ES2733644T3 - Compuestos para tratar atrofia muscular espinal - Google Patents

Compuestos para tratar atrofia muscular espinal Download PDF

Info

Publication number
ES2733644T3
ES2733644T3 ES13740919T ES13740919T ES2733644T3 ES 2733644 T3 ES2733644 T3 ES 2733644T3 ES 13740919 T ES13740919 T ES 13740919T ES 13740919 T ES13740919 T ES 13740919T ES 2733644 T3 ES2733644 T3 ES 2733644T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
alkyl
isochromen
pyrazin
amino
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES13740919T
Other languages
English (en)
Inventor
Guangming Chen
Amal Dakka
Gary Mitchell Karp
Chunshi Li
Jana Narasimhan
Nikolai Naryshkin
Marla L Weetall
Ellen Welch
Xin Zhao
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
PTC Therapeutics Inc
Original Assignee
PTC Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by PTC Therapeutics Inc filed Critical PTC Therapeutics Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2733644T3 publication Critical patent/ES2733644T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/76—Benzo[c]pyrans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D497/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having oxygen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D497/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having oxygen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D497/04—Ortho-condensed systems

Abstract

Un compuesto según la fórmula (Ia1):**Fórmula** o un ácido libre, base libre, sal, isotopólogo, estereoisómero, racemato, enantiómero, diaestereómero o su tautómero, en donde: R1 es heterociclilo seleccionado de azetidin-1-ilo, tetrahidrofurano-3-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, piperidin-4-ilo, piperazin-1-ilo, 1,4-diazepan-1-ilo, 1,2,5,6-tetrahidropiridin-5-ilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo, hexahidropirrolo[3,4b]pirrol-1(2H)-ilo, (3aS,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-1(2H)-ilo, (3aS,6aS)- hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1 H)-ilo, (3aR,6aR)-hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-ilo, hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol- 2(1H)-ilo, (3aR,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-ilo, octahidro-5H-pirrolo[3,2-c]piridin-5-ilo, octahidro-6Hpirrolo[ 3,4-b]piridin-6-ilo, (4aR,7aR)-octahidro-6H-pirrolo[3,4-b]piridin-6-ilo, (4aS,7aS)-octahidro-6H-pirrolo[3,4- b]piridin-6-ilo, hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-6(2H)-ona, hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-ilo, (7R,8aS)- hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-ilo, (8aS)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-ilo, (8aR)-hexahidropirrolo[1,2- a]pirazin-2(1H)-ilo, (8aS)-octahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-ilo, (8aR)-octahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-ilo, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazin-2-ilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hex-3-ilo, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, (1 R,5S)-8- azabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-ilo, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-ilo, 9- azabiciclo[3.3.1]non-3-ilo, (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-ilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-ilo, (1S,4S)-2,5- diazabiciclo[2.2.1]hept-2-ilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.2]oct-2-ilo, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, (1R,5S)-3,8- diazabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 1,4-diazabiciclo[3.2.2]non-4-ilo, azaespiro[3.3]hept-2-ilo, 2,6-diazaespiro[3.3]hept-2-ilo, 2,7-diazaespiro[3.5]non-7-ilo, 5,8-diazaespiro[3.5]non-8-ilo, 2,7-diazaespiro[4.4]non-2-ilo o 6,9-diazaespiro[4.5]dec-9- ilo; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R3; R2 es fenilo o heteroarilo seleccionados de tien-2-ilo, tien-3-ilo, 1H-pirazol-3-ilo, 1H-pirazol-4-ilo, 1H-pirazol-5-ilo, 1Himidazol- 1-ilo, 1H-imidazol-4-ilo, 1,3-tiazol-2-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3-ilo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, pirimidin-4-ilo, 1H-indol-3-ilo, 1H-indol-4-ilo, 1H-indol-5-ilo, 1H-indol-6-ilo, 1H-indazol-5-ilo, 2H-indazol-5- ilo, indolizin-2-ilo, benzofuran-2-ilo, benzofuran-5-ilo, benzotien-2-ilo, benzotien-3-ilo, 1H-bencimidazol-2-ilo, 1Hbencimidazol- 6-ilo, 1,3-benzoxazol-2-ilo, 1,3-benzoxazol-5-ilo, 1,3-benzoxazol-6-ilo, 1,3-benzotiazol-2-ilo, 1,3- benzotiazol-5-ilo, 1,3-benzotiazol-6-ilo, 9H-purin-8-ilo, furo[3,2-b]piridin-2-ilo, furo[3,2-c]piridin-2-ilo, furo[2,3-c]piridin- 2-ilo, tieno[3,2-c]piridin-2-ilo, tieno[2,3-d]pirimidin-6-ilo, 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-ilo, 1H-pirrolo[2,3-c]piridin-4-ilo, pirrolo[1,2-a]pirimidin-7-ilo, pirrolo[1,2-a]pirazin-7-ilo, pirrolo[1,2-b]piridazin-2-ilo, pirazolo[1,5-a]piridin-2-ilo, pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-2-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-6-ilo, imidazo[1,2-a]pirimidin-2-ilo, imidazo[1,2-a]pirimidin-6-ilo, imidazo[1,2-c]pirimidin-2-ilo, imidazo[1,2-b]piridazin-2-ilo, imidazo[1,2-a]pirazin-2-ilo, imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-ilo, imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-6-ilo, [1,3]oxazolo[4,5-b]piridin-2-il o quinoxalin-2-ilo; en donde cada caso de fenilo o heteroarilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R6; Ra es hidrógeno; Rb es hidrógeno; R3 se selecciona, en cada caso, independientemente de ciano, halógeno, hidroxi, oxo, alquilo C1-8, halo-alquilo C1-8, alquil C1-8-carbonilo, alcoxi C1-8, halo-alcoxi C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, alcoxi C1-8-carbonilo, amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1-8)2-amino, amino-alquilo C1-8, alquil C1-8-amino-alquilo C1-8, (alquil C1-8)2-amino-alquilo C1-8, amino-alquil C1- 8-amino, alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1-8)2-amino, (alquil C1-8)2-amino-alquil C1-8-amino, [(alquil C1-8)2-amino-alquil C1-8]2-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1-8)(alquil C1-8)amino, [(alquil C1-8)2-amino-alquil C1- 8](alquil C1-8)amino, alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1-8)2-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1-8)(alquil C1- 8)amino, alquil C1-8-carbonil-amino, alcoxi C1-8-carbonil-amino, hidroxi-alquilo C1-8, hidroxi-alcoxi C1-8-alquilo C1-8, hidroxi-alquil C1-8-amino, (hidroxi-alquil C1-8)2-amino o (hidroxi-alquil C1-8)(alquil C1-8)amino; y R6 se selecciona, en cada caso, independientemente de halógeno, hidroxi, ciano, nitro, alquilo C1-8, alquenilo C2-8, halo-alquilo C1-8, hidroxi-alquilo C1-8, alcoxi C1-8, halo-alcoxi C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1-8)2-amino o alquil C1-8-tio.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos para tratar atrofia muscular espinal
Introducción
En el presente documento se proporcionan compuestos, composiciones de los mismos y usos con los mismos para tratar atrofia muscular espinal.
Antecedentes
La atrofia muscular espinal (AME), en su sentido más amplio, describe un conjunto de enfermedades hereditarias y adquiridas del sistema nervioso central (SNC) caracterizadas por pérdida progresiva de neuronas motoras en la médula espinal y el tronco encefálico que provoca debilidad muscular y atrofia muscular. La forma más común de la AME es provocada por mutaciones en el gen supervivencia de la neurona motora (SMN) y se manifiesta en un amplio intervalo de gravedad que afecta desde lactantes hasta adultos (Crawford y Pardo, Neurobiol. Dis., 1996, 3:97).
La AME infantil es la forma más grave de este trastorno neurodegenerativo. Los síntomas incluyen debilidad muscular, tono muscular bajo, llanto débil, flojedad o una tendencia a desplomarse, dificultad para aspirar o tragar, acumulación de secreciones en los pulmones o la garganta, dificultades para alimentarse y elevada susceptibilidad a infecciones de las vías respiratorias. Las piernas tienden a ser más débiles que los brazos y no se pueden alcanzar hitos del desarrollo, tales como levantar la cabeza o sentarse. En general, cuanto más pronto aparezcan los síntomas, más corta es la esperanza de vida. A medida que se deterioran las células de las neuronas motoras, poco después aparecen los síntomas. Las formas graves de la enfermedad son mortales y todas las formas no tienen cura conocida. La evolución de AME se relaciona directamente con la tasa de deterioro de las células de las neuronas motoras y la gravedad resultante de la debilidad. Los lactantes con una forma grave de AME frecuentemente sucumben a la enfermedad respiratoria debido a la debilidad en los músculos que soportan la respiración. Los niños con formas más suaves de la AME viven mucho más, aunque pueden necesitar una amplia asistencia médica, especialmente aquellos en el extremo más grave del espectro. El espectro clínico de los trastornos de AME se ha dividido en los cinco siguientes grupos.
(a) La AME tipo 0 (AME en el útero) es la forma más grave de la enfermedad y empieza antes del nacimiento. Normalmente, el primer síntoma de la AME tipo 0 es el movimiento reducido del feto que se puede observar por primera vez entre las semanas 30 y 36 de embarazo. Después del nacimiento, estos recién nacidos tienen poco movimiento y tienen dificultades con la deglución y respiración.
(b) La AME tipo 1 (AME infantil o enfermedad de Werdnig-Hoffmann) normalmente presenta síntomas entre los 0 y 6 meses. Esta forma de AME también es muy grave. Los pacientes nunca consiguen la capacidad de sentarse, y la muerte ocurre normalmente en el plazo de los primeros 2 años sin respiración asistida.
(c) La AME tipo 2 (AME intermedia) tiene una edad de aparición a los 7-18 meses. Los pacientes consiguen la capacidad de sentarse sin ayuda, pero nunca se ponen de pie o caminan sin ayuda. El pronóstico en este grupo es ampliamente dependiente del grado de participación respiratoria.
(d) La AME tipo 3 (AME juvenil o enfermedad de Kugelberg-Welander) se diagnostica generalmente después de los 18 meses. Los individuos con AME tipo 3 son capaces de caminar independientemente en algún momento durante su ciclo de enfermedad, pero frecuentemente llegan a quedar postrados en una silla de ruedas durante la juventud o adultez.
(e) AME tipo 4 (AME de aparición adulta). La debilidad empieza normalmente a finales de la adolescencia en la lengua, manos o pies, luego progresa a otras áreas del cuerpo. La evolución de la AME adulta es mucho más lenta y tiene poco o ningún impacto sobre la esperanza de vida.
Se ha mapeado el gen SMN por análisis de enlace a una compleja región en el cromosoma 5q. En seres humanos, esta región contiene una duplicación invertida de aproximadamente 500 mil pares de bases (kb) que da como resultado dos copias casi idénticas del gen SMN. Se provoca AME por una mutación o deleción inactivante de la copia telomérica del gen (SMN1) en ambos cromosomas, dando como resultado la pérdida de función del gen SMN1. Sin embargo, todos los pacientes retienen la copia centromérica del gen (SMN2), y el número de copias del gen SMN2 en pacientes con AME se correlaciona generalmente inversamente con la gravedad de la enfermedad; es decir, pacientes con AME menos grave tienen más copias de SMN2. Sin embargo, SMN2 es incapaz de compensar completamente la pérdida de función de SMN1 debido al corte y empalme alternativo del exón 7 provocado por una mutación C a T traduccionalmente silenciosa en el exón 7. Como resultado, la mayoría de los transcritos producidos a partir de SMN2 carecen del exón 7 (SMN2 A7), y codifican una proteína Smn truncada que tiene una función alterada y se degrada rápidamente.
Se cree que la proteína Smn desempeña una función en el procesamiento y metabolismo de ARN, que tiene una función bien caracterizada en mediar en el ensamblaje de una clase específica de complejos ARN-proteína denominados snRNPs. Smn puede tener otras funciones en las neuronas motoras, sin embargo, no está bien establecida su función en prevenir la degeneración selectiva de neuronas motoras.
En la mayoría de los casos, la AME se diagnostica basándose en síntomas clínicos y por la ausencia de todas las copias del exón 7 en el gen SMN1, como se ha determinado por prueba genética. Sin embargo, en aproximadamente el 5 % de los casos, la AME se provoca por mutaciones distintas de una deleción del gen SMN1 entero o distintas de una deleción del exón 7 entero en el gen SMN1, algunas conocidas y otras todavía no definidas. En tales casos, cuando no es factible la prueba del gen SMN1 o la secuencia del gen SMN1 no muestra ninguna anomalía, se pueden indicar otras pruebas tales como una electromiografía (EMG) o biopsia de músculo.
El cuidado médico para pacientes con AME se limita actualmente al tratamiento complementario que incluye cuidado respiratorio, nutricional y de rehabilitación; no se conoce fárma
El actual tratamiento para AME consiste en la prevención y el tratamiento de los efectos secundarios de la pérdida crónica de unidades motoras. El principal problema del tratamiento de AME tipo 1 es la prevención y el tratamiento temprano de problemas pulmonares, que son la causa primaria de muerte en la mayoría de los casos. Aunque algunos lactantes aquejados con AME llegan a ser adultos, aquellos con AME tipo 1 tienen una esperanza de vida inferior a dos años.
Se han desarrollado varios modelos de ratón de AME. En particular, el modelo SMNA7 (Le et al., Hum. Mol. Genet., 2005, 14:845) lleva tanto el gen SMN2 como varias copias de ADNc de SMN2A7 y resume muchas de las características fenotípicas de AME tipo 1. El modelo SMNA7 se puede usar para tanto estudios de expresión de SMN2, así como la evaluación de la función motora y supervivencia. El modelo de ratón de alelo C/C (cepa n.°: 008714 de Jackson Laboratory) proporciona un modelo de enfermedad de AME menos grave, teniendo los ratones niveles reducidos de tanto ARNm de SMN2 de longitud completa (SMN2 FL) como proteína Smn. El fenotipo del ratón de alelo C/C tiene el gen SMN2 y un gen híbrido mSmn1-SMN2 que experimenta corte y empalme alternativo, pero no tiene debilidad muscular evidente. El modelo de ratón de alelo C/C se usa para estudios de expresión de SMN2.
Como resultado del entendimiento mejorado de la base genética y fisiopatología de AME, se han explorado varias estrategias para el tratamiento, pero ninguna ha demostrado aún éxito en la clínica.
La sustitución génica de SMN1, usando vectores de administración viral, y sustitución celular, usando células madre SMN1+/+ diferenciadas, ha demostrado eficacia en modelos animales de AME. Se necesita más investigación para determinar la seguridad y respuesta inmunitaria y para tratar el requisito del inicio de tratamiento en la etapa neonatal antes de que se puedan aplicar estos enfoques a seres humanos.
También se ha logrado la corrección de corte y empalme alternativo de SMN2 en células cultivadas usando ácidos nucleicos sintéticos como agentes terapéuticos: (i) oligonucleótidos antisentido que secuencian elementos diana en pre-ARNm de SMN2 y desplazan el resultado de la reacción de corte y empalme hacia la generación de ARNm de SMN2 de longitud completa (Passini et al., Sci. Transl. Med., 2011, 3:72ra18; y, Hua et al., Nature, 2011,478:123) y (ii) moléculas de ARN de corte y empalme en trans que proporcionan una secuencia de ARN completamente funcional que sustituyen el fragmento mutante durante el corte y empalme y generan un ARNm de SMN1 de longitud completa (Coady y Lorson, J Neurosci., 2010, 30:126).
Otros enfoques en exploración incluyen la búsqueda de fármacos que aumentan los niveles de Smn, potencian la función residual de Smn, o compensan la pérdida de Smn. Se ha mostrado que los aminoglucósidos potencian la expresión de la proteína Smn estabilizada producida a partir de ARNm de SMN2 A7 promoviendo la ultralectura traduccional del codón de terminación aberrante, pero tienen una mala penetración del sistema nervioso central y son tóxicos después de dosificación repetida. Se ha mostrado que los agentes quimioterapéuticos, tales como la aclarubicina, aumentan la proteína Smn en cultivo celular; sin embargo, el perfil de toxicidad de estos fármacos prohíbe el uso a largo plazo en pacientes con AME. Algunos fármacos en investigación clínica para el tratamiento de AME incluyen activadores de la transcripción, tales como inhibidores de histona desacetilasa ("HDAC") (por ejemplo, butiratos, ácido valproico e hidroxiurea) y estabilizadores de ARNm (inhibidor del desencapuchado de ARNm RG3039 de Repligen), previstos para aumentar la cantidad de ARN total transcrito a partir del gen SMN2. Sin embargo, el uso de inhibidores de HDAC o estabilizadores de ARNm no trata la causa subyacente de AME y puede dar como resultado un aumento global en la transcripción y expresión génica con posibles problemas de seguridad en seres humanos.
En un enfoque alternativo, se han elegido para investigación agentes neuroprotectores tales como olesoxima. Dichas estrategias no pretenden aumentar la producción de Smn funcional para el tratamiento de AME, sino que en su lugar están siendo exploradas para proteger las neuronas motoras deficientes en Smn de la neurodegeneración.
Así, se ha descrito un sistema diseñado para identificar compuestos que aumentan la inclusión del exón 7 de SMN en ARN transcrito a partir del gen SMN2 y ciertos compuestos de benzooxazol y benzoisoxazol identificados en la solicitud internacional PCT/US2009/003238 presentada el 27 de mayo de 2009 (publicada como la publicación internacional número WO2009/151546 y la publicación de Estados Unidos número US2011/0086833). Así, se han descrito un sistema diseñado para identificar compuestos que producen una proteína Smn estabilizada de ARNm de SMN2 A7 y ciertos compuestos de isoindolinona identificados en la solicitud internacional PCT/US2009/004625 presentada el 13 de agosto de 2009 (publicada como la publicación internacional número WO2010/019236 y la publicación de Estados Unidos número US2011/0172284).
Fengton et al., Journal of Medicinal Chemistry, vol. 32, N.° 1, páginas 265-272 y Jakobsen et al., Bioorganic & Medical Chemistry, vol. 8, N.° 8, páginas 2095-2103, Rabilloud et al., Journal of Heterocyclic Chemistry, vol. 17, páginas 1065­ 1068 y el documento de patente US 6.180.625 describen compuestos que tienen un núcleo de 4H-3,1-benzoxazin-4-ona. Los documentos de patente WO 2008/123756, WO 2006/112666 y WO 2009/041715 describen compuestos que tienen un núcleo de pirano[3,4-c]piridin-1-ona. Yagi et al., Yuki Gosei Kagaku, vol. 27, N.° 6, páginas 564-569, describen compuestos de 2H-nafto[1,2-d]-triazol-2-ilo, un amino, un catión diazonio o un naftilazo. El documento de patente WO 03/074519 describe compuestos que tienen un núcleo de cromen-2-ona. Los documentos de patente WO 2004/002961 y WO 2004/111014 desvelan derivados condensados de pirimidina.
A pesar del progreso hecho en el entendimiento de la base genética y la fisiopatología de AME, sigue existiendo una necesidad de identificar compuestos que alteren el curso de la atrofia muscular espinal, una de las enfermedades neurológicas infantiles más devastadoras.
Compendio
En una realización, en el presente documento se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. En una realización específica, en el presente documento se proporciona un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo para tratar atrofia muscular espinal (AME).
La AME se provoca por la deleción o mutación del gen SMN1, dando como resultado la degeneración selectiva de neuronas motoras deficientes en Smn. Aunque los sujetos humanos retienen varias copias del gen SMN2, la pequeña cantidad de proteína Smn funcional expresada de SMN2 no compensa completamente la pérdida de Smn que se hubiera expresado del gen SMN1. Los compuestos, composiciones de los mismos y usos con los mismos descritos en el presente documento se basan, en parte, en el descubrimiento de los solicitantes de que un compuesto de la fórmula (Ia1) aumenta la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir de un minigén SMN2. El minigén reproduce la reacción de corte y empalme alternativo del exón 7 de SMN2 que da como resultado el salto del exón 7 en la mayoría de los transcritos de s MN2. Así, se pueden usar los compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos para modular la inclusión del exón 7 de s MN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2. Los solicitantes también han descubierto que un compuesto de la fórmula (Ia1) aumenta la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir de un minigén SMN1. Así, se puede usar los compuestos de la fórmula o una forma de los mismos para modular la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1.
En una realización específica, en el presente documento se proporcionan compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos que se puede usar para modular la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2. En otra realización específica, en el presente documento se proporcionan compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos que se pueden usar para modular la inclusión del exón 7 de s MN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1. En otra realización más, en el presente documento se proporcionan compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos que se pueden usar para modular la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2, respectivamente.
En otro aspecto, en el presente documento se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo para tratar AME. En una realización específica, en el presente documento se proporciona un compuesto de la fórmula (Ia1) para su uso en un método de tratamiento de AME en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz del compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. El compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se administra preferentemente a un sujeto humano en una composición farmacéutica. En otra realización específica, en el presente documento se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) para tratar AME, en donde el compuesto potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2. Sin desear quedar ligado por teoría, los compuestos de la fórmula (Ia1) potencian la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 y aumentan los niveles de proteína Smn producida a partir del gen SMN2, y así se pueden usar para tratar AME en un sujeto humano en necesidad de los mismos.
En el presente documento también se describen cebadores y/o sondas descritos más adelante en los ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13, y/o SEQ ID NO. 2, 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO. 3 o 10) y el uso de los cebadores y/o sondas. También se describe en el presente documento una secuencia de nucleótidos aislada que comprende SEQ ID NO. 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o 13. También se describe en el presente documento una secuencia de nucleótidos aislada que consiste esencialmente en SEQ ID NO. 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o 13. También se describe en el presente documento una secuencia de nucleótidos aislada que consiste en SEQ ID NO. 1,2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o 13.
En ciertas realizaciones, la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o gen SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 se puede usar como biomarcador para AME, tal como se describe en el presente documento. En otras realizaciones, la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 se puede usar como biomarcador para tratar un paciente con un compuesto, tal como se describe en el presente documento. En una realización específica, el paciente es un paciente con AME. En otra realización específica, el paciente no es un paciente con AME.
En ciertas realizaciones, la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, así como la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, se puede usar como biomarcadores para tratar un paciente con un compuesto, tal como se describe en el presente documento. En una realización específica, el paciente es un paciente con AME. En otra realización específica, el paciente no es un paciente con AME.
Se pueden usar en ensayos un cebador(es) de SMN y/o una sonda de SMN descritos más adelante, tales como PCR (por ejemplo, qPCR), amplificación por círculo rodante y RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR) para evaluar y/o cuantificar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o gen SMN2 e incluye o no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2.
Se pueden usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 2, 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO.
3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para determinar si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo) potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir de un gen SMN2.
Se pueden usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 2, 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO.
3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para determinar si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo) potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir de un gen SMN1.
Se pueden usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 2, 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO.
3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para determinar si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo) potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en ARNm que se transcribe a partir de un gen SMN1 y/o SMN2.
Se pueden usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 7, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO. 3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para monitorizar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 e incluye el exón 7 de SMN2 en una muestra de paciente. El paciente puede ser un paciente con AME. Por tanto, el paciente puede no ser un paciente con AME.
Se pueden usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 7, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO. 3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para monitorizar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 e incluye el exón 7 de SMN1 en una muestra de paciente. El paciente puede ser un paciente con AME. Por tanto, el paciente puede no ser un paciente con AME.
Se pueden usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 7, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO. 3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para monitorizar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra de paciente. El paciente puede ser un paciente con AME. Por tanto, el paciente puede no ser un paciente con AME.
Se pueden usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 7,8, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO. 3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para monitorizar la respuesta de un paciente a un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo). El paciente puede ser un paciente con AME. Por tanto, el paciente puede no ser un paciente con AME.
También se describe en el presente documento un método de determinación de si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, que comprende (a) poner en contacto ARNm que se transcribe a partir de un minigén SMN2 descrito en el presente documento o en la solicitud internacional PCT/US2009/004625, presentada el 13 de agosto de 2009 (publicada como la publicación internacional número WO2010/019236) o la publicación de Estados Unidos número US2011/0172284 en presencia de un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) con un cebador(es) descrito(s) en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 1 y/o 2) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR, RT-qPCR, PCR, RT-PCR de punto final, qPCR o amplificación por círculo rodante; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en ausencia del compuesto indica que el compuesto potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en ausencia del compuesto indica que el compuesto no potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2.
También se describe en el presente documento un método de determinación de si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1, que comprende (a) poner en contacto ARNm que se transcribe a partir de un minigén SMN1 descrito en la solicitud internacional p Ct /US2009/004625, presentada el 13 de agosto de 2009 (publicada como la publicación internacional número WO2010/019236) o la publicación de Estados Unidos número US2011/0172284 en presencia de un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) con un cebador(es) descrito(s) en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 1 y/o 2) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR, RT-qPCR, PCR, RT-PCR de punto final, qPCR o amplificación por círculo rodante; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en ausencia del compuesto indica que el compuesto potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en ausencia del compuesto indica que el compuesto no potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1.
También se describe en el presente documento un método de determinación de si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, que comprende (a) poner en contacto ARNm que se transcribe a partir de un minigén SMN2 descrito en el presente documento o en la solicitud internacional PCT/US2009/004625, presentada el 13 de agosto de 2009 (publicada como la publicación internacional número WO2010/019236) o la publicación de Estados Unidos número US2011/0172284 en presencia de un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) con una sonda descrita en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante y, cuando sea aplicable, transferencia Northern o transferencia Southern; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en ausencia del compuesto indica que el compuesto potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en ausencia del compuesto indica que el compuesto no potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2.
También se describe en el presente documento un método de determinación de si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1, que comprende (a) poner en contacto ARNm que se transcribe a partir de un minigén SMN1 descrito en la solicitud internacional p Ct /US2009/004625, presentada el 13 de agosto de 2009 (publicada como la publicación internacional número WO2010/019236) o la publicación de Estados Unidos número US2011/0172284 en presencia de un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) con una sonda descrita en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante y, cuando sea aplicable, transferencia Northern o transferencia Southern; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en ausencia del compuesto indica que el compuesto potencia la inclusión del exón 7 de SMN 1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en ausencia del compuesto indica que el compuesto no potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2.
También se describe en el presente documento un método de determinación de si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, que comprende (a) poner en contacto ARNm que se transcribe a partir de un minigén SMN2 descrito en el presente documento o en la solicitud internacional PCT/US2009/004625, presentada el 13 de agosto de 2009 (publicada como la publicación internacional número WO2010/019236) o la publicación de Estados Unidos número US2011/0172284 en presencia de un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) con un cebador(es) (por ejemplo, SEQ ID NO. 1 o 2) y/o una sonda descrita en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante y, cuando sea aplicable, transferencia Northern o transferencia Southern; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en ausencia del compuesto indica que el compuesto potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN2 en ausencia del compuesto indica que el compuesto no potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2.
También se describe en el presente documento un método de determinación de si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1, que comprende (a) poner en contacto ARNm que se transcribe a partir de un minigén SMN1 descrito en la solicitud internacional p Ct /US2009/004625, presentada el 13 de agosto de 2009 (publicada como la publicación internacional número WO2010/019236) o la publicación de Estados Unidos número US2011/0172284 en presencia de un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) descrito en el presente documento) con un cebador(es) (por ejemplo, SEQ ID NO. 1 o 2) y/o una sonda descrita en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante y, cuando sea aplicable, transferencia Northern o transferencia Southern; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en ausencia del compuesto indica que el compuesto potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en presencia del compuesto con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 en ausencia del compuesto indica que el compuesto no potencia la inclusión del exón 7 de s MN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1.
En el presente documento también se describen kits que comprenden un cebador y/o sondas descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de s Mn tales como SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 2, 9 o 12, y/o sondas de Sm N tales como SEQ ID NO. 3 o 10) y su uso.
Breve descripción de las figuras
La figura 1, mencionada en el ejemplo biológico 1, es un dibujo esquemático de la construcción de minigén SMN2-A, que produce dos transcritos de ARNm alternativamente cortados y empalmados: un ARNm de longitud completa que contiene el exón 7 y un ARNm A7 que carece del exón 7. El nucleótido adenina insertado en el exón 7 de SMN2-A después del resto nucleico 48 se representa por la letra "A". Alternativamente, el nucleótido también se puede seleccionar de citosina o timina. Debido a la inserción de un nucleótido (A, C, o T) después del resto nucleico 48, el ARNm de longitud completa no contiene un codón de terminación en el marco de lectura abierto de SMN, mientras que el ARNm A7 tiene un codón de terminación en el exón 8 que se indica por la palabra "Parada".
La figura 2, mencionada en el ejemplo biológico 1, proporciona la secuencia de ADN del minigén de la construcción de minigén SMN2-A de SEQ ID NO.21 (figura 2a). Como se muestra en la figura 2b, se pueden encontrar las siguientes subsecuencias:
1-70: 5'UTR (deg);
71-79: exón 6: codón de iniciación y sitio BamHI (atgggatcc);
80-190: exón 6;
191-5959: intrón 6;
5960-6014: el exón 7 con inserto del nucleótido adenina "A" (posición 6008);
6015-6458: intrón 7;
6459-6481: parte del exón 8;
6482-8146: sitio BamHI (secuencia en el extremo 5'), secuencia codificante de luciferasa que empieza con el codón 2 (sin codón de iniciación), sitio NotI (secuencia en el extremo 3'), codón de terminación TAA; y
8147-8266: 3'UTR (deg).
Para generar la versión SMN1 del minigén, el sexto nucleótido del exón 7 (un resto de timina) de la construcción de minigén SMN2-A se cambia a citosina usando mutagénesis dirigida al sitio. Así, similar a la construcción de minigén SMN2-A, la construcción de minigén SMN1 tiene un único resto de adenina insertado después del resto nucleico 48 del exón 7. La construcción de minigén SMN1 se denomina SMN1-A. Similarmente, el nucleótido insertado en la construcción de minigén SMN1 después del resto nucleico 48 del exón 7 también se puede seleccionar alternativamente de citosina o timina.
La figura 3, mencionada en el ejemplo biológico 2, muestra la corrección del sitio de corte y empalme alternativo del minigén SMN2 en células tratadas con concentraciones crecientes de compuesto 65 (figura 3a) y compuesto 69 (figura 3b) durante un periodo de 24 h. Se cuantificaron los niveles de ARNm del minigén SMN2 de longitud completa usando PCR cuantitativa con transcripción inversa (RT-qPCR). Se normalizó el nivel de ARNm del minigén SMN2 de longitud completa en muestras tratadas con compuesto al de en muestras tratadas con vehículo y se representó en función de la concentración de compuesto.
La figura 4, mencionada en el ejemplo biológico 3, muestra la corrección del sitio de corte y empalme alternativo de SMN2 en fibroblastos de pacientes con AME tipo 1 tratados con concentraciones crecientes de compuesto 65 (figura 4a) y compuesto 69 (figura 4b) durante un periodo de 24 h. Se cuantificaron los niveles de ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 usando RT-qPCR. Se normalizaron los niveles de ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 en muestras tratadas con compuesto a aquellos en muestras tratadas con vehículo y se representaron en función de la concentración de compuesto.
La figura 5, mencionada en el ejemplo biológico 4, muestra la corrección del sitio de corte y empalme alternativo de SMN2 en fibroblastos de pacientes con AME tipo 1 tratados con concentraciones crecientes de compuesto 65 (figura 5a) y compuesto 69 (figura 5b) durante un periodo de 24 h. Se amplificaron ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 usando PCR de punto final con transcripción inversa (RT-PCR) y se separaron los productos de PCR usando electroforesis en gel de agarosa. Las bandas superiores e inferiores corresponden a ARNm de SMN2 de longitud completa y A7, respectivamente. La intensidad de cada banda es proporcional a la cantidad de ARN presente en la muestra.
La figura 6, mencionada en el ejemplo biológico 5, muestra la corrección del sitio de corte y empalme alternativo de SMN2 (en tanto el gen SMN2 como el gen híbrido Smn1-SMN2 de ratón) en tejidos de cerebro y de músculo en un modelo de ratón con AME de alelo C/C resultante del tratamiento durante 10 días dos veces al día (BID) con 10 mg/kg de compuesto 65 (figura 6a) y compuesto 69 (figura 6b). Se cuantificaron los niveles de ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 usando RT-qPCR, se estableció a 1 la cantidad combinada de ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 y se calcularon las cantidades fraccionarias de SMN2 de longitud completa y A7.
La figura 7, mencionada en el ejemplo biológico 6, muestra la corrección del sitio de corte y empalme alternativo de SMN2 (en tanto el gen SMN2 como el gen híbrido Smn1-SMN2 de ratón) en tejidos de cerebro y de músculo en un modelo de ratón con AME de alelo C/C resultante del tratamiento durante 10 días BID con 10 mg/kg de compuesto 65 (figura 7). Se amplificaron ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 usando RT-PCR. Los productos de PCR se separaron usando electroforesis en gel de agarosa. Las bandas superiores e inferiores corresponden a ARNm de s MN2 de longitud completa y A7, respectivamente. La intensidad de cada banda es proporcional a la cantidad de ARN presente en la muestra.
La figura 8, mencionada en el ejemplo biológico 7, muestra un aumento dependiente de la dosis en la expresión de proteínas Smn en células humanas de fibroblasto de AME tipo 1 tratadas durante un periodo de 48 horas con compuesto 65 (figura 8a) y compuesto 69 (figura 8b).
La figura 9, mencionada en el ejemplo biológico 8, muestra un aumento en los recuentos de motas nucleares (gemas) en fibroblastos de pacientes con a Me tipo 1 tratados con compuesto 65 (figura 9a) y compuesto 69 (figura 9b) durante un periodo de 48 horas. Se contaron las motas usando microscopía de fluorescencia. Se normalizó el número de motas en muestras tratadas con compuesto a aquél en muestras tratadas con vehículo y se representó en función de la concentración de compuesto.
La figura 10, mencionada en el ejemplo biológico 9, muestra un aumento en la expresión de proteínas Smn (círculos negros) en neuronas motoras generadas a partir de células iPS generadas a partir de fibroblastos de pacientes con AME tipo 1 tratados con compuesto 65 (figura 10a) y compuesto 69 (figura 10b) durante un periodo de 72 horas. Se cuantificó el nivel de proteína Smn usando inmunotinción de Smn y microscopía de fluorescencia confocal. Se normalizó el nivel de proteína Smn en muestras tratadas con compuesto a aquél en muestras tratadas con vehículo y se representó en función de la concentración de compuesto.
La figura 11, mencionada en el ejemplo biológico 11, muestra el aumento de la expresión de proteínas Smn en tejidos de cerebro, médula espinal, músculo y hígado en un modelo de ratón con AME de alelo C/C resultante del tratamiento durante 10 días BID con 10 mg/kg de compuesto 65 (figura 11a, n = 5) y compuesto 69 (figura 11b, n = 4), donde tres estrellas (***) en cada figura representa p < 0,001 por ANOVA.
La figura 12, mencionada en el ejemplo biológico 12, muestra un aumento dependiente de la dosis en la expresión de proteínas Smn en tejidos (Cerebro, figura 12a; médula espinal, figura 12b; y músculo, figura 12c) en un modelo de ratón neonatal con AME A7 resultante del tratamiento durante 7 días una vez al día (QD) con las dosis indicadas de compuesto 65, donde tres estrellas (***) en cada figura representan p < 0,001 por ANOVA.
La figura 13, mencionada en el ejemplo ejemplo biológico 13, muestra diferencias en el peso corporal en un modelo de ratón neonatal con AME A7 resultante del tratamiento hasta el día postnatal (PND) 140 con compuesto 65 (figura 13a) y hasta PND 79 con compuesto 69 (figura 13b).
La figura 14, mencionada en el ejemplo biológico 14, muestra un reflejo de enderezamiento en un modelo de ratón neonatal con AME A7 resultante del tratamiento con compuesto 65 (figura 14a) y compuesto 69 (figura 14b).
La figura 15, mencionada en el ejemplo biológico 15, muestra la supervivencia mejorada en el enderezamiento resultante de tratamiento con compuesto 65 (figura 15a) y compuesto 69 (figura 15b).
La figura 16, mencionada en el ejemplo biológico 15, muestra el aumento de la expresión de proteínas Smn en tejidos de cerebro y músculo en un modelo de ratón con AME A7 resultante de tratamiento con compuesto 65 hasta PND 144 (figura 16a) y con compuesto 69 hasta PND 80 y PND 83 con respecto a ratones heterocigóticos tratados con vehículo y de la misma edad, respectivamente.
La figura 17, mencionada en el ejemplo biológico 16, muestra un aumento dependiente de la dosis en ARNm del minigén SMN1 FL y una disminución dependiente de la dosis en ARNm del minigén SMN1 A7 en células humanas de fibroblasto con AME tipo 1 tratadas durante un periodo de 7 horas con compuesto 65 (figura 17a) y compuesto 69 (figura 17b). Se amplificaron cada uno de ARNm del minigén SMN1 de longitud completa y A7 usando RT-PCR y se separaron los productos de PCR resultantes usando electroforesis en gel de agarosa. Las bandas superiores e inferiores corresponden a ARNm del minigén SMN1 de longitud completa y A7, respectivamente. La intensidad de cada banda es proporcional a la cantidad de ARN presente en la muestra.
Descripción detallada
En el presente documento se describen compuestos de la fórmula (I):
Figure imgf000009_0001
o una forma del mismo, en donde:
W1 es C-Rb o N;
W2 y W6 son C-R1 o C-R2;
W3 , W4 y W5 son C-Ra o N;
en donde uno de W2 y W6 es C-R1 y el otro es C-R2 , a condición de que, cuando W2 sea C-R1 , entonces W6 es C-R2 ; o, cuando W2 sea C-R2 , entonces W6 es C-R1 y,
en donde uno cualquiera, dos o tres de los restantes w-i , W3, W4 y W5 pueden ser simultáneamente N;
R1 es alquilo C1 -8 , amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8 )2-amino, alcoxi C1_s-alquil C1-8-amino, (alcoxi C1_s-alquil C1-8)2-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1 _8)(alquil C1 -8 )amino, amino-alquilo C1 -8 , alquil C1-8-amino-alquilo C1 -8 , (alquil C1 -8 )2-aminoalquilo Ci _8 , alcoxi Ci _8-alquil Ci _8-amino-alquilo Ci _8 , (alcoxi Ci _8-alquil Ci _8)2-amino-alquilo Ci _8 , (alcoxi Ci _8-alquil Ci_ 8)(alquil C1-8)amino-alquilo C1-8 , amino-alquil C1-8-amino, (amino-alquil C1 -8 )2-amino, (amino-alquil C1 -8 )(alquil C1-8)amino, alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1 -8 )2-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1-8)(alquil e x a m in o , (alquil Ci - 8 )2-amino-alquil Ci -8-amino, [(alquil Ci -8 )2-amino-alquil Ci -8](alquil Ci -8)amino, amino-alcoxi C1 -8 , alquil Ci -8-amino-alcoxi Ci -8, (alquil Ci - 8 )2-amino-alcoxi C1-8 , alcoxi Ci -8-alquil Ci -8-amino-alcoxi Ci -8, alcoxi Ci -8-alquil Ci -8-amino-alcoxi Ci -8, (alcoxi Ci -8-alquil Ci - s )(alquil Ci -8)amino-alcoxi Ci -8, amino-alquenilo C2-8, alquil Ci -8-aminoalquenilo C2-8, (alquil Ci -8 )2-amino-alquenilo C2-8, amino-alquinilo C2-8, alquil Ci -8-amino-alquinilo C2-8, (alquil Ci - 8 )2-amino-alquinilo C2-8, halo-alquil Ci -8-amino, (halo-alquil Ci - 8 )2-amino, (halo-alquil Ci - s )(alquil Ci -8)amino, hidroxi-alquilo Ci -8, hidroxi-alcoxi Ci -8-alquilo Ci -8, hidroxi-alquil Ci -8-amino, (hidroxi-alquil Ci - 8 )2-amino, (hidroxi-alquil Ci - s )(alquil Ci -8)amino, hidroxi-alquil Ci -8-amino-alquilo Ci -8, (hidroxi-alquil Ci - 8 )2-amino-alquilo Ci -8, (hidroxi-alquil Ci - s )(alquil Ci -8)amino-alquilo Ci -8, hidroxi-alquil Ci -8-amino-alcoxi Ci -8, (hidroxi-alquil Ci - 8 )2-amino-alcoxi Ci -8, (hidroxi-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino-alcoxi Ci -8, hidroxi-alquil Ci -8-amino-alquil Ci -8-amino, (hidroxi-alquil Ci -8-amino-alquil Ci -8 )2-amino, (hidroxi-alquil Ci - 8 )2-amino-alquil Ci -8-amino, (hidroxi-alquil Ci -8-amino-alquil C i -8)(alquil Ci -8)amino, (hidroxi-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino-alquil Ci -8-amino, [(hidroxi-alquil Ci - 8 )2-amino-alquil Ci -8](alquil Ci -8)amino, [(hidroxi-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino-alquil Ci -8](alquil Ci -8)amino, heterociclilo, heterociclil-alquilo Ci -8, heterociclil-alcoxi Ci -8, heterociclil-amino, (heterociclil)(alquil Ci -8)amino, heterociclil-amino-alquilo Ci -8, heterociclil-alquil Ci -8-amino, (heterociclil-alquil Ci - 8 )2-amino, (heterociclil-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino, heterociclil-alquil Ci -8-amino-alquilo Ci -8, (heterociclil-alquil Ci -8 )2-amino-alquilo Ci -8, (heterociclil-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino-alquilo Ci -8, heterociclil-oxi, heterociclil-carbonilo, heterociclil-carbonil-oxi, aril-alquil Ci -8-amino, (aril-alquil Ci -8 )2-amino, (aril-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino, aril-alquil Ci -8-amino-alquilo Ci -8, (aril-alquil Ci -8 )2-amino-alquilo Ci -8, (aril-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino-alquilo Ci -8, heteroarilo, heteroaril-alquilo Ci -8, heteroaril-alcoxi Ci -8, heteroaril-amino, heteroaril-alquil Ci -8-amino, (heteroarilalquil Ci - 8 )2-amino, (heteroaril-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino, heteroaril-alquil Ci -8-amino-alquilo Ci -8, (heteroaril-alquil Ci - 8 )2-amino-alquilo Ci -8 o (heteroaril-alquil C i -8)(alquil Ci -8)amino-alquilo Ci -8; en donde cada caso de heterociclilo y heteroarilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R3 y un sustituyente R4 opcional adicional; y,
en donde, alternativamente, cada caso de heterociclilo y heteroarilo se sustituye opcionalmente con uno, dos, tres o cuatro sustituyentes R3;
R2 es arilo, aril-amino, aril-amino-carbonilo, heterociclilo, heteroarilo o heteroaril-amino;
en donde cada caso de arilo, heterociclilo y heteroarilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R6 y un sustituyente R7 opcional adicional;
Ra se selecciona, en cada caso, independientemente de hidrógeno, halógeno o alquilo Ci -8;
Rb es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci -8 o alcoxi Ci -8;
R3 se selecciona, en cada caso, independientemente de ciano, halógeno, hidroxi, oxo, alquilo Ci -8, halo-alquilo Ci -8, alquil Ci -8-carbonilo, alcoxi Ci -8, halo-alcoxi Ci -8, alcoxi Ci -8-alquilo Ci -8, alcoxi Ci -8-carbonilo, amino, alquil Ci -8-amino, (alquil Ci -8 )2-amino, amino-alquilo Ci -8, alquil Ci -8-amino-alquilo Ci -8, (alquil Ci - 8 )2-amino-alquilo Ci -8, amino-alquil Ci -8-amino, alquil Ci -8-amino-alquil Ci -8-amino, (alquil Ci -8-amino-alquil Ci - 8 )2-amino, (alquil Ci - 8 )2-amino-alquil Ci -8-amino, [(alquil Ci - 8 )2-amino-alquil Ci -8 ]2-amino, (alquil Ci -8-amino-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino, [(alquil Ci -8 )2-amino-alquil C i -8](alquil Ci -8)amino, alcoxi Ci -8-alquil Ci -8-amino, (alcoxi Ci -8-alquil Ci - 8 )2-amino, (alcoxi Ci -8-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino, alquil Ci -8-carbonil-amino, alcoxi Ci -8-carbonil-amino, hidroxi-alquilo Ci -8, hidroxi-alcoxi Ci -8-alquilo Ci -8, hidroxi-alquil Ci -8-amino, (hidroxi-alquil Ci - 8 )2-amino o (hidroxi-alquil Ci -8)(alquil Ci -8)amino;
R4 es cicloalquilo C3 - i4 , cicloalquil C3 - i4 -alquilo Ci -8, cicloalquil C3 - i4 -amino, aril-alquilo Ci -8, aril-alcoxi Ci -8-carbonilo, aril-sulfoniloxi-alquilo Ci -8, heterociclilo o heterociclil-alquilo Ci -8; en donde cada caso de cicloalquilo C3 - i4 , arilo y heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R5 ;
R5 se selecciona, en cada caso, independientemente de halógeno, hidroxi, ciano, nitro, alquilo Ci -8, halo-alquilo Ci -8, alcoxi Ci -8, halo-alcoxi Ci -8, amino, alquil Ci -8-amino, (alquil Ci - 8 )2-amino o alquil Ci -8-tio;
R6 se selecciona, en cada caso, independientemente de halógeno, hidroxi, ciano, nitro, alquilo Ci -8, alquenilo C2-8, halo-alquilo Ci -8, hidroxi-alquilo Ci -8, alcoxi Ci -8, halo-alcoxi Ci -8, alcoxi Ci -8-alquilo Ci -8, amino, alquil Ci -8-amino, (alquil Ci - 8 )2-amino o alquil Ci -8-tio; y,
R7 es cicloalquilo C3 - i4 , cicloalquil C3 - i4 -oxi, arilo, heterociclilo o heteroarilo.
Realizaciones
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w i es C-Rb; W3 es C-Ra; W4 es C-Ra; W5 es C-Ra ; y, uno de W2 y W6 es C-R i y el otro es C-R2 , a condición de que, cuando W2 sea C-Ri , entonces W6 es C-R2 ; o, cuando W2 sea C-R2 , entonces W6 es C-R i .
