RU2738127C2

RU2738127C2 - Масла, содержащие полиненасыщенные жирные кислоты, устойчивые к окислению

Info

Publication number: RU2738127C2
Application number: RU2017116173A
Authority: RU
Inventors: Кристин Шейла КРОУФОРД; Тан СЮЭЦЗЮНЬ; Майкл Ленн СТЕФАНСКИ
Original assignee: ДСМ АйПи АССЕТС Б.В.
Priority date: 2011-11-01
Filing date: 2012-11-01
Publication date: 2020-12-08
Also published as: BR112014010347A2; JP2022068179A; AU2018204154B2; JP2014532773A; AR090072A1; AU2016204866A1; EP2773216A1; AU2012333227B2; SG11201401783YA; TW201417715A; CA2854178C; AU2018204154A1; WO2013066373A1; US20150017304A1; JP2018070887A; CN109924268A; JP2020002364A; PH12019501057A1; US20130316061A1; IL232428A

Abstract

Изобретение относится к масложировой промышленности. Масло, содержащее: (i) по меньшей мере 30 масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойных связи; (ii) по меньшей мере один первый антиоксидант, причём по меньшей мере один первый антиоксидант является токоферолом, причём указанное масло содержит токоферол в количестве от около 1000 ч./млн до около 3000 ч./млн; (iii) менее чем около 750 ч./млн второго антиоксиданта, выбранного из производных аскорбиновой кислоты; и (iv) менее чем около 150 ч./млн лецитина. Конечное масло, содержащее вышеописанное масло и по меньшей мере одно другое масло. Масло применяется для изготовления пищевого продукта или добавки к пищевому продукту. Способ изготовления пищевого продукта, включающий введение масла в пищевой продукт. Пищевой продукт, содержащий масло. Изобретение позволяет получить масло с низкой степенью окисления. 6 н. и 33 з.п. ф-лы, 7 ил., 24 табл., 16 пр.

Description

Область техники

Данное изобретение относится к маслам, содержащим одну или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойные связи.

Уровень техники

Масла, содержащие полиненасыщенные жирные кислоты (PUFA), могут окисляться и прогоркать в процессе хранения. Из-за этого у масла появляются неприятные запах и привкус, приобретаемые также продуктами, в составе которых имеется это масло. Полиненасыщенные жирные кислоты, в молекулах которых имеются 4 или более двойных связей между атомами углерода (С=С), могут быть менее устойчивы к окислению, чем те, в которых двойных связей меньше. Кроме того, скорость окисления масел, содержащих полиненасыщенные жирные кислоты, может возрастать в присутствии металлов, например железа.

В данной области техники предпринимались попытки ослабить окисление масел, содержащих полиненасыщенные жирные кислоты, различными средствами, включая производные аскорбиновой кислоты, например аскорбилпальмитат, в сочетании с лецитином. Однако остается нужда в более устойчивых к окислению маслах, содержащих полиненасыщенные жирные кислоты.

Теперь обнаружено, что комбинации производных аскорбиновой кислоты, например аскорбилпальмтата, с лецитином усиливают окисление масел, содержащих 30% по меньшей мере одной полиненасыщенной жирной кислоты с 4 или более двойными связями углерод-углерод. В настоящем документе представлены воплощения данного изобретения, не ограничивающие его объем. Описанные в настоящем документе воплощения данного изобретения можно желаемым образом комбинировать или подразделять для получения нужных сочетаний, содержащих дополнительные воплощения или состоящие из них, или в основном состоящие из них.

Краткое описание фигур

Фигура 1 изображает график, демонстрирующий изменение показателя (полученного при сенсорном анализе) интенсивности рыбного запаха во времени для масел по примерам 7a, 7b, 7c, 8e и 8f.

Фигура 2 изображает график, демонстрирующий изменение показателя (полученного путем сенсорного анализа) интенсивности рыбного запаха во времени для масел по примерам 7a, 7d, 7e и 8b.

Фигура 3 изображает график, демонстрирующий изменение показателя (полученного путем сенсорного анализа) интенсивности рыбного запаха во времени для масел по примерам 7a, 7f, 7g и 8c.

Фигура 4 изображает график, демонстрирующий изменение показателя (полученного путем сенсорного анализа) интенсивности рыбного запаха во времени для масел по примерам 7a , 7h, 7i и 7j.

Фигура 5 изображает график, демонстрирующий изменение показателя (полученного путем сенсорного анализа) интенсивности рыбного запаха во времени для масел по примерам 7a , 7c, 7k и 8a.

Фигура 6 изображает график концентрации железа (ч/млрд) в маслах, практически не содержащих лецитина (примеры 7a, 7c, 7h, 8a-c и 8f) по сравнению с маслом, содержащим смешанный токоферол, аскорбилпальмитат и лецитин (пример 7b).

Фигура 7 изображает график, демонстрирующий изменение показателя (полученного путем сенсорного анализа) интенсивности рыбного запаха во времени для масел по примерам 7a, 8d и 7m.

В настоящем документе описываются масла, содержащие (i) по меньшей мере 30 масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод; (ii) по меньшей мере один первый антиоксидант; и (iii) менее чем около 1000 частей на миллион (ч/млн) лецитина.

В настоящем документе описываются масла, содержащие (i) по меньшей мере 30 масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод; (ii) по меньшей мере один первый антиоксидант; и (iii) менее чем около 750 частей на миллион (ч/млн) второго антиоксиданта, выбранного из производных аскорбиновой кислоты.

В настоящем документе описываются масла, содержащие (i) по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод; (ii) по меньшей мере один первый антиоксидант; и (iii) менее чем около 30 частей на миллиард (ч/млрд) железа. При необходимости эти масла содержат по меньшей мере 30 масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод.

В настоящем документе описываются масла, содержащие (i) по меньшей мере 30 масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод; (ii) по меньшей мере один первый антиоксидант; и (iii) средства для улучшения устойчивости к окислению, причем указанные масла имеют рыбный запах, характеризующийся показателем. полученным путем сенсорного анализа, менее 1,5.

В настоящем документе масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод, выражается относительно суммарной массы всех жирных кислот в данном масле.

В настоящем документе выражение масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот» относится к выраженной в процентах доле суммарной массы всех полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод, в данном масле.

В настоящем документе масс.% какой-либо конкретной жирной кислоты или какой-либо комбинации конкретных жирных кислот выражается относительно суммарной массы всех жирных кислот в данном масле.

Выражение «практически не содержит» применительно к лецитину означает, что его содержание составляет менее около 150 ч/млн, около 15 ч/млн, около 10 ч/млн, около 5 ч/млн, около 1 ч/млн и около 0 ч/млн или равно указанным значениям.

Выражение «практически не содержит» применительно к производным аскорбиновой кислоты означает, что содержание производного аскорбиновой кислоты составляет менее около 3 ч/млн, около 2,5 ч/млн, около 2 ч/млн, около 1,5 ч/млн, около 1 ч/млн, около 0,5 ч/млн и около 0 ч/млн или равно указанным значениям.

Выражение «не содержит» применительно к лецитину или производным аскорбиновой кислоты означает, что эти соединения не присутствуют в детектируемых количествах.

Термин «лецитин» в настоящем документе включает, например, подсолнечный лецитин, соевый лецитин, яичный лецитин и их смеси. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит менее чем около 1200 ч/млн лецитина, менее чем около 1000 ч/млн лецитина, менее чем около 750 ч/млн лецитина, менее чем около 500 ч/млн лецитина, менее чем около 250 ч/млн лецитина или менее чем около 200 ч/млн лецитина. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящее документе масло не содержит лецитина. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящее документе масло практически не содержит лецитина.

В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит менее чем около 30 ч/млрд железа или более, в частности, менее чем или равно около 25 ч/млрд, 20 ч/млрд, 15 ч/млрд, 10 ч/млрд,5 ч/млрд, 1 ч/млрд, 0,5 ч/млрд или 0,2 ч/млрд. В другом воплощении данного изобретения содержание железа составляет 0 ч/млрд.

Термин «антиоксидант» в настоящем документе включает, например, производные аскорбиновой кислоты, токоферол, экстракт зеленого чая и/или их смеси.

В одном из воплощений данного изобретения антиоксидант является первым антиоксидантом, выбираемым из токоферола, экстракта зеленого чая и/или их смесей. В другом воплощении данного изобретения антиоксидант является вторым антиоксидантом, выбираемым из производных аскорбиновой кислоты.

Термин «производные аскорбиновой кислоты» в настоящем документе включает, например, аскорбиновую кислоту, аскорбилпальмитат, аскорбилстеарат и/или их смеси. В одном из воплощений данного изобретения производное аскорбиновой кислоты является аскорбилпальмитатом.

В другом воплощении данного изобретения производной аскорбиновой кислоты присутствует в описанном в настоящем документе масле в количестве от около 0 ч/млн до около 50 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 250 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 300 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 400 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 750 ч/млн, от около 50 ч/млн до около 250 ч/млн, от около 50 ч/млн до около 300 ч/млн, от около 50 ч/млн до около 400 ч/млн, от около 50 ч/млн до около 750 ч/млн, от около 250 ч/млн до около 750 ч/млн, от около 250 ч/млн до около 400 ч/млн, от около 250 ч/млн до около 300 ч/млн, от около 300 ч/млн до около 400 ч/млн. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит менее чем около 750 ч/млн производного аскорбиновой кислоты, менее чем около 400 ч/млн производного аскорбиновой кислоты, менее чем около 300 ч/млн производного аскорбиновой кислоты, менее чем около 250 ч/млн производного аскорбиновой кислоты, менее чем около 50 ч/млн производного аскорбиновой кислоты. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло практически не содержит производных аскорбиновой кислоты. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло практически не содержит аскорбилпальмитата. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит около 250 ч/млн производного аскорбиновой кислоты. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит около 250 ч/млн аскорбилпальмитата. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло не содержит производных аскорбиновой кислоты. В еще одном воплощении данного изобретения указанное масло не содержит аскорбилпальмитата.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло практически не содержит производных аскорбиновой кислоты и практически не содержит лецитина. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло практически не содержит аскорбилпальмитата и практически не содержит лецитина. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло не содержит производных аскорбиновой кислоты и не содержит лецитина. В еще одном воплощении данного изобретения указанное масло не содержит аскорбилпальмитата и не содержит лецитина.

В еще одном воплощении данного изобретения по меньшей мере один первый антиоксидант является токоферолом. В другом воплощении данного изобретения по меньшей мере один первый антиоксидант является добавленным токоферолом. В еще одном воплощении данного изобретения по меньшей мере один первый антиоксидант является смешанным токоферолом. В еще одном воплощении данного изобретения по меньшей мере один первый антиоксидант является dl-α-токоферолом, d-α-токоферолом, β-токоферолом, γ-токоферолом, δ-токоферолом, α-токотриенолом, β-токотриенолом, γ -токотриенолом и δ-токотриенолом или их смесью.

В другом воплощении данного изобретения термин «токоферол» означает любой изомер токоферола (или их смесь), включая (но не ограничиваясь перечисленным здесь) dl-α-токоферол (например, синтетический токоферол), d-α-токоферол (например, природный токоферол), β-, γ- и δ-токоферол, dl-α-токоферол и α-токотриенол, β-токотриенол, γ-токотриенол и δ-токотриенол.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать токоферол в количестве от около 900 ч/млн до около 3400 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 2400 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 2000 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 1700 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 1400 ч/млн, от около 1400 ч/млн до около 3400 ч/млн, от около 1400 ч/млн до около 2400 ч/млн, от около 1400 ч/млн до около 2000 ч/млн, от около 1400 ч/млн до около 1700 ч/млн, от около 1700 ч/млн до около 3400 ч/млн, от около 1700 ч/млн до около 2400 ч/млн, от около 1700 ч/млн до около 2000 ч/млн, от около 2000 ч/млн до около 3400 ч/млн, от около 2000 ч/млн до около 2400 ч/млн, от около 2400 ч/млн до около 3400 ч/млн. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит менее чем около 3400 ч/млн токоферола, менее чем около 2400 ч/млн токоферола, менее чем около 2000 ч/млн токоферола, менее чем около 1700 ч/млн токоферола, менее чем около 1400 ч/млн токоферола или менее чем около 900 ч/млн токоферола. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит по меньшей мере около 900 ч/млн токоферола, по меньшей мере около 1400 ч/млн токоферола, по меньшей мере около 1700 ч/млн токоферола, по меньшей мере около 2000 ч/млн токоферола, по меньшей мере около 2400 ч/млн токоферола или по меньшей мере около 3400 ч/млн токоферола. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит около 1400 ч/млн токоферола, около 1700 ч/млн токоферола или около 2400 ч/млн токоферола.

В настоящем документе термин «добавленный токоферол» включает изомеры и производные токоферола, добавляемые в описанное здесь масло. Добавленный токоферол включает, например, α-токоферол, dl-α-токоферол, d-α-токоферол, β-токоферол, γ-токоферол, δ-токоферол, α-токотриенол, β-токотриенол, γ-токотриенол, δ-токотриенол, D-α-токоферол, D-β-токоферол, D-γ-токоферол, D-δ-токоферол и/или их смеси.

В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать добавленный токоферол в количестве от около 0 ч/млн до около 2500 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 1500 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 900 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 800 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 500 ч/млн, от около 50 ч/млн до около 5000 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 3500 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 2500 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 1500 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 900 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 800 ч/млн, от около 300 ч/млн до около 700 ч/млн, от около 800 ч/млн до около 2500 ч/млн, от около 800 ч/млн до около 1500 ч/млн, от около 800 ч/млн до около 900 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 2500 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 1500 ч/млн, от около 1500 ч/млн до около 2500 ч/млн. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит менее чем около 2500 ч/млн добавленного токоферола, менее чем около 1500 ч/млн добавленного токоферола, менее чем около 900 ч/млн добавленного токоферола, менее чем около 800 ч/млн добавленного токоферола, менее чем около 500 ч/млн добавленного токоферола. В другом воплощении данного изобретения указанное масло содержит около 500 ч/млн добавленного токоферола, около 800 ч/млн добавленного токоферола или около 1500 ч/млн добавленного токоферола.

В одном из воплощений данного изобретения токоферол выбирают из α-токоферола, dl-α-токоферола, d-α-токоферола, β-токоферола, γ-токоферола, δ-токоферола, α-токотриенола, β-токотриенола, γ-токотриенола, δ-токотриенола, D-α-токоферола, D-β-токоферола, D-γ-токоферола, D-δ-токоферола и/или их смесей.

