SA113340270B1 - عملية للتجديد الإنزيمي لعوامل مشتركة خاصة بالأكسدة / الاختزال - Google Patents
عملية للتجديد الإنزيمي لعوامل مشتركة خاصة بالأكسدة / الاختزال Download PDFInfo
- Publication number
- SA113340270B1 SA113340270B1 SA113340270A SA113340270A SA113340270B1 SA 113340270 B1 SA113340270 B1 SA 113340270B1 SA 113340270 A SA113340270 A SA 113340270A SA 113340270 A SA113340270 A SA 113340270A SA 113340270 B1 SA113340270 B1 SA 113340270B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- reaction
- hydroxy
- reduction
- acid
- oxo
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 83
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 79
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 title claims abstract description 68
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 230000009467 reduction Effects 0.000 title claims description 40
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 91
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims abstract description 74
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 claims abstract description 57
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 41
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O NAD(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O 0.000 claims abstract description 34
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 claims abstract description 27
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 63
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 62
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 claims description 61
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 53
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 51
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 47
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 47
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 claims description 25
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 23
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 20
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- -1 hydroxy cholanic acid Chemical compound 0.000 claims description 20
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 18
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 claims description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 18
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 15
- RPKLZQLYODPWTM-KBMWBBLPSA-N cholanoic acid Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]1(C)CC2 RPKLZQLYODPWTM-KBMWBBLPSA-N 0.000 claims description 14
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 14
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229940049920 malate Drugs 0.000 claims description 13
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 claims description 12
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 claims description 11
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 10
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 8
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 claims description 8
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 7
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 claims description 7
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 5
- 102000011145 Hydroxysteroid Dehydrogenases Human genes 0.000 claims description 4
- 108010062875 Hydroxysteroid Dehydrogenases Proteins 0.000 claims description 4
- 102000013460 Malate Dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010026217 Malate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 4
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 3
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 3
- VXUGVISSBXKUEL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropanoic acid;2-oxopropanoic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O.CC(=O)C(O)=O VXUGVISSBXKUEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 claims description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 claims description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- FANCTJAFZSYTIS-IQUVVAJASA-N (1r,3s,5z)-5-[(2e)-2-[(1r,3as,7ar)-7a-methyl-1-[(2r)-4-(phenylsulfonimidoyl)butan-2-yl]-2,3,3a,5,6,7-hexahydro-1h-inden-4-ylidene]ethylidene]-4-methylidenecyclohexane-1,3-diol Chemical compound C([C@@H](C)[C@@H]1[C@]2(CCCC(/[C@@H]2CC1)=C\C=C\1C([C@@H](O)C[C@H](O)C/1)=C)C)CS(=N)(=O)C1=CC=CC=C1 FANCTJAFZSYTIS-IQUVVAJASA-N 0.000 claims 1
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- WVYWICLMDOOCFB-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2-pentanol Chemical compound CC(C)CC(C)O WVYWICLMDOOCFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241001093575 Alma Species 0.000 claims 1
- 101100492584 Caenorhabditis elegans ast-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 claims 1
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101100458361 Drosophila melanogaster SmydA-8 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100136092 Drosophila melanogaster peng gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims 1
- 241001214257 Mene Species 0.000 claims 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims 1
- 244000117054 Rungia klossii Species 0.000 claims 1
- 235000002492 Rungia klossii Nutrition 0.000 claims 1
- 241001464870 [Ruminococcus] torques Species 0.000 claims 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 1
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 claims 1
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 claims 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001012 protector Effects 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 claims 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 51
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 19
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 description 17
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 13
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 13
- 108010007843 NADH oxidase Proteins 0.000 description 12
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 11
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 11
- 241001468191 Lactobacillus kefiri Species 0.000 description 11
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 11
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 11
- 229960005335 propanol Drugs 0.000 description 11
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 11
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 11
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 10
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-L malate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C(O)CC([O-])=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 9
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 9
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 9
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 7
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 102000016912 Aldehyde Reductase Human genes 0.000 description 5
- 108010053754 Aldehyde reductase Proteins 0.000 description 5
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 241000192031 Ruminococcus Species 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N n-butyl carbinol Natural products CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940044613 1-propanol Drugs 0.000 description 4
- KVUXYQHEESDGIJ-UHFFFAOYSA-N 10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-3,16-diol Chemical class C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CC(O)CC1(C)CC2 KVUXYQHEESDGIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 4
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000192130 Leuconostoc mesenteroides Species 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 150000001261 hydroxy acids Chemical class 0.000 description 4
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 description 4
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193457 Anaerocolumna aminovalerica Species 0.000 description 3
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 3
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 3
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 3
- AAGHWTGPJCVOMM-UHFFFAOYSA-K potassium manganese(2+) phosphate Chemical compound [K+].[Mn+2].[O-]P([O-])([O-])=O AAGHWTGPJCVOMM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001147706 Clostridium sardiniense Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 2
- 241000568397 Lysinibacillus Species 0.000 description 2
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N Protium Chemical compound [1H] YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 150000002440 hydroxy compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 2
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000012958 reprocessing Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOZDNCFKGOLECZ-BTVCFUMJSA-N 2-hydroxypropanoic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)C(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O VOZDNCFKGOLECZ-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- PEFXYFJKNHCDGG-UHFFFAOYSA-N 2-oxopropanoic acid propan-1-ol Chemical compound C(CC)O.C(C(=O)C)(=O)O PEFXYFJKNHCDGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710187573 Alcohol dehydrogenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100039702 Alcohol dehydrogenase class-3 Human genes 0.000 description 1
- 101710133776 Alcohol dehydrogenase class-3 Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000606124 Bacteroides fragilis Species 0.000 description 1
- 240000006162 Chenopodium quinoa Species 0.000 description 1
- 241000581364 Clinitrachus argentatus Species 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 101100234002 Drosophila melanogaster Shal gene Proteins 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N Formic acid Chemical compound OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229930194542 Keto Natural products 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000192003 Leuconostoc carnosum Species 0.000 description 1
- 244000141359 Malus pumila Species 0.000 description 1
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 1
- 108010002998 NADPH Oxidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004722 NADPH Oxidases Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 241000134861 Ruminococcus sp. Species 0.000 description 1
- 244000166071 Shorea robusta Species 0.000 description 1
- 235000015076 Shorea robusta Nutrition 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N etoac etoac Chemical compound CCOC(C)=O.CCOC(C)=O OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229950010772 glucose-1-phosphate Drugs 0.000 description 1
- 108010051015 glutathione-independent formaldehyde dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- GBHRVZIGDIUCJB-UHFFFAOYSA-N hydrogenphosphite Chemical compound OP([O-])[O-] GBHRVZIGDIUCJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N keto-D-fructose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000005895 oxidative decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000003329 reductase reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009834 vaporization Methods 0.000 description 1
- 230000008016 vaporization Effects 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/02—Monosaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
- C12P19/36—Dinucleotides, e.g. nicotineamide-adenine dinucleotide phosphate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/002—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by oxidation/reduction reactions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
يتعلق الاختراع الحالي بعملية للتجديد الإنزيمي enzymatic regeneration للعوامل المشتركة الخاصة بredox / reduction NAD+/NADH وNADP+/NADPH في تفاعل يتم في وعاء واحد، حيث، كنتيجة لاثنين على الأقل من تفاعلات redox / reduction المحفزة إنزيميًا الإضافية يستمر في نفس دفعة التفاعل (تفاعلات تكوين المنتج)، تتراكم واحدة من اثنين من عوامل مشتركة خاصة بredox / reduction في صورتها المختزلة و، على التوالي، الأخرى في صورتها المؤكسدة، تتميز بأن أ) في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المختزل إلى الصورة المؤكسدة الأصلية الخاصة به، يتم اختزال أكسجين أو مركب له الصيغة العامة R1C(O)COOH، و ب) في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المؤكسد إلى الصورة المختزلة الأصلية الخاصة به، تتم أكسدة مركب له الصيغة العامة R2CH(OH)R3 وحيث R1، R2 وR3 في المركبات يكون لها معاني مختلفة. شكل 1.
Description
— \ — عملية للتجديد الإنزيمي لعوامل مشتركة خاصة بالأكسدة / الاختزال Process for the enzymatic regeneration of redox [ reduction cofactors الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي بعملية للتجديد الإنزيمي enzymatic regeneration للعوامل المشتركة الخاصة ب reduction NAD+/NADH [redox ران اناخل!+ ناخلا في تفاعل يتم في وعاء (Cua cals كنتيجة لاثنين على الأقل من تفاعلات ١60101100 [redox المحفزة إنزيميًا © الإضافية يستمر في نفس دفعة التفاعل )= تفاعلات تكوين المنتج)؛ تتراكم واحدة من اثنين من عوامل مشتركة خاصة [redox 16000100 في صورتها المختزلة و؛ على التوالي »٠ الأخرى في صورتها المؤكسدة. يتم استخدام تفاعلات reduction / redox المحفزة إنزيميًا في العمليات الصناعية؛ على سبيل المثال» في إنتاج مركبات a~hydroxy acids 5 0-800100 acids « chiral alcohols . ٠ تستخدم غالبية الإنزيمات المستخدمة في تفاعلات reduction / redox الصناعية عوامل مشتركة مثل: NADH أو 80011/ل!. من بين تفاعلات reduction / redox الإنزيمية؛ تكون تلك التفاعلات مثيرة للاهتمام تحديدًا Cua يتم استرجاع عوامل مشتركة خاصة redox reduction بواسطة نظم تجديد العامل المشترك في الموقع. eg هذاء يتمثل السبب في أنه من Sad) استخدام. julie حفزية فقط من العوامل المشتركة باهظة الثمن al L(NAD(P)+/NAD(P)H) ٠١ أدت إتاحة إنزيمات hydrogen الملائمة والإنزيمات الأخرى إلى تطوير نظم تجديد العامل المشترك المتنوعة. يمكن تصنيف نظم التجديد الموصفة إلى الآن باعتبارها: مرتبطة بإنزيم؛ مرتبطة بمادة تتأثر بإنزيم؛ في جسم الكاثن الحي (نظم تجديد العامل المشترك الطبيعي في الكائنات الحية)؛ كيميائية ضوئية؛ كيميائية أو كهرو - إنزيمية. تتعلق العملية الموصفة في هذا الطلب بنظام تجديد مرتبط بإنزيم. Whe ٠ نظم التجديد المرتبطة بإنزيم تكون عالية الانتقاء؛ القابلية للتطبيق من أجل إنتاج منتجات متنوعة ومعدل sale) استخدام Je خاص بالعامل المشترك (إجمالي عدد التحؤل؛ ل111).
ا في منتصف التسعينات»؛ تم استخدام عملية صناعية أولى باستخدام نظام تجديد عامل مشترك مرتبط بإنزيم على صعيد التعامل بالطن. في العملية المذكورة؛ تم استخدام فورمات hydrogen من 5010017 .0800108. تستخدم العمليات الصناعية المعروفة بشكل طبيعي إنزيم أكسدة / اختزال لتخليق المنتج ail إضافي لتجديد العامل المشترك. © يتحتم تمييز العمليات حيث اثنين أو أكثر من تفاعلات reduction [redox الإنزيمية المتضمنة في عملية تكوين المنتج واثنين من النظم الإنزيمية لتجديد العامل المشترك (بشكل فوري أو (nls تستمر في دفعة تفاعل واحدة بدون مركب وسيط يتم عزله. Bian جذبت التفاعلات الإنزيمية المتسلسلة هذه - المشار إليها في هذا الطلب باعتبارها التفاعلات التي تتم في وعاء واحد - اهتمامًا aS حيث إنها تقلل بفعالية من تكاليف التشغيل؛ زمن التشغيل والتأثيرات البيئية. ٠ بالإضافة إلى ذلك؛ gag التسلسلات الإنزيمية الخاصة بتفاعلات reduction / redox إلى تيسير عمليات التحويل غير اليسيرة من حيث التنفيذ بواسطة الطرق الكيميائية التقليدية. بالرغم من ذلك؛ يمثل إجراء العديد من التفاعلات redox) والاختزال) بشكل فوري في تفاعل واحد يتم في وعاء واحد مع تجديد موازي للعامل المشترك تحديًاء حيث Wie ما تكون ظروف التفاعل عالية التباعد مطلوبة لعمليات التحويل الفردية. حتى الآن؛ تم إجراء فقط عدد صغير جدًا من ١ تجارب الوعاء الواحد المشتملة على تفاعلات redox و reduction مع نظم تجديد العامل المشترك المصاحبة. Laid سبق نشره ( Advanced Synth.
Catal., 2008, Volume 351, Issue 9, p. 1303-1311( تم توصيف تجربة تفاعل يتم في وعاء واحد باستخدام hydroxy a -١7 ستيرويد VY HSDH - BY ((HSDH) hydrogen - 150001. في العملية المذكورة؛ تم shal Yo عملية Gaul انتقائية النطاقات وانتقائية التجاسم؛ عند المواضع ١ و١١ من حمض كوليك؛ متبوعًا بعملية اختزال انتقائية النطاقات والتجاسم عند الموضع 7. في تلك العملية كل من؛ تم استخدام lactate dehydrogenase (غير معتمد على (NAD+ وجلوكوز pe) hydrogen معتمد على (NADPH كنظام تجديد العامل المشترك. تم استخدام pyruvate وجلوكوز كمواد تتأثر بالإنزيم مشتركة. بالرغم من أن هذه العملية تهدف بشكل أساسي إلى عملية فعلية تتم في وعاء © واحدء في النهاية تم cha) تفاعلات reduction redox على نحو منفصل. عند عمل «ld
و تقسيم الخطوات المؤكسدة والمختزلة التي تحدث إما فيما يُطلق عليه مفاعل lal spe” أو في مفاعل غشائي. كان التقسيم المذكور ضروريًا من أجل تجنب إنتاج منتجات ثانوية بسبب انتقائية العامل المشترك المنخفضة الخاصة ب NADPH - جلوكوز hydrogen بالرغم من ذلك؛ في التفاعل الذي يتم في وعاء واحد؛ قام جلوكوز NADP+ hydrogen بتحويل Wis NAD+ Unf 0 الأمر الذي تضمن عملية الأكسدة. في العملية الموصفة؛ تم استخدام فقط ١١5 ملي مولار (X40) من المادة المتأثرة بالإنزيم حمض كوليك؛ التي تجعل العملية غير مثيرة للاهتمام من وجهة نظر بيئية. علاوة على ذلك؛ لقد تم توصيف محاولة لإجراء نزع خاصية الراسمية من الراسيمات الخاصة بالمركبات الكحولية الثانوية من خلال كيتون طليعة كيرالي كمركب وسيط باستخدام نظام sles Am.
Chem.
