RU2553325C2 - Нейтрализующие антитела против вируса гриппа а и их использование - Google Patents
Нейтрализующие антитела против вируса гриппа а и их использование Download PDFInfo
- Publication number
- RU2553325C2 RU2553325C2 RU2011105062/10A RU2011105062A RU2553325C2 RU 2553325 C2 RU2553325 C2 RU 2553325C2 RU 2011105062/10 A RU2011105062/10 A RU 2011105062/10A RU 2011105062 A RU2011105062 A RU 2011105062A RU 2553325 C2 RU2553325 C2 RU 2553325C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- influenza
- seq
- antibodies
- amino acid
- Prior art date
Links
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 title abstract description 26
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 104
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims abstract description 60
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 46
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 80
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 77
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 71
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 70
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 70
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 43
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 40
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 40
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 37
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 30
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 27
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 26
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 claims description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 10
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims description 10
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 9
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 73
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 52
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 33
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 21
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 19
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 17
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 16
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 10
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 7
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- -1 dichlorotriazinyl Chemical group 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 4
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 208000032163 Emerging Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 229940033324 influenza A vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 2
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101800001415 Bri23 peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000107 C-terminal peptide Human genes 0.000 description 1
- 101800000655 C-terminal peptide Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Polymers OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 241000702620 H-1 parvovirus Species 0.000 description 1
- 101001037139 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-30 Proteins 0.000 description 1
- 101000604674 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 4-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100040219 Immunoglobulin heavy variable 3-30 Human genes 0.000 description 1
- 102100038198 Immunoglobulin kappa variable 4-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 1
- 241000371980 Influenza B virus (B/Shanghai/361/2002) Species 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241000702437 Parvovirus H3 Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical class CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N Sorbitol Polymers OCC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000599 controlled substance Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Polymers 0.000 description 1
- 150000002304 glucoses Polymers 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Polymers C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Polymers 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N indium atom Chemical compound [In] APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000003046 intermediate neglect of differential overlap Methods 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012804 iterative process Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 150000002690 malonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N oseltamivir phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 description 1
- 108010052044 polyclonal B cell activator Proteins 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 238000013337 sub-cultivation Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 229940036185 synagis Drugs 0.000 description 1
- 229940061367 tamiflu Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006216 vaginal suppository Substances 0.000 description 1
- 229940120293 vaginal suppository Drugs 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000007794 visualization technique Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
- VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N yttrium atom Chemical compound [Y] VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Предложенное изобретение относится к иммунологии. Предложены варианты антител, нейтрализующих инфекцию субтипа группы 1 и субтипа группы 2 вируса гриппа А. Антитело характеризуется: либо набором 3 CDR легкой и 3 СDR тяжелой цепи, либо наличием вариабельных участков лёгкой и тяжёлой цепей. Раскрыты: кодирующая антитело молекула нуклеиновой кислоты; экспрессирующая антитело клетка; а также способ ослабления инфекции вируса гриппа А или снижения его риска, использующий антитело в терапевтически или профилактически эффективном количестве. Использование изобретения обеспечивает нейтрализующие вирус гриппа А антитела, которые могут найти применение в медицине при лечении гриппа субтипов: H1, H2, H3, H5, H7, H9. 6 н. и 12 з.п. ф-лы, 6 табл., 2 пр.
Description
Данная заявка претендует на приоритет временных заявок США №№61/083838 и 61/181582, поданных 25 июля 2008 г., и 27 мая 2009 г., соответственно, описания которых настоящим целиком включены сюда в качестве ссылок.
Уровень техники
Считается, что иммунный ответ на вирус гриппа А с образованием нейтрализующих антител является специфическим по отношению к данному вирусному субтипу. Существует 16 субтипов гриппа А, определяемых их гемагглютининами (ГА). Эти 16 ГА, Н1-Н16, могут быть разделены на две группы. Группа 1 состоит из субтипов Н1, Н2, Н5, Н6, Н8, Н9, Н11, Н12, Н13 и Н16, и группа 2 включает субтипы Н3, Н4, Н7, Н10, Н14 и Н15. Хотя все субтипы присутствуют у птиц, болезнь у людей вызывают преимущественно субтипы Н1, Н2 и Н3. Субтипы Н5, Н7 и Н9 вызывают спорадические тяжелые инфекции у людей и могут вызвать новую пандемию. Вирусы Н1 и Н3 непрерывно эволюционируют, образуя новые варианты, в результате явления, называемого антигенным дрейфом. Вследствие этого, антитела, продуцируемые в ответ на предшествующие варианты вирусов, плохо или совсем не защищают от новых дрейфовых вариантов вирусов. Это приводит к тому, что каждый год необходимо готовить новую вакцину против вирусов Н1 и Н3, появление которых прогнозируется, что является очень дорогостоящим процессом, а также не всегда эффективным. То же самое относится к производству вакцины гриппа Н5. Действительно, точно не известно, будут ли современные вакцины Н5 на основе вьетнамских или индонезийских изолятов вируса гриппа А защищать против будущей пандемии вируса Н5.
По этим причинам было бы очень желательно создать вакцину, которая индуцирует нейтрализующие антитела широкого спектра действия, способные нейтрализовать все субтипы вируса гриппа А, а также их ежегодные варианты (обзор Gerhard et al., 2006). Кроме того нейтрализующие гетеросубтиповые антитела широкого спектра действия могут быть использованы по профилактическому или терапевтическому назначению.
Антитела, распознающие вирус гриппа А, были охарактеризованы. Антитела к М2 (инвариантный малый белок, экспрессируемый инфицированными клетками, но не вызывающими инфекцию вирусами) продемонстрировали некоторый защитный эффект in vivo, возможно, путем превращения инфицированных клеток в мишени для разрушения NK-клетками (природными клетками-киллерами) или цитотоксичными Т-клетками. Однако основной мишенью нейтрализующих антител является ГА. Он содержит большой эктодомен из ок.500 аминокислот, который расщепляется ферментами хозяина с образованием 2 полипептидов, остающихся связанными дисульфидной связью. Более крупный N-концевой фрагмент (НА1, 320-330 аминокислот) образует удаленный от мембраны глобулярный домен, который содержит рецепторсвязывающий сайт и большинство детерминант, распознаваемых нейтрализующими вирус антителами. Меньший по размеру C-концевой участок (НА2, ок.180 аминокислот) образует стеблеобразную структуру, с помощью которой глобулярный домен крепится к клеточной или вирусной мембране. Степень гомологии последовательностей между субтипами у полипептидов НА1 меньше (34-59% гомологии между субтипами), чем у полипептида НА2 (51-80% гомологии). Наиболее консервативной областью является последовательность вокруг места расщепления, особенно N-концевые 11 аминокислот НА2, называемые пептидом слияния, который является консервативным для всех субтипов вируса гриппа А. Часть этой области выходит на поверхность в виде петли в молекуле-прекурсоре ГА (НА0), но становится недоступной после расщепления НА0 на НА1/НА2. Таким образом, существуют консервативные участки в разных субтипах ГА, особенно, в соединительном участке НА1-НА2 и в области НА2. Однако такие участки могут быть малодоступными для нейтрализующих антител.
Был достигнут лишь ограниченный успех в идентификации антител, которые нейтрализуют более одного субтипа вируса гриппа А, и их спектр нейтрализации является узким, а их активность - низкой. Okuno et al. иммунизировали мышей вирусом гриппа A/Okuda/57 (H2N2) и выделяли моноклональное антитело (С179), которое связывается с консервативным конформационным эпитопом в НА2 и нейтрализует субтипы Н2, Н1 и Н5 группы 1 вирусов гриппа A in vitro и in vivo на животных моделях (Okuno et al., 1993; Smirnov et al., 1999; Smirnov et al., 2000).
Недавно, Gioia et al. описали присутствие антител, нейтрализующих вирус H5N1, в сыворотке некоторых особ, которым была введена обычная сезонная вакцина против гриппа. (Gioia et al., 2008). Авторы выдвинули предположение, что нейтрализующая активность может быть вызвана антителами к нейраминидазе (N1). Однако, моноклональные антитела не были выделены и эпитопы-мишени не были охарактеризованы. Неясно, нейтрализуют ли антитела сыворотки другие субтипы вируса гриппа А.
Несмотря на десятилетия исследований, на рынке нет антител, которые бы нейтрализовали или ингибировали инфекцию вируса гриппа А с широким спектром действия или ослабляли болезнь, вызванную вирусом гриппа А. Таким образом, существует необходимость в идентификации новых антител, которые защищали бы против множественных субтипов вируса гриппа А.
Сущность изобретения
Данное изобретение основано, частично, на выделении у особ, вакцинированных сезонной вакциной против гриппа, природных моноклональных антител человека, которые связываются с НА и нейтрализуют инфекцию нескольких субтипов вируса гриппа А, а также новых эпитопов, с которыми связываются антитела по изобретению. Соответственно, в одном аспекте изобретения, изобретение предусматривает антитело и его антигенсвязывающие фрагменты, которые нейтрализуют инфекцию нескольких субтипов вируса гриппа А, выбранных из субтипов группы 1 и группы 2.
В одном варианте исполнения изобретения, изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые нейтрализуют инфекцию субтипа группы 1 и субтипа группы 2 вируса гриппа А. В другом варианте исполнения изобретения, изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие по меньшей мере одну последовательность участка, определяющего комплементарность (CDR), имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с любым одним из SEQ ID NO:1-6 или 17-22, причем антитело нейтрализует вирус гриппа А.
В еще одном варианте исполнения изобретения, изобретение предусматривает CDR1 тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:17; CDR2 тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:18; и CDR3 тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:19, причем антитело нейтрализует вирус гриппа А. В еще одном варианте исполнения изобретения, изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие CDR1 легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:20; CDR2 легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:21; и CDR3 легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:22, причем антитело нейтрализует вирус гриппа А.
В еще одном варианте исполнения изобретения, изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14; или вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14; или вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:29, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:30; или вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:30, причем антитело нейтрализует вирус гриппа А. Изобретение далее предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело представляет собой вариант 1 FI6 или вариант 2 FI6.
В еще одном варианте исполнения изобретения, изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые нейтрализуют инфекцию субтипа группы 1 и субтипа группы 2 вируса гриппа А, где антитело или его фрагмент экспрессируются иммортализованным клоном В-клеток.
В другом аспекте, изобретение предусматривает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую полинуклеотид, кодирующий антитело или фрагмент антитела по изобретению. В еще одном аспекте, изобретение предусматривает вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению или клетку, экспрессирующую антитело по изобретению или его антигенсвязывающий фрагмент. В еще одном аспекте, изобретение предусматривает выделенный или очищенный иммуногенный полипептид, содержащий эпитоп, который связывается с антителом или антигенсвязывающим фрагментом по изобретению.
Изобретение далее предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую антитело по изобретению или его антигенсвязывающий фрагмент, молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению, вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению, клетку, экспрессирующую антитело или фрагмент антитела по изобретению, или иммуногенный полипептид по изобретению, и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель. Изобретение также предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где первое антитело представляет собой антитело по изобретению и второе антитело представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые нейтрализуют инфекцию вируса гриппа А.
Также предусматривается, что использование антитела по изобретению, или его антигенсвязывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты по изобретению, вектора, содержащего нуклеиновую кислоту по изобретению, клетки, экспрессирующей вектор по изобретению, выделенного или очищенного иммуногенного полипептида, содержащего эпитоп, который связывается с антителом или фрагментом антитела по изобретению, или фармацевтической композиции по изобретению (i) в производстве лекарственного средства для лечения инфекции вируса гриппа A, (ii) в вакцине, или (iii) в диагностике инфекции вируса гриппа А, входит в объем изобретения. Кроме того, предусматривается также, что использование антитела по изобретению или его антигенсвязывающего фрагмента для контроля качества вакцин против вируса гриппа А путем проверки того, чтобы антиген указанной вакцины содержал специфический эпитоп в правильной конформации, входит в объем изобретения.
В другом аспекте, изобретение предусматривает способ ослабления инфекции вируса гриппа А или снижения риска инфекции вируса гриппа А, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества антитела или антигенсвязывающего фрагмента антитела по изобретению.
В другом аспекте, изобретение предусматривает эпитоп, который специфически связывается с антителом по изобретению или его антигенсвязывающим фрагментом, предназначенный для использования (i) в терапии, (ii) в производстве лекарственного средства для лечения инфекции вируса гриппа A, (iii) в качестве вакцины, или (iv) при скрининге лигандов, способных нейтрализовать инфекцию вируса гриппа А.
Детальное описание изобретения
Изобретение основано, частично, на открытии и выделении у особ, которые были вакцинированы сезонной вакциной против гриппа А, природных антител человека, нейтрализующих, с широким спектром, действия вирус гриппа А разных субтипов, а также новых эпитопов, с которыми связываются антитела по изобретению. Такие антитела являются желательными, поскольку для нейтрализации разных субтипов вируса гриппа А потребуется только одно или несколько антител. Кроме того, эпитопы, распознаваемые такими антителами, могут быть частью вакцины, способной индуцировать широкое защитное действие против как сезонных, так и возможных пандемичных изолятов разных субтипов.
Соответственно, в одном аспекте, изобретение предусматривает антитело и его антигенсвязывающие фрагменты, которые нейтрализуют по меньшей мере два вируса гриппа А в субтипах группы 1 и группы 2. В одном варианте исполнения, изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые нейтрализуют инфекцию вируса гриппа А субтипа группы 1 и субтипа группы 2.
В другом аспекте изобретения, оно предусматривает нейтрализующее антитело и его антигенсвязывающие фрагменты, обладающие широкой специфичностью против ГА разных субтипов вируса гриппа А. В одном варианте исполнения, антитело или антигенсвязывающие фрагменты по изобретению специфически связываются с эпитопом в области стебля ГА, являющимся консервативным для двух или более субтипов вируса гриппа А, выбранных из группы 1 и группы 2. В другом варианте исполнения, антитело или антигенсвязывающие фрагменты по изобретению специфически связываются с полипептидом, содержащим аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO:37, 38, 39 или 40.
Моноклональные антитела человека, иммортализованные клоны В-клеток или трансфицированные клетки-хозяева, которые секретируют антитела по изобретению, и нуклеиновая кислота, кодирующая антитела по изобретению также включены в объем изобретения.
В используемом тут значении, термины "антигенсвязывающий фрагмент", "фрагмент" и "фрагмент антитела" используются взаимозаменяемо для обозначения любого фрагмента антитела по изобретению, который сохраняет антигенсвязывающую активность антитела. Типичные примеры фрагментов антител включают, без ограничений, одноцепочечное антитело, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv. Термин "антитело", в используемом тут значении, включает как антитела, так и их антигенсвязывающие фрагменты.
В используемом тут значении, термин "широкая специфичность" используется для описания антитела или антигенсвязывающего фрагмента по изобретению, которые могут связываться с и/или нейтрализовать один или несколько субтипов группы 1 и один или несколько субтипов группы 2 вируса гриппа А.
В используемом тут значении, "нейтрализующее антитело" представляет собой антитело, которое может нейтрализовать, т.е., предупреждать, ингибировать, ослаблять, затруднять или препятствовать способности патогена инициировать и/или поддерживать инфекцию хозяина. Термины "нейтрализующее антитело" и "антитело, которое нейтрализует" или "антитела, которые нейтрализуют" используются тут взаимозаменяемо. Такие антитела могут быть использованы, сами или в комбинации, в качестве профилактических или терапевтических агентов при соответствующем составлении композиций, в сочетании с активной вакцинацией, в качестве диагностического инструмента или в качестве производственного инструмента, как описано тут.
