CN104302181B - 用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物 - Google Patents

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Abstract

本文提供了化合物、其组合物和将其用于治疗脊髓性肌萎缩的用途。

Description

用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物
本文所描述的技术还没有得到美国政府的支持。
交叉引用
本申请要求2012年3月1日提交的美国临时申请序列号61/605,487(其以引用方式全部并入本文并用于所有目的)的优先权。
联合研究协议声明
由联合研究协议的一方或多方或由其代表开发所披露的主题或形成所要求保护的发明，该联合研究协议在所要求保护的发明的有效申请日当日或之前生效。
所要求保护的发明是在该联合研究协议的范围内开展的活动的结果；以及
所要求保护的发明的专利申请披露或经修改披露该联合研究协议各方的名称。
引言
本文提供化合物、其组合物以及将其用于治疗脊髓性肌萎缩的用途。
发明背景
脊髓性肌萎缩症(SMA)，在其最广泛的意义上，描述了以引起肌肉无力和肌肉萎缩的脊髓和脑干中的进行性运动神经元损失为特征的遗传性和获得性中枢神经系统(CNS)疾病的集合。最常见形式的SMA由存活的运动神经元(SMN)基因中的突变造成并显示影响婴幼儿乃至成年人的大范围严重性(Crawford和Pardo，Neurobiol.Dis.，1996，3:97)。
小儿SMA是这类神经退行性病症的最严重形式。症状包括肌肉无力、肌肉张力差、哭声弱、松弛或下垂倾向、吸吮或吞咽困难、肺部或咽喉分泌物的堆积、喂养困难以及呼吸道感染几率增加。双腿往往弱于手臂以及发育的里程碑，如抬头或坐立，无法达成。在一般情况下，该症状出现地 越早，寿命越短。随着运动神经元细胞退化，症状在不久之后便出现。该疾病的严重形式是致命的以及各种形式均没有已知的疗法。SMA的过程与运动神经元细胞退化的速率和所产生的松弛的严重性直接相关。患有严重形式的SMA的婴幼儿由于支持呼吸的肌肉的无力而经常患有呼吸系统疾病。患有稍轻度形式的SMA的孩子活得更长，尽管他们，特别是该范围里面更严重端的那些孩子，可能需要广泛的医疗支持。已经将SMA病症的临床范围分为以下五组。
(a)0型SMA(子宫内SMA)是该疾病的最严重形式并在出生前开始。通常情况下，0型SMA的第一症状是胎动的减少，其可在妊娠第30至36周期间初次观察到。出生后，这些新生儿几乎没有一点活动并且具有吞咽和呼吸困难。
(b)1型SMA(小儿SMA或Werdnig-Hoffmann病)通常在0至6个月期间表现症状。这种形式的SMA也是非常严重的。患者从未获得坐立的能力，以及死亡通常发生在没有通气支持的前2年内。
(c)2型SMA(居间SMA)在7-18个月龄发病。患者具有在没有支撑的情况下坐立的能力，但从来不能独立站立或行走。本组的预后在很大程度上依赖于呼吸系统的参与程度。
(d)3型SMA(少年SMA或Kugelberg-Welander病)一般在18个月后诊断。3型SMA个体在他们的病程中某些时候都能够独立行走，却往往在青年或成年期坐上轮椅。
(e)4型SMA(成年发病的SMA)。松弛通常在青春期后期开始于舌、手或脚部，然后发展到身体的其它区域。成年人SMA的过程缓慢得多并且对寿命很少或没有影响。
已经通过关联分析将SMN基因映射到染色体5q的复杂区域。在人体中，这个区域包含大约50万个碱基对(kb)倒转复制，其产生两个几乎相同的SMN基因拷贝拷贝。SMA由两个染色体中的基因(SMN1)的端粒拷贝拷贝的失活突变或缺失从而导致SMN1基因功能缺失而造成的。然而，所有患者都保持着基因(SMN2)的着丝粒复制，以及SMA患者中SMN2基因的拷贝拷贝数通常与疾病的严重程度成反比；也就是说，SMA病情较轻的患者有更多的SMN2拷贝拷贝。然而，SMN2无法完全补偿外显子7中翻译沉默C至T突变所引起的外显子7的选择性剪接所导致的SMN1功能的缺失。结果，从SMN2所产生的大部分转录物缺乏外显子7(SMN2Δ7)，以及编码功能受损并迅速退化的截断Smn蛋白质。
认为，该Smn蛋白质在RNA加工和新陈代谢中起作用，具有调节特定类的RNA-蛋白质复合物(称为snRNP)组装的得到很好体现的功能。Smn 在运动神经元中可以具有其他功能，但是其在预防运动神经元的替代性退行性变方面的作用没有很好地确立。
在大多数情况下，基于临床症状并通过，如通过基因检测来测定的，SMN1基因中所有外显子7拷贝拷贝的缺乏诊断SMA。然而，在约5％的情况下，SMA由突变而非整个SMN1基因的缺失或而非SMN1基因中全部外显子7的缺失导致，一些已知而其他尚未定义。在这种情况下，当SMN1基因检测不可行或SMN1基因序列没有显示出任何异常时，可指出其他检测，如肌电图(EMG)或肌肉活检。
目前SMA患者的医疗护理仅限于支持疗法，包括呼吸、营养和康复护理；没有已知解决该疾病的根本原因的药物。SMA目前的疗法由对慢性运动单元缺损的预防和管控组成。1型SMA的主要管控问题是对肺部问题的预防和早期治疗，肺部问题是大多数病例中死亡的首要原因。虽然患有SMA的一些婴幼儿成长为成年人，但是那些患有1型SMA的婴幼儿的预期寿命不到两年。
已开发了几种SMA小鼠模型。具体地，SMNΔ7模型(Le等人，Hum.Mol.Genet.，2005，14:845)带有SMN2基因和多个SMN2Δ7cDNA拷贝拷贝，以及概括了1型SMA的许多表型特征。该SMNΔ7模型可用于SMN2表达研究以及对运动功能和存活率的评价。C/C-等位基因小鼠模型(杰克逊实验室菌株编号：008714)提供了一种不太严重的SMA疾病模型，其小鼠具有降低的SMN2全长(SMN2FL)mRNA和Smn蛋白质水平。C/C-等位基因小鼠表型具有SMN2基因和经历选择性剪接但没有明显的肌肉无力的杂合mSmn1-SMN2基因。将C/C-等位基因小鼠模型用于SMN2表达研究。
由于对SMA的遗传基础和病理生理学认识的提高，已经对几个治疗策略进行了探讨，但仍未有一个在临床上取得经证明的成功。
在SMA动物模型中，利用病毒递送载体的SMN1基因置换和利用差异化SMN1+/+干细胞的细胞置换具有经证明的疗效。确定安全性和免疫应答以及解决新生儿阶段治疗开始的要求需要更多的研究，之后，才可以将这些方法应用于人类。
对培养细胞中SMN2的选择性剪接的修正也已通过将合成的核酸用作治疗剂得以实现：(i)反义寡核苷酸，其靶向SMN2前体mRNA中序列元件并使剪接反应的结果转向生成全长SMN2mRNA(Passini等人，Sci.Transl.Med.，2011，3:72ra18；以及，Hua等人，Nature，2011，478:123)以及(ii)分子间剪接RNA分子，其提供全功能的RNA序列，在剪接期间取代突变 体片段并生成全长的SMN1mRNA(Coady和Lorson，J Neurosci.，2010，30:126)。
探讨中的其他方法包括寻求增加Smn水平、提高残余Smn功能或补偿Smn缺损的药物。已经显示出的是，氨基糖苷类通过促进异常终止密码子的翻译通读而增强了产自SMN2Δ7mRNA的稳定化的Smn蛋白质的表达，但其中枢神经系统渗透性差以及在重复给药后有毒性。化疗剂(如阿柔比星)已显示增加了细胞培养物中的Smn蛋白质；然而，这些药物的毒性特征禁止SMA患者长期服用。临床研究中用于治疗SMA的一些药物包括转录活化剂，例如组蛋白质脱乙酰基酶(“HDAC”)抑制剂(如丁酸盐、丙戊酸和羟基脲)；和mRNA稳定剂(来自Repligen的mRNA脱帽抑制剂RG3039)，其意在增加转录自SMN2基因的总RNA的量。然而，HDAC抑制剂或mRNA稳定剂的使用并没有解决SMA的根本原因，并且可能导致人体中有安全隐患的转录和基因表达的全面性提高。
在一种替代性方法中，已经选择神经保护剂(如奥利索西)用于研究。这样的策略并不旨在提高用于治疗SMA的功能性Smn的产量，而是探索保护缺乏SMN的运动神经元免于神经退行性疾病。
经设计以确认增加转录自SMN2基因的RNA对SMN外显子7的纳入(inclusion)的化合物的系统和由此确认的某些苯并恶唑和苯并异恶唑化合物已经在2009年5月27日提交的国际申请PCT/US2009/003238(作为国际公布号WO2009/151546和美国公开号US2011/0086833进行公布)中得以描述。经设计以确认从SMN2Δ7mRNA生产稳定的Smn蛋白质的化合物的系统和由此确认的某些异吲哚啉化合物已经在2009年8月13日提交的国际申请PCT/US2009/004625(作为国际公布号WO2010/019236和美国公开号US2011/0172284进行公布)中得以描述。上述各文献全部并入本文并用于所有的目的。
本文提及的所有其他文献以引用方式被并入本申请，就好像在本文中被完整阐述一样。
尽管对SMA的遗传基础和病理生理学的认识取得了进展，但仍然需要确认改变最具破坏性的儿童神经系统疾病之一脊髓性肌萎缩的病程的化合物。
发明概述
在一个方面，本文提供了式(I)的化合物：
或其一种形式，其中w1、w2、w3、w4、w5和w6如本文中所定义。在一个实施方式中，本文提供包括式(I)的化合物或其一种形式以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。在具体的实施方式中，本文提供用于治疗脊髓性肌萎缩(SMA)的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物。
SMA由SMN1基因的缺失或突变引起，从而导致缺乏SMN的运动神经元的选择性变性。虽然人类对象保留SMN2基因的多个拷贝，但是表达自SMN2的少量功能性Smn蛋白质不能完全弥补原本将表达自SMN1基因的Smn的缺损。本文所描述的化合物、其组合物及其用途部分地基于本申请人的发现，即式(I)的化合物增加转录自SMN2小基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。该小基因再现SMN2外显子7的选择性剪接反应，这导致了大多数SMN2转录物中外显子7的遗漏(skipping)。因此，可以使用式(I)的化合物或其一种形式来调节转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。申请人还已发现，式(I)的化合物增加转录自SMN1小基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。因此，可以使用式(I)的化合物或其一种形式来调节转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。
在具体的实施方式中，本文提供了可用来调节转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式。在另一具体的实施方式中，本文提供了可用来调节转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式。在仍然另一实施方式中，本文提供了可用来调节分别转录自SMN1和SMN2基因的mRNA对SMN1和SMN2外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式。
在另一方面，本文提供式(I)的化合物或其一种形式用于治疗SMA的用途。在具体的实施方式中，本文提供一种治疗有这类需要的人类对象体内SMA的方法，其包括向该对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式。该式(I)的化合物或其一种形式优选地含于药物组合物被施用至人类对象。在另一具体的实施方式中，本文提供式(I)的化合物用于治疗SMA的用途，其中该化合物增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。不受理论限制，式(I)的化合物增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外 显子7的纳入并提高产自SMN2基因的Smn蛋白质的水平，因此可被用来治疗有这类需要的人类对象体内的SMA。
在另一方面，本文提供了下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13；和/或SEQ ID NO.2、9或12；和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)和那些引物和/或探针的用途。在具体的实施方式中，本文提供包括SEQ ID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13的分离的核苷酸序列。在另一具体的实施方式中，本文提供基本上由SEQ ID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13构成的分离的核苷酸序列。在另一具体的实施方式中，本文提供由SEQ ID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13构成的分离的核苷酸序列。
在某些实施方式中，转录自SMN1基因和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量可以被用作SMA的生物标记，如本文所披露。在其他的实施方式中，转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量可以被用作用于使用化合物治疗患者的生物标记，如本文所披露。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中，该患者不是SMA患者。
在某些实施方式中，转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量以及转录自SMN1和/或SMN2基因且不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量可以被用作用于使用化合物治疗患者的生物标记，如本文所披露。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中，该患者不是SMA患者。
根据这些实施方式，下文所述的SMN引物和/或SMN探针可被用于检测，例如PCR(如qPCR)、滚环扩增和RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)以评价和/或量化转录自SMN1基因和/或SMN2基因以及包括或不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量。
在具体的实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12；和/或SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测，如下文生物实施例中所述的检测)，以测定化合物(如式(I)的化合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。
在具体的实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12；和/或SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、 RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测，如下文生物实施例中所述的检测)，以测定化合物(如式(I)的化合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。
在具体的实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12；和/或SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测，如下文生物实施例中所述的检测)，以测定化合物(如式(I)的化合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。
在另一实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.7、11或13和/或SEQ ID NO.9或12；和/或SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测，如下文生物实施例中所述的检测)，以监测患者样本中转录自SMN2基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中，该患者不是SMA患者。
在另一实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.7、11或13和/或SEQ ID NO.9或12；和/或SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测，如下文生物实施例中所述的检测)，以监测患者样本中转录自SMN1基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中，该患者不是SMA患者。
在另一实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.7、11或13和/或SEQ ID NO.9或12；和/或SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测，如下文生物实施例中所述的检测)，以监测患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中，该患者不是SMA患者。
在另一实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.7、11或13和/或SEQ ID NO.9或12；和/或SMN 探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测，如下文生物实施例中所述的检测)，以监测患者对化合物(如式(I)的化合物或其一种形式)的反应。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中，该患者不是SMA患者。
在另一实施方式中，本文提供一种用于测定化合物(如本文披露的式(I)的化合物)是否增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括(a)使在化合物(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下，转录自本文或2009年8月13日提交的国际申请PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284中所述的SMN2小基因的mRNA与本文所述的引物(如SEQ ID NO.1和/或2)连同适用于，如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增的组分接触；以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的增加表明该化合物增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入；以及(2)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。
在另一实施方式中，本文提供一种用于测定化合物(如本文披露的式(I)的化合物)是否增强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入的方法，其包括(a)使在化合物(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下，转录自2009年8月13日提交的国际申请PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284中所述的SMN1小基因的mRNA与本文所述的引物(如SEQ ID NO.1和/或2)连同适用于，如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增的组分接触；以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的增加表明该化合物增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入；以及(2)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基 因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。
在另一实施方式中，本文提供一种用于测定化合物(如本文披露的式(I)的化合物)是否增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括(a)使在化合物(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下，转录自本文或2009年8月13日提交的国际申请PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284中所述的SMN2小基因的mRNA与本文所述的探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR、滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触；以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的增加表明该化合物增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入；以及(2)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。
在另一实施方式中，本文提供一种用于测定化合物(如本文披露的式(I)的化合物)是否增强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入的方法，其包括(a)使在化合物(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下，转录自2009年8月13日提交的国际申请PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284中所述的SMN1小基因的mRNA与本文所述的探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR、滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触；以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量，其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的增加表明该化合物增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入；以及(2)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。
在另一实施方式中，本文提供一种用于测定化合物(如本文披露的式(I)的化合物)是否增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括(a)使在化合物(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下，转录自本文或2009年8月13日提交的国际申请PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284中所述的SMN2小基因的mRNA与本文所述的引物(如SEQ ID NO.1或2)和/或探针(如SEQ IDNO.3或10)连同适用于，如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR、滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触；以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的增加表明该化合物增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入；以及(2)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。
在另一实施方式中，本文提供一种用于测定化合物(如本文披露的式(I)的化合物)是否增强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入的方法，其包括(a)使在化合物(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下，转录自2009年8月13日提交的国际申请PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284中所述的SMN1小基因的mRNA与本文所述的引物(如SEQ ID NO.1或2)和/或探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR、滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触；以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量，其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的增加表明该化合物增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入；以及(2)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。
在另一方面，本文提供了包括下文生物实施例所述的引物和/或探针(例如SM引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12；和/或SMN探针，例如SEQ IDNO.3或10)的试剂盒及其用途。
附图概述
生物实施例1中所引用的图1是SMN2-A小基因构建体的示意图，该构造产生两种选择性剪接的mRNA转录物：包含外显子7的全长mRNA和缺乏外显子7的Δ7mRNA。在核酸残基48之后被插入SMN2-A外显子7的腺嘌呤核苷酸由字母“A”表示。可替代性地，该核苷酸还可以选自胞嘧啶或胸腺嘧啶。由于在核酸残基48之后一种核苷酸(A、C、或T)的插入，该全长mRNA在SMN开放阅读框中不包含终止密码子，而该Δ7mRNA在外显子8中具有由词语“终止”表示的终止密码子。
生物实施例1中所引用的图2提供来自SMN2-A小基因构建体SEQ ID NO.21的DNA序列(图2a)。如图2b中所示，可以发现如下子序列：
1-70：5’UTR(deg)；
71-79：外显子6：起始密码子和BamHI位点(atgggatcc)；
80-190：外显子6；
191-5959：内含子6；
5960-6014：具有腺嘌呤核苷酸“A”插入物(位置6008)的外显子7；
6015-6458：内含子7；
6459-6481：部分外显子8；
6482-8146：BamHI位点(5’端序列)，起始于密码子2(没有起动密码子)的萤光素酶编码序列，NotI位点(3’端序列)，TAA终止密码子；以及
8147-8266：3’UTR(deg)。
为了生成SMN1版本的小基因，使用位点定向诱变将该SMN2-A小基因构建体的外显子7的第六个核苷酸(胸腺嘧啶残基)改变为胞嘧啶。因此，与该SMN2-A小基因构建体类似，SMN1小基因构建体具有在外显子7 的核酸残基48之后插入的单一腺嘌呤残基。该SMN1小基因构建体被称为SMN1-A。类似地，在外显子7的核酸残基48之后插入该SMN1小基因构建体的核苷酸也可以替代性地选自胞嘧啶或胸腺嘧啶。
生物实施例2中所引用的图3示出在24小时内用浓度增加的化合物5(图3a)和化合物27(图3b)处理的细胞中的SMN2小基因选择性剪接的校正。用逆转录-定量PCR(RT-qPCR)对SMN2小基因全长mRNA的水平进行定量。化合物处理的样本中SMN2小基因全长mRNA的水平被归一化为溶媒处理的样本中的所述水平并被绘制成化合物浓度的函数。
生物实施例3中所引用的图4示出在24小时内用浓度增加的化合物5(图4a)和化合物27(图4b)处理的1型SMA患者成纤维细胞中的SMN2选择性剪接的校正。使用RT-qPCR对SMN2全长和Δ7mRNA的水平进行定量。化合物处理的样本中全长和SMN2Δ7mRNA的水平被归一化为溶媒处理的样本中的所述水平并被绘制成化合物浓度的函数。
生物实施例4中所引用的图5示出在24小时内用浓度增加的化合物5(图5a)和化合物27(图5b)处理的1型SMA患者成纤维细胞中的SMN2选择性剪接的校正。使用逆转录-终点PCR(RT-PCR)扩增SMN2全长和SMN2Δ7mRNA以及使用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。顶部和底部的条带分别对应于SMN2全长和Δ7mRNA。每个条带的强度与样本中存在的RNA的量成比例。
生物实施例7中所引用的图6示出在48小时内用化合物5(图6a)和化合物27(图6b)处理的1型SMA人成纤维细胞中的Smn蛋白质表达的剂量依赖性增加。
生物实施例8中所引用的图7示出在48小时内用化合物5处理的1型SMA患者成纤维细胞中的核小斑点计数(gems)的增加。用荧光显微镜对小斑点计数。化合物处理的样本中小斑点的数目被归一化为溶媒处理的样本中的所述数目并被绘制成化合物浓度的函数。
生物实施例11中所引用的图8示出用50mg/kg化合物5(n＝10)每天两次(BID)处理10天所导致的，C-C等位基因SMA小鼠模型中脑、脊髓和肌肉组织中Smn蛋白质表达的增加。通过方差分析的p值用三颗星(***)表示为P<0.001。
生物实施例12中所引用的图9示出用化合物27(脑，图9a；脊髓，图9b；和肌肉，图9c)每天一次(QD)处理7天所导致的，新生Δ7SMA小鼠模型组织中Smn蛋白质表达的剂量依赖性增加。通过方差分析的p值用一颗星(*)表示为P<0.05以及用三颗星(***)表示为P<0.001。
生物实施例16中所引用的图10示出在7小时内用化合物5(图10a)和化合物27(图10b)处理的HEK293H人体细胞中SMN1小基因全长mRNA中的剂量依赖性增加和SMN1小基因Δ7mRNA中的剂量依赖性下降。使用RT-PCR对该SMN1小基因全长和Δ7mRNA的每个进行扩增。使用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。顶部和底部条带分别对应于该SMN1小基因全长和Δ7mRNA。每个条带的强度与样本中存在的RNA的量成比例。
发明详述
本文提供了式(I)的化合物：
或其一种形式，其中：
w1是C-Rb或N；
w2和w6独立地是C-R1或C-R2；
w3、w4和w5独立地是C-Ra或N；
其中w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，
当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1；以及，
其中w1、w3、w4和w5的一个、两个或三个独立地是N；
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8·烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨 基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；
其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况可选地用一种、两种或三种R3取代基以及可选地，用一种附加的R4取代基取代；或者，
其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况可选地用一种、两种、三种或四种R3取代基取代；
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况可选地用一种、两种或三种R6取代基以及可选地，用一种附加的R7取代基取代；
在每种情况下，Ra独立地选自氢、卤素或C1-8烷基；
Rb是氢、卤素、C1-8烷基或C1-8烷氧基；
在每种情况下，R3独立地选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨 基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基；
R4是C3-14环烷基、C3-14环烷基-C1-8烷基、C3-14环烷基-氨基、芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基、芳基-磺酰氧基-C1-8烷基、杂环基或杂环基-C1-8烷基；其中，C3-14环烷基、芳基和杂环基的每种情况可选地用一种、两种或三种R5取代基取代；
在每种情况下，R5独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；
在每种情况下，R6独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、C2-8烯基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；以及，
R7是C3-14环烷基、C3-14环烷基-氧基、芳基、杂环基或杂芳基。
实施方式
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w1是C-Rb。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，w1是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w3是C-Ra。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，w3是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w4是C-Ra。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，w4是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w5是C-Ra。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，w5是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w2是C-R1以及w6是C-R2。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2以及w6是C-R1。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w3、w4和w5独立地是C-Ra或N和w1是C-Rb或N，其中w1、w3、w4和w5的一种、两种或三种同时为N。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w3、w4和w5独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N，其中w1、w3、w4和w5的一种、两种或三种同时为N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w1和w5是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w3和w5是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w4和w5是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w1、w3和w5是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w1、w4和w5是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w3、w4和w5是N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷 基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷 基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基或[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基或杂环基-羰基-氧基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是可选地用R3和R4取代基取代的杂环基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是可选地用R3和R4取代基取代的C3-14环烷基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，芳基的每种情况可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是可选地用R3和R4取代基取代的芳基-C1-8烷基-氨基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或 (杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是可选地用R3和R4取代基取代的杂芳基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，
