KR20110049802A - 중화 항-인플루엔자 ａ 바이러스 항체 및 이의 용도 - Google Patents

중화 항-인플루엔자 ａ 바이러스 항체 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20110049802A
KR20110049802A KR1020117003495A KR20117003495A KR20110049802A KR 20110049802 A KR20110049802 A KR 20110049802A KR 1020117003495 A KR1020117003495 A KR 1020117003495A KR 20117003495 A KR20117003495 A KR 20117003495A KR 20110049802 A KR20110049802 A KR 20110049802A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
antibody
antigen
influenza
binding fragment
Prior art date
Application number
KR1020117003495A
Other languages
English (en)
Inventor
안토니오 란차페히아
Original Assignee
인스티튜트 포 리서치 인 바이오메드슨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 인스티튜트 포 리서치 인 바이오메드슨 filed Critical 인스티튜트 포 리서치 인 바이오메드슨
Publication of KR20110049802A publication Critical patent/KR20110049802A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Abstract

본 발명은 헤마글루티닌에 결합하고 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 2개의 상이한 1그룹 아형 또는 적어도 2개의 상이한 2그룹 아형의 감염을 중화시키는 항체 및 이의 항원 결합 단편에 관한 것이다. 본 발명은 또한 항체 및 항체 단편을 생산하는 불멸화된 B 세포 및 배양된 단일 형질세포를 인코딩하는 핵산, 및 그와 같은 항체 및 항체 단편에 결합하는 에피토프에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 감염의 스크리닝 방법, 및 진단, 치료 및 예방에서의 항체, 항체 단편, 및 에피토프의 용도에 관한 것이다.

Description

중화 항-인플루엔자 Ａ 바이러스 항체 및 이의 용도 {NEUTRALIZING ANTI-INFLUENZA A VIRUS ANTIBODIES AND USES THEREOF}
본원은 2008년 7월 25일과 2009년 5월 27에 각각 출원된 미국 가출원 제61/083,838호 및 제61/181,582호의 우선권을 주장하며, 이들의 내용은 전체가 참조로써 본원에 통합되어 있다.
인플루엔자 A 바이러스에 대한 중화 항체 반응은 특정한 바이러스 아형(subtype)에 대해 특이적인 것으로 여겨진다. 헤마글루티닌(hemagglutinin, HA)에 의해 정의된 16종의 인플루엔자 A 아형이 존재한다. 16종의 HA인 H1-H6은 두 가지 그룹으로 분류될 수 있다. 1그룹은 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, 및 H16 아형으로 이루어지며, 2그룹은 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 아형을 포함한다. 모든 아형이 조류에 존재함에도 불구하고, 주로 H1, H2 및 H3 아형이 인간에게 질병을 일으킨다. H5, H7 및 H9 아형은 인간에게 산발적인 심각한 감염을 일으키고 있으며 새로운 전염병을 발생시킬 수 있다. H1 및 H3 바이러스는 끊임없이 진화하여 항원 소변이(antigenic drift)라 불리는 현상인 새로운 변종을 발생시킨다. 그 결과, 이전의 바이러스에 대한 반응으로 생성된 항체는 소변이된 새로운 바이러스에 대해 예방효과가 좋지 못하거나 없다. 결론은 출현할 것으로 예측되는 H1 및 H3 바이러스에 대해 매해 새로운 백신을 생산해야 하는데, 이 과정은 매우 비용이 많이 들뿐만 아니라 항상 효과적이지만은 않다는 것이다. 동일한 상황이 H5 인플루엔자의 생산에 적용된다. 실제로 베트남 또는 인도네시아 인플루엔자 A 바이러스 분리물에 기초한 현재의 H5 백신이 미래의 유행성 H5 바이러스를 예방할지 여부는 불분명하다.
이러한 이유로 인해, 모든 인플루엔자 A 바이러스 아형뿐만 아니라 이들의 매해의 변종을 중화시킬 수 있는 광범위 중화 항체를 유도하는 백신을 갖는 것이 매우 바람직할 것이다 (Gerhard et al., 2006에 의해 검토됨). 또한, 광범위 중화 이질아형(heterosubtype) 항체가 예방 또는 치료 세팅에 사용될 수 있을 것이다.
인플루엔자 A 바이러스를 인식하는 항체가 규명되어 왔다. M2에 대한 항체 (감염된 세포 상에서는 발현되지만 감염성 바이러스 상에서는 발현되지 않는 불변 (invariant) 소단백질)는 아마도 감염된 세포를 표적으로 하여 NK 세포나 세포독성 T 세포에 의해 파괴함으로써, 생체내에서 약간의 예방 효과를 나타내었다. 하지만, HA가 중화 항체의 1차 표적이다. 이는, 숙주 유래의 효소에 의해 분해되어 이황화 결합으로 여전히 연결된 2개의 폴리펩타이드를 생성하는 대략 500개의 아미노산인 거대한 엑토도메인 (ectodomain)을 포함한다. 보다 큰 N 말단 단편 (HA1, 320-330개의 아미노산)은 수용체 결합 부위 및 바이러스 중화 항체에 의해 인식되는 대부분의 결합부위 (determinant)를 함유하는 막 말단의 구형 도메인 (globular domain)을 형성한다. 보다 작은 C 말단 부분 (HA2, 대략 180개의 아미노산)은 상기 구형 도메인을 세포막 또는 바이러스 막에 고정시키는 줄기유사(stem-like) 구조를 형성한다. 아형 간의 서열 상동성 정도는 HA2 폴리펩타이드 (51%-80% 상동성)에서보다 HA1 폴리펩타이드(34%-59%)에서 더 작다. 최대로 보존된 영역은 절단 부위 주위의 서열, 특히 모든 인플루엔자 A 바이러스 아형 간에 보존되어 있는, 융합 펩타이드로 명명된 HA2 N 말단의 11개 아미노산이다. 이 영역의 일부는 HA 전구체 분자(HAO)에서 표면 루프(loop)로 노출되지만, HAO가 HA1/HA2로 분해되는 경우 접근하기 어렵게 된다. 요약하면, 상이한 HA 아형간의 보존 영역이 HA1-HA2 접합 영역과 HA2 영역에 존재한다. 하지만, 이들 영역은 중화 항체에 대한 접근성이 좋지 않을 수 있다.
인플루엔자 A 바이러스의 하나 이상의 아형을 중화시키는 항체를 동정하는데 있어 제한된 성공만이 있었으며, 이들의 중화 범위가 좁고 이들의 잠재력이 낮다. Okuno 등(1993)은 인플루엔자 바이러스 A/Okuda/57 (H2N2)로 마우스를 면역화시킨 후, HA2 내에 보존된 입체형태적 에피토프(conformational epitope)에 결합하며 테스트관내 및 생체내 동물 모델에서 1그룹 H2, H1 및 H5 아형 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 단일클론 항체 (C179)를 분리하였다 (Okuno et al.,1993; Smirnov et al., 2000; Smirnov et al., 1999).
최근에, Gioia 등은 통상적인 계절성 인플루엔자 백신을 접종한 일부 개인의 혈청에서 H5N1 바이러스 중화 항체의 존재를 기술하였다 (Gioia et al., 2008). 저자는 중화 활성이 뉴라민산분해효소(neuraminidase, N1)에 대한 항체로 인한 것일 수 있음을 제시하고 있다. 하지만, 단일클론 항체가 분리되지 않았고 표적 에피토프가 규명되지 않았다. 상기 혈청 항체가 인플루엔자 A 바이러스의 다른 아형을 중화시키는지 여부가 불분명하다.
수십 년의 연구에도 불구하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 광범위하게 중화시키거나 억제하거나 또는 인플루엔자 A 바이러스에 의해 유발되는 질병을 약화시키는 항체가 시판된 적이 없다. 그러므로, 인플루엔자 A 바이러스의 다수의 아형을 예방하는 새로운 항체를 동정할 필요가 있다.
발명의 요약
본 발명은, 부분적으로는, 계절성 인플루엔자 백신을 접종한 개인으로부터 HA에 결합하고 인플루엔자 A 바이러스의 하나 이상의 아형의 감염을 중화시키는 자연적으로 발생하는 인간 단일클론 항체뿐만 아니라 본 발명의 항체가 결합하는 신규 에피토프를 분리하는 것에 기초를 두고 있다. 따라서, 본 발명의 하나의 실시형태에서, 본 발명은 1그룹 또는 2그룹 아형으로부터 선택된, 인플루엔자 A 바이러스의 하나 이상의 아형의 감염을 중화시키는 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
본 발명의 하나의 구체예에서, 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 2개의 상이한 1그룹 아형 또는 적어도 2개의 상이한 2그룹 아형의 감염을 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 본 발명의 다른 구체예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 1-6, 17-22, 33-38, 49-53, 64-68, 78-82, 93-98, 109-114, 125-127, 또는 133-135 중 어떤 하나에 대해 적어도 95% 서열 일치도를 갖는 적어도 하나의 상보성 결정 영역 (CDR) 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시킨다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO:　49, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 125 및 SEQ ID NO: 133으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 CDR1; SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 126 및 SEQ ID NO: 134로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 127 및 SEQ ID NO:　135로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 CDR3을 포함하고, 여기서, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시킨다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:　20, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 96, 및 SEQ ID NO: 112로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 97, 및 SEQ ID NO: 113으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 98, 및 SEQ ID NO: 114로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 CDR3을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시킨다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서, 상기 항체는 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 60의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 74의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시킨다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명은 불멸화된 B 세포 클론 FB54, FB139, FC6, FC41, FE43, FE53, FE17, FB75, FB110, FB177, FB79, FC1c, FB118, FB179, FB186, FE9b, FE25, FE54, FG20, FB15b, 또는 FC54에 의해 발현되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시킨다.
다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자를 포함한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 벡터 또는 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현시키는 세포를 포함한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편에 결합하는 에피토프를 포함하는 분리 또는 정제된 면역성 폴리펩타이드를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 본 발명의 핵산 분자, 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 벡터, 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 발현시키는 세포, 또는 본 발명의 면역성 폴리펩타이드, 및 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 본 발명은 또한 제 1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 제 2 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하고, 상기 제 1 항체는 본 발명의 항체이고, 상기 제 2 항체는 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다
(ⅰ) 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료용 의약의 제조에, (ⅱ) 백신으로서, 또는 (ⅲ) 인플루엔자 A 바이러스 감염의 진단에서의, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 본 발명의 핵산, 본 발명의 핵산을 포함하는 벡터, 본 발명의 벡터를 발현시키는 세포, 본 발명의 항체 또는 항체 단편에 결합하는 에피토프를 포함한는 분리 또는 정제된 면역성 폴리펩타이드, 또는 본 발명의 약제학적 조성물의 용도는 또한 본 발명의 범위 내인 것으로 생각된다. 또한, 백신의 항원이 정확한 형태로 특이적 에피토프를 함유하는지를 조사하여 항-인플루엔자 A 바이러스 백신의 질을 모니터하기 위한, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 본 발명의 범위 내인 것으로 생각된다.
다른 양상에서, 본 발명은 치료적 유효량의 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 항체 단편을 필요한 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 감소시키거나 인플루엔자 A 바이러스 감염의 위험을 낮게 하는 방법을 포함한다.
추가 양상에서, 본 발명은 (ⅰ) 치료에, (ⅱ) 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료용 의약의 제조에, (ⅲ) 백신으로서, 또는 (ⅳ) 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킬 수 있는 리간드의 스크리닝에 사용하기 위한, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 특이적으로 결합하는 에피토프를 포함한다.
도 1A-E는 예방적으로 항체 FE17 또는 FE43으로 치료하고 24시간 후 H1N1 A/PR/8/34, H6N1 A/teal/HK/W312/97, H5N1 A/VN/1203/04, H5N1 A/INDO/5/05, 또는 H7N7 A/NL/219/03으로 각각 면역성테스트를 한 마우스의 생존 그래프를 나타낸 것이다.
도 1F는 비-치사 H9N2 A/ck/HK/G9/97 바이러스에 대한 생체내 중화 활성 결과를 나타낸 것이다. 마우스에 복강내로 FE43, FE17, 대조군 항체 또는 흰족제비(ferret) 고면역혈청을 주사하고, 24시간 후 105 TCID50의 H9N2 바이러스로 면역성테스트를 하였다. 감염 4일 후 폐에서의 바이러스 역가가 나타나 있다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 부분적으로, 상이한 아형의 인플루엔자 A 바이러스를 광범위하게 중화시키는 자연 인간 항체의, 계절성 인플루엔자 백신으로 백신접종된 개체로부터의 발견 및 분리를 기초로 한다. 그와 같은 항체는, 단지 하나 또는 소수의 항체가 인플루엔자 A 바이러스의 상이한 아형을 중화하기 위해 필요한 바와 같이 바람직하다. 또한, 그와 같은 항체에 의해 인식되는 에피토프는 상이한 인플루엔자 A 바이러스 아형의 계절성 및 후보 대유행 분리물 모두에 대한 광범위한 보호를 유도할 수 있는 백신의 일부일 수 있다.
따라서, 하나의 양상에서, 본 발명은 1그룹 및 2그룹 아형에서 적어도 2개의 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 항체 및 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스의 2개의 상이한 1그룹 아형 또는 2개의 상이한 2그룹 아형의 감염을 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
본 발명의 다른 양상에서, 상이한 인플루엔자 A 바이러스 아형의 HA에 대항하여 광범위한 특이성을 갖는 중화 항체 및 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 인플루엔자 A 바이러스 1그룹 또는 2그룹 아형 중에서 보존되는 HA의 줄기 영역에서 에피토프에 특이적으로 결합한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 2개 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1그룹 또는 2그룹 아형 중에서 보존되는 HA의 구형 헤드부(head) 영역에서 에피토프에 특이적으로 결합한다.
인간 모노클로날 항체, 본 발명의 항체를 분비하는 불멸화된 B 세포 클론 또는 형질감염된 세포, 및 본 발명의 항체를 인코딩하는 핵산은 또한 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "항원 결합 단편", "단편", 및 "항체 단편"은 항체의 항원 결합 활성을 보유하는 본 발명의 항체의 어떤 단편을 의미하는 것으로 상호교환적으로 사용된다. 예시적인 항체 단편은 비제한적으로 단쇄 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv를 포함한다. 본 명세서에 사용된 용어 "항체"는 항체 및 이의 항원 결합 단편 둘 모두를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "광범위한 특이성"은 인플루엔자 A 바이러스의 2개 이상의 1그룹 아형 또는 2개 이상의 2그룹 아형에 결합하고/하거나 그 아형들을 중화시킬 수 있는 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편을 의미하는 것으로 사용된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "항체를 중화시키는"이란 숙주에서 감염을 개시 및/또는 영속시키기 위해 병원체의 능력을 중화, 즉 방지, 억제, 감소, 방해 및/또는 저해할 수 있는 것이다. 용어 "중화 항체" 및 "...를 중화시키는 항체"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 이들 항체는 활성 백신접종과 관련하여 적당한 제형시 예방제 또는 치료제로서, 본 명세서에 기재된 진단 도구 또는 생산 도구로서, 단독으로 또는 병용하여 사용된 수 있다.
본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 1그룹 아형 (H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, 및 H16 및 이들의 돌연변이체)로부터의 인플루엔자 A 바이러스의 하나 초과의 아형 또는 2그룹 아형 (H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 및 이들의 돌연변이체)로부터의 인플루엔자 A 바이러스의 하나 초과의 아형을 중화시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항체는 1그룹 및 2그룹 아형으로부터의 인플루엔자 A 바이러스의 하나 초과의 아형을 중화시킨다.
본 발명의 항체 및 항체 단편은 다양한 조합의 인플루엔자 A 바이러스 아형을 중화시킬 수 있다. 하나의 구체예에서, 항체는 인플루엔자 A 바이러스 H1 및 H2 아형, 또는 H1 및 H5 아형, 또는 H1 및 H9 아형, 또는 H2 및 H5 아형, 또는 H2 및 H9 아형, 또는 H5 및 H9 아형, 또는 H3 및 H7 아형, 또는 H1, H2 및 H5 아형, 또는 H1, H2 및 H9 아형, 또는 H1, H5, 및 H9 아형, 또는 H2, H5 및 H9 아형, 또는 H1, H2, H5 및 H9 아형을 중화시킬 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항체 및 항원 결합 단편은 인플루엔자 A 바이러스 H6 아형을 중화시키는 것에 추가하여 하나 이상의 상기 조합을 중화시킬 수 있다.
본 발명의 항체 및 항원 결합 단편은 높은 중화 효능을 갖는다. 인플루엔자 A 바이러스의 50% 중화에 필요한 본 발명의 항체의 농도는 예를 들어, 약 50 μg/ml 이하일 수 있다. 하나의 구체예에서, 인플루엔자 A 바이러스의 50% 중화에 필요한 본 발명의 항체의 농도는 약 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 17.5, 15, 12.5, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4.5, 4, 3.5, 3, 2.5, 2, 1.5 또는 약 1 μg/ml 이하이다. 다른 구체예에서, 인플루엔자 A 바이러스의 50% 중화에 필요한 본 발명의 항체의 농도는 약 0.9, 0.8, 0.75, 0.7, 0.65, 0.6, 0.55, 0.5, 0.45, 0.4, 0.35, 0.3, 0.25, 0.2, 0.15, 0.1, 0.075, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01, 0.008, 0.006, 0.004, 0.003, 0.002 또는 약 0.001 μg/ml 이하이다. 이는, 단지 저농도의 항체가 인플루엔자 A의 50% 중화에 필요하다는 것을 의미한다. 특이성 및 효능은 본 기술분야의 숙련자에게 공지된 바와 같이 표준 중화 분석을 사용하여 측정될 수 있다.
본 발명의 항체
본 발명은 특히 HA에 대한 광범위한 특이성을 가지며 1그룹으로부터의 하나 초과의 인플루엔자 A 바이러스 아형 또는 2그룹으로부터의 하나 초과의 인플루엔자 A 바이러스 아형2를 중화시키는 항체를 제공한다. 본 발명의 항체는 2개 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1그룹 아형 또는 2개 이상의 인플루엔자 A 바이러스 2그룹 아형 중에서 보존되는 HA의 영역에서 에피토프에 결합한다.
하나의 구체예에서, 본 발명은 2개 이상의 1그룹 또는 2그룹 인플루엔자 A 바이러스 아형 중에서 보존되는 HA의 줄기 영역에서 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 2개 이상의 1그룹 또는 2그룹 인플루엔자 A 바이러스 아형 중에서 보존되는 구형 헤드부 HA의 영역에서 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 줄기 영역 또는 HA의 구형 헤드부 영역에서 보존 에피토프에 특이적으로 결합하고, 바이러스성 복제 또는 스프레딩(spreading)를 저해하는 항체, 예를 들어, 분리된 항체 또는 정제된 항체를 제공한다. 본 발명은 또한, 줄기 영역 또는 HA의 구형 헤드부 영역에서 보존 에피토프에 특이적으로 결합하고, 세포에의 바이러스 침입을 억제하는 항체, 예를 들어, 분리된 항체 또는 정제된 항체를 제공한다. 이론에 구속되지 않으면서, 예시적인 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 인플루엔자 A 바이러스의 줄기 영역에서 보존된 에피토프에 결합하고, 융합 단계를 방해하여 세포에의 바이러스 침입을 억제한다. 단백질의 에피토프, 즉 항원결정부위는 항체의 결합 부위(즉 파라토프)에 의해 특이적으로 인식되는 분자의 부분들에 상응한다. 따라서, 에피토프는 작동 인식에 대한 상보적 파라토프를 필요로 하는 관계적 실체이다. 단백질의 상이한 돌연변이체 중에서 보존되는 에피토프는, 동일한 파라토프가 분자의 동일 부분을 접촉시켜 이들 상이한 돌연변이체를 특이적으로 인식할 수 있다는 것을 의미한다.
본 발명의 항체는 모노클로날, 예를 들어, 인간 모노클로날 항체, 또는 재조합 항체일 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 항체의 단편, 특히 항체의 항원 결합 활성을 유지하는 단편을 제공한다. 특허청구범위를 포함하는 명세서가 일부 위치에서 명백하게 항원 결합 단편(들), 항체 단편(들), 항체의 돌연변이체(들) 및/또는 유도체(들)를 언급할 수 있을 지라도, 용어 "항체" 또는 "본 발명의 항체"는 모든 카테고리의 항체, 즉, 항원 결합 단편(들), 항체 단편(들), 항체의 돌연변이체(들) 및 유도체(들)을 포함하는 것으로 이해된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항체 및 항체 단편은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 2개의 상이한 1그룹 아형 또는 적어도 2개의 상이한 2그룹 아형을 중화시킨다. 예시적인 인플루엔자 A 바이러스 아형은 비제한적으로 H5N1 (A/Vietnam/1203/04), H1N1 (A/New Caledonia/20/99), H1N1 (A/Salomon Island/3/2006), H3N2 (A/Wyoming/3/03) 및 H9N2 (A/chicken/Hong Kong/G9/97)을 포함한다. 다른 구체예에서, 항체는 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 그 초과의 1그룹 인플루엔자 A 바이러스 아형 또는 2그룹 인플루엔자 A 바이러스 아형에 대해 특이적이다.
예시적인 구체예에서, 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 아형 H1 및 H5 (예, H1N1 및 H5N1)에 대해 특이적인 항체 또는 이의 항체 단편을 포함한다. 다른 구체예에서, 항체 또는 이의 항체 단편은 인플루엔자 A 바이러스 아형 H1 및 H9 (예, H1N1 및 H9N2)에 대해 특이적이다. 다른 구체예에서, 항체 또는 이의 항체 단편은 인플루엔자 A 바이러스 아형 H1, H5 및 H9 (예, H1N1, H5N1 및 H9N2)에 대해 특이적이다. 기타 예시적인 인플루엔자 A 바이러스의 아형은 본 출원에서 이전에 제공된다.
본 발명의 예시적인 항체의 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)에 대한 아미노산 서열의 SEQ ID NO 는 표 1에 열거되어 있다.
[표 1]
Figure pct00001