Soc., 2008, Volume 130, p. 13969-13972) als ٠ . ل). تم تحقيق نزع خاصية الراسمية من المركبات الكحولية الثانوية من خلال اثنين من المركبات الكحولية Ry— 5( 00 النوعي) بقيم دقة مختلفة للعامل المشترك. في النظام المذكور؛ تم تجديد NADP بواسطة NADPH أكسيداز (منتج بيروكسيد (hydrogen وتم تجديد NADH بواسطة فورمات hydrogen . تم استخدام فورمات وأكسجين كمواد تتأثر بالإنزيم مشتركة. في ذلك النظام؛ تم استخدام ؛ من الإنزيمات بدون تقسيم خطوات مؤكسدة ومختزلة. تتمثل أحد مساوئ العملية في التركيز المنخفض للغاية الخاص بالمادة المتأثرة بالإنزيم المستخدمة البالغ 7.. = 20.5 الذي يعتبر غير مناسب للأغراض الصناعية. لقد تم توصيف نظام وعاء واحد إضافي في الطلب الدولي 7009/97197488. في العملية المذكورة؛. تمت أكسدة متجاسم لكحول ثانوي نشط ضوئيًا إلى الكيتون ثم اختزاله إلى CO ٠ المقابل الضوئي المناظر؛ حيث تم استخدام اثنين من المركبات الكحولية hydrogen التي لها قيم انتقائية تجاسم ملائمة وقيم دقة مختلفة للعامل المشترك. تم تجديد العوامل المشتركة بواسطة ما يُطلق عليه "نظام نقل هيدريد"؛ باستخدام فقط إنزيم إضافي واحد. لتجديد العوامل المشتركة؛ تم استخدام الإنزيمات المتنوعة مثل: فورمات hydrogen ؛ جلوكوز lactate « hydrogen (dehydrogenase يتمتل أحد مساوئ العملية المذكورة في التركيز المنخفض الخاص بالمواد Ye التي تتأثر بالإنزيم المستخدمة.
يتمثل أحد مساوئ طرق الوعاء الواحد الإنزيمية المشتملة على نظم تجديد العامل المشترك المعروفة في تركيز sale تتأثر بإنزيم المنخفض للغاية؛ الذي يعتبر غير كافي للأغراض الصناعية. على النقيض من ذلك؛ تكون العديد من تفاعلات reduction [redox الإنزيمية الفردية معروفة بالفعل حيث يتم استخدام نظم تجديد العامل المشترك. تم توصيف التجارب باستخدام كائنات دقيقة 0 كاملة؛ نواتج تحلل الخلايا أو الإنزيمات المعزولة مع NAD(P)H متزامن أو تجديد NAD(P)+ يشتمل نظم تجديد العامل المشترك الإنزيمية المعروفة لتفاعلات reduction [ redox الفردية على؛ على سبيل المثال؛ فورمات hydrogen ل NADH (فورمات كمادة تتأثير بالإنزيم مشتركة)ء sp. alcohol dehydrogenase 056000001010385 ل Y) NADH - بروبانول كمادة تتأثير بالإنزيم مشتركة) hydrogen ل H2) NADPH ; NADH كمادة تتأثير بالإنزيم ٠ مشتركة)؛ جلوكوز - + - فوسفات hydrogen من mesenteroides .ا ل NADPH (جلوكوز - 1 - فوسفات كمادة تتأثير بالإنزيم مشتركة)؛ جلوكوز hydrogen ل NADH NADPH (جلوكوز كمادة تتأثير بالإنزيم مشتركة)؛ NADH أكسيداز ل NADH (02 كمادة تتأثير بالإنزيم مشتركة) وفوسفيت NADH 1 hydrogen (فوسفيت كمادة تتأثير بالإنزيم مشتركة). Vo يكمن JB على استخدام تفاعلات reduction / redox الفردي هذا في إنتاج مركبات hydroxy كيرالية؛ بدءًا من مركبات كيتو طليعة كيرالية ملائمة. في العملية المذكورة؛ يتم تجديد العامل المشترك بواسطة إنزيم إضافي. تشترك هذه الطرق في أنها تُشكل تفاعل اختزال معزول وتجديد NAD(P)H (انظر على سبيل المثال؛ 054 152 1 (EP العمليات الإنزيمية التي تستخدم مركبات hydroxy ستيرويد hydrogen ؛ المقترنة مع نظام ٠ تجديد العامل المشترك؛ التي تستمر عند تركيزات sale تتأثر بإنزيم أعلى (تقريبًا >77)؛ لقد تم توصيف )618 731 1 Microbiol.
Biotechnol., ‘WO 2007/118644 EP .امم 127-135 .م 90 Volume 2011). في العمليات المذكورة؛ تم تجديد العوامل المشتركة NAD(P)H أو ddaulsy NAD(P) إنزيمات مختلفة_ (Jie على سبيل lactate (Jl sales pyruvate) dehydrogenase تتأثير بالإنزيم alcohol dehydrogenase «(4S iis brockii ce Yo .1 (أيزو بروبانول كمادة تتأثير بالإنزيم مشتركة) alcohol dehydrogenase
— أ — من brevis ال minor مل Clostridium 1. ethanolicus (Leuconostoc carnosum .beijerinckii بالرغم من ذلك؛ تتعلق هذه العمليات المعروفة فقط بالتفاعلات الفردية المعزولة لأكسدة مركب hydroxy أو لاختزال مركب 0*0 . لقد تم بالفعل توصيف نظام تجديد العامل المشترك ل NADH باستخدام malate al’) dehydrogenase © مالات") ) Can.
J.
Chem.
Eng. 1992, Volume 70, p. 306-312( في النشرة المذكورة؛ تم استخدامه للأمينة الاختزالية pyruvate J بواسطة ألانين 000 . ثم تم استخدام pyruvate J) التي تظهر أثناء تجديد العامل المشترك في تفاعل تكوين المنتج. في 2004/022764 (WO 24 بالمتل توصيفه لتجديد NADH بواسطة malate .dehydrogenase ٠ على نحو مختلف عن النشرة dda من Jd لم يتم استخدام ال pyruvate التي تظهر أثناء تفاعل نزع الكربوكسيل المؤكسد الخاص بمالات بشكل إضافي. مثال على اختزال إنزيمي enzymatic reduction ل لا - زايلوز إلى زايليتول يشتمل على نظام تجديد العامل المشترك لقد تم توصيف ( -3816 .0 ,272 FEBS J., 2005, Volume 7. تم استخدام طفرة معتمدة على NADPH فوسفيت hydrogen من Vo .50 05611000100735 كإنزيم تجديد العامل المشترك. يعتبر هذا ag تفاعلاً فرديًا لتكوين منتج. لقد تم توصيف أمثلة إضافية على إنتاج إنزيمي لمركبات عضوية غنية تشاكليًا (AS على سبيل (Jia) مركبات كحولية أو أحماض أمينية؛ ( Organic Letters, 2003, Volume 5, p. US 7,163,815; Biochem.
Eng.
J., 2008, Volume 39(2) p. ;3649-3650 EP 1 285 962 ;319-327(. في _النظم_المذكورة؛ تم استخدام أكسيداز معتمد على NADPH ٠ من Lactobacillus brevis أو Lactobacillus sanfranciscensis كإنزيم تجديد العامل المشترك. (Jilly تُكوّن التجارب تفاعلات فردية لتكوين منتج. في 2011/000693 WO يتم توصيف ١١بيتا - hydroxy ستيرويد hydrogen إضافة إلى عملية تسمح بتنفيذ تفاعلات reduction / redox عند الموضع VY من 4 - أندروستين - OF ١١ - دايون. مرة أخرى» هناك تفاعل اختزال معزول. تفتقر تفاعلات redox أرو reduction
التي تستمر بشكل فردي المذكورة Led سبق لمزايا التفاعل الذي يتم في وعاء واحدء؛ على سبيل (JE) تأثير التكلفة كنتيجة لتوفير الوقت والمواد إضافة إلى تحوّل أفضل بسبب التفاعلات التسلسلية الإنزيمية. الوصف العام للاختراع © الهدف من العملية وتوصيفها
كان الهدف من الاختراع الحالي هو توفير عملية لتجديد العوامل المشتركة الخاصة redox / reduction NAD+/NADH و( أو؛ على سبيل المثالء 5 « NADP+/NADPH من أجل إجراء اثنين أو أكثر من تفاعلات reduction / redox المحفزة Lay) معها في دفعة تفاعل واحدة بطريقة اقتصادية.
٠ وفقًا للاختراع الحالي؛ يتم تحقيق الهدف المذكور في عملية من النوع المذكور مبدثيًا؛ في تلك العملية يتم توفير file للتجديد الإنزيمي regeneration 02/018116©_للعوامل المشتركة الخاصة reduction NAD+/NADH / redox. و of على سبيل JEN وء NADP+/NADPH في تفاعل يتم في وعاء cml حيث؛ كنتيجة لاثنين على الأقل من تفاعلات reduction / redox المحفزة Lay) الإضافية يستمر في نفس دفعة التفاعل (تفاعلات تكوين
VO المنتج)؛ تتراكم واحدة من اثنين من عوامل مشتركة خاصة reduction [redox في صورتها المختزلة و؛ على التوالي؛ الأخرى في صورتها المؤكسدة؛ تتميز هذه العملية بأنه (I في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المختزل إلى الصورة المؤكسدة الأصلية الخاصة به؛ يتم اختزال أكسجين أو مركب بالصيغة العامة
0 R, تاب
OH
0 Yo
EY YY
A — — حيث R] تمثل مجموعة (Cl - C4) - ال7»ا8 ذات سلسلة خطية أو متفرعة أو مجموعة Cl) «carboxy alkyl - )- C4 ب) في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المؤكسد إلى الصورة المختزلة الأصلية الخاصة به؛ تتم أكسدة (C8 - C4) - سيكلو ألكانول أو مركب بالصيغة العامة OH EN R, ١ حيث يتم اختيار 42 و43 كل على حدة من المجموعة التي تتكون من (C1 - C6) H ألكيل؛ حيث يكون alkyld) ذا سلسلة خطية أو متفرعة؛ (Jail )61 - C6) حيث يكون الألكنيل ذا ALL خطية أو متفرعة ويشمل من واحدة إلى ثلاثة من روابط مزدوجة؛ أريل» تحديدًا 66 - 2 أريل» كربوكسيل» أو «carboxy alkyl )61 - C4) تحديدًا أيضنًا «cycloalkyl على ٠ سببيل المقالء .cycloalkyl C8 - C3 عملية يتم توفيرها وفقًا للاختراع الحالي تتم Und الإشارة إليها باعتبارها "عملية By للاختراع الحالي"'. في جانب إضافي» يوفر الاختراع الحالي عملية Ga, للاختراع الحالي للتجديد الإنزيمي Jel! enzymatic regeneration المشتركة الخاصة reduction / redoxo ٠ ل NAD+/NADH و أو؛ على سبيل المثال» 5« NADP+/NADPH في تفاعل يتم في وعاء واحدء؛ (Cua كنتيجة لاثنين على الأقل من تفاعلات reduction / redox المحفزة Lj) الإضافية يستمر في نفس dada التفاعل )= تفاعلات تكوين المنتج)؛ تتراكم واحدة من اثنين من عوامل مشتركة خاصة ب*00©" / 60110000" في صورتها المختزلة و؛ على التوالي» الأخرى في صورتها المؤكسدة؛ 9ص تتميز هذه العملية بأن أ) أثناء تجديد العامل المشترك المؤكسد؛ يتم اختزال مركب له الصيغة العامة
q —_ _ 0 حب ب OH 0 حيث 1» تمثل بها استبدال أو ليس بها استبدال C4 - 1© مجموعة ألكيل؛ و ب) أثناء تجديد العامل المشترك المختزل؛ تتم أكسدة مركب له الصيغة العامة OH EN R, I حيث يتم اختيار R2 و J, R3 مستقل عن AY J من المجموعة التي تتكون من
- ١ حيث يكون الالا6ا81 ذا سلسلة خطية أو متفرعة؛ (Ji )-)61-©6 )" ألكنيل» حيث يكون الألكنيل ذا سلسلة خطية أو متفرعة واختياريًا يشمل ما يصل (C1-C6) — )" إلى ثلاثة روابط مزدوجة؛
«cycloalkyl C8 - C3 ابوالهواءلاه؛ تحديدًا - )6 ٠ «Jay C12 - 6 تحديدًا «Jay - (° يكون بيروفات؛ اختياريًا أيضًا ١ في الحالة حيث المركب ccarboxy alkyl (C1-C4) - (1 كربوكسيل؛ AY و43 بشكل مستقل عن R2 في جانب إضافي؛ في عملية وفقًا للاختراع الحالي؛ يتم اختيار
V0 من المجموعة التي تتكون من ا (JS )61 - C6) حيث يكون الال7اا8 ذا سلسلة خطية أو متفرعة؛ (Jus )61 - C6) حيث يكون الألكنيل ذا سلسلة خطية أو متفرعة ويشمل من واحدة إلى ثلاثة من روابط مزدوجة؛ أريل» تحديذًا 6© - C12 أريل؛ كربوكسيل» أو (Cl - C4) .carboxy alkyl
_ \ «=
مقارنة بالفن السابق؛ تُشكل By Lhe للاختراع الحالي Guat ملحوظًا في العمليات حيث تتم أكسدة واختزال المركبات (lagi) حيث أنها تسمح بتشغيل تفاعلات reduction yredox المطلوبة إضافة إلى التفاعلات المصاحبة لتجديد العامل المشترك في دفعة تفاعل واحدة و؛ في نفس الوقت؛ لاستخدام تركيزات sale تتأثر بإنزيم أعلى بشكل كبير مما هي عليه Gy للفن السابق.
© في عملية وفقًا للاختراع الحالي؛ يتم استخدام العوامل المشتركة NADH و/ أو NADPH هذا الصددء تشير NAD+ إلى الصورة المؤكسدة 5 NADH تشير إلى الصورة المختزلة من داي نيوكليوتيد نيكوتيناميد أدينين؛ بينما NADPH تشير إلى الصورة المؤكسدة 5 NADPH تشير إلى الصورة المختزلة من فوسفات داي نيوكليوتيد نيكوتيناميد أدينين. تتم الإشارة إلى تفاعلات reduction / redox المحفزة إنزيميًا التي لا JSS جزءًا من تجديد
أ العامل المشترك و؛ في عملية FER للاختراع الحالي « المتضمنة في عملية تكوين المنتج في هذا الطلب باعتبارها 'تفاعل (تفاعلات) الأكسدة" و"تفاعل (تفاعلات) الاختزال". يتم تلخيص "تفاعل (تفاعلات) الأكسدة" و'تفاعل (تفاعلات) الاختزال" تحت المصطلح 'تفاعلات تكوين المنتج". تشتمل التفاعلات المكونة للمنتج في عملية Ey للاختراع الحالي على؛ في كل حالة؛ تفاعل أكسدة واحد على الأقل وتفاعل اختزال واحد على الأقل.
١ إذا تم استخدام NAD+ كعامل مشترك لتفاعل (تفاعلات) الأكسدة؛ يكون NADPH هو العامل المشترك لتفاعل (تفاعلات) الاختزال. إذا تم استخدام NADP+ كعامل مشترك لتفاعل (تفاعلات) الأكسدة؛ يكون NADH هو العامل المشترك لتفاعل (تفاعلات) الاختزال. في عملية وفقًا للاختراع Jal يمكن إجراء تفاعل (تفاعلات) redox وتفاعل (تفاعلات) UW) reduction على نحو متوازي زمنيًا أو على نحو متتابع cline) يُفضل على نحو متوازي Lie)
٠٠ في نفس دفعة التفاعل. تتم الإشارة إلى المركبات التي يتم استخدامها بهدف تكوين منتج في هذا الطلب باعتبارها مواد تتأثر بالإنزيم. تتم الإشارة إلى المركبات التي تتفاعل أثناء تجديد العامل المشترك في هذا الطلب باعتبارها مواد تتأثر بالإنزيم مشتركة.