Антитело или антигенсвязывающие фрагменты по изобретению нейтрализуют один или несколько субтипов вируса гриппа А из группы 1 (Н1, Н2, Н5, Н6, Н8, Н9, НИ, Н12, Н13 и Н16 и их варианты) и один или несколько вирусов гриппа А из группы 2 (Н3, Н4, Н7, Н10, Н14 и Н15 и их варианты). В одном варианте исполнения, типичные примеры субтипов группы 1 включают Н1, Н2, Н5, Н6 и Н9 и типичные примеры субтипов группы 2 включают Н3 и Н7.
Антитело и фрагмент антитела по изобретению способны нейтрализовать различные комбинации субтипов вируса гриппа А. В одном варианте исполнения, антитело может нейтрализовать субтипы Н1 и Н3 вируса гриппа А, или субтипы Н2 и Н3, или субтипы Н3 и Н5, или субтипы Н3 и Н9, или субтипы Н1 и Н7, или субтипы Н2 и Н7, или субтипы Н5 и Н7, или субтипы Н7 и Н9.
В другом варианте исполнения, антитело и фрагмент антитела по изобретению могут нейтрализовать субтипы вируса гриппа А Н1, Н2 и Н3, или субтипы Н1, Н3 и Н5, или субтипы Н1, Н3 и Н9, или субтипы Н2, H3 и Н5, или субтипы Н2, H3 и Н9, или субтипы H3, Н5 и Н9, или субтипы Н1, Н2 и Н7, или субтипы Н1, Н5 и Н7, или субтипы Н1, Н7 и Н9, или субтипы Н2, Н5 и Н7, или субтипы Н2, Н7 и Н9, или субтипы Н5, Н7 и Н9, или субтипы Н1, H3 и Н7, или субтипы Н2, H3 и Н7, или субтипы H3, Н5 и Н7, или субтипы H3, Н7 и Н9.
В еще одном варианте исполнения, антитело может нейтрализовать субтипы вируса гриппа А Н1, Н2, H3 и Н7, или субтипы Н1, H3, Н5 и Н7, или субтипы Н1, H3, Н7 и Н9, или субтипы Н2, H3, Н5 и Н7, или субтипы Н2, H3, Н7 и Н9, или субтипы H3, Н5, Н7 и Н9 или субтипы Н1, Н2, H3 и Н5, или субтипы Н1, Н2, H3 и Н9, или субтипы Н1, H3, Н5 и Н9, или субтипы Н2, H3, Н5 и Н9, или субтипы Н1, Н2, Н5 и Н7, или субтипы Н1, Н2, Н7 и Н9, или субтипы Н1, Н5, Н7 и Н9, или субтипы Н2, Н5, Н7 и Н9.
В еще одном варианте исполнения, антитело по изобретению может нейтрализовать субтипы вируса гриппа А Н1, Н2, H3, Н5 и Н7, или субтипы Н1, Н2, H3, Н7 и Н9, или субтипы Н1, H3, Н5, Н7 и Н9, или субтипы Н2, H3, Н5, Н7 и Н9, или субтипы Н1, Н2, H3, Н5 и Н9, или субтипы Н1, Н2, Н5, Н7 и Н9, или субтипы Н1, Н2, H3, Н5, Н7 и Н9. В еще одном варианте исполнения, антитело и антигенсвязывающие фрагменты по изобретению нейтрализуют одну или несколько вышеуказанных комбинаций в дополнении к нейтрализации субтипа Н6 вируса гриппа А.
Антитело и антигенсвязывающий фрагмент по изобретению обладают высокой нейтрализующей активностью. Концентрация антитела по изобретению, необходимая для 50% нейтрализации вируса гриппа А, может составлять, например, примерно 50 мкг/мл или меньше. В одном варианте исполнения, концентрация антитела по изобретению, необходимая для 50% нейтрализации вируса гриппа А, составляет примерно 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 17,5, 15, 12,5, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4,5, 4, 3,5, 3, 2,5, 2, 1,5 или примерно 1 мкг/мл или меньше. В другом варианте исполнения, концентрация антитела по изобретению, необходимая для 50% нейтрализации вируса гриппа А, составляет примерно 0,9, 0,8, 0,75, 0,7, 0,65, 0,6, 0,55, 0,5, 0,45, 0,4, 0,35, 0,3, 0,25, 0,2, 0,15, 0,1, 0,075, 0,05, 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, 0,008, 0,006, 0,004, 0,003, 0,002 или примерно 0,001 мкг/мл или меньше. Это означает, что лишь низкие концентрации антитела будут необходимы для 50% нейтрализации вируса гриппа А. Специфичность и активность могут быть измерены с использованием стандартного анализа нейтрализации, известного квалифицированным специалистам.
Антитела по изобретению
Изобретение предусматривает антитело, обладающее особенно широкой специфичностью к ГА, которое нейтрализует один или несколько субтипов вируса гриппа А из группы 1 и один или несколько субтипов вируса гриппа А из группы 2. Антитело по изобретению связывается с эпитопом в области ГА, являющейся консервативной для двух или более субтипов вируса гриппа А, выбранных из группы 1 и группы 2.
В одном варианте исполнения, изобретение предусматривает антитело, например, выделенное антитело или очищенное антитело, которые специфически связываются с консервативным эпитопом в области стебля ГА субтипов вируса гриппа А группы 1 и группы 2 и препятствуют вирусной репликации или распространению. Изобретение также предусматривает антитело, например, выделенное антитело или очищенное антитело, которое специфически связывается с консервативным эпитопом в области стебля ГА субтипов группы 1 и группы 2 и ингибирует проникновение вируса в клетку. Без ограничений какой-либо теорией, в типичном варианте исполнения антитело или антигенсвязывающие фрагменты по изобретению связываются с консервативным эпитопом в области стебля вируса гриппа А и ингибируют проникновение вируса в клетку путем препятствования стадии слияния. Эпитоп или антигенная детерминанта белка соответствует тем частям молекулы, которые специфически распознаются связывающим сайтом (или паратопом) антитела. Эпитопы, таким образом, представляют собой родственные структуры, которые нуждаются в комплементарных паратопах для их функционального распознавания. Эпитоп, консервативный для разных вариантов белка, означает, что один и тот же паратоп может специфически распознавать такие разные варианты путем вхождения в контакт с одинаковыми частями молекул.
Антитела по изобретению могут быть моноклональными, например, моноклональными антителами человека, или рекомбинантными антителами. Изобретение также предусматривает фрагменты антител по изобретению, особенно фрагменты, которые сохраняют антигенсвязывающую активность антител. Хотя описание, включая формулу изобретения, может, в некоторых местах, недвузначно указывать на антигенсвязывающий фрагмент(ы), фрагмент(ы) антитела, вариант(ы) и/или производное (производные) антител, подразумевается, что термин "антитело" или "антитело по изобретению" включает все категории антител, а именно, антигенсвязывающий фрагмент(ы), фрагмент(ы) антитела, вариант(ы) и производное (производные) антител.
В одном варианте исполнения, антитела и фрагменты антител по изобретению нейтрализуют комбинацию двух или больше субтипов вируса гриппа А группы 1 и группы 2. Типичные примеры субтипов вируса гриппа А включают, без ограничений, H5N1 (A/Vietnam/1203/04), H1N1 (A/New Caledonia/20/99), H1N1 (A/Salomon lsland/3/2006), H3N2 (A/Wyoming/3/03) и H9N2 (A/chicken/Hong Kong/G9/97). В другом варианте исполнения, антитела нейтрализуют и/или являются специфическими по отношению к комбинации 3, 4, 5, 6, 7 или больше субтипов группы 1 и группы 2 вируса гриппа А.
В типичном варианте исполнения, изобретение предусматривает антитело или фрагмент антитела, являющиеся специфическими по отношению к субтипам вируса гриппа А Н1 и H3 (например H1N1 и H3N2); или Н1, H3, Н5 и Н9 (например H1N1, H3N2, H5N1 и H9N2). В еще одном варианте исполнения, антитело или фрагменты антител являются специфическими по отношению к Н1, H3, Н5, Н7 и Н9 (например, H1N1, H3N2, H5N1, H7N1, H7N7, H9N2). Другие типичные примеры комбинаций субтипов вируса гриппа А приведены ранее в заявке.
Номера SEQ ID аминокислотных последовательностей вариабельных участков тяжелой цепи (VH) и вариабельных участков легкой цепи (VL) типичных примеров антител по изобретению, а также номера SEQ ID кодирующих их последовательностей нуклеиновых кислот приведены в Таблице 1.
| Таблица 1. | ||||
| Номера SEQ ID полипептидов и полинуклеотидов VH и VL для типичных примеров антител, нейтрализующих вирус гриппа А | ||||
| SEQ ID NO полипептидов и полинуклеотидов VH и VL | ||||
| VH Полипептид | VL Полипептид | VH Полинуклеотид | VL Полинуклеотид | |
| Вариант 1 FI6 | 13 | 14 | 15 | 16 |
| Вариант 2 FI6 | 33 | 14 | 34 | 16 |
| Вариант 1 FI28 | 29 | 30 | 31 | 32 |
| Вариант 2 FI28 | 35 | 30 | 36 | 32 |
В одном варианте исполнения, антитело или фрагмент антитела по изобретению предусматривает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, примерно на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную последовательности, приведенной в любой из SEQ ID NO:13, 33, 29 или 35. В другом варианте исполнения, антитело или фрагмент антитела по изобретению предусматривает вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, примерно на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную последовательности, приведенной в SEQ ID NO:14 или 30.
В еще одном варианте исполнения, вариабельный участок тяжелой цепи антитела по изобретению может кодироваться нуклеиновой кислотой, имеющей последовательность, примерно на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную последовательности, приведенной в любой из SEQ ID NO:15, 34, 31 или 36. В еще одном варианте исполнения, вариабельный участок легкой цепи антитела по изобретению может кодироваться нуклеиновой кислотой, имеющей последовательность, примерно на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичную последовательности, приведенной в SEQ ID NO:16 или 32.
CDR тяжелых цепей антитела обозначены CDRH1, CDRH2 и CDRH3, соответственно. Аналогично, CDR легких цепей антитела обозначены CDRL1, CDRL2 и CDRL3, соответственно. Положения аминокислот CDR определяются в соответствии с системой нумерации IMGT следующим образом: CDR1 - положения 27-38 по IMGT, CDR2 - положения 56-65 по IMGT и CDR3 - положения 105-117 по IMGT.
В Таблице 2 приведены номера SEQ ID аминокислотных последовательностей шести CDR тяжелых и легких цепей, соответственно, для типичных примеров антитела по изобретению.
| Таблица 2. | ||||||
| Номера SEQ ID полипептидов CDR типичных примеров антител, нейтрализующих вирус гриппа А | ||||||
| SEQ ID NO. полипептидов CDR | ||||||
| CDRH1 | CDRH2 | CDRH3 | CDRL1 | CDRL2 | CDRL3 | |
| Вариант 1 FI6 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Вариант 2 FI6 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Вариант 1 FI28 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 |
| Вариант 2 FI28 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 |
В одном варианте исполнения, антитело или фрагмент антитела по изобретению предусматривает по меньшей мере один CDR с последовательностью, имеющей по меньшей мере 95% идентичности последовательности с любым одним из SEQ ID NO:1-6 или 17-22.
В другом варианте исполнения, изобретение предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую один или несколько (т.е. один, два или все три) CDR тяжелой цепи из варианта 1 FI6, варианта 2 FI6, варианта 1 FI28 или варианта 2 FI28. В типичном варианте исполнения, антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению предусматривают CDR1 тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:17; CDR2 тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:18; и CDR3 тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:19. В определенных вариантах исполнения, антитело или фрагмент антитела, предусматриваемые тут, содержат тяжелую цепь, содержащую (i) SEQ ID NO:1 в качестве CDRH1, SEQ ID NO:2 в качестве CDRH2 и SEQ ID NO:3 в качестве CDRH3, или (ii) SEQ ID NO:17 в качестве CDRH1, SEQ ID NO:18 в качестве CDRH2 и SEQ ID NO:19 в качестве CDRH3.
Также предусматривается антитело, содержащее легкую цепь, содержащую один или несколько (т.е. один, два или все три) CDR легкой цепи из варианта 1 FI6, варианта 2 FI6, варианта 1 FI28 или варианта 2 FI28, В типичном варианте исполнения, антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению предусматривают CDR1 легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:20; CDR2 легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:21; и CDR3 легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:22. В определенных вариантах исполнения, предусматриваемое тут антитело содержит легкую цепь, содержащую (i) SEQ ID NO:4 в качестве CDRL1, SEQ ID NO:5 в качестве CDRL2 и SEQ ID NO:6 в качестве CDRL3, или (ii) SEQ ID NO:20 в качестве CDRL1, SEQ ID NO:21 в качестве CDRL2 и SEQ ID NO:22 в качестве CDRL3.
В одном варианте исполнения, антитело по изобретению или его антигенсвязывающий фрагмент содержат все CDR варианта 1 антитела FI6, указанные в Таблице 2, и нейтрализуют инфекцию вируса гриппа А. В другом варианте исполнения, антитело по изобретению или его антигенсвязывающий фрагмент содержат все CDR варианта 2 антитела FI6, указанные в Таблице 2, и нейтрализуют инфекцию вируса гриппа А. В еще одном варианте исполнения, антитело по изобретению или его антигенсвязывающий фрагмент содержат все CDR варианта 1 антитела FI28, указанные в Таблице 2, и нейтрализуют инфекцию вируса гриппа А. В еще одном варианте исполнения, антитело по изобретению или его антигенсвязывающий фрагмент содержат все CDR варианта 2 антитела FI28, указанные в Таблице 2, и нейтрализуют инфекцию вируса гриппа А.
Типичные примеры антител по изобретению включают, без ограничений, вариант 1 FI6, вариант 2 FI6, вариант 1 FI28 или вариант 2 FI28.
Изобретение далее предусматривает антитело, или его фрагмент, которые связываются с тем же эпитопом, что и антитело по изобретению, или антитело, конкурирующее с антителом или антигенсвязывающим фрагментом по изобретению.
Антитела по изобретению также включают гибридные молекулы антитела, содержащие один или несколько CDR из антитела по изобретению и один или несколько CDR из другого антитела к этому же эпитопу. В одном варианте исполнения, такие гибридные антитела содержат три CDR из антитела по изобретению и три CDR из другого антитела к этому же эпитопу. Типичные примеры гибридных антител включают i) три CDR легкой цепи из антитела по изобретению и три CDR тяжелой цепи из другого антитела к этому же эпитопу, или ii) три CDR тяжелой цепи из антитела по изобретению и три CDR легкой цепи из другого антитела к этому же эпитопу.
Варианты антител также включены в объем изобретения. Таким образом, варианты последовательностей, указанные в заявке, также включены в объем изобретения. Такие варианты включают природные варианты, образующиеся в результате соматической мутации in vivo при иммунном ответе или in vitro при культивировании иммортализованных клонов В-клеток. Альтернативно, варианты могут возникать вследствие вырожденности генетического кода, как было указано выше, или могут продуцироваться в результате ошибок транскрипции или трансляции.
