RU2008103319A - Бессывороточная стабильная трансфекция и продукция рекомбинантных белков человека в клеточных линиях человека - Google Patents

Бессывороточная стабильная трансфекция и продукция рекомбинантных белков человека в клеточных линиях человека Download PDF

Info

Publication number
RU2008103319A
RU2008103319A RU2008103319/13A RU2008103319A RU2008103319A RU 2008103319 A RU2008103319 A RU 2008103319A RU 2008103319/13 A RU2008103319/13 A RU 2008103319/13A RU 2008103319 A RU2008103319 A RU 2008103319A RU 2008103319 A RU2008103319 A RU 2008103319A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
human
factor
seq
csf
protein
Prior art date
Application number
RU2008103319/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2453597C2 (ru
Inventor
Карола ШРЕДЕР (DE)
Карола ШРЕДЕР
Кетлин ВЕГМАНН (DE)
Кетлин ВЕГМАНН
Хайянь ДИН (DE)
Хайянь ДИН
Original Assignee
Октафарма АГ (CH)
Октафарма Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=35427852&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2008103319(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Октафарма АГ (CH), Октафарма Аг filed Critical Октафарма АГ (CH)
Publication of RU2008103319A publication Critical patent/RU2008103319A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2453597C2 publication Critical patent/RU2453597C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
    • C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C07K14/8121—Serpins
    • C07K14/8125—Alpha-1-antitrypsin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6427—Chymotrypsins (3.4.21.1; 3.4.21.2); Trypsin (3.4.21.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6437—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21001—Chymotrypsin (3.4.21.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21021—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/04—Immortalised cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2820/00—Vectors comprising a special origin of replication system
    • C12N2820/007—Vectors comprising a special origin of replication system tissue or cell-specific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2820/00—Vectors comprising a special origin of replication system
    • C12N2820/60—Vectors comprising a special origin of replication system from viruses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

1. Способ получения иммортализованной клеточной линии человека, стабильно трансфицированной последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей ген, кодирующий целевой белок человека, или его производное, или его мутант, промотор и сигнал полиаденилирования (полиА) гормона роста быка, где указанный промотор и сигнал полиA связаны с 5'- и 3'-концом гена, кодирующего указанный целевой белок человека соответственно, где способ включает трансфекцию иммортализованной линии клеток-хозяев человека в бессывороточных условиях вектором трансфекции, содержащим указанную последовательность нуклеиновой кислоты и начало репликации. ! 2. Способ по п.1, в котором целевой белок человека представляет собой белок плазмы человека, выбранный из факторов свертывания крови, таких, как фактор IX, фактор VIII (дикого типа и с делецией B-домена), фактор VII/VIIa и фактор фон Виллебранда (vWF), факторов роста, таких, как эритропоэтин, колониестимулирующих факторов (CSF), таких, как гранулоцитстимулирующий фактор (G-CSF), макрофаг CSF (M-CSF) и гранулоцит-макрофаг CSF (GM-CSF), цитокины, такие, как интерлейкины, ингибиторы протеаз, такие, как альфа-1-антитрипсин (A1AT) и химотрипсин, транспортные белки, такие, как гормоны, белки с ингибиторным или регуляторным действием и их производные и мутанты, предпочтительно белок человека выбран из фактора IX, фактора VIII, включая фактор VIII дикого типа и фактор VIII с делецией B-домена, фактора VII/VIIa, G-CSF, vWF и A1AT, наиболее предпочтительно белок человека представляет собой фактор IX свертывания крови, кодируемый п.о. 939-2324 SEQ ID NO:1, A1AT человека, кодируемый п.о. 973-2259 SEQ ID NO:2, фактор VIII дикого типа, показанный в SEQ ID NO:9, фактор VIII человека с делецией B

Claims (17)

