UA55303C2 - Method for modified chromatographic purification of human insulin drug substance and sustained-release dosage form - Google Patents
Method for modified chromatographic purification of human insulin drug substance and sustained-release dosage form Download PDFInfo
- Publication number
- UA55303C2 UA55303C2 UA2002118718A UA2002118718A UA55303C2 UA 55303 C2 UA55303 C2 UA 55303C2 UA 2002118718 A UA2002118718 A UA 2002118718A UA 2002118718 A UA2002118718 A UA 2002118718A UA 55303 C2 UA55303 C2 UA 55303C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- insulin
- substance
- human insulin
- solution
- propanol
- Prior art date
Links
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 title abstract 4
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 title abstract 4
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 title abstract 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 title abstract 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 158
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 85
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 78
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 78
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 77
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 28
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 23
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 14
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims abstract description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims abstract description 8
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 7
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 6
- 229940074545 sodium dihydrogen phosphate dihydrate Drugs 0.000 claims description 5
- OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-fluorophenyl)methyl]piperazine Chemical compound C1=CC(F)=CC=C1CN1CCNCC1 OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 claims description 3
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 abstract 2
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108700025187 desamido (A21)- insulin Proteins 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108010092217 Long-Acting Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000016261 Long-Acting Insulin Human genes 0.000 description 1
- 229940100066 Long-acting insulin Drugs 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010067035 Pancrelipase Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 150000004688 heptahydrates Chemical class 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 1
- 108010033606 insulin dimers Proteins 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108010000947 protamine zinc Proteins 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної промисловості і може бути використаним при виробництві 2 рекомбінантних субстанцій інсуліну людини та готових лікарських форм на їх основі, у тому числі, пролонгованої дії з активністю 40 одиниць на мл (далі - 4А0мМО/мл).The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry and can be used in the production of 2 recombinant substances of human insulin and ready-made dosage forms based on them, including prolonged action with an activity of 40 units per ml (hereinafter - 4A0mIU/ml).
Для виробництва сучасних препаратів інсуліну як діючу речовину використовують свинячі субстанції інсуліну та субстанції інсуліну людини високого ступеня очищення (Ейгореап РіПапгтасореїа 2002, стор.1370-1380). Це пов'язано з тим, що білкові домішки, зазвичай присутні в субстанціях інсулінів, які одержуються з 70 підшлункових залоз тварин, напівсинтетичних та в біосинтетичних субстанціях інсуліну людини - проінсулін, ефіри інсуліну, високомолекулярні білки (димери та полімери інсуліну), деривати білків клітин хазяїна - мають антигенну активність та можуть викликати імуногенні пошкодження судин та внутрішніх органів у хворих на діабет (А.С. Ефимов, Н.А. Скробонская, С.Н. Ткач, Е.А. Сакало "Инсулинотерапия больньїх сахарньім диабетом",Pig insulin substances and highly purified human insulin substances are used as an active substance for the production of modern insulin preparations (Eigoreap RiPapgtasoreia 2002, p. 1370-1380). This is due to the fact that protein impurities, usually present in insulin substances obtained from 70 animal pancreases, semi-synthetic and in biosynthetic human insulin substances - proinsulin, insulin esters, high-molecular proteins (insulin dimers and polymers), derivatives of cell proteins the host - have antigenic activity and can cause immunogenic damage to blood vessels and internal organs in patients with diabetes (A.S. Efimov, N.A. Skrobonskaya, S.N. Tkach, E.A. Sakalo "Insulinotherapy of patients with diabetes",
Киев, Здоровье, 2000г., стр.28-30). Для виробництва високоочищених субстанцій інсуліну у теперішній час 12 широко використовують традиційні хроматографічні способи очищення: гель-проникаючу, іонообмінну та обернено-фазову хроматографію, а також їх комбінації |(патент США Мо5621073 "Хроматографічний процес очищення інсуліну", 1997р.; Сеопйгеу В. Сох, Іпїцепсе ої Орегаййпуд Рагатейег оп (Ше Ргерагаїйме ОгадіепіKyiv, Health, 2000, pp. 28-30). For the production of highly purified insulin substances, traditional chromatographic methods of purification are widely used: gel-permeation, ion-exchange, and reversed-phase chromatography, as well as their combinations | .