하나의 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 SEQ ID NO: 13, 29, 45, 60, 74, 89, 105, 121, 131 또는 139 중 어느 하나에서 인용된 서열과 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 SEQ ID NO: 14, 30, 46, 61, 75, 90, 106, 또는 122 중 어느 하나에서 인용된 서열과 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체의 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 15, 31, 47, 62, 76, 91, 107, 123, 132 또는 140 중 어느 하나에서 인용된 서열과 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열을 갖는 핵산에 의해 인코딩될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체의 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 16, 32, 48, 63, 77, 92, 108, 또는 124 중 어느 하나에서 인용된 서열과 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 서열을 갖는 핵산에 의해 인코딩될 수 있다.
항체 중쇄의 CDR는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3으로 각각 부른다. 마찬가지로, 항체 경쇄의 CDR은 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3으로 각각 부른다. CDR 아미노산의 위치는 하기와 같은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 정의된다: CDR1 - IMGT 위치 27 내지 38, CDR2 - IMGT 위치 56 내지 65 및 CDR3 - IMGT 위치 105 내지 117.
표 2는 본 발명의 예시적인 항체의 중쇄 및 경쇄 각각의 6개의 CDR의 아미노산 서열에 대한 SEQ ID NO을 제공한다.
[표 2]
Figure pct00002

하나의 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 SEQ ID NO: 1-6 17-22, 33-38, 49-53, 64-68, 78-82, 93-98, 109-114, 125-127, 또는 133-135의 어떤 하나에 대해 적어도 95% 서열 일치도를 갖는 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하고, 여기서, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시킨다.
다른 구체예에서, 본 발명은 FB54, FB139, FC6, FC41, FE43, FE53, FE17, FB75, FB110, FB177, FB79, FC1c, FB118, FB179, FB186, FE9b, FE25, FE54, FG20, FB15b 또는 FC54로부터 하나 이상 (즉, 하나, 2개 또는 3개 모두)의 중쇄 CDR을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체를 제공한다. 예시적인 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 125 및 SEQ ID NO: 133으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 CDR1; SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 126 및 SEQ ID NO: 134로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 127 및 SEQ ID NO: 135 으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 CDR3을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 FB54, FB139, FC6, FC41, FE43, FE53, FE17, FB75, FB110, FB177, FB79, FC1c, FB118, FB179, FB186, FE9b, FE25, FE54, FG20, FB15b 또는 FC54로부터 하나 이상 (즉, 하나, 2개 또는 3개 모두)의 경쇄 CDR을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체를 제공한다. 예시적인 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 96, 및 SEQ ID NO: 112로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 97, 및 SEQ ID NO: 113으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 98, 및 SEQ ID NO: 114로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경쇄 CDR3을 포함한다.
예시적인 구체예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 1, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 2, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 3; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 17, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 18, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 19; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 33, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 34, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 35; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 49, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 50, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 51; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 64, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 65, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 66; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 78, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 79, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 80; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 93, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 94, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 95; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 109, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 110, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 111; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 125, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 126, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 127; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 133, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 134, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
예시적인 구체예에서, 본 명세서에 제공된 항체는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 4, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 5, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 6; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 20, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 21, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 22; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 36, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 37, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 38; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 52, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 5, 및 CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 53; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 36, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 67, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 68; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 81, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 21, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 82; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 96, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 97, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 98; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 112, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 113, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 열거된 바와 같은 항체 FB54의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 열거된 바와 같은 항체 FB139의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 열거된 바와 같은 항체 FC6의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 열거된 바와 같은 FC41의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 열거된 바와 같은 FE43의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 열거된 바와 같은 FE53의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표2에 열거된 바와 같은 항체 FE17의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표2에 열거된 바와 같은 항체 FB75의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표2에 열거된 바와 같은 항체 FB110의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표2에 열거된 바와 같은 항체 FB177의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표2에 열거된 바와 같은 항체 FB79의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표2에 열거된 바와 같은 항체 FC1c의 CDR 모두를 포함하고, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킨다.
본 발명의 예시적인 항체는 비제한적으로 FB54, FB139, FC6, FC41, FE43, FE53, FE17, FB75, FB110, FB177, FB79, FC1c, FB118, FB179, FB186, FE9b, FE25, FE54, FG20, FB15b 또는 FC54를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 단편, 또는 본 발명의 항체와 경쟁하는 항체를 포함한다.
본 발명의 항체는 또한 본 발명의 항체로부터의 하나 이상의 CDR 및 동일한 에피토프에 대한 다른 항체로부터의 하나 이상의 CDR을 포함하는 하이브리드 항체 분자를 포함한다. 하나의 구체예에서, 그와 같은 하이브리드 항체는 본 발명의 항체로부터의 3개의 CDR 및 동일한 에피토프에 대한 다른 항체로부터의 3개의 CDR을 포함한다. 예시적인 하이브리드 항체는 i) 본 발명의 항체로부터의 3개의 경쇄 CDR 및 동일한 에피토프에 대한 다른 항체로부터의 3개의 중쇄 CDR, 또는 ⅱ) 본 발명의 항체로부터의 3개의 중쇄 CDR 및 동일한 에피토프에 대한 다른 항체로부터의 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
돌연변이형 항체는 또한 본 발명의 범위 내에 포함된다. 따라서, 본 출원에서 인용된 서열의 돌연변이체는 또한 본 발명의 범위 내에 포함된다. 그와 같은 돌연변이체는 면역 반응 동안에 생체 내에서 또는 불멸화된 B 세포 클론의 배양시 실험실 내에서 체세포 돌연변이에 의해 산출된 자연적인 돌연변이체를 포함한다. 대안으로, 돌연변이체는 상기에서 언급한 바와 같이 유전 코드의 퇴보로 인해 생길 수 있고, 또는 전사 또는 번역에서의 오차로 인해 생성될 수 있다.
개선된 친화도 및/또는 효능을 갖는 항체 서열의 추가 돌연변이체는 본 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 얻을 수 있고, 본 발명의 범위 내에 포함된다. 예를 들어, 아미노산 치환은 추가 개선된 친화도를 갖는 항체를 얻기 위해 사용될 수 있다. 대안으로, 뉴클레오티드 서열의 코돈 최적화는 항체의 생성을 위한 발현 시스템에서 번역의 효율을 개선하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 어떤 핵산 서열에 대한 유도된 질화 방법의 적용에 의해 항체 특이성 또는 중화 활성을 위해 최적화된 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 또한 본 발명의 범위 내에 있다.
하나의 구체예에서, 돌연변이형 항체 서열은 70% 또는 그 초과 (즉, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과) 아미노산 서열 일치도를 본 출원에서 인용된 서열와 함께 할 수 있다. 일부 구체예에서, 그와 같은 서열 일치도는 참조 서열 (즉, 본 출원에서 인용된 서열)의 전체 길이에 관해서 계산된다. 일부 추가 구체예에서, 본 명세서에 언급된 % 일치도는 NCBI (the National Center for Biotechnology Information; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)에 의해 열거된 디폴트 파라미터 [Blosum 62 매트릭스; 갭 오픈 벌점(gap open penalty)=11 및 갭(gap) 확장 벌점=1]를 사용하는 BLAST 버젼 2.1.3를 사용하여 특정된다.
다른 양상에서, 본 발명은 또한 본 발명의 항체의 경쇄 및 중쇄 및 CDR의 일부 또는 전부를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 본 발명의 예시적인 항체의 경쇄 및 중쇄 및 CDR의 일부 또는 전부를 인코딩하는 핵산 서열이 본 명세서에 제공된다.
표 3은 CDR을 인코딩하는 핵산 서열에 대한 SEQ ID NO, 및 본 발명의 예시적인 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 제공한다. 유전 코드의 잉여에 기인하여, 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 이들 서열의 돌연변이체가 존재할 것이다.
[표 3]
Figure pct00003

