JP2022542964A - 抗ｍｓ４ａ４ａ抗体、及びその使用方法 - Google Patents

抗ｍｓ４ａ４ａ抗体、及びその使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2022542964A
JP2022542964A JP2022506146A JP2022506146A JP2022542964A JP 2022542964 A JP2022542964 A JP 2022542964A JP 2022506146 A JP2022506146 A JP 2022506146A JP 2022506146 A JP2022506146 A JP 2022506146A JP 2022542964 A JP2022542964 A JP 2022542964A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
acid sequence
hvr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022506146A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2021022083A5 (ja
Inventor
ジョンフン スン，
ウェイ－シェン ホ，
ムハンマド エー． アルハワグリ，
フィリップ リン コン，
エルヴェ リン，
フア ロン，
カルパガム スリニバサン，
アナンヤ ミトラ，
ダニエル ピー． バーミンガム，
クラウス－ディーター ヘーガー，
サンティアゴ ビベロス サラザー，
フランチェスカ チグナレッラ，
イラリア タッシ，
ティナ シュワーブ，
アンジー グレース イー，
アーノン ローゼンタール，
Original Assignee
アレクトル エルエルシー
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アレクトル エルエルシー filed Critical アレクトル エルエルシー
Publication of JP2022542964A publication Critical patent/JP2022542964A/ja
Publication of JPWO2021022083A5 publication Critical patent/JPWO2021022083A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本開示は、一般的に、ＭＳ４Ａ４Ａポリペプチド、例えば、哺乳動物ＭＳ４Ａ４ＡまたはヒトＭＳ４Ａ４Ａに特異的に結合する抗体、例えば、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、及び抗体フラグメントを含む組成物、ならびにそれを必要とする個体での予防、リスクの抑制、または、治療におけるそのような組成物の使用に関する。【選択図】なし

Description

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の全内容を、参照により、本明細書で援用する：コンピューターで読み取り可能な（ＣＲＦ）配列表（ファイル名称：４５０３＿００８ＰＣ０６＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ＴＸＴ、作成日：２０２０年７月２８日、サイズ：２８９，４４８バイト）。
本開示の技術分野
本開示は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、及び、そのような抗体の治療的使用に関する。
本開示の背景
４回膜貫通ドメインサブファミリーＡ（ＭＳ４Ａ）遺伝子クラスターは、染色体１１ｑ１２に存在しており、また、１８個の遺伝子を含む。このＭＳ４Ａ遺伝子ファミリーは、一般的には、テトラ貫通トポロジーを有する膜タンパク質をコードする（Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ，２６５：８７－９３；Ｌｉａｎｇ ａｎｄ Ｔｅｄｄｅｒ，２００１，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７２：１１９－１２７；Ｅｆｔｈｙｍｉｏｕ ａｎｄ Ｇｏａｔｅ，２０１７，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，１２：４３）。これらの膜貫通ドメインは、１つの細胞内ループと、２つの細胞外ループで相互に接続されており、Ｎ末端とＣ末端の両方が細胞質の内部にある。大部分のＭＳ４Ａタンパク質は、ＭＳ４Ａ１（ＣＤ２０）とアミノ酸配列の相同性（２０～３０％の類似性）を共有しており、最初の３つの膜貫通ドメインで、最も高い配列同一性が認められる。異なるＭＳ４Ａタンパク質にまで及んで、これらの膜貫通領域内において高度に保存されたモチーフは、当該膜貫通ドメインが、ＭＳ４Ａタンパク質の機能において重要な一般的な役割を果たすことを示唆している。ＭＳ４Ａタンパク質の間での最大の変動領域が、Ｎ末端とＣ末端の細胞質ドメイン、及び第２の推定細胞外ループで認められており（Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ，２６５：８７－９３）、これらの領域が、独特の機能特性を付与することが示唆されている。
この多様性にもかかわらず、ＭＳ４Ａドメインには、幾つかの共有要素がある。例えば、ＭＳ４Ａタンパク質（ＭＳ４Ａ８Ｂ、及び、ＭＳ４Ａ１２を除く）で保存されている注目に値する機能の１つは、ジスルフィド架橋を形成し得る第２の推定細胞外ループでの２つのシステイン残基の保存である。ＭＳ４Ａタンパク質のＮ末端ドメインとＣ末端ドメインも、プロリン残基が豊富であるが、この機能的な重要性は未だ解明されていない（Ｈｕｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７２：１１９－１２７）。しかしながら、プロリンに富む領域は、一般的に、細胞骨格の再構成、転写の開始、シグナル伝達カスケード、及び、タンパク質間相互作用を促すアダプターシステムの一部としてＳＨ３ドメインと関連するなど、様々な細胞プロセスに関与している（Ｋａｙ ｅｔ ａｌ，２０００，ＦＡＳＥＢ Ｊ，１４：２３１－２４１）。
ＭＳ４Ａタンパク質ファミリーは、一部の重要な例外：ＭＳ４Ａ１（ＣＤ２０）は、Ｂリンパ球においてのみ発現し、当該タンパク質が、Ｂ細胞抗原受容体、及び、カルシウム流入によるシグナル伝達機能を有することを除いて、機能面では特徴決定があまり進んでいない。ＣＤ２０は、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、自己免疫疾患、及び、固形臓器移植での病原性Ｂ細胞を枯渇させるために使用する免疫療法抗体の標的である。ＭＳ４Ａ２（ＦｃεＲβ）は、肥満細胞に関する高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）、及び、低親和性ＩｇＧ受容体（ＦｃεＲＩＩＩ）のシグナル伝達サブユニットであり、過敏症とアレルギー反応において重要な役割を果たす。ＭＳ４Ａ２は、４つのタンパク質の高親和性ＩｇＥ受容体複合体を介してシグナルを増幅するＩＴＡＭドメインのタンパク質である。ＭＳ４Ａ３（Ｈｔｍ４）は、リンパ系、及び、骨髄細胞の細胞内膜に発現し、そして、細胞周期調節のアダプタータンパク質として機能する。
ＭＳ４Ａファミリーのメンバーの大部分は特徴決定されていないが、ＭＳ４Ａタンパク質が、脂肪酸、ペプチド、及び、硫酸化ステロイドなどの様々な外因性、及び、内因性リガンドの化学センサー、及び、化学受容体として機能しており、そして、カルシウム流入の媒介、エンドサイトーシスの調節、輸送に関与しており、また、シグナル伝達複合体のアダプターとして機能し得ることを示唆する報告がある（Ｃｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ，２６：１７１１－１７２７；Ｇｒｅｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｅｌｌ，１６５：１７３４－１７４８；Ｅｏｎ Ｋｕｅｋ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｅｌｌ，１６５：１７３４－１７４８；Ｋｏｓｌｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ，２００８，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，６８：３４５８－３４６６；Ｂｕｂｉｅｎ ｅｔ ａｌ，１９９３；Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１２１：１１２１－１１３２）。
特定のＭＳ４Ａ遺伝子は、様々な障害や疾患、特に、神経変性障害と遺伝的に関連している。例えば、ゲノムワイド有意性関連分析は、染色体１１ｑ１２にあるＭＳ４Ａ遺伝子クラスターを、最も重要なアルツハイマー病の遺伝子座の１つとして特定した。特に興味深い同定された遺伝子の１つは、ＭＳ４Ａ４Ａである（Ｌａｍｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４５：１４５２－１４５８；Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４３：４２９－４３５；Ｎａｊ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４３：４３６－４４１）。
したがって、ＭＳ４Ａ４Ａ活性に関連する様々な疾患、障害、及び病態を治療するために、ＭＳ４Ａ４Ａに特異的に結合する抗体など、ＭＳ４Ａ４Ａを標的とする治療法、及び／または、例えば、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質レベルまたは活性を抑制してまたは大きくして、ＭＳ４Ａ４Ａの活性を調節する（例えば、阻害するまたは抑制する、活性化するまたは高める）ことができる治療法が必要とされている。
特許出願、及び、刊行物を含む、本明細書で引用するすべての文献を、参照により、それらの全内容を本明細書で援用する。
Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ，２６５：８７－９３ Ｌｉａｎｇ ａｎｄ Ｔｅｄｄｅｒ，２００１，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７２：１１９－１２７ Ｅｆｔｈｙｍｉｏｕ ａｎｄ Ｇｏａｔｅ，２０１７，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，１２：４３ Ｈｕｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７２：１１９－１２７ Ｋａｙ ｅｔ ａｌ，２０００，ＦＡＳＥＢ Ｊ，１４：２３１－２４１ Ｃｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ，２６：１７１１－１７２７ Ｇｒｅｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｅｌｌ，１６５：１７３４－１７４８ Ｅｏｎ Ｋｕｅｋ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｅｌｌ，１６５：１７３４－１７４８ Ｋｏｓｌｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ，２００８，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，６８：３４５８－３４６６ Ｂｕｂｉｅｎ ｅｔ ａｌ，１９９３；Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１２１：１１２１－１１３２ Ｌａｍｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４５：１４５２－１４５８ Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４３：４２９－４３５ Ｎａｊ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４３：４３６－４４１
本開示の概要
本開示は、一般的に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、及び、そのような抗体を使用する方法に関する。本明細書で提供する方法は、神経変性疾患、障害、または、病態の予防、そのリスクの抑制、またはそれを有する個体の治療における用途を見出す。一部の実施形態では、本開示は、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、認知症、及び、認知障害から選択する神経変性疾患、障害、または、病態を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａの発現または活性の高まりに関連する疾患、障害、または、病態を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。
ある態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体に関し、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域が：配列番号：９４、１０８、１１６、１４６、１４７、３０８、及び３１１から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号９６、９７、９８、９９、１１０、１１１、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、３０９、及び３１２から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号１００、１０１、１０２、１１２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１５４、３１０、及び３１３から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域が；配列番号１０３、１０４、１１３、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１５６、１５７、１５８、３１４、及び３１７から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０５、１０６、１１４、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１５９、１６０、１６１、３１５、及び３１８から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１０７、１１５、１４４、１４５、１６３、３１６、及び３１９配列番号から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域が；配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号９６～９９から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、配列番号１００～１０２から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域が：配列番号１０３～１０４から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０５～１０６から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域が：配列番号３０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号３０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号３１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域が：配列番号３１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号３１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、配列番号３１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域が：配列番号３１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、配列番号３１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域が：配列番号３１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、配列番号３１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域が：配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号１１０～１１１から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域が：配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は：配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号１１８～１２２から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号１２３～１２９から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域が：配列番号１３０～１３８から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１３９～１４３から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１４４～１４５から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域が：配列番号１４６～１４７から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号１４９～１５３から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域が：配列番号１５６～１５８から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１５９～１６１から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号５～１５、３０４、及び３０６から選択するアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号２４～３０から選択するアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号４０～５３から選択するアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号７６～８４から選択するアミノ酸配列を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、配列番号１７～２２、３０５、及び３０７から選択するアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、配列番号３２～３６から選択するアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、配列番号５５～７４から選択するアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、配列番号８６～９３から選択するアミノ酸配列を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号５～１５、３０４、及び３０６から選択するアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は、配列番号１７～２２、３０５、及び３０７から選択するアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号２４～３０から選択するアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は、配列番号３２～３６から選択するアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号４０～５３から選択するアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は、配列番号５５～７４から選択するアミノ酸配列を含む。実施形態のいずれかと組み合わせることができる一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号７６～８４から選択したアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は、配列番号８６～９３から選択するアミノ酸配列を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号３２０～３４３から選択するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、当該重鎖は、配列番号３３６～３４３から選択するアミノ酸配列を含む（任意に、当該軽鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、さらに任意に、当該軽鎖は、配列番号３４４のアミノ酸配列を含む定常領域を含む）。一部の実施形態では、当該重鎖は、配列番号３２０～３２７から選択するアミノ酸配列を含む（任意に、当該軽鎖は、配列番号３０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、さらに任意に、当該軽鎖は、配列番号３４４のアミノ酸配列を含む定常領域を含む）。一部の実施形態では、当該重鎖は、配列番号３２８～３３５から選択するアミノ酸配列を含む（任意に、軽鎖は、配列番号３０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、さらに任意に、当該軽鎖は、配列番号３４４のアミノ酸配列を含む定常領域を含む）。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号３５９または３６０のアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖は、配列番号３６５のアミノ酸配列を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は：配列番号３０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号３０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号３１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域は：配列番号３１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号３１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号３１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号３０４のアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は配列番号３０５のアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号３２４または３２５のアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖は、配列番号３６３のアミノ酸配列を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は：配列番号３１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号３１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域は：配列番号３１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号３０６のアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は、配列番号３０７のアミノ酸配列を含む。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号３３２または３３３のアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖は配列番号３６４のアミノ酸配列を含む。
ある態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に結合する単離した抗体に関し、当該抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、本明細書のいずれかの実施形態の１つ以上の抗体との結合を競合的に阻害する。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体に関し、当該抗体は、本明細書のいずれかの実施形態の抗体と本質的に同じである、または重複しているＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに結合する。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン１に結合する。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列ＣＭＡＳＮＴＹＧＳＮＰＩＳ（配列番号１７７）での１つ以上のアミノ酸残基に結合する。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン２に結合する。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳ（配列番号１７８）での１つ以上のアミノ酸残基に結合する。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳ（配列番号１７８）での１つ以上のアミノ酸残基に結合し、さらに当該抗体は、配列番号１のアミノ酸残基プロリン１６３（Ｐ１６３）に結合しない。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体またはヒト化抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体である。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であり、当該抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞表面レベルを下げる、またはＭＳ４Ａ４Ａの細胞内レベルを下げる。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、哺乳動物タンパク質、またはヒトタンパク質である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、野生型タンパク質である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、天然に存在するバリアントである。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞において、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる、膜ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる、または可溶性ＴＲＥＭ２を増やし、膜ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、膜ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２レベル、及び膜ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、血清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、脳脊髄液（ＣＳＦ）での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、血清及びＣＳＦでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞でのＭ２細胞表面マーカー（例えば、受容体）の発現を抑制する。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞、例えば、マクロファージにおけるＭ２細胞表面マーカーのレベルを下げる、または抑制する。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞でのＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、またはＣＤ１６３の発現を抑制する。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞、例えば、マクロファージでのＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、及び／またはＣＤ１６３の細胞表面レベルを下げる、または抑制する。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞でのゲルゾリン及び／またはオステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の発現を高める。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞でのＩＬ１ＲＮのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞でのＣＳＦ１ＲのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞でのプリン作動性受容体Ｐ２ＲＹ１２及び／またはＣＸ３Ｃケモカイン受容体１（ＣＸ３ＣＲ１）のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを下げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞での１－ホスホチジルイノシトール－４，５－二リン酸ホスホジエステラーゼガンマ－２（ＰＬＣＧ２）、Ｃ－タイプレクチンドメインファミリー７メンバーＡ（ＣＬＥＣ７Ａ）、イノシトール１，４、５－三リン酸受容体２（ＩＴＰＲ２）、及び／または抗原ＫＩ－６７（ＭＫ１６７）のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞での膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ）のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを下げる。