Дополнительные варианты последовательностей антител, обладающих повышенной аффинностью и/или активностью, могут быть получены с использованием способов, известных специалистам, и включены в объем изобретения. Например, замещения аминокислот могут быть использованы для получения антител с дополнительно повышенной аффинностью. Альтернативно, оптимизация кодонов нуклеотидной последовательности может быть использована для повышения эффективности трансляции в системах экспрессии для продуцирования антитела. Кроме того, полинуклеотиды, содержащие последовательности, оптимизированные по специфичности или нейтрализующей активности антитела путем применения способа напрвленной эволюции к любой из последовательностей нуклеиновой кислоты по изобретению, также входят в объем изобретения.
В одном варианте исполнения, последовательности вариантов антител могут иметь 70% или больше (т.е. 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или больше) идентичности аминокислотной последовательности с последовательностями, указанными в заявке. В некоторых вариантах исполнения, такая идентичность последовательностей рассчитывается по отношению к полной длине референсной последовательности (т.е. последовательности, указанной в заявке). В некоторых дополнительных вариантах исполнения, процент идентичности, указываемый тут, рассчитывается с помощью BLAST версии 2.1.3 с использованием параметров по умолчанию, определенных NCBI (National Center for Biotechnology Information; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) [матрица Blosum 62; штраф за открытие пробела=11 и штраф за продолжение пробела=1].
В другом аспекте, изобретение также включает последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие часть или все легкие и тяжелые цепи и CDR антител по настоящему изобретению. Предусматриваются последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие часть или все легкие и тяжелые цепи и CDR типичных примеров антител по изобретению. В Таблице 1 приведены номера SEQ ID для последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих вариабельные участки тяжелой цепи и легкой цепи типичных примеров антител по изобретению. Например, предусматриваемые тут последовательности нуклеиновой кислоты включают SEQ ID NO:15 (кодирующую вариабельный участок тяжелой цепи варианта 1 FI6), SEQ ID NO:34 (кодирующую вариабельный участок тяжелой цепи варианта 2 FI6), SEQ ID NO:16 (кодирующую вариабельный участок легкой цепи варианта 1 FI6 и варианта 2 FI6), SEQ ID NO:31 (кодирующую вариабельный участок тяжелой цепи варианта 1 FI28); SEQ ID NO:36 (кодирующую вариабельный участок тяжелой цепи варианта 2 FI28) и SEQ ID NO:32 (кодирующую вариабельный участок легкой цепи варианта 1 и варианта 2 FI28).
В Таблице 3 приведены номера SEQ ID для последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих CDR типичных примеров антител по изобретению. Вследствие избыточности генетического кода, будут существовать варианты таких последовательностей, которые кодируют те же самые аминокислотные последовательности.
| Таблице 3. | ||||||
| Номера SEQ ID полинуклеотидов CDR типичных примеров антител, нейтрализующих вирус гриппа А | ||||||
| SEQ ID NO полинуклеотидов CDR | ||||||
| CDRH1 | CDRH2 | CDRH3 | CDRL1 | CDRL2 | CDRL3 | |
| Вариант 1 FI6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
| Вариант 2 FI6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
| Вариант 1 FI28 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 |
| Вариант 2 FI28 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 |
В одном варианте исполнения, последовательности нуклеиновой кислоты в соответствии с изобретением включают последовательности нуклеиновой кислоты, имеющие по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, или по меньшей мере 99% идентичности с нуклеиновой кислотой, кодирующей тяжелую или легкую цепь антитела по изобретению. В другом варианте исполнения, последовательность нуклеиновой кислоты по изобретению имеет последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую или легкую цепь CDR антитела по изобретению. Например, последовательность нуклеиновой кислоты в соответствии с изобретением предусматривает последовательность, являющуюся по меньшей мере на 75% идентичной с последовательностями нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:7-12, 15, 16, 34, 23-28, 31, 32 или 36.
В объем изобретения дополнительно включены векторы, например, векторы экспрессии, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты в соответствии с изобретением. Клетки, трансформированные такими векторами, также включены в объем изобретения. Примеры таких клеток включают, без ограничений, эукариотические клетки, например, дрожжевые клетки, животные клетки или растительные клетки. В одном варианте исполнения, клетки принадлежат млекопитающему, например, клетки человека, СНО, HEK293T, PER.C6, NS0, миеломы или гибридомы.
Изобретение также относится к моноклональным антителам, которые связываются с эпитопом, способным связывать антитела по изобретению, включая, без ограничений, моноклональное антитело, выбранное из группы, состоящей из варианта 1 FI6, варианта 2 FI6, варианта 1 FI28 и варианта 2 FI28.
Моноклональные и рекомбинантные антитела являются особенно пригодными для идентификации и очистки индивидуальных полипептидов или других антигенов, против которых они направлены. Антитела по изобретению дополнительно полезны тем, что они могут быть использованы в качестве реагентов для иммунологических анализов, радиоиммунологических анализов (RIA) или твердофазовых иммуноферментных анализов (ELISA). Для такого применения, антитела могут быть мечеными аналитически детектируемым реагентом, таким как радиоизотоп, флуоресцентная молекула или фермент. Антитела также могут быть использованы для молекулярной идентификации и характеризации (картирования эпитопов) антигенов.
Антитела по изобретению могут быть сцеплены с лекарственным препаратом для доставки к месту лечения или сцеплены с детектируемой меткой для облегчения визуализации участка, содержащего представляющие интерес клетки, такие как клетки, инфицированные вирусом гриппа А. Методы сцепления антител с лекарственными средствами и детектируемыми метками хорошо известны специалистам, так же как и методы визуализации с использованием детектируемых меток. Меченые антитела могут быть использованы для проведения различных анализов с использованием разнообразных меток. Детектированию образования комплекса антитело-антиген между антителом по изобретению и представляющим интерес эпитопом (эпитоп вируса гриппа А) может способствовать присоединение детектируемого вещества к антителу. Пригодные средства детектирования включают использование меток, таких как радионуклиды, ферменты, коферменты, люминофоры, хемилюминофоры, хромогены, субстраты или кофакторы ферментов, ингибиторы ферментов, комплексы простетических групп, свободные радикалы, частицы, красители и т.п. Примеры пригодных ферментов включают пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу, β-галактозидазу или ацетилхолинэстеразу; примеры пригодных комплексов простетических групп включают стрептавидин/биотин и авидин/биотин; примеры пригодных флуоресцентных материалов включают умбеллиферон, флуоресцеин, флуоресцеинизотиоцианат, родамин, дихлортриазиниламинфлуоресцеин, дансил хлорид или фикоэритрин; примером люминесцентного материала является люминол; примеры биолюминесцентных материалов включают люциферазу, люциферин и экворин; и примеры пригодных радиоактивных материалов включают 125I, 131I, 35S или 3H. Такие меченые реагенты могут быть использованы в различных хорошо известных анализах, таких как радиоиммунологические анализы, ферментные иммунологические анализы, например, ELISA, флуоресцентные иммунологические анализы и т.п. (см., например, US 3766162; US 3791932; US 3817837; и US 4233402).
Антитело по изобретению может быть конъюгировано с терапевтическим фрагментом, таким как цитотоксин, терапевтический агент или ион радиоактивного металла или радиоизотоп. Примеры радиоизотопов включают, без ограничений, I-131, I-123, I-125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212, Bi-213, Pd-109, Tc-99, In-111 и т.п. Такие конъюгаты антител могут быть использованы для модификации определенной биологической реакции; фрагмент лекарственного средства не должен пониматься как ограниченный классическими химическими терапевтическими агентами. Например, фрагмент лекарственного средства может быть белком или полипептидом, обладающим желательной биологической активностью. Такие белки могут включать, например, токсин, такой как абрин, рицин А, экзотоксин Pseudomonas или дифтерийный токсин.
Методики конъюгирования таких терапевтических фрагментов с антителами хорошо известны. См., например, Arnon et al. (1985) "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy," в Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ed. Reisfeld et al. (Alan R. Liss, Inc.), pp.243-256; ed. Hellstrom et al. (1987) "Antibodies for Drug Delivery," в Controlled Drug Delivery, ed. Robinson et al. (2d ed; Marcel Dekker, Inc.), pp.623-653; Thorpe (1985) "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review," в Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ed. Pinchera et al. pp.475-506 (Editrice Kurtis, Milano, Italy, 1985); "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy," в Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ed. Baldwin et al. (Academic Press, New York, 1985), pp.303-316; и Thorpe etal. (1982) Immunol. Rev. 62:119-158.
Альтернативно, антитело или фрагмент антитела могут быть конъюгированы со вторым антителом или фрагментом антитела с образованием гетероконъюгата антител, как описано в US 4676980. В дополнение к этому, могут быть использованы линкеры между метками и антителами по изобретению (например, US 4831175). Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут быть непосредственно мечеными радиоактивными йодом, индием, иттрием или другими радиоактивными частицами, известными специалистам (например, US 5595721). Лечение может состоять из комбинации лечения конъюгированными и неконъюгированными антителами, которые вводятся одновременно или последовательно (например, WO00/52031; WO00/52473).
Антитела по изобретению также могут быть связаны с твердой подложкой. Дополнительно, антитела по изобретению или функциональные фрагменты таких антител могут быть химически модифицированы путем образования ковалентных связей с полимером, например, для увеличения их периода полувыведения из циркуляции. Примеры полимеров и способов их присоединения к пептидам приведены в документах US 4766106; US 4179337; US 4495285 и US 4609546. В некоторых вариантах исполнения, полимеры могут быть выбраны из полиоксиэтилированных полиолов и полиоксиэтиленгликоля (ПЭГ). ПЭГ является растворимым в воде при комнатной температуре и имеет общую формулу: R(O-CH2-CH2)nO-R, где R может обозначать водород или защитную группу, такую как алкильная или алканольная группа. В одном варианте исполнения, защитная группа может содержать от 1 до 8 атомов углерода. В дополнительном варианте исполнения, защитная группа является метилом. Символ n обозначает положительное целое число. В одном варианте исполнения n имеет значение в интервале от 1 до 1000. В другом варианте исполнения n имеет значение в интервале от 2 до 500. В одном варианте исполнения ПЭГ имеет средний молекулярный вес от 1000 до 40000. В дополнительном варианте исполнения, ПЭГ имеет молекулярный вес от 2000 до 20000. В еще одном варианте исполнения ПЭГ имеет молекулярный вес от 3000 до 12000. В одном варианте исполнения ПЭГ содержит по меньшей мере одну гидроксильную группу. В другом варианте исполнения ПЭГ содержит терминальную гидроксильную группу. В еще одном варианте исполнения она представляет собой терминальную гидроксильную группу, которая активируется для реакции со свободной аминогруппой ингибитора. Однако, следует понимать, что тип и количество реакционноспособных групп могут меняться для получения ковалентно конъюгированных ПЭГ/антитело по настоящему изобретению.
Водорастворимые полиоксиэтилированные полиолы также являются пригодными по настоящему изобретению. Они включают полиоксиэтилированный сорбит, полиоксиэтилированную глюкозу, полиоксиэтилированный глицерин (POG) и т.п. В одном варианте исполнения, используется POG. Без ограничений какой-либо теорией, укажем, что, поскольку глицериновая основная цепь полиоксиэтилированного глицерина является такой же самой цепью, которая встречается в природных условиях, например, у животных и людей, в моно-, ди- и триглицеридах, такая разветвленность не обязательно будет восприниматься организмом как чужеродный агент. В некоторых вариантах исполнения POG имеет молекулярный вес в таком же интервале значений, что и ПЭГ. Другой системой доставки лекарственного средства, которая может быть использована для увеличения периода полувыведения из циркуляции, являются липосомы. Методы приготовления систем доставки на основе липосом описаны в Gabizon et al. (1982), Cafiso (1981) и Szoka (1980). Другие системы доставки лекарственных средств известны специалистам и описаны, например, в Poznansky et al. (1980) и Poznansky(1984).
Антитела по изобретению могут быть обеспечены в очищенной форме. Типично, антитело будет входить в состав композиций, которые по существу не содержат других полипептидов, например, в которых менее 90% (мас.), обычно, менее 60%, и чаще всего, менее 50% композиции состоит из других полипептидов.
Антитела по изобретению могут быть иммуногенными в не принадлежащих человеку (или гетерологичных) организмах-хозяевах, например, у мышей. В частности, антитела могут иметь идиотипическую детерминанту (idiotope), иммуногенную в организмах хозяев, кроме человека, но не в организме человека-хозяина. Антитела по изобретению для использования у людей включают антитела, которые не могут быть легко выделены из организмов хозяев, таких как мыши, козы, кролики, крысы, млекопитающие кроме приматов и т.д., и обычно не могут быть получены путем гуманизации или у мышей с ксенотрансплантатами (xeno-mice).
Антитела по изобретению могут принадлежать к любому изотипу (например, IgA, IgG, IgM т.е., α-, γ- или µ-тяжелая цепь), но обычно будут представлять собой IgG. В рамках изотипа IgG, антитела могут принадлежать к подклассам IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Антитела по изобретению могут иметь κ- или λ-легкую цепь.
Продуцирование антител
Антитела в соответствии с изобретением могут быть получены любым способом, известным специалистам. Например, общая методология получения моноклональных антител с использованием гибридомной технологии хорошо известна (Kohler, G. and Milstein, С,. 1975; Kozbar et al. 1983). В одном варианте исполнения, используется альтернативный метод иммортализации EBV, описанный в WO2004/076677.
Используя метод, описанный в WO2004/076677, В-клетки, продуцирующие антитело по изобретению, могут быть трансформированы с помощью EBV в присутствии поликлонального активатора В-клеток. Трансформация с помощью EBV является стандартной методикой и может быть легко адаптирована с включением поликлональных активаторов В-клеток.
Дополнительные стимуляторы клеточного роста и дифференцировки могут быть необязательно добавлены на стадии трансформации для дополнительного увеличения эффективности. Такие стимуляторы могут быть цитокинами, такими как IL-2 и IL-15. В одном аспекте, IL-2 добавляют на стадии иммортализации для дополнительного увеличения эффективности иммортализации, но его использование не является существенным. Иммортализованные В-клетки, полученные с использованием этих методов, могут затем культивироваться с использованием методов, известных специалистам, и из них выделяются антитела.
При использовании способа, описанного в патентной заявке UK 0819376.5, отдельные клетки плазмы могут культивироваться на культуральных микропланшетах. Антитела могут быть выделены из культур отдельных клеток плазмы. Кроме того, из культур отдельных клеток плазмы может быть экстрагирована РНК и может быть проведена ПЦР отдельных клеток с использованием известных специалистам способов. Участки VH и VL антител могут быть амплифицированы методом ОТ-ПЦР, секвенированы и клонированы в вектор экспрессии, который затем трансфицируют в клетки HEK293T или другие клетки-хозяева. Клонирование нуклеиновой кислоты в векторы экспрессии, трансфекция клеток-хозяев, культивирование трансфицированных клеток-хозяев и выделение продуцируемых антител могут быть выполнены любыми способами, известными квалифицированному специалисту.