하나의 구체예에서, 돌연변이형 항체 서열은 본 출원에서 인용된 서열와 함께 70% 또는 그 초과 (즉, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과) 아미노산 서열 일치도를 공유할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명의 핵산 서열은 본 발명의 항체의 중쇄 또는 경쇄 CDR을 인코딩하는 핵산의 서열을 갖는다. 예를 들어, 본 발명에 따른 핵산 서열은 SEQ ID NO: 7-12, 15, 16, 23-28, 31, 32, 39-44, 47, 48, 54-59, 62, 63, 69-73, 76, 77, 83-88, 91, 92, 99-104, 107, 108, 115-120, 123, 124, 128-130, 132, 136-138, 또는 140의 핵산 서열과 적어도 75% 동일한 서열을 포함한다.
벡터, 예를 들어 본 발명에 따른 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터가 또한 본 발명의 범위 내에 포함된다. 그와 같은 벡터로 형질전환된 세포는 또한 본 발명의 범위 내에 포함된다. 그와 같은 세포의 예는 비제한적으로 진핵 세포, 예를 들어 효모 세포, 동물 세포 또는 식물 세포를 포함한다. 구체예에서, 세포는 포유류, 예를 들어 인간, CHO, HEK293T, PER.C6, NS0, 골수종 또는 하이브리도마 세포를 포함한다.
본 발명은 또한 FB54, FB139, FC6, FC41, FE43, FE53, FE17, FB75, FB110, FB177, FB79, FC1c, FB118, FB179, FB186, FE9b, FE25, FE54, FG20, FB15b 및 FC54로부터 선택된 모노클로날 항체를 비제한적으로 포함하는 본 발명의 항체를 결합할 수 있는 에피토프에 결합하는 모노클로날 항체에 관한 것이다.
모노클로날 및 재조합 항체는 이들 항체를 지도하는 개별적인 폴리펩타이드 또는 다른 항원의 확인 및 정제에 특히 유용하다. 본 발명의 항체는, 면역분석, 방사선면역분석 (RIA) 또는 효소결합 면역흡수 분석법 (ELISA)에서 시약으로 이용될 수 있다는 점에서 추가적인 유용성을 갖는다. 이들 적용에서, 항체는 방사선동위원소, 형광 분자 또는 효소와 같은 분석적으로 검출가능한 시약으로 표지될 수 있다. 항체는 또한 항원의 분자 확인 및 특성화 (에피토프 맵핑)을 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 항체는 치료 부위로의 전달을 위한 약물에 커플링될 수 있거나 관심 세포, 예컨대 인플루엔자 A 바이러스로 감염된 세포를 포함하는 부위의 이미징을 용이하게 하기 위해 검출가능 표지에 커플링될 수 있다. 항체를 약물 및 검출가능 표지에 커플링하기 위한 방법은 검출가능 표지를 이미징화하기 위한 방법인 바와 같이 본 기술분야에 공지되어 있다. 표지된 항체는 다양한 표지를 이용하여 다양한 분석에서 이용될 수 있다. 본 발명의 항체 및 관심 에피토프 (인플루엔자 A 바이러스 에피토프) 사이의 항원-항체 복합체의 형성의 검출은 검출가능 기질을 항체에 부착시킴으로써 용이하게 될 수 있다. 적당한 검출 수단은 표지, 예컨대 방사선핵종, 효소, 조효소, 형광물질, 켐일루미네서(chemiluminescer), 색원체, 효소 기질 또는 공동인자, 효소 억제제, 보결분자(prosthetic) 그룹 복합체, 유리 라디칼, 입자, 염료 등의 사용을 포함한다. 적당한 효소의 예는 양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase), 알칼리 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 또는 아세틸콜린스테라아제를 포함하고; 적당한 보결분자(prosthetic) 그룹 복합체의 예는 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴을 포함하고; 적당한 형광 물질의 예는 움벨리페론(umbelliferone), 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함하고; 발광 물질의 예는 루미놀이고; 생물발광 물질의 예는 루시페라제, 루시페린, 및 에쿼린을 포함하고; 적당한 방사선활성 물질의 예는 125I, 131I, 35S, 또는 3H을 포함한다. 그와 같은 표지된 시약은 다양한 공지 분석, 예컨대 방사선면역분석, 효소 면역분석, 예를 들어, ELISA, 형광 면역분석 등에 사용될 수 있다 (참고, 예를 들어 US 3,766,162; US 3,791,932; US 3,817,837; 및 US 4,233,402).
본 발명에 따른 항체는 치료성분, 예컨대 세포독소, 치료제, 또는 방사선활성 금속 이온 또는 방사선동위원소에 콘쥬게이트될 수 있다. 방사선동위원소의 예는 비제한적으로 I-131, I-123, I-125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212, Bi-213, Pd-109, Tc-99, In-111 등을 포함한다. 그와 같은 항체 콘쥬게이트는 주어진 생물학적 반응을 변경시키기 위해 사용될 수 있고; 약물성분은 고전적인 화학 치료제로 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 약물성분은 원하는 생물학적 활성을 가지고 있는 단백질 또는 폴리펩타이드일 수 있다. 그와 같은 단백질은 예를 들어, 독소, 예컨대 아브린(abrin), 리신(ricin) A, 슈도모나스(pseudomonas) 외독소, 또는 디프테리아 독소를 포함할 수 있다.
그와 같은 치료성분을 항체에 콘쥬게이트하기 위한 기술은 공지되어 있다. 참조, 예를 들어, Arnon et al. (1985) "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ed. Reisfeld et al . (Alan R. Liss, Inc.), pp. 243-256; ed. Hellstrom et al. (1987) "Antibodies for Drug Delⅳery," in Controlled Drug Delⅳ ery, ed. Robinson et al. (2d ed; Marcel Dekker, Inc.), pp. 623-653; Thorpe (1985) "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Reⅵew," in Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ed. Pinchera et al. pp. 475-506 (Editrice Kurtis, Milano, Italy, 1985); "Analysis, Results, and Future Prospectⅳe of Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ed. Baldwin et al . (Academic Press, New York, 1985), pp. 303-316; and Thorpe et al . (1982) Immunol . Rev . 62:119-158.
대안으로, 항체 또는 이의 항체 단편은 제 2 항체 또는 이의 항체 단편에 콘쥬게이트되어, US 4,676,980에 기재되어 있는 바와 같이 항체 헤테로콘쥬게이트를 형성할 수 있다. 또한, 링커는 표지 및 본 발명의 항체 사이에 사용될 수 있다 (예, US 4,831,175). 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사선활성요오드, 인듐, 이트륨, 또는 본 기술분야에 공지된 기타 방사선활성 입자로 직접 표지될 수 있다 (예, US 5,595,721). 치료제는 치료제와, 동시에 또는 순차적으로 투여된 콘쥬게이트 또는 비(non)콘쥬게이트된 항체의 병용으로 이루어질 수 있다 (예, WO00/52031; WO00/52473).
본 발명의 항체는 또한 고형 지지체에 부착될 수 있다. 추가로, 본 발명의 항체, 또는 이의 기능적 항체 단편은 예를 들어 순환 반감기를 증가시키기 위해 폴리머에 대한 공유 콘쥬게이션에 의해 화학적으로 변성될 수 있다. 폴리머, 및 이들을 펩타이드에 부착시키는 방법의 예는 하기에 나타나 있다: US 4,766,106; US 4,179,337; US 4,495,285 및 US 4,609,546. 일부 구체예에서, 폴리머는 폴리옥시에틸렌화 폴리올 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)로부터 선택될 수 있다. PEG는 실온에서 물에서 가용성이고, 하기 일반식으로 표시된다: R(O--CH2 --CH2)n O--R (여기서, R은 수소, 또는 보호 그룹, 예컨대 알킬 또는 알칸올 그룹일 수 있다). 하나의 구체예에서, 상기 보호 그룹은 1 내지 8개의 탄소를 가질 수 있다. 추가 구체예에서, 상기 보호 그룹은 메틸이다. 부호 n은 양의 정수이다. 하나의 구체예에서, n은 1 내지 1,000이다. 다른 구체예에서, n은 2 내지 500이다. 하나의 구체예에서, PEG는 1,000 내지 40,000의 평균 분자량을 갖는다. 추가 구체예에서, PEG는 2,000 내지 20,000의 분자량을 갖는다. 추가 구체예에서, PEG는 3,000 내지 12,000의 분자량을 갖는다. 하나의 구체예에서, PEG는 적어도 하나의 히드록시 그룹을 갖는다. 다른 구체예에서, PEG는 말단 히드록시 그룹을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 억제제 상에서 유리 아미노 그룹과 반응하도록 활성화되는 말단 히드록시 그룹이다. 그러나, 반응성 그룹의 유형 및 양은 본 발명의 공유 콘쥬게이트된 PEG/항체을 성취하기 위해 변할 수 있다는 것을 이해할 것이다.
수용성 폴리옥시에틸렌화 폴리올은 또한 본 발명에 유용하다. 이들은 폴리옥시에틸렌화 소르비톨, 폴리옥시에틸렌화 글루코스, 폴리옥시에틸렌화 글리세로 (POG) 등을 포함한다. 하나의 구체예에서, POG가 사용된다. 이론에 구속되지 않고, 폴리옥시에틸렌화 글리세롤의 글리세롤 주쇄는, 예를 들어 모노-, 디-, 트리글라세라이드에서 동물 및 인간에서 자연적으로 생기는 동일한 주쇄이기 때문에, 이 분지화는 신체에서 외부 제제로서 반드시 보일 필요는 없다. 일부 구체예에서, POG는 PEG로서 동일한 범위에서 분자량을 갖는다. 순환 반감기를 증가시키기 위해 사용될 수 있는 다른 약물 전달 시스템은 리포좀이다. 리포좀 전달 시스템의 제조 방법은 Gabizon et al. (1982), Cafiso (1981) 및 Szoka (1980)에서 논의된다. 기타 약물 전달 시스템은 본 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 하기 문헌에 기재되어 있다: Poznansky et al. (1980) 및 Poznansky (1984).
본 발명의 항체는 정제된 형태로 제공될 수 있다. 전형적으로, 항체는 기타 폴리펩타이드가 실질적으로 없는 조성물에 존재할 것이고, 예를 들어, 여기서, 조성물의 90% (중량)% 미만, 일반적으로 60% 미만, 더욱 일반적으로 50% 미만이 기타 폴리펩타이드로 구성된다.
본 발명의 항체는 비(non)인간 (또는 이종의) 숙주, 예를 들어 마우스에서 면역성일 수 있다. 특히, 항체는 인간 숙주에서가 아니라 비(non) 인간 숙주에서 면역성인 이디오토프(idiotope)를 가질 수 있다. 인간 사용을 위한 본 발명의 항체은숙주, 예컨대 마우스, 염소, 토끼, 랫트, 비(non) 영장류 등으로부터 쉽게 분리될 수 없는 것들을 포함하고, 인간화에 의해 또는 제노마우스(xeno-mouse)로부터 일반적으로 얻을 수 없다.
본 발명의 항체는 어떤 아이소타입 (예, IgA, IgG, IgM, 즉 α, γ 또는 μ 중쇄)일 수 있지만, 일반적으로 IgG일 것이다. IgG 아이소타입 내에, 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 서브클래스일 수 있다. 본 발명의 항체는 κ 또는 λ 경쇄를 가질 수 있다.
항체의 생성
본 발명에 따른 항체는 본 기술분야에 공지된 방법으로 만들 수 있다. 예를 들어, 하이브리도마 기술을 사용하여 모노클로날 항체를 만드는 일반적인 방법은 공지되어 있다 (Kohler, G. 및 Milstein, C,. 1975; Kozbar et al. 1983). 하나의 구체예에서, WO2004/076677에 기재된 대안적인 EBV 불멸화 방법이 사용된다.
참조문헌 WO2004/076677에 기재된 방법을 사용하여, 본 발명의 항체를 생산하는 B 세포는 폴리클로날 B 세포 활성화제의 존재에서 EBV로 형질전환될 수 있다. EBV에 의한 형질전환은 표준 기술이고, 폴리클로날 B 세포 활성화제를 포함하도록 쉽게 맞출 수 있다.
세포 성장 및 분화의 추가 자극제는 효율을 추가로 향상시키도록 형질전환 단계 동안에 임으로 첨가될 수 있다. 이들 자극제는 사이토카인, 예컨대 IL 2 및 IL-15일 수 있다. 하나의 양상에서, IL-2이 불멸화의 효율을 추가로 향상시키기 위해 불멸화 단계 동안에 첨가되지만, 그의 사용이 필수는 아니다. 그 다음, 이들 방법을 사용하여 생산된 불멸화된 B 세포는 본 기술분야에 공지된 방법 및 그 세포로부터 분리된 항체를 사용하여 배양될 수 있다.
UK 특허출원 0819376.5에 기재된 방법을 사용하여, 단일 형질세포는 마이크로웰 배양 접시에서 배양될 수 있다. 항체는 단일 형질세포 배양으로부터 분리될 수 있다. 또한, 단일 형질세포 배양으로부터, RNA는 추출될 수 있고, 단일 세포 PCR은 본 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 항체의 VH 및 VL 영역은 RT-PCR에 의해 증폭되고, 서열화되며, 그 다음 HEK293T 세포 또는 기타 숙주세포로 형질감염된 발현 벡터로 클로닝된다. 발현 벡터에서의 핵산의 클로닝, 숙주세포의 형질감염(transfection), 형질감염된 숙주세포의 배양 및 생산된 항체의 분리는 본 기술분야의 숙련자에 공지된 어떤 방법을 사용하여 행할 수 있다.
항체는, 필요에 따라, 여과, 원심분리 및 다양한 크로마토그래피 방법, 예컨대 HPLC 또는 친화성 크로마토그래피를 사용하여 추가로 정제될 수 있다. 제약 등급의 항체를 생산하기 위한 기술을 포함하는, 항체, 예를 들어, 모노클로날 항체의 정제 기술은 본 기술분야에 공지되어 있다.
본 발명의 항체의 단편은 효소, 예컨대 펩신 또는 파파인(papain)에 의한 소화를 포함하는 방법, 및/또는 화학 환원에 의한 디설파이드 결합의 절단에 의해 항체로부터 얻을 수 있다. 대안으로, 항체의 단편은 중쇄 또는 경쇄의 서열 일부의 클로닝 및 발현에 의해 얻을 수 있다. 항체 "단편"은 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편을 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 항체의 중쇄 및 경쇄로부터 유도된 단쇄 Fv 단편 (scFv)을 포함하고, 예를 들어 본 발명은 본 발명의 항체로부터 CDR을 포함하는 scFv를 포함한다. 중쇄 또는 경쇄 모노머 및 다이머, 단일 도메인 중쇄 항체, 단일 도메인 경쇄 항체, 및 단쇄 항체, 예를 들어 단쇄 Fv가 또한 포함되며, 여기서, 상기 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 펩타이드 링커에 의해 연결된다.
본 발명의 항체 단편은 1가 또는 다가 상호작용을 부여할 수 있고, 상기에 기재된 바와 같은 다양한 구조로 함유될 수 있다. 예를 들어, scFv 분자는 3가 "트리아바디(triabody)" 또는 4가 "테트라바디(tetrabody)"를 만들도록 합성될 수 있다. scFv 분자는 2가 미니바디가 생기는 Fc 영역의 도메인을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 서열은 다중특이성 분자의 성분일 수 있고, 여기서, 본 발명의 서열은 본 발명의 에피토프, 및 기타 표적에 결합하는 분자의 기타 영역을 표적으로 한다. 예시적인 분자는 비제한적으로 이중특이성 Fab2, 3중특이성 Fab3, 이중특이성 scFv, 및 다이아바디를 포함한다 (Holliger 및 Hudson, 2005, Nature Biotechnology 9: 1126-1136).
분자생물학의 표준 기술은 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 인코딩하는 DNA 서열을 준비하도록 사용될 수 있다. 원하는 DNA 서열은 올리고뉴클레오티드 합성 기술을 사용하여 완전히 또는 부분적으로 합성될 수 있다. 부위 겨냥된 돌연변이생성 및 폴리머라제 사슬 반응 (PCR) 기술은 필요에 따라 사용될 수 있다.
어떤 적당한 숙주세포/벡터 시스템은 본 발명의 항체 분자 또는 이의 단편을 인코딩하는 DNA 서열의 발현을 위해 사용될 수 있다. 박테리아, 예를 들어 대장균, 및 기타 미생물 시스템은 항체 단편, 예컨대 Fab 및 F(ab')2 단편, 특히 Fv 단편 및 단쇄 항체 단편, 예를 들어, 단쇄 Fvs의 발현을 위해 부분적으로 사용될 수 있다. 진핵, 예를 들어 포유류, 숙주세포 발현 시스템은 완전한 항체 분자를 포함하는 더 큰 항체 분자의 생산을 위해 사용될 수 있다. 적당한 포유류 숙주세포는 비제한적으로 CHO, HEK293T, PER.C6, NS0, 골수종 또는 하이브리도마 세포를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체 분자의 생산 방법을 제공하고, 이 방법은 본 발명의 항체 분자를 인코딩하는 DNA로부터 단백질의 발현을 이끄는데 적당한 조건 하에서 본 발명의 핵산을 인코딩하는 벡터를 포함하는 숙주세포를 배양하는 단계 및 항체 분자를 분리하는 단계를 포함한다.
항체 분자는 단지 중쇄 또는 경쇄 폴리펩타이드를 포함할 수 있고, 이 경우에, 단지 중쇄 또는 경쇄 폴리펩타이드 코딩 서열은 숙주세포를 트랩스펙션하도록 사용될 필요가 있다. 중쇄 및 경쇄 모두를 포함하는 생성물을 생산하기 위해, 세포주는 2개의 벡터, 즉 경쇄 폴리펩타이드를 인코딩하는 제1 벡터 및 중쇄 폴리펩타이드를 인코딩하는 제2 벡터로 형질감염될 수 있다. 대안으로, 단일 벡터가 사용될 수 있고, 이 벡터는 경쇄 및 중쇄 폴리펩타이드를 인코딩하는 서열을 포함한다.
대안으로, 본 발명에 따른 항체는 i) 숙주세포에서 본 발명에 따른 핵산 서열을 발현시키는 단계 ⅱ) 발현된 항체 생성물을 분리하는 단계에 의해 생산될 수 있다. 추가로, 이 방법은 ⅲ) 항체를 정제하는 단계를 포함할 수 있다.
형질전환된 B 세포, 배양된 단일 형질세포 및 형질감염 된 HEK293T 세포의 스크리닝
형질전환된 B 세포 및 배양된 단일 형질세포는 원하는 특이성 또는 기능의 항체를 생산하는 것을 위해 스크리닝될 수 있다.
스크리닝 단계는 원하는 특이성 또는 기능을 확인하기 위한 어떤 면역분석, 예를 들어, ELISA, 조직 또는 세포 (형질감염된 세포 포함)의 염색(staining), 중화 분석 또는 수많은 기타 본 기술분야에 공지된 방법 중의 하나에 의해 수행될 수 있다. 분석은 하나 이상의 항원의 단일 인식의 기초에 대해 선택될 수 있고, 또는 예를 들어 항원 결합 항체보다는 항체를 중화시키는 것을 선택하기 위해, 표적 세포, 예컨대 신호전달 케스케이드(cascade), 형태, 성장 속도, 기타 세포에 영향을 미치는 능력, 기타 세포 또는 기타 시약 또는 조건의 변화에 의한 영향에 대한 반응, 분화 상황의 특징을 변화시킬 수 있는 항체를 선택하기 위해 원하는 기능의 추가적인 기초에 대해 선택될 수 있다.
그 다음, 개별적인 형질전환된 B 세포 클론은 포지티브 형질전환된 B 세포 배양으로부터 생산될 수 있다. 포지티브 세포의 혼합물로부터 개별적인 클론을 분리하기 위한 클로닝 단계는 한계 희석, 현미 조작, 세포 분류에 의한 단일 세포 침착 또는 본 기술분야에 공지된 다른 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
배양된 단일 형질세포로부터의 핵산은 본 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 HEK293T 세포 또는 기타 숙주세포에서 분리, 클로닝 및 발현될 수 있다.
본 발명의 불멸화된 B 세포 클론 또는 형질감염된 HEK293T 세포는, 예를 들어 모노클로날 항체의 공급원으로서, 관심 모노클로날 항체를 인코딩하는 핵산 (DNA 또는 mRNA)의 공급원으로서, 연구를 위해 다양한 방식으로 사용될 수 있다.
본 발명은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 2개의 상이한 1그룹 아형 또는 적어도 2개의 상이한 2그룹 아형을 중화시키는 항체를 생산하는 불멸화된 B 기억 세포 또는 형질감염된 숙주세포를 포함하는 조성물을 제공한다.
에피토프
상기에서 언급된 바와 같이, 본 발명의 항체는 결합되는 에피토프를 맵핑하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명자들은, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시키는 항체가 HA 상에서 발견된 에피토프를 향한 것이라는 것을 발견했다. 하나의 구체예에서, 항체는 2개 이상의 인플루엔자 A 바이러스 아형 중에서 보존되는 HA의 줄기 영역 또는 구형 헤드부 영역에서 하나 이상의 에피토프에 대한 것이다. 본 발명의 항체가 결합되는 에피토프는 선형적 (연속) 또는 형태적 (불연속)일 수 있다.
본 발명의 항체에 의해 인식된 에피토프는 수많은 용도를 가질 수 있다. 정제 및 합성 형태의 에피토프 및 이의 미모토프(mimotope)는 면역 반응 (즉, 백신으로서, 또는 기타 용도의 항체의 생성을 위한)을 상승시키기 우해 또는 에피토프 또는 이의 미모토프(mimotope)와 면역반응을 하는 항체의 혈청을 스크리닝하기 위해 사용될 수 있다. 하나의 구체예에서, 그와 같은 에피토프 또는 미모토프, 또는 그와 같은 에피토프 또는 미모토프를 포함하는 항원은 면역 반응을 상승시키기 위해 백신으로서 사용될 수 있다. 본 발명의 항체 및 항체 단편은 또한 백신의 질을 모니터하는 방법에 사용될 수 있다. 특히 항체는, 백신 중의 항원이 정확한 형태로 정확한 면역성 에피토프를 함유하는 지를 검사하기 위해 사용될 수 있다.
에피토프는 또한 상기 에피토프에 결합하는 리간드를 스크리닝하는데 유용할 수 있다. 그와 같은 리간드는 비제한적으로 낙타, 상어 및 기타 종을 포함하는 항체, 항체의 단편, 펩타이드, 파지(phage) 디스플레이 기술 생성물, 압타머(aptamer), 아드넥틴(adnectin) 또는 기타 바이러스성 또는 세포성 단백질의 단편을 포함하고, 에피토프를 차단할 수 있어서, 감염을 방지할 수 있다. 그와 같은 리간드는 본 발명의 범위 내에 포함된다.
재조합 발현
본 발명의 불멸화된 B 세포 클론 또는 배양된 혈장 세포는 또한 이후의 재조합 발현을 위하여 항체 유전자의 클로닝을 위한 핵산 공급원으로 사용될 수 있다. 재조합 공급원으로부터의 발현이, 예컨대 안정성, 재현성, 배양 편의 등의 이유로 인해 B 세포나 하이브리도마로부터의 발현보다 약제학적 목적을 위해 더 일반적이다.
따라서, 본 발명은 (ⅰ) 목적하는 항체를 인코딩하는 B 세포 클론 또는 배양된 단일 혈장 세포로부터 하나 이상의 핵산 (예컨대, 중쇄 및/또는 경쇄 mRNA)을 수득하는 단계; (ⅱ) 상기 핵산을 발현 벡터로 삽입하는 단계; 및 (ⅲ) 목적하는 항체를 숙주세포에서 발현시키기 위해, 상기 벡터를 숙주세포 내로 형질감염시키는 단계를 포함하는, 재조합 세포를 제조하는 방법을 제공한다.
유사하게, 본 발명은 (ⅰ) 목적하는 항체를 인코딩하는 B 세포 클론 또는 배양된 단일 혈장 세포로부터 핵산의 서열을 결정하는 단계; 및 (ⅱ) 목적하는 항체를 숙주세포에서 발현시키기 위해, 단계 (ⅰ)로부터 얻은 정보를 이용하여 숙주세포 내로 삽입하기 위한 핵산을 제조하는 단계를 포함하는, 재조합 세포를 제조하는 방법을 제공한다. 상기 핵산은, 제한효소 부위를 도입하거나, 코돈 빈도를 변화시키고/시키거나 전사 및/또는 번역 조절 서열을 최적화하기 위해, 단계 (ⅰ) 및(ⅱ) 중간에 조작될 수 있으나, 조작되지 않아도 된다.
본 발명은 또한 숙주세포를 목적하는 항체를 인코딩하는 하나 이상의 핵산으로 형질감염시키는 단계를 포함하는, 형질감염된 숙주세포를 제조하는 방법을 제공하며, 여기에서 상기 핵산은 본 발명의 불멸화된 B 세포 클론 또는 배양된 단일 혈장 세포로부터 유래된 핵산이다. 따라서, 일차적으로 핵산을 제조한 다음, 이를 이용하여 숙주세포를 형질감염시키는 과정은 상이한 장소 (예컨대, 상이한 국가)에서 상이한 사람들에 의해 상이한 시점에 수행될 수 있다.
본 발명의 이러한 재조합 세포들은 이후 발현 및 배양 목적을 위해 사용될 수 있다. 이들은 대규모의 의약품 생산을 위한 항체의 발현에 특히 유용하다. 이들은 또한 약제학적 조성물의 활성 성분으로 사용될 수 있다. 임의의 적절한 배양 기법, 예를 들어 정치 배양, 롤러 용기 (roller bottle) 배양, 복수액 (ascites fluid), 실관형 (hollow-fiber type) 생물반응기 카트리지, 모듈 미니발효기 (modular minifermenter), 교반 탱크, 미세담체 (microcarrier) 배양, 세라믹 코어 관류 (ceramic core perfusion) 등이 또한 사용될 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다.
B 세포 또는 혈장 세포로부터 면역글로불린 유전자를 수득하고 서열을 결정하는 방법은 당업계에 널리 알려져 있다 (예컨대, Kuby Immunology, 4th edition, 2000의 제4장 참조).
형질감염된 숙주세포는 효모 및 동물 세포, 특히 포유동물 세포 (예컨대, CHO 세포, NS0 세포, PER.C6 (Jones et al 2003) 또는 HKB-11 (Cho et al. 2001; Cho et al. 2003) 세포와 같은 인간 세포, 골수종 세포 (US 5,807,715; US 6,300,104 등)) 뿐만 아니라 식물 세포를 포함하는 진핵 세포일 수 있다. 바람직한 발현 숙주는 본 발명의 항체를, 특히 인간에서 그 자체로 면역원성이 아닌 탄수화물 구조로 글리코실화할 수 있다. 하나의 구체예에서, 형질감염된 숙주세포는 혈청이 없는 배지에서 성장할 수 있다. 추가의 구체예에서, 형질감염된 숙주세포는 동물 유래 산물이 존재하지 않는 배양액 중에 성장할 수 있다. 형질감염된 숙주세포는 또한 배양되어 세포주를 생성할 수도 있다.
본 발명은 (ⅰ) 본 발명에 따라 불멸화된 B 세포 클론을 수득하거나 혈장 세포를 배양하는 단계; 및 (ⅱ) 상기 B 세포 클론 또는 배양된 단일 혈장 세포로부터 목적하는 항체를 인코딩하는 핵산을 수득하는 단계를 포함하는, 목적하는 항체를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 분자 (예컨대, 중쇄 및 경쇄 유전자)를 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 (ⅰ) 본 발명에 따라 불멸화된 B 세포 클론을 제조하거나 단일 혈장 세포를 배양하는 단계; 및 (ⅱ) 상기 B 세포 클론 또는 배양된 혈장 세포로부터 목적하는 항체를 인코딩하는 핵산의 서열을 결정하는 단계를 포함하는, 목적하는 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 수득하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 형질전환된 B 세포 클론 또는 배양된 혈장 세포로부터 수득한 핵산을 수득하는 단계를 포함하는, 목적하는 항체를 인코딩하는 핵산 분자를 제조하는 방법을 제공한다. 따라서, 일차적으로 B 세포 클론 또는 배양된 혈장 세포를 수득한 다음, 상기 B 세포 클론 또는 배양된 혈장 세포로부터 핵산을 얻는 과정은 상이한 장소 (예컨대, 상이한 국가)에서 상이한 사람들에 의해 상이한 시점에 수행될 수 있다.
본 발명은 (ⅰ) 목적하는 항체를 발현하는 선발된 B 세포 클론 또는 배양된 혈장 세포로부터 하나 이상의 핵산 (예컨대, 중쇄 및 경쇄 유전자)을 수득하고/하거나 서열을 결정하는 단계; (ⅱ) 상기 핵산을 삽입하거나 핵산 서열을 이용하여 발현 벡터를 제조하는 단계; (ⅲ) 목적하는 항체를 발현할 수 있는 숙주세포를 형질감염시키는 단계; (ⅳ) 상기 형질감염된 숙주세포를 목적하는 항체가 발현되는 조건하에서 배양하거나 하위배양하는 단계; 및 임의로, (v) 목적하는 항체를 정제하는 단계를 포함하는, 항체 (예컨대, 약제학적 용도용)를 제조하는 방법 을 제공한다.
본 발명은 또한 목적하는 항체가 발현되는 조건하에서 형질감염된 숙주세포 집단을 배양하거나 하위배양하는 단계; 및 임의로, 목적하는 항체를 정제하는 단계를 포함하는, 항체를 제조하는 방법을 제공하며, 여기서, 상기 형질감염된 숙주세포 집단은 (ⅰ) 상기에서 기술한 바와 같이 제조된 B 세포 클론 또는 배양된 혈장 세포에 의해 생산된, 선별된 목적하는 항체를 인코딩하는 핵산을 제공하는 것, (ⅱ) 상기 핵산을 발현 벡터 내로 삽입하는 것, (ⅲ) 상기 벡터를 목적하는 항체를 발현할 수 있는 숙주세포로 형질감염시키는 것, 및 (ⅳ) 상기 삽입된 핵산을 포함하는 형질감염된 숙주세포를 배양하거나 하위배양하여 목적하는 항체를 생산하는 것에 의해 제조되어 왔다. 따라서, 일차적으로 재조합 숙주세포를 제조한 다음 이를 배양하여 항체를 발현하는 과정은 상이한 장소 (예컨대, 상이한 국가)에서 상이한 사람들에 의해 상이한 시점에 수행될 수 있다.