ЕІшіоп СПготайодгарпу ої Іпзціп, З. Спготаї., 1992, 195-203). Гель-проникаючу хроматографію зазвичай використовують для очищення субстанції інсуліну від високомолекулярних домішок. Недоліками способу являються невеликі питомі навантаження на колонку та низькі швидкості елюювання, що робить процес очищення неефективним. Іонообмінну хроматографію використовують для очищення субстанцій інсуліну від інсулін-споріднених домішок, зокрема від дезамідоінсулінів. Недоліками цього способу є ті ж низькі питомі навантаженні на сорбент та незадовільний відсоток виходу продукту. Обернено-фазову хроматографію використовують для очищення субстанцій інсулінів від проінсулінів, інсулін-споріднених домішок, дериватів с білків клітин хазяїна для біосинтетичних інсулінів, залишкових кількостей протеолітичних ферментів, які Ге) використовуються для виробництва напівсинтетичних та біосинтетичних субстанцій інсуліну людини. Головні домішки в субстанціях інсуліну - це інсулін-споріднені сполуки, які мають мінімальні структурні відміни, і тому для їх відокремлення від головного продукту необхідно використовувати високоефективні сорбенти, а отже хроматографічні системи високого тиску. Тільки це дає можливість використовувати високі питомі навантаження о на сорбент, забезпечує відповідну якість і вихід продукту та робить процес економічно ефективним. авEishiop SPgotayodharpu oi Ipstsip, Z. Spgotai., 1992, 195-203). Gel-permeation chromatography is usually used to purify the substance of insulin from high molecular weight impurities. The disadvantages of the method are small specific loads on the column and low elution speeds, which makes the cleaning process inefficient. Ion exchange chromatography is used to purify insulin substances from insulin-related impurities, in particular from desamidoinsulins. The disadvantages of this method are the same low specific loads on the sorbent and an unsatisfactory percentage of product yield. Reverse-phase chromatography is used to purify insulin substances from proinsulins, insulin-related impurities, derivatives of host cell proteins for biosynthetic insulins, residual amounts of proteolytic enzymes, which are used for the production of semisynthetic and biosynthetic substances of human insulin. The main impurities in insulin substances are insulin-related compounds that have minimal structural differences, and therefore, to separate them from the main product, it is necessary to use highly effective sorbents, and therefore high-pressure chromatographic systems. Only this makes it possible to use high specific loads on the sorbent, ensures the appropriate quality and yield of the product, and makes the process cost-effective. Av
Прототипом даного винаходу є спосіб очищення субстанції інсуліну людини обернено-фазовою хроматографією (Е.Р. Кгоепй, К.А. Омепв, аї а). "Ргодасіоп Зсаіе Ригійсайоп ої Віозупіпейс Нитап Іпзиїп о ру Кезегзеа-Рпазе Нідп-Репогтапсе ІГідцій Спготаїйодгарпу") який включає розчинення субстанції інсуліну, ою врівноваження колонки, нанесення розчину субстанції інсуліну на хроматографічну колонку, наступного 39 елюювання субстанції інсуліну градієнтом та оцінки отриманих піків методом аналітичної ВЕРХ о (високоефективної рідинної хроматографії). Як органічний модифікатор у рухомій фазі використовують ацетонітрил з градієнтом концентрації 15-3095 та рН 3. Даний спосіб дозволяє одержати субстанцію інсуліну високої якості з виходом більш, ніж 7595, та з чистотою більш, ніж 9795. Але недоліками способу є низькі питомі « навантаження на колонку (від 13 до 15мг на їмл сорбенту), що робить процес очищення неефективним, та З 50 використання в якості органічного модифікатора у рухомій фазі ацетонітрилу, який має високу токсичність і с дорого коштує.The prototype of this invention is a method of purifying the substance of human insulin by reversed-phase chromatography (E.R. Kgoepy, K.A. Omepv, ai a). "Rhodasiop Zsaie Rygisayop oi Viozupipeis Nytap Ipziip o ru Kezegzea-Rpaze Nidp-Repogtapse IGidtsiy Spgotaiiodgarpu") which includes dissolving the substance insulin, equilibration of the column, application of the solution of the substance insulin to a chromatographic column, the following 39 elution of the substance insulin with a gradient and evaluation of the obtained peaks by the analytical method HPLC o (high performance liquid chromatography). As an organic modifier in the mobile phase, acetonitrile with a concentration gradient of 15-3095 and pH 3 is used. This method makes it possible to obtain a high-quality insulin substance with a yield of more than 7595 and a purity of more than 9795. But the disadvantages of the method are low specific "loads of column (from 13 to 15 mg per ml of sorbent), which makes the cleaning process ineffective, and C 50 use as an organic modifier in the mobile phase of acetonitrile, which has high toxicity and is expensive.