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w i es C-Rb; W3 es C-Ra ; W4 es N; W5 es C-Ra; y, uno de W2 y W6 es C-Ri y el otro es C-R2 , a condición de que, cuando W2 sea C-R i , entonces W6 es C-R2 ; o, cuando W2 sea C-R2 , entonces W6 es C-R i .
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w i es C-Rb; W3 es N; W4 es C-Ra ; W5 es C-Ra; y, uno de W2 y W6 es C-Ri y el otro es C-R2 , a condición de que, cuando W2 sea C-R i , entonces W6 es C-R2 ; o, cuando W2 sea C-R2 , entonces
i0
W6 es C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w i es N; W3 es C-Ra ; W4 es C-Ra ; W5 es C-Ra; y, uno de W2 y w@ es C-Ri y el otro es C-R2 , a condición de que, cuando w2 sea C-R1 , entonces w6 es C-R2 ; o, cuando w2 sea C-R2 , entonces w6 es C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb; w3 es C-Ra ; w4 es C-Ra; w5 es N; y, uno de w2 y w6 es C-R1 y el otro es C-R2 , a condición de que, cuando w2 sea C-R1 , entonces w6 es C-R2 ; o, cuando w2 sea C-R2 , entonces w6 es C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb; w2 es C-R1 ; w3 es C-Ra ; w4 es C-Ra ; w5 es C-Ra ; y, w6 es C-R2.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb; w2 es C-R2 ; w3 es C-Ra ; w4 es C-Ra ; w5 es C-Ra ; y, w6 es C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb; w2 es C-R1 ; w3 es C-Ra; w4 es N; w5 es C-Ra ; y, w6 es C-R2.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb; w2 es C-R2 ; w3 es C-Ra; w4 es N; w5 es C-Ra ; y, w6 es C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb; w2 es C-R1 ; w3 es N; w4 es C-Ra; w5 es C-Ra ; y, w6 es C-R2.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb; w2 es C-R2 ; w3 es N; w4 es C-Ra; w5 es C-Ra ; y, w6 es C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es N; w2 es C-R1 ; w3 es C-Ra ; w4 es C-Ra; w5 es C-Ra ; y, w6 es C-R2.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es N; w2 es C-R2 ; w3 es C-Ra ; w4 es C-Ra; w5 es C-Ra ; y, w6 es C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb; w2 es C-R1 ; w3 es C-Ra; w4 es C-Ra ; w5 es N; y, w6 es C-R2.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb; w2 es C-R2 ; w3 es C-Ra; w4 es C-Ra ; w5 es N; y, w6 es C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es C-Rb.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w 1 es N.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w2 es C-R1 , a condición de
Figure imgf000011_0001
e w6 sea C-R2.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w2 es C-R2 , a condición de
Figure imgf000011_0002
e w6 sea C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w6 es C-R1 , a condición de
Figure imgf000011_0003
e w2 sea C-R2.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w6 es C-R2 , a condición de
Figure imgf000011_0004
e w2 sea C-R1.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w3 es C-Ra .
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w3 es N.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w4 es C-Ra .
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w4 es N.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w5 es C-Ra .
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I), w5 es N.
Por ejemplo, en un compuesto de la fórmula (I),
R1 es alquilo C1-8 , amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8 )2-amino, alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1 -8)2-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1 - s )(alquil C1 -8 )amino, amino-alquilo C1.8 , alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (alquil C1 -8 )2-aminoalquilo C1 -8 , alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (alcoxi C1-8-alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C1.8 , (alcoxi C1-8-alquil C1.
8)(alquil C1-8 )amino-alquilo C1.8 , amino-alquil C1-8-amino, (amino-alquil C1 -8 )2-amino, (amino-alquil C1 - s )(alquil C1.
8)amino, alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1 -8 )2-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1-8 )(alquil e x a m in o , (alquil Ci-8)2-amino-alquil Ci-8-amino, [(alquil Ci-8)2-amino-alquil Ci-8](alquil Ci-8)amino, amino-alcoxi C1-8, alquil Ci-8-amino-alcoxi Ci-8, (alquil Ci-8)2-amino-alcoxi C1-8, alcoxi Ci-8-alquil Ci-8-amino-alcoxi Ci-8, (alcoxi Ci-8-alquil Ci-8)2-amino-alcoxi Ci-8, (alcoxi Ci-8-alquil Ci-s)(alquil Ci-8)amino-alcoxi Ci-8, amino-alquenilo C2-8, alquil Ci-8-aminoalquenilo C2-8, (alquil Ci-8)2-amino-alquenilo C2-8, amino-alquinilo C2-8, alquil Ci-8-amino-alquinilo C2-8, (alquil Ci-8)2-amino-alquinilo C2-8, halo-alquil Ci-8-amino, (halo-alquil Ci-8)2-amino, (halo-alquil Ci-s)(alquil Ci-8)amino, hidroxi-alquilo Ci-8, hidroxi-alcoxi Ci-8-alquilo Ci-8, hidroxi-alquil Ci-8-amino, (hidroxi-alquil Ci-8)2-amino, (hidroxi-alquil Ci-s)(alquil Ci-8)amino, hidroxi-alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (hidroxi-alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8, (hidroxi-alquil Ci-s)(alquil Ci-8)amino-alquilo Ci-8, hidroxi-alquil Ci-8-amino-alcoxi Ci-8, (hidroxi-alquil Ci-8)2-amino-alcoxi Ci-8, (hidroxi-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alcoxi Ci-8, hidroxi-alquil Ci-8-amino-alquil Ci-8-amino, (hidroxi-alquil Ci-8-amino-alquil Ci-8)2-amino, (hidroxi-alquil Ci-8)2-amino-alquil Ci-8-amino, (hidroxi-alquil Ci-8-amino-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, (hidroxi-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquil Ci-8-amino, [(hidroxi-alquil Ci-8)2-amino-alquil Ci-8](alquil Ci-8)amino, [(hidroxi-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquil Ci-8](alquil Ci-8)amino, heterociclilo, heterociclil-alquilo Ci-8, heterociclil-alcoxi Ci-8, heterociclil-amino, (heterociclil)(alquil Ci-8)amino, heterociclil-amino-alquilo Ci-8, heterociclil-alquil Ci-8-amino, (heterociclil-alquil Ci-8)2-amino, (heterociclil-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, heterociclil-alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (heterociclil-alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8, (heterociclil-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquilo Ci-8, heterociclil-oxi, heterociclil-carbonilo, heterociclil-carbonil-oxi, aril-alquil Ci-8-amino, (aril-alquil Ci-8)2-amino, (aril-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, aril-alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (aril-alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8, (aril-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquilo Ci-8, heteroarilo, heteroaril-alquilo Ci-8, heteroaril-alcoxi Ci-8, heteroaril-amino, heteroaril-alquil Ci-8-amino, (heteroarilalquil Ci-8)2-amino, (heteroaril-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, heteroaril-alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (heteroaril-alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8 o (heteroaril-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquilo Ci-8; en donde cada caso de heterociclilo y heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
También se describe en el presente documento un compuesto de la fórmula (I), en donde
Ri es amino, (alquil Ci-8)2-amino, alcoxi Ci-8-alquil Ci-8-amino, (alcoxi Ci-8-alquil Ci-8)2-amino, amino-alquilo Ci-8, alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8, alcoxi Ci-8-alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (alcoxi Ci-8-alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8, (alcoxi Ci-8-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquilo Ci-8, amino-alquil Ci-8-amino, (amino-alquil Ci-8)2-amino, (amino-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, alquil Ci-8-amino-alquil Ci-8-amino, (alquil Ci-8-amino-alquil Ci-8)2-amino, (alquil Ci-8-amino-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, (alquil Ci-8)2-amino-alquil Ci-8-amino, [(alquil Ci-8)2-amino-alquil Ci-8](alquil Ci-8)amino, amino-alcoxi Ci-8, alquil Ci-8-amino-alcoxi Ci-8, (alquil Ci-8)2-amino-alcoxi Ci-8, alcoxi Ci-8-alquil Ci-8-amino-alcoxi Ci-8, (alcoxi Ci-8-alquil Ci-8)2-amino-alcoxi Ci-8, (alcoxi Ci-8-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alcoxi Ci-8, amino-alquenilo C2-8, alquil Ci-8-amino-alquenilo C2-8, (alquil Ci-8)2-amino-alquenilo C2-8, amino-alquinilo C2-8, alquil Ci-8-amino-alquinilo C2-8, (alquil Ci-8)2-amino-alquinilo C2-8, halo-alquil Ci-8-amino, (halo-alquil Ci-8)2-amino, (halo-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, hidroxi-alquilo Ci-8, hidroxi-alcoxi Ci-8-alquilo Ci-8, hidroxi-alquil Ci-8-amino, (hidroxi-alquil Ci-8)2-amino, (hidroxi-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, hidroxi-alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (hidroxi-alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8, (hidroxi-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquilo Ci-8, hidroxi-alquil Ci-8-amino-alcoxi Ci-8, (hidroxi-alquil Ci-8)2-aminoalcoxi Ci-8, (hidroxi-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alcoxi Ci-8, hidroxi-alquil Ci-8-amino-alquil Ci-8-amino, (hidroxi-alquil Ci-8-amino-alquil Ci-8)2-amino, (hidroxi-alquil Ci-8)2-amino-alquil Ci-8-amino, (hidroxi-alquil Ci-8-amino-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, (hidroxi-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquil Ci-8-amino, [(hidroxi-alquil Ci-8)2-amino-alquil Ci-8](alquil Ci-8)amino, [(hidroxi-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquil Ci-8](alquil Ci-8)amino, heterociclilo, heterociclil-alquilo Ci-8, heterociclil-alcoxi Ci-8, heterociclil-amino, (heterociclil)(alquil Ci-8)amino, heterociclil-amino-alquilo Ci-8, heterociclilalquil Ci-8-amino, (heterociclil-alquil Ci-8)2-amino, (heterociclil-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, heterociclil-alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (heterociclil-alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8, (heterociclil-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquilo Ci-8, heterociclil-oxi, heterociclil-carbonilo, heterociclil-carbonil-oxi, aril-alquil Ci-8-amino, (aril-alquil Ci-8)2-amino, (aril-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, aril-alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (aril-alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8, (aril-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquilo Ci-8, heteroarilo, heteroaril-alquilo Ci-8, heteroaril-alcoxi Ci-8, heteroaril-alquil Ci-8-amino, (heteroarilalquil Ci-8)2-amino, (heteroaril-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino, heteroaril-alquil Ci-8-amino-alquilo Ci-8, (heteroaril-alquil Ci-8)2-amino-alquilo Ci-8 o (heteroaril-alquil Ci-8)(alquil Ci-8)amino-alquilo Ci-8; en donde cada caso de heterociclilo y heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), Ri es heterociclilo seleccionado de azetidinilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, i,4-diazepanilo, i,2,5,6-tetrahidropiridinilo, i,2,3,6-tetrahidropiridinilo, hexahidropirrolo[3,4-6]pirrol-(iH)-ilo, (3aS,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-6]pirrol-(iH)-ilo, (3aR,6aR)-hexahidropirrolo[3,4-£)]pirrol-(iH)-ilo, hexahidropirrolo[3,4-£)]pirrol-(2H)-ilo, (3aS,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-6]pirrol-(2H)-ilo, hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-(iH)-ilo, (3aR,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-(iH)-ilo, octahidro-5H-pirrolo[3,2-c]piridinilo, octahidro-6H-pirrolo[3,4-¿]piridinilo, (4aR,7aR)-octahidro-6H-pirrolo[3,4-£)]piridinilo, (4aS,7aS)-octahidro-6H-pirrolo[3,4-£)]piridinilo, hexahidropirrolo[i,2-a]pirazin-(2H)-ona, hexahidropirrolo[i,2-a]pirazin-(iH)-ilo, (7R,8aS)-hexahidropirrolo[i,2-a]pirazin-(iH)-ilo, (8aS)-hexahidropirrolo[i,2-a]pirazin-(iH)-ilo, (8aR)-hexahidropirrolo[i,2-a]pirazin-(iH)-ilo, (8aS)-octahidropirrolo[i,2-a]pirazin-(iH)-ilo, (8aR)-octahidropirrolo[i,2-a]pirazin-(iH)-ilo, octahidro-2H-pirido[i,2-a]pirazinilo, 3-azabiciclo[3.i.0]hexilo, ( i R,5S)-3-azabiciclo[3.i.0]hexilo, 8-azabiciclo[3.2.i]octilo, ( i R,5S)-8-azabiciclo[3.2.i]octilo, 8-azabiciclo[3.2.i]oct-2-enilo, (iR,5S)-8-azabiciclo[3.2.i]oct-2-enilo, 9-azabiciclo[3.3.i]nonilo, (iR,5S)-9-azabiciclo[3.3.i]nonilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.i]heptilo, (iS,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.i]heptilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.2]octilo, 3,8-diazabiciclo[3.2.i]octilo, (iR,5S)-3,8-diazabiciclo[3.2.i]octilo, i,4 -diazabiciclo[3.2.2]nonilo, azaespiro[3.3]heptilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptilo, 2,7-diazaespiro[3.5]nonilo, 5,8-diazaespiro[3.5]nonilo, 2,7-diazaespiro[4.4]nonilo o 6,9-diazaespiro[4.5]decilo; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
i2
También en un compuesto de la fórmula (I), Ri es heterociclilo seleccionado de azetidin-1-ilo, tetrahidrofurano-3-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, piperidin-4-ilo, piperazin-1-ilo, 1,4-diazepan-1-ilo, 1,2,5,6-tetrahidropiridin-5-ilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo, hexahidropirrolo[3,4-£)]pirrol-1(2H)-ilo, (3aS,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-6]pirrol-1(2H)-ilo, (3aS,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-£)]pirrol-5(1H)-ilo, (3aR,6aR)-hexahidropirrolo[3,4-6]pirrol-5(1H)-ilo, hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-ilo, (3aR,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-ilo, octahidro-5H-pirrolo[3,2-c]piridin-5-ilo, octahidro-6H-pirrolo[3,4-6]piridin-6-ilo, (4aR,7aR)-octahidro-6H-pirrolo[3,4-£)]piridin-6-ilo, (4aS,7aS)-octahidro-6H-pirrolo[3,4-6]piridin-6-ilo, hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-6(2H)-ona, hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1 H)-ilo, (7R,8aS)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1 H)-ilo, (8aS)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1 H)-ilo, (8aR)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-ilo, (8aS)-octahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1 H)-ilo, (8aR)-octahidropirrolo[1,2-а] pirazin-2(1H)-ilo, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazin-2-ilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hex-3-ilo, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-ilo, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-ilo, 9-azabiciclo[3.3.1]non-3-ilo, (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-ilo, 2,5-diazabicido[2.2.1]hept-2-ilo, (1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-ilo, 2,5-diazabicido[2.2.2]oct-2-ilo, 3,8-diazabicido[3.2.1]oct-3-ilo, (1R,5s )-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 1,4-diazabicido[3.2.2]non-4-ilo, azaespiro[3.3]hept-2-ilo, 2,6-diazaespiro[3.3]hept-2-ilo, 2,7-diazaespiro[3.5]non-7-ilo, 5,8-diazaespiro[3.5]non-8-ilo, 2,7-diazaespiro[4.4]non-2-ilo o 6,9-diazaespiro[4.5]dec-9-ilo; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), Ri es heterociclilo sustituido seleccionado de 4-metil-1,4-diazepan-1-ilo, (3aS,6aS)-1-metilhexahidropirrolo[3,4-6]pirrol-5(1H)-ilo, (3aS,6aS)-5-metilhexahidropirrolo[3,4-£)]pirrol-1(2H)-ilo, (3aR,6aR)-1-metilhexahidropirrolo[3,4-£)]pirrol-5(1H)-ilo, (3aR,6aS)-5-metilhexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-ilo, (3aR,6aS)-5-(2-hidroxietil)hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-ilo, (3aR,6aS)-5-(propan-2-il)hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-ilo, (3aR,6aS)-5-etilhexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-ilo, (4aR,7aR)-1-metiloctahidro-6H-pirrolo[3,4-6]piridin-6-ilo, (4aR,7aR)-1-etiloctahidro-6H-pirrolo[3,4-£)]piridin-6-ilo, (4aR,7aR)-1-(2-hidroxietil)octahidro-6H-pirrolo[3,4-£)]piridin-6-ilo, (4aS,7aS)-1-metiloctahidro-6H-pirrolo[3,4-b]piridin-6-ilo, (4aS,7aS)-1-(2-hidroxietil)octahidro-6H-pirrolo[3,4-б ] piridin-6-ilo, (7R,8aS)-7-hidroxihexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-ilo, (8aS)-8a-metiloctahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2 (1 H)-ilo, (8aR)-8a-metiloctahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-ilo, (1R,5S,6s)-6-(dimetilamino)-3-azabiciclo[3.1.0]hex-3-ilo, (1R,5S)-8-metil-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-ilo, (3-exo)-9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-ilo, (1R,5S)-9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-ilo, (1S,4S)-5-metil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-ilo o (1 S,4S)-5-etil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-ilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-alquilo C1.8, en donde heterociclilo se selecciona de morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, imidazolilo o pirrolidinilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-alquilo C1-8 seleccionado de morfolin-4-il-metilo, morfolin-4-il-etilo, morfolin-4-il-propilo, piperidin-1-il-metilo, piperazin-1-il-metilo, piperazin-1-il-etilo, piperazin-1-il-propilo, piperazin-1-ilbutilo, imidazol-1 -il-metilo, imidazol-1 -il-etilo, imidazol-1 -il-propilo, imidazol-1 -il-butilo, pirrolidin-1 -il-metilo, pirrolidin-1 -il-etilo, pirrolidin-1 -il-propilo o pirrolidin-1 -il-butilo; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-alcoxi C1-8, en donde heterociclilo se selecciona de pirrolidinilo, piperidinilo o morfolinilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-alcoxi C1-8 seleccionado de pirrolidin-2-il-metoxi, pirrolidin-2-iletoxi, pirrolidin-1-il-metoxi, pirrolidin-1-il-etoxi, piperidin-1-il-metoxi, piperidin-1-il-etoxi, morfolin-4-il-metoxi o morfolin-4-il-etoxi; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-amino, en donde heterociclilo se selecciona de azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, 9-azabiciclo[3.3.1]nonilo o (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-amino seleccionado de azetidin-3-il-amino, pirrolidin-3-il-amino, piperidin-4-il-amino, 9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino, (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino, 9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino, (3-exo)-9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino o (1R,5S)-9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es (heterociclil)(alquil C ^am ino , en donde heterociclilo se selecciona de pirrolidinilo o piperidinilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es (heterociclil)(alquil C ^a m in o seleccionado de (pirrolidin-3-il)(metil)amino o (piperidin-4-il)(metil)amino; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-amino-alquilo C1-8, en donde heterociclilo se selecciona de tetrahidrofuranilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-amino-alquilo C1-8 seleccionado de 3-(tetrahidrofuran-3-ilamino)propilo; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), Ri es heterociclil-alquil Ci -8-amino-alquilo C1 -8 , en donde heterociclilo se selecciona de tetrahidrofuranilo, tienilo o piridinilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-alquil C1-8-amino-alquilo C1-8 seleccionado de 3-[(tetrahidrofuran-2-ilmetil)amino]propilo, 3-[(tiofenil-3-ilmetil)amino]propilo, 3-[(piridin-2-ilmetil)amino]propilo o 3-[(piridin-4-ilmetil)amino]propilo; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4. En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-oxi, en donde heterociclilo se selecciona de pirrolidinilo o piperidinilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-oxi seleccionado de pirrolidin-3-il-oxi o piperidin-4-il-oxi; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-carbonilo, en donde heterociclilo se selecciona de piperazinilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-carbonilo seleccionado de piperazin-1-il-carbonilo; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-carbonil-oxi, en donde heterociclilo se selecciona de piperazinilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heterociclil-carbonil-oxi seleccionado de piperazin-1-il-carbonil-oxi; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es aril-alquil C1-8-amino-alquilo C1-8 , en donde arilo se selecciona de fenilo; y, en donde cada caso de arilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es aril-alquil C1-8-amino-alquilo C1-8 seleccionado de 3-(bencilamino)propilo; en donde cada caso de arilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heteroarilo, en donde heteroarilo se selecciona de piridinilo; y, en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heteroarilo seleccionado de piridin-4-ilo; en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heteroaril-alquilo C1-8 , en donde heteroarilo se selecciona de 1H-imidazolilo; y, en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heteroaril-alquilo C1-8 seleccionado de 1H-imidazol-1-il-metilo; en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es (heteroaril-alquil C1 -8)(alquil C1 -8 )amino, en donde heteroarilo se selecciona de piridinilo; y, en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es (heteroaril-alquil C1 - s )(alquil C1 -8 )amino seleccionado de (piridin-3-ilmetil)(metil)amino; en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heteroaril-alquil C1-8-amino-alquilo C1 -8 , en donde heteroarilo se selecciona de tienilo o piridinilo; y, en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4. En un compuesto de la fórmula (I), R1 es heteroaril-alquil C1-8-amino-alquilo C1-8 seleccionado de tien-3-il-metil-aminopropilo, piridin-2-il-metil-amino-propilo, piridin-3-il-metil-amino-propilo o piridin-4-il-metil-amino-propilo; en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R3 y R4.
En un compuesto de la fórmula (I), R3 se selecciona de ciano, halógeno, hidroxi, oxo, alquilo C1 -8 , halo-alquilo C1 -8 , alquil C1-8-carbonilo, alcoxi C1-8 , halo-alcoxi C1-8 , alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , alcoxi C1-8-carbonilo, amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8)2-amino, amino-alquilo C1.8 , alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C1.8 , amino-alquil C1 -8-amino, alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8 )2-amino-alquil C1-8-amino, alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino, alquil C1-8-carbonil-amino, alcoxi C1-8-carbonil-amino, hidroxi-alquilo C1.8 , hidroxi-alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , hidroxi-alquil C1-8-amino, (hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino o (hidroxi-alquil C1 -s )(alquil C1 -8 )amino.
En un compuesto de la fórmula (I), R3 se selecciona de ciano, halógeno, hidroxi, oxo, alquilo C1 -8 , halo-alquilo C1 -8 , alcoxi C1.8 , alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , alcoxi C1-8-carbonilo, amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8 )2-amino, amino-alquilo C1.
8 ,alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C1.8 , alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino, alcoxi C1-8-alquil C1.
8-amino, alcoxi C1-8-carbonil-amino, hidroxi-alquilo C1.8 , hidroxi-alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , hidroxi-alquil C1-8-amino, (hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino o (hidroxi-alquil C1 -s )(alquil C1-8 )amino.
En un compuesto de la fórmula (I), R3 es alquilo C1-8 seleccionado de metilo, etilo, propilo, isopropilo o terc-butilo. En un compuesto de la fórmula (I), R3 es alquilo C1-8 seleccionado de etilo, propilo, isopropilo o terc-butilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R3 es halo-alquilo C1-8 seleccionado de trihalo-metilo, dihalo-metilo, halo-metilo, trihalo-etilo, dihalo-etilo, halo-etilo, trihalo-propilo, dihalo-propilo o halo-propilo; en donde halo se selecciona de flúor, cloro, bromo o yodo.
En un compuesto de la fórmula (I), R3 es halo-alquilo C1-8 seleccionado de trihalo-metilo, dihalo-metilo, halo-metilo, trihalo-etilo, dihalo-etilo, trihalo-propilo o dihalo-propilo; en donde halo se selecciona de flúor, cloro, bromo o yodo. En un compuesto de la fórmula (I), R3 es hidroxi-alquilo C1-8 seleccionado de hidroxi-metilo, hidroxi-etilo, hidroxipropilo, dihidroxi-propilo, hidroxi-butilo o dihidroxi-butilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R3 es hidroxi-alquilo C1-8 seleccionado de hidroxi-metilo, dihidroxi-propilo, hidroxibutilo o dihidroxi-butilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R3 es alcoxi C1-8 seleccionado de metoxi, etoxi, propoxi o isopropoxi.
En un compuesto de la fórmula (I), R3 es halo-alcoxi C1-8 seleccionado de trihalo-metoxi, dihalo-metoxi, halo-metoxi, trihalo-etoxi, dihalo-etoxi, halo-etoxi, trihalo-propoxi, dihalo-propoxi o halo-propoxi; en donde halo se selecciona de flúor, cloro, bromo o yodo.
En un compuesto de la fórmula (I), R3 es alcoxi C1-8-carbonil-amino seleccionado de metoxi-carbonil-amino, etoxicarbonil-amino, propoxi-carbonil-amino, isopropoxi-carbonil-amino, terc-butoxi-carbonil-amino.
En un compuesto de la fórmula (I), R4 es cicloalquilo C3-14 seleccionado de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo; en donde cada caso de cicloalquilo C3-14 se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5. En un compuesto de la fórmula (I), R4 es cicloalquilo C3-8 seleccionado de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo; en donde cada caso de cicloalquilo C3-8 se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5. En un compuesto de la fórmula (I), R4 es cicloalquil C3-14-alquilo C1 -8 , en donde cicloalquilo C3-14 se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo; y, en donde cada caso de cicloalquilo C3-14 se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5.
En un compuesto de la fórmula (I), R4 es cicloalquil C3-8-alquilo C1 -8 , en donde cicloalquilo C3-8 se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo; y, en donde cada caso de cicloalquilo C3-8 se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5.
En un compuesto de la fórmula (I), R4 es cicloalquil C3-14-amino, en donde cicloalquilo C3-14 se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo; y, en donde cada caso de cicloalquilo C3-14 se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5.
En un compuesto de la fórmula (I), R4 es cicloalquil C3-8-amino, en donde cicloalquilo C3-8 se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo; y, en donde cada caso de cicloalquilo C3-8 se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5.
En un compuesto de la fórmula (I), R4 es aril-alquilo C1-8 , aril-alcoxi C1-8-carbonilo o aril-sulfoniloxi-alquilo C1 -8 , en donde arilo se selecciona de fenilo; y, en donde cada caso de arilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5. En un compuesto de la fórmula (I), R4 es aril-alquilo C1-8 o aril-alcoxi C1-8-carbonilo, en donde cada caso de arilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5.
En un compuesto de la fórmula (I), R4 es heterociclilo seleccionado de oxetanilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, 1,3-dioxanilo o morfolinilo, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5. En un compuesto de la fórmula (I), R4 es heterociclilo seleccionado de oxetan-3-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, piperazin-1-ilo, 1,3-dioxan-5-ilo o morfolin-4-ilo, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5.
En un compuesto de la fórmula (I), R4 es heterociclil-alquilo C1 -8 , en donde cada caso de heterociclilo se selecciona de pirrolidinilo o piperidinilo; y, en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5. En un compuesto de la fórmula (I), R4 es heterociclil-alquilo C1-8 seleccionado de pirrolidin-1-il-alquilo C1-8 o piperidin-1-il-alquilo C1 -8 , en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R5.
En un compuesto de la fórmula (I), R5 se selecciona de halógeno, hidroxi, ciano, nitro, halo-alquilo C1-8 , alcoxi C1 -8 , halo-alcoxi C1 -8 , amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1-8 )2-amino o alquil C1-8-tio; en donde halógeno y halo se seleccionan de flúor, cloro, bromo o yodo.
En un compuesto de la fórmula (I), R5 es hidroxi.
En un compuesto de la fórmula (I), R5 es alquilo C1-8 seleccionado de metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo o tercbutilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R5 es alquilo C1-8 seleccionado de etilo, propilo, isopropilo o terc-butilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R5 es halo-alquilo C1-8 seleccionado de trihalo-metilo, dihalo-metilo, halo-metilo, trihalo-etilo, dihalo-etilo, halo-etilo, trihalo-propilo, dihalo-propilo o halo-propilo; en donde halo se selecciona de flúor, cloro, bromo o yodo.
En un compuesto de la fórmula (I), R5 es alcoxi C1-8 seleccionado de metoxi, etoxi, propoxi o isopropoxi.
En un compuesto de la fórmula (I), R5 es halo-alcoxi C1-8 seleccionado de trihalo-metoxi, dihalo-metoxi, halo-metoxi, trihalo-etoxi, dihalo-etoxi, halo-etoxi, trihalo-propoxi, dihalo-propoxi o halo-propoxi; en donde halo se selecciona de flúor, cloro, bromo o yodo.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es arilo seleccionado de fenilo opcionalmente sustituido con sustituyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es aril-amino, en donde arilo se selecciona de fenilo; y, en donde cada caso de arilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es aril-amino seleccionado de fenil-amino; en donde cada caso de arilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es aril-amino-carbonilo, en donde arilo se selecciona de fenilo; y, en donde cada caso de arilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es aril-amino-carbonilo seleccionado de fenil-amino-carbonilo; en donde cada caso de arilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es heterociclilo seleccionado de 1,2,3,6-tetrahidropiridinilo, 1,3-benzodioxolilo o 2,3-dihidro-1,4-benzodioxinilo; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es heterociclilo seleccionado de 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo, 1,3-benzodioxol-5-ilo o 2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-ilo; en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es heteroarilo seleccionado de tienilo, 1 H-pirazolilo, 1 H-imidazolilo, 1,3-tiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, piridinilo, pirimidinilo, 1 H-indolilo, 2H-indolilo, 1H-indazolilo, 2H-indazolilo, indolizinilo, benzofuranilo, benzotienilo, 1H-bencimidazolilo, 1,3-benzotiazolilo, 1,3-benzoxazolilo, 9H-purinilo, furo[3,2-b]piridinilo, furo[3,2-c]piridinilo, furo[2,3-c]piridinilo, tieno[3,2-c]piridinilo, tieno[2,3-d]pirimidinilo, 1H-pirrolo[2,3-b] piridinilo, 1H-pirrolo[2,3-c]piridinilo, pirrolo[1,2-a]pirimidinilo, pirrolo[1,2-a]pirazinilo, pirrolo[1,2-b]piridazinilo, pirazolo[1,5-a]piridinilo, pirazolo[1,5-a]pirazinilo, imidazo[1,2-a]piridinilo, imidazo[1,2-a]pirimidinilo, imidazo[1,2-c] pirimidinilo, imidazo[1,2-b]piridazinilo, imidazo[1,2-a]pirazinilo, imidazo[2,1-b][1,3]tiazolilo, imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazolilo, [1,3]oxazolo[4,5-b]piridinilo o quinoxalinilo; en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es heteroarilo seleccionado de tien-2-ilo, tien-3-ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1H-pirazol-4-ilo, 1 H-pirazol-5-ilo, 1H-imidazol-1-ilo, 1H-imidazol-4-ilo, 1,3-tiazol-2-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3-ilo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, pirimidin-4-ilo, 1 H-indol-3-ilo, 1 H-indol-4-ilo, 1 H-indol-5-ilo, 1 H-indol-6-ilo, 1 H-indazol-5-ilo, 2H-indazol-5-ilo, indolizin-2-ilo, benzofuran-2-ilo, benzofuran-5-ilo, benzotien-2-ilo, benzotien-3-ilo, 1H-bencimidazol-2-ilo, 1H-bencimidazol-6-ilo, 1,3-benzoxazol-2-ilo, 1,3-benzoxazol-5-ilo, 1,3-benzoxazol-6-ilo, 1,3-benzotiazol-2-ilo, 1,3-benzotiazol-5-ilo, 1,3-benzotiazol-6-ilo, 9H-purin-8-ilo, furo[3,2-b]piridin-2-ilo, furo[3,2-c]piridin-2-ilo, furo[2,3-c]piridin-2-ilo, tieno[3,2-c]piridin-2-ilo, tieno[2,3-d]pirimidin-6-ilo, 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-ilo, 1H-pirrolo[2,3-c]piridin-4-ilo, pirrolo[1,2-a]pirimidin-7-ilo, pirrolo[1,2-a]pirazin-7-ilo, pirrolo[1,2-b]piridazin-2-ilo, pirazolo[1,5-a]piridin-2-ilo, pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-2-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-6-ilo, imidazo[1,2-a]pirimidin-2-ilo, imidazo[1,2-a]pirimidin-6-ilo, imidazo[1,2-c]pirimidin-2-ilo, imidazo[1,2-b]piridazin-2-ilo, imidazo[1,2-a]pirazin-2-ilo, imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-ilo, imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-6-ilo, [1,3]oxazolo[4,5-b]piridin-2-ilo o quinoxalin-2-ilo; en donde cada caso de heteroarilo se sustituye opcionalmente con sustituyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es heteroarilo sustituido seleccionado de 4-metiltien-2-ilo, 1 -metil-1 H-pirazol-3-ilo, 4-metil-1H-pirazol-3-ilo, 1 -fenil-1 H-pirazol-3-ilo, 1 -fenil-1 H-imidazol-4-ilo, 2-metil-1 -(piridin-2-il)-1 H-imidazol-4-ilo, 4-metil-1,3-tiazol-2-ilo, 4-(trifluorometil)-1,3-tiazol-2-ilo, 4-fenil-1,3-tiazol-2-ilo, 5-fenil-1,2,4-oxadia-zol-3-ilo, 3-fluoropiridin-4-ilo, 6-fluoropiridin-2-ilo, 2-cloropiridin-4-ilo, 4-cloropiridin-3-ilo, 5 -cloropiridin-2-ilo, 6-metilpiridin-3-ilo, 2-(trifluorometil)piridin-3-ilo, 4-(trifluorometil)piridin-2-ilo, 6-(trifluorometil)piridin-2-ilo, 2-metoxipiridin-4-ilo, 4-metoxipiridin-3-ilo, 6-metoxipiridin-2-ilo, 2-etoxipiridin-3-ilo, 6-etoxipiridin-2-ilo, 6-(propan-2-iloxi)piridin-2-ilo, 6 (dimetilamino)piridin-3-ilo, 6-(metilsulfanil)piridin-2-ilo, 6-(cidobutiloxi)piridin-2-ilo, 6-(pirrolidin-1-il)piridin-2-ilo, 2-metilpirimidin-4-ilo, 2-(propan-2-il)pirimidin-4-ilo, 2-cidopropilpirimidin-4-ilo, 1-metil-1H-indol-3-ilo, 2-met¡l-2H-¡ndazol-5-ilo, 2-metil-1-benzofuran-5-ilo, 1-met¡l-1H-benc¡m¡dazol-2-¡lo, 4-met¡l-1H-benc¡m¡dazol-2-¡lo, 5-fluoro-1H-bencimidazol-2-ilo, 4-fluoro-1,3-benzoxazol-2-ilo, 5-fluoro-1,3-benzoxazol-2-ilo, 4-cloro-1,3-benzoxazol-2-ilo, 4-yodo-1,3-benzoxazol-2-ilo, 2-metil-1,3-benzoxazol-6-ilo, 4-metil-1,3-benzoxazol-2-ilo, 4-(trifluorometil)-1,3-benzoxazol-2-ilo, 7-(trifluorometil)-1,3-benzoxazol-2-ilo, 2-metil-1,3-benzotiazol-2-ilo, 2-metil-1,3-benzotiazol-5-ilo, 2-met¡l-1,3-benzotiazol-6-ilo, 4-cloro-1,3-benzotiazol-2-ilo, 7-cloro-1,3-benzotiazol-2-ilo, 4-(trifluorometil)-1,3-benzotiazol-2-ilo, 5-met¡lfuro[3,2-6]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 4,6-dimetilfuro[3,2-c]piridin-2-ilo, 5,7-dimetilfuro[2,3-c]piridin-2-ilo, 4,6-d¡met¡lt¡eno[3,2-c]piridin-2-ilo, 2,4-dimetiltieno[2,3-d]pirimidin-6-ilo, 1-metilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-ilo, 3-metilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-ilo, ,3-dimetilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-ilo, 2-met¡lp¡rrolo[1,2-¿)]p¡r¡daz¡n-2-¡lo, 4,6-dimetilpirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilo, 5-metilpirazolo[1,5-a]piridin-2-ilo, 4,6-dimetilpirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilo, 2-doroimidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-ilo, 2-met¡l¡m¡dazo[2,1-6][1,3]t¡azol-6-¡lo, 3-met¡l¡m¡dazo[2,1-6][1,3]t¡azol-6-¡lo, 2-etilimidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-ilo, 2-met¡l¡m¡dazo[2,1-6][1,3,4]t¡ad¡azol-6-¡lo, 6-cianoimidazo[1,2-a]piridin-2-ilo (también denominado 2-¡m¡dazo[1,2-a]piridin-6-carbonitrilo), 6-fluoro¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-fluoro¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 6,8-d¡fluoro¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 7-(tr¡fluoromet¡l)¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-(tr¡fluoromet¡l)¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 6-doro¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 7-cloro¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-doro¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-bromo¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 2-metil¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡din-2-¡lo, 5-metil¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡din-2-¡lo, 6-metil¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡din-2-¡lo, 7-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 7-et¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-et¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 6,8-d¡met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-et¡l-6-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 7-metox¡¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-metox¡¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 6-fluoro-8-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-fluoro-6-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-doro-6-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 6-met¡l-8-n¡tro¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 8-c¡cloprop¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-2-¡lo, 2-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-6-¡lo, 2-et¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-6-¡lo, 2,3-d¡met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-6-¡lo, 2,8-d¡met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-6-¡lo, 2-(tr¡fluoromet¡l)¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-6-¡lo, 8-doro-2-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-6-¡lo, 8-fluoro-2-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡d¡n-6-¡lo, 6-fluoro¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡m¡d¡n-2-¡lo, -doro¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡m¡d¡n-2-¡lo, 6-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡m¡d¡n-2-¡lo, 7-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡m¡d¡n-2-¡lo, 2-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡r¡m¡d¡n-6-¡lo, 6-met¡l¡m¡dazo[1,2-¿]p¡r¡daz¡n-2-¡lo, 2-met¡l-3-(1,2,3,6-tetrah¡drop¡r¡d¡n-4-¡l)¡m¡dazo[1,2-b]p¡r¡daz¡n-6-¡lo, 6-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-2-¡lo, 8-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-2-¡lo, 6,8-d¡met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-2-¡lo, 6-doro-8-met¡l¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-2-¡lo, 6-met¡l-8-(tr¡fluoromet¡l)¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-2-¡lo, 8-(met¡lsulfan¡l)¡m¡dazo[1,2-a]p¡raz¡n-2-¡lo, 2-met¡l¡m¡dazo[2,1-¿)][1,3]t¡azol-6-¡lo, 3-met¡l¡m¡dazo[2,1-b][1,3]t¡azol-6-¡lo o 2-met¡l¡m¡dazo[2,1-6][1,3,4]t¡ad¡azol-6-¡lo.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es heteroar¡l-am¡no, en donde heteroar¡lo se selecc¡ona de p¡r¡d¡n¡lo o p¡r¡m¡d¡n¡lo; y, en donde cada caso de heteroar¡lo se sust¡tuye opc¡onalmente con sust¡tuyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R2 es heteroar¡l-am¡no selecc¡onado de p¡r¡d¡n-2-¡l-am¡no, p¡r¡d¡n-3-¡l-am¡no o p¡r¡m¡d¡n-2-¡l-am¡no; en donde cada caso de heteroar¡lo se sust¡tuye opc¡onalmente con sust¡tuyentes R6 y R7.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 se selecc¡ona de halógeno, h¡drox¡, c¡ano, n¡tro, alqu¡lo C1-8 , halo-alqu¡lo C1.8 , h¡drox¡-alqu¡lo C1.8 , alcox¡ C1.8 , halo-alcox¡ C1.8 , alcox¡ C1-8-alqu¡lo C1.8 , (alqu¡l C1-8 )2-am¡no o alqu¡l C1-8-t¡o; en donde halógeno y halo se selecc¡onan de flúor, cloro, bromo o yodo.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 es alqu¡lo C1-8 selecc¡onado de met¡lo, et¡lo, prop¡lo, ¡soprop¡lo o terc-but¡lo.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 es alqu¡lo C1.8 selecc¡onado de et¡lo, prop¡lo, ¡soprop¡lo o terc-but¡lo.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 es alquen¡lo C2-8 selecc¡onado de eten¡lo, al¡lo o buta-1,3-d¡en¡lo.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 es alquen¡lo C2-8 selecc¡onado de eten¡lo o al¡lo.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 es halo-alqu¡lo C1.8 selecc¡onado de tr¡halo-met¡lo, d¡halo-met¡lo, halo-met¡lo, tr¡halo-et¡lo, d¡halo-et¡lo, halo-et¡lo, tr¡halo-prop¡lo, d¡halo-prop¡lo o halo-prop¡lo; en donde halo se selecc¡ona de flúor, cloro, bromo o yodo.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 es h¡drox¡-alqu¡lo C1-8 selecc¡onado de h¡drox¡-met¡lo, h¡drox¡-et¡lo, h¡drox¡prop¡lo, d¡h¡drox¡-prop¡lo, h¡drox¡-but¡lo o d¡h¡drox¡-but¡lo.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 es h¡drox¡-alqu¡lo C1.8 selecc¡onado de h¡drox¡-met¡lo, d¡h¡drox¡-prop¡lo, h¡drox¡but¡lo o d¡h¡drox¡-but¡lo.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 es alcox¡ C1.8 selecc¡onado de metox¡, etox¡, propox¡ o ¡sopropox¡.
En un compuesto de la fórmula (I), R6 es halo-alcox¡ C1-8 selecc¡onado de tr¡halo-metox¡, d¡halo-metox¡, halo-metox¡, tr¡halo-etox¡, d¡halo-etox¡, halo-etox¡, tr¡halo-propox¡, d¡halo-propox¡ o halo-propox¡; en donde halo se selecc¡ona de flúor, cloro, bromo o yodo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es c¡cloalqu¡lo C3 -14 , c¡cloalqu¡l C3 -14-ox¡, ar¡lo, heteroc¡cl¡lo o heteroar¡lo; en donde c¡cloalqu¡lo C3-14 se selecc¡ona de c¡cloprop¡lo o c¡clobutox¡; en donde ar¡lo se selecc¡ona de fen¡lo; en donde heteroc¡cl¡lo se selecc¡ona de oxetan¡lo, p¡rrol¡d¡n¡lo o 1,2,3,6-tetrah¡drop¡r¡d¡n¡lo; y, en donde heteroar¡lo se selecc¡ona de tienilo o piridinilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es cicloalquilo C3 -14 o cicloalquil C3 - i4 -oxi, en donde cada caso de cicloalquilo C3 -14 se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es cicloalquilo C3-8 o cicloalquil C3-8-oxi, en donde cada caso de cicloalquilo C3-8 se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es arilo seleccionado de fenilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es heterociclilo seleccionado de oxetanilo, pirrolidinilo o 1,2,3,6-tetrahidropiridinilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es heterociclilo seleccionado de oxetan-3-ilo, pirrolidin-1-ilo o 1,2,3,6­ tetrahidropiridin-4-ilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es heteroarilo seleccionado de tienilo o piridinilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es heteroarilo seleccionado de piridinilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es heteroarilo seleccionado de tien-2-ilo o piridin-2-ilo.
En un compuesto de la fórmula (I), R7 es heteroarilo seleccionado de piridin-2-ilo.
En un compuesto de la fórmula (I), el compuesto puede ser de la fórmula (Ia):
Figure imgf000018_0001
o una forma del mismo.
En una realización, el compuesto es la fórmula (Ia1):
Figure imgf000018_0002
o una forma del mismo.
También se describe en el presente documento un compuesto de la fórmula (II), fórmula (III), fórmula (IV) o fórmula (V):
Figure imgf000019_0001
o una forma del mismo.
También se describe en el presente documento un compuesto de la fórmula (IIa), fórmula (Illa), fórmula (IVa) y fórmula (Va), respectivamente:
Figure imgf000019_0002
(lia ) , ( I l la ) , ( IV a ) y (V a) o una forma del mismo.
También se describe en el presente documento un compuesto de la fórmula (IIa1) o fórmula (IIa2):
Figure imgf000019_0003
o una forma del mismo.
También se describe en el presente documento un compuesto de la fórmula (IIIa1) o fórmula (IIIa2):
Figure imgf000019_0004
o una forma del mismo.
También se describe en el presente documento un compuesto de la fórmula (IVa1) o fórmula (IVa2):
Figure imgf000020_0001
o una forma del mismo.
También se describe en el presente documento un compuesto de la fórmula (Val) o fórmula (Va2):
Figure imgf000020_0002
o una forma del mismo.
En una realización de un compuesto de la fórmula (Ia1), el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000025_0001
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
o una forma del mismo.
TERMINOLOGÍA
Los términos químicos usados anteriormente y en toda la descripción en el presente documento, a menos que se defina específicamente de otro modo, se deben entender por un experto habitual en la técnica como que tienen los siguientes significados indicados.