Моноклональные антитела могут быть дополнительно очищены, при необходимости, с использованием фильтрации, центрифугирования и различных хроматографических методов, таких как ВЭЖХ или аффинная хроматография. Методики очистки антител, например, моноклональных антител, включая методики получения антител для фармацевтического применения, хорошо известны специалистам.
Фрагменты антител по изобретению могут быть получены из антител методами, которые включают гидролиз ферментами, такими как пепсин или папаин, и/или путем расщепления дисульфидных связей химическим восстановлением. Альтернативно, фрагменты антител могут быть получены путем клонирования и экспрессии части последовательностей тяжелых или легких цепей. "Фрагменты" антител могут включать фрагменты Fab, Fab', F(ab')2 и Fv. Изобретение также охватывает одноцепочечные фрагменты Fv (scFv), выделенные из тяжелых и легких цепей моноклонального антитела по изобретению, например, изобретение включает scFv, содержащий CDR антитела по изобретению. Также включены мономеры и димеры тяжелых или легких цепей, однодоменные антитела из фрагмента тяжелой цепи, однодоменные антитела из фрагмента легкой цепи, а также одноцепочечные антитела, например, одноцепочечный Fv, в котором вариабельные домены тяжелой и легкой цепей соединены пептидным линкером.
Фрагменты антител по изобретению могут придавать способность к моновалентным или мультивалентным взаимодействиям и входить в состав различных структур, как описано выше. Например, могут быть синтезированы молекулы scFv для создания тривалентного "триатела" (triabody) или тетравалентного "тетратела" (tetrabody). Молекулы scFv могут включать домен из области Fc, с образованием в результате бивалентных минител. Кроме того, последовательности по изобретению могут быть компонентом мультиспецифических молекул, в которых последовательности по изобретению нацелены на эпитопы по изобретению, и другие участки молекулы связываются с другими мишенями. Типичные примеры молекул включают, без ограничений, биспецифический Fab2, триспецифический Fab3, биспецифический scFv и диатела (Holligerand Hudson, 2005, Nature Biotechnology 9:1126-1136).
Стандартные методики молекулярной биологии могут быть использованы для получения ДНК последовательностей, кодирующих антитела или фрагменты антител по настоящему изобретению. Желательные ДНК последовательности могут быть синтезированы полностью или частично с использованием методик олигонуклеотидного синтеза. При необходимости, могут быть использованы методики сайт-направленного мутагенеза и полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Любая пригодная система клетка-хозяин/вектор может быть использована для экспрессии ДНК последовательностей, кодирующих молекулы антител по настоящему изобретению или их фрагменты. Бактериальные, например, Е.coli, и другие микробиологические системы могут быть использованы, частично, для экспрессии фрагментов антител, таких как фрагменты Fab и F(ab')2 и, особенно, фрагменты Fv и одноцепочечные фрагменты антител, например, одноцепочечные Fv. Системы экспрессии на основе эукариотических, например, принадлежащих млекопитающим, клеток-хозяев могут быть использованы для продуцирования более крупных молекул антител, включая полные молекулы антител. Пригодные клетки-хозяева млекопитающих включают клетки СНО, HEK293T, PER.C6, NS0, миеломы или гибридомы.
Настоящее изобретение также предусматривает способ продуцирования молекулы антитела в соответствии с настоящим изобретением, включающий культивацию клетки-хозяина, содержащей вектор, кодирующий нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, в условиях, пригодных для обеспечения экспрессии белка из ДНК, кодирующей молекулу антитела по настоящему изобретению, и выделение молекулы антитела.
Молекула антитела может содержать только полипептид тяжелой или легкой цепи, и в этом случае для трансфекции клеток-хозяев должна быть использована последовательность, кодирующая только полипептид тяжелой цепи или легкой цепи. Для получения продуктов, содержащих как тяжелые, так и легкие цепи, клеточная линия может быть трансфицирована двумя векторами, причем первый вектор кодирует легкую цепь полипептида и второй вектор кодирует тяжелую цепь полипептида. Альтернативно, может быть использован один вектор, содержащий последовательности, кодирующие полипептиды легкой цепи и тяжелой цепи.
Альтернативно, антитела в соответствии с изобретением могут быть получены путем i) экспрессии последовательности нуклеиновой кислоты в соответствии с изобретением в клетке-хозяине, и ii) выделения экспрессируемого продукта антитела. Дополнительно, способ может включать iii) очистку антитела.
Скрининг трансформированных В-клеток, культивируемые отдельные клетки плазмы и трансфицированные клетки HEK293T
Трансформированные В клетки и культивируемые отдельные клетки плазмы могут быть подвергнуты скринингу для определения клеток, продуцирующих антитела с желательной специфичностью или функцией.
Стадия скрининга может быть проведена методом иммунологического анализа, например, ELISA, окрашиванием тканей или клеток (включая трансфицированные клетки), методом анализа нейтрализации или одним из ряда других известных специалистам методов идентификации желательной специфичности или функции. Анализ может осуществлять селекцию на основании простого распознавания одного или нескольких антигенов, или может осуществлять селекцию на основании дополнительной желательной функции, например, отбирать нейтрализующие антитела, а не просто антигенсвязывающие антитела, отбирать антитела, которые могут изменять характеристики клеток-мишеней, такие как их сигнальные каскады, их форму, их скорость роста, их способность влиять на другие клетки, их реакцию на воздействие других клеток или других реагентов или на изменение условий, их состояние дифференцировки и т.д.
Индивидуальные трансформированные клоны В-клеток могут затем быть получены из культур позитивных трансформированных В-клеток. Стадия клонирования для выделения индивидуальных клонов из смеси позитивных клеток может быть проведена с использованием предельного разбавления, микроманипуляции, осаждения отдельных клеток путем сортировки клеток или другим способом, известным специалистам.
Нуклеиновая кислота из культивируемых отдельных клеток плазмы может быть выделена, клонирована и экспрессирована в клетках HEK293T или других клетках-хозяевах с использованием способов, известных специалистам.
Иммортализованные клоны В-клеток или трансфицированных клеток HEK293T по изобретению могут быть использованы различными способами, например, в качестве источника моноклональных антител, в качестве источника нуклеиновой кислоты (ДНК или мРНК), кодирующей моноклональное антитело, представляющее интерес для исследований, и т.д.
Изобретение предусматривает композицию, содержащую иммортализованные В-клетки памяти или трансфицированные клетки-хозяева, продуцирующие антитела, которые нейтрализуют по меньшей мере два разных субтипа вируса гриппа А, выбранных из субтипов группы 1 и группы 2.
Эпитопы
Как было указано выше, антитела по изобретению могут быть использованы для картирования эпитопов, с которыми они связываются. Авторы изобретения обнаружили, что антитела, нейтрализующие инфекцию вируса гриппа А, направлены против эпитопов, присутствующих на ГА. В одном варианте исполнения, антитела направлены на один или несколько эпитопов в области стебля ГА, являющихся консервативными для одного или нескольких субтипов вируса гриппа А группы 1 и группы 2. Эпитопы, с которыми связываются антитела по изобретению, могут быть линейными (непрерывными) или конформационными (прерывистыми). В одном варианте исполнения, антитела и фрагменты антител по изобретению связываются с участком полипептида, содержащим SEQ ID NO:37, 38, 39 или 40, как описано тут.
Эпитопы, распознаваемые антителами по настоящему изобретению, могут использоваться в различных целях. Эпитоп и его мимотопы в очищенной или синтетической форме могут быть использованы для усиления иммунных ответов (т.е., в качестве вакцины или для продуцирования антител для другого применения) или для скрининга сывороток на антитела, иммунореактивные по отношению к эпитопу или его мимотопам. В одном варианте исполнения, такой эпитоп или мимотоп, или антиген, содержащий такой эпитоп или мимотоп, могут быть использованы в качестве вакцины для усиления иммунного ответа. Антитела и фрагменты антител по изобретению также могут быть использованы в методах контроля качества вакцины. В частности, антитела могут быть использованы для проверки того, чтобы антиген в вакцине содержал точный иммуногенный эпитоп в правильной конформации.
Эпитоп может также использоваться для скрининга лигандов, которые связываются с указанным эпитопом. Такие лиганды, включают, без ограничений, антитела; включая полученные от верблюдов, акул и других видов животных, фрагменты антител, пептиды, продукты технологии фагового дисплея, аптамеры, аднектины или фрагменты других вирусных или клеточных белков, которые могут блокировать эпитоп и, таким образом, предотвращать инфекцию. Такие лиганды включены в объем изобретения.
Рекомбинантная экспрессия
Иммортализованные клоны В-клеток или культивируемые клетки плазмы по изобретению также могут быть использованы в качестве источника нуклеиновой кислоты для клонирования генов антител для последующей рекомбинантной экспрессии. Экспрессия из рекомбинантных источников чаще используется в фармацевтических целях, чем экспрессия из В-клеток или гибридом, например, по причинам стабильности, воспроизводимости, простоты культивации и т.д.
Таким образом, изобретение предусматривает способ получения рекомбинантной клетки, включающий стадии: (i) получения одной или нескольких нуклеиновых кислот (например, мРНК тяжелой и/или легкой цепи) из клона В-клеток или культивируемых отдельных клеток плазмы, которые кодируют представляющее интерес антитело; (ii) вставки нуклеиновой кислоты в вектор экспрессии, и (iii) трансфекции вектора в клетку-хозяина для обеспечения экспрессии представляющего интерес антитела в данной клетке-хозяине.
Аналогично, изобретение предусматривает способ получения рекомбинантной клетки, включающий стадии: (i) секвенирования нуклеиновой кислоты (кислот) из клона В-клеток или культивируемых отдельных клеток плазмы, которые кодируют антитело, представляющее интерес; и (ii) использование информации о последовательности со стадии (i) для получения нуклеиновой кислоты (кислот) для вставки в клетку-хозяина с целью обеспечения экспрессии антитела, представляющего интерес, в данной клетке-хозяине. Нуклеиновая кислота может, но не обязательно, быть подвергнута манипуляциям между стадиями (i) и (ii) для введения сайтов рестрикции, для изменения частоты использования кодонов, и/или для оптимизации регуляторных последовательностей транскрипции и/или трансляции.
Изобретение также предусматривает способ получения трансфицированной клетки-хозяина, включающий стадию трансфекции клетки-хозяина одной или несколькими нуклеиновыми кислотами, кодирующими представляющее интерес антитело, где нуклеиновые кислоты представляют собой нуклеиновые кислоты, полученные из иммортализованного клона В-клеток или культивируемых отдельных клеток плазмы по изобретению. Таким образом, процедуры получения сначала нуклеиновой кислоты (кислот) и затем ее использования для трансфекции клетки-хозяина могут производиться в разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
Такие рекомбинантные клетки по изобретению могут быть затем использованы для экспрессии и культивации. Они являются особенно пригодными для экспрессии антител в крупномасштабном фармацевтическом производстве. Они также могут быть использованы в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции. Могут быть использованы любые пригодные методики культивации, включая, без ограничений, статическую культуру, культуру во вращающемся флаконе, асцитическую жидкость, картриджи биореактора из пустотелого волокна, модульные мини-ферментеры, емкость с перемешиванием, культуру на микроносителях, перфузию через керамическую сердцевину и т.д.
Способы получения и секвенирования генов иммуноглобулина из В-клеток или клеток плазмы хорошо известны специалистам (например, см. Главу 4 в Kuby Immunology, 4th edition, 2000).
Трансфицированная клетка-хозяин может быть эукариотической клеткой, включая дрожжевые и животные клетки, особенно, клетки млекопитающих (например, клетки СНО, клетки NS0, клетки человека, такие как клетки PER.C6 (Jones et al 2003) или HKB-11 (Cho et al. 2001; Cho et al. 2003), клетки миеломы (US 5807715; US 6300104 и т.д.)), а также растительные клетки. Предпочтительные хозяева экспрессии могут гликозилировать антитело по изобретению, в частности, углеводными структурами, которые сами по себе не являются иммуногенными для людей. В одном варианте исполнения, трансфицировання клетка-хозяин может быть способной к росту в бессывороточной среде. В дополнительном варианте исполнения, трансфицированная клетка-хозяин может быть способной к росту в культуре, не содержащей продуктов животного происхождения. Трансфицированная клетка-хозяин также может культивироваться для получения клеточной линии.
Изобретение предусматривает способ получения одной или нескольких молекул нуклеиновых кислот (например, генов тяжелой и легкой цепей), кодирующих представляющее интерес антитело, включающий стадии: (i) получения иммортализованного клона В-клеток или культивирования клетки плазмы в соответствии с изобретением; (ii) получения из клона В-клеток или культивируемой отдельной клетки плазмы нуклеиновой кислоты, которая кодирует представляющее интерес антитело. Изобретение также предусматривает способ получения последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющее интерес антитело, включающий стадии: (i) получения иммортализованного клона В-клеток или культивирования отдельной клетки плазмы в соответствии с изобретением; (ii) секвенирования из клона В-клеток или культивируемой клетки плазмы нуклеиновой кислоты, которая кодирует представляющее интерес антитело.
Изобретение также предусматривает способ получения молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты, которые кодируют представляющее интерес антитело, включающий стадию получения нуклеиновой кислоты, получаемой из клона трансформированных В-клеток или культивируемой клетки плазмы по изобретению. Таким образом, процедуры получения сначала клона В-клеток или культивируемой клетки плазмы и затем получения нуклеиновой кислоты (кислот) из клона В-клеток или культивируемой клетки плазмы могут производиться в совершенно разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
Изобретение предусматривает способ получения антитела (например, для фармацевтического применения), включающий стадии: (i) получения и/или секвенирования одной или нескольких нуклеиновых кислот (например, генов тяжелой и легкой цепей) из выбранного клона В-клеток или культивируемой клетки плазмы, экспрессирующих представляющее интерес антитело; (ii) введения нуклеиновой кислоты (кислот) в, или использования последовательности (последовательностей) нуклеиновой кислоты (кислот), для получения вектора экспрессии; (iii) трансфекции клетки-хозяина, которая может экспрессировать представляющее интерес антитело; (iv) культивации или субкультивации трансфицированной клетки-хозяина в условиях, при которых протекает экспрессия представляющего интерес антитела; и, необязательно, (v) очистки антитела, представляющего интерес.
Изобретение также предусматривает способ получения антитела, включающий стадии: культивации или субкультивации популяции трансфицированных клеток-хозяев в условиях, при которых протекает экспрессия представляющего интерес антитела и, необязательно, очистки антитела, представляющего интерес, в котором указанная популяция трансфицированных клеток-хозяев была получена путем (i) обеспечения нуклеиновой кислоты (кислот), кодирующих выбранное представляющее интерес антитело, продуцируемое клоном В-клеток или культивируемой клеткой плазмы, полученными, как описано выше, (ii) вставки нуклеиновой кислоты (кислот) в вектор экспрессии, (iii) трансфекции вектора в клетку-хозяина, которая может экспрессировать представляющее интерес антитело, и (iv) культивации или субкультивации трансфицированной клетки-хозяина, содержащей вставленные нуклеиновые кислоты для получения представляющего интерес антитела. Таким образом, процедуры получения сначала рекомбинантной клетки-хозяина и затем ее культивации с целью экспрессии антитела могут производиться в совершенно разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
Фармацевтические композиции
Изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую антитела и/или фрагменты антител по изобретению и/или нуклеиновую кислоту, кодирующую такие антитела, и/или эпитопы, распознаваемые антителами по изобретению. Фармацевтическая композиция может также содержать фармацевтически приемлемый носитель для обеспечения возможности введения. Носитель не должен сам по себе индуцировать продуцирования антител, вредных для особы, принимающей композицию, и не должен быть токсичным. Пригодными носителями могут быть крупные, медленно метаболизирующиеся макромолекулы, такие как белки, полипептиды, липосомы, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот и инактивированные вирусные частицы.