Із» Відомі препарати інсуліну пролонгованої дії, в яких як діюча речовина використовувалась субстанція свинячого інсуліну, як пролонгатори іони цинку та протамінсульфат, як ізотонічний агент гліцерин, як консерванти м-крезол та фенол, як речовина з буферною ємністю натрій фосфорнокислий або оцтовокислийFrom" Known long-acting insulin preparations, in which the substance of porcine insulin was used as an active substance, zinc ions and protamine sulfate as extenders, glycerin as an isotonic agent, m-cresol and phenol as preservatives, sodium phosphate or acetic acid as a buffering agent
ГСовременньїе гормональние средства", Киев, "Здоровье", 1994). Але такі препарати містили велику кількість і-й шкідливих для здоров'я людини домішок, які викликали небажані алергічні реакції та ускладнення. Більш 4! досконалими та менш шкідливими були препарати, які як діючу речовину містили субстанцію інсуліну людини о або аналоги цієї субстанції |наприклад, патент США Мо5547930, 1996 року "Кристали інсуліну АВРУ8", Відомо, що якість готової лікарської форми визначається якістю очищення діючої речовини - субстанції інсуліну. Ця (ав) 50 операція очищення також у значному ступені визначає витрати на виробництво та вихід готового продукту. Тому со їй приділяється велика увага. Найбільш близькою до готової лікарської форми інсуліну людини пролонгованої дії, що заявляється, є готова лікарська форма інсуліну людини патентом України Мо50679. Вона містить як діючу речовину високоочищену традиційною хроматографією високого тиску субстанцію інсуліну людини, пролонгатори - протамінсульфат та цинку хлорид, ізотонічні агенти - гліцерин та натрію хлорид, консерванти - 59 м-крезол та фенол, агент з буферною ємністю - натрій дигідрогенфосфат дигідрат або динатрійгідрогенфосфатGSovremennyye hormonalnye sreddy", Kiev, "Zdorovye", 1994). But such drugs contained a large number of impurities harmful to human health, which caused unwanted allergic reactions and complications. More perfect and less harmful were drugs that as an active substance contained the substance of human insulin or analogues of this substance | for example, US patent Mo5547930, 1996 "Crystals of insulin AVRU8", It is known that the quality of the finished dosage form is determined by the quality of purification of the active substance - the substance of insulin. This (ав) 50 purification operation also largely determines the production costs and output of the finished product. That is why it is given great attention. The closest to the ready-made dosage form of long-acting human insulin, which is claimed, is the ready-made dosage form of human insulin under the patent of Ukraine Mo50679. It contains as an active ingredient highly purified by traditional high-pressure chromatography, human insulin substance, prolongers - protamine sulfate and zinc ku chloride, isotonic agents - glycerol and sodium chloride, preservatives - 59 m-cresol and phenol, buffering agent - sodium dihydrogen phosphate dihydrate or disodium hydrogen phosphate
ГФ) гептагідрат і воду. Використання очищеної традиційною хроматографією високого тиску субстанції інсуліну 7 людини дозволило одержати препарат високої якості з вмістом високомолекулярних білків 0,2 90 та інсулін-споріднених сполук менше 295, але при цьому понести значні витрати на сорбент та органічний модифікатор. бо Завданням винаходу є поліпшення ефективності виробничого процесу, підвищення якості кінцевого продукту за рахунок отримання більш чистої субстанції інсуліну і зниження витрат на виробництво.GF) heptahydrate and water. The use of human insulin substance 7 purified by traditional high-pressure chromatography made it possible to obtain a high-quality drug with a high-molecular-weight protein content of 0.290 and insulin-related compounds less than 295, but at the same time incurring significant costs for a sorbent and an organic modifier. because the task of the invention is to improve the efficiency of the production process, increase the quality of the final product due to obtaining a purer substance of insulin and reducing production costs.
Поставлене завдання вирішується тим, що у способі модифікованого хроматографічного очищення субстанції інсуліну людини шляхом розчинення субстанції інсуліну у буферному розчині, врівноваження колонки, нанесення розчину субстанції інсуліну на хроматографічну колонку, наступного елюювання градієнтом субстанції бо інсуліну та оцінки отриманих піків методом аналітичної ВЕРХ, у відповідності з винаходом як органічний модифікатор буферного розчину використовують пропанол або пропанол-2, рН розчину доводять до 2,4-2,6 і для розчинення субстанції інсуліну використовують концентрацію органічного модифікатора 13-1495 об'ємних, а в готовій лікарській формі інсуліну людини пролонгованої дії, яка містить діючу речовину, пролонгатори, ізотонічні агенти, консерванти, агент з буферною ємністю і воду, у відповідності з винаходом як діючу речовину використовують субстанцію інсуліну людини, наприклад, очищену модифікованим хроматографічним способом, при наступному співвідношенні компонентів, г/л: високоочищена субстанція інсуліну людини - 1,35-1,64; протамінсульфат - 0,086-0,139; цинку хлорид - 0,0057-0,0084; гліцерин - 14,4-17,6;5 м-крезол - 1,26-1,54; фенол - 0,54-0,66; натрій дигідрогенфосфат дигідрат - 1,35-1,65; натрію хлорид - 0,54-0,66; вода - /о решта.The task is solved by the fact that in the method of modified chromatographic purification of the human insulin substance by dissolving the insulin substance in a buffer solution, equilibrating the column, applying the insulin substance solution to the chromatographic column, subsequent elution of the insulin substance with a gradient and evaluating the obtained peaks by the analytical HPLC method, in accordance with according to the invention, propanol or propanol-2 is used as an organic modifier of the buffer solution, the pH of the solution is brought to 2.4-2.6, and to dissolve the insulin substance, the concentration of the organic modifier is 13-1495 by volume, and in the finished dosage form of long-acting human insulin, which contains an active ingredient, extenders, isotonic agents, preservatives, an agent with a buffer capacity and water, in accordance with the invention, the substance of human insulin is used as an active ingredient, for example, purified by a modified chromatographic method, with the following ratio of components, g/l: high purified substance of human insulin - 1.35-1.64; protamine sulfate - 0.086-0.139; zinc chloride - 0.0057-0.0084; glycerol - 14.4-17.6; 5 m-cresol - 1.26-1.54; phenol - 0.54-0.66; sodium dihydrogen phosphate dihydrate - 1.35-1.65; sodium chloride - 0.54-0.66; water - the rest.