— \ \ — في عملية Ey للاختراع الحالي» يمكن استخدام مادة تتأثر بإنزيم واحدة إضافة إلى العديد من مواد تتأثر بالإنزيم. عند عمل ذلك؛ يمنك أن يحدث 6000000 و/ أو تفاعل (تفاعلات) redox على نفس المادة المتأثرة بالإنزيم (المركب الرئيسي الجزيئي) Unis على مواد تتأثر بالإنزيم مختلفة؛ يُفضل على نفس المادة التي تتأثر بالإنزيم. علاوة على ذلك» في عملية Ey للاختراع الحالي؛ © يمكن أن تحدث تفاعلات [reduction أو redox على نفس المجموعات الوظيفية أو على تكون عملية Ey للاختراع الحالي ملائمة للعديد من التفاعلات؛ على سبيل المثال لتحويل تشكيل مركبات hydroxy المتجاسمة عبر redox إلى الكيتون المناظر و reduction التالي إلى مركب hydroxy J) نوعي التجاسم المقابل. ٠ ثتم الإشارة إلى عملية حيث اثنين أو أكثر من تفاعلات reduction [redox الإنزيمية المتضمنة في عملية تكوين منتج واثنين من النظم الإنزيمية لتجديد العامل المشترك تستمر في دفعة تفاعل واحدة بدون مركب وسيط يتم عزله في هذا الطلب باعتبارها "التفاعل الذي يتم في وعاء واحد". ينطوي ذكر حمض أو ملح لحمض في هذا الطلب على المصطلح غير المذكور المناظر. بالمثل؛ ذكر الأحماض؛ تحديدًا الأحماض الصفراوية؛ يتضمن في هذا الطلب كل الإسترات المشتقة منه. ٠5 علاوة على ذلك؛ يتم تضمين المركبات المزودة (جزئيًا) بمجموعات حماية في ذكر المواد المتضمنة. في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية Ey للاختراع الحالي بأن تفاعل redox وتفاعل reduction يستمرا على نحو متوازي زمنيًا. في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية Gy للاختراع الحالي بأن كل من تفاعل redox Ye وتفاعل reduction يحدثا على نفس المركب الرئيسي الجزيثي. في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية وفقًا للاختراع الحالي ash يتم استخدام ؛ كمركب له الصيغة | (حمض ؟ - 0*0 )؛ pyruvate (مادة تتأثر بإنزيم مشتركة) يتم اختزاله إلى لاكتات بواسطة Jactate dehydrogenase مما يعني cas في تفاعل التجديد الذي يحول
— \ \ —
العامل المشترك المختزل إلى الصورة المؤكسدة الأصلية الخاصة به؛ يتم اختزال pyruvate إلى lactate dehydrogenase لاكتات بواسطة
في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية وفقًا للاختراع الحالي بأنه يتم استخدام ؛
كمركب له الصيغة اا (كحول ثانوي)؛ ١ - بروبانول (كحول أيزو بروبيل؛ (IPA (مادة تتأثر © بإنزيم مشتركة) تتم أكسدته إلى acetone بواسطة calcohol dehydrogenase مما يعني «il
في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المؤكسد إلى الصورة المختزلة الأصلية الخاصة به؛
تتم أكسدة ١ - بروبانول إلى acetone بواسطة .alcohol dehydrogenase
في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية Gy للاختراع الحالي aly يتم استخدام
أكسجين يتم ala) بواسطة إنزيم NADH أكسيداز.
٠ في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية وفقًا للاختراع الحالي بأنه يتم استخدام؛ ككحول ثانوي؛ مالات (مادة تتأثر بإنزيم مشتركة) تتم أكسدته إلى pyruvate و0602 بواسطة أوكسالو أسيتات - malate dehydrogenase نازعة للكربوكسيل ("إنزيم مالات")؛ على سبيل dua (JUAN في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المؤكسد إلى الصورة المختزلة الأصلية Lal به؛ تتم أكسدة مالات إلى pyruvate و602© بواسطة malate
.dehydrogenase ١٠ المتولدة في تفاعل أكسدة / اختزال إضافي لا يعمل pyruvate في هذا النموذج؛ يتم تفاعل لتكوين منتج؛ ولكنه يُشكل تفاعل تجديد العامل المشترك الثاني. في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية وفقًا للاختراع الحالي بأنه يتم استخدامها لإجراء تفاعل أكسدة واحد على الأقل وتفاعل اختزال واحد على الأقل؛ على التوالي»؛ في نفس دفعة
٠ التفاعل على المركبات التي لها الصيغة العامة
_ \ —
RR, 2
Rg
N 0s 1 : 8 15 3 ل 7 سس
R; 4 5 6 و R, 1 ؛ OXO أو مجموعة hydroxy ic seas ؛ methyl ic seas chydrogen تشير إلى R4 « methyl أو مجموعة OXO مجموعة « hydroxy ie seas 7/0060 تشير إلى RS « hydroxy أو مجمرعة hydrogen تشير إلى 86 © R7 تشير إلى —COR13 <hydrogen حيث R13 تكون مجموعة alkyl 01 - C4 تكون ليس بها استبدال أو بها استبدال بمجموعة hydroxy ؛ أو carboxy a Cl - C4 مجموعة alkyl تكون بها استبدال؛ تحديدًا بمجموعة hydroxy ؛ أو ليس بها استبدالء أو 6 و87 Ge تشير إلى مجموعة 0*0 ¢ REY تشير إلى methyl ic seas chydrogen ؛ hydroxy ic seas أو مجموعة OXO ؛ RO تشير إلى methyl ic seas chydrogen ؛ hydroxy ic seas أو مجموعة OXO ؛ R10 تشير إلى halogen a § methyl ic seas hydrogen 1 تشير إلى hydrogen مجموعة methyl ؛ مجموعة hydroxy ؛ مجموعة OXO أو «halogen و Ye 12 تشير إلى 7/0060 hydroxy ie seas ؛ مجموعة OXO أو مجموعة methyl ؛ حيث العنصر التركيبي
— ¢ \ — يشير إلى benzene ring أو حلقة مشتملة على 6 ذرات كربون وصفر» ١ أو ¥ من الراوبط المزدوجة ¢C - C حيث يُفضل أن يتم توفير المادة (المواد) EEA) بالإنزيم عند تركيز يبلغ <75 (وزن / حجم) في dada التفاعل لتفاعل (تفاعلات) reduction المتضمن في عملية تكوين المنتج. © في نموذج مفضل_ من الاختراع (Jal تتميز عملية وفقًا للاختراع الحالي ob تحوّل dehydroepiandrosterone إنزيمي (DHEA) بالصيغة CH, 7 S00 H HO إلى تستوستيرون بالصيغة S00 vill 8 80 H 0 Ye يحدث. في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية Gy للاختراع الحالي بأن تشكل مصاوغات صنوية إنزيمي خاص بالمركب 7/0707 ستيرويد حمض 07 aV - داي Bo - hydroxy - كولانيك (حمض كينو ديوكسي كوليك « (C DC بالصيغة
اج \ — HC, 0 CH, OH S00 Iv : 9 HO" “OH H يحدث عبر redox إلى (KLC) ketolithocholic acid بالصيغة HC, 0 CH, OH S00 لا : 9 HO" 0 H reduction إلى حمض BY «af - داي Bo - hydroxy - كولانيك (حمض يورسو ديوكسي © كوليك؛ (UDC بالصيغة 0 0و CH, OH oi 1) الا 8 : 9 HO" OH H Je سبيل المثال؛ باستخدام اثنين من؟ stereospecific hydroxysteroid dehydrogenases نوعية المتقابلة. في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية وفقًا للاختراع الحالي بأنه يتم استخدامها ٠ -لللتشكل الإنزيمي للمصاوغات الصنوية الخاصة ب 07 caV 097 - تراي Bo - hydroxy - حمض كولانيك (حمض كولانيك) بالصيغة
— \ أ —
H,C, 0
OH 3 7 - CH, ١ OH
S00 : IX 9
HO" “OH
H
ما كولانيك - Bo - oxo - VY - hydroxy 7ه - داي «af للحصول على redox أ) عبر بالصيغة (CDC - oxo - VY) 0 HC, 0
CH,
OH
S00 : X 9 0م OH
H o 0*0 داي - ١١ ¢¥ - hydroxy - af الذي يتم تفاعله بشكل إضافي للحصول على حمض بالصيغة (KLC - 0x0 VY) كولانيك - Bo - o HC, 0
CH,
OH
S00 : Xl 9
HO" 0
H a, 73 ~dihydroxy—12-oxo—-Yz stereoisomic hydroxy التالي إلى مركب reduction و بالصيغة (keto-ursodeoxycholanic acid-) Y) 5B-cholanic acid ٠
EY YY
0 ناوا 0
CH,
OH
0 08 : XI 7
HO" OH
H
أو a, 12a—dihydroxy—7-oxo-5B—cholanic 86107 ب) عبر *«600! للحصول على بالصيغة نم 0
OH 377 : CH, : OH زرخ : Xl 8
HO" 0
H ° - Bo - 0x0 -داي ١١ ¥ - hydroxy - af متبوعًا بأكسدة إنزيمية للحصول على حمض للحصول على مركب Jul reduction 3 XI بالصيغة (KLC - oxo VV) كولانيك a, 73 -dihydroxy-12-oxo-5@3—cholanséure (12-Y stereoisomic hydroxy
XII بالصيغة (keto—ursodeoxycholsaure أو ١ ٠ a, 12a—dihydroxy—7-oxo-5B—cholanic 806107 للحصول على redox ج) عبر «af للحصول على حمض enzymatic reduction باختزال إنزيمي legis XH بالصيغة تراي دروكسي 5 8 - كولانيك بالصيغة - ٠١ » 8 7
م \ — H,C, 0 OH 5 7 CH, 0 ١ OH S00 XIV 8 9 HO" OH H redox 4 التالية للحصول على مركب a, 7B3~dihydroxy—12-Y stereoisomic hydroxy (keto—ursodeoxycholanic acid—\Y) oxo-5B-cholanic acid بالصيغة ¢XIl على سبيل المثال؛ باستخدام stereospecific hydroxysteroid dehydrogenases ¥V 0 نوعية؛ يشتمل ؟ منها على تجاسم نوعي متقابل. في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية وفقًا للاختراع الحالي بأنه يتم استخدام sale سكرية C5 - أو C6 كمادة متأثرة eal على Jil dow يتم استخدام تلك العملية isomerization مركبات سكرية C5 - أو .C6 في نموذج مفضل من الاختراع الحالي؛ تتميز عملية Ey للاختراع الحالي بأن أزمرة جلوكوز ٠ تحدث من خلال reduction إلى redox y sorbitol إلى fructose على سبيل المثال؛ يتم استخدام تلك العملية isomerization of glucose من خلال reduction إلى sorbitol redox التالية إلى fructose يُفضل أن يتم إجراء عملية Ey للاختراع الحالي في نظام مائي؛ حيث يصبح من الممكن أن يتم توفير المادة المتأثرة بالإنزيم لتفاعل Gia reduction redox في Ala غير مذابة في صورة Yo معلق و أو كطور سائل ثان. في نموذج بعينه؛ تتميز عملية وفقًا للاختراع الحالي ash يتم توفير المادة (المواد) المتأثرة بالإنزيم لتفاعل (تفاعلات) redox المتضمنة في عملية تكوين منتج في دفعة التفاعل عند تركيز يبلغ على الأقل 5 C139) A / حجم) وأكثر 3 يُفضل 7 C139) A / حجم) وأكثر 3 Baad ا يُفضل 9 C139) A / حجم) وأكثرء على سبيل المثال؛ من C139) lo / حجم) إلى JPEN / C139) AR مثل: من C139) lo /
-؟ -١ حجم) إلى C139) ARS / حجم) على سبيل المثال ؛ من م (وزن / حجم) إلى C139) ZY / حجم)؛ مثل: من 75 (وزن / حجم) إلى 7٠١ (وزن / حجم). في نموذج بعينه؛ تتميز عملية FER للاختراع الحالي lea casly يتم تحقيق تحوّل يبلغ ARTS تحديدًا >5 في تفاعلات تكوين المنتج؛ على سبيل Jal) من ARP إلى ARE مثل: من IN © إلى JAY JAY JAY JA ككل مكل تحال JAN JAY حك أو ٠ في عملية وفقًا للاختراع الحالي؛ يمكن إضافة محلول منظم إلى النظام المائي. تتضمن المحاليل المنظمة الملائمة؛ على سبيل المثال؛ فوسفات بوتاسيوم» تريس - HOE وجليسين بقيمة PH تتراوح من © إلى ١٠؛ يُفضل من ١ إلى 9. علاوة على ذلك أو على نحو بديل؛ يمكن إضافة أيونات لتثبيت الإنزيمات؛ مثتل: +92 أو مواد إضافة أخرى مثل: ods pls إلى النظام. في عملية Gy ٠ ا للاختراع الحالي؛ عادة ما يكون تركيز العوامل المشتركة المضافة NAD(P)+ و NAD(P)H فيما بين ©000١ ملي مولار و١٠ ملي مولار؛ يُفضل فيما بين 00٠ ملي مولار و١ ملي مولار. اعتماذًا على الإنزيمات المستخدمة؛ يمكن إجراء العملية By للاختراع الحالي عند درجة حرارة تتراوح من ١٠م إلى ١0 م؛ يُفضل من ١٠م إلى fo ينبغي إدراك of مركبات hydroxy ستيرويد (HSDH) hydrogen هي إنزيمات تحفز أكسدة Vo مجموعات hydroxyl إلى مجموعات الكيتو المناظرة eof نحو عكسي؛ اختزال مجموعات كيتو إلى مجموعات hydroxy Jl المناظرة عند هيكل الستيرويد. تكون مركبات hydroxy ستيرويد | (Ka ddshydrogen استخدامها لتفاعلات redox [ le reduction مركبات hydroxy ستيرويد هي؛ على سبيل المثال» Ba—HSDH أو -38 1501 أو «7a-HSDH أو 78-11504 أو .17B-HSDH. Yo يمكن الحصول على إنزيمات ملاثمة بنشاط 1انا15ا-70؛ على سبيل المثال؛ من Clostridia Escherichia coli «(Clostridium sordelii «Clostridium absonum) أو .Bacteroides fragilis EY YY
=« \ — يمكن الحصول على إنزيمات ملائمة بنشاط TB-HSDH ؛ على سبيل JE من Ruminococcus sp. أى .Clostridium absonum يمكن الحصول على مركبات (ADL lactate dehydrogenase على سبيل المثال؛ من .oryctolagus cuniculus © يمكن الحصول على مركبات alcohol dehydrogenase ملائمة؛ على سبيل المثال؛ من .Lactobacillus kefir .Candida tropicalis من «JB يمكن الحصول على زايلوز ريدكتاز ملاثم؛ على سبيل sheep على سبيل المثال» من (483 hydrogen sorbitol يمكن الحصول على مركبات .Malus domestica J Bacillus subtilis liver
Leuconostoc أكسيداز ملائمة؛ على سبيل المثال» من NADH يمكن الحصول على مركبات Vo .Clostridium aminovalericum (Streptococcus mutans (mesenteroides في عملية وفقًا للاختراع الحالي؛ يُفضل أ يتم استخدام الإنزيمات كبروتينات تم التعبير عنها على حيث يُفضل أن يتم الاستمرار في (EL coli نحو ناتج عودة الترابط الجيني بصورة مبالغ فيها في استخدام نواتج تحلل الخلايا المناظرة بدون أية تنقية إضافية. وبالتالي؛ تناظر وحدة الإنزيم لا1 Vo مقدار الإنزيم المطلوب لتفاعل ١ ميكرو مول من مادة تتأثر بإنزيم في الدقيقة. شرح مختصر للرسومات يعرض الشكل ١ مخطط التفاعل الخاص بتشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو ديوكسي كوليك إلى حمض يورسو ديوكسي كوليك عبر المركب الوسيط حمض 7ه - hydroxy - ا oxo - 85 - كولانيك؛ مع تجديد العامل المشترك باستخدام ١ - بروبانول وبيروفات. Yo يعرض الشكل ١ مخطط التفاعل الخاص بتشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو ديوكسي كوليك إلى حمض يورسو ديوكسي كوليك عبر المركب الوسيط حمض hydroxy — af Bo - oxo ١7 - - كولانيك؛ مع تجديد العامل المشترك باستخدام مالات وبيروفات.