Термин «смешанный токоферол» в настоящем документе включает смеси изомеров и производных добавленных токоферолов, в том числе, например, смеси dl-α-токоферола, d-α-токоферола, β-токоферола, γ-токоферола, δ-токоферола, α-токотриенола, β-токотриенола, γ-токотриенола, δ-токотриенол, D-α-токоферола, D-β-токоферола, D-γ-токоферола и D-δ-токоферола.

В одном из воплощений данного изобретения смешанный токоферол представляет собой смесь D-α-токоферола, D-β-токоферола, D-γ-токоферола и D-δ-токоферола. В другом воплощении данного изобретения смешанный токоферол представляет собой смесь от около 9% до около 20% D-α-токоферола, от около 1% до около 4% D-β-токоферола, от около 50% до около 65% D-γ-токоферола и от около 20% до около 30% D-δ-токоферола. В еще одном воплощении данного изобретения смешанный токоферол представляет собой природный смешанный токоферол.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит смешанный токоферол в количестве от около 900 ч/млн до около 3400 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 2400 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 2000 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 1700 ч/млн, от около 900 ч/млн до около 1400 ч/млн, от около 1400 ч/млн до около 3400 ч/млн, от около 1400 ч/млн до около 2400 ч/млн, от около 1400 ч/млн до около 2000 ч/млн, от около 1400 ч/млн до около 1700 ч/млн, от около 1700 ч/млн до около 3400 ч/млн, от около 1700 ч/млн до около 2400 ч/млн, от около 1700 ч/млн до около 2000 ч/млн, от около 2000 ч/млн до около 3400 ч/млн, от около 2000 ч/млн до около 3400 ч/млн, от около 2000 ч/млн до около 2400 ч/млн, от около 2400 ч/млн до около 3400 ч/млн. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит менее чем около 3400 ч/млн смешанного токоферола, менее чем около 2400 ч/млн смешанного токоферола, менее чем около 2000 ч/млн смешанного токоферола, менее чем около 1700 ч/млн смешанного токоферола, менее чем около 1400 ч/млн смешанного токоферола или менее чем около 900 ч/млн смешанного токоферола. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит около 1400 ч/млн смешанного токоферола, около 1700 ч/млн смешанного токоферола или около 2400 ч/млн смешанного токоферола.

Описанные в настоящем документе масла могут также содержать природные токоферолы в форме, например, токотриенолов, которые продуцировались микроорганизмами в процессе ферментации и в результате содержались в неочищенном масле. Количество природных токоферолов, содержащихся в неочищенном масле, может варьировать от, например, около 25 ч/млн до около 500 ч/млн токотриенолов.

Термин «экстракт зеленого чая» включает, например, экстракты зеленого чая, содержащие, например, полифенольные соединения (например, катехины). Примеры полифенольных соединений, которые могут присутствовать в экстрактах зеленого чая, включают эпигаллокатехина галлат 25 (EGCG), эпигаллокатехин (EGC), эпикатехина галлат (ECG), эпигаллокатехин (EC) и их смеси. В одном из воплощений данного изобретения экстракт зеленого чая содержит по меньшей мере одно полифенольное соединение в количестве от около 1% до около 90%, от около 5% до около 85%, от около 10% до около 80%, от около 15% до около 75%, от около 20% до около 70%, от около 25% до около 65%, от около 30% до около 60%, от около 35% до около 55%, от около 40% до около 50% от массы экстракта зеленого чая (без учета носителей).

Термин «ароматизирующий реагент» включает, например, экстракт розмарина и ваниль. Экстракт розмарина может быть получен, например, из Rosmarinus officinalis. Экстракт розмарина может быть, например, органическим. Экстракт розмарина можно получить следующим образом: высушить листьев этого растения, принадлежащего к семейству яснотковых (Lamiaceae), измельчить их в порошок, полученный порошок экстрагировать водой, горячей водой, гексаном, этиловым спиртом, ацетоном, этилацетатом или смесью любых из этих растворителей. В число компонентов, обнаруженных в экстракте розмарина, входят, например, кофейная (3,4-дигидроксикоричная) кислота, карнозиновая кислота, карнозол, метоксикарнозиновая кислота, розмариновая кислота, розманол, розмаридифенол, розмаридихинон и/или их смеси. В продаже имеется множество экстрактов розмарина, любой из них или несколько можно использовать по данному изобретению. Из имеющихся в продаже экстрактов розмарина по данному изобретению можно использовать, например, препараты производства фирм: Kalsec (Каламазу, шт. Миннеаполис, США) под торговым названием Herbalox ^®; Vitiva (Марковцы, Словения) под торговым названием Inolens^®; Naturex (Авиньон, Франция) под торговым названием StabileEnhance^® и Ecom Food Industries Corporation (пров. Онтарио, Канада) под кодовым обозначением продукта NR 3401.

В одном из воплощений данного изобретения ароматизирующий реагент является экстрактом розмарина. В другом воплощении данного изобретения экстракт розмарина получен из Rosmarinus officinalis.

В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит экстракт розмарина в количестве от около 0 ч/млн до около 5000 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 3500 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 3000 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 2000 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 750 ч/млн, от около 0 ч/млн до около 500 ч/млн, от около 50 ч/млн до около 5000 ч/млн, от около 50 ч/млн до около 7500 ч/млн, от около 50 ч/млн до около 10 000 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 5000 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 4000 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 3500 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 3000 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 2000 ч/млн, от около 500 ч/млн до около 750 ч/млн, от около 750 ч/млн до около 5000 ч/млн, от около 750 ч/млн до около 3500 ч/млн, от около 750 ч/млн до около 3000 ч/млн, от около 750 ч/млн до около 2000 ч/млн, от около 2000 ч/млн до около 5000 ч/млн, от около 2000 ч/млн до около 3500 ч/млн, от около 2000 ч/млн до около 3000 ч/млн, от около 3000 ч/млн до около 3500 ч/млн, от около 3500 ч/млн до около 5000 ч/млн. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит менее чем около 5000 ч/млн экстракта розмарина, менее чем около 3500 ч/млн экстракта розмарина, менее чем около 3000 ч/млн экстракта розмарина, менее чем около 200 ч/млн экстракта розмарина, менее чем около 750 ч/млн экстракта розмарина или менее чем около 500 ч/млн экстракта розмарина. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит около 5000 ч/млн экстракта розмарина, около 3500 ч/млн экстракта розмарина, около 3000 ч/млн экстракта розмарина или около 2000 ч/млн экстракта розмарина.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 3000 ч/млн экстракта розмарина, около 1700 ч/млн смешанного токоферола и около 250 ч/млн аскорбилпальмитата при условии, что это масло практически не содержит лецитина. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 3000 ч/млн экстракта розмарина, около 800 ч/млн смешанного токоферола и около 250 ч/млн аскорбилпальмитата при условии, что это масло практически не содержит лецитина. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 3500 ч/млн экстракта розмарина и около 1400 ч/млн смешанного токоферола при условии, что это масло практически не содержит лецитина и аскорбилпальмитата. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 3500 ч/млн экстракта розмарина и около 500 ч/млн добавленного токоферола при условии, что это масло практически не содержит лецитина и аскорбилпальмитата. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 2000 ч/млн экстракта розмарина и около 2400 ч/млн смешанного токоферола при условии, что это масло практически не содержит лецитина и аскорбилпальмитата. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 2000 ч/млн экстракта розмарина и около 1500 ч/млн добавленного токоферола при условии, что это масло практически не содержит лецитина и аскорбилпальмитата. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 5000 ч/млн экстракта розмарина, около 1700 ч/млн смешанного токоферола и около 250 ч/млн аскорбилпальмитата при условии, что это масло практически не содержит лецитина. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 5000 ч/млн экстракта розмарина, около 800 ч/млн добавленного токоферола и около 250 ч/млн аскорбилпальмитата при условии, что это масло практически не содержит лецитина.

В одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 3000 ч/млн экстракта розмарина, около 1700 ч/млн смешанного токоферола и около 250 ч/млн аскорбилпальмитата при условии, что это масло практически не содержит лецитина. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 3000 ч/млн экстракта розмарина, около 800 ч/млн добавленного токоферола и около 250 ч/млн аскорбилпальмитата при условии, что это масло практически не содержит лецитина. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 3500 ч/млн экстракта розмарина и около 1400 ч/млн смешанного токоферола при условии, что это масло практически не содержит лецитина и аскорбилпальмитата. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 3500 ч/млн экстракта розмарина и около 500 ч/млн добавленного токоферола при условии, что это масло практически не содержит лецитина и аскорбилпальмитата. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 2000 ч/млн экстракта розмарина и около 2400 ч/млн смешанного токоферола при условии, что это масло практически не содержит лецитина и аскорбилпальмитата. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 2000 ч/млн экстракта розмарина и около 1500 ч/млн добавленного токоферола при условии, что это масло практически не содержит лецитина и аскорбилпальмитата. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 5000 ч/млн экстракта розмарина, около 1700 ч/млн смешанного токоферола и около 250 ч/млн аскорбилпальмитата при условии, что это масло практически не содержит лецитина. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 5000 ч/млн экстракта розмарина, около 800 ч/млн добавленного токоферола и около 250 ч/млн аскорбилпальмитата при условии, что это масло практически не содержит лецитина.

Одно из воплощений данного изобретения относится к маслу, содержащему по меньшей мере около 30 масс.% относительно содержания жирных кислот в этом масле по меньшей мере одной полиненасыщенной жирной кислоты, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод; по меньшей мере один первый антиоксидант и средства для улучшения устойчивости к окислению.

Анизидиновое число (p-AV) определяли стандартным методом AOCS Cd 18-90. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло характеризуется анизидиновым числом (p-AV) менее чем около 40; менее чем около 30 или менее чем около 20.

Перекисное число (РV) определяли стандартным методом AOCS Cd 8-53. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло характеризуется перекисным числом (РV) менее чем около 20 мэкв/кг; менее чем около 10 мэкв/кг или менее чем около 5 мэкв/кг.

Стандартное определение окислительной стабильности масла на приборе RANCIMAT («Рансимат») проводили при температуре 90°C с потоком воздуха 10 л/час (AOCS Cd 12b-92). В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло характеризовалось индексом окислительной стабильности (показателем, полученным на приборе RANCIMAT) менее чем (или равно) около 3, около 4, около 5, около 6, около 7, около 8, около 9, около 10, около 11, около 12, около 13, около 14, около 15, около 16, около 17, около 18, около 19 при надлежащем хранении. В одном из воплощений данного изобретения показатель RANCIMAT определяли через около 3 месяцев, около 5 месяцев, около 6 месяцев, около 7 месяцев или около 8 месяцев надлежащего хранения. Специалистам в данной области техники известно, в каких условиях следует хранить описанные в настоящем документе масла. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло хранят при комнатной температуре (25°C) в вакуумной упаковке (нейлон/фольга/полиэтилен низкой плотности, производство Heritage Packaging), запаянной в азоте, или в алюминиевых контейнерах с эпоксифенольным покрытием (Elemental Container Inc.).

Рыбный («морской») запах и привкус оценивали стандартными методами сенсорного анализа пищевых продуктов, как описано в Meilgaard et al., CRC Press; 4 edition (December 13, 2006). Группа имеющих соответствующий опыт испытуемых пробовали на вкус (или вдыхали запах) образца. Каждый из испытуемых давал образцу оценку в баллах. Затем все эти значения приводились к среднему арифметическому и результат округляли до ближайшей величины в баллах. Значения больше или равно 1,5 для рыбного запаха и больше или равно 2,5 для рыбного привкуса считаются ощутимыми для большинства людей.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло характеризуется интенсивностью рыбного запаха по результатам сенсорного анализа менее чем 1,5 через около 3 месяца, через около 4 месяца, через около 5 месяцев, через около 6 месяцев, через около 7 месяцев, через около 8 месяцев или через около 9 месяцев надлежащего хранения. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло характеризуется интенсивностью рыбного запаха по результатам сенсорного анализа менее чем 1,5 в период времени, выбранный из 0-3 месяцев, 0-4 месяцев, 0-5 месяцев, 0-6 месяцев, 0-7 месяцев, 0-8 месяцев или 0-9 месяцев. В одном из воплощений данного изобретения надлежащее хранение осуществлялось при комнатной температуре (25°C) в вакуумной упаковке Nylon/Foil/PE (нейлон/фольга/полиэтилен низкой плотности), запаянной в азоте, или в алюминиевых контейнерах с эпоксифенольным покрытием.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло характеризуется рыбным привкусом по результатам сенсорного анализа менее чем 2,5 через около 3 месяца, через около 4 месяца, через около 5 месяцев, через около 6 месяцев, через около 7 месяцев, через около 8 месяцев или через около 9 месяцев надлежащего хранения. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло характеризуется рыбным запахом по результатам сенсорного анализа менее чем 1,5 в период времени, выбранный из 0-3 месяцев, 0-4 месяцев, 0-5 месяцев, 0-6 месяцев, 0-7 месяцев, 0-8 месяцев или 0-9 месяцев. В одном из воплощений данного изобретения надлежащее хранение осуществлялось при комнатной температуре (25°C) в вакуумной упаковке Nylon/Foil/PE (нейлон/фольга/полиэтилен низкой плотности), запаянной в азоте, или в алюминиевых контейнерах с эпоксифенольным покрытием.

В одном из воплощений данного изобретения по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, содержащую 4 двойных связи углерод-углерод, выбирают из докозагексаеновой кислоты (“DHA”), эйкозапентаеновой кислоты (“EPA”), арахидоновой кислоты (“ARA”), омега-3-докозапентаеновой кислоты («DPA n-3») и омега-6-докозапентаеновой кислоты («DPA n-6»). В некоторых воплощениях данного изобретения описанное предлагаемое масло содержит омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты. В других воплощениях данного изобретения омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты выбирают из докозагексаеновй (DHA), эйкозапентаеновой (EPA), омега-3-докозапентаеновой кислоты (DPAn-3) и их смесей.