약제학적 조성물
본 발명은 항체 및/또는 본 발명의 항체 단편 및/또는 그와 같은 항체를 인코딩하는 핵산 및/또는 본 발명의 항체에 의해 인식된 에피토프를 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적 조성물은 또한 투여를 허용하는 약제학적으로 허용가능한 담체를 함유할 수 있다. 담체는 그 자체가 조성물을 수용하는 개체에 해로운 항체의 생성을 유도하지 않아야 하고, 유독성이어서는 안 된다. 적당한 담체는 큰, 느리게 물질대사된 거대분자, 예컨대 단백질, 폴리펩타이드, 리포좀, 폴리사카라이드, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 폴리머 아미노산, 아미노산 코폴리머 및 불활성 바이러스 입자일 수 있다.
약제학적으로 허용가능한 염은 예를 들어 무기산 염, 예컨대 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 포스페이트 및 설페이트, 또는 유기산의 염, 예컨대 아세테이트, 프로피오네이트, 말로네이트 및 벤조에이트일 수 있다.
치료용 조성물 중 약제학적으로 허용가능한 담체는 액체, 예컨대 물, 염수, 글리세롤 및 에탄올을 추가로 함유할 수 있다. 추가로, 보조물, 예컨대 습윤제 또는 에멀젼화제 또는 pH 완충 물질은 그와 같은 조성물에 존재할 수 있다. 그와 같은 담체는, 약제학적 조성물이 대상체에 의한 섭취를 위해, 정제, 환약, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리 및 서스펜션으로 제형되도록 할 수 있다.
본 발명의 범위 내에, 투여 비경구 투여에 적합한 형태, 예를 들어 주사 또는 주입, 예를 들어 볼러스(bolus) 주사 또는 연속 주입을 포함할 수 있다. 생성물이 주사 또는 주입용인 경우, 오일성 또는 수성 비이클(vehicle) 중 서스펜션, 용액 또는 에멀젼의 형태를 취할 수 있고, 제형 제제, 예컨대 현탁화제, 보존제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 대안으로, 항체 분자는 적절한 살균액과 함께 사용하기 전에, 재구성을 위해 건조 형태일 수 있다.
일단 제형되면, 본 발명의 조성물은 대상체에 직접 투여될 수 있다. 하나의 구체예에서, 조성물은 인간 대상체에 투여를 위해 적응된다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 수질내, 복강내, 수강내, 뇌실내, 경피, 경피, 국소, 피하, 비강, 장(enteral), 설하, 질내 또는 직장 경로를 비제한적으로 포함하는 임의 수의 경로에 의해 투여될 수 있다. 하이포스프레이(Hypospray)는 또한 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하기 위해 사용될 수 있다. 전형적으로, 치료 조성물은 주사가능물질, 예를 들어 액체 용액 또는 서스펜션으로서 제조될 수 있다. 주사 전 액체 비이클 내의 용액, 또는 서스펜션에 적합한 고형 형태가 또한 제조될 수 있다.
조성물의 직접 전달은 일반적으로 주사, 피하, 복강내, 정맥내 또는 근육내로 이루어질 것이고, 또는 조직의 세포 사이의 공간으로 전달될 것이다. 조성물은 또한 병변(lesion)에 투여될 수 있다. 투약 치료는 단일 투약 스케줄 또는 다중 투약 스케줄일 수 있다. 공지된 항체 기잔 제약은 투여의 빈도, 예를 들어 제약이 매일, 매주, 매월 등으로 투여되어야 하는지에 관한 안내를 제공한다. 빈도 및 투약은 증상의 심각도에 좌우될 수 있다.
본 발명의 조성물은 다양한 형태로 조제될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 액체 용액 또는 서스펜션과 같은 주사가능물질로서 제조될 수 있다. 주사 전 액체 비이클 내의 용액, 또는 서스펜션에 적합한 고형 형태가 또한 제조될 수 있다 (예, 동결건조된 조성물, 예를 들어 SynagisTM 및 HerceptinTM, 보존제를 함유하는 살균수에 의한 재구성을 목적으로). 조성물은 국소 투여를 위해, 예를 들어 연고, 크림 또는 파우더로서 제조될 수 있다. 조성물은 경구 투여, 예를 들어 정제 또는 캡슐, 스프레이, 또는 시럽 (임의의 풍미)으로서 제조될 수 있다. 조성물은 미세 파우더 또는 스프레이를 사용하여 예를 들어 흡입기로서 폐 투여를 위해 제조될 수 있다. 조성물은 좌약 또는 페서리(pessary)로서 제조될 수 있다. 조성물은 코, 귀, 또는 점적약과 같은 눈 투여를 위해 제조될 수 있다. 조성물은 대상체에 투여 직전에 조합된 조성물이 재구성되도록 고안된 키트 형태일 수 있다. 예를 들어, 동결건조된 항체는 살균수 또는 살균 완충액을 갖는 키트 형태로 제공될 수 있다.
조성물 내의 활성 성분은 항체 분자, 항체 단편 또는 이의 돌연변이체 및 유도체일 수 있다는 것을 인정할 것이다. 그와 같은 자격으로, 위장관에서 분해가 쉬울 것이다. 따라서, 조성물이 위장관을 사용하는 경로에 의해 투여되어야 한다면, 조성물은, 분해로부터 항체를 보호하지만, 위장관으로부터 흡수되면 항체를 방출하는 제제를 함유할 필요가 있다.
약제학적으로 허용가능한 담체의 철저한 논의는 하기로부터 이용가능하다: Gennaro (2000) Remington : The Science 및 Practice of Pharmacy , 20th edition, ISBN: 0683306472.
본 발명의 약제학적 조성물은 일반적으로 5.5 내지 8.5의 pH를 갖는다. 일부 구체예에서, 이는 6 내지 8이고, 추가 구체예에서는 약 7이다. pH는 완충액의 사용에 의해 유지될 수 있다. 조성물은, 살균이고/이거나 발열물질이 없을 수 있다. 조성물은 인간에 대해 등장(isotonic)일 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 밀봉 용기로 공급된다.
약제학적 조성물은 하나 이상의 본 발명의 항체 및/또는 본 발명의 항체를 결합하는 에피토프를 포함하는 폴리펩타이드의 유효량, 즉 목적 질환 또는 상태를 치료, 경감, 또는 예방하거나 검출가능 치료 효과를 나타내는데 충분한 양을 포함할 것이다. 치료 효과는 또한 신체 증상의 감소를 포함한다. 어떤 특정 대상체에 대한 정확한 유효량은 크기 및 건강, 상태의 본질 및 정도, 및 투여를 위해 선택된 치료제 또는 이의 조합에 좌우될 것이다. 주어진 상황에 대한 유효량은 일상적인 실험에 의해 결정되고 임상의 판단의 범위 내에 있다. 본 발명을 위해, 유효 투여량은 일반적으로 투여되는 개체에서 약 0.01 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 또는 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 본 발명의 조성물일 것이다. 공지된 항체 기반 제약은 이러한 점에서 안내를 제공한다. 예를 들어, HerceptinTM는 초기 부하 용량 4 mg/kg 체중 및 매주 유지 용량 2 mg/kg 체중과 함께 21　mg/ml 용액의 정맥내 주입에 의해 투여되고; RituxanTM는 375 mg/m2로 매주 투여된다.
구체예에서, 조성물은 부가 또는 상승적인 치료 효과를 제공하도록 하나 초과 (예, 2, 3, 4, 5 등)의 본 발명의 항체를 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 조성물은 인플루엔자 A 바이러스에 대항하는 하나 이상 (예, 2, 3, 4, 5 등)의 본 발명의 항체 및 하나 이상 (예, 2, 3, 4, 5 등)의 추가 항체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 하나의 항체는 HA 에피토프에 결합할 수 있지만, 다른 항체는 HA 상의 상이한 에피토프 (예를 들어, 하나는 줄기 영역에서 에피토프에 결하할 수 있고, 한편, 다른 하나는 구형 헤드부 영역에서 에피토프에 결합할 수 있음), 또는 뉴라민산분해효소 및/또는 매트릭스 단백질 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 또한, 인플루엔자 백신, 또는 인플루엔자 A 바이러스 이외의 특이성의 항체와 함께하는 본 발명의 항체의 투여는 본 발명의 범위 내이다. 본 발명의 항체는 인플루엔자 A 백신 또는 인플루엔자 A 바이러스 이외의 특이성의 항체로부터 병용으로/동시에 또는 별도로 투여될 수 있다.
다른 구체예에서, 본 발명은 2개 이상의 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 여기서, 상기 제 1 항체는 본 발명의 항체이고 HA 에피토프에 대해 특이적이고, 상기 제 2 항체는 뉴라민산분해효소 에피토프, 제2 HA 에피토프 및/또는 매트릭스 에피토프에 대해 특이적이다. 예를 들어, 본 발명은 2개 이상의 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 여기서, 상기 제 1 항체는 본 발명의 항체이고 인플루엔자 A 바이러스 HA의 줄기에서 에피토프에 대해 특이적이고, 상기 제 2 항체는 뉴라민산분해효소 에피토프, HA의 구형 헤드부에서 에피토프, HA의 줄기에서 제2 에피토프, 및/또는 매트릭스 에피토프에 대해 특이적이다. 인플루엔자 A 바이러스 HA 의 줄기에서 제2 에피토프 또는 구형 헤드부에서 하나 초과의 인플루엔자 A 바이러스 아형 중에서 보존될 수 있지만 그럴 필요는 없다.
다른 예에서, 본 발명은 2개 이상의 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 여기서, 상기 제 1 항체는 본 발명의 항체이고 인플루엔자 A 바이러스 HA의 구형 헤드부에서 에피토프에 대해 특이적이고, 상기 제 2 항체는 뉴라민산분해효소 에피토프, HA의 줄기에서 에피토프, 제2 HA의 구형 헤드부에서 에피토프 및/또는 매트릭스 에피토프에 대해 특이적이다. 구형 헤드부에서 제2 에피토프 또는 인플루엔자 A 바이러스 HA의 줄기에서 에피토프는 하나 초과의 인플루엔자 A 바이러스 아형 중에서 보존될 수 있지만 그럴 필요는 없다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 2개 이상의 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 여기서, 상기 제 1 항체는 뉴라민산분해효소 에피토프에 대해 특이적이고, 상기 제 2 항체는 제2 뉴라민산분해효소 에피토프, HA 에피토프 및/또는 매트릭스 에피토프에 대해 특이적이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 2개 이상의 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 여기서, 상기 제 1 항체는 매트릭스 에피토프에 대해 특이적이고, 상기 제 2 항체는 제2 매트릭스 에피토프, HA 상의 에피토프 및/또는 뉴라민산분해효소에 대해 특이적이다.
하나의 구체예에서, 인플루엔자 A 바이러스 표적 단백질에 대해 특이적인 본 발명의 항체는 비제한적으로 FB54, FB139, FC6, FC41, FE43, FE53, FE17, FB75, FB110, FB177, FB79, FC1c, FB118, FB179, FB186, FE9b, FE25, FE54, FG20, FB15b 또는 FC54을 포함하고. 다른 구체예에서, 인플루엔자 A 바이러스 표적 단백질에 대해 특이적인 본 발명의 항체는 비제한적으로 FB54, FB139, FC6, FC41, FE43, FE53, FE17, FB75, FB110, FB177, FB79 또는 FC1c를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명은 항체 FB54 돌연변이체 1 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FB139 돌연변이체 2 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FC6 돌연변이체 1 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FC41 돌연변이체 2 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FE43, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FE53, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FE17, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FB75, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FB110, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 본 발명은 항체 FB177, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FB79, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 항체 FC1c, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 항체는 기타 치료제, 예를 들어 화학치료 화합물, 방사선치료 등과 함께 (병용으로 또는 별개로) 투여될 수 있다. 하나의 구체예에서, 치료 화합물은 항-바이러스 화합물, 예컨대 TamifluTM를 포함한다. 그와 같은 병용 치료는, 단독으로 투여될 때의 개별적인 치료제에 대해 치료 효능의 부가 또는 상승적인 개선을 제공한다. 용어 "상승작용"은, 활성제 각각의 개별적인 효과의 합보다 더 큰 2개 이상의 활성제의 병용 효과를 묘사하기 위해 사용된다. 따라서, 2개 이상의 제제의 병용 효과가 활성 또는 공정의 "상승적인 억제"로 귀결되는 경우에, 활성 도는 공정의 억제는 활성제 각각의 억제 효과의 합보다 더 큰 것으로 의도된다. 용어 "상승적인 치료 효과"란 2개 이상의 치료제의 병용으로 관찰된 치료 효과를 의미하고, 여기서, 치료 효과 (수많은 파라미터 중 어떤 것으로 측정)는 개별적인 치료제 각각으로 관찰된 개별적인 치료 효과의 합보다 더 크다.
항체는 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료에 대한 반응을 이전에는 보여주기 않은, 즉 항-인플루엔자 A 치료에 대해 굴절력이 있는 것으로 보여진 대상체에 투여될 수 있다. 그와 같은 치료는 항-바이러스제에 의한 이전의 치료를 포함할 수 있다. 이는 예를 들어 인플루엔자 A 바이러스의 항-바이러스 저항성 긴장에 의한 감염에 기인할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 본 발명의 항체를 포함할 수 있고, 여기서, 항체는 조성물 중 총 단백질의 적어도 50 중량% (예, 60 중량%, 70 중량%, 75 중량%, 80 중량%, 85 중량%, 90 중량%, 95 중량%, 97 중량%, 98 중량%, 99% 또는 그 초과로 된다. 그와 같은 조성물에서, 항체는 정제된 형태이다.
본 발명은 (ⅰ) 본 발명의 항체를 제조하는 단계; 및 (ⅱ) 정제된 항체를 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합하는 단계를 포함하는 제약의 제조 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 항체를 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합하는 단계를 포함하는 제약의 제조 방법을 제공하고, 여기서, 상기 항체는 본 발명의 형질전환된 B 세포 또는 배양된 형질세포로부터 얻은 모노클로날 항체이다. 따라서 먼저 모노클로날 항체를 얻고, 그 다음, 제약을 제조하는 절차는 상이한 곳 (예, 상이한 국가)에서 상이한 사람들에 의해 매우 상이한 시간에서 수행될 수 있다.
치료 목적을 위한 항체 또는 B 세포의 전달의 대안으로서, B 세포 또는 배양된 형질세포로부터 유도된 관심 모노클로날 항체 (또는 이의 활성 단편)을 인코딩하는 핵산(전형적으로 DNA) 을 대상체에 전달할 수 있고, 이로써, 핵산은 원하는 치료 효과를 제공하도록 원위치 대상체에서 발현될 수 있다. 적당한 유전차 치료 및 핵산 전달 벡터는 본 기술분야에 공지되어 있다.
본 발명의 조성물은 면역성 조성물일 수 있고, 일부 구체예에서, 본 발명의 항체에 의해 인식된 에피토프를 포함하는 항원을 포함하는 백신 조성물일 수 있다. 본 발명에 따른 백신은 예방적 (즉, 감염 예방) 또는 치료적 (즉, 감염 치료)일 수 있다.
조성물은, 툭히 다중 투약 형식으로 포장된다면, 항미생물을 포함할 수 있다. 세정제, 예를 들어 Tween (폴리소르베이트), 예컨대 Tween 80를 포함할 수 있다. 세정제는 일반적으로 낮은 수준, 예를 들어 <0.01%으로 존재할 수 있다. 조성물은 또한 강장(tonicity)을 제공하기 위해 나트륨 염 (예, 염화나트륨)을 포함할 수 있다. 10±2 mg/ml NaCl의 농도가 전형적이다.
또한, 조성물은, 동결건조될 수 있거나, 동결건조된 물질로부터 재구성된 물질을 포함할하면, 예를 들어 약 15-30 mg/ml (예, 25 mg/ml)로 당 알콜 (예, 만니톨) 또는 이당류 (예, 수크로오스 또는 트레할로오스)를 포함할 수 있다. 동결건조를 위한 조성물의 pH는 동결건조 전에 약 6.1로 조정될 수 있다.
본 발명의 조성물 또한 하나 이상의 면역조절제를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 하나 이상의 면역조절제는 보조약(adjuvant)을 포함한다.
본 발명의 에피포트 조성물은 인플루엔자 A 바이러스 감염에 효과적으로 초점을 맞추기 위해 인간 면역 반응뿐만 아니라 세포 매개된 면역 반응 모두를 유도할 수 있다. 이 면역 반응은 인플루엔자 A 바이러스에 노출시 빨리 반응할 수 있는 항체 및 세포 매개된 면역을 장기간 지속하는 (예, 중화시키는) 것을 유도할 수 있다.
의학적 치료 및 용도
본 발명의 항체 및 항체 단편 또는 이의 유도체 및 돌연변이체는 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료, 인플루엔자 A 바이러스 감염의 예방 또는 인플루엔자 A 바이러스 감염의 진단을 위해 사용될 수 있다.
진단 방법은 항체 또는 항체 단편을 샘플과 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 그와 같은 샘플은, 예를 들어 콧구멍, 부비강(sinus caⅵty), 침샘, 폐, 간, 췌장, 신장, 귀, 눈, 태반, 소화관, 심장, 난소, 뇌하수체, 부신, 갑상선, 뇌 또는 피부로부터 취한 조직 샘플일 수 있다. 진단 방법은 또한 항원/항체 복합체의 검출을 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명은 치료에 사용하기 위한 (ⅰ) 본 발명에 따른 항체, 항체 단편, 또는 이의 돌연변이체 및 유도체, (ⅱ) 본 발명에 따른 불멸화된 B 세포 클론, (ⅲ) 본 발명의 항체를 결합할 수 있는 에피토프 또는 (ⅳ) 본 발명의 항체를 결합하는 에피토프를 결합할 수 있는 리간드, 바람직하게는 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 대상체에, 본 발명에 따른 항체, 항체 단편, 또는 이의 돌연변이체 및 유도체, 또는 본 발명의 항체를 결합하는 에피토프를 결합할 수 있는 리간드, 바람직하게는 항체를 투여하는 것을 포함하는 대상체의 치료 방법을 제공한다. 하나의 구체예에서, 상기 방법으로 대상체의 인플루엔자 A 바이러스 감염이 감소하게 된다. 다른 구체예에서, 상기 방법은 대상체의 인플루엔자 A 바이러스 감염을 예방하고, 그 위험을 감소시키고 또는 그 감염을 지연시킨다.
본 발명은 또한 인플루엔자 A 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 의약의 제조에서의, (ⅰ) 본 발명에 따른 항체, 항체 단편, 또는 이의 돌연변이체 및 유도체, (ⅱ) 본 발명에 따른 불멸화된 B 세포 클론, (ⅲ) 본 발명의 항체를 결합할 수 있는 에피토프, 또는 (ⅳ) 본 발명의 항체를 결합할 수 있는 에피토프에 결합하는 리간드, 바람직하게는 항체의 용도를 제공한다.
본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 조성물을 제공한다. 또한, 대상체의 치료 및/또는 대상체의 진단용 의약의 제조에서의, 그와 같은 항체가 결합되는 에피토프를 포함하는 본 발명의 항체 및/또는 단백질의 용도를 제공한다. 또한, 대상체에 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체의 치료 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 대상체는 인간일 수 있다. 치료의 효능을 검사하는 하나의 방법은 본 발명의 조성물의 투여 후에 질환 증상을 모니터하는 것을 수반한다. 치료는 단일 투약 스케줄 또는 다중 투약 스케줄일 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명에 따른 항체, 항체 단편, 불멸화된 B 세포 클론, 에피토프 또는 조성물은 그와 같은 치료가 필요한 대상체에 투여된다. 그와 같은 대상체는 예를 들어, 면역타협된(immunocompromised) 대상체를 포함하는, 특히 인플루엔자 A 바이러스 감염의 위험이 있거나 쉬운 대상체를 비제한적으로 포함한다. 항체 또는 본 발명의 항체 단편은 또한 수동적인 면역 또는 활성 백신접종에 사용될 수 있다.
본 발명에 기재된 항체 및 이의 단편은 또한 인플루엔자 A 바이러스 감염의 진단용 키트에 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체를 결합할 수 있는 에피토프는 보호 항-인플루엔자 A 바이러스 항체의 존재를 탐지하여 백신접종 절차의 효능을 모니터하기 위한 키트에 사용될 수 있다. 본 발명에 기재된 바와 같은 항체, 항체 단편, 또는 이의 돌연변이체 및 유도체는 또한 원하는 면역원성을 갖는 백신 제품을 모니터하기 위한 키트에 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 모노클로날 항체를 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합하는 단계를 포함하는 제약의 제조 방법을 제공하고, 여기서, 상기 모노클로날 항체는 본 발명의 형질감염된 숙주세포로부터 얻은 모노클로날 항체이다. 따라서, 먼저 모노클로날 항체를 얻고 (예, 이를 발현시킴 및/또는 그것을 정제함), 그 다음 그 항체를 약제학적 담체(들)과 혼합시키는 절차는 상이한 곳 (예, 상이한 국가)에서 상이한 사람들에 의해 매우 상이한 시간에서 수행될 수 있다.
본 발명의 형질전환된 B 세포나 배양된 혈장 세포로 시작하여, 다양한 배양, 하위 배양 (sub-culturing), 클로닝, 하위 클로닝 (sub-cloning), 서열분석, 핵산 준비 등의 단계들은 형질전환된 B 세포나 배양된 혈장 세포에 의해 발현된 항체를 지속시키기 위해 각 단계에서 임의의 최적화 과정과 함께 수행될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 상기 방법은 항체를 인코딩하는 핵산에 적용되는 최적화 기법 (예컨대, 친화력 성숙 (affinity maturation) 또는 최적화)을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명은 상기 단계 중에 사용 및 제조된 모든 세포, 핵산, 벡터, 서열, 항체 등을 포함한다.
이들 방법 모두에서, 발현 숙주에 사용되는 핵산은 특정 핵산 서열을 삽입하거나, 결실시키거나 수정하도록 조작될 수 있다. 그러한 조작으로 인한 변화로는 제한효소 부위를 도입하거나, 코돈 빈도 (codon usage)를 수정하거나, 전사 및/또는 번역 조절 서열을 최적화하는 등의 변화를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 또한 핵산을 바꾸어 인코딩된 아미노산을 변경시킬 수도 있다. 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 내로 하나 이상의 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 등) 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 도입하는 것이 유용할 수 있다. 그러한 점 돌연변이 (point mutation)는 작용 기능 (effector function), 항원 결합 친화력, 번역후 변형, 면역원성 등을 변형시키거나, 공유 그룹 (예컨대, 라벨)의 부착을 위해 아미노산을 도입하거나, 태그 (tag)(예컨대, 정제 목적을 위함)를 도입할 수 있다. 돌연변이는 특정 부위에 도입되거나 무작위로 도입된 다음, 선별 (예컨대, 분자 진화 (molecular evolution))될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체의 CDR 영역, 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역 중 어느 하나를 인코딩하는 하나 이상의 핵산이 무작위로 또는 지정되어 돌연변이되어 상기 인코딩된 아미노산에 상이한 특성을 도입할 수 있다. 그러한 변화는 초기 변화가 유지되고 다른 뉴클레오타이드 위치에 새로운 변화가 도입되는 반복적인 과정의 결과일 수 있다. 더욱이, 독립된 단계에서 달성된 변화들이 결합될 수 있다. 인코딩된 아미노산에 도입된 상이한 특성으로는 친화력 증가를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
개괄
용어 "포함하는"은 "함유하는" 뿐만 아니라 "이루어지는"을 포함하며, 예컨대 X를 "포함하는" 조성물은 배타적으로 X만으로 이루어질 수 있거나 부가적인 것, 예컨대 X + Y를 포함할 수 있다.
단어 "실질적으로"는 "완전히"를 배제하지는 않으며, 예컨대 Y가 "실질적으로 없는" 조성물은 Y가 완전히 없을 수 있다. 필요한 경우, 단어 "실질적으로"는 본 발명의 정의로부터 생략될 수 있다.
수치 χ와 관련된 용어 "약"은, 예를 들어 χ±10%를 의미한다.
본원에 사용된 용어 "질환"은, 용어 "장애" 및 "상태"(의학적 상태로서)와 일반적으로 같은 의미인 것으로 의도되며 상호교환적으로 사용되는데, 이들 모두 정상적인 기능을 손상시키는, 인간이나 동물의 신체 또는 그 일부 중 하나의 비정상적인 상태를 반영하고, 구별되는 징후 및 증상에 의해 통상적으로 나타나며, 인간이나 동물의 수명 또는 삶의 질을 감소시킨다는 점에서 그러하다.
본원에 사용된 바와 같이, 대상 또는 환자의 "치료"에 대한 언급에는 예방 및 치료요법을 포함하는 것으로 의도된다. 용어 "대상" 또는 "환자"는 상호교환적으로 사용되며 인간을 포함한 모든 포유동물을 의미한다. 대상의 예로는 인간, 소, 개, 고양이, 말, 염소, 양, 돼지 및 토끼를 포함한다. 하나의 구체예에서, 상기 환자는 인간이다.
실시예
본 발명의 예시적 구체예가 하기의 실시예에 제공된다. 하기 실시예는 단지 예시로써 통상의 기술을 가진 자가 본 발명을 사용하는 것을 돕기 위해 제공되는 것이다. 실시예는 어떤 식으로든 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것은 아니다.
실시예 1: 불멸화된 B 세포의 생성 및 인플루엔자 A 바이러스에 대한 이질아형 항체의 동정
건강한 지원자들에게 계절성 인플루엔자 백신을 접종하였다. 백신접종 후 초기 (2주)에, 모든 공여자들의 혈장에서 백신 특이적 IgG 항체 역가가 증가하였다. 발생 가능한 이종 항체 반응을 감지하기 위하여, 혈청을 대상으로 A/VN/1194/04 유래의 H5 HA를 갖는 슈도타입을 중화시키는 이들의 능력을 시험하였다. 주목할만하게도, 몇몇 공여자들은 증강전(pre-boost) 이질아형 혈청 중화 활성을 나타내었는데, 이는 백신접종에 의해 증강되어 일부 개인에서는 20,000까지의 높은 IC50에 달하였다(데이터 미제시). 이러한 결과들은 일부 개인이 인플루엔자 백신에 의해 회상될 수 있는 H1 및 H5 HA에 공통적인 보존된 에피토프에 특이적인 기억 B 세포를 갖는다는 것을 제시한다.
다클론 수준에서 관찰된 이질아형 항체 반응을 규명하기 위하여, 백신접종시 가장 강력한 H5-중화 반응을 시작한 4명의 공여자로부터 백신접종 2주 후에 회수한 냉동보존된 말초혈액단핵세포(PMBC)로부터 기억 B 세포를 분리하였다. CpG 올리고데옥시뉴클레오타이드 2006 및 방사능처리된 동종이계의(allogeneic) PMBC의 존재하에 EBV로 CD22+ IgM-, IgD-, IgA-, IgG+ 기억 B 세포를 불멸화시켰다. 2주 후, 배양 상등액을 대상으로 H5-슈도타입 중화 항체의 존재를 스크리닝하였다. 양성 배양물을 감염성 H1N1 바이러스 (A/SI/3/2006)로 수행된 결합 및 중화 분석을 이용하여 추가로 시험하였다. H5-슈도타입 및 H1N1 바이러스 중화에 대하여 양성을 기록한 배양물을 하위클로닝하고 추가 규명을 위해 항체를 친화성 크로마트그래피로 정제하였다.
1차 스크리닝으로부터 본 발명자들은, ELISA에서 H1 및 H5 HA에 결합하고 H5-슈도타입 (H5pp) 및 H5N1, H1N1, H3N2 및 H9N2 감염성 바이러스를 중화시키는 상이한 능력을 나타낸 18가지의 단일클론 항체를 분리하였다 (표 4).
[표 4]
Figure pct00004