1. Способ получения иммортализованной клеточной линии человека, стабильно трансфицированной последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей ген, кодирующий целевой белок человека, или его производное, или его мутант, промотор и сигнал полиаденилирования (полиА) гормона роста быка, где указанный промотор и сигнал полиA связаны с 5'- и 3'-концом гена, кодирующего указанный целевой белок человека соответственно, где способ включает трансфекцию иммортализованной линии клеток-хозяев человека в бессывороточных условиях вектором трансфекции, содержащим указанную последовательность нуклеиновой кислоты и начало репликации.
2. Способ по п.1, в котором целевой белок человека представляет собой белок плазмы человека, выбранный из факторов свертывания крови, таких, как фактор IX, фактор VIII (дикого типа и с делецией B-домена), фактор VII/VIIa и фактор фон Виллебранда (vWF), факторов роста, таких, как эритропоэтин, колониестимулирующих факторов (CSF), таких, как гранулоцитстимулирующий фактор (G-CSF), макрофаг CSF (M-CSF) и гранулоцит-макрофаг CSF (GM-CSF), цитокины, такие, как интерлейкины, ингибиторы протеаз, такие, как альфа-1-антитрипсин (A1AT) и химотрипсин, транспортные белки, такие, как гормоны, белки с ингибиторным или регуляторным действием и их производные и мутанты, предпочтительно белок человека выбран из фактора IX, фактора VIII, включая фактор VIII дикого типа и фактор VIII с делецией B-домена, фактора VII/VIIa, G-CSF, vWF и A1AT, наиболее предпочтительно белок человека представляет собой фактор IX свертывания крови, кодируемый п.о. 939-2324 SEQ ID NO:1, A1AT человека, кодируемый п.о. 973-2259 SEQ ID NO:2, фактор VIII дикого типа, показанный в SEQ ID NO:9, фактор VIII человека с делецией B-домена, кодируемый п.о. 783-5162 SEQ ID NO:3, фактор VII/VIIa, кодируемый SEQ ID NO:13 и 14, G-CSF, кодируемый SEQ ID NO:15, 16 и 17, или vWF, кодируемый SEQ ID NO:18.
3. Способ по п.1 или 2, в котором в векторе трансфекции
(i) промотор выбран из вирусных промоторов, промоторов генов «домашнего хозяйства» и тканеспецифических промоторов, предпочтительно промотор представляет собой промотор CMV с интроном A или без такового, промотор SV40, промотор EF-1альфа, промотор HSV TK и т.д., наиболее предпочтительным промотором является промотор CMV; и/или
(ii) начало репликации обеспечивает репликацию и амплификацию плазмиды в бактериях;
(iii) вектор дополнительно несет, по меньшей мере, один ген маркера селекции, предпочтительно выбранный из генов резистентности к гигромицину, резистентности к неомицину, резистентности к аминогликозидфосфотрансферазе (neo, G418, APH), резистентности к блеомицину (флео, блео, зеоцину) и резистентности к ксантин-гуанинфосфорибозилтрансферазе (XGPRT, gpt), и/или находится под контролем промотора, как определено в (i) выше; и/или
(iv) вектор дополнительно несет один или более иных регуляторных элементов, предпочтительно выбранных из сайтов сплайсинга, сайтов рекомбинации, сайтов полиА, энхансеров, сайтов мультиклонирования и прокариотических последовательностей плазмид.
4. Способ по п.3, в котором вектор трансфекции несет промотор CMV, ген гигромицина, последовательность полиA и представляющий интерес ген и предпочтительно происходящий из вектора пкДНК3.1, имеющего последовательность SEQ ID NO:4 или 5.
5. Способ по п.1 или 2, в котором иммортализованная клеточная линия человека
(i) способна быть трансфицирована и культивироваться в бессывороточных условиях; и/или
(ii) интегрирует аденовирусные последовательности в свой геном; и/или
(iii) выбрана из группы клеток почек, мочевого пузыря, печени, легких, сердечной мышцы, гладкой мышцы, яичников и желудочно-кишечного тракта, предпочтительно клеточной линии почек человека; и/или