В некоторых воплощениях данного изобретения предлагаемое масло отличается наличием по меньшей мере одной из следующих жирных кислот (или их эфиров), содержание которой выражено в массовых процентах от общего содержания жирных кислот в этом масле. В описанных в настоящем документе вариантах это масло может также содержать около 3% или менее других жирных кислот или их эфиров.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит по меньшей мере около 30 масс.%, по меньшей мере около 35 масс.%, по меньшей мере около 40 масс.%, по меньшей мере около 45 масс.% или по меньшей мере около 50 масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются 4 двойных связи углерод-углерод. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит от около 30 масс.% до около 60 масс.%, от около 30 масс.% до около 50 масс.%, от около 30 масс.% до около 40 масс.%, от около 40 масс.% до около 60 масс.% или от около 40 масс.% до около 50 масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит по меньшей мере около 30 масс.%, по меньшей мере около 35 масс.%, по меньшей мере около 40 масс.%, по меньшей мере около 45 масс.% или по меньшей мере около 50 масс.% докозагексаеновой кислоты. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит от около 30 масс.% до около 60 масс.%, от около 30 масс.% до около 50 масс.%, от около 30 масс.% до около 40 масс.%, от около 40 масс.% до около 60 масс.% или от около 40 масс.% до около 50 масс.% докозагексаеновой кислоты.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит по меньшей мере около 35 масс.% докозагексаеновой кислоты + эйкозапентаеновой кислоты, по меньшей мере около 40 масс.%, по меньшей мере около 45 масс.% или по меньшей мере около 50 масс.% докозагексаеновой кислоты + эйкозапентаеновой кислоты, причем указанное масло содержит меньше чем около 80 масс.%, меньше чем около 70 масс.% или меньше чем около 60 масс.% докозагексаеновой кислоты + эйкозапентаеновой кислоты.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод, в количестве по меньшей мере около 30 масс.%, по меньшей мере около 35 масс.%, по меньшей мере около 40 масс.%, по меньшей мере около 45 масс.% или по меньшей мере около 50 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод, в количестве от около 30 масс.% до около 60 масс.%, от около 30 масс.% до около 50 масс.%, от около 30 масс.% до около 40 масс.%, от около 40 масс.% до около 60 масс.% или от около 40 масс.% до около 50 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит докозагексаеновую кислоту в количестве по меньшей мере около 30 масс.%, по меньшей мере около 35 масс.%, по меньшей мере около 40 масс.%, по меньшей мере около 45 масс.% или по меньшей мере около 50 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит докозагексаеновую кислоту в количестве от около 30 масс.% до около 60 масс.%, от около 30 масс.% до около 50 масс.%, от около 30 масс.% до около 40 масс.%, от около 40 масс.% до около 60 масс.% или от около 40 масс.% до около 50 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле.

В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4 двойных связи углерод-углерод, в количестве меньше чем около 80 масс.%, меньше чем около 70 масс.% или меньше чем около 60 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот.

Cодержание докозагексаеновой (DHA) и эйкозапентаеновой (EPA) кислот определяли стандартным методом AOCS Ce 1b-89. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит от около 200 мг DHA/г масла, от около 300 мг DHA/г масла, от около 350 мг DHA/г масла, от около 400 мг DHA/г масла, от около 500 мг DHA/г масла. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит от около 120 мг EPA/г масла, от около 130 мг EPA/г масла. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит от около 200 мг DHA/г масла до около 600 мг DHA/г масла, от около 200 мг DHA/г масла до около 500 мг DHA/г масла, от около 200 мг DHA/г масла до около 400 мг DHA/г масла, от около 300 мг DHA/г масла до около 600 мг DHA/г масла, от около 300 мг DHA/г масла до около 500 мг DHA/г масла или от около 300 мг DHA/г масла до около 400 мг DHA/г масла. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит от около 100 мг EPA/г масла до около 250 мг EPA/г масла. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит от около 400 мг DHA + EPA/г масла или от около 500 мг DHA+EPA/г масла.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит арахидоновую кислоту (ARA) в количестве около 2 масс.% или менее относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) в количестве около 3 масс.% или менее относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит DPA n-6 в количестве около 18 масс.% или менее или от около 12% до около 18 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать другие жирные кислоты в количестве около 10 масс.% или менее относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле.

В некоторых воплощениях данного изобретения предлагаемое масло практически не содержит эйкозапентаеновой кислоты. В настоящем документе выражение «практически не содержит эйкозапентаеновой кислоты» может относиться к маслу, в котором содержание эйкозапентаеновой кислоты составляет менее чем около 3 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле. В некоторых воплощениях данного изобретения предлагаемое масло содержит эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) в количестве менее чем около 2 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле, менее чем около 1 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле, менее чем около 0,5 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле, менее чем около 0,2 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле или менее чем около 0,01 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле. В некоторых воплощениях настоящего изобретения предлагаемое масло не содержит эйкозапентаеновой кислоты в количествах, определяемых известными в данной области техники методами. В некоторых воплощениях настоящего изобретения предлагаемое масло не содержит эйкозапентаеновой кислоты.

В некоторых воплощениях данного изобретения предлагаемое масло может также практически не содержать арахидоновой кислоты (ARA). В некоторых воплощениях данного изобретения количество арахидоновой кислоты в предлагаемом масле составляет менее чем около 3 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле. В некоторых воплощениях данного изобретения количество арахидоновой кислоты в предлагаемом масле составляет менее чем около 2 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле, менее чем около 1 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле, менее чем около 0,5 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле, менее чем около 0,2 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле, менее чем около 0,01 масс.% относительно суммарного содержания жирных кислот в этом масле. В некоторых воплощениях настоящего изобретения предлагаемое масло не содержит детектируемых количеств арахидоновой кислоты.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 2 масс.% или менее арахидоновой кислоты. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит около 3 масс.% или менее эйкозапентаеновой кислоты. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло содержит около 18 масс.% или менее или от около 12 масс.% до около 18 масс.% DPA n-6. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло может содержать около 10 масс.% или менее других жирных кислот.

В некоторых воплощениях данного изобретения предлагаемое масло практически не содержит эйкозапентаеновой кислоты. В настоящем документе выражением» практически не содержит эйкозапентаеновой кислоты» может относиться к маслу, в котором содержание эйкозапентаеновой кислоты составляет менее чем около 3 масс.%. В некоторых воплощениях данного изобретения предлагаемое масло практически содержит эйкозапентаеновую кислоту в количестве менее чем около 2 масс.%, менее чем около 1 масс.%, менее чем около 0,5 масс.%, менее чем около 0,2 масс.%, менее чем около 0,01 масс.%. В некоторых воплощениях настоящего изобретения предлагаемое масло не содержит эйкозапентаеновой кислоты в количествах, определяемых известными в данной области техники методами. В некоторых воплощениях настоящего изобретения предлагаемое масло не содержит эйкозапентаеновой кислоты.

В некоторых воплощениях данного изобретения предлагаемое масло может также практически не содержать арахидоновой кислоты (ARA). В некоторых воплощениях данного изобретения количество арахидоновой кислоты в предлагаемом масле составляет менее чем около 3 масс.%. В некоторых воплощениях данного изобретения количество арахидоновой кислоты в предлагаемом масле составляет менее чем около 2 масс.%, менее чем около 1 масс.%, менее чем около 0,5 масс.%, менее чем около 0,2 масс.% или менее чем около 0,01 масс.%. В некоторых воплощениях настоящего изобретения предлагаемое масло не содержит детектируемых количеств арахидоновой кислоты.

Описанное в настоящем документе масло можно использовать в любых случаях применения, в которых требуются такие масла. Указанное масло можно использовать, например, в пищевых продуктах (включая прохладительные напитки и пищевые добавки), кормах для животных и/или продуктах личной гигиены. Эти продукты могут быть в любой форме, например, в виде жидкости, эмульсии, геля и/или в твердом виде. Эти продукты могут быть как готовыми к применению (потреблению), так и нуждающимися в дальнейшей обработке (например, путем разведения, растворения, нагревания и проч.). В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло является съедобным. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло является съедобным маслом, используемым в пищевых продуктах. Примеры таких пищевых продуктов включают (но не ограничиваются перечисленным здесь) питательные батончики, диетические добавки, батончики мюсли, выпечку (например, хлеб, булочки, печенье, крекеры, фруктовые пироги или кексы), макаронные изделия, приправы, салатные дрессинги, суповые смеси, снэки и подобные им продукты, переработанные фруктовые соки, соусы, подливы, сиропы, прохладительные напитки, порошки для приготовления прохладительных напитков, джемы или желе.

В других воплощениях данного изобретения описанное в настоящем документе масло является органическим. Термин «органический» в настоящем документе включает, например, стандартные случаи применения этого термина согласно установлениям Министерства сельского хозяйства США и Европейского союза относительно использования данного термина в маркировке пищевых продуктов. Стандарты Европейского союза изложены, например, в Регламенте ЕС 834/2007; стандарты Министерства сельского хозяйства США – в Регламенте государственной органической программы в 7 С.F.R., часть 205.

В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло является натуральным/природным. Термин «природный» в настоящем документе включает, например, употребление этого термина при маркировке пищевых продуктов, которые не содержат добавленных красителей, искусственных ароматных веществ или синтетических соединений.

По меньшей мере одна полиненасыщенная жирная кислота C_18-22, в которой имеются 4 двойных связи углерод-углерод, может быть получена из различных источников, включая, например, таких водных животных, как рыбы, морские млекопитающие и ракообразные (например, криль и другие эвфаузииды); животные источники, например ткани животных, включая, например, мозг, печень и глаза, и животные продукты, включая, например, яйца и молоко; микроскопические водоросли; растения и/или семена. В одном из воплощений данного изобретения предлагаемое масло получают из рыбы, микроскопических водорослей, растений и/или семян.

В одном из воплощений данного изобретения по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4 двойных связи углерод-углерод, получают из микроскопических водорослей. В другом воплощении данного изобретения эти микроскопические водоросли относятся к порядку траустохитриевых (Thraustochytriales). Порядок Thraustochytriales включает, например, род Thraustochytrium (в том числе виды Т. arudimentale, Т. aureum, Т. benthicola, Т. globosum, Т. kinnei, Т. motivum, Т. multirudimentale, Т. pachydermum, Т. proliferum, Т. roseum, Т. striatum), род Schizochytrium (в том числе виды S. aggregatum, S. limnaceum, S. mangrovei, S. minutum, S. octosporum), род Ulkenia (в том числе виды U. amoeboidea, U. kerguelensis, U. minuta, U. profunda, U. radiate, U. sailens, U. sarkariana, U. schizochytrops, U. visurgensis, U. yorkensis), род Aurantiacochytrium; род Oblongichytrium, род Sicyoidochytium, род Parientichytrium, род Botryochytrium и их комбинации. В целях данного изобретения виды, описанные как принадлежащие к роду Ulkenia, будут считаться членами рода Schizochytrium. В еще одном воплощении данного изобретения микроскопические водоросли представлены видами рода Thraustochytrium. В еще одном воплощении данного изобретения микроскопические водоросли представлены видами рода Schizochytrium. В другом воплощении данного изобретения микроскопические водоросли выбирают из видов. относящихся к родам Thraustochytrium и Schizochytrium.

В другом воплощении данного изобретения по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4 двойных связи углерод-углерод, получают из растений, выращиваемых как культура клеток для ферментации или как сельскохозяйственная культура, включая, например, зерновые (например, маис, кукурузу, ячмень, пшеницу, рис, сорго, просо, рожь и овес); бобы; соевые бобы; перцы; салат-латук; горох; различные представители рода Brassica,
например белокочанную, цветную капусту, брюссельскую капусту, брокколи, рапс (Brassica napus), редис, редьку; морковь; свеклу; баклажаны; шпинат; огурцы; тыкву; дыню, в том числе мускусную; подсолнечник; сафлор; турнепс (Brassica rapa), капусту полевую (Brassica campestris), лен; арахис; горчицу; льняное семя; нут; чечевицу; белый клевер; оливу; масличную пальму; бурачник; энотеру; льняное семя и табак.

В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло является неочищенным. В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло является рафинированным. В еще одном воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло является конечным. Термин «неочищенное масло» означает масло, выделенное из биомассы микроорганизмов без какой-либо дальнейшей обработки. Термин «рафинированное масло» означает масло, полученное в результате обработки неочищенного масла путем стандартных методов очистки, обесцвечивания и/или дезодорации (см. например, патент US 5130242). Термин «конечное масло» означает рафинированное масло, смешанное с каким-либо растительным маслом. В некоторых воплощениях данного изобретения конечное масло является рафинированным маслом, которое смешано с растительным маслом, выбираемым из триглицеридов со средней длиной цепи (МСТ), улучшенного рапсового, пальмового и подсолнечного масел. В некоторых воплощениях данного изобретения подсолнечное масло является подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты. В других воплощениях данного изобретения подсолнечное масло является органическим. В других воплощениях данного изобретения подсолнечное масло с высоким содержанием олеиновой кислоты является органическим.

Одно из воплощений данного изобретения относится к способу для повышения окислительной стабильности масла, включающий добавление эффективного количества по меньшей мере одного первого антиоксиданта к маслу, содержащему по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи углерод-углерод, в количестве по меньшей мере 30 масс.% относительно содержания жирных кислот в данном масле.

Масла микробного происхождения, описанные в настоящем документе, можно выделить из микроскопических водорослей любыми подходящими средствами, известными в данной области техники. Так, эти масла можно выделить путем экстракции, как описано, например, в международных публикациях WO 2001/053512, WO 2001/051598, WO 2001/076715 и WO 2001/076385; заявках US 2007/0004678 и US 2005/012739 и в патенте US 6399803. Способы ферментативной обработки биомассы для выделения липидов описаны в международной публикации WO 2003/09628; заявке US 2005/0170479; ЕP 0776356 и патенте US 5928696.

