TWI404931B - 癌化生物樣本之檢測方法及其使用之檢驗試劑 - Google Patents

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Description

癌化生物樣本之檢測方法及其使用之檢驗試劑
本發明係有關一種癌化生物樣本之檢測方法及其使用之檢驗試劑，尤其是一種利用物理吸附性質差異的癌化生物樣本之檢測方法及其使用之檢驗試劑。
在臨床上癌症的早期診斷有其困難性；一般而言，當病人產生症狀而就醫時往往已經是癌症中末期甚至已經轉移至其他器官。因此，如何以簡單而快速的方法進行癌症之早期篩檢為醫學研究人員努力的目標。
在過去針對各種不同的癌症發展出許多的腫瘤生物標記如癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)或是EGTM(European Group on Tumour Marker)等，這些指標有敏感性和特異性不佳的問題，且從取樣到檢測完成需要一至二週的時間。因此，此法常被建議做為癌症患者治療後的追蹤工具，而不作為早期檢測的依據。
在美國專利5726061號中，利用生化酵素作為偵測雙醣標誌(Disaccharide marker，-D-Gal(1-3)-D-GalNAc(1-Thr/Ser)及單醣標誌(D-半乳糖，及2-乙酰胺基-2-去氧-D半乳糖(2-acetamido-2-deoxy-D-galactose))，因此需要製造特定抗體進行腫瘤抗原偵測，故有其侷限之處。
另外，在美國專利6187591號中，針對結腸癌細胞表面之碳鏈長度為12-20的直鏈醛類(aliphatic aldehyde)的表面標記，利用席夫試劑(Schiff's reagent)以進行化學反應，以對結腸黏膜組織進行結腸癌早期篩檢，但此一篩檢方法無法針對單一細胞進行測試。
此外，口腔癌中利用基因檢測癌症其程序複雜不易在短時間內完 成檢測。因此需要快速針對單一細胞或組織檢體進行檢測之方法。
綜合上述，目前急需可針對單一細胞或組織檢體進行檢測之方法，以進行簡單且快速的各種癌症早期篩檢。
本發明之目的為提供一種癌化生物樣本之檢測方法及其使用之檢驗試劑，其係利用檢測試劑與癌化生物樣本以及正常生物樣本之物理吸附性質差異，因此可以廣泛地利用於各種癌症之檢測。本發明可以快速檢測，並為一非破壞性的檢測方法，因此可重覆使用並進行比較。
依據本發明之一實施例，一種癌化生物樣本之檢測方法，包括：提供一生物樣本、一第一附著步驟、一第一脫附步驟、及一第一判別步驟。第一附著步驟係將生物樣本浸潤於一第一檢測試劑，其包括一第一附著劑，其中第一附著劑以物理吸附方式附著於生物樣本，第一附著劑為一碳鏈長度為16碳至46碳之長鏈酯類蠟化合物或碳鏈長度為21碳至30碳之長鏈烷類蠟化合物，第一附著劑之濃度不大於10% w/w。第一脫附步驟係將生物樣本於一第一脫附試劑浸潤一第一預定時間。以及，第一判別步驟係測量第一附著劑吸附於生物樣本之含量，藉由比較該第一附著劑吸附於一癌化生物樣本或一正常生物樣本之含量，以判斷生物樣本是否癌化。
依據本發明之另一實施例，一種檢測癌化生物樣本之檢測試劑，其用以實現上述癌化生物樣本之檢測方法，檢測試劑包括一附著劑，附著劑為一碳鏈長度為16碳至46碳之長鏈酯類蠟化合物或碳鏈長度為21碳至30碳之長鏈烷類蠟化合物，附著劑之濃度不大於10% w/w。
目前已知癌化生物樣本之的細胞膜脂質組成與正常生物樣本不同，因此造成癌化生物樣本之與正常生物樣本之的物理吸附力具有差異。本發明利用此一特性，使用對於癌化生物樣本之及正常生物樣本之具有不同之物理吸附力的附著劑進行篩檢可能癌化的生物樣本。
