RS64034B1 - Anti-sortilin antitela i načini njihove upotrebe - Google Patents

Anti-sortilin antitela i načini njihove upotrebe

Info

Publication number
RS64034B1
RS64034B1 RS20230194A RSP20230194A RS64034B1 RS 64034 B1 RS64034 B1 RS 64034B1 RS 20230194 A RS20230194 A RS 20230194A RS P20230194 A RSP20230194 A RS P20230194A RS 64034 B1 RS64034 B1 RS 64034B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
sortilin
amino acid
acid sequence
seq
Prior art date
Application number
RS20230194A
Other languages
English (en)
Inventor
Tina Schwabe
Michael Kurnellas
Arnon Rosenthal
Robert Pejchal
Anthony B Cooper
Original Assignee
Alector Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Alector Llc filed Critical Alector Llc
Publication of RS64034B1 publication Critical patent/RS64034B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/286—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against neuromediator receptors, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis
OBLAST
[0001] Predmetno otkriće se odnosi na anti-sortilin antitela i terapeutske upotrebe takvih antitela.
OSNOVA
[0002] Sortilin je transmembranski protein tipa I koji deluje i kao receptor nekoliko liganada, i u sortiranju odabranog tereta iz trans-Goldži mreže (TGN) do kasnih endozoma i lizozoma za degradaciju. Sortilin sadrži veliki ekstracelularni domen koji je deo VPS10 porodice, homologan VPS10P kvasca, i sadrži strukturu beta-propelera sa 10 lopatica i 10CC modul bogat cisteinom (Nykjaer, A et al., (2012) Trends Neurosci 35: 261-270; i Zheng, Y et al., (2011) PLoS One 6: (21023). Mali deo sortilina se može osloboditi aktivnošću ADAM10 ili gama-sekretaze (<5%) (Nykjaer, A et al., (2012) Trends Neurosci 35: 261-270; i Willnow, TE et al., (2011) Curr Opin Lipidol 22: 79-85).
[0003] Sortilin vezuje izlučeni protein progranulin (PGRN) i cilja ga za lizozomalnu degradaciju, čime negativno reguliše ekstracelularne nivoe PGRN (Hu, F et al. (2010) Neuron 68, 654-667. U skladu sa ovim, nedostatak sortilina značajno povećava nivoe PGRN u plazmi i na modelima miša in vivo i humane ćelije in vitro (Carrasquillo, M.M et al., (2010) Am J Hum Genet 87, 890-897; Lee, W.C et al., (2014) Hum Mol Genet 23, 1467-1478). Dodatno, pokazalo se da je polimorfizam u sortilinu snažno povezan sa nivoima PGRN u serumu kod ljudi (Carrasquillo MM et al., (2010), Am J Hum Genet.10; 87(6):890-7).
[0004] Progranulin (PGRN) je izlučeni, trofični i antiinflamatorni protein sličan faktoru rasta, koji takođe igra ulogu adipokina uključenog u gojaznost izazvanu ishranom i insulinsku rezistenciju (Nguyen DA et al., (2013). Trends in Endocrinology and Metabolism, 24, 597-606). Nedostatak progranulina čini oko 25% svih naslednih oblika frontotemporalne demencije (FTD), neurodegenerativne bolesti sa ranim početkom. Pacijenti sa heterozigotnim mutacijama gubitka funkcije u PGRN imaju ~50% smanjene ekstracelularne nivoe proteina i oni će uvek razviti FTD, čineći PGRN uzročnim genom za bolest (Baker, M et al., (2006) Nature 442, 916-919; Carecchio M et al., (2011) J Alzheimers Dis 27, 781-790; Cruts, M et al., (2008) Trends Genet 24, 186-194; Galimberti, D et al., (2010) J Alzheimers Dis 19, 171-177). Pored toga, PGRN mutantni aleli su identifikovani kod pacijenata sa Alchajmerovom bolešću (Seelaar, H et al., (2011). Journal of neurology, neurosurgery, and psychiatry 82, 476-486). Važno je da PGRN deluje zaštitno na nekoliko modela bolesti sa povećanim nivoima PGRN, ubrzavajući oporavak ponašanja od ishemije (Tao, J et al., (2012) Brain Res 1436, 130-136; Egashira, I. et al., (2013). J Neuroinflammation 10, 105), suzbija lokomotorne deficite u modelu Parkinsonove bolesti (Van Kampen, J.M et al. (2014). PLoS One 9, e97032), ublažava patologiju u modelu amiotrifične lateralne skleroze (Laird, A.S. et al., (2010). PLoS One 5, ek13368.) i artritis (Tang, V et al., (2011). Science 332, 478-484) i sprečava deficita pamćenja u modelu Alchajmerove bolesti (Minami, S.S. et al., (2014). Nat Med 20, 1157-1164).
[0005] Sortilin se takođe direktno vezuje za pro-neurotrofine, kao što su pro-nervni faktor rasta (pro-NGF), pro-BDNF, pro-neurotrofin-3, itd., koji nose pro-domen i obično su pro-apoptotični. Takvi prekursori pro-neurotrofina se oslobađaju tokom stresa, a sortilin je uključen u regulisanje njihovog oslobađanja, kao i vezivanje za ćeliju koja prima i stimulaciju apoptoze u kombinaciji sa p75NTR (Willnow, TE et al., (2008) Nat Rev Neurosci 9: 899-909; Nykjaer, A et al., Trends Neurosci 35: 261-270; i Nykjaer, A et al., (2004) Nature 427: 843-848; Hiroko Yano et al., (2009) J Neurosci.; 29: 14790-14802.Teng U.K., et al., J. Neurosci.25:5455-5463(2005)). Sortilin se takođe direktno vezuje za p75NTR (Skeldal S et al., (2012) J Biol Chem.; 287:43798). Sortilin se takođe vezuje za neurotenzin u regionu koji se delimično preklapa sa vezivanjem progranulina (Quistgaard, EM et al., (2009) Nat Struct Mol Biol 16: 96-98; i Zheng, Y et al., PLoS One 6: e21023). Sortilin takođe stupa u interakciju sa Trk receptorima NTRK1, NTRK2 i NTRK3; i može regulisati njihov anterogradni aksonalni transport i signalizaciju (Vaegter, CB et al., (2011) Nat. Neurosci. 14:54-61). Sortilin takođe stupa u interakciju i reguliše obradu i promet amiloidnog prekursora proteina i rezultujuću proizvodnju patoloških beta amiloidnih peptida (Gustafsen C et al., (2013). J Neurosci._2;33(1):64-71).
[0006] Takođe se pokazalo da se sortilin vezuje za apolipoproteine i lipoprotein lipazu; stoga, nedostatak dovodi do smanjenog oslobađanja VLDL iz jetre i smanjenog holesterola (Willnow, TE et al., (2011) Curr Opin Lipidol 22: 79-85; Kjolb), M et al., (2010) Cell Metab 12: 213-223; Nilsson, SK et al., (2007) Biochemistry 46: 3896-3904.; Nilsson, SK et al., (2008) J Biol Chem 283: 25920-25927; i Klinger, SC et al., (2011) J Cell Sci 124: 1095-1105). Nedavno je sortilin takođe bio umešan u direktno vezivanje za APP (Gustafsen, C et al., (2013) J. Neurosc. 33:64-71) kao i za enzim za obradu APP BACE1 (Gustafsen, C et al., (2013) J. Neurosc.33:64-71; i Finan, GM et al., J Biol Chem 286: 12602-12610). Sortilin se takođe vezuje za apolipoprotein E (APOE), za A beta peptid (Carlo, AS et al., (2013) J. Neurosc, 33: 358-370), i na PCSK9 (Gustafsen et al, (2014) Cell Metab, 19: 310-318). Takođe se pokazalo da se sortilin vezuje za i reguliše ekstracelularne nivoe PCSK9, koji usmerava receptor lipoproteina niske gustine na razgradnju u lizozomima, što dovodi do povećanja nivoa LDL holesterola (Gustafsen C et al., (2014). Cell Metab.2014. februar 4;19(2):310-8).
[0007] Kada je prisutan u intracelularnim vezikulama kao što su endozomi, amino-terminalni ekstracelularni domen sortilina je usmeren ka lumenu, gde je prisutan teret iz vezikula. Karboksiterminalni intracelularni/citoplazmatski domen sortilina se, međutim, vezuje za niz adapterskih proteina, koji regulišu njegov promet sa površine i unutar intracelularnih odeljenja. To uključuje AP2 (klatrinski adapter za modulaciju endocitoze sa površine ćelije) i Retromer kompleks/AP1, koji modulira kretanje od ranih endozoma do Goldži aparata za reciklažu; i interakcija sa proteinima porodice GGA (Golgi-localizing, gama-ear containing, ADP-ribosilation factor binding) za kretanje od Goldži aparata direktno do ranih endozoma, obično za naknadnu degradaciju kroz lizozome. Dakle, sortilin se može vezati za ligande u svom luminalnom domenu, dok angažuje citoplazmatske adaptere koji određuju njegovo odredište da bi odredili intracelularne sudbine, kao što je degradacija za progranulin i druge faktore.
[0008] Kroz različite interakcije sa proteinima, kao što je progranulin, sortilin i njegovi višestruki ligandi su se pokazali uključeni u različite bolesti, poremećaje i stanja, kao što su frontotemporalna demencija, amiotrofična lateralna skleroza, amiotrofična lateralna skleroza-fenotipovi frontotemporalne demencije, Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, depresija, neuropsihijatrijski poremećaji, vaskularna demencija, konvulzije, distrofija mrežnjače, starosna makularna degeneracija, glaukom, traumatska povreda mozga, starenje, napadi, zarastanje rana, moždani udar, artritis i aterosklerozne bolesti.
[0009] Shodno tome, postoji potreba za terapijskim antitelima koja specifično vezuju sortilin proteine i blokiraju vezivanje sortilina za njegove ligande, kao što je progranulin, ili na drugi način moduliraju efikasnu koncentraciju liganada, u cilju lečenja jedne ili više bolesti, poremećaja i stanja povezana sa aktivnošću sortilina.
[0010] WO2016164637, WO2017009327 i WO2016164608 otkrivaju anti-sortilin antitela.
REZIME
[0011] Ovo otkriće je generalno usmereno na kompozicije koje uključuju antitela, npr., monoklonska, himerna, humanizovana antitela, fragmente antitela, itd., koji specifično vezuju humani sortilin, i na postupke korišćenja takvih kompozicija.
[0012] Svako pominjanje u opisu postupaka lečenja odnosi se na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove ovog pronalaska za upotrebu u postupku lečenja humanog (ili životinjskog) tela terapijom.
[0013] Pronalazak je definisan priloženim patentnim zahtevima. Svi aspekti, primeri izvođenja i primeri ovog otkrića koji ne potpadaju pod obim priloženih zahteva ne čine deo pronalaska i samo su dati u ilustrativne svrhe.
[0014] U prvom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje antitelo koje se vezuje za humani protein sortilin, pri čemu antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 56 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži sekvencu aminokiselina od SEQ ID NO: 57.
[0015] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje antitelo koje se vezuje za humani protein sortilin, pri čemu antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 56 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži sekvencu aminokiselina od SEQ ID NO: 60.
[0016] U nekim primerima izvođenja koje se mogu kombinovati sa bilo kojim od prethodnih aspekata, anti-sortilin antitelo iz predmetnog pronalaska je IgG klase, IgM klase ili IgA klase. U određenim specifičnim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je IgG klase i ima izotip IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4. U nekim primerima izvođenja ovog pronalaska, obezbeđeno je anti-sortilin antitelo izotipa IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4, pri čemu (a) antitelo je IgG1 ili IgG2 izotip i Fc region sadrži aminokiselinsku supstituciju na poziciji P331S, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numeraciji; (b) antitelo je izotip IgG1 i Fc region sadrži aminokiselinske supstitucije na pozicijama L234A, L235A i P33 IS, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numeraciji; (c) antitelo je izotip IgG1, IgG2 ili IgG4 i Fc region sadrži aminokiselinsku supstituciju na poziciji N297A, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numerisanju; ili (d) Fc region sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama S267E i L328F, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja, antitelo je izotip IgG1 i Fc region sadrži aminokiselinske supstitucije na pozicijama L234A, L235A i P33 IS, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numerisanju.
[0017] U nekim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje antitelo koje se vezuje za humani protein sortilin, pri čemu antitelo sadrži teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 137 i laki lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 142.
[0018] U nekim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje antitelo koje se vezuje za humani protein sortilin, pri čemu antitelo sadrži teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 138 i laki lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 142.
[0019] U ovom pronalasku, humani protein sortilin može da sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 81.
[0020] U nekim primerima izvođenja koje se mogu kombinovati sa bilo kojim od prethodnih izvođenja, antitelo je humano antitelo, bispecifično antitelo, monoklonsko antitelo, multivalentno antitelo, konjugovano antitelo ili himerno antitelo. U određenim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog pronalaska je monoklonsko antitelo.
[0021] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog pronalaska je bispecifično antitelo koje prepoznaje sortilin protein i drugi antigen. U određenim primerima izvođenja, bispecifična antitela ovog pronalaska prepoznaju i sortilin i antigen koji olakšava transport kroz krvno-moždanu barijeru. U nekim specifičnim rešenjima, prvi antigen je sortilin, a drugi antigen je sortilin, receptor transferina (TR), insulinski receptor (HIR), receptor faktora rasta sličan insulinu (IGFR), proteini 1 i 2 povezani sa receptorom lipoproteina niske gustine (LPR-1 i 2), receptor difterijskog toksina, CRM197, jednodomensko antitelo Ilama, TMEM 30(A), domen transdukcije proteina, TAT, Sin-B, penetratin, poli-argininski peptid, angiopep peptid, bazigin, Glut!, CD98hc ili ANG1005.
[0022] U određenim primerima izvođenja ovog pronalaska, anti-sortilin antitelo je fragment antitela koji se vezuje za humani protein sortilin. U određenim primerima izvođenja koje se mogu kombinovati sa bilo kojim od prethodnih izvođenja, fragment anti-sortilin antitela je Fab, Fab ', Fab'-SH. F(ab')2, Fv ili scFv fragment. U nekim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje izolovanu nukleinsku kiselinu koja sadrži sekvencu nukleinske kiseline koja kodira antitelo na sortilin prema patentnim zahtevima. Shodno tome, neki aspekti obezbeđuju vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira anti-sortilin antitelo, a neki aspekti obezbeđuju izolovanu ćeliju domaćina koja sadrži takav vektor. U određenim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za proizvodnju anti-sortilin antitela koje se vezuje za sortilin, koji obuhvata kultivisanje takve izolovane ćelije domaćina tako da se proizvodi anti-sortilin antitelo. U određenim primerima izvođenja, postupak dalje obuhvata rekuperaciju antitela koje proizvodi ćelija.
[0023] U drugom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži bilo koje od anti-sortilin antitela prema patentnim zahtevima i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim primerima izvođenja, ovaj pronalazak se odnosi na antitelo prema patentnim zahtevima za upotrebu kao lek. U nekim primerima izvođenja, antitelo je za upotrebu u postupku prevencije, smanjenja rizika ili lečenja bolesti, poremećaja ili povrede izabranih od frontotemporalne demencije, Alchajmerove bolesti, vaskularne demencije, konvulzija, distrofije mrežnjače, amiotrofične lateralne skleroze, traumatske povrede mozga, povreda kičmene moždine, neuropatskog bola, demencije, moždanog udara, Parkinsonove bolesti, degeneracije mrežnjače, multiple skleroze, septičkog šoka, artritisa ili osteoartritisa.
[0024] U određenim aspektima, ovde je obezbeđeno antitelo prema patentnim zahtevima za upotrebu u postupku inhibicije neuroinflamacije, ili aksonopatije koju karakteriše kratki aksonalni izraštaj i aberantno grananje.
[0025] U određenim aspektima, ovde je obezbeđeno antitelo prema patentnim zahtevima za upotrebu u postupku za podsticanje zarastanja rana.
[0026] U određenim aspektima, ovde je obezbeđeno antitelo prema patentnim zahtevima za upotrebu u postupku za prevenciju, smanjenje rizika ili lečenje artritisa ili inflamatornog poremećaja.
[0027] U nekim aspektima, ovde je dat in vitro postupak inhibicije interakcije između sortilina i progranulina, postupak koji obuhvata izlaganje ćelije koja eksprimira sortilin antitelu protiv sortilina ili farmaceutskoj kompoziciji prema ovim patentnim zahtevima. U nekim primerima izvođenja, postupak dalje obuhvata smanjenje nivoa sortilina eksprimiranog na površini ćelije. U nekim primerima izvođenja, ekstracelularni nivoi progranulina su povećani. U nekim primerima izvođenja, pojedinac ima jednu ili više mutacija u genu koji kodira progranulin. Kod nekih je osoba heterozigotna za jednu ili više mutacija gubitka funkcije u genu koji kodira progranulin. Pojedinac ima ekspanziju ponavljanja heksanukleotida c9orf72. Osoba ima ili je u opasnosti od frontotemporalne demencije, Alchajmerove bolesti ili amiotrofične lateralne skleroze.
[0028] U nekim primerima izvođenja koje se mogu kombinovati sa bilo kojim od prethodnih aspekata ili primera izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži dva ili više anti-sortilin antitela.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0029]
Sl. 1A-1C obezbeđuju farmakokinetičke i farmakodinamičke studije primata koji nisu ljudi kojima su date pojedinačne doze antitela na sortilin S-60-15.1 [N33T] LALAPS (S-60-15.1 [N33T] sa huIgG1 sa mutacijama L234A/L235A/P331S). Sl. 1A obezbeđuje nivo SORT1 u perifernim belim krvnim ćelijama kao procenat početne vrednosti u naznačeno vreme nakon tretmana (sati) sa navedenim dozama anti-sortilin antitela. Ekspresija SORT1 se smanjila sa svim testiranim dozama anti-sortilin antitela. Više doze antitela (60 mg/kg, 200 mg/kg) dovele su do ranijeg i dužeg smanjenja nivoa SORT1 u poređenju sa nižim dozama anti-sortilin antitela (5 mg/kg, 20 mg/kg). SL. 1B obezbeđuje nivoe PGRN u plazmi kao procenat početne vrednosti u naznačeno vreme nakon tretmana (sati) sa navedenim dozama anti-sortilin antitela. Nivoi PGRN su se povećavali na način koji zavisi od vremena i doze. Konkretno, nivoi PGRN u plazmi su se povećali 3- do 4- puta na Cmax, u poređenju sa osnovnim nivoima, za sve testirane doze anti-sortilin antitela i ostale su povišene tokom dužeg vremenskog perioda pri višim dozama antitela. SL. 1C daje nivoe PGRN u CSF kao procenat početne vrednosti u naznačeno vreme nakon tretmana (sati) sa navedenim dozama anti-sortilin antitela. Nivoi CSF PGRN su porasli 2- do 3- puta u odnosu na početnu vrednost kod životinja koje su primale ili 20 mg/kg, 60 mg/kg ili 200 mg/kg. Kao što je primećeno kod nivoa PGRN u plazmi (SL. 1B), nivoi PGRN CSF-a ostali su povišeni tokom vremena u grupama sa višim dozama antitela. Za Fig. 1A-1C, n = 3 životinje po dozi.
Fig. 2A-2C obezbeđuju farmakokinetičke i farmakodinamičke studije primata koji nisu ljudi kojima su primenjene ponovljene doze antitela na sortilin S-60-15.1 [N33T] LALAPS. Životinjama (2 mužjaka i 2 ženke) je davano antitelo na sortilin S-60-15.1 [N33T] LALAPS u dozi od 60 mg/kg jednom nedeljno tokom četiri nedelje. Dani u kojima je došlo do doziranja predstavljeni su vertikalnim isprekidanim linijama. SL. 2A daje srednju vrednost (+/- standardnu devijaciju) koncentracije SORT1 u perifernim belim krvnim ćelijama (VBC) kao procenat početne vrednosti u naznačenim vremenima (danima). Nivoi SORT1 u perifernim belim krvnim ćelijama ostali su smanjeni tokom trajanja studije. SL. 2B daje srednju vrednost (+/- standardnu devijaciju) koncentracije PGRN u plazmi kao procenat početne vrednosti (normalizovano) u naznačeno vreme (dani). Nivoi PGRN u plazmi su porasli na 5- do 6 puta iznad osnovne linije na pik nivoima. Smanjenje PGRN u plazmi je primećeno nakon četvrte i poslednje primene antitela na sortilin; međutim, nivoi PGRN u plazmi su ostali povišeni za 2 puta iznad početne vrednosti. SL. 2C daje srednju vrednost (+/- standardnu devijaciju) koncentracije PGRN u CSF kao procenat osnovne linije (normalizovano) u naznačeno vreme (dani). Nivoi PGRN CSF-a su povećani 3-do 4 puta iznad početne vrednosti (SL.2C).
DETALJAN OPIS
Definicije
[0030] Kako se ovde koristi, termin "sprečavanje" uključuje pružanje profilakse u pogledu pojave ili ponovnog pojavljivanja određene bolesti, poremećaja ili stanja kod pojedinca. Pojedinac može biti predisponiran, podložan određenoj bolesti, poremećaju ili stanju, ili u riziku od razvoja takve bolesti, poremećaj ili stanje, ali još uvek nije dijagnostifikovana bolest, poremećaj ili stanje.
[0031] Kako se ovde koristi, pojedinac „u riziku“ od razvijanja određene bolesti, poremećaja ili stanja može, ali ne mora imati bolest ili simptome bolesti koje se može otkriti, i može, a ne mora da pokazuje bolest ili simptome bolesti koje se može otkriti pre ovde opisanih postupaka lečenja. „U riziku“ označava da pojedinac ima jedan ili više faktora rizika, koji su merljivi parametri koji koreliraju sa razvojem određene bolesti, poremećaja ili stanja, kao što je poznato u tehnici. Osoba koja ima jedan ili više ovih faktora rizika ima veću verovatnoću da će razviti određene bolesti, poremećaja ili stanja od pojedinca bez jednog ili više ovih faktora rizika.
[0032] Kako se ovde koristi, termin "tretman" odnosi se na kliničku intervenciju osmišljenu da promeni prirodni tok bolesti kod pojedinca koji se leči tokom kliničke patologije. Poželjni efekti lečenja uključuju smanjenje stope progresije, poboljšanje ili ublažavanje patološkog stanja i remisiju ili poboljšanu prognozu određene bolesti Pojedinac se uspešno „leči“, na primer, ako se ublaži ili eliminiše jedan ili više simptoma povezanih sa određenom bolešću, poremećajem ili stanjem.
[0033] "Efektivna količina" se odnosi na najmanju efektivnu količinu, u dozama i u vremenskom periodu koji su neophodni da bi se postigao željeni terapeutski ili profilaktički rezultat. Efektivna količina se može obezbediti u jednoj ili više primena. Efektivna količina ovde može da varira u zavisnosti od faktora kao što su stanje bolesti, starost, pol i težina pojedinca, kao i sposobnost tretmana da izazove željeni odgovor kod pojedinca. Efektivna količina je takođe ona u kojoj su bilo koji toksični ili štetni efekti tretmana manji od terapijskih korisnih efekata. Za profilaktičku upotrebu, korisni ili željeni rezultati uključuju rezultate kao što su eliminisanje ili smanjenje rizika, smanjenje ozbiljnosti ili odlaganje početka bolesti, uključujući biohemijske, histološke i/ili ponašajne simptome bolesti, njene komplikacije i intermedijerne patološke fenotipove koji se pojavljuju tokom razvoja bolesti. Za terapijsku upotrebu, korisni ili željeni rezultati uključuju kliničke rezultate kao što je smanjenje jednog ili više simptoma koji proističu iz bolesti, povećanje kvaliteta života onih koji pate od bolesti, smanjenje doze drugih lekova potrebnih za lečenje bolesti, pojačavanje efekta drugog leka kao što je ciljanje, odlaganje progresije bolest i/ili produženje preživljavanja. Efektivna količina leka, jedinjenja ili farmaceutske kompozicije je količina dovoljna da se izvrši profilaktički ili terapijski tretman, bilo direktno ili indirektno. Kao što se podrazumeva u kliničkom kontekstu, efektivna količina leka, jedinjenja ili farmaceutske kompozicije može ili ne mora da se postigne u kombinaciji sa drugim lekom, jedinjenjem ili farmaceutskom kompozicijom. Prema tome, „efektivna količina“ se može razmatrati u kontekstu davanja jednog ili više terapeutskih agenasa, a može se smatrati da se jedan agens daje u efektivnoj količini ako, u kombinaciji sa jednim ili više drugih agenasa, može da se postigne ili je postignut poželjan rezultat.
[0034] Kako se ovde koristi, administracija „zajedno sa“ sa drugim jedinjenjem ili kompozicijom uključuje istovremenu primenu i/ili davanje u različito vreme. Zajedno davanje takođe obuhvata davanje kao ko-formulacije ili davanje kao odvojene kompozicije, uključujući različite učestalosti doziranja ili intervale, i korišćenje istog puta primene ili različite načine primene.
[0035] „Pojedinac“ za svrhe lečenja, prevencije ili smanjenja rizika odnosi se na bilo koju životinju klasifikovanu kao sisar, uključujući ljude, domaće i životinje sa farmi, i zoološkog vrta, sportske ili kućne ljubimce, kao što su psi, konji, zečevi, goveda, svinje, hrčci, gerbili, miševi, tvorovi, pacovi, mačke i sl. Poželjno, pojedinac je čovek.
[0036] Izrazi "sortilin" ili "sortilin polipeptid" se ovde koriste naizmenično i odnose se na bilo koji nativni sortilin iz bilo kog izvora sisara, uključujući primate (npr. ljude i makake) i glodare (npr. miševe i pacove), osim ako nije drugačije naznačeno. U nekim primerima izvođenja, termin obuhvata i sekvence divljeg tipa i sekvence varijanti koje se javljaju u prirodi, npr. splajs varijante ili alelne varijante. U nekim primerima izvođenja, termin obuhvata neprerađeni sortilin „pune dužine“, kao i bilo koji oblik sortilina koji nastaje preradom u ćeliji. U nekim primerima izvođenja, sortilin je humani sortilin. U nekim primerima izvođenja, sekvenca aminokiselina primera humanog sortilina je SEQ ID NO: 81.
[0037] Izrazi „antitelo protiv sortilina“, „antitelo koje se vezuje za sortilin“ i „antitelo koje se specifično vezuje za sortilin“ odnose se na antitelo koje je sposobno da veže sortilin sa dovoljnim afinitetom tako da je antitelo korisno kao dijagnostičko i/ili terapeutsko sredstvo za ciljanje sortilina. U jednom aspektu, stepen vezivanja antitela na sortilin za nepovezani, ne-sortilin polipeptid je manji od oko 10% vezivanja antitela za sortilin kao što je mereno, npr., radioimunotestom (RIA). U određenim primerima izvođenja, antitelo koje se vezuje za sortilin ima konstantu disocijacije (KD) od < 1 µM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0.1 nM, < 0.01 nM ili < 0.001 nM, 1-0-g.8 M ili manje, npr. od 10-8 M do 10-13 M, npr. od 10-9 M do 10-13 M). U određenim primerima izvođenja, antitelo na sortilin se vezuje za epitop sortilina koji je konzervativan kod različitih vrsta.
[0038] Termin „imunoglobulin“ (Ig) se ovde koristi naizmenično sa „antitelo“. Termin „antitelo“ ovde se koristi u najširem smislu i posebno obuhvata monoklonska antitela, poliklonska antitela, multispecifična antitela (npr., bispecifična antitela) uključujući ona formirana od najmanje dva intaktna antitela i fragmente antitela sve dok pokazuju željenu biološku aktivnost.
[0039] „Nativna antitela“ su obično heterotetramerni glikoproteini od oko 150.000 Daltona, sastavljeni od dva identična laka („L“) lanca i dva identična teška („H“) lanca. Svaki laki lanac je vezan za težak lanac jednom kovalentnom disulfidnom vezom, dok broj disulfidnih veza varira između teških lanaca različitih izotipova imunoglobulina. Svaki teški i laki lanac takođe ima pravilno raspoređene intralančane disulfidne mostove. Svaki teški lanac na jednom kraju ima varijabilni domen (VH) praćen brojnim konstantnim domenima. Svaki laki lanac ima varijabilni domen na jednom kraju (VL) i konstantni domen na njegovom drugom kraju; konstantni domen lakog lanca je poravnat sa prvim konstantnim domenom teškog lanca, a varijabilni domen lakog lanca je poravnat sa varijabilnim domenom teškog lanca. Smatra se da određeni aminokiselinski ostaci formiraju interfejs između varijabilnih domena lakog i teškog lanca.
[0040] Za strukturu i svojstva različitih klasa antitela, videti, npr., Basic and Clinical Immunology, 8th Ed., Daniel P. Stites, Abba I. Terr i Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 i Chapter 6.
[0041] Laki lanac bilo koje vrste kičmenjaka može se dodeliti jednom od dva jasno različita tipa, nazvana kapa („κ“) i lambda („λ“), na osnovu aminokiselinskoj sekvenci njihovih konstantnih domena. U zavisnosti od sekvence aminokiselina konstantnog domena njihovih teških lanaca (CH), imunoglobulini se mogu dodeliti različitim klasama ili izotipovima. Postoji pet klasa imunoglobulina: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, koji imaju teške lance označene kao alfa („α“), delta („δ“), epsilon („ε“), gama i mu ("µ"), respektivno. γ i α klase se dalje dele na podklase (izotipove) na osnovu relativno malih razlika u CH sekvenci i funkciji, npr., ljudi izražavaju sledeće podklase: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2. Strukture podjedinica i trodimenzionalne konfiguracije različitih klasa imunoglobulina su dobro poznate i generalno opisane u, npr. Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders Co., 2000).
[0042] "Varijabilni region" ili "promenljivi domen" antitela, kao što je antitelo na sortilin prema ovom pronalasku, odnosi se na amino-terminalne domene teškog ili lakog lanca antitela. Varijabilni domeni teškog i lakog lanca mogu se nazvati „VH“ i „VL“, respektivno. Ovi domeni su generalno najvarijabilniji delovi antitela (u odnosu na druga antitela iste klase) i sadrže mesta za vezivanje antigena.
[0043] Termin „varijabilni“ odnosi se na činjenicu da se određeni segmenti varijabilnih domena u velikoj meri razlikuju po sekvenci među antitelima, kao što su antitela na sortilin prema ovom pronalasku. Varijabilni domen posreduje u vezivanju antigena i definiše specifičnost određenog antitela za njegov određeni antigen. Međutim, varijabilnost nije ravnomerno raspoređena po celom rasponu varijabilnih domena. Umesto toga, koncentrisana je u tri segmenta koja se nazivaju hipervarijabilni regioni (HVRs) i u varijabilnim domenima lakog i teškog lanca. Konzervativniji delovi varijabilnih domena se nazivaju okvirni regioni (FR). Varijabilni domeni nativnih teških i lakih lanaca se sastoje od četiri FR regiona, koji u velikoj meri usvajaju konfiguraciju beta-listova, povezanih sa tri HVR, koji formiraju petlje koje povezuju, a u nekim slučajevima čine deo struktura beta lista. HVR u svakom lancu se drže zajedno u neposrednoj blizini FR regiona i, sa HVR iz drugog lanca, doprinose formiranju mesta antitela za vezivanje antigena (videti Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991.)). Konstantni domeni nisu direktno uključeni u vezivanje antitela za antigen, ali pokazuju različite efektorske funkcije, kao što je učešće antitela u ćelijskoj toksičnosti zavisnoj od antitela.
[0044] „Izolovano“ antitelo, kao što je anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku, je ono koje je identifikovano, odvojeno i/ili ekstrahovano iz komponente njegovog proizvodnog okruženja (npr., prirodno ili rekombinantno). Poželjno, izolovani polipeptid nije povezan sa svim drugim zagađujućim komponentama iz njegovog proizvodnog okruženja. Zagađujuće komponente iz njegovog proizvodnog okruženja, kao što su one koje su rezultat rekombinantnih transfektovanih ćelija, su materijali koji bi tipično ometali istraživanje, dijagnostičku ili terapeutsku upotrebu antitela, i mogu uključivati enzime, hormone i druge proteinske ili neproteinske rastvorene supstance. U poželjnim primerima izvođenja, polipeptid će biti prečišćen: (1) na više od 95% težinskih antitela kao što je određeno, na primer, Lowry postupkom, a u nekim primerima izvođenja, na više od 99% težine; (2) do stepena koji je dovoljan da se dobije najmanje 15 ostataka N-terminalne ili interne aminokiselinske sekvence korišćenjem rotirajućeg sekvenatora, ili (3) do homogenosti pomoću SDS-PAGE pod neredukujućim ili redukujućim uslovima korišćenjem Coomassie blue ili, poželjno, bojenjem srebrom. Izolovano antitelo uključuje antitelo in situ unutar rekombinantnih T ćelija pošto najmanje jedna komponenta prirodnog okruženja antitela neće biti prisutna. Obično, međutim, izolovani polipeptid ili antitelo će se pripremiti najmanje jednim korakom prečišćavanja.
[0045] Termin „monoklonsko antitelo“ kako se ovde koristi, odnosi se na antitelo, kao što je monoklonsko anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku, dobijeno iz populacije suštinski homogenih antitela, tj., pojedinačna antitela koja čine populaciju su identična osim za moguće prirodne mutacije i/ili modifikacije nakon translacije (npr. izomerizacije, amidacije, itd.) koji mogu biti prisutni u manjim količinama. Monoklonska antitela su visoko specifična, usmerena su protiv jednog antigenskog mesta. Za razliku od preparata poliklonskih antitela koji tipično uključuju različita antitela usmerena protiv različitih determinanti (epitopa), svako monoklonsko antitelo je usmereno protiv jedne determinante na antigenu. Pored svoje specifičnosti, monoklonska antitela imaju prednost po tome što se sintetišu u kulturi hibridoma, nekontaminirana drugim imunoglobulinima. Modifikator "monoklonsko" ukazuje na karakter antitela kao dobijenog iz suštinski homogene populacije antitela, i ne treba se tumačiti kao da zahteva proizvodnju antitela bilo kojim posebnim postupkom. Na primer, monoklonska antitela koja će se koristiti u skladu sa ovim pronalaskom mogu biti napravljena različitim tehnikama, uključujući, ali ne ograničavajući se na jedan ili više od sledećih postupaka, postupke imunizacije životinja uključujući, ali ne ograničavajući se na pacove, miševe, zečeve, zamorce, hrčke i/ili piliće sa jednom ili više DNK, virusnim česticama, polipetidom (polipeptidima) i/ili ćelijom (ćelijama), postupke hibridoma, postupke kloniranja B-ćelija, postupke rekombinantne DNK i tehnologije za proizvodnju humanih ili humanih antitela kod životinja koje imaju delove ili sve lokuse humanog imunoglobulina ili gene koji kodiraju sekvence humanog imunoglobulina.
[0046] Termini „antitelo pune dužine“, „intaktno antitelo“ ili „celo antitelo“ se naizmenično koriste za označavanje antitela, kao što je antitelo protiv sortilina ovog otkrića, u njegovom suštinski intaktnom obliku, za razliku od fragmenta antitela. Konkretno, cela antitela uključuju ona sa teškim i lakim lancima uključujući Fc region. Konstantni domeni mogu biti konstantni domeni izvorne sekvence (npr., konstantni domeni humane prirodne sekvence) ili njihove varijante sekvence aminokiselina. U nekim slučajevima, intaktno antitelo može imati jednu ili više efektorskih funkcija.
[0047] „Fragment antitela“ sadrži deo intaktnog antitela, poželjno vezujući antigen i/ili varijabilni region intaktnog antitela. Primeri fragmenata antitela uključuju Fab, Fab', F(ab')2i Fv fragmente; diatela; linearna antitela (videtii U.S. Patent 5.641,870, Primer 2; Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995.).)); jednolančani molekuli antitela i multispecifična antitela formirana od fragmenata antitela.
[0048] Digestija antitela papinom, kao što su anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku, proizvodi dva identična fragmenta koji se vezuju za antigen, nazvana "Fab" fragmenti i ostatak"Fc" fragment, oznaka koja odražava sposobnost lake kristalizacije. Fab fragment se sastoji od celog L lanca zajedno sa domenom varijabilnog regiona H lanca (VH), i prvi konstantni domen jednog teškog lanca (CH1). Svaki Fab fragment je monovalentan u pogledu vezivanja antigena, tj. ima jedno mesto za vezivanje antigena. Tretman antitela pepsinom daje jedan veliki F(ab')2fragment koji otprilike odgovara dva disulfidno povezana Fab fragmenta koji imaju različitu aktivnost vezivanja antigena i još uvek je sposoban da unakrsno veže antigen. Fab' fragmenti se razlikuju od Fab fragmenata po tome što imaju nekoliko dodatnih ostataka na karboksi terminusu CH1 domena uključujući jedan ili više cisteina iz zglobnog regiona antitela. Fab'-SH je ovde oznaka za Fab' u kojoj cisteinski ostatak(i) konstantnih domena nose slobodnu tiolnu grupu. F(ab')2fragmenti antitela su prvobitno proizvedeni kao parovi Fab' fragmenata koji imaju zglobne cisteine između sebe. Poznata su i druga hemijska spajanja fragmenata antitela.
[0049] Fc fragment sadrži karboksi-terminalne delove oba H lanca koji se drže zajedno disulfidima. Efektorske funkcije antitela određene su sekvencama u Fc regionu, regionu koji takođe prepoznaju Fc receptori (FcR) koji se nalaze na određenim tipovima ćelija.
[0050] „Fv“ je minimalni fragment antitela koji sadrži kompletno mesto za prepoznavanje i vezivanje antigena. Ovaj fragment se sastoji od dimera jednog domena varijabilnog regiona teškog i jednog lakog lanca u čvrstoj, nekovalentnoj vezi. Savijanjem ova dva domena nastaje šest hipervarijabilnih petlji (po 3 petlje iz H i L lanca) koje doprinose aminokiselinskim ostacima za vezivanje antigena i daju antitelu specifičnost vezivanja antigena. Međutim, čak i jedan varijabilni domen (ili polovina Fv koji sadrži samo tri HVR specifični za antigen) imaju sposobnost da prepoznaju i vezuju antigen, iako sa nižim afinitetom od celog mesta vezivanja.
[0051] „Jednolančani Fv“ takođe skraćeno kao "sFv"ili"scFv" su fragmenti antitela koji sadrže VH i VL domene antitela povezane u jedan polipeptidni lanac. Poželjno, sFv polipeptid dalje sadrži polipeptidni linker između VHi VLdomena koji omogućavaju sFv-u da formira željenu strukturu za vezivanje antigena. Za pregled sFv-a, videti Pluckthun u The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp.269-315 (1994.).
[0052] „Funkcionalni fragmenti“ antitela, kao što su anti-sortilin antitela iz ovog otkrića, obuhvataju deo intaktnog antitela, generalno uključujući vezujući antigen ili varijabilni region intaktnog antitela ili F region antitela koji zadržava ili ima modifikovanu sposobnost vezivanja FcR. Primeri fragmenata antitela uključuju linearna antitela, jednolančane molekule antitela i multispecifična antitela formirana od fragmenata antitela.
[0053] Termin "diatela" odnosi se na male fragmente antitela pripremljene konstruisanjem sFv fragmenata (videti prethodni pasus) sa kratkim linkerima (oko 5-10) ostataka) između VHi VLdomena tako da se postiže uparivanje varijabilnih domena između lanca, ali ne i unutar lanca, što dovodi do bivalentnog fragmenta, tj., fragment koji ima dva mesta za vezivanje antigena. Bispecifična diatela su heterodimeri dva „krosover“ sFv fragmenta u kojima su VHi VLdomeni dva antitela prisutni na različitim polipeptidnim lancima.
[0054] Kako se ovde koristi, „himerno antitelo“ se odnosi na antitelo (imunoglobulin), kao što je himerno anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku, u kome je deo teškog i/ili lakog lanca identičan ili homologan sa odgovarajućim sekvencama u antitelima koja potiču od određene vrste ili pripadaju određenoj klasi ili potklasi antitela, dok je ostatak (ostacii) lanca (lanaca) identičan (identični) ili homologan sa odgovarajućim sekvencama u antitelima izvedenim od druge vrste ili pripadaju drugoj klasi ili podklasi antitela, kao i na fragmente takvih antitela, sve dok pokazuju željenu biološku aktivnost. Himerna antitela od interesa ovde uključuju PRIMATIZED<®>antitela u kojima je antigen vezujući region antitela izveden iz antitela proizvedenog od, npr., imunizacija makaki majmuna antigenom od interesa. Kako se ovde koristi, „humanizovano antitelo“ se koristi kao podskup „himernih antitela“.
[0055] „Humanizovani“ oblici ne-humanih (npr., mišjih) antitela, kao što su humanizovani oblici antisortilin antitela prema ovom pronalasku, su himerna antitela koja sadrže aminokiselinske ostatke iz nehumanih HVR i aminokiselinske ostatke iz humanih FR. U određenim primerima izvođenja, humanizovano antitelo će sadržati u suštini sve od najmanje jednog, a tipično dva, varijabilna domena, u kojima svi ili suštinski svi HVR (npr., CDR) odgovaraju onima kod ne-humanog antitela, a svi ili suštinski svi FR odgovaraju onima kod humanog antitela. Humanizovano antitelo izborno može sadržati bar deo konstantnog regiona antitela koji je izveden iz humanog antitela. „Humanizovani oblik“ antitela, npr., ne-humano antitelo, odnosi se na antitelo koje je podvrgnuto humanizaciji.
[0056] „Humano antitelo“ je ono koji poseduje amino-kiselinsku sekvencu koja odgovara onoj antitela, kao što je anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku, proizvedeno od čoveka i/ili je napravljeno korišćenjem bilo koje od tehnika za pravljenje humanih antitela kako je otkriveno. Ova definicija humanog antitela posebno isključuje humanizovano antitelo koje sadrži ostatke koji se ne vezuju za humani antigen. Humana antitela se mogu proizvesti korišćenjem različitih tehnika poznatih u tehnici, uključujući biblioteke za prikaz faga i tehnologije platforme zasnovane na kvascu. Humana antitela se mogu pripremiti davanjem antigena transgenskoj životinji koja je modifikovana da proizvodi takva antitela kao odgovor na antigenski izazov, ali čiji su endogeni lokusi onemogućeni, npr., imunizovani Xenomiševi, kao i generisani pomoću tehnologije hibridoma humanih B-ćelija.
[0057] Termin „hipervarijabilni region“, „HVR“, ili „HV“, kada se ovde koristi, odnosi se na regione domena promenljivog antitela, kao što je onaj antitela na sortilin prema ovom pronalasku, koji su hipervarijabilni u sekvenci i/ili formiraju strukturno definisane petlje. Generalno, antitela sadrže šest HVR; tri u VH(H1, H2, H3) i tri u VL(L1, L2, L3). U nativnim antitelima, H3 i L3 pokazuju najveću raznolikost od šest HVR, a veruje se da posebno H3 igra jedinstvenu ulogu u davanju fine specifičnosti antitelima. Prirodna antitela kamelida koja se sastoje samo od teškog lanca su funkcionalna i stabilna u odsustvu lakog lanca.
[0058] Određeni broj HVR razgraničenja je u upotrebi i ovde je obuhvaćen. U nekim primerima izvođenja, HVR-ovi mogu biti Kabat regioni koji određuju komplementarnost (CDR) na osnovu varijabilnosti sekvence i najčešće se koriste (Kabat et al., supra). U nekim primerima izvođenja, HVR mogu biti Chothia CDR. Chothia se umesto toga odnosi na lokaciju strukturnih petlji (Chothia i Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). U nekim primerima izvođenja, HVR mogu biti AbM HVR. AbM HVR predstavljaju kompromis između Kabat CDR-a i Chothia strukturnih petlji, a koristi ih softver za modeliranje AbM antitela od Oxford Molecular. U nekim primerima izvođenja, HVR-ovi mogu biti „kontakt“ HVR-ovi. „Kontakt“ HVR se zasnivaju na analizi dostupnih složenih kristalnih struktura. Ostaci iz svakog od ovih HVR su navedeni u nastavku.
[0059] HVR-ovi mogu sadržavati „proširene HVR-ove“ kao što sledi: 24-36 ili 24-34 (L1), 46-56 ili 50-56 (L2), i 89-97 ili 89-96 (L3) u VL, i 26- 35 (H1), 50-65 ili 49-65 (poželjan primer izvođenja) (H2), i 93-102, 94-102 ili 95-102 (H3) u VH. Ostaci varijabilnog domena su numerisani prema Kabat et al., supra, za svaku od ovih proširenih HVR definicija.
[0060] „Okvirni“ ili “FR“ ostaci su oni ostaci varijabilnog domena koji nisu HVR ostaci kako je ovde definisano.
[0061] „Akceptorski humani okvir“ kako se ovde koristi je okvir koji sadrži aminokiselinsku sekvencu VLili VHokvira izveden iz okvira humanog imunoglobulina ili okvira humanog konsenzusa. Akceptorski humani okvir „izveden iz“ okvira humanog imunoglobulina ili humanog konsenzusnog okvira može sadržati istu njegovu aminokiselinsku sekvencu, ili može sadržati već postojeće promene aminokiselinske sekvence. U nekim primerima izvođenja, broj već postojećih promena aminokiselina je 10 ili manje, 9 ili manje, 8 ili manje, 7 ili manje, 6 ili manje, 5 ili manje, 4 ili manje, 3 ili manje, ili 2 ili manje. Tamo gde su već postojeće promene aminokiselina prisutne u VH, poželjno je da se te promene dešavaju samo na tri, dve ili na jednoj od pozicija 71H, 73H i 78H; na primer, aminokiselinski ostaci na tim pozicijama mogu biti 71A, 73T i/ili 78A. U jednom aspektu, humani okvir VL akceptora je identičan po sekvenci sa VLsekvencom okvira humanog imunoglobulina ili sekvencom humanog konsenzus okvira.
[0062] „Humani konsenzusni okvir" je okvir koji predstavlja najčešće prisutne aminokiselinske ostatke u selekciji humanog imunoglobulina VLili VHokvirne sekvence. Generalno, izbor humanog imunoglobulina VLili VHsekvence je iz podgrupe sekvenci varijabilnog domena. Generalno, podgrupa sekvenci je podgrupa kao u Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). Primeri uključuju da za VL, podgrupa može biti podgrupa kapa I, kapa II, kapa III ili kapa IV kao u Kabat et al., supra. Pored toga, za VH, podgrupa može biti podgrupa I, podgrupa II ili podgrupa III kao u Kabatu et al., supra.
[0063] „Modifikacija aminokiselina“ na određenoj poziciji, npr., antitela na sortilin prema ovom pronalasku, odnosi se na supstituciju ili deleciju navedenog ostatka, ili insercija najmanje jednog aminokiselinskog ostatka pored navedenog ostatka. Insercija „pored“ određenog ostatka znači inserciju unutar jednog do dva njegova ostatka. Insercija može biti N-terminalna ili C-terminalna na specificirani ostatak. Poželjna modifikacija aminokiselina ovde je supstitucija.
[0064] „Afinitetno sazrelo“ antitelo, kao što je antitelo na sortilin prema ovom pronalasku, je ono sa jednom ili više promena u jednom ili više njihovih HVR koje rezultuju poboljšanjem afiniteta antitela za antigen, u poređenju sa roditeljskim antitelom koje ne poseduje tu izmenu (izmene). U jednom aspektu, afinitetno sazrelo antitelo ima nanomolarne ili čak pikomolarne afinitete za ciljni antigen. Afinitetno sazrela antitela se proizvode postupcima poznatim u tehnici. Na primer, Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992) opisuje afinitetno sazrevanje mešanjem VH- i VL domena. Slučajna mutageneza HVR i/ili ostataka okvira je opisana, na primer u: Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. SAD 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol.
155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995.).); i Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992.).).
[0065] Kako se ovde koristi, termin „specifično prepoznaje“ ili „specifično vezuje“ odnosi se na merljive i reproducibilne interakcije kao što je privlačenje ili vezivanje između ciljnog mesta i antitela, kao što je anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku, koje je determinantno za prisustvo ciljno mesto u prisustvu heterogene populacije molekula uključujući biološke molekule. Na primer, antitelo, kao što je anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku, koje se specifično ili preferencijalno vezuje za ciljno mesto ili epitop je antitelo koje vezuje ovo ciljno mesto ili epitop sa većim afinitetom, avidnošću, lakše, i/ili sa dužim trajanjem nego što se vezuje za druga ciljna mesta ili druge epitope ciljnih mesta.Takođe se podrazumeva na osnovu čitanja ove definicije da, na primer, antitelo (ili deo) koji se specifično ili preferencijalno vezuje za prvo ciljno mesto može ili možda se ne vezuju specifično ili preferencijalno za drugo ciljno mesto. Kao takvo, „specifično vezivanje“ ili „preferencijalno vezivanje“ ne zahteva nužno (iako može uključivati) ekskluzivno vezivanje. Antitelo koje se specifično vezuje za ciljno mesto može imati konstantu asocijacije od najmanje oko 10<3>M<-1>ili 10<4>M<-1>, ponekad oko 10<5>M<-1>ili 10<6>M<-1>, u drugim slučajevima oko 10<6>M<-1>ili 10<7>M<-1>, oko 10<8>M<-1>do 10<9>M<-1>, ili oko 10<10>M<-1>do 10<11>M<-1>ili više. Različiti formati imunoeseja se mogu koristiti za odabir antitela koja su specifično imunoreaktivna sa određenim proteinom. Na primer, imunološki testovi čvrste faze ELISA se rutinski koriste za odabir monoklonskih antitela koja su specifično imunoreaktivna sa proteinom. Videti, npr., Harlow i Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York, za opis formata imunoeseja i uslova koji se mogu koristiti za određivanje specifične imunoreaktivnosti.
[0066] Kako se ovde koristi, „interakcija“ između proteina sortilina i drugog proteina obuhvata, bez ograničenja, interakciju protein-protein, fizičku interakciju, hemijsku interakciju, vezivanje, kovalentno vezivanje i jonsko vezivanje. Kako se ovde koristi, antitelo „inhibira interakciju“ između dva proteina kada antitelo remeti, redukuje ili potpuno eliminiše interakciju između dva proteina. Antitelo prema ovom pronalasku, ili njegov fragment, „inhibira interakciju“ između dva proteina kada se antitelo ili njegov fragment vezuju za jedan od dva proteina.
[0067] „Agonist“ antitelo ili „aktivirajuće“ antitelo je antitelo, kao što je agonisto anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku, koje indukuje (npr., povećava) jednu ili više aktivnosti ili funkcija antigena nakon što antitelo veže antigen.
[0068] „Blokirajuće“ antitelo, „antagonist“ antitelo, ili „inhibitorno“ antitelo je antitelo, kao što je antisortilin antitelo prema ovom pronalasku, koje inhibira ili smanjuje (npr., smanjuje) vezivanje antigena za jedan ili više liganda nakon što se antitelo veže za antigen, i/ili koje inhibira ili smanjuje (npr., smanjuje) jednu ili više aktivnosti ili funkcija antigena nakon što antitelo veže antigen. U nekim primerima izvođenja, blokirajuća antitela, antagonistička antitela ili inhibitorna antitela suštinski ili potpuno inhibiraju vezivanje antigena za jedan ili više liganda i/ili jednu ili više aktivnosti ili funkcija antigena.
[0069] „Efektorske funkcije" antitela odnose se na one biološke aktivnosti koje se mogu pripisati Fc regionu (Fc region nativne sekvence ili Fc region varijante aminokiselinske sekvence) antitela i variraju u zavisnosti od izotipa antitela.
[0070] Termin „Fc region“ Ovde se koristi za definisanje C-terminalnog regiona teškog lanca imunoglobulina, uključujući Fc regione prirodne sekvence i varijante Fc regiona. Iako granice Fc regiona teškog lanca imunoglobulina mogu da variraju, Fc region teškog lanca humanog IgG obično se definiše tako da se proteže od aminokiselinskog ostatka na poziciji Cis226, ili od Pro230, do njegovog karboksilnog kraja. C-terminalni lizin (ostatak 447 prema EU sistemu numeracije) Fc regiona može biti uklonjen, na primer, tokom proizvodnje ili prečišćavanja antitela, ili rekombinantnim inženjeringom nukleinske kiseline koja kodira teški lanac antitela. Shodno tome, kompozicija intaktnih antitela može da sadrži populacije antitela sa uklonjenim svim ostacima K447, populacije antitela bez uklonjenih ostataka K447 i populacije antitela koje imaju mešavinu antitela sa i bez ostatka K447. Pogodni Fc regioni prirodne sekvence za upotrebu u antitelima prema ovom pronalasku uključuju humani IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4.
[0071] „Fc region nativne sekvence“ sadrži aminokiselinsku sekvencu identičnu aminokiselinskoj sekvenci Fc regiona koji se nalazi u prirodi. Humani Fc regioni nativne sekvence uključuju nativnu sekvencu humanog IgG1 Fc regiona (ne-A i A alotipovi); nativna sekvenca humanog IgG2 Fc regiona; nativna sekvenca humanog IgG3 Fc regiona; i nativnu sekvencu humanog IgG4 Fc regiona kao i njihove prirodne varijante.
[0072] „Varijantni Fc regiona“ sadrži aminokiselinsku sekvencu koja se razlikuje od Fc regiona prirodne sekvence na osnovu najmanje jedne modifikacije aminokiseline, poželjno jedne ili više supstitucije(a) aminokiselina. Poželjno, varijantni Fc region ima najmanje jednu aminokiselinsku supstituciju u poređenju sa Fc regionom prirodne sekvence ili sa Fc regionom roditeljskog polipeptida, npr. od oko jedne do oko deset aminokiselinskih supstitucija, i poželjno od oko jedne do oko pet aminokiselinskih supstitucija u Fc regionu prirodne sekvence ili u Fc regionu roditeljskog polipeptida. Varijanta Fc regiona ovde će poželjno imati najmanje oko 80% homologije sa Fc regionom prirodne sekvence i/ili sa Fc regionom roditeljskog polipeptida, a najpoželjnije najmanje oko 90% homologije sa njim, poželjnije najmanje oko 95% homologije sa njim.
[0073] „Fc receptor“ ili „FcR“ opisuje receptor koji se vezuje za Fc region antitela. Poželjni FcR je nativna sekvenca humanog FcR. Dodatno, poželjni FcR je onaj koji vezuje IgG antitelo (gama receptor) i uključuje receptore FeiRI, FciRII, i podklase FcγRIII, uključujući alelne varijante i alternativno spojene oblike ovih receptora, FciRTI receptori uključuju FcγRIIA („aktivirajući receptor“) i FcγRIIB („inhibirajući receptor“), koji imaju slične sekvence aminokiselina koje se prvenstveno razlikuju u svojim citoplazmatskim domenima. Aktivirajući receptor FcγRIIA sadrži aktivacioni motiv zasnovan na imunoreceptoru tirozina ("ITAM") u svom citoplazmatskom domenu, inhibirajući receptor FcγRIIB sadrži motiv inhibicije zasnovan na imunoreceptoru tirozina ("ITIM") u svom citoplazmatskom R domenu, uključujući i one Fc koji će se identifikovani u budućnosti, obuhvaćeni su terminom „FcR“ ovde. FcR takođe mogu povećati poluživot antitela u serumu. Kako se ovde koristi, „procenat (%) identičnosti sekvence aminokiselina“ i „homologija“ u odnosu na sekvencu peptida, polipeptida ili antitela odnosi se na procenat aminokiselinskih ostataka u sekvenci kandidata koji su identični sa aminokiselinskim ostacima u specifičnoj peptidnoj ili polipeptidnoj sekvenci, nakon poravnanja sekvenci i uvođenja praznina, ako je potrebno, da bi se postigao maksimalni procenat identičnosti sekvence, a ne uzimajući u obzir bilo kakve konzervativne supstitucije kao deo identičnosti sekvence. Poravnanje u svrhu određivanja procenta identičnosti sekvence aminokiselina može se postići na različite načine koji su u okviru tehnike u ovoj oblasti, na primer, korišćenjem javno dostupnog računarskog softvera kao što je BLAST, BLAST-2, ALIGN ili MEGALIGN<™>(DNASTAR) softver. Stručnjaci u ovoj oblasti mogu da odrede odgovarajuće parametre za merenje poravnanja, uključujući sve algoritme poznate u struci koji su potrebni za postizanje maksimalnog poravnanja preko cele dužine sekvenci koje se porede.
[0074] „Izolovana“ ćelija je molekul ili ćelija koja je identifikovana i odvojena od najmanje jedne ćelije zagađivača sa kojom je obično povezana u sredini u kojoj je proizvedena. U nekim primerima izvođenja, izolovana ćelija nije povezana sa svim komponentama koje su povezane sa proizvodnim okruženjem. Izolovana ćelija je u obliku koji nije u obliku ili okruženju u kojem se nalazi u prirodi. Izolovane ćelije se razlikuju od ćelija koje prirodno postoje u tkivima, organima ili pojedincima. U nekim primerima izvođenja, izolovana ćelija je ćelija domaćina prema ovom pronalasku.
[0075] „izolovan“ molekul nukleinske kiseline koji kodira antitelo, kao što je anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku, je molekul nukleinske kiseline koji je identifikovan i odvojen od najmanje jednog molekula kontaminantne nukleinske kiseline sa kojim je obično povezan u sredini u kojoj se nalazi. Poželjno je da je izolovana nukleinska kiselina slobodna od svih komponenti povezanih sa proizvodnim okruženjem. Izolovani molekuli nukleinske kiseline koji kodiraju polipeptide i antitela ovde su u obliku koji nije u obliku ili okruženju u kojem se nalazi u prirodi. Izolovani molekuli nukleinske kiseline se stoga razlikuju od nukleinske kiseline koja kodira polipeptide i antitela koja prirodno postoje u ćelijama.
[0076] Termin „vektor“, kako se ovde koristi, ima za cilj da se odnosi na molekul nukleinske kiseline sposoban da transportuje drugu nukleinsku kiselinu za koju je vezan. Jedan tip vektora je „plazmid“, koji se odnosi na kružnu dvolančanu DNK za koju mogu biti vezani dodatni DNK segmenti. Drugi tip vektora je vektor faga. Drugi tip vektora je virusni vektor, pri čemu dodatni segmenti DNK mogu biti vezani u virusni genom. Određeni vektori su sposobni za autonomnu replikaciju u ćeliji domaćinu u koju su introdukovani (npr., bakterijski vektori koji imaju bakterijsko poreklo replikacije i epizomalni vektori sisara). Ostali vektori (npr., neepizomalni vektori sisara) mogu biti integrisani u genom ćelije domaćina nakon uvođenja u ćeliju domaćina, i na taj način se repliciraju zajedno sa genomom domaćina. Dodatno, određeni vektori su sposobni da usmeravaju ekspresiju gena za koje su operativno povezani. Takvi vektori se ovde pominju kao "rekombinantni ekspresioni vektori", ili jednostavno, „ekspresioni vektori“. Generalno, ekspresioni vektori korisni u tehnikama rekombinantne DNK su često u obliku plazmida. U ovoj specifikaciji, „plazmid“ i „vektor“ se mogu koristiti naizmenično pošto je plazmid najčešće korišćeni oblik vektora.
[0077] „Polinukleotid“, ili „nukleinska kiselina“, kako se ovde naizmenično koriste, odnose se na polimere nukleotida bilo koje dužine i uključuju DNK i RNK. Nukleotidi mogu biti dezoksiribonukleotidi, ribonukleotidi, modifikovani nukleotidi ili baze, i/ili njihovi analozi, ili bilo koji supstrat koji se može ugraditi u polimera pomoću DNK ili RNK polimeraze ili sintetičkom reakcijom.
[0078] „Ćelija domaćin“ uključuje pojedinačnu ćeliju ili ćelijsku kulturu koja može biti ili je bila primalac vektora za ugradnju polinukleotidnih inserata. Ćelije domaćini uključuju potomstvo jedne ćelije domaćina, a potomstvo ne mora nužno biti potpuno identično (u morfologiji ili u genomskom DNK komplementu) u odnosu na originalnu roditeljsku ćeliju zbog prirodne, slučajne ili namerne mutacije. Ćelija domaćin uključuje ćelije koje su transfektovane in vivo sa polinukleotidom (polinukleotidima) prema ovom pronalasku.
[0079] „Nosači“ kako se ovde koriste uključuju farmaceutski prihvatljive nosače, ekscipijente ili stabilizatore koji su netoksični za ćeliju ili sisara koji su im izloženi u korišćenim dozama i koncentracijama.
[0080] Termin „oko“ kako se ovde koristi, odnosi se na uobičajeni opseg greške za odgovarajuću vrednost koja je lako poznata stručnjaku u ovoj oblasti tehnike. Referenca na vrednost ili parametar „oko“ ovde uključuje (i opisuje) primere izvođenja koja su usmerena na tu vrednost ili parametar po sebi.
[0081] Kako se ovde koristi i u priloženim patentnim zahtevima, oblici jednine "a", "an" i "the" (na engleskom jeziku) uključuju referencu u množini osim ako kontekst jasno ne ukazuje drugačije. Na primer, referenca na "antitelo" je referenca na od jednog do više antitela, kao što su molarne količine, i uključuje njihove ekvivalente poznate stručnjacima, i tako dalje.
[0082] Podrazumeva se da aspekt i primeri izvođenja predmetnog otkrića koje su ovde opisani uključuju „koji se sastoje“, "sastoje se" i "sastoje se u suštini od" aspekata i primera izvođenja.
Pregled
[0083] Ovo otkriće se delimično odnosi na anti-sortilin antitela koja pokazuju jednu ili više poboljšanih i/ili pojačanih funkcionalnih karakteristika u odnosu na anti-sortilin antitelo, S-60, koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca kao opisano u WO2016164637. Neograničavajuća poboljšana i/ili pojačana funkcionalna svojstva uključuju, na primer, antitela sposobna da vežu sortilin sa većim afinitetom, smanjuju nivoe sortilina na površini ćelije, smanjujući pola maksimalne efektivne koncentracije (EC50) za smanjenje nivoa sortilina na površini ćelije, poboljšavajući maksimalno smanjenje nivoa sortilina na površini ćelije, povećavajući ekstracelularnu sekreciju sortilin liganda: npr., progranulin (PGRN), smanjujući polovinu maksimalne efektivne koncentracije (EC50) da blokira PGRN vezivanje za sortilin, poboljšavajući maksimalno blokiranje PGRN vezivanja za sortilin, ili bilo koju njihovu kombinaciju. Ovde se takođe razmatraju anti-sortilin antitela sa različitim varijantama Fc koja pokazuju jednu ili više poboljšanih i/ili pojačanih funkcionalnih karakteristika, uključujući smanjenje polovinu maksimalne efektivne koncentracije (EC50) za smanjenje nivoa sortilina na površini ćelije, poboljšavajući maksimalno smanjenje nivoa sortilina na površini ćelije, povećavajući ekstracelularnu sekreciju sortilin liganda: npr., Progranulin (PGRN), smanjujući polovinu maksimalne efektivne koncentracije (EC50) za blokiranje PGRN vezivanja za sortilin i poboljšanje maksimalnog blokiranja PGRN vezivanja za sortilin.
[0084] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju veće potencijale u smanjenju nivoa sortilina na površini ćelije u odnosu na anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U nekim primerima izvođenja, potencija se meri polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) za smanjenje nivoa ćelijskih nivoa SORT ! na površini ćelije.
[0085] Ovo otkriće se dalje odnosi na postupke pravljenja i upotrebe anti-sortilin antitela kao što je ovde opisano; farmaceutske kompozicije koje sadrže takva antitela; nukleinske kiseline koje kodiraju takva antitela; i ćelije domaćina koje sadrže nukleinske kiseline koje kodiraju takva antitela.
[0086] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića mogu imati jednu ili više aktivnosti koje su posledica, barem delimično, sposobnosti antitela da smanje nivoe (npr., nivoi površine ćelije) sortilina izazivanjem degradacije, nishodne regulacije, cepanja, desenzibilizacije receptora i/ili lizozomskog ciljanja sortilina. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela pokazuju jedno ili više od sledećih svojstava: a. imaju konstantu disocijacije (KD) za humani sortilin koja je niža od one kod anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60; b. smanjuju nivoe sortilina na površini ćelije (npr., smanjuju nivoe sortilina na površini ćelije na konstruisanim ćelijama koje eksprimiraju humani sortilin in vitro) sa pola maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koji je niži od anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60; c. imaju konstantu disocijacije (KD) za humani sortilin koja može da se kreće od oko 0.560 nM do oko 1.63 nM, na primer, kada se KDodređuje fluorescentno aktiviranim sortiranjem ćelija (FACS); d. imaju konstantu disocijacije (KD) za humani sortilin koja može da se kreće od oko 0.270 nM do oko 2.910 nM, na primer kada se KDodređuje se BioLayer interferometrijom; c. Smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije (npr., smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije na konstruisanim ćelijama koje eksprimiraju humani sortilin in vitro) sa pola maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koji može da se kreće od oko 72.58 pM do oko 103.6 pM, na primer kada se EC50utvrđuje in vitro sa FACS; f. smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije uz maksimalno smanjenje koje može da se kreće od oko 51.33% do 88.76%; g. povećanje ekstracelularne sekrecije PGRN veće od one anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60; h. blokira PGRN vezivanje za sortilin (npr., blokada vezivanja PGRN sortilina na konstruisane ćelije koje eksprimiraju humani sortilin in vitro) sa pola maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koji može da se kreće od oko .325 nM do oko 2.27 nM, na primer kada se EC50utvrđuje in vitro sa FACS; i/ili i. poboljša maksimalno blokiranje vezivanja PGRN za sortilin veće nego kod anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60.
[0087] Povoljno, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku smanjuju nivoe sortilina na površini ćelije (npr., do približno 3.02 puta) snažnije (npr., sa nižim EC50) u poređenju sa kontrolnim antisortilin antitelom (npr., kontrolno anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60) (Videti npr., Primer 2). U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku smanjuju vezivanje PGRN za sortilin sa nižim EC50(do približno 5.36 puta) snažnije u poređenju sa kontrolnim anti-sortilin antitelom (npr., kontrolno anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60) (Videti npr., Primer 3). Dodatno, poželjno je da antitela na sortilin prema ovom pronalasku imaju veći afinitet (npr., do približno 2.79 puta veći afinitet) za sortilin (npr., niži KDvrednost izmerena pomoću FACS ili BioLayer interferometrije) u poređenju sa kontrolnim anti-sortilin antitelom (npr., kontrolno anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60 (Videti npr., Primeri 1 i 4). Iznenađujuće, veći afinitet prema sortilinu ne mora nužno biti u korelaciji sa povećanjem sposobnosti ili moći smanjenja nivoa sortilina na površini ćelije (Videti, npr., Primeri 2 i 4) niti povećanje sposobnosti ili potencije blokiranja vezivanja PGRN za sortilin (Videti, npr., Primere 3 i 4).
[0088] Ovo otkriće se dalje odnosi na anti-sortilin antitela sa poboljšanom stabilnošću tokom proizvodnje, skladištenja i in vivo primene. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju poboljšanu stabilnost u različitim uslovima stresa (Videti, npr. Primer 4).
Sortilin proteini
[0089] U jednom aspektu, ovo otkriće obezbeđuje antitela, kao što su izolovana (npr., monoklonska) antitela, koja stupaju u interakciju sa ili se na drugi način vezuju za region, kao što je epitop, unutar proteina sortilina prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, antitela stupaju u interakciju sa ili se na drugi način vezuju za region, kao što je epitop, unutar proteina sortilina ovog otkrića sa poboljšanom/pojačanom kinetikom (npr., u odnosu na anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, antitela stupaju u interakciju sa ili se na drugi način vezuju za region, kao što je epitop, unutar humanog sortilin proteina, sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koja je niža od one kod kontrolnog antitela (npr., u odnosu na anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku vezuju se za protein sortilina i moduliraju jednu ili više aktivnosti sortilina nakon vezivanja za protein sortilina, na primer, aktivnost povezana sa ekspresijom sortilina na ćeliji. Sortilin proteini ovog pronalaska uključuju, bez ograničenja, protein sortilina sisara, humani sortilin protein, mišji sortilin protein i protein sortilin pacova. Primeri sekvenci proteina sortilina prikazani su u Tabeli 32.
[0090] Sortilin se različito naziva sortilin 1, SORT1, 100 kDa NT receptor, glikoprotein 95 (GP95), progranulinski receptor (PGRN-R) i neurotenzinski receptor 3 (NT-3 ili NTR-3). Sortilin je protein od 831 aminokiseline koji kodira membranski receptor tipa I. Poznati su različiti homolozi sortilina, uključujući bez ograničenja humani sortilin, sortilin pacova i sortilin miša. Aminokiselinska sekvenca humanog sortilina je navedena u nastavku kao SEQ ID NO: 81 (sa ključnim ostacima aminokiselina za koje se predviđa da će učestvovati u vezivanju progranulina prikazanim podebljanim i predviđeni pro-NGF vezujući region je podvučen):
[0091] Aminokiselinska sekvenca mišjeg sortilina je navedena u SEQ ID NO: 82:
[0092] Aminokiselinska sekvenca sortilina pacova je navedena u SEQ ID NO: 83:
[0093] U nekim primerima izvođenja, Sortilin je preprotein koji uključuje signalnu sekvencu. U nekim primerima izvođenja, sortilin je zreo protein. U nekim primerima izvođenja, zreli protein sortilin ne uključuje signalnu sekvencu. U nekim primerima izvođenja, zreli protein sortilin se eksprimira na ćeliji.
[0094] Sortilin proteini ovog otkrića uključuju nekoliko domena, uključujući bez ograničenja signalnu sekvencu, propeptid, luminalni domen, Vps10p domen, 10 CC domen, transmembranski domen i citoplazmatski domen. Dodatno, proteini ovog otkrića se eksprimiraju na visokim nivoima u brojnim tkivima, uključujući bez ograničenja, mozak, kičmenu moždinu, srce i skeletne mišiće, štitastu žlezdu, placentu i testise.
[0095] Shodno tome, kako se ovde koristi, protein „sortilin“ ovog otkrića uključuje, bez ograničenja, protein sortilin sisara, humani sortilin protein, protein sortilin primata, protein sortilin miša i protein sortilin pacova. Dodatno, anti-sortilin antitela ovog otkrića mogu da vežu epitop unutar jednog ili više proteina sortilina sisara, humanog sortilin proteina, sortilina primata, sortilina proteina miša i sortilina proteina pacova.
Domeni sortilin proteina
[0096] Sortilin proteini prema ovom pronalasku sadrže nekoliko domena, kao što je Vps10p domen koji sadrži motiv Asp-box, strukturu beta-propelera sa deset lopatica i hidrofobnu petlju; i 10 CC domen.
[0097] Kao što je ovde otkriveno, interakcije između sortilin proteina ovog otkrića i pro-neurotrofina ili neurotrofina su posredovane Vps10p domenom koji sadrži strukturu beta-propelera sa deset lopatica i motiv Asp-box. U određenim primerima izvođenja, sortilin proteini ovog otkrića sadrže Vps10 domen koji uključuje strukturu beta-propelera sa deset lopatica i nalazi se unutar aminokiselinskih ostataka 78-611 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81) ili aminokiselinskih ostataka sortilina sisara koji odgovaraju aminokiselinskim ostacima 78-611 SEQ ID NO: 81. U određenim primerima izvođenja, aminokiselinski ostaci 190-220 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81) ili aminokiselinski ostaci sisara koji odgovaraju sortilinu sisara aminokiselinskim ostacima 190-220 SEQ ID NO: 81 nalaze se unutar Vps10p domena.
[0098] Vps10p domeni ovog otkrića mogu uključivati motiv Asp-box: Kako se ovde koristi, motivi Asp-box imaju sledeću sekvencu: (S/T)-Ks-(D/N)-Ks-Ks-Ks-Ks-(V/F/I) (SEQ ID NO: 84), ili X-X-(S/T)-X-(D/N)-X-G-X-(T/S)-(V/F/I)-X (SEQ ID NO: 85), gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu. U humanom sortilinu, motiv Asp-box je SSDFAKNF (SEQ ID NO:86), lociran na aminokiselinskim ostacima 200-207 humanog sortilina. Shodno tome, u određenim primerima izvođenja, motiv Asp-box se nalazi na aminokiselinskim ostacima 200-207 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81) ili aminokiselinskim ostacima sortilina sisara koji odgovaraju aminokiselinskim ostacima 200-207 SEQ ID NO: 81.
[0099] Kao što je ovde otkriveno, interakcije između sortilin proteina ovog otkrića i p75 su posredovane 10CC domenom hidrofobne petlje Vps10p domena.
[0100] U određenim primerima izvođenja, sortilin proteini ovog otkrića sadrže 10CC domen koji se nalazi unutar aminokiselinskih ostataka 610-757 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81) ili aminokiselinskih ostataka sortilina sisara koji odgovaraju aminokiselinskim ostacima 610- 757 SEQ ID NO: 81. U poželjnim rešenjima, aminokiselinski ostaci 592-593, 610-660 i/ili 667-749 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81) ili aminokiselinski ostaci sisara koji odgovaraju sortilinu aminokiselinskim ostacima 592-593, 610-660, i/ili 667-749 SEQ ID NO: 81 nalaze se unutar 10CC domena sortilina.
[0101] U drugim primerima izvođenja, sortilin proteini ovog otkrića sadrže hidrofobnu petlju unutar Vps10p domena koja se nalazi unutar aminokiselinskih ostataka 130-141 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81) ili aminokiselinskih ostataka sortilina sisara koji odgovaraju aminokiselinskim ostacima 130-141 SEQ ID NO: 81.
[0102] Kao što će stručnjak iz ove oblasti razumeti, početni i krajnji ostaci domena ovog otkrića mogu da variraju u zavisnosti od korišćenog programa za kompjutersko modelovanje ili postupaka koji se koriste za određivanje domena.
Sortilin vezujući partneri
[0103] Sortilin proteini ovog otkrića mogu da stupaju u interakciju sa (npr., vezuju se za) jedan ili više proteina uključujući, bez ograničenja, protein progranulin (PGRN); neurotrofini, kao što su proneurotrofini, pro-neurotrofin-3, neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, neurotrofin-4/5, pro-nervni faktor rasta (Pro-NGF), faktor rasta nerava (NGF), pro-neurotrofični faktor iz mozga (Pro-BDNF) i neurotrofični faktor iz mozga (BDNF); neurotenzin, p75, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5), apolipoprotein E (APOE), amiloidni prekursorski protein, A beta peptid, PCSK9, p75NTR i protein povezan sa receptorom (RAP).
Progranulin (PGRN)
[0104] Pokazalo se da sortilin proteini ovog otkrića interaguju (npr., vezuju se za) direktno sa progranulinom i posreduju u razgradnji progranulina (npr., Zheng, Y et al., (2011) PLoS ONE 6(6): e21023).
[0105] Progranulin se različito naziva PGRN, proepitelin, prekursor granulin-epitelina, PC (rak prostate) ćelijski faktor rasta (PCDGF) i akrogranin. Progranulin je protein od 593 aminokiseline koji kodira 68.5 kD sekretorni glikoprotein koji ima 7.5 ponavljanja manjih granulinskih (epitelinskih) motiva, u rasponu od 6-25 kDa, koji se mogu proteolitički odvojiti od prekursora PGRN. Primeri proizvoda cepanja progranulina uključuju, bez ograničenja, granulin A/epiteline 1, granulin B, epiteline 2, granulin C, granulin D, granulin E, granulin F, granulin G i sve druge poznate peptidne proizvode izvedene iz progranulina.
[0106] Shodno tome, antitela na sortilin prema ovom pronalasku koja povećavaju nivoe progranulina, smanjuju nivoe sortilina na površini ćelije i/ili blokiraju interakciju (npr., vezivanje) između sortilina i progranulina bi bila korisno za prevenciju, smanjenje rizika ili lečenje stanja i/ili bolesti povezanih sa smanjenim nivoima ekspresije i/ili aktivnosti progranulina, ćelijske smrti (npr., smrt neuronskih ćelija), frontotemporalnom demencijom, Alchajmerovom bolešću, vaskularnom demencijom, konvulzijama, distrofijom mrežnjače, traumatskom povredom mozga, povredom kičmene moždine, dugotrajnom depresijom, aterosklerotičnim vaskularnnim bolestima, neželjenim simptomima normalnog starenja, demencijom, mešovitom demencijom, Krojcfeld-Jakob bolešću, hidrocefalusom normalnog pritiska, amiotrofičnom lateralnom sklerozom, Hantingtonovom bolešću, taupatičnom bolešću, moždanim udarom, akutnom traumom, hroničnom traumom, lupusom, akutnim i hroničnim kolitisom, Kronovom bolešću, inflamatornom bolešću creva, ulceroznim kolitisom, esencijalnim kolitisom, lupusom centralnog nervnog sistema, Behcetovom bolešću, Parkinsonovom bolešću, demencijom sa Levijevim telima, multiplom sistemskom atrofijom, degeneracijom intervertebralnog diska, Shi-Dragerovim sindromom, progresivnom supranuklearnom paralizom, kortikalnom bazalnom degeneracijom ganglija, akutnom diseminiranom encefalomijelopatijom, granulomatoznim bolestima, sarkoidozom, bolestima u starenju, starosnom makularnom degeneracijom, glaukomom, retinitis pigmentosa, degeneracijom mrežnjače, infekcijom respiratornog trakta, sepsom, infekcijom oka, sistemskom infekcijom, upalnim poremećajima, artritisom, multiplom sklerozom, metaboličkim poremećajem, gojaznošću, insulinskom rezistencijom, dijabetesom tipa 2, oštećenjem tkiva ili krvnih sudova, povredom i/ili jednim ili više neželjenih simptoma normalnog starenja. Pored toga, antitela na sortilin prema ovom pronalasku koja povećavaju nivoe progranulina, smanjuju nivoe sortilina na površini ćelije i/ili blokiraju interakciju (npr., vezivanje) između sortilina i progranulina mogu inhibirati interakciju između sortilina i progranulina, mogu indukovati jednu ili više aktivnosti progranulina, mogu smanjiti endozomalnu internalizaciju progranulina ili njegovih fragmenata i/ili mogu povećati efektivnu koncentraciju progranulina.
[0107] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku koja povećavaju nivoe progranulina, smanjuju nivoe sortilina na površini ćelije i/ili blokiraju interakciju (npr. vezivanje) između sortilina i progranulina vezuju se za jednu ili više aminokiselina unutar aminokiselinskih ostataka 131-138, 175-181, 190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207, 207-231, 207-222, 207-231, 207-222 243, 237-247, 237-260, 297-317, 314-338, 367-391, 429-443, 623-632 i/ili 740-749 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81); ili unutar aminokiselinskih ostataka sortilina sisara koji odgovara aminokiselinskim ostacima 131-138, 175-181, 190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 72-72, 207-231, 207-227, 212-221, 233-243, 237-247, 237-260, 297-317, 314-338, 367-391, 429-443, 623-ili 749 SEQ ID NO: 81. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića koja povećavaju nivoe progranulina, smanjuju nivoe sortilina na površini ćelije i/ili blokiraju interakciju (npr. vezivanje) između sortilina i progranulina mogu da vežu jednu ili više aminokiselina iz aminokiselinskih ostataka His131, Val132, Prol33, Leul34, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phel98, Arg199, Phe203, Lis205, Phe207, Thr218,. Tir222, Ser223, Ser227, Ser242, Lis243, Lis248, Lis254, Lis260, Ser305, Phe306, Gli307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Phe325, Arg326, Phe325, Arg326, Phe325, Ser32, Phe32, Ser32, Ser32, Ser32, Ser303 Ser595, i/ili Glu700 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81); ili aminokiselinskih ostataka sortilina sisara koji odgovara jednom ili više aminokiselinskih ostataka His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thrl38, Arg196, Phe198, Arg199, Ther207, Phe207, Phe207, Phe207 Tir222, Ser223, Ser227, Ser242, Lis243, Lis248, Lis254, Lis260, Ser305, Phe306, Gli307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Phe325, Arg326, Phe325, Arg326, Phe325, Arg326, Phe325, Arg326, Phe303, Ser32, Ser32, Ser32, Ser32, Ser303, Ser303 Ser595 i/ili Glu700 SEQ ID NO: 81.
Drugi sortilin ligandi
[0108] Pokazalo se da sortilin proteini prema ovom pronalasku stupaju u interakciju (npr. vezuju se) direktno sa pro-neurotrofinima (npr. pro-NGF), koji sadrže pro-domen i tipično su pro-apoptotični. Ovo vezivanje može biti posredovano preko linearnog epitopa na sortilinu koji odgovara aminokiselinskim ostacima 163-174 SEQ ID NO: 81. Takođe je pokazano da sortilin proteini iz ovog otkrića interaguju (npr. vezuju se) sa neurotenzinom unutar beta-strukture propelera sortilina, a pokazano je da je važan kontakt kod serina 283 humanog sortilina.
[0109] Takođe je pokazano da sortilin proteini iz ovog otkrića interaguju (npr. vezuju se) sa receptorom faktora rasta nerva niskog afiniteta (NGF) (p75) unutar 10CC domena sortilina ili hidrofobne petlje Vps10p domena sortilina. Kao što je ovde otkriveno, sortilin proteini ovog otkrića mogu da funkcionišu kao ko-receptor sa p75 za pro-neurotrofine, koji indukuju apoptotičku signalizaciju. Dalje je pokazano da sortilin proteini iz ovog otkrića interaguju (npr. vezuju se) sa amiloidnim prekursorskim proteinom (APP).
[0110] Pokazalo se da sortilin proteini prema ovom pronalasku deluju (npr. vezuju se) sa lipoprotein lipazom (LpL). Kao što je ovde otkriveno, sortilin proteini ovog otkrića se vezuju za i modifikuju degradaciju LpL. Pokazalo se da sortilin proteini prema ovom pronalasku deluju (npr. vezuju se) sa apolipoproteinom AV (APOA5). Kao što je ovde otkriveno, sortilin proteini ovog otkrića se vezuju za i modifikuju degradaciju APOA5.
[0111] Pokazano je da sortilin proteini prema ovom pronalasku deluju (npr. vezuju se) sa apolipoproteinom E (APOE, APOE2, APOE3, APOE4). Kao što je ovde otkriveno, sortilin proteini ovog otkrića se vezuju za i modifikuju degradaciju i transport APOE, kao i sredstva koja APOE nosi, kao što je A beta peptid. Pored toga, pokazalo se da sortilin proteini ovog otkrića interaguju (npr. vezuju se) sa proteinom pridruženog receptora (RAP). Dalje, pokazalo se da sortilin proteini ovog otkrića interaguju (npr. vezuju se) sa proprotein konvertazom subtilizin/keksin tip 9 (PCSK9) i izlučuju ga u cirkulaciju.
[0112] U nekim primerima izvođenja bilo kog od anti-sortilin antitela, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku mogu takođe inhibirati (npr., blokirati) interakciju između sortilina i jednog ili više drugih sortilin liganda iz ovog otkrića. U nekim primerima izvođenja, jedan ili više drugih liganda je jedan ili više pro-neurotrofina, neurotenzina, receptora faktora rasta nerva niskog afiniteta (NGF) (p75), amiloidnog prekursorskog proteina, lipoproteinske lipaze, apolipoproteina AV, apolipoproteina, proteina povezanog sa receptorom, i/ili proprotein konvertaza subtilizin/keksin tip 9. Takva antitela mogu biti korisna za prevenciju, smanjenje rizika ili lečenje stanja i/ili bolesti povezanih sa smanjenim nivoima ekspresije i/ili aktivnosti jednog ili više drugih sortilin liganda, ćelijskom smrću (npr. smrt neuronskih ćelija). U nekim primerima izvođenja, jedan ili više drugih liganda je jedan ili više proneurotrofina, neurotenzina, receptora faktora rasta nerva niskog afiniteta (NGF) (p75), amiloidnog prekursorskog proteina, lipoproteinske lipaze, apolipoproteina AV, apolipoproteina, proteina povezanog sa receptorom i/ili proprotein konvertaza subtilizin/keksin tip 9.
[0113] Anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku koja inhibiraju (npr. blokiraju) interakciju između sortilina i jednog ili više drugih sortilin liganada iz ovog otkrića mogu takođe sprečiti ćelijsku smrt (npr. apoptozu) indukovanu jednim ili više drugih sortilin liganda. U nekim primerima izvođenja, jedan ili više drugih liganda je jedan ili više pro-neurotrofina, neurotenzina, receptora faktora rasta nerva niskog afiniteta (NGF) (p75), amiloidnog prekursorskog proteina, lipoproteinske lipaze, apolipoproteina AV, apolipoproteina, proteina povezanog sa receptorom i/ili proprotein konvertaza subtilizin/keksin tip 9.
[0114] U nekim primerima izvođenja bilo kog od anti-sortilin antitela, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića koja inhibiraju (npr. blokiraju) interakciju između sortilina i jednog ili više sortilin liganada iz ovog otkrića vezuju jednu ili više aminokiselina unutar aminokiselinskih ostataka unutar aminokiselinskih ostataka 131-138, 175-181, 190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207-7, 12, 207 -221, 233-243, 237-247, 237-260, 297-317, 314-338, 367-391, 429-443, 623-632 i/ili 740-749 humanog sortilina: (SEK ID NO: 81); ili unutar aminokiselinskih ostataka sortilina sisara koji odgovara aminokiselinskim ostacima 131-138, 175-181, 190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 72-72, 207-231, 207-227, 212-221, 233-243, 237-247, 237-260, 297-317, 314-338, 367-391, 429-443, 623-ili 749 SEQ ID NO: 81. U nekim primerima izvođenja, jedan ili više drugih liganda je jedan ili više od pro-neurotrofina, neurotenzina, receptora faktora rasta nerva niskog afiniteta (NGF) (p75), amiloidnog prekursorskog proteina, lipoproteinske lipaze, apolipoproteina AV, apolipoprotein, proteina povezanog sa receptorom i/ili proprotein konvertaze subtilizin/keksin tip 9.
[0115] U drugim primerima izvođenja bilo kog od anti-sortilin antitela, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića koja inhibiraju (npr. blokiraju) interakciju između sortilina i jednog ili više sortilin liganda iz ovog otkrića vezuju jednu ili više aminokiselina iz aminokiselinskih ostataka His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phel98, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350,Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595, i/ili Glu700 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81); ili aminokiselinskih ostataka sortilina sisara koji odgovara jednom ili više aminokiselinskih ostataka His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phel98, Arg199, The205, The207, Phe208 Tir222, Ser223, Ser227, Ser242, Lis243, Lis248, Lis254, Lis260, Ser305, Phe306, Gli307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Phe325, Arg326, Phe325, Arg326, Phe325, Ser32, Phe32, Ser32, Ser32, Ser32, Ser303 Ser595, i/ili Glu700 SEQ ID NO: 81. U nekim primerima izvođenja, jedan ili više drugih liganda je jedan ili više pro-neurotrofina, neurotenzin, receptor faktora rasta nerva niskog afiniteta (NGF) (p75), amiloidni prekursorski protein, lipoproteinska lipaza, apolipoprotein AV, apolipoprotein, protein povezan sa receptorom i/ili proprotein konvertaza subtilizin/keksin tipa 9.
Sortilin antitela
[0116] Određeni aspekti ovog otkrića se odnose na anti-sortilin antitela koja sadrže jednu ili više poboljšanih i/ili pojačanih funkcionalnih karakteristika. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže jednu ili više poboljšanih i/ili pojačanih funkcionalnih karakteristika u odnosu na anti-sortilin antitelo, S-60, koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca kao što je opisano u WO2016164637. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju afinitet za sortilin (npr., humani sortilin) koji je veći od afiniteta kontrolnog anti-sortilin antitela (npr., kontrolno anti-sortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku smanjuju ćelijske nivoe (npr. nivoe na ćelijskoj površini) sortilina u većem stepenu i sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koja je niža od one kod kontrolnog antitela (npr., kontrolno anti-sortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku poboljšavaju maksimalno smanjenje nivoa sortilina na površini ćelije u odnosu na anti-sortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku povećavaju sekreciju ekstracelularnog progranulina (PGRN) u odnosu na anti-sortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku blokiraju vezivanje PGRN za sortilin u većem stepenu i sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koja je niža od one kontrolnog antitela (npr., kontrolno anti-sortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku poboljšavaju maksimalno blokiranje PGRN vezivanja za sortilin u odnosu na antisortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60.
[0117] Ovde se takođe razmatraju anti-sortilin antitela sa različitim Fc varijantama koja pokazuju jednu ili više poboljšanih i/ili pojačanih funkcionalnih karakteristika u odnosu na anti-sortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60, uključujući smanjenje polumaksimalne efektivne koncentracije (EC50) za smanjenje nivoa sortilina na površini ćelije, poboljšanje maksimalnog smanjenja nivoa sortilina na površini ćelije, povećanje ekstracelularne sekrecije PGRN, smanjenje polumaksimalne efektivne koncentracije (EC50) da bi se blokiralo vezivanje PGRN za sortilin, i poboljšanje maksimalnog blokiranja PGRN vezivanja za Sortilin,
[0118] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića je ljudsko antitelo, bispecifično antitelo, monoklonsko antitelo, multivalentno antitelo, konjugovano antitelo ili himerno antitelo.
[0119] U poželjnom izvođenju, anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku je monoklonsko antitelo.
Vezivanje antitela na sortilin, epitop
[0120] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku vezuju se za protein sortilin iz ovog otkrića i/ili varijante koje se javljaju u prirodi. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela prema ovom pronalasku vezuju se za protein sortilin, pri čemu je protein sortilin humani protein. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku vezuju se za protein sortilin, pri čemu je protein sortilin protein divljeg tipa. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela prema ovom pronalasku vezuju se za protein sortilin, pri čemu je protein sortilin prirodna varijanta.
[0121] U određenim poželjnim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku vezuju se specifično za humani protein sortilina.
[0122] Određeni aspekti sadašnjeg otkrića obezbeđuju anti-sortilin antitela koja vezuju diskontinualni epitop sortilina. U nekim primerima izvođenja, diskontinuirani epitop Sortilina sadrži dva ili više peptida, tri ili više peptida, četiri ili više peptida, pet ili više peptida, šest ili više peptida, sedam ili više peptida, osam ili više peptida, devet ili više peptida, ili 10 ili više peptida. U nekim primerima izvođenja, svaki od peptida sadrži pet ili više, šest ili više, sedam ili više, osam ili više, devet ili više, 10 ili više, 11 ili više, 12 ili više, 13 ili više 14 ili više, 15 ili više, 16 ili više, 17 ili više, 18 ili više, 19 ili više, 20 ili više, 21 ili više, 22 ili više, 23 ili više, 24 ili više, 25 ili više, 26 ili više, 27 ili više, 28 ili više, 29 ili više, ili 30 ili više aminokiselinskih ostataka aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 81; ili pet ili više, šest ili više, sedam ili više, osam ili više, devet ili više, 10 ili više, 11 ili više, 12 ili više, 13 ili više 14 ili više, 15 ili više, 16 ili više, 17 ili više, 18 ili više, 19 ili više, 20 ili više, 21 ili više, 22 ili više, 23 ili više, 24 ili više, 25 ili više, 26 ili više, 27 ili više, 28 ili više, 29 ili više, ili 30 ili više aminokiselinskih ostataka proteina sortilina sisara koji odgovara aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 81. Drugi aspekti ovog otkrića obezbeđuju anti-sortilin antitela koja se vezuju za konformacioni epitop sortilina.
[0123] Određeni aspekti ovog otkrića obezbeđuju anti-sortilin antitela koja se vezuju za jednu ili više aminokiselina unutar aminokiselinskih ostataka 207-231 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81); ili unutar aminokiselinskih ostataka na sortilinu sisara koji odgovaraju aminokiselinskim ostacima 207-231 SEQ ID NO: 81. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela se vezuju za jednu ili više aminokiselina aminokiselinskih ostataka Thr218, Ser2 Tir2322, i/ili Ser227 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81); ili aminokiselinskih ostataka na sortilinu sisara koji odgovaraju aminokiselinskim ostacima Thr218, Tir222, Ser223 i/ili Ser227 SEQ ID NO: 81. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela se vezuju za jednu ili više aminokiselina aminokiselina ostaci F105, L108, R109, G110, 1537, F569, E590, F592, L593, S595 i/ili V597 humanog sortilina (SEQ ID NO: 81); ili aminokiselinskih ostataka na sortilin sisara koji odgovaraju aminokiselinskim ostacima F105, L108, R109, G110, I537, F569, E590, F592, L593, S595 i/ili V597 iz SEQ ID NO: 81. Drugi aspekti predmetnog otkrića obezbeđuju antitela na sortilin koja se vezuju za epitop koji ima aminokiselinske ostatke (S/T)-X-(D/N)-X-X-X-X-(V/F/I), gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu (SEQ ID NO: 84).
[0124] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića vezuju se za protein sortilin iz ovog otkrića eksprimiran na površini ćelije, a gola antitela inhibiraju interakciju (npr. vezivanje) između proteina sortilina i proteina odabranog od progranulina (PGRN ), pro-neurotrofina, neurotrofina, pro-neurotrofina-3, neurotrofina-3, pro-neurotrofina-4/5, neurotrofina-4/5, pro-nervnog faktora rasta (pro-NGF), faktora rasta nerava (NGF ), neurotrofičnog faktora iz mozga (pro-BDNF), neurotrofičnog faktora iz mozga (BDNF), neurotenzina, p75, sortilin propeptida (Sort-pro), amiloidnog prekursorskog proteina (APP), A beta peptida, lipoproteinske lipaze (LpL), apolipoproteina AV (APOA5), apolipoproteina E (APOE), PCSK9 i proteina povezanog sa receptorom (RAP). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku vezuju se za protein sortilin iz ovog otkrića eksprimiran na površini ćelije i gola antitela inhibiraju interakciju (npr. vezivanje) između proteina sortilina i PGRN.
[0125] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića koja se vezuju za protein sortilin iz ovog otkrića inhibiraju interakciju (npr., vezivanje) između proteina sortilina i progranulina, pro-neurotrofina, neurotrofina, pro-neurotrofina-3, neurotrofina-3, pro-neurotrofina-4/5, neurotrofina-4/5, pro-nervnog faktora rasta (pro-NGF), faktora rasta nerava (NGF), pro neurotrofičnog faktora iz mozga (pro-BDNF), neurotrofičnog faktora iz mozga (BDNF), neurotenzina, p75, sortilin propeptida (Sort-pro), amiloidnog prekursorskog proteina (APP ), beta peptida A, lipoprotein lipaze (LpL), apolipoproteina AV (APOA5), apolipoproteina E (APOE), PCSK9 i proteina povezanog sa receptorom (RAP) smanjenjem efektivnih nivoa sortilina koji je dostupan za interakciju sa ovim proteinima ili na površini ćelije ili unutar ćelije.
[0126] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića koja se vezuju za protein sortilin iz ovog otkrića inhibiraju interakciju (npr., vezivanje) između proteina sortilina i progranulina, pro-neurotrofina, neurotrofina, pro-neurotrofina-3, neurotrofina-3, pro-neurotrofina-4/5, neurotrofina-4/5, pro-nervnog faktora rasta (pro -NGF), faktora rasta nerava (NGF), pro neurotrofičnog faktora iz mozga (pro-BDNF), neurotrofičnog faktora iz mozga (BDNF), neurotenzina, p75, sortilin propeptida (Sort-pro), amiloidnog prekursorskog proteina (APP ), beta peptida A, lipoprotein lipaze (LpL), apolipoproteina AV (APOA5), apolipoproteina E (APOE), PCSK9 i proteina povezanog sa receptorom (RAP) izazivanjem degradacije Sortilina.
[0127] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku vezuju se za humani sortilin, ili njegov homolog, uključujući bez ograničenja, protein sortilin sisara ili protein sortilin ne-humanog primata. U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku specifično se vezuju za humani sortilin. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku vezuju se za humani sortilin i nisu unakrsno reaktivna sa sortilin ortolozima ili homolozima drugih vrsta.
Kompetitivno vezivanje anti-sortilin antitela
[0128] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku kompetitivno inhibiraju vezivanje najmanje jednog drugog anti-sortilin antitela odabranog od bilo kog od antitela navedenih u Tabelama 1-29. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića kompetitivno inhibiraju vezivanje najmanje jednog antitela izabranog od: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60- 16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; i bilo koje njihove kombinacije.
[0129] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića je u kompeticiji sa jednim ili više anti-sortilin antitela odabranih od: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60 -4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-1 1, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S- 60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F] ], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60 -16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 i bilo koje njihove kombinacije, za vezivanje za sortilin kada anti-sortilin antitelo smanjuje vezivanje jednog ili više antitela odabranih od: S-60, S-60 -1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60- 9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60- 16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; i bilo koje njihove kombinacije za sortilin u količini koja se kreće od oko 50% do 100%, u poređenju sa vezivanjem za sortilin u odsustvu anti-sortilin antitela.
[0130] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića je u kompeticiji sa jednim ili više anti-sortilin antitela odabranih od: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60 -4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60- 16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, i bilo koja njihova kombinacija, za vezivanje za sortilin kada anti-sortilin antitelo smanjuje vezivanje jednog ili više antitela odabranih od: S-60, S- 60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60 -9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60- 16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; i bilo koja njihova kombinacija sa sortilinom za najmanje 50%, najmanje 55%, za najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 95% ili 100%, u poređenju sa vezivanjem za sortilin u odsustvu anti-sortilin antitela.
[0131] U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin ovog otkrića koje smanjuje vezivanje jednog ili više antitela izabranih od: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60 -4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60- 16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, i bilo koja njihova kombinacija, na sortilin za 100% ukazuje da anti-sortilin antitelo suštinski potpuno blokira vezivanje za sortilin jednog ili više antitela odabranih od S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60- 16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, i bilo koja njihova kombinacija. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin i jedno ili više antitela izabranih između S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-1 1, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [ N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F] ], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, i bilo koja njihova kombinacija, prisutni su u količini koja odgovara 10:1 odnosu, 9:1 odnosu, 8:1 odnosu, 7:1 odnosu, 6:1 odnosu, 5:1 odnosu, 4:1 odnosu, 3:1 odnosu, 2:1 odnosu, 1:1 odnosu, 0.75:1 odnosu, 0.5:1 odnosu, 0.25:1 odnosu, 0.1:1 odnosu, 0.075:1 odnosu, 0.050:1 odnosu, 0.025:1 odnosu, 0.01:1 odnosu, 0.0075: odnosu, 0.0050:1 odnosu, 0.0025:1 odnosu, 0.001: odnosu, 0.00075:1 odnosu, 0.00050:1 odnosu, 0.00025:1 odnosu, 0.0001: odnosu, 1:10 odnosu, 1:9 odnosu, 1:8 odnosu, 1:7 odnosu, 1:6 odnosu, 1:5 odnosu, 1:4 odnosu, 1:3 odnosu, 1:2 odnosu, 1:0.75 odnosu, 1:0.5 odnosu, 1:0.25 odnosu, 1:0.1 odnosu, 1:0.075 odnosu, 1:0.050 odnosu, 1:0.025 odnosu, 1:0.01 odnosu, 1:0.0075 odnosu, 1:0.0050 odnosu, 1:0.0025 odnosu, 1:0.001 odnosu, 1:0.00075 odnosu, 1 :0.00050 odnosu, 1:0.00025 odnosu, ili 1:0.0001 odnosu anti-sortilin antitela na jedno ili više sortilin antitela na jedno ili više antitela odabranih od S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S -60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 i bilo koja njihova kombinacija. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitelo je prisutno u višku u količini koja se kreće od oko 1.5 puta do 100 puta, ili veća od 100 puta u poređenju sa količinom jednog ili više antitela odabranih od S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S -60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60- 16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 i bilo koja njihova kombinacija. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je prisutno u količini koja je oko 2 puta, 3 puta, 4 puta, 5 puta, 6 puta, 7 puta, 8 puta, 9 puta, 10 puta, 15 puta, 20 puta, 25 puta, 30 puta, 35 puta, 40 puta, 45 puta, 50 puta, 55 puta, 60 puta, 65 puta, 70 puta, 75-puta, 80-puta, 85-puta, 90-puta, 95-puta ili 100-puta veća u poređenju sa količinom jednog ili više antitela odabranih od S-60, S-60-1, S -60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60- 16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 i bilo koja njihova kombinacija.
[0132] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku vezuju se za epitop humanog sortilina koji je isti kao ili se preklapa sa epitopom sortilina vezanim za najmanje jedno antitelo izabrano iz bilo kog od antitela navedenih u tabelama 1-29. U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku vezuju se za epitop humanog sortilina koji je isti kao ili se preklapa sa epitopom sortilina vezanim za najmanje jedno antitelo izabrano od: S-60, S-60-1, S -60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F ], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60 -16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; i bilo koja njihova kombinacija. U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku vezuju u suštini isti epitop sortilina vezan za najmanje jedno antitelo odabrano od bilo kog od antitela navedenih u Tabelama 1-29. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela ovog otkrića vezuju u suštini isti sortilin epitop vezan za najmanje jedno antitelo odabrano od: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S -60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S-60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.1 1 [N33V], S-60-15.12 [N33F ], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; i bilo koja njihova kombinacija. Dati su detaljni primeri postupaka za mapiranje epitopa za koji se antitelo vezuje u Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", Methods in Molecular Biology vol.66 (Humana Press, Totowa, NJ).
[0133] Bilo koji odgovarajući kompetitivni test ili test vezivanja za sortilin poznat u tehnici, kao što su BIAcore analiza, ELISA testovi ili protočna citometrija, može se koristiti da bi se utvrdilo da li se antisortilin antitelo takmiči sa jednim ili više antitela odabranih od: S-60, S -60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 i S- 60-9 (opisano u WO2016164637); ili S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T ], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60 -15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], $-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60- 16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; i bilo koja njihova kombinacija za vezivanje za sortilin. U prieru kompetitivnog testa, imobilisani sortilin ili ćelije koje eksprimiraju sortilin na površini ćelije se inkubiraju u rastvoru koji sadrži prvo obeleženo antitelo koje se vezuje za sortilin (npr. humani ili ne-humani primat) i drugo neobeleženo antitelo koje se testira u odnosu na njegovu sposobnost da je u kompeticiji sa prvim antitelom za vezivanje za sortilin. Drugo antitelo može biti prisutno u supernatantu hibridoma. Kao kontrola, imobilisani sortilin ili ćelije koje eksprimiraju sortilin se inkubiraju u rastvoru koji sadrži prvo obeleženo antitelo, ali ne i drugo neobeleženo antitelo. Posle inkubacije u uslovima koji dozvoljavaju vezivanje prvog antitela za sortilin, uklanja se višak nevezanog antitela i meri se količina obeleživača povezana sa imobilisanim sortilinom ili ćelijama koje eksprimiraju sortilin. Ako je količina obeleživača povezanog sa imobilisanim sortilinom ili ćelijama koje eksprimiraju sortilin značajno smanjena u test uzorku u odnosu na kontrolni uzorak, onda to ukazuje da se drugo antitelo takmiči sa prvim antitelom za vezivanje za sortilin. Videti, Harlow i Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, ch. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
[0134] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića je u kompeticiji sa antitelom koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca antitela izabranog iz grupe koju čine S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19, S-60-24, i bilo koja njihova kombinacija za vezivanje za sortilin.
[0135] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića vezuje suštinski isti epitop sortilina kao antitelo koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca antitela izabranog iz grupe koju čine S-60-10, S -60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19 i S-60-24.
[0136] Dodatna anti-sortilin antitela, npr., antitela koja se specifično vezuju za protein sortilin prema predmetnom pronalasku, mogu se identifikovati, pregledati i/ili okarakterisati po njihovim fizičkim/hemijskim osobinama i/ili biološkim aktivnostima različitim testovima poznatim u tehnici.
Varijabilni regioni teškog i lakog lanca antitela protiv sortilina
A. HVR teškog lanca
[0137] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića uključuju varijabilni region teškog lanca koji sadrži jedan ili više (npr., jedan ili više, dva ili više, ili sva tri) HVR izabrana između HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 (kao što je prikazano na Tabelama 14-16). U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 (kao što je prikazano na Tabelama 14-16).
[0138] U nekim primerima izvođenja, HVR-H1 sadrži sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1). U nekim primerima izvođenja, HVR-H2 sadrži sekvencu prema formuli I: TIYHSGSTYYNPSLX1S (SEQ ID NO: 4), pri čemu X1je K ili E. U nekim primerima izvođenja, HVR-H2 sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 2-3. U nekim primerima izvođenja, HVR-H3 sadrži sekvencu u skladu sa Formulom II: ARQGSIX1QGYYGMDV (SEQ ID NO: 7). U nekim primerima izvođenja, HVR-H3 sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 5-6.
[0139] U nekim primerima izvođenja, HVR-H1 sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 1. U nekim primerima izvođenja, HVR-H1 sadrži aminokiselinsku sekvencu koja sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 1), ali zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, do 1, do 2, do 3, do 4 ili do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci HVR-H1 SEQ ID NO: 1. U nekim primerima izvođenja, HVR-H2 sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od SEQ ID NO: 2-3. U nekim primerima izvođenja, HVR-H2 sadrži aminokiselinsku sekvencu koja sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na sekvencu aminokiselina izabranu od SEQ ID NO: 2-3), ali zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, do 1, do 2, do 3, do 4 ili do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u HVR-H2 aminokiselinskoj sekvenci izabranoj od SEQ ID NO: 2 -3. U nekim primerima izvođenja, HVR-H3 sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom odabranom od SEQ ID NO: 5-6. U nekim primerima izvođenja, HVR-H3 sadrži aminokiselinsku sekvencu koja sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 5-6), ali zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, do 1, do 2, do 3, do 4 ili do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u HVR-H3 aminokiselinskoj sekvenci izabranoj od SEQ ID NO: 5 -6.
[0140] U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži HVR-H1 koji sadrži sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koji sadrži sekvencu prema formuli I, i HVR-H3 koji sadrži sekvencu prema formuli II.
[0141] U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži HVR-H1 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 1, HVR-H2 koja sadrži sekvencu odabranu od SEQ ID NO: 2-3, i HVR-H3 koja sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 5-6.
[0142] U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca obuhvata HVR-H1 HVR-H2 i HVR-H3 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S- 60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R ], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60 -15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 ili bilo koju njihovu kombinaciju (kao što je prikazano na Tabelama 14-16).
[0143] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića uključuju varijabilni region teškog lanca, pri čemu varijabilni region teškog lanca sadrži jedan ili više od: (a) HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 85%, na najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, na najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-H1 antitela S-60-10, S-60-11, S-60- 12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [ N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S- 60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V] ], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24; (b) HVR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-H2 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S- 60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F] ], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60 -16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24; i (c) HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, na najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa HVR-H3 aminokiselinom sekvenca antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S -60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15, 11 [N33V], S-60- 15.12 [N33F], S-60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L] S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24.
[0144] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže HVR-H1 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), i HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6).
B. HVR lakih lanaca
[0145] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region lakog lanca koji sadrži jedan ili više (npr., jedan ili više, dva ili više ili sva tri) HVR izabranih između HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 (kao što je prikazano na Tabelama 17-19). U nekim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 (kao što je prikazano na Tabelama 17-19).
[0146] U nekim primerima izvođenja, HVR-L1 sadrži sekvencu u skladu sa Formulom III: RSSQX1LLX2SX3GYNYLD (SEQ ID NO: 28), pri čemu X1je S ili G, X2je R ili H, i X3je N, T, S, G, R, D, H, K, Q, Y, E, V, F, I, V, A, M ili L. U nekim primerima izvođenja, HVR-L1 sadrži odabranu sekvencu od SEQ ID NO: 8-27. U nekim primerima izvođenja, HVR-L1 sadrži sekvencu RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO:8). RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO:9), RSSQSLLRSSGYNYLD (SEQ ID NO:10), RSSQSLLRSGGYNYLD (SEQ ID NO:11), RSSQSLLRSRG YNYLD (SEQ ID NO: 12), RSSQSLLRSDGYNYLD (SEQ ID NO: 13), RSSQSLLRSHGYNYLD (SEQ ID NO: 14), RSSQSLLRSKGYNYLD (SEQ ID NO: 15), RSSQSLLRSQGYNYLD (SEQ ID NO:16), RSSQSLLRSYGYNYLD (SEQ ID NO:17), RSSQSEPLLRSEGYNYLD (SEQ ID NO:18), RSSQSLLRSWGYNYLD (SEQ ID NO:19), RSSQSLLRSEGYNYLD (SEQ ID NO:20), RSSQSL LRSIGYNYLD (SEQ ID NO:21), RSSQSLLRSVGYNYLD (SEQ ID NO:22), RSSQSLLRSAG YNYLD (SEQ ID NO:23), RSSQSLLRSMGYNYLD (SEQ ID NO:24), RSSQSLLRSEGYNYLD (SEQ ID NO:25), RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:26), ili RSSQGLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO:27). U jednom specifičnom izvođenju, HVR-L1 sadrži sekvencu RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO:8). U drugom specifičnom izvođenju, HVR-L1 sadrži sekvencu RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO:9) (kao što je prikazano na Tabeli 19).
[0147] U nekim primerima izvođenja, HVR-L2 sadrži sekvencu u skladu sa Formulom IV: LGSNRX1S (SEQ ID NO: 31), gde je X1 A ili V. U nekim primerima izvođenja, HVR-L2 sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 29 -30.
[0148] U nekim primerima izvođenja, HVR-L3 sadrži sekvencu prema formuli V: MQQQEX1PLT (SEQ ID NO: 34), gde je X1 A ili T. U nekim primerima izvođenja, HVR-L3 sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 32 -33.
[0149] U nekim primerima izvođenja, HVR-L1 sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od SEQ ID NO: 8-27. U nekim primerima izvođenja, HVR-L1 sadrži aminokiselinsku sekvencu koja sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na sekvencu aminokiselina izabranu između SEQ ID NO: 8-27), ali zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, do 1, do 2, do 3, do 4 ili do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u HVR-L1 aminokiselinskoj sekvenci izabranoj od SEQ ID NO: 8 -27. U nekim primerima izvođenja, HVR-L2 sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom odabranom od SEQ ID NO: 29-30. U nekim primerima izvođenja, HVR-L2 sadrži aminokiselinsku sekvencu koja sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na sekvencu aminokiselina izabranu između SEQ ID NO: 29-30), ali zadržava sposobnost vezivanja za sortilin . U određenim primerima izvođenja, do 1, do 2, do 3, do 4 ili do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u HVR-L2 aminokiselinskoj sekvenci izabranoj od SEQ ID NO: 29 -30. U nekim primerima izvođenja, HVR-L3 sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom odabranom od SEQ ID NO: 32-33. U nekim primerima izvođenja, HVR-L3 sadrži aminokiselinsku sekvencu koja sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 32-33), ali zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, do 1, do 2, do 3, do 4 ili do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u HVR-L3 aminokiselinskoj sekvenci izabranoj od SEQ ID NO: 32 -33.
[0150] U nekim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca sadrži HVR-L1 koji sadrži sekvencu prema formuli III, HVR-L2 koji sadrži sekvencu prema formuli IV, i HVR-L3 koji sadrži sekvencu prema formuli V. U nekim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca sadrži HVR-L1 koji sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 8-27, HVR-L2 koja sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 29-30, i HVR-L3 koja sadrži sekvencu koja je izabrana od SEQ ID NO: 32-33.
[0151] U nekim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S -60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [ N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S- 60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33V] ], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 ili bilo koja njihova kombinacija (kao što je prikazano u tabelama 17-19).
[0152] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni region lakog lanca, pri čemu varijabilni region lakog lanca sadrži jedan ili više od: (a) HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 85%, na najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, na najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-L1 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G ], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60 -15.9 [N33IJ, S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24; (b) HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-L2 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S- 60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F] ], S-60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60 -16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24; i (c) HVR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, na najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa HVR-L3 aminokiselinskom sekvencom antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S -60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [ N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S- 60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24.
[0153] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže HVR-L1 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
[0154] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže HVR-Ll koja sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
C. HVR teškog lanca i HVR lakog lanca
[0155] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića uključuju varijabilni region teškog lanca koji sadrži jedan ili više (npr., jedan ili više, dva ili više ili sva tri) HVR izabranih između HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 (kao što je prikazano na Tabelama 14-16), i varijabilni region lakog lanca koji sadrži jedan ili više (npr., jedan ili više, dva ili više, ili sva tri) HVR odabranih između HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 (kao što je prikazano na Tabelama 17-19). U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 (kao što je prikazano na Tabelama 14-16), a varijabilni region lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 (kao što je prikazano u tabelama Tabelama 17-19).
[0156] U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži HVR-111 koji sadrži sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koji sadrži sekvencu prema formuli I, i HVR-H3 koji sadrži sekvencu prema formuli II, a varijabilni region lakog lanca sadrži HVR-L1 koji sadrži sekvencu prema formuli III, HVR-L2 koji sadrži sekvencu prema formuli IV, i HVR-L3 koji sadrži sekvencu prema formuli V. U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži HVR-H1 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 1, HVR-H2 koja sadrži sekvencu odabranu od SEQ ID NO: 2-3, i HVR-H3 koja sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO : 5-6, a varijabilni region lakog lanca sadrži HVR-L1 koji sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 8-27, HVR-L2 koja sadrži sekvencu odabranu od SEQ ID NO: 29-30, i HVR- L3 koji sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 32-33.
[0157] U nekim aspektima, varijabilni region teškog lanca obuhvata HVR-H1 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 1, HVR-H2 koja sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 2-3, i HVR-H3 koja sadrži sekvencu koja je izabrana od SEQ ID NO: 5-6, a varijabilni region lakog lanca sadrži HVR-L1 koji sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 8-27, HVR-L2 koja sadrži sekvencu odabranu od SEQ ID NO: 29-30, i HVR-L3 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 32.
[0158] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 antitela S-60-10, S-60-11, S-60- 12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [ N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S- 60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V] ], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 ili bilo koja njihova kombinacija (kao što je prikazano na Tabelama 14-16); i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60- 14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S -60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 ili bilo koja njihova kombinacija (kao što je prikazano na Tabelama 17-19).
[0159] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1, HVR-L2 i HVR -L3, pri čemu antitelo sadrži HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 antitela S-60-10, S-60-11, S-60- 12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [ N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S- 60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V] ], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24 (kao što je prikazano na Tabelama 14-19).
[0160] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca, pri čemu varijabilni region teškog lanca sadrži jedan ili više od (a) HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-H1 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S -60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24; (b) HVR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%), najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-H2 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60- 13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60 -15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60- 15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24; i (c) HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-H3 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60- 13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60 -15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60- 15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24; i gde varijabilni region lakog lanca sadrži jedno ili više od: (a) HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%), najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-L1 antitela S-60-10, S-60 -11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt.)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60- 15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24; (b) HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-L2 antitela S-60-10, S-60-1 1, S-60-12, S-60- 13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-6015.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60 -15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D), S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60- 15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24; i (c) HVR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom HVR-L3 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60- 13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60 -15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60- 15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24,
[0161] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID BR: 2), HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinska sekvenca MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
[0162] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID BR: 2), HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRVS (SEQ ID NO: 30), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinska sekvenca MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
[0163] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLES (SEQ ID BR: 3), HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinska sekvenca MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
[0164] U nekim aspektima, anti-sortilin antitelo ovog otkrića sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID BR: 2), HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinska sekvenca MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
[0165] U nekim aspektima, anti-sortilin antitelo ovog otkrića sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID BR: 2), HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinska sekvenca MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
[0166] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID BR: 2), HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinska sekvenca MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
[0167] U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-N1. koji sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 26), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinska sekvenca MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
[0168] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID BR: 2), HVR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); i varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQGLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 27), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinska sekvenca MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
D. Varijabilni region teškog lanca
[0169] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku uključuju varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 54-56. U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od SEQ ID NO: 54-56. U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži sekvencu aminokiselina koja sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na sekvencu aminokiselina izabranu od SEQ ID NO: 54-56), ali zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, do 1, do 2, do 3, do 4, do 5, do 6, do 7, do 8, do 9 ili do 10 aminokiselina je zamenjeno, ubačeno i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog regiona teškog lanca izabrana od SEQ ID NO: 54-56.
[0170] U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 56.
[0171] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića uključuju varijabilni region teškog lanca antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S- 60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E ], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60 -15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24 (kao što je prikazano na Tabeli 30).
[0172] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića uključuju varijabilni region teškog lanca koji sadrži HVR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2 koja sadrži aminokiselinsku sekvencu TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), i HVRH3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6).
E. Varijabilni region lakog lanca
[0173] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića uključuju varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 57-80. U nekim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom odabranom od SEQ ID NO: 57-80. U nekim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca sadrži sekvencu aminokiselina koja sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 57-80), ali zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, do 1, do 2, do 3, do 4, do 5, do 6, do 7, do 8, do 9 ili do 10 aminokiselina je zamenjeno, ubačeno i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog regiona lakog lanca izabrana od SEQ ID NO: 57-80.
[0174] U nekim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 57. U nekim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca uključuje sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 60.
[0175] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region lakog lanca antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S -60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33KJ, S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E ], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60 -15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24 (kao što je prikazano na Tabeli 31).
[0176] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića uključuju varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
[0177] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića uključuju varijabilni region lakog lanca koji sadrži HVR-L 1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu LGSNRAS (SEQ ID BR: 29), i HVR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
F. Varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca
[0178] U nekim aspektima, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku uključuje varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO: 54-56; i/ili varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO: 57-80. U nekim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od SEQ ID NO: 54-56, i varijabilnog regiona lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje oko 90%, najmanje oko 91%, najmanje oko 92%, najmanje oko 93%, najmanje oko 94%, najmanje oko 95%, najmanje oko 96%, najmanje oko 97%, najmanje oko 98%, najmanje oko 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od SEQ ID NO: 57-80. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitelo ovog otkrića uključuje varijabilni region teškog lanca koji sadrži sekvencu aminokiselina koja sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 54-56), i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na aminokiselinsku sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 57-80), ali zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, do 1, do 2, do 3, do 4, do 5, do 6, do 7, do 8, do 9 ili do 10 aminokiselina je zamenjeno, ubačeno i/ili deletirano u varijabilnom regionu teškog lanca aminokiselinske sekvence odabrane od SEQ ID NO: 54-56; i do 1, do 2, do 3, do 4, do 5, do 6, do 7, do 8, do 9 ili do 10 aminokiselina je zamenjeno, ubačeno i/ ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog regiona lakog lanca izabranog od SEQ ID NO: 57-80.
[0179] U nekim aspektima, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku uključuje varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO: 54-56; i/ili varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO: 57-58, 60-78 i 80.
[0180] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića se vezuje za protein sortilin, pri čemu antitelo uključuje varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 54, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinu sekvenca SEQ ID NO: 57; varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 54, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 58; varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 54, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 59; varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 55, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 57; varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 55, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 58; varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 56, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 57; varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 56, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 77; varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 56, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 78; varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 54, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 79; ili varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 56, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 80.
[0181] U jednom aspektu, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku uključuje varijabilni region teškog lanca koji ima sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 56, i varijabilni region lakog lanca koji ima sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 57.
[0182] U jednom aspektu, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku uključuje varijabilni region teškog lanca koji ima sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 56, i varijabilni region lakog lanca koji ima sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 60.
[0183] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S- 60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E ], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60 -15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24 (kao što je prikazano na Tabeli 30), i varijabilni region lakog lanca antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S -60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [ N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24 (kao što je prikazano na Tabeli 31).
[0184] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 56, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu između SEQ ID NO: 56 i 60 U nekim primerima izvođenja, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca od S-60-15 [N33 (wt)] (kao što je prikazano na Tabeli 30), i varijabilni region lakog lanca antitela S-60-15 [N33 (wt)] (kao što je prikazano na Tabeli 31). U nekim primerima izvođenja, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca S-60-15.1 [N33T] (kao što je prikazano na Tabela 30), i varijabilni region lakog lanca antitela S-60-15.1 [N33T] (kao što je prikazano na Tabela 31).
Primeri antitela na sortilin
[0185] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca antitela odabranog od S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G ], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60 -15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo koje sadrži teški lanac i laki lanac antitela odabranog od S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60 -13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N335], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I ], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60 -15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24.
(1) S-60-10
[0186] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-10 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 54; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-10 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 57. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-10 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 54, gde varijabilni domen teškog lanca sadrži HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-10. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-10 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 57, gde varijabilni domen lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-10. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-10 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 54 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-10 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 54. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-10 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 54. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-10 ili SEQ ID NO: 54, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-10, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -10, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-10. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-10 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 57 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-10 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 57. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-10 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 57. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj., u FR regionima). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-10 ili SEQ ID NO: 57, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-10, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -10, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-10.
[0187] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 105 ili SEQ ID NO: 106. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 139. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 105 ili SEQ ID NO: 106 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 139.
(2) S-60-11
[0188] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-11 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 54; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-11 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 58. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%) ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-11 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 54, gde varijabilni domen teškog lanca obuhvata HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-1 1. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, na najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-11 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 58, pri čemu varijabilni domen lakog lanca obuhvata HVR-L 1, HVR-L2 i HVR-L3 sekvence aminokiselina antitela S-60-11. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-11 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO : 54 i sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-11 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 54. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-11 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 54. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj., u regionima FR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-1 1 ili SEQ ID NO: 54, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-1 1, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S- 60-11, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-1 1. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90 %, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%) ili 100 % identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-11 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 58 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-1 1 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 58 U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-11 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 58. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-11 ili SEQ ID NO: 58, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-11, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -11, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-11.
[0189] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 105 ili SEQ ID NO: 106. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 140. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 105 ili SEQ ID NO: 106 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 140.
(3) S-60-12
[0190] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100%, identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-12 ili aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 54; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti, sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-12 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 59. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95 %, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-12 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID BR: 54, gde varijabilni domen teškog lanca sadrži HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-12. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-12 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 59, gde varijabilni domen lakog lanca sadrži HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-12. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-12 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 54 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-12 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 54. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-12 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 54. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj., u FR regionima). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-12 ili SEQ ID NO: 54, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-12, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -12, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-12. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-12 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 59 i sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-12 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 59. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-12 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 59. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima van HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-12 ili SEQ ID NO: 59, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-12, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -12, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-12.
[0191] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 105 ili SEQ ID NO: 106. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 141. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 105 ili SEQ ID NO: 106 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 141.
(4) S-60-13
[0192] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-13 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 55; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-13 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 57. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-13 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 55, gde varijabilni domen teškog lanca sadrži HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-13. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-13 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 57, gde varijabilni domen lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-13. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-13 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO : 55 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-13 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 55. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-13 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 55. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-13 ili SEQ ID NO: 55, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-13, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -13, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-13. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-13 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 57 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-13 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 57. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-13 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 57. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-13 ili SEQ ID NO: 57, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-13, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -13, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-13.
[0193] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 135 ili SEQ ID NO: 136. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 139. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 135 ili SEQ ID NO: 136 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 139.
(5) S-60-14
[0194] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-14 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 55; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-14 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 58. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-14 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 55, gde varijabilni domen teškog lanca obuhvata HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-14. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-14 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 58, gde varijabilni domen lakog lanca sadrži HVR-L 1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-14. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%), najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-14 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 55 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-14 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 55. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-14 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 55. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-14 ili SEQ ID NO: 55, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-14, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -14, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-14. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-14 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 58 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-14 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 58. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-14 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 58. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima FR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-14 ili SEQ ID NO: 58, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-14, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -14, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-14.
[0195] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 135 ili SEQ ID NO: 136. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 140. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 135 ili SEQ ID NO: 136 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 140.
(6) S-60-15
[0196] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 57. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56, pri čemu varijabilni domen teškog lanca obuhvata HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-15. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 57, gde varijabilni domen lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-15. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj., u regionima FR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-15 ili SEQ ID NO: 56, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-15, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -15, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-15. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 57 i sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 57. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 57. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-15 ili SEQ ID NO: 57, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-15, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -15, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-15.
[0197] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 139. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 139.
(7) S-60-15.1
[0198] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15.1 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15.1 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 60. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15.1 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56, gde varijabilni domen teškog lanca sadrži HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-15.1. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15.1 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 60, gde varijabilni domen lakog lanca sadrži HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-15.1. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15.1 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15.1 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-15.1 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj., u regionima FR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-15.1 ili SEQ ID NO: 56, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-N1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-15.1, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -15.1, i (c) HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-15.1. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15.1 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 60 i sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15.1 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 60. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-15.1 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 60. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-15.1 ili SEQ ID NO: 60, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-15.1, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -15.1, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-15.1.
[0199] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 142. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 142.
(8) S-60-16
[0200] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-16 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-16 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 77. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-16 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56, gde varijabilni domen teškog lanca obuhvata HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-16. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-16 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 77, gde varijabilni domen lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-16. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-16 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-16 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-16 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-16 ili SEQ ID NO: 56, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-16, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -16, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela 5-60-16, U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti aminokiselinske sekvence varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-16 ili aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 77 i sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali anti-sortilin antitelo koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-16 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 77. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-16 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 77. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-16 ili SEQ ID NO: 77, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-16, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -16, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-16.
[0201] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 131. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 131.
(9) S-60-18
[0202] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-18 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-18 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 78. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića obuhvataju varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-18 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-18. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-18 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 78, gde varijabilni domen lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-18. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-18 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-18 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-18 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj. u regionima SR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-18 ili SEQ ID NO: 56, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-18, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -18, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-18. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-18 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 78 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-18 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 78. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-18 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 78. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (iu regionima FR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-18 ili SEQ ID NO: 78, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-18, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -18, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-18.
[0203] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 132. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 132.
(10) S-60-19
[0204] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-19 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 54; i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-19 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 79. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95 %, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-19 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID BR: 54, gde varijabilni domen teškog lanca obuhvata HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-19. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-19 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 79, gde varijabilni domen lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-19. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-19 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 54 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-19 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 54. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-19 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 54. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj., u regionima FR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-19 ili SEQ ID NO: 54, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-19, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -19, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-19. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-19 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 79 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-19 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 79. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-19 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 79. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj., u regionima FR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-19 ili SEQ ID NO: 79, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-19, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -19, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-19.
[0205] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 105 ili SEQ ID NO: 106. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 133. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 105 ili SEQ ID NO: 106 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 133.
(11) S-60-24
[0206] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92 %, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-24 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56: i/ili varijabilni domen lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, na najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-24 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 80. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen teškog lanca koji sadrži sekvencu aminokiselina e sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99 %, ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-24 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56, pri čemu varijabilni domen teškog lanca obuhvata HVR-H1, HVR-H2 i HVR-H3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-24. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, na najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-24 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 80, gde varijabilni domen lakog lanca obuhvata HVR-L1, HVR-L2 i HVR-L3 aminokiselinske sekvence antitela S-60-24. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-24 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 56 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-24 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena teškog lanca antitela S-60-24 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 56. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj., u regionima FR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VH sekvencu antitela S-60-24 ili SEQ ID NO: 56, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-H1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-24, (b) HVR-H2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -24, i (c) HVR-H3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-24. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (VL) koja ima najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-24 ili sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 80 i sadrži supstitucije (npr., konzervativne supstitucije, insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu), ali antitelo na sortilin koje sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za sortilin. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 10 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-24 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 80. U određenim primerima izvođenja, ukupno 1 do 5 aminokiselina je supstituisano, inserirano i/ili deletirano u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena lakog lanca antitela S-60-24 ili aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 80. U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u regionima izvan HVR (tj., u regionima FR). U nekim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se javljaju u FR regionima. Izborno, antitelo na sortilin sadrži VL sekvencu antitela S-60-24 ili SEQ ID NO: 80, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U posebnom izvođenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR izabrana između: (a) HVR-L1 aminokiselinske sekvence antitela S-60-24, (b) HVR-L2 aminokiselinske sekvence antitela S-60 -24, i (c) HVR-L3 aminokiselinska sekvenca antitela S-60-24.
[0207] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića sadrže laki lanac koja sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 134. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže teški lanac koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 137 ili SEQ ID NO: 138 i laki lanac koji sadrži aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 134.
[0208] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića vezuje u suštini isti epitop sortilina kao antitelo koje sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca antitela izabranog iz grupe koju čine S-60-10, S -60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19 i S-60-24.
[0209] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-10. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje vezuje suštinski isti epitop Sortilina kao S-60-10. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-10. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-10. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-10.
[0210] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-11. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje vezuje u suštini isti epitop sortilina kao S-60-11. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-11. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela. antitelo S-60-1 1. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-11.
[0211] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-12. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje vezuje suštinski isti epitop sortilina kao S-60-12. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-12. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-12. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-12.
[0212] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-13. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje vezuje suštinski isti epitop sortilina kao S-60-13. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-13. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-13. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-13.
[0213] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-14. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje vezuje suštinski isti Sortilin epitop kao S-60-14. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-14. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-14. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-14.
[0214] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-15. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje vezuje suštinski isti Sortilin epitop kao S-60-15. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-15. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-15. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-15.
[0215] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-15.1. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje vezuje suštinski isti Sortilin epitop kao S-60-15.1. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-15.1. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-15.1. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-15.1.
[0216] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-16. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje vezuje suštinski isti epitop sortilina kao S-60-16. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-16. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-16. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-16.
[0217] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-18. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje vezuje suštinski isti sortilin epitop kao S-60-18. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-18. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-18. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-18.
[0218] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-19. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je izolovano antitelo koje vezuje suštinski isti sortilin epitop kao S-60-19. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-19. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-19. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-19.
[0219] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo je anti-sortilin monoklonsko antitelo S-60-24. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje vezuje u suštini isti epitop sortilina kao S-60-24. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca monoklonskog antitela S-60-24. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-24. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca monoklonskog antitela S-60-24.
[0220] U određenim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je antagonističko antitelo. U određenim primerima izvođenja, antitelo na sortilin je agonističko antitelo. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela prema ovom pronalasku su IgG klase, IgM klase, ili IgA klase. U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku su IgG klase i imaju izotip IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4.
[0221] Dodatna anti-sortilin antitela, npr., antitela koja se specifično vezuju za protein sortilin prema ovom pronalasku, mogu se identifikovati, pregledati i/ili okarakterisati po njihovim fizičkim/hemijskim osobinama i/ili biološkim aktivnostima različitim testovima poznatim u tehnici.
[0222] Određeni aspekti ovog otkrića se odnose na upotrebu dva ili više antitela na sortilin koja kada se koriste zajedno pokazuju aditivne ili sinergističke efekte, u poređenju sa upotrebom odgovarajućeg pojedinačnog antitela na sortilin.
[0223] U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku je fragment antitela koji se vezuje za humani protein sortilina.
[0224] U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku je fragment antitela koji se vezuje za jedan ili više humanih proteina izabranih iz grupe koju čine humani sortilin, varijanta humanog sortilina koja se javlja u prirodi i varijanta humanog sortilina koja se javlja u prirodi.
[0225] U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku je fragment antitela, pri čemu je fragment antitela Fab, Fab', Fab-SH, F(ab')2, Fv ili scFv fragment.
Okvirni regioni antitela
[0226] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca koji sadrži jedan ili više (npr., jedan ili više, dva ili više, tri ili više, ili sva četiri) okvirna regiona izabrana između VH FR1, VH FR2, VH FR3 i VH FR4 (kao što je prikazano na Tabelama 20-23). U nekim primerima izvođenja, VH FR1 sadrži sekvencu QVQLQESGPGLVKPSETLSL TCAVSG (SEQ ID NO: 35). U nekim primerima izvođenja, VH FR2 sadrži sekvencu WIRQPPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 36). U nekim primerima izvođenja, VH FR3 sadrži sekvencu u skladu sa Formulom VI: X1VTISVDTSKNQFSLX2LSSVTAADTAVYYC (SEQ ID NO: 39), gde X1je K ili R, i X2je E ili K. U nekim primerima izvođenja, VH FR3 sadrži sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO: 37-38. U nekim primerima izvođenja, VH FR4 sadrži sekvencu WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 40). U nekim primerima izvođenja, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži VH FR1 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 35, VH FR2 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 36, VH FR3 prema formuli VI i VH FR4 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 40.
[0227] U nekim primerima izvođenja, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži VH FR1 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 35, VH FR2 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 36, VH FR3 koji sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO : 37-38, i VH FR4 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 40.
[0228] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca koji sadrži VH FR1, VH FR2, VH FR3 i VH FR4 antitela S-60-10, S-60-11, S- 60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60- 15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15. 16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24 (kao što je prikazano na Tabelama 20-23).
[0229] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region lakog lanca koji sadrži jedan ili više (npr., jedan ili više, dva ili više, tri ili više, ili sva četiri) okvirna regiona izabrana od VL FR1, VL FR2, VL FR3 i VL FR4 (kao što je prikazano u Tabelma 24-27). U nekim primerima izvođenja, VL FR1 sadrži sekvencu u skladu sa Formulom VII: DIVMTQSPLSLPVTPGX1X2ASISC (SEQ ID NO: 44), pri čemu X1je E ili G, i X2je P ili S. U nekim primerima izvođenja, VL FR1 sadrži sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO: 41-43. U nekim primerima izvođenja, VL FR2 sadrži sekvencu u skladu sa Formulom VIII: WYLQKPGQX1PQLLIY (SEQ ID NO: 47), pri čemu X1je S ili P. U nekim primerima izvođenja, VL FR2 sadrži sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO: 45-46. U nekim primerima izvođenja, VL FR3 sadrži sekvencu u skladu sa Formulom IX: GVPDRX1SGSGSGT DFTLKISRX2EAEDVGX3YYC (SEQ ID NO: 52), pri čemu X1je F ili L, X2je A ili V, a X3je V ili A. U nekim primerima izvođenja, VL FR3 sadrži sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO: 48-51. U nekim primerima izvođenja, VL FR4 sadrži sekvencu FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 53). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region lakog lanca koji sadrži VL FR1 koji sadrži sekvencu prema formuli VII, VL FR2 koji sadrži sekvencu prema formuli VIII, VL FR3 koji sadrži sekvencu prema formuli IX i VL FR4 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 53.
[0230] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region lakog lanca koji sadrži VL FR1 koji sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 41-43, VL FR2 koja sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 45-46, VL FR3 koji sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 48-51, i VL FR4 koja sadrži sekvencu SEQ ID NO: 53.
[0231] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region lakog lanca koji sadrži VL FR1, VL FR2, VL FR3 i VL FR4 antitela S-60-10, S-60-11, S- 60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60- 15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24 (kao što je prikazano na Tabelama 24-27).
[0232] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca koji sadrži jedan ili više (npr., jedan ili više, dva ili više, tri ili više, ili sva četiri) okvirna regiona izabrana između VH FR1, VH FR2, VH FR3 i VH FR4 (kao što je prikazano na tabelama 20-23), i varijabilni region lakog lanca koji sadrži jedan ili više (npr., jedan ili više, dva ili više, tri ili više, ili sva četiri) okvirna regiona izabrana od VL FR1, VL FR2, VL FR3 i VL FR4 (kao što je prikazano u Tabelama 24-27). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca koji sadrži
[0233] VH FR1 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 35, VH FR2 koja sadrži sekvencu SEQ ID NO: 36, VH FR3 prema formuli VI, i VH FR4 koja sadrži sekvencu SEQ ID NO: 4t1; i varijabilni region lakog lanca koji sadrži VL FR1 koji sadrži sekvencu prema formuli VII, VL FR2 koji sadrži sekvencu prema formuli VIII, VL FR3 koji sadrži sekvencu prema formuli IX, i VL FR4 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 53. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca koji sadrži VH FR1 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 35, VH FR2 koja sadrži sekvencu SEQ ID NO: 36, a VH FR3 koji sadrži sekvencu odabranu od SEQ ID NO: 37-38, i VH FR4 koja sadrži sekvencu SEQ ID NO: 40; varijabilni region lakog lanca koji sadrži VL FR1 koji sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 41-43, VL FR2 koja sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 45-46, VL FR3 koja sadrži sekvencu izabranu od SEQ ID NO: 48-51, i VL FR4 koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 53.
[0234] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića sadrže varijabilni region teškog lanca koji sadrži VH FR1, VH FR2, VH FR3 i VH FR4 antitela S-60-10, S-60-11, S- 60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60- 15.3 [N336], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24 (kao što je prikazano na Tabelama 20-23), i varijabilni region lakog lanca koji sadrži VL FR1, VL FR2, VL FR3 i VL FR4 antitela S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S- 60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R ], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60 -15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 ili S-60-24 (kao što je prikazano na Tabelama 24-27).
Aktivnosti anti-sortilin antitela
[0235] U određenim aspektima bilo kog od anti-sortilin antitela, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića mogu inhibirati jednu ili više aktivnosti sortilin proteina, uključujući, ali ne ograničavajući se na, smanjenje ćelijskih nivoa sortilina (npr., nivoi sortilina na površini ćelije, intracelularni nivoi sortilina i/ili ukupni nivoi sortilina); povećanje nivoa progranulina (npr., ekstracelularni nivoi progranulina i/ili ćelijski nivoi progranulina); i inhibiranje interakcije (npr., vezivanje) između progranulina i sortilina. Kao što je ovde predviđeno, anti-sortilin antitela ovog otkrića mogu inhibirati dodatne aktivnosti sortilin proteina, uključujući, ali ne ograničavajući se na inhibiciju interakcije (npr., vezivanje) sa jednim ili više pro-neurotrofina iz ovog otkrića (pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, itd.), neurotrofina ovog otkrića (neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzina, p75, sortilin propeptida (Sort-pro), amiloidnog prekursorskog proteina (APP), A beta peptida, lipoprotein lipaze (LpL), apolipoproteina AV (APOA5), apolipoproteina E (APOE) i proteina povezanog sa receptorom (RAP ), smanjujući lučenje PCSK9, smanjujući proizvodnju beta amiloidnog peptida.
[0236] U određenim primerima izvođenja, ovo otkriće obezbeđuje anti-sortilin antitelo, pri čemu (a) anti-sortilin antitelo povećava ekstracelularne nivoe progranulina, smanjuje ćelijske nivoe sortilina, inhibira interakciju između sortilina i progranulina, ili bilo koje njihove kombinacije; (b) antitelo na sortilin smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije, povećava ekstracelularne nivoe progranulina, inhibira interakciju između sortilina i progranulina, ili bilo koje njihove kombinacije; (c) anti-sortilin antitelo smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije, smanjuje intracelularne nivoe sortilina, smanjuje ukupne nivoe sortilina, ili bilo koju njihovu kombinaciju; (d) antitelo na sortilin indukuje degradaciju sortilina, cepanje sortilina, internalizaciju sortilina, regulaciju smanjenja sortilina ili bilo koju njihovu kombinaciju; (e) antitelo na sortilin smanjuje ćelijske nivoe sortilina i inhibira interakciju između sortilina i progranulina; (f) antitelo na sortilin smanjuje ćelijske nivoe sortilina i povećava ćelijske nivoe progranulina; i/ili (g) antitelo na sortilin povećava efektivnu koncentraciju progranulina.
[0237] U određenim primerima izvođenja, ovo otkriće obezbeđuje anti-sortilin antitelo, pri čemu antisortilin antitelo smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije, povećava ekstracelularne nivoe progranulina, inhibira interakciju između sortilina i progranulina, ili bilo koje njihove kombinacije.
[0238] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku (a) smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koji je manji od 150 pM, mereno protočnom citometrijom; (b) smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije za više od oko 50% pri 1.25 nM IgG, za više od oko 80% pri 0.63 nM IgG, ili za više od oko 69% pri 150 nM IgG u odnosu na kontrolu, mereno protočnom citometrijom; povećava sekreciju progranulina za više od oko 1.13 puta u odnosu na kontrolu pri 0.63 nM IgG, ili za više od oko 1.22 puta u odnosu na kontrolu pri 50 nM IgG, mereno standardnim ELISA testom; blokira vezivanje progranulina za sortilin sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koji je manji od .325 nM, mereno protočnom citometrijom; (e) blokira vezivanje progranulina za sortilin za više od oko 88% pri 50 nM IgG, ili za više od oko 27.5% pri 150 nM IgG u odnosu na kontrolu, što je mereno protočnom citometrijom; ili (f) bilo koja njihova kombinacija (videti, npr., Primeri 2-4).
[0239] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku (a) smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koji je manji od 681 pM, mereno protočnom citometrijom; (b) smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije za više od oko 40% pri 1.25 nM IgG, za više od oko 29% pri 0.6 nM IgG, ili za više od oko 62% pri 150 nM IgG u odnosu na kontrolu, mereno protočnom citometrijom; (c) povećava sekreciju progranulina za više od oko 1.11 puta u odnosu na kontrolu pri 0.63 nM IgG, ili za više od oko 1.75 puta u odnosu na kontrolu pri 50 nM IgG, mereno standardnom ELISA testom; (d) blokira vezivanje progranulina za sortilin sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koji je manji od 0.751 nM, mereno protočnom citometrijom; (e) blokira vezivanje progranulina za sortilin za više od oko 90% pri 50 nM IgG, ili za više od oko 95% pri 150 nM IgG u odnosu na kontrolu, mereno protočnom citometrijom; ili (f) bilo koja njihova kombinacija (videti, npr., Primeri 2-4).
Smanjenje nivoa sortilina
[0240] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića vezuju se za protein sortilin ovog otkrića eksprimiran na površini ćelije i moduliraju (npr. indukuju ili inhibiraju) jednu ili više aktivnosti sortilina iz ovog otkrića nakon vezivanja za površinski eksprimirani protein sortilin.
[0241] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku smanjuju ćelijske nivoe sortilina in vitro. U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku mogu smanjiti ćelijske nivoe sortilina in vivo (npr. u mozgu i/ili perifernim organima pojedinca). U nekim primerima izvođenja, smanjenje ćelijskih nivoa sortilina obuhvata smanjenje nivoa sortilina na površini ćelije. Kako se ovde koristi, antitelo na sortilin smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije ako izaziva smanjenje koncentracije antitela za zasićenje (npr., 0.6 nM, 0.63 nM, 1.25 nM, 50 nM ili 150 nM) i/ili u odnosu na kontrolno antitelo (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60) u nivoima sortilina na površini ćelije izmerenim bilo kojim in vitro testovima zasnovanim na ćelijama ili pogodan in vivo model koji je ovde opisan ili poznat u tehnici. U nekim primerima izvođenja, smanjenje ćelijskih nivoa sortilina obuhvata smanjenje intracelularnih nivoa sortilina. Kao što je ovde razmatrano, anti-sortilin antitelo smanjuje intracelularne nivoe sortilina ako indukuje smanjenje koncentracije zasićenih antitela i/ili u odnosu na kontrolno antitelo (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60) u intracelularnim nivoima sortilina mereno bilo kojim in vitro testovima zasnovanim na ćelijama ili pogodan in vivo model opisan ovde ili poznat u tehnici. U nekim primerima izvođenja, smanjenje ćelijskih nivoa sortilina obuhvata smanjenje ukupnih nivoa sortilina. Kao što je ovde razmatrano, antitelo na sortilin smanjuje ukupne nivoe sortilina ako izaziva smanjenje koncentracije zasićenih antitela i/ili u odnosu na kontrolno antitelo (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60) u ukupnim nivoima sortilina izmerenim bilo kojim in vitro testovima zasnovanim na ćelijama ili pogodan in vivo model opisan ovde ili poznat u tehnici.
[0242] Kako se ovde koristi, nivoi sortilina mogu se odnositi na nivoe ekspresije gena koji kodira sortilin; do nivoa ekspresije jednog ili više transkripata koji kodiraju sortilin; do nivoa ekspresije sortilin proteina; i/ili na količinu sortilin proteina prisutnog unutar ćelija i/ili na površini ćelije. Bilo koje postupke poznate u tehnici za merenje nivoa genske ekspresije, transkripcije, translacije i/ili abundance ili lokalizacije proteina mogu se koristiti za određivanje nivoa sortilina.
[0243] Ćelijski nivoi sortilina mogu se odnositi, bez ograničenja, na nivoe sortilina na površini ćelije, unutarćelijske nivoe sortilina i ukupne nivoe sortilina. U nekim primerima izvođenja, smanjenje ćelijskih nivoa sortilina obuhvata smanjenje nivoa sortilina na površini ćelije. U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku koja smanjuju ćelijske nivoe sortilina (npr., nivoi sortilina na površini ćelije) imaju jednu ili više od sledećih karakteristika: (1) inhibira ili smanjuje jednu ili više aktivnosti sortilina; (2) sposobnost inhibicije ili smanjenja vezivanja sortilina za jedan ili više njegovih liganada; (3) sposobnost smanjenja ekspresije sortilina u ćelijama koje eksprimiraju sortilin; (4) sposobnost interakcije, vezivanja ili prepoznavanja sortilin proteina; (5) sposobnost specifične interakcije sa ili vezivanja za sortilin protein; i (6) sposobnost lečenja, poboljšanja ili prevencije bilo kog aspekta bolesti ili poremećaja koji su ovde opisani ili razmatrani.
[0244] U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku indukuje smanjenje regulacije sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo ovog otkrića indukuje cepanje sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku indukuje internalizaciju sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano antisortilin antitelo prema ovom pronalasku indukuje izlučivanje sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku indukuje degradaciju sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku indukuje desenzibilizaciju sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano antitelo na sortilin prema ovom pronalasku deluje kao mimetik liganda da bi privremeno aktivirao sortilin. U nekim primerima izvođenja, izolovano antisortilin antitelo ovog otkrića deluje kao mimetik liganda i prolazno aktivira sortilin pre nego što izazove smanjenje ćelijskih nivoa sortilina i/ili inhibiciju interakcije (npr., vezivanje) između sortilina i jednog ili više sortilin liganada. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku deluje kao mimetik liganda i privremeno aktivira sortilin pre nego što izazove degradaciju sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku deluje kao mimetik liganda i privremeno aktivira sortilin pre nego što izazove cepanje sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku deluje kao mimetik liganda i privremeno aktivira sortilin pre nego što izazove internalizaciju sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku deluje kao mimetik liganda i privremeno aktivira sortilin pre nego što izazove izlučivanje sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo ovog otkrića deluje kao mimetik liganda i prolazno aktivira sortilin pre nego što izazove smanjenje ekspresije sortilina. U nekim primerima izvođenja, izolovano anti-sortilin antitelo iz ovog otkrića deluje kao mimetik liganda i prolazno aktivira sortilin pre nego što izazove desenzibilizaciju sortilina.
[0245] U određenim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku mogu smanjiti ćelijske nivoe sortilina (npr., nivoi sortilina na površini ćelije, intracelularni nivoi sortilina i/ili ukupni nivoi sortilina) izazivanjem degradacije sortilina. Shodno tome, u nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku izazivaju degradaciju sortilina.
[0246] Anti-sortilin antitela ovog otkrića mogu smanjiti ćelijske nivoe (npr., nivoi na površini ćelije) sortilina sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) (npr., kada se meri in vitro) u pikomolarnom opsegu. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je manji od oko 680.9 pM. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je oko 72.58 pM do oko 680.9 nM. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je oko 103.6 pM do oko 680.9 nM. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je manje od oko 600 pM, 500 pM, 400 pM, 300 pM, 200 pM, 100 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 1 pM ili 0.5 pM.
[0247] U nekim primerima izvođenja, EC50antitela je manje od ili jednako oko 675 pM, 650 pM, 625 pM, 600 pM, 575 pM, 550 pM, 525 pM, 500 pM, 475 pM, 450 pM, 425 pM, 400 pM, 350 pM, 325 pM, 300 pM, 275 pM, 250 pM, 225 pM, 200 pM, 175 pM, 150 pM, 125 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 70 pM, 50 pM 30 pm, 20 pm, 10 pm, 9 pm, 8 pm, 7 pm, 6 pm, 5 pm, 4 pm, 3 pm, 2 pm, 1 pm ili 0.5 pm.
[0248] U nekim primerima izvođenja, EC50antitela manji od oko 680.9 pM. U nekim primerima izvođenja, EC50antitela veći od ili jednak oko 0.1 pM, 0.5 pM, 1 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 125 pM, 150 pM, 175 pM, 200 pM, 225 pM, 250 pM, 275 pM, 300 pM, 325 pM, 350 pM, 375 pM, 400 pM, 425 pM, 450 pM, 450 pM, 450 pM, 5 pM, 550 pM, 575 pM, 600 pM, 625 pM, 650 pM, 675 pM. Odnosno EK50antitela može biti bilo koji iz opsega koji ima gornju granicu od oko 675 pM, 650 nM, 650 pM, 625 pM, 600 pM, 575 pM, 550 pM, 525 pM, 500 pM, 475 pM, 450 pM,, 400 pM, 375 pM, 350 pM, 325 pM, 300 pM, 275 pM, 250 pM, 225 pM, 200 pM, 175 pM, 150 pM, 125 pM, 100 pM, 80 pM, 70 pM, 90 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 1 pM ili 0.5 pM i nezavisno izabrana donja granica od oko 0.1 pM, 0.5 pM, 1 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 125 pM, 150 pM, 175 pM, 200 pM, 225 pM, 250 pM, 275 pM, 300 pM, 325 pM, 335 pM, 375 pM, 400 pM, 425 pM, 450 pM, 475 pM, 500 pM, 525 pM, 550 pM, 575 pM, 600 pM, 625 pM, 650 pM ili 675 pM, pri čemu je donja granica u manja od donje granice . U nekim primerima izvođenja, EC50antitela je bilo koji od oko 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 15 pM, 20 pM, 25 pM, 30 pM, 35 pM, 40 pm, 45 pm, 50 pm, 55 pm, 60 pm, 65 pm, 70 pm, 75 pm, 80 pm, 85 pm, 90 pm, 95 pm, 100 pm, 105 pm, 115 pm, 120 pM, 125 pM, 130 pM, 135 pM, 140 pM, 145 pM, 150 pM, 155 pM, 160 pM, 165 pM, 170 pM, 175 pM, 180 pM, 180 pM, 195 pM0, 195 pM0 posle podne.
[0249] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koja je manji od 150 pM, mereno protočnom citometrijom. U nekim primerima izvođenja, EC50antitela na sortilin prema ovom pronalasku je oko 103.6 pM. U nekim primerima izvođenja, EC50antitela na sortilin prema ovom pronalasku je oko 72.58 pM.
[0250] U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije za više od oko 40% na 1.25 nM IgG ili za više od oko 80% na 0.63 nM IgG, kao što je mereno protočnom citometrijom. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije za oko 60.92% na 1.25 nM IgG, što je mereno protočnom citometrijom. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije za oko 69.3% na 150 nM IgG, što je mereno protočnom citometrijom. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije za oko 70.3% na 150 nM IgG, što je mereno protočnom citometrijom.
[0251] Različiti postupci merenja EC50vrednosti antitela su poznati u tehnici, uključujući, na primer, protočnu citometriju (Videti npr. Primer 2). U nekim primerima izvođenja, EC50se meri in vitro koristeći ćelije konstruisane za ekspresiju humanog sortilina. U nekim primerima izvođenja, EC50meri se na temperaturi od približno 4°C. U nekim primerima izvođenja, EC50meri se na temperaturi od približno 25°C. U nekim primerima izvođenja, EC50meri se na temperaturi od približno 35°C. U nekim primerima izvođenja, EC50meri se na temperaturi od približno 37°C. U nekim primerima izvođenja, EC50se određuje korišćenjem monovalentnog antitela (npr., Fab) ili antitela pune dužine u monovalentnom obliku. U nekim primerima izvođenja, EC50se određuje korišćenjem antitela koja sadrže konstantne regione koji pokazuju pojačano vezivanje Fc receptora. U nekim primerima izvođenja, EC50se određuje korišćenjem antitela koja sadrže konstantne regione koji pokazuju smanjeno vezivanje Fc receptora.
[0252] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju veće potencijale u smanjenju nivoa sortilina na površini ćelije u odnosu na kontrolno antitelo (npr. antisortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku smanjuju ćelijske nivoe (npr., nivoi površine ćelije) sortilina sa nižim EC50(npr., izmereno in vitro) nego kontrolno antitelo (npr., anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku smanjuju ćelijske nivoe (npr., nivoi površine ćelije) sortilina sa EC50to je najmanje oko 5%, najmanje oko 10%, najmanje oko 15%, najmanje oko 20%, najmanje oko 25%, najmanje oko 30%, najmanje oko 35%, najmanje oko 40%, najmanje oko 45%, najmanje oko 50%, najmanje oko 55%, najmanje oko 60%, najmanje oko 65%, najmanje oko 70%, najmanje oko 75%, najmanje oko 80%, najmanje oko 85%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95%, ili najmanje oko 99% niže od EC50kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku smanjuju ćelijske nivoe (npr., nivoi površine ćelije) sortilina sa EC50to je najmanje oko 1 puta, najmanje oko 1.1 puta, najmanje oko 1.5 puta, najmanje oko 2 puta, najmanje oko 3 puta, najmanje oko 4 puta, najmanje oko 5 puta, najmanje oko 6 puta, najmanje oko 7 puta, najmanje oko 8 puta, najmanje oko 9 puta, najmanje oko 10 puta, najmanje oko 12.5 puta, najmanje oko 15 puta, najmanje oko 17.5 puta, najmanje oko 20 puta, najmanje oko 22.5 puta, najmanje oko 25 puta, najmanje oko 27.5 puta, najmanje oko 30 puta, najmanje oko 50 puta, ili najmanje oko 100 puta niže od EK50kontrolnog antitela (npr., anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60).
[0253] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku imaju EC50koje je najmanje 1.5 puta niža od kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku imaju EC50što je najmanje 1.1 puta niže od kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60).
[0254] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku (a) smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koji je manji od 681 pM, mereno protočnom citometrijom; (b) smanjuje nivoe sortilina na površini ćelije za više od oko 40% pri 1.25 nM IgG, za više od oko 29% pri 0.6 nM IgG, ili za više od oko 62% pri 150 nM IgG u odnosu na kontrolu, mereno protočnom citometrijom; (c) povećava sekreciju progranulina za više od oko 1.11 puta u odnosu na kontrolu pri 0.63 nM IgG, ili za više od oko 1.75 puta u odnosu na kontrolu pri 50 nM IgG, mereno standardnom ELISA testom; (d) blokira vezivanje progranulina za sortilin sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) koja je manji od 0.751 nM, mereno protočnom citometrijom; (e) blokira vezivanje progranulina za sortilin za više od oko 90% pri 50 nM IgG, ili za više od oko 95% pri 150 nM IgG u odnosu na kontrolu, mereno protočnom citometrijom; ili (f) bilo koja njihova kombinacija (videti, npr., Primeri 2-4).
Povećanje nivoa progranulina
[0255] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku povećavaju ekstracelularne nivoe progranulina in vitro. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića mogu povećati ćelijske nivoe progranulina ili in vivo (npr., u mozgu, krvi i/ili perifernim organima pojedinca). Kako se ovde koristi, antitelo na sortilin povećava ekstracelularne nivoe progranulina ako izaziva povećanje koncentracije antitela za zasićenje (npr., 0.6 nM, 0.63 nM, 1.25 nM, 50 nM ili 150 nM) i/ili u odnosu na kontrolno antitelo (npr., anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60) u ekstracelularnim nivoima progranulina izmerenim bilo kojim in vitro testovima zasnovanima na ćelijama ili u testovima zasnovanim na tkivu (kao što je moždano tkivo) opisanim ovde ili poznatim u tehnici. Kao što je ovde razmatrano, antitelo na sortilin povećava ćelijske nivoe progranulina ako izaziva povećanje koncentracije antitela za zasićenje (npr., 0.6 nM, 0.63 nM, 1.25 nM, 50 nM ili 150 nM) i/ili u odnosu na kontrolno antitelo (npr., anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60) u ćelijskim nivoima progranulina mereno bilo kojim in vitro testovima zasnovanim na ćelijama ili u testovima zasnovanim na tkivu (kao što je moždano tkivo) opisanim ovde ili poznatim u tehnici.
[0256] Kako se ovde koristi, nivoi progranulina se mogu odnositi na nivoe ekspresije gena koji kodira progranulin; do nivoa ekspresije jednog ili više transkripata koji kodiraju progranulin; do nivoa ekspresije proteina progranulina; i/ili na količinu progranulin proteina izlučenog iz ćelija i/ili prisutnog unutar ćelija. Bilo koje postupke poznate u tehnici za merenje nivoa genske ekspresije, transkripcije, translacije, obilja proteina, sekrecije proteina i/ili lokalizacije proteina mogu se koristiti za određivanje nivoa progranulina.
[0257] Kako se ovde koristi, nivoi progranulina se mogu odnositi, bez ograničenja, na ekstracelularne nivoe progranulina, intracelularne nivoe progranulina i ukupne nivoe progranulina; u nekim primerima izvođenja, povećanje nivoa progranulina obuhvata povećanje ekstracelularnih nivoa progranulina.
[0258] U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku povećava sekreciju progranulina za više od oko 1.11 puta u odnosu na kontrolu pri 0.63 nM IgG, kao što je mereno standardnom ELISA testom. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku povećava sekreciju progranulina za oko 1.42 puta u odnosu na kontrolu pri 0.63 nM IgG, kao što je mereno standardnom ELISA testom. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku povećava sekreciju progranulina za više od oko 1.75 puta u odnosu na kontrolu pri 50 nM IgG, kao što je mereno standardnom ELISA testom. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku povećava sekreciju progranulina za oko 1.97 puta u odnosu na kontrolu pri 50 nM IgG, kao što je mereno standardnom ELISA testom. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku povećava sekreciju progranulina za oko 2.29 puta u odnosu na kontrolu pri 50 nM IgG, kao što je mereno standardnom ELISA testom.
[0259] U tehnici su poznati različiti postupci merenja sekrecije progranulina, uključujući, na primer, ELISA (Videti npr., Primeri 2 i 4). U nekim primerima izvođenja, EC50se meri in vitro koristeći ćelije koje eksprimiraju humani sortilin. U nekim primerima izvođenja, sekrecija progranulina se određuje korišćenjem monovalentnog antitela (npr., Fab) ili antitela pune dužine u monovalentnom obliku. U nekim primerima izvođenja, sekrecija progranulina se određuje korišćenjem antitela koja sadrže konstantne regione koji pokazuju pojačano vezivanje Fc receptora. U nekim primerima izvođenja, sekrecija progranulina se određuje korišćenjem antitela koja sadrže konstantne regione koji pokazuju smanjeno vezivanje Fc receptora.
[0260] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju veću snagu u povećanju nivoa progranulina u odnosu na kontrolno antitelo (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića povećavaju nivoe (npr., ekstracelularni nivoi) progranulina sa nižim EC50(npr., izmereno in vitro) nego kontrolno antitelo (npr., anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela ovog otkrića povećavaju nivoe (npr. ekstracelularne nivoe) progranulina za najmanje oko 5%, najmanje oko 10%, najmanje oko 15%, najmanje oko 20%, najmanje oko 25%, najmanje oko 30%, najmanje oko 35%, najmanje oko 40%, najmanje oko 45%, najmanje oko 50%, najmanje oko 55%, najmanje oko 60%, najmanje oko 65%, najmanje oko 70%, najmanje oko 75%, najmanje oko 80%, najmanje oko 85%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95%, ili najmanje oko 99% od kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića povećavaju nivoe (npr., ekstracelularni nivoi) progranulina za oko 1 puta, najmanje oko 1.1 puta, najmanje oko 1.5 puta, najmanje oko 2 puta, najmanje oko 3 puta, najmanje oko 4 puta, najmanje oko 5 puta, najmanje oko 6 puta, najmanje oko 7 puta, najmanje oko 8 puta, najmanje oko 9 puta, najmanje oko 10 puta, najmanje oko 12.5 puta, najmanje oko 15 puta, najmanje oko 17.5 puta, najmanje oko 20 puta, najmanje oko 22.5 puta, najmanje oko 25 puta, najmanje oko 27.5 puta, najmanje oko 30 puta, najmanje oko 50 puta, ili najmanje oko 100 puta više od kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60).
[0261] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića povećavaju nivoe progranulina za oko 1.1 puta više od kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku povećavaju nivoe progranulina za oko 1.3 puta više od kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60).
[0262] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku povećavaju efektivnu koncentraciju progranulina. Efektivna koncentracija progranulina se odnosi na koncentraciju progranulina u plazmi ili cerebrospinalnoj tečnosti. U nekim primerima izvođenja, povećanje efektivne koncentracije progranulina je povećanje veće od 1.5 puta. U nekim primerima izvođenja, efikasna koncentracija progranulina se povećava za 7-28 dana.
Smanjenje interakcije između sortilina i vezujućeg partnera
[0263] U određenim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela inhibiraju interakciju (npr. vezivanje) između sortilin proteina prema ovom pronalasku i jednog ili više proteina odabranih od progranulina, pro-neurotrofina, neurotrofina, pro-neurotrofin-3, neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, neurotrofin-4/5, pro-nervni faktor rasta (pro-NGF), faktor rasta nerava (NGF), neurotrofični faktor koji potiče od mozga (pro-BDNF), neurotrofični faktor iz mozga faktor (BDNF), neurotenzin, p75, sortilin propeptid (Sortpro), amiloidni prekursorski protein (APP), A beta peptid, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5), apolipoprotein E (APOE), PCSK9 i protein povezan sa receptorom (RAP) i/ili varijante koje se javljaju u prirodi. U specifičnom izvođenju, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku inhibiraju interakciju (npr., vezivanje) između proteina Sortilin prema ovom pronalasku i progranulina;
[0264] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela mogu inhibirati interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina ovog otkrića i neurotrofina ovog otkrića, kao što je pro-neurotrofin, proneurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin -3, neurotrofin-4/5, NGF i BDNF. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela mogu inhibirati interakciju (npr. vezivanje) između sortilin proteina prema ovom pronalasku i neurotenzina. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela inhibiraju interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina prema ovom pronalasku i p75. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela mogu inhibirati interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina prema ovom pronalasku i Sort-pro. U drugim primerima izvođenja, antisortilin antitela mogu inhibirati interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina prema ovom pronalasku i APP. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela mogu inhibirati proizvodnju A beta peptida. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela mogu inhibirati transport i sekreciju PCSK9. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela mogu inhibirati interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina prema ovom pronalasku i LpL. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela mogu inhibirati interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina prema ovom pronalasku i APOA5. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela mogu inhibirati interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina prema ovom pronalasku i APOE. U drugim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela mogu inhibirati interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina prema ovom pronalasku i RAP.
[0265] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku vezuju se za sortilin protein ovog otkrića eksprimiran na površini ćelije, a gola antitela inhibiraju interakciju (npr. vezivanje) između sortilin proteina i jednog ili više sortilin liganda. U nekim primerima izvođenja, antisortilin antitela iz ovog otkrića koja se vezuju za predmetni sortilin protein inhibiraju interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina i jednog ili više sortilin liganda smanjenjem efektivnih nivoa sortilin koji je dostupan za interakciju sa ovim proteinima bilo na površini ćelije ili unutar ćelije. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića koja se vezuju za sortilin protein sadašnje inhibiraju interakciju (npr., vezivanje) između sortilin proteina i jednog ili više sortilin liganada izazivanjem degradacije sortilin.
A. Smanjenje interakcije između sortilina i progranulina
[0266] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku povećavaju nivoe progranulina i/ili smanjuju ćelijske nivoe sortilina dok blokiraju (npr. inhibiraju) interakcije (npr., vezivanje) između sortilina i progranulina. Shodno tome, u nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku blokiraju interakciju (npr., vezivanje) između sortilina i progranulina; Kao što se ovde koristi, anti-sortilin antitelo blokira interakciju (npr., vezivanje) između sortilina i progranulina ako smanjuje vezivanje progranulina za sortilin u odnosu na kontrolno antitelo (npr. antisortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60) pri zasićenim koncentracijama antitela (npr., 0.6 nM, 0.63 nM, 1.25 nM, 50 nM ili 150 nM) u bilo kom in vitro testu ili testu na ćelijskoj kulturi koji je ovde opisan ili poznat u tehnici.
[0267] Antitela na sortilin prema ovom pronalasku mogu smanjiti vezivanje progranulina za sortilin sa polovinom maksimalne efektivne koncentracije (EC50) (npr., kada se meri in vitro) u pikomolarnom opsegu. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je manja od oko 2.2 nM. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je manja od oko 1.22 nM. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je manja od oko 751 pM. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je oko 325 pM do oko 751 nM. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je oko 405 pM do oko 751 nM. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je oko 588 pM do oko 751 nM. U određenim primerima izvođenja, EC50antitela je manja od oko 2.2 nM, 2.1 nM, 2.0 nM, 1.9 nM, 1.8 nM, 1.7 nM, 1.6 nM, 1.5 nM, 1.4 nM, 1.3 nM, 1.2 nM, 1.1 nM, 1.0 nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 600 pM, 500 pM, 400 pM, 300 pM, 200 pM, 100 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 1pM, or 0.5 pM.
[0268] U nekim primerima izvođenja, EC50antitela za smanjenje vezivanja progranulina za sortilin je manje od ili jednako oko 2.2 nM, 2.1 nM, 2.0 nM, 1.9 nM, 1.8 nM, 1.7 nM, 1.6 nM, 1.5 nM, 1.4 nM, 1.3 nM, 1.2 nM, 1.1 nM, 1.0 nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 600 pM, 500 pM, 475 pM, 450 pM, 425 pM, 400 pM, 375 pM, 350pM, 325 pM, 300 pM, 275 pM, 250 pM, 225 pM, 200 pM, 175 pM, 150 pM, 125 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 70 pM, 60 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 9 pM, 8 pM, 7 pM, 6 pM, 5 pM, 4 pM, 3 pM, 2 pM, 1 pM, or 0.5 pM.
[0269] U nekim primerima izvođenja, EC50antitela na sortilin prema ovom pronalasku je oko 1.22 nM. U nekim primerima izvođenja, EC50antitela na sortilin ovog otkrića je oko 588 pM, U nekim primerima izvođenja, EC50antitela na sortilin prema ovom pronalasku je oko 405 pM. U nekim primerima izvođenja, EC50antitela na sortilin prema ovom pronalasku je oko 325 pM.
[0270] Različite postupci merenja vrednosti EC50antitela su poznati u tehnici, uključujući, na primer, protočnu citometriju (Videti npr. Primer 3). U nekim primerima izvođenja, EC50za smanjenje vezivanja progranulina za sortilin se meri in vitro koristeći ćelije koje eksprimiraju humani sortilin. U nekim primerima izvođenja, EC50meri se na temperaturi od približno 4°C. U nekim primerima izvođenja, EC50meri se na temperaturi od približno 25°C. U nekim primerima izvođenja, EC50meri se na temperaturi od približno 35°C. U nekim primerima izvođenja, EC50meri se na temperaturi od približno 37°C. U nekim primerima izvođenja, EC50za smanjenje vezivanja progranulina za sortilin se određuje korišćenjem monovalentnog antitela (npr. Fab) ili antitela pune dužine u monovalentnom obliku. U nekim primerima izvođenja, EC50se određuje korišćenjem antitela koja sadrže konstantne regione koji pokazuju pojačano vezivanje Fc receptora. U nekim primerima izvođenja, EC50za smanjenje vezivanja progranulina za sortilin se određuje korišćenjem antitela koja sadrže konstantne regione koji pokazuju smanjeno vezivanje Fc receptora.
[0271] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju veću snagu u smanjenju vezivanja progranulina za sortilin u odnosu na kontrolno antitelo (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića smanjuju vezivanje progranulina za sortilin sa nižim EC50(npr., izmereno in vitro) nego kontrolno antitelo (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića smanjuju vezivanje progranulina za sortilin sa EC50što je najmanje oko 5%, najmanje oko 10%, najmanje oko 5%, najmanje oko 20%, najmanje oko 25%, najmanje oko 30%, najmanje oko 35%, najmanje oko 40%, najmanje oko 45%, najmanje oko 50%, najmanje oko 55%, najmanje oko 60%, najmanje oko 65%, najmanje oko 70%, najmanje oko 75%, najmanje oko 80%, najmanje oko 85%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95%, ili najmanje oko 99% niže od EC50kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića smanjuju vezivanje progranulina za sortilin sa EC50što je najmanje oko jedanput, najmanje oko 1.1 puta, najmanje oko 1.5 puta, najmanje oko 2 puta, najmanje oko 3 puta, najmanje oko 4 puta, najmanje oko 5 puta, najmanje oko 6 puta, najmanje oko 7 puta, najmanje oko 8 puta, najmanje oko 9 puta, najmanje oko 10 puta, najmanje oko 12.5 puta, najmanje oko 15 puta, na najmanje oko 17.5 puta, najmanje oko 20 puta, najmanje oko 22.5 puta, najmanje oko 25 puta, najmanje oko 27.5 puta, najmanje oko 30 puta, najmanje oko 50 puta, ili na najmanje oko 100 puta niže od EK50kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60).
[0272] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku imaju EC50koje je najmanje 1.3 puta niže od kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku imaju EC50koje je najmanje 1.8 puta niže od kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku imaju EC50koje je najmanje 9 puta niže od kontrolnog antitela (npr. anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60). U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku imaju EC50što je najmanje 2.3 puta niže od kontrolnog antitela (npr., anti-sortilin antitelo koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60).
[0273] Bilo koji in vitro testovi zasnovani na ćelijama ili pogodan in vivo model koji je ovde opisan ili poznat u tehnici može se koristiti za merenje inhibicije ili smanjenja interakcije (npr., vezivanja) između sortilina i jednog ili više sortilin liganada. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku inhibiraju ili smanjuju interakciju (npr., vezivanje) između sortilina i jednog ili više sortilin liganda smanjenjem ekspresije sortilina (npr., smanjenjem nivoa sortilina na površini ćelije). U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku inhibiraju ili smanjuju interakciju (npr., vezivanje) između sortilina i jednog ili više sortilin liganda za najmanje 21%, najmanje 22%, najmanje 23%, najmanje 24%, najmanje 25%, najmanje 26%, najmanje 27%, najmanje 28%, najmanje 29%, najmanje 30%, najmanje 31%, najmanje 32%, najmanje 33%, najmanje 34%, najmanje 35%, najmanje 36%, najmanje 37%, najmanje 38%, najmanje 39%, najmanje 40%, najmanje 41%, najmanje 42%, najmanje 43%, najmanje 44%, najmanje 45%, najmanje 46%, najmanje 47%, najmanje 48%, najmanje 49%, najmanje 50%, najmanje 51%, najmanje 52%, najmanje 53%, najmanje 54%, najmanje 55%, najmanje 56%, najmanje 57%, najmanje 58%, najmanje 59%, najmanje 60%, najmanje 61%, najmanje 62%, najmanje 63%, najmanje 64%, najmanje 65%, najmanje 66%, najmanje 67%, najmanje 68%, najmanje 69%, najmanje 70%, najmanje 71%, najmanje 72%, najmanje 73%, najmanje 74%, najmanje 75%, najmanje 76%, najmanje 77%, najmanje 78%, najmanje 79%, najmanje 80%, najmanje 81%, najmanje 82%, najmanje 83%, najmanje 84%, najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili više pri zasićenim koncentracijama antitela koristeći bilo koje in vitro test ili test ćelijske kulture koji je ovde opisan ili poznat u tehnici..
[0274] U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku blokira vezivanje progranulina za sortilin za više od oko 90% na 50 nM IgG ili za više od oko 96% na 150 nM IgG, što je mereno protočnom citometrijom. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku blokira vezivanje progranulina za sortilin za oko 90.74% na 50 nM IgG, što je mereno protočnom citometrijom. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku blokira vezivanje progranulina za sortilin za oko 96.5% na 150 nM IgG, što je mereno protočnom citometrijom. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku blokira vezivanje progranulina za sortilin za oko 96.9% na 150 nM IgG, što je mereno protočnom citometrijom.
Smanjenje ekspresije proinflamatornih medijatora
[0275] U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku mogu da smanje ekspresiju proinflamatornih medijatora nakon vezivanja za sortilin protein eksprimiran u ćeliji.
[0276] Kako se ovde koristi, proinflamatorni medijatori su proteini uključeni direktno ili indirektno (npr., putem proinflamatornih signalnih puteva) u mehanizmu koji indukuje, aktivira, promoviše ili na drugi način smanjuje inflamatorni odgovor. Može se koristiti bilo koji postupak poznat u tehnici za identifikaciju i karakterizaciju proinflamatornih medijatora.
[0277] Primeri proinflamatornih medijatora uključuju, bez ograničenja, citokine, kao što su interferoni tipa I i II, IL-6, IL12p70, IL12p40, IL-1β, TNF-α, IL-8, CRP, članovi porodice IL-20, IL -33, LIF, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18 i CRP. Dalji primeri proinflamatornih medijatora uključuju, bez ograničenja, hemokine, kao što su CKSCL1, CCL2, CCL3, CCL4 i CCL5.
[0278] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića mogu da smanje funkcionalnu ekspresiju i/ili sekreciju pro-inflamatornih medijatora, IL-6, IL12p70, IL12p40, IL-1β, TNF-α, GKSCL I, CCL2, CCL3, CCL4 i CCL5. U određenim primerima izvođenja, smanjena ekspresija proinflamatornih medijatora se javlja u makrofagima, dendritskim ćelijama, monocitima, osteoklastima, Langerhansovim ćelijama kože, Kupferovim ćelijama, T ćelijama i/ili mikroglijalnim ćelijama. Smanjena ekspresija može uključivati, bez ograničenja, smanjenje ekspresije gena, smanjenje ekspresije transkripcije ili smanjenje ekspresije proteina. Bilo koji postupak poznat u tehnici za određivanje gena, transkripta (npr., iRNK) i/ili ekspresija proteina može se koristiti. Na primer, Northern blot analiza se može koristiti za određivanje nivoa ekspresije gena proinflamatornog medijatora, RT-PCR se može koristiti za određivanje nivoa transkripcije proinflamatornog medijatora, a Western blot analiza se može koristiti za određivanje proinflamatornog medijatora nivoi proteina.
[0279] Kako se ovde koristi, proinflamatorni medijator može da ima smanjenu ekspresiju ako je njegova ekspresija u jednoj ili više ćelija subjekta lečenog sortilin agensom, kao što je agonističko antisortilin antitela iz ovog otkrića, veća od ekspresije istog proinflamatornog medijatora eksprimiranog u jednoj ili više ćelija odgovarajućeg subjekta koji nije tretiran agonističkim anti-sortilin antitelom. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo ovog otkrića može smanjiti ekspresiju proinflamatornog medijatora u jednoj ili više ćelija subjekta za najmanje 10%, najmanje 15%, najmanje 20%, najmanje 25%, na najmanje 30%, najmanje 35%, najmanje 40%, najmanje 45%, najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, na najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 100%, najmanje 110%, najmanje 115%, najmanje 120%, najmanje 125%, najmanje 130%, na najmanje 135%, najmanje 140%, najmanje 145%, najmanje 150%, najmanje 160%, najmanje 170%, najmanje 180%, najmanje 190%, ili najmanje 200% na primer, u poređenju sa ekspresijom proinflamatornog medijatora u jednoj ili više ćelija odgovarajućeg subjekta koji nije lečen anti-sortilin antitelom. U drugim primerima izvođenja, antisortilin antitelo može smanjiti ekspresiju pro-inflamatornog medijatora u jednoj ili više ćelija subjekta za najmanje 1.5 puta, najmanje 1.6 puta, najmanje 1.7 puta, najmanje 1.8 puta, najmanje 1.9 puta puta, najmanje 2.0 puta, najmanje 2.1 puta, najmanje 2.15 puta, najmanje 2.2 puta, najmanje 2.25 puta, najmanje 2.3 puta, najmanje 2.35 puta, najmanje 2.4 puta, najmanje 2.45 puta, najmanje 2.5 puta puta, najmanje 2.55 puta, najmanje 3.0 puta, najmanje 3.5 puta, najmanje 4.0 puta, najmanje 4.5 puta, najmanje 5.0 puta, najmanje 5.5 puta, najmanje 6.0 puta, najmanje 6.5 puta, najmanje 7.0 puta, najmanje 7.5 puta, najmanje 8.0 puta, najmanje 8.5 puta, najmanje 9.0 puta, najmanje 9.5 puta, ili najmanje 10 puta, na primer, u poređenju sa ekspresijom proinflamatornog medijatora u jednoj ili više ćelija odgovarajućeg subjekta koji nije lečen anti-sortilin antitelom.
[0280] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitelo u skladu sa bilo kojom od gore navedenih realizacija može da sadrži bilo koju od karakteristika, pojedinačno ili u kombinaciji, kao što je opisano u odeljcima 1-7 u nastavku:
(1) Afinitet vezivanja antitela na sortilin
[0281] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, antitelo ima konstantu disocijacije (Kd) od < 1 µM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0.1 nM, < 0.0 1 nM ili < 0.001 nM (npr., 10<-8>M ili manje, npr. od 10<-8>M do 10<-13>M, npr., od 10<-9>M do 10<-13>M).
[0282] Anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku mogu imati nanomolarne ili čak pikomolarne afinitete za ciljni antigen (npr., humani sortilin ili sortilin sisara). U određenim primerima izvođenja, afinitet vezivanja anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku za ciljni antigen (npr., humani sortilin ili sortilin sisara) se meri konstantom disocijacije, KD. Konstante disocijacije mogu se odrediti bilo kojom analitičkom tehnikom, uključujući bilo koju biohemijsku ili biofizičku tehniku kao što je fluorescentno aktivirano sortiranje ćelija (FACS), protočna citometrija, enzimski imunotest (ELISA), rezonanca površinskog plazmona (SPR), interferometrija BioLayer (videti, npr. Octet System by ForteBio), otkrivanje mezo skale (videti, npr. MSD-SET), izotermna titraciona kalorimetrija (ITC), diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC), cirkularni dihroizam (CD), analiza zaustavljenog protoka i kolorimetrijska ili fluorescentna analiza topljenja proteina; ili test vezivanja ćelija. U nekim primerima izvođenja, KDza sortilin se određuje na temperaturi od približno 25°C. U nekim primerima izvođenja, konstanta disocijacije (KD) može se meriti na 4°C ili sobnoj temperaturi koristeći, na primer, FACS ili BioLayer interferometrijski test.
[0283] U nekim primerima izvođenja, KDza sortilin se određuje na temperaturi od približno 4°C. U nekim primerima izvođenja, KDse određuje korišćenjem monovalentnog antitela (npr., Fab) ili antitela pune dužine u monovalentnom obliku. U nekim primerima izvođenja, KDse određuje korišćenjem bivalentnog antitela i monomernog rekombinantnog sortilin proteina.
[0284] U određenim primerima izvođenja, KDanti-sortilin antitela ovog otkrića za humani sortilin, sortilin sisara, ili oba, se meri korišćenjem FACS-a kao što je ovde opisano (videti, npr., Primeri 1 i 4).
U određenim primerima izvođenja, KDanti-sortilin antitela ovog otkrića za humani sortilin, sortilin sisara, ili oba, se meri korišćenjem BioLayer interferometrijiom kao što je ovde opisano (videti, npr.
Primer 4).
[0285] U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin ima konstantu disocijacije (KD) za humani sortilin koji je do 2.5 puta niži od anti-sortilin antitela koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 56 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži sekvencu SEQ ID NO: 79, pri čemu the KDodređuje FACS (videti, npr. Primer 1). U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin ima konstantu disocijacije (KD) za ljudski sortilin koji se kreće od oko 1.10E-8 M do oko 4.68E-10 M pri čemu je KDodređuje FACS (videti, npr. Primer 1), ili oko 270 do oko 2910 pM pri čemu je KDodređuje se interferometrijom biosloja (videti, npr. Primer 4).
[0286] U određenim primerima izvođenja, KDanti-sortilin antitela ovog otkrića za humani sortilin, sortilin sisara, ili oba, može biti manji od 100 nM, manji od 90 nM, manji od 80 nM, manji od 70 nM, manji od 60 nM, manji od 50 nM, manje od 40 nM, manje od 30 nM, manje od 20 nM, manje od 0 nM, manje od 9 nM, manje od 8 nM, manje od 7 nM, manje od 6 nM, manje od 5 nM, manje od 4 nM, manje od 3 nM, manje od 2 nM, manje od 1 nM, manje od 0.5 nM, manje od 0.1 nM, manje od 0.09 nM, manje od 0.08 nM, manje od 0.07 nM, manje od 0.06 nM, manje od 0. nM, manje od 0.04 nM, manje od 0.03 nM, manje od 0.02 nM, manje od 0.01 nM, manje od 0.009 nM, manje od 0.008 nM, manje od 0.007 nM, manje od 0.006 nM, manje od 0.006 nM, manje od 0.05 nM manje od 0.0 nM, manje od 0.003 nM, manje od 0.002 nM, manje od 0.001 nM, ili manje od 0.001 nM.
[0287] Konstante disocijacije (KD) antitela na sortilin za humani sortilin, sortilin sisara ili oba, mogu biti manji od 10 nM, manji od 9.5 nM, manji od 9 nM, manji od 8.5 nM, manji od 8 nM, manji od 7.5 nM, manji od 7 nM, manje od 6.9 nM, manje od 6.8 nM, manje od 6.7 nM, manje od 6.6 nM, manje od 6.5 nM, manje od 6.4 nM, manje od 6.3 nM, manje od 6.2 nM, manje od 6.1 nM, manje od 6 nM, manje od 5.5 nM, manje od 5 nM, manje od 4.5 nM, manje od 4 nM, manje od 3.5 nM, manje od 3 nM, manje od 2.5 nM, manje od 2 nM, manje od 1.5 nM, manje od 1 nM, manje od 0.95 nM, manje od 0.9 nM, manje od 0.89 nM, manje od 0.88 nM, manje od 0.87 nM, manje od 0.86 nM, manje od 0.85 nM, manje od 0.84 nM.8, manje od nM manje od 0.82 nM, manje od 0.81 nM, manje od 0.8 nM, manje od 0.75 nM, manje od 0.7 nM, manje od 0.65 nM, manje od 0.64 nM, manje od 0.63 nM, manje od 0.62 nM, manje od 0.1 nM, nM manje od 0.6 nM, manje od 0.55 nM, manje od 0.5 nM, manje od 0.45 nM, manje od 0.4 nM, manje od 0.35 nM, manje od 0.3 nM., manje od 0.29 nM, manje od 0.28 nM, manje od 0.27 nM, manje od 0.26 nM, manje od 0.25 nM, manje od 0.24 nM od 3, manje od n M. 0.22 nM, manje od 0.21 nM, manje od 0.2 nM, manje od 0.15 nM, manje od 0.1 nM, manje od 0.09 nM, manje od 0.08 nM, manje od 0.07 nM, manje od 0.06 nM, manje od nM, manje od nM 0.04 nM, manje od 0.03 nM, manje od 0.02 nM, manje od 0.01 nM, manje od 0.009 nM, manje od 0.008 nM, manje od 0.007 nM, manje od 0.006 nM, manje od 0.00 nM manje od 0.00 nM 0.003 nM, manje od 0.002 nM ili manje od 0.001 nM.
[0288] U određenim primerima izvođenja, konstanta disocijacije (KD) antitela za sortilin je od oko 0.560 nM do oko 1.63 nM, na primer kada je KDutvrđuje FACS. U određenim primerima izvođenja, konstanta disocijacije (KD) antitela za sortilin je od oko 0.270 nM do oko 2.910 nM, na primer kada je KDse određuje BioLayer interferometrijom. U nekim primerima izvođenja, antitelo ima konstantu disocijacije (KD) za humani sortilin, mišji sortilin ili oba, koji se kreće od oko 0.36 nM do oko 0.43 nM, ili manje od 1.02 nM. U nekim primerima izvođenja, konstanta disocijacije je manja od 1.02 nM. U nekim primerima izvođenja, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima konstantu disocijacije za humani sortilin od .560 nM ili manje.
[0289] U jednom specifičnom izvođenju, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima konstantu disocijacije za humani sortilin od oko .560 nM. U jednom specifičnom izvođenju, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima konstantu disocijacije za humani sortilin od oko .423 nM. U jednom specifičnom izvođenju, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima konstantu disocijacije za humani sortilin od oko .365 nM. U jednom specifičnom izvođenju, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima konstantu disocijacije za humani sortilin od oko .344 nM. U jednom specifičnom izvođenju, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima konstantu disocijacije za humani sortilin od oko .298 nM. U jednom specifičnom izvođenju, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima konstantu disocijacije za humani sortilin od oko .270 nM. U drugom specifičnom izvođenju, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima konstantu disocijacije za humani sortilin od oko .260 nM.
[0290] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju nižu konstantu disocijacije (KD) za sortilin nego za kontrolno anti-sortilin antitelo (npr., kontrolno antisortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju a KDza cilj (npr. ljudski sortilin) koji je najmanje oko 5%, najmanje oko 10%, najmanje oko 15%, najmanje oko 20%, najmanje oko 25%, najmanje oko 30%, najmanje oko 35%, najmanje oko 40%, najmanje oko 45%, najmanje oko 50%, najmanje oko 55%, najmanje oko 60%, najmanje oko 65%, najmanje oko 70%, najmanje oko 75%, najmanje oko 80%, najmanje oko 85%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95%, ili najmanje oko 99% niže od KDkontrolnog anti-sortilin antitela za cilj (npr., kontrolno antisortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju KDza ciljno mesto (npr., humani sortilin) koji je najmanje oko 1 puta, najmanje oko 1.1 puta, najmanje oko 1.5 puta, najmanje oko 2 puta, najmanje oko 3 puta, najmanje oko 4 puta, na najmanje oko 5 puta, najmanje oko 6 puta, najmanje oko 7 puta, najmanje oko 8 puta, najmanje oko 9 puta, najmanje oko 10 puta, najmanje oko 12.5 puta, najmanje oko 15 puta, najmanje oko 17.5 puta, najmanje oko 20 puta, najmanje oko 22.5 puta, najmanje oko 25 puta, najmanje oko 27.5 puta, najmanje oko 30 puta, najmanje oko 50 puta, najmanje oko 100 puta, najmanje oko 200 puta, najmanje oko 300 puta, najmanje oko 400 puta, najmanje oko 500 puta, najmanje oko 600 puta, najmanje oko 700 - puta, najmanje oko 800 puta, najmanje oko 900 puta, ili najmanje oko 000 puta niže od KDkontrolnog antisortilin antitela za cilj (npr., kontrolno anti-sortilin antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60.
[0291] U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju KDza humani sortilin koji je najmanje 100 puta niži od anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju KDza humani sortilin koji je najmanje 50 puta niži od antisortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju KDza humani sortilin koji je najmanje 10 puta niži od anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U nekim primerima izvođenja, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku imaju KDza humani sortilin koji je najmanje 5 puta niži od anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U nekim primerima izvođenja, antitela na sortilin prema ovom pronalasku imaju KDza humani sortilin koji je najmanje 2 puta niži od anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60.
[0292] U specifičnom izvođenju, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima KDza humani sortilin koji je oko 2.79 puta niži od anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60. U drugom specifičnom izvođenju, antitelo na sortilin prema ovom pronalasku ima KDza humani sortilin koji je oko 2.05 puta niži od anti-sortilin antitela koje ima varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji odgovara S-60.
(2) Fragmenti antitela
[0293] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, antitelo antitela je fragment antitela. Fragmenti antitela uključuju, ali nisu ograničeni na, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv i scFv fragmenti i drugi fragmenti opisani u nastavku. Za pregled određenih fragmenata antitela, videti Hudson et al. Nat. Med.9: 129-134 (2003.).). Za pregled scFv fragmenata, videti, npr. WO 93/16185; i U.S. Patent Nos.5571894 i 5587458. Za diskusiju o Fab i F(ab')2fragmenti koji sadrže ostatke epitopa koji vezuju receptor za spasavanje i koji imaju povećani in vivo polu život, videti U.S. Patent No.
5869046.
[0294] Diatela su fragmenti antitela sa dva mesta za vezivanje antigena koja mogu biti dvovalentna ili bispecifična. Videti, na primer, EP404097; WO 1993/01161; Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003.).). Triatela i tetratela su takođe opisana u Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)). Antitela sa jednim domenom su fragmenti antitela koji sadrže ceo ili deo varijabilnog domena teškog lanca ili ceo ili deo varijabilnog domena lakog lanca antitela. U određenim primerima izvođenja, jednodomensko antitelo je humano jednodomensko antitelo (videti, npr. U.S. Patent No.6248516).
[0295] Fragmenti antitela se mogu napraviti različitim tehnikama, uključujući, ali ne ograničavajući se na proteolitičku digestiju intaktnog antitela, kao i proizvodnju od strane rekombinantnih ćelija domaćina (npr., E. coli ili fag), kao što je ovde opisano.
[0296] U nekim primerima izvođenja, fragment antitela se koristi u kombinaciji sa drugim sortilin antitelom i/ili sa jednim ili više antitela koja specifično vezuju protein koji izaziva bolest izabranu između: amiloid beta ili njegovih fragmenata, Tau, IAPP, alfa-sinukleina, TDP -43, FUS protein, prionski protein, PrPSc, huntingtin, kalcitonin, superoksid dismutaza, ataksin, Levijevo telo, atrijalni natriuretički faktor, amiloidni polipeptid ostrvaca, insulin, apolipoprotein AI, serum amiloid A, medin, prolaktin, transtiretin, lizozime, beta 2 mikroglobulin, gelsolin, keratoepitelin, cistatin, imunoglobulin laki lanac AL, S-IBM protein, Repeat-associated non-ATG (RAN) translacioni proizvodi, DiPeptide repeat (DPR) peptidi, glicin-alanin (GA) peptidni ponovci, glicine-prolin (GP) peptidni ponovci, glicinarginin (GR) peptidni ponovci, prolin-alanin (PA) peptidni ponovci, prolin-arginin (PR) peptidni ponovci, i bilo koja njihova kombinacija.
(3) Himerna i humanizovana antitela
[0297] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde datih antitela, antitelo je himerno antitelo. Određena himerna antitela su opisana, npr., u U.S. Patent No. 4816567. U jednom primeru, himerno antitelo sadrži ne-humani varijabilni region (npr., varijabilni region dobijen od miša, pacova, hrčka, zeca ili primata koji nije čovek, kao što je majmun) i humani konstantni region. U daljem primeru, himerno antitelo je antitelo „promenjene klase“ u kome je klasa ili podklasa promenjena u odnosu na onu kod roditeljskog antitela. Himerna antitela uključuju njihove fragmente koji se vezuju za antigen.
[0298] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, antitelo je humanizovano antitelo. Tipično, ne-humano antitelo je humanizovano da bi se smanjila imunogenost na ljude, uz zadržavanje specifičnosti i afiniteta roditeljskog ne-humanog antitela. U određenim primerima izvođenja, humanizovano antitelo je u suštini neimunogeno kod ljudi. U određenim primerima izvođenja, humanizovano antitelo ima suštinski isti afinitet za ciljn omesto kao antitelo druge vrste iz kojeg je izvedeno humanizovano antitelo. Videti, npr., U.S. Pat. No. 5530101, 5693761; 5693762; i 5585089. U određenim primerima izvođenja, identifikovane su aminokiseline varijabilnog domena antitela koje se mogu modifikovati bez smanjenja prirodnog afiniteta domena za vezivanje antigena uz istovremeno smanjenje njegove imunogenosti. Videti, npr., U.S. Pat. Nos. 5766886 i 5869619. Generalno, humanizovano antitelo obuhvata jedan ili više varijabilnih domena u kojima su HVR (ili njihovi delovi) izvedeni iz ne-humanog antitela, a FR (ili njihovi delovi) su izvedeni iz sekvenci humanih antitela. Humanizovano antitelo izborno će takođe sadržati bar deo humanog konstantnog regiona. U nekim primerima izvođenja, neki FR ostaci u humanizovanom antitelu su supstituisani odgovarajućim ostacima iz ne-humanog antitela (npr. antitela iz kojeg su dobijeni ostaci HVR), na primer, da bi se obnovila ili poboljšala specifičnost ili afinitet antitela.
[0299] Humanizovana antitela i postupci njihovog pravljenja razmatraju se, na primer, u Almagro et al. Front. Biosci. 13: 161 9-1633 (2008), i dalje su opisani, npr u US Patent Nos. 5821337, 7527791, 6982321, i 7087409. Humani okvirni regioni koji se mogu koristiti za humanizaciju uključuju, ali nisu ograničeni na: okvirne regione odabrane postupkom za „najbolje uklapanje“ (videti, npr. Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)); okvirni regioni izvedeni iz konsenzus sekvence humanih antitela određene podgrupe varijabilnih regiona lakog ili teškog lanca (videti, npr. Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. SAD 89:4285 (1992); i Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993.).)); humani zreli (somatski mutirani) okvirni regioni ili okvirni regioni humane klicine linije (videti, npr. Almagro i Fransson Front. Biosci.
13: 1619-1633 (2008)); i okvirni regioni izvedeni iz skrininga FR biblioteka (videti, npr. Baca et al. J. Biol. Chem.272: 10678-10684 (1997) i Rosok et al. J. Biol. Chem.271:22611-22618(1996)).
(4) Humana antitela
[0300] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, antitelo je humano antitelo.
Humana antitela se mogu proizvesti korišćenjem različitih tehnika poznatih u tehnici. Humana antitela su generalno opisana u van Dijk et al. Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001.).) i Lonberg Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008.).).
[0301] Humana antitela se mogu pripremiti davanjem imunogena transgenoj životinji koja je modifikovana da proizvodi intaktna humana antitela ili intaktna antitela sa humanim varijabilnim regionima kao odgovor na antigenski izazov. Mogu se konstruisati sojevi miševa kojima nedostaje proizvodnja mišjih antitela sa velikim fragmentima humanih Ig lokusa u očekivanju da će takvi miševi proizvoditi humana antitela u odsustvu mišjih antitela. Veliki humani Ig fragmenti mogu da sačuvaju veliku varijabilnu gensku raznovrsnost, kao i odgovarajuću regulaciju proizvodnje i ekspresije antitela. Iskorišćavanjem mašinerije miša za diverzifikaciju i selekciju antitela i nedostatak imunološke tolerancije na humane proteine, reprodukovani repertoar humanih antitela u ovim sojevima miševa može da proizvede potpuno humana antitela visokog afiniteta protiv bilo kog antigena od interesa, uključujući humane antigene. Koristeći tehnologiju hibridoma, mogu se proizvesti i odabrati antigenspecifična humana MAb sa željenom specifičnošću. Određeni primeri postupaka su opisani u U.S. Pat. No. 5545807, EP 546073, i EP 546073. Videti takođe, na primer, U.S. Patent Nos.6075181 i 6150584 koji opisuju XENOMOUSE<™>tehnologiju; U.S. Patent No. 5770429 koji opisuje HUMAB<®>tehnologiju; U.S. Patent No. 7041870 koji opisuje K-M MOUSE@ tehnologiju, i U.S. Patent Application Publication No. US 2007/0061900, koja opisuje VELOCIMOUSE<®>tehnologiju. Humani varijabilni regioni iz intaktnih antitela koje stvaraju takve životinje mogu se dalje modifikovati, npr., kombinovanjem sa različitim humanim konstantnim regionom.
[0302] Humana antitela se takođe mogu napraviti postupcima zasnovanim na hibridomima. Opisane su ćelijske linije humanog mijeloma i heteromijeloma miša i čoveka za proizvodnju humanih monoklonskih antitela. (Videti, npr. Kozbor J. Immunol. 133:3001 (1984) i Boemer et al. J. Immunol.
147:86 (1991)). Ljudska antitela stvorena tehnologijom hibridoma humanih B-ćelija su takođe opisana u Li et al. Proc. Natl. Acad. Sci. SAD, 103:3557-3562 (2006). Dodatni postupci uključuju one opisane, na primer, u U.S. Patent No. 7189826 (opisuje proizvodnju monoklonskih humanih IgM antitela iz hibridomskih ćelijskih linija). Tehnologija humanog hibridoma (Trioma tehnologija) je takođe opisana u Vollmers et al. Histology and Histopathology 20(3):927-937 (2005)) i Vollmers et al. Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(3): 185-91 (2005.). Humana antitela takođe mogu da se generišu izolovanjem sekvenci varijabilnog domena klona Fv izabranih iz biblioteka faga za prikaz faga. Takve sekvence varijabilnog domena se zatim mogu kombinovati sa željenim humanim konstantnim domenom. Tehnike za odabir humanih antitela iz biblioteka antitela su opisane u nastavku.
[0303] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde datih antitela, antitelo je humano antitelo izolovano pomoću in vitro postupaka i/ili skrininga kombinatornih biblioteka za antitela sa željenom aktivnošću ili aktivnostima. Pogodni primeri uključuju, ali nisu ograničeni na prikaz faga (CAT, Morphosys, Dyax, Biosite/Medarex, Xoma, Symphogen, Alexion (ranije Proliferon), Affimed) prikaz ribozoma (CAT), platforme zasnovane na kvascu (Adimab) i slično. U određenim postupcima prikaza faga, repertoari VH i VL gena se odvojeno kloniraju lančanom reakcijom polimeraze (PCR) i nasumično rekombinuju u bibliotekama faga, na kojime se zatim može izvršiti skrining na fag koji vezuje antigen kao što je opisano u Vinter et al. Ann. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994.).). Na primer, u struci su poznati različiti postupci za generisanje biblioteka za prikaz faga i skrining takvih biblioteka za antitela koja poseduju željene karakteristike vezivanja. Takođe videti Sidhu et al. J. Mol. Biol.
338(2): 299-310, 2004; Lee et al. J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093, 2004; Fellouse Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); i Lee et al. J. Immunol. Postupke 284(-2):119-132 (2004.)). Fag obično prikazuje fragmente antitela, bilo kao jednolančane Fv (scFv) fragmente ili kao Fab fragmente. Biblioteke iz imunizovanih izvora obezbeđuju antitela visokog afiniteta na imunogen bez potrebe za konstruisanjem hibridoma. Alternativno, naivni repertoar može da se klonira (npr. od čoveka) da bi se obezbedio jedan izvor antitela na širok spektar nesopstvenih, a takođe i sopstvenih antigena bez ikakve imunizacije kako je opisano u Griffiths et al. EMBO J. 12: 725-734 (1993). Konačno, naivne biblioteke se takođe mogu napraviti sintetički kloniranjem nepreuređenih V-genskih segmenata iz matičnih ćelija i korišćenjem PCR prajmera koji sadrže nasumične sekvence za kodiranje visoko varijabilnih HVR3 regiona i za postizanje preuređenja in vitro, kako opisuje Hoogenboom et al. J. Mol. Biol., 227: 381-388, 1992. Patentne publikacije koje opisuju biblioteke faga humanih antitela uključuju, na primer: US Patent No. 5750373, i US Patent Publication Nos. 2007/0292936 i 2009/0002360. Antitela izolovana iz biblioteka humanih antitela se ovde smatraju humanim antitelima ili fragmentima humanih antitela.
(5) Konstantni regioni uključujući Fc regione
[0304] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, antitelo sadrži Fc. U nekim primerima izvođenja, Fc je ljudski IgG1, IgG2, IgG3 i/ili IgG4 izotip. U nekim primerima izvođenja, antitelo je IgG klase, IgM klase ili IgA klase.
[0305] U određenim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, antitelo ima izotip IgG2. U nekim primerima izvođenja, antitelo sadrži humani IgG2 konstantni region. U nekim primerima izvođenja, humani IgG2 konstantni region uključuje Fc region. U nekim primerima izvođenja, antitelo indukuje jednu ili više aktivnosti sortilina ili nezavisno od vezivanja za Fc receptor. U nekim primerima izvođenja, antitelo vezuje inhibitorni Fc receptor. U određenim primerima izvođenja, inhibitorni Fc receptor je inhibitorni Fc-gama receptor IIB (FcγIIB).
[0306] U određenim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, antitelo ima izotip IgG1. U nekim primerima izvođenja, antitelo sadrži mišji IgG1 konstantni region. U nekim primerima izvođenja, antitelo sadrži humani IgG1 konstantni region. U nekim primerima izvođenja, humani IgG1 konstantni region uključuje Fc region. U nekim primerima izvođenja, antitelo vezuje inhibitorni Fc receptor. U određenim primerima izvođenja, inhibitorni Fc receptor je inhibitorni Fc-gama receptor IIB (FcillB).
[0307] U određenim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, antitelo ima izotip IgG4. U nekim primerima izvođenja, antitelo sadrži humani IgG4 konstantni region. U nekim primerima izvođenja, humani IgG4 konstantni region uključuje Fc region. U nekim primerima izvođenja, antitelo vezuje inhibitorni Fc receptor. U određenim primerima izvođenja, inhibitorni Fc receptor je inhibitorni Fc-gama receptor IIB (FcγIIB).
[0308] U određenim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, antitelo ima hibridni IgG2/4 izotip. U nekim primerima izvođenja, antitelo uključuje aminokiselinsku sekvencu koja sadrži aminokiseline od 118 do 260 prema EU numeraciji humanog IgG2 i aminokiseline 261-447 prema EU numeraciji humanog IgG4 (WO 1997/11971; WO 2007/106585).
[0309] U nekim primerima izvođenja, Fc region povećava klasterovanje bez aktiviranja komplementa u poređenju sa odgovarajućim antitelom koje sadrži Fc region koji ne sadrži aminokiselinske supstitucije. U nekim primerima izvođenja, antitelo indukuje jednu ili više aktivnosti ciljnog mesta specifično vezanog za antitelo. U nekim primerima izvođenja, antitelo se vezuje za sortilin.
[0310] Takođe može biti poželjno da se modifikuje anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku da se modifikuje efektorska funkcija i/ili da se poveća poluživot antitela u serumu. Na primer, mesto vezivanja Fc receptora na konstantnom regionu može biti modifikovano ili mutirano da bi se uklonio ili smanjio afinitet vezivanja za određene Fc receptore, kao što su FciRl, FciRII i/ili FcγRIII da bi se smanjila citotoksičnost posredovana ćelijama zavisna od antitela. U nekim primerima izvođenja, efektorska funkcija je oštećena uklanjanjem N-glikozilacije Fc regiona (npr., u CH2 domenu IgG) antitela. U nekim primerima izvođenja, efektorska funkcija je oštećena modifikovanjem regiona kao što su 233-236, 297 i/ili 327-331 humanog IgG kao što je opisano u WO 99/58572 i Armor et al. Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddi et al. J. Immunology 164: 1925-1933 (2000). U drugim primerima izvođenja, takođe može biti poželjno da se modifikuje anti-sortilin antitelo iz ovog otkrića da se modifikuje efektorska funkcija kako bi se povećala selektivnost pronalaženja prema FcgRIIb (CD32b) koji sadrži ITIM da bi se povećalo grupisanje sortilin antitela na susednim ćelijama bez aktiviranja humoralnih odgovora uključujući ćelijski posredovanu citotoksičnost zavisnu od antitela i ćelijsku fagocitozu zavisnu od antitela.
[0311] Da bi se produžio poluživot antitela u serumu, može se u antitelo (naročito fragment antitela) ugraditi epitop koji se vezuje za receptor za spasavanje, kao što je opisano u U.S. Patent 5739277, npr., Kako se ovde koristi, termin "epitop koji vezuje receptor za spasavanje" odnosi se na epitop Fc regiona IgG molekula (npr., IgG1, IgG2, IgG3ili IgG4) koji je odgovoran za povećanje in vivo poluživota molekula IgG u serumu. Druge modifikacije sekvence aminokiselina.
(6) Multispecifična antitela
[0312] Multispecifična su antitela koja imaju specifičnosti vezivanja za najmanje dva različita epitopa, uključujući one na istom ili drugom polipeptidu (npr., jedan ili više sortilin polipeptida prema ovom pronalasku). U nekim primerima izvođenja, multispecifično antitelo može biti bispecifično antitelo, U nekim primerima izvođenja, multispecifično antitelo može biti trispecifično antitelo. U nekim primerima izvođenja, multispecifično antitelo može biti tetraspecifično antitelo. Takva antitela mogu biti izvedena iz antitela pune dužine ili fragmenata antitela (npr. F(ab')2bispecifična antitela). U nekim primerima izvođenja, multispecifično antitelo sadrži prvi region vezivanja antigena koji se vezuje za prvo mesto na sortilinu i sadrži drugi region vezivanja antigena koji se vezuje za drugo mesto na sortilinu. U nekom izvođenju, multispecifična antitela obuhvataju prvi region za vezivanje antigena koji se vezuje za Sortilin i drugi region koji se vezuje za antigen koji se vezuje za drugi polipeptid.
[0313] Ovde su obezbeđena multispecifična antitela koja sadrže prvi region za vezivanje antigena, pri čemu prvi region za vezivanje antigena sadrži šest HVR ovde opisanog antitela, koje se vezuje za sortilin i drugi region za vezivanje antigena koji se vezuje za drugi polipeptid. U nekim primerima izvođenja, prvi region vezivanja antigena sadrži VHili VLovde opisanog antitela.
[0314] U nekim primerima izvođenja bilo kog od multispecifičnih antitela, drugi polipeptid je a) antigen koji olakšava transport kroz krvno-moždanu barijeru; (b) antigen koji olakšava transport kroz krvno-moždanu barijeru izabran od receptora transferina (TR), receptora insulina (HIR), receptora faktora rasta sličnog insulinu (IGFR), proteina 1 i 2 povezanih sa receptorom lipoproteina niske gustine (LPR -1 i 2), receptor difterijskog toksina, CRM197, jednodomensko antitelo lame. TMEM 30(A), domen transdukcije proteina, TAT, Sin-B, penetratin, poli-argininski peptid, angiopep peptid i ANG1005; (c) protein koji izaziva bolest izabran između amiloida beta, oligomernog amiloid beta, amiloid beta plakova, amiloidnog prekursora proteina ili njihovih fragmenata, Tau, IAPP, alfasinukleina, TDP-43, FUS proteina, C9orf72 (otvoreni okvir za čitanje hromozoma 9 72), c9RAN protein, prionski protein, PrPSc, huntingtin, kalcitonin, superoksid dismutaza, ataksin, ataksin 1, ataksin 2, ataksin 3, ataksin 7, ataksin 8, ataksin 10, Levijevo telo, atrijalni natriuretski faktor, popeptidni insulinski faktor, apolipoprotein AI, serumski amiloid A, medin, prolaktin, transtiretin, lizozim, beta 2 mikroglobulin, gelsolin, keratoepitelin, cistatin, AL lakog lanca imunoglobulina, S-IBM protein, ne-ATG (RAN) ponovci prioizvodi translacije povezani sa ponovcima, DiPeptid (DPR) peptidi, glicin-alanin (GA) peptidi ponovci, glicin-prolin (GP) peptidi ponovci, glicin-arginin (GR) peptidi ponovci, prolin-alanin (PA) peptidi ponovci, ubikvitin i prolin-arginin (PR) peptidi ponovci; (d) ligandi i/ili proteini eksprimirani na imunim ćelijama, pri čemu su ligandi i/ili proteini odabrani između CD40, OKS40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA-4, PD- L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG-3 i fosfatidilserina; i/ili (e) protein, lipid, polisaharid ili glikolipid eksprimiran na jednoj ili više tumorskih ćelija i bilo koja njihova kombinacija.
[0315] U tehnici su poznati brojni antigeni koji olakšavaju transport kroz krvno-moždanu barijeru (videti, npr., Gabathuler R. Neurobiol. Dis. 37:48-57 (2010.).)). Takvi drugi antigeni uključuju, bez ograničenja, receptor transferina (TR), insulinski receptor (HIR), receptor faktora rasta sličan insulinu (IGFR), proteine 1 i 2 povezane sa receptorom lipoproteina niske gustine (LPR-1 i 2), receptor toksina difterije, uključujući CRM 197 (netoksični mutant difterijskog toksina), jednodomenska antitela lame kao što je TMEM 30(A) (Flippase), domene proteinske transdukcije kao što su TAT, Sin-B ili penetratin, poli-arginin ili uopšte pozitivno naelektrisani peptidi, Angiopep peptidi kao što je ANG1005 (videti, npr., Gabathuler, 2010), i druge proteine ćelijske površine koji su obogaćeni endotelnim ćelijama krvno-moždane barijere (videti, npr., Daneman et al. PLoS One 5(10):e13741 (2010)).
[0316] Multivalentna antitela mogu da prepoznaju sortilin antigen kao i bez ograničenja dodatne antigene Aβ peptid, antigen ili α-sinuklein proteinski antigen ili, Tau proteinski antigen ili, TDP-43 proteinski antigen ili, prionski proteinski antigen ili, Hanttingin proteinski antigen, ili RAN, antigen translacionog proizvoda, uključujući DiPeptide ponovke, (DPRs peptide) koji se sastoje od glicinalanina (GA), glicin-prolina (GP), glicin-arginina (GR), prolin-alanina (PA) ili prolin-arginina ( PR), insulinski receptor, receptor faktora rasta sličan insulinu. Transferin receptor ili bilo koji drugi antigen koji olakšava prenos antitela kroz krvno-moždanu barijeru. U nekim primerima izvođenja, drugi polipeptid je transferin. U nekim primerima izvođenja, drugi polipeptid je Tau. U nekim primerima izvođenja, drugi polipeptid je Ap. U nekim primerima izvođenja, drugi polipeptid je TREM2. U nekim primerima izvođenja, drugi polipeptid je α-sinuklein.
[0317] Multivalentno antitelo sadrži najmanje jedan polipeptidni lanac (i poželjno dva polipeptidna lanca), pri čemu polipeptidni lanac ili lanci sadrže dva ili više varijabilnih domena. Na primer, polipeptidni lanac ili lanci mogu sadržati VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc, gde je VD 1 prvi varijabilni domen, VD2 je drugi varijabilni domen, Fc je jedan polipeptidni lanac Fc regiona, X1 i X2 predstavljaju aminokiselinu ili polipeptid, a n je 0 ili 1. Slično, polipeptid lanac ili lanci mogu sadržati lanac VR-CR1-fleksibilnog linkera-VH-CH1-Fc regiona; ili VH-CH1-VR-CH1-Fc regiona. Multivalentno antitelo ovde poželjno dalje sadrži najmanje dva (i poželjno četiri) polipeptida varijabilnog domena lakog lanca. Multivalentno antitelo ovde može, na primer, da sadrži od oko dva do oko osam polipeptida varijabilnog domena lakog lanca. Polipeptidi varijabilnog domena lakog lanca koji se ovde razmatraju obuhvataju varijabilni domen lakog lanca i, izborno, dalje sadrže CL domen.
[0318] Tehnike za pravljenje multispecifičnih antitela uključuju, ali nisu ograničene na, rekombinantnu koekspresiju dva para imunoglobulina teškog lanca-lakog lanca koji imaju različite specifičnosti (videti Milstein i Cuello Nature 305: 537 (1983), WO 93/08829, i Traunecker et al. EMBO J.10:3655 (1991)), i inženjering „knob-in-hole“ (videti, npr. U.S. Patent No. 5731168). Takođe videti WO 2013/026833 (CrossMab). Multispecifična antitela se takođe mogu napraviti inženjeringom upravljanja elektrostatičkim efektima za pravljenje Fc-heterodimernih molekula antitela (WO 2009/089004A1); unakrsno povezivanje dva ili više antitela (videti, npr. US Patent No. 4676980); korišćenje leucina; korišćenje "diatelo" tehnologije za pravljenje fragmenata bispecifičnih antitela (videti, npr. Hollinger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. SAD 90:6444-6448 (1993)), i korišćenjem jednolančanih Fv (scFv) dimera (videti, npr., Gruber et al. J. Immunol. 152:5368 (1994)); i priprema trispecifičnih antitela kako je opisano, npr., u Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991.).).
[0319] Konstruisana antitela sa tri ili više funkcionalnih mesta vezivanja antigena, uključujući "antitela hobotnice", takođe su uključena ovde (videti, npr., US 2006/0025576). Antitelo ovde takođe uključuje „FAb sa dvostrukim dejstvom“ ili „DAF“ koje sadrži mesto vezivanja antigena koje se vezuje za višestruki sortilin (videti, US 2008/0069820, na primer).
(7) Antitela sa poboljšanom stabilnošću
[0320] Modifikacije aminokiselinske sekvence antitela na sortilin prema ovom pronalasku, ili njihovih fragmenata antitela radi poboljšanja stabilnosti tokom proizvodnje, skladištenja i in vivo primene, takođe se razmatraju. Na primer, može biti poželjno da se smanji degradacija antitela ili fragmenata antitela iz ovog otkrića kroz više puteva, uključujući bez ograničenja, oksidaciju i deamidaciju. Varijante sekvence aminokiselina antitela ili fragmenata antitela se pripremaju uvođenjem odgovarajućih nukleotidnih promena u nukleinsku kiselinu koja kodira antitela ili fragmente antitela, ili sintezom peptida. Takve modifikacije obuhvataju, na primer, delecije iz, i/ili insercije u i/ili supstitucije, ostataka unutar aminokiselinskih sekvenci antitela. Bilo koja kombinacija delecije, insercije i supstitucije može se napraviti da bi se došlo do konačnog konstrukta, pod uslovom da konačni konstrukt poseduje željene karakteristike (tj. smanjenu podložnost degradaciji).
[0321] U nekim primerima izvođenja, mesto asparagina (N33) u HVR-Ll regionu antitela na sortilin prema ovom pronalasku može biti podložno degradaciji putem deamidacije. U određenim primerima izvođenja, mesto asparagina (N33) u HVR-L1 regionu S-60-15 (SEQ ID NO:8) može biti podložno deamidaciji. Nakon deamidacije, mesto asparagina (N33) u HVR-L1 regionu S-60-15 dovodi do promene Asn u Asp/IsoAsp. U određenim primerima izvođenja, mesto asparagina (N33) u HVR-Ll regionu S-60-15 može biti zamenjeno da bi se sprečila ili smanjila deamidacija. Neograničavajući primeri varijanti sekvence aminokiselina S-60-15 koje imaju supstitucije aminokiselina na mestu asparagina (N33) HVR-Ll regiona uključuju S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M] ili S-60-15.17 [N33L].
(8) Varijante antitela
[0322] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde datih antitela, razmatrane su varijante sekvence aminokiselina antitela. Na primer, može biti poželjno da se poboljša afinitet vezivanja i/ili druga biološka svojstva antitela.
(i) Varijante supstitucije, insercije i delecije
[0323] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde datih antitela, obezbeđene su varijante antitela koje imaju jednu ili više supstitucija aminokiselina. Varijante aminokiselinske sekvence antitela mogu biti pripremljene uvođenjem odgovarajućih modifikacija u nukleotidnu sekvencu koja kodira antitelo, ili sintezom peptida. Takve modifikacije obuhvataju, na primer, delecije iz, i/ili insercije u i/ili supstitucije ostataka unutar aminokiselinskih sekvenci antitela.
TABELA 37: Supstitucije aminokiselina
[0324] Značajne modifikacije u biološkim svojstvima antitela se postižu odabirom supstitucija koje se značajno razlikuju po svom efektu na održavanje (a) strukture polipeptidne kičme u oblasti supstitucije, na primer, kao ploča ili spiralna konformacija, (b ) naelektrisanje ili hidrofobnost molekula na ciljnom mestu, ili (c) najveći deo bočnog lanca. Prirodni ostaci su podeljeni u grupe na osnovu zajedničkih svojstava bočnog lanca:
(1) hidrofobni: Norleucin, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) neutralni hidrofilni: Cis, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) kiseli: Asp, Glu;
(4) osnovni: His, Lis, Arg;
(5) ostaci koji utiču na orijentaciju lanca: Gli, Pro; i
(6) aromatični: Trp, Tir, Phe.
[0325] Na primer, nekonzervativne supstitucije mogu uključivati razmenu člana jedne od ovih klasa za člana iz druge klase. Takvi supstituisani ostaci mogu biti uvedeni, na primer, u regione humanog antitela koji su homologi sa nehumanim antitelima, ili u nehomologne regione molekula.
[0326] U pravljenju promena na polipeptidu ili antitelu opisanom ovde, u skladu sa određenim primerima izvođenja, hidropatski indeks aminokiselina može se uzeti u obzir. Svakoj aminokiselini je dodeljen hidropatski indeks na osnovu njene hidrofobnosti i karakteristika naelektrisanja. To su: izoleucin (+4.5); valin (+4.2); leucin (+3.8); fenilalanin (+2.8); cistein/cistin (+2.5); metionin (+1.9); alanin (+1.8); glicin (-0.4); treonin (-0.7); serin (-0.8); triptofan (-0.9); tirozin (-1.3); prolin (-1.6); histidin (-3.2); glutamat (-3.5); glutamin (-3.5); aspartat (-3.5); asparagin (-3.5); lizin (-3.9); i arginin (-4.5).
[0327] Značaj hidropatskog aminokiselinskog indeksa u davanju interaktivne biološke funkcije proteinu je shvaćen u tehnici. Kite et al. J. Mol. Biol., 157:105-131 (1982)). Poznato je da određene aminokiseline mogu biti zamenjene drugim aminokiselinama koje imaju sličan hidropatski indeks ili rezultat i da i dalje zadržavaju sličnu biološku aktivnost. U vršenju promena na osnovu hidropatskog indeksa, u određenim primerima izvođenja, uključena je supstitucija aminokiselina čiji su hidropatski indeksi unutar ±2. U određenim primerima izvođenja, uključeni su oni koji su unutar ±1, a u određenim primerima izvođenja uključeni su oni unutar ±0.5.
[0328] U tehnici se takođe shvata da se supstitucija sličnih aminokiselina može efikasno izvršiti na osnovu hidrofilnosti, posebno kada je biološki funkcionalni protein ili peptid koji se na taj način stvara namenjen za upotrebu u imunološkim rešenjima, kao u ovom slučaju. U određenim primerima izvođenja, najveća lokalna prosečna hidrofilnost proteina, kako je regulisana hidrofilnošću njegovih susednih aminokiselina, u korelaciji je sa njegovom imunogenošću i antigenošću, tj., sa biološkim svojstvom proteina.
[0329] Sledeće vrednosti hidrofilnosti dodeljene su ovim aminokiselinskim ostacima: arginin (+3.0); lizin (+3.0+1); aspartat (+3.0±1); glutamat (+3.0±1); serin (+0.3); asparagin (+0.2); glutamin (+0.2); glicin (0); treonin (-0.4); prolin (-0.5±1); alanin (-0.5); histidin (-0.5); cistein (-1.0); metionin (-1.3); valin (-1.5); leucin (-1.8); izoleucin (-1.8); tirozin (-2.3); fenilalanin (-2.5) i triptofan (-3.4). Prilikom pravljenja promena na osnovu sličnih vrednosti hidrofilnosti, u određenim primerima izvođenja, uključena je supstitucija aminokiselina čije su vrednosti hidrofilnosti unutar ±2, u određenim primerima izvođenja uključene su one koje su unutar ±1, a u određenim primerima izvođenja one unutar ±0.5 su uključene. Takođe se mogu identifikovati epitopi iz primarnih aminokiselinskih sekvenci na osnovu hidrofilnosti. Ovi regioni se takođe nazivaju „regionima epitopskog jezgra“.
[0330] U određenim primerima izvođenja, supstitucije, insercije ili delecije se mogu javiti unutar jednog ili više HVR sve dok takve promene ne smanjuju značajno sposobnost antitela da veže antigen. Na primer, konzervativne izmene (npr., konzervativne supstitucije kao što je ovde predviđeno) koje suštinski ne smanjuju afinitet vezivanja mogu se napraviti u HVR. Takve promene mogu, na primer, biti izvan ostataka koji kontaktiraju antigen u HVR. U određenim primerima izvođenja varijanti VH i VL sekvenci koje su date gore, svaka HVR ili je nepromenjena, ili ne sadrži više od jedne, dve ili tri aminokiselinske supstitucije.
[0331] Insercije sekvence aminokiselina uključuju amino- i/ili karboksil-terminalne fuzije dužine u rasponu od jednog ostatka do polipeptida koji sadrže stotinu ili više ostataka, kao i intrasekvenciona insercije pojedinačnih ili višestrukih aminokiselinskih ostataka. Primeri terminalnih insercija uključuju antitelo sa N-terminalnim metionil ostatkom. Druge insercione varijante molekula antitela uključuju fuziju na N- ili C-terminus antitela sa enzimom (npr. za ADEPT) ili polipeptidom koji povećava poluživot antitela u serumu.
[0332] Bilo koji cisteinski ostatak koji nije uključen u održavanje pravilne konformacije antitela takođe može biti zamenjen, generalno serinom, da bi se poboljšala oksidativna stabilnost molekula i sprečilo aberantno unakrsno vezivanje. Nasuprot tome, cisteinska veza(e) se može dodati antitelu da bi se poboljšala njegova stabilnost (naročito kada je antitelo fragment antitela, kao što je Fv fragment).
(ii) varijante glikozilacije
[0333] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde datih antitela, antitelo se menja da bi se povećao ili smanjio stepen do kojeg je antitelo glikozilovano. Dodavanje ili brisanje glikozilacionih mesta na antitelo može se pogodno postići promenom aminokiselinske sekvence tako da se stvori ili ukloni jedno ili više mesta glikozilacije.
[0334] Glikozilacija antitela je tipično ili N-vezana ili O-vezana. N-vezana odnosi se na vezivanje ugljenohidratnog dela za bočni lanac asparaginskog ostatka. Tripeptidne sekvence asparagin-X-serin i asparagin-X-treonin, gde je X bilo koja aminokiselina osim prolina, su sekvence prepoznavanja za enzimsko vezivanje ugljenohidratnog dela za bočni lanac asparagina. Dakle, prisustvo bilo koje od ovih tripeptidnih sekvenci u polipeptidu stvara potencijalno mesto glikozilacije, O-vezana glikozilacija se odnosi na vezivanje jednog od šećera N-aceilgalaktozamina, galaktoze ili ksiloze za hidroksiaminokiselinu, najčešće serin ili treonin, iako se takođe mogu koristiti 5-hidroksiprolin ili 5-hidroksilizin.
[0335] Dodavanje mesta glikozilacije na antitelo se pogodno postiže promenom aminokiselinske sekvence tako da sadrži jednu ili više od gore opisanih tripeptidnih sekvenci (za N-vezana mesta glikozilacije). Promena se takođe može izvršiti dodavanjem, ili supstitucijom, jednim ili više ostataka serina ili treonina u sekvencu originalnog antitela (za O-vezana mesta glikozilacije).
[0336] Tamo gde antitelo sadrži Fc region, ugljeni hidrat vezan za njega može biti izmenjen. Nativna antitela proizvedena u ćelijama sisara tipično sadrže razgranati, biantenarni oligosaharid koji je generalno vezan N-vezom za Asn297 prema Kabat numerisanju CH2 domena Fc regiona. Oligosaharid može uključivati različite ugljene hidrate, na primer, manozu, N-acetil glukozamin (GlcNAc), galaktozu i sijalinsku kiselinu, kao i fukozu vezanu za GlcNAc u "stablu" biantenarne strukture oligosaharida. U nekim primerima izvođenja, modifikacije oligosaharida u antitelu pronalaska mogu da se naprave da bi se stvorilo varijanta antitela sa određenim poboljšanim svojstvima.
[0337] U jednom aspektu, varijante antitela daju se sa strukturom ugljenih hidrata kojoj nedostaje fukoza vezana (direktno ili indirektno) za Fc region. Videti, npr., US Patent Publication Nos.
2003/0157108 i 2004/0093621. Primeri publikacija u vezi sa varijantama antitela sa „defukozilovanim“ ili „deficijentnom fukozom“ uključuju: US 2003/0157108; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004.).); Iamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614 (2004). Primeri ćelijskih linija sposobnih da proizvode defukozilovana antitela uključuju Led 3 CHO ćelije sa nedostatkom fukozilacije proteina (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986).); US 2003/0157108), i nokaut ćelijske linije, kao što je gen alfa-1.6-fukoziltransferaze, FUT8, nokaut ćelije CHO (videti, npr., Iamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004).) i Kanda et al. Biotechnol. Bioeng. 94(4):680-688 (2006))).
(iii) Modifikovani konstantni regioni
[0338] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde datih antitela, antitelo Fc je izotip i/ili modifikacija Fc antitela. U nekim primerima izvođenja, Fc izotip i/ili modifikacija antitela je sposobna da se veže za Fc gama receptor.
[0339] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, modifikovani Fc antitelo je modifikovani Fc IgG1. U nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG1 sadrži jednu ili više modifikacija. Na primer, u nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG1 sadrži jednu ili više aminokiselinskih supstitucija (npr., u odnosu na divlji tip Fc regiona istog izotipa). U nekim primerima izvođenja, jedna ili više aminokiselinskih supstitucija se biraju između N297A (Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23:403-41 1), D265A (Shields et al. (2001) R. J. Biol. Chem. 276, 6591-66(4), L234A, L235A (Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984; Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543, 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A (Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537-1543.31; Xu et al. (2000) Cell Immunol, 200: 16-26), C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E (McEarchem et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P331S (Sazinski et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105:20167-20172), S267E, L328F, A330L, M252I, S254T i/ili T256E, gde je pozicija aminokiselina u skladu sa konvencijom EU numeracije. U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde datih antitela, antitelo je izotip IgG1 i Fc region sadrži aminokiselinske supstitucije na pozicijama L234A, L235A i P331S, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numeraciji.
[0340] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži mutaciju N297A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži D265A i N297A mutacije prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži D270A mutacije prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG1 sadrži mutacije L234A i L235A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži mutacije L234A i G237A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži mutacije L234A, L235A i G237A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo koje od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži jednu ili više (uključujući sve) P238D, L328E, E233, G237D, H268D, P271G i A330R mutacija prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži jednu ili više mutacija S267E/L328F prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo koje od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G i A330R mutacije prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo koje od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži P238D, L328E, G237D, H268D, P271G i A330R mutacije prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo koje od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži P238D, S267E, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G i A330R mutacije prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo koje od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži P238D, S267E, L328E, G237D, H268D, P271G i A330R mutacije prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo koje od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži mutacije C226S, C229S, E233P, L234V i L235A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanog Fc, Fc sadrži mutacije L234F, L235E i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži S267E i L328F mutacije prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanih Fc, Fc sadrži S267E mutacije prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanog Fc, Fc sadrži supstituent za konstantni 1 teškog lanca (CH1) i zglobni region IgG1 sa CH1 i zglobni region IgG2 (aminokiseline 118-230 IgG2 prema EU numeraciji) sa kapa lakim lancem.
[0341] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanog Fc, Fc uključuje dve ili više supstitucija aminokiselina koje povećavaju klasterovanje antitela bez aktiviranja komplementa u poređenju sa odgovarajućim antitelom koje ima Fc region koji ne uključuje dve ili više supstitucija aminokiselina. Shodno tome, u nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanih Fc, modifikovani Fc IgG1 je antitelo koje sadrži Fc region, gde antitelo sadrži aminokiselinsku supstituciju na poziciji E430G i jednu ili više aminokiselinskih supstitucija u Fc regionu na ostatku pozicija izabranih između: L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, i bilo koja njihova kombinacija prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG1 sadrži supstituciju aminokiselina na pozicijama E430G, L243A, L235A i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG1 sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG1 sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G i K322A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG1 sadrži supstituciju aminokiselina na pozicijama E430G, A330S i P33 1S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG1 sadrži supstituciju aminokiselina na pozicijama E430G, K322A, A330S i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG1 sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G, K322A i A330S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja, IgG 1 modifikovani Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G, K322A i P331S prema EU numeraciji.
[0342] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanog Fc, modifikovani Fc IgG1 može dalje da se kombinuje sa A330L mutacijom (Lazar et al. Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010 (2006.)), ili jednu ili više mutacija L234F, L235E i/ili P331S (Sazinski et al. Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172 (2008)), prema konvenciji EU numeracije, da bi se eliminisala aktivacija komplementa. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanog Fc, IgG1 modifikovanog Fc može dalje da sadrži jedan ili više od A330L, A330S, L234F, L235E i/ili P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanog Fc, IgG1 modifikovanog Fc može dalje da sadrži jednu ili više mutacija za poboljšanje poluživota antitela u humanom serumu (npr., jednu ili više (uključujući sve) mutacije M252I, S254T i T256E prema konvenciji EU numeracije). U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 modifikovanog Fc, modifikovani Fc IgG1 može dalje da sadrži jedan ili više od E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, E345K, E345R, E345I, S440I i/ili prema EU numeraciji.
[0343] Drugi aspekti ovog otkrića odnose se na antitela koja imaju modifikovane konstantne regione (tj., Fc regioni). Antitelo koje zavisi od vezivanja za FcgR receptor da bi aktiviralo ciljane receptore može izgubiti svoju agonističku aktivnost ako je projektovano da eliminiše FcgR vezivanje (videti, npr., Vilson et al. Cancer Cell 19: 101-113 (2011); Armour et al. Imunology 40:585-593 (2003), i White et al. Cancer Cell 27: 138-148 (2015)). Kao takvo, smatra se da anti-Sortlin antitelo ovog otkrića sa tačnom specifičnošću epitopa može aktivirati ciljni antigen, sa minimalnim neželjenim efektima, kada antitelo ima Fc domen iz humanog IgG2 izotipa (CH1 i zglobni region) ili drugi tip Fc domena koji je sposoban da prvenstveno veže inhibitorne FcgRIIB r receptore, ili njihovu varijaciju.
[0344] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, modifikovano antitelo Fc je IgG2 modifikovani Fc. U nekim primerima izvođenja, IgG2 modifikovani Fc sadrži jednu ili više modifikacija. Na primer, u nekim primerima izvođenja, IgG2 modifikovani Fc sadrži jednu ili više aminokiselinskih supstitucija (npr. u odnosu na divlji tip Fc regiona istog izotipa). U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, jedna ili više aminokiselinskih supstitucija se biraju između V234A (Alegre et al. Transplantation 57:1537-1543 (1994); Xu et al. Cell Immunol, 200:16-26 (2000)); G237A (Cole et al. Transplantation, 68:563-571 (1999.).)); H268K, V309L, A330S, P331S (US 2007/0148167; Armour et al. Eur J Immunol 29: 2613-2624 (1999); Armour et al. The Hematology Journal 1 (Suppl.1):27 (2000); Armour et al. The Hematology Journal 1 (Suppl. 1): 27 (2000)), C219S i/ili C220S (White et al. Cancer Cell 27, 138-148 (2015)); S267E, L328F (Chu et al. Mol Immunol. 45:3926-3933 (2008)); i M252I, S254T i/ili T256E prema konvenciji EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama V234A i G237A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama C219S ili C220S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama A330S i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama S267E i L328F prema EU numeraciji.
[0345] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, Fc sadrži C127S aminokiselinsku supstituciju u skladu sa EU konvencijom numeracije (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010); i WO 2008/079246). U nekim primerima izvođenja bilo kog IgG2 modifikovanog Fc, antitelo ima izotip IgG2 sa konstantnim domenom kapa lakog lanca koji sadrži C214S aminokiselinsku supstituciju u skladu sa EU konvencijom numeracijie (White et al. Cancer Cell 27: 138-148 (2015); Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010); i WO 2008/079246).
[0346] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, Fc sadrži C220S aminokiselinsku supstituciju u skladu sa EU konvencijom numeracije. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, antitelo ima izotip IgG2 sa konstantnim domenom kapa lakog lanca koji sadrži C214S aminokiselinsku supstituciju u skladu sa EU konvencijom numeracije.
[0347] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, Fc sadrži C219S aminokiselinsku supstituciju u skladu sa EU konvencijom numeracije. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, antitelo ima izotip IgG2 sa konstantnim domenom kapa lakog lanca koji sadrži C214S aminokiselinsku supstituciju u skladu sa EU konvencijom numeracije.
[0348] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanog Fc, Fc uključuje IgG2 izotip teškog lanca konstantnog domena 1(CH1) i zglobnog regiona (White et al. Cancer Cell 27: 138-148 (2015)). U određenim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanog Fc, IgG2 izotip CH1 i zglobni region sadrže aminokiselinsku sekvencu od 118-230 prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanog Fc, Fc region antitela sadrži supstituciju aminokiselina S267E, supstituciju aminokiselina L328F ili oboje, i/ili supstituciju aminokiselina N297A ili N297K u skladu sa EU konvencijom numeracije.
[0349] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanog Fc, Fc dalje sadrži jednu ili više aminokiselinskih supstitucija na pozicijama E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, E345K, E345R, E345I, S440I i S440. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanog Fc, Fc može dalje sadržati jednu ili više mutacija za poboljšanje poluživota antitela u humanom serumu (npr., jedna ili više (uključujući sve) mutacije M252I, S254T i T256E prema EU konvenciji numeracije). U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanog Fc, Fc može dalje da sadrži A330S i P331S.
[0350] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG2 modifikovanih Fc, Fc je IgG2/4 hibridni Fc. U nekim primerima izvođenja, IgG2/4 hibridni Fc sadrži IgG2 aa 118 do 260 i IgG4 aa 261 do 447. U nekim primerima izvođenja bilo kog IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži jednu ili više aminokiselinskih supstitucija na pozicijama H2698, A30, A30, V30. P331S prema EU numeraciji.
[0351] U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži jednu ili više dodatnih aminokiselinskih supstitucija izabranih između A330L, L234F; L235E, ili P331S prema EU numeraciji; i bilo koja njihova kombinacija.
[0352] U određenim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži jednu ili više aminokiselinskih supstitucija na poziciji ostatka izabranog od C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, A L330S, E345R, E430G, S440I i bilo koja njihova kombinacija prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G, L243A, L235A i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G i K322A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G, A330S i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G, K322A, A330S i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G, K322A i A330S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G, K322A i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama S267E i L328F prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na poziciji C127S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG1 i/ili IgG2 modifikovanog Fc, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E345R, E430G i S440I prema EU numeraciji.
[0353] U nekim primerima izvođenja bilo kog od ovde navedenih antitela, modifikovano Fc antitelo je modifikovani Fc IgG4. U nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG4 sadrži jednu ili više modifikacija. Na primer, u nekim primerima izvođenja, modifikovani Fc IgG4 sadrži jednu ili više supstitucija aminokiselina (npr. u odnosu na divlji tip Fc regiona istog izotipa). U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG4 modifikovanih Fc, jedna ili više supstitucija aminokiselina se bira između L235A, G237A, S229P, L236E (Reddy et al. J Immunol 164:1925-1933 (2000)), S267E, E318A, L328F, M252I, S254T i/ili T256E u skladu sa EU konvencijom numeracije. U nekim primerima izvođenja bilo kog od IgG4 modifikovanih Fc, Fc može dalje da sadrži L235A, G237A i E318A prema EU konvenciji numeracije. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanih Fc IgG4, Fc može dalje da sadrži S228P i L235E u skladu sa EU konvencijom numeracije. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanog Fc IgG4, modifikovani Fc IgG4 može dalje da sadrži S267E i L328F prema EU konvenciji numeracije.
[0354] U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanog Fc IgG4, modifikovani Fc IgG4 se može kombinovati sa mutacijom S228P u skladu sa EU konvencijom numeracije (Angal et al. Mol Immunol. 30:105-108 (1993)) i/ili sa jednom ili više mutacija opisanih u (Peters et al. J Biol Chem.
287(29):24525-33 (2012)) za poboljšanje stabilizacije antitela.
[0355] U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanog Fc IgG4, modifikovani Fc IgG4 može dalje da sadrži jednu ili više mutacija za poboljšanje poluživota antitela u humanom serumu (npr., jedna ili više (uključujući sve) mutacije M252I, S254T i T256E prema EU konvenciji numeracije).
[0356] U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanih Fc IgG4, Fc sadrži L235E prema EU numeraciji. U određenim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanog Fc IgG4, Fc sadrži jednu ili više aminokiselinskih supstitucija na poziciji ostatka izabranom od C127S, F234A, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, E345R, S4 E430G i bilo koje kombinacije, prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanih Fc IgG4, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G, L243A, L235A i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanog Fc IgG4, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G i P331S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanog Fc IgG4, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G i K322A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanih Fc IgG4, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na poziciji E430 prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanih Fc IgG4, Fc region sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E430G i K322A prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanih Fc IgG4, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama S267E i L328F prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanih Fc IgG4, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na poziciji C127S prema EU numeraciji. U nekim primerima izvođenja bilo kog od modifikovanog Fc IgG4, Fc sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama E345R, E430G i S440I prema EU numeraciji.
(9) Druge modifikacije antitela
[0357] U nekim primerima izvođenja bilo kog od antitela, antitelo je derivat. Termin "derivat" se odnosi na molekul koji uključuje hemijsku modifikaciju koja nije insercija, delecija ili supstitucija aminokiselina (ili nukleinskih kiselina). U određenim primerima izvođenja, derivati sadrže kovalentne modifikacije, uključujući, ali ne ograničavajući se na, hemijsko vezivanje sa polimerima, lipidima ili drugim organskim ili neorganskim delovima. U određenim primerima izvođenja, hemijski modifikovani protein koji vezuje antigen može imati duži poluživot u cirkulaciji od proteina koji vezuje antigen koji nije hemijski modifikovan. U određenim primerima izvođenja, hemijski modifikovani protein za vezivanje antigena može imati poboljšani kapacitet ciljanja za željene ćelije, tkiva i/ili organe. U nekim primerima izvođenja, derivat proteina koji vezuje antigen je kovalentno modifikovan da uključi jedan ili više polimernih spojeva rastvorljivih u vodi, uključujući, ali bez ograničenja, polietilen glikol, polioksietilen glikol ili polipropilen glikol. Videti, npr., U.S. Pat. Nos. 4640835, 4496689, 4301144, 4670417, 4791 192 i 4179337. U određenim primerima izvođenja, derivat koji vezuje antigen sadrži jedan ili više polimera, uključujući, ali ne ograničavajući se na, monometoksipolietilen glikol, dekstran, celulozu, kopolimere etilen glikola/propilen glikola, karboksimetilcelulozu, polidovinil3, poli-1-dioksolan, poli-1,3,6-trioksan, kopolimer etilen/maleinskog anhidrida, poliaminokiseline (bilo homopolimeri ili nasumični kopolimeri), poli-(N-vinil pirolidon)-polietilen glikol, propilen glikol poetiloksid/amopolioksid kopolimer, polioksietilovani polioli (npr., glicerol) i polivinil alkohol, kao i mešavine takvih polimera.
[0358] U određenim primerima izvođenja, derivat je kovalentno modifikovan sa podjedinicama polietilen glikola (PEG). U određenim primerima izvođenja, jedan ili više polimera rastvorljivih u vodi je vezano na jednoj ili više specifičnih pozicija, na primer na amino terminusu, derivata, U određenim rešenjima, jedan ili više polimera rastvorljivih u vodi je nasumično vezano za jedan ili više bočnih lanaca derivata. U određenim primerima izvođenja, PEG se koristi za poboljšanje terapeutskog kapaciteta za protein koji vezuje antigen. U određenim primerima izvođenja, PEG se koristi za poboljšanje terapeutskog kapaciteta za humanizovano antitelo. O nekim takvim postupcima se govori, na primer, u U.S. Pat. No.6133426.
[0359] Analozi peptida se obično koriste u farmaceutskoj industriji kao nepeptidni lekovi sa svojstvima analognim onima šablonskog peptida. Ove vrste nepeptidnih jedinjenja nazivaju se "peptidni mimetici" ili "peptidomimetici". Fauchere, J. Adv. Drug Res., 15:29 (1986); i Evans et al. J. Med. Chem., 30:1229 (1987).). Takva jedinjenja se često razvijaju uz pomoć kompjuterizovanog molekularnog modeliranja. Peptidni mimetici koji su strukturno slični terapeutski korisnim peptidima mogu se koristiti za proizvodnju sličnog terapeutskog ili profilaktičkog efekta. Generalno, peptidomimetici su strukturno slični polipeptidu paradigme (tj., polipeptid koji ima biohemijsko svojstvo ili farmakološku aktivnost), kao što je humano antitelo, ali ima jednu ili više peptidnih veza izborno zamenjenih vezom izabranom od: -CH2NH-, -CH2S-, - CH2-CH2-, -CH=CH-(cis i trans), -COCH2-, -CH(OH)CH2-, i -CH2SO-, postupcima dobro poznatim u tehnici. Sistematska supstitucija jedne ili više aminokiselina konsenzus sekvence sa D-aminokiselinom istog tipa (npr., D-lizin umesto L-lizina) se može koristiti u određenim primerima izvođenja za stvaranje stabilnijih peptida. Pored toga, ograničeni peptidi koji sadrže konsenzus sekvencu ili suštinski identičnu varijaciju konsenzus sekvence mogu se generisati postupcima poznatim u tehnici (Rizo i Gierasch En. Rev, Biochem., 61:387 (1992.).); na primer, dodavanjem unutrašnjih cisteinskih ostataka sposobnih da formiraju intramolekulske disulfidne mostove koji ciklizuju peptid.
[0360] Konjugacija leka uključuje spajanje biološki aktivnog citotoksičnog (antikancerogenog) tereta ili leka sa antitelom koje specifično cilja određeni tumorski marker (npr., polipeptid koji se u idealnom slučaju može naći samo u ili na tumorskim ćelijama). Antitela prate ove proteine u telu i vezuju se za površinu ćelija raka. Biohemijska reakcija između antitela i ciljnog proteina (antigena) pokreće signal u tumorskoj ćeliji, koja zatim apsorbuje ili internalizuje antitelo zajedno sa citotoksinom. Nakon što se ADC internalizuje, citotoksični lek se oslobađa i ubija kancer. Zbog ovog ciljanja, idealno bi bilo da lek ima manje neželjenih efekata i daje širi terapeutski prozor od drugih hemoterapeutskih agenasa. Otkrivene su tehnike konjugovanja antitela koje su poznate u tehnici (videti. npr., Jane de Lartigue One Live July 5, 2012; ADC Review on antibody-drug conjugates; and Ducry et al. Bioconjugate Chemistry 21 (1):5-13 (2010).
Testovi vezivanja i drugi testovi
[0361] Anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku mogu se testirati na aktivnost vezivanja antigena, npr., poznatim postupcima kao što su ELISA, rezonanca površinskog plazmona (SPR), Western blot, protočna citometrija, FACS, Biolayer interferometrija itd.
[0362] U nekim primerima izvođenja, testovi konkurencije se mogu koristiti za identifikaciju antitela koje je u kompeticiji sa bilo kojim od ovde opisanih antitela. U nekim primerima izvođenja, kompetitivni testovi se mogu koristiti za identifikaciju antitela koje je u kompeticiji sa bilo kojim od antitela navedenih u Tabelama 1-30 ili koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca antitela izabranog od S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60 -7, S-60-8, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60- 15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16, S-60-18, S-60-19 i S-60-24 za vezivanje za sortilin. U određenim primerima izvođenja, takvo konkurentsko antitelo se vezuje za isti epitop (npr., linearni ili konformacioni epitop) koji je vezan za bilo koje od antitela navedenih u Tabelama 1-30 ili koji sadrže varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca antitela izabranog od S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60 -7, S-60-8, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60- 15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33K], S-60-15.9 [N33I], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33V], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16, S-60-18, S-60-19 i S-60-24. Dati su detaljni primeri postupaka za mapiranje epitopa za koji se antitelo vezuje u Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", in Methods in Molecular Biology vol.66 (Humana Press, Totowa, NJ).
[0363] U primeru kompetitvnog testa, imobilisani sortilin ili ćelije koje eksprimiraju sortilin na površini ćelije se inkubiraju u rastvoru koji sadrži prvo obeleženo antitelo koje se vezuje za sortilin (npr. humani ili ne-humani primat) i drugo neobeleženo antitelo koje se testira na njegova sposobnost da se takmiči sa prvim antitelom za vezivanje za sortilin. Drugo antitelo može biti prisutno u supernatantu hibridoma. Kao kontrola, imobilisani sortilin ili ćelije koje eksprimiraju sortilin se inkubiraju u rastvoru koji sadrži prvo obeleženo antitelo, ali ne i drugo neobeleženo antitelo. Posle inkubacije u uslovima koji dozvoljavaju vezivanje prvog antitela za sortilin, uklanja se višak nevezanog antitela i meri se količina obeleživača povezanog sa imobilisanim sortilinom ili ćelijama koje eksprimiraju sortilin. Ako je količina obeleživača povezanog sa imobilisanim sortilinom ili ćelijama koje eksprimiraju sortilin značajno smanjena u test uzorku u odnosu na kontrolni uzorak, onda to ukazuje da se drugo antitelo takmiči sa prvim antitelom za vezivanje za sortilin. Videti, Harlow i Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, gl. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
Testovi vezivanja liganda
[0364] Ovde su dalje dati postupci skrininga za anti-sortilin antitela koja vezuju His131, Val 132, Pro 133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Ther Lis207, Phe2r The207, Thr207. Ser223, Ser227, Ser242, Lis243, Lis248, Lis254, Lis260, Ser305, Phe306, Gli307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Ser32, Ser32, Ser32, Ser32, Ser32, Ser39, Ser39, Ser39, Ser39, Ser39, Ser39, Ser38 i/ili Glu700 humani sortilin (SEQ ID NO:81); ili aminokiselinskih ostataka sortilina sisara koji odgovaraju jednom ili više aminokiselinskih ostataka His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phel98, Arg199, The205, The207, Phe208 Tir222, Ser223, Ser227, Ser242, Lis243, Lis248, Lis254, Lis260, Ser305, Phe306, Gli307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Phe325, Arg326, Phe313, Tir326, Phe313, Tir326, Phe313, Tir3, 353, 3, 3, 3, 7 Ser595, i/ili Glu700 SEQ ID NO: 81, čime se blokiraju interakcije između sortilina i sortilin liganda (npr., progranulin, pro-neurotrofin, pro-NGF, pro-BDNF, pro-NT3, p75, APP, LpL, APOA5, APOE). U nekim primerima izvođenja, biblioteka peptida može da se sintetiše u kojoj se protein sortilin seče na uzastopne 15-merne i 25-merne peptide razdvojene jednim aminokiselinskim ostatkom i zatim se izdvaja na filterima. Vezivanje sortilin liganda se zatim može testirati na njegovu sposobnost interakcije sa peptidom receptora ili sa peptidima koji su, na primer, mutirani na Hisl31, Val132, Prol33, Leu134, Val135, Ile 136, Met137, Thr138, Arg196, Phe, Arg199, Phe203, Lis205, Phe207, Thr210, Thr218, Tir222, Ser223, Ser227, Ser242, Lis243, Lis248, Lis254, Lis260, Ser305, Phe306, Thr218, Tir222, Ser223, Ser227, Ser242, Lis243, Lis248, Lis254, Lis260, Ser305, Phe306, Phe306, Ar30g, Ar30, Ar30, Gli31, Ar30, Gli31, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tir386, Ser595 i/ili Glu700 humanih sortilin biblioteka u prisustvu ili odsustvu anti-sortilin antitela SPOT analizom vezivanja (npr., Frank, R i Overwin, H (1996) Methods, Mol. Biol.66, 149-169; Reineke, U et al., (2002) J. Immunol. Methods 267, 13-26; i Andersen, OS et al., (2010) J, Biological Chemistry 285, 12210-12222).
[0365] Ovde su dalje dati postupci skrininga za anti-sortilin antitela koja blokiraju interakcije (npr., vezivanje) sortilina i sortilin liganda (npr., progranulin, pro-neurotrofin, pro-NGF, pro-BDNF, pro-NT3, p75, APP, LpL, APOA5, APOE). U nekim primerima izvođenja, interakcija između sortilina i sortilin liganda (npr., progranulin, pro-neurotrofin, pro-NGF, pro-BDNF, pro-NT3, p75, APP, LpL, APOA5, APOE) mogu se okarakterisati korišćenjem analize rezonance površinskog plazmona (npr., Skeldal. S et al., (2012) J Biol Chem., 287:43798; i Andersen, OS et al., (2010) The Journal Of Biological Chemistry, 285.12210-12222, pulldown test (npr., Andersen, OS et al., (2010) The Journal Of Biological Chemistry, 285.12210-12222, proteini vezani za celulozu (npr. Andersen, OS et al., (2010) The Journal Of Biological Chemistry, 285.12210-12222), test ligacije u blizini (npr., Gustafsen, C et al., (2013) The Journal of Neuroscience, 33:64-71), i/ili ligandi obeleženi alkalnom fosfatazom u testovima ćelijskog vezivanja (npr., Hu, F et al., (2010) Neuron 68, 654-667).
Testovi zasnovani na ćelijama
[0366] Ovde su dalje date postupci skrininga za antagonist vezivanja sortilina, kao što je antitelo na sortilin, koje uključuju kontaktiranje agensa (npr., anti-sortilin antitelo) sa ćelijom koja eksprimira protein sortilin na svojoj ćelijskoj površini. U nekim primerima izvođenja, agens i ćelija su dalje u kontaktu sa sortilin ligandom prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, sama ćelija eksprimira sortilin ligand prema ovom pronalasku. Postupci zasnovani na ćelijama su posebno pogodni za skrining i validaciju antagonista vezivanja sortilina (npr., anti-sortilin antitela) procenom efekta na interakciju između sortilina i sortilin liganda u kontekstu ćelije.
[0367] Shodno tome, određeni aspekti predmetnog otkrića se odnose na ćeliju koja eksprimira sortilin protein prema predmetnom pronalasku na svojoj ćelijskoj površini. U nekim primerima izvođenja, ćelija endogeno eksprimira sortilin protein prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, ćelija je rekombinantno konstruisana da eksprimira sortilin protein prema ovom pronalasku. U bilo kojoj od ovih realizacija, sortilin protein ovog otkrića (bilo endogeni ili rekombinantni) kodiran polinukleotidom će poželjno uključivati najmanje domene proteina potrebne za posttranslacionu obradu, translokaciju membrane i ciljanje na površinu ćelije, uključujući bez ograničenja signalni peptid i transmembranski domen. U nekim primerima izvođenja, signalni peptid i/ili transmembranski domen se mogu odnositi na endogeni sortilin signalni peptid i/ili transmembranski domen. U drugim primerima izvođenja, signalni peptid i/ili transmembranski domen mogu se odnositi na egzogeni signalni peptid i/ili transmembranski domen za koji je poznato da promoviše ekspresiju na površini ćelije u željenoj ćeliji domaćinu. U poželjnim primerima izvođenja, sortilin protein će takođe sadržati domen dovoljan za vezivanje sortilin liganda prema ovom pronalasku.
[0368] U ovim primerima izvođenja, može se koristiti bilo koja ćelija koja eksprimira sortilin protein prema ovom pronalasku na svojoj ćelijskoj površini. U nekim primerima izvođenja, ćelija endogeno eksprimira sortilin protein prema ovom pronalasku na svojoj ćelijskoj površini. U nekim primerima izvođenja, ćelija je rekombinantno konstruisana da eksprimira sortilin protein prema ovom pronalasku na svojoj ćelijskoj površini. Može se koristiti bilo koji pogodan sortilin ligand prema ovom pronalasku, tako da zadrži sposobnost da se veže za protein sortilin eksprimiran na površini ćelije. Sortilin ligand ne mora biti fluorescentno obeležen. Nivoi sortilin liganda mogu biti detektovani bilo kojim testom poznatim u tehnici, uključujući bez ograničenja ELISA, SPR, Western blot, masenu spektrometriju, imunoprecipitaciju, peptidni mikroniz, i tako dalje.
[0369] U nekim primerima izvođenja, postupci koji su ovde otkriveni uključuju kultivisanje ćelije koja eksprimira i sortilin protein na svojoj ćelijskoj površini i sortilin ligand u medijumu pod uslovima u kojima su sortilin protein i sortilin ligand eksprimirani i sortilin ligand se oslobađa u medijum; kontaktiranje ćelije sa agensom (npr., anti-sortilin antitelo) pod uslovima u kojima je sortilin protein sposoban da se veže za sortilin ligand; i detektovanje povećanja nivoa sortilin liganda u medijumu, u poređenju sa nivoom sortilin liganda u medijumu u odsustvu agensa. Povećanje nivoa sortilin liganda ukazuje da je agens antagonist vezivanja sortilina. Bez želje da se vezujemo za teoriju, smatra se da će interakcija između sortilin proteina eksprimiranog na površini ćelije i izlučenog sortilin liganda rezultovati endocitozom i lizozomalnom degradacijom sortilin liganda. Stoga se smatra da smanjenje ove interakcije (npr., dodavanjem antagonista vezivanja sortilina prema ovom pronalasku) dovodi do povećanja nivoa sortilin liganda u medijumu tokom vremena.
[0370] U ovim primerima izvođenja, može se koristiti bilo koja ćelija koja eksprimira sortilin protein prema ovom pronalasku na svojoj ćelijskoj površini i eksprimira i luči sortilin ligand prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, ćelija može endogeno da eksprimira sortilin protein prema ovom pronalasku na svojoj ćelijskoj površini. U nekim primerima izvođenja, ćelija može endogeno da eksprimira i luči sortilin ligand prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, ćelija je U-251 ćelija, a sortilin ligand je protein progranulin. U nekim primerima izvođenja, ćelija može biti rekombinantno konstruisana da eksprimira sortilin protein prema ovom pronalasku na svojoj ćelijskoj površini. U nekim primerima izvođenja, ćelija može biti rekombinantno konstruisana da eksprimira i luči sortilin ligand prema ovom pronalasku.
[0371] U bilo kom od ovde opisanih testova zasnovanih na ćelijama, može se koristiti sortilin ligand prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, sortilin ligand je protein progranulin. Sortilin ligand može biti protein pune dužine, ili može biti njegov peptidni fragment koji se vezuje za sortilin.
Nukleinske kiseline, vektori i ćelije domaćini
[0372] Anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku mogu se proizvesti korišćenjem rekombinantnih postupaka i kompozicija, npr., kako je opisano u U.S. Patent No. 4816567. U nekim primerima izvođenja, obezbeđene su izolovane nukleinske kiseline koje imaju nukleotidnu sekvencu koja kodira bilo koje od anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku. Takve nukleinske kiseline mogu kodirati sekvencu aminokiselina koja sadrži VLi/ili aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VHantitela na sortilin (npr., lakih i/ili teških lanaca antitela). U nekim primerima izvođenja, obezbeđeni su jedan ili više vektora (npr., ekspresioni vektori) koji sadrže takve nukleinske kiseline. U nekim primerima izvođenja, takođe je obezbeđena ćelija domaćina koja sadrži takvu nukleinsku kiselinu. U nekim primerima izvođenja, ćelija domaćin sadrži (npr., transdukovano je sa): (1) vektorom koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VLantitela i aminokiselinske sekvence koja sadrži VHantitela, ili (2) prvi vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VLantitela i drugi vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VHantitela. U nekim primerima izvođenja, ćelija domaćin je eukariotska, npr., ćelija jajnika kineskog hrčka (CHO) ili limfoidna ćelija (npr., Y0, NS0, Sp20 ćelija). Ćelije domaćini prema ovom pronalasku takođe uključuju, bez ograničenja, izolovane ćelije, in vitro kultivisane ćelije, i ex vivo kultivisane ćelije.
[0373] Dati su postupci za pravljenje anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, postupak uključuje kultivisanje ćelije domaćina prema ovom pronalasku koja sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira anti-sortilin antitelo, pod uslovima pogodnim za ekspresiju antitela. U nekim primerima izvođenja, antitelo se naknadno dobija iz ćelije domaćina (ili medijuma za kulturu ćelije domaćina).
[0374] Za rekombinantnu proizvodnju anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku, nukleinska kiselina koja kodira anti-sortilin antitelo je izolovana i ubačena u jedan ili više vektora za dalje kloniranje i/ili ekspresiju u ćeliji domaćinu. Takva nukleinska kiselina može se lako izolovati i sekvencirati korišćenjem konvencionalnih procedura (npr. korišćenjem oligonukleotidnih sondi koje su sposobne da se specifično vezuju za gene koji kodiraju teške i lake lance antitela).
[0375] Pogodni vektori koji sadrže sekvencu nukleinske kiseline koja kodira bilo koje od anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku, ili fragmente eksprimirane na površini ćelije ili njihove polipeptide (uključujući antitela) opisane ovde uključuju, bez ograničenja, vektore za kloniranje i vektore ekspresije. Pogodni vektori za kloniranje mogu se konstruisati u skladu sa standardnim tehnikama, ili se mogu izabrati iz velikog broja vektora za kloniranje dostupnih u tehnici. Dok odabrani vektor za kloniranje može da varira u zavisnosti od ćelije domaćina koja je predviđena da se koristi, korisni vektori za kloniranje generalno imaju sposobnost samoreplikacije, mogu imati jedno ciljno mesto za određenu restrikcionu endonukleazu i/ili mogu nositi gene za marker koji se može koristiti u selekciji klonova koji sadrže vektor. Pogodni primeri uključuju plazmide i bakterijske viruse, npr., pUC18, pUC19, Bluescript (npr., pBS SK+) i njegovi derivati, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, DNK faga i šatl vektori kao što su pSA3 i pAT28. Ovi i mnogi drugi vektori za kloniranje dostupni su od komercijalnih proizvođača kao što su BioRad, Strategene i Invitrogen.
[0376] Pogodne ćelije domaćini za kloniranje ili ekspresiju vektora koji kodiraju antitelo uključuju prokariotske ili eukariotske ćelije. Na primer, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku mogu se proizvesti u bakterijama, posebno kada glikozilacija i Fc efektorska funkcija nisu potrebne. Za ekspresiju fragmenata antitela i polipeptida u bakterijama (npr., U.S. Patent Nos. 5648237, 5789199, i 5840523. Nakon ekspresije, antitelo se može izolovati iz paste bakterijske ćelije u rastvorljivoj frakciji i može se dalje prečistiti.
[0377] Pored prokariota, eukariotski mikroorganizmi, kao što su filamentozne gljive ili kvasac, takođe su pogodni domaćini za kloniranje ili ekspresiju za vektore koji kodiraju antitela, uključujući gljive i sojeve kvasca čiji su putevi glikozilacije „humanizovani“, što dovodi do proizvodnje antitela sa delimično ili potpuno humanim obrascem glikozilacije (npr., Gerngross Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004); i Li et al. Nat. Biotech.24:210-215 (2006.).)).
[0378] Pogodne ćelije domaćini za ekspresiju glikozilovanog antitela mogu takođe biti izvedene iz višećelijskih organizama (beskičmenjaci i kičmenjaci). Primeri ćelija beskičmenjaka uključuju ćelije biljaka i insekata. Identifikovani su brojni bakulovirusni sojevi koji se mogu koristiti u kombinaciji sa ćelijama insekata, posebno za transfekciju Spodoptera frugiperda ćelija. Kulture biljnih ćelija se takođe mogu koristiti kao domaćini (npr., U.S. Patent Nos. 5959177, 6040498, 6420548, 7125978, i 6417429, opisujući PLANTIBODIES<™>tehnologiju za proizvodnju antitela u transgenim biljkama),
[0379] Ćelije kičmenjaka se takođe mogu koristiti kao domaćini. Na primer, ćelijske linije sisara koje su prilagođene da rastu u suspenziji mogu biti korisne. Drugi primeri korisnih ćelijskih linija domaćina sisara su CV1 linija bubrega majmuna transformisana sa SV40 (COS-7); humana embrionalna linija bubrega (293 ili 293 ćelije kako je opisano, npr., u Graham et al. J. Gen Virol. 36:59 (1977)); ćelije bubrega bebe hrčka (BHK); mišje Sertoli ćelije (TM4 ćelije kako je opisano, npr., u Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980.).)); ćelije bubrega majmuna (CV1); ćelije bubrega afričkog zelenog majmuna (VERO-76); ćelije humanog karcinoma grlića materice (HELA); ćelije psećeg bubrega (MOCK; ćelije jetre bivolja pacova (BRL 3A); humane ćelije pluća (V138); humane ćelije jetre (Hep G2); tumor dojke miša (MMT 060562); TRI ćelije, kako je opisano, npr., u Mather et al. Annals N. Y Acad. Sci. 383:44-68 (1982.).); MRC 5 ćelije; i FS4 ćelije. Druge korisne ćelijske linije domaćina sisara uključuju ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO), uključujući ćelije DHFR-CHO (Urlaub et al. Proc. Natl. Acad. Sci. SAD 77:4216 (1980)); i ćelijske linije mijeloma kao što su Y0, NS0 i Sp2/0. Za pregled određenih ćelijskih linija domaćina sisara pogodnih za proizvodnju antitela, videti, npr., Yazaki i Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ur., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
Farmaceutske kompozicije
[0380] Ovde su obezbeđene farmaceutske kompozicije i/ili farmaceutske formulacije koje sadrže antisortilin antitela prema ovom pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0381] U nekim primerima izvođenja, farmaceutski prihvatljivi nosači su poželjno netoksični za primaoce u korišćenim dozama i koncentracijama. Ovde opisana antitela mogu biti formulisana u preparate u čvrstom, polučvrstom, tečnom ili gasovitom obliku. Primeri takvih formulacija uključuju, bez ograničenja, tablete, kapsule, praškove, granule, masti, rastvore, supozitorije, injekcije, inhalante, gelove, mikrosfere i aerosole. Farmaceutski prihvatljivi nosači mogu uključivati, u zavisnosti od željene formulacije, farmaceutski prihvatljive, netoksične nosače razblaživača, koji su nosači koji se obično koriste za formulisanje farmaceutskih kompozicija za primenu na životinjama ili ljudima. U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija može da sadrži materijale za formulaciju za modifikaciju, održavanje ili očuvanje, na primer, pH, osmolarnosti, viskoziteta, bistrine, boje, izotoničnosti, mirisa, sterilnosti, stabilnosti, brzine rastvaranja ili oslobađanja, adsorpcije ili penetracije kompozicija.
[0382] U određenim primerima izvođenja, farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju, ali nisu ograničeni na, aminokiseline (kao što su glicin, glutamin, asparagin, arginin ili lizin); antimikrobna sredstva; antioksidansi (kao što su askorbinska kiselina, natrijum-sulfit ili natrijum-hidrogen-sulfit); puferi (kao što su borat, bikarbonat, Tris-HCl, citrati, fosfati ili druge organske kiseline); sredstva za povećanje zapremine (kao što su manitol ili glicin); helatni agensi (kao što je etilendiamin tetrasirćetna kiselina (EDTA)); agensi za stvaranje kompleksa (kao što su kofein, polivinilpirolidon, betaciklodekstrin ili hidroksipropil-beta-ciklodekstrin); punioci; monosaharidi; disaharidi; i drugi ugljeni hidrati (kao što su glukoza, manoza ili dekstrini); proteini (kao što su serumski albumin, želatin ili imunoglobulini); sredstva za bojenje, aromu i razblaživanje; emulgatori; hidrofilni polimeri (kao što je polivinilpirolidon); polipeptidi male molekularne težine; protivjoni koji stvaraju soli (kao što je natrijum); konzervansi (kao što su benzalkonijum hlorid, benzojeva kiselina, salicilna kiselina, timerosal, fenetil alkohol, metilparaben, propilparaben, hlorheksidin, sorbinska kiselina ili vodonik peroksid); rastvarači (kao što su glicerin, propilen glikol ili polietilen glikol); šećerni alkoholi (kao što su manitol ili sorbitol); sredstva za suspendovanje; surfaktanti ili sredstva za vlaženje (kao što su pluronic, PEG, sorbitan estri, polisorbati kao što su polisorbat 20, polisorbat 80, triton, trometamin, lecitin, holesterol, tiloksapal); sredstva za poboljšanje stabilnosti (kao što su saharoza ili sorbitol); sredstva za poboljšanje toničnosti (kao što su halogenidi alkalnih metala, poželjno natrijum ili kalijum hlorid, manitol sorbitol); dostavni vehikulumi; razblaživači; ekscipijenti i/ili farmaceutski adjuvansi. Dalji primeri formulacija koje su pogodne za različite vrste primene mogu se naći u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Pharmaceutical Press 22. ed. (2013). Za kratak pregled postupaka za isporuku lekova, videti, Langer, Science 249:1527-1533 (1990).
[0383] Formulacije pogodne za parenteralnu primenu obuhvataju vodene i nevodene, izotonične sterilne rastvore za injekcije, koji mogu sadržati antioksidante, pufere, bakteriostate i rastvorene supstance koje čine formulaciju izotoničnom sa krvlju predviđenog primaoca, i vodene i nevodene sterilne suspenzije koje mogu uključivati suspendovane agense, solubilizatore, zgušnjivače, stabilizatore i konzervanse.
[0384] Formulacije mogu biti optimizovane za zadržavanje i stabilizaciju u mozgu ili centralnom nervnom sistemu. Kada se agens primenjuje u kranijalnom delu, poželjno je da se agens zadrži u tom delu, a ne da difunduje ili na drugi način prelazi krvno-moždanu barijeru. Tehnike stabilizacije uključuju unakrsno povezivanje, multimerizaciju ili povezivanje sa grupama kao što su polietilen glikol, poliakrilamid, neutralni proteinski nosači, itd. kako bi se postiglo povećanje molekulske mase.
[0385] Druge strategije za povećanje retencije uključuju hvatanje antitela, kao što je anti-sortilin antitelo prema ovom pronalasku, u biorazgradivi ili bioerodibilni implant. Brzina oslobađanja terapeutski aktivnog agensa je kontrolisana brzinom transporta kroz polimerni matriks i biorazgradnjom implantata. Implantati mogu biti čestice, listovi, flasteri, plakovi, vlakna, mikrokapsule i slično i mogu biti bilo koje veličine ili oblika kompatibilnog sa izabranim mestom insercije. Biorazgradive polimerne kompozicije koje se mogu koristiti mogu biti organski estri ili etri, koji kada se razgrade dovode do fiziološki prihvatljivih proizvoda razgradnje, uključujući monomere. Anhidridi, amidi, ortoestri ili slično, sami ili u kombinaciji sa drugim monomerima, mogu naći primenu. Polimeri će biti kondenzacioni polimeri. Polimeri mogu biti unakrsno vezani ili da nisu unakrsno povezani. Od posebnog interesa su polimeri hidroksialifatičnih karboksilnih kiselina, bilo homo- ili kopolimeri, i polisaharidi. Uključeni među poliestre od interesa su polimeri D-mlečne kiseline, L-mlečne kiseline, racemske mlečne kiseline, glikolne kiseline, polikaprolaktona i njihovih kombinacija. Među polisaharidima od interesa su kalcijum alginat i funkcionalizovane celuloze, posebno estri karboksimetilceluloze koje karakteriše nerastvorljivost u vodi, molekulske težine od oko 5 kD do 500 kD, itd. Biorazgradivi hidrogelovi se takođe mogu koristiti u implantatima predmetnog pronalaska. Hidrogelovi su tipično kopolimerni materijal, koji se odlikuje sposobnošću da upija tečnost.
Farmaceutske doze
[0386] Ovde obezbeđeno antitelo (i bilo koji dodatni terapeutski agens) se može primeniti na bilo koji pogodan način, uključujući parenteralnu, intrapulmonalnu, intranazalnu, intralezionalnu, intracerobrospinalnu, intrakranijalnu, intraspinalnu, intrasinovijalnu, intratekalnu, oralnu, lokalnu primenu ili inhalaciju. Parenteralne infuzije obuhvataju intramuskularnu, intravensku primenu kao bolus ili kontinuiranu infuziju tokom određenog vremenskog perioda, intraarterijsku, intraartikularnu, intraperitonealnu ili potkožnu primenu. U nekim primerima izvođenja, primena je intravenska primena. U nekim primerima izvođenja, primena je potkožna. Doziranje može biti bilo kojim pogodnim putem, npr., putem injekcija, kao što su intravenske ili subkutane injekcije, delimično u zavisnosti od toga da li je primena kratka ili hronična. Ovde se razmatraju različiti rasporedi doziranja uključujući, ali ne ograničavajući se na jednu ili višestruku primenu u različitim vremenskim tačkama, bolusnu primenu i pulsnu infuziju.
[0387] Ovde data antitela bi bila formulisana, dozirana i primenjena na način koji je u skladu sa dobrom medicinskom praksom. Faktori za razmatranje u ovom kontekstu uključuju određeni poremećaj koji se leči, određenog sisara koji se leči, kliničko stanje pojedinačnog pacijenta, uzrok poremećaja, mesto isporuke agensa, način primene, raspored primene i druge faktore poznate lekarima. Antitelo ne mora da bude, ali je izborno formulisano sa jednim ili više agenasa koji se trenutno koriste za prevenciju ili lečenje dotičnog poremećaja. Efikasna količina takvih drugih agenasa zavisi od količine antitela prisutnog u formulaciji, tipa poremećaja ili tretmana i drugih faktora o kojima je prethodno diskutovano. Oni se generalno koriste u istim dozama i sa putevima primene kao što je ovde opisano, ili oko 1 do 99% doza opisanih ovde, ili u bilo kojoj dozi i bilo kojim putem za koji je empirijski/klinički utvrđeno da je prikladan.
[0388] Doze za određeno anti-sortilin antitelo se mogu odrediti empirijski kod pojedinaca kojima je data jedna ili više primena anti-sortilin antitela. Pojedinci dobijaju inkrementalne doze anti-sortilin antitela. Za procenu efikasnosti anti-sortilin antitela, kliničkog simptoma bilo koje od bolesti, poremećaja ili stanja ovog otkrića (npr., frontotemporalna demencija, Alchajmerova bolest, vaskularna demencija, konvulzije, distrofija mrežnjače, traumatska povreda mozga, povreda kičmene moždine, dugotrajna depresija, aterosklerotična vaskularna oboljenja i neželjeni simptomi normalnog starenja).
[0389] Za prevenciju ili lečenje bolesti, odgovarajuća doza antitela prema pronalasku (kada se koristi samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih dodatnih terapeutskih agenasa) zavisiće od vrste bolesti koja se leči, tipa antitela, težine i toka bolesti, da li se antitelo primenjuje u preventivne ili terapijske svrhe, prethodne terapije, kliničke istorije pacijenta i odgovora na antitelo, kao i procene lekara. Antitelo se prikladno daje pacijentu u jednom trenutku ili tokom serije tretmana.
[0390] U zavisnosti od vrste i težine bolesti, oko 1 µg/kg do 1.5 mg/kg (npr., 0.1 mg/kg-10 mg/kg) antitela može biti početna kandidatska doza za primenu pacijentu, bilo da se radi, na primer, o jednoj ili više odvojenih primena, ili kontinuiranoj infuziji. Jedna tipična dnevna doza može se kretati od oko 1 µg/kg do 100 mg/kg ili više, u zavisnosti od faktora navedenih gore. Za ponovljene administracije tokom nekoliko dana ili duže, u zavisnosti od stanja, tretman bi se generalno održavao sve dok se ne pojavi željena supresija simptoma bolesti. Jedna primerna doza antitela bi bila u opsegu od oko 0.05 mg/kg do oko 10 mg/kg. Prema tome, pacijentu se može dati jedna ili više doza od oko 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg ili 10 mg/kg (ili bilo koja njihova kombinacija). Takve doze se mogu davati povremeno, npr., svake nedelje ili svake tri nedelje (npr., tako da pacijent prima od oko dva do oko dvadeset, ili npr., oko šest doza antitela). U određenim primerima izvođenja, učestalost doziranja je tri puta dnevno, dva puta dnevno, jednom dnevno, jednom svakog drugog dana, jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom u četiri nedelje, jednom u pet nedelja, jednom u šest nedelja, jednom na svakih sedam nedelja, jednom u osam nedelja, jednom u devet nedelja, jednom u deset nedelja ili jednom mesečno, jednom u dva meseca, jednom u tri meseca ili duže. Može se primeniti početna veća udarna doza, praćena sa jednom ili više nižih doza. Međutim, drugi režimi doziranja mogu biti korisni. Napredak ove terapije se lako prati konvencionalnim tehnikama i testovima.
Terapeutske upotrebe
[0391] U određenim aspektima, anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku mogu se koristiti za prevenciju, smanjenje rizika za, ili lečenje pojedinca koji ima bolest, poremećaj ili povredu. Antisortilin antitela iz ovog otkrića mogu se koristiti za sprečavanje, smanjenje rizika ili lečenje ćelijske smrti (npr., smrt neuronskih ćelija), frontotemporalne demencije Alchajmerove bolesti, vaskularne demencije, konvulzija, distrofije mrežnjače, traumatske povrede mozga, povrede kičmene moždine, dugotrajne depresije, aterosklerotične vaskularne bolesti, neželjenih simptoma normalnog starenja, demencije, mešovite demencije, Krojcfeld-Jakobove bolesti, hidrocefalusa normalnog pritiska, amiotrofične lateralne skleroze, Hantingtonove bolesti, taupatične bolesti, moždanog udara, akutne traume, hronične traume, lupusa, akutnog i hroničnog kolitisa, Kronove bolesti, inflamatorne bolesti creva, ulceroznog kolitisa, esencijalnog kolitisa, lupusa centralnog nervnog sistema, Behcetove bolesti, Parkinsonove bolesti, demencije sa Levijevim telima, multiple sistemske atrofije, degeneracije intervertebralnog diska, Shi-Dragerovog sindroma, progresivne supranuklearne paralize, kortikalne bazalne ganglijske degeneracije, akutne diseminirane encefalomijelopatije, granulomatoznih poremećaja, sarkoidoze, poremećaja kod starenja, starosne makularne degeneracije, glaukoma, retinitis pigmentosa, degeneracije mrežnjače, infekcije respiratornog trakta, sepse, infekcije oka, sistemske infekcije, upalnih poremećaja, artritisa, multiple skleroze, metaboličkog poremećaja, gojaznosti, insulinske rezistencije, dijabetesa tipa 2, oštećenja tkiva ili krvnih sudova, povrede i/ili jednog ili više neželjenih simptoma normalnog starenja.
[0392] U određenim aspektima, ovde je dat postupak prevencije, smanjenja rizika ili lečenja pojedinca koji ima bolest, poremećaj ili povredu, koji se sastoji od davanja pojedincu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine predmetnog anti-sortilin antitela. U nekim primerima izvođenja, bolest, poremećaj ili povreda su izabrani iz grupe koju čine frontotemporalna demencija, progresivna supranuklearna paraliza, Alchajmerova bolest, vaskularna demencija, konvulzije, distrofija mrežnjače, amiotrofična lateralna skleroza, traumatska povreda mozga, povreda kičmenog stuba, demencija, moždani udar, Parkinsonova bolest, akutni diseminovani encefalomijelitis, degeneracija mrežnjače, starosna degeneracija makule, glaukom, multipla skleroza, septički šok, bakterijska infekcija, artritis i osteoartritis.
[0393] Određeni aspekti ovog otkrića obezbeđuju postupke povećanja nivoa progranulina kod pojedinca kome je to potrebno, kao što je u mozgu, krvi i/ili perifernim organima pojedinca, davanjem pojedincu terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku. Drugi aspekti predmetnog otkrića obezbeđuju postupke za povećanje ekstracelularnih nivoa progranulina, dovođenjem u kontakt jedne ili više ćelija sa jednim ili više anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, nivoi progranulina se povećavaju bez smanjenja ćelijskih nivoa sortilina. Drugi aspekti ovog otkrića obezbeđuju postupke za smanjenje ćelijskih nivoa sortilina kod osobe kojoj je to potrebno, kao što je u mozgu i/ili perifernim organima pojedinca, davanjem pojedincu terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku. Drugi aspekti sadašnjeg otkrića obezbeđuju postupke za smanjenje ćelijskih nivoa sortilina jedne ili više ćelija, koje obuhvataju dovođenje u kontakt jedne ili više ćelija sa jednim ili više antitela na sortilin prema ovom pronalasku.
[0394] Dalji aspekti ovog otkrića obezbeđuju postupke za povećanje efektivnih koncentracija progranulina i/ili smanjenje efektivnih koncentracija neurotrofina prema ovom pronalasku (npr., proneurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-neurotrofin, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, sortilin propeptid (Sort-pro), amiloidni prekursorski protein (APP), A beta peptid, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5), apolipoprotein E (APOE), PCSK9 i protein povezan sa receptorom (RAP) kod pojedinca ako je to potrebno, davanjem pojedincu terapeutski efikasne količine anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku da inhibira interakciju između sortilina i progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, proneurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, sortilin propeptid (Sort-pro), amiloidni prekursorski protein (APP), A beta peptid, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5), apolipoprotein E (APOE) i/ili protein povezan sa receptorom (RAP).
[0395] Ovo otkriće takođe pruža postupke inhibicije interakcije između sortilina i progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, sortilin propeptid (Sortpro), amiloidni prekursorski protein (APP), A beta peptid, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5), apolipoprotein E (APOE), PCSK9 i/ili protein povezan sa receptorom (RAP); kao i jednu ili više aktivnosti sortilina, progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, proneurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, sortilin propeptid (Sort-pro), amiloidni prekursorski protein (APP), A beta peptid, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5), apolipoprotein E (APOE) i/ili protein povezan sa receptorom (RAP ) kod pojedinca davanjem pojedincu terapeutski efikasne količine antisortilin antitela prema ovom pronalasku.
[0396] U određenim aspektima, ovde je obezbeđen postupak prevencije, smanjenja rizika ili lečenja pojedinca koji ima bolest, poremećaj ili povredu, koji se sastoji od davanja pojedincu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku. .
[0397] Kao što je ovde otkriveno, anti-sortilin antitela iz ovog otkrića mogu se koristiti za prevenciju, smanjenje rizika ili lečenje frontotemporalne demencije, Alchajmerove bolesti, vaskularne demencije, konvulzija, distrofije mrežnjače, traumatske povrede mozga, povrede kičmene moždine, dugotrajne depresije, aterosklerotične vaskularne bolesti, neželjenih simptoma normalnog starenja, demencije, mešovite demencija, Krojcfeld-Jakobove bolesti, hidrocefalusa normalnog pritiska, amiotrofične lateralne skleroze, Hantingtonove bolesti, taupatične bolesti, moždanog udara, akutne traume, hronične traume, lupusa, akutnog i hroničnog kolitisa, Kronove bolesti, inflamatorne bolesti creva, ulceroznog kolitisa, malarije, esencijalnog tremora, lupusa centralnog nervnog sistema, Behcetove bolesti, Parkinsonove bolesti, demencije sa Levijevim telima, multiple sistemske atrofije, degeneracije intervertebralnog diska, Shi-Dragerovog sindroma, progresivne supranuklearne paralize, kortikalne bazalne ganglijske degeneracije, akutne diseminirane encefalomijelopatije, granulomatoznih poremećaja, sarkoidoze, poremećaja kod starenja, starosne makularne degeneracije, glaukoma, retinitis pigmentosa, degeneracije mrežnjače, infekcije respiratornog trakta, sepse, infekcije oka, sistemske infekcije, upalnih poremećaja, artritisa, multiple skleroze, metaboličkog poremećaja, gojaznosti, insulinske rezistencije, dijabetesa tipa 2, oštećenja tkiva ili krvnih sudova, povrede i/ili jednog ili više neželjenih simptoma normalnog starenja.
[0398] U nekim primerima izvođenja, ovo otkriće obezbeđuje postupke prevencije, smanjenja rizika ili lečenja pojedinca koji ima frontotemporalnu demenciju, Alchajmerovu bolest, vaskularnu demenciju, konvulzije, distrofiju mrežnjače, traumatsku povredu mozga, povredu kičmene moždine, dugotrajnu depresiju, aterosklerozu vaskularne bolesti, neželjene simptome normalnog starenja, demenciju, mešanu demenciju, Krojcfeld-Jakobovu bolest, hidrocefalus normalnog pritiska, amiotrofičnu lateralnu sklerozu, Hantingtonovu bolest, bolest taupatije, moždani udar, akutnu traumu, hroničnu traumu, lupus, akutni i hronični kolitis, Kronovu bolest, inflamatornu bolest creva, ulcerozni kolitis, malariju, esencijalni tremor, lupus centralnog nervnog sistema, Behcetovu bolest, Parkinsonovu bolest, demenciju sa Levijevim telima, multiplu sistemsku atrofiju, degeneraciju intervertebralnog diska, Shi-Dragerov sindrom, progresivnu supranuklearnu bazalnu paralizu, kortikalnu bazalnu ganglijsku degeneraciju, akutni diseminovani encefalomijelitis, granulomatozne poremećaje, sarkoidozu, bolesti starenja, starosnu makularnu degeneraciju, glaukom, retinitis pigmentosa, degeneraciju mrežnjače, infekciju respiratornog trakta, sepsu, infekciju oka, sistemsku infekciju, inflamatorne poremećaje, artritis, multiplu sklerozu, metabolički poremećaj, gojaznost, insulinsku rezistenciju, dijabetes tipa 2 oštećenje tkiva ili krvnih sudova, povredu i jedan ili više neželjenih simptoma normalnog starenja, kod osobe kojoj je to potrebno davanjem pojedincu terapeutski efikasne količine anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku da: (i) inhibira interakciju između sortilina i progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, sortilin propeptid (Sort-pro), amiloidni prekursorski protein (APP), A beta peptid, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5), apolipoprotein E (APOE) i/ili protein povezan sa receptorom (RAP); i/ili (ii) inhibiraju jednu ili više aktivnosti sortilina, progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, sortilin propeptid (Sort-pro), amiloidni prekursorski protein (APP), A beta peptid, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5), apolipoprotein E (APOE) i/ili protein povezan sa receptorom (RAP). U nekim primerima izvođenja, ovo otkriće obezbeđuje postupke za indukovanje zarastanja rana kod pojedinca kome je to potrebno davanjem pojedincu terapeutski efikasne količine anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku.
[0399] Ovo otkriće takođe obezbeđuje postupke promovisanja preživljavanja ćelija, kao što je preživljavanje neuronskih ćelija, davanjem anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku da inhibira interakciju između sortilina i progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, proneurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, amiloidni prekursorski protein (APP) i A beta peptid. Anti-sortilin antitelo se može primeniti na ćelije in vitro da promoviše preživljavanje ćelija. Alternativno, može se primeniti antitelo na sortilin in vivo (npr., davanjem antitela pojedincu) radi promovisanja preživljavanje ćelija.
[0400] U određenim aspektima, ovde je dat postupak za inhibiciju jedne ili više neuroinflamacije, aksonopatije koju karakteriše kratki izrast aksona i aberantno grananje, mikroglijalna aktivacija i inflamatorni odgovor, koji se sastoji od davanja pojedincu terapeutski efikasne količine anti-sortilin antitela predmetnog otkrića.
[0401] Ovo otkriće pruža postupke inhibicije neuroinflamacije, aksonopatije koju karakteriše kratki aksonalni izrast i aberantno grananje, mikroglijalna aktivacija i inflamatorni odgovor i podsticanje zarastanja rana, autofagija i uklanjanja agregatnih proteina davanjem anti-sortilin antitela predmetnog otkrića da bi se inhibirala interakcija između sortilina i progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzina, p75, amiloidnog prekursorskog proteina (APP) i A beta peptida. Anti-sortilin antitelo se može primeniti na ćelije in vitro. Alternativno, može se primeniti antitelo na sortilin in vivo (npr., davanjem antitela pojedincu).
[0402] U određenim aspektima, ovde je dat postupak za promovisanje jednog ili više od zarastanja rana, autofagije i uklanjanja agregatnih proteina, koji obuhvata davanje pojedincu terapeutski efikasne količine anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku,
[0403] U određenim aspektima, ovde je dat postupak prevencije, smanjenja rizika ili lečenja pojedinca koji ima artritis, koji se sastoji od davanja pojedincu terapeutski efikasne količine anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku.
[0404] Ovo otkriće takođe obezbeđuje postupke za smanjenje ekspresije jednog ili više proinflamatornih medijatora davanjem pojedincu kome je to potrebno antitela na sortilin prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, jedan ili više pro-inflamatornih medijatora se bira između IL-6, 1L12p70, IL12p40, IL-1β, TNF-α, CKSCL1, CCL2, CCL3, CCL4 i CCL5.
[0405] U nekim primerima izvođenja, postupak ovog otkrića uključuje antitelo na sortilin koje sadrži dva ili više antitela na sortilin.
Demencija
[0406] Demencija je nespecifičan sindrom (tj. skup znakova i simptoma) koji se manifestuje kao ozbiljan gubitak globalnih kognitivnih sposobnosti kod ranije neoštećene osobe, izvan onoga što se može očekivati od normalnog starenja. Demencija može biti statična kao rezultat jedinstvene globalne povrede mozga. Alternativno, demencija može biti progresivna, što dovodi do dugotrajnog opadanja usled oštećenja ili bolesti u telu. Dok je demencija mnogo češća u gerijatrijskoj populaciji, može se javiti i pre 65. godine. Kognitivne oblasti pogođene demencijom uključuju, bez ograničenja, pamćenje, raspon pažnje, jezik i rešavanje problema. Generalno, simptomi moraju biti prisutni najmanje do šest meseci pre nego što se osobi dijagnostikuje demencija.
[0407] Primeri oblika demencije uključuju, bez ograničenja, frontotemporalnu demenciju, Alchajmerovu bolest, vaskularnu demenciju, semantičku demenciju i demenciju sa Levijevim telima,
[0408] Bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da primena antitela na sortilin prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti demenciju. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može izazvati jednu ili više aktivnosti progranulina kod pojedinca koji ima demenciju (npr., neurotrofična i/ili aktivnost preživljavanja na neuronima i antiinflamatorna aktivnost.
Frontotemporalna demencija
[0409] Frontotemporalna demencija (FTD) je stanje koje je rezultat progresivnog propadanja frontalnog režnja mozga. Vremenom, degeneracija može napredovati do temporalnog režnja. Drugi posle Alchajmerove bolesti (AD) po prevalenciji, FTD čini 20% slučajeva presenilne demencije. Kliničke karakteristike FTD uključuju deficit pamćenja, abnormalnosti u ponašanju, promene ličnosti i jezička oštećenja (Cruts, M. & Van Broeckhoven, C., Trends Genet. 24: 186-194 (2008.).); Neary, D., et al., Neurology 51:1546-1554 (1998.); Ratnavalli, E., Braine, C., Dawson, K. & Hodges, J. R, Neurology 58:1615-1621 (2002.)).
[0410] Značajan deo slučajeva FTD nasleđuje se na autozomno dominantan način, ali čak i u jednoj porodici, simptomi mogu da obuhvataju spektar od FTD sa poremećajima ponašanja, do primarne progresivne afazije, do kortiko-bazalne ganglionske degeneracije. FTD, kao i većina neurodegenerativnih bolesti, može se okarakterisati patološkim prisustvom specifičnih proteinskih agregata u obolelom mozgu. Istorijski gledano, prvi opisi FTD-a su prepoznali prisustvo intraneuronskih akumulacija hiperfosforilisanog Tau proteina u neurofibrilarnim spletovima ili Pikovim telima. Uzročna uloga proteina Tau povezanog sa mikrotubulama je podržana identifikacijom mutacija u genu koji kodira Tau protein u nekoliko porodica (Hutton, M., et al., Nature 393:702-705 (1998.). Međutim, većina FTD mozgova ne pokazuje akumulaciju hiperfosforilisanog Taua, ali pokazuje imunoreaktivnost na ubikvitin (Ub) i TAR DNK vezujući protein (TDP43) (Neumann, M., et al. Arch. Neurol, 64:1388-1394 (2007)). Pokazalo se da većina slučajeva FTD sa inkluzijama Ub (FTD-U) nosi mutacije u genu za progranulin.
[0411] Mutacije progranulina dovode do haploinsuficijencije i poznato je da su prisutne u skoro 50% porodičnih slučajeva FTD, što mutaciju progranulina čini glavnim genetskim doprinosom FTD. Bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da heterozigotni karakter mutacija progranulina zbog gubitka funkcije ukazuje na to da kod zdravih osoba, ekspresija progranulina igra kritičnu ulogu zavisnu od doze u zaštiti zdravih osoba od razvoja FTD. Shodno tome, povećanje nivoa progranulina inhibiranjem interakcije između sortilina i progranulina, može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti FTD.
[0412] U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin prema ovom pronalasku, može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti FTD. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima FTD.
Alchajmerova bolest
[0413] Alchajmerova bolest (AD) je najčešći oblik demencije. Ne postoji lek za bolest, koja se pogoršava kako napreduje i na kraju dovodi do smrti. Najčešće se AD dijagnostikuje kod ljudi starijih od 65 godina. Međutim, manje rasprostranjena rana Alchajmerova bolest može se javiti mnogo ranije.
[0414] Uobičajeni simptomi Alchajmerove bolesti uključuju simptome ponašanja, kao što su teškoće u pamćenju nedavnih događaja; kognitivni simptomi, konfuzija, razdražljivost i agresija, promene raspoloženja, problemi sa jezikom i dugotrajni gubitak pamćenja. Kako bolest napreduje, telesne funkcije se gube, što na kraju dovodi do smrti. Alchajmerova bolest se razvija nepoznato i promenljivo vreme pre nego što postane potpuno očigledna, i može da napreduje nedijagnostikovano godinama.
[0415] Pokazalo se da se sortilin vezuje za amiloidni prekursorski protein (APP) i enzim za obradu APP BACE1. Bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da su ove interakcije uključene u Alchajmerovu bolest. Shodno tome, i bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku mogu da se koriste za inhibiranje takvih interakcija i prevenciju, smanjenje rizika ili lečenje Alchajmerove bolesti kod pojedinaca kojima je to potrebno.
[0416] U nekim primerima izvođenja, i bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da antitela na sortilin prema ovom pronalasku koja inhibiraju interakciju između sortilina i neurotrofina iz ovog otkrića (npr. pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), p75, protein prekursora amiloida (APP) i/ili A beta peptid, ili koji inhibiraju jednu ili više aktivnosti sortilina, mogu se koristiti za prevenciju, smanjenje rizika ili lečenje Alchajmerove bolesti kod osoba kojima je to potrebno.
[0417] U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti Alchajmerovu bolest. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima Alchajmerovu bolest.
Vaskularna demencija
[0418] Vaskularna demencija (VaD) je suptilno progresivno pogoršanje pamćenja i drugih kognitivnih funkcija za koje se veruje da je posledica cerebrovaskularne bolesti (vaskularna bolest u mozgu). Cerebrovaskularna bolest je progresivna promena u našim krvnim sudovima (vaskulatura) u mozgu (cerebrum). Najčešća vaskularna promena povezana sa godinama je nakupljanje holesterola i drugih supstanci u zidovima krvnih sudova. To dovodi do zadebljanja i očvršćavanja zidova, kao i do sužavanja sudova, što može rezultirati smanjenjem ili čak potpunim zaustavljanjem dotoka krvi u regione mozga koje snabdeva zahvaćena arterija. Pacijenti sa vaskularnom demencijom često imaju slične simptome kao pacijenti sa Alchajmerovom bolešću (AD). Međutim, povezane promene u mozgu nisu posledica AD patologije, već hronično smanjenog protoka krvi u mozgu, što na kraju dovodi do demencije. VaD se smatra jednim od najčešćih tipova demencije kod starijih osoba. Simptomi VaD uključuju poteškoće sa pamćenjem, poteškoće sa organizacijom i rešavanjem složenih problema, usporeno razmišljanje, ometanje ili „odsutnost uma“, poteškoće u vraćanju reči iz sećanja, promene u raspoloženju ili ponašanju kao što su depresija, razdražljivost ili apatija, i halucinacije ili zablude.
[0419] Bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da jedna ili više aktivnosti sortilina, ili jedna ili više interakcija između sortilina i progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr. pro-neurotrofina, proneurotrofin-3, pro-neurotrofina -4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, lipoprotein lipaza, apolipoprotein AV i/ili proteina povezanog sa receptorom su uključeni u vaskularnu demenciju. Shodno tome, i bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da se anti-sortilin antitela iz ovog otkrića koja inhibiraju interakciju između sortilina i neurotrofina iz ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro- neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, sortilin propeptid (Sort-pro), amiloidni prekursorski protein (APP), A beta peptid, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5), apolipoprotein E (APOE) i/ili protein povezan sa receptorom (RAP); ili koji inhibiraju jednu ili više aktivnosti sortilina mogu koristiti za sprečavanje, smanjenje rizika ili lečenje vaskularne demencije kod osoba kojima je to potrebno.
[0420] U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti VaD. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima VaD.
Konvulzije, distrofija mrežnjače, traumatske povrede mozga, povrede kičmene moždine i dugotrajna depresija
[0421] Kako se ovde koristi, distrofija mrežnjače se odnosi na bilo koju bolest ili stanje koje uključuje degeneraciju mrežnjače. Takve bolesti ili stanja mogu dovesti do gubitka vida ili potpunog slepila.
[0422] Kako se ovde koristi, konvulzije takođe uključuju epileptičke napade i odnose se na prolazni simptom abnormalne prekomerne ili sinhrone neuronske aktivnosti u mozgu. Spoljašnji efekat može biti dramatičan poput divljeg udaranja ili blag kao kratak gubitak svesti. Napadi se mogu manifestovati kao promena mentalnog stanja, tonični ili klonični pokreti, konvulzije i razni drugi psihički simptomi.
[0423] Traumatske povrede mozga (TBI), takođe mogu biti poznate kao intrakranijalne povrede. Traumatske povrede mozga nastaju kada spoljašnja sila traumatično povređuje mozak. Traumatske povrede mozga mogu se klasifikovati na osnovu težine, mehanizma (zatvorena ili prodorna povreda glave) ili drugih karakteristika (npr., koji se javljaju na određenoj lokaciji ili na široko rasprostranjenom području).
[0424] Povrede kičmene moždine (SCI) uključuju svaku povredu kičmene moždine koja je uzrokovana traumom umesto bolešću. U zavisnosti od toga gde su kičmena moždina i nervni koreni oštećeni, simptomi mogu veoma varirati, od bola do paralize do inkontinencije. Povrede kičmene moždine su opisane na različitim nivoima „nepotpunih“, koji mogu varirati od toga da nemaju efekta na pacijenta do „potpune“ povrede što znači potpuni gubitak funkcije.
[0425] Dugotrajna depresija (LTD) je smanjenje efikasnosti neuronskih sinapsi u zavisnosti od aktivnosti koja traje satima ili duže nakon dugog obrasca stimulusa. Dugotrajna depresija se može javiti u mnogim oblastima centralnog nervnog sistema sa različitim mehanizmima u zavisnosti od regiona mozga i napretka u razvoju. Dugotrajna depresija se može javiti u hipokampusu, malom mozgu i u različitim tipovima neurona koji oslobađaju različite neurotransmitere. Bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da dugotrajna depresija može biti povezana sa neurodegeneracijom, demencijom i Alchajmerovom bolešću.
[0426] Pokazalo se da pro-neurotrofini (npr., pro-neurotrofin-4/5, neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, itd.) igraju ulogu u konvulzuijama, distrofiji mrežnjače, traumatskoj povredi mozga, povredi kičmene moždine i dugotrajne depresije.
[0427] Shodno tome, i bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da se antitela na sortilin prema ovom pronalasku koja inhibiraju interakciju između sortilina i neurotrofina prema ovom pronalasku (npr., pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.)-, ili koji inhibiraju jednu ili više aktivnosti sortilina mogu koristiti za sprečavanje, smanjenje rizika ili lečenje napada, distrofije mrežnjače, traumatskih povreda mozga, povreda kičmene moždine i/ili dugotrajne depresije kod osoba kojima je to potrebno.
[0428] U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti napade, distrofiju retine, traumatske povrede mozga, povrede kičmene moždine i/ili dugotrajnu depresiju. U nekim primerima izvođenja, davanje anti-sortilin antitela može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima napade, distrofiju mrežnjače, traumatske povrede mozga, povrede kičmene moždine i/ili dugotrajnu depresiju.
Aterosklerotične vaskularne bolesti
[0429] Kako se ovde koristi, „aterosklerotična vaskularna bolest“, „ASVD“ i „ateroskleroza“ se koriste naizmenično i odnose se na bilo koje stanje u kome se zid arterije zgušnjava kao rezultat akumulacije masnih materijala kao što su holesterol, lipidi i trigliceridi. Aterosklerotične vaskularne bolesti uključuju, bez ograničenja, bilo koje stanje, poremećaj ili bolest povezano sa ASVD, uključujući, bez ograničenja, tromboemboliju, moždani udar, ishemiju, infarkt, koronarnu trombozu, infarkt miokarda (npr., srčani udar) i klaudikaciju.
[0430] Kao što je ovde otkriveno, sortilin proteini ovog otkrića su uključeni u regulaciju lipida, vezivanjem proteina povezanih sa lipidima, kao što su protein povezan sa receptorom, lipoprotein lipaza i apopolipoproteini APOA5 i APOE.
[0431] Shodno tome, i bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da anti-sortilin antitela iz ovog otkrića koja inhibiraju interakciju između sortilina i lipoprotein lipaze (LpL), apolipoproteina AV (APOA5), apolipoproteina E (APOE) i/ ili proteina povezanog sa receptorom (RAP); ili koji inhibiraju jednu ili više aktivnosti sortilina mogu se koristiti za prevenciju, smanjenje rizika ili lečenje jedne ili više aterosklerotičnih vaskularnih bolesti kod pojedinaca kojima je to potrebno.
[0432] U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti aterosklerotsku vaskularnu bolest. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima aterosklerotsku vaskularnu bolest.
Neželjeni simptomi starenja
[0433] Kako se ovde koristi, neželjeni simptomi starenja uključuju, bez ograničenja, gubitak pamćenja, promene u ponašanju, demenciju, Alchajmerovu bolest, degeneraciju mrežnjače, aterosklerotične vaskularne bolesti, gubitak sluha i ćelijski slom.
[0434] U nekim primerima izvođenja, i bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da se antitela na sortilin prema ovom pronalasku koja inhibiraju interakciju između sortilina i progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, lipoprotein lipazu (LpL), apolipoprotein AV (APOA5) i/ili protein povezan sa receptorom (RAP); ili koji inhibiraju jednu ili više aktivnosti sortilina mogu se koristiti za sprečavanje, smanjenje rizika ili lečenje jednog ili više neželjenih simptoma starenja.
[0435] U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti jedan ili više neželjenih simptoma starenja. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima jedan ili više neželjenih simptoma starenja.
Amiotrofična lateralna skleroza (ALS)
[0436] Kako se ovde koristi, amiotrofična lateralna skleroza (ALS) ili bolest motornih neurona ili Lu Gerigova bolest se koriste naizmenično i odnose se na iscrpljujuću bolest različite etiologije koju karakteriše brzo progresivna slabost, atrofija mišića i fascikulacije, spastičnost mišića, teškoće u govoru (dizartrija), otežano gutanje (disfagija) i otežano disanje (dispneja).
[0437] PGRN haploinsuficijencija zbog heterozigotnih mutacija gubitka funkcije u GRN gen rezultira smanjenjem nivoa PGRN CSF-a i uzročnik je za razvoj frontotemporalne demencije (FTD) sa patologijom TDP-43 (Sleegers et al., (2009) Ann Neurol 65:603; Smith et al., (2012) Am J Hum Genet 90:1102). TDP-43 je takođe identifikovan kao glavni patološki protein u ALS, što ukazuje na sličnost između ALS i FTD.
[0438] Na primer, preko dvadeset dominantnih mutacija u TDP-43 je identifikovano kod sporadičnih i porodičnih pacijenata sa ALS (Lagier-Tourenne et al., (2009) Cell 136:1001) i TDP-43 pozitivni agregati se nalaze u približno 95% slučajeva ALS (Prasad et al., (2019) Front Mol Neurosci 12:25). Dodatno, geni rizika za ALS, kao što su MOBP, C9ORF72, MOBKL2B, NSF i FUS, takođe mogu izazvati FTD (Karch et al., (2018) JAMA Neurol 75:860). Pored toga, i PGRN i C9ORF72 mutacije su povezane sa abnormalnom mikroglijalnom aktivacijom, što se čini da je još jedna uobičajena patologija FTD i ALS (Haukedal et al., (2019) J Mol Biol 431:1818). Drugi dokazi takođe sugerišu da su ALS i FTD blisko povezana stanja sa preklapajućim genetskim, neuropatološkim i kliničkim karakteristikama (Weishaupt et al., (2016) Trends Mol Med 22:769; McCauley et al., (2018) Acta Neuropathol 137:715). Uzeti zajedno, ovi rezultati sugerišu da bi obe bolesti mogle imati koristi od zajedničkog lečenja i da genetska varijabilnost PGRN deluje kao modifikator toka ALS-a.
[0439] U nekim primerima izvođenja, i bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da se antitela na sortilin prema ovom pronalasku koja inhibiraju interakciju između sortilina i progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, lipoprotein lipazu (LpL), apolipoprotein AV (APOA5) i/ili proteina povezanog sa receptorom (RAP); ili koji inhibiraju jednu ili više aktivnosti sortilina mogu koristiti za prevenciju ili lečenje jednog ili više neželjenih simptoma ALS.
[0440] U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti ALS. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima ALS.
Depresija
[0441] Kako se ovde koristi, depresija ili veliki depresivni poremećaj (MDD), klinička depresija, velika depresija, unipolarna depresija, unipolarni poremećaj, rekurentna depresija ili distimija, koriste se naizmenično i odnose se na mentalni poremećaj koji karakterišu epizode sveobuhvatnog lošeg raspoloženja praćeno niskim samopoštovanjem i gubitkom interesovanja ili zadovoljstva za uobičajeno prijatne aktivnosti.
[0442] Shodno tome, i bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da se antitela na sortilin prema ovom pronalasku koja inhibiraju interakciju između sortilina i progranulina, neurotrofina ovog otkrića (npr., pro-neurotrofini, pro-neurotrofin-3, pro-neurotrofin-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, netrotrofin-3, neurotrofin-4/5, NGF, BDNF, itd.), neurotenzin, p75, lipoprotein lipaza (LpL), apolipoprotein AV (APOA5) i/ili proteina povezanog sa receptorom (RAP); ili koja inhibiraju jednu ili više aktivnosti sortilina mogu koristiti za prevenciju ili lečenje jednog ili više neželjenih simptoma depresije.
[0443] U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti depresiju. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima depresiju.
Parkinsonova bolest
[0444] Parkinsonova bolest, koja se može nazvati idiopatskim ili primarnim parkinsonizmom, hipokinetički rigidni sindrom (HRS) ili paralysis agitans, je neurodegenerativni poremećaj mozga koji utiče na kontrolu motornog sistema. Progresivna smrt ćelija koje proizvode dopamin u mozgu dovodi do glavnih simptoma Parkinsonove bolesti. Najčešće, Parkinsonova bolest se dijagnostikuje kod ljudi starijih od 50 godina. Parkinsonova bolest je idiopatska (bez poznatog uzroka) kod većine ljudi. Međutim, genetski faktori takođe igraju ulogu u bolesti.
[0445] Simptomi Parkinsonove bolesti uključuju, bez ograničenja, drhtanje šaka, ruku, nogu, vilice i lica, rigidnost mišića u udovima i trupu, usporenost pokreta (bradikinezija), posturalnu nestabilnost, otežano hodanje, neuropsihijatrijske probleme, promene u govoru ili ponašanju, depresiju, anksioznost, bol, psihozu, demenciju, halucinaciju i probleme sa spavanjem.
[0446] U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti Parkinsonovu bolest. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može izazvati jednu ili više aktivnosti progranulina kod pojedinca koji ima Parkinsonovu bolest. U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima Parkinsonovu bolest,
Hantingtonova bolest
[0447] Hantingtonova bolest (HD) je nasledna neurodegenerativna bolest uzrokovana autozomno dominantnom mutacijom u Huntingtin genu (HTT). Ekspanzija ponavljanja tripleta citokin-adeninguanin (CAG) unutar Huntingtin gena rezultira proizvodnjom mutantnog oblika huntingtin proteina (Htt) koji je kodiran genom. Ovaj mutantni huntingtin protein (mHtt) je toksičan i doprinosi smrti neurona. Simptomi Hantingtonove bolesti najčešće se javljaju između 35. i 44. godine, iako se mogu pojaviti u bilo kom uzrastu.
[0448] Simptomi Hantingtonove bolesti uključuju, bez ograničenja, probleme sa motornom kontrolom, trzaje, nasumične pokrete (horeju), abnormalne pokrete očiju, poremećenu ravnotežu, napade, poteškoće sa žvakanjem, otežano gutanje, kognitivne probleme, izmenjen govor, nedostatak pamćenja, poteškoće u razmišljanju, nesanicu, umor, demenciju, promene ličnosti, depresiju, anksioznost i kompulzivno ponašanje.
[0449] U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti Hantingtonovu bolest. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može izazvati jednu ili više aktivnosti progranulina kod pojedinca koji ima Hantingtonovu bolest. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima Hantingtonovu bolest.
Taupatična bolest
[0450] Bolest taupatija ili tauopatije su klasa neurodegenerativnih bolesti uzrokovanih agregacijom proteina tau povezanog sa mikrotubulama unutar mozga. Alchajmerova bolest (AD) je najpoznatija bolest taupatije i uključuje akumulaciju tau proteina unutar neurona u obliku nerastvorljivih neurofibrilarnih čvorova (NFT). Ostale bolesti i poremećaji taupatije uključuju progresivnu supranuklearnu paralizu, dementia pugilisticu (hromna traumatska encefalopatija), frontotemporalnu demenciju i parkinsonizam povezan sa hromozomom 17, Litiko-Bodigovu bolest (kompleks Parkinsondemencije Guama), Tangle-predominantnu demenciju, Gmigliogliom i gangliocitom, meningioangiomatozu, subakutni sklerozirajući panencefalitis, olovnu encefalopatiju, tuberoznu sklerozu, Hallervorden-Spatz bolest, lipofuscinozu, Pikovu bolest, kortikobazalnu degeneraciju, argirofilnu zrnastu bolest (AGD), Hantingtonovu bolest i frontotemporalnu lobarnu degeneraciju.
[0451] U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin prema ovom pronalasku, može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti bolest taupatije. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može indukovati jednu ili više aktivnosti progranulina kod pojedinca koji ima bolest taupatije. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima bolest taupatije.
Multipla skleroza
[0452] Multipla skleroza (MS) se takođe može nazvati diseminovanom sklerozom ili diseminiranim encefalomijelitisom. MS je inflamatorna bolest u kojoj su masne mijelinske ovojnice oko aksona mozga i kičmene moždine oštećene, što dovodi do demijelinizacije i ožiljaka, kao i do širokog spektra znakova i simptoma.
[0453] Simptomi MS uključuju, bez ograničenja, promene u osećaju, kao što je gubitak osetljivosti ili peckanje; bockanje ili utrnulost, kao što su hipoestezija i parestezija; slabost mišića; klonus; grčenje mišića; teškoće u kretanju; poteškoće sa koordinacijom i ravnotežom, kao što je ataksija; problemi u govoru, kao što je dizartrija, ili pri gutanju, kao što je disfagija; problemi sa vidom, kao što su nistagmus, optički neuritis uključujući fosfene i diplopiju; umor; akutni ili hronični bol; i poteškoće sa bešikom i crevima; kognitivno oštećenje različitog stepena; emocionalni simptomi depresije ili nestabilnog raspoloženja; Uhthoffsov fenomen, koji je pogoršanje postojećih simptoma zbog izlaganja višim od uobičajenih temperatura okoline; i Lermiteov znak, koji je električni osećaj koji teče niz leđa kada se savija vrat.
[0454] U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti multiplu sklerozu. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može izazvati jednu ili više aktivnosti progranulina kod pojedinca koji ima multiplu sklerozu. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima multiplu sklerozu.
Glaukom i makularna degeneracija
[0455] Glaukom opisuje, bez ograničenja, grupu bolesti koje karakteriše oštećenje optičkog nerva, što dovodi do gubitka vida i slepila. Glaukom je obično uzrokovan povećanim pritiskom tečnosti (= intraokularnim pritiskom) u prednjoj komori ispod rožnjače. Glaukom dovodi do sukcesivnog gubitka ganglijskih ćelija mrežnjače koje su važne za vid. Makularna degeneracija povezana sa uzrastom obično pogađa starije ljude i prvenstveno uzrokuje gubitak vida u makuli, centralnom vidnom polju. Makularna degeneracija izaziva, bez ograničenja, druze, pigmentne promene, izobličen vid, krvarenja oka, atrofiju, smanjenu oštrinu vida, zamagljen vid, centralne skotome, smanjen vid boja i smanjenu osetljivost na kontrast.
[0456] Bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da davanje anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti glaukom i makularnu degeneraciju. U nekim primerima izvođenja, primena anti-sortilin antitela može izazvati jedna ili više aktivnosti progranulina kod osobe koja ima glaukom ili makularnu degeneraciju. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima glaukom ili makularnu degeneraciju.
Degenerativna bolest diska (DDD)
[0457] Degenerativna bolest diska (DDD) opisuje, bez ograničenja, grupu bolesti u kojima intervertebralni disk (IVD) prolazi kroz opsežne morfološke, kao i biomehaničke promene, i obično se klinički manifestuje kod pacijenata sa bolom u donjem delu leđa. Degenerativni diskovi obično pokazuju degenerativnu fibrohrskavicu i klastere hondrocita, što ukazuje na popravljanje. Upala može ili ne mora biti prisutna. Patološki nalazi u DDD uključuju protruziju, spondilolizu i/ili subluksaciju pršljenova (sponilolisteza) i spinalnu stenozu.
[0458] Bez želje da budemo vezani teorijom, veruje se da primena anti-sortilin antitela prema ovom pronalasku može sprečiti, smanjiti rizik i/ili lečiti DDD. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može indukovati jednu ili više aktivnosti progranulina kod pojedinca koji ima DDD. U nekim primerima izvođenja, primena antitela na sortilin može da modulira jednu ili više aktivnosti sortilina kod pojedinca koji ima DDD.
Bol
[0459] Bol opisuje, bez ograničenja, neuropatski bol koji nastaje usled povrede nerva, na primer, od traume ili bolesti. Takva povreda može uključivati povredu perifernih nerava i/ili kičmene moždine.
Pokazalo se da antagonisti sortilina ublažavaju neuropatski bol. (Rieliner M et al. (2019) Sci. Adv. 5: eaav9946.)
Kompleti/proizvodni artikli
[0460] Ovde su obezbeđeni proizvodi (npr., komplet) koji sadrži anti-sortilin antitelo opisano ovde. Proizvod može uključivati jedan ili više kontejnera koji sadrže antitelo opisano ovde. Kontejneri mogu biti bilo koje pogodno pakovanje uključujući, ali nije ograničeno na, bočice, boce, tegle, fleksibilno pakovanje (npr., zapečaćene Mylar ili plastične kese) i slično. Kontejneri mogu biti jedinične doze, rinfuzni paketi (npr., višedozna pakovanja) ili podjedinične doze.
[0461] U nekim primerima izvođenja, kompleti mogu dalje da sadrže drugo sredstvo. U nekim primerima izvođenja, drugi agens je farmaceutski prihvatljiv pufer ili agens za razblaživanje uključujući, ali bez ograničenja, kao što je bakteriostatska voda za injekcije (BVFI), fiziološki rastvor puferovan fosfatom, Ringerov rastvor i rastvor dekstroze. U nekim primerima izvođenja, drugi agens je farmaceutski aktivan agens.
[0462] U nekim primerima izvođenja bilo kog od proizvodnih artikala, proizvodni artikal dalje uključuje uputstva za upotrebu u skladu sa postupcima ovog otkrića. Uputstva generalno uključuju informacije o doziranju, rasporedu doziranja i načinu primene za predviđeni tretman. U nekim primerima izvođenja, ova uputstva sadrže opis primene izolovanog antitela prema ovom pronalasku (npr., anti-sortilin antitelo koje je ovde opisano) za sprečavanje, smanjenje rizika ili lečenje pojedinca koji ima bolest, poremećaj ili povredu izabranu između demencije, frontotemporalne demencije, Alchajmerove bolesti, Gaucheove bolesti, vaskularne demencije, napada, distrofije mrežnjače, traumatske povrede mozga, povrede kičmene moždine, aterosklerotične vaskularne bolesti, neželjenih simptoma normalnog starenja, amiotrofične lateralne skleroze (ALS), dugotrajne depresije, Parkinsonove bolesti, Hantingtonove bolest, Taupatijske bolesti, multiple skleroze, starosne makularne degeneracije, glaukoma, degenerativne bolesti diska (DDD), Krojcfeld-Jakobove bolesti, hidrocefalusa normalnog pritiska, Nasu-Hakola bolesti, moždanog udara, akutne traume, hronične traume, lupusa, akutnog i hroničnog kolitisa, Kronove bolesti, inflamatorne bolesti creva, ulceroznog kolitisa, malarije, esencijalnog tremora, lupusa centralnog nervnog sistema, Behcetove bolesti, mešane demencije, demencije sa Levijevim telima, multiple sistemske atrofije, Shi-Drager sindroma, progresivnog suprapalnog sindroma, kortikalne bazalne ganglijske degeneracije, akutnog diseminovanog encefalomijelitisa, granulomatoznih poremećaja, sarkoidoze, bolesti starenja, retinitis pigmentosa, degeneracije mrežnjače, infekcije respiratornog trakta, sepse, infekcije oka, sistemske infekcije, lupusa, artritisa i zarastanja rana, prema bilo kojim postupcima predmetnog otkrića. U nekim primerima izvođenja, bolest, poremećaj ili povreda je frontotemporalna demencija. U nekim primerima izvođenja, uputstva uključuju uputstva za upotrebu anti-sortilin antitela i drugog agensa (npr., drugi farmaceutski aktivni agens).
Dijagnostičke upotrebe
[0463] Izolovana antitela prema ovom pronalasku (npr., ovde opisano antitelo na sortilin) takođe imaju dijagnostičku korist. Ovo otkriće stoga obezbeđuje postupke korišćenja antitela iz ovog otkrića, ili njihovih funkcionalnih fragmenata, u dijagnostičke svrhe, kao što je detekcija sortilin proteina u pojedincu ili u uzorcima tkiva dobijenim od pojedinca.
[0464] U nekim primerima izvođenja, pojedinac je čovek. U nekim primerima izvođenja, pojedinac je humani pacijent koji pati od ili je u riziku od razvoja bolesti, poremećaja ili povrede prema ovom pronalasku. U nekim primerima izvođenja, dijagnostički postupci uključuju detekciju sortilin proteina u biološkom uzorku, kao što je uzorak biopsije, tkivo ili ćelija. Ovde opisano antitelo na sortilin dovodi se u kontakt sa biološkim uzorkom i detektuje se antitelo vezano za antigen. Na primer, uzorak biopsije može biti obojen ovde opisanim antitelom protiv sortilina da bi se otkrile i/ili kvantifikovale ćelije povezane sa bolešću. Postupak detekcije može uključivati kvantifikaciju antitela vezanog za antigen. Detekcija antitela u biološkim uzorcima može se uraditi bilo kojim postupkom poznatim u tehnici, uključujući imunofluorescentnu mikroskopiju, imunocitohemiju, imunohistohemiju, ELISA, FACS analizu, imunoprecipitaciju ili mikro-pozitronsku emisionu tomografiju. U određenim primerima izvođenja, antitelo je radioaktivno obeleženo, na primer sa<18>F i naknadno detektovano korišćenjem analize mikropozitronske emisione tomografije. Vezivanje antitela se takođe može kvantifikovati kod pacijenta neinvazivnim tehnikama kao što su pozitronska emisiona tomografija (PET), rendgenska kompjuterska tomografija, jednofotonska emisiona kompjuterska tomografija (SPECT), kompjuterska tomografija (CT) i kompjuterska aksijalna tomografija (CAT).
[0465] Izolovano antitelo prema ovom pronalasku (npr., anti-sortilin antitelo opisano ovde) može se koristiti za otkrivanje i/ili kvantifikaciju, na primer, mikroglije u uzorku mozga uzetom iz pretkliničkog modela bolesti (npr. model ne-humane bolesti). Kao takvo, izolovano antitelo ovog pronalaska (npr., anti-sortilin antitelo opisano ovde) može biti korisno u proceni terapijskog odgovora nakon tretmana u modelu za bolest ili povredu nervnog sistema kao što je frontotemporalna demencija, Alchajmerova bolest, vaskularna demencija, napadi, retinalna distrofija, aterosklerotične vaskularne bolesti, Nasu-Hakola bolest ili multipla skleroza, u poređenju sa kontrolom.
[0466] Ovo otkriće će biti potpunije shvaćeno pozivanjem na sledeće Primere. Međutim, ne treba ih tumačiti kao ograničavanje obima ovog otkrića.
PRIMERI
[0467] Primeri 1-3 opisuju generisanje afinitetno zrelih varijanti anti-humanog sortilin antitela, S-60, i karakterizaciju tih varijanti u pogledu ne samo njihovog afiniteta vezivanja za SORT1, već i njihove biološke aktivnosti u smanjenju SORT! ekspresije, povećanje sekrecije PGRN, i blokiranje vezivanja PGRN-SORT1. Iznenađujuće, otkriveno je da poboljšana biološka aktivnost nije nužno bila u korelaciji sa povećanim afinitetom.
Primer 1: Generisanje S-60 varijanti i merenje SORT1 afiniteta vezivanja
[0468] Svrha sledećeg Primera je bila da se generišu afinitetno zrele varijante antitela na humani sortilin, S-60, i da se karakteriše vezivanje afinitetno zrelih antitela za humani sortilin (SORTI).
S-60 afinitetno zrele varijante
[0469] Stvorena su afinitetno zrela antitela protiv humanog sortilina (SORT!) i njihovo vezivanje za SORT! je izmereno. Anti-SORT1 antitelo, S-60, kao i S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S -60-7, S-60-8 i 5.60-9 su opisani u WO2016164637. VHi VLsekvence za S-60-9 i S60 u WO2016164637 su identične, a S-60 će se ovde koristiti za označavanje antitela. VHi VLsekvence za S-60-5, S-60-6 i S-60-7 u WO2016164637 su identične, a S-60-7 će se ovde koristiti za označavanje antitela, otkriveno je da je S-60 i snažan regulator nivoa SORT1 i moćan blokator vezivanja između SORT1 i PGRN (videti, npr., Tabele 8-10 i SLIKE 6A i 10D u WO2016164637). Zbog toga je S-60 odabran za dalje sazrevanje afiniteta.
[0470] Anti-SORT1 varijante S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15, S-60-16, S-60 -18, S-60-19 i S-60-24 su generisane kako je opisano u nastavku.
Proizvodnja S-60 afinitetno sazrelih varijanti
[0471] Anti-SORT1 antitelo S-60 je afinitetno sazrelo. Ukratko, raznovrsne biblioteke antitela su stvorene u kvascu za svako od početnih roditeljskih antitela. Raznovrsnost u prvom krugu sazrevanja afiniteta stvorena je korišćenjem standardnih tehnika molekularnog kloniranja za kombinovanje roditeljskog teškog lanca HVR-H3 i lakog lanca (LC) sa već postojećim genetskim diverzitetom u HVR-H1 i HVR-H2 regionima teškog lanca (HC) (nazvan optimizacija „H1/H2“). Za drugi krug sazrevanja po afinitetu, sekvence oba varijabilna regiona teškog lanca (VH) i varijabilnog regiona lakog lanca (VL) su optimizovane, sa posebnim fokusom na HVR-H3.
[0472] Selekcioni pritisci korišćeni za skrining biblioteka uključivali su ravnotežnu titraciju humanog SORT! antigena, kinetiku Fab konkurencije roditeljskog antitela i upotrebu deselekcije polispecifičnih reagensa. Zatim je korišćena FACS protočna citometrija za vizuelizaciju i selekciju antitela, koristeći standardne tehnike (videti, npr., Chao et al. Nature Protocols, 2006). Željena populacija je zatim preneta u dodatne krugove selekcije.
[0473] Afinitetno sazrela anti-SORT1 antitela su prečišćena na sledeći način: klonovi su uzgajani do zasićenja i zatim indukovani 48 h na 30°C uz mućkanje. Posle indukcije, ćelije kvasca su peletirane i supernatanti su sakupljeni za prečišćavanje. Imunoglobulini su prečišćeni korišćenjem kolone Proteina A i eluirani sirćetnom kiselinom, pH 2.0. Fab fragmenti su generisani digestijom sa papainom i prečišćeni preko CaptureSelect IgG-CH1 matrice afiniteta (LifeTechnologies).
Merenje afiniteta vezivanja za SORT1
[0474] Anti-SORT1 antitelo S-60 i njegove afinitetno sazrele varijante su testirane i upoređene u SORT1 testu vezivanja. Za test vezivanja, stabilne HEK293T ćelije koje eksprimiraju humani SORT1 su sakupljene tripsinizacijom, isprane u PBS, prebrojane i postavljene na ploče sa u-dnom sa 96 bunarčića pri 1×10<5>ćelija/bunarčić. Ploče su centrifugirane na 1400 rpm tokom 3 minuta i primarna anti-SORT1 ili kontrolna antitela su dodata u FACS pufer (PBS 2 FBS) i inkubirana na ledu jedan sat. Ćelije su zatim centrifugirane kao i ranije i isprane tri puta sa FACS puferom. Ćelije su zatim inkubirane sa anti-humanim APC konjugovanim sekundarnim antitelom (BD Biosciences) u FACS puferu 30 minuta na ledu. Ćelije su ponovo isprane tri puta sa FACS puferom i analizirane na BD FACS Canto ili Intellicit protočnom citometru. Vezivanje je mereno kao srednji fluorescentni intenzitet (MFI) u PE kanalu GFP pozitivne ćelijske populacije.
Rezultati
[0475] Afiniteti vezivanja anti-SORT1 antitela za SORT1 prikazani su u nastavku u tabeli 1. Sva antitela su testirana na osovinskom lancu huIgG1.
[0476] Anti-SORTI antitela S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8, S-60-10, S-60-11, S-60-13, S-60- 15, S-60-16, S-60-19 i S-60-24 pokazala su značajno poboljšan afinitet za vezivanje za SORT1 u poređenju sa S-60. Konkretno, S-60-8 i S-60-15 su pokazali najveće afinitete vezivanja za SORT1 od testiranih varijanti, imajući 2.46- i 2.05- povećanu promenu puta, respektivno, u poređenju sa afinitetom vezivanja roditeljskog antitela, S-60.
Primer 2: Efekat S-60 varijanti na ekspresiju SORT1 i sekreciju PGRN
[0477] Svrha sledećeg Primera je bila da se karakteriše efekat afinitetno zrelih varijanti anti-humanog SORT1 antitela, S-60, na ekspresiju SORT1 i ekstracelularne nivoe progranulina (PGRN).
SORT1 testovi ekspresije i PGRN sekrecije
[0478] Afinitetno zrele varijante S-60 su generisane kao što je opisano u Primeru 1, a zatim je izvršen skrining sa FACS u odnosu na njihovu sposobnost da smanje SORT1 i da podignu ekstracelularne nivoe PGRN. Da bi se ispitao efekat anti-SORT1 antitela na ekspresiju SORT1 i sekreciju PGRN, ćelije U251 koje endogeno eksprimiraju SORT1 i luče PGRN su inkubirane sa anti-SORT1 antitelom S-60 i varijantama sazrelim afinitetom. Nivoi SORT1 na površini ćelije pri različitim koncentracijama antitela mereni su pomoću FACS na sledeći način: anti-SORT1 antitelo S-60 i afinitetno zrele varijante dodati su U251 ćelijama zasejanim pri 3×10<3>ćelije/bunariću u pločama sa 96 bunarčića sa serijskim razblaženjem od 0.023 nM do 150 nM. Posle 72 h, ćelije su sakupljene tripsinom, isprane u PBS i obeležene sa Dilight-650 konjugovanim anti-SORT1 antitelom S-2-11 (opisano u WO2016164637) da se kvantifikuju nivoi preostalog SORT! proteina. Nakon što su ćelije inkubirane sa 5 µg/ml S-2-11 konjugovanog sa DiLight-650 (Invitrogen) jedan sat na ledu, ćelije su isprane tri puta u PBS+ 2 FBS i vezivanje je kvantifikovano korišćenjem FACSCanto<™>ili Intellicit protočnog citometra kao srednji intenzitet fluorescencije (MFI) APC.
[0479] Količina PGRN izlučenog u ćelijski supernatant tokom 72 h je merena standardnim ELISA testom na sledeći način: ćelije su rekuperovane i podloga je sakupljena; koncentracija PGRN u uzorcima medija je merena korišćenjem R&D Systems human PGRN Duoset ELISA kompleta, prema uputstvima proizvođača. Podaci su analizirani u Microsoft Excel i GraphPad Prism.
Rezultati
[0480] Polovina maksimalne efektivne koncentracije (EC50) za nishodnu regulaciju (DR) nivoa SORT! sa površine ćelije za svaku od testiranih varijanti S-60 prikazan je na Tabela 1. SORT1 DR je kvantifikovan za svaku testiranu varijantu S-60 i izražen kao procenat kontrole (netretirane ćelije) (Tabele 2-4). Pored toga, nivo ekstracelularne sekrecije PGRN je kvantifikovan i izražen kao umnožek netretirane kontrole kao što je prikazano u Tabelama 2-4. Nezavisni eksperimenti su predstavljeni u posebnim tabelama (Tabele 2-4). Sva antitela su testirana na osovinskom lancu huIgG1 VT.
[0481] U prvom eksperimentu koji analizira SORT1 DR EC50, procenat SORT1 DR koristeći zasićenu koncentraciju antitela od 0.6 nM IgG, i PGRN sekreciju koristeći koncentraciju zasićenih antitela od 0.62 ili 0.63 nM IgG, sledeće varijante su testirane: S-60, S-60-1, S-60 -2, S-60-3, S-60-4, S-60-7 i S-60-8. Kao što je prikazano u Tabeli 2, S-60-3 je pokazao najnižu DR EC50(.269 nM) i najveća sekrecija PGRN, povećanje od 1.77 puta u odnosu na kontrolu, i poboljšanje u odnosu na S-60, koji je pokazao povećanje od 1.38 puta u odnosu na kontrolu. Koristeći 0.6 nM IgG, S-60-1 je pokazalo najznačajniji efekat na ekspresiju SORT1 kod testiranih varijanti, smanjujući SORT1 za 50.4% u poređenju sa kontrolom, dok je S-60 smanjio SORT1 za 29.3%.
[0482] U sledećem eksperimentu, procenat DR korišćenjem zasićene koncentracije antitela od 1.25 nM IgG i sekrecije PGRN korišćenjem koncentracije zasićenog antitela od 0.63 nM IgG analiziran je za sledeće varijante: S-60, S-60-3, S- 60-24, S-60-15, S-60-16, S-60-18 i S-60-19. Kao što je prikazano u tabeli 3, i S-60-15 i S-60-16 su pokazali najviše nivoe ekstracelularne sekrecije PGRN sa povećanjem od 1.42 puta u poređenju sa kontrolom, što je poboljšanje u odnosu na S-60 koje je pokazalo povećanje od 1.11 puta u odnosu na kontrolu. Zaista, ove dve varijante su takođe značajno smanjile ekspresiju SORT1 u poređenju sa S-60, smanjujući SORT1 za 60.92% i 70.14%, respektivno, u odnosu na kontrolu, dok je S-60 smanjio SORT1 za samo 40.17%.
[0483] U trećem eksperimentu, procenat DR korišćenjem zasićene koncentracije antitela od 0.63 nM IgG i sekrecije PGRN korišćenjem koncentracije zasićenog antitela od 0.63 nM IgG analiziran je za sledeće varijante: S-60-24, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13 i S-60-14. Kao što je prikazano u tabeli 4, S-60-11 i S-60-12 su pokazali najveću količinu ekstracelularne sekrecije PGRN sa povećanjem od 1.89 puta u poređenju sa kontrolom. S-60-11 je takođe pokazao najveći SORT1 DR na 0.63 nM IgG, smanjujući SORT1 za 88.76% u odnosu na kontrolu.
Zaključak
[0484] Kao što je prikazano u Tabeli 1 u Primeru 1, S-60-8 i S-60-15 su pokazali najveće afinitete za vezivanje za SORT1 u poređenju sa S-60 i drugim varijantama S-60 testiranim sa najnižim KDvrednostima od 4.68E-10M i 5.60E-10, respektivno. Međutim, u poređenju sa specifičnom varijantom, S-60-3, koja ima veću KDvrednost 8.56E-10M (Tabela 1), S-60-8 je pokazalo manji porast sekrecije PGRN (Tabela 2) dok je S-60-15 pokazao višestruko povećanje sekrecije PGRN nego S-60-3 (Tabela 3). Pored toga, S-60-8 (pri koncentraciji zasićenja od 0.6 nM IgG) pokazao je manji procenat smanjenja ekspresije SORT1 (Tabela 2) u poređenju sa S-60-3 i S-60-15 (pri koncentraciji zasićenja od 1.25 nM IgG), koji su smanjili SORT1 za 61.50% i 60.92%, respektivno (Tabela 3). Dakle, S-60-15 je imao bolji učinak od S-60-3 u pogledu povećanja sekrecije PGRN i pokazao sličan efekat u poređenju sa S-60-3 u smanjenju nivoa ćelijske površine SORT!, dok je S-60-8 lošije od S-60-3 u pogledu povećanja sekrecije PGRN i smanjenja nivoa ćelijske površine SORT1.
[0485] Rezultati ove studije pokazuju da relativna efikasnost varijanti anti-SORT1 S-60 antitela u odnosu na smanjenje ekspresije SORT1 ili povećanje sekrecije PGRN nije bila predviđena njihovim relativnim afinitetima vezivanja za sortilin.
[0486] Dodatno, S-60-15 je pokazao najveće povećanje sekrecije PGRN u poređenju sa S-60 i određenim varijantama S-60 (tabela 3, poslednja kolona), uključujući S-60-3. S-60-3 je zauzvrat pokazao povećanu sekreciju PGRN u odnosu na S-60-1, -2, -4, -7 i -8 (Tabela 2, poslednja kolona). Stoga je S-60-15 efikasno antitelo za povećanje sekrecije PGRN u odnosu na te S-60 varijante. Sposobnost povećanja sekrecije PGRN je važna osobina u odabiru terapeutskog antitela za lečenje bolesti kao što je FTD i drugih patologija u kojima nedostatak PGRN igra direktnu uzročnu ulogu. Takvo antitelo bi bilo korisno u vraćanju nivoa PGRN na nivoe divljeg tipa ili bliže njima, čime bi se lečila bolest. Dodatno, ovo svojstvo je važan farmakodinamički parametar u proceni aktivnosti antitela in vivo (videti u nastavku, Primer 5).
Primer 3: S-60 varijante blokiraju vezivanje PGRN za SORT1
[0487] Svrha sledećeg Primera je bila da se okarakteriše efekat afinitetno zrelih varijanti anti-humanog SORT1 antitela, S-60, na interakciju vezivanja između SORT1 i prirodnog liganda, PGRN.
SORT1-PGRN blokirajući test
[0488] Takođe je testirana sposobnost varijanti S-60 da blokiraju vezivanje PGRN-a za SORT1. Rekombinantni humani PGRN (PGRN) (Adipogen) je biotinilovan sa EZ-Link Micro NHS-PEG4 kompletom kompanije ThermoScientific/Pierce prema uputstvima proizvođača. Stabilna ćelijska linija koja eksprimira neoznačeni humani SORT1 pune dužine (SORT1) ustanovljena je virusnom infekcijom ćelija HEK293T i pozitivnom selekcijom sa higromicinom (Genscript prilagođeni projekat). Kao kontrolne ćelije, korišćene su roditeljske ćelije HEK293T.
[0489] Ćelije koje eksprimiraju SORT1 ili kontrolne ćelije su sakupljene i isprane u PBS. Biotinilovani humani PGRN je dodat u PBS+ 2% FBS sa ili bez titracije anti-SORT1 antitela ili kontrolnih humanih ItG1 antitela izotipa i inkubiran na ledu 2 sata. Posle ispiranja ćelija 3 puta u PBS+ 2% FBS, ćelije su inkubirane u Streptavidin-APC (BD Biosciences, 1:100) na ledu 30 minuta. Zatim su ćelije ponovo isprane, resuspendovane u PBS+ 2% FBS i analizirane na FACSCanto<™>protočnom citometru (BD Biosciences, Mississauga, ON). Vezivanje PGRN je mereno kao srednji intenzitet fluorescencije (MFI) APC populacije ćelija koje eksprimiraju SORT1. Vezivanje biotinilovanog PGRN za SORT1 eksprimiran na HEK293T ćelijama je mereno pomoću FACS u odsustvu ili prisustvu S-60 i njegovih varijanti antitela.
Rezultati
[0490] Polovina maksimalne efektivne koncentracije (EC50) za blokiranje PGRN vezivanja za SORT1 za svaku od testiranih varijanti S-60 prikazano je na Tabelama 5-7. Pored toga, maksimalni nivo blokiranja PGRN za SORT1 je kvantifikovan i izražen kao procenat maksimalne blokade postignute korišćenjem koncentracije zasićenja od 50 nM IgG ili 150 nM IgG (Tabele 5-7). Nezavisni eksperimenti su prikazani u odvojenim tabelama ispod.
[0491] U prvom eksperimentu analizirajući PGRN vezujući blok EC50i procenat PGRN veznog bloka za SORT1 sa koncentracijom zasićenja od 150 nM IgG, testirane su sledeće varijante: S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S- 60-7, S-60-8 i S-60. Kao što je prikazano u Tabeli 5, S-60-4 je pokazao najnižu EC50vrednost (0.584 nM), čime se postiže blok od 95.7% PGRN vezivanja za SORT1. Od analiziranih varijanti, S-60-7 je pokazao najveće smanjenje PGRN vezivanja, blokirajući 96.5% PGRN vezivanja za SORT1, iako je pokazao nižu efikasnost u blokiranju PGRN vezivanja (veći EC50vrednost) od S-60 i varijanti S-60-3 i S-60-4.
[0492] U sledećem eksperimentu analizirajući PGRN vezujući blok EC50i procenat PGRN veznog bloka za SORT1 sa koncentracijom zasićenja od 50 nM IgG, testirane su sledeće varijante: S-60, S-60-3, S-60-24, S-60-15, S-60- 16, S-60-18 i S-60-19. Kao što je prikazano na Tabeli 6, S-60-24, S-60-15 i S-60-16 su pokazali najnižu EC50vrednosti u poređenju sa S-60, u rasponu od 1.11 nM do 1.22 nM. Dodatno, varijanta S-60-15 je pokazala najjaču moć u poređenju sa S-60, postigavši blokadu od 90.74% PGRN vezivanja za SORT1.
[0493] U trećem eksperimentu testirane su sledeće varijante: S-60-24, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13 i S-60-14. Kao što je prikazano na Tabela 7, S-60-11 je pokazao najnižu EC50(0.410 nM), postižući blokadu od 94.97% PGRN vezivanja za SORT1. Od analiziranih varijanti, S-60-24 je pokazao najveće smanjenje PGRN vezivanja, blokirajući 95.64% PGRN vezivanja za SORT1.
Zaključak
[0494] Kao što je prikazano na Tabeli 1 u Primeru 1, i S-60-8 i S-60-15 su pokazali najveće afinitete za vezivanje za SORT1 u odnosu na S-60 i druge testirane varijante S-60, pri čemu je S-60-8 imao najveći afinitet za SORT1. Međutim, u poređenju sa S-60, S-60-8 je pokazao nižu efikasnost u blokiranju vezivanja za PGRN (veća EC50vrednost u odnosu na S-60) (Tabela 5) dok je S-60-15 pokazao veću efikasnost u blokiranju vezivanja za PGRN (smanjen EC50vrednost u odnosu na S-60) (Tabela 6). Dodatno, S-60-8 je pokazao manji procenat maksimalnog blokiranja PGRN vezivanja za SORT1 u poređenju sa S-60 (Tabela 5) dok je S-60-15 pokazao veći procenat maksimalnog blokiranja PGRN vezivanja za SORT1 u odnosu na S-60 (Tabela 6). Dakle, S-60-15 je imao bolje rezultate od S-60-8 u poređenju sa S-60 u odnosu na EC50vrednost u blokiranju PGRN vezivanja za SORT1 i maksimalni procenat blokiranja PGRN vezivanja za SORT1, uprkos činjenici da je S-60-8 pokazao veći afinitet vezivanja za SORT1 u poređenju sa S-60-15.
[0495] Dakle, rezultati ove studije neočekivano ukazuju da relativna efikasnost varijanti anti-SORT1 S-60 antitela u pogledu blokiranja stepena vezivanja PGRN za SORT1 nije bila predviđena njihovim relativnim afinitetima vezivanja za SORT1.
Primer 4: S-60-15 Analiza za testiranje stabilnosti i uticaja stresa
[0496] Svrha sledećeg Primera je bila da se okarakteriše S-60-15, afinitetno sazrela varijanta S-60 opisana u prethodnim Primerima, za stabilnost pod različitim uslovima stresnog testiranja.
[0497] Stabilnost terapeutskog antitela je važna za kliničku efikasnost. Tokom proizvodnje, skladištenja i in vivo primene, terapeutska antitela su izložena riziku od degradacije putem višestrukih načina. Faktori koji su odgovorni za takvu degradaciju ostaju nedovoljno shvaćeni. S obzirom da je S60-15 pokazao visok afinitet vezivanja za SORT1 (videti Primer 1), efektivno smanjio nivoe SORT1 na površini ćelije i povećao ekstracelularnu sekreciju PGRN (videti Primer 2), kao i značajno blokirao PGRN vezivanje za SORT1 (videti Primer 3), i neočekivano izvršio ove funkcionalne testove bolje od S-60-8 koji je pokazao veći afinitet za SORT1, S-60-15 je dalje procenjen na stabilnost.
Testiranja na stres u odnosu na pH i temperaturnu
[0498] Da bi se izmerila stabilnost aminokiselinskih ostataka unutar S-60-15, uzorci S-60-15 su podvrgnuti pH i temperaturnim stresnim uslovima da bi se oponašali stresni uslovi koji se javljaju tokom proizvodnje, skladištenja i in vivo primene. Ukratko, pojedinačni uzorci S-60-15 podvrgnuti su stres testiranju na pH 3.5 ili pH 5.0 i na 40°C ili 50°C. Uzorci su testirani u različitim vremenskim tačkama - 0, 1, 3 i 5 dana za dva pH uslova i 0, 7, 14 i 30 dana za uslove visokog temperaturnog stresa -tretmanom sa DTT i IAA praćenim digestijom tripsinom. Razloženi uzorci su analizirani tečnom hromatografijom sa detekcijom masene spektroskopije korišćenjem Waters ACQUITY UPLC spojenog na Xevo G2-XS QTOF maseni spektrometar korišćenjem kolone BEH C18. Rezultati su prikazani na Tabeli 8.
[0499] Aminokiseline koje imaju potencijal da izazovu post-translacione modifikacije (PTM) nakon stresa su identifikovane, a odgovarajući peptidni fragmenti generisani iz uzoraka pod stresom su praćeni kinetički. Rezultati potvrđuju da dva mesta asparagin-glicina, jedno u Fc regionu teškog lanca (SEQ ID NO: 11) i jedno u Fab regionu lakog lanca (SEQ ID NO:15) S-60-15, su bili najpodložniji PTM, pokazujući 45.9% i 65.6% deamidacije, nakon što su bili podvrgnuti skladištenju na 50°C tokom 30 dana. Nijedno drugo PTM ili mesto cepanja nije pokazalo značajnu PTM ili degradaciju nakon testiranja na stres.
Deamidacija mesta asparagina (N33).
[0500] Bilo kakva deamidacija u Fc regionu teškog lanca S-60-15 ne bi trebalo da utiče na afinitet vezivanja S-60-15 za SORT1, pošto taj region nema direktnu interakciju sa SORT1. Međutim, mesto asparagina (N33) u Fab regionu S-60-15 je u HVR-L1 (SEQ ID NO:8), regionu lakog lanca koji određuje komplementarnost, a koji učestvuje u vezivanju antigena. Dakle, deamidacija mesta asparagina (N33) u Fab regionu S-60-15 može uticati na afinitet vezivanja S-60-15 za SORT1. Nakon deamidacije, mesto asparagina (N33) u Fab regionu S-60-15 podleže promeni Asn u Asp/IsoAsp.
[0501] Mutageneza usmerena na mesto je korišćena da se testiraju efekti deamidacije na mestu asparagina (N33) u Fab regionu S-60-15 i potencijalne supstitucije aminokiselina da bi se smanjila verovatnoća degradacije i deamidacije i rezultirajuća odgovornost proizvodnje. Sedamnaest različitih tačkastih mutacija na HVR-L1 N33 poziciji S-60-15 huIgG1 je proizvedeno i sekvencirano korišćenjem standardnih procedura. Alotip G1m3 ili G1m(f) sa mutacijama L234A/L233A/P331S (motiv „LALAPS”) korišćen je kao pozadina (Jefferis R i Lefranc M-P, Mabs, 2009 Jul-Aug; 1(4): 332-338). Tačkaste mutacije LALAPS imaju za cilj da poboljšaju ukupnu bezbednost minimiziranjem efektorskih funkcija kao što je vezivanje Fc gama receptora, aktivacija komplementa i citotoksičnost posredovana ćelijama zavisna od antitela (ADCC). Smanjenje vezivanja Fc gama receptora, aktivacija komplementa i ADCC kao rezultat LALAPS mutacija primećeni su u različitim eksperimentima (podaci nisu prikazani). Podaci interferometrije bio-sloja (BLI) prikupljeni su brzinom od 5 Hz na 25°C na Pall ForteBio Octet RED96 instrumentu. Analiza podataka je izvršena korišćenjem ForteBio softvera za analizu podataka, verzija 9.0. Za analizu i za pripremu reagenasa korišćen je standardni kinetički pufer (PBS, 0.1 BSA, 0.02 Tween-20, pH 7.2). Za sve testove, vrhovi senzora su ekvilibrisani u puferu pre analize.
[0502] Za inicijalni off-rate skrining, S-60-15 LALAPS N33 i N33Ks mutanti (1 µg/mL, 300 s vreme punjenja) su snimljeni na Anti-Human IgG Fc Capture Dip i Read biosenzorima (Pall ForteBio, Menlo Park, CA). Dvadeset nM humanog SORT1 obeleženog histidinom (R&D Systems, Minneapolis, MN) je zatim vezan za uhvaćenu anti-SORT1 površinu (vreme povezivanja 200 s, vreme disocijacije 1200 s). Rezultujući BLI signal je dobijen kao razlika u odgovoru od referentnog (1 µg/mL S60-15 0 nM SORT1) senzora. Kontrola nultog liganda (0 µg/mL IgG 20 nM SORT1) nije pokazala merljivo nespecifično vezivanje antigena za površinu vrha senzora. Potpuno, lokalno prilagođavanje korišćenjem modela interakcije 1:1 primenjeno je za izdvajanje konstanti brzine asocijacije i disocijacije (kai kd, odnosno) za svaki N33 mutant. Konstante afiniteta (KD) su izračunate iz odnosa kd/ka. Različite supstitucije aminokiselina su napravljene na N33 i testirane na vezivanje za SORT1 na skriningu off-rate skriningu (pod uslovima bez stresa) kao što je prikazano na Tabeli 9.
[0503] Skrining ovog N33Ks mutantnog panela je pokazao da je antitelo S-60-15.5 (N33D), koje imitira deamidaciju N33, dovelo do značajnog smanjenja vezivanja, sa KDod 1000 pM u poređenju sa 270 pM za N33 divljeg tipa (wt) (Tabela 9). Nasuprot tome, antitelo S-60-15.1 (N33T) imalo je najbolje zadržavanje afiniteta S-60-15 prema SORT1, pokazujući najmanju razliku KDu odnosu na divlji tip u panelu (Tabela 9).
[0504] Pored toga, izvršena je kompletna kinetička analiza korišćenjem više koncentracija SORT1 za S-60-15.1 [N33T] kao huIgG1 i huIgG1 LALAPS u nezavisnom eksperimentu. Kinetički podaci su prikazani u Tabeli 10. Kinetički podaci pokazuju da je S60-15.1 [N33T] antitelo visokog afiniteta i kao huIgG1 i kao huIgG1 LALAPS.
Vezivanje ćelija i funkcionalnost
[0505] S-60-15.1 [N33T], i kao huIgG1 i huIgG1 LALAPS, i S-60-15.5 [N33D] su naknadno testirani na vezivanje ćelija i funkcionalnost kao što je opisano u nastavku.
[0506] Afinitetno sazrela antitela S-60, S-60-15.1 [N33T] i S-60-15.5 [N33D] su testirana jedno pored drugog na vezivanje za humani SORT1 eksprimiran na ćelijama HEK293T kao što je ranije opisano. Rezultati su prikazani u Tabeli 11. S-60-15.1 [N33T] kao huIgG1 ili huIgG1 LALAPS je pokazao veći afinitet od S-60 (Tabela 11), sa nižom Kdi višim Bmax. Čini se da Fc varijanta nije imala uticaj na afinitet, imajući samo marginalne razlike u Kdi Bmaxod S-60-15.1 [N33T] huIgG1 naspram huIgG1 LALAPS. Potpuno deamidirana verzija S-60-15.5 [N33D] nije pokazala nikakvo značajno vezivanje (Tabela 11, N.B. (Bez vezivanja)) na ćelije koje eksprimiraju SORT1, što sugeriše da je amidacija ostatka N33 neophodna za vezivanje ciljnog mesta.
[0507] U251 ćelije koje endogeno eksprimiraju SORT1 i luče PGRN inkubirane su sa anti-SORT1 antitelom S-60, S-60-15.1 [N33T] ili S-60-15.5 [N33D] u različitim koncentracijama, a nivoi SORT1 na površini ćelije su mereni pomoću FACS kao što je opisano u Primer 2. Kontrola su bile netretirane ćelije. Da bi se kvantifikovao procenat smanjene regulacije sortilina, korišćena je koncentracija zasićenih antitela od 150 nM IgG. Za kvantifikaciju sekrecije PGRN, korišćena je koncentracija zasićenih antitela od 50 nM IgG. Rezultati su prikazani u Tabeli 12. S-60-15.1 [N33T] pri čemu je huIgG1 ili huIgG1 LALAPS rezultovao značajnom smanjenom regulacijom SORT1 i povećanjem sekrecije PGRN. I nivo smanjenja regulacije SORT1 i nivo povećanja sekrecije PGRN su značajno poboljšani sa S-60-15.1 [N33T] kao huIgG1 ili huIgG1 LALAPS u poređenju sa S-60, S-60-15.1 [N33T] kao huIgG1 koji su prikazali samo neznatno smanjenje EC50i procenta SORT1 nishodne regulacije, sa manjim povećanjem sekrecije PGRN-a u poređenju sa S-60-15.1 [N33T] kao huIgG1 LALAPS. Nasuprot tome, potpuno deamidirana verzija S-60-15.5 [N33D] pokazala je lošije rezultate od S-60 u svakom od ovih funkcionalnih testova; nije pokazala značajnu nishodnu regulaciju SORT1 i imala je samo minimalnu promenu u nivoima sekretiranih PGRN.
[0508] Vezivanje biotinilovanog PGRN za SORT1 eksprimiranog na HEK293T ćelijama je mereno pomoću FACS u odsustvu ili prisustvu anti-SORT1 antitela S-60, S-60-15.1 [N33T] i S-60-15.5 [N33D] kao što je opisano u Primeru 3. Rezultati su prikazani u Tabeli 13. Za kvantifikaciju procenta blokiranja vezivanja PGRN za SORT1 korišćena je koncentracija zasićenog antitela od 150 nM IgG.
[0509] Varijante S-60-15.1 [N33T], sa i bez LALAPS-a, pokazale su najniže EC50vrednosti i najviši nivo blokiranja PGRN vezivanja za SORT1 u poređenju sa S-60-15.5 kao i u poređenju sa S-60. Dakle, S-60-15.1 [N33T] je imao bolji učinak od S-60 i S-60-15.5 u blokiranju PGRN vezivanja za SORT1.
[0510] Ukratko, otkriveno je da je S-60-15 podvrgnut ekstenzivnoj deamidaciji na N33 pod stresom skladištenja (videti Tabela 8), što povećava verovatnoću degradacije i posledične proizvodne odgovornosti. Prethodno opisano anti-SORT1 antitelo S-60 i varijante S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7 i S-60-8 takođe sadrže asparagin na poziciji 33 u VL. Konkretno, lokacija mesta deamidacije N33 unutar mesta HVR-L1 će verovatno uticati na vezivanje S-60-15 za SORT1. S-60-15.1 [N33T], jedna od nekoliko testiranih varijanti S-60-15, zadržala je značajan afinitet vezivanja za SORT1 u poređenju sa S-60-15 (videti Tabelu 9) i pokazala je značajno poboljšan afinitet vezivanja za SORT1 u poređenju sa S-60 (videti Tabelu 11; uporediti sa S-60-15 VT u Tabeli 1). Ovo visoko zadržavanje afiniteta vezivanja bilo je neočekivano za antitelo koje ima nepoželjnu supstituciju unutar HVR-L1 jer ostaci HVR-L1 mogu da kontaktiraju antigen. Takođe, neočekivano, varijanta S-60-15.1 [N33T] je zadržala povećanu regulaciju SORT1, povećano lučenje PGRN i povećano blokiranje vezivanja PGRN za SORT1 u poređenju sa S-60 (videti Tabele 12 i 13). Ovi rezultati su takođe bili neočekivani jer bi se takođe očekivalo da će nepoželjna supstitucija u HVR sekvenci negativno uticati na funkcionalne karakteristike antitela. Umesto toga, S-60-15.1 [N33T] zadržava poželjna svojstva regulacije SORT1 na površini ćelije, povećavajući sekreciju PGRN i blokirajući vezivanje PGRN za SORT1 pored toga što je stabilniji od prethodno opisanih antitela uklanjanjem proizvodne nepoželjne karakteristike na poziciji 33 u VL.
Primer 5: PK i PD antitela na sortilin kod primata koji nisu ljudi
[0511] U ovom primeru, farmakokinetika (PK) i farmakodinamika (PD) intravenski (IV) primenjenih anti-sortilin antitela S-60-15.1 [N33T] LALAPS su određene kod primata koji nisu ljudi.
Materijali i postupci
Farmakokinetičke i farmakodinamičke studije pojedinačne doze
[0512] Za farmakokinetičke studije pojedinačne doze, makaki majmunima je dato antitelo na sortilin u jednoj IV dozi od 5 mg/kg, 20 mg/kg, 60 mg/kg ili 200 mg/kg dana 0 (n = 3 životinje po dozi). Krv i cerebrospinalna tečnost su uzeti iz životinja u više vremenskih tačaka nakon toga da bi se dobile koncentracije anti-sortilin antitela u plazmi i cerebrospinalnoj tečnosti (CSF), koje su mere farmakokinetike anti-sortilin antitela. Određeni su i koncentracija progranulina (PGRN) i nivoi sortilina (SORT1) na belim krvnim ćelijama (VBC), koji su mere farmakodinamike.
[0513] Koncentracije anti-sortilin antitela su analizirane korišćenjem ELISA testa sa anti-idiotipskim antitelima specifičnim za anti-sortilin antitela. Koncentracije PGRN su analizirane sa komercijalno dostupnim ELISA kompletom. Nivoi SORT1 na belim krvnim ćelijama su analizirani korišćenjem ELISA testa i normalizovani na koncentraciju proteina.
Rezultati
[0514] Tabela 14 daje srednju vrednost za Cmaxu plazmi, srednju vrednost AUC, i t1/2za svaku od testiranih doza antitela na sortilin.
[0515] Kao što je prikazano u SL. 1A, Nivoi ekspresije SORT1 u perifernim belim krvnim ćelijama su se smanjili nakon tretmana primata koji nisu ljudi sa bilo kojom od testiranih doza anti-sortilin antitela. Veće doze anti-sortilin antitela (60 mg/kg, 200 mg/kg) dovele su do ranijeg i dužeg smanjenja SORT! nivoa u perifernim belim krvnim ćelijama u poređenju sa nižim dozama anti-sortilin antitela (5 mg/kg, 20 mg/kg).
[0516] Nivoi PGRN su povećani u plazmi neljudskih primata kojima je primenjena jedna IV injekcija anti-sortilin antitela na način koji zavisi od vremena i doze (SL.1B). Konkretno, nivoi PGRN u plazmi su se povećali 3- do 4 puta na Cmax, u poređenju sa osnovnim nivoima, za sve testirane doze antisortilin antitela. Nivoi PGRN u plazmi ostali su povišeni tokom dužih vremenskih perioda pri višim dozama antitela. Pored toga, povećani nivoi PGRN u plazmi bili su u korelaciji sa smanjenim nivoima ekspresije SORT1 u perifernim belim krvnim ćelijama.
[0517] Nivoi PGRN u likvoru su takođe povećani kod neljudskih primata kojima je primenjena jedna IV injekcija anti-sortilin antitela. Kao što je prikazano na SL. 1C, nivoi CSF PGRN su porasli 2- do 3 puta iznad početne vrednosti kod životinja koje su primale ili 20 mg/kg, 60 mg/kg ili 200 mg/kg. Kao što je primećeno kod nivoa PGRN u plazmi, nivoi PGRN u CSF su tokom vremena ostali povišeni u grupama sa višim dozama antitela.
[0518] Tabela 15 daje CSF srednju vrednost Cmax, srednju vrednost AUC, i t1/2za svaku od testiranih doza antitela na sortilin kod primata koji nisu ljudi. Koncentracije anti-sortilin antitela u CSF bile su u proseku oko 0.1% količine uočene u plazmi.
Farmakokinetičke i farmakodinamičke studije ponovljene doze
[0519] Dalje farmakokinetičke i farmakodinamičke studije su sprovedene na primatima koji nisu ljudi kojima su davana anti-sortilin antitela nakon režima ponovljene doze. U ovim studijama, životinjama (2 mužjaka i 2 ženke) davana su antitela na sortilin u dozi od 60 mg/kg jednom nedeljno tokom četiri nedelje. U različitim vremenskim tačkama nakon toga, određivani su nivoi ekspresije SORT! u perifernim belim krvnim ćelijama. Pored toga, određeni su nivoi anti-sortilin antitela u plazmi i CSF.
[0520] Kao što je prikazano na SL. 2A, nivoi SORT1 u perifernim belim krvnim ćelijama ostali su smanjeni tokom trajanja studije. Nivoi PGRN u plazmi su porasli na 5- do 6 puta iznad osnovne linije na nivoima pika (SL. 2B). Smanjenje PGRN u plazmi je primećeno nakon četvrte i poslednje primene antitela na sortilin; međutim, nivoi PGRN u plazmi su ostali povišeni za 2 puta iznad osnovne linije. Pored toga, nivoi PGRN CSF su povećani 3- do 4 puta iznad osnovne linije (SL.2C).
[0521] Sistemska izloženost antitelu na sortilin, procenjena srednjim Cmaxi AUC0-168, bio je 2100 µg/mL i 114000 µg/mL × h prvog dana, i 3020 µg/mL i 174000 µg/mL × h 22. dana. Ovi rezultati su pokazali da je izloženost bila veća 22. dana u odnosu na dan 1, ukazujući na nešto akumulacije antitela.
[0522] Koncentracija anti-sortilin antitela u CSF kod ovih životinja kretala se u rasponu od 0.03% do 0.12% one uočene u plazmi, u skladu sa distribucijom drugih antitela u CSF (Pestalozzi et al., (2000) J Clin Oncol 18(11):2349-51, Petereit et al., (2009) Mult Scler 15(2):189-92).
[0523] Uzeti zajedno, ovi rezultati pokazuju da varijanta S-60-15.1 [N33T], uprkos relativno kratkom poluživotu, ima trajnu aktivnost in vivo, smanjujući nivoe SORT1 u perifernim belim krvnim ćelijama i povećavajući nivoe PGRN u plazmi i CSF.
[0524] Dodatno, IV primena S-60-15.1 [N33T] makaki majmunima u 4-nedeljnoj i 26-nedeljnoj toksikološkoj studiji ponovljenih doza dobro se podnosila do 200 mg/kg nedeljno, i nije bilo štetnih nalaza da bi onemogućilo sprovođenje kliničkih studija na ljudima na osnovu tih i drugih toksikoloških studija koje su uključivale procenu oslobađanja citokina, mortaliteta, telesne težine, brzine i dubine disanja i lokalne podnošljivosti na mestu injekcije. Prema tome, S-60-15.1 [N33T] je pogodan za testiranje u humanim kliničkim studijama FTD i drugih indikacija kako je ovde predviđeno.
[0525] Nedostatak neželjenih nalaza u pogledu toksičnosti od primene anti-sortilin antitela bio je iznenađujući s obzirom na činjenicu da sortilin deluje kao receptor nekoliko liganada i ima višestruku ulogu u ćelijskom transportu i signalizaciji (Nykjaer, A et al., (2012) Trends Neurosci 35: 261-270). Zbog višestrukih liganada i funkcionalnih uloga sortilina, moglo se očekivati da će primena anti-sortilin antitela izazvati efekte van ciljnog mesta; međutim, antitelo S-60-15.1 [N33T] se dobro podnosilo u primenjenim dozama.
Sekvence VH regiona varijanti S-60 antitela, poravnanje sa S-60 i lokacije HVR
[0526]
Sekvence VL regiona varijanti S-60 antitela, poravnanje sa S-60 i lokacije HVR [0527]

Claims (36)

Patentni zahtevi
1. Antitelo koje se vezuje za humani sortilin protein, naznačeno time da antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 56 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 60.
2. Antitelo koje se vezuje za humani sortilin protein, naznačeno time da antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 56 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 57.
3. Antitelo koje se vezuje za humani sortilin protein, naznačeno time da antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 137 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 142.
4. Antitelo koje se vezuje za humani sortilin protein, naznačeno time da antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 138 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 142.
5. Antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde humani sortilin protein sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 81.
6. Antitelo prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, naznačeno time da je antitelo IgG klase, IgM klase ili IgA klase.
7. Antitelo prema patentnom zahtevu 6, gde je antitelo IgG klase i ima izotip IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4.
8. Antitelo prema patentnom zahtevu 7, naznačeno time da:
(a) antitelo je izotip IgG1 ili IgG2 i Fc region sadrži aminokiselinsku supstituciju na poziciji P331S, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numeraciji;
(b) antitelo je IgG1 izotip i Fc region sadrži aminokiselinske supstitucije na pozicijama L234A, L235A i P331S, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numeraciji;
(c) antitelo je izotip IgG1, IgG2 ili IgG4 i Fc region sadrži aminokiselinsku supstituciju na poziciji N297A, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numeraciji; ili
(d) Fc region sadrži aminokiselinsku supstituciju na pozicijama S267E i L328F, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numeraciji.
9. Antitelo prema patentnom zahtevu 8, naznačeno time da je antitelo izotip IgG1 i Fc region sadrži aminokiselinske supstitucije na pozicijama L234A, L235A i P331S, pri čemu je numerisanje položaja ostatka prema EU numeraciji.
10. Antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9, naznačeno time da je antitelo humano antitelo, bispecifično antitelo, monoklonsko antitelo, multivalentno antitelo ili konjugovano antitelo.
11. Antitelo prema patentnom zahtevu 10, naznačeno time da je antitelo bispecifično antitelo koje prepoznaje sortilin protein i drugi antigen.
12. Antitelo prema patentnom zahtevu 11, naznačeno time da drugi antigen je antigen koji olakšava transport kroz krvno-moždanu barijeru.
13. Antitelo prema patentnom zahtevu 12, naznačeno time da je drugi antigen izabran iz grupe koju čine transferin receptor (TR), insulinski receptor (HIR), receptor faktora rasta sličan insulinu (IGFR), proteini 1 i 2 povezani sa receptorom lipoproteina niske gustine ( LPR-1 i 2), receptor difterijskog toksina, CRM197, jednodomensko antitelo lame, TMEM 30(A), domen transdukcije proteina, TAT, Sin-B, penetratin, poli-argininski peptid, angiopep peptid, bazigin, Glutl, CD98hc i ANG1005.
14. Antitelo prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačeno time da je antitelo fragment antitela koji se vezuje za humani sortilin protein.
15. Antitelo prema patentnom zahtevu 14, naznačeno time da je fragment antitela Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv ili scFv fragment.
16. Izolovana nukleinska kiselina koja sadrži sekvencu nukleinske kiseline koja kodira antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15.
17. Vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu prema patentnom zahtevu 16.
18. Izolovana ćelija domaćina koja sadrži vektor prema patentnom zahtevu 17.
19. Postupak za proizvodnju antitela koje se vezuje za sortilin, koji obuhvata kultivisanje ćelije domaćina prema patentnom zahtevu 18 tako da se antitelo proizvodi.
20. Postupak prema patentnom zahtevu 19, koji dalje obuhvata rekuperaciju antitela koje proizvodi ćelija domaćin.
21. Farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
22. Antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 za upotrebu kao lek.
23. Antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15, za upotrebu u postupku prevencije, smanjenja rizika ili lečenja bolesti, poremećaja ili povrede izabranih iz grupe koju čine frontotemporalna demencija, Alchajmerova bolest, vaskularna demencija, konvulzije, retinalna distrofija, amiotrofična lateralna skleroza, traumatska povreda mozga, povreda kičmene moždine, demencija, moždani udar, Parkinsonova bolest, degeneracija mrežnjače, multipla skleroza, septički šok, artritis, osteoartritis i neuropatski bol.
24. Antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15, za upotrebu u postupku prevencije, smanjenja rizika ili lečenja bolesti, poremećaja ili povrede izabranih iz grupe koju čine frontotemporalna demencija, Alchajmerova bolest, vaskularna demencija, konvulzije, retinalna distrofija, amiotrofična lateralna skleroza, traumatska povreda mozga, povreda kičmene moždine, demencija, moždani udar, Parkinsonova bolest, degeneracija mrežnjače, multipla skleroza, septički šok, artritis i osteoartritis.
25. Antitelo za upotrebu prema patentnom zahtevu 24, naznačeno time da je bolest, poremećaj ili povreda bira izabran grupe koju čine frontotemporalna demencija, Alchajmerova bolest, amiotrofična lateralna skleroza i Parkinsonova bolest.
26. Antitelo za upotrebu prema patentnom zahtevu 25, gde je bolest, poremećaj ili povreda frontotemporalna demencija.
27. Antitelo prema bilo kom od patentnom zahteva 1-15, za upotrebu u postupku prevencije, smanjenja rizika ili lečenja inflamatornog poremećaja.
28. Antitelo prema bilo kom od patentnom zahteva 1-15 za upotrebu u postupku inhibicije neuroinflamacije ili aksonopatije naznačeno kratkim izrastom aksona i aberantnim grananjem kod pojedinca kome je to potrebno.
29. Antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 za upotrebu u postupku za podsticanje zarastanja rana.
30. Antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 za upotrebu u postupku prevencije, smanjenja rizika ili lečenja artritisa kod pojedinca kome je to potrebno.
31. In vitro postupak inhibicije interakcije između sortilina eksprimiranog na ćeliji i progranulina, pri čemu postupak obuhvata izlaganje ćelije koja eksprimira sortilin antitelu na sortilin prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 ili farmaceutskoj kompoziciji prema zahtevu 21.
32. Postupak prema patentnom zahtevu 31, gde postupak inhibicije interakcije između sortilina eksprimiranog na ćeliji i progranulina dalje obuhvata smanjenje nivoa sortilina eksprimiranog na površini ćelije.
33. Postupak prema patentnom zahtevu 31 ili 32, gde postupak inhibicije interakcije između sortilina eksprimiranog na ćeliji i progranulina dalje obuhvata povećanje ekstracelularnih nivoa progranulina.
34. Antitelo za upotrebu prema bilo kom od patentnih patentnih zahteva 23-26, naznačeno time što postupak prevencije, smanjenja rizika ili lečenja bolesti, poremećaja ili povrede obuhvata davanje antitela osobi koja ima jednu ili više mutacija u genu koji kodira progranulin.
35. Antitelo za upotrebu prema patentnom zahtevu 34, naznačeno time da je pojedinac heterozigot za jednu ili više mutacija gubitka funkcije u genu koji kodira progranulin.
36. Antitelo za upotrebu ili postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 23-35, naznačeno time da antitelo na sortilin sadrži dva ili više antitela na sortilin.
RS20230194A 2018-07-13 2019-07-12 Anti-sortilin antitela i načini njihove upotrebe RS64034B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862698007P 2018-07-13 2018-07-13
US201962860184P 2019-06-11 2019-06-11
US201962868849P 2019-06-28 2019-06-28
EP19746306.0A EP3618928B1 (en) 2018-07-13 2019-07-12 Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof
PCT/US2019/041614 WO2020014617A1 (en) 2018-07-13 2019-07-12 Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64034B1 true RS64034B1 (sr) 2023-04-28

Family

ID=67480375

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230194A RS64034B1 (sr) 2018-07-13 2019-07-12 Anti-sortilin antitela i načini njihove upotrebe

Country Status (31)

Country Link
US (4) US11396546B2 (sr)
EP (2) EP4212210A1 (sr)
JP (3) JP7208157B2 (sr)
KR (2) KR20230065382A (sr)
CN (2) CN119552251A (sr)
AU (1) AU2019246837B2 (sr)
BR (1) BR112019022666A2 (sr)
CA (1) CA3060547A1 (sr)
CL (2) CL2021000089A1 (sr)
CO (1) CO2021001742A2 (sr)
CR (1) CR20210057A (sr)
DK (1) DK3618928T5 (sr)
EC (1) ECSP21010450A (sr)
ES (1) ES2940311T3 (sr)
FI (1) FI3618928T3 (sr)
HR (1) HRP20230344T1 (sr)
HU (1) HUE061841T2 (sr)
IL (1) IL270214B2 (sr)
LT (1) LT3618928T (sr)
MX (1) MX2019012869A (sr)
MY (1) MY202133A (sr)
PE (1) PE20210186A1 (sr)
PH (1) PH12021550041A1 (sr)
PL (1) PL3618928T3 (sr)
PT (1) PT3618928T (sr)
RS (1) RS64034B1 (sr)
SI (1) SI3618928T1 (sr)
SM (1) SMT202300110T1 (sr)
TW (1) TWI809147B (sr)
WO (1) WO2020014617A1 (sr)
ZA (2) ZA201906731B (sr)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE057432T2 (hu) 2015-04-07 2022-05-28 Alector Llc Anti-sortilin antitestek és ezek alkalmazási módjai
GB201512215D0 (en) 2015-07-13 2015-08-19 Lundbeck & Co As H Agents,uses and methods
US10894833B2 (en) * 2017-07-20 2021-01-19 H. Lundbeck A/S Agents, uses and methods for treatment
RS64034B1 (sr) 2018-07-13 2023-04-28 Alector Llc Anti-sortilin antitela i načini njihove upotrebe
KR102919581B1 (ko) * 2019-06-11 2026-01-30 알렉터 엘엘씨 치료요법에 사용하기 위한 항-소르틸린 항체
CN116420078A (zh) 2020-10-14 2023-07-11 戴纳立制药公司 用于治疗和监测额颞痴呆的方法
WO2022120352A1 (en) * 2020-12-02 2022-06-09 Alector Llc Methods of use of anti-sortilin antibodies
CN112920264B (zh) * 2021-02-08 2022-07-05 武汉大学 Tdp-43蛋白的o-糖基化突变体及其应用
EP4543858A1 (en) 2022-06-23 2025-04-30 Draupnir Bio ApS Bifunctional molecules that selectively induce degradation of extracellular targets in lysosomes
CN115281146B (zh) * 2022-07-08 2023-06-16 山东省农业科学院家禽研究所（山东省无特定病原鸡研究中心） 一种鸡湿热下利证模型的构建方法
WO2024245719A1 (en) 2023-05-26 2024-12-05 Charité - Universitätsmedizin Berlin Sortilin inhibitors for treatment of patients with functional neuroendocrine tumors
KR20250021812A (ko) 2023-08-07 2025-02-14 주식회사 케이티앤지 에어로졸 생성 장치 및 에어로졸 생성 시스템
WO2025031098A1 (zh) * 2023-08-09 2025-02-13 瑞诺元(苏州)生物科技有限公司 一种分拣蛋白1特异性的纳米抗体、含有其的重组aav及应用
CN116731169B (zh) * 2023-08-09 2023-11-03 瑞诺元(苏州)生物科技有限公司 一种分拣蛋白1特异性的纳米抗体及其应用

Family Cites Families (149)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
USRE30985E (en) 1978-01-01 1982-06-29 Serum-free cell culture media
US4657760A (en) 1979-03-20 1987-04-14 Ortho Pharmaceutical Corporation Methods and compositions using monoclonal antibody to human T cells
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US5206344A (en) 1985-06-26 1993-04-27 Cetus Oncology Corporation Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
ES2058199T3 (es) 1987-09-23 1994-11-01 Bristol Myers Squibb Co Heteroconjugados de anticuerpos para la eliminacion de celulas infectadas por el vih.
DE68925971T2 (de) 1988-09-23 1996-09-05 Cetus Oncology Corp Zellenzuchtmedium für erhöhtes zellenwachstum, zur erhöhung der langlebigkeit und expression der produkte
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
FI903489A0 (fi) 1988-11-11 1990-07-10 Medical Res Council Ligander med en enda sektion, receptorer innehaollande naemnda ligander, foerfaranden foer deras framstaellning samt anvaendning av liganderna och receptorerna.
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
ES2096590T3 (es) 1989-06-29 1997-03-16 Medarex Inc Reactivos biespecificos para la terapia del sida.
US5225212A (en) 1989-10-20 1993-07-06 Liposome Technology, Inc. Microreservoir liposome composition and method
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
ES2087997T3 (es) 1990-01-12 1996-08-01 Cell Genesys Inc Generacion de anticuerpos xenogenicos.
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
JPH06507398A (ja) 1991-05-14 1994-08-25 リプリジェン　コーポレーション Ｈｉｖ感染治療のための異種複合抗体
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
FI941572L (fi) 1991-10-07 1994-05-27 Oncologix Inc Anti-erbB-2-monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistelmä ja käyttömenetelmä
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
JPH07501451A (ja) 1991-11-25 1995-02-16 エンゾン・インコーポレイテッド 多価抗原結合タンパク質
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
EP1291360A1 (en) 1991-12-13 2003-03-12 Xoma Corporation Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
DE69333807T2 (de) 1992-02-06 2006-02-02 Chiron Corp., Emeryville Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
DE69308573T2 (de) 1992-08-17 1997-08-07 Genentech Inc Bispezifische immunoadhesine
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
JP2002514895A (ja) 1995-09-28 2002-05-21 アレクション、ファーマスーティカルズ、インコーポレーテッド ブタ細胞相互作用タンパク質
DE19544393A1 (de) 1995-11-15 1997-05-22 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Synergistische herbizide Mischungen
EP2305027B1 (en) 1996-12-03 2014-07-02 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
US6133426A (en) 1997-02-21 2000-10-17 Genentech, Inc. Humanized anti-IL-8 monoclonal antibodies
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
AU760562B2 (en) 1997-12-05 2003-05-15 Scripps Research Institute, The Humanization of murine antibody
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
DE60022369T2 (de) 1999-10-04 2006-05-18 Medicago Inc., Sainte Foy Verfahren zur regulation der transkription von fremden genen in gegenwart von stickstoff
ES2637801T3 (es) 2000-04-11 2017-10-17 Genentech, Inc. Anticuerpos multivalentes y usos de los mismos
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
JP3523245B1 (ja) 2000-11-30 2004-04-26 メダレックス，インコーポレーテッド ヒト抗体作製用トランスジェニック染色体導入齧歯動物
US20030157108A1 (en) 2001-10-25 2003-08-21 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
WO2003084569A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Drug containing antibody composition
JP4628679B2 (ja) 2002-04-09 2011-02-09 協和発酵キリン株式会社 Ｇｄｐ−フコースの輸送に関与する蛋白質の活性が低下または欠失した細胞
CN102911987B (zh) 2002-04-09 2015-09-30 协和发酵麒麟株式会社 基因组被修饰的细胞
US20040132140A1 (en) 2002-04-09 2004-07-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
EP1556684A4 (en) 2002-11-01 2008-01-23 Univ Colorado Regents QUANTITATIVE ANALYSIS OF PROTEIN ISOFORMS USING FLIGHT TIME MASS SPECTROMETRY BY MATRIX ASSISTED LASER DESORPTION / IONIZATION
DK1891966T3 (da) 2002-12-20 2012-04-02 Lundbeck & Co As H Modulation af neurotrophinaktivitet; fremgangsmåde til screening
EP1682170A2 (en) 2003-11-07 2006-07-26 Lay Line Genomics SpA Compositions able to prevent neurodegenerative processes and methods of assaying the same
RU2386638C2 (ru) 2004-03-31 2010-04-20 Дженентек, Инк. Гуманизированные анти-тфр-бета-антитела
CN101120021A (zh) 2004-12-31 2008-02-06 基因技术公司 结合br3的多肽及其用途
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
WO2006138343A2 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Raptor Pharmaceutical Inc. Compositions comprising receptor - associated protein (rap) variants specific for lrp2 and uses thereof
EA019344B1 (ru) 2005-07-01 2014-03-31 МЕДАРЕКС, Эл.Эл.Си. Человеческие моноклональные антитела против лиганда-1 запрограммированной гибели клеток (pd-l1) и их применения
US9062126B2 (en) 2005-09-16 2015-06-23 Raptor Pharmaceuticals Inc. Compositions comprising receptor-associated protein (RAP) variants specific for CR-containing proteins and uses thereof
FR2896881B1 (fr) 2006-01-31 2008-04-18 Biomerieux Sa Procede de dosage du prongf pour le diagnostic in vitro du cancer du sein et utilisation du prongf en therapie
SI2359834T1 (sl) 2006-03-15 2017-02-28 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Zdravljenje pacientov,ki imajo paroksizmalno nočno hemoglobinurijo, z zaviralcem komplementa
WO2007134050A2 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
EP2059533B1 (en) 2006-08-30 2012-11-14 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
CN101594878A (zh) 2006-09-18 2009-12-02 雷普特药品公司 通过给予受体相关蛋白（rap）-缀合物对肝病症的治疗
WO2008052016A2 (en) 2006-10-23 2008-05-02 Columbia University The sortilin-related receptor sorl1 is functionally and genetically associated with alzheimer's disease
US20100028333A1 (en) 2006-12-15 2010-02-04 Getty Krista L Receptor for amyloid beta and uses thereof
UY30776A1 (es) 2006-12-21 2008-07-03 Medarex Inc Anticuerpos cd44
RS60019B1 (sr) 2006-12-21 2020-04-30 H Lundbeck As Modulacija aktivnosti proneurotrofina
WO2008086452A2 (en) 2007-01-10 2008-07-17 Columbia University Treatment and prevention of alzheimer's disease
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
CL2008002153A1 (es) * 2007-07-24 2009-06-05 Amgen Inc Anticuerpo aislado o fragmanto de unión de antigeno del mismo que se une al receptor de il-18 (il-18r); molecula de ácido nucleico codificante; celula huesped que la comprende; composición farmaceutica; uso médico para tratar o prevenir una condición asociada con il-18r; método in vitro para inhibir la unión de il-18 al il-18r.
JP5933894B2 (ja) 2007-09-14 2016-06-15 アディマブ， エルエルシー 合理的に設計された、合成抗体ライブラリおよびその使用
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
SI2235064T1 (sl) 2008-01-07 2016-04-29 Amgen Inc. Metoda za izdelavo heterodimernih molekul - protitelesa fc z uporabo elektrostatičnih usmerjevalnih učinkov
JP5715045B2 (ja) 2008-04-27 2015-05-07 ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット ソルチリンに対する特異的リガンドの設計
ES2680222T3 (es) 2008-05-22 2018-09-05 H. Lundbeck A/S Modulación de los receptores con dominio Vps10p para el tratamiento de la enfermedad cardiovascular
US20160359907A1 (en) 2015-06-02 2016-12-08 Vmware, Inc. Automatically auditing virtual machines for security hardening compliance
WO2009155932A2 (en) 2008-06-25 2009-12-30 H. Lundbeck A/S Modulation of the trpv : vps10p-domain receptor system for the treatment of pain
US8124093B2 (en) 2008-07-16 2012-02-28 Institute For Research In Biomedicine Human cytomegalovirus neutralizing antibodies and use thereof
US20120039865A1 (en) * 2008-08-19 2012-02-16 Yale University Identification of sortilin as a neuronal receptor for the frontotemporal dementia protein, progranulin
CA2736460A1 (en) 2008-09-08 2010-03-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and devices for ligating tubular structures
WO2010069331A2 (en) 2008-12-19 2010-06-24 H. Lundbeck A/S Modulation of the vps 10-domain receptor family for the treatment of mental and behavioural disorders
FR2945538B1 (fr) 2009-05-12 2014-12-26 Sanofi Aventis Anticorps humanises specifiques de la forme protofibrillaire du peptide beta-amyloide.
CN102869775A (zh) 2009-09-30 2013-01-09 哈佛大学校长及研究员协会 通过调节自噬抑制基因产物调节自噬的方法
US20130115222A1 (en) 2010-06-15 2013-05-09 Cornell University Methods of limiting microvascular damage following acute myocardial ischemia
KR102810907B1 (ko) 2010-07-16 2025-05-21 아디맵 엘엘씨 항체 라이브러리
US20130336988A1 (en) 2010-11-17 2013-12-19 New York University Methods for treating early stage or mild neurological disorders
BR112013031943B1 (pt) 2011-06-13 2021-10-13 Csl Limited Composição que compreende proteínas e anticorpos contra g-csfr
PH12013502531A1 (en) 2011-08-23 2014-01-20 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
WO2014071131A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Sortilin 1 is a novel inducer of vascular calcification
US20140323315A1 (en) 2013-04-29 2014-10-30 Adimab, Llc Polyspecificity reagents, methods for their preparation and use
BR112016000106B1 (pt) 2013-07-09 2023-11-21 Annexon, Inc. Anticorpos anti-c1q e usos dos mesmos, célula de hibridoma, composição farmacêutica e métodos de detecção de sinapses em uma amostra biológica referências cruzadas a pedidos relacionados
CN106573153A (zh) 2014-02-04 2017-04-19 纽约大学 用于诊断和治疗溶酶体贮积病的颗粒蛋白前体(pgrn)及其衍生物
US20160349276A1 (en) 2014-02-12 2016-12-01 H. Lundbeck A/S Use of Sortilin as Biomarker for Affective/Mood Disorders
KR101522729B1 (ko) * 2014-03-25 2015-06-05 (주)오스티오뉴로젠 파골세포 융합의 새로운 바이오 마커인 piro
US20170096486A1 (en) 2014-03-26 2017-04-06 Goran Landberg Agents inhibiting granulin for treatment of cancer
US10603364B2 (en) 2014-08-11 2020-03-31 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Lysosomal targeting and uses thereof
US10849992B1 (en) 2015-04-07 2020-12-01 Alector Llc Methods of screening for sortilin binding antagonists
HUE057432T2 (hu) 2015-04-07 2022-05-28 Alector Llc Anti-sortilin antitestek és ezek alkalmazási módjai
US20160331746A1 (en) 2015-05-12 2016-11-17 University Of South Florida Sortilin-Binding Small Molecules for Increasing Glucose Uptake
GB201512215D0 (en) * 2015-07-13 2015-08-19 Lundbeck & Co As H Agents,uses and methods
US11390656B2 (en) 2015-08-04 2022-07-19 New York University Progranulin (PGRN) fragments and derivatives for treatment or alleviation of lysosomal storage diseases
US10085969B1 (en) 2016-02-12 2018-10-02 University Of South Florida Sortilin binding compounds, formulations, and uses thereof
WO2018191786A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Implicit Bioscience Pty Ltd Cd 14 antagonist antibodies for treating neurodegenerative diseases
US10894833B2 (en) 2017-07-20 2021-01-19 H. Lundbeck A/S Agents, uses and methods for treatment
JP7438119B2 (ja) 2017-10-23 2024-02-26 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッド 細胞外小胞関連疾患のための材料および方法
US20210284702A1 (en) 2018-06-18 2021-09-16 Denali Therapeutics Inc. Fusion proteins comprising progranulin
RS64034B1 (sr) 2018-07-13 2023-04-28 Alector Llc Anti-sortilin antitela i načini njihove upotrebe
US20220000971A1 (en) 2018-08-24 2022-01-06 Transfert Plus, S.E.C. Methods and compounds for targeting sortilin receptors and inhibiting vasculogenic mimicry
WO2020051624A1 (en) 2018-09-11 2020-03-19 Grophin Pty Ltd Methods and compositions for improving recovery from a brain injury
EP3666281A1 (en) 2018-12-14 2020-06-17 Insusense ApS Compositions comprising sortilin-1
EP3942049A4 (en) 2019-03-20 2023-10-18 President And Fellows Of Harvard College ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE BASED PROGRANULIN AUGMENTATION THERAPY FOR NEURODEGENERATIVE DISEASES
KR102919581B1 (ko) 2019-06-11 2026-01-30 알렉터 엘엘씨 치료요법에 사용하기 위한 항-소르틸린 항체
WO2022120352A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Alector Llc Methods of use of anti-sortilin antibodies
BR112023025188A2 (pt) 2021-06-08 2024-02-27 Alector Llc Métodos de uso de anticorpos anti-sortilina

Also Published As

Publication number Publication date
US20250297016A1 (en) 2025-09-25
KR20230065382A (ko) 2023-05-11
KR102530517B1 (ko) 2023-05-09
IL270214B2 (en) 2024-07-01
JP2021530960A (ja) 2021-11-18
CR20210057A (es) 2021-03-22
EP3618928B1 (en) 2023-01-18
MX2019012869A (es) 2020-01-23
WO2020014617A1 (en) 2020-01-16
US20230047941A1 (en) 2023-02-16
CL2021000089A1 (es) 2021-07-02
US20220348656A1 (en) 2022-11-03
DK3618928T3 (da) 2023-03-27
ES2940311T3 (es) 2023-05-05
JP2023036932A (ja) 2023-03-14
ECSP21010450A (es) 2021-03-31
CN119552251A (zh) 2025-03-04
SMT202300110T1 (it) 2023-05-12
AU2019246837B2 (en) 2024-03-21
NZ758448A (en) 2025-07-25
HUE061841T2 (hu) 2023-08-28
PL3618928T3 (pl) 2023-05-02
AU2019246837A1 (en) 2020-01-30
CN111372655B (zh) 2024-12-10
CA3060547A1 (en) 2020-01-13
FI3618928T3 (fi) 2023-04-21
KR20210030185A (ko) 2021-03-17
PT3618928T (pt) 2023-03-29
US12297277B2 (en) 2025-05-13
ZA202300348B (en) 2024-09-25
CN111372655A (zh) 2020-07-03
US12358991B2 (en) 2025-07-15
CL2021003327A1 (es) 2022-09-30
IL270214B1 (en) 2024-03-01
DK3618928T5 (da) 2024-09-02
US11396546B2 (en) 2022-07-26
TWI809147B (zh) 2023-07-21
IL270214A (en) 2020-01-30
LT3618928T (lt) 2023-04-11
JP7564255B2 (ja) 2024-10-08
PE20210186A1 (es) 2021-02-02
TW202035450A (zh) 2020-10-01
MY202133A (en) 2024-04-05
ZA201906731B (en) 2023-04-26
SI3618928T1 (sl) 2023-04-28
JP2025004050A (ja) 2025-01-14
BR112019022666A2 (pt) 2020-09-01
JP7208157B2 (ja) 2023-01-18
EP4212210A1 (en) 2023-07-19
EP3618928A1 (en) 2020-03-11
US20200024348A1 (en) 2020-01-23
PH12021550041A1 (en) 2021-09-20
HRP20230344T1 (hr) 2023-06-09
CO2021001742A2 (es) 2021-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12358991B2 (en) Anti-Sortilin antibodies and methods of use thereof
TWI874431B (zh) 抗ms4a4a抗體及其使用方法
JP2021508498A (ja) 抗ｔｍｅｍ１０６ｂ抗体及びその使用方法
US20240101681A1 (en) Methods of use of anti-sortilin antibodies
HK40099363A (en) Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof
HK40025057B (en) Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof
HK40025057A (en) Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof
EA046146B1 (ru) Антитела против сортилина и способы их применения
HK40028702A (en) Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof
HK40028702B (zh) 抗分拣蛋白抗体及其使用方法
CN116964089A (zh) 使用抗分拣蛋白抗体的方法