R1是选自如下的杂环基：氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基或6,9-二氮杂螺[4.5]癸基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是选自如下的杂环基：氮杂环丁烷-1-基、四氢呋喃-3-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、哌啶-4-基、哌嗪-1-基、1,4-二氮杂环庚烷-1-基、1,2,5,6-四氢吡啶-5-基、1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5-基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-6(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基、9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬-4-基、氮杂螺[3.3]庚-2-基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬-8-基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基或6,9-二氮杂螺[4.5]癸-9-基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1由选自如下的杂环基取代：4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基、(3aS,6aS)-1-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aS,6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、(3aR,6aR)-1-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aR,6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-5-(2-羟基乙基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-5-(丙烷-2-基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-5-乙基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(4aR,7aR)-1-甲基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aR,7aR)-1-乙基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aR,7aR)-1-(2-羟基乙基)八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aS,7aS)-1-甲基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aS,7aS)-1-(2-羟基乙基)八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(7R,8aS)-7-羟基六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-8a-甲基八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-8a-甲基八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(1R,5S,6s)-6-(di甲基氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基、(1R,5S)-8-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(3-exo)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1R,5S)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1S,4S)-5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基或(1S,4S)-5-乙基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂环基-C1-8烷基，其中杂环基选自吗啉基、哌啶基、哌嗪基、咪唑基或吡咯烷基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自如下的杂环基-C1-8烷基：吗啉-4-基-甲基、吗啉-4-基-乙基、吗啉-4-基-丙基、哌啶-1-基-甲基、哌嗪-1-基-甲基、哌嗪-1-基-乙基、哌嗪-1-基-丙基、哌嗪-1-基-丁基、咪唑-1-基-甲 基、咪唑-1-基-乙基、咪唑-1-基-丙基、咪唑-1-基-丁基、吡咯烷-1-基-甲基、吡咯烷-1-基-乙基、吡咯烷-1-基-丙基或吡咯烷-1-基-丁基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂环基-C1-8烷氧基，其中杂环基选自吡咯烷基、哌啶基或吗啉基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自如下的杂环基-C1-8烷氧基：吡咯烷-2-基-甲氧基、吡咯烷-2-基-乙氧基、吡咯烷-1-基-甲氧基、吡咯烷-1-基-乙氧基、哌啶-1-基-甲氧基、哌啶-1-基-乙氧基、吗啉-4-基-甲氧基或吗啉-4-基-乙氧基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂环基-氨基，其中杂环基选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基或(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自如下的杂环基-氨基：氮杂环丁烷-3-基-氨基、吡咯烷-3-基-氨基、哌啶-4-基-氨基、9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、(3-外向)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基或(1R,5S)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是(杂环基)(C1-8烷基)氨基，其中杂环基选自吡咯烷基或哌啶基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自(吡咯烷-3-基)(甲基)氨基或(哌啶-4-基)(甲基)氨基的(杂环基)(C1-8烷基)氨基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂环基-氨基-C1-8烷基，其中杂环基选自四氢呋喃基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自3-(四氢呋喃-3-基-氨基)丙基的杂环基-氨基-C1-8烷基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其中杂环基选自四氢呋喃基、噻吩基或吡啶基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自3-[(四氢呋喃-2-基甲基)氨基]丙基、3-[(噻吩基-3-基甲基)氨基]丙基、3-[(吡啶-2-基甲基)氨基]丙基或3-[(吡啶-4-基甲基)氨基]丙基的杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂环基-氧基，其中杂环基选自吡咯烷基或哌啶基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自吡咯烷-3-基-氧基或哌啶-4-基-氧基的杂环基-氧基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂环基-羰基，其中杂环基选自哌嗪基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自哌嗪-1-基-羰基的杂环基-羰基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂环基-羰基-氧基，其中杂环基选自哌嗪基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自哌嗪-1-基-羰基-氧基的杂环基-羰基-氧基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基或环庚基的C3-14环烷基；其中，每种情况的C3-14环烷基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基或环庚基的C3-8环烷基；其中，每种情况的C3-8环烷基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其中芳基选自苯基；以及，其中，每种情况的芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自3-(苯甲基氨基)丙基的芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基；其中，每种情况的芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂芳基，其中杂芳基选自吡啶基；以及，其中，每种情况的杂芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自吡啶-4-基的杂芳基；其中，每种情况的杂芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂芳基-C1-8烷基，其中杂芳基选自1H-咪唑基；以及，其中，每种情况的杂芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自1H-咪唑-1-基-甲基的杂芳基-C1-8烷基；其中，每种情况的杂芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基，其中杂芳基选自吡啶基；以及，其中，每种情况的杂芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自(吡啶-3-基甲基)(甲基)氨基的(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基；其中，每种情况的杂芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1是杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其中杂芳基选自噻吩基或吡啶基；以及，其中，每种情况的杂芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R1是选自噻吩-3-基-甲基-氨基-丙基、吡啶-2-基-甲基-氨基-丙基、吡啶-3-基-甲基-氨基-丙基或吡啶-4-基-甲基-氨基-丙基的杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基；其中，每种情况的杂芳基可选地用R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R3选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R3选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8 烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R3是选自甲基、乙基、丙基、异丙基或叔丁基的C1-8烷基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R3是选自乙基、丙基、异丙基或叔丁基的C1-8烷基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R3是选自三卤代-甲基、二卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、二卤代-乙基、卤代-乙基、三卤代-丙基、二卤代-丙基或卤代-丙基的卤代-C1-8烷基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R3是选自三卤代-甲基、二卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、二卤代-乙基、三卤代-丙基或二卤代-丙基的卤代-C1-8烷基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R3是选自羟基-甲基、羟基-乙基、羟基-丙基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基的羟基-C1-8烷基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R3是选自羟基-甲基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基的羟基-C1-8烷基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R3是选自甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基的C1-8烷氧基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R3是选自如下的卤代-C1-8烷氧基：三卤代-甲氧基、二卤代-甲氧基、卤代-甲氧基、三卤代-乙氧基、二卤代-乙氧基、卤代-乙氧基、三卤代-丙氧基、二卤代-丙氧基或卤代-丙氧基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R3是选自甲氧基-羰基-氨基、乙氧基-羰基-氨基、丙氧基-羰基-氨基、异丙氧基-羰基-氨基、叔丁氧基-羰基-氨基的C1-8烷氧基-羰基-氨基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R4是选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基的C3-14环烷基；其中，每种情况的C3-14环烷基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R4是选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基的C3-8环烷基；其中，每种情况的C3-8环烷基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R4是C3-14环烷基-C1-8烷基，其中C3-14环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；以及，其中，每种情况的C3-14环烷基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R4是C3-8环烷基-C1-8烷基，其中C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；以及，其中，每种情况的C3-8环烷基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R4是C3-14环烷基-氨基，其中C3-14环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；以及，其中，每种情况的C3-14环烷基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R4是C3-8环烷基-氨基，其中C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；以及，其中，每种情况的C3-8环烷基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R4是芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基或芳基-磺酰氧基-C1-8烷基，其中芳基选自苯基；以及，其中，每种情况的芳基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R4是芳基-C1-8烷基或芳基-C1-8烷氧基-羰基，其中每种情况的芳基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R4是选自环氧丙烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1,3-二噁烷基或吗啉基的杂环基，其中每种情况的杂环基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R4是选自环氧丙烷-3-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、哌嗪-1-基、1,3-二噁烷-5-基或吗啉-4-基的杂环基，其中每种情况的杂环基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R4是杂环基-C1-8烷基，其中每种情况的杂环基选自吡咯烷基或哌啶基；以及，其中，每种情况的杂环基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R4是选自吡咯烷-1-基-C1-8烷基或哌啶-1-基-C1-8烷基的杂环基-C1-8烷基，其中每种情况的杂环基可选地用R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R5选自卤素、羟基、氰基、硝基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；其中，卤素和卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R5是羟基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R5是选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基或叔丁基的C1-8烷基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R5是选自乙基、丙基、异丙基或叔丁基的C1-8烷基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R5是选自如下的卤代-C1-8烷基：三卤代-甲基、二卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、二卤代-乙基、卤代-乙基、三卤代-丙基、二卤代-丙基或卤代-丙基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R5是选自甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基的C1-8烷氧基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R5是选自如下的卤代-C1-8烷氧基：三卤代-甲氧基、二卤代-甲氧基、卤代-甲氧基、三卤代-乙氧基、二卤代-乙氧基、卤代-乙氧基、三卤代-丙氧基、二卤代-丙氧基或卤代-丙氧基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R2是可选地用R6和R7取代基取代的选自苯基的芳基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R2是芳基-氨基，其中芳基选自苯基；以及，其中，每种情况的芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R2是选自苯基-氨基的芳基-氨基；其中，每种情况的芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R2是芳基-氨基-羰基，其中芳基选自苯基；以及，其中，每种情况的芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R2是选自苯基-氨基-羰基的芳基-氨基-羰基；其中，每种情况的芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，
R2是选自1,2,3,6-四氢吡啶基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯基或2,3-二氢-1,4-苯并二噁英基的杂环基；其中，每种情况的杂环基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R2是选自1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基或2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基的杂环基；其中，每种情况的杂环基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，
R2是选自如下的杂芳基：噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1,3-噻唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并 [1,2-a]嘧啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基；其中，每种情况的杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R2是杂芳基选自噻吩-2-基、噻吩-3-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、1H-吡唑-5-基、1H-咪唑-1-基、1H-咪唑-4-基、1,3-噻唑-2-基、1,2,4-噁二唑基-3-基、1,3,4-噁二唑基-2-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、嘧啶-4-基、1H-吲哚-3-基、1H-吲哚-4-基、1H-吲哚-5-基、1H-吲哚-6-基、1H-吲唑-5-基、2H-吲唑-5-基、吲嗪-2-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-5-基、苯并噻吩-2-基、苯并噻吩-3-基、1H-苯并咪唑-2-基、1H-苯并咪唑-6-基、1,3-苯并噻唑-2-基、1,3-苯并噻唑-5-基、1,3-苯并噻唑-6-基、1,3-苯并噻唑-2-基、1,3-苯并噻唑-5-基、1,3-苯并噻唑-6-基、9H-嘌呤-8-基、呋喃并[3,2-b]吡啶-2-基、呋喃并[3,2-c]吡啶-2-基、呋喃并[2,3-c]吡啶-2-基、噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基、噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基、吡咯并[1,2-a]嘧啶-7-基、吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、吡咯并[1,2-b]哒嗪-2-基、吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基、吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、咪唑并[1,2-a]嘧啶-6-基、咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-基、咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基、咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-6-基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基或喹喔啉-2-基；其中，每种情况的杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R2是选自如下的被取代的杂芳基：4-甲基噻吩-2-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、4-甲基-1H-吡唑-3-基、1-苯基-1H-吡唑-3-基、1-苯基-1H-咪唑-4-基、2-甲基-1-(吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基、4-甲基-1,3-噻唑-2-基、4-(三氟代甲基)-1,3-噻唑-2-基、4-苯基-1,3-噻唑-2-基、5-苯基-1,2,4-噁二唑基-3-基、3-氟代吡啶-4-基、6-氟代吡啶-2-基、2-氯代吡啶-4-基、4-氯代吡啶-3-基、5-氯代吡啶-2-基、6-甲基吡啶-3-基、2-(三氟代甲基)吡啶-3-基、4-(三氟代甲基)吡啶-2-基、6-(三氟代甲基)吡啶-2-基、2-甲氧基吡啶-4-基、4-甲氧基吡啶-3-基、6-甲氧基吡啶-2-基、2-乙氧基吡啶-3-基、6-乙氧基吡啶-2-基、6-(丙烷-2-基氧)吡啶-2-基、6-(二甲基氨基)吡啶-3-基、6-(甲基硫烷基)吡啶-2-基、6-(环丁基氧)吡啶-2-基、6-(吡咯烷-1-基)吡啶-2-基、2-甲基嘧啶-4-基、2-(丙烷-2-基)嘧啶-4-基、2-环丙基嘧啶-4-基、1-甲基-1H-吲哚-3- 基、2-甲基-2H-吲唑-5-基、2-甲基-1-苯并呋喃-5-基、1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基、4-甲基-1H-苯并咪唑-2-基5-氟代-1H-苯并咪唑-2-基、4-氟代-1,3-苯并噻唑-2-基、5-氟代-1,3-苯并噻唑-2-基、4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基、4-碘代-1,3-苯并噻唑-2-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-6-基、4-甲基-1,3-苯并噻唑-2-基、4-(三氟代甲基)-1,3-苯并噻唑-2-基、7-(三氟代甲基)-1,3-苯并噻唑-2-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-2-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-5-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-6-基、4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基、7-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基、4-(三氟代甲基)-1,3-苯并噻唑-2-基、5-甲基呋喃并[3,2-b]吡啶-2-基、4,6-二甲基呋喃并[3,2-c]吡啶-2-基、5,7-二甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-2-基、4,6-二甲基噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基、2,4-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基、1-甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、3-甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、2-甲基吡咯并[1,2-b]哒嗪-2-基、4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、5-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基、4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、2-氯代咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、3-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、2-乙基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-6-基、6-氰基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基(也被称为2-咪唑并[1,2-a]吡啶-6-腈)、6-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6,8-二氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-(三氟代甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-(三氟代甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-溴代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-乙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-氟代-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氯代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-甲基-8-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2,3-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2-(三氟代甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、8-氯代-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、8-氟代-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、6-氟代咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、6-氯代咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、6-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、7-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、2-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-6-基、6-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基、2-甲基-3-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)咪唑并 [1,2-b]哒嗪-6-基、6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、8-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、6-氯代-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、6-甲基-8-(三氟代甲基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、8-(甲基硫烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、3-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基或2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-6-基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R2是选自如下的杂芳基：噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1,3-噻唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基；其中，每种情况的杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R2是选自如下的杂芳基：呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基；其中，每种情况的杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R2是杂芳基-氨基，其中杂芳基选自吡啶基或嘧啶基；以及，其中，每种情况的杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R2是选自吡啶-2-基-氨基、吡啶-3-基-氨基或嘧啶-2-基-氨基的杂芳基-氨基；其中，每种情况的杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；其中，卤素和卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6是选自甲基、乙基、丙基、异丙基或叔丁基的C1-8烷基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R6是选自乙基、丙基、异丙基或叔丁基的C1-8烷基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6是选自乙川、烯丙基或丁间-1,3-二烯基的C2-8烯基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R6是选自乙川或烯丙基的C2-8烯基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6是选自三卤代-甲基、二卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、二卤代-乙基、卤代-乙基、三卤代-丙基、二卤代-丙基或卤代-丙基的卤代-C1-8烷基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6是选自羟基-甲基、羟基-乙基、羟基-丙基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基的羟基-C1-8烷基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R6是选自羟基-甲基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基的羟基-C1-8烷基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6是选自甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基的C1-8烷氧基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6是选自三卤代-甲氧基、二卤代-甲氧基、卤代-甲氧基、三卤代-乙氧基、二卤代-乙氧基、卤代-乙氧基、三卤代-丙氧基、二卤代-丙氧基或卤代-丙氧基的卤代-C1-8烷氧基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R7是C3-14环烷基、C3-14环烷基-氧基、芳基、杂环基或杂芳基；其中C3-14环烷基选自环丙基或环丁氧基；其中芳基选自苯基；其中杂环基选自环氧丙烷基、吡咯烷基或1,2,3,6-四氢吡啶基；以及，其中杂芳基选自噻吩基或吡啶基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R7是C3-14环烷基或C3-14环烷基-氧基，其中每种情况的C3-14环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R7是C3-8环烷基或C3-8环烷基-氧基，其中每种情况的C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R7是选自苯基的芳基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R7是选自环氧丙烷基、吡咯烷基或1,2,3,6-四氢吡啶基的杂环基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R7是选自环氧丙烷-3-基、吡咯烷-1-基或1,2,3,6-四氢吡啶-4-基的杂环基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R7是选自噻吩基或吡啶基的杂芳基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R7是选自吡啶基的杂芳基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R7是选自噻吩-2-基或吡啶-2-基的杂芳基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，R7是选自吡啶-2-基的杂芳基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，每种情况的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基可选地用R3和R4取代基取代；以及，
其中，杂环基选自氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2] 壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基或6,9-二氮杂螺[4.5]癸基。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，芳基是苯基；
其中，杂环基选自1,2,3,6-四氢吡啶基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯基或2,3-二氢-1,4-苯并二噁英基；
其中，杂芳基选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1,3-噻唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基；以及，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；
其中，杂环基选自氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、 (3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基或6,9-二氮杂螺[4.5]癸基；以及，其中，每种情况的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基可选地用R3和R4取代基取代；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，杂环基选自1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基或2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基；
其中，杂芳基选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1,3-噻唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基；以及，其中，每种情况的杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基或[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨 基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，每种情况的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基可选地用R3和R4取代基取代；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基或杂环基-羰基-氧基；其中，每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是可选地用R3和R4取代基取代的杂环基；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是可选地用R3和R4取代基取代的C3-14环烷基；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，每种情况的芳基可选地用R3和R4取代基取代；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是可选地用R3和R4取代基取代的芳基-C1-8烷基-氨基；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，每种情况的杂环基，C3-14环烷基、芳基和杂芳基可选地用R3和R4取代基取代；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一实施方式中，