ある態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に結合する単離した抗体に関し、当該抗体は、骨髄細胞でのゲルゾリン及び／またはオステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の発現を高める。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、当該骨髄細胞は、ヒトマクロファージである。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体は、ヒトのもの、またはヒト化したものである。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、またはキメラ抗体である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体は、４Ａ－１８、４Ａ－２５、４Ａ－２１４、４Ａ－２１、及び４Ａ－２０２から選択する抗体と同じエピトープに結合する。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体は、骨髄細胞でのＭ２マーカーの発現を抑制する。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、当該骨髄細胞は、ヒトマクロファージである。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、当該Ｍ２マーカーは、ＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、及び／またはＣＤ１６３である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体は、ヒトマクロファージでの原形質膜または細胞表面ＴＲＥＭ２を、少なくとも５０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、または２５０％増やす。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体は、ヒトマクロファージ上清での可溶性ＴＲＥＭ２を、少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、または７０％増やす。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、第１の抗原と、第２の抗原とを認識する二重特異性抗体である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、第１の抗原は、ＭＳ４Ａ４Ａであり、かつ、第２の抗原は、血液脳関門を通過する輸送を促す抗原である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第２の抗原を、ＭＳ４Ａ４Ａ、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリ－アルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、ベイシジン、Ｇｌｕｔ１、及びＣＤ９８ｈｃ、及びＡＮＧ１００５から選択する。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、モノクローナル抗体である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト抗体である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト化抗体である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、二重特異性抗体である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、多価抗体である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、キメラ抗体である。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスに属する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラスに属し、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗体は、抗体フラグメントである。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａまたは哺乳動物ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のアミノ酸残基を含むエピトープに対して結合する抗体フラグメントである。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る一部の実施形態では、当該第１の抗原は、ＭＳ４Ａ４Ａであり、かつ、当該第２の抗原は：
（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド、及び、ＡＮＧ１００５から選択する、血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；
（ｃ）病原ペプチドまたはタンパク質、または、病原核酸から選択する病原作用物質であって、当該病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡであり、当該病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、または、そのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチド反復（ＤｉＰｅｐｔｉｄｅ ｒｅｐｅａｔ）（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及び、プロリン－アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドから選択する、当該病原作用物質；
（ｄ）免疫細胞で発現するリガンド、及び／またはタンパク質であって、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ－３、及び、ホスファチジルセリンから選択する、当該リガンド、及び／または、タンパク質；または、
（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞で発現するタンパク質、脂質、多糖、または、糖脂質である。
別の態様では、本開示は、先行実施形態のいずれかの抗体をコードする核酸配列を含む単離した核酸に関する。一部の実施形態では、本開示は、先行実施形態のいずれかの核酸を含むベクターに関する。一部の実施形態では、本開示は、先行実施形態のいずれかのベクターを含む単離した宿主細胞に関する。
別の態様では、本開示は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を製造するために、先行実施形態のいずれかの宿主細胞を培養することを含む、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ抗体に対して結合する抗体を製造する方法に関する。特定の実施形態では、この方法は、細胞が産生した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を回収することをさらに含む。
別の態様では、本開示は、先行実施形態のいずれか１つの抗体と、医薬として許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。
ある態様では、本開示は、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び認知障害から選択する、疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、先行実施形態のいずれか１つの抗体の治療有効量を投与することを含む、当該方法に関する。別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａの過剰発現または活性の増大が引き起こす、またはそのことに関連する疾患、障害、病態、または損傷を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、先行実施形態のいずれか１つの抗体の治療有効量を投与することを含む、当該方法に関する。本開示の一部の実施形態では、当該方法は、当該抗体の投与の前及び／または後でのオステオポンチン、ゲルゾリン、原形質膜または細胞表面のＴＲＥＭ２、及び／または可溶性ＴＲＥＭ２のレベルを検出することをさらに含む。
ある態様では、本開示は、ＣＳＦ１Ｒ欠損疾患または障害を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、先行実施形態のいずれか１つの抗体の治療有効量を投与することを含む、当該方法に関する。一部の実施形態では、当該ＣＳＦ１Ｒ欠損疾患または障害は、軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症性白質脳症（ＡＬＳＰ）または遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）である。
本開示のその他の態様は、先行実施形態のいずれかの方法で製造した単離した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。本開示のその他の態様は、先行実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体と、医薬として許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、（表１、表５、表３０、及び表３１に示した）抗体４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－４１９、または４Ａ－４５０のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、（表１、表５、表３０、及び表３１に示した）抗体４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－４１９、または４Ａ－４５０のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含み、当該抗体は、（表１、表５、表３０、及び表３１に示した）抗体４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－４１９、または４Ａ－４５０のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、（表２及び表６に示した）抗体４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、または４Ａ－３３１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びのＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、（表２及び表６に示した）抗体４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、または４Ａ－３３１のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含み、当該抗体は、（表２及び表６に示した）抗体４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、または４Ａ－３３１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、（表３及び表７に示した）抗体４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６１、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、または４Ａ－３８１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、（表３及び表７に示した）抗体４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６１、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、または４Ａ－３８１のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含み、当該抗体は、（表３及び表７に示した）抗体４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６１、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、または４Ａ－３８１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、（表４及び表８に示した）抗体４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、または４Ａ－３９０のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及び抗ＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、（表４及び表８に示した）抗体４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、または４Ａ－３９０のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含み、当該抗体は、（表４及び表８に示した）抗体４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、または４Ａ－３９０のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体に関し、当該抗体は、骨髄細胞でのゲルゾリン及び／またはオステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の発現を高める。一部の実施形態では、当該骨髄細胞は、マクロファージである。
本明細書のいずれかの実施形態と組み合わせ得る特定の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ、マウスＭＳ４Ａ４Ａ、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａ、またはそれらの組み合わせに対して特異的に結合する。
本明細書に記載した様々な実施形態の１つ、一部、または全部の特性を組み合わせて、本開示のその他の実施形態を形成し得ることを理解されたい。本開示のこれらの態様、及びその他の態様は、当業者には自明である。本開示のこれらの実施形態、及びその他の実施形態を、以下にさらに詳細に説明する。
特許または出願書類は、カラーで出力した少なくとも１枚の図面を含む。カラーで出力した図面を具備した特許公報、または、特許出願公報公開のコピーは、所定の請求を行い、かつ、所定の手数料を支払うことで、庁から提供を受ける。
ヒトＭＳ４Ａ４Ａの一次アミノ酸配列を示す。細胞内ドメインはイタリック体で示し、膜貫通ドメインには下線を付けて示し、細胞外ループは太字のイタリック体で示す。 Ａは、ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋから得た可溶性の４ヘリックスバンドルスキャホールド（ＰＤＢ＿ＩＤ：１Ｐ６８）の構造概略図を示しており、螺旋状のリボンとして認められる４つの膜貫通ドメインを構造内に有する。Ｂ及びＣは、それぞれ、可溶性の４ヘリックスバンドルスキャホールドＰＤＢ－ＩＤ：１Ｐ６８及びＰＤＢ＿ＩＤ：１Ｍ６Ｔの一次アミノ酸配列を示す；４つの膜貫通ドメインは、アミノ酸配列に下線を付した。 Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの２つの細胞外ループ（太い下線を付した）を加えた可溶性の４ヘリックスバンドルスキャホールドＪＳ１、ＪＳ５、及びＪＳ６の一次アミノ酸配列を示す。 Ｂは、ネガティブコントロールバリアントとして使用する可溶性の４ヘリックスバンドルスキャホールドＪＳ４及びＪＳ１０の一次アミノ酸配列を示す。 ＥＬＩＳＡによって、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ループグラフト化ポリペプチドＪＳ１、ＪＳ４、ＪＳ５、ＪＳ６、及びＪＳ１０に対して結合する本開示の特定の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を示す。 組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ループグラフト化ポリペプチドＪＳ１に対して結合するマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１の特定のヒト化した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体バリアントを示す。 組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ループグラフト化ポリペプチドＪＳ１に対して結合するマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２の特定のヒト化した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体バリアントを示す。 組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ループグラフト化ポリペプチドＪＳ５に対して結合するマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２のヒト化した、及び親和性成熟した特定の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体バリアントを示す。 組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ループグラフト化ポリペプチドＪＳ５に対して結合するマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１のヒト化した、及び親和性成熟した特定の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体バリアントを示す。 組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ループグラフト化ポリペプチドＪＳ５に対して結合するマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１のヒト化した、及び親和性成熟した特定の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体バリアントを示す。 カニクイザルの血清でのｓＴＲＥＭ２のレベルに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２の効果を示す。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２またはアイソタイプコントロール抗体（ｈｕＩｇＧ１）を、いずれも８０ｍｇ／ｋｇの用量で投与して、提示した時間（時間）が経過した時点でのカニクイザルの血清でのｓＴＲＥＭ２のレベル（ｎｇ／ｍＬ）を示す。 カニクイザルの血清でのｓＴＲＥＭ２のレベルに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２の効果を示す。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２またはアイソタイプコントロール抗体（ｈｕＩｇＧ１）を、いずれも８０ｍｇ／ｋｇの用量で投与して、提示した時間（時間）が経過した時点でのカニクイザルの血清でのｓＴＲＥＭ２のレベル（ベースラインのパーセント）を示す。 カニクイザルの脳脊髄液（ＣＳＦ）でのｓＴＲＥＭ２のレベルに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２の効果を示す。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２またはアイソタイプコントロール抗体（ｈｕＩｇＧ１）を、いずれも８０ｍｇ／ｋｇの用量で投与して、提示した時間（時間）が経過した時点でのカニクイザルのＣＳＦでのｓＴＲＥＭ２のレベル（ｎｇ／ｍＬ）を示す。 カニクイザルの脳脊髄液（ＣＳＦ）でのｓＴＲＥＭ２のレベルに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２の効果を示す。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２またはアイソタイプコントロール抗体（ｈｕＩｇＧ１）を、いずれも８０ｍｇ／ｋｇの用量で投与して、提示した時間（時間）が経過した時点でのカニクイザルのＣＳＦでのｓＴＲＥＭ２のレベル（ベースラインのパーセント）を示す。 組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを発現するＵ９３７細胞に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３野生型（ＷＴ）ｈｕＩｇＧ１及び４Ａ－４５０ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１の結合曲線を表すデータを示す。 抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－４５０ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、及び４Ａ－４５０ Ｋ３２２Ａ ｈｕＩｇＧ１で処理した初代ヒトマクロファージでの膜ＴＲＥＭ２レベルを表すデータを示す。 抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、及び４Ａ－３１３ Ｋ３２２Ａ ｈｕＩｇＧ１で処理した初代ヒトマクロファージでの膜ＴＲＥＭ２レベルを表すデータを示す。 抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０ ｈｕＩｇＧ１で処理した初代ヒトマクロファージの上清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルの増大を表すデータを示す。 抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ｈｕＩｇＧ１で処理した初代ヒトマクロファージの上清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルの増大を表すデータを示す。 抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ｓ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－３１３ ＰＳ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－４５０．ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、及び４Ａ－４５０ ＰＳ ｈｕ ＩｇＧ１で処理した初代ヒトマクロファージでのＡＴＰレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１及び４Ａ－４１９ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１で処理した初代ヒトマクロファージでのＣＤ１４、ＣＤ１６３、及びＣＤ２００Ｒのレベルの変化を表すデータを（それぞれ）示す。 ヨウ化プロピジウム取り込みで測定した、組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを発現するＵ９３７細胞における抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－３１３ Ｋ３２２Ａ ｈｕＩｇＧ１及び４Ａ－３１３ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１の補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性を表すデータを示す。 ＦｃｙＲＩＩＩａ活性化で測定した、初代ヒトマクロファージにおける抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－３１３ Ｋ３２２Ａ ｈｕＩｇＧ１、及び４Ａ－３１３ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１のＡＤＣＰ活性を表すデータを示す。 ＦｃｙＲＩＩＩａ活性化で測定した、初代ヒトマクロファージにおける抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－３１３ Ｋ３２２Ａ ｈｕＩｇＧ１、及び４Ａ－３１３ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１のＡＤＣＣ活性を表すデータを示す。 Ａ～Ｂは、初代ヒトマクロファージにおける膜ＴＲＥＭ２（Ａ）及び可溶性ＴＲＥＭ２（Ｂ）に関するＭＳ４Ａ４Ａノックアウトの効果を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、それぞれ、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理したヒトマクロファージでの可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質のレベル、膜ＴＲＥＭ２タンパク質のレベル、及びＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡレベルの変化の動態を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、それぞれ、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理したヒトマクロファージでの可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質のレベル、膜ＴＲＥＭ２タンパク質のレベル、及びＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡレベルの変化の動態を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、それぞれ、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理したヒトマクロファージでの可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質のレベル、膜ＴＲＥＭ２タンパク質のレベル、及びＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡレベルの変化の動態を表すデータを示す。 Ａ～Ｂは、ＭＳ４Ａ４ＡのｓｉＲＮＡノックダウンが、ヒトマクロファージにおける膜ＴＲＥＭ２及び可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げたことを表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の３名の異なるドナーに由来する初代ヒトマクロファージにおける膜ＴＲＥＭ２レベルの用量依存的増加を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の３名の異なるドナーに由来する初代ヒトマクロファージにおける膜ＴＲＥＭ２レベルの用量依存的増加を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の３名の異なるドナーに由来する初代ヒトマクロファージにおける膜ＴＲＥＭ２レベルの用量依存的増加を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の３名の異なるドナーに由来する初代ヒトマクロファージにおける可溶性ＴＲＥＭ２レベルの用量依存的増加を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の３名の異なるドナーに由来する初代ヒトマクロファージにおける可溶性ＴＲＥＭ２レベルの用量依存的増加を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の３名の異なるドナーに由来する初代ヒトマクロファージにおける可溶性ＴＲＥＭ２レベルの用量依存的増加を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の３名の異なるドナーに由来する初代ヒトマクロファージにおけるＡＴＰレベルの用量依存的増加を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の３名の異なるドナーに由来する初代ヒトマクロファージにおけるＡＴＰレベルの用量依存的増加を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の３名の異なるドナーに由来する初代ヒトマクロファージにおけるＡＴＰレベルの用量依存的増加を表すデータを示す。 Ａ～Ｂは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ＣＳＦ１Ｒ阻害が誘導する細胞死を救済する上で有効であることを表すデータを示す。 本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルＣＳＦでのプロテオームワイドの効果のボルケーノプロットを示す。 本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザル血清でのｓＴＲＥＭ２レベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｄは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルＣＳＦでのオステオポンチンレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｄは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルＣＳＦでのオステオポンチンレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｄは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルＣＳＦでのオステオポンチンレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｄは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルＣＳＦでのオステオポンチンレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｂは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルの脳の前頭葉及び海馬のそれぞれでのオステオポンチンレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｂは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルの脳の前頭葉及び海馬のそれぞれでのオステオポンチンレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｂは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルの脳の前頭葉及び海馬のそれぞれでのＣＳＦ１Ｒレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｂは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルの脳の前頭葉及び海馬のそれぞれでのＣＳＦ１Ｒレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｂは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のカニクイザルの脳の前頭葉及び海馬のそれぞれでの総ＴＲＥＭ２タンパク質のレベルの増大を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与したカニクイザルの脳から単離したミクログリアにおけるミクログリア活性化、遊走、及び増殖のマーカーでのｍＲＮＡレベルの変化を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与したカニクイザルの脳から単離したミクログリアにおけるミクログリア活性化、遊走、及び増殖のマーカーでのｍＲＮＡレベルの変化を表すデータを示す。 Ａ～Ｃは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与したカニクイザルの脳から単離したミクログリアにおけるミクログリア活性化、遊走、及び増殖のマーカーでのｍＲＮＡレベルの変化を表すデータを示す。 本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、Ｕ９３７細胞において組換え的に発現したＨＡ－シュノーケルタグを付けたＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の細胞表面発現を抑制することを表すデータを示す。 本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、初代ヒトマクロファージにおいて、ＧＰＮＭＢ細胞表面発現を抑制したことを表すデータを示す。
