CN117836322A

CN117836322A - 针对SARS-CoV-2的人中和单克隆抗体及其用途

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Publication number: CN117836322A
Application number: CN202280041932.3A
Authority: CN
Inventors: H·穆奎; C·普兰查斯; O·施瓦茨; I·费尔南德斯; T·布鲁埃尔; X·蒙塔古泰利; H·波希; G·戴斯德梅洛; F·雷伊
Original assignee: Institut Pasteur de Lille
Current assignee: Institut Pasteur de Lille
Priority date: 2021-04-26
Filing date: 2022-04-01
Publication date: 2024-04-05

Abstract

本发明涉及针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS‑CoV‑2)的抗体，特别是针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS‑CoV‑2)的人中和单克隆抗体，及其用于诊断、监测、预防和治疗SARS‑CoV‑2感染及相关疾病(COVID‑19)的用途。

Description

针对SARS-CoV-2的人中和单克隆抗体及其用途

发明领域

本发明涉及针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗体，特别是针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人中和单克隆抗体，及其用于诊断、监测、预防和治疗SARS-CoV-2感染及相关疾病(COVID-19)的用途。

发明背景

由新出现的严重急性呼吸综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)(它导致冠状病毒病-2019(COVID-19)并且迄今为止已在全球造成近4.7亿感染病例和600万人死亡(https://www.who.int/))引起的大流行提出了严重的全球公共卫生紧急情况，迫切需要预防和治疗干预措施。

冠状病毒是有包膜的、正义、单链RNA病毒，其感染人和哺乳动物。冠状病毒基因组编码非结构多蛋白和结构蛋白，包括同源三聚刺突(S)糖蛋白、包膜(E)、膜(M)和核衣壳(N)蛋白。几种冠状病毒对人具有致病性，导致不同程度的症状严重程度(Cui等人,Nat RevMicrobiol.2019Mar；17(3):181-92)。分为4个谱系或组(A、B、C、D)的β冠状病毒属(Beta-CoV或β-CoV)包括B/C组中的高度人致病性冠状病毒。Beta-CoV B/C组包括2002年出现的严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV或SARS-CoV-1)、2012年在沙特阿拉伯首次检测到的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)以及2019年分离出的导致COVID-19的被称为SARS-CoV-2的新型冠状病毒，其与严重急性呼吸综合症病例有关(Peiris等人,Nat Med.,2004Dec；10(12Suppl):S88-97；Zaki等人,N Engl J Med.,2012Nov 8；367(19):1814-20；Lee等人,BMC Infect Dis.2017Jul 14；17(1):498；Zhu N等人,N Engl J Med.,2020Jan24)。相比之下，Beta-CoV A组包括HCoV-OC43和HCoV-HKU1，其可引起普通感冒。

响应SARS-CoV-2感染而产生的抗体和疫苗接种对于长期预防COVID-19至关重要。人中和SARS-CoV-2抗体似乎在控制COVID-19感染中发挥着关键作用并代表了用于治疗患有轻度至中度疾病的SARS-CoV-2感染人的有前景的免疫治疗工具。解码COVID-19中的抗体反应对于了解针对SARS-CoV-2刺突蛋白(SARS-CoV-2-S)的体液免疫的基本机制、中和抗体的靶标以及开发有效的疫苗和基于单克隆抗体的免疫治疗策略至关重要。

刺突糖蛋白在病毒周期中具有关键作用，因为它参与受体识别、病毒附着和进入，因此是宿主向性和传播能力的关键决定因素。SARS-CoV-2细胞进入取决于病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)和血管紧张素转换酶2(ACE2)靶受体之间的结合。与ACE2结合触发细胞膜融合事件级联以用于病毒进入。每个S原聚体由两个被蛋白酶切割的亚基组成：球状S1结构域和N端区域，以及近膜S2和跨膜结构域。宿主范围和细胞向性的决定因素存在于S1结构域内的RBD中，而膜融合的介质已在S2结构域内被鉴定。抗SARS-CoV-2抗体中和效力是通过与ACE2受体竞争RBD结合来确定的。

抗体响应于SARS-CoV-2感染迅速产生，包括识别不同S蛋白区域的中和抗体。RBD是中和抗体(包括强效中和剂)的主要靶标，但NTD和S2茎区也含有中和表位。SARS-CoV-2中和IgA抗体最早在症状出现一周后即可检测到，促成血清中和，并且与IgG一样有效。中和抗体是COVID-19疫苗保护的主要相关因素。尽管如此，SARS-CoV-2刺突特异性抗体，包括非中和剂，可以发挥对体内保护很重要的抗病毒Fc依赖性效应子功能，即抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和吞噬作用(ADCP)。

自2020年中期以来，由于刺突蛋白，特别是其受体结合区(RBD)中的预测突变，SARS-CoV-2的新出现的具有增加的传播性和/或对中和抗体的降低的敏感性的变体在多个国家中被报道并且目前正在全球范围内传播。报道的第一个变体是在英国(谱系B.1.1.7；显著突变N501Y、69-70del、P681H)；然后是南非(SA)(谱系B.1.351；显著突变N501Y、E484K、K417N)和巴西(BR)(谱系P.1；显著突变N501Y、E484K、K417T)。据报道，一些单克隆抗体和血清来源的抗体在中和带有E484K突变的病毒(SARS-CoV-2变体SA和BR)方面的效果要低10到60倍。一些疫苗针对这些变体的功效可能会降低。

此后，SARS-CoV-2的新出现变体在世界范围内传播，包括关注的变体(VOC)谱系，例如下面引用的那些，或在刺突蛋白中包含负责增加对hACE2的亲和力和潜在的免疫逃逸的相同突变的VOC：

Alpha(B.1.1.7)N501Y；A570D；P681H；T716I；S982A；D1118H

Beta(B.1.351)D80A；D215G；K417N；E484K；N501Y；A701V

Gamma(P.1)L18F；T20 N；P26S；D138Y；R190S；K417T；E484K；N501Y；H655Y；T1027I

Delta(B.1.617.2)T19R；L452R；T478K；P681R；D950N

Omicron(BA.1亚谱系)(B.1.1.529)A67V,H69-,V70-,T95I,G142-,V143-,Y144-,Y145D,N211-,L212I,G339D,S371L,S373P,S375F,K417N,N440K,G446S,S477N,T478K,E484A,Q493R,G496S,Q498R,N501Y,T547K,D614G,H655Y,N679K,P681H,N764K,D796Y,N856K,Q954H,N969K,L981F

Omicron(BA.2亚谱系)G339D；F367V；S371F；S373P；S375F；T376A；D405N；R408S；K417N；N440K；S477N；T478K；E484A；Q493R；Q498R；N501Y；Y505H

为了开发特异于SARS-CoV-2的预防和治疗方法，需要针对SARS-CoV-2的中和抗体，特别是针对SARS-CoV-2的人中和抗体，包括能够中和SARS-CoV-2变体(尤其是上述VOC和此类VOC的变体以及具有上述突变的组合的VOC)的人抗体。挑战是提供单独或组合的单克隆抗体，其保留有效的中和特性以向处于发生SARS的风险的个体提供针对目前和未来VOC的保护。虽然不能期望通用的SARS-CoV2刺突单克隆抗体(mAb)能够对大多数VOC和未来的VOC保持足够的功效，但目标是提供持续中和大多数这些VOC和包含这些突变的不同组合的VOC的mAb；以便它随着时间的推移对于预防或治疗SARS仍然有用。

基于SARS-CoV-2中和抗体的免疫疗法已被迅速探索，这导致了几种mAb单独或在联合疗法(bi-therapy)中的临床使用。迄今为止分离出的高效人SARS-CoV-2中和抗体，包括那些在临床中测试或使用的抗体，都靶向RBD并且可以在临床前模型中预防或保护动物免受感染。然而，在大流行期间出现了具有赋予对抗体中和的抵抗力的刺突突变的病毒变体，并摧毁了其中一些疗法。正在寻求广泛中和性mAb。已经描述了针对所有VOC(包括当前流行的omicron谱系)具有活性的新型抗体。

考虑到本文呈现的结果显示大多数当前FDA/EMEA批准的治疗性mAb的效力丧失，提供在中和大多数这些VOC和包含这些突变的不同组合的VOC方面具有一致性的mAb的挑战是巨大的。本发明满足了这一需要并提供了在展示此类突变的主要VOC中具有保留效力的特定mAb。

最有效的Cv2.1169 IgA和Cv2.3194 IgG对于VOC Alpha、Beta、Gamma和Delta具有完全活性，并且在体外仍然强烈阻断OmicronBA.1和BA.2感染。Cv2.1169 IgA的J链二聚化大大提高了其对BA.1和BA.2的中和效力。Cv2.1169在小鼠和仓鼠SARS-CoV-2感染模型中显示出治疗效果。

发明概述

本发明提供了针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗体及其片段，包括其抗原结合片段，特别是针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人中和抗体-CoV-2)，编码抗体的核酸、载体，包含根据本公开内容的抗体、核酸、载体的组合物、试剂、医疗装置和试剂盒。

本发明涵盖根据本公开内容的抗体、核酸、载体的制备和使用方法以及用途，特别是用于检测、诊断、监测、预防和治疗SARS-CoV-2感染和相关疾病(COVID-19)。

本公开内容涉及针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人中和单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)，并且是以下参考抗体中的至少一种的与RBD的结合的竞争性抑制剂：

-参考人抗体Cv2.1169，其包含(i)包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列的重链可变区和(ii)包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列的轻链可变区；

-参考人抗体Cv2.3194，其包含(i)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的重链可变区和(ii)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的轻链可变区；

-参考人抗体Cv2.1353，其包含(i)包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的重链可变区和(ii)包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的轻链可变区；

-参考人抗体Cv2.5213，其包含(i)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的重链可变区和(ii)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区；和

-参考人抗体Cv2.3235，其包含(i)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区和(ii)包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的轻链可变区。

本公开内容还涉及针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人中和单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)并且是以下参考抗体的与RBD的结合的竞争性抑制剂：参考人抗体Cv2.5179，其包含(i)包含SEQID NO：152的氨基酸序列的重链可变区和(ii)包含SEQ ID NO：153的氨基酸序列的轻链可变区。

因此，本公开内容还涉及针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人中和单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)，并且是以下参考抗体中的至少一种的与RBD的结合的竞争性抑制剂：

-参考人抗体Cv2.3194，其包含(i)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO：8的轻链可变区；

-参考人抗体Cv2.5179，其包含(i)包含SEQ ID NO：152的氨基酸序列的重链可变区和(ii)包含SEQ ID NO：153的氨基酸序列的轻链可变区

-参考人抗体Cv2.3235，其包含(i)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的轻链可变区；

所述人中和抗体或其抗原结合片段包含：

a)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3；

b)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3；

c)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3；

d)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：29的重链CDR1、SEQ ID NO：30的重链CDR2和SEQ ID NO：31的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：32的轻链CDR1、SEQID NO：33的轻链CDR2和SEQ ID NO：34的轻链CDR3；

e)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：41的重链CDR1、SEQ ID NO：42的重链CDR2和SEQ ID NO：43的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：44的轻链CDR1、SEQID NO：45的轻链CDR2和SEQ ID NO：46的轻链CDR3；

f)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：47的重链CDR1、SEQ ID NO：48的重链CDR2和SEQ ID NO：49的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：50的轻链CDR1、SEQID NO：51的轻链CDR2和SEQ ID NO：52的轻链CDR3；

g)重链可变结构域，其包含重链CDR1、CDR2和CDR3，其分别与SEQ ID NO：23至25或138至140的不同之处在于在1、2或3个CDR的序列中有多至2个氨基酸突变；以及轻链可变结构域，其包含：轻链CDR1、CDR2和CDR3，其分别与SEQ ID NO：26至28或141至143的不同之处在于在1、2或3个CDR的序列中有多至2个氨基酸突变。

因此，本公开内容还涉及针对SARS-CoV-2的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于其包含：

-选自以下的重链可变结构域：

重链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：138的重链CDR1、SEQ ID NO：139的重链CDR2和SEQ ID NO：140的重链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

重链可变结构域，其包含以下至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

重链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：29的重链CDR1、SEQ ID NO：30的重链CDR2和SEQ ID NO：31的重链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

重链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，或具有一或两个保守取代的变体；或者

重链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：41的重链CDR1、SEQ ID NO：42的重链CDR2和SEQ ID NO：43的重链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

重链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：47的重链CDR1、SEQ ID NO：48的重链CDR2和SEQ ID NO：49的重链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；

和

-选自以下的轻链可变结构域：

轻链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：141的轻链CDR1、SEQ ID NO：142的轻链CDR2和SEQ ID NO：143的轻链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

轻链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

轻链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：32的轻链CDR1、SEQ ID NO：33的轻链CDR2和SEQ ID NO：34的轻链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

轻链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQ ID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3，或具有一或两个保守取代的变体；或者

轻链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：44的轻链CDR1、SEQ ID NO：45的轻链CDR2和SEQ ID NO：46的轻链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

轻链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：50的轻链CDR1、SEQ ID NO：51的轻链CDR2和SEQ ID NO：52的轻链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的抗体或抗原结合片段与参考人抗体Cv2.5179、Cv2.1169或Cv2.3194；例如Cv2.1169或Cv.3194；例如Cv2.1169或Cv2.5179；优选参考人抗体Cv2.1169竞争结合。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段包含：重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3或其在1、2或3个CDR的序列中包含多至6(1、2、3、4、5或6)个氨基酸突变；优选保守氨基酸取代的变体。

在一些优选的实施方案中，根据本发明的抗体或抗原结合片段包含：

a)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3；

b)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：29的重链CDR1、SEQ ID NO：30的重链CDR2和SEQ ID NO：31的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：32的轻链CDR1、SEQID NO：33的轻链CDR2和SEQ ID NO：34的轻链CDR3；

c)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3；

d)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：41的重链CDR1、SEQ ID NO：42的重链CDR2和SEQ ID NO：43的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：44的轻链CDR1、SEQID NO：45的轻链CDR2和SEQ ID NO：46的轻链CDR3；

e)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：47的重链CDR1、SEQ ID NO：48的重链CDR2和SEQ ID NO：49的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：50的轻链CDR1、SEQID NO：51的轻链CDR2和SEQ ID NO：52的轻链CDR3；或者

f)重链可变结构域，其包含重链CDR1、CDR2和CDR3，其分别与SEQ ID NO：23至25、29至31、35至37、41至43或47至49的不同之处在于在1、2或3个CDR的序列中有多至6(1、2、3、4、5或6)个氨基酸突变；以及轻链可变结构域，其包含：轻链CDR1、CDR2和CDR3，其分别与SEQID NO：26至28、32至34、38至40、44至46或50至52的不同之处在于在1、2或3个CDR的序列中有多至6(1、2、3、4、5或6)个氨基酸突变。

在一些更优选的实施方案中，根据本发明的抗体或抗原结合片段包含：重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3。

在一些其他更优选的实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段包含：SEQ IDNO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQ ID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3。

在一些优选的实施方案中，本发明的抗体包括：

a)包含与SEQ ID NO：3具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO：4具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，

b)包含与SEQ ID NO：5具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO：6具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，

c)包含与SEQ ID NO：7具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO：8具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，

d)包含与SEQ ID NO：9具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO：10具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域，或

e)包含与SEQ ID NO：11具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO：12具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

在一些实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段不包含：

a)由SEQ ID NO：3组成的重链可变结构域和由SEQ ID NO：4组成的轻链可变结构域，

b)由SEQ ID NO：5组成的重链可变结构域和由SEQ ID NO：6组成的轻链可变结构域，

c)由SEQ ID NO：7组成的重链可变结构域和由SEQ ID NO：8组成的轻链可变结构域，

d)由SEQ ID NO：9组成的重链可变结构域和由SEQ ID NO：10组成的轻链可变结构域，或

e)由SEQ ID NO：11组成的重链可变结构域和由SEQ ID NO：12组成的轻链可变结构域。

在一些优选的实施方案中，根据本公开内容的抗体包含SEQ ID NO：3的重链可变区和SEQ ID NO：4的轻链可变区。

在一些实施方案中，根据本公开内容的抗体的重链可变结构域与与SEQ ID NO：132具有至少90％序列同一性的重链恒定区缔合。

在一些实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段的重链可变结构域与IgG或IgA恒定区缔合。在一些具体的实施方案中，包含IgA恒定区的抗体进一步包含J链和/或分泌组分。在一些具体的实施方案中，恒定区包含沉默抗体效应子功能和/或增加抗体体内半衰期的突变和/或修饰。

在一些优选的实施方案中，根据本发明的抗体或抗原结合片段与IgG1恒定区缔合。优选地，所述抗体包含与SEQ ID NO：13、15、17、19和21中任一个、优选SEQ ID NO：13具有至少90％同一性的重链氨基酸序列。更优选地，所述抗体包含：

a)包含与SEQ ID NO：13的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链；

b)包含与SEQ ID NO：15的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链；

c)包含与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：18的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链；

d)包含与SEQ ID NO：19的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：20的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链；或者

e)包含与SEQ ID NO：21的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：22的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链。

在一些其他优选的实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO：133、134、135、136和137中任一个、优选SEQ ID NO：133具有至少90％同一性的重链氨基酸序列。更优选地，该抗体包含：

a)包含与SEQ ID NO：133的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链；

b)包含与SEQ ID NO：134的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链；

c)包含与SEQ ID NO：135的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：18的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链；

d)包含与SEQ ID NO：136的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：20的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链；或者

e)包含与SEQ ID NO：137的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：22的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列的轻链。

在一些更优选的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段包含SEQ IDNO：13的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：14的轻链氨基酸序列。

在一些其他更优选的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：133的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：14的轻链氨基酸序列。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段是重组人单克隆抗体；优选地是IgG1或IgA同种型；其中IgA可以是单体、聚合或分泌性IgA；优选地，IgA是聚合或分泌性IgA。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段选自10nM或更小、1nM或更小、500pM或更小、400pM或更小、以及300pM或更小的KD结合SEQ ID NO：106的重组SARS-CoV-2S-三聚体。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段以选自25nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、以及1nM或更小的KD结合SEQ ID NO：107的重组SARS-CoV-2S1蛋白。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段以选自25nM或更小、10nM或更小、1nM或更小、500pM或更小、400pM或更小、300pM或更小、以及100pM或更小的KD结合SEQ ID NO：108至111和122至125中任一项的重组SARS-CoV-2RBD蛋白。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段结合选自以下的至少一种重组SARS-CoV-2S蛋白：SEQ ID NO：106的tri-S1蛋白、SEQ ID NO：107的S1蛋白和SEQ ID NO：108至111和122至125的RBD蛋白，其结合亲和力高于SEQ ID NO：103的重组血管紧张素转化酶2(ACE2)胞外域蛋白的结合亲和力；优选为至少5、10、25、50、100、250、500或1000倍更高；优选地，其中抗体对RBD蛋白的结合亲和力是ACE2胞外域蛋白的结合亲和力的至少10、25、50、100、250、500或1000倍。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段竞争性抑制SEQ ID NO：106或126的重组SARS-CoV-2刺突蛋白与SEQ ID NO：103的重组ACE2胞外域蛋白的结合，其EC₅₀选自1μg/mL或更小、0.5μg/mL或更小、0.4μg/mL或更小、0.3μg/mL或更小、0.2μg/mL或更小和0.1μg/mL或更小。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段阻断SEQ IDNO：106或126的重组SARS-CoV-2刺突或SEQ ID NO：108至111和122至125的RBD蛋白与重组ACE2胞外域蛋白的结合的至少70％、80％或90％。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段阻断SEQ IDNO：106或126的重组SARS-CoV-2刺突或SEQ ID NO：108至111和122至125和184的RBD蛋白与重组ACE2胞外域蛋白的结合的至少70％、80％或90％

在根据本公开内容的抗体或抗原结合片段的一些具体的实施方案中，重组SARS-CoV-2S-三聚体、S1和/或RBD蛋白选自分离株野生型-Hu-1、B.1.1.7谱系、P.1谱系、B.1.351谱系、B.1.617谱系、B.1.1.529谱系(包括“Omicron变体”)或任何亚谱系、关注的变体(VOC)或其感兴趣的变体(VOI)；例如任何Omicron变体、谱系或亚谱系，例如BA.1、BA.1.1或BA.2。

在一些具体的实施方案中，B.1.617谱系可以包括选自B.1.617.1、B.1.617.2和B.1.617.3的亚谱系中的任何一种。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段中和选自谱系B.1.1.7、P.1和B.1.351和B.1.617和B.1.1.529；特别地选自谱系B.1.1.7、P.1和B.1.351以及B.1.617.2和B.1.617.2.1和B.1.617.1.3的至少一种SARS-CoV-2变体。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段中和选自谱系B.1.1.7、P.1和B.1.351和B.1.617和B.1.1.529和BA.2；特别地选自谱系B.1.1.7、P.1和B.1.351以及B.1.617.2和B.1.617.2.1和B.1.617.1.3和BA.2的至少一种SARS-CoV-2变体。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段中和至少一种SARS-CoV-2变体、谱系或亚谱系；例如选自Omicron变体的亚谱系的谱系；例如BA.2变体亚谱系。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段以选自20ng/mL或更小、15ng/mL或更小、10ng/mL或更小、5ng/mL或更小以及1ng/mL或更小的半最大有效浓度(EC₅₀)中和SARS-CoV-2。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段中和选自以下的至少一种SARS-CoV-2：SARS-CoV-2分离株野生型-Hu-1、SARS-CoV-2变体D614G以及包含RBD结构域中的突变的SARS-CoV-2变体。

根据优选的实施方案，RBD结构域中的突变选自N501Y、E484K、K417N和K417T取代中的一种或多种。根据其他优选的实施方案，RBD结构域中的突变选自N501Y、E484K、E484Q、K417N、K417T、L452R、T478K取代中的一种或多种。

根据其他优选的实施方案，RBD结构域中的突变选自K417N、K417T、N440K、L452R、G446S、S477N、T478K、E484A、E484K、E484Q、Q493R、G496S、Q498R和N501Y取代中的一种或多种。

根据其他优选的实施方案，RBD结构域中的突变选自K417N、N440K、G446S、S477N、T478K、E484A、E484KQ493R、G496S、Q498R和N501Y取代中的一种或多种

优选地，SARS-CoV-2变体选自B.1.1.7、P.1谱系和B.1.351谱系以及B.1.617谱系和B.1.1.529谱系。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段不与选自SARS-CoV-1、MERS-CoV、NL63-CoV、OC43-CoV、HKU1-CoV和229E-CoV的至少一种人冠状病毒交叉反应；优选地，该抗体不与所有所述人冠状病毒交叉反应。

在一些具体的实施方案中，与对照抗体相比，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段具有正常水平的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)；具体地，与对照抗体相比，该抗体对CD16(FcγRI)受体具有正常的亲和力。

在一些具体的实施方案中，与对照(阳性或内源性)相比，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段具有调节的(即低的或降低的)水平的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)抗体；具体地，与对照抗体相比，该抗体对CD16(FcγRI)受体的亲和力受到调节(即低或降低)。

在一些具体的实施方案中，与对照抗体相比，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段具有低水平的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。

在一些具体的实施方案中，与对照抗体相比，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段具有正常水平的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)；具体地，与对照抗体相比，该抗体对CD32A(FcγRIIA)受体具有正常的亲和力。

在一些具体的实施方案中，与对照(阳性或内源性)相比，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段具有调节的(即正常或改善的)抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)水平抗体；具体地，与对照抗体相比，该抗体对CD32A(FcγRIIA)受体的亲和力受到调节(即正常或改善)。

在一些具体的实施方案中，与对照抗体相比，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段具有改善的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)水平。

当测定给定抗体的ADCP或ADCC活性时，对照(阴性)抗体可以选自mGO53作为同种型对照。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段不具有预测的对人蛋白的反应性，与对照抗体相比不具有自身反应性，和/或与对照抗体相比不具有多反应性。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段在真核重组系统中产生。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段在原核重组系统中产生。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段包含非天然人糖基化模式和/或非人糖基化模式。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段是重组产生的并且包含非天然人糖基化模式和/或非人糖基化模式。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段是重组产生的并且包含非人糖基化模式。

本公开内容的另一方面涉及针对SARS-CoV-2的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于其包含：

-选自以下的重链可变结构域：

重链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

重链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

重链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ IDNO：41的重链CDR1、SEQ ID NO：42的重链CDR2和SEQ ID NO：43的重链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

和

-选自以下的轻链可变结构域：

轻链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQ ID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含重链和/或轻链可变结构域，所述重链和/或轻链可变结构域包含如上文所公开的序列；优选地与如上文所公开的IgG或IgA恒定区缔合；例如与与SEQ ID NO：132具有至少90％序列同一性的重链恒定区缔合。在一些具体的实施方案中，抗体或抗原结合片段包含重链和/或轻链，其包含如上文所公开的序列。

在一些实施方案中，根据本公开内容的抗体或其抗原结合片段进一步包含可检测标记。

根据其主要实施方案之一，本发明涉及针对SARS-CoV-2的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于其包含：

-重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ IDNO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，或其在1、2或3个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体；轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3，或其在1、2或3个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体；或者

-重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ IDNO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3；和轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQ ID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3。

根据第二个主要实施方案，本发明涉及针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人中和单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)，并且是以下参考抗体中的至少一种的与RBD的结合的竞争性抑制剂：

-参考人抗体Cv2.1169，其包含(i)包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列的重链可变区和(ii)包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列的轻链可变区；和

所述人中和抗体或其抗原结合片段包含：

a)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：2的轻链CDR3；或者

b)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3。

本发明的另一个方面涉及编码根据本公开内容的抗体或抗原结合片段的分离的核酸；优选地至少包含编码根据本公开内容的所述抗体的重链和/或轻链的核酸序列。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的分离的核酸是mRNA，优选修饰的mRNA。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的分离的核酸是DNA。

本发明的另一个方面涉及用于在宿主细胞中重组产生根据本公开内容的抗体的表达载体，其包含至少一种编码根据本公开内容的所述抗体的核酸。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的表达载体包含选自以下的一对核酸序列：与SEQ ID NO：93具有至少90％同一性的序列和与SEQ ID NO：94具有至少90％同一性的序列；与SEQ ID NO：95具有至少90％同一性的序列以及与SEQ ID NO：96具有至少90％同一性的序列；与SEQ ID NO：97具有至少90％同一性的序列以及与SEQ ID NO：98具有至少90％同一性的序列；与SEQ ID NO：99具有至少90％同一性的序列以及与SEQ ID NO：100具有至少90％同一性的序列；与SEQ ID NO：101具有至少90％同一性的序列和与SEQ ID NO：102具有至少90％同一性的序列。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的表达载体包含在选自以下细菌菌株中：Cv2.1169_pIgH和Cv2.1169_pIgL，所述菌株根据布达佩斯条约条款分别以编号I-5651和I-5652于2021年1月28日保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(Collection Nationalede Cultures de Microorganismes，CNCM)。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的表达载体包含在选自以下的细菌菌株中：Cv2.1353_IgH、Cv2.1353_IgL、Cv2.3194_IgH、Cv2.3194_IgL、Cv2.3235_IgH、Cv2.3235_IgL，Cv2.5213_IgH、Cv2.5213_IgL，所述菌株根据布达佩斯条约条款分别以编号I-5668、I-5669、I-5670、I-5671、I-5672、I-5673、I-5674和I-5675于2021年4月2日保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的表达载体包含在选自以下的细菌菌株中：Cv2.5179_IgH和Cv2.5179_IgL，所述菌株根据布达佩斯条约条款分别以编号CNCM I-5775和CNCM I-5776于2021年11月15日注册于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

另一方面涉及包含根据本公开内容的表达载体或根据本公开内容的核酸的宿主细胞。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的宿主细胞是用表达载体稳定转化的抗体产生细胞系。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的宿主细胞是真核细胞；优选选自酵母、昆虫和哺乳动物细胞。

另一方面涉及产生根据本公开内容的抗体的方法，包括：(i)培养本公开内容的宿主细胞以通过宿主细胞表达所述抗体；和任选地(ii)回收抗体；和(iii)纯化所述抗体。

另一方面涉及药物组合物，其包含根据本公开内容的抗体、其抗原结合片段、核酸或载体，以及药学上可接受的载体、佐剂和防腐剂中的至少一种。

本公开内容的另一个具体方面涉及药物组合物，其包含：

(i)抗体或其抗原结合片段、核酸或载体；和

(ii)选自以下参考抗体中的至少一种的抗体：Adintrevimab、Cilgavimab、Sotrovimab、Imdevimab；

本公开内容的另一方面涉及试剂盒，其包含：

(i)抗体或其抗原结合片段、核酸或载体；和

(ii)选自以下参考抗体中的至少一种的抗体：Adintrevimab、Cilgavimab、Sotrovimab、Imdevimab。

在一些具体的实施方案中，核酸是mRNA，特别是修饰的mRNA；优选配制在囊泡或颗粒中，特别是脂质纳米颗粒(LNP)中。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的药物组合物用于肠胃外注射、输注、局部递送、吸入或持续(sustained)递送。

另一方面涉及根据本公开内容的抗体、其抗原结合片段、核酸、载体或根据本公开内容的药物组合物，其用作药物。

另一方面涉及根据本公开内容的药物组合物，其用于预防或治疗SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病。

另一方面涉及根据本公开内容的药物组合物在制造用于预防或治疗SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病的药物中的用途。

另一方面涉及用于检测样品中的SARS-CoV-2的方法，包括：使所述样品与根据本公开内容的抗体或其抗原结合片段接触，并检测所形成的抗原-抗体复合物，从而检测样品中SARS-CoV-2的存在、不存在或水平。

在根据本公开内容的方法的一些具体的实施方案中，样品是来自疑似被SARS-CoV-2感染的受试者的生物样品，并且该方法用于诊断SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病。

在根据本公开内容的方法的一些具体的实施方案中，样品是来自在治疗COVID-19疾病之前或期间的COVID-19患者的生物样品，并且该方法用于监测COVID-19疾病的治疗。

另一方面涉及用于检测或诊断SARS-CoV-2感染或污染或监测COVID-19疾病的治疗的试剂盒，其至少包含根据本公开内容的抗体或其抗原结合片段，优选进一步包括可检测标记。

另一方面涉及降低受试者中发生SARS-CoV-2相关的COVID-19疾病的风险的方法，包括向受试者施用有效量的根据本公开内容的抗体、其抗原结合片段、核酸或载体或药物组合物。

在该方法的一些具体的实施方案中，住院治疗的风险被降低。

在该方法的一些具体的实施方案中，死亡风险被降低。

另一方面涉及治疗受试者中的SARS-CoV-2相关的COVID-19疾病的方法，包括向受试者施用有效量的根据本公开内容的抗体、其抗原结合片段、核酸或载体或药物组合物。

在该方法的一些具体的实施方案中，通过治疗降低了发生严重疾病的可能性。

在该方法的一些具体的实施方案中，通过治疗降低了住院治疗的可能性。

在该方法的一些具体的实施方案中，受试者是住院的。

另一方面涉及治疗受试者中的SARS-CoV-2相关的COVID-19疾病的方法，包括施用有效量的根据本公开内容的至少两种抗体或其抗原结合片段的组合。

另一方面涉及治疗受试者中的SARS-CoV-2相关的COVID-19疾病的方法，包括施用有效量的根据本公开内容的抗体或其抗原结合片段与选自Adintrevimab、Cilgavimab、Sotrovimab和Imdevimab的抗体的组合。

另一方面涉及根据本公开内容的方法，其中受试者处于发生SARS的风险中，更具体地是患有并发基础病况例如肥胖、糖尿病、癌症、处于免疫抑制治疗下、具有原发性免疫缺陷或对疫苗无反应的受试者。

另一方面涉及一种方法，其包括施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，用于预防和/或降低冠状病毒科感染；特别是SARS-CoV-2感染的发生的可能性。

另一方面涉及一种方法，其包括施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，用于预防和/或降低冠状病毒科感染的并发症，特别是冠状病毒科感染的呼吸道、神经、胃肠道或心血管并发症的发生的可能性；所述冠状病毒科感染特别地是SARS-CoV-2感染。

另一个具体方面涉及一种方法，其包括施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，用于预防和/或降低冠状病毒科感染；特别是SARS-CoV-2感染的严重急性呼吸道并发症的发生的可能性。

另一方面涉及一种方法，其包括施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，用于预防和/或降低个体中的冠状病毒科感染的发生的可能性，所述个体的特征在于

-该个体尚未施用针对所述冠状病毒科感染的疫苗；或者

-该个体对所述疫苗没有反应；或者

-该个体的针对冠状病毒感染的抗体水平处于或低于保护阈值水平。

另一方面涉及一种方法，其包括施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，以改善针对冠状病毒科病毒；特别是SARS-CoV-2感染的免疫应答。

另一个具体方面涉及一种方法，该方法包括施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，用于改善针对冠状病毒科病毒的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)或其片段的免疫应答。

另一方面涉及一种方法，其包括与针对冠状病毒科感染，特别是SARS-CoV-2感染的疫苗组合施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物。

另一方面涉及一种方法，该方法包括与特异性中和严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的第二抗体组合施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，所述第二抗体不是第一抗体的与RBD的结合的竞争性抑制剂。

另一方面涉及一种方法，其包括与特异性结合严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的第二抗体组合施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，所述第二抗体是2类或3类抗SARS-CoV2刺突蛋白抗体。

另一方面涉及一种方法，该方法包括与选自以下参考抗体中的至少一种的组的第二抗体组合施用有效量的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物：Adintrevimab、Cilgavimab、Imdevimab和Sotrovimab。

另一方面涉及与针对冠状病毒科感染、特别是SARS-CoV-2感染的疫苗组合的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，其用作药物。

另一方面涉及与针对冠状病毒科感染、特别是SARS-CoV-2感染的疫苗组合的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物用于制备药物的用途。

另一方面涉及与特异性中和严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的第二抗体组合的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，所述第二抗体不是第一抗体的与RBD的结合的竞争性抑制剂；其用作药物。

另一方面涉及与特异性中和严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的第二抗体组合的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物的用途，所述第二抗体不是第一抗体的与RBD的结合的竞争性抑制剂；其用于制备药物。

另一方面涉及与特异性结合严重急性呼吸综合症相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的第二抗体组合的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物，所述第二抗体是2类或3类抗SARS-CoV2刺突蛋白抗体；其用作药物。

另一方面涉及与特异性结合严重急性呼吸综合症相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的第二抗体组合的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物的用途，所述第二抗体是2类或3类抗SARS-CoV2刺突蛋白抗体；其用于制备药物。

另一方面涉及与选自以下参考抗体中的至少一种的组的第二抗体组合的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物：Adintrevimab、Cilgavimab、Imdevimab和Sotrovimab；其用作药物，特别是用于上述适应症。

另一方面涉及与选自以下参考抗体中的至少一种的组的第二抗体组合的根据本公开内容的抗体或抗原结合片段或核酸或载体或药物组合物的用途：Adintrevimab、Cilgavimab、Imdevimab和Sotrovimab；其用于制备药物。

根据本公开内容的用途、方法、组合物和试剂盒可以有利地适用于人和非人患者，例如非人哺乳动物。

另一方面涉及一种医疗装置，其包含根据本公开内容的药物组合物；优选为适合于通过注射或吸入施用的形式。

发明详述

本公开内容提供了针对SARS-CoV-2刺突蛋白的抗体，包括其抗原结合片段，特别是针对SARS-CoV-2刺突蛋白的重组人单克隆抗体，其具有以下特性：

-它们与SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域(RBD)特异性结合，其结合亲和力高于血管紧张素转换酶2(ACE2)胞外域的结合亲和力；图3A显示了与SARS-CoV-2刺突(S三聚体或tri-S)、S1亚基、刺突-RBD(S-RBD)蛋白的抗体和ACE2胞外域蛋白结合测定的结果；

-它们阻断来自SARS-CoV-2和病毒变体(B.1.1.7、B.1.351、P.1、B.1.617和B.1.1.529)的刺突和S-RBD蛋白与ACE2胞外域蛋白的结合；(图3C、3F、3I和3L)；

-它们中和SARS-CoV-2病毒，包括野生型-Hu-1分离株及其变体(D614G、B.1.1.7、B.1.351、P.1)，特别是含有E484K免疫逃逸突变的变体(P.1、B.1.351)；图3D、3G和3I；

-它们相互竞争与SARS-CoV-2刺突和S-RBD蛋白的结合(图3B)，表明它们可能与SARS-CoV-2刺突受体结合结构域上的相同或相关(空间邻近)表位结合；和

-它们不与其他冠状病毒(包括人致病性β冠状病毒(B/C组)SARS-CoV-1和MERS-CoV；α冠状病毒NL63-CoV和229E-CoV以及β冠状病毒A组HKU1-CoV)发生交叉反应(表5)。

-它们至少作为IgG或IgA是具有活性的(图3L和3M)。

此外，所有抗体(测试的6种抗体)都具有有限的Fc效应子功能，特别是抗体依赖性细胞毒性(ADCC)(表5)。预测所有抗体都不会与人蛋白质发生反应(无脱靶结合；图5E)，并且它们不是自身反应性抗体(图5C、5D和5E)。大多数抗体是非多反应性抗体(图5A、5B和5F)。

针对SARS-CoV-2的人中和IgG抗体的治疗功效在SARS-CoV-2感染的两种不同的动物模型中得到验证(图6)。由于它们对SARS-CoV-2具有特异性，这些抗体也可用于诊断SARS-CoV-2感染和监测COVID-19治疗。

本公开内容进一步提供了实验证据，证明此类抗体及其抗原结合片段也是针对新的关注的变体(VOC)和感兴趣的变体(VOI)(包括delta和omicron变体)的有效中和抗体(图9、10、11、12、13和14)。

本公开内容进一步以竞争测定的形式提供了此类抗体和抗原结合片段与针对SARS-CoV-2刺突蛋白的其他参考治疗抗体的基准研究。具体地，本文证明了此类抗体和抗原结合片段表现出比其他治疗抗体更广泛的中和作用，同时还靶向不同或部分重叠的表位(图10、11、16和18)。

鉴于这些结果，根据本公开内容的SARS-CoV-2中和抗体，包括其抗原结合片段，代表了用于治疗和诊断SARS-CoV-2感染和相关疾病COVID-19的有前途的免疫治疗和诊断工具。

本公开内容涉及针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人中和单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)并且是以下参考抗体中的至少一种的与RBD的结合的竞争性抑制剂：

-参考人抗体Cv2.1353，其包含(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO：5的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO：6的轻链可变区；

-参考人抗体Cv2.5213，其包含(i)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区；和

所述人中和抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：138的重链CDR1、SEQ ID NO：139的重链CDR2和SEQ ID NO：140的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：141的轻链CDR1、SEQ ID NO：142的轻链CDR2和SEQ ID NO：143的轻链CDR3；

f)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：47的重链CDR1、SEQ ID NO：48的重链CDR2和SEQ ID NO：49的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：50的轻链CDR1、SEQID NO：51的轻链CDR2和SEQ ID NO：52的轻链CDR3；或者

本公开内容进一步涉及针对SARS-CoV-2的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于其包含：

-选自以下的重链可变结构域：

重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3；或者

重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：138的重链CDR1、SEQ IDNO：139的重链CDR2和SEQ ID NO：140的重链CDR3，或其具有一个或两个保守取代的变体；或者

重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，或其具有一个或两个保守取代的变体；或者

重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：29的重链CDR1、SEQ ID NO：30的重链CDR2和SEQ ID NO：31的重链CDR3，或

重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：41的重链CDR1、SEQ ID NO：42的重链CDR2和SEQ ID NO：43的重链CDR3；或者

重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：47的重链CDR1、SEQ ID NO：48的重链CDR2和SEQ ID NO：49的重链CDR3；

和

-选自以下的轻链可变结构域：

轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQ ID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3；或者

轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：141的轻链CDR1、SEQ IDNO：142的轻链CDR2和SEQ ID NO：143的轻链CDR3，或其具有一个或两个保守取代的变体；或者

轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3，或其具有一个或两个保守取代的变体；或者

轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：32的轻链CDR1、SEQ ID NO：33的轻链CDR2和SEQ ID NO：34的轻链CDR3；或者

轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：44的轻链CDR1、SEQ ID NO：45的轻链CDR2和SEQ ID NO：46的轻链CDR3；或者

轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：50的轻链CDR1、SEQ ID NO：51的轻链CDR2和SEQ ID NO：52的轻链CDR3。

-重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ IDNO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，或其在1、2或3个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体；和轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3，或其在1、2或3个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体；或者

在一些具体的实施方案中，本发明涉及针对SARS-CoV-2的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于其包含：

-重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ IDNO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，或其在1、2或3个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体；和轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3，或其在1、2或3个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体。

-重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ IDNO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，或其在1或2个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体；轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3，或其在1或2个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体。

-重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ IDNO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，或其在1个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体；轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ IDNO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3，或其在1个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体。

-重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ IDNO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3；和轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3。

-参考人抗体Cv2.3194，其包含(i)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的轻链可变区；

所述人中和抗体或其抗原结合片段包含：

在一些具体的实施方案中，本发明涉及针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人中和单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)，并且是以下参考抗体的与RBD的结合的竞争性抑制剂：

所述人中和抗体或其抗原结合片段包含：

-重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：2的轻链CDR3。

-参考人抗体Cv2.3194，其包含(i)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列重链可变区和包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的轻链可变区；

所述人中和抗体或其抗原结合片段包含：

-重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3。

定义

如本文所使用的，术语“SARS-CoV-2刺突(S)蛋白或糖蛋白”具有其在本领域中的一般含义并且指具有以登录号UniProtK P0DTC2或SEQ ID NO：1报告的规范序列的三聚体I类病毒融合蛋白(S三聚体或tri-S)。根据结构预测，信号肽(SP)位于SEQ ID NO：1的位置1至12；胞外域(细胞外结构域)位于位置13至1213；跨膜结构域I位于位置1214至1234和胞质结构域位于位置1235至1273。S1亚基位于位置13至685，受体结合结构域(RBD或RBD结构域)位于位置319至541和S2亚基位于位置686到1273。然而，结构域或亚基的位置相对于指示的位置可能略有不同(+1到+15和-1到-15)。例如，信号肽可以位于参考序列SEQ ID NO：1的位置1至15，胞外域可以位于位置13至1208，S1蛋白可以位于位置16至681，RBD可以位于位置331至530。被根据本公开内容的抗SARS-CoV-2抗体识别的RBD结构域通常可以是SEQ IDNO：2。

如本文所用，SARS-CoV-2是指SARS-CoV-2分离株野生型-Hu-1及其被根据本发明的抗体中和的任何分离株、毒株、谱系、亚谱系或变体。用作SARS-CoV-2参考的SARS-CoV-2分离株野生型-Hu-1也称为BetaCoV_野生型_WIV04_2019(EPI_ISL_402124)或BetaCoV_野生型_IVDC-HB-05_2019EPI_ISL_402121。可以被根据本发明的抗体中和的SARS-CoV-2变体或谱系的非限制性实例包括在RBD中包含一种或多种选自下组的突变的SARS-CoV-2变体：K417N、K417T、N440K、L452R、G446S、S477N、T478K、E484A、E484K、E484Q、Q493R、G496S、Q498R和N501Y取代；例如，N501Y、E484K、K417T和K417N。变体可包含RBD、刺突蛋白或任何其他病毒蛋白中的其他突变，其可能不会阻止根据本公开内容的抗体的中和。

本文使用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。因此，术语抗体不仅涵盖完整抗体分子，还涵盖抗体片段以及抗体的变体(包括衍生物)。

因此，如本文所用且除非另有说明，否则术语“抗体”可涵盖完整抗体分子，还涵盖其抗原结合片段。

在啮齿动物和灵长类动物的天然抗体中，两条重链通过二硫键彼此连接，并且每条重链通过二硫键与轻链连接。轻链有两种类型：lambda(λ)和kappa(κ)。存在决定抗体分子的功能活性的五种主要重链类别(或同种型)：IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在人中，IgG有四个亚类：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(按血清中浓度递减的顺序编号)。IgA存在两个亚类：IgA1和IgA2。IgA1和IgA2均存在于外分泌物中(分泌性IgA)，其中IgA2比血液中的(血清IgA)更为突出。每条链包含不同的序列结构域。在典型的IgG抗体中，轻链包括两个结构域：可变结构域(VL)和恒定结构域(CL)。重链包括四个结构域，一个可变结构域(VH)和三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3，统称为CH)。轻链(VL)和重链(VH)的可变区决定对抗原的结合识别和特异性。轻链(CL)和重链(CH)的恒定区赋予重要的生物学特性，例如抗体链缔合、分泌、跨胎盘迁移性、补体结合以及与Fc受体(FcR)的结合。分泌性IgA是聚合体：2-4个IgA单体由两条附加链连接：免疫球蛋白连接(J)链和分泌组分(SC)。J链通过半胱氨酸残基之间的二硫键与两个IgA分子共价结合。分泌组分是与含有J链的聚合Ig结合的聚合免疫球蛋白受体(pIgR)的胞外部分的蛋白水解裂解产物。聚合IgA(主要是分泌性二聚体)由邻近粘膜表面的固有层中的浆细胞产生。它与上皮细胞基底外侧表面的聚合免疫球蛋白受体结合，并通过内吞作用被摄入细胞内。受体-IgA复合物穿过细胞区室，随后分泌到上皮细胞的管腔表面，仍然附着在受体上。受体发生蛋白水解，二聚IgA分子以及受体的一部分(称为分泌组分)(称为sIgA)可以自由扩散到整个管腔。

Fv片段是免疫球蛋白的Fab片段的N端部分并且由一条轻链和一条重链的可变部分组成。抗体的特异性在于抗体结合位点和抗原决定簇之间的结构互补性。抗体结合位点由主要来自高变或互补决定区(CDR)的残基组成。有时，来自非高变区或框架区(FR)的残基可以参与抗体结合位点或影响整体结构域结构，从而影响结合位点。互补决定区或CDR是指共同限定天然免疫球蛋白结合位点的天然Fv区的结合亲和力和特异性的氨基酸序列。免疫球蛋白的轻链和重链各自具有三个CDR，分别命名为L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3和H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3。因此，抗原结合位点通常包括六个CDR，其包含来自重链和轻链V区中的每一个的CDR集合。框架区(FR)是指插入CDR之间的氨基酸序列。因此，轻链和重链的可变区通常包含以下序列的4个框架区和3个CDR：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。

抗体可变结构域中的残基根据Kabat等人设计的系统常规编号。该系统在Kabat等人,1987,in Sequences of Proteins of Immunological Interest,USDepartment ofHealth and Human Services,NIH,USA(Kabat等人,1992,下文称为“Kabat等人”)中示出。本说明书中使用该编号系统。Kabat残基命名并不总是与SEQ ID序列中氨基酸残基的线性编号直接对应。实际的线性氨基酸序列可以包含比严格的Kabat编号更少或更多的氨基酸，对应于基本可变结构域结构的结构组分(无论是框架还是互补决定区(CDR))的缩短或插入。对于给定的抗体，残基的正确Kabat编号可以通过将抗体序列中的同源残基与“标准”Kabat编号序列进行比对来确定。根据Kabat编号系统，重链可变结构域的CDR位于残基31-35(H-CDR1)、残基50-65(H-CDR2)和残基95-102(H-CDR3)。根据Kabat编号系统，轻链可变结构域的CDR位于残基24-34(L-CDR1)、残基50-56(L-CDR2)和残基89-97(L-CDR3)。本文描述了一些抗SARS-CoV-2抗体(例如Cv2.1169、Cv2.5213、Cv2.3235、Cv2.1353和Cv2.3194)的预测的CDR。

本文使用的术语“单克隆抗体”是指单一特异性的抗体分子的制剂。单克隆抗体对特定表位表现出单一的结合特异性和亲和力。因此，术语“人单克隆抗体”是指表现出单一结合特异性的抗体，其具有衍生自或基于人种系免疫球蛋白序列或衍生自完全合成序列的可变区和恒定区。制备单克隆抗体的方法与结合特异性无关。

如本文所用，术语“重组抗体”是指通过重组手段产生、表达、生成或分离的抗体，例如使用转染至宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体；从重组组合抗体文库分离的抗体；从因人免疫球蛋白基因而转基因的动物(例如小鼠)分离的抗体；或以其中特定免疫球蛋白基因序列(例如人免疫球蛋白基因序列)与其他DNA序列组装的任何其他方式产生、表达、产生或分离的抗体。重组抗体包括例如嵌合抗体和人源化抗体。在一些实施方案中，本发明的重组人抗体具有与天然存在的人抗体相同的氨基酸序列，但在结构上不同于天然存在的人抗体。例如，在一些实施方案中，糖基化模式由于重组人抗体的重组产生而不同。在一些实施方案中，重组人抗体通过相对于人体内天然存在的人抗体的结构添加或减去至少一个共价化学键进行化学修饰。

如本文所用，术语“非天然人糖基化模式”是指特征在于其在人细胞中产生(即体外产生；例如，在HEK细胞中体外产生)并且其可能或可能不对应于参考人抗体的天然糖基化模式的糖基化模式(即根据本公开内容的抗体的糖基化模式)。

如本文所用，术语“非人糖基化模式”是指其特征在于其在非人细胞中产生(即在CHO细胞中体外产生)的糖基化模式。

本文使用的术语抗体的“抗原结合片段”(或简称为“抗体片段”)是指保留特异性结合抗原(例如，SARS-CoV-2的刺突糖蛋白，优选RBD结构域)的能力的抗体的全长或一个或多个片段。已经表明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。术语抗体的“抗原结合片段”涵盖的结合片段的实例包括Fab片段，其是由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；F(ab’)2片段，其是包含通过铰链区二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；由VH结构域组成的dAb片段(Ward等人，1989Nature 341:544-546)，或包含此类抗原结合片段的任何融合蛋白。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头连接，使它们能够制成单链蛋白，其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人,1988Science242:423-426；和Huston等人,1988Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883)。此类单链抗体也旨在涵盖在术语抗体的“抗原结合片段”内。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并以与完整抗体相同的方式针对效用筛选片段。

表述抗体重链或轻链的“可变结构域”或“可变区”可互换使用，因为抗体的可变区由可变结构域组成。

短语“识别抗原(X)的抗体”、“对抗原(X)具有特异性的抗体”、“抗X抗体”、“针对X的抗体”和“针对......的抗体”在本文中可与术语“特异性结合抗原(X)的抗体”互换使用。

如本文所用，“抗体”或“核酸”是指分离的抗体或核酸。

如本文所用，“2类抗SARS-CoV2刺突蛋白抗体”是指可以特异性结合处于“向上”构象的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)和处于“向下”构象的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)两者的中和抗体。

RBD的“向上”构象对应于将受体结合位点暴露于血管紧张素转化酶2(ACE2)的肽酶结构域(PD)的RBD构象。RBD的“向下”构象对应于ACE2受体结合位点无法接近的闭合RBD构象。

如本文所用，“3类抗SARS-CoV2刺突蛋白抗体”是指在RBD的ACE2结合位点外部结合的中和抗体。2类或3类抗SARS-CoV2刺突蛋白抗体的分类对应于在Barnes等人(“SARS-CoV-2neutralizing antibody structures inform therapeutic strategies”；Nature；588,682-687(2020))中开发的Barnes分类。

本公开内容涵盖根据本公开内容的抗体或抗原结合片段(抗体治疗)和编码所述抗体或抗原结合片段的核酸或载体，特别是mRNA，例如修饰的mRNA(核酸治疗)的治疗用途。

本文所用的术语“Kassoc”或“Ka”意指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，而本文所用的术语“Kdis”或“Kd”意指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。

本文所用的术语“KD”意指解离常数，其由Kd与Ka的比率(即Kd/Ka)获得并表示为摩尔浓度(M)。抗体的KD值使用系统通过表面等离子共振测定(Biacore测定)。

如本文所用，术语“特异性”是指抗体可检测地结合抗原上呈现的表位同时不可检测地与其他表位结合(即交叉反应)的能力，所述抗原为例如SARS-CoV-2刺突糖蛋白(S三聚体或tri-S)，其是三聚体I类病毒融合蛋白，特别是S蛋白单体的S1亚基，更特别是SARS-CoV-2刺突受体结合结构域(RBD或S-RBD)，本公开内容的抗体与SARS-CoV-2刺突受体结合结构域(RBD或S-RBD)的特异性结合是指其与SARS-CoV-2刺突(S三聚体或tri-S)、S1亚基蛋白和S-RBD蛋白中的至少一种(特别选自SARS-CoV-2tri-S(SEQ ID NO：106)、S1亚基(SEQID NO：107)、S-RBD(SEQ ID NO：108)蛋白)结合。由于RBD存在于刺突和S1蛋白中，因此抗体针对RBD蛋白的特异性也意味着其针对刺突和S1蛋白的特异性。

当抗体在Biacore测定中对其靶标具有1μM或更小的KD时，抗体特异性结合其靶标。该靶标特别选自SARS-CoV-2tri-S(SEQ IDNO：106)、S1亚基(SEQ ID NO：107)和S-RBD(SEQ ID NO：108)(图3A)。如果至少S-RBD靶标满足条件，则满足该定义。根据制造商的程序，使用氨基偶联试剂盒(Biacore)将抗体共价偶联到CM5传感器芯片(Biacore)。重组ACE2胞外域也可以在相同条件下与传感器芯片偶联，以用于比较。所有分析均使用HBS-EP缓冲液(10mM HEPESpH7.2；150mM NaCl；3mM EDTA和0.005％Tween 20)进行。所有实时相互作用测量期间缓冲液的流速设置为30μl/min。所有相互作用均在25℃的温度进行。SARS CoV-2tri-S和S1蛋白在HBS-EP中连续稀释(两倍步骤)，浓度范围为40-0.156nM。RBD使用相同的浓度范围，但低亲和力相互作用除外，其中应用的浓度范围为1280-10nM。病毒蛋白与固定化抗体和ACE2结合的缔合和解离阶段分别监测3分钟和4分钟。蛋白质与仅含有羧甲基化葡聚糖的参考通道的结合用作阴性对照，并在数据处理期间从结合中减去。使用BIAevaluation版本4.1.1软件(Biacore)评估所研究相互作用的动力学参数。在这些条件下，本公开内容的抗体Cv2.3235、Cv2.5213、Cv2.1353、Cv2.3194和Cv2.1169对于三个靶标tri-S(SEQ ID NO：106)、S1亚基(SEQ ID NO：107)和S-RBD(SEQ ID NO：108)的KD小于1μM，如图3A所示。它们对S-RBD靶标的KD低于ACE2胞外域的KD(图3A)。

特异性还可以通过与特定抗原结合的亲和力/亲合力相对与其他不相关分子的非特异性结合的例如约10:1、约20:1、约50:1、约100:1、10,000:1或更大的比例来展现(在这种情况下，特异性抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白(tri-S)、S1亚基或S-RBD，特别选自SARS-CoV-2 tri-S(SEQ ID NO：106)、S1亚基(SEQ ID NO：107)和S-RBD(SEQ ID NO：108)蛋白。对于至少S-RBD蛋白和一种非特异性抗原的经实验证明的特异性意味着该抗体对于抗原是特异性的。本文所用的术语“亲和力”是指抗体与表位的结合的强度。

如本文所用，术语“亲合力”是指抗体-抗原复合物的总体稳定性或强度的信息性测量。它受三个主要因素控制：抗体表位亲和力；抗原和抗体二者的化合价；以及相互作用部分的结构布置。最终，这些因素定义了抗体的特异性，即特定抗体与精确抗原表位结合的可能性。

根据本发明的抗体在竞争ELISA结合测定中彼此竞争与SARS-CoV-2刺突蛋白(S三聚体或tri-S)和S-RBD蛋白的结合。“交叉竞争”在本文中可与“竞争性抑制......的结合”或“是......的竞争性抑制剂”互换使用。对于竞争性ELISA，ELISA板用250ng/孔的无StrepTag的SARS-CoV-2tri-S和S-RBD蛋白(SEQ ID NO：106、108，其中缺失了C端StrepTag序列WSHPQFEK(SEQ ID NO：121))包被，并用生物素化抗体(对于tri-S竞争，浓度为100ng/ml，对于RBD竞争，浓度为25ng/ml)在溶于PBS的抗体竞争剂的1:2连续稀释的溶液(IgG浓度范围为0.39至50μg/ml)中孵育。抗体孵育步骤持续2小时。

对于所有ELISA测定，包被步骤在PBS缓冲液中进行过夜。每个步骤之间使用0.05％Tween 20-PBS缓冲液进行洗涤。包被步骤后，用2％BSA、1mM EDTA、0.05％Tween 20-PBS(封闭缓冲液)进行2小时的封闭步骤。抗体稀释和孵育在PBS中进行。在适当的OD处测量光密度，并减去通过在包被中孵育单独的PBS给出的背景值。OD>0.5(截断值)被视为阳性。

图3B和4D显示本公开内容的抗体Cv2.3235、Cv2.5213、Cv2.1353、Cv2.3194和Cv2.1169竞争性抑制彼此与SARS-CoV-2tri-S和S-RBD蛋白的结合。使用与RBD外部表位结合的抗S对照抗体(Cv2.2396)不存在竞争性抑制(图4D)。抗体的竞争性抑制百分比可以通过测量曲线下面积(AUC)来确定(图3B)。根据本公开内容的抗体在根据本公开内容的竞争ELISA结合测定中抑制参考抗体Cv2.3235、Cv2.5213、Cv2.1353、Cv2.3194和Cv2.1169中的至少一种与SARS-CoV-2tri-S和/或S-RBD蛋白的结合的至少30％，优选50％或更多(60％；70％；80％；90％)。

本公开内容涵盖抗SARS-CoV-2抗体，其在根据本公开内容的竞争性ELISA结合测定中抑制参考抗体Cv2.1169、Cv2.5213、Cv2.3235、Cv2.1353和Cv2.3194中的至少一种的与SARS-CoV-2刺突蛋白和/或S-RBD蛋白的结合的至少30％。

可以首先在直接ELISA结合测定中筛选测试抗体与SARS-CoV-2刺突(S三聚体或tri-S)、S1亚基和S-RBD的结合亲和力。ELISA板包被有250ng/孔纯化的重组SARS-CoV-2tri-S(SEQ ID NO：106)、S1(SEQ ID NO：107)和S-RBD(SEQ ID NO：108)，并与4或10μg/ml的重组单克隆IgG1或IgA抗体和在PBS中的4至7个连续1:4稀释液一起孵育。抗体孵育步骤持续2小时。包被、洗涤、显影和缓冲液如上文所公开。在针对根据本公开内容的SARS-CoV-2刺突(S三聚体或tri-S)、S1亚基和S-RBD(SEQ ID NO：106至108)的ELISA结合测定中OD值>0.5表明结合亲和力的存在(表5)。

在如上文所述的竞争性ELISA测定中测试抗体与本公开内容的抗体交叉竞争或竞争性抑制与SARS-CoV-2刺突(S)(S三聚体或tri-S)和S-RBD蛋白的结合的能力表明，测试抗体可以与该抗体竞争结合SARS-CoV-2刺突(S)(S三聚体或tri-S)和RBD蛋白；根据非限制性理论，这样的抗体可以结合至SARS-CoV-2刺突受体结合结构域上的与与其竞争的抗体相同或相关的(例如，结构上相似或空间上邻近的)表位。

在使用生物素化的SARS-CoV-2tri-S(SEQ ID NO：106)或S-RBD(SEQ ID NO：108)蛋白和ACE2胞外域蛋白(SEQ ID NO：103)的竞争性ELISA结合测定中，根据本发明的抗体抑制SARS-CoV-2刺突(S三聚体或tri-S)和/或S-RBD蛋白与血管紧张素转化酶2(ACE2)的结合。板用纯化的ACE2胞外域蛋白(250ng/孔)包被，并与2μg/ml的重组单克隆抗体和在1μg/ml的生物素化tri-S蛋白存在下的连续稀释液(1:2)，或10或100μg/ml的重组单克隆IgG1抗体和在0.5μg/ml生物素化RBD存在下的连续稀释液(1:2)一起孵育2小时。使用链霉抗生物素蛋白缀合物(例如链霉抗生物素蛋白-HRP)和适当的显色底物检测抗原-抗体复合物。

抗体的抑制活性表示为半最大有效浓度(EC₅₀)，例如抑制50％的与ACE2-胞外域蛋白的tri-S或S-RBD蛋白结合的浓度。EC₅₀值(μg/ml)是基于在所示的各种浓度下的抑制百分比的重构曲线来计算的，如本实施例中所示(参见图3C和3L)。或者，它可以通过测量曲线下面积(AUC)来表示为SARS-CoV-2tri-S或S-RBD蛋白与ACE2胞外域蛋白结合的抑制(或阻断)百分比(表5)。SARS-CoV-2S-RBD或tri-S蛋白与ACE2胞外域结合的竞争性抑制剂具有低于5μg/mL的EC₅₀和/或在竞争性ELISA结合测定中抑制至少70％的SARS-CoV-2S-RBD或tri-S蛋白与ACE2胞外域的结合。

根据本公开内容的抗体结合SARS-CoV-2变体(特别地包括P.1、B.1.1.7和B.1.351)的RBD并阻断RBD与ACE2-胞外域结合的能力使用SARS-CoV-2变体P.1、B.1.1.7和B.1.351(SEQ ID NO：109至111)的S-RBD蛋白，在根据本公开内容的直接和竞争ELISA结合测定中进行测定。RBD结合以及RBD与Cv2.1169、Cv2.5213、Cv2.3235、Cv2.1353和Cv2.3194的ACE2胞外域的结合的阻断显示在图3F、4E至4J中。

或者，根据本公开内容的抗体与SARS-CoV-2变体(特别地包括B.1.617和B.1.1.529)的RBD结合并阻断RBD与ACE2-胞外域结合的能力使用SARS-CoV-2变体B.1.617和B.1.1.529的S-RBD蛋白(SEQ ID NO：122至125)在根据本公开内容的直接和竞争ELISA结合测定中测定。

在使用冠状病毒刺突胞外域(tri-S)蛋白(SEQ ID NO：115至120)的ELISA结合测定中，根据本发明的抗体不与其他冠状病毒(包括其他人致病性β冠状病毒(SARS-CoV-1和MERS-CoV)、α冠状病毒229E-CoV和NL63-CoV以及β冠状病毒A组HKU1-CoV)交叉反应。ELISA板包被有250ng/孔的纯化的重组冠状病毒tri-S蛋白(其包含三聚化基序上的折叠和C端标签(8×HisTag、StrepTag和AviTag))，并与4或10μg/ml的重组单克隆IgG1或IgA抗体和在PBS中的4至7个连续1:4稀释液一起孵育。抗体孵育步骤持续2小时。包被、洗涤、显影和缓冲液如上文所述。在针对根据本公开内容的SARS-CoV-1、MERS-CoV、229E-CoV、NL63-CoV、HKU1-CoV或OC43-CoV刺突蛋白(SEQ ID NO：115至120)的ELISA结合测定中OD值≤0.5表明没有交叉反应性(表5)。

在ELISA结合测定中确定根据本公开内容的抗体的多反应性的不存在。ELISA板包被有500ng/孔的纯化双链(ds)-DNA、KLH、LPS、溶菌酶、甲状腺球蛋白、来自枯草芽孢杆菌的肽聚糖、250ng/孔的胰岛素、来自枯草芽孢杆菌的鞭毛蛋白、MAPK14(9)和PBS中的125ng/孔的YU2 HIV-1Env gp140蛋白。封闭和洗涤步骤后，重组单克隆IgG抗体以4μg/ml和PBS中的7个连续1:4稀释液进行测试。每个实验中均包含对照抗体mGO53(阴性)(3)和ED38(高阳性)(4)。ELISA结合如上文所述进行。OD>0.5(截断值)被视为阳性。用根据本公开内容的抗体Cv2.1169、Cv2.5213、Cv2.3235、Cv2.1353和Cv2.3194获得的结果如图5(A、B、D和F)所示。

在蛋白质微阵列结合测定中确定根据本公开内容的抗体与人蛋白质的反应性的不存在。使用ProtoArray人蛋白质微阵列(Thermo Fisher Scientific)在4℃进行实验。微阵列在封闭溶液(Thermo Fisher)中封闭1小时，洗涤并用2.5μg/ml的IgG抗体孵育1h30，如前所述(9)。洗涤后，将阵列与AF647缀合的山羊抗人IgG抗体(PBS中1μg/ml；Thermo FisherScientific)一起孵育1h30，并使用GenePix 4000B微阵列扫描仪(Molecular Devices)和GenePix Pro6.0软件(Molecular Devices)进行显影，如前所述(9)。使用软件(SICASYS Software GmbH，Germany)对荧光强度进行定量，并使用GraphPad Prism软件(v8.1.2，GraphPad Prism Inc.)针对参考抗体mGO53(非多反应性同种型对照)绘制每种抗体(来自重复蛋白质点)的平均荧光强度(MFI)信号。对于每种抗体，使用/>Prospector软件(v5.2.3，Thermo Fisher Scientific)计算Z分数，并计算对角线偏差(σ)和多反应性指数(PI)值，如先前所述(9)。当PI>0.21时，抗体被定义为多反应性。

在HEp-2细胞上的间接免疫荧光测定(IFA)中确定根据本公开内容的抗体的自身反应性的不存在。根据制造商的说明，使用试剂盒的对照和FITC缀合的抗人IgG抗体作为示踪剂在HEp-2细胞切片(AnA HEp-2Aesku.Diagnostics，Wendelsheim，Germany)上通过间接免疫荧光测定(IFA)测试100μg/ml的重组SARS-CoV-2S特异性和对照IgG抗体(mGO53和ED38)。使用荧光显微镜检查HEp-2切片并以x40放大倍数拍摄照片。用根据本公开内容的抗体Cv2.1169、Cv2.5213、Cv2.3235、Cv2.1353和Cv2.3194获得的结果如图5C所示。

如本文所用，术语“中和抗体”指抑制病毒感染的抗体，特别是通过与SARS-CoV-2刺突(S)蛋白竞争结合宿主细胞上的血管紧张素-转化酶2ACE2受体并通过与RBD结合阻断RBD与ACE2的相互作用来抑制或阻断病毒进入宿主细胞的抗体。抗体的中和活性通过SARS-CoV-2S-融合(S-Fuse)测定来测量。SARS-CoV-2病毒(感染复数(MOI)为0.1)与10μg/ml或5μg/ml的重组单克隆IgA或IgG抗体和在培养基中的连续1:4稀释液一起在室温下孵育30分钟并添加到S-融合细胞培养物中(U2OS-ACE2 GFP1-10和U2OS-ACE2 GFP 11；比例1:1；每孔8×10³)。孵育18小时后，固定细胞并进行细胞核染色。通过共聚焦显微术对显示GFP表达的区域和细胞核数量进行定量。中和百分比根据GFP阳性面积如下计算：100×(1-(有IgA/IgG的值-“未感染”中的值)/(“无IgA/IgG”中的值-“未感染”中的值))(表5)。每种同种型的中和活性以半数最大有效浓度(EC₅₀)表示。EC₅₀值(ng/ml)是根据所示的各种浓度下中和百分比的重构曲线来计算的(参见图3D、3G和3L)。中和抗体具有低于1000ng/mL的EC₅₀，和/或在SARS-CoV-2S-融合测定中中和至少90％的SARS-CoV-2。

如本文所用，术语“ADCC”或“抗体依赖性细胞毒性”和“CDC”或“补体依赖性细胞毒性”活性是指细胞耗尽活性。ADCC和CDC活性可以通过本领域众所周知的并且在实施例中公开的标准方法来测量。使用ADCC报告因子生物测定(Promega)来定量本公开内容的抗体的ADCC活性。在存在或不存在10μg/ml或50μg/ml SARS-CoV2 S特异性或对照mGO53 IgG抗体(3)和PBS中10个连续1:2稀释液的情况下，将Raji-刺突细胞(5x10⁴)与Jurkat-CD16-NFAT-rLuc细胞(5x10⁴)共培养。孵育18小时后测量萤光素酶活性。ADCC测量为与对照抗体相比萤光素酶活性的诱导倍数。低ADCC活性是与对照抗体相比，高出不到2倍。如前所述(10)，使用表达SARS-CoV-2刺突的Raji细胞对本公开内容的抗体的CDC活性进行定量。Raji-刺突细胞(5x10⁴)在50％正常(NHS)或热灭活(HIHS)人血清的存在下以及在有或没有重组IgG抗体(10μg/ml或50μg/ml和PBS中的10个连续1:2稀释液)的情况下进行培养。24小时后，用PBS洗涤细胞，并添加活/死可固定水性死细胞标记物(PBS中1:1,000；Life Technologies)在4℃放置30分钟，然后固定。通过荧光显微术分析细胞。CDC使用以下公式计算：100×(有血清情况下的死细胞％-无血清情况下的死细胞％)/(100-无血清情况下的死细胞％)。低CDC活性为低于3％。

如本文所用，“预防”SARS-CoV-2感染和/或相关疾病是指降低SARS-CoV-2感染和/或相关疾病的风险。

中和抗体

根据本公开内容的中和抗体或其抗原结合片段包括选定的重组抗SARS-CoV-2抗体Cv2.3235、Cv2.5213、Cv2.1169、Cv2.1353和Cv2.3194和Cv2.5179，其结构特征在于其重链可变结构域和轻链可变结构域氨基酸序列，如下表1所述：

表1：Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235以及Cv2.5213和Cv2.5179的可变重链和轻链氨基酸序列。

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根据本公开内容的中和抗体或其抗原结合片段还包括特异性结合SARS-CoV-2-刺突蛋白受体结合结构域(RBD)并且是以下参考抗体中的至少一种的与RBD的结合的竞争性抑制剂的人抗体：

-参考人抗体Cv2.1353，其包含(i)包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的轻链可变区；

-参考人抗体Cv2.3235，其包含(i)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的轻链可变区；和

-参考人抗体Cv2.5179，其包含(i)包含SEQ ID NO：152的氨基酸序列的重链可变区和(ii)包含SEQ ID NO：153的氨基酸序列的轻链可变区。

根据特定的实施方案，根据本公开内容的中和抗体或其抗原结合片段包括特异性结合SARS-CoV-2-刺突蛋白受体结合结构域(RBD)并且是以下参考抗体中的至少一种的与RBD的结合的竞争性抑制剂的人抗体：

-参考人抗体Cv2.1169包含(i)包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的重链和(ii)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的轻链；或者

-参考人抗体Cv2.3194包含(i)包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的轻链。

在根据本公开内容的竞争ELISA结合测定中测定与参考抗体的竞争性抑制(参见定义)。本公开内容涵盖抗SARS-CoV-2抗体，其在根据本公开内容的竞争性ELISA结合测定中抑制参考抗体Cv2.1169、Cv2.5213、Cv2.3235、Cv2.1353、Cv2.3194和Cv2.5179中的至少一种的与SARS-CoV-2刺突和/或S-RBD蛋白的结合的至少30％。参考抗体Cv2.1169、Cv2.5213、Cv2.3235、Cv2.1353、Cv2.3194或Cv2.5179包含上文公开的重链和轻链可变区氨基酸序列，如表1所示。参考抗体优选是IgA或IgG1。IgG1参考抗体优选包含表2所示的全长重链和轻链氨基酸序列：Cv2.1169(SEQ ID NO：13-14)；Cv2.1353(SEQ ID NO：15-16)；Cv2.3194(SEQ ID NO：17-18)；Cv2.3235(SEQ ID NO：19-20)；Cv2.5213(SEQ ID NO：21-22)；Cv2.5179(SEQ ID NO：154-155)。

根据一个可选的优选实施方案，IgG1参考抗体优选包含以下全长重链和轻链氨基酸序列：Cv2.1169“prime”(SEQ ID NO:133-14)；Cv2.1353“prime”(SEQ ID NO:134-16)；Cv2.3194“prime”(SEQ ID NO:135-18)；Cv2.3235“prime”(SEQ ID NO:136-20)；Cv2.5213“prime”(SEQ ID NO:137-22)。

在一些优选的实施方案中，所述抗体是参考人抗体Cv2.1169或Cv2.1169“prime”或Cv2.3194或Cv2.3194“prime”的竞争性抑制剂；优选参考人抗体Cv2.1169。优选地，参考抗体Cv2.1169或Cv2.1169“prime”或Cv2.3194或Cv2.3194“prime”是IgA或IgG1；IgG1参考抗体Cv2.1169或Cv2.1169“prime”或Cv2.3194或Cv2.3194“prime”优选包含全长重链和轻链氨基酸序列，分别为SEQ ID NO：13-14、SEQ ID NO：133-14、SEQ ID NO：17-18和SEQ IDNO：135-18。

在一些具体的实施方案中，该抗体在根据本公开内容的Biacore测定中(参见定义)以600nM至100pM或更小的KD结合选自S-三聚体、S1亚基和S-RBD结构域的至少一种重组SARS-CoV-2S蛋白。在一些优选的实施方案中，S-三聚体蛋白包含序列SEQ ID NO：106或由其组成，S1亚基蛋白包含序列SEQ ID NO：107或由其组成，S-RBD蛋白包含SEQ ID NO：108至111和122至125中的任一个或由其组成，和/或ACE2胞外域蛋白包含SEQ ID NO：103或由其组成。在一些优选的实施方案中，其结合重组SARS-CoV-2S-三聚体，优选包含SEQ ID NO：106，其KD为50nM至300pM或更小；优选KD为10nM至300pM；具体地，KD选自5nM、1nM、500pM和300pM或更小(参见图3A)。在一些优选的实施方案中，其结合重组S1亚基，优选包含SEQ IDNO：107，其KD为600nM至1nM或更小；优选KD为100nM至1nM；更优选KD为25nM至1nM；具体地，KD选自10nM、5nM、2.5nM和1nM或更小(参见图3A)。在一些优选的实施方案中，其结合重组RBD结构域，优选地包含SEQ ID NO：108至111中的任一个；其KD为500nM至100pM或更小；优选KD为100nM至100pM；更优选KD为25nM至100pM；具体地，KD选自10nM、1nM、500pM、400pM、300pM和100pM或更小(参见图3A)。

在一些具体的实施方案中，该抗体结合选自S-三聚体、S1亚基和S-RBD的至少一种重组SARS-CoV-2S蛋白，其结合亲和力高于ACE2胞外域蛋白；优选地至少5、10、25、50、100、250、500或1000倍更高(这意味着该抗体对于S-三聚体、S1亚基和/或S-RBD的KD与ACE2胞外域蛋白的KD相比至少5、10、25、50、100、250、500或1000倍更低)；优选地，其中抗体对重组S-RBD蛋白的结合亲和力与重组ACE2胞外域蛋白的结合亲和力相比至少10、25、50、100、250、500或1000倍更高；更优选地，其中重组S-三聚体、S1亚基和S-RBD蛋白的结合亲和力与重组ACE2胞外域蛋白的结合亲和力相比至少10、25、50、100、250、500或1000倍更高。优选地，其中所述S-三聚体蛋白包含SEQ ID NO：106，所述S1亚基蛋白包含SEQ ID NO：107，所述S-RBD蛋白包含SEQ ID NO：108至111中的任一个，和/或所述重组ACE2胞外域蛋白包含SEQ IDNO：103。

在一些具体的实施方案中，该抗体在根据本公开内容的竞争性ELISA结合测定(参见定义)中竞争性抑制重组SARS-CoV-2刺突蛋白(S三聚体或tri-S)与重组血管紧张素转化酶2(ACE2)胞外域蛋白的结合，其EC₅₀为1μg/mL至0.1μg/mL或更小。在一些实施方案中，抗体竞争性抑制重组SARS-CoV-2刺突蛋白(S三聚体或tri-S)与重组血管紧张素-转化酶2(ACE2)胞外域蛋白的结合，其EC₅₀选自1μg/mL或更小、0.5μg/mL或更小、0.4μg/mL或更小、0.3μg/mL或更小、0.2μg/mL或更小和0.1μg/mL或更小，如在根据本公开内容的竞争ELISA结合测定中测定的。(参见图3C和3L)。在一些实施方案中，在如上文所述的竞争ELISA结合测定中，抗体阻断重组SARS-CoV-2tri-S和/或RBD蛋白与重组ACE2胞外域蛋白的至少70％、80％或90％的结合(表5)。优选地，其中所述S-三聚体蛋白包含SEQ ID NO：106，所述S-RBD蛋白包含SEQ ID NO：108至111中的任一个，和/或所述胞外域蛋白包含SEQ ID NO：103。

在一些上述实施方案中，重组SARS-CoV-2S-三聚体、S1和/或RBD蛋白来自分离株野生型-Hu-1或其在RBD结构域中包含突变的变体。RBD结构域中的突变优选是取代，更优选选自N501Y、E484K、K417N和K417T突变中的一种或多种。在一些优选的实施方案中，SARS-CoV-2变体选自B.1.1.7、P.1和B.1.351谱系。在一些更优选的实施方案中，重组SARS-CoV-2S-三聚体、S1和/或RBD蛋白选自SEQ ID NO：106至111。

在一些具体的实施方案中，抗体以20ng/mL至1ng/mL的半数最大有效浓度(EC₅₀)中和SARS-CoV-2和/或在根据本公开内容的SARS-CoV-2S-融合测定(参见定义)中中和至少90％的SARS-CoV-2。在一些优选的实施方案中，抗体以选自20ng/mL或更小、15ng/mL或更小、10ng/mL或更小、5ng/mL或更小和1ng/mL或更小的半最大有效浓度(EC₅₀)中和SARS-CoV-2。

在一些具体的实施方案中，该抗体中和至少一种选自以下的SARS-CoV-2：分离株野生型-Hu-1、SARS-CoV-2变体D614G和包含RBD结构域中的突变的SARS-CoV-2变体。RBD结构域中的突变优选是取代，更优选选自N501Y、E484K、K417N和K417T取代中的一种或多种。在一些优选的实施方案中，SARS-CoV-2变体选自B.1.1.7、P.1和B.1.351谱系。在一些优选的实施方案中，该抗体中和SARS-CoV-2分离株野生型-Hu-1和至少一种选自B.1.1.7、P.1和B.1.351谱系的SARS-CoV-2变体；优选地，该抗体中和SARS-CoV-2分离株野生型-Hu-1和SARS-CoV-2变体谱系B.1.1.7、P.1和B.1.351。

在一些具体的实施方案中，在根据本公开内容的ELISA结合测定(参见定义)中，抗体不与其他冠状病毒发生交叉反应。在一些优选的实施方案中，所述抗体不与选自以下的一种或多种冠状病毒反应：人致病性β冠状病毒(B/C组)SARS-CoV-1和MERS-CoV；α冠状病毒NL63-CoV和229E-CoV；和β冠状病毒A组HKU1-CoV(SEQ ID NO：115至120的刺突蛋白)。在一些优选的实施方案中，该抗体不与SARS-CoV-1、MERS-CoV、NL63-CoV、OC43-CoV、HKU1-CoV和229E-CoV交叉反应。

在一些具体的实施方案中，与对照抗体相比，抗体在根据本公开内容的ELISA结合测定中不具有多反应性(参见定义)。在一些具体的实施方案中，与对照抗体相比，根据本公开内容的抗体在HEp-2细胞的间接免疫荧光测定(IFA)中不具有自身反应性(参见定义)。在一些具体的实施方案中，抗体在根据本公开内容的蛋白质微阵列结合测定中不具有与人蛋白质的预测的反应性(参见定义)。

在一些具体的实施方案中，在根据本公开内容的对表达SARS-CoV-2刺突的Raji细胞的CDC测定中，抗体具有低水平的CDC活性(例如，小于3％)(参见定义)。在一些具体的实施方案中，抗体在根据本公开内容的ADCC报告因子生物测定中具有低水平的ADCC活性(例如，与对照抗体相比高不到2倍)(参见定义)。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：3、5、7、9、11和152，例如SEQID NO：3和7，优选SEQ ID NO：3。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或其抗原结合片段包含：

a)包含与SEQ ID NO：3具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：4具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；

b)包含与SEQ ID NO：5具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：6具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；

c)包含与SEQ ID NO：7具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：8具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；

d)包含与SEQ ID NO：9具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：10具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或者

e)包含与SEQ ID NO：11具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：12具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或者

f)包含与SEQ ID NO：152具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：153具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区。

在一些具体的实施方案中，a)至f)中任一项，例如a)至e)中任一项中的重链和轻链可变区包含与上文公开的序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

具有与上述定义的氨基酸序列中的任一个具有至少90％，例如至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的抗SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段是本公开内容的一部分，通常抗SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段在根据本公开内容的S融合测定中具有与由SEQ ID NO：3的重链和SEQ ID NO：4的轻链组成的所述抗SARS-CoV-2抗体相比至少相等或更高的中和活性。

a)包含与SEQ ID NO：3具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：4具有至少99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；

b)包含与SEQ ID NO：5具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：6具有至少99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；

c)包含与SEQ ID NO：7具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：8具有至少99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；

d)包含与SEQ ID NO：9具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：10具有至少99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；

e)包含与SEQ ID NO：11具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：12具有至少99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或者

f)包含与SEQ ID NO：152具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：153具有至少99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区。

特别地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含与SEQ ID NO：3或SEQ ID NO7具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：8具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；更优选地，SEQ ID NO：3的重链可变区，和SEQID NO：4的轻链可变区

优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含与SEQ ID NO：3具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID NO：4具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；更优选地，SEQ ID NO：3的重链可变区为，和SEQ ID NO：4的轻链可变区。

优选地，抗体或其抗原结合片段包含：

a)包含与SEQ ID NO：3具有至少99％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO：4具有至少99％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；或者

b)包含与SEQ ID NO：7具有至少99％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO：8具有至少99％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

如本文所用，两个序列之间的百分比同一性是序列共有的相同位置的数量的函数(即，％同一性＝相同位置的数量/位置总数x100)，其中考虑了缺口的数量以及每个缺口的长度，其需要被引入以实现两个序列的最佳比对。序列的比较和两个序列之间的百分比同一性的确定可以使用数学算法来完成，如下所述。

两个氨基酸序列或核苷酸序列之间的百分比同一性可以使用已并入ALIGN程序(版本2.0)的E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.,4:11-17,1988)的算法来确定，其中使用PAM120权重残基表，12的缺口长度罚分，和4的缺口罚分。或者，两个氨基酸序列或核苷酸序列之间的百分比同一性可以使用已被并入GCG软件包中的GAP程序(可在http://www.gcg.com获得)的Needleman和Wunsch(J.Mol,Biol.48:444-453,1970)算法，其中使用Blossom 62矩阵或PAM250矩阵，和16、14、12、10、8、6或4的缺口权重，和1、2、3、4、5或6的长度权重。

两个核苷酸或氨基酸序列之间的百分比同一性也可以使用例如算法例如用于核酸或氨基酸序列的BLASTN程序使用11的默认字长(W)、10的期望值(E)、M＝5，N＝4和两条链的比较来确定。

全长轻链和重链氨基酸序列显示于表2中。

表2：Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235以及Cv2.5213和Cv2.5179的全长重链和轻链氨基酸序列。恒定同种型区(人IgG1)的氨基酸序列以粗体表示。

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因此，在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或其抗原结合片段包含选自以下的重链氨基酸序列：SEQ ID NO：13、15、17、19和21，特别是SEQ ID NO：13和17，优选SEQ ID NO：13。

在一些其他具体的实施方案中，根据本公开内容的抗体或其抗原结合片段包含选自以下的重链氨基酸序列：SEQ ID NO：133、134、135、136和137和154，优选SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：133。

在一些更具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)与SEQ ID NO：13具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：14具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，

b)与SEQ ID NO：15具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：16具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，

c)与SEQ ID NO：17具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：18具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，

d)与SEQ ID NO：19具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：20具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，或

e)与SEQ ID NO：21具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：22具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列；

f)与SEQ ID NO：154具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：155具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列。

在一些具体的实施方案中，a)至f)中任一项，例如a)至e)中任一项中的重链和轻链氨基酸序列与上文公开的序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性

在一些其他更具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：与SEQ IDNO：154具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：155具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，重链和轻链氨基酸序列与上文公开的序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。

在一些其他更具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)与SEQ ID NO：133具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：14具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，

b)与SEQ ID NO：134具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：16具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，

c)与SEQ ID NO：135具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：18具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，

d)与SEQ ID NO：136具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：20具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，或

e)与SEQ ID NO：137具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：22具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列；

优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含与SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：133具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：14具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列；更优选地，所述抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：133的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：14的轻链氨基酸序列。

具有与上述定义的氨基酸序列中的任一个具有至少90％，例如至少95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的抗SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段其是本公开内容的一部分，通常抗SARS-CoV-2抗体与由SEQ ID NO:13或SEQ ID NO：133的重链和SEQ ID NO：14的轻链组成的所述抗SARS-CoV-2抗体相比具有至少相等或更高的中和活性。

可以使用的根据本公开内容的其他中和性抗SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包括包含如下表3所示的Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235或Cv2.5213或Cv2.5179的6个CDR的任何抗体。

表3：根据Kabat编号的Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235、Cv2.5213和Cv2.5179的CDR区。

在一些具体的实施方案中，根据本公开内容的抗SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：

a)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，

b)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：29的重链CDR1、SEQ ID NO：30的重链CDR2和SEQ ID NO：31的重链CDR3，

c)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，

d)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：41的重链CDR1、SEQ ID NO：42的重链CDR2和SEQ ID NO：43的重链CDR3，或

e)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：47的重链CDR1、SEQ ID NO：48的重链CDR2和SEQ ID NO：49的重链CDR3，

f)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：138的重链CDR1、SEQ ID NO：139的重链CDR2和SEQ ID NO：140的重链CDR3。

优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3。

在一个更具体的实施方案中，所述抗SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段包含：

a)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3，

b)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：29的重链CDR1、SEQ ID NO：30的重链CDR2和SEQ ID NO：31的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：32的轻链CDR1、SEQID NO：33的轻链CDR2和SEQ ID NO：34的轻链CDR3，

c)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3，

d)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：41的重链CDR1、SEQ ID NO：42的重链CDR2和SEQ ID NO：43的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：44的轻链CDR1、SEQID NO：45的轻链CDR2和SEQ ID NO：46的轻链CDR3，

e)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：47的重链CDR1、SEQ ID NO：48的重链CDR2和SEQ ID NO：49的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：50的轻链CDR1、SEQID NO：51的轻链CDR2和SEQ ID NO：52的轻链CDR3或

f)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：138的重链CDR1、SEQ ID NO：139的重链CDR2和SEQ ID NO：140的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：141的轻链CDR1、SEQ ID NO：142的轻链CDR2和SEQ ID NO：143的轻链CDR3。

优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：

SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及

SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2，和SEQ ID NO：28的轻链CDR3。

还考虑了可以进一步筛选或优化抗体或其抗原结合片段的如上定义的中和特性。具体地，考虑了单克隆抗体或其抗原结合片段可以在本文提供的单克隆抗体的1、2、3、4、5或6个CDR的氨基酸序列中(特别是在SEQ ID NO：23-52的CDR中)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变。考虑了位于抗体的轻或重可变区的VJ或VDJ区的CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5或CDR6的位置1、2、3、4、5、6、7、8、9或10中的氨基酸可以具有保守或非保守氨基酸的插入、缺失或取代。下面公开了可以被取代或构成取代的此类氨基酸。在一些具体的实施方案中，单克隆抗体或抗原结合片段在本文提供的单克隆抗体的1、2、3、4、5或6个CDR的氨基酸序列中(特别是在SEQ ID NO：23-52的CDR中)具有1或2个保守取代。

在一些实施方案中，氨基酸差异是保守性取代，即，用具有相似化学或物理性质(大小、电荷或极性)的另一种氨基酸取代，该取代通常不会不利地影响抗体的生物化学、生物物理和/或生物学特性。特别地，取代不会破坏抗体与刺突糖蛋白抗原的相互作用和中和特性。所述保守取代有利地在以下五组之一中选择：第1组-小的脂肪族、非极性或微极性残基(A、S、T、P、G)；第2组-极性、带负电荷的残基及其酰胺(D、N、E、Q)；第3组-极性、带正电荷的残基(H、R、K)；第4组-大的脂肪族、非极性残基(M、L、I、V、C)；以及第5组-大的芳香族残基(F、Y、W)。

由其CDR结构域定义的根据本公开内容的中和抗体或其抗原结合片段可以包含如下表所定义的Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235、Cv2.5213和Cv2.5179抗体的框架区FR1、FR2、FR3和FR4。

表4：Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235、Cv2.5213和Cv2.5179的框架区。

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在本公开内容的一个具体方面，公开了如上文通过其CDR结构域所定义的抗体或其抗原结合片段，其中:

a)可变重链结构域包含选自以下的框架FR1的氨基酸序列：SEQ ID NO：53、61、69、77、85和144，选自以下的框架FR2的氨基酸序列：SEQ ID NO：54、62、70、78、86和145，选自以下的框架FR3的氨基酸序列：SEQ ID NO：55、63、71、79、87和146，和/或选自以下的框架FR4的氨基酸序列：SEQ ID NO：56、64、72、80、88和147；和/或，

b)可变轻结构域包含选自以下的框架FR1的氨基酸序列：SEQ ID NO：57、65、73、81、89和148，选自以下的框架FR2的氨基酸序列：SEQ ID NO：58、66、74、82、90和149，选自以下的框架FR3的氨基酸序列：SEQ ID NO：59、67、75、83、91和150，和/或选自以下的框架FR4的氨基酸序列：SEQ ID NO：60、68、76、84、92和151。

a)可变重链结构域包含选自以下的框架FR1的氨基酸序列：SEQ ID NO：53、61、69、77和85，选自以下的框架FR2的氨基酸序列:SEQ ID NO：54、62、70、78和86，选自以下的框架FR3的氨基酸序列：SEQ ID NO：55、63、71、79和87，和/或选自以下的框架FR4的氨基酸序列：SEQ ID NO：56、64、72、80和88；和/或，

b)可变轻结构域包含选自以下的框架FR1的氨基酸序列：SEQ ID NO：57、65、73、81和89，选自以下的框架FR2的氨基酸序列:SEQ ID NO：58、66、74、82和90，选自以下的框架FR3的氨基酸序列：SEQ ID NO：59、67、75、83和91，和/或选自以下的框架FR4的氨基酸序列：SEQ ID NO：60、68、76、84和92。

特别地，考虑了单克隆抗体或其抗原结合片段可以在本文提供的单克隆抗体的1、2、3、4、5、6、7、8个FR的氨基酸序列中，特别是SEQ ID NO：53-92的FR中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个改变。考虑了FR序列具有保守或非保守氨基酸的插入、缺失或取代。上面公开了可以被取代或构成取代的此类氨基酸。在一些具体的实施方案中，单克隆抗体或抗原结合片段在本文提供的单克隆抗体的1、2、3、4、5、6、7、8个FR的氨基酸序列中，特别是在SEQ ID NO：53-92和144-151的FR中，特别是在SEQ ID NO：53-92的FR中具有1、2、3、4、5个；优选1或2个保守取代。

根据本公开内容的变体抗体是与SARSV-CoV-2刺突蛋白RBD特异性结合的功能性抗体，并且表现出与如上文所述的相应参考抗体人抗体Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235或Cv2.5213的相应功能特性基本上等同或更优的功能特性。本文中的“基本上等同”意指功能变体保留参考人抗体的相应功能特性的至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。

在一个更具体的实施方案中，由其CDR结构域限定的所述抗体或其抗原结合片段包含以下框架结构域：

-SEQ ID NO：53的VHFR1

-SEQ ID NO：54的VHFR2，

-SEQ ID NO：55的VHFR3

-SEQ ID NO：56的VHFR4，

-SEQ ID NO：57的VLFR1，

-SEQ ID NO：58的VLFR2

-SEQ ID NO：59的VLFR3，和

-SEQ ID NO：60的VLFR4。

在另一个具体的实施方案中，由其CDR结构域限定的所述抗体或其抗原结合片段包含以下框架结构域：

-SEQ ID NO：69的VHFR1

-SEQ ID NO：70的VHFR2，

-SEQ ID NO：71的VHFR3

-SEQ ID NO：72的VHFR4，

-SEQ ID NO：73的VLFR1，

-SEQ ID NO：74的VLFR2

-SEQ ID NO：75的VLFR3，和

-SEQ ID NO：76的VLFR4。

在本公开内容的具体的实施方案中，如上文所述的抗体的可变区可以与抗体恒定区(如IgA、IgM、IgE、IgD或IgG例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)缔合。所述抗体的可变区优选与IgG或IgA恒定区；优选IgG1或IgA(IgA1、IgA2)恒定区。这些恒定区可以通过本领域已知的方法进一步突变或修饰，特别是用于修饰它们对Fc受体的结合能力或增强抗体半衰期。包含IgA恒定区的抗体可以进一步包含J链和/或分泌组分以产生聚合或分泌性IgA。

如本文所用，术语“IgG Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C端区，包括天然序列Fc区和变体Fc区。人IgG重链Fc区通常定义为包含IgG抗体的从位置C226或从P230到羧基端的氨基酸残基。Fc区残基的编号是Kabat的EU索引的编号。Fc区的C端赖氨酸(残基K447)可以在例如抗体的产生或纯化过程中被除去。因此，本公开内容的抗体组合物可包含所有K447残基被去除的抗体群体、没有K447残基被去除的抗体群体、以及具有有和没有K447残基的抗体的混合物的抗体群体。

在一个具体的实施方案中，根据本公开内容的抗SARS-CoV-2抗体是沉默抗体。如本文所用，术语“沉默”抗体是指不表现出ADCC活性或表现出低ADCC活性的抗体。沉默的效应子功能可以通过抗体Fc区的突变获得，并且已经在本领域以下文献中描述：Strohl 2009(LALA&N297A)；Baudino 2008,D265A(Baudino等人,J.Immunol.181(2008):6664-69,Strohl,CO Biotechnology 20(2009):685-91)。沉默Fc IgG1抗体的实例包含IgG1 Fc氨基酸序列中的N297A或L234A和L235A突变。

在本文所述的任何抗体或抗原结合片段的另一个具体的实施方案中，变体人Fc恒定区包含Kabat的EU索引中的M428L和N434S取代(LS)以增强抗体半衰期。在一些实施方案中，本公开内容的抗体不包含能够基本上结合FcgRIIIA(CD16)多肽的Fc结构域。在一些实施方案中，本公开内容的抗体缺乏Fc结构域(例如缺乏CH2和/或CH3结构域)。

其他突变是G236A/A330L/I332E，本文称为“GAALIE，其提高针对病原体的抗病毒功效(Bournazos等人,Nature,2020,588,485-490)。M428L和N434S取代(LS)有利地与G236A/A330L/I332E组合。

本公开内容考虑的本文的抗体的另一种修饰是聚乙二醇化或hesylation或相关技术。抗体可以被聚乙二醇化以例如增加抗体的生物(例如血清)半衰期。为了聚乙二醇化抗体，抗体或其片段通常在一个或多个PEG基团与抗体或抗体片段附接的条件下与聚乙二醇(PEG)(例如PEG的反应性酯或醛衍生物)反应。聚乙二醇化可以通过与反应性PEG分子(或类似的反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应来进行。如本文所用，术语“聚乙二醇”旨在涵盖已用于衍生其他蛋白质的任何形式的PEG，例如单(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方案中，待聚乙二醇化的抗体是非糖基化抗体。用于聚乙二醇化蛋白质的方法是本领域已知的并且可以应用于本公开内容的抗体。参见例如Nishimura等人的EP0154316以及Ishikawa等人的EP0401384。

本文考虑的抗体的另一种修饰是缀合物或融合蛋白。抗体或其抗原结合片段可以融合至另一个感兴趣的蛋白质部分或缀合至感兴趣的药剂。该药剂可以是例如治疗剂；用于抗体检测的标记或增加抗体半衰期的蛋白质。在一些实施方案中，至少本公开内容的抗体的抗原结合区与血清蛋白(例如人血清白蛋白或其片段)融合以增加所得分子的半衰期。在其他实施方案中，根据本公开内容的抗体或抗原结合片段还包含可检测标记。优选的标记包括荧光团，例如伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明、四甲基罗丹明、曙红、绿色荧光蛋白、赤藓红、香豆素、甲基香豆素、芘、孔雀绿、芪、荧光黄、级联蓝、德克萨斯红、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯、藻红蛋白、荧光稀土配合物例如包括铕和铽的那些、花青染料家族成员例如Cy3和Cy5、分子信标及其荧光衍生物、发色团标记；发光标记，例如鲁米诺；放射性标记，例如¹⁴C,¹²³I,¹²⁴I,¹²⁵I,³²P,³³P,³⁵S,或³H等；亲和配体标记，例如链霉抗生物素蛋白/生物素、抗生物素蛋白/生物素或抗同种型抗体；酶标记，例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、萤光素酶、β半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；酶辅因子标记；半抗原缀合物标记，例如地高辛或二硝基苯基；拉曼信号生成标记；磁性标记；自旋标记；表位标记，例如FLAG或HA表位；重原子标记；纳米颗粒标记、电化学标记；光散射或等离子体共振材料，例如金或银颗粒或量子点；球壳标记；半导体纳米晶标记；以及本领域已知的其他标记，其中所述标记能够允许在有或没有第二检测分子的情况下可视化。

在一些实施方案中，所述抗体是聚合的。聚合抗体包含Ig聚合物或由Ig聚合物组成。聚合抗体优选是衍生自如上定义的单克隆抗体的聚合单克隆抗体。Ig聚合物包含二聚体或由二聚体组成。除了Ig分子之外，聚合抗体通常还包含免疫球蛋白连接(J)链。J链是由血浆或骨髓瘤细胞表达的137个氨基酸的多肽，其通过半胱氨酸残基之间的二硫键与两个Ig分子共价结合来调节Ig聚合物的形成。特别地，二聚体抗体由两个单体Ig分子形成，它们共价结合J链。在优选的实施方案中，所述抗体是聚合IgA，优选衍生自如上定义的单克隆抗体的聚合IgA单克隆抗体。

在一些实施方案中，抗体是分泌性抗体。分泌性抗体能够跨上皮细胞转运至浆膜组织的管腔表面。分泌性抗体通常是聚合抗体，优选聚合IgA，其包含Ig的含有J链的聚合物和分泌组分(SC)的复合物。分泌组分是与含有J链的聚合Ig结合的聚合免疫球蛋白受体(pIgR)的胞外部分的蛋白水解裂解产物。分泌性抗体优选是衍生自如上定义的单克隆抗体的分泌性IgA单克隆抗体。

在一些优选的实施方案中，中和抗体是重组人单克隆抗体，优选IgG1或IgA同种型。IgA可以是单体、聚合或分泌性IgA；它优选是聚合或分泌性IgA。在一些更优选的实施方案中，重组抗体是沉默抗体，其可以进一步包含突变和/或修饰以增强抗体半衰期，如上文所述。

本发明还涉及抗体的抗原结合片段，其含有可变结构域，所述可变结构域包含如上文所述的CDR结构域，所述抗原结合片段为例如Fv、dsFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2。具体地，所述抗原结合片段是F(ab')2片段。F(ab')2片段可以通过在铰链二硫键下方胃蛋白酶消化抗体来产生；它包含两个Fab’片段，和另外地免疫球蛋白分子的铰链区的一部分。Fab片段是可通过木瓜蛋白酶消化抗体获得的单体片段；它们包含整个L链和H链的VH-CH1片段，其通过二硫键结合在一起。通过切割铰链区中的二硫键可以从F(ab')2片段获得Fab'片段。F(ab')2片段是二价的，即类似天然免疫球蛋白分子，它们包含两个抗原结合位点；另一方面，Fv(构成Fab的可变部分的VHVL二聚体)、dsFv、scFv、Fab和Fab’片段是单价的，即它们包含单个抗原结合位点。本公开内容的这些基本抗原结合片段可以组合在一起以获得多价抗原结合片段，例如双抗体、三抗体或四抗体。这些多价抗原结合片段也是本发明的一部分。Fv片段由通过疏水相互作用缔合在一起的抗体的VL和VH结构域组成；在dsFv片段中，VH:VL异二聚体通过二硫键稳定；在scFv片段中，VL和VH结构域通过柔性肽接头彼此连接，从而形成单链蛋白。

-选自以下的重链可变结构域：

重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：138的重链CDR1、SEQ ID NO：139的重链CDR2和SEQ ID NO：140的重链CDR3；或者

重链可变结构域，其包含以下的至少一个、优选全部三个：SEQ IDNO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，或具有一个或两个保守取代的变体；或者

和

-选自以下的轻链可变结构域：

在一些具体的实施方案中，抗体是完整抗体或抗原结合片段。

在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段进一步包含如上表4中定义的Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235和Cv2.5213和Cv2.5179抗体或其如上文公开的变体的框架区FR1、FR2、FR3和FR4。在一些实施方案中，抗体包含如上表1中所定义的Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235和Cv2.5213和Cv2.5179抗体或其如上文公开的变体的重链和/或轻链可变结构域。抗体的重链和/或轻链可变结构域优选与可以如上文公开的进一步修饰的IgG或IgA恒定区缔合。

在一些具体的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含如上表2中定义的Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235和Cv2.5213和Cv2.5179抗体或其如上文公开的变体的重链和/或轻链。

在一些具体的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含可变区，该可变区是以下V(D)J重组事件中的至少一种的产物：

(i)V基因等位基因IGHV1-58*01与J基因等位基因IGHJ3*02和V基因等位基因IGKV3-20*01与J基因等位基因IGKJ1*01(例如Cv2.5179和Cv2.1169)；

(ii)V基因等位基因IGHV3-53*01与J基因等位基因IGHJ6*02和V基因等位基因IGKV1-9*01与J基因等位基因IGKJ3*01(例如Cv2.5213)；

(iii)V基因等位基因IGHV3-53*01与J基因等位基因IGHJ6*02和V基因等位基因IGKV3-20*01与J基因等位基因IGKJ4*01(例如Cv2.3194)；

(iv)V基因等位基因IGHV3-66*02与J基因等位基因IGHJ3*02和V基因等位基因IGKV1-9*01与G基因等位基因IGKJ3*01(例如Cv2.1353)；或者

(v)V基因等位基因IGHV3-53*01与J基因等位基因IGHJ6*02和V基因等位基因IGKV1-9*01与J基因等位基因IGKJ5*01(例如Cv2.3235)。

在一些具体的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含可变区，其是以下V(D)J重组事件的产物：

(i)V基因等位基因IGHV1-58*01与J基因等位基因IGHJ3*02；或者

(ii)V基因等位基因IGKV3-53*01与J基因等位基因IGHJ6*02。

(i)V基因等位基因IGKV3-20*01与J基因等位基因IGKJ1*01；或者

(ii)V基因等位基因IGKV3-20*01与J基因等位基因IGKJ4*01。

在一些优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含可变区，其是以下V(D)J重组事件中的至少一种的产物：

(i)V基因等位基因IGHV1-58*01与J基因等位基因IGHJ3*02和V基因等位基因IGKV3-20*01与J基因等位基因IGKJ1*01；或者

(ii)V基因等位基因IGHV3-53*01与J基因等位基因IGHJ6*02和V基因等位基因IGKV3-20*01与J基因等位基因IGKJ4*01。

核酸、宿主细胞、抗体产生

本文还公开了编码本公开内容的抗SARS-CoV-2抗体的核酸分子。

通常，所述核酸是重组的、合成的或半合成的核酸，其可在适合抗体表达或产生、特别是人抗体产生的宿主细胞中表达。宿主细胞可以是用于重组抗体产生的细胞或用于体内抗体产生的患者细胞。通常，核酸可以是DNA、RNA或混合分子，其可以进一步被修饰和/或包含在任何合适的表达载体中。本文所用的术语“载体”和“表达载体”是指通过其可以将DNA或RNA序列(例如外源基因)引入宿主细胞中以转化宿主并促进引入的序列的表达(例如转录和翻译)的媒介物。重组载体可以是用于真核或原核表达的载体例如质粒、用于细菌引入的噬菌体、能够转化酵母的YAC、病毒载体并且尤其是逆转录病毒载体，或任何表达载体。选择本文定义的表达载体以使得能够在体外或体内产生抗体。

因此，本公开内容的另一个目的涉及包含本文所述的核酸的载体。

核酸分子的实例是编码如前一节中公开的抗SARS-CoV-2抗体的可变轻链和重链氨基酸序列并且使用遗传密码并且任选地考虑了取决于宿主细胞物种的密码子偏倚的那些。

核酸分子或构建体序列有利地经过密码子优化以用于在适合于在宿主细胞、特别是哺乳动物细胞中产生抗体的宿主细胞中表达。密码子优化用于通过提高靶基因的翻译效率来改善生物体中的蛋白质表达水平。用于在所需宿主中进行密码子优化的适当方法和软件是本领域众所周知并且是公开可得的(参见例如Raab等人，Systems and SyntheticBiology,2010,4,(3),215-225中的GeneOptimizer软件套件)。

用于抗体产生的宿主细胞可以是真核细胞或原核细胞。原核细胞特别是细菌。真核细胞包括酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。

通常，编码Cv2.1169抗体的可变重链和轻链的核酸分别包含序列SEQ ID NO：93和SEQ ID NO：94或由其组成，编码Cv2.1353抗体的可变重链和轻链的核酸分别包含序列SEQID NO：95和SEQ ID NO：96或由其组成，编码Cv2.3194抗体的可变重链和轻链的核酸包含序列SEQ ID NO：97和SEQ ID NO：98或由其组成，编码Cv2.3235抗体的可变重链和轻链的核酸分别包含序列SEQ ID NO：99和SEQ ID NO：100或由其组成以及编码Cv2.5213抗体的可变重链和轻链的核酸分别包含序列SEQ ID NO：101和SEQ ID NO：102或由其组成，编码Cv2.5179抗体的可变重链和轻链的核酸分别包含序列SEQ ID NO：156和SEQ ID NO：157或由其组成。

具有与上述定义的核苷酸序列中的任一个具有至少80％，例如至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的核苷酸序列的编码本公开内容的抗SARS-CoV-2抗体的核酸也是本公开内容的一部分。

本公开内容还涉及衍生自后一序列的核酸分子，所述序列已针对在宿主细胞、特别是真核细胞、优选哺乳动物细胞例如CHO或HEK细胞系或人细胞中的蛋白质表达进行了优化。

在一些实施方案中，所述核酸分子是真核表达盒，优选哺乳动物表达盒，其中抗体编码序列可操作地连接至适当的调节序列以用于其在抗体产生细胞或患者细胞中的表达。本领域众所周知的此类序列特别包括启动子，以及能够进一步控制转基因表达的其他调节序列，例如但不限于增强子、终止子和内含子。启动子可以是在抗体产生细胞中具有功能的组织特异性的、普遍存在的、组成型的或诱导型的启动子。此类启动子是本领域众所周知的并且它们的序列可在公共序列数据库中获得。

在一些具体的实施方案中，核酸是RNA，优选mRNA，其中抗体轻链和/或重链的编码序列可操作地连接至适当的调节序列以用于其在个体的靶细胞或组织中的表达。mRNA疗法是本领域众所周知的。mRNA被递送到宿主细胞的细胞质中，其中表达产生感兴趣的治疗蛋白。mRNA构建体包含帽结构、5'和3'非翻译区(UTR)、开放阅读框(ORF)以及3'多聚(A)尾。mRNA构建体可以是非复制mRNA(MRM)或自扩增mRNA(SAM)。SAM包含源自正链mRNA病毒(最常见的是诸如辛德比斯病毒和塞姆利基森林病毒的甲病毒)的遗传复制机制。在SAM构建体中，编码病毒结构蛋白的ORF被编码感兴趣的治疗性蛋白的转录物取代，并且保留病毒RNA依赖性RNA聚合酶以指导复制子构建体的细胞质扩增。反式复制RNA公开于例如WO2017/162461中。WO2017/162460中公开了来自甲病毒属的适合基因表达的RNA复制子。mRNA制造过程使用含有DNA依赖性RNA聚合酶启动子(例如T7)的质粒DNA(pDNA)以及mRNA构建体的相应序列。pDNA被线性化，以用作用于转录mRNA的DNA依赖性RNA聚合酶的模板，并随后通过DNase处理步骤进行降解。5'帽和3'多聚(A)尾的添加可以在体外转录步骤中或在转录后通过酶促方式实现。可以通过使用鸟苷基转移酶和2'-O-甲基转移酶来完成帽的酶促添加，以分别产生Cap0(^N7MeGpppN)或Cap1(^N7MeGpppN^2’-oMe)结构，而多聚A尾可以通过酶促添加通过多聚腺苷酸聚合酶来实现。然后使用适合mRNA纯化的标准方法(例如高压液相色谱(HPLC)等)纯化mRNA。用于产生mRNA的方法公开于例如WO2017/182524中。

为了提高经处理的受试者细胞中的翻译效率，根据本发明的mRNA包含针对在人中的表达而密码子优化的序列。对根据本发明的mRNA构建体进行进一步改进以提高其体内稳定性和翻译效率，包括优化5'-UTR和3'UTR的长度和调节元件序列；帽结构中的碱基和/或糖修饰以增加核糖体相互作用和/或mRNA稳定性；和修饰的核苷。修饰的核苷可能位于5'-UTR、3'-UTR或ORF中。修饰的核苷的实例包括假尿苷和N-1-甲基假尿苷，其去除了蛋白激酶R激活的细胞内信号传导触发因素。减少进入细胞的RNA降解的修饰的核苷的实例公开于WO2013/039857中。修饰的帽结构公开于WO2011/015347和WO2019/175356中。优化的3'-UTR序列公开于WO2017/059902中。改善RNA稳定性和翻译效率的修饰的多聚A序列公开于US2020/0392518中。具有改善的稳定性和翻译效率的修饰的mRNA还公开于WO2007/036366中。

本发明可以使用适合于将核酸递送和表达到个体细胞中、特别是适合于核酸治疗的任何载体。本领域众所周知的此类载体包括病毒和非病毒载体。非病毒载体包括通常用于将核酸引入或维持到个体细胞中的各种(非病毒)试剂。用于通过各种方式将核酸引入个体细胞的试剂尤其包括基于聚合物的、基于颗粒的、基于脂质的、基于肽的递送载体或其组合，例如但不限于阳离子聚合物、树枝状聚合物、胶束、脂质体、脂多聚复合物、外泌体、微粒和纳米颗粒，包括脂质纳米颗粒(LNP)和病毒样颗粒；和细胞穿透肽(CPP)。用于将核酸维持在个体细胞中的试剂尤其包括裸核酸载体，例如质粒、转座子和微环。根据被称为病毒转导的过程，病毒载体本质上能够穿透到细胞中并将感兴趣的核酸递送到细胞中。如本文所用，术语“病毒载体”是指被改造用于将遗传物质递送至细胞内的非复制、非致病性病毒。在病毒载体中，复制和毒力所必需的病毒基因被感兴趣的转基因的表达盒所取代。因此，病毒载体基因组包含侧翼为病毒载体产生所需的病毒序列的转基因表达盒。如本文所用，术语“重组病毒”是指通过本领域已知的标准重组DNA技术产生的病毒，特别是病毒载体。本文所用的术语“病毒颗粒”或“病毒粒子”意指非致病性病毒特别是病毒载体的胞外形式，其由被蛋白质外壳(称为衣壳)和在某些情况下源自宿主细胞膜部分并包括病毒糖蛋白的包膜包围的由DNA或RNA制成的遗传物质组成。如本文所用，病毒载体是指病毒载体颗粒。这些载体具有最少的真核序列，以最小化染色体整合的可能性。此外，这些方法可以有利地组合以将本发明的核酸引入并维持到个体的细胞中。

在一些实施方案中，如上文所公开的根据本发明的mRNA与本领域众所周知的适合于将mRNA递送至哺乳动物宿主细胞中的核酸递送剂组合。mRNA递送剂可以是聚合物载体、聚阳离子蛋白或肽、脂质纳米颗粒或其他。例如，可以使用聚合物，特别是阳离子聚合物，例如聚乙烯亚胺(PEI)、聚-L-赖氨酸(PEL)、聚乙烯胺(PVA)或聚烯丙胺(PAA)将mRNA(非复制或自扩增)递送至细胞中，其中mRNA优选以单体、二聚体、三聚体或寡聚体的形式存在，如WO2021/001417中公开的。或者，mRNA可以与复合物(polyplex)颗粒形式的聚亚烷基亚胺组合，适合于肌内施用，如WO2019/137999或WO2018/011406中所公开。mRNA还可以与聚阳离子、特别是鱼精蛋白组合，如WO2016/000792中所公开的。一种或多种mRNA分子可以配制在阳离子脂质纳米颗粒(LNP)内；例如，制剂可以包含20-60％阳离子脂质；5-25％非阳离子脂质、25-55％甾醇和0.5-15％PEG修饰的脂质，如WO2015/164674所公开的。mRNA还可以配制在RNA装饰的颗粒中，例如RNA装饰的脂质颗粒，优选RNA装饰的脂质体，如WO2015/043613中公开的。

在具体的实施方案中，载体是颗粒或囊泡，特别是基于脂质的微米或纳米囊泡或颗粒，例如脂质体或脂质纳米颗粒(LNP)。在更具体的实施方案中，核酸是RNA，特别是mRNA，并且载体是颗粒或囊泡，特别是如上文所述的LNP。LNP:mRNA质量比可以约为10:1至30:1。

在其他实施方案中，核酸是DNA，优选地包含在表达载体例如质粒或病毒载体中。本发明还涉及包含根据本公开内容的核酸的载体。优选地，载体是重组整合或非整合病毒载体。重组病毒载体的实例包括但不限于源自逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒(AAV)、疱疹病毒、痘病毒和其他病毒的载体。逆转录病毒尤其包括慢病毒载体，例如人免疫缺陷病毒，包括HIV 1型(HIV-1)和HIV 2型(HIV-2)载体。

在一些优选的实施方案中，表达载体包含选自以下的一对核酸序列：与SEQ IDNO：93具有至少90％同一性的序列和与SEQ ID NO：94具有至少90％同一性的序列；与SEQID NO：95具有至少90％同一性的序列以及与SEQ ID NO：96具有至少90％同一性的序列；与SEQ ID NO：97具有至少90％同一性的序列和与SEQ ID NO：98具有至少90％同一性的序列；与SEQ ID NO：99具有至少90％同一性的序列和与SEQ ID NO：100具有至少90％同一性的序列；与SEQ ID NO：101具有至少90％同一性的序列和与SEQ ID NO：102具有至少90％同一性的序列。

在一些更优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.1169抗体重链的质粒Cv2.1169_pIgH，特别是包含在用Cv2.1169_pIgH转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.1169_pIgH根据布达佩斯条约条款于2021年1月28日以编号I-5651保藏在法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.1169抗体轻链的质粒Cv2.1169_pIgL，特别是包含在用Cv2.1169_pIgL转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.1169_pIgL根据布达佩斯条约条款于2021年1月28日以编号I-5652保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.1353抗体重链的质粒Cv2.1353_pIgH，特别是包含在用Cv2.1353_pIgH转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.1353_IgH根据布达佩斯条约条款于2021年4月2日以编号I-5668保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.1353抗体轻链的质粒Cv2.1353_pIgL，特别是包含在用Cv2.1353_pIgL进行转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.1353_IgL根据布达佩斯条约条款于2021年4月2日以编号I-5669保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.3194抗体重链的质粒Cv2.3194_pIgH，特别是包含在用Cv2.3194_pIgH转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.3194_IgH根据布达佩斯条约条款于2021年4月2日以编号I-5670保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.3194抗体轻链的质粒Cv2.3194_pIgL，特别是包含在用Cv2.3194_pIgL转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.3194_IgL根据布达佩斯条约条款于2021年4月2日以编号I-5671保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.3235抗体重链的质粒Cv2.3235_pIgH，特别是包含在用Cv2.3235_pIgH转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.3235_IgH根据布达佩斯条约条款于2021年4月2日以编号I-5672保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.3235抗体轻链的质粒Cv2.3235_pIgL，特别是包含在用Cv2.3235_pIgL转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.3235_IgL根据布达佩斯条约条款于2021年4月2日以编号I-5673保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.5213抗体重链的质粒Cv2.5213_pIgH，特别是包含在用Cv2.5213_pIgH转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.5213_IgH根据布达佩斯条约条款于2021年4月2日以编号I-5674保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

在一些优选的实施方案中，用于表达本公开内容的抗体的重组载体是编码可表达形式的Cv2.5213抗体轻链的质粒Cv2.5213_pIgL，特别是包含在用Cv2.5213_pIgL转化的大肠杆菌细菌(DH10B，C3019，NEB)中。这些细菌Cv2.5213_IgL根据布达佩斯条约条款于2021年4月2日以编号I-5675保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

根据本公开内容的多核苷酸通过本领域已知的常规方法制备。例如，它是通过PCR或RT-PCR扩增核酸序列、通过与同源探针杂交筛选基因组DNA文库或者通过全部或部分化学合成来产生的。通过本领域已知的常规重组DNA和基因工程技术构建重组载体并引入宿主细胞。

本公开内容的另一个目的涉及已被根据本发明的核酸和/或载体转染、感染或转化的宿主细胞。本文所用的术语“转化”是指将“外源”(即外来的或细胞外的)基因、DNA或RNA序列引入宿主细胞，使得宿主细胞将表达引入的基因或序列以产生所需的物质，通常是由引入的基因或序列编码的蛋白质或酶。转化可以是顺时的或随着时间推移是稳定的。稳定转化可以通过将核酸整合到宿主细胞基因组中来实现。接受并表达引入的DNA或RNA的宿主细胞已被“转化”。

所述宿主细胞可以是原核细胞例如细菌或真核细胞例如酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞。哺乳动物细胞可以是猿、人、狗和啮齿动物细胞。用于表达本公开内容的抗体的哺乳动物宿主细胞具体包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)，包括与DHFR选择标记物(如Kaufman和Sharp，1982中所述)一起使用的dhfr-CHO细胞(Urlaub和Chasin，1980中所述)，CHOK1 dhfr+细胞系、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞，例如GS CHO细胞系以及GS Xceed^TM基因表达系统(Lonza)，HEK-293细胞(ATCC CRL-1573)。在一个优选的实施方案中，所述宿主细胞是CHO细胞或HEK-293。

本公开内容的多核苷酸、载体或细胞可用于使用熟知的重组DNA技术产生本发明的蛋白质。多核苷酸或载体也可用于如下所公开的核酸治疗。

本公开内容的抗体可以使用例如本领域众所周知的重组DNA技术和基因转染方法的组合在宿主细胞转染瘤中产生(Morrison，1985)。为了表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染至宿主细胞中。术语“转染”的各种形式旨在涵盖通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞中的多种技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。当将编码抗体基因的重组表达载体引入宿主细胞，特别是真核细胞如哺乳动物细胞时，通过将宿主细胞培养足以在宿主细胞中表达抗体和任选地将抗体分泌到其中生长宿主细胞的培养基中的时间来产生抗体。可以使用标准蛋白质纯化方法例如从分泌后的培养基中回收和纯化抗体(Shukla等人，2007)。

药物组合物和治疗用途

在另一个方面，本公开内容提供了组合物，例如药物组合物，其含有本文公开的抗体、抗原结合片段、核酸或载体，其与药学上可接受的载体、佐剂和防腐剂中的至少一种一起配制。例如，组合物包含选自Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235、Cv2.5179和Cv2.5213的抗体、它们的抗原结合片段或编码如本文所公开的所述抗体或抗原结合片段的核酸或载体。

在一些实施方案中，如本文所公开的，核酸是mRNA，优选地是修饰的mRNA；如本文所公开的，mRNA包括修饰的mRNA有利地配制在颗粒或囊泡中，特别是LNP。

如本文所用，术语“药学上可接受的”意指经监管机构或公认的药典例如欧洲药典批准用于动物和/或人。术语“赋形剂”是指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂、载体或媒介物。

任何合适的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂可用于制备药物组合物(参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Alfonso R.Gennaro(Editor)Mack Publishing Company,April 1997)。药物组合物通常是无菌的并且在制造和储存条件下是稳定的。药物组合物可以配制为溶液(例如盐水、葡萄糖溶液或缓冲溶液，或其他药学上可接受的无菌流体)、微乳液、脂质体或其他适合容纳高产品浓度的有序结构(例如微粒或纳米颗粒)。载体可以是溶剂或分散介质，包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。适当的流动性可以例如通过使用包衣如卵磷脂、通过在分散体的情况下维持所需的粒度以及通过使用表面活性剂来维持。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇或氯化钠。

在一些实施方案中，药物组合物用于全身、局部或与局部组合的全身施用。肠胃外药物组合物包括适合于静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内施用的组合物。局部施用优选是经呼吸系统的，例如通过鼻施用、吸入、吹入或支气管肺泡灌洗。施用可以是肠胃外注射或输注、局部递送或吸入或持续递送。优选地，施用是通过注射、吸入或与吸入组合的注射。优选地，注射是静脉内、皮下或肌内。吸入有利地通过雾化进行。

在一些实施方案中，药物组合物包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例是抗氧化剂和抗菌剂。在一些实施方案中，防腐剂以已知浓度存在。组合物中防腐剂的存在将该组合物区别于自然界中存在的任何组合物。它还赋予组合物以任何天然存在的组合物中不存在的独特功能，例如在某些实施方案中在其中防腐剂有用的某些条件下用于治疗的能力。

在一些实施方案中，药物组合物包含确定浓度的本发明的重组人抗体。此类组合物不是天然存在的并且具有与任何天然存在的组合物不同的结构。已知浓度的重组抗体赋予组合物以任何天然存在的组合物中不存在的独特功能，例如在某些实施方案中，在其中确定浓度的重组抗体有用的某些条件下用于治疗的能力。

在一些实施方案中，包含IgA、特别是本文公开的聚合或分泌性IgA的药物组合物用于粘膜施用，特别是施用至呼吸道，优选通过雾化或吸入。包含IgA、特别是聚合(例如，IgA的J链二聚化)或分泌性IgA的药物组合物优选作为预防性治疗，以预防SARS-CoV-2感染。

在一些实施方案中，包含IgG、优选IgG1的药物组合物用于注射，特别是静脉内、皮下或肌内注射。

这些药物组合物仅是示例性的并且不限制适合于其他肠胃外和非肠胃外施用途径的药物组合物。本文所述的药物组合物可以以单一单位剂量或多剂量形式包装。

优选地，药物组合物含有媒介物，其对于能够注射的制剂是药学上可接受的。这些特别可以是等渗的、无菌的盐溶液(磷酸一钠或磷酸二钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙或氯化镁等或这些盐的混合物)，或干燥的、尤其是冷冻干燥的组合物，其在添加时取决于无菌水或生理盐水的情况，允许配制可注射溶液。可以使用用于吸入或注射的缓释(sustainedrelease)制剂，例如PLA或PLGA或其他聚合物。

在某些方面，本公开内容涉及根据前述实施方案中任一项的抗体、其抗原结合片段或药物组合物，其用作药物。

在某些方面，本公开内容提供了根据前述实施方案中任一项的抗体、其抗原结合片段或组合物的治疗用途，优选用于治疗、预防或减轻有需要的受试者中的SARS-CoV-2相关或介导的病症的症状。

本文使用的术语“受试者”或“患者”是指哺乳动物。可以受益于所公开的治疗方法的哺乳动物物种包括但不限于人、非人灵长类动物例如猿、黑猩猩、猴子和红毛猩猩、驯养动物包括狗和猫以及家畜例如马、牛、猪、绵羊和山羊，或其他哺乳动物物种，包括但不限于小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、仓鼠等。

如本文所用，术语“治疗”、“医治”或“疗治”是指旨在改善患者健康状况的任何行为，例如疾病的治疗、防止、预防和延缓。在某些实施方案中，这样的术语是指疾病或与疾病相关的症状的改善或根除，例如根据本公开内容，肺中的病毒负载和/或炎症水平的降低。在其他实施方案中，该术语指由向患有此类疾病的受试者施用一种或多种治疗剂而导致的最小化疾病的传播或恶化。

在进一步的方面，本公开内容涉及在有需要的受试者中治疗和/或降低发生SARS-CoV-2相关病症的风险的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的如上文所述的抗体、其抗原结合片段、核酸或载体或药物组合物。

在一些实施方案中，受试者没有感染SARS-CoV-2并且治疗是预防性治疗。

在一些具体的实施方案中，该方法是降低发生SARS-CoV-2相关的COVID-19疾病的风险的方法，其中通过治疗降低住院风险或死亡风险。在一些具体的实施方案中，在向受试者施用治疗有效量的如上文所述的抗体、其抗原结合片段、核酸或载体或药物组合物后，发生SARS-CoV-2相关的COVID-19疾病的风险的降低持续至少3或4个月，优选5或6个月，更优选7至9个月。

在一些实施方案中，受试者是COVID-19患者并且治疗是治愈性治疗。

在一些具体的实施方案中，该方法是治疗SARS-CoV-2相关的COVID-19疾病的方法，其中通过治疗降低了发展严重疾病的可能性；其中住院的可能性通过治疗而降低；其中受试者是住院的。

在一些具体的实施方案中，该方法是治疗SARS-CoV-2相关的COVID-19疾病的方法，其中受试者处于发展SARS的风险中，更具体地是患有并发基础病况例如肥胖、糖尿病、癌症、处于免疫抑制治疗下、具有原发性免疫缺陷或对疫苗无反应的受试者。患有并发基础病况的受试者的非限制性实例包括接受抗CD20抗体治疗的受试者、患有淋巴血液病的受试者、实体器官移植接受者或同种异体造血干细胞移植接受者。

在本发明的上下文中，“有效量”是指治疗有效量。如本文所用，“治疗有效量”是指在所需剂量和持续时间下有效实现所需治疗结果(例如预防或治疗SARS-CoV-2感染，特别是减少肺中的病毒负荷和/或炎症水平)的量。本发明的产品或包含其的药物组合物的治疗有效量可以根据因素诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及产品或药物组合物在个体中引发所需反应的能力而变化。可以调整剂量方案以提供最佳的治疗反应。治疗有效量通常也是其中产品或药物组合物的任何毒性或有害作用被治疗有益作用胜过的量。

本公开内容的产品通常包含在药物组合物或药物中，任选地与药物载体、稀释剂和/或佐剂组合。此类组合物或医药产品包含足以提供所需治疗效果的有效量的本公开内容的产品以及药学上可接受的载体或赋形剂。

在一个实施方案中，通过肠胃外途径，特别是通过静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内途径，向受试者或患者施用用于其治疗用途的抗体或抗原结合片段或药物组合物。在另一个具体的实施方案中，通过吸入将用于其治疗用途的抗体或抗原结合片段或药物组合物施用于受试者或患者。

施用至受试者或患者的本发明的产品的量可以取决于个体受试者或患者的具体情况(包括个体的年龄、性别和体重；疾病的性质和阶段、疾病的侵袭性；施用途径；和/或已为受试者或患者开出的伴随药物)而变化。可以调整剂量方案以提供最佳的治疗反应。

对于任何特定受试者，可以根据个体需要和施用组合物或监督组合物的施用的人的专业判断随时间调整具体剂量方案。本文阐述的剂量范围仅是示例性的并且不限制执业医师可以选择的剂量范围。

在一个实施方案中，可以将根据本公开内容的抗体或抗原结合片段以2.5mg/kg至40mg/kg(kg：受试者或患者的体重)范围内的量或剂量施用于受试者或患者用于治疗SARS-CoV-2相关疾病。在更具体的实施方案中，抗体或抗原结合片段以5至30mg/kg范围内的量施用。在更具体的实施方案中，对于体重70kg的人，以8.5至28.5mg/kg范围内的量施用抗体或抗原结合片段。在更具体的实施方案中，以至少5mg/kg，优选10mg/kg，更优选15mg/kg，更优选30mg/kg的剂量施用抗体或抗原结合片段。

在一些实施方案中，药物组合物包含在试剂盒中，该试剂盒还可包含描述如何向患者施用包含在试剂盒内的产品的说明书或包装材料。试剂盒的容器可以是任何合适的材料，例如玻璃、塑料、金属等，并且可以是任何合适的尺寸、形状或构造。在某些实施方案中，试剂盒可包括一个或多个安瓿或注射器，其含有合适液体或溶液形式的本发明的产品。

本发明的另一方面涉及医疗装置，其包含根据本公开内容的药物组合物。该医疗装置是适合于组合物的施用的形式。在一些实施方案中，医疗装置适合于组合物的注射；所述医疗装置有利地选自注射器、输液袋、注射口以及本领域众所周知的其他装置。在其他实施方案中，医疗装置适合于组合物的呼吸道施用；所述医疗装置有利地选自吸入器、雾化器，例如小体积雾化器以及本领域众所周知的其他装置。

本发明的另一个方面涉及根据本公开内容的药物组合物在制造用于预防或治疗SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病的药物中的用途。

诊断试剂、试剂盒和方法

包含根据本公开内容的抗原结合位点的抗体或其片段对SARS-CoV-2具有特异性，并且特别地不与其他冠状病毒(包括人致病性β冠状病毒(B/C组)SARS-CoV-1和MERS-CoV；α冠状病毒NL63-CoV和229E-CoV以及β冠状病毒A组HKU1-CoV)交叉反应(表5)。因此，它们可用作检测各种样品(特别是生物或环境样品)中的SARS-CoV-2感染或污染的试剂。

样品是怀疑含有SARS-CoV-2的任何样品，例如特别是生物或环境样品。生物样品可以是任何组织、体液或粪便。体液的非限制性实例包括全血、血清、血浆、尿液、脑脊液(CSF)和粘膜分泌物，例如但不限于口腔和呼吸道分泌物(痰、唾液等)。样品包括拭子，例如口腔或鼻咽(NP)拭子、吸出物、洗涤物或灌洗物。用于SARS-CoV-2的诊断检测的样品可取自上呼吸道(鼻咽/口咽拭子、鼻吸出物、鼻洗液或唾液)或下呼吸道(痰或气管吸出物或支气管肺泡灌洗液(BAL))。优选的生物样品包括鼻咽拭子和唾液样品。样品还包括可能含有SARS-CoV-2的环境样品，如空气、水、土壤、食物、饮料、饲料、水(例如淡水、盐水、废水和饮用水)、污水、污泥、环境表面等。环境表面样品例如是表面拭子或擦拭物。

检测或诊断通过本领域众所周知的免疫测定技术进行，并且依赖于使用适当标记检测抗原-抗体复合物。本发明的方法可以使用任何免疫测定，例如但不限于免疫印迹、免疫沉淀、ELISA、免疫细胞化学或免疫组织化学和免疫荧光样流式细胞术测定和FACS。流式细胞术，也称为流式病毒测定法、纳米级流式细胞术或简称小颗粒流式细胞术，是一种用于定量通过感染的细胞释放的完整病毒颗粒的快速、高通量且有效的方法。

本发明涵盖用于检测样品中的SARS-CoV-2的方法，其包括：使所述样品与根据本公开内容的抗体接触并检测所形成的抗原-抗体复合物。

本发明的方法可以使用在免疫测定中使用的任何适当的标记，例如酶、化学发光、荧光染料/蛋白质或放射性试剂或其他。标记可以位于与抗原结合的抗体或其片段上，或者位于与标记缀合的结合配偶体例如二抗或抗生物素蛋白/链霉抗生物素蛋白上。

优选地，以缀合物或融合蛋白的形式标记抗体，并且通过如上文所述可用于该目的的任何适当手段测量来自标记的信号来检测抗原-抗体复合物。

在一些实施方案中，抗原检测通过ELISA、侧流免疫测定或基于珠子的免疫测定进行。

检测步骤可以是定性的或半定量的，并且可以包括检测样品中病毒抗原的存在或水平。在一些实施方案中，检测步骤包括测定混合物中结合的抗原的量，并且任选地将混合物中结合的抗原的量与至少一种预定值进行比较。

使用本发明的方法检测来自个体的生物样品中病毒抗原的存在或水平指示该个体是否患有SARS-CoV-2感染或相关的COVID-19疾病。

因此，本发明的上述方法可用于诊断个体中的SARS-CoV-2感染或相关的COVID-19疾病，以及监测COVID-19患者中的治疗。

该治疗可以是抗病毒治疗或使用SARS-CoV-2中和抗体的免疫治疗。

在一些实施方案中，上述方法是诊断方法，其包括由此推断个体是否患有SARS-CoV-2感染或相关疾病的步骤。

在一些实施方案中，上述方法是监测COVID-19患者中的治疗的方法，包括由此推断治疗是否有效的步骤。治疗效果是通过与治疗前或治疗过程中在患者中测定的先前病毒抗原水平相比病毒抗原水平的降低来确定的。

在与本发明的该方面相关的一些实施方案中，上述诊断方法包括取决于个体是否被诊断患有SARS-CoV-2病毒感染和特别是COVID-19相关疾病而向个体施用适当的治疗的进一步步骤。

在与本发明的该方面相关的一些实施方案中，上述监测COVID-19患者中的治疗的方法包括当确定所述治疗在患者中无效时修改COVID-19治疗的进一步步骤。

在另一个方面，本公开内容进一步涉及用于检测或诊断SARS-CoV-2感染或污染的试剂盒，其至少包含抗体或其抗原结合片段，优选进一步包含可检测标记。试剂盒任选地包含用于检测抗原/抗体复合物的试剂。可用于该目的的试剂是本领域众所周知的，并且包括但不限于缓冲液、与标记缀合的二抗、与标记缀合的抗生物素蛋白/链霉抗生物素蛋白。在本发明的试剂盒的一些优选实施方案中，抗体和任选的试剂是冻干形式以允许环境储存。试剂盒的组分一起包装到适合于抗原/抗体复合物检测的各种容器中，例如板、载玻片、孔、皿、珠、颗粒、杯、链、芯片、条带等。该试剂盒任选地包括用于执行本发明的方法的至少一个具体的实施方案的说明书。在一些有利的实施方案中，试剂盒包含微孔板或微管，优选为干燥形式，即，其中微管或板的孔包含至少含有抗体的干燥组合物，并且优选还包含用于检测抗原/抗体复合物的所有试剂。在一些其他有利的实施方案中，抗体和任选的试剂被包括在可用于免疫测定的任何装置中。

除非另有说明，否则本发明的实践将采用本领域技术范围内的常规技术。这样的技术在文献中有充分的解释。

现在将参照附图通过以下非限制性的实施例来举例说明本发明，其中：

附图说明

图1.从恢复期的COVID-19个体中克隆的SARS-CoV-2刺突特异性记忆抗体。

(A)点图显示了与SARS-CoV-2tri-S结合的IgG抗体作为曲线下面积(AUC)值，其通过ELISA用来自CORSER(n＝212；两个时间点t1和t2)和法国COVID-19队列(n＝159；一些样品进行超时随访)中恢复期COVID-19个体的系列稀释的血清测定。所有点分别显示在(B)和(C)中测试的所选样品。

(B)热图显示了来自CORSER(n＝8)和法国COVID-19(n＝34)队列的选定恢复期COVID-19个体针对SARS-CoV-2tri-S和RBD蛋白的IgG、IgG亚类和IgA血清反应性，如图2B中测量的。还对样品进行了针对MERS tri-S的测试，以测定与另一种β冠状病毒的交叉反应性。

(C)热图显示了从选定的恢复期供体中纯化的血清IgG和IgA抗体针对SARS-CoV-2抗原和来自其他冠状病毒(α冠状病毒；β冠状病毒)的三聚刺突蛋白的抗体结合，如图2D和2E中测量的。RBD，受体结合结构域；FP，融合肽。

(D)该图显示了来自选定的COVID-19恢复者的纯化的血清IgG和IgA抗体的体外SARS-CoV-2中和活性(上图)。计算出的IC₅₀值显示在下图的热图中。

(E)流式细胞图显示来自恢复期供体的血液中的SARS-CoV-2S-结合IgG⁺和IgA⁺记忆B细胞。左上角的流式细胞术直方图显示了SARS-CoV-2S结合IgG⁺和IgA⁺记忆B淋巴细胞中RBD⁺细胞的比例。

(F)气泡图显示从恢复期供体的SARS-CoV-2S结合IgG⁺和IgA⁺记忆B细胞中克隆的人单克隆IgG抗体对SARS-CoV-2S蛋白的反应性，如通过S-Flow(Y轴)、tri-S ELISA(X轴)和tri-S-捕获ELISA(气泡大小)测量的。对于每个供体，饼图显示了来自克隆的抗体的SARS-CoV-2S特异性抗体的比例(顶部；饼图中心所示的总数)以及每个SARS-CoV-2S特异性B细胞克隆家族中的变体数量(n)。

图2.来自COVID-19恢复者的血清、纯化的多克隆和单克隆抗体的SARS-CoV-2反应性。

(A)该图比较了针对与SARS-CoV-2tri-S的ELISA IgG抗体结合使用来自CORSER(n＝212)和法国COVID-19队列(n＝159)以及流行前供体(n＝100)中恢复期COVID-19个体的系列稀释的血清进行测量的单次稀释OD测量值(1:400)(X轴)和AUC值(Y轴)，如之前报道的(2)。

(B)ELISA图显示了来自CORSER(n＝8)和法国COVID-19(n＝34)队列中选定的恢复期COVID-19个体的血清IgG和IgA抗体针对SARS-CoV-2tri-S和RBD蛋白的反应性。还对样品进行了针对MERS tri-S的测试，以测定与另一种β冠状病毒的交叉反应性。显示了重复值的平均值。DF，稀释因子。

(C)相关性图比较了血清IgG和IgA抗体与SARS-CoV-2tri-S、MERS-CoV tri-S和RBD蛋白的AUC结合值，如(A)中确定的。p值使用双尾皮尔逊相关检验计算。

(D)ELISA图显示了来自选定供体(n＝10)的纯化的IgG和IgA血清抗体针对SARS-CoV-2蛋白和蛋白亚基的反应性。显示了重复值的平均值。

(E)与(D)相同，但针对来自其他冠状病毒的三聚刺突蛋白。

(F)ELISA图显示从SARS-CoV-2S捕获的记忆B细胞(n＝133)克隆的抗体针对SARS-CoV-2tri-S蛋白的反应性。显示了重复值的平均值。

图3.有效的抗RBD抗体中和剂的结合和中和特性-与图12和13相关。

(A)SPR传感图比较了中和性抗RBD IgG抗体与SARS-CoV-2S三聚体、S1和RBD蛋白的结合的相对亲和力。计算出的K_D值显示在底部。

(B)竞争ELISA图(左图)比较了在Cv2.1169作为潜在竞争剂存在的情况下，选定的生物素化抗RBD抗体与SARS-CoV-2tri-S(上图)和RBD(下图)的IgG结合。误差线表示重复值的SD。热图(右图)显示了选定的抗RBD抗体对tri-S和RBD结合的竞争，如图4D所示。黑色表示竞争剂的更强抑制作用；灰色表示低竞争或无竞争。

(C)竞争ELISA图显示，在抗RBD抗体作为竞争剂存在的情况下，生物素化的SARS-CoV-2tri-S蛋白与固定化的可溶性ACE2胞外域的结合。误差线表示重复值的SD

(D)该图显示了通过伪中和(上图)和S-融合中和(下图)测定确定的选定抗RBDIgG抗体对SARS-CoV-2的中和曲线。误差线表示一式三份测定的SD。IC₅₀值显示在左上角。

(E)热图比较了RBD特异性IgG抗体与SARS-CoV-2的细胞表达的刺突蛋白和选定病毒变体的结合，如通过流式细胞术测量的。每个单元格中显示重复log10ΔgMFI值的几何平均值。

(F)热图比较了RBD特异性IgG抗体对SARS-CoV-2的RBD蛋白和选定病毒变体(B.1.1.7、B.1.351和P.1)的结合(左图)和RBD-ACE2阻断能力(右图)，如图4E-4G中测量的。黑色表示高结合或竞争，而灰色表示中等结合或竞争(白色＝无结合)。每个单元格中显示AUC值。

(G)该图显示了通过S-融合中和测定确定的抗RBD IgG抗体对SARS-CoV-2病毒变体的中和曲线。误差线表示测定重复的SD。

(H)热图比较了使用伪中和(下图)和S-融合中和(上图)测定的选定抗RBD抗体针对SARS-CoV-2和选定VOC的IC₅₀中和值，如图14D和14E所示。

(I)热图显示与刺突蛋白(上图)和RBD蛋白(中图)的结合、RBD-ACE2阻断能力(中图)和中和活性(下图)，但针对Cv2.5179抗体，如图7B-E中测量的。

(J)雷达图比较了Cv2.1169 IgG和IgA抗体与SARS-CoV-2tri-S、S1和RBD以及与来自SARS-CoV-2病毒变体(粗体；B.1.1.7、B.1.351和P.1)的RBD蛋白结合。

(K)雷达图比较了单体Cv2.1169 IgG和IgA抗体与SARS-CoV-2tri-S、S1和RBD蛋白以及与来自选定病毒变体(粗体)的RBD的结合，如图4J中所测量的

(L)竞争ELISA图(左图)比较了生物素化的SARS-CoV-2tri-S蛋白与固定化可溶性ACE2胞外域在Cv2.1169 IgG或IgA作为竞争剂存在的情况下的结合。误差线表示重复值的SD。图表(右图)比较了使用伪中和测定确定的Cv2.1169 IgG、IgA和IgA Fab的SARS-CoV-2中和活性。误差线表示重复值的SD。

(M)该图比较了使用S-融合中和测定确定的单体和二聚IgA(dIgA)Cv2.1169抗体的SARS-CoV-2中和活性。误差线表示一式三份值的SD。n.dIgA，根据结合位点数量的标准化值。

图4.有效的抗RBD抗体中和剂的结合特性

(A)红外免疫印迹显示SARS-CoV-2S特异性IgG抗体(n＝101)对变性的SARS-CoV-2tri-S蛋白的反应性。免疫反应带(上图)对应于用抗6xHis标签抗体显示的变性SARS-CoV-2tri-S蛋白。下图中的条带表示识别变性tri-S蛋白的SARS-CoV-2抗体Cv2.3132，其特征在于SEQ ID NO 164的重链可变区和SEQ ID NO 165的轻链可变区。

(B)红外点印迹显示Cv2.3132抗体对各种浓度的变性SARS-CoV-2tri-S蛋白的反应性。mGO53是非SARS-CoV-2同种型对照。Cv2.1169被纳入用于比较。

(C)该图显示Cv2.3132 IgG抗体针对15聚体S2重叠5-氨基酸肽的反应性(n＝52)。mGO53是非SARS-CoV-2同种型对照。显示了重复值的平均值±SD。

(D)竞争ELISA图显示了在相应的非生物素化IgG抗体作为潜在的竞争剂的存在下，选定生物素化SARS-CoV-2S特异性抗体与SARS-CoV-2tri-S(上图)和RBD(下图)的IgG结合。显示了重复值的平均值±SD。

(E)ELISA图显示SARS-CoV-2RBD特异性IgG抗体对SARS-CoV-2病毒变体(B.1.1.7(α)、B.1.351(β)和P.1(γ))的RBD蛋白的反应性。显示了重复OD_405nm值的平均值±SD。

(F)竞争ELISA图显示来自SARS-CoV-2和病毒变体(B.1.1.7(α)、B.1.351(β)和P.1(γ))的生物素化RBD蛋白与可溶性ACE2胞外域在SARS-CoV-2S特异性IgG抗体作为潜在竞争剂的存在下的结合。显示了重复值的平均值±SD。

(G)与(F)相同，但选定的IgG竞争剂针对B.1.1.7和B.1.351以更高浓度测试RBD蛋白。显示了重复值的平均值。

(H)与(E)相同，但针对来自SARS-CoV-2病毒变体κ、δ和δ+的RBD蛋白。

(I)与(F)相同，但针对来自SARS-CoV-2病毒变体κ、δ和δ+的RBD蛋白。

(J)ELISA图比较了Cv2.1169的单体IgG/IgA和二聚IgA(dIgA)抗体形式与SARS-CoV-2tri-S、S1和RBD以及来自SARS-CoV-2病毒变体(α、β、γ、δ、δ+和κ)的RBD蛋白的反应性。显示了重复OD_405nm值的平均值±SD。

图5.有效的SARS-CoV-2中和抗体的多反应性和自身反应性评估

(A)ELISA图显示选定的SARS-CoV-2中和抗体针对dsDNA(DNA)、鞭毛蛋白(Fla)、YU2 HIV-1Env(gp140)、胰岛素(INS)、匙孔血蓝蛋白(KLH)、脂多糖(LPS)、溶菌酶(LZ)、MAPK-14(MAPK)、蛋白聚糖(PG)和甲状腺球蛋白(Tg)的反应性；mGO53(3)和ED38(4)分别是阴性和阳性对照抗体。(C)中显示HEp-2反应性的抗SARS-CoV-2S抗体Cv2.3132也被纳入用于比较。显示了重复值的平均值。

(B)热图比较了从(A)中所示的ELISA结合分析确定的曲线下面积(AUC)值。较深的颜色表示高结合，而浅色显示中等结合(白色＝无结合)。

(C)显微图像显示通过间接免疫荧光测定法测定的选定SARS-CoV-2抗体对表达HEp2的自身抗原的反应性。实验中包括阴性(mGO53)、低阳性(ED38)和试剂盒的阳性(Ctr+)对照。HEp-2反应性抗SARS-CoV-2S抗体Cv2.3132也被纳入用于比较。比例尺代表40μm。

(D)条形图显示通过ELISA测量的选定SARS-CoV-2抗体的HEp-2反应性。显示了重复值的平均值±SD。Ctr+和Ctr-分别是试剂盒的阳性对照和阴性对照。

(E)代表性微阵列图显示选定的SARS-CoV-2抗体对人蛋白质的反应性。图(上图)显示了分别在y轴和x轴上通过参考抗体(Ref：mGO53)和测试抗体在每个蛋白质点上给出的平均荧光强度(MFI)值。每个点代表重复阵列蛋白质的平均值。图(下图)显示了参考抗体(Ref：mGO53，y轴)和测试抗体(x轴)对单个蛋白质给出的z分数。

(F)频率直方图显示选定SARS-CoV-2抗体的MFI信号与从两个独立实验(阵列#1和#2)获得的非反应性抗体mGO53相比的log₁₀蛋白质位移(σ)。多反应性指数(PI)对应于所有阵列蛋白质位移的高斯平均值。浅灰色(5213、1169和1353)和深灰色(3235和3194)直方图分别表示非多反应性和多反应性抗体。

图6.有效的SARS-CoV-2中和剂Cv2.1169的体内治疗活性

(A)示意图显示了在SARS-CoV-2感染的K18-hACE2小鼠中Cv2.1169抗体治疗的实验设计(上图)。动物经鼻内(i.n.)感染10⁴个噬斑形成单位(PFU)的SARS-CoV-2病毒，并在6小时后腹膜内(i.p.)注射约10mg/kg(0.25mg)和约20mg/kg(0.5mg)的Cv2.1169或同种型对照IgG抗体。图表显示动物组中初始体重(％Δ重量，左下图)和存活率(右下图)的演变。使用Log-rank Mantel-Cox检验在Kaplan-Meier分析中对小鼠组进行比较。

(B)与(A)相同，但使用感染10⁵PFU的K18-hACE2小鼠，并在22小时后用1mg i.p.的Cv2.1169 IgG抗体(约40mg/kg)或用1mg+0.4mg Cv2.1169 IgG抗体(分别为i.p.和i.n.)治疗的K18-hACE2小鼠。

(C)与(A)相同，但使用用Cv2.1169 IgG和IgA抗体以约5mg/kg(0.125mg)i.p.治疗的感染小鼠。

(D)示意图显示了SARS-CoV-2感染的叙利亚金黄仓鼠中Cv2.1169抗体治疗的实验设计(上图)。动物经鼻内(i.n.)感染6x10⁴个噬斑形成单位(PFU)的SARS-CoV-2病毒，并在24小时后接受腹膜内(i.p.)注射的PBS、约10mg/kg(1mg)的Cv2.1169或同种型对照IgG抗体。点图显示了在5dpi下测量的动物组中的肺重量/体重比(LW/BW)x100(左图)、感染性(中图)和RNA负载(右图)。使用双尾Mann-Whitney检验对仓鼠组进行比较。

(E)与(D)相同，但4小时后用约5mg/kg(0.5mg)i.p.的Cv2.1169 IgG和IgA抗体治疗受感染动物。

(F)与(A)相同，但使用感染了10⁴PFU的SARS-CoV-2变体β(B.1.351)，并且在感染前6小时用约5mg/kg(0.5mg)的Cv2.1169 IgA预处理或在感染后6小时用约5mg/kg(0.5mg)的Cv2.1169 IgG或同种型对照(ctr)处理的K18-hACE2小鼠。

图7.V_H1-58编码的SARS-CoV-2刺突捕获的记忆B细胞抗体。

(A)由SARS-CoV-2刺突捕获的记忆B细胞抗体产生的V_H1-58编码的人抗体的重链(IgH，左)和轻链(IgL，右)的氨基酸比对。底部显示了树状图，其显示了从IgH和IgL序列比对生成的V_H1-58编码的人抗体之间的关系。

(B)ELISA图显示V_H1-58编码的抗体针对SARS-CoV-2tri-S蛋白的反应性。显示了重复OD_405nm值的平均值±SD。

(C)ELISA图比较了Cv2.5179和Cv2.1169抗体与RBD蛋白的结合。显示了重复OD_405nm值的平均值±SD。

(D)竞争ELISA图显示在作为竞争剂的Cv2.5179或Cv2.1169抗体的存在下，生物素化的RBD蛋白与固定的可溶性ACE2胞外域的结合。显示了重复值的平均值±SD。

(E)该图显示了通过S-融合中和测定确定的Cv2.5179 IgG抗体对SARS-CoV-2和VOC的中和曲线。显示了重复值的平均值±SD。IC₅₀值显示在左上角。

图8.在存在其他中和抗体作为潜在竞争剂的情况下，生物素化的Cv2.5179与野生型triS蛋白的ELISA结合。

竞争ELISA图显示在选定的抗RBD抗体作为潜在竞争剂的存在下生物素化的Cv2.5179抗体与SARS-CoV-2tri-S的结合。结合曲线显示所有测试的抗RBD nAb均抑制/阻断Cv2.5179与SARS-Cov-2triS蛋白的结合。

图9.Cv2.1169与VOC Beta和Omicron(BA.1)的tri-S和RBD蛋白结合-与图17A和17C相关。

ELISA图显示Cv2.1169抗体对SARS-CoV-2野生型(历史数据)和BA.1tri-S(A)；和来自SARS-CoV-2野生型及其病毒变体的RBD蛋白(β和BA.1)(B)的反应性。显示了重复OD_405nm值的平均值±SD。(C)Cv2.1169和选定基准抗体的IC₅₀值在热图中显示。灰色的空单元格表示抗体未结合，因此无法确定IC₅₀值。

图10.在Cv2.1169和基准抗体存在的情况下，SARS-CoV-2S蛋白(tri-S)与固定化ACE-2的结合

(A)竞争ELISA显示在Cv2.1169抗体存在下生物素化的SARS-CoV-2野生型和BA.1tri-S蛋白与可溶性ACE2胞外域的结合。显示了重复值的平均值±SD。

(B)Cv2.1169和选定基准抗体(包含可变区SEQ ID N°158至163)的IC₅₀值显示在热图中。2.0的值(灰色)表示2μg/ml IgG浓度下未达到50％结合抑制。

图11.Cv2.1169和基准抗体对SARS-CoV-2Delta和Omicron(BA.1)的中和作用(通过S-融合中和测定确定)

(A)该图显示了通过S-融合中和测定确定的Cv2.1169抗体对SARS-CoV-2Delta和BA.1病毒变体的中和曲线。误差线表示测定重复的SD。

(B)Cv2.1169和选定基准抗体的IC₅₀值(ng/ml)显示在右侧的热图中。灰色值表示在最大浓度(>9000ng/ml)时未达到50％结合抑制。

图12.有效的抗RBD中和剂对SARS-CoV-2病毒变体κ、δ和δ⁺的结合和中和特性-与图3F(右图)相关。

热图比较了RBD特异性IgG抗体对SARS-CoV-2和选定病毒变体(包括δ、δ⁺和κ)的RBD蛋白的结合(左图)和RBD-ACE2阻断能力(右图)，如在图4E-4H中测量的。较深的颜色表示高结合或竞争，而浅色表示中等结合或竞争(白色＝无结合或竞争)。AUC值显示在每个单元格中。

图13.有效的抗RBD抗体中和剂Cv2.5179对SARS-CoV-2病毒变体κ、δ和δ⁺的结合特征-与图3L相关。

热图比较了RBD特异性IgG抗体Cv2.5179与SARS-CoV-2和选定病毒变体(包括δ、δ⁺和κ)的RBD蛋白的结合(上图)和RBD-ACE2阻断能力(下图)，如图12所示。显示了重复值的平均值±SD。

图14.有效SARS-CoV2中和剂的交叉中和和Fc依赖性效应子功能。

(A)该图比较了选定的中和性(nAb)和非中和性(非nAb)SARS-CoV-2S特异性抗体的ADCC活性。显示了重复值的平均值±SD。

(B)与(A)相同，但针对CDC活性。

(C)Cv2.1169的ADCP活性。点图(左图)显示浓度为1和10μg/ml的Cv2.1169 IgG的单核细胞介导的ADCP活性。每个点对应于原代单核细胞的供体(n＝6)。该图比较了表达为重组IgG1、IgG1^NA、IgG1^LALA、单体IgA1(mIgA1)和二聚IgA1(dIgA1)抗体的Cv2.1169的ADCP活性。mGO53是阴性同种型对照，ADCP诱导的S309 IgG1被纳入用于比较。PS，吞噬分数。显示了重复值的平均值。

(D)该图显示了通过S-融合中和测定确定的有效抗RBD IgG抗体对SARS-CoV-2和选定VOC的中和曲线。误差线表示重复值的SD。IC₅₀值显示在左上角。ND，未确定。

(E)该图显示了通过伪中和测定确定的Cv2.1169和Cv2.3194 IgG抗体对SARS-CoV-2和选定VOC的中和曲线。误差线表示重复值的SD。IC₅₀值显示在左上角。

图15.SARS-CoV-2感染的小鼠和仓鼠中的Cv2.1169抗体治疗。

(A)点图比较了用5mg/kg i.p.的Cv2.1169 IgG或IgA(n＝8/组)或mGO53对照(ctr)IgA抗体(n＝6)处理的SARS-CoV-2感染的K18hACE2小鼠(4dpi)的口腔拭子(OS)中的SARS-CoV-2RNA水平，如图6C所示。每个点对应一只小鼠。显示了重复值的平均值。

(B)点图比较了接受一次5、10或20mg/kg i.p.的抗体Cv2.1169(n＝7/组)的感染SARS-CoV-2的K18 hACE2小鼠(20dpi)的血清中的人IgG浓度，如图6A和6C所示。每个点对应一只小鼠。显示了重复值的平均值。

(C)点图比较了感染SARS-CoV-2β变体并用Cv2.1169或mGO53IgG对照(ctr，n＝7)预处理(IgA，n＝8)或处理(IgG，n6)的K18 hACE2小鼠的血清中的人IgG和IgA浓度，如图6F所示。每个点对应一只小鼠。显示了重复值的平均值。

(D)点图显示感染SARS-CoV-2β变体并用Cv2.1169预处理(IgA，n＝8)或处理(IgG，n＝6)的K18 hACE2小鼠中血清鼠IgG抗体的ELISA SARS-CoV-2tri-S结合，如图6F所示。AUC，曲线下面积。每个点对应一只小鼠。显示了重复值的平均值。

(E)点图比较了用Cv2.1169或mGO53对照(5mg/kg i.p.,n＝8；或10mg/kg i.p.,n＝7)处理一次的SARS-CoV-2感染的叙利亚金黄仓鼠(5dpi)的血清中的人IgG和IgA浓度，如图6D和6E(分别为左图和右图)所示。每个符号对应一只小鼠。显示了重复值的平均值。

(F)点图显示用Cv2.1169或mGO53对照(5mg/kg i.p.,n＝8；或10mg/kg i.p.,n＝7)处理一次的SARS-CoV-2感染的仓鼠(5dpi)中的血清仓鼠IgG抗体的ELISA SARS-CoV-2tri-S结合，如图6D和6E(分别为左图和右图)所示。AUC，曲线下面积。每个符号对应一只小鼠。显示了重复值的平均值。

图16.Cv2.169和Cv2.3194与其他抗刺突抗体的基准测试。

热图比较了针对选定病毒变体的RBD特异性抗体的ELISA结合(A)和流式细胞术结合(B)。较深的颜色表示高结合，而浅色表示中等结合(白色＝无结合)。(A)和(B)的每个单元格中分别显示重复OD_405nm值的平均值和重复log10ΔgMFI值的几何平均值。报告了以下参考RBD特异性抗体：Adintrevimab(ADI),Bamlaivimab(BAM),Casirivimab(CAS),Cilgavimab(CIL),Etesevimab(ETE),Imdevimab(IMD),Regdanvimab(REG),Sotrovimab(SOT),Tixagevimab(TIX)。每种抗体的可变区提供为SEQ ID NO：164至183。

(C)(D)(E)热图对应于精选的RBD特异性抗体针对野生型毒株(RBD野生型-16C)、β毒株(16D)和δ毒株(16E)的RBD结构域的结合竞争。较深的颜色表示高竞争，而浅色表示中等竞争(白色＝无竞争)。对于每个实验，竞争剂都在Y轴上定义。

图17.Cv2.1169、Cv2.3194和Cv2.5179与其他基准SARS-CoV-2中和剂针对SARS-CoV-2 Omicron变体的活性-与图9相关。

(A)热图(右图)比较了分别通过流式细胞术(重复值的平均log₁₀ΔMFI)和ELISA(重复值的平均AUC)测量的RBD特异性IgG抗体与细胞表达的(CE)和可溶性(tri-S)Omicron(ο)SARS-CoV-2刺突蛋白的结合，如对于Cv2.1169在左侧所示。NT ctr，未转染的细胞对照。热图还显示了针对β和οRBD蛋白的比较抗体反应性(AUC值)。白色表示没有结合。

(B)热图(下图)比较了中和抗RBD抗体对SARS-CoV-2和ο变体BA.1的RBD蛋白的RBD-ACE2阻断能力，如对于Cv2.1169(上图)所示。较深的颜色表示高竞争，而浅色表示中等竞争(白色＝无结合或竞争)。每个单元格中显示重复值的平均AUC。

(C)热图比较了Cv2.1169与基准SARS-CoV-2中和剂RBD特异性IgG抗体的与ο变体BA.1的SARS-CoV-2蛋白的tri-S结合(上图)和tri-S-ACE2阻断能力(下图)。较深的颜色表示高结合或竞争，而浅色表示中等结合或竞争(白色＝无结合或竞争)。每个单元格中显示重复值的平均EC₅₀。

(D)热图(右图)比较Cv2.1169和Cv2.3194与基准SARS-CoV-2中和剂对ο变体BA.1和BA.2的RBD蛋白的结合(ELISA测量)(重复AUC值的平均值))如Cv2.1169左侧所示。较深的颜色表示高结合，而浅色表示中等结合(白色＝无结合)。每个单元格中显示重复值的平均EC₅₀。

(E)该图显示了通过S-融合中和测定确定的有效抗RBD IgG抗体对SARS-CoV-2δ和οBA.1的中和曲线。误差线表示来自2个(Cv2.5179)或5个(Cv2.1169和Cv2.3194)独立实验的重复值的SD。IC₅₀值已标出(对于οBA.1为灰色)。ND，未确定。

(F)竞争ELISA图显示了在存在Cv2.1169和Cv2.3194抗体作为竞争剂的情况下，来自SARS-CoV-2o BA.1和BA.2变体的生物素化RBD蛋白与可溶性ACE2胞外域的结合。显示了重复值的平均值±SD。

(G)该图显示了通过S-融合中和测定确定的Cv2.1169和Cv2.3194对SARS-CoV-2οBA.2的中和曲线。误差线表示重复值的SD。

(H)该图比较了单体和二聚Cv2.1169 IgA抗体与SARS-CoV-2oBA.1和BA.2变体的RBD蛋白的ELISA结合。显示了重复值的平均值±SD。n.dIgA，根据结合位点数量的标准化值。

(I)与(E)相同，但针对野生型和o BA.1tri-S蛋白使用单体和二聚体Cv2.1169IgA抗体。显示了重复值的平均值±SD。n.dIgA，根据结合位点数量的标准化值。

(J)与(F)相同，但对于针对BA.1和BA.2的Cv2.1169 IgA单体和J链二聚体(dIgA)。误差线表示重复值的SD。热图(右图)显示了从曲线(左图)计算出的IC₅₀值。n.dIgA，根据结合位点数量的标准化值。

图18.Cv2.1169与基准抗体的比较分析。如图9、图16和图17中所示。

(A)热图比较了Cv2.1169、Cv2.3194和临床使用或开发中的基准中和抗体的与选定SARS-CoV-2蛋白的ELISA结合。较深的颜色表示高结合，而浅色表示中等结合或竞争(白色＝0，无结合)。每个单元格中显示了重复AUC值的平均值。

(B)热图比较了Cv2.1169、Cv2.3194和基准中和抗体的tri-S-和RBD-ACE2阻断能力。较深的颜色表示高竞争，而浅色表示竞争中等(白色＝0，无竞争)。每个单元格中显示了重复值的平均值(结合抑制百分比)。NT，未测试。

(C)热图比较了Cv2.1169和基准中和抗体针对选定SARS-CoV-2病毒变体的体外中和活性。每个单元格中显示了以pM为单位的三次重复IC₅₀值的平均值。白色表示在25nM的最大抗体浓度下未达到50％中和。

(D)热图显示了Cv2.1169、Cv2.3194和基准中和抗体在ELISA中与tri-S和RBD蛋白结合的竞争潜力。较深的颜色表示高竞争，而浅色表示竞争中等(白色＝0，无竞争)。每个单元格中显示了重复值的平均值(结合抑制百分比)。

图19.Cv2.1169和基准抗体在感染SARS-CoV-2Delta和OmicronBA.1的仓鼠中的体内治疗和预防活性。

(A)示意图显示了在感染SARS-CoV-2δ变体的叙利亚金黄仓鼠中用Cv2.1169和Evusheld进行抗体治疗的实验设计。动物经鼻内(i.n.)感染10⁴个噬斑形成单位(PFU)的SARS-CoV-2δ，并在24小时后接受腹膜内(i.p.)注射的PBS、Cv2.1169或Evusheld，剂量为6mg/kg(上图)或2mg/kg(下图)。点图显示了在3dpi时在动物组(n＝3)中测量的肺内感染性(左图)和RNA负载(右图)。使用双尾Mann-Whitney检验对仓鼠组进行比较。

(B)该图比较了Cv2.1169、Evusheld和Sotrovimab对SARS-CoV-2Omicron(ο)BA.1的中和曲线，如通过qRT-PCR测定对Vero细胞进行中和测定确定的。误差线表示一式三份值的SD。显示了IC₅₀值(右图)。

(C)与(A)相同，但动物感染了SARS-CoV-2 Omicron BA.1，并用Cv2.1169、Evusheld、Sotrovimab或对照(mGO53-LS)抗体以6mg/kg进行治疗。该图显示了随时间推移的与基线相比的动物体重变化(Δ体重)(左图)、肺内感染性(中图)和RNA负载(右图)。使用双尾Mann-Whitney检验对仓鼠组(n＝4)进行比较。星号表示p＝0.029。

(D)与(C)相同，但动物(n＝4)用Cv2.1169(3或30mg/kg)、Evusheld(3mg/kg)或对照(mGO53-LS，3mg/kg)抗体)在使用10⁴PFU的SARS-CoV-2 Omicron BA.1进行i.n.攻击前预处理。

实施例

材料与方法

人体样品

根据所有法国立法和监管机构并在获得所有法国立法和监管机构的伦理批准后，获得来自COVID-19恢复期供体的血液样品，作为CORSER和REACTing法国COVID-19队列的一部分。CORSER研究已在ClinicalTrials.gov注册(NCT04325646)，并获得ComitédeProtection des Personnes Ilede France III的伦理批准。REACTing法国Covid-19研究得到了地区研究审查委员会(IRB；Comitéde Protection des Personnes Ile-de-FranceVII,Paris,France)的批准，并根据欧洲指南和赫尔辛基宣言进行。所有参与者均书面同意参与本研究，并使用主题编码在伪匿名条件下收集数据。

血清IgG和IgA纯化

所有人血清在56℃热灭活60分钟。分别使用Protein G4Fast Flow(GE Healthcare)和肽M偶联琼脂糖珠(Invivogen)通过亲和层析从供体血清中纯化人IgG和IgA抗体。使用/>盒(10K MWCO，Thermo Fisher Scientific)针对PBS透析纯化的血清抗体。

病毒

SARS-CoV-2 BetaCoV/France/IDF0372/2020 、hCoV-19/France/GES-1973/2020、D614G(hCoV-19/France/GE1973/2020)和B.1.351(β变体；hcoV-19/France/IDF-IPP00078/2021)毒株由法国国家呼吸道病毒参考中心(法国巴斯德研究所)提供。分离出BetaCoV/France/IDF0372/2020毒株的人体样品由来自Bichat Hospital,Paris的Drs.Xavier Lescure,YazdanYazdanpanah提供。分离出β变体的人样品由Dr.MouniraSmati-Lafarge(CHI de Créteil,Créteil,France)提供。所有变异毒株均从鼻拭子中分离出来，并在Vero E6细胞培养物中通过一或两次传代进行扩增。用于中和测定的α变体(B.1.1.7)和δ变体(B.1.617.2)是分别从Tours(France)和Hopital EuropéenGeorges Pompidou(Assistance Publique desde Paris,Paris,France)的个体中分离出来的。γ变体(P.1.；hCoV-19/Japan/TY7-501/2021)获自全球卫生安全行动小组实验室网络。GISAID数据库的序列ID如下：D614G：EPI_ISL_414631；α变体：EPI_ISL_735391；β变体：EPI_ISL_964916；γ变体：EPI_ISL_833366；δ变体：EPI_ISL_2029113。所有个体都对生物材料的使用提供了知情同意。病毒在Vero E6细胞培养物中扩增一到两代并进行滴定。病毒原液的序列通过RNAseq进行验证。所有有关传染性病毒的工作均在巴斯德研究所的生物安全3级遏制实验室中进行。

病毒蛋白的表达和纯化

将编码稳定形式的SARS-CoV-2、SARS-CoV-1、MERS-CoV、OC43-CoV、HKU1-CoV、229E-CoV和NL63-CoV(2P)和BA.1刺突(HexaPro)刺突(S)胞外域和SARS-CoV-2S2结构域，然后是foldon三聚化基序和C端标签(Hisx8标签、Strep标签和AviTag)的密码子优化的核苷酸片段合成并克隆到pcDNA3.1/Zeo(+)载体(Thermo Fisher Scientific)中。对于竞争ELISA实验，不含Strep标签的SARS-CoV-2S胞外域DNA序列也被克隆到pcDNA3.1/Zeo(+)载体中。编码野生型SARS-CoV-2RBD、S1亚基、S1 N端结构域(NTD)、S1连接结构域(CD)、核衣壳蛋白(N)、BA.1和BA.2RBD然后是C端标签(Hisx8标签、Strep标签和AviTag)以及人血管紧张素转换酶2(ACE2)(加上Hisx8标签和Strep标签)的合成核苷酸片段被克隆到pcDNA3.1/Zeo(+)载体中。对于SARS-CoV-2RBD变体蛋白、突变(α变体为N501Y，β变体为K417N、E484K和N501Y；γ变体为K471T、E484K和N501Y；δ变体为L452R和T478K，δ⁺变体为K417N、L452R和T478K，κ变体为L452R和E484Q)使用QuickChange定点诱变试剂盒(Agilent Technologies)按照制造商的说明引入。使用聚乙烯亚胺(PEI)沉淀方法通过瞬时转染指数生长的Freestyle 293-F悬浮细胞(Thermo Fisher Scientific，Waltham,MA)产生糖蛋白，如前所述(5)。根据制造商的说明(GE Healthcare)，使用NiExcel树脂通过高效色谱法从培养物上清液中纯化蛋白质，使用/>透析盒(Thermo FisherScientific)针对PBS进行透析，使用NanoDrop 2000仪器(Thermo Fisher Scientific)进行定量，并使用NuPAGE 3-8％tris-acetate凝胶(Life Technologies)通过SDS-PAGE控制纯度，如前所述(5)。使用BirA生物素蛋白连接酶批量反应试剂盒(Avidity,LLC)或酶蛋白生物素化试剂盒(Sigma-Aldrich)对Avi标记的tri-S和RBD蛋白进行生物素化。还使用胺反应染料试剂盒(Thermo Fisher Scientific)将SARS-CoV-2RBD蛋白与DyLight 650偶联。

对于晶体学实验，将编码SARS-CoV-2RBD蛋白(残基331-528)，随后是肠激酶切割位点和C端双strep标签的密码子优化的核苷酸片段克隆到修饰的pMT/BiP表达载体(pT350，Invitrogen)中。果蝇S2细胞用pT350和pCoPuro(用于嘌呤霉素选择)质粒稳定共转染。选择细胞系并将其维持在补充有7μg/ml嘌呤霉素和1％青霉素/链霉素抗生素的无血清昆虫细胞培养基(HyClone，Cytiva)中。细胞生长至密度为1×10⁷个细胞/ml，然后用4μMCdCl₂诱导蛋白质表达。培养6天后，收集上清液，浓缩，并使用Streptactin柱(IBA)通过高效色谱法纯化蛋白质。使用HiPrep 26/10脱盐柱(GE Healthcare)将洗脱液缓冲液交换至10mM Tris-HCl(pH8.0)、100mM NaCl、2mM CaCl₂中，随后用肠激酶在室温下处理过夜以去除strep标签。使用Streptactin柱去除未消化的加标签蛋白，并使用用10mM Tris-HCl(pH8.0)、100mM NaCl平衡的Superdex 75柱(Cytiva)通过尺寸排阻色谱(SEC)纯化单体未加标签蛋白。将纯化的单体未加标签蛋白浓缩并储存在-80℃直至使用。

对于Cryo-EM实验，将编码SARS-CoV-2刺突(S)蛋白(残基1-1208)的密码子优化的核苷酸片段与其内源信号肽一起克隆到pcDNA3.1(+)载体中，并且通过引入六个脯氨酸取代(F817P、A892P、A899P、A942P、K986P、V987P)以及弗林蛋白酶切割位点(残基682-685)处的GSAS取代，然后是Foldon三聚化基序和C端标签(Hisx8标签、Strep标签和AviTag)，而表达为稳定的三聚体预融合构建体。重组蛋白S_6P是根据制造商的说明，使用DNA转染试剂(Polyplus)瞬时转染Expi293FTM细胞(Thermo FisherScientific,Waltham,MA)产生的。培养5天后，使用SrepTactin柱(IBA)通过亲和层析从浓缩的上清液纯化重组蛋白，然后使用在10mM Tris-HCl、100mM NaCl(pH8.0)中平衡的Superose 6 10/300柱(Cytiva)进行SEC。将对应于三聚体蛋白的峰浓缩并储存在-80℃直至使用。

流式细胞术免疫表型分析

使用Ficoll Plaque Plus(GE Healthcare)从供体的血液中分离外周血单核细胞(PBMC)。使用两种不同的荧光标记的抗体混合物对人血B细胞和循环T滤泡辅助T细胞(cTfh)进行分析。对于B细胞表型分析，首先通过MACS使用人CD19微珠(MiltenyiBiotec)从供体的PBMC中分离B细胞。然后使用LIVE/DEAD液体可修复死细胞染色试剂盒(MolecularProbes，Thermo Fisher Scientific)对CD19⁺B细胞进行染色，以排除死细胞。B细胞与生物素化tri-S和DyLight 650偶联RBD在4℃孵育30分钟，用1％FBS-PBS(FACS缓冲液)洗涤一次，并与以下小鼠抗人抗体的混合物在4℃孵育30分钟：CD19 Alexa 700(HIB19,BDBiosciences,San Jose,CA),CD21 BV421(B-ly4,BD Biosciences),CD27 PE-CF594(M-T271,BD Biosciences),IgG BV786(G18-145,BD Biosciences),IgA FITC(IS11-8E10,MiltenyiBiotec,BergischGladbach,Germany),整合素β7BUV395(FIB504,BDBiosciences)和链霉抗生物素蛋白R-PE缀合物(Invitrogen,Thermo FisherScientific)。然后洗涤细胞并重悬于FACS缓冲液中。淋巴细胞和单细胞门控后，活细胞在CD19⁺B细胞上门控。使用FACS Aria Fusion Cell Sorter(Becton Dickinson,FranklinLakes,NJ)和FlowJo软件(v10.3,FlowJo LLC,Ashland,OR)进行FACS分析。对来自CD19MACS的阴性组分进行cTfh子集的免疫表型分析。cTfh抗体组包括：CD3 BV605(SK7),CD4 PE-CF594(RPA-T4),CD185/CXCR5 AF-488(RF8B2),CD183/CXCR3 PE-Cy^TM5(1C6/CXCR3),CD196/CCR6PE-Cy^TM7(11A9),CD197/CCR7 AF647(3D12)(BD Biosciences),CD279/PD1 BV421(EH12.2H7,BioLegend),和CD278/ICOS PE(ISA-3,Thermo Fisher Scientific)。如上文所述对细胞进行染色、洗涤并在1％多聚甲醛-PBS中固定。经过淋巴细胞和单细胞门控后，死细胞被排除。使用BD LSR Fortessa^TM仪器(BD Biosciences)和FlowJo软件(v10.6，FlowJoLLC)对染色细胞进行流式细胞术分析

单B细胞FACS分选和抗体的表达克隆

通过CD19 MACS(MiltenyiBiotec)从供体的PBMC分离外周血人B细胞并如上文所述染色。如前所述(6)，使用FACS Aria Fusion Cell Sorter(Becton Dickinson,FranklinLakes,NJ)将单个SARS-CoV-2 S⁺ IgG⁺和IgA⁺B细胞分选到96孔PCR板中。使用SuperScriptIV逆转录酶(Thermo Fisher Scientific)合成单细胞cDNA，然后进行IgH、Igκ和Igλ基因的巢式PCR扩增，并如前所述(6,13)进行Ig基因特征的序列分析。如前所述，将纯化的消化的PCR产物克隆到人Igγ1-、Igκ-或Igλ-表达载体(分别为GenBank#LT615368.1、LT615369.1和LT615370.1)中。Cv2.1169也被克隆到人Igγ1NA、Igγ1LALA[通过定点诱变(QuickChange，Agilent Technologies)引入的N297A和L234A/L235A突变]、Igα1和Fab-Igα1表达载体中。Cv2.3235和Cv2.6264 IgH也被克隆到人Fab-Igγ1表达载体中。

使用先前描述(5)的PEI-沉淀方法，通过瞬时共转染Freestyle^TM 293-F悬浮细胞(Thermo Fisher Scientific)来产生重组抗体。Cv2.1169 IgA1的二聚体形式是通过共转染Freestyle^TM 293-F细胞与人J链pcDNA^TM3.1/Zeo(+)载体来产生的，如前所述。分别使用Protein G4Fast Flow(GE Healthcare)、肽M偶联琼脂糖珠(Invivogen)和Ni/>Excel树脂(GE Healthcare)通过亲和层析纯化重组人IgG和IgA抗体以及Fab片段。使用Superose 6Increase10/300柱(Cytiva)通过SEC分离单体和二聚Cv2.1169IgA1抗体。用PBS平衡柱后，将纯化的IgA抗体以0.3ml/min的流速注入柱中。在使用1.2CV的PBS的等度洗脱后分离单体、二聚体和多聚体。在非还原条件下使用3-8％Tris-Acetate凝胶(Life Technologies)通过SDS-PAGE，然后通过银染(Siver Stain试剂盒，ThermoScientific)评估不同纯化级分的质量/纯度。纯化的抗体针对PBS进行透析。在克隆编码免疫球蛋白可变结构域的合成的DNA片段(GeneArt，Thermo Fisher Scientific)后，如上所述制备基准单克隆抗体[REGN10933、REGN10987、CB6、LY-CoV555、CT-P59)、COV2-2196、COV2-2130、ADG-2和S309]的纯化亲本IgG1抗体形式。用于体内输注的抗体制剂经过微过滤(/>装置-0.1μm PVDF膜，Merck-Millipore，Darmstadt，Germany)，并使用ToxinSensor^TM Chromogenic LAL内毒素测定试剂盒(GenScript)检查内毒素水平。

在克隆合成DNA片段(GeneArt，Thermo Fisher Scientific)后，如上所述制备基准单克隆抗体[REGN10933,REGN10987(PMID:32540901),CB6(PMID:32454512),LY-CoV555(PMID:33820835),CT-P59(PMID:33436577),COV2-2196,COV2-2130(PMID:32668443),ADG-2(PMID:33495307)and S309(PMID:32422645)]的纯化亲本IgG1抗体形式。

ELISA

如先前所描述的(5、6)进行ELISA。简言之，高结合96孔ELISA板(Costar,Corning)用250ng/孔的纯化重组冠状病毒蛋白和500ng/孔的含有SARS-CoV-2融合序列的肽(KRSFIEDLLFNKVTLADAGFIK(SEQ ID NO:105),GenScript Biotech)包被过夜。用0.05％Tween20-PBS(洗涤缓冲液)洗涤后，用2％ BSA、1mM EDTA、0.05％ Tween20-PBS(封闭缓冲液)封闭板2小时，洗涤并与PBS中连续稀释的人和啮齿动物血清、纯化的血清IgA/IgG或重组单克隆抗体一起孵育。将总血清1:100(对于人和金黄仓鼠)或1:10(对于K18小鼠)稀释，然后在PBS中进行7次连续1:4稀释。纯化的血清IgG和IgA抗体以50μg/ml和在PBS中的7个连续1:3稀释液进行测试。重组单克隆IgG1抗体以4或10μg/ml和在PBS中的4至7个连续1:4稀释液进行测试。Cv2.1169 IgG1和IgA1抗体的比较ELISA结合以70nM的浓度和在PBS中的7个连续稀释液进行。为了定量经处理的K18小鼠和金黄仓鼠中的血液循环人Cv2.1169 IgA1和IgG1，用250ng/孔的纯化的山羊抗人IgA或IgG抗体(Jackson ImmunoResearch，最终浓度为0.8μg/ml)过夜包被高结合96孔ELISA板(Costar，Corning)。洗涤后，将板封闭、洗涤，并用来自K18小鼠和金黄仓鼠的1:100稀释的血清以及在PBS中的7个连续1:3稀释液孵育2小时。使用12μg/ml以及在PBS中的7个连续1:3稀释液的Cv2.1169 IgA1或IgG1抗体作为标准品。洗涤后，通过与山羊HRP缀合的抗小鼠IgG、抗金黄仓鼠IgG、抗人IgG或抗人IgA抗体(Jackson ImmunoReseach，终浓度为0.8μg/ml)一起孵育1小时和通过在洗涤步骤后添加100μl HRP显色底物(ABTS溶液，Euromedex)来显色板。在405nm处测量光密度(OD_405nm)，并减去在包被孔中单独孵育PBS给出的背景值。使用HydroSpeed^TM微孔板清洗机和Sunrise^TM微孔板吸光度读数器(TecanSwitzerland)进行实验。对于肽-ELISA，使用如前所述(7)的相同的程序测试SARS-CoV2和对照IgG抗体(1μg/ml)与15聚体S2重叠5-氨基酸肽(n＝52，GenScript Biotech，500ng/孔)的结合。对于竞争ELISA，将250ng/孔不含StrepTag的tri-S和RBD蛋白包被在ELISA板(Costar，Corning)上，然后封闭、洗涤，并与生物素化抗体(对于tri-S竞争浓度为100ng/ml，对于RBD竞争为25ng/ml)在抗体竞争剂在PBS中的1:2系列稀释溶液(IgG浓度范围为0.39至50μg/ml)中一起孵育2小时。如上所述，使用HRP缀合的链霉抗生物素蛋白(BD Biosciences)对板显影。对于与ACE2的tri-S-和RBD-结合的竞争实验，用250ng/孔的纯化的ACE2胞外域包被ELISA板(Costar，Corning)过夜。洗涤后，用封闭缓冲液封闭板2小时，用PBST洗涤，并与在PBS中1μg/ml的生物素化tri-S蛋白存在下的2μg/ml和7个连续1:2稀释液以及在0.5μg/ml生物素化RBD存在下的10或100μg/ml以及在PBS中的7个连续1:2稀释液的重组单克隆IgG1抗体一起孵育。洗涤后，如上所述，通过与HRP缀合的链霉抗生物素蛋白(BD Biosciences)孵育30分钟来显色板。/>

如先前所述(9)的进行多反应性ELISA。简而言之，用PBS中的500ng/孔纯化的双链(ds)-DNA、KLH、LPS、溶菌酶、甲状腺球蛋白、来自枯草芽孢杆菌的肽聚糖、250ng/孔胰岛素(Sigma-Aldrich,Saint-Louis,MO)、来自枯草芽孢杆菌(Invivogen)的鞭毛蛋白、MAPK14(9)和125ng/孔YU2 HIV-1Env gp140蛋白过夜包被高结合96孔ELISA板。封闭和洗涤步骤后，重组单克隆IgG抗体以4μg/ml和PBS中的7个连续1:4稀释液进行测试。每个实验均包含对照抗体mGO53(阴性)(3)和ED38(高阳性)(4)。如上所述显影ELISA结合。使用DuoSetELISA试剂盒(R&D Systems)和未稀释的血浆样品测量人IL6、IP10、CXCL13和BAFF的血清水平。

HEp-2 IFA测定

根据制造商的说明使用试剂盒的对照和FITC缀合的抗人IgG抗体作为示踪剂通过间接免疫荧光测定(IFA)对HEp-2细胞切片(ANA HEp-2Aesku.Diagnostics，Wendelsheim，Germany)分析100μg/ml的重组SARS-CoV-2S-特异性和对照IgG抗体(mGO53和ED38)。使用荧光显微镜Axio Imager 2(Zeiss，Jena，Germany)检查HEp-2切片，并使用Imagopole平台(巴斯德研究所)上的ZEN成像软件(Zen 2.0蓝色版本，Zeiss)以40倍放大倍率和5000ms的采集时间拍摄照片。

红外免疫印迹

将重组tri-S蛋白在含有1X样品还原剂(Invitrogen)的上样缓冲液(Invitrogen)中在100℃热变性3分钟。使用4-12％ Bis-Tris凝胶(1-孔，Invitrogen)通过SDS-PAGE分离变性的tri-S蛋白(总共50μg)，电转移到硝酸纤维素膜上，并在PBS-0.05％Tween20(PBST)-5％奶粉和在4℃饱和过夜。将膜插入Miniblot装置(Immunetics)中，然后在每个通道中与在PBS-T 5％奶粉中的人单克隆抗体(浓度为1μg/ml)和小鼠抗Hisx6抗体(1μg/ml，BD Biosciences)一起孵育2小时。对于点印迹实验，将变性的tri-S(范围为0.125至2μg)在室温下固定在干燥的硝酸纤维素膜上2小时，并在PBS-0.05％Tween 20(PBST)-5％奶粉中在4℃饱和过夜。然后将膜与在PBS-T 5％奶粉中的人单克隆抗体(浓度为1μg/ml)和小鼠抗Hisx6抗体(1μg/ml，BD Biosciences)孵育2小时。用PBST洗涤后，将膜与PBST-5％奶粉中的1/25,000稀释的Alexa Fluor 680缀合的驴抗人IgG(JacksonImmunoResearch)和1/25,000稀释的IR/>800CW缀合的山羊抗小鼠IgG(LI-CORBiosciences)孵育1h。最后，洗涤膜并用Odyssey红外成像系统(LI-COR Biosciences)进行检查。

蛋白质微阵列结合分析

所有实验均使用ProtoArray人蛋白质微阵列(Thermo Fisher Scientific)在4℃进行。微阵列在封闭溶液(Thermo Fisher)中封闭1小时，洗涤并用2.5μg/ml的IgG抗体孵育1h30，如前所述(9)。洗涤后，将阵列与AF647缀合的山羊抗人IgG抗体(PBS中的1μg/ml；Thermo Fisher Scientific)一起孵育1h30，并使用GenePix 4000B微阵列扫描仪(Molecular Devices)和GenePix Pro6.0软件(Molecular Devices)进行显影，如前所述(9)。使用软件(SICASYS Software GmbH，Germany)对荧光强度进行定量，并使用GraphPad Prism软件(v8.1.2，GraphPad Prism Inc.)针对参考抗体mGO53(非多反应同种型对照)绘制每种抗体的平均荧光强度(MFI)信号(来自重复蛋白点)。对于每种抗体，使用/>Prospector软件(v5.2.3，Thermo Fisher Scientific)计算Z分数，并如前所述(9)计算对角线偏差(σ)和多反应性指数(PI)值。当PI>0.21时，抗体被定义为多反应性。

表面等离子共振

基于表面等离子体共振(SPR)的技术(Biacore 2000，Biacore，Uppsala，Sweden)用于评估单克隆抗体与SARS CoV2蛋白-三聚体S、S1和RBD相互作用的动力学。根据制造商的程序，使用氨基偶联试剂盒(Biacore)将抗体(Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235和Cv2.5213)和ACE2胞外域共价偶联至CM5传感器芯片(Biacore)。简而言之，将IgG抗体和ACE2蛋白在5mM马来酸溶液(pH4)中稀释至终浓度10μg/ml，并注射到由1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的混合物预激活的传感器表面上。通过暴露于1M乙醇胺.HCl溶液(Biacore)来封闭未偶联的羧基。IgG抗体和ACE2的固定密度分别为500RU和1000RU。所有分析均使用HBS-EP缓冲液(10mM HEPES pH7.2；150mM NaCl；3mM EDTA和0.005％Tween 20)进行。所有实时相互作用测量期间缓冲液的流速设置为30μl/min。所有相互作用均在25℃的温度进行。SARS CoV-2tri-S和S1蛋白在HBS-EP中以40-0.156nM的范围连续稀释(两倍步骤)。对于RBD使用相同的浓度范围，但低亲和力相互作用除外，其中应用的浓度范围为1280-10nM。对病毒蛋白与固定化抗体和ACE2结合的缔合和解离阶段分别监测3分钟和4分钟。蛋白质与仅含有羧甲基化葡聚糖的参考通道的结合用作阴性对照，并在数据处理期间从结合中减去。传感器芯片表面通过对4M胍.HCl溶液(Sigma-Aldrich)暴露30秒而再生。通过使用BIAevaluation 4.1.1版软件(Biacore)评估所研究相互作用的动力学参数。

SARS-CoV-2S-融合中和测定

将S-融合细胞(U20S-ACE2 GFP1-10或GFP11细胞)混合(比例1:1)并以每孔8×10³的密度铺板于μClear 96孔板(Greiner Bio-One)中，如前所述(1)。将SARS-CoV-2和VOC病毒(MOI 0.1)与35nM或7nM和在培养基中的11个连续1:4稀释液的重组单克隆IgG1、单体和二聚体IgA1抗体在室温下孵育30分钟，然后添加到S-融合细胞中。18小时后，将细胞在2％多聚甲醛中固定，洗涤并用Hoechst染色剂(稀释度1:1000；Invitrogen)染色。使用OperaPhenix高含量共聚焦显微镜(Perkin Elmer)采集图像。使用Harmony软件4.8(PerkinElmer)对显示GFP表达的区域和细胞核数量进行定量。中和百分比从GFP阳性区域如下计算：100×(1-(具有IgA/IgG的值-“非感染”中的值)/(“无IgA/IgG”中的值-“非感染”中的值))。使用Prism软件(v.9.3.1，GraphPad Prism Inc.)通过使用四参数剂量反应模型(可变斜率)的拟合重复值来计算IC₅₀值。每种同种型的中和活性表示为半最大有效值浓度(IC₅₀)。IC₅₀值(μg/ml)是根据所示不同浓度下中和百分比的重构曲线计算的。

体外SARS-CoV-2伪中和测定

SARS-CoV-2伪中和测定如先前所述进行(10、12)。简而言之，将2x10⁴个293T-ACE2-TMPRSS2铺在96孔板中。纯化的血清IgA和IgG抗体以250μg/ml和在PBS(或含青霉素/链霉素的10％-FCSDMEM)中的7个连续1:2稀释液进行测试，并与刺突假型慢病毒颗粒在添加到细胞之前在室温下一起孵育15-30分钟。还在70或350nM和在PBS中的11个连续1:3稀释液的重组单克隆IgG1、IgA1或Fab-IgA片段抗体进行了测试。在37℃、5％CO2下孵育48小时后，使用ONE-Glo^TM萤光素酶测定系统(Promega)进行显影，并使用多模式读板仪(PerkinElmer)测量萤光素酶信号。中和百分比如下计算：100x(1-平均值(样品重复中的萤光素酶信号)/平均值(单独病毒中的萤光素酶信号))。使用Cv2.3235抗体对各个实验进行标准化。IC₅₀值如上文所述计算。

抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)测定

使用Ficoll Plaque Plus(GE Healthcare)从健康供体的血液(EtablissementduS ang)分离PBMC。使用全血CD14微珠(Miltenyi Biotech)通过MACS从PBMC中纯化原代人单核细胞。将生物素化的SARS-CoV-2tri-S蛋白与FITC标记的NeutrAvidin珠(1μm，Thermo Fisher Scientific)混合(对于1μl珠1μg的tri-S)，并在室温下孵育30分钟。PBS洗涤后，将在DMEM中以1:500稀释的tri-S偶联珠与人单克隆IgG1抗体(3μg/ml)在37℃孵育1小时。然后将tri-S-珠-抗体混合物与7.5x10⁴人单核细胞在37℃孵育2小时。用0.5％BSA、2mM EDTA-PBS洗涤后，用4％PFA-PBS固定细胞并使用CytoFLEX流式细胞仪(BeckmanCoulter)进行分析。ADCP测定在两个独立实验中进行，并使用FlowJo软件(v10.6，FlowJoLLC)进行分析。通过将抗SARS-CoV-2刺突抗体给出的荧光信号(％FITC阳性细胞x几何MFIFITC阳性细胞)除以阴性对照抗体mGO53给出的荧光信号来计算吞噬分数。

抗体依赖性细胞毒性(ADCC)测定

抗SARS-CoV2 S IgG抗体的ADCC活性使用ADCC报告因子生物测定法(Promega)测定，如先前所述(10)。简而言之，在存在或不存在10μg/ml或50μg/ml和在PBS中的10个连续1:2稀释液的SARS-CoV2 S特异性或对照mGO53 IgG抗体的情况下，将5x10⁴个Raji-刺突细胞与5x10⁴个Jurkat-CD16-NFAT-rLuc细胞共培养。孵育18小时后使用EnSpire读板仪(PerkinElmer)测量萤光素酶。ADCC被测量为与对照抗体相比萤光素酶活性的诱导倍数。在两个独立的实验中一式两份地进行实验。

补体依赖性细胞毒性(CDC)测定

如先前所述(10)，使用表达SARS-CoV-2刺突的Raji细胞测量抗SARS-CoV2 S IgG抗体的CDC活性。简而言之，5x10⁴个Raji-刺突细胞在存在50％正常或热灭活人血清和有或没有IgG抗体(10μg/ml或50μg/ml以及PBS中的10个连续1:2稀释液)的情况下培养。24小时后，用PBS洗涤细胞，并在固定前用活/死可固定液体死细胞标记物(PBS中1:1,000；LifeTechnologies)在4℃孵育30分钟。数据是在Attune NxT仪器(Life Technologies)上采集的。使用以下公式计算CDC：100×(有血清情况下死细胞的百分比-无血清情况下死细胞的百分比)/(100-无血清情况下死细胞的百分比)。在两个独立的实验中一式两份地进行实验。

金黄仓鼠的SARS-CoV-2感染和治疗

5-6周大(平均重量60-80克)的叙利亚金黄仓鼠(Mesocricetus auratus；RjHan:AURA)购自Janvier Laboratories(Le Genest-Saint-Isle,France)并在特定无病原体条件下处理。金黄仓鼠被饲养在法国农业部认可的巴斯德研究所动物设施的三级安全柜中并进行操作以用于对活体啮齿动物进行实验，其中可随意获取水和食物。动物感染如前所述进行(11)。简而言之，对麻醉的动物鼻内感染6x10⁴噬斑形成单位(PFU)的SARS-CoV-2(BetaCoV/France/IDF00372/2020；EVAg集合，Ref-SKU：014V-03890)(50μl/鼻孔)。模拟感染的动物仅接受生理溶液。鼻内接种后4或24小时，仓鼠接受腹膜内(i.p.)注射的10或5mg/kg Cv2.1169 IgG或IgA抗体，以及mGO53对照抗体或PBS。每天对所有仓鼠进行随访，记录体重和临床评分。接种后第5天，使用过量麻醉剂(氯胺酮和赛拉嗪)对动物实施安乐死并放血(AVMA指南2020)。通过心脏穿刺采集血样；凝固后，将试管在4℃以1,500xg离心10分钟，收集血清并在-80℃冷冻下直至进一步分析。对肺进行称重并在-80℃冷冻直至进一步分析。在Lysing Matrix M2ml试管(116923050-CF，MP Biomedicals)中使用补充有1％青霉素/链霉素(15140148，Thermo Fisher)的1ml冰冷DMEM(31966021，Gibco)使用FastPrep-24^TM系统(MP Biomedicals)以及以下方案对冷冻肺碎片进行称重并匀浆：在4.0m/s下均质化20秒，在4℃孵育2分钟，以及在4.0m/s下进行新的均质化20秒。将管在4℃以10,000xg离心1分钟。使用半固体覆盖层(Avicel，RC581-NFDR080I，DuPont)通过经典噬斑测定法在Vero-E6细胞上滴定上清液，并表达为PFU/100mg组织(12)。用Trizol(15596026，Invitrogen)使用FastPrep-24^TM系统(MP Biomedicals)和以下方案在Lysing Matrix D 2ml试管(116913100,MP Biomedicals)中对冷冻肺碎片进行匀浆：以6.5m/s匀浆60秒，并在4℃以12,000xg离心2分钟。收集上清液，然后使用Direct-zol RNA MiniPrep试剂盒(R2052，ZymoResearch)提取总RNA，并使用NanoDrop 2000进行定量。如前所述(11)，使用热循环仪(7500t实时PCR系统，Applied Biosystems)在96孔PCR板中以每个反应25μl的终体积通过一步法RT-qPCR评估这些样品中基因组SARS-CoV-2RNA的存在。使用六种已知数量的含有RdRp序列的RNA转录物(范围从10⁷至10²拷贝)的标准曲线，通过线性回归评估病毒负载定量(表示为RNA拷贝数/μg RNA)。

K18小鼠中的SARS-CoV-2感染和治疗

B6.Cg-Tg(K18-ACE2)2Prlmn/J小鼠(库存#034860)从Jackson Laboratory(BarHarbor,ME,USA)进口并在巴斯德研究所在严格的SPF条件下培育。在巴黎巴斯德研究所的动物生物安全3级(BSL-3)设施中，对6至16周大的雄性和雌性小鼠进行了感染研究。所有动物均严格按照良好动物操作规范进行处理。动物工作在实验开始前经巴斯德研究所动物实验伦理委员会(CETEA89)批准(项目dap 200008和200023)，并根据欧洲共同体理事会指令(2010/63/UE，法国法律2013-118，2013年2月6日)得到法国法规(项目24613)并根据巴斯德研究所动物护理委员会的规定授权。麻醉(氯胺酮/赛拉嗪)的小鼠鼻内(i.n.)接种1x10⁴或1x10⁵ PFU的SARS-CoV-2病毒(20μl/鼻孔)。接种后6或22小时，小鼠腹膜内(i.p.)注射5、10、20或40mg/kg Cv2.1169IgG或IgA抗体以及mGO53对照IgG或IgA抗体。感染后第3天采集口咽拭子。在20天内每天监测疾病的临床症状(毛发皱起、驼背姿势、活动能力下降和呼吸困难)和体重减轻。当小鼠达到预定的终点标准时，对它们实施安乐死，并从收集的心脏血液穿刺中收获血清。

定量和统计分析

使用未配对的学生t检验和Welch’s校正来比较抗体组之间的V_H、Vκ和Vλ突变的数量。使用双尾皮尔逊相关性检验来分析双变量相关性。使用GraphPad Prism软件(v.8.2，GraphPad Prism Inc.)进行统计和分析。还使用GraphPad Prism软件(v.8.4，GraphPadPrism Inc.)进行了比较tri-S⁺B细胞和正常记忆B细胞(mB)的基因特征(n＝206个参数)的火山图。y轴表示以-log₁₀(p值)表示的统计数据，x轴表示每个参数的组平均值之间的差异。t分布的随机邻域嵌入(t-SNE)的Barnes-Hut实现是使用FlowJo软件(v.10.3，FlowJo LLC，Ashland，OR)计算的，迭代次数为2000次，困惑度参数为200。颜色代表表面表达标记或细胞群的从低(蓝色)到高(红色)变化的密度。使用http://mkweb.bcgsc.ca/circos上的在线软件绘制了连接其CDR_H3内具有至少75％同一性的抗体序列的Circos图。使用CLC MainWorkbench(Qiagen)在对齐的V_H序列上使用对100个重复进行自助分析(bootstrapanalysis)的邻接方法构建系统发育树。使用Kaplan-Meier分析和Log-rank Mantel-Cox检验(GraphPad Prism，v8.2，GraphPad Prism Inc.)比较各组小鼠的存活率。使用双尾Mann-Whitney检验(GraphPad Prism，v.8.2，GraphPad Prism Inc.)对各分析比较叙利亚金黄仓鼠组。使用R Studio Server(v1.4.1103)中的prcomp()函数执行主成分分析(PCA)。个体[fviz_pca_ind()]、变量[fviz_pca_var()]和双图[fviz_pca_biplot()]的PCA图是使用factoextra包(v1.0.7，https://CRAN.R-project.org/package＝factoextra)生成的。Spearman秩相关用于建立多参数关联。所有相关图和散点图均分别使用corrplot和plot R函数创建。使用GraphPad Prism(v6.4，GraphPad Prism Inc.)生成相关图。

流式细胞术结合测定

使用如前所述的S-Flow测定法进行克隆的人IgG抗体的SARS-CoV-2特异性验证(PMID:32817357)。为了评估刺突交叉反应性，使用PEI沉淀方法用pUNO1-刺突-dfur表达载体(刺突和刺突V1至V11质粒，Invivogen)(每10⁶个细胞1.2μg质粒DNA)转染Freestyle^TM293-F。转染后48小时，将0.5x10⁶个转染和未转染的对照细胞与IgG抗体(1μg/ml)在4℃孵育30分钟。洗涤后，将细胞与AF647缀合的山羊抗人IgG抗体(1:1000稀释；Thermo FisherScientific)和LIVE/DEAD可固定活力液体染料(1:1000稀释；Thermo Fisher Scientific)一起在4℃孵育20分钟，洗涤并重悬于PBS-多聚甲醛1％(Electron Microscopy Sciences)中。使用CytoFLEX流式细胞仪(Beckman Coulter)采集数据，并使用FlowJo软件(v10.7.1；FlowJo LLC)进行分析。抗体一式两份地进行测试。

结晶和结构测定

如上文所述(标题为单B细胞FACS分选和抗体的表达克隆的部分)产生和纯化待用作结晶伴侣分子的抗SARS-CoV-2S抗体CR3022的Fab片段。将纯化的RBD蛋白与Fab以2:1的RBD-Fab摩尔比(对于三元复合物RBD-Cv2.1169-CR3022为2:1:1)在4℃孵育过夜。将每个结合反应加载到在10mM Tris-HCl(pH8.0)、100mM NaCl中平衡的Superdex200柱(Cytiva)上。将对应于复合物的级分合并，浓缩至9-10mg/ml，并用于使用坐滴蒸气扩散法在18℃进行的结晶试验。RBD-Cv2.2325 Fab复合物用0.1M柠檬酸铵(pH7.0)、12％PEG 3350结晶，而RBD-Cv2.6264 Fab的晶体用0.1M NaAc、7％ PEG 6000、30％乙醇获得。RBD-Cv2.1169-CR3022晶体在6％ PEG 8000、0.5MLi2SO4存在的情况下生长。通过浸入含有补充有30％(v/v)甘油(RBD-Cv2.2325；RBD-Cv2.1169-CR3022)或30％(v/v)乙二醇(RBD-Cv2.6264)的结晶溶液的冷冻保护剂中，然后快速转移到液氮中来快速冷冻晶体。数据收集在SOLEIL同步加速器(StAubin,France)上进行。使用XDS和AIMLESS处理、缩放和缩减数据。使用来自PHENIX(101)套件的Phaser和从PBDs 6M0J(RBD)、5I1E(Cv2.2325)、5VAG(Cv2.6264)、7K3Q(Cv2.1169)和6YLA(CR3022)获得的搜索整体包(search ensembles)通过分子替换确定结构。最终模型是通过将Coot中的真实空间模型构建与phenix.refine的倒易空间细化相结合来构建的。最终模型使用Molprobity进行验证。通过访问欧洲生物信息学研究所的PISA(www.ebi.ac.uk/pdbe/prot_int/pistart.html)来鉴定表位和互补位残基及其相互作用。叠加和图形是使用Pymol和UCSF Chimera渲染的。

冷冻电子显微镜

将S_6P蛋白与Cv2.1169 IgA Fab以1:3.6(三聚体:Fab)的比例和0.8μM的最终三聚体浓度在室温下温育1小时。在8℃和100％湿度下使用Vitrobot Mk IV(Thermo FischerScientific)进行骤冷之前，将3μl等份样品施加到新辉光放电的R1.2/1.3Quantifoil网格上(印迹4秒，印迹力0)。使用EPU自动图像采集软件(Thermo Fisher Scientific)在300kV电压下运行的Titan Krios透射电子显微镜(Thermo Fischer Scientific)上获取复合物的数据。影片是在Gatan K3直接电子探测器上采集的，该探测器以计数超分辨率模式运行，标称放大倍率为105,000x(/像素)，散焦范围为-1.0μm至-3.0μm。影片以2秒的曝光时间和约/>的总剂量收集。

图像处理

所有影片均使用MotionCorr2进行运动校正和剂量加权，并且使用对准的显微照片来估计cryoparc内的patchCTF的散焦值。CryoSPARC blob picker用于自动颗粒拾取，所得颗粒用于获取初始2D参考，其然后用于自动拾取显微照片。在Cryoparc中获得初始3D模型，并用于执行3D分类，而无需在Relion中强加任何对称性。选择最好的类别并在cryoparc中进行3D、非均匀细化。

各种测定中使用的蛋白质/肽的序列

SEQ ID NO：103：血管紧张素转换酶2(ACE2)胞外域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEK

SEQ ID NO：104：SARS-CoV-2核衣壳蛋白(N)

MGWSCIILFLVATATGVHSQRNAPRITFGGPSDSTGSNQNGERSGARSKQRRPQGLPNNTASWFTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRRATRRIRGGDGKMKDLSPRWYFYYLGTGPEAGLPYGANKDGIIWVATEGALNTPKDHIGTRNPANNAAIVLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQASSRSSSRSRNSSRNSTPGSSRGTSPARMAGNGGDAALALLLLDRLNQLESKMSGKGQQQQGQTVTKKSAAEASKKPRQKRTATKAYNVTQAFGRRGPEQTQGNFGDQELIRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGMEVTPSGTWLTYTGAIKLDDKDPNFKDQVILLNKHIDAYKTFPPTEPKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDFSKQLQQSMSSADSTQAGSHHHHHHHHGSGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO：105：SARS-CoV-2融合肽(FP)

KRSFIEDLLFNKVTLADAGFIK

SEQ ID NO：106：SARS-CoV-2刺突胞外域(tri-S)

MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSFLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDPPEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO：107：SARS-CoV-2S1结构域

MGWSCIILFLVATATGVHSVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSFLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPGGSHHHHHHHH

SEQ ID NO：108：SARS-CoV-2RBD结构域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSFLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO：109：SARS-CoV-2RBD(B.1.1.7)结构域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSFLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTYGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO：110：SARS-CoV-2RBD(B.1.351)结构域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSFLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGNIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVKGFNCYFPLQSYGFQPTYGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO：111：SARS-CoV-2RBD(P.1)结构域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSFLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGTIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVKGFNCYFPLQSYGFQPTYGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO：112：SARS-CoV-2S1 NTD结构域

MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSGSGLVPRGSHHHHHHHH

SEQ ID NO：113：SARS-CoV-2S1连接结构域(CD)

MGWSCIILFLVATATGVHSTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPGGGSGGKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGGSGLVPRGSHHHHHHHH

SEQ ID NO：114：SARS-CoV-2S2结构域

MGWSCIILFLVATATGVHSSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDPPEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGGSHHHHHHHH

SEQ ID NO：115:CoV-OC43刺突胞外域

MPMGSLQPLATLYLLGMLVASVLAVIGDLKCTSDNINDKDTGPPPISTDTVDVTNGLGTYYVLDRVYLNTTLFLNGYYPTSGSTYRNMALKGSVLLSRLWFKPPFLSDFINGIFAKVKNTKVIKDRVMYSEFPAITIGSTFVNTSYSVVVQPRTINSTQDGDNKLQGLLEVSVCQYNMCEYPQTICHPNLGNHRKELWHLDTGVVSCLYKRNFTYDVNADYLYFHFYQEGGTFYAYFTDTGVVTKFLFNVYLGMALSHYYVMPLTCNSKLTLEYWVTPLTSRQYLLAFNQDGIIFNAVDCMSDFMSEIKCKTQSIAPPTGVYELNGYTVQPIADVYRRKPNLPNCNIEAWLNDKSVPSPLNWERKTFSNCNFNMSSLMSFIQADSFTCNNIDAAKIYGMCFSSITIDKFAIPNGRKVDLQLGNLGYLQSFNYRIDTTATSCQLYYNLPAANVSVSRFNPSTWNKRFGFIEDSVFKPRPAGVLTNHDVVYAQHCFKAPKNFCPCKLNGSCVGSGPGKNNGIGTCPAGTNYLTCDNLCTPDPITFTGTYKCPQTKSLVGIGEHCSGLAVKSDYCGGNSCTCRPQAFLGWSADSCLQGDKCNIFANFILHDVNSGLTCSTDLQKANTDIILGVCVNYDLYGILGQGIFVEVNATYYNSWQNLLYDSNGNLYGFRDYITNRTFMIRSCYSGRVSAAFHANSSEPALLFRNIKCNYVFNNSLTRQLQPINYFDSYLGCVVNAYNSTAISVQTCDLTVGSGYCVDYSKNGGSGGAITTGYRFTNFEPFTVNSVNDSLEPVGGLYEIQIPSEFTIGNMVEFIQTSSPKVTIDCAAFVCGDYAACKSQLVEYGSFCDNINAILTEVNELLDTTQLQVANSLMNGVTLSTKLKDGVNFNVDDINFSPVLGCLGSECSKASSRSAIEDLLFDKVKLSDVGFVEAYNNCTGGAEIRDLICVQSYKGIKVLPPLLSENQFSGYTLAATSASLFPPWTAAAGVPFYLNVQYRINGLGVTMDVLSQNQKLIANAFNNALYAIQEGFDATNSALVKIQAVVNANAEALNNLLQQLSNRFGAISASLQEILSRLDALEAEAQIDRLINGRLTALNAYVSQQLSDSTLVKFSAAQAMEKVNECVKSQSSRINFCGNGNHIISLVQNAPYGLYFIHFSYVPTKYVTARVSPGLCIAGDRGIAPKSGYFVNVNNTWMYTGSGYYYPEPITENNVVVMSTCAVNYTKAPYVMLNTSIPNLPDFKEELDQWFKNQTSVAPDLSLDYINVTFLDLLIKRMKQIEDKIEEIESKQKKIENEIARIKKIKLVPRGSLEWSHPQFEK

SEQ ID NO：116:CoV-HKU1刺突胞外域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGVIGDFNCTNSFINDYNKTIPRISEDVVDVSLGLGTYYVLNRVYLNTTLLFTGYFPKSGANFRDLALKGSIYLSTLWYKPPFLSDFNNGIFSKVKNTKLYVNNTLYSEFSTIVIGSVFVNTSYTIVVQPHNGILEITACQYTMCEYPHTVCKSKGSIRNESWHIDSSEPLCLFKKNFTYNVSADWLYFHFYQERGVFYAYYADVGMPTTFLFSLYLGTILSHYYVMPLTCNAISSNTDNETLEYWVTPLSRRQYLLNFDEHGVITNAVDCSSSFLSEIQCKTQSFAPNTGVYDLSGFTVKPVATVYRRIPNLPDCDIDNWLNNVSVPSPLNWERRIFSNCNFNLSTLLRLVHVDSFSCNNLDKSKIFGSCFNSITVDKFAIPNRRRDDLQLGSSGFLQSSNYKIDISSSSCQLYYSLPLVNVTINNFNPSSWNRRYGFGSFNLSSYDVVYSDHCFSVNSDFCPCADPSVVNSCAKSKPPSAICPAGTKYRHCDLDTTLYVKNWCRCSCLPDPISTYSPNTCPQKKVVVGIGEHCPGLGINEEKCGTQLNHSSCFCSPDAFLGWSFDSCISNNRCNIFSNFIFNGINSGTTCSNDLLYSNTEISTGVCVNYDLYGITGQGIFKEVSAAYYNNWQNLLYDSNGNIIGFKDFLTNKTYTILPCYSGRVSAAFYQNSSSPALLYRNLKCSYVLNNISFISQPFYFDSYLGCVLNAVNLTSYSVSSCDLRMGSGFCIDYALPSSGGSGSGISSPYRFVTFEPFNVSFVNDSVETVGGLFEIQIPTNFTIAGHEEFIQTSSPKVTIDCSAFVCSNYAACHDLLSEYGTFCDNINSILNEVNDLLDITQLQVANALMQGVTLSSNLNTNLHSDVDNIDFKSLLGCLGSQCGSSSRSLLEDLLFNKVKLSDVGFVEAYNNCTGGSEIRDLLCVQSFNGIKVLPPILSETQISGYTTAATVAAMFPPWSAAAGVPFSLNVQYRINGLGVTMDVLNKNQKLIANAFNKALLSIQNGFTATNSALAKIQSVVNANAQALNSLLQQLFNKFGAISSSLQEILSRLDPPEAQVQIDRLINGRLTALNAYVSQQLSDITLIKAGASRAIEKVNECVKSQSPRINFCGNGNHILSLVQNAPYGLLFIHFSYKPTSFKTVLVSPGLCLSGDRGIAPKQGYFIKQNDSWMFTGSSYYYPEPISDKNVVFMNSCSVNFTKAPFIYLNNSIPNLSDFEAELSLWFKNHTSIAPNLTFNSHINATFLDLYYEMNVIQESIKSLNGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGSLVPRGSHHHHHHHH

SEQ ID NO：117:CoV-MERS刺突胞外域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGVDVGPDSVKSACIEVDIQQTFFDKTWPRPIDVSKADGIIYPQGRTYSNITITYQGLFPYQGDHGDMYVYSAGHATGTTPQKLFVANYSQDVKQFANGFVVRIGAAANSTGTVIISPSTSATIRKIYPAFMLGSSVGNFSDGKMGRFFNHTLVLLPDGCGTLLRAFYCILEPRSGNHCPAGNSYTSFATYHTPATDCSDGNYNRNASLNSFKEYFNLRNCTFMYTYNITEDEILEWFGITQTAQGVHLFSSRYVDLYGGNMFQFATLPVYDTIKYYSIIPHSIRSIQSDRKAWAAFYVYKLQPLTFLLDFSVDGYIRRAIDCGFNDLSQLHCSYESFDVESGVYSVSSFEAKPSGSVVEQAEGVECDFSPLLSGTPPQVYNFKRLVFTNCNYNLTKLLSLFSVNDFTCSQISPAAIASNCYSSLILDYFSYPLSMKSDLSVSSAGPISQFNYKQSFSNPTCLILATVPHNLTTITKPLKYSYINKCSRLLSDDRTEVPQLVNANQYSPCVSIVPSTVWEDGDYYRKQLSPLEGGGWLVASGSTVAMTEQLQMGFGITVQYGTDTNSVCPKLEFANDTKIASQLGNCVEYSLYGVSGRGVFQNCTAVGVRQQRFVYDAYQNLVGYYSDDGNYYCLRACVSVPVSVIYDKETKTHATLFGSVACEHISSTMSQYSRSTRSMLKRRDSTYGPLQTPVGCVLGLVNSSLFVEDCKLPLGQSLCALPDTPSTLTPASVGSVPGEMRLASIAFNHPIQVDQLNSSYFKLSIPTNFSFGVTQEYIQTTIQKVTVDCKQYVCNGFQKCEQLLREYGQFCSKINQALHGANLRQDDSVRNLFASVKSSQSSPIIPGFGGDFNLTLLEPVSISTGSRSARSAIEDLLFDKVTIADPGYMQGYDDCMQQGPASARDLICAQYVAGYKVLPPLMDVNMEAAYTSSLLGSIAGVGWTAGLSSFAAIPFAQSIFYRLNGVGITQQVLSENQKLIANKFNQALGAMQTGFTTTNEAFQKVQDAVNNNAQALSKLASELSNTFGAISASIGDIIQRLDPPEQDAQIDRLINGRLTTLNAFVAQQLVRSESAALSAQLAKDKVNECVKAQSKRSGFCGQGTHIVSFVVNAPNGLYFMHVGYYPSNHIEVVSAYGLCDAANPTNCIAPVNGYFIKTNNTRIVDEWSYTGSSFYAPEPITSLNTKYVAPQVTYQNISTNLPPPLLGNSTGIDFQDELDEFFKNVSTSIPNFGSLTQINTTLLDLTYEMLSLQQVVKALNESYIDLKELGNYTYYNKGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGSLVPRGSHHHHHHHHGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO:118:SARS-CoV-1刺突胞外域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGSDLDRCTTFDDVQAPNYTQHTSSMRGVYYPDEIFRSDTLYLTQDLFLPFYSNVTGFHTINHTFDNPVIPFKDGIYFAATEKSNVVRGWVFGSTMNNKSQSVIIINNSTNVVIRACNFELCDNPFFAVSKPMGTQTHTMIFDNAFNCTFEYISDAFSLDVSEKSGNFKHLREFVFKNKDGFLYVYKGYQPIDVVRDLPSGFNTLKPIFKLPLGINITNFRAILTAFSPAQDTWGTSAAAYFVGYLKPTTFMLKYDENGTITDAVDCSQNPLAELKCSVKSFEIDKGIYQTSNFRVVPSGDVVRFPNITNLCPFGEVFNATKFPSVYAWERKKISNCVADYSVLYNSTFFSTFKCYGVSATKLNDLCFSNVYADSFVVKGDDVRQIAPGQTGVIADYNYKLPDDFMGCVLAWNTRNIDATSTGNYNYKYRYLRHGKLRPFERDISNVPFSPDGKPCTPPALNCYWPLNDYGFYTTTGIGYQPYRVVVLSFELLNAPATVCGPKLSTDLIKNQCVNFNFNGLTGTGVLTPSSKRFQPFQQFGRDVSDFTDSVRDPKTSEILDISPCSFGGVSVITPGTNASSEVAVLYQDVNCTDVSTAIHADQLTPAWRIYSTGNNVFQTQAGCLIGAEHVDTSYECDIPIGAGICASYHTVSLLRSTSQKSIVAYTMSLGADSSIAYSNNTIAIPTNFSISITTEVMPVSMAKTSVDCNMYICGDSTECANLLLQYGSFCTQLNRALSGIAAEQDRNTREVFAQVKQMYKTPTLKYFGGFNFSQILPDPLKPTKRSFIEDLLFNKVTLADAGFMKQYGECLGDINARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDDMIAAYTAALVSGTATAGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKQIANQFNKAISQIQESLTTTSTALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDPPEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQAAPHGVVFLHVTYVPSQERNFTTAPAICHEGKAYFPREGVFVFNGTSWFITQRNFFSPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIINNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGSLVPRGSHHHHHHHH

SEQ ID NO:119:CoV-229E刺突胞外域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGAGCQTTNGLNTSYSVCNGCVGYSENVFAVESGGYIPSDFAFNNWFLLTNTSSVVDGVVRSFQPLLLNCLWSVSGLRFTTGFVYFNGTGRGDCKGFSSDVLSDVIRYNLNFEENLRRGTILFKTSYGVVVFYCTNNTLVSGDAHIPFGTVLGNFYCFVNTTIGTETTSAFVGALPKTVREFVISRTGHFYINGYRYFTLGNVEAVNFNVTTAETTDFFTVALASYADVLVNVSQTSIANIIYCNSVINRLRCDQLSFYVPDGFYSTSPIQSVELPVSIVSLPVYHKHMFIVLYVDFKPQSGGGKCFNCYPAGVNITLANFNETKGPLCVDTSHFTTKYVAVYANVGRWSASINTGNCPFSFGKVNNFVKFGSVCFSLKDIPGGCAMPIVANWAYSKYYTIGTLYVSWSDGDGITGVPQPVEGVSSFMNVTLDKCTKYNIYDVSGVGVIRVSNDTFLNGITYTSTSGNLLGFKDVTKGTIYSITPCNPPDQLVVYQQAVVGAMLSENFTSYGFSNVVELPKFFYASNGTYNCTDAVLTYSSFGVCADGSIIAVQPRNVSYDSVSAIVTANLSIPSNWTISVQVEYLQITSTPIVVDCSTYVCNGNVRCVELLKQYTSACKTIEDALRNSARLESADVSEMLTFDKKAFTLANVSSFGDYNLSSVIPSLPTSGSRVAGRSAIEDILFSKIVTSGLGTVDADYKNCTKGLSIADLACAQYYNGIMVLPGVADAERMAMYTGSLIGGIALGGLTSAVSIPFSLAIQARLNYVALQTDVLQENQKILAASFNKAMTNIVDAFTGVNDAITQTSQALQTVATALNKIQDVVNQQGNSLNHLTSQLRQNFQAISSSIQAIYDRLDPPQADQQVDRLITGRLAALNVFVSHTLTKYTEVRASRQLAQQKVNECVKSQSKRYGFCGNGTHIFSIVNAAPEGLVFLHTVLLPTQYKDVEAWSGLCVDGTNGYVLRQPNLALYKEGNYYRITSRIMFEPRIPTMADFVQIENCNVTFVNISRSELQTIVPEYIDVNKTLQELSYKLPNYTVPDLVVEQYNQTILNLTSEISTLENKSAELNYTVQKLQTLIDNINSTLVDLKWLNRVETYIKSGGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGSLVPRGSHHHHHHHH

SEQ ID NO:120:CoV-NL63刺突胞外域

METDTLLLWVLLLWVPGSTGFFTCNSNANLSMLQLGVPDNSSTIVTGLLPTHWFCANQSTSVYSANGFFYIDVGNHRSAFALHTGYYDANQYYIYVTNEIGLNASVTLKICKFSRNTTFDFLSNASSSFDCIVNLLFTEQLGAPLGITISGETVRLHLYNVTRTFYVPAAYKLTKLSVKCYFNYSCVFSVVNATVTVNVTTHNGRVVNYTVCDDCNGYTDNIFSVQQDGRIPNGFPFNNWFLLTNGSTLVDGVSRLYQPLRLTCLWPVPGLKSSTGFVYFNATGSDVNCNGYQHNSVVDVMRYNLNFSANSLDNLKSGVIVFKTLQYDVLFYCSNSSSGVLDTTIPFGPSSQPYYCFINSTINTTHVSTFVGILPPTVREIVVARTGQFYINGFKYFDLGFIEAVNFNVTTASATDFWTVAFATFVDVLVNVSATNIQNLLYCDSPFEKLQCEHLQFGLQDGFYSANFLDDNVLPETYVALPIYYQHTDINFTATASFGGSCYVCKPHQVNISLNGNTSVCVRTSHFSIRYIYNRVKSGSPGDSSWHIYLKSGTCPFSFSKLNNFQKFKTICFSTVEVPGSCNFPLEATWHYTSYTIVGALYVTWSEGNSITGVPYPVSGIREFSNLVLNNCTKYNIYDYVGTGIIRSSNQSLAGGITYVSNSGNLLGFKNVSTGNIFIVTPCNQPDQVAVYQQSIIGAMTAVNESRYGLQNLLQLPNFYYVSNGGNNCTTAVMTYSNFGICADGSLIPVRPRNSSDNGISAIITANLSIPSNWTTSVQVEYLQITSTPIVVDCATYVCNGNPRCKNLLKQYTSACKTIEDALRLSAHLETNDVSSMLTFDSNAFSLANVTSFGDYNLSSVLPQRNIRSSRIAGRSALEDLLFSKVVTSGLGTVDVDYKSCTKGLSIADLACAQYYNGIMVLPGVADAERMAMYTGSLIGGMVLGGLTSAAAIPFSLALQARLNYVALQTDVLQENQKILAASFNKAINNIVASFSSVNDAITQTAEAIHTVTIALNKIQDVVNQQGSALNHLTSQLRHNFQAISNSIQAIYDRLDSPPADQQVDRLITGRLAALNAFVSQVLNKYTEVRGSRRLAQQKINECVKSQSNRYGFCGNGTHIFSIVNSAPDGLLFLHTVLLPTDYKNVKAWSGICVDGIYGYVLRQPNLVLYSDNGVFRVTSRVMFQPRLPVLSDFVQIYNCNVTFVNISRVELHTVIPDYVDVNKTLQEFAQNLPKYVKPNFDLTPFNLTYLNLSSELKQLEAKTASLFQTTVELQGLIDQINSTYVDLKLLNRFENLIKRMKQIEDKIEEIESKQKKIENEIARIKKIKGSLVPRGSHHHHHHHH

SEQ ID NO:122:合成多肽(SARS-CoV-2κ变体B.1.617.1/3RBD结构域)

METDTLLLWVLLLWVPGSTGNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSFLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYRYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVQGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO:123:合成多肽(SARS-CoV-2δ变体B.1.617.2/3RBD结构域)

METDTLLLWVLLLWVPGSTGNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSFLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYRYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSKPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO:124:合成多肽(SARS-CoV-2δ⁺变体)

METDTLLLWVLLLWVPGSTGNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSFLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGNIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYRYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSKPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO:125:合成多肽(SARS-CoV-2omicron变体B.1.1.529/RBD结构域)

METDTLLLWVLLLWVPGSTGNITNLCPFDEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNLAPFFTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGNIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNKLDSKVSGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGNKPCNGVAGFNCYFPLRSYSFRPTYGVGHQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO:126:合成多肽(SARS-CoV-2omicron变体B.1.1.529/刺突胞外域)

MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHVISGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASIEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLDHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPIIVREPEDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFDEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNLAPFFTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGNIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNKLDSKVSGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGNKPCNGVAGFNCYFPLRSYSFRPTYGVGHQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLKGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQGVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEYVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTKSHGSAGSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLKRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKYFGGFNFSQILPDPSKPSKRSPIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFKGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGPALQIPFPMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTPSALGKLQDVVNHNAQALNTLVKQLSSKFGAISSVLNDIFSRLDPPEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQGSGYIP

EAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGGSHHHHHHHH

SAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

SEQ ID NO:184:合成多肽(Omicron亚变种BA.2)

METDTLLLWVLLLWVPGSTGNITNLCPFDEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNFAPFFAFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGNEVSQIAPGQTGNIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNKLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGNKPCNGVAGFNCYFPLRSYGFRPTYGVGHQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGSGLVPRGSHHHHHHHHSAWSHPQFEKGTGGLNDIFEAQKIEWHE

序列表

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结果

1.针对SARS-CoV-2S蛋白的人单克隆抗体的产生

在恢复期的COVID-19个体中，针对刺突蛋白和RBD蛋白的血清抗体水平已与SARS-CoV-2IgA血清中和活性相关。

基于通过ELISA结合实验的针对SARS-CoV-2tri-S和RBD的IgG和IgA血清反应性，从COVID-19队列中选择对SARS-CoV-2S蛋白具有高抗体应答的恢复期COVID-19患者(在第一流行病潮期间感染)(图1A，1B；2A，2B，2C)。

大多数恢复期COVID-19患者具有高滴度的抗tri-S IgG，主要是IgG1，包括针对中东呼吸综合征相关冠状病毒(MERS-CoV)tri-S蛋白的交叉反应抗体(图1A、1B、2A和2B)。还检测到高水平的血清抗RBD IgG(图1A、1B、2A和2B)，并且其与抗tri-S抗体滴度相关(图2C)。尽管IgA抗体的SARS-CoV-2血清反应性总体上弱于IgG，但两者具有相关性(图1B、2B和2C)。

然后，纯化来自选定的恢复期COVID-19患者的多克隆血清IgG和IgA，并通过针对各种SARS-CoV-2抗原(包括tri-S、S1、S2、RBD、FP和N蛋白)的ELISA结合实验进行测定(图1C、2D、2E)。来自选定的Covid-19恢复者的纯化的血清IgG和IgA抗体显示出与野生型核衣壳(N)、tri-S、S1和S2亚基以及RBD的强ELISA结合，并且还针对来自其他β冠状病毒(SARS-CoV-1、MERS-CoV、HKU1和OC43)以及α冠状病毒(229E和NL63)的重组刺突蛋白发生交叉反应(图1C、2D和2E)。还对来自选定的Covid-19恢复者的纯化的血清IgG和IgA抗体进行了体外SARS-CoV-2中和活性测定(图1D)。与IgG相比，纯化的IgA抗体的50％抑制浓度(IC₅₀)平均较低(对于IgA和IgG分别为70.4相对115.6μg/ml，p＝0.068)，对于IgA范围为43至133μg/ml，对于IgG范围为21至257μg/ml(图1D)。IgA(而非IgG)抗体的IC₅₀值与其各自与SARS-CoV-2S1和RBD蛋白的结合水平呈负相关。

还针对MERS tri-S测试样品以测定针对另一种β冠状病毒的交叉反应性(图1B、1C、2C)。

外周血单个SARS-CoV-2S⁺IgG⁺和IgA⁺B细胞用荧光标记的RBD和tri-S染色，后者用作捕获单个SARS-CoV-2反应性B细胞的诱饵并通过流式细胞术分选，其频率通过流式细胞术分析确定。还确定了S⁺RBD⁺IgG⁺和IgA⁺B细胞的频率(图1E)。从分离的2870个SARS-CoV-2tri-S+IgA+/G+记忆B细胞中，通过重组表达克隆总共产生了133个独特的人mAb，其中大多数是B细胞克隆扩增的一部分(图1F)。

基于他们的刺突蛋白血清反应性和中和性选择10名恢复期COVID-19患者。

从选定的恢复期COVID-19患者的单细胞分选的SARS-CoV-2S⁺IgG⁺和IgA⁺B细胞克隆单克隆抗体。通过S-Flow、tri-SELISA和tri-S捕获ELISA分析重组人单克隆抗体针对SARS-CoV-2S蛋白的反应性(图1F、2F)。

从克隆、产生并验证其SARS-CoV-2S蛋白特异性的133个重组人单克隆抗体中分离出总共101种对SARS-CoV-2刺突蛋白特异性的重组人单克隆抗体。

2.来自COVID-19恢复者的人SARS-CoV-2刺突特异性记忆B细胞抗体(一些数据未显示)

ELISA和基于流式细胞术(S-Flow)的结合分析显示101种纯化的mAb特异性结合SARS-CoV-2S蛋白(76％[40-100％]；图1F和2F)。RBD结合细胞分别占tri-S+IgA+和IgG+B细胞的11％和17％。抗RBD IgA滴度与血液RBD+IgA+B细胞频率相关，并且与IgA的中和IC50值呈负相关。总的和SARS-CoV-2tri-S特异性类别转换的记忆B细胞均显示出静息记忆B细胞表型(RM，CD19+CD27+CD21+)。还确定了循环血滤泡辅助T细胞(cTfh)亚群的频率。cTfh2(CD4+CXCR5+CCR6-CXCR3-)大部分被激活，被发现占主导地位，并与tri-S+IgG+RM B细胞相关(r＝0.83；p＝0.0098)，说明如前所示的它们促进B细胞的类别转换和亲和力成熟的能力。免疫球蛋白基因特征与健康对照的IgG+记忆B细胞的比较发现重排的VH3Vλ3(p＝0.0047)和Vλ3/Jλ2(p＝0.0019)、JH4(p＝0.0312)和Jκ4(p＝0.0387)基因的SARS-CoV-2刺突特异性B细胞库以及IgG1亚类(p＝0.0001)中的增加的使用。如之前观察到的，抗刺突抗体也富集了VH1-24/-69和VH3-30/-33基因，并且具有减少的CDRH3正电荷(p＝0.0001)和IgH(9.5vs 19.2，p<0.0001))和Igλ(6.8vs 12.4,p<0.0001)中的体细胞突变。据报道，某些抗体克隆在几位COVID-19恢复者中共有，进一步证明了对SARS-CoV-2抗体反应的个体间趋同性。

3.人抗SARS-CoV-2刺突抗体的结合和抗病毒特性(数据未显示)

表位作图分析表明，59％的抗S mAb(n＝101)结合S2亚基，16％结合RBD结构域，17％结合NTD结构域，1％结合S1连接结构域，7％结合SARS-CoV-2刺突的未定义的区域。通过免疫印迹，只有一种靶向S2亚基的抗S抗体(占总数的0.99％)识别变性的tri-S蛋白，但不结合S-覆盖线性肽，表明大多数SARS-CoV-2-S记忆抗体靶向构象表位。为了确定抗刺突记忆抗体是否中和野生型毒株，使用三种不同的体外功能测定法测量了它们的抑制活性：竞争ELISA(测量与ACE2胞外域的可溶性tri-S或RBD结合的阻断)、伪中和测定法和中和测定法，其使用被称为S-融合的活病毒(19)。总体而言，约15％的抗S mAb在S-融合测定中显示出>50％的抑制活性，其中许多还中和假型SARS-CoV-2病毒粒子并阻断tri-S-ACE2相互作用。有效的中和剂靶向RBD，但所有抗RBD抗体中只有50％阻断SARS-CoV-2感染，IC₅₀值<10μg/ml。

SARS-CoV-2抗体可以配备有Fc依赖性效应子功能，允许消除病毒体和感染细胞，这可以改变体内感染过程。评估了抗S mAb在体外促进抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖性细胞毒性(CDC)的能力。平均而言，41.6％、74.2％和42.6％的IgG抗体分别表现出ADCC、ADCP和CDC活性。SARS-CoV-2抗体的效应活性具有全局相关性。ADCC和ADCP诱导抗体主要针对S2(分别为50％和85％)和NTD(分别为53％和76％)。相反，抗RBD抗体作为一个组在执行ADCC方面效率较低，并且达到较低程度的ADCP。具有CDC潜力的SARS-CoV-2抗体主要靶向NTD(抗NTD的59％)和RBD(抗RBD的56％)。因此，CDC和tri-S-ACE2阻断活性是相关的。主成分分析(PCA)显示，中和效应子功能和Fc依赖性效应子功能在抗病毒功能的PCA中分离成两个独立的簇，当组合两个第一主成分时，达到了77％的方差。“中和”簇主要包括抗RBD抗体，而“效应子”簇包括NTD和S2特异性IgG。

4.针对SARS-CoV-2S蛋白的人单克隆抗体的表征

进一步表征了对SARS-CoV-2刺突蛋白具有特异性的101种重组人单克隆抗体。

给出了6种有效抗RBD抗体中和剂(Cv2.5213、Cv2.5179、Cv2.3235、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.1169)的结果。Cv2.1169源自产生IgA的B细胞，而Cv2.5213、Cv2.5197、Cv2.3235、Cv2.1353和Cv2.3194源自产生IgG的B细胞。

人单克隆抗体Cv2.5213、Cv2.5179、Cv2.3235、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.1169的重链和轻链的氨基酸序列呈现于表2中。这些抗体的CDR、VH、VL和FR序列呈现于表1、表3和表4中。Cv2.1169可变重链和轻链分别由核酸序列SEQ ID NO：93和SEQ ID NO：94编码。Cv2.1353可变重链和轻链分别由核酸序列SEQ ID NO：95和SEQ ID NO：96编码。Cv2.3194可变重链和轻链分别由核酸序列SEQ ID NO：97和SEQ ID NO：98编码。Cv2.3235可变重链和轻链分别由核酸序列SEQ ID NO：99和SEQ ID NO：100编码。Cv2.5179可变重链和轻链分别由核酸序列SEQ ID NO：152和SEQ ID NO：153编码。Cv2.5213可变重链和轻链分别由核酸序列SEQ ID NO：101和SEQ ID NO：102编码。

将这些序列独立克隆到表达载体((pUC19质粒：GeneBank#LT615368.1(IgG1)；LT615369.1(IgK)；LT615370.1(IgL))中以产生用于表达抗体Cv2.1169、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.3235、Cv2.5179和Cv2.5213的重链和轻链的10个重组质粒抗体，如下所示。质粒Cv2.1169_pIgH和Cv2.1169_pIgL(抗体Cv2.1169)；质粒Cv2.1353_pIgH和Cv2.1353_pIgL(抗体Cv2.1353)；质粒Cv2.3194_pIgH和Cv2.3194_pIgL(抗体Cv2.3194)；质粒Cv2.3235_pIgH和Cv2.3235_pIgL(抗体Cv2.3235))；质粒Cv2.5179_pIgH和Cv2.5179_pIgL(抗体Cv2.5179)、质粒Cv2.5213_pIgH和Cv2.5213_pIgL(抗体Cv2.5213)。用这些质粒转化的大肠杆菌(DH10B，C3019，NEB)于2021年1月28日和4月2日保藏于法国巴黎75724 25ruedu Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

含有可表达形式的编码Cv2.1169抗体重链和轻链的质粒Cv2.1169_pIgH和Cv2.1169_pIgL的菌株Cv2.1169_pIgH和Cv2.1169_pIgL于2021年1月28日分别以编号I-5651和I-5652保藏于巴斯德研究所的CNCM。

含有可表达形式的编码Cv2.1353抗体重链和轻链的质粒Cv2.1353_pIgH和Cv2.1353_pIgL的菌株Cv2.1353_IgH和Cv2.1353_IgL于2021年4月2日分别以编号I-5668和I-5669保藏于巴斯德研究所的CNCM。

含有可表达形式的编码Cv2.3194抗体重链和轻链的质粒Cv2.3194_pIgH和Cv2.3194_pIgL的菌株Cv2.3194_IgH和Cv2.3194_IgL于2021年4月2日分别以编号I-5670和I-5671保藏于巴斯德研究所的CNCM。

含有可表达形式的编码Cv2.3235抗体重链和轻链的质粒Cv2.3235_pIgH和Cv2.3235_pIgL的菌株Cv2.3235_IgH和Cv2.3235_IgL于2021年4月2日分别以编号I-5672和I-5673保藏于巴斯德研究所的CNCM。

含有可表达形式的编码Cv2.5179抗体重链和轻链的质粒Cv2.5179_pIgH和Cv2.5179_pIgL的菌株Cv2.5179_IgH和Cv2.5179_IgL于2021年11月15日分别以编号I-5775和I-5776保藏于巴斯德研究所的CNCM。

含有可表达形式的编码Cv2.5213抗体重链和轻链的质粒Cv2.5213_pIgH和Cv2.5213_pIgL的菌株Cv2.5213_IgH和Cv2.5213_IgL于2021年4月2日分别以编号I-5674和I-5675保藏于巴斯德研究所的CNCM。

通过用上文公开的重组表达质粒瞬时共转染Freestyle^TM 293-F悬浮细胞来产生重组抗体，并且如材料和方法中公开的那样纯化重组抗体。

通过S-Flow、tri-S ELISA和tri-S捕获ELISA分析有效的抗RBD中和剂针对SARS-CoV-2刺突蛋白的反应性。对单克隆抗体在S蛋白上的结合区域作图。测试了与其他β冠状病毒的交叉反应性。在tri-S和RBD与ACE2结合的竞争ELISA测定以及SARS-CoV-2中和测定(SARS-CoV-2S-融合测定和伪中和测定)中评估了单克隆抗体的抗病毒功能。通过补体依赖性细胞毒性(CDC)测定和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)测定来分析Fc依赖性效应子功能。

在101种抗S mAb的集合中，鉴定出5种有效的SARS-CoV-2中和抗体(Cv2.5213、Cv2.3235、Cv2.1353、Cv2.3194、Cv2.1169)。通过表面等离子共振测量，它们以高亲和力与重组tri-S、S1和RBD蛋白结合(图3A)。它们靶向RBD上相似或空间接近的表位，如其在ELISA中对配体结合的交叉竞争所示(图3B和4D)。它们有效地阻断了tri-S与可溶性ACE2胞外域的相互作用(图3C)，表明它们识别受体结合基序(RBM)。使用伪中和和S-融合测定确定的SARS-CoV-2中和的IC₅₀值范围分别为3至37ng/ml和0.95至11.5ng/ml(图3D)。Cv2.1169和Cv2.3194抗体的亲和力和中和活性总结于下表5和表6中。

最有效的抗体Cv2.1169由V_H1-58/D_H2-15/J_H3和Vκ3-20/Jκ1免疫球蛋白基因重排编码，并且表现出低水平的体细胞突变(在氨基酸水平上3.1％ V_H和2.1％V_K)。

然后，在不同的互补结合测定中评价SARS-CoV-2中和剂与低亲和力无关配体结合(多反应性)以及与自身抗原交叉反应的潜力(图5)。所有抗体均未表现出自身反应性，而只有Cv2.3235和Cv2.3194显示出多反应性(图5和第5节：有效的SARS-CoV-2中和抗体的多反应性和自身反应性评估)。

有效的中和剂均没有ADCC潜力，但显示出中等的CDC和强大的ADCP活性(图14A-14C和第11节。有效的CoV-2中和剂的Fc依赖性效应子功能)。值得注意的是，表达为IgG1抗体的Cv2.1169是所有SARS-CoV-2刺突mAb中最强的ADCP诱导剂之一(前2％；图14C)。

表5：抗RBD中和抗体的结合和中和特性

通过表面等离子共振(SPR)测量有效抗RBD中和剂对tri-S、S1和RBD蛋白的结合亲和力并测定K_D值(图3A)。

通过ELISA使用生物素化抗RBD抗体和作为潜在竞争剂的抗体评价抗RBD抗体针对与tri-S和RBD的结合的竞争(图3B和4D)。

在ELISA中评估在作为竞争剂的抗RBD抗体的存在下生物素化的tri-S与固定化ACE-2的结合(图3C)。

使用SARS-CoV-2S-融合测定和伪中和测定来确定抗RBD抗体对SARS-CoV-2和SARS-CoV-2病毒变体的中和曲线(图3D和3G)。

通过ELISA测量RBD特异性IgG抗体对SARS-CoV-2和病毒变体(B.1.1.7、B.1.351和P.1)的RBD蛋白的结合和RBD-ACE2阻断能力(图3F、4E、4F、4G)。

在ELISA中评估在作为竞争剂的Cv2.1169 IgG和IgA抗体存在下生物素化的tri-S与固定化ACE-2的结合(图3L)。

使用SARS-CoV-2S-融合测定和伪中和测定来确定Cv2.1169 IgG和IgA对SARS-CoV-2的中和曲线(图3L)。

Cv2.1169 IgG和IgA抗体与SARS-CoV-2tri-S、S1和RBD以及与来自SARS-CoV-2病毒变体的RBD蛋白的结合在ELISA中测定(图3J、4J)。

所有有效的中和剂对S具有高亲和力，靶向RBD并且彼此交叉竞争S-结合。此外，最有效的抗体Cv2.1169还在体外中和D614G、B1.1.7、B1.351和P1病毒变体，与原始野生型毒株相当。

5.有效的SARS-CoV-2中和抗体的多反应性和自身反应性评估

通过针对dsDNA(DNA)、鞭毛蛋白(Fla)、gp140(HIV-1YU2)、胰岛素(INS)、匙孔血蓝蛋白(KLH)、脂多糖(LPS)、溶菌酶(LZ)、MAPK-14(MAPK)、肽聚糖(PG)和甲状腺球蛋白(Tg)的ELISA(图5A和5B)；对表达Hep2自身抗原的免疫荧光(图5C)；通过ELISA检测Hep-2反应性(图5D)；人蛋白质(图5E)评估有效的SARS-CoV-2中和抗体的多反应性和自身反应性。通过与非反应性抗体比较来确定多反应性指数(图5F)。

没有检测到(特别是对于超强中和剂Cv2.1169)多反应性、自身反应性和与人蛋白质的脱靶结合(图5A至5F)。

6.有效的SARS-CoV-2中和抗体的体内治疗活性

在感染SARS-CoV-2(野生型毒株)的K18-hACE2小鼠和叙利亚金黄仓鼠中测试了有效的SARS-CoV-2中和剂Cv2.1169的治疗功效。

K18-hACE2小鼠用10⁴噬斑形成单位(PFU)的SARS-CoV-2病毒鼻内(i.n.)感染，并根据两种不同的治疗方案接受Cv2.1169抗体：

-6小时后腹腔内(i.p.)注射约10mg/kg(0.25mg)和约20mg/kg(0.5mg)的Cv2.1169或同种型对照IgG抗体(图6A)；

-6小时后腹腔内(i.p.)注射约5mg/kg(0.125mg)的Cv2.1169 IgG和IgA抗体或同种型对照IgG抗体(图6C)。

K18-hACE2小鼠用10⁵噬斑形成单位(PFU)的SARS-CoV-2(野生型毒株)病毒鼻内(i.n.)感染，并在22小时后接受腹膜内(i.p.)注射的约40mg/kg(1mg)的Cv2.1169或同种型对照IgG抗体加上(i.n.)注射的约16mg/kg(0.4mg)的Cv2.1169(图6B)。

K18-hACE2小鼠中的结果表明:

-Cv2.1169 IgG治疗6h pi(10和20mg/kg)导致100％存活和恢复(对照组为0％)(图6A)。

-在感染10倍病毒接种物的小鼠中，Cv2.1169 IgG治疗24hpi(40mg/kg)仍导致50％的存活和恢复(对照组为0％)(图6B)。

-单次注射5mg/kg的Cv2.1169 IgG(而非Cv2.1169 IgA)仍导致高达77％的存活率(图6C)。

来自对照组的感染小鼠在感染后的前6天(dpi)内体重损失高达25％，然后在7-8dpi死亡(图6A)。相比之下，所有接受Cv2.1169 IgG治疗的动物均存活并在第一周经历短暂体重减轻后恢复了体重(图6A)。即使感染更高的病毒接种物(10⁵PFU SARS-CoV-2)，并在感染后22小时用Cv2.1169 IgG(约40mg/kg i.p.加i.n.)治疗，与对照组相比，一半的小鼠存活(p＝0.029)(图6B)。接下来，为了评估Cv2.1169 IgA抗体的体内功效，将单次低剂量的Cv2.1169 IgA或IgG抗体(0.125mg i.p.,约5mg/kg)施用至SARS-CoV-2感染的小鼠。尽管在4dpi时，与对照动物相比，Cv2.1169 IgA和IgG治疗的小鼠的口腔拭子中的病毒负载显著且可比地减少(Cv2.1169 IgA为2.6x10⁴ eqPFU/ml vs5.7x10³ eqPFU/ml[p＝0.008]]，对于Cv2.1169 IgG为4.7x10³ eqPFU/ml[p＝0.029])(图15A)，所有接受SARS-CoV-2IgA治疗的小鼠均在7-8dpi时死亡，而75％的Cv2-1169 IgG-治疗的小鼠在两周后存活并恢复了初始体重(图6C)。这可以通过循环人IgA与小鼠中IgG抗体相比的快速衰减来解释(图15C)。

受感染的叙利亚金黄仓鼠中的SARS-CoV-2相关发病机制类似于人中的轻度COVID-19疾病。叙利亚金黄仓鼠经鼻内(i.n.)感染6.10⁴噬斑形成单位(PFU)的SARS-CoV-2(野生型毒株)病毒，并接受各种治疗方案：

-24小时后腹腔内(i.p.)注射PBS、约40mg/kg(1mg i.p.)的Cv2.1169或同种型对照IgG抗体(图6D)；

-4小时后腹膜内(i.p.)注射约20mg/kg(0.5mg i.p.)的Cv2.1169IgG和IgA抗体或同种型对照IgG抗体(图6E)。

叙利亚仓鼠的结果表明，在受感染的仓鼠中单次注射Cv2.1169IgG诱导肺内病毒感染性和病毒血症的显著降低(图6D)，甚至在感染后24小时也如此(图6E)。

在5dpi时测量肺重量与体重(LW/BW)比率、肺内病毒感染性和RNA负载。与对照动物相比，用Cv2.1169治疗的仓鼠中的肺部病毒感染性和RNA水平均显著降低(分别为2.44x10³ vs 10x10⁵ PFU/肺,p＝0.0005和4.3x10⁷ vs 3.4x10⁸拷贝/μg RNA,p＝0.013)(图6D)。

与对照动物相比，IgA和IgG处理的仓鼠表现出LW/BW比率的降低(对于IgA为1.64vs 1.4[p＝0.03]，对于IgG为1.32[p＝0.004])(图6E)。

如从治疗的动物中循环人IgA抗体的快速消失所预期的(图15E)，SARS-CoV-2中和IgA治疗的仓鼠和对照仓鼠之间的肺内病毒感染性和RNA负载是相当的(图6D)。相比之下，施用Cv2.1169 IgG抗体降低治疗的仓鼠的肺中的SARS-CoV-2感染性和RNA水平(1.39x10⁶vs80PFU/肺,p＝0.0002；6.14x10⁸ vs 1.51x10⁸拷贝/μg RNA，p＝0.028)(图6D)。Cv2.1169IgA和IgG治疗的动物显示出相似的内源性抗刺突IgG滴度，其与对照组相比有所降低(分别为p<0.0001和p＝0.0003)，表明Cv2.1169 IgA抗体针对SARS-CoV-2感染的潜在的早期抗病毒作用(图15F)。

对于针对VOC的活性，还参见第13节.针对β变体的有效的SARS-CoV-2中和抗体Cv2.1169的体内治疗活性和第15节.感染SARS-CoV-2Delta和Omicron BA.1变体的仓鼠中Cv2.1169和基准抗体的体内治疗和预防活性。

7.有效的SARS-CoV-2中和剂的中和谱

关注的几种SARS-CoV-2变体(VOC)，即，Alpha(α，B.1.1.7)、Beta(β，B.1.351)、Gamma(γ，P.1)和Delta(δ，B.1.617.2)，以及感兴趣的变体(VOI)已流行病期间出现(https://www.who.int/)。接下来评估了16种抗RBD抗体的交叉反应潜力。流式细胞术的结合分析表明，5种有效中和剂中的3种与表达来自VOC(α、β、γ、δ)和VOI(ε、ι、κ、λ、μ)的刺突蛋白的细胞结合，而大多数非中和抗体具有窄的交叉反应谱(图3E)。仅中和剂Cv2.1169、Cv2.3194和Cv2.1353以及三分之一的非中和抗体显示与来自VOCα、β、γ、δ和VOIκ、δ+的RBD蛋白的未改变的ELISA结合(图3G、4E和4H)。Cv2.1169和Cv2.3194是唯一的均匀地阻断ACE2胞外域与来自测试的病毒变体的RBD蛋白的相互作用的抗RBD抗体(图3G)。由VH3-53/-66免疫球蛋白基因(Cv2.1353、Cv2.5213和Cv2.3235)编码的对417和501位的RBD突变敏感的三种有效中和剂失去了针对SARS-CoV-2α、β、γ、δ的结合和/或阻断活性(图3G和4E-4I)。S-融合和伪中和测定均显示Cv2.1169和Cv2.3194中和了SARS-CoV-2变体α、β、γ、δ(图3J、14D和14E)。VH3-53基因表达抗体Cv2.3194有效结合并中和所有变体，很可能是由于使用了先前报道的重排的Vκ3-20/Jκ4轻链基因。在这些交叉中和剂中，Cv2.1169是最有效的，在S-融合测定中针对野生型、D614G变体、α、β、γ和δ毒株的IC₅₀值范围为1.5至2.7ng/ml，在伪中和试验中针对D614G变体、α、β、γ、δ和δ+毒株的IC₅₀值范围为3.5至14ng/ml(图3D、3J、14D和14E)。与临床或开发中使用的基准抗体的亲代版本相比，Cv2.1169属于最强的交叉中和剂(图18A-18C)。此外，基于个体间克隆收敛分析(图7A和7B)，产生了来自不同恢复期供体的Cv2.1169 IgG同源物(V_H1-58/DH2/JH3和Vκ3-20/Jκ1)，即Cv2.5179，其也表现出有效且广泛的SARS-CoV-2中和活性(图3L和18C-18E)。

分选的B细胞的免疫表型分型表明Cv2.1169最初由具有激活的记忆表型(CD27+CD21-)的刺突+RBD+IgA+B细胞表达，并且表达粘膜归巢整联蛋白β7。因此，Cv2.1169也表达为单体IgA抗体，与其IgG对应物相比，其显示出同等的结合和中和作用(图3K、3L和4I)。相比之下，含有IgA二聚体的纯化的J链表现出对野生型毒株更高的中和能力(图3M)，这表明如之前报道的通过结合亲合力效应增强了中和能力。因此，与二价免疫球蛋白相比，Cv2.1169 IgA Fab针对SARS-CoV-2的中和活性严重受损(图3L)。

8.与VOC Omicron的刺突和RBD蛋白的Cv2.1169结合

SARS-CoV-2 Omicron变体B.1.1.529或BA.1在全世界占据主导地位(https://www.who.int/)。Omicron BA.1含有15个RBD氨基酸取代，这赋予了对多种有效的抗RBD中和剂(包括临床使用的中和剂)的抗性。

本研究的目的是比较Cv2.1169和选定基准抗体与来自VOC Omicron的SARS-CoV-2刺突蛋白(tri-S)以及来自VOC Beta(β)和Omicron(o)病毒株的RBD蛋白的结合。

选择的基准抗体在图7A中报告为Cv2.1174、Cv2.5156和Cv2.1388。对应于它们的可变区(重链可变区VH和轻链可变区VL)的多肽序列报告为序列SEQ ID N°158至SEQ ID N°163。

ELISA板用来自β(用作对照)和o的纯化重组SARS-CoV-2刺突VOC o和RBD蛋白包被。洗涤后，用含有BSA的溶液封闭板，与不同浓度的Cv2.1169或基准IgG抗体一起孵育，然后通过山羊过氧化物酶缀合的抗人IgG抗体进行显色。在405nm(OD_405nm)处测量光密度。

图9以及图17A和17C显示Cv2.1169以剂量依赖性方式结合来自Omicron变体(o)的纯化的重组SARS-CoV-2刺突和RBD结构域。对于tri-S的平台值达到约150ng/ml，对于RBD的平台值达到625ng/ml。对于RBD的以ng/ml表示的EC₅₀值(平均值±SD，n＝2)从5.4(β)到27(o)不等，表明与RBDβ相比，Cv2.1169与RBD o的结合减少了5倍。

Cv2.1169和Cv2.3194，但不是其他抗RBD抗体，与细胞表达的可溶性Omicron BA.1刺突蛋白以及o BA.1RBD良好结合(图17A)。两种抗体均阻断Omicron BA.1tri-S与ACE2的结合，尽管效率低于野生型病毒刺突(图17B)。通过ELISA检测，与基准抗体相比，Cv2.1169和Cv2.3194对Omicron BA.1病毒蛋白也具有最高的结合和刺突ACE2阻断能力(图17C和17D)。Cv2.1169和Cv2.3194，但不是Cv2.5179，在S-融合测定中中和BA.1，IC₅₀分别为253ng/ml和24.2ng/ml(图17E)。因此，与Delta相比，Cv2.1169和Cv2.3194对Omicron BA.1分别呈现出79倍和2.2倍降低的中和功效(图17E)。相反，与oBA.1相比，Cv2.1169和Cv2.3194显示出针对Omicron BA.2的稍强的RBD结合(图17D)。一致地，两种抗体更有效地阻断RBDBA.2与可溶性ACE2的结合(图17F)。尽管如此，Cv2.1169和Cv2.3194在S-融合测定中显示出针对Omicron BA.1和BA.2的相当的中和活性(图17G)。与其单体对应物相比，二聚体Cv2.1169IgA抗体对Omicron变体尤其是BA.1具有增强的RBD结合和刺突ACE2阻断活性(图17H和17I)。当针对结合位点数量标准化时，这转化为Cv2.1169 IgA二聚体针对Omicron BA.1和BA.2的分别13倍和20倍的中和效力增加(图17J)。

9.Cv2.1169抑制来自野生型的SARS-CoV-2刺突和RBD以及VOCo与ACE-2的结合

使用来自野生型和VOC Omicron病毒株的刺突(tri-S)蛋白通过ELISA研究了Cv2.1169和基准抗体抑制刺突蛋白与其受体ACE-2相互作用的能力。

ELISA板用250ng/孔的纯化ACE-2胞外域包被过夜。封闭后，在Cv2.1169或基准抗体存在的情况下添加生物素化的tri-S和RBD(野生型和变体o)。洗涤后，通过与过氧化物酶缀合的链霉抗生物素蛋白(BD Biosciences)孵育30分钟来对板显色。在405nm(OD_405nm)处测量光密度。

图10显示Cv2.1169以剂量依赖性方式抑制tri-S和ACE-2之间的相互作用。平台值范围为92.5ng/ml至583.4ng/ml(o)。IC₅₀以平均值±SD(n＝2)表示，范围为250ng/ml至～2000ng/ml(o)。Cv2.1169仍然抑制刺突Omicron与其配体ACE-2的相互作用。这一功能特性表明，Cv2.1169可以阻止Omicron BA.1病毒与其靶标的附着，从而仍然减少SARS-CoV-2Omicron变体介导的病毒感染。

10.使用S-融合测定确定本公开内容的抗体(包括Cv2.3194、Cv2.5179、Cv2.1169)针对δ、δ+和o毒株的体外SARS-CoV-2中和。

使用S-融合中和测定在体外评价Cv2.1169和其他基准抗体中和SARS-CoV-2Delta(用作对照)和Omicron病毒的能力。

将S-融合细胞(U2 OS-ACE-2GFP1-10或GFP 11细胞)与SARS-CoV-2病毒变体在各种稀释度的IgG抗体存在下一起孵育。18小时后，固定细胞并用共焦显微镜获取图像。基于显示GFP表达的面积和细胞核数量，计算中和百分比。基于剂量反应曲线计算EC₅₀值(ng/ml)。

图11显示了Cv2.1169对SARS-CoV-2中和的剂量反应。平台值从15.6ng/ml(Delta)和1000ng/ml(o)获得。S-融合测定的IC₅₀值为4.46ng/ml(Delta)至212.2ng/ml(o)，表明Cv2.1169对Omicron o的中和活性与Delta相比降低了50倍。

尽管Cv2.1169显示出降低的RBD结合和RBD-ACE2阻断能力以及针对SARS-CoV-2VOC Omicron的降低的中和活性，但该抗体仍然以约0.25μg/ml的IC₅₀中和SARS-CoV-2Omicron，并且在所述测定中测试的所有基准抗体中排名第一。

图12和13进一步证实根据本公开内容的所有测试的中和抗体，特别是包括Cv2.3194、Cv2.5179和Cv2.1169的那些，具有针对多种所关注的变体的广泛中和特性。

表6：Cv2.1169和Cv2.3194抗体的亲和力和中和活性。

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11.有效的CoV-2中和剂的Fc依赖性效应子功能

图14A说明根据本公开内容的有效的SARS-Cov-2中和剂倾向于诱导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性，尽管与非中和剂(非nAb)相比该诱导是中等的。

图14B说明根据本公开内容的有效的SARS-Cov-2中和剂倾向于诱导中等补体依赖性细胞毒性(CDC)活性，但与非中和剂(非nAb)相比，该诱导是中等的。

图14C说明根据本公开内容的有效SARS-Cov-2中和剂Cv2.1169倾向于诱导显著的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)活性，对于重组IgG1、单体IgA1和二聚IgA1抗体均如此。

12.表位的结构表征(数据未显示)

为了精确定义最有效的mAb的表位和中和机制，产生相应的Fab以进行与野生型RBD复合的共结晶试验。获得了Cv2.3235 Fab/RBD和Cv2.6264 Fab/RBD复合物的晶体，并分别以和/>分辨率确定了它们的X射线结构。Cv2.1169 Fab并未结晶为与RBD的二元复合物，而是结晶为Cv2.1169 IgA Fab/CR3022 IgG1 Fab/RBD三元复合物，这使得可以确定达到/>的X射线结构。这些晶体没有显示出可解释的Cv2.1169 Fab恒定结构域的密度，这些恒定结构域是可移动的，但可变结构域和互补位/表位区域被清楚地解析。晶体结构显示，Cv2.1169与RBM结合，并横跨RBD脊，该脊倾斜于RBD的“向下”构象中“封闭”刺突上阻塞的面。Cv2.1169的结合模式与其他VH1-58/VK3-20衍生的中和抗体类似，如与A23-58.1、COVOX-253和S2E12 mAb的叠加模型所示。将RBD-Cv2.1169和RBD-ACE2复合物的结构叠加显示出抗体和受体之间的广泛冲突。通过Cv2.1169结合引入的空间位阻为其中和机制提供了结构基础，并且与其RBD-ACE2阻断能力一致(图3C、3F、4F和4I)。Cv2.1169的RBD结合不同于两种效力较低的VH3-53和VH1-69抗RBD中和抗体(分别为Cv2.3235和Cv2.6264)之一。与Cv2.3235和Cv2.6264抗体相比，Cv2.1169以适度的总埋藏表面积(BSA)结合(对于Cv2.1169、Cv2.3235和Cv2.6264，分别为约1400/>约2620/>和约1820/>)。此外，Cv2.1169(但不是Cv2.3235和Cv2.6264)的所有CDR与RBD接触，重链的主要贡献是提供大部分相互作用表面(互补位BSA的约80％)，主要以CDRH3依赖性方式。Cv2.1169 CDRH3(Kabat定义的14个氨基酸的长度)在P99和F110处包含扭结，其界定舌状环，该环通过C101CDRH3和C106CDRH3之间的二硫键稳定。这种特殊的形状允许仅从CDRH3“舌头”一侧的G104和F110之间的几个残基识别RBD尖端，并通过其主链原子与RBD形成氢键。此外，界面处的极性相互作用涉及CDRH3中的D108和CDRL1中的Y33的侧链。/>

总体而言，Cv2.1169与RBD区段417-421、455-458、473-478和484-493相互作用。除T478外，Omicron之前的SARS-CoV-2 VOC中存在的所有突变的RBD残基均位于接触区域的边缘(K417、E484)或外部(L452、N501)。相反，Cv2.3235抗体重链和轻链与多种VOC中突变的残基(例如K417和N501)相互作用，解释了它们结合和中和α、β、γ和δ+变体的降低的能力(图3E、3F和14A)。RBD残基T478与Cv2.1169重链和轻链形成氢键，并在δ和δ+变体(T478K)中发生突变。然而，尽管用苏氨酸取代为赖氨酸，Cv2.1169抗体仍然能够有效结合并中和这两种变体(图3E、3F、14A和14B)。这表明界面的完整性不依赖于与T478侧链形成的氢键，并且赖氨酸残基有足够的空间采用具有减少与抗体的冲突的方向的旋转异构体。与Cv2.6264抗体不同，Cv2.6264抗体也横跨RBD脊，但失去了针对δ和δ+变体的反应性(图3E)，Cv2.1169将RBD F486和N487残基埋藏在疏水腔内。该口袋由FWRH2(W50)、CDRH3(F110)、CDRL1(Y33)和CDR13(Y92和W97)的芳香族残基形成，并模拟这些残基在与ACE2相互作用时遇到的环境。因此，F486和N487残基最有可能充当Cv2.1169的锚点，从而加强其与RBM的相互作用，从而允许耐受δ和δ+变体中的T478K突变。BA.1和BA.2变体中的四个Cv2.1169-RBD接触残基发生突变，包括β和γ中已存在的取代K417N和δ中的T478K，以及两个Omicron特异性突变S477N和Q493R。尽管全部位于Cv2.1169结合位点的外围，但这些组合的突变解释了与其他VOC相比，SARS-CoV-2BA.1和BA.2的降低的结合和中和作用(图17)。

如上文所述，Cv2.1169抗体倾斜于RBD的阻塞面，使得由于与邻近原聚体的接近而使得“向下”RBD构象上的表位不可接近。这意味着抗体只会在其“向上”构象中结合RBD。通过将与Cv2.1169 IgA Fab复合的SARS-CoV-2S_6P蛋白三聚体的冷冻电镜重建测定至分辨率，情况确实如此。该结构表明3-向上RBD开放刺突中的每个原聚体均与Cv2.1169 Fab片段结合。考虑到Cv2.1169阻断了SARS-CoV-2tri-S与可溶性ACE2受体的结合，并且其结合位点仅在向上-RBD构象中可接近，我们的数据表明该抗体属于1类(或Ia)，具有RBD-B组中的表位。因此，Cv2.1169与1类基准SARS-CoV-2中和剂(CT-P59、COV2-2196、REGN10933和CB6)交叉竞争但也与2类抗体LY-CoV555适度竞争与刺突和RBD蛋白的结合。

13.有效的SARS-CoV-2中和抗体Cv2.1169针对Beta变体的体内治疗活性。

在接种Beta变体后，在感染SARS-CoV-2的K18-hACE2小鼠中进一步测试有效的SARS-CoV-2中和剂Cv2.1169的治疗功效，如图15所示，并且如先前对于图6使用野生型毒株所示的。

为了确定Cv2.1169在体内是否具有针对SARS-CoV-2VOC感染的活性，Cv2.1169IgA抗体的预防活性和Cv2.1169 IgG抗体针对SARS-CoV-2 VOCβ的治疗活性在K18-hACE2敲入小鼠中进行了测试。在感染10⁴PFU SARS-CoV-2变体β之前6小时，以约10mg/kg(0.25mgi.p.)单次施用Cv2.1169 IgA抗体保护87.5％的动物免于死亡(图6F)。尽管人SARS-CoV-2IgA抗体并未在小鼠循环中持续存在(图15C)，但Cv2.1169 IgA治疗的小鼠在随访期间也恢复了初始体重(图6F)。同样，感染6小时后用Cv2.1169 IgG抗体(0.25mg i.p.,约10mg/kg)治疗一次SARS-CoV-2β感染的小鼠实现100％存活，而所有接受对照抗体的动物均在7-8dpi死亡(图6F)。值得注意的是，在随访结束时，在小鼠血清中仍然可检测到人Cv2.1169IgG抗体(图15B和15C)。此外，与用Cv2.1169 IgG抗体处理的小鼠相比，用Cv2.1169IgA预处理的小鼠产生了更高的抗刺突IgG抗体滴度，表明前一组中较弱的病毒控制(图15)。

总之，数据证实用包含Cv2.1169可变区的IgA免疫球蛋白预处理或用包含相同可变区的IgG免疫球蛋白处理对于多种关注的SARS-CoV2变体来说是有效的体内中和剂。

特别地，图15A证实，与对照小鼠相比，在腹膜内注射5mg/kg Cv2.1169 IgG或IgA后，感染后四天(dpi)的SARS-CoV2 RNA水平显著降低。

对于针对野生型SARS-CoV-2的活性，也参见第6节：有效的SARS-CoV-2中和抗体的体内治疗活性。有关针对VOC的活性，也参见第15节：Cv2.1169和基准抗体在感染SARS-CoV-2Delta和Omicron BA.1变体的仓鼠中的体内治疗和预防活性。

14.与针对SARS-CoV2的RBD结构域的其他治疗抗体进行基准测试。

图16A和16B提供了Cv2.1169和Cv2.3194结合特性与选择的具有针对一种或多种所关注的变体的中和特性的其他参考治疗抗体的比较研究。测试的参考治疗抗体包括Adintrevimab、Cilgavimab、Sotrovimab(在本领域中也报道为Xevudy^TM)、Imdevimab(在本领域中也报道为Ronapreve^TM)、Tixagevimab、Regdanvimab(在本领域中也报道为Regkirona^TM)、Casirvimab、Etesivimab、Bamlanivimab及其组合，包括：Casirivimab与Imdevimab组合、Bamlanivimab与Etesevimab组合、Cilgavimab与Tixagevima组合。总体而言，根据本公开内容的中和抗体被证明是所有测试变体的RBD的有效结合剂。

图16C和16D和16E进一步说明了每对抗体和多个RBD构建体的结合竞争。总体而言，Cv2.1169和Cv2.3194被证明属于最好的1级竞争剂。本文通过ELISA测定进一步证明，它们的结合界面与选择的其他治疗性抗体互补；特别是选自以下的那些：Adintrevimab、Cilgavimab、Sotrovimab、Imdevimab。

图17和18进一步说明，值得注意的是，当与临床或开发中使用的基准抗体的亲本版本相比时，Cv2.1169也被列为最强的交叉中和剂。特别是，Cv2.1169与1类基准SARS-CoV-2中和剂(CT-P59、COV2-2196、REGN10933和CB6)交叉竞争但也与2类抗体LY-CoV555适度竞争与刺突和RBD蛋白的结合。

15.Cv2.1169和基准抗体在感染SARS-CoV-2Delta和OmicronBA.1变体的仓鼠中的体内治疗和预防活性。

Cv2.1169和选择的基准抗体(Evusheld[Cilgavimab+Tixagevimab]和S309/Sotrovimab)的治疗功效在感染SARS-CoV-2变体Delta和Omicron BA.1的叙利亚金黄仓鼠中进行测试(图19B)。

动物用10⁴噬斑形成单位(PFU)的SARS-CoV-2Delta(图19A)或Omicron BA.1(图19C)鼻内(i.n.)感染并接受两种不同的治疗方案：

-感染SARS-CoV-2Delta后24小时，腹膜内(i.p.)注射Cv2.1169IgG或Evusholdat2mg/kg(和6mg/kg(图19A)；

-感染SARS-CoV-2BA.1后24小时，腹膜内(i.p.)注射浓度为3mg/kg的Cv2.1169、Sotrovimab或Evusheld抗体。还以30mg/kg施用Cv2.1169 IgG抗体(图19C)。

结果表明，在感染的仓鼠单次注射Cv2.1169 IgG和Evusheld在2mg/kg和6mg/kg下诱导肺内SARS-CoV-2Delta病毒感染性和病毒血症的显著降低(图19A)。用接受单次注射6mg/kg的Cv2.1169 IgG和Evusheld制剂的感染Omicron BA.1的仓鼠获得了类似的数据(图19C)。

还在叙利亚仓鼠中测试了Cv2.1169针对SARS-CoV-2 OmicronBA.1的预防活性。与Evusheld制剂相比，在感染10⁴PFU的SARS-CoV-2 Omicron BA.1变体前24小时单次施用Cv2.1169 IgG抗体显著降低肺内病毒感染性和病毒血症，以及在3mg/kg和30mg/kg下感染后80小时的体重减轻(图19C)。

总体而言，叙利亚仓鼠的体内实验表明，Cv2.1169比Sotrovimab和Evusheld具有针对SARS-CoV-2 VOC Delta和Omicron BA.1更高的治疗和预防潜力。

对于针对野生型SARS-CoV-2的活性，也参见第6节：有效的SARS-CoV-2中和抗体的体内治疗活性。有关针对VOC的活性，也参见第13节：有效的SARS-CoV-2中和抗体Cv2.1169针对Beta变体的体内治疗活性。

结论

为了检查针对SARS-CoV2的保护性体液反应，本发明人从基于高中和抗体滴度选择的十个COVID-19恢复者的记忆B细胞中克隆并表征了对SARS-CoV2-S特异性的101种人抗体。他们发现，尽管人SARS-CoV-2抗体是由一组不同的免疫球蛋白基因编码的，但不同个体之间共享多个B细胞克隆。抗体识别各种构象表位，其中绝大多数靶向S2亚基。大约10％的SARS-CoV2-S特异性抗体识别受体结合结构域(RBD)，其中5种在体外有效中和SARS-CoV2。SARS-CoV-2中和剂不与其他冠状病毒发生反应，并且表现出针对RBD结合的交叉竞争。然而，没有一种抗-S2具有中和作用，在体外测试ADCC和CDC潜力时，许多抗S2具有Fc依赖性效应子功能。值得注意的是，最有效的抗体Cv2.1169也在体外中和了D614G、B1.1.7、B.1.351和P.1病毒变体，与原始野生型毒株相当。值得注意的是，使用超强中和抗体Cv2.1169进行单一疗法在小鼠和仓鼠SARS-CoV2模型中诱导体内病毒血症下降，并保护所有受感染的小鼠免于死亡。

本发明人在本文中进一步表明，SARS-CoV2-S特异性抗体还有效地中和多种关注的变体，包括kappa(κ)delta(δ)、delta+(δ⁺)和omicron(o)变体。

在本研究中描述的102种SARS-CoV-2抗体中，Cv2.1169和Cv2.3194是对所有SARS-CoV-2变体(包括Omicron BA.1和BA.2亚型)具有持续活性的唯一有效中和剂。与典型的1类抗RBD抗体相比，Cv2.3194使用VH3-53可变基因并显示短CDRH3，但与其他抗体的不同之处在于其对VOC中的逃逸突变的抵抗力。事实上，VH3-53编码的抗RBD抗体通常会失去它们中和在K417和N501位置中具有突变的SARS-CoV-2病毒(包括α、β、γ和ο变体)的能力。表达Vκ3-20的1类抗RBD抗体(P30S)的CDRκ1中的罕见突变已被提出挽救VOC中和，但在Cv2.3194中不存在。由于Cv2.3194 Fab/RBD复合物未结晶，其针对所有VOC的未改变的有效交叉中和能力的分子基础仍有待解决。除了Cv2.3194之外，我们还分离出了另一种有效的SARS-CoV-2交叉中和抗体Cv2.1169，它是一种与RBD结合的1类中和剂，具有适度的总埋藏表面积。除Omicron BA.1和BA.2外，SARS-CoV-2 VOC中所有突变的RBD残基对Cv2.1169的SARS-CoV-2结合和中和能力的影响均可忽略不计。基于结构数据分析，本发明人鉴定F486和N487位置中的RBM残基对于Cv2.1169结合至关重要，充当锚点并有助于耐受多种VOC中存在的T478K突变。重要的是，如之前针对VH1-58类抗体S2E12所示，F486和N487位置中的取代不太可能在未来潜在的VOC中发生，因为它们在降低RBD与ACE2的结合和病毒复制适应性方面具有有害作用。因此，Cv2.1169属于一类广泛的SARS-CoV-2中和剂(即S2E12、A23.58.1、AZD8895[COV2-2196])，其对病毒逃逸具有较高的屏障并且是具有最低的逃逸能力之一。此外，与针对RBD“VH1-58超级位点”的其他中和抗体(而其针对BA.1和BA.2的活性显著降低或丧失)相比，Cv2.1169针对SARS-CoV-2 Omicron的效力减弱似乎是中等的。

使用啮齿动物和非人灵长类动物的SARS-CoV-2动物模型对于证明人中和抗刺突抗体的体内预防和治疗能力至关重要。本发明人表明，Cv2.1169 IgG有效预防和/或保护动物免受SARS-CoV-2及其VOCβ的感染。Cv2.1169最初由可能在粘膜组织中发育的循环血液表达IgA的激活记忆B细胞表达，我们确定Cv2.1169 IgA抗体可以保护小鼠免受SARS-CoV-2VOCβ的感染。因此，我们可以假设，如果此类抗体局部存在于粘膜表面，特别是作为二聚体IgA，可以有效中和和/或消除病毒颗粒，从而可能降低SARS-CoV-2变体感染的风险。在这方面，与IgG1对应物相比(20,78)，IgA1抗体二聚体的更长的铰链区和多价性允许增强体外SARS-CoV-2中和作用。与此一致，本发明人发现，Cv2.1169针对BA.1和BA.2的中和活性的丧失被以其二聚IgA形式产生的抗体的亲合力效应极大地挽救。

SARS-CoV-2变体的刺突中的几个逃逸突变导致对抗体中和的抗性，损害疫苗和治疗性抗体功效。值得注意的是，Cv2.1169和Cv2.3194表现出广泛的活性，不仅中和VOCα、β、γ、δ和δ⁺，还中和BA.1和BA.2，并且与临床使用的基准抗体相比，被评为最有效的交叉中和剂。除了中和活性之外，Cv2.1169 IgG抗体的强大ADCP潜力可能有助于消除无细胞和细胞相关的病毒粒子，并通过疫苗效应刺激适应性免疫。考虑到由对抗COVID-19的抗体疗法所带来的医疗保健益处，并考虑到Cv2.1169和Cv2.3194的出色抗病毒特性，它们代表了针对COVID-19的预防和/或治疗策略的有前途的候选者。这些广泛的SARS-CoV-2中和抗体的具有较长的半衰期的长效形式可用于为免疫功能低下人群提供保护性免疫力。

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<400> 1

Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val

1 5 10 15

Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe

20 25 30

Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu

35 40 45

His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp

50 55 60

Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp

65 70 75 80

Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu

85 90 95

Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser

100 105 110

Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile

115 120 125

Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr

130 135 140

Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr

145 150 155 160

Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu

165 170 175

Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe

180 185 190

Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr

195 200 205

Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu

210 215 220

Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr

225 230 235 240

Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser

245 250 255

Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro

260 265 270

Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala

275 280 285

Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys

290 295 300

Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val

305 310 315 320

Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys

325 330 335

Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala

340 345 350

Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Phe Leu

355 360 365

Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro

370 375 380

Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe

385 390 395 400

Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly

405 410 415

Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys

420 425 430

Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn

435 440 445

Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe

450 455 460

Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys

465 470 475 480

Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly

485 490 495

Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val

500 505 510

Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys

515 520 525

Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn

530 535 540

Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu

545 550 555 560

Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val

565 570 575

Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe

580 585 590

Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val

595 600 605

Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile

610 615 620

His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser

625 630 635 640

Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val

645 650 655

Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala

660 665 670

Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala

675 680 685

Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser

690 695 700

Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile

705 710 715 720

Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val

725 730 735

Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu

740 745 750

Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr

755 760 765

Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln

770 775 780

Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe

785 790 795 800

Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser

805 810 815

Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly

820 825 830

Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp

835 840 845

Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu

850 855 860

Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly

865 870 875 880

Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile

885 890 895

Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr

900 905 910

Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn

915 920 925

Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala

930 935 940

Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn

945 950 955 960

Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val

965 970 975

Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln

980 985 990

Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val

995 1000 1005

Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu

1010 1015 1020

Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val

1025 1030 1035 1040

Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala

1045 1050 1055

Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu

1060 1065 1070

Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His

1075 1080 1085

Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val

1090 1095 1100

Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr

1105 1110 1115 1120

Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr

1125 1130 1135

Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu

1140 1145 1150

Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp

1155 1160 1165

Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp

1170 1175 1180

Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu

1185 1190 1195 1200

Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile

1205 1210 1215

Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile

1220 1225 1230

Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys

1235 1240 1245

Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val

1250 1255 1260

Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr

1265 1270

<210> 2

<211> 200

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SARS-CoV-2刺突受体结合结构域(RBD)

<400> 2

Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg

1 5 10 15

Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val

20 25 30

Ala Asp Tyr Ser Phe Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys

35 40 45

Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn

50 55 60

Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile

65 70 75 80

Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro

85 90 95

Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp

100 105 110

Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys

115 120 125

Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln

130 135 140

Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe

145 150 155 160

Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln

165 170 175

Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala

180 185 190

Thr Val Cys Gly Pro Lys Gly Ser

195 200

<210> 3

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.1169 VH)

<400> 3

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Ser

20 25 30

Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Pro Tyr Cys Ser Gly Gly Thr Cys Leu Asp Gly Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 4

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.1169 VL)

<400> 4

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 5

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.1353 VH)

<400> 5

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Leu Gly Pro Met Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 6

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.1353 VL)

<400> 6

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Asp Pro Pro

85 90 95

Val Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 7

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.3194 VH)

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Val Thr Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Pro Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Leu Val Val Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.3194 VL)

<400> 8

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Gly Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Thr Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100

<210> 9

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.3235 VH)

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.3235 VL)

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Phe

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Thr Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Leu Asp Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 11

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.5213 VH)

<400> 11

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Leu Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Leu Asn Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Ala Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 12

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.5213 VL)

<400> 12

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asp Ser Tyr Ser Pro

85 90 95

Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 13

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.1169 全长重链)

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Ser

20 25 30

Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Pro Tyr Cys Ser Gly Gly Thr Cys Leu Asp Gly Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly Lys

450

<210> 14

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.1169 全长轻链)

<400> 14

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 15

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.1353 全长重链)

<400> 15

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Leu Gly Pro Met Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 16

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.1353 全长轻链)

<400> 16

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Asp Pro Pro

85 90 95

Val Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 17

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.3194 全长重链)

<400> 17

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Val Thr Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Pro Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Leu Val Val Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 18

<211> 211

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.3194 全长轻链)

<400> 18

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Gly Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Thr Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val

100 105 110

Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser

115 120 125

Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln

130 135 140

Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val

145 150 155 160

Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu

165 170 175

Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu

180 185 190

Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg

195 200 205

Gly Glu Cys

210

<210> 19

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.3235 全长重链)

<400> 19

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 20

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.3235 全长轻链)

<400> 20

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Phe

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Thr Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Leu Asp Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 21

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.5213 全长重链)

<400> 21

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Leu Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Leu Asn Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Ala Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 22

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Cv2.5213 全长轻链)

<400> 22

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asp Ser Tyr Ser Pro

85 90 95

Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 23

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 CDR-H1)

<400> 23

Thr Ser Ala Val Gln

1 5

<210> 24

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 CDR-H2)

<400> 24

Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Glu

<210> 25

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 CDR-H3)

<400> 25

Pro Tyr Cys Ser Gly Gly Thr Cys Leu Asp Gly Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 26

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 CDR-L1)

<400> 26

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 27

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169-CDR-L2)

<400> 27

Ser Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 28

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 CDR-L3)

<400> 28

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr

1 5

<210> 29

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 CDR-H1)

<400> 29

Ser Asn Tyr Met Asn

1 5

<210> 30

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 CDR-H2)

<400> 30

Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 31

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 CDR-H3)

<400> 31

Asp Leu Gly Pro Met Gly Phe Asp Ile

1 5

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 CDR-L1)

<400> 32

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 33

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353-CDR-L2)

<400> 33

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 34

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 CDR-L3)

<400> 34

Gln Gln Leu Asn Ser Asp Pro Pro Val Thr

1 5 10

<210> 35

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 CDR-H1)

<400> 35

Ser Asn Tyr Met Ser

1 5

<210> 36

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 CDR-H2)

<400> 36

Val Ile Tyr Pro Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 37

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 CDR-H3)

<400> 37

Asp Leu Val Val Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 38

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 CDR-L1)

<400> 38

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 39

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194-CDR-L2)

<400> 39

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 40

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 CDR-L3)

<400> 40

Gln Gln Gly Val Thr

1 5

<210> 41

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 CDR-H1)

<400> 41

Arg Asn Tyr Met Ser

1 5

<210> 42

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 CDR-H2)

<400> 42

Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 43

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 CDR-H3)

<400> 43

Asp Gly Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 44

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 CDR-L1)

<400> 44

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 45

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235-CDR-L2)

<400> 45

Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 46

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 CDR-L3)

<400> 46

Gln Arg Leu Asp Ser Tyr Pro Pro Ile Thr

1 5 10

<210> 47

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 CDR-H1)

<400> 47

Ser Asn Tyr Met Ser

1 5

<210> 48

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 CDR-H2)

<400> 48

Leu Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 49

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 CDR-H3)

<400> 49

Asp Leu Asn Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 50

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 CDR-L1)

<400> 50

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 51

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213-CDR-L2)

<400> 51

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 52

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 CDR-L3)

<400> 52

Gln Gln Leu Asp Ser Tyr Ser Pro Phe Thr

1 5 10

<210> 53

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 H-FW1)

<400> 53

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr

20 25 30

<210> 54

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 H-FW2)

<400> 54

Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 55

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 H-FW3)

<400> 55

Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Thr Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala

20 25 30

<210> 56

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 H-FW4)

<400> 56

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 57

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 L-FW1)

<400> 57

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 58

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 L-FW2)

<400> 58

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 59

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 L-FW3)

<400> 59

Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 60

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1169 L-FW4)

<400> 60

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 61

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 H-FW1)

<400> 61

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Thr Val Ser

20 25 30

<210> 62

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 H-FW2)

<400> 62

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser

1 5 10

<210> 63

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 H-FW3)

<400> 63

Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 64

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 H-FW4)

<400> 64

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 65

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 L-FW1)

<400> 65

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 66

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 L-FW2)

<400> 66

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 67

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 L-FW3)

<400> 67

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 68

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.1353 L-FW4)

<400> 68

Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

1 5 10

<210> 69

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 H-FW1)

<400> 69

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Val Thr

20 25 30

<210> 70

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 H-FW2)

<400> 70

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser

1 5 10

<210> 71

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 H-FW3)

<400> 71

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 72

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 H-FW4)

<400> 72

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 73

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 L-FW1)

<400> 73

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 74

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 L-FW2)

<400> 74

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 75

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 L-FW3)

<400> 75

Gly Ile Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 76

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3194 L-FW4)

<400> 76

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 77

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 H-FW1)

<400> 77

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser

20 25 30

<210> 78

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 H-FW2)

<400> 78

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser

1 5 10

<210> 79

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 H-FW3)

<400> 79

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 80

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 H-FW4)

<400> 80

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 81

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 L-FW1)

<400> 81

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 82

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 L-FW2)

<400> 82

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 83

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 L-FW3)

<400> 83

Gly Val Thr Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 84

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.3235 L-FW4)

<400> 84

Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 85

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 H-FW1)

<400> 85

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser

20 25 30

<210> 86

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 H-FW2)

<400> 86

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser

1 5 10

<210> 87

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 H-FW3)

<400> 87

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 88

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 H-FW4)

<400> 88

Trp Gly Gln Gly Ala Thr Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 89

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 L-FW1)

<400> 89

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 90

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 L-FW2)

<400> 90

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 91

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 L-FW3)

<400> 91

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 92

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (Cv2.5213 L-FW4)

<400> 92

Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

1 5 10

<210> 93

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.1169 VH)

<400> 93

caggtgcagc tggtgcagtc tgggcctgag gtgaagaagc ctgggacctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggatt cacctttact acctctgctg tgcagtgggt gcgacaggct 120

cgtggacaac gccttgagtg gataggctgg atcgtcgttg gcagtggtaa cacaaactac 180

gcacagaagt tccaggaaag agtcaccatt accagggaca tgtccacaac cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atccgaggac acggccgtgt attactgtgc ggcgccatat 300

tgtagtggtg ggacctgctt agatggtttt gatatctggg gccaagggac aatggtcacc 360

gtctcttca 369

<210> 94

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.1169 VL)

<400> 94

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccggggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc cgcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat agtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180

gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240

cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgtg gacgttcggc 300

caagggacca aggtggagat caaa 324

<210> 95

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.1353 VH)

<400> 95

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggagt caccgtcagt agcaactaca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac attctacgca 180

gactccgtga agggccgatt catcatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240

caaatgaaca gcctgaaaac tgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agatttaggg 300

cccatgggtt ttgatatctg gggccagggg acaatggtca ccgtctcttc a 351

<210> 96

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.1353 VL)

<400> 96

gacatccaga tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120

gggaaagccc caaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtg atcctccggt cactttcggc 300

cctgggacca aagtggatat caaa 324

<210> 97

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.3194 VH)

<400> 97

gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctgggat caccgtcact agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatcccg gtggtagcac attctacgca 180

gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240

caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatcttgta 300

gtatacggta tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc a 351

<210> 98

<211> 312

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.3194 VL)

<400> 98

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180

ggcaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240

cctgaagatt ttgcaatcta ttactgtcaa caaggggtca ctttcggcgg agggaccaag 300

gtggagatca aa 312

<210> 99

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.3235_VH)

<400> 99

gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctgggtt caccgtcagt aggaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac attctacgca 180

gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaact ccaagaacac gctgtatctt 240

caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatggggac 300

tactacggta tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc a 351

<210> 100

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.3235 VL)

<400> 100

gacatccaga tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttttttag cctggtatca gcaaaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcatccactt tgcaaagtgg ggtcacatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacgg cttgatagtt accctccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggagat taaa 324

<210> 101

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.5213 VH)

<400> 101

gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctgggtt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcactt atctatagcg gtggtagcac atactacgca 180

gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240

caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag ggacctgaac 300

tactacggta tggacgtctg gggccaaggg gccacggtca ccgtctcctc a 351

<210> 102

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸 (Cv2.5213 VL)

<400> 102

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttgatagtt actctccatt cactttcggc 300

cctgggacca aagtggatat caaa 324

<210> 103

<211> 644

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(ACE2 胞外域)

<400> 103

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Ser Thr Ile Glu Glu Gln Ala Lys Thr Phe Leu Asp

20 25 30

Lys Phe Asn His Glu Ala Glu Asp Leu Phe Tyr Gln Ser Ser Leu Ala

35 40 45

Ser Trp Asn Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Glu Glu Asn Val Gln Asn Met

50 55 60

Asn Asn Ala Gly Asp Lys Trp Ser Ala Phe Leu Lys Glu Gln Ser Thr

65 70 75 80

Leu Ala Gln Met Tyr Pro Leu Gln Glu Ile Gln Asn Leu Thr Val Lys

85 90 95

Leu Gln Leu Gln Ala Leu Gln Gln Asn Gly Ser Ser Val Leu Ser Glu

100 105 110

Asp Lys Ser Lys Arg Leu Asn Thr Ile Leu Asn Thr Met Ser Thr Ile

115 120 125

Tyr Ser Thr Gly Lys Val Cys Asn Pro Asp Asn Pro Gln Glu Cys Leu

130 135 140

Leu Leu Glu Pro Gly Leu Asn Glu Ile Met Ala Asn Ser Leu Asp Tyr

145 150 155 160

Asn Glu Arg Leu Trp Ala Trp Glu Ser Trp Arg Ser Glu Val Gly Lys

165 170 175

Gln Leu Arg Pro Leu Tyr Glu Glu Tyr Val Val Leu Lys Asn Glu Met

180 185 190

Ala Arg Ala Asn His Tyr Glu Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Arg Gly Asp

195 200 205

Tyr Glu Val Asn Gly Val Asp Gly Tyr Asp Tyr Ser Arg Gly Gln Leu

210 215 220

Ile Glu Asp Val Glu His Thr Phe Glu Glu Ile Lys Pro Leu Tyr Glu

225 230 235 240

His Leu His Ala Tyr Val Arg Ala Lys Leu Met Asn Ala Tyr Pro Ser

245 250 255

Tyr Ile Ser Pro Ile Gly Cys Leu Pro Ala His Leu Leu Gly Asp Met

260 265 270

Trp Gly Arg Phe Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Leu Thr Val Pro Phe Gly

275 280 285

Gln Lys Pro Asn Ile Asp Val Thr Asp Ala Met Val Asp Gln Ala Trp

290 295 300

Asp Ala Gln Arg Ile Phe Lys Glu Ala Glu Lys Phe Phe Val Ser Val

305 310 315 320

Gly Leu Pro Asn Met Thr Gln Gly Phe Trp Glu Asn Ser Met Leu Thr

325 330 335

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Pro Lys His Leu Lys Ser Ile Gly Leu Leu Ser Pro Asp Phe Gln Glu

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435 440 445

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Glu Met Lys Arg Glu Ile Val Gly Val Val Glu Pro Val Pro His Asp

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Gln Phe Glu Lys

<210> 104

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 核衣壳蛋白 (N))

<400> 104

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325 330 335

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355 360 365

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370 375 380

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405 410 415

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420 425 430

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<210> 105

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 105

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1 5 10 15

Asp Ala Gly Phe Ile Lys

20

<210> 106

<211> 1276

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 刺突胞外域 (tri-S))

<400> 106

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1 5 10 15

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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325 330 335

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340 345 350

Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Phe Leu

355 360 365

Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro

370 375 380

Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe

385 390 395 400

Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly

405 410 415

Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys

420 425 430

Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn

435 440 445

Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe

450 455 460

Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys

465 470 475 480

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485 490 495

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500 505 510

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915 920 925

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930 935 940

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<210> 107

<211> 696

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 S1 结构域)

<400> 107

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325 330 335

Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala

340 345 350

Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp

355 360 365

Tyr Ser Phe Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr

370 375 380

Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr

385 390 395 400

Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro

405 410 415

Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp

420 425 430

Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys

435 440 445

Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn

450 455 460

Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly

465 470 475 480

Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu

485 490 495

Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr

500 505 510

Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val

515 520 525

Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn

530 535 540

Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn

545 550 555 560

Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr

565 570 575

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580 585 590

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595 600 605

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610 615 620

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625 630 635 640

Ser Thr Gly Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly

645 650 655

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660 665 670

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675 680 685

His His His His His His His His

690 695

<210> 108

<211> 263

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 RBD 结构域)

<400> 108

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245 250 255

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<210> 109

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 变体 B.1.1.7 RBD 结构域)

<400> 109

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1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe

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Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr

145 150 155 160

Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe

165 170 175

Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly

180 185 190

Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu

195 200 205

His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Gly Ser Gly Leu Val Pro

210 215 220

Arg Gly Ser His His His His His His His His Ser Ala Trp Ser His

225 230 235 240

Pro Gln Phe Glu Lys Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala

245 250 255

Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

260

<210> 110

<211> 263

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 变体 B.1.351 RBD 结构域)

<400> 110

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe

20 25 30

Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile

35 40 45

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145 150 155 160

Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe

165 170 175

Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly

180 185 190

Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu

195 200 205

His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Gly Ser Gly Leu Val Pro

210 215 220

Arg Gly Ser His His His His His His His His Ser Ala Trp Ser His

225 230 235 240

Pro Gln Phe Glu Lys Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala

245 250 255

Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

260

<210> 111

<211> 263

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 变体 P.1 RBD 结构域)

<400> 111

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe

20 25 30

Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile

35 40 45

Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Phe Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe

50 55 60

Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu

65 70 75 80

Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu

85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg

130 135 140

Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr

145 150 155 160

Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe

165 170 175

Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly

180 185 190

Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu

195 200 205

His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Gly Ser Gly Leu Val Pro

210 215 220

Arg Gly Ser His His His His His His His His Ser Ala Trp Ser His

225 230 235 240

Pro Gln Phe Glu Lys Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala

245 250 255

Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

260

<210> 112

<211> 322

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 S1 NTD 结构域)

<400> 112

Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val

1 5 10 15

Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe

20 25 30

Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu

35 40 45

His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp

50 55 60

Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp

65 70 75 80

Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu

85 90 95

Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser

100 105 110

Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile

115 120 125

Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr

130 135 140

Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr

145 150 155 160

Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu

165 170 175

Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe

180 185 190

Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr

195 200 205

Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu

210 215 220

Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr

225 230 235 240

Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser

245 250 255

Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro

260 265 270

Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala

275 280 285

Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys

290 295 300

Ser Gly Ser Gly Leu Val Pro Arg Gly Ser His His His His His His

305 310 315 320

His His

<210> 113

<211> 238

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 S1 连接结构域 (CD))

<400> 113

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg

20 25 30

Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Gly Gly Gly Ser Gly

35 40 45

Gly Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe

50 55 60

Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe

65 70 75 80

Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala

85 90 95

Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser

100 105 110

Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln

115 120 125

Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala

130 135 140

Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly

145 150 155 160

Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His

165 170 175

Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys

180 185 190

Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val

195 200 205

Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Gly Ser Gly

210 215 220

Leu Val Pro Arg Gly Ser His His His His His His His His

225 230 235

<210> 114

<211> 582

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 S2 结构域)

<400> 114

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser

20 25 30

Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile

35 40 45

Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser

50 55 60

Met Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser

65 70 75 80

Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln

85 90 95

Leu Asn Arg Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr

100 105 110

Gln Glu Val Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile

115 120 125

Lys Asp Phe Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser

130 135 140

Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val

145 150 155 160

Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly

165 170 175

Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu

180 185 190

Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr

195 200 205

Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala

210 215 220

Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe

225 230 235 240

Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu

245 250 255

Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu

260 265 270

Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln

275 280 285

Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe

290 295 300

Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Pro

305 310 315 320

Pro Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln

325 330 335

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340 345 350

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370 375 380

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385 390 395 400

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405 410 415

His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn

420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp

465 470 475 480

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565 570 575

His His His His His His

580

<210> 115

<211> 1322

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(CoV-OC43 刺突胞外域)

<400> 115

Met Pro Met Gly Ser Leu Gln Pro Leu Ala Thr Leu Tyr Leu Leu Gly

1 5 10 15

Met Leu Val Ala Ser Val Leu Ala Val Ile Gly Asp Leu Lys Cys Thr

20 25 30

Ser Asp Asn Ile Asn Asp Lys Asp Thr Gly Pro Pro Pro Ile Ser Thr

35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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100 105 110

Ile Phe Ala Lys Val Lys Asn Thr Lys Val Ile Lys Asp Arg Val Met

115 120 125

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130 135 140

Ser Tyr Ser Val Val Val Gln Pro Arg Thr Ile Asn Ser Thr Gln Asp

145 150 155 160

Gly Asp Asn Lys Leu Gln Gly Leu Leu Glu Val Ser Val Cys Gln Tyr

165 170 175

Asn Met Cys Glu Tyr Pro Gln Thr Ile Cys His Pro Asn Leu Gly Asn

180 185 190

His Arg Lys Glu Leu Trp His Leu Asp Thr Gly Val Val Ser Cys Leu

195 200 205

Tyr Lys Arg Asn Phe Thr Tyr Asp Val Asn Ala Asp Tyr Leu Tyr Phe

210 215 220

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225 230 235 240

Gly Val Val Thr Lys Phe Leu Phe Asn Val Tyr Leu Gly Met Ala Leu

245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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325 330 335

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340 345 350

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370 375 380

Ser Phe Thr Cys Asn Asn Ile Asp Ala Ala Lys Ile Tyr Gly Met Cys

385 390 395 400

Phe Ser Ser Ile Thr Ile Asp Lys Phe Ala Ile Pro Asn Gly Arg Lys

405 410 415

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420 425 430

Arg Ile Asp Thr Thr Ala Thr Ser Cys Gln Leu Tyr Tyr Asn Leu Pro

435 440 445

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450 455 460

Arg Phe Gly Phe Ile Glu Asp Ser Val Phe Lys Pro Arg Pro Ala Gly

465 470 475 480

Val Leu Thr Asn His Asp Val Val Tyr Ala Gln His Cys Phe Lys Ala

485 490 495

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500 505 510

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515 520 525

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530 535 540

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675 680 685

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705 710 715 720

Leu Gln Pro Ile Asn Tyr Phe Asp Ser Tyr Leu Gly Cys Val Val Asn

725 730 735

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770 775 780

Asn Ser Val Asn Asp Ser Leu Glu Pro Val Gly Gly Leu Tyr Glu Ile

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805 810 815

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820 825 830

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835 840 845

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865 870 875 880

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900 905 910

Arg Ser Ala Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asp Lys Val Lys Leu Ser Asp

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930 935 940

Arg Asp Leu Ile Cys Val Gln Ser Tyr Lys Gly Ile Lys Val Leu Pro

945 950 955 960

Pro Leu Leu Ser Glu Asn Gln Phe Ser Gly Tyr Thr Leu Ala Ala Thr

965 970 975

Ser Ala Ser Leu Phe Pro Pro Trp Thr Ala Ala Ala Gly Val Pro Phe

980 985 990

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1025 1030 1035 1040

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Glu Ile Leu Ser Arg Leu Asp Ala Leu Glu Ala Glu Ala Gln Ile Asp

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Glu Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ser Gln Ser Ser Arg Ile Asn Phe

1125 1130 1135

Cys Gly Asn Gly Asn His Ile Ile Ser Leu Val Gln Asn Ala Pro Tyr

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Gly Leu Tyr Phe Ile His Phe Ser Tyr Val Pro Thr Lys Tyr Val Thr

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Ala Arg Val Ser Pro Gly Leu Cys Ile Ala Gly Asp Arg Gly Ile Ala

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Pro Lys Ser Gly Tyr Phe Val Asn Val Asn Asn Thr Trp Met Tyr Thr

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Gly Ser Gly Tyr Tyr Tyr Pro Glu Pro Ile Thr Glu Asn Asn Val Val

1205 1210 1215

Val Met Ser Thr Cys Ala Val Asn Tyr Thr Lys Ala Pro Tyr Val Met

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Leu Asn Thr Ser Ile Pro Asn Leu Pro Asp Phe Lys Glu Glu Leu Asp

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Gln Trp Phe Lys Asn Gln Thr Ser Val Ala Pro Asp Leu Ser Leu Asp

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Tyr Ile Asn Val Thr Phe Leu Asp Leu Leu Ile Lys Arg Met Lys Gln

1265 1270 1275 1280

Ile Glu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Glu Ser Lys Gln Lys Lys Ile Glu

1285 1290 1295

Asn Glu Ile Ala Arg Ile Lys Lys Ile Lys Leu Val Pro Arg Gly Ser

1300 1305 1310

Leu Glu Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys

1315 1320

<210> 116

<211> 1328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(CoV-HKU1 刺突胞外域)

<400> 116

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Val Ile Gly Asp Phe Asn Cys Thr Asn Ser Phe Ile

20 25 30

Asn Asp Tyr Asn Lys Thr Ile Pro Arg Ile Ser Glu Asp Val Val Asp

35 40 45

Val Ser Leu Gly Leu Gly Thr Tyr Tyr Val Leu Asn Arg Val Tyr Leu

50 55 60

Asn Thr Thr Leu Leu Phe Thr Gly Tyr Phe Pro Lys Ser Gly Ala Asn

65 70 75 80

Phe Arg Asp Leu Ala Leu Lys Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Thr Leu Trp

85 90 95

Tyr Lys Pro Pro Phe Leu Ser Asp Phe Asn Asn Gly Ile Phe Ser Lys

100 105 110

Val Lys Asn Thr Lys Leu Tyr Val Asn Asn Thr Leu Tyr Ser Glu Phe

115 120 125

Ser Thr Ile Val Ile Gly Ser Val Phe Val Asn Thr Ser Tyr Thr Ile

130 135 140

Val Val Gln Pro His Asn Gly Ile Leu Glu Ile Thr Ala Cys Gln Tyr

145 150 155 160

Thr Met Cys Glu Tyr Pro His Thr Val Cys Lys Ser Lys Gly Ser Ile

165 170 175

Arg Asn Glu Ser Trp His Ile Asp Ser Ser Glu Pro Leu Cys Leu Phe

180 185 190

Lys Lys Asn Phe Thr Tyr Asn Val Ser Ala Asp Trp Leu Tyr Phe His

195 200 205

Phe Tyr Gln Glu Arg Gly Val Phe Tyr Ala Tyr Tyr Ala Asp Val Gly

210 215 220

Met Pro Thr Thr Phe Leu Phe Ser Leu Tyr Leu Gly Thr Ile Leu Ser

225 230 235 240

His Tyr Tyr Val Met Pro Leu Thr Cys Asn Ala Ile Ser Ser Asn Thr

245 250 255

Asp Asn Glu Thr Leu Glu Tyr Trp Val Thr Pro Leu Ser Arg Arg Gln

260 265 270

Tyr Leu Leu Asn Phe Asp Glu His Gly Val Ile Thr Asn Ala Val Asp

275 280 285

Cys Ser Ser Ser Phe Leu Ser Glu Ile Gln Cys Lys Thr Gln Ser Phe

290 295 300

Ala Pro Asn Thr Gly Val Tyr Asp Leu Ser Gly Phe Thr Val Lys Pro

305 310 315 320

Val Ala Thr Val Tyr Arg Arg Ile Pro Asn Leu Pro Asp Cys Asp Ile

325 330 335

Asp Asn Trp Leu Asn Asn Val Ser Val Pro Ser Pro Leu Asn Trp Glu

340 345 350

Arg Arg Ile Phe Ser Asn Cys Asn Phe Asn Leu Ser Thr Leu Leu Arg

355 360 365

Leu Val His Val Asp Ser Phe Ser Cys Asn Asn Leu Asp Lys Ser Lys

370 375 380

Ile Phe Gly Ser Cys Phe Asn Ser Ile Thr Val Asp Lys Phe Ala Ile

385 390 395 400

Pro Asn Arg Arg Arg Asp Asp Leu Gln Leu Gly Ser Ser Gly Phe Leu

405 410 415

Gln Ser Ser Asn Tyr Lys Ile Asp Ile Ser Ser Ser Ser Cys Gln Leu

420 425 430

Tyr Tyr Ser Leu Pro Leu Val Asn Val Thr Ile Asn Asn Phe Asn Pro

435 440 445

Ser Ser Trp Asn Arg Arg Tyr Gly Phe Gly Ser Phe Asn Leu Ser Ser

450 455 460

Tyr Asp Val Val Tyr Ser Asp His Cys Phe Ser Val Asn Ser Asp Phe

465 470 475 480

Cys Pro Cys Ala Asp Pro Ser Val Val Asn Ser Cys Ala Lys Ser Lys

485 490 495

Pro Pro Ser Ala Ile Cys Pro Ala Gly Thr Lys Tyr Arg His Cys Asp

500 505 510

Leu Asp Thr Thr Leu Tyr Val Lys Asn Trp Cys Arg Cys Ser Cys Leu

515 520 525

Pro Asp Pro Ile Ser Thr Tyr Ser Pro Asn Thr Cys Pro Gln Lys Lys

530 535 540

Val Val Val Gly Ile Gly Glu His Cys Pro Gly Leu Gly Ile Asn Glu

545 550 555 560

Glu Lys Cys Gly Thr Gln Leu Asn His Ser Ser Cys Phe Cys Ser Pro

565 570 575

Asp Ala Phe Leu Gly Trp Ser Phe Asp Ser Cys Ile Ser Asn Asn Arg

580 585 590

Cys Asn Ile Phe Ser Asn Phe Ile Phe Asn Gly Ile Asn Ser Gly Thr

595 600 605

Thr Cys Ser Asn Asp Leu Leu Tyr Ser Asn Thr Glu Ile Ser Thr Gly

610 615 620

Val Cys Val Asn Tyr Asp Leu Tyr Gly Ile Thr Gly Gln Gly Ile Phe

625 630 635 640

Lys Glu Val Ser Ala Ala Tyr Tyr Asn Asn Trp Gln Asn Leu Leu Tyr

645 650 655

Asp Ser Asn Gly Asn Ile Ile Gly Phe Lys Asp Phe Leu Thr Asn Lys

660 665 670

Thr Tyr Thr Ile Leu Pro Cys Tyr Ser Gly Arg Val Ser Ala Ala Phe

675 680 685

Tyr Gln Asn Ser Ser Ser Pro Ala Leu Leu Tyr Arg Asn Leu Lys Cys

690 695 700

Ser Tyr Val Leu Asn Asn Ile Ser Phe Ile Ser Gln Pro Phe Tyr Phe

705 710 715 720

Asp Ser Tyr Leu Gly Cys Val Leu Asn Ala Val Asn Leu Thr Ser Tyr

725 730 735

Ser Val Ser Ser Cys Asp Leu Arg Met Gly Ser Gly Phe Cys Ile Asp

740 745 750

Tyr Ala Leu Pro Ser Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ile Ser Ser Pro

755 760 765

Tyr Arg Phe Val Thr Phe Glu Pro Phe Asn Val Ser Phe Val Asn Asp

770 775 780

Ser Val Glu Thr Val Gly Gly Leu Phe Glu Ile Gln Ile Pro Thr Asn

785 790 795 800

Phe Thr Ile Ala Gly His Glu Glu Phe Ile Gln Thr Ser Ser Pro Lys

805 810 815

Val Thr Ile Asp Cys Ser Ala Phe Val Cys Ser Asn Tyr Ala Ala Cys

820 825 830

His Asp Leu Leu Ser Glu Tyr Gly Thr Phe Cys Asp Asn Ile Asn Ser

835 840 845

Ile Leu Asn Glu Val Asn Asp Leu Leu Asp Ile Thr Gln Leu Gln Val

850 855 860

Ala Asn Ala Leu Met Gln Gly Val Thr Leu Ser Ser Asn Leu Asn Thr

865 870 875 880

Asn Leu His Ser Asp Val Asp Asn Ile Asp Phe Lys Ser Leu Leu Gly

885 890 895

Cys Leu Gly Ser Gln Cys Gly Ser Ser Ser Arg Ser Leu Leu Glu Asp

900 905 910

Leu Leu Phe Asn Lys Val Lys Leu Ser Asp Val Gly Phe Val Glu Ala

915 920 925

Tyr Asn Asn Cys Thr Gly Gly Ser Glu Ile Arg Asp Leu Leu Cys Val

930 935 940

Gln Ser Phe Asn Gly Ile Lys Val Leu Pro Pro Ile Leu Ser Glu Thr

945 950 955 960

Gln Ile Ser Gly Tyr Thr Thr Ala Ala Thr Val Ala Ala Met Phe Pro

965 970 975

Pro Trp Ser Ala Ala Ala Gly Val Pro Phe Ser Leu Asn Val Gln Tyr

980 985 990

Arg Ile Asn Gly Leu Gly Val Thr Met Asp Val Leu Asn Lys Asn Gln

995 1000 1005

Lys Leu Ile Ala Asn Ala Phe Asn Lys Ala Leu Leu Ser Ile Gln Asn

1010 1015 1020

Gly Phe Thr Ala Thr Asn Ser Ala Leu Ala Lys Ile Gln Ser Val Val

1025 1030 1035 1040

Asn Ala Asn Ala Gln Ala Leu Asn Ser Leu Leu Gln Gln Leu Phe Asn

1045 1050 1055

Lys Phe Gly Ala Ile Ser Ser Ser Leu Gln Glu Ile Leu Ser Arg Leu

1060 1065 1070

Asp Pro Pro Glu Ala Gln Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Asn Gly Arg

1075 1080 1085

Leu Thr Ala Leu Asn Ala Tyr Val Ser Gln Gln Leu Ser Asp Ile Thr

1090 1095 1100

Leu Ile Lys Ala Gly Ala Ser Arg Ala Ile Glu Lys Val Asn Glu Cys

1105 1110 1115 1120

Val Lys Ser Gln Ser Pro Arg Ile Asn Phe Cys Gly Asn Gly Asn His

1125 1130 1135

Ile Leu Ser Leu Val Gln Asn Ala Pro Tyr Gly Leu Leu Phe Ile His

1140 1145 1150

Phe Ser Tyr Lys Pro Thr Ser Phe Lys Thr Val Leu Val Ser Pro Gly

1155 1160 1165

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Asn Tyr Thr Val Gln Lys Leu Gln Thr Leu Ile Asp Asn Ile Asn Ser

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Ser Gly Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val

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Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly Ser Leu

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Val Pro Arg Gly Ser His His His His His His His His

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<210> 120

<211> 1345

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(CoV-NL63 刺突胞外域)

<400> 120

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1 5 10 15

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50 55 60

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100 105 110

Phe Ser Arg Asn Thr Thr Phe Asp Phe Leu Ser Asn Ala Ser Ser Ser

115 120 125

Phe Asp Cys Ile Val Asn Leu Leu Phe Thr Glu Gln Leu Gly Ala Pro

130 135 140

Leu Gly Ile Thr Ile Ser Gly Glu Thr Val Arg Leu His Leu Tyr Asn

145 150 155 160

Val Thr Arg Thr Phe Tyr Val Pro Ala Ala Tyr Lys Leu Thr Lys Leu

165 170 175

Ser Val Lys Cys Tyr Phe Asn Tyr Ser Cys Val Phe Ser Val Val Asn

180 185 190

Ala Thr Val Thr Val Asn Val Thr Thr His Asn Gly Arg Val Val Asn

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980 985 990

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1045 1050 1055

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1060 1065 1070

Ala Ala Leu Asn Ala Phe Val Ser Gln Val Leu Asn Lys Tyr Thr Glu

1075 1080 1085

Val Arg Gly Ser Arg Arg Leu Ala Gln Gln Lys Ile Asn Glu Cys Val

1090 1095 1100

Lys Ser Gln Ser Asn Arg Tyr Gly Phe Cys Gly Asn Gly Thr His Ile

1105 1110 1115 1120

Phe Ser Ile Val Asn Ser Ala Pro Asp Gly Leu Leu Phe Leu His Thr

1125 1130 1135

Val Leu Leu Pro Thr Asp Tyr Lys Asn Val Lys Ala Trp Ser Gly Ile

1140 1145 1150

Cys Val Asp Gly Ile Tyr Gly Tyr Val Leu Arg Gln Pro Asn Leu Val

1155 1160 1165

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His

1345

<210> 121

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽 (StrepTag)

<400> 121

Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys

1 5

<210> 122

<211> 263

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 κ变体B.1.617.1/3 RBD结构域)

<400> 122

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1 5 10 15

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Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

260

<210> 123

<211> 263

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 δ变体B.1.617.2/3 RBD结构域)

<400> 123

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe

20 25 30

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245 250 255

Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

260

<210> 124

<211> 263

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 δ+变体)

<400> 124

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe

20 25 30

Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile

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225 230 235 240

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245 250 255

Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

260

<210> 125

<211> 263

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 omicron 变体B.1.1.529 / RBD结构域)

<400> 125

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe

20 25 30

Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile

35 40 45

Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Leu Ala Pro Phe

50 55 60

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65 70 75 80

Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu

85 90 95

Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn

100 105 110

Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser

115 120 125

Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Ser Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg

130 135 140

Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr

145 150 155 160

Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe

165 170 175

Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser Tyr Ser Phe Arg Pro Thr Tyr Gly

180 185 190

Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu

195 200 205

His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Gly Ser Gly Leu Val Pro

210 215 220

Arg Gly Ser His His His His His His His His Ser Ala Trp Ser His

225 230 235 240

Pro Gln Phe Glu Lys Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala

245 250 255

Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

260

<210> 126

<211> 1273

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(SARS-CoV-2 omicron 变体B.1.1.529 /刺突胞外域)

<400> 126

Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val

1 5 10 15

Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe

20 25 30

Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu

35 40 45

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50 55 60

Phe His Val Ile Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro

65 70 75 80

Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Ile Glu Lys Ser

85 90 95

Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr

100 105 110

Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val

115 120 125

Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Asp His Lys Asn Asn

130 135 140

Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn

145 150 155 160

Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly

165 170 175

Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile

180 185 190

Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Ile Val Arg

195 200 205

Glu Pro Glu Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val

210 215 220

Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala

225 230 235 240

Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr

245 250 255

Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe

260 265 270

Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys

275 280 285

Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser Phe Thr

290 295 300

Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro Thr

305 310 315 320

Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Asp

325 330 335

Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg

340 345 350

Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Leu

355 360 365

Ala Pro Phe Phe Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu

370 375 380

Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg

385 390 395 400

Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Asn Ile Ala

405 410 415

Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala

420 425 430

Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Ser Gly Asn Tyr Asn Tyr

435 440 445

Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp

450 455 460

Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys Pro Cys Asn Gly Val

465 470 475 480

Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser Tyr Ser Phe Arg Pro

485 490 495

Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe

500 505 510

Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr

515 520 525

Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Lys

530 535 540

Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln

545 550 555 560

Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp Pro

565 570 575

Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val

580 585 590

Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val Ala Val Leu

595 600 605

Tyr Gln Gly Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile His Ala Asp

610 615 620

Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser Asn Val Phe

625 630 635 640

Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu Tyr Val Asn Asn Ser

645 650 655

Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala Ser Tyr Gln

660 665 670

Thr Gln Thr Lys Ser His Gly Ser Ala Gly Ser Val Ala Ser Gln Ser

675 680 685

Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr

690 695 700

Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val Thr

705 710 715 720

Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys Thr

725 730 735

Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu Gln

740 745 750

Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Lys Arg Ala Leu Thr Gly Ile Ala

755 760 765

Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln Val Lys Gln

770 775 780

Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Tyr Phe Gly Gly Phe Asn Phe Ser

785 790 795 800

Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Pro Ile Glu

805 810 815

Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Ile Lys

820 825 830

Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys

835 840 845

Ala Gln Lys Phe Lys Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp

850 855 860

Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr

865 870 875 880

Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Pro Ala Leu Gln Ile Pro Phe Pro

885 890 895

Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val

900 905 910

Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile

915 920 925

Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Pro Ser Ala Leu Gly Lys

930 935 940

Leu Gln Asp Val Val Asn His Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val

945 950 955 960

Lys Gln Leu Ser Ser Lys Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp

965 970 975

Ile Phe Ser Arg Leu Asp Pro Pro Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg

980 985 990

Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln

995 1000 1005

Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr

1010 1015 1020

Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys

1025 1030 1035 1040

Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly

1045 1050 1055

Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe

1060 1065 1070

Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg

1075 1080 1085

Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg

1090 1095 1100

Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser

1105 1110 1115 1120

Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp

1125 1130 1135

Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr

1140 1145 1150

Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly

1155 1160 1165

Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn

1170 1175 1180

Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu

1185 1190 1195 1200

Gly Lys Tyr Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp

1205 1210 1215

Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr

1220 1225 1230

Phe Leu Gly Gly Ser His His His His His His His His Ser Ala Trp

1235 1240 1245

Ser His Pro Gln Phe Glu Lys Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe

1250 1255 1260

Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

1265 1270

<210> 127

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 内源前导序列

<400> 127

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly

20

<210> 128

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 凝血酶切割位点

<400> 128

Leu Val Pro Arg Gly Ser

1 5

<210> 129

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 聚His-标签

<400> 129

His His His His His His His His

1 5

<210> 130

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Foldon 三聚化基序

<400> 130

Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp

1 5 10 15

Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu

20 25

<210> 131

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Avi-标签

<400> 131

Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

1 5 10 15

<210> 132

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 恒定重链区Prime

<400> 132

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 133

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.1169 全长重链 Prime

<400> 133

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Ser

20 25 30

Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Pro Tyr Cys Ser Gly Gly Thr Cys Leu Asp Gly Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

370 375 380

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

385 390 395 400

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

405 410 415

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

420 425 430

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 134

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.1353 全长重链 Prime

<400> 134

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Leu Gly Pro Met Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 135

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.3194 全长重链 Prime

<400> 135

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Val Thr Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Pro Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Leu Val Val Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 136

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.3235 全长重链 Prime

<400> 136

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Arg Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 137

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5213 全长重链 Prime

<400> 137

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Leu Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Leu Asn Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Ala Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 138

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 HCDR1

<400> 138

Ser Ser Ala Val Gln

1 5

<210> 139

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 HCDR2

<400> 139

Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Glu

<210> 140

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 HCDR3

<400> 140

Pro His Cys Ser Ser Thr Ser Cys Tyr Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 141

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 LCDR1

<400> 141

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 142

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 LCDR2

<400> 142

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 143

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 LCDR3

<400> 143

Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Pro Trp Thr

1 5

<210> 144

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 H-FR1

<400> 144

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr

20 25 30

<210> 145

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 H-FR2

<400> 145

Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 146

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 H-FR3

<400> 146

Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala

20 25 30

<210> 147

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 H-FR4

<400> 147

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 148

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 L-FR1

<400> 148

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 149

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 L-FR2

<400> 149

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 150

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 L-FR3

<400> 150

Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 151

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 L-FR4

<400> 151

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 152

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 VH

<400> 152

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser

20 25 30

Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Pro His Cys Ser Ser Thr Ser Cys Tyr Asp Ala Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 153

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 VL

<400> 153

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 154

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 重链

<400> 154

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser

20 25 30

Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Pro His Cys Ser Ser Thr Ser Cys Tyr Asp Ala Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

370 375 380

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

385 390 395 400

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

405 410 415

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

420 425 430

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 155

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5179 轻链

<400> 155

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 156

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码Cv2.5179重链的核酸

<400> 156

caggtgcagc tggtgcagtc tgggcctgag gtgaagaagc ctgggacctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggatt cacctttact agctctgctg tgcagtgggt gcgacaggcc 120

cgtggacaac gccttgagtg gataggatgg atcgtcgttg gcagtggtaa cacaaactac 180

gcacagaagt tccaagaaag agtcaccatt accagggaca tgtccacaag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atccgaggac acggccgtgt attactgtgc ggcaccacat 300

tgtagtagta ccagttgcta tgacgctttt gatatctggg gccaagggac aatggtcacc 360

gtctcttca 369

<210> 157

<211> 324

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码Cv2.5179轻链的核酸

<400> 157

Gly Ala Ala Ala Thr Thr Gly Thr Gly Thr Thr Gly Ala Cys Gly Cys

1 5 10 15

Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Cys Cys Cys Thr

20 25 30

Gly Thr Cys Thr Thr Thr Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Gly

35 40 45

Gly Ala Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Thr

50 55 60

Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Thr Cys Ala

65 70 75 80

Gly Ala Gly Thr Gly Thr Thr Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys

85 90 95

Thr Ala Cys Thr Thr Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys

100 105 110

Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala

115 120 125

Gly Gly Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Thr Cys

130 135 140

Ala Thr Cys Thr Ala Thr Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Cys Cys Ala

145 150 155 160

Gly Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Cys Thr Gly Gly Cys Ala Thr

165 170 175

Cys Cys Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Thr

180 185 190

Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala

195 200 205

Cys Ala Gly Ala Cys Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys

210 215 220

Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly Ala Gly

225 230 235 240

Gly Cys Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Gly Cys Ala Gly

245 250 255

Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala

260 265 270

Gly Thr Ala Thr Gly Gly Thr Ala Gly Gly Thr Cys Ala Cys Cys Gly

275 280 285

Thr Gly Gly Ala Cys Gly Thr Thr Cys Gly Gly Cys Cys Ala Ala Gly

290 295 300

Gly Gly Ala Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr

305 310 315 320

Cys Ala Ala Ala

<210> 158

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5156 VH

<400> 158

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser

20 25 30

Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asn Tyr Cys Ser Ser Thr Ser Cys Ser Asp Ala Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 159

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.5156 VL

<400> 159

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 160

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.1174 VH

<400> 160

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Arg Ser

20 25 30

Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 161

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.1174 VL

<400> 161

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Met Ser Asn Ser

20 25 30

Leu Asp Trp Asp Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Asp Pro Pro

85 90 95

Lys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 162

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.1388 VH

<400> 162

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser

20 25 30

Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Arg Gln Ala Gly Ser Arg Thr Tyr Tyr Phe Pro Gly Glu

100 105 110

Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 163

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.1388 VL

<400> 163

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Thr Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Arg Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln

65 70 75 80

Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Val Val Phe Arg Arg Arg Asp Gln Ala Asp Arg Pro Arg

100 105 110

<210> 164

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.3132 VH

<400> 164

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Val Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Trp Lys Arg Leu Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 165

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cv2.3132 VL

<400> 165

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 166

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Casirivimab VH

<400> 166

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Gly Thr Thr Met Val Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 167

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Casirivimab VL

<400> 167

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 168

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Etesevimab VH

<400> 168

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Met Asn Thr Leu Phe Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Val Leu Pro Met Tyr Gly Asp Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 169

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Etesevimab VL

<400> 169

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

85 90 95

Glu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 170

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Regdanvimab VH

<400> 170

Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr His Thr Thr Ser

50 55 60

Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ile Pro Gly Phe Leu Arg Tyr Arg Asn Arg Tyr Tyr Tyr

100 105 110

Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 171

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Regdanvimab VL

<400> 171

Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln

65 70 75 80

Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu

85 90 95

Ser Ala Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 172

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Tixagevimab VH

<400> 172

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Met Ser Ser

20 25 30

Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Val Ile Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Pro Tyr Cys Ser Ser Ile Ser Cys Asn Asp Gly Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 173

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Tixagevimab VL

<400> 173

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Arg

85 90 95

Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 174

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Adintrevimab VH

<400> 174

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Glu Asp Gly Tyr Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Leu

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Phe Ser Gly His Thr Ala Trp Ala Gly Thr Gly Phe Glu

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 175

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Adintrevimab VL

<400> 175

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Ser Ser Ser Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95

Leu Ser Val Leu Tyr Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 176

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Bamlanivimab VH

<400> 176

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Tyr Tyr Glu Ala Arg His Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Ala Met

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 177

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Bamlanivimab VL

<400> 177

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 178

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cilgavimab VH

<400> 178

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Val

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Lys Ser Lys Ile Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala

50 55 60

Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Thr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Asp Thr Val Gly Pro Gly

100 105 110

Leu Pro Glu Gly Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

115 120 125

Val Ser Ser

130

<210> 179

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Cilgavimab VL

<400> 179

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Met Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 180

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Sotrovimab VH

<400> 180

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Gln Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Thr Thr Gly Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Tyr Thr Arg Gly Ala Trp Phe Gly Glu Ser Leu Ile Gly

100 105 110

Gly Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 181

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Sotrovimab VL

<400> 181

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Thr

20 25 30

Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asp Thr Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 182

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Imdevimab VH

<400> 182

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Ser Asp Tyr Gly Asp Tyr Leu Leu Val Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 183

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Imdevimab VL

<400> 183

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Leu Thr Ser Ile

85 90 95

Ser Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 184

<211> 263

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽(Omicron subvariant BA.2)

<400> 184

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe

20 25 30

Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile

35 40 45

Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Phe Ala Pro Phe

50 55 60

Phe Ala Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu

65 70 75 80

Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asn Glu

85 90 95

Val Ser Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn

100 105 110

Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser

115 120 125

Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg

130 135 140

Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr

145 150 155 160

Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe

165 170 175

Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser Tyr Gly Phe Arg Pro Thr Tyr Gly

180 185 190

Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu

195 200 205

His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Gly Ser Gly Leu Val Pro

210 215 220

Arg Gly Ser His His His His His His His His Ser Ala Trp Ser His

225 230 235 240

Pro Gln Phe Glu Lys Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala

245 250 255

Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

260

Claims

1.一种针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于其包含：

-重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，或其在1、2或3个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体；和轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3，或其在1、2或3个CDR的序列中包含多至1个氨基酸突变的变体；或者

-重链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3；和轻链可变结构域，其包含以下的全部三个：SEQID NO：38的轻链CDR1、SEQ ID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3。

2.一种针对严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人中和单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)并且是以下参考抗体中的至少一种的与RBD的结合的竞争性抑制剂：

所述人中和抗体或其抗原结合片段包含：

a)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：2的轻链CDR3，或

3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中：

-参考人抗体Cv2.3194包含(i)包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列的重链和包含SEQ IDNO：18的氨基酸序列的轻链。

4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：SEQ ID NO：23的重链CDR1、SEQ ID NO：24的重链CDR2和SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2和SEQ ID NO：28的轻链CDR3。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：SEQ ID NO：35的重链CDR1、SEQ ID NO：36的重链CDR2和SEQ ID NO：37的重链CDR3，以及轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO：38的轻链CDR1、SEQ ID NO：39的轻链CDR2和SEQ ID NO：40的轻链CDR3。

6.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：

7.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其包含：SEQ ID NO：3的重链可变结构域和SEQ ID NO：4的轻链可变结构域，或者其包含SEQ ID NO：7的重链可变结构域和SEQ ID NO：8的轻链可变区。

8.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其不包含：

a)由SEQ ID NO：3组成的重链可变结构域和由SEQ ID NO：4组成的轻链可变结构域，或

b)由SEQ ID NO：7组成的重链可变结构域和由SEQ ID NO：8组成的轻链可变结构域。

9.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含可变区，所述可变区是以下V(D)J重组事件中的至少一种的产物：

10.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：

a)包含与SEQ ID NO：13或133的氨基酸序列具有至少99％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少99％同一性的序列的轻链；或者

b)包含与SEQ ID NO：17或135的氨基酸序列具有至少99％同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO：18的氨基酸序列具有至少99％同一性的序列的轻链。

11.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO：13或133的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：14的轻链氨基酸序列；或SEQ ID NO：17或135的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：18的轻链氨基酸序列。

12.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域与IgG或IgA恒定区缔合；优选地，其中与IgA恒定区缔合的抗体还包含J链和/或分泌组分。

13.根据前述权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述恒定区包含沉默抗体效应子功能和/或增加抗体体内半衰期的突变和/或修饰。

14.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其与IgG1恒定区缔合。

15.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其是重组人单克隆抗体，优选为IgG1或IgA同种型。

16.根据权利要求15所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述IgA是聚合或分泌性IgA。

17.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其以选自10nM或更小、1nM或更小、500pM或更小、400pM或更小、以及300pM或更小的KD结合SEQ ID NO：106的重组SARS-CoV-2S-三聚体。

18.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其以选自25nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、以及1nM或更小的KD结合SEQ ID NO：107的重组SARS-CoV-2S1蛋白。

19.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其以选自25nM或更小、10nM或更小、1nM或更小、500pM或更小、400pM或更小、300pM或更小、以及100pM或更小的KD结合SEQ ID NO：108至111和122至125中任一项的重组SARS-CoV-2RBD蛋白。

20.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其结合选自以下的至少一种重组SARS-CoV-2S蛋白：SEQ ID NO：106的tri-S1蛋白、SEQ ID NO：107的S1蛋白和SEQ ID NO：108至111和122至125的RBD蛋白，其结合亲和力高于SEQ ID NO：103的重组血管紧张素转化酶2(ACE2)胞外域蛋白的结合亲和力；优选为至少5、10、25、50、100、250、500或1000倍更高；优选地，其中抗体对RBD蛋白的结合亲和力是ACE2胞外域蛋白的结合亲和力的至少10、25、50、100、250、500或1000倍。

21.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其竞争性抑制SEQ IDNO：106的重组SARS-CoV-2刺突蛋白与SEQ ID NO：103的重组ACE2胞外域蛋白的结合，其EC₅₀选自1μg/mL或更小、0.5μg/mL或更小、0.4μg/mL或更小、0.3μg/mL或更小、0.2μg/mL或更小和0.1μg/mL或更小。

22.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其阻断SEQ ID NO：106的重组SARS-CoV-2刺突和/或SEQ ID NO：108至111和122至125和184的RBD蛋白与重组ACE2胞外域蛋白的结合的至少70％、80％或90％。

23.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重组SARS-CoV-2S-三聚体、S1和/或RBD蛋白来自分离株野生型-Hu-1，B.1.1.7谱系、P.1谱系或B.1.351谱系或B.1.617谱系或B.1.1.529谱系；特别是来自分离株野生型-Hu-1，B.1.1.7谱系、P.1谱系或B.1.351谱系或BA.2谱系。

24.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其以选自20ng/mL或更小、15ng/mL或更小、10ng/mL或更小、5ng/mL或更小、以及1ng/mL或更小的半最大有效浓度(EC₅₀)中和SARS-CoV-2。

25.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中和选自分离株野生型-Hu-1、SARS-CoV-2变体D614G和包含RBD结构域中的突变的SARS-CoV-2变体的至少一种SARS-CoV-2；优选地，RBD结构域中的突变选自K417N、K417T、N440K、L452R、G446S、S477N、T478K、E484A、E484K、E484Q、Q493R、G496S、Q498R和N501Y取代中的一种或多种；更优选选自N501Y、E484K、K417N和K417T取代中的一种或多种。

26.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中和选自谱系B.1.1.7、P.1和B.1.351和B.1.617和B.1.1.529和BA.2；特别地选自谱系B.1.1.7、P.1和B.1.351以及B.1.617.2和B.1.617.2.1、B.1.617.1.3和BA.2的至少一种SARS-CoV-2变体。

27.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其不与选自SARS-CoV-1、MERS-CoV、NL63-CoV、OC43-CoV、HKU1-CoV和229E-CoV的至少一种人冠状病毒交叉反应；优选地，其不与所有所述人冠状病毒交叉反应。

28.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其与阳性对照抗体相比具有调节水平的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性；例如，与阳性对照抗体相比，较低水平的ADCC；更具体地，其中所述抗体与阳性对照抗体相比具有正常或降低的ADCC活性；特别地，其中与阳性对照抗体相比，所述抗体对CD16(FcγRI)受体具有正常或降低的亲和力。

29.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其与阳性对照抗体相比具有调节水平的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)活性；更具体地，其中与阳性对照抗体相比，所述抗体具有正常或改善的ADCP活性；特别地，其中与阳性对照抗体相比，所述抗体对CD32A(FcγRIIA)受体具有正常或改善的亲和力。

30.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其与对照抗体相比不具有预测的对人蛋白的反应性、不具有自身反应性和/或与对照抗体相比不具有多反应性。

31.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其在真核重组系统中产生。

32.根据权利要求1至30中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其在原核重组系统中产生。

33.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其是重组产生的并且包含非天然人糖基化模式和/或非人糖基化模式。

34.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含可检测标记。

35.一种分离的核酸，其编码根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；优选地至少包含编码所述抗体或其抗原结合片段的重链和/或轻链的核酸序列。

36.根据前述权利要求所述的分离的核酸，其是mRNA，优选修饰的mRNA。

37.根据权利要求35或36所述的分离的核酸，其是DNA。

38.一种用于在宿主细胞中重组产生根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或抗原结合片段的表达载体，其包含至少一种根据权利要求35至37中任一项所述的编码抗体的核酸。

39.根据权利要求38所述的表达载体，其包含选自以下的一对核酸序列：与SEQ ID NO：93具有至少90％同一性的序列和与SEQ ID NO：94具有至少90％同一性的序列；与SEQ IDNO：97具有至少90％同一性的序列和与SEQ ID NO：98具有至少90％同一性的序列。

40.根据权利要求38所述的表达载体，其包含在选自以下的菌株中：Cv2.1169_pIgH和Cv2.1169_pIgL，所述菌株根据布达佩斯条约条款分别以编号I-5651和I-5652于2021年1月28日保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

41.根据权利要求38所述的表达载体，其包含在选自以下的菌株中：Cv2.3194_IgH和Cv2.3194_IgL，所述菌株根据布达佩斯条约条款分别以编号I-5670和I-5671于2021年4月2日保藏于法国巴黎75724 25rue du Docteur Roux巴斯德研究所的国家微生物保藏中心(CNCM)。

42.一种宿主细胞，其包含根据权利要求38至41中任一项所述的表达载体或根据权利要求35至37中任一项所述的核酸。

43.根据前述权利要求所述的宿主细胞，其是用表达载体稳定转化的抗体产生细胞系。

44.根据权利要求42或43所述的宿主细胞，其是真核细胞；优选选自酵母、昆虫和哺乳动物细胞。

45.一种产生根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或抗原结合片段的方法，其包括：(i)培养根据权利要求42至44中任一项所述的宿主细胞以由宿主细胞表达所述抗体或抗原结合片段；和任选地(ii)回收抗体或抗原结合片段；和(iii)纯化所述抗体或其抗原结合片段。

46.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体，以及药学上可接受的载体、佐剂和防腐剂。

47.根据前述权利要求所述的药物组合物，其中所述核酸是mRNA，特别是修饰的mRNA；优选配制在囊泡或颗粒中，特别是脂质纳米颗粒(LNP)中。

48.根据权利要求46或47所述的药物组合物，其用于肠胃外注射、输注、局部递送、吸入或持续递送。

49.根据权利要求46至48中任一项所述的药物组合物，其用作药物；特别是用于预防和/或降低发生SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病的可能性和/或治疗SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病的方法。

50.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物，其用作药物；特别是用于预防和/或降低发生SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病的可能性和/或治疗SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病的方法。

51.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物，其用于预防和/或降低发生SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病的可能性和/或治疗SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病的方法。

52.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物，其用作人哺乳动物的药物。

53.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物，其用作非人哺乳动物的药物。

54.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物，其用作与针对冠状病毒科感染、特别是SARS-CoV-2感染的疫苗组合的药物。

55.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物；其用作与特异性中和严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的第二抗体组合的药物，所述第二抗体不是第一抗体的与RBD的结合的竞争性抑制剂。

56.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物；其用作与特异性结合严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的第二抗体组合的药物，所述第二抗体不是第一抗体的与RBD的结合的竞争性抑制剂。

57.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物；其用作与特异性结合严重急性呼吸综合征相关冠状病毒2(SARS-CoV-2)的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的第二抗体组合的药物，所述第二抗体是2类或3类抗SARS-CoV2刺突蛋白抗体。

58.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物；其用作与选自以下参考抗体中的至少一种的第二抗体组合的药物：Adintrevimab、Cilgavimab、Imdevimab和Sotrovimab。

59.一种药物组合物，其包含：

(i)根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体，或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物；

(ii)选自以下参考抗体中的至少一种的抗体：Adintrevimab、Cilgavimab、Imdevimab和Sotrovimab。

60.根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求46至49和59中任一项所述的药物组合物在制备用于预防或治疗SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病的药物中的用途。

61.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求41至48中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49和59中任一项所述的药物组合物。

62.根据前述权利要求所述的试剂盒，还包含选自以下参考抗体中的至少一种的抗体：Adintrevimab、Cilgavimab、Imdevimab和Sotrovimab。

63.根据权利要求61或62所述的试剂盒，其中所述抗体包括可检测标记。

64.根据权利要求61至63中任一项所述的试剂盒，其还包含针对冠状病毒科感染、特别是针对SARS-CoV-2感染的疫苗。

65.一种用于检测样品中的SARS-CoV-2的方法，包括：使所述样品与根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段接触，并检测所形成的抗原-抗体复合物，从而检测样品中SARS-CoV-2的存在、不存在或水平。

66.根据前述权利要求所述的方法，其中所述样品是生物样品或环境样品。

67.根据权利要求65或66所述的方法，其中所述样品来自人或非人哺乳动物。

68.根据权利要求65至67中任一项所述的方法，其中所述样品是来自疑似被SARS-CoV-2污染的受试者的生物样品，并且所述方法用于诊断SARS-CoV-2感染和相关的COVID-19疾病。

69.根据权利要求65至67中任一项所述的方法，其中所述样品是来自在治疗COVID-19疾病之前或期间的COVID-19患者的生物样品，并且所述方法用于监测COVID-19疾病的治疗。

70.一种降低在受试者中发生SARS-CoV-2相关疾病的风险的方法，其包括向受试者施用有效量的根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49中任一项所述的药物组合物。

71.根据权利要求70所述的方法，其中住院治疗的风险降低。

72.根据权利要求70所述的方法，其中死亡风险降低。

73.根据权利要求1至34和54至58中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41和54至58中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49和54至59中任一项所述的药物组合物；其用于预防和/或降低冠状病毒科感染、特别是SARS-CoV-2感染的发生可能性的方法。

74.根据权利要求1至34和54至58中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41和54至58中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49和54至59中任一项所述的药物组合物；其用于预防和/或降低冠状病毒科感染的并发症、特别是冠状病毒科感染的呼吸、神经、胃肠或心血管并发症、特别是SARS-CoV-2感染的并发症的发生的可能性的方法。

75.根据权利要求1至34和54至58中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，根据权利要求35至41和54至58中任一项所述的核酸或载体，或根据权利要求46至49和54至59中任一项所述的药物组合物；其用于预防和/或降低冠状病毒科感染、特别是SARS-CoV-2感染的严重急性呼吸道并发症的发生的可能性的方法。

76.根据权利要求1至34和54至58中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，根据权利要求35至41和54至58中任一项所述的核酸或载体，或根据权利要求46至49和54至59中任一项所述的药物组合物；其用于预防和/或降低个体中冠状病毒科感染的发生的可能性的方法，所述个体的特征在于

-所述个体尚未施用针对所述冠状病毒科感染的疫苗；或者

-所述个体对所述疫苗没有反应；或者

-所述个体的针对冠状病毒感染的抗体水平处于或低于保护阈值水平。

77.根据权利要求1至34和54至58中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41和54至58中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49和54至59中任一项所述的药物组合物；其用于改善针对冠状病毒科病毒、特别是SARS-CoV-2感染的免疫应答的方法。

78.根据权利要求1至34和54至58中任一项的抗体或其抗原结合片段，根据权利要求35至41和54至58中任一项的核酸或载体，或根据权利要求46至49和54至59中任一项所述的药物组合物；其用于改善针对冠状病毒科病毒的病毒刺突蛋白受体结合结构域(RBD)或其片段的免疫应答的方法。

79.一种治疗受试者中的SARS-CoV-2相关疾病的方法，包括向受试者施用有效量的根据权利要求1至34和54至58中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41和54至58中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49和54至59中任一项所述的药物组合物。

80.根据权利要求79所述的方法，其中通过所述治疗降低发生严重疾病的风险。

81.根据权利要求79所述的方法，其中通过所述治疗降低住院风险。

82.根据权利要求79所述的方法，其中所述受试者是住院的。

83.一种治疗受试者中的SARS-CoV-2相关疾病的方法，包括施用有效量的与选自Adintrevimab、Cilgavimab、Sotrovimab和Imdevimab的抗体组合的根据权利要求1至34和54至58中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

84.根据权利要求79至83中任一项所述的方法，其中所述受试者处于发生SARS-CoV-2相关疾病的风险中，更具体地是患有并发基础病况例如肥胖、糖尿病、癌症、处于免疫抑制治疗下、具有原发性免疫缺陷或对疫苗无反应的受试者。

85.一种医疗装置，其包含根据权利要求1至34和54至58中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求35至41和54至58中任一项所述的核酸或载体或根据权利要求46至49和54至59中任一项所述的药物组合物；优选为适合于通过注射或吸入施用的形式。