R1是可选地用R3和R4取代基取代的杂芳基；以及
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
该式(I)的化合物的一种实施方式，其中该化合物选自式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)或式(XI)：
或其一种形式。
在该式(II)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w3、w4和w5独立地是C-Ra或N。
在该式(II)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w3、w4和w5独立地是C-Ra或N。
在该式(III)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w4和w5独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(III)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w4和w5独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(IV)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w3和w5独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(IV)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w3和w5独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(V)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w3和w4独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(V)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w3和w4独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(VI)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w3和w4是C-Ra或N。
在该式(VI)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w3和w4是C-Ra或N。
在该式(VII)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w4是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(VII)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w4是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(VIII)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w3是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(VIII)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w3是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(IX)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w4是C-Ra或N。
在该式(IX)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w4是C-Ra或N。
在该式(X)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w3是C-Ra或N。
在该式(X)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w3是C-Ra或N。
在该式(XI)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w1是C-Rb或N。
在该式(XI)的化合物的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w1是C-Rb或N。
在该式(I)的化合物的另一实施方式中，其中该化合物选自式(II)或式(III)：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(II)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(III)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(IV)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(V)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(VI)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(VII)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(VIII)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(IX)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(X)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是式(XI)的化合物：
或其一种形式。
该式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)或式(XI)的化合物的一种实施方式是分别选自式(IIa)、式(IIIa)、式(IVa)、式(Va)、式(VIa)、式(VIIa)、式(VIIIa)、式(IXa)、式(Xa)或式(XIa)的化合物：
或其一种形式。
在该式(IIa)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(IIIa)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(IVa)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(Va)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(VIa)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(VIIa)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(VIIIa)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(IXa)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(Xa)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(XIa)的化合物的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
该式(II)或式(III)的化合物的一种实施方式是分别选自式(IIa)或式(IIIa)的化合物：
或其一种形式。
该式(II)的化合物的一种实施方式是式(IIa)的化合物：
或其一种形式。
该式(III)的化合物的一种实施方式是式(IIIa)的化合物：
或其一种形式。
该式(IV)的化合物的一种实施方式是式(IVa)的化合物：
或其一种形式。
该式(V)的化合物的一种实施方式是式(Va)的化合物：
或其一种形式。
该式(VI)的化合物的一种实施方式是式(VIa)的化合物：
或其一种形式。
该式(VII)的化合物的一种实施方式是式(VIIa)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIII)的化合物的一种实施方式是式(VIIIa)的化合物：
或其一种形式。
该式(IX)的化合物的一种实施方式是式(IXa)的化合物：
或其一种形式。
该式(X)的化合物的一种实施方式是式(Xa)的化合物：
或其一种形式。
该式(XI)的化合物的一种实施方式是式(XIa)的化合物：
或其一种形式。
该式(IIa)的化合物的一种实施方式是式(IIa1)或式(IIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(IIIa)的化合物的一种实施方式是式(IIIa1)或式(IIIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(IVa)的化合物的一种实施方式是式(IVa1)或式(IVa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(Va)的化合物的一种实施方式是式(Va1)或式(Va2)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIa)的化合物的一种实施方式是式(VIa1)或式(VIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIIa)的化合物的一种实施方式是式(VIIa1)或式(VIIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIIIa)的化合物的一种实施方式是式(VIIIa1)或式(VIIIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(IXa)的化合物的一种实施方式是式(IXa1)或式(IXa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(Xa)的化合物的一种实施方式是式(Xa1)或式(Xa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(XIa)的化合物的一种实施方式是式(XIa1)或式(XIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(IIa)的化合物的一种实施方式是式(IIa1)的化合物：
或其一种形式。
该式(IIa)的化合物的一种实施方式是式(IIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(IIIa)的化合物的一种实施方式是式(IIIa1)的化合物：
或其一种形式。
该式(IIIa)的化合物的一种实施方式是式(IIIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(IVa)的化合物的一种实施方式是式(IVa1)的化合物：
或其一种形式。
该式(IVa)的化合物的一种实施方式是式(IVa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(Va)的化合物的一种实施方式是式(Va1)的化合物：
或其一种形式。
该式(Va)的化合物的一种实施方式是式(Va2)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIa)的化合物的一种实施方式是式(VIa1)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIa)的化合物的一种实施方式是式(VIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIIa)的化合物的一种实施方式是式(VIIa1)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIIa)的化合物的一种实施方式是式(VIIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIIIa)的化合物的一种实施方式是式(VIIIa1)的化合物：
或其一种形式。
该式(VIIIa)的化合物的一种实施方式是式(VIIIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(IXa)的化合物的一种实施方式是式(IXa1)的化合物：
或其一种形式。
该式(IXa)的化合物的一种实施方式是式(IXa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(Xa)的化合物的一种实施方式是式(Xa1)的化合物：
或其一种形式。
该式(Xa)的化合物的一种实施方式是式(Xa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(XIa)的化合物的一种实施方式是式(XIa1)的化合物：
或其一种形式。
该式(XIa)的化合物的一种实施方式是式(XIa2)的化合物：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的一种实施方式是选自如下的化合物：
或其一种形式。
术语
上文和此处整个说明书中所用的化学术语，除非另行特别定义，否则应被本领域普通技术人员理解为具有以下指示的含义。
如本文中所用，术语“C1-8烷基”一般地指具有直链或支链构型的一到八个碳原子的饱和烃基，包括但不限于甲基、乙基、正丙基(也被称为丙基或丙烷基)、异丙基、正丁基(也被称为丁基或丁烷基)、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基(也被称为戊基或戊烷基)、正己基(也被称为己基或己烷基)、正庚基(也被称为庚基或庚烷基)、正辛基等等。在一些实施方式中，C1-8烷基包括但不限于C1-6烷基、C1-4烷基等等。C1-8烷基在可用化合价允许的情况下，可选地用本文所述的取代基种类取代。
如本文中所用，术语“C2-8烯基”一般地指具有直链或支链构型的两到八个碳原子和在其中的一个或多个碳碳双键的部分不饱和的烃基，包括但不限于乙川(也被称为乙烯基)、烯丙基、丙烯基等等。在一些实施方式中，C2-8烯基包括但不限于C2-6烯基、C2-4烯基等等。C2-8烯基在可用化合价允许的情况下，可选地用本文所述的取代基种类取代。
如本文中所用，术语“C2-8炔基”一般地指具有直链或支链构型的两到八个碳原子和在其中的一个或多个碳碳三键的部分不饱和的烃基，包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基等等。在一些实施方式中，C2-8炔基包括但不限于C2-6炔基、C2-4炔基等等。C2-8炔基在可用化合价允许的情况下，可选地用本文所述的取代基种类取代。
如本文中所用，术语“C1-8烷氧基”一般地指具有直链或支链构型的一到八个碳原子，式为-O-C1-8烷基的饱和烃基，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等等。在一些实施方式中，C1-8烷氧基包括但不限于C1-6烷 氧基、C1-4烷氧基等等。C1-8烷氧基在可用化合价允许的情况下，可选地用本文所述的取代基种类取代。
如本文中所用，术语“C3-14环烷基”一般地指饱和或部分不饱和的单环、双环或多环烃基，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、1H-茚满基、茚基、四氢-萘基等等。在一些实施方式中，C3-14环烷基包括但不限于C3-8环烷基、C5-8环烷基、C3-10环烷基等等。C3-14环烷基在可用化合价允许的情况下，可选地用本文所述的取代基种类取代。
如本文中所用，术语“芳基”一般地指单环、双环或多环芳族碳原子环结构基，包括但不限于苯基、萘基、蒽基、芴基、薁基、菲基等等。芳基在可用化合价允许的情况下，可选地用本文所述的取代基种类取代。
如本文中所用，术语“杂芳基”一般地指单环、双环或多环芳族碳原子环结构基，其中在结构稳定性允许的情况下，一个或多个碳原子环元已被一个或多个杂原子(例如O、S或N原子)取代，所述芳族碳原子环结构基包括但不限于呋喃基、噻吩基(也被称为硫代苯基)、吡咯基、2H-吡咯基、3H-吡咯基、吡唑基、1H-吡唑基、咪唑基、1H-咪唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、1,3-噻唑基、噻唑基(例如1H-1,2,3-噻唑基以及诸如此类)、噁二唑基(例如1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基以及诸如此类)、噻二唑基、四唑基(例如1H-四唑基、2H-四唑基以及诸如此类)、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、吲哚基、1H-吲哚基、吲唑基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(也被称为苯并硫代苯基)、苯并咪唑基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基(也被称为1,3-苯并噁唑基)、嘌呤基、9H-嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉、喹喔啉基、1,3-二嗪基、1,2-二嗪基、1,2-二唑基、1,4-二氮杂萘基、吖啶基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、6H-噻吩并[2,3-b]吡咯基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、1H-吡咯并[3,2-b]吡啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-b]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶基等等。在可用化合价允许的情况下，在碳或氮原子环元上可选地用本文所述的取代基种类取代杂芳基。
如本文中所用，术语“杂环基”一般地指饱和或部分不饱和的单环、双环或多环碳原子环结构基，在结构稳定性允许的情况下，一个或多个碳原子 环元已被一种杂原子(例如O、S或N原子)取代，所述碳原子环结构基包括但不限于环氧乙烷基、环氧丙烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑烷基、异噻唑啉基、异噻唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、三唑啉基、三唑烷基、噁二唑啉基、噁二唑烷基、噻二唑啉基、噻二唑烷基、四唑啉基、四唑烷基、吡喃基、二氢-2H-吡喃基、硫代吡喃基、1,3-二噁烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯基(也被称为苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯基)、1,4-苯并二噁烷基、2,3-二氢-1,4-苯并二噁英基(也被称为2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英基)、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基、6,9-二氮杂螺[4.5]癸基等等。在可用化合价允许的情况下，在碳或氮原子环元上可选地用本文所述的取代基种类取代杂环基。
如本文中所用，术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-O-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-O-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基-O-C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-O-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基-O-C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-O-C1-8烷基)。
如本文中所用，术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-O-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-O-C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-O-C1-8烷基)。
如本文中所用，术语“C1-8烷氧基-羰基”指如下式的自由基：-C(O)-O-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“C1-8烷氧基-羰基-C2-8烯基”指如下式的自由基：-C2-8烯基-C(O)-O-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“C1-8烷氧基-羰基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C(O)-O-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“(C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“C1-8烷基-氨基-C2-8烯基”指如下式的自由基：-C2-8烯基-NH-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基”指如下式的自由基：-C2-8烯基-N(C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-NH-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-NH-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-N(C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基-NH-C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基”指如下式的自由基：-N[C1-8烷基-N(C1-8烷基)2]2。
如本文中所用，术语“(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-NH-C1-8烷基)。
如本文中所用，术语“[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)[C1-8烷基-N(C1-8烷基)2]。
如本文中所用，术语“C1-8烷基-氨基-C2-8炔基”指如下式的自由基：-C2-8炔基-NH-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基”指如下式的自由基：-C2-8炔基-N(C1-8烷基)2。
如本文中所用，术语“C1-8烷基-羰基”指如下式的自由基：-C(O)-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“C1-8烷基-羰基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C(O)-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“C1-8烷基-硫代”指如下式的自由基：-S-C1-8烷基。
如本文中所用，术语“氨基-C2-8烯基”指如下式的自由基：-C2-8烯基-NH2。
如本文中所用，术语“氨基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-NH2。
如本文中所用，术语“氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-NH2。
如本文中所用，术语“氨基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-NH2。
如本文中所用，术语“(氨基-C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基-NH2)2。
如本文中所用，术语“(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-NH2)。
如本文中所用，术语“氨基-C2-8炔基”指如下式的自由基：-C2-8炔基-NH2。
如本文中所用，术语“芳基-C1-8烷氧基-羰基”指如下式的自由基：-C(O)-O-C1-8烷基-芳基。
如本文中所用，术语“芳基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-芳基。
如本文中所用，术语“芳基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-芳基。
如本文中所用，术语“(芳基-C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基-芳基)2。
如本文中所用，术语“(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-芳基)。
如本文中所用，术语“芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-芳基。
如本文中所用，术语“(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-芳基)2。
如本文中所用，术语“(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-芳基)。
如本文中所用，术语“芳基-氨基”指如下式的自由基：-NH-芳基。
如本文中所用，术语“芳基-氨基-羰基”指如下式的自由基：-C(O)-NH-芳基。
如本文中所用，术语“芳基-磺酰氧基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-O-SO2-芳基。
如本文中所用，术语“苯酰氧基-羰基”指如下式的自由基：-C(O)-O-CH2-苯基。
如本文中所用，术语“C3-14环烷基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-C3-14环烷基。
如本文中所用，术语“C3-14环烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C3-14环烷基。
如本文中所用，术语“C3-14环烷基-氧基”指如下式的自由基：-O-C3-14环烷基。
如本文中所用，术语“卤代”或“卤素”一般地指包括氟代、氯代、溴代和碘代的卤素原子自由基。
如本文中所用，术语“卤代-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-卤素，其中C1-8烷基在可用化合价允许的情况下被一个或多个卤素原子部分地或完全地用取代。
如本文中所用，术语“卤代-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-卤素，其中C1-8烷基在可用化合价允许的情况下被一个或多个卤素原子部分地或完全地取代。
如本文中所用，术语“卤代-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-卤素。
如本文中所用，术语“(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-卤素)。
如本文中所用，术语“(卤代-C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基-卤素)2。
如本文中所用，术语“杂芳基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-杂芳基。
如本文中所用，术语“杂芳基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-杂芳基。
如本文中所用，术语“杂芳基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-杂芳基。
如本文中所用，术语“(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基-杂芳基)2。
如本文中所用，术语“(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂芳基)。
如本文中所用，术语“杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-杂芳基。
如本文中所用，术语“(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-杂芳基)2。
如本文中所用，术语“(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂芳基)。
如本文中所用，术语“杂芳基-氨基”指如下式的自由基：-NH-杂芳基。
如本文中所用，术语“杂环基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-杂环基。
如本文中所用，术语“杂环基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-杂环基。
如本文中所用，术语“杂环基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-杂环基。
如本文中所用，术语“(杂环基-C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基-杂环基)2。
如本文中所用，术语“(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂环基)。
如本文中所用，术语“杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-杂环基。
如本文中所用，术语“(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-杂环基)2。
如本文中所用，术语“(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂环基)。
如本文中所用，术语“杂环基-氨基”指如下式的自由基：-NH-杂环基。
如本文中所用，术语“(杂环基)(C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)(杂环基)。
如本文中所用，术语“杂环基-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-NH-杂环基。
如本文中所用，术语“杂环基-羰基”指如下式的自由基：-C(O)-杂环基。
如本文中所用，术语“杂环基-羰基-氧基”指如下式的自由基：-O-C(O)-杂环基。
如本文中所用，术语“杂环基-氧基”指如下式的自由基：-O-杂环基。
如本文中所用，术语“羟基”指如下式的自由基：-OH。
如本文中所用，术语“羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-O-C1-8烷基-OH。
如本文中所用，术语“羟基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-OH，其中C1-8烷基在可用化合价允许的情况下被一个或多个羟基自由基部分地或完全地取代。
如本文中所用，术语“羟基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-OH。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基-OH)2。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)。
如本文中所用，术语“羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指如下式的自由基：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)。
如本文中所用，术语“羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基”指如下式的自由基：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)。
如本文中所用，术语“羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH)2。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH)。
如本文中所用，术语“[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)[C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2]。
如本文中所用，术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基”指如下式的自由基：-NH-C1-8烷基-N(C1-8烷基,C1-8烷基-OH)。
如本文中所用，术语“[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基”指如下式的自由基：-N(C1-8烷基)[C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)]。
如本文中所用，术语“取代基”是指核心分子的原子上，附着在指定的原子位置，取代该指定的原子上的一个或多个氢原子的位置变量，前提是连接的原子不超过可用化合价或共享化合价，以便该取代产生稳定的化合物。因此，只有当取代基和/或变量的组合产生稳定的化合物时，这样的组合才是被允许的。还应当注意的是，具有如本文所述或所示，看起来不令人满意的化合价水平的任何碳以及杂原子被假定具有足够数量的氢原子，以满足所述或所示的化合价。
为了本说明书的目的，其中式(I)的化合物的一个或多个取代基变量包括掺入式(I)的化合物的官能度，出现在所披露的化合物中的任何位置上的每个官能度可以独立地被选定，以及适当的时候，独立地和/或可选地被取代。
如本文中所用，术语“独立地被选定”或“每个被选定”是指取代基列表中可被不止一次连接在核心分子结构上的功能性变量，其中每次出现的取代图案独立于任何其他事件的图案。另外，将核心结构上的一般取代基用于本文提供的化合物被理解为包括用特定属类包含在内的特定取代基取代该一般取代基，例如，芳基可以独立地被苯基或萘基等等取代，以便所得到的化合物意在被包括在本文所述的化合物的范围之内。
如本文中所用，当用于短语(例如“......芳基、芳基-C1-8烷基、杂环基和杂环基-C1-8烷基，其中芳基和杂环基的每种情况可选地用一种或两种取代基取代...”)时，术语“的每种情况”意在包括该芳基和杂环基环的每个上以及芳基-C1-8烷基和杂环基-C1-8烷基的芳基和杂环基部分上可选的、独立的取代。
如本文中所用，术语“可选地被取代的”是指指定的取代基变量、基团、自由基或部分代表属的范围并且可以根据需要，独立地被选定以取代核心分子的指定连接原子上的一个或多个氢原子。
如本文中所用，术语“稳定的化合物”或“稳定的结构”是指具有足够的稳固性，以从反应混合物及其制剂中以有用的纯度被分离出并被加入有效治疗剂的化合物。
使用由ACD Labs提供的ACD Labs Index Name软件和/或 提供的ChemDraw Ultra软件获得本文提供的化合物名称。当本文公开的化合物名称与所描绘的结构相冲突时，示出的结构将替代名称而被用于定义目标化合物。本文所定义的取代基的命名可以与其衍生来的化学名称略有不同；本领域的技术人员将认识到，该取代基的定义意在包括在化学名称中找到的自由基。
术语“SMN”除非本文另有规定，否则便指人SMN1基因、DNA或RNA；和/或人SMN2基因、DNA或RNA。在具体的实施方式中，术语“SMN1”指人SMN1基因、DNA或RNA。在另一具体的实施方式中，术语“SMN2”指人SMN2基因、DNA或RNA。
人SMN1和SMN2基因的核酸序列为本领域所知。对于人SMN1的核酸序列，见，如GenBank登录号DQ894095、NM—000344、NM—022874和BC062723。对于人SMN2核酸序列，见，如NM—022875、NM—022876、NM—022877、NM—017411、DQ894734(Life Technologies、Inc.(之前是Invitrogen)，加利福尼亚卡尔斯巴德)、BC000908、BC070242、CR595484、CR598529、CR609539、U21914和BC015308。
SMN1基因可以发现于人染色体5从大约70,220,768核苷酸至大约70,249,769核苷酸的正链上。人染色体5上SMN1外显子6、7和8以及内含子6和7的大致位置如下：
70,241,893至70,242,003外显子6；
70,242,004至70,247,767内含子6；
70,247,768至70,247,821外显子7；
70,247,822至70,248,265内含子7；以及，
70,248,266至70,248,839外显子8。
SMN2基因可以发现于人染色体5从大约69,345,350核苷酸至大约69,374,349核苷酸的正链上。
人染色体5上SMN2外显子6、7和8以及内含子6和7的大致位置如下：
69,366,468至69,366,578外显子6；
69,366,579至69,372,347内含子6；
69,372,348至69,372,401外显子7；
69,372,402至69,372,845内含子7；以及，
69,372,846至69,373,419外显子8。
在具体的实施方式中，以上列举的SMN1外显子6、7和8以及内含子6和7的核苷酸序列被用于本文所述的SMN1小基因核酸构建体中。在其他具体的实施方式中，本文提供的实施例中SMN2外显子6、7和8以及内含子6和7的核苷酸序列被用于本文所述的SMN2小基因核酸构建体中。
术语“Smn”或“Smn蛋白质”，除非本文另有规定，否则便指包含由SMN1基因和/或SMN2基因的外显子1到7编码的氨基酸残基的人Smn蛋白质。在具体的实施方式中，通过本领域技术人员已知的方法评价，该Smn蛋白质在活体外和/或活体内具有稳定性和功能性。在另一具体的实施方式中，该Smn蛋白质是由人SMN1基因和/或SMN2基因编码的全长蛋白质。在另一具体的实施方式中，该Smn蛋白质具有以GenBank登录号NP_000335、AAC50473.1、AAA66242.1或NP_059107发现的氨基酸序列。
如本文中所用，术语“增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入”和类似的术语，除非本文另有规定，否则便指通过本领域技术人员已知的方法评价，在活体外和/或活体内转录自SMN2基因的成熟mRNA对SMN2外显子7的完整、完好、非截断序列的纳入(即，导致全长SMN2mRNA的产生)，以便通过本领域技术人员已知的方法评价，在活体外和/或活体内从SMN2基因产生增加水平的Smn蛋白质；或者，以便通过本领域技术人员已知的方法评价，在活体外和/或活体内从SMN2基因产生表达增加的具有稳定性和功能性的Smn蛋白质；或者，以便通过本领域技术人员已知的方法评价，在活体外和/或活体内由该小基因编码的融合蛋白质的表达增加；或者，以便有这类需要的对象(如SMA动物模型或人类对象或SMA患者)体内产自SMN2基因的Smn蛋白质的表达增加。
