JP5601836B2 - Ｔｅｓ７およびｔｅｓ７に結合する抗体 - Google Patents

Ｔｅｓ７およびｔｅｓ７に結合する抗体 Download PDF

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Description

本発明は、生物学および免疫療法の分野にある。さらに具体的には、本発明は、新規の疾患およびガン関連抗原ＴＥＳ７、ならびに、ＴＥＳ７に結合するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体と他のポリペプチドに関する。本発明によってはさらに、ＴＥＳ７に結合するアンタゴニスト、調節因子、およびペプチド（抗ＴＥＳ７抗体を含む）を使用する、ＴＥＳ７が関係している様々なヒトの疾患およびガンの診断ならびに／あるいは処置も提供される。
診断におけるそれらの公知の用途に加えて、抗体は、治療薬として有用であることが示されている。例えば、免疫療法、すなわち、治療目的のための抗体の使用が、近年、ガンを処置するために使用されている。受動免疫療法には、ガンの処置におけるモノクローナル抗体の使用が含まれる。例えば、Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，第６版（２００１）２０章、４９５−５０８頁を参照のこと。これらの抗体は、腫瘍細胞の増殖または生存の直接の阻害と、そして体の免疫系の生まれながらの細胞を死滅させる活性を補強するそれらの能力の両方によって、本来備わっている治療的な生物学的活性を有し得る。これらの薬剤は、単独で投与することができ、また、放射線もしくは化学療法薬と組み合わせて投与することもできる。それぞれ、非ホジキンリンパ腫と乳ガンの処置について承認されているリツキシマブとトラスツズマブが、そのような治療の２つの例である。あるいは、抗体は、抗体結合体を作製するために使用することができる。この場合、抗体は、毒物に連結させられ、腫瘍に特異的に結合することによって腫瘍に対してその薬剤を案内する。ゲムツズマブオゾガマイシンは、白血病の処置に使用される承認されている抗体結合体の一例である。ガン細胞に結合し、診断と治療に利用できる可能性があるモノクローナル抗体は、複数の刊行物において開示されている。例えば、以下の特許出願を参照のこと。特に、標的タンパク質のいくつかの分子量を開示しているもの：特許文献１（２００ｋＤのｃ−ｅｒｂＢ−２（Ｈｅｒ２）、および４０〜２００ＫＤの大きさの他の未知の抗原）および特許文献２（５０ｋＤおよび５５ｋＤの腫瘍胎児タンパク質）。臨床試験の段階にある、および／または充実性腫瘍の処置について承認されている抗体の例としては以下が挙げられる：トラスツズマブ（抗原：１８０ｋＤ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、エドレコロマブ（抗原：４０〜５０ｋＤ、Ｅｐ−ＣＡＭ）、抗ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ１）（抗原＞２００ｋＤ、ＨＭＷムチン）、セツキシマブ（抗原：１５０ｋＤおよび１７０ｋＤ、ＥＧＦ受容体）、アレムツズマブ（抗原：２１〜２８ｋＤ、ＣＤ５２）、およびリツキシマブ（抗原：３５ｋＤ、ＣＤ２０）。
乳ガンの処置に使用されるトラスツズマブ（Ｈｅｒ−２受容体）といくつかの種類のガンの処置についての臨床試験中であるセツキシマブ（ＥＧＦ受容体）の抗原標的は、皮膚、結腸、肺、卵巣、肝臓、および膵臓を含む多数の正常なヒトの成人組織上に、ある程度の検出可能なレベルで存在する。このような治療薬を使用する際の安全性の限界は、発現レベル、またはこれらの部位への抗体のアクセスもしくはこれらの部位での抗体活性の違いによって生じると思われる。
別のタイプの免疫療法は、特定のガン（単数または複数）に存在する抗原、または抗原の発現を指示するＤＮＡ構築物を用いる、能動免疫療法、すなわち、ワクチン接種である。これによっては、その後、個体において免疫応答が誘発される、すなわち個体自身のガンに対する抗体を活発に生産するように個体が誘導される。能動免疫化は、受動免疫療法または免疫毒素ほど頻繁には使用されていない。
疾患（ガンを含む）進行のモデルがいくつか示唆されている。理論は単なる感染／形質転換事象による原因から、「疾患様」または「ガン様」タイプの組織が徐々に増殖して最終的に完全な病原性または悪性の組織になる進行までの範囲に及ぶ。ガンに関する議論がいくつかあり、例えば、悪性になるには単一の変異事象が発生するだけで十分であるとする議論がある一方で、それに続く変化もまた必要であるとする別の議論もある。さらに別の議論もいくつか示唆されている。突然変異の負荷と腫瘍の悪性度の増加が細胞レベルでの突然変異−選択事象の連続を介する新生物の組織形成の開始ならびに進行の両方に必要であることが示唆されている。いくつかのガン標的は腫瘍組織の中でのみ発見されているが、他のガン標的は正常組織の中にもあり、腫瘍組織の中ではアップレギュレートされるか、および／または過剰発現される。そのような状況では、悪性の獲得に過剰発現が関連していることを示唆する研究者がいる一方、過剰発現は病状の悪化過程に沿った傾向を示すマーカーに過ぎないと示唆する研究者もいる。
いくつかの場合には、ガン標的（例えば、腫瘍の中で発現されるかまたは過剰発現されるガンタンパク質）は、胚発生と胎児の発育の間に存在し、そして増殖および分化の調節因子としての役割を担うことが示されている。一部の研究者らは、胚発生と胎児の発育の間のこれらのガンタンパク質の発現が特異的組織に限定されるようであり、そしてまた、発育の特定の段階にも限定されるようであることを見出した。対照的に、成人でのこれらのガンタンパク質の発現が、腫瘍の増殖における過剰発現、および／または腫瘍サプレッサータンパク質の誤作動に関係することが示されている。
理想的な診断用および／または治療用抗体は、多数のガンの上に存在するが、いずれの正常組織の上にも存在しないか、または全ての正常な組織上にはわずかしか存在しない抗原に特異的なものである。ガン（単数または複数）に特異的に関係している新規の抗原の発見、特性決定、および単離は、色々な意味で有用であろう。第１に、そのような抗原は、その抗原に対するモノクローナル抗体を作製するために使用することができる。抗体は、ガン細胞に対する生物学的活性を有しており、そして外来抗原に対する免疫系の応答を補強することができることが理想的である。抗体は、治療薬として単独で、もしくは最新の治療法と組み合わせて投与することができ、また、毒物に連結させられた免疫結合体を調製するために使用することもできる。同じ特異性を有しているが、単独で投与された場合には生物学的活性が低いかまたは生物学的活性を持たない抗体はまた、抗体を放射性同位体、毒素、または化学療法薬もしくは化学療法薬を含むリポソームとの免疫結合体を調製するために使用することができる点でも有用であり得、この場合、結合させられた形態は、抗原を含む細胞に対して毒素を導く抗体によって生物学的に活性である。
理想的な診断用および／または治療用抗体について望ましい１つの態様は、様々なガンに関係している抗原の発見と特性決定である。多数のタイプのガンの上で発現され、非ガン性の細胞の上では限定された発現を有している抗原（汎ガン（ｐａｎ−ｃａｎｃｅｒ）抗原）はわずかしか存在しない。そのような抗原の単離と精製が、抗原を標的化する（例えば、診断用または治療用）抗体の作製に有用であろう。「汎ガン」抗原に結合する抗体は、わずかに１つの特異的なタイプのガンに関係している抗原に対する抗体と比較して、異なる組織の中で見られる様々なガンを標的化することができる。この抗原はまた、薬物（例えば、低分子）の発見に、そしてさらには、細胞の調節、増殖、および分化の特性決定にも有用である。
必要なものは、細胞表面の標的を特異的に認識する抗体および他の薬剤で、そのような疾患および／またはがンを診断し、処置するために使用することができる、異常細胞および／またはガン細胞の表面上の新規の標的である。本明細書中に開示される発見に基づくと、ＴＥＳ７の疾患を促進する活性を低下させるかまたは増大させるかのいずれかによって調節することができる、細胞表面上の標的を特異的に認識する新規の抗体ならびに他の薬剤が、さらに必要である。本発明の１つの目的は、その疾患に関係している活性を阻害することができる、ＴＥＳ７の調節因子を同定することである。別の目的は、ＴＥＳ７のアッセイで使用される、そして、免疫原として使用される、あるいは、抗ヒトＴＥＳ７抗体を選択するために使用される、新規の化合物を提供することである。
以下に詳細に記載されるように、本発明では、タンパク質のＢ７−Ｈ３ファミリの新規の抗原（本発明者らは本明細書中で、ＴＥＳ７と呼ぶ）を発見した。類似する複数のポリペプチドが知られている。例えば、マウスＢ７−Ｈ３ホモログの同定が記載されており、Ｔ細胞の増殖とＩＦＮ−γの生産を媒介することが示されているヒトＢ７−Ｈ３遺伝子が特性決定された、非特許文献１を参照のこと。新規のアンタゴニスト、調節因子、および抗体の他の抗原標的もまた記載されている。例えば、新規の抗原ＲＡＡＧ１０と、この新規の抗原標的に対するアンタゴニスト、調節因子、および抗体が記載されている、特許文献３を参照のこと。
Ｂ７−Ｈ３は、Ｉｇ様ドメインを有しているＩ型膜タンパク質である、タンパク質のヒトＢ７ファミリのメンバーである。２つのＩｇ様ドメインを有しているとして最初に同定され、他の研究者らにより、樹状細胞上で発現される４個のＩｇ様ドメインを持つ形態が報告された。研究者らは、これを２個のＩｇ様ドメインを持つ形態と区別するために、４個のＩｇ様ドメインを持つＢ７−Ｈ３を、４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３と命名した。抗４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３抗体で処理された、４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３を発現している神経芽腫細胞は、ＮＫ細胞に対してより敏感である。しかし、この活性の原因が、４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３形態だけに対する抗体によるものであり得るかどうかは、４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３に対して惹起させられた全ての報告されている抗体はまた、Ｂ７Ｈ３の２つのＩｇ様ドメインを持つ形態にも結合するとの理由から、明らかではない（非特許文献２および非特許文献３）。
神経芽細胞腫上での発現に加えて、Ｂ７−Ｈ３はまた、様々なガン細胞上で発現されていることも知られている。本発明者らは、本明細書中に提供される新規のアンタゴニスト、調節因子、および抗体の抗原標的として同定された、ＴＥＳ７と本明細書中で呼ばれる新規の抗原を発見した。
米国特許第６，０５４，５６１号明細書 米国特許第５，６５６，４４４号明細書 国際公開第２００４／００１３８１号パンフレット
Ｓｕｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２，１６８：６２９４−６２９７ Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７２（４）：２３５２−２３５９ Ｃａｓｔｒｉｃｏｎｉら、ＰＮＡＳ ２００４，１０１（３４）：１２６４０−１２６４５
本発明により、様々なヒトのガンの上で発現されるＴＥＳ７に結合する、ＴＥＳ７アンタゴニスト、調節因子、およびモノクローナル抗体が提供される。１つの態様においては、本発明は、ＴＥＳ７に結合するモノクローナル抗体のファミリである。ＴＥＳ７は、Ｂ７−Ｈ３の４Ｉｇ形態と特徴を共有する。
別の態様においては、本発明は、特許管理番号ＰＴＡ−７０９３として、アメリカンタイプカルチャーコレクションに２００５年９月２２日に寄託された宿主細胞株Ｔｅｓｔｉｓ．１．２Ｇ７．１Ｅ１１によって生産されるモノクローナル抗体抗ＴＥＳ７である。別の態様においては、本発明は、特許管理番号ＰＴＡ−８５７６として、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに２００７年８月８日に寄託された宿主細胞株Ｓｔｏｍａｃｈ３．１Ｅ１０．１Ｇ８によって生産される、Ｂ７−Ｈ３の４ＩＧ形態に対するモノクローナル抗体である。
なお別の態様においては、本発明は、異常細胞および／またはガン細胞と反応するモノクローナル抗体抗ＴＥＳ７を作製する方法であり、この方法には、以下の工程が含まれる：（ａ）免疫原で哺乳類宿主を免疫化する工程；（ｂ）哺乳類からリンパ球を得る工程；（ｃ）リンパ球（ｂ）を骨髄腫細胞株と融合させてハイブリドーマを作製する工程；（ｄ）（ｃ）のハイブリドーマを培養してモノクローナル抗体を生産する工程；ならびに、（ｅ）抗体をスクリーニングして、異常細胞および／もしくはガン細胞または細胞株に結合するが、非ガン性もしくは正常な細胞または細胞株には結合しないか、あるいはより低いレベルまたは異なる様式で正常細胞に結合するそのような抗体だけを選択する工程。
別の態様においては、本発明は、抗ＴＥＳ７抗体を作製する方法であり、この方法には、そのような抗体またはその子孫をコードする宿主細胞を抗体産生が可能な条件下で培養する工程、および、抗ＴＥＳ７抗体を精製する工程が含まれる。
別の態様においては、本発明により、本明細書中に記載される任意の抗体（またはポリペプチド）を作製する方法が提供される。この方法は、抗体をコードする１つ以上のポリヌクレオチド（１つの軽鎖または重鎖として別々に発現させることができ、また、軽鎖と重鎖の両方を１つのベクターから発現させられる場合もある）を適切な細胞の中で発現させ、一般的にはその後に、目的の抗体またはポリペプチドを回収および／または単離することによる。
別の態様においては、本発明は、抗ＴＥＳ７抗体のＴＥＳ７への優先的結合を競合的に阻害する抗ＴＥＳ７抗体またはポリペプチド（抗体である場合も、また、抗体ではない場合もある）である。いくつかの実施形態においては、本発明は、他の抗ＴＥＳ７抗体としてＴＥＳ７上の同じまたは異なるエピトープ（単数または複数）に優先的に結合する抗体またはポリペプチド（抗体である場合も、また、抗体ではない場合もある）である。
別の態様においては、本発明は、抗ＴＥＳ７抗体のＴＥＳ７への優先的結合を競合的に阻害するＴＥＳ７調節因子（ポリペプチドである場合も、また、ポリペプチドではない場合もある）である。いくつかの実施形態においては、本発明は、他の抗ＴＥＳ７抗体としてＴＥＳ７上の同じまたは異なるエピトープ（単数または複数）に優先的に結合する低分子または化合物であり得る。
なお別の態様においては、本発明は、ＴＥＳ７のエピトープに特異的な抗体によって結合されたＴＥＳ７を含む組成物である。１つの実施形態においては、抗体は抗ＴＥＳ７である。他の実施形態においては、２つ以上の抗ＴＥＳ７抗体が、ＴＥＳ７上の２つ以上の異なるエピトープにマッピングするそのような抗体とともに投与される。いくつかの実施形態においては、抗ＴＥＳ７抗体は治療薬または検出標識に連結させられる。
別の態様においては、本発明は、抗ＴＥＳ７抗体の断片または領域を含む抗体である。１つの実施形態においては、断片は抗体の軽鎖である。別の実施形態においては、断片は抗体の重鎖である。さらに別の実施形態においては、断片には、抗体の軽鎖および／または重鎖に由来する１つ以上の可変領域が含まれる。なお別の実施形態においては、断片には、抗体の軽鎖および／または重鎖に由来する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。
別の態様においては、本発明により、以下のうちの任意のものを含むポリペプチド（抗体である場合も、また、抗体ではない場合もある）が提供される：抗ＴＥＳ７抗体の（ａ）軽鎖または重鎖に由来する１つ以上のＣＤＲ（またはその断片）；（ｂ）軽鎖に由来する３つのＣＤＲ；（ｃ）重鎖に由来する３つのＣＤＲ；（ｄ）軽鎖に由来する３つのＣＤＲと重鎖に由来する３つのＣＤＲ；（ｅ）軽鎖可変領域；（ｆ）重鎖可変領域。
別の態様においては、本発明はヒト化抗体である。いくつかの実施形態においては、ヒト化抗体には、非ヒト抗ＴＥＳ７抗体の１つ以上のＣＤＲが含まれる。いくつかの実施形態においては、ヒト化抗体は、他の抗ＴＥＳ７抗体と同じまたは異なるエピトープ（単数または複数）に結合する。一般的には、本発明のヒト化抗体は、元になっている非ヒト抗ＴＥＳ７抗体のＣＤＲ（単数または複数）と同じであるかおよび／またはそれに由来する１つ以上（１個、２個、３個、４個、５個、６個、またはその断片）のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態においては、ヒト抗体は、別の抗ＴＥＳ７抗体と同じまたは異なるエピトープ（単数または複数）に結合する。別の態様においては、本発明は、非ヒト抗ＴＥＳ７抗体の重鎖および軽鎖の可変領域に由来する可変領域と、ヒト抗体の重鎖および軽鎖の定常領域由来の定常領域が含まれているキメラ抗体である。
別の態様においては、本発明は、ＡＴＣＣ寄託管理番号７０９３の宿主細胞、またはその子孫によって産生される抗体ｍｕ−抗ＴＥＳ７をコードする単離されたポリヌクレオチドである。本発明には、上記に特定されている任意のうちの任意のもの固有の結合活性または生物学的活性を有している抗体ポリペプチドが含まれる。別の態様においては、本発明により、任意の抗体（抗体断片を含む）をコードするポリヌクレオチド、ならびに、本明細書中に記載される他の任意のポリペプチドが提供される。
別の態様においては、本発明は、任意のポリペプチド（本明細書中に記載される任意の抗体を含む）または本明細書中に記載されるポリヌクレオチドと、薬学的に許容される賦形剤が含まれている薬学的組成物であり、そのような薬学的組成物には、化学療法薬に連結させられた抗ＴＥＳ７抗体、抗ＴＥＳ７抗体の断片が含まれている抗体、非ヒト抗ＴＥＳ７抗体のヒト化抗体、非ヒト抗ＴＥＳ７抗体の可変領域に由来する可変領域とヒト抗体に由来する定常領域が含まれているキメラ抗体、または非ヒト抗ＴＥＳ７抗体の特性を１つ以上有しているヒト抗体、または化学療法薬（放射性成分など）に連結させられた本明細書中に記載される任意の抗ＴＥＳ７抗体が含まれる。
１つの態様においては、本発明は、異常細胞またはガン細胞上にあるＴＥＳ７に結合させられた抗ＴＥＳ７抗体が含まれている組成物である。好ましい実施形態においては、ガン細胞は、腎臓、肺、および前立腺のガン細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態においては、ガン細胞は単離されている。いくつかの実施形態においては、ガン細胞は生物学的試料中にある。一般的には、生物学的試料は、個体（例えば、ヒト）に由来するものである。
別の態様においては、本発明は、個体に由来する細胞上のＴＥＳ７を検出することによって個体の疾患、特に、個体の炎症反応または自己免疫応答に関係している疾患または障害を診断する方法である。本発明の他の態様においては、個体の炎症反応または自己免疫応答を調節するための方法が提供される。本発明の組成物および方法を使用する処置を施すことができる炎症および自己免疫性疾患によって生じる疾患および状態としては、例えば、多発性硬化症、髄膜炎、脳炎、脳卒中、他の大脳外傷、炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎およびクローン病を含む）、重症筋無力症、狼瘡、関節リウマチ、喘息、急性若年型糖尿病、ＡＩＤＳによる認知症、アテローム性動脈硬化症、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および白血球媒介性急性肺傷害が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の抗体および他の治療薬が治療的に使用されるさらに他の適応症としては、臓器または移植片の拒絶のリスクがある個体への投与が挙げられる。近年、組織および臓器（例えば、皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓および骨髄）を移植するための外科手術技術の効率性に著しい改善が見られる。特に重要な問題は、移植された同種移植片または臓器に対してレシピエントにおいて免疫トレランスを誘導するための薬剤として満足のいく薬剤が得られていないことであると考えられる。同種異系細胞または臓器が宿主（すなわち、提供者および被提供者が同種であるが異なる個体である）に移植される場合は、宿主の免疫系は、おそらく、移植物の外部抗原に対し免疫応答（宿主対移植片病）を開始し、これは、移植された組織の破壊につながる。
別の態様においては、本発明は、個体がガンを有しているかどうかを診断するための方法であり、この方法には、個体から選択された細胞上にＴＥＳ７の発現があるかどうか決定する工程が含まれる。この場合、上記細胞上でのＴＥＳ７の発現は、上記ガンの指標である。いくつかの実施形態においては、ＴＥＳ７の発現は、抗ＴＥＳ７抗体を使用して決定される。いくつかの実施形態においては、この方法には、細胞によるＴＥＳ７発現のレベルを検出する工程が含まれる。本明細書中で使用される場合には、用語「検出」には、対照との対比の有無とは無関係に、質的検出および／または量的検出（測定レベル）が含まれる。
なお別の態様においては、本発明は、個体に由来する細胞上または細胞から放出されるＴＥＳ７を検出することによって個体のガンを診断する方法である。この場合、ガンは、以下を含む群より選択されるが、これらに限定されない：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン（有棘細胞ガン腫および移行上皮ガン腫）、骨のガン（アダマンチノーマ、動脈瘤様（ａｎｅｕｒｉｓｍａｌ）骨嚢腫、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫（ｄｈｏｒｄｏｍａ）、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨（ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｍｐｅｒｆｅｃｔａ ｏｓｓｉｕｍ）、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞ガン腫）、白血病、脂肪腫／良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性の脂肪性腫瘍、肝ガン（肝芽腫、肝細胞ガン）、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫（ｐｈａｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ）、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜（ｐｏｓｔｅｒｉｏｕｓ ｕｎｖｅａｌ）黒色腫、まれな血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫（ｒｈａｂｄｏｍｙｓａｒｃｏｍａ）、肉腫、皮膚ガン、軟組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン（頚部のガン腫、子宮内膜ガン腫、および平滑筋腫）。
別の態様においては、本発明は、個体に由来する生物学的試料中のＴＥＳ７の発現を決定する工程を含む、個体のガン（例えば、腎臓、肺、および前立腺のガンであるが、これらに限定されない）の診断を補助するための方法である。いくつかの実施形態においては、ＴＥＳ７の発現は、抗ＴＥＳ７抗体を使用して決定される。いくつかの実施形態においては、この方法は、細胞によるＴＥＳ７の発現のレベルを検出することである。ガンから放出されたＴＥＳ７は、体液（例えば、血液、唾液、または胃粘膜の分泌液）の中で検出することができるＴＥＳ７の高いレベル、またはその一部の原因となり得る。
なお別の態様においては、本発明は、ガン細胞の増殖を低下させるために十分な、有効量のＴＥＳ７に結合する抗体を投与することによってガンを処置する方法である。いくつかの実施形態においては、抗体は抗ＴＥＳ７抗体である。特定の実施形態においては、ガン細胞は、以下からなる群より選択されるが、これらに限定はされない：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン（有棘細胞ガン腫および移行上皮ガン腫）、骨のガン（アダマンチノーマ、動脈瘤様骨嚢腫、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞ガン腫）、白血病、脂肪腫／良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性の脂肪性腫瘍、肝ガン（肝芽腫、肝細胞ガン）、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜黒色腫、まれな血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚ガン、軟組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン（頚部のガン腫、子宮内膜ガン腫、および平滑筋腫）。特定の好ましい実施形態においては、ガン細胞は、乳ガン、大腸ガン、前立腺ガン、肺ガン、肉腫、転移性腎ガン、転移性甲状腺ガン、および明細胞ガン腫を含む充実性腫瘍の群から選択されるが、これらに限定されない。
なお別の態様においては、本発明は、ガンを有している個体内での転移の進行を遅らせる方法であり、この方法には、ＴＥＳ７に特異的に結合する抗体の少なくとも１つのファミリの有効量を投与する工程が含まれる。１つの実施形態においては、抗体は抗ＴＥＳ７抗体である。別の態様においては、本発明は、インビトロまたは個体内でガン細胞の成長および／または増殖を阻害する方法であり、この方法には、化学療法薬と会合させられた（化学療法薬に連結させられたことを含む）抗ＴＥＳ７抗体が含まれている組成物の有効量を、細胞培養物もしくは試料、または個体に投与する工程が含まれる。
なお別の態様においては、本発明は、ＴＥＳ７に特異的に結合する抗体ファミリの少なくとも１つのメンバーの有効量を個体に投与することによって、個体内のガン細胞に治療薬を送達する方法である。他の実施形態においては、抗ＴＥＳ７抗体は、別の治療薬と組み合わせて（別の治療薬に連結させられていることを含む）を個体に送達される。
いくつかの実施形態においては、抗ＴＥＳ７抗体は、本明細書中で命名された抗体から誘導されたヒト化抗体である（通常は、抗体の部分的または完全なＣＤＲのうちの１つ以上が含まれているが、必ずしもそうであるとは限らない）。いくつかの実施形態においては、抗ＴＥＳ７抗体は、命名された抗体の１つ以上の特性を持っているヒト抗体である。いくつかの実施形態においては、化学療法薬（例えば、毒素または放射性分子）がガン細胞に送達される（インターナライズさせられる）。いくつかの実施形態においては、薬剤はサポリンである。
別の態様においては、本発明は個体内のガンを処置する方法であり、この方法には、化学療法薬と会合させられた（化学療法薬に連結させられたことを含む）抗ＴＥＳ７抗体が含まれている組成物の有効量を個体に投与する工程が含まれる。
本発明によってはさらに、細胞質シグナル伝達パートナーとのＴＥＳ７の会合を調節する（強化するかまたは減少させるかのいずれかによる）ための方法が提供される。細胞質シグナル伝達パートナーとのＴＥＳ７の会合は、細胞表面上に存在しているＴＥＳ７分子を、ＴＥＳ７に対するシグナル伝達パートナーの結合を調節する薬剤と接触させることによって、影響をうけ得る。ＴＥＳ７のその結合パートナーおよび／またはシグナル伝達パートナーとの会合をブロックするかまたは減少させる薬剤を使用して、ＴＥＳ７によって媒介される炎症または免疫応答に関与している生物学的および病理学的プロセスを調節することができる。この作用が含まれている病理学的プロセスとしては、腫瘍に関連する細胞増殖が挙げられる。
薬剤は、結合パートナー（例えば、抗ＴＥＳ７抗体）とのＴＥＳ７の会合をブロックする、減少させる、強化する、または別の方法で調節するそれらの能力について試験することができる。具体的には、ＴＥＳ７相互作用部位（典型的には、完全な生存している細胞上にそれが存在している場合のその自然な立体構造である）を含むペプチドを結合パートナーおよび試験薬剤とともにインキュベートし、試験薬剤が結合パートナーのＴＥＳ７ペプチドに対する結合を減少させるかまたは強化するかを決定することによって、薬剤をそのような相互作用を調節する能力について試験することができる。
ＴＥＳ７機能のアゴニスト、アンタゴニスト、および他の調節因子が、明白に、本発明の範囲に含まれる。これらのアゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子は、ＴＥＳ７の抗原決定基のうちの１つ以上を含むか、または、そのような部位の１つ以上の断片、そのような部位の変異体、もしくはそのような部位のペプチド模倣物を含むポリペプチドである。これらのアゴニスト化合物、アンタゴニスト化合物、およびＴＥＳ７調節化合物は、直鎖形態または環化された形態で提供され、これには状況に応じて、自然界では一般的には見られない少なくとも１つのアミノ酸残基、または少なくとも１つのアミド等量式が含まれる。これらの化合物は、グリコシル化される場合がある。本発明のＴＥＳ７機能のアゴニスト、アンタゴニスト、および他の調節因子は、抗体に関して上記に記載された実施形態と方法の全てにおいて使用されることが望ましい。