Внесені зміни, що заявляються, тобто: використання пропанолу або пропанолу-2 замість ацетонітрилу, збільшення концентрації органічного модифікатора до 13-1495 об'ємних та зниження значення рН розчину субстанції інсуліну у буфері до 2,4-2,6, зсувають рівновагу димер - мономер субстанції інсуліну в бік мономера, зменшують асоціацію субстанції інсуліну з інсулін-спорідненими домішками, знижують імовірність багатоточкової (необоротної) адсорбції субстанції інсуліну, механізм адсорбції в рамках конкуренція - синергізм зміщується в бік конкуренції. Внаслідок цього при нанесенні розчину субстанції інсуліну на хроматографічну колонку реалізується механізм фронтально-витискувальної хроматографії і формується первинний хроматографічний розподіл субстанції інсуліну по довжині колонки.The declared changes, i.e.: the use of propanol or propanol-2 instead of acetonitrile, an increase in the concentration of the organic modifier to 13-1495 by volume and a decrease in the pH value of the solution of the insulin substance in the buffer to 2.4-2.6, shift the dimer equilibrium the monomer of the insulin substance towards the monomer, reduce the association of the insulin substance with insulin-related impurities, reduce the probability of multipoint (irreversible) adsorption of the insulin substance, the mechanism of adsorption within the framework of competition - synergism shifts towards competition. As a result, when a solution of the insulin substance is applied to the chromatographic column, the mechanism of frontal extrusion chromatography is realized and the primary chromatographic distribution of the insulin substance along the length of the column is formed.
Вирішення поставленого авторами завдання ілюструється прикладами конкретного виконання.The solution to the task set by the authors is illustrated by examples of specific implementation.
Приклад 1. Процес модифікованого хроматографічного очищення субстанції інсуліну проводять за кімнатної температури. 450мг по технічній масі (414мг в перерахунку на суху речовину) субстанції інсуліну, яка містить 96,195 головної речовини, 1,895 дезамідо(А-21)інсуліну та 2,195 інсулін-споріднених домішок розчинюють в 25мМл буферного розчину, який містить 0,25моль/л оцтової кислоти, 13,5 об'ємних відсотків пропанола-2. Значення рн розчину субстанції інсуліну у рухомій фазі доводять розчином соляної кислоти з масовою долею 1095 до 2,5. сExample 1. The process of modified chromatographic purification of insulin substance is carried out at room temperature. 450 mg by technical weight (414 mg on a dry matter basis) of the insulin substance, which contains 96.195 of the main substance, 1.895 of desamido(A-21) insulin and 2.195 of insulin-related impurities, is dissolved in 25 mL of a buffer solution containing 0.25 mol/L of acetic acid , 13.5 percent by volume of propanol-2. The pH value of the solution of the insulin substance in the mobile phase is adjusted to 2.5 with a solution of hydrochloric acid with a mass fraction of 1095. with
Отриманий розчин субстанції інсуліну фільтрують через мембранний фільтр Віо-Іпег МК фірми Раї зі здатністю утримання 0,2мкм. (8)The resulting insulin substance solution is filtered through a Vio-Ipeg MK membrane filter of the Rai company with a retention capacity of 0.2 μm. (8)
Хроматографічну колонку з внутрішнім діаметром 0О,8см і довжиною З0,О0см, яка упакована сферичним силікагелем С-18 з розміром часток 15мкм, з розміром пор 12нм врівноважують 45мл буферного розчину А наступного складу: 0,25моль/л кислоти оцтової, 10,0 об'ємних відсотків пропанолу-2. Процес очищення с зо субстанції інсуліну ведуть на рідинному хроматографі високого тиску (зізоп. Розчин інсуліну подають в хроматографічну колонку зі швидкістю потоку 1,0мл/хв. Потім колонку промивають 15мл буферного розчину А. оA chromatographic column with an inner diameter of 00.8 cm and a length of 30.00 cm, which is packed with spherical silica gel C-18 with a particle size of 15 μm, with a pore size of 12 nm, is balanced with 45 ml of buffer solution A of the following composition: 0.25 mol/l acetic acid, 10.0 vol. "capacity percentages of propanol-2. The process of purification of the insulin substance is carried out on a high-pressure liquid chromatograph (zizop. The insulin solution is fed into a chromatographic column with a flow rate of 1.0 ml/min. Then the column is washed with 15 ml of buffer solution A. o