(1) 상이한 항체 농도를 H5-슈도타입과 함께 배양하고 기술된 바와 같이 HEK293T 세포에 첨가하였다 (Temperton, et al., Emerg Infect Dis 11, 411-416, 2005). 3일째에 루시퍼라아제 활성을 측정하였다.
(2) 상이한 항체 농도를 상온에서 1시간 동안 100 TCID50의 바이러스와 함께 배양하고 MDCK 세포의 단일층에 첨가하였다. 세포 단일층을 2-3일간 더 배양하고 세포변성효과(cytopathic effect, CPE)를 조사하였다. 중화 역가는 MDCK 세포에 대한 100 TCID50의 적절한 야생형 바이러스의 감염력이 웰 중 50%에서 완전히 중화되는 가장 낮은 항체 농도의 역수로 정의하였다. 감염력을 4일째에 CPE의 존재에 의해 확인하고 역가를 Reed-Muench 방법에 의해 산출하였다.
(3) H1 특이적 항체 (FA6 및 FC98)를 대조군으로 포함시켰다.
2차 스크리닝으로부터 본 발명자들은 8개의 추가적인 단일클론 항체를 분리하였다. 1차 스크리닝에서 분리된 13개의 항체와 더불어, 이들 항체를 대상으로 상이한 인플루엔자 A 바이러스 아형 유래의 HA에 대한 결합을 추가로 규명하였다 (표 5).
[표 5]
Figure pct00005