如本文中所用，术语“增强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入”和类似的术语，除非本文另有规定，否则便指通过本领域技术人员已知的方法评价，在活体外和/或活体内转录自SMN1基因的成熟mRNA对SMN1外显子7的完整、完好、非截断序列的纳入(即，导致全 长SMN1mRNA的产生)，以便通过本领域技术人员已知的方法评价，在活体外和/或活体内从SMN1基因产生增加水平的Smn蛋白质；或者，以便通过本领域技术人员已知的方法评价，在活体外和/或活体内从SMN1基因产生表达增加的具有稳定性和功能性的Smn蛋白质；或者，以便通过本领域技术人员已知的方法评价，在活体外和/或活体内由该小基因编码的融合蛋白质的表达增加；或者，以便有这类需要的对象(如SMA动物模型或人类对象)体内产自SMN1基因的Smn蛋白质的表达增加。
如本文中所用，在mRNA的量的情况下，术语“实质性变化”指mRNA的量不发生统计显著量(如小于选自0.1、0.05、0.01、0.005、0.001、0.0005、0.0001、0.00005或0.00001的值的p值)的变化。
如本文中所用，术语“对象”和“患者”可互换使用以指感觉和自主运动的能力以及其存在需要氧气和有机食物的动物或任何活的有机体。非限制性的例子包括人、马、猪、牛、家鼠、鼠、犬和猫科动物的成员。在一些实施方式中，该对象是哺乳动物或温血的脊椎动物。在某些实施方式中，该对象是非人类动物。在具体的实施方式中，该对象是人类。在一个具体的实施方式中，该对象是SMA患者。
如本文中所用，术语“老年人”指65岁或以上的人类。
如本文中所用，术语“成年人”指18岁或以上的人类。
如本文中所用，术语“儿童”指1岁到18岁的人类。
如本文中所用，术语“婴儿”指新生儿至1岁的人类。
如本文中所用，术语“幼童”指1岁至3岁的人类。
化合物形式
如本文中所用，术语“式(II)的化合物”、“式(IIa)的化合物”、“式(IIa1)的化合物”、“式(IIa2)的化合物”、“式(III)的化合物”、“式(IIIa)的化合物”、“式(IIIa1)的化合物”、“式(IIIa2)的化合物”、“式(IV)的化合物”、“式(IVa)的化合物”、“式(IVa1)的化合物”、“式(IVa2)的化合物”、“式(V)的化合物”、“式(Va)的化合物”、“式(Va1)的化合物”、“式(Va2)的化合物”、“式(VI)的化合物”、“式(VIa)的化合物”、“式(VIa1)的化合物”、“式(VIa2)的化合物”、“式(VII)的化合物”、“式(VIIa)的化合物”、“式(VIIa1)的化合物”、“式(VIIa2)的化合物”、“式(VIII)的化合物”、“式(VIIIa)的化合物”、“式(VIIIa1)的化合物”、“式(VIIIa2)的化合物”、“式(IX)的化合物”、“式(IXa)的化合物”、“式(IXa1)的化合物”、“式(IXa2)的化合物”、“式(X)的化合物”、“式(Xa)的化合物”、“式(Xa1)的化合物”、“式(Xa2)的化合物”、“式(XI)的化合物”、“式(XIa)的化合物”、“式(XIa1)的化合物”和“式(XIa2)的化合物”每个指式(I)的化合物的亚属或其一种形式。
没有重复式(I)的化合物的各种亚属的实施方式，在某些实施方式中，术语“式(I)的化合物或其一种形式”被用于以包含在内的方式指，单独地或一起地，式(II)的化合物或其一种形式、式(IIa)的化合物或其一种形式、式(IIa1)的化合物或其一种形式、式(IIa2)的化合物或其一种形式、式(III)的化合物或其一种形式、式(IIIa)的化合物或其一种形式、式(IIIa1)的化合物或其一种形式、式(IIIa2)的化合物或其一种形式、式(IV)的化合物或其一种形式、式(IVa)的化合物或其一种形式、式(IVa1)的化合物或其一种形式、式(IVa2)的化合物或其一种形式、式(V)的化合物或其一种形式、式(Va)的化合物或其一种形式、式(Va1)的化合物或其一种形式、式(Va2)的化合物或其一种形式、式(VI)的化合物或其一种形式、式(VIa)的化合物或其一种形式、式(VIa1)的化合物或其一种形式、式(VIa2)的化合物或其一种形式、式(VII)的化合物或其一种形式、式(VIIa)的化合物或其一种形式、式(VIIa1)的化合物或其一种形式、式(VIIa2)的化合物或其一种形式、式(VIII)的化合物或其一种形式、式(VIIIa)的化合物或其一种形式、式(VIIIa1)的化合物或其一种形式、式(VIIIa2)的化合物或其一种形式、式(IX)的化合物或其一种形式、式(IXa)的化合物或其一种形式、式(IXa1)的化合物或其一种形式、式(IXa2)的化合物或其一种形式、式(X)的化合物或其一种形式、式(Xa)的化合物或其一种形式、式(Xa1)的化合物或其一种形式、式(Xa2)的化合物或其一种形式、式(XI)的化合物或其一种形式、式(XIa)的化合物或其一种形式、式(XIa1)的化合物或其一种形式或式(XIa2)的化合物或其一种形式。
因此，“式(I)的化合物”的实施方式和对其的提及意在包括式(II)、式(IIa)、式(IIa1)、式(IIa2)、式(III)、式(IIIa)、式(IIIa1)、式(IIIa2)、式(IV)、式(IVa)、式(IVa1)、式(IVa2)、式(V)、式(Va)、式(Va1)、式(Va2)、式(VI)、式(VIa)、式(VIa1)、式(VIa2)、式(VII)、式(VIIa)、式(VIIa1)、式(VIIa2)、式(VIII)、式(VIIIa)、式(VIIIa1)、式(VIIIa2)、式(IX)、式(IXa)、式(IXa1)、式(IXa2)、式(X)、式(Xa)、式(Xa1)、式(Xa2)、式(XI)、式(XIa)、式(XIa1)和式(XIa2)的化合物。
如本文中所用，术语“形式”指选自其游离酸、游离碱、盐、isotopologue(同位素物)、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体的式(I)的化合物。
在本文所述的某些实施方式中，该式(I)的化合物的形式选自其盐、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体。
在本文所述的某些实施方式中，该式(I)的化合物的形式选自其游离酸、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体。
在本文所述的某些实施方式中，该式(I)的化合物的形式选自其游离碱、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体。
在本文所述的某些实施方式中，该式(I)的化合物的形式是其游离酸、游离碱或盐。
在本文所述的某些实施方式中，该式(I)的化合物的形式是其同位素物。
在本文所述的某些实施方式中，该式(I)的化合物的形式是其立体异构体、外消旋体、对映异构体或非对映体。
在本文所述的某些实施方式中，该式(I)的化合物的形式是其互变异构体。
在本文所述的某些实施方式中，该式(I)的化合物的形式是药学上可接受的形式。
在本文所述的某些实施方式中，该式(I)的化合物或其一种形式分离使用。
如本文中所用，术语“分离”指根据本文所述的或技术人员所熟知的一种或多种分离或纯化工艺(例如，色谱法、重结晶等)，以可通过本文所述的或技术人员所熟知的标准分析技术被表征的足够纯度，从合成工艺(例如，从反应混合物)或天然来源或其组合中被分离和/或纯化后的式(I)的化合物或其一种形式的物理状态。
如本文中所用，术语“保护”指当式(I)的化合物进行反应时，该化合物上官能团的形式被修饰以防止受保护位点的不希望的副反应。合适的保护基团将由本领域的普通技术人员以及通过参考标准教科书(例如，T.W.Greene等人,Protective Groups in OrganicSynthesis(1991),Wiley,纽约)来确认。
本文还考虑了式(I)的化合物或其一种形式的前药。
如本文中所用，术语“前药”指式(I)的化合物上官能团的形式(例如，作为一种活性或无活性的药物前体)在活体内经转化以收获有活性或更多活性的式(I)的化合物或其一种形式。该转化可通过各种机制(如通过代谢和/或不可代谢的化学过程)，例如(作为举例)，通过在血液、肝脏和/或其它器官和组织中水解和/或代谢发生。关于前药用途的讨论由V.J..Stella,等人,“Biotechnology:Pharmaceutical Aspects,Prodrugs:Challengesand Rewards,”American Association of Pharmaceutical Scientists and SpringerPress,2007提供。
在一个实施例中，当式(I)的化合物或其一种形式包含羧酸官能团时，前药可包括通过用官能团(如烷基等)置换酸基的氢原子而形成的酯。在另一个实施例中，当式(I)的化合物或其一种形式包含醇官能团时，前药可 以通过用官能团(如烷基或被取代的羰基等)置换醇基的氢原子而形成。在另一个实施例中，当式(I)的化合物或其一种形式包含胺官能团时，前药可以通过用官能团(如烷基或被取代的羰基等)置换一个或多个胺氢原子而形成。在另一个实施例中，式(I)的化合物或其一种形式包含氢取代基时，前药可以通过用烷基取代基置换一个或多个氢原子而形成。
式(I)的化合物或其一种形式的药学上可接受的前药包括那些用一种或多种如下基团所取代的化合物：羧酸酯；磺酸酯；氨基酸酯；膦酸酯；单、二或三磷酸酯或在适当情况下，烷基取代基。如本文中所描述的，本领域的普通技术人员理解的是，这类取代基的一种或多种可以被用来提供用作前药的式(I)的化合物或其一种形式。
式(I)的化合物可以形成意图被包括在本说明书范围之内的盐。本文提及式(I)的化合物，除非另有说明，否则被理解为包括对其盐的提及。如本文中所采用，术语“盐”指与无机和/或有机酸形成的酸式盐，以及与无机和/或有机碱形成的碱式盐。此外，当式(I)的化合物同时包含碱性部分(例如，但不限于吡啶或咪唑)和酸性部分(例如，但不限于羧酸)时，两性离子(“内盐”)可以形成并被包括在如本文中所用的术语“盐”中。
如本文中所用，术语“药学上可接受的盐”指本文所述的化合物的安全有效(即，无毒、生理学上可接受的)以用于哺乳动物并且具有生物活性的那些盐，虽然其它盐也是有用的。式(I)的化合物的盐可以通过，例如，式(I)的化合物与一定量(如等效或化学计量的量)的酸或碱在一种介质，例如在其中有盐沉淀的一种介质或在水性介质中反应，继之以冻干而形成。
药学上可接受的盐包括存在于本文所述的化合物中的酸性或碱性基团的一种或多种盐。酸加成盐的实施方式包括，但不限于，乙酸盐、二乙酸盐、酸式磷酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、氯化物、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、龙胆酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、三盐酸盐、氢碘酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐、丙酸盐、糖质酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、三氟代醋酸盐等等。酸加成盐的一种或多种实施方式包括氯化物，氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、三盐酸盐、乙酸盐、二乙酸盐、三氟乙酸盐、三氟代醋酸盐等等。更具体的实施方案包括氯化物、氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、三氟乙酸盐、三氟代醋酸盐等等。
此外，在例如，P.Stahl等人,Camille G.(编辑)Handbook of PharmaceuticalSalts.Properties,Selection and Use.(2002)Zurich:Wiley-VCH；S.Berge等人,Journalof Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould,International J.ofPharmaceutics(1986)33,201-217；Anderson等人,The Practice of MedicinalChemistry(1996),Academic Press,New York；以及在The Orange Book(见，华盛顿特区食品与药品管理局的网站)中对通常被认为适合于从碱性药用化合物形成药学上有用的盐的酸进行了讨论。这些披露以引用方式被并入本文。
适宜的碱式盐包括，但不限于，铝盐、铵盐、钙盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐，锌盐和二乙醇胺盐。本文所述的某些化合物也可以与有机碱(例如有机胺)(例如，但不限于，二环己胺，叔丁基胺等)并与各种氨基酸(例如，但不限于，精氨酸、赖氨酸等等)形成药学上可接受的盐。碱性含氮基团可以用试剂(例如低级烷基卤化物(如甲基、乙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二丁酯)、长链卤化物(如癸基、月桂基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(如苯甲基和苯乙基溴化物)及其它)季化(quarternized)。
所有此类酸式盐和碱式盐意欲成为本说明书范围内的药学上可接受的盐以及，用于本文描述的目的，所有这类酸式和碱式盐被认为等同于相应化合物的游离形式。
式I的化合物及其一种形式可进一步以互变异构形式存在。所有这类互变异构形式作为本说明书的一部分被考虑进本文。
式(I)的化合物可含有不对称或手性中心，并因此，可以以不同的立体异构形式存在。本说明书意在包括该式(I)的化合物的所有立体异构形式及其混合物(包括外消旋混合物)。
本文所述的该式(I)的化合物可包括一个或多个手性中心，并因此可以作为外消旋混合物(R/S)或作为基本上纯的对映异构体和非对映体而存在。该化合物也可以作为基本上纯的(R)或(S)对映异构体存在(当存在一个手性中心时)。在一个实施方式中，本文所述的该式(I)的化合物是(S)异构体以及可以作为基本上仅包括该(S)异构体的对映体纯的组合物而存在。在另一实施方式中，本文所述的该式(I)的化合物是(R)异构体以及可以作为基本上仅包括该(R)异构体的对映体纯的组合物而存在。如本领域技术人员将认识到的，当存在多于一个的手性中心时，本文所述的该式(I)的化合物也可以包括，如IUPAC命名法推荐所定义的，描述为(R,R)、(R,S)、(S,R)或(S,S)异构体的部分。
如本文中所用，术语“基本上纯的”指化合物基本上由单一异构体组成，该单一异构体占有大于或等于90％的量、大于或等于92％的量、大于或等于95％的量、大于或等于98％的量、大于或等于99％的量或等于100％的量。
在一个方面，式(I)的化合物以大于或等于90％的量、大于或等于92％的量、大于或等于95％的量、大于或等于98％的量、大于或等于99％的量或等于100％的量存在的基本上纯的(S)对映异构体。
在一个方面，式(I)的化合物是以大于或等于90％的量、大于或等于92％的量、大于或等于95％的量、大于或等于98％的量、大于或等于99％的量或等于100％的量存在的基本上纯的(R)对映异构体。
如本文中所用，“外消旋体”是并非“对映异构体纯的”异构形式的任何混合物，包括例如，但不限于约50/50、约60/40、约70/30、约80/20、约85/15或约90/10比例的混合物。
此外，本说明书包括所有几何和位置异构体。例如，如果式(I)的化合物包含双键或稠环，则顺式和反式形式以及混合物被包含在本说明书的范围内。
非对映体的混合物可以通过本领域技术人员熟知的方法，例如(作为举例)通过色谱法和/或分级结晶法，基于其物理化学差异被分离成其个体非对映体。对映异构体可以通过使用手性HPLC柱或本领域技术人员已知的其他色谱方法进行分离。
对映异构体还可以通过以下方式进行分离：通过与适当的光学活性化合物(例如，手性助剂，如手性醇或Mosher酸氯化物)反应将对映异构体混合物转化成非对映体混合物；分离非对映体并将个体的非对映体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体。此外，式(I)的化合物的某些可以是阻转异构体(例如被取代的联芳基)并且被认为是本说明书的一部分。
本发明化合物(包括其盐、溶剂化物、酯和前药以及经转化的前药)可能由于各种取代基上的不对称碳而存在的所有立体异构体形式(例如，几何异构体、光学异构体、位置异构体等等)，包括对映异构形式(其甚至可以在没有不对称碳的情况下存在)、旋转异构形式、阻转异构体、非对映异构形式和区域异构体形式都被考虑进本文说明书的范围内。例如，如果式(I)的化合物包含双键或稠环，则顺式和反式形式及其混合物都被包含在本文说明书的范围内。此外，例如，该化合物的所有酮-烯醇和亚胺-烯胺互变异构形式都包括在本文说明书中。本文所述的该式(I)的化合物的个体立体异构体可以，如上文所述，例如基本上不含其它异构体或可存在于外消旋混合物中。
术语“盐”、“前药”和“经转化的前药”的使用意在同样地适用于本发明化合物的所有预期同位素物、立体异构体、外消旋体或互变异构体的盐、前药和经转化的前药。
术语“同位素物”指要不是一个或多个原子被原子质量或质量数不同于通常在自然界中发现的原子质量或质量数的原子取代这样一个事实，则与本文所述的相同的同位素富集的化合物。可以掺入本文所述的化合物的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别如H2、H3、C13、C14、N15、O18、O17、P31、P32、S35、F18、Cl35和Cl36，其中每个也在本说明书的范围之内。
本文所述的某些同位素富集的化合物(例如，那些用H3和C14标记的化合物)可用于化合物和/或底物组织分布测定中。氚化(即H3)和碳-14(即C14)同位素因其易于制备和检测是特别优选的。此外，用较重的同位素(例如氘)的取代(即“氘富集”)可以提供由更大的代谢稳定性所带来的某些治疗优点(例如，活体内半衰期增加或剂量需求降低)，因此在某些情况下可以是优选的。同位素富集的式(I)的化合物通常可以使用本领域中普通技术人员已知的操作，通过由适当的同位素富集的试剂取代非同位素富集的试剂来制备。
当化合物用氘富集时，分子的氘化原子上的氘-氢比基本上超过了天然存在的氘-氢比。
本文所述的实施方式可包括该式(I)的化合物的同位素物形式，其中用一个或多个氘原子代替一个或多个氢原子在该式(I)的化合物的一个或多个原子成员上取代该同位素物。
本文所述的实施方式可包括式(I)的化合物及其形式，其中碳原子可以有可选地被氘取代的1到3个氢原子。
本文所述的一种或多种化合物可以未溶剂化的以及与药学上可接受的溶剂(如水、乙醇等)形成的溶剂化的形式而存在，以及本文的说明书旨在包含溶剂化的和未溶剂化的形式。
如本文所用，术语“溶剂化物”指本文所述的化合物与一种或多种溶剂分子的物理缔合。此物理缔合涉及不同程度的离子和共价结合，包括氢键合。在某些情况中，溶剂化物能够分离，例如当一种或多种溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。如本文所用，“溶剂化物”包括溶液相和可分离的溶剂化物。合适的溶剂化物的非限制性例子包括乙醇化物、甲醇化物等。
本文所述的一种或多种化合物可以可选地被转化成溶剂化物。溶剂化物的制备通常是已知的。一种典型的、非限制性方法涉及于高于环境温度的温度下在所需量的所需溶剂(有机或水或其混合物)中溶解化合物，并 以足以形成晶体的比率冷却溶液，然后通过标准方法分离该晶体。分析技术，例如(作为举例)红外光谱，表明作为溶剂化物(或水合物)的晶体中溶剂(或水)的存在。
如本文所用，术语“水合物”指其中溶剂分子是水的溶剂化物。
该式(I)的化合物的多晶型晶体和无定形形式以及该式(I)的化合物的盐、溶剂化物、酯和前药的多晶型晶体和无定形形式进一步地意在被包括在本文所述的化合物的范围内。
化合物用途
本文中描述了增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式。使用本文所述的检测已经显示，这类式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入(见下文生物实施例部分)。因此，式(I)的化合物或其一种形式可用作转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的增强子。
本文中描述了增强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式。使用，例如SMN1小基因检测，这类式(I)的化合物或其一种形式可以增强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。因此，式(I)的化合物或其一种形式可用作转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入的增强子。
在一个方面，本文提供了用于调节转录自SMN2基因的RNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中，本文提供了用于调节转录自SMN2基因的RNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触，该式(I)的化合物或其一种形式调节本文或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的SMN2小基因的表达。在一个实施方式中，该小基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小基因。在另一实施方式中，该小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。该人细胞可以在活体外和/或活体内，如在非人类动物或在人类体内，与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中，该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方式中，该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内。在另一具体的实施方式中，该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内，其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在另一实施方式中，该人细胞是来自人SMA患者的人细胞。在某些实施方式中，该人细胞来自细胞系，例如GM03813、GM00232、GM09677和/或 GM23240(可从Coriell Institute处获得)。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在具体的实施方式中，本文提供了一种用于增强转录自SMN2基因的RNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触。在另一实施方式中，本文提供了一种用于增强转录自SMN2基因的RNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触，该式(I)的化合物或其一种形式增强本文或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的SMN2小基因的表达。在一个实施方式中，该小基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小基因。在另一实施方式中，该小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。该人细胞可以在活体外和/或活体内，如在非人类动物或在人类体内，与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中，该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方式中，该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内。在另一具体的实施方式中，该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内，其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在另一实施方式中，该人细胞是来自人SMA患者的人细胞。在某些实施方式中，该人细胞来自细胞系，例如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(可从CoriellInstitute处获得)。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一个方面，本文提供了用于增强转录自SMN1基因的RNA对SMN1外显子7的纳入的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中，本文提供了用于增强转录自SMN1基因的RNA对SMN1外显子7的纳入的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触。在另一具体的实施方式中，本文提供了用于增强转录自SMN1基因的RNA对SMN1外显子7的纳入的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触，该式(I)的化合物或其一种形式调节国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中的SMN1小基因的表达。在一个实施方式中，该小基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小基因。该人细胞可以在活体外和/或活体内，如在非人类动物或在人类体内，与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中，该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方 式中，该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在具体的实施方式中，本文提供了用于增强转录自SMN1和SMN2基因的RNA对SMN1和SMN2的外显子7的纳入的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触。该人细胞可以在活体外和/或活体内，如在非人类动物或在人类体内，与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中，该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方式中，该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一个方面，本文提供了一种用于调节转录自SMN2基因的RNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，本文提供了一种用于调节转录自SMN2基因的RNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式，该式(I)的化合物或其一种形式调节本文或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的SMN2小基因的表达。在一个实施方式中，该小基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小基因。在另一实施方式中，该小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。在具体的实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在具体的实施方式中，本文提供了一种用于增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式。在另一具体的实施方式中，本文提供了一种用于增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式，该式(I)的化合物或其一种形式增强本文或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的SMN2小基因的表达。在一个实施方式中，该小基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小基因。在另一实施方式中，该小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。在具体的实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一个方面，本文提供了一种用于增强转录自SMN1基因的RNA对SMN1外显子7的纳入的方法，其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，本文提供了一种用于增强转录自SMN1基因的RNA对SMN1外显子7的纳入的方法，其包括向SMA 的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式，该式(I)的化合物或其一种形式调节本文或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的SMN1小基因的表达。在一个实施方式中，该小基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小基因。在具体的实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在具体的实施方式中，本文提供了一种用于增强转录自SMN1和SMN2基因的RNA对SMN1和SMN2的外显子7的纳入的方法，其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一方面，本文提供一种增加Smn蛋白质量的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中，本文提供一种增加Smn蛋白质量的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物接触，该式(I)的化合物增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。在另一具体的实施方式中，本文提供一种增加Smn蛋白质量的方法，其包括使人细胞与式(I)的化合物接触，该式(I)的化合物增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。该人细胞可以在活体外和/或活体内，如在非人类动物或在人类体内，与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中，该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方式中，该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内。在另一具体的实施方式中，该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内，其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在另一实施方式中，该人细胞是来自人SMA患者的人细胞。在某些实施方式中，该人细胞来自细胞系，例如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(可从Coriell Institute处获得)。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一方面，本文提供一种增加Smn蛋白质量的方法，其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，本文提供一种增加Smn蛋白质量的方法，其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物，例如下文生物实施例部分所述，如在基于细胞的或者不含细胞的测试中，该式(I)的化合物增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。在另一具体的实施方式中，本文提供一种增加Smn蛋白质量的方法，其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物，如在基于细胞的或者不含细胞的测试中，该式(I)的化合物增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。
在一个实施方式中，该式(I)的化合物增强本文或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的小基因的表达。在具体的实施方式中，该式(I)的化合物增强国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的实施例中所述的小基因的表达。在另一具体的实施方式中，该式(I)的化合物增强下文生物实施例1中所述的小基因的表达。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在一个实施方式中，本文提供式(I)的化合物或其一种形式用于制备增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的药剂的用途。在另一实施方式中，本文提供式(I)的化合物或其一种形式用于制备增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入，从而增加有这类需要的人类对象体内的Smn蛋白质的表达的药剂的用途。在特定的实施方式中，在本文所述的检测中，该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入(见，如下文的生物实施例)。在具体的实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在一个实施方式中，本文提供式(I)的化合物或其一种形式用于制备增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入的药剂的用途。在另一实施方式中，本文提供式(I)的化合物或其一种形式用于制备增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入，从而增加有这类需要的人类对象体内的Smn蛋白质的表达的药剂的用途。在具体的实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一方面，本文提供了用于增强有这类需要的人类对象体内转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括向该人类对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，本文提供了一种用于增强有这类需要的人类对象体内转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的方法，其包括向该人类对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式，如本文所述的检测中所测定的，该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入(见，如下文生物实施例)。在具体的实施方式中，该有效量的式(I)的化合物或其一种形式含于包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中，被施用至该人类对象。在特定的实施方式中，在本文所述的检测中，该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入(见，如下文生物实施例)。在具体的实施方式中，该人类对象是人SMA患者。在另一具体的实施方式中，该人类 对象是人SMA患者，其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一方面，本文提供了用于增强有这类需要的人类对象体内转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入的方法，其包括向该人类对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，在国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833中所述的检测中，该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。在具体的实施方式中，该有效量的式(I)的化合物或其一种形式含于包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中，被施用至该人类对象。在具体的实施方式中，该人类对象是人SMA患者。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一方面，本文提供了一种用于增强有这类需要的人类对象体内转录自SMN1和SMN2基因的mRNA对SMN1和SMN2外显子7的纳入的方法，其包括向该人类对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，在国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中，该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入(见，例如这些公开文本中的实施例)。在具体的实施方式中，该有效量的式(I)的化合物或其一种形式含于包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中，被施用至该人类对象。在具体的实施方式中，该人类对象是人SMA患者。在另一具体的实施方式中，该人类对象是人SMA患者，其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一方面，本文提供了用于增强有这类需要的人类对象体内Smn蛋白质表达的方法，其包括向该人类对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，本文提供了一种用于增强有这类需要的人类对象体内Smn蛋白质表达的方法，其包括向该人类对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式，该式(I)的化合物或其一种形式增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。在另一具体的实施方式中，本文提供了一种用于增强有这类需要的人类对象体内Smn蛋白质表达的方法，其包括向该人类对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式，该式(I)的化合物或其一种形式增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。在具体的实施方式中，该有效量的式(I)的化 合物或其一种形式含于包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中，被施用至该人类对象。在具体的实施方式中，在本文(见，如下文生物实施例)或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(见，例如这些公开文本中的实施例；其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中，该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。