yy يعرض الشكل ؟ مخطط التفاعل الخاص بتشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو hydroxy - af ديوكسي كوليك إلى حمض يورسو ديوكسي كوليك عبر المركب الوسيط حمض بروبانول وأكسجين. - ١ كولانيك؛ مع تجديد العامل المشترك باستخدام - Bo - oxo لا - يعرض الشكل ؛ مخطط التفاعل الخاص بأزمرة جلوكوز إلى 00101056؛ مع تجديد العامل المشترك باستخدام ؟ - بروبانول وبيروفات. مع تجديد العامل cfructose يعرض الشكل © مخطط التفاعل الخاص بأزمرة جلوكوز إلى المشترك باستخدام ¥ - بروبانول وأكسجين. يعرض الشكل +7 مخطط التفاعل الخاص بتشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كولانيك عبر المركبات الوسيطة حمض a, 7B-dihydroxy—12-oxo-5B—cholanic إلى ح280107 لا = hydroxy - af كولانيك وحمض - fo - oxo - VY - hydroxy لاله - داي «af | ٠ بروبانول وبيروفات. - ١ كولانيك مع تجديد العامل المشترك باستخدام - fo - 0*0 -داي VY مخطط التفاعل الخاص بتشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كولانيك ١7 يعرض الشكل عبر المركبات الوسيطة حمض a, 7B-dihydroxy—12-oxo-5B—cholanic إلى ح280107 «Y = hydroxy - af كولانيك وحمض - fo - oxo - VY - hydroxy داي - aV «af كولانيك مع تجديد العامل المشترك الخاص بتشكل المصاوغات - Bo - 0x0 gla - VY Ve a, 73—dihydroxy—12-oxo-5@3—cholanic 80107 J الصنوية الخاصة بحمض كولانيك كولانيك - Bo - oxo - ١١ - hydroxy داي - 07 «af عبر المركبات الوسيطة حمض كولانيك مع تجديد العامل المشترك - Bo - 0X0 داي - VY لاء - hydroxy — af وحمض باستخدام باستخدام ؟ - بروبانول وأكسجين. والشكل 4 مخططات التفاعل الخاصة بتشكل المصاوغات الصنوية الخاصة A يعرض الشكل Yo عبر المركبات a, 7B-dihydroxy—12-oxo-53—cholanic 8650 بحمض كولانيك إلى ح7 - 07 كولانيك وحمض - Bo - oxo - VY - hydroxy 7ه - داي «af الوسيطة حمض - ١ كولانيك مع تجديد العامل المشترك باستخدام - Bo - 0X0 داي - VY لاء - hydroxy وأكسجين. pyruvate بروبانول»
— \ \ — يعرض الشكل ٠١ مخططات محتملة لتفاعل خاصة بتشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كولانيك إلى ح86107 a, 7B-dihydroxy-12-oxo-5B-cholanic .من خلال مركبات وسيطة مختلفة ونظم تجديد العامل المشترك. لتجديد NAD+ على نحو بديل؛ تم استخدام lactate pyruvate) dehydrogenase كمادة متأثرة بإنزيم) 5 NADH أكسيداز (أكسجين كمادة تتأثر © بالإنزيم). لتجديد NADPH تم استخدام alcohol dehydrogenase (أيزو بروبانول كمادة متأثرة بإنزيم). يعرض الشكل ١١ مخطط التفاعل الخاص بتشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو ديوكسي كولانيك إلى حمض يورسو ديوكسي كولانيك عبر المركب الوسيط حمض 07 - Bo - oxo ١ - hydroxy - كولانيك (حمض ١ - كيتو ليثوكولانيك = (TK-LCA = KLC Ve مع تجديد العامل المشترك باستخدام ¥ - بروبانول و - بنتانول (في كل حالة alcohol (lactate dehydrogenase) pyruvate Lay (dehydrogenase وأكسجين NADH) أكسيداز) . الوصف ١ لتفصيلي: في الأشكال؛ يتم استخدام الاختصارات التالية: hydrogen sorbitol BsSDH ١٠١ من Bacillus subtilis CA = حمض a¥ «a¥ 017 - تراي Bo - hydroxy - كولانيك ca) Y BY cal = 7B3-CA - تراي Bo - hydroxy - حمض كولانيك Clostridium aminovalericum NADH Caoxo أكسيداز CDCA «CDC حمض aV «a¥ -داي Bo - hydroxy - كولانيك Candida tropicalis CtXR 0 ٠ زايلوز ريدكتاز hydroxy — av Ta—-HSDH ستيرويد hydrogen hydroxy - BY 73-HSDH ستيرويد hydrogen EY YY
دس hydroxy — 7 = 12a-HSDH ستيرويد 9617 010لا KLC حمض hydroxy — af - لا - Bo - oxo — كولانيك TK-LCA = حمض hydroxy — af - لا - Bo - oxo — كولانيك lactate dehydrogenase LacDH معتمد على NAD(H) ه Lactobacillus kefir alcohol dehydrogenase LKADH معتمد على
NADP(H) أكسيداز - Leuconostoc mesenteroides NADH = Lmoxid
NADP(H) معتمد على malate dehydrogenase E. coli MalDH كولانيك - Bo - oxo - لا - hydroxy داي - a ١١ «af حمض = CA- oxo ١ =CDC-oxoY ٠ حمض «af لاله - داي Bo - oxo - ١١ - hydroxy - كولانيك KLC- 0*»0© ١ = حمض hydroxy - a¥ - لاء» VY - داي Bo - oxo - كولانيك UDC- oxo VY = حمض BY «af - داي Bo - oxo - VY - hydroxy - كولانيك hydrogen sorbitol sheep liver SISDH SmOxo طفرات استربتوكوكس NADH أكسيداز UDC. UDCA yo حمض BY «af - داي Bo — hydroxy — كولانيك في الأمثلة التالية؛ يتم إعطاء كل بيانات درجة الحرارة بالدرجة المئوية (م). يتم استخدام الاختصارات التالية: EtOAc أسيتات إيثيل EY YY
— ¢ \ — h ساعة (ساعات) IPA كحول أيزو بروبيل Y) - بروبانول ) MeOH ميثانول Rt درجة حرارة الغرفة © مثال ١
تشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو ديوكسي كوليك إلى حمض يورسو ديوكسي كوليك بواسطة hydroxy - aV ستيرويد hydrogen و hydroxy 3 -١7 ستيرويد hydrogen ؛ باستخدام نظام تجديد عامل مشترك معتمد على lactate dehydrogenase - رو alcohol dehydrogenase
Yo تشتمل شحنة ٠.٠ مل على Cu مجم حمض كينو ديوكسي كوليك ١١ وحدة من ناتج عودة ترابط جيني hydroxy - aV ستيرويد ١ «Escherichia coli («hydrogen وحدات من ناتج Lali sae جيني hydrogen usu hydroxy fB -١7 من ade ad الدوران Ruminococcus إضافة إلى 0.+ ملي NAD+ Noe و +.Y ملي مولار .NADPH لتجديد (NAD+ يتم استخدام ١ وحدات من ناتج عودة ترابط جيني dehydrogenase 1801816 و Yo.
Vo ملي مولار pyruvate الصوديوم. لتجديد (NADPH يتم استخدام 7 وحدات من ناتج sage ترابط جيني dehydrogenase ا81600 من Lactobacillus kefir وبشكل أولي 4 ا (وزن / حجم) . يتم إجراء التفاعل في محلول منظم من فوسفات بوتاسيوم ماني ) Yeo ملي مولار 13 pH (VLA = عند YO م؛ مع الرج المستمر Ao) لفة في الدقيقة). يستمر استخدام نظام مفتوح من أجل تيسير jas 8061006 ولإزاحة التفاعل تجاه حمض يورسو ديوكسي كوليك. تتم إضافة IPA
ART dem Yo (وزن / حجم) بعد 1 calle 77.6 (وزن / حجم) من IPA بعد ١ ساعة 4 (وزن / حجم) من IPA بعد YE ساعة و720.8 (وزن [ حجم) من IPA بعد 560 ساعة. بالإضافة إلى ذلك؛ تتم إضافة ٠١ ميكرو لتر من ¢ - methyl - ؟ - بنتانول بعد YE ساعة. تتم إضافة ٠٠١ ميكرو لتر من ؟ - بنتانول إضافة إلى 71:6 (وزن / حجم) من IPA بعد £7
اج \ —
ساعات. بعد $A ساعة؛ بلغت نسبة حمض يورسو ديوكسي كوليك في كل الأحماض الصفراوية
في خليط التفاعل > JAY
١ Jb
تشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو ديوكسي كوليك إلى حمض يورسو ديوكسي hydrogen ستيرويد hydroxy |] -١7 و hydrogen ستيرويد hydroxy - aV كوليك بواسطة ©
؛ باستخدام نظام تجديد عامل مشترك معتمد على lactate dehydrogenase -ر malate dehydrogenase
تشتمل شحنة ٠.٠ مل على Cu مجم حمض كينو ديوكسي كوليك + ٠ وحدة من ناتج عودة ترابط
جيني hydroxy - av ستيرويد hydrogen من ٠١ «Escherichia coli وحدة من ناتج عودة ٠ تابط جيني hydroxy ] -١7 ستيرويد hydrogen من ad عزم الدوران Ruminococcus
إضافة إلى ١ ملي مولار NAD+ و١ ملي مولار .NADPH لتجديد «(NAD+ يتم استخدام أ
وحدة من (Sigma — Aldrich) lactate dehydrogenase ؛ ولبدء التفاعل؛ يتم استخدام
١5 ملي مولار pyruvate الصوديوم. لتجديد (NADPH يتم استخدام Yo وحدة من ناتج عودة
ترابط جيني malate dehydrogenase من Escherichia coli و١٠؟ ملي مولار مالات Yo الصوديوم . يتم إجراء التفاعل في محلول منظم من فوسفات بوتاسيوم ماني ) Yoo ملي مولار « pH
(VLA = عند YO م؛ مع الرج المستمر Ao) لفة في الدقيقة). يستمر استخدام نظام مفتوح من
أجل السماح بتسريب 602 المتولد. تم استخدام جرعات إضافية بمقدار ٠١ وحدة من -70
HSDH أيضنًا ٠ وحدة من lactate dehydrogenase بعد ١١ ساعة وبعد 56 ساعة. تم
استخدام جرعات إضافية بمقدار ٠١ وحدات من 78-1150071 بعد dela YE dela ٠١ 4 ٠ ساعة fA ساعة. علاوة على ذلك؛ تم استخدام جرعات إضافية بمقدار ٠١ وحدة من malate
dehydrogenase بعد 5٠0 ساعة. بعد (dela YY نسبة حمض يورسو ديوكسي كوليك في كل
الأحماض الصفراوية في خليط التفاعل يبلغ تقريبًا JA
مثال ؟
— أ \ — تشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو ديوكسي كوليك إلى حمض يورسو ديوكسي كوليك بواسطة hydroxy - aV ستيرويد hydrogen و hydroxy 3 -١7 ستيرويد hydrogen ؛+ باستخدام نظام تجديد عامل مشترك معتمد على إنزيم NADH أكسيداز - و alcohol dehydrogenase 2 تشتمل شحنة ٠.٠ مل على Cu مجم حمض كينو ديوكسي كوليك ١١ وحدة من ناتج عودة ترابط جيني 6097 - hydroxy ستيرويد hydrogen من V.0 Escherichia coli وحدة من ناتج Lali sae جيني hydrogen usu hydroxy fB -١7 من ade ad الدوران Ruminococcus إضافة إلى ١ ملي مولار NAD+ و ١ ملي مولار «(NAD+ 33531 NADPH يتم استخدام Yoo وحدة من ناتج عودة ترابط NADH jw أكسيداز من Clostridium .aminovalericum | ٠ _لتجديد (NADPH يتم استخدام © وحدات من ناتج عودة ترابط جيني Lactobacillus kefir (alcohol dehydrogenase وبشكل أولي 7 ا (وزن / حجم). يتم إجراء التفاعل في محلول منظم من فوسفات بوتاسيوم ماني ) A ملي مولار ٠ م 1 ( عند ca YO مع الرج المستمر AG) لفة في الدقيقة). يستمر استخدام نظام مفتوح من أجل تيسير تبخير ال©806100 ولإزاحة التفاعل تجاه حمض يورسو ديوكسي كوليك. تتم إضافة ZY حرطا EA بعد )£ ساعة وبعد IPA 75 Unf ساعة و١؟؛ ساعة YT ساعة؛ YY ساعة؛ VA بجرعة بعد VO أكسيداز بعد ؛ 7 ساعة؛ ويتم NADH وحدة من ٠١ ساعة. يتم استخدام جرعات إضافية بمقدار إضافة hydrogen ستيرويد hydroxy |] -١7 استخدام جرعات إضافية بمقدار 7.5 وحدة من ساعة. بعد 58 ساعة؛ تبلغ نسبة حمض 5١ بعد alcohol dehydrogenase إلى © وحدة من
JAA - 90 يورسو ديوكسي كوليك في كل الأحماض الصفراوية في خليط التفاعل تقريبًا ¢ Jie . ٠ إعادة معالجة وتحليل الأحماض الصفراوية يتم استخلاص خليط التفاعل oF إلى ١ عند اكتمال التفاعلات كما هو موصف في الأمثلة من تتم إزالة المذيب بواسطة التبخير. تتم إذابة المادة المتبقية من cel) باستخدام 0/6]. بعد ؟؛ = pH أسيتو نيتريل : محلول منظم بفوسفات الصوديوم : MeOH التبخير في خليط من
ا" 4 جم / لتر )£0 : 0 : (YY وتتم مراقبة تحوّل حمض كينو ديوكسي كوليك إلى حمض lS Spd spn بواسطة HPLC وبالتالي؛ يتم استخدام عمود فصل بطور معكوس Je A 385 ZORBAX®Eclipse® XDB C18) / الدقيقة) وكاشف انكسار الضوء Lads (Agilent 1260 Infinity® (RID) من .Agilent Technologies Inc.
