RU2002117383A

RU2002117383A - Способ очистки фармакологически активных белков с помощью катионообменной хроматографии

Info

Publication number: RU2002117383A
Application number: RU2002117383/15A
Authority: RU
Inventors: Лючи СКАПОЛЬ (IT); Лючия СКАПОЛЬ; Джузеппе Клаудио ВИСКОМИ (IT); Джузеппе Клаудио Вискоми
Original assignee: Альфа Вассерманн С.П.А. (It); Альфа Вассерманн С.П.А.
Priority date: 2001-07-06
Filing date: 2002-06-28
Publication date: 2004-01-27
Also published as: YU50502A; HRP20020480B1; SK8592002A3; CA2388716A1; EP1273592B1; RU2274471C2; MXPA02006303A; ATE307824T1; ES2250544T3; JP3940037B2; EP1273592A3; DE60206847D1; EP1273592A2; CA2388716C; UY27354A1; EG23150A; CN100484954C; MEP3408A; DZ3236A1; CU23149A3

Claims

1. Способ очистки фармакологически активных белков, включающий проведение катионообменной хроматографии на твердой матрице при значении рН более основном, чем рН, соответствующий изоэлектрической точке, pI, очищаемых белков, при таком значении рН, при котором указанные белки все еще остаются абсорбированными, и элюирование указанных белков путем увеличения ионной силы и/или рН элюентов.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что элюенты, используемые для катионообменной хроматографии, получают из водных буферных растворов, рН которых находится в интервале между 2 и 11.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что рН водных буферных растворов, находится в интервале между 4 и 8,5.

4. Способ по пп.2 и 3, отличающийся тем, что водные буферные растворы содержат от 5 до 100 мМ следующих буферных смесей: моноосновного фосфата калия и двухосновного фосфата натрия, моноосновного фталата калия и гидроксида натрия, двухосновного цитрата натрия и гидроксида натрия, лимонной кислоты и двухосновного фосфата натрия, имидазола и хлористоводородной кислоты.

5. Способ по пп.2-4, отличающийся тем, что буферные растворы могут содержать от 1 до 100 мМ органических или неорганических солей, способных модифицировать ионную силу раствора.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что фармакологически активные белки представляют собой белки интерферон и альбумин.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что белки интерферона представляют собой альфа, бета, гамма, дельта, омега, тау, природный альфа из лейкоцитов, рекомбинантный альфа-2b и консенсусный интерфероны, и белки альбумина представляют собой природный и рекомбинантный альбумин человека.

8. Способ очистки рекомбинантного альфа-2b-интерферона, rIFNα-2b, включающий загрузку полученной проведением ферментации rIFNα-2b смеси белков, дополненной добавлением 1М раствора ацетата натрия и доведенной до рН 5,5 уксусной кислотой, на колонку, наполненную сильной катионообменной смолой, кондиционированной при рН 5,5 с помощью 20 мМ раствора ацетата натрия, так что на каждый мл стационарной фазы приходится от 6 до 8 мг белка; проведении двух циклов промывки колонки, первый из которых - буферным раствором при рН 6,1 при концентрации между 5 и 15 мМ, затем тем же буферным раствором, дополненным 2 мМ хлорида калия, и наконец элюирование чистого rIFNα-2b из колонки с использованием буферного раствора при рН 6,1 с концентрацией между 5 и 15 мМ, содержащего хлорид калия в концентрации, составляющей между 15 и 25 мМ.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что используемая смола представляет собой Mustang® S и буферные смеси выбирают из полученных из моноосновного фосфата калия и двухосновного фосфата натрия, моноосновного фталата калия и гидроксида натрия, двухосновного цитрата натрия и гидроксида натрия, лимонной кислоты и двухосновного фосфата натрия, имидазода и хлористоводородной кислоты.

10. Способ очистки сывороточного альбумина человека, включающий загрузку раствора, содержащего сывороточный альбумин человека, доведенного до рН 3 с помощью лимонной кислоты, на колонку, наполненную сильной катионообменной смолой, кондиционированной при рН 3 с помощью 20 мМ раствора лимонной кислоты, так что на каждый мл стационарной фазы приходится от 6 до 8 мг белка; проведении двух циклов промывки колонки 20 мМ растворами ацетата натрия, доведенными последовательно до значений рН 5,5 и 5,8, и затем элюирование из колонки чистого сывороточного альбумина человека с помощью буферного раствора при рН 6,0, полученного из смеси моноосновного фосфата калия и двухосновного фосфата натрия при концентрации между 5 и 100 мМ.

11. Применение способов по любому из предшествующих пунктов для получения активных начал, содержащихся в лекарственных препаратах, на основе фармакологически активных белков.

12. Применение по п.11, отличающееся тем, что активные начала представляют собой белки интерферона.

13. Применение по п.12, отличающееся тем, что белок интерферона представляет собой рекомбинантный альфа-2b-интерферон.

14. Применение по п.11, отличающееся тем, что активные начала представляют собой белки альбумина.

15. Применение по п.14, отличающееся тем, что белки альбумина представляют собой природный или рекомбинантный сывороточный альбумин человека.