Елюювання субстанції інсуліну ведуть зі швидкістю потоку 1,О0мл/хв. у лінійному градієнті концентрації с пропанолу-2 від 12 до 18 об'ємних відсотків протягом 120 хвилин. Формування градієнту виконують автоматично шляхом змішування буферного розчину А та буферного розчину Б, який містить 0,25моль/л кислоти оцтової та о 50,0 об'ємних відсотків пропанолу-2. Після закінчення градієнту сорбент у колонці регенерують 45мл буферного ю розчину Б. Елюат, який містить субстанцію інсуліну, розбивають на фракції об'ємом З,Омл. Фракції аналізують за допомогою високоефективної рідинної хроматографії на вміст домішок. За результатами аналізів формують головну фракцію, яка містить 339,5мг субстанції інсуліну (35,О0мл елюату з концентрацією інсуліну 9,7мг/мл) наступного складу: 98,995 головної речовини, 0,395 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,890 інсулін-споріднених домішок. У « розчин головної фракції за перемішування додають З0,О0мл очищеної води, 0,34мл розчину цинку хлористого з Ше) с масовою долею 10595, 2,3мл розчину кислоти лимонної з молярною концентрацією 1,5моль/л. За перемішування у розчин субстанції інсуліну додають розчин гидроокису натрію з масовою долею 10,095 до значення рН 6,6. з Розчин перемішують 90 хвилин. Потім розчином кислоти соляної з масовою долею 5,096 доводять значення рн до 5,9 і продовжують перемішування ще 240 хвилин, після чого одержані кристали субстанції інсуліну Відокремлюють від маточного розчину фільтрацією через мембрану ШОПірог Мб фірми Раї! з розміром пор 0О,8мкм. с Кристали промивають 5,0мл очищеної води і ліофільно висушують. Одержують 363,5мг субстанції інсуліну (334,4мг в перерахунку на суху речовину) наступного складу: 98,895 головної речовини, 0,490 о дезамідо(А-21)інсуліну, 0,895 інсулін-споріднених домішок. Вихід продукту складає 80,890. 2) Приклад 2. Процес очищення проводять аналогічно прикладу 1, але збільшують навантаження по субстанції 5ор інсуліну: беруть 75Омг по технічній масі субстанції інсуліну, яка містить 96,195 головної речовини, 1,895 о дезамідо(А-21)інсуліну та 2,195 інсулін-споріднених домішок, та розчинять у 42мл буферного розчину. 4) Одержують 592,5мг субстанції інсуліну по технічній масі наступного складу: 97,995 головної речовини, 0,890 дезамідо(А-21)інсуліну, 1,395 інсулін-споріднених домішок. Вихід продукту складає 79,090.The insulin substance is eluted at a flow rate of 1.00 ml/min. in a linear concentration gradient with propanol-2 from 12 to 18 volume percent for 120 minutes. The formation of the gradient is performed automatically by mixing buffer solution A and buffer solution B, which contains 0.25 mol/l acetic acid and 50.0 volume percent propanol-2. After the end of the gradient, the sorbent in the column is regenerated with 45 ml of buffer solution B. The eluate, which contains the insulin substance, is divided into fractions with a volume of 3.0 ml. Fractions are analyzed using high-performance liquid chromatography for the content of impurities. Based on the results of the analysis, the main fraction is formed, which contains 339.5 mg of insulin substance (35.00 ml of eluate with an insulin concentration of 9.7 mg/ml) of the following composition: 98.995 of the main substance, 0.395 of desamido(A-21) insulin, 0.890 of insulin-related impurities. 30.00 ml of purified water, 0.34 ml of a solution of zinc chloride with Fe) with a mass fraction of 10595, 2.3 ml of a solution of citric acid with a molar concentration of 1.5 mol/l are added to the solution of the main fraction with stirring. While stirring, a solution of sodium hydroxide with a mass fraction of 10.095 is added to the insulin substance solution to a pH value of 6.6. The solution is stirred for 90 minutes. Then, with a solution of hydrochloric acid with a mass fraction of 5.096, the pH value is brought to 5.9 and the mixing is continued for another 240 minutes, after which the resulting crystals of the insulin substance are separated from the mother solution by filtration through the membrane SHOPirog MB of the company Rai! with a pore size of 0.8 μm. c Crystals are washed with 5.0 ml of purified water and lyophilized. 363.5 mg of insulin substance (334.4 mg in terms of dry matter) of the following composition are obtained: 98.895 of the main substance, 0.490 of desamido(A-21) insulin, 0.895 of insulin-related impurities. The output of the product is 80,890. 2) Example 2. The purification process is carried out in the same way as in example 1, but the load on the substance 5or insulin is increased: take 75Omg of the technical mass of the insulin substance, which contains 96.195 of the main substance, 1.895 of desamido (A-21) insulin and 2.195 of insulin-related impurities, and dissolve in 42 ml of buffer solution. 4) Receive 592.5 mg of insulin substance by technical mass of the following composition: 97.995 of the main substance, 0.890 of desamido(A-21) insulin, 1.395 of insulin-related impurities. The output of the product is 79,090.