Como se usa en el presente documento, el término "alquilo C W se refiere generalmente a radicales de hidrocarburo saturados que tienen desde uno hasta ocho átomos de carbono en una configuración de cadena lineal o ramificada, que incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo (también denominado propilo o propanilo), isopropilo, n-butilo (también denominado butilo o butanilo), isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo (también denominado pentilo o pentanilo), n-hexilo (también denominado hexilo o hexanilo), n-heptilo (también denominado heptilo o heptanilo), noctilo y similares. En algunas realizaciones, alquilo C1-8 incluye, pero no se limita a, alquilo C1 -6 , alquilo C1 -4 y similares. Un radical alquilo C1-8 se sustituye opcionalmente con especies sustituyentes como se describe en el presente documento donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "alquenilo C2-8" se refiere generalmente a radicales de hidrocarburo parcialmente insaturados que tienen desde dos hasta ocho átomos de carbono en una configuración de cadena lineal o ramificada y uno o más dobles enlaces carbono-carbono en su interior, que incluyen, pero no se limitan a, etenilo (también denominado vinilo), alilo, propenilo y similares. En algunas realizaciones, alquenilo C2-8 incluye, pero no se limita a, alquenilo C2-6, alquenilo C2-4 y similares. Un radical alquenilo C2-8 se sustituye opcionalmente con especies sustituyentes como se describen en el presente documento donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "alquenilo C2-8" se refiere generalmente a radicales de hidrocarburo parcialmente insaturados que tienen desde dos hasta ocho átomos de carbono en una configuración de cadena lineal o ramificada y uno o más triples enlaces carbono-carbono en su interior, que incluyen, pero no se limitan a, etinilo, propinilo, butinilo y similares. En algunas realizaciones, alquinilo C2-8 incluye, pero no se limita a, alquinilo C2-6, alquinilo C2-4 y similares. Un radical alquinilo C2-8 se sustituye opcionalmente con especies sustituyentes como se describen en el presente documento donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "alcoxi C W se refiere generalmente a radicales de hidrocarburo saturado que tienen desde uno hasta ocho átomos de carbono en una configuración de cadena lineal o ramificada de fórmula: -O-alquilo C1 -8 , que incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, secbutoxi, terc-butoxi, n-pentoxi, n-hexoxi y similares. En algunas realizaciones, alcoxi C1-8 incluye, pero no se limita a, alcoxi C1 -6 , alcoxi C1-4 y similares. Un radical alcoxi C1-8 se sustituye opcionalmente con especies sustituyentes como se describen en el presente documento donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquilo C3 -14" se refiere generalmente a un radical de hidrocarburo monocíclico, bicíclico o policíclico saturado o parcialmente insaturado, que incluye, pero no se limita a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo, ciclooctilo, 1H-indanilo, indenilo, tetrahidronaftalenilo y similares. En algunas realizaciones, cicloalquilo C3-14 incluye, pero no se limita a, cicloalquilo C3-8 , cicloalquilo C5-8, cicloalquilo C3-10 y similares. Un radical cicloalquilo C3-14 se sustituye opcionalmente con especies sustituyentes como se describen en el presente documento donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "arilo" se refiere generalmente a un radical de estructura de anillos de átomos de carbono aromático monocíclico, bicíclico o policíclico, que incluye, pero no se limita a, fenilo, naftilo, antracenilo, fluorenilo, azulenilo, fenantrenilo y similares. Un radical arilo se sustituye opcionalmente con especies sustituyentes como se describen en el presente documento donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "heteroarilo" se refiere generalmente a un radical de estructura de anillos de átomos de carbono aromático monocíclico, bicíclico o policíclico en el que uno o más miembros de anillo de átomos de carbono se han sustituido, donde se permita por la estabilidad estructural, con uno o más heteroátomos, tales como un átomo de O, S o N, que incluyen, pero no se limitan a, furanilo (también denominado furilo), tienilo (también denominado tiofenilo), pirrolilo, 2H-pirrolilo, 3H-pirrolilo, pirazolilo, 1H-pirazolilo, imidazolilo, 1H-imidazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, 1,3-tiazolilo, triazolilo (tal como 1H-1,2,3-triazolilo y similares), oxadiazolilo (tal como 1,2,4-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo y similares), tiadiazolilo, tetrazolilo (tal como 1H-tetrazolilo, 2H-tetrazolilo y similares), piridinilo (también denominado piridilo), pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, triazinilo, indolilo, 1 H-indolilo, indazolilo, 1H-indazolilo, 2H-indazolilo, indolizinilo, isoindolilo, benzofuranilo, benzotienilo (también denominado benzotiofenilo), benzoimidazolilo, 1H-benzoimidazolilo, 1,3-benzotiazolilo, 1,3-benzoxazolilo (también denominado 1.3- benzooxazolilo), purinilo, 9H-purinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 1,3-diazinilo, 1,2-diazinilo, 1,2-diazolilo, 1,4-diazanaftalenilo, acridinilo, furo[3,2-d]piridinilo, furo[3,2-c]piridinilo, furo[2,3-c]piridinilo, 6H-tieno[2,3-d]pirrolilo, tieno[3,2-c]piridinilo, tieno[2,3-d]pirimidinilo, 1 H-pirrolo[2,3-£)]piridinilo, 1 H-pirrolo[2,3-c]piridinilo, 1H-pirrolo[3,2-d]piridinilo, pirrolo[1,2-a7pirazinilo, pirrolo[1,2-d]piridazinilo, pirazolo[1,5-a]piridinilo, pirazolo[1,5-a] pirazinilo, imidazo[1,2-a]piridinilo, 3H-imidazo[4,5-b]piridinilo, imidazo[1,2-a]pirimidinilo, imidazo[1,2-c]pirimidinilo, imidazo[1,2-b]piridazinilo, imidazo[1,2-a]pirazinilo, imidazo[2,1-b][1,3]tiazolilo, imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazolilo, [1,2,4]triazolo[1,5-a]piridinilo, [1,2,4]triazolo[4,3-a]piridinilo y similares. Un radical heteroarilo se sustituye opcionalmente en un miembro de anillo de átomos de carbono o nitrógeno con especies sustituyentes como se describen en el presente documento donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclilo" se refiere generalmente a un radical de estructura de anillos de átomos de carbono monocíclico, bicíclico o policíclico saturado o parcialmente insaturado en el que uno o más miembros de anillo de átomos de carbono se han sustituido, donde se permita por la estabilidad estructural, con un heteroátomo, tal como un átomo de O, S o N, que incluyen, pero no se limitan a, oxiranilo, oxetanilo, azetidinilo, tetrahidrofuranilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolidinilo, isotiazolinilo, isotiazolidinilo, oxazolinilo, oxazolidinilo, tiazolinilo, tiazolidinilo, triazolinilo, triazolidinilo, oxadiazolinilo, oxadiazolidinilo, tiadiazolinilo, tiadiazolidinilo, tetrazolinilo, tetrazolidinilo, piranilo, dihidro-2H-piranilo, tiopiranilo, 1,3-dioxanilo, 1,2,5,6-tetrahidropiridinilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, 1,4-diazepanilo, 1,3-benzodioxolilo (también denominado benzo[d][1,3]dioxolilo), 1,4-benzodioxanilo, 2.3- dihidro-1,4-benzodioxinilo (también denominado 2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxinilo), hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-(1H)-ilo, (3aS,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-(1H)-ilo, (3aR,6aR)-hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-(1H)-ilo, hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-(2H)-ilo, (3aS,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-(2H)-ilo, (3aR,6aR)-hexahidropirrolo[3,4-b] pirrol-(2H)-ilo, hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-(1H)-ilo, (3aR,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-(1H)-ilo, (3aR,6aR)-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-(1H)-ilo, octahidro-5H-pirrolo[3,2-c]piridinilo, octahidro-6H-pirrolo[3,4-b]piridinilo, (4aR,7aR)-octahidro-6H-pirrolo[3,4-b]piridinilo, (4aS,7aS)-octahidro-6H-pirrolo[3,4-b]piridinilo, hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-(1H)-ilo, (7R,8aS)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-(1H)-ilo, (8aS)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-(1H)-ilo, (8aR)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-(1 H)-ilo, (8aS)-octahidropirrolo[1,2-a]pirazin-(1 H)-ilo, (8aR)-octahidropirrolo[1,2-a]pirazin-(1 H)-ilo, hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-(2H)-ona, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazinilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexilo, (1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexilo, 8-azabiciclo[3.2.1]octilo, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octilo, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-enilo, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-enilo, 9-azabiciclo[3.3.1]nonilo, (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptilo, (1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptilo,2,5-diazabiciclo[2.2.2]octilo,3,8-diazabiciclo[3.2.1]octilo, (1R,5S)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octilo, 1,4-diazabiciclo[3.2.2]nonilo, azaespiro[3.3]heptilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptilo, 2,7-diazaespiro[3.5]nonilo, 5,8-diazaespiro[3.5]nonilo, 2,7-diazaespiro[4.4]nonilo, 6,9-diazaespiro[4.5]decilo y similares. Un radical heterociclilo se sustituye opcionalmente en un miembro de anillo de átomos de carbono o nitrógeno con especies sustituyentes como se describen en el presente documento donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "alcoxi C-i -s -alquilo C-i -s " se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C-i-a -O-alquilo C1 -8.
Como se usa en el presente documento, el término "alcoxi C-i^-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C- i^ -O-alquilo C- i ^
Como se usa en el presente documento, el término "(alcoxi Ci -8-alquil Ci - 8 )2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8-O-alquilo C1 -8 )2.
Como se usa en el presente documento, el término "alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1-8-NH-alquil C1-8-O-alquilo C1.8.
Como se usa en el presente documento, el término "(alcoxi C1-8-alquil C1 -8 )2-amino-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1-8-N(alquil C1-8-O-alquilo C1 -8 )2.
Como se usa en el presente documento, el término "(alcoxi C1-8-alquil C^ X alquil C1 -8 )amino-alcoxi C1.8" se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1-8-N(alquil C1 - s )(alquil C1-8-O-alquilo C1.8 ).
Como se usa en el presente documento, el término "alcoxi C^ -alquil C1-8-amino-alquilo C1.8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-NH-alquil C1-8-O-alquilo C1.8.
Como se usa en el presente documento, el término "(alcoxi C1-8-alquil C1 -8)2-amino-alquilo C1.8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C1-8-O-alquilo C1 -8 )2.
Como se usa en el presente documento, el término "(alcoxi C1-8-alquil C1 - s )(alquil C1 -8 )amino-alquilo C1.8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C1 - s )(alquil C1-8-O-alquilo C1.8 ).
Como se usa en el presente documento, el término "alcoxi C1-8-carbonilo" se refiere a un radical de la fórmula: -C(O)-O-alquilo C1 -8.
Como se usa en el presente documento, el término "alcoxi C1-8-carbonil-alquenilo C2-8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquenil C2-8-C(O)-O-alquilo C1-8.
Como se usa en el presente documento, el término "alcoxi C1-8-carbonil-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-C(O)-O-alquilo C1.8.
Como se usa en el presente documento, el término "alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquilo C1 -8.
Como se usa en el presente documento, el término "(alquil C1-8 )2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquilo C1-8)2.
Como se usa en el presente documento, el término "alquil C1-8-amino-alquenilo C2-8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquenil C2-8-NH-alquilo C1-8.
Como se usa en el presente documento, el término "(alquil C1 -8 )2-amino-alquenilo C2-8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquenil C2-8-N(alquilo C1 -8 )2.
Como se usa en el presente documento, el término "alquil C1-8-amino-alcoxi C1.8" se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1-8-NH-alquilo C1.8.
Como se usa en el presente documento, el término "(alquil C1 -8)2-amino-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1-8-N(alquilo C1 -8 )2.
Como se usa en el presente documento, el término "alquil C1-8-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-NH-alquilo C1.8.
Como se usa en el presente documento, el término "(alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquilo C1 -8 )2.
Como se usa en el presente documento, el término "alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1-8-NH-alquilo C1 -8.
Como se usa en el presente documento, el término "(alquil C1 -8)2-amino-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1-8-N(alquilo C1 -8 )2.
Como se usa en el presente documento, el término "(alquil C1-8-amino-alquil C1 -8 )2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8-NH-alquilo C1 -8 )2.
Como se usa en el presente documento, el término "[(alquil C1 -8 )2-amino-alquil C1-8]2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N[alquil C1-8-N(alquilo C1 -8 )2]2.
Como se usa en el presente documento, el término "(alquil C1-8-amino-alquil C1 - s )(alquil C1-8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1 - s )(alquil C1-8-NH-alquilo C1.8 ).
Como se usa en el presente documento, el término "[(alquil C1 -8 )2-amino-alquil C1 -s ](alquil C1 -8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil Ci -8)[alquil Ci -8-N(alquilo Ci -8 )2].
Como se usa en el presente documento, el término "alquil Ci -8-amino-alquenilo C2-8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquinil C2-8-NH-alquilo C1 -8.
Como se usa en el presente documento, el término "(alquil C1 -8 )2-amino-alquinilo C2-8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquinil C2-8-N(alquilo C ^ 2.
Como se usa en el presente documento, el término "alquil C1-8-carbonilo" se refiere a un radical de la fórmula: -C(O)-alquilo C1-8.
Como se usa en el presente documento, el término "alquil C1-8-carbonil-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-C(O)-alquilo C ^ .
Como se usa en el presente documento, el término "alquil C1-8-tio" se refiere a un radical de la fórmula: -S-alquilo C1 -8.
Como se usa en el presente documento, el término "amino-alquenilo C2-8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquenil C2-8-NH2.
Como se usa en el presente documento, el término "amino-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1.8-NH2.
Como se usa en el presente documento, el término "amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-NH2.
Como se usa en el presente documento, el término "amino-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1.8-NH2.
Como se usa en el presente documento, el término "(amino-alquil C1 -8 )2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8-NH2 )2.
Como se usa en el presente documento, el término "(amino-alquil C1-8 )(alquil C1 -8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1 -8 )(alquil C1-8-NH2).
Como se usa en el presente documento, el término "amino-alquinilo C2-8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquinil C2-8-NH2.
Como se usa en el presente documento, el término "aril-alcoxi C1-8-carbonilo" se refiere a un radical de la fórmula: -C(O)-O-alquil C1-8-arilo.
Como se usa en el presente documento, el término "aril-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-arilo.
Como se usa en el presente documento, el término "aril-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1-8-arilo.
Como se usa en el presente documento, el término "(aril-alquil C1-8 )2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8-arilo)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(aril-alquil C1 -8 )(alquil C1 -8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1 -8 )(alquil C1-8-arilo).
Como se usa en el presente documento, el término "aril-alquil C1-8-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-NH-alquil C1-8-arilo.
Como se usa en el presente documento, el término "(aril-alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C1-8-arilo)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(aril-alquil C1 -8 )(alquil C1 -8)amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C1 -8 )(alquil C1-8-arilo).
Como se usa en el presente documento, el término "aril-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-arilo.
Como se usa en el presente documento, el término "aril-amino-carbonilo" se refiere a un radical de la fórmula: -C(O)-NH-arilo.
Como se usa en el presente documento, el término "aril-sulfoniloxi-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-O-SO2-arilo.
Como se usa en el presente documento, el término "benzoxi-carbonilo" se refiere a un radical de la fórmula: -C(O)O-CH2-fenilo.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquil C3 -14-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-cicloalquilo C3 -14.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquil C3 -14-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-cicloalquilo C3 -14.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquil C3-14-oxi" se refiere a un radical de la fórmula: -O-cicloalquilo C3 -14.
Como se usa en el presente documento, el término "halo" o "halógeno" se refiere generalmente a un radical de átomo de halógeno, que incluye flúor, cloro, bromo y yodo.
Como se usa en el presente documento, el término "halo-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1 -8-halógeno, en donde alquilo C1-8 se sustituye parcialmente o completamente con uno o más átomos de halógeno donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "halo-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-halógeno, en donde alquilo C1-8 se sustituye parcialmente o completamente con uno o más átomos de halógeno donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "halo-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1-8-halo.
Como se usa en el presente documento, el término "(halo-alquil C1 - s )(alquil C1-8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1 -8 )(alquil C1-8-halo).
Como se usa en el presente documento, el término "(halo-alquil C1 -8 )2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8-halo)2.
Como se usa en el presente documento, el término "heteroaril-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O­ alquil C1-8-heteroarilo.
Como se usa en el presente documento, el término "heteroaril-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-heteroarilo.
Como se usa en el presente documento, el término "heteroaril-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1-8-heteroarilo.
Como se usa en el presente documento, el término "(heteroaril-alquil C1 -8 )2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8-heteroarilo)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(heteroaril-alquil C1 - s )(alquil C1 -8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1 - s )(alquil C1-8-heteroarilo).
Como se usa en el presente documento, el término "heteroaril-alquil C1-8-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-NH-alquil C1-8-heteroarilo.
Como se usa en el presente documento, el término "(heteroaril-alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C1-8-heteroarilo)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(heteroaril-alquil C1 -s (alquil C1 -8 )amino-alquilo C1.8" se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C1 - s )(alquil C1-8-heteroarilo).
Como se usa en el presente documento, el término "heteroaril-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-heteroarilo.
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclil-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O­ alquil C1-8-heterociclilo.
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclil-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-heterociclilo.
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclil-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1-8-heterociclilo.
Como se usa en el presente documento, el término "(heterociclil-alquil C1-8 )2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8-heterociclilo)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(heterociclil-alquil Ci -8)(alquil C ^am ino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8 )(alquil C1-8-heterociclilo).
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclil-alquil C1-8-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-NH-alquil C1-8-heterociclilo.
Como se usa en el presente documento, el término "(heterociclil-alquil C1-8 )2-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C1-8-heterociclilo)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(heterociclil-alquil C1-8 )(alquil C1 -8 )amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C^Xalquil C1-8-heterociclilo).
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclil-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-heterociclilo.
Como se usa en el presente documento, el término "(heterociclil)(alquil C1 -8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1 -8 )(heterociclilo).
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclil-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-NH-heterociclilo.
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclil-carbonilo" se refiere a un radical de la fórmula: -C(O)-heterociclilo.
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclil-carbonil-oxi" se refiere a un radical de la fórmula: -O-C(O)-heterociclilo.
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclil-oxi" se refiere a un radical de la fórmula: -O-heterociclilo.
Como se usa en el presente documento, el término "hidroxi" se refiere a un radical de la fórmula: -OH.
Como se usa en el presente documento, el término "hidroxi-alcoxi C1-8-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-O-alquil C1-8-OH.
Como se usa en el presente documento, el término "hidroxi-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-OH, en donde alquilo C1-8 se sustituye parcialmente o completamente con uno o más radicales hidroxi donde se permita por las valencias disponibles.
Como se usa en el presente documento, el término "hidroxi-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1.8-OH.
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil C1-8 )2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8-OH)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil C1 -8 )(alquil C1 -8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1 -8 )(alquil C1-8-OH).
Como se usa en el presente documento, el término "hidroxi-alquil C1-8-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-NH-alquil C1-8-OH.
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C1-8-OHX.
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil C1 -8 )(alquil C1-8 )amino-alquilo C W se refiere a un radical de la fórmula: -alquil C1-8-N(alquil C^Xalquil C1-8-OH).
Como se usa en el presente documento, el término "hidroxi-alquil C1-8-amino-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1-8-NH-alquil C1-8-OH.
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1-8-N(alquil C1-8-OH)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil C1 -8 )(alquil C1-8 )amino-alcoxi C W se refiere a un radical de la fórmula: -O-alquil C1-8-N(alquil C1-8 )(alquil C1-8-OH).
Como se usa en el presente documento, el término "hidroxi-alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1-8-NH-alquil C1-8-OH.
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil C1-8-amino-alquil C1 -8)2-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil Ci -8 -NH-alquil Ci -8-OH)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil Ci ^-am ino-alquil Ci -8 -amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1-8-N(alquil C1-8-OH)2.
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil C1-8-amino-alquil C1-8 )(alquil C1 -8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C^Xalquil C1-8-NH-alquil C1.8-OH).
Como se usa en el presente documento, el término "[(hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino-alquil C^Kalquil C1 -8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1 -8 )[alquil C1-8-N(alquil C1-8-OH)2 ]
Como se usa en el presente documento, el término "(hidroxi-alquil C1-8 )(alquil C1 -8 )amino-alquil C1-8-amino" se refiere a un radical de la fórmula: -NH-alquil C1-8-N(alquil C1-8-alquil C1.8-OH).
Como se usa en el presente documento, el término "[(hidroxi-alquil C^Xalquil C1 -8 )amino-alquil C^Kalquil C1 -8 )amino" se refiere a un radical de la fórmula: -N(alquil C1-8 )[alquil C1_8-N(alquil C1-8 )(alquil C1-8-OH)].
Como se usa en el presente documento, el término "sustituyente" significa variables de posición sobre los átomos de una molécula de núcleo que se unen en una posición de átomo designada, sustituyendo uno o más átomos de hidrógeno en el átomo designado, a condición de que el átomo de unión no supere la valencia disponible o valencias compartidas, de forma que la sustitución dé como resultado un compuesto estable. Por consiguiente, son permisibles combinaciones de sustituyentes y/o variables solo si dichas combinaciones dan como resultado compuestos estables. También se debe observar que se supone que cualquier carbono, así como heteroátomo con un nivel de valencia que parece no satisfacerse como se describe o muestra en el presente documento, tiene un número suficiente número de átomo(s) de hidrógeno para satisfacer las valencias descritas o mostradas.
Para los fines de esta descripción, donde una o más variables sustituyentes para un compuesto de la fórmula (Ia1) engloban funcionalidades incorporadas en un compuesto de la fórmula (Ia1), se puede seleccionar independientemente cada funcionalidad que aparece en cualquier localización dentro del compuesto descrito, y según convenga, independientemente y/u opcionalmente sustituida.
Como se usa en el presente documento, los términos "seleccionado independientemente" o "cada uno seleccionado" se refieren a variables funcionales en una lista de sustituyentes que se pueden unir más de una vez en la estructura de una molécula de núcleo, donde el patrón de sustitución en cada aparición es independiente del patrón en cualquier otra aparición. Además, se entiende que el uso de un sustituyente genérico en una estructura de núcleo para un compuesto proporcionado en el presente documento incluye la sustitución del sustituyente genérico con sustituyentes de especies que se incluyen dentro del género particular, por ejemplo, arilo se puede sustituir independientemente con fenilo o naftalenilo (también denominado naftilo) y similares, de forma que el compuesto resultante se pretende incluir dentro del alcance de los compuestos descritos en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, el término "cada caso de", cuando se usa en una frase tal como "...arilo, arilalquilo C1 -8 , heterociclilo y heterociclil-alquilo C1 -8 , en donde cada caso de arilo y heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno o dos sustituyentes..." pretende incluir la sustitución independiente opcional en cada uno de los anillos de arilo y heterociclilo y en las porciones de arilo y heterociclilo de aril-alquilo C1-8 y heterociclil-alquilo C1 -8.
Como se usa en el presente documento, el término "opcionalmente sustituido" significa que las variables, grupos, radicales o restos sustituyentes representan el alcance del género y se pueden elegir independientemente según se necesite para sustituir uno o más átomos de hidrógeno en el átomo de unión designado de una molécula de núcleo.
Como se usa en el presente documento, los términos "compuesto estable' o "estructura estable" significan un compuesto que es suficientemente robusto para ser aislado hasta un grado de pureza útil de una mezcla de reacción y sus formulaciones en un agente terapéutico eficaz.
Los nombres de compuestos proporcionados en el presente documento se obtuvieron usando ACD Labs Index Name software proporcionado por ACD Labs y/o ChemDraw Ultra software proporcionado por CambridgeSoft®. Cuando el nombre de compuesto descrito en el presente documento entra en conflicto con la estructura representada, la estructura mostrada sustituirá el uso del nombre para definir el compuesto previsto. La nomenclatura para radicales sustituyentes definida en el presente documento se puede diferenciar ligeramente del nombre químico del que derivan; un experto en la técnica reconocerá que la definición del radical sustituyente pretende incluir el radical como se encuentra en el nombre químico.
El término "SMN", a menos que se especifique de otro modo en el presente documento, se refiere al gen SMN1, ADN o ARN humano, y/o el gen SMN2, ADN o a Rn humano. En una realización específica, el término "SMN1" se refiere al gen SMN1, ADN o ARN humano. En otra realización específica, el término "SMN2" se refiere al gen SMN2, ADN o ARN humano.
Se conocen en la técnica las secuencias de ácidos nucleicos para los genes SMN1 y SMN2 humanos. Para secuencias de ácidos nucleicos de SMN1 humano, véanse, por ejemplo, los N.° de acceso de GenBank DQ894095, NM_000344, NM_022874 y BC062723. Para las secuencias de ácidos nucleicos de SMN2 humano, véanse, por ejemplo, NM_022875, NM_022876, NM_022877, NM_017411, DQ894734 (Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Carlsbad, Calif.), BC000908, BC070242, CR595484, CR598529, CR609539, U21914 y BC015308.
El gen SMN1 se puede encontrar en la hebra directa del cromosoma 5 humano desde aproximadamente el nucleótido 70.220.768 hasta aproximadamente el nucleótido 70.249.769. Las localizaciones aproximadas de los exones 6, 7 y 8 y los intrones 6 y 7 de SMN1 en el cromosoma 5 humano son del siguiente modo:
70.241.893 a 70.242.003 exón 6;
70.242.004 a 70.247.767 intrón 6;
70.247.768 a 70.247.821 exón 7;
70.247.822 a 70.248.265 intrón 7; y
70.248.266 a 70.248.839 exón 8.
El gen SMN2 se puede encontrar en la hebra directa del cromosoma 5 humano desde aproximadamente el nucleótido 69.345.350 hasta aproximadamente el nucleótido 69.374.349.
Las localizaciones aproximadas de los exones 6, 7 y 8 y los intrones 6 y 7 de SMN2 en el cromosoma 5 humano son del siguiente modo:
69.366.468 a 69.366.578 exón 6;
69.366.579 a 69.372.347 intrón 6;
69.372.348 a 69.372.401 exón 7;
69.372.402 a 69.372.845 intrón 7; y
69.372.846 a 69.373.419 exón 8.
En realizaciones específicas, las secuencias de nucleótidos delineadas anteriormente para los exones 6, 7 y 8 y los intrones 6 y 7 de SMN1 se usan en las construcciones de ácidos nucleicos de minigén SMN1 descritas en el presente documento. En otras realizaciones específicas, las secuencias de nucleótidos de los exones 6, 7 y 8 e intrones 6 y 7 de SMN2 en los ejemplos proporcionados en el presente documento se usan en las construcciones de ácidos nucleicos de minigén SMN2 descritas en el presente documento.
El término "Smn" o "proteína Smn", a menos que se especifique de otro modo en el presente documento, se refiere a una proteína Smn humana que contiene los restos de aminoácidos codificados por los exones 1 a 7 del gen SMN1 y/o gen SMN2. En una realización específica, la proteína Smn es estable y funcional in vitro y/o in vivo como se evalúa por métodos conocidos por un experto en la técnica.
En otra realización específica, la proteína Smn es la proteína de longitud completa codificada por el gen SMN1 y/o gen SMN2 humano. En otra realización específica, la proteína Smn tiene la secuencia de aminoácidos encontrada en los N.° de acceso de GenBank NP_000335, AAC50473.1, AAA66242.1 o NP_059107.
Como se usa en el presente documento, el término "potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2", y términos análogos, a menos que se especifique de otro modo en el presente documento, se refiere a la inclusión de la secuencia completa, intacta, no truncada del exón 7 de SMN2 en el ARNm maduro que se transcribe a partir del gen SMN2 (es decir, dando como resultado la producción de ARNm de SMN2 de longitud completa) in vitro y/o in vivo, como se evalúa por métodos conocidos por un experto en la técnica, de forma que se produzcan elevados niveles de proteína Smn a partir del gen SMN2 in vitro y/o in vivo, como se evalúa por métodos conocidos por un experto en la técnica; o, que se produzca la elevada expresión de proteína Smn estable y funcional a partir del gen SMN2 in vitro y/o in vivo, como se evalúa por métodos conocidos por un experto en la técnica; o, que se incremente in vitro y/o in vivo la expresión de la proteína de fusión codificada por el minigén, como se evalúa por métodos conocidos por un experto en la técnica; o, que se incremente la expresión de la proteína Smn producida a partir del gen SMN2 en un sujeto (por ejemplo, un modelo animal para AME o un sujeto humano o un paciente con AME) en necesidad del mismo.
Como se usa en el presente documento, el término "potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1", y términos análogos, a menos que se especifique de otro modo en el presente documento, se refiere a la inclusión de la secuencia completa, intacta, no truncada del exón 7 de SMN1 en el ARNm maduro que se transcribe a partir del gen SMN1 (es decir, dando como resultado la producción de ARNm de SMN1 de longitud completa) in vitro y/o in vivo, como se evalúa por métodos conocidos por un experto en la técnica, de forma que se produzcan elevados niveles de proteína Smn a partir del gen SMN1 in vitro y/o in vivo, como se evalúa por métodos conocidos por un experto en la técnica; o, que se produzca la elevada expresión de proteína Smn estable y funcional a partir del gen SMN1 in vitro y/o in vivo, como se evalúa por métodos conocidos por un experto en la técnica; o, que se incremente in vitro y/o in vivo la expresión de la proteína de fusión codificada por el minigén, como se evalúa por métodos conocidos por un experto en la técnica; o, que se incremente la expresión de la proteína Smn producida a partir del gen SMN1 en un sujeto (por ejemplo, un modelo animal para AME o un sujeto humano) en necesidad del mismo.
Como se usa en el presente documento, el término "cambio sustancial", en el contexto de la cantidad de ARNm, significa que la cantidad de ARNm no cambia en una cantidad estadísticamente significativa, por ejemplo, un valor de p inferior a un valor seleccionado de 0,1,0,05, 0,01,0,005, 0,001, 0,0005, 0,0001, 0,00005 o 0,00001.
Como se usa en el presente documento, los términos "sujeto" y "paciente" se usan indistintamente para referirse a un animal o cualquier organismo vivo que tiene la sensación y la potencia de movimiento voluntario, y que requiere para su existencia oxígeno y comida orgánica. Los ejemplos no limitantes incluyen miembros de las especies humana, equina, porcina, bovina, rattus, murina, canina y felina. En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero o un animal vertebrado de sangre caliente. En ciertas realizaciones, el sujeto es un animal no humano. En realizaciones específicas, el sujeto es un ser humano. En una realización específica, el sujeto es un paciente humano con AME.
Como se usa en el presente documento, el término "humano anciano" se refiere a un humano de 65 años de edad o mayor.
Como se usa en el presente documento, el término "adulto humano" se refiere a un humano que tiene 18 años o mayor.
Como se usa en el presente documento, el término "niño humano" se refiere a un humano que tiene 1 año a 18 años de edad.
Como se usa en el presente documento, el término "lactante humano" se refiere desde un recién nacido hasta un humano de 1 año de edad.
Como se usa en el presente documento, el término "niño pequeño humano" se refiere a un humano que tiene 1 año a 3 años de edad.
FORMAS DE COMPUESTOS
Como se usa en el presente documento, los términos "un compuesto de la fórmula (Ia)", "un compuesto de la fórmula (Ia1)", "un compuesto de la fórmula (Ia2)", "un compuesto de la fórmula (II)", "un compuesto de la fórmula (IIa)", "un compuesto de la fórmula (IIa1)", "un compuesto de la fórmula (IIa2)", "un compuesto de la fórmula (III)", "un compuesto de la fórmula (IIIa)", "un compuesto de la fórmula (IIIa1)", "un compuesto de la fórmula (IIIa2)", "un compuesto de la fórmula (IV)", "un compuesto de la fórmula (IVa)", "un compuesto de la fórmula (IVa1)", "un compuesto de la fórmula (IVa2)", "un compuesto de la fórmula (V)", "un compuesto de la fórmula (Va)", "un compuesto de la fórmula (Va1)" y "un compuesto de la fórmula (Va2)" se refieren cada uno a subgéneros del compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo y se definen en el presente documento.
En vez de realizaciones repetidas para los diversos subgéneros del compuesto de la fórmula (I), en ciertas realizaciones, el término "un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo" se usa para referirse inclusivamente a un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
Como se usa en el presente documento, el término "forma" significa un compuesto de la fórmula (Ia1) seleccionado de un ácido libre, base libre, sal, isotopólogo, estereoisómero, racemato, enantiómero, diaestereómero, o su tautómero.
En ciertas realizaciones descritas en el presente documento, la forma del compuesto de la fórmula (Ia1) es una seleccionada de una sal, isotopólogo, estereoisómero, racemato, enantiómero, diaestereómero o su tautómero.
En ciertas realizaciones descritas en el presente documento, la forma del compuesto de la fórmula (Ia1) es una seleccionada de un ácido libre, isotopólogo, estereoisómero, racemato, enantiómero, diaestereómero o su tautómero.
En ciertas realizaciones descritas en el presente documento, la forma del compuesto de la fórmula (Ia1) es una seleccionada de una base libre, isotopólogo, estereoisómero, racemato, enantiómero, diaestereómero o su tautómero.
En ciertas realizaciones descritas en el presente documento, la forma del compuesto de la fórmula (Ia1) es un ácido libre, base libre o su sal.
En ciertas realizaciones descritas en el presente documento, la forma del compuesto de la fórmula (Ia1) es un isotopólogo del mismo.
En ciertas realizaciones descritas en el presente documento, la forma del compuesto de la fórmula (Ia1) es un estereoisómero, racemato, enantiómero o su diaestereómero.
En ciertas realizaciones descritas en el presente documento, la forma del compuesto de la fórmula (Ia1) es un tautómero del mismo.
En ciertas realizaciones descritas en el presente documento, la forma del compuesto de la fórmula (Ia1) es una forma farmacéuticamente aceptable.
En ciertas realizaciones descritas en el presente documento, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se aísla para su uso.
Como se usa en el presente documento, el término "aislado" significa el estado físico de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo después de ser aislado y/o purificado a partir de un proceso sintético (por ejemplo, a partir de una mezcla de reacción) o fuente natural o su combinación según un proceso o procesos de aislamiento o purificación descritos en el presente documento o que se conocen bien por el experto (por ejemplo, cromatografía, recristalización y similares) en pureza suficiente para ser caracterizable por técnicas analíticas convencionales descritas en el presente documento o bien conocidas por el experto.
Como se usa en el presente documento, el término "protegido" significa que un grupo funcional en un compuesto de la fórmula (Ia1) está en una forma modificada para descartar reacciones laterales no deseadas en el sitio protegido cuando el compuesto se somete a una reacción. Los grupos protectores adecuados serán reconocidos por los expertos habituales en la técnica, así como la referencia a libros de textos convencionales tales como, por ejemplo, T. W. Greene et al, Protective Groups in Organic Synthesis (1991), Wiley, New York.
También se contemplan en el presente documento los profármacos de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
Como se usa en el presente documento, el término "profármaco" significa que un grupo funcional en un compuesto de la fórmula (Ia1) está en una forma (por ejemplo, que actúan como precursor de fármaco activo o inactivo) que se transforma in vivo dando un compuesto activo o más activo de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. La transformación puede ocurrir por diversos mecanismos (por ejemplo, por procesos metabólicos y/o químicos no metabólicos), tales como, por ejemplo, por hidrólisis y/o metabolismo en sangre, hígado y/u otros órganos y tejidos. Una discusión del uso de profármacos se proporciona por V.J. Stella, et. al., "Biotechnology: Pharmaceutical Aspects, Prodrugs: Challenges and Rewards", American Association of Pharmaceutical Scientists and Springer Press, 2007.
En un ejemplo, cuando un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo contiene un grupo funcional ácido carboxílico, un profármaco puede comprender un éster formado por la sustitución del átomo de hidrógeno del ácido grupo con un grupo funcional tal como alquilo y similares. En otro ejemplo, cuando un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo contiene un grupo funcional alcohol, se puede formar un profármaco por la sustitución del átomo de hidrógeno del grupo alcohol con un grupo funcional tal como alquilo o carbonilo sustituido y similares. En otro ejemplo, cuando un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo contiene un grupo funcional amina, se puede formar un profármaco por la sustitución de uno o más átomos de hidrógeno de la amina con un grupo funcional tal como alquilo o sustituido carbonilo. En otro ejemplo, cuando un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo contiene un sustituyente de hidrógeno, se puede formar un profármaco por la sustitución de uno o más átomos de hidrógeno con un sustituyente de alquilo.
Los profármacos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos incluyen aquellos compuestos sustituidos con uno o más de los siguientes grupos: ésteres de ácido carboxílico, ésteres de sulfonato, ésteres de aminoácido, ésteres de fosfonato, ésteres de mono-, di- o trifosfato o sustituyentes de alquilo cuando corresponda. Como se describe en el presente documento, se entiende por un experto habitual en la técnica que uno o más de dichos sustituyentes se puede usar para proporcionar un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo para su uso como un profármaco.
Los compuestos de la fórmula (Ia1) pueden formar sales que se pretenden incluir dentro del alcance de esta descripción. La referencia a un compuesto de la fórmula (Ia1) en el presente documento se entiende que incluye la referencia a sus sales, a menos que se indique lo contrario. El término "sal(es)", como se emplea en el presente documento, indica sales de ácido formadas con ácidos inorgánicos y/u orgánicos, así como sales básicas formadas con bases inorgánicas y/u orgánicas. Además, cuando un compuesto de la fórmula (Ia1) contiene tanto un resto básico, tal como, pero no se limita a, una piridina o imidazol, como un resto ácido, tal como, pero no se limita a, un ácido carboxílico, se pueden formar iones bipolar ("sales inertes") y se incluyen dentro del término "sal(es)" como se usa en el presente documento.
El término "sal(es) farmacéuticamente aceptable(s)", como se usa en el presente documento, significa las sales de compuestos descritos en el presente documento que son seguras y eficaces (es decir, no tóxicas, fisiológicamente aceptables) para su uso en mamíferos y que poseen actividad biológica, aunque también son útiles otras sales. Las sales de los compuestos de la fórmula (Ia1) se pueden formar, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula (Ia1) con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente o estequiométrica, en un medio tal como uno en el que precipita la sal o en un medio acuoso seguido por liofilización.
Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen una o más sales de grupos ácidos o básicos presentes en los compuestos descritos en el presente documento. Las realizaciones de las sales de adición de ácido incluyen, y no se limitan a, las sales de acetato, fosfato ácido, ascorbato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, bitartrato, borato, butirato, cloruro, citrato, canforato, canforsulfonato, etanosulfonato, formiato, fumarato, gentisinato, gluconato, glucaronato, glutamato, bromhidrato, clorhidrato, diclorhidrato, yodhidrato, isonicotinato, lactato, maleato, metanosulfonato, naftalenosulfonato, nitrato, oxalato, pamoato, pantotenato, fosfato, propionato, sacarato, salicilato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, toluenosulfonato (también conocidos como tosilato), trifluoroacetato y similares. Una o más realizaciones de las sales de adición de ácido incluyen una sal de cloruro, clorhidrato, diclorhidrato, triclorhidrato, bromhidrato, acetato, diacetato o trifluoroacetato. Las realizaciones más particulares incluyen una sal de cloruro, clorhidrato, diclorhidrato, bromhidrato o trifluoroacetato.
Además, ácidos que generalmente se consideran adecuados para la formación de sales farmacéuticamente útiles de compuestos farmacéuticos básicos se tratan, por ejemplo, por P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33, 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; y en The Orange Book (véase la página web de Food & Drug Administration, Washington, D.C.).
Las sales básicas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, sales de aluminio, amonio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio, cinc y dietanolamina. Ciertos compuestos descritos en el presente documento también pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas) tales como, pero no se limitan a, diciclohexilaminas, ferc-butilaminas y similares, y con diversos aminoácidos tales como, pero no se limitan a, arginina, lisina y similares. Los grupos que contienen nitrógeno básico pueden ser cuaternizados con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo y dibutilo), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo), y otros.
Todas de dichas sales de ácido y sales de base pretenden ser sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la descripción en el presente documento y todas de dichas sales de ácido y base se consideran equivalentes a las formas libres de los compuestos correspondientes para los fines descritos en el presente documento.
Los compuestos de la fórmula (Ia1) y sus formas pueden existir adicionalmente en una forma tautómera. Todas de dichas formas tautómeras se contemplan en el presente documento como parte de la presente descripción.
Los compuestos de la fórmula (Ia1) pueden contener centros asimétricos o quirales, y, por tanto, pueden existir en diferentes formas estereoisoméricas. La presente descripción pretende incluir todas las formas estereoisoméricas de los compuestos de la fórmula (Ia1), así como sus mezclas, que incluyen mezclas racémicas.
Los compuestos de la fórmula (Ia1) descritos en el presente documento pueden incluir uno o más centros quirales, y como tales pueden existir como mezclas racémicas (R/S) o como enantiómeros y diaestereómeros sustancialmente puros. Los compuestos también pueden existir como enantiómeros sustancialmente puros (R) o (S) (cuando está presente un centro quiral). En una realización, los compuestos de la fórmula (Ia1) descritos en el presente documento son isómeros (S) y puede existir como composiciones enantioméricamente puras que comprenden sustancialmente solo el isómero (S). En otra realización, los compuestos de la fórmula (Ia1) descritos en el presente documento son los isómeros (R) y pueden existir como composiciones enantioméricamente puras que comprenden sustancialmente solo el isómero (R). Como reconocerá un experto en la técnica, cuando está presente más de un centro quiral, los compuestos de la fórmula (Ia1) descritos en el presente documento también pueden incluir las porciones descritas como un isómero (R,R), (R,S), (S,R) o (S,S), como se define por las Recomendaciones de Nomenclatura de la IUPAC.
Como se usa en el presente documento, el término "sustancialmente puro" se refiere a compuestos que consisten sustancialmente en un isómero individual en una cantidad superior a o igual al 90 %, en una cantidad superior o igual al 92 %, en una cantidad superior o igual al 95 %, en una cantidad superior o igual al 98 %, en una cantidad superior o igual al 99 %, o en una cantidad igual al 100 % del isómero individual.
En un aspecto, un compuesto de la fórmula (Ia1) es una enantiómero sustancialmente puro (S) presente en una cantidad superior o igual al 90 %, en una cantidad superior o igual a 92 %, en una cantidad superior o igual al 95 %, en una cantidad superior o igual al 98 %, en una cantidad superior o igual al 99 %, o en una cantidad igual al 100 %.
En un aspecto, un compuesto de la fórmula (Ia1) es una enantiómero sustancialmente puro (R) presente en una cantidad superior o igual al 90 %, en una cantidad superior o igual al 92 %, en una cantidad superior o igual al 95 %, en una cantidad superior o igual al 98 %, en una cantidad superior o igual al 99 %, o en una cantidad igual al 100 %.
Como se usa en el presente documento, un "racemato" es cualquier mezcla de formas isométricas que no son "enantioméricamente puras", que incluyen mezclas tales como, sin limitación, en una relación de aproximadamente 50/50, aproximadamente 60/40, aproximadamente 70/30, aproximadamente 80/20, aproximadamente 85/15 o aproximadamente 90/10.
Además, la presente descripción engloba todos los isómeros geométricos y de posición. Por ejemplo, si un compuesto de la fórmula (Ia1) incorpora un doble enlace o un anillo condensado, tanto las formas cis como trans, así como mezclas, están englobadas dentro del alcance de la descripción en el presente documento.
Las mezclas diaestereoméricas se pueden separar en sus diaestereómeros individuales basándose en sus diferencias fisicoquímicas por métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, tales como, por ejemplo, por cromatografía y/o cristalización fraccionada. Los enantiómeros se pueden separar por uso de columna de HPLC quiral u otros métodos cromatográficos conocidos por los expertos en la técnica.
Los enantiómeros también se pueden separar convirtiendo la mezcla enantiomérica en una mezcla diaestereomérica por reacción con un compuesto ópticamente activo apropiado (por ejemplo, auxiliar quiral tal como un alcohol quiral o cloruro de ácido de Mosher), separando los diaestereómeros y convirtiendo (por ejemplo, hidrolizando) los diaestereómeros individuales en los enantiómeros puros correspondientes. Por tanto, algunos de los compuestos de la fórmula (Ia1) puede ser atropisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos) y se consideran parte de esta descripción.
Todas las formas de estereoisómero (por ejemplo, isómeros geométricos, isómeros ópticos, isómeros de posición y similares) de los presentes compuestos (incluyendo sales, solvatos, ésteres y profármacos y sus profármacos transformados) que pueden existir debido a carbonos asimétricos en los diversos sustituyentes, que incluyen formas enantioméricas (que pueden existir incluso en ausencia de carbonos asimétricos), formas rotámeras, atropisómeros, formas diaestereoméricas y formas regioisoméricas se contemplan dentro del alcance de la descripción en el presente documento. Por ejemplo, si un compuesto de la fórmula (Ia1) incorpora un doble enlace o un anillo fusionado, tanto las formas cis como trans, así como sus mezclas, están englobadas dentro del alcance de la descripción en el presente documento. Por tanto, por ejemplo, todas las formas tautómeras ceto-enólicas y de imina-enamina de los compuestos están incluidas en la descripción en el presente documento. Los estereoisómeros individuales de los compuestos de la fórmula (Ia1) descritos en el presente documento pueden estar, por ejemplo, sustancialmente libres de otros isómeros, o pueden estar presentes en una mezcla racémica, como se describe arriba.
El uso de los términos "sal", "profármaco" y "profármaco transformado" pretenden aplicarse igualmente a las sales, profármacos y profármacos transformados de todos los isotopólogos, estereoisómeros, racematos o tautómeros contemplados de los presentes compuestos.
El término "isotopólogo" se refiere a compuestos isotópicamente enriquecidos que son idénticos a los citados en el presente documento, pero por el hecho de que uno o más átomos están sustituidos por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico normalmente encontrado en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos descritos en el presente documento incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como H2, H3, C13, C14, N15, O18, O17, P31, P32, S35, F18, Cl35 y Cl36, respectivamente, cada uno de los cuales también está dentro del alcance de esta descripción.
Ciertos compuestos isotópicamente enriquecidos descritos en el presente documento (por ejemplo, los marcados con H3 y C14) son útiles en ensayos de distribución de compuesto y/o sustrato en tejido. Los isótopos tritiados (es decir, H3) y de carbono-14 (es decir, C14) son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio (es decir, "enriquecidos con deuterio") pueden proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de mayor estabilidad metabólica (por ejemplo, elevada semivida in vivo o reducidos requisitos de dosificación) y, por tanto, se pueden preferir en algunas circunstancias. Los compuestos isotópicamente enriquecidos de la fórmula (Ia1) se pueden preparar generalmente usando procedimientos conocidos por los expertos habituales en la técnica sustituyendo un reactivo isotópicamente enriquecido apropiado con un reactivo no isotópicamente enriquecido.
Cuando los compuestos se enriquecen con deuterio, la relación entre deuterio e hidrógeno en los átomos deuterados de la molécula supera sustancialmente la relación entre deuterio e hidrógeno que existe de forma natural.
Una realización descrita en el presente documento puede incluir una forma de isotopólogo del compuesto de la fórmula (Ia1), en donde el isotopólogo está sustituido en uno o más miembros de átomo del compuesto de la fórmula (Ia1) con uno o más átomos de deuterio en lugar de uno o más átomos de hidrógeno.
Una realización descrita en el presente documento puede incluir un compuesto de la fórmula (Ia1) y sus formas, en donde un átomo de carbono puede tener desde 1 hasta 3 átomos de hidrógeno opcionalmente sustituidos con deuterio.