在具体的实施方式中，该人类对象是人SMA患者。在另一具体的实施方式中，该人类对象是人SMA患者，其中SMA是两个染色体上SMN1基因的端粒拷贝中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一实施方式中，本文提供式(I)的化合物或其一种形式用于制备增强有这类需要的人类对象体内的Smn蛋白质的表达的药剂的用途。在特定的方式中，如本文所述的检测中所测定的，该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入(见，如下文生物实施例)。在另一实施方式中，如本文(见，如下文生物实施例)或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(见，例如这些公开文本中的实施例；其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中所测定的，该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。在具体的实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一方面，本文提供了用于治疗脊髓性肌萎缩(SMA)的方法，其包括向对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，本文提供一种用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的方法，其包括向该对象施用有效量的式(I)的化合物或其一种形式。在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的方法，其包括向该对象施用一种药物组合物，该药物组合物包括有效量的式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。在一个实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一实施方式中，本文提供一种用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的方法，其包括向该对象施用有效量的增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，本文提供一种用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的方法，其包括向该对象施用一种药物组合物，该药物组合物包括有效量的增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。在另一具体的实 施方式中，本文提供一种用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的方法，其包括向该对象施用一种药物组合物，该药物组合物包括有效量的增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。在特定的实施方式中，在本文所述的检测中，该式(I)的化合物或其一种形式增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入(见，如下文的生物实施例)。在另一实施方式中，如本文(见，如下文的生物实施例)或者国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(见，例如这些公开文本中的实施例；其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中所测定的，该式(I)的化合物或其一种形式增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。在具体的实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在另一实施方式中，本文提供式(I)的化合物或其一种形式在用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的药剂的制造中的用途。在特定的实施方式中，在本文所述的检测中，该式(I)的化合物或其一种形式增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入(见，如下文的生物实施例)。在另一实施方式中，如本文(见，如下文的生物实施例)或者国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(见，例如这些公开文本中的实施例；其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中所测定的，该式(I)的化合物或其一种形式增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。在具体的实施方式中，该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
在本文提供的用途或方法的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式与一种或多种附加的试剂组合使用。在一种或多种附加的试剂被施用至对象或与细胞接触之前、同时或随后，一种或多种式(I)的化合物或其一种形式可以被施用至该对象或与该细胞接触。一种或多种式(I)的化合物或其一种形式和一种或多种附加的试剂可以含于单一组合物或不同的组合物中，被施用至对象或与细胞接触。在具体的实施方式中，一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与SMN1的基因置换(使用，如病毒递送载体)组合使用。在另一具体的实施方式中，一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与利用差异化SMN1+/+和/或SMN2+/+细胞的细胞置换组合使用。在另一具体的实施方式中，一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与利用差异化SMN1+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一具体的实施方式中，一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与利用差异化SMN2+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一具体的实施方式中，一种或多种式(I)的化合物或其一种形 式与阿克拉霉素A组合使用。在另一具体的实施方式中，一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与转录活化剂，例如组蛋白质脱乙酰基酶(“HDAC”)抑制剂(如丁酸盐、丙戊酸和羟基脲)；和mRNA稳定剂(来自Repligen的mRNA脱帽抑制剂RG3039)。
在一个实施方式中，本文提供式(I)的化合物或其一种形式结合支持疗法，包括呼吸、营养或康复护理的用途。
在某些实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA具有治疗效果和/或有益效果。在具体的实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生一个、两个或更多如下效果：(i)降低或缓解SMA的严重度；(ii)延迟SMA的发作；(iii)抑制SMA的进展；(iv)减少对象的住院治疗；(v)减少对象的住院时间；(vi)增加对象的存活率；(vii)提高对象的生活质量；(viii)降低与SMA相关的症状数；(ix)降低或缓解与SMA相关的一种或多种症状的严重度；(x)减少与SMA相关的症状的持续时间；(xi)防止与SMA相关的症状的复发；(xii)抑制SMA的症状的进展或发作；和/或(xiii)抑制与SMA相关的症状的进展。
SMA的症状包括肌肉无力、肌肉张力差、哭声弱、咳嗽无力、松弛或下垂倾向、吸吮或吞咽困难、呼吸困难、肺部或咽喉分泌物的堆积、握紧拳头时手部出汗、舌部颤动/颤抖、头经常向一侧倾斜(即使是躺着的时候)、双腿往往弱于手臂、腿部经常呈现“青蛙腿”的姿势、喂养困难、呼吸道感染几率增加、肠道/膀胱无力、低于正常体重、没有支撑不能坐立、不能走、不能爬以及肌张力低下、反射消失以及与前角细胞缺失相关的多种先天性挛缩(关节挛缩)。
在具体的实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生一个、两个或更多如下效果：(i)减少肌肉力量的损失；(ii)提高肌肉力量；(iii)减少肌肉萎缩；(iv)减少运动功能的损失；(v)增加运动神经元；(vii)减少运动神经元的损失；(viii)保护缺乏SMN的运动神经元免于退行性变；(ix)增加运动功能；(x)增加肺功能；和/或(xi)减少肺功能损失。
在另一实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿或幼童坐立的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童或成年人独立站立的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童 或成年人独立行走的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童或成年人独立跑动的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童或成年人独立呼吸的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童或成年人睡眠中独立翻身的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中，用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童或成年人独立吞咽的机能能力或有助于保持这种机能能力。
在某些实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12；以及SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹，以测定式(I)的化合物或其一种形式是否增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。在某些实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12；以及SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹；或如下文所述的药物或检测试剂盒，以监测患者对式(I)的化合物或其一种形式的应答。
在一个实施方式中，如本文所述使用式(I)的化合物：
或其一种形式，其中：
w1是C-Rb或N；
w2和w6独立地是C-R1或C-R2；
w3、w4和w5独立地是C-Ra或N；
其中w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，
当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1；以及，
其中w1、w3、w4和w5的一个、两个或三个独立地是N；
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；
其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况可选地用一种、两种或三种R3取代基以及可选地，用一种附加的R4取代基取代；或者，
其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况可选地用一种、两种、三种或四种R3取代基取代；
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况可选地用一种、两种或三种R6取代基以及可选地，用一种附加的R7取代基取代；
在每种情况下，Ra独立地选自氢、卤素或C1-8烷基；
Rb是氢、卤素、C1-8烷基或C1-8烷氧基；
在每种情况下，R3独立地选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基；
R4是C3-14环烷基、C3-14环烷基-C1-8烷基、C3-14环烷基-氨基、芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基、芳基-磺酰氧基-C1-8烷基、杂环基或杂环基-C1-8烷基；其中，C3-14环烷基、芳基和杂环基的每种情况可选地用一种、两种或三种R5取代基取代；
在每种情况下，R5独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；
在每种情况下，R6独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、C2-8烯基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；以及，
R7是C3-14环烷基、C3-14环烷基-氧基、芳基、杂环基或杂芳基。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式，其中该化合物选自式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)或式(XI)：
或其一种形式。
在该式(II)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w3、w4和w5独立地是C-Ra或N。
在该式(II)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w3、w4和w5独立地是C-Ra或N。
在该式(III)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w4和w5独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(III)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w4和w5独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(IV)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w3和w5独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(IV)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w3和w5独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(V)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w3和w4独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(V)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w3和w4独立地是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(VI)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w3和w4是C-Ra或N。
在该式(VI)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w3和w4是C-Ra或N。
在该式(VII)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w4是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(VII)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w4是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(VIII)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2，w3是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(VIII)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1，w3是C-Ra或N以及w1是C-Rb或N。
在该式(IX)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w4是C-Ra或N。
在该式(IX)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w4是C-Ra或N。
在该式(X)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w3是C-Ra或N。
在该式(X)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w3是C-Ra或N。
在该式(XI)的化合物的用途的一种实施方式中，w2是C-R1，w6是C-R2以及w1是C-Rb或N。
在该式(XI)的化合物的用途的另一实施方式中，w2是C-R2，w6是C-R1以及w1是C-Rb或N。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是选自式(II)或式(III)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(II)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(III)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(IV)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(V)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(VI)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(VII)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIII)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(IX)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(X)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(I)的化合物的用途的一种实施方式是式(XI)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)或式(XI)的化合物的用途的一种实施方式是分别选自式(IIa)、式(IIIa)、式(IVa)、式(Va)、式(VIa)、式(VIIa)、式(VIIIa)、式(IXa)、式(Xa)式(XIa)的化合物的用途：
或其一种形式。
在该式(IIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(IVa)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(Va)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(VIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(VIIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(VIIIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(Xa)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
在该式(XIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w2和w6的一个是C-R1以及另一个是C-R2，前提是，当w2是C-R1时，则w6是C-R2；或者，当w2是C-R2时，则w6是C-R1。
该式(II)或式(III)的化合物的用途的一种实施方式是分别选自式(IIa)或式(IIIa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(II)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(III)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIIa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IV)的化合物的用途的一种实施方式是式(IVa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(V)的化合物的用途的一种实施方式是式(Va)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VI)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VII)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIII)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIIa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IX)的化合物的用途的一种实施方式是式(IXa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(X)的化合物的用途的一种实施方式是式(Xa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(XI)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIa)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIa1)或式(IIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIIa1)或式(IIIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IVa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IVa1)或式(IVa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(Va)的化合物的用途的一种实施方式是式(Va1)或式(Va2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIa1)或式(VIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIa1)或式(VIIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIIa1)或式(VIIIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IXa1)或式(IXa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(Xa)的化合物的用途的一种实施方式是式(Xa1)或式(Xa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(XIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIa1)或式(XIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
或其一种形式。
该式(IIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIa1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIIa1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IVa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IVa1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IVa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IVa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(Va)的化合物的用途的一种实施方式是式(Va1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(Va)的化合物的用途的一种实施方式是式(Va2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIa1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIa1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIIa1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(VIIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IXa1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IXa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(Xa)的化合物的用途的一种实施方式是式(Xa1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(Xa)的化合物的用途的一种实施方式是式(Xa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(XIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIa1)的化合物的用途：
或其一种形式。
该式(XIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIa2)的化合物的用途：
或其一种形式。
患者群
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至罹患SMA的对象。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式被施用至易感染或易患SMA的对象。在具体的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有SMA的人类对象，其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在某些实施方式中，在施用式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物之前对该人类对象进行基因分型以测定该对象是否具有两个染色体中的SMN1基因的端粒拷贝中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失。在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有0型SMA的对象。在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有1型SMA的对象。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有2型SMA的对象。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有3型SMA的对象。在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有4型SMA的对象。在某些实施方式中，该人类对象是SMA患者。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至对象，该对象会或可能得益于转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的增强的纳入。在具体的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至对象，该对象会或可以得益于增强的Smn蛋白质表达。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至年龄范围如下的人类：从约0月至约6月龄；从约6至约12月龄；从约6至约18月龄；从约18至约36月龄；从约1至约5岁；从约5至约10岁；从约10至约15岁；从约15至约20岁；从约20至约25岁；从约25至约30岁；从约30至约35岁；从约35至约40岁；从约40至约45岁；从约45至约50岁；从约50至约55岁；从约55至约60岁；从约60至约65岁；从约65至约70岁；从约70至约75岁；从约75至约80岁；从约80至约85岁；从约85至约90岁；从约90至约95岁或从约95至约100岁。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至婴儿。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至幼童。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或 其药物组合物被施用至儿童。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至成年人。在仍然其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至老年人。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。在其他的实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。在其他的实施方式中，预防有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。在其他的实施方式中，治疗有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至SMA患者以治疗或缓解SMA。在其他的实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至SMA患者以治疗或缓解SMA。在其他的实施方式中，预防有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至SMA患者以预防SMA的进展。在其他的实施方式中，治疗有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至SMA患者以治疗或缓解SMA。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至罹患SMA的对象。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式被施用至易感染或易患SMA的对象。在具体的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有SMA的人类对象，其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在某些实施方式中，在施用式(I)的化合物或其一种形式或其药剂之前对该人类对象进行基因分型以测定该对象是否具有两个染色体中的SMN1基因的端粒拷贝中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失。在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有0型SMA的对象。在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有1型SMA的对象。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有2型SMA的对象。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有3型SMA的对象。在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有4型SMA的对象。在某些实施方式中，该人类对象是SMA患者。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至对象，该对象会或可能得益于转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对 SMN1和/或SMN2外显子7的增强的纳入。在具体的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至对象，该对象会或可以得益于增强的Smn蛋白质表达。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至年龄范围如下的人类：从约0月至约6月龄；从约6至约12月龄；从约6至约18月龄；从约18至约36月龄；从约1至约5岁；从约5至约10岁；从约10至约15岁；从约15至约20岁；从约20至约25岁；从约25至约30岁；从约30至约35岁；从约35至约40岁；从约40至约45岁；从约45至约50岁；从约50至约55岁；从约55至约60岁；从约60至约65岁；从约65至约70岁；从约70至约75岁；从约75至约80岁；从约80至约85岁；从约85至约90岁；从约90至约95岁或从约95至约100岁。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至婴儿。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至幼童。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至儿童。在其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至成年人。在仍然其他的实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至老年人。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。在其他的实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。在其他的实施方式中，预防有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。在其他的实施方式中，治疗有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至SMA患者以治疗或缓解SMA。在其他的实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至SMA患者以治疗或缓解SMA。在其他的实施方式中，预防有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至SMA患者以预防SMA的进展。在其他的实施方式中，治疗有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至SMA患者以治疗或缓解SMA。
给药方式
当施用至患者时，式(I)的化合物或其一种形式优选地作为组合物的组分给药，该组合物可选地包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。该组合物可经口或通过任何其它方便的途径，例如通过输注或弹丸注射，通 过粘膜上皮或粘膜皮肤(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜)给药，并且可以与另一种生物活性剂一起给药。给药可以是全身或局部的。各种递送系统是已知的，例如，包封在脂质体、微粒、微胶囊、胶囊剂内，并且可以用于施用该化合物。
给药方法包括但不限于肠胃外、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、经口、舌下、鼻内、脑内、阴道内、透皮、直肠、通过吸入或局部地，特别是对耳朵、鼻子、眼睛或皮肤，给药。给药方式具体由医师决定。在大多数情况下，给药将使化合物释放到血流中。在具体的实施方式中，化合物是经口给药。
剂量和剂型
将在SMA的治疗中有效的式(I)的化合物或其一种形式的量取决于，例如，给药途径、SMA的类型、对象、对象的一般健康状况、对象的种族、年龄、体重和性别、饮食、时间和SMA的严重程度，并且应该根据医师的判断和每位患者或对象的情况来决定。
在具体的实施方式中，在施用式(I)的化合物或其一种形式或其组合物或药剂的情况下，“有效量”、“预防有效量”或“治疗有效量”指具有治疗效果和/或有益效果的式(I)的化合物的量。在某些具体的实施方式中，在施用式(I)的化合物或其一种形式或其组合物或药剂的情况下，“有效量”、“预防有效量”或“治疗有效量”指产生一个、两个或更多如下效果：(i)降低或缓解SMA的严重度；(ii)延迟SMA的发作；(iii)抑制SMA的进展；(iv)减少对象的住院治疗；(v)减少对象的住院时间；(vi)增加对象的存活率；(vii)提高对象的生活质量；(viii)降低与SMA相关的症状数；(ix)降低或缓解与SMA相关的一种或多种症状的严重度；(x)减少与SMA相关的症状的持续时间；(xi)防止与SMA相关的症状的复发；(xii)抑制SMA的症状的进展或发作；和/或(xiii)抑制与SMA相关的症状的进展。在某些实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其一种形式是有效地增强转录自SMN2基因的SMN2mRNA对SMN2外显子7的纳入以及提高产自SMN2基因的Smn蛋白质的水平并因此在有这类需要的对象体内产生所需的有益效果的量。在一些情况下，该所需的效果可以通过如下分析或量化来测定：(1)转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入；或(2)产自SMN2基因的Smn蛋白质的水平。式(I)的化合物或其一种形式的有效量的非限制性例子如本文所述。
例如，该有效量可以是治疗有这类需要的人类对象体内的SMA所需的量；或增强有这类需要的人类对象体内转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入所需的量；或增加有这类需要的人类对象体内产自SMN2 基因的Smn蛋白质的水平所需的量。在具体的实施方式中，该人类对象是SMA患者。
一般说来，对于体重范围在约1kg至约200kg之间的患者或对象来说，该有效量的范围将是从约0.001mg/kg/日到约500mg/kg/日。典型的成年对象的中位数体重范围预计在约70到约100kg之间。
在本说明书的范围内，在药剂的制造、药物试剂盒的制备或在一种用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的方法中使用的式(I)的化合物或其一种形式的“有效量”意在包括从约0.001mg到约35,000mg范围的量。在具体的实施方式中，该人类对象是SMA患者。
本文所述的组合物被配制用于经由本领域中已知的任何药物递送途径被施用至对象。非限制性例子包括经口、眼、直肠、口腔、局部、鼻、眼、皮下、肌内、静脉内(丸剂和输注)、脑内、经皮和肺部给药途径。
药物组合物