本開示は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（例えば、モノクローナル抗体）；それらの抗体を作り出す、及び、使用する方法；それらの抗体を含む医薬組成物；それらの抗体をコードする核酸；及び、それらの抗体をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。
本明細書で説明または参照した技術や手順は、一般的に、よく理解がされており、そして、当業者であれば、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ （２００１） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ．， （２００３）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｐ． Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ． Ｄｅａｎ， ｅｄｓ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ２０００）に記載されている方法論など、広く利用がされている方法論である従来の方法論を進んで使用している。
Ｉ．定義
本明細書では、用語「ＭＳ４Ａ４Ａ」または「ＭＳ４Ａ４Ａポリペプチド」を、互換的に使用しており、特に断りがない限り、霊長類（例えば、ヒト、及び、カニクイザル）、及び、齧歯類（例えば、マウス、及び、ラット）などの哺乳類を含む、あらゆる脊椎動物起源の天然のあらゆるＭＳ４Ａ４Ａのことを指す。一部の実施形態では、この用語は、野生型配列、及び、天然に存在する変異配列、例えば、スプライスバリアント、または、対立遺伝子バリアントの両方を含む。一部の実施形態では、この用語は、「全長」の未処理ＭＳ４Ａ４Ａ、ならびに、細胞内での処理が関与するあらゆる形態のＭＳ４Ａ４Ａを含む。一部の実施形態では、当該ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａである。一部の実施形態では、例示的なＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列は、２００１年１２月１日現在でのＵｎｉｐｒｏｔ受託番号：Ｑ９６ＪＱ５である。一部の実施形態では、例示的なヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列は、配列番号１である。
用語「抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体」、「ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する抗体」、及び、「ＭＳ４Ａ４Ａに特異的に結合する抗体」は、ＭＳ４Ａ４Ａを標的にする診断薬、及び／または、治療薬として有用な抗体であり、ＭＳ４Ａ４Ａに対して十分な親和性で結合することができる抗体のことを指す。ある実施形態では、無関係の非ＭＳ４Ａ４Ａポリペプチドに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）で決定したように、ＭＳ４Ａ４Ａに対する抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または、＜０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、異なる種に由来するＭＳ４Ａ４Ａの間で保存されているＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する。
標的分子に対する抗体の結合に関して、用語「特異的結合」または「特異的に結合する」、または、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチド標的に関するエピトープに「特異的」であるとは、非特異的相互作用とは異なる測定可能な結合を意味する。特異的結合は、例えば、コントロール分子の結合と比較して、分子の結合を決定して測定することができる。例えば、特異的結合は、標的、例えば、過剰の非標識標的に類似するコントロール分子と競合させて決定することができる。この事例では、プローブに対する標識した標的の結合を、過剰な非標識標的が競合的に阻害していれば、特異的結合を示す。本明細書で使用する用語「特異的結合」または「特異的に結合する」、または、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチド標的に関するエピトープに「特異的」であるとは、例えば、概ね、１０－４Ｍ以下、１０－５Ｍ以下、１０－６Ｍ以下、１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、１０－９Ｍ以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１１Ｍ以下、１０－１２Ｍ以下のいずれかの標的に関するＫＤ、または、１０－４Ｍ～１０－６Ｍ、または、１０－６Ｍ～１０－１０Ｍ、または、１０－７Ｍ～１０－９Ｍの範囲のＫＤを有する分子として示すことができる。当業者であれば、親和性とＫＤ値とが反比例することを理解する。抗原に対する高い親和性は、低いＫＤ値として表れる。ある実施形態では、用語「特異的結合」とは、分子が、あらゆるその他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに対して実質的に結合せずに、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチドに関するエピトープに対して結合する結合のことを指す。
本明細書では、用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）を、「抗体」と互換的に使用する。本明細書において、用語「抗体」は、最も広い意味で使用しており、特に、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成した多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び、所望の生物学的活性を示す限りは、抗体フラグメントを含む。
「ネイティブ抗体」は、通常、２つの同一の軽（「Ｌ」）鎖、及び、２つの同一の重（「Ｈ」）鎖から構成されている約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。それぞれの軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合で重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。それぞれの重鎖、及び、それぞれの軽鎖は、規則的な間隔を設けた鎖内ジスルフィド架橋も有する。それぞれの重鎖は、一端に、可変ドメイン（ＶＨ）を有しており、これに、幾つかの定常ドメインが続く。それぞれの軽鎖は、一端に、可変ドメイン（ＶＬ）を有しており、他端に、定常ドメインを有しており；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列しており、そして、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられる。
異なる抗体クラスの構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ ７１ ａｎｄ Ｃｈａｐｔｅｒ ６を参照されたい。
あらゆる脊椎動物種に由来する軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）、及び、ラムダ（「λ」）と称する２つの明確に異なる種類のうちの一方に割り当てることができる。免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには；ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及び、ＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）、及び、ミュー（「μ」）と表記される重鎖を有する。γ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能での相対的にわずかな相違に基づいて、サブクラス（アイソタイプ）にさらに分類され、例えば、ヒトでは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及び、ＩｇＡ２を発現する。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造、及び、三次元構成は公知であり、例えば、Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，２０００）で概説されている。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインのことを指す。当該重鎖及び軽鎖の可変ドメインを、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と称し得る。これらのドメインは、一般的に、（同じクラスのその他の抗体と比較して）最も変化しやすい抗体の箇所であり、そして、抗原結合部位を含む。
用語「可変」とは、可変ドメインの特定のセグメントが、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体の間で配列が大きく異なるという事実のことを指す。当該可変ドメインは、抗原結合を媒介し、そして、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。しかしながら、当該可変性は、当該可変ドメイン全体に均一に分布しているわけではない。むしろ、それは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメインの超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれている３つのセグメントに集中している。可変ドメインにおいて高度に保存されている部分を、フレームワーク領域（ＦＲ）と称する。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、３つのＨＶＲで接続した、ベータシート立体配置を主体とする４つのＦＲ領域を含み、それらは、当該ベータシート構造に接続するループ、及び、一部の事例では、当該ベータシート構造の一部を形成するループを形成する。それぞれの鎖でのＨＶＲは、ＦＲ領域に非常に近接して一緒に保持され、他方の鎖に由来するＨＶＲとともに、それらの抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。当該定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
本明細書で使用する用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体集団から得た抗体、例えば、本開示のモノクローナル抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体のことを指し、すなわち、当該集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る自然発生の変異、及び／または、翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化など）を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、特異性が高く、１つ以上の抗原部位に指向する。一般的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、当該抗原の単一の決定基に指向する。それらの特異性に加えて、当該モノクローナル抗体は、その他の免疫グロブリンによる汚染を受けていないハイブリドーマ培養で合成するという点で有利である。修飾語「モノクローナル」とは、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体の特徴を示すものであって、あらゆる特定の方法で抗体を生産する必要があると解釈すべきではない。例えば、本開示にしたがって使用するモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子座、または、ヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部またはすべてを有する動物において、ヒトまたはヒト様抗体を生産する技術などの様々な技術によって生産し得る。
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」、または、「全抗体」とは、抗体フラグメントとは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体を指すために、互換的に使用している。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。当該定常ドメインは、ネイティブ配列の定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列の定常ドメイン）、または、そのアミノ酸配列変異体とし得る。一部の事例では、当該インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。
「抗体フラグメント」とは、インタクト抗体が結合する抗原に対して結合するインタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子のことを指す。抗体フラグメントの例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）を参照されたい）；一本鎖抗体分子、及び、抗体フラグメントから形成した多重特異性抗体がある。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体をパパイン消化すると、「Ｆａｂ」フラグメントと称する２つの同一の抗原結合フラグメントと、容易に結晶化する能力を反映した名称を有する残留「Ｆｃ」フラグメントとを生成する。当該Ｆａｂフラグメントは、軽鎖全体に加えて、重鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と、１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とからなる。それぞれのＦａｂフラグメントは、抗原結合に関しては一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体をペプシン処理すると、単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントが得られ、これは、異なる抗原結合活性を有するジスルフィド結合した２つのＦａｂフラグメントに概ね対応しており、また、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’フラグメントは、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステインを含んだ幾つかのさらなる残基を有する点で、Ｆａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’に関する本明細書での表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、本来は、そのフラグメント間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントのペアとして生産した。抗体フラグメントのその他の化学的カップリングも公知である。
当該Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドとともに保持された両方の重鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決定され、この領域は、特定の細胞型で認められるＦｃ受容体（ＦｃＲ）でも認識される。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体の「機能性フラグメント」は、インタクト抗体の一部分を含み、一般的には、インタクト抗体の抗原結合領域または可変領域、または、ＦｃＲ結合能力を保持する、または、改変したＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦｃ領域を含む。抗体フラグメントの例として、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び、抗体フラグメントから形成した多重特異性抗体がある。
用語「ダイアボディ」とは、可変ドメインの鎖内ではなく、鎖間のペアリングを達成し、それにより、二価フラグメント、すなわち、２つの抗原結合部位を有するフラグメントが得られるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５～１０個）の残基）を用いてｓＦｖフラグメント（前出の段落を参照されたい）を構築して調製した小さな抗体フラグメントのことを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインが、異なるポリペプチド鎖に存在している、２つの「交差」ｓＦｖフラグメントのヘテロ二量体である。
本明細書で使用する「キメラ抗体」とは、本開示のキメラ抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体（免疫グロブリン）であって、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体、または、特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体での対応する配列と同一または相同であり、かつ、その（それらの）鎖（複数可）の残部が、別の種に由来する抗体、または、別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体での対応する配列と同一または相同である抗体、ならびに、所望の生物活性を奏する限りは、それら抗体のフラグメントのことを指す。本明細書で対象とするキメラ抗体として、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体があり、当該抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルを目的の抗原で免疫処置して生産した抗体に由来する。本明細書で使用する、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用する。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のヒト化など、非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及び、ヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び、一般的には、２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、それぞれのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべて、または、実質的にすべてが、非ヒト抗体のＨＶＲに対応しており、そして、それぞれのＦＲのすべて、または、実質的にすべてが、ヒト抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体の「ヒト化形態」、例えば、非ヒト抗体とは、ヒト化を受けた抗体のことを指す。
「ヒト抗体」は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体であり、ヒトで生産した抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を持つ及び／または本明細書に開示したヒト抗体を作り出すためのいずれかの技術を使用して生産されている。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して生産することができる。ヒト抗体は、かかる抗体を抗原接種に応答して生産するように修飾しているが、例えば、免疫処置したゼノマウス、ならびに、ヒトＢ細胞ハイブリドーマを介して生成させて、その内因性遺伝子座を無効化したトランスジェニック動物に対して当該抗原を投与して、調製することができる。
本明細書で使用する用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」とは、配列が超可変性であり、及び／または、構造的に定義したループを形成する、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の抗体可変ドメインの領域などの抗体可変ドメインの領域のことを指す。一般的に、抗体には、６つのＨＶＲがあり；３つが、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、そして、３つが、ＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。ネイティブ抗体では、Ｈ３及びＬ３が、６つのＨＶＲのうちで最も多様性に富んでおり、そして、特に、Ｈ３が、抗体に対して優れた特異性を与える上で独特の役割を果たすものと考えられている。重鎖のみからなる天然ラクダ抗体は、軽鎖がなくとも機能的であり、かつ、安定している。
数多くのＨＶＲの記載を、本明細書で使用しており、かつ、本明細書に含んでいる。一部の実施形態では、これらのＨＶＲは、配列変動性に基づいたＫａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）とし得るものであり、そして、最も一般的に使用している（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，上掲）。一部の実施形態では、それらのＨＶＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲとし得る。Ｃｈｏｔｈｉａは、どちらかと言えば、構造的ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。一部の実施形態では、これらのＨＶＲを、ＡｂＭ ＨＶＲとし得る。これらのＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと、Ｃｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の折衷案を示しており、そして、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。一部の実施形態では、これらのＨＶＲを、「接触」ＨＶＲとし得る。当該「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲのそれぞれの残基を、以下に示す。
Figure 2022542964000001
ＨＶＲは、次の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬでの２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、及び、８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、及び、ＶＨでの２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）、及び、９３～１０２、９４～１０２または９５～１０２（Ｈ３）。当該可変ドメイン残基を、これらの伸長ＨＶＲ定義のそれぞれに対して、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，上掲に従って付番する。
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義するＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
本明細書で使用する「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク、または、ヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク、または、ヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、当該フレームワークと同じアミノ酸配列を含み得る、または、既存のアミノ酸配列変化を含み得る。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０個以下、９つ以下、８つ以下、７つ以下、６つ以下、５つ以下、４つ以下、３つ以下、または、２つ以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、好ましいアミノ酸変化は、位置７１Ｈ、７３Ｈ、及び、７８Ｈのうちの３つ、２つ、または、１つのみに生じ；例えば、当該位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または、７８Ａとし得る。ある実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免役グロブリンフレームワーク配列、または、ヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンのＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免役グロブリンのＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから行う。一般的には、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）などのサブグループである。例として、ＶＬに関するものとして、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，上掲などのサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、または、カッパＩＶとし得る。さらに、ＶＨに関するものとして、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，上掲などのサブグループＩ、サブグループＩＩ、または、サブグループＩＩＩとし得る。
例えば、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のアミノ酸修飾など、指定した位置での「アミノ酸修飾」とは、指定した残基の置換もしくは欠失、または、少なくとも１つのアミノ酸残基を、指定した残基に隣接するように挿入することを指す。指定した残基に「隣接する」とは、そこから１個～２個の残基までに挿入することを意味する。当該挿入は、指定した残基のＮ末端側またはＣ末端側で行い得る。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は、置換である。
例えば、本開示の親和性成熟抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの「親和性成熟した」抗体とは、当該抗体の１つ以上のＨＶＲが、１つ以上の改変を有し、その結果、抗原に対する抗体の親和性が、当該改変（複数可）を有しない親抗体と比較して改善した抗体である。ある実施形態では、親和性成熟した抗体は、標的抗原に対して、ナノモル、または、ひいてはピコモルの親和性を有する。親和性成熟した抗体は、当該技術分野で公知の手法で生産する。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９～７８３（１９９２）は、ＶＨ－及びＶＬ－ドメインのシャッフリングを用いた親和性成熟について記載している。ＨＶＲ、及び／または、フレームワーク残基のランダム変異導入については、例えば、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９～３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７～１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４～２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０～９（１９９５）；及び、Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６（１９９２）に記載されている。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位、及び、抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは、１つの重鎖可変領域ドメインと、１つの軽鎖可変領域ドメインが、非共有結合で緊密に結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みが、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供して、この抗体に抗原結合特異性を与える、６つの超可変ループ（Ｈ及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または、抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まない半分のＦｖ）であっても、全結合部位よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有する。
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略称される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖の状態で接続したＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む、抗体フラグメントである。好ましくは、当該ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成する、ことを可能にする。
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、アミノ酸配列バリアントＦｃ領域）が関与する生物活性のことを指しており、また、抗体のアイソタイプに応じて異なる。
本明細書で使用する用語「Ｆｃ領域」とは、ネイティブ配列Ｆｃ領域、及び、バリアントＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用する。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、アミノ酸残基の位置Ｃｙｓ２２６、または、Ｐｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端にまで及ぶものと定義される。当該Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ付番システムでの残基４４７）は、例えば、抗体の生産もしくは精製の間に、または、抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することで除去し得る。したがって、インタクト抗体の組成は、すべてのＫ４４７残基を除去した抗体集団、Ｋ４４７残基を除去していない抗体集団、及び、Ｋ４４７残基を持つ抗体と持たない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本開示の抗体における使用に好適なネイティブ配列Ｆｃ領域として、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び、ＩｇＧ４がある。