本発明の別の態様は、本明細書中で同定され、ＴＥＳ７と呼ばれる新規の抗原に関する。この抗原は免疫原としての使用に適しており、そして、様々な研究、診断上および治療上の目的に適している。
特定の態様においては、本発明は個体の疾患の診断を補助するための方法であり、この方法には以下の工程が含まれる：（ｉ）個体から得られた血液または組織試料中のＴＥＳ７の存在をアッセイする工程；（ｉｉ）上記試料が、正常な（罹患していない）血液または組織試料と比べて、多量のＴＥＳ７マーカーを有しているかどうかを決定する工程；および（ｉｉｉ）上記マーカーの量の増加を疾患の陽性診断と関連付けるか、上記マーカーの量の増加が無いことを疾患の陰性診断と関連付ける工程。特定の実施形態においては、マーカーは抗ＴＥＳ７抗体を使用して検出される。特定の実施形態においては、この方法は、放射性核種イメージング、フローサイトメトリー、および免疫組織化学からなる群から選択される技術によって行われる。
例えば、本発明の好ましい実施形態では、以下が提供される：
（項目１）
ＴＥＳ７に特異的に結合し、以下の特徴のうちの少なくとも一つ以上を有する、実質的に精製された免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片：
ａ．ガン細胞上のＴＥＳ７に結合する能力；
ｂ．インビトロまたはインビボで生存している細胞の表面上に露出しているＴＥＳ７の一部に結合する能力；
ｃ．ＴＥＳ７を発現しているガン細胞に治療薬または検出マーカーを送達する能力；および
ｄ．ＴＥＳ７を発現しているガン細胞の中に治療薬または検出マーカーを送達する能力。
（項目２）
前記ガン細胞が以下に由来するガン細胞からなる群から選択される、項目１に記載の精製された免疫グロブリンポリペプチドまたは抗原結合断片：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン（有棘細胞ガン腫および移行上皮ガン腫）、骨ガン（アダマンチノーマ、動脈瘤様骨嚢腫、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭部および頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞ガン腫）、白血病、脂肪腫／良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性の脂肪性腫瘍、肝ガン（肝芽腫、肝細胞ガン）、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜黒色腫、まれな血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚ガン、軟部組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン（頚部のガン腫、子宮内膜ガン腫、および平滑筋腫）。
（項目３）
項目１に記載の免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片をコードする単離された核酸配列。
（項目４）
前記核酸がプロモータに作動可能に連結されている、項目３に記載の核酸。
（項目５）
前記プロモータおよび前記核酸が発現ベクターに含まれている、項目４に記載の核酸。
（項目６）
前記ポリペプチドがモノクローナル抗体である、項目３に記載の核酸。
（項目７）
項目３に記載の核酸を含むベクターでトランスフェクトされたか、形質転換されたか、または感染させられた細胞株。
（項目８）
実質的に精製された免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片を産生する方法であって：
ａ．該免疫グロブリンポリペプチドまたは抗原結合断片を発現させる条件下で、項目３に記載の核酸で形質転換された細胞株を増殖させる工程；および
ｂ．該発現させた免疫グロブリンポリペプチドまたは断片を回収する工程
を含む、方法。
（項目９）
前記細胞株がハイブリドーマである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記ハイブリドーマがＡＴＣＣ番号ＰＴＡ＃７０９３である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記免疫グロブリンポリペプチドがモノクローナル抗体である、項目８に記載の方法。
（項目１２）
治療有効用量の項目１に記載の精製された免疫グロブリンまたは抗原結合断片が薬学的に許容される担体とともに含まれている、薬学的組成物。
（項目１３）
ＴＥＳ７に特異的に結合し、以下の特徴のうちの少なくとも一つ以上を有する、治療有効用量のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が薬学的に許容される担体とともに含まれている、薬学的組成物：
ａ．ガン細胞上のＴＥＳ７に結合する能力、
ｂ．インビトロまたはインビボで生存している細胞の表面上に露出しているＴＥＳ７の一部に結合する能力；
ｃ．ＴＥＳ７を発現しているガン細胞に治療薬または検出マーカーを送達する能力；および
ｄ．ＴＥＳ７を発現しているガン細胞の中に治療薬または検出マーカーを送達する能力。
（項目１４）
前記組成物にさらに別の治療用部分が含まれている、項目１３記載の薬学的組成物。
（項目１５）
ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ＃７０９３またはその子孫からなる単離された細胞株。
（項目１６）
化学療法薬と結合した抗ＴＥＳ７抗体が含まれている組成物を投与する工程を含む、化学療法薬をガン細胞に送達するための方法であって、ここでは、該ガン細胞は、以下に由来するガン細胞からなる群より選択される、方法：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン（有棘細胞ガン腫および移行上皮ガン腫）、骨ガン（アダマンチノーマ、動脈瘤様骨嚢腫、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭部および頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞ガン腫）、白血病、脂肪腫／良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性の脂肪性腫瘍、肝ガン（肝芽腫、肝細胞ガン）、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜黒色腫、まれな血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚ガン、軟部組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン（頚部のガン腫、子宮内膜ガン腫、および平滑筋腫）。
（項目１７）
前記化学療法薬が個体に投与される、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
ハイブリドーマが、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ＃７０９３またはその子孫である、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
化学療法薬と結合した抗ＴＥＳ７抗体が含まれている有効量の組成物を個体に投与する工程を含む、該個体内でのガン細胞の増殖を阻害する方法であって、ここでは、該ガン細胞は、以下に由来するガン細胞からなる群より選択される、方法：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン（有棘細胞ガン腫および移行上皮ガン腫）、骨ガン（アダマンチノーマ、動脈瘤様骨嚢腫、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭部および頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞ガン腫）、白血病、脂肪腫／良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性の脂肪性腫瘍、肝ガン（肝芽腫、肝細胞ガン）、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜黒色腫、まれな血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚ガン、軟部組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン（頚部のガン腫、子宮内膜ガン腫、および平滑筋腫）。
（項目２０）
前記化学療法薬が前記ガン細胞に送達される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記抗ＴＥＳ７抗体が、ハイブリドーマＡＴＣＣ番号ＰＴＡ＃７０９３またはその子孫によって発現されるモノクローナル抗体である、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
個体由来の細胞を抗ＴＥＳ７抗体と接触させる工程、および、存在する場合には、該細胞由来のＴＥＳ７と該抗体の複合体を検出する工程を含む個体内のガン細胞の有無を検出するための方法であって、ここでは、該ガン細胞は、以下に由来するガン細胞からなる群より選択される、方法：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン（有棘細胞ガン腫および移行上皮ガン腫）、骨ガン（アダマンチノーマ、動脈瘤様骨嚢腫、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭部および頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞ガン腫）、白血病、脂肪腫／良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性の脂肪性腫瘍、肝ガン（肝芽腫、肝細胞ガン）、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜黒色腫、まれな血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚ガン、軟部組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン（頚部のガン腫、子宮内膜ガン腫、および平滑筋腫）。
（項目２３）
ＴＥＳ７とＴＥＳ７結合パートナーとの間での以下の相互作用のうちの少なくとも１つをブロックする薬剤：
ａ．ガン細胞上のＴＥＳ７に結合する能力；
ｂ．インビトロまたはインビボで生存している細胞の表面上に露出しているＴＥＳ７の一部に結合する能力；
ｃ．ＴＥＳ７を発現しているガン細胞に治療薬または検出マーカーを送達する能力；および
ｄ．ＴＥＳ７を発現しているガン細胞の中に治療薬または検出マーカーを送達する能力。
（項目２４）
治療有効用量の項目２３に記載の薬剤が薬学的に許容される担体とともに含まれている、薬学的組成物。
（項目２５）
以下の特徴のうちの少なくとも１つを有している、ＴＥＳ７調節因子：
ａ．ヒトＴＥＳ７と天然のＴＥＳ７リガンドとの間での相互作用を破壊するかまたはブロックする能力；
ｂ．ヒトＴＥＳ７と抗ＴＥＳ７抗体との間での相互作用を破壊するかまたはブロックする能力；
ｃ．ヒトＴＥＳ７に結合する能力；
ｄ．ヒトＴＥＳ７の天然のリガンドに結合する能力
ｅ．抗ＴＥＳ７抗体に結合する能力；
ｆ．ヒトＴＥＳ７、天然のＴＥＳ７リガンド、または抗ＴＥＳ７抗体に結合することができる抗体を惹起させることにおいて使用することができる抗原性部位を含む；
ｇ．ヒトＴＥＳ７、天然のＴＥＳ７リガンド、または抗ＴＥＳ７抗体に結合することができる抗体のスクリーニングに使用することができる抗原性部位を含む；
ｈ．ヒトＴＥＳ７と天然のＴＥＳ７リガンドとの間、またはＴＥＳ７と抗ＴＥＳ７抗体との間での相互作用を破壊するかまたはブロックすることができる抗体を惹起させることにおいて使用することができる抗原性部位を含む；
ｉ．ヒトＴＥＳ７と天然のＴＥＳ７リガンドとの間、またはＴＥＳ７と抗ＴＥＳ７抗体との間での相互作用を破壊するかまたはブロックすることができる抗体のスクリーニングに使用することができる抗原性部位を含む。
（項目２６）
ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−８５７６またはその子孫からなる単離された細胞株。
図１は、ヒトの膵臓腺ガン細胞株Ｈｓ７００Ｔの増殖に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７とＭａｂ−ＺＡＰ（サポリンに結合させられた抗ＩｇＧ）の作用のグラフによる結果を示す。 図２は、抗ＴＥＳ７抗体、ｍｕ−抗ＴＥＳ７による単層として増殖させられた、ヒトの結腸直腸腺ガン細胞株ＨＴ２９のインビトロでの阻害を示している実験のグラフによる結果を示す。 図３は、組み換え体ヒトＢ７Ｈ３とｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体を使用したウェスタンブロット実験の結果を示す。 図４は、４−Ｉｇ−ループＢ７−Ｈ３に優先的に結合するｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体を示しているＥＬＩＳＡアッセイのグラフによる結果を示す。 図５は、ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体がＣＳＣ−ＢＭＣ同時培養物の中でのＶＥＧＦの分泌を減少させたことを示す。 図６は、ｍｕ−抗ＴＥＳ７がＢＭＣまたはＣＳＣ−ＢＭＣ同時培養物の中でのＭＩＰ−１α（ＣＣＬ３）の分泌を減少させたことを示す。 図７は、捕捉抗体でブロックされたプレートの中の５マイクログラム／ｍｌの濃度の捕捉抗体では、ｍｕ−抗ＴＥＳ７が濃度依存性の様式で結合したことを示す（四角、左側の図）。 図８は、インビボで腫瘍の増殖を低下させるｍｕ−抗ＴＥＳ７の能力を、皮下異種移植モデルにおいて試験したことを示す。 図９は、ＣＳＣ−ＢＭＣ同時培養物の中でのＶＥＧＦの分泌のｍｕ−抗ＴＥＳ７による減少を示す（ＶＥＧＦ発生率：３／７）。 図１０は、ＢＭＣまたはＣＳＣ−ＢＭＣ同時培養物の中でのＭＩＰ−１α（ＣＣＬ３）の分泌のｍｕ−抗ＴＥＳ７による減少を示す（ＣＣＬ３、発生率：６／７）。 図１１は、マウス抗ＴＥＳ７抗体（ＴＥＳ７−ＶＫ）と２つのヒト化変異体ＴＥＳ７−ＨｕＶＫ１およびＴＥＳ７−ＨｕＶＫ２の可変軽鎖配列を示す。ＣＤＲ配列はオレンジ色である。ヒト化バージョンについては、考えられるアミノ酸は、特に明記されない限りは、ヒト配列ＡＡＫ９４８０８の中に示されるアミノ酸と同じである。 図１２は、マウス抗ＴＥＳ７抗体（ＴＥＳ７−ＶＨ）と２つのヒト化変異体ＴＥＳ７−ＨｕＶＨ１およびＴＥＳ７−ＨｕＶＨ２の可変重鎖配列を示す。ＣＤＲ配列はオレンジ色である。ヒト化バージョンについては、考えられるアミノ酸は、特に明記されない限りは、ヒト配列ＡＡＡ１８２７９に示されるアミノ酸と同じである。
本発明により、肺ガン、前立腺ガン、および腎臓ガンを含むがこれらに限定されない種々のタイプの組織を起源とするガン細胞上で発現される新規の抗原ＴＥＳ７が提供される。さらに、本発明により、ＴＥＳ７に結合するモノクローナル抗体およびポリペプチドが提供され、ならびに、ＴＥＳ７の発現および／または過剰発現が関係している様々なヒトのガン疾患を診断し、処置するためにこれらの抗体およびポリペプチドを作製し使用する方法が提供される。
Ｉ．一般的技術
本発明の実施では、特に明記されない限りは、当業者の能力の範囲内にある分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技術が使用されるであろう。そのような技術は、例えば、以下のような文献の中で十分に説明されている：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ，１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８−１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）；およびＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａら編、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）。
ＩＩ．定義
「Ｂ７−Ｈ３」は、Ｉｇ様ドメインを有しているＩ型膜タンパク質である、タンパク質のＢ７ファミリのメンバーである。Ｂ７−Ｈ３は、２つのＩｇ様ドメインを有しているとして最初に特性決定され、それから、複数の研究者らにより、ヒト樹状細胞上で発現される、Ｂ７−Ｈ３の４個のＩｇ様ドメインを持つ形態が報告された。研究者らは、これを２個のＩｇ様ドメインを持つ形態と区別するために、４個のＩｇ様ドメインを持つものを、４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３と命名した。（Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７２（４）：２３５２−２３５９、およびＣａｓｔｒｉｃｏｎｉら、ＰＮＡＳ ２００４，１０１（３４）：１２６４０−１２６４５）。
「ＴＥＳ７」は、本発明の抗体がそれに対して向けられる新規の抗原である、Ｂ７−Ｈ３の４Ｉｇイソ型の特徴を共有している抗原をいう。ＴＥＳ７は、抗ＴＥＳ７抗体によって結合される細胞表面タンパク質であり、正常なヒトの膵臓および肝臓組織と、いくつかのタイプのガン腫の上に存在する。この抗原は、１つ以上の異なるエピトープを有している場合があり、これらのエピトープは直鎖状ではない場合がある。いくつかの抗Ｂ７−Ｈ３抗体は、４Ｉｇイソ型上にしか存在しないいくつかのものを含む、直鎖状ではないエピトープに結合することが知られている。現在のところ、ＴＥＳ７は、それらの正常組織である対照物と比較して、特定のガン細胞の中で過剰発現される場合があると考えられている。
ＴＥＳ７機能のアゴニスト、アンタゴニスト、および他の調節因子が、明白に、本発明の範囲に含まれる。これらのアゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子は、ＴＥＳ７の抗原決定基部位のうちの１つ以上を含むか、または、そのような部位の１つ以上の断片、そのような部位の変異体、もしくはそのような部位のペプチド模倣物を含むポリペプチドである。これらのアゴニスト化合物、アンタゴニスト化合物、およびＴＥＳ７調節化合物は、直鎖形態または環化された形態で提供され、これには状況に応じて、自然界では一般的には見られない少なくとも１つのアミノ酸残基、または少なくとも１つのアミド等量式が含まれる。これらの化合物は、グリコシル化される場合がある。
さらに具体的には、用語「ＴＥＳ７調節因子」は、本明細書中で使用される場合は、以下の化合物のいずれかであると定義される：（１）ヒトＴＥＳ７とその天然のリガンドまたは抗ＴＥＳ７抗体との間での相互作用を破壊するかまたはブロックすることができる化合物；（２）ヒトＴＥＳ７およびその天然のリガンドまたは抗ＴＥＳ７抗体に結合することができる化合物；（３）ヒトＴＥＳ７およびその天然のリガンドまたは抗ＴＥＳ７抗体に結合できる抗体を惹起させることにおいて使用することができる抗原部位を含む化合物；（４）ヒトＴＥＳ７およびその天然のリガンドまたは抗ＴＥＳ７抗体に結合できる抗体のスクリーニングにおいて使用することができる抗原性部位を含む化合物；（５）ヒトＴＥＳ７とその天然のリガンドまたは抗ＴＥＳ７抗体との間での相互作用を破壊するかまたはブロックすることができる抗体を惹起させることにおいて使用することができる抗原性部位を含む化合物；（６）ヒトＴＥＳ７と天然のリガンドまたは抗ＴＥＳ７抗体との間での相互作用を破壊するかまたはブロックすることができる抗体のスクリーニングにおいて使用することができる抗原性部位を含む化合物。ＴＥＳ７調節因子は、それらの活性が正常なＴＥＳ７生物学的活性を強化するかまたは阻害するかに応じて、それぞれ、「ＴＥＳ７アゴニスト」である場合も、また、「ＴＥＳ７アンタゴニスト」である場合もある。
ＴＥＳアゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子には、ＴＥＳ７変異体、ＴＥＳ７ペプチドアンタゴニスト、ペプチド模倣物、および低分子、抗ＴＥＳ７抗体および免疫グロブリン変異体、アミノ酸置換、欠失、および付加変異、またはそれらの任意の組み合わせを含むヒトＴＥＳ７のアミノ酸変異体、ならびにキメラ免疫グロブリンが含まれる。本発明のＴＥＳ７アゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子は、ヒトＴＥＳ７のその天然のリガンドまたは抗ＴＥＳ７抗体への結合に関与しているＴＥＳ７ドメインの本発明者らによる同定に基づく。したがって、本発明により、ヒトＴＥＳ７の抗ＴＥＳ７結合ドメインの１つ以上を複写するかまたは模倣する分子構造を有しているＴＥＳ７アゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子が提供される。
本明細書中で使用される場合は、用語「ＴＥＳ７変異体」は、アミノ酸置換、欠失、および付加変異、またはそれらの任意の組み合わせを含む、ヒトＴＥＳ７のアミノ酸変異体を示す。この定義には、ヒトＴＥＳ７／非ヒトキメラのようなキメラ分子、および他のハイブリッド分子も含まれる。その分子の変異体またはハイブリッド領域（単数または複数）を含むＴＥＳ７変異体分子の任意の断片も、この定義に含まれる。
「抗体」は、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に対して、免疫グロブリン分子の可変領域の中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書中で使用される場合は、この用語には、完全なポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけではなく、それらの断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの突然変異体、天然の変異体、必要とされる特異性がある抗原認識部位をもつ抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および必要とされる特異性がある抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構造も含まれる。
「モノクローナル抗体」は、均質な抗体群をいう。この場合、モノクローナル抗体は、抗原の選択的結合に関与するアミノ酸（天然のもの、および自然界には存在しないもの）から構成される。モノクローナル抗体は、特異性が極めて高く、１つの抗原性部位を標的とする。用語「モノクローナル抗体」には、完全なモノクローナル抗体と全長のモノクローナル抗体だけではなく、それらの断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの突然変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、および必要とされる特異性と抗原に結合する能力がある抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構造も含まれる。この用語は、抗体の供給源または抗体が作製される方法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物など）に関して限定されるようには意図されない。この用語には、免疫グロブリン全体、さらには、「抗体」の定義の中で上記に記載された断片なども含まれる。
「ヒト化」抗体は、ヒト以外の種に由来する免疫グロブリンから導かれた抗原結合部位を有しており、ヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づくその分子の残りの免疫グロブリンの構造を有している、組換え技術を使用して一般的に調製されたキメラ分子をいう。抗原結合部位には、定常ドメインに融合させられた完全な可変ドメインが含まれる場合があり、また、可変ドメインの中の適切なフレームワーク領域上に繋がれた相補性決定領域（ＣＤＲ）だけが含まれる場合もある。抗原結合部位は、野生型である場合も、また、１つ以上のアミノ酸置換によって修飾される場合もある。これによって、ヒト個体の中での免疫原としての定常領域が排除されることになるが、外来性の可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，Ａ．Ｆ．ら（１９８９）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：４２２０−４２２４）。別のアプローチでは、ヒト由来の定常領域を提供することだけでなく、可変領域を修飾し、それらをヒト形態にできるだけ近くなるよう形を整えることにも焦点があてられる。重鎖および軽鎖の可変領域はいずれも、問題の抗原に応答して変化し、そして結合能力を決定付ける３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、相補性決定領域には、任意の種において比較的保存されており、ＣＤＲの足場を提供していると推測される四つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接していることが公知である。特定の抗原に対する非ヒト抗体が調製される場合には、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを修飾されるヒト抗体の中に存在するＦＲ上に繋ぐことにより、可変領域を「再形成する（ｒｅｓｈａｐｅｄ）」または可変領域を「ヒト化する」ことができる。このアプローチの種々の抗体への適用は、例えば、以下によって報告されている：Ｓａｔｏ，Ｋ．ら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５３：８５１−８５６．Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｍ．ら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：７７３−３７８３；Ｍａｅｄａ，Ｈ．ら（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：１２４−１３４；Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．ら（１９９１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：４１８１−４１８５；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．Ｒ．ら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６−２７１；Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ら（１９９１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：２８６９−２８７３；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ら（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：４２８５−４２８９；およびＣｏ，Ｍ．Ｓ．ら（１９９２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８：１１４９−１１５４。いくつかの実施形態においては、ヒト化抗体は、全てのＣＤＲ配列を維持する（例えば、マウス抗体に由来する６個のＣＤＲを全て含むヒト化マウス抗体）。他の実施形態においては、ヒト化抗体は、もとの抗体と比較して変化したＣＤＲを１つ以上（１個、２個、３個、４個、５個、６個）有しており、これは、もとの抗体に由来する１つ以上のＣＤＲ「に由来する」１つ以上のＣＤＲとも呼ばれる。