Могут быть использованы фармацевтически приемлемые соли, например, соли минеральных кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты и сульфаты, или соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты и бензоаты.
Фармацевтически приемлемые носители в терапевтических композициях могут дополнительно содержать жидкости, такие как вода, солевой раствор, глицерин и этанол. Дополнительно, в таких композициях могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как смачивающие агенты или эмульгаторы, или буферные вещества для регулирования рН. Такие носители позволяют изготавливать фармацевтические композиции в виде таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, дисперсий и суспензий, для приема внутрь пациентом.
В пределах объема изобретения, формы для введения могут включать формы, пригодные для парентерального введения, например, путем инъекции или инфузии, например, болюсной инъекции или непрерывной инфузии. В тех случаях, когда продукт предназначен для инъекции или инфузии, он может иметь форму суспензии, раствора или эмульсии в масляном или водном носителе, и может содержать агенты для приготовления композиций, такие как суспендирующие агенты, консерванты, стабилизаторы и/или диспергенты. Альтернативно, молекула антитела может находиться в сухой форме, предназначенной для восстановления перед применением соответствующей стерильной жидкостью.
После составления рецептуры, композиции по изобретению могут быть введены непосредственно субъекту. В одном варианте исполнения, композиции адаптированы для введения людям.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена с использованием любого числа путей, включая, без ограничений, пероральный, внутривенный, внутримышечный, интраартериальный, интрамедуллярный, интраперитонеальный, интратекальный, интравентрикулярный, трансдермальный, чрескожный, местный, подкожный, интраназальный, энтеральный, сублингвальный, интравагинальный или ректальный пути. Продукты в аэрозольных упаковках (hyposprays) также могут быть использованы для введения фармацевтических композиций по изобретению. Типично, терапевтические композиции могут быть приготовлены в виде препаратов для инъекций, таких как жидкие растворы или суспензии. Также могут быть приготовлены твердые формы, пригодные для растворения или суспендирования в жидких носителях перед инъекцией.
Прямая доставка композиций будет обычно осуществляться путем инъекции, подкожно, интраперитонеально, внутривенно или внутримышечно, или путем доставки в интерстициальное пространство ткани. Композиции также могут быть введены на участки поражения. Дозировка курса лечения может предусматривать введение однократной дозы или введение кратных доз по графику. Известные фармацевтические препараты на основе антител позволяют получить общее представление о частоте введения, например, должен ли фармацевтический препарат вводиться ежедневно, еженедельно, ежемесячно и т.д. Частота и дозировка могут также зависеть от тяжести симптомов.
Композиции по изобретению могут быть приготовлены в различных формах. Например, композиции могут быть приготовлены в виде препаратов для инъекций, таких как жидкие растворы или суспензии. Также могут быть изготовлены твердые формы, пригодные для растворения или суспендирования в жидких носителях перед инъекцией (например, лиофилизированные композиции, такие как Synagis™ и Herceptin™, предназначенные для восстановления стерильной водой, содержащей консервант). Композиция может быть приготовлена для местного введения, например, в виде жидкой мази, крема или порошка. Композиция может быть приготовлена для перорального введения, например, в виде таблетки или капсулы, в виде спрея или сиропа (необязательно, с вкусовыми добавками). Композиция может быть приготовлена для легочного введения, например, в виде ингалятора, с использованием тонкодисперсного порошка или спрея. Композиция может быть изготовлена в виде суппозитория или вагинального суппозитория. Композиция может быть приготовлена для назального, ушного или глазного введения, например, в виде капель. Композиция может иметь форму набора, составленного таким образом, чтобы объединенная композиция восстанавливалась непосредственно перед введением пациенту. Например, лиофилизированное антитело может быть обеспечено в виде набора со стерильной водой или стерильным буфером.
Следует понимать, что активным ингредиентом в композиции будет молекула антитела, фрагмент антитела или его варианты и производные. Как таковые, они будут подвергаться деградации в желудочно-кишечном тракте. Таким образом, если композиция должна вводиться путем, проходящим через желудочно-кишечный тракт, композиция должна будет содержать агенты, которые защищают антитело от деградации, но высвобождают антитело после его всасывания из желудочно-кишечного тракта.
Детальное описание фармацевтически приемлемых носителей приведено в Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, ISBN: 0683306472.
Фармацевтические композиции по изобретению обычно имеют значение рН от 5,5 до 8,5, в некоторых вариантах исполнения оно может находиться в интервале значений от 6 до 8 и, в дополнительном варианте исполнения, быть равным примерно 7. Величина рН может поддерживаться с помощью буфера. Композиция может быть стерильной и/или апирогенной. Композиция может быть изотонической для людей. В одном варианте исполнения, фармацевтические композиции по изобретению поставляются в герметично упакованных контейнерах.
Фармацевтические композиции будут содержать эффективное количество одного или нескольких антител по изобретению и/или полипептида, содержащего эпитоп, который связывает антитело по изобретению, т.е., количество, являющееся достаточным для лечения, облегчения или предотвращения требуемого заболевания или состояния, или для проявления детектируемого терапевтического эффекта. Терапевтические эффекты также включают ослабление физических симптомов. Точная величина эффективного количества для любого конкретного субъекта будет зависеть от его размеров и состояния здоровья, характера и степени проявления состояния, и терапевтического средства или комбинации терапевтических средств, выбранных для введения. Эффективное количество в конкретной ситуации определяется обычным экспериментированием и на усмотрение клинического врача. В целях настоящего изобретения, эффективная доза будет обычно составлять от примерно 0,01 мг/кг до примерно 50 мг/кг, или от примерно 0,05 мг/кг до примерно 10 мг/кг, композиций по настоящему изобретению для индивидуума, которому производится введение. Известные фармацевтические средства на основе антител позволяют получить об этом общее представление, например, Herceptin™ вводится путем внутривенной инфузии раствора с концентрацией 21 мг/мл, при начальной ударной дозе 4 мг/кг веса тела и еженедельной поддерживающей дозе 2 мг/кг веса тела; Rituxan™ вводится еженедельно по 375 мг/м2; и т.д.
В одном варианте исполнения, композиции могут содержать более одного (например, 2, 3, и т.д.) антитела по изобретению для обеспечения аддитивного или синергичного терапевтического эффекта. В другом варианте исполнения, композиция может содержать одно или несколько (например, 2, 3, и т.д.) антител по изобретению и одно или несколько (например, 2, 3, 4, 5 и т.д.) дополнительных антител против вируса гриппа А. Например, одно антитело может связываться с эпитопом ГА, а другое может связываться с другим эпитопом ГА, или с эпитопом, расположенным на нейраминидазе и/или белках матрикса. Кроме того, в объем изобретения входит введение антител по изобретению вместе с вакциной против гриппа А или с антителами, обладающими специфичостями, отличными от вируса гриппа А. Антитела по изобретению могут быть введены в комбинации/одновременно или в разное время, с вакциной против гриппа или с антителами, обладающими специфичостями, отличными от вируса гриппа А.
В другом варианте исполнения, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую два или больше антител, в которой первое антитело представляет собой антитело по изобретению и является специфическим по отношению к эпитопу ГА, и второе антитело является специфическим по отношению к эпитопу нейраминидазы, второму эпитопу ГА и/или эпитопу матрикса. Например, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую два или больше антител, в которой первое антитело является специфическим по отношению к эпитопу в стебле ГА вируса гриппа А, и второе антитело является специфическим по отношению к эпитопу нейраминидазы, второму эпитопу ГА (например, эпитопу в глобулярной головке ГА, второму эпитопу в стебле ГА), и/или эпитопу матрикса. Второй эпитоп в стебле или эпитоп в глобулярной головке ГА вируса гриппа А может, но не обязательно, быть консервативным для нескольких субтипов вируса гриппа А.
В еще одном варианте исполнения, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую два или больше антител, в которой первое антитело является специфическим по отношению к эпитопу нейраминидазы и второе антитело является специфическим по отношению к второму эпитопу нейраминидазы, эпитопу ГА и/или эпитопу матрикса.
В еще одном варианте исполнения, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую два или больше антител, в которой первое антитело является специфическим по отношению к эпитопу матрикса и второе антитело является специфическим по отношению к второму эпитопу матрикса, эпитопу на ГА и/или нейраминидазе.
Типичные примеры антител по изобретению, специфических по отношению к белку-мишени вируса гриппа А, включают, без ограничений, вариант 1 FI6, вариант 2 FI6, вариант 1 FI28 или вариант 2 FI28.
В одном варианте исполнения, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую вариант 1 антитела FI6 или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель. В другом варианте исполнения, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую вариант 2 антитела FI6 или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель. В еще одном варианте исполнения, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую вариант 1 антитела FI28 или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель. В еще одном варианте исполнения, изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую вариант 2 антитела FI28 или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель.
Антитела могут быть введены (в комбинации или раздельно) с другими терапевтическими средствами, например, с химиотерапевтическими соединениями, с радиотерапией и т.д. В одном варианте исполнения, терапевтические соединения включают антивирусные соединения, такие как Tamiflu™. Такая комбинированная терапия обеспечивает аддитивное или синергичное увеличение терапевтической эффективности по сравнению с индивидуальными терапевтическими агентами при их введении по отдельности. Термин "синергия" используется для описания объединенного эффекта двух или больше активных агентов, который превышает сумму индивидуальных эффектов для каждого соответствующего активного агента. Таким образом, в тех случаях. когда комбинированный эффект двух или больше агентов приводит к "синергичному ингибированию" активности или процесса, подразумевается, что степень ингибирования активности или процесса превышает сумму ингибирующих эффектов каждого соответствующего активного агента. Термин "синергичный терапевтический эффект" относится к терапевтическому эффекту, наблюдаемому для комбинации двух или больше терапий, когда терапевтический эффект (измеряемый по любому числу параметров) превышает сумму индивидуальных терапевтических эффектов, наблюдаемых при соответствующих индивидуальных терапиях.
Антитела или фрагменты антител могут быть введены тем пациентам, которые ранее не проявляли отклика на лечение инфекции вируса гриппа А, т.е., оказались невосприимчивыми к противогриппозному лечению. Такое лечение может включать предшествующее лечение антивирусным агентом. Это может быть связано, например, с инфекцией штаммом вируса гриппа А, резистентным к антивирусным средствам.
В одном варианте исполнения, композиция по изобретению может содержать антитела по изобретению, где антитела могут составлять по меньшей мере 50% мае. (например, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или больше) от общего белка в композиции. В такой композиции, антитела находятся в очищенной форме.
Изобретение предусматривает способ приготовления фармацевтического средства, включающий стадии: (i) получения антитела по изобретению; и (ii) смешения очищенного антитела с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями.
Изобретение также предусматривает способ приготовления фармацевтического средства, включающий стадию смешения антитела с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, в котором антитело представляет собой моноклональное антитело, полученое из трансформированной В-клетки или культивируемой клетки по изобретению. Таким образом, процедуры сначала получения моноклонального антитела и затем приготовления фармацевтического средства могут производиться в совершенно разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
В качестве альтернативы доставке антитела или В-клеток в терапевтических целях, можно осуществлять доставку субъекту нуклеиновой кислоты (типично, ДНК), полученной из В-клетки или культивируемой клетки плазмы, которая кодирует представляющее интерес моноклональное антитело (или его активный фрагмент), так чтобы нуклеиновая кислота могла экспрессироваться у субъекта in situ для обеспечения желательного терапевтического эффекта. Пригодные методы генной терапии и векторы доставки нуклеиновых кислот известны специалистам.
Композиции по изобретению могут быть иммуногенными композициями и, в некоторых вариантах исполнения, могут быть композициями вакцины, содержащими антиген, содержащий эпитоп, распознаваемый антителом по изобретению. Вакцины в соответствии с изобретением могут быть профилактическими (т.е., для предотвращения инфекции) или терапевтическими (т.е., для лечения инфекции). В одном варианте исполнения, изобретение предусматривает вакцину, содержащую полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37, 38, 39 или 40.
Композиции могут содержать противомикробное средство, особенно, упакованные в виде кратных доз. Композиции могут содержать поверхностно-активное вещество, например, твин (Tween) (полисорбат), такой как Tween 80. Поверхностно-активные вещества обычно присутствуют в низких количествах, например, <0,01%. Композиции могут также содержать соли натрия (например, хлорид натрия) для обеспечения тоничности. Типичная концентрация составляет 10±2 мг/мл NaCl.
Композиции могут содержать сахароспирт (например, маннит) или дисахарид (например, сахарозу или трегалозу) например, в количестве примерно 15-30 мг/мл (например, 25 мг/мл), особенно в тех случаях, когда они должны быть лиофилизированы или когда они содержат материал, восстановленный из лиофилизированного материала. Величина рН композиции для лиофилизации может быть отрегулирована до примерно 6,1 перед лиофилизацией.
Композиции по изобретению могут также содержать один или несколько иммунорегуляторных агентов. В одном варианте исполнения, один или несколько иммунорегуляторных агентов включает (включают) адъювант.
Композиции эпитопа по изобретению могут вызывать медиируемый клетками иммунный ответ, а также гуморальный иммунный ответ, с целью эффективного реагирования на инфекцию вируса гриппа А. Этот иммунный ответ может индуцировать длительный (например, нейтрализующий) гуморальный и клеточно-опосредованный иммунитет, которые могут быстро проявляться при воздействии вируса гриппа А.
Консервативные виды лечения и применение
Антитела и фрагменты антител по изобретению или их производные и варианты могут быть использованы для лечения инфекции вируса гриппа А, для профилактики инфекции вируса гриппа А или для диагностики инфекции вируса гриппа А.
Способы диагностики могут включать введение в контакт антитела или фрагмента антитела с образцом. Такие образцы могут быть образцами ткани, взятыми, например, из носовых ходов, полостей пазух, слюнных желез, легких, печени, поджелудочной железы, почки, уха, глаза, плаценты, пищеварительного тракта, сердца, яичников, гипофиза, надпочечников, щитовидной железы, мозга или кожи. Способы диагностики могут также включать детектирование комплекса антиген/антитело.
Изобретение, таким образом, предусматривает (i) антитело, фрагмент антитела или их варианты и производные в соответствии с изобретением, (ii) иммортализованный клон В-клеток в соответствии с изобретением, (iii) эпитоп, способный связывать антитело по изобретению, или (iv) лиганд, предпочтительно, антитело, способный связывать эпитоп, который связывает антитело по изобретению, для использования в терапии.
Изобретение также предусматривает способ лечения субъекта, включающий введение данному субъекту антитела, фрагмента антитела или их вариантов и производных в соответствии с изобретением, или лиганда, предпочтительно, антитела, способного связывать эпитоп, который связывает антитело по изобретению. В одном варианте исполнения, способ приводит к ослаблению инфекции вируса гриппа А у субъекта. В другом варианте исполнения, способ предупреждает, снижает риск или замедляет инфекцию вируса гриппа А у субъекта.