Приклад 3. Процес очищення проводять аналогічно прикладу 1, але беруть 45Омг по технічній масі субстанції дв Інсуліну-сирцю, яка містить 90,495 головної речовини, 3,595 дезамідо(А-21)інсуліну та 6,195 інсулін-споріднених домішок, та розчинять у 42мл буферного розчину, який містить як органічний модифікатор пропанол. ОдержуютьExample 3. The purification process is carried out similarly to example 1, but take 45 Ωg by technical mass of substance dv Crude insulin, which contains 90.495 of the main substance, 3.595 of desamido(A-21) insulin and 6.195 of insulin-related impurities, and dissolve in 42 ml of buffer solution, which contains propanol as an organic modifier. They receive
Ф) 334,О0мг субстанції інсуліну по технічній масі наступного складу: 98,595 головної речовини, 0,695 ка дезамідо(А-21)інсуліну, 0,095 інсулін-споріднених домішок. Вихід продукту складає 74290.Ф) 334.00 mg of insulin substance according to the technical weight of the following composition: 98.595 of the main substance, 0.695 ka of desamido(A-21) insulin, 0.095 of insulin-related impurities. The output of the product is 74290.
Приклад 4. Процес очищення проводять аналогічно прикладу 1, але змінюють склад буферного розчину. во Субстанцію інсуліну розчинюють в 25мл буферного розчину, який містить 0,25моль/л кислоти оцтової та 15 об'ємних відсотків пропанолу-2. Внаслідок цього при введенні розчину субстанції інсуліну на колонку спостерігають динамічний проскок, який містить 63,Омг субстанції інсуліну. Одержують 298,5мг субстанції інсуліну по технічній масі наступного складу: 98,995 головної речовини, 1,196 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,990 інсулін-споріднених домішок. Вихід продукту складає 66,3905. 65 Приклад 5. Процес очищення проводять аналогічно прикладу 1, але змінюють склад буферного розчину.Example 4. The cleaning process is carried out similarly to example 1, but the composition of the buffer solution is changed. The insulin substance is dissolved in 25 ml of a buffer solution containing 0.25 mol/l acetic acid and 15 percent by volume of propanol-2. As a result, when a solution of the insulin substance is introduced into the column, a dynamic slip is observed, which contains 63.Omg of the insulin substance. 298.5 mg of insulin substance is obtained according to the technical weight of the following composition: 98.995 of the main substance, 1.196 of desamido(A-21) insulin, 0.990 of insulin-related impurities. The output of the product is 66.3905. 65 Example 5. The cleaning process is carried out similarly to example 1, but the composition of the buffer solution is changed.
Субстанцію інсуліну розчинюють в 25мл буферного розчину, який містить 0,25моль/л кислоти оцтової та 12 об'ємних відсотків пропанолу. Одержують 360,5мг субстанції інсуліну по технічній масі наступного складу: 98,1956 головної речовини, 0,795 дезамідо(А-21)інсуліну, 1,295 інсулін-споріднених домішок. Вихід продукту складає 77,8905.The insulin substance is dissolved in 25 ml of a buffer solution containing 0.25 mol/l acetic acid and 12 percent by volume of propanol. 360.5 mg of insulin substance is obtained according to the technical weight of the following composition: 98.1956 of the main substance, 0.795 of desamido(A-21) insulin, 1.295 of insulin-related impurities. The output of the product is 77.8905.
Приклад 6. Процес очищення проводять аналогічно прикладу 1, але значення рН буферного розчину доводять до 3,0. Одержують 336,Омг субстанції інсуліну по технічній масі наступного складу: 97,095 головної речовини, 0,890 дезамідо(А-21)інсуліну, 1,890 інсулін-споріднених домішок. Вихід продукту 74,7905.Example 6. The cleaning process is carried out similarly to example 1, but the pH value of the buffer solution is adjusted to 3.0. 336.0mg of insulin substance is obtained by the technical weight of the following composition: 97.095 of the main substance, 0.890 of desamido(A-21) insulin, 1.890 of insulin-related impurities. Product yield 74.7905.