抗体またはポリペプチドに「特異的に結合する」または「優先的に結合する」（本明細書中では互換的に使用される）エピトープは、当該分野で十分に理解されている用語であり、そのような特異的または優先的結合を決定する方法も当該分野では周知である。分子が、別の細胞または物質よりも、特定の細胞または物質と、より頻繁に、より迅速に、より長い期間、および／またはより強い親和性で反応するか、あるいは会合する場合には、その分子は、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体は、それが、他の物質に結合するよりも、標的に対して強い親和性で、結合力で、より迅速に、および／またはより長い期間結合する場合には、抗体は、標的に対して「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、特異的または優先的にＴＥＳ７エピトープに結合する抗体は、それが他のＴＥＳ７エピトープまたは非ＴＥＳ７エピトープに結合するよりも大きな親和力で、より大きな結合力で、より容易に、および／または長い時間、このＴＥＳ７エピトープに結合する抗体である。例えば、特異的または優先的に第１の標的に結合する抗体（または、部分もしくはエピトープ）は、第２の標的に対して特異的または優先的に結合する場合があり、また、そうではない場合もあることも、この定義を読むことによって理解される。このように、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を必ず必要とするものではない（が、排他的結合が含まれる場合もある）。一般的には、結合との言及は優先的結合を意味するが、必ずしもそうではない。
エピトープに関する用語「免疫学的に活性である」、または「免疫学的活性を維持している」は、様々な条件下（例えば、エピトープが還元条件および変性条件に供された後）でのエピトープに結合する抗体（例えば抗ＴＥＳ７抗体）の能力をいう。
以下を含むがこれらに限定されない様々な生物学的機能が、抗ＴＥＳ７抗体に関係している：ＴＥＳ７（腎臓、前立腺、または肺のガン細胞を含むがこれらに限定されないガン細胞上のＴＥＳ７を含む）に結合する能力；インビトロまたはインビボで生存している細胞の表面上に露出しているＴＥＳ７の一部に結合する能力；ＴＥＳ７を発現しているガン細胞（例えば、腎臓、前立腺、または肺のガン細胞）に化学療法薬を送達する能力；ＴＥＳ７を発現しているガン細胞の中へ治療薬または検出マーカーを送達する能力。本明細書中で議論される場合には、本発明のポリペプチド（抗体を含む）は、これらの特徴のうちの任意の１つ以上を有することができる。
「抗ＴＥＳ７等価抗体」または「抗ＴＥＳ７等価ポリペプチド」は、抗ＴＥＳ７抗体と関係があり、例えば結合特異性のような１つ以上の生物学的機能を有している抗体またはポリペプチドをいう。
本明細書中で使用される場合は、「薬剤」は、生物学的、薬学的、または化学的化合物をいう。例として、単純なまたは複雑な有機または無機分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体断片、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素、または化学療法用の化合物が挙げられるが、これらに限定されない。様々な化合物を合成することができ、例えば、低分子物およびオリゴマー（例えば、オリゴペプチドおよびオリゴヌクレオチド）、ならびに、様々なコア構造をベースとする合成有機化合物を合成することができる。加えて、様々な天然源（例えば、植物または動物からの抽出物など）により、スクリーニング用の化合物が提供され得る。当業者であれば、本発明の薬剤の構造的特徴に制限がないことは容易に理解できる。
本発明の方法に使用される薬剤は、無作為に選択することができ、また、合理的に選択もしくは設計することもできる。本明細書中で使用される場合は、その自然界での結合パートナーまたは公知の抗体とのＴＥＳ７の会合に関係している特異的な配列を考慮することなく薬剤が無作為に選択される場合には、薬剤が無作為に選択されるといわれる。無作為に選択された薬剤の例は、化学的ライブラリまたはペプチド・コンビナトリアル・ライブラリの使用である。
本明細書中で使用される場合は、薬剤の作用に関連する標的部位の配列および／またはその立体構造を考慮して薬剤が作為的な基準に基づいて選択される場合に、薬剤が合理的に選択されるまたは設計されるといわれる。抗ＴＥＳ７剤に関して、それに対して抗体が惹起させることができるエピトープがＴＥＳ７上に少なくとも３つ存在し、したがって、ＴＥＳ７／抗ＴＥＳ７の相互作用をブロックする薬剤について少なくとも３つの作用部位が存在すると現在考えられている。本発明にはまた、ＴＥＳ７とその天然の結合パートナーとの間での相互作用の部位で作用する薬剤が含まれるが、他のリガンドとそれらの活性のあるＴＥＳ７相互作用部位もまた、これらが現在公知であるか、将来同定されるものかにはかかわらず、本発明の範囲内に含まれる。薬剤は、受容体／リガンドおよび／またはＴＥＳ７／抗ＴＥＳ７抗体の複合体の接触部位を構成するペプチド配列を利用することによって、合理的に選択するかまたは合理的に設計することができる。例えば、合理的に選択されたペプチド薬剤は、これが、その本来の環境にある生存している細胞の表面上に露出しているので、そのアミノ酸配列がＴＥＳ７上に現れるエピトープと同一であるペプチドであり得る。このような薬剤は、所望される場合には、抗ＴＥＳ７抗体に、または本来のリガンドに結合させることによって、抗ＴＥＳ７抗体のＴＥＳ７との会合またはその本来のリガンドとのＴＥＳ７の会合を減少させるか、あるいは阻止するであろう。
本明細書中で使用される場合は、抗体に関する用語「標識される」は、検出可能な物質（例えば、放射性薬剤または蛍光色素分子（例えばフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）またはフィコエリトリン（ＰＥ）））を抗体にたいして結合（すなわち、物理的連結）させることによって抗体を直接標識すること、さらには、検出可能な物質との反応性によってプローブまたは抗体を間接的に標識することも含むように意図される。
本明細書中で使用される場合は、抗体に関する用語「会合」には、薬剤（例えば、化学療法薬）への共有および非共有的な付着または結合が含まれる。抗体は、抗体が結合するガン細胞にこの薬剤の局在化を抗体が指示するように、共通の基体への付着を介して直接結合または間接的に結合させることによって、薬剤（例えば、化学療法薬）と会合させることができる。この場合、抗体が結合する同じガン細胞に対して薬剤が標的化させられないように、または薬剤の有効性が低下してしまわないように、抗体と薬剤は生理学的条件下で実質的には解離しない。
「生物学的試料」には、個体から得られた様々なタイプの試料が含まれ、これらは診断アッセイまたはモニタリングアッセイに使用することができる。この定義には、唾液、血液、および生物を供給源とする他の液体試料、固体組織試料（例えば、生検標本または組織培養物またはそれらに由来する細胞）、ならびに、その子孫などの固形組織試料（例えば、ガンの疑いのある個体から収集された組織試料（好ましい実施形態においては、卵巣、肺、前立腺、膵臓、大腸、および乳房の組織から得られた細胞）から得られた細胞）が含まれる。この定義にはまた、それらの入手後に任意の方法（例えば、試薬での処理、可溶化、または特定の成分（例えば、タンパク質またはポリヌクレオチド）についての富化、あるいは、切片化の目的のために半固形または固形のマトリックスの中に包埋すること）で操作された試料も含まれる。用語「生物学的試料」には臨床試料が含まれ、これにはまた、培養物中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、生物学的流体、および組織試料も含まれる。
「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入断片の取り込みをさせるためのベクター（単数または複数）のレシピエントになることができるか、または既にレシピエントである個体の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には単一の宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、自然発生的、偶発的または意図的な突然変異が原因で、必ずしももともとの親細胞と（形態学またはゲノムＤＮＡの相補性において）完全に同じであるとは限らない。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチド（単数または複数）によってインビボでトランスフェクションされた細胞が含まれる。
本明細書中で使用される場合は、「転移の進行を遅らせる」は、転移の進行を保留する、妨害する、減速させる、抑制する、一定に保つ、および／または後延ばしにすることを意味する。このような遅延の時間の長さは、ガンの病歴および／または処置される個体に応じて様々である可能性がある。当業者に明らかであるように、十分な、または有意な遅延には、事実上、個体が転移を進行させない阻止を含めることができる。
薬学的組成物の「有効量」は、１つの実施形態においては、例えば、以下を含むが、これらに限定されない、有効なあるいは処方される臨床結果を得るために十分な量である：腫瘍（ガン（例えば、乳ガンまたは前立腺ガン）の状況において）の大きさを縮める、ガン細胞の増殖を遅らせること、転移の進行を遅らせること、疾患によって生じる症状を軽減すること、疾患に罹患している患者の生活の質を向上させること、疾患を処置するために必要な他の薬剤の投薬量を減らすこと、例えば、標的化および／またはインターナライゼーションなどによって別の投薬の効果を強化すること、疾患の進行を遅らせること、および／または個体の生存を延ばすこと。有効量は、１回以上の投与において投与することができる。本発明の目的について、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、直接または間接的のいずれかによって、ガン細胞の増殖を減少させ（または破壊し）、そしてガン細胞の転移の発生または増殖を減少させる、および／または遅らせるために十分な量である。いくつかの実施形態においては、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物と組み合わせて達成される場合も、また、そうではない場合もある。したがって、「有効量」は、１つ以上の化学療法薬を投与する状況において考えられる場合があり、そして、一種類の薬剤を、１つ以上の他の薬剤と組み合わせて所望される結果が達成されると思われるか、または達成される有効量で投与されるように考えられる場合もある。個々のニーズは様々であるので、各成分の有効量の最適範囲の決定は当業者の能力の範囲内である。典型的な投薬量には、０．１から１００ｍｇ／ｋｇ／体重が含まれる。好ましい投薬量には、１から１００ｍｇ／ｋｇ／体重が含まれる。最も好ましい投薬量には、１０から１００ｍｇ／ｋｇ／体重が含まれる。
本明細書中で使用される場合は、核酸分子もしくは薬剤、抗体、組成物、または細胞などは、核酸分子もしくは薬剤、抗体、組成物、または細胞などが、そのもともとの供給源から、混入している核酸分子、抗体、薬剤、組成物、または細胞と実質的に分離されている場合には、「単離された」といわれる。
「個体」とは、脊椎動物、好ましくは、哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物には、家畜、競技用動物、ペット、霊長類、マウスおよびラットが含まれるが、これらに限定されない。
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいうように、本明細書中では互換的に使用される。ポリマーは直鎖である場合も、また、分枝鎖である場合もあり、これには、修飾されたアミノ酸が含まれる場合があり、そして、これはアミノ酸以外のものが間に介在している場合もある。この用語にはまた、自然にまたは介入；例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質付加反応、アセチル化、リン酸反応、または任意の他の操作もしくは修飾、例えば標識成分との結合によって既に修飾されているアミノ酸ポリマーも含まれる。この定義には、また、例えば、アミノ酸の１つ以上のアナログ（例えば、自然界には存在しないアミノ酸などを含む）が含まれているポリペプチド、ならびに、当該分野で公知の他の修飾物も含まれる。本発明のポリペプチドは抗体をベースとするものであるので、ポリペプチドは単鎖として存在することも、また、会合した鎖として存在することもできることが理解される。
本発明の範囲にはまた、本明細書中に記載されるＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子（抗ＴＥＳ７抗体を含む）のペプチド模倣物も含まれる。そのようなペプチド模倣物には、少なくとも１つのアミノ酸残基が、アミノ酸のＤ異性体、またはアミノ酸のＮアルキル化された種のような、自然界では一般的には見られないアミノ酸残基で置換されたペプチドが含まれる。他の実施形態においては、ペプチド模倣物は、ＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、または調節因子の中の少なくとも１つのアミド結合（−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＮＨ−−）を、アミド等量式で置き換えることによって構築される。適切なアミド等量式としては、−−ＣＨ２−ＮＨ−−、−−ＣＨ２−Ｓ−−、−−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）ｎ−−（式中、ｎは１または２）、−−ＣＨ２−ＣＨ２−−、−−ＣＨ＝ＣＨ−−（ＥまたはＺ）、−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ（ＣＮ）−−ＮＨ−−、−−Ｃ（ＯＨ）−−ＣＨ２−−、および−−Ｏ−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＮＨ−−が挙げられる。アミド等量式での置換についての適切な候補であるＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、または調節因子の中のアミド結合としては、ＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、または調節因子での処理についての意図される目的の内因性エステラーゼまたはプロテアーゼによって加水分解される結合が挙げられる。
本明細書中で使用される場合は、「実質的に純粋」は、少なくとも５０％純粋（すなわち混入物がない）、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、より好ましくは少なくとも９８％純粋、より好ましくは少なくとも９９％純粋、またはそれ以上純粋である材料をいう。
「毒素」は、細胞内で有害な反応をもたらす任意の物質をいう。例えば、ガン細胞に対する毒素は、ガン細胞に対し有害な効果、時には悪影響を有する。毒素の例として、放射性同位体、カリケアマイシン、およびメイタンシノイドが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用される場合は、「処置」または「処置する」は、有用な結果または所望される結果（臨床結果を含む、好ましくは、臨床結果である）を得るためのアプローチである。本発明の目的のためには、有用な結果または所望される臨床結果には、以下の１つ以上が含まれるが、これらに限定されない：ガン細胞または他の異常細胞の増殖を低下させること（または破壊すること）、ガンにおいてみられるガン細胞の転移を減らすこと、腫瘍の大きさを縮めること、疾患によって生じる症状を軽減すること、疾患に罹患している患者の生活の質を向上させること、疾患を処置するために必要な他の薬剤の投薬量を減らすこと、疾患の進行を遅らせること、および／または個体の生存を延ばすこと。
ＩＩＩ．抗体およびポリペプチドの作製方法
モノクローナル抗体の作製方法は当該分野で公知である。利用できる１つの方法は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７（１９７５）の方法またはそれを改良した方法である。典型的には、モノクローナル抗体は、ヒト以外の種（例えば、マウス）の中で生産させる。一般的には、マウスまたはラットが免疫化に使用されるが、他の動物もまた使用することができる。ヒトＴＥＳ７を含む、免疫原性を示す量の細胞、細胞抽出物、またはタンパク質調製物でマウスを免疫化することによって抗体が生産される。免疫原は、初代細胞、培養細胞株、ガン細胞、核酸、または組織であり得るが、これに限定されない。１つの実施形態においては、ヒト肺ガン細胞が使用される。免疫化に適している細胞株は実施例１で詳しく説明される。免疫化に使用される細胞（例えば、ヒト精巣細胞または膵臓腺ガン細胞または胃細胞）は、免疫原としてのそれらの使用の前に、一定期間（少なくとも２４時間）培養される場合がある。細胞（例えば、ヒト精巣、胃、または膵臓の腺ガン細胞）自体が免疫原として使用される場合があり、また、リビ（Ｒｉｂｉ）などの非変性アジュバントと組み合わせて免疫原として使用される場合もある。一般的には、細胞は免疫原として使用される場合には、無傷な状態、そして好ましくは生存可能な状態を維持していなければならない。免疫化された動物によっては、破裂した細胞よりも、無傷な細胞のほうが、良好に抗原を検出することができる。変性剤またはきついアジュバント（例えばフロイトのアジュバント）の使用は、細胞を破裂させてしまうおそれがあり、したがって、回避される。免疫原は、複数回、定期的に、例えば２週間ごと、または毎週投与される場合があり、また、動物（例えば組換え組織）内での生存性を維持できるような方法で投与される場合もある。実施例２は、抗ＴＥＳ７抗体の作製に使用される方法を記載し、これは、ＴＥＳ７に結合する他のモノクローナル抗体を作製するために使用することができる。
１つの実施形態においては、ＴＥＳ７に結合するモノクローナル抗体は、免疫原としてＴＥＳ７を過剰発現する宿主細胞を使用することによって得られる。そのような細胞としては、たとえば、ヒト肺ガン細胞、およびヒト大腸ガン細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
抗体反応をモニターするためには、少量の生物学的試料（例えば血液）を動物から得て、免疫原に対する抗体価を試験することができる。脾臓および／またはいくつかの大きなリンパ節を取り出して単細胞に解離させることができる。必要に応じて、脾臓細胞は、抗原でコーティングされたプレートまたはウェルに細胞懸濁液を塗布することによって（非特異的に接着した細胞の除去後に）スクリーニングすることができる。抗原に特異的な膜結合型の免疫グロブリンを発現しているＢ細胞がプレートに結合することになり、これは懸濁液の残りと一緒に洗い流されることはない。次に、生じたＢ細胞または全ての解離した脾臓細胞を骨髄腫細胞（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３およびＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから得られる細胞）と融合させることができる。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を使用して、脾臓またはリンパ球を骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマを形成させることもできる。その後、ハイブリドーマが選択培地（例えば、「ＨＡＴ培地」としても知られているヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジンの培地）で培養される。次に、得られたハイブリドーマは限界希釈によってプレーティングされ、ＦＡＣＳまたは免疫組織化学（ＩＨＣスクリーニング）を使用することによって、免疫原（例えば、ヒト胎児腎臓細胞の表面、ガン細胞株の表面、胎児性膀胱切片など）に特異的に結合する抗体の産生についてアッセイされる。その後、選択されたモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマが、インビトロで（例えば、組織培養ビンまたは中空繊維型反応器の中で）、またはインビボで（例えば、マウスの腹水の中で）のいずれかで培養される。実施例３には、抗ＴＥＳ７抗体を獲得し、そしてスクリーニングするために利用される方法についてのさらなる詳細が提供される。
細胞融合技術の別の選択肢として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を使用して、本発明のモノクローナル抗体を生産させることができる。ハイブリドーマが増殖させられ、サブクローニングされ、そして所望される場合には、上清が、従来のアッセイ手順（例えば、ＦＡＣＳ、ＩＨＣ、放射免疫アッセイ、酵素免疫アッセイ、蛍光免疫アッセイなど）によって、抗免疫原活性についてアッセイされる。
別の選択肢では、モノクローナル抗体である抗ＴＥＳ７と、任意の他の等価抗体は配列決定され、当該分野で公知の任意の手段（例えば、ヒト化、完全なヒト抗体を生産させるためのトランスジェニックマウスの使用、ファージディスプレイ技術など）により、組み換えによって生産することができる。１つの実施形態においては、抗ＴＥＳ７モノクローナル抗体が配列決定され、その後、ポリヌクレオチド配列が、発現または増殖のためにベクターにクローニングされる。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞の中のベクター中に保持させることができ、宿主細胞は、その後、将来の使用に備えて、増殖させ、凍結しておくことができる。
親和力または抗体の他の特徴を改善するために、モノクローナル抗体である抗ＴＥＳ７および任意の他の等価抗体のポリヌクレオチド配列を遺伝子操作に使用して、「ヒト化」抗体を作製することができる。抗体のヒト化の一般的原理には、抗体の抗原結合性部分の基本的な配列を保ったまま、抗体の非ヒトである残りの部分をヒト抗体の配列と交換することが含まれる。モノクローナル抗体のヒト化には４つの一般的な工程がある。これらは以下である：（１）開始抗体の軽鎖および重鎖の可変ドメインのヌクレオチド配列と予想されるアミノ酸配列を決定する工程、（２）ヒト化抗体を設計する、すなわち、ヒト化のプロセスに使用する抗体のフレームワーク領域を決定する工程、（３）実際のヒト化の方法論／技術、ならびに、（４）ヒト化抗体のトランスフェクションと発現。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；同第５，８０７，７１５号；同第５，８６６，６９２号；および第６，３３１，４１５号を参照のこと。
非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位が含まれている多数の「ヒト化」抗体分子がこれまでに記載されている。これには、ヒト定常領域に対して、げっ歯類のＶ領域または修飾されたげっ歯類のＶ領域と、それに付随する相補性決定領域（ＣＤＲ）が融合させられたキメラ抗体が含まれる。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９：２９３−２９９（１９９１）、Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：４２２０−４２２４（１９８９）、Ｓｈａｗら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４−４５３８（１９８７）、およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：３５７７−３５８３（１９８７）を参照のこと。他の参考文献には、適切なヒト抗体の定常領域との融合の前に、ヒトの支持フレームワーク領域（ＦＲ）に繋がれたげっ歯類のＣＤＲが記載されている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６（１９８８）、およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５（１９８６）を参照のこと。別の参考文献には、組み換えによって張りつけられたげっ歯類のフレームワーク領域によって支えられたげっ歯類のＣＤＲが記載されている。例えば、欧州特許出願公開番号第５１９，５９６号を参照のこと。これらの「ヒト化」分子は、ヒトであるレシピエントの中のそのような部分の治療的適用の期間および有効性を限定してしまう、げっ歯類抗ヒト抗体分子に対する好ましくない免疫応答が最小限に抑えられるように設計される。それらもまた利用することができる抗体をヒト化する別の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９：２４７１−２４７６（１９９１）および米国特許第６，１８０，３７７号；同第６，０５４，２９７号；同第５，９９７，８６７号；および第５，８６６，６９２号に開示されている。
本発明にはまた、ｍｕ−抗ＴＥＳ７のような、本発明の抗体の単鎖可変領域断片（「ｓｃＦｖ」）も含まれる。単鎖可変領域断片は、短い連結ペプチドを使用することにより軽鎖および／または重鎖の可変領域を連結させることによって作製される。Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６には、１つの可変領域のカルボキシ末端と他の可変領域のアミノ末端との間のおよそ３．５ｎｍを架橋結合する連結ペプチドの例が記載されている。他の配列のリンカーが設計されており、使用されている。Ｂｉｒｄら（１９８８）。リンカーは、同様に、薬物の結合、または固体支持物への結合のようなさらなる機能のために修飾することができる。この単鎖変異体は組み換えによるか、または合成的によるかのいずれかによって産生することができる。ｓｃＦｖの合成による産生のためには、自動化合成装置を使用することができる。ｓｃＦｖの組換えによる産生については、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドが含まれている適切なプラスミドを、真核生物（例えば、酵母、植物、昆虫、または哺乳動物）、または原核生物（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））のいずれかである適切な宿主細胞に導入することができる。目的のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、日常的に行われている操作（例えば、ポリヌクレオチドのライゲーション）によって作製することができる。得られるｓｃＦｖは、当該分野で公知の標準的なタンパク質精製技術を使用して単離することができる。
本発明には、ＴＥＳ７アゴニスト、アンタゴニスト、調節因子、ならびに抗体への修飾が含まれる。これには、高い活性を有しているか、または低い活性を有している、それらの特性および変異体に有意な影響を及ぼさない機能的に等価な抗体およびポリペプチドが含まれる。ポリペプチドの修飾は、当該分野で日常的に実施されているものであり、本明細書中で詳細に記載される必要はない。修飾されたポリペプチドの例としては、アミノ酸残基の保存的置換、機能的活性が非常に悪化するほど変化させることはないアミノ酸の１つ以上の欠失または付加、または化学的アナログの使用を有しているポリペプチドが挙げられる。互いに保存的に置換することができるアミノ酸残基としては以下が挙げられるが、これらに限定されない：グリシン／アラニン；バリン／イソロイシン／ロイシン；アスパラギン／グルタミン；アスパラギン酸／グルタミン酸；セリン／スレオニン；リジン／アルギニン；およびフェニルアラニン／チロシン。これらのポリペプチドにはまた、グリコシル化されたポリペプチドおよび非グリコシル化ポリペプチド、ならびに、他の翻訳後修飾（例えば、様々な異なる糖でグリコシル化、アセチル化、およびリン酸反応）を有しているポリペプチドも含まれる。好ましくは、アミノ酸置換は保存的であり、すなわち、置換されたアミノ酸は、もとのアミノ酸と類似する化学的特性を有する。そのような保存的置換は当該分野で公知であり、例は、上記に提供されている。アミノ酸の修飾は、１つ以上のアミノ酸の変化または修飾から、可変領域のような１つの領域の完全な再設計まで範囲にわたり得る。可変領域の中での変化によっては、結合親和力および／または特異性を変化させることができる。他の修飾方法として、当該分野で公知であるカップリング技術の使用が含まれる。これには、酵素的手段、酸化的置換およびキレート化が含まれるが、これらに限定されない。修飾は、例えば、ラジオイムノアッセイのための放射性部分の結合のような、免疫アッセイのための標識の結合のために使用することができる。修飾されたポリペプチドは、当該分野で確立されている手順を使用して作製され、当該分野で公知の標準的なアッセイを使用してスクリーニングすることができる。
本発明にはまた、本発明のポリペプチドおよび抗体に由来する１つ以上の断片または領域が含まれている融合タンパク質が含まれる。１つの実施形態においては、可変軽鎖領域の少なくとも１０個の連続しているアミノ酸と可変重鎖領域の少なくとも１０個のアミノ酸が含まれている融合ポリペプチドが提供される。別の実施形態においては、融合ポリペプチドには、異種免疫グロブリンの定常領域が含まれる。別の実施形態においては、融合ポリペプチドには、本明細書中に記載されるように、ＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生された抗体の軽鎖可変領域と重鎖可変領域が含まれる。本発明の目的のためには、抗体融合タンパク質には、１つ以上の抗ＴＥＳ７ポリペプチドと、天然の分子には結合していない別のアミノ酸配列（例えば、異種配列または別の領域に由来する相同配列）が含まれる。