Изобретение также предусматривает использование (i) антитела, фрагмента антитела или их вариантов и производных в соответствии с изобретением, (ii) иммортализованного клона В-клеток в соответствии с изобретением, (iii) эпитопа, способного связывать антитело по изобретению, или (iv) лиганда, предпочтительно, антитела, которое связывается с эпитопом, способным связывать антитело по изобретению, в производстве лекарственного средства для профилактики или лечения инфекции вируса гриппа А.
Изобретение предусматривает композицию по изобретению для использования в качестве лекарственного средства для профилактики или лечения инфекции вируса гриппа А. Оно также предусматривает использование антитела по изобретению и/или белка, содержащего эпитоп, с которым связывается такое антитело, в производстве лекарственного средства для лечения субъекта и/или диагностики субъекта. Оно также предусматривает способ лечения субъекта, включающий стадию введения субъекту композиции по изобретению. В некоторых вариантах исполнения, субъект может быть человеком. Один из способов проверки эффективности терапевтического лечения включает мониторинг симптомов болезни после введения композиции по изобретению. Лечение может проводиться путем введения разовой дозы или по схеме введения кратных доз.
В одном варианте исполнения, антитело, фрагмент антитела, иммортализованный клон В-клеток, эпитоп, или композиция в соответствии с изобретением вводятся субъекту, нуждающемуся в таком лечении. Такой субъект включает, без ограничений, особу, подверженную риску, или восприимчивую к, инфекции вируса гриппа А, включая, например, иммунологически скомпрометированного субъекта. Антитело или фрагмент антитела по изобретению также могут быть использованы для пассивной иммунизации или активной вакцинации.
Антитела и их фрагменты, как описано в настоящем изобретении, также могут быть использованы в наборе для диагностики инфекции вируса гриппа А. Кроме того, эпитопы, способные связывать антитело по изобретению, могут быть использованы в наборе для контроля эффективности процедур вакцинации путем детектирования присутствия защитных антител против вируса гриппа А. Антитела, фрагменты антител или их варианты и производные, как описано в настоящем изобретении, также могут быть использованы в наборе для контроля производства вакцины с желательной иммуногенностью.
Изобретение также предусматривает способ изготовления фармацевтического средства, включающий стадию смешения моноклонального антитела с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, где моноклональное антитело представляет собой моноклональное антитело, полученное от трансфицированной клетки-хозяина по изобретению. Таким образом, процедуры сначала получения монокпонального антитела (например, его экспрессией и/или его очисткой) и затем его смешения с фармацевтическим носителем (носителями) могут производиться в совершенно разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
Начиная с трансформированной В-клетки или культивируемой клетки плазмы по изобретению, могут выполняться различные стадии культивации, субкультивации, клонирования, субклонирования, секвенирования, получения нуклеиновых кислот и т.д., с целью увеличения продолжительности жизни антитела, экспрессируемого трансформированной В-клеткой или культивируемой клеткой плазмы, с необязательной оптимизацией каждой стадии. В предпочтительном варианте исполнения, вышеуказанные способы дополнительно включают методики оптимизации (например, созревание или оптимизация аффинности), применяемые к нуклеиновым кислотам, кодирующим антитело. Изобретение охватывает все клетки, нуклеиновые кислоты, векторы, последовательности, антитела и т.д., используемые и получаемые на таких стадиях.
Во всех таких способах, нуклеиновая кислота, используемая в хозяине экспрессии, может подвергаться манипуляциям с целью вставки, делеции или внесения изменений в определенные последовательности нуклеиновой кислоты. Изменения, полученные в результате таких манипуляций, включают, без ограничений, изменения с целью введения сайтов рестрикции, изменения статистики употребления кодонов, добавления или оптимизации регуляторных последовательностей транскрипции и/или трансляции, и т.д. Можно также производить замены нуклеиновых кислот для изменения кодируемых аминокислот. Например, может оказаться полезным выполнение одного или нескольких (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.д.) замещений, делеции и/или инсерций аминокислот в аминокислотной последовательности антитела. Такие точечные мутации могут модифицировать эффекторные функции, антигенсвязывающее сродство, посттрансляционные модификации, иммуногенность и т.д., могут вводить аминокислоты для присоединения ковалентно связанных групп (например, меток), или могут вводить метки (например, с целью очистки). Мутации могут вводиться в конкретные сайты или могут вводиться случайным образом, с последующей селекцией (например, молекулярной эволюцией). Например, одна или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих любой из участков CDR, вариабельные участки тяжелой цепи или вариабельные участки легкой цепи антител по изобретению, могут быть случайным образом или направленно мутированы для придания различных свойств кодируемым аминокислотам. Такие изменения могут быть результатом итерационного процесса, при котором сохраняются начальные изменения и вводятся новые изменения в других положениях нуклеотидов. Кроме того, изменения, полученные на независимых стадиях, могут быть объединены. Различные свойства, придаваемые кодированным аминокислотам, могут включать, без ограничений, повышение аффинности.
Общие положения
Термин "содержащий" охватывает "включающий", а также "состоящий из", например, композиция, "содержащая" X, может состоять исключительно из Х или можеть включать что-то дополнительно, например, Х+Y.
Слова "по существу" не исключают "полностью", например, композиция, которая "по существу не содержит" Y, могут совершенно не содержать Y. При необходимости, слова "по существу" в формулировках изобретения могут быть опущены.
Термин "примерно", по отношению к численному значению х, означает, например, х±10%.
Термин "болезнь", в используемом тут значении, должен рассматриваться как в общем синонимичный, и используемый взаимозаменяемо, с терминами "расстройство" и "состояние" (такое как медицинское состояние), в той мере, в которой все они описывают аномальное состояние организма человека или животного или одной из его частей, нарушающее нормальное функционирование, что типично проявляется посредством отличительных признаков и симптомов и приводит к снижению продолжительности или качества жизни человека или животного.
В используемом тут значении, указание на "лечение" субъекта или пациента должно включать предотвращение, профилактику и терапию. Термины "субъект" или "пациент" используются в данном описании взаимозаменяемо для обозначения всех млекопитающих, включая людей. Примеры субъектов включают людей, коров, собак, кошек, лошадей, коз, овец, свиней и кроликов. В одном варианте исполнения, пациент является человеком.
Примеры
Типичные варианты исполнения настоящего изобретения представлены в приведенных ниже примерах. Приведенные ниже примеры даны только с целью иллюстрации и в помощь рядовым специалистам при использовании изобретения. Примеры никоим образом не должны иначе ограничивать объем изобретения.
Пример 1. Получение и характеризация нейтрализующих антител с широким спектром действия против вируса гриппа А из клеток плазмы
Для идентификации особ, которые могут продуцировать гетеросубтиповые антитела в ответ на сезонную вакцину против гриппа (содержащую ГА Н1 и H3), мы провели скрининг с использованием методики ELISPOT циркулирующих клеток плазмы, отобранных в день 7 после ревакцинации, на их способность секретировать антитела, которые связываются с вакциной или с неродственным ГА Н5 (A/VN/1203/04). Неожиданно было обнаружено, что, в то время как у четырех из пяти обследованых доноров Н5-специфические клетки плазмы не детектировались, у одного донора 14% lgG-секретирующих клеток плазмы продуцировали антитела к Н5, а 57% продуцировали антитела к вакцине. Клетки CD138"" плазмы были выделены из моноядерных клеток периферической крови (РВМС), отобранных через 7 дней после вакцинации с помощью магнитных микробусин с последующей сортировкой клеток с использованием машины FACSAria. Предельные количества клеток плазмы высеивали на культуральные микропланшеты. Супернатанты культур тестировали в трех параллельных ELISA с использованием в качестве антигенов рекомбинантных ГА Н5 или Н9 и неспецифического антигена столбнячного анатоксина. Из 4928 подвергнутых скринингу супернатантов культур 12 связывались с ГА Н5, но не Н9, 25 - с ГА Н9, но не Н5, и 54 - с обоими Н5 и Н9. Некоторые из 54 культур с наивысшими сигналами оптической плотности (OD) подвергали ОТ-ПЦР, и были получены два спаренных гена VH и VL.
Гены VH и VL клонировали в векторы экспрессии и рекомбинантные антитела продуцировали путем трансфекции клеток HEK293T. Два моноклональные антитела, FI6 и FI28, содержат большинство одинаковых генных фрагментов V, D и J (IGHV3-30*01, IGHD3-9*01, IGHJ4*02 и IGKV4-1*01), но различаются в области N, по статистике использования IGKJ и по характеру соматических мутаций, и потому клонально не являются родственными.
Специфичность рекомбинантных антител исследовали методом ELISA с использованием панели ГА, принадлежащих к разным субтипам. Примечательно, что F16 связывал все тестируемые субтипы ГА гриппа А, включая группу 1 (Н1, Н5 и Н9) и группу 2 (H3 и Н7), но не связывал ГА вируса гриппа В. В отличие от него, FI28 связывался только с тремя ГА группы 1 (Н1, Н5 и Н9).
| Таблица 4 | |||||
| Связывание с ГА по результатам ELISA (% от субтип-специфических контрольных антител) | |||||
| Н1 | H3 | Н5 | Н7 | Н9 | |
| A/NC/ 20/99 | A/BR/ 10/07 | A/VN/ 1203/04 | A/NL/ 219/03 | A/HK/ 1073/99 | |
| FI6 | 85,9 | 68,5 | 73,7 | 87,9 | 98,7 |
| FI28 | 59,4 | 1,3 | 46,3 | -0,5 | 87,7 |
С учетом гомологии последовательностей VH и VL двух антител, были проведены эксперименты по перемешиванию (shuffling) с использованием Н- и L-цепей FI6, FI28 и 7113, hCMV-специфического антитела, использующего те же самые элементы V, D и J Н-цепи. Если связывание с Н7 требовало спаривания Н- и L-цепей FI6, связывание с Н5 сохранялось при перемешивании L-цепей FI6 и FI28. Кроме того, связывание Н5 также наблюдалось при спаривании Н-цепи FI6 с неродственной L-цепью 7113. В отличие от этого, связывание Н5 не наблюдалось, когда гомологичная Н-цепь 7113 спаривалась с L-цепью FI6. Без ограничения какой-либо конкретной теорией, эти результаты позволяют предположить, что основной вклад в связывание Н5 вносит Н-цепь, тогда как связывание Н7 требует точного спаривания Н- и L-цепей FI6.
Затем FI6 и FI28 были протестированы на их способность нейтрализовать субтипы группы 1 и группы 2 гриппа А с использованием псевдотипированных вирусов (Таблица 5), а также инфекционных вирусов (Таблица 6). Примечательно, что FI6 нейтрализовал все протестированные псевдовирусы, включая шесть изолятов Н5, принадлежащих к антигенно дивергентным кладам 0, 1, 2.1, 2.2 и 2.3, и два изолята птичьего Н7, Кроме того, FI6 нейтрализовал все протестированные инфекционные вирусы, включая два вируса H3N2 и четыре вируса H1N1, охватывающие несколько десятилетий, вплоть до изолята недавней пандемии H1N1 А/СА/04/09 (Таблица 6). FI28 нейтрализовал все псевдовирусы Н5, но не нейтрализовал псевдовирусы Н7, а также все протестированные инфекционные вирусы. Нейтрализующие титры к псевдовирусам были выше, чем титры к инфекционным вирусам.
| Таблица 5 | ||||||||
| Нейтрализация псевдотипов ГА (IC90, мкг/мл) | ||||||||
| H5N1 | H7N1 | |||||||
| А/HK/ 491/97 | А/HK/ 213/03 | A/VN/ 1203/04 | A/INDO/ 5/05 | A/WS/ MONG/05 | А/АН/ 1/05 | A/ck/IT/ 13474/99 | A/ck/FPV/ Ro/34 | |
| FI6 | 0,07 | 0,02 | 0,02 | 0,31 | 0,03 | 0,05 | 1,87 | 0,09 |
| FI28 | 0,05 | 0,33 | 0,02 | 0,35 | 0,04 | 0,05 | >100 | >100 |
| Таблица 6 | ||||||
| Нейтрализация инфекционных вирусов (IC50, мкг/мл) | ||||||
| H1N1 | H3N2 | |||||
| A/PR/ 8/34 | A/NC/ 20/99 | A/SI/ 3/06 | A/CA/ 4/09 | A/CA/ 7/04 | A/WI/ 67/05 | |
| FI6 | 2,2 | 6,3 | 8,8 | 12,5 | 7,9 | 12,5 |
| FI28 | >100 | >100 | >100 | nd | >100 | >100 |
| nd, анализ не выполнялся | ||||||
Пример 2. Антигенсвязывающие сайты FI6 и FI28
Для идентификации антигенных сайтов, с которыми связываются антитела FI6 и FI28, мы сначала проверили их способность ингибировать связывание С179, мышиного моноклонального антитела, которое было картировано в консервативном участке области стебля ГА (Y, Okuno, et al., J Virol 67, 2552 (1993)). Как FI6, так и FI28 полностью ингибировали связывание С179 с рекомбинантным Н5 VN/1203/04 ГА, указывая на то, что они распознают перекрывающийся эпитоп. В отличие от этого, FI6 и FI28 не конкурировали с панелью Н5-специфических антител, выделенных у H5N1-иммунных доноров, которые распознают разные эпитопы в глобулярной головке ГА (С.Р. Simmons et al., PLoS Med 4, e178 (2007); S. Khurana et al., PLoS Med 6, e1000049 (2009)). Попытки картировать эпитоп FI6 путем селекции "ускользнувших" мутантов были неудачными, указывая на то, что его эпитоп не может легко мутировать без компрометации адекватности вируса (viral fitness).
Затем мы провели пептидное картирование с использованием библиотек линейных и циклизированных пептидов ГА A/VN/1194/04, а также сканирования спирали (helix-scan) с использованием систем Pepscan Presto BV (Leiystad, The Netherlands). Этот анализ идентифицировал связывающий участок FI6, который включает пептид слияния FGAIAG НА2 (аминокислоты 3-8, в соответствии с нумерацией H3; SEQ ID NO:37), пептид DGVTNKVNS А-спирали НА2 (аминокислоты 46-54; SEQ ID NO:38), пептид MENERTLDFHDSNVK В-спирали НА2 (аминокислоты 102-116; SEQ ID NO:39) и C-концевой пептид LVLATGLRNSP НА1 (аминокислоты 315-325; SEQ ID NO:40). Связывающие участки FI28 и FI6 отличались друг от друга, поскольку это антитело не реагировало с C-концевым пептидом НА1 и пептидом В-спирали НА2.
Список литературы
Okuno et al., (1993) Journal of Virology 67:2552-2558.
Gerhard et al., (2006) Emerging Infectious Diseases 12:569-574.
Gioia et al., (2008) Emerging Infectious Diseases 14:121-128.
US 3,766,162
US 3,791,932
US 3,817,837
US 4,233,402
US 4,676,980
US 4,831,175
US 5,595,721
WO00/52031
WO00/52473
US 4,766,106
US 4,179,337
US 4,495,285
US 4,609,546
Gabizon et al., (1982) Cancer Research 42:4734
Cafiso (1981) Biochem Biophys Acta 649:129
Szoka (1980) Ann. Rev. Biophys. Eng. 9:467
Poznansky et al., (1980) Drug Delivery Systems (R.L. Juliano, ed, Oxford, N.Y.) pp.253-315
Poznansky (1984) Pharm Revs 36:277
Kohler, G. and Milstein, C,. 1975, Nature 256:495-497.