이후 항체를 슈도타입 중화 분석에서 기능적으로 규명하였다 (표 6). 대부분의 항체는 분기군(clade) 0, 1, 2.1, 2.2 및 2.3을 대표하는 모든 H5 슈도타입에 대해 광범위한 중화 패턴을 나타내었다. FB54, FB110, FC6, FC41 및 FE43과 같은 일부 항체는 매우 강력하였는데, 이들이 0.4 μg/ml 미만의 IC90 값으로 슈도타입을 중화시켰기 때문이다. 이러한 데이터는 분리된 인간 항체 중 몇몇이 항원적으로 다른 H5 슈도타입에 대해 광범위하고 강력한 중화 활성을 갖는다는 것을 입증한다.
[표 6]
Figure pct00006

다음으로, 항체를 대상으로 1그룹 및 2그룹 아형에 속하는 인간 및 조류 감염성 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 이들의 능력을 시험하였다 (표 7A, 7B). 대부분의 항체는 상당한 범위의 바이러스 중화를 나타내었고, 1그룹 아형, 즉 H1N1, H2N2, H5N1, H6N1 및 H9N2에 속하는 둘 이상의 인플루엔자 A 바이러스를 중화시킬 수 있었다.
[표 7a]
Figure pct00007

[표 7b]
Figure pct00008

선발된 세가지의 줄기 특이적 (하단 참조) 항체 (FE43, FC41 및 FB110) 및 구형 헤드부 특이적 (하단 참조) 항체 (FE17)를 수십년의 항원 진화를 걸쳐온 그리고 오고 최근의 전염병 바이러스 A/CA/07/09를 포함하는 인간 및 동물 H1N1 바이러스의 패널에 대해 시험하였다(표 8). FE17은 6가지 바이러스 중 4가지를 중화시켰고, FB110, FC41 및 FE43은 전염병 A/CA/07/09 계통(strain)을 포함하는 6가지의 모든 H1N1 분리물을 중화시켰다. 종합하면, 이러한 결과는 분리된 이질아형 중화 항체의 능력이 인플루엔자 A 바이러스의 항원 진화에 둔감함을 보여준다.
[표 8]
Figure pct00009

실시예 2: 이질아형 중화 항체에 의한 항원 부위 및 VH -유전자 사용
분리된 항체가 HA1 또는 HA2 상에 위치한 에피토프에 결합하는지 여부를 이해하고자, 본 발명자들은 H5N1 A/VN/1194/04 바이러스로부터 유래한 재조합 HA를 이용하여 웨스턴 블롯 (WB)을 수행하였다. 항체 중 어느 것도 WB에서 반응하지 않았는데, 이는 항체들이 입체형태적 에피토프를 인식할 수 있다는 것을 제시한다. 그러므로, 본 발명자들은 HA 분자에 비가역적인 입체형태적 변화를 촉발시키는 pH 5.0에서 처리전과 처리후 HA-형질감염된 (A/VN/1194/04) HEK293T 세포에 대한 항원 결합을 평가하였다. FE17 하나만 제외하고는, 모든 항체는 H5 형질감염된 대조군 세포를 염색하였지만 산처리된 세포와 반응하지 못하였다. 에피토프 결합과 관련하여 어떤 특정 이론에 구속됨이 없이 상기 결과들은 이들이 산 처리시 소실되는 융합전 결정부위에 결합함을 제시한다 (표 9).
항체가 결합하는 항원 부위의 확인을 추가로 분석하기 위해, 본 발명자들은 알려진 에피토프 특이성을 갖는 참조 항체의 결합을 방해하는 항체의 능력을 측정하였다: i) C179, HA의 줄기 내 에피토프에 결합하는 마우스 단일클론 항체 (Okuno et al., 1993), 및 ⅱ) FLD21, HA 구형 헤드부에 결합하는 인간 H5 HA 특이적 단일클론 항체. ELISA 플레이트를 재조합 삼량체 H5 HA (A/VN/1203/04)로 코팅하고 과량의 인간 항체와 함께 상온에서 1시간 동안 배양한 후, 제한된 농도의 C179 또는 FLD21를 첨가하고, 이를 특이적 이차 시약으로 검출하였다. FE17 하나만 제외하고는, 모든 항체들이 H5 HA에 대한 결합을 위해 C179와 충분히 경쟁하는 반면, 이들은 FLD21의 결합에 영향을 미치지 않았다 (표 9). 상반되게, FE17은 HA 결합을 위해 FLD21과 경쟁하였지만 C179 결합에는 영향을 미치지 않았다. 이러한 발견은 FE17이 구형 헤드부에 있는 에피토프에 결합하는 반면, 다른 모든 이질아형 항체는 시험관내 H5 HA 분자상의 C179 에피토프와 중첩되는 HA 줄기 영역 내에 위치하는 에피토프에 결합한다는 것을 보여준다.
[표 9]
Figure pct00010

분리된 이질아형 중화 항체의 이질성(heterogeneity)을 추가로 분석하기 위해, 본 출원인들은 Ig 유전자의 서열을 결정하였다. 14가지의 항체는 VH1-69 생식세포 서열을 사용하였고, 이는 상이한 VL과 접합되었다 (표 10). 다른 항체는 VL2-23과 접합된 VH3-23 또는 VL1-44과 접합된 VH4-39를 사용하였다.
[표 10]
Figure pct00011

반응성 패턴과 VH-유전자 사용에 근거할 때, 상기 결과들은 1유형, 2유형 및 3유형으로 명명된 세 가지 유형의 이질아형 항체의 분리와 일치한다. 에피토프 인식 또는 중화와 관련하여 생식세포 사용에 대한 어떤 특정 이론에 구속됨이 없이, 1유형 항체는 산성 처리시 소실되며 VH1-69 생식세포 서열을 사용하는 HA 줄기 영역에 위치한 입체형태적 에피토프를 인식한다. 2유형 항체는 HA 줄기 영역에 위치한 산에 민감한 입체형태적 에피토프를 인식하지만 VH1-69 생식세포 서열을 사용하지 않는다. 3유형 항체는, FE17에 의해 예시된 바와 같이, H1 및 일부 H5 아형 간에 공통적인 HA 구형 헤드부에 있는 에피토프를 인식한다. 1유형 및 2유형 항체는 H1N1 바이러스에 대해 매우 낮은 적혈구응집반응(hemagglutination) 억제 역가를 나타내며, 이는 이들 항체가 HA 줄기 영역에 결합한다는 개념과 일치한다 (표 11). 대조적으로, 구형 헤드부에 특이적인 항체는 강력한 적혈구응집반응 억제를 나타내었다.
[표 11]
Figure pct00012

실시예 3: 이질아형 중화 항체의 에피토프 특이성
이질아형 중화 항체에 의해 인식되는 에피토프의 지도를 작성하기 위해, 본 발명자들은 인플루엔자 바이러스 A/SI/2/06를 이용하여 바이러스 도피변이(escape mutant)를 분리하고자 하였다. FE17의 존재시 분리한 7가지 도피변이는 구형 헤드부에 점 돌연변이를 가지고 있었다 (H3 번호에 따라, HA1의 145 위치에서 S에서 N으로). 이 발견은 교차-경쟁 데이터와 일치하며, 동일한 위치에서 S에서 P로의 치환을 갖는 A/INDO/5/05 유래의 H5에 결합하는데 FE17이 실패한 것과 일치한다. 대조적으로, 몇 가지 시도에도 불구하고, 본 발명자들은 FE43 및 FB110으로부터 도피변이를 분리하는데 실패하였다. 이러한 발견은 이질아형 항체에 의해 인식된 줄기 영역이 바이러스 적합도(fitness)의 소실이 없이는 돌연변이 가능성이 더 낮다는 것을 제시한다.
실시예 4: 생체내에서 인간 항체의 예방 효능
시험관내에서 항체에 의해 나타난 중화 활성이 이들의 생체내 예방 효능을 예측할지 여부를 결정하기 위해, BALB/c 마우스에 25 또는 2.5 mg/kg의 FE17, FE43 또는 대조군 항체로 복강내 (i.p)로 수동으로 면역화시키고 24시간 후 50 MLD50 (50 퍼센트 마우스 치사 용량)의 하기의 인플루엔자 바이러스로 면역성테스트를 하였다: H1N1 A/PR/8/34, H6N1 A/teal/HK/W312/97, H5N1 A/VN/1203/04, H5N1 A/INDO/5/05, 또는 H7N7 A/NL/219/03. FE43은 시험된 농도에서 PR8을 이용한 치사량의 면역성테스트로부터 마우스를 보호하는 반면, FE17은 용량 의존적인 방식으로 보호하였는데, 25 mg/kg의 항체를 접종한 마우스에는 100% 보호를 제공하고 2.5 mg/kg으로 주사한 동물에는 80% 보호를 제공하였다 (도 1A). 흥미롭게도, 생체내에서 검출가능한 바이러스 중화 활성이 존재하지 않음에도 불구하고, 25 mg/kg에서 FE43은 치명적인 분기군 I인 A/VN/1203/04 바이러스로부터 모든 마우스를 보호하는 반면, 2.5 mg/kg에서는 단지 일부 보호를 제공하였다 (도　1B). 시험관내 중화 활성에 의해 예측된 바와 같이, FE17의 두 가지 용량 모두 치명적인 H5N1 A/VN/1203/04 바이러스 면역성테스트로부터 마우스를 보호하였다. 분기군 2 H5N1 A/INDO/5/05 바이러스를 이용하여 면역성테스트 후, 가장 높은 FE43 용량에서만 보호가 관찰되었다 (도 1C). 시험관내에서 나타난 중화 활성과 일치하게도, FE43은 시험한 두 가지 용량 모두에서 치명량의 조류 H6N1 A/teal/HK/W312/97 바이러스를 이용한 면역성테스트에 대해 마우스를 완벽하게 보호하였다 (도 1D). 예상된 바와 같이, 상기 항체 중 어느 것도 치명적인 H7N7 A/NL/219/03 바이러스 면역성테스트에 대해 보호를 제공하지 못했다 (도 1E).
치명적이지 않은 H9N2 A/ck/HK/G9/97 바이러스에 대한 생체내 중화활성을 평가하기 위하여, 마우스에 FE43, FE17, 대조군 항체 또는 희족제비 고면역혈청을 복강내로 주사하고 24시간 후 105 TCID50의 H9N2 바이러스로 면역성테스트를 하였다. 감염 후 4일째에 마우스를 희생시키고 폐를 회수하여 복제 바이러스 역가를 측정하였다. 시험관내에서 입증된 중화 활성과 일치하게도, FE43을 주사한 마우스는 폐에서 2-로그 바이러스 복제 감소를 나타낸 반면, 대조군 항체와 어떠한 유의적인 차이도 관찰되지 않았다 (도 1F).
참조문헌
Okuno et al., (1993) Journal of Virology 67: 2552-2558.
Gerhard et al., (2006) Emerging Infectious Diseases 12: 569-574.
Gioia et al., (2008) Emerging Infectious Diseases 14: 121-128.
US 3,766,162
US 3,791,932
US 3,817,837
US 4,233,402
US 4,676,980
US 4,831,175
US 5,595,721
WO00/52031
WO00/52473
US 4,766,106
US 4,179,337
US 4,495,285
US 4,609,546
Gabizon et al., (1982) Cancer Research 42:4734
Cafiso (1981) Biochem Biophys Acta 649:129
Szoka (1980) Ann. Rev. Biophys. Eng. 9:467
Poznansky et al., (1980) Drug Delⅳery Sy줄기s (R.L. Juliano, ed., Oxford, N.Y.) pp. 253-315
Poznansky (1984) Pharm Revs 36:277
Kohler, G. 및 Milstein, C,. 1975, Nature 256:495-497.
Kozbar et al., 1983, Immunology Today 4:72.
WO2004/076677
Chapter 4 of Kuby Immunology (4th edition, 2000; ASIN: 0716733315
Jones et al., Biotechnol Prog 2003,19(1):163-8
Cho et al., Cytotechnology 2001,37:23-30
Cho et al., Biotechnol Prog 2003,19:229-32
US 5,807,715
US 6,300,104
Rowe et al., (1999) J Clin Microbiol 37(4):937-43.
Temperton, et al., (2005). Emerg Infect Dis 11, 411-416.
Smirnov et al., (2000). Arch Virol 145, 1733-1741.
Smirnov et al., (1999). Acta Virol 43, 237-244.
Simmons et al., (2007). PLoS Med 4, e178.
Traggiai et al., (2004). Nat Med 10, 871-875.
<110> Institute For Research In Biomedicine <120> NEUTRALIZING ANTI-INFLUENZA VIRUS ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> HMB0008-402-US <150> 61/181,582 <151> 2009-05-27 <150> 61083838 <151> 2008-07-25 <160> 140 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Val Thr Phe Ser Met Tyr Thr 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Ala 1 5 <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Ala Arg Ala Gly Thr Thr Leu Thr Arg Phe Asn Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gln Thr Val Ser Ser Ser Tyr 1 5 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Gly Ala Ser 1 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 ggagtcacct tcagcatgta tact 24 <210> 8 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 atcatccctc tctttggaac agca 24 <210> 9 <211> 45 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 gcgagagcgg ggactacatt aactagattt aattggttcg acccc 45 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 cagactgtta gcagcagtta c 21 <210> 11 <211> 9 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 ggtgcatcc 9 <210> 12 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 caacagtatg gtaactcacc gtacact 27 <210> 13 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Val Thr Phe Ser Met Tyr 20 25 30 Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Glu Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Gly Thr Thr Leu Thr Arg Phe Asn Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 14 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 15 <211> 367 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc gttgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagt caccttcagc atgtatacta tcagctgggt gcgccaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctc tctttggaac agcaaactac 180 gaacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca catccacgaa cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtat attactgtgc gagagcgggg 300 actacattaa ctagatttaa ttggttcgac ccctggggcc agggaaccct cgtcaccgtc 360 tcctcag 367 <210> 16 <211> 325 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gactgttagc agcagttact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcaa cagtatggta actcaccgta cacttttggc 300 caggggacca agctggagat caaac 325 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Gly Val Thr Phe Ser Met Tyr Ala 1 5 <210> 18 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Thr 1 5 <210> 19 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Ala Arg Ala Gly Thr Thr Val Thr Arg Phe Asn Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr 1 5 <210> 21 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Asp Ala Ser 1 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 23 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 23 ggagtcacct tcagcatgta tgct 24 <210> 24 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 24 atcatccctc tgtttggtac aaca 24 <210> 25 <211> 45 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 25 gcgagagcgg gcactacagt aactagattt aactggttcg acccc 45 <210> 26 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 26 cagagtgtta gcagcagtta c 21 <210> 27 <211> 9 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 27 gatgcatcc 9 <210> 28 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 28 cagcagtatg gtagttcacc gtacact 27 <210> 29 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Ala Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Gln Ser Ser Gly Val Thr Phe Ser Met Tyr 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Glu Gly Arg Leu Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Met Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Gly Thr Thr Val Thr Arg Phe Asn Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 30 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 31 <211> 367 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 31 caggtgcagt tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagg ctgggtcctc ggtgaaagtt 60 tcgtgccagt cttctggagt caccttcagc atgtatgctg tcagctgggt gcgccaggcc 120 cctggtcaag ggcttgagtg gatggggggg atcatccctc tgtttggtac aacaacctac 180 gcacagaagt tcgagggcag actcaccatt accgcggaca catccacgaa catggcatac 240 ctggagctgc gcagcctgag atctgaagac acggccgtat atttctgtgc gagagcgggc 300 actacagtaa ctagatttaa ctggttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctccg 367 <210> 32 <211> 325 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 32 gaagttgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggca aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagttact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca acagggccac tggcatccca 180 gacagattca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gttcaccgta cacttttggc 300 caggggacca agctggagat caaac 325 <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Gly Gly Thr Phe Asn Ser His Ala 1 5 <210> 34 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Ile Ile Pro Met Phe Gly Thr Thr 1 5 <210> 35 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Ala Arg Gly Gln Arg Tyr Tyr Tyr Asp Arg Asp Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 36 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Lys Thr Tyr 1 5 10 <210> 37 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Glu Val Phe 1 <210> 38 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Met Gln Ser Leu Gln Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 39 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 39 ggaggcacct tcaacagcca tgct 24 <210> 40 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 40 attatcccta tgtttggaac aaca 24 <210> 41 <211> 45 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 41 gcgcgagggc agaggtatta ctatgatagg gacggtatgg acgtc 45 <210> 42 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 42 cagagcctcc tgcatagtga tggaaagacc tat 33 <210> 43 <211> 9 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 43 gaagttttc 9 <210> 44 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 44 atgcaaagtt tacaactccc tctcact 27 <210> 45 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Gln Gly Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Ser Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Gly Thr Phe Asn Ser His 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Lys Gly Arg Ile Ala Ile Thr Ala Asp Gln Leu Pro Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gln Arg Tyr Tyr Tyr Asp Arg Asp Gly Met Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 46 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Glu Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Ser Glu Val Phe Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Gln Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 47 <211> 367 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 47 caggggcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagt ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaaga catctggagg caccttcaac agccatgcta tcagctgggt ccgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gattggaggg attatcccta tgtttggaac aacaaactac 180 gcgcagaagt tgaagggcag aatcgcgatt accgcggacc aactcccgac cacagcctac 240 ctggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtct attactgtgc gcgagggcag 300 aggtattact atgataggga cggtatggac gtctggggcc aagggaccat ggtcaccgtc 360 tcctcag 367 <210> 48 <211> 337 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 48 gagattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtgatg gaaagaccta tttgtattgg 120 tacctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct ctgaagtttt caaccggttc 180 tctggagtgc cagataggtt cagtggtagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agccgggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaagttt acaactccct 300 ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaac 337 <210> 49 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Gly Gly Ile Phe Ser Pro Tyr Ala 1 5 <210> 50 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Ile Ile Ala Ile Phe Gly Thr Thr 1 5 <210> 51 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Ala Arg Gly Gly Arg Tyr Tyr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 52 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Gln Ser Ile Ser Ser Gly Tyr 1 5 <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Pro Gln Thr 1 5 <210> 54 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 54 ggaggcatct tcagtccgta tgct 24 <210> 55 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 55 atcatcgcta tctttggtac aaca 24 <210> 56 <211> 39 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 56 gcgagaggcg ggagatacta cgtcgactac tttgactac 39 <210> 57 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 57 cagagtatta gcagcggcta c 21 <210> 58 <211> 9 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 58 ggtgcatca 9 <210> 59 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 59 cagcaatatg gtacctcacc tcagacg 27 <210> 60 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Gln Val Gln Leu Val Gln Pro Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ile Phe Ser Pro Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Ala Ile Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Phe Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Arg Tyr Tyr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ser 115 120 <210> 61 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Pro 85 90 95 Gln Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 62 <211> 361 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 62 caggtgcagc tggtgcagcc tggggctgag gtaaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg catcttcagt ccgtatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgcta tctttggtac aacaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt accgcggaca aatccacgac cacagcctat 240 ctggaactga acagcctgag atttgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggcggg 300 agatactacg tcgactactt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcag cgtctcctca 360 g 361 <210> 63 <211> 325 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 63 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtcggtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtattagc agcggctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcaa gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag caatatggta cctcacctca gacgttcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaac 325 <210> 64 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Gly Gly Pro Phe Ser Gly Phe Ala 1 5 <210> 65 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Ile Ser Ala Val Phe Gly Thr Ala 1 5 <210> 66 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Ala Arg Ser Gly Gly Tyr Leu Pro Gln Asn Asn Trp Ile Asp Pro 1 5 10 15 <210> 67 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Glu Val Ser 1 <210> 68 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Met Gln Asn Ile Leu Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 69 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 69 ggaggcccct tcagcggctt tgct 24 <210> 70 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 70 atctccgctg tctttggcac agca 24 <210> 71 <211> 45 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 71 gcgagatcgg gtggttattt acctcagaac aactggatcg acccc 45 <210> 72 <211> 9 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 72 gaagtttcc 9 <210> 73 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 73 atgcaaaata tactacttcc gctcact 27 <210> 74 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Gly Pro Phe Ser Gly Phe 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Gly Ile Ser Ala Val Phe Gly Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Gln Phe Thr Ser Thr Ser His 65 70 75 80 Met Asp Leu Ser Arg Leu Thr Tyr Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Gly Tyr Leu Pro Gln Asn Asn Trp Ile Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile Val Ser Ser 115 120 <210> 75 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Asn 85 90 95 Ile Leu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 76 <211> 367 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 76 caggtgcacc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaggctc 60 tcttgctcgg cttctggagg ccccttcagc ggctttgcta tcagctggct gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gttgggcggg atctccgctg tctttggcac agcaacctac 180 gcacagaagt tccaggggag agtcaccatt actgcggacc aattcacgag cacatctcac 240 atggacctga gtagactgac atatgacgac acggccgttt attactgtgc gagatcgggt 300 ggttatttac ctcagaacaa ctggatcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcatcgtc 360 tcctcag 367 <210> 77 <211> 337 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 77 gacattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtctagtca gagcctcctg catagtgatg gaaagaccta tttgtattgg 120 tacctgcaga agccaggcca gtctccacaa ctcctgatct atgaagtttc caaccgcttc 180 tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agccgggtgg aggctgagga tgttggtgtt tattactgca tgcaaaatat actacttccg 300 ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaac 337 <210> 78 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Gly Val Thr Ser Ser Asn Tyr Pro 1 5 <210> 79 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Val Leu Pro Leu Phe Gly Val Thr 1 5 <210> 80 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Ala Arg Gly Lys Arg Pro Gly Tyr Cys Ser Gly Gly Val Cys Ser Ser 1 5 10 15 Asp Tyr Trp <210> 81 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 81 Gln Asp Ile Ser Arg Tyr 1 5 <210> 82 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Gln Gln Tyr Gly Tyr Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 83 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 83 ggagtcacgt ccagcaacta tcct 24 <210> 84 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 84 gtcctccctt tgtttggtgt aact 24 <210> 85 <211> 54 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 85 gcgcggggga agagacctgg atattgttct ggtggtgtct gctcatccga ctac 54 <210> 86 <211> 18 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 86 caggacatta gcaggtat 18 <210> 87 <211> 9 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 87 gacgcatcc 9 <210> 88 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 88 caacagtatg gctatctccc tctcact 27 <210> 89 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Val Thr Ser Ser Asn Tyr 20 25 30 Pro Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Val Leu Pro Leu Phe Gly Val Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Arg Pro Gly Tyr Cys Ser Gly Gly Val Cys Ser Ser 100 105 110 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 90 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Gly Tyr Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ser Lys 100 105 <210> 91 <211> 376 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 91 caggtacagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagt cacgtccagc aactatccta taacctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatgggaggg gtcctccctt tgtttggtgt aactaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt tccgcggaca aatccacgaa cacagcctac 240 atggagctga gcagccttag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgggggaag 300 agacctggat attgttctgg tggtgtctgc tcatccgact actggggcca gggaaccctg 360 gtcaccgtct catcag 376 <210> 92 <211> 322 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 92 gacatccaga tgacccagtc tccttcttcc ttgtctgcat ctgtaggaga cagagtcagt 60 atcacatgcc aggcgagtca ggacattagc aggtatttaa attggtatca gcagaaacca 120 ggggaagccc ctaagctcct gatctacgac gcatccaatc tggagacagg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagatattg cgacatattt ctgtcaacag tatggctatc tccctctcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggattccaa ac 322 <210> 93 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Gly Asp Ser Val Thr Arg Gly Gly Phe Tyr 1 5 10 <210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 94 Ile Tyr Tyr Asn Tyr Asn Ile 1 5 <210> 95 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Ala Arg His Tyr Pro Tyr Tyr Asp Leu Pro Thr Gly Phe Tyr Ser Gln 1 5 10 15 Phe Asp Phe <210> 96 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Gly Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr 1 5 <210> 97 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Thr Asn Asn 1 <210> 98 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Gln Leu 1 5 10 <210> 99 <211> 30 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 99 ggtgactccg tcaccagagg cggtttctac 30 <210> 100 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 100 atctattata attacaacat c 21 <210> 101 <211> 57 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 101 gcgagacatt acccgtatta tgatcttccg actggttttt atagtcagtt tgacttc 57 <210> 102 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 102 ggctccaaca tcggaagtaa tact 24 <210> 103 <211> 9 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 103 actaataat 9 <210> 104 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 104 gcggcatggg atgacagcct caatggtcag ctg 33 <210> 105 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Gln Pro Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Val Thr Arg Gly 20 25 30 Gly Phe Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Asn Tyr Asn Ile Tyr His Ser Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Ser Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ala Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg His Tyr Pro Tyr Tyr Asp Leu Pro Thr Gly Phe Tyr Ser 100 105 110 Gln Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 106 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Leu Ser Cys Ser Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Val Phe Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Gln Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 107 <211> 382 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 107 cagccgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaggc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtga ctccgtcacc agaggcggtt tctactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct tgagtggatt gggagcatct attataatta caacatctac 180 cacagcccgt ccctcaagag tcgggtcagt ttgtccgtag acacgtccaa gaaccaggtc 240 tccctgaagc tggcctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagacat 300 tacccgtatt atgatcttcc gactggtttt tatagtcagt ttgacttctg gggccaggga 360 accccggtca ccgtctcctc ag 382 <210> 108 <211> 331 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 108 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctggggccc ccggccagag ggtcaccctc 60 tcttgttctg gaagcggctc caacatcgga agtaatactg ttagctggta ccagcaactc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcgtcttt actaataatc agcggccctc aggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tctgaagatg aggctgatta ttactgtgcg gcatgggatg acagcctcaa tggtcagctg 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtcctg g 331 <210> 109 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala 1 5 <210> 110 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ala Thr 1 5 <210> 111 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111 Ala Lys Glu Gly Gly Asn Thr Ile Phe Gly Leu Val Thr Met Ala Tyr 1 5 10 15 Tyr Phe Asp Ser 20 <210> 112 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 112 Gly Ser Asp Val Gly Ser Ser Asn Leu 1 5 <210> 113 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 113 Glu Val Thr 1 <210> 114 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114 Cys Ser Tyr Ala Gly Ser Ser Ser Ser Arg Val 1 5 10 <210> 115 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 115 ggattcacct ttagtaacta tgcc 24 <210> 116 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 116 ataaatagtg gcggtggtgc caca 24 <210> 117 <211> 60 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 117 gcgaaagagg gcggaaatac gatttttgga ttggttacca tggcgtacta ctttgactcc 60 60 <210> 118 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 118 ggaagtgatg ttgggagttc taacctt 27 <210> 119 <211> 9 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 119 gaggtcact 9 <210> 120 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 120 tgctcatatg caggtagtag cagttccaga gtc 33 <210> 121 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 121 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Ser 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Asn Thr Ile Phe Gly Leu Val Thr Met Ala Tyr 100 105 110 Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 122 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 122 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Gly Ser Asp Val Gly Ser Ser 20 25 30 Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Ile Ile Tyr Glu Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Ser 85 90 95 Ser Ser Ser Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 123 <211> 382 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 123 gaggtgcagt tgttggaatc tgggggaggc ctggtacacc ctggggggtc actgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt aactatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt ataaatagtg gcggtggtgc cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtct 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagagggc 300 ggaaatacga tttttggatt ggttaccatg gcgtactact ttgactcctg gggccaggga 360 accctggtca ccgtctcctc ag 382 <210> 124 <211> 334 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 124 cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60 tcctgcactg gaaccggaag tgatgttggg agttctaacc ttgtctcctg gtaccaacaa 120 cacccagcca aggcccccaa actcataatt tatgaggtca ctaagcggcc ctcaggggtt 180 tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgacaat ctctggactc 240 caggctgagg acgaggctga ttattactgc tgctcatatg caggtagtag cagttccaga 300 gtcttcggaa ctgggaccaa ggtcaccgtc ctag 334 <210> 125 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125 Gly Gly Ile Phe Ile Ser Gln Ala 1 5 <210> 126 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 126 Ile Ile Pro Met Phe Gly Ala Thr 1 5 <210> 127 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 127 Ala Arg Leu Gly Ser Gly Ser Tyr His Asn Gly Pro Asn Trp Phe Asp 1 5 10 15 Pro <210> 128 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 128 ggaggcatct tcatcagcca agct 24 <210> 129 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 129 atcatcccta tgtttggtgc aact 24 <210> 130 <211> 51 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 130 gcgagactcg gttcggggag ttatcataac ggacccaact ggttcgaccc c 51 <210> 131 <211> 124 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 131 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ile Phe Ile Ser Gln 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Gly Ser Gly Ser Tyr His Asn Gly Pro Asn Trp Phe Asp 100 105 110 Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 132 <211> 373 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 132 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg catcttcatc agccaagcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tgtttggtgc aactaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgaa cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgac atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactcggt 300 tcggggagtt atcataacgg acccaactgg ttcgacccct ggggccaggg aaccctggtc 360 accgtctcct cag 373 <210> 133 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 133 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 134 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 134 Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Gln 1 5 <210> 135 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 135 Ala Lys Asp Pro Arg Leu Arg His Leu Leu Tyr Phe Pro Phe Thr Ser 1 5 10 15 Met Ile Tyr Phe Asp Tyr 20 <210> 136 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 136 ggattcacct tcagtagtta tgcc 24 <210> 137 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 137 atatcatatg atggaagtaa tcaa 24 <210> 138 <211> 66 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 138 gcgaaagacc cccgtcttag gcacctgcta tatttcccgt ttacatctat gatttacttt 60 gactac 66 <210> 139 <211> 129 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 139 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Arg Leu Arg His Leu Leu Tyr Phe Pro Phe Thr Ser 100 105 110 Met Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 140 <211> 388 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 140 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggatt caccttcagt agttatgcca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa tcaatattat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacactatat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctttgt attactgtgc gaaagacccc 300 cgtcttaggc acctgctata tttcccgttt acatctatga tttactttga ctactggggc 360 cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 388