(iv) не способна экспрессировать прионный белок человека.
6. Способ по п.5, в котором клетки почек представляют собой фетальные клетки почек человека, предпочтительно фетальные клетки почек человека, выбранные из клеток 293 (ATCC CRL-1573; DSM ACC 305), клеток 293T (DSM ACC 2494), клеток FreeStyle 293 (клетки 293F; Invitrogen R79007), предпочтительно клетки 293F (фирма Invitrogen R79007).
7. Способ по п.6, в котором клеточная линия представляет собой 293F, а вектор трансфекции происходит от пкДНК3.1, вектор предпочтительно кодирует фактор IX свертывания крови человека, представленный п.о. 939-2324 SEQ ID NO:l, A1AT человека кодируется п.о. 973-2259 SEQ ID NO:2, фактор VIII дикого типа человека, представленный в SEQ ID NO:9, или фактор VIII человека с делецией B-домена, показанный в SEQ ID NO:3, FVII/FVIIa, G-CSF, включая G-CSFb, показанный в SEQ ID NO:27, или фактор фон Виллебранда.
8. Способ по п.1 или 2, в котором бессывороточная трансфекция проводится в суспензионной культуре без сыворотки с катионным трансфекционным агентом или фосфатом кальция, предпочтительно с липофектамином 2000 CD (Invitrogen).
9. Способ по п.1 или 2, который дополнительно включает отбор стабильно трансфицированных клеток предпочтительно по продуктивности, активности и качеству продуцированного рекомбинантного белка.
10. Стабильно трансфицированная иммортализованная клеточная линия человека, получаемая способом по пп.1-9.
11. Клеточная линия по п.10, получаемая способом по пп.4-9, предпочтительно клеточная линия представляет собой 293F, а вектор трансфекции происходит от пкДНК3.1.
12. Способ рекомбинантной продукции целевого белка человека, или его производного, или мутанта, который включает культивирование иммортализованной клеточной линии человека, определенной в п.10 или 11.
13. Способ по п.12, в котором целевой белок человека представляет собой фактор IX свертывания крови человека, показанный п.о. 939-2324 SEQ ID NO:l, A1AT человека, кодируемый п.о. 973-2259 SEQ ID NO:2, фактор VIII дикого типа человека, показанный в SEQ ID NO:9, или фактор VIII человека с делецией B-домена, показанный в SEQ ID NO:3, FVII/FVIIa, G-CSF, включая G-CSFb, показанную в SEQ ID NO:27, или фактор фон Виллебранда.
14. Способ по п.12 или 13, который дополнительно включает стадии концентрирования рекомбинантного белка человека из культурального бульона, и/или очистки белка, и/или удаления прионов.
15. Способ по п.12 или 13, в котором продукция белка человека осуществляется в бессывороточных условиях.
16. Вектор трансфекции, содержащий начало репликации и последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую ген, кодирующий целевой белок человека, или его производное, или мутант, как определено в пп.1-4.
17. Вектор трансфекции по п.16, который представляет собой вектор пкДНК3.1, содержащий ген, кодирующий целевой белок, выбранный из группы, состоящей из белка фактора IX свертывания крови человека, A1AT человека, фактора VIII свертывания крови человека, включая его дикий тип и мутанты с делецией B-домена, G-CSF, включая его формы a, b и c, FVII/VIIa, включая его формы a и b, и vWF, где предпочтительно указанный вектор трансфекции имеет последовательность нуклеиновой кислоты, показанную в SEQ ID NO:1, 2, 3 или 22.
RU2008103319/10A 2005-06-30 2006-06-29 Способ получения иммортализованной клетки человека, стабильно трансфицированная иммортализованная клетка человека, способ рекомбинантной продукции целевого белка человека, применение вектора трансфекции RU2453597C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP05105965.7 2005-06-30
EP05105965A EP1739179A1 (en) 2005-06-30 2005-06-30 Serum-free stable transfection and production of recombinant human proteins in human cell lines