Jie © ه Jas جلوكوز إلى fructose من خلال زايلوز ريدكتاز 5 hydrogen sorbitol « باستخدام alcohol dehydrogenase لإعادة تدوير lactate dehydrogenase NADPH لإعادة
تدوير NAD+ تشتمل شحنة 0.5 مل على 5٠ مجم / مل جلوكوز و١ وحدة / مل من ناتج عودة ترابط جيني ٠ زيلوز ريدكتاز من Candida tropicalis (تم التعبير عنه بشكل مبالغ فيه في 8121 coli ((DE3) و ١.١ ملي مولار .NADP+ لتجديد العامل المشترك؛ تتم إضافة 797 alcohol IPA dehydrogenase لناتج عودة الترابط الجيني من Lactobacillus kefir (تم التعبير aie بشكل مبالغ فيه في (DE3) 8121 1ا60). يتم استخدام الإنزيمات في صورة نواتج تحلل الخلايا. يحدث التفاعل لمدة 74 ساعة عند 46 م 5١( 9 = pHs ملي مولار محلول منظم تريس = (HCI VO نظام مفتوح؛ مع الرج المستمر (900 لفة في الدقيقة). يؤدي النظام المفتوح إلى إزالة الأسيتون؛ مما يدفع التفاعل تجاه تكوين سوربيتول. في النظام المفتوح؛ يتبخر الماء (al IPA بحيث يتم استخدامها بجرعات إضافية بعد ١ ساعات وبعد 7١ ساعة. وبالتالي في كل مرة يتم ضبط إجمالي حجم يبلغ 20+ مل أيضًا تركيز IPA يبلغ 797 (حجم / حجم). بعد YE ساعة؛ يتم إجراء حضانة لوعاء التفاعل عند Te م تحت ضغط منخفض من أجل إيقاف فعالية الإنزيمات وتبخير المذيبات YL العضوية. بعد التبريد وصولاً إلى درجة حرارة الغرفة؛ تتم إضافة ناتج sae الترابط الجيني Bacillus subtilis (hydrogen sorbitol (تم التعبير عنه بشكل مبالغ فيه في coli (BL21 (DE3) عند تركيز نهائي يبلغ © وحدة / cde 20012 عند تركيز نهائي يبلغ ١ ملي مولار NAD+ عند تركيز نهائي يبلغ 00٠ ملي مولار. لتجديد العامل المشترك؛ يتم استخدام © وحدة / مل (التركيز النهائي) من Sigma ( rabbit muscles «lactate dehydrogenase Too (Aldrich Yo ملي مولار بيروفات. يتم رفع الشحنة وصيلاً إلى ٠١5 مل باستخدام الماء.
م \ — يحدث التفاعل لمدة YE ساعة إضافية عند 50 م في نظام مغلق مع الرج المستمر (900 لفة في الدقيقة). يتم تحقيق تحوّل D - جلوكوز إلى fructose - D يبلغ >0 749. مثال + Jas جلوكوز إلى fructose من خلال زايلوز ريدكتاز 5 hydrogen sorbitol « باستخدام هه alcoholdehydrogenase لإعادة NADPH, ox: ولا0ظلا أكسيداز لإعادة تدوير NAD+ تشتمل شحنة ٠.٠ مل على Cu مجم / Je جلوكوز ١٠ وحدة / Je من ناتج عودة ترابط جيني زايلوز ريدكتاز من Candida tropicalis (تم التعبير عنه بشكل مبالغ فيه في 8121 coli ((DE3) و ٠.١ ملي مولار .NADP+ لتجديد العامل المشترك؛ تتم إضافة ب (حجم / حجم) alcohol dehydrogenase 5 IPA لناتج عودة الترابط الجيني من Lactobacillus kefir )& ٠ التعبير عنه بشكل مبالغ فيه في o(coli 8121 (DE3) يتم استخدام الإنزيمات في صورة نواتج تحلل الخلايا. يحدث التفاعل لمدة 74 ساعة عند 50 م وام aot) A= مولار Tris HCl (buffer في نظام مفتوح؛ مع الرج المستمر (900 لفة في الدقيقة). يؤدي النظام المفتوح إلى إزالة الأسيتون؛ مما يدفع التفاعل تجاه تكوين سوربيتول. في النظام المفتوح؛ يتبخر الماء 5 IPA أيضاء بحيث يتم استخدامها بجرعات إضافية بعد 7١ ساعات وبعد ١ 7 ساعة. وبالتالي في كل مرة يتم Yo ضبط إجمالي حجم يبلغ 0+ Je إضافة إلى تركيز IPA يبلغ YAY (حجم / حجم) ٠. بعد Y¢ ساعة»؛ يتم إجراء حضانة لوعاء التفاعل عند 10 م تحت ضغط منخفض من أجل إيقاف فعالية الإنزيمات وتبخير IPA إضافة إلى أي acetone تكوّن. بعد التبريد وصولاً إلى درجة حرارة الغرفة؛ تتم إضافة ناتج عودة الترابط الجيني لا - Bacillus hydrogen sorbitol subtilis )5 التعبير عنه بشكل مبالغ فيه في (coli 8121 (DE3) عند تركيز نهائي ily © Yo وحدة / «da 8012 عند تركيز نهائي يبلغ ١ ملي مولار وخليط من NAD+ رلاناخل! عند تركيز نهائي يبلغ vl) ملي مولار. لتجديد العامل المشترك؛ يتم استخدام ٠١ وحدة / مل (التركيز النهائي) من NADH أكسيداز من 171656016101065 Leuconostoc (تم التعبير عنه بشكل مبالغ فيه في (DE3) 8121 أا60). يتم استخدام الإنزيمات في صورة نواتج تحلل الخلايا. يتم رفع الشحنة وصولاً إلى ١5 مل باستخدام الماء. يحدث التفاعل لمدة Ye ساعة عند 0 م في Yo نظام مفتوح؛ مع الرج المستمر (900 لفة في الدقيقة)؛ من أجل ضمان الإمداد بأكسجين كافي ل
q — \ — NADH أكسيداز من الهواء. في ذلك النظام المفتوح عند 560 م يتبخر الماء. وبالتالي؛ بعد 6 ساعات وبعد VY ساعة تتم atid باستخدام الماء إلى حجم يبلغ 6.5 مل. يتم تحقيق تحؤّل نا - جلوكوز إلى نا - fructose يبلغ حوالي JAN مثال ١ © إعادة معالجة وتحليل المواد السكرية يتم إجراء حضانة للشحنة عند 15 م لمدة ٠١ دقائق لإيقاف فعالية الإنزيمات ثم يتم بعد ذلك إجراء طرد مركزي. ثم يتم ترشيح sold) الطافية على مرشح PVDF 8.7 ميكرو متر وتحليله بواسطة تبادل المركب الترابطي Technologies Inc.) HPLC 8911601). عند عمل ذلك؛ يتم فصل المواد السكرية ومركبات بولي أول من خلال ase رئيسي خاص ب Showa Denko (Shodex® Sugar 500810( K.K. ٠ بتدفق يبلغ 0.5 مل / الدقيقة من الماء ( +ا/لا/ا (International GmbH, HPLC Grade عند oA ٠ يحدث الكشف بمساعدة كاشف انكسار الضرء (Agilent Technologies Inc. (Agilent 1260 Infinity® (RID) يتم استخدام مرشح أنيلين من Agilent Technologies Inc. وء؛ كأعمدة Ad عمود تبادل أنيون ((Shodex® Axpak — WAG) عمود طور عكسي ( 50 - Shodex® Asahipak® ODP Vo 66) وعمود sale سكرية أولي (SUGAR SP - G) من .Showa Denko K.K. مثال A Jind بيولوجي حمض كولانيك إلى ح 86107 a, 73—dihydroxy—12-oxo-5@—cholanic بواسطة 0607 — BY hydrogen iu hydroxy — aV « hydrogena s yi hydroxy hydroxy - ستيرويد 70109860 باستخدام نظام تجديد العامل المشترك المعتمد على lactate dehydrogenase ٠٠ و alcohol dehydrogenase تشتمل شحنة 6.58 مل على YO مجم من حمض كولانيك VY.0 وحدة من ناتج عودة ترابط جيني hydroxy o —VY ستيرويد hydrogen من Eggertella lenta أى Lysinibacillus ١١ sphaericus وحدة من ناتج عودة ترابط جيني 6097 - hydroxy ستيرويد c= hydrogen 1١ Escherichia coli وحدات من ناتج عودة ترابط جيني hydroxy 8 —V _ستيرويد
ل hydrogen من قيم عزم الدوران 40100100000005 إضافة إلى ١ ملي مولار NAD+ و١ ملي مولار NADPH لتجديد NAD+ يتم استخدام VY.0 وحدة من ناتج عودة ترابط جيني lactate dehydrogenase من (muscle isoform) oryctolagus cuniculus و ٠٠١ ملي مولار من pyruvate الصوديوم. لتجديد NADPH يتم استخدام © وحدة من ناتج عودة ترابط جيني alcohol dehydrogenase © من Lactobacillus kefir وبشكل أولي 7 من IPA وزن حجم). يتم إجراء التفاعل في محلول منظم من فوسفات بوتاسيوم ٠٠١( Sh ملي مولارء PH (VLA عند Yo ثم تحت الرج المستمر Ao) لفة في الدقيقة). يتم بشكل إضافي استخدام نظام مفتوح من أجل السماح بتبخير ال 8061006 ولإزاحة التفاعل تجاه a, 7B—dihydroxy-12-¥7 acid 2016ا0»0-5]8-00 . بعد YA ساعة و4 ؟ ساعة تمت إضافة جرعات 77 IPA (وزن Ve حجم) على نحو إضافي. بعد EA ساعة يتم تفاعل 771١ من حمض الكولانيك المستخدم إلى حمض «af 09 - داي Bo - oxo - VY - hydroxy - كولانيك. مثال q تحؤل بيولوجي حمض كولانيك إلى ح 86107 a, 73—dihydroxy—12-oxo-5@—cholanic Vo بواسطة 007 - hydroxy ستيرويد hydrogen ؛ hydroxy - av ستيرويد hydrogen BY - ساعة hydroxy ستيرويد hydrogen باستخدام نظام تجديد العامل المشترك المعتمد على NADH (lactate dehydrogenase - أكسيداز و alcohol dehydrogenase شحنة تشتمل ١.5 مل على YO مجم من حمض ١7.8 (NS وحدة من ناتج عودة ترابط جيني hydroxy — 07 ستيرويد hydrogen من Eggertella lenta أى Lysinibacillus ١١ sphaericus ٠ وحدة من ناتج عودة ترابط جيني hydroxy - aV ستيرويد hydrogen من ١ Escherichia coli وحدات من ناتج عودة ترابط جيني hydroxy - BY _ستيرويد hydrogen من قيم عزم الدوران 40100100000005 إضافة إلى ١ ملي مولار NAD+ و١ ملي مولار NADPH لتجديد NAD+ يتم استخدام © وحدة من ناتج عودة ترابط جيني NADH أكسيداز من VV.0 4 Leuconostoc mesenteroides وحدة من ناتج عودة ترابط جيني
— \ اذ (muscle isoform) oryctolagus cuniculus lactate dehydrogenase و ٠٠١ ملي مولار من pyruvate الصوديوم. لتجديد NADPH يتم استخدام © وحدة من ناتج عودة ترابط جيني alcohol dehydrogenase من Lactobacillus kefir وبشكل أولي 7 من IPA (وزن / حجم) . يتم إجراء التفاعل في محلول منظم من فوسفات بوتاسيوم ماني ) Yeo ملي مولار 13 pH 0 8.لا) عند YO ثم تحت الرج المستمر ١( 85 لفة في الدقيقة). يتم بشكل إضافي استخدام نظام مفتوح من أجل السماح بتبخير acetone) ولإزاحة التفاعل تجاه ح86107 8016ا12-0*0-53]8-00-لا00لاا0,7]8-0 . بعد YE sacle YA ساعة تمت من حمض الكولانيك المستخدم إلى حمض aV «af - داي Bo - oxo - ١١ hydroxy - ٠ كولانيك. مثال ٠١ تشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو ديوكسي كولانيك إلى حمض يورسو ديوكسي كولانيك باستخدام 0097 - hydroxy _ستيرويد hydrogen و 7- | لا*«00لاط_ستيرويد hydrogen في ظل استخدام نظام تجديد العامل المشترك المعتمد على lactate alcohol dehydrogenase ; dehydrogenase ٠ فائدة إضافة كلوريد منجنيز (MnCI2) تشتمل شحنة ٠.٠ مل على Cu مجم من حمض كينو ديوكسي كولانيك + ١١ وحدة من ناتج عودة ترابط جيني 007 - ١ caus Escherichia coli hydrogen piu hydroxy وحدات من ناتج sae الترابط الجيني hydroxy ] -١7 ستيرويد af hydrogen عزم الدوران (Ruminococcus أيضًا +.o ملي مولار NAD+ و +.Y ملي مولار .NADPH لتجديد NAD+ ٠ يتم استخدام 7 وحدات من ناتج عودة ترابط جيني dehydrogenase 1861816 و Yo. ملي مولار من pyruvate الصوديوم. لتجديد NADPH يتم استخدام 7 وحدات من ناتج عودة ترابط جيني dehydrogenase 816000 من Lactobacillus kefir وبشكل أولي 4؛. 7 من IPA C139) / حجم) . يتم إجراء التفاعل في محلول منظم من فوسفات بوتاسيوم ماني ) A ملي مولار ¢ (V.A = pH مع © ملي مولار MNCI2 عند Yo م وتحت الرج المستمر ١( 85 لفة في الدقيقة).