Kozbar et al., 1983, Immunology Today 4:72.
WO2004/076677
Chapter 4 of Kuby Immunology (4th edition, 2000; ASIN: 0716733315
Jones et al., Biotechnol Prog 2003, 19(1):163-8
Cho et al., Cytotechnology 2001, 37:23-30
Cho et al., Biotechnol Prog 2003, 19:229-32
US 5,807,715
US 6,300,104
Rowe et al., (1999) J Clin Microbiol 37(4):937-43.
Temperton, et al., (2005). Emerg Infect Dis 11, 411-416.
Smirnov et al., (2000). Arch Virol 145, 1733-1741.
Smirnov et al., (1999). Acta Virol 43, 237-244.
Simmons et al., (2007). PLoS Med 4, e178.
Traggiai et al., (2004). Nat Med 10, 871-875.
| Перечень номеров SEQ ID | ||
| SEQID NO | Описание | Последовательность |
| 1 | CDRH1 aa (аминокислотная) |
 |
| 2 | CDRH2 аа |
 |
| 3 | CDRH3 аа |
 |
| 4 | CDRL1 аа |
 |
| 5 | CDRL2 аа |
 |
| 6 | CDRL3 аа |
 |
| 7 | CDRH1 nuc (нуклеотидная) |
 |
| 8 | CDRH2 nuc |
 |
| 9 | CDRH3 nuc |
 |
| 10 | CDRL1 nuc |
 |
| 11 | CDRL2 nuc |
 |
| 12 | CDRL3 nuc |
 |
| 13 | тяж. цепь аа |
 |
| 14 | легк. цепь аа |
 |
| 15 | тяж. цепь nuc |
 |
 |
||
| 16 | легк. цепь nuc |
 |
| 17 | CDRH1 aa |
 |
| 18 | CDRH2 aa |
 |
| 19 | CDRH3 aa |
 |
| 20 | CDRL1 aa |
 |
| 21 | CDRL2 aa |
 |
| 22 | CDRL3 aa |
 |
| 23 | CDRH1 nuc |
 |
| 24 | CDRH2 nuc |
 |
| 25 | CDRH3 nuc |
 |
| 26 | CDRL1 nuc |
 |
| 27 | CDRL2 nuc |
 |
| 28 | CDRL3 nuc |
 |
| 29 | тяж. цепь aa |
 |
| 30 | легк. цепь aa |
 |
| 31 | тяж. цепь nuc |
 |
 |
||
| 32 | легк. цепь nuc |
 |
| 33 | тяж. цепь аа |
 |
| 34 | тяж. цепь nuc |
 |
| 35 | тяж. цепь аа |
 |
| 36 | тяж. цепь nuc |
 |
| 37 | аа |
 |
| 38 | аа |
 |
| 39 | аа |
 |
| 40 | аа |
 |
Claims (18)
1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие CDR1 тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1; CDR2 тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2; и CDR3 тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3; и CDR1 легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4; CDR2 легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5; и CDR3 легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6, при этом антитело или его антигенсвязывающий фрагмент нейтрализуют инфекцию субтипа группы 1 и субтипа группы 2 вируса гриппа А.
2. Антитело по п. 1 или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело специфически связывается с эпитопом в области стебля гемагглютинина и где эпитоп является консервативным для двух или больше субтипов вируса гриппа А, выбранных из группы 1 и группы 2.
3. Антитело по п. 1 или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело или фрагмент антитела связывают полипептид, содержащий аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 и SEQ ID NO: 40.
4. Антитело по пп. 1, 2 или 3, где концентрация антитела, необходимая для 50% нейтрализации вируса гриппа А, составляет 20 мкг/мл или меньше.
5. Антитело по пп. 1, 2 или 3, где концентрация антитела, необходимая для 50% нейтрализации вируса гриппа А, составляет 4 мкг/мл или меньше.
6. Антитело по пп. 1, 2 или 3 или его антигенсвязывающий фрагмент, где субтип группы 1 представляет собой Н1, Н2, Н5 или Н9.
7. Антитело по пп. 1, 2 или 3 или его антигенсвязывающий фрагмент, где субтип группы 2 представляет собой Н3 или Н7.
8. Антитело по пп. 1, 2 или 3 или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело или фрагмент антитела нейтрализуют инфекцию вирусов гриппа А трех, четырех, пяти или больше субтипов.
9. Антитело по пп. 1, 2 или 3 или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело нейтрализует инфекцию вируса гриппа А субтипов (i) Н1 и Н3; (ii) Н1 и Н7; (iii) Н3 и Н5; (iv) Н3 и Н9; (v) Н5 и Н7; (vi) Н7 и Н9; (vii) Н1, Н3, Н5 и Н7; или (viii) Н1, Н3, Н5, Н7 и Н9.
10. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий по меньшей мере 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 13 или 33, и содержащие вариабельный участок легкой цепи, имеющий по меньшей мере 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, где антитело нейтрализует инфекцию субтипа группы 1 и субтипа группы 2 вируса гриппа А.
11. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; или вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, где антитело нейтрализует инфекцию субтипа группы 1 и субтипа группы 2 вируса гриппа А.
12. Антитело по любому из пп. 1, 2, 3 или 11 или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело представляет собой вариант 1 FI6 или вариант 2 FI6.
13. Антитело по любому из пп. 1, 2, 3 или 11 или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело представляет собой антитело человека, моноклональное антитело, очищенное антитело, выделенное антитело, одноцепочечное антитело, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv.
14. Антитело по любому из пп. 1, 2, 3 или 11 или его антигенсвязывающий фрагмент, предназначенные для лечения инфекции вируса гриппа А.
15. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1, 2, 3 или 11.
16. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 15, в которой полинуклеотидная последовательность является по меньшей мере на 75% идентичной с последовательностью нуклеиновой кислоты любой из SEQ ID NO: 7-12, 15, 16 или 34.
17. Клетка, экспрессирующая антитело по любому из пп. 1, 2, 3 или 11 или его антигенсвязывающий фрагмент.
18. Способ ослабления инфекции вируса гриппа А или снижения риска инфекции вируса гриппа А, включающий: введение нуждающемуся в этом субъекту профилактически или терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп. 1, 2, 3 или 11 или его антигенсвязывающего фрагмента.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US8383808P | 2008-07-25 | 2008-07-25 | |
| US61/083,838 | 2008-07-25 | ||
| US18158209P | 2009-05-27 | 2009-05-27 | |
| US61/181,582 | 2009-05-27 | ||
| PCT/IB2009/006616 WO2010010466A2 (en) | 2008-07-25 | 2009-07-27 | Neutralizing anti-influenza a virus antibodies and uses thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011105062A RU2011105062A (ru) | 2012-08-27 |
| RU2553325C2 true RU2553325C2 (ru) | 2015-06-10 |
Family
ID=41570664
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011105062/10A RU2553325C2 (ru) | 2008-07-25 | 2009-07-27 | Нейтрализующие антитела против вируса гриппа а и их использование |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US8685402B2 (ru) |
| EP (2) | EP2313433A2 (ru) |
| JP (3) | JP5607620B2 (ru) |
| KR (2) | KR101732056B1 (ru) |
| CN (2) | CN102164613B (ru) |
| AU (2) | AU2009275227A1 (ru) |
| BR (1) | BRPI0911699B8 (ru) |
| CA (2) | CA2733218A1 (ru) |
| CO (1) | CO6341572A2 (ru) |
| CR (2) | CR20110079A (ru) |
| EC (1) | ECSP11010823A (ru) |
| ES (1) | ES2662519T3 (ru) |
| GT (1) | GT201100023A (ru) |
| HK (1) | HK1161110A1 (ru) |
| IL (2) | IL210772A0 (ru) |
| MA (1) | MA32577B1 (ru) |
| MX (2) | MX2011000768A (ru) |
| NZ (2) | NZ590891A (ru) |
| RU (1) | RU2553325C2 (ru) |
| WO (2) | WO2010010467A2 (ru) |
| ZA (2) | ZA201101113B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2671477C2 (ru) * | 2016-12-30 | 2018-10-31 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBiPr-ABIgA2m1F16-ht ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА А ИЗОТИПА IGA2m1 |
Families Citing this family (74)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20100115346A (ko) | 2007-12-06 | 2010-10-27 | 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. | 인플루엔자 바이러스에 대한 항체 및 그의 이용 방법 |
| MX2011000768A (es) | 2008-07-25 | 2011-10-05 | Inst Research In Biomedicine | Anticuerpos neutralizantes del virus anti-influenza a y usos de los mismos. |
| US8871207B2 (en) | 2008-07-25 | 2014-10-28 | Humabs, LLC | Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof |
| CN102791734B (zh) * | 2010-03-08 | 2014-10-15 | 赛特瑞恩股份有限公司 | 源自人b细胞且具有抗甲型流感病毒的中和活性的人单克隆抗体 |
| BR112012032185A2 (pt) * | 2010-06-17 | 2016-10-11 | Trellis Bioscience Inc | anticorpos úteis na imunização passiva de influenza. |
| US9534042B2 (en) * | 2010-09-03 | 2017-01-03 | Fujita Health University | Influenza virus-neutralizing antibody and screening method therefor |
| US20130289246A1 (en) * | 2010-09-30 | 2013-10-31 | Vanderbilt University | Influenza virus antibodies and immunogens and uses therefor |
| WO2012145572A1 (en) | 2011-04-20 | 2012-10-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens |
| BR112014000263B1 (pt) | 2011-07-14 | 2022-01-18 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Anticorpo isolado capaz de se ligar especificamente à proteína hemaglutinina (ha) dos subtipos de vírus influenza b, e, composição farmacêutica que o compreende |
| CN107417789A (zh) * | 2011-07-18 | 2017-12-01 | 生物医学学会 | 中和抗甲型流感病毒抗体及其用途 |
| HUE044089T2 (hu) * | 2011-07-18 | 2019-09-30 | Inst Res Biomedicine | Neutralizáló anti-influenza A antitestek és alkalmazásaik |
| CN104114186B (zh) * | 2011-08-03 | 2017-05-03 | 儿童医疗中心有限公司 | 识别流行性感冒血凝素的受体‑结合袋状结构的广泛中和人类抗体 |
| EP2748184A1 (en) * | 2011-08-27 | 2014-07-02 | Universität Zürich | Multi-strain-reactive antibodies for therapy and diagnosis of influenza |
| CA2850720C (en) | 2011-09-30 | 2016-03-29 | Celltrion Inc. | Binding molecule having influenza a virus-neutralizing activity produced from human b cell |
| CA2852474A1 (en) * | 2011-10-18 | 2013-04-25 | Emory University | Antibodies directed against influenza |
| KR20130059721A (ko) * | 2011-11-29 | 2013-06-07 | (주)셀트리온 | 인간 ｂ 세포에서 생산된 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 활성을 가지는 결합 분자 |
| US9718874B2 (en) | 2011-12-02 | 2017-08-01 | Aimm Therapeutics B.V. | Influenza A virus specific antibodies |
| JP6371222B2 (ja) * | 2011-12-05 | 2018-08-08 | トレリス バイオサイエンス リミテッド ライアビリティー カンパニー | インフルエンザの受動免疫用抗体 |
| ES2564138T3 (es) * | 2011-12-12 | 2016-03-18 | Novartis Ag | Ensayo para Hemaglutinina del virus de la influenza |
| WO2013089496A1 (ko) * | 2011-12-15 | 2013-06-20 | (주)에이프로젠 | H1n1-감염된 환자들로부터 유도된 매우 잠재력 있는 넓은-스펙트럼 중화 단일클론 항체 및 이를 포함하는 바이러스의 치료용 조성물 |
| RU2502745C2 (ru) * | 2011-12-30 | 2013-12-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Технофарма" | Наноантитело "anti-flu", рекомбинантные вирусные векторы и фармацевтические композиции для профилактики и терапии гриппа типа а |
| NZ628382A (en) * | 2012-03-08 | 2017-03-31 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Human binding molecules capable of binding to and neutralizing influenza b viruses and uses thereof |
| US9969794B2 (en) | 2012-05-10 | 2018-05-15 | Visterra, Inc. | HA binding agents |
| EP3492101A3 (en) | 2012-05-10 | 2019-10-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Agents for influenza neutralization |
| CN103665155B (zh) * | 2012-09-14 | 2016-07-06 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 一种抗流感病毒广谱中和性的中和分子1f2 |
| CN103665154B (zh) * | 2012-09-14 | 2016-08-03 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 一种抗流感病毒广谱中和性的中和分子3c4 |
| CN103665157B (zh) * | 2012-09-14 | 2016-06-29 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 一种抗流感病毒广谱中和性的中和分子1c4 |
| CN103665156B (zh) * | 2012-09-14 | 2016-08-03 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 一种抗流感病毒广谱中和性的结合分子3e1 |
| CN104968367B (zh) * | 2012-11-13 | 2018-04-13 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 抗血凝素抗体和使用方法 |
| CA2906676A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Contrafect Corporation | Composition and methods based on neutralizing antibodies delivered intranasally for enhanced therapeutic efficacy |
| KR20140118682A (ko) * | 2013-03-29 | 2014-10-08 | (주)셀트리온 | 2 이상의 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 조성물 |
| CN104098692B (zh) * | 2013-04-02 | 2018-11-30 | 厦门大学 | 识别流感病毒血凝素蛋白ha1结构域的广谱单克隆抗体 |
| ES2837392T3 (es) | 2013-10-02 | 2021-06-30 | Medimmune Llc | Anticuerpos anti-influenza A neutralizantes y usos de los mismos |
| US20160264648A1 (en) * | 2013-11-06 | 2016-09-15 | Osaka University | Antibody having broad neutralization activity against group 1 influenza a viruses |
| US10639370B2 (en) | 2014-02-04 | 2020-05-05 | Contrafect Corporation | Antibodies useful in passive influenza immunization, and compositions, combinations and methods for use thereof |
| MX2016010059A (es) | 2014-02-04 | 2017-04-27 | Contrafect Corp | Anticuerpos útiles en la inmunización pasiva contra la gripe y composiciones, combinaciones y métodos para utilizarlos. |
| CN104892753B (zh) * | 2014-03-07 | 2019-11-29 | 神州细胞工程有限公司 | 一种中和人感染h7n9甲型流感病毒的抗体及其用途 |
| DK3142750T3 (da) | 2014-05-13 | 2020-09-14 | Univ Pennsylvania | Sammensætninger omfattende aav, som udtrykker dobbelt-antistofkonstrukter og anvendelser deraf |
| US10077309B2 (en) * | 2014-07-14 | 2018-09-18 | The Penn State Research Foundation | Compositions and methods for targeting of the surfactant protein A receptor |
| CA2954780A1 (en) * | 2014-07-15 | 2016-01-21 | Medimmune, Llc | Neutralizing anti-influenza b antibodies and uses thereof |
| JPWO2016010160A1 (ja) * | 2014-07-18 | 2017-06-01 | 国立感染症研究所長 | 抗インフルエンザウイルス抗体及びその利用 |
| WO2016089181A1 (ko) * | 2014-12-05 | 2016-06-09 | (주)셀트리온 | 1 이상의 인플루엔자 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 애주번트 조성물 및 이를 포함하는 백신 조성물 |
| US20180008702A1 (en) * | 2014-12-05 | 2018-01-11 | Celltrion Inc. | Adjuvant composition containing at least one influenza virus neutralizing and binding molecule and vaccine composition containing same |