Uno o más compuestos descritos en el presente documento pueden existir en formas no solvatadas, así como solvatadas, con disolventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol, y similares, y la descripción en el presente documento pretende engloban tanto las formas solvatadas como no solvatadas.
Como se usa en el presente documento, el término "solvato" significa una asociación física de un compuesto descrito en el presente documento con una o más moléculas de disolvente. Esta asociación física implica grados variables de enlace iónico y covalente, que incluyen enlace de hidrógeno. En ciertos casos, el solvato será capaz de aislamiento, por ejemplo cuando una o más moléculas de disolvente se incorporan en la red cristalina del sólido cristalino. Como se usa en el presente documento, "solvato" engloba tanto los solvatos en fase de disolución como aislables. Los ejemplos no limitantes de solvatos adecuados incluyen etanolatos, metanolatos, y similares.
Uno o más compuestos descritos en el presente documento se pueden convertir opcionalmente en un solvato. Generalmente se conoce la preparación de solvatos. Un proceso no limitante típico implica disolver un compuesto en una cantidad deseada del disolvente deseado (orgánico o agua o sus mezclas) a una temperatura superior a temperatura ambiente, y enfriar la disolución a una tasa suficiente para formar cristales que entonces se aíslan por métodos convencionales. Las técnicas analíticas tales como, por ejemplo, espectroscopía infrarroja, muestran la presencia del disolvente (o agua) en los cristales como un solvato (o hidrato).
Como se usa en el presente documento, el término "hidrato" significa un solvato en donde la molécula de disolvente es agua.
Las formas cristalinas y amorfas polimórficas de los compuestos de la fórmula (Ia1), y de las sales de los compuestos de la fórmula (Ia1), tienen la finalidad adicional de estar incluidas en el alcance de los compuestos descritos en el presente documento.
USOS DE COMPUESTOS
Se describen en el presente documento compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos que potencian la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2. Se ha mostrado que dichos compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos potencian la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 usando los ensayos descritos en el presente documento (véase la sección de ejemplos biológicos, abajo). Por consiguiente, los compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos tienen utilidad como potenciadores para la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2.
Se describen en el presente documento compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos para potenciar la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1. Dichos compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos pueden potenciar la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 usando, por ejemplo, un ensayo de minigén de SMN1. Por consiguiente, los compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos pueden tener utilidad como potenciadores para la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1.
En el presente documento también se describen métodos de modulación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARN transcrito a partir del gen SMN2, que comprenden poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo. En el presente documento también se describen métodos de modulación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARN transcrito a partir del gen SMN2, que comprenden poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo que modula la expresión de un minigén SMN2 descrito en el presente documento o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. El minigén puede ser un minigén descrito en los ejemplos de la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. El minigén puede ser el minigén descrito en el ejemplo biológico 1, abajo. La célula humana se puede poner en contacto con un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo in vitro y/o in vivo, por ejemplo, en un animal no humano o en un humano. La célula humana puede ser de o estar en un humano. La célula humana puede ser de o estar en un paciente humano con AME. La célula humana puede ser de o estar en un paciente humano con AME, en donde AME se provoca por una mutación o deleción inactivante en el gen SMN1 en ambos cromosomas, dando como resultado una pérdida de función del gen SMN1. La célula humana puede ser una célula humana de un paciente humano con AME. La célula humana puede ser de una línea celular, tal como GM03813, GM00232, GM09677 y/o GM23240 (disponible de Coriell Institute). El compuesto puede ser un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo.
En una realización específica, en el presente documento se proporciona un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, que comprende poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. En otra realización, en el presente documento se proporciona un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, que comprende poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo que potencia la expresión de un minigén SMN2 descrito en el presente documento o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. En una realización, el minigén es un minigén descrito en los ejemplos de la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. En otra realización, el minigén es el minigén descrito en el ejemplo biológico 1, abajo. La célula humana se puede poner en contacto con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo in vitro y/o in vivo, por ejemplo, en un animal no humano o en un humano. En una realización específica, la célula humana es de o está en un humano. En otra realización específica, la célula humana es de o está en un paciente humano con AME. En otra realización específica, la célula humana es de o está en un paciente humano con AME, en donde AME se provoca por una mutación inactivante o deleción en el gen SMN1 en ambos cromosomas, dando como resultado una pérdida de función del gen SMN1. En otra realización, la célula humana es una célula humana de un paciente humano con AME. En ciertas realizaciones, la célula humana es de una línea celular, tal como GM03813, GM00232, GM09677, y/o GM23240 (disponible de Coriell Institute). En una realización, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En el presente documento también se describen métodos de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARN transcrito a partir del gen SMN1, que comprenden poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo. En el presente documento también se describen métodos de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARN transcrito a partir del gen SMN1, que comprenden poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo. En el presente documento también se describen métodos de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARN transcrito a partir del gen SMN1, que comprenden poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo que modula la expresión de un minigén SMN1 descrito en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. El minigén puede ser un minigén descrito en los ejemplos de la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. La célula humana se puede poner en contacto con un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo in vitro y/o in vivo, por ejemplo, en un animal no humano o en un humano. La célula humana puede ser de o estar en un humano. La célula humana puede ser de o estar en un paciente humano con AME. El compuesto puede ser un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo.
En realizaciones específicas, en el presente documento se proporcionan métodos de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARN transcrito a partir de los genes SMN1 y SMN2, que comprenden poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. La célula humana se puede poner en contacto con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo in vitro y/o in vivo, por ejemplo, en un animal no humano o en un humano. En una realización específica, la célula humana es de o está en un humano. En otra realización específica, la célula humana es de o está en un paciente humano con AME. En una realización, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
También se describe en el presente documento un método de modulación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARN transcrito a partir del gen SMN2, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo. También se describe en el presente documento un método de modulación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARN transcrito a partir del gen SMN2, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo que modula la expresión de un minigén SMN2 descrito en el presente documento o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. El minigén puede ser un minigén descrito en los ejemplos de la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. El minigén puede ser el minigén descrito en el ejemplo biológico 1, abajo. El compuesto puede ser un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo.
En una realización específica, en el presente documento se proporciona un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. En otra realización específica, en el presente documento se proporciona un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo que potencia la expresión de un minigén SMN2 descrito en el presente documento o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. En una realización, el minigén es un minigén descrito en los ejemplos de la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. En otra realización, el minigén es el minigén descrito en el ejemplo biológico 1, abajo. En una realización específica, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
También se describe en el presente documento un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARN transcrito a partir del gen SMN1, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo. También se describe en el presente documento un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARN transcrito a partir del gen SMN1, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo que modula la expresión de un minigén SMN1 descrito en el presente documento o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. El minigén puede ser un minigén descrito en los ejemplos de la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. El compuesto puede ser un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo.
En realizaciones específicas, en el presente documento se proporciona un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARN transcrito a partir de los genes SMN1 y SMN2, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (Ia1) una forma del mismo. En una realización específica, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En otro aspecto, en el presente documento se proporciona un método de aumento de la cantidad de proteína Smn, que comprende poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. En una realización específica, en el presente documento se proporciona un método de aumento de la cantidad de proteína Smn, que comprende poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (Ia1) que potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2. En otra realización específica, en el presente documento se proporciona un método de aumento de la cantidad de proteína Smn, que comprende poner en contacto una célula humana con un compuesto de la fórmula (Ia1) que potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen del SMN1 y SMN2. La célula humana se puede poner en contacto con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo in vitro y/o in vivo, por ejemplo, en un animal no humano o en un humano. En una realización específica, la célula humana es de o está en un humano. En otra realización específica, la célula humana es de o está en un paciente humano con AME. En otra realización específica, la célula humana es de o está en un paciente humano con AME, en donde AME se provoca por una mutación inactivante o deleción en el gen SMN1 en ambos cromosomas, dando como resultado una pérdida de función del gen SMN1. En otra realización, la célula humana es una célula humana de un paciente humano con AME. En ciertas realizaciones, la célula humana es de una línea celular, tal como GM03813, GM00232, GM09677, y/o GM23240 (disponible de Coriell Institute). En una realización, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
También se describe en el presente documento un método de aumento de la cantidad de proteína Smn, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo. También se describe en el presente documento un método de aumento de la cantidad de proteína Smn, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (I) que potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 en, por ejemplo, un ensayo basado en células o sin células, tal como se describen en ejemplos biológicos, abajo. También se describe en el presente documento un método de aumento de la cantidad de proteína Smn, que comprende administrar a un modelo de animal no humano para AME un compuesto de la fórmula (I) que potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 en, por ejemplo, un ensayo basado en células o sin células.
En una realización, el compuesto de la fórmula (Ia1) potencia la expresión de un minigén descrito en el presente documento o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. En una realización específica, el compuesto de la fórmula (Ia1) potencia la expresión de un minigén descrito en los ejemplos de la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. En otra realización específica, el compuesto de la fórmula (Ia1) potencia la expresión de un minigén descrito en el ejemplo biológico 1, abajo. En una realización, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En una realización, en el presente documento se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo para la preparación de un medicamento que potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2. En otra realización, en el presente documento se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo para la preparación de un medicamento que potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, aumentando así la expresión de proteína Smn en un sujeto humano en necesidad del mismo. En una realización particular, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo). En una realización específica, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En una realización, en el presente documento se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo para la preparación de un medicamento que potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen del SMN1 y SMN2. En otra realización, en el presente documento se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo para la preparación de un medicamento que potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen del SMN1 y SMN2, aumentando así la expresión de proteína Smn en un sujeto humano en necesidad del mismo. En una realización específica, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan métodos de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 en un sujeto humano en necesidad de los mismos, que comprenden administrar al sujeto humano una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. En una realización específica, en el presente documento se proporciona un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto humano una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo que potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 como se determina en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo). En realizaciones específicas, la cantidad eficaz del compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se administra al sujeto humano en una composición farmacéutica que comprende un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo). En una realización específica, el sujeto humano es un paciente humano con AME. En otra realización específica, el sujeto humano es un paciente humano con AME, en donde AME se provoca por una mutación inactivante o deleción en el gen SMN1 en ambos cromosomas, dando como resultado una pérdida de función del gen SMN1. En una realización, el compuesto es un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo.
En el presente documento también se describen métodos de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 en un sujeto humano en necesidad de los mismos, que comprenden administrar al sujeto humano una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo. El compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo puede potenciar la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 en un ensayo descrito en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. La cantidad eficaz del compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo se puede administrar al sujeto humano en una composición farmacéutica que comprende un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. El sujeto humano puede ser un paciente humano con AME. El compuesto puede ser un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo.
En otro aspecto, en el presente documento se proporciona un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2 en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto humano una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. En una realización particular, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 en un ensayo(s) descrito(s) en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833 (véanse, por ejemplo, los ejemplos en las publicaciones). En realizaciones específicas, la cantidad eficaz del compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se administra al sujeto humano en una composición farmacéutica que comprende un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. En una realización específica, el sujeto humano es un paciente humano con AME. En otra realización específica, el sujeto humano es un paciente humano con AME, en donde AME se provoca por una mutación inactivante o deleción en el gen SMN1 en ambos cromosomas, dando como resultado una pérdida de función del gen SMN1. En una realización, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En el presente documento también se describen métodos de potenciación de la expresión de proteína Smn en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprenden administrar al sujeto humano una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo. También se describe en el presente documento un método de potenciación de la expresión de proteína Smn en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto humano una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo que potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2. También se describe en el presente documento un método de potenciación de la expresión de proteína Smn en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto humano una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo que potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2. La cantidad eficaz del compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo se puede administrar al sujeto humano en una composición farmacéutica que comprende un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. El compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo puede potenciar la inclusión del exón 7 de SMN1 y/o s MN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo) o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833 (véanse, por ejemplo, los ejemplos en las publicaciones).
En una realización específica, el sujeto humano es un paciente humano con AME. En otra realización específica, el sujeto humano es un paciente humano con AME, en donde AME se provoca por una mutación inactivante o deleción en la copia telomérica del gen SMN1 en ambos cromosomas, dando como resultado una pérdida de función del gen SMN1. En una realización, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En otra realización, en el presente documento se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo para la preparación de un medicamento que potencia la expresión de la proteína Smn en un sujeto humano en necesidad del mismo. En una realización particular, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 como se determina en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo). En otra realización, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen del SMN1 y SMN2 como se determina en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo) o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833 (véanse, por ejemplo, los ejemplos en las publicaciones). En una realización específica, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan compuestos de la fórmula (Ia1) para su uso en métodos de tratamiento de atrofia muscular espinal (AME), que comprenden administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. En una realización específica, en el presente documento se proporciona un compuesto de la fórmula (Ia1) para su uso en un método de tratamiento de AME en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo. En otra realización específica, en el presente documento se proporciona un compuesto de la fórmula (Ia1) para su uso en un método de tratamiento de AME en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. En una realización, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En otra realización, en el presente documento se proporciona un compuesto de la fórmula (Ia1) para su uso en un método de tratamiento de AME en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo que potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2. En una realización específica, en el presente documento se proporciona un compuesto de la fórmula (Ia1) para su uso en un método de tratamiento de AME en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo que potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. En otra realización específica, en el presente documento se proporciona un compuesto de la fórmula (Ia1) para su uso en un método de tratamiento de AME en un sujeto humano en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo que potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2, y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo). En otra realización, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen del SMN1 y SMN2 como se determina en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo) o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833 (véanse, por ejemplo, los ejemplos en las publicaciones). En una realización específica, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En otra realización, en el presente documento se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo en la fabricación de un medicamento para tratar AME en un sujeto humano en necesidad del mismo. En una realización particular, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 como se determina en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo). En otra realización, el compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen del SMN1 y SMN2 como se determina en un ensayo descrito en el presente documento (véase, por ejemplo, ejemplos biológicos, abajo) o en la publicación internacional N.° WO2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833 (véanse, por ejemplo, los ejemplos en las publicaciones). En una realización específica, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo.
En una realización de un uso o método proporcionado en el presente documento, los compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos se usan en combinación con uno o más agentes adicionales. Un compuesto(s) de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se puede administrar a un sujeto o pone en contacto con una célula antes de, simultáneamente con, o posterior a administrar al sujeto o poner en contacto la célula con un agente (s) adicional(es). Un compuesto(s) de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo y un agente(s) adicional(es) se puede administrar a un sujeto o poner en contacto con una célula en la composición individual o diferentes composiciones. El (Los) compuesto(s) de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos usados en combinación con la sustitución de gen de SMN1 (que usa, por ejemplo, vectores de administración viral). En otras realizaciones específicas, un compuesto(s) de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se usan en combinación con sustitución celular que usa células madre SMN1+/+ y SMN2+/+ diferenciadas. El (Los) compuesto(s) de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos usada en combinación con sustitución celular que usa células madre SMN1+/+ diferenciadas. En otras realizaciones específicas, un compuesto(s) de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se usan en combinación con sustitución celular que usa células madre SMN2+/+ diferenciadas. En otra realización específica, un compuesto(s) de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos se usan en combinación con aclarubicina. En otra realización específica, un compuesto(s) de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se usan en combinación con un activador de la transcripción tal como un inhibidor de histona desacetilasa ("HDAC") (por ejemplo, butiratos, ácido valproico e hidroxiurea) y estabilizadores de ARNm (por ejemplo, inhibidor del desencapuchado de ARNm RG3039 de Repligen).
En una realización, en el presente documento se proporciona el uso de compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos en combinación con terapia complementaria, que incluye cuidado respiratorio, nutricional o de rehabilitación.
En ciertas realizaciones, tratar AME con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) tiene un efecto terapéutico y/o efecto beneficioso. En una realización específica, tratar AME con un compuesto de la fórmula o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) da como resultado uno, dos o más de los siguientes efectos: (i) reduce o mejora la gravedad de AME; (ii) retrasa la aparición de AME; (iii) inhibe la progresión de AME; (iv) reduce la hospitalización de un sujeto; (v) reduce la duración de hospitalización para un sujeto; (vi) aumenta la supervivencia de un sujeto; (vii) mejora la calidad de vida de un sujeto; (viii) reduce el número de síntomas asociados a AME; (ix) reduce o mejora la gravedad de un síntoma(s) asociado(s) a AME; (x) reduce la duración de un síntoma asociado a AME; (xi) previene la reaparición de un síntoma asociado a AME; (xii) inhibe el desarrollo o la aparición de un síntoma de AME; y/o (xiii) inhibe la progresión de un síntoma asociado a AME.
Los síntomas de AME incluyen debilidad muscular, tono muscular bajo, llanto débil, tos débil, flojedad o una tendencia a desplomarse, dificultad para aspirar o tragar, dificultad al respirar, acumulación de secreciones en los pulmones o garganta, puños apretados con mano sudorosa, parpadeo/vibración de la lengua, cabeza frecuentemente inclinada hacia un lado, incluso cuando están tumbados, piernas que tienden a ser más débiles que los brazos, piernas que asumen frecuentemente una posición de "ancas de rana", dificultades para alimentarse, elevada susceptibilidad a infecciones de las vías respiratorias, debilidad intestinal/incontinencia urinaria, peso inferior al normal, incapacidad para sentarse sin ayuda, retraso al caminar, retraso al gatear e hipotonía, arreflexia, y múltiples contracturas congénitas (artrogriposis) asociadas a la pérdida de células del asta anterior.
En una realización específica, tratar AME con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) da como resultado uno, dos o más de los siguientes efectos: (i) una reducción en la pérdida de fuerza muscular; (ii) un aumento en la fuerza muscular; (iii) una reducción en la atrofia muscular; (iv) una reducción en la pérdida de función motora; (v) un aumento en las neuronas motoras; (vii) una reducción en la pérdida de neuronas motoras; (viii) protección de neuronas motoras deficientes de SMN de la degeneración; (ix) un aumento en la función motora; (x) un aumento en la función pulmonar; y/o (xi) una reducción en la pérdida de la función pulmonar.
En otra realización, tratar AME con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) da como resultado la capacidad funcional o ayuda para retener la capacidad funcional para un lactante humano o un niño pequeño humano para incorporarse. En otra realización, tratar AME con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) da como resultado la capacidad funcional o ayuda para retener la capacidad funcional para un lactante humano, un niño pequeño humano, un niño humano o un adulto humano para levantarse sin ayuda. En otra realización, tratar AME con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) da como resultado la capacidad funcional o ayuda para retener la capacidad funcional para un lactante humano, un niño pequeño humano, un niño humano o un adulto humano para caminar sin ayuda. En otra realización, tratar AME con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) da como resultado la capacidad funcional o ayuda para retener la capacidad funcional para un lactante humano, un niño pequeño humano, un niño humano o un adulto humano para correr sin ayuda. En otra realización, tratar AME con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) da como resultado la capacidad funcional o ayuda para retener la capacidad funcional para un lactante humano, un niño pequeño humano, un niño humano o un adulto humano para respirar sin ayuda. En otra realización, tratar AME con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) da como resultado la capacidad funcional o ayuda para retener la capacidad funcional para un lactante humano, un niño pequeño humano, un niño humano o un adulto humano para girarse al dormir sin ayuda. En otra realización, tratar AME con un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo (solo o en combinación con un agente adicional) da como resultado la capacidad funcional o ayuda para retener la capacidad funcional para un lactante humano, un niño pequeño humano, un niño humano o un adulto humano para tragar sin ayuda.
Se puede usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 2, 9 o 12, y sondas de SMN tales como SEQ ID NO. 3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern o transferencia Southern, para determinar si un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en ARNm que se transcribe a partir de un gen SMN1 y/o SMN2. Se puede usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 2, 9 o 12, y sondas de SMN tales como SEQ ID NO.
3 o 10) en un ensayo, tales como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern o transferencia Southern, o un kit farmacéutico o de ensayo como se describe abajo, para monitorizar las respuestas del paciente a un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo.
Un compuesto de la fórmula (I):
Figure imgf000047_0001
o una forma del mismo se puede usar según un método descrito en el presente documento, en donde:
W1 es C-Rb o N;
W2 y W6 son C-R1 o C-R2;
W3 , W4 y W5 son C-Ra o N;
en donde uno de W2 y W6 es C-R1 y el otro es C-R2 , a condición de que, cuando W2 sea C-R1 , entonces W6 es C-R2 ; o, cuando w2 sea C-R2 , entonces w6 es C-R1 y,
en donde uno cualquiera, dos o tres de los restantes w 1 , w3, w4 y w5 pueden ser simultáneamente N;
R1 es alquilo C1.8 , amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8 )2-amino, alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1 -8)2-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1 - s )(alquil C1 -8 )amino, amino-alquilo C1.8 , alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (alquil C1 -8 )2-aminoalquilo C1.8 , alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (alcoxi C1-8-alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C1.8 , (alcoxi C1-8-alquil C1.
8)(alquil C1-8 )amino-alquilo C1.8 , amino-alquil C1-8-amino, (amino-alquil C1 -8 )2-amino, (amino-alquil C1 - s )(alquil C1.
8)amino, alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1 -8 )2-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1-8 )(alquil C1 -8 )amino, (alquil C1 -8 )2-amino-alquil C1-8-amino, [(alquil C1-8 )2-amino-alquil C1 -s ](alquil C1-8 )amino, amino-alcoxi C1.8 , alquil C1-8-amino-alcoxi C1.8 , (alquil C1 -8 )2-amino-alcoxi C1-8 , alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino-alcoxi C1.8 , alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino-alcoxi C1.8 , (alcoxi C1-8-alquil C1 - s )(alquil C1 -8 )amino-alcoxi C1.8 , amino-alquenilo C2-8, alquil C1-8-aminoalquenilo C2-8, (alquil C1-8 )2-amino-alquenilo C2-8, amino-alquinilo C2-8, alquil C1-8-amino-alquinilo C2-8, (alquil C1 -8 )2-amino-alquinilo C2-8, halo-alquil C1-8-amino, (halo-alquil C1 -8 )2-amino, (halo-alquil C1 - s )(alquil C1 -8 )amino, hidroxi-alquilo C1.8 , hidroxi-alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , hidroxi-alquil C1-8-amino, (hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino, (hidroxi-alquil C1 - s )(alquil C1.
8)amino, hidroxi-alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C1.8 , (hidroxi-alquil C1 - s )(alquil C1.
8)amino-alquilo C1.8 , hidroxi-alquil C1-8-amino-alcoxi C1 -8 , (hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino-alcoxi C1.8 , (hidroxi-alquil C1.
8)(alquil C1 -8 )amino-alcoxi C1.8 , hidroxi-alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino, (hidroxi-alquil C1-8-amino-alquil C1-8 )2-amino, (hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino-alquil C1-8-amino, (hidroxi-alquil C1-8-amino-alquil C1 -8 )(alquil C1-8 )amino, (hidroxi-alquil C1.
8)(alquil C1 -8 )amino-alquil C1-8-amino, [(hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino-alquil C1 -s ](alquil C1 -8 )amino, [(hidroxi-alquil C1.
8)(alquil C1 -8 )amino-alquil C1 -s ](alquil C1 -8 )amino, heterociclilo, heterociclil-alquilo C1.8 , heterociclil-alcoxi C1 -8 , heterociclil-amino, (heterociclil)(alquil C1-8 )amino, heterociclil-amino-alquilo C1.8 , heterociclil-alquil C1-8-amino, (heterociclil-alquil C1 -8 )2-amino, (heterociclil-alquil C1-8 )(alquil C1-8 )amino, heterociclil-alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (heterociclil-alquil C1-8 )2-amino-alquilo C1.8 , (heterociclil-alquil C1 -s )(alquil C1 -8 )amino-alquilo C1.8 , heterociclil-oxi, heterociclil-carbonilo, heterociclil-carbonil-oxi, aril-alquil C1-8-amino, (aril-alquil C1-8 )2-amino, (aril-alquil C1 - s )(alquil C1.
8)amino, aril-alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (aril-alquil C1-8 )2-amino-alquilo C1 -8 , (aril-alquil C1 - s )(alquil C1 -8 )amino-alquilo C1.8 , heteroarilo, heteroaril-alquilo C1.8 , heteroaril-alcoxi C1.8 , heteroaril-amino, heteroaril-alquil C1-8-amino, (heteroarilalquil C1 -8 )2-amino, (heteroaril-alquil C1-8 )(alquil C1 -8 )amino, heteroaril-alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (heteroaril-alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C1.8 o (heteroaril-alquil C1 -8)(alquil C1-8 )amino-alquilo C1.8 ; en donde cada caso de heterociclilo y heteroarilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R3 y un sustituyente R4 opcional adicional; y,
en donde, alternativamente, cada caso de heterociclilo y heteroarilo se sustituye opcionalmente con uno, dos, tres o cuatro sustituyentes R3;
R2 es arilo, aril-amino, aril-amino-carbonilo, heterociclilo, heteroarilo o heteroaril-amino;
en donde cada caso de arilo, heterociclilo y heteroarilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R6 y un sustituyente R7 opcional adicional;
Ra se selecciona, en cada caso, independientemente de hidrógeno, halógeno o alquilo C1 -8 ;
Rb es hidrógeno, halógeno, alquilo C1-8 o alcoxi C1 -8 ;
R3 se selecciona, en cada caso, independientemente de ciano, halógeno, hidroxi, oxo, alquilo C1 -8 , halo-alquilo C1-8 , alquil C1-8-carbonilo, alcoxi C1-8 , halo-alcoxi C1-8 , alcoxi C1-8-alquilo C1-8 , alcoxi C1-8-carbonilo, amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8)2-amino, amino-alquilo C1.8 , alquil C1-8-amino-alquilo C1.8 , (alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C1.8 , amino-alquil C1.
8-amino, alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1 -8 )2-amino, (alquil C1 -8 )2-amino-alquil C1-8-amino, [(alquil C1 -8 )2-amino-alquil C1-8 ]2-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1 - s )(alquil C1 -8 )amino, [(alquil C1-8 )2-amino-alquil C1.
8](alquil C1 -8 )amino, alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1 -8 )2-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1-8 )(alquil C1.
8)amino, alquil C1-8-carbonil-amino, alcoxi C1-8-carbonil-amino, hidroxi-alquilo C1-8 , hidroxi-alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , hidroxi-alquil C1-8-amino, (hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino o (hidroxi-alquil C1 - s )(alquil C1-8 )amino;
R4 es cicloalquilo C3 -14 , cicloalquil C3-14-alquilo C1.8 , cicloalquil C3-14-amino, aril-alquilo C1.8 , aril-alcoxi C1-8-carbonilo, aril-sulfoniloxi-alquilo C1.8 , heterociclilo o heterociclil-alquilo C1.8 ; en donde cada caso de cicloalquilo C3 -14 , arilo y heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R5 ;
R5 se selecciona, en cada caso, independientemente de halógeno, hidroxi, ciano, nitro, alquilo C1 -8 , halo-alquilo C1 -8 , alcoxi C1.8 , halo-alcoxi C1.8 , amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8 )2-amino o alquil C1-8-tio;
R6 se selecciona, en cada caso, independientemente de halógeno, hidroxi, ciano, nitro, alquilo C1 -8 , alquenilo C2-8, halo-alquilo C1.8 , hidroxi-alquilo C1.8 , alcoxi C1.8 , halo-alcoxi C1.8 , alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8 )2-amino o alquil C1-8-tio; y,
R7 es cicloalquilo C3 -14 , cicloalquil C3-14-OXÍ, arilo, heterociclilo o heteroarilo.
El compuesto de la fórmula (I) puede ser un compuesto seleccionado de la fórmula (la):
Figure imgf000049_0001
o una forma del mismo.
En una realización del uso descrito en el presente documento, el compuesto es un compuesto de la fórmula (Ia1):
Figure imgf000049_0002
o una forma del mismo.
El compuesto de la fórmula (I) puede ser un compuesto seleccionado de la fórmula (II), fórmula (III), fórmula (IV) o fórmula (V):
Figure imgf000049_0003
o una forma del mismo.
El compuesto de la fórmula (II), fórmula (III), fórmula (IV) y fórmula (V) puede ser un compuesto seleccionado de la fórmula (IIa), fórmula (IIIa), fórmula (IVa) y fórmula (Va), respectivamente:
Figure imgf000049_0004
o una forma del mismo.
El compuesto de la fórmula (IIa) puede ser un compuesto seleccionado de la fórmula (IIa1) o fórmula (IIa2):
Figure imgf000050_0001
o una forma del mismo.
El compuesto de la fórmula (Illa) puede ser un compuesto seleccionado de la fórmula (IlIa l) o fórmula (IIIa2):
Figure imgf000050_0002
o una forma del mismo.
El compuesto de la fórmula (IVa) puede ser un compuesto seleccionado de la fórmula (IVa1) o fórmula (IVa2):
Figure imgf000050_0003
El compuesto de la fórmula (Va) puede ser un compuesto seleccionado de la fórmula (Va1) o fórmula (Va2):
Figure imgf000050_0004
POBLACIÓN DE PACIENTES
En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un sujeto que padece AME. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se administra a un sujeto predispuesto o susceptible a AME. En una realización específica, un compuesto de la fórmula o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un sujeto humano, en donde el sujeto humano es un paciente humano con AME, en donde AME se provoca por una mutación inactivante o deleción en el gen SMN1 en ambos cromosomas, dando como resultado una pérdida de función del gen SMN1. En ciertas realizaciones, el sujeto humano se genotipifica antes de la administración de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, para determinar si el sujeto tiene una mutación inactivante o deleción en la copia telomérica del gen SMN1 en ambos cromosomas, que da como resultado una pérdida de función del gen SMN1. En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o composición farmacéutica del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 0. En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 1. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 2. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 3. En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 4.
En ciertas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un sujeto que se beneficiará o se podría beneficiar de la potenciada inclusión del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2. En realizaciones específicas, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un sujeto que se beneficiará o se puede beneficiar de la potenciada expresión de proteínas Smn.
En ciertas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un humano que tiene una edad en un intervalo de desde aproximadamente 0 meses hasta aproximadamente 6 meses de edad, desde aproximadamente 6 hasta aproximadamente 12 meses de edad, desde aproximadamente 6 hasta aproximadamente 18 meses de edad, desde aproximadamente 18 hasta aproximadamente 36 meses de edad, desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 5 años de edad, desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10 años de edad, desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 15 años de edad, desde aproximadamente 15 hasta aproximadamente 20 años de edad, desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 25 años de edad, desde aproximadamente 25 hasta aproximadamente 30 años de edad, desde aproximadamente 30 hasta aproximadamente 35 años de edad, desde aproximadamente 35 hasta aproximadamente 40 años de edad, desde aproximadamente 40 hasta aproximadamente 45 años de edad, desde aproximadamente 45 hasta aproximadamente 50 años de edad, desde aproximadamente 50 hasta aproximadamente 55 años de edad, desde aproximadamente 55 hasta aproximadamente 60 años de edad, desde aproximadamente 60 hasta aproximadamente 65 años de edad, desde aproximadamente 65 hasta aproximadamente 70 años de edad, desde aproximadamente 70 hasta aproximadamente 75 años de edad, desde aproximadamente 75 hasta aproximadamente 80 años de edad, desde aproximadamente 80 hasta aproximadamente 85 años de edad, desde aproximadamente 85 hasta aproximadamente 90 años de edad, desde aproximadamente 90 hasta aproximadamente 95 años de edad o desde aproximadamente 95 hasta aproximadamente 100 años de edad.
En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un lactante humano. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un niño pequeño humano. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un niño humano. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un adulto humano. En aún otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un humano anciano.
En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un paciente para prevenir la aparición de AME en un paciente en riesgo de desarrollar AME. En otras realizaciones, una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un paciente para prevenir la aparición de AME en un paciente en riesgo de desarrollar AME. En otras realizaciones, una cantidad profilácticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un paciente para prevenir la aparición de AME en un paciente en riesgo de desarrollar AME. En otras realizaciones, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un paciente para prevenir la aparición de AME en un paciente en riesgo de desarrollar AME.
En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un paciente con AME para tratar o mejorar AME. En otras realizaciones, una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un paciente con AME para tratar o mejorar AME. En otras realizaciones, una cantidad profilácticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un paciente con AME para prevenir el avance de AME. En otras realizaciones, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o una composición farmacéutica del mismo, se administra a un paciente con AME para tratar o mejorar AME.
En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un sujeto que padece AME. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, se administra a un sujeto predispuesto o susceptible a AME. En una realización específica, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un sujeto humano, en donde el sujeto humano es un paciente humano con AME, en donde AME se provoca por una mutación inactivante o deleción en el gen SMN1 en ambos cromosomas, dando como resultado una pérdida de función del gen SMN1. En ciertas realizaciones, el sujeto humano se genotipifica antes de la administración de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, para determinar si el sujeto tiene una mutación inactivante o deleción en la copia telomérica del gen SMN1 en ambos cromosomas, que da como resultado una pérdida de función del gen SMN1. En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o medicamento del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 0. En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 1. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 2. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 3. En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un sujeto con AME tipo 4.
En ciertas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un sujeto que se beneficiará o podría beneficiarse de la potenciada inclusión del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2. En realizaciones específicas, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administran a un sujeto que se beneficiará o se puede beneficiar de la potenciada expresión de proteínas Smn.
En ciertas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un humano que tiene una edad en un intervalo de desde aproximadamente 0 meses hasta aproximadamente 6 meses de edad, desde aproximadamente 6 hasta aproximadamente 12 meses de edad, desde aproximadamente 6 hasta aproximadamente 18 meses de edad, desde aproximadamente 18 hasta aproximadamente 36 meses de edad, desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 5 años de edad, desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10 años de edad, desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 15 años de edad, desde aproximadamente 15 hasta aproximadamente 20 años de edad, desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 25 años de edad, desde aproximadamente 25 hasta aproximadamente 30 años de edad, desde aproximadamente 30 hasta aproximadamente 35 años de edad, desde aproximadamente 35 hasta aproximadamente 40 años de edad, desde aproximadamente 40 hasta aproximadamente 45 años de edad, desde aproximadamente 45 hasta aproximadamente 50 años de edad, desde aproximadamente 50 hasta aproximadamente 55 años de edad, desde aproximadamente 55 hasta aproximadamente 60 años de edad, desde aproximadamente 60 hasta aproximadamente 65 años de edad, desde aproximadamente 65 hasta aproximadamente 70 años de edad, desde aproximadamente 70 hasta aproximadamente 75 años de edad, desde aproximadamente 75 hasta aproximadamente 80 años de edad, desde aproximadamente 80 hasta aproximadamente 85 años de edad, desde aproximadamente 85 hasta aproximadamente 90 años de edad, desde aproximadamente 90 hasta aproximadamente 95 años de edad o desde aproximadamente 95 hasta aproximadamente 100 años de edad.
En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un lactante humano. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un niño pequeño humano. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un niño humano. En otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un adulto humano. En aún otras realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un humano anciano.
En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un paciente para prevenir la aparición de AME en un paciente en riesgo de desarrollar AME. En otras realizaciones, una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un paciente para prevenir la aparición de AME en un paciente en riesgo de desarrollar AME. En otras realizaciones, una cantidad profilácticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un paciente para prevenir la aparición de AME en un paciente en riesgo de desarrollar AME. En otras realizaciones, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un paciente para prevenir la aparición de AME en un paciente en riesgo de desarrollar AME.
En algunas realizaciones, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un paciente con AME para tratar o mejorar AME. En otras realizaciones, una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un paciente con AME para tratar o mejorar AME. En otras realizaciones, una cantidad profilácticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un paciente con AME para prevenir el avance de AME. En otras realizaciones, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o un medicamento del mismo, se administra a un paciente con AME para tratar o mejorar AME.
MODO DE ADMINISTRACIÓN
Cuando se administra a un paciente, un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se administra preferentemente como un componente de una composición que opcionalmente comprende un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. La composición se puede administrar por vía oral, o por cualquier otra vía conveniente, por ejemplo, por infusión o inyección en bolo, por absorción a través de los revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal e intestinal) y se puede administrar junto con otro agente biológicamente activo. La administración puede ser sistémica u local. Se conocen diversos sistemas de administración, por ejemplo, encapsulación en liposomas, micropartículas, microcápsulas, cápsulas, y se pueden usar para administrar el compuesto.
Los métodos de administración incluyen, pero no se limitan a, parenteral, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal, epidural, oral, sublingual, intranasal, intracerebral, intravaginal, transdérmica, rectal, por inhalación, o por vía tópica, particularmente a los oídos, nariz, ojos o piel. El modo de administración se deja a criterio del médico. En la mayoría de los casos, la administración dará como resultado la liberación de un compuesto en la circulación sanguínea. En una realización específica, un compuesto se administra por vía oral.
DOSIFICACIÓN Y FORMAS FARMACÉUTICAS
La cantidad de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo que será eficaz en el tratamiento de AME depende, por ejemplo, de la vía de administración, el tipo de AME, la salud general del sujeto, etnia, edad, peso y sexo del sujeto, dieta, tiempo, y gravedad de AME, y se debe decidir según el criterio del médico y cada una de las circunstancias del paciente o sujeto.
En realizaciones específicas, una "cantidad eficaz", "cantidad profilácticamente eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" en el contexto de la administración de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o composición o medicamento del mismo, se refiere a una cantidad de un compuesto de la fórmula (Ia1) que tiene un efecto terapéutico y/o efecto beneficioso. En ciertas realizaciones específicas, una "cantidad eficaz", "cantidad profilácticamente eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" en el contexto de la administración de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo, o composición o medicamento del mismo, da como resultado uno, dos o más de los siguientes efectos: (i) reduce o mejora la gravedad de AME; (ii) retrasa la aparición de AME; (iii) inhibe la progresión de AME; (iv) reduce la hospitalización de un sujeto; (v) reduce la duración de hospitalización para un sujeto; (vi) aumenta la supervivencia de un sujeto; (vii) mejora la calidad de vida de un sujeto; (viii) reduce el número de síntomas asociados a AME; (ix) reduce o mejora la gravedad de un síntoma(s) asociado(s) a AME; (x) reduce la duración de un síntoma asociado a AME; (xi) previene la reaparición de un síntoma asociado a AME; (xii) inhibe el desarrollo o la aparición de un síntoma de AME; y/o (xiii) inhibe la progresión de un síntoma asociado a AME. En ciertas realizaciones, una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo es una cantidad eficaz para potenciar la inclusión del exón 7 de SMN2 dentro de ARNm de SMN2 que se transcribe a partir del gen SMN2 y aumenta los niveles de proteína Smn producida a partir del gen SMN2 y así produce un efecto beneficioso deseado en un sujeto en necesidad del mismo. En algunos casos, el efecto deseado se puede determinar analizando o cuantificando: (1) la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2; o (2) los niveles de proteína Smn producida a partir del gen SMN2. Los ejemplos no limitantes de las cantidades eficaces de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo se describen en el presente documento.
Por ejemplo, la cantidad eficaz puede ser la cantidad requerida para tratar AME en un sujeto humano en necesidad del mismo, o la cantidad requerida para potenciar la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 en un sujeto humano en necesidad del mismo, o la cantidad requerida para aumentar niveles de proteína Smn producida a partir del gen SMN2 en un sujeto humano en necesidad del mismo. En una realización específica, el sujeto humano es un paciente con AME.
En general, la cantidad eficaz estará en un intervalo de desde aproximadamente 0,001 mg/kg/día hasta aproximadamente 500 mg/kg/día para un paciente o sujeto que tiene un peso en un intervalo de entre aproximadamente 1 kg hasta aproximadamente 200 kg. Se espera que el sujeto adulto típico tenga una mediana del peso en un intervalo de entre aproximadamente 70 y aproximadamente 100 kg.
Dentro del alcance de la presente descripción, la "cantidad eficaz" de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo para su uso en la fabricación de un medicamento, la preparación de un kit farmacéutico o en un método de tratamiento de AME en un sujeto humano en necesidad del mismo, pretende incluir una cantidad en un intervalo de desde aproximadamente 0,001 mg hasta aproximadamente 35.000 mg. En una realización específica, el sujeto humano es un paciente con AME.
Las composiciones descritas en el presente documento se formulan para administración al sujeto por cualquier vía de administración de fármacos conocida en la técnica. Los ejemplos no limitantes incluyen vías de administración oral, ocular, rectal, bucal, tópica, nasal, oftálmica, subcutánea, intramuscular, intravenosa (bolo e infusión), intracerebral, transdérmica y pulmonar.
COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS
Las realizaciones descritas en el presente documento incluyen el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo en una composición farmacéutica. En una realización específica, en el presente documento se describe el uso de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo en una composición farmacéutica para tratar AME en un sujeto humano en necesidad del mismo que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo en mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable. En una realización específica, el sujeto humano es un paciente con AME.
Un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo puede estar opcionalmente en forma de una composición que comprende el compuesto o una forma del mismo y un vehículo, excipiente o diluyente opcional. Otras realizaciones proporcionadas en el presente documento incluyen composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (Ia1) o una forma del mismo y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. En una realización específica, las composiciones farmacéuticas son adecuadas para administración veterinaria y/o humana. Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento pueden estar en cualquier forma que permita que la composición se administre a un sujeto.
En una realización específica y en este contexto, el término "vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable" significa un vehículo, excipiente o diluyente autorizado por una agencia reguladora del gobierno federal o un gobierno estatal o enumerada en la farmacopea estadounidense u otra farmacopea generalmente reconocida para su uso en animales, y más particularmente en seres humanos. El término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante (por ejemplo, adyuvante de Freund (completo e incompleto)), excipiente, o vehículo con el que se administra un agente terapéutico. Dichos vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, que incluyen los de origen de petróleo, animal, vegetal o sintético, tal como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. El agua es un vehículo específico para composiciones farmacéuticas administradas por vía intravenosa. También se pueden emplear soluciones salinas y disoluciones de dextrosa acuosa y glicerol como vehículos líquidos, particularmente para disoluciones inyectables.
Las composiciones y formas farmacéuticas típicas comprenden uno o más excipientes. Los excipientes adecuados son bien conocidos para los expertos en la técnica de la farmacia, y ejemplos no limitantes de excipientes adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, caliza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro sódico, leche desnatada en polvo, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares. Si un excipiente particular es adecuado para incorporación en una composición farmacéutica o forma farmacéutica depende de una variedad de factores bien conocidos en la técnica que incluyen, pero no se limitan a, la forma en la que la forma farmacéutica se administrará a un paciente y los principios activos específicos en la forma farmacéutica. Además, en el presente documento se proporcionan composiciones farmacéuticas anhidras y formas farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos de la fórmula (Ia1) o una forma de los mismos como se describen en el presente documento. Las composiciones y formas farmacéuticas unitarias individuales pueden tomar la forma de disoluciones o jarabes (opcionalmente con un aromatizante), suspensiones (opcionalmente con un aromatizante), emulsiones, comprimidos (por ejemplo, comprimidos masticables), píldoras, cápsulas, gránulos, polvo (opcionalmente para reconstitución), formulaciones de sabor enmascarado o de liberación sostenida, y similares.
Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento que son adecuadas para administración por vía oral se pueden presentar como formas farmacéuticas discretas, tales como, pero no se limitan a, comprimidos, comprimidos oblongos, cápsulas, gránulos, polvo y líquidos. Dichas formas farmacéuticas contienen cantidades predeterminadas de principios activos, y se puede preparar por métodos de farmacia bien conocidos para los expertos en la técnica.
Los ejemplos de excipientes que se pueden usar en las formas farmacéuticas orales proporcionadas en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, aglutinantes, cargas, disgregantes y lubricantes.
BIOMARCADORES
La cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o gen SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 se puede usar como biomarcador para AME. La cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o gen SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 se usa como biomarcador para AME. La cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o s MN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 se puede usar como biomarcador para un paciente con AME que está tratándose con un compuesto, tal como se describe en el presente documento. La cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 se puede usar como biomarcador para un paciente con AME que está tratándose con un compuesto, tal como se describe en el presente documento. Un cambio en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y un cambio correspondiente en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 puede ser un biomarcador para un paciente que está tratándose con un compuesto, tal como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
Un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y una disminución correspondiente en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 después de la administración de un compuesto indica que el compuesto puede ser eficaz para tratar a Me . Una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 e incluye el exón 7 de SMN2 y un aumento correspondiente en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN2 después de la administración de un compuesto indica que el compuesto no será eficaz para tratar AME. Se pueden usar en ensayos un cebador(es) de SMN y/o una sonda de SMN descritos más adelante, tales como PCR (por ejemplo, qPCR) y RT-PCR (por ejemplo, RT-qPCR o RT-PCR de punto final) para evaluar y/o cuantificar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen s MN1 y/o gen SMN2 e incluye o no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2.
En el presente documento se describen cebadores de SMN y/o sondas de SMN (por ejemplo, un cebador directo que tiene la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13; y/o un cebador inverso que tiene la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO. 9 o 12; y/o una sonda de SMN tal como SEQ ID NO. 3 o 10) para amplificar ácidos nucleicos que codifican o codificados por SMN1 y/o SMN2 humana. Estos cebadores se pueden usar como cebadores en, por ejemplo, RT-PCR (tal como RT-PCR, r T-PCR de punto final y/o RT-qPCR como se describen en el presente documento o como se conocen por un experto en la técnica), PCR (tal como qPCR) o amplificación por círculo rodante, y como sondas en ensayos de hibridación, tales como un ensayo de transferencia Northern y/o una transferencia Southern. Como se utiliza en ejemplos biológicos en el presente documento, RT-PCR de punto final es una reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa que se lleva a cabo durante un cierto número de ciclos de amplificación (o hasta que se agoten los materiales de partida), seguido por una cuantificación de cada uno de los productos de ADN usando, por ejemplo, separación en gel electroforético, tinción con un colorante fluorescente, cuantificación de fluorescencia y similares.