「ネイティブ配列Ｆｃ領域」は、自然界で認められるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。ネイティブ配列のヒトＦｃ領域として、ネイティブ配列のヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ、及び、Ａアロタイプ）、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびに、それらの天然バリアントがある。
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは、１つ以上のアミノ酸置換（複数可）によって、ネイティブ配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該バリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有しており、例えば、ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、親ポリペプチドのＦｃ領域に、約１～約１０個のアミノ酸置換、好ましくは、約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書でのバリアントＦｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域、及び／または、親ポリペプチドのＦｃ領域に対して、少なくとも約８０％の相同性、及び、最も好ましくは、それらに対して少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらに対して少なくとも約９５％の相同性を有する。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体のことを表す。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合する抗体であり、そして、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩのサブクラスの受容体があり、これらの受容体の対立遺伝子バリアント、及び、選択的スプライシング形態を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体として、同様のアミノ酸配列を有し、主にその細胞質ドメインが異なるＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）と、ＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）とを含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含む。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系阻害性モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含む。その他のＦｃＲは、今後同定されるものを含めて、本明細書での用語「ＦｃＲ」に含まれる。また、ＦｃＲは、抗体の血清での半減期を長くすることができる。
ペプチド、ポリペプチド、または、抗体配列に関して本明細書で使用する、「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、配列を整列させ、必要に応じて、最大配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後に、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮しない、指定のペプチド、または、ポリペプチド配列でのアミノ酸残基と同一である候補配列でのアミノ酸残基のパーセンテージのことを指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術範囲に属する様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、または、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる当該技術分野において公知のあらゆるアルゴリズムなど、アラインメントを評価するための適切なパラメーターを決定することができる。
同じエピトープに関して競合する抗体（例えば、中和抗体）の文脈で使用する用語「競合する」とは、試験する抗体が、共通の抗原（例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ、または、そのフラグメント）に対するリファレンス分子（例えば、リガンド、または、リファレンス抗体）の特異的結合を予防または阻害（例えば、抑制）するアッセイによって決定する抗体間の競合のことを意味する。無数のタイプの競合結合アッセイを使用して、抗体が、別の抗体と競合するか否かを判断することができ、例えば；固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９）固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；１－１２５ラベルを使用した固相直接ラベルＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２を参照されたい）；及び、直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７－８２）がある。一般的には、そのようなアッセイは、非標識試験抗体、及び、標識リファレンス抗体のいずれかを担持する固体表面または細胞に結合した精製抗原の使用を含む。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定して測定する。通常、当該試験抗体は、過剰に存在する。競合アッセイ（競合抗体）で同定した抗体として、リファレンス抗体と同じエピトープに対して結合する抗体と、立体障害を招くリファレンス抗体が結合するエピトープに対して十分近位の隣接エピトープに対して結合する抗体がある。競合結合を決定するための方法に関するさらなる詳細を、本明細書の実施例において説明する。通常、競合する抗体が過剰に存在すると、共通抗原に対するリファレンス抗体の特異的結合は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または、ほぼ１００％を阻害（例えば、抑制）する。
本明細書で使用するＭＳ４Ａ４Ａポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の「相互作用」として、タンパク質間相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、及び、イオン結合があるが、これらに限定されない。本明細書において、抗体が、２つのポリペプチドの間の相互作用を、攪乱、抑制、または、完全に解消する場合、当該抗体は、２つのポリペプチドの間の「相互作用を阻害する」。その抗体が、２つのポリペプチドのうちの一方に結合する場合、本開示の抗体は、２つのポリペプチドの間の「相互作用を阻害する」。一部の実施形態では、当該相互作用は、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または、ほぼ１００％のいずれかで阻害することができる。
用語「エピトープ」として、抗体が結合することができる、あらゆる決定基がある。エピトープは、その抗原を標的とする抗体が結合する抗原の領域であり、また、抗原がポリペプチドである場合、当該抗体と直接に接触する特定のアミノ酸を含む。大抵の場合、エピトープは、ポリペプチドに存在するが、一部の事例では、核酸などのその他の種類の分子に存在することができる。エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの分子に属する化学的に活性な表面を含み、そして、特定の三次元構造特性、及び／または、特定の電荷特性を有することができる。一般的に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、ポリペプチド、及び／または、高分子の複雑な混合物での標的抗原に関するエピトープを優先的に認識する。
「アゴニスト」抗体、または、「活性化」抗体は、抗体が抗原と結合した後に、当該抗原の１つ以上の活性または機能を誘導する（例えば、強める）抗体である。
「アンタゴニスト」抗体、または、「ブロッキング」抗体、または、「阻害」抗体とは、当該抗体が、抗原と結合した後に、１つ以上のリガンドに対する抗原結合を抑制し、阻害し、及び／または、解消する（例えば、弱める）抗体、及び／または、当該抗体が抗原と結合した後に、当該抗原の１つ以上の活性または機能を抑制し、阻害し、及び／または、解消する（例えば、弱める）抗体である。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体、または、ブロッキング抗体、または、阻害抗体は、１つ以上のリガンドへの抗原結合、及び／または、当該抗原の１つ以上の活性または機能を、実質的または完全に阻害する。
本開示の単離した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの「単離した」抗体は、その生産環境の成分から（例えば、自然に、または、組換えて）同定、分離、及び／または、回収したものである。好ましくは、当該単離した抗体は、その生産環境に由来するその他のすべての汚染成分とは関連がない。組換えトランスフェクト細胞から得られるものなど、その生産環境に由来する汚染成分は、一般的には、抗体の研究、診断、または、治療への使用を妨げる物質であり、そして、酵素、ホルモン、及び、その他のタンパク質性、または、非タンパク質性溶質を含み得る。好ましい実施形態では、抗体を：（１）例えば、ローリー法で決定した抗体の９５重量％を超えるまで、そして、一部の実施形態では、９９重量％を超えるまで；（２）スピニングカップシーケンサーを使用して、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または、（３）クマシーブルー、または、好ましくは、銀染色を使用する非還元または還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥで均一になるまで精製する。単離した抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換えＴ細胞内の元の位置に抗体を含む。しかしながら、通常、単離したポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程で調製する。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体をコードする「単離した」核酸分子とは、それが生産された環境において通常会合している少なくとも１つの汚染核酸分子から同定及び分離した核酸分子である。好ましくは、当該単離した核酸は、その生産環境に関連するすべての構成成分とは会合しない。本明細書のポリペプチド、及び、抗体をコードする単離した核酸分子は、自然界で認められる形態または状況とは異なる形態で存在する。したがって、単離した核酸分子は、細胞内に自然に存在する本明細書のポリペプチド、及び、抗体をコードする核酸とは区別される。
本明細書で使用する用語「ベクター」とは、それに結合した別の核酸を輸送することができる核酸分子のことを指す。「プラスミド」は、ベクターの一種であり、さらなるＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡのことを指す。ファージベクターは、別の種類のベクターである。別の種類のベクターとして、ウイルスベクターがあり、さらなるＤＮＡセグメントを、ウイルスゲノムに対してライゲーションすることができる。特定のベクター（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、及び、エピソーム哺乳動物ベクター）は、導入した宿主細胞で自己複製が可能である。その他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入すると、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、これにより、宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、特定のベクターは、作動可能に連結した遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、本明細書では、「組換え発現ベクター」、または、簡略して「発現ベクター」と称する。一般的に、組換えＤＮＡ技法で利用する発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドが、ベクターのうちで最も一般的に使用される形態であるため、互換的に使用し得る。
本明細書で互換的に使用する「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、あらゆる長さのヌクレオチドの重合体のことを指すものであり、そして、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。当該ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたは塩基、及び／または、それらの類似体、または、ＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼにより、または、合成反応により重合体に組み込まれ得るあらゆる基質とすることができる。
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物を組み込むためのベクター（複数可）のレシピエントになることができる、または、レシピエントになっている個々の細胞、または、細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、そして、その子孫は、自然発生的、偶発的、または、意図的な変異により、起源の親細胞と必ずしも完全に（形態学的に、または、ゲノムＤＮＡ相補鎖において）同一でなくともよい。宿主細胞は、本開示のポリヌクレオチド（複数可）をインビボでトランスフェクションした細胞を含む。
本明細書で使用する用語「膜ＴＲＥＭ２」、「原形質膜ＴＲＥＭ２」、及び「細胞表面ＴＲＥＭ２」は、互換可能に使用する。
本明細書で使用する「担体」は、使用する用量、及び、濃度で、そこに曝露される細胞または哺乳動物に対して無毒であり、医薬として許容可能な担体、賦形剤、または、安定剤を含む。
本細書で使用する用語「予防する」とは、個体における特定の疾患、障害、または、病態の発生または再発に関して予防を提供することを含む。個体は、特定の疾患、障害、または、病態にかかりやすく、影響を受けやすく、または、そのような疾患、障害、または、病態を発症するリスクがあるが、未だに、当該疾患、障害、または、病態であると診断されていない。
本明細書で使用する、特定の疾患、障害、または、病態を発症する「リスクのある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を有し得る、または、有し得ず、そして、本明細書に記載した治療法を行う前に、検出可能な疾患または疾患の症状を示し得る、または、示し得ない。「リスクがある」とは、個体が、特定の疾患、障害、または、病態の発症と相関する測定可能なパラメーターである当該技術分野で公知の１つ以上のリスク因子を有することを示す。これらのリスク因子の１つ以上を有する個体は、これらのリスク因子の１つ以上を持たない個体よりも、特定の疾患、障害、または、病態を発症する可能性が高くなる。
本明細書で使用する用語「治療」とは、臨床病理の経過期間で治療を受けている個体の自然な経過を変えるようにデザインした臨床介入のことを指す。治療の望ましい効果として、進行速度の低下、病的状態の改善または緩和、及び、特定の疾患、障害、または、病態の寛解または予後の改善がある。例えば、特定の疾患、障害、または、病態に関連する１つ以上の症状が緩和または解消した場合、個体の「治療」は成功している。
「有効量」とは、所望の治療的または予防的結果を達成するために必要な投薬量及び期間での少なくとも有効な量のことを指す。有効量は、１回以上の投与で提供することができる。本明細書に記載の有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び、体重、ならびに、個体において所望の応答を誘発する治療の能力などの要因によって変化し得る。有効量は、治療でのあらゆる毒性または有害な効果よりも、治療的に有益な効果が勝る量でもある。予防的使用の場合、有益または望ましい結果として、疾患の生化学的、組織学的、及び／または、行動的症状、その合併症、及び、疾患の進行過程での中間的病理学的表現型など、疾患のリスクの排除または軽減、重症度の軽減、または、発症の遅延などの結果がある。治療的使用の場合、有益または望ましい結果として、疾患が関与する１つ以上の症状の抑制、疾患を煩った方々の生活の質の向上、疾患の治療に必要なその他の薬物の投与量の抑制、標的化などを介した別の薬物の効果の改善、疾患の進行の遅延、及び／または、生存期間の延長などがある。薬物、化合物、または、医薬組成物の有効量は、直接的または間接的のいずれかで予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床の関連での理解では、薬物、化合物、または、医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または、医薬組成物と組み合わせて達成し得る、または、達成し得ない。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療薬を投与する状況で考慮し得るものであり、そして、単一の薬剤が、１つ以上のその他の薬剤と組み合わせて、所望の結果を達成し得る、または、達成するのであれば、有効量で与えられると考え得る。
治療、予防、または、リスクの軽減を目的とする「個体」とは、ヒト、飼育動物、及び、家畜、ならびに、動物園展示用動物、競技用または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む、哺乳動物に分類されるあらゆる動物のことを指す。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
本明細書で使用する、別の化合物または組成物との「併用」投与とは、同時投与、及び／または、異なる時点での投与を含む。また、併用投与は、合剤としての投与、または、別個の組成物としての投与を含み、異なる投与頻度または間隔で、かつ、同じ投与経路、または、異なる投与経路を使用することを含む。一部の実施形態では、併用投与は、同じ治療レジメンの一部としての投与である。
本明細書で使用する用語「約」とは、それぞれの数値の通常の誤差範囲のことを指しており、当該技術分野の当業者は容易に理解する。本明細書において「約」を付した値またはパラメーターへの言及は、その数値、または、パラメーターそれ自体を対象にした実施形態を含む（及び、説明する）。
本明細書、及び、添付した特許請求の範囲で使用する単数形「ａ」、「ａｎ」、及び、「ｔｈｅ」は、特に断りのない限り、複数形を含む。例えば、「抗体」への言及は、１つの抗体から、モル量の数多くの抗体までを指しており、そして、当業者に公知のそれらの等価物なども含む。
本明細書で説明する本開示の態様及び実施形態は、態様、及び、実施形態を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」、及び、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」を含む、ことを理解されたい。
ＩＩ．抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。本明細書で提供する抗体は、例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ関連障害の診断または治療に有用である。
ある態様では、本開示は、本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のエピトープに結合する単離した（例えば、モノクローナル）抗体を提供する。本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質として、哺乳動物ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質、ヒトＭＳ４Ａ４Ａタンパク質、マウスＭＳ４Ａ４Ａタンパク質、及び、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａタンパク質があるが、これらに限定されない。本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、天然に存在するＭＳ４Ａ４Ａのバリアントを含む。
ヒトＭＳ４Ａ４Ａは、膜糖タンパク質をコードする２３９アミノ酸のタンパク質である。ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列を、配列番号１に示す：
ＭＨＱＴＹＳＲＨＣＲＰＥＥＳＴＦＳＡＡＭＴＴＭＱＧＭＥＱＡＭＰＧＡＧＰＧＶＰＱＬＧＮＭＡＶＩＨＳＨＬＷＫＧＬＱＥＫＦＬＫＧＥＰＫＶＬＧＶＶＱＩＬＴＡＬＭＳＬＳＭＧＩＴＭＭＣＭＡＳＮＴＹＧＳＮＰＩＳＶＹＩＧＹＴＩＷＧＳＶＭＦＩＩＳＧＳＬＳＩＡＡＧＩＲＴＴＫＧＬＶＲＧＳＬＧＭＮＩＴＳＳＶＬＡＡＳＧＩＬＩＮＴＦＳＬＡＦＹＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳＩＬＭＧＬＤＧＭＶＬＬＬＳＶＬＥＦＣＩＡＶＳＬＳＡＦＧＣＫＶＬＣＣＴＰＧＧＶＶＬＩＬＰＳＨＳＨＭＡＥＴＡＳＰＴＰＬＮＥＶ
加えて、マウスＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列を、配列番号２に示す：
ＭＬＶＩＱＧＴＥＱＳＡＬＥＡＧＹＧＡＱＱＮＧＱＰＬＹＶＮＳＨＳＷＫＲＭＴＥＫＦＬＫＧＥＰＫＩＬＧＩＶＱＩＶＩＡＩＭＮＬＳＩＧＩＭＭＩＩＡＴＶＳＴＧＥＩＰＰＳＳＶＹＩＧＹＰＩＷＧＳＬＭＦＩＩＳＧＳＦＳＩＶＡＧＲＲＴＴＫＧＬＶＲＳＳＬＧＬＮＩＴＳＳＶＦＡＦＳＧＩＶＩＳＳＬＳＰＧＩＹＳＦＨＶＹＹＣＴＹＲＧＳＳＥＧＣＨＭＴＬＳＩＬＭＧＬＤＩＶＶＶＶＬＳＶＬＥＦＣＩＧＶＳＬＳＡＦＧＣＲＶＭＣＣＮＰＧＧＶＭＩＩＭＰＳＮＰＴＫＡＥＴＡＮＰＶＴＬＱＳＧＬＭＰＰＥＨＱＥＲＮＶＰＥＮＭＨ
加えて、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列を、配列番号３に示す：
ＨＱＴＹＲＲＨＣＲＰＥＥＳＴＦＳＡＡＭＴＴＭＱＧＭＥＱＡＴＰＧＡＧＰＧＶＰＱＬＧＮＭＡＶＶＨＳＨＬＷＫＧＬＱＥＫＦＬＫＧＥＰＫＶＬＧＶＶＱＩＬＩＡＬＭＳＬＳＭＧＩＴＭＭＣＶＡＦＳＡＹＧＨＹＰＩＳＶＹＩＧＹＴＩＷＧＳＶＭＦＩＩＳＧＳＬＳＩＡＡＧＩＲＴＴＫＧＬＶＲＧＳＬＧＭＮＩＴＳＳＶＬＡＶＳＡＩＬＩＮＴＩＳＬＴＩＹＳＦＹＨＲＹＣＮＹＹＧＮＰＮＮＣＨＧＴＶＳＩＬＭＧＭＤＧＭＶＬＬＬＳＶＬＥＦＣＩＡＶＳＬＳＡＦＧＣＫＡＩＣＣＴＰＧＧＶＶＬＩＩＰＳＮＳＨＭＡＥＡＡＰＬＴＰＬＮＥＶ
一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、細胞で発現する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、骨髄細胞で発現する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、脳細胞で発現する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、成熟星状細胞など、これに限定されない星状細胞で発現する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、乏突起膠細胞で発現する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、ミクログリア細胞で発現する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、及び、Ｔ細胞などであるが、これらに限定されない免疫細胞で発現する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、嗅覚細胞で発現する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、細胞表面で発現する。
本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、細胞質ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１～６４；配列番号１を参照されたい）；膜貫通ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基６５～８５）；ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基８６～９８に対応する細胞外ドメイン（細胞外ドメイン１；ＥＣＬ１）；膜貫通ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基９９～１１９）；細胞質ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１２０～１３７）；膜貫通ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１３８～１５８）；アミノ酸残基１５９～１７９に対応する細胞外ドメイン（細胞外ドメイン２；ＥＣＬ２）；膜貫通ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１８０～２００）；及び、細胞質ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基２０１～２３９）などの幾つかのドメインがあるが、これらに限定されない。加えて、本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、脳、ニューロン、グリア細胞、内皮細胞、血管周囲細胞、周皮細胞などであるが、これらに限定されない、数多くの組織、及び、細胞で発現する。
マクロファージ及びミクログリア細胞機能でのＭＳ４Ａ４Ａ
ミクログリアなどの中枢神経系（ＣＮＳ）のマクロファージ及び骨髄細胞は、本質的に多様な表現型及び機能を有する。マクロファージは、インビトロで、食細胞性、及び、潜在的炎症性、表現型、及び、活性が異なる、Ｍ１マクロファージ及びＭ２マクロファージに分けることができる。例えば、末梢器官では、Ｍ１表現型を有するマクロファージは、炎症誘発性及び抗菌性の表現型及び機能を有するものと考えられており、一方で、Ｍ２表現型を有するマクロファージは、抗炎症性表現型及び機能を有しており、さらに恒常的な状態にあると考えられている。
健康で恒常性状態に関連するミクログリアは、Ｍ１マーカー（例えば、ＣＤ１６、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８６）の発現と比較して、それらの細胞表面で、より多くのＭ２マーカー（例えば、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３、及び、ＣＤ１１５など）を発現する（Ｇｉｎｈｏｕｘ ａｎｄ Ｐｒｉｎｚ，２０１５，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｂｉｏｌ，７：ａ０２０５３７）。しかしながら、アルツハイマー病のマウスモデルと、ヒトアルツハイマー病との両方の疾患関連ミクログリア（ＤＡＭ）は、炎症性または活性化状態にある。炎症性または活性化状態の疾患関連ミクログリアは、アルツハイマー病、及び、その他の神経変性疾患に関連する病理の抑制に積極的な役割を果たしており、有益であると考えられている。
ＭＳ４Ａ４Ａの発現は、インビトロで、Ｍ２マクロファージにおいて高まっており、また、ＭＳ４Ａ４Ａは、Ｍ２マクロファージの新規の細胞表面マーカーであることが示唆されている。加えて、ＭＳ４Ａ４Ａは、肥満細胞でのｃＫｉｔの細胞表面輸送を調節することも示されており、肥満細胞の脱顆粒と生存調節におけるＭＳ４Ａ４Ａの役割を示唆している（Ｃｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ，２６：１７１１－１７２７）。まとめると、これらの報告での知見は、ＭＳ４Ａ４Ａを標的にすると、Ｍ１及びＭ２マクロファージ表現型に関連する様々なマクロファージ細胞表面受容体の再利用、発現、及び／または、分解に影響を与え、それが故に、機能と活動に影響を与える可能性があることを示唆している。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、Ｍ２マクロファージ細胞表面マーカーの発現に影響を与える。特に、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、マクロファージにおけるＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、及び、ＣＤ１６３の細胞表面発現を抑制しており、このことは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、Ｍ２マクロファージ細胞表面受容体の発現を抑制することで、マクロファージの分極、機能、及び／または、活性を調節することを示唆している。本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、Ｍ２マクロファージ細胞表面受容体を抑制しており、このことは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ミクログリア細胞の生理学的状態を、例えば、炎症性または活性化状態が高まった、より保護的な表現型へと（例えば、Ｍ１表現型が多くなるように）改変する上で有効であることを示唆している。したがって、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、一部では、マクロファージ及びミクログリアの表現型を、炎症誘発性及び活性化状態に改変することで、アルツハイマー病、及び、その他の神経変性障害の治療において有用になる。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ミクログリアの活性化状態に影響を与える。本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、ミクログリア活性化（例えば、Ｃ型レクチンドメインファミリー７メンバーＡ（ＣＬＥＣ７Ａ））、ミクログリア遊走（例えば、イノシトール１，４，５－三リン酸受容体２（ＩＴＰＲ２））、及びミクログリア増殖（例えば、抗原ＫＩ－６７（ＭＫＩ６７））に関連するタンパク質のｍＲＮＡレベルを引き上げた。加えて、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ミクログリア活性化マーカーＩＬ１ＲＮ、ＳＰＰ１、及びＰＬＣＧ２のｍＲＮＡレベルを高めた。また、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、恒常性ミクログリアマーカーであるプリン作動性受容体Ｐ２ＲＹ１２及びＣＸ３Ｃケモカイン受容体１（ＣＸ３ＣＲ１）のｍＲＮＡレベルを低下させた。したがって、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ミクログリアの活性化、遊走、及び増殖に関連するタンパク質の様々なｍＲＮＡレベルを引き上げること；及び、ミクログリアの恒常性に関連するタンパク質の様々なｍＲＮＡレベルを下げることにより証明されているように、インビボで、ミクログリアを活性化する上で有効である。
ＭＳ４Ａ４Ａ及びＴＲＥＭ２の発現
神経変性疾患は、一部では、中枢神経系（ＣＮＳ）の欠陥免疫機能によって特徴決定される。例えば、ＣＮＳ骨髄細胞の一部の生存能力と機能の低下は、ミクログリアに限ったものではなく、アルツハイマー病などの神経変性疾患に対する感受性に寄与するものと考えられている。骨髄細胞の生存能力、及び／または、機能を高める薬理学的介入は、そのような神経変性疾患、及び、障害の発症、重症度、または、進行を改善するための効果的な治療を提供する。