دج يتم بشكل إضافي استخدام نظام مفتوح من أجل السماح بتبخير acetone) ولإزاحة التفاعل تجاه يورسو ديوكسي حمض كولانيك. 7906 (وزن / حجم) من IPA بعد ١ ساعات؛ تتم إضافة جرعات 77.4 (وزن / حجم) من IPA بعد ٠١ ساعة و77.9 (وزن / حجم) من IPA بعد VE ساعة على نحو إضافي. بعد TT ساعة تتم إضافة Yer ميكرو لتر من ؟ - بنتانول إضافة إلى © 27 (وزن / حجم) من IPA وبعد A ساعة تتم إضافة جرعات ٠٠١ ميكرو لتر ؟ - بنتانول و؛ 7 (وزن / حجم) من IPA على نحو إضافي. بعد TE ساعة يبلغ الجزء الخاص بحمض يورسو ديوكسي كولانيك لكل الأحماض الصفراوية في خليط التفاعل >799. تحديدًاء الجزء الخاص بحمض كينو ديوكسي كولانيك حوالي ".6 7. في شحنة مقارنة بدون إضافة 1/012 يبلغ الجزء الخاص بحمض كينو ديوكسي كولانيك عند حوالي 7 7 والجزء الخاص بحمض يورسو ديوكسي ٠ كرلانيك عند حوالي 797.5 (متوسط قيمة من © تجارب لكل منها). مثال ١١ تشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو ديوكسي كرلانيك إلى حمض يورسو ديوكسي كولانيك بواسطة -V, hydrogen agi. hydroxy - aV 8 لا.0+كلاط_ستيرويد hydrogen في ظل استخدام نظام تجديد العامل المشترك المعتمد على alcohol dehydrogenase Veo إضافة إلى نظام تجديد العامل المشترك المعتمد على lactate NADH ; dehydrogenase أكسيداز مدمجين تشتمل شحنة ١05 مل على 5٠ مجم من حمض كينو ديوكسي كولانيك؛ VY وحدة من ناتج عودة ترابط جيني 6097 - hydroxy ستيرويد «Escherichia coli hydrogen 1 وحدات من ناتج sae ترابط جيني hydroxy -V _ستيرويد hydrogen من af عزم الدوران ٠٠ | 40001000060015 إضافة إلى 28.» ملي مولار من NAD+ و ¥.+ ملي مولار من NADPH لتجديد NAD+ يتم استخدام T وحدات من ناتج عودة ترابط جيني lactate dehydrogenase You ملي مولار من pyruvate الصوديوم. لتجديد NAD+ بشكل إضافي يتم استخدام 9 وحدة من ناتج عودة ترابط جيني NADH أكسيداز من Leuconostoc mesenteroides إضافة إلى 71 وحدات من ناتج عودة Lp جيني NADH أكسيداز من Clostridium .aminovalericum Yo _لتجديد NADPH يتم استخدام ١ وحدات من ناتج عودة ترابط جيني py وبشكل أولي 4 (وزن / حجم) من Lactobacillus kefir alcohol dehydrogenase = PH ملي مولارء ٠٠١( يتم إجراء التفاعل في محلول منظم من فوسفات بوتاسيوم مائي IPA لفة في الدقيقة). يتم بشكل إضافي استخدام نظام ASL) عند 75م تحت الرج المستمر )7.4 التفاعل تجاه يورسو ديوكسي حمض كولانيك. dally مفتوح من أجل السماح بتبخير ال©806100 / ساعة 27.4 (وزن ١١ ساعات تتم إضافة جرعات 71.6 (وزن / حجم) من متا بعد ١ بعد 0 ساعة YU على نحو إضافي. بعد IPA ساعة 77.9 (وزن / حجم) من YE وبعد IPA حجم) من
EA وبعد IPA ميكرو لتر من ¥ - بنتانول إضافة إلى 77 (وزن / حجم) من ٠00 تتم إضافة / ميكرو لتر من ؟ - بنتانول و؛ 7 (وزن ٠٠١ ساعة تتم إضافة جرعات بشكل إضافي بمقدار ساعة يبلغ الجزء الخاص بحمض يورسو ديوكسي كولانيك لكل TE بعد JAPA حجم) من الأحماض الصفراوية في خليط التفاعل >799. تحديدًا يبلغ الجزء الخاص بحمض كينو ديوكسي ٠ أكسيداز يبلغ الجزء الخاص - NADH كولانيك حوالي 007 7#. في شحنة مقارنة بدون إضافة ويبلغ الجزء الخاص بحمض يورسو ديوكسي 7# ١7 بحمض كينو ديوكسي كولانيك عند حوالي كولانيك عند حوالي 997.5 7# (نفس شحنة المقارنة كما في مثال ١١؛ متوسط القيم من © تجارب (lee لكل ١١ مثال Ye تشكل المصاوغات الصنوية الخاصة بحمض كينو ديوكسي كولانيك إلى حمض يورسو ديوكسي لا04+كلا_ستيرويد — BY, hydrogen agin hydroxy - aV كولانيك بواسطة alcohol تجديد العامل المشترك المعتمد على alas في ظل استخدام hydrogen lactate إضافة إلى نظام تجديد العامل المشترك المعتمد على dehydrogenase أكسيداز مدمجين. تأثير إضافي ل ؟ - بنتانول و7 - بروبانول NADH 5 dehydrogenase ٠ وحدة / مل من ناتج YE مل شحنة على 5 جم من حمض كينو ديوكسي كولانيك» 5٠0 تشتمل / وحدة ١١ «Escherichia coli من hydrogen ستيرويد hydroxy - 607 عودة ترابط جيني عزم الدوران ad من hydrogen ستيرويد hydroxy - BY مل من ناتج عودة ترابط جيني
NADPH و 6.7 ملي مولار من NAD+ ملي مولار من roo إضافة إلى Ruminococcus lactate dehydrogenase وحدة / مل ناتج عودة ترابط جيني VY يتم استخدام NAD+ لتجديد ©
دوم You ملي Noe من pyruvate الصوديوم. لتجديد NAD+ بشكل إضافي يتم استخدام VA وحدة / مل من ناتج عودة ترابط جيني NADH أكسيداز من Leuconostoc mesenteroides إضافة إلى ١١ وحدة / مل من ناتج عودة ترابط جيني NADH أكسيداز من Clostridium .aminovalericum لتجديد NADPH يتم استخدام VY وحدة / مل من ناتج عودة ترابط جيني alcohol dehydrogenase © من Lactobacillus kefir وبشكل أولي 8 7 (وزن / حجم) من IPA يتم إجراء التفاعل في محلول منظم من فوسفات بوتاسيوم ٠٠١( Sle ملي مولانء PH = 7.8) مع © ملي مولار 1/0012 عند YO م. في مكبس ثلاثي الأعناق؛ يتم تقليبه باستخدام وسيلة تقليب KPG عند حوالي ٠٠١ لفة في الدقيقة. يتم تفعيل إزالة acetone الذي ينشأ من التفاعل بواسطة تيار من الهواء (حوالي 406 - Tee مل / الدقيقة) خلال وعاء التفاعل. Cua ٠ إنه في نفس الوقت؛ يتم تبخير ؟ - بروبانول أيضًاء يكون وجود جرعات إضافية أمرًا ضروريًاء على سبيل المثال؛ بمقدار يبلغ 0.75 مل (Rela ٠.5( 0.725 مل )¥ ساعات)؛ ٠. مل )£ ساعات)؛ .. مل )1 ساعات)؛ ٠. مل A) ساعات)؛ .. مل ( \ v.0 (dela مل 3 ١ ساعة)ء veo مل VY) ساعة)ء veo مل YY) ساعة)ء ١ مل YY) ساعة)ء 0.¥ مل Yo) ساعة)؛ 8 مل YY) ساعة). بعد حوالي ٠١ ساعة إضافية؛ تتم إضافة ٠١ مل 7 - بنتانول إضافة إلى ؟ VO .مل ؟ - بروبانول. بعد 476 ساعة من (laa) زمن التفاعل يبلغ الجزء الخاص بحمض ١ - كيتو ليثوكولانيك حوالي 7١ (بالنسبة إلى مجموع حمض كينو ديوكسي كولانيك؛ حمض يورسو ديوكسي كولانيك وحمض 7 - كيتو ليثوكولانيك. بشكل إضافي؛ تتم إضافة ١ - بروبانول: © مل )£1 ساعة)ء 4 مل (Rela OY) ؛ مل (54 ساعة)؛ أيضنًا بالإضافة إلى ٠١ مل من ؟ - بنتانول. بعد VY ساعة من إجمالي زمن التفاعل يمكن تقليل الجزء الخاص بحمض 7 - كيتو ليثوكولانيك ٠ إلى أقل من LLY يبلغ الجزء الخاص بحمض يورسو ديوكسي كولانيك JAAS مثال ١٠١ فحص وتحليل الأحماض الصفراوية بعد إنهاء التفاعل كما هو موصف في الأمثلة من + إلى OY يمكن تحليل الأحماض الصفراوية الموجودة في التجارب من خلال طريقة كما هو موصف في مثال 4.
Claims (1)
- و عناصر الحماية -١ عملية للتجديد الإنزيمي enzymatic regeneration للعوامل المشتركة الخاصة [redox reduction NAD+/NADH و أوء تحديدًا 4 « NADP+/NADPH في تفاعل يتم في slog واحد؛ حيث؛ كنتيجة لاثنين على الأقل من تفاعلات reduction [redox المحفزة )33 Gey الإضافية يستمر في نفس دفعة التفاعل (تفاعلات تكوين المنتج)؛ تتراكم واحدة من اثنين من © عوامل مشتركة خاصة [redoxc 060100100 في صورتها المختزلة و؛ على التوالي» الأخرى في صورتها المؤكسدة؛ تتميز بأنه 0 في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المختزل إلى الصورة oxidized الأصلية الخاصة به؛ يتم اختزال OXygen أو مركب بالصيغة العامة 0 ِْ ماب 0 Vo حيث Rl تمثل مجموعة (Cl - C4) - ال7ا81 ذات سلسلة خطية أو متفرعة أو مجموعة Cl) «carboxy alkyl - )- C4 ب) في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المؤكسد إلى الصورة المختزلة الأصلية الخاصة cay تتم أكسدة cycloalcanol - (C4 - C8) أو مركب بالصيغة العامة OH A 1 ١ حيث يتم اختيار 42 و43 كل على حدة من المجموعة التي تتكون من alkyl ((C1 - 06 H ٠ حيث يكون الا»ا81 ذا سلسلة خطية أو متفرعة؛ alkenyl (C1 - C6) حيث alkenyl, ذا سلسلة خطية أو متفرعة ويشمل من واحدة إلى ثلاثة من روابط مزدوجة؛ edly تحديدًا - 06 carboxyl «aryl C12 ؛ أو ccarboxy alkyl (C1 - C4) تحديدًا أيضًا cycloalkyl على سبيل المثالء .cycloalkyl C3 - C8 ٠ "- عملية a, لعنصر الحماية ١ للتجديد الإنزيمي enzymatic regeneration للعوامل المشتركة الخاصة reduction NAD+/NADH [redox و أوء تحديدًا و؛1+ NADP+/NADPH في تفاعل يتم في وعاء واحد؛ حيث؛ كنتيجة لاثنين على الأقل من تفاعلات reduction [redox المحفزة إنزيميًا الإضافية يستمر في نفس دفعة التفاعل )= تفاعلات تكوين المنتج)؛ تتراكم واحدة من اثنين من عوامل مشتركة خاصة ب*«600؟ / 1601101100 في صورتها المختزلة و؛ على التوالي؛ الأخرى في صورتها المؤكسدة؛ تتميز بأنه 0 أ) أثناء تجديد العامل المشترك المؤكسد؛ يتم اختزال مركب بالصيغة العامة 0 ِْ ماب 0 حيث 1» تمثل بها استبدال أو ليس بها استبدال C1 - C4 مجموعة alkyl و ب) أثناء تجديد العامل المشترك المختزل؛ تتم أكسدة مركب بالصيغة العامة OH EN ١ ١ حيث يتم اختيار 2 و83 بشكل مستقل عن الآخر من المجموعة التي تتكون من H-( سلسلة خطية أو متفرعة؛ alkyl حيث يكون alkyl )61-06(- ؟) alkenyl (C1-C6)- )© Vo حيث يكون الا0©»)!اهذا سلسلة خطية أو متفرعة واختياريًا يشمل ما يصل إلى ثلاثة روابط مزدوجة؛ cycloalkyl - )6 تحديدًا «cycloalkyl C3 - C8 caryl - (o تحديدًا caryl C6 - C12 «carboxy alkyl (C1-C4)- (3 في الحالة حيث يكون المركب بالصيغة | عبارة عن.carboxyl ay ial » pyruvate ٠ حيث يتم اختيار 2 و43 بشكل مستقل عن oF أو ١ ؟*- عملية وفقًا لأي من عناصر الحماية حيث يكون ال7أ816 ذا سلسلة calkyl ))01 - C6 (H من المجموعة التي تتكون من AY— 7 اذ خطية أو متفرعة؛ calkenyl (C1 - C6) حيث يكون الا81»80 ذا سلسلة خطية أو متفرعة ويشمل من واحدة إلى ثلاثة من روابط مزدوجة؛ c aryl تحديدًا carboxyl « aryl C6 - C12 «.carboxy alkyl (C1 - C4) 4 0 ¢— عملية وفقًا لأي من عناصر الحماية من ١ إلى oF تتميز بأن تفاعل (تفاعلات) redox وتفاعل (تفاعلات) reduction يحدثا على نفس المادة المتأثرة بالإنزيم (المركب الرئيسي الجزيئي). 0— عملية وفقًا لأي من عناصر الحماية من ١ إلى of تتميز بأن تفاعل (تفاعلات) redox ٠ وتفاعل (تفاعلات) reduction يستمرا على نحو متوازي زمنيًا. 7- عملية وفقًا لأي من عناصر الحماية من ١ إلى ©؛ تتميز بأنه؛ في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المؤكسد إلى الصورة المختزلة الأصلية الخاصة cay تتم 2-propanolis 0 إلى acetone بواسطة dehydrogenase ا816000. Vo إلى ©؛ تتميز بأنه؛ في تفاعل التجديد الذي يحول ١ عملية وفقًا لأي من عناصر الحماية من -" إلى pyruvate العامل المشترك المختزل إلى الصورة المؤكسدة الأصلية الخاصة به؛ يتم اختزال lactate dehydrogenase il.) lactate =A Yo عملية GB لعنصر الحماية of تتميز بأنه؛ في تفاعل التجديد الذي يحول العامل المشترك المؤكسد إلى الصورة المختزلة الأصلية الخاصة به؛ تتم malate is oxidized إلى pyruvate CO2 بواسطة .malate dehydrogenase 4- عملية وفقًا لأي من عناصر الحماية من ١ إلى ov تتميز بأنه يتم استخدامها shay تفاعل vo أكسدة واحد على الأقل وتفاعل اختزال واحد على الأقل؛ على التوالي؛ في نفس دفعة التفاعل على المركبات التي لها الصيغة العامةم RR, 8 Rq1 .م PN ل م ; سس 3 اله ا R, 1 R4 تشير إلى hydrogen مجموعة hydroxy ic sess « methyl أو مجموعة OXO ؛ RS تشير إلى chydrogen مجموعة hydroxy ؛ مجموعة OXO أو مجموعة methyl « © 86 تشير إلى 1700980 أو hydroxy ic sas « R7 تشير إلى «COR13- chydrogen حيث C1 - C4 8 5ا 413 مجموعة ossialkyl ليس بها استبدال أو بها استبدال بمجموعة hydroxy » أو ic seascarboxy a Cl - C4 alkyl تكون بها استبدال؛ تحديدًا بمجموعة hydroxy ؛ أو ليس بها استبدال؛ أو 6 و87 معًا تشير إلى مجموعة OXO ¢ REV تشير إلى 17/000 مجموعة methyl « مجموعة hydroxy أو مجموعة OXO ؛ RO تشير إلى 17/000 مجموعة methyl « مجموعة hydroxy أو مجموعة OXO ؛ R10 تشير إلى methyl ic seas chydrogen أر halogen 1 نشير إلى chydrogen مجموعة hydroxy ie seas « methyl » مجموعة OXO أو 8007 و ve 412 تشير إلى OXO ie seas » hydroxy ic seas hydrogen أو مجموعة methyl « حيث العنصر التركيبي يشير إلى 109" 56026086 أو حلقة مشتملة على carbonatoms 6 وصفرء ١ أو ؟ من الراوبط المزدوجة © - ©؛ تحديدًا حيث يتم توفير المادة (المواد) المتأثرة بالإنزيم عند تركيز يبلغ Z0> - ٠ (وزن / حجم) في دفعة التفاعل لتفاعل (تفاعلات) reduction المتضمن في عملية تكوين المنتج.q —_ اذ -٠ عملية وفقًا لعنصر الحماية 9؛ تتميز بأنه يتم استخدامها Jail (DHEA) dehydroepiandrosterone بالصيغة م CH, ,200 SOLE. H HO إلى تستوستيرون بالصيغة 08 0 vii : 90 H 2 0 -١١ عملية Gy لعنصر الحماية 9؛ تتميز aly يتم استخدامها للتشكل الإنزيمي للمصاوغات الصنوية الخاصة 3a,7a—dihydroxy—53—cholanic acid (chenodeoxycholic acid) بالصيغة 0 0و CH, OH FOU, \Y : : 9 بو 0م H Ye إلى ketolithocholicacid بالصيغة H,C, 0 CH, OH or 08 الا 8 : fi HO" OH H=« ¢ — عن طريق الأكسدة» والى مركب 3a,7B—dihydroxy—53- stereoisomic hydroxy cholanic acid (ursodeoxycholic acid) بالصيغة H,C,, 0 CH, OH S00 الا : 9 HO" OH H بواسطة reduction التالي؛ باستخدام اثنين من ¥ stereospecific hydroxysteroid dehydrogenases © نوعية المتقابلة؛ تحديدًا Cua يتم تحفيز تفاعل redox بواسطة -]7 dehydrogenase 010(:0/5181010لامن coli .ا ؛ و أو يتم تحفيز تفاعل reduction بواسطة 73—-hydroxysteroid dehydrogenase من a عزم الدوران Ruminococcus torques VY ٠ عملية Gy لعنصر الحماية 9؛ تتميز بأنه يتم استخدامها لتشكل المصاوغات الصنوية الإنزيمي الخاص 3a,7a,12a-trihydroxy-5p—cholanic acid (cholanic acid) بالصيغة H,C, 0 OH 3 7 CH, : OH : S00 IX 8 9 HO" “OH H ما Vo أ) عبر Jsaaliredox على -12) 3a, 7a~dihydroxy—12-oxo-53-cholanséure 0x0-CDC) بالصيغة الذي يتم تفاعله بشكل إضافي للحصول على 3a—hydroxy=7,12- dioxo-5B—cholanic acid (120x0-KLC) بالصيغة EY YY0 HC, 0 CH, OH 0 08 : X 7 HO" OH H 3a,7B-dihydroxy—12-oxo- stereoisomic hydroxy التالي إلى مركب reduction , بالصيغة 5B-cholanic acid (12-keto-ursodeoxycholanic acid) 0 ناوا 0 CH, OH 0 08 : XI 7 HO" OH H أو oe 3a,12a-dihydroxy—7-oxo-5@-cholanic acid على Jspasliredox ب) عبر بالصيغة نم 0 OH 577 : CH, : OH +O : 8 XII 7 HO" 0 H o—hydroxy—7,12-dioxo-5B—cholanic ¥ متبوحًا بأكسدة إنزيمية للحصول على stereocisomic التالي للحصول على مركب reduction 5 XI 0ل4ا-©3610)120*0) بالصيغة | ٠ a, 73—dihydroxy—-12-oxo-5@3—cholansaure (12-keto-Y hydroxy XII بالصيغة (ursodeoxycholsaure أو— \ ¢ — ج) عبر Jsasliredox على 3a, 12a-dihydroxy—7-oxo-53-cholanic acid بالصيغة XII متبوعًا باختزال إنزيمي Jsasllenzymatic reduction على 3a,7B,120- triydroxy-53—cholanic acid بالصيغة H,C, 0 OH 3 7 CH, 0 ١ OH S00 XIV 8 9 HO" OH H © و*00© التالية للحصول على مركب a, 7B3~dihydroxy—Y stereoisomic hydroxy (keto—ursodeoxycholanic acid—12) 12-oxo-5@3—cholanic acid بالصيغة «XI باستخدام stereospecific hydroxysteroid dehydrogenases 33 نوعية؛ يشتمل ¥ منها على تجاسم نوعي متقابل. VY ٠ عملية وفقًا لأي من عناصر الحماية من ١ إلى cA تتميز بأنه يتم استخدامها «ul isomerization سكرية C5 - أو «C6 تحديدًا isomerization of glucose من خلال reduction إلى redox ysorbitol التالية إلى fructose )— عملية By لأي من عناصر الحماية من ١ إلى OY تتميز بأنه يتم توفير المادة (المواد) ١ المتأثرة بالإنزيم لتفاعل (تفاعلات) redox المتضمنة في عملية تكوين منتج في دفعة التفاعل عند تركيز aly على الأقل 75 (وزن / حجم) «ily تحديدًا ZY (وزن / حجم) وأكثرء تحديدًا 74 (وزن / حجم) وأكثر. -١ عملية وفقًا لأي من عناصر الحماية من ١ إلى VE تتميز بأنه؛ إجمالاً؛ يتم تحقيق تحوّل A ١ > .١ن تحديدًا > 7960 فى, تفاعلات تكوب نتج. بد YA ب YA J في ثتفا تكوينoH 7 ل HO" Ho Ho i 1 HG. 1 Re, J Pe od wef ed اي ion OH, ood { § = 4- TN oH, : >” wh of 1 Ne BE Jf Pan] Sv | Fa ا ER كيم & r TEE Fe HSOH Ta A oa يس الل اللا TF الال ١ Ng 3 3 he sa 0 سداد 0 اا ري Fay Te ا لا f, 3: rd >85 He ب م He ETE SUR oft me B { § Ke 1 0 H ene 3 . ¥ uBe HAD.MAOH FEAENRH HaDPs : 1 ) ems pe N : م تيا 7 Ne i J = 1 Hat ha : 3 3 St 8 ¥ 8 pd | 4 T | Hy ba CH, a 0 Neh py 0 HO ) LH HE TH ) ) ! Assigns ميعز Lactate عونصم Ma شكل ١8 م 3 Hf pre 7 HON HO" N HO, ] Hi ! = HE, J رقي إن الع ٍ 7 ا ااا w SH F احم إٍّ 0 امن : a 3 EE NS! a | SR SH Sis Tu ; TS IE الح | 0 ا ا خض ال صر z SR امي ا J Sa : [ FZ =. FoeREDH H H 7R-HBOH, Sq & [7 H H اسيل "يبب : i SS ES ; 8 1 25 امي ل الاين Ne TS ١ 0 al . nT Ho Te Pr Tey صلا i H °o Non EN ات ا Toe 1 § MC ! yo 9 ون enc sD SDH MADPH wanes = : 1 : 1 1 3 iN ; J - tl ا ae 5 a ry Lael Z ا gr 5% A np Maio 1 نما يمر ho rd B oi & By وج ا See hil 0: oO 3 o CH, di Lactste Pyruvate Malate 7 شكل ؟_ اج 7 J ° UK Hag i HON HTN HAN Rr i Hal 0 sil } HE J 0 با ل Ae, J w gf £3 4 “ pl PE JR | امن 8 VEN a RC aa ” : R Fea TR Of SH مضي CR a ERT PRS ل 0 ل ب 8 8 8 Enc TrcHSDH 5 fi FRHSOH Ee م 8 ذا EH yd H H ادي اد اا سين 52 ا ٍ با ممعم 4 5 وير EN NP رض اويل م جا The al ™~ “UN HE i aH 1 13 2 ب اس لاسر ويا م cot 08 عم | ' Bue or HALE 04 او RATE+ ! ١ A hy : A Ye yi il Su J 7 Laaxe Laas RN { 3 { ERAiDi ب i إٍ ا 3 HID, HO bs i ne Tom HET oH, ممضاععية خرص شكل ؟ عضيفHy 0 : CH,OH GH,OH H OH H OH 0 شب 4 "0 Hy H HO 1خ H - (3H / 3 H——0H 4 NN H oH cron na CH, OH 0 : CH_OH 7-7 napeu NADIR 2 NAD+ NADH 2 Ghicose { 0 Sorhibal i Fructose 3 i; 3 J x ) A cya : 2 تب 8 وم 1 حب ب 4 lif = Oo i ExADR TE Of Lach 0 ٍ 0 ل we ين ال ا TCH عه “oH, و HE il Acetone BA 0 o Lactate Pyruvate § i a“ 5 EY YYHo oo - T° CH OH CHO H Of 8 OH 0 HO—r—H CIR HG MH HO—r—H by ا 0 4 ; ا هليم H—T—OH DOR سو ad HOR H——GH / Hon / 0 ولي CHO Yo CH. 1 ٍ وجوه - nape NADP “Ra +صمل NADH Ric i DERTE oY 3 4 } Barba i i Fructose J LT PAN 0 - LKADH oH oo ممصمع 12 0. 1 I we zo, E en SP Pr 1 } He OH, He” CH, Acetone’ Pa شكل هه8 : ٍ i A 2 KX fo 0 0 1 ري 0 ف 0 TRE 3 أن ب SH i ane o He ب" ار IR 1 { ا "حب اسل . 74 pa % a حب i 12 5 1 1ق 5 s, : & A 3 cH Ee x 4 By م 8 ال ب هد و م OEE - يدوا 5 2 ramen ا ال يي | 8# + 37 8 BH a لبس SN CR Er RB م ايا ER ل ا مين الأ & hy SF BRE PT TT م ا 5 GE 1 1 مل م12 wo |! = 3 8 { HOY TN PN Ng I ا : 0 1 : 1 7 المحم EE Jo #متمدا gap 1 ٍ <u as wh يمي i pi 4 i rai MADE | ww ال > ا : : i >85 Fg Ri TE fo 3 ببويعة لت ا الا ب الما 4 7 Fh * 0 ا ot on ES aad Se at) NaN _ SF Rely 4 oH J = A 3 & era OH A 0 Oh 3 Hy, go © LQ 5 الل سوم جلاعتا | سمسجون NaPynsate Lede : HT we, J ie 3 f oH, 7 © FA يس Ho AE oi poe bs “OI 4 : | Pr Ey2 1 0 1: io 1 م i Br HOT 5 Hy ب 4 ل no1 H.C 1 : بيج HR Wi a 3 ب wt Ho, 1 Vik 4 ل : wf” I cath 2و > 2 4 i , Hy Ps ie الج js ma IN اط J Ny BE FE لأا 2 . TINTS szemsoH ا د حا ل بوكب واج ol 8 iy 8 اكد ل ET eT BLP مو LE FER ا الو WIE ; ابا أ 2 rd ا SE hi 8 0 ا 4 i Hao ! fa ; 1 : ل ا i: TA 5 موص 9 ADS NADH fain WATS Nae a : 1 8 1 : ; J 0 LS | 0 HET Tow, Sani Na SATS 3 a 4 fC م MADE سر اند Foetus J #لتمه A Emad 5 il i ل 1 ا % “HSH سب رن 8 وص : وس Hy 3 WER HLL 5 ) ) : ًُ o ليح |[ ف Ip 4 en EH so 4 HG 0 1 ار أ يا ١ CH, CH, Say al CH, ? I ME L BLY حون HO الب معت i et ai 4 ¥ شكل_ Qo = + : 0 i o if A i EEN E18 N ot راع 0 HD § } ed BL Ff 0 3 3 wd hi 1 OH Ey £8 J gost ef Ig en, f ; En JE. : اللي حي | of 42 مي ااا er Le Ny 1 ل 0 AY oH, : ال 0 34 ات حا ا نب لخبي مط ف PENG | - a, ed [ hs [ = 325 [ 8 A ToHSDH al af i # H Tee . Ea EE a 8 1+ ; 5 الم pig YE AE ee 1 : 2-0 HG ot 3 يم و4 ا ام / Tyo يي i ad {3H 7 3 نل ذا م i or Eo H { i f H 222-1 BE ¥ 12-400 So ¥ © SAD naps 202 nape aon ; i 4 } i i / ! كين So NN Pd وان تر 3 ب حي لت ee NATE ow Bote a Pan 0 حي Ng © 3 مستا NY vi ¢ ! ; TH-HEOH RADE Ligclale ا الا وت وكوي 3 ونال HO EN 4 7 ) 22 RE وم ا : i الاو I 8 او 0 HO ey oH, CH, a ¥ a X oi : َك Hy 2 APA A [ / " 8 ume 3 سٍ ع Net TE وو + شكل م IAA_— \ جم 0 م 1 : i ge 70 ho, il wl HO - Fa 7 1 Tra oH أاث"ي NS PIS B 4 gl Yo fae Sod kN aR 3 [ ? :8 م مين J 2 | lt yf 0 ل طن ل RE 1 a Ea ا I I= 12 HEDH & | ff Tewsow Se ER ( و12 + ; pe i REIS NI pats tS) TN ماص od 7 N HoT 8 ص 2 eT NT gy اتير y 8 1 > ‘ { = : حا ١ ب NAD wah 2200© mene gan a i A | J J we on بأ مضع سا ا صمي حصن 1 يا ei] val 1 ١ iN g "م - vi 0 ب العا م Faas J مس | / i 0 i ) 3 ا تيع w2 Em, يا ا جتوتج 2 a 2 wyate: SE لبت Herr Tie NADPH § AN I we, | re SE HOT Toh, oH, 7 ين a eof | السام Te ا AR I& oe [ GH بر د HoT H شكل 4_— \ جم TH-0A ed : Rewer = hg i oT TR F ا a By i ER bi i Bae of lh Se 3 اا يل 3 3 أي Cw 3 : sii اريخ i 8 129 FU Ey Se Sa Co Rad نتتب orm Le Rae Tend ATT | fa I: 6 4 و يب لاا لك اه ليا ينا انر اماي oe HI 5 a Elo Bt 2 اال gt i لبج hed Ra ii 4 أدبب | THHEDR 3 السب / ا He © Cag o Hh, 8 oH OH Sen Tous Gs: OH Spe RHE Ea El NE BL Het EEE { FE =] gal a #5 ast 1 ا aH . et ا اس م 188 REN FE gl w| To HSR ou To 1am HED of " % لحن ا "— =a عد اال Sa Sa حر on rer [ a | = "= 1 ; | ميض > لمحيل ET eR Ro a 3 fe Ux Gna EN SE اا اليد 8 ans وج ro) i + 1 ايد 8 Le ا 1 57و12 ىس AS, 1 1 5 ا" ل إٍْ NE اتات اب 1 8 ا 8 لحي إْ on] H by موحد Ee: SE at Fre FESR 1 ا wa TT الل ناا نيا AD مجميد LE Ba vr ON ادر ايت عات RAOPH NADP: تق لصم NADH امكل Fron ما راي ين الل TIN Fane? Fain } Ho CHIU Brean sepa لصوي يمدب Alhodaykogenasee ملام Laktatdehydmgensse FAD شكل ٠١ عضيفAd —_ جم we, © ممص 8 cota we, ? AREY we, أب وج oh Coty Nk oH ل 8 Pr 8 or a E83 : of = i ga] 8 اوج وان Rad Pre تاس الي ا ا Is FST L ik 8 ا ومسي 8 2 [ nt | fy بس ما ات ا جا ل #ير الإ اتيت جو م بي الاو HoT 1 و HoT و 7 ل F ¥ ¥ HAD IEE: NADPH NADP بودي a NADH ADH - HaDPH موقن iW 0 ل : ¥ 3 الل LER: tig EARLE 4 3 bd . x vi 0 5 ال ٍ ب Ay EN, ag Tani 8 8 LEADH oH S-promsnat عمتاعدد انوع fantate مط HATH wan Hag NADPH NADP A ! hast ا 0 A PRL reps يولي Har PT SE. ji fa Load B LRADH HD تمعد موصعم شكل ١١ عضيفمدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب TAT الرياض 57؟؟١١ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: patents @kacst.edu.sa
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP12450007 | 2012-02-07 | ||
| PCT/EP2012/067781 WO2013117251A1 (de) | 2012-02-07 | 2012-09-12 | Verfahren zur enzymatischen regenerierung von redoxkofaktoren |
| AT12842012A AT513721B1 (de) | 2012-12-10 | 2012-12-10 | Verfahren zur enzymatischen Regenerierung von Redoxkofaktoren |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA113340270B1 true SA113340270B1 (ar) | 2015-09-03 |
Family
ID=48946925
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA113340270A SA113340270B1 (ar) | 2012-02-07 | 2013-02-05 | عملية للتجديد الإنزيمي لعوامل مشتركة خاصة بالأكسدة / الاختزال |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US9644227B2 (ar) |
| EP (1) | EP2812439B1 (ar) |
| JP (1) | JP6329086B2 (ar) |
| KR (1) | KR102022137B1 (ar) |
| CN (2) | CN104136620A (ar) |
| AR (1) | AR089841A1 (ar) |
| AU (1) | AU2013218042B2 (ar) |