В некоторых воплощениях данного изобретения описанное в настоящем документе масло получают в результате следующих этапов: создание биомассы путем ферментации микроскопических водорослей, способных продуцировать масло, содержащее по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4 двойных связи углерод-углерод; сбор полученной биомассы; сушка распылением этой биомассы; экстрагирование масла из этой биомассы; очистка выделенного масла (для удаления свободных жирных кислот и фосфолипидов); обесцвечивание полученного масла (для удаления каких-либо оставшихся полярных соединений и металлов-прооксидантов и для разрушения продуктов окисления липидов); холодное фильтрование полученного масла (для удаления каких-либо оставшихся нерастворимых жиров, восков и твердых веществ); дезодорация полученного масла (при необходимости под вакуумом и, например, на колонке, с использованием противоточного дезодоратора с отгонкой водяным паром); добавление антиоксиданта в полученное масло и любые комбинации указанных этапов. В некоторых воплощениях данного изобретения после контролируемого роста культуры в течение предварительно установленного периода времени клетки собирают путем центрифугирования, затем пастеризуют и сушат распылением. В некоторых воплощениях данного изобретения высушенную биомассу насыщают азотом, расфасовывают и хранят замороженной при температуре -20ºC. В некоторых воплощениях данного изобретения предлагаемое масло экстрагируют из высушенной биомассы путем смешивания ее с н-гексаном или изогексаном (периодическая экстракция), что разрушает клетки и позволяет отделить масло от клеточных остатков. В некоторых воплощениях данного изобретения растворитель затем удаляют. В одном из воплощений данного изобретения описанное в настоящем документе масло хранят при комнатной температуре (25°C) в вакуумной упаковке Nylon/Foil/PE (нейлон/фольга/полиэтилен низкой плотности), запаянной в азоте с помощью упаковочной машины AGV Multivac. (Multivac Sepp Haggenmüller GmbH & Co. KG). В другом воплощении данного изобретения описанное в настоящем документе масло хранят при комнатной температуре (25°C) в алюминиевых контейнерах с эпоксифенольным покрытием.

В зависимости от конечного применения описанного в настоящем документе масла оно может содержать и другие ингредиенты, которые могут быть полезны для конечного продукта и/или для процесса производства конечного продукта. Такие ингредиенты могут включать, например, красители, отдушки, наполнители, ароматизаторы, эмульгирующие агенты (отличные от лецитина), стабилизирующие агенты и другие липофильные вещества.

Примеры

Материалы. Экстракт розмарина, использовавшийся в примерах 3-15, может быть предоставлен, например, компанией Ecom Foods Industries Corporation (пров. Онтарио, Канада). Подсолнечное масло с высоким содержанием олеиновой кислоты, использовавшееся в примерах 3-15, может быть предоставлено, например, компанией Humko oils (Мемфис, шт. Теннеси, США) под торговым названием TriSun®. TAP1010 Sun предоставляется компанией Vitablend (Вольвега, Нидерланды). Соевый лецитин, использовавшийся в приведенных ниже примерах, предоставляется, например, компанией Archer Daniels Midland Co. (Декатур, шт. Иллинойс, США) под торговым названием Yelkin® Gold. Аскорбилпальмитат, использовавшийся в приведенных ниже примерах, предоставляется, например, компанией DSM, Nutritional Products (Базель, Швейцария).

Пример 1

Получение высококачественного неочищенного масла, содержащего по меньшей мере 30% по меньшей мере одной полиненасыщенной жирной кислоты с по меньшей мере 4 двойными связями углерод-углерод.

Клетки Shizochytrium sp. (депонирован как ATCC PTA-10208), здесь и далее обозначаемые “PTA-10208”, выращивали в отдельных циклах ферментации, как описано ниже. Типичные среды и условия культивирования представлены в таблице 1.

При углеродном (глюкоза) и азотном питании культуры PTA-10208, содержащие 1000 ч/млн ионов Cl^- при температуре 22,5°C и pH 7,0 в присутствии 20% растворенного кислорода во время азотного питания и затем 10% растворенного кислорода через 200 часов культивирования в 10-литровом ферментере давали 95 г/л сухого веса клеток. Выход липидов составлял 53,7 г/л; выход омега-3 жирных кислот составлял 37 г/л; выход эйкозапентаеновой кислоты составлял 14,3 г/л; выход докозагексаеновой кислоты составлял 21 г/л. Содержание жирных кислот составляло 57 масс.%; содержание эйкозапентаеновой кислоты составляло 27,7% метиловых эфиров жирных кислот (FAME); содержание докозагексаеновой кислоты составляло 39,1% FAME. В этих условиях производительность составляла 6,4 г липидов/л/сут, 4,4 г омега-3 жирных кислот/л/сут, 1,7 г эйкозапентаеновой кислоты/л/сут и 2,5 г докозагексаеновой кислоты/л/сут.

При углеродном (глюкоза) и азотном питании культуры PTA-10208, содержащие 1000 ч/млн ионов Cl^- при температуре 22,5°C и pH 7,5 в присутствии 20% растворенного кислорода во время азотного питания и затем 10% растворенного кислорода через 139 часов культивирования в 10-литровом ферментере давали 56 г/л сухого веса клеток. Выход липидов составлял 53 г/л; выход омега-3 жирных кислот составлял 34 г/л; выход эйкозапентаеновой кислоты составлял 11,5 г/л; выход докозагексаеновой кислоты составлял 22 г/л. Содержание жирных кислот составляло 58 масс.%; содержание эйкозапентаеновой кислоты составляло 21,7% FAME; содержание докозагексаеновой кислоты составляло 41,7% FAME. В этих условиях производительность составляла 9,2 г липидов/л/сут, 5,9 г омега-3 жирных кислот/л/сут, 2 г эйкозапентаеновой кислоты/л/сут и 3,8 г докозагексаеновой кислоты/л/сут.

При углеродном (глюкоза) и азотном питании культуры PTA-10208, содержащие 1000 ч/млн ионов Cl^- при температуре 22,5°C и pH 7,0 в присутствии 20% растворенного кислорода во время азотного питания и затем 10% растворенного кислорода через 167 часов культивирования в 2000-литровом ферментере давали 93,8 г/л сухого веса клеток. Выход липидов составлял 47,2 г/л; выход омега-3 жирных кислот составлял 33,1 г/л; выход эйкозапентаеновой кислоты составлял 10,5 г/л; выход докозагексаеновой кислоты составлял 20,4 г/л. Содержание жирных кислот составляло 50,6 масс.%; содержание эйкозапентаеновой кислоты составляло 23% FAME; содержание докозагексаеновой кислоты составляло 42,6% FAME. В этих условиях производительность составляла 6,8 г липидов/л/сут, 4,7 г омега-3 жирных кислот/л/сут, 1,5 г эйкозапентаеновой кислоты/л/сут и 2,9 г докозагексаеновой кислоты/л/сут.

При углеродном (глюкоза) и азотном питании культуры PTA-10208, содержащие 1000 ч/млн ионов Cl^- при температуре 22,5°C и pH 7,0 в присутствии 20% растворенного кислорода во время азотного питания и затем 10% растворенного кислорода через 168 часов культивирования в 2000-литровом ферментере давали 105 г/л сухого веса клеток. Выход липидов составлял 46,4 г/л; выход омега-3 жирных кислот составлял 33 г/л; выход эйкозапентаеновой кислоты составлял 10,7 г/л; выход докозагексаеновой кислоты составлял 20,3 г/л. Содержание жирных кислот составляло 43,9 масс.%; содержание эйкозапентаеновой кислоты составляло 24% FAME; содержание докозагексаеновой кислоты составляло 43,7% FAME. В этих условиях производительность составляла 6,6 г липидов/л/сут, 4,7 г омега-3 жирных кислот/л/сут, 1,5 г эйкозапентаеновой кислоты/л/сут и 2,9 г докозагексаеновой кислоты/л/сут.

При углеродном (глюкоза) и азотном питании культуры PTA-10208, содержащие 1000 ч/млн ионов Cl^- при температуре 22,5°C и pH 7,0 в присутствии 20% растворенного кислорода во время азотного питания и затем 10% растворенного кислорода через 168 часов культивирования в 2000-литровом ферментере давали 64,8 г/л сухого веса клеток. Выход липидов составлял 38,7 г/л; выход омега-3 жирных кислот составлял 29,9 г/л; выход эйкозапентаеновой кислоты составлял 8,5 г/л; выход докозагексаеновой кислоты составлял 16,7 г/л. Содержание жирных кислот составляло 59,6 масс.%; содержание эйкозапентаеновой кислоты составляло 23% FAME; содержание докозагексаеновой кислоты составляло 42,3% FAME. В этих условиях производительность составляла 5,53 г липидов/л/сут, 3,8 г омега-3 жирных кислот/л/сут, 1,2 г эйкозапентаеновой кислоты/л/сут и 2,3 г докозагексаеновой кислоты/л/сут.

Таблица 1. Культуральные среды и условия культивирования PTA-10208

Ингредиент		Концентрация (г/л)	Диапазон
Na₂SO₄		8,8	0-25, 2-20 или 3-10
NaCl		0,625	0-25, 0,1-10 или 0,5-5
KCl		1,0	0-5, 0,25-3 или 0,5-2
MgSO₄·7H₂O		5,0	0-10, 2-8 или 3-6
(NH₄)₂SO₄		0,42	0-10, 0,25-5 или 0,05-3
CaCl₂		0,29	0,1-5, 0,15-3 или 0,2-1
T 154 (дрожжевой экстракт)		1,0	0-20, 0,1-10 или 0,5-5
KH₂PO₄		1,765	0,1-10, 0,5-5 или 1-3
После автоклавирования (соли металлов)
Ингредиент		Концентрация (мг/л)	Диапазон
Лимонная кислота		46,82	0,1-5000, 10-3000 или 40-2500
FeSO₄·7H₂O		10,30	0,1-100, 1-50 или 5-25
MnCl₂·4H₂O		3,10	0,1-100, 1-50 или 2-25
ZnSO₄·7H₂O		9,3	0,01-100, 1-50 или 2-25
CoCl₂·6H₂O		0,04	0-1, 0,001-0,1 или 0,01-0,1
Na₂MoO₄·2H₂O		0,04	0,001-1, 0,005-0,5 или 0,01-0,1
CuSO₄·5H₂O		2,07	0,1-100, 0,5-50 или 1-25
NiSO₄·6H₂O		2,07	0,1-100, 0,5-50 или 1-25
После автоклавирования (витамины)
Ингредиент		Концентрация (мг/л)	Диапазон
Тиамин		9,75	0,1-100, 1-50 или 5-25
Ca½-пантотенат		3,33	0,1-100, 0,1-50 или 1-10
Биотин		3,58	0,1-100, 0,1-50 или 1-10
После автоклавирования (углеродное питание)
Ингредиент		Концентрация (г/л)	Диапазон
Глюкоза		30,0	5-150, 10-100 или 20-50
Азотное питание
Ингредиент		Концентрация (мл/л)	Диапазон
NH₄OH		23,6	0-150, 10-100 или 15-50
Типичные условия культивирования включают следующие пункты (по отдельности или в сочетании):
Условие	Диапазон
pH	около 6,5 – около 8,5, около 6,5 – около 8,0, или около 7,0 – около 8,0
Температура	около 17 – около 30°C, около 20 – около 28°C, или около 22 - около 24°C
Растворенный кислород	около 2 – около 100% насыщения, около 5 – около 50% насыщения, или около 7 – около 20% насыщения
Глюкоза (поддерживается на указанном уровне)	около 5 – около 50 г/л, около 10 – около 40 г/л, или около 20– около 35 г/л

Пример 2

Жирнокислотный профиль PTA-10208.

Определяли суммарное содержание неочищенного масла путем экстракции растворителем, типы присутствующих липидов путем высокоэффективной жидкостной хроматографии с испарительным детектором светорассеяния (HPLC/ELSD), триацилглицерин (TAG) путем высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (HPLC/MS) и жирнокислотный профиль путем газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектором (GC-FID) в двух образцах биомассы, образовавшейся, как описано в примере 1 (PTA-10208 Образец #1 and PTA-10208 Образец #2).

Содержание неочищенных липидов в каждом образце лиофилизованной биомассы определяли, применяя измельчение с растворителем (гексаном) и сравнивали с суммарным количеством (мг/г) метиловых эфиров жирных кислот (FAME), образовавшихся в результате прямой переэтерификации, и образовавшиеся метиловые эфиры жирных кислот количественно определяли путем GC/FID. Жирные кислоты в экстрагированных неочищенных липидах также количественно определяли, осуществляя переэтерификацию и анализ полученных метиловых эфиров жирных кислот путем GC/FID. Содержание масс.% всех нейтральных липидов (NL) и свободных жирных кислот (FFA) определяли в экстрагированных неочищенных липидах путем нормально-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (с ELSD) и масс-спектрометрии с химической ионизацией при атмосферном давлении (APCI-MS). Этот метод позволяет разделить и количественно определить стериновые эфиры (SE), триацилглицерин (TAG), свободные жирные кислоты (FFA), 1,3-диацилглицерины (1,3-DAG), стерины, 1,2- диацилглицерины (1,2-DAG) и моноацилглицерины (MAG). Результаты представлены в таблицах 2 и 3.

Триацилглицерин и фосфолипиды (PL) выделяли из экстрагированных неочищенных липидов (PTA-10208 Образец #1 и PTA-10208 Образец #2). Триацилглицерин выделяли путем флэш-хроматографии низкого давлении, а фосфолипиды выделяли путем твердофазной экстракции (SPE). Каждую выделенную фракцию идентифицировали путем тонкослойной хроматографии (TLC). Жирнокислотные профили триацилглицерина и выделенных фракций фосфолипидов определяли после прямой переэтерификации путем GC-FID метиловых эфиров жирных кислот. Результаты представлены в таблице 4.

Отдельные типы липидов выделяли из образца неочищенного масла, экстрагированного из PTA-10208 (PTA-10208 Образец #3) путем нормально-фазовой HPLC c ELSD и идентифицировали путем APCI-MS.

Описание экспериментов

Экстракция неочищенного масла

Неочищенное масло экстрагировали из образцов лиофилизованной биомассы путем измельчения в растворителе. Например, отвешивают приблизительно 3 грамма биомассы в «шведскую» колбу (типа «Можонье»), кладут туда три металлических шарика (от подшипника) и добавляют 30 мл гексана; колбу закрывают неопреновой пробкой и помешают на шейкер на 2 часа. Полученную смесь фильтруют с помощью воронки Бюхнера и фильтровальной бумаги «ватман». Профильтрованную жидкость собирали, удаляли растворитель в вакууме и определяли гравиметрически количество оставшихся неочищенных липидов.