骨髄細胞２（ＴＲＥＭ２）で発現するトリガー受容体は、マクロファージ、樹状細胞、単球、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、破骨細胞、ミクログリアなどの骨髄細胞で主に発現する免疫グロブリン様受容体である。ＴＲＥＭ２は、実験的自己免疫性脳脊髄炎、及び、アルツハイマー病の間に、ＣＮＳのミクログリア及び浸潤性マクロファージで高度に発現する（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ，２００７，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３７：１２９０－１３０１；Ｗａｎｇ，２０１５，Ｃｅｌｌ，１６０：１０６１－１０７１）。当該ＴＲＥＭ２経路は、ＣＮＳ骨髄細胞の生存能力と機能の重要な調節因子と考えられている。
ヒトの遺伝学研究のデータは、ＭＳ４Ａ４ＡとＴＲＥＭ２との間に強い遺伝的関連があり、かつ、アルツハイマー病に罹患しやすいことを示唆している（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１３１：９２５－９３３０）。特に、アルツハイマー病の予防のためのＭＳ４Ａ４Ａ対立遺伝子は、患者の脳脊髄液でのｓＴＲＥＭ２レベルの増大に関連している。
本発明の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、マクロファージにおける細胞ＡＴＰレベルを引き上げており、このことは、抗ＭＡ４Ａ４Ａ抗体が、細胞（例えば、マクロファージ、骨髄細胞、ミクログリア）の生存能力及び機能の増大、維持、または増強に有効であることを示している。加えて、本発明の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２が、培養したヒトマクロファージの上清でのｓＴＲＥＭ２レベルを抑制したことを報告した従前の報告とは対照的に、マクロファージでのｓＴＲＥＭ２、及び、ｍＴＲＥＭ２レベルを引き上げた（Ｄｅｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ，２０１８，ｂｉｏＲｘｉｖ，ｄｏｉ：ｄｘｄｏｉｏｒｇ／１０．１１０１／３５２１７９）。アルツハイマー病に関するＭＳ４Ａ４Ａ保護対立遺伝子は、ｓＴＲＥＭ２レベルの増大と関連しているので、本明細書で提供した結果は、本発明の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ｓＴＲＥＭ２、及び、ｍＴＲＥＭ２レベルの増大を受けて、アルツハイマー病などの神経変性疾患、及び、障害での保護的表現型を、模倣または複製することを示すものである。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）におけるＴＲＥＭ２の細胞表面発現を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％。少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、または少なくとも２５０％増やす。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）における可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％。少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％引き上げる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）でのｍＴＲＥＭタンパク質のレベルを引き上げ、ＥＣ５０は約０．０２８μｇ／ｍｌから約０．０３９μｇ／ｍｌとなる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）でのｓＴＲＥＭタンパク質のレベルを引き上げ、ＥＣ５０は約０．０２５μｇ／ｍｌから約０．０６９μｇ／ｍｌとなる。なおもその他の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）でのＡＴＰレベルを引き上げ、ＥＣ５０は約０．０１０μｇ／ｍｌから約０．０２１μｇ／ｍｌとなる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）でのＡＴＰレベルを、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の非存在下でそれら細胞でのＡＴＰのレベルの約１．２倍、約１．４倍、または約１．７倍引き上げる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで（例えば、非ヒト霊長類、またはヒトにおいて）、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでの血清におけるベースライン可溶性ＴＲＥＭ２レベルよりも、インビボで血清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、または少なくとも１５０％引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでの血清におけるベースライン可溶性ＴＲＥＭ２レベルよりも、インビボで血清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、約５０％引き上げる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでの血清における可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボで血清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、または少なくとも２倍引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでの血清における可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボで血清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、約１．５倍引き上げる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでの血清における可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボで血清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、または少なくとも２０日間引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでの血清における可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボで血清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも２０日間引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでの血清における可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボで血清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも２４時間、少なくとも４８時間、少なくとも７２時間、少なくとも９６時間、少なくとも１２０時間、少なくとも１４４時間、少なくとも１６８時間、少なくとも１９２時間、少なくとも２１６時間、少なくとも２４０時間、少なくとも２６４時間、少なくとも２８８時間、少なくとも３１２時間、少なくとも３３６時間、少なくとも３６０時間、少なくとも３８４時間、少なくとも４０８時間、４３２時間、少なくとも４５６時間、または少なくとも４８０時間引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでの血清における可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボで血清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも４８０時間引き上げる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでのＣＳＦにおけるベースライン可溶性ＴＲＥＭ２レベルから、インビボでＣＳＦでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも２２５％、少なくとも２５０％、少なくとも２７５％、少なくとも３００％、少なくとも３２５％、少なくとも３５０％、少なくとも３７５％、または少なくとも４００％引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでのＣＳＦにおけるベースライン可溶性ＴＲＥＭ２レベルから、インビボでＣＳＦでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、約３００％引き上げる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでのＣＳＦにおける可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボでＣＳＦでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも１．４倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．８倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．６倍、少なくとも２．８倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．２倍、少なくとも３．４倍、少なくとも３．６倍、少なくとも３．８倍、または少なくとも４．０倍増やす。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでのＣＳＦにおける可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボでＣＳＦでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、約２倍から約４倍増やす。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでのＣＳＦにおける可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボでＣＳＦでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、または少なくとも４日間引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでのＣＳＦにおける可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボでＣＳＦでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも４日間引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでのＣＳＦにおける可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボでＣＳＦでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも２４時間、少なくとも４８時間、少なくとも７２時間、または少なくとも９６時間は引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与する前のインビボでのＣＳＦにおける可溶性ＴＲＥＭ２レベルと比較して、インビボでＣＳＦでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも９６時間は引き上げる。
本明細書で提供する証拠は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ＴＲＥＭ２に影響を与えることを実証しているが、その他の経路を介して作用する抗体は除外しない。
アンタゴニスト抗体
一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に結合する抗体として、ＭＳ４Ａ４Ａとそのリガンド（複数可）との間の相互作用を妨げる、あるいは、リガンドの存在下で、ＭＳ４Ａ４Ａのシグナルを細胞質へ伝達することを妨げることで、ＭＳ４Ａ４Ａに結合して、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を阻害するアンタゴニスト抗体があり得る。一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗体は、本開示のアゴニスト抗体のエピトープ特異性を有し得るが、Ｆｃｇ受容体に結合することができず、したがって、例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ受容体のクラスターを形成することができないＦｃドメインを有する。
一部の実施形態では、本開示の抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を阻害する。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ依存性遺伝子の活性を抑制する。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａと、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａリガンドとの間の相互作用を阻害する。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａシグナル伝達を阻害する。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａと、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａリガンドとの間の相互作用を阻害し、そして、ＭＳ４Ａ４Ａシグナル伝達を阻害する。
一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のレベルのダウンレギュレーションまたはＭＳ４Ａ４Ａ活性の抑制は、細胞内のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のレベルをダウンレギュレーションするまたは抑制する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で達成する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のレベルのダウンレギュレーションまたはＭＳ４Ａ４Ａ活性の抑制は、当業者に公知で、かつ利用可能な方法を使用して、例えば、アンチセンス方法論、遺伝子治療などを使用して、ＭＳ４Ａ４Ａ核酸発現またはレベルをダウンレギュレーションして達成する。したがって、一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のレベルまたは活性の抑制は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を使用して、またはＭＳ４Ａ４Ａ核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の発現またはレベルを下げることで達成する。
一部の実施形態では、アゴニスト抗体機能のために、抗体架橋が必要である。抗体架橋は、インビトロでの二次抗体への結合を介して、または、インビボでのＦｃ受容体への結合を介して作り出すことができる。例えば、アンタゴニスト抗体は、インビトロでのビオチン／ストレプトアビジン架橋、または、二次抗体結合を介して、アゴニスト抗体へと変換することができる（例えば、Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，１９９６、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：６７５－６８５；Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，１９９４、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，７：５５１－５５７を参照されたい）。アゴニスト抗体は、受容体リガンドの生物学的活性を模倣する、または、受容体凝集を増強することで、それらの活性を発揮し、それにより、受容体シグナル伝達を活性化し得る。一部の実施形態では、抗体架橋を存在させないことが、アンタゴニスト活性のために必要となる。アンタゴニスト抗体は、受容体－リガンド相互作用をブロックすることで、それらの活性を発揮し得る。
ゲルゾリン、オステオポンチン、及びアルツハイマー病保護対立遺伝子の表現型模写
ＭＳ４Ａ遺伝子クラスターには３つのＳＮＰがあり、それらは、遅発性アルツハイマー病のリスク増大に関連している。これらには、ＭＳ４Ａ４Ａのｒｓ４９３８９３３、ＭＳ４Ａ４Ｅのｒｓ６７０１３９、そして、ＭＳ４Ａ６Ａのｒｓ６１０９３２がある（Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ， ２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４３：４２９－４３５；Ｎａｊ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４３：４３６－４４１；Ａｎｔｕｎｅｚ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３，ａｒｔｉｃｌｅ ３３）。加えて、ＭＳ４Ａ４Ａ遺伝子座ＳＮＰ（ｒｓ２３０４９３３、及びｒｓ２３０４９３５）は、ＭＳ４Ａ４Ａのレベルの増加、及び遅発性アルツハイマー病（ＬＯＡＤ）を含むアルツハイマー病のリスクの増加と関連している（Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７９：２２１－２２８）。
ＭＳ４Ａ遺伝子クラスターに関連するアルツハイマー病に関連する遺伝的変異（ＳＮＰ）が特定されている。それらのバリアント対立遺伝子の１つが、ｒｓ１５８２７６３であり、これは、ＣＳＦ ｓＴＲＥＭ２レベルの増大、アルツハイマー病のリスクの低下、そして、発症年齢の遅延に関連しているので、保護対立遺伝子とみなされている（Ｄｅｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ，２０１８，ｂｉｏＲｘｉｖ，ｄｏｉ：ｄｘ ｄｏｉ ｏｒｇ／１０．１１０１／３５２１７９）。このｒｓ１５８２７６３保護対立遺伝子は、血中でのＭＳ４Ａ４Ａ ｍＲＮＡレベルの低下に関連している。さらに、これらの知見は、ｒｓ１５８２７６３対立遺伝子が、ＭＳ４Ａ４Ａレベルを低下させ、アルツハイマー病のリスクまたは重症度を抑制することで、保護的な役割を果たすことを示唆している。この保護ｒｓ１５８２７６３は、オステオポンチンの発現レベルの増大、及びゲルゾリンのレベルの増大にも関連している。本発明の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、少なくともＭＳ４Ａ４Ａ発現の抑制、オステオポンチン発現の増大、ゲルゾリン発現の増大、及び／またはｓＴＲＥＭレベルの増大に関して、保護対立遺伝子でのこれらの態様を表現型模写する上で有効である。本開示の一部の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供し、当該抗体は、アルツハイマー病のリスクの低下、及び／またはアルツハイマー病の発症年齢の遅延に関連するＭＳ４Ａの１つ以上の対立遺伝子を表現型模写する。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト末梢血単核細胞由来マクロファージにおいて、オステオポンチン（ＳＰＰ１）のｍＲＮＡレベルを高め、また、ゲルゾリン（ＧＳＮ）のｍＲＮＡレベルを高めた。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、オステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ゲルゾリンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）におけるオステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、または少なくとも２５０％引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）におけるゲルゾリンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、または少なくとも２５０％引き上げる。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、非ヒト霊長類においてオステオポンチン（ＳＳＰ１）レベルを高めた。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで（例えば、非ヒト霊長類またはヒトにおいて）、オステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、血清及び／またはＣＳＦにおけるオステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、血清及び／またはＣＳＦでのオステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、または少なくとも２５０％引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、脳内のオステオポンチンのタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、前頭葉及び／または海馬におけるオステオポンチンのタンパク質のレベルを引き上げる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、オステオポンチン及びゲルゾリンの発現の増加に関して、保護ｒｓ１５８２７６３対立遺伝子を表現型模写する。その他の態様では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、オステオポンチン、ゲルゾリン、及び／またはｓＴＲＥＭ２の発現を高める上で有効であり、保護ｒｓ１５８２７６３対立遺伝子と同様に、アルツハイマー病のリスク及び／または重症度の抑制において生物学的に活性である。このデータは、ＳＰＰ１とＧＳＮが、ｒｓ１５８２７３対立遺伝子に関連する保護生物活性の薬力学的マーカーであることを示した。
ＣＳＦＲ１及びＩＬ１ＲＮの発現
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、非ヒト霊長類においてＣＳＦ１Ｒレベルを高めた。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで（例えば、非ヒト霊長類またはヒトにおいて）、ＣＳＦ１ＲのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、血清及び／またはＣＳＦにおけるＣＳＦ１ＲのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、血清及び／またはＣＳＦでのＣＳＦ１ＲのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、または少なくとも２５０％引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、脳内のＣＳＦ１Ｒのタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、前頭葉及び／または海馬におけるＣＳＦ１Ｒのタンパク質のレベルを引き上げる。
ＣＳＦ１Ｒ欠損症は、脳内のミクログリアの発達に悪影響を及ぼし（Ｓｗｅｒｄｌｏｗ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１１１：３００－３１１；Ｂａｂａ ｅｔ ａｌ（２００６）Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ，１１１：３００－３１１）、そして、最近の研究は、ＣＳＦ１Ｒ遺伝子の変異と、軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症性白質脳症（ＡＬＳＰ）、及びスフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）などの様々な障害との関連を突き止めている（Ｏｏｓｔｅｒｈｏｆ ｅｔ ａｌ（２０１９）Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ，１０４：９３６－９４７；Ｒａｄｅｍａｋｅｒ ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４４：２００－２０５；Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ（２０１３）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，８０：１０３３－１０４０）。本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＣＳＦ１Ｒ阻害後のヒトマクロファージの細胞死を抑制し、その生存を持続させた。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＡＬＳＰまたはＨＤＬＳなどのＣＳＦ１Ｒ欠損疾患または障害を有する個体を治療する上で有用である。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト末梢血単核細胞由来マクロファージにおいてＩＬ１ＲＮレベルを高めた。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＬ１ＲＮのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＬ１ＲＮのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを引き上げる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）におけるＩＬ１ＲＮのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、または少なくとも２５０％引き上げる。
ＧＰＮＭＢ発現
ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質非転移性黒色腫タンパク質Ｂ）；は、組織マクロファージやミクログリアなどの複数の細胞型で発現する表面糖タンパク質である。幾つかの遺伝的バリアントが、パーキンソン病（ＰＤ）のリスクに関連している。ＧＰＮＭＢタンパク質のレベルは、ＰＤ患者の黒質で上昇しており、また、ＧＰＮＭＢレベルは、リソソームストレス後に高まる（Ｍｏｌｏｎｅｙ ｅｔ．ａｌ．，２０１８，Ｎｅｕｒｏｂｉｏ Ｄｉｓ．１２０：１－１１）。加えて、ＧＰＮＭＢ発現の増大は、ＳＮＰ ｒｓ１９９３４７に関連しており、このリスクＳＮＰは、ＧＰＮＭＢ遺伝子内に位置している（Ｍｕｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１７，１８：１２１－１３３）。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト初代マクロファージにおけるＧＰＮＭＢ細胞表面タンパク質のレベルを低下させた。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞（例えば、マクロファージ、ヒトマクロファージ、ミクログリア）におけるＧＰＮＭＢ細胞表面タンパク質のレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％引き下げる。ＧＰＮＭＢレベルの増大は、ＰＤのリスク対立遺伝子に関連しているので、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後のＧＰＮＭＢの低下は、ＰＤの治療手段を提供し得る。
Ａ．例示的な抗体、及び特定のその他の抗体の実施形態