SEQ ID NO. 1 se hibrida con nucleótidos que comprenden ADN o ARN correspondiente a los nucleótidos 22 a 40 del exón 7 de SMN1 y/o SMN2, SEQ ID NO. 2 se hibrida con ADN o ARN que comprende nucleótidos correspondientes a los nucleótidos 4 a 26 de la secuencia codificante de luciferasa de luciérnaga; SEQ ID NO. 7 se hibrida con secuencias de ácidos nucleicos (por ejemplo, la hebra codificante de ADN) que comprende nucleótidos correspondientes a los nucleótidos 32 a 54 del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y los nucleótidos 1 a 4 del exón 8 de SMN1 y/o s MN2, SEQ ID NO. 8 se hibrida con secuencias de ácidos nucleicos (por ejemplo, la hebra codificante de ADN) que comprende nucleótidos correspondientes, en orden, a los nucleótidos 87 a 111 del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y nucleótidos 1 a 3 del exón 8 de s MN1 y/o SMN2, SEQ ID NO. 9 se hibrida con secuencias de ácidos nucleicos (por ejemplo, la hebra no codificante de ADN o ARN) que comprende nucleótidos correspondientes a los nucleótidos 39 a 62 del exón 8 de SMN1 y/o SMN2, SEQ ID NO. 11 se hibrida con secuencias de ácidos nucleicos (por ejemplo, la hebra codificante de ADN) que comprende nucleótidos correspondientes a los nucleótidos 43 a 63 del exón 6 de SMN1 y/o SMN2, SEQ ID NO. 12 se hibrida con secuencias de ácidos nucleicos (por ejemplo, la hebra no codificante de ADN o ARN) que comprende nucleótidos correspondientes a los nucleótidos 51 a 73 del exón 8 de SMN1 y/o SMN2, y SEQ ID NO. 13 se hibrida con la secuencia de ácidos nucleicos (por ejemplo, la hebra codificante de ADN) que comprende nucleótidos correspondientes a los nucleótidos 22 a 46 del exón 6 de SMN1 y/o SMN2.
Por consiguiente, se puede usar un oligonucleótido correspondiente a SEQ ID NO. 9, 11, 12 y/o 13 en una reacción de amplificación para amplificar ácidos nucleicos que codifican o codificados por SMN1 y/o SMN2 humanas que carecen del exón 7 de s MN1 y/o SMN2 humanas y ácido nucleico que codifica o codificado por SMN1 y/o SMN2 humanas e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 humana. A diferencia, se puede usar un oligonucleótido correspondiente a SEQ ID NO. 8 conjuntamente con un cebador inverso en la dirección 3' (por ejemplo, SEQ ID NO.
9 o 12) para amplificar ácidos nucleicos que codifican o codificados por SMN1 y/o SMN2 humanas que carece del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 humanas y un oligonucleótido correspondiente a SEQ ID NO. 1 y 7 conjuntamente con un cebador inverso en la dirección 3' (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) se puede usar para amplificar ácidos nucleicos que codifican o codificados por SMN1 humana y/o SMN2 humana e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2.
SEQ ID NO. 3 se hibrida con secuencias de ácidos nucleicos (por ejemplo, la hebra codificante de ADN) que comprenden los nucleótidos correspondientes, en orden, a los nucleótidos 50 a 54 del exón 7 de SMN1 y/o SMN2 humanas y los nucleótidos 1 a 21 del exón 8 de SMN1 y/o SMN2 humanas, y SEQ ID NO. 10 se hibrida con secuencias de ácidos nucleicos (por ejemplo, la hebra codificante de ADN) que comprende nucleótidos correspondientes a los nucleótidos 7 a 36 del exón 8 de SMN1 y/o SMN2 humanas. s Eq ID NO. 3 es útil como sonda para detectar ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, descrito en el presente documento o descrito en la publicación internacional N.° WO 2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833 y para detectar ARNm que se transcribe a partir de SMN1 y/o SMN2 humanas e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2. Además, SEQ ID NO. 10 es útil como una sonda para detectar ARNm que se transcribe a partir del minigén e incluye o no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y para detectar ARNm que se transcribe a partir de SMN1 y/o SMN2 humana, descritas en el presente documento o como se describen en la publicación internacional N.°WO 2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833.
Se puede usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 2, 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO. 3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante y, cuando sea aplicable, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para determinar si un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo) potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y/o s MN2 en ARNm que se transcribe a partir de un gen SMN1 y/o SMN2.
Se puede usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO. 3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante y, cuando sea aplicable, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para monitorizar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra de paciente. En una realización específica, el paciente es un paciente con AME.
Se puede usar un cebador y/o sonda descritos más adelante en ejemplos biológicos (por ejemplo, cebadores de SMN tales como SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13 y/o SEQ ID NO. 9 o 12, y/o sondas de SMN tales como SEQ ID NO. 3 o 10) en un ensayo, tal como RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR de punto final, PCR, qPCR, amplificación por círculo rodante y, cuando sea aplicable, transferencia Northern o transferencia Southern (por ejemplo, un ensayo tal como se describe más adelante en ejemplos biológicos), para monitorizar la respuesta de un paciente a un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo). En una realización específica, el paciente es un paciente con AME.
Se puede obtener una muestra (por ejemplo, una muestra de sangre, muestra de CMSP, o muestra de tejido, tal como una muestra de piel o de tejido muscular) de un paciente usando técnicas conocidas por un experto en la técnica y los cebadores y/o sondas descritos en ejemplos biológicos más adelante se pueden usar en ensayos (por ejemplo, PCR, RT-PCR, RT-qPCR, qPCR, RT-PCR de punto final, amplificación por círculo rodante, transferencia Northern y transferencia Southern) para determinar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y/o SMN2 (por ejemplo, la cantidad de ARNm que incluye el exón 7 de SMN2 transcrito a partir del gen SMN2). Una muestra derivada de un paciente se refiere a una muestra que se procesa y/o manipula después de ser obtenida del paciente usando técnicas conocidas por un experto en la técnica. Por ejemplo, se puede procesar una muestra de un paciente para, por ejemplo, extraer ARN, usando técnicas conocidas por un experto en la técnica. Se puede procesar una muestra de un paciente para, por ejemplo, extraer ARN y el a Rn se transcribe de forma inversa para producir ADNc. En una realización específica, el paciente es un paciente con AME.
En el presente documento se describe un método de detección de la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID No . 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, una RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2. La muestra puede ser de o derivar de un paciente administrado con un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
También se describe en el presente documento un método de detección de la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, una RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2. La muestra puede ser de o derivar de un paciente administrado con un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
La cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2 humanos que incluye el exón 7 de SMN1 y SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2 humanos y no incluye el exón 7 de SMN1 y SMN2 se puede diferenciar entre sí por, por ejemplo, el tamaño del fragmento de a Rn o ADN generado a partir de ARNm de s Mn 1 y SMN2 que incluye el exón 7 de SMN1 y SMN2 y a partir de ARNm de SMN1 y SMN2 que no incluyen el exón 7 de SMN1 y SMN2.
También se describe en el presente documento un método de detección de la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, una RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2. La muestra puede ser de o derivar de un paciente administrado con un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
También se describe en el presente documento un método de detección de la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con una sonda de SMN descrita más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables, por ejemplo, de una RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR), amplificación por círculo rodante y, cuando sea aplicable, transferencia Northern o transferencia Southern; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2. La muestra puede ser de o derivar de un paciente administrado con un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
También se describe en el presente documento un método de detección de la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con una sonda de s Mn descrita más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, una RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR), amplificación por círculo rodante y, cuando sea aplicable, transferencia Northern o transferencia Southern; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2.
La cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2 humanos que incluye el exón 7 de SMN1 y SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2 humanos y no incluye el exón 7 de SMN1 y SMN2 se puede diferenciar entre sí por, por ejemplo, el tamaño del fragmento de a Rn o ADN generado a partir de ARNm de s Mn 1 y SMN2 que incluye el exón 7 de SMN1 y SMN2 y a partir de ARNm de SMN1 y SMN2 que no incluyen el exón 7 de SMN1 y SMN2. La muestra puede ser de o derivar de un paciente administrado con un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
También se describe en el presente documento un método de detección de la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con una sonda de SMN descrita más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, una RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR), amplificación por círculo rodante, o transferencia Northern o transferencia Southern; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2. La muestra puede ser de o derivar de un paciente administrado con un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
También se describe en el presente documento un método de detección de la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID No . 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, s Eq ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN descrita en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, una r T-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen s Mn 1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2. La muestra puede ser de o derivar de un paciente administrado con un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
También se describe en el presente documento un método de detección de la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, s Eq iD NO. 1, 7, 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN descrita en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, una RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, cuando sea aplicable; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2. En una realización específica, el paciente es un paciente con AME.
La cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2 humanos que incluye el exón 7 de SMN1 y SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir de los genes SMN1 y SMN2 humanos que no incluyen el exón 7 de SMN1 y SMN2 se puede diferenciar entre sí por, por ejemplo, el tamaño del fragmento de ARN o ADN generado a partir de ARNm de SMN1 y SMN2 que incluye el exón 7 de SMN1 y SMN2 y a partir de ARNm de SMN1 y SMN2 que no incluye el exón 7 de SMN1 y s MN2. La muestra puede ser de o derivar de un paciente administrado con un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
También se describe en el presente documento un método de detección de la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 8) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN descrita en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, una RT-PCR (por ejemplo, RT-PCr de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2. La muestra puede ser de o derivar de un paciente administrado con un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. El paciente puede ser un paciente con AME.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto descrito en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen s MN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, s Eq ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), p Cr (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o s MN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), p Cr (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCr (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID No . 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCr de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN 1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN 1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), p Cr (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID No . 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), p Cr (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o s MN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, s Eq ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID n O. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de Sm N1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con una sonda de s Mn (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen s MN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o Sm N2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR) o p Cr (por ejemplo, qPCR), en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de s MN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o Sm N2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o s MN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de evaluación de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMn 2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que SMN1 y/o paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede evaluar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días,1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una sensibilidad del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de Sm N1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se monitorizó 1 hora,2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una sensibilidad del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una sensibilidad del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, r T-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), p Cr (por ejemplo, qPCR) 0 amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o Sm N2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una sensibilidad del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, Se Q ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCr (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una sensibilidad del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, s Eq ID NO. 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de s MN1 y/o SMN2, en donde (1) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una sensibilidad del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una sensibilidad del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, s Eq ID NO. 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), p Cr (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de s Mn 1 y/o SMN2, en donde (1) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10­ 15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una sensibilidad del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 8, 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o s MN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior indica que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen s Mn 1 y/o SMn 2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR), o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen Sm n 1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o s Mn 2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o s MN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con una sonda de s Mn (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN 1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen s MN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMn 2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) poner en contacto una muestra de paciente con AME (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) o una muestra derivada de un paciente con AME (por ejemplo, una muestra de sangre o muestra de tejido que se ha procesado para extraer ARN) con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ iD n O. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante, en donde la muestra es de o deriva de un paciente con AME administrado con un compuesto (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento); y (b) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o s MN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
También se describe en el presente documento un método de monitorización de una respuesta del paciente con AME a un compuesto, que comprende: (a) administrar un compuesto a un paciente con AME; (b) poner en contacto una muestra (por ejemplo, muestra de sangre o muestra de tejido) obtenida o derivada del paciente con un cebador directo de SMN descrito más adelante (por ejemplo, SEQ ID NO. 11 o 13) y/o un cebador inverso de SMN descrito en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 9 o 12) y/o una sonda de SMN (SEQ ID NO. 10) junto con componentes aplicables para, por ejemplo, RT-PCR (por ejemplo, r T-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante; y (c) detectar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, en donde (1)(i) un aumento en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o Sm N2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) una disminución en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, del mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente es sensible al compuesto y que el compuesto puede ser o es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente; y (2)(i) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o Sm N2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, y (ii) ningún cambio o cambio no sustancial en la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en la muestra de paciente con respecto a la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 en una muestra análoga (por ejemplo, el mismo tipo de muestra de tejido) del paciente antes de la administración del compuesto o un cierto número de dosis del compuesto, o una cierta fecha anterior, indican que el paciente no es sensible al compuesto y que el compuesto no es beneficioso y/o de valor terapéutico para el paciente. La respuesta del paciente se puede monitorizar 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 14 días, 28 días, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o más después de la administración de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de que el paciente haya recibido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 o más dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar después de la administración de 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 o 50-100 dosis de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento. La respuesta del paciente se puede monitorizar durante un periodo de días, semanas, meses o años durante o después de la administración continua de un compuesto, tal como un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo como se describe en el presente documento.
En realizaciones específicas, AME en un paciente es provocada por una mutación inactivante o deleción en el gen SMN1 en ambos cromosomas, dando como resultado una pérdida de función del gen SMN1.
KITS
En el presente documento también se describen kits farmacéuticos o de ensayo que comprenden un cebador o sonda de SMN descrito en el presente documento, en uno o más recipientes, e instrucciones para su uso. Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender en un recipiente uno o más cebadores inversos de s Mn (por ejemplo, SEQ ID NO. 2, 9 y/o 12) y/o uno o más cebadores directos de SMN (SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 y/o 13)) e instrucciones para su uso. Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender en un recipiente un cebador inverso de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 2, 9 o 12), un cebador directo de SMN (SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13)) e instrucciones para su uso.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender en recipientes separados, un cebador inverso de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 2, 9 o 12) en un recipiente, otro cebador directo de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13)) en otro recipiente, e instrucciones para su uso.
Los componentes aplicables necesarios para una PCR (por ejemplo, qPCR), RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR) o amplificación por círculo rodante, tales como polimerasa, trifosfatos de desoxinucleósido, etc., se pueden incluir en dichos kits. Se puede incluir en dichos kits los componentes necesarios para la hibridación. Un kit farmacéutico o de ensayo que contiene dichos cebadores se puede usar en PCR y RT-PCR para, por ejemplo,: (i) evaluar si un agente terapéutico (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo) potencia la inclusión del exón 7 de s Mn 1 y/o SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2, (ii) monitorizar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, y/o (iii) monitorizar la respuesta de un sujeto a un agente terapéutico (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo). El sujeto puede ser un sujeto humano. El sujeto humano puede ser un paciente humano. El paciente humano puede ser un paciente humano con AME.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia encontrada en SEQ ID NO.
1, en un recipiente, y el cebador inverso con la secuencia encontrada en SEQ ID NO. 2, en otro recipiente. Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por un minigén SMN1 humano o minigén SMN2 humano, tal como se describen los descritos en el presente documento o en la publicación internacional N.° WO 2009/151546 o la publicación de solicitud de patente de EE.UU. N.° 2011/0086833. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 7, en un recipiente, y el cebador inverso con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 9, en otro recipiente. Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por los genes SMN1 y SMN2 humanos endógenos. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 8, en un recipiente, y el cebador inverso con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 9, en otro recipiente. Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por el gen SMN2 humano endógeno. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 7, en un recipiente, el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 8, en otro recipiente, y el cebador inverso con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 9, en otro recipiente. Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por los genes SMN1 y SMN2 humanos endógenos. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 11, en un recipiente, y el cebador inverso con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 12, en otro recipiente. Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por los genes SMN1 y SMN2 humanos endógenos. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 11, en un recipiente, y el cebador inverso con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 9, en otro recipiente.
Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por los genes SMN1 y SMN2 humanos endógenos. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 13, en un recipiente, y el cebador inverso con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 12, en otro recipiente. Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por los genes SMN1 y SMN2 humanos endógenos. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 13, en un recipiente, y el cebador inverso con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 9, en otro recipiente. Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por los genes SMN1 y SMN2 humanos endógenos. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 1, en un recipiente, y el cebador inverso con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 9, en otro recipiente. Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por los genes SMN1 y SMN2 humanos endógenos. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender el cebador directo con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 1, en un recipiente, y el cebador inverso con la secuencia de nucleótidos encontrada en SEQ ID NO. 12, en otro recipiente. Estos cebadores se pueden usar en RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR), PCR (por ejemplo, qPCR) o amplificación por círculo rodante para amplificar secuencias de nucleótidos codificadas por los genes SMN1 y SMN2 humanos endógenos. Estos cebadores se pueden usar como sondas en, por ejemplo, ensayos de hibridación, tales como transferencia Southern o transferencia Northern.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender una sonda de SMN descrita en el presente documento (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10), en un recipiente. La sonda se puede usar en, por ejemplo, un ensayo de hibridación, tal como una transferencia Southern o transferencia Northern. La sonda se puede usar en RT-qPCR o qPCR. Los componentes necesarios para una PCR (por ejemplo, qPCR), RT-PCR (por ejemplo, RT-PCR de punto final y/o RT-qPCR) o amplificación por círculo rodante, tales como polimerasa, trifosfatos de desoxinucleósido, cebadores, etc., se pueden incluir en dichos kits. Los componentes necesarios para la hibridación se pueden incluir en dichos kits.
Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender un cebador inverso de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 2, 9 o 12) en un recipiente, un cebador directo de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 o 13) en otro recipiente, y una sonda de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 o 10) en otro recipiente, e instrucciones para su uso. Un kit farmacéutico o de ensayo puede comprender uno o más cebadores inversos de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 2, 9 y/o 12) en un recipiente, uno o más cebadores directos de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 y/o 13) en otro recipiente, y una o más sondas de SMN (por ejemplo, SEQ ID NO. 3 y/o 10) en otro recipiente, e instrucciones para su uso.
Los componentes necesarios para realizar una PCR, RT-PCR o amplificación por círculo rodante, tales como polimerasa, trifosfatos de desoxinucleósido, etc., se pueden incluir en dichos kits. Un kit farmacéutico o de ensayo que contiene dichas sondas y/o cebadores se puede usar en PCR y RT-PCR para, por ejemplo: (i) evaluar si un agente terapéutico (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo) potencia la inclusión del exón 7 de SMN1 y/o s Mn 2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2, (ii) monitorizar la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 e incluye el exón 7 y la cantidad de ARNm que se transcribe a partir del gen SMN1 y/o SMN2 y no incluye el exón 7 de SMN1 y/o SMN2, y/o (iii) monitorizar la respuesta de un sujeto a un agente terapéutico (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo). En otras realizaciones, el sujeto es un sujeto humano. El sujeto humano puede ser un paciente humano. El paciente humano puede ser un paciente humano con AME.
También se describe en el presente documento un kit farmacéutico que comprende un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo, en un recipiente, e instrucciones para el uso del compuesto o forma del mismo. También se describe en el presente documento un kit farmacéutico que comprende una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable, e instrucciones para su uso. También se describe en el presente documento un kit farmacéutico que comprende una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable, e instrucciones para su uso. Las instrucciones para su uso explican uno, dos o más de los siguientes: la dosis, vía de administración, frecuencia de administración y efectos secundarios de administración de un compuesto de la fórmula (I) o una forma del mismo a un sujeto. El sujeto puede ser un sujeto humano. El sujeto humano puede ser un paciente humano. El paciente humano puede ser un paciente humano con AME.
MÉTODOS GENERALES DE SÍNTESIS
Como se describe en el presente documento, los métodos generales de preparación de los compuestos de la fórmula (I) o una forma de los mismos como se describe en el presente documento están disponibles mediante metodología de síntesis convencional bien conocida. Muchos de los materiales de partida están comercialmente disponibles o, cuando no estén disponibles, se pueden preparar usando las vías descritas más adelante usando técnicas conocidas por el experto en la técnica. Los esquemas de síntesis proporcionados en el presente documento comprenden múltiples etapas de reacción, cada una de las cuales pretende valerse por sí misma y se pueden llevar a cabo con o sin ninguna etapa precedente o subsiguiente. En otras palabras, se contempla cada una de las etapa de reacción individuales de los esquemas de síntesis proporcionados en el presente documento aisladamente.
Esquema A
Los compuestos de la fórmula (I), en donde R2 es un sistema de anillos de arilo, heterociclilo o heteroarilo monocíclico o bicíclico, se pueden preparar como se describe en el esquema A a continuación.
Figure imgf000074_0001
El compuesto A1 (donde X representa diversos grupos reactivos, que se pueden usar para proporcionar una pluralidad de sustituyentes del grupo funcional R1 haciendo reaccionar materiales de partida adecuados con el compuesto A1, compuesto A3 o compuesto A4 usando técnicas conocidas por un experto habitual en la técnica y donde L es un grupo saliente, tal como halógeno o trifluorometilsulfoniloxi y similares) se hace reaccionar con el compuesto A2 en presencia de un catalizador metálico adecuado, o una combinación de dos catalizadores metálicos adecuados diferentes (tales como cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) y yoduro de cobre (I), y similares), con al menos un equivalente de base, inorgánica u orgánica (tal como trietilamina y similares), en un disolvente orgánico (tal como acetonitrilo y similares), que se somete a acoplamiento de Sonogashira para proporcionar el compuesto A3. La reacción se puede llevar a cabo a temperaturas ambiente o elevadas. Opcionalmente, la reacción también se puede llevar a cabo usando radiación de microondas a una temperatura elevada. El compuesto A3 se hace reaccionar con un ácido de Lewis (tal como ácido trifluoroacético o ácido p-toluenosulfónico y similares), con o sin un disolvente orgánico (tal como tolueno o alcohol etílico y similares), a temperatura ambiente o elevada, que se somete a ciclación para proporcionar el compuesto A4.
Esquema B
Los compuestos de la fórmula (I), en donde R2 es un sistema de anillos de arilo, heterociclilo o heteroarilo monocíclico o bicíclico, también se pueden preparar como se describe en el esquema B a continuación.
Figure imgf000074_0002
El compuesto A1 se hace reaccionar con trimetilsililacetileno en presencia de un catalizador metálico adecuado, o una combinación de dos catalizadores metálicos adecuados diferentes (tales como cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) y yoduro de cobre (I), y similares), con al menos un equivalente de base, inorgánica u orgánica (tal como trietilamina y similares), en un disolvente orgánico (tal como acetonitrilo y similares), que se somete a acoplamiento de Sonogashira. La reacción se puede llevar a cabo a temperaturas ambiente o elevadas. Opcionalmente, la reacción también se puede llevar a cabo usando radiación microondas a una temperatura elevada. El producto intermedio de trimetilsililacetileno resultante se trata con una base inorgánica (tal como carbonato de potasio y similares) en metanol para proporcionar el compuesto B1. El compuesto B1 se hace reaccionar con el compuesto B2 usando las condiciones descritas en el esquema A , que se somete a acoplamiento de Sonogashira para proporcionar el compuesto A3, que entonces se puede convertir en el compuesto A4 tratando con ácido como se describe en el esquema A.
Esquema C
Los compuestos de la fórmula (I), en donde R2 es un sistema de anillos de heterociclilo o heteroarilo monocíclico o bicíclico, se pueden preparar como se describe en el esquema C a continuación.
Figure imgf000075_0001
El compuesto C1 (donde X representa diversos grupos reactivos que se pueden usar para proporcionar una pluralidad de sustituyentes del grupo funcional Ri haciendo reaccionar materiales de partida adecuados con el compuesto C1, compuesto C2, compuesto C3, compuesto C4 o compuesto C6 usando técnicas conocidas por un experto habitual en la técnica y donde L es un grupo saliente, tal como halógeno o trifluorometilsulfoniloxi, y similares) se hace reaccionar con but-3-in-2-ol y, en presencia de un catalizador de paladio adecuado (tal como tetraquis(trifenilfosfina) paladio(0) y similares), un cocatalizador de metal adecuado (tal como cloruro de cinc y similares), y una base orgánica (tal como trietilamina y similares) en un disolvente orgánico (tal como N,N-dimetilformamida y similares), a una temperatura elevada en un intervalo de desde aproximadamente 50 hasta aproximadamente 150 °C, que se somete a acoplamiento de Sonogashira, seguido por ciclación, para proporcionar el compuesto C2. El compuesto C2 se hace reaccionar con un agente de oxidación adecuado (tal como dióxido de manganeso y similares) en un disolvente adecuado (tal como diclorometano y similares) a temperatura ambiente o elevada para proporcionar el compuesto C3. El grupo a-metilo del compuesto C3 se hace reaccionar con un reactivo de bromación selectivo apropiado (tal como Br2 o NBS y similares) para proporcionar el compuesto C4. El compuesto C4 se hace reaccionar con el compuesto C5 (en donde el término "Het" se refiere a un sistema de anillos de heterociclilo o heteroarilo opcionalmente sustituido que contiene un resto de tipo amidina tal como, pero no se limita a, 2-aminopiridina, 2-aminopirimidina, 2-aminopirazina, 3-aminopiridazina, 2-aminotiazol, 4-aminotiazol, 4-aminopirimidina y similares) para proporcionar el compuesto C6.
Esquema D
Los compuestos de la fórmula (I), en donde R2 es un sistema de anillos de heterociclilo o heteroarilo monocíclico o bicíclico, se pueden preparar como se describe en el esquema D a continuación.
Figure imgf000075_0002
El compuesto C4 (donde X representa diversos grupos reactivos, que se pueden usar para proporcionar una pluralidad de sustituyentes del grupo funcional Ri haciendo reaccionar materiales de partida adecuados con el compuesto C4 o el compuesto D2 usando técnicas conocidas por un experto habitual en la técnica), preparado como se describe en el esquema C, se hace reaccionar con el compuesto D1 (en donde el término "Het" se refiere a un sistema de anillos de heterociclilo o heteroarilo opcionalmente sustituido que contiene un resto libre de cetimina tal como, pero no se limita a, 2-metilpiridina, 2-metilpirimidina, 2-metilpirazina, 3-metilpiridazina, 2-metiltiazol, 4-metiltiazol, 4-metilpirimidina y similares) en presencia de una base orgánica (tal como trietilamina y similares) en un disolvente adecuado (tal como acetonitrilo y similares), que se somete a un ciclación deshidratante por alquilación en tándem, dando el compuesto D2.
EJEMPLOS DE SÍNTESIS ESPECÍFICOS
Para describir con más detalle y ayudar en el entendimiento, los siguientes ejemplos no limitantes se ofrecen para ilustrar más completamente el alcance de los compuestos descritos en el presente documento y no se deben interpretar como que limiten específicamente su alcance. Estos ejemplos ilustran la preparación de ciertos compuestos. Los expertos en la técnica entenderán que las técnicas descritas en estos ejemplos representan técnicas, como se describen por los expertos habituales en la técnica, que funcionan bien en la práctica de síntesis, y como tales constituyen los modos preferidos para la práctica de la misma. Sin embargo, se debe apreciar que los expertos en la técnica deben apreciar, en vista de la presente divulgación, que se pueden hacer muchos cambios en los métodos específicos que se desvelan y todavía obtener un resultado parecido o similar.
A diferencia de en los siguientes ejemplos de los compuestos incorporados, a menos que se indique lo contrario, todos los números que expresan cantidades de componentes, condiciones de reacción, datos experimentales, etc., usados en la memoria descriptiva y las reivindicaciones se deben entender como que están modificados por el término "aproximadamente". Por consiguiente, todos dichos números representan aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que se busca obtener por una reacción o como resultado de condiciones experimentales variables. Por tanto, dentro de un intervalo esperado de reproducibilidad experimental, el término "aproximadamente", en el contexto de los datos resultantes, se refiere a un intervalo de datos a condición de que pueda variar según una desviación estándar de la media. También, para resultados experimentales proporcionados, los datos resultantes se pueden redondear al alza o a la baja para presentar datos coherentemente, sin pérdida de figuras significativas. Por lo menos, y no como un intento por limitar la aplicación de la doctrina de equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada parámetro numérico se debe interpretar en vista del número de dígitos significativos y las técnicas de redondeo usadas por los expertos en la técnica.
Aunque los intervalos numéricos y parámetros que exponen el amplio alcance de la presente descripción son aproximaciones, los valores numéricos expuestos en los ejemplos expuestos más adelante se informan con tanta precisión como sea posible. Cualquier valor numérico, sin embargo, contiene inherentemente ciertos errores necesariamente resultantes de la desviación estándar encontrada en sus mediciones de prueba respectivas.
EJEMPLOS DE COMPUESTOS
Como se usa anteriormente, y en toda la presente descripción, se debe entender que las siguientes abreviaturas, a menos que se indique lo contrario, tienen los siguientes significados:
Abreviatura Significado
A calentamiento (química) o deleción (biología)
AcOH o HOAc ácido acético
Ac2O anhídrido acético
Ar argón
ACN acetonitrilo
BINAP 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftaleno
B(OiPr)3 borato de triisopropilo
Boc terc-butoxi-carbonilo
Boc2O dicarbonato de di-terc-butilo
BuOH n-butanol
°C grados centígrados
CDI 1,1-carbonildiimidazol o W,W-carbonildiimidazol
(CHO)n o (HCHO)n paraformaldehído
Comp compuesto
d/h/min/s Día (d)/hora (h)/minuto (min)/segundo (s)
DavePhos 2-diciclohexilfosfino-2'-(W,W-dimetilamino)bifenilo
DCE 1,2-dicloroetano
DCM diclorometano (CH2CI2)
DIAD azodicarboxilato de diisopropilo
DIEA o DIPEA W,W-diisopropiletilamina
DMA dimetilacetamida
DMAP 4-(dimetilamino)piridina
DME 1,2-dimetoxietano
DMF dimetilformamida
DMSO sulfóxido de dimetilo
EDC o EDCI clorhidrato de W-(3-dimetilaminopropil)-W-etilcarbodiimida EtOAc acetato de etilo
EtOH etanol
Et2O dietil éter
HCOH formaldehído
iPrl yodopropano
JohnPhos (2-bifenil)-di-t-butilfosfina
KOAc acetato de potasio
LAH hidruro de litio y aluminio
CL/EM, CLEM o CL-EM cromatografía de líquidos-espectroscopia de masas LDA diisopropilamina de litio
LiHMDS o LHMDS bis(trimetilsilil)amida de litio
MeOH metanol
Mel yodometano
Me-THF 2-metiltetrahidrofurano
Me2Zn dimetilcinc
MnO2 manganeso dióxido
MS espectroscopia de masas
NaH hidruro de sodio
NaHS hidrosulfuro de sodio
NaHMDS bis(trimetilsilil)amida de sodio o hexametildisilazida de sodio Nal yoduro de sodio
NaOAc acetato sódico
NaOMe metóxido de sodio
NBS W-bromosuccinimida
NMP N-metilpirrolidona
RMN resonancia magnética nuclear
d/n durante la noche
Pd paladio
Pd/C paladio sobre carbono
Pd(dba)2 bis(dibencilidenacetona)paladio
Pd2(dba)3 o Pd2dba3 tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0)
PdCl2(PhCN)2 trans-bis(benzonitrilo)dicloropaladio (II)
PdCl2(dppf), PdCl2dppf o [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) Pd(dppf)Cl2
Pd(OAc)2 acetato de paladio (II)
Pd(PPh3)40 Pd(Ph3P)4 tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0)
Pd(PPh3)2Cl2, PdCl2(PPh3)2 o dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) PdCl2(Ph3P)2
PHBU3 BF4 o ÍBU3PHBF4 tetrafluoroborato de tri-terc-butilfosfonio
Phl yodobenceno
PhI(OTFA)2 [bis(trifluoroacetoxi)yodo]benceno
PhMe tolueno
POCI3 cloruro de fosforilo
PPh3 trifenilfosfina
PPA ácido polifosfórico
PPTs p-toluenosulfonato de piridinio
psi presión por libras por pulgada cuadrada
PyBOP hexafluorofosfato de (benzotriazol-1 -iloxi)tripirrolidinofosfonio ta temperatura ambiente
S-Phos, SPhos o Sphos 2-diciclohexilfosfino-2',6'-dimetoxibifenilo
T3 P anhídrido propilfosfónico
TEA, Et3N o NEt3 trietilamina
Tf2O anhídrido tríflico
TFA ácido trifluoroacético
THF tetrahidrofurano
CCF cromatografía en capa fina
TMS trimetilsilano
TMSC1 trimetilclorosilano o cloruro de trimetilsililo
TMSOK trimetilsilanolato de potasio
t-Bu terc-butilo
TsOH, p-TsOH o pTSA ácido tosílico o ácido p-toluenosulfónico
xantphos 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno
Ejemplo 1
Preparación del Comp 1
Figure imgf000079_0001
Etapa A: A una disolución de 4-(3-(etoxicarbonil)-fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (13,4 g, 40,0 mimóles) comercialmente disponible en diclorometano (200 mL), a temperatura ambiente mientras se agita suavemente, se añadió N-bromosuccinimida (8,5 g, 48 mmoles) en porciones. Después de la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas. El análisis de CL/EM de una alícuota reveló una desaparición completa del material de partida. La mezcla se trató con una disolución saturada de Na2CO3 (100 mL) y se agitó durante l5 minutos. Se separó la fase orgánica y se secó sobre Na2SO4. Después de retirar el disolvente, el residuo se purificó por cromatografía sobre una columna de gel de sílice usando un gradiente de 0-50 % de acetato de etilo en hexanos. Se obtuvo el producto intermedio de bromuro como un aceite incoloro (14,2 g, 86 %). EM m/z 412,4 [M+H]+, 414,4 [M+2H]+.
Etapa B: Se cargó un matraz redondo de 250 mL con PdCl2(PhCN)2 (0,51 g, 1,33 mmoles), PBu3HBF4 (0,77 g, 2,66 mmoles) y Cul (0,20 g, 1,06 mmoles), y se purgó con argón tres veces, seguido por la adición de dioxano (30 mL) y diisopropilamina (5,6 mL, 4,03 g, 40,0 mmoles). La mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, seguido por la adición del producto intermedio de bromuro (11,0 g, 26,6 mmoles) obtenido en la etapa A y TMS-acetileno (4,51 mL, 3,13 g, 32,0 mmoles). Entonces se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 6 días. El análisis de CL/EM de una alícuota mostró >95 % de conversión lograda. Se retiró el precipitado por filtración y se lavó con acetato de etilo. Se combinaron los filtrados y se retiraron los volátiles en un rotavapor. Se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, 0-70 % de acetato de etilo en hexanos) proporcionando el producto intermedio de TMS alquino como un aceite marrón (8,73 g, 76 %). EM m/z 431,4 [M+H]+.
Etapa C: Se agitó una mezcla del producto intermedio de TMS alquino obtenido en la etapa B (3,10 g, 7,21 mmoles), K2CO3(1,49 g, 10,8 mmoles) y MeOH (40 mL) en un baño de agua con hielo. La CL/EM reveló una conversión completa lograda en el plazo de 2 horas. Entonces se añadió una disolución saturada de NH4Cl (20 mL) y acetato de etilo (200 mL) y se separó la fase orgánica. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 mL) y los extractos orgánicos combinados se evaporaron a sequedad en un rotavapor. Se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, 0-10 % de acetato de etilo en hexanos) dando el producto intermedio de alquino como un aceite marrón (1,65 g, 64 %). EM m/z 359,3 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, CDCla-d) 8 ppm 7,51 (1H, d, J=8,51 Hz), 7,44 (1H, d, J=2,84 Hz), 6,97 - 7,03 (1H, m), 4,41 (2H, q, J=7,15 Hz), 3,57 - 3,64 (4H, m), 3,21 - 3,27 (5H, m), 1,49 (9H, s), 1,41 (3H, t, J=7,09 Hz).
Etapa D: A una mezcla del producto intermedio de alquino obtenida en la etapa C (1,10 g, 3,1 mmoles), 2-yodopiridina (0,69 g, 3,38 mmoles), PdCl2(Ph3P)2 (0,11 g, 0,15 mmoles) y Cul (0,03 g, 0,15 mmoles), bajo argón, se añadió acetonitrilo (6,0 mL) y trietilamina (0,62 g, 6,14 mmoles). La mezcla se agitó a 50 °C durante 4 horas. Se retiraron los volátiles en un rotavapor y se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en hexanos 0-70 %) dando el producto de acoplamiento, 4-(3-(etoxicarbonil)-4-(piridin-2-iletinil)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo como un aceite marrón (1,2 g, 87 %). e M m/z 436,4 [M+H]+.
Etapa E: Se irradió una mezcla del compuesto obtenido en la etapa D (0,59 g, 1,4 mmoles) y ácido p-toluenosulfónico (0,05 g, 0,27 mmoles) en etanol (6,0 mL) en un reactor de microondas a 180 °C durante 3 horas. Entonces se diluyó la mezcla con agua (20 mL) y se basificó hasta pH 8 usando Na2CO3. Se recogió el precipitado, se lavó con agua y se secó. El sólido se disolvió en diclorometano (10 mL), se trató con TFA (2 mL) durante 0,5 h a temperatura ambiente, luego se basificó usando Na2CO3 hasta pH 8-9. Se separó la fase de diclorometano y se extrajo la fase acuosa con diclorometano adicional ( 3 x 5 mL). Se secó la disolución combinada de diclorometano sobre Na2SO4 y se cromatografió (gel de sílice, MeOH en diclorometano, 0-30 %) dando el compuesto del título como un sólido amarillo (0,071 g, 17 %).
Punto de fusión 179-181 °C; EM m/z 308,2 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, DMSO-de ) 6 ppm 8,64 -8,69 (1H, m), 7,95 (1H, td, J=7,80, 1,73 Hz), 7,85 (1H, dt, J=7,96, 1,06 Hz), 7,68 - 7,74 (2H, m), 7,57 (1H, dd, J=8,83, 2,84 Hz), 7,51 (1H, d, J=2,52 Hz), 7,42 (1H, ddd, J=7,57, 4,73, 1,26 Hz), 3,21 - 3,26 (4H, m), 2,84 - 2,89 (4H, m).
Ejemplo 2
Preparación del Comp 2
Figure imgf000080_0001
Etapa A: Se agitó una mezcla de 4-(4-bromo-3-(etoxicarbonil)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo, preparada como se representa en el ejemplo 1, etapa A (22,63 g, 54,8 mmoles), Cul (0,52 g, 2,75 mmoles), Nal (16,44 g, 109,6 mmoles) y N1,N2-dimetilciclohexano-1,2-diamina (0,87 mL, 5,5 mmoles) en dioxano (100 mL) a 110 °C bajo argón durante 18 horas. Se retiró el sólido por filtración y el filtrado se concentró a sequedad en un rotavapor. Se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en hexanos, 0-30 %) proporcionando el producto intermedio de yoduro como un aceite marrón (26,2 g, 102 %). EM m/z 461,2 [M+H]+.
Etapa B: Se preparó 4-(3-(etoxicarbonil)-4-(tiofen-3-iletinil)fenil)-piperazin-1-carboxilato de terc-butilo empleando el procedimiento de acoplamiento de Sonagashira representado en el ejemplo 1, etapa D, a partir del yoduro preparado en la etapa A anterior y 3-etinil-tiofeno (87 %). EM m/z 441,2 [M+H]+.
Etapa C: Se agitó el compuesto preparado en la etapa B (192 mg, 0,44 mmoles) se agitó con TFA (1,0 mL) a 100 °C durante 6 horas. Después del enfriamiento, la mezcla se diluyó con agua (5 mL) y se neutralizó con NaHCO3. Se recogió el precipitado y se lavó con agua, diclorometano y acetona proporcionando el compuesto del título como un polvo marrón (47 mg, 34 %). Punto de fusión 240 °C (descomp.); EM m/z 313,2 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, DMSO-de ) 6 ppm 7,95 (1H, dd, J=2,99, 1,42 Hz), 7,71 (1H, dd, J=5,04, 2,84 Hz), 7,54 - 7,65 (4H, m), 7,27 (1H, s), 3,45 - 3,53 (4H, m), 3,20 -3,28 (4H, m).
Ejemplo 3
Preparación del Comp 3
Etapa A: Una mezcla de 4-(3-(etoxicarbonil)-4-etinilfenil)-piperazin-1-carboxilato de terc-butilo, preparada usando la química representada en el ejemplo 1, etapa C (3,58 g, 10,0 mmoles), 3,4-dimetoxibromobenceno (2,60 g, 12,0 mmoles), CuI (0,095 g, 0,5 mmoles), PdCl2(Ph3P)2 (0,35 g, 0,5 mmoles), Et3N (2,8 mL, 2,02 g, 20,0 mmoles) y acetonitrilo (10,0 mL) se irradió en un reactor de microondas bajo argón a 120 °C durante 0,5 horas. Entonces se enfrió la mezcla y se sometió a cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en hexanos, 0-70 %) dando el producto intermedio de alquino como un aceite marrón, que entonces se purificó nuevamente por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en diclorometano, 0-10 %) dando un aceite incoloro, homogéneo en análisis de CL/EM. EM m/z 495,2 [M+H]+.
Etapa B: Se trató el producto intermedio de alquino obtenido en la etapa A con ácido trifluoroacético (10,0 mL) a temperatura ambiente durante 1 hora. Se diluyó la disolución con agua (50 mL) y se neutralizó con NaHCO3 hasta pH 8-9. Se recogió el precipitado amarillo y se lavó con agua y se secó proporcionando el compuesto del título (1,26 g, 34 % global, 2 etapas). Punto de fusión: 142-143 °C; EM m/z 367,2 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, DMSO-de ) 8 ppm 7,52 - 7,59 (2H, m), 7,46 (1H, d, J=1,58 Hz), 7,42 (1H, dd, J=8,51,2,21 Hz), 7,38 (1H, d, J=2,21 Hz), 7,32 (1H, s), 7,08 (1H, d, J=8,83 Hz), 3,86 (3H, s), 3,81 (3H, s), 3,15 - 3,22 (4H, m), 2,82 - 2,89 (4H, m).
Ejemplo 4
Preparación del Comp 31
Figure imgf000081_0001
Etapa A: Se irradió en un reactor de microondas una mezcla de 2-bromo-5-fluorobenzoato de metilo (699 mg, 3,0 mmoles), 1-etinil-4-metoxibenceno (475 mg, 3,6 mmoles), CuI (28,5 mg, 0,15 mmoles), PdCl2(Ph3P)2 (105 mg, 0,15 mmoles), Et3N (0,83 mL, 606 mg, 6,0 mmoles) y acetonitrilo (3,0 mL), bajo argón a 120 °C durante 0,5 horas. Entonces se enfrió la mezcla y se sometió a cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en hexanos, 0-10 %) dando el producto intermedio de alquino como un aceite marrón, usado directamente en la siguiente etapa. EM m/z 285,1 [M+H]+.
Etapa B: Se trató el producto intermedio de alquino obtenido en la etapa A con ácido trifluoroacético (6,0 mL) a 100 °C durante 1 hora. Se retiraron a vacío los volátiles y el residuo se trató con agua y se neutralizó con NaHCO3. Se recogió el precipitado y se sometió a cromatografía (gel de sílice, diclorometano) dando el producto intermedio de isocumarina (581 mg, 72 %, 2 etapas). EM m/z 271,1 [M+H]+.
Etapa C: Se agitó una mezcla del compuesto obtenido en la etapa B (108 mg, 0,4 mmoles) y (SJ-2-metilpiperazina (120 mg, 1,2 mmoles) en NMP (1,0 mL) a 180 °C durante 24 horas. Después del enfriamiento, la mezcla se cargó sobre una columna de gel de sílice y se sometió a cromatografía (MeOH en diclorometano, 0-20 %) proporcionando el compuesto del título como un polvo amarillo (24 mg, 17 %). Punto de fusión: 129-131 °C; EM m/z 351,3 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, DMSO-de ) 8 ppm 7,80 (2H, d, J=9,14 Hz), 7,51 - 7,59 (2H, m), 7,46 (1H, d, J=2,21 Hz), 7,26 (1H, s), 7,06 (2H, d, J=8,83 Hz), 3,82 (3H, s), 3,64 - 3,73 (2H, m), 2,97 - 3,03 (1H, m), 2,76 - 2,85 (2H, m), 2,61 - 2,70 (1H, m), 2,31 (1H, t, J=11,03 Hz), 1,06 (3H, d, J=6,31 Hz).
Como se muestra en la tabla 1 a continuación, se pueden preparar compuestos adicionales descritos en el presente documento según el ejemplo 4 sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Ejemplo 5
Preparación del Comp 30
Figure imgf000082_0001
Etapa A: Una mezcla de 5-bromo-2-yodobenzoato de metilo (18,4 g, 54,0 mimóles), TMS acetileno (8,5 mL, 5,88 g, 60,0 mimóles), CuI (0,51 g, 2,7 mimóles), PdCl2(Ph3P)2 (1,9 g, 2,7 mmoles), Et3N (15,0 mL, 10,9 g, 108,0 mmoles) y acetonitrilo (100 mL) se agitó bajo argón a temperatura ambiente durante 4 horas. Después de la retirada de los volátiles a vacío, se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en hexanos, 0-20 %) proporcionando el producto intermedio de TMS alquino como un aceite incoloro (15,7 g, 94 %).
Etapa B: Se mezcló el producto intermedio de alquino obtenido en la etapa A (9,33 g, 30,0 mmoles) con (S)-2-metilpiperazina (3,60 g, 36,0 mmoles), Pd2dba3 (0,27 g, 0,6 mmoles), JohnPhos (0,18 g, 0,6 mmoles) y Cs2CO3 (13,7 g, 42,0 mmoles). Se purgó el sistema de reacción con argón tres veces y se añadió el disolvente DME (60 mL). Entonces se agitó la suspensión a 80 °C durante 4 horas. El análisis de CL/EM de una alícuota de la mezcla de reacción reveló un consumo completo del bromuro de partida. Se retiró el disolvente en un rotavapor y se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en diclorometano 0-50 %) dando 5-(3-metilpiperazin-1-il)-2-((trimetilsilil)etinil)benzoato de (S)-metilo como un aceite marrón (7,56 g, 79 %). EM m/z 331,1 [M+H]+.
Etapa C: Se trató el compuesto obtenido en la etapa B (7,56 g, 22,9 mmoles) con dicarbonato de di-terc-butilo (7,5 g, 34,4 mmoles) y algunos cristales de DMAP en diclorometano (100 mL). Después de agitar durante 2 h a temperatura ambiente, el análisis de CL/EM de una alícuota de la mezcla de reacción reveló una desaparición completa del material de partida. Se retiró en un rotavapor el disolvente y se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en diclorometano, 0-10 %) proporcionando 4-(3-(metoxicarbonil)-4-((trimetilsilil)etinil)fenil)-2-metilpiperazin-1-carboxilato de (S)-terc-butilo como un aceite incoloro (6,49 g, 66 %). EM m/z 431,1 [M+H]+.
Etapa D: Se trató el compuesto obtenido en la etapa C (6,49 g, 15,1 mmoles) con K2CO3 (carbonato de potasio) (3,12 g, 22,6 mmoles) en MeOH (40 mL) en un baño de agua con hielo durante 2 horas. Se retiraron los volátiles en un rotavapor y el residuo se trató con NH4Cl saturado (100 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 150 mL). Entonces se concentraron a sequedad los extractos combinados y se sometieron a cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en hexanos 0-80 %) dando 4-(4-etinil-3-(metoxicarbonil)fenil)-2-metilpiperazin-1-carboxilato de (S)-terc-butilo como un aceite marrón claro (5,39 g, 100 %). EM m/z 359,3 [M+H]+.