Анализ жирных кислот

В образцах биомассы, экстрагированных неочищенных липидах и выделенных типах липидов определяли жирнокислотный состав посредством образования метиловых эфиров жирных кислот. Лиофилизованную биомассу и выделенные типы липидов отвешивали непосредственно в пробирки с завинчивающейся крышкой, а образцы неочищенного масла растворяли в гексане до концентрации приблизительно 2 мг/мл. В каждую пробирку добавляли толуол, содержащий внутренний стандарт, и раствор соляной кислоты (1,5 н) в метаноле. Пробирки встряхивали, закрывали и нагревали до 100° C в течение 2 часов. Затем давали пробиркам остыть и добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия. Пробирки опять встряхивали и центрифугировали, чтобы фазы разделились. Часть органической фазы анализировали методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектором. Для количественного определения метиловых эфиров жирных кислот использовали трехточечную калибровочную кривую, построенную с помощью стандартных смесей метиловых эфиров Nu-Check-Prep GLC (NuCheck, Элизайан, шт. Миннесота, США). Содержание жирных кислот выражали в мг/г и в масс.%. Содержание жиров в образцах оценивали исходя из одинакового ответа на внутренний стандарт при анализе GC-FID.

Метод HPLC/ELSD/MS

Прибор Agilent 1100 HPLC, Alltech 3300 ELSD, Agilent 1100 MSD

Колонка Phenomenex Luna Silica, 250 x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм
w/ предколонка

Подвижная фаза A – 99,5% гексан (Omnisolv); 0,4% изопропиловый спирт (Omnisolv);

0,1% уксусная кислота

B – 99,9% этиловый спирт (Omnisolv, 95:5 этиловый спирт : изопропиловый спирт); 0,1% уксусная кислота

Градиент

	0 мин	5 мин	15 мин	20 мин	25 мин	26 мин	35 мин
% A	100	100	85	0	0	100	100
% B	0	0	10	100	100	0	0

Температура колонки 30°C

Скорость потока 1,5 мл/мин

Вносимый объем 5 мкл

Детектор ELSD Температура 35°C, газовый поток 1,2 л/мин

MSD Диапазон масс 200 – 1200, фрагментор 225 V; температура высушивающего газа 350°C; температура испарителя 325°C; напряжение на капилляре 3500 В; ток коронного разряда 10 мкA

Твердофазная экстракция

Фракции фосфолипидов выделяли из неочищенных липидов путем твердофазной экстракции (SPE) с использованием аминопропиловых картриджей (Biotage, Упсала, Швеция), размещаемых на вакуумном устройстве Vac Elut (Varian Inc, Пало-Альто, США). Картридж кондиционировали 15 мл гексана; ~60 мг каждого образца растворяли в 1 мл CHCl₃ и наносили на картридж. Колонку промывали смесью CHCl₃:изопропиловый спирт (2:1), чтобы смыть все нейтральные липиды, которые отбрасывали. Затем элюировали жирные кислоты 15 мл 2%-ным раствором уксусной кислоты (HOAc) в эфире и отбрасывали. Фракцию фосфолипидов элюировали 15 мл смеси метанол:хлороформ (6:1), собирали, высушивали в азоте и взвешивали.

Флэш-хроматография

Метод флэш-хроматографии применяли для разделения типов липидов, присутствующих в неочищенном масле. На колонку наносили приблизительно 200 мг неочищенного масла, растворенного в гексане. Использовали силикагель 60 (Silica Gel 60 производства EMD Chemical, Гибстаун, шт. Нью-Джерси, США) и подвижную фазу из петролейного эфира и этилацетата при скорости 5 мл/мин (таблицы 6-7) или 3 мл/мин (таблицы 8-13). Для избирательного элюирования каждого типа липидов использовали ступенчатый градиент. Градиент подвижной фазы начинался с 100% петролейного эфира и заканчивался 50% этилацетата. Фракции собирали в 10-миллилитровые пробирки с помощью коллектора FC 204 (large-bed) (Gilson, Inc., Миддлтон, шт.Висконсин, США). Содержимое каждой пробирки анализировали путем тонкослойной хроматографии (TLC) и отбирали пробирки, содержащие по одному типу липидов (исходя из единичных пятен на хроматографической пластине с ожидаемым коэффициентом подвижности Rf); их содержимое концентрировали (высушивали) и взвешивали. Затем определяли гравиметрически суммарное содержание фракций.

Тонкослойная хроматография (ТLC)

Для тонкослойной хроматографии использовали силикагелевые пластины. Для элюирования использовали систему растворителей, состоящую из петролейного эфира, этилового эфира и уксусной (80:20:1); проявляли парами йода. Значения коэффициента подвижности (Rf) для каждого пятна сравнивали с литературными данными для каждого типа липидов.

Анализ фракций триацилглицерина и форсфолипидов

Исследовали жирнокислотный состав выделенных фракций триацилглицерина и фосфолипидов посредством метиловых эфиров жирных кислот (FAME). Фракции триацилглицерина растворяли в гексане до концентрации приблизительно 1-2 мг/мл. Аликвоты (1 мл) этих растворов высушивали в азоте. В каждую пробирку прибавляли толуол, содержащий внутренний стандарт, и раствор HCl в метиловом спирте (1 н). Пробирки встряхивали закрывали крышками и нагревали до 100°C в течение 2 часов. В пробирки, содержащие фракцию фосфолипидов, непосредственно прибавляли внутренний стандарт и HCl в метиловом спирте; так же нагревали. Затем пробиркам давали остыть и добавляли насыщенный водный раствор NaCl. пробирки опять встряхивали и центрифугировали, чтобы фазы разделились. Часть органической фазы анализировали методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектором. Для количественного определения метиловых эфиров жирных кислот использовали трехточечную калибровочную кривую, построенную с помощью стандартных смесей метиловых эфиров Nu-Check-Prep GLC 502В (NuCheck, Элизайан, шт. Миннесота, США). Содержание жирных кислот, присутствующих в экстракте, выражали в мг/г и в масс.% FAME.

PTA-10208 Образец #1

Для PTA-10208 Образец #1 определяли жирнокислотный профиль биомассы и экстрагированных неочищенных липидов методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектором (GC-FID). Жирные кислоты, присутствующие в биомассе, переэтерифицировали in situ: отвешивали 28,6 мг биомассы прямо в пробирку для FAME; в случае же экстрагированных неочищенных липидов отвешивали 55,0 мг неочищенных липидов в 50-миллилитровую волюметрическую колбу и переносили 1 мл в отдельную пробирку для FAME. По результатам определения методом GC-FID содержание неочищенных липидов в биомассе составило 53,2% (как сумма метиловых эфиров жирных кислот); из сухой биомассы было экстрагировано 52,0 масс.% липидов, что составило 97,8% суммарного количества липидов. По результатам определения методом GC-FID в неочищенных липидах жирные кислоты (как сумма метиловых эфиров) составили 91,9%. Основными жирными кислотами в неочищенных липидах оказались C16:0 (182,5 мг/г), C20:5 n-3 (186,8 мг/г) и C22:6 n-3 (423, 1 мг/г).

Для определения профиля типов липидов в экстрагированных неочищенных липидах отвешивали 55,0 мг неочищенных липидов в 50-миллилитровую волюметрическую колбу, переносили аликвоту в систему для высокоэффективной жидкостной хроматографии и проводили анализ методом HPLC/ELSD/MS. По полученным данным, неочищенные липиды содержали 0,2% стериновых эфиров (SE), 95,1% триацилглицерина (TAG), 0,4% стеринов и 0,5% 1,2-диацилглицерина (DAG). Во фракции TAG 5% соответствовал пик, который элюировался сразу за пиком TAG, но не давал распознаваемого масс-спектра.

По данным флэш-хроматографии, триацилглицерин, выделенный из этого образца, составлял приблизительно 92,4% неочищенного масла. Фосфолипиды не определялись по массе или путем тонкослойной хроматографии после твердофазной экстракции. Основными (содержание >50 мг/г) жирными кислотами в триацилглицерине были C16:0 (189 мг/г), C20:5 n-3 (197 мг/г) и C22:6 n-3 (441 мг/г).

PTA-10208 Образец #2

Для PTA-10208 Образец #2 определяли жирнокислотный профиль биомассы и экстрагированных неочищенных липидов методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектором (GC-FID). Жирные кислоты, присутствующие в биомассе, переэтерифицировали in situ: отвешивали 32,0 мг биомассы прямо в пробирку для FAME; в случае же экстрагированных неочищенных липидов отвешивали 60,1 мг неочищенных липидов в 50-миллилитровую волюметрическую колбу и переносили 1 мл в отдельную пробирку для FAME. По результатам определения методом GC-FID, содержание неочищенных липидов в биомассе составило 52,4% (как сумма метиловых эфиров жирных кислот); из сухой биомассы было экстрагировано 48,0 масс.% липидов, что составило 91,7% суммарного количества липидов. По результатам определения методом GC-FID, в неочищенных липидах жирные кислоты (как сумма метиловых эфиров) составили 95,3%. Основными жирными кислотами в неочищенных липидах оказались C16:0 (217,5 мг/г), C20:5 n-3 (169,3 мг/г) и C22:6 n-3 (444, 1 мг/г).

Для определения профиля типов липидов в экстрагированных неочищенных липидах отвешивали 60,1 мг неочищенных липидов в 50-миллилитровую волюметрическую колбу, переносили аликвоту в систему для высокоэффективной жидкостной хроматографии и проводили анализ методом HPLC/ELSD/MS. По полученным данным, неочищенные липиды содержали 0,2% стериновых эфиров (SE), 95,7% триацилглицерина (TAG), 0,3% стеринов и 0,7% 1,2-диацилглицерина (DAG). Во фракции TAG 5,1% соответствовал пик, который элюировался сразу за пиком TAG, но не давал распознаваемого масс-спектра.

Триацилглицерин, выделенный из этого образца, составлял приблизительно 93,9% неочищенного масла. Фосфолипиды не определялись по массе или путем тонкослойной хроматографии после твердофазной экстракции. Основными (содержание >50 мг/г) жирными кислотами в триацилглицерине были C16:0 (218 мг/г), C20:5 n-3 (167 мг/г) и C22:6 n-3 (430 мг/г).

PTA-10208 Образец #3

Образец неочищенного масла из микроорганизмов с регистрационным номером в банке ATCC PTA-10208 (образец PTA-10208 #3) исследовали методом HPLC/ELSD/MS. Суммарное содержание липидов составило 98,38%, причем на фракцию стериновых эфиров (SE) приходилось 0,32%, на фракцию триацилглицерина (TAG) - 96,13%, 1,3-диацилглицерина (DAG) - 0,22%, 1,2-DAG - 0,78% и на фракцию стеринов 0,93%.

Таблица 2. Жирнокислотный профиль биомасс и экстрагированных липидов PTA-10208 (мг/г)

	Образец #1 Биомасса	Образец #1 Неочищ. липиды	Образец #2 Биомасса	Образец #2 Неочищ. липиды	Образец #1 Биомасса	Образец #1 Неочищ. липиды	Образец #2 Биомасса	Образец #2 Неочищ. липиды
Жирные кислоты	FAME (мг/г)	FAME (мг/г)	FAME (мг/г)	FAME (мг/г)	Жирные кислоты	FAME (мг/г)	FAME (мг/г)	FAME (мг/г)
C12:0	1,47	2,43	1,80	3,14	C22:0	0,10	0,00	0,08
C14:0	11,62	20,12	16,72	31,03	C20:4 n-7	0,81	0,45	0,67
C14:1	0,00	0,00	0,00	0,00	C20:4 n-6	7,22	12,23	6,84
C15:0	2,43	3,75	3,60	6,22	C22:1 n-9	0,00	0,00	0,00
C16:0	105,04	182,47	117,72	217,49	C20:4 n-5	0,63	0,52	0,00
C16:1	0,00	0,00	0,06	0,01	C20:4 n-3	3,45	5,45	3,33
C18:0	5,37	8,96	4,77	8,37	C20:3 n-3	0,09	0,00	0,11
C18:1 n-9	0,00	3,26	0,00	3,09	C20:5 n-3	107,31	186,83	92,99
C18:1 n-7	0,00	0,00	0,00	0,00	C22:4 n-9	0,00	0,00	0,00
C18:2 n-6	0,00	0,00	0,00	0,00	C24:0	0,60	0,00	0,52
C20:0	1,48	1,79	1,40	1,85	C24:1 n-9	1,55	3,26	0,85
C18:3 n-3	0,00	0,00	0,00	0,00	C22:5 n-6	9,66	15,84	10,27
C20:1 n-9	0,00	0,00	0,00	0,00	C22:5 n-3	20,44	35,13	9,92
C18:4 n-3	0,91	1,61	1,10	2,00	C22:6 n-3	246,98	423,10	245,96
C20:2 n-6	0,00	0,00	0,00	0,00	Сумма FAME (мг/г)	527,15	907,18	518,71
C20:3 n-6	0,00	0,00	0,00	0,00

Таблица 3. Жирнокислотный профиль биомасс и экстрагированных липидов

PTA-10208 (%)

	Образец #1 Биомасса	Образец #1 Неочищ. .липиды	Образец #2 Био-масса	Образец #2 Неочищ. Липиды		Образец #1 Био-масса	Образец #1 Неочищ. липиды	Образец #2 Био-масса	Образец #2 Неочищ. липиды
Жирные кислоты	% FAME	% FAME	% FAME	% FAME	Жирные кислоты	% FAME	% FAME	% FAME	% FAME
C12:0	0,28	0,27	0,35	0,33	C22:0	0,02	0,00	0,01	0,00
C14:0	2,20	2,22	3,22	3,29	C20:4 n-7	0,15	0,05	0,13	0,04
C14:1	0,00	0,00	0,00	0,00	C20:4 n-6 ARA	1,37	1,35	1,32	1,29
C15:0	0,46	0,41	0,69	0,66	C22:1 n-9	0,00	0,00	0,00	0,00
C16:0	19,93	20,11	22,70	23,07	C20:4 n-5	0,12	0,06	0,00	0,05
C16:1	0,00	0,00	0,01	0,00	C20:4 n-3	0,65	0,60	0,64	0,59
C18:0	1,02	0,99	0,92	0,89	C20:3 n-3	0,02	0,00	0,02	0,00
C18:1 n-9	0,00	0,36	0,00	0,33	C20:5 n-3 EPA	20,36	20,59	17,93	17,96
C18:1 n-7	0,00	0,00	0,00	0,00	C22:4 n-9	0,00	0,00	0,00	0,00
C18:2 n-6	0,00	0,00	0,00	0,00	C24:0	0,11	0,00	0,10	0,00
C20:0	0,28	0,20	0,27	0,20	C24:1 n-9	0,29	0,36	0,16	0,22
C18:3 n-3	0,00	0,00	0,00	0,00	C22:5 n-6	1,83	1,75	1,98	1,91
C20:1 n-9	0,00	0,00	0,00	0,00	C22:5 n-3	3,88	3,87	1,91	1,86
C18:4 n-3	0,17	0,18	0,21	0,21	C22:6 n-3 DHA	46,85	46,64	47,42	47,10
C20:2 n-6	0,00	0,00	0,00	0,00	Сумма FAME %	100	100	100	100
C20:3 n-6	0,00	0,00	0,00	0,00