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号９４、１０８、１１６、１４６、１４７、３０８、及び３１１からなる群から選択するアミノ酸配列、または、配列番号９４、１０８、１１６、１４６、１４７、３０８、及び３１１からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号９６、９７、９８、９９、１１０、１１１、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、３０９、及び３１２からなる群から選択するアミノ酸配列、または、配列番号９６、９７、９８、９９、１１０、１１１、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、３０９、及び３１２からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１００、１０１、１０２、１１２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１５４、３１０、及び３１３からなる群から選択するアミノ酸配列、または、配列番号１００、１０１、１０２、１１２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１５４、３１０、及び３１３からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０３、１０４、１１３、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１５６、１５７、１５８、３１４、及び３１７からなる群から選択するアミノ酸配列、または、配列番号１０３、１０４、１１３、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１５６、１５７、１５８、３１４、及び３１７からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０５、１０６、１１４、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１６０、１６１、３１５、及び３１８からなる群から選択するアミノ酸配列、または、配列番号１０５、１０６、１１４、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１６０、１６１、３１５、及び３１８からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０７、１１５、１４４、１４５、１６３、３１６、及び３１９からなる群から選択するアミノ酸配列、または、配列番号１０７、１１５、１４４、１４５、１６３、３１６、及び３１９からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号９４及び３０８からなる群から選択するアミノ酸配列、または、配列番号９４及び３０８からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号９６、９７、９８、９９、及び３０９からなる群から選択するアミノ酸配列、または、配列番号９６、９７、９８、９９、及び３０９からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１００、１０１、１０２、及び３１０からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１００、１０１、１０２、及び３１０からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０３、１０４、及び３１４からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１０３、１０４、及び３１４からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０５、１０６、及び３１５からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１０５、１０６、及び３１５からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ２：及び（ｆ）配列番号１０７及び３１６からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１０７及び３１６からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１０８のアミノ酸配列、または配列番号１０８のアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１０及び１１１からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１１０及び１１１からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列、または配列番号１１２のアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１１３のアミノ酸配列、または配列番号１１３のアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１４のアミノ酸配列、または配列番号１１４のアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列、または配列番号１１５のアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列、または配列番号１１６のアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、及び１２２からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、及び１２２からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、及び１２９からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、及び１２９からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９、１４０、１４１、１４２、及び１４３からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１３９、１４０、１４１、１４２、及び１４３からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４及び１４５からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１４４及び１４５からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１４６及び１４７からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１４６及び１４７からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、及び１５３からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、及び１５３からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列、または配列番号１５４のアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１５６、１５７、及び１５８からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１５６、１５７、及び１５８からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１５９、１６０、及び１６１からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１５９、１６０、及び１６１からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１６３からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１６３からなる群から選択するアミノ酸と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；または、（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号３０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号３１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；または、（ａ）配列番号３１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号３１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；または、（ａ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含

むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列、または配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号９６、９７、９８、及び９９からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号９６、９７、９８、及び９９からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号３０８のアミノ酸配列、または配列番号３０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３０９のアミノ酸配列、または配列番号３０９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３１０のアミノ酸配列、または配列番号３１０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号３１１のアミノ酸配列、または配列番号３１１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３１２のアミノ酸配列、または配列番号３１２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３１３のアミノ酸配列、または配列番号３１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号１０３及び１０４からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１０３及び１０４からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０５及び１０６からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１０５及び１０６からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列、または配列番号１０７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号３１４のアミノ酸配列、または配列番号３１４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号３１５のアミノ酸配列、または配列番号３１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１６のアミノ酸配列、または配列番号３１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号３１７のアミノ酸配列、または配列番号３１７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号３１８のアミノ酸配列、または配列番号３１８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１９のアミノ酸配列、または配列番号３１９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）（ｉ）配列番号９４のアミノ酸配列、または配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号９６、９７、９８、及び９９からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号９６、９７、９８、及び９９からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１００、１０１、及び１０２からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１０３及び１０４からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１０３及び１０４からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号１０５及び１０６からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１０５及び１０６からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列、または配列番号１０７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）（ｉ）配列番号３０８のアミノ酸配列、または配列番号３０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号３０９のアミノ酸配列、または配列番号３０９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号３１０のアミノ酸配列、または配列番号３１０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号３１４のアミノ酸配列、または配列番号３１４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号３１５のアミノ酸配列、または配列番号３１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号３１６のアミノ酸配列、または配列番号３１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）（ｉ）配列番号３１１のアミノ酸配列、または配列番号３１１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号３１２のアミノ酸配列、または配列番号３１２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号３１３のアミノ酸配列、または配列番号３１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号３１７のアミノ酸配列、または配列番号３１７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号３１８のアミノ酸配列、または配列番号３１８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号３１６のアミノ酸配列、または配列番号３１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、及び３０からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、及び３０からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１０及び１１１からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１１０及び１１１からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列、または配列番号１１２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１１３のアミノ酸配列、または配列番号１１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１１４のアミノ酸配列、または配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列、または配列番号１１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）（ｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列、または配列番号１０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１１０及び１１１からなる群から選択するアミノ酸配列、または、配列番号１１０及び１１１からなる群から選択するアミノ酸配列少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列、または配列番号１１２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列、または配列番号１１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列、または配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列、または配列番号１１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列、または配列番号１１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、及び１２２からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、及び１２２からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、及び１２９からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、及び１２９からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１３９、１４０、１４１、１４２、及び１４３からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１３９、１４０、１４１、１４２、及び１４３からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１４４及び１４５からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１４４及び１４５からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）（ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列、または配列番号１１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、及び１２２からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、及び１２２からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、及び１２９からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、及び１２９からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号１３９、１４０、１４１、１４２、及び１４３からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１３９、１４０、１４１、１４２、及び１４３からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１４４及び１４５からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１４４及び１４５からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１４６及び１４７からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１４６及び１４７からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、及び１５３からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、及び１５３からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列、または配列番号１５４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）配列番号１５６、１５７、及び１５８からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１５６、１５７、及び１５８からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１６０及び１６１からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１６０及び１６１からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列、または配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）（ｉ）配列番号１４６及び１４７からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１４６及び１４７からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、及び１５３からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、及び１５３からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１５４のアミノ酸配列、または配列番号１５４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１５６、１５７、及び１５８からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１５６、１５７、及び１５８からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）配列番号１６０及び１６１からなる群から選択するアミノ酸配列、または配列番号１６０及び１６１からなる群から選択するアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列、または配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、３０４、及び３０６からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、３０４、及び３０６からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、３０４、または３０６において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、３０４、または３０６において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、３０４、または３０６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは：（ａ）配列番号９４、１０８、１１６、１４６、１４７、及び３０８、及び３１１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９６、９７、９８、９９、１１０、１１１、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、３０９、及び３１２からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１００、１０１、１０２、１１２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１５４、３１０、及び３１３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供し、当該抗体は、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３２、３３、３４、３５、３６、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、３０５、及び３０７からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３２、３３、３４、３５、３６、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、３０５、及び３０７からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。一部の実施形態では、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３２、３３、３４、３５、３６、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、３０５、または３０７において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３２、３３、３４、３５、３６、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、３０５、または３０７において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３２、３３、３４、３５、３６、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、３０５、または３０７のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは：（ａ）配列番号１０３、１０４、１１３、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１５６、１５７、１５８、３１４、及び３１７からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５、１０６、１１４、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１６０、１６１、３１５、及び３１８からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０７、１１５、１４４、１４５、１６３、３１６、及び３１９からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供し、当該抗体は、先に提供した実施形態のいずれかでのＶＨと、先に提供した実施形態のいずれかでのＶＬとを含む。一部の実施形態では、本明細書では抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、先に提供した実施形態のいずれかでのＶＨと、先に提供した実施形態のいずれかでのＶＬとを含む。ある実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列は、それぞれ、配列番号５～１５及び配列番号１７～２２であり、これらの配列の翻訳後修飾を含む。ある実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列は、それぞれ、配列番号２４～３０及び配列番号３２～３６であり、これらの配列の翻訳後修飾を含む。ある実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列は、それぞれ、配列番号４０～５３及び配列番号５５～７４であり、これらの配列の翻訳後修飾を含む。ある実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列は、それぞれ、配列番号７６～８４及び配列番号８６～９３であり、これらの配列の翻訳後修飾を含む。ある実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列は、それぞれ、配列番号３０４及び配列番号３０５であり、これらの配列の翻訳後修飾を含む。ある実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列は、それぞれ、配列番号３０６及び配列番号３０７であり、これらの配列の翻訳後修飾を含む。
一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供し、当該ＶＨ及びＶＬを：配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び配列番号３０６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３０７のアミノ酸配列を含むＶＬからなる群から選択する。
一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供し、当該ＶＨ及びＶＬを：配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬからなる群から選択する。
一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供し、当該ＶＨ及びＶＬを：配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４０アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬからなる群から選択する。
一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供し、当該ＶＨ及びＶＬを：配列番号７６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号７９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号８０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬからなる群から選択する。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、３０４、及び３０６からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、３０４、及び３０６からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、３０４、または３０６において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、３０４、または３０６において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、３０４、または３０６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは：（ａ）配列番号９４及び３０８からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９６、９７、９８、９９、及び３０９からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１００、１０１、１０２、及び３１０からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が提供され、当該抗体は、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３０５、及び３０７からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３０５、及び３０７からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。一部の実施形態では、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３０５、または３０７において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３０５、または３０７において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、３０５、または３０７のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは：（ａ）配列番号１０３、１０４、及び３１４からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５、１０６、及び３１５からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０７及び３１６からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、及び３０からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、及び３０からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは：（ａ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１０及び１１１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供し、当該抗体は、配列番号３２、３３、３４、３５、及び３６からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号３２、３３、３４、３５、及び３６からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。一部の実施形態では、配列番号３２、３３、３４、３５、または３６において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号３２、３３、３４、３５、または３６において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号３２、３３、３４、３５、または３６のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは：（ａ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、及び５３からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、及び５３からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、配列番号４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、または５３において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、または５３において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、または５３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは：（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、及び１２２からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、及び１２９からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が提供され、当該抗体は、配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び７４からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び７４からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。