本文所述的实施方式包括含于药物组合物的式(I)的化合物或其一种形式的用途。在具体的实施方式中，本文描述了含于药物组合物的式(I)的化合物或其一种形式用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的用途，其包括施用有效量的混合有药学上可接受的赋形剂的式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中，该人类对象是SMA患者。
式(I)的化合物或其一种形式可以可选地是一种组合物的形式，该组合物包括该化合物或其一种形式以及可选的载体、赋形剂或稀释剂。本文提供的其他的实施方式包括包含有效量的式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。在具体的实施方式中，该药物组合物适于兽用和/或人类给药。本文提供的该药物组合物可以是允许该组合物被施用至对象的任何形式。
在具体的实施方式中以及在这种情况下，术语“药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂”指经联邦的管理机构或州政府批准的或列在美国药典或其他公认的药典中用于动物，以及更具体地，用于人类的载体、赋形剂或稀释剂。术语“载体”指与治疗剂一起给药的稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全和不完全))、赋形剂或溶媒。此类药物载体可以是无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等等。水是用于静脉内给药的药物组合物的特定载体。盐水溶液和葡萄糖水溶液以及甘油溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。
典型的组合物和剂型包含一种或多种赋形剂。合适的赋形剂为药学领域的技术人员所熟知，以及合适的赋形剂的非限制性例子包括淀粉、葡萄 糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等等。一种特定的赋形剂是否适于掺入药物组合物或剂型取决于本领域熟知的多种因素，包括但不限于，该剂型施用至患者的方式和该剂型中的特定活性成分。本文进一步提供了如本文所述，包含一种或多种式(I)化合物或其一种形式的无水药物组合物和剂型。该组合物和单一单位剂型可以采取溶液剂或糖浆(可选地具有调味剂)、混悬液(可选地具有调味剂)、乳剂、片剂(例如，咀嚼片)、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂(可选地用于复溶)、掩味或缓释制剂等等的形式。
本文提供的适合于口服的药物组合物可以呈现离散的剂型，例如，但不限于，片剂、小胶囊、胶囊剂、颗粒剂、粉剂和液体。这样的剂型包含预定量的活性成分，并且可以通过本领域技术人员熟知的药学方法来制备。
可以被用于本文提供的口服剂型中的赋形剂的例子包括但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。
生物标记
在某些实施方式中，转录自SMN1基因和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量被用作SMA生物标记。在某些实施方式中，转录自SMN1基因和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量被用作SMA生物标记。在其他的实施方式中，转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量被用作正用例如本文披露的化合物进行治疗的SMA患者的生物标记。在其他的实施方式中，转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量被用作正用例如本文披露的化合物进行治疗的SMA患者的生物标记。在一些实施方式中，转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的变化以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的相应变化是正用例如本文披露的化合物进行治疗的患者的生物标记。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，在施用化合物(如本文披露的式(I)的化合物)之后，转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的相应增加表明该化合物可以有效地治疗SMA。在另一具体的实施方式中，在施用化合物(如本文披露的式(I)的化合物)之后，转录自SMN2基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的减少以及转录自SMN2基因以及不包括SMN2外显子7的mRNA的量的 相应增加表明该化合物不能有效地治疗SMA。根据这些实施方式，下文所述的一种或多种SMN引物和/或一种SMN探针可以被用于检测，例如PCR(如qPCR)和RT-PCR(如RT-qPCR或终点RT-PCR)以评价和/或量化转录自SMN1基因和/或SMN2基因以及包括或不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。
在一个实施方式中，本文提供了用于扩增编码人SMN1和/或SMN2或由其编码的核酸的SMN引物和/或SMN探针(如具有SEQ ID NO.1、7、8、11或13的核苷酸序列的正向引物；和/或具有SEQ ID NO.9或12的核苷酸序列的反向引物该；和/或SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)。这些引物可以作为引物，被用于，如RT-PCR(例如本文所述的或本领域技术人员已知的RT-PCR、终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增；以及作为探针，被用于杂化检测，例如Northern印迹和/或Southern印迹检测。如本文中生物实施例中所用，终点RT-PCR是一种逆转录-聚合酶链式反应，该反应按一定数目的扩增循环进行(或直至起始原料耗尽)，然后使用，例如凝胶电泳分离、用荧光染料染色、荧光定量等等对每个DNA产物进行定量。
SEQ ID NO.1与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸22至40的核苷酸的DNA或RNA杂交，SEQ ID NO.2与包括对应于萤火虫萤光素酶编码序列的核苷酸4至26的核苷酸的DNA或RNA杂交；SEQ ID NO.7与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸32至54和SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至4的核苷酸的核酸序列(如DNA的有意义链)杂交，SEQ ID NO.8与包括依次对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸87至111和SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至3的核苷酸的核酸序列(如DNA的有意义链)杂交，SEQ ID NO.9与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸39至62的核苷酸的核酸序列(如DNA或RNA的反意义链)杂交，SEQ ID NO.11与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子6的核苷酸43至63的核苷酸的核酸序列(如DNA的有意义链)杂交，SEQ ID NO.12与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸51至73的核苷酸的核酸序列(如DNA或RNA的反意义链)杂交，以及SEQID NO.13与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子6的核苷酸22至46的核苷酸的核酸序列(如DNA的有意义链)杂交。
因此，对应于SEQ ID NO.9、11、12和/或13的低聚核苷酸可以被用于扩增反应以扩增编码缺乏人SMN1和/或SMN2外显子7的人SMN1和/或SMN2或由其编码的核酸以及编码包括人SMN1和/或SMN2外显子7的人SMN1和/或SMN2或由其编码的核酸。相反，结合下游反向引物(如 SEQ ID NO.9或12)、对应于SEQ ID NO.8的低聚核苷酸可被用来扩增编码缺乏人SMN1和/或SMN2外显子7的人SMN1和/或SMN2或由其编码的核酸以及结合下游反向引物(如SEQID NO.9或12)、对应于SEQ ID NO.1和7的低聚核苷酸可被用来扩增编码包括SMN1和/或SMN2外显子7的人SMN1和/或SMN2或由其编码的核酸。
SEQ ID NO.3与包括依次对应于人SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸50至54和人SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至21的核苷酸的核酸序列(如DNA的有意义链)杂交，以及SEQ ID NO.10与包括对应于人SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸7至36的核苷酸的核酸序列(如DNA的有意义链)杂交。SEQ ID NO.3可作为探针，被用以如本文中所述或在国际公开号WO 2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述，检测转录自小基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA，以及用以检测转录自人SMN1和/或SMN2以及包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA。此外，SEQ ID NO.10可作为探针，被用以如本文中所述或在国际公开号WO 2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述，检测转录自小基因以及包括或不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及用以检测转录自人SMN1和/或SMN2的mRNA。
在具体的实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12；和/或SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增以及，如适用，Northern印迹或Southern印迹(如下文生物实施例中所述的检测)，以测定化合物(如式(I)的化合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2的外显子7的纳入。
在另一实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、11或13和/或SEQ ID NO.9或12；和/或SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增以及，如适用，Northern印迹或Southern印迹(如下文生物实施例中所述的检测)，以监测患者样本内转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在另一实施方式中，下文生物实施例中所述的引物和/或探针(例如SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、11或13和/或SEQ ID NO.9或12；和/或 SMN探针，例如SEQ ID NO.3或10)被用于检测，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增以及，如适用，Northern印迹或Southern印迹(如下文生物实施例中所述的检测)，以监测患者对化合物(如式(I)的化合物或其一种形式)的响应。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
可以使用本领域技术人员已知的技术从患者中获得样本(如血样、PBMC样本或组织样本，例如皮肤或肌肉组织样本)以及可以将下文生物实施例中所述的引物和/或探针用于检测(如PCR、RT-PCR、RT-qPCR、qPCR、终点RT-PCR、滚环扩增、Northern印迹和Southern印迹)以测定转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA的量(如转录自SMN2基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量)。来源于患者的样本指从该患者中获得之后使用本领域技术人员已知的技术进行处理和/或处置的样本。例如，可以使用本领域技术人员已知的技术对来自患者的样本进行处理以，如提取RNA。可以对来自患者的样本进行处理以，如提取RNA以及对该RNA进行逆转录以产生cDNA。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)使患者样本(如血样或组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，该样本来自或来源于施用了化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于检测转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA的量的方法，其包括：(a)使患者样本(如血样或组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA的量。在某些实施方式中，该样本来自或来源于施用了化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
转录自人SMN1和SMN2基因以及包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量与转录自人SMN1和SMN2基因以及不包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量可以通过，如从包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA和从不包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA生成的RNA或DNA片段的大小而彼此区分。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)使患者样本(如血样或组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，该样本来自或来源于施用了化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)使患者样本(如血样或组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，该样本来自或来源于施用了化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于检测转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA的量的方法，其包括：(a)使患者样本(如血样或组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA的量。
转录自人SMN1和SMN2基因以及包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量与转录自人SMN1和SMN2基因以及不包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量可以通过，如从包括SMN1和SMN2的外显子7 的SMN1和SMN2mRNA和从不包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA生成的RNA或DNA片段的大小而彼此区分。在某些实施方式中，该样本来自或来源于施用了化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)使患者样本(如血样或组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)、滚环扩增或者Northern印迹或Southern印迹的组分接触；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，该样本来自或来源于施用了化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)使患者样本(如血样或组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或本文所述的SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，该样本来自或来源于施用了化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于检测转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA的量的方法，其包括：(a)使患者样本(如血样或组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或本文所述的SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增(如适用)的组分接触；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA的量。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
转录自人SMN1和SMN2基因以及包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量与转录自人SMN1和SMN2基因以及不包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量可以通过，如从包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA和从不包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA生成的RNA或DNA片段的大小而彼此区分。在某些实施方式中，该样本来自或来源于施用了化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)使患者样本(如血样或组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或本文所述的SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，该样本来自或来源于施用了化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中，该患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的化合物)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的 mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合 物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在 某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1) 该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该 患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和 /或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患 者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相 对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括 SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或PCR(如qPCR)的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或 SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于评价SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该SMN1和/或患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前，来自该患 者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应性的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物 或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应性的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I) 的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应性的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应性的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应性的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反 向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应性的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或 SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应性的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/ 或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应性的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量，其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的 减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化 合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA 的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于 SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施 方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8 小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)使SMA患者样本(如血样或组织样本)或来源于SMA患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触，其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者；以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实 质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在另一具体的实施方式中，本文提供一种用于监测SMA患者对化合物的响应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)使从该患者中获得的或来源于该患者的样本(如血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于，如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触；以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1 和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少，表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值；以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前，来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化，表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，该患者的响应在施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中，在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
在具体的实施方式中，患者体内的SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。
试剂盒
在一个方面，本文提供了包括含于一个或多个容器的本文所述的SMN引物或探针以及使用说明书的药物或检测试剂盒。在一个实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的一种或多种SMN反向引物(如SEQ ID NO.2、9和/或12)和/或一种或多种SMN正向引物(SEQ ID NO.1、7、8、11和/或13)以及使用说明书。在另一实施方式中，药物或检测试剂盒包括 含于一个容器的一种SMN反向引物(如SEQ ID NO.2、9或12)、一种SMN正向引物(SEQID NO.1、7、8、11或13)以及使用说明书。
在一个实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于单独的容器，含于一个容器的一种SMN反向引物(如SEQ ID NO.2、9或12)、含于另一个容器的另一种SMN正向引物(如SEQ IDNO.1、7、8、11或13)以及使用说明书。
在某些实施方式中，PCR(如qPCR)、RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或滚环扩增所需的适用组分，例如聚合酶、脱氧核苷三磷酸等被包含在这类试剂盒中。在一些实施方式中，杂化所需的组分被包含在这类试剂盒中。包含这类引物的药物或检测试剂盒可以被用于PCR和RT-PCR以，例如：(i)评价治疗剂(如式(I)的化合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2的外显子7的纳入；(ii)监测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量；和/或(iii)监测对象对治疗剂(如式(I)的化合物或其一种形式)的响应。在其他的实施方式中，该对象是人类对象。在其他的实施方式中，该人类对象是人类患者。在某些其他的实施方式中，该人类患者是人类SMA患者。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.1的序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.2的序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由人SMN1小基因或人SMN2小基因编码的核苷酸序列，例如于本文或于国际公开号WO 2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的那些。在其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.7的核苷酸序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.9的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.8的核苷酸序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.9的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.7的核苷酸序列的正向引物、含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.8的核苷酸序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.9的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.11的核苷酸序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.12的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.11的核苷酸序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.9的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.13的核苷酸序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.12的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在 其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.13的核苷酸序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.9的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.1的核苷酸序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.9的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在具体的实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一种容器的具有发现于SEQ IDNO.1的核苷酸序列的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.12的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施方式中，这些引物作为探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。
在另一实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一个容器的本文所述的一种SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)。在其他的实施方式中，该探针被用于，例如杂化检测，如Southern印迹或Northern印迹。在具体的实施方式中，该探针被用于RT-qPCR或qPCR。在某些实施方式中，PCR(如qPCR)、RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或滚环扩增所需的组分，例如聚合酶、脱氧核苷三磷酸等被包含在这类试剂盒中。在一些实施方式中，杂化所需的组分被包含在这类试剂盒中。
在一个实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一个容器的一种SMN反向引物(如SEQ ID NO.2、9或12)、含于另一个容器的一种SMN正向引物(如SEQ ID NO.1、7、8、11或13)以及含于另一个容器的一种SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)以及使用说明书。在另一实施方式中，药物或检测试剂盒包括含于一个容器的一种或多种SMN反向引物(如SEQ ID NO.2、9和/或12)、含于另一个容器的一种或多种SMN正向引物(如SEQ ID NO.1、7、8、11和/或13)和含于另一个容器的一种或多种SMN探针(如SEQ ID NO.3和/或10)以及使用说明书。
在某些实施方式中，PCR、RT-PCR或滚环扩增所需的组分，例如聚合酶、脱氧核苷三磷酸等被包含在这类试剂盒中。包含这类探针和/或引物的药物或检测试剂盒可以被用于PCR和RT-PCR以，例如：(i)评价治疗剂(如式(I)的化合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2的外显子7的纳入；(ii)监测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量；和/或(iii)监测对象对治疗剂(如式(I)的化合物或其一种形式)的响应。在其他的实施方式中，该对象是人类对象。在其他的实施方式中，该人类对象是人类患者。在某些其他的实施方式中，该人类患者是人类SMA患者。
在另一方面，本文提供一种药物试剂盒，其包括含于一种容器的式(I)的化合物或其一种形式以及该化合物或其一种形式的使用说明书。在具体的实施方式中，本文提供一种药物试剂盒，其包括一种包含式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物以及使用说明书。在另一具体的实施方式中，本文提供一种药物试剂盒，其包括一种包含有效量的式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物和使用说明书。在一个实施方式中，该使用说明书对如下的一种、两种或更多种做出解释：针对对象的式(I)的化合物或其一种形式的给药剂量、给药途径、给药频率和给药的副作用。在其他的实施方式中，该对象是人类对象。在其他的实施方式中，该人类对象是人类患者。在某些其他的实施方式中，该人类患者是人类SMA患者。
一般的合成方法
如本文中所述，用于制备如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的一般方法可通过标准的公知的合成方法得到。许多起始原料可购得；或者，不可购得时，可以使用本领域技术人员已知的技术制备得到。本文所提供的合成方案包括多个反应步骤，其中的每一个步骤意欲独立以及可在有或没有任何前面或后面的步骤的情况下进行。换言之，本文所提供的合成方案的每个单独的反应步骤的效能被分开考虑。
方案A
本文所述的式(I)的化合物，其中R1是单环或双环杂环基环状系统，R2是可选地被取代的单环或双环杂环、芳基或杂芳基环状系统以及Ra是氢，如下文方案A中所述进行制备。
在有或没有可选的钯催化剂(例如PdCl2dppf以及诸如此类)的条件下，被取代的6-羟基吡啶化合物A1(其中X表示各种反应基团，该反应基团被用以使用本领域的普通技术人员已知的技术，使合适的起始原料与化合物A1或继而与化合物A3、化合物A4或化合物A6反应而提供多个R1官能团取代基)与化合物A2(其中L1是合适的亲核离去基团以及R1是包含至少一种胺基，例如，N-Boc-哌嗪或N-Boc-4-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-5,6-二氢吡啶的单或双环杂环环状系统)在合适的溶剂或溶剂混合物(例如n-BuOH、DMSO、NMP以及诸如此类或其混合物)中反应以提供化合物A3。
在MgCl2等等的存在下，化合物A3与多聚甲醛反应，以提供化合物A4。化合物A4可以在酸或弱碱(例如R2被取代的酯类或哌啶等等)的存在下，与R2-α-被取代的乙酸酯化合物A5(其中L2表示C1-2烷基离去基团)缩合，经历Knoevenagel缩合反应，以提供化合物A6。
在可选的催化剂的存在下，含于合适溶剂(例如THF等等)的乙酸酯化合物A7(例如乙酸叔丁酯等等)和碱(例如LHMDS等等)与化合物A8(其中L3表示用于偶合反应的离去基团或对应物，例如反应性亲核物质)反应，以提供化合物A5。
被取代的4-氯代-3-氧代丁酸酯化合物A9(其中L2表示C1-2烷基离去基团)与可选地被取代的单环杂环基或杂芳基环状系统化合物A10(其中术语“Het”指脒类部分，例如但不限于2-氨基吡啶、2-氨基嘧啶、4-氨基嘧 啶、2-氨基吡嗪、3-氨基哒嗪、2-氨基噻唑、4-氨基噻唑等等)反应以提供化合物A11，然后进一步用该化合物A11替代化合物A5与化合物A4反应。
方案B
本文所述的式(I)的化合物，其中R2是可选地被取代的单环或双环杂环、芳基或杂芳基环状系统以及Ra是氢，如下文方案B中所述进行制备。
烟酸化合物B1(其中其中X表示各种反应基团，该反应基团可以被用以使用本领域的普通技术人员已知的技术，使合适的起始原料与化合物B1或继而与化合物B2、化合物B3或化合物B4反应而提供多个R1官能团取代基)与试剂(例如，在一种实施方式式中甲醇钠，其中X是氯代)在合适的溶剂(例如甲醇等等)中反应以提供作为2-X-6-甲氧基和2-甲氧基-6-X结构异构体的混合物的化合物B2。然后通过还原试剂(例如乙硼烷等等)将化合物B2还原为相应的醛，接着用合适的氧化剂(例如MnO2或Dess-Martin高碘烷等等)进行氧化以提供作为结构异构体的混合物的化合物B3。用BBr3使化合物B3脱甲基以提供作为结构异构体的混合物的化合物B4。分离2-羟基-6-X化合物B4结构异构体以及根据方案A的程序进一步用其替代化合物A4。
方案C
本文所述的式(I)的化合物，其中R1是单环或双环杂环基环状系统，R2是可选地被取代的双环杂芳基环状系统以及Ra是氢，如下文方案C中所述进行制备。
化合物A4可以在酸或弱碱(例如乙酸或哌啶等等)的存在下，在合适的溶剂(例如乙腈、乙醇等等或其混合物)中与乙酰乙酸盐缩合，经历Knoevenagel缩合反应，以提供化合物C1。然后用适当的溴化试剂(例如Br2或NBS等等)溴化化合物C1以提供化合物C2，该化合物C2与化合物A10反应以提供化合物C3。
方案D
本文所述的式(I)的化合物，其中R1是单环或双环杂环基环状系统，R2是可选地被取代的单环或双环杂环、芳基或杂芳基环状系统以及Ra和Rb是氢，如下文方案D中所述进行制备。
用可选的钯催化剂，使被取代的4-羟基吡啶化合物D1(其中X表示各种反应基团，该反应基团被用以使用本领域的普通技术人员已知的技术，使合适的起始原料与化合物D1或继而与化合物D2、化合物D3或化合物D4反应而提供多个R1官能团取代基)与化合物A2在合适的溶剂中反应以提供化合物D2。使用方案A的程序使化合物D2与多聚甲醛反应以提供化合物D3。使用方案A的程序使化合物D3与化合物A5反应，经历Knoevenagel缩合反应，以提供化合物D4。
具体的合成实施例
为了更详细地描述并帮助理解，提供了以下非限制性实施例以更充分地说明本文所述的化合物的范围，并且不应被解释为对其范围的具体限制。将在本领域技术人员所确定的范围内的、现在已知的或以后开发的本文所述的化合物的这类变化都被认为落入本文所述的和下文要求保护的化合物的范围内。这些实施例说明某些化合物的制备方法。本领域的技术人员将理解的是，在这些实施例中描述的技术代表，如本领域普通技术人员所述，在合成实践中起良好作用，并因此构成其实践的优选方式的技术。然而，应当理解的是，本领域的技术人员应该根据本公开，认识到可以以具体方法做出许多被公开的以及仍然获得相同或类似结果的变更，而不背离本说明书的精神和范围。