| BR (1) | BR112014019287B1 (ar) |
| CA (1) | CA2862384C (ar) |
| ES (1) | ES2742381T3 (ar) |
| HK (1) | HK1204010A1 (ar) |
| HR (1) | HRP20191514T1 (ar) |
| HU (1) | HUE044690T2 (ar) |
| IN (1) | IN2014DN07015A (ar) |
| LT (1) | LT2812439T (ar) |
| MX (1) | MX358771B (ar) |
| MY (1) | MY172493A (ar) |
| NZ (1) | NZ627477A (ar) |
| PH (1) | PH12014501770B1 (ar) |
| PL (1) | PL2812439T3 (ar) |
| PT (1) | PT2812439T (ar) |
| RS (1) | RS59114B1 (ar) |
| RU (1) | RU2635087C2 (ar) |
| SA (1) | SA113340270B1 (ar) |
| SG (1) | SG11201404614XA (ar) |
| SI (1) | SI2812439T1 (ar) |
| TW (1) | TW201343623A (ar) |
| UA (1) | UA117453C2 (ar) |
| WO (1) | WO2013117584A1 (ar) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW201343623A (zh) | 2012-02-07 | 2013-11-01 | Annikki Gmbh | 使氧化還原輔因子經酶催化再生之方法 |
| AT513928B1 (de) | 2013-02-06 | 2015-06-15 | Annikki Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Fructose |
| WO2014154676A1 (de) * | 2013-03-27 | 2014-10-02 | Annikki Gmbh | Verfahren zur isomerisierung von glucose |
| EP3636743A1 (en) * | 2014-04-02 | 2020-04-15 | The Regents of The University of California | A synthetic biochemistry molecular purge valve module that maintains co-factor balance |
| US9890397B1 (en) | 2015-07-15 | 2018-02-13 | Gaurab Chakrabarti | Hydrogen peroxide production method, system, and apparatus |
| US20180216142A1 (en) * | 2015-07-24 | 2018-08-02 | Annikki Gmbh | Process for enzymatic production of oxidation and reduction products of mixed sugars |
| CN105861613B (zh) * | 2016-03-30 | 2019-12-13 | 中山百灵生物技术有限公司 | 一种熊去氧胆酸制备方法 |
| WO2017202686A1 (de) | 2016-05-23 | 2017-11-30 | Annikki Gmbh | Verfahren zur enzymatischen umwandlung von d-glucose in d-fructose via d-sorbitol |
| WO2018036982A1 (de) * | 2016-08-22 | 2018-03-01 | Pharmazell Gmbh | Chemisch-biokatalytisches verfahren zur herstellung von ursodesoxycholsäure |
| US11203769B1 (en) | 2017-02-13 | 2021-12-21 | Solugen, Inc. | Hydrogen peroxide and gluconic acid production |
| CN106957886A (zh) * | 2017-03-01 | 2017-07-18 | 南京远淑医药科技有限公司 | 一种熊去氧胆酸的制备方法 |
| CN107315038B (zh) * | 2017-07-06 | 2019-06-18 | 江南大学 | 一种批量化对酒类样品中氨基甲酸乙酯快速测定的方法 |
| JP6559745B2 (ja) | 2017-08-23 | 2019-08-14 | 株式会社東芝 | 半導体デバイス検査装置、半導体デバイス検査方法、そのプログラム、半導体装置およびその製造方法 |
| CN108251491A (zh) * | 2018-03-09 | 2018-07-06 | 中山百灵生物技术有限公司 | 一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法 |
| EP3775178A4 (en) * | 2018-04-06 | 2022-01-05 | Braskem S.A. | NEW NADH-DEPENDENT ENZYMMUTANTS FOR THE CONVERSION OF ACETONE INTO ISOPROPANOL |
| CN109055473A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-12-21 | 湖南宝利士生物技术有限公司 | 一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度d-氨基酸的方法 |
| CN111217744A (zh) * | 2018-11-26 | 2020-06-02 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种d-氨基酸基nad+类似物及其合成和应用 |
| CN109486896A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-03-19 | 南京工业大学 | 一种催化拆分制备异甘草酸的方法 |
| CN109486895A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-03-19 | 南京工业大学 | 一种催化拆分制备异甘草酸的方法 |
| CN110387360B (zh) * | 2019-06-18 | 2021-12-28 | 华东理工大学 | 羟基类固醇脱氢酶及其在合成熊去氧胆酸前体中的应用 |
| CN111593085A (zh) * | 2020-05-26 | 2020-08-28 | 四川澄华生物科技有限公司 | 一种12-酮基胆酸的制备方法 |
| CN112813128A (zh) * | 2021-01-12 | 2021-05-18 | 中山百灵生物技术股份有限公司 | 一种别熊去氧胆酸的合成方法 |
| KR102504343B1 (ko) | 2021-02-22 | 2023-02-28 | 전남대학교산학협력단 | 단량체 이소시트레이트 디하이드로게나아제에 기반한 nadph 재생 시스템 및 이의 용도 |
| CN116536279B (zh) * | 2022-01-25 | 2023-11-14 | 杭州馨海酶源生物科技有限公司 | 一种基因工程菌及在制备去氢表雄酮上的应用 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3502141A1 (de) * | 1985-01-23 | 1986-10-16 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V., 8000 München | Verfahren zur intrasequentiellen cofaktor-regeneration bei enzymatischen synthesen, insbesondere bei der herstellung von vitamin c |
| CZ20012792A3 (cs) | 1999-12-03 | 2002-03-13 | Kaneka Corporation | Polypeptid, polynukleotid kódující polypeptid, expresní vektor, transformant a způsob přípravy |
| DE10140088A1 (de) | 2001-08-16 | 2003-03-13 | Degussa | NADH-Oxidase aus Lactobacillus |
| AU2003257986A1 (en) | 2002-07-31 | 2004-02-16 | Georgia Tech Research Corporation | Methods and compositions for nad(p)(h) oxidases |
| DE10240603A1 (de) | 2002-09-03 | 2004-03-11 | Degussa Ag | Verwendung von Malat-Dehydrogenase zur NADH-Regenerierung |
| EP1731618A1 (en) | 2005-06-07 | 2006-12-13 | Prodotti Chimici E Alimentari Spa | Process for the selective oxydation of colic acid |
| AT503486B1 (de) * | 2006-04-11 | 2008-05-15 | Iep Gmbh | Verfahren zur enantioselektiven reduktion von steroiden |
| EP1925674A1 (en) | 2006-11-27 | 2008-05-28 | Universiteit van Amsterdam | Regeneration of NADPH and/or NADH cofactors |
| AT506639A1 (de) | 2008-04-01 | 2009-10-15 | Kroutil Wolfgang Dipl Ing Dr T | Verfahren zur deracemisierung von enantiomerengemischen unter verwendung von enzymsystemen |
| IT1398729B1 (it) | 2009-07-01 | 2013-03-18 | F S I Fabbrica Italiana Sint | Processo per la preparazione di testosterone |
| JP2013511973A (ja) * | 2009-11-30 | 2013-04-11 | ファルマツェル、ゲーエムベーハー | 新規７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼおよびその使用 |
| US8530213B2 (en) | 2009-12-02 | 2013-09-10 | Georgia Tech Research Corporation | Compositions and methods for using NADH oxidases |
| WO2013117251A1 (de) | 2012-02-07 | 2013-08-15 | Annikki Gmbh | Verfahren zur enzymatischen regenerierung von redoxkofaktoren |
| TW201343623A (zh) | 2012-02-07 | 2013-11-01 | Annikki Gmbh | 使氧化還原輔因子經酶催化再生之方法 |
-
2013
- 2013-01-28 TW TW102103119A patent/TW201343623A/zh unknown
- 2013-01-29 AR ARP130100266A patent/AR089841A1/es active IP Right Grant
- 2013-02-05 SA SA113340270A patent/SA113340270B1/ar unknown
- 2013-02-06 SI SI201331563T patent/SI2812439T1/sl unknown
- 2013-02-06 US US14/376,512 patent/US9644227B2/en active Active
- 2013-02-06 AU AU2013218042A patent/AU2013218042B2/en active Active
- 2013-02-06 IN IN7015DEN2014 patent/IN2014DN07015A/en unknown
- 2013-02-06 CN CN201380008572.8A patent/CN104136620A/zh active Pending
- 2013-02-06 CN CN202110638003.8A patent/CN113337568A/zh active Pending
- 2013-02-06 LT LTEP13703568.9T patent/LT2812439T/lt unknown
- 2013-02-06 KR KR1020147023136A patent/KR102022137B1/ko active IP Right Grant
- 2013-02-06 RU RU2014136162A patent/RU2635087C2/ru active
- 2013-02-06 PT PT13703568T patent/PT2812439T/pt unknown
- 2013-02-06 BR BR112014019287-1A patent/BR112014019287B1/pt active IP Right Grant
- 2013-02-06 SG SG11201404614XA patent/SG11201404614XA/en unknown
- 2013-02-06 PL PL13703568T patent/PL2812439T3/pl unknown
- 2013-02-06 HU HUE13703568 patent/HUE044690T2/hu unknown
- 2013-02-06 MY MYPI2014702060A patent/MY172493A/en unknown
- 2013-02-06 JP JP2014556034A patent/JP6329086B2/ja active Active
- 2013-02-06 UA UAA201409679A patent/UA117453C2/uk unknown
- 2013-02-06 EP EP13703568.9A patent/EP2812439B1/de active Active
- 2013-02-06 NZ NZ627477A patent/NZ627477A/en unknown
- 2013-02-06 ES ES13703568T patent/ES2742381T3/es active Active
- 2013-02-06 CA CA2862384A patent/CA2862384C/en active Active
- 2013-02-06 RS RS20191065A patent/RS59114B1/sr unknown
- 2013-02-06 WO PCT/EP2013/052313 patent/WO2013117584A1/de active Application Filing
- 2013-02-06 MX MX2014009455A patent/MX358771B/es active IP Right Grant
-
2014
- 2014-08-06 PH PH12014501770A patent/PH12014501770B1/en unknown
-
2015
- 2015-05-06 HK HK15104308.2A patent/HK1204010A1/xx unknown
-
2017
- 2017-04-18 US US15/490,416 patent/US10370691B2/en active Active
-
2019
- 2019-06-25 US US16/451,838 patent/US11339415B2/en active Active
- 2019-08-22 HR HRP20191514 patent/HRP20191514T1/hr unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SA113340270B1 (ar) | عملية للتجديد الإنزيمي لعوامل مشتركة خاصة بالأكسدة / الاختزال | |
| Ferry | Methane from acetate | |
| ES2583203T3 (es) | Microorganismos recombinantes y métodos de uso de los mismos | |
| CN104263791A (zh) | 一种酶法制备11a,17a-二羟基-孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮的方法 | |
| SA517381696B1 (ar) | فينيل بيروفات ديكاربوكسيلاز معدلة وراثيا، وعمليات تحضيرها، واستخداماتها | |
| Felix | Bioconversions in permeabilized cells | |
| WO2013117251A1 (de) | Verfahren zur enzymatischen regenerierung von redoxkofaktoren | |
| Thauer | Biodiversity and unity in biochemistry | |
| Davis et al. | Stereochemical specificity of the biosynthesis of the alkyl ether bond in alkyl ether lipids. | |
| Kremer et al. | Catabolism of malate and related dicarboxylic acids in various Desulfovibrio strains and the involvement of an oxygen-labile NADPH dehydrogenase | |
| Boll et al. | Catabolic pathways and enzymes involved in the anaerobic degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons | |
| WO2010050231A1 (ja) | シロ－イノシトール産生細胞および当該細胞を用いたシロ－イノシトール製造方法 | |
| JP2007089466A (ja) | 乳酸の製造方法 | |
| Grahame et al. | Redox enzymes of methanogens: physicochemical properties of selected, purified oxidoreductases | |
| Wan et al. | Recent progress in engineering Clostridium autoethanogenum to synthesize the biochemicals and biocommodities | |
| Aresta et al. | Enzymatic conversion of CO 2 (carboxylation reactions and reduction to energy-rich C1 molecules) | |
| Tomonou et al. | Photoinduced H 2 production with Mg chlorophyll-a from Spirulina and colloidal platinum by visible light | |
| Fast | Engineering Bacterial CO 2 Fixation to Enhance Biofuel and Biochemical Yields | |
| EP4001424A1 (en) | Synthesis of 25-hydroxy-vitamin d3, 25-hydroxy-7-dehydrocholesterol and analogous alcohols using the beta-proteobacterium thauera aromatica | |
| Zhang et al. | Confining enzyme clusters in supramolecular nanoreactors enhances cofactor-dependent cascade for chiral alcohol synthesis | |
| JP5474280B2 (ja) | 光学活性なｔｒａｎｓ体含窒素環状β−ヒドロキシエステルの製造方法 | |
| AT513721B1 (de) | Verfahren zur enzymatischen Regenerierung von Redoxkofaktoren | |
| US20030153051A1 (en) | Cholesterol oxidase | |
| JP2010161982A (ja) | ブタノールの製造方法 | |
| Kesen et al. | Pyruvate ferredoxin oxidoreductase from the hyperthermophilic archaeon, Pyrococcus furious, functions as a CoA-dependent pyruvate decarboxylase |