抗ＴＥＳ７ポリペプチドは、ならびに、他のＴＥＳ７アゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子は、当該分野で公知の方法によって、例えば合成により、または組み換えによって作製することができる。ＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子を生産するための１つの方法には、ポリペプチドの化学合成、それに続く、自然な立体構造、すなわち、正確なジスルフィド結合を得るために適している酸化条件下での処理が含まれる。これは、当業者に周知の方法論を使用して行うことができる（Ｋｅｌｌｅｙ，Ｒ．Ｆ．＆ Ｗｉｎｋｌｅｒ，Ｍ．Ｅ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｓｅｔｌｏｗ，Ｊ．Ｋ．編，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，第１２巻，ｐｐ．１−１９（１９９０）；Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．＆ Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．（１９８４）を参照のこと；米国特許第４，１０５，６０３号；同第３，９７２，８５９号；同第３，８４２，０６７号；および同第３，８６２，９２５号もまた参照のこと）。
本発明のポリペプチドは、固相ペプチド合成を使用して調製することが便利であり得る（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９（１９６４）；Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３２（１９８５））。
なお別の選択肢では、完全なヒト抗体は、特異的なヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販されているマウスを使用することによって得ることができる。さらに望ましい（例えば完全なヒト抗体）またはさらに強い免疫応答を生じるように設計されているトランスジェニック動物もまた、ヒト化抗体またはヒト抗体の作製に使用される場合がある。そのような技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆ．）によるＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）、そしてＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）によるＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ Ｍｏｕｓｅ（商標）である。
１つの選択肢においては、抗体は、当該分野で公知である任意の方法を使用して、組み換えによって作製され、そして発現させることができる。抗体は、最初に、宿主動物から作られた抗体を単離し、遺伝子配列を得て、その遺伝子配列を使用して抗体を宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）の中で組み換えによって発現させることによって、組み換えによって作製することができる。使用することができる別の方法は、植物（例えば、タバコ）またはトランスジェニック乳の中で抗体配列を発現させることである。植物または乳の中で組み換えによって抗体を発現させるための方法は開示されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓら（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２７５６；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．およびＤ．Ｈｕｓｚａｒ（１９９５）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １３：６５；およびＰｏｌｌｏｃｋら（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１４７を参照のこと。抗体の誘導体（例えば、ヒト化抗体、単鎖抗体など）を作製するための方法は、当該分野で公知である。別の選択肢では、抗体は、ファージディスプレイ技術により組み換えによって作製することができる。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号；同第５，５８０，７１７号；同第５，７３３，７４３号；同第６，２６５，１５０号；およびＷｉｎｔｅｒら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５（１９９４）を参照のこと。
目的の抗体またはタンパク質は、当業者に周知であるエドマン分解によって配列決定することができる。質量スペクトル分析またはエドマン分解によって得られたペプチドの情報は、目的のタンパク質のクローニングに使用されるプローブまたはプライマーを設計するために使用することができる。
目的のタンパク質をクローニングする別の方法は、目的の抗体またはタンパク質を発現している細胞に、精製されたＴＥＳ７またはその一部を使用する「パニング」によるものである。「パニング」手順は、目的の抗体またはタンパク質を発現する組織または細胞からｃＤＮＡライブラリを得、第２の細胞タイプにｃＤＮＡを過剰発現させ、ＴＥＳ７に対する特異的結合について第２の細胞タイプのトランスフェクトされた細胞をスクリーニングすることによって行われる。「パニング」による細胞表面のタンパク質をコードする哺乳動物の遺伝子のクローニングに使用される方法の詳細な記載は、当該分野で見ることができる。例えば、Ａｒｕｆｆｏ，Ａ．ａｎｄ Ｓｅｅｄ，Ｂ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４、８５７３−８５７７（１９８７）、およびＳｔｅｐｈａｎ，Ｊ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４０：５８４１−５８５４（１９９９）を参照のこと。
抗ＴＥＳ７抗体、ならびに、他のＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子をコードするｃＤＮＡは、当該分野で標準的である方法に従って特定の細胞型に由来するｍＲＮＡを逆転写させることによって得ることができる。具体的には、ｍＲＮＡは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前述）に示されている手順に従って様々な溶解酵素または化学溶液を使用して単離することができ、また、製造業者（例えば、Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｐｒｏｍｅｇａ）による添付の説明書に従って市販されている核酸結合樹脂によって抽出することもできる。その後、合成されたｃＤＮＡは発現ベクターに導入され、第２のタイプの細胞の中で目的の抗体またはタンパク質が産生される。発現ベクターは、エピソームまたは染色体ＤＮＡに組み込まれた部分のいずれかとして宿主細胞中で複製することができなければならないことが意味される。適切な発現ベクターとしては、プラスミド、ウイルスベクター（アデノウィルス、アデノ随伴ウィルス、レトロウィルスを含む）、およびコスミドが挙げられるが、これらに限定されない。
目的のポリヌクレオチドが含まれているベクターは、多数の適切な手段（エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；マイクロプロジェクタイルボンバードメント；リポフェクション；および感染（例えばベクターがワクシニアウイルスのような感染性因子である場合））のうちの任意のものによって宿主細胞に導入することができる。ベクターまたはポリヌクレオチドの導入方法の選択は、多くの場合は、宿主細胞の性質に依存するであろう。
目的の抗体、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的のためには、異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を使用することができる。哺乳動物の宿主細胞の限定ではない例としては、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、およびＣＨＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、宿主細胞は、対応する目的の内因性の抗体またはタンパク質が宿主細胞中に存在するのであれば、その内因性の抗体またはタンパク質のｃＤＮＡよりも約５倍以上、より好ましくは１０倍以上、さらにより好ましくは２０倍以上高いレベルでｃＤＮＡを発現する。ＴＥＳ７に対する特異的結合についての宿主細胞のスクリーニングは、免疫アッセイまたはＦＡＣＳによって行われる。目的の抗体またはタンパク質を過剰発現している細胞を同定することができる。
もとのＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、または調節因子と比較して、得られるタンパク質のアミノ酸配列の中に付加、欠失、または変化をコードする、変異体ＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子を生産するために現在使用することができる様々な技術もまた、利用できる。
本発明には、本発明の抗体のアミノ酸配列が含まれているポリペプチドが含まれる。本発明のポリペプチドは、当該分野で公知の手順によって作製することができる。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解または他の分解による分解によって、上記に記載されたような組換え方法（すなわち、１つのポリペプチドまたは融合ポリペプチド）、または化学合成によって、産生することができる。抗体のポリペプチド、特に、約５０アミノ酸までの短いポリペプチドは、化学合成によって作製されることが便利である。化学合成の方法は当該分野で公知であり、市販されているものを利用することができる。例えば、抗ＴＥＳ７ポリペプチドは、固相法を使用する自動ポリペプチド合成装置によって生産させることができる。
ＩＶ．ポリペプチドとモノクローナル抗体のスクリーニングのための方法
ＴＥＳ７に結合するポリペプチドおよびモノクローナル抗体をスクリーニングするためには、いくつかの方法を使用することができる。「結合」が、生物学的または免疫学的に関連のある結合、すなわち、それについての免疫グロブリン分子がコードされており、ポリペプチドがそれに対して特異的である、特定の抗原に特異的である結合をいうことが理解される。これは、非特異的標的に対して、免疫グロブリンが極めて高濃度で使用された場合に生じ得る非特異的結合は言うものではない。１つの実施形態においては、モノクローナル抗体は、標準的なスクリーニング技術を使用して、ＴＥＳ７に対する結合についてスクリーニングされる。この様式で、抗ＴＥＳ７モノクローナル抗体を得た。ブタペスト条約に従い、抗ＴＥＳ７モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを、２００５年９月２２日に、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ ２０１１０−２２０９に、ＰＴＡ＃７０９３の特許管理番号として寄託した。
ＴＥＳ７に結合するモノクローナル抗体は、ガン組織およびガンではない細胞への結合についてスクリーニングされる。１つの実施形態においては、ＴＥＳ７に結合し、ヒトのガン細胞または組織に対して交差反応性もあるが、正常な細胞または組織に対しては同じ程度の反応性を示さないモノクローナル抗体が選択される。スクリーニングに使用することができる１つの方法は、免疫組織化学（ＩＨＣ）である。標準的な免疫組織化学技術は当該分野の平均的な当業者には公知である。例えば、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｄ．Ｂａｒｎｅｓ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、第５７巻、第１８章および第１９章、３１４−３５０ページ、１９９８年）を参照のこと。生物学的試料（例えば、組織）は、生検、死体解剖、または検視により得ることができる。ＴＥＳ７がガン細胞上にのみ存在しているかどうかを確かめるためには、抗ＴＥＳ７抗体を使用して、ガンを有している個体に由来する組織上にＴＥＳ７が存在することを検出することができ、他方では、ガンに罹患している個体に由来する他のガンではない組織、またはガンに罹患していない個体に由来する組織が対照として使用される。組織は、凍結中の損傷を防ぐ固体または半固体の物質（例えば、アガロースゲルまたはＯＣＴ）に包埋することができ、その後、染色のために切片とすることができる。様々な臓器および異なる段階のガンを使用して、モノクローナル抗体をスクリーニングすることができる。スクリーニングの目的に使用することができる組織の例としては、卵巣、乳房、肺、前立腺、大腸、腎臓、皮膚、甲状腺、脳、心臓、肝臓、胃、神経、血管、骨、上部消化管、および膵臓が挙げられるが、これらに限定されない。スクリーニングの目的に使用することができる様々なガンのタイプの例としては、ガン腫、腺ガン、肉腫、腺肉腫、リンパ腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。
なお別の選択肢では、以下のようなガン細胞株：ＨＭＥＣ（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ ＣＣ−２２５１）、ＨＵＶＥＣ（初代内皮細胞）、ＢＴ−４７４（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−２０）、ＭＣＦ７（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ２２）、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５−ＶＩＩ（ＡＴＣＣ＃ＨＢ−２５）、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１（ＡＴＣＣ＃ＨＢ−２７）、ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−３０）、９９７９（Ｒａｖｅｎによって独自開発された肺ガン細胞株）、Ａ５４９（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−１８５）、ＣＡ１３０（Ｒａｖｅｎによって独自開発された肺小細胞性肺ガン細胞株）、Ｃａｌｕ−３（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−５５）、ＳＫＭＥＳ−１（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−５８）、ＥＳ−２（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１９７８）、ＳＫＯＶ３（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−７７）、９９２６（Ｒａｖｅｎによって独自開発された膵臓腺ガン細胞株）、ＡｓＰＣ−１（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１６８２）、ＨＰＡＦ−ＩＩ（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１９９７）、Ｈｓ７００Ｔ（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−１７４）、Ｃｏｌｏ２０５（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−２２２）、ＨＴ−２９（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−３８）、ＳＷ４８０（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−２２８）、ＳＷ９４８（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−２３７）、２９３（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１５７３）、７８６−Ｏ（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１９３２）、Ａ４９８（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−４４）、Ｃａｋｉ−２（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−４７）、ＣＯＳ−７（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１６５１）、ＲＬ−６５（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１０３４５）、ＳＶ−Ｔ２（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−１６３．１）、２２ＲＶ１（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−２５０５）、ＤＵ１４５（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−８１）、ＬＮＣａＰ（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１７４０）、ＰＣ−３（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１４３５）、ＴＤＨ（Ｒａｖｅｎによって独自開発された前立腺ガン細胞株）、Ｈｓ７４６Ｔ（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−１３５）、ＮＣＩ−Ｎ８７（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−５８２２）、ならびに、それらのそれぞれの組織に由来する正常細胞を、ガン組織に特異的なモノクローナル抗体についてスクリーニングするために使用することができる。腎臓、卵巣、乳房、肺、前立腺、大腸、腎臓、皮膚、甲状腺、大動脈平滑筋、および内皮細胞を含むがこれらに限定されない様々な臓器に由来する正常な組織から導かれた初代細胞、または継代数の低い細胞の細胞培養を、ネガティブ対照として使用することができる。ガン細胞またはガンではない細胞がスライドガラスまたはカバーガラス上で、またはプラスチック表面上で増殖させることができ、国際公開ＷＯ０１／４３８６９に記載されているように、ＣｅｌｌＡｒｒａｙ（商標）の中で調製し、組織について上記に記載されたように、ＩＨＣを使用して抗体の結合についてスクリーニングすることができる。あるいは、細胞を非タンパク質分解手段を使用して増殖表面から除去し、これを回転させてペレット状にすることができ、これは、その後、上記に記載されたように、ＩＨＣ分析用の組織として包埋され、処置される。細胞は、免疫不全動物に接種して、腫瘍を増殖させることができ、その後、この腫瘍を回収して包埋し、ＩＨＣ分析のための組織供給源として使用することができる。別の選択肢では、単細胞を、初代抗体、蛍光分子に連結させられた二次「レポータ」抗体とともにインキュベートすることによってスクリーニングし、次に、蛍光活性化細胞選別器（ＦＡＣＳ）を使用して分析することができる。
組織切片に対する抗体の結合を検出するためには、いくつかの様々な検出システムを利用することができる。典型的には、免疫組織化学法には、組織に対して一次抗体を結合させることが含まれ、その後、一次抗体に由来する種に対して反応性のある二次抗体が生産され、検出マーカーに（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ＨＲＰ、またはジアミノベンジジン、ＤＡＢ）結合させられる。使用することができる１つの別の方法は、ポリクローナル鏡像相補抗体またはｐｏｌｙＭＩＣＡである。Ｄ．Ｃ．Ｍａｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｉｓａａｃｓｏｎ（Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ（１９９９）３５（２）：１２９−３３）によって記載されているＰｏｌｙＭＩＣＡ（ポリクローナル鏡像的相補抗体（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ｍｉｒｒｏｒ Ｉｍａｇｅ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ Ａｎｔｉｂｏｄｙ））技術は、一次抗体（例えば、抗ＴＥＳ７抗体）の正常な組織およびガン組織に対する結合を試験するために使用することができる。いくつかの種類のｐｏｌｙＭＩＣＡ（商標）検出キットが、Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ ４０７３ Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｂ２９ ６ＡＴ Ｅｎｇｌａｎｄ）から市販されている。製品番号ＨＫ００４．Ｄは、ＤＡＢ色素原を使用するｐｏｌｙＭＩＣＡ（商標）検出キットである。製品番号ＨＫ００４．Ａは、ＡＥＣ色素原を使用するｐｏｌｙＭＩＣＡ（商標）検出キットである。あるいは、一次抗体を検出マーカーで直接標識することもできる。
適切な抗体を選択するためのＩＨＣスクリーニングの最初の工程は、１つ以上の免疫原（例えば、細胞または組織試料）に対する、マウスの中で惹起させられた一次抗体（例えば、抗ＴＥＳ７抗体）の結合である。１つの実施形態においては、組織試料は、様々な臓器に由来する凍結組織の切片である。細胞または組織の試料はガン性である場合も、また、非ガン性である場合もある。
凍結組織は、当業者には公知である多数の方法のうちのいずれかによって、調製し、固定して、または固定することなく切片化し、そしてＩＨＣを行うことができる。例えば、Ｓｔｅｐｈａｎら、Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２１２：２６４−２７７（１９９９）、およびＳｔｅｐｈａｎらＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１４０：５８４１−５４（１９９９）を参照のこと。
Ｖ．抗ＴＥＳ７抗体の特性決定する方法
抗ＴＥＳ７抗体を特性決定するためには、いくつかの方法を使用することができる。１つの方法は、それが結合するエピトープを同定することである。エピトープマッピングが様々な販売元、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ １５，８２１９ ＰＨ Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から市販されている。エピトープマッピングを使用して、抗ＴＥＳ７抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープは、直鎖状のエピトープ（すなわち、アミノ酸の１つのストレッチの中に含まれる）である場合も、また、１つのストレッチに必ずしも含まれないアミノ酸の３次元的相互作用によって形成される立体構造的エピトープである場合もある。様々な長さのペプチド（例えば、少なくとも４〜６のアミノ酸長）を単離または合成して（例えば、組み換えによって）、抗ＴＥＳ７抗体の結合アッセイに使用することができる。抗ＴＥＳ７抗体が結合するエピトープは、細胞外配列に由来する重複しているペプチドを使用し、そして抗ＴＥＳ７抗体による結合を決定する系統的なスクリーニングによって決定することができる。
抗ＴＥＳ７抗体を特性決定するために使用することができるなお別の方法は、同じ抗原（すなわち、ＴＥＳ７）に結合することが公知である他の抗体を用いて、抗ＴＥＳ７抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定する競合アッセイを使用することである。市販されているＴＥＳ７に対する抗体の例をそのまま利用できる場合があり、また、本明細書中に教示される結合アッセイを使用して同定される場合もある。競合アッセイは、当業者に周知であり、そのような手順および具体的なデータは、実施例でさらに詳しく説明される。抗ＴＥＳ７抗体は、それらが結合する組織、ガンのタイプまたは腫瘍のタイプによってさらに特性決定することができる。
抗ＴＥＳ７抗体を特性決定する別の方法は、抗体が結合する抗原による方法である。抗ＴＥＳ７抗体を、様々なヒトガンに由来する細胞溶解物とともにウェスタンブロットにおいて使用した。当業者に公知であるように、ウェスタンブロッティングには、細胞溶解物および／または細胞画分を変性または非変性ゲル上で泳動させる工程、タンパク質をニトロセルロース紙に移動させる工程、その後、抗体（例えば、抗ＴＥＳ７抗体）でブロットをプローブして、この抗体がどのタンパク質に結合するかを見る工程が含まれ得る。この手順は、実施例４でさらに詳しく記載される。ＴＥＳ７は、大腸、乳房、卵巣、膵臓、および肺を含むがこれらに限定されない様々なヒトのガン組織に関係している。ＴＥＳ７についてのさらなる記述は、実施例５および６に提供される。
ＶＩ．抗ＴＥＳ７抗体とＴＥＳ７調節因子を使用してガンを診断する方法
本明細書中に開示される方法によって作製されたＴＥＳ７に対するモノクローナル抗体を使用して、卵巣、乳房、肺、前立腺、大腸、腎臓、膵臓、皮膚、甲状腺、脳、心臓、肝臓、胃、神経、血管、骨、および上部消化管を含むがこれらに限定されない様々な組織中のガン細胞の存在、またはガン細胞が存在しないことを、診断目的で同定することができる。また、本明細書中に開示される方法によって作製されたＴＥＳ７に対するモノクローナル抗体を使用し、充実性腫瘍からそれらが放出された後に血液中を循環しているガン細胞の存在、もしくはガン細胞が存在しないこと、またはそのレベルも、同定することができる。このように循環している抗原は、本明細書中で教示された方法に従って検出される能力を保っている、完全なＴＥＳ７抗原またはその断片であり得る。このような検出は、当該分野で一般に使用される標準的な方法を使用して、ＦＡＣＳ分析によって行うことができる。
これらの使用には、ＴＥＳ７に特異的に結合する抗体とＴＥＳ７との間で複合体を形成させる工程が含まれ得る。そのような抗体の例としては、寄託番号ＰＴＡ＃７０９３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマによって生産される抗ＴＥＳ７モノクローナル抗体が挙げられるが、これに限定されない。このような複合体の形成は、インビトロでも、またインビボでも可能である。理論には束縛されないが、モノクローナル抗体抗ＴＥＳ７は、ＴＥＳ７の細胞外ドメインを介してＴＥＳ７に結合することができ、その結果、インターナライゼーションすることができると考えられる。
本発明の診断法の好ましい１つの実施形態においては、抗体は検出可能な標識を有する。使用することができる標識の例としては、フルオロイソチオシアネートまたはフィコエリトリンのような放射性薬剤または蛍光色素分子が挙げられる。
診断および治療の目的のために商業ベースで利用されている他の公知の抗体と同じように、本発明の標的抗原は、正常な組織の中で広く発現されている。これはまた、いくつかの腫瘍中ではアップレギュレートされる。したがって、診断薬または治療薬のために使用される場合には、本発明の抗体の特定の投薬量と送達経路は、現在手がけている特定の腫瘍または病状、ならびに、処置されている特定の個体に合わせられるであろう。
診断のために抗体を使用する１つの方法は、放射性または放射線不透過性薬剤に抗体を連結させ、この抗体を個体に投与し、Ｘ線または他の画像処理機械を使用して、抗原をガン細胞表面で発現している標識された抗体の局在化を可視化することによる、インビボでの腫瘍の画像処理である。抗体は、生理学的条件下で結合を促進する濃度で投与される。
ＴＥＳ７の検出のためのインビトロ技術は、当該分野で日常的に行われており、これには、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、免疫蛍光、酵素免疫学的検定（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、およびウェスタンブロット分析が含まれる。