除了在具体化合物的下列实施例中，除非有相反的指示，本说明书和权利要求书中所用的表示成分的数量、反应条件、实验数据等等的所有数字都应当被理解为通过术语“约”得以修改。因此，所有这些数字都表示近似值，其可以依据所需的特性而变化，所述特性试图通过反应或作为可变实验条件的结果而获得。因此，在实验的重复性的预期范围内，在所得到的数据的情况下，术语“约”指所提供的数据的范围，其可根据相对于平均值的标准偏差而变化。还有，对于所提供的实验结果，所得的数据可以被上舍入或下舍入以一致地呈现数据，而不损失显著数字。在最低限度下，并且不试图将等同原则申请限制在本权利要求的范围内，应当按照本领域技术人员所用的有效数字位数和舍入技术解释每个数值参数。
虽然陈述本说明书宽泛范围的数值范围和参数是近似值，对下文阐述的实施例中列出的数值则是尽可能精确地报道。然而，任何数值固有地包含一定的误差，该误差由其各自的测试测量中发现的标准偏差而必然地产生。
化合物实施例
如上文所使用的，并且在整个本说明书中，下面的缩写，除非另外说明，否则应理解为具有以下含义：
实施例1
Cpd 5的制备
第1部分：4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
步骤A：向含于n-BuOH(50mL)的2-氯代-6-羟基吡啶(12.3g，94mmol)添加哌嗪-1-羧酸叔丁酯(46.0g，235mmol)。于140℃将混合物加热3天。用乙酸乙酯(1.5L)萃取反应混合物，以及先用饱和的NH4Cl溶液、然后用盐水对其进行清洗。将有机层分离，于MgSO4之上干燥，并减压浓缩。所得固体通过CH3CN(100mL)溶解并通过添加水(1L)沉淀。将沉淀物滤出，用水和乙醚清洗。将滤出液的有机层分离并减压浓缩。通过柱色谱法(50％-100％EtOAc/己烷)将残余物纯化。获得作为白色固体的总共18.7g(71％)的4-(6-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 280.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)7.40(1H,m),6.04(1H,d,J＝8.8Hz),5.64(1H,d,J＝7.2Hz),3.62(4H,m),3.36(4H,m),1.51(9H,s)。
步骤B：向含于CH3CN(100mL)的4-(6-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8.4g，30mmol)和MgCl2(5.8g，60mmol)的混合物中添加三乙胺(25.2mL，150mmol)。在环境温度下将混合物搅拌10分钟之后，向混合物中添加多聚甲醛(9.0g，300mmol)。于60℃搅拌混合物18小时，然后冷却至室温。然后用EtOAc(500mL)稀释混合物并用1M Rochelle盐溶液(200mL)和饱和的NH4Cl溶液(200mL)清洗。减压浓缩有机层并柱色谱法(30％-50％EtOAc/己烷)纯化，以收获作为白色固体的3.6g(39％)4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 308.2[M+H]+； 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)12.35(1H,br),9.55(1H,s),7.66(1H,d,J＝8.51Hz),6.26(1H,d,J＝8.83Hz),3.79(4H,m),3.56(4H,m),1.51(9H,s)。
第2部分：2-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)乙酸叔丁酯的制备
向装有氮气导入管、500mL加料漏斗和隔膜止动件的1L三颈圆底烧瓶中添加乙酸叔丁酯(26.8mL，200mmol)和无水THF(50mL)。在干冰-丙酮浴中冷却之后，在15min内通过注射器向混合物中添加锂二(三甲基甲硅烷基)酰胺(1M，THF溶液)(200mL，200mmol)。在该温度下搅拌30分钟后，在15分钟内从加料漏斗中向混合物中添加2,4-二氯-苯并噻唑(8.15g，40mmol)的THF(100mL)溶液。除去冷却浴，使反应能够在1小时内升温至室温。将反应混合物浓缩，然后用EtOAc和饱和的NaHCO3溶液稀释。将有机层分离，并用EtOAc两次萃取水层。在无水硫酸钠之上将合并的有机层干燥、过滤、浓缩，以及用EtOAc/己烷的梯度混合物洗脱，在硅胶上通过柱色谱法进行纯化，得到作为黄色固体的11.28g(99％)标题化合物。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)8.00(1H,dd,J＝1.0,8.0Hz),7.53(1H,dd,J＝1.0,8.0Hz),7.36(1H,t,J＝8.0Hz),4.19(2H,s),1.38(9H,s)。
第3部分：3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
步骤A：向含于EtOH(15mL)的4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(614mg，2.0mmol)和2-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)乙酸叔丁酯(624mg，2.2mmol)的混合物中添加哌啶(0.6mL，6.0mmol)和乙酸(0.25mL，3.0mmol)。将反应混合物加热至90℃达6小时并冷却至室温。向混合物中添加水(30mL)，得到沉淀物。过滤沉淀物并用水，然后用乙醚清洗。在氮气流下干燥后，得到作为黄色固体的850mg(85％)4-(3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 499.3[M+H]+；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)9.04(1H,s),7.87(1H,d,J＝6.9Hz),7.85(1H,d,J＝8.8Hz),7.54(1H,m),7.33(1H,t,J＝7.9Hz),6.69(1H,d,J＝8.8Hz),3.83(4H,m),3.62(4H,m),1.52(9H,s)。
步骤B：向含于CH2Cl2(15mL)的4-(3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(850mg，1.7mmol)的悬浮液中添加含于二噁烷(5mL)的4N HCl。将混合物搅拌16小时，并过滤。用乙醚清洗固体，并在氮气下干燥。得到定量的3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐以及无需进一步纯化而用于下一步骤。MS m/z 399.1[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)9.12(1H,s),9.11(2H,br),8.36(1H,d,J＝8.8Hz),8.16,(1H,d,J＝6.9Hz),7.66(1H,d,J＝8.8Hz),7.45(1H,t,J＝7.9Hz),7.14(1H,d,J＝8.8Hz),4.03(4H,m),3.26(4H,m).
步骤C：向含于DMF(10mL)的3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐(890mg，2.0mmol)的悬浮液中添加37％含水HCHO(0.4mL，3.4mmol)，然后添加NaBH(OAc)3(636mg，3.0mmol)。在室温下将反应混合物搅拌30min。向混合物中添加水(10mL)和饱和的NaHCO3溶液(10mL)中，以形成沉淀物。将该沉淀物滤出，用水清洗并在氮气下干燥，得到作为黄色固体的680mg(97％)标题化合物。 熔点258-260℃；MSm/z 413.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)9.06(1H,s),8.25(1H,d,J＝8.8Hz),8.14(1H,d,J＝6.9Hz),7.64(1H,m),7.44(1H,d,J＝7.7Hz),7.08(1H,d,J＝9.1Hz),3.79(4H,m),2.44(4H,m),2.25(3H,s)。
实施例2
Cpd 39的制备
步骤A：将4-氯代-3-氧代-丁酸乙酯(6.58g，40mmol)、2-氨基-4-甲基吡啶(4.33g，40mmol)和200酒精度数(proof)的EtOH(40mL)装入75mL的高压釜中。在油浴中，于100℃过夜搅拌后，将反应混合物减压浓缩，然后用CH2Cl2和饱和的NaHCO3溶液稀释。将有机层分离，用CH2Cl2两次萃取水层。在无水硫酸钠之上将合并的有机层干燥、过滤、浓缩，以及在硅胶上通过柱色谱法进行纯化。用二氯甲烷-甲醇的梯度混合物的洗脱收获了作为深棕色油状物的3.23g(37％)的标题化合物。MS m/z 219.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)8.38(1H,d,J＝6.95Hz),7.73(1H,s),7.24(1H,d,J＝1.60Hz),6.71(1H,dd,J＝1.60,6.95Hz),4.10(2H,q,J＝7.00Hz),3.74(2H,s),2.34(3H,s),1.20(3H,t,J＝7.00Hz)；
步骤B：向含于EtOH(0.2mL)的4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(120mg，0.4mmol)和2-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙酸乙酯(96mg，0.44mmol)的混合物中添加哌啶(0.3mL)和乙酸(0.1mL)。将反应混合物加热至120℃达15小时并冷却至室温。向混合物中添加水(6mL)，以产生沉淀物。将该沉淀物滤出并用水、然后用乙醚清洗。在氮气下干燥之后，得到作为黄色固体的112mg(60％)的4-(3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸丁酯。MS m/z 462.4[M+H]+。
步骤C：向含于CH2Cl2(3mL)的4-(3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸丁酯(112mg，0.24mmol)的悬浮液中添加含于二噁烷(1.5mL)的4N HCl。将混合物搅拌16小时，并过滤。用乙醚清洗固体，并在氮气下干燥。得到定量的3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐以及无需进一步纯化而用于下一步骤。MS m/z 362.3[M+H]+。
步骤D：向含于DMF(1.5mL)的3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐(42mg，0.11mmol)的悬浮液中添加37％含水甲醛(0.02mL，0.22mmol)，然后添加NaBH(OAc)3(52mg，0.22mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌30min。将混合物用CH2Cl2(30mL)稀释并用饱和的NaHCO3溶液清洗。减压浓缩有机层以及通过柱色谱法(5％-10％MeOH/CH2Cl2)纯化，以收获作为黄色固体的25mg(60％)标题化合物。熔点264-268℃；MS m/z 376.3[M+H]+； 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)8.55(1H,s),8.32(1H,s),7.92(1H,d,J＝6.94Hz),7.64(1H,d,J＝8.83Hz),7.26(1H,s),6.56(2H,m),3.74(4H,m),2.52(4H,m),2.33(6H,s)。
如下文表1中所示，本文所披露的其他化合物可以根据实施例2通过替换适当的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例3
Cpd 11的制备
步骤A：向含于n-BuOH(50mL)的2-氯代-4-羟基吡啶(12.9g，100mmol)的溶液中添加哌嗪-1-羧酸叔丁酯(46.5g，250mmol)。于140℃将混合物加热达3天，然后在环境温度下用EtOAc(2L)进行稀释。将有机相用饱和的NH4Cl溶液，然后用盐水清洗。将有机层分离，在MgSO4之上干燥并减压浓缩。通过柱色谱法(5％-20％MeOH/CH2Cl2)将残余物纯化，得到作为白色固体的12.2g(44％)4-(4-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 280.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)7.72(1H,d,J＝6.62Hz),6.20(1H,dd,J＝6.31,2.21Hz),6.02(1H,d,J＝1.89Hz),3.56(4H,m),3.42(4H,m),1.50(9H,s)。
步骤B：向含于CH3CN(100mL)的4-(4-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.03g，18.0mmol)和MgCl2(3.42g，36mmol)的混合物中添加三乙胺(15.1mL，90mmol)。在环境温度下将该混合物搅拌10分钟后，将多聚甲醛(5.4g，180mmol)加入到该混合物中。于60℃将该混合物搅拌18小时，然后冷却至室温。然后用EtOAc(400mL)稀释并用1M Rochelle盐溶液(200mL)和饱和的NH4Cl溶液(200mL)清洗混合物。将有机层减压浓缩并通过柱色谱法(30％-80％EtOAc/己烷)纯化，以收获作为白色固体的1.5g(27％)的4-(5-甲酰基-4-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 308.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)11.37(1H,s),9.64(1H,s),8.27(1H,s),5.98(1H,s),3.71(4H,m),3.56(4H,m),1.48(9H,s)。
步骤C：向含于EtOH(2mL)的4-(5-甲酰基-4-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(61mg，0.2mmol)和2-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)乙酸叔丁酯(62mg，0.22mmol)的混合物中添加哌啶(0.06mL，0.6mmol)和乙酸(0.025mL，0.3mmol)。将反应混合物加热至60℃达6小时，并冷却至室温。向该混合物中添加水(6mL)，得到沉淀物。过滤该沉淀物并用水、然后用乙醚清洗。在氮气下干燥后，得到作为黄色固体的96mg(96％)的4-(3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 499.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)9.08(1H,s),8.62(1H,s),7.86(1H,d,J＝9.14Hz),7.55(1H,m),7.34(1H,t,J＝7.88Hz),6.48(1H,s),3.80(4H,m),3.62(4H,m),1.51(9H,s)。
步骤D：向含于CH2Cl2(2mL)的4-(3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(96mg，0.19mmol)的悬浮液中添加含于二噁烷(1mL)的4N HCl。将混合物搅拌6小时并过滤。将固体用乙醚清洗，并在氮气下干燥，得到61mg(82％)的3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐，其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS m/z 399.1[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)9.34(2H,br),9.13(1H,s),8.96(1H,s),8.16(1H,d,J＝ 6.94Hz),7.66(1H,d,J＝6.62Hz),7.46(1H,t,J＝7.88Hz),7.00(1H,s),4.01(4H,m),3.22(4H,m)。
步骤E：向含于二氯乙烷(1mL)的3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐中添加37％甲醛水溶液(0.01mL，0.2mmol)，然后添加NaBH(OAc)3(40mg，0.2mmol)。在室温下将反应混合物搅拌30min。蒸发溶剂并将水(2mL)加入混合物中。将沉淀物滤出，用水清洗并在氮气下干燥，得到作为黄色固体的34mg(82％)的标题化合物。熔点285-288℃；MS m/z 413.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)9.08(1H,s),8.89(1H,s),8.14(1H,m),7.66(1H,m),7.44(1H,t,J＝7.72Hz),6.89(1H,s),3.77(4H,m),2.42(4H,m),2.24(3H,s)。
实施例4
Cpd 57的制备
步骤A：向含于EtOH(0.2mL)的4-(5-甲酰基-4-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸(124mg，0.40mmol)和2-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙酸乙酯(96mg，0.44mmol)的混合物中添加哌啶(0.3mL)和乙酸(0.1mL)。于120℃将反应混合物加热达15小时并冷却至室温。向该混合物中添加水(2mL)，得到沉淀物。过滤该沉淀物并用水、然后用乙醚清洗。在氮气下干燥后，得到作为黄色固体的115mg(63％)的4-(3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 462.3[M+H]+。
步骤B：向含于CH2Cl2(2mL)的4-(3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(115mg，0.25mmol)的悬浮液中添加含于二噁烷(1mL)的4N HCl。将混合物搅拌2小时，然后过滤。将固体用乙醚清洗并在氮气下干燥以定量提供3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐，其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS m/z 362.2[M+H]+。
步骤C：向含于DMF(10mL)的3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐(50mg，0.12mmol)的悬浮液中添加37％的甲醛水溶液(0.025mL，0.25mmol)，然后添加NaBH(OAc)3(55mg，0.25mmol)。于环境温度下将反应混合物搅拌1h。向该混合物添加水(2mL)和饱和的NaHCO3溶液(2mL)以形成沉淀物。将该沉淀物滤出，用水清洗以及在氮气下干燥，以提供作为黄色固体的30mg(67％)的标题化合物。MSm/z 376.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)8.63(1H,s),8.59(1H,s),8.41(1H,d,J＝6.96Hz),8.32(1H,s),7.22(1H,s),6.71(1H,s),6.66(1H,dd,J＝6.94,1.58Hz),3.60(4H,m),2.49(3H,s),2.28(3H,s),2.22(4H,m)。
如下文表1中所示，本文所披露的其他化合物可以根据实施例4通过替换适当的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例5
Cpd 91的制备
第1部分：6-氯代-2-羟基烟碱醛的制备
步骤A：于室温下将2,6-二氯烟酸(30g，156.3mmol)溶解于甲醇(300mL)中。在相同温度下缓慢地添加乙醇钠(5.4M含于MeOH，781.3mmol，145mL)。于70℃将反应混合物搅拌5小时并冷却至室温。将来自反应混合物的沉淀固体滤出并在真空下浓缩母液。将收集到的所有固体溶解于水(300mL)并于0℃将该溶液用6N HCl溶液酸化至pH 6。用乙基乙酸酯萃取水层五次。在MgSO4之上将合并的有机层干燥。将该有机层滤出并浓缩，以提供6-氯代-2-甲氧基烟酸和2-氯代-6-甲氧基烟酸的1：1混合物(20.22g，69％)。MS m/z 188[M+H]+。
步骤B：将上文获得的混合物(11.48g，61.2mmol)溶解于THF(50mL)并冷却至0℃。于0℃缓慢地加入硼烷-THF络合物(1.0M含于THF，200mL)。于室温下将反应混合物搅拌1h并冷却回至0℃。于0℃非常缓慢地加入6N HCl(15mL)水溶液。用饱和的NaHCO3溶液将水层中和至pH7。加入二氯甲烷并萃取水层。将合并的有机层于K2CO3之上干燥、过滤以及在真空下浓缩，以收获10.6g相应的醇。可以将残留物直接用于氧化步 骤或用乙基乙酸酯和己烷的混合物于硅胶上纯化。TLC Rf 0.31(含于己烷的30％EtOAc)。MS m/z 174[M+H]+。
将分离的醇(3.9g，22.7mmol)溶解于二氯甲烷(110mL)中并冷却至0℃。将Dess-Martin高碘烷(11.6g，27.3mmol)分批加入。于0℃搅拌反应混合物30min。用饱和的NaHCO3溶液将反应淬火并用二氯甲烷萃取。于K2CO3之上干燥合并的有机层，过滤并浓缩以提供6-氯代-2-甲氧基烟碱醛和2-氯代-6-甲氧基烟碱醛的3.53g(91％)混合物。
步骤C：将6-氯代-2-甲氧基烟碱醛和2-氯代-6-甲氧基烟碱醛的混合物(3.3g，19.3mmol)溶解于二氯甲烷(100mL)中并冷却至-15℃。在该温度下缓慢地加入BBr3(1.0M含于CH2Cl2，38.6mmol)。于0℃将溶液搅拌30min并用饱和的NaHCO3溶液中和至pH 7。将水层用二氯甲烷清洗两次以去除2-氯代-6-甲氧基醛。用盐水处理水层并放置3小时。将沉淀的固体过滤并于真空下干燥，以提供作为白色粉末的1.07g的6-氯代-2-甲氧基醛(71％)。TLCRf0.06(含于EtOAc的70％CH3CN)。MS m/z 158[M+H]+。
第2部分：2-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)乙酸乙酯的制备
将4-氯代-3-氧代-丁酸乙酯(4g，24.4mmol)、3,5-二甲基吡嗪-2-胺(3g，24.4mmol)和200酒精度数的乙醇(24mL)装入75mL的高压釜中。在油浴中，于100℃搅拌16小时后，将反应混合物浓缩，用二氯甲烷和饱和的碳酸氢钠溶液稀释。将有机层分离并用二氯甲烷两次萃取水层。在无水硫酸钠之上将合并的有机层干燥、过滤、浓缩，以及在硅胶上进行纯化。用二氯甲烷和甲醇的梯度混合物的洗脱收获了作为浅棕色固体的2-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)乙酸乙酯(5g)。MS m/z 234[M+H]+。
第3部分：Cpd 91的制备
步骤A：在室温下将6-氯代-2-羟基烟碱醛(1g，6.37mmol)溶解于DMSO(12mL)。在室温下用1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(2.55g，12.74mmol)处理溶液。于100℃搅拌反应混合物2小时并冷却至室温。加入饱和的NaHCO3水溶液(50mL)。将水层用用CH2Cl2萃取三次。将合并的有机层于K2CO3之上干燥、过滤并在真空下浓缩，以提供2.1g的4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯。将浓缩的残余物不经进一步纯化而用于下一步骤。MS m/z 322[M+H]+。
步骤B：在室温下，用哌啶(119.2mg，1.4mmol)、乙酸(252mg，4.2mmol)和2-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)乙酸乙酯(196mg，0.84mmol)处理含于3mL EtOH的4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(225mg，0.7mmol)溶液。将反应混合物于150℃在微波反应器中搅拌2小时。将混合物浓缩，用饱和的NaHCO3溶液淬灭并用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机层合并以及浓缩。浓缩后，将残余物在硅胶上纯化以提供4-(3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 491[M+H]+。
步骤C：在室温下将上文获得的白色固体溶解于2mL二氯甲烷并用含于二噁烷(2mL)的4M HCl进行处理。在室温下将溶液搅拌16小时之后，将全部溶剂蒸发。将残余物用乙醚/二氯甲烷/己烷研磨以提供7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮的HCl盐(164mg，55％)。游离碱的分析样本通过将该HCl盐再溶解于二氯甲烷，用饱和的NaHCO3溶液处理混合物，继之以萃取和蒸发而制备。MS m/z 391[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.74(1H,s),8.51(1H,s),8.33(1H,br.s),8.08(1H,d,J＝8.8Hz),6.80(1H,d,J＝8.8Hz),3.9-3.7 (4H,br.m),2.9(2H,br.t),2.74(3H,s),2.65(2H,br.m),2.38(3H,s),1.8(2H,br.m)。
步骤D：在室温下将7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮的HCl盐(100mg，0.26mmol)溶解于DMF(4mL)。在室温下用甲醛(含于水37wt％，2.56mmol，0.19mL)和三乙酰氧基硼氢钠(165mg，0.78mmol)处理溶液。在室温下将反应混合物搅拌2小时并于真空下浓缩。将残余物载到硅胶柱上并用含于二氯甲烷的甲醇(5-20％)纯化以提供标题化合物(66.9mg，64％)。熔点243-245℃；MSm/z 405.1[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ8.74(1H,s),8.51(1H,s),8.32(1H,br.s),8.09(1H,d,J＝8.8Hz),6.80(1H,d,J＝8.8Hz),3.9-3.7(4H,br.m),3.18(2H,br.d),2.74(3H,s),2.65(2H,br.m),2.38(3H,s),2.25(3H,s),1.8(2H,br.m)。
如下文表1中所示，本文所披露的其他化合物可以根据实施例5通过替换适当的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例6
Cpd 71的制备
步骤A：在室温下将6-氯代-2-羟基烟碱醛(1.06g，6.76mmol)溶解于DMSO(20mL)。在室温下用顺式-2,6-二甲基哌嗪(1.16g，10.18mmol)处理溶液。于100℃将反应混合物搅拌3小时并冷却至室温，以收获粗制的6-(顺式-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-羟基烟碱醛。MSm/z 236[M+H]+。
步骤B：于室温下分三部分，用二异丙基乙胺(2.62g，20.3mmol)和二碳酸二叔丁酯(2.95g，13.52mmol)处理含于二氯甲烷(30mL)的6-(顺式-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-羟基烟碱醛的溶液。于40℃将混合物搅拌2小时并冷却至室温。用水将反应淬火并用二氯甲烷萃取三次。浓缩合并的有机层并在硅胶上纯化残余物，以提供4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)-顺式-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.03g，89％)。MS m/z 336[M+H]+。
步骤C：通过与实施例5第3部分步骤B中所述的程序类似的程序制备4-(3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 529[M+H]+。
步骤D：通过与实施例5第3部分步骤C中所述的程序类似的程序制备3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-7-顺式-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮。MS m/z429[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ9.08(1H,s),8.33(1H,d,J＝8.8Hz),8.13(1H,d,J＝7.8Hz),7.64(1H,d,J＝7.6Hz),7.43(1H,t,J＝7.8Hz),7.16(1H,d,J＝8.8Hz),4.70(2H,br.t),3.4-3.2(2H,br.m),3.0(2H,br.t),1.31(3H,s),1.30(3H,s)。
步骤E：通过与实施例5第3部分步骤D中所述的程序类似的程序制备标题化合物。熔点286-288℃；MS m/z 441.1[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ9.06(1H,s),8.24(1H,d,J＝9.0Hz),8.13(1H,dd,J＝1.0,7.9Hz),7.64(1H,d,J＝1.0,7.8Hz),7.43(1H,t,J＝7.8Hz),7.11(1H,d,J＝9.0Hz),4.4(2H,br.m),2.8(2H,br.t),2.22(3H,s),2.15(2H,br.m),1.12(3H,s),1.14(3H,s)。
如下文表1中所示，本文所披露的其他化合物可以根据实施例6通过替换适当的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例7
Cpd 114的制备
步骤A：在室温下用哌啶(239mg，2.8mmol)，乙酸(511mg，9.35mmol)和乙酰乙酸乙酯(487mg，3.74mmol)处理含于EtOH(4mL)的4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.87mmol)的溶液。于90℃将反应混合物搅拌3小时。将该混合物浓缩，用饱和的NaHCO3溶液淬灭并用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机层合并，于K2CO3之上干燥，过滤和浓缩。用含于二氯甲烷的甲醇(0-10％)于硅胶上纯化残余物以提供4-(3-乙酰基-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(450mg，62％)。MS m/z 388[M+H]+。
步骤B：在室温下用溴(1M含于CHCl3，0.9mmol)处理含于10mL氯仿的4-(3-乙酰基-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，0.903mmol)。在室温下将反应混合物搅拌16小时。过滤沉淀的固体并浓缩母液。于硅胶上纯化残余物以收获4-(3-(2-溴代乙酰基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(132.2mg，32％)。MS m/z 489[M+Na]+。
步骤C：在室温下2-氨基噻唑(34.1mg，0.34mmol)处理含于5mL的EtOH的4-(3-(2-溴代乙酰基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(132mg，0.28mmol)。将溶液回流16小时并在真空下浓缩。于硅胶上纯化残余物以提供4-(3-(咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(64.3mg，49％)。MS m/z 468[M+H]+。
步骤D：通过与实施例5第3部分步骤C中所述的程序类似的程序制备7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮的HCl盐。MSm/z 367[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ9.3(1H,br.s),8.61(1H,s),8.38(1H,s),8.07(1H,d,J＝8.8Hz),7.98(1H,d,J＝4.4Hz),7.30(1H,d,J＝4.4Hz),6.89(1H,d,J＝8.8Hz),4.29(1H,br.m),4.02(2H,br.m),3.80(2H,br.m),3.29(2H,br.m),3.17(2H,br.m),2.13(2H,br.m)。
步骤E：通过与实施例5第3部分步骤D中所述的程序类似的程序制备3-标题化合物。熔点224-226℃；MS m/z 382[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ8.54(1H,br.s),8.30(1H,s),8.00(1H,d,J＝8.8Hz),7.95(1H,d, J＝4.4Hz),7.26(1H,d,J＝4.4Hz),6.80(1H,d,J＝8.8Hz),3.95-3.61(4H,br.m),2.89-2.60(4H,br.m),2.38(3H,s),1.99(2H,br.m)。
如下文表1中所示，本文所披露的其他化合物可以根据实施例7通过替换适当的起始原料、试剂和反应条件来制备。
表1提供式的(I)的化合物的游离碱形式的分离的化合物，其可以通过替换适当的起始原料、试剂和反应条件，根据指明的实施例的程序来制备。从式的(I)的化合物的游离碱形式对任何盐、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体的制备也被考虑到了以及进一步被包括在本文说明书的范围之内。在该化合物的游离碱形式没有从盐形式分离得到的情况下，本领域的普通技术人员能够预期执行所需的反应以制备和分离得到该化合物的游离碱形式。
术语“Cpd”表示化合物号，术语“Ex”表示“实施例号”(其中*表示化合物的相应实施例如上文提供)，术语“M.P.”表示“熔点(℃)”，术语“MS”表示“质谱峰m/z[M+H]+，[M+2+H]+，[M-H]-或[M+2-H]-”，术语“D”表示“分解/分解的”，术语“DR”表示“分解范围”，术语“S”表示“软化”，术语“ND”表示该值是“未确定的”以及术语“NI”表示该化合物“未分离”。
表1
或其盐、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体。
表2进一步提供式的(I)的化合物的盐形式的某些分离的化合物，其可以通过使用适当的反应物、试剂和反应条件，根据指明的实施例的程序来制备。从式的(I)的化合物的盐形式对任何自由碱、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体的制备也被考虑到了以及进一步被包括在本文说明书的范围之内。在该化合物的游离碱形式没有从盐形式分离得到的情况下，本领域的普通技术人员能够预期执行所需的反应以制备和分离得到该化合物的游离碱形式。
术语“Cpd”表示化合物号，术语“Ex”表示“实施例号”(其中*表示化合物的相应实施例如上文提供)，术语“M.P.”表示“熔点(℃)”，术语“MS”表示“质谱峰m/z[M+H]+，[M+2+H]+，[M-H]-或[M+2-H]-”，术语“D”表示“分解/分解的”，术语“DR”表示“分解范围”，术语“S”表示“软化”，以及术语“ND”表示该值是“未确定的”。
表2
或同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或其互变异构体。
生物实施例
为了更详细地描述并帮助理解本发明书，提供了以下非限制性实施例以更充分地说明该说明书的范围，并且不应被解释为对其范围的具体限制。将在本领域技术人员所确定的范围内的、现在已知的或以后开发的本说明书的这类变化都被认为落入本说明书和下文要求保护的范围内。这些实施例对本文所述的某些化合物进行的活体外和/或活体内检测作出说明以及证实了所述化合物通过增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入而用于治疗SMA的有用性。式(I)的化合物增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入并增强了产自SMN2基因的Smn蛋白质的水平，因此可被用来治疗有这类需要的人类对象体内的SMA。
实施例1
SMN2小基因构建体
该小基因构建体的制备
对应于SMN2基因的开始于外显子6的5’端(ATAATTCCCCC)(SEQ ID NO.14)以及结束于外显子8的核酸残基23(CAGCAC)(SEQ ID NO.15)的区域的DNA通过使用如下引物的PCR进行扩增：
正向引物：5’-CGCGGATCCATAATTCCCCCACCACCTC-3’(SEQ ID NO.16)以及
反向引物：5’-CGCGGATCCGTGCTGCTCTATGCCAGCA-3’(SEQ ID NO.17)。
每个引物的5’端被设计成在外显子6的5’端(GGATCC)(SEQ ID NO.18)和外显子8第23个核苷酸后的3’端都增加BamHI限制性内切核酸酶识别位点。使用该BamHI限制性内切核酸酶识别位点，将PCR片段克隆入如美国专利公开US2005/0048549中所披露进行修饰的原pcDNA3.1/Hygro载体的衍生物。
用HindIII位点和BamHI限制性位点将新UTR加入到经修饰的载体中，该新UTR包含5′DEG UTR：5’-TAGCTTCTTACCCGTACTCCACCGTTGGCAGCACGATCGCACGTCCCACGTGAACCATTGGTAAACCCTG-3’(SEQ ID NO.19)，在该BamHI限制性位点上游处将其连同起始密码子克隆入经修饰的pcDNA3.1/Hygro载体中；以及
该新UTR包含3′DEG UTR：5’-ATCGAAAGTACAGGACTAGCCTTCCTAGCAACCGCGGGCTGGGAGTCTGAGACATCACTCAAGATATATGCTCGGTAACGTATGCTCTAGCCATCTAACTATTCCCTATGTCTTATAGGG-3’(SEQ ID NO.20)，用NotI限制性内切酶识别位点和XhoI限制性核酸内切酶识别位点在紧挨该NotI 限制性位点下游处将其连同终止密码子克隆入经修饰的pcDNA3.1/Hygro载体中。此外，用BamHI和NotI限制性位点将缺乏起始密码子的萤火虫荧光素酶基因克隆入该载体中。
所得的小基因包括，按5’至3’的顺序：5'-DEG UTR、起始密码子、形成BamHI限制性位点的另外6个核苷酸、外显子6的核酸残基、SMN2内含子6的核酸残基、SMN2外显子7的核酸残基、SMN2内含子7的核酸残基和SMN2外显子8的前23个核酸残基、形成BamHI限制性位点的另外6个核苷酸和缺乏起始密码子的萤火虫萤光素酶基因。
通过定位诱变将单个腺嘌呤残基插入SMN2外显子7的核苷酸48之后。这种小基因构建体被称为SMN2-A。
衍生自含有外显子6到8和间插内含子的小基因的SMN2转录物概括其内源性mRNA前体的剪接(Lorson等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1999,96(11),6307)。生成含有外显子6到8和间插内含子的SMN2-选择性剪接报告基因构建体，之后生成萤光素酶报告基因。此构建体的显着特征是在荧光素酶基因中缺少起始密码子，通过在外显子7的核苷酸48之后插入核苷酸以及在紧挨外显子6上游之处添加起始密码子(ATG)使终止密码子(在开放阅读框架中，其编码SMN蛋白)失活。将单个腺嘌呤(SMN2-A)插入外显子7的核酸残基48之后。