一部の実施形態では、配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、または７４において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、または７４において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、または７４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは：（ａ）配列番号１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１３９、１４０、１４１、１４２、及び１４３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１４４及び１４５からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、及び８４からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、及び８４からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、または８４において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、または８４において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、または８４のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは：（ａ）配列番号１４６及び１４７からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、及び１５３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が提供され、当該抗体は、配列番号８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、及び９３からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、及び９３からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。一部の実施形態では、配列番号８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、または９３において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、または９３において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、または９３のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは：（ａ）配列番号１５６、１５７、及び１５８からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１６０及び１６１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択する１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号３２０～３３５及び３５５～３６２からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する全長重鎖アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、配列番号３２０～３３５及び３５５～３６２からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する全長重鎖アミノ酸配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、配列番号３２０～３３５及び３５５～３６２において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号３２０～３３５及び３５５～３６２において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。
別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号３６３～３６５からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する全長軽鎖アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、配列番号３６３～３６５からなる群から選択するアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する全長重鎖アミノ酸配列は、リファレンス配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、配列番号３６３～３６５において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、配列番号３６３～３６５において、合計で１～５つのアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失している。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＬＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。
一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号３５５～３６２の全長重鎖アミノ酸配列と、配列番号３６５の全長軽鎖アミノ酸配列とを含む。一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号３２０～３２７の全長重鎖アミノ酸配列と、配列番号３６３の全長軽鎖アミノ酸配列とを含む。一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号３２８～３３５の全長重鎖アミノ酸配列と、配列番号３６４の全長軽鎖アミノ酸配列とを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２０２、４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３３０、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－４１９、及び４Ａ－４５０から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－１８、４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、及び４Ａ－３３１から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２１、４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６１、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、及び４Ａ－３８１から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２５、４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、４Ａ－３９０から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体の結合を競合的に阻害する。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２０２、４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－１８、４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、４Ａ－３３１、４Ａ－２１、４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６１、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、４Ａ－３８１、４Ａ－２５、４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、４Ａ－３９０、４Ａ－４１９、及び４Ａ－４５０から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体が結合するＭＳ４Ａ４Ａエピトープと同一である、または重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングする例示的な方法の詳細は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に記載されている。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、４Ａ－２０２、４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、Ａ－４１９、４Ａ－４５０から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体、及びそれらのあらゆる組み合わせの結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、４Ａ－１８、４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、４Ａ－３３１から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体、及びそれらのあらゆる組み合わせの結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、４Ａ－２１、４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６１、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、及び４Ａ－３８１から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体、及びそれらのあらゆる組み合わせの結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、４Ａ－２５、４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、または４Ａ－３９０から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体、及びそれらのあらゆる組み合わせの結合を競合的に阻害する。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、４Ａ－２０２、４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－４１９、及び４Ａ－４５０から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体、及びそれらのあらゆる組み合わせと同じである、または重複する、ＭＳ４Ａ４Ａでのエピトープを有する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、４Ａ－１８、４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、及び４Ａ－３３１から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体、及びそれらのあらゆる組み合わせと同じである、または重複する、ＭＳ４Ａ４Ａでのエピトープを有する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、４Ａ－２１、４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６１、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、及び４Ａ－３８１から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体、及びそれらのあらゆる組み合わせと同じである、または重複する、ＭＳ４Ａ４Ａでのエピトープを有する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、４Ａ－２５、Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、及び４Ａ－３９０、から選択する少なくとも１つのリファレンス抗体、及びそれらのあらゆる組み合わせと同じである、または重複する、ＭＳ４Ａ４Ａでのエピトープを有する。
一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン１（ＥＣＬ１）に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列ＣＭＡＳＮＴＹＧＳＮＰＩＳ（配列番号１７７）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン２（ＥＣＬ２）に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳ（配列番号１７８）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
当該技術分野で公知のあらゆる適切な競合アッセイまたはＭＳ４Ａ４Ａ結合アッセイ、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーなどを利用して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、４Ａ－２０２、４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－１８、４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、４Ａ－３３１、４Ａ－２１、４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６１、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、４Ａ－３８１、４Ａ－２５、４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、４Ａ－３９０、４Ａ－４１９、及び４Ａ－４５０、及びそれらのあらゆる組み合わせから選択する１つ以上のリファレンス抗体と競合する（または、競合的にその結合を阻害する）か否かを決定し得る。例示的な競合アッセイでは、固定化したＭＳ４Ａ４Ａ、または細胞表面にＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞を、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する第１の標識抗体（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）と、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して第１の抗体と競合する能力について試験する第２の非標識抗体とを含む溶液でインキュベーションする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清に存在し得る。コントロールとして、固定化したＭＳ４Ａ４Ａ、またはＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞を、第２の非標識抗体ではなく、第１の標識抗体を含む溶液においてインキュベーションする。ＭＳ４Ａ４Ａに対する第１の抗体の結合を許容する条件下でインキュベーションした後に、過剰な非結合抗体を除去し、そして、固定化したＭＳ４Ａ４Ａ、またはＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞に関連する標識の量を測定する。固定化したＭＳ４Ａ４Ａ、またはＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞に関連する標識の量が、コントロール試料と比較して、試験試料において実質的に減っていれば、このことは、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、第２の抗体が、第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を競合的に阻害する、及び／または当該抗体への結合について競合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をさらに提供しており、これらの抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号９４及び３０８からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９６、９７、９８、９９、及び３０９からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１００、１０１、１０２、及び３１０からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１０３、１０４、及び３１４からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０５、１０６、及び３１５からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１０７及び３１６からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれ、配列番号５～１５及び３０４、及び配列番号１７～２２及び３０５である。
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合するエピトープと同じである、または重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、これらの抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号９４及び３０８からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９６、９７、９８、９９、及び３０９からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１００、１０１、１０２、及び３１０からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１０３、１０４、及び３１４からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０５、１０６、及び３１５からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１０７及び３１６からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれ、配列番号５～１５及び３０４、ならびに配列番号１７～２２及び３０５である。一部の実施形態では、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合するものと同じエピトープである。
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を競合的に阻害する、及び／または当該抗体への結合について競合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をさらに提供しており、これらの抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１１０及び１１１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１１２のアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれ、配列番号２４～３０、及び配列番号３２～３６である。
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合するエピトープと同じである、または重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、これらの抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１１０及び１１１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１１２のアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれ、配列番号２４～３０、及び配列番号３２～３６である。一部の実施形態では、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合するものと同じエピトープである。
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を競合的に阻害する、及び／または当該抗体への結合について競合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をさらに提供しており、これらの抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、及び１２２からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、及び１２９からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１３９、１４０、１４１、１４２、及び１４３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１４４及び１４５からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれ、配列番号４０～５３、及び配列番号５５～７４である。
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合するエピトープと同じである、または重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、これらの抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、及び１２２からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、及び１２９からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、及び１３８からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１３９、１４０、１４１、１４２、及び１４３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１４４及び１４５からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれ、配列番号４０～５３、及び配列番号５５～７４である。一部の実施形態では、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合するものと同じエピトープである。
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を競合的に阻害する、及び／または当該抗体への結合について競合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をさらに提供しており、これらの抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１４６及び１４７からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、及び１５３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１５４のアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１５６、１５７、及び１５８からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１６０及び１６１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれ、配列番号７６～８４、及び配列番号８６～９３である。
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合するエピトープと同じである、または重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、これらの抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１４６及び１４７からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、及び１５３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１５４のアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１５６、１５７、及び１５８からなる群から選択するアミノ配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１６０及び１６１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれ、配列番号７６～８４、及び配列番号８６～９３である。一部の実施形態では、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合するものと同じエピトープである。
一部の実施形態では、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト化、及び／または、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、または、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントである。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、実質的な全長抗体、例えば、本明細書で定義するＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または、その他の抗体クラス、または、アイソタイプである。
一部の実施形態では、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、以下の第１～７節に記載したように、あらゆる特徴を、単独で、または、組み合わせて取り込み得る。
（１）抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体結合親和性
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または、＜０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏのＯｃｔｅｔ Ｓｙｓｔｅｍを参照されたい）、等温滴定カロリメトリー（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップト－フロー分析、及び、比色分析、または、蛍光タンパク質融解分析などのあらゆる生化学的または生物物理学的技法など、あらゆる解析技法で決定することができる。ある実施形態では、Ｋｄを、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）で測定する。一部の実施形態では、ＲＩＡを、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９））に記載された、目的の抗体のＦａｂバージョン、または、その抗原を用いて実施する。一部の実施形態では、ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴アッセイ、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ－２０００、または、ＢＩＡＣＯＲＥ－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイを使って、約１０反応単位（ＲＵ）の固定化した抗原ＣＭ５チップを用いて、２５℃で、Ｋｄの測定を行う。一部の実施形態では、当該ＫＤを、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）、または、全長抗体を使用して決定する。一部の実施形態では、当該ＫＤを、一価形態の全長抗体を使用して決定する。
（２）抗体フラグメント
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、抗体フラグメントである。抗体フラグメントとして、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及び、ｓｃＦｖフラグメント、及び、後述するその他のフラグメントがあるが、これらに限定されない。特定の抗体フラグメントの概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖフラグメントの概説については、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；及び、米国特許第５５７１８９４号、及び、第５５８７４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつ、インビボでの半減期が延びたＦａｂ、及びＦ（ａｂ’）２フラグメントの考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。
ダイアボディは、二価、または、二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、ＥＰ４０４０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。トリアボディ、及び、テトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部または一部、または、軽鎖可変ドメインの全部または一部を含む抗体フラグメントである。特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６２４８５１６号を参照されたい）。
抗体フラグメントは、本明細書に記載した通り、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびに、組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、または、ファージ）による生産などであるが、これらに限定されない様々な技術で生産することができる。
（３）キメラ、及び、ヒト化抗体