Таблица 4. Жирнокислотный профиль выделенного триацилглицерина (TAG)

PTA-10208

	Образец #1	Образец #1	Образец #2	Образец #2		Образец #1	Образец #1	Образец #2	Образец #2
Жирные кислоты	FAME (мг/г)	% FAME	FAME (мг/г)	% FAME	Жирные кислоты	FAME (мг/г)	% FAME	FAME (мг/г)	% FAME
C12:0	2,57	0,27	3,35	0,36	C22:0	0,00	0,00	0,00	0,00
C14:0	21,07	2,23	31,37	3,41	Не-известно	0,00	0,00	0,00	0,00
C14:1	0,00	0,00	0,00	0,00	C20:4 n-7	0,39	0,04	0,05	0,01
C15:0	3,89	0,41	6,17	0,67	C20:3 n-3	0,00	0,00	0,00	0,00
C16:0	189,28	20,07	218,78	23,75	C20:4 n-6 ARA	12,79	1,36	11,82	1,28
C16:1	0,00	0,00	0,00	0,00	C22:1 n-9	0,00	0,00	0,00	0,00
C18:0	9,21	0,98	8,07	0,88	C20:4 n-5	0,39	0,04	0,07	0,01
C18:1 n-9	3,35	0,36	3,64	0,40	C20:4 n-3	5,52	0,59	5,09	0,55
C18:1 n-7	0,00	0,00	0,00	0,00	C20:5 n-3 EPA	197,14	20,90	166,68	18,10
C18:2 n-6	0,00	0,00	0,00	0,00	C24:0	0,00	0,00	0,00	0,00
C20:0	1,86	0,20	1,55	0,17	C22:4 n-9	0,00	0,00	0,00	0,00
C18:3 n-3	0,00	0,00	0,00	0,00	C24:1 n-9	1,08	0,11	<0,1	<0,1
C20:1 n-9	0,00	0,00	0,00	0,00	C22:5 n-6	15,88	1,68	16,57	1,80
C18:4 n-3	1,64	0,17	2,00	0,22	C22:5 n-3	36,05	3,82	16,00	1,74
C20:2 n-6	0,00	0,00	0,00	0,00	C22:6 n-3 DHA	440,99	46,76	429,83	46,67
C20:3 n-6	0,00	0,00	0,00	0,00	Сумма FAME (мг/г)	943,11	-	921,03	-

Пример 3

Неочищенное масло может быть получено так, как описано в примерах 1 и 2. Далее неочищенное масло можно подвергнуть очистке, обесцвечиванию и дезодорации для получения рафинированного масла. Затем рафинированное масло можно смешать с подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты (HOSO) для получения конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой и эйкозапентаеновой кислот (DHA + EPA) составляет по меньшей мере около 400 мг на 1 г масла. Типичные свойства конечного масла по данному примеру представлены в таблице 5.

Таблица 5. Свойства конечного масла, содержащего по меньшей мере около 400 мг/г докозагексаеновой и эйкозапентаеновой кислот (DHA + EPA)

Свойство	Норматив	Результат
Содержание DHA (мг/г)	Не менее 240	255
Содержание EPA (мг/г)	Не менее 120	155
Содержание DHA + EPA (мг/г)	Не менее 400	411
Перекисное число (мэкв/кг)	Не более 5,0	0,4
Анизидиновое число	Не более 20	<1
Свободные жирные кислоты, %	Не более 0,25	0,1
Влага и летучие вещества, %	Не более 0,02	<0,01
Неомыляемое вещество, %	Не более 4,5	0,9
Транс-жирные кислоты, %	Не более 1	<1
Содержание некоторых элементов
Мышьяк, ч/млн	Не более 0,1	<0,1
Кадмий, ч/млн	Не более 0,1	<0,1
Медь, ч/млн	Не более 0,05	<0,02
Железо, ч/млн	Не более 0,2	0,0
Свинец, ч/млн	Не более 0,1	<0,1
Ртуть, ч/млн	Не более 0,04	<0,01

Другие ингредиенты, содержащиеся в этом масле, включают: лецитин подсолнечного масла (1200 ч/млн); экстракт розмарина (2000 ч/млн); смешанный токоферол (2000 ч/млн) и аскорбилпальмитат (300 ч/млн). Содержание смешанного токоферола (2000 ч/млн) складывается из 1700 ч/млн добавленного токоферола (включая 1100 ч/млн, добавляемых в ходе наращивания биомассы), в качестве которого может служить продукт фирмы Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и смешанного токоферола, содержавшегося в 3000 ч/млн антиоксидантного препарата TAP 1010 Sun, который добавляется к маслу. TAP1010 Sun дает 300 ч/млн аскорбилпальмитата, 300 ч/млн смешанного токоферола и 1200 ч/млн подсолнечного лецитина.

Пример 4

Конечное масло, содержащее подсолнечный лецитин, экстракт розмарина, смешанный токоферол и аскорбилпальмитат.

Неочищенное масло может быть получено так, как описано в примерах 1 и 2. Далее неочищенное масло можно подвергнуть очистке, обесцвечиванию и дезодорации для получения рафинированного масла. Затем рафинированное масло можно смешать с подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты (HOSO) для получения конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой и эйкозапентаеновой кислот (DHA + EPA) составляет по меньшей мере около 500 мг на 1 г масла. Типичные свойства конечного масла по данному примеру представлены в таблице 6.

Другие ингредиенты, содержащиеся в этом конечном масле, включают: лецитин подсолнечного масла (1600 ч/млн); экстракт розмарина (2000 ч/млн); смешанный токоферол (2400 ч/млн) и аскорбилпальмитат (400 ч/млн). Содержание смешанного токоферола (2400 ч/млн) складывается из 2000 ч/млн добавленного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемых в ходе наращивания биомассы), в качестве которого может служить продукт фирмы Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и смешанного токоферола, содержавшегося в 4000 ч/млн антиоксидантного препарата TAP 1010 Sun, который добавляется к маслу. TAP1010 Sun дает 400 ч/млн аскорбилпальмитата, 400 ч/млн смешанного токоферола и 1600 ч/млн подсолнечного лецитина.

Таблица 6. Свойства конечного масла, содержащего по меньшей мере около 500 мг/г докозагексаеновой и эйкозапентаеновой кислот (DHA + EPA)

Свойство	Норматив
Содержание DHA (мг/г)	Не менее 320
Содержание EPA (мг/г)	Не менее 130
Содержание DHA + EPA (мг/г)	Не менее 500
Перекисное число (мэкв/кг)	Не более 5,0
Анизидиновое число	Не более 20
Свободные жирные кислоты, %	Не более 0,25
Влага и летучие вещества, %	Не более 0,02
Неомыляемое вещество, %	Не более 4,5
Транс-жирные кислоты, %	Не более 1
Содержание некоторых элементов
Мышьяк, ч/млн	Не более 0,1
Кадмий, ч/млн	Не более 0,1
Медь, ч/млн	Не более 0,05
Железо, ч/млн	Не более 0,2
Свинец, ч/млн	Не более 0,1
Ртуть, ч/млн	Не более 0,04

Пример 5

Конечное масло, содержащее экстракт розмарина, смешанный токоферол и аскорбилпальмитат

Другие ингредиенты, содержащиеся в этом конечном масле, включают: экстракт розмарина (3000 ч/млн); смешанный токоферол (1700 ч/млн, включая 900 ч/млн, добавляемых в ходе наращивания биомассы), в качестве которого может служить продукт фирмы Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и аскорбилпальмитат (250 ч/млн).

Пример 6

Сравнивали содержание отдельных жирных кислот, интенсивность рыбного запаха и рыбного вкуса конечных масел, полученных согласно примерам 4 и 5. Результаты этого сравнения представлены в таблице 7.

Содержание жирных кислот определяли согласно протоколу метода AOCS Ce 1b-89 (модифицированному). Характеризующие рыбные запах и вкус показатели, получаемые путем сенсорного анализа, определяли согласно методу, описанному в работе Sensory Evaluation Techniques, Meilgaard et al., CRC Press; 4 edition (December 13, 2006). Группа из 8-18 людей, имеющих опыт такого рода испытаний, пробовали на вкус и вдыхали запах конечных масел, полученных согласно примерам 4 и 5. Каждый испытуемый присваивал образцу некоторое значение. Из всех этих значений выводили среднее арифметическое и результат округляли до ближайшего (большего или меньшего) числа. Показатели для рыбного запаха ≥ 1,5 и для рыбного вкуса ≥ 2,5 считаются ощутимыми для большинства людей.

Конечные масла, полученные согласно примерам 4 и 5, расфасовывали в 100-граммовые алюминиевые контейнеры с эпоксифенольным покрытием (Elemental Container Inc., MC 12532) и 25-миллиметровым уплотнителем из природных полимеров для крышки (Elemental Container Inc., 024PLUG); хранили при температуре 25°C.

Таблица 7

	Время (месяцы)	Пример 4a	Пример 4b	Пример 4c	Пример 4d	Среднее по примерам 4a-d	Пример 5
Содержание DHA (мг/г)	0	359	354	382	348	361	360
Содержание DHA (мг/г)	3	372	365	394	346	369	362
Содержание EPA (мг/г)	0	199	213	179	158	187	178
Содержание EPA (мг/г)	3	202	218	184	160	191	162
Рыбный/ морской запах	0	1	0	0	1	1	0
	1	2	1	1	1	1	0
	2	1	1	1	2	1	1
	3	1	1	1	3	2	1
	4	2	1	1	2	2	1
	5	2	1	2	2	2	2
Рыбный/ морской привкус	0	1	0	0	1	1	0
	1	2	1	1	1	1	0
	2	2	1	2	2	2	1
	3	1	2	2	3	2	1
	4	2	2	1	3	2	2
	5	3	2	2	3	3	3

Пример 7

Неочищенное масло можно получить из клеток Schizochytrium sp., как описано, например, в публикациях WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 и WO 2011/153246. Далее неочищенное масло можно подвергнуть очистке, обесцвечиванию и дезодорации для получения рафинированного масла. Затем рафинированное масло можно смешать с подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты (HOSO) для получения конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 350 мг на 1 г масла. Типичные свойства конечного масла по данному примеру представлены в таблице 8.

Таблица 8. Свойства конечного масла, содержащего по меньшей мере около 350 мг/г докозагексаеновой кислоты (DHA)

Жирные кислоты	Концентрация (масс.%)
14:0	6%-12%
16:0	18%-28%
18:0	Не более 2%
18:1	Не более 8%
18:2	Не более 2%
20:4 ARA	Не более 2%
20:5 EPA	Не более 3%
22:5n-6 DPA	12%-18%
22:6 DHA	Не менее 35%
Другие	Не более 10%
Содержание некоторых элементов
Мышьяк	Не более 0,2 ч/млн
Медь	Не более 0,05 ч/млн
Железо	Не более 0,2 ч/млн
Свинец	Не более 0,1 ч/млн
Ртуть	Не более 0,04 ч/млн
Свойства
Перекисное число	Не более 5 мэкв/кг
Свободные жирные кислоты	Не более 0,25%
Влага и летучие вещества	Не более 0,05%
Неомыляемое вещество	Не более 4,5%
Транс-жирные кислоты	Не более 1%

Пример 7а. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 900 ч/млн смешанного токоферола, добавляемого в процессе наращивания биомассы. В качестве смешанного токоферола можно использовать продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7b. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 900 ч/млн смешанного токоферола, добавляемого в процессе наращивания биомассы; 400 ч/млн аскорбилпальмитата и 2800 ч/млн соевого лецитина. В качестве смешанного токоферола можно использовать продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7c. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 900 ч/млн смешанного токоферола, добавляемого в процессе наращивания биомассы; 750 ч/млн аскорбилпальмитата и 2800 ч/млн соевого лецитина. В качестве смешанного токоферола можно использовать продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7d. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2800 ч/млн соевого лецитина; 3500 ч/млн экстракта розмарина; 1400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 50 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7e. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2800 ч/млн соевого лецитина; 3500 ч/млн экстракта розмарина; 1400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 750 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7f. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2800 ч/млн соевого лецитина; 3500 ч/млн экстракта розмарина; 3400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 50 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7g. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2800 ч/млн соевого лецитина; 3500 ч/млн экстракта розмарина; 3400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 750 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7h. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 1400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы), в качестве которого можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 500 ч/млн экстракта розмарина.

Пример 7i. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2800 ч/млн соевого лецитина; 500 ч/млн экстракта розмарина; 1400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 50 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7j. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2800 ч/млн соевого лецитина; 500 ч/млн экстракта розмарина; 1400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 750 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7k. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2800 ч/млн соевого лецитина; 500 ч/млн экстракта розмарина; 3400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 50 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7L. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2800 ч/млн соевого лецитина; 500 ч/млн экстракта розмарина; 3400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 750 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 7m. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2800 ч/млн соевого лецитина; 2000 ч/млн экстракта розмарина; 2400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 400 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 8

Конечное масло, содержащее экстракт розмарина и смешанный токоферол.

Неочищенное масло можно получить из клеток Schizochytrium sp., как описано, например, в публикациях WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 и WO 2011/153246. Далее неочищенное масло можно подвергнуть очистке, обесцвечиванию и дезодорации для получения рафинированного масла. Затем рафинированное масло можно смешать с подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты (HOSO) для получения конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 350 мг на 1 г масла. Свойства этого масла сходны с представленными в таблице 8.

Пример 8а. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 3400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы), в качестве которого можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 500 ч/млн экстракта розмарина. В таблице 9 представлен состав масла по данному примеру, не содержащего аскорбилпальмитата или лецитина.

Таблица 9

Ингредиенты	Количество: 96,1% жира с
Масло, содержащее по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4-6 двойных связей углерод-углерод	Всего около 65,01 масс.%
Токоферол	3400 ч/млн
Экстракт розмарина	500 ч/млн
Высшие олеиновые кислоты	7,8%

Пример 8b. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 1400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы), в качестве которого можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 3500 ч/млн экстракта розмарина. В таблице 10 представлен состав масла по данному примеру, не содержащего аскорбилпальмитата или лецитина.