Etapa E: Se irradió una mezcla del producto intermedio preparado en la etapa D, 4-(4-etinil-3-(metoxicarbonil)fenil)-2-metilpiperazin-1-carboxilato de (S)-terc-butilo (716 mg, 2,0 mmoles), 4-yodo-1,2-dimetoxibenceno (634 mg, 2,4 mmoles), CuI (19,0 mg, 0,1 mmoles), PdCl2(Ph3P)2 (70 mg, 0,1 mmoles), Et3N (0,56 mL, 202 mg, 4,0 mmoles) y acetonitrilo (2,0 mL) en un reactor de microondas, bajo argón a 120 °C durante 20 minutos. Entonces se enfrió la mezcla y se sometió a cromatografía dos veces (gel de sílice, acetato de etilo en hexanos, 0-50 %, luego acetato de etilo en diclorometano, 7,5 %) dando el producto intermedio de alquino como un aceite amarillo (367 mg, 37 %). EM m/z 495,3 [M+H]+.
Etapa F: Se trató el compuesto obtenido en la etapa E (367 mg, 0,74 mmoles) con TFA (5,0 mL) a temperatura ambiente durante 2 horas. El análisis de CL/EM de una alícuota de la mezcla de reacción mostró una conversión completa lograda. Esta se diluyó con agua (40 mL), se neutralizó con NaHCO3 y se extrajo con diclorometano (3 x 20 mL). Se secaron los extractos combinados y se evaporaron a sequedad. Se trituró el residuo amarillo con etil éter y se secó. El compuesto del título se obtuvo como un polvo amarillo (228 mg, 81 %). Punto de fusión: 155-157 °C; EM m/z 381,5 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, DMSO-da): 8 ppm 7,51 -7,58 (2H, m), 7,46 (1H, d, J=2,52 Hz), 7,42 (1H, dd, J=8,51, 1,89 Hz), 7,38 (1H, d, J=1,89 Hz), 7,32 (1H, s), 7,07 (1H, d, J=8,83 Hz), 3,86 (3H, s), 3,81 (3H, s), 3,64 - 3,71 (2H, m), 2,96 -3,02 (1H, m), 2,75 -2,84 (2H, m), 2,65 (1H, m, J=3,15 Hz), 2,30 (1H, dd, J=11,35, 10,40 Hz), 1,05 (3H, d, J=6,31 Hz).
Como se muestra en la tabla 1 a continuación, se pueden preparar compuestos adicionales descritos en el presente documento según el ejemplo 5 sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Ejemplo 6
Preparación del Comp 65
Figure imgf000083_0001
Etapa A: Una mezcla de ácido 5-fluoro-2-yodobenzoico (9,04 g, 34,0 mmoles), but-3-in-2-ol (5,7 mL, 5,46 g, 78,0 mmoles), ZnCl2 (4,62 g, 34,0 mmoles), Pd(Ph3P)4 (1,96 g, 1,7 mmoles), Et3N (14,2 mL, 10,3 g, 102,0 mmoles) y DMF (50 mL) se agitó bajo argón a 100 °C durante 2 horas. Después de la retirada de los volátiles a vacío, se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en hexanos, 0-50 %) proporcionando el producto intermedio 7-fluoro-3-(1-hidroxietil)-1H-isocromen-1-ona como un aceite marrón (5,93 g, 84 %). EM m/z 209,2 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, CDCh-d) 8 ppm 7,91 - 7,96 (1H, m), 7,43 - 7,47 (2H, m), 6,55 - 6,59 (1H, m), 4,67 (1H, q, J=6,52 Hz), 1,57 (3H, d, J=6,62 Hz).
Etapa B: Se disolvió el producto intermedio obtenida en la etapa A (5,93 g, 28,5 mmoles) en diclorometano (50 mL) y se trató con MnO2 (24,8 g, 285 mmoles) durante 48 h a temperatura ambiente. Se retiró el disolvente en un rotavapor y el residuo se suspendió en diclorometano (500 mL) y se agitó durante 0,5 horas. Se filtró la mezcla y el sólido se lavó minuciosamente con diclorometano (4 x 100 mL). Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad en un rotavapor y se sometieron a cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en diclorometano 0-20 %) proporcionando el producto intermedio de cetona como agujas blancas (3,88 g, 66 %). EM m/z 207,1 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, CDChd): 8 ppm 8,01 - 8,06 (1H, m), 7,68 (1H, dd, J=8,51, 5,04 Hz), 7,51 - 7,57 (1H, m), 7,40 (1H, d, J=0,63 Hz), 2,59 (3H, s)
Etapa C: Se disolvió el producto intermedio de cetona obtenido en la etapa B (2,63 g, 12,8 mmoles) en cloroformo (30 mL) y se trató con bromo (0,72 mL, 2,25 g, 14,0 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, seguido por la adición de hexanos (150 mL) y la mezcla se agitó durante 15 minutos. El precipitado se recogió por filtración y se lavó con hexanos, agua y se secó. El filtrado se lavó con NaHCO3 y se concentró. Se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en diclorometano, 0-5 %) proporcionando el producto intermedio adicional de bromocetona (total 3,48 g, 96 %). EM m/z 283,0 [M-H]-, 285,0 [M-H]-; RMN 1H (500 MHz, CDCla-d): 8 ppm 8,05 (1H, dd, J=8,20, 2,84 Hz), 7,72 (1H, dd, J=8,51, 5,04 Hz), 7,54 - 7,60 (1H, m), 7,52 (1H, s), 4,47 (2H, s).
Etapa D: Se mezcló el producto intermedio de bromocetona obtenido en la etapa C (1,43 g, 5,0 mimóles) con 3,5-dimetil-pirazin-2-amina (0,67 g, 5,5 mmoles) y acetonitrilo (10,0 mL) en un tubo cerrado. Se agitó la mezcla a 100 °C durante la noche y se enfrió hasta temperatura ambiente. Se añadió acetato de etilo (20 mL) y el precipitado se recogió, se lavó con acetato de etilo y luego se secó, proporcionando bromhidrato de 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-fluoro-1H-isocromen-1-ona (1,81 g, 93 %). EM m/z 310,3 [M+H]+.
Etapa E: Se agitó una mezcla del compuesto obtenido en la etapa D (390 mg, 1,0 mmol), N-metilpiperazina (300 mg, 3,0 mmoles) en NMP (2,0 mL) a 180 °C durante 24 h bajo argón. Después del enfriamiento hasta temperatura ambiente, la mezcla se cargó sobre una columna de gel de sílice. Se realizó cromatografía ultrarrápida (gel de sílice) usando MeOH en diclorometano (0-30 %) proporcionando el compuesto del título como un polvo amarillo (223 mg, 57 %). Punto de fusión: 240-241 °C; EM m/z 390,1 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,34 (1H, s), 8,24 -8,27 (1H, m), 7,70 (1H, d, J=8,83 Hz), 7,57 (1H, dd, J=8,83, 2,52 Hz), 7,50 (1H, d, J=2,52 Hz), 7,42 (1H, s), 3,26 -3,31 (4H, m), 2,74 (3H, s), 2,45 - 2,49 (4H, m), 2,38 (3H, d, J=0,95 Hz), 2,24 (3H, s).
Como se muestra en la tabla 1 más adelante, se pueden preparar compuestos adicionales descritos en el presente documento según el ejemplo 6 sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Ejemplo 7
Preparación del Comp 33
Figure imgf000084_0001
Etapa A: Se mezcló el producto intermedio de bromocetona obtenido en la etapa C, ejemplo 6 (285 mg, 1,0 mmol) con 2-aminotiazol (110 mg, 1,1 mmoles) y acetonitrilo (4,0 mL) en un tubo cerrado. La mezcla se agitó a 100 °C durante 0,5 h y se enfrió hasta temperatura ambiente. Se añadió acetato de etilo (10 mL) y el precipitado se recogió por filtración. El precipitado se lavó con acetato de etilo y se secó proporcionando el producto intermedio, bromuro de 2-amino-3-(2-(7-fluoro-1-oxo-1H-iso-cromen-3-il)-2-oxoetil)tiazol-3-io (355 mg, 92 %) homogéneo en análisis de CL/EM. EM m/z 305,0 M+.
Etapa B: Se agitó una mezcla del compuesto obtenido en la etapa A (193 mg, 0,5 mmoles) en NMP (1,0 mL) a 180 °C durante 1 h hasta que el análisis de CL/EM de una alícuota de la mezcla de reacción mostró que todo el material de partida se había convertido en el producto intermedio de ciclación. EM m/z 287,0 [M+H]+. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadió N-metilpiperazina (150 mg, 1,5 mmoles) bajo argón. Entonces se agitó la mezcla resultante a 180 °C durante 24 horas. Después del enfriamiento, la mezcla se cargó sobre una columna de gel de sílice y el compuesto del título se eluyó con MeOH en diclorometano (0-30 %) como un polvo amarillo (32 mg, 17 %). Punto de fusión: 236-238 °C; EM m/z 367,2 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, DMSO-dej 8 ppm 8,12 (1H, s), 7,93 (1H, d, J=4,41 Hz), 7,52 - 7,63 (2H, m), 7,48 (1H, s), 7,32 (1H, d, J=4,41 Hz), 7,17 (1H, s), 3,23 - 3,30 (4H, m), 2,43 - 2,49 (4H, m), 2,23 (3H, s).
Como se muestra en la tabla 1 más adelante, se pueden preparar compuestos adicionales descritos en el presente documento según el ejemplo 7 sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Ejemplo 8
Preparación del Comp 61
Figure imgf000085_0001
Etapa A: Siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 6, etapa D, se obtuvo el producto intermedio, bromhidrato de 3-(8-doroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-fluoro-1H-isocromen-1-ona (244 mg, 62 %), a partir de la 3-cloro-2-aminopiridina comercialmente disponible. EM m/z 315,1 [M+H]+.
Etapa B: Siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 6, etapa E, a partir de bromhidrato de 3-(8-cloroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-fluoro-1H-isocromen-1-ona (99 mg, 0,25 mmoles) y N-metilpiperazina (86 mg, 0,75 mmoles), se obtuvo el compuesto del título como un polvo amarillo (19 mg, 19 %). Punto de fusión: 240 °C (descomposición); EM m/z 395,0 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 8,57 (1H, dd, J=6,94, 0,95 Hz), 8,46 (1H, s), 7,72 (1H, d, J=8,83 Hz), 7,58 (1H, s), 7,52 (1H, dd, J=7,25, 0,95 Hz), 7,51 (1H, d, J=2,52 Hz), 7,44 (1H, s), 6,95 (1H, dd, J=7,41,6,78 Hz), 3,28 - 3,31 (4H, m), 2,47 (4H, m), 2,24 (3H, s).
Como se muestra en la tabla 1 más adelante, se pueden preparar compuestos adicionales descritos en el presente documento según el ejemplo 8 sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Ejemplo 9
Preparación del Comp 66
Figure imgf000085_0002
Se suspendió (S)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(3-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona (78 mg, 0,2 mmoles), preparada según el procedimiento del ejemplo 6, en dicloroetano (1,0 mL) seguido por la adición de formaldehído (0,4 mL, 37 %, 4,9 mmoles) y NaBH(OAc)3 (85 mg, 0,4 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se diluyó con diclorometano (5,0 mL) y se neutralizó con NaHCO3. Se separó la fase de diclorometano y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 2,0 mL). Se combinaron los extractos y se secaron sobre Na2SO4 y se sometieron a cromatografía (gel de sílice, MeOH en diclorometano 0-20 %) proporcionando el compuesto del título como un polvo amarillo pálido (55 mg, 68 %). Punto de fusión: 255-256 °C; e M m/z 404,1 [M+H]+ ; RMN 1H (500 MHz, DMSO-dej 5 ppm 8,33 (1H, s), 8,23 - 8,26 (1H, m), 7,68 (1H, d, J=8,83 Hz), 7,56 (1H, dd, J=8,83, 2,52 Hz), 7,48 (1H, d, J=2,52 Hz), 7,40 (1H, s), 3,65 - 3,76 (2H, m), 2,82 - 2,91 (2H, m), 2,73 (3H, s), 2,37 (3H, d, J=0,95 Hz), 2,21 -2,28 (4H, m), 2,09 -2,19 (1H, m), 1,08 (3H, d, J=6,31 Hz).
Como se muestra en la tabla 1 más adelante, se pueden preparar compuestos adicionales descritos en el presente documento según el ejemplo 9 sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Ejemplo 10
Preparación del Comp 76
Figure imgf000086_0001
Se mezcló el producto intermedio de bromocetona obtenido en la etapa C, ejemplo 6 (855 mg, 3,0 mimóles) con 2,3,5-trimetilpirazina (402 mg, 3,3 mmoles) y acetonitrilo (10,0 mL) en un tubo cerrado. La mezcla se agitó a 80 °C durante 4 h y se enfrió hasta temperatura ambiente, seguido por la adición de trietilamina (1,3 mL, 9,0 mmoles). Después de agitar durante 0,5 horas a temperatura ambiente, la mezcla se agitó a 60 °C durante la noche. Se retiró el disolvente en un rotavapor y se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en diclorometano 30 %) proporcionando el producto intermedio, 3-(1,3-dimetilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-il)-7-fluoro-1H-isocromen-1-ona (782 mg, 85 %). EM m/z 309,3 [M+H]+.
Etapa B: Siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 6 , etapa E, a partir de 3-(1,3-dimetilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-il)-7-fluoro-1H-isocromen-1-ona (77 mg, 0,25 mmoles) y N-metilpiperazina (75 mg, 0,75 mmoles), el compuesto del título se obtuvo como un polvo amarillo (44 mg, 45 %). Punto de fusión: 219-221 °C; EM m/z 389,5 [M+H]+; RMN 1H (500 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,03 (1H, d, J=1,58 Hz), 7,97 (1H, d, J=0,63 Hz), 7,56 (1H, d, J=2,84 Hz), 7,47 - 7,53 (2H, m), 7,22 (1H, s), 7,16 - 7,19 (1H, m), 3,24 - 3,30 (4H, m), 2,57 (3H, s), 2,45 - 2,49 (4H, m), 2,28 (3H, d, J=0,95 Hz), 2,24 (3H, s).
Como se muestra en la tabla 1 más adelante, se pueden preparar compuestos adicionales descritos en el presente documento según el ejemplo 10 sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Ejemplo 11
Preparación del Comp 85
Figure imgf000086_0002
Se mezcló el Comp 65 obtenido en el ejemplo 6 (188 mg, 0,5 mmoles) con 1-bromo-2-etoxietano (104 mg, 0,75 mmoles), K2CO3 (172 mg, 1,25 mmoles) y d Mf (1,0 mL) en un tubo cerrado. La mezcla se agitó a 60 °C durante la noche, se enfrió hasta temperatura ambiente y se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (metanol en diclorometano, 0-20 %) proporcionando el compuesto del título como un polvo amarillo (100 mg, 46 %). Punto de fusión: 192-194 °C; EM m/z 434,3 [M+H]+. RMN 1H (500 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,36 (1H, s), 8,25 -8,29 (1H, m), 7,71 (1H, d, J=8,83 Hz), 7,57 (1H, dd, J=8,83, 2,52 Hz), 7,50 (1H, d, J=2,52 Hz), 7,43 (1H, s), 3,48 (2H, t, J=5,83 Hz), 3,27 - 3,31 (4H, m), 3,26 (3H, s), 2,74 (3H, s), 2,56 - 2,62 (4H, m), 2,54 (2H, t, J=5,83 Hz), 2,38 (3H, d, J=0,95 Hz).
Como se muestra en la tabla 1 más adelante, se pueden preparar compuestos adicionales descritos en el presente documento según el ejemplo 11 sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Ejemplo 12
Preparación del Comp 88
Figure imgf000087_0001
Parte 1, etapa A: A una disolución enfriada de 2,6-dimetilpirazina (108 g, 1,0 moles) en DMF (260 mL) sobre un baño de hielo/H2Ü, mientras se agita vigorosamente, se añadió cloruro de sulfurilo (270 mL, 3,3 moles). Se controló la tasa de adición para mantener la temperatura de reacción entre 40-60 °C durante aproximadamente 2 horas. Después de la adición, se retiró el baño de refrigeración y la mezcla se agitó durante 0,5 horas adicionales. El análisis de CL/EM de una alícuota mostró que quedó <5 % del material de partida. Entonces se enfrió la mezcla de reacción en un baño de hielo/agua y, mientras se mantenía la temperatura por debajo de 35 °C, se extinguió cuidadosamente con NaOH 10 M (1 l), seguido por la adición de Na2CO3 (sólido) hasta pH 6. Después de la adición de agua (800 mL), se destiló la mezcla. Se recogió el destilado y se separaron los extractos orgánicos. Se extrajo la fase acuosa con etil éter (100 mL x 3) y se combinaron los extractos de éter con los extractos orgánicos separados previamente. Se lavaron con agua (30 mL x 3) los extractos combinados, luego salmuera y se secaron sobre Na2SO4. Después de concentrarse los extractos, se destiló el residuo y el producto se recogió como un líquido incoloro, punto de ebullición aproximado: 127 °C a 154 mmHg (99,1 g, 69 %). RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 8,05 (1H, s), 2,61 (3H, d, J=0,63 Hz), 2,50 (3H, s).
Parte 1, etapa B: Se agitó una mezcla de 2-cloro-3,5-dimetilpirazina (28,5 g, 0,2 moles), preparada anteriormente, CuO (0,8 g, 0,01 moles) y NH3 acuoso concentrado (28~30 %, 150 mL) en un recipiente a presión sellado a 150 °C durante 3 días. Después del enfriamiento, la mezcla se concentró a sequedad y el residuo se trató con acetato de etilo (500 mL), entonces se agitó durante 15 minutos y se filtró. El precipitado se lavó con acetato de etilo adicional (aproximadamente 1,5 l) hasta que el material de partida ya no se detectó en el filtrado. Se combinaron los filtrados y se concentraron. Se purificó el residuo por cromatografía sobre una columna de gel de sílice (MeOH/CH2Cl2, 0-10 %) proporcionando una sólido amarillo/parduzco (20,7 g, 84 %). RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 7,68 (1H, s), 2,46 (3H, s), 2,42 (3H, d, J=0,63 Hz).
Figure imgf000087_0002
Parte 2, etapa A: Se agitó una mezcla de ácido 5-bromo-2-yodobenzoico (12,6 g, 38,5 mimóles), but-3-in-2-ol (3,1 mL, 2,96 g, 42,4 mmoles), ZnCh (5,2 g, 38,5 mmoles), Pd(PhaP)4 (2,23 g, 1,9 mmoles), Eta N (16,0 mL, 11,7 g, 115,5 mimóles) y DMF (80 mL) bajo argón a 80 °C durante 2 horas. Después de retirar los volátiles a vacío, se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo en hexanos, 0-100 %) proporcionando el producto intermedio 7-bromo-3-(1-hidroxietN)-1H-isocromen-1-ona como un aceite marrón (7,5 g, 72 %). RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 8,38-8,45 (1H, m), 7,81 (1H, dd, J=8,35, 2,05 Hz), 7,32 (1H, d, J=8,51 Hz), 6,52-6,59 (1H, m), 4,66 (1H, qd, J=6,52, 0,95 Hz), 1,54-1,60 (3H, m).
Parte 2, etapa B: Se disolvió el producto intermedio obtenido en la Parte 2, etapa A (7,5 g, 27,7 mmoles) en diclorometano (100 mL) y se trató con MnO2 (48,0 g, 554 mmoles) durante 20 horas a temperatura ambiente. Se filtró el sólido y se lavó minuciosamente con diclorometano (4 x 200 mL). Se evaporaron los filtrados combinados a sequedad en un rotavapor y se sometieron a cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo/CH2Cl2 , 0-20 %) proporcionando el producto como agujas blancas (4,5 g, 61 %). RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 8,51 (1H, dd, J=2,84, 0,63 Hz), 7,92 (1H, dd, J=8,35, 2,05 Hz), 7,53 (1H, d, J=8,51 Hz), 7,36 (1H, s), 2,59 (3H, s).
Parte 2, etapa C: Se disolvió el producto intermedio obtenido en la Parte 2, etapa B (23,0 g, 86,0 mmoles) en cloroformo (400 mL) y se trató con bromo (4,64 mL, 14,5 g, 90,3 mmoles). Se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas la mezcla, seguido por la adición de hexanos (1000 mL), y la mezcla resultante se agitó durante 15 minutos. Se recogió por filtración el precipitado y se lavó con hexanos, luego agua y se secaron. Se lavó el filtrado con NaHCO3 y se concentró. Se purificó el residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo/CH2Cl2 , 0-5 %) proporcionando producto intermedio adicional (total de 27,0 g, 91 %). RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 6 ppm 8,48 - 8,56 (1H, m), 7,94 (1H, dd, J=8,35, 2,05 Hz), 7,56 (1H, d, J=8,20 Hz), 7,48 (1H, s), 4,46 (2H, s).
Parte 2, etapa D: Se mezcló el producto intermedio obtenido en la Parte 2, etapa C (4,84 g, 14,0 mmoles) con 3,5-dimetil-pirazin-2-amina (1,81 g, 14,7 mmoles), obtenida en Parte 1, y acetonitrilo (30 mL) en un tubo cerrado. Se agitó la mezcla a 100 °C durante la noche y se enfrió hasta temperatura ambiente. Se añadió acetato de etilo (60 mL) y el precipitado se recogió, luego se lavó con acetato de etilo y se secó, proporcionando bromhidrato de 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-bromo-1H-isocromen-1-ona (5,04 g, 80 %). EM m/z 370,2, 372,2 [M+H]+ . Rm N 1H (500 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 8,50-8,54 (1H, m), 8,34 (1H, s), 8,21 (1H, d, J=1,89 Hz), 8,02 (1H, dd, J=8,35, 2,05 Hz), 7,80 (1H, d, J=8,51 Hz), 7,51-7,57 (1H, m), 2,79 (3H, s), 2,41 (3H, d, J=0,95 Hz).
Parte 2, etapa E: Se mezcló bromhidrato de 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-bromo-1H-isocromen-1-ona, obtenida en Parte 2, etapa D (1,13 g, 2,5 mmoles) con 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de terc-butilo (1,55 g, 5,0 mmoles), Pd2dba3 (0,12 g, 0,013 mmoles), KF (0,87 g, 15,0 mmoles), t-Bu3PHBF4 (0,087 g, 0,3 mmoles) y THF (10,0 mL). Bajo una atmósfera de argón, se agitó la mezcla de reacción a 60 °C durante la noche.
Después del enfriamiento, la mezcla se diluyó con CH2O 2 (10 mL) y se filtró. El precipitado se lavó con CH2Cl2 y se combinaron los filtrados y se evaporaron. El residuo se trató con un 10 % de TFA en CH2Cl2 (55 mL) durante 2 horas a temperatura ambiente. Se retiraron los volátiles y el residuo se neutralizó con NaHCO3. Después de evaporarse a sequedad, el residuo se suspendió en un 10 % de MeOH en CH2Cl2 y se filtró. El filtrado se purificó por cromatografía (gel de sílice, MeOH/CH2Cl2 , 0-20 %) proporcionando el compuesto del título como un polvo blanco (0,92 g, 99 %). Punto de fusión: 266 °C (dec.); EM m/z 373,2 [M+H]+ . RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 6 ppm 8,45 (1H, s), 8,27-8,30 (1H, m), 8,18 (1H, d, J=1,00 Hz), 8,04 (1H, dd, J=1,00 Hz), 7,88 (1H, d, J=8,51 Hz), 7,56 (1H, s), 6,41-6,49 (1H, m), 3,80-3,87 (2H, m), 3,38 (2H, t, J=6,15 Hz), 2,76-2,81 (2H, m), 2,75 (3H, s), 2,39 (3H, d, J=0,95 Hz).
Como se muestra en la tabla 1 más adelante, se pueden preparar compuestos adicionales descritos en el presente documento según el ejemplo 12 sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Ejemplo 13
Preparación del Comp 96
Figure imgf000088_0001
Se mezcló el Comp 88 obtenido en el ejemplo 12 (37,2 mg, 0,1 mmoles) con un 10 % de Pd/C (8,0 mg) y EtOH (1,0 mL) y se hidrogenó a temperatura ambiente durante la noche usando un balón de hidrógeno. Se diluyó la mezcla con CH2CI2 (2,0 mL) y se filtró sobre Celite. Se recogió el filtrado y se sometió a cromatografía (gel de sílice, 0-20 % de MeOH en CH2Ch ) proporcionando el compuesto del título como un polvo blanco (21,0 mg, 56 %). Punto de fusión: 218-220 °C; EM m/z 375,2 [M+H]+ . RMN 1H (500 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 8,43 (1H, s), 8,29 (1H, d, J=0,63 Hz), 8,02 (1H, d, J=1,58 Hz), 7,85 (1H, d, J=8,20 Hz), 7,76 (1H, dd, J=8,20, 1,89 Hz), 7,54 (1H, s), 3,38-3,47 (2H, m), 2,96-3,10 (3H, m), 2,76 (3H, s), 2,40 (3H, d, J=0,95 Hz), 1,97-2,08 (2H, m), 1,76-1,92 (2H, m).
La tabla 1 proporciona compuestos aislados de forma de base libre de un compuesto de la fórmula (Ia1) que se puede preparar según los procedimientos del ejemplo indicado sustituyendo los materiales de partida, reactivos y condiciones de reacción apropiados. También se contempla la preparación de cualquier sal, isotopólogo, estereoisómero, racemato, enantiómero, diaestereómero o tautómero de una forma de base libre de un compuesto de la fórmula (Ia1) y se incluye adicionalmente dentro del alcance de la descripción en el presente documento. Donde no se aisló una forma de base libre del compuesto de la forma de sal, se podría esperar que un experto habitual en la técnica realizara las reacciones requeridas para preparar y aislar la forma de base libre del compuesto.
El término "Comp" representa número de compuesto, el término "Ej" representa "Número de ejemplo " (en donde * indica que el ejemplo correspondiente para el compuesto se proporciona anteriormente), el término "P.F." representa "Punto de fusión (°C)", el término "EM" representa "Pico(s) de espectroscopía de masas m/z M+ , [M+H]+ , [M+2h ]+, [M-H]- o [M-2H]'", el término "D" representa "Descomposición/descompuesto", el término "DR" representa "Intervalo de descomposición", el término "S" representa "Reblandecimiento", el término "ND" indica que el valor fue "No determinado" y el término "NI" indica que el compuesto fue "No aislado".
Tabla 1
Ej. Comp Nombre P.F. EM
1* 1 7-(piperazin-1-il)-3-(piridin-2-il)-1H-isocromen-1-ona 179-181 308,2
2* 2 7-(piperazin-1-il)-3-(tiofen-3-il)-1H-isocromen-1-ona 240 (D) 313,2
3* 3 3-(3,4-dimetoxifenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 142-143 367,2
4 4 7-(4-metilpiperazin-1-il)-3-(piridin-2-il)-1H-isocromen-1-ona 174-176 322,3
4 5 7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(piridin-2-il)-1H-isocromen-1-ona 168-170 336,3
3-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1- 387,2 4 6 ona 220-222
4 7 3-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-7-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)-1H- isocromen-1-ona 175-177 415,3
4 8 3-(1,3-benzotiazol-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 324-326 364,2
4 9 3-(1,3-benzotiazol-2-il)-7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-1H- 310-312 392,3
isocromen-1-ona
4 10 3-(1,3-benzotiazol-2-il)-7-(1,4-diazepan-1-il)-1H-isocromen-1-ona 277-279 378,3
3-(1,3-benzotiazol-2-il)-7-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)-1H-isocromen-1- 270-272 392,3 4 11 ona
3 12 3-(1,3-benzodioxol-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 267-269 351,2
3 13 3-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1- 253-255 365,2
ona
3 14 3-(3,5-difluorofenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 200-202 343,1
4 15 3-(1,3-benzodioxol-5-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 297-299 365,2
4 16 3-(3,4-dimetoxifenil)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona ND 381,3
3-(3,4-dimetoxifenil)-7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-1H- 309-311 395,3 4 17 isocromen-1-ona
4 18 3-(3-metoxifenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 140-142 337,2
4 19 3-(3-metoxifenil)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 140-142 351,2 7-[(3R,5S)-3,5-dimetNpiperazin-1-N]-3-(3-iTietoxifenN)-1H-isocroiTien-1- 195-197 365,3 20 ona
21 7-(1,4-diazepan-1-il)-3-(3-metoxifenil)-1H-isocromen-1-ona 148-150 351,2 22 3-(2-metoxifenil)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 118-120 351,3 23 7-[(3R,5S)-3,5-dimetNpiperazin-1-N]-3-(2-iTietoxifenN)-1H-isocroiTien-1- 154-157 365,3 ona
24 3-(4-metoxifenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 235-238 337,2 25 3-(4-metoxifenil)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 166-168 351,3 26 3-(imidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 248 (D) 347,2
27 3-(imidazo[1,2-a]pindin-2-N)-7-(4-iTietNpiperazin-1-N)-1H-isocroiTien-1- 252-254 361,3 ona
28 3-(imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 224-226 353,3 29 7-[(3R,5S)-3,5-dimetNpiperazin-1-N]-3-(4-iTietoxifenN)-1H-isocroiTien-1- 109-110 365,3 ona
* 30 3-(3,4-dimetoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona 155-157 381,3 * 31 3-(4-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona 129-131 351,3 32 3-(2-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona 143.146 351,3 * 33 3-(imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-N)-7-(4-iTietNpiperazin-1-N)-1H-isocroiTien- 236-238 367,2
1 -ona
34 7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-3-(piridin-2-il)-1H-isocromen-1-ona 343-345 322,1
35 3-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-N)-7-[(3S)-3-iTietNpiperazin-1-N]-1H- 175-177 379,2 isocromen-1 -ona
36 3-(1,3-benzotiazol-2-N)-7-[(3S)-3-metNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien-1- 236-238 378,2 ona
37 3-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-N)-7-[(3R)-3-iTietNpiperazin-1-N]-1H- 175-177 379,2 isocromen-1 -ona
38 3-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-N)-7-(4-iTietNpiperazin-1-N)-1H- 163-165 379,2 isocromen-1 -ona
39 3-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-N)-7-[(3R,5S)-3,5-diirietNpiperazin-1- 218-220 393,3 il]-1H-isocromen-1 -ona
40 3-(1,3-benzodioxol-5-N)-7-[(3S)-3-metNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien-1- 248-250 365,3 ona
41 3-(3,4-dihidroxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona 220 -222 353,2 42 3-(4-etoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona 239-240 365,3 43 3-(3-fluoro-4-metoxifenN)-7-[(3S)-3-irietNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien- 209-211 369,1 1 -ona
44 3-(3-hidroxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona 256-258 337,2 45 3-(2-fluoro-4-metoxifenN)-7-[(3S)-3-irietNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien- 167-168 369,2 1 -ona
46 3-(3-doro-4-metoxifenN)-7-[(3S)-3-irietNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien-1- 187-189 385,2 ona
47 3-(4-fluoro-3-metoxifenN)-7-[(3S)-3-irietNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien- 118-120 369,2 1 -ona
3-(5-fluoro-2-metoxifeml)-7-[(3S)-3-irietNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien- 115-117 1-ona
3-(3,5-difluoro-4-metoxifeml)-7-[(3S)-3-irietNpiperazin-1-N]-1H- 170-173 isocromen-1-ona
3-(2,4-dimetoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona 231 (D) 3-(4-etoxifenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 245 (D) 3-(2-metil-1-benzofuran-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 206-208 3-[3-(difluorometoxi)fenN]-7-[(3S)-3-irietNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien- 132-134 1-ona
3-[4-(difluorometoxi)fenN]-7-[(3S)-3-irietNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien- 121-123 1-ona
3-(imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-N)-7-[(3S)-3-iTietNpiperazin-1-N]-1H- 340-342 isocromen-1-ona
3-(6-metNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(piperazin-1-N)-1H-isocroiTien-1- 225-227 ona
3-(6-metNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3S)-3-iTietNpiperazin-1-N]-1H- 242-244 isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-3,5-dimetNpiperazin-1-N]-3-(6-irietNiiTiidazo[1,2-a]pirazin-2- 279-281 il)-1H-isocromen-1 -ona
3-(8-doroimidazo[1,2-a]pindin-2-N)-7-(piperazin-1-N)-1H-isocroiTien-1- 343-345 ona
3-(8-doroimidazo[1,2-a]pindin-2-N)-7-[(3S)-3-iTietNpiperazin-1-N]-1H- 314-316 isocromen-1-ona
3-(8-doroimidazo[1,2-a]pindin-2-N)-7-(4-iTietNpiperazin-1-N)-1H- 240 (D) isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(piperazin-1-N)-1H- >330 isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3S)-3-iTietNpiperazin-1-N]- 325-327 1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3R,5S)-3,5-diiTietNpiperazin- 244-246 1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(4-iTietNpiperazin-1-N)-1H- 240-241 isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3S)-3,4-diiTietNpiperazin-1- 255-256 il]-1H-isocromen-1 -ona
3-(3,4-dimetoxifeml)-7-[(3S)-3,4-diirietNpiperazin-1-N]-1H-isocroiTien-1- 138-140 ona
7-[(8aR)-hexahidropimdo[1,2-a]pirazin-2(1H)-N]-3-(6-irietNiiTiidazo[1,2- 255-257 a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(8aS)-hexahidropimdo[1,2- 282-285 a]pirazin-2(1H)-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(8aR)-hexahidropimdo[1,2- 282-285 a]pirazin-2(1H)-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3R)-3-iTietNpiperazin-1-N]- 331-333 1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3R)-3,4-diiTietNpiperazin-1- 252-254 il]-1H-isocromen-1 -ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(4-etNpiperazin-1-N)-1H- 238-240 isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[4-(propan-2-N)piperazin-1-N]- 260-262 1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[4-(2-hidroxietN)piperazin-1- 248-250 il]-1H-isocromen-1 -ona
3-(1,3-dimetNpimdo[1,2-a]pirazin-7-N)-7-(4-irietNpiperazin-1-N)-1H- 219- 221 isocromen-1-ona
3-(1,3-dimetNpimdo[1,2-a]pirazin-7-N)-7-(4-etNpiperazin-1-N)-1H- 202-204 isocromen-1-ona
3-(1,3-dimetNpimdo[1,2-a]pirazin-7-N)-7-[4-(propan-2-N)piperazin-1-N]- 213-215 1H-isocromen-1-ona
3-(1,3-dimetNpimdo[1,2-a]pirazin-7-N)-7-[4-(2-hidroxietN)piperazin-1-N]- 240-242 1H-isocromen-1-ona
3-(1,3-dimetNpimdo[1,2-a]pirazin-7-N)-7-[(8aS)-hexahidropimdo[1,2- 220- 222 a]pirazin-2(1H)-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(1,3-dimetNpimdo[1,2-a]pirazin-7-N)-7-[(8aR)-hexahidropimdo[1,2- 218-220 a]pirazin-2(1H)-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(4-propNpiperazin-1-N)-1H- 244-246 isocromen-1-ona, y
7-(4-terc-butNpiperazin-1-N)-3-(6,8-diirietNiiTiidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-1H- 300-302 isocromen-1-ona;
7-(4-ddopropNpiperazin-1-N)-3-(6,8-diirietNiiTiidazo[1,2-a]pirazin-2-N)- 260 (D) 1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[4-(2-iTietoxietN)piperazin-1- 192-194 il]-1H-isocromen-1 -ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[4-(2-iTietNpropN)piperazin-1- 243-245 il]-1H-isocromen-1 -ona
7-(4-ddobutNpiperazin-1-N)-3-(6,8-diirietNiiTiidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-1H- 279-281 isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(1,2,3,6-tetrahidropindin-4-N)- 266 (D) 1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(1-iTietN-1,2,3,6- 240-242 tetrahidropiridin-4-il)-lH-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(1-etN-1,2,3,6- 227-229 tetrahidropiridin-4-il)-lH-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[1-(propan-2-N)-1,2,3,6- 259-261 tetrahidropiridin-4-il]-lH-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[1-(2-iTietoxietN)-1,2,3,6- 174-176 tetrahidropiridin-4-il]-lH-isocromen-1-ona
7-(1-ddopropN-1,2,3,6-tetrahidropindin-4-N)-3-(6,8-diirietNiiTiidazo[1,2- 230-232 a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
7-(1-ddobutN-1,2,3,6-tetrahidropindin-4-N)-3-(6,8-diirietNiiTiidazo[1,2- 252-254 a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-propil-1,2,3,6- 226-228 415,3 95 tetrahidropiridin-4-il)-lH-isocromen-1-ona
* 96 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(piperidin-4-il)-1H-isocromen- 2 <|g 220 375,2
1 -ona
97 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]- 294 296
1H-isocromen-1-ona 432,3 98 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[1-(oxetan-3-il)-1,2,3,6- 253-255 429,3 tetrahidropiridin-4-il]-lH-isocromen-1-ona
99 3-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H- 221 226 396,3 isocromen-1 -ona -100 3-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)- 291-296 410,3 1H-isocromen-1-ona
101 3-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[4-(propan-2-il)piperazin- 286-291 438,3 1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-etilpiperazin-1-il)-1H- 229-234 424,3 102 isocromen-1 -ona
103 3-(2-metil-1,3-benzotiazol-6-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 271-276 378,3 104 3-(2-metil-1,3-benzotiazol-6-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen- 231-236 392,3 1 -ona
105 3-(2-metil-1,3-benzotiazol-6-il)-7-[4-(propan-2-il)piperazin-1-il]-1H- 222-228 420,3 isocromen-1 -ona
106 3-(2-metil-1,3-benzotiazol-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 229-235 378,2 3-(2-metil-1,3-benzotiazol-6-il)-7-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-1H- 222-228 434,4 107 isocromen-1 -ona
3-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1- 251-258 410,2 108 il]-1H-isocromen-1 -ona
109 3-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3-metilpiperazin-1- 251-258 410,2 il]-1H-isocromen-1 -ona
110 3-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,5- 261-266 424,2 dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3,4- 271-276 424,2 111 dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3,4- 270-275 424,2 112 dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
113
Figure imgf000093_0001
69-237933,2
114 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-metilpiperidin-4-il)-1H- 248-250 389,4 isocromen-1 -ona
115 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-etilpiperidin-4-il)-1H- 215-217 403,4 isocromen-1 -ona
3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-propilpiperidin-4-il)-1H- 204-206 417,5 116 isocromen-1 -ona
117 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[1-(propan-2-il)piperidin-4-il]- 227-229 417,5 1H-isocromen-1-ona
118 7-(1-cidobutilpiperidin-4-il)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H- ND 429,5 isocromen-1 -ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[1-(oxetan-3-N)piperidin-4-N]- 225-227 1H-isocromen-1-ona
7-[(3S)-4-etN-3-metNpiperazin-1-N]-3-(6-irietNiiTiidazo[1,2-a]pirazin-2-N)- 255-260 lH-isocromen-1-ona
7-[(3S)-3,4-dimetNpiperazin-1-N]-3-(6-irietNiiTiidazo[1,2-a]pirazin-2-N)- 250-255 lH-isocromen-1-ona
3-(6-metNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(4-iTietNpiperazin-1-N)-1H- 279-285 isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-(4-hidroxipiperidin-1-N)-1H- 290-292 isocromen-1-ona
7-[4-(dimetNairimo)pipendin-1-N]-3-(6,8-diiTietNiiTiidazo[1,2-a]pirazin-2- 274-276 il)-1H-isocromen-1 -ona
3-(6-metNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3R)-3-iTietNpiperazin-1-N]-1H- 219-225 isocromen-1-ona
7-[(3R)-4-etN-3-metNpiperazin-1-N]-3-(6-irietNiiTiidazo[1,2-a]pirazin-2-N)- 238-241 lH-isocromen-1-ona
7-[(3R)-3,4-dimetNpiperazin-1-N]-3-(6-irietNiiTiidazo[1,2-a]pirazin-2-N)- 243-248 lH-isocromen-1-ona
3-(6-metNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[4-(propan-2-N)piperazin-1-N]-1H- 231-236 isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-4-etN-3,5-dimetNpiperazin-1-N]-3-(6-iTietNiiTiidazo[1,2- 233-238 a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-4-(2-hidroxietN)-3,5-diirietNpiperazin-1-N]-3-(6- 241-245 metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(6-metNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3R,5S)-3,4,5-tniTietNpiperazin- 279-284 1-il]-1H-isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-4-ddobutN-3,5-dimetNpiperazin-1-N]-3-(6-iTietNiiTiidazo[1,2- ND a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
7-[(3R)-4-(2-hidroxietN)-3-irietNpiperazin-1-N]-3-(6-iTietNiiTiidazo[1,2- ND a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3S)-4-(2-hidroxietN)-3- ND metilpiperazin-1-il]-lH-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3S)-4-etN-3-iTietNpiperazin- 238-243 1-il]-1H-isocromen-1-ona
7-[(3S)-4-ddobutN-3-metNpiperazin-1-N]-3-(6,8-diirietNiiTiidazo[1,2- 277-282 a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3S)-3-iTietN-4- 249-254 propilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3S)-3-iTietN-4-(propan-2- 266-271 il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3S)-3-iTietN-4-(oxetan-3- 251-256 il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3R)-4-etN-3-iTietNpiperazin- 243-246 1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetNiiriidazo[1,2-a]pirazin-2-N)-7-[(3R)-3-iTietN-4- 251-256 propilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-4-(2-hidroxietil)-3- 256-261 434,2
9 142 metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
9 143 7-[(3R)-4-ciclobutil-3-metilpiperazin-1-il]-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2- 281-285 444,3
a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
9 144 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3-metil-4-(propan-2- 262-267 432,2
il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-4-(2-metoxietil)-3- 205-210 448,2
11 145 metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-4-(2-metoxietil)-3- 221-226 448,2
11 146 metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
9 147 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-4-etil-3,5- 253-258 432,2
dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
9 148 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,5-dimetil-4- 259-263 446,3
propilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,4,5- 261-266 418,2
9 149 trimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H- ND 390,2
6 150 isocromen-1-ona
6 151 3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H- 229-234 404,3
isocromen-1-ona
6 152 3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]- 206-211 404,3
1H-isocromen-1-ona
3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3-metilpiperazin-1-il]- 208-213 404,3
6 153 1H-isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2- 239-244 418,2
6 154 a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
9 155 7-[(3S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin- 233-238 418,2
il-il)-1H-isocromen-1-ona
4 156 3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona 268-270 361,3
4 157 3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1- 239-240 375,3
ona
9 158 3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,4,5- 235-238 432,2
trimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
12 159 3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4- 239-241 387,3
il)-1H-isocromen-1 -ona
o una sal, isotopólogo, estereoisómero, racemato, enantiómero, diaestereómero o su tautómero.
EJEMPLOS BIOLÓGICOS
Para describir con más detalle y ayudar en el entendimiento de la presente descripción, se ofrecen los siguientes ejemplos biológicos no limitantes para ilustrar más completamente el alcance de la descripción y no se deben interpretar como específicamente limitantes de su alcance. Se considera que entran dentro del alcance de la presente descripción dichas variaciones de la presente descripción que pueden ser ahora conocidas o después desarrolladas, que estarían por determinar dentro del alcance de un experto en la técnica, y como se reivindica en lo sucesivo. Estos ejemplos ilustran el ensayo de ciertos compuestos descritos en el presente documento in vitro y/o in vivo y demuestran la utilidad de los compuestos para tratar de AME potenciando la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm transcrito a partir del gen SMN2. Los compuestos de la fórmula (Ia1) potencian la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm transcrito a partir del gen SMN2 y aumentan los niveles de proteína Smn producida a partir del gen SMN2, y así se pueden usar para tratar AME en un sujeto humano en necesidad del mismo.
Ejemplo 1
Construcción de minigén SMN2
Preparación de las construcciones de minigén
Se amplificó por PCR ADN correspondiente a una región del gen SMN2 a partir del extremo 5' del exón 6 (ATAATTCCCCC) (SEQ ID NO. 14) y que termina en el resto de ácidos nucleicos 23 del exón 8 (CAGCAC) (SEQ ID NO. 15) usando los siguientes cebadores:
Cebador directo: 5'-CGCGGATCCATAATTCCCCCACCACCTC-3' (SEQ ID NO. 16)
Cebador inverso: 5'-CGCGGATCCGTGCTGCTCTATGCCAGCA-3' (SEQ ID NO. 17)
Se diseñó el extremo 5' de cada cebador para añadir un sitio de reconocimiento de la endonucleasa de restricción BamHI en tanto el extremo 5' del exón 6 (GGATCC) (SEQ ID NO. 18) como el extremo 3' después del 23° nucleótido del exón 8. Usando los sitios de reconocimiento de la endonucleasa de restricción BamHI, se clonó el fragmento de PCR en un derivado del vector pcDNA 3.1/Hygro original que se modificó como se describe en la publicación de patente de Estados Unidos US2005/0048549.
Se añadieron nuevas UTR al vector modificado usando el sitio HindlII y los sitios de restricción BamHI que comprenden una UTR 5'DEG:
5'-TAGCTTCTTACCCGTACTCCACCGTTGGCAGCACGATCGCACGTCCCACGTGAACCATTGGTAAAC- CCTG-3' (SEQ ID NO. 19) clonada en el vector pcDNA 3.1/Hygro modificado junto con un codón de iniciación en la dirección 5' del sitio de restricción BamHI y;
una UTR 3'DEG:
5'-ATCGAAAGTACAGGACTAGCCTTCCTAGCAACCGCGGGCTGGGAGTCTGAGACATCACTCAAGATATATGCTCG GTAACGTATGCTCTAGCCATCTAACTATTCCCTATGTCTTATAGGG-3' (SEQ ID NO. 20) clonada en el vector pcDNA 3.1/Hygro modificado usando el sitio de reconocimiento de la endonucleasa de restricción Notl y el sitio de reconocimiento de la endonucleasa de restricción Xhol con un codón de terminación inmediatamente en la dirección 3' del sitio de restricción Notl. Además, se clonó un gen de luciferasa de luciérnaga que carecía del codón de iniciación en el vector usando los sitios de restricción BamHI y Notl.