| TWI701258B (zh) | 2014-12-19 | 2020-08-11 | 美商再生元醫藥公司 | 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體 |
| WO2016200543A2 (en) * | 2015-05-13 | 2016-12-15 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Aav-mediated expression of anti-inluenza antibodies and methods of use thereof |
| AU2016271323B2 (en) | 2015-06-01 | 2022-08-25 | Medimmune, Llc | Neutralizing anti-influenza binding molecules and uses thereof |
| WO2017083627A1 (en) | 2015-11-13 | 2017-05-18 | Visterra, Inc. | Compositions and methods for treating and preventing influenza |
| CN116271017A (zh) | 2016-01-13 | 2023-06-23 | 免疫医疗有限责任公司 | 治疗甲型流感的方法 |
| CN109195629A (zh) | 2016-02-24 | 2019-01-11 | 威特拉公司 | 流行性感冒抗体分子制剂 |
| WO2018030777A1 (ko) * | 2016-08-10 | 2018-02-15 | ㈜셀트리온 | 항-인플루엔자 바이러스 항체의 안정한 액체 약제학적 제제 |
| JP2017086068A (ja) * | 2016-10-31 | 2017-05-25 | インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシンＩｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ | Ａ型インフルエンザウイルス中和抗体及びその使用法 |
| RU2664184C2 (ru) * | 2016-12-30 | 2018-08-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBiPr-ABIgA1FI6-Intht ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА А ИЗОТИПА IgA1 |
| RU2656142C1 (ru) * | 2016-12-30 | 2018-05-31 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBiPr-ABIgA1FI6-ht ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА А ИЗОТИПА IGA1 |
| JOP20190200A1 (ar) | 2017-02-28 | 2019-08-27 | Univ Pennsylvania | تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي |
| AU2018229293A1 (en) | 2017-02-28 | 2019-08-29 | Janssen Biotech, Inc. | Influenza vaccines based on AAV vectors |
| LT3589730T (lt) | 2017-02-28 | 2024-03-12 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adenoasocijuoto viruso (aav) monofiletinės grupės f vektorius, ir jo panaudojimo būdai |
| JP7403733B2 (ja) | 2017-09-04 | 2023-12-25 | 国立感染症研究所長 | インフルエンザｈａスプリットワクチンの製造方法 |
| EP3684939A1 (en) * | 2017-09-18 | 2020-07-29 | Amyris, Inc. | Methods for genomic integration in pichia and other host cells |
| CN109988236B (zh) * | 2017-12-30 | 2022-04-01 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种流感病毒抗体的应用 |
| IL294797B2 (en) * | 2018-01-23 | 2024-06-01 | Janssen Vaccines Prevention B V | Influenza virus vaccines and their uses |
| JP6622825B2 (ja) * | 2018-01-25 | 2019-12-18 | インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシンＩｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ | Ａ型インフルエンザウイルス中和抗体及びその使用法 |
| CA3088194A1 (en) | 2018-01-26 | 2019-08-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Human antibodies to influenza hemagglutinin |
| TW202011986A (zh) | 2018-07-23 | 2020-04-01 | 公益財團法人日本健康科學振興財團 | 包含流感疫苗之組合物 |
| WO2020160560A2 (en) * | 2019-02-01 | 2020-08-06 | Novarock Biotherapeutics, Ltd. | Anti-claudin 18 antibodies and methods of use thereof |
| EP3946613A1 (en) | 2019-03-25 | 2022-02-09 | Visterra, Inc. | Compositions and methods for treating and preventing influenza |
| JP2020048568A (ja) * | 2019-11-22 | 2020-04-02 | インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシンＩｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ | Ａ型インフルエンザウイルス中和抗体及びその使用法 |
| IL293804A (en) | 2019-12-11 | 2022-08-01 | Visterra Inc | Anti-hemagglutinin (ha) antibody molecules, preparations containing them and their uses |
| WO2021201677A1 (en) | 2020-04-01 | 2021-10-07 | Kiadis Pharma Intellectual Property B.V. | Compositions and methods targeting influenza |
| CN111825763B (zh) * | 2020-07-15 | 2022-04-19 | 扬州大学 | 流感病毒ha蛋白茎部特异性单克隆抗体及其制备方法和应用 |
| CN114181303B (zh) * | 2020-09-14 | 2022-12-23 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 抗甲型流感病毒的抗体和试剂盒 |
| TW202237850A (zh) | 2020-12-01 | 2022-10-01 | 賓州大學委員會 | 具有組織特異性靶向基序的新穎構成物及含有其之組成物 |
| EP4329885A1 (en) | 2021-04-27 | 2024-03-06 | Generation Bio Co. | Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof |
| WO2023177655A1 (en) | 2022-03-14 | 2023-09-21 | Generation Bio Co. | Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use |
| KR20240088574A (ko) | 2022-11-21 | 2024-06-20 | (주)샤페론 | 인플루엔자 바이러스에 대한 단일 도메인 항체 및 이의 용도 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2031941C1 (ru) * | 1991-03-14 | 1995-03-27 | Научно-исследовательский институт гриппа РАМН | Штамм вируса гриппа а(нini) для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей |
| WO2007134327A2 (en) * | 2006-05-15 | 2007-11-22 | Sea Lane Biotechnologies, Llc. | Neutralizing antibodies to influenza viruses |
| EP1925318A1 (en) * | 2006-11-20 | 2008-05-28 | Paul-Ehrlich-Institut | Recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA)-based vaccine for the avian flu |
Family Cites Families (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US630064A (en) * | 1899-02-10 | 1899-08-01 | William Martindale | Safety-hook. |
| NL154600B (nl) * | 1971-02-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen. |
| US3817837A (en) * | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
| US3766162A (en) * | 1971-08-24 | 1973-10-16 | Hoffmann La Roche | Barbituric acid antigens and antibodies specific therefor |
| US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| US4233402A (en) * | 1978-04-05 | 1980-11-11 | Syva Company | Reagents and method employing channeling |
| JPS5896026A (ja) * | 1981-10-30 | 1983-06-07 | Nippon Chemiphar Co Ltd | 新規ウロキナ−ゼ誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する血栓溶解剤 |
| EP0098110B1 (en) * | 1982-06-24 | 1989-10-18 | NIHON CHEMICAL RESEARCH KABUSHIKI KAISHA also known as JAPAN CHEMICAL RESEARCH CO., LTD | Long-acting composition |
| US5807715A (en) * | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
| US4766106A (en) * | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4676980A (en) * | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
| US4831175A (en) * | 1986-09-05 | 1989-05-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate |
| US5595721A (en) * | 1993-09-16 | 1997-01-21 | Coulter Pharmaceutical, Inc. | Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20 |
| CA2229043C (en) * | 1995-08-18 | 2016-06-07 | Morphosys Gesellschaft Fur Proteinoptimierung Mbh | Protein/(poly)peptide libraries |
| AU8063798A (en) * | 1997-06-19 | 1999-01-04 | Regents Of The University Of California, The | Secretory immunoglobulin produced by single cells and methods for making and using same |
| MY133346A (en) | 1999-03-01 | 2007-11-30 | Biogen Inc | Kit for radiolabeling ligands with yttrium-90 |
| US20020102208A1 (en) | 1999-03-01 | 2002-08-01 | Paul Chinn | Radiolabeling kit and binding assay |
| JP4656478B2 (ja) * | 2000-02-22 | 2011-03-23 | 株式会社医学生物学研究所 | 抗体ライブラリー |
| WO2004007667A2 (en) | 2002-07-11 | 2004-01-22 | The General Hospital Corporation | Polynucleotide and polypeptide fat metabolism regulators and uses thereof |
| CN1756562A (zh) * | 2003-03-07 | 2006-04-05 | 麦克公司 | 流感病毒疫苗 |
| JP4817625B2 (ja) * | 2003-08-11 | 2011-11-16 | 一般財団法人阪大微生物病研究会 | 粘膜免疫誘導アジュバントを含む新規ワクチン |
| WO2006124269A2 (en) | 2005-05-16 | 2006-11-23 | Amgen Fremont Inc. | Human monoclonal antibodies that bind to very late antigen-1 for the treatment of inflammation and other disorders |
| KR20080049113A (ko) | 2005-10-21 | 2008-06-03 | 노파르티스 아게 | Ｉｌ-13에 대항한 인간 항체 및 치료적 용도 |
| TWI477602B (zh) * | 2006-02-09 | 2015-03-21 | Educational Foundation Jichi Medical Univ | Novel viral vector |
| EP2450377A1 (en) | 2006-09-07 | 2012-05-09 | Crucell Holland B.V. | Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus H5N1 and uses thereof |
| DK2769992T3 (da) * | 2006-10-02 | 2021-03-22 | Regeneron Pharma | Humane antistoffer med høj affinitet for human IL-4-receptor |
| JP5601836B2 (ja) * | 2006-11-08 | 2014-10-08 | マクロジェニックス ウエスト， インコーポレイテッド | Ｔｅｓ７およびｔｅｓ７に結合する抗体 |
| NO347649B1 (no) | 2006-12-14 | 2024-02-12 | Regeneron Pharma | Humant antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder human deltaliknende ligand 4 (hDII4), nukleinsyremolekyl som koder for slike og vektor og vert-vektorsystemer, samt fremgangsmåte for fremstilling, sammensetning og anvendelse. |
| GB0700133D0 (en) | 2007-01-04 | 2007-02-14 | Humabs Llc | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
| US8124092B2 (en) * | 2007-03-13 | 2012-02-28 | Institute For Research In Biomedicine | Antibodies against H5N1 strains of influenza A virus |
| ITTO20080204A1 (it) | 2008-03-17 | 2009-09-18 | Pomona Biotechnologies Llc | Anticorpi monoclonali atti a reagire con una pluralita di sottotipi del virus influenzale a |
| MX2011000768A (es) | 2008-07-25 | 2011-10-05 | Inst Research In Biomedicine | Anticuerpos neutralizantes del virus anti-influenza a y usos de los mismos. |
| US8871207B2 (en) * | 2008-07-25 | 2014-10-28 | Humabs, LLC | Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof |
-
2009
- 2009-07-27 MX MX2011000768A patent/MX2011000768A/es not_active Application Discontinuation
- 2009-07-27 AU AU2009275227A patent/AU2009275227A1/en not_active Abandoned
- 2009-07-27 CN CN200980132989.9A patent/CN102164613B/zh active Active
- 2009-07-27 KR KR1020117003526A patent/KR101732056B1/ko active IP Right Grant
- 2009-07-27 US US12/509,835 patent/US8685402B2/en active Active
- 2009-07-27 NZ NZ590891A patent/NZ590891A/xx not_active IP Right Cessation
- 2009-07-27 KR KR1020117003495A patent/KR20110049802A/ko not_active Application Discontinuation
- 2009-07-27 ES ES09745097.7T patent/ES2662519T3/es active Active
- 2009-07-27 US US12/509,731 patent/US9340603B2/en active Active
- 2009-07-27 RU RU2011105062/10A patent/RU2553325C2/ru active
- 2009-07-27 WO PCT/IB2009/006623 patent/WO2010010467A2/en active Application Filing
- 2009-07-27 CN CN2009801329884A patent/CN102216327A/zh active Pending
- 2009-07-27 JP JP2011519252A patent/JP5607620B2/ja active Active
- 2009-07-27 EP EP09759983A patent/EP2313433A2/en not_active Withdrawn
- 2009-07-27 WO PCT/IB2009/006616 patent/WO2010010466A2/en active Application Filing
- 2009-07-27 JP JP2011519253A patent/JP2011528902A/ja active Pending
- 2009-07-27 MX MX2011000767A patent/MX2011000767A/es active IP Right Grant
- 2009-07-27 BR BRPI0911699A patent/BRPI0911699B8/pt active IP Right Grant
- 2009-07-27 CA CA2733218A patent/CA2733218A1/en not_active Abandoned
- 2009-07-27 NZ NZ590890A patent/NZ590890A/xx not_active IP Right Cessation
- 2009-07-27 EP EP09745097.7A patent/EP2313112B1/en active Active
- 2009-07-27 CA CA2731686A patent/CA2731686C/en active Active
- 2009-07-27 AU AU2009275226A patent/AU2009275226B2/en active Active
-
2011
- 2011-01-20 IL IL210772A patent/IL210772A0/en unknown
- 2011-01-20 IL IL210771A patent/IL210771A0/en unknown
- 2011-01-21 GT GT201100023A patent/GT201100023A/es unknown
- 2011-02-09 CO CO11015221A patent/CO6341572A2/es active IP Right Grant
- 2011-02-11 ZA ZA2011/01113A patent/ZA201101113B/en unknown
- 2011-02-11 CR CR20110079A patent/CR20110079A/es unknown
- 2011-02-11 EC EC2011010823A patent/ECSP11010823A/es unknown
- 2011-02-14 CR CR20110084A patent/CR20110084A/es unknown
- 2011-02-14 ZA ZA2011/01150A patent/ZA201101150B/en unknown
- 2011-02-22 MA MA33633A patent/MA32577B1/fr unknown
-
2012
- 2012-02-24 HK HK12101857.6A patent/HK1161110A1/xx unknown
-
2014
- 2014-08-28 JP JP2014174221A patent/JP6022515B2/ja active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2031941C1 (ru) * | 1991-03-14 | 1995-03-27 | Научно-исследовательский институт гриппа РАМН | Штамм вируса гриппа а(нini) для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей |
| WO2007134327A2 (en) * | 2006-05-15 | 2007-11-22 | Sea Lane Biotechnologies, Llc. | Neutralizing antibodies to influenza viruses |
| EP1925318A1 (en) * | 2006-11-20 | 2008-05-28 | Paul-Ehrlich-Institut | Recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA)-based vaccine for the avian flu |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| OKUNO et al., "Common neutralizing epitope conserved between the hemagglutinins of influenza A virus H1 and H2 strains", J.Virol, 1993 May; 67(5), cтр.2552-8, см. Реферат. КASHYAP et al., "Combinatorial antibody libraries from survivors of the Turkish H5N1 avian influenza outbreak reveal virus neutralization strategies", PNAS, vol. 105, no. 16, 22.04.2008, стр.5986-5991. * |
| РОЙТ и др., "Иммунология", пер. с англ.- М.: Мир, 2000, стр.111, 150-151, 153 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2671477C2 (ru) * | 2016-12-30 | 2018-10-31 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBiPr-ABIgA2m1F16-ht ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА А ИЗОТИПА IGA2m1 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2553325C2 (ru) | Нейтрализующие антитела против вируса гриппа а и их использование | |
| US10815294B2 (en) | Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof | |
| US8871207B2 (en) | Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof | |
| EP3831404A1 (en) | Antibodies that potently neutralize rabies virus and other lyssaviruses and uses thereof | |
| JP2020048568A (ja) | Ａ型インフルエンザウイルス中和抗体及びその使用法 | |
| JP6622825B2 (ja) | Ａ型インフルエンザウイルス中和抗体及びその使用法 | |
| JP2017086068A (ja) | Ａ型インフルエンザウイルス中和抗体及びその使用法 |