依據上述原理，本發明提供一種癌化生物樣本之檢測方法。請參照圖1，圖1為流程圖顯示依據本發明一實施例之癌化生物樣本之檢測方法，其開始於步驟S11，提供一生物樣本，例如一組織或一細胞。
接著進行一第一附著步驟S12，將生物樣本浸潤於一第一檢測試劑，其包含一第一附著劑，其中第一附著劑以物理吸附方式附著於生物樣本。其中，第一附著劑對癌化生物樣本之物理吸附力大於其對正常生物樣本之物理吸附力。舉例而言，第一附著劑可為一碳鏈長度為16碳至46碳之長鏈酯類蠟化合物。
或者，第一附著劑對正常生物樣本之物理吸附力大於其對癌化生物樣本之物理吸附力。舉例而言，第一附著劑可為碳鏈長度為21碳至30碳之長鏈烷類蠟化合物。
在完成第一附著步驟S12後，進行一第一脫附步驟S13，將生物樣本於一第一脫附試劑浸潤一第一預定時間。舉例而言，第一脫附試劑可為一有機溶劑，其可脫除附著於生物樣本的第一附著劑。與生物樣本之物理吸附力較差之第一附著劑較容易被脫附試劑所脫除，反之則較不容易被脫除。
將生物樣本浸潤於第一脫附試劑之第一預定時間可取決於多項因素，舉例而言，包括第一附著劑及第一脫附試劑之種類及濃度。此外，因為不同階段的癌化生物樣本其物理吸附力不同，因此亦可調整第一預定時間以使第一附著劑於不同階段癌化生物樣本的附著含量，進而用以分辨生物樣本之癌化程度。
最後進行一第一判別步驟S14，測量第一附著劑吸附於生物樣本之含量，以判斷生物樣本是否癌化。在一實施例中，第一附著劑吸附於生物樣本之含量是藉由測量紅外光譜或拉曼散射光譜所得，紅外光譜範圍及拉曼散射光譜範圍為3000-2800 cm-1 之區間。
在另一實施例中，第一檢測試劑更包含一染劑，其中染劑對第一附著劑之親和性大於對生物樣本之親和性，以避免與生物樣本之非專一性結合。其中，染劑之較佳者為一螢光染劑，例如LC6500、別藻藍蛋白(Allophycocyanin,APC)、或APC-Cy7，因此第一附著劑吸附於生物樣本之含量可藉由測量螢光光譜所得。需注意者，染劑並不限於螢光染劑，適當的可見光染劑亦可適用於本發明。
其中第一脫附步驟S13以及第一判別步驟S14可重複進行多次，並可相互比較以得到最佳的檢測效果。詳言之，如前所述，生物樣本浸潤於第一脫附試劑之第一預定時間會影響第一附著劑附著於生物樣本的含量，因此藉由進行多次第一脫附步驟S13以及第一判別步驟S14以改變第一預定時間，進而可檢測生物樣本中不同區域個別的癌化程度。
在一實施例中，本發明之檢測方法更包括一第一預清洗步驟，在第一附著步驟S12之前，將生物樣本浸潤於第一脫附試劑，其浸潤時間大於第一預定時間，藉此將雜質清除以降低背景雜訊。
請參照圖2，本發明另一較佳實施例之癌化生物樣本之檢測方法，除了圖1所示之步驟外，更包括：一第二附著步驟S21，將生物樣本浸潤於一第二檢測試劑，其包含一第二附著劑，其中第二附著劑以物理吸附方式附著於生物樣本；一第二脫附步驟S22，將生物樣本於一第二脫附試劑浸潤一第二預定時間，其中第二脫附試劑可為一有機溶劑，其可脫除附著於生物樣本的第二附著劑；以及一第二判別步驟S23，測量第二附著劑吸附於生物樣本之含量，以判斷生物樣本是否癌化。其中第二脫附步驟S22以及第二判別步驟S23重複進行多次， 並可相互比較，以得到最佳的檢測效果。
如同前述，第一附著劑對癌化生物樣本之物理吸附力可大於或小於其對正常生物樣本之物理吸附力。因此，在一較佳實施例中，本發明使用對癌化生物樣本之物理吸附力分別為大於及小於其對正常生物樣本之物理吸附力之兩種附著劑，以比較癌化生物樣本之吸附情形。
其中，第一附著劑對癌化生物樣本之物理吸附力可大於其對正常生物樣本之物理吸附力，而第二附著劑對正常生物樣本之物理吸附力則大於其對癌化生物樣本之物理吸附力。舉例而言，第一附著劑為一長鏈酯類蠟化合物，其碳鏈長度為16碳至46碳；第二附著劑為一長鏈烷類蠟化合物，其碳鏈長度為21碳至30碳。
或者，第一附著劑對正常生物樣本之物理吸附力可大於其對癌化生物樣本之物理吸附力，而第二附著劑對癌化生物樣本之物理吸附力則大於其對正常生物樣本之物理吸附力。舉例而言，第一附著劑為一長鏈烷類蠟化合物，其碳鏈長度為21碳至30碳；第二附著劑為一長鏈酯類蠟化合物，其碳鏈長度為16碳至46碳。
在一實施例中，本發明之檢測方法更包括一第二預清洗步驟，在第二附著步驟S21之前，將生物樣本浸潤於第二脫附試劑，其浸潤時間大於第二預定時間，藉此將雜質清除以降低背景雜訊。
在一較佳實施例中，第二判別步驟S23與前述的第一判別步驟S14所用之方法為相同，以得到較佳之比較效果。
如下所示，本發明揭示口腔癌或結腸癌之生物樣本之檢測，但應註明，本發明係利用癌化生物樣本與正常生物樣本之物理吸附性質差異，因此可以廣泛地利用於各種癌症。
以下通過具體實施例配合附圖詳加說明，可更容易瞭解本發明的目的、技術內容、特點及所達成的功效，並據以實施，但不能以此限定本發明的保護範圍。
實施例一、結腸癌細胞檢測
以下揭示結腸癌細胞之檢測步驟，包括：
1.將細胞樣品固定於紅外載玻片(Low-e slide)上並浸泡二甲苯(Dimethylbenzene,Xylene,C8 H10 )20分鐘後，擷取細胞樣品之紅外吸收光譜及其影像作為後續癌症篩檢程序之參考背景。本篩檢程序均在25℃的二甲苯溶劑及篩檢溶液下進行，且樣品在室溫下進行乾燥。
2.將細胞樣品之玻片浸泡於5% w/w(重量百分濃度)第一附著劑石蠟(Paraffin,C25 H52 )之二甲苯溶液的試管中2分鐘後取出，並於室溫靜置10分鐘等待樣品乾燥。
3.再以二甲苯脫附樣品玻片5秒，並於室溫下靜置至乾燥後擷取光譜及其影像。
4.重複步驟(3)兩次，完成二甲苯脫附石蠟5秒、10秒及15秒等三個脫蠟時序。
請參照圖3為細胞樣品吸附石蠟之紅外動力學影像。其中(a)、(f)及(k)分別為人類結腸正常細胞CCD-18Co、結腸癌細胞SW-480及SW-403等細胞樣品之白光影像；(b)、(g)及(l)分別為CCD-18Co、SW-480及SW-403等細胞樣品在浸泡二甲苯溶液20分鐘並乾燥後於紅外波數3000-2800 cm-1 區間積分之紅外光譜影像，作為石蠟吸附及脫附過程的參考背景影像，其中圖(b)例示顯示XY軸代表影像的平面座標，Z軸代表紅外光譜吸收值，其中XY平面係對應圖(a)之細胞樣品影像，下列紅外光譜影像亦同；(c-e)、(h-j)及(m-o)分別為CCD-18Co、SW-480及SW-403等細胞樣品分別在脫附石蠟時間為5秒、10秒、15秒之紅外光譜影像。比較參考背景之光譜及其影像(細胞樣品浸泡二甲苯20分鐘之光譜及其影像)與細胞樣品進行不同石蠟脫附之時序的光譜影像，正常細胞在3000-2800 cm-1 光譜區間顯示因石蠟殘留所增加的訊號，反之癌細胞殘留量則不明顯。
5.為進行樣品吸附第二附著劑蜜蠟(Beeswax,C46 H92 O2 )的程序，再一次以二甲苯浸泡樣品20分鐘去除可能殘留的石蠟，待乾燥後擷取細胞樣品之光譜，即為細胞浸泡二甲苯20分鐘後之紅外吸收光譜及其影像。
6.將細胞樣品之玻片浸泡於2.5% w/w蜜蠟之二甲苯溶液的試管中2分鐘，取出後於室溫下靜置10分鐘等待樣品乾燥。
7.以二甲苯脫附樣品玻片，並於室溫下靜置至乾燥後取光譜並扣除背景值，即為細胞吸附蜜蠟經二甲苯溶劑脫蠟後5秒之紅外吸收光譜及其影像。
8.重複步驟(7)兩次完成二甲苯脫附蜜蠟5秒、10秒及15秒等三個脫蠟時序。
請參照圖4，顯示細胞樣品吸附蜜蠟之紅外動力學影像。其中，(a)、(f)及(k)分別為CCD-18Co、SW-480及SW-403等細胞樣品之白光影像；(b)、(g)及(l)分別為CCD-18Co、SW-480及SW-403等細胞樣品在浸泡二甲苯溶液20分鐘並乾燥後於紅外波數3000-2800 cm-1 區間積分之紅外光譜影像，作為蜜蠟吸附及脫附過程的參考背景影像；(c-e)、(h-j)及(m-o)為CCD-18Co、SW-480及SW-403等細胞樣品分別在脫附蜜蠟時間為5秒、10秒、15秒之紅外光譜影像。比較參考背景之光譜及其影像(細胞樣品浸泡二甲苯20分鐘之光譜影像)與細胞樣品進行不同蜜蠟脫附之時序的光譜影像，癌細胞在3000-2800 cm-1 光譜區間顯示因蜜蠟殘留所增加的訊號，反之正常細胞則蜜蠟殘留並不明顯。因此上述方法可快速有效的區分出正常細胞與癌細胞並可運用於結腸癌篩檢。
實施例二、口腔癌細胞檢測(I)
口腔癌細胞之篩檢亦使用上述步驟；但在此實驗中，第一附著劑及第二附著劑分別為石蠟及蜜蠟，其濃度為5% w/w。
圖5顯示細胞樣品吸附石蠟之紅外動力學影像。(a)與(f)分別為人類正常口腔細胞NHOK與口腔癌細胞OECM-1細胞樣品之白光影像；(b)及(g)分別為NHOK及OECM-1細胞樣品在浸泡二甲苯溶液20分鐘並乾燥後於紅外波數3000-2800 cm-1 區間積分之紅外光譜影像，作為石蠟之吸附及脫附過程的參考背景影像；(c-e)為NHOK以及(h-j)為OECM-1細胞樣品分別在脫附石蠟時間為5秒、10秒、15秒之紅外光譜影像。如圖所示，NHOK有較明顯的石蠟吸附。
以及，圖6顯示細胞樣品吸附蜜蠟之紅外動力學影像。其中(a)及(f)分別為人類口腔正常黏膜細胞NHOK及口腔癌細胞OECM-1之白光影像；(b)及(g)為細胞樣品在浸泡二甲苯溶液20分鐘並乾燥後於紅外波數3000-2800 cm-1 區間積分之紅外光譜影像，作為蜜蠟之吸附及脫附過程的參考背景影像；(c-e)為NHOK及(h-j)為OECM-1細胞樣品在脫附蜜蠟時間為5秒、10秒、15秒之紅外光譜影像。如圖所示，OECM-1具有較明顯的蜜蠟吸附。
實施例三、口腔癌細胞檢測(II)
實驗步驟如例一之步驟1至步驟8，其中第一附著劑則為三十烷(Triacontane,C30 H62 )，其濃度為5% w/w；第二附著劑為肉荳蔻酸乙酯(ethyl myristate,C16 H32 O2 )，其濃度為7.5 wt% w/w。
圖7顯示細胞樣品吸附三十烷之紅外動力學影像。其中，口腔上皮鱗狀癌細胞(OECM-1)經二甲苯脫附蠟5秒，有三十烷殘留訊號於3000-2800 cm-1 之紅外吸收光譜。
圖8顯示細胞樣品吸附肉荳蔻酸乙酯之紅外動力學影像。其中，口腔上皮角質細胞(NNHOK)經二甲苯脫附蠟5秒，有較多的肉荳蔻酸乙酯殘留訊號於3000-2800 cm-1 之紅外吸收光譜。
實施例四、口腔癌細胞檢測(III)
實驗步驟如例一之步驟1至步驟4，其中第一附著劑則為具支鏈 之3,5,5-三甲基己酸-3,5,5-三甲基己酯(3,5,5-Trimethylhexyl 3,5,5-trimethylcaproat,C18 H36 O2 )，其濃度為10% w/w。
圖9顯示細胞樣品吸附3,5,5-三甲基己酸-3,5,5-三甲基己酯之紅外動力學影像。其中，正常口腔上皮角質細胞(NHOK)經二甲苯脫附蠟5秒，有較多的3,5,5-三甲基己酸-3,5,5-三甲基己酯殘留訊號於3000-2800 cm-1 之紅外吸收光譜。
實施例五、口腔癌化組織檢測
以下揭示口腔癌化組織之檢測步驟，包括：
1.將組織固定於紅外載玻片上，以適當的溶劑去除包埋組織樣品之石蠟或包埋物質並經紅外吸收光譜確認無包埋物質殘留。待樣品乾燥後，再浸泡二甲苯溶劑60分鐘以除去可能的有機物的殘留，最後擷取此一組織樣品之紅外吸收光譜及其影像作為後續程序之參考背景。
2.將含5% w/w第一附著劑石蠟的二甲苯溶液滴於組織樣品玻片上並於室溫下靜置2小時等待乾燥。。
3.以二甲苯溶劑進行脫附石蠟30秒，靜置至乾燥後擷取紅外吸收光譜及其影像。
4.重複步驟(3)，完成二甲苯脫石蠟30秒及60秒等兩個時序。
圖10顯示組織樣品吸附石蠟之紅外動力學影像。(a)及(e)分別為人類口腔正常黏膜組織及口腔癌化組織切片(T2N1G1)之白光影像；(b)及(f)為組織切片在浸泡二甲苯溶液60分鐘並乾燥後於紅外波數3000-2800 cm-1 區間積分之紅外光譜影像，作為石蠟之吸附及脫附過程的參考背景影像；(c)及(g)分別為正常及口腔癌化組織切片於二甲苯脫附石蠟30秒之紅外光譜影像；(d)及(h)分別為正常及口腔癌化組織切片於二甲苯脫附石蠟60秒之紅外光譜影像。
比較參考背景之光譜及其影像與細胞樣品進行不同石蠟脫附之 時序的光譜影像，正常組織在3000-2800 cm-1 光譜區間顯示因石蠟殘留所增加的訊號，反之癌化組織殘留量則不明顯。
5.為進行樣品吸附第二附著劑蜜蠟的程序，再一次以二甲苯浸泡樣品60分鐘去除可能殘留的石蠟，待乾燥後擷取細胞樣品之光譜，即為組織浸泡二甲苯60分鐘後之紅外吸收光譜及其影像。
6.將5% w/w第二附著劑蜜蠟之二甲苯溶液滴於組織樣品上，並於室溫下靜置1小時等待乾燥。
7.待組織樣品乾燥後，以二甲苯溶劑進行脫蠟30秒。最後在室溫靜置至乾燥後擷取光譜及其影像。
8.重複步驟(7)完成二甲苯脫蜜蠟30秒及60秒等兩個脫蠟時序。
圖11顯示組織樣品吸附蜜蠟之紅外動力學影像。其中，(a)及(e)分別為人類口腔正常黏膜組織及口腔癌化組織切片(T2N1G1)之白光影像；(b)及(f)為組織切片在浸泡二甲苯溶液20分鐘並乾燥後於紅外波數3000-2800 cm-1 區間積分之紅外光譜影像，作為蜜蠟之吸附及脫附過程的參考背景影像；(c)及(g)分別為正常及口腔癌化組織切片於二甲苯脫附蜜蠟30秒之紅外光譜影像；(d)及(h)分別為正常及口腔癌化組織切片於二甲苯脫附蜜蠟60秒之紅外光譜影像。
比較參考背景之光譜影像與細胞樣品進行不同蜜蠟脫附之時序的光譜影像，癌化組織在3000-2800 cm-1 光譜區段會有蜜蠟殘留所增加的訊號，反之正常組織則不明顯。以此方法將快速有效的區分出正常組織與癌化組織並可運用於口腔癌與結腸癌之檢測。
實施例六、以螢光顯微術進行癌細胞檢測
以下揭示檢測步驟，包括：
1.先將細胞樣品固定於紅外載玻片上並浸泡二甲苯溶液20分鐘。
2.將染劑與石蠟以二甲苯溶解混合後，染劑及蜜蠟之濃度為0.01 wt%及0.25 wt%，分別溶於二甲苯溶液，將樣品玻片分別浸置於石蠟、蜜臘染劑1分鐘，取出樣品玻片靜置室溫10分鐘。
3.待樣品乾燥後再以二甲苯溶液浸泡樣品5秒，取出後靜置至乾燥後於螢光顯微鏡下觀察。
4.重複步驟(3)完成二甲苯脫蠟5秒及10秒、15秒及60秒等四個脫蠟時序。
圖12顯示細胞樣品吸附螢光蠟之螢光影像。(a)SW-403之白光影像；(b)SW-403於脫附蜜蠟對照組、5秒、10秒、15秒及60秒之影像；(c)SW-403經脫附石蠟對照組、5秒、10秒、15秒及60秒之影像。如圖所示，由於癌細胞上有螢光蜜蠟的殘留造成癌細胞有較強的螢光強度。
綜合上述，本發明所提供之癌化生物樣本之檢測方法係利用檢測試劑與癌化生物樣本及正常生物樣本之物理吸附性質差異，因此可以廣泛地利用於各種癌症之檢測。本發明可以快速檢測，並為一非破壞性的檢測方法，因此重覆使用並進行比較。