Taблица 10

Ингредиенты	Количество: 96,7% жира с
Масло, содержащее по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4-6 двойных связей С=С	Всего около 64,67 масс.%
Токоферол	1400 ч/млн
Экстракт розмарина	3500 ч/млн
Высшие олеиновые кислоты	7,8%

Пример 8с. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 3400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы), в качестве которого можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 3500 ч/млн экстракта розмарина. В таблице 11 представлен состав масла по данному примеру, не содержащего аскорбилпальмитата или лецитина.

Taблица 11

Ингредиенты	Количество: 95,3% жира с
Масло, содержащее по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4-6 двойных связей С=С	Всего около 64,99 масс.%
Токоферол	3400 ч/млн
Экстракт розмарина	3500 ч/млн
Высшие олеиновые кислоты	7,5%

Пример 8d. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы), в качестве которого можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 2000 ч/млн экстракта розмарина. В таблице 12 представлен состав масла по данному примеру, не содержащего аскорбилпальмитата или лецитина.

Taблица 12

Ингредиенты	Количество: 95,9% жира с
Масло, содержащее по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4-6 двойных связей С=С	Всего около 64,71 масс.%
Токоферол	2400 ч/млн
Экстракт розмарина	2000 ч/млн
Высшие олеиновые кислоты	7,8%

Пример 8е. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы), в качестве которого можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 0 ч/млн экстракта розмарина. В таблице 13 представлен состав масла по данному примеру, не содержащего аскорбилпальмитата, лецитина или экстракта розмарина.

Taблица 13

Ингредиенты	Количество: 95,8% жира с
Масло, содержащее по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4-6 двойных связей С=С	Всего около 64,66 масс.%
Токоферол	2400 ч/млн
Экстракт розмарина	0 ч/млн
Высшие олеиновые кислоты	8,0%

Пример 8f. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 900 ч/млн смешанного токоферола (добавленного в процессе наращивания биомассы), в качестве которого можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 2000 ч/млн экстракта розмарина. В таблице 14 представлен состав масла по данному примеру, не содержащего аскорбилпальмитата или лецитина.

Taблица 14

Ингредиенты	Количество: 96,6% жира с
Масло, содержащее по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4-6 двойных связей С=С	Всего около 64,71 масс.%
Токоферол	900 ч/млн
Экстракт розмарина	2000 ч/млн
Высшие олеиновые кислоты	8,0%

Пример 8g. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 2400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы), в качестве которого можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 2000 ч/млн экстракта розмарина. В таблице 15 представлен состав масла по данному примеру, не содержащего аскорбилпальмитата или лецитина.

Taблица 15

Ингредиенты	Количество: 97,2% жира с
Масло, содержащее по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту C_18-22, в которой имеются 4-6 двойных связей С=С	Всего около 64,64 масс.%
Токоферол	2400 ч/млн
Экстракт розмарина	2000 ч/млн
Высшие олеиновые кислоты	7,8%

Пример 9

Таблица 16a

Примеры	Показатель сенсорного анализа для рыбного запаха	Показатель RANCIMAT
8a	1,4 @ 6 месяцев RT*	5,6
8b	0,9 @ 8 месяцев RT	5,3
8c	1,2 @ 8 месяцев RT	5,8
8d	1,2 @ 6 месяцев RT	5,5
8e	1,3 @ 6 месяцев RT	4,1
	1,3 @ 7 месяцев RT	4,1
8g	1,4 @ 6 месяцев RT	5,2

* RT – комнатная температура

Таблица 16b

	Время (мес)	Пример 7a	Пример 7b	Пример 7c	Пример 7d	Пример 7e	Пример 7f	Пример 7g	Пример 7h	Пример 7i	Пример 7j	Пример 7k
Содержание DHA (мг/г)	0	427	370	371	368	368	365	375	428	368	365	366
Содержание DHA (мг/г)	6	438	368	368	360	368	368	370	425	368	371	377
Рыбный/ морской запах	0	0,3	1,0	0,8	0,8	0,3	0,8	0,3	0,5	1,4	0,5	1,4
	1	0,3	1,6	0,7	0,8	1,3	1,1	1,1	0,3	1,8	1,3	1,9
	2	0,6	1,4	0,5	1,2	1,0	1,0	1,2	0,7	1,7	1,1	1,6
	3	1,2	1,6	1,7	1,6	1,7	1,8	1,8	1,1	2,3	1,7	2,3
	4	1,6	1,9	1,1	1,7	1,6	1,5	1,9	1,6	2,2	1,4	2,2
	5	1,5	1,9	1,2	1,8	1,7	2,0	1,6	1,1	2,2	2,2	2,3
	6	1,5	1,9	1,2	2,3	2,1	2,5	2,0	1,6	2,3	2,2	2,5
	7	1,8	2,2	1,7	2,1	2,1	2,0	2,2	1,6	2,4	2,2	2,5
	8	-	2,2	1,5	2,1	2,2	2,2	2,2	1,8	2,9	2,5	2,6
Рыбный/ морской привкус	0	0,7	1,3	1,2	0,9	0,6	0,9	0,5	0,7	1,7	0,9	1,4
	1	0,7	2,5	1,1	1,1	1,2	1,1	1,4	0,6	2,3	1,4	2,5
	2	1,2	2,1	0,7	1,5	1,1	1,1	1,7	1,1	2,2	1,4	2,1
	3	1,6	2,4	2,4	1,9	2,1	2,1	2,1	1,6	2,8	2,1	2,8
	4	2,0	2,4	1,5	2,0	2,1	1,9	2,2	1,9	2,9	2,3	3,0
	5	2,0	2,4	1,5	2,2	2,1	2,4	2,1	1,6	2,9	2,6	2,8
	6	2,2	2,5	1,8	2,7	2,6	-	2,4	2,2	3,1	2,7	3,2
	7	2,5	2,8	1,9	2,6	2,4	2,6	2,5	2,4	3,1	2,6	3,2
	8	-	2,7	1,5	2,6	2,8	3,0	2,5	2,6	3,8	3,0	3,4

Стандартное определение окислительной стабильности масла на приборе RANCIMAT («Рансимат») проводили при температуре 90°C с потоком воздуха 10 л/час (AOCS Cd 12b-92). Содержание жирных кислот определяли согласно протоколу метода AOCS Ce 1b-89 (модифицированному). Характеризующие рыбные запах и вкус показатели, получаемые путем сенсорного анализа, определяли согласно методу, описанному в работе Sensory Evaluation Techniques, Meilgaard et al., CRC Press; 4 edition (December 13, 2006). Группа из 8-18 людей, имеющих опыт такого рода испытаний, вдыхали запах конечных масел, полученных согласно примерам 7a-m и 8a-g, и/или пробовали их на вкус. Каждый испытуемый присваивал образцу некоторое значение. Из всех этих значений выводили среднее арифметическое и результат округляли до ближайшего (большего или меньшего) числа. Показатели для рыбного запаха ≥ 1,5 и для рыбного вкуса ≥ 2,5 считаются ощутимыми для большинства людей.

Таблица 16c

	Время (мес.)	7L	Пример 7m(i)	Пример 7m(ii)	Пример 7m(iii)	Пример 8a	Пример 8b	Пример 8c	Пример8d	Пример 8e	Пример 8f	Пример 8g
Содержание DHA (мг/г)	0	363	364	377	373	430	430	426	427	426	430	432
Содержание DHA (мг/г)	6	365	367	368	370	430	425	430	432	429	425	430
Рыбный/ морской запах	0	0,4	0,6	0,3	0,6	0,5	0,3	0,2	0,5	0,3	0,3	0,2
	1	1,0	1,2	0,9	0,8	0,4	0,5	0,5	0,5	0,3	0,5	0,3
	2	1,3	0,8	1,0	0,9	0,6	0,7	0,6	0,6	0,3	0,7	0,5
	3	1,8	1,7	1,5	1,3	1,2	0,8	1,0	1,0	0,8	0,8	1,0
	4	2,0	1,7	1,4	1,5	1,4	1,2	1,1	1,2	1,3	1,3	1,1
	5	1,8	1,7	1,8	1,6	1,3	1,0	1,1	1,0	0,8	1,0	1,1
	6	2,3	2,5	2,2	1,7	1,4	1,3	1,2	1,3	1,3	1,4	1,4
	7	2,0	2,1	1,9	2,0	1,7	1,2	1,4	1,5	1,6	1,4	1,5
	8	2,5	2,5	-	2,3	2,9	0,9	1,2	1,9	1,7	1,6	-
	9	-	-	-	-	-	1,3	1,9	-	-	1,8	-
Рыбный/ морской привкус	0	0,7	0,8	0,5	0,8	0,8	0,5	0,4	0,6	0,5	0,5	0,5
	1	1,3	1,3	1,2	1,0	0,8	0,6	0,5	0,6	0,6	0,6	0,5
	2	1,5	1,2	1,1	1,2	1,1	0,8	0,7	0,8	0,7	0,8	1,0
	3	2,3	2,1	1,9	1,9	1,5	0,9	1,2	1,2	1,5	1,0	1,2
	4	2,4	-	2,1	-	1,9	1,3	1,5	1,4	1,7	1,4	1,3
	5	2,4	2,2	2,2	2,2	1,8	1,4	1,4	1,5	1,3	1,3	1,6
	6	2,8	-	-	-	2,1	1,4	1,5	1,5	1,9	1,6	1,8
	7	2,7	-	2,5	-	2,1	1,4	1,7	1,7	2,3	1,9	2,1
	8	3,0	3,0	-	2,9	3,1	1,3	1,9	2,4	2,4	2,1	-
	9		-	-	-	-	1,9	2,5	-	-	2,3	-

Конечные масла, полученные согласно примерам 7a-m и 8a-g, расфасовывали на вакуумной упаковочной машине AGV Multivac (Multivac Sepp Haggenmüller GmbH & Co. KG, Германия) в мешки Nylon/Foil/PE (нейлон/фольга/полиэтилен низкой плотности), запаивали в азоте и хранили при температуре 25°C.

Пример 10

Неочищенное масло можно получить из клеток Schizochytrium sp., как описано, например, в публикациях WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 и WO 2011/153246. Далее неочищенное масло можно подвергнуть очистке, обесцвечиванию и дезодорации для получения рафинированного масла. Затем рафинированное масло можно смешать с подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты (HOSO) для получения конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 350 мг на 1 г масла. Типичные свойства конечного масла по данному примеру представлены в таблице 17.

Таблица 17. Свойства конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 350 мг/г

Свойство
Содержание DHA (мг/г)	Не менее 350
Перекисное число (мэкв/кг)	Не более 5,0
Анизидиновое число	Не более 20
Свободные жирные кислоты, %	Не более 0,25
Влага и летучие вещества, %	Не более 0,05
Неомыляемое вещество, %	Не более 4,5
Транс-жирные кислоты, %	Не более 1
Содержание некоторых элементов
Мышьяк, ч/млн	Не более 0,1
Кадмий, ч/млн	Не более 0,1
Медь, ч/млн	Не более 0,05
Железо, ч/млн	Не более 0,2
Свинец, ч/млн	Не более 0,1
Ртуть, ч/млн	Не более 0,04

Примеры 10a-10e. Другие ингредиенты, содержащиеся в этом конечном масле, включают: лецитин подсолнечного масла (1600 ч/млн); экстракт розмарина (2000 ч/млн); смешанный токоферол (2400 ч/млн) и аскорбилпальмитат (400 ч/млн). Содержание смешанного токоферола (2400 ч/млн) складывается из 2000 ч/млн добавленного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемых в ходе наращивания биомассы), в качестве которого может служить продукт фирмы Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и смешанного токоферола, содержавшегося в 4000 ч/млн антиоксидантного препарата TAP 1010 Sun, который добавляется к маслу. TAP1010 Sun дает 400 ч/млн аскорбилпальмитата, 400 ч/млн смешанного токоферола и 1600 ч/млн подсолнечного лецитина.

Пример 11

Конечное масло, содержащее экстракт розмарина, смешанный токоферол и аскорбилпальмитат.

Неочищенное масло можно получить из клеток Schizochytrium sp., как описано, например, в публикациях WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 и WO 2011/153246. Далее неочищенное масло можно подвергнуть очистке, обесцвечиванию и дезодорации для получения рафинированного масла. Затем рафинированное масло можно смешать с подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты (HOSO) для получения конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 400 мг на 1 г масла. Свойства этого конечного масла по данному примеру сходны с представленными в таблице 26.

Примеры 11a-b. Другие ингредиенты, содержащиеся в конечном масле, включают 3000 ч/млн экстракта розмарина; 1700 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемые в процессе наращивания биомассы) и 250 ч/млн аскорбилпальмитата. В качестве смешанного токоферола можно использовать, например, продукт компании Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 12

Сравнивали содержание жирных кислот; интенсивность рыбного запаха и рыбного привкуса для конечных масел по примерам 10a-e и 11a-b. Результаты этого сравнения представлены в таблице 18.

Содержание жирных кислот определяли согласно протоколу метода AOCS Ce 1b-89 (модифицированному). Характеризующие рыбные запах и привкус показатели, получаемые путем сенсорного анализа, определяли согласно методу, описанному в работе Sensory Evaluation Techniques, Meilgaard et al., CRC Press; 4 edition (December 13, 2006). Группа из 8-18 людей, имеющих опыт такого рода испытаний, вдыхали запах конечных масел, полученных согласно примерам 10а-е и 11а-b, и/или пробовали их на вкус. Каждый испытуемый присваивал образцу некоторое значение. Из всех этих значений выводили среднее арифметическое и результат округляли до ближайшего (большего или меньшего) числа. Показатели для рыбного запаха ≥ 1,5 и для рыбного привкуса ≥ 2,5 считаются ощутимыми для большинства людей.

Конечные масла по примерам 10а-d и 11а, упаковывали в 100-граммовые алюминиевые контейнеры с эпоксифенольным покрытием (Elemental Container Inc., MC 12532) и 25-миллиметровым уплотнителем из природных полимеров для крышки (Elemental Container Inc., 024PLUG); хранили при температуре 25°C.

Конечные масла по примерам 10e и 11b упаковывали в 300-граммовые вакуумные мешки из трехслойной (нейлон/фольга/полиэтилен низкой плотности) пленки (производство Heritage Packaging) и хранили при комнатной температуре (25°C).