Claims (32)

  1. 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 2개의 상이한 1그룹 아형 또는 적어도 2개의 상이한 2그룹 아형의 감염을 중화시키는 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 인플루엔자 A 바이러스 아형은 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, 및 H16으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항체.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 인플루엔자 A 바이러스의 50% 중화에 필요한 항체의 농도는 50 μg/ml 이하인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 인플루엔자 A 바이러스의 50% 중화에 필요한 항체의 농도는 10 μg/ml 이하인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1그룹 아형은 H1, H2, H5 또는 H9인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 2그룹 아형은 H3 또는 H7인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편은 3개, 4개, 5개 또는 그 초과의 아형의 인플루엔자 A 바이러스의 감염을 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  8. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 아형 (ⅰ) H1 및 H2; (ⅱ) H1 및 H5; (ⅲ) H1 및 H9; (ⅳ) H2 및 H5; (v) H2 및 H9; (ⅵ) H5 및 H9; (ⅶ) H3 및 H7; (ⅷ) H1, H2 및 H5; (ⅸ) H1, H2 및 H9; (x) H1, H5 및 H9; 또는 (xi) H1, H2, H5 및 H9의 인플루엔자 A 바이러스의 감염을 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. SEQ ID NO: 1-6, 17-22, 33-38, 49-53, 64-68, 78-82, 93-98, 109-114, 125-127, 또는 133-135 중 어느 하나에 대해 적어도 95% 서열 일치도를 갖는 적어도 하나의 상보성 결정 영역 (CDR) 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 125 및 SEQ ID NO: 133으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 CDR1; SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 126 및 SEQ ID NO: 134로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 127 및 SEQ ID NO: 135로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 CDR3을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 96, 및 SEQ ID NO: 112로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO:　37, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 97, 및 SEQ ID NO: 113으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 98, 및 SEQ ID NO:　114로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 CDR3을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 제 10 항 또는 제 11 항에 있어서, CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 1, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 2, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 3; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 17, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 18, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 19; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 33, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 34, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 35; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 49, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 50, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 51; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 64, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 65, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 66; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 78, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 79, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 80; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 93, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 94, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 95; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 109, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 110, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 111; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 125, CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 126, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 127; 또는 CDRH1에 대한 SEQ ID NO: 133, SEQ CDRH2에 대한 SEQ ID NO: 134, 및 CDRH3에 대한 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제 10 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 4, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 5, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 6; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 20, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 21, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 22; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 36, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 37, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 38; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 52, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 5, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 53; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 36, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 67, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 68; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 81, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 21, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 82; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 96, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 97, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 98; 또는 CDRL1에 대한 SEQ ID NO: 112, CDRL2에 대한 SEQ ID NO: 113, 및 CDRL3에 대한 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 13, 29, 45, 60, 74, 89, 105, 121, 131 또는 139 중 어느 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 서열 일치도를 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 14, 30, 46, 61, 75, 90, 106 또는 122 중 어느 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 서열 일치도를 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  16. 항체는 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 60의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 74의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 표함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 FC41, FE43, FB110 또는 FE17인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 모노클로날 항체, 정제된 항체, 분리된 항체, 단쇄 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 scFv인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항의 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  20. 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료를 위한, 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  21. 불멸화된 B 세포 클론 FB54, FB139, FC6, FC41, FE43, FE53, FE17, FB75, FB110, FB177, FB79, FC1c, FB118, FB179, FB186, FE9b, FE25, FE54, FG20, FB15b 또는 FC54에 의해 발현되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체는 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  22. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자.
  23. 제 22 항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 7-12, 15, 16, 23-28, 31, 32, 39-44, 47, 48, 54-59, 62, 63, 69-73, 76, 77, 83-88, 91, 92, 99-104, 107, 108, 115-120, 123, 124, 128-130, 132, 136-138, 또는 140 중 어느 하나의 핵산 서열과 적어도 75% 동일한 핵산 분자.
  24. 제 22 항 또는 제 23 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  25. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현시키고; 또는 제 24 항의 벡터를 포함하는 세포.
  26. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 결합하는 에피토프를 포함하는 분리 또는 정제된 면역성 폴리펩타이드.
  27. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 제 22 항 또는 제 23 항의 핵산; 제 24 항의 벡터; 제 25 항의 세포; 또는 제 26 항의 면역성 폴리펩타이드; 및 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  28. 제 1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 제 2 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물에 있어서, 상기 제 1 항체는 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항의 항체이며, 상기 제 2 항체는 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시키는 약제학적 조성물.
  29. (ⅰ) 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료용 의약의 제조에서의, (ⅱ) 백신에서의, 또는 (ⅲ) 인플루엔자 A 바이러스 감염의 진단에서의, 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제 22 항 또는 제 23 항의 핵산, 제 24 항의 벡터, 제 25 항의 세포, 제 26 항의 면역성 폴리펩타이드, 또는 제 27 항 또는 제 28 항의 약제학적 조성물의 용도.
  30. 백신의 항원이 정확한 형태로 특이적 에피토프를 함유하는지를 조사하여 항-인플루엔자 A 바이러스 백신의 질을 모니터하기 위한, 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도.
  31. 인플루엔자 A 바이러스 감염을 감소시키거나 인플루엔자 A 바이러스 감염의 위험을 낮게 하는 방법에 있어서, 치료적 유효량의 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 필요한 대상체에 투여하는 것을 포함하는 방법.
  32. (ⅰ) 치료에, (ⅱ) 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료용 의약의 제조에, (ⅲ) 백신으로서, 또는 (ⅳ) 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킬 수 있는 리간드의 스크리닝에 사용하기 위한, 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 특이적으로 결합하는 에피토프.
KR1020117003495A 2008-07-25 2009-07-27 중화 항-인플루엔자 ａ 바이러스 항체 및 이의 용도 KR20110049802A (ko)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8383808P 2008-07-25 2008-07-25
US61/083,838 2008-07-25
US18158209P 2009-05-27 2009-05-27
US61/181,582 2009-05-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20110049802A true KR20110049802A (ko) 2011-05-12

Family

ID=41570664

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020117003526A KR101732056B1 (ko) 2008-07-25 2009-07-27 중화 항-인플루엔자 ａ 바이러스 항체 및 이의 용도
KR1020117003495A KR20110049802A (ko) 2008-07-25 2009-07-27 중화 항-인플루엔자 ａ 바이러스 항체 및 이의 용도

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020117003526A KR101732056B1 (ko) 2008-07-25 2009-07-27 중화 항-인플루엔자 ａ 바이러스 항체 및 이의 용도

Country Status (21)

Country Link
US (2) US9340603B2 (ko)
EP (2) EP2313433A2 (ko)
JP (3) JP5607620B2 (ko)
KR (2) KR101732056B1 (ko)
CN (2) CN102164613B (ko)
AU (2) AU2009275226B2 (ko)
BR (1) BRPI0911699B8 (ko)
CA (2) CA2733218A1 (ko)
CO (1) CO6341572A2 (ko)
CR (2) CR20110079A (ko)
EC (1) ECSP11010823A (ko)
ES (1) ES2662519T3 (ko)
GT (1) GT201100023A (ko)
HK (1) HK1161110A1 (ko)
IL (2) IL210771A0 (ko)
MA (1) MA32577B1 (ko)
MX (2) MX2011000768A (ko)
NZ (2) NZ590891A (ko)
RU (1) RU2553325C2 (ko)
WO (2) WO2010010467A2 (ko)
ZA (2) ZA201101113B (ko)