以上所述之實施例僅係為說明本發明之技術思想及特點，其目的在使熟習此項技藝之人士能夠瞭解本發明之內容並據以實施，當不能以之限定本發明之專利範圍，即大凡依本發明所揭示之精神所作之均等變化或修飾，仍應涵蓋在本發明之專利範圍內。
S11~S14‧‧‧癌化生物樣本之檢測步驟
S21~S23‧‧‧癌化生物樣本之檢測步驟
圖1為流程圖顯示依據本發明一實施例之癌化生物樣本之檢測方法。
圖2為流程圖顯示依據一實施例之癌化生物樣本之檢測方法。
圖3顯示細胞樣品吸附石蠟之紅外動力學影像。
圖4顯示細胞樣品吸附蜜蠟之紅外動力學影像。
圖5顯示細胞樣品吸附石蠟之紅外動力學影像。
圖6顯示細胞樣品吸附蜜蠟之紅外動力學影像。
圖7顯示細胞樣品吸附三十烷之紅外動力學影像。
圖8顯示細胞樣品吸附肉荳蔻酸乙酯之紅外動力學影像。
圖9顯示細胞樣品吸附3,5,5-三甲基己酸-3,5,5-三甲基己酯之紅外動力學影像。
圖10顯示組織樣品吸附石蠟之紅外動力學影像。
圖11顯示組織樣品吸附蜜蠟之紅外動力學影像。
圖12顯示細胞樣品吸附螢光蠟之螢光影像。
S11~S14‧‧‧癌化生物樣本之檢測步驟

Claims (25)

  1. 一種癌化生物樣本之檢測方法，包含：提供一生物樣本；一第一附著步驟，將該生物樣本浸潤於一第一檢測試劑，其包含一第一附著劑，其中該第一附著劑以物理吸附方式附著於該生物樣本，該第一附著劑為一碳鏈長度為16碳至46碳之長鏈酯類蠟化合物或碳鏈長度為21碳至30碳之長鏈烷類蠟化合物，該第一附著劑之濃度不大於10% w/w；一第一脫附步驟，將該生物樣本於一第一脫附試劑浸潤一第一預定時間；以及一第一判別步驟，測量該第一附著劑吸附於該生物樣本之含量，藉由比較該第一附著劑吸附於一癌化生物樣本或一正常生物樣本之含量，以判斷該生物樣本是否癌化。
  2. 如請求項1所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一脫附步驟以及該第一判別步驟重複進行多次。
  3. 如請求項1所述之癌化生物樣本之檢測方法，更包含：一第一預清洗步驟，在該第一附著步驟之前，將該生物樣本浸潤於該第一脫附試劑，其浸潤時間大於該第一預定時間。
  4. 如請求項1所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一脫附試劑為一有機溶劑。
  5. 如請求項1所述之癌化生物樣本之檢測方法，更包含：一第二附著步驟，將該生物樣本浸潤於一第二檢測試劑，其包含一第二附著劑，其中該第二附著劑以物理吸附方式附著於該生物樣本，該第二附著劑為一碳鏈長度為16碳至46碳之長鏈酯類蠟化合物或碳鏈長度為21碳至30碳之長鏈烷類蠟化合物，該第二附著劑之濃度不大於10% w/w；一第二脫附步驟，將該生物樣本於一第二脫附試劑浸潤一第二預定 時間；以及一第二判別步驟，測量該第二附著劑吸附於該生物樣本之含量，以判斷該生物樣本是否癌化。
  6. 如請求項5所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第二脫附步驟以及該第二判別步驟重複進行多次。
  7. 如請求項5所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一附著劑對該癌化生物樣本之物理吸附力大於其對該正常生物樣本之物理吸附力，而該第二附著劑對該正常生物樣本之物理吸附力大於其對該癌化生物樣本之物理吸附力。
  8. 如請求項5所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一附著劑對該正常生物樣本之物理吸附力大於其對該癌化生物樣本之物理吸附力，而該第二附著劑對該癌化生物樣本之物理吸附力大於其對該正常生物樣本之物理吸附力。