Приклад 7. 1,493г субстанції інсуліну людини, очищеної модифікованим хроматографічним способом, суспендували в 15О0мл води, потім за допомогою 1М НСЇ рН суспензії довели до 3,1 для розчинення кристалів 70 субстанції. 0,3127г протамінсульфату розчинили в 25мл води і довели рН розчину до 3,1, додаючи 1М НС. 0,008г цинку хлориду додали до розчину протамінсульфату. Потім змішали розчин субстанції інсуліну людини та розчин, який містив протамінсульфат і цинку хлорид.Example 7. 1.493 g of human insulin substance, purified by a modified chromatographic method, was suspended in 1500 ml of water, then with the help of 1 M HCl, the pH of the suspension was brought to 3.1 to dissolve crystals of 70 substances. 0.3127 g of protamine sulfate was dissolved in 25 ml of water and the pH of the solution was adjusted to 3.1 by adding 1 M HCl. 0.008 g of zinc chloride was added to the protamine sulfate solution. Then a solution of human insulin substance and a solution containing protamine sulfate and zinc chloride were mixed.
Після цього приготували буферний розчин, який містив 1,5г натрійдигідрогенфосфату дигідрату, 1,4г м-крезолу, 0,бг фенолу, 16г гліцерину та 0,бг натрію хлориду в об'ємі 800мл та довели рН буферного розчину до 7/5. 7,8, провели стерилізуючу фільтрацію і профільтрували туди суміш кислих розчинів субстанції інсуліну людини, протамінсульфату та цинку хлориду. Отриману суміш витримали при перемішуванні 18 годин за температури 182 для одержання кристалічної суспензії готового лікарського препарату. Готовий препарат розлили в асептичних умовах у флакони ємністю 1Омл. Готовий препарат проаналізували методом аналітичної високоефективної рідинної хроматографії (методом ВЕРХ). Аналіз показав практичну відсутність інсуліну в супернатанті при загальному вмісті інсуліну 39,5МО/мл. Вміст високомолекулярних білків склав 0,159, вміст інсулін-споріднених сполук 0,895, А-21 дезамідоінсуліну 0,490.After that, a buffer solution containing 1.5 g of sodium dihydrogen phosphate dihydrate, 1.4 g of m-cresol, 0.bg of phenol, 16 g of glycerin and 0.bg of sodium chloride in a volume of 800 ml was prepared and the pH of the buffer solution was adjusted to 7/5. 7,8, carried out sterilizing filtration and filtered there a mixture of acidic solutions of human insulin substance, protamine sulfate and zinc chloride. The resulting mixture was kept with stirring for 18 hours at a temperature of 182 to obtain a crystalline suspension of the finished drug. The finished drug was poured under aseptic conditions into vials with a capacity of 1 Oml. The finished preparation was analyzed by analytical high-performance liquid chromatography (HPLC). The analysis showed the practical absence of insulin in the supernatant with a total insulin content of 39.5 IU/ml. The content of high molecular weight proteins was 0.159, the content of insulin-related compounds 0.895, A-21 desamidoinsulin 0.490.
Приклад 8. 75905 кристалічної долі готової лікарської форми готували, як в прикладі 7. 2595 розчинної частини лікарської форми готували таким чином: 0,77г субстанції інсуліну людини, очищеної модифікованим хроматографічним способом, суспендували в 100мл води, за допомогою 1М НСЇ довели рН до 3,1. В 230мл води Га приготували буферний розчин, який містив 0,875г натрій дигідрогенфосфату дигідрату, О,35г м-крезолу, 0,15г фенолу, 4г гліцерину та 0,15г натрію хлориду. Буферний розчин змішали з розчином субстанції інсуліну, і) відкоригували рН одержаного розчину до 7,3 і провели стерилізуючу фільтрацію в ємність з кристалічною частиною готової лікарської форми. Суміш перемішували протягом 1 години і потім в асептичних умовах провели розлив. соExample 8. 75905 crystalline parts of the finished dosage form were prepared as in example 7. 2595 soluble parts of the dosage form were prepared as follows: 0.77 g of human insulin substance, purified by a modified chromatographic method, was suspended in 100 ml of water, with the help of 1 M HCl the pH was brought to 3 ,1. A buffer solution containing 0.875 g of sodium dihydrogen phosphate dihydrate, 0.35 g of m-cresol, 0.15 g of phenol, 4 g of glycerin and 0.15 g of sodium chloride was prepared in 230 ml of water. The buffer solution was mixed with the insulin substance solution, and) the pH of the resulting solution was adjusted to 7.3 and sterilizing filtration was carried out in a container with the crystalline part of the finished dosage form. The mixture was stirred for 1 hour and then poured under aseptic conditions. co
Аналіз готового препарату таким же методом, як в прикладі 7, показав загальний вміст інсуліну людини 39,4МО/мл, вміст інсуліну в супернатанті ТЛО0МО/мл. Вміст високомолекулярних білків склав 0,1395, вміст о інсулін-споріднених сполук 0,6790, вміст А-21 дезамідоінсуліну - 0,295. соAnalysis of the finished drug by the same method as in example 7 showed the total content of human insulin 39.4 IU/ml, the content of insulin in the supernatant TLO0 IU/ml. The content of high molecular weight proteins was 0.1395, the content of insulin-related compounds was 0.6790, and the content of A-21 desamidoinsulin was 0.295. co