Таблица 18

	Время (мес.)	Пример 10a	Пример 10b	Пример 10c	Пример 10d	Среднее по примерам 10a-d	Пример 10e	Пример 11a	Пример 11b
Содержание DHA (мг/г)	0	354	364	363	371	363	421	416	420
Содержание DHA (мг/г)	3	355	356	354	366	358	418	417	419
Рыбный/ морской запах	0	1	0	0	1	1	0	1	0
	1	2	1	1	1	1	1	1	0
	2	1	1	1	2	1	1	1	1
	3	1	1	1	3	2	2	2	1
Рыбный/ морской привкус	0	1	0	0	1	1	1	1	0
	1	2	1	1	1	1	2	2	1
	2	2	1	2	2	2	1	2	1
	3	1	2	2	3	2	2	2	2

Пример 13

Неочищенное масло можно получить из клеток Schizochytrium sp., как описано, например, в публикациях WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 и WO 2011/153246. Далее неочищенное масло можно подвергнуть очистке, обесцвечиванию и дезодорации для получения рафинированного масла. Затем рафинированное масло можно смешать с подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты (HOSO) для получения конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 400 мг на 1 г масла. Типичные свойства конечного масла по данному примеру представлены в таблице 19.

Таблица 19. Свойства конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 400 мг/г

Свойство
Содержание DHA (мг/г)	Не менее 400
Перекисное число (мэкв/кг)	Не более 5,0
Анизидиновое число	Не более 20
Свободные жирные кислоты, %	Не более 0,25
Влага и летучие вещества, %	Не более 0,05
Неомыляемое вещество, %	Не более 4,0
Транс-жирные кислоты, %	Не более 1
Содержание некоторых элементов
Мышьяк, ч/млн	Не более 0,1
Кадмий, ч/млн	Не более 0,1
Медь, ч/млн	Не более 0,05
Железо, ч/млн	Не более 0,2
Свинец, ч/млн	Не более 0,1
Ртуть, ч/млн	Не более 0,04

Пример 14

Неочищенное масло можно получить из клеток Schizochytrium sp., как описано, например, в публикациях WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 и WO 2011/153246. Далее неочищенное масло можно подвергнуть очистке, обесцвечиванию и дезодорации для получения рафинированного масла. Затем рафинированное масло можно смешать с подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты (HOSO) для получения конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 400 мг на 1 г масла. Свойства конечного масла по данному примеру сходны с представленными в таблице 19.

Пример 14a. Другие ингредиенты, содержащиеся в этом конечном масле, включают 2000 ч/млн экстракта розмарина; 1700 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемых в ходе наращивания биомассы), в качестве которого может служить, например, продукт фирмы Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 250 ч/млн аскорбилпальмитата.

Примеры 14b и 14c. Другие ингредиенты, содержащиеся в этом конечном масле, включают 3000 ч/млн экстракта розмарина; 1700 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемых в ходе наращивания биомассы), в качестве которого может служить, например, продукт фирмы Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 250 ч/млн аскорбилпальмитата.

Пример 14d. Другие ингредиенты, содержащиеся в этом конечном масле, включают 5000 ч/млн экстракта розмарина; 1700 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемых в ходе наращивания биомассы), в качестве которого может служить, например, продукт фирмы Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70, и 250 ч/млн аскорбилпальмитата.

Пример 15

Конечное масло, содержащее органический экстракт розмарина и смешанный токоферол.

Неочищенное масло можно получить из клеток Schizochytrium sp., как описано, например, в публикациях WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 и WO2011/153246. Далее неочищенное масло можно подвергнуть очистке, обесцвечиванию и дезодорации для получения рафинированного масла. Затем рафинированное масло можно смешать с органическим подсолнечным маслом с высоким содержанием олеиновой кислоты (HOSO), которое можно приобрести, например, в компании Adams Vegetables Oils, Inc. (Альбукерке, шт. Калифорния, США), для получения конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 400 мг на 1 г масла. Типичные свойства конечного масла по данному примеру представлены в таблице 20.

Пример 15a. Другие ингредиенты, содержащиеся в этом конечном масле, включают 750 ч/млн экстракта розмарина, который можно приобрести, например, в фирме Vitiva (Марковцы, Словения) под торговым названием Inolens® 4 organic и в фирме Naturex (Авиньон, Франция) под торговым названием StabilEnhance® OSR-4 organic; и 1700 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемых в ходе наращивания биомассы), в качестве которого может служить, например, продукт фирмы Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Таблица 20. Свойства конечного масла, в котором содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) составляет по меньшей мере около 400 мг/г

Свойство
Содержание DHA (мг/г)	Не менее 400
Перекисное число (мэкв/кг)	Не более 5,0
Анизидиновое число	Не более 20
Свободные жирные кислоты, %	Не более 0,25
Влага и летучие вещества, %	Не более 0,02
Неомыляемое вещество, %	Не более 4,0
Транс-жирные кислоты, %	Не более 1
Содержание некоторых элементов
Мышьяк, ч/млн	Не более 0,1
Кадмий, ч/млн	Не более 0,1
Медь, ч/млн	Не более 0,05
Железо, ч/млн	Не более 0,2
Свинец, ч/млн	Не более 0,1
Ртуть, ч/млн	Не более 0,04

Пример 15b. Другие ингредиенты, содержащиеся в этом конечном масле, включают 2000 ч/млн экстракта розмарина, который можно приобрести, например, в фирме Vitiva (Марковцы, Словения) под торговым названием Inolens® 4 organic и в фирме Naturex (Авиньон, Франция) под торговым названием StabilEnhance® OSR-4 organic; и 2400 ч/млн смешанного токоферола (включая 900 ч/млн, добавляемых в ходе наращивания биомассы), в качестве которого может служить, например, продукт фирмы Vitablend (Вольвега, Нидерланды) под торговым названием Tocoblend™ L70.

Пример 16

Сравнивали содержание жирных кислот; интенсивность рыбного запаха и рыбного привкуса для конечных масел по примерам 13, 14 и 15. Результаты этого сравнения представлены в таблице 21. Содержание жирных кислот определяли согласно протоколу метода AOCS Ce 1b-89 (модифицированному). Характеризующие рыбные запах и привкус показатели, получаемые путем сенсорного анализа, определяли согласно методу, описанному в работе Sensory Evaluation Techniques, Meilgaard et al., CRC Press; 4 edition (December 13, 2006). Группа из 8-18 людей, имеющих опыт такого рода испытаний, вдыхали запах конечных масел, полученных согласно примерам 13, 14 и 15, и/или пробовали их на вкус. Каждый испытуемый присваивал образцу некоторое значение. Из всех этих значений выводили среднее арифметическое и результат округляли до ближайшего (большего или меньшего) числа. Показатели для рыбного запаха ≥ 1,5 и для рыбного привкуса ≥ 2,5 считаются ощутимыми для большинства людей.

Конечные масла по примерам 13 и 14а-d, упаковывали в 300-граммовые вакуумные мешки из трехслойной (нейлон/фольга/полиэтилен низкой плотности) пленки (производства компании Heritage Packaging) и хранили при комнатной температуре (25°C).

Конечные масла по примерам 15a-b упаковывали в 100-граммовые алюминиевые контейнеры с эпоксифенольным покрытием (Elemental Container Inc., MC 12532) и 25-миллиметровым уплотнителем из природных полимеров для крышки (Elemental Container Inc., 024PLUG); хранили при температуре 25°C.

Таблица 21

	Время (мес.)	Пример 13	Пример 14a	Пример 14b	Пример 14c	Пример 14d	Пример 15a	Пример 15b
Содержание DHA (мг/г)	0	420	420	425	423	426	439	423
Содержание DHA (мг/г)	3	421	419	415	416	420	428	428
Рыбный/ морской запах	0	0	0	0	0	0	0	0
	1	1	0	1	0	1	1	1
	2	1	1	1	1	1	-	-
	3	2	2	2	2	1	-	-
	4	2	2	1	2	2	-	-
	5	2	2	2	2	2	-	-
Рыбный/ морской привкус	0	0	0	0	0	0	0	0
	1	1	1	1	1	1	2	2
	2	2	1	1	1	1	-	-
	3	2	2	3	2	2	-	-
	4	3	2	2	2	2	-	-
	5	3	2	3	2	2	-	-

Claims

1. Масло, содержащее

(i) по меньшей мере 30 масс.% одной или более полиненасыщенных жирных кислот, в которых имеются по меньшей мере 4 двойных связи;

(ii) по меньшей мере один первый антиоксидант, причём по меньшей мере один первый антиоксидант является токоферолом,

причём указанное масло содержит токоферол в количестве от около 1000 ч./млн до около 3000 ч./млн;

(iii) менее чем около 750 ч./млн второго антиоксиданта, выбранного из производных аскорбиновой кислоты; и

(iv) менее чем около 150 ч./млн лецитина.

2. Масло по п. 1, которое содержит менее чем около 30 ч./млрд железа.

3. Масло по п. 1 или 2, причем указанное масло обладает рыбным запахом слабее 1,5.

4. Масло по любому из предшествующих пунктов, которое дополнительно содержит ароматизирующий реагент.

5. Масло по п. 4, в котором указанный ароматизирующий реагент является экстрактом розмарина.

6. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором производное аскорбиновой кислоты присутствует в количестве от около 50 ч./млн до около 400 ч./млн, например от около 100 ч./млн до около 300 ч./млн.

7. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором указанный второй антиоксидант является аскорбилпальмитатом.

8. Масло по любому из предшествующих пунктов, которое обладает рыбным запахом с сенсорной оценкой менее 1,5 и/или рыбным привкусом с сенсорной оценкой менее 2,5.

9. Масло по любому из предшествующих пунктов, которое характеризуется перекисным числом (POV) менее 5, например менее 2, например менее 1.

10. Масло по любому из предшествующих пунктов, которое характеризуется анизидиновым числом (AnV) менее 20, например менее 10.

11. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором указанный по меньшей мере один первый антиоксидант выбирают из добавленного токоферола, экстракта зеленого чая или их сочетаний.

12. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором указанный по меньшей мере один первый антиоксидант является смешанным токоферолом.

13. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором указанный по меньшей мере один первый антиоксидант является добавленным токоферолом.

14. Масло по любому из предшествующих пунктов, которое является органическим маслом.

15. Масло по любому из предшествующих пунктов, которое является природным маслом.

16. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором указанное масло и/или указанную по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи, получают из по меньшей мере одного вида микроводорослей, рыб, растений, семян или их сочетаний.

17. Масло по п. 16, в котором указанные микроводоросли являются траустохитриевыми.

18. Масло по п. 16, в котором указанные микроводоросли выбирают из Thraustochytrium sp., Schizochytrium sp. и их сочетаний.

19. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором указанную по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи, получают из растения.

20. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором указанную по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи, получают из рыбы.

21. Масло по любому из предшествующих пунктов, которое является съедобным.

22. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором указанную по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи, выбирают из докозагексаеновой кислоты (DHA), эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА), омега-3-докозапентаеновой кислоты (DPA n-3) и их смесей.

23. Масло по любому из предшествующих пунктов, в котором указанную по меньшей мере одну полиненасыщенную жирную кислоту, в которой имеются по меньшей мере 4 двойных связи, выбирают из омега-6-докозапентаеновой кислоты (DPA n-6) и арахидоновой кислоты (ARA).

24. Конечное масло, содержащее масло по любому из предшествующих пунктов и по меньшей мере одно другое масло.

25. Конечное масло по п. 24, причём указанное другое масло выбирают из растительных масел.

26. Применение масла по любому из предшествующих пунктов для изготовления пищевого продукта.

27. Применение масла по любому из пп. 1-25 в качестве добавки к пищевому продукту.

28. Способ изготовления пищевого продукта, включающий введение масла по любому из пп. 1-25 в указанный пищевой продукт.

29. Пищевой продукт, содержащий масло по любому из пп. 1-25.

30. Масло по любому из пп. 1-25, содержащее по меньшей мере около 35 масс.%, по меньшей мере около 40 масс.%, по меньшей мере около 45 масс.%, по меньшей мере около 50 масс.% докозагексаеновой кислоты (DHA) и менее чем около 80 масс.%, менее чем около 70 масс.%, менее чем около 60 масс.% докозагексаеновой кислоты (DHA).

31. Масло по любому из пп. 1-25, содержащее по меньшей мере около 35 масс.%, по меньшей мере около 40 масс.%, по меньшей мере около 45 масс.%, по меньшей мере около 50 масс.% докозагексаеновой и эйкозапентаеновой кислот (DHA+ЕРА) и менее чем около 80 масс.%, менее чем около 70 масс.%, менее чем около 60 масс.% докозагексаеновой и эйкозапентаеновой кислот (DHA+ЕРА).

32. Масло по любому из пп. 1-25, которое характеризуется показателем, полученным на приборе RANCIMAT, менее чем около 19.

33. Масло по любому из пп. 1-25, которое характеризуется интенсивностью рыбного запаха по результатам сенсорного анализа менее чем 1,5 в период времени, выбранный из 0-3 месяцев, 0-4 месяцев, 0-5 месяцев, 0-6 месяцев, 0-7 месяцев, 0-8 месяцев или 0-9 месяцев.

34. Масло по любому из пп. 1-25, которое характеризуется интенсивностью рыбного привкуса по результатам сенсорного анализа менее чем 2,5 в период времени, выбранный из 0-3 месяцев, 0-4 месяцев, 0-5 месяцев, 0-6 месяцев, 0-7 месяцев, 0-8 месяцев или 0-9 месяцев.

35. Масло по любому из пп. 1-25, которое содержит менее чем около 10 ч./млн лецитина.

36. Масло по любому из пп. 1-25, которое содержит токоферол в количестве от около 1000 ч./млн до 3000 ч./млн.

37. Масло по любому из пп. 1-25, которое содержит добавленный токоферол в количестве от около 300 ч./млн до около 1000 ч./млн.

38. Масло по любому из пп. 1-25, которое содержит экстракт розмарина в количестве от 1500 ч./млн до 5000 ч./млн.

39. Масло по любому из пп. 1-25, в котором указанные одна или более полиненасыщенных жирных кислот включают докозагексаеновую кислоту (DHA), эйкозапентаеновую кислоту (EPA), арахидоновую кислоту (ARA), омега-3-докозапентаеновую кислоту (DPA n-3) и/или омега-6-докозапентаеновую кислоту (DPA n-6).