El minigén resultante comprende, en orden de 5' a 3': la UTR 5'-DEG, el codón de iniciación, seis nucleótidos adicionales que forman un sitio de restricción BamHI, los restos de ácidos nucleicos del exón 6, los restos de ácidos nucleicos del intrón 6 de SMN2, los restos de ácidos nucleicos del exón 7 de SMN2, los restos de ácidos nucleicos de intrón 7 de SMN2 y los primeros 23 restos de ácidos nucleicos del exón 8 de SMN2, seis nucleótidos adicionales que forman un sitio de restricción BamHI y el gen de luciferasa de luciérnaga que carece del codón de iniciación.
Se insertó un resto de adenina individual después del nucleótido 48 del exón 7 de SMN2 por mutagénesis dirigida al sitio. Esta construcción de minigén se denomina SMN2-A.
Los transcritos de SMN2 derivados de minigenes que contienen el exón 6 a 8 y los intrones intermedios resumen el corte y empalme de su pre-ARNm endógeno (Lorson et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1999, 96 (11), 6307). Se generó una construcción indicadora de corte y empalme alternativo de SMN2 que contenían los exones 6 a 8 y los intrones intermedios, seguido por un indicador de gen luciferasa. Las características destacadas de esta construcción son la ausencia del codón de iniciación en el gen de luciferasa, inactivación del codón de terminación (en el marco de lectura abierto que codifica la proteína SMN) del exón 7 por inserción de un nucleótido después del ácido nucleico 48 del exón 7 y la adición de un codón de iniciación (ATG) inmediatamente en la dirección 5' del exón 6. Se insertó una adenina individual (SMN2-A) después del resto nucleico 48 del exón 7.
El minigén SMN2 se diseñó de forma que el indicador de luciferasa estuviera en marco con el codón de iniciación ATG inmediatamente en la dirección 5' del exón 6 cuando el exón 7 está presente en el ARNm y el indicador de luciferasa está fuera del marco con el codón de iniciación ATG inmediatamente en la dirección 5' del exón 6 si el exón 7 de SMN2 se retira durante el corte y empalme del pre-ARNm. Además, en ausencia del exón 7, el marco de lectura abierto que empieza desde el codón de iniciación ATG inmediatamente en la dirección 5' del exón 6 contiene un codón de terminación en el fragmento del exón 8 de SMN. Así, en presencia de compuestos que aumentan la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm transcrito a partir del gen SMN2, se producen más transcritos que contienen el exón 7 y más indicador funcional. Se puede encontrar una ilustración esquemática de esta descripción en la figura 1.
Se proporciona en la figura 2a la secuencia de ADN del minigén a partir de la construcción SMN2-A de SEQ ID NO.
21. Se muestra una imagen de las subsecuencias del minigén SMN2-A en la figura 2b.
Ejemplo 2
Ensayo de RT-qPCR de corte y empalme de ARNm de minigén SMN2 en células cultivadas
Se usa la PCR cuantitativa con ensayo basado en transcripción inversa (RT-qPCR) para cuantificar el nivel de ARNm de longitud completa del minigén SMN2 que contiene el exón 7 de SMN2 en una línea celular HEK293H transfectada establemente con dicho minigén y se trata con un compuesto de prueba.
Materiales
Material Fuente
Células HEK293H ATCC, Catálogo N.°: CRL-1573
Tampón de lisis Cells-To-Ct Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), Catálogo N.°: 4399002 DMEM Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: 11960-044 Placas de fondo plano de 96 Becton Dickinson, Catálogo N.°: 353072
pocillos
Mezcla de enzimas de RT- Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), N.° de pieza: 4388520 PCR (también incluida en el kit AgPath-ID, Catálogo N.°: 4387391)
Tampón de RT-PCR Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), N.° de pieza: 4388519
(también incluido en el kit AgPath-ID, Catálogo N.°: 4387391)
Kit de RT-PCR AgPath-ID Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), Catálogo N.°: 4387391 One-Step
Ciclador térmico Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems) 7900HT Protocolo. Se siembran células HEK293H transfectadas establemente con la construcción de minigén SMN2-A descrita anteriormente (10.000 células/pocillo) en 200 pL de medio de cultivo celular (DMEM más 10 % de FBS, con 200 pg/mL de higromicina) en placas de fondo plano de 96 pocillos y la placa se giró inmediatamente para garantizar la apropiada dispersión de células, formando una monocapa uniforme de células. Se deja que las células se unan durante al menos 4-6 horas. Se diluyen los compuestos de prueba sucesivamente 3,16 veces en 100 % de DMSO para generar una curva de concentración de 7 puntos. Se añade una disolución de compuesto de prueba (1 pL, 200x en DMSO) a cada pocillo que contiene células y la placa se incuba durante 24 horas en una estufa de incubación de cultivos celulares (37 °C, 5 % de CO2, 100 % de humedad relativa). Se hacen 2 duplicados para cada concentración de compuesto de prueba. Entonces se lisan las células en tampón de lisis Cells-To-Ct y el lisado se almacena a -80 °C.
Se cuantifican el minigén SMN2-A de longitud completa y ARNm de GAPDH usando los siguientes cebadores y sondas proporcionados en la tabla 3. Se hibrida el cebador directo de SMN A (SEQ ID NO. 1) con una secuencia de nucleótidos en el exón 7 (nucleótido 22 a nucleótido 40), se hibrida el cebador inverso SMN A (SEQ ID NO. 2) con una secuencia de nucleótidos en la secuencia codificante de luciferasa de luciérnaga, se hibrida la sonda de SMN A (SEQ ID NO. 3) con una secuencia de nucleótidos en el exón 7 (nucleótido 50 a nucleótido 54) y el exón 8 (nucleótido 1 a nucleótido 21). La combinación de estos tres oligonucleótidos detecta solo los minigenes SMN1 o SMN2 (RT-qPCR) y no detectará genes SMN1 o SMN2 endógenos.
Tabla 3
Cebadores/Sondas Secuencia Fuente Cebador directo de SMN A SEQ ID NO. 1: GAAGGAAGGTGCTCACATT PTC1 Cebador inverso de SMN A SEQ ID NO. 2: TCTTTATGTTTTTGGCGTCTTC PTC1 Sonda directa de SMN A SEQ ID NO. 3: 6FAM-AAGGAGAAA TGCTGGCATAGAGCAGC-TAMRAPTC1 Sonda inversa de hGAPDH SEQ ID NO. 4: VIC-CGCCTGGTCACCAGGGCTGCT-TAMRA LTI2 Cebador directo de hGAPDH SEQ ID NO. 5: CAACGGATTTGGTCGTATTGG LTI2 Cebador inverso de hGAPDH SEQ ID NO. 6: TGATGGCAACAATATCCACTTTACC LTI2 1 Cebadores y sondas diseñados por PTC Therapeutics, Inc.; 2 Comercialmente disponible de Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen).
Se usan los cebadores directos e inversos de SMN a concentraciones finales de 0,4 pM. Se usa la sonda de SMN a una concentración final de 0,15 pM. Se usan los cebadores de GAPDH a concentraciones finales de 0,2 pM y la sonda a 0,15 pM.
Se prepara la mezcla de minigén SMN2-GAPDH (15 pL de volumen total) combinando 7,5 pL de 2x tampón RT-PCR, 0,4 pL de 25x mezcla de enzimas de RT-PCR, 0,75 pL de 20x mezcla de cebador-sonda de GAPDH, 4,0075 pL de agua, 2 pL de lisado celular diluido 10 veces, 0,06 pL de cebador directo de SMN 100 pM, 0,06 pL de cebador inverso de SMN 100 pM y 0,225 pL de sonda de SMN 100 pM.
Se lleva a cabo la PCR a las siguientes temperaturas durante el tiempo indicado: etapa 1: 48 °C (15 min); etapa 2: 95 °C (10 min); etapa 3: 95 °C (15 s); etapa 4: 60 °C (1 min); luego repetir las etapas 3 y 4 durante un total de 40 ciclos.
Cada mezcla de reacción contiene tanto el minigén SMN2-A como los conjuntos de cebadores/sonda de GAPDH (diseño de múltiplex), que permite la medición simultánea de los niveles de dos transcritos.
Se generan dos productos de corte y empalme de SMN a partir del minigén SMN2. El primer producto de corte y empalme que contiene el exón 7, correspondiente a ARNm de SMN2 de longitud completa, se refiere en el presente documento usando el término "minigén SMN2 FL". El segundo producto de corte y empalme que carece del exón 7 se refiere en el presente documento usando el término "minigén SMN2 A7".
El aumento del ARNm de minigén SMN2 FL con respecto a aquél en células tratadas con control de vehículo se determina a partir de los datos de PCR en tiempo real usando un método de AACt modificado (como se describe en Livak y Schmittgen, Methods, 2001,25:402-8). La eficiencia de amplificación (E) se calcula a partir de la pendiente de la curva de amplificación para el minigén SMN2 FL y GAPDH individualmente. Las abundancias de minigén SMN2 FL y GAPDH se calculan entonces como (1 E)-Ct, donde Ct es el valor umbral para cada amplicón. La abundancia del minigén SMN2 FL se normaliza a la abundancia de GAPDH. La abundancia del minigén SMN2 FL normalizada a partir de las muestras tratadas con el compuesto de prueba se divide entonces entre la abundancia normalizada del minigén SMN2 FL de células tratadas con vehículo para determinar el nivel de ARNm de SMN2 FL con respecto al control de vehículo.
Resultados. Como se observa en la figura 3, las células tratadas con el compuesto 65 (figura 3a) y el compuesto 69 (figura 3b) aumentaron el ARNm de minigén SMN2 FL a bajas concentraciones. Los dos compuestos de prueba restauraron completamente la inclusión del exón 7 con respecto a las células sin tratar.
Para los compuestos de la fórmula (I) o una forma de los mismos descrita en el presente documento, la tabla 4 proporciona la CE-i,5x para la producción de ARNm de SMN2 de longitud completa que se obtuvo a partir de los datos de concentración de 7 puntos generados para cada compuesto de prueba según el procedimiento delejemplo biológico 2. El término "CE-i,5x para la producción de ARNm de SMN2 de longitud completa" se define como la concentración de compuesto de prueba que es eficaz en aumentar la cantidad de ARNm de SMN2 de longitud completa hasta un nivel 1,5 veces mayor con respecto a aquella en células tratadas con vehículo. Una CE-i,5x para la producción de ARNm de SMN2 de longitud completa entre > 3 pM y < 30 pM se indica por una estrella (*), una CE-i,5x entre > 1 pM y < 3 pM se indica por dos estrellas (**), una CE-i,5x entre > 0,3 pM y < 1 pM se indica por tres estrellas (***), una CE-i,5x entre > 0,1 pM y < 0,3 pM se indica por cuatro estrellas (****) y una CE-i,5x< 0,1 pM se indica por cinco estrellas (*****).
Tabla 4
Comp
Figure imgf000098_0001
Comp CE1 Comp CEl,5X
1 * * 54 * * * 107 * * *
2 * * * 55 * * * * 108 * * * * *
3 * * * * * 56 * * * * * 109 * * * * *
4 * 57 * * * * * 110 * * *
5 * * 58 * * * * * 111 * * * *
6 * * 59 * * 112 * *
7 * * 60 * * * 113 * * * * *
8 * 61 * 114 * * * * *
9 * 62 * * * * * 115 * * * * *
10 * * 63 * * * * * 116 * * * * *
11 * * * 64 * * * * * 117 * * * * *
* * * 65 * * * * * 118 * * * * * * 66 * * * * * 119 * * *
* * 67 * * * 120 * * * * *
* 68 * * * * * 121 * * * * *
* * * 69 * * * * * 122 * * * * * * * * 70 * * * * 123 * * * * * 71 * * * * * 124 * * * * *
* 72 * * * * * 125 * * * * *
* 73 >£ $>};>{(»(c 126 * * * * *
* 74 * * * * * 127 * * * * *
* * 75 * * * * * 128 * * * * *
+ * 76 * * * * * 129 * * * * *
* * * * 77 * * * * * 130 * * * * *
♦ ♦ 78
Figure imgf000099_0001
131
Figure imgf000099_0002
* * 79 * * * * * 132 * * * * *
* 8 0 * * * * * 133 * * * * *
+ *♦ 81 * * * * * 134 * * * * * * * * 82 * * * * * 135 * * * * * * * * * * 83 * * * * 136 * * * * * * * * * * 84 * * * * 137 * * * * * ♦ * * 85 * * * * 138 * * * * * 86 * * * * * 139 * * * * * * 87 * * * * * 140 * * * * * * * * 88 * * * * * 141 * * * * *
* 89 * * * * * 142 * * * * *
* * 90 * * * * * 143 * * * * *
* 91 * * * * * 144 * * * * *
* * 92 * * * * * 145 * * * * *
* * * 93 * * * * * 146 * * * * * * * 94 * * * * * 147 * * * * * * * * * 95 * * * * * 148 * * * * * * * * * * 96 * * * * * 149 * * * * *
* 97 * * 150 * * * * * 4 5 44 44 98 4 4 44 4 151 4 4 44 4 4 6 * * * * 99 44 4 44 152 44 4 44
4 7 * 100 44 44 4 153 4 4 44 4
4 8 44 4 101 44 4 4 154 4 4 44 4
4 9 4 102 44 4 4 155 4 4 44 4
5 0 4 44 4 4 103 4 4 44 4 156 4 44 4 4
51 44 104 44 4 4 157 4 44 4 4
52 44 44 105 44 4 4 158 4 4 44 4
53 44 4 106 44 159 4 4 44 4
Ejemplo 3
Ensayo de corte y empalme de RT-qPCR de ARNm de SMN2 endógeno en células cultivadas
Se usa el ensayo basado en PCR cuantitativa con transcripción inversa (RT-qPCR) para cuantificar los niveles de ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 en células primarias y líneas celulares que contienen el gen SMN2 tratado con un compuesto de prueba.
Materiales
Material Fuente
Células humanas de AME GM03813 (Coriell Institute)
tipo 1
Tampón de lisis Cells-To-Ct Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), Catálogo N.°: 4399002 DMEM Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: 11960-044 Placas de fondo plano de 96 Becton Dickinson, Catálogo N.°: 353072
pocillos
Mezcla de enzimas de RT- Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), N.° de pieza: 4388520 PCR (también incluido en el kit AgPath-ID, Catálogo N.°: 4387391)
Tampón de RT-PCR Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), N.° de pieza: 4388519
(también incluido en el kit AgPath-ID, Catálogo N.°: 4387391)
Kit de RT-PCR AgPath-ID Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), Catálogo N.°: 4387391 One-Step
Ciclador térmico Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems) 7900HT Protocolo. Se siembran células de paciente con AME GM03813 (5.000 células/pocillo) en 200 j L de medio de cultivo celular (DMEM más 10 % de FBS) en placas de fondo plano de 96 pocillos y la placa se gira inmediatamente para garantizar la apropiada dispersión de las células, formando una monocapa uniforme de células. Se deja que las células se unan durante al menos 4-6 horas. Se diluyen los compuestos de prueba sucesivamente 3,16 veces en 100 % de DMSO para generar una curva de concentración de 7 puntos. Se añade una disolución de compuesto de prueba (1 j L, 200x en DMSO) a cada pocillo de ensayo y se añade 1 j L de DMSO a cada pocillo de control. Se incuba la placa durante 24 horas en una estufa de incubación de cultivo celular (37 °C, 5 % de CO2, 100 % de humedad relativa). Entonces se lisan las células en tampón de lisis Cells-To-Ct y se almacena el lisado a -80 °C.
Se identifican productos de corte y empalme específicos de SMN2 y ARNm de GAPDH usando los siguientes cebadores y sondas en la tabla 5. Se hibrida el cebador directo de SMN FL B (SEQ ID NO. 7) con una secuencia de nucleótidos en el exón 7 (nucleótido 32 a nucleótido 54) y el exón 8 (nucleótido 1 a nucleótido 4), se hibrida el cebador directo de SMN A7 B (SEQ ID NO. 8) con una secuencia de nucleótidos en el exón 6 (nucleótido 87 a nucleótido 111) y el exón 8 (nucleótido 1 a nucleótido 3), se hibrida el cebador inverso de SMN B (SEQ ID NO. 9) con una secuencia de nucleótidos en el exón 8 (nucleótido 39 a nucleótido 62), se hibrida la sonda directa de SMN B (SEQ ID NO. 10) con una secuencia de nucleótidos en el exón 8 (nucleótido 7 a nucleótido 36). Estos cebadores y sonda se hibridan con secuencias de nucleótidos comunes para ARNm de SMN1 y SMN2 humano. Puesto que las células del paciente con AME usadas en el ejemplo 3 contienen solo el gen SMN2, RT-qPCR solo puede cuantificar ARNm de SMN2 de longitud completa y A7.
Tabla 5
Cebador/Sonda Secuencia Fuente
Cebador directo de SMN SEQ ID NO. 7: GCTCACATTCCTTAAATTAAGGAGAAA PTC1 FL B
Cebador directo de SMN SEQ ID NO. 8: TGGCTATCATACTGGCTATTATATGGAA PTC1 A7 B
Cebador inverso de SMN SEQ ID NO. 9: TCCAGATCTGTCTGATCGTTTCTT PTC1 B
Sonda directa de SMN B SEQ ID NO. 10: 6 FAM-CTGGCATAGAGCAGCACTAAATGACACCAC- PTC1 TAMRA
Sonda directa de SEQ ID NO. 4: VIC-CGCCTGGTCACCAGGGCTGCT-TAMRA LTI2 hGAPDH
Sonda directa de SEQ ID NO. 5: CAACGGATTTGGTCGTATTGG LTI2 hGAPDH
Cebador inverso de SEQ ID NO. 6: TGATGGCAACAATATCCACTTTACC LTI2 hGAPDH
1 Cebadores y sondas diseñados por PTC Therapeutics, Inc.; 2 Comercialmente disponible de Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen).
Se usan los cebadores directos e inversos de SMN a concentraciones finales de 0,4 pM. Se usa la sonda de SMN a una concentración final de 0,15 pM. Se usan los cebadores de GAPDH a concentraciones finales de 0,1 pM y la sonda a 0,075 pM. Se usó el kit de RT-PCR One-Step como la mezcla de PCR en tiempo real.
Se prepara la mezcla de SMN-GAPDH (10 pL de volumen total) combinando 5 pL de 2x tampón de RT-PCR, 0,4 pL de 25x mezcla de enzimas de RT-PCR, 0,25 pL de 20x mezcla de cebador-sonda de GAPDH, 1,755 pL de agua, 2,5 pL de lisado celular, 0,04 pL de cebador directo de SMN FL o SMN A7 100 pM, 0,04 pL de cebador inverso de SMN 100 pM y 0,015 pL de sonda 100 pM.
Se lleva a cabo la PCR a las siguientes temperaturas durante el tiempo indicado: etapa 1: 48 °C (15 min); etapa 2: 95 °C (10 min); etapa 3: 95 °C (15 s); etapa 4: 60 °C (1 min); luego, repetir las etapas 3 y 4 durante un total de 40 ciclos.
Cada mezcla de reacción contiene o bien los conjuntos de cebadores/sonda de SMN2 FL y GAPDH o bien SMN2 A7 y GAPDH (diseño de múltiplex), que permite la medición simultánea de los niveles de dos transcritos.
El gen SMN2 endógeno da lugar a dos ARNm alternativamente cortados y empalmados. El ARNm de SMN2 de longitud completa que contiene el exón 7 y se refiere en el presente documento usando el término "SMN2 FL". El ARNm truncado que carece del exón 7 y se refiere en el presente documento usando el término "SMN2 A7".
Se determinan el aumento de SMN2 FL y la disminución en el ARNm de SMN2 A7 con respecto a aquellos en células tratadas con control de vehículo a partir de los datos de PCR en tiempo real usando un método de AACt modificado (como se describe en Livak y Schmittgen, Methods, 2001, 25:402-8). La eficiencia de amplificación (E) se calcula a partir de la pendiente de la curva de amplificación para SMN2 FL, SMN2 A7 y GAPDH individualmente. Las abundancias de SMN2 FL, SMN2 A7 y GAPDh se calculan entonces como (1 E)'Ct, donde Ct es el valor umbral para cada amplicón. Las abundancias de SMN2 FL y SMN2 A7 se normalizaron a la abundancia de GAPDH. Las abundancias normalizadas de SMN2 FL y SMN2 A7 de las muestras tratadas con compuesto de prueba se dividen entonces entre las abundancias normalizadas de SMN2 FL y SMN2 A7, respectivamente, a partir de las células tratadas con vehículo para determinar los niveles de ARNm de SMN2 FL y SMN2 A7 con respecto al control de vehículo.
Resultados. Como se observa en la figura 4, las células tratadas con concentraciones crecientes del compuesto 65 (figura 4a) y compuesto 69 (figura 4b) contienen progresivamente más ARNm de SMN2 FL y menos ARNm de SMN2 A7 que las tratadas con vehículo, que indica una corrección del sitio de corte y empalme alternativo de SMN2.
Ejemplo 4
Ensayo de corte y empalme de RT-PCR semicuantitativa de punto final de ARNm de SMN2 endógeno en células cultivadas
Se usa el ensayo de corte y empalme de PCR con transcripción inversa de punto final para visualizar y cuantificar los niveles de ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 en células primarias y líneas celulares que contienen el gen SMN2 se tratado con un compuesto de prueba.
Materiales
Material Fuente
Células humanas de AME tipo 1 GM03813 (Coriell Institute)
Tampón de lisis Cells-To-Ct Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems),
Catálogo N.°: 4399002
DMEM Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°:
11960-044
Placas de fondo plano de 96 pocillos Becton Dickinson, Catálogo N.°: 353072
Platinum Taq HiFi DNA Polymerase SuperMix Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°:
11304-016
Kit enzimático iScript RT BioRad: Catálogo N.°: 170-8890
E-Gel de bromuro de etidio - 2 % de agarosa en Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: doble peine de 48 pocillos G8008-02
Sistema de documentación de gel Sistema de obtención de imágenes UVP Gel Doc It 310
Protocolo. Se siembran células de paciente con AME GM03813 (5.000 células/pocillo) en 200 pL de medio de cultivo celular (DMEM más 10 % de FBS) en placas de fondo plano de 96 pocillos y la placa se gira inmediatamente para garantizar la apropiada dispersión de células, formando una monocapa uniforme de células. Se deja que las células se unan durante al menos 4-6 horas. Se diluyen los compuestos de prueba sucesivamente 3,16 veces en 100 % de DMSO para generar una curva de concentración de 7 puntos. Se añade una disolución de compuesto de prueba (1 pL, 200x en DMSO) a cada pocillo de ensayo y se añade 1 pL de DMSO a cada pocillo de control. La placa se incuba durante 24 horas en una estufa de incubación de cultivo celular (37 °C, 5 % de CO2, 100 % de humedad relativa). Entonces se lisan las células en tampón de lisis Cells-To-Ct y se almacena el lisado a -80 °C.
Se identifican ARNm de SMN FL y A7 usando los siguientes cebadores en la tabla 6. Estos cebadores se hibridan con una secuencia de nucleótidos en el exón 6 (Directo de SMN C, SEQ ID NO. 11) (nucleótido 43 a nucleótido 63) y el exón 8 (Inverso de SMN C, SEQ ID NO. 12) (nucleótido 51 a nucleótido 73) común a ARNm de SMN1 y SMN2 humano. Puesto que las células del paciente con AME usadas en el ejemplo 4 contienen solo el gen SMN2, RT-PCR solo puede visualizar y cuantificar ARNm de SMN2 de longitud completa y de SMN2 A7.
Tabla 6
Primer Secuencia Fuente
Directo de SMN C SEQ ID NO. 11: GATGCTGATGCTTTGGGAAGT PTC1
Inverso de SMN C SEQ ID NO. 12: CGCTTCACATTCCAGATCTGTC PTC1
1 Cebadores diseñados por PTC Therapeutics, Inc.
Para sintetizar ADNc, se combinan 5 pL de lisado, 4 pL de 5x mezcla de reacción iScript, 1 pL de transcriptasa inversa y 10 pL de agua y se incuban 5 min a 25 °C seguido por 30 min a 42 °C, seguido por 5 min a 85 °C. Se almacena la disolución de ADNc a -20 °C.
Para realizar PCR de punto final, se combinan 5 pL de ADNc, 0,2 pL de cebador directo 100 pM, 0,2 pL de cebador inverso 100 pM y 22,5 pL de supermezcla de polimerasa en una placa de PCR de 96 pocillos con semifaldón. Se lleva a cabo PCR a las siguientes temperaturas durante el tiempo indicado: etapa 1: 94 °C (2 min), etapa 2: 94 °C (30 s), etapa 3: 55 °C (30 s), etapa 4: 68 °C (1 min), luego repetir las etapas 2 a 4 durante un total de 33 ciclos, luego mantener a 4 °C.
Se separan electroforéticamente 10 pL de cada muestra de PCR en un E-Gel de 2 % de agarosa durante 14 minutos, se tiñe con reactivos de tinción de a Dn bicatenario (ADNbc) (por ejemplo, bromuro de etidio) y se visualiza usando un dispositivos de obtención de imágenes de gel.
Resultados. Como se observa en la figura 5, las células tratadas con concentraciones crecientes del compuesto 65 (figura 5a) y compuesto 69 (figura 5b) contienen progresivamente más ARNm de SMN2 FL y menos ARNm de SMN2 A7, que indica una corrección del sitio de corte y empalme alternativo de SMN2.
Ejemplo 5
Ensayo de corte y empalme de RT-qPCR de ARNm de SMN2 en tejidos de animal
Se usa el ensayo basado en PCR cuantitativa con transcripción inversa (RT-qPCR) para cuantificar los niveles del ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 en tejidos de ratones tratados con el compuesto de prueba.
Materiales
Material *I Fuente
Tejidos de ratones con AME The Jackson Laboratory, cepa N.°: 008714 (B6,129-Smn1tm5(Smn1/SMN2)Mrph/J) de alelo C/C
Tejidos de ratones con AME The Jackson Laboratory, cepa N.°: 005025 (FVB.Cg-Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb A7 Tg(SMN2)89Ahmb Smn1tmIMsd/J)
Mezcla de enzimas de RT- Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), N.° de pieza: 4388520 PCR (también incluido en el kit AgPath-ID, Catálogo N.°: 438739l)
Tampón de RT-PCR Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), N.° de pieza: 4388519
(también incluido en el kit AgPath-ID, Catálogo N.°: 4387391)
Kit de RT-PCR AgPath-ID Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), Catálogo N.°: 4387391 One-Step
Cebadores y sondas de Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), Catálogo N.°: GAPDH de ratón 4352339E
Reactivo de lisis QIAzol Qiagen Catálogo N.°: 79306
Minikit RNeasy Lipid Tissue Qiagen Catálogo N.°: 74804
Perla de acero inoxidable de 5 Qiagen Catálogo N.°: 69989
mm
TissueLyser II Qiagen Catálogo N.°: 85300
Ciclador térmico Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems) 7900HT Protocolo. Se tratan ratones con AME de alelo C/C por sonda nasogástrica oral dos veces al día (BID) durante 10 días con compuestos de prueba resuspensos en 0,5 % de HPMC y 0,1 % de Tween-80. Se recogieron las muestras de tejido y se congelaron criogénicamente para purificación de ARN.
Se homogeneizan muestras de tejido (20-40 mg) en reactivo de lisis QIAzol durante 2 minutos a 20 Hz en TissueLyser II usando una perla de acero inoxidable. Después de la adición de cloroformo, se separa el homogeneizado en fases acuosas y orgánicas por centrifugación. Se extrae el ARN repartido a la fase acuosa superior y se añade etanol para proporcionar condiciones de unión apropiadas. Entonces se aplica la muestra a la columna de centrifugación de RNeasy del minikit de RNeasy, donde se une ARN total a la membrana. Se eluye el ARN en agua sin RNasa, luego se guarda a -20 °C y posteriormente se analiza usando RT-qPCR de TaqMan en el ciclador térmico 7900HT. Se diluye ARN total diez veces y se añaden 2,5 pL de la muestra diluida a la mezcla de RT-qPCR de TaqMan.
Se identifican los productos de corte y empalme de SMN2 usando los siguientes cebadores y sondas en la tabla 7. Se hibrida el cebador directo de SMN FL B (SEQ ID NO. 7) con una secuencia de nucleótidos en los exones 7 y 8, se hibrida el cebador directo de SMN A7 B (SEQ ID NO. 8) con una secuencia de nucleótidos en los exones 6 y 8, se hibrida el cebador inverso de SMN B (SEQ ID NO. 9) con una secuencia de nucleótidos en el exón 8, se hibrida la sonda de SMN B (SEQ ID NO. 10) con una secuencia de nucleótidos en el exón 8. Estos cebadores y sonda se hibridan con secuencias de nucleótidos comunes para el ARNm de SMN1 y SMN2 humano. Puesto que las células del paciente con AME usadas en el ejemplo 5 contienen solo el gen SMN2, RT-qPCR solo puede cuantificar ARNm de SMN2 de longitud completa y A7.
Tabla 7
Cebador/sonda Secuencia Fuente Cebador directo de SMN FL B SEQ ID NO. 7: GCTCACATTCCTTAAATTAAGGAGAAA PTC1 Cebador directo de SMN A7 B SEQ ID NO. 8: TGGCTATCATACTGGCTATTATATGGAA PTC1
Cebador inverso de SMN B SEQ ID NO. 9: TCCAGATCTGTCTGATCGTTTCTT PTC1 Sonda inversa de SMN B SEQ ID NO. 10: 6 FAM-PTC1
CTGGCATAGAGCAGCACTAAATGACACCAC- TAMRA
1 Cebadores y sondas diseñados por PTC Therapeutics, Inc.
Se usan los cebadores directos e inversos de SMN a concentraciones finales de 0,4 pM. La sonda de SMN se usa a una concentración final de 0,15 pM. La mezcla de SMN-GAPDH (10 pL de volumen total) se prepara combinando 5 pL de 2x tampón de RT-PCR, 0,4 pL de 25x mezcla de enzimas de RT-PCR, 0,5 pL de 20x mezcla de cebador-sonda de GAPDH, 1,505 pL de agua, 2,5 pL de disolución de ARN, 0,04 pL de cebador directo 100 pM, 0,04 pL de cebador inverso 100 pM y 0,015 pL de sonda de SMN 100 pM.
Cada ciclo de PCR se llevó a cabo a las siguientes temperaturas durante el tiempo indicado: etapa 1: 48 °C (15 min); etapa 2: 95 °C (10 min); etapa 3: 95 °C (15 s); etapa 4: 60 °C (1 min); luego repetir las etapas 3 y 4 durante un total de 40 ciclos.
Cada mezcla de reacción contiene o bien los conjuntos de cebadores/sonda de SMN2 FL y mGAPDH o bien SMN2 A7 y mGAPDH (diseño de múltiplex), que permite la medición simultánea de los niveles de dos transcritos.
Se determinan el aumento de SMN2 FL y la disminución en el ARNm de SMN2 A7 con respecto a aquellos en tejidos de animales tratados con control de vehículo a partir de los datos de PCR en tiempo real usando un método de AACt modificado (como se describe en Livak y Schmittgen, Methods, 2001,25:402-8). La eficiencia de amplificación (E) se calcula a partir de la pendiente de la curva de amplificación para SMN2 FL, SMN2 A7 y GAPDH individualmente. Las abundancias de SMN2 FL, SMN2 A7 y GAPDH se calculan entonces como (1 E)'Ct, donde Ct es el valor umbral para cada amplicón. Las abundancias de SMN2 FL y SMN2 A7 se normalizaron a la abundancia de GAPDH. Las abundancias normalizadas de SMN2 FL y SMN2 A7 de las muestras tratadas con compuesto de prueba se dividen entonces entre las abundancias normalizadas de SMN2 FL y SMN2 A7, respectivamente, a partir de las células tratadas con vehículo para determinar los niveles de ARNm de SMN2 FL y SMN2 A7 con respecto al control de vehículo.
Resultados. Como se observa en la figura 6 , los tejidos de animales tratados con el compuesto 65 (figura 6a) y compuesto 69 (figura 6b) contienen sustancialmente más ARNm de SMN2 FL y menos ARNm de SMN2 A7 que los tratados con vehículo, que indica una corrección del sitio de corte y empalme alternativo de SMN2.
Ejemplo 6
Ensayo de corte y empalme de RT-PCR semicuantitativa de punto final de ARNm de SMN2 endógeno en tejidos de animal
Se usa el ensayo de corte y empalme de PCR con transcripción inversa de punto final (RT-PCR) para cuantificar los niveles de la ARNm de SMN2 de longitud completa y A7 en tejidos de ratones tratados con compuesto de prueba.
Materiales
Material Fuente
Tejidos de ratones con AME de alelo The Jackson Laboratory, cepa N.°: 008714 (B6,129-C/C
Smn1 tm5(Smn1/SMN2)Mrph/J)
Tejidos de ratones con AME AExón 7 The Jackson Laboratory, cepa N.°: 005025 (FVB.Cg-Tg(SMN2*delta7)
4299Ahmb Tg(SMN2)89Ahmb Smn1tm1Msd/J)
Kit de lípidos RNeasy de Qiagen Qiagen Catálogo N.°: 74804
Platinum Taq HiFi DNA Polymerase Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: 11304-016 SuperMix
Kit enzimático iScript RT BioRad Catálogo N.°: 170-8890
Placa de PCR de 96 pocillos con Eppendorf Catálogo N.°: 951020389
semifaldón Twin.tec
E-Gel de bromuro de etidio - 2 % de Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: G8008-02 agarosa en doble peine de 48 pocillos
Sistema de documentación de gel Sistema de obtención de imágenes UVP Gel Doc It 310
Protocolo. Se tratan ratones con AME de alelo C/C por sonda nasogástrica oral BID durante 10 días con compuestos de prueba en 0,5 % de HPMC y 0,1 % de Tween-80. Se recogen las muestras de tejido y se congelan criogénicamente para purificación de ARN.
Se homogeneizan muestras de tejido (20-40 mg) en reactivo de lisis QIAzol durante 2 minutos a 20 Hz en TissueLyser II usando una perla de acero inoxidable. Después de la adición de cloroformo, se separa el homogeneizado en fases acuosas y orgánicas por centrifugación. Se extrae el ARN repartido a la fase acuosa superior y se añade etanol para proporcionar condiciones de unión apropiadas. Entonces se aplica la muestra a la columna de centrifugación de RNeasy del minikit de RNeasy, donde se une ARN total a la membrana. Se eluye el ARN en agua sin RNasa, luego se guarda a -20 °C.
Se identifican los productos de corte y empalme de SMN2 usando los siguientes cebadores de amplificación en la tabla 8. Estos cebadores se hibridan con una secuencia de nucleótidos en el exón 6 (SMN Forward D, SEQ ID NO.
13) (nucleótido 22 a nucleótido 46) y el exón 8 (SMN Reverse C, SEQ ID NO. 12), común a ARNm de SMN1 y SMN2 humano.
Tabla 8
Cebador Secuencia Fuente Directo de SMN D SEQ ID NO. 13: PTC1
ATATGTCCAGATTCTCTTGATGATG
Inverso de SMN C SEQ ID NO. 12: CGCTTCACATTCCAGATCTGTC PTC1
1Cebadores diseñados por PTC Therapeutics, Inc.
Para sintetizar ADNc, se combinan 1 pL de disolución de ARN (25-50 ng), 4 pL de 5x mezcla de reacción iScript, 1 pL de transcriptasa inversa y 10 pL de agua y se incuba a 25 °C durante 5 min, seguido por 42 °C durante 30 min seguido por 85 °C durante 5 min. Se almacena la disolución de ADNc a -20 °C.
Para realizar PCR de punto final, se combinan 5 pL de ADNc, 0,2 pL de cebador directo 100 pM, 0,2 pL de cebador inverso 100 pM y 22,5 pL de supermezcla de polimerasa en una placa de PCR con semifaldón de 96 pocillos. Se lleva a cabo PCR a las siguientes temperaturas durante el tiempo indicado: etapa 1: 94 °C (2 min), etapa 2: 94 °C (30 s), etapa 3: 55 °C (30 s), etapa 4: 68 °C (1 min), luego repetir las etapas 2 a 4 durante un total de 33 ciclos, luego mantener a 4 °C.
Se separan electroforéticamente 10 pL de cada muestra de PCR sobre un E-gel de 2 % de agarosa durante 14 minutos teñido con reactivos de tinción de ADNbc (por ejemplo, bromuro de etidio) y se visualizan usando un dispositivo de obtención de imágenes en gel.
Resultados. Como se observa de la figura 7, los tejidos de ratones tratados con concentraciones crecientes del compuesto 65 contienen progresivamente más ARNm de SMN2 FL y menos ARNm de SMN2 A7, que indica una corrección del sitio de corte y empalme alternativo de SMN2.
Ejemplo 7
Ensayo de proteínas Smn en células cultivadas
Se usa el ensayo de HTRF (fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo) de SMN para cuantificar el nivel de proteína Smn en células de fibroblasto de pacientes con AME tratadas con compuestos de prueba. Los resultados del ensayo se muestran en la tabla 9.
Materiales
Material *1 Fuente
Células humanas de EMA tipo GM03813 (Coriell Institute)
1
Mezcla de inhibidores de la Roche Applied Science Catálogo N.°: 11836145001
proteasa
Anti-SMN d2 Blue cap Cisbio, Catálogo N.°: 63IDC002-SMN
Criptato anti-SMN Red cap Cisbio, Catálogo N.°: 63IDC002-SMN
Tampón de reconstitución de Cisbio, Catálogo N.°: 63IDC002-SMN-Buffer
SMN
DMEM Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: 11960-044
Tampón de lisis RIPA Tris-HCl 20 mM pH 7,5, NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, 1 % de NP-40, 1 % de desoxicolato de sodio
Tampón diluyente Tris-HCl 20 mM pH 7,5, NaCl 150 mM
Lector de placas Envision Perkin Elmer Modelo No.: 2103
Protocolo. Se descongelan las células y se cultivan en DMEM-10 % de FBS durante 72 horas. Se tripsinan las células, se cuentan y se resuspenden hasta una concentración de 25.000 células/mL en DMEM-10 % de FBS. Se siembran las suspensiones de células a 5.000 células por pocillo en una placa de microtitulación de 96 pocillos y se incuban durante 3 a 5 horas. Para proporcionar una señal de control, tres (3) pocillos en la placa de 96 pocillos no reciben células y, así sirven de pocillos de control de blanco. Se diluyen los compuestos de prueba sucesivamente 3,16 veces en 100 % de DMSO para generar una curva de concentración de 7 puntos. Se transfiere 1 pL de disolución de compuesto de prueba a pocillos que contienen células, y las células se incuban durante 48 horas en una estufa de incubación de cultivo celular (37 °C, 5 % de CO2, 100 % de humedad relativa). Se establecen las muestras por triplicado para cada concentración de compuesto de prueba. Después de 48 horas, se retira el sobrenadante de los pocillos y se añaden 25 pL del tampón de lisis RIPA, que contiene inhibidores de la proteasa, a los pocillos y se incuban con agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añaden 25 pL del diluyente y luego se transfieren 35 pL del lisado resultante a una placa de 384 pocillos, donde cada pocillo contiene 5 pL de la disolución de anticuerpo (dilución 1:100 de anti-SMN d2 y criptato anti-SMN en tampón de reconstitución de SMN). La placa se centrifuga durante 1 minuto para llevar la disolución al fondo de los pocillos, luego se incuban durante la noche a temperatura ambiente. Se mide la fluorescencia para cada pocillo de la placa a 665 nm y 620 nm en un lector de placas multimarca EnVision (Perkin-Elmer).
Se calcula la señal de fluorescencia normalizada para cada pocillo de muestra, blanco y control de vehículo dividiendo la señal a 665 nm entre la señal a 620 nm. El normalizar la señal explica la posible extinción de fluorescencia debido al efecto de matriz del lisado. El valor de AF (una medida de la abundancia de proteína Smn como porcentaje de valor) para cada pocillo de muestra se calcula restando la fluorescencia promedio normalizada para los pocillos de control de blanco de la fluorescencia normalizada para cada pocillo de muestra, luego dividiendo esta diferencia entre la fluorescencia promedio normalizada para los pocillos de control de blanco y multiplicando el valor resultante por 100. El valor de AF para cada pocillo de muestra representa la abundancia de proteína Smn de las muestras tratadas con compuesto de prueba. El valor de AF para cada pocillo de muestra se divide entre el valor de AF para los pocillos de control de vehículo para calcular las veces de aumento en la abundancia de proteína Smn con respecto al control de vehículo.
Resultados. Como se observa de la figura 8, las células de fibroblasto de pacientes con AME tipo 1 tratadas con el compuesto 65 (figura 8a) y compuesto 69 (figura 8b) muestran un aumento dependiente de la dosis en la expresión de proteínas Smn como se mide por el ensayo de HTRF de SMN.
Para compuestos de la fórmula (I) o una forma de los mismos descritos en el presente documento, la tabla 9 proporciona la CE1,5x para la expresión de proteínas Smn que se obtuvieron a partir de los datos de concentración de 7 puntos generados para cada compuesto de prueba según el procedimiento del ejemplo biológico 7. El término "CE1,5x para la expresión de proteínas Smn" se define como esa concentración de compuesto de prueba que es eficaz en producir 1,5 veces la cantidad de proteína Smn en una célula de fibroblasto de pacientes con AME en comparación con la cantidad producida a partir del control de vehículo de DMSO. Una CE1,5x para la expresión de proteínas Smn entre > 3 pM y < 10 pM se indica por una estrella (*), una CE1,5x entre > 1 pM y < 3 pM se indica por dos estrellas (**), una CE1,5x entre > 0,3 pM y < 1 pM se indica por tres estrellas (***) y una CE1,5x< 0,3 pM se indica por cuatro estrellas
Tabla 9
Comp CE1 Comp CE1 Comp CE1
85 4=4=4= 127 ****
24 *** 87 4= 4= 4= 4= 128 **4=4=
30 88 4=4= 4=4= 129 ****
31 ** 89 4= 4= 4= 4= 130 **4=4=
34 * 90 4= 4= 4= 4= 131 **4=4=
43 * ** 91 4=4=4= 132 ****
46 *** 92 4=4=*4= 133 ****
50 ** 93 4= 4= 4= 4= 134 * * * *
52 * 94 *** 135 **4=*
56 **** 95 4= 4= 4= 4= 136 ***4=
57 * ** 96 4= 4=4=4= 137 ****
58 **** 98 4=4=4= 138 ***
62 * * * * 99 *4=* 139 *4=
63 100 *4=4= 140 **4=4=
64 **** 101 4=4=* 141 ****
65 **** 103 4=4=4=* 142 ****
66 108 4=4=*4= 143 **4=*
67 ** 109 4=4=* 144 ***4=
68 4= 110 *4=* 145 **4=4=
69 **** 111 ♦ ♦ ♦ 146 **4=4=
70 ♦ ♦ ♦ 112 4=4= 147 * * *
71 **4= 113 4=4= 148 ***
72 114 4= 4= 4= 4= 149
73 4=**4= 115 4= 4= 4= * 150 * 4=4=4=
74 4«4=*4« 116 4=4=* 151 ***4=
75 4» 4» 117 4=4=4» 152 ****
76 ** 118 4=*** 153 ****
77 119 *4=4= 154
79 4*'**4= 120 4= 4= 4= 4= 155 *4=4=4=
80 ***4= 121 4=4=4=* 156 4» 4=4=4=
81 4< 4=4=4= 122 4=*** 157 4=4=4=
82 * * * * 124 * * * * 158 * * * *
83 *** 125 *** * 159 ****
84 *** 126 *** *
Para los compuestos de la fórmula (I) o una forma de los mismos descritos en el presente documento, la tabla 10 proporciona el aumento máximo en veces (Veces) de proteína Smn que se obtuvo a partir de los datos de concentración de 7 puntos generados para cada compuesto de prueba según el procedimiento delejemplo biológico 7. Se indica un aumento máximo en veces de < 1,2 por una estrella (*), se indica un aumento en veces entre > 1,2 y < 1,35 por dos estrellas (**), se indica un aumento en veces entre > 1,35 y < 1,5 por tres estrellas (***), se indica un aumento en veces entre > 1,5 y < 1,65 por cuatro estrellas (****) y se indica un aumento en veces > 1,65 por cinco estrellas (*****).
Tabla 10
Comp Veces Comp Veces Comp Veces
1 * * 54 * 107 * * *
2 * * 55 ** 108 * * * * *
3
Figure imgf000108_0001
56 * * * * * 109 * * * * *
4 * 57 if; >J; >}; >f: 110 * * * *
5 * 58 * * * * * 111 * * * * *
6 * 59 * * 112 * * * * *
7 * 60 * * * 113 * * * *
8 * 61 * 114 * * * * *
9 * 62 il» >£ >); >(; >f« 115 * * * * *
1» * 63 * * * * * 116 * * * *
11 * 64 * * * * * 117 * * * * *
12 * * 65 * * * * * 118 * * * *
13 * 66 * * * * * 119 * * * * *
14 * * 67 * * * 120 * * * * *
15 * 68 * * * * 121 * * * * *
16 69 * * * * * 122 * * * * *
17 * * * 70 * * * * 123 *
18 * 71 * * * * * 124 * * * *
19 * 72 *c * * * *c 125 * * * * *
20 * 73 s|c s|t s|c 126 * * * *
21 * 74 * * * * * 127 * * * * *
* 75 * * * * * 128 * * * * * * 76 * * * 129 * * * * * * * * 77 * * * 130 * * * * * 78 * * * 131 * * * * * * 79 * * * * 132 * * * * * * 80 * * * * 133 * * * * * * * * 81 * * * * * 134 * * * * * * 82 * * * * * 135 * * * * * * * * * 83 * * * * 136 * * * * * * * * * 84 4c 4c * 4c ifc 137 * * * * * * 85 * * * * * 138 * * * * * 86 * * * 139 * * * * * * * * 87 * * * * 140 * * * * * * 88 * * * * 141 * * * * * * 89 * * * * 142 * * * * * * 90 * * * * * 143 * * * * * * 91 * * * 144 * * * * * * 92 4c 4¡ 4* 4* 4« 145 * * * * * * 93 4c s$ 4* 4* 4* 146 * * * * * ♦ 94 * * * * * 147 * * * * * 95 * * * * * 148 * * * * * * * 9 6 * * * * * 149 * * * * * * * 9 7 * * * 150 * * * * * * * ♦ 98 4< 4c 4c 4c 4c 151 * * * * * * * * * 99 4c 4« 4* 4* 41 152 * * * * * * 100 * * * * * 153 * * * * * * 101 * * * * * 154 * * * * * * 102 * * * 155 * * * * * * * * 103 * * * * 156 * * * * * ♦ 104 * * * 157 * * * * * * ♦ 105 * * 158 * * * * * * * 106 * 159 * * * * * Ejemplo 8
Ensayo de recuento de gemas (recuento de motas nucleares dependientes de Smn)
El nivel de proteína Smn se correlaciona directamente con la cantidad de focos nucleares, también conocidos como gemas, producidos tras la tinción de la célula con un anticuerpo anti-Smn fluorescentemente marcado (Liu y Dreyfuss, EMBO J., 1996, 15:3555). Las gemas son complejos multiproteína cuya formación está nucleada por la proteína Smn y se usa el ensayo de recuento de gemas para evaluar el nivel de proteína Smn en la célula. Como se describe en el presente documento, el ensayo de recuento de gemas se usa para cuantificar el nivel de proteína Smn en células de fibroblasto de pacientes con AME tratados con un compuesto de prueba.