Families Citing this family (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2222701B1 (en) 2007-12-06 2017-11-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antibodies against influenza virus and methods of use thereof
US8871207B2 (en) 2008-07-25 2014-10-28 Humabs, LLC Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof
NZ590891A (en) * 2008-07-25 2013-03-28 Inst Research In Biomedicine Neutralizing anti-influenza a virus antibodies and uses thereof
CA2849668A1 (en) * 2010-03-08 2011-09-15 Celltrion, Inc. Human monoclonal antibodies derived from human b cells and having neutralizing activity against influenza a viruses
AU2011268072C1 (en) 2010-06-17 2017-10-19 Trellis Bioscience, Llc Antibodies useful in passive influenza immunization
US9534042B2 (en) * 2010-09-03 2017-01-03 Fujita Health University Influenza virus-neutralizing antibody and screening method therefor
WO2012045001A2 (en) * 2010-09-30 2012-04-05 Vanderbilt University Influenza virus antibodies and immunogens and uses therefor
EP2699688A1 (en) 2011-04-20 2014-02-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens
IN2014CN00953A (ko) * 2011-07-14 2015-04-10 Crucell Holland Bv
WO2013011347A1 (en) * 2011-07-18 2013-01-24 Institute For Research In Biomedicine Neutralizing anti-influenza a virus antibodies and uses thereof
CN107417789A (zh) * 2011-07-18 2017-12-01 生物医学学会 中和抗甲型流感病毒抗体及其用途
WO2013020074A2 (en) * 2011-08-03 2013-02-07 Children's Medical Center Corporation A broadly neutralizing human antibody that recognizes the receptor-binding pocket of influenza hemagglutinin
US9512202B2 (en) 2011-08-27 2016-12-06 University Of Zurich Multi-strain-reactive antibodies for therapy and diagnosis of influenza
CA2900712A1 (en) * 2011-09-30 2013-04-04 Celltrion Inc. Binding molecule having influenza a virus-neutralizing activity produced from human b cell
US9321829B2 (en) * 2011-10-18 2016-04-26 Emory University Antibodies directed against influenza
KR20130059721A (ko) * 2011-11-29 2013-06-07 (주)셀트리온 인간 ｂ 세포에서 생산된 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 활성을 가지는 결합 분자
AU2012346669B2 (en) 2011-12-02 2017-08-31 Kling Biotherapeutics B.V. Influenza A virus specific antibodies
JP6371222B2 (ja) * 2011-12-05 2018-08-08 トレリス バイオサイエンス リミテッド ライアビリティー カンパニー インフルエンザの受動免疫用抗体
EP3023790A1 (en) * 2011-12-12 2016-05-25 Novartis AG Assay for influenza virus hemagglutinins
KR101749316B1 (ko) 2011-12-15 2017-06-21 (주) 에이프로젠 Ｈ１ｎ１―감염된 환자들로부터 유도된 매우 잠재력 있는 넓은-스펙트럼 중화 단일클론 항체 및 이를 포함하는 바이러스의 치료용 조성물
RU2502745C2 (ru) * 2011-12-30 2013-12-27 Общество с ограниченной ответственностью "Технофарма" Наноантитело "anti-flu", рекомбинантные вирусные векторы и фармацевтические композиции для профилактики и терапии гриппа типа а
AU2013229488B2 (en) * 2012-03-08 2017-12-07 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Human binding molecules capable of binding to and neutralizing influenza B viruses and uses thereof
US9683030B2 (en) * 2012-05-10 2017-06-20 Massachusetts Institute Of Technology Agents for influenza neutralization
US9969794B2 (en) 2012-05-10 2018-05-15 Visterra, Inc. HA binding agents
CN103665157B (zh) * 2012-09-14 2016-06-29 中国科学院上海生命科学研究院 一种抗流感病毒广谱中和性的中和分子1c4
CN103665155B (zh) * 2012-09-14 2016-07-06 中国科学院上海生命科学研究院 一种抗流感病毒广谱中和性的中和分子1f2
CN103665154B (zh) * 2012-09-14 2016-08-03 中国科学院上海生命科学研究院 一种抗流感病毒广谱中和性的中和分子3c4
CN103665156B (zh) * 2012-09-14 2016-08-03 中国科学院上海生命科学研究院 一种抗流感病毒广谱中和性的结合分子3e1
EP2919813B1 (en) 2012-11-13 2018-10-24 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-hemagglutinin antibodies and methods of use
EP3003373A4 (en) 2013-03-14 2016-10-19 Contrafect Corp COMPOSITION AND METHODS BASED ON INTRANASAL ADMINISTERED NEUTRALIZING ANTIBODIES FOR IMPROVED THERAPEUTIC EFFICIENCY
KR20140118682A (ko) * 2013-03-29 2014-10-08 (주)셀트리온 2 이상의 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 조성물
US9650434B2 (en) 2013-04-02 2017-05-16 Xiamen University Broad-spectrum monoclonal antibody recognizing HA1 domain of hemagglutinin of influenza virus
KR102501920B1 (ko) 2013-10-02 2023-02-20 메디뮨 엘엘씨 중화 항-인플루엔자 a 항체 및 이의 용도
EP3070167A4 (en) * 2013-11-06 2017-06-07 Osaka University Antibody having broad neutralizing activity in group 1 influenza a virus
EP3102598A2 (en) 2014-02-04 2016-12-14 Contrafect Corporation Antibodies useful in passive influenza immunization, and compositions, combinations and methods for use thereof
US10639370B2 (en) 2014-02-04 2020-05-05 Contrafect Corporation Antibodies useful in passive influenza immunization, and compositions, combinations and methods for use thereof
CN104892753B (zh) * 2014-03-07 2019-11-29 神州细胞工程有限公司 一种中和人感染h7n9甲型流感病毒的抗体及其用途
MA44179B1 (fr) 2014-05-13 2020-10-28 Univ Pennsylvania Compositions comprenant un virus adeno-associe exprimant des constructions a double anticorps et leurs utilisations
CA2954518C (en) * 2014-07-14 2024-02-20 The Penn State Research Foundation Compositions and methods for targeting of the surfactant protein a receptor
US10294292B2 (en) 2014-07-15 2019-05-21 Medimmune, Llc Neutralizing anti-influenza B antibodies and uses thereof
WO2016010160A1 (ja) * 2014-07-18 2016-01-21 国立感染症研究所長が代表する日本国 抗インフルエンザウイルス抗体及びその利用
WO2016089181A1 (ko) * 2014-12-05 2016-06-09 (주)셀트리온 1 이상의 인플루엔자 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 애주번트 조성물 및 이를 포함하는 백신 조성물
US20180008702A1 (en) * 2014-12-05 2018-01-11 Celltrion Inc. Adjuvant composition containing at least one influenza virus neutralizing and binding molecule and vaccine composition containing same
TWI702229B (zh) 2014-12-19 2020-08-21 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
US11535665B2 (en) 2015-05-13 2022-12-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV-mediated expression of anti-influenza antibodies and methods of use thereof
MX2017015189A (es) 2015-06-01 2018-04-13 Medimmune Llc Neutralizacion de moleculas de union anti-influenza y usos de las mismas.
WO2017083627A1 (en) 2015-11-13 2017-05-18 Visterra, Inc. Compositions and methods for treating and preventing influenza
IL260413B2 (en) 2016-01-13 2024-01-01 Medimmune Llc A method for treating type A influenza
JP7104629B2 (ja) 2016-02-24 2022-07-21 ビステラ， インコーポレイテッド インフルエンザウイルスに対する抗体分子の製剤
JP2017086068A (ja) * 2016-10-31 2017-05-25 インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシンＩｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ Ａ型インフルエンザウイルス中和抗体及びその使用法
RU2664184C2 (ru) * 2016-12-30 2018-08-15 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBiPr-ABIgA1FI6-Intht ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА А ИЗОТИПА IgA1
RU2656142C1 (ru) * 2016-12-30 2018-05-31 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBiPr-ABIgA1FI6-ht ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА А ИЗОТИПА IGA1
RU2671477C2 (ru) * 2016-12-30 2018-10-31 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBiPr-ABIgA2m1F16-ht ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА А ИЗОТИПА IGA2m1
JOP20190200A1 (ar) 2017-02-28 2019-08-27 Univ Pennsylvania تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي
EP3589649A1 (en) 2017-02-28 2020-01-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Influenza vaccines based on aav vectors
US11827906B2 (en) 2017-02-28 2023-11-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (AAV) clade f vector and uses therefor
JP7403733B2 (ja) 2017-09-04 2023-12-25 国立感染症研究所長 インフルエンザｈａスプリットワクチンの製造方法
WO2019055481A1 (en) * 2017-09-18 2019-03-21 Amyris, Inc. METHODS OF GENOMIC INTEGRATION IN PICHIA AND OTHER HOST CELLS
CN109988236B (zh) * 2017-12-30 2022-04-01 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种流感病毒抗体的应用
HUE059545T2 (hu) * 2018-01-23 2022-11-28 Janssen Vaccines & Prevention Bv Influenzavírus-vakcinák és alkalmazásaik
JP6622825B2 (ja) * 2018-01-25 2019-12-18 インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシンＩｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ Ａ型インフルエンザウイルス中和抗体及びその使用法
US11780907B2 (en) 2018-01-26 2023-10-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to influenza hemagglutinin
KR20210134321A (ko) 2019-02-01 2021-11-09 노바록 바이오테라퓨틱스 리미티드 항-클라우딘 18 항체 및 이의 이용 방법
JP2022521819A (ja) 2019-03-25 2022-04-12 ビステラ， インコーポレイテッド インフルエンザを処置および予防するための組成物および方法
JP2020048568A (ja) * 2019-11-22 2020-04-02 インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシンＩｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ Ａ型インフルエンザウイルス中和抗体及びその使用法
BR112022011350A2 (pt) 2019-12-11 2022-08-23 Visterra Inc Composições e métodos para tratamento e prevenção da influenza
WO2021201677A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Kiadis Pharma Intellectual Property B.V. Compositions and methods targeting influenza
CN111825763B (zh) * 2020-07-15 2022-04-19 扬州大学 流感病毒ha蛋白茎部特异性单克隆抗体及其制备方法和应用
CN114181303B (zh) * 2020-09-14 2022-12-23 东莞市朋志生物科技有限公司 抗甲型流感病毒的抗体和试剂盒
AU2021390480A1 (en) 2020-12-01 2023-06-22 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel compositions with tissue-specific targeting motifs and compositions containing same
WO2022232289A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US630064A (en) * 1899-02-10 1899-08-01 William Martindale Safety-hook.
NL154600B (nl) 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3766162A (en) * 1971-08-24 1973-10-16 Hoffmann La Roche Barbituric acid antigens and antibodies specific therefor
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4233402A (en) 1978-04-05 1980-11-11 Syva Company Reagents and method employing channeling
JPS5896026A (ja) * 1981-10-30 1983-06-07 Nippon Chemiphar Co Ltd 新規ウロキナ−ゼ誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する血栓溶解剤
US4609546A (en) * 1982-06-24 1986-09-02 Japan Chemical Research Co., Ltd. Long-acting composition
US5807715A (en) * 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US4766106A (en) * 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4676980A (en) * 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4831175A (en) * 1986-09-05 1989-05-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate
RU2031941C1 (ru) * 1991-03-14 1995-03-27 Научно-исследовательский институт гриппа РАМН Штамм вируса гриппа а(нini) для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей
US5595721A (en) * 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
ES2176484T3 (es) * 1995-08-18 2002-12-01 Morphosys Ag Bancos de proteinas/(poli)peptidos.
AU8063798A (en) * 1997-06-19 1999-01-04 Regents Of The University Of California, The Secretory immunoglobulin produced by single cells and methods for making and using same
MY133346A (en) 1999-03-01 2007-11-30 Biogen Inc Kit for radiolabeling ligands with yttrium-90
US20020102208A1 (en) 1999-03-01 2002-08-01 Paul Chinn Radiolabeling kit and binding assay
JP4656478B2 (ja) * 2000-02-22 2011-03-23 株式会社医学生物学研究所 抗体ライブラリー
AU2003251809A1 (en) 2002-07-11 2004-02-02 The General Hospital Corporation Polynucleotide and polypeptide fat metabolism regulators and uses thereof
CN1756562A (zh) * 2003-03-07 2006-04-05 麦克公司 流感病毒疫苗
US20070219149A1 (en) * 2003-08-11 2007-09-20 The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University Novel Vaccine Containing Adjuvant Capable Of Inducing Mucosal Immunity
WO2006124269A2 (en) 2005-05-16 2006-11-23 Amgen Fremont Inc. Human monoclonal antibodies that bind to very late antigen-1 for the treatment of inflammation and other disorders
EP2532679B1 (en) * 2005-10-21 2017-04-12 Novartis AG Human antibodies against il13 and therapeutic uses
TWI477602B (zh) 2006-02-09 2015-03-21 Educational Foundation Jichi Medical Univ Novel viral vector
AU2007249160B2 (en) * 2006-05-15 2013-09-12 I2 Pharmaceuticals, Inc. Neutralizing antibodies to influenza viruses
EA017203B1 (ru) * 2006-09-07 2012-10-30 Круселл Холланд Б.В. Связывающие молекулы человека, способные нейтрализовать вирус гриппа h5n1, и их применение
PL2069403T3 (pl) * 2006-10-02 2015-08-31 Regeneron Pharma Przeciwciała ludzkie o wysokim powinowactwie wobec receptora ludzkiej IL-4
US7718774B2 (en) 2006-11-08 2010-05-18 Macrogenics, Inc. TES7 and antibodies that bind thereto
EP1925318A1 (en) * 2006-11-20 2008-05-28 Paul-Ehrlich-Institut Recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA)-based vaccine for the avian flu
RU2448979C2 (ru) 2006-12-14 2012-04-27 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Антитела человека к дельта-подобному лиганду-4 человека
GB0700133D0 (en) 2007-01-04 2007-02-14 Humabs Llc Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof
US8124092B2 (en) 2007-03-13 2012-02-28 Institute For Research In Biomedicine Antibodies against H5N1 strains of influenza A virus
ITTO20080204A1 (it) 2008-03-17 2009-09-18 Pomona Biotechnologies Llc Anticorpi monoclonali atti a reagire con una pluralita di sottotipi del virus influenzale a
US8871207B2 (en) * 2008-07-25 2014-10-28 Humabs, LLC Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof
NZ590891A (en) * 2008-07-25 2013-03-28 Inst Research In Biomedicine Neutralizing anti-influenza a virus antibodies and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
JP2014237714A (ja) 2014-12-18
CO6341572A2 (es) 2011-11-21
CR20110079A (es) 2011-07-18
AU2009275226B2 (en) 2015-05-14
MA32577B1 (fr) 2011-08-01
CA2731686C (en) 2020-04-07
CN102164613A (zh) 2011-08-24
JP6022515B2 (ja) 2016-11-09
RU2553325C2 (ru) 2015-06-10
MX2011000768A (es) 2011-10-05
WO2010010466A2 (en) 2010-01-28
GT201100023A (es) 2013-12-10
ECSP11010823A (es) 2011-08-31
AU2009275226A1 (en) 2010-01-28
CA2731686A1 (en) 2010-01-28
RU2011105062A (ru) 2012-08-27
US9340603B2 (en) 2016-05-17
WO2010010467A3 (en) 2010-12-16
BRPI0911699A2 (pt) 2014-09-23
CR20110084A (es) 2011-07-18
CA2733218A1 (en) 2010-01-28
ZA201101113B (en) 2012-08-29
AU2009275227A1 (en) 2010-01-28
IL210771A0 (en) 2011-03-31
KR20110047193A (ko) 2011-05-06
WO2010010467A2 (en) 2010-01-28
US20100080813A1 (en) 2010-04-01
EP2313433A2 (en) 2011-04-27
JP2011528902A (ja) 2011-12-01
HK1161110A1 (en) 2012-08-24
US8685402B2 (en) 2014-04-01
KR101732056B1 (ko) 2017-05-02
CN102216327A (zh) 2011-10-12
CN102164613B (zh) 2014-11-26
MX2011000767A (es) 2011-09-21
ZA201101150B (en) 2012-08-29
IL210772A0 (en) 2011-03-31
NZ590890A (en) 2013-05-31
ES2662519T3 (es) 2018-04-06
BRPI0911699B8 (pt) 2023-02-28
EP2313112A2 (en) 2011-04-27
NZ590891A (en) 2013-03-28
JP5607620B2 (ja) 2014-10-15
JP2011528901A (ja) 2011-12-01
WO2010010466A3 (en) 2010-07-29
BRPI0911699B1 (pt) 2020-11-17
EP2313112B1 (en) 2017-12-27
US20100086555A1 (en) 2010-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20110049802A (ko) 중화 항-인플루엔자 ａ 바이러스 항체 및 이의 용도
KR101659306B1 (ko) 인간 사이토메갈로바이러스 중화 항체 및 이의 용도
CN108640989B (zh) 可结合并中和b型流感病毒的人类结合分子及其用途
ES2682596T3 (es) Anticuerpos neutralizantes del citomegalovirus humano y uso de los mismos
DK2734545T3 (en) NEUTRALIZING ANTI-INFLUENZA A VIRUS ANTIBODIES AND APPLICATIONS THEREOF
JP5814790B2 (ja) デングウイルス中和抗体およびその使用
KR20100115346A (ko) 인플루엔자 바이러스에 대한 항체 및 그의 이용 방법
CN114805558B (zh) 强力地中和狂犬病毒和其它狂犬病毒属病毒的抗体和其用途
CN107880121B (zh) 中和rsv、mpv和pvm的抗体和其应用
CN117836322A (zh) 针对SARS-CoV-2的人中和单克隆抗体及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid