ES2940311T3 - Anticuerpos anti-sortilina y métodos de uso de los mismos - Google Patents

Anticuerpos anti-sortilina y métodos de uso de los mismos Download PDF

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Abstract

La presente descripción se refiere generalmente a composiciones que incluyen anticuerpos, por ejemplo, anticuerpos monoclonales, quiméricos, madurados por afinidad, humanizados, fragmentos de anticuerpos, etc., que se unen específicamente a una proteína Sortilina, por ejemplo, Sortilina humana o Sortilina de mamífero, y han mejorado y /o características funcionales mejoradas, y el uso de dichas composiciones para prevenir, reducir el riesgo o tratar a un individuo que lo necesite. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Anticuerpos anti-sortilina y métodos de uso de los mismos
Campo
La presente divulgación se refiere a anticuerpos anti-sortilina y a usos terapéuticos de dichos anticuerpos.
Antecedentes
La sortilina es una proteína transmembrana de tipo I que actúa tanto como receptor de varios ligandos como en la clasificación de cargas seleccionadas de la red trans-Golgi (TGN) en endosomas tardíos y lisosomas para su degradación. La sortilina alberga un gran dominio extracelular que forma parte de la familia VPS10, homólogo al de la levadura VPS10P, y contiene una estructura de propulsor beta de 10 láminas y un módulo 10CC rico en cisteína (Nykjaer, A et al., (2012) Trends Neurosci 35: 261-270; y Zheng, Y et al., (2011) PLoS One 6: (21023). Una pequeña fracción de la sortilina puede eliminarse por la actividad de ADAM10 o gamma-secretasa (<5 %) (Nykjaer, A et al., (2012) Trends Neurosci 35: 261 -270; y Willnow, TE et a l, (2011) Curr Opin Lipidol 22: 79-85).
La sortilina se une a la proteína de secreción progranulina (PGRN) y la dirige para su degradación lisosómica, regulando así negativamente los niveles extracelulares de PGRN (Hu, F et al. (2010) Neuron 68, 654-667. En línea con esto, la deficiencia de sortilina aumenta significativamente los niveles de PGRN en plasma tanto en modelos de ratón in vivo como en células humanas in vitro (Carrasquillo, M.M et al., (2010) Am J Hum Genet 87, 890-897; Lee, W.C et al., (2014) Hum Mol Genet 23, 1467-1478). Además, se demostró que un polimorfismo en la sortilina está fuertemente asociado con los niveles séricos de PGRN en seres humanos (Carrasquillo MM et al., (2010), Am J Hum Genet. 10; 87(6):890-7).
La progranulina (PGRN) es una proteína de secreción trófica y antiinflamatoria similar al factor de crecimiento, que también actúa como una adipocina involucrada en la obesidad inducida por la dieta y la resistencia a la insulina (Nguyen DA et al., (2013). Trends in Endocrinology and Metabolism, 24, 597-606). La deficiencia de progranulina representa aproximadamente el 25 % de todas las formas hereditarias de demencia frontotemporal (FTD), una enfermedad neurodegenerativa de aparición temprana. Los pacientes con mutaciones heterocigotas de pérdida de función en PGRN tienen niveles extracelulares de la proteína reducidos en ~50 % e invariablemente desarrollarán FTD, lo que hace que PGRN sea un gen causante de la enfermedad (Baker, M et al., (2006) Nature 442, 916-919; Carecchio M et al., (2011) J Alzheimers Dis 27, 781 -790; Cruts, M et al., (2008) Trends Genet 24, 186-194; Galimberti, D et al., (2010) J Alzheimers Dis 19, 171-177). Además, se han identificado alelos mutantes de PGRN en pacientes con enfermedad de Alzheimer (Seelaar, H et al., (2011). Journal of neurology, neurosurgery, and psychiatry 82, 476­ 486). Es importante destacar que PGRN actúa de manera protectora en varios modelos de enfermedad con niveles elevados de PGRN, acelerando la recuperación conductual de una isquemia (Tao, J et al., (2012) Brain Res 1436, 130-136; Egashira, Y. et al., (2013). J Neuroinflammation 10, 105), reduciendo los déficits locomotores en un modelo de enfermedad de Parkinson (Van Kampen, J.M et al. (2014). PLoS One 9, e97032), atenuando la patología en un modelo de esclerosis lateral amiotrófica (Laird, A.S et al., (2010). PLoS One 5, ex13368.) y de artritis (Tang, W et al., (2011). Science 332, 478-484) y previniendo los déficits de memoria en un modelo de enfermedad de Alzheimer (Minami, S.S et a l, (2014). Nat Med 20, 1157-1164).
La sortilina también se une directamente a proneurotrofinas, tales como el precursor del factor de crecimiento nervioso (pro-NGF), pro-BDNF, proneurotrofina-3, etc., que albergan un dominio "pro" y típicamente son proapoptóticos. Dichos precursores de proneurotrofina se liberan durante el estrés y la sortilina participa en la regulación de su liberación, así como en la unión a la célula receptora y la estimulación de la apoptosis junto con p75NTR (Willnow, TE et al., (2008) Nat Rev Neurosci 9: 899-909; Nykjaer, A et al., Trends Neurosci 35: 261-270; y Nykjaer, A et al., (2004) Nature 427: 843-848; Hiroko Yano et al., (2009) J Neurosci.; 29: 14790-14802. Teng U.K., et al., J. Neurosci.25:5455-5463(2005)). La sortilina también se une a p75NTR directamente (Skeldal S et al., (2012) J Biol Chem.; 287:43798). La sortilina también se une a la neurotensina en una región que se superpone parcialmente con la unión de progranulina (Quistgaard, EM et al., (2009) Nat Struct Mol Biol 16: 96-98; y Zheng, Y et al., PLoS One 6: e21023). La sortilina también interactúa con los receptores Trk NTRK1, NTRK2 y NTRK3; y puede regular su transporte axonal anterógrado y señalización (Vaegter, CB et al., (2011) Nat. Neurosci. 14:54-61). La sortilina también interactúa y regula el procesamiento y tráfico de la proteína precursora de amiloide y la producción resultante de péptidos beta-amiloides patológicos (Gustafsen C et al., (2013). J Neurosci._2;33(1):64-71).
También se ha demostrado que la sortilina se une a apolipoproteínas y a la lipoproteína lipasa; por lo tanto, su deficiencia conduce a una liberación reducida de VLDL desde el hígado y a una reducción del colesterol (Willnow, TE et a l, (2011) Curr Opin Lipidol 22: 79-85; Kjolb), M et a l, (2010) Cell Metab 12: 213-223; Nilsson, SK et a l, (2007) Biochemistry 46: 3896-3904.; Nilsson, SK et al., (2008) J Biol Chem 283: 25920-25927; y Klinger, SC et al., (2011) J Cell Sci 124: 1095-1105). Recientemente, también se ha implicado a la sortilina en la unión a APP directamente (Gustafsen, C et al., (2013) J. Neurosc. 33:64-71) y también a la enzima de procesamiento de APP BACE1 (Gustafsen,C et al., (2013) J. Neurosc.33:64-71; y Finan, GM et al., J Biol Chem 286: 12602-12610). La sortilina también se une a la apolipoproteína E (APOE), al péptido A beta (Cario, AS et al., (2013) J. Neurosc, 33: 358-370), y a PCSK9 (Gustafsen et al, (2014) Cell Metab, 19: 310-318). También se ha demostrado que la sortilina se une y regula los niveles extracelulares de PCSK9, que dirige al receptor de lipoproteínas de baja densidad para su degradación en los lisosomas, dando como resultado un aumento de los niveles de colesterol LDL (Gustafsen C et al., (2014). Cell Metab. 4 de febrero de 2014; 19(2) :310-8).
Cuando está presente en vesículas intracelulares tales como los endosomas, el dominio extracelular amino-terminal de la sortilina está dirigido hacia la luz, donde está presente la carga de la vesícula. El dominio citoplasmático/intracelular carboxi-terminal de la sortilina, sin embargo, se une a una serie de proteínas adaptadoras, que regulan su tráfico desde la superficie y hacia el interior de los compartimentos intracelulares. Estas incluyen AP2 (un adaptador de clatrina para modular la endocitosis desde la superficie celular) y el complejo de retrómero/AP1, que modulan el movimiento desde los primeros endosomas hasta el aparato de Golgi para su reciclaje; y la interacción con proteínas de la familia GGA (Golgi-localizing, gamma-ear containing, ADP-ribosylation factor binding (unión al factor de ribosilación de ADP, que contiene dominio "ear" de las adaptinas gamma, de localización del aparato de Golgi)) para el movimiento desde el aparato de Golgi directamente a los primeros endosomas, generalmente para su posterior degradación a través de los lisosomas. Por lo tanto, la sortilina puede unirse a ligandos en su dominio luminal, mientras se acopla a los adaptadores citoplasmáticos que determinan su destino para determinar los destinos intracelulares, tales como la degradación en el caso de la progranulina y otros factores.
A través de sus diversas interacciones con proteínas, tales como la progranulina, se ha demostrado que la sortilina y sus múltiples ligandos están implicados en diversas enfermedades, trastornos y afecciones, tales como demencia frontotemporal, esclerosis lateral amiotrófica, fenotipos de esclerosis lateral amiotrófica-demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, depresión, trastornos neuropsiquiátricos, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, degeneración macular senil, glaucoma, lesión cerebral traumática, envejecimiento, ataques, curación de heridas, ictus, artritis y enfermedades vasculares ateroscleróticas.
Por consiguiente, existe la necesidad de anticuerpos terapéuticos que se unan específicamente a las proteínas sortilina y bloqueen la unión de la sortilina a sus ligandos, tales como progranulina, o modulen de otra manera la concentración eficaz de los ligandos, para tratar una o más enfermedades, trastornos y afecciones asociados con la actividad de la sortilina.
Los documentos WO2016164637, WO2017009327 y WO2016164608 divulgan anticuerpos anti-sortilina.
Sumario
La presente divulgación se refiere, en general, a composiciones que incluyen anticuerpos, por ejemplo, anticuerpos monoclonales, quiméricos, humanizados, fragmentos de anticuerpo, etc., que se unen específicamente a la sortilina humana, y a métodos para utilizar dichas composiciones.
Cualquier mención en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia.
La invención se define por las reivindicaciones adjuntas. Cualquier aspecto, realización y ejemplo de la presente divulgación que no esté dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas no forma parte de la invención y se proporciona meramente con fines ilustrativos.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 57.
En un segundo aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 60.
En algunas realizaciones que se pueden combinar con cualquiera de los aspectos anteriores, un anticuerpo antisortilina de la presente invención es de la clase IgG, la clase IgM, o la clase IgA. En determinadas realizaciones específicas, el anticuerpo anti-sortilina es de clase IgG y tiene un isotipo IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4. En algunas realizaciones de la presente invención, se proporciona un anticuerpo anti-sortilina de isotipo IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4, en donde (a) el anticuerpo es un isotipo IgG 1 o IgG2 y la región Fc comprende una sustitución de aminoácido en la posición P331S, en donde la numeración de la posición del resto está de acuerdo con la numeración EU; (b) el anticuerpo es un isotipo IgG1 y la región Fc comprende sustituciones de aminoácidos en las posiciones L234A, L235A y P331S, en donde la numeración de la posición del resto está de acuerdo con la numeración EU; (c) el anticuerpo es un isotipo IgG1, IgG2 o IgG4 y la región Fc comprende una sustitución de aminoácido en la posición N297A, en donde la numeración de la posición del resto está de acuerdo con la numeración EU; o (d) la región Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones S267E y L328F, en donde la numeración de la posición del resto está de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un isotipo IgG 1 y la región Fc comprende sustituciones de aminoácidos en las posiciones L234A, L235A y P331S, en donde la numeración de la posición del resto está de acuerdo con la numeración EU.
En algunos aspectos, la presente invención proporciona un anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 142.
En algunos aspectos, la presente invención proporciona un anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 138 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 142.
En la presente invención, la proteína sortilina humana puede comprender la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 81.
En algunas realizaciones que se pueden combinar con cualquiera de las realizaciones anteriores, el anticuerpo es un anticuerpo humano, un anticuerpo biespecífico, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo multivalente, un anticuerpo conjugado o un anticuerpo quimérico. En determinadas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente invención es un anticuerpo monoclonal.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente invención es un anticuerpo biespecífico que reconoce una proteína sortilina y un segundo antígeno. En determinadas realizaciones, los anticuerpos biespecíficos de la presente invención reconocen tanto a la sortilina como a un antígeno que facilita el transporte a través de la barrera hematoencefálica. En algunas realizaciones específicas, el primer antígeno es sortilina y el segundo antígeno es sortilina, receptor de transferrina (TR), receptor de la insulina (HIR), receptor del factor de crecimiento similar a la insulina (IGFR), proteínas 1 y 2 relacionadas con receptores de lipoproteínas de baja densidad (LPR-1 y 2), receptor de toxina diftérica, CRM197, un anticuerpo de dominio único de Ilama, TMEM 30(A), dominio de transducción de proteínas, TAT, Syn-B, penetratina, un péptido de poliarginina, un péptido Angiopep, basigina, Glut1, CD98hc o ANG1005.
En determinadas realizaciones de la presente invención, el anticuerpo anti-sortilina es un fragmento de anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana, En determinadas realizaciones que se pueden combinar con cualquiera de las realizaciones anteriores, el fragmento de anticuerpo anti-sortilina es un fragmento Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv o scFv. En algunos aspectos, la presente invención proporciona un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un anticuerpo anti-sortilina de acuerdo con las reivindicaciones. Por consiguiente, algunos aspectos proporcionan un vector que contiene un ácido nucleico que codifica el anticuerpo antisortilina y algunos aspectos proporcionan una célula hospedadora aislada que contiene dicho vector. En determinados aspectos, la presente invención proporciona un método para producir un anticuerpo anti-sortilina que se une a sortilina, que comprende cultivar dicha célula hospedadora aislada de modo que se produzca el anticuerpo anti-sortilina. En determinadas realizaciones, el método comprende además recuperar el anticuerpo producido por la célula.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los anticuerpos anti-sortilina de acuerdo con las reivindicaciones y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, la presente invención se refiere a un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones para su uso como un medicamento. En algunas realizaciones, el anticuerpo es para su uso en un método para prevenir, reducir el riesgo de o tratar una enfermedad, trastorno o lesión seleccionada de la demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, esclerosis lateral amiotrófica, lesión cerebral traumática, una lesión de la médula espinal, dolor neuropático, demencia, ictus, enfermedad de Parkinson, degeneración de la retina, esclerosis múltiple, choque séptico, artritis u osteoartritis.
En determinados aspectos, en el presente documento se proporciona un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones para su uso en un método para inhibir la neuroinflamación o axonopatía caracterizada por un crecimiento axonal corto y una ramificación aberrante.
En determinados aspectos, en el presente documento se proporciona un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones para su uso en un método para promover la curación de heridas.
En determinados aspectos, en el presente documento se proporciona un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones para su uso en un método para prevenir, reducir el riesgo o tratar la artritis, o un trastorno inflamatorio.
En algunos aspectos, en el presente documento se proporciona un método in vitro para inhibir la interacción entre la sortilina y la progranulina, comprendiendo el método exponer una célula que expresa sortilina a un anticuerpo antisortilina o a una composición farmacéutica de las presentes reivindicaciones. En algunas realizaciones, el método comprende además disminuir el nivel de sortilina expresado en la superficie celular. En algunas realizaciones, aumentan los niveles extracelulares de progranulina. En algunas realizaciones, el individuo tiene una o más mutaciones en el gen que codifica la progranulina. En algunas, el individuo es heterocigoto para una o más mutaciones de pérdida de función en el gen que codifica la progranulina. El individuo tiene una expansión repetida de hexanucleótido en c9orf72. El individuo tiene o está en riesgo de padecer demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer o esclerosis lateral amiotrófica.
En algunas realizaciones que se pueden combinar con cualquiera de los aspectos o realizaciones anteriores, el anticuerpo anti-sortilina comprende dos o más anticuerpos anti-sortilina.
Breve descripción de los dibujos
Las FIG. 1A-1C proporcionan estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos de primates no humanos a los que se les administraron dosis únicas de anticuerpo anti-sortilina S-60-15.1 [N33T] LALAPS (S-60-15.1 [N33T] con huIgG1 con mutaciones L234A/L235A/P331S). La FIG. 1A proporciona el nivel de SORT1 en glóbulos blancos periféricos como un porcentaje desde el valor de referencia en los tiempos indicados después del tratamiento (horas) con las dosis de anticuerpos anti-sortilina especificadas. La expresión de SORT1 disminuyó con todas las dosis de anticuerpos anti-sortilina analizadas. Las dosis más altas de anticuerpos (60 mg/kg, 200 mg/kg) produjeron una disminución más temprana y prolongada de los niveles de SORT1 en comparación con las dosis más bajas de anticuerpos anti-sortilina (5 mg/kg, 20 mg/kg). La FIG. 1B proporciona los niveles de PGRN en plasma como un porcentaje desde el valor de referencia en los tiempos indicados después del tratamiento (horas) con las dosis de anticuerpos anti-sortilina especificadas. Los niveles de PGRN aumentaron de manera dependiente del tiempo y de la dosis. En particular, los niveles plasmáticos de PGRN aumentaron de 3 a 4 veces a la Cmáx., en comparación con los niveles de referencia, para todas las dosis de anticuerpos anti-sortilina ensayadas y permanecieron elevados durante períodos de tiempo más prolongados a las dosis de anticuerpos más altas. La FIG. 1C proporciona los niveles de PGRN en CSF (siglas en inglés de líquido cefalorraquídeo) como un porcentaje desde el valor de referencia en los tiempos indicados después del tratamiento (horas) con las dosis de anticuerpos antisortilina especificadas. Los niveles de PGRN en CSF aumentaron de 2 a 3 veces por encima del valor de referencia en animales a los que se les administraron 20 mg/kg, 60 mg/kg o 200 mg/kg. Como se observa con los niveles plasmáticos de PGRn (FIG. 1B), Los niveles de PGRN en CSF permanecieron elevados a lo largo del tiempo en los grupos de dosis de anticuerpos más altas. En las FIG. 1A-1C, n = 3 animales por dosis.
Las FIG. 2A-2C proporcionan estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos de primates no humanos a los que se les administraron dosis repetidas del anticuerpo anti-sortilina S-60-15.1 [N33T] LALAPS. A los animales (2 machos y 2 hembras) se les administró el anticuerpo anti-sortilina S-60-15.1 [N33T] LALAPS a una dosis de 60 mg/kg una vez por semana durante cuatro semanas. Los días en los que se realizó la dosificación están representados por las líneas discontinuas verticales. La FIG. 2A proporciona la media (/- desviación estándar) de la concentración de SORT1 en glóbulos blancos periféricos (WBC) como porcentaje del valor de referencia en los tiempos (días) indicados. Los niveles de SORT1 en los glóbulos blancos periféricos permanecieron disminuidos a lo largo de todo el estudio. La FIG. 2B proporciona la media (/- desviación estándar) de la concentración de PGRN en plasma como porcentaje del valor de referencia (normalizado) en los tiempos (días) indicados. Los niveles plasmáticos de PGRN aumentaron de 5 a 6 veces por encima del valor de referencia en los niveles máximos. Se observó una disminución de PGRN en plasma después de la cuarta y última administración del anticuerpo antisortilina; sin embargo, los niveles de PGRN en plasma permanecieron elevados dos veces por encima del valor de referencia. La FIG. 2C proporciona la media (/- desviación estándar) de la concentración de PGRN en CSF como porcentaje del valor de referencia (normalizado) en los tiempos (días) indicados. Los niveles de PGRN en CSF aumentaron de 3 a 4 veces por encima del valor de referencia (FIG. 2C).
Descripción detallada
Definiciones
Como se utiliza en el presente documento, el término "prevenir" incluye proporcionar profilaxis con respecto a la aparición o recurrencia de una enfermedad, trastorno o afección particular en un individuo. Es posible que un individuo esté predispuesto a, sea susceptible a una determinada enfermedad, trastorno o afección, o esté en riesgo de desarrollar tal enfermedad, trastorno o afección, pero todavía no se le haya diagnosticado la enfermedad, trastorno o afección.
Como se utiliza en el presente documento, un individuo "en riesgo" de desarrollar una determinada enfermedad, trastorno o afección puede tener o no la enfermedad o síntomas de enfermedad detectables, y puede o no haber mostrado enfermedad o síntomas de enfermedad detectable antes de los métodos de tratamiento descritos en el presente documento. "En riesgo" denota que un individuo tiene uno o más factores de riesgo, que son parámetros medibles que se correlacionan con el desarrollo de una determinada enfermedad, trastorno o afección, como se conoce en la técnica. Un individuo que tiene uno o más de estos factores de riesgo tiene una mayor probabilidad de desarrollar una determinada enfermedad, trastorno o afección que un individuo sin uno o más de estos factores de riesgo.
Como se utiliza en el presente documento, el término "tratamiento" se refiere a una intervención clínica diseñada para alterar el curso natural del individuo que se está tratando durante el curso de la patología clínica. Los efectos deseables del tratamiento incluyen la disminución de la tasa de progresión, la mejoría o paliación del estado patológico, y la remisión o mejor pronóstico de una determinada enfermedad, trastorno o afección. Un individuo se "trata" con éxito, por ejemplo, si se mitigan o eliminan uno o más síntomas asociados con una determinada enfermedad, trastorno o afección.
Una "cantidad eficaz" se refiere a al menos una cantidad eficaz, a las dosificaciones y durante los periodos de tiempo necesarios, para conseguir el resultado terapéutico o profiláctico deseado. Una cantidad eficaz puede proporcionarse en una o más administraciones. En el presente documento, una cantidad eficaz puede variar de acuerdo con factores tales como la patología, la edad, el sexo y el peso del individuo y de la capacidad del tratamiento para desencadenar una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad eficaz es también una en la que cualquier efecto tóxico o perjudicial del tratamiento se ve superado por los efectos terapéuticamente beneficiosos. Para uso profiláctico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen resultados tales como la eliminación o la reducción del riesgo, la disminución de la gravedad o el retraso del inicio de la enfermedad, incluidos los síntomas bioquímicos, histológicos y/o de comportamiento de la enfermedad, sus complicaciones y los fenotipos patológicos intermedios que se presentan durante el desarrollo de la enfermedad. Para uso terapéutico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen resultados clínicos tales como la disminución de uno o más síntomas resultantes de la enfermedad, el aumento de la calidad de vida de aquellos que padecen la enfermedad, la disminución de la dosis de otras medicaciones necesarias para tratar la enfermedad, la potenciación del efecto de otra medicación tal como a través del direccionamiento, el retraso de la progresión de la enfermedad y/o la prolongación de la supervivencia. Una cantidad eficaz de fármaco, compuesto o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para llevar a cabo el tratamiento profiláctico o terapéutico directa o indirectamente. Como se entiende en el contexto clínico, una cantidad eficaz de un fármaco, compuesto o composición farmacéutica puede conseguirse o no junto con otro fármaco, compuesto o composición farmacéutica. Por lo tanto, se puede considerar una "cantidad eficaz" en el contexto de la administración de uno o más agentes terapéuticos, y se puede considerar que un único agente se administra en una cantidad eficaz si, junto con uno o más agentes diferentes, puede proporcionar o proporciona un resultado deseable.
Como se utiliza en el presente documento, administración "junto" con otro compuesto o composición incluye la administración simultánea y/o la administración en momentos diferentes. La administración conjunta también incluye la administración como una coformulación o la administración como composiciones separadas, incluso a diferentes frecuencias o intervalos de dosificación, y utilizando la misma vía de administración o diferentes vías de administración.
Un "individuo" para fines de tratamiento, prevención o reducción del riesgo se refiere a cualquier animal clasificado como mamífero, incluidos los seres humanos, animales domésticos y de granja y animales de zoológico, de competición o mascotas, tales como perros, caballos, conejos, ganado bovino, cerdos, hámsteres, jerbos, ratones, hurones, ratas, gatos y similares. Preferentemente, el individuo es un ser humano.
Los términos "sortilina" o "polipéptido de sortilina" se usan indistintamente en el presente documento para referirse a cualquier sortilina nativa de cualquier fuente de mamífero, incluidos los primates (p. ej., seres humanos y monos cynomolgus) y roedores (p. ej., ratones y ratas), salvo que se indique lo contrario. En algunas realizaciones, el término abarca tanto las secuencias de tipo silvestre como las secuencias variantes naturales, por ejemplo, variantes de corte y empalme o variantes alélicas. En algunas realizaciones, el término abarca la sortilina "de longitud completa", no procesada, así como cualquier forma de la sortilina que sea el resultado de un procesamiento en la célula. En algunas realizaciones, la sortilina es sortilina humana. En algunas realizaciones, la secuencia de aminoácidos de una sortilina humana ilustrativa es la SEQ ID NO: 81.
Las expresiones "anticuerpo anti-sortilina", un "anticuerpo que se une a la sortilina", y "anticuerpo que se une específicamente a la sortilina" se refieren a un anticuerpo que es capaz de unirse a la sortilina con suficiente afinidad de manera que el anticuerpo es útil como agente de diagnóstico y/o terapéuti
como diana. En una realización, el grado de unión de un anticuerpo anti-sortilina a un polipéptido distinto de sortilina, no relacionado, es menor de aproximadamente el 10 % de la unión del anticuerpo a sortilina medido, por ejemplo, mediante radioinmunoensayo (RIA, por sus siglas en inglés). En determinadas realizaciones, un anticuerpo que se une a la sortilina tiene una constante de disociación (KD) de < 1 qM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM, < 0,01 nM o < 0,001 nM (por ejemplo, 10-8 M o menor, p. ej., de 10-8 M a 10-13 M, por ejemplo, de 10-9 M a 10-13 M). En determinadas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina se une a un epítopo de sortilina que está conservado entre la sortilina de diferentes especies.
El término "inmunoglobulina" (Ig) se utiliza indistintamente con "anticuerpo" en el presente documento. El término "anticuerpo" se usa en el presente documento en el sentido más amplio y específicamente abarca anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) que incluyen los formados a partir de al menos dos anticuerpos intactos, y fragmentos de anticuerpos, siempre que presenten la actividad biológica deseada.
Los "anticuerpos nativos" son normalmente glucoproteínas heterotetraméricas de aproximadamente 150.000 Dalton, compuestas de dos cadenas ligeras ("L") idénticas y dos cadenas pesadas ("H") idénticas. Cada cadena ligera está unida a una cadena pesada mediante un enlace disulfuro covalente, aunque el número de enlaces disulfuro varía entre las cadenas pesadas de diferentes isotipos de inmunoglobulina. Cada cadena pesada y ligera tiene también puentes disulfuro intracatenarios a espacios regulares. Cada cadena pesada tiene en un extremo un dominio variable (VH) seguido de varios dominios constantes. Cada cadena ligera tiene un dominio variable en un extremo (VL) y un dominio constante en su otro extremo; el dominio constante de la cadena ligera está alineado con el primer dominio constante de la cadena pesada y el dominio variable de la cadena ligera está alineado con el dominio variable de la cadena pesada. Se cree que determinados restos de aminoácidos forman una interfaz entre los dominios variables de cadena ligera y de cadena pesada.
Para obtener más información sobre la estructura y propiedades de las diferentes clases de anticuerpos, véase, por ejemplo, Basic and Clinical Immunology, 8.a ed., Daniel P. Stites, Abba I. Terr y Tristram G. Parslow (eds.), Appleton y Lange, Norwalk, CT, 1994, página 71 y capítulo 6.
La cadena ligera de cualquier especie de vertebrado puede asignarse a uno de dos tipos claramente distintos, denominados kappa ("k") y lambda ("A"), basándose en las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes. Dependiendo la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas (CH), las inmunoglobulinas pueden asignarse a diferentes clases o isotipos. Hay cinco clases de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, que tienen cadenas pesadas denominadas alfa ("a"), delta ("5"), épsilon ("s"), gamma ("y") y mu ("p"), respectivamente. Las clases y y a se dividen además en subclases (isotipos) basándose en diferencias relativamente secundarias en la secuencia y función de CH, por ejemplo, los seres humanos expresan las siguientes subclases: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Las estructuras de las subunidades y las configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas y se han descrito generalmente en, por ejemplo, Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4.a ed. (W.B. Saunders Co., 2000).
La "región variable" o "dominio variable" de un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, se refiere a los dominios amino-terminales de la cadena pesada o ligera del anticuerpo. Los dominios variables de la cadena pesada y la cadena ligera pueden denominarse "Vh " y "Vl", respectivamente. Estos dominios son generalmente las partes más variables del anticuerpo (en relación con otros anticuerpos de la misma clase) y contienen los sitios de unión a antígeno.
El término "variable" se refiere al hecho de que determinados segmentos de los dominios variables difieren ampliamente en su secuencia entre los anticuerpos, tales como los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación. El dominio variable media la unión al antígeno y define la especificidad de un anticuerpo particular por su antígeno particular. Sin embargo, la variabilidad no está distribuida uniformemente a lo largo del tramo de los dominios variables. En su lugar, se concentra en tres segmentos llamados regiones hipervariables (HVR), en los dominios variables tanto de cadena ligera como de cadena pesada. Las porciones más altamente conservadas de los dominios variables se denominan regiones marco (FR). Los dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras nativas comprenden, cada uno, cuatro regiones FR, que adoptan en gran parte una configuración de lámina beta, conectadas por tres HVR, que forman bucles que conectan y, en algunos casos, forman parte de, la estructura de lámina beta. Las HVR en cada cadena se mantienen en estrecha proximidad por las regiones FR y, con las HVR de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión a antígeno de los anticuerpos (véase Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, 5.a edición, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)). Los dominios constantes no están implicados directamente en la unión del anticuerpo a un antígeno, sino que presentan diversas funciones efectoras, tal como la participación del anticuerpo en la toxicidad celular dependiente de anticuerpos.
Un anticuerpo "aislado", tal como un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, es uno que se ha identificado, separado y/o recuperado de un componente de su entorno de producción (por ejemplo, de forma natural o recombinante). Preferentemente, el polipéptido aislado está libre de asociación con todos los demás componentes contaminantes de su entorno de producción. Los componentes contaminantes de su entorno de producción, tales como los que resultan de células transfectadas recombinantes, son materiales que normalmente interferirían con la investigación, diagnóstico o usos terapéuticos del anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteicos o no proteicos. En realizaciones preferidas, el polipéptido se purificará: (1) a más del 95 % en peso de anticuerpo según lo determinado por, por ejemplo, el método de Lowry y, en algunas realizaciones, a más del 99 % en peso; (2) hasta un grado suficiente para obtener al menos 15 restos de la secuencia de aminoácidos del extremo N o interna mediante el uso de un secuenciador de copa giratoria o (3) hasta homogeneidad mediante una SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras usando azul de Coomassie o, preferentemente, tinción con plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de células T recombinantes, ya que al menos un componente del entorno natural del anticuerpo no estará presente. Habitualmente, sin embargo, un polipéptido o anticuerpo aislado se preparará mediante al menos una etapa de purificación.
La expresión "anticuerpo monoclonal", como se utiliza en el presente documento, se refiere a un anticuerpo, tal como un anticuerpo monoclonal anti-sortilina de la presente divulgación, obtenido a partir de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posibles mutaciones y/o modificaciones postraduccionales de origen natural (p. ej., isomerizaciones, amidaciones, etc.) que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, al dirigirse contra un único sitio antigénico. A diferencia de las preparaciones de anticuerpos policlonales que generalmente incluyen anticuerpos diferentes dirigidos contra determinantes (epítopos) diferentes, cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un único determinante en el antígeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos porque se sintetizan mediante el cultivo de hibridomas, sin contaminarse por otras inmunoglobulinas. El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo como obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea y no debe interpretarse que requiera la producción del anticuerpo por cualquier método concreto. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales a utilizar según la presente invención pueden prepararse mediante una diversidad de técnicas, que incluyen, aunque no de forma limitativa, uno o más de los siguientes métodos, métodos de inmunización de animales que incluyen, aunque no de forma limitativa, ratas, ratones, conejos, cobayas, hámsteres y/o pollos con uno o más de ADN, partículas similares a virus, polipéptido(s) y/o célula(s), los métodos de hibridoma, métodos de clonación de células B, métodos de ADN recombinante y tecnologías para producir anticuerpos humanos o de tipo humano en animales que tienen parte o la totalidad de los loci o genes de inmunoglobulinas humanas que codifican secuencias de inmunoglobulinas humanas.
Las expresiones "anticuerpo de longitud completa", "anticuerpo intacto" o "anticuerpo entero" se usan indistintamente para referirse a un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, en su forma sustancialmente intacta, a diferencia de un fragmento de anticuerpo. Específicamente, los anticuerpos enteros incluyen aquellos con cadenas pesadas y ligeras que incluyen una región Fc. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia nativa (por ejemplo, dominios constantes de secuencia nativa humana) o variantes de la secuencia de aminoácidos de los mismos. En algunos casos, el anticuerpo intacto puede tener una o más funciones efectoras.
Un "fragmento de anticuerpo"comprende una porción de un anticuerpo intacto, preferentemente, la región de unión a antígeno y/o la región variable del anticuerpo intacto. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales (véase la patente de EE.UU. 5.641.870, Ejemplo 2; Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); moléculas de anticuerpos monocatenarios y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.
La digestión con papaína de anticuerpos, tales como anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación, produce dos fragmentos de unión a antígeno idénticos, llamados fragmentos "Fab", y un fragmento "Fc" residual, un nombre que refleja la capacidad de cristalizar fácilmente. El fragmento Fab consiste en una cadena L completa junto con el dominio de región variable de la cadena H (Vh) y el primer dominio constante de una cadena pesada (Ch 1). Cada fragmento Fab es monovalente con respecto a la unión a antígeno, es decir, tiene un único sitio de unión a antígeno. El tratamiento con pepsina de un anticuerpo produce un único fragmento F(ab')2 grande que corresponde aproximadamente a dos fragmentos Fab unidos por enlaces disulfuro que tienen diferente actividad de unión a antígeno y todavía es capaz de formar entrecruzamientos con el antígeno. Los fragmentos Fab' difieren de los fragmentos Fab en que tienen unos pocos restos adicionales en el extremo carboxi del dominio Ch 1 incluyendo una o más cisteínas de la región bisagra del anticuerpo. Fab'-SH es la denominación en el presente documento para Fab' en los que el o los restos de cisteína de los dominios constantes portan un grupo tiol libre. Los fragmentos de anticuerpos F(ab’)2 originalmente se produjeron como pares de fragmentos Fab’ que tienen cisteínas de bisagra entre ellos. También se conocen otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpo.
El fragmento Fc comprende las porciones carboxi-terminales de las dos cadenas H mantenidas juntas por enlaces disulfuro. Las funciones efectoras de los anticuerpos están determinadas por secuencias en la región Fc, la región que también es reconocida por los receptores de Fc (FcR) que se encuentran en determinados tipos de células.
"Fv" es el fragmento de anticuerpo mínimo que contiene un sitio completo de reconocimiento y unión a antígeno. Este fragmento consiste en un dímero de un dominio de región variable de cadena pesada y uno de ligera en asociación estrecha, no covalente. A partir del plegamiento de estos dos dominios surgen seis bucles hipervariables (3 bucles cada uno de la cadena H y L) que aportan los restos de aminoácidos para la unión a antígeno y confieren al anticuerpo la especificidad de unión a antígeno. Sin embargo, incluso un solo dominio variable (o la mitad de un Fv que comprende solamente tres HVR específicas para un antígeno) tiene la capacidad de reconocer y unirse al antígeno, aunque con una afinidad menor que el sitio de unión completo.
Los "Fv monocatenarios" también abreviados como "sFv" o "scFv" son fragmentos de anticuerpo que comprenden los dominios de anticuerpo VH y VL conectados en una única cadena polipeptídica. Preferentemente, el polipéptido de sFv comprende además un enlazador polipeptídico entre los dominios Vh y Vl que permite que el sFv forme la estructura deseada para la unión a antígeno. Para una revisión del sFv, véase Pluckthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, Nueva York, pág. 269-315 (1994).
Los "fragmentos funcionales" de anticuerpos, tales como anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación, comprenden una porción de un anticuerpo intacto, incluyendo generalmente la región de unión a antígeno o variable del anticuerpo intacto o la región F de un anticuerpo que conserva o tiene capacidad de unión a FcR modificada. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen anticuerpos lineales, moléculas de anticuerpos monocatenarios y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.
El término "diacuerpos" se refiere a fragmentos de anticuerpo pequeños preparados mediante la construcción de fragmentos sFv (véase el párrafo anterior) con enlazadores cortos (aproximadamente 5-10 restos) entre los dominios Vh y Vl de tal manera que se consigue el emparejamiento intercatenario pero no intracatenario de los dominios variables, dando como resultado un fragmento bivalente, es decir, un fragmento que tiene dos sitios de unión a antígeno. Los diacuerpos biespecíficos son heterodímeros de dos fragmentos sFv "cruzados" en los cuales los dominios Vh y Vl de los dos anticuerpos están presentes en diferentes cadenas polipeptídicas.
Como se utiliza en el presente documento, un "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo (inmunoglobulina), tal como un anticuerpo quimérico anti-sortilina de la presente divulgación, en el que una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica a u homóloga a las secuencias correspondientes en los anticuerpos obtenidos a partir de una especie particular o pertenecientes a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la o las cadenas son idénticas u homólogas a las secuencias correspondientes en los anticuerpos derivados de otra especie o pertenecientes a otra clase o subclase de anticuerpo, así como fragmentos de dichos anticuerpos, siempre que presenten la actividad biológica deseada. Los anticuerpos quiméricos de interés en el presente documento incluyen anticuerpos PRIMATIZED® en donde la región de unión a antígeno del anticuerpo deriva de un anticuerpo producido, por ejemplo, inmunizando monos macacos con un antígeno de interés. Como se utiliza en el presente documento, "anticuerpo humanizado" se utiliza como un subconjunto de "anticuerpos quiméricos".
Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (p. ej., murinos), tales como formas humanizadas de anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación, son anticuerpos quiméricos que comprenden restos de aminoácidos de HVR no humanas y restos de aminoácidos de FR humanas. En determinadas realizaciones, un anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente la totalidad de al menos uno, y normalmente dos, dominios variables, en los que la totalidad o sustancialmente todas las HVR (por ejemplo, las c Dr) corresponden a las de un anticuerpo no humano y la totalidad o sustancialmente todas las FR corresponden a las de un anticuerpo humano. Un anticuerpo humanizado puede comprender opcionalmente al menos una porción de una región constante de anticuerpo procedente de un anticuerpo humano. Una "forma humanizada" de un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo no humano, se refiere a un anticuerpo que se ha sometido a humanización.
Un "anticuerpo humano" es aquel que posee una secuencia de aminoácidos correspondiente a la de un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, producido por un ser humano y/o se ha elaborado usando cualquiera de las técnicas para fabricar anticuerpos humanos divulgadas en el presente documento. Esta definición de un anticuerpo humano excluye específicamente un anticuerpo humanizado que comprende restos de unión a antígeno no humanos. Los anticuerpos humanos se pueden producir también usando diversas técnicas conocidas en este campo, incluyendo fagotecas y tecnologías de plataforma basadas en levadura. Pueden prepararse anticuerpos humanos administrando el antígeno a un animal transgénico que se ha modificado para producir dichos anticuerpos en respuesta a la exposición a antígenos, pero cuyos loci endógenos se han desactivado, por ejemplo, xenorratones inmunizados, así como generarse a través de una tecnología de hibridoma de células B humanas.
La expresión "región hipervariable", "HVR", o "HV", cuando se usa en el presente documento se refiere a las regiones de un dominio variable de anticuerpo, tal como el de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, que son hipervariables en secuencia y/o forman bucles estructuralmente definidos. Generalmente, los anticuerpos comprenden seis HVR; tres en la Vh (H1, H2, H3) y tres en la Vl (L1, L2, L3). En anticuerpos nativos, H3 y L3 muestran la mayor diversidad de las seis HVR y se cree que H3 en particular desempeña un papel único en conferir una especificidad excelente a los anticuerpos. Los anticuerpos de camélidos de origen natural que consisten en una cadena pesada únicamente son funcionales y estables en ausencia de cadena ligera.
Varias delineaciones de HVR están en uso y se abarcan en el presente documento. En algunas realizaciones, las HVR pueden ser regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de Kabat basadas en la variabilidad de la secuencia y son las más utilizadas (Kabat et al., supra). En algunas realizaciones, las HVR pueden ser CDR de Chothia. Chothia se refiere, en cambio, a la ubicación de los bucles estructurales (Chothia y Lesk J. Mol. Biol. 196:901 -917 (1987)). En algunas realizaciones, las HVR pueden ser HVR de AbM. Las HVR de AbM representan un compromiso entre las CDR de Kabat y los bucles estructurales de Chothia y se usan por el software de modelado de anticuerpos AbM de Oxford Molecular. En algunas realizaciones, las HVR pueden ser HVR de "contacto". Las HVR "de contacto" se basan en un análisis de las estructuras cristalinas complejas disponibles. Los restos de cada una de estas HVR se indican a continuación.
Bucle Kabat AbM Chothia Contacto
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (numeración de Kabat) H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (numeración de Chothia) H2 H50-HS5 H50-H58 H33-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
Las HVR pueden comprender las "HVR extendidas" que se indican a continuación: 24-36 o 24-34 (L1), 46-56 o 50-56 (L2) y 89-97 u 89-96 (L3) en la VL y 26-35 (H1), 50-65 o 49-65 (una realización preferida) (H2) y 93-102, 94-102 o 95­ 102 (H3) en la VH. Los restos del dominio variable se numeran de acuerdo con Kabat et al., supra, para cada una de estas definiciones de HVR extendidas.
Los restos de la región "marco" o "FR" son los restos de dominio variable distintos de los restos de HVR como se define en el presente documento.
Un "marco aceptor humano", a efectos del presente documento, es un marco que comprende la secuencia de aminoácidos de un marco de Vl o Vh derivado de un marco de inmunoglobulina humana o un marco consenso humano. Un marco aceptor humano "derivado de" un marco de inmunoglobulina humana o de un marco consenso humano puede comprender la misma secuencia de aminoácidos del mismo o puede comprender cambios en la secuencia de aminoácidos preexistente. En algunas realizaciones, el número de cambios de aminoácidos preexistentes es 10 o menos, 9 o menos, 8 o menos, 7 o menos, 6 o menos, 5 o menos, 4 o menos, 3 o menos o 2 o menos. En donde los cambios de aminoácidos preexistentes están presentes en una VH, preferentemente esos cambios se producen en solo tres, dos o una de las posiciones 71H, 73h y 78H; por ejemplo, los restos de aminoácidos en esas posiciones pueden ser 71A, 73T y/o 78A. En una realización, el marco aceptor humano de VL es idéntico en secuencia a la secuencia del marco de VL de inmunoglobulina humana o a la secuencia de marco consenso humana.
Un "marco consenso humano" es un marco que representa los restos de aminoácidos más comunes en una selección de secuencias marco de VL o VH de inmunoglobulina humana. Generalmente, la selección de secuencias de VL o VH de inmunoglobulina humana procede de un subgrupo de secuencias de dominio variable. Generalmente, el subgrupo de secuencias es un subgrupo como en Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md (1991). Los ejemplos incluyen, para la Vl , el subgrupo puede ser el subgrupo kappa I, kappa II, kappa III o kappa IV como en Kabat et al., supra. Adicionalmente, para la Vh , el subgrupo puede ser el subgrupo I, subgrupo II o subgrupo III como en Kabat et al., supra.
Una "modificación de aminoácidos" en una posición específica, por ejemplo, de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, se refiere a la sustitución o eliminación del resto especificado o a la inserción de al menos un resto de aminoácido adyacente al resto especificado. La inserción "adyacente" a un resto especificado significa la inserción dentro de una distancia de uno o dos restos del mismo. La inserción puede ser N-terminal o C-terminal en el resto especificado. La modificación de aminoácidos preferida en el presente documento es una sustitución.
Un anticuerpo de "afinidadmadurada", tal como un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, es uno con una o más alteraciones en una o más HVR del mismo que tienen como resultado una mejora en la afinidad del anticuerpo por el antígeno, en comparación con un anticuerpo precursor que no posee esa o esas alteraciones. En una realización, un anticuerpo de afinidad madurada tiene afinidades nanomolares o incluso picomolares por el antígeno diana. Los anticuerpos de afinidad madurada se producen mediante procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992) describe la maduración de la afinidad mediante el reordenamiento de dominios VH y VL. Se describe la mutagénesis aleatoria de restos de HVR y/o regiones marco por, por ejemplo: Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); y Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992).
Como se utiliza en el presente documento, la expresión "reconoce específicamente" o "se une específicamente" se refiere a interacciones medibles y reproducibles tales como atracción o unión entre una diana y un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, que es determinante de la presencia de la diana en presencia de una población heterogénea de moléculas que incluyen moléculas biológicas. Por ejemplo, un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, que se une específica o preferentemente a una diana o un epítopo es un anticuerpo que se une a esta diana o epítopo con mayor afinidad, avidez, más fácilmente y/o con mayor duración que con la que se une a otras dianas u otros epítopos de la diana. También se entiende al leer esta definición que, por ejemplo, un anticuerpo (o una fracción) que se une específica o preferentemente a una primera diana puede o no unirse específica o preferentemente a una segunda diana. Por lo tanto, "unión específica"o "unión preferente"no requiere necesariamente (aunque puede incluir) unión exclusiva. Un anticuerpo que se une específicamente a una diana puede tener una constante de asociación de al menos aproximadamente 103 M-1 o 104 M-1, algunas veces aproximadamente 105 M-1 o aproximadamente 106 M-1, en otros casos aproximadamente 106 M-1 o aproximadamente 107 M-1, aproximadamente de 108 M-1 a aproximadamente 109 M-1 o aproximadamente de 1010 M-1 a aproximadamente 1011 M-1 o mayor. Puede usarse una diversidad de formatos de inmunoensayo para seleccionar anticuerpos que son específicamente inmunorreactivos con una proteína particular. Por ejemplo, se usan rutinariamente inmunoensayos ELISA en fase sólida para seleccionar anticuerpos monoclonales específicamente inmunorreactivos con una proteína. Véase, por ejemplo, Harlow y Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, Nueva York, para una descripción de formatos y condiciones de inmunoensayo que pueden usarse para determinar la inmunorreactividad específica.
Como se utiliza en el presente documento, un "interacción" entre una proteína sortilina y una segunda proteína abarca, sin limitación, una interacción de proteína-proteína, una interacción física, una interacción química, unión, unión covalente y unión iónica. Como se utiliza en el presente documento, un anticuerpo "inhibe la interacción" entre dos proteínas cuando el anticuerpo interrumpe, reduce o elimina por completo una interacción entre las dos proteínas. Un anticuerpo de la presente divulgación, o fragmento del mismo, "inhibe la interacción" entre dos proteínas cuando el anticuerpo o fragmento del mismo se une a una de las dos proteínas.
Un anticuerpo "agonista" o un anticuerpo de '"activación" es un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-sortilina agonista de la presente divulgación, que induce (p. ej., aumenta) una o más actividades o funciones del antígeno después de que el anticuerpo se une al antígeno.
Un anticuerpo "bloqueante", un anticuerpo "antagonista" o un anticuerpo "inhibidor" es un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, que inhibe o reduce (p. ej., disminuye) la unión del antígeno a uno o más ligandos después de que el anticuerpo se une al antígeno, y/o que inhibe o reduce (p. ej., disminuye) una o más actividades o funciones del antígeno después de que el anticuerpo se une al antígeno. En algunas realizaciones, los anticuerpos bloqueantes, los anticuerpos antagonistas o los anticuerpos inhibidores inhiben sustancial o completamente la unión del antígeno a uno o más ligandos y/o una o más actividades o funciones del antígeno.
Las "funciones efectoras" del anticuerpo hacen referencia a las actividades biológicas atribuibles a la región Fc (una región Fc de secuencia nativa o una región Fc variante de la secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo y varían con el isotipo del anticuerpo.
La expresión "región Fc" en el presente documento se utiliza para definir una región C-terminal de una cadena pesada de inmunoglobulina, que incluye regiones Fc de secuencia nativa y regiones Fc variantes. Aunque los límites de la región Fc de una cadena pesada de inmunoglobulina pueden variar, habitualmente se define que la región Fc de cadena pesada de la lgG humana se extiende desde un resto de aminoácido en la posición Cys226, o desde Pro230, al extremo carboxilo de la misma. La lisina C-terminal (resto 447 de acuerdo con el sistema de numeración EU) de la región Fc puede eliminarse, por ejemplo, durante la producción o purificación del anticuerpo o mediante ingeniería recombinante del ácido nucleico que codifica una cadena pesada del anticuerpo. Por consiguiente, una composición de anticuerpos intactos puede comprender poblaciones de anticuerpos con todos los restos K447 eliminados, poblaciones de anticuerpos sin restos K447 eliminados y poblaciones de anticuerpos que tienen una mezcla de anticuerpos con y sin el resto K447. Las regiones Fc de secuencia nativa adecuadas para su uso en los anticuerpos de la presente divulgación incluyen IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 humanas.
Una "región Fc de secuencia nativa" comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica a la secuencia de aminoácidos de una región Fc encontrada en la naturaleza. Las regiones Fc humanas de secuencia nativa incluyen una región Fc de IgG1 humana de secuencia nativa (alotipos A y no A); región Fc de IgG2 humana de secuencia nativa; región Fc de IgG3 humana de secuencia nativa; y región Fc de IgG4 humana de secuencia nativa así como variantes de las mismas de origen natural.
Una "región Fc variante" comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de la de una región Fc de secuencia nativa como consecuencia de al menos una modificación de aminoácidos, preferentemente una o más sustituciones de aminoácidos. Preferentemente, la región Fc variante tiene al menos una sustitución de aminoácido en comparación con una región Fc de secuencia nativa o con la región Fc de un polipéptido precursor, p. ej., de aproximadamente una a aproximadamente diez sustituciones de aminoácidos, y preferentemente de aproximadamente una a aproximadamente cinco sustituciones de aminoácidos en una región Fc de secuencia nativa o en la región Fc del polipéptido precursor. La región Fc variante en el presente documento poseerá preferentemente al menos aproximadamente un 80 % de homología con una región Fc de secuencia nativa y/o con una región Fc de un polipéptido precursor y, más preferentemente, al menos aproximadamente un 90 % de homología con la misma, más preferentemente al menos aproximadamente un 95 % de homología con la misma.
Un "receptor de Fc" o "FcR" describe un receptor que se une a la región Fc de un anticuerpo. El FcR preferido es un FcR humano de secuencia nativa. Además, un FcR preferido es uno que se une a un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de las subclases FcyRI, FcyRII y FcyRIII, incluyendo variantes alélicas y formas de corte y empalme alternativas de estos receptores, incluyendo los receptores FcyRTI FcyRIIA (un "receptor de activación") y FcyRIIB (un "receptor inhibidor"), que tienen secuencias de aminoácidos similares que difieren principalmente en los dominios citoplasmáticos de las mismas. El receptor de activación FcyRIIA contiene un motivo de activación del inmunorreceptor basado en tirosina (ITAM) en su dominio citoplasmático. El receptor inhibidor FcyRIIB contiene un motivo de inhibición del inmunorreceptor basado en tirosina (ITIM) en su dominio citoplasmático. Otros FcR, incluyendo los que se identifiquen en el futuro, están abarcados por el término "FcR" en el presente documento. Los FcR también pueden aumentar la semivida sérica de los anticuerpos. Como se utilizan en el presente documento, "porcentaje (%) de identidad de secuencia de aminoácidos" y '"homología" con respecto a una secuencia de péptido, polipéptido o anticuerpo, se refiere al porcentaje de restos de aminoácido en una secuencia candidata que son idénticos a los restos de aminoácidos en la secuencia de péptido o polipéptido específica, después de alinear las secuencias e introducir huecos, si es necesario, para lograr el porcentaje máximo de identidad de secuencia y sin tomar en consideración ninguna sustitución conservativa como parte de la identidad de secuencia. El alineamiento para determinar el porcentaje de identidad de secuencia de aminoácidos puede realizarse de varias maneras que se encuentran dentro de las capacidades de la técnica, por ejemplo, usando programas informáticos disponibles de manera pública, tales como los programas informáticos BlAST, BLAST-2, ALIGN o MEGALIGN™ (DNa St AR). Los expertos en la materia pueden determinar los parámetros adecuados para medir el alineamiento, incluyendo cualquier algoritmo conocido en la técnica necesario para lograr el alineamiento máximo a lo largo de la longitud completa de las secuencias que se estén comparando.
Una célula "aislada" es una molécula o una célula que se identifica y separa de al menos una célula contaminante con la que normalmente está asociada en el entorno en el que se produjo. En algunas realizaciones, la célula aislada está libre de asociación con todos los componentes asociados con el entorno de producción. La célula aislada se encuentra en una forma diferente a la forma o situación en la que se encuentra en la naturaleza. Las células aisladas se distinguen de las células que existen de forma natural en los tejidos, órganos o individuos. En algunas realizaciones, la célula aislada es una célula hospedadora de la presente divulgación.
Una molécula de ácido nucleico "aislada" que codifica un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, es una molécula de ácido nucleico que se identifica y separa de al menos una molécula de ácido nucleico contaminante con la que normalmente está asociada en el entorno en el que se produjo. Preferentemente, el ácido nucleico aislado está libre de asociación con todos los componentes asociados con el entorno de producción. Las moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican los polipéptidos y anticuerpos en el presente documento se encuentran en una forma distinta a la forma o situación en la que se encuentran en la naturaleza. Por tanto, las moléculas de ácido nucleico aisladas se distinguen del ácido nucleico que codifica los polipéptidos y anticuerpos en el presente documento que existen de forma natural en las células.
El término "vector", como se utiliza en el presente documento, pretende hacer referencia a una molécula de ácido nucleico capaz de transportar otro ácido nucleico al que se ha unido. Un tipo de vector es un "plásmido", que se refiere a un ADN bicatenario circular en el que se pueden ligar segmentos de ADN adicionales. Otro tipo de vector es un vector de fago. Otro tipo de vector es un vector vírico, en donde pueden unirse segmentos de ADN adicionales al genoma vírico. Determinados vectores son capaces de replicación autónoma en una célula hospedadora en la cual se introducen (p. ej., vectores bacterianos que tienen un origen de replicación bacteriano y vectores episómicos de mamífero). Otros vectores (p. ej., vectores no episómicos de mamífero) pueden integrarse en el genoma de una célula hospedadora tras su introducción en la célula hospedadora y de este modo pueden replicarse junto con el genoma del hospedador. Además, determinados vectores son capaces de dirigir la expresión de genes a los que están unidos operativamente. Tales vectores se denominan en el presente documento "vectores de expresión recombinante", o simplemente, "vectores de expresión". En general, los vectores de expresión útiles en las técnicas de ADN recombinante están con frecuencia en forma de plásmidos. En la presente memoria descriptiva, "plásmido" y "vector" pueden utilizarse indistintamente, dado que el plásmido es la forma de vector utilizada más comúnmente.
"Polinucleótido", o "ácido nucleico", como se usan indistintamente en el presente documento, se refiere a polímeros de nucleótidos de cualquier longitud e incluye ADN y ARN. Los nucleótidos pueden ser desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos, nucleótidos o bases modificadas y/o sus análogos o cualquier sustrato que pueda incorporarse en un polímero mediante la ADN o ARN polimerasa o mediante una reacción sintética.
Una "célula hospedadora" incluye una célula o cultivo celular individual que puede ser o ha sido un receptor de uno o más vectores para la incorporación de insertos polinucleotídicos. Las células hospedadoras incluyen la descendencia de una sola célula hospedadora, y la descendencia puede no ser necesariamente completamente idéntica (en morfología o en complemento de ADN genómico) a la célula progenitora original debido a una mutación natural, accidental o deliberada. Una célula hospedadora incluye células transfectadas in vivo con uno o más polinucleótidos de la presente divulgación.
Los "vehículos" como se utiliza en el presente documento incluyen vehículos, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables que no son tóxicos para la célula o mamífero que se va a exponer a los mismos en las dosificaciones y concentraciones empleadas.
El término "aproximadamente", como se utiliza en el presente documento, se refiere al intervalo de error habitual para el valor correspondiente, fácilmente conocido por los expertos en este campo técnico. La referencia a "aproximadamente" un valor o parámetro en el presente documento incluye (y describe) realizaciones que se refieren a ese valor o parámetro en sí.
Como se utiliza en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un" o "una", "uno", y "el/la", incluyen referencias en plural a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Por ejemplo, la referencia a un "anticuerpo" es una referencia de uno a muchos anticuerpos, tales como cantidades molares, e incluye equivalentes de las mismas conocidas por los expertos en la materia, y similares.
Se entiende que los aspectos y realizaciones de la presente divulgación descrita en el presente documento incluyen aspectos y realizaciones "que comprenden", "que consisten" y "que consisten esencialmente en".
Visión general
La presente divulgación se refiere, en parte, a anticuerpos anti-sortilina que presentan una o más características funcionales mejoradas y/o potenciadas en relación con un anticuerpo anti-sortilina, S-60, que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera como se describe en el documento WO2016164637. Las propiedades funcionales mejoradas y/o potenciadas no limitativas incluyen, por ejemplo, anticuerpos capaces de unirse a la sortilina con mayor afinidad, reducción de los niveles de sortilina en la superficie celular, disminución de la concentración eficaz semimáxima (CE50) para reducir los niveles de sortilina en la superficie celular, mejora de la reducción máxima de los niveles de sortilina en la superficie celular, aumento de la secreción extracelular de un ligando de sortilina: p. ej., progranulina (PGRN), disminución de la concentración eficaz semimáxima (CE50) para bloquear la unión de PGRN a la sortilina, mejora del bloqueo máximo de la unión de PGRN a la sortilina, o cualquier combinación de los mismos. También se contemplan en el presente documento anticuerpos anti-sortilina con diferentes variantes de Fc que presentan una o más características funcionales mejoradas y/o potenciadas, incluida la disminución de la concentración eficaz semimáxima (CE50) para reducir los niveles de sortilina en la superficie celular, mejora de la reducción máxima de los niveles de sortilina en la superficie celular, aumento de la secreción extracelular de un ligando de sortilina: p. ej., progranulina (PGRN), disminución de la concentración eficaz semimáxima (CE50) para bloquear la unión de PGRN a la sortilina y mejora del bloqueo máximo de la unión de PGRN a la sortilina.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen potencias más altas para reducir los niveles de sortilina en la superficie celular en relación con un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En algunas realizaciones, la potencia se mide por la concentración eficaz semimáxima (CE50) para la reducción de los niveles celulares en la superficie celular de SORT1.
La presente divulgación se refiere además a métodos para producir y usar anticuerpos anti-sortilina como se describe en el presente documento; composiciones farmacéuticas que contienen dichos anticuerpos; ácidos nucleicos que codifican dichos anticuerpos; y células hospedadoras que contienen ácidos nucleicos que codifican dichos anticuerpos.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden tener una o más actividades que se deben, al menos en parte, a la capacidad de los anticuerpos para reducir los niveles (p. ej., niveles en la superficie celular) de sortilina al inducir la degradación, regulación negativa, escisión, desensibilización del receptor y/o direccionamiento lisosómico de la sortilina. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina presentan una o más de las siguientes propiedades: a. tienen una constante de disociación (Kd) para la sortilina humana que es menor que la de un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60; b. disminuyen los niveles de sortilina en la superficie celular (p. ej., disminuyen los niveles de sortilina en la superficie celular en células modificadas por ingeniería genética que expresan sortilina humana in vitro) con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es menor que la de un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60; c. tienen una constante de disociación (KD) para la sortilina humana que puede variar entre aproximadamente 0,560 nM y aproximadamente 1,63 nM, por ejemplo cuando la Kd se determina por clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS); d. tienen una constante de disociación (Kd) para la sortilina humana que puede variar entre aproximadamente 0,270 nM y aproximadamente 2,910 nM, por ejemplo, cuando la Kd se determina por interferometría de biocapa; c. disminuyen los niveles de sortilina en la superficie celular (p. ej., disminuyen los niveles de sortilina en la superficie celular en células modificadas por ingeniería genética que expresan sortilina humana in vitro) con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que puede variar de aproximadamente 72,58 pM a aproximadamente 103,6 pM, por ejemplo, cuando la CE50 se determina in vitro por FACS; f. reducen los niveles de sortilina en la superficie celular con una reducción máxima que puede variar de aproximadamente el 51,33 % al 88,76 %; g. aumentan la secreción extracelular de PGRN más que un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60; h. bloquean la unión de PGRN a la sortilina (p. ej., bloquean la unión de PGRN a la sortilina en células modificadas por ingeniería genética que expresan sortilina humana in vitro) con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que puede variar de aproximadamente 0,325 nM a aproximadamente 2,27 nM, por ejemplo, cuando la CE50 se determina in vitro por FACS; y/o i. mejoran el bloqueo máximo de la unión de PGRN a la sortilina más que un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60.
Ventajosamente, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación reducen los niveles en la superficie celular (p. ej., hasta aproximadamente 3,02 veces) de sortilina de forma más potente (p. ej., con una CE50 más baja) en comparación con un anticuerpo anti-sortilina de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina de control que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60) (véase p. ej., el Ejemplo 2). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación reducen la unión de PGRN a la sortilina con una CE50 más baja (hasta aproximadamente 5,36 veces) de forma más potente en comparación con un anticuerpo anti-sortilina de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina de control que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60) (véase p. ej., el Ejemplo 3). Además, ventajosamente, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una mayor afinidad (p. ej., una afinidad hasta aproximadamente 2,79 veces mayor) por la sortilina (p. ej., un valor de Kd más bajo medido por FACS o interferometría de biocapa) en comparación con un anticuerpo anti-sortilina de control (por ejemplo, un anticuerpo anti-sortilina de control que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60 (véanse p. ej., los Ejemplos 1 y 4). Sorprendentemente, una mayor afinidad por la sortilina no se correlaciona necesariamente con un aumento en la capacidad o potencia de reducción de los niveles de sortilina en la superficie celular (véanse, por ejemplo, los Ejemplos 2 y 4) ni un aumento en la capacidad o potencia de bloquear la unión de PGRN a la sortilina (véanse, p. ej., los Ejemplos 3 y 4).
La presente divulgación se refiere además a anticuerpos anti-sortilina con estabilidad mejorada durante la fabricación, almacenamiento y administración in vivo. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una estabilidad mejorada en diversas condiciones de estrés (véase, p. ej., el Ejemplo 4).
Proteínas sortilinas
En un aspecto, la presente divulgación proporciona anticuerpos, tales como anticuerpos aislados (p. ej., monoclonales), que interactúan o se unen de otra manera a una región, tal como un epítopo, dentro de una proteína sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, los anticuerpos interactúan o se unen de otra manera a una región, tal como un epítopo, dentro de una proteína sortilina de la presente divulgación con cinética mejorada/potenciada (p. ej., en relación con un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos interactúan o se unen de otra manera a una región, tal como un epítopo, dentro de una proteína sortilina humana, con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es menor que la de un anticuerpo de control (p. ej., en relación con un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una proteína sortilina y modulan una o más actividades de sortilina después de unirse a la proteína sortilina, por ejemplo, una actividad asociada con la expresión de sortilina en una célula. Las proteínas sortilinas de la presente divulgación incluyen, sin limitación, una proteína sortilina de mamífero, proteína sortilina humana, proteína sortilina de ratón y proteína sortilina de rata. En la Tabla 32 se muestran secuencias ilustrativas de la proteína sortilina.
La sortilina se denomina indistintamente sortilina 1, SORT1, receptor de NT de 100 kDa, glicoproteína 95 (GP95), receptor de progranulina (PGRN-R) y receptor de neurotensina 3 (NT-3 o NTR-3). La sortilina es una proteína de 831 aminoácidos que codifica un receptor de membrana de tipo I. Se conocen diversos homólogos de la sortilina, incluyendo, aunque no de forma limitativa, sortilina humana, sortilina de rata y sortilina de ratón. La secuencia de aminoácidos de la sortilina humana se expone a continuación como SEQ ID NO: 81 (con los restos de aminoácidos clave que se prevé que participen en la unión de progranulina representados en negrita y la región de unión de pro-NGF prevista subrayada):
10 20 30 40 50
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La secuencia de aminoácidos de la sortilina de ratón se expone en la SEQ ID NO: 82:
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AAPGGPVPRA GRWRRGAPAE DQDCGRLPDF 1AKLTHNTHQ HVFDDLSGSV SLSWVGDSTG
V1LVLTTFQV PLVIVSFGQS KLYRSEDYGK NFKDITNLIN NTF1RTEFGM A1GPEMSGKV
XLTAEVSGGS RGGRVFRSSD FAKNFVQTDL PFHPLTQMMY SPQNSDYLLA LSTENGLWVS
KNFGEKWEEI HKAVCLAKWG PNNIIFFTTH VNGSCKADLG ALELWRTSDL GKTFKTIGVK
1YSFGLGGRF LFASVMADKD TTRR1HVSTD QGDTWSMAQL PSVGQEQFYS ILAANEDMVF
MHVDEPGDTG FGTIFTSDDR GIVYSKSLDR HLYTTTGGET DFTNVTSLRG VYITSTLSED
NSIQSMITFD QGGRWEHLRK PENSKCDATA KNKNECSLHI HASYSISQKL NVPMAPLSEP
NAVGIVIAHG SVGDAISVMV PDVYISDDGG YSWAKMLEGP BYYT1LDSGG IIVAIEHSNR
P1NV1KFSTD EGQCWQSYVF TQEP1YFTGL ASEPGARSMN ISIWGFTESF 1TRQWVSYTV
DFKDILERNC EEDDYTTWLA HSIDPGDYKD GC1LGYKEQF LRLRKSSVCQ NGRDYWAKQ
PSVCPCSLED FLCDFGYFRP ENASECVEQP ELKGHELEFC LYGKEEHLTT NGYRKIPGDK
CQGGMN'PARE VKDLKKKCTS NFLNPTKQNS KSNSVPIILA IVGLMLVTW AGVLIVKKYV
CGGRFLVHRY SVLQQHAEAD GV'EALDSTSH AKSGYHDDSD EDLLE
La secuencia de aminoácidos de la sortilina de rata se expone en la SEQ ID NO: 83:
KEFPFGAAEG LLAUFLGLLL LLCGIPFAAY GQD-LEAFFF FAFFLLPUAG FYCV3VYJLPA
AAFGGFY^RA GBUP-GAFAE E3DCGPE?:'? :AKL7N1!TH2 HABRIASG3Y CLEYV'Y¡S7G
YILVL7IFA'' p l v i v s f g l s KLYR3EEYGK NFKYCTNIjYX N T F I P T E F G K ALGREK3GKY
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G G G P F L V H R I SVLQGHAEAD G V E A I L T A S H AK3CANEASE ELLLE
En algunas realizaciones, la sortilina es una preproteína que incluye una secuencia señal. En algunas realizaciones, la sortilina es una proteína madura. En algunas realizaciones, la proteína sortilina madura no incluye una secuencia señal. En algunas realizaciones, la proteína sortilina madura se expresa en una célula,
Las proteínas sortilinas de la presente divulgación incluyen varios dominios, incluyendo, aunque no de forma limitativa, una secuencia señal, un propéptido, un dominio luminal, un dominio Vps10p, un dominio de 10 CC, un dominio transmembrana y un dominio citoplasmático. Adicionalmente, las proteínas de la presente divulgación se expresan a altos niveles en varios tejidos, incluyendo, aunque no de forma limitativa, el cerebro, médula espinal, corazón y músculo esquelético, tiroides, placenta y testículos.
Por consiguiente, como se utiliza en el presente documento, una proteína "sortilina" de la presente divulgación incluye, sin limitación, una proteína sortilina de mamífero, proteína sortilina humana, proteína sortilina de primate, proteína sortilina de ratón y proteína sortilina de rata. Adicionalmente, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden unirse a un epítopo dentro de una o más de una proteína sortilina de mamífero, proteína sortilina humana, sortilina de primate, proteína sortilina de ratón y proteína sortilina de rata.
Dominios de la pro teína sortilina
Las proteínas sortilinas de la presente divulgación contienen varios dominios, tales como un dominio Vps10p que contiene un motivo de caja de Asp, una estructura de propulsor beta de diez láminas y un bucle hidrófobo; y un dominio 10 CC.
Como se ha divulgado en el presente documento, las interacciones entre las proteínas sortilinas de la presente divulgación y las proneurotrofinas o las neurotrofinas están mediadas por el dominio Vps10p que contiene una estructura de propulsor beta de diez láminas y un motivo de caja de Asp. En determinadas realizaciones, Las proteínas sortilinas de la presente divulgación contienen un dominio Vps10 que incluye una estructura de propulsor beta de diez láminas y está ubicado dentro de los restos de aminoácido 78-611 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81) o los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero que corresponden a los restos de aminoácido 78-611 de la SEQ ID NO: 81. En determinadas realizaciones, los restos de aminoácido 190-220 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81) o los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero correspondientes a los restos de aminoácido 190-220 de la SEQ ID NO: 81 están ubicados dentro del dominio Vps10p.
Los dominios Vps10p de la presente divulgación pueden incluir un motivo de caja de Asp: Como se utiliza en el presente documento, Los motivos de caja de Asp tienen la siguiente secuencia: (S/T)-X-(D/N)-X-X-X-X-(W/F/Y) (SEQ ID NO: 84) o X-X-(S/T)-X-(D/N)-X-G-X-(T/S)-(W/F/Y)-X (SEQ ID NO: 85), donde X representa cualquier aminoácido. En la sortilina humana, el motivo de caja de Asp es SSDFAKNF (SEQ ID NO: 86), ubicado en los restos de aminoácido 200-207 de la sortilina humana. Por consiguiente, en determinadas realizaciones, un motivo de caja de Asp está ubicado en los restos de aminoácido 200-207 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81) o los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero correspondientes a los restos de aminoácido 200-207 de SEQ ID NO: 81.
Como se ha divulgado en el presente documento, las interacciones entre las proteínas sortilinas de la presente divulgación y p75 están mediadas por el dominio 10CC del bucle hidrófobo del dominio Vps10p.
En determinadas realizaciones, Las proteínas sortilinas de la presente divulgación contienen un dominio 10CC que está ubicado dentro de los restos de aminoácido 610-757 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81) o los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero que corresponden a los restos de aminoácido 610-757 de la SEQ ID NO: 81. En realizaciones preferidas, los restos de aminoácido 592-593, 610-660 y/o 667-749 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81) o los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero correspondientes a los restos de aminoácido 592­ 593, 610-660 y/o 667-749 de la SEQ ID NO: 81 están ubicados dentro del dominio 10CC de la sortilina.
En otras realizaciones, las proteínas sortilinas de la presente divulgación contienen un bucle hidrófobo dentro del dominio Vps10p que está ubicado dentro de los restos de aminoácido 130-141 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81) o los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero que corresponden a los restos de aminoácido 130-141 de la SEQ ID NO: 81.
Como apreciará un experto en la materia, los restos inicial y final de los dominios de la presente divulgación pueden variar dependiendo del programa de modelado informático utilizado o el método utilizado para determinar el dominio.
Compañeros de unión de sortilina
Las proteínas sortilinas de la presente divulgación pueden interactuar con (por ejemplo, unirse a) una o más proteínas, incluidas, sin limitación, proteína progranulina (PGRN); neurotrofinas, tales como las proneurotrofinas, proneurotrofina-3, neurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, neurotrofina-4/5, precursor de factor de crecimiento nervioso (Pro-NGF), factor de crecimiento nervioso (NGF), precursor de factor neurotrófico derivado del cerebro (Pro-BDNF) y factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF); neurotensina, p75, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE), proteína precursora de amiloide, péptido A beta, PCSK9, p75NTR y proteína asociada a receptor (RAP).
Progranulina (PGRN)
Se ha demostrado que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (p. ej., se unen a) directamente con la progranulina y median en la degradación de la progranulina (p. ej., Zheng, Y et al., (2011) PLoS ONE 6(6): e21023).
La progranulina se denomina indistintamente PGRN, proepitelina, precursor de granulina-epitelina, factor de crecimiento derivado de células de PC (cáncer de próstata) (PCDGF) y acrogranina. La progranulina es una proteína de 593 aminoácidos que codifica una glucoproteína de secreción de 68,5 kD que tiene 7,5 repeticiones de motivos de granulina (epitelina) más pequeños, que varían de 6-25 kDa, que se puede escindir proteolíticamente del precursor PGRN. Los ejemplos de productos de escisión de progranulina incluyen, sin limitación, granulina A/epitelinas 1, granulina B epitelinas 2, granulina C, granulinas D, granulina E, granulina F, granulina G y cualquier otro producto peptídico conocido derivado de la progranulina.
Por consiguiente, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que aumentan los niveles de progranulina, disminuyen los niveles de sortilina en la superficie celular y/o bloquean la interacción (p. ej., la unión) entre la sortilina y la progranulina serían beneficiosos para prevenir, reducir el riesgo de, o tratar afecciones y/o enfermedades asociadas con niveles reducidos de expresión y/o actividad de progranulina, muerte celular (p. ej., muerte de células neuronales), demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, una lesión cerebral traumática, una lesión de la médula espinal, depresión de larga duración, enfermedades vasculares ateroscleróticas, síntomas indeseables del envejecimiento normal, demencia, demencia mixta, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de presión normal, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Huntington, taupatía, ictus, traumatismo agudo, traumatismo crónico, lupus, colitis aguda y crónica, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, paludismo, temblor esencial, lupus del sistema nervioso central, enfermedad de Behcet, enfermedad de Parkinson, demencia con cuerpos de Lewy, atrofia multisistémica, degeneración de discos intervertebrales, síndrome de Shy-Drager, parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal gangliónica, encefalomielitis diseminada aguda, trastornos granulomatosos, sarcoidosis, enfermedades asociadas con el envejecimiento, degeneración macular senil, glaucoma, retinitis pigmentaria, degeneración de la retina, infecciones del tracto respiratorio, septicemia, infección ocular, infección sistémica, trastornos inflamatorios, artritis, esclerosis múltiple, trastorno metabólico, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes de tipo 2, daño tisular o vascular, una lesión y/o uno o más síntomas indeseables del envejecimiento normal. Adicionalmente, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que aumentan los niveles de progranulina, disminuyen los niveles de sortilina en la superficie celular y/o bloquean la interacción (p. ej., la unión) entre la sortilina y la progranulina, pueden inhibir la interacción entre la sortilina y la progranulina, pueden inducir una o más actividades de la progranulina, pueden reducir la internalización en los endosomas de la progranulina, o fragmentos de la misma y/o pueden aumentar la concentración eficaz de progranulina.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que aumentan los niveles de progranulina, disminuyen los niveles de sortilina en la superficie celular y/o bloquean la interacción (p. ej., la unión) entre la sortilina y la progranulina, se unen a uno o más aminoácidos dentro de los restos de aminoácido 131-138, 175-181,190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207, 207-231,207-227, 212-221,233-243, 237­ 247, 237-260, 297-317, 314-338, 367-391,429-443, 623-632 y/o 740-749 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81); o dentro de los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero correspondientes a los restos de aminoácido 131­ 138, 175-181, 190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207, 207-231, 207-227, 212-221, 233­ 243, 237-247, 237-260, 297-317, 314-338, 367-391, 429-443, 623-632 y/o 740-749 de la SEQ ID NO: 81. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que aumentan los niveles de progranulina, disminuyen los niveles de sortilina en la superficie celular y/o bloquean la interacción (p. ej., la unión) entre la sortilina y la progranulina, pueden unirse a uno o más aminoácidos de los restos de aminoácido His131, Val132, Prol33, Leul34, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phel98, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595 y/o Glu700 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81); o de los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero correspondientes a uno o más restos de aminoácido His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350; Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595 y/o Glu700 de la SEQ ID NO: 81).
Otros ligandos de sortilina
Se ha demostrado que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (p. ej., se unen) directamente con proneurotrofinas (p. ej., pro-NGF), que albergan un dominio "pro" y típicamente son proapoptóticos. Esta unión puede estar mediada por un epítopo lineal presente en la sortilina que corresponde a los restos de aminoácido 163­ 174 de la SEQ ID NO: 81. También se ha demostrado que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (p. ej., se unen) con neurotensina dentro de la estructura de propulsor beta de la sortilina, y se ha demostrado que existe un contacto importante en la serina 283 de la sortilina humana.
También se ha demostrado que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (por ejemplo, se unen) con el receptor (p75) del factor de crecimiento nervioso (NGF) de baja afinidad dentro del dominio 10CC de la sortilina o el bucle hidrófobo del dominio Vps10p de la sortilina. Como se ha divulgado en el presente documento, las proteínas sortilinas de la presente divulgación pueden funcionar como un correceptor con p75 para proneurotrofinas, que inducen la señalización apoptótica. Se ha demostrado además que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (por ejemplo, se unen) con la proteína precursora de amiloide (APP).
Se ha demostrado que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (por ejemplo, se unen) con la lipoproteína lipasa (LpL). Como se ha divulgado en el presente documento, las proteínas sortilinas de la presente divulgación se unen y modifican la degradación de LpL. Se ha demostrado que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (por ejemplo, se unen) con la apolipoproteína AV (APOA5). Como se ha divulgado en el presente documento, las proteínas sortilinas de la presente divulgación se unen y modifican la degradación de APOA5.
Se ha demostrado que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (por ejemplo, se unen) con la apolipoproteína E (APOE, APOE2, APOE3, APOE4). Como se ha divulgado en el presente documento, las proteínas sortilinas de la presente divulgación se unen y modifican la degradación y el transporte de APOE así como de agentes que transporta APOE tales como el péptido A beta. Además, se ha demostrado que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (por ejemplo, se unen) con la proteína asociada a receptor (RAP). Además, se ha demostrado que las proteínas sortilinas de la presente divulgación interactúan (p. ej., se unen) con la proproteína convertasa subtilisina/kexina tipo 9 (PCSK9) y la secretan a la circulación.
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos anti-sortilina, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación también pueden inhibir (por ejemplo, bloquear) la interacción entre la sortilina y uno o más ligandos de sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, el uno o más de los otros ligandos es uno o más de proneurotrofinas, neurotensina, receptor (p75) del factor de crecimiento nervioso (NGF) de baja afinidad, proteína precursora de amiloide, lipoproteína lipasa, apolipoproteína AV, apolipoproteína, proteína asociada a receptor y/o proproteína convertasa subtilisina/kexina tipo 9. Dichos anticuerpos pueden ser beneficiosos para prevenir, reducir el riesgo de, o tratar afecciones y/o enfermedades asociadas con niveles reducidos de expresión y/o actividad de uno o más de los otros ligandos de sortilina, muerte celular (p. ej., muerte de células neuronales). En algunas realizaciones, el uno o más de los otros ligandos es uno o más de proneurotrofinas, neurotensina, receptor (p75) del factor de crecimiento nervioso (NGF) de baja afinidad, proteína precursora de amiloide, lipoproteína lipasa, apolipoproteína AV, apolipoproteína, proteína asociada a receptor y/o proproteína convertasa subtilisina/kexina tipo 9.
Los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que inhiben (p. ej., bloquean) la interacción entre la sortilina y uno o más de los otros ligandos de la sortilina de la presente divulgación también pueden prevenir la muerte celular (por ejemplo, apoptosis) inducida por uno o más de los otros ligandos de la sortilina. En algunas realizaciones, el uno o más de los otros ligandos es uno o más de proneurotrofinas, neurotensina, receptor (p75) del factor de crecimiento nervioso (NGF) de baja afinidad, proteína precursora de amiloide, lipoproteína lipasa, apolipoproteína AV, apolipoproteína, proteína asociada a receptor y/o proproteína convertasa subtilisina/kexina tipo 9.
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos anti-sortilina, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que inhiben (p. ej., bloquean) la interacción entre la sortilina y uno o más ligandos de sortilina de la presente divulgación se unen a uno o más aminoácidos dentro de los restos de aminoácido 131-138, 175-181, 190-220, 199­ 220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207, 207-231, 207-227, 212-221, 233-243, 237-247, 237-260, 297­ 317, 314-338, 367-391,429-443, 623-632 y/o 740-749 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81); o dentro de los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero correspondientes a los restos de aminoácido 131-138, 175-181,190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207, 207-231,207-227, 212-221,233-243, 237-247, 237-260, 297­ 317, 314-338, 367-391,429-443, 623-632 y/o 740-749 de la SEQ ID NO: 81. En algunas realizaciones, el uno o más de los otros ligandos es uno o más de proneurotrofinas, neurotensina, receptor (p75) del factor de crecimiento nervioso (NGF) de baja afinidad, proteína precursora de amiloide, lipoproteína lipasa, apolipoproteína AV, apolipoproteína, proteína asociada a receptor y/o proproteína convertasa subtilisina/kexina tipo 9.
En otras realizaciones de cualquiera de los anticuerpos anti-sortilina, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que inhiben (por ejemplo, bloquean) la interacción entre la sortilina y uno o más ligandos de sortilina de la presente divulgación se unen a uno o más aminoácidos de los restos de aminoácido His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phel98, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595 y/o Glu700 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81); o de los restos de aminoácido de una sortilina de mamífero correspondientes a uno o más restos de aminoácido His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phel98, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595 y/o Glu700 de la SEQ ID NO: 81). En algunas realizaciones, el uno o más de los otros ligandos es uno o más de proneurotrofinas, neurotensina, receptor (p75) del factor de crecimiento nervioso (NGF) de baja afinidad, proteína precursora de amiloide, lipoproteína lipasa, apolipoproteína AV, apolipoproteína, proteína asociada a receptor y/o proproteína convertasa subtilisina/kexina tipo 9.
Anticuerpos de sortilina
Ciertos aspectos de la presente divulgación se refieren a anticuerpos anti-sortilina que comprenden una o más características funcionales mejoradas y/o potenciadas. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una o más características funcionales mejoradas y/o potenciadas en relación con un anticuerpo anti-sortilina, S-60, que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera como se describe en el documento WO2016164637. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una afinidad por la sortilina (por ejemplo, la sortilina humana) que es mayor que la de un anticuerpo anti-sortilina de control (por ejemplo, un anticuerpo anti-sortilina de control que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación disminuyen los niveles celulares (p. ej., los niveles en la superficie celular) de sortilina en mayor grado y con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es menor que la de un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina de control que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación mejoran la reducción máxima de los niveles de sortilina en la superficie celular en relación con un anticuerpo anti-sortilina que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación aumentan la secreción de progranulina (PGRN) extracelular en relación con un anticuerpo anti-sortilina que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación bloquean la unión de PGRN a la sortilina en mayor grado y con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es menor que la de un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina de control que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación mejoran el bloqueo máximo de la unión de PGRN a la sortilina en relación con un anticuerpo anti-sortilina que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60.
También se contemplan en el presente documento anticuerpos anti-sortilina con diferentes variantes de Fc que muestran una o más características funcionales mejoradas y/o potenciadas en relación con un anticuerpo anti-sortilina que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60, incluida la disminución de la concentración eficaz semimáxima (CE50) para reducir los niveles de sortilina en la superficie celular, mejora de la reducción máxima de los niveles de sortilina en la superficie celular, aumento de la secreción extracelular de PGRN, disminución de la concentración eficaz semimáxima (CE50) para bloquear la unión de PGRN a la sortilina y mejora del bloqueo máximo de la unión de PGRN a la sortilina.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es un anticuerpo humano, un anticuerpo biespecífico, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo multivalente, un anticuerpo conjugado o un anticuerpo quimérico.
En una realización preferida, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es un anticuerpo monoclonal.
Unión de anticuerpos anti-sortilina, epítopo
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una proteína sortilina de la presente divulgación y/o variantes naturales. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una proteína sortilina, en donde la proteína sortilina es una proteína humana. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una proteína sortilina, en donde la proteína sortilina es una proteína de tipo silvestre. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una proteína sortilina, en donde la proteína sortilina es una variante de origen natural.
En determinadas realizaciones preferidas, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen específicamente a una proteína sortilina humana.
Ciertos aspectos de la presente divulgación proporcionan anticuerpos anti-sortilina que se unen a un epítopo discontinuo de sortilina. En algunas realizaciones, el epítopo discontinuo de sortilina comprende dos o más péptidos, tres o más péptidos, cuatro o más péptidos, cinco o más péptidos, seis o más péptidos, siete o más péptidos, ocho o más péptidos, nueve o más péptidos, o 10 o más péptidos. En algunas realizaciones, cada uno de los péptidos comprende cinco o más, seis o más, siete o más, ocho o más, nueve o más, 10 o más, 11 o más, 12 o más, 13 o más, 14 o más, 15 o más, 16 o más, 17 o más, 18 o más, 19 o más, 20 o más, 21 o más, 22 o más, 23 o más, 24 o más, 25 o más, 26 o más, 27 o más, 28 o más, 29 o más, o 30 o más restos de aminoácido de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 81; o cinco o más, seis o más, siete o más, ocho o más, nueve o más, 10 o más, 11 o más, 12 o más, 13 o más, 14 o más, 15 o más, 16 o más, 17 o más, 18 o más, 19 o más, 20 o más, 21 o más, 22 o más, 23 o más, 24 o más, 25 o más, 26 o más, 27 o más, 28 o más, 29 o más, o 30 o más restos de aminoácido en una proteína sortilina de mamífero correspondiente a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 81. Otros aspectos de la presente divulgación proporcionan anticuerpos anti-sortilina que se unen a un epítopo conformacional de sortilina.
Ciertos aspectos de la presente divulgación proporcionan anticuerpos anti-sortilina que se unen a uno o más aminoácidos dentro de los restos de aminoácido 207-231 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81); o dentro de los restos de aminoácido en una sortilina de mamífero correspondientes a los restos de aminoácido 207-231 de la SEQ ID NO: 81. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina se unen a uno o más aminoácidos de los restos de aminoácido Thr218, Tyr222, Ser223 y/o Ser227 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81); o de los restos de aminoácido en una sortilina de mamífero correspondientes a los restos de aminoácido Thr218, Tyr222, Ser223 y/o Ser227 de la SEQ ID NO: 81). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina se unen a uno o más aminoácidos de los restos de aminoácido F105, L108, R109, G110, I537, F569, E590, F592, L593, S595 y/o W597 de la sortilina humana (SEQ ID NO: 81); o de los restos de aminoácido en una sortilina de mamífero correspondientes a los restos de aminoácido F105, L108, R109, G110, I537, F569, E590, F592, L593, S595 y/o W597 de la SEQ ID NO: 81). Otros aspectos de la presente divulgación proporcionan anticuerpos anti-sortilina que se unen a un epítopo que tiene restos de aminoácido (S/T)-X-(D/N)-X-X-X-X-(W/F/Y), donde X representa cualquier aminoácido (SeQ ID NO: 84).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una proteína sortilina de la presente divulgación expresada en la superficie celular y los anticuerpos desnudos inhiben la interacción (por ejemplo, la unión) entre la proteína sortilina y una proteína seleccionada de progranulina (PGRN), una proneurotrofina, una neurotrofina, proneurotrofina-3, neurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, neurotrofina-4/5, precursor de factor de crecimiento nervioso (Pro-NGF), factor de crecimiento nervioso (NGF), precursor de factor neurotrófico derivado del cerebro (pro-BDNF), factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sortpro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE), PCSK9 y proteína asociada a receptor (RAP). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una proteína sortilina de la presente divulgación expresada en la superficie celular y los anticuerpos desnudos inhiben la interacción (por ejemplo, la unión) entre la proteína sortilina y PGRN.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que se unen a una proteína sortilina de la presente divulgación inhiben la interacción (por ejemplo, la unión) entre la proteína sortilina y la progranulina, una proneurotrofina, una neurotrofina, proneurotrofina-3, neurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, neurotrofina-4/5, precursor de factor de crecimiento nervioso (Pro-NGF), factor de crecimiento nervioso (NGF), precursor de factor neurotrófico derivado del cerebro (pro-BDNF), factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sort-pro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE), PCSK9 y la proteína asociada a receptor (RAP) al reducir los niveles eficaces de sortilina que está disponible para interactuar con estas proteínas, ya sea en la superficie celular o dentro de la célula.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que se unen a una proteína sortilina de la presente divulgación inhiben la interacción (por ejemplo, la unión) entre la proteína sortilina y la progranulina, una proneurotrofina, una neurotrofina, proneurotrofina-3, neurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, neurotrofina-4/5, precursor de factor de crecimiento nervioso (Pro-NGF), factor de crecimiento nervioso (NGF), precursor de factor neurotrófico derivado del cerebro (pro-BDNF), factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sort-pro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE), PCSK9 y proteína asociada a receptor (RAP) al inducir la degradación de la sortilina.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una sortilina humana, o a un homólogo de la misma, incluyendo, aunque no de forma limitativa, una proteína sortilina de mamífero, o una proteína sortilina de primate no humano. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen específicamente a la sortilina humana. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a la sortilina humana y no reaccionan de forma cruzada con los ortólogos u homólogos de sortilina de otras especies.
Unión competitiva de anticuerpos anti-sortilina
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación inhiben de forma competitiva la unión de al menos otro anticuerpo anti-sortilina seleccionado de cualquiera de los anticuerpos indicados en las T ablas 1 -29. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación inhiben de forma competitiva la unión de al menos un anticuerpo seleccionado entre: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; y cualquier combinación de los mismos.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación compite con uno o más anticuerpos anti-sortilina seleccionados de: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 y cualquier combinación de los mismos, por la unión a sortilina cuando el anticuerpo anti-sortilina reduce la unión de uno o más anticuerpos seleccionados de: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; y cualquier combinación de los mismos con la sortilina en una cantidad que varía de aproximadamente el 50 % al 100 %, en comparación con la unión a sortilina en ausencia del anticuerpo anti-sortilina.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación compite con uno o más anticuerpos anti-sortilina seleccionados de: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, y cualquier combinación de los mismos, por la unión a sortilina cuando el anticuerpo anti-sortilina reduce la unión de uno o más anticuerpos seleccionados de: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; y cualquier combinación de los mismos a sortilina en al menos un 50 %, al menos un 55 %, en al menos un 60 %, al menos un 65 %, al menos un 70 %, al menos un 75 %, al menos un 80 %, al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 95 % o un 100 %, en comparación con la unión a sortilina en ausencia del anticuerpo anti-sortilina.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación que reduce la unión de uno o más anticuerpos seleccionados de: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14
[N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, y cualquier combinación de los mismos, con la sortilina en un 100 % indica que el anticuerpo anti-sortilina bloquea de forma prácticamente completa la unión de uno o más anticuerpos seleccionados de S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, y cualquier combinación de los mismos, con la sortilina. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina y el uno o más anticuerpos seleccionados de S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, y cualquier combinación de los mismos, están presentes en una cantidad que corresponde a una relación de 10:1, relación de 9:1, relación de 8:1, relación de 7:1, relación de 6:1, relación de 5:1, relación de 4:1, relación de 3:1, relación de 2:1, relación de 1:1, relación de 0,75:1, relación de 0,5:1, relación de 0,25:1, relación de 0,1:1, relación de 0,075:1, relación de 0,050:1, relación de 0,025:1, relación de 0,01:1, relación de 0,0075:, relación de 0,0050:1, relación de 0,0025:1, relación de 0,001:, relación de 0,00075:1, relación de 0,00050:1, relación de 0,00025:1, relación de 0,0001:, relación de 1:10, relación de 1:9, relación de 1:8, relación de 1:7, relación de 1:6, relación de 1:5, relación de 1:4, relación de 1:3, relación de 1:2, relación de 1:0,75, relación de 1:0,5, relación de 1:0,25, relación de 1:0,1, relación de 1:0,075, relación de 1:0,050, relación de 1:0,025, relación de 1:0,01, relación de 1:0,0075, relación de 1:0,0050, relación de 1:0,0025, relación de 1:0,001, relación de 1:0,00075, relación de 1:0,00050, relación de 1:0,00025, o relación de 1:0,0001 entre anticuerpo antisortilina y uno o más anticuerpos seleccionados de S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, y cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina está presente en exceso en una cantidad que varía de aproximadamente 1,5 veces a 100 veces, o más de 100 veces en comparación con la cantidad del uno o más anticuerpos seleccionados de S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, y cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina está presente en una cantidad que es aproximadamente un exceso de 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 25 veces, 30 veces, 35 veces, 40 veces, 45 veces, 50 veces, 55 veces, 60 veces, 65 veces, 70 veces, 75 veces, 80 veces, 85 veces, 90 veces, 95 veces o 100 veces en comparación con la cantidad del uno o más anticuerpos seleccionados de S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, y cualquier combinación de los mismos.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a un epítopo de la sortilina humana que es el mismo o coincide parcialmente con el epítopo de sortilina al que se une al menos un anticuerpo seleccionado de cualquiera de los anticuerpos indicados en las T ablas 1-29. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a un epítopo de la sortilina humana que es el mismo o coincide parcialmente con el epítopo de sortilina al que se une al menos un anticuerpo seleccionado de: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; y cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen esencialmente al mismo epítopo de sortilina al que se une al menos un anticuerpo seleccionado de cualquiera de los anticuerpos indicados en las Tablas 1-29. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen esencialmente al mismo epítopo de sortilina al que se une al menos un anticuerpo seleccionado de: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; y cualquier combinación de los mismos. Se proporcionan métodos detallados para mapear un epítopo al que se une un anticuerpo en Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", en Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
Puede utilizarse cualquier ensayo de competición adecuado o ensayo de unión a sortilina conocido en la técnica, tal como el análisis BIAcore, ensayos ELISA o citometría de flujo, para determinar si un anticuerpo anti-sortilina compite con uno o más anticuerpos seleccionados de: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y S-60-9 (descrito en el documento WO2016164637); o S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; y cualquier combinación de los mismos por la unión a la sortilina. En un ensayo de competición ilustrativo, se incuban sortilina inmovilizada o células que expresan sortilina en la superficie celular en una solución que comprende un primer anticuerpo marcado que se une a la sortilina (p. ej., humana o de primate no humano) y un segundo anticuerpo no marcado cuya capacidad para competir con el primer anticuerpo por la unión a la sortilina se está ensayando. El segundo anticuerpo puede estar presente en un sobrenadante de hibridoma. Como control, se incuban sortilina inmovilizada o células que expresan sortilina en una solución que comprende el primer anticuerpo marcado pero no el segundo anticuerpo no marcado. Después de la incubación en condiciones que permiten la unión del primer anticuerpo a la sortilina, se elimina el exceso de anticuerpo no unido y se mide la cantidad de marcador asociado con sortilina inmovilizada o con células que expresan sortilina. Si la cantidad de marcador asociado con sortilina inmovilizada o con células que expresan sortilina se encuentra sustancialmente reducida en la muestra de ensayo con respecto a la muestra del control, entonces esto indica que el segundo anticuerpo está compitiendo con el primer anticuerpo por la unión a la sortilina. Véase, Harlow y Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual cáp. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación compite con un anticuerpo que comprende el dominio variable de cadena pesada y el dominio variable de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19, S-60-24, y cualquier combinación de los mismos por la unión a la sortilina.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación se une prácticamente al mismo epítopo de sortilina que un anticuerpo que comprende el dominio variable de cadena pesada y el dominio variable de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19 e S-60-24.
Otros anticuerpos anti-sortilina adicionales, por ejemplo, anticuerpos que se unen específicamente a una proteína sortilina de la presente divulgación, pueden identificarse, explorarse o caracterizarse para determinar sus propiedades fisicoquímicas y/o sus actividades biológicas mediante diversos ensayos conocidos en la técnica.
Regiones variables de cadena ligera y cadena pesada de anticuerpo anti-sortilina
A. HVR de cadena pesada
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena pesada que comprende uno o más (por ejemplo, una o más, dos o más, o las tres) HVR seleccionadas de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 (como se muestra en las Tablas 14-16). En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende una HVR-H1, una HVR-H2 y una HVR-H3 (como se muestra en Tablas 14-16).
En algunas realizaciones, la HVR-H1 comprende una secuencia de YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1). En algunas realizaciones, la HVR-H2 comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula I: TIYHSGSTYYNPSLx -iS (SEQ ID NO: 4), en donde X1 es K o E. En algunas realizaciones, la HVR-H2 comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 2-3. En algunas realizaciones, la HVR-H3 comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula II: ARQGSIX1QGYYGMDV (SEQ ID NO: 7). En algunas realizaciones, la HVR-H3 comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 5-6.
En algunas realizaciones, la HVR-H1 comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos aproximadamente un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. En algunas realizaciones, la HVR-H1 comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o deleciones en relación con una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1), pero conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4 o hasta 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 de SEQ ID NO: 1. En algunas realizaciones, la HVR-H2 comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 2-3. En algunas realizaciones, la HVR-H2 comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o deleciones relativas a una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 2-3), pero conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4 o hasta 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 seleccionada de las SEQ ID NO: 2-3. En algunas realizaciones, la HVR-H3 comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 5-6. En algunas realizaciones, la HVR-H3 comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o deleciones relativas a una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 5-6), pero conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4 o hasta 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 seleccionada de las SEQ ID NO: 5-6.
En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende un HVR-H1 que comprende una secuencia de YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), una HVR-H2 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula I y una HVR-H3 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula II.
En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende una HVR-H1 que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 1, una HVR-H2 que comprende una secuencia seleccionada de las s Eq ID NO: 2-3 y una HVR-H3 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 5-6.
En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende las HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, o cualquier combinación de los mismos (como se muestra en las Tablas 14-16).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena pesada, en donde la región variable de cadena pesada comprende uno o más de: (a) una HVR-H1 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 85 %, al menos un 86 %, al menos un 87 %, al menos un 88 %, al menos un 89 %, al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24; (b) una HVR-H2 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 85 %, al menos un 86 %, al menos un 87 %, al menos un 88 %, al menos un 89 %, al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24; y (c) una HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 85 %, al menos un 86 %, al menos un 87 %, al menos un 88 %, al menos un 89 %, al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-6013, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2) y una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6).
B. HVR de cadena ligera
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena ligera que comprende una o más (por ejemplo, una o más, dos o más, o las tres) HVR seleccionadas de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 (como se muestra en las Tablas 17-19). En algunas realizaciones, la región variable de cadena ligera comprende una HVR-L1, una HVR-L2 y una HVR-L3 (como se muestra en las Tablas 17-19).
En algunas realizaciones, la HVR-L1 comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula III: RSSQX1LLX2SX3GYNYLD (SEQ ID NO: 28), en donde X1 es S o G, X2 es R o H, y X3 es N, T, S, G, R, D, H, K, Q, Y, E, W, F, I, V, A, M o L. En algunas realizaciones, la HVR-L1 comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 8-27. En algunas realizaciones, la HVR-L1 comprende una secuencia de RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8). RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), RSSQS LLRSSGYNYLD (SEQ ID NO: 10), RSSQSLLRSGGYNYLD (SEQ ID NO: 11), RSSQSLLRSRG YNYLD (SEQ ID NO: 12), RSSQSLLRSDGYNYLD (SEQ ID NO: 13), RSSQSLLRSHGYNYLD (SEQ ID NO: 14), RSSQSLLRSKGYNYLD (SEQ ID NO: 15), RSSQSLLRSQGYNYLD (SEQ ID NO: 16), RSSQSLLRSYGYNYLD (SEQ ID NO: 17), RSSQSLLRSEGYNYLD (SEQ ID NO: 18), RSSQSLLRSWGYNYLD (SEQ ID NO: 19), RSSQSLLRSEGYNYLD (SEQ ID NO: 20), RSSQSL LRSIGYNYLD (SEQ ID NO: 21), RSSQSLLRSVGYNYLD (SEQ ID NO: 22), RSSQSLLRSAG YNYLD (SEQ ID NO: 23), RSSQSLLRSMGYNYLD (SEQ ID NO: 24), RSSQSLLRSEGYNYLD (SEQ ID NO: 25), RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 26) o RSSQGLl Rs NGYNYLD (SEQ ID NO: 27). En una realización específica, la HVR-L1 comprende una secuencia de RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8). En otra realización específica, la HVR-L1 comprende una secuencia de RSSQSLLRSTGYNYLD (SeQ ID NO: 9) (como se muestra en la Tabla 19).
En algunas realizaciones, la HVR-L2 comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula IV: LGSNRX1S (SEQ ID NO: 31), en donde X1 es A o V. En algunas realizaciones, la HVR-L2 comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 29-30.
En algunas realizaciones, la HVR-L3 comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula V: MQQQEX1PLT (SEQ ID NO: 34), en donde X1 es A o T. En algunas realizaciones, la HVR-L3 comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 32-33.
En algunas realizaciones, la HVR-L1 comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 8-27. En algunas realizaciones, la HVR-L1 comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o deleciones relativas a una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 8-27), pero conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4 o hasta 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 seleccionada de las SEQ ID NO: 8-27, En algunas realizaciones, la HVR-L2 comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 29-30. En algunas realizaciones, la HVR-L2 comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o deleciones relativas a una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 29-30), pero conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4 o hasta 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 seleccionada de las SEQ ID NO: 29-30. En algunas realizaciones, la HVR-L3 comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 32-33. En algunas realizaciones, la HVR-L3 comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o deleciones relativas a una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 32-33), pero conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4 o hasta 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 seleccionada de las SEQ ID NO: 32-33.
En algunas realizaciones, la región variable de cadena ligera comprende una HVR-L1 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula III, una HVR-L2 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula IV y una HVR-L3 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula V. En algunas realizaciones, la región variable de cadena ligera comprende una HVR-L1 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 8-27, una HVR-L2 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 29-30 y una HVR-L3 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 32-33.
En algunas realizaciones, la región variable de cadena ligera comprende la HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, o cualquier combinación de los mismos (como se muestra en las Tablas 17-19).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena ligera, en donde la región variable de cadena ligera comprende uno o más de: (a) una HVR-L1 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 85 %, al menos un 86 %, al menos un 87 %, al menos un 88 %, al menos un 89 %, al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24; (b) una HVR-L2 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 85 %, al menos un 86 %, al menos un 87 %, al menos un 88 %, al menos un 89 %, al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24; y (c) una HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 85 %, al menos un 86 %, al menos un 87 %, al menos un 88 %, al menos un 89 %, al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
C. HVR de cadena pesada y HVR de cadena ligera
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena pesada que comprende una o más (por ejemplo, una o más, dos o más, o las tres) HVR seleccionadas de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 (como se muestra en las Tablas 14-16), y una región variable de cadena ligera que comprende una o más (p. ej., una o más, dos o más, o las tres) HVR seleccionadas de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 (como se muestra en las Tablas 17-19). En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende una HVR-H1, una HVR-H2 y una HVR-H3 (como se muestra en las Tablas 14-16), y la región variable de cadena ligera comprende una HVR-L1, una HVR-L2 y una HVR-L3 (como se muestra en las tablas Tablas 17-19).
En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende una HVR-H1 que comprende una secuencia de YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), una HVR-H2 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula I y una HVR-H3 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula II, y la región variable de cadena ligera comprende una HVR-L1 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula III, una HVR-L2 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula IV y una HVR-L3 que comprende una secuencia de acuerdo con la Fórmula V. En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende una HVR-H1 que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 1, una HVR-H2 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 2-3 y una HVR-H3 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 5-6, y la región variable de cadena ligera comprende una HVR-L1 que comprende una secuencia seleccionada de las s Eq ID NO: 8-27, una HVR-L2 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 29-30 y una HVR-L3 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 32-33.
En algunos aspectos, la región variable de cadena pesada comprende una HVR-H1 que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 1, una HVR-H2 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 2-3 y una HVR-H3 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 5-6, y la región variable de cadena ligera comprende una HVR-L1 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 8-27, una HVR-L2 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 29-30, y una HVR-L3 que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 32.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada que comprende la hVr-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, o cualquier combinación de los mismos (como se muestra en las Tablas 14-16); y una región variable de cadena ligera que comprende la HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, o cualquier combinación de los mismos (como se muestra en las Tablas 17-19).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 y una región variable de cadena ligera que comprende una HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3, en donde el anticuerpo comprende la HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, hVr -L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24 (como se muestra en las Tablas 14-19).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera, en donde la región variable de cadena pesada comprende uno o más de (a) una HVR-H1 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24; (b) una HVR-H2 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %), al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24; y (c) una HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24; y en donde la región variable de cadena ligera comprende uno o más de: (a) una HVR-L1 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %), al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24; (b) una HVR-L2 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24; y (c) una HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24,
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación comprende una región variable de cadena pesada que comprende la HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), la HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2 ), la HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); y una región variable de cadena ligera que comprende la HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), la HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y la HVR-L3 que comprende el secuencia de aminoácidos MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación comprende una región variable de cadena pesada que comprende la HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), la HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2 ), la HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); y una región variable de cadena ligera que comprende la HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), la HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRVS (SEQ ID NO: 30) y la HVR-L3 que comprende el secuencia de aminoácidos MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación comprende una región variable de cadena pesada que comprende la HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), la hVr -H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLES (SEQ ID NO: 3), la HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); y una región variable de cadena ligera que comprende la HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), la HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y la HVR-L3 que comprende el secuencia de aminoácidos MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
En algunos aspectos, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación comprende una región variable de cadena pesada que comprende la HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), la HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), la HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); y una región variable de cadena ligera que comprende la HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8) , la HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y la HVR-L3 que comprende el secuencia de aminoácidos MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
En algunos aspectos, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación comprende una región variable de cadena pesada que comprende la HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), la HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), la HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); y una región variable de cadena ligera que comprende la HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9) , la HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y la HVR-L3 que comprende el secuencia de aminoácidos MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación comprende una región variable de cadena pesada que comprende la HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), la HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), la HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); y una región variable de cadena ligera que comprende la HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), la HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y la HVR-L3 que comprende el secuencia de aminoácidos MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación comprende una región variable de cadena pesada que comprende la HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), la HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2 ), la HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); y una región variable de cadena ligera que comprende la HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 26) , la HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y la HVR-L3 que comprende el secuencia de aminoácidos MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación comprende una región variable de cadena pesada que comprende la HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), la HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), la HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); y una región variable de cadena ligera que comprende la HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQGLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 27) , la HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y la HVR-L3 que comprende el secuencia de aminoácidos MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
D. Región variable de cadena pesada
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 54-56. En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 54-56. En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservativas, inserciones o deleciones relativas a una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 54-56), pero conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4, hasta 5, hasta 6, hasta 7, hasta 8, hasta 9 o hasta 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada seleccionada de las SEQ ID NO: 54-56.
En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24 (como se muestra en la Tabla 30).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena pesada que comprende una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2) y una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6).
E. Región variable de cadena ligera
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 57-80. En algunas realizaciones, la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 57-80. En algunas realizaciones, la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservativas, inserciones o deleciones relativas a una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 57-80), pero conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4, hasta 5, hasta 6, hasta 7, hasta 8, hasta 9 o hasta 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NO: 57-80.
En algunas realizaciones, una región variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En algunas realizaciones, una región variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 60.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24 (como se muestra en la Tabla 31).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena ligera que comprende una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), una hVr -L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación incluyen una región variable de cadena ligera que comprende una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), una h Vr -L2 que comprende la secuencia de aminoácidos LGSNRAS (SEQ ID NO: 29) y una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
F. Región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera
En algunos aspectos, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación incluye una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 54­ 56; y/o una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 57-80. En algunas realizaciones, la región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 54-56, y la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 57-80. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación incluye una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservativas, inserciones o deleciones relativas a una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 54-56), y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservativas, inserciones o deleciones relativas a una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 57-80), pero conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4, hasta 5, hasta 6, hasta 7, hasta 8, hasta 9 o hasta 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada seleccionada de las SEQ ID NO: 54-56; y hasta 1, hasta 2, hasta 3, hasta 4, hasta 5, hasta 6, hasta 7, hasta 8, hasta 9 o hasta 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NO: 57-80.
En algunos aspectos, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación incluye una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 54­ 56; y/o una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 57-58, 60-78 y 80.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación se une a una proteína sortilina, en donde el anticuerpo incluye una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 54 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 57; una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 54 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 58; una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 54 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 59; una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 55 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 57; una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 55 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 58; una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 57; una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 77; una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 78; una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 54 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 79; o una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 80.
En un aspecto, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación incluye una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 57.
En un aspecto, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación incluye una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la s Eq ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 60.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24 (como se muestra en la Tabla 30) y una región variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24 (como se muestra en la Tabla 31).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEQ ID NO: 56 y 60. En algunas realizaciones, el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada de S-60-15 [N33 (wt)] (como se muestra en la Tabla 30) y una región variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15 [N33 (wt)] (como se muestra en la Tabla 31). En algunas realizaciones, el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada de S-60-15.1 [N33T] (como se muestra en la Tabla 30) y una región variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15.1 [N33T] (como se muestra en la Tabla 31).
Anticuerpos anti-sortilina ilustrativos
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo anti-sortilina monoclonal que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado de S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo anti-sortilina monoclonal que comprende la cadena pesada y la cadena ligera de un anticuerpo seleccionado de S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24.
(1) S-60-10
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-10 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-10 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-10 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-10. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-10 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-10. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-10 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-10 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-10 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VH del anticuerpo S-60-10 o de SEQ ID NO: 54, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-10, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-10 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-10. En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-10 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-10 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-10 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-10 o de SEQ ID NO: 57, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-10, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-10 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-10.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 o SEQ ID NO: 106. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 139. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 o SEQ ID NO: 106 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 139.
(2) S-60-11
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-11 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-11 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 %) o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-11 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-11. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-11 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-11. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-11 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-11 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-11 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia VH del anticuerpo S-60-11 o de SEQ ID NO: 54, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-11, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-11 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-11. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 %) o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-11 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58 y contiene sustituciones (p. ej.), sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-11 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-11 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-11 o de SEQ ID NO: 58, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-11, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-11 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-11.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 o SEQ ID NO: 106. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 140. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 o SEQ ID NO: 106 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 140.
(3) S-60-12
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 %, de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-12 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos 99 % o 100 % de identidad, con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-12 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 59. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-12 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-12. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-12 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 59, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-12. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-12 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-12 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-12 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR), En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VH del anticuerpo S-60-12 o de SEQ ID NO: 54, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-12, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-12 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-12. En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-12 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 59 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-12 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 59. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-12 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 59. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-12 o de SEQ ID NO: 59, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-12, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-12 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-12.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 o SEQ ID NO: 106. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 141. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 o SEQ ID NO: 106 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.
(4) S-60-13
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-13 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-13 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-13 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-13. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-13 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-13. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-13 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-13 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-13 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VH del anticuerpo S-60-13 o de SEQ ID NO: 55, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-13, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-13 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-13. En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-13 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-13 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-13 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-13 o de SEQ ID NO: 57, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-13, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-13 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-13.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 o SEQ ID NO: 136. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 139. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 o SEQ ID NO: 136 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 139.
(5) S-60-14
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-14 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-14 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-14 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-14. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-14 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-14. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %), al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-14 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-14 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-14 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 55. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VH del anticuerpo S-60-14 o de SEQ ID NO: 55, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-14, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-14 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-14. En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-14 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-14 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-14 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-14 o de SEQ ID NO: 58, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-14, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-14 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-14.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 o SEQ ID NO: 136. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 140. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 o SEQ ID NO: 136 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 140.
(6) S-60-15
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-15. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-15. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VH del anticuerpo S-60-15 o de SEQ ID NO: 56, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-15, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-15 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-15. En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-15 o de SEQ ID NO: 57, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-15, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-15 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-6015.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 139. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 139.
(7) S-60-15.1
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15.1 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15.1 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 60. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15.1 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-15.1. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15.1 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 60, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-15.1. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15.1 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15.1 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-15.1 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia VH del anticuerpo S-60-15.1 o de SEQ ID NO: 56, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-15.1, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-15.1 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-15.1. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15.1 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 60 y contiene sustituciones (p. ej.), sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15.1 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 60. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-15.1 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 60. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia VL del anticuerpo S-60-15.1 o de SEQ ID NO: 60, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-15.1, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-15.1 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-15.1.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 142. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 142.
(8) S-60-16
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-16 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-16 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-16 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-16. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-16 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-16. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-16 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-16 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-16 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VH del anticuerpo S-60-16 o de SEQ ID NO: 56, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-16, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-16 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo 5-60-16, En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-16 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-16 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-16 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-16 o de SEQ ID NO: 77, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-16, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-16 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-16.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 131. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 131.
(9) S-60-18
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-18 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-18 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 78. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-18 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-18. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-18 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 78, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-18. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-18 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-18 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-18 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VH del anticuerpo S-60-18 o de SEQ ID NO: 56, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-18, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-18 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-18. En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-18 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 78 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-18 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 78. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-18 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 78. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-18 o de SEQ ID NO: 78, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-18, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-18 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-18.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 132. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 132.
(10) S-60-19
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-19 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54; y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-19 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 79. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-19 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-19. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-19 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 79, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-19. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-19 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-19 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-19 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VH del anticuerpo S-60-19 o de SEQ ID NO: 54, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-19, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-19 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-19. En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-19 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 79 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-19 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 79. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-19 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 79. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-19 o de SEQ ID NO: 79, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-19, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-19 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-19.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 o SEQ ID NO: 106. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 133. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 105 o SEQ ID NO: 106 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 133.
(11) S-60-24
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-24 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56: y/o el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-24 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 80. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-24 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56, en donde el dominio variable de cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 del anticuerpo S-60-24. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-24 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 80, en donde el dominio variable de cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3 del anticuerpo S-60-24. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-24 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-24 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada del anticuerpo S-60-24 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 56. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VH del anticuerpo S-60-24 o de SEQ ID NO: 56, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-H1 del anticuerpo S-60-24, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-H2 del anticuerpo S-60-24 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-H3 del anticuerpo S-60-24. En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación comprenden una secuencia de dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 % o un 100 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-24 o con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 80 y contiene sustituciones (p. ej., sustituciones conservativas, inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia), pero el anticuerpo anti-sortilina que comprende esta secuencia conserva la capacidad de unirse a la sortilina. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 10 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-24 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 80. En determinadas realizaciones, un total de 1 a 5 aminoácidos se han sustituido, insertado y/o eliminado en la secuencia de aminoácidos del dominio variable de cadena ligera del anticuerpo S-60-24 o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 80. En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en regiones que están fuera de las HVR (es decir, en las regiones FR). En algunas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se producen en las regiones FR. Opcionalmente, el anticuerpo anti-sortilina comprende la secuencia de VL del anticuerpo S-60-24 o de SEQ ID NO: 80, incluyendo modificaciones posteriores a la traducción de esta secuencia. En una realización particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas de: (a) la secuencia de aminoácidos de HVR-L1 del anticuerpo S-60-24, (b) la secuencia de aminoácidos de HVR-L2 del anticuerpo S-60-24 y (c) la secuencia de aminoácidos de HVR-L3 del anticuerpo S-60-24.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 134. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 o SEQ ID NO: 138 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 134.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación se une prácticamente al mismo epítopo de sortilina que un anticuerpo que comprende el dominio variable de cadena pesada y el dominio variable de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19 y S-60-24.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-10. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-10. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-10. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-10. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-10.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-11. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-11. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-11. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-11. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-11.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-12. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-12. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-12. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-12. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-12.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-13. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-13. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-13. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-13. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-13.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-14. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-14. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-14. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-14. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-14.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-15. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-15. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-15. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-15. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-15.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-15.1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-15.1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-15.1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-15.1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-15.1.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-16. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-16. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-16. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-16. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-16.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-18. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-18. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-18. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-18. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-18.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-19. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-19. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-19. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-19. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-19.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es el anticuerpo anti-sortilina monoclonal S-60-24. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que se une esencialmente al mismo epítopo de sortilina que S-60-24. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal S-60-24. En algunas realizaciones, el anticuerpo antisortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-24. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo aislado que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal S-60-24.
En determinadas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo antagonista. En determinadas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina es un anticuerpo agonista. En algunas realizaciones, los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación son de la clase IgG, la clase IgM o la clase IgA. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación son de la clase IgG y tienen un isotipo IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4.
Otros anticuerpos anti-sortilina adicionales, p. ej., anticuerpos que se unen específicamente a una proteína sortilina de la presente divulgación, pueden identificarse, explorarse o caracterizarse para determinar sus propiedades fisicoquímicas y/o sus actividades biológicas mediante diversos ensayos conocidos en la técnica.
Determinados aspectos de la presente divulgación se refieren al uso de dos o más anticuerpos anti-sortilina que, cuando se utilizan juntos, presentan efectos aditivos o sinérgicos, en comparación con la utilización de un único anticuerpo anti-sortilina correspondiente.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es un fragmento de anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es un fragmento de anticuerpo que se une a una o más proteínas humanas seleccionadas del grupo que consiste en sortilina humana, una variante natural de sortilina humana y una variante de enfermedad de sortilina humana.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es un fragmento de anticuerpo, en donde el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv o scFv.
Regiones marco de anticuerpos
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una o más (por ejemplo, una o más, dos o más, tres o más, o las cuatro) regiones marco seleccionadas de VH FR1, VH FR2, Vh FR3 y VH FR4 ( como se muestra en las Tablas 20-23). En algunas realizaciones, la VH FR1 comprende una secuencia de QVQLq Es GPGLVKPSETLSL TCAVSG (SEQ iD NO: 35). En algunas realizaciones, la VH FR2 comprende una secuencia de WIRQPPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 36). En algunas realizaciones, la VH FR3 comprende la secuencia de acuerdo con la Fórmula VI: X1VTISVDTSKNQFSLX2LSSVTAADTAVYYC (SEQ ID NO: 39), en donde X1 es Q o R, y X2 es E o K. En algunas realizaciones, la VH FR3 comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 37-38. En algunas realizaciones, la VH FR4 comprende una secuencia de WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 40). En algunas realizaciones, un anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende una VH FR1 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 35, una VH FR2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 36, una VH FR3 de acuerdo con la Fórmula VI, y una VH FR4 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 40.
En algunas realizaciones, un anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende una VH FR1 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 35, una VH FR2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 36, una VH FR3 que comprende la secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 37-38, y una VH FR4 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 40.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una Vh FR1, una VH FR2, una VH FR3 y VH FR4 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.
16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24 (como se muestra en las Tablas 20-23).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena ligera que comprende una o más (por ejemplo, una o más, dos o más, tres o más, o las cuatro) regiones marco seleccionadas de VL FR1, VL FR2, VL FR3 y VL FR4 ( como se muestra en las Tablas 24-27). En algunas realizaciones, la VL FR1 comprende una secuencia de acuerdo con la fórmula VII: DIVMTQSPLSLPVTPGX1X2ASISC (SEQ ID NO: 44), en donde X1 es E o G, y X2 es P o S. En algunas realizaciones, VL FR1 comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 41-43. En algunas realizaciones, la VL FR2 comprende una secuencia de acuerdo con la fórmula VIII: WYLQKPGQX1PQLLIY (SEQ ID NO: 47), en donde X1 es S o P. En algunas realizaciones, VL FR2 comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 45-46. En algunas realizaciones, la VL FR3 comprende una secuencia de acuerdo con la fórmula IX: GVPDRX1SGSGSGT DFTLKISRX2EAEDVGX3YYC (SEQ ID NO: 52), en donde X1 es F o L, X2 es A o V, y X3 es V o A. En algunas realizaciones, VL FR3 comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 48-51. En algunas realizaciones, la VL FR4 comprende una secuencia de FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 53). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena ligera que comprende una VL FR1 que comprende la secuencia de acuerdo con la Fórmula VII, una VL FR2 que comprende la secuencia de acuerdo con la Fórmula VIII, una VL FR3 que comprende la secuencia de acuerdo con la Fórmula IX y una VL FR4 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 53.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena ligera que comprende una VL FR1 que comprende la secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 41-43, una VL FR2 que comprende la secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 45-46, una VL FR3 que comprende la secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 48-51, y una VL FR4 que comprende la secuencia de s Eq ID NO: 53.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena ligera que comprende una VL FR1, una VL FR2, una VL FR3 y VL FR4 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24 (como se muestra en las Tablas 24-27).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una o más (por ejemplo, una o más, dos o más, tres o más, o las cuatro) regiones marco seleccionadas de VH FR1, VH FR2, VH FR3 y VH FR4 (como se muestra en las Tablas 20-23), y una región variable de cadena ligera que comprende una o más (p. ej., una o más, dos o más, tres o más, o las cuatro) regiones marco seleccionadas de VL FR1, VL FR2, VL FR3 y VL FR4 ( como se muestra en las Tablas 24-27). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una
VH FR1 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 35, una VH FR2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 36, una VH FR3 de acuerdo con la Fórmula VI y una VH FR4 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 4t1; y una región variable de cadena ligera que comprende un VL FR1 que comprende la secuencia de acuerdo con la Fórmula VII, una VL FR2 que comprende la secuencia de acuerdo con la Fórmula VIII, una VL FR3 que comprende la secuencia de acuerdo con la Fórmula IX y una VL FR4 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 53. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una VH FR1 que comprende las secuencias de SEQ ID NO: 35, una VH FR2 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 36, una VH FR3 que comprende la secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 37-38, y una VH FR4 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 40; una región variable de cadena ligera que comprende una VL FR1 que comprende la secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 41-43, una VL FR2 que comprende la secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 45-46, una VL FR3 que comprende la secuencia seleccionada de las SEQ ID NO: 48-51, y una VL FR4 que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 53.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una Vh FR1, una VH FR2, una VH FR3 y VH FR4 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24 (como se muestra en las Tablas 20-23), y una región variable de cadena ligera que comprende una VL FR1, una VL FR2, una VL FR3 y VL FR4 del anticuerpo S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 o S-60-24 (como se muestra en las Tablas 24-27).
Actividades de anticuerpos anti-sortilina
En ciertos aspectos de cualquiera de los anticuerpos anti-sortilina, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden inhibir una o más actividades de una proteína sortilina, incluyendo, pero no de forma limitativa, la disminución de los niveles celulares de sortilina (p. ej., niveles de sortilina en la superficie celular, niveles intracelulares de sortilina y/o niveles totales de sortilina); el aumento de los niveles de progranulina (p. ej., niveles extracelulares de progranulina y/o niveles celulares de progranulina); y la inhibición de la interacción (p. ej., unión) entre la progranulina y la sortilina. Como se contempla en el presente documento, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden inhibir otras actividades adicionales de una proteína sortilina, incluyendo, aunque no de forma limitativa, la inhibición de la interacción (p. ej., la unión) con una o más de las proneurotrofinas de la presente divulgación (proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, etc.), neurotrofinas de la presente divulgación (neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sort-pro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína Av (APOA5), apolipoproteína E (APOE) y proteína asociada a receptor (RAP), la disminución de la secreción de PCSK9, la disminución de la producción de péptido beta amiloide.
En determinadas realizaciones, la presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-sortilina, en donde (a) el anticuerpo anti-sortilina aumenta los niveles extracelulares de progranulina, disminuye los niveles celulares de sortilina, inhibe la interacción entre la sortilina y la progranulina, o cualquier combinación de los mismos; (b) el anticuerpo antisortilina disminuye los niveles de sortilina en la superficie celular, aumenta los niveles extracelulares de progranulina, inhibe la interacción entre la sortilina y la progranulina, o cualquier combinación de los mismos; (c) el anticuerpo antisortilina disminuye los niveles de sortilina en la superficie celular, disminuye los niveles intracelulares de sortilina, disminuye los niveles totales de sortilina, o cualquier combinación de los mismos; (d) el anticuerpo anti-sortilina induce la degradación de la sortilina, la escisión de la sortilina, la internalización de la sortilina, la regulación negativa de la sortilina, o cualquier combinación de los mismos; (e) el anticuerpo anti-sortilina reduce los niveles celulares de sortilina e inhibe la interacción entre la sortilina y la progranulina; (f) el anticuerpo anti-sortilina reduce los niveles celulares de sortilina y aumenta los niveles celulares de progranulina; y/o (g) el anticuerpo anti-sortilina aumenta la concentración eficaz de progranulina.
En determinadas realizaciones, la presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-sortilina, en donde el anticuerpo anti-sortilina disminuye los niveles de sortilina en la superficie celular, aumenta los niveles extracelulares de progranulina, inhibe la interacción entre la sortilina y la progranulina, o cualquier combinación de los mismos.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación (a) reduce los niveles de sortilina en la superficie celular con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es menor de 150 pM, medido mediante citometría de flujo; (b) reduce los niveles de sortilina en la superficie celular en más de aproximadamente un 50 % a una concentración 1,25 nM de IgG, en más de un 80 % a una concentración 0,63 nM de IgG, o en más de un 69 % a una concentración 150 nM de IgG en relación con el control, medido mediante citometría de flujo; aumenta la secreción de progranulina en más de aproximadamente 1,13 veces con respecto al control a una concentración 0,63 nM de IgG, o en más de aproximadamente 1,22 veces con respecto al control a una concentración 50 nM de IgG, medido por ELISA estándar; bloquea la unión de la progranulina a la sortilina con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es inferior a 0,325 nM, medido mediante citometría de flujo; (e) bloquea la unión de la progranulina a la sortilina en más de aproximadamente un 88 % a una concentración 50 nM de IgG, o en más de aproximadamente un 27,5 % a una concentración 150 nM de IgG en relación con el control, medido mediante citometría de flujo; o (f) cualquier combinación de los mismos (véanse, p. ej., los Ejemplos 2-4).
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación (a) reduce los niveles de sortilina en la superficie celular con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es menor de 681 pM, medido mediante citometría de flujo; (b) reduce los niveles de sortilina en la superficie celular en más de aproximadamente un 40 % a una concentración 1,25 nM de IgG, en más de un 29 % a una concentración 0,6 nM de IgG, o en más de un 62 % a una concentración 150 nM de IgG en relación con el control, medido mediante citometría de flujo; (c) aumenta la secreción de progranulina en más de aproximadamente 1,11 veces con respecto al control a una concentración 0,63 nM de IgG, o en más de aproximadamente 1,75 veces con respecto al control a una concentración 50 nM de IgG, medido por ELISA estándar; (d) bloquea la unión de la progranulina a la sortilina con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es inferior a 0,751 nM, medido mediante citometría de flujo; (e) bloquea la unión de la progranulina a la sortilina en más de aproximadamente un 90 % a una concentración 50 nM de IgG, o en más de aproximadamente un 95 % a una concentración 150 nM de IgG en relación con el control, medido mediante citometría de flujo; o (f) cualquier combinación de los mismos (véanse, p. ej., los Ejemplos 2-4).
Disminución de los niveles de sortilina
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una proteína sortilina de la presente divulgación expresada en la superficie de una célula y modulan (p. ej., inducen o inhiben) una o más actividades de la sortilina de la presente divulgación después de unirse a la proteína sortilina expresada en la superficie,
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación disminuyen los niveles celulares de sortilina in vitro. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden disminuir los niveles celulares de sortilina in vivo (p. ej., en el cerebro y/u órganos periféricos de un individuo). En algunas realizaciones, una disminución en los niveles celulares de sortilina comprende una disminución en los niveles de sortilina en la superficie celular. Como se utiliza en el presente documento, un anticuerpo anti-sortilina disminuye los niveles de sortilina en la superficie celular si induce una disminución en las concentraciones de anticuerpos saturantes (por ejemplo, 0,6 nM, 0,63 nM, 1,25 nM, 50 nM o 150 nM) y/o en relación con un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60) en los niveles de sortilina en la superficie celular medidos por cualquier ensayo basado en células in vitro o modelo adecuado in vivo descrito en el presente documento o conocido en la técnica. En algunas realizaciones, una disminución en los niveles celulares de sortilina comprende una disminución en los niveles intracelulares de sortilina. Como se contempla en el presente documento, un anticuerpo anti-sortilina reduce los niveles intracelulares de sortilina si induce una disminución en las concentraciones de anticuerpos saturantes y/o en relación con un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60) en los niveles intracelulares de sortilina medidos por cualquier ensayo basado en células in vitro o modelo adecuado in vivo descrito en el presente documento o conocido en la técnica. En algunas realizaciones, una disminución en los niveles celulares de sortilina comprende una disminución en los niveles totales de sortilina. Como se contempla en el presente documento, un anticuerpo antisortilina reduce los niveles totales de sortilina si induce una disminución en las concentraciones de anticuerpos saturantes y/o en relación con un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60) en los niveles totales de sortilina medidos por cualquier ensayo basado en células in vitro o modelo adecuado in vivo descrito en el presente documento o conocido en la técnica.
Como se utiliza en el presente documento, los niveles de sortilina pueden referirse a los niveles de expresión del gen que codifica la sortilina; a los niveles de expresión de uno o más transcritos que codifican sortilina; a los niveles de expresión de la proteína sortilina; y/o a la cantidad de proteína sortilina presente dentro de las células y/o en la superficie celular. Cualquier método conocido en la técnica para medir los niveles de expresión génica, la transcripción, la traducción y/o la abundancia o localización de proteínas pueden usarse para determinar los niveles de sortilina.
Los niveles celulares de sortilina pueden referirse a, aunque no de forma limitativa, los niveles de sortilina en la superficie celular, niveles intracelulares de sortilina y niveles totales de sortilina. En algunas realizaciones, una disminución en los niveles celulares de sortilina comprende una disminución en los niveles de sortilina en la superficie celular. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que disminuyen los niveles celulares de sortilina (p. ej., los niveles de sortilina en la superficie celular) tienen una o más de las siguientes características: (1) inhiben o reducen una o más actividades de la sortilina; (2) la capacidad de inhibir o reducir la unión de la sortilina a uno o más de sus ligandos; (3) la capacidad de reducir la expresión de sortilina en células que expresan sortilina; (4) la capacidad de interactuar, unirse o reconocer una proteína sortilina; (5) la capacidad de interactuar específicamente o unirse a una proteína sortilina; y (6) la capacidad de tratar, mejorar o prevenir cualquier aspecto de una enfermedad o trastorno descrito o contemplado en el presente documento.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación induce la regulación negativa de la sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación induce la escisión de sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación induce la internalización de sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación induce la eliminación de sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación induce la degradación de sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación induce la desensibilización de sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación actúa como mimético de ligando para activar transitoriamente la sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación actúa como un mimético de ligando y activa transitoriamente la sortilina antes de inducir una disminución en los niveles celulares de sortilina y/o la inhibición de la interacción (p. ej., unión) entre la sortilina y uno o más ligandos de sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación actúa como un mimético de ligando y activa transitoriamente la sortilina antes de inducir la degradación de la sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación actúa como un mimético de ligando y activa transitoriamente la sortilina antes de inducir la escisión de la sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación actúa como un mimético de ligando y activa transitoriamente la sortilina antes de inducir la internalización de la sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación actúa como un mimético de ligando y activa transitoriamente la sortilina antes de inducir la eliminación de la sortilina. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación actúa como un mimético de ligando y activa transitoriamente la sortilina antes de inducir la regulación negativa de la sortilina, En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina aislado de la presente divulgación actúa como un mimético de ligando y activa transitoriamente la sortilina antes de inducir la desensibilización de la sortilina.
En determinadas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden disminuir los niveles celulares de sortilina (p. ej., los niveles de sortilina en la superficie celular, los niveles intracelulares de sortilina y/o los niveles totales de sortilina) al inducir la degradación de la sortilina. Por consiguiente, en algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación inducen la degradación de sortilina.
Los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden disminuir los niveles celulares (p. ej., niveles en la superficie celular) de sortilina con una concentración eficaz semimáxima (CE50) (p. ej., cuando se mide in vitro) en el intervalo picomolar. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es inferior a aproximadamente 680,9 pM. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es de aproximadamente 72,58 pM a aproximadamente 680,9 nM. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es de aproximadamente 103,6 pM a aproximadamente 680,9 nM. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es inferior a aproximadamente 600 pM, 500 pM, 400 pM, 300 pM, 200 pM, 100 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 1 pM o 0,5 pM.
En algunas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es inferior o igual a aproximadamente 675 pM, 650 pM, 625 pM, 600 pM, 575 pM, 550 pM, 525 pM, 500 pM, 475 pM, 450 pM, 425 pM, 400 pM, 375 pM, 350 pM, 325 pM, 300 pM, 275 pM, 250 pM, 225 pM, 200 pM, 175 pM, 150 pM, 125 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 70 pM, 60 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 9 pM, 8 pM, 7 pM, 6 pM, 5 pM, 4 pM, 3 pM, 2 pM, 1 pM o 0,5 pM.
En algunas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es inferior a aproximadamente 680,9 pM. En algunas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es mayor que aproximadamente o igual a aproximadamente 0,1 pM, 0,5 pM, 1 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 125 pM, 150 pM, 175 pM, 200 pM, 225 pM, 250 pM, 275 pM, 300 pM, 325 pM, 350 pM, 375 pM, 400 pM, 425 pM, 450 pM, 475 pM, 500 pM, 525 pM, 550 pM, 575 pM, 600 pM, 625 pM, 650 pM, 675 pM. Es decir, la CE50 del anticuerpo puede ser cualquiera de un intervalo que tenga un límite superior de aproximadamente 675 pM, 650 nM, 650 pM, 625 pM, 600 pM, 575 pM, 550 pM, 525 pM, 500 pM, 475 pM, 450 pM, 425 pM, 400 pM, 375 pM, 350 pM, 325 pM, 300 pM, 275 pM, 250 pM, 225 pM, 200 pM, 175 pM, 150 pM, 125 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 70 pM, 60 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 1 pM o 0,5 pM y un límite inferior seleccionado independientemente de aproximadamente 0,1 pM, 0,5 pM, 1 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 125 pM, 150 pM, 175 pM, 200 pM, 225 pM, 250 pM, 275 pM, 300 pM, 325 pM, 350 pM, 375 pM, 400 pM, 425 pM, 450 pM, 475 pM, 500 pM, 525 pM, 550 pM, 575 pM, 600 pM, 625 pM, 650 pM o 675 pM, en donde el límite inferior es menor que el límite superior. En algunas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es cualquiera de aproximadamente 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 15 pM, 20 pM, 25 pM, 30 pM, 35 pM, 40 pM, 45 pM, 50 pM, 55 pM, 60 pM, 65 pM, 70 pM, 75 pM, 80 pM, 85 pM, 90 pM, 95 pM, 100 pM, 105 pM, 110 pM, 115 pM, 120 pM, 125 pM, 130 pM, 135 pM, 140 pM, 145 pM, 150 pM, 155 pM, 160 pM, 165 pM, 170 pM, 175 pM, 180 pM, 185 pM, 190 pM, 195 pM o 200 pM.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación reduce los niveles de sortilina en la superficie celular con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es menor de 150 pM, medido mediante citometría de flujo. En algunas realizaciones, la CE50 de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es de aproximadamente 103,6 pM. En algunas realizaciones, la CE50 de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es de aproximadamente 72,58 pM.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación reduce los niveles de sortilina en la superficie celular en más de un 40 % a una concentración 1,25 nM de IgG o en más de un 80 % a una concentración 0,63 nM de IgG, medido mediante citometría de flujo. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación reduce los niveles de sortilina en la superficie celular en aproximadamente un 60,92 % a una concentración 1,25 nM de IgG, medido mediante citometría de flujo. En algunas realizaciones, un anticuerpo antisortilina de la presente divulgación reduce los niveles de sortilina en la superficie celular en aproximadamente un 69,3 % a una concentración 150 nM de IgG, medido mediante citometría de flujo. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación reduce los niveles de sortilina en la superficie celular en aproximadamente un 70,3 % a una concentración 150 nM de IgG, medido mediante citometría de flujo.
En la técnica se conocen diversos métodos para medir los valores de CE50 de anticuerpos, incluyendo, por ejemplo, mediante citometría de flujo (véase, p. ej., el Ejemplo 2). En algunas realizaciones, la CE50 se mide in vitro utilizando células modificadas por ingeniería genética para expresar sortilina humana. En algunas realizaciones, la CE50 se mide a una temperatura de aproximadamente 4 °C. En algunas realizaciones, la CE50 se mide a una temperatura de aproximadamente 25 °C. En algunas realizaciones, la CE50 se mide a una temperatura de aproximadamente 35 °C. En algunas realizaciones, la CE50 se mide a una temperatura de aproximadamente 37 °C. En algunas realizaciones, la CE50 se determina utilizando un anticuerpo monovalente (p. ej., un Fab) o un anticuerpo de longitud completa en forma monovalente. En algunas realizaciones, la CE50 se determina utilizando anticuerpos que contienen regiones constantes que demuestran una mayor unión al receptor de Fc. En algunas realizaciones, la CE50 se determina utilizando anticuerpos que contienen regiones constantes que demuestran una unión reducida al receptor de Fc.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen potencias más altas para reducir los niveles de sortilina en la superficie celular en relación con un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación disminuyen los niveles celulares (p. ej., los niveles en la superficie celular) de sortilina con una CE50 más baja (p. ej., medido in vitro) que un anticuerpo de control (por ejemplo, un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación disminuyen los niveles celulares (p. ej., niveles en la superficie celular) de sortilina con una CE50 que es al menos aproximadamente un 5 %, al menos aproximadamente un 10 %, al menos aproximadamente un 15 %, al menos aproximadamente un 20 %, al menos aproximadamente un 25 %, al menos aproximadamente un 30 %, al menos aproximadamente un 35 %, al menos aproximadamente un 40 %, al menos aproximadamente un 45 %, al menos aproximadamente un 50 %, al menos aproximadamente un 55 %, al menos aproximadamente un 60 %, al menos aproximadamente un 65 %, al menos aproximadamente un 70 %, al menos aproximadamente un 75 %, al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 % o al menos aproximadamente un 99 % inferior a la CE50 de un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación disminuyen los niveles celulares (p. ej., niveles en la superficie celular) de sortilina con una CE50 que es al menos aproximadamente 1 vez, al menos aproximadamente 1,1 veces, al menos aproximadamente 1,5 veces, al menos aproximadamente 2 veces, al menos aproximadamente 3 veces, al menos aproximadamente 4 veces, al menos aproximadamente 5 veces, al menos aproximadamente 6 veces, al menos aproximadamente 7 veces, al menos aproximadamente 8 veces, al menos aproximadamente 9 veces, al menos aproximadamente 10 veces, al menos aproximadamente 12,5 veces, al menos aproximadamente 15 veces, al menos aproximadamente 17,5 veces, al menos aproximadamente 20 veces, al menos aproximadamente 22,5 veces, al menos aproximadamente 25 veces, al menos aproximadamente 27,5 veces, al menos aproximadamente 30 veces, al menos aproximadamente 50 veces o al menos aproximadamente 100 veces menor que la CE50 de un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una CE50 que es al menos 1,5 veces menor que el anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una CE50 que es al menos 1,1 veces menor que el anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60).
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación (a) reduce los niveles de sortilina en la superficie celular con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es menor de 681 pM, medido mediante citometría de flujo; (b) reduce los niveles de sortilina en la superficie celular en más de aproximadamente un 40 % a una concentración 1,25 nM de IgG, en más de un 29 % a una concentración 0,6 nM de IgG, o en más de un 62 % a una concentración 150 nM de IgG en relación con el control, medido mediante citometría de flujo; (c) aumenta la secreción de progranulina en más de aproximadamente 1,11 veces con respecto al control a una concentración 0,63 nM de IgG, o en más de aproximadamente 1,75 veces con respecto al control a una concentración 50 nM de IgG, medido por ELISA estándar; (d) bloquea la unión de la progranulina a la sortilina con una concentración eficaz semimáxima (CE50) que es inferior a 0,751 nM, medido mediante citometría de flujo; (e) bloquea la unión de la progranulina a la sortilina en más de aproximadamente un 90 % a una concentración 50 nM de IgG, o en más de aproximadamente un 95 % a una concentración 150 nM de IgG en relación con el control, medido mediante citometría de flujo; o (f) cualquier combinación de los mismos (véanse, p. ej., los Ejemplos 2-4).
Aumento de los niveles de progranulina
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación disminuyen los niveles extracelulares de progranulina in vitro. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden aumentar los niveles celulares de progranulina in vivo (p. ej., en el cerebro, sangre y/u órganos periféricos de un individuo). Como se utiliza en el presente documento, un anticuerpo anti-sortilina aumenta los niveles extracelulares de progranulina si induce un aumento en las concentraciones de anticuerpos saturantes (p. ej., 0,6 nM, 0,63 nM, 1,25 nM, 50 nM o 150 nM) y/o en relación con un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60) en niveles extracelulares de progranulina medidos por cualquier ensayo basado en células in vitro o en ensayos basados en tejidos (tales como los basados en tejido cerebral) descritos en el presente documento o conocidos en la técnica. Como se contempla en el presente documento, un anticuerpo anti-sortilina aumenta los niveles celulares de progranulina si induce un aumento en las concentraciones de anticuerpos saturantes (p. ej., 0,6 nM, 0,63 nM, 1,25 nM, 50 nM o 150 nM) y/o en relación con un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60) en niveles celulares de progranulina medidos por cualquier ensayo basado en células in vitro o en ensayos basados en tejidos (tales como los basados en tejido cerebral) descritos en el presente documento o conocidos en la técnica.
Como se utiliza en el presente documento, los niveles de progranulina pueden referirse a los niveles de expresión del gen que codifica la progranulina; a los niveles de expresión de uno o más transcritos que codifican progranulina; a los niveles de expresión de la proteína progranulina; y/o a la cantidad de proteína progranulina secretada por las células y/o presente dentro de las células. Cualquier método conocido en la técnica para medir los niveles de expresión génica, transcripción, traducción, abundancia de proteínas, secreción de proteínas y/o localización de proteínas puede usarse para determinar los niveles de progranulina.
Como se utiliza en el presente documento, los niveles de progranulina pueden referirse a, aunque no de forma limitativa, niveles extracelulares de progranulina, niveles intracelulares de progranulina y niveles totales de progranulina; En algunas realizaciones, un aumento en los niveles de progranulina comprende un aumento en los niveles extracelulares de progranulina.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación aumenta la secreción de progranulina en más de aproximadamente 1,11 veces con respecto al control a una concentración 0,63 nM de IgG, medido por ELISA estándar. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación aumenta la secreción de progranulina en aproximadamente 1,42 veces con respecto al control a una concentración 0,63 nM de IgG, medido por ELISA estándar. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación aumenta la secreción de progranulina en más de aproximadamente 1,75 veces con respecto al control a una concentración 50 nM de IgG, medido por ELISA estándar. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación aumenta la secreción de progranulina en aproximadamente 1,97 veces con respecto al control a una concentración 50 nM de IgG, medido por ELISA estándar. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación aumenta la secreción de progranulina en aproximadamente 2,29 veces con respecto al control a una concentración 50 nM de IgG, medido por ELISA estándar.
En la técnica se conocen varios métodos para medir la secreción de progranulina, incluyendo, por ejemplo, mediante ELISA (véanse, p. ej., los Ejemplos 2 y 4). En algunas realizaciones, la CE50 se mide in vitro utilizando células que expresan sortilina humana. En algunas realizaciones, la secreción de progranulina se determina utilizando un anticuerpo monovalente (p. ej., un Fab) o un anticuerpo de longitud completa en forma monovalente. En algunas realizaciones, la secreción de progranulina se determina utilizando anticuerpos que contienen regiones constantes que demuestran una unión potenciada al receptor de Fc. En algunas realizaciones, la secreción de progranulina se determina utilizando anticuerpos que contienen regiones constantes que demuestran una unión reducida al receptor de Fc.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen potencias más altas para aumentar los niveles de progranulina en relación con un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación aumentan los niveles (p. ej., los niveles extracelulares) de progranulina con una CE50 más baja (p. ej., medido in vitro) que un anticuerpo de control (por ejemplo, un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación aumentan los niveles (p. ej., los niveles extracelulares) de progranulina en al menos aproximadamente un 5 %, al menos aproximadamente un 10 %, al menos aproximadamente un 15 %, al menos aproximadamente un 20 %, al menos aproximadamente un 25 %, al menos aproximadamente un 30 %, al menos aproximadamente un 35 %, al menos aproximadamente un 40 %, al menos aproximadamente un 45 %, al menos aproximadamente un 50 %, al menos aproximadamente un 55 %, al menos aproximadamente un 60 %, al menos aproximadamente un 65 %, al menos aproximadamente un 70 %, al menos aproximadamente un 75 %, al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 % o al menos aproximadamente un 99 % con respecto a un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación aumentan los niveles (p. ej., los niveles extracelulares) de progranulina al menos aproximadamente 1 vez, al menos aproximadamente 1,1 veces, al menos aproximadamente 1,5 veces, al menos aproximadamente 2 veces, al menos aproximadamente 3 veces, al menos aproximadamente 4 veces, al menos aproximadamente 5 veces, al menos aproximadamente 6 veces, al menos aproximadamente 7 veces, al menos aproximadamente 8 veces, al menos aproximadamente 9 veces, al menos aproximadamente 10 veces, al menos aproximadamente 12,5 veces, al menos aproximadamente 15 veces, al menos aproximadamente 17,5 veces, al menos aproximadamente 20 veces, al menos aproximadamente 22,5 veces, al menos aproximadamente 25 veces, al menos aproximadamente 27,5 veces, al menos aproximadamente 30 veces, al menos aproximadamente 50 veces o al menos aproximadamente 100 veces más que un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación aumentan los niveles de progranulina aproximadamente 1,1 veces más que un anticuerpo de control (por ejemplo, un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación aumentan los niveles de progranulina aproximadamente 1,3 veces más que un anticuerpo de control (por ejemplo, un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación aumentan la concentración eficaz de progranulina. La concentración eficaz de progranulina se refiere a la concentración de progranulina en plasma o líquido cefalorraquídeo. En algunas realizaciones, un aumento en la concentración eficaz de progranulina es un aumento de más de 1,5 veces. En algunas realizaciones, la concentración eficaz de progranulina se aumenta durante 7-28 días.
Disminución de la interacción entre la sortilina y el compañero de unión
En determinadas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina inhiben la interacción (por ejemplo, la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y una o más proteínas seleccionadas de progranulina, una proneurotrofina, una neurotrofina, proneurotrofina-3, neurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, neurotrofina-4/5, precursor de factor de crecimiento nervioso (Pro-NGF), factor de crecimiento nervioso (NGF), precursor de factor neurotrófico derivado del cerebro (pro-BDNF), factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sortpro), proteína precursora de amiloide (APP), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE), PCSK9 y proteína asociada a receptor (RAP) y/o variantes naturales. En una realización específica, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación inhiben la interacción (p. ej., la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y la progranulina;
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina pueden inhibir la interacción (por ejemplo, la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y una neurotrofina de la presente divulgación, tal como una proneurotrofina, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF y BDNF. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina pueden inhibir la interacción (p. ej., la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y la. neurotensina. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina inhiben la interacción (p. ej., la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y p75. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina pueden inhibir la interacción (p. ej., la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y Sort-pro. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina pueden inhibir la interacción (p. ej., la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y APP. En otras realizaciones, los anticuerpos antisortilina pueden inhibir la producción del péptido A beta. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina pueden inhibir el transporte y la secreción de PCSK9. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina pueden inhibir la interacción (p. ej., la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y LpL. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina pueden inhibir la interacción (p. ej., la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y APOA5. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina pueden inhibir la interacción (p. ej., la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y APOE. En otras realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina pueden inhibir la interacción (p. ej., la unión) entre una proteína sortilina de la presente divulgación y RAP.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se unen a una proteína sortilina de la presente divulgación expresada en la superficie celular y los anticuerpos desnudos inhiben la interacción (por ejemplo, la unión) entre la proteína sortilina y uno o más ligandos de la sortilina. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que se unen a una proteína sortilina de la presente inhiben la interacción (p. ej., la unión) entre la proteína sortilina y uno o más ligandos de sortilina al reducir los niveles eficaces de sortilina que está disponible para interactuar con estas proteínas ya sea en la superficie celular o dentro de la célula. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que se unen a una proteína sortilina de la presente inhiben la interacción (p. ej., la unión) entre la proteína sortilina y uno o más ligandos de sortilina al inducir la degradación de la sortilina.
A. Disminución de la interacción entre la sortilina y la progranulina
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación aumentan los niveles de progranulina y/o disminuyen los niveles celulares de sortilina mientras bloquean (p. ej., inhiben) la interacción (p. ej., la unión) entre la sortilina y la progranulina. Por consiguiente, en algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación bloquean la interacción (p. ej., la unión) entre la sortilina y la progranulina; Como se utiliza en el presente documento, un anticuerpo anti-sortilina bloquea la interacción (p. ej., la unión) entre la sortilina y la progranulina si disminuye la unión de progranulina a sortilina en relación con un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo antisortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60) a concentraciones de anticuerpos saturantes (p. ej., 0,6 nM, 0,63 nM, 1,25 nM, 50 nM o 150 nM) en cualquier ensayo in vitro o ensayo de cultivo basado en células descrito en el presente documento o conocido en la técnica.
Los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden disminuir la unión de la progranulina a la sortilina con una concentración eficaz semimáxima (CE50) (p. ej., cuando se mide in vitro) en el intervalo picomolar. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es inferior a aproximadamente 2,2 nM. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es inferior a aproximadamente 1,22 nM. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es inferior a aproximadamente 751 pM. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es de aproximadamente 325 pM a aproximadamente 751 nM. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es de aproximadamente 405 pM a aproximadamente 751 nM. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es de aproximadamente 588 pM a aproximadamente 751 nM. En determinadas realizaciones, la CE50 del anticuerpo es inferior a aproximadamente 2,2 nM, 2,1 nM, 2,0 nM, 1,9 nM, 1,8 nM, 1,7 nM, 1,6 nM, 1,5 nM, 1,4 nM, 1,3 nM, 1,2 nM, 1.1 nM, 1,0 nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 600 pM, 500 pM, 400 pM, 300 pM, 200 pM, 100 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 1 pM o 0,5 pM.
En algunas realizaciones, la CE50 del anticuerpo para disminuir la unión de la progranulina a la sortilina es inferior o igual a aproximadamente 2,2 nM, 2,1 nM, 2,0 nM, 1,9 nM, 1,8 nM, 1,7 nM, 1,6 nM, 1,5 nM, 1,4 nM, 1,3 nM, 1,2 nM, 1.1 nM, 1,0 nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 600 pM, 500 pM, 475 pM, 450 pM, 425 pM, 400 pM, 375 pM, 350 pM, 325 pM, 300 pM, 275 pM, 250 pM, 225 pM, 200 pM, 175 pM, 150 pM, 125 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 70 pM, 60 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 9 pM, 8 pM, 7 pM, 6 pM, 5 pM, 4 pM, 3 pM, 2 pM, 1 pM o 0,5 pM.
En algunas realizaciones, la CE50 de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es de aproximadamente 1,22 nM. En algunas realizaciones, la CE50 de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es de aproximadamente 588 pM, En algunas realizaciones, la CE50 de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es de aproximadamente 405 pM. En algunas realizaciones, la CE50 de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación es de aproximadamente 325 pM.
En la técnica se conocen diversos métodos para medir los valores de CE50 de anticuerpos, incluyendo, por ejemplo, por citometría de flujo (véase p. ej., el Ejemplo 3). En algunas realizaciones, la CE50 para disminuir la unión de la progranulina a la sortilina se mide in vitro utilizando células que expresan sortilina humana. En algunas realizaciones, la CE50 se mide a una temperatura de aproximadamente 4 °C. En algunas realizaciones, la CE50 se mide a una temperatura de aproximadamente 25 °C. En algunas realizaciones, la CE50 se mide a una temperatura de aproximadamente 35 °C. En algunas realizaciones, la CE50 se mide a una temperatura de aproximadamente 37 °C.
En algunas realizaciones, la CE50 para disminuir la unión de la progranulina a la sortilina se determina utilizando un anticuerpo monovalente (p. ej., un Fab) o un anticuerpo de longitud completa en forma monovalente. En algunas realizaciones, la CE50 se determina utilizando anticuerpos que contienen regiones constantes que demuestran una
mayor unión al receptor de Fc. En algunas realizaciones, la CE50 para disminuir la unión de la progranulina a la sortilina
se determina usando anticuerpos que contienen regiones constantes que demuestran unión reducida al receptor de
Fc.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen potencias más altas para
reducir la unión de la progranulina a la sortilina en relación con un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo antisortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación disminuyen la unión de la progranulina a la sortilina con una CE50 más baja (p. ej., medido in vitro) que un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación disminuyen la unión de la progranulina a la sortilina con una CE50 que es al menos aproximadamente un 5 %, al menos aproximadamente un 10 %, al menos aproximadamente un 5 %, al menos aproximadamente un 20 %, al menos aproximadamente un 25 %, al menos aproximadamente
Figure imgf000053_0001
menos aproximadamente un 35 %, a aproximadamente un 40 %, al menos aproximadamente menos aproximadamente un 50 %, a aproximadamente un 55 %, al menos aproximadamente
Figure imgf000053_0002
menos aproximadamente un 65 %, a aproximadamente un 70 %, al menos aproximadamente un 75 %, al menos aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 % o al menos aproximadamente un 99 % inferior a la CE50 de un anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene
una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación disminuyen la unión de la progranulina a la
sortilina con una CE50 que es al menos aproximadamente 1 vez, al menos aproximadamente 1,1 veces, al menos aproximadamente 1,5 veces, al menos aproximadamente 2 veces, al menos aproximadamente 3 veces, al menos aproximadamente 4 veces, al menos aproximadamente 5 veces, al menos aproximadamente 6 veces, al menos aproximadamente 7 veces, al menos aproximadamente 8 veces, al menos aproximadamente 9 veces, al menos aproximadamente 10 veces, al menos aproximadamente 12,5 veces, al menos aproximadamente 15 veces, al menos aproximadamente 17,5 veces, al menos aproximadamente 20 veces, al menos aproximadamente 22,5 veces, al menos aproximadamente 25 veces, al menos aproximadamente 27,5 veces, al menos aproximadamente 30 veces, al menos aproximadamente 50 veces o al menos aproximadamente 100 veces menor que la CE50 de un anticuerpo de control
(p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena
ligera correspondientes a S-60).
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una CE50 que es al menos
1,3 veces menor que el anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos
anti-sortilina de la presente divulgación tienen una CE50 que es al menos 1,8 veces menor que el anticuerpo de control
(p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena
ligera correspondientes a S-60). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación
tienen una CE50 que es al menos 9 veces menor que el anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que
tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60). En
algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una CE50 que es al menos 2,3
veces menor que el anticuerpo de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena
pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60).
Puede utilizarse cualquier ensayo basado en células in vitro o modelo adecuado in vivo descrito en el presente documento o conocido en la técnica para medir la inhibición o reducción de la interacción (p. ej., unión) entre la sortilina
y uno o más ligandos de sortilina. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación
inhiben o reducen la interacción (p. ej., la unión) entre la sortilina y uno o más ligandos de sortilina al reducir la expresión de la sortilina (p. ej., al reducir los niveles de sortilina en la superficie celular). En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación inhiben o reducen la interacción (p. ej., la unión) entre la sortilina
y uno o más ligandos de sortilina en al menos un 21 %, al menos un 22 %, al menos un 23 %, al menos un 24 %, al
menos un 25 %, al menos un 26 %, al menos un 27 %, al menos un 28 %, al menos un 29 %, al menos un 30 %, al
menos un 31 %, al menos un 32 %, al menos un 33 %, al menos un 34 %, al menos un 35 %, al menos un 36 %, al
menos un 37 %, al menos un 38 %, al menos un 39 %, al menos un 40 %, al menos un 41 %, al menos un 42 %, al
menos un 43 %, al menos un 44 %, al menos un 45 %, al menos un 46 %, al menos un 47 %, al menos un 48 %, al
menos un 49 %, al menos un 50 %, al menos un 51 %, al menos un 52 %, al menos un 53 %, al menos un 54 %, al
menos un 55 %, al menos un 56 %, al menos un 57 %, al menos un 58 %, al menos un 59 %, al menos un 60 %, al
menos un 61 %, al menos un 62 %, al menos un 63 %, al menos un 64 %, al menos un 65 %, al menos un 66 %, al
menos un 67 %, al menos un 68 %, al menos un 69 %, al menos un 70 %, al menos un 71 %, al menos un 72 %, al
menos un 73 %, al menos un 74 %, al menos un 75 %, al menos un 76 %, al menos un 77 %, al menos un 78 %, al
menos un 79 %, al menos un 80 %, al menos un 81 %, al menos un 82 %, al menos un 83 %, al menos un 84 %, al menos un 85 %, al menos un 86 %, al menos un 87 %, al menos un 88 %, al menos un 89 %, al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, al menos un 99 %, o más a concentraciones de anticuerpos saturantes utilizando cualquier ensayo in vitro o ensayo de cultivo basado en células descrito en el presente documento o conocido en la técnica.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación bloquea la unión de la progranulina a la sortilina en más de aproximadamente un 90 % a una concentración 50 nM de IgG o en más de aproximadamente un 96 % a una concentración 150 nM de IgG, medido mediante citometría de flujo. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación bloquea la unión de la progranulina a la sortilina en aproximadamente un 90,74 % a una concentración 50 nM de IgG, medido mediante citometría de flujo. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación bloquea la unión de la progranulina a la sortilina en aproximadamente un 96,5 % a una concentración 150 nM de IgG, medido mediante citometría de flujo. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación bloquea la unión de la progranulina a la sortilina en aproximadamente un 96,9 % a una concentración 150 nM de IgG, medido mediante citometría de flujo.
Disminución de la expresión de mediadores proinflamatorios
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden disminuir la expresión de mediadores proinflamatorios después de unirse a una proteína sortilina expresada en una célula.
Como se utiliza en el presente documento, los mediadores proinflamatorios son proteínas involucradas directa o indirectamente (p. ej., a través de vías de señalización proinflamatoria) en un mecanismo que induce, activa, promueve o disminuye de otro modo una respuesta inflamatoria. Puede usarse cualquier método conocido en la técnica para identificar y caracterizar mediadores proinflamatorios.
Los ejemplos de mediadores proinflamatorios incluyen, aunque no de forma limitativa, citocinas, tales como interferones tipo I y II, IL-6, IL12p70, IL12p40, IL-1 p, TNF-a, IL-8, CRP, miembros de la familia de IL-20, IL-33, LIF, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18 y CRP. Otros ejemplos de mediadores proinflamatorios incluyen, aunque no de forma limitativa, quimiocinas, tales como CXCL1, CCL2, CCL3, CCL4 y CCL5.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden disminuir la expresión funcional y/o la secreción de mediadores proinflamatorios, IL-6, IL12p70, IL12p40, IL-1 p, TNF-a, CXCL1, CCL2, CCL3, CCL4 y CCL5. En determinadas realizaciones, la disminución de la expresión de los mediadores proinflamatorios se produce en los macrófagos, células dendríticas, monocitos, osteoclastos, células de Langerhans de la piel, células de Kupffer, células T y/o células microgliales. La disminución de la expresión puede incluir, aunque no de forma limitativa, una disminución en la expresión génica, una disminución en la expresión transcripcional o una disminución en la expresión de proteínas. Puede utilizarse cualquier método conocido en la técnica para determinar la expresión génica, transcripcional (p. ej., ARNm) y/o de proteínas. Por ejemplo, Puede utilizarse en análisis de transferencia de Northern para determinar los niveles de expresión de un gen de mediador proinflamatorio, se puede utilizar RT-PCR para determinar el nivel de transcripción del mediador proinflamatorio y se puede utilizar el análisis de transferencia de Western para determinar los niveles de proteína mediadora proinflamatoria.
Como se utiliza en el presente documento, un mediador proinflamatorio puede tener expresión disminuida si su expresión en una o más células de un sujeto tratado con un agente de sortilina, tal como un anticuerpo anti-sortilina agonista de la presente divulgación, es mayor que la expresión del mismo mediador proinflamatorio expresada en una o más células de un sujeto correspondiente que no se trata con el anticuerpo anti-sortilina agonista. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede disminuir la expresión del mediador proinflamatorio en una o más células de un sujeto en al menos un 10 %, al menos un 15 %, al menos un 20 %, al menos un 25 %, al menos un 30 %, al menos un 35 %, al menos un 40 %, al menos un 45 %, al menos un 50 %, al menos un 55 %, al menos un 60 %, al menos un 65 %, al menos un 70 %, al menos un 75 %, al menos un 80 %, al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 100 %, al menos un 110 %, al menos un 115 %, al menos un 120 %, al menos un 125 %, al menos un 130 %, al menos un 135 %, al menos un 140 %, al menos un 145 %, al menos un 150 %, al menos un 160 %, al menos un 170 %, al menos un 180 %, al menos un 190 % o al menos un 200 %, por ejemplo, en comparación con la expresión del mediador proinflamatorio en una o más células de un sujeto correspondiente que no se trata con el anticuerpo anti-sortilina. En otras realizaciones, el anticuerpo antisortilina puede disminuir la expresión del mediador proinflamatorio en una o más células de un sujeto al menos 1,5 veces, al menos 1,6 veces, al menos 1,7 veces, al menos 1,8 veces, al menos 1,9 veces, al menos 2,0 veces, al menos 2,1 veces, al menos 2,15 veces, al menos 2,2 veces, al menos 2,25 veces, al menos 2,3 veces, al menos 2,35 veces, al menos 2,4 veces, al menos 2,45 veces, al menos 2,5 veces, al menos 2,55 veces, al menos 3,0 veces, al menos 3,5 veces, al menos 4,0 veces, al menos 4,5 veces, al menos 5,0 veces, al menos 5,5 veces, al menos 6,0 veces, al menos 6,5 veces, al menos 7,0 veces, al menos 7,5 veces, al menos 8,0 veces, al menos 8,5 veces, al menos 9,0 veces, al menos 9,5 veces o al menos 10 veces, por ejemplo, en comparación con la expresión del mediador proinflamatorio en una o más células de un sujeto correspondiente que no se trata con el anticuerpo anti-sortilina.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores puede incorporar cualquiera de las características, por separado o en combinación, como se describe en las secciones 1 -7 a continuación:
(1) Afinidad de unión del anticuerpo anti-sortilina
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo tiene una constante de disociación (Kd) de < 1 pM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM, < 0,01 nM o < 0,001 nM (p. ej., 10-8 M o menor, p. ej., de 10-8 M a 10-13 M, p. ej. , de 10-9 M a 10-13 M).
Los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden tener afinidades nanomolares o incluso picomolares por el antígeno diana (p. ej., sortilina humana o sortilina de mamífero). En determinadas realizaciones, la afinidad de unión de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación por el antígeno diana (p. ej., sortilina humana o sortilina de mamífero) se mide mediante la constante de disociación, Kd. Las constantes de disociación se pueden determinar mediante cualquier técnica analítica, incluyendo cualquier técnica bioquímica o biofísica tal como la clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS), citometría de flujo, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), resonancia de plasmón superficial (SPR), interferometría de biocapa (véase, p. ej., sistema Octet de ForteBio), tecnología Meso Scale Discovery (véase, p. ej., MSD-SET), calorimetría de titulación isotérmica (ITC), calorimetría diferencial de barrido (DSC), dicroísmo circular (DC), análisis de flujo detenido y análisis colorimétricos o de fusión de proteínas fluorescentes; o un ensayo de unión celular. En algunas realizaciones, la Kd para la sortilina se determina a una temperatura de aproximadamente 25 °C. En algunas realizaciones, la constante de disociación (Kd) puede medirse a 4 °C o a temperatura ambiente utilizando, por ejemplo, ensayo FACS o de interferometría de biocapa.
En algunas realizaciones, la Kd para la sortilina se determina a una temperatura de aproximadamente 4 °C. En algunas realizaciones, la Kd se determina utilizando un anticuerpo monovalente (p. ej., un Fab) o un anticuerpo de longitud completa en forma monovalente. En algunas realizaciones, la Kd se determina usando un anticuerpo bivalente y proteína sortilina monomérica recombinante,
En determinadas realizaciones, la Kd de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación para sortilina humana, sortilina de mamífero, o ambas, se mide usando FACS como se describe en el presente documento (véanse, p. ej., los EJEMPLOS 1 y 4). En determinadas realizaciones, la Kd de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación para sortilina humana, sortilina de mamífero, o ambas, se mide usando interferometría de biocapa como se describe en el presente documento (véase., p. ej., el Ejemplo 4).
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina tiene una constante de disociación (Kd) para la sortilina humana que es hasta 2,5 veces menor que un anticuerpo anti-sortilina que comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 79, en donde la Kd se determina por FACS (véase, p. ej., el Ejemplo 1). En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-sortilina tiene una constante de disociación (Kd) para la sortilina humana que varía de aproximadamente 1, 10E-8 M a aproximadamente 4,68E-10 M en donde la Kd se determina por FACS (véase, p. ej., el Ejemplo 1), o de aproximadamente 270 a aproximadamente 2910 pM en donde la Kd se determina por interferometría de biocapa (véase, p. ej., el Ejemplo 4).
En determinadas realizaciones, la Kd de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación para sortilina humana, sortilina de mamífero, o ambas, puede ser inferior a 100 nM, inferior a 90 nM, inferior a 80 nM, inferior a 70 nM, inferior a 60 nM, inferior a 50 nM, inferior a 40 nM, inferior a 30 nM, inferior a 20 nM, inferior a 0 nM, inferior a 9 nM, inferior a 8 nM, inferior a 7 nM, inferior a 6 nM, inferior a 5 nM, inferior a 4 nM, inferior a 3 nM, inferior a 2 nM, inferior a 1 nM, inferior a 0,5 nM, inferior a 0,1 nM, inferior a 0,09 nM, inferior a 0,08 nM, inferior a 0,07 nM, inferior a 0,06 nM, inferior a 0,05 nM, inferior a 0,04 nM, inferior a 0,03 nM, inferior a 0,02 nM, inferior a 0,01 nM, inferior a 0,009 nM, inferior a 0,008 nM, inferior a 0,007 nM, inferior a 0,006 nM, inferior a 0,005 nM, inferior a 0,004 nM, inferior a 0,003 nM, inferior a 0,002 nM, inferior a 0,001 nM o inferior a 0,001 nM.
Las constantes de disociación (Kd) de anticuerpos anti-sortilina para la sortilina humana, sortilina de mamífero, o ambas, puede ser inferior a 10 nM, inferior a 9,5 nM, inferior a 9 nM, inferior a 8,5 nM, inferior a 8 nM, inferior a 7,5 nM, inferior a 7 nM, inferior a 6,9 nM, inferior a 6,8 nM, inferior a 6,7 nM, inferior a 6,6 nM, inferior a 6,5 nM, inferior a 6,4 nM, inferior a 6,3 nM, inferior a 6,2 nM, inferior a 6, 1 nM, inferior a 6 nM, inferior a 5,5 nM, inferior a 5 nM, inferior a 4,5 nM, inferior a 4 nM, inferior a 3,5 nM, inferior a 3 nM, inferior a 2,5 nM, inferior a 2 nM, inferior a 1,5 nM, inferior a 1 nM, inferior a 0,95 nM, inferior a 0,9 nM, inferior a 0,89 nM, inferior a 0,88 nM, inferior a 0,87 nM, inferior a 0,86 nM, inferior a 0,85 nM, inferior a 0,84 nM, inferior a 0,83 nM, inferior a 0,82 nM, inferior a 0,81 nM, inferior a 0,8 nM, inferior a 0,75 nM, inferior a 0,7 nM, inferior a 0,65 nM, inferior a 0,64 nM, inferior a 0,63 nM, inferior a 0,62 nM, inferior a 0,61 nM, inferior a 0,6 nM, inferior a 0,55 nM, inferior a 0,5 nM, inferior a 0,45 nM, inferior a 0,4 nM, inferior a 0,35 nM, inferior a 0,3 nM, inferior a 0,29 nM, inferior a 0,28 nM, inferior a 0,27 nM, inferior a 0,26 nM, inferior a 0,25 nM, inferior a 0,24 nM, inferior a 0,23 nM, inferior a 0,22 nM, inferior a 0,21 nM, inferior a 0,2 nM, inferior a 0,15 nM, inferior a 0,1 nM, inferior a 0,09 nM, inferior a 0,08 nM, inferior a 0,07 nM, inferior a 0,06 nM, inferior a 0,05 nM, inferior a 0,04 nM, inferior a 0,03 nM, inferior a 0,02 nM, inferior a 0,01 nM, inferior a 0,009 nM, inferior a 0,008 nM, inferior a 0,007 nM, inferior a 0,006 nM, inferior a 0,005 nM, inferior a 0,004 nM, inferior a 0,003 nM, inferior a 0,002 nM o inferior a 0,001 nM.
En determinadas realizaciones, la constante de disociación (Kd) del anticuerpo para la sortilina es de aproximadamente 0,560 nM a aproximadamente 1,63 nM, por ejemplo cuando la Kd se determina mediante FACS. En determinadas realizaciones, la constante de disociación (Kd) del anticuerpo para la sortilina es de aproximadamente 0,270 nM a aproximadamente 2,910 nM, por ejemplo cuando la Kd se determina mediante interferometría de biocapa. En algunas realizaciones, el anticuerpo tiene una constante de disociación (Kd) para la sortilina humana, sortilina de ratón, o ambas, que varía de aproximadamente 0,36 nM a aproximadamente 0,43 nM, o es inferior a 1,02 nM. En algunas realizaciones, la constante de disociación es inferior a 1,02 nM. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tiene una constante de disociación para la sortilina humana de 0,560 nM o menor.
En una realización específica, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tiene una constante de disociación para la sortilina humana de aproximadamente 0,560 nM. En una realización específica, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tiene una constante de disociación para la sortilina humana de aproximadamente 0,423 nM. En una realización específica, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tiene una constante de disociación para la sortilina humana de aproximadamente 0,365 nM. En una realización específica, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tiene una constante de disociación para la sortilina humana de aproximadamente 0,344 nM. En una realización específica, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tiene una constante de disociación para la sortilina humana de aproximadamente 0,298 nM. En una realización específica, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tiene una constante de disociación para la sortilina humana de aproximadamente 0,270 nM. En otra realización específica, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tiene una constante de disociación para la sortilina humana de aproximadamente 0,260 nM.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una constante de disociación más baja (Kd) para la sortilina que un anticuerpo anti-sortilina de control (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina de control que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una Kd para una diana (p. ej., sortilina humana) que es al menos aproximadamente un 5 %, al menos aproximadamente un 10 %, al menos aproximadamente un 15 %, al menos aproximadamente un 20 %, al menos aproximadamente un 25 %, al menos aproximadamente un 30 %, al menos aproximadamente un 35 %, al menos aproximadamente un 40 %, al menos aproximadamente un 45 %, al menos aproximadamente un 50 %, al menos aproximadamente un 55 %, al menos aproximadamente un 60 %, al menos aproximadamente un 65 %, al menos aproximadamente un 70 %, al menos aproximadamente un 75 %, al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 % o al menos aproximadamente un 99 % inferior a la Kd de un anticuerpo anti-sortilina de control para la diana (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina de control que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una Kd para una diana (p. ej., sortilina humana) que es al menos aproximadamente 1 vez, al menos aproximadamente 1,1 veces, al menos aproximadamente 1,5 veces, al menos aproximadamente 2 veces, al menos aproximadamente 3 veces, al menos aproximadamente 4 veces, al menos aproximadamente 5 veces, al menos aproximadamente 6 veces, al menos aproximadamente 7 veces, al menos aproximadamente 8 veces, al menos aproximadamente 9 veces, al menos aproximadamente 10 veces, al menos aproximadamente 12,5 veces, al menos aproximadamente 15 veces, al menos aproximadamente 17,5 veces, al menos aproximadamente 20 veces, al menos aproximadamente 22,5 veces, al menos aproximadamente 25 veces, al menos aproximadamente 27,5 veces, al menos aproximadamente 30 veces, al menos aproximadamente 50 veces, al menos aproximadamente 100 veces, al menos aproximadamente 200 veces, al menos aproximadamente 300 veces, al menos aproximadamente 400 veces, al menos aproximadamente 500 veces, al menos aproximadamente 600 veces, al menos aproximadamente 700 veces, al menos aproximadamente 800 veces, al menos aproximadamente 900 veces o al menos aproximadamente 1000 veces inferior a la Kd de un anticuerpo anti-sortilina de control para la diana (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina de control que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60.
En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una Kd para la sortilina humana que es al menos 100 veces inferior que un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una Kd para la sortilina humana que es al menos 50 veces inferior que un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una Kd para la sortilina humana que es al menos 10 veces inferior que un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una Kd para la sortilina humana que es al menos 5 veces inferior que un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación tienen una KD para la sortilina humana que es al menos 2 veces inferior que un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60.
En una realización específica, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tienen una Kd para la sortilina humana que es aproximadamente 2,79 veces inferior que un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60. En otra realización específica, un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación tienen una KD para la sortilina humana que es aproximadamente 2,05 veces inferior que un anticuerpo anti-sortilina que tiene una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera correspondientes a S-60.
(2) Fragmentos de anticuerpo
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo. Los fragmentos de anticuerpo incluyen, aunque no de forma limitativa, fragmentos Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv y scFv, y otros fragmentos descritos a continuación. Para una revisión de algunos fragmentos de anticuerpo, véase Hudson et al. Nat. Med. 9: 129-134 (2003). Para una revisión de fragmentos scFv, véase, p. ej., el documento WO 93/16185; y las patentes de EE. UU. N.° 5571894 y 5587458. Para un análisis de los fragmentos Fab y F(ab')2 que comprenden restos de epítopo de unión a receptor de rescate y que tienen semivida in vivo aumentada, véase la patente de EE. UU. N.° 5869046.
Los diacuerpos son fragmentos de anticuerpo con dos sitios de unión a antígeno que pueden ser bivalentes o biespecíficos. Véase, por ejemplo, EP404097; el documento WO 1993/01161; Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). También se describen triacuerpos y tetracuerpos en Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). Los anticuerpos de un solo dominio son fragmentos de anticuerpo que comprenden la totalidad o una porción del dominio variable de cadena pesada o la totalidad o una porción del dominio variable de cadena ligera de un anticuerpo, En determinadas realizaciones, un anticuerpo de un solo dominio es un anticuerpo de un solo dominio humano (véase, p. ej., la patente de EE. UU. N.° 6248516).
Los fragmentos de anticuerpo se pueden preparar mediante diversas técnicas, que incluyen, pero no de forma limitativa, digestión proteolítica de un anticuerpo intacto así como la producción por células hospedadoras recombinantes (por ejemplo, E. coli o fago), como se describe en el presente documento.
En algunas realizaciones, el fragmento de anticuerpo se utiliza en combinación con un segundo anticuerpo de sortilina y/o con uno o más anticuerpos que se unen específicamente a una proteína causante de enfermedad seleccionada de: beta amiloide o fragmentos de la misma, Tau, IAPP, alfa-sinucleína, TDP-43, proteína FUS, proteína priónica, PrPSc, huntingtina, calcitonina, superóxido dismutasa, ataxina, cuerpo de Lewy, factor natriurético auricular, polipéptido amiloide de los islotes, insulina, apolipoproteína AI, amiloide sérico A, medina, prolactina, transtiretina, lisozima, beta 2 microglobulina, gelsolina, queratoepitelina, cistatina, cadena ligera de inmunoglobulina AL, proteína S-IBM, productos de traducción no ATG (RAN) asociados a repeticiones, péptidos de repetición del dipéptidos (DPR), péptidos de repetición de glicina-alanina (GA), péptidos de repetición de glicina-prolina (GP), péptidos de repetición de glicina-arginina (GR), péptidos de repetición de prolina-alanina (PA), péptidos de repetición de prolina-arginina (PR), y cualquier combinación de los mismos.
(3) Anticuerpos quiméricos y humanizados
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo es un anticuerpo quimérico. Se describen determinados anticuerpos quiméricos, p. ej., en la patente de EE. UU. N.° 4816567. En un ejemplo, un anticuerpo quimérico comprende una región variable no humana (p. ej., una región variable derivada de un ratón, rata, hámster, conejo o primate no humano, tal como un mono) y una región constante humana. En un ejemplo adicional, un anticuerpo quimérico es un anticuerpo "con la clase cambiada" en el que se ha cambiado la clase o subclase con respecto a la del anticuerpo precursor. Los anticuerpos quiméricos incluyen fragmentos de unión a antígeno de los mismos.
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado. Normalmente, un anticuerpo no humano se humaniza para reducir la inmunogenicidad para seres humanos, a la vez que se conserva la especificidad y la afinidad del anticuerpo no humano precursor. En determinadas realizaciones, un anticuerpo humanizado es sustancialmente no inmunogénico en seres humanos. En determinadas realizaciones, un anticuerpo humanizado tiene sustancialmente la misma afinidad por una diana que un anticuerpo de otra especie de la que procede el anticuerpo humanizado. Véase, p. ej., la patente de EE. UU N.° 5530101,5693761; 5693762; y 5585089, En determinadas realizaciones, se identifican aminoácidos de un dominio variable de anticuerpo que pueden modificarse sin reducir la afinidad nativa del dominio de unión a antígeno a la vez que se reduce su inmunogenicidad. Véanse, p. ej., las patentes de EE. UU. N.° 5766886 y 5869619. Por lo general, un anticuerpo humanizado comprende uno o más dominios variables en los que las HVR (o porciones de las mismas) proceden de un anticuerpo no humano y las FR (o porciones de las mismas) proceden de secuencias de anticuerpos humanos. Un anticuerpo humanizado también comprenderá opcionalmente al menos una porción de una región constante humana. En algunas realizaciones, se sustituyen algunos restos de FR en un anticuerpo humanizado por restos correspondientes de un anticuerpo no humano (por ejemplo, el anticuerpo del que proceden los restos de la HVR), por ejemplo, para restaurar o mejorar la especificidad o afinidad del anticuerpo.
Se revisan anticuerpos humanizados y métodos para producirlos, por ejemplo, en Almagro et al. Front. Biosci. 13: 161 9-1633 (2008) y se describen adicionalmente, p. ej., en las patentes de EE. UU n.° 5821337, 7527791, 6982321 y 7087409. Las regiones marco humanas que pueden usarse para humanización incluyen, pero no de forma limitativa: regiones marco seleccionadas utilizando el método de "mejor ajuste" (véase, p. ej., Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)); regiones marco procedentes de la secuencia consenso de anticuerpos humanos de un subgrupo particular de regiones variables de cadena ligera o pesada (véanse, p. ej., Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285 (1992); y Presta et al., J. Immunol. 151: 2623 (1993)); regiones marco humanas maduras (mutadas somáticamente) o regiones marco de línea germinal humana (véase, p. ej., Almagro y Fransson Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008)); y regiones marco procedentes de la exploración de bibliotecas de Fr (véanse, p. ej., Baca et al. J. Biol. Chem. 272: 10678-10684 (1997) y Rosok et al. J. Biol. Chem. 271:22611 -22618(1996)).
(4) Anticuerpos humanos
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo es un anticuerpo humano. Los anticuerpos humanos se pueden producir usando diversas técnicas conocidas en este campo. Se describen anticuerpos humanos, en general, en van Dijk et al. Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001) y Lonberg Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).
Pueden prepararse anticuerpos humanos administrando un inmunógeno a un animal transgénico que se ha modificado para producir anticuerpos humanos intactos o anticuerpos intactos con regiones variables humanas en respuesta a la exposición a antígenos. Se pueden modificar por ingeniería genética cepas de ratón deficientes para la producción de anticuerpos de ratón con fragmentos grandes de los loci de Ig humana previendo que dichos ratones podrían producir anticuerpos humanos en ausencia de anticuerpos de ratón. Los fragmentos grandes de Ig humana pueden preservar la gran diversidad génica variable así como la regulación adecuada de la producción y expresión de anticuerpos. Al aprovechar la maquinaria de ratón para la diversificación y selección de anticuerpos y la ausencia de tolerancia inmunológica contra proteínas humanas, el repertorio de anticuerpos humanos reproducido en estas estirpes de ratón puede producir anticuerpos completamente humanos de alta afinidad dirigidos contra cualquier antígeno de interés, incluyendo antígenos humanos. Utilizando la tecnología de hibridoma, pueden producirse y seleccionarse mAb humanos específicos de antígeno con la especificidad deseada. Se describen determinados métodos ilustrativos en la patente de EE. UU N.° 5545807, el documento EP 546073 y el documento EP 546073. Véanse también, por ejemplo, las patentes de EE. UU. N.° 6075181 y 6150584, que describen la tecnología XENOMOUSE™; la patente de EE. UU. N.° 5770429, que describe la tecnología HUMAB®; la patente de EE. UU. N.° 7041870 que describe la tecnología K­ M MOUSE® y la publicación de solicitud de patente de EE. UU. N.° US 2007/0061900, que describe la tecnología VELOCIMOUSE®. Las regiones variables humanas procedentes de anticuerpos intactos generados por dichos animales pueden modificarse, además, p. ej., por combinación con una región constante humana diferente.
También pueden prepararse anticuerpos humanos mediante métodos basados en hibridoma. Se han descrito líneas celulares de mieloma humano y de heteromieloma de ratón-humano para la producción de anticuerpos monoclonales humanos. (Véanse, p. ej., Kozbor J. Immunol. 133:3001 (1984) y Boemer et al. J. Immunol. 147:86 (1991)). También se describen anticuerpos humanos generados a través de la tecnología de hibridoma de células B humanas en Li et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006). Otros métodos adicionales incluyen los descritos, por ejemplo, en la patente de EE. UU. N.° 7189826 (que describe la producción de anticuerpos IgM humanos monoclonales de líneas celulares de hibridoma). También se describe la tecnología de hibridoma humano (tecnología de Trioma) en Vollmers et al. Histology and Histopathology 20(3): 927-937 (2005) y Vollmers et al. Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(3): 185-91 (2005). También pueden generarse anticuerpos humanos aislando secuencias de dominio variable de clon de Fv seleccionadas de bibliotecas de presentación en fagos de origen humano. Posteriormente, pueden combinarse dichas secuencias de dominio variable con un dominio constante humano deseado. Más adelante se describen técnicas para seleccionar anticuerpos humanos de bibliotecas de anticuerpos.
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo es un anticuerpo humano aislado por métodos in vitro y/o cribado de bibliotecas combinatorias para seleccionar anticuerpos con la actividad o actividades deseadas. Los ejemplos adecuados incluyen, pero no de forma limitativa, presentación en fagos (CAT, Morphosys, Dyax, Biosite/Medarex, Xoma, Symphogen, Alexion (anteriormente Proliferon), Affimed) presentación en ribosomas (CAT), plataformas basadas en levadura (Adimab), y similares. En determinados métodos de presentación en fagos, se clonan por separado repertorios de genes de VH y VL mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y se recombinan aleatoriamente en fagotecas, que posteriormente pueden someterse a cribado para seleccionar fagos de unión a antígeno como se describe en Winter et al. Ann. Rev. Immunol.
12: 433-455 (1994). Por ejemplo, en la técnica se conocen diversos métodos para generar bibliotecas de presentación en fagos y para cribar dichas bibliotecas para seleccionar anticuerpos que poseen las características de unión deseadas. Véase también Sidhu et al. J. Mol. Biol. 338(2): 299-310, 2004; Lee et al. J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093, 2004; Fellouse Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); y Lee et al. J. Immunol. Methods 284(-2):1 19-132 (2004). Los fagos normalmente presentan fragmentos de anticuerpo, ya sea en forma de fragmentos Fv monocatenarios (scFv) o en forma de fragmentos Fab. Las bibliotecas de fuentes inmunizadas proporcionan anticuerpos de alta afinidad para el inmunógeno sin necesidad de construir hibridomas. Como alternativa, el repertorio sin exposición previa se puede clonar (por ejemplo, a partir de un ser humano) para proporcionar una única fuente de anticuerpos contra una amplia gama de antígenos no propios y también propios sin ninguna inmunización como se describe en Griffiths et al. EMBO J. 12: 725-734 (1993). Finalmente, también pueden producirse sintéticamente bibliotecas sin exposición previa clonando segmentos de gen V no reordenados de células madre y usando cebadores para la PCR que comprenden secuencia aleatoria para codificar las regiones HVR3 altamente variables y para lograr el reordenamiento in vitro, como describe Hoogenboom et al. J. Mol. Biol., 227: 381-388, 1992. Las publicaciones de patente que describen fagotecas de anticuerpos humanos incluyen, por ejemplo: la patente de EE. UU. N.° 5750373 y la publicación de patente de EE. UU. N.° 2007/0292936 y 2009/0002360. Los anticuerpos aislados de bibliotecas de anticuerpos humanos se consideran anticuerpos humanos o fragmentos de anticuerpos humanos en el presente documento.
(5) Regiones constantes que incluyen regiones Fc
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo comprende una Fc. En algunas realizaciones, la Fc es de un isotipo IgG1, IgG2, IgG3 y/o IgG4 humana. En algunas realizaciones, el anticuerpo es de la clase IgG, la clase IgM o la clase IgA.
En determinadas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo tiene un isotipo IgG2. En algunas realizaciones, el anticuerpo contiene una región constante de IgG2 humana. En algunas realizaciones, la región constante de IgG2 humana incluye una región Fc. En algunas realizaciones, el anticuerpo induce dichas una o más actividades de sortilina o independientemente de la unión a un receptor de Fc. En algunas realizaciones, el anticuerpo se une a un receptor de Fc inhibidor. En determinadas realizaciones, el receptor de Fc inhibidor es el receptor de Fc-gamma inhibidor IIB (Fcy IIB).
En determinadas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo tiene un isotipo IgG1. En algunas realizaciones, el anticuerpo contiene una región constante de IgG 1 de ratón. En algunas realizaciones, el anticuerpo contiene una región constante de IgG1 humana. En algunas realizaciones, la región constante de IgG1 humana incluye una región Fc. En algunas realizaciones, el anticuerpo se une a un receptor de Fc inhibidor. En determinadas realizaciones, el receptor de Fc inhibidor es el receptor de Fcgamma inhibidor IIB (FcyIIB).
En determinadas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo tiene un isotipo IgG4. En algunas realizaciones, el anticuerpo contiene una región constante de IgG4 humana. En algunas realizaciones, la región constante de IgG4 humana incluye una región Fc. En algunas realizaciones, el anticuerpo se une a un receptor de Fc inhibidor. En determinadas realizaciones, el receptor de Fc inhibidor es el receptor de Fc-gamma inhibidor IIB (Fcy IIB).
En determinadas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo tiene un isotipo híbrido IgG2/4. En algunas realizaciones, el anticuerpo incluye una secuencia de aminoácidos que comprende los aminoácidos 118 a 260 de acuerdo con la numeración EU de la IgG2 humana y los aminoácidos 261-447 de acuerdo con la numeración EU de la IgG4 humana (documentos WO 1997/11971; WO 2007/106585).
En algunas realizaciones, la región Fc aumenta la agrupación sin activar el complemento en comparación con un anticuerpo correspondiente que comprende una región Fc que no comprende las sustituciones de aminoácidos. En algunas realizaciones, el anticuerpo induce una o más actividades de una diana unida específicamente al anticuerpo. En algunas realizaciones, el anticuerpo se une a sortilina.
También puede ser deseable modificar un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación para modificar la función efectora y/o aumentar la semivida sérica del anticuerpo. Por ejemplo, el sitio de unión del receptor de Fc en la región constante puede modificarse o mutarse para eliminar o reducir la afinidad de unión a determinados receptores de Fc, tales como FcyRI, FcyRII y/o FcyRIII para reducir la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos. En algunas realizaciones, la función efectora se ve afectada al eliminar la N-glucosilación de la región Fc (p. ej., en el dominio CH2 de IgG) del anticuerpo. En algunas realizaciones, la función efectora se ve afectada por la modificación de regiones tales como 233-236, 297 y/o 327-331 de la IgG humana como se describe en el documento WO 99/58572 y Armour et al. Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy et al. J. Immunology 164: 1925-1933 (2000). En otras realizaciones, también puede ser deseable modificar un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación para modificar la función efectora para aumentar la selectividad de búsqueda hacia el FcgRIIb (CD32b) que contiene ITIM para aumentar la agrupación de anticuerpos de sortilina en células adyacentes sin activar respuestas humorales, incluidas la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos y la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos.
Para aumentar la semivida sérica del anticuerpo, se puede incorporar un epítopo de unión al receptor de rescate en el anticuerpo (especialmente un fragmento de anticuerpo) como se describe en la patente de EE. UU N.° 5739277, por ejemplo. Como se utiliza en el presente documento, la expresión "epítopo de unión al receptor de rescate" se refiere a un epítopo de la región Fc de una molécula de IgG (por ejemplo, IgGi, IgG2, IgG3 o IgG4) que es responsable del aumento de la semivida sérica de la molécula de IgG in vivo. Otras modificaciones de la secuencia de aminoácidos.
(6) Anticuerpos multiespecfficos
Los anticuerpos multiespecíficos son anticuerpos que tienen especificidades de unión para al menos dos epítopos diferentes, incluidos los del mismo u otro polipéptido (p. ej., uno o más polipéptidos de sortilina de la presente divulgación). En algunas realizaciones, el anticuerpo multiespecífico puede ser un anticuerpo biespecífico. En algunas realizaciones, el anticuerpo multiespecífico puede ser un anticuerpo triespecífico. En algunas realizaciones, el anticuerpo multiespecífico puede ser un anticuerpo tetraespecífico. Estos anticuerpos pueden prepararse como anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpos (por ejemplo anticuerpos biespecíficos F(ab')2). En algunas realizaciones, el anticuerpo multiespecífico comprende una primera región de unión a antígeno que se une al primer sitio de sortilina y comprende una segunda región de unión a antígeno que se une a un segundo sitio de sortilina. En alguna realización, los anticuerpos multiespecíficos comprenden una primera región de unión a antígeno que se une a sortilina y una segunda región de unión a antígeno que se une a un segundo polipéptido.
En el presente documento se proporcionan anticuerpos multiespecíficos que comprenden una primera región de unión a antígeno, en donde la primera región de unión a antígeno comprende las seis HVR de un anticuerpo descrito en el presente documento, que se une a sortilina y una segunda región de unión a antígeno que se une a un segundo polipéptido. En algunas realizaciones, la primera región de unión a antígeno comprende la VH o VL de un anticuerpo descrito en el presente documento.
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos multiespecíficos, el segundo polipéptido es a) un antígeno que facilita el transporte a través de la barrera hematoencefálica; (b) un antígeno que facilita el transporte a través de la barrera hematoencefálica seleccionado del receptor de transferrina (TR), receptor de la insulina (HIR), receptor del factor de crecimiento similar a la insulina (IGFR), proteínas 1 y 2 relacionadas con receptores de lipoproteínas de baja densidad (LPR-1 y 2), receptor de toxina diftérica, CRM197, un anticuerpo de dominio único de llama. TMEM 30(A), dominio de transducción de proteínas, TAT, Syn-B, penetratina, un péptido de poliarginina, un péptido Angiopep y ANG1005; (c) una proteína causante de enfermedad seleccionada de beta amiloide, beta amiloide oligomérico, placas de beta amiloide, proteína precursora de amiloide o fragmentos de la misma, Tau, IAPP, alfa-sinucleína, TDP-43, proteína FUS, C9orf72 (marco de lectura abierto 72 del cromosoma 9), proteína c9RAN, proteína priónica, PrPSc, huntingtina, calcitonina, superóxido dismutasa, ataxina, ataxina 1, ataxina 2, ataxina 3, ataxina 7, ataxina 8, ataxina 10, cuerpo de Lewy, factor natriurético auricular, polipéptido amiloide de los islotes, insulina, apolipoproteína Al, amiloide sérico A, medina, prolactina, transtiretina, lisozima, beta 2 microglobulina, gelsolina, queratoepitelina, cistatina, cadena ligera de inmunoglobulina AL, proteína S-IBM, productos de traducción no ATG (RAN) asociados a repeticiones, péptidos de repetición del dipéptidos (DPR), péptidos de repetición de glicina-alanina (GA), péptidos de repetición de glicina-prolina (GP), péptidos de repetición de glicina-arginina (GR), péptidos de repetición de prolinaalanina (PA), ubiquitina y péptidos de repetición de prolina-arginina (PR); (d) ligandos y/o proteínas expresadas en células inmunitarias, en donde los ligandos y/o proteínas se seleccionan de CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA-4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG-3 y fosfatidilserina; y/o (e) una proteína, lípido, polisacárido o glicolípido expresado en una o más células tumorales y cualquier combinación de los mismos.
En la técnica se conocen numerosos antígenos que facilitan el transporte a través de la barrera hematoencefálica (véase, p. ej., Gabathuler R. Neurobiol. Dis. 37:48-57 (2010)). Dichos segundos antígenos incluyen, aunque no de forma limitativa, receptor de transferrina (TR), receptor de la insulina (HIR), receptor del factor de crecimiento similar a la insulina (IGFR), proteínas 1 y 2 relacionadas con receptores de lipoproteínas de baja densidad (LPR-1 y 2), receptor de toxina diftérica, incluyendo CRM 197 (un mutante no tóxico de la toxina diftérica), anticuerpos de dominio único de llama tales como TMEM 30(A) (Flippase), dominios de transducción de proteínas tales como TAT, Syn-B o penetratina, péptidos de poliarginina o cargados positivamente en general, péptidos Angiopep tales como ANG1005 (véase, p. ej., Gabathuler, 2010), y otras proteínas de la superficie celular en las que están enriquecidas las células endoteliales de la barrera hematoencefálica (véase, p. ej., Daneman et al. PLoS One 5(10):e13741 (2010)).
Los anticuerpos multivalentes pueden reconocer el antígeno sortilina así como, aunque no de forma limitativa, antígenos adicionales del péptido Ap, antígeno o un antígeno proteico de a-sinucleína o, antígeno de la proteína Tau o, antígeno de la proteína TDP-43 o, antígeno de proteína priónica o, antígeno de la proteína huntingtina, o RAN, antígeno de productos de traducción, incluyendo las repeticiones de dipéptido, (péptidos DPR) compuestas de glicinaalanina (GA), glicina-prolina (GP), glicina-arginina (GR), prolina-alanina (PA) o prolina-arginina (PR), receptor de insulina, receptor del factor de crecimiento similar a la insulina. Receptor de transferrina o cualquier otro antígeno que facilite la transferencia de anticuerpos a través de la barrera hematoencefálica. En algunas realizaciones, el segundo polipéptido es transferrina. En algunas realizaciones, el segundo polipéptido es Tau. En algunas realizaciones, el segundo polipéptido es Ap. En algunas realizaciones, el segundo polipéptido es TREM2. En algunas realizaciones, el segundo polipéptido es a-sinucleína.
El anticuerpo multivalente contiene al menos una cadena polipeptídica (y preferentemente dos cadenas polipeptídicas), en donde la cadena o cadenas polipeptídicas comprenden dos o más dominios variables. Por ejemplo, la cadena o cadenas polipeptídicas pueden comprender VD1-(X1 )n-VD2-(X2)n-Fc, en donde VD1 es un primer dominio variable, VD2 es un segundo dominio variable, Fc es una cadena polipeptídica de una región Fc, X1 y X2 representan un aminoácido o polipéptido y n es 0 o 1. De modo similar, la cadena o cadenas polipeptídicas pueden comprender VR-CR1-enlazador flexible-VH-CH1-cadena de región Fc; o VH-CH1-VR-CH1-cadena de región Fc. El anticuerpo multivalente en el presente documento comprende además preferentemente al menos dos (y preferentemente cuatro) polipéptidos de dominio variable de cadena ligera. El anticuerpo multivalente en el presente documento puede, por ejemplo, comprender de aproximadamente dos a aproximadamente ocho polipéptidos de dominio variable de cadena ligera. Los polipéptidos de dominio variable de cadena ligera contemplados en el presente documento comprenden un dominio variable de cadena ligera y, opcionalmente, comprenden adicionalmente un dominio CL.
Las técnicas para producir anticuerpos multiespecíficos incluyen, aunque no de forma limitativa, coexpresión recombinante de dos pares de cadena pesada-cadena ligera de inmunoglobulina que tienen diferentes especificidades (véase Milstein y Cuello, Nature 305: 537 (1983), documento WO 93/08829 y Traunecker et al. EMbO J. 10:3655, 1991)), y la modificación por ingeniería genética de "botón en ojal" (véase, p. ej., la patente de EE. UU. N.° 5731168). Véase también el documento WO 2013/026833 (CrossMab). También pueden producirse anticuerpos multiespecíficos creando por ingeniería genética efectos de direccionamiento electrostático para producir moléculas heterodiméricas de Fc de anticuerpo (documento WO 2009/089004A1); mediante entrecruzamiento de dos o más anticuerpos o fragmentos (véase, p. ej., la patente de EE. UU. N.° 4676980); utilizando leucina; utilizando la tecnología de "diacuerpo" para producir fragmentos de anticuerpo biespecíficos (véase, p. ej., Hollinger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)), y utilizando dímeros de Fv monocatenarios (scFv) (véase, p. ej., Gruber et al. J. Immunol.
152:5368 (1994)); y preparando anticuerpos triespecíficos, como se describe, p. ej., en Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991).
También se incluyen en el presente documento anticuerpos modificados por ingeniería genética con tres o más sitios de unión a antígeno funcionales, que incluyen los "anticuerpos Octopus" (véase, p. ej., el documento US 2006/0025576). El anticuerpo del presente documento también incluye un "FAb de doble acción" o "DAF" que comprende un sitio de unión a antígeno que se une a múltiples sortilinas (véase, por ejemplo, el documento US 2008/0069820).
(7) Anticuerpos con estabilidad mejorada
También se contemplan modificaciones de la secuencia de aminoácidos de los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación, o fragmentos de anticuerpo de los mismos para mejorar la estabilidad durante la fabricación, almacenamiento y administración in vivo. Por ejemplo, puede ser deseable reducir la degradación de los anticuerpos o fragmentos de anticuerpo de la presente divulgación a través de múltiples vías, incluyendo, aunque no de forma limitativa, oxidación y desamidación. Las variantes de secuencia de aminoácidos de los anticuerpos o fragmentos de anticuerpo se preparan introduciendo cambios de nucleótidos apropiados en el ácido nucleico que codifica los anticuerpos o fragmentos de anticuerpo, o mediante la síntesis de péptidos. Dichas modificaciones incluyen, por ejemplo, eliminaciones de y/o inserciones en y/o sustituciones de, restos dentro de las secuencias de aminoácidos del anticuerpo. Puede efectuarse cualquier combinación de eliminación, inserción y sustitución para llegar a la construcción final, siempre que la construcción final posea las características deseadas (es decir, susceptibilidad reducida a la degradación).
En algunas realizaciones, el sitio de asparagina (N33) en la región HVR-L1 de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede ser susceptible de degradación por medio de desamidación. En determinadas realizaciones, el sitio de asparagina (N33) en la región HVR-L1 de S-60-15 (SEQ ID NO: 8) puede ser susceptible a la desamidación. Tras la desamidación, el sitio de asparagina (N33) en la región HVR-L1 de S-60-15 da como resultado un cambio de Asn a Asp/IsoAsp. En determinadas realizaciones, el sitio de asparagina (N33) en la región HVR-Ll de S-60-15 puede sustituirse para prevenir o reducir la desamidación. Las variantes de secuencia de aminoácidos ilustrativas no limitantes de S-60-15 que tienen sustituciones de aminoácidos en el sitio de asparagina (N33) de la región HVR-Ll incluyen S-60-15. 1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M] o S-60-15.17 [N33L].
(8) Variantes de anticuerpos
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, se contemplan variantes de secuencia de aminoácidos de los anticuerpos. Por ejemplo, puede ser deseable mejorar la afinidad de unión y/u otras propiedades biológicas del anticuerpo.
(i) Variantes de sustitución, inserción y eliminación
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, se proporcionan variantes de anticuerpo que tienen una o más sustituciones de aminoácidos. Pueden prepararse variantes de secuencias de aminoácidos de un anticuerpo mediante la introducción de modificaciones adecuadas en la secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo o mediante síntesis peptídica. Dichas modificaciones incluyen, por ejemplo, eliminaciones de y/o inserciones en y/o sustituciones de restos en las secuencias de aminoácidos del anticuerpo. TABLA 37: Sustituciones de aminoácidos
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Se logran modificaciones sustanciales en las propiedades biológicas del anticuerpo seleccionando sustituciones que difieren significativamente en su efecto en el mantenimiento de (a) la cadena principal polipeptídica en la zona de la sustitución, por ejemplo, en forma de una conformación de lámina o de hélice, (b) la carga o la hidrofobicidad de la molécula en el sitio diana, o (c) el volumen de la cadena lateral. Los restos de origen natural se dividen en grupos basándose en las propiedades comunes de las cadenas laterales:
(1) hidrófobos: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) hidrófilos neutros: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) ácidos: Asp, Glu;
(4) básicos: His, Lys, Arg;
(5) restos que influyen en la orientación de la cadena: Gly, Pro; y
(6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe.
Por ejemplo, las sustituciones no conservativas pueden implicar el intercambio de un miembro de una de estas clases por un miembro de otra clase. Dichos restos sustituidos pueden introducirse, por ejemplo, en regiones de un anticuerpo humano que son homólogas a las de anticuerpos no humanos o en las regiones no homólogas de la molécula.
Al realizar cambios en el polipéptido o anticuerpo descrito en el presente documento, de acuerdo con determinadas realizaciones, puede tenerse en consideración el índice hidropático de los aminoácidos. A cada aminoácido se le ha asignado un índice hidropático basándose en sus características de hidrofobicidad y carga. Estos son: isoleucina (+4,5); valina (+4,2); leucina (+3,8); fenilalanina (+2,8); cisteína/cistina (+2,5); metionina (+1,9); alanina (+1,8); glicina (-0,4); treonina (-0,7); serina (-0,8); triptófano (-0,9); tirosina (-1,3); prolina (-1,6); histidina (-3,2); glutamato (-3,5); glutamina (-3,5); aspartato (-3,5); asparagina (-3,5); lisina (-3,9); y arginina (-4,5).
Se comprende en la técnica la importancia del índice hidropático de aminoácidos a la hora de conferir una función biológica interactiva a una proteína. Kyte et al. J. Mol. Biol., 157:105-131 (1982). Se sabe que pueden sustituirse ciertos aminoácidos por otros aminoácidos que tengan un índice hidropático o una puntuación similar y que sigan conservando una actividad biológica similar. Al hacer cambios basados en el índice hidropático, en determinadas realizaciones, se incluye la sustitución de aminoácidos cuyos índices hidropáticos se encuentran a ±2. En determinadas realizaciones, se incluyen aquellos que se encuentran a ±1 y en determinadas realizaciones, se incluyen aquellos a ±0,5.
También se entiende en la técnica que la sustitución de aminoácidos similares puede efectuarse eficazmente basándose en la hidrofilia, en particular cuando la proteína biológicamente funcional o el péptido creado de este modo está pensado para su uso en realizaciones inmunológicas, como es el presente caso. En determinadas realizaciones, la mayor hidrofilia media local de una proteína, regida por la hidrofilia de sus aminoácidos adyacentes, está correlacionada con su inmunogenicidad y antigenicidad, es decir, con una propiedad biológica de la proteína.
Se han asignado los siguientes valores de hidrofilia a estos restos de aminoácido: arginina (+3,0); lisina (+3,0+1); aspartato (+3,0±1); glutamato (+3,0±1); serina (+0,3); asparagina (+0,2); glutamina (+0,2); glicina (0); treonina (-0,4); prolina (-0,5±1); alanina (-0,5); histidina (-0,5); cisteína (-1,0); metionina (-1,3); valina (-1,5); leucina (-1,8); isoleucina (-1,8); tirosina (-2,3); fenilalanina (-2,5) y triptófano (-3,4). Al hacer cambios basándose en valores de hidrofilia similares, en determinadas realizaciones, se incluye la sustitución de aminoácidos cuyos valores de hidrofilia se encuentren en un intervalo de ±2, en determinadas realizaciones, se incluyen aquellos que se encuentran a ±1 y en determinadas realizaciones, se incluyen aquellos a ±0,5. También pueden identificarse epítopos de secuencias de aminoácidos primarias basándose en la hidrofilia. Estas regiones también denominan "regiones centrales epitópicas".
En determinadas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones se pueden realizar en una o más HVR siempre que dichas alteraciones no reduzcan sustancialmente la capacidad del anticuerpo para unirse al antígeno. Por ejemplo, pueden efectuarse alteraciones conservativas (por ejemplo, sustituciones conservativas, tal como se proporcionan en el presente documento) que no reduzcan sustancialmente la afinidad de unión en las HVR. Dichas alteraciones pueden, por ejemplo, estar fuera de los restos de contacto con el antígeno en las HVR. En determinadas realizaciones de las secuencias variantes de VH y VL proporcionadas anteriormente, cada HVR bien está intacta o bien no contiene más de una, dos o tres sustituciones de aminoácidos.
Las inserciones en secuencias de aminoácidos incluyen fusiones en el extremo amino y/o carboxilo con un intervalo de longitudes de un resto a polipéptidos que contienen cien o más restos, así como inserciones intrasecuencia de restos de aminoácidos individuales o múltiples. Los ejemplos de inserciones en los extremos incluyen un anticuerpo con un resto metionilo en el extremo N. Otras variantes de inserción de la molécula de anticuerpo incluyen la fusión al extremo N o C del anticuerpo de una enzima (por ejemplo, para ADEPT) o un polipéptido que aumenta la semivida sérica del anticuerpo.
Cualquier resto de cisteína no implicado en el mantenimiento de la conformación apropiada del anticuerpo también puede sustituirse, en general con serina, para mejorar la estabilidad oxidativa de la molécula y evitar un entrecruzamiento aberrante. A la inversa, puede añadirse uno o más enlaces de cisteína al anticuerpo para mejorar su estabilidad (particularmente cuando el anticuerpo sea un fragmento de anticuerpo, tal como un fragmento Fv).
(ii) Variantes de glucosilación
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo se altera para aumentar o disminuir el grado en el que el anticuerpo está glucosilado. La adición o eliminación de sitios de glucosilación en un anticuerpo puede lograrse convenientemente alterando la secuencia de aminoácidos, de tal forma que se crea o elimina más de un sitio de glucosilación.
La glucosilación de anticuerpos suele estar unida a N o unida a O. La unida a N se refiere a la unión de la fracción de carbohidrato a la cadena lateral de un resto de asparagina. Las secuencias tripeptídicas de asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina, donde X es cualquier aminoácido excepto prolina, son las secuencias de reconocimiento para la unión enzimática de la fracción de carbohidrato a la cadena lateral de asparagina. Por lo tanto, la presencia de una de estas secuencias tripeptídicas en un polipéptido crea un posible sitio de glucosilación. La glucosilación unida a O se refiere a la unión de uno de los azúcares N-acetilgalactosamina, galactosa o xilosa a un hidroxiaminoácido, la mayoría de las veces serina o treonina, aunque también pueden usarse 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina.
La adición de sitios de glucosilación al anticuerpo se realiza convenientemente alterando la secuencia de aminoácidos de tal manera que contenga una o más de las secuencias tripeptídicas descritas anteriormente (para sitios de glucosilación unidos a N). La modificación también puede realizarse mediante la adición de, o sustitución por, uno o más restos de serina o treonina en la secuencia del anticuerpo original (para sitios de glucosilación unidos a O).
Cuando el anticuerpo comprende una región Fc, puede alterarse el carbohidrato unido a la misma. Los anticuerpos nativos producidos por células de mamífero comprenden normalmente un oligosacárido biantenario, ramificado, que está unido generalmente mediante un enlace N a la Asn297 del dominio CH2 de la región Fc. El oligosacárido puede incluir diversos carbohidratos, por ejemplo, manosa, N-acetil glucosamina (GlcNAc), galactosa y ácido siálico, así como una fucosa unida a una GlcNAc en el "tallo" de la estructura de oligosacárido biantenaria. En algunas realizaciones, para crear variantes de anticuerpo con determinadas propiedades mejoradas, pueden realizarse modificaciones del oligosacárido en un anticuerpo de la invención.
En una realización, se proporcionan variantes de anticuerpos que tienen una estructura de carbohidrato que carece de fucosa unida (directa o indirectamente) a una región Fc. Véanse, p. ej., las publicaciones de patente de EE. UU. N.° 2003/0157108 y 2004/0093621. Como ejemplos de publicaciones relacionadas con variantes de anticuerpo "desfucosiladas" o "deficientes en fucosa" se incluyen: el documento US 2003/0157108; el documento US 2003/0115614; el documento US 2002/0164328; el documento US 2004/0093621; el documento US 2004/0132140; el documento US 2004/0110704; el documento US 2004/0110282; el documento US 2004/0109865; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614 (2004). Los ejemplos de líneas celulares capaces de producir anticuerpos desfucosilados incluyen células Led 3 CHO deficientes en fucosilación de proteínas (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); documento US 2003/0157108) y líneas celulares con supresión génica, tales como el gen de la alfa-1,6-fucosiltransferasa, FUT8, células CHO con supresión génica (véase, p. ej., Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004) y Kanda et al. Biotechnol. Bioeng. 94(4):680-688 (2006)).
(iii) Regiones constantes modificadas
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo Fc es un anticuerpo de isotipos y/o modificaciones de Fc. En algunas realizaciones, el isotipo de Fc del anticuerpo y/o la modificación es capaz de unirse al receptor de Fc gamma.
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, la Fc del anticuerpo modificado es una Fc modificada con IgG1. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG1 comprende una o más modificaciones. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG 1 comprende una o más sustituciones de aminoácidos (p. ej., en relación con una región Fc de tipo silvestre del mismo isotipo). En algunas realizaciones, la una o más sustituciones de aminoácidos se seleccionan de N297A (Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23:403-41 1), D265A (Shields et al. (2001) R. J. Biol. Chem. 276, 6591-66(4), L234A, L235A (Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci u Sa , 92:11980-11984; Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543, 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A (Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al. (2000) Cell Immunol, 200: 16-26), C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E (McEarchem et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P331S (Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105:20167-20172), S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T y/o T256E, donde la posición del aminoácido está de acuerdo con la convención de numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, el anticuerpo es un isotipo IgG1 y la región Fc comprende sustituciones de aminoácidos en las posiciones L234A, L235A y P331S, en donde la numeración de la posición del resto está de acuerdo con la numeración EU.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG 1, la Fc comprende la mutación N297A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende las mutaciones D265A y N297A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende mutaciones D270A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG1 comprende las mutaciones L234A y L235A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende las mutaciones L234A y G237A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende las mutaciones L234A, L235A y G237A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende una o más (incluidas todas) de P238D, L328E, E233, G237D, H268D, P271G y A330R de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende una o más de las mutaciones S267E/L328F de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG 1, la Fc comprende P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G y A330R de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende P238D, L328E, G237D, H268D, P271G y A330R de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende P238D, S267E, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G y a 330R de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende P238D, S267E, L328E, G237D, H268D, P271G y A330R de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende C226S, C229S, E233P, L234V y L235A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende L234F, L235E y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende las mutaciones S267E y L328F de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende mutaciones S267E de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc comprende una sustitución de la región constante pesada 1 (CH1) y la región bisagra de IgG1 con la región CH1 y la región bisagra de IgG2 (aminoácidos 118-230 de IgG2 de acuerdo con la numeración EU) con una cadena ligera Kappa.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG 1, la Fc incluye dos o más sustituciones de aminoácidos que aumentan la agrupación de anticuerpos sin activar el complemento en comparación con un anticuerpo correspondiente que tiene una región Fc que no incluye las dos o más sustituciones de aminoácidos. Por consiguiente, en algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc modificada con IgG1 es un anticuerpo que comprende una región Fc, donde el anticuerpo comprende una sustitución de aminoácidos en la posición E430G y una o más sustituciones de aminoácidos en la región Fc en una posición de resto seleccionada de: L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S y cualquier combinación de los mismos de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG1 comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, L243A, L235A y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG1 comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG1 comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G y K322A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG1 comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, A330S y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG1 comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, K322A, A330S y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG1 comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, K322A y A330S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG1 comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, K322A y P331S de acuerdo con la numeración EU.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc modificada con IgG1 del presente documento puede combinarse con una mutación A330L (Lazar et al. Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010 (2006)), o una o más de las mutaciones L234F, L235E y/o P331S (Sazinsky et al. Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172 (2008)), de acuerdo con la convención de numeración EU, para eliminar la activación del complemento. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc modificada con IgG 1 puede comprender además una o más de A330L, A330S, L234F, L235E y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1, la Fc modificada con IgG1 puede comprender además una o más mutaciones para mejorar la semivida del anticuerpo en suero humano (p. ej., una o más mutaciones (incluidas todas) de M252Y, S254T y T256E de acuerdo con la convención de numeración EU). En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG 1, la Fc modificada con IgG1 puede comprender además una o más de E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, E345Q, E345R, E345Y, S440Y y S440W de acuerdo con la numeración EU.
Otros aspectos de la presente divulgación se refieren a anticuerpos que tienen regiones constantes modificadas (es decir, regiones Fc). Un anticuerpo que depende de la unión al receptor FcgR para activar los receptores específicos puede perder su actividad agonista si se modifica por ingeniería genética para eliminar la unión de FcgR (véase, p. ej., Wilson et al. Cancer Cell 19:101-113 (2011); Armour at al. Immunology 40:585-593 (2003) y White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015)). Por lo tanto, se cree que un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación con la especificidad de epítopo correcta puede activar el antígeno diana, con efectos adversos mínimos, cuando el anticuerpo tiene un dominio Fc de un isotipo IgG2 humano (CH1 y región bisagra) u otro tipo de dominio Fc que es capaz de unirse preferentemente a los receptores FcgRIIB r inhibidores, o una variación de los mismos.
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, la Fc del anticuerpo modificado es una Fc modificada con IgG2. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG2 comprende una o más modificaciones. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG2 comprende una o más sustituciones de aminoácidos (p. ej., en relación con una región Fc de tipo silvestre del mismo isotipo). En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la una o más sustituciones de aminoácidos se seleccionan de V234A (Alegre et al. Transplantation 57:1537-1543 (1994); Xu et al. Cell Immunol, 200:16-26 (2000)); G237A (Cole et al. Transplantation, 68:563-571 (1999)); H268Q, V309L, A330S, P331S (US 2007/0148167; Armour et al. Eur J Immunol 29: 2613-2624 (1999); Armour et al. The Haematology Journal 1 (Suppl.1):27 (2000); Armour et al. The Haematology Journal 1(Suppl. 1):27 (2000)), C219S y/o C220S (White et al. Cancer Cell 27, 138-148 (2015)); S267E, L328F (Chu et al. Mol Immunol. 45:3926-3933 (2008)); y M252Y, S254T y/o T256E de acuerdo con la convención de numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones V234A y G237A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones C219S y C220S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones A330S y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones S267E y L328F de acuerdo con la numeración EU.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos C127S de acuerdo con la convención de numeración EU (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010); y documento WO 2008/079246). En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, el anticuerpo tiene un isotipo IgG2 con un dominio constante de cadena ligera Kappa que comprende una sustitución de aminoácidos C214S de acuerdo con la convención de numeración EU (White et al. Cancer Cell 27: 138-148 (2015); Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010); y documento WO 2008/079246).
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos C220S de acuerdo con la convención de numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, el anticuerpo tiene un isotipo IgG2 con un dominio constante de cadena ligera Kappa que comprende una sustitución de aminoácido C214S de acuerdo con la convención de numeración EU.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos C219S de acuerdo con la convención de numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, el anticuerpo tiene un isotipo IgG2 con un dominio constante de cadena ligera Kappa que comprende una sustitución de aminoácido C214S de acuerdo con la convención de numeración EU.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc incluye un dominio constante de cadena pesada 1 (CH1) de isotipo IgG2 y una región bisagra (White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015)). En ciertas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, el isotipo CH1 de IgG2 y la región bisagra comprenden la secuencia de aminoácidos de 118-230 de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la región Fc del anticuerpo comprende una sustitución de aminoácido S267E, una sustitución de aminoácido L328F, o ambas, y/o una sustitución de aminoácido N297A o N297Q de acuerdo con la convención de numeración EU.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc comprende además una o más sustituciones de aminoácidos en las posiciones E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, e 345Q, E345R, E345Y, S440Y y S440W de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc puede comprender además una o más mutaciones para mejorar la semivida del anticuerpo en suero humano (p. ej., una o más mutaciones (incluidas todas) de M252Y, S254T y T256E de acuerdo con la convención de numeración EU). En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc puede comprender además A330S y P331S.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc es una Fc híbrida de IgG2/4. En algunas realizaciones, la Fc híbrida de IgG2/4 comprende los aa 118 a 260 de IgG2 y los aa 261 a 447 de IgG4. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG2, la Fc comprende una o más sustituciones de aminoácidos en las posiciones H268Q, A330S y P331S de acuerdo con la numeración EU.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una o más sustituciones de aminoácidos adicionales seleccionadas de A330L, L234F; L235E y P331S de acuerdo con la numeración EU; y cualquier combinación de las mismas.
En determinadas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una o más sustituciones de aminoácidos en una posición de resto seleccionada de C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, E345r , E430G, S440Y y cualquier combinación de los mismos de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, L243A, L235A y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G y K322A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, A330S y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, K322A, A330S y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, K322A y A330S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, K322A y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones S267E y L328F de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácido en la posición C127S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG 1 y/o IgG2, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E345R, E430G y S440Y de acuerdo con la numeración EU.
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos proporcionados en el presente documento, la Fc del anticuerpo modificado es una Fc modificada con IgG4. En algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG4 comprende una o más modificaciones. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la Fc modificada con IgG4 comprende una o más sustituciones de aminoácidos (p. ej., en relación con una región Fc de tipo silvestre del mismo isotipo). En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la una o más sustituciones de aminoácidos se seleccionan de L235A, G237A, S229P, L236E (Reddy et al. J Immunol 164:1925-1933(2000)), S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T y/o T256E de acuerdo con la convención de numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc puede comprender además L235A, G237A y E318A de acuerdo con la convención de numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc puede comprender además S228P y L235E de acuerdo con la convención de numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc modificada con IgG4 puede comprender además S267E y L328F de acuerdo con la convención de numeración EU.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc modificada con IgG4 puede combinarse con una mutación S228P de acuerdo con la convención de numeración EU (Angal et al. Mol Immunol. 30:105-108 (1993)) y/o con una o más mutaciones descritas en (Peters et al. J Biol Chem.287(29):24525-33 (2012)) para potenciar la estabilización del anticuerpo.
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc modificada con IgG4 puede comprender además una o más mutaciones para mejorar la semivida del anticuerpo en suero humano (p. ej., una o más mutaciones (incluidas todas) de M252Y, S254T y T256E de acuerdo con la convención de numeración EU).
En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc comprende L235E de acuerdo con la numeración EU. En ciertas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc comprende una o más sustituciones de aminoácidos en una posición de resto seleccionada de C127S, F234A, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, E345R, E430G, S440Y, y cualquier combinación de las mismas, de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G, L243A, L235A y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G y P331S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G y K322A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc comprende una sustitución de aminoácido en la posición E430 de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la región Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E430G y K322A de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones S267E y L328F de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc comprende una sustitución de aminoácido en la posición C127S de acuerdo con la numeración EU. En algunas realizaciones de cualquiera de las Fc modificadas con IgG4, la Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones E345R, E430G y S440Y de acuerdo con la numeración EU.
(9) Otras modificaciones de anticuerpos
En algunas realizaciones de cualquiera de los anticuerpos, el anticuerpo es un derivado. El término "derivado" se refiere a una molécula que incluye una modificación química distinta de una inserción, eliminación o sustitución de aminoácidos (o ácidos nucleicos). En determinadas realizaciones, los derivados comprenden modificaciones covalentes, incluyendo, pero no de forma limitativa, enlace químico con polímeros, lípidos u otros restos orgánicos o inorgánicos. En determinadas realizaciones, una proteína de unión a antígeno químicamente modificada puede tener una mayor semivida en circulación que una proteína de unión a antígeno que no se ha modificado químicamente. En determinadas realizaciones, una proteína de unión a antígeno modificada químicamente puede tener una capacidad de direccionamiento mejorada para las células, tejidos y/u órganos deseados. En algunas realizaciones, se modifica covalentemente una proteína de unión a antígeno derivada para que incluya una o más uniones de polímero hidrosolubles, incluyendo, pero no de forma limitativa, polietilenglicol, polioxietilenglicol o polipropilenglicol. Véanse, p. ej., las patentes de EE. Uu . N.° 4640835, 4496689, 4301144, 4670417, 4791192 y 4179337. En determinadas realizaciones, una proteína de unión a antígeno derivada comprende uno o más polímeros, incluyendo, pero no de forma limitativa, monometoxi-polietilenglicol, dextrano, celulosa, copolímeros de etilenglicol/propilenglicol, carboximetilcelulosa, polivinilpirrolidona, poli-1,3-dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, copolímero de etileno/anhídrido maleico, poliaminoácidos (ya sean homopolímeros o copolímeros aleatorios), poli-(N-vinilpirrolidona)-polietilenglicol, homopolímeros de propilenglicol, un copolímero de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados (por ejemplo, glicerol) y alcohol polivinílico, así como mezclas de dichos polímeros.
En determinadas realizaciones, un derivado se modifica covalentemente con subunidades de polietilenglicol (PEG). En determinadas realizaciones, se unen uno o más polímeros hidrosolubles en una o más posiciones específicas, por ejemplo, en el extremo amino, de un derivado. En determinadas realizaciones, se acoplan aleatoriamente uno o más polímeros a una o más cadenas laterales de un derivado. En determinadas realizaciones, se utiliza PEG para mejorar la capacidad terapéutica para una proteína de unión a antígeno. En determinadas realizaciones, se utiliza PEG para mejorar la capacidad terapéutica para un anticuerpo humanizado. Se analizan algunos de estos métodos, por ejemplo, en la patente de EE. UU N.° 6133426.
Los análogos peptídicos se usan comúnmente en la industria farmacéutica como fármacos no peptídicos con propiedades análogas a las del péptido molde. Estos tipos de compuesto no peptídico se denominan "miméticos peptídicos" o "peptidomiméticos". Fauchere, J. Adv. Drug Res., 15:29 (1986); y Evans et al. J. Med. Chem., 30:1229 (1987). Normalmente, dichos compuestos se desarrollan con la ayuda de modelado molecular computarizado. Los miméticos peptídicos que son estructuralmente similares a péptidos terapéuticamente útiles pueden usarse para producir un efecto terapéutico o profiláctico similar. Por lo general, los peptidomiméticos son estructuralmente similares a un polipéptido paradigma (es decir, un polipéptido que tiene una propiedad bioquímica o una actividad farmacológica), tal como un anticuerpo humano, pero tienen uno o más enlaces peptídicos opcionalmente reemplazados por un enlace seleccionado de: -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH-(cis y trans), -COCH2-, -CH(OH)CH2- y -CH2SO-, mediante métodos bien conocidos en la técnica. La sustitución sistemática de uno o más aminoácidos de una secuencia consenso con un D-aminoácido del mismo tipo (por ejemplo, D-lisina en lugar de L-lisina) puede usarse en ciertas realizaciones para generar péptidos más estables. Además, pueden generarse péptidos restringidos que comprenden una secuencia consenso o una variación de la secuencia consenso sustancialmente idéntica mediante métodos conocidos en la técnica (Rizo y Gierasch, Ann. Rev, Biochem., 61:387 (1992); por ejemplo, mediante la adición de restos de cisteína internos capaces de formar puentes disulfuro intramoleculares que ciclan al péptido.
La conjugación de fármacos implica el acoplamiento de una carga biológica activa citotóxica (anticancerosa) o un fármaco a un anticuerpo que se dirige específicamente a un determinado marcador tumoral (por ejemplo, un polipéptido que, idealmente, solo se encuentra en o sobre células tumorales). Los anticuerpos rastrean estas proteínas en el cuerpo y se adhieren a la superficie de las células cancerosas. La reacción bioquímica entre el anticuerpo y la proteína diana (antígeno) desencadena una señal en la célula tumoral, que luego absorbe o internaliza el anticuerpo junto con la citotoxina. Una vez internalizado el ADC, el fármaco citotóxico se libera y destruye el cáncer. Debido a esta localización específica, idealmente, el fármaco tiene menores efectos secundarios y ofrece una ventana terapéutica más amplia que otros agentes quimioterapéuticos. Se divulgan técnicas para conjugar anticuerpos conocidas en la técnica (véase, p. ej., Jane de Lartigue One Live, 5 de julio de 2012; ADC Review on antibody-drug conjugates; y Ducry et al. Bioconjugate Chemistry 21 (1):5-13 (2010).
Ensayos de unión y otros ensayos
Los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden ensayarse para determinar la actividad de unión al antígeno, p. ej., por métodos conocidos tales como ELISA, resonancia de plasmón superficial (SPR), transferencia de Western, citometría de flujo, FACS, Interferometría de biocapa etc.
En algunas realizaciones, se pueden utilizar ensayos de competición para identificar un anticuerpo que compita con cualquiera de los anticuerpos descritos en el presente documento. En algunas realizaciones, pueden utilizarse ensayos de competición para identificar un anticuerpo que compite con cualquiera de los anticuerpos indicados en las Tablas 1-30, o que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado de S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16, S-60-18, S-60-19 y S-60-24 para la unión a la sortilina. En determinadas realizaciones, dicho anticuerpo de competición se une al mismo epítopo (p. ej., un epítopo lineal o conformacional) al que se une cualquiera de los anticuerpos indicados en las Tablas 1-30, o que comprende la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado de S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16, S-60-18, S-60-19 y S-60-24. Se proporcionan métodos detallados para mapear un epítopo al que se une un anticuerpo en Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", en Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
En un ensayo de competición ilustrativo, se incuban sortilina inmovilizada o células que expresan sortilina en la superficie celular en una solución que comprende un primer anticuerpo marcado que se une a la sortilina (p. ej., humana o de primate no humano) y un segundo anticuerpo no marcado cuya capacidad para competir con el primer anticuerpo por la unión a la sortilina se está ensayando. El segundo anticuerpo puede estar presente en un sobrenadante de hibridoma. Como control, se incuban sortilina inmovilizada o células que expresan sortilina en una solución que comprende el primer anticuerpo marcado pero no el segundo anticuerpo no marcado. Después de la incubación en condiciones que permiten la unión del primer anticuerpo a la sortilina, se elimina el exceso de anticuerpo no unido y se mide la cantidad de marcador asociado con sortilina inmovilizada o con células que expresan sortilina. Si la cantidad de marcador asociado con sortilina inmovilizada o con células que expresan sortilina se encuentra sustancialmente reducida en la muestra de ensayo con respecto a la muestra del control, entonces esto indica que el segundo anticuerpo está compitiendo con el primer anticuerpo por la unión a la sortilina. Véase, Harlow y Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual cáp. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
Ensayos de unión a ligandos
Además, en el presente documento se proporcionan métodos de cribado de anticuerpos anti-sortilina que se unen a His131, Val 132, Pro 133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595 y/o Glu700 de sortilina humana (SEQ ID NO: 81); o a restos de aminoácidos de una sortilina de mamífero que corresponden a uno o más restos de aminoácidos His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595 y/o Glu700 de SEQ ID NO: 81, bloqueando de este modo las interacciones entre la sortilina y un ligando de sortilina (por ejemplo, progranulina, proneurotrofina, pro-NGF, pro-BDNF, pro-NT3, p75, APP, LpL, APOA5, APOE). En algunas realizaciones, se puede sintetizar una biblioteca de péptidos en la que una proteína sortilina se disecciona en péptidos consecutivos de 15 y 25 unidades separados por un resto de aminoácido y posteriormente se colocan en filtros. Después puede ensayarse la unión de un ligando de sortilina para determinar su capacidad para interactuar con el péptido receptor o con péptidos que están, por ejemplo, mutados en His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile 136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595 y/o Glu700 de bibliotecas de sortilina humana en presencia o ausencia de anticuerpos anti-sortilina mediante análisis de unión SPOT (por ejemplo, Frank, R y Overwin, H (1996) Methods. Mol. Biol. 66, 149-169; Reineke, U et al., (2002) J. Immunol. Methods 267, 13-26; y Andersen, OS et al., (2010) J, Biological Chemistry 285, 12210­ 12222).
Además, en el presente documento se proporcionan métodos de cribado de anticuerpos anti-sortilina que bloquean las interacciones (p. ej., la unión) de sortilina y un ligando de sortilina (p. ej., progranulina, proneurotrofina, pro-NGF, pro-BDNF, pro-NT3, p75, APP, LpL, APOA5, APOE). En algunas realizaciones, la interacción entre sortilina y ligandos de sortilina (p. ej., progranulina, proneurotrofina, pro-NGF, pro-BDNF, pro-NT3, p75, APP, LpL, APOA5, Ap OE) se puede caracterizar mediante análisis de resonancia de plasmón superficial (p. ej., Skeldal. S et al., (2012) J Biol Chem., 287:43798; y Andersen, OS et al., (2010) The Journal Of Biological Chemistry, 285,12210-12222, un ensayo de precipitación (pulldown) (por ejemplo, Andersen, OS et al., (2010) The Journal Of Biological Chemistry, 285,12210­ 12222, proteínas unidas a celulosa (por ejemplo, Andersen, OS et al., (2010) The Journal Of Biological Chemistry, 285.12210-12222), un ensayo de ligadura de proximidad (por ejemplo, Gustafsen, C et al., (2013) The Journal of Neuroscience, 33:64-71) y/o ligandos con etiqueta de fosfatasa alcalina en ensayos de unión celular (p. ej., Hu, F et al., (2010) Neuron 68, 654-667).
Ensayos basados en células
Además, en el presente documento se proporcionan métodos de cribado de un antagonista de unión a sortilina, tal como un anticuerpo anti-sortilina, que incluyen poner en contacto un agente (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina) con una célula que expresa una proteína sortilina en su superficie celular. En algunas realizaciones, el agente y la célula se ponen en contacto adicionalmente con un ligando de sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, la propia célula expresa un ligando de sortilina de la presente divulgación. Los métodos basados en células son particularmente adecuados para el cribado y validación de antagonistas de la unión de sortilina (p. ej., anticuerpos anti-sortilina) mediante la evaluación del efecto sobre la interacción entre la sortilina y un ligando de sortilina en el contexto de una célula.
Por consiguiente, ciertos aspectos de la presente divulgación se refieren a una célula que expresa una proteína sortilina de la presente divulgación en su superficie celular. En algunas realizaciones, la célula expresa endógenamente una proteína sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, la célula se modifica por ingeniería genética para expresar una proteína sortilina de la presente divulgación. En cualquiera de estas realizaciones, la proteína sortilina de la presente divulgación (ya sea endógena o recombinante) codificada por el polinucleótido incluirá preferentemente al menos los dominios de proteína requeridos para el procesamiento postraduccional, translocación a través de la membrana y direccionamiento a la superficie celular, incluyendo, aunque no de forma limitativa, un péptido señal y un dominio transmembrana. En algunas realizaciones, el péptido señal y/o el dominio transmembrana pueden referirse al péptido señal y/o el dominio transmembrana endógenos de la sortilina. En otras realizaciones, el péptido señal y/o el dominio transmembrana pueden referirse a un péptido señal y/o dominio transmembrana exógeno que se sabe que promueve la expresión en la superficie celular en la célula hospedadora deseada. En realizaciones preferidas, la proteína sortilina también contendrá un dominio suficiente para unirse a un ligando de sortilina de la presente divulgación.
En estas realizaciones, puede usarse cualquier célula que exprese una proteína sortilina de la presente divulgación en su superficie celular. En algunas realizaciones, la célula expresa endógenamente una proteína sortilina de la presente divulgación en su superficie celular. En algunas realizaciones, la célula se modifica por ingeniería genética para expresar una proteína sortilina de la presente divulgación en su superficie celular. Se puede usar cualquier ligando de sortilina adecuado de la presente divulgación, de manera que conserve la capacidad de unirse a la proteína sortilina expresada en la superficie celular. El ligando de sortilina no necesita estar marcado con fluorescencia. Los niveles de ligando de sortilina pueden detectarse mediante cualquier ensayo conocido en la técnica, incluyendo, aunque no de forma limitativa, ELISA, SPR, transferencia de Western, espectrometría de masas, inmunoprecipitación, micromatrices de péptidos, y similares.
En algunas realizaciones, los métodos divulgados en el presente documento implican cultivar una célula que expresa tanto una proteína sortilina en su superficie celular como un ligando de sortilina en un medio en condiciones en las que se expresan la proteína sortilina y el ligando de sortilina y el ligando de sortilina se libera en el medio; poner en contacto la célula con un agente (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina) en condiciones en las que la proteína sortilina es capaz de unirse al ligando de sortilina; y detectar un aumento en el nivel del ligando de sortilina en el medio, en comparación con el nivel del ligando de sortilina en el medio en ausencia del agente. Un aumento en el nivel del ligando de sortilina indica que el agente es un antagonista de la unión a la sortilina. Sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que la interacción entre la proteína sortilina expresada en la superficie celular y el ligando de sortilina secretado dará como resultado endocitosis y degradación en los lisosomas del ligando de sortilina. Por tanto, se cree que la disminución de esta interacción (p. ej., mediante la adición de un antagonista de la unión de sortilina de la presente divulgación) conduce a un aumento en el nivel del ligando de sortilina en el medio a lo largo del tiempo.
En estas realizaciones, puede usarse cualquier célula que exprese una proteína sortilina de la presente divulgación en su superficie celular y exprese y secrete un ligando de sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, la célula puede expresar endógenamente una proteína sortilina de la presente divulgación en su superficie celular. En algunas realizaciones, la célula puede expresar y secretar endógenamente un ligando de sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, la célula es una célula U-251 y el ligando de sortilina es una proteína progranulina. En algunas realizaciones, la célula puede modificarse mediante ingeniería genética recombinante para expresar una proteína sortilina de la presente divulgación en su superficie celular. En algunas realizaciones, la célula puede modificarse mediante ingeniería genética recombinante para expresar y secretar un ligando de sortilina de la presente divulgación.
En cualquiera de los ensayos basados en células descritos en el presente documento, se puede usar un ligando de sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, el ligando de sortilina es una proteína progranulina. El ligando de sortilina puede ser una proteína de longitud completa o puede ser un fragmento peptídico de unión a sortilina de la misma.
Ácidos nucleicos, vectores y células hospedadoras
Los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se pueden producir utilizando métodos y composiciones recombinantes, p. ej., como se describe en la patente de EE. UU. N.° 4816567. En algunas realizaciones, se proporcionan ácidos nucleicos aislados que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica cualquiera de los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación. Los ácidos nucleicos pueden codificar una secuencia de aminoácidos que comprende la Vl y/o una secuencia de aminoácidos que comprende la Vh del anticuerpo anti-sortilina (por ejemplo, las cadenas ligeras y/o pesadas del anticuerpo). En algunas realizaciones, se proporcionan uno o más vectores (p. ej., vectores de expresión) que comprenden dichos ácidos nucleicos. En algunas realizaciones, también se proporciona una célula hospedadora que comprende dicho ácido nucleico. En algunas realizaciones, una célula hospedadora comprende (por ejemplo, se ha transducido con): (1) un vector que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende la Vl del anticuerpo y una secuencia de aminoácidos que comprende la Vh del anticuerpo o (2) un primer vector que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende la Vl del anticuerpo y un segundo vector que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende la Vh del anticuerpo. En algunas realizaciones, la célula hospedadora es eucariota, p. ej., una célula de ovario de hámster chino (CHO) o una célula linfoide (p. ej., célula Y0, NS0, Sp20). Las células hospedadoras de la presente divulgación también incluyen, aunque no de forma limitativa, células aisladas, células cultivadas in vitro y células cultivadas ex-vivo.
Se proporcionan métodos para fabricar un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, el método incluye cultivar una célula hospedadora de la presente divulgación que comprende un ácido nucleico que codifica el anticuerpo anti-sortilina, en condiciones adecuadas para la expresión del anticuerpo. En algunas realizaciones, el anticuerpo se recupera posteriormente de la célula hospedadora (o del medio de cultivo de la célula hospedadora).
Para la producción recombinante de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, se aísla un ácido nucleico que codifica el anticuerpo anti-sortilina y se inserta en uno o más vectores para su posterior clonación y/o expresión en una célula hospedadora. Dicho ácido nucleico puede aislarse y secuenciarse fácilmente utilizando procedimientos convencionales (por ejemplo, utilizando sondas de oligonucleótidos que son capaces de unirse específicamente a genes que codifican las cadenas pesadas y ligeras del anticuerpo).
Los vectores adecuados que comprenden una secuencia de ácido nucleico que codifica cualquiera de los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación, o fragmentos expresados en la superficie celular o polipéptidos de los mismos (incluidos los anticuerpos) descritos en el presente documento incluyen, aunque no de forma limitativa, vectores de clonación y vectores de expresión. Pueden construirse vectores de clonación adecuados de acuerdo con técnicas convencionales o pueden seleccionarse de un gran número de vectores de clonación disponibles en la técnica. Si bien el vector de clonación seleccionado puede variar según la célula hospedadora que pretenda utilizarse, los vectores de clonación útiles generalmente tienen la capacidad de auto-replicarse, pueden poseer una única diana para una endonucleasa de restricción particular y/o pueden llevar genes para un marcador que puede utilizarse en la selección de clones que comprenden el vector. Los ejemplos adecuados incluyen plásmidos y virus bacterianos, p. ej., pUC18, pUC19, Bluescript (p. ej., pBS SK+) y sus derivados, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, Ad N de fagos y vectores lanzadera tales como pSA3 y pAT28. Estos y muchos otros vectores de clonación están disponibles de proveedores comerciales tales como BioRad, Strategene e Invitrogen.
Las células hospedadoras adecuadas para la clonación o expresión de vectores que codifican anticuerpos incluyen células procariotas o eucariotas. Por ejemplo, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se pueden producir en bacterias, en particular cuando no son necesarias las funciones de glucosilación y efectora de Fc. Para la expresión de fragmentos de anticuerpo y polipéptidos en bacterias (p. ej., Patentes de EE. UU. N.° 5648237, 5789199 y 5840523. Después de la expresión, el anticuerpo puede aislarse de la pasta de células bacterianas en una fracción soluble y puede purificarse adicionalmente.
Además de los procariotas, también son hospedadores de clonación o expresión adecuados microorganismos eucariotas, tales como hongos filamentosos o levaduras, para vectores que codifican anticuerpos, incluyendo cepas de hongos y levaduras cuyas vías de glucosilación se han "humanizado", dando como resultado la producción de un anticuerpo con un patrón de glucosilación parcial o totalmente humano (p. ej., Gerngross Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004); y Li etal. Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)).
Las células hospedadoras adecuadas para la expresión de anticuerpos glucosilados también pueden proceder de organismos multicelulares (invertebrados y vertebrados). Los ejemplos de células de invertebrados incluyen células vegetales y de insecto. Se han identificado numerosas cepas baculovíricas que pueden usarse junto con células de insecto, en particular para la transfección de células de Spodoptera frugiperda. También se pueden utilizar como hospedadores cultivos de células vegetales (p. ej., patentes de EE. UU. N.° 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 y 6417429, que describen la tecnología PLANTIBODIES™ para producir anticuerpos en plantas transgénicas).
También pueden usarse como hospedadores células de vertebrado. Por ejemplo, pueden ser útiles líneas celulares de mamífero que están adaptadas para crecer en suspensión. Otros ejemplos de células de mamífero útiles son la línea CV1 de riñón de mono trasformada mediante SV40 (COS-7); la línea de riñón embrionario humano (293 o células 293 como se describen, p. ej., en Graham et al. J. Gen Virol. 36:59 (1977)); células de riñón de cría de hámster (BHK); células de Sertoli de ratón (células TM4 como se describe, p. ej., en Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); células de riñón de mono (CV1); células de riñón de mono verde africano (VERO-76); células de carcinoma de cuello de útero humano (HELA); células de riñón canino (MOCK; células de hígado de rata búfalo (BRL 3 A); células de pulmón humano (W138); células de hígado humano (Hep G2); tumor de mama de ratón (MMT 060562); células TRI, como se describe, p. ej., en Mather et al. Annals N. Y Acad. Sci. 383:44-68 (1982); células MRC 5; y células FS4. Otras líneas celulares de mamífero hospedadoras útiles incluyen células de ovario de hámster chino (CHO), incluyendo células CHO DHFR-(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); y líneas celulares de mieloma, tales como Y0, NS0 y Sp2/0. Para una revisión de determinadas líneas celulares de mamífero hospedadoras adecuadas para la producción de anticuerpos, véase, p. ej., Yazaki y Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), págs. 255-268 (2003).
Composiciones farmacéuticas
En el presente documento se proporcionan composiciones farmacéuticas y/o formulaciones farmacéuticas que comprenden los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En algunas realizaciones, los vehículos farmacéuticamente aceptables preferentemente no son tóxicos para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas. Los anticuerpos descritos en el presente documento pueden formularse en preparaciones en formas sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas. Los ejemplos de tales formulaciones incluyen, aunque no de forma limitativa, comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, pomadas, soluciones, supositorios, inyecciones, inhalantes, geles, microesferas y aerosoles. Los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden incluir, dependiendo de la formulación deseada, vehículos o diluyentes no tóxicos farmacéuticamente aceptables, que son vehículos habitualmente usados para formular composiciones farmacéuticas para su administración a animales o seres humanos. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica puede comprender materiales de formulación para modificar, mantener o conservar, por ejemplo, el pH, la osmolaridad, la viscosidad, la transparencia, el color, la isotonicidad, el olor, la esterilidad, la estabilidad, la velocidad de disolución o liberación, la adsorción o penetración de la composición.
En ciertas realizaciones, los vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, aunque no de forma limitativa, aminoácidos (tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina); agentes antimicrobianos; antioxidantes (tales como ácido ascórbico, sulfito de sodio o hidrogenosulfito de sodio); tampones (tales como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos u otros ácidos orgánicos); agentes de carga (tales como manitol o glicina); agentes quelantes (tal como ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)); agentes complejantes (tales como cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina o hidroxipropil-beta-ciclodextrina); cargas; monosacáridos; disacáridos; y otros hidratos de carbono (tales como glucosa, manosa o dextrinas); proteínas (tales como seroalbúmina, gelatina o inmunoglobulinas); colorantes, agentes aromatizantes y diluyentes; agentes emulsionantes; polímeros hidrófilos (tales como polivinilpirrolidona); polipéptidos de bajo peso molecular; contraiones formadores de sales (tales como sodio); conservantes (tal como cloruro de benzalconio, ácido benzoico, ácido salicílico, timerosal, alcohol fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, clorhexidina, ácido sórbico o peróxido de hidrógeno); disolventes (tales como glicerina, propilenglicol o polietilenglicol); alcoholes de azúcar (tales como manitol o sorbitol); agentes de suspensión; tensioactivos o agentes humectantes (tales como pluronics, PEG, ésteres de sorbitán, polisorbatos, tales como polisorbato 20, polisorbato 80, triton, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal); agentes potenciadores de la estabilidad (tales como sacarosa o sorbitol); agentes potenciadores de la tonicidad (tales como haluros de metales alcalinos, preferentemente cloruro de sodio o potasio, manitol sorbitol); vehículos de suministro; diluyentes; excipientes y/o adyuvantes farmacéuticos. Se pueden encontrar más ejemplos de formulaciones que son adecuadas para diversos tipos de administración en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Pharmaceutical Press 22a ed. (2013). Para una breve revisión de los métodos para suministro de fármacos, véase, Langer, Science 249:1527-1533 (1990).
Las formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estériles isotónicas acuosas y no acuosas, que pueden comprender antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión, solubilizantes, agentes espesantes, estabilizantes y conservantes.
Las formulaciones pueden optimizarse para la retención y estabilización en el cerebro o el sistema nervioso central. Cuando el agente se administra en el compartimiento craneal, es deseable que el agente quede retenido en el compartimento y que no se difunda o atraviese de otro modo la barrera hematoencefálica. Las técnicas de estabilización incluyen entrecruzamiento, multimerización o unión a grupos tales como polietilenglicol, poliacrilamida, portadores de proteínas neutras, etc. para lograr un aumento en el peso molecular.
Otras estrategias para aumentar la retención incluyen el atrapamiento del anticuerpo, tal como un anticuerpo antisortilina de la presente divulgación, en un implante biodegradable o bioerosionable. La velocidad de liberación del agente terapéuticamente activo está controlada por la velocidad de transporte a través de la matriz polimérica y la biodegradación del implante. Los implantes pueden ser partículas, láminas, parches, placas, fibras, microcápsulas y similares y pueden ser de cualquier tamaño o forma compatible con el sitio de inserción seleccionado. Las composiciones poliméricas biodegradables que se pueden emplear pueden ser ésteres o éteres orgánicos, que al degradarse dan lugar a productos de degradación fisiológicamente aceptables, incluyendo los monómeros. Pueden encontrar utilidad anhídridos, amidas, ortoésteres o similares, por sí mismos o junto con otros monómeros. Los polímeros serán polímeros de condensación. Los polímeros pueden estar reticulados o no reticulados. Son de particular interés los polímeros de ácidos carboxílicos hidroxialifáticos, ya sea homo- o copolímeros, y polisacáridos. Entre los poliésteres de interés se incluyen polímeros de ácido D-láctico, ácido L-láctico, ácido láctico racémico, ácido glicólico, policaprolactona y combinaciones de los mismos. Entre los polisacáridos de interés se encuentran el alginato de calcio y las celulosas funcionalizadas, particularmente ésteres de carboximetilcelulosa caracterizados por ser insolubles en agua, un peso molecular de aproximadamente 5 kD a 500 kD, etc. También pueden emplearse hidrogeles biodegradables en los implantes de la presente invención. Los hidrogeles son habitualmente un material de copolímero, caracterizado por la capacidad de embeber un líquido.
Dosis farmacéuticas
Un anticuerpo (y cualquier agente terapéutico adicional) puede administrarse por cualquier medio adecuado, incluyendo la vía parenteral, intrapulmonar, intranasal, administración intralesional, intracerebrospinal, intracraneal, intraespinal, intrasinovial, intratecal, oral, tópica o inhalación. Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular o intravenosa en embolada o mediante infusión continua durante un período de tiempo, la administración intraarterial, intraarticular, intraperitoneal o subcutánea. En algunas realizaciones, la administración es administración intravenosa. En algunas realizaciones, la administración es subcutánea. La dosificación puede ser por cualquier vía adecuada, por ejemplo, mediante inyecciones, tales como inyecciones intravenosas o subcutáneas, dependiendo en parte de si la administración es corta o crónica. En el presente documento se contemplan diversas pautas de dosificación que incluyen, aunque no de forma limitativa, administraciones únicas o múltiples en diversos puntos de tiempo, administración en embolada y la infusión pulsátil.
Los anticuerpos proporcionados en el presente documento se formularán, dosificarán y administrarán de una forma acorde con un correcto ejercicio de la medicina. Los factores a tener en cuenta en este contexto incluyen el trastorno particular que se está tratando, el mamífero particular que se va a tratar, el estado clínico del paciente individual, la causa del trastorno, al sitio de suministro del agente, el método de administración, la pauta de administración y otros factores conocidos por los profesionales sanitarios. Aunque no es necesario, el anticuerpo opcionalmente se formula con uno o más agentes usados en la actualidad para prevenir o tratar el trastorno en cuestión. La cantidad eficaz de dichos otros agentes depende de la cantidad de anticuerpo presente en la formulación, del tipo de trastorno o tratamiento y de otros factores analizados anteriormente. Estos se usan generalmente con las mismas dosis y por vías de administración como las descritas en el presente documento o de aproximadamente el 1 al 99 % de las dosis descritas en el presente documento o en cualquier dosis y por cualquier vía que se haya determinado empíricamente/clínicamente como adecuada.
Las dosis para un anticuerpo anti-sortilina en particular pueden determinarse empíricamente en individuos que han recibido una o más administraciones del anticuerpo anti-sortilina. Los individuos reciben dosis crecientes de un anticuerpo anti-sortilina. Para evaluar la eficacia de un anticuerpo anti-sortilina, puede supervisarse un síntoma clínico de cualquiera de las enfermedades, trastornos o afecciones de la presente divulgación (por ejemplo, demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, una lesión cerebral traumática, lesión de la médula espinal, depresión a largo plazo, enfermedades vasculares ateroscleróticas y síntomas indeseables del envejecimiento normal).
Para la prevención o el tratamiento de la enfermedad, la dosis adecuada de un anticuerpo de la invención (cuando se usa solo o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales diferentes) dependerá del tipo de enfermedad que se vaya a tratar, del tipo de anticuerpo, de la gravedad y de la evolución de la enfermedad, de si el anticuerpo se administra con fines preventivos o terapéuticos, de la terapia previa, de la historia clínica del paciente y de la respuesta al anticuerpo y del criterio del médico responsable. El anticuerpo se administra adecuadamente al paciente una vez o en una serie de tratamientos.
Dependiendo del tipo y de la gravedad de la enfermedad, puede ser una dosis candidata inicial para la administración al paciente de aproximadamente 1 pg/kg a 1,5 mg/kg (por ejemplo, 0,1-10 mg/kg) de anticuerpo, ya sea, por ejemplo, mediante una o más administraciones distintas o mediante infusión continua. Una dosificación diaria habitual estará en el intervalo de aproximadamente 1 pg/kg a 100 mg/kg o más, dependiendo de los factores mencionados anteriormente. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la afección, se continuará generalmente con el tratamiento hasta que se produzca una supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Una dosis ilustrativa del anticuerpo se encontrará en el intervalo de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg. Por lo tanto, se pueden administrar al paciente una o más dosis de aproximadamente 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg o 10 mg/kg (o cualquier combinación de las mismas). Dichas dosis pueden administrarse de manera intermitente, p. ej., cada semana o cada tres semanas (por ejemplo, de modo que el paciente recibe de aproximadamente dos a aproximadamente veinte o, p. ej., aproximadamente seis dosis del anticuerpo). En ciertas realizaciones, la frecuencia de la dosificación es tres veces al día, dos veces al día, una vez al día, una vez cada dos días, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez cada cuatro semanas, una vez cada cinco semanas, una vez cada seis semanas, una vez cada siete semanas, una vez cada ocho semanas, una vez cada nueve semanas, una vez cada diez semanas, o una vez al mes, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses, o cada más tiempo. Puede administrarse una dosis de carga inicial superior, seguida de una o más dosis inferiores. Sin embargo, pueden ser útiles otras pautas posológicas. El progreso de esta terapia se supervisa fácilmente mediante técnicas y ensayos convencionales.
Usos terapéuticos
En determinados aspectos, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se pueden utilizar para prevenir, reducir el riesgo de o tratar a un individuo que tiene una enfermedad, trastorno o lesión. Los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se pueden utilizar para prevenir, reducir el riesgo de o tratar la muerte celular (p. ej., muerte de células neuronales), demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, una lesión cerebral traumática, una lesión de la médula espinal, depresión a largo plazo, enfermedades vasculares ateroscleróticas, síntomas indeseables del envejecimiento normal, demencia, demencia mixta, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de presión normal, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Huntington, taupatía, ictus, traumatismo agudo, traumatismo crónico, lupus, colitis aguda y crónica, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, paludismo, temblor esencial, lupus del sistema nervioso central, enfermedad de Behcet, enfermedad de Parkinson, demencia con cuerpos de Lewy, atrofia multisistémica, degeneración de disco intervertebral, síndrome de Shy-Drager, parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal gangliónica, encefalomielitis diseminada aguda, trastornos granulomatosos, sarcoidosis, enfermedades del envejecimiento, degeneración macular senil, glaucoma, retinitis pigmentaria, degeneración de la retina, infecciones del tracto respiratorio, septicemia, infección ocular, infección sistémica, trastornos inflamatorios, artritis, esclerosis múltiple, trastorno metabólico, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes de tipo 2, daño tisular o vascular, una lesión y/o uno o más síntomas indeseables del envejecimiento normal.
En determinados aspectos, en el presente documento se proporciona un método para prevenir, reducir el riesgo de o tratar a un individuo que tiene una enfermedad, trastorno o lesión, que comprende administrar a un individuo que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, la enfermedad, trastorno o lesión se selecciona del grupo que consiste en demencia frontotemporal, parálisis supranuclear progresiva, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, esclerosis lateral amiotrófica, lesión cerebral traumática, una lesión de la médula espinal, demencia, ictus, enfermedad de Parkinson, encefalomielitis diseminada aguda, degeneración de la retina, degeneración macular senil, glaucoma, esclerosis múltiple, choque séptico, infección bacteriana, artritis y osteoartritis.
Ciertos aspectos de la presente divulgación proporcionan métodos para aumentar los niveles de progranulina en un individuo que lo necesita, tal como en el cerebro, sangre y/u órganos periféricos del individuo, mediante la administración al individuo de una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación. Otros aspectos de la presente divulgación proporcionan métodos para aumentar los niveles extracelulares de progranulina, poniendo en contacto una o más células con uno o más anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, los niveles de progranulina aumentan sin disminuir los niveles celulares de sortilina. Otros aspectos de la presente divulgación proporcionan métodos para disminuir los niveles celulares de sortilina en un individuo que lo necesita, tal como en el cerebro y/u órganos periféricos del individuo, mediante la administración al individuo de una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación. Otros aspectos de la presente divulgación proporcionan métodos para disminuir los niveles celulares de sortilina de una o más células, que comprende poner en contacto una o más células con uno o más anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación.
Otros aspectos adicionales de la presente divulgación proporcionan métodos para aumentar las concentraciones eficaces de progranulina y/o reducir las concentraciones eficaces de una neurotrofina de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, proneurotrofinas, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sort-pro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE), PCSK9 y proteína asociada a receptor (RAP) en un individuo que lo necesita, mediante la administración al individuo de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación para inhibir la interacción entre la sortilina y la progranulina, una neurotrofina de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sort-pro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE) y/o proteína asociada a receptor (RAP).
La presente divulgación también proporciona métodos para inhibir la interacción entre la sortilina y la progranulina, una neurotrofina de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sortpro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE), PCSK9 y/o proteína asociada a receptor (RAP); así como una o más actividades de la sortilina, progranulina, una neurotrofina de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sort-pro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE) y/o proteína asociada a receptor (RAP) en un individuo mediante la administración al individuo de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación.
En determinados aspectos, en el presente documento se proporciona un método para prevenir, reducir el riesgo de o tratar a un individuo que tiene una enfermedad, trastorno o lesión, que comprende administrar a un individuo que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación.
Como se divulga en el presente documento, los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación se pueden utilizar para prevenir, reducir el riesgo de o tratar la demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, una lesión cerebral traumática, una lesión de la médula espinal, depresión a largo plazo, enfermedades vasculares ateroscleróticas, síntomas indeseables del envejecimiento normal, demencia, demencia mixta, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de presión normal, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Huntington, taupatía, ictus, traumatismo agudo, traumatismo crónico, lupus, colitis aguda y crónica, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, paludismo, temblor esencial, lupus del sistema nervioso central, enfermedad de Behcet, enfermedad de Parkinson, demencia con cuerpos de Lewy, atrofia multisistémica, degeneración de disco intervertebral, síndrome de Shy-Drager, parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal gangliónica, encefalomielitis diseminada aguda, trastornos granulomatosos, sarcoidosis, enfermedades del envejecimiento, degeneración macular senil, glaucoma, retinitis pigmentaria, degeneración de la retina, infecciones del tracto respiratorio, septicemia, infección ocular, infección sistémica, trastornos inflamatorios, artritis, esclerosis múltiple, trastorno metabólico, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes de tipo 2, daño tisular o vascular, una lesión y uno o más síntomas indeseables del envejecimiento normal.
En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona métodos para prevenir, reducir el riesgo de o tratar a un individuo que padece demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, una lesión cerebral traumática, una lesión de la médula espinal, depresión a largo plazo, enfermedades vasculares ateroscleróticas, síntomas indeseables del envejecimiento normal, demencia, demencia mixta, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de presión normal, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Huntington, taupatía, ictus, traumatismo agudo, traumatismo crónico, lupus, colitis aguda y crónica, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, paludismo, temblor esencial, lupus del sistema nervioso central, enfermedad de Behcet, enfermedad de Parkinson, demencia con cuerpos de Lewy, atrofia multisistémica, degeneración de disco intervertebral, síndrome de Shy-Drager, parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal gangliónica, encefalomielitis diseminada aguda, trastornos granulomatosos, sarcoidosis, enfermedades del envejecimiento, degeneración macular senil, glaucoma, retinitis pigmentaria, degeneración de la retina, infecciones del tracto respiratorio, septicemia, infección ocular, infección sistémica, trastornos inflamatorios, artritis, esclerosis múltiple, trastorno metabólico, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes de tipo 2, daño tisular o vascular, una lesión y uno o más síntomas indeseables del envejecimiento normal, en un individuo que lo necesita, mediante la administración al individuo de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación para: (i) inhibir la interacción entre la sortilina y la progranulina, una neurotrofina de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sort-pro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE) y/o proteína asociada a receptor (RAP); y/o (ii) inhibir una o más actividades de la sortilina, progranulina, una neurotrofina de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sortpro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE) y/o proteína asociada a receptor (RAP). En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona métodos para inducir la curación de heridas en un individuo que lo necesita mediante la administración al individuo de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación.
La presente divulgación también proporciona métodos para promover la supervivencia celular, tal como la supervivencia de células neuronales, mediante la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación para inhibir la interacción entre la sortilina y la progranulina, una neurotrofina de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, proteína precursora de amiloide (APP) y el péptido A beta. El anticuerpo anti-sortilina se puede administrar a las células in vitro para promover la supervivencia celular. Como alternativa, el anticuerpo anti-sortilina puede administrarse in vivo (p. ej., mediante la administración del anticuerpo a un individuo) para promover la supervivencia celular.
En determinados aspectos, en el presente documento se proporciona un método para inhibir uno o más de neuroinflamación, axonopatía caracterizada por crecimiento axonal corto y ramificación aberrante, activación microglial y respuesta inflamatoria, que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación.
La presente divulgación proporciona métodos para inhibir la neuroinflamación, axonopatía caracterizada por crecimiento axonal corto y ramificación aberrante, activación microglial y respuesta inflamatoria y promover la curación de heridas, autofagia y eliminación de proteínas agregadas mediante la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación para inhibir la interacción entre la sortilina y la progranulina, una neurotrofina de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, proteína precursora de amiloide (APP) y el péptido A beta. El anticuerpo anti-sortilina se puede administrar a las células in vitro. Como alternativa, el anticuerpo anti-sortilina puede administrarse in vivo (p. ej., mediante la administración del anticuerpo a un individuo).
En determinados aspectos, en el presente documento se proporciona un método para promover uno o más de la curación de heridas, autofagia y eliminación de proteínas agregadas, que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación.
En determinados aspectos, en el presente documento se proporciona un método para prevenir, reducir el riesgo de o tratar a un individuo que tiene artritis, que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación.
La presente divulgación también proporciona métodos para disminuir la expresión de uno o más mediadores proinflamatorios mediante la administración a un individuo que lo necesita de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación. En algunas realizaciones, el uno o más mediadores proinflamatorios se seleccionan de IL-6, lL12p70, IL12p40, IL-1 p, TNF-a, CXCL1, CCL2, CCL3, CCL4 y CCL5.
En algunas realizaciones, un método de la presente divulgación incluye un anticuerpo anti-sortilina que comprende dos o más anticuerpos anti-sortilina.
Demencia
La demencia es un síndrome inespecífico (es decir, un conjunto de signos y síntomas) que se presenta como una pérdida grave de la capacidad cognitiva global en una persona que antes no tenía deterioro, más allá de lo que cabría esperar del envejecimiento normal. La demencia puede ser estática como resultado de una lesión cerebral global única. Como alternativa, la demencia puede ser progresiva, dando como resultado una disminución a largo plazo debido a daños o enfermedades en el cuerpo. Si bien la demencia es mucho más común en la población geriátrica, también puede aparecer antes de los 65 años. Las áreas cognitivas afectadas por la demencia incluyen, aunque no de forma limitativa, la memoria, capacidad de atención, lenguaje y resolución de problemas. Por lo general, los síntomas deben estar presentes durante al menos seis meses antes de que a un individuo se le diagnostique demencia.
Las formas ilustrativas de demencia incluyen, aunque no de forma limitativa, demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, demencia semántica y demencia con cuerpos de Lewy.
Sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la demencia. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede inducir una o más actividades de progranulina en un individuo que tiene demencia (p. ej., actividad neurotrófica y/o de supervivencia en las neuronas y actividad antiinflamatoria.
Demencia frontotemporal
La demencia frontotemporal (FTD) es una afección que resulta del deterioro progresivo del lóbulo frontal del cerebro. Con el paso del tiempo, la degeneración puede avanzar al lóbulo temporal. En segundo lugar después de la enfermedad de Alzheimer (EA) en prevalencia, la FTD representa el 20 % de los casos de demencia presenil. Las características clínicas de la FTD incluyen déficits de memoria, anomalías en el comportamiento, cambios de personalidad y alteraciones del lenguaje (Cruts, M. y Van Broeckhoven, C., Trends Genet. 24:186-194 (2008); Neary, D., et al., Neurology 51:1546-1554 (1998); Ratnavalli, E., Brayne, C., Dawson, K. y Hodges, J. R, Neurology 58:1615-1621 (2002)).
Una parte sustancial de los casos de FTD se heredan de forma autosómica dominante, pero incluso en una familia, los síntomas pueden abarcar un espectro desde FTD con alteraciones del comportamiento, pasando por la afasia progresiva primaria, hasta la degeneración corticobasal gangliónica. La DFT, como la mayoría de las enfermedades neurodegenerativas, puede caracterizarse por la presencia patológica de agregados proteicos específicos en el cerebro enfermo. Históricamente, las primeras descripciones de FTD reconocieron la presencia de acumulaciones intraneuronales de proteína Tau hiperfosforilada en ovillos neurofibrilares o cuerpos de Pick. La identificación de mutaciones en el gen que codifica la proteína Tau en varias familias apoyó un papel causal para la proteína Tau asociada a los microtúbulos (Hutton, M., et al., Nature 393:702-705 (1998). Sin embargo, la mayoría de los cerebros con FTD no muestran acumulación de Tau hiperfosforilada, pero muestran inmunorreactividad a la ubiquitina (Ub) y a la proteína de unión al ADN TAR (TDP43) (Neumann, M., et al. Arch. Neurol, 64:1388-1394 (2007)). Se demostró que la mayoría de los casos de FTD con inclusiones de Ub (FTD-U) portan mutaciones en el gen de la progranulina.
Las mutaciones de progranulina dan como resultado haploinsuficiencia y se sabe que están presentes en casi el 50 % de los casos de DFT familiar, haciendo que la mutación de progranulina sea un factor genético importante en la FTD. Sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que el carácter heterocigoto de pérdida de función de las mutaciones de progranulina indica que, en individuos sanos, la expresión de progranulina juega un papel fundamental dependiente de la dosis en la protección de individuos sanos contra el desarrollo de FTD. En consecuencia, el aumento de los niveles de progranulina al inhibir la interacción entre la sortilina y la progranulina, puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la FTD.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la FTD. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene FTD.
Enfermedad de Alzheimer
La enfermedad de Alzheimer (AD) es la causa más común de demencia. No hay cura para la enfermedad, que empeora a medida que avanza, y finalmente conduce a la muerte. Con mucha frecuencia, La AD se diagnostica en personas mayores de 65 años. Sin embargo, el Alzheimer de inicio temprano menos frecuente puede aparecer mucho antes.
Los síntomas comunes de la enfermedad de Alzheimer incluyen, síntomas conductuales, tales como dificultad para recordar eventos recientes; síntomas cognitivos, confusión, irritabilidad y agresividad, cambios de humor, problemas con el lenguaje y pérdida de memoria a largo plazo. A medida que la enfermedad avanza, se pierden funciones corporales, finalmente ocasionando la muerte. La enfermedad de Alzheimer se desarrolla durante un período de tiempo desconocido y variable antes de volverse completamente evidente, y puede progresar sin ser diagnosticada durante años.
Se ha demostrado que la sortilina se une a la proteína precursora de amiloide (APP) y a la enzima de procesamiento de APP BACE1. Sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que estas interacciones están implicadas en la enfermedad de Alzheimer. En consecuencia, y sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación pueden utilizarse para inhibir tales interacciones y prevenir, reducir el riesgo de o tratar la enfermedad de Alzheimer en individuos que lo necesitan.
En algunas realizaciones, y sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que inhiben la interacción entre la sortilina y las neurotrofinas de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), p75, proteína precursora de amiloide (APP) y/o el péptido A beta, o que inhiben una o más actividades de la sortilina pueden utilizarse para prevenir, reducir el riesgo de o tratar la enfermedad de Alzheimer en individuos que lo necesitan.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo y/o tratar la enfermedad de Alzheimer. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que padece la enfermedad de Alzheimer.
Demencia vascular
La demencia vascular (VaD) es un empeoramiento sutilmente progresivo de la memoria y otras funciones cognitivas que se cree que se debe a una enfermedad cerebrovascular (enfermedad vascular dentro del cerebro). La enfermedad cerebrovascular es el cambio progresivo en nuestros vasos sanguíneos (sistema vascular) en el cerebro (encéfalo). El cambio vascular más común asociado con la edad es la acumulación de colesterol y otras sustancias en las paredes de los vasos sanguíneos. Esto tiene como resultado el engrosamiento y endurecimiento de las paredes, así como el estrechamiento de los vasos, que puede dar como resultado una reducción o incluso una interrupción completa del flujo de sangre a las regiones del cerebro irrigadas por la arteria afectada. Los pacientes con demencia vascular a menudo presentan síntomas similares a los pacientes con enfermedad de Alzheimer (AD). Sin embargo, los cambios relacionados en el cerebro no se deben a la patología de la AD sino a la reducción crónica del flujo sanguíneo en el cerebro, ocasionando finalmente demencia. La VaD se considera uno de los tipos más comunes de demencia en adultos mayores. Los síntomas de la VaD incluyen dificultades con la memoria, dificultad con la organización y la resolución de problemas complejos, pensamiento lento, distracción o "despistes", dificultad para recuperar palabras de la memoria, cambios en el estado de ánimo o el comportamiento tales como depresión, irritabilidad o apatía, y alucinaciones o delirios.
Sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que una o más actividades de la sortilina, o una o más interacciones entre la sortilina y la progranulina, neurotrofinas de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, lipoproteína lipasa, la apolipoproteína AV y/o la proteína asociada a receptor están involucradas en la demencia vascular. En consecuencia, y sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que los anticuerpos antisortilina de la presente divulgación que inhiben la interacción entre la sortilina y las neurotrofinas de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, propéptido de sortilina (Sort-pro), proteína precursora de amiloide (PPA), el péptido A beta, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE) y/o proteína asociada a receptor (RAP); o que inhiben una o más actividades de la sortilina pueden utilizarse para prevenir, reducir el riesgo de o tratar la demencia vascular en individuos que lo necesitan.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la VaD. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene VaD.
Ataques, distrofia de la retina, lesiones cerebrales traumáticas, lesiones de la médula espinal y depresión a largo plazo
Como se utiliza en el presente documento, la distrofia de la retina se refiere a cualquier enfermedad o afección que implica la degeneración de la retina. Tales enfermedades o afecciones pueden provocar la pérdida de la visión o la ceguera total.
Como se utiliza en el presente documento, los ataques también incluyen ataques epilépticos y se refieren a un síntoma transitorio de actividad neuronal anormal excesiva o sincrónica en el cerebro. El efecto externo puede ser tan dramático como un movimiento salvaje o tan leve como una breve pérdida de conciencia. Los ataques pueden manifestarse como una alteración del estado mental, movimientos tónicos o clónicos, convulsiones y otros diversos síntomas psíquicos.
Las lesiones cerebrales traumáticas (TBI), también pueden ser conocidas como lesiones intracraneales. Las lesiones cerebrales traumáticas se producen cuando una fuerza externa daña traumáticamente el cerebro. Las lesiones cerebrales traumáticas se pueden clasificar según la gravedad, el mecanismo (lesión cerebral cerrada o penetrante) u otras características (por ejemplo, que se producen en un punto específico en un área extensa).
Las lesiones de la médula espinal (SCI) incluyen cualquier lesión en la médula espinal causada por un traumatismo en lugar de una enfermedad. Dependiendo de dónde se dañen la médula espinal y las raíces nerviosas, los síntomas pueden variar ampliamente, desde dolor, pasando por una parálisis hasta la incontinencia. Las lesiones de la médula espinal se describen en varios niveles desde "incompletas", que pueden variar desde no tener efecto en el paciente hasta una lesión "completa" que significa una pérdida total de la función.
La depresión a largo plazo (LTD) es una reducción dependiente de la actividad en la eficacia de las sinapsis neuronales que dura horas o más después de un estímulo con patrón prolongado. La depresión a largo plazo se puede producir en muchas áreas del sistema nervioso central con diversos mecanismos según la región del cerebro y el progreso del desarrollo. La depresión a largo plazo se puede producir en el hipocampo, cerebelo, y en diferentes tipos de neuronas que liberan diversos neurotransmisores. Sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que la depresión a largo plazo puede estar asociada con una neurodegeneración, demencia y enfermedad de Alzheimer.
Se ha demostrado que las proneurotrofinas (p. ej., la proneurotrofina-4/5, neurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, etc.) desempeñan un papel en los ataques, distrofia de la retina, lesión cerebral traumática, lesión de la médula espinal y depresión a largo plazo.
En consecuencia, y sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que inhiben la interacción entre la sortilina y las neurotrofinas de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), o que inhiben una o más actividades de la sortilina pueden utilizarse para prevenir, reducir el riesgo de o tratar los ataques, distrofia de la retina, lesiones cerebrales traumáticas, lesiones de la médula espinal y/o depresión a largo plazo en personas que lo necesitan.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar los ataques, distrofia de la retina, lesiones cerebrales traumáticas, lesiones de la médula espinal y/o depresión a largo plazo. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene ataques, distrofia de la retina, lesiones cerebrales traumáticas, lesiones de la médula espinal y/o depresión a largo plazo,
Enfermedades vasculares ateroscleróticas
Como se utiliza en el presente documento, "enfermedad vascular aterosclerótica", "ASVD" y "aterosclerosis" se usan indistintamente y se refieren a cualquier afección en la que la pared de una arteria se engrosa como resultado de la acumulación de materiales grasos tales como el colesterol, lípidos y triglicéridos. Las enfermedades vasculares ateroscleróticas incluyen, aunque no de forma limitativa, cualquier afección, trastorno o enfermedad asociada con ASVD, incluyendo, aunque no de forma limitativa, tromboembolia, ictus, isquemia, infartos, trombosis coronaria, infarto de miocardio (por ejemplo, ataque al corazón) y claudicación.
Como se divulga en el presente documento, las proteínas sortilinas de la presente divulgación están involucradas en la regulación de los lípidos, al unirse a proteínas asociadas a lípidos, tales como la proteína asociada a receptor, lipoproteína lipasa y apolipoproteínas APOA5 y APOE.
En consecuencia, y sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que inhiben la interacción entre la sortilina y la lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5), apolipoproteína E (APOE) y/o proteína asociada a receptor (RAp ); o que inhiben una o más actividades de la sortilina pueden utilizarse para prevenir, reducir el riesgo de o tratar una o más enfermedades vasculares ateroscleróticas en individuos que lo necesitan.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la enfermedad vascular aterosclerótica. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene enfermedad vascular aterosclerótica.
Síntomas indeseables del envejecimiento
Como se utiliza en el presente documento, los síntomas indeseables del envejecimiento incluyen, aunque no de forma limitativa, pérdida de memoria, cambios de comportamiento, demencia, enfermedad de Alzheimer, degeneración de la retina, enfermedades vasculares ateroscleróticas, pérdida de audición y descomposición celular.
En algunas realizaciones, y sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que inhiben la interacción entre la sortilina y la progranulina, neurotrofinas de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5) y/o proteína asociada al receptor (RAP); o que inhiben una o más actividades de la sortilina pueden utilizarse para prevenir, reducir el riesgo de o tratar uno o más síntomas indeseables del envejecimiento.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo y/o tratar uno o más síntomas indeseables del envejecimiento. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene uno o más síntomas indeseables del envejecimiento.
Esclerosis lateral amiotrófica (ALS)
Como se utiliza en el presente documento, la esclerosis lateral amiotrófica (ALS) o, enfermedad de las neuronas motoras o enfermedad de Lou Gehrig se usan indistintamente y se refieren a una enfermedad debilitante con una etiología variada caracterizada por una debilidad que progresa rápidamente, atrofia muscular y fasciculaciones, espasticidad muscular, dificultad para hablar (disartria), dificultad para tragar (disfagia) y dificultad para respirar (disnea).
La haploinsuficiencia de PGRN debida a mutaciones heterocigóticas con pérdida de función en el gen GRN da como resultado una reducción de los niveles de PGRN en el CSF y es causante del desarrollo de demencia frontotemporal (FTD) con patología TDP-43 (Sleegers et al., (2009) Ann Neurol 65:603; Smith et al., (2012) Am J Hum Genet 90:1102). TDP-43 también se ha identificado como una proteína patológica importante en la ALS, lo que sugiere una similitud entre la ALS y la FTD.
Por ejemplo, se han identificado más de veinte mutaciones dominantes en TDP-43 en pacientes con ALS esporádica y familiar (Lagier-Tourenne et al., (2009) Cell 136:1001) y se encuentran agregados positivos para TDP-43 en aproximadamente el 95 % de los casos de ALS (Prasad et al., (2019) Front Mol Neurosci 12:25). Además, algunos genes de riesgo de ALS, tales como MOBP, C9ORF72, MOBKL2B, NSF y FUS, también pueden causar FTD (Karch et al., (2018) JAMA Neurol 75:860). Además, las mutaciones tanto de Pg Rn como de C9ORF72 están asociadas con una activación anómala de la microglía, que parece ser otra patología común de FTD y ALS (Haukedal et al., (2019) J Mol Biol 431:1818). Otra evidencia también sugiere que la ALS y la FTD son afecciones estrechamente relacionadas con características genéticas, clínicas y neuropatológicas solapantes (Weishaupt et al., (2016) Trends Mol Med 22:769; McCauley et al., (2018) Acta Neuropathol 137:715). Considerados en conjunto, estos resultados sugieren que ambas enfermedades podrían beneficiarse de tratamientos compartidos y que la variabilidad genética de la PGRN actúa como modificador del curso de la ALS.
En algunas realizaciones, y sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que inhiben la interacción entre la sortilina y la progranulina, neurotrofinas de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5) y/o proteína asociada al receptor (RAP); o que inhiben una o más actividades de la sortilina pueden utilizarse para prevenir o tratar uno o más síntomas indeseables de la ALS
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la ALS. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene ALS.
Depresión
Como se utiliza en el presente documento, depresión o, trastorno depresivo mayor (MDD), depresión clínica, depresión mayor, depresión unipolar, trastorno unipolar, depresión recurrente o, distimia, se usan indistintamente y se refieren a un trastorno mental caracterizado por episodios de bajo estado de ánimo que lo abarcan todo, acompañados de baja autoestima y pérdida de interés o placer en actividades que normalmente son agradables.
En consecuencia, y sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que los anticuerpos anti-sortilina de la presente divulgación que inhiben la interacción entre la sortilina y la progranulina, neurotrofinas de la presente divulgación (por ejemplo, proneurotrofinas, proneurotrofina-3, proneurotrofina-4/5, pro-NGF, pro-BDNF, neurotrofina-3, neurotrofina-4/5, NGF, BDNF, etc.), neurotensina, p75, lipoproteína lipasa (LpL), apolipoproteína AV (APOA5) y/o proteína asociada al receptor (RAP); o que inhiben una o más actividades de la sortilina pueden utilizarse para prevenir o tratar uno o más síntomas indeseables de la depresión.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la depresión. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene depresión.
Enfermedad de Parkinson
La enfermedad de Parkinson, que puede denominarse parkinsonismo idiopático o primario, síndrome rígido hipocinético (HRS) o parálisis agitante, es un trastorno cerebral neurodegenerativo que afecta al control del sistema motor. La muerte progresiva de las células productoras de dopamina en el cerebro conduce a los principales síntomas de la enfermedad de Parkinson. La mayoría de las veces, la enfermedad de Parkinson se diagnostica en personas mayores de 50 años. La enfermedad de Parkinson es idiopática (sin causa conocida) en la mayoría de las personas. Sin embargo, los factores genéticos también juegan un papel en la enfermedad.
Los síntomas de la enfermedad de Parkinson pueden incluir, aunque no de forma limitativa, temblores en las manos, brazos, piernas, mandíbula y cara, rigidez muscular en las extremidades y el tronco, lentitud de movimiento (bradicinesia), inestabilidad postural, dificultad para caminar, problemas neuropsiquiátricos, cambios en el habla o el comportamiento, depresión, ansiedad, dolor, psicosis, demencia, alucinaciones y problemas para dormir.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la enfermedad de Parkinson. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede inducir una o más actividades de progranulina en un individuo que padece la enfermedad de Parkinson. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que padece la enfermedad de Parkinson.
Enfermedad de Huntington
La enfermedad de Huntington (HD) es una enfermedad neurodegenerativa hereditaria causada por una mutación autosómica dominante en el gen de la huntingtina (HTT). La expansión de una repetición del triplete de citocinaadenina-guanina (CAG) dentro del gen de la huntingtina da como resultado la producción de una forma mutante de la proteína huntingtina (Htt) codificada por el gen. Esta proteína huntingtina mutante (mHtt) es tóxica y contribuye a la muerte neuronal. Los síntomas de la enfermedad de Huntington aparecen con mayor frecuencia entre los 35 y los 44 años, aunque pueden aparecer a cualquier edad.
Los síntomas de la enfermedad de Huntington incluyen, aunque no de forma limitativa, problemas de control motor, movimientos espasmódicos aleatorios (corea), movimientos anómalos de los ojos, deterioro del equilibrio, ataques, dificultad para masticar, dificultad para tragar, problemas cognitivos, alteraciones del habla, déficits de memoria, dificultades de pensamiento, insomnio, fatiga, demencia, cambios en la personalidad, depresión, ansiedad y conducta compulsiva.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la enfermedad de Huntington. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede inducir una o más actividades de progranulina en un individuo que padece la enfermedad de Huntington. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que padece la enfermedad de Huntington.
Tauopatía
Las enfermedades de taupatía o taupatías son una clase de enfermedades neurodegenerativas causadas por la agregación de la proteína tau asociada a los microtúbulos dentro del cerebro. La enfermedad de Alzheimer (AD) es la taupatía más conocida e implica una acumulación de proteína tau dentro de las neuronas en forma de ovillos neurofibrilares (NFT) insolubles. Otras enfermedades y trastornos de taupatía incluyen parálisis supranuclear progresiva, demencia pugilística (encefalopatía traumática crómica), demencia frontotemporal y parkinsonismo asociado al cromosoma 17, enfermedad de Lytico-Bodig (complejo de Parkinson-demencia de Guam), demencia predominante de ovillo, ganglioglioma y gangliocitoma, meningioangiomatosis, panencefalitis esclerosante subaguda, encefalopatía plúmbica, esclerosis tuberosa, enfermedad de Hallervorden-Spatz, lipofuscinosis, enfermedad de Pick, degeneración corticobasal, enfermedad de granos argirófilos (AGD) enfermedad de Huntington y degeneración lobular frontotemporal.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación, puede prevenir, reducir el riesgo y/o tratar la taupatía. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede inducir una o más actividades de progranulina en un individuo que padece una enfermedad de taupatía. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que padece una enfermedad de taupatía.
Esclerosis múltiple
La esclerosis múltiple (MS) también puede denominarse esclerosis diseminada o encefalomielitis diseminada. La MS es una enfermedad inflamatoria en la que se dañan las vainas de mielina grasa que rodean los axones del cerebro y la médula espinal, provocando desmielinización y cicatrización, así como un amplio espectro de signos y síntomas.
Los síntomas de la MS incluyen, aunque no de forma limitativa, cambios en la sensación, tales como pérdida de sensibilidad u hormigueo; pinchazos o entumecimiento, tales como hipoestesia y parestesia; debilidad muscular; clono; espasmos musculares; dificultad para moverse; dificultades con la coordinación y el equilibrio, tales como ataxia; problemas en el habla, tal como disartria, o al tragar, tal como disfagia; problemas visuales, tales como el nistagmo, neuritis óptica incluyendo fosfenos y diplopía; fatiga; dolor agudo o crónico; y dificultades de la vejiga y del intestino; deterioro cognitivo de diversos grados; síntomas emocionales de depresión o estado de ánimo inestable; fenómeno de Uhthoff, que es una exacerbación de los síntomas existentes debido a una exposición a temperaturas ambiente más altas de lo normal; y el signo de Lhermitte, que es una sensación eléctrica que recorre la espalda al doblar el cuello.
En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la esclerosis múltiple. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo antisortilina puede inducir una o más actividades de progranulina en un individuo que padece esclerosis múltiple. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene esclerosis múltiple.
Glaucoma y degeneración macular
El glaucoma describe, aunque no de forma limitativa, un grupo de enfermedades que se caracterizan por un nervio óptico dañado, que tiene como resultado pérdida de visión y ceguera. El glaucoma generalmente se produce por un aumento de la presión del líquido (= presión intraocular) en la cámara anterior debajo de la córnea. El glaucoma provoca la pérdida sucesiva de células ganglionares de la retina que son importantes para la visión. La degeneración macular senil suele afectar a las personas mayores y provoca principalmente la pérdida de la visión en la mácula, el campo de visión central. La degeneración macular produce, aunque no de forma limitativa, drusas, cambios pigmentarios, visión distorsionada, hemorragias del ojo, atrofia, agudeza visual reducida, visión borrosa, escotomas centrales, reducción de la visión del color y reducción de la sensibilidad al contraste.
Sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar el glaucoma y la degeneración macular. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede inducir una o más actividades de la progranulina en un individuo que tiene glaucoma o degeneración macular. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene glaucoma o degeneración macular.
Enfermedad degenerativa de discos (DDD)
La enfermedad degenerativa de discos (DDD) describe, aunque no de forma limitativa, un grupo de enfermedades en las que el disco intervertebral (IVD) sufre cambios morfológicos y biomecánicos extensos, y generalmente se manifiesta clínicamente en pacientes con dolor lumbar. Los discos degenerativos suelen mostrar fibrocartílago degenerativo y grupos de condrocitos, sugerentes de reparación. Puede o no estar presente inflamación. Los hallazgos patológicos en DDD incluyen protrusión, espondilólisis y/o subluxación de vértebras (espondilolistesis) y estenosis espinal.
Sin desear quedar ligado a teoría alguna, se cree que la administración de un anticuerpo anti-sortilina de la presente divulgación puede prevenir, reducir el riesgo de y/o tratar la DDD. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede inducir una o más actividades de progranulina en un individuo que padece DDD. En algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo anti-sortilina puede modular una o más actividades de la sortilina en un individuo que tiene DDD.
Dolor
El dolor describe, aunque no de forma limitativa, dolor neuropático que se produce por una lesión de nervios, p. ej., por traumatismo o enfermedad. Dicha lesión puede incluir lesiones en los nervios periféricos y/o la médula espinal. Se ha demostrado que los antagonistas de sortilina alivian el dolor neuropático. (Rielliner M et al. (2019) Saber. Adv. 5: eaav9946.)
Kits/artículos de fabricación
En el presente documento se proporcionan artículos de fabricación (p. ej., kit) que comprenden un anticuerpo antisortilina descrito en el presente documento. El artículo de fabricación puede incluir uno o más recipientes que comprenden un anticuerpo descrito en el presente documento. Los recipientes pueden ser cualquier envase adecuado incluyendo, aunque no de forma limitativa, viales, frascos, tarros, envases flexibles (por ejemplo, Mylar sellado o bolsas de plástico) y similares. Los recipientes pueden ser dosis unitarias, envases a granel (por ejemplo, envases multidosis) o dosis subunitarias.
En algunas realizaciones, los kits pueden incluir además un segundo agente. En algunas realizaciones, el segundo agente es un tampón o agente diluyente farmacéuticamente aceptable que incluye, aunque no de forma limitativa, por ejemplo, agua bacteriostática para inyección (BWFI), solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. En algunas realizaciones, el segundo agente es un agente farmacéuticamente activo.
En algunas realizaciones de cualquiera de los artículos de fabricación, el artículo de fabricación incluye además instrucciones de uso de acuerdo con los métodos de esta divulgación. Las instrucciones generalmente incluyen información sobre la dosis, pauta posológica y vía de administración para el tratamiento previsto. En algunas realizaciones, estas instrucciones comprenden una descripción de la administración del anticuerpo aislado de la presente divulgación (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina descrito en el presente documento) para prevenir, reducir el riesgo de o tratar a un individuo que tiene una enfermedad, trastorno o lesión seleccionados de demencia, demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Gaucher, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, una lesión cerebral traumática, una lesión de la médula espinal, enfermedades vasculares ateroscleróticas, síntomas indeseables del envejecimiento normal, esclerosis lateral amiotrófica (ALS), depresión de larga duración, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, taupatía, esclerosis múltiple, degeneración macular senil, glaucoma, enfermedad degenerativa de discos (DDD), enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de presión normal, enfermedad de Nasu-Hakola, ictus, traumatismo agudo, traumatismo crónico, lupus, colitis aguda y crónica, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, paludismo, temblor esencial, lupus del sistema nervioso central, enfermedad de Behcet, demencia mixta, demencia con cuerpos de Lewy, atrofia multisistémica, síndrome de Shy-Drager, parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal gangliónica, encefalomielitis diseminada aguda, trastornos granulomatosos, sarcoidosis, enfermedades del envejecimiento, retinitis pigmentaria, degeneración de la retina, infecciones del tracto respiratorio, septicemia, infección ocular, infección sistémica, lupus, artritis y curación de heridas, de acuerdo con cualquier método de la presente divulgación. En algunas realizaciones, la enfermedad, trastorno o lesión es la demencia frontotemporal. En algunas realizaciones, las instrucciones incluyen instrucciones para el uso del anticuerpo anti-sortilina y el segundo agente (p. ej., segundo agente farmacéuticamente activo).
Usos diagnósticos
Los anticuerpos aislados de la presente divulgación (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina descrito en el presente documento) también tienen utilidad de diagnóstico. Por lo tanto, esta divulgación proporciona métodos para usar los anticuerpos de esta divulgación, o fragmentos funcionales de los mismos, con fines de diagnóstico, tales como la detección de una proteína sortilina en un individuo o en muestras de tejido derivadas de un individuo.
En algunas realizaciones, el individuo es un ser humano. En algunas realizaciones, el individuo es un paciente humano que sufre o está en riesgo de desarrollar una enfermedad, trastorno o lesión de la presente divulgación. En algunas realizaciones, los métodos de diagnóstico implican la detección de una proteína sortilina en una muestra biológica, tal como una muestra de biopsia, un tejido o una célula. Un anticuerpo anti-sortilina descrito en el presente documento se pone en contacto con la muestra biológica y se detecta el anticuerpo unido al antígeno. Por ejemplo, una muestra de biopsia puede teñirse con un anticuerpo anti-sortilina descrito en el presente documento para detectar y/o cuantificar las células asociadas a la enfermedad. El método de detección puede implicar la cuantificación del anticuerpo unido al antígeno. La detección de anticuerpos en muestras biológicas se puede realizar con cualquier método conocido en la técnica, incluyendo microscopía de inmunofluorescencia, inmunocitoquímica, inmunohistoquímica, ELISA, análisis FACS, inmunoprecipitación o tomografía por emisión de micropositrones. En ciertas realizaciones, el anticuerpo está radiomarcado, por ejemplo con 18F y posteriormente se detecta utilizando análisis de tomografía por emisión de micropositrones. La unión de anticuerpos también se puede cuantificar en un paciente mediante técnicas no invasivas tales como la tomografía por emisión de positrones (PET), tomografía computarizada de rayos X, tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT), tomografía computarizada (CT) y tomografía axial computarizada (CAT).
Un anticuerpo aislado de la presente divulgación (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina descrito en el presente documento) puede usarse para detectar y/o cuantificar, por ejemplo, la microglía en una muestra de cerebro tomada de un modelo de enfermedad preclínica (p. ej., un modelo de enfermedad no humano). Por lo tanto, un anticuerpo aislado de la presente divulgación (p. ej., un anticuerpo anti-sortilina descrito en el presente documento) puede ser útil para evaluar la respuesta terapéutica después del tratamiento en un modelo para una enfermedad o lesión del sistema nervioso, tal como la demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, enfermedades vasculares ateroscleróticas, enfermedad de Nasu-Hakola o esclerosis múltiple, en comparación con un control.
La presente divulgación se entenderá más completamente con referencia a los siguientes ejemplos. No deberían, sin embargo, interpretarse como limitantes del alcance de la presente divulgación.
Ejemplos
Los ejemplos 1 -3 describen la generación de variantes de afinidad madurada de un anticuerpo anti-sortilina humana, S-60, y la caracterización de esas variantes con respecto no solo a su afinidad de unión por SORT1, sino también a su actividad biológica en la regulación negativa de la expresión de SORT 1, aumentando la secreción de PGRN y bloqueando la unión de PGRN-SORT1. Sorprendentemente, se observó que la actividad biológica mejorada no se correlacionaba necesariamente con una mayor afinidad.
Ejemplo 1: Generación de variantes de S-60 y medición de la afinidad de unión a SORT1
El propósito del siguiente ejemplo fue generar variantes de afinidad madurada de un anticuerpo anti-sortilina humana, S-60, y para caracterizar la unión de los anticuerpos de afinidad madurada a la sortilina humana (SORT1).
Variantes de afinidad madurada de S-60
Se generaron anticuerpos de afinidad madurada contra la sortilina humana (SORT 1) y se midió su unión a SORT 1. El anticuerpo anti-SORT1, S-60, así como S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8 y 5.60-9 se han descrito en el documento WO2016164637. Las secuencias de Vh y Vl para S-60-9 y S60 en el documento WO2016164637 son idénticas, y en el presente documento se usará S-60 para referirse al anticuerpo. Las secuencias de Vh y Vl para S-60-5, S-60-6 y S-60-7 en el documento WO2016164637 son idénticas, y en el presente documento se usará S-60-7 para referirse al anticuerpo. Se observó que S-60 es un potente regulador negativo de los niveles de SORT1 y un potente bloqueante de la unión entre SORT 1 y PGRN (véanse, p. ej., las Tablas 8-10 y las Figuras 6A y 10D del documento WO2016164637). Por lo tanto, se seleccionó S-60 para una maduración de afinidad adicional.
Las variantes de anticuerpo anti-SORT1 S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15, S-60-16, S-60-18, S-60-19 y S-60-24 se generaron como se describe a continuación.
Producción de variantes de S-60 de afinidad madurada
El anticuerpo anti-SORT1 S-60 se sometió a maduración de la afinidad. En resumen, se crearon bibliotecas de anticuerpos diversificadas en levadura para cada uno de los anticuerpos progenitores iniciales. La diversidad en la primera ronda de maduración de la afinidad se creó utilizando técnicas estándar de clonación molecular para combinar la cadena pesada HVR-H3 y la cadena ligera (LC) progenitoras con diversidad genética preexistente en las regiones HVR-H1 y HVR-H2 de la cadena pesada (HC) (que recibe el nombre de optimización "H1/H2"). Para la segunda ronda de maduración de la afinidad, se optimizaron las secuencias tanto de la región variable de cadena pesada (Vh) como de la región variable de cadena ligera (Vl), con un enfoque particular en HVR-H3.
Las presiones de selección utilizadas para seleccionar las bibliotecas incluyeron titulación de equilibrio del antígeno SORT1, la cinética de competición del anticuerpo Fab progenitor y el uso de la deselección del reactivo de poliespecificidad. Luego se empleó citometría de flujo FACS para visualizar y seleccionar anticuerpos, usando técnicas estándar (véase, p. ej., Chao et al. Nature Protocols, 2006). A continuación, la población deseada se llevó a rondas de selección adicionales.
Los anticuerpos anti-SORT 1 de afinidad madurada se purificaron de la siguiente manera: los clones se cultivaron hasta la saturación y luego se indujeron durante 48 h a 30 °C con agitación. Después de la inducción, se sedimentaron las células de levadura y se recolectaron los sobrenadantes para la purificación. Las inmunoglobulinas se purificaron usando una columna de Proteína A y se eluyeron con ácido acético, pH 2,0. Los fragmentos Fab se generaron mediante digestión con papaína y se purificaron sobre matriz de afinidad CaptureSelect IgG-CH1 (LifeTechnologies).
Medición de la afinidad de unión a SORT1
El anticuerpo anti-SORT 1 S-60 y sus variantes de afinidad madurada se analizaron y compararon en un ensayo de unión a SORT 1. Para el ensayo de unión, se recolectaron células HEK293T estables que expresaban SORT 1 humana mediante tripsinización, se lavaron en PBS, se contaron y se sembraron en placas de fondo en U de 96 pocillos a 1 x 105 células/pocillo. Las placas se centrifugaron a 1400 rpm durante 3 minutos y se añadieron anticuerpos primarios anti-SORT1 o de control en tampón FACS (PBS 2 FBS) y se incubaron en hielo durante una hora. Posteriormente, las células se centrifugaron como se ha indicado anteriormente y se lavaron tres veces con tampón FACS. A continuación, las células se incubaron con anticuerpo secundario anti-humano conjugado con APC (BD Biosciences) en tampón FACS durante 30 minutos en hielo. Las células se lavaron de nuevo tres veces con tampón FACS y se analizaron en un citómetro de flujo BD FACS Canto o Intellicyt. La unión se midió como mediana de la intensidad de fluorescencia (MFI) en el canal PE de la población de células positivas para GFP.
Resultados
Las afinidades de unión de los anticuerpos anti-SORT1 a SORT1 se muestran a continuación en la Tabla 1. Todos los anticuerpos se ensayaron en la cadena principal de huIgG1.
Tabla 1: Afinidad de unión a SORT1.
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*Nota: los valores de KD representan el promedio de dos experimentos.
Los anticuerpos anti-SORT1 S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8, S-60-10, S-60-11, S-60-13, S-60-15, S-60-16, S-60-19 y S-60-24 mostraron una afinidad significativamente mejorada para unirse a SORT1 en comparación con S-60. En particular, S-60-8 y S-60-15 demostraron las mayores afinidades de unión a SORT1 de las variantes ensayadas, al tener un factor de cambio de 2.46 y 2.05 veces mayor, respectivamente, en comparación con la afinidad de unión del anticuerpo precursor, S-60.
Ejemplo 2: Efecto de las variantes de S-60 en la expresión de SORT1 y la secreción de PGRN
El propósito del siguiente ejemplo fue caracterizar el efecto de las variantes de afinidad madurada de un anticuerpo anti-SORT 1 humana, S-60, sobre la expresión de SORT 1 y los niveles extracelulares de progranulina (PGRN).
Ensayos de expresión de SORT 1 y de secreción de PGRN
Se generaron variantes de S-60 de afinidad madurada como se describe en el Ejemplo 1 y posteriormente se analizaron mediante FACS en cuanto a sus capacidades para regular negativamente SORT1 y elevar los niveles extracelulares de PGRN. Para ensayar el efecto de los anticuerpos anti-SORT1 sobre la expresión de SORT1 y la secreción de PGRN, se incubaron células U251 que expresan endógenamente SORT1 y secretan PGRN con el anticuerpo anti-SORT1 S-60 y variantes de afinidad madurada. Los niveles en la superficie celular de SORT1 a diferentes concentraciones de anticuerpos se midieron mediante FACS de la siguiente manera: se añadieron el anticuerpo anti-SORT1 S-60 y las variantes de afinidad madurada a las células U251 sembradas a 3 x 103 células/pocillo en placas de 96 pocillos con una dilución en serie de 0,023 nM a 150 nM. Después de 72 h, las células se recolectaron con tripsina, se lavaron en PBS y se marcaron con el anticuerpo anti-SORT1 S-2-11 conjugado con Dylight-650 (descrito en el documento WO2016164637) para cuantificar los niveles de proteína SORT1 restante. Después de que las células se incubaran con 5 gg/ml de S-2-11 conjugado con DyLight-650 (Invitrogen) durante una hora en hielo, las células se lavaron tres veces en PBS+ 2 FBS y la unión se cuantificó usando un citómetro de flujo FACSCanto™ o Intellicyt como mediana de intensidad de fluorescencia (MFI) de APC.
La cantidad de PGRN secretada en el sobrenadante celular en el transcurso de las 72 h se midió mediante ELISA estándar de la siguiente manera: se recolectaron las células y se recogió el medio; la concentración de PGRN en las muestras de medio se midió usando un kit ELISA de PGRN Duoset humano de R&D Systems, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los datos se analizaron en Microsoft Excel y GraphPad Prism.
Resultados
La concentración eficaz semimáxima (CE50) para la regulación negativa (DR) de los niveles en la superficie celular de SORT1 para cada una de las variantes S-60 ensayadas se muestra en la Tabla 2. Se cuantificó la DR de SORT1 para cada variante de S-60 ensayada y se expresó como un porcentaje del control (células no tratadas) (Tablas 2-4). Adicionalmente, el nivel de secreción extracelular de PGRN se cuantificó y expresó como un factor de cambio con respecto al control no tratado, como se muestra en las Tablas 2-4. Los experimentos independientes se representan en tablas separadas (Tablas 2-4). Todos los anticuerpos se ensayaron en la cadena principal de huIgG1 WT.
Tabla 2: Porcentaje de regulación negativa (DR) de SORT1 y secreción de PGRN para S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-
3 S-60-4 S-60-7 S-60-8
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Tabla 3: Porcentaje de regulación negativa (DR) de SORT1 y secreción de PGRN para S-60, S-60-3, S-60-24, S-60-
15 S-60-16 S-60-18 S-60-19.
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Tabla 4: Porcentaje de regulación negativa (DR) de SORT1 y secreción de PGRN para S-60-24, S-60-10, S-60-11,
S-60-12 S-60-13 S-60-14.
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En un primer experimento que analizaba la CE50 de DR de SORT1, el porcentaje de DR de SORT1 utilizando una concentración de anticuerpos saturante de 0,6 nM de IgG y la secreción de PGRn utilizando una concentración de anticuerpos saturante de 0,62 o 0,63 nM de IgG, se ensayaron las siguientes variantes: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7 y S-60-8. Como se muestra en la Tabla 2, S-60-3 demostró la CE50 de DR más baja (0.269 nM) y la mayor secreción de PGRN, un aumento de 1,77 veces con respecto al control y una mejora con respecto a S-60, que mostró un aumento de 1,38 veces con respecto a control. Utilizando una concentración 0,6 nM de IgG, S-60-1 presentó el efecto más sustancial sobre la expresión de SORT1 de las variantes ensayadas, regulando negativamente SORT1 en un 50,4 % en comparación con el control, mientras que S-60 reguló negativamente SORT 1 en un 29,3 %.
En un experimento posterior, se analizó el porcentaje de DR usando una concentración de anticuerpos saturante de 1,25 nM de IgG y la secreción de PGRN usando una concentración de anticuerpos saturante de 0,63 nM de IgG para las siguientes variantes: S-60, S-60-3, S-60-24, S-60-15, S-60-16, S-60-18 y S-60-19. Como se muestra en la Tabla 3, tanto S-60-15 como S-60-16 demostraron los niveles más altos de secreción extracelular de PGRN con un aumento de 1,42 veces en comparación con el control, una mejora sobre S-60 que mostró un aumento de 1,11 veces con respecto al control. De hecho, estas dos variantes también redujeron significativamente la expresión de SORT1 en comparación con S-60, regulando negativamente SORT 1 en un 60,92 % y un 70,14 %, respectivamente, con respecto al control, mientras que S-60 reguló negativamente SORT 1 solo en un 40,17 %.
En un tercer experimento, se analizó el porcentaje de DR usando una concentración de anticuerpos saturante de 0,63 nM de IgG y la secreción de PGRN usando una concentración de anticuerpos saturante de 0,63 nM de IgG para las siguientes variantes: S-60-24, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13 y S-60-14. Como se muestra en la Tabla 4, S-60-11 y S-60-12 mostraron la mayor cantidad de secreción extracelular de PGRN con un aumento de 1,89 veces en comparación con el control. S-60-11 también demostró la DR de SORT1 más alta a una concentración 0,63 nM de IgG, regulando negativamente SORT1 en un 88,76 % con respecto al control.
Conclusiones
Como se muestra en la Tabla 1 del Ejemplo 1, S-60-8 y S-60-15 demostraron las afinidades más altas para unirse a SORT1 en comparación con S-60 y las otras variantes de S-60 ensayadas con los valores de KD más bajos de 4,68E-10M y 5.60E-10, respectivamente. Sin embargo, en comparación con una variante específica, S-60-3, que tiene un valor de Kd más alto de 8,56E-10M (Tabla 1), S-60-8 mostró un aumento menor en la secreción de PGRN (Tabla 2) mientras que S-60-15 mostró un mayor aumento en la secreción de PGRN que S-60-3 (Tabla 3). Adicionalmente, S-60-8 (a una concentración saturante de 0,6 nM de IgG) demostró una reducción porcentual más pequeña de la expresión de SORT 1 (Tabla 2) en comparación con S-60-3 y S-60-15 (a una concentración saturante de 1,25 nM de IgG), que regularon negativamente SORT 1 en un 61,50 % y un 60,92 %, respectivamente (Tabla 3). Por lo tanto, S-60-15 tuvo un mejor comportamiento que S-60-3 con respecto al aumento de la secreción de PGRn y presentó un efecto similar en comparación con S-60-3 en la regulación negativa de los niveles de SORT1 en la superficie celular, mientras que S-60-8 tuvo un peor comportamiento que S-60-3 con respecto al aumento de la secreción de PGRN y la regulación negativa de los niveles de SORT1 en la superficie celular.
Los resultados de este estudio indican que la eficacia relativa de variantes de anticuerpos anti-SORT1 S-60 con respecto a la regulación negativa de la expresión de SORT1 o el aumento de la secreción de PGRN no se predecía por sus afinidades de unión relativas para la sortilina.
Además, S-60-15 mostró el mayor aumento en la secreción de PGRN en comparación con S-60 y determinadas variantes de S-60 (Tabla 3, última columna), incluyendo S-60-3. S-60-3, a su vez, mostró una mayor secreción de PGRN en relación con S-60-1, -2, -4, -7 y -8 (Tabla 2, última columna). Por lo tanto, S-60-15 es un anticuerpo eficaz para aumentar la secreción de PGRN en relación con esas variantes de S-60. La capacidad de aumentar la secreción de PGRN es una propiedad importante en la selección de un anticuerpo terapéutico para el tratamiento de enfermedades tales como FTD y otras patologías en las que la deficiencia de PGRN juega un papel causal directo. Dicho anticuerpo sería útil para restaurar los niveles de PGRN a, o más cerca de, los niveles de tipo silvestre, tratando de este modo la enfermedad. Por otra parte, esta propiedad es un parámetro farmacodinámico importante para evaluar la actividad de los anticuerpos in vivo (véase más adelante el Ejemplo 5).
Ejemplo 3: Las variantes de S-60 bloquean la unión de PGRN a SORT1
El propósito del siguiente ejemplo fue caracterizar el efecto de las variantes de afinidad madurada de un anticuerpo anti-SORT1 humana, S-60, sobre la interacción de unión entre SORT1 y un ligando natural, PGRN.
Ensayo de bloqueo de SORT1-PGRN
También se ensayó la capacidad de las variantes de S-60 para bloquear la unión de PGRN a SORT1. Se biotiniló PGRN humana recombinante (PGRN) (Adipogen) con un kit EZ-Link Micro NHS-PEG4 de ThermoScientific/Pierce de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se estableció una línea celular estable que expresaba SORT1 humana de longitud completa sin etiqueta (SORT1) mediante infección vírica de células HEK293T y selección positiva con higromicina (proyecto personalizado de Genscript). Como células de control, se utilizaron células HEK293T progenitoras.
Las células que expresan SORT1 o las células de control se recolectaron y lavaron en PBS. Se añadió PGRN humana biotinilada en PBS+ FBS al 2 % con o sin una titulación de anticuerpos anti-SORT1 o anticuerpos de isotipo ItG 1 humano de control y se incubó en hielo durante 2 h. Después de lavar las células 3 veces en PBS+ FBS al 2 %, las células se incubaron en Streptavidin-APC (BD Biosciences, 1:100) en hielo durante 30 min. Luego las células se lavaron de nuevo, se resuspendieron en PBS+ FBS al 2 % y se analizaron en un citómetro de flujo FACSCanto™ (BD Biosciences, Mississauga, ON). La unión de PGRN se midió como la mediana de la intensidad de fluorescencia (MFI) de APC de la población celular que expresaba SORT1. La unión de PGRN biotinilada a SORT1 expresada en células HEK293T se midió mediante FACS en ausencia o presencia de S-60 y sus variantes de anticuerpos.
Resultados
La concentración eficaz semimáxima (CE50) para bloquear la unión de PGRN a SORT 1 para cada una de las variantes de S-60 ensayadas se muestra en las Tablas 5-7. Adicionalmente, el nivel máximo de bloqueo de PGRN a SORT 1 se cuantificó y expresó como un porcentaje del bloqueo máximo logrado usando una concentración saturante de 50 nM de IgG o 150 nM de IgG (Tabla 5-7). Los experimentos independientes se muestran en tablas separadas a continuación.
Tabla 5: Bloqueo de la unión de PGRN a SORT1 expresada en células HEK293T para S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-
4 S-60-7 S-60-8 S-60
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Tabla 6: Bloqueo de la unión de PGRN a SORT1 expresada en células HEK293T para S-60, S-60-3, S-60-24, S-60-15 S-60-16 S-60-18 S-60-19. ____
e PG
ción
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(IgG))
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Tabla 7: Bloqueo de la unión de PGRN a SORT1 expresada en células HEK293T para S-60-24, S-60-10, S-60-11,
- -12 - -1 - -H.
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En un primer experimento que analizó la CE50 del bloqueo de unión de PGRN y el porcentaje de bloqueo de unión de PGRN a SORT1 con una concentración saturante 150 nM de IgG, se ensayaron las siguientes variantes: S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8 y S-60. Como se muestra en la Tabla 5, S-60-4 demostró la CE50 más baja (0,584 nM), logrando un bloqueo del 95,7 % de la unión de PGRN a SORT1. De las variantes analizadas, S-60-7 mostró la mayor reducción en la unión de PGRN, bloqueando el 96,5 % de la unión de PGRN a SORT1, aunque mostró una menor eficacia en el bloqueo de la unión de PGRN (mayor valor de CE50) que S-60 y las variantes S-60-3 y S-60-4.
En un experimento posterior que analizó la CE50 del bloqueo de unión de PGRN y el porcentaje de bloqueo de unión de PGRN a SORT1 con una concentración saturante 50 nM de IgG, se ensayaron las siguientes variantes: S-60, S-60-3, S-60-24, S-60-15, S-60-16, S-60-18 y S-60-19. Como se muestra en la Tabla 6, S-60-24, S-60-15 y S-60-16 mostraron los valores de CE50 más bajos en comparación con S-60, que variaban de 1,11 nM a 1,22 pM. Además, la variante S-60-15 demostró la potencia más fuerte en comparación con S-60, logrando un bloqueo del 90,74 % de la unión de PGRN a SORT 1.
En un tercer experimento, se ensayaron las siguientes variantes: S-60-24, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13 y S-60-14. Como se muestra en la Tabla 7, S-60-11 demostró la CE50 más baja (0,410 nM), logrando un bloqueo del 94,97 % de la unión de PGRN a SORT 1. De las variantes analizadas, S-60-24 mostró la mayor reducción en la unión de PGRN, bloqueando el 95,64 % de la unión de PGRN a SORT 1.
Conclusiones
Como se muestra en la Tabla 1 del Ejemplo 1, tanto S-60-8 como S-60-15 demostraron las afinidades más altas para unirse a SORT 1 en relación con S-60 y las otras variantes de S-60 ensayadas, teniendo S-60-8 la mayor afinidad por SORT1. Sin embargo, cuando se comparó con S-60, S-60-8 mostró una menor eficiencia en el bloqueo de la unión a PGRN (mayor valor de CE50 con respecto a S-60) (Tabla 5) mientras que S-60-15 mostró una mayor eficacia en el bloqueo de la unión a PGRN (valor de CE50 reducido con respecto a S-60) (Tabla 6). Por otra parte, S-60-8 demostró un bloqueo máximo porcentual más pequeño de la unión de PGRN a SORT1 en comparación con S-60 (Tabla 5) mientras que S-60-15 demostró un mayor porcentaje de bloqueo máximo de la unión de PGRN a SORT1 con respecto a S-60 (Tabla 6). Por lo tanto, S-60-15 tuvo un mejor comportamiento que S-60-8 en comparación con S-60 con respecto al valor de CE50 en el bloqueo de la unión de PGRN a SORT1 y el porcentaje máximo de bloqueo de la unión de PGRN a SORT 1, a pesar del hecho de que S-60-8 mostró una mayor afinidad de unión a SORT 1 que S-60-15.
Por lo tanto, los resultados de este estudio indican, inesperadamente, que la eficacia relativa de las variantes de anticuerpos anti-SORT 1 S-60 con respecto al bloqueo del grado de unión de PGRN a SORT 1 no se predecía por sus afinidades de unión relativas para SORT 1.
Ejemplo 4: Análisis de ensayos de estabilidad y estrés de S-60-15
El propósito del siguiente Ejemplo fue caracterizar S-60-15, una variante de S-60 de afinidad madurada descrita en ejemplos anteriores, en relación con la estabilidad bajo diversas condiciones de ensayo de estrés.
La estabilidad de un anticuerpo terapéutico es importante para la eficacia clínica. Durante la fabricación, almacenamiento y administración in vivo, los anticuerpos terapéuticos corren el riesgo de degradarse a través de múltiples vías. Los factores que son responsables de tal degradación siguen siendo poco conocidos. Dado que S-60 15 demostraba una alta afinidad de unión por SORT1 (véase el Ejemplo 1), redujo eficazmente los niveles de SORT1 en la superficie celular y aumentó la secreción extracelular de PGRN (véase el Ejemplo 2), también bloqueó sustancialmente la unión de PGRN a SORT1 (véase el Ejemplo 3) e, inesperadamente, tuvo un mejor comportamiento en estos ensayos funcionales que S-60-8, que mostró una mayor afinidad por SORT1, se evaluó adicionalmente la estabilidad de S-60-15.
Ensayos de estrés por pH y temperatura
Para medir la estabilidad de los restos de aminoácidos dentro de S-60-15, se sometieron muestras de S-60-15 a condiciones de estrés por pH y temperatura para emular las condiciones de estrés que se producen durante la fabricación, el almacenamiento y la administración in vivo. En resumen, se sometieron muestras individuales de S-60-15 a ensayos de estrés a pH 3,5 o pH 5,0 y a 40 °C o 50 °C. Las muestras se ensayaron en varios puntos de tiempo: 0, 1,3 y 5 días para las dos condiciones de pH, y 0, 7, 14 y 30 días para las condiciones de estrés por alta temperatura, mediante tratamiento con DTT e IAA seguido de digestión con tripsina. Las muestras digeridas se analizaron mediante cromatografía de líquidos con detección por espectroscopia de masas usando un ACQUITY UPLC de Waters acoplado a un espectrómetro de masas Xevo G2-XS QTOF usando una columna BEH C18. Los resultados se muestran en la Tabla 8.
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Se identificaron aminoácidos que tenían el potencial de sufrir modificaciones postraduccionales (PTM) tras el estrés, y se rastrearon cinéticamente los fragmentos peptídicos correspondientes generados a partir de las muestras sometidas a estrés. Los resultados confirman que dos sitios de asparagina-glicina, uno en la región Fc de la cadena pesada (SEQ ID NO: 11) y uno en la región Fab de la cadena ligera (SEQ ID NO: 15) de S-60-15, eran los más susceptibles a PTM, presentando un 45,9 % y 65,6 % de desamidación, respectivamente, después de someterse a un almacenamiento a 50 °C durante 30 días. Ningún otro sitio de PTM o de escisión presentó una PTM o degradación notable en los ensayos de estrés.
Desamidación del sitio de asparagina (N33)
Cualquier desaminación en la región Fc de la cadena pesada de S-60-15 no debería afectar a la afinidad de unión de S-60-15 a SORT1, ya que esa región no interactúa directamente con SORT1. Sin embargo, el sitio de asparagina (N33) en la región Fab de S-60-15 está en la HVR-L1 (SEQ ID NO: 8), la región determinante de la complementariedad de la cadena ligera, que participa en la unión al antígeno. Por lo tanto, la desamidación del sitio de asparagina (N33) en la región Fab de S-60-15 puede afectar a la afinidad de unión de S-60-15 a SORT1. Tras la desamidación, el sitio de asparagina (N33) en la región Fab de S-60-15 sufre un cambio de Asn a Asp/IsoAsp.
Se utilizó mutagénesis dirigida para ensayar los efectos de la desamidación del sitio de asparagina (N33) en la región Fab de S-60-15 y la posible sustitución de aminoácidos para reducir la probabilidad de degradación y desamidación y la responsabilidad de fabricación resultante. Se produjeron diecisiete mutaciones puntuales diferentes en la posición N33 de HVR-L1 de huIgG1 S-60-15 y se secuenciaron usando procedimientos estándar. El alotipo G1m3 o G1m(f) con mutaciones L234A/L233A/P331S (motivo ''LALAPS'') se utilizó como fondo (Jefferis R y Lefranc M-P, Mabs, julioagosto de 2009; 1 (4): 332-338). Las mutaciones puntuales LALAPS están destinadas a mejorar la seguridad general al minimizar las funciones efectoras, tales como la unión al receptor de Fc gamma, la activación del complemento y la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC). Se han observado en varios experimentos (no mostrados) la reducción de la unión del receptor de Fc gamma, la activación del complemento y la ADCC como resultado de mutaciones LALAPS. Se recopilaron datos de interferometría de biocapa (BLI) a una velocidad de 5 Hz a 25 °C en un instrumento Pall ForteBio Octet RED96. El análisis de datos se realizó utilizando el software de análisis de datos ForteBio, versión 9.0. Para el ensayo y para preparar los reactivos se utilizó tampón cinético estándar (PBS, BSA al 0,1 %, Tween-20 al 0,02 %, pH 7,2). Para todos los ensayos, las puntas de los sensores se equilibraron en tampón antes del análisis.
Para la investigación de la tasa de disociación inicial, se capturaron mutantes LALAPS N33 y N33X de S-60-15 (1 pg/ml, tiempo de carga de 300 s) en Biosensores Dip and Read de captura de Fc de IgG anti-humana (Pall ForteBio, Menlo Park, CA). Después se unió SORT 1 humana con etiqueta de histidina 20 nM (R&D Systems, Minneapolis, MN) a la superficie de anti-SORT1 capturada (tiempo de asociación de 200 s, tiempo de disociación de 1200 s). La señal de BLI resultante se obtuvo como la diferencia en la respuesta con respecto al sensor de referencia (1 pg/ml de S60-15 SORT1) 0 nM. Un control sin ligando (0 pg/ml de IgG SORT1 20 nM) no mostró unión no específica medible del antígeno a la superficie de la punta del sensor. Se aplicó un ajuste local completo usando un modelo de interacción 1:1 para extraer las constantes de tasa de asociación y disociación (ka y kd, respectivamente) para cada mutante N33. Las constantes de afinidad (Kd) se calcularon a partir de la relación kd/ka. Se realizaron diferentes sustituciones de aminoácidos en N33 y se ensayó la unión a SORT1 en una investigación de tasa de disociación (en condiciones sin estrés) como se muestra en la Tabla 9.
T l : K k k xr í r m n N X - -1 n n RT1
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Nota: ka, kd y kD representan un valor promedio de varios experimentos.
La exploración de este panel de mutantes N33X mostró que el anticuerpo S-60-15.5 (N33D), que imita la desamidación de n 33, conducía a una reducción significativa de la unión, con una kü de 1000 pM en comparación con 270 pM para N33 de tipo silvestre (wt) (Tabla 9). Por el contrario, el anticuerpo S-60-15.1 (N33T) tuvo la mejor retención de la afinidad de S-60-15 por SORT1, mostrando la menor diferencia de kü con respecto al tipo silvestre en el panel (Tabla 9).
Además, se realizó un análisis cinético completo usando múltiples concentraciones de SORT1 para S-60-15.1 [N33T] como huIgG1 y huIgG1 LALAPS en un experimento independiente. Los datos cinéticos se muestran en la Tabla 10. Los datos cinéticos demuestran que S60-15.1 [N33T] es un anticuerpo de alta afinidad tanto en forma de huIgG1 como en forma de huIgG1 LALAPS.
T l 1 : D in i ni n RT1 r - -1 .1 N T n f rm h I 1 h I 1 LALAP .
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Unión a las células y funcionalidad
Posteriormente se ensayaron S-60-15.1 [N33T], tanto en forma de huIgG1 como en forma de huIgG1 LALAPS, y S-60-15.5 [N33D] con respecto a la unión celular y la funcionalidad como se describe a continuación.
Se analizaron en paralelo anticuerpos S-60, S-60-15.1 [N33T] y S-60-15.5 [N33D] de afinidad madurada para determinar la unión a SORT1 humana expresada en células HEK293T como se ha descrito anteriormente. Los resultados se muestran en la Tabla 11. S-60-15.1 [N33T] en forma de huIgG1 o en forma de huIgG1 LALAPS mostró una mayor afinidad que S-60 (Tabla 11)con una menor kd y una mayor Bmáx. La variante de Fc no parecía tener efecto sobre la afinidad, teniendo sólo diferencias marginales en la kd y la Bmáx. de S-60-15.1 [N33T] huIgG1 vs. huIgG1 LALAPS. La versión completamente desamidada de S-60-15.5 [N33D] no mostró ninguna unión significativa (Tabla 11, N.B. (sin unión)) a células humanas que expresan SORT1, lo que sugiere que la amidación del resto N33 es esencial para la unión a la diana.
T l 11: V l r fini ni n l l r m i r FA .
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Se incubaron células U251 que expresan endógenamente SORT1 y secretan PGRN con el anticuerpo anti-SORT1 S-60, S-60-15.1 [N33T] o S-60-15.5 [N33D] a diferentes concentraciones, y los niveles de SORT 1 en la superficie celular se midieron mediante FACS como se describe en el Ejemplo 2. El control eran células no tratadas. Para cuantificar el porcentaje de regulación negativa de la sortilina, se usó una concentración de anticuerpos saturante de 150 nM de IgG. Para la cuantificación de la secreción de PGRN, se utilizó una concentración de anticuerpos saturante de 50 nM de IgG. Los resultados se muestran en la Tabla 12. S-60-15.1 [N33T] en forma de huIgG1 o huIgG1 LALAPS tuvo como resultado una regulación negativa significativa de SORT1 y un aumento en la secreción de PGRN. Tanto el nivel de regulación negativa de SORT1 como el nivel de aumento en la secreción de PGRN mejoraron significativamente en S-60-15.1 [N33T] en forma de huIgG1 o huIgG1 LALAPS en comparación con S-60, S-60-15.1 [N33T] en forma de huIgG1 mostró solo una reducción menor en la CE50 y el porcentaje de regulación negativa de SORT1, teniendo un factor de aumento menor en la secreción de PGRN en comparación con S-60-15.1 [N33T] en forma de huIgG1 LALAPS. Por el contrario, la versión completamente desamidada de S-60-15.5 [N33D] tuvo un peor comportamiento que S-60 en cada uno de estos ensayos funcionales; no mostró una regulación negativa significativa de SORT 1 y solo tuvo un cambio mínimo en los niveles de PGRN secretados.
Tabla 12: R e g u la c ió n n e g a tiv a (D R ) d e S O R T1 en la su p e rfic ie c e lu la r p o r v a r ia n te s d e a n ticu e rp o s S60.
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La unión de PGRN biotinilada a SORT1 expresada en células HEK293T se midió mediante FACS en ausencia o presencia de anticuerpo anti-SORT1 S-60, S-60-15.1 [N33T] y S-60-15.5 [N33D] como se describe en el Ejemplo 3. Los resultados se muestran en la T abla 13. Se usó una concentración de anticuerpo saturante de 150 nM de IgG para cuantificar el porcentaje de bloqueo de la unión de PGRN a SORT1.
Tabla 13: Blo ueo de la unión de PGRN a SORT1 ex resada en células HEK293T.
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Las variantes S-60-15.1 [N33T], tanto con como sin LALAPS, mostró los valores de CE50 más bajos y el valor más alto de bloqueo de la unión de PGRn a SORT1 en comparación con S-60-15.5 así como en comparación con S-60. Por lo tanto, S-60-15.1 [N33T] tuvo un mejor comportamiento que S-60 y S-60-15.5 en el bloqueo de la unión de PGRN a SORT 1.
En resumen, se observó que S-60-15 experimentaba una desamidación extensa en N33 en las condiciones de estrés del almacenamiento (véase la Tabla 8), lo que aumenta la probabilidad de degradación y la susceptibilidad resultante durante la fabricación. El anticuerpo anti-SORT1 S-60 descrito anteriormente y las variantes S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7 y S-60-8 también contienen una asparagina en la posición 33 en la Vl. En particular, es probable que la ubicación del sitio de desamidación N33 dentro del sitio HVR-L1 afecte a la unión de S-60-15 a SORT 1. S-60-15.1 [N33T], una de las diversas variantes de S-60-15 ensayadas, retuvo una afinidad de unión significativa a SORT1 en comparación con S-60-15 (véase la Tabla 9) y mostró una afinidad de unión significativamente mejorada a SORT1 en comparación con S-60 (véase la Tabla 11; compárese con S-60-15 WT en la Tabla 1). Esta alta retención de la afinidad de unión fue inesperada para un anticuerpo que tiene una sustitución no preferida dentro de HVR-L1 porque los restos de HVR-L1 pueden entrar en contacto con el antígeno. Asimismo, inesperadamente, la variante S-60-15.1 [N33T] retuvo una mayor regulación negativa de SORT1, una mayor secreción de PGRN y un mayor bloqueo de la unión de PGRN a SORT1 en comparación con S-60 (véanse las Tablas 12 y 13). Estos resultados también fueron inesperados porque se habría esperado que una sustitución no preferida en una secuencia de HVR afectara negativamente a las características funcionales de un anticuerpo. En cambio, S-60-15.1 [N33T] conserva las propiedades deseables de regulación negativa de SORT1 en la superficie celular, aumentando la secreción de PGRN y bloqueando la unión de PGRN a SORT1, además de ser más estable que los anticuerpos descritos anteriormente mediante la eliminación de la susceptibilidad durante la fabricación en la posición 33 de la VL.
Ejemplo 5: PK y PD del anticuerpo anti-sortilina en primates no humanos
En este ejemplo, se determinaron la farmacocinética (PK) y la farmacodinámica (PD) del anticuerpo anti-sortilina S-60-15.1 [N33T] LALAPS administrado por vía intravenosa (IV) en primates no humanos.
Materiales y métodos
Estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos de dosis única
Para estudios farmacocinéticos de dosis única, se administró a monos cynomolgus anticuerpo anti-sortilina mediante una dosis IV única de 5 mg/kg, 20 mg/kg, 60 mg/kg o 200 mg/kg el día 0 (n = 3 animales por dosis). Posteriormente, se extrajo sangre y CSF de los animales en múltiples puntos de tiempo para obtener concentraciones de anticuerpos anti-sortilina en plasma y líquido cefalorraquídeo (CSF), que son medidas de farmacocinética del anticuerpo antisortilina. También se determinaron la concentración de progranulina (PGRN) y los niveles de sortilina (SORT1) en los glóbulos blancos (WBC), que son medidas de farmacodinámica.
Las concentraciones de anticuerpos anti-sortilina se ensayaron utilizando un ensayo ELISA con anticuerpos antiidiotípicos específicos de anticuerpos anti-sortilina. Las concentraciones de PGRN se ensayaron con un kit ELISA disponible en el mercado. Los niveles de SORT1 en los glóbulos blancos se analizaron mediante un ensayo ELISA y se normalizaron a la concentración de proteína.
Resultados
La Tabla 14 proporciona el valor medio de la Cmáx. en plasma, el valor medio de AUC y el t1/2 para cada una de las dosis de anticuerpos anti-sortilina ensayadas.
T l 14. mx A m i 12 r l i ni r ni- rilin in i n = r i .
Figure imgf000095_0002
Como se muestra en la Figura 1A, los niveles de expresión de SORT1 en glóbulos blancos periféricos disminuyeron después del tratamiento de primates no humanos con cualquiera de las dosis de anticuerpos anti-sortilina ensayadas. Las dosis más altas de anticuerpos anti-sortilina (60 mg/kg, 200 mg/kg) dieron como resultado una disminución más temprana y prolongada de los niveles de SORT1 en glóbulos blancos periféricos en comparación con dosis más bajas de anticuerpos anti-sortilina (5 mg/kg, 20 mg/kg).
Los niveles de PGRN aumentaron en el plasma de primates no humanos a los que se les administró una única inyección IV de anticuerpo anti-sortilina de una manera dependiente del tiempo y la dosis (FIG. 1B). En particular, los niveles plasmáticos de PGRN aumentaron de 3 a 4 veces a la Cmáx., en comparación con los niveles de referencia, para todas las dosis de anticuerpos anti-sortilina ensayadas. Los niveles plasmáticos de PGRN permanecieron elevados durante períodos de tiempo más prolongados a las dosis más altas de anticuerpos. Adicionalmente, el aumento de los niveles plasmáticos de PGRN se correlacionó con la disminución de los niveles de expresión de SORT1 en los glóbulos blancos periféricos.
Los niveles de PGRN en CSF también aumentaron en primates no humanos a los que se administró una única inyección IV de anticuerpo anti-sortilina. Como se muestra en la Figura 1C, los niveles de PGRN en CSF aumentaron de 2 a 3 veces por encima del valor de referencia en animales a los que se les administraron 20 mg/kg, 60 mg/kg o 200 mg/kg. Como se observa con los niveles plasmáticos de PGRN, los niveles de PGRN en CSF permanecieron elevados a lo largo del tiempo en los grupos de dosis más altas de anticuerpos.
La Tabla 15 proporciona la Cmáx. media en CSF, la AUC media y el t1/2 para cada una de las dosis de anticuerpos antisortilina ensayadas en primates no humanos. Las concentraciones de anticuerpo anti-sortilina en CSF fueron en promedio aproximadamente el 0,1 % de la cantidad observada en el plasma.
TABLA 15. Parámetros farmacocinéticos de anticuerpo anti-sortilina en CSF y semivida estimada en primates no humanos.
Figure imgf000095_0001
Estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos a dosis repetidas
Se realizaron estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos adicionales en primates no humanos a los que se administró anticuerpo anti-sortilina siguiendo un régimen de dosis repetidas. En estos estudios, a los animales (2 machos y 2 hembras) se les administró anticuerpo anti-sortilina a una dosis de 60 mg/kg una vez por semana durante cuatro semanas. En varios puntos de tiempo posteriores, se determinaron los niveles de expresión de SORT1 en glóbulos blancos periféricos. Además, se determinaron los niveles plasmáticos y en CSF del anticuerpo anti-sortilina.
Como se muestra en la Figura 2A, los niveles de SORT1 en los glóbulos blancos periféricos permanecieron disminuidos a lo largo de la duración del estudio. Los niveles de PGRN en plasma aumentaron de 5 a 6 veces por encima del valor de referencia en los niveles máximos (FIG. 2B). Se observó una disminución de PGRN en plasma después de la cuarta y última administración del anticuerpo anti-sortilina; sin embargo, los niveles de PGRN en plasma permanecieron elevados dos veces por encima del valor de referencia. Adicionalmente, los niveles de PGRN en CSF aumentaron de 3 a 4 veces por encima del valor de referencia (FIG. 2C).
La exposición sistémica a anticuerpos anti-sortilina, evaluada por la Cmáx. media y la AUC0-168, fue de 2100 cg/ml y 114.000 Mg/ml x h el día 1, y de 3020 Mg/ml y 174.000 Mg/ml x h el día 22. Estos resultados mostraron que la exposición fue mayor el día 22 en comparación con el día 1, indicando cierta acumulación del anticuerpo.
La concentración de anticuerpos anti-sortilina en el CSF en estos animales varió entre el 0,03 % y el 0,12 % de la observada en el plasma, que es coherente con la distribución de otros anticuerpos en el CSF (Pestalozzi et al., (2000) J Clin Oncol 18(11):2349-51, Petereit et al., (2009) Mult Scler 15(2):189-92).
Considerados en conjunto, estos resultados indican que la variante S-60-15.1 [N33T], a pesar de tener una semivida relativamente corta, tiene una actividad sostenida in vivo, disminuyendo los niveles de SORT1 en los glóbulos blancos periféricos y aumentando los niveles de PGRN en plasma y CSF.
Por otra parte, la administración IV de S-60-15.1 [N33T] a monos cynomolgus en un estudio toxicológico de dosis repetidas de 4 semanas y de 26 semanas fue bien tolerada a dosis de hasta 200 mg/kg por semana, y no hubo hallazgos adversos que impidieran la realización de estudios clínicos en humanos basados en esos y otros estudios toxicológicos que incluyeron evaluaciones de la liberación de citocinas, mortalidad, peso corporal, frecuencia y profundidad respiratoria y tolerabilidad local en el sitio de inyección. Por lo tanto, S-60-15.1 [N33T] es adecuado para ensayos en estudios clínicos humanos de FTD y otras indicaciones como se contempla en el presente documento.
La ausencia de hallazgos adversos con respecto a la toxicidad de la administración de un anticuerpo anti-sortilina fue sorprendente en vista del hecho de que la sortilina actúa como un receptor de varios ligandos y tiene múltiples funciones en el transporte y la señalización celular (Nykjaer, A et al., (2012) Trends Neurosci 35: 261-270). Debido a los múltiples ligandos y papeles funcionales de la sortilina, se podría haber esperado que la administración de un anticuerpo anti-sortilina causara efectos inespecíficos; sin embargo, el anticuerpo S-60-15.1 [N33T] fue bien tolerado a las dosis administradas.
Secuencias de las regiones V h de las variantes de anticuerpo de S-60, alineamiento con S-60 y ubicaciones de HVR
S - 60 i SEO I D NO: 56 ) QVQLQESGPG1VKpSET 1 SI..TCAVSGYSISSGYYWGWXRQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYY 60
Figure imgf000096_0001
S - 60 HVR HX (SEC ID NO: 1) - YSISSGYYWG-
S-60HVR H2 «SEO ID NO: 2} -TIYHSGSTYY
Figure imgf000097_0001
Secuencias de las regiones V l de las variantes de anticuerpo de S-60, alineamiento con S-60 y ubicaciones de HVR
Figure imgf000097_0002
Figure imgf000098_0001
T l 1: ni HVR H1 n ni r ni- RH
Figure imgf000098_0002
T l 17: ni HVR H2 n ni r ni- RH
Figure imgf000098_0003
T l 1: n i HVR H n ni r ni- RT1
Figure imgf000099_0001
Tabla 19: Secuencias de HVR L1 de cadena li era de anticuer os anti-SORT1
Figure imgf000099_0002
Figure imgf000100_0001
T l 2: n i HVR L2 n li r ni r ni- RT1
Figure imgf000100_0002
T l 21: n i HVR L n li r ni r ni- RT1
Figure imgf000100_0003
T l 22: n i r i n m r 1 n ni r ni- RT1
Figure imgf000101_0001
T l 2: n i r i n m r 2 n ni r ni- RT1
Figure imgf000101_0002
T l 24: n i r i n m r n ni r ni- RT1
Figure imgf000101_0003
T l 2: n i r i n m r 4 n ni r ni- RT1
Figure imgf000101_0004
T l 2 : n i r i n m r 1 n li r ni r ni- RT1
Figure imgf000102_0001
T l 27: n i r i n m r 2 n li r ni r ni- RT1
Figure imgf000102_0002
T l 2 : n i r i n m r n li r ni r ni- RT1
Figure imgf000102_0003
continuación
Figure imgf000103_0001
T l 2 : n i r i n m r 4 n li r ni r ni- RT1
Figure imgf000103_0002
T l : n i r i n v ri l n ni r ni- RT1
Figure imgf000103_0003
T l 1: n i r i n v ri l n li r ni r ni- RT1
Figure imgf000104_0001
Figure imgf000105_0001
Figure imgf000106_0001
Tabla 32: Secuencias de aminoácidos de sortilina
Figure imgf000107_0001
Figure imgf000108_0001
T l : ni í i - -1
Figure imgf000108_0002
Figure imgf000109_0001
Tabla 34: Secuencias de aminoácidos del dominio Fc
Figure imgf000109_0002
T l : ni min i n l n i m l
Figure imgf000109_0003
continuación
Figure imgf000110_0001
Figure imgf000111_0001
Figure imgf000111_0002
(continuación)
Figure imgf000112_0001
(continuación)
Figure imgf000113_0001
(continuación)
Figure imgf000114_0001
(continuación)
Figure imgf000115_0001
(continuación)
Figure imgf000116_0001
(continuación)
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Claims (36)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 60.
2. Un anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 57.
3. Un anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 137 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 142.
4. Un anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 138 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 142.
5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la proteína sortilina humana comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 81.
6. El anticuerpo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el anticuerpo es de la clase IgG, la clase IgM o la clase IgA.
7. El anticuerpo de la reivindicación 6, en donde el anticuerpo es de la clase IgG y tiene un isotipo IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4.
8. El anticuerpo de la reivindicación 7, en donde:
(a) el anticuerpo es un isotipo IgG1 o IgG2 y la región Fc comprende una sustitución de aminoácido en la posición P331S, en donde la numeración de la posición de restos está de acuerdo con la numeración EU;
(b) el anticuerpo es un isotipo IgG1 y la región Fc comprende sustituciones de aminoácidos en las posiciones L234A, L235A y P331S, en donde la numeración de la posición de restos está de acuerdo con la numeración EU; (c) el anticuerpo es un isotipo IgG1, IgG2 o IgG4 y la región Fc comprende una sustitución de aminoácidos en la posición N297A, en donde la numeración de la posición de restos está de acuerdo con la numeración EU; o (d) la región Fc comprende una sustitución de aminoácidos en las posiciones S267E y L328F, en donde la numeración de la posición de restos está de acuerdo con la numeración EU.
9. El anticuerpo de la reivindicación 8, en donde el anticuerpo es un isotipo IgG1 y la región Fc comprende sustituciones de aminoácidos en las posiciones L234A, L235A y P331S, en donde la numeración de la posición de restos está de acuerdo con la numeración EU.
10. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde el anticuerpo es un anticuerpo humano, un anticuerpo biespecífico, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo multivalente o un anticuerpo conjugado.
11. El anticuerpo de la reivindicación 10, en donde el anticuerpo es un anticuerpo biespecífico que reconoce una proteína sortilina y un segundo antígeno.
12. El anticuerpo de la reivindicación 11, en donde el segundo antígeno es un antígeno que facilita el transporte a través de la barrera hematoencefálica.
13. El anticuerpo de la reivindicación 12, en donde el segundo antígeno se selecciona del grupo que consiste en receptor de transferrina (TR), receptor de la insulina (HIR), receptor del factor de crecimiento similar a la insulina (IGFR), proteínas 1 y 2 relacionadas con receptores de lipoproteínas de baja densidad (LPR-1 y 2), receptor de toxina diftérica, CRM197, un anticuerpo de dominio único de llama, TMEM 30(A), dominio de transducción de proteínas, TAT, Syn-B, penetratina, un péptido de poliarginina, un péptido Angiopep, basigina, Glutl, CD98hc y ANG1005.
14. El anticuerpo de la reivindicación 1 o 2, en donde el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo que se une a una proteína sortilina humana.
15. El anticuerpo de la reivindicación 14, en donde el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv o scFv.
16. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-15.
17. Un vector que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 16.
18. Una célula hospedadora aislada que comprende el vector de la reivindicación 17.
19. Un método para producir un anticuerpo que se une a sortilina, que comprende cultivar la célula hospedadora de la reivindicación 18 de tal manera que se produce el anticuerpo.
20. El método de la reivindicación 19, que comprende además recuperar el anticuerpo producido por la célula hospedadora.
21. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
22. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -15 para su uso como un medicamento.
23. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, para su uso en un método para prevenir, reducir el riesgo de o tratar una enfermedad, trastorno o lesión seleccionada del grupo que consiste en demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, esclerosis lateral amiotrófica, lesión cerebral traumática, una lesión de la médula espinal, demencia, ictus, enfermedad de Parkinson, degeneración de la retina, esclerosis múltiple, choque séptico, artritis, artrosis y dolor neuropático.
24. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, para su uso en un método para prevenir, reducir el riesgo de o tratar una enfermedad, trastorno o lesión seleccionada del grupo que consiste en demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, demencia vascular, ataques, distrofia de la retina, esclerosis lateral amiotrófica, lesión cerebral traumática, una lesión de la médula espinal, demencia, ictus, enfermedad de Parkinson, degeneración de la retina, esclerosis múltiple, choque séptico, artritis y osteoartritis.
25. El anticuerpo para el uso de la reivindicación 24, en donde la enfermedad, trastorno o lesión se selecciona del grupo que consiste en demencia frontotemporal, enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica y enfermedad de Parkinson.
26. El anticuerpo para el uso de la reivindicación 25, en donde la enfermedad, trastorno o lesión es la demencia frontotemporal.
27. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, para su uso en un método para prevenir, reducir el riesgo de o tratar un trastorno inflamatorio.
28. Un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-15 para su uso en un método para inhibir la neuroinflamación o axonopatía caracterizada por crecimiento axonal corto y ramificación aberrante en un individuo que lo necesita.
29. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -15 para su uso en un método para promover la curación de heridas.
30. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -15 para su uso en un método para prevenir, reducir el riesgo de o tratar la artritis en un individuo que lo necesita.
31. Un método in vitro para inhibir la interacción entre la sortilina expresada en una célula y la progranulina, comprendiendo el método exponer una célula que expresa sortilina al anticuerpo anti-sortilina de una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 o a la composición farmacéutica de la reivindicación 21.
32. El método de la reivindicación 31, en donde el método para inhibir la interacción entre la sortilina expresada en una célula y la progranulina comprende además disminuir el nivel de sortilina expresada en la superficie celular.
33. El método de la reivindicación 31 o 32, en donde el método para inhibir la interacción entre la sortilina expresada en una célula y la progranulina comprende además aumentar los niveles extracelulares de progranulina.
34. El anticuerpo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 23-26 en donde el método para prevenir, reducir el riesgo o tratar la enfermedad, trastorno o lesión comprende administrar el anticuerpo a un individuo que tiene una o más mutaciones en el gen que codifica la progranulina.
35. El anticuerpo para el uso de la reivindicación 34, en donde el individuo es heterocigoto para una o más mutaciones de pérdida de función en el gen que codifica la progranulina.
36. El anticuerpo para el uso o el método de una cualquiera de las reivindicaciones 23-35, en donde el anticuerpo antisortilina comprende dos o más anticuerpos anti-sortilina.
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