本発明の複数の態様においては、腫瘍または新生物の放射線画像化方法、または放射標識された抗体を用いた処理方法の有効性を測定する方法には、本発明の実施にしたがって、放射標識された腫瘍特異的抗体を個体に投与する工程が含まれる。放射標識された抗体は、放射標識（好ましくは、テクネチウム−９９ｍ、インジウム−１１１、ヨウ素−１３１、レニウム−１８６、レニウム−１８８、サマリウム−１５３、ルテチウム−１７７、銅−６４、スカンジウム−４７、イットリウム−９０からなる群から選択される放射標識）が含まれているモノクローナルまたはポリクローナル抗体であり得る。抗体の免疫反応性を損なわず、インビボで壊れない治療用の放射性核種（例えば、ヨウ素−１３１、レニウム−１８８、ホルミウム−１６６、サマリウム−１５３、およびスカンジウム−４７）で標識されたモノクローナル抗体が特に好ましい。当業者は、他の放射性同位体も公知であり、これらが特定の用途に適している場合があることを理解するであろう。放射線画像化法は、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（Ｓｉｎｇｌｅ Ｐｈｏｔｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）（ＳＰＥＣＴ）、ポジション放出断層撮影（Ｐｏｓｉｔｉｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）（ＣＴ）、または磁気共鳴画像処理（ＭＲＩ）を使用して行うことができる。放射線免疫画像化法によって決定された転移の位置のさらなる解剖学的定義を可能にする相関画像処理もまた想定される。
他の方法では、ガン細胞が取り出され、組織は、当該分野で周知の方法（例えば、凍結化合物の包埋、固定するかもしくは固定しない凍結と切片化；抗原の回収および対比染色法の様々な方法を用いるかもしくは用いない固定およびパラフィン包埋）によって免疫組織化学分析のために準備される。モノクローナル抗体もまた、異なる病期にあるガン細胞を同定するために使用される場合がある。これらの抗体はまた、どの個体の腫瘍がそれらの表面上で所定のレベルで抗原を発現しているのか、したがって、どの個体の腫瘍が上記抗原に特異的な抗体を使用する免疫療法についての候補であるかを決定するために使用される場合もある。この抗体は、ＴＥＳ７を発現する腎臓、卵巣、前立腺、および膵臓の原発性および転移性ガンの両方、ならびに、肺の原発性ガンを認識することができる。本明細書中で使用される場合は、検出には、質的および／または定量的検出が含まれる場合があり、そして／または、ガン細胞中のＴＥＳ７の高い発現レベルについて、正常細胞に対して測定したレベルを比較することが含まれる場合もある。
本発明によってはまた、ＴＥＳ７に結合する任意の抗体を使用して個体内のガン（例えば、前立腺、肺、または腎臓のガンであるが、これらに限定されない）の診断を補助する方法、およびＴＥＳ７発現のレベルを決定するために使用することができる任意の別の方法も提供される。本明細書中で使用される場合は、「診断を補助する」ための方法は、これらの方法が、ガンの分類または性質に関する臨床的な決定を行うために役に立つことを意味し、そしてこれは、最終的な診断に対して決定的である場合も、またそうではない場合もある。したがって、ガンの診断を補助する方法には、個体に由来する生物学的試料中のＴＥＳ７のレベルを検出する工程、および／または試料中のＴＥＳ７発現のレベルを決定する工程が含めることができる。抗原またはその一部を認識する抗体はまた、体液（血液、唾液、尿、肺液、または腹水液を含むがこれらに限定されない）中の生存しているかもしくは瀕死のガン細胞から放出されたかまたは分泌された抗原を検出するための診断用の免疫アッセイを開発するために使用される場合もある。
目的の特定の腫瘍中の細胞が全てＴＥＳ７を発現するわけではなく、他の組織の中のガン細胞がＴＥＳ７を発現する場合もあり、したがって、個体は、ガン細胞上のＴＥＳ７の存在、またはガン細胞が存在しないことについてスクリーニングされて、個体における免疫療法の有効性について決定されなければならない。本明細書中に開示される方法によって作製された抗ＴＥＳ７抗体は、ガンと診断された個体が、ＴＥＳ７に特異的な抗体を使用する免疫療法についての候補と考えられ得るかどうか決定するために使用することができる。１つの実施形態においては、ＴＥＳ７に特異的な抗体を使用して、ガン性の腫瘍または生検試料をＴＥＳ７の発現について試験することができる。ＴＥＳ７を発現するガン細胞を有している個体は、ＴＥＳ７に特異的な抗体を使用する免疫療法についての適切な候補である。抗ＴＥＳ７抗体での染色もまた、ガン組織を正常組織と区別するために使用することができる。
診断目的のために抗ＴＥＳ７抗体を使用する方法は、抗ガン処置の任意の形式（例えば、化学療法または放射線治療の前後の両方で、所定の処置、ガン個体の予後、腫瘍のサブタイプまたは転移性疾患の起源、および疾患の進行または処置への反応に対し、どの腫瘍が最も反応しやすいのかを決定するために有用である。
本発明の組成物はまた、他の異常（非ガン性）細胞に関して上記に一般的に記載された方法を私用して、ガン以外の病状を診断するためにも適している。本発明の方法での使用に適している病状としては、個体の炎症反応または自己免疫応答に関係している疾患または障害が挙げられるが、これらに限定されない。上記に記載された方法は、個体の炎症反応または自己免疫応答を調節するために使用することができる。本発明の組成物および方法を使用する診断および／または処置の対象であり得る、炎症障害および自己免疫障害が原因で生じる疾患ならびに病状としては、多発性硬化症、髄膜炎、脳炎、脳卒中、他の大脳外傷、炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎およびクローン病を含む）、重症筋無力症、狼瘡、関節リウマチ、喘息、急性若年型糖尿病、ＡＩＤＳによる認知症、アテローム性動脈硬化症、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および白血球媒介性急性肺傷害が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の抗体および他の治療薬が診断的および／または治療的に使用されるなお別の適応症としては、臓器または移植片の拒絶のリスクがある個体への投与が挙げられる。近年、組織および臓器（例えば、皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、および骨髄）を移植するための外科技術の効率性に著しい改善が見られている。特に重要な問題は、おそらく、移植された同種移植片または臓器に対して、レシピエントが免疫トレランスを誘導するための十分な薬剤が不足していることである。同種異系細胞または臓器が宿主に移植される（すなわち、提供者および被提供者が同種であるが異なる個体である）場合、宿主の免疫系は、移植物の外部抗原に対し免疫応答（宿主対移植片病）を開始し、移植された組織の破壊を導くと考えられる。
抗ＴＥＳ７抗体についての本出願の範囲に記載された使用にはまた、本明細書中に記載される他のＴＥＳ７アゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子の使用も含まれる。そのような実施形態においては、ＴＥＳ７アゴニスト、アンタゴニスト、または他の非抗体調節因子で、記載される工程においてＴＥＳ７抗体が置き換えられ、当業者の能力の範囲内である変更は、置き換えられたＴＥＳ７調節組成物にその方法を合わせるように行われる。
本明細書中に開示される方法によって作製されたＴＥＳ７に対するモノクローナル抗体は、様々な組織の中にヒトのガン幹細胞が存在すること、またはそれが存在しないことを同定するために使用することができる。ガン幹細胞（ＣＳＣ）は、腫瘍の増殖および転移において役割を担っているとの仮説が立てられている。この仮説に基づくと、ＣＳＣは、際限なく自己再生することができ、そして複製能力が比較的限られているより成熟した腫瘍細胞（単数または複数）（ａｄｕｌｔ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ）へと成長することができる個々の腫瘍の中の細胞の小さな明白なサブセットを提供する。これらのガン幹細胞は、化学療法薬、放射線、または他の毒性の条件に対してより耐性である可能性があり、したがって、臨床治療後も生き残り、後に二次性の腫瘍、転移へと成長するか、あるいは再発の原因となる可能性があるとの仮説が立てられている。ＣＳＣは「正常な」組織幹細胞から、またはより分化した組織前駆細胞からのいずれかから生じ得ると示唆されている。この仮説については、造血幹細胞および前駆細胞、ならびに造血器腫瘍についてサポートする強いデータがあるが、充実性腫瘍およびそれらのそれぞれのＣＳＣについてはほとんど知られていない。
ヒトのガン幹細胞は、いくつかの決定的な特徴を有する。このような特徴は、米国仮特許出願番号６０／９７２，６１３に記載されており、これは引用により本明細書中に組み入れられる。ガン幹細胞上の細胞表面標的に対するモノクローナル抗体を使用して、様々な組織の中にガン幹細胞が存在すること、または存在しないことを同定することができる。様々なガン幹細胞上でのＴＥＳ７の発現の例は、以下の実施例８に示される。本明細書中に開示される方法によって作製されたＴＥＳ７に対するモノクローナル抗体はまた、試料または組織の中、あるいは、充実性腫瘍からそれらが放出された後の循環の中に、ガン幹細胞が存在することもしくは存在しないことを同定するために、あるいは、ガン幹細胞のレベルを同定するために使用される場合もある。そのような循環している抗原は、完全なＴＥＳ７抗原であり得、また、本明細書中に教示される方法にしたがって検出される能力を保っているその断片である場合もある。そのような検出は、当該分野で一般的に使用されている標準的な方法を使用して、ＦＡＣＳ分析によって行うことができる。別の実施形態においては、そのような検出は、当該分野で一般的に使用されている標準的な方法を使用して、組織試料の免疫組織化学分析によって行われる場合もある。
これらの使用には、ガン幹細胞上のＴＥＳ７に特異的に結合する抗体とＴＥＳ７との間での複合体の形成を含めることができる。そのような抗体の例としては、寄託番号ＰＴＡ＃７０９３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマによって生産される抗ＴＥＳ７モノクローナル抗体が挙げられるが、これに限定されない。このような複合体の形成は、インビトロでも、またインビボでも可能である。
抗ＴＥＳ７抗体についてそれらの使用が記載された本出願に記載された使用にはまた、ガン幹細胞の同定および処置に使用される、本明細書中に記載される他のＴＥＳ７アゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子の使用も含まれる。そのような実施形態においては、抗ＴＥＳ７抗体、ならびに、他のＴＥＳ７アゴニスト、アンタゴニスト、および調節因子が、記載される方法と同様の方法を使用してガン幹細胞の同定、診断、または治療的処置に使用され、そして、当業者の能力の範囲内である変更は、ガン幹細胞の同定／診断または処置のためにその方法を合わせるように行われる。
ＶＩＩ．本発明の組成物
本発明にはまた薬学的組成物を含む組成物も含まれ、これには、抗ＴＥＳ７抗体、抗ＴＥＳ７抗体に由来するポリペプチド、抗ＴＥＳ７抗体をコードする配列が含まれているポリヌクレオチド、および本明細書中に記載される他の薬剤が含まれる。本明細書中で使用される場合は、組成物にはさらに、ＴＥＳ７、ＴＥＳ７アゴニスト、アンタゴニスト、調節因子に結合する、１つ以上の抗体、ポリペプチド、および／またはタンパク質、ならびに／あるいは、ＴＥＳ７に結合する１つ以上の抗体、ポリペプチド、およびタンパク質をコードする配列が含まれている１つ以上のポリヌクレオチドが含まれる。
本発明によってはさらに、任意のＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、または調節因子と、特定のＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、または調節因子の意図される機能（単数または複数）をサポートするさらに別の化学的構造の結合体が提供される。これらの結合体には、マクロ分子（例えば、本明細書中で議論される診断手順、スクリーニング手順、または精製手順において使用される任意の不溶性の固体の支持マトリックス）に共有結合させられたＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、または調節因子が含まれる。適切なマトリックス材料としては、化学的に不活性であり、高い多孔率を有しており、そしてペプチドリガンドと共有結合を形成することができる多数の官能基を有している任意の物質が挙げられる。マトリックス材料とマトリックス−リガンド結合体の調製のための手順の例は、Ｄｅａｎら（編）Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９８５）；Ｌｏｗｅ，「Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ」，Ｗｏｒｋら（編）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第７巻，Ｐａｒｔ ＩＩ，Ｎｏｒｔｈ−Ｈｏｌｌａｎｄ（１９７９）；Ｐｏｒａｔｈら、「Ｂｉｏｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ」，Ｎｅｕｒａｔｈら（編），Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，第３版，第１巻，ｐｐ．９５−１７８（１９７５）；および、Ｓｃｈｏｔｔ，Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｄｅｋｋｅｒ（１９８４）に記載されている。
ＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、または調節因子の、本明細書中で議論される診断用手順において使用される任意のレポーター部分との結合体もまた、本明細書中で提供される。
本発明のＴＥＳ７ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト、または調節因子、ポリペプチド、およびタンパク質（抗ＴＥＳ７抗体を含む）は、以下の基準の任意のもの（１つ以上）によってさらに同定され、特性決定される：（ａ）ＴＥＳ７（前立腺、肺、または腎臓のガン細胞を含むがこれらに限定されないガン細胞上のＴＥＳ７を含む）に結合する能力；（ｂ）公知の抗ＴＥＳ７抗体のＴＥＳ７に対する優先的結合を競合的に阻害する能力（もともとの抗体が優先的に結合するエピトープと同じＴＥＳ７エピトープに優先的に結合する能力を含む能力；（ｃ）インビトロまたはインビボの生存している細胞の表面上に露出しているＴＥＳ７の一部に結合する能力；（ｄ）生存しているガン細胞（例えば、前立腺、肺、または腎臓のガン細胞を含むが、これらに限定されない）の表面上に露出されるＴＥＳ７の一部に結合する能力；（ｅ）ＴＥＳ７を発現するガン細胞（例えば、前立腺、肺、または腎臓のガン細胞であるが、これらに限定されない）に化学療法薬または検出マーカーを送達する能力；（ｆ）ＴＥＳ７を発現しているガン細胞（例えば、前立腺ガン細胞であるが、これに限定されない）に治療薬を送達する能力。
いくつかの実施形態においては、本発明の抗体は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ＃７０９３の寄託番号をもつ宿主細胞またはその子孫によって産生される抗体である。本発明にはまた、これらの寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体および等価抗体またはポリペプチド断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの突然変異体、抗体部分が含まれている融合タンパク質、ヒト化抗体、および必要とされる特異性の抗原（ＴＥＳ７）認識部位を含む任意の上記抗体または等価抗体の任意の他の修飾された立体構造の様々な処方物も含まれる。本発明によってはまた、抗ＴＥＳ７ファミリメンバーの生物学的特徴の１つ以上示すヒト抗体も提供される。抗ＴＥＳ７ファミリ（ヒト化抗体およびヒト抗体を含む）の等価抗体、ポリペプチド断片、および任意のこれらの断片を含むポリペプチドが同定され、上記に記載される５つの基準のうちの任意のもの（１つ以上）によって特性決定される。
抗ＴＥＳ７抗体のマウス配列と例示的なヒト化可変ドメインの配列が、図１１および１２に提供される（それぞれ、軽鎖および重鎖）。これらの配列は、限定ではなく説明のために提供され、様々な配列、さらには提供される配列の断片や変異体も本発明の範囲に含まれる。いくつかの実施形態においては、本発明のキメラ抗ＴＥＳ７抗体には、図１１および１２のマウス可変ドメイン配列が含まれる。
いくつかの実施形態においては、ＴＥＳ７に結合する本発明の抗体、ポリペプチドおよびタンパク質は、本明細書中で具体的に記載される抗ＴＥＳ７抗体のＴＥＳ７に対する優先的結合を競合的に阻害する抗体、ポリペプチドおよびタンパク質である。いくつかの実施形態においては、抗体、ポリペプチドおよびタンパク質は、抗体ｍｕ−抗ＴＥＳ７が優先的に結合するエピトープと同じであるＴＥＳ７上のエピトープに優先的に結合する。
従って、本発明により、以下のいずれか（または以下のうちの任意のものが含まれている薬学的組成物を含む組成物）が提供される：（ａ）上記に記載された管理番号をもつ宿主細胞またはその子孫によって産生される抗体；（ｂ）そのような抗体のヒト化形態；（ｃ）そのような抗体の軽鎖および／または重鎖の可変領域の１つ以上が含まれている抗体；（ｄ）そのような抗体の重鎖および軽鎖の可変領域に相同であるかまたはそれに由来する可変領域と、ヒト抗体の重鎖および軽鎖の定常領域に相同であるかまたはそれに由来する定常領域が含まれているキメラ抗体；（ｅ）そのような抗体の軽鎖および／または重鎖のＣＤＲの１つ以上（少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、または６個）が含まれている抗体；（ｆ）そのような抗体の重鎖および／または軽鎖が含まれている抗体；（ｇ）そのような抗体と等価であるヒト抗体。抗体のヒト化形態は、そのもとの抗体または上記で特定された寄託番号をもつ宿主細胞によって産生される抗体と同じＣＤＲを有する場合があり、また、有さない場合もある。ＣＤＲ領域の決定は当業者に周知である。いくつかの実施形態においては、本発明により、上記で特定された、寄託されたハイブリドーマ（またはいくつかの実施形態においては、これらの抗体のうちの１つの抗体の６個のＣＤＲ全てに実質的に相同であるか、またはこれらの抗体のうち１つに由来する）の１つによって産生される抗体の少なくとも１つのＣＤＲ、少なくとも２つの、少なくとも３つの、少なくとも４つの、少なくとも５つのＣＤＲに実質的に相同である、少なくとも１つのＣＤＲを含む抗体、あるいは、上記で特定された寄託番号をもつ宿主細胞によって産生される抗体が提供される。他の実施形態には、本明細書中で特定された寄託されているハイブリドーマから産生される抗体のＣＤＲ、またはそのような抗体に由来するＣＤＲを少なくとも２個、３個、４個、５個、または６個に実質的に相同である少なくとも２個、３個、４個、５個、または６個のＣＤＲ（単数または複数）を有する抗体が含まれる。本発明の目的のためには、結合特異性および／または全体的な活性（これは、化学療法薬をガン細胞へまたはガン細胞に送達して、ガン細胞の成長および／または増殖を低下させ、ガン細胞においてアポトーシスによる細胞死を導き、転移の進行を遅延させる、および／または対症的に処置することに関する活性であり得る）は、一般的には維持されるが、寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体に比べ、活性の範囲は（多かれ少なかれ）様々であり得る。本発明によってはまた、これらの抗体のうちの任意のものを作製する方法も提供される。抗体を作製する方法は当該分野で公知であり、本明細書中に記載されている。
本発明によってはまた、本発明の抗体のアミノ酸配列が含まれているポリペプチドも提供される。いくつかの実施形態においては、ポリペプチドには、抗体の軽鎖および／または重鎖の可変領域のうちの１つ以上が含まれる。いくつかの実施形態においては、ポリペプチドには、抗体の軽鎖および／または重鎖のＣＤＲを１つ以上が含まれる。いくつかの実施形態においては、ポリペプチドには、抗体の軽鎖および／または重鎖のＣＤＲのうちの３個が含まれる。いくつかの実施形態においては、ポリペプチドには、以下のいずれかを有している抗体のアミノ酸配列が含まれる：もとの抗体の配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸、少なくとも８個の連続するアミノ酸、少なくとも約１０個の連続するアミノ酸、少なくとも約１５個の連続するアミノ酸、少なくとも約２０個の連続するアミノ酸、少なくとも約２５個の連続するアミノ酸、少なくとも約３０個の連続するアミノ酸。この場合、アミノ酸のうちの少なくとも３個は、抗体の可変領域に由来する。１つの実施形態においては、可変領域はもとの抗体の軽鎖に由来する。別の実施形態においては、可変領域は抗体の重鎖に由来する。別の実施形態においては、５個（またはそれ以上）の連続するアミノ酸は、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する。
本発明のいくつかの実施形態においては、本発明のＴＥＳ７、ＴＥＳ７の一部、抗ＴＥＳ７抗体、または他のＴＥＳ７に結合するポリペプチドを発現する本発明の細胞は、それらのインビボでのＴＥＳ７の生物学的活性を調節するために、個体に直接投与される。
ＶＩＩＩ．治療目的のためにＴＥＳ７調節因子および抗ＴＥＳ７抗体を使用する方法
ＴＥＳ７に対するモノクローナル抗体は、ガンまたは他の疾患を有している個体において治療目的で使用することができる。抗ＴＥＳ７抗体を用いる治療には、上記に記載されたように、インビトロおよびインビボの両方での複合体の形成を含めることができる。１つの実施形態においては、モノクローナル抗体抗ＴＥＳ７は、ガン細胞に結合して、ガン細胞の増殖を低下させることができる。抗体は、生理学的（例えば、インビボ）条件下で結合を促進する濃度で投与されることが理解される。別の実施形態においては、ＴＥＳ７モノクローナル抗体は、大腸、肺、乳房、前立腺、卵巣、膵臓、腎臓のような様々な組織のガン細胞、および肉腫のような他のタイプのガンに対する免疫療法のために使用することができる。別の実施形態においては、モノクローナル抗体抗ＴＥＳ７は単独でガン細胞に結合し、ガン細胞の細胞分裂を減少させることができる。別の実施形態においては、モノクローナル抗体抗ＴＥＳ７は、ガン細胞に結合し、転移の進行を遅らせることができる。なお別の実施形態においては、ガンを有している個体には抗ＴＥＳ７抗体を用いる対症療法が行われる。ガン個体の対症療法には、疾患の有害な症状、またはガンの進行には直接影響を及ぼさない疾患のために施された他の処置が原因で生じる医原性症状の処置または低減が含まれる。これには、痛み、栄養的補給、性の問題、心理学的な悩み、抑圧、疲労、精神医学的疾患、吐き気、嘔吐などを緩和するための処置が含まれる。
そのような状況においては、抗ＴＥＳ７抗体は、ＡＤＣＣを強める薬剤のような、個体自身の免疫応答を強化するかまたは導く薬剤とともに投与される場合がある。
なお別の実施形態においては、抗ＴＥＳ７抗体は、放射性分子、毒素（例えば、カリケアマイシン）、化学療法用の分子、化学療法用の化合物を含むリポソームまたは他の小胞と結合させられるかまたは会合させられ、そして、抗体によって認識される抗原を含むガン細胞に対してこれらの化合物を標的化させ、それにより、ガン細胞または異常細胞を排除するために、そのような処置が必要な個体に投与される。いずれの特定の理論にも束縛されないが、抗ＴＥＳ７抗体は、ＴＥＳ７をその表面上にもつ細胞によってインターナライゼーションされ、それにより、結合させられた成分が細胞へと送達され、治療的効果が誘導される。なお別の実施形態においては、抗体を、転移の進行を遅らせるために、抗原を発現しているガンの外科切除時に補助治療として使用することができる。抗体はまた、抗原を発現している腫瘍を有している個体に手術をする前に、腫瘍の大きさを小さくし、それによって、手術を可能にするかまたは容易にするために、手術中に組織を残しておくために、および／または外観の損傷を小さくするために、投与することもできる（ネオアジュバント治療）。
細胞周期投与（ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｄｏｓｉｎｇ）が本発明の実施において意図される。そのような実施形態においては、化学療法薬は、腫瘍または他の標的である異常細胞の細胞周期を、予め決定された段階に同調させるために使用される。その後、本発明の抗ＴＥＳ７抗体の投与（単独で、または別の治療用部分とともに）が行われる。別の実施形態においては、抗ＴＥＳ７抗体は細胞周期を同調させ、そして２回目の処置を行うまでの細胞分裂を減らすために使用される；２回目の処置は、抗ＴＥＳ７抗体および／またはさらに別の治療用部分の投与であり得る。
化学療法薬としては、放射性分子、毒素（ガン細胞の生存に有害である任意の薬剤を含む細胞毒素または細胞毒性薬とも呼ばれる）、薬剤、および化学療法用の化合物が含まれているリポソームまたはその他の小胞が挙げられる。適切な化学療法薬の例としては以下が挙げられるが、これらに限定されない：１−デヒドロテストステロン、５−フルオロウラシルデカルバジン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アルキル化剤、アロプリノールナトリウム、アルトレタミン、アミフォスチン、アナストロゾール、アントラマイシン（ＡＭＣ））、抗分裂剤、ｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、ジアミノジクロロ白金、アントラサイクリン、抗生物質、代謝拮抗剤、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ（小胞内）、リン酸ベタメタゾンナトリウムおよび酢酸ベタメタゾン、ビカルタミド、硫酸ブレオマイシン、ブスルファン、カルシウムロイコボリン、カリケアマイシン、カペシタビン、カルボプラチン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、コルヒチン、共役エストロゲン、シクロホスファミド、シクロフォスファミド（Ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、シタラビン、シタラビン、サイトカラシンＢ、サイトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダクチノマイシン（以前は、アクチノマイシン）、ダウノルビシンＨＣＬ、クエン酸ダウノルビシン、デニロイキンジフチトクス、デクスラゾキサン、ジブロモマンニトール、ジヒドロキシアントラシンジオン、ドセタキセル、メシル酸ドラセトロン、ドキソルビシンＨＣＬ、ドロナビノール、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｌ−アスパラギナーゼ、エメチン、エポエチンアルファ、エルビニアＬ−アスパラギナーゼ、エステル化エストロゲン、エストラジオール、リン酸エストラムスチンナトリウム、臭化エチジウム、エチニルエストラジオール、エチドロネート、エトポシド・シトロロラン因子、リン酸エトポシド、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルコナゾール、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、フォリン酸、ゲムシタビンＨＣＬ、糖質コルチコイド、酢酸ゴセレリン、グラミシジンＤ、グラニセトロンＨＣＬ、ヒドロキシ尿素、イダルビシンＨＣＬ、イホスファミド、インターフェロンα−２ｂ、イリノテカンＨＣＬ、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、酢酸ロイプロリド、レバミゾールＨＣＬ、リドカイン、ロムスチン、メイタンシノイド、メクロレタミンＨＣＬ、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファランＨＣＬ、メルカプチプリン（ｍｅｒｃａｐｔｉｐｕｒｉｎｅ）、メスナ、メトトレキセート、メチルテストステロン、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、酢酸オクトレオチド、オンダンセトロンＨＣＬ、パクリタキセル、パミドロン酸二ナトリウム、ペントスタチン、ピロカルピンＨＣＬ、プリマイシン、カルムスチンインプラントを伴うポリフェプロサン２０、ポルフィマーナトリウム、プロカイン、プロカルバジンＨＣＬ、プロプラノロール、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾトシン、タモキシフェン、タキソール、テニポシド、テノポシド、テストラクトン、テトラカイン、チオテパクロラムブシル、チオグアニン、チオテパ、トポテカンＨＣＬ、クエン酸トレミフェン、トラスツズマブ、トレチノイン、バルルビシン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、および酒石酸ビノレルビン。