Аналіз наведених прикладів показує, що використання рішення, яке заявляється, дозволяє поліпшити ефективність хроматографічного розділення субстанції інсуліну та досягти виходу продукту 8095, тобто юю 3з5 Збільшити його на 5-695, отримати чистоту субстанції інсуліну кращу за 9895, тобто поліпшити її якість, а за юю рахунок використання у якості органічного модифікатора пропанолу-2 або пропанолу замість ацетонітрилу збільшити питомі навантаження на мл сорбенту практично в два рази (до 25-30), а отже у два рази знизити витрати на сорбент та на 3095 на органічний модифікатор, що безумовно позначається на собівартості готової « лікарської форми інсуліну людини. - сThe analysis of the given examples shows that the use of the claimed solution makes it possible to improve the efficiency of the chromatographic separation of the insulin substance and achieve a product yield of 8095, i.e. 3z5. due to the use of propanol-2 or propanol instead of acetonitrile as an organic modifier, the specific loads per ml of sorbent can be increased by almost two times (up to 25-30), and therefore, the cost of the sorbent can be reduced by two times and the cost of the organic modifier by 3095, which definitely affects on the cost price of the ready-made medicinal form of human insulin. - with
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002118718A UA55303C2 (en) | 2002-11-04 | 2002-11-04 | Method for modified chromatographic purification of human insulin drug substance and sustained-release dosage form |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002118718A UA55303C2 (en) | 2002-11-04 | 2002-11-04 | Method for modified chromatographic purification of human insulin drug substance and sustained-release dosage form |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA55303C2 true UA55303C2 (en) | 2006-10-16 |
Family
ID=37505514
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2002118718A UA55303C2 (en) | 2002-11-04 | 2002-11-04 | Method for modified chromatographic purification of human insulin drug substance and sustained-release dosage form |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA55303C2 (en) |
-
2002
- 2002-11-04 UA UA2002118718A patent/UA55303C2/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5631347A (en) | Reducing gelation of a fatty acid-acylated protein | |
| CN1033738C (en) | Stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony stimulating factor and process for producing same | |
| US4172071A (en) | Chromophore blue adsorbent method for the purification of preparations having an interferon type activity | |
| US4022758A (en) | Isolation of coagulation factors I and VIII from biological material | |
| JP4594298B2 (en) | High purity fondaparinux sodium composition | |
| JP3110078B2 (en) | Mass production of high-purity antimicrobial peptides | |
| JP4454311B2 (en) | Method for purification and / or isolation of biologically active granulocyte colony stimulating factor | |
| CN112442096A (en) | High-purity Zhongshengmycin F reference substance and preparation method thereof | |
| CZ300604B6 (en) | Chromatographic purification process of insulins | |
| JP3714951B2 (en) | IL-6-containing pharmaceutical composition | |
| CN102408468A (en) | Argatroban compound and preparation method thereof | |
| JP2008523003A (en) | Pure vancomycin hydrochloride | |
| JP2566919B2 (en) | Method for producing α-interferon | |
| UA55303C2 (en) | Method for modified chromatographic purification of human insulin drug substance and sustained-release dosage form | |
| JP5016830B2 (en) | Method for producing purified peptide | |
| JPS59231097A (en) | Manufacture of homogeneous human immunological interferon subtype 26k and 21k | |
| BR112019012273A2 (en) | Process for Purification of Lipopolipeptide Antibiotics from Culture Broths and Uses of a Cation Exchange Resin | |
| RU2223315C2 (en) | RECOMBINANT ACTIVATOR OF DESMONDUS ROTUNDUS SALIVA α1-PLASMINOGEN (RDSPA α1), METHOD FOR ITS PURIFICATION, PHARMACEUTICAL COMPOSITION BASED ON THEREOF | |
| WO1992018537A1 (en) | Interleukin 6 composition and production thereof | |
| JP2521551B2 (en) | Method for producing anti-hemophilia factor | |
| EP0408146A2 (en) | Method for the purification of therapeutically active recombinant acidic fibroblast growth factor | |
| WO1992014832A1 (en) | Processes for purifying human bcdf | |
| CN111039999A (en) | Synthesis method of etimicin impurity | |
| CN112279895A (en) | Preparation method of chemically synthesized acidic polypeptide | |
| JPH06800B2 (en) | Purification method of human interferon-β |