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2008103319A true RU2008103319A (ru) 2009-08-10
RU2453597C2 RU2453597C2 (ru) 2012-06-20

Family

ID=35427852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008103319/10A RU2453597C2 (ru) 2005-06-30 2006-06-29 Способ получения иммортализованной клетки человека, стабильно трансфицированная иммортализованная клетка человека, способ рекомбинантной продукции целевого белка человека, применение вектора трансфекции

Country Status (20)

Country Link
US (4) US8871439B2 (ru)
EP (2) EP1739179A1 (ru)
JP (3) JP5925407B2 (ru)
KR (1) KR101320489B1 (ru)
CN (2) CN101233238A (ru)
AU (1) AU2006265173B2 (ru)
BR (1) BRPI0613721B1 (ru)
CA (1) CA2611708C (ru)
DK (1) DK1896590T3 (ru)
ES (1) ES2574584T3 (ru)
HU (1) HUE028028T2 (ru)
IL (3) IL187676A (ru)
MX (1) MX2007015370A (ru)
NO (1) NO343221B1 (ru)
PL (1) PL1896590T3 (ru)
RU (1) RU2453597C2 (ru)
SI (1) SI1896590T1 (ru)
UA (1) UA99700C2 (ru)
WO (1) WO2007003582A2 (ru)
ZA (1) ZA200711013B (ru)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2164971B1 (en) * 2007-06-15 2015-12-09 Mogam Biotechnology Research Institute Method for manufacturing active recombinant blood coagulation factor ix
ES2538706T3 (es) 2008-06-24 2015-06-23 Octapharma Ag Procedimiento de purificación del factor de coagulación VIII
US9120873B2 (en) * 2008-08-21 2015-09-01 Octapharma Ag Recombinantly produced human factor VIII and IX
JP5592080B2 (ja) * 2009-05-08 2014-09-17 株式会社日立製作所 細胞培養方法、細胞培養システム
CN101906438B (zh) * 2009-06-05 2013-04-24 苏州泽璟生物制药有限公司 一种重组人凝血因子ⅶ在动物细胞内的表达和生产方法
WO2011060242A2 (en) 2009-11-13 2011-05-19 Talecris Biotherapeutics, Inc. Von willebrand factor (vwf)-containing preparations, and methods, kits, and uses related thereto
RU2731720C2 (ru) 2010-03-30 2020-09-08 Октафарма Аг Способ очистки витамин к-зависимых белков, таких как коагуляционный фактор vii
MX2012011065A (es) 2010-03-30 2012-10-10 Octapharma Ag Proceso para purificacion de proteina de factor de crecimiento.
CN103003422B (zh) 2010-04-20 2015-02-11 奥克塔法马股份有限公司 用于药物蛋白的新型稳定剂
EP4353743A2 (en) 2011-05-13 2024-04-17 Octapharma AG A method of increasing the productivity of eucaryotic cells in the production of recombinant fviii
CN102277379B (zh) * 2011-08-18 2013-07-24 中国科学院遗传与发育生物学研究所 表达凝血因子viii的表达载体及其应用
CN103031277B (zh) * 2011-09-29 2015-07-15 重庆大学 力生长因子在制备无血清培养耐受型哺乳动物工程细胞中的应用
CN103305540B (zh) * 2012-03-14 2015-03-25 齐鲁制药有限公司 一种用于生物学活性测定的质粒及其制备方法
CA2872476C (en) 2012-05-02 2020-07-07 Life Technologies Corporation High yield transient expression in mammalian cells using unique pairing of high density growth and transfection medium and expression enhancers
JP6545153B2 (ja) * 2013-05-03 2019-07-17 フジフィルム・ダイオシンス・バイオテクノロジーズ ・ユーケイ・リミテッド 発現方法
RU2710307C2 (ru) 2013-09-12 2019-12-26 Байомарин Фармасьютикал Инк. Векторы экспрессии фактора viii на основе аденоассоциированного вируса
JP6778111B2 (ja) 2014-01-20 2020-10-28 オクタファルマ・アーゲー ＦＶＩＩＩ：Ｃ／ＦＶＩＩＩ：Ａｇの改良された比を有する第ＶＩＩＩ因子を製造するための方法
JP6728156B2 (ja) 2014-11-02 2020-07-22 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． メッセンジャーｕｎａ分子およびその使用
EP3625329A1 (en) 2017-05-17 2020-03-25 Octapharma AG Method for the production of a recombinant target protein
JP7150056B2 (ja) 2018-05-04 2022-10-07 フラウンホーファー－ゲゼルシャフト ツール フエルデルング デア アンゲヴァンテン フォルシュング エー．ファオ． 磁化の反転状態の評価を伴う動脈スピンラベリング法
KR20210091205A (ko) * 2018-12-06 2021-07-21 바스프 에스이 제올라이트 물질 및 지르코늄 킬레이트 착물을 포함하는 수성 현탁액
CN110438066B (zh) * 2019-08-19 2021-01-12 杭州百凌生物科技有限公司 一种可稳定传代的可悬浮培养的哺乳动物细胞系293 c18p及其制备方法和应用