好ましい１つの実施形態においては、細胞毒素は、分裂している細胞、または迅速に分裂している細胞において特に有効であり、その結果、分裂していない細胞は、毒性効果によっては比較的損傷を受けない。
本発明の抗体は、それらが結合する異常細胞またはガン細胞の中にインターナライゼーションさせることができ、したがって、例えば、それらの有害な活性を生じさせるためにはインターナライゼーションされる必要がある毒素を細胞の中へ送達する、治療用途に特に有用である。このような毒素の例としては、サポリン、カリケアマイシン、オーリスタチン、およびメイタンシノイドが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の抗体またはポリペプチドは、共有的または非共有的に、直接的または間接的に、放射性分子、毒素、または他の治療薬、または治療薬を含むリポソームまたは他の小胞に会合させることができる（結合または連結を含む）。抗体がその標的であるＴＥＳ７に結合できる限りは、抗体は、放射性分子、毒素、または化学療法分子と、抗体に沿った任意の位置で連結させることができる。
毒素または化学療法薬は、同時に（投与の前、後、または投与の間に）投与される場合があり、また、適切なモノクローナル抗体に対して、直接的または間接的のいずれかで（例えば、リンカー基を介するか、または代わりに、米国特許第５，５５２，３９１号に記載される基盤分子のような適切な付着部位をもつ連結分子を介して）結合させられる（例えば、共有結合させられる）場合もある。本発明の毒素および化学療法薬は、当該分野で公知の方法を使用して特定の標的タンパク質に直接結合させることができる。例えば、薬剤と抗体が互いに反応することができる置換基を有している場合は、両者の間での直接の反応が可能である。例えば、一方にある求核基（例えば、アミノ基またはスルフヒドリル基）を、他方にあるカルボニルを含む基（例えば、無水物または酸ハロゲン化物）または良好な脱離基（例えば、ハロゲン化物）を含むアルキル基と反応させることができる。
さらに抗体またはポリペプチドは、マイクロキャリアを介して化学療法薬に連結させることもできる。マイクロキャリアは、生体分解性または非生体分解性の粒子を意味し、これは水に不溶であり、約１５０、１２０、または１００ｍｍ未満の大きさを有し、より一般的には、約５０〜６０μｍ未満、好ましくは約１０、５、２．５、２、または１．５μｍ未満の大きさを有する。マイクロキャリアには、約１μｍ未満、好ましくは約５００ｎｍ未満の大きさを有するマイクロキャリアである「ナノキャリア」が含まれる。このような粒子は当該分野で公知である。固相マイクロキャリアは、生体適合性のある天然のポリマー、合成ポリマーまたは合成コポリマーから形成される粒子であり得る。これには、アガロースまたは架橋されたアガロース、ならびに、当該分野で公知の他の生体分解性材料から形成されるマイクロキャリアが含まれる場合も、また含まれない場合もある。生体分解性である固相マイクロキャリアは、哺乳動物の生理学的条件下で分解されるポリマー（例えば、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）およびそのコポリマー）または浸食性のある（例えば、ポリ（オルトエステル、例えば、３，９−ジエチリデン−２，４，８，１０−テトラオキサスピロ［５．５］ウンデカン（ＤＥＴＯＳＵ）、またはセバシン酸のポリ（無水物）、例えば、ポリ（無水物））から形成させることができる。マイクロキャリアは、液相マイクロキャリアが生体分解性である限りは、液相（例えば、油または脂質ベースのもの）であってもよく、例えば、リポソーム、抗原をもたないｉｓｃｏｍｓ（コレステロール、およびリン脂質、アジュバント作用のあるサポニンの安定な複合体である免疫刺激複合体（Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ））、あるいは、例えば、水中油型エマルジョンまたは油中水型エマルジョンの中で見られる液滴またはミセルであり得る。生体分解性液相マイクロキャリアには、通常、生体分解性の油が配合され、スクアレンおよび植物性油脂を含む複数のそのような生体分解性の油は当該分野で公知である。マイクロキャリアは、通常は、球状であるが、球状以外のマイクロキャリアも許容される（例えば、エリプソイド（ｅｌｉｐｓｏｉｄ）、桿状など）。それらの（水に関して）不溶性の性質が原因で、マイクロキャリアは、水および水をベースとする（水性）溶液から濾過することができる。
本発明の抗体またはポリペプチドの結合体には、毒性物質または化学療法薬に結合させることができる基と抗体に結合することができる基の両方を含む二官能性リンカーが含まれる場合がある。リンカーは、結合能力に妨害しないように、薬剤から抗体を間隔を隔てるためのスペーサーとして機能することができる。リンカーは切断できる場合も、また切断できない場合もある。リンカーはまた、薬剤または抗体上の置換基の化学反応性を高め、これによって結合効率を高めるようにも作用することができる。さらに化学反応性の増大により、そうでなければ不可能である、薬剤または薬剤上の官能基の使用を促進する場合もある。二官能性リンカーは、当該分野の公知の手段によって抗体に結合させることができる。例えば、活性なエステル部分（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）が含まれているリンカーを、抗体中のリジン残基に対するアミド結合を介する結合のために使用することができる。別の例においては、求核アミンまたはヒドラジン残基を含むリンカーを、抗体炭水化物残基の糖分解性の酸化によって生じるアルデヒド基に結合させることができる。このような直接的な結合方法に加えて、リンカーは、アミノデキストランなどの媒介担体によって抗体に間接的に結合させることができる。これらの実施形態においては、修飾された連結は、リジン、炭水化物、または媒介担体を介する。１つの実施形態においては、リンカーは、タンパク質中の遊離のチオール残基に対して部位選択的に結合させられる。タンパク質上のチオール基に対する選択的結合に適している部分は、当該分野で周知である。例として、二硫化物、α−ハロカルボニル、およびα−ハロカルボキシル化合物、およびマレイミドが挙げられる。求核性アミン官能基がα−ハロカルボニルまたはカルボキシル基と同じ分子の中に存在する場合は、アミンの分子内アルキル化を介して環化が起こる可能性がある。この問題を避けるための方法は当業者に周知であり、例えば、望ましくない環化が立体化学的に好ましくないようにする柔軟性のない（例えば、アリール基またはｔｒａｎｓ−アルケン基）によって、アミンとα−ハロ官能基が間隔を隔てられて配置されている分子を調製することによる。例えば、二硫化物部分を介するメイタンシノイドと抗体との結合体の調製に関する米国特許第６，４４１，１６３号を参照のこと。
抗体−薬物結合体の調製に使用することのできる切断可能なリンカーの１つは、ｃｉｓ−アコニット酸をベースとする酸に不安定であるリンカーであり、これは、様々な細胞内区画（例えば受容体によって媒介されるエンドサイトシスの際に見られるエンドソーム、およびリソソーム）の酸性環境を活用する。例えば、ダウノルビシンとマクロ分子担体との結合体の調製については、Ｓｈｅｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１０２：１０４８−１０５４（１９８１）；ダウノルビシンの抗黒色腫抗体に対する結合体の調製については、Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ．Ｉｎｓｔ．８０：１１５４−１１５９（１９８８）；ダウノルビシンと抗Ｔ細胞抗体との結合体を調製するために、酸に不安定なリンカーを同じ方法で使用することについては、Ｄｉｌｉｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４８：６０９７−６１０２（１９８８）；ペプチド・スペーサー・アームを介する抗体へのダウノルビシンの連結については、Ｔｒｏｕｅｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７９：６２６−６２９（１９８２）を参照のこと。
本発明の抗体（またはポリペプチド）は、当該分野で公知である任意の方法によって放射性分子に結合（連結）させられる場合がある。放射標識抗体の方法についての議論は、「Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＴ」、Ｄ．Ｍ．Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ編（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９５）を参照のこと。
あるいは、米国特許第４，６７６，９８０号にＳｅｇａｌによって記載されているように、抗体を第二抗体に結合させて、抗体ヘテロ結合体を形成させることができる。架橋抗体の形成により、例えば、特定のタイプの細胞（例えば、ＴＥＳ７を発現しているガン細胞または異常細胞）に対する免疫系を標的とすることができる。
本発明によってはまた、抗ＴＥＳ７抗体を使用するか、または、化学療法薬と一緒にＴＥＳ７に結合するか、もしくは化学療法薬に連結させられたＴＥＳ７に結合する他の実施形態を使用して、ガン（前立腺、肺、または腎臓ガンを含むが、これらに限定されない）を有している個体内での転移の進行を遅らせる方法も提供される。いくつかの実施形態においては、抗体は非ヒト抗ＴＥＳ７抗体のヒト化形態またはキメラ形態である。
なおに別の実施形態においては、抗体を、転移の進行を遅らせるために、抗原を発現しているガンの外科切除時に補助治療として使用することができる。また抗体または化学療法薬と結合した抗体は、抗原を発現している腫瘍を有している個体を手術をする前に、腫瘍の大きさを小さくし、これによって、手術を可能または容易にするために、手術中に組織を残しておくために、および／または外観の損傷を小さくする減らすために、投与することもできる（ネオアジュバント治療）。
なお別の実施形態においては、本明細書中に記載されるＴＥＳ７結合実施形態の内の任意のものは、ＴＥＳ７を発現しているガン細胞に結合して、ＴＥＳ７を発現しているガン細胞に対し活発な免疫応答を誘導することができる。いくつかの場合には、活発な免疫応答によって、ガン細胞の死を引き起こすことができる（例えば、ガン細胞に対する抗体の結合がアポトーシスによる細胞死を誘導する）か、またはガン細胞の増殖を阻害することができる（例えば、細胞周期の進行を阻止する）。他の場合には、本明細書中に記載される新規の抗体のいずれかが、ガン細胞に結合することができ、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）によって、抗ＴＥＳ７が結合するガン細胞を排除することができる。従って、本発明により、本明細書中に記載される組成物のうちの任意のものを投与する工程を含む、免疫応答を刺激する方法が提供される。
いくつかの場合には、抗体の結合によってはまた、細胞性免疫応答と体液性免疫応答の両方を活性化することができ、そして、さらに多くのナチュラルキラー細胞を動員することができるか、またはサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−βなど）の産生を増大させることができる。これらは、ガン細胞を破壊するために、個体の免疫系をさらに活性化させる。なお別の実施形態においては、抗ＴＥＳ７はガン細胞に結合することができ、マクロファージまたは他の食作用性細胞によってガン細胞をオプソニン化することができる。
抗ＴＥＳ７抗体またはその断片の様々な処方物を、投与のために使用することができる。いくつかの実施形態においては、抗ＴＥＳ７抗体またはその断片を手際よく投与することができる。薬理学的有効成分に加えて、本発明の組成物には、当該分野で周知であり、薬理学的に有効な物質の投与を容易にするか、または作用部位への送達のために薬学的に使用することができる調製物になるように活性のある化合物を加工することを容易にする比較的不活性である物質である賦形剤および助剤を含む適切な薬学的に許容される担体を含めることができる。例えば、賦形剤は、剤形または一貫性をもたらすことができる、また、希釈剤として作用することもできる。適切な賦形剤としては、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、モル浸透圧濃度を変化させるための塩類、カプセル化剤、緩衝剤、および皮膚浸透促進剤が挙げられるが、これらに限定されない。
非経口投与に適している処方物としては、水溶性の形態（例えば、水溶性の塩）の活性のある化合物の水溶液が挙げられる。加えて、油性の注射用懸濁液に適しているような活性のある化合物の懸濁液を投与することができる。適切な親油性溶媒または媒体としては、脂肪油（例えば、ゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド）が挙げられる。水性の注射用懸濁液には、懸濁液の粘性を高める物質を含めることができ、これには、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、および／またはデキストランが含まれる。状況に応じて、懸濁液には安定剤も含めることができる。リポソームもまた、細胞に送達される薬剤をカプセル化するために使用することができる。
本発明にしたがう全身投与のための薬学的処方物は、経腸、非経口的、または局所的投与のために処方することができる。実際、これらの３つのタイプの処方物は全て、有効成分の全身投与を行うために同時に使用される場合がある。賦形剤、ならびに、非経口的および非経口的ではない薬物送達のための処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ 第２０版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）の中で説明されている。
経口投与に適している処方物としては、硬質または軟質ゼラチンカプセル、丸剤、錠剤（コーティングされた錠剤を含む）、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ、またはこれらの吸入式および放出制御式の形態が挙げられる。
一般的には、これらの薬剤は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与のために処方されるが、他の投与形式（例えば、経口、粘膜など）も使用することができる。したがって、抗ＴＥＳ７抗体は、好ましくは、薬学的に許容される媒体（例えば、食塩水、リンガー溶液、ブドウ糖溶液など）と組み合わせられる。
特定の投与レジュメ（すなわち、用量、タイミング、および回数）は、特定の個体およびその個体の病歴に応じて様々であろう。一般的には、少なくとも約１００ｕｇ／ｋｇ体重、より好ましくは少なくとも約２５０ｕｇ／ｋｇ体重、なおさらに好ましくは少なくとも約７５０ｕｇ／ｋｇ体重、なおさらに好ましくは少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、なおさらに好ましくは少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、なおさらに好ましくは少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量が投与される。
投与量の決定には、一般的には、半減期などの経験的な検討が行われるであろう。ヒト免疫系に適合する抗体（例えば、ヒト化抗体または完全なヒト抗体）を使用して、抗体の半減期を延長し、抗体が宿主の免疫系によって攻撃されることを防ぐことができる。治療過程の間を通じて、投与頻度を決定し、調節することができ、回数は、ガン細胞数の減少、ガン細胞減少の維持、ガン細胞の増殖の低下、または転移進行の遅延に基づく。あるいは、抗ＴＥＳ７抗体を持続して連続的に放出させる処方物が適切である場合がある。徐放を実現するための様々な処方物および装置は、当該分野で公知である。
１つの実施形態においては、抗ＴＥＳ７抗体の投与量は、既に一回以上の投与（単数または複数）を受けた個体から経験的に決定することができる。個体には、漸増量の抗ＴＥＳ７抗体が投与される。抗ＴＥＳ７抗体の有効性を評価するためには、特定のガンの病状のマーカーが追跡される。これらには、触診または視覚的観察による腫瘍サイズの直接測定、Ｘ線または他の画像処理技術による腫瘍の大きさの間接的測定；腫瘍の直接生検および腫瘍試料の顕微鏡試験によって評価される改善；間接的腫瘍マーカー（例えば、前立腺ガンについてはＰＳＡ）の測定、痛みまたは麻痺の減少；腫瘍に関連する言語、視覚、呼吸または他の能力障害の改善；食欲の増進；あるいは、認可されている試験によって測定される生活の質の向上または生存期間の延長が含まれる。投与量は、個体、ガンのタイプ、ガンの病期に応じて、ガンが個体の他の場所への転移を開始したかどうか、ならびに、使用された過去の処置および同時に使用されている処置に応じて様々であることは、当業者には明らかであろう。
他の処方物としては、リポソームのような担体を含むがこれに限定されない、当該分野で公知の適切な送達方式が挙げられる。例えば、Ｍａｈａｔｏら（１９９７）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１４：８５３−８５９を参照のこと。リポソーム調製物としては、サイトフェクチン（ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎｓ）、多重膜小胞および単層の小胞が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態においては、２つ以上の抗体が存在する場合がある。抗体は、モノクローナルである場合も、また、ポリクローナルである場合もある。このような組成物には、ガン腫、腺ガン、肉腫、または腺肉腫に対して反応性がある、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個の異なる抗体を含めることができる。抗ＴＥＳ７抗体は、臓器（卵巣、乳房、肺、前立腺、大腸、腎臓、皮膚、甲状腺、骨、上部消化管、および膵臓を含むがこれらに限定されない）の中のガン腫、腺ガン、肉腫、または腺肉腫に対して反応性がある１つ以上の抗体と混合することができる。１つの実施形態においては、様々な抗ＴＥＳ７抗体の混合物が使用される。当該分野で頻繁に示されるように、抗体の混合物は、広範囲の個体群の処置に特に有用であり得る。
以下の実施例は、説明のために提供されるものであって、本発明を限定するものではない。
（実施例１）
免疫原としてのヒト胎児精巣細胞の調製
妊娠週令が１０から１８週の間であるヒト胎児の精巣を、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ａｌａｍｅｄａ Ｃｏｕｎｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）から入手した。精巣を調達し、氷水の上の組織培地の中に入れた状態で実験室に運んだ。到着後すぐに、精巣を洗浄培養液（Ｆ１２／ＤＭＥ（１：１））に移した。精巣を、乾いた１００ｍｍ培養皿の中で、外科用はさみを用いて１ｍｍ角に切り刻んだ。組織の断片を１０ｍｌの定義した無血清培地（精巣用培地と呼ぶ）にプレートした。
この実施例で使用した培地には、以下に示し最終濃度で以下の成分を含めた：Ｆ１２／ＤＭＥ（１：１）、インシュリン１０μｇ／ｍｌ、トランスフェリン１００ｍｇ／ｍｌ、ＥＧＦ５０μｇ／ｍｌ、エタノールアミン１０−３Ｍ、ホスホエタノールアミン１０−３Ｍ、トリヨードサイロニン（Ｔ３）１０−９Ｍ、セレニウム２．５×１０−５Ｍ、ビタミンＥ ５μｇ／ｍｌ、およびゲンタマイシン１００μｇ／ｍｌ。様々な一般的に使用されている細胞培養培地を本発明の実施のために使用することができるが、本発明の好ましい実施形態では、無血清のものをベースとする細胞培養培地を使用する。
組織の断片を１５ｍｌの遠心管に移し、組織の断片を１０００×ｇで５分間遠心分離した。組織の断片を精巣用培地、ペニシリン／ストレプトマイシン（１×）、およびコラゲナーゼ／ジスパーゼ（０．１％）の中に再度懸濁させ、そして４℃で一晩インキュベートした。翌日、酵素消化された組織断片を１０００×ｇで５分間遠心分離して、精巣用培地で２回洗浄した。ペレットを１０ｍｌの精巣用培地の中に再度懸濁させ、フィブロネクチンを予めコーティングしておいた１０ｃｍのプレートの中で培養した。
細胞を回収するために、細胞の単層を、カルシウムおよびマグネシウムが含まれていないハンクス生理的食塩水で１回すすぎ、ハンクス生理的食塩水に溶かしたＡｃｃｕｔａｓｅ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とともに３７℃で１５分間インキュベートした。細胞を、軽くピペッティングすることによって培養表面から剥がした。細胞懸濁液を１０００×ｇで５分間の遠心分離にかけてペレットとした。上清を除去し、細胞を適切な非変性アジュバントを含む無血清培地の中に再度懸濁させた。
（実施例２）
モノクローナル抗体の作製
非変性アジュバント（Ｒｉｂｉ，Ｒ７３０，Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＭＴ）を、リン酸緩衝化生理食塩水の中で２ｍｌになるように再水和した。その後、１００μｌのこの再水和させたアジュバントを、免疫化のために使用する実施例１による細胞ペレットの一部とゆっくりと混合させた。マウス１匹あたり、およそ１０６個のヒト胎児の精巣細胞を、足蹠からＢａｌｂ／ｃマウスに、およそ１週間に１回または２回で注射した。正確な免疫化のスケジュールは、以下のとおりである：０日目、免疫化とＲｉｂｉ。３日目、免疫化とＲｉｂｉ。７日目、免疫化とＲｉｂｉ。２４日目、Ｒｉｂｉを除いた免疫化。２９日目、Ｒｉｂｉを除いた免疫化。３２日目、Ｒｉｂｉを除いた免疫化。３６日目、Ｒｉｂｉを除いた免疫化。４４日目、Ｒｉｂｉを除いた免疫化。５１日目、Ｒｉｂｉを除いた免疫化。６９日目、力価試験のための採血。７１日目、免疫化とＲｉｂｉ。７４日目、免疫化とＲｉｂｉ。８１日目、免疫化とＲｉｂｉ。９１日目、プレヒュージョンブースト（ｐｒｅｆｕｓｉｏｎ ｂｏｏｓｔ）（Ｒｉｂｉを用いない）。１０４日目、融合のために節を回収。
６９日目に、血液を１滴、免疫化したそれぞれの動物の尾から採血して、ヒト胎児の腎臓細胞に対する抗体の力価をＦＡＣＳ分析によって試験した。力価が少なくとも１：２０００に達していれば、マウスをＣＯ２の使用、続いて、頚椎の脱臼によって屠殺した。リンパ節をハイブリドーマの調製のために回収した。
マウス由来のリンパ球を、３５％ポリエチレングリコール４０００を使用して、マウスの骨髄腫細胞株Ｘ６３−Ａｇ８．６５３と融合させた。融合の１０日後に、ハイブリドーマの上清を、ヒト胎児腎臓細胞特異的モノクローナル抗体の存在について蛍光活性化細胞選別装置（ＦＡＣＳ）によってスクリーニングした。それぞれのハイブリドーマによる馴化培地を、ヒト胎児腎臓細胞のアリコートとともに３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞試料を洗浄し、０．１ｍｌの希釈液の中に再度懸濁させ、そして１μｇ／ｍｌのヤギ抗マウスＩｇＧのＦＩＴＣ結合Ｆ（ａｂ’）２断片とともに４℃で３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、０．２ｍｌのＦＡＣＳ希釈液の中に再度懸濁させ、そしてＦＡＣＳｃａｎ細胞分析器（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，Ｃａｌｉｆ．）を使用して分析した。ハイブリドーマクローンを、さらなる増殖、クローニング、およびＦＡＣＳによるヒト胎児腎臓細胞の表面へのそれらの結合に基づく特性決定のために選択した。Ａｇ−ＴＥＳ７と命名された抗原とその抗原上のエピトープに結合する、ｍｕ−抗ＴＥＳ７と命名されたモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマを選択した。
（実施例３）
ｍｕ−抗ＴＥＳ７を含む抗ＴＥＳ７抗体の精製
ヒト胎児の精巣細胞（例えば、ＳＫＭＥＳ−１、７８６−Ｏ、およびＣｏｌｏ２０５細胞株であるが、これらに限定されない）を、１０．０ｍＭのＥＤＴＡの存在下で組織培養フラスコから剥がし、１４００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１％のＢＳＡと２ｍＭのＥＤＴＡ（ＦＡＣＳ希釈液）を含むＰＢＳの中に再度懸濁させた。細胞数を数えて、１０７細胞／ｍｌになるように調整した。約０．１ｍｌの細胞を１００μｌのＦＡＣＳ希釈液とともに、３７℃で３０分間インキュベートした。ヒト胎児の精巣細胞に結合するモノクローナル抗体を、プロテイン−Ｇアフィニティークロマトグラフィーを使用して組織培養上清から精製した。以下の材料を、抗体精製プロセスに使用した：ハイブリドーマ組織培養上清、Ｉｍｍｕｎｏｐｕｒｅ（Ｇ）ＩｇＧ結合緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ ＃２１０１１ Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、Ｉｍｍｕｎｏｐｕｒｅ ＩｇＧ溶出緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ ＃２１００９）、濃ＨＣｌ（ｐＨの調整のため）、Ｃｏｒｎｉｎｇの１リットルのＰＥＳ（ポリエーテルスルホン）、０．２２μｍのフィルター（Ｃｏｒｎｉｎｇ ＃４３１０９８，Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｎ．Ｙ．）、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃１７−０６１８−０３）、３Ｍのチオシアン酸カリウム／５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ ７．８）およびＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）からなる引き剥がし用緩衝液（Ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）、３ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ ９．０）。
マウス抗ｈｕＴＥＳ７抗体（本明細書中では、ｍｕ−抗ＴＥＳ７と呼ぶ）を精製するために、上清の容積を測定し、等量の結合緩衝液を上清に添加した。混合物を室温になるように平衡化させた。上清を０．２２μｍのフィルターを通過させることによって明澄化させた。上清をＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してプロテイン−Ｇセファロースカラム上にロードし、その後、５〜１０倍のカラム容量の結合緩衝液で洗浄した。モノクローナル抗体を溶出緩衝液で溶出させ、画分を回収した。画分を、空のチューブへの３ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ ９．０）（画分の１／６０の容量）の添加を用いて溶出の際に中和した。モノクローナル抗体を含むピーク画分をプールした。プールした試料を予め湿らせておいたＳｌｉｄｅ−Ａ−ｌｙｚｅｒ（ｓｌｉｄｅａｌｙｚｅｒ）カセット（１０，０００のＭＷカットオフ；Ｐｉｅｒｃｅ ＃６６８１０）に注入し、１×ＰＢＳで４℃で透析した（少なくとも４時間で１回の交換で、３回緩衝液を交換した）。精製したモノクローナル抗体を濾過滅菌し（０．２μｍのＡｃｒｏｄｉｓｃ）、そして２〜８℃で保存した。
精製した抗体の試料を、ＵＶ吸光度（Ａ２８０）による濃度の決定とＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）のために採取した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、分子量の分析、モノクローナル抗体の典型的なバンドパターンの同定、および純度の評価のために、非還元条件と還元条件の両方で行った。
ハイブリドーマ上清からのｍｕ−抗ＴＥＳ７モノクローナル抗体を精製した後、これを、ヒト胎児の精巣細胞に対する結合について再度試験した。細胞試料は、上記に記載したように調製し、様々な濃度の精製抗体とともにインキュベートした。インキュベーションの後に、細胞を洗浄し、０．１ｍｌの希釈液の中に再度懸濁させ、１μｇのヤギ抗マウス免疫ＩｇＧのＦＩＴＣ結合Ｆ（ａｂ’）２断片とともに、４℃で３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、０．５ｍｌのＦＡＣＳ希釈液に再度懸濁させ、そしてＦＡＣＳｃａｎ細胞選別装置（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，Ｃａｌｉｆ．）を使用し分析した。ＦＡＣＳｃａｎヒストグラム上での右側へのシフトは、精製した抗体が依然としてヒト胎児の精巣細胞に結合していることを示していた。
（実施例４）
組み換え体４−Ｉｇ Ｂ７Ｈ３を用いたガン細胞株ＳＷ９４８ＴＥＳ７の発現の生化学的分析
結腸直腸腺ガンＳＷ９４８（ＡＴＣＣ＃ ＣＣＬ−２３７）細胞を、１７５ｃｍ２の培養皿の上でコンフルエンシーになるまで増殖させた。コンフルエントな単層をハンクス平衡塩溶液（重炭酸ナトリウムまたはフェノールレッドを含まないＨＢＳＳ＋；１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．４）で平衡化した；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）で３回洗浄し、２００μｇのスルホ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ Ｅｎｄｏｇｅｎ）で、室温で３０分間ビオチニル化させた。その後、細胞を、０．１ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ ７．４）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を含むＨＢＳＳ＋で洗浄し、０．１ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ ７．４）を含むＨＢＳＳ＋の中で、室温で１５分間インキュベートした。細胞を、最後にＨＢＳＳ＋で３回洗浄し、溶解緩衝液（２％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、２ｍＭのＰＭＳＦ、０．１％のアジ化ナトリウムを含むＨＢＳＳ＋、および５ｍｌの溶解緩衝液あたり１錠のＥＤＴＡを含まない完全なミニ−プロテアーゼ混合物（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ））の中で、氷上で５分間のインキュベーションによって溶解させた。
細胞を、溶解緩衝液中でこすり取り、溶解物を回収した。溶解物は、１４，０００×ｇで４℃で１時間遠心分離した。その後、明澄化させた溶解物を、５μｌのヒトＩｇＧ結合（１ｍｇ／ｍｌ）ＣＮＢｒ ４ＭＢセファロースビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ）とともに、４℃で２時間、プレクリアした（ｐｒｅ−ｃｌｅａｒｅｄ）。ヒトＩｇＧビーズを遠心分離して除去し、その後、プレクリアした溶解物を、ＣＮＢｒ ４ＭＢセファロースビーズに結合させた（１ｍｇ／ｍｌで結合させた）モノクローナル抗体ｍｕ−抗ＴＥＳ７とともに、４℃で２時間インキュベートした。ｍｕ−抗ＴＥＳ７ビーズを遠心分離し、２時間のインキュベーション後に取り出した。ヒトＩｇＧとｍｕ−抗ＴＥＳ７ビーズの両方を、別々に、１ｍｌの溶解緩衝液で３回洗浄し、その後、１ｍｌのＨＢＳＳ＋で３回洗浄した。洗浄したビーズを、３０μｌのＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液の添加と、９９℃で５分間沸騰させることによって溶出させた。
その後、試料を、４〜２０％のＮｏｖｅｘ勾配ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上で分離させ、０．２μｍのニトロセルロース膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上に移動させ、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ Ｅｎｄｏｇｅｎ）によって視覚化させた。ＨＲＰ結合ストレプトアビジンでの検出のために、ニトロセルロースを、最初にブロッキング緩衝液（０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含むＴｒｉｓ緩衝化食塩水中の５％の無脂肪乳（ＴＢＳＴ））で１時間ブロックした。ＨＲＰ結合ストレプトアビジンを１μｇ／ｍｌになるようにＴＢＳＴの中に希釈し、そしてニトロセルロースを室温で３０分間露光させた。ニトロセルロースをＴＢＳＴ中で３回洗浄し、その後、ＥＣＬ＋（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で視覚化させた。結果は、およそ１１０ｋＤａの大きさのｍｕ−抗ＴＥＳ７ビーズを使用した特異的なバンドを示した（結果は示さない）。
ｍｕ−抗ＴＥＳ７の抗原標的がＢ７Ｈ３であることを確認するために、１００ｎｇの組み換え体４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３タンパク質（ＨＩＳタグをつけたもの、および担体を含まないもの、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、上記に記載したものと同様の標準的なプロトコールを利用して、還元条件下と非還元条件下で４〜２０％の勾配ＳＤＳゲル上での電気泳動によって分離させた。タンパク質を０．２μｍのニトロセルロース膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に移動させ、そしてＨＢＳＳ中の５％の無脂肪乳の中で、室温で２時間、または４℃で一晩ブロックした。ブロッキング緩衝液（０．１％のＴｗｅｅｎ ２０を含むＨＢＳＳ中の５％の無脂肪乳）の中で５μｇ／ｍｌの濃度で、一次抗体（ｍｕ−抗ＴＥＳ７）を、室温で少なくとも１時間かけて添加した。膜を、３回、それぞれ、ＨＢＳＳの中で１０分間洗浄し、０．１％のＴｗｅｅｎ ２０と二次抗体（ロバ抗マウス、Ｈ＋Ｌ、ＨＲＰを結合させたもの、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、室温で１時間かけて添加した。ブロットを、ＨＢＳＳ、０．１％のＴｗｅｅｎ ２０で３回洗浄し、その後、ＥＣＬ＋（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で視覚化させた。
結果は、図３に示すように、ｍｕ−抗ＴＥＳ７が、ウェスタンブロット分析においては、非還元条件下でのみヒト組み換え体４Ｉｇ Ｂ７Ｈ３を認識することを示していた。組み換え体４Ｉｇ Ｂ７Ｈ３（８０〜８５ｋＤａ）とビオチニル化された細胞溶解物からｍｕ−抗ＴＥＳ７ビーズを使用して引っ張り出された（ｐｕｌｌｅｄ ｄｏｗｎ）Ｂ７Ｈ３（およそ１００から１１０ｋＤａ）の間での大きさの差は、おそらく、組み換え体４ＩｇＧ Ｂ７Ｈ３タンパク質はＧｌｙ２７で始まり、ビオチニル化された細胞溶解物に由来するＢ７Ｈ３タンパク質は全長の分子であることが原因である。
（実施例５）
免疫組織化学分析の方法
抗ＴＥＳ７抗体（例えば、ｍｕ−抗ＴＥＳ７）を、外科生検および／または解剖標本に由来する凍結させた正常なヒト組織および腫瘍組織試料についてスクリーニングした。凍結させた組織試料をＯＣＴ化合物の中に包埋し、ドライアイスを使用してイソペンタンの中で迅速に凍結させた。凍結切片を、８〜１０μｍの厚さになるようにＬｅｉｃａ ３０５０ ＣＭミクロトームを用いて切断し、ＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ Ｐｌｕｓスライド（ＶＷＲ ＃４８３１１−７０３）上に融解させて取り付け（ｔｈａｗ−ｍｏｕｔｅｄ）、そして室温で２時間風乾させた。切片を、７５％のアセトン／２５％のエタノールで、室温で１０分間固定し、室温で１〜２時間風乾させた。固定した切片を使用するまで−８０℃で保存した。
免疫組織化学分析のために、組織切片を取り出し、−８０℃から室温にまでゆっくりと平衡化させ、０．０５％の、Ｔｒｉｓ緩衝化Ｔｗｅｅｎ（ＴＢ−Ｔ）の中で３回、それぞれ５分間洗浄し、そしてブロッキング緩衝液（ＴＢ−Ｔ、５％の正常なヤギ血清および１００μｇ／ｍｌのアビジン）の中で、室温で２０分間ブロックした。その後、スライドを、ブロッキング緩衝液の中に希釈したｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体および対照であるモノクローナル抗体（１〜５μｇ／ｍｌ）とともに、室温で６０〜９０分間、または４℃で一晩インキュベートした。その後、切片をブロッキング緩衝液で３回洗浄し、続いて、ＴＢ−Ｔ中で過酸化水素（１〜３％）ビオチン（ｄ−ビオチン、３０μｇ／ｍｌ）ブロックでのブロックを、室温で２０分間行った。ＴＢ−Ｔでの３回目の洗浄を、その後、上記に記載したように３回行った。切片を、二次ビオチニル化ヤギ抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ（Ｈ＋Ｌ）抗体を含むブロッキング緩衝液の中で、室温で３０分間インキュベートした。ＴＢ−Ｔを用いて、さらに３回、それぞれ５分間の洗浄を行った。その後、アビジンビオチンペルオキシダーゼ複合体の形成を、製造業者の説明書にしたがって、予め作られたＡＢＣ溶液（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣ Ｅｌｉｔｅキット）を添加することによって行わせ、スライドを室温で３０分間インキュベートした。その後、スライドを、ＴＢ−Ｔで２回、その後、脱イオン水で１回、それぞれ５分間の洗浄を行った。ＤＡＢ基質（１０ｍｌの１０×ＤＡＢ溶液、９０ｍｌのＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ ７．６）、および１００μｌの３％ Ｈ２Ｏ２）を、室温で３０分かけてスライドに添加して、色のついた沈殿を形成させ、結合した一次抗体を視覚化させた。その後、スライドを、ヘマトキシリンで対比染色した。
ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体の、様々な正常なヒト組織および腫瘍組織に対する結合を評価した。結果を、はっきりしない染色については「＋／−」、弱いポジティブな染色については「１＋」、中程度のポジティブな染色については「２＋」、強いポジティブな染色については「３＋」としてスコアした。焦点染色を示す。
凍結させた組織と正常組織を使用する別のＩＨＣプロトコール（ＨＲＰポリマー結合ヤギ抗マウスＩｇＧ）もまた、ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体を使用して行った。アッセイしたガン組織には、前立腺ガン、肺ガン、大腸ガン、および乳ガンを含めた。３つの症例を評価した前立腺を除いて、それぞれのタイプの腫瘍について４つの症例を、この別のＩＨＣプロトコールを使用して評価した。正常組織のパネルには、心臓、肺、肝臓、腎臓、膵臓、大腸、および皮膚（それぞれの組織型から１つの標本）を含めた。アッセイはＨ＆Ｅ染色を使用して定量して、正確な診断とよりよい形態が得られることを確実にした。ポジティブ対照である胎児の前立腺組織もまた使用し、対応するマウスＩｇＧ抗体をイソ型対照として使用した。ｍｕ−抗ＴＥＳ７ ＩＨＣを、アセトンで固定した凍結したヒトの標本上で、室温で６０分間インキュベートした１μｇ／ｍｌの抗体濃度を使用して行った。ＨＲＰポリマーを結合させたヤギ抗マウスＩｇＧ（ＤＡＫＯ）を、連結させた二次抗体として使用した。ＤＡＢは、抗体の結合を視覚化するために使用した色素原である。
便宜上、様々な供給源に由来する凍結させた外科的な正常組織を使用したいくつかの実験の結果を合わせたもののまとめを、以下の表１に示す（従来のＡＢＣプロトコール）。表２は、ＨＲＰポリマー結合ＩＨＣ法を使用した、正常組織に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合を示す。表３は、従来のＡＢＣプロトコールを使用した、腫瘍組織試料に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体の結合を示す。表４は、ＨＲＰポリマー結合ＩＨＣ法を使用した、腫瘍組織試料に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体の結合を示す。表５には、前立腺組織および膵臓組織の拡大パネルに対するｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体の結合をまとめる。表６には、１０〜１２週、および１８〜２２週のヒト胎児の組織に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体の結合をまとめる。簡単に説明すると、多くの胎児組織はＴＥＳ７染色についてポジティブであり、特に、新しい臓器の形成および新しい骨の形成の領域においてポジティブであった。
Figure 0005601836
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 （実施例６）
免疫細胞化学分析の結果
モノクローナル抗体ｍｕ−抗ＴＥＳ７を使用して、様々な組織型に由来する様々な細胞株との反応性を試験した。上記に記載したものと同じ免疫組織化学分析のプロトコールを、ＣｅｌｌＡｒｒａｙの染色に使用した。結果を、弱いポジティブ染色については「＋」、中程度のポジティブ染色については「＋＋」、強いポジティブ染色については「＋＋＋」、そしてネガティブ染色については「−」とスコアした。
免疫組織化学分析の結果を、ＣｅｌｌＡｒｒａｙ（商標）技術を使用して、国際公開番号ＷＯ０１／４３８６９に記載されているとおりに得た。様々な確立されている細胞株に由来する細胞を、プロテアーゼを使用することなく増殖表面から取り出し、ＯＣＴ化合物の中に閉じ込め、包埋した。細胞を凍結させ、切片とし、その後、標準的なＩＨＣプロトコールを使用して染色した。
ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体の様々な確立されているヒトの正常細胞株と腫瘍細胞株に対する結合の結果を、便宜上、表７に集めた。
Figure 0005601836
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 （実施例７）
ｍｕ−抗ＴＥＳ７は様々な腫瘍を起源とするガン幹細胞に結合する。
胎児組織上でのＴＥＳ７の発現の理由により、ヒトのガン幹細胞上での（ガン幹細胞のマーカーとしての）ＴＥＳ７の発現を特性決定するための実験を、ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体と様々な腫瘍組織起源に由来する様々なヒトガン幹細胞を使用して行った。これらのヒトのガン幹細胞上でのＴＥＳ７の分析は、当該分野で一般的に公知であり、行われている標準的なＦＡＣＳ分析方法を使用して行った。簡単に説明すると、ヒトのガン幹細胞を、２ｍｌの０．２％のコラゲナーゼ／ジスパーゼを使用してフラスコから、５分間、または細胞がフラスコから解離するか離れるまで、持ち上げた。細胞を、５ｍｌのピペットを使用してバラバラにして、細胞の塊を全てなくし、その後、１５ｍｌの円錐管に移して、１２００ｒｐｍで５分間遠沈させた。上清を除去し、細胞を、分析緩衝液（１％のＢＳＡを含むハンクス平衡塩溶液）の１ｍｌ／Ｔ７５フラスコ、または５ｍｌ／Ｔ１７５フラスコの中に再度懸濁させた。細胞を血球計を使用してカウントした。５０，０００個の細胞を、１μｇ／ｍｌの濃度のｍｕ−抗ＴＥＳ７モノクローナル抗体と、５０μｌの容量の中で混合させた。ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ５３２二次抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を２μｇ／ｍｌの濃度で使用した。細胞をＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒまたはＧｕａｖａ機器を使用して分析した。様々な腫瘍組織の供給源に由来するヒトのガン幹細胞上でのＴＥＳ７発現の結果を以下の表８にまとめる。「高い」は、蛍光強度の１対数以上のシフトを示し、「中程度」は、蛍光強度の０．５から１対数のシフトを示し、「低い」は、蛍光強度の０．５対数までのシフトを示し、そして「−」は、蛍光強度のシフトがないことを示す。
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 表８に示したように、ｍｕ−抗ＴＥＳ７は試験した全てのヒトのガン幹細胞に結合した。ｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合によっては、乳房、結腸直腸、肺、マントル細胞リンパ腫、膵臓、および基底細胞ガンの幹細胞上で１対数を超える（高い）シフトが生じた。０．５対数から１対数までのシフトは、メルケル細胞ガン、大腸ガン、および前立腺ガンの幹細胞上で見られた。このデータは、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３が、抗ＴＥＳ７抗体を使用するヒトのガン幹細胞の同定のための見込みのあるマーカーとしてそれが有用であるために十分なレベルおよび密度でガン幹細胞上で発現されることを示唆している。
（実施例８）
ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体を使用する生存細胞のＥＬＩＳＡアッセイ
ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体のＴＥＳ７に対する結合を、生存細胞ＥＬＩＳＡを使用して試験した。以下の方法を使用したが、当該分野で一般的に使用されている他の方法を適用することもできる。細胞（例えば、Ａ３７５、ＨＴ−２９、ＳＫＯＶ３、ＳＫＭＥＳ−１、ＳＷ４８０、ＳＫＢＲ−３、およびＨＰＡＦＩＩ）を、組織培養物で処理した９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）上で、コンフルエンシーになるまで、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含む培地の中で増殖させた。細胞をＰＢＳで洗浄し、その後、１％のＢＳＡと０．１％のアジ化ナトリウムを含むハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）の中で所望される濃度の所望される抗体５０μｌとともに、室温で１時間インキュベートした。その後、細胞を、１ウェルあたり１００μｌのＨＢＳＳで３回洗浄し、その後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）二次抗体（ＨＢＳＳ中に稀釈したもの、１ウェルあたり５０μｌ）とともに室温で３０分間インキュベートした。最後に細胞をＨＢＳＳで３回洗浄し、色が変化する基質（ＴＭＢ基質、ＫＰＬ）を、各ウェルに１ウェルあたり１００μｌで添加した。色の変化の反応を、１ウェルあたり１００μｌの１Ｍのリン酸の添加によって停止させた。その後、プレートをＯ．Ｄ．４５０ｎｍで読み取った。ＴＥＳ７は、Ａ３７５細胞についての生存細胞ＥＬＩＳＡにおいてはポジティブであり、Ｂ７−Ｈ３ ４Ｉｇイソ型と関係があることを示す典型的な結合パターンを示していた。
（実施例９）
ｍｕ−抗ＴＥＳ７だけがＢ７Ｈ３の４Ｉｇ型に結合する。
ｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合特性を決定するために、ＥＬＩＳＡ実験を、Ｂ７Ｈ３の２Ｉｇ型とＢ７Ｈ３の４Ｉｇ型の両方を使用して行った。両方の形態の組み換え体であるヒトＢ７Ｈ３タンパク質を、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍから購入した（担体を含まないもの）。両方の形態のＢ７Ｈ３タンパク質を９６ウェルプレート上に、ＨＢＳＳ＋（フェノールレッドを含まないハンクス平衡塩溶液）中で、２μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェルでコーティングした。プレートを、室温で２時間インキュベートし、その後、ＨＢＳＳ＋で洗浄した。続いて、プレートを１５０μｌのブロッキング緩衝液（１．０％（ｗ／ｖ）のＢＳＡを含むＨＢＳＳ＋）で室温で３０分間ブロックした。その後、ブロッキング緩衝液を除去し、ｍｕ−抗ＴＥＳ７（ブロッキング緩衝液中で１０〜２０μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）を添加し、室温で１時間インキュベートした。続いて、プレートを１５０μｌのブロッキング緩衝液で３回洗浄した。ブロッキング緩衝液中に１：１０００の濃度で稀釈した二次抗体（ロバ抗マウスＩｇＧ Ｈ＋Ｌ ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を添加し、室温で３０分間インキュベートした。その後、プレートを１５０μｌのブロッキング緩衝液で３回洗浄し、ＴＭＢ基質（ＫＰＬ）を用いて発色させた。反応を１Ｍのリン酸で停止させ、プレートをプレートリーダー上でＯ．Ｄ．４５０ｎｍで読み取った。図４に示すように、ｍｕ−抗ＴＥＳ７（１０μｇ／ｍｌと２０マイクログラム／ｍｌの濃度の両方で）だけが、Ｂ７Ｈ３の４Ｉｇ型に結合した。ポジティブ対照（抗Ｂ７Ｈ３抗体）は、Ｂ７Ｈ３の２Ｉｇ型と４Ｉｇ型の両方に結合した。
（実施例１０）
他のＢ７Ｈ３抗体とのｍｕ−抗ＴＥＳ７の比較
ｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合プロフィールをさらに調べるために、他のＢ７Ｈ３抗体に対してｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体を比較する生化学的分析を行った。Ｂ７Ｈ３抗体は、当該分野で、例えば、引用により本明細書中に組み入れられるＷＯ０４／００１３８１の中に記載されている。その出願では抗体ＢＬＡ８とＰＡ２０が開示されている。ＢＬＡ８はＢ７Ｈ３に対するモノクローナル抗体であり、これは、４Ｉｇ型と２Ｉｇ型を両方認識するであろう。ＰＡ２０は４Ｉｇ型だけを認識する、Ｂ７Ｈ３に対するモノクローナル抗体である。ＰＡ２０は、登録番号ＰＴＡ−４２４４（ハイブリドーマの名称：Ｐａｎｃ．１．５Ｃ１０．５Ｄ１１）として、２００２年４月２３日にＡＴＣＣに寄託された。ＳＴＯ５は、Ｂ７Ｈ３の４Ｉｇ型だけを認識する別の抗Ｂ７Ｈ３抗体である；ＳＴＯ５は、２００７年８月８日にＰＴＡ−８５７６としてＡＴＣＣに寄託された（ハイブリドーマの名称：Ｓｔｏｍａｃｈ３．１Ｅ１０．１Ｇ８）。
ｍｕ−抗ＴＥＳ７が４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３の２つの分子を架橋できるかどうかを調べるために、ＥＬＩＳＡを、９６ウェルプレート上にコーティングした２．５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、または１０μｇ／ｍｌの組み換え体４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（Ｈｉｓタグをつけたもの）と、ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体またはＰＡ２０抗体のいずれかを使用して行った。「０」コーティング条件では、図５に示すように、ウェルをビオチニル化Ｂ７Ｈ３（４Ｉｇ）でコーティングし、ｍｕ−抗ＴＥＳ７またはＰＡ２０（いずれも、ＨＲＰ結合ロバ抗マウスＩｇＧで検出した）で、あるいはビオチニル化Ｂ７Ｈ３だけの条件ではストレプトアビジンでコーティングした。マウス抗ポリＨｉｓ抗体もまた、ポジティブ対照として使用した。結果は、ＰＡ２０抗体は用量依存性の様式（点線の棒）で４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３を架橋できることを示しているが、ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体は３種類の用量のいずれでも、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３を架橋することはできなかった。これは、ＴＥＳ７エピトープのビオチンによる妨害が原因ではなかった。なぜなら、固定されたビオチニル化４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（０コーティング条件）はｍｕ−抗ＴＥＳ７によって検出されたからである（実線の灰色の棒）。
４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に対するｍｕ−抗ＴＥＳの結合をさらに調べるために、Ｈｉｓタグをつけた２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いたＥＬＩＳＡ架橋実験を行った。５μｇ／ｍｌの捕捉抗体、マウス抗ポリＨｉｓ抗体を、対照として９６ウェルプレート上にコーティングし、コーティングしなかったウェル（裸のウェル）もまた使用した。続いて、捕捉抗体を含むウェルをＨＢＳＳ＋１％のＢＳＡでブロックした。５μｇ／ｍｌの２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（Ｈｉｓ）または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（Ｈｉｓ）を、裸のウェルまたは捕捉抗体をコーティングしたウェルに導入した。対照として、５μｇ／ｍｌの２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（Ｆｃ）を裸のウェルに導入した。その後、プレートを再びＨＢＳＳ＋１％のＢＳＡでブロックした。次いで、２ｇ／ｍｌのビオチニル化ｍｕ−抗ＴＥＳ７、ＢＬＡ８、ＰＡ２０、またはＳＴＯ５（Ｂ７Ｈ３の４Ｉｇ型だけを認識する別の抗Ｂ７Ｈ３抗体）をプレートに導入した。結合したビオチニル化抗体を、その後、標準的なプロトコールを使用してストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて検出した。
図６に示すように、ＢＬＡ８抗体は、全ての５種類の条件を認識することができた：２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（Ｆｃ）、２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（白色の棒、２Ｉｇ）、架橋された２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（薄い灰色の棒、ｘＨｉｓ ２Ｉｇ）、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（中程度の灰色の棒、４Ｉｇ）、および架橋された４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（濃い灰色の棒、ｘＨｉｓ ４Ｉｇ）。Ｂ７Ｈ３の２Ｉｇ型および４Ｉｇ型のいずれを用いた場合にも、架橋されていない抗原（白色の棒と中程度の灰色の棒）と比較して、抗原をマウス抗ポリＨｉｓ抗体を使用して架橋させると（薄い灰色の棒と濃い灰色の棒）、より多量のＢＬＡ８が結合した。
ＰＡ２０抗体とＳＴＯ５抗体はいずれも、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３だけに結合した（中程度の灰色の棒と濃い灰色の棒）。また、ＰＡ２０抗体とＳＴＯ５抗体はいずれも、架橋された４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３抗原に対する結合の増加を示した。興味深いことに、ｍｕ−抗ＴＥＳ７は４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に結合したが（中程度の灰色の棒と濃い灰色の棒）、ＰＡ２０抗体およびＳＴＯ５抗体を用いた場合に見られたものと同様に、架橋された４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に対しては結合の増加を示さなかった。この結果は、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合に関する濃度成分が存在していること、この濃度成分は、ＰＡ２０およびＳＴＯ５のような特定の他の４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３特異的抗体を用いた場合には見られないことを示唆している。この実験の結果は、試験したこれらの３種類の４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３抗体が全て、Ｂ７Ｈ３の４Ｉｇ型の特有のＩｇドメイン上にあるエピトープに特異的であったこともまた示唆している。なぜなら、３種類の抗体はいずれも、ＥＬＩＳＡにおいては架橋された２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３を認識しなかったからである。
４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合の抗原密度依存性をさらに調べるために、捕捉のためのマトリックスとコーティング条件を使用してＥＬＩＳＡを行った。２つのプレートを０．５μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、または５μｇ／ｍｌのマウス抗ポリＨｉｓ抗体でコーティングした。一方のプレートはＨＢＳＳ＋１％のＢＳＡでブロックし、一方、他方のプレートは洗浄だけを行った。その後、プレートを、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（Ｈｉｓタグをつけたもの）の滴定とともにインキュベーションし、１０μｇ／ｍｌから０．３１２μｇ／ｍｌまで段階稀釈した。次いで、プレートをＨＢＳＳ＋１％のＢＳＡでブロックし、その後、２μｇ／ｍｌのビオチニル化ｍｕ−抗ＴＥＳ７を用いて検出した。
図７に示すように、ｍｕ−抗ＴＥＳ７は、捕捉抗体でブロックしたプレートの中で、５マイクログラム／ｍｌの濃度の捕捉抗体の中で濃度依存性の様式で結合した（四角、左側の図）。ｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合は、ブロックしなかった捕捉抗体のプレートの中では、５マイクログラム／ｍｌの濃度の捕捉抗体の中で減少した（四角、右側の図）。この結果は、ブロックしなかった捕捉プレートが、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３の架橋された分子と、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３の鎖だけの分子の混合物を提示し、抗原のこの混合物はｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合に適していないことを示唆している。ブロックされた捕捉プレートの中には、架橋された４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３抗原だけが存在し、この抗原の密度がｍｕ−抗ＴＥＳ７結合をサポートすると見られる。
また、捕捉抗体がブロックされたプレートの中の１μｇ／ｍｌおよび０．５μｇ／ｍｌの濃度の捕捉抗体条件ではｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合は存在しなかったが（図７、菱形と三角、左側の図）、同じ濃度の捕捉抗体のブロックされていない補足抗体のプレートの中では、ｍｕ−抗ＴＥＳ７の濃度依存性の結合が存在していた。この結果はほぼおそらく、架橋されていない４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３と最適に満たない密度の抗原（１μｇ／ｍｌの捕捉抗体は１μｇ／ｍｌの４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３を捕捉できると推定される）に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７の優先性が原因である。これらの結果は、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合が密度依存性であり空間依存性であることを示す他の結果と一致する。ｍｕ−抗ＴＥＳ７結合についてのこの特有の密度依存性および空間依存性の性質は、おそらく、細胞表面上の４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のクラスターまたは密度に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７の結合に影響を与えるであろう。
（実施例１１）
ｍｕ−抗ＴＥＳ７および毒素に結合させた抗マウスＩｇＧのインターナライゼーション
Ｍａｂ−ＺＡＰ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）は、タンパク質合成を阻害する毒素であるサポニンに結合させられた抗マウスＩｇＧである。この毒素は細胞膜を透過することができない。モノクローナル抗体が、インターナライズすることができる細胞表面抗原に結合すると、毒素結合体が、結合したモノクローナル抗体に結合することができ、それにより、インターナライズさせられ、最終的には細胞を死滅させることができる。毒性作用の実証のためのインターナライゼーションに応じて、Ｍａｂ−ＺＡＰは、所定の表面抗原が細胞の毒性作用を発現するためのインターナライゼーションに依存して任意の毒素の適切な標的となり得るかどうかの評価に役立てることができる。このように、Ｍａｂ−ＺＡＰは、そのようなインターナライゼーションに依存する毒素（例えば、メイタンシノイドおよびカリケアマイシン）のモデルとなる。
腫瘍細胞によるｍｕ−抗ＴＥＳ７およびサポニン結合抗マウスＩｇＧのインターナライゼーションと、サポニンのインターナライゼーション後の腫瘍細胞の死滅の効果を試験するために、ヒトの膵臓ガン細胞ＨＳ７００Ｔ細胞株を、１０ｍＭのＥＤＴＡを含むストックフラスコから取り出し、遠心分離した。細胞を適切な培地の中に５０，０００／ｍｌになるように再度懸濁させ、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μｌをプレートした。ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体を、直ちに、適切なウェルに１０×濃度として添加して、１０ｕｇ／ｍｌの最終濃度とした。室温で１５分後、Ｍａｂ−ＺＡＰ（Ｃａｔ．＃ＩＴ−０４，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＣＡ）を適切なウェルに１０×濃度として添加して、０．００１ｎＭから１０ｎＭの最終濃度とした。４日間増殖させた後、ＭＴＴを、３７℃で４時間かけて添加した（ストック ５ｍｇ／ｍｌ ＰＢＳ，ウェルの中で１：１０に稀釈）。その後、培地を全てのウェルから取り除き、１００μｌ／ウェルのＤＭＳＯを添加した。プレートをゆっくりと旋回させて青色のＭＴＴ沈殿を可溶化させ、プレートをＯ．Ｄ．５４０ｎｍで読み取った。
ｍｕ−抗ＴＥＳ７が存在しない条件下での染色と比較して、ｍｕ−抗ＴＥＳ７の存在下でのＨＳ７００Ｔ細胞の中のＭＴＴ染色は減少した。これは、ＨＳ７００Ｔ細胞の増殖がｍｕ−抗ＴＥＳ７とＭａｂ−ＺＡＰの存在下で阻害されたことを示しており、これらの結果は、ｍｕ−抗ＴＥＳ７と毒素が結合させられた抗マウスＩｇＧがＨＳ７００Ｔ細胞の中でインターナライズされたことを暗示している。
この実施例の方法によるインターナライゼーション実験の結果を図１に示す。
（実施例１２）
ヒトの結腸直腸腺ガンＨＴ２９細胞株に対するｍｕ−抗ＴＥＳ７の効果
単層として増殖させた場合にインビトロにおいて細胞数を減少させる抗体の能力は、様々な量の精製された試験抗体または対照抗体の存在下、あるいはそれらが存在しない条件下で増殖させた細胞の単層を使用して評価することができ、細胞数の変化はＭＴＴを使用して評価することができる。ＭＴＴは、ミトコンドリア酵素の活性を測定する色素であり、これは、相対的な生存している細胞の数と相関関係にある。目的の細胞をプレーティングし、９６ウェルプレートの中で、１０％のウシ胎児血清を補充したＦ１２／ＤＭＥＭ（１：１）増殖培地の中で増殖させた。ＨＴ２９細胞株を９６ウェル皿の３連のウェルに、１５００細胞／ウェルでプレートした。プレーティングの直後に、ｍｕ−抗ＴＥＳ７を添加した。細胞を５％ＣＯ２／空気の加湿したインキュベーターの中で３７℃で６日間インキュベーションした。アッセイの最後に、ＭＴＴをＰＢＳ中に溶解させ（５ｍｇ／ｍｌ）、１：１０希釈でウェルに直接添加した。プレートをインキュベーターの中に戻し、４時間置いた。インキュベーション後、培地を除去し、１００μｌのＤＭＳＯを添加してＭＴＴ沈殿を可溶化させた。プレートをプレートリーダー上で５４０で読み取った。
図２は、ＨＴ２９細胞株に対する、様々な濃度のｍｕ−抗ＴＥＳ７の結果の模式的なグラフを示す。ＨＴ２９細胞株を用いた他の生体アッセイによって、ｍｕ−抗ＴＥＳ７の増殖阻害作用を確認した。未公開データにおいては、ｍｕ−抗ＴＥＳ７はまた、ＮＣＩ−Ｈ３２２Ｍ肺ガン細胞株とＭＤＡ３６１乳腺ガン細胞株の増殖を阻害することも示された。
（実施例１３）
腎被膜下移植法（Ｓｕｂ−Ｒｅｎａｌ Ｃａｐｓｕｌｅ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）と皮下移植法（Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｍｏｄｅｌ）モデルの両方におけるインビボでのｍｕ−抗ＴＥＳ７の効果
インビボで腫瘍の増殖を低下させるｍｕ−抗ＴＥＳ７の能力を、腎被膜下移植法と皮下移植法モデルの両方において試験した。いずれの異種移植モデルも当該分野で周知であり、標準的なプロトコールが、ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体のインビボでの腫瘍増殖の阻害を試験するには適している。
腎被膜下移植法モデルについては、雌のｎｕ／ｎｕホモ接合型マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を使用した。動物は、実験の開始時には６から８週齢であり、平均すると２０〜３０グラムの体重を有していた。前立腺ガン細胞株をこの実験で使用した。細胞を腎被膜（ｓｕｂ−ｒｅｎａｌ ｃａｐｓｕｌｅ）部位への移植のためにコラーゲンボタン（ｃｏｌｌａｇｅｎ ｂｕｔｔｏｎｓ）の中に包埋した。移植後、マウスを外科手術から回復させた。処置グループについては、ｍｕ−抗ＴＥＳ７をＰＢＳ中に５０ｍｇ／ｋｇの濃度になるように希釈した。対照グループにはＰＢＳを投与した。投与は移植の２日後に開始し、５０ｍｇ／ｋｇの用量のｍｕ−抗ＴＥＳ７とＰＢＳ対照を、１週間に３回、単回の急速注入として、腹腔内に投与した。実験の終了時にマウスを屠殺し、腫瘍と隣接している組織をヒトＤＮＡの定量のために回収した。
ｑＲＴ−ＰＣＲは当該分野で周知であり、標準的なプロトコールを使用した。簡単に説明すると、処置したマウスと対照のマウスから取り出した腫瘍を、ＤＮＡの単離のために、プロテイナーゼＫ（１．４５ｍｇ／ｍｌ）とＲＮａｓｅ Ａ（０．０７ｍｇ／ｍｌ）を含む消化緩衝液の中で、５５℃で一晩インキュベートした。ゲノムＤＮＡを、製造業者の説明書にしたがって、Ｗｉｚａｒｄ ＳＶ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用して腫瘍から単離した。それぞれのＤＮＡ試料を、２００μｌの最終容量となるように再度懸濁した。ヒトリボソーム遺伝子ＲＰＬ１９に特異的なプライマーを使用して、腫瘍試料に由来するヒトＤＮＡを、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＳＤＳ７０００システム（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）上でのリアルタイム（ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ）ＰＣＲを使用して定量した。試料のＤＮＡ濃度は検量線から補間した。それぞれの腫瘍試料を３連のＰＣＲ反応において分析し、ＤＮＡ濃度の平均を決定した。平均のＤＮＡ濃度と平均の標準偏差を、腫瘍の試料のそれぞれのグループについて決定した。腫瘍の増殖の阻害は、以下の絶対値として計算した：［（処置したグループのヒトＤＮＡの平均のｎｇ数／ＰＢＳ対照グループのヒトＤＮＡの平均のｎｇ数）×１００］−１００。
前立腺ガン細胞株を使用した場合には、ｍｕ−抗ＴＥＳ７で処置した腫瘍は、ＰＢＳで処理した腫瘍と比較して６５．７％の腫瘍増殖の阻害を示した。同様の腫瘍の増殖の阻害が、大腸ガン細胞株、肺ガン細胞株、Ｈ３２２Ｍ、および結腸直腸ガン細胞株、ＨＴ−２９を使用した場合に、ｍｕ−抗ＴＥＳ７で処理した腫瘍において見られた。
ｍｕ−抗ＴＥＳ７のインビボでの腫瘍増殖阻害作用を、また、皮下移植法モデルを使用して試験した。皮下移植モデルは当該分野で周知であり、他の標準的なプロトコールもまた適しているであろう。５０％のＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）と混合した腫瘍細胞を、マウスの脇腹または背中に、０．１ｍｌの容量で皮下注射した。対照ＰＢＳまたは５０ｍｇ／ｋｇのｍｕ−抗ＴＥＳ７のいずれかの１週間に２回の投与を、腫瘍の接種後１０日（腫瘍の容積がおよそ７５〜１００ｍｍに達した時点）で開始した。腫瘍を三次元（高さ×長さ×幅）でデジタルキャリパーによって測定し、腫瘍の容積を、３回の測定の結果の２分の１として計算した。平均の腫瘍容積と平均の標準偏差を、それぞれの測定時にそれぞれのグループについて決定した。統計学的有意性を、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ ｐｏｓｔｔｅｓｔｓ（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０ｃ ｆｏｒ Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ，Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃａｌｉｆｐｒｎｉａ，ＵＳＡ）を用いて二元ＡＮＯＶＡを使用して決定した。腫瘍増殖の阻害は以下の絶対値として計算した：［（処置グループの腫瘍容積の平均／ＰＢＳ対照グループの腫瘍容積の平均）×１００］−１００。
膵臓の腺ガン細胞株Ｈｓ７００Ｔを、皮下移植法の実験において使用した。５００万個の細胞を上記のプロトコールにしたがって注射し、ｍｕ−抗ＴＥＳ７抗体の投与を腫瘍の移植後１１日で開始した。最後の投与は腫瘍の移植の３５日後に行い、腫瘍の測定は投与後さらに１週間続けた。この実験の結果を図８に示し、統計分析を表９にまとめる。
ｍｕ−抗ＴＥＳ７で処置した腫瘍は、腫瘍の移植後１８日より後に測定した全ての日について、ＰＢＳ対照と比較して、４０〜５０％小さかった。有意な（０．０５未満のｐ値）腫瘍増殖の阻害が、腫瘍の移植後３５日目、３９日目、および４２日目に、ｍｕ−抗ＴＥＳ７で処置した腫瘍について見られた。この結果は、腎被膜下移植モデルを使用した場合に、また、インビトロでの腫瘍細胞の増殖阻害を用いた場合にも観察された腫瘍の増殖の阻害と一致している。
Figure 0005601836
 （実施例１４）
サイトカインに対するｍｕ−抗ＴＥＳ７の効果
サイトカインシグナル伝達を、以下のガン幹細胞（ＣＳＣ）株を使用したアッセイにおいて試験した：ＢＲＣＡ０３１２（クローン番号２、乳房ＣＳＣ）、ＣＡ１３０（肺ＣＳＣ）、ＣＲＣＡ１１１５（大腸ＣＳＣ）、ＰＡ９９２６（膵臓ＣＳＣ）、ＰＲＣＡ０３１２−５８およびＰＲＣＡ６２９Ａ（前立腺ＣＳＣ）、ＲＥＣＡ１２０８（結腸直腸ＣＳＣ）。放射線照射されていない骨髄間質細胞（ＢＭＣ）はＬｏｎｚａ（Ｃａｔ＃ ２Ｍ−３０２）から入手した。
骨髄間質細胞（ＢＭＣ）は、６×１０４で得られた。細胞を１０％のＦＢＳとともに２日間培養した。細胞を２回洗浄し、血清を４時間の間枯渇させ、その後、さらに２回洗浄した。ガン幹細胞（ＣＳＣ）の単層を、１〜２×１０ｅ４で、５０マイクログラム／ｍｌのマウスＩｇＧ抗体対照もしくは抗ＴＥＳ７とともに、あるいはそれらを伴わずに、Ｂａｓａｌ Ｆ１２ ＤＭＥＭに３日間かけて添加した。細胞上清をＬｕｍｉｎｅｘ多重アッセイのために確保した。
Ｌｕｍｉｎｅｘ多重アッセイを、以下の３５種類の可溶性因子を使用して行った（Ｕｐｓｔａｔｅ）：増殖因子：ＥＧＦ、ＦＧＦ−２、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ／ＢＢおよびＶＥＧＦ。サイトカイン：ＩＦＮγ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２（ｐ４０）、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５およびＩＰ−１０。ケモカイン：エオタキシン（ＣＣＬ１１）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）、ＭＩＰ−１α（ＣＣＬ３）およびＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）。使用した他の可溶性因子には以下が含まれる：ＦａｓＬ、Ｆｌｔ−３Ｌ、ＩＬ−ＩＲα、ＩＬ−６Ｒα、ＩＣＡＭ−１、ｇｐ１３０およびＶＣＡＭ−１。
試料の培地蛍光単位（Ｍｅｄｉａ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｕｎｉｔ）（ＭＦＵ）が≧１００（バックグラウンドを２〜５倍上回る）であった場合には、ＴＥＳ７とマウスＩｇＧ対照との間で比較を行った。比較により≧２倍の変化が生じていた場合には、それに応じてアップレギュレーション／ダウンレギュレーションを割り当てた。結果を、Ｔｕｋｅｙ ｐｏｓｔ試験を用いたＡＮＯＶＡによってさらに評価し、ｐ≦０．０５である場合に統計学的優位性があると考えた。
図９に示すように、ＴＥＳ７は、ＣＳＣ−ＢＭＣ同時培養物の中でのＶＥＧＦの分泌を減少させた（ＶＥＧＦ発生率：３／７）。図１０に示すように、ＴＥＳ７は、ＢＭＣまたはＣＳＣ−ＢＭＣ同時培養物の中でのＭＩＰ−１α（ＣＣＬ３）の分泌を減少させた（ＣＣＬ３、発生率：６／７）。ＶＥＧＦは、腫瘍の血管形成に関係していることが知られているサイトカインである。ＭＩＰ−１α（ＣＣＬ３）は、腫瘍の生物学において役割を担っていることが知られているサイトカインである（例えば、Ｂｉｅｃｈｅら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００４，Ｙａｎｇら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００６、およびＲｙｓｃｈｉｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００６を参照のこと）。
サイトカインプロフィールの分析により、マウス抗ＴＥＳ７抗体がサイトカイン経路と、いくつかの細胞株を横切るサイトカインシグナル伝達を調節することができることの証拠が提供された。これは、腫瘍の増殖を駆動することができるシグナル伝達機構と、ほかの標準的な増殖アッセイにおいては失敗するであろう、本明細書中に教示される方法にしたがって増殖を調節する抗体を同定する能力についての新しい知見を提供する。
本明細書中に記載された実施例と実施形態は説明の目的だけのためにあり、その範囲内での様々な改良または変更が当業者に示唆されており、それらもまた本出願の精神および範囲に含まれることが理解される。本明細書中で引用された全ての刊行物、特許、および特許出願は、それぞれの個々の刊行物、特許、または特許出願が具体的かつ個別に、引用により本明細書中に組み入れられることが示されている場合と同じ程度に、全ての目的のためにそれらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる。

Claims (26)

  1. ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７０９３の宿主細胞により産生された抗体の軽鎖に由来する３つのＣＤＲと重鎖に由来する３つのＣＤＲとを有し、ガン細胞上に発現したＢ７−Ｈ３の４Ｉｇ型に特異的に結合し、Ｂ７−Ｈ３の２Ｉｇ型には特異的に結合せず、Ｂ７−Ｈ３の４Ｉｇ型を架橋することができない、実質的に精製された免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片。
  2. 前記ガン細胞が以下に由来するガン細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の精製された免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン、骨ガン、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭部および頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン、白血病、脂肪腫、脂肪肉腫、肝ガン、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜黒色腫、血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚ガン、軟部組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン。
  3. 請求項１に記載の免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
  4. 前記核酸がプロモータに作動可能に連結されている、請求項３に記載の核酸。
  5. 前記プロモータおよび前記核酸が発現ベクターに含まれている、請求項４に記載の核酸。
  6. 前記免疫グロブリンポリペプチドがモノクローナル抗体である、請求項３に記載の核酸。
  7. 請求項３に記載の核酸を含むベクターでトランスフェクトされたか、形質転換されたか、または感染させられた細胞株。
  8. 実質的に精製された免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片を産生する方法であって：
    ａ．該免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片を発現させる条件下で、請求項３に記載の核酸で形質転換された細胞株を増殖させる工程；および
    ｂ．該発現させた免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片を回収する工程を含む、方法。
  9. 前記細胞株がハイブリドーマである、請求項８に記載の方法。
  10. 前記ハイブリドーマがＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７０９３である、請求項９に記載の方法。
  11. 前記免疫グロブリンポリペプチドがモノクローナル抗体である、請求項８に記載の方法。
  12. 治療有効用量の請求項１に記載の精製された免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片が薬学的に許容される担体とともに含まれている、薬学的組成物。
  13. 前記組成物にさらに別の治療用部分が含まれている、請求項１２記載の薬学的組成物。
  14. ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７０９３またはその子孫からなる単離された細胞株。
  15. 化学療法薬と結合した請求項１に記載の精製された免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片が含まれている、化学療法薬をガン細胞に送達するための組成物であって、ここでは、該ガン細胞は、以下に由来するガン細胞からなる群より選択される、組成物：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン、骨ガン、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭部および頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン、白血病、脂肪腫、脂肪肉腫、肝ガン、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜黒色腫、血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚ガン、軟部組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン。
  16. 前記組成物が個体に投与されることを特徴とする、請求項１５に記載の組成物。
  17. 前記免疫グロブリンポリペプチドが、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７０９３のハイブリドーマまたはその子孫によって産生される、請求項１５に記載の組成物。
  18. 化学療法薬と結合した請求項１に記載の精製された免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片が含まれている有効量の組成物を含む、個体内でのガン細胞の増殖を阻害するための組成物であって、ここでは、該ガン細胞は、以下に由来するガン細胞からなる群より選択される、組成物：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン、骨ガン、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭部および頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン、白血病、脂肪腫、脂肪肉腫、肝ガン、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜黒色腫、血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚ガン、軟部組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン。
  19. 前記組成物が前記ガン細胞に送達されることを特徴とする、請求項１８に記載の組成物。
  20. 前記免疫グロブリンポリペプチドが、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７０９３のハイブリドーマまたはその子孫によって発現されるモノクローナル抗体である、請求項１８に記載の組成物。
  21. 個体由来の細胞を請求項１に記載の精製された免疫グロブリンポリペプチドまたはその抗原結合断片と接触させる工程、および、存在する場合には、該細胞由来のＴＥＳ７と該抗体の複合体を検出する工程を含む個体内のガン細胞の有無を検出するためのインビトロ方法であって、ここでは、該ガン細胞は、以下に由来するガン細胞からなる群より選択される、方法：副腎腫瘍、ＡＩＤＳに関連するガン、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱ガン、骨ガン、脳および脊髄ガン、転移性脳腫瘍、乳ガン、頚動脈小体腫瘍、頚部の癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞ガン腫、明細胞ガン腫、大腸ガン、結腸直腸ガン、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢および胆管ガン、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭部および頸部ガン、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎ガン、白血病、脂肪腫、脂肪肉腫、肝ガン、リンパ腫、肺ガン、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣ガン、膵臓ガン、乳頭甲状腺ガン、上皮小体腫瘍、小児ガン、末梢神経鞘腫、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、前立腺ガン、後方ブドウ膜黒色腫、血液疾患、転移性腎ガン、横紋筋様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚ガン、軟部組織の肉腫、扁平細胞ガン、胃ガン、滑膜肉腫、睾丸ガン、胸腺ガン腫、胸腺腫、転移性甲状腺ガン、および子宮ガン。
  22. ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７０９３の宿主細胞またはその子孫によって産生される単離された抗体。
  23. ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７０９３の宿主細胞によって産生される抗体に由来する３つの重鎖のＣＤＲを含む重鎖可変領域と、３つの軽鎖のＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含み、Ｂ７−Ｈ３の４Ｉｇ型に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片。
  24. 前記単離された抗体はキメラ抗体である、請求項２３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  25. 前記単離された抗体はヒト化抗体である、請求項２３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  26. 前記抗原結合断片はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖからなる群から選択される、請求項２３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
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