  9. 如請求項5所述之癌化生物樣本之檢測方法，更包含：一第二預清洗步驟，在該第二附著步驟之前，將該生物樣本浸潤於該第二脫附試劑，其浸潤時間大於該第二預定時間。
  10. 如請求項5所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一附著劑為一長鏈酯類蠟化合物，其碳鏈長度為16碳至46碳；該第二附著劑為一長鏈烷類蠟化合物，其碳鏈長度為21碳至30碳。
  11. 如請求項5所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一附著劑為一長鏈烷類蠟化合物，其碳鏈長度為21碳至30碳；該第二附著劑為一長鏈酯類蠟化合物，其碳鏈長度為16碳至46碳。
  12. 如請求項5所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一脫附試劑以及該第二脫附試劑為一有機溶劑。
  13. 如請求項1所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一檢測試劑更包含一染劑，其中該染劑對該第一附著劑之親和性大於對該生物樣本之親和性。
  14. 如請求項13所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該染劑為一螢光染劑。
  15. 如請求項14所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一附著劑吸附於該生物樣本之含量是藉由測量螢光光譜所得。
  16. 如請求項14所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該螢光染劑包含LC6500 DCM、別藻藍蛋白(Allophycocyanin,APC)、或APC-Cy7。
  17. 如請求項1所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該第一附著劑吸附於該生物樣本之含量是藉由測量紅外光譜或拉曼散射光譜所得。
  18. 如請求項17所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該紅外光譜範圍為3000-2800 cm-1 之區間。
  19. 如請求項17所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該拉曼散射光譜範圍為3000-2800 cm-1 之區間。
  20. 如請求項1所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該生物樣本為一組織或細胞。
  21. 如請求項1所述之癌化生物樣本之檢測方法，其中該癌化生物樣本為一口腔癌或結腸癌。
  22. 一種檢測癌化生物樣本之檢測試劑，其用以實現如請求項1所述之癌化生物樣本之檢測方法，該檢測試劑包含一附著劑，其為一碳鏈長度為16碳至46碳之長鏈酯類蠟化合物或碳鏈長度為21碳至30碳之長鏈烷類蠟化合物，該附著劑之濃度不大於10% w/w。
  23. 如請求項22所述之檢測癌化生物樣本之檢測試劑，更包含一染劑，其中該染劑對該附著劑之親和性大於對該生物樣本之親和性。
  24. 如請求項22所述之檢測癌化生物樣本之檢測試劑，其中該染劑為一螢光染劑。
  25. 如請求項22所述之檢測癌化生物樣本之檢測試劑，其中該癌化生物樣本為一口腔癌或結腸癌之細胞或組織。
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