Family Cites Families (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU577259B2 (en) 1982-08-13 1988-09-22 Zymogenetics Inc. Glycolytic promters for regulated protein expression protease inhibitor
US4540573A (en) 1983-07-14 1985-09-10 New York Blood Center, Inc. Undenatured virus-free biologically active protein derivatives
DE122004000028I1 (de) 1984-01-12 2004-09-30 Chiron Corp F}r Faktor-VIIIc kodierende DNA-Sequenzen und verwandte DNA-Konstruktionen.
IL74909A (en) 1984-04-20 1992-01-15 Genentech Inc Preparation of functional human factor viii and dna sequences,expression vectors,transformed microorganisms and cell lines used therein
JPS6171774A (ja) 1984-09-14 1986-04-12 Sony Corp テレビジヨンカメラ装置のビ−ム電流制御装置
JPH0788399B2 (ja) 1985-04-12 1995-09-27 ジェネティックス・インスチチュ−ト・インコ−ポレ−テッド 新規プロコアギュラント蛋白質
JPS63500636A (ja) * 1985-08-23 1988-03-10 麒麟麦酒株式会社 多分化能性顆粒球コロニー刺激因子をコードするｄｎａ
US4810643A (en) 1985-08-23 1989-03-07 Kirin- Amgen Inc. Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor
ATE87663T1 (de) 1986-01-03 1993-04-15 Genetics Inst Verfahren zur herstellung von faktor-viii:c-typ- proteinen.
FI98829C (fi) 1986-01-27 1997-08-25 Chiron Corp Menetelmä rekombinoidun proteiinikompleksin valmistamiseksi, jolla on humaanitekijä VIII:C-aktiivisuutta
US5451521A (en) 1986-05-29 1995-09-19 Genetics Institute, Inc. Procoagulant proteins
EP0251843A1 (fr) 1986-06-06 1988-01-07 Transgene S.A. Procédé de préparation de facteur VIII à partir de cellules de mammifères
DK155388C (da) 1986-07-08 1989-10-23 Palle Pedersen Laas
ATE63335T1 (de) 1986-07-11 1991-05-15 Miles Inc Herstellung von rekombinantem protein.
NO872932L (no) 1986-07-18 1988-01-19 Gist Brocades Nv Fremgangsmaate for fremstilling av proteiner med faktorviiiaktivitet ved hjelp av mikrobielle vertsceller, eksprimeringsvektorer, vertsceller, antibiotika.
IL84168A0 (en) 1986-10-15 1988-03-31 Rorer Int Overseas Human factor viii-c analogs,process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing the same
EP0294910B1 (en) 1987-06-12 1996-09-11 Immuno Ag Novel proteins with factor VIII activity, process for their preparation using genetically engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
FR2619314B1 (fr) 1987-08-11 1990-06-15 Transgene Sa Analogue du facteur viii, procede de preparation et composition pharmaceutique le contenant
JPH084495B2 (ja) * 1988-08-19 1996-01-24 帝人株式会社 接着性動物細胞の培養方法
HUT64591A (en) 1989-11-17 1994-01-28 Novo Nordisk As Protein complexes with viii/c factor activity and process for their production
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
DE4204694C3 (de) 1992-02-01 1995-10-12 Octapharma Ag Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie
CA2155337A1 (en) 1993-02-09 1994-08-18 Monika Stadler Method for inactivating viruses devoid of lipid envelopes
US5585237A (en) 1993-10-25 1996-12-17 Creative Biomolecules, Inc. Methods and compositions for high protein production from recombinant DNA
DK128093D0 (da) 1993-11-12 1993-11-12 Novo Nordisk As Hidtil ukendte forbindelser
US6136865A (en) 1995-05-20 2000-10-24 Octapharma Ag Method for reduction of the infectiousness of potentially infectious material
AU735763B2 (en) * 1997-12-05 2001-07-12 Immune Response Corporation, The Novel vectors and genes exhibiting increased expression
CZ20003842A3 (cs) * 1998-04-17 2001-08-15 Société des Produits Nestlé S. A. Buněčná linie lidských keratinocytů
US6210924B1 (en) * 1998-08-11 2001-04-03 Amgen Inc. Overexpressing cyclin D 1 in a eukaryotic cell line
CA2252972C (en) * 1998-11-26 2012-09-18 National Research Council Of Canada Serum-free production of recombinant proteins and adenoviral vectors
EP1010762A1 (en) * 1998-12-02 2000-06-21 Aventis Behring Gesellschaft mit beschränkter Haftung DNA constructs of blood clotting factors and P-Selectin
ATE536417T1 (de) * 1999-04-15 2011-12-15 Crucell Holland Bv Herstellung von rekombinanten proteinen in einer menschlichen zelle mit mindestens einem e1 adenovirus protein
JP2002542813A (ja) * 1999-04-29 2002-12-17 レウコテク アクティーゼルスカブ 組換哺乳動物細胞におけるヘパリン結合性タンパク質の発現
IL148060A0 (en) * 1999-08-25 2002-09-12 Immunex Corp Compositions and methods for improved cell culture
CA2404163C (en) 2000-03-22 2009-09-29 Octagene Gmbh Production of recombinant blood clotting factors in human cell lines
MXPA03000458A (es) * 2000-07-20 2004-06-02 Neurogen Corp Ligandos receptores de capsaicina.
US20040161817A1 (en) * 2001-06-04 2004-08-19 Corixa Corporation Compositions and methods for high-level, large-scale production of recombinant proteins
US20040180438A1 (en) * 2002-04-26 2004-09-16 Pachuk Catherine J. Methods and compositions for silencing genes without inducing toxicity
CA2507664C (en) 2002-11-29 2010-09-07 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Novel neomycin-phosphotransferase-genes and methods for the selection of recombinant cells producing high levels of a desired gene product
US7217566B2 (en) 2003-03-24 2007-05-15 Invitrogen Corporation Attached cell lines
US7763430B2 (en) 2003-04-22 2010-07-27 Baxter International Inc. Diagnostic assay for anti-von Willebrand Factor cleaving protease (ADAMTS13) antibodies
EP1638606B1 (en) * 2003-06-27 2016-01-06 Amgen Fremont Inc. Antibodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof
JP2005073509A (ja) * 2003-08-28 2005-03-24 Nihon Pharmaceutical Co Ltd ヒトアンチトロンビンの生産方法
BRPI0414961A (pt) * 2003-10-03 2006-11-07 Keiichi Fukuda processo de indução da diferenciação de células tronco em células do miocárdio
JP4705473B2 (ja) * 2003-11-06 2011-06-22 株式会社リプロセル 幹細胞の凍結保存法およびシステム
JP2007510425A (ja) * 2003-11-06 2007-04-26 エグゾニ・テラピューティック・ソシエテ・アノニム ＢＡＣＥ４５５、ヒトβ−セクレターゼの選択的スプライシング変異体
WO2009101560A2 (en) 2008-02-15 2009-08-20 Koninklijke Philips Electronics N.V. Apparatus for segmenting an object comprising sub-objects

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0613721A2 (pt) 2011-02-08
JP2019058173A (ja) 2019-04-18
KR101320489B1 (ko) 2013-10-30
CA2611708C (en) 2019-11-12
AU2006265173A1 (en) 2007-01-11
RU2453597C2 (ru) 2012-06-20
CA2611708A1 (en) 2007-01-11
NO20076087L (no) 2008-01-28
IL187676A0 (en) 2008-08-07
PL1896590T3 (pl) 2016-10-31
EP1739179A1 (en) 2007-01-03
US20150044720A1 (en) 2015-02-12
WO2007003582A2 (en) 2007-01-11
JP6754414B2 (ja) 2020-09-09
KR20080028891A (ko) 2008-04-02
ZA200711013B (en) 2008-10-29
US9512457B2 (en) 2016-12-06
US9796986B2 (en) 2017-10-24
HUE028028T2 (en) 2016-11-28
CN105755041A (zh) 2016-07-13
IL266122A (en) 2019-06-30
US20170152523A1 (en) 2017-06-01
US9273325B2 (en) 2016-03-01
AU2006265173B2 (en) 2011-07-28
NO343221B1 (no) 2018-12-10
DK1896590T3 (da) 2016-06-13
UA99700C2 (ru) 2012-09-25
JP5925407B2 (ja) 2016-05-25
EP1896590B1 (en) 2016-03-23
SI1896590T1 (sl) 2016-07-29
IL187676A (en) 2017-02-28
CN101233238A (zh) 2008-07-30
IL250575A0 (en) 2017-03-30
WO2007003582A3 (en) 2007-05-18
US20160177362A1 (en) 2016-06-23
US20100184141A1 (en) 2010-07-22
MX2007015370A (es) 2008-02-11
ES2574584T3 (es) 2016-06-20
JP2016154537A (ja) 2016-09-01
US8871439B2 (en) 2014-10-28
EP1896590A2 (en) 2008-03-12
JP2008544750A (ja) 2008-12-11
BRPI0613721B1 (pt) 2022-05-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2008103319A (ru) Бессывороточная стабильная трансфекция и продукция рекомбинантных белков человека в клеточных линиях человека
US8957196B2 (en) Vector and expression cell line for mass production of recombinant protein and a process of producing recombinant protein using same
US20230131164A1 (en) Integration Sites in CHO Cells
JP4525863B1 (ja) 高生産性細胞の樹立のための発現ベクター及び高生産性細胞
EP2898077B1 (en) Expression vectors comprising chimeric cytomegalovirus promoter and enhancer sequences
JP2008536506A (ja) ｍＣＭＶプロモーターおよびｈＣＭＶ主要最初期遺伝子を含む哺乳類発現ベクター
JP2017534283A (ja) サイトメガロウイルス抗原を発現する哺乳動物細胞
KR20170132784A (ko) 글로빈 유전자 클러스터의 조절 요소를 포함하는 진핵생물 발현 벡터
WO2016003368A1 (en) Optimized vectors for the production of recombinant proteins
JP3861134B2 (ja) タンパク質発現法およびタンパク質発現用コンストラクト
WO2010023787A1 (ja) 遺伝子発現安定化エレメント
Eibl et al. Insect cell-based recombinant protein production
CN1657628A (zh) 一种高效筛选目的蛋白的表达载体，其制备方法及用途
AU2019273200A1 (en) Novel vector and use thereof
JP2012055303A (ja) 遺伝子増幅を含む高生産性細胞の樹立のための発現ベクター
JPWO2011071147A1 (ja) 新規な発現ベクター及び該ベクターを用いたタンパク質の製造方法
Shayesteh et al. Cloning and expression of codon optimized human interferon beta-1a gene in CHO cell line
GARNER International Bureau

Legal Events

Date Code Title Description
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20141014