Materiales
Material Fuente
Células humanas de AME tipo 1 GM03813 (Coriell Institute)
Anticuerpo primario - clon 2B1 anti-SMN de ratón Sigma, Catálogo N.°: S2944
Anticuerpo secundario - anti-ratón Alexa Fluor Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: 555 A21422
Albúmina de suero bovino (BSA) Sigma, Catálogo N.°: A3294
4 % de paraformaldehído Electron Microscopy Sciences, Catálogo N.°: 15710 Bortezomib LC Labs, Catálogo N.°: B-1408
0,05 % de Triton X-100 Sigma, Catálogo N.°: 93443-100mL
Medio de montaje - Reactivo antidecolorante de Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: oro ProLong con DAPI P7481 y P36935
Cubreobjetos estériles 22x22 N.°: 1 Fisher, Catálogo N.°: 12-548-B
DMEM Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°:
11960-044
PBS Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°:
10010-031
Barniz de uñas de recubrimiento claro Marca Revlon, Catálogo N.°: 1271-76
Microscopio de fluorescencia Zeiss Axovert 135 Zeiss
Protocolo: Se descongelan células y se incuban en DMEM-10 % de FBS durante 72 horas, luego se tripsinan, se cuentan y se resuspenden hasta 100.000 células/mL en DMEM-10 % de FBS. Se siembran 2 mL de la suspensión de células en una placa de cultivo celular de 6 pocillos con un cubreobjetos estéril y se incuban durante 3 a 5 horas. Se diluyen los compuestos de prueba sucesivamente 3,16 veces en 100 % de DMSO para generar una curva de dilución de 7 puntos. Se añaden 10 pL de disolución de compuesto de prueba a cada pocillo que contiene célula y se incuban durante 48 horas en una estufa de incubación de cultivo celular (37 °C, 5 % de CO2, 100 % de humedad relativa). Se establecen duplicados para cada concentración de compuesto de prueba. Se usan como controles las células que contienen DMSo a una concentración final de 0,5 %.
Se aspira medio de cultivo celular de los pocillos que contienen cubreobjetos y se lavan suavemente tres veces con PBS frío. Las células se fijan por incubación durante 20 minutos a temperatura ambiente mientras están en paraformaldehído. Entonces se lavan las células dos veces con PBS frío, seguido por incubación durante 5 minutos a temperatura ambiente con 0,05 % de Triton X-100 en PBS para permeabilizar las células. Después de lavar las células fijadas tres veces con PBS frío, se bloquean con 10 % de FBS durante 1 hora. Se añaden 60 pL de anticuerpo primario diluido 1:1000 en tampón de bloqueo y la mezcla se incuba durante una hora a temperatura ambiente. Las células se lavan tres veces con PBS y se añaden 60 pL de anticuerpo secundario diluido 1:5000 en tampón de bloqueo, entonces la mezcla se incuba durante una hora a temperatura ambiente. Los cubreobjetos se montan sobre los portaobjetos con la ayuda de medio de montaje y se dejan secar durante la noche. Se aplica barniz de uñas a los lados de los cubreobjetos y se almacenan los portaobjetos, protegidos de la luz. Se usa un Zeiss Axovert 135 con un objetivo 63x Plan-Apochromat, NA=1,4, para la detección de inmunofluorescencia y recuento. Se cuenta el número de gemas por >150 núcleos y se calcula el % de activación usando DMSO y bortezomib 10 nM como controles. Para cada compuesto de prueba, las células se examinan a todas las longitudes de onda para identificar los compuestos de prueba con fluorescencia inherente.
Resultados. Como se observa de la figura 9, las células de pacientes con AME tipo 1 tratadas con el compuesto 65 (figura 9a) y compuesto 69 (figura 9b) contienen progresivamente más gemas con respecto a las células tratadas con DMSO.
Ejemplo 9
Ensayo de proteínas Smn en neuronas motoras humanas
Se usa microscopía confocal inmunofluorescente de Smn para cuantificar el nivel de proteína Smn en neuronas motoras humanas tratadas con compuestos de prueba.
Protocolo. Se tratan neuronas motoras humanas derivadas de células iPS de AME (Ebert et al., Nature, 2009, 457:2770; y, Rubin et al., BMC Biology, 2011,9:42) con compuesto de prueba a diversas concentraciones durante 72 horas. Se cuantifica el nivel de proteína Smn en el núcleo de la célula usando inmunotinción de Smn y microscopía de fluorescencia confocal esencialmente como se describe en Makhortova et al., Nature Chemical Biology, 2011, 7:544. Se normaliza el nivel de proteína Smn en muestras tratadas con el compuesto a aquél en muestras tratadas con vehículo y se representa en función de la concentración de compuesto.
Resultados. Como se observa de la figura 10, las neuronas motoras humanas tratadas durante 72 horas con concentraciones crecientes de compuesto 65 (figura 10a) y compuesto 69 (figura 10b) contienen progresivamente más proteína Smn en el núcleo.
Ejemplo 10
Ensayo de proteínas Smn en tejidos animales
Este ensayo de proteínas Smn compara tejidos de ratones tratados con compuesto de prueba con los de ratones tratados con vehículo DMSO para determinar el aumento en los niveles de proteína Smn producida a partir del gen SMN2 humano.
Materiales
Material Fuente
Tejidos de ratones con AME de The Jackson Laboratory, cepa N.°: 008714 (B6,129-Smn1tm5(Smn1/SMN2)Mrph/J) alelo C/C
Tejidos de ratones con AME A7 The Jackson Laboratory, cepa N.°: 005025 (FVB.Cg-Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg(SMN2)89Ahmb Smn1tm1Msd/J)
Mezcla de inhibidores de la Roche Applied Science, Catálogo N.°: 11836145001
proteasa
Anti-SMN d2 Blue cap Cisbio, Catálogo N.°: 63IDC002-SMN
Criptato anti-SMN Red cap Cisbio, Catálogo N.°: 63IDC002-SMN
Tampón de reconstitución de Cisbio, Catálogo N.°: 63IDC002-SMN-Buffer
SMN
Tampón de lisis RIPA Tris-HCl 20 mM pH 7,5, NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, 1 % de NP-40, 1 % de desoxicolato de sodio
Tampón diluyente Tris-HCl 20 mM pH 7,5, NaCl 150 mM
Kit de ensayo de proteínas BCA Pierce, Catálogo N.°: 23225
Placa blanca de 384 pocillos Nunc, Catálogo N.°: 351190
Placa de polipropileno de fondo Falcon, Catálogo N.°: 165195
en V
Placa clara de poliestireno de Nunc, Catálogo N.°: 442404
96 pocillos
Perlas de acero inoxidable de 5 Qiagen, Catálogo N.°: 69989
mm
Tubos Safe-Lock de 2,0 mL Eppendorf, Catálogo N.°: 022363352
Placa de PCR de 96 pocilios Eppendorf, Catálogo N.°: 951020389
con semifaldón Twin.tec
TissueLyser II Qiagen, Catálogo N.°: 85300
Lector de placas Envision Perkin Elmer modelo N.°: 2103
Protocolo. Se pesan las muestras de tejido en tubos Safe-Lock y se añade el volumen de tampón RIPA que contiene la mezcla de inhibidores de la proteasa basándose en las relaciones entre el peso y el volumen para cada tipo de tejido: cerebro (50 mg/mL), músculo (50 mg/mL) y médula espinal (25 mg/mL).
Se homogeneizan los tejidos usando TissueLyser moliendo con perlas. Se añaden perlas de acero inoxidable de 5 mm a la muestra y se agitan vigorosamente durante 5 minutos a 30 Hz en TissueLyser. Entonces, se centrifugan las muestras durante 20 minutos a 14.000 x g en una microcentrífuga y los homogeneizados se transfieren a la placa de PCR. Los homogeneizados se diluyen en tampón RIPA hasta aproximadamente 1 mg/mL para HTRF y aproximadamente 0,5 mg/mL para la medición de proteína total usando el ensayo de proteína BCA. Para el ensayo de HTRF de SMN, se transfieren 35 pL del homogeneizado de tejido a una placa de 384 pocillos que contiene 5 pL de la disolución de anticuerpo (dilución 1:100 de cada uno de anti-SMNd2 y criptato anti-SMN en tampón de reconstitución). Para proporcionar una señal de control, tres (3) pocillos en la placa contienen solo tampón de lisis RIPA y así sirven de pocillos de control de blanco. Se centrifuga la placa durante 1 minuto para llevar la disolución al fondo de los pocillos y entonces se incuba durante la noche a temperatura ambiente. Se mide la fluorescencia para cada pocillo de la placa a 665 nm y 620 nm en un lector de placas multimarca EnVision (Perkin-Elmer). Se mide la proteína total en el homogeneizado de tejido usando el ensayo de BCA según el protocolo del fabricante.
Se calcula la señal de fluorescencia normalizada para cada pocillo de muestra, blanco y control de vehículo dividiendo la señal a 665 nm entre la señal a 620 nm. El normalizar la señal explica la posible extinción de fluorescencia debido al efecto de matriz del homogeneizado de tejido. El valor de AF (una medida de la abundancia de proteína Smn como porcentaje de valor) para cada pocillo de muestra de tejido se calcula restando la fluorescencia promedio normalizada para los pocillos de control de blanco de la fluorescencia normalizada para cada pocillo de muestra de tejido, luego dividiendo esta diferencia entre la fluorescencia promedio normalizada para los pocillos de control de blanco y multiplicando el valor resultante por 100. El valor de AF para cada pocillo de muestra de tejido se divide entre la cantidad total de proteína (determinada usando el ensayo de BCA) para esa muestra de tejido. Se calcula el cambio en la abundancia de proteína Smn para cada muestra de tejido con respecto al control de vehículo como el porcentaje de diferencia en el valor de AF de la muestra de tejido en presencia del compuesto de prueba y el valor promedio de AF de la señal de control de vehículo dividido entre el valor promedio de AF de la señal de control de vehículo.
Ejemplo 11
Ensayo de proteínas Smn en tejidos de ratones adultos con AME de alelo C/C
Se preparan los tejidos para su uso en el ensayo para la proteína Smn en ratones adultos con AME de alelo C/C como se describe en ejemplo 10. El ensayo evalúa si el tratamiento de ratones con AME de alelo C/C con un compuesto de prueba durante 10 días aumenta los niveles de proteína Smn producida a partir del gen SMN2.
Materiales
Material Fuente
Tejidos de ratones con AME de The Jackson Laboratory, cepa N.°: 008714 (B6.12Q-Smn1tm5(Smn1/SMN2)MrphlJ) alelo C/C
Protocolo. Se administran BID por vía oral (en 0,5 % de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) con 0,1 % de Tween-80) ratones con AME de alelo C/C con un compuesto de prueba o vehículo a 10 mg/kg durante 10 días. Se administran con vehículo ratones heterocigóticos de la misma edad para su uso como control. Los tejidos se recogen para análisis de niveles de proteína según el ejemplo 10.
Resultados. Como se observa de la figura 11, el nivel de Smn normalizado de proteína total aumentó en tejidos de cerebro, médula espinal, músculo e hígado de ratones adultos con AME de alelo C/C tratados a 10 mg/kg BID durante 10 días con compuesto 65 (figura 11a) y compuesto 69 (figura 11b) con respecto al grupo de vehículo.
Ejemplo 12
Proteína Smn en tejidos de ratones neonatales con AME A7
Se usa el ensayo para proteína Smn en tejidos de ratones neonatales con AME para determinar si el tratamiento con un compuesto de prueba aumenta los niveles de proteína Smn producida a partir del gen SMN2.
Materiales
Material Fuente
Tejidos de ratones con AME The Jackson Laboratory, cepa N.°: 005025 (FVB.Cg-Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb A7 Tg(SMN2)89Ahmb Smn1tm1Msd/J)
Protocolo. Se administran ratones inactivados homocigóticos AME A7 una vez al día (QD) por vía intraperitoneal (IP) con un compuesto de prueba o vehículo (100 % de DMSO) desde el día posnatal (PND) 3 hasta PND 9. Se recogen los tejidos para el análisis de niveles de proteína según el ejemplo 10.
Resultados. Como se observa de la figura 12, el nivel de Smn normalizado a proteína total aumentó en función de la dosis en tejidos de cerebro (figura 12a), médula espinal (figura 12b) y músculo (figura 12c) de ratones neonatales inactivados homocigóticos con AME A7 tratados durante 7 días QD con las dosis indicadas de compuesto 65.
Ejemplo 13
Peso corporal de ratones neonatales con AME A7
Se usa el cambio en el peso corporal de ratones neonatales con AME para determinar si tratamiento con un compuesto de prueba mejora el peso corporal.
Materiales
Material Fuente
Tejidos de ratones con AME The Jackson Laboratory, cepa N.°: 005025 (FVB.Cg-Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg de Aexón 7 (SMN2)89Ahmb Smn1tm1Msd/J)
Protocolo. Se administran ratones inactivados homocigóticos con AME A7 por vía intraperitoneal (IP) con compuesto de prueba o vehículo (100 % de DMSO) QD desde PND 3 hasta que la pauta de dosis se cambia a una dosis oral BID en 0,5 % de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) con 0,1 % de Tween-80 a una dosis 3,16 veces superior a la dosis usada para IP. Se registran cada día los pesos corporales de ratones con AME A7 tratados con compuesto de prueba o vehículo y ratones heterocigóticos de la misma edad.
Resultados. Como se observa de la figura 13, el peso corporal de ratones neonatales inactivados homocigóticos con AME A7 tratados con el compuesto 65 (figura 13a) y compuesto 69 (figura 13b), administrados IP QD desde PND 3 hasta PND 23, luego por vía oral BID desde PND 24 hasta el fin del estudio, mejoró en comparación con los ratones tratados con vehículo.
Ejemplo 14
Reflejo de enderezamiento en ratones neonatales con AME A7
Se usa el cambio funcional en el reflejo de enderezamiento de ratones con AME neonatales para determinar si el tratamiento con un compuesto de prueba mejora el reflejo de enderezamiento.
Materiales
Material Fuente
Tejidos de ratones con AME The Jackson Laboratory, cepa N.°: 005025 (FVB.Cg-Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg de Aexón 7 (SMN2)89Ahmb Smn1tm1Msd/J)
Protocolo. Se administran ratones inactivados homocigóticos con AME A7 por vía intraperitoneal (IP) con compuesto de prueba o vehículo (100 % de DMSO) QD desde PND 3 hasta que la pauta de dosis se cambia a una dosis oral BID en 0,5 % de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) con 0,1 % de Tween-80 a una dosis 3,16 veces superior a la dosis usada para IP. Se mide el tiempo de reflejo de enderezamiento como el tiempo que necesita un ratón para volverse sobre sus patas después de tumbarse sobre su espalda. Se mide el reflejo de enderezamiento cinco veces para cada ratón (que permite un tiempo máximo de 30 s para cada intento) con 5 minutos entre cada medición. Se mide el tiempo de reflejo de enderezamiento para ratones inactivados homocigóticos con AME A7 tratados con compuesto de prueba o vehículo y ratones heterocigóticos de la misma edad en PND 10, 14 y 18 y se representa.
Resultados. Como se observa de la figura 14, el reflejo de enderezamiento de ratones neonatales inactivados homocigóticos con AME A7 tratados con compuesto 65 (figura 15a) y compuesto 69 (figura 15b) administrados IP QD desde PND 3 mejoró en comparación con los ratones tratados con vehículo. El tiempo de enderezamiento de los ratones inactivados homocigóticos con AME A7 tratados con compuesto fue similar al de los ratones heterocigóticos de la misma edad en PND 18.
Ejemplo 15
Supervivencia de ratones neonatales con AME A7
Se usa el cambio en el número de ratones sobrevivientes con el tiempo para determinar si el tratamiento con un compuesto de prueba mejora la supervivencia.
Materiales
Material Fuente
Tejidos de ratones con AME A7 The Jackson Laboratory, cepa N.°: 005025 (FVB.Cg-Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg(SMN2)89Ahmb Smn1tm1Msd/J)
Protocolo . Se administran ratones inactivados homocigóticos con AME A7 por vía intraperitoneal (IP) con compuesto de prueba o vehículo (100 % de DMSO) QD desde PND 3 hasta que la pauta de dosis se cambia a una dosis oral BID en 0,5 % de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) con 0,1 % de Tween-80 a una dosis 3,16 veces superior a la dosis usada para IP y después se cambia a una dosis oral QD en 0,5 % de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) con 0,1 % de Tween-80 a una dosis 6,32 veces superior a la dosis usada para IP. Se registra cada día el número de ratones supervivientes en cada grupo y se representa como un porcentaje del número total de ratones. Se recogen tejidos de ratones heterocigóticos con a Me A7 y de la misma edad para la medición de niveles de proteína Smn y se procesan como se detalló en el ejemplo 10. Se representan los niveles de proteína medida normalizada a proteína total en los tejidos como un porcentaje de aquellos en los tejidos de ratones heterocigóticos de la misma edad, con el nivel de Smn en ratones heterocigóticos establecido al 100 por cien. El nivel de proteína Smn en el tejido de ratones tratados con el compuesto de prueba con respecto a aquél en tejido de ratones heterocigóticos se indica como un porcentaje de valor por encima de cada barra en el gráfico.
Resultados. Como se observa de la figura 15, la supervivencia de ratones neonatales inactivados homocigóticos con AME A7 tratados con el compuesto 65 (figura 15a) y compuesto 69 (figura 15b), administrados IP QD desde PND 3 hasta PND 23, luego por vía oral BID desde PND 24 hasta el fin del estudio, mejoró en comparación con los ratones tratados con vehículo. Como se observa de la figura 16, se midieron los niveles de proteína Smn en tejidos de cerebro y músculo de ratones inactivados homocigóticos con AME A7 después del tratamiento con el compuesto 65 (figura 16a) hasta PND 144 y el compuesto 69 (figura 16b) desde PND 3 hasta PND 80 y 83 y se representaron con respecto a los ratones heterocigóticos tratados con vehículo y de la misma edad.
Ejemplo 16
Ensayo de corte y empalme de RT-PCR semicuantitativa de punto final de ARNm del minigén SMN1 humano en células cultivadas
Se usa el ensayo de RT-PCR para visualizar y cuantificar los niveles de ARNm del minigén SMN1 de longitud completa y A7 en células primarias y líneas celulares que expresan la construcción de minigén SMN1 humano tratada con un compuesto de prueba.
Materiales
Material Fuente
Células HEK293H ATCC, Catálogo N.°: CRL-1573
Tampón de lisis Cells-To-Ct Life Technologies, Inc. (antiguamente Applied Biosystems), Catálogo
N.°: 4399002
Reactivo de transfección de lípidos
FuGENE-6 Roche Applied Science, Catálogo N.°: 11 814443 001
DMEM Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: 11960­
044
Placas de fondo plano de 96 pocillos Becton Dickinson, Catálogo N.°: 353072
Platinum Taq HiFi DNA Polymerase Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: 11304­ SuperMix 016
Kit enzimático iScript RT BioRad, Catálogo N.°: 170-8890
E-Gel de bromuro de etidio - 2 % de Life Technologies, Inc. (antiguamente Invitrogen), Catálogo N.°: G8008-agarosa en doble peine de 48 pocillos 02
Sistema de documentación de gel Sistema de obtención de imágenes UVP Gel Doc It 310 Construcción de minigén SMN1
Preparación de las construcciones de minigén
Usando el procedimiento para la preparación de la construcción de minigén SMN2 descrita en el ejemplo biológico 1, se genera la versión SMN1 del minigén cambiando el sexto nucleótido del exón 7 (un resto de timina) de la construcción de minigén SMN2-A a citosina usando mutagénesis dirigida al sitio. Así, similar a la construcción de minigén de SMN2-A, la construcción de minigén SMN1 tiene un único resto de adenina insertado después del resto nucleico 48 del exón 7. La construcción de minigén SMN1 se denomina SMN1-A.
Protocolo. Se transfectaron células HEK293H (10.000 células/pocillo/199 j L), usando el reactivo FuGENE-6, en una placa de 96 pocillos con 15 ng del plásmido indicador de minigén SMN1-A por pocillo. Se incubaron las células durante 24 horas tras la transfección. Se diluyeron los compuestos de prueba sucesivamente 3,16 veces en 100 % de DMSO para generar una curva de concentración de 7 puntos. Se añadió una disolución de compuesto de prueba (1 j L, 200x en DMSO) a cada pocillo de prueba. Se añadió 1 j L de DMSO a cada pocillo de control. La placa se incubó durante 7 horas en una estufa de incubación de cultivo celular (37 °C, 5 % de CO2, 100 % de humedad relativa). Entonces se lisaron las células en tampón de lisis Cells-To-Ct y se almacenaron los lisados a -80 °C.
Se generan dos ARNm cortados y empalmados de SMN a partir del minigén SMN1. El término "minigén de SMN1 FL" se refiere al primer producto cortado y empalmado que contiene el exón 7, correspondiente al ARNm de SMN1 de longitud completa. El término "minigén de SMN1 A7" se refiere al segundo producto que carece del exón 7.
Se amplifican ARNm de minigén SMN FL y A7 usando los cebadores en la tabla 11. El cebador directo de SMN C (SEQ ID NO. 11) se hibrida con una secuencia de nucleatidos en el exan 6 (nucleatido 43 a nucleatido 63), el cebador inverso de SMN A (SEQ ID NO. 2) se hibrida con una secuencia de nucleatidos en la secuencia codificante de luciferasa de luciirnaga. La combinacian de estos dos oligonucleatidos detecta solo minigenes SMN1 o SMN2 (RT-PCR) y no detectara genes SMN1 o SMN2 endagenos. Puesto que las cilulas del paciente con AME usadas en el ejemplo 16 se transfectaron con solo el minigén SMN1 humano, RT-PCR solo puede visualizar y cuantificar el ARNm del minigén SMN1 de longitud completa y del minigén SMN1 A7.
Tabla 11
Primer Secuencia Fuente
Directo de SMN C SEQ ID NO. 11: GATGCTGATGCTTTGGGAAGT PTC* 1
Inverso de SMN A SEQ ID NO. 2: CGCTTCACATTCCAGATCTGTC PTC1
1 Cebadores diseñados por PTC Therapeutics, Inc.
Para sintetizar ADNc, se combinan y se incuban 5 j L de lisado, 4 j L de 5x mezcla de reacción iScript, 1 j L de transcriptasa inversa y 10 j L de agua 5 min a 25 °C seguido por 30 min a 42 °C, seguido por 5 min a 85 °C. Se almacena la disolución de ADNc a -20 °C.
Para realizar PCR de punto final, se combinan 5 j L de ADNc, 0,2 j L de cebador directo 100 j M, 0,2 j L de cebador inverso 100 j M y 22,5 j L de supermezcla de polimerasa en una placa de PCR de 96 pocillos con semifaldón. Se lleva a cabo la PCR a las siguientes temperaturas durante el tiempo indicado: etapa 1: 94 °C (2 min), etapa 2: 94 °C (30 s), etapa 3: 55 °C (30 s), etapa 4: 68 °C (1 min), luego repetir las etapas 2 a 4 durante un total de 33 ciclos, luego mantener a 4 °C.
Se separan electroforéticamente 10 j L de cada muestra de PCR sobre un E-gel de 2 % de agarosa durante 14 minutos teñido con reactivos de tinción de ADNbc (por ejemplo, bromuro de etidio) y se visualizan usando un dispositivo de obtención de imágenes de gel.
Resultados. Como se observa de la figura 17, las células tratadas con concentraciones crecientes del compuesto 65 (figura 17a) y compuesto 69 (figura 17b) contienen progresivamente más ARNm de minigén SMN1 FL y menos ARNm de minigén SMN1 A7, que indica una corrección del corte y empalme alternativo de SMN1.

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto según la fórmula (Ia1):
Figure imgf000124_0001
o un ácido libre, base libre, sal, isotopólogo, estereoisómero, racemato, enantiómero, diaestereómero o su tautómero, en donde:
R1 es heterociclilo seleccionado de azetidin-1-ilo, tetrahidrofurano-3-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, piperidin-4-ilo, piperazin-1-ilo, 1,4-diazepan-1-ilo, 1,2,5,6-tetrahidropiridin-5-ilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-ilo, hexahidropirrolo[3,4b]pirrol-1(2H)-ilo, (3aS,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-1(2H)-ilo, (3aS,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1 H)-ilo, (3aR,6aR)-hexahidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1 H)-ilo, hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1 H)-ilo, (3aR,6aS)-hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2(1H)-ilo, octahidro-5H-pirrolo[3,2-c]piridin-5-ilo, octahidro-6H-pirrolo[3,4-b]piridin-6-ilo, (4aR,7aR)-octahidro-6H-pirrolo[3,4-b]piridin-6-ilo, (4aS,7aS)-octahidro-6H-pirrolo[3,4-b]piridin-6-ilo, hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-6(2H)-ona, hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-ilo, (7R,8aS)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1 H)-ilo, (8aS)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1 H)-ilo, (8aR)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1 H)-ilo, (8aS)-octahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1 H)-ilo, (8aR)-octahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1 H)-ilo, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazin-2-ilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hex-3-ilo, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, (1 R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-ilo, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-ilo, 9-azabiciclo[3.3.1]non-3-ilo, (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-ilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-ilo, (1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-ilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.2]oct-2-ilo, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, (1R,5s )-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 1,4-diazabiciclo[3.2.2]non-4-ilo, azaespiro[3.3]hept-2-ilo, 2,6-diazaespiro[3.3]hept-2-ilo, 2,7-diazaespiro[3.5]non-7-ilo, 5,8-diazaespiro[3.5]non-8-ilo, 2,7-diazaespiro[4.4]non-2-ilo o 6,9-diazaespiro[4.5]dec-9-ilo;
en donde cada caso de heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R3 ;
R2 es fenilo o heteroarilo seleccionados de tien-2-ilo, tien-3-ilo, 1 H-pirazol-3-ilo, 1 H-pirazol-4-ilo, 1 H-pirazol-5-ilo, 1H-imidazol-1-ilo, 1H-imidazol-4-ilo, 1,3-tiazol-2-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3-ilo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, pirimidin-4-ilo, 1 H-indol-3-ilo, 1 H-indol-4-ilo, 1 H-indol-5-ilo, 1 H-indol-6-ilo, 1H-indazol-5-ilo, 2H-indazol-5-ilo, indolizin-2-ilo, benzofuran-2-ilo, benzofuran-5-ilo, benzotien-2-ilo, benzotien-3-ilo, 1H-bencimidazol-2-ilo, 1H-bencimidazol-6-ilo, 1,3-benzoxazol-2-ilo, 1,3-benzoxazol-5-ilo, 1,3-benzoxazol-6-ilo, 1,3-benzotiazol-2-ilo, 1,3-benzotiazol-5-ilo, 1,3-benzotiazol-6-ilo, 9H-purin-8-ilo, furo[3,2-b]piridin-2-ilo, furo[3,2-c]piridin-2-ilo, furo[2,3-c]piridin-2-ilo, tieno[3,2-c]piridin-2-ilo, tieno[2,3-d]pirimidin-6-ilo, 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-ilo, 1H-pirrolo[2,3-c]piridin-4-ilo, pirrolo[1,2-a]pirimidin-7-ilo, pirrolo[1,2-a]pirazin-7-ilo, pirrolo[1,2-b]piridazin-2-ilo, pirazolo[1,5-a]piridin-2-ilo, pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-2-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-6-ilo, imidazo[1,2-a]pirimidin-2-ilo, imidazo[1,2-a]pirimidin-6-ilo, imidazo[1,2-c]pirimidin-2-ilo, imidazo[1,2-b]piridazin-2-ilo, imidazo[1,2-a]pirazin-2-ilo, imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-ilo, imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-6-ilo, [1,3]oxazolo[4,5-b]piridin-2-il o quinoxalin-2-ilo;
en donde cada caso de fenilo o heteroarilo se sustituye opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes R6; Ra es hidrógeno;
Rb es hidrógeno;
R3 se selecciona, en cada caso, independientemente de ciano, halógeno, hidroxi, oxo, alquilo C1 -8 , halo-alquilo C1-8 , alquil C1-8-carbonilo, alcoxi C1.8 , halo-alcoxi C1-8 , alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , alcoxi C1-8-carbonilo, amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8)2-amino, amino-alquilo C1.8 , alquil C1-8-amino-alquilo C1 -8 , (alquil C1 -8 )2-amino-alquilo C1.8 , amino-alquil C1.
8-amino, alquil C1-8-amino-alquil C1-8-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1 -8 )2-amino, (alquil C1 -8 )2-amino-alquil C-i -8-amino, [(alquil C1 -8 )2-amino-alquil C1-8 ]2-amino, (alquil C1-8-amino-alquil C1 -8 )(alquil C1 -8 )amino, [(alquil C1-8 )2-amino-alquil C1 -8](alquil C1 -8 )amino, alcoxi C1-8-alquil C1-8-amino, (alcoxi C1-8-alquil C1 -8 )2-amino, (alcoxi C-i -8-alquil C1-8 )(alquil C1.
8)amino, alquil C1-8-carbonil-amino, alcoxi C1-8-carbonil-amino, hidroxi-alquilo C1.8 , hidroxi-alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , hidroxi-alquil C1-8-amino, (hidroxi-alquil C1 -8 )2-amino o (hidroxi-alquil C1 -8 )(alquil C1-8 )amino; y
R6 se selecciona, en cada caso, independientemente de halógeno, hidroxi, ciano, nitro, alquilo C1 -8 , alquenilo C2-8, halo-alquilo C1.8 , hidroxi-alquilo C1.8 , alcoxi C1.8 , halo-alcoxi C1-8 , alcoxi C1-8-alquilo C1.8 , amino, alquil C1-8-amino, (alquil C1 -8 )2-amino o alquil C-i -8-tio.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en donde la forma de sal es una sal de cloruro, clorhidrato, diclorhidrato, bromhidrato, acetato o trifluoroacetato.
3. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona de:
7-(piperazin-1 -il)-3-(piridin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
7-(piperazin-1-il)-3-(tiofen-3-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(3,4-dimetoxifenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
7-(4-metilpiperazin-1-il)-3-(piridin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(piridin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-7-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(1,3-benzotiazol-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(1,3-benzotiazol-2-il)-7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(1,3-benzotiazol-2-il)-7-(1,4-diazepan-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(1,3-benzotiazol-2-il)-7-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(1,3-benzodioxol-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(3,5-difluorofenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(1,3-benzodioxol-5-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(3,4-dimetoxifenil)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(3,4-dimetoxifenil)-7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(3-metoxifenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(3-metoxifenil)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(3-metoxifenil)-1H-isocromen-1-ona
7-(1,4-diazepan-1-il)-3-(3-metoxifenil)-1H-isocromen-1-ona
3-(2-metoxifenil)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(2-metoxifenil)-1H-isocromen-1-ona
3-(4-metoxifenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(4-metoxifenil)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(imidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(imidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(4-metoxifenil)-1H-isocromen-1-ona
3-(3,4-dimetoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(4-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(2-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-3-(piridin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(1,3-benzotiazol-2-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-il)-7-[(3R)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-il)-7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(1,3-benzodioxol-5-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(3,4-dihidroxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(4-etoxifenil)-7-[(3 S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(3-fluoro-4-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(3-hidroxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(2-fluoro-4-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(3-doro-4-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(4-fluoro-3-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(5-fluoro-2-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(3,5-difluoro-4-metoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(2,4-dimetoxifenil)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(4-etoxifenil)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(2-metil-1-benzofuran-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-[3-(difluorometoxi)fenil]-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-[4-(difluorometoxi)fenil]-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-(8-doroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(8-doroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(8-doroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(3,4-dimetoxifenil)-7-[(3S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-[(8aR)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(8aS)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(8aR)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-etilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[4-(propan-2-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(1,3-dimetilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(1,3-dimetilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-il)-7-(4-etilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(1,3-dimetilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-il)-7-[4-(propan-2-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(1,3-dimetilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-il)-7-[4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(1,3-dimetilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-il)-7-[(8aS)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il]-1H-isocromen-1-ona -(1,3-dimetilpirrolo[1,2-a]pirazin-7-il)-7-[(8aR)-hexahidropirrolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-propilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(4-terc-butilpiperazin-1-il)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-(4-cidopropilpiperazin-1-il)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[4-(2-metoxietil)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[4-(2-metilpropil)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(4-cidobutilpiperazin-1-il)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-etil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[1-(propan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[1-(2-metoxietil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-1H-isocromen-1-ona -(1-cidopropil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona -(1-cidobutil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-propil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(piperidin-4-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[1-(oxetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-1H-isocromen-1-ona -(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[4-(propan-2-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-etilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(2-metil-1,3-benzotiazol-6-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(2-metil-1,3-benzotiazol-6-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(2-metil-1,3-benzotiazol-6-il)-7-[4-(propan-2-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(2-metil-1,3-benzotiazol-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(2-metil-1,3-benzotiazol-6-il)-7-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6-doro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-etilpiperidin-4-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1-propilpiperidin-4-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[1-(propan-2-il)piperidin-4-il]-1H-isocromen-1-ona
-(1-cidobutilpiperidin-4-il)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[1-(oxetan-3-il)piperidin-4-il]-1H-isocromen-1-ona
-[(3S)-4-etil-3-metilpiperazin-1-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-[(3S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-hidroxipiperidin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-[(3R)-4-etil-3-metilpiperazin-1-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-[(3R)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[4-(propan-2-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-[(3R,5S)-4-etil-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona -[(3R,5S)-4-(2-hidroxietil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona -(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -[(3R,5S)-4-cidobutil-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona -[(3R)-4-(2-hidroxietil)-3-metilpiperazin-1-il]-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-4-(2-hidroxietil)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-4-etil-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-[(3S)-4-cidobutil-3-metilpiperazin-1-il]-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3-metil-4-propilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3-metil-4-(propan-2-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-4-etil-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3-metil-4-propilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-4-(2-hidroxietil)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -[(3R)-4-cidobutil-3-metilpiperazin-1-il]-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3-metil-4-(propan-2-il)piperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona -(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-4-(2-metoxietil)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-4-(2-metoxietil)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-4-etil-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,5-dimetil-4-propilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R)-3-metilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona
7-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il]-3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
7-[(3S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-7-(piperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-1H-isocromen-1-ona
3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3R,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il]-1H-isocromen-1-ona, o
3-(8-etil-6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-isocromen-1-ona;
0 una sal, isotopólogo, estereoisómero, racemato, enantiómero, diaestereómero o su tautómero.
4. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del compuesto de la reivindicación 1 o 3 y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.
5. La composición farmacéutica de la reivindicación 4 para su uso en un método de tratamiento de atrofia muscular espinal (AME).
6. El compuesto de la reivindicación 1 o 3 para su uso en un método de potenciación de la inclusión del exón 7 de SMN2 en ARNm que se transcribe a partir del gen SMN2, en donde el método comprende poner en contacto una célula humana con el compuesto.
7. El compuesto de la reivindicación 1 o 3 para su uso en un método de aumento de la cantidad de proteína Smn, en donde el método comprende poner en contacto una célula humana con el compuesto.
8. El compuesto para el uso de la reivindicación 6 o 7, en donde la célula humana es una célula humana de un paciente humano con AME.
9. El compuesto de la reivindicación 1 o 3 para su uso en un método de tratamiento de AME en un sujeto humano en necesidad del mismo, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz del compuesto.
10. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 5, que comprende administrar a un sujeto la composición farmacéutica.
ES13740919T 2012-01-26 2013-01-25 Compuestos para tratar atrofia muscular espinal Active ES2733644T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261591102P 2012-01-26 2012-01-26
PCT/US2013/023067 WO2013112788A1 (en) 2012-01-26 2013-01-25 Compounds for treating spinal muscular atrophy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2733644T3 true ES2733644T3 (es) 2019-12-02

Family

ID=48873933

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES13740919T Active ES2733644T3 (es) 2012-01-26 2013-01-25 Compuestos para tratar atrofia muscular espinal

Country Status (13)

Country Link
US (1) US9399649B2 (es)
EP (1) EP2809322B9 (es)
JP (2) JP6193888B2 (es)
KR (1) KR102064624B1 (es)
CN (1) CN104203239B (es)
BR (1) BR112014018027B1 (es)
CA (1) CA2862084C (es)
EA (1) EA028344B1 (es)
ES (1) ES2733644T3 (es)
HK (1) HK1202069A1 (es)
MX (1) MX357834B (es)
PL (1) PL2809322T3 (es)
WO (1) WO2013112788A1 (es)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX352861B (es) 2011-12-30 2017-12-13 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para tratar la atrofia muscular espinal.
PL2809322T3 (pl) * 2012-01-26 2019-11-29 Ptc Therapeutics Inc Związki do leczenia zaniku mięśni pochodzenia rdzeniowego
MX354074B (es) 2012-02-10 2018-02-12 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para tratar la atrofia muscular espinal.
BR112014021531B1 (pt) 2012-03-01 2022-10-04 Ptc Therapeutics, Inc. Composto, composição farmacêutica e usos dos mesmos
US9914722B2 (en) 2012-03-23 2018-03-13 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
US10987370B2 (en) * 2012-12-24 2021-04-27 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Methods of inducing read-through of a nonsense mutation associated with ataxia telangiectasia, Rett syndrome or spinal muscular atrophy by erythromycin or azithromycin
RU2016109324A (ru) 2013-08-19 2017-09-26 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Способ скрининга
WO2015095446A1 (en) * 2013-12-19 2015-06-25 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for modulating the amount of rna transcripts
EP3082820B1 (en) 2013-12-19 2022-07-20 PTC Therapeutics, Inc. Methods for modulating the amount of rna transcripts
US10882868B2 (en) 2014-05-15 2021-01-05 Hoffmann-La Roche Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
WO2016196386A1 (en) 2015-05-30 2016-12-08 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for modulating rna splicing
MX2018005890A (es) 2015-11-12 2018-08-15 Hoffmann La Roche Composiciones para tratar atrofia muscular espinal.
CA3005434A1 (en) 2015-11-16 2017-05-26 Ohio State Innovation Foundation Methods and compositions for treating disorders and diseases using survival motor neuron (smn) protein
CN108137579B (zh) 2015-12-10 2022-01-07 豪夫迈·罗氏有限公司 桥连哌啶衍生物
ES2879995T3 (es) 2015-12-10 2021-11-23 Ptc Therapeutics Inc Métodos para el tratamiento de la enfermedad de Huntington
JP6738044B2 (ja) * 2016-07-22 2020-08-12 Jnc株式会社 ベンゾピラン骨格を有する液晶性化合物、液晶組成物、および液晶表示素子
US11702646B2 (en) 2016-11-28 2023-07-18 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for modulating RNA splicing
EA201992878A1 (ru) 2017-06-05 2020-05-08 ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. Соединения для лечения болезни хантингтона
CN111372611A (zh) 2017-06-14 2020-07-03 Ptc医疗公司 修饰rna剪接的方法
BR112019027717A2 (pt) 2017-06-28 2020-07-28 Ptc Therapeutics, Inc. métodos para tratar a doença de huntington
MX2019015580A (es) 2017-06-28 2020-07-28 Ptc Therapeutics Inc Metodos para tratar la enfermedad de huntington.
SG10202002990XA (en) 2017-08-04 2020-05-28 Skyhawk Therapeutics Inc Methods and compositions for modulating splicing
CN112135815A (zh) 2018-03-27 2020-12-25 Ptc医疗公司 用于治疗亨廷顿氏病的化合物
EP3814360A1 (en) 2018-06-27 2021-05-05 PTC Therapeutics, Inc. Heteroaryl compounds for treating huntington's disease
KR20210025625A (ko) * 2018-06-27 2021-03-09 리보르나 바이오사이언시스, 아이엔씨. 척수성 근위축증 예방제 또는 치료제
AU2019294478B2 (en) 2018-06-27 2023-03-23 Ptc Therapeutics, Inc. Heterocyclic and heteroaryl compounds for treating Huntington's disease
CN114007613A (zh) 2019-02-05 2022-02-01 斯基霍克疗法公司 用于调节剪接的方法和组合物
EP3920928A4 (en) 2019-02-06 2022-09-28 Skyhawk Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATION OF SPLICING
US11129829B2 (en) 2019-06-17 2021-09-28 Skyhawk Therapeutics, Inc. Methods for modulating splicing

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5854142B2 (ja) * 1975-04-16 1983-12-02 株式会社興人 イソカルボスチリル誘導体の製造方法
US5089633A (en) * 1987-04-28 1992-02-18 Georgia Tech Research Corporation Substituted isocoumarins
US6180625B1 (en) 1998-03-24 2001-01-30 Novo Nordisk A/S Heterocyclic compounds regulating clotting
WO2003005025A1 (en) * 2001-07-03 2003-01-16 Biovitrum Ab Methods for identifying compounds modulating the activity of ppar-gamma
GB0205281D0 (en) * 2002-03-06 2002-04-17 Novartis Ag Organic compounds
AU2003237492A1 (en) 2002-06-10 2003-12-22 Acadia Pharmaceuticals Inc. Urotensin ii receptor modulators
CN100503572C (zh) 2002-06-28 2009-06-24 沃泰克斯药物股份有限公司 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶抑制剂及其用途
JP2004168707A (ja) * 2002-11-20 2004-06-17 Bayer Cropscience Ag イソチアゾリルベンゾオキサジン誘導体および病害防除剤
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
DE602004022819D1 (de) 2003-06-06 2009-10-08 Vertex Pharma Von atp-bindende kassette transportern
EP1846397A1 (en) 2005-01-21 2007-10-24 Janssen Pharmaceutica N.V. Novel heterocyclic benzoy[c]chromene derivatives useful as modulators of the estrogen receptors
KR100781704B1 (ko) * 2005-04-20 2007-12-03 에스케이케미칼주식회사 피리딘 유도체와 이의 제조방법, 및 이를 포함하는약제조성물
AR059339A1 (es) 2006-02-09 2008-03-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Derivados de la cumarina para trastornos proliferativos de celulas, composicion farmaceutica y agente terapeutico que los contiene
WO2008013997A2 (en) 2006-07-27 2008-01-31 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fluorescent substrates for monoamine transporters as optical false neurotransmitters
KR20080091949A (ko) * 2007-04-10 2008-10-15 에스케이케미칼주식회사 락톤형 피리딘 화합물을 포함하는 허혈성 질환의 예방 및치료용 약학조성물
JP5276878B2 (ja) * 2007-09-27 2013-08-28 富士フイルム株式会社 ベンゾオキサジノン系化合物の製造方法
WO2009151546A2 (en) 2008-05-27 2009-12-17 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating spinal muscular atrophy
US8986935B2 (en) 2008-08-13 2015-03-24 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating spinal muscular atrophy
MX352861B (es) 2011-12-30 2017-12-13 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para tratar la atrofia muscular espinal.
PL2809322T3 (pl) * 2012-01-26 2019-11-29 Ptc Therapeutics Inc Związki do leczenia zaniku mięśni pochodzenia rdzeniowego
MX354074B (es) 2012-02-10 2018-02-12 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para tratar la atrofia muscular espinal.
BR112014021531B1 (pt) 2012-03-01 2022-10-04 Ptc Therapeutics, Inc. Composto, composição farmacêutica e usos dos mesmos
US9914722B2 (en) 2012-03-23 2018-03-13 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy

Also Published As

Publication number Publication date
MX2014008875A (es) 2014-10-14
WO2013112788A1 (en) 2013-08-01
BR112014018027A8 (pt) 2017-07-11
HK1202069A1 (en) 2015-09-18
CN104203239A (zh) 2014-12-10
JP2015511224A (ja) 2015-04-16
JP6193888B2 (ja) 2017-09-06
JP2017171667A (ja) 2017-09-28
KR102064624B1 (ko) 2020-01-09
CN104203239B (zh) 2017-09-08
EA028344B1 (ru) 2017-11-30
EP2809322B9 (en) 2019-10-30
KR20140127271A (ko) 2014-11-03
EP2809322B1 (en) 2019-05-15
EP2809322A1 (en) 2014-12-10
US20150126515A1 (en) 2015-05-07
CA2862084A1 (en) 2013-08-01
PL2809322T3 (pl) 2019-11-29
BR112014018027B1 (pt) 2020-10-27
US9399649B2 (en) 2016-07-26
MX357834B (es) 2018-07-26
CA2862084C (en) 2021-05-11
EA201491412A1 (ru) 2014-12-30
BR112014018027A2 (es) 2017-06-20
EP2809322A4 (en) 2015-12-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2733644T3 (es) Compuestos para tratar atrofia muscular espinal
EP2819519B1 (en) Compounds for treating spinal muscular atrophy
US9914722B2 (en) Compounds for treating spinal muscular atrophy
AU2013216870B2 (en) Compounds for treating spinal muscular atrophy
JP6193881B2 (ja) 脊髄性筋萎縮症を治療するための化合物
BR112014016443B1 (pt) Mistura de pó e método de fabricação de um componente sinterizado