SMN2小基因经设计使得，当外显子7存在于mRNA中时，萤光素酶报告基因在紧挨外显子6的上游具有ATG起始密码子的框架内；以及当SMN2外显子7在mRNA前体剪接过程中被除去时，萤光素酶报告基因在紧挨外显子6的上游具有ATG起始密码子的框架之外。此外，当不存在外显子7时，开始于紧挨外显子6的上游的ATG起始密码子的开放阅读框在SMN外显子8的片段中包含终止密码子。因此，当不存在增加转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的化合物时，产生更多含外显子7和多官能报告基因的转录物。本说明书的示意图可见图1。
来自SMN2-A构建体的小基因的DNA序列SEQ ID NO.21在图2a中提供。小基因SMN2-A子序列的图像如图2b中所示。
实施例2
培养细胞中的SMN2小基因mRNA剪接RT-qPCR检测
利用基于逆转录-定量PCR(RT-qPCR)的检测来量化用所述小基因稳定转染并用测试化合物处理的HEK293H细胞系中含有SMN2外显子7的全长SMN2小基因mRNA的水平。
材料
实验设计.将上述用SMN2-A小基因构建体稳定转染的HEK293H细胞(10,000个细胞/孔)接种于96孔平底板中的200μL细胞培养基(DMEM加10％FBS，200μg/mL潮霉素)并将该板立即涡旋以确保细胞适当扩散，形成均匀的单层细胞。允许细胞附着至少4-6小时。在100％DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍，以生成7点浓度曲线。向每个含细胞的孔中添加测试化合物的溶液(1μL，在DMSO中200倍)并在细胞培养孵育箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中将该板孵育24小时。为每个测试化 合物浓度制备两个拷贝。然后在Cells-To-Ct裂解缓冲液中将细胞裂解并将裂解物保存于-80℃。
使用表3中提供的如下引物和探针量化全长SMN2-A小基因和GAPDH mRNA。引物SMN正向A(SEQ ID号1)与外显子7中的核苷酸序列(核苷酸22到核苷酸40)杂交，引物SMN反向A(SEQ ID NO.2)与萤火虫萤光素酶的编码序列中的核苷酸序列杂交，SMN探针A(SEQ IDNO.3)与外显子7中的核苷酸序列(核苷酸50至核苷酸54)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1到核苷酸21)杂交。这三种低聚核苷酸的组合只检测SMN1和SMN2小基因(RT-qPCR)而并不会检测内源性SMN1或SMN2基因。
表3
1引物和探针由PTC Therapeutics,Inc.设计；2购自Life Technologies,Inc.(之前是Invitrogen)。
SMN正向和反向引物按最终浓度0.4μM使用。SMN探针按最终浓度0.15μM使用。GAPDH引物按最终浓度0.2μM以及探针按照0.15μM使用。
SMN2-小基因GAPDH混合物(15μL总体积)是通过混合7.5μL的2倍RT-PCR缓冲液、0.4μL的25倍RT-PCR酶混合物、0.75μL的20倍GAPDH引物-探针混合物、4.0075μL的水、2μL的10倍稀释细胞裂解物、0.06μL的100μM SMN正向引物、0.06μL的100μM SMN反向引物和0.225μL的100μM SMN探针制备的。
在下列温度下按所指示的时间进行PCR：第1步：48℃(15min)；第2步：95℃(10min)；第3步：95℃(15s)；第4步：60℃(1min)；然后重复第3步和第4步共循环40次。
每个反应混合物包含SMN2-A小基因和GAPDH引物/探针组(复用的设计)，允许同时测量两个转录物的水平。
从SMN2小基因生成两种SMN剪接产物。在此使用术语“SMN2小基因FL”称谓对应于SMN2全长mRNA的含外显子7的第一种剪接产物。在此使用术语“SMN2小基因Δ7”称谓缺乏外显子7的第二种剪接产物。
使用改良的ΔΔCt方法(如Livak和Schmittgen,Methods,2001,25:402-8中所述)从实时PCR数据中确定SMN2小基因FL mRNA相对于用溶媒对照处理的细胞中的mRNA的增加情况。根据SMN2小基因FL和GAPDH的扩增曲线的斜率单独计算扩增效率(E)。然后将SMN2小基因FL和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct，其中Ct是每个扩增子的阈值。将SMN2小基因FL的丰度归一化为GAPDH丰度。然后用来自测试化合物处理的样本的归一化的SMN2小基因FL丰度除以来自溶媒处理的细胞的归一化的SMN2小基因FL丰度，以测定SMN2FL mRNA相对于溶媒对照的水平。
结果.如图3中所示，用化合物5(图3a)和化合物27(图3b)处理的细胞以低浓度增加了SMN2小基因FL mRNA。相对于未处理的细胞，这两种测试化合物完全恢复了外显子7的纳入。
对于本文披露的式(I)的化合物或其一种形式，表4提供针对SMN2全长mRNA生产的EC1.5x，其从根据生物实施例2的程序为每个测试化合物所生成的7点浓度数据中获得。术语“针对全长SMN2mRNA生产的EC1.5x”被定义为测试化合物的浓度，该浓度有效地增加SMN2全长mRNA的量，使其是溶媒处理的细胞中mRNA的量的1.5倍。>3μm和≤30μm之间的全长SMN2mRNA生产的EC1.5x由一个星号(*)表示，>1μm和≤3μm之间的EC1.5x由两个星号(**)表示，>0.3μm和≤1μm之间的EC1.5x由三个星号(***)表示，>0.1μm和≤0.3μm之间的EC1.5x由四个星号(****)表示以及≤0.1μm的EC1.5x由五个星号(*****)表示。
表4
实施例3
培养细胞中的内源性SMN2mRNA RT-qPCR剪接检测
利用基于逆转录-定量PCR(RT-qPCR)的检测来量化原代细胞和用测试化合物处理的含有SMN2基因的细胞系中SMN2全长和Δ7mRNA的水平。
材料
实验设计.将GM03813SMA患者细胞(5,000个细胞/孔)接种于96孔平底板中的200μL细胞培养基(DMEM加10％FBS)并将该板立即涡旋以确保细胞适当扩散，形成均匀的单层细胞。允许细胞附着至少4-6hrs。在100％DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍，以生成7点浓度曲线。 向每个测试孔中添加测试化合物的溶液(1μL，在DMSO中200倍)并向每个对照孔中添加1μL DMSO。在细胞培养孵育箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中将该板孵育24hrs。在Cells-To-Ct裂解缓冲液中将细胞裂解并将裂解物保存于-80℃。
使用表5中的如下引物和探针识别SMN2特异性剪接产物和GAPDH mRNA。引物SMNFL正向B(SEQ ID号7)与外显子7中的核苷酸序列(核苷酸32到核苷酸54)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1到核苷酸4)杂交，引物SMNΔ7正向B(SEQ ID NO.8)与外显子6中的核苷酸序列(核苷酸87到核苷酸111)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1到核苷酸3)杂交，引物SMN反向B(SEQ ID号9)与外显子8中的核苷酸序列(核苷酸39到核苷酸62)杂交，探针SMN探针B(SEQ ID号10)与外显子8中的核苷酸序列(核苷酸7到核苷酸36)杂交。这些引物和探针与人SMN1和SMN2mRNA的常见核苷酸序列杂交。由于实施例3中所用的SMA患者细胞仅包含SMN2基因，因此RT-qPCR仅可以量化SMN2全长和Δ7mRNA。
表5
1引物和探针由PTC Therapeutics,Inc.设计；2购自Life Technologies,Inc.(之前是Invitrogen)。
SMN正向和反向引物按最终浓度0.4μM使用。SMN探针按最终浓度0.15μM使用。GAPDH引物按最终浓度0.1μM以及探针按照0.075μM使用。
SMN2-GAPDH混合物(10μL总体积)是通过混合5μL的2倍RT-PCR缓冲液、0.4μL的25倍RT-PCR酶混合物、0.25μL的20倍GAPDH引物-探针混合物、1.755μL的水、2.5μL的细胞裂解物、0.04μL的100μM SMNFL或SMNΔ7正向引物、0.04μL的100μM SMN反向引物和0.015μL的100μM探针制备的。
在下列温度下按所指示的时间进行PCR：第1步：48℃(15min)；第2步：95℃(10min)；第3步：95℃(15s)；第4步：60℃(1min)；然后，重复第3步和第4步共循环40次。
每个反应混合物包含SMN2FL和GAPDH或SMN2Δ7和GAPDH引物/探针组(复用的设计)，允许同时测量两个转录物的水平。
内源性SMN2基因产生了两种选择性剪接mRNA。在此使用术语“SMN2FL”称谓含外显子7的全长SMN2mRNA。在此使用术语“SMN2Δ7”称谓缺乏外显子7的截断mRNA。
使用改良的ΔΔCt方法(如Livak和Schmittgen,Methods,2001,25:402-8中所述)从实时PCR数据中确定相对于用溶媒对照处理的细胞中的mRNA，SMN2FL mRNA的增加和SMN2Δ7mRNA的减少。根据SMN2FL、SMN2Δ7和GAPDH的扩增曲线的斜率单独计算扩增效率(E)。然后将SMN2FL、SMN2Δ7和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct，其中Ct是每个扩增子的阈值。将SMN2FL和SMN2Δ7的丰度归一化为GAPDH丰度。然后用来自测试化合物处理的样本的归一化的SMN2FL和SMN2Δ7的丰度分别除以来自溶媒处理的细胞的归一化的SMN2FL和SMN2Δ7的丰度，以测定SMN2FL和SMN2Δ7mRNA相对于溶媒对照的水平。
结果.如图4中所示，用浓度增加的化合物5(图4a)和化合物27(图4b)处理的细胞与用溶媒处理的那些细胞相比，包含逐步增加的SMN2FLmRNA和减少的SMN2Δ7mRNA，指示出对SMN2选择性剪接的校正。
实施例4
培养的细胞中的内源性SMN2mRNA终点半定量RT-PCR剪接检测
利用终点逆转录-PCR剪接检测来目测和量化原代细胞和用测试化合物处理的含有SMN2基因的细胞系中SMN2全长和Δ7mRNA的水平。
材料
实验设计.将GM03813SMA患者细胞(5,000个细胞/孔)接种于96孔平底板中的200μL细胞培养基(DMEM加10％FBS)并将该板立即涡旋以确保细胞适当扩散，形成均匀的单层细胞。允许细胞附着至少4-6hrs。在100％DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍，以生成7点浓度曲线。向每个测试孔中添加测试化合物的溶液(1μL，在DMSO中200倍)并向每个对照孔中添加1μL DMSO。在细胞培养孵育箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中将该板孵育24hrs。在Cells-To-Ct裂解缓冲液中将细胞裂解并将裂解物保存于-80℃。
使用表6中的如下引物识别SMN2FL和Δ7mRNA。这些引物和探针与人SMN1和SMN2mRNA的常见的外显子6中的核苷酸序列(SMN正向C，SEQ ID NO.11)(核苷酸43到核苷酸63)和外显子8中的核苷酸序列(SMN反向C，SEQ ID NO.12)(核苷酸51到核苷酸73)杂交。由于实施例4中所用的SMA患者细胞仅包含SMN2基因，因此RT-PCR仅可以目测和量化SMN2全长和SMN2Δ7mRNA。
表6
为了合成cDNA，将5μL裂解物、4μL的5倍iScript反应混合物、1μL的逆转录酶和10μL的水混合并于25℃孵育5min，之后于42℃孵育30min，再接着于85℃孵育5min。将cDNA溶液贮存于-20℃。
为了进行终点PCR，将5μL的cDNA、0.2μL的100μM正向引物、0.2μL的100μM反向引物和22.5μL的聚合酶超级混合物混合于96孔半裙边PCR板中。在下列温度下按指示的时间进行PCR：第1步：94℃(2min)，第2步：94℃(30s)，第3步：55℃(30s)，第4步：68℃(1min)，然后重复步骤2到4，共循环33次，然后保持在4℃。
在2％琼脂糖E-凝胶上将10μL的各个PCR样本进行电泳分离14分钟，用双链DNA(dsDNA)染色试剂(如溴化乙锭)染色并用凝胶成像仪目测。
结果.如图5中所见，用浓度增加的化合物5(图5a)和化合物27(图5b)处理的细胞包含逐步增加的SMN2FL mRNA和减少的SMN2Δ7mRNA，表明对SMN2选择性剪接的校正。
实施例5
动物组织中的SMN2mRNA RT-qPCR剪接检测
利用基于逆转录-定量PCR(RT-qPCR)的检测来量化来自用测试化合物处理的小鼠的组织中的全长和SMN2Δ7mRNA的水平。
材料
实验设计.将测试化合物再悬浮于0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)和0.1％吐温-80中，通过口服强饲法每日两次(BID)处理C/C等位基因SMA小鼠达10天。将组织样本收集并快速冷冻用于RNA纯化。
使用一个不锈钢珠在组织研磨仪II中按20Hz将含于QIAzol裂解试剂中的组织样本(20-40mg)均化2分钟。加入氯仿后，将匀浆离心分离为水相和有机相。将分配到上部水相中的RNA萃取并加入乙醇以提供合适的结合条件。然后将该样本施加到来自RNeasy迷你试剂盒的RNeasy旋转柱，其中全部RNA与膜结合。将RNA在无核糖核酸酶的水中洗脱，然后存贮于-20℃，并随后在7900HT热循环仪上利用TaqMan RT-qPCR进行分析。将全部RNA稀释10倍并将2.5μL的稀释试样加入TaqMan RT-qPCR混合物。
使用表7中的如下引物和探针识别SMN2剪接产物。引物SMN FL正向B(SEQ ID号7)与外显子7和外显子8中的核苷酸序列杂交，引物SMNΔ7正向B(SEQ ID NO.8)与外显子6和外显子8中的核苷酸序列杂交，引物SMN反向B(SEQ ID号9)与外显子8中的核苷酸序列杂交，探针SMN探针B(SEQ ID号10)与外显子8中的核苷酸序列杂交。这些引物和探针与人SMN1和SMN2mRNA的常见核苷酸序列杂交。由于实施例5中所用的SMA患者细胞仅包含SMN2基因，因此RT-qPCR仅可以量化SMN2全长和Δ7mRNA。
表7
1引物由PTC Therapeutics,Inc.设计。
SMN正向和反向引物按最终浓度0.4μM使用。SMN探针按最终浓度0.15μM使用。SMN2-GAPDH混合物(10μL总体积)是通过混合5μL的2倍RT-PCR缓冲液、0.4μL的25倍RT-PCR酶混合物、0.5μL的20倍GAPDH引物-探针混合物、2.5μL的RNA溶液、0.04μL的100μM正向引物、0.04μL的100μM反向引物和0.015μL的100μM SMN探针制备的。
在下列温度下按所指示的时间进行每个PCR：第1步：48℃(15min)；第2步：95℃(10min)；第3步：95℃(15s)；第4步：60℃(1min)；然后，重复第3步和第4步共循环40次。
每个反应混合物包含SMN2FL和mGAPDH或SMN2Δ7和mGAPDH引物/探针组(复用的设计)，允许同时测量两个转录物的水平。
使用改良的ΔΔCt方法(如Livak和Schmittgen,Methods,2001,25:402-8中所述)从实时PCR数据中确定相对于用溶媒对照处理的动物中的mRNA，SMN2FL mRNA的增加和SMN2Δ7mRNA的减少。根据SMN2FL、SMN2Δ7和GAPDH的扩增曲线的斜率单独计算扩增效率(E)。然后将SMN2FL、SMN2Δ7和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct，其中Ct是每个扩增子的阈值。将SMN2FL和SMN2Δ7的丰度归一化为GAPDH丰度。然后用来自测试化合物处理的样本的归一化的SMN2FL和SMN2Δ7的丰度分别除以来自溶媒处理的细胞的归一化的SMN2FL和SMN2Δ7的丰度，以测定SMN2FL和SMN2Δ7mRNA相对于溶媒对照的水平。
实施例6
动物组织中的内源性SMN2mRNA终点半定量RT-PCR剪接检测
利用终点逆转录-PCR(RT-PCR)剪接检测来量化来自用测试化合物处理的大鼠的组织中全长和Δ7SMN2mRNA的水平。
材料
实验设计.使用含于0.5％HPMC和0.1％吐温-80的测试化合物，通过口服强饲法BID处理C/C等位基因SMA小鼠达10天。将组织样本收集并快速冷冻用于RNA纯化。
使用一个不锈钢珠在组织研磨仪II中按20Hz将含于QIAzol裂解试剂中的组织样本(20-40mg)均化2分钟。加入氯仿后，将匀浆离心分离为水相和有机相。将分配到上部水相中的RNA萃取并加入乙醇以提供合适的结合条件。然后将该样本施加到来自RNeasy迷你试剂盒的RNeasy旋转柱，其中全部RNA与膜结合。将RNA在无核糖核酸酶的水中洗脱，然后存贮于-20℃。
使用表8中的如下扩增引物识别SMN2剪接产物。这些引物与人SMN1和SMN2mRNA的常见的外显子6中的核苷酸序列(SMN正向D，SEQ ID NO.13)(核苷酸22到核苷酸46)和外显子8中的核苷酸序列(SMN反向C，SEQ ID NO.12)杂交。
表8
1引物由PTC Therapeutics,Inc.设计。
为了合成cDNA，将1μL的RNA溶液(25-50ng)、4μL的5倍iScript反应混合物、1μL的逆转录酶和10μL的水混合并将混合物于25℃孵育5min，之后于42℃孵育30min，然后于85℃孵育5min。将cDNA溶液贮存于-20℃。
为了进行终点PCR，将5μL的cDNA、0.2μL的100μM正向引物、0.2μL的100μM反向引物和22.5μL的聚合酶超级混合物混合于96孔半裙边PCR板中。在下列温度下按指示的时间进行PCR：第1步：94℃(2min)，第2步：94℃(30s)，第3步：55℃(30s)，第4步：68℃(1min)，然后重复步骤2到4，共循环33次，然后保持在4℃。
在2％琼脂糖E-凝胶上将10μL的各个PCR样本进行电泳分离14分钟，用dsDNA染色试剂(如溴化乙锭)染色并用凝胶成像仪目测。
实施例7
培养细胞中的Smn蛋白质检测
使用Smn HTRF(均相时间分辨荧光)检测来量化用测试化合物处理SMA患者的成纤维细胞中的Smn蛋白水平。该检测的结果示于表9。
材料
实验设计.将细胞解冻并培养在DMEM-10％FBS中72小时。将细胞用胰蛋白酶消化，计数并再悬浮DMEM-10％FBS中直至25,000个细胞/mL浓度。在96孔微量滴定板中将细胞悬浮液以每孔5,000个细胞制成板并孵育3到5个小时。为了提供对照信号，96孔板中的三(3)个孔不接收细胞并因此作为空白对照孔。在100％DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍，以生成7点浓度曲线。将1μL的测试化合物溶液转移到含有细胞的孔中并在细胞培养孵育箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中将细胞孵育48小时。为各个测试化合物浓度设置三份样本。48小时后，将上清液从孔中除去以及将含有蛋白酶抑制剂的25μL RIPA裂解缓冲液加入到孔中并在室温下振荡孵育1小时。加入25μL稀释剂，然后将35μL所得裂解物转移至384孔板中，其中每孔含有5μL的抗体溶液(SMN溶解缓冲液中抗SMN d2和抗SMN kryptate的1：100稀释液)。将该板离心1分钟以将溶液带至孔的底部，然后在室温下孵育过夜。在EnVision多标记平板读数仪(Perkin-Elmer)上测量该板的各孔上665nm和620nm处的荧光。
通过将665nm处的信号除以620nm处的信号计算每个样本对照孔、空白对照孔和溶媒对照孔的归一化的荧光信号。将信号归一化对裂解物的基体效应可能导致的荧光淬灭进行了说明。通过从各个样本孔的归一化荧光中减去该空白对照孔的归一化平均荧光，然后将差值除以该空白对照孔归一化平均荧光并将得到的值乘以100来计算每个样本孔的ΔF值(对Smn蛋白质丰度的百分比值量度)。每个样本孔的ΔF值表示来自测试化合物处理的样本的Smn蛋白质丰度。每个样本孔的ΔF值除以该溶媒对照孔的ΔF值来计算相对于溶媒对照的Smn蛋白质丰度的增长倍数。
结果.如图6中所示，如由SMN HTRF检测所测量，用化合物5(图6a)和化合物27(图6b)处理的1型SMA患者的成纤维细胞显示了Smn蛋白质表达的剂量依赖性增加。
对于本文披露的式(I)的化合物或其一种形式，表9提供针对Smn蛋白质表达的EC1.5x，其从根据生物实施例7的程序为每个测试化合物所生成的7点浓度数据中获得。术语“针对Smn蛋白质表达的EC1.5x”被定义为测试化合物的浓度，该浓度有效地使SMA患者的成纤维细胞中生产的Smn蛋白质的量是DMSO溶媒对照中产生的量的1.5倍。>3μm和≤10μm之间的针对Smn蛋白质表达的EC1.5x由一个星号(*)表示，>1μm和≤3μm之间的EC1.5x由两个星号(**)表示，>0.3μm和≤1μm之间的EC1.5x由三个星号(***)表示以及≤0.3μm的EC1.5x由四个星号(****)表示。
表9
对于本文披露的式(I)的化合物或其一种形式，表10提供Smn蛋白质的最大增加倍数(倍)，其从根据生物实施例7的程序为每个测试化合物所生成的7点浓度数据中获得。≤1.2的最大增加倍数由一个星号(*)表示，>1.2和≤1.35之间的增加倍数由两个星号(**)表示，>1.35和≤1.5之间的增加倍数由三个星号(***)表示，>1.5和≤1.65之间的增加倍数由四个星号(****)表示以及>1.65的增加倍数由五个星号(*****)表示。
表10
实施例8
gems(依赖Smn的核小斑点计数)测定法
Smn蛋白质的水平与用荧光标记的抗-Smn抗体将细胞染色之后产生的核聚焦点的量(也被称为gems)直接相关(Liu和Dreyfuss,EMBO J.,1996,15:3555)。gems是多蛋白质复合物，其通过Smn蛋白质形核而形成；以及将gems计数测定法用于评估细胞中的Smn蛋白质水平。如本文中所述，将gems计数测定法用于量化用检测化合物处理的SMA患者的成纤维细胞中的Smn蛋白质水平。
材料
实验设计：将细胞解冻并培养在DMEM-10％FBS中72小时，然后将细胞用胰蛋白酶消化，计数并再悬浮DMEM-10％FBS中直至100,000个细胞/mL。在带有无菌盖玻片的6孔细胞培养板中将细胞悬浮液(2mL)制成板并孵育3到5个小时。在100％DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍，以生成7点浓度曲线。将10μL的测试化合物溶液加入每个含有细胞的孔中并在细胞培养孵育箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中孵育48小时。为各个测试化合物浓度设置两个拷贝。将最终浓度为0.5％的含DMSO的细胞用作对照物。
将细胞培养基从含有盖玻片的孔中吸出并用冷PBS轻轻清洗三次。在室温下同时在多聚甲醛中通过孵育将该细胞固定20分钟。然后用冷PBS将该细胞清洗两次，接着在室温下用含于PBS的0.05％Triton X-100孵育5 分钟以透化该细胞。用冷PBS将固定后的细胞清洗三次之后，用10％FBS将其封闭1小时。将封闭缓冲液中1：1000稀释的60μL初级抗体加入并在室温下将该混合物孵育1小时。用PBS将细胞清洗三次并将封闭缓冲液中1：5000稀释的60μL二级抗体加入，然后在室温下将该混合物孵育1小时。在封固剂的辅助下将盖玻片安装在载片上并允许干燥过夜。将指甲油施加到盖玻片的载片上并将载片避光存储。将带有63xPlan-Apochromat,NA＝1.4物镜的Zeiss Axovert 135用于免疫荧光检测和计数。对每≥150细胞核的gems数量进行计数并通过将DMSO和10nM硼替佐米作为对照计算％活化。对于每个检测化合物，检查所有波长下的细胞，以识别具有固有荧光的测试化合物。
结果.如图7中所示，用化合物5处理的1型SMA患者的细胞与用DMSO处理的细胞相比，包含逐渐增加的gems。
实施例9
人类运动神经元中的Smn蛋白质检测
使用Smn免疫荧光共聚焦显微镜来量化用测试化合物处理的人类运动神经元中的Smn蛋白质水平。
实验设计.用各种浓度的测试化合物将衍生自SMA iPS细胞的人类运动神经元(Ebert等人,Nature,2009,457:2770；以及Rubin等人,BMC Biology,2011,9:42)处理72小时。基本上如Makhortova等人,Nature Chemical Biology,2011,7:544中所述，使用Smn免疫染色和共聚焦荧光显微镜量化细胞核中的Smn蛋白质水平。化合物处理的样本中的Smn蛋白质水平被归一化为溶媒处理的样本中的所述水平并被绘制成化合物浓度的函数。
实施例10
动物组织中的Smn蛋白质检测
使用Smn HTRF蛋白质检测来量化小鼠组织中的Smn蛋白质水平。
材料
实验设计.称取Safe-Lock管中的组织样本的重量并针对每个类型的组织，基于该重量与体积的比率加入一定体积的含有蛋白酶抑制剂鸡尾酒的RIPA缓冲液：脑(50mg/mL)、肌肉(50mg/mL)和脊髓(25mg/mL)。
使用组织研磨仪通过珠粒研磨将组织均化。向样本中添加5mm不锈钢珠，并在组织研磨仪中按30Hz剧烈振荡5分钟。然后在微量离心机中以14,000xg将样本离心20分钟，并将匀浆转移至PCR板中。在RIPA缓冲液中将匀浆稀释为经BCA蛋白质检测，针对HTRF，约1mg/mL以及针对 总蛋白质量度，约0.5mg/mL。为了SMN HTRF检测，将35μL的组织匀浆转移到含有5μL抗体溶液(溶解缓冲液中抗SMNd2和抗SMN Kryptate其每个的1：100稀释液)的384孔板中。为了提供对照信号，该板中的三(3)个孔仅含有RIPA裂解缓冲液并因此作为空白对照孔。将该板离心1分钟以将溶液带至孔的底部，然后在室温下孵育过夜。在EnVision多标记平板读数仪(Perkin-Elmer)上测量该板的各孔上665nm和620nm处的荧光。根据制造商的方案，使用BCA检测测量组织匀浆中的总蛋白。
通过将665nm处的信号除以620nm处的信号计算每个样本对照孔、空白对照孔和溶媒对照孔的归一化的荧光信号。将信号归一化对组织匀浆的基体效应可能导致的荧光淬灭进行了说明。通过从各个组织样本孔的归一化荧光中减去该空白对照孔的归一化平均荧光，然后将差值除以该空白对照孔归一化平均荧光并将得到的值乘以100来计算每个组织样本孔的ΔF值(对Smn蛋白质丰度的百分比值量度)。对于该组织样本，每个组织样本孔的ΔF值除以总蛋白质量(使用该BCA检测测定)。每个组织样本相对于溶媒对照的Smn蛋白质丰度的变化被计算为在测试化合物的存在下该组织样本的ΔF值与溶媒对照信号的平均ΔF值的差除以该溶媒控制信号的平均ΔF值。
实施例11
成年C/C等位基因SMA小鼠的组织中的Smn蛋白质检测
如实施例10中所述制备用于量化成年C/C等位基因SMA小鼠的组织中的Smn蛋白质的组织样本。该检测评估用测试化合物对C/C等位基因SMA小鼠长达10天的处理是否增加了产自SMN2基因和杂种小鼠Smn1-SMN2基因的Smn蛋白质的水平。
材料
实验设计.用测试化合物或溶媒(含于具有0.1％吐温-80的0.5％HPMC)按10mg/kg对C/C等位基因SMA小鼠BID经口给药达10天。用溶媒对年龄匹配的杂合小鼠给药，用作对照。收集组织以根据实施例10进行蛋白质水平的分析。
结果.如图8中所示，用化合物5按50mg/kg进行BID处理达10天的成年C/C等位基因SMA小鼠中的大脑、脊髓和肌肉组织中，总蛋白质-归一化的Smn水平相对于对照组被增加。
实施例12
新生Δ7SMA小鼠的组织中的Smn蛋白质
如实施例10中所述制备用于量化新生Δ7SMA小鼠体内的Smn蛋白质的组织样本。该检测评估用测试化合物对新生Δ7SMA小鼠长达7天的处理是否增加了产自SMN2基因的Smn蛋白质水平。
材料
实验设计.从出生后3天(PND 3)至PND 9，用测试化合物或溶媒(100％DMSO)对SMAΔ7纯合敲除小鼠进行腹膜内(IP)给药每天一次(QD)。收集组织以根据实施例10进行蛋白质水平的分析。
结果.如图9中所示，用化合物27处理的新生SMAΔ7纯合敲除小鼠的大脑(图9a)、脊髓(图9b)和肌肉(图9c)组织中，总蛋白质归一化的Smn水平呈剂量依赖性增加。
实施例13
新生Δ7SMA小鼠的体重
新生Δ7SMA小鼠的体重变化被用于确定用测试化合物进行的处理是否改善了体重。
材料
实验设计.从PND 3，用测试化合物或溶媒(100％DMSO)对SMAΔ7纯合敲除小鼠进行IP给药QD直到剂量方案切换为含于具有0.1％吐温-80 的0.5％HPMC口服剂量BID，剂量是IP所用剂量的3.16倍。每天记录用测试化合物或溶媒处理的SMAΔ7小鼠和年龄匹配的杂合小鼠的体重。
实施例14
新生Δ7SMA小鼠中的翻正反射
新生Δ7SMA小鼠的翻正反射的功能变化被用于确定用测试化合物进行的处理是否改善了翻正反射。
材料
实验设计.从PND 3，用测试化合物或溶媒(100％DMSO)对SMAΔ7纯合敲除小鼠进行IP给药QD直到剂量方案切换为含于具有0.1％吐温-80的0.5％HPMC口服剂量BID，剂量是IP所用剂量的3.16倍。将翻正反射时间测量为小鼠从躺倒之后到翻正所花费的时间。为每个小鼠标测量5次翻正反射时间(允许每次尝试的最长时间为30s)，每次测量间隔5分钟。于PND 10、14和18测量用测试化合物或溶媒处理的SMAΔ7纯合敲除小鼠和年龄匹配的杂合小鼠的翻正反射时间并绘图。
实施例15
新生Δ7SMA小鼠的存活率
存活小鼠的数量随时间推移的变化被用于确定用测试化合物的处理是否改善了存活率。
材料
实验设计.从PND 3，用测试化合物或溶媒(100％DMSO)对SMAΔ7纯合敲除小鼠进行IP给药QD直到剂量方案切换为含于具有0.1％吐温-80的0.5％HPMC口服剂量BID，剂量是IP所用剂量的3.16倍；以及稍后切 换为含于具有0.1％吐温-80的0.5％HPMC口服剂量QD，剂量是IP所用剂量的6.32倍。每天记录各组中存活小鼠的数量并绘制为小鼠总数的百分比。
实施例16
培养细胞中的人SMN1小基因mRNA终点半定量RT-PCR剪接检测
RT-PCR检测被用于目测和量化原代细胞和用测试化合物处理的表达人SMN1小基因构建体的细胞系中的人SMN1小基因全长和Δ7mRNA的水平。
材料
SMN1小基因构建体
小基因构建体的制备
使用生物实施例1中所述的用于制备SMN2小基因构建体的程序，通过使用位点定向诱变将SMN2-A小基因构建体的外显子7的第六个核苷酸(胸腺嘧啶残基)替换为胞嘧啶生成SMN1版本的小基因。因此，与该 SMN2-A小基因构建体类似，SMN1小基因构建体具有在外显子7的核酸残基48之后插入的单一腺嘌呤残基。该SMN1小基因构建体被称为SMN1-A。
方案：在96孔板(每孔15ng的SMN1-A小基因报告质粒)中，使用FuGENE-6试剂对HEK293H细胞(10,000细胞/孔/199μL)进行了转染。转染后将细胞孵育24小时。在100％DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍，以生成7点浓度曲线。向每个测试孔中添加测试化合物的溶液(1μL，在DMSO中200倍)。在细胞培养孵育箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中将该板孵育7小时。然后在Cells-To-Ct裂解缓冲液中将细胞裂解并将裂解物保存于-80℃。
从SMN1小基因生成两种SMN剪接mRNA。术语“SMN1小基因FL”指对应于全长SMN1mRNA的含外显子7的第一种剪接产物。术语“SMN1小基因Δ7”指缺乏外显子7的第二种产物。
使用表11中的引物扩增SMN1小基因FL和SMN1小基因Δ7mRNA。引物SMN正向C(SEQID号11)与外显子6中的核苷酸序列(核苷酸43到核苷酸63)杂交，引物SMN反向A(SEQ IDNO.2)与萤火虫萤光素酶的编码序列中的核苷酸序列杂交。这两种低聚核苷酸的组合只检测SMN1或SMN2小基因(RT-PCR)而并不会检测内源性SMN1或SMN2基因。由于实施例16中所用的HEK293H细胞仅用人SMN1小基因转染，因此RT-PCR方法仅可以目测和量化SMN1小基因FL和SMN1小基因Δ7mRNA。
表11
1引物由PTC Therapeutics,Inc设计。
为了合成cDNA，将5μL裂解物、4μL的5倍iScript反应混合物、1μL的逆转录酶和10μL的水混合并于25℃孵育5min，之后于42℃孵育30min，再接着于85℃孵育5min。将cDNA溶液贮存于-20℃。
为了进行终点PCR，将5μL的cDNA、0.2μL的100μM正向引物、0.2μL的100μM反向引物和22.5μL的聚合酶超级混合物混合于96孔半裙边PCR板中。在下列温度下按指示的时间进行PCR：第1步：94℃(2min)，第2步：94℃(30s)，第3步：55℃(30s)，第4步：68℃(1min)，然后重复步骤2到4，共循环33次，然后保持在4℃。
在2％琼脂糖E-凝胶上将10μL的各个PCR样本进行电泳分离14分钟，用dsDNA染色试剂(如溴化乙锭)染色并用凝胶成像仪目测。
结果.如图10中所见，用化合物5(图10a)和化合物27(图10b)处理的细胞包含逐步增加的SMN1小基因FL mRNA和减少的SMN1小基因Δ7mRNA，表明对SMN1选择性剪接的校正。
不考虑到本文中所引用的文件是否被具体和单独地指示为以引用方式并入，这里所指的所有文档都以相同的程度，以引用方式被并入本申请中，用于任何和所有目的，好像每一个体的参考文件在本文中得到完全阐述。
虽然已在上文对某些实施方式进行了详细的描述，本领域的普通技术人员将清楚地认识到，实施方式可能有许多修改而不脱离其教导。所有这样的修改意在被包含在本文所描述的权利要求中。

Claims (10)

1.式(IIa1)或式(IIIa1)的化合物：
或其游离酸、游离碱、药学上可接受的盐、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体，其中
R1独立地选自哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基和2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基，其每一个可选地被一个、两个或三个独立地选自C1-6烷基、卤代-C16烷基、羟基-C1-6烷基、羟基-甲氧基、C1-6烷氧基-羰基的取代基取代；
R2独立地选自咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、噻唑基、1,3-苯并噻唑基、吡唑并[1,5-a]吡啶基和1,3-苯并噁唑基，其每一个可选地被一个、两个或三个独立地选自C1-6烷基、卤素和卤代-C1-6烷基的取代基取代；
Ra是氢；
Rb是氢。
2.权利要求1所述的化合物，其中该药学上可接受的盐是氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、乙酸盐或三氟代醋酸盐。
3.选自如下的化合物：
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2-氯代乙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2-羟基苯甲基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
4-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯
4-[3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-丙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(4-甲基-1,3-噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(哌嗪-1-基)-3-[4-(三氟代甲基)-1,3-噻唑-2-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-丙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(丙烷-2-基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(4-甲基-1,3-噻唑-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-甲基-1,3-噻唑-2-基)-7-(4-丙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(丙烷-2-基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(8-氯代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(5-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噁唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(5-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2S)-2,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2S)-2,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(1S,4S)-5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-4-乙基-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-4-乙基-3-甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-4-乙基-3-甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(3S)-4-乙基-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-4-乙基-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮或
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
或其盐、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体。
4.权利要求3的化合物，其中该化合物的盐形式选自：
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(4-甲基-1,3-噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(哌嗪-1-基)-3-[4-(三氟代甲基)-1,3-噻唑-2-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(8-氯代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(5-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(1,3-苯并噁唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐或
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
或其同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体。
5.药物组合物，其包含有效量的权利要求1-4任意一项所述的化合物以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
6.权利要求5所述的药物组合物在制备用于脊髓性肌萎缩(SMA)的治疗的药物中的用途。
7.权利要求1-4任意一项所述的化合物在制备用于在人细胞中增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的药物中的用途。
8.权利要求1-4任意一项所述的化合物在制备用于在人细胞中增加Smn蛋白质的量的药物中的用途。
9.权利要求7或8的用途，其中该人细胞是来自人SMA患者的人细胞。
10.权利要求1-4任意一项所述的化合物在制备用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的药物中的用途。
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