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されている。ある例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または、サルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）、及び、ヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスを、親抗体のものから変更した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合フラグメントを含む。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト化抗体である。一般的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性と親和性とを保持しながら、ヒトに対する免疫原性を抑制するためにヒト化する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、標的に対して、ヒト化抗体が由来する別の種に由来する抗体と実質的に同じ親和性を有する。例えば、米国特許第５５３０１０１号、第５６９３７６１号；第５６９３７６２号；及び、第５５８５０８９号を参照されたい。特定の実施形態では、免疫原性を低下させながら、抗原結合ドメインの本来の親和性を抑制せずに修飾することができる抗体可変ドメインのアミノ酸を同定する。例えば、米国特許第５７６６８８６号、及び、第５８６９６１９号を参照されたい。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体に由来し、かつ、ＦＲ（またはその一部）が、ヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体での一部のＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）に由来する対応する残基で置換する。
ヒト化抗体、及び、それらを生産する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）で概説されており、また、例えば、米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号、及び、第７０８７４０９号に記載されている。ヒト化に使用し得るヒトフレームワーク領域として、「ベストフィット」法を使用して選択したフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５（１９９２）；及び、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒトの成熟した（体細胞変異）フレームワーク領域、または、ヒトの生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）、及びＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）、及び、Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）があるが、これらに限定されない。
（４）ヒト抗体
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して生産することができる。ヒト抗体は、一般的には、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）、及び、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）で説明されている。
ヒト抗体は、抗原接種に応答して、ヒト可変領域を有する、インタクトなヒト抗体、または、インタクトな抗体を生産するように修飾したトランスジェニック動物に対して免疫原を投与して調製することができる。そのようなマウスが、マウス抗体の非存在下でヒト抗体を生産するものとして予想して、ヒトＩｇ遺伝子座の大きなフラグメントを有するマウス抗体生産を欠損しているマウス系統を遺伝子操作することができる。大きなヒトＩｇフラグメントは、大きな可変遺伝子の多様性、ならびに、抗体の生産と発現の適切な調節を続けることができる。抗体の多様化と選択、及び、ヒトタンパク質に対する免疫学的寛容の欠如のためのマウス機構を利用することで、これらのマウス系統において再現したヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原などの目的の抗原に対する高親和性完全ヒト抗体を生み出すことができる。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトモノクローナル抗体を、生産及び選択することができる。特定の例示的な方法は、米国特許第５５４５８０７号、ＥＰ５４６０７３、及び、ＥＰ５４６０７３で説明されている。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載している米国特許第６０７５１８１号、及び、第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許番号７０４１８７０号、及び、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号を参照されたい。そのような動物が生成したインタクトな抗体に由来するヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせて、さらに改変し得る。
また、ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づいた方法で生産することができる。ヒトモノクローナル抗体の生産のためのヒト骨髄腫、及び、マウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）、及び、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６（１９９１））。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成したヒト抗体は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１ ０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法として、例えば、（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の生産を説明している）米国特許第７１８９８２６号に記載されている方法がある。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０（３）：９２７－９３７（２００５）、及び、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２７（３）：１８５－９１（２００５）に記載されている。また、ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択したＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することで生成し得る。次に、そのような可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせ得る。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を、以下に説明する。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、インビトロ法、及び／または、所望の１つ以上の活性を有する抗体に関するコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングして単離したヒト抗体である。適切な例として、ファージディスプレイ（ＣＡＴ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（かつてのＰｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）リボソームディスプレイ（ＣＡＴ）、酵母ディスプレイ（Ａｄｉｍａｂ）などがあるが、これらに限定されない。特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ、及び、ＶＬ遺伝子のレパートリーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で別々にクローニングし、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されているファージライブラリーでランダムに再結合する。例えば、当該技術分野では、ファージディスプレイライブラリーを生成し、そして、所望の結合特性を保有する抗体に関する当該ライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が公知である。Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０、２００４；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３，２００４；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；及び、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（－２）：１１９－１３２（２００４）も参照されたい。一般的に、ファージは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、または、Ｆａｂフラグメントのいずれかで抗体フラグメントを表す。免疫源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要がなく、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、未処理のレパートリーを、（例えば、ヒトから）クローニングして、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されているようにして、免疫化処置をせずに、広範囲の非自己抗原、それに、自己抗原に対する単一の抗体源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーは、幹細胞から再配置していないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、そして、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して可変性に富んだＨＶＲ３領域をコードし、そして、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８、１９９２に記載されているようにして、インビトロでの再配置を達成した。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許文献として、例えば：米国特許第５７５０３７３号、ならびに、米国特許公開第２００７／０２９２９３６号、及び、第２００９／０００２３６０号がある。ヒト抗体ライブラリーから単離した抗体は、本明細書では、ヒト抗体またはヒト抗体フラグメントと見なす。
（５）Ｆｃ領域を含む定常領域
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、Ｆｃを含む。一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／または、ＩｇＧ４アイソタイプである。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、または、ＩｇＡクラスの抗体である。
本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を誘導し、または、Ｆｃ受容体に対する結合とは無関係に誘導する。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１軽鎖定常領域は、配列番号３４４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番法で定めたヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２６０、及び、ＥＵ付番法で定めたヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１～４４７を含む、アミノ酸配列を含む（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）。
一部の実施形態では、当該Ｆｃ領域は、アミノ酸置換を含まないＦｃ領域を含む対応する抗体と比較して、補体を活性化せずに、クラスター形成を高める。一部の実施形態では、当該抗体は、当該抗体が特異的に結合する標的の１つ以上の活性を誘導する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を修飾して、エフェクター機能を修飾すること、及び／または、抗体の血清半減期を長くすることも望ましい。例えば、当該定常領域のＦｃ受容体結合部位を修飾または変異させて、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／または、ＦｃγＲＩＩＩなどの特定のＦｃ受容体に対する結合親和性を除去または抑制して、抗体依存性細胞性細胞毒性を抑制し得る。一部の実施形態では、当該抗体の（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメインにおける）Ｆｃ領域のＮ－グリコシル化を除去すると、当該エフェクター機能は低下する。一部の実施形態では、ＷＯ９９／５８５７２、及び、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１６４：１９２５－１９３３（２０００）に記載されているようなヒトＩｇＧの２３３～２３６、２９７、及び／または、３２７～３３１などの領域を修飾すると、当該エフェクター機能は低下する。その他の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を修飾してエフェクター機能を修飾すると、ＩＴＩＭ含有ＦｃｇＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する発見選択性を高めて、抗体依存性細胞媒介細胞毒性、及び、抗体依存性細胞食作用などの体液性応答を活性化せずに、隣接細胞でのＭＳ４Ａ４Ａ抗体のクラスター形成を高めることも望ましい。
当該抗体の血清半減期を長くするために、例えば、米国特許第５７３９２７７号に記載されているようにして、サルベージ受容体結合エピトープを、当該抗体（特に、抗体フラグメント）に組み込み得る。本明細書で使用する用語「サルベージ受容体結合エピトープ」とは、インビボでのＩｇＧ分子の血清半減期の延長に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、または、ＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープのことを指す。その他のアミノ酸配列の修飾。
（６）多重特異性抗体
多重特異性抗体とは、同じまたは別のポリペプチド（例えば、本開示の１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａポリペプチド）のエピトープなど、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体のことである。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、二重特異性抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、三重特異性抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、四重特異性抗体とすることができる。そのような抗体を、全長抗体、または、抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）に由来する抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａでの第１の部位に対して結合する第１の抗原結合領域を含み、かつ、ＭＳ４Ａ４Ａでの第２の部位に対して結合する第２の抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する第１の抗原結合領域、及び、第２のポリペプチドに対して結合する第２の抗原結合領域を含む。
本明細書では、第１の抗原結合領域を含む多重特異性抗体を提供しており、当該第１の抗原結合領域は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する本明細書に記載の抗体の６つのＨＶＲ、及び、第２のポリペプチドに対して結合する第２の抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、当該第１の抗原結合領域は、本明細書に記載している抗体のＶＨまたはＶＬを含む。
当該多重特異性抗体のいずれかの一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、ａ）血液脳関門を通る輸送を促す抗原；（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、及び、ＡＮＧ１００５から選択した血液脳関門を通る輸送を促す抗原；（ｃ）アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、または、そのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチド反復（ＤｉＰｅｐｔｉｄｅ ｒｅｐｅａｔ）（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及び、プロリン－アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドから選択した疾患原因タンパク質；（ｄ）免疫細胞で発現するリガンド、及び／または、タンパク質であって、当該リガンド、及び／または、タンパク質を、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ－３、及び、ホスファチジルセリンから選択する；及び／または、（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞、及び、それらのあらゆる組み合わせで発現するタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質である。
血液脳関門を通る輸送を促す多数の抗原は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ Ｒ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．３７：４８－５７（２０１０））。そのような第２の抗原として、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性変異体）などのジフテリア毒素、ＴＭＥＭ３０（Ａ）（Ｆｌｉｐｐａｓｅ）などのラマ単一ドメイン抗体、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、または、ペネトラチンなどのタンパク質形質導入ドメイン、ポリアルギニン、または、一般的に正電荷を有するペプチド、ＡＮＧ１００５などのＡｎｇｉｏｐｅｐペプチド（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ、２０１０を参照されたい）、及び、血液脳関門内皮細胞で濃縮を受けるその他の細胞表面タンパク質（例えば、Ｄａｎｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（１０）：ｅ１３７４１（２０１０）を参照されたい）があるが、これらに限定されない。
当該多価抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａ抗原、ならびに、さらなる抗原Ａβペプチド、抗原またはα－シヌクレインタンパク質抗原、または、Ｔａｕ－タンパク質抗原、または、ＴＤＰ－４３タンパク質抗原、または、プリオンタンパク質抗原、または、ハンチンチンタンパク質抗原、または、ＲＡＮ、グリシン－アラニン（ＧＡ）、グリシン－プロリン（ＧＰ）、グリシン－アルギニン（ＧＲ）、プロリン－アラニン（ＰＡ）、または、プロリン－アルギニン（ＰＲ）、からなるジペプチド反復（ＤｉＰｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｐｅａｔｓ）、（ＤＰＲペプチド）を含む翻訳産物抗原、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体などを認識し得るが、これらに限定されない。トランスフェリン受容体、または、抗体の移動を促すその他の抗原は、血液脳関門を通る。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、トランスフェリンである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、Ｔａｕである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、Ａβである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、ＴＲＥＭ２である。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、α－シヌクレインである。
当該多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（及び、好ましくは、２つのポリペプチド鎖）を含み、１つ以上の当該ポリペプチド鎖は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、１つ以上のポリペプチド鎖は、ＶＤ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）ｎ－Ｆｃを含み得るものであり、ＶＤ１は、第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の可変ドメインであり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２は、アミノ酸またはポリペプチドを表し、そして、ｎは、０または１である。同様に、１つ以上のポリペプチド鎖は、ＶＨ－ＣＨ１可撓性リンカー－ＶＨ－ＣＨ１－Ｆｃ領域鎖；または、ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１－Ｆｃ領域鎖を含む。本明細書の多価抗体は、好ましくは、少なくとも２つ（及び、好ましくは４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書の多価抗体は、例えば、約２～約８個の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。本明細書で企図する軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、また、任意に、ＣＬドメインをさらに含む。
多重特異性抗体を作り出す技術として、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖ペアの組換え共発現があるが、これらに限定されない（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、及び、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１））、及び、「ノブ－イン－ホール」遺伝子操作（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照されたい）を参照されたい）。また、ＷＯ２０１３／０２６８３３（ＣｒｏｓｓＭａｂ）も参照されたい。また、多特異性抗体は、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作り出す静電ステアリング効果を操作して（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体を架橋して（例えば、米国特許第４６７６９８０号を参照されたい）；ロイシンを使用して；二重特異性抗体フラグメントを作り出す「ダイアボディ」技術を使用して（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい）；そして、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用して（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；及び、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているようにして三重特異性抗体を調製して、作り出し得る。
本明細書は、「オクトパス抗体」などの３つ以上の機能的な抗原結合部位を有する遺伝子操作した抗体も含む（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６を参照されたい）。また、本明細書の抗体は、複数のＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」を含む（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
（７）抗体バリアント
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体のアミノ酸配列のバリアントを企図している。例えば、抗体の結合親和性、及び／または、その他の生物学的特性を改善することが望ましい。
（ｉ）置換、挿入、及び、欠失バリアント
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントを提供する。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することで、または、ペプチド合成により調製し得る。そのような修飾として、例えば、当該抗体のアミノ酸配列での残基の欠失、及び／または、挿入、及び／または、残基の置換がある。
Figure 2022542964000002
当該抗体の生物特性の実質的な修飾は、（ａ）置換領域内のポリペプチド主鎖の構造、例えば、シートまたはヘリックス構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または、（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対する作用が著しく異なる置換を選択することで達成される。天然に存在する残基は、共通する側鎖特性に基づいて：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
（６）芳香族性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、に分けられる。
例えば、非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを、別のクラスのものと交換することに関係する。そのような置換した残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域、または、当該分子の非相同領域に導入することができる。
本明細書に記載のポリペプチドまたは抗体に変更を加える場合、特定の実施形態では、アミノ酸の疎水性指標を考慮することができる。それぞれのアミノ酸には、その疎水性と電荷特性に基づいて、疎水性指標を割り当てている。それらは：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；スレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸塩（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸塩（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リジン（－３．９）；及び、アルギニン（－４．５）である。
タンパク質に対して相互作用的な生物学的機能を付与する際の疎水性アミノ酸指標の重要性は、当該技術分野で理解されている。Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５－１３１（１９８２）。特定のアミノ酸では、類似の疎水性指標、または、スコアを有するその他のアミノ酸の代わりに使用することができ、かつ、なおも類似の生物活性を保持することができる、ことは公知である。疎水性指標に基づいて変更を加える場合、特定の実施形態では、疎水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換を含む。特定の実施形態では、±１以内の事例を含み、そして、特定の実施形態では、±０．５以内の事例を含む。
また、類似のアミノ酸の置換を、親水性に基づいて効果的に行うことができ、特に、そうして生成した生物学的機能性タンパク質またはペプチドは、本事例のように免疫学的実施形態での使用を意図している、ことも理解されたい。特定の実施形態では、隣接するアミノ酸の親水性が支配するタンパク質の最大の局所平均親水性は、その免疫原性、及び、抗原性、すなわち、タンパク質の生物学的特性と相関する。
これらのアミノ酸残基には：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０±１）；アスパラギン酸塩（＋３．０±１）；グルタミン酸塩（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）、及び、トリプトファン（－３．４）の親水性値を割り当てている。類似の親水性値に基づいて変更を加える場合、特定の実施形態では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換を含み、特定の実施形態では、±１以内のアミノ酸の置換を含み、特定の実施形態では、±０．５以内のアミノ酸の置換を含む。親水性に基づいて、一次アミノ酸配列からエピトープを同定することもできる。これらの領域を、「エピトープコア領域」とも称する。
特定の実施形態において、置換、挿入、または、欠失は、そのような改変が、抗体が抗原に対して結合する能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲで起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書で提供する保存的置換）は、ＨＶＲで行い得る。そのような改変は、例えば、ＨＶＲの抗原接触残基の外側で行い得る。前出の変異ＶＨ、及び、ＶＬ配列の特定の実施形態では、それぞれのＨＶＲは改変されておらず、または、１つ、２つ、または、３つ以下のアミノ酸置換を含む。
アミノ酸配列挿入として、１残基～１００以上の残基の長さのポリペプチドまでの範囲のアミノ末端、及び／または、カルボキシル末端での融合、ならびに、１つ以上のアミノ酸残基の配列内挿入がある。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体がある。抗体分子のその他の挿入バリアントとして、（例えば、ＡＤＥＰＴに関しては）抗体のＮ－またはＣ－末端、または、当該抗体の血清半減期を長くするポリペプチドへの融合がある。
抗体の適切な立体構造の維持に関与しないシステイン残基も、一般的に、セリンで置換することができ、分子の酸化安定性を改善し、そして、異常な架橋を阻止することができる。逆に、システイン結合（複数可）を抗体に付加すると、その安定性を改善することができる（特に、当該抗体が、Ｆｖフラグメントなどの抗体フラグメントである場合）。
（ｉｉ）グリコシル化バリアント
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体を改変して、当該抗体がグリコシル化する程度を増大または抑制する。抗体に対するグリコシル化部位の追加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位を、生成または除去するように当該アミノ酸配列を改変することで好都合に達成し得る。
抗体のグリコシル化は、一般的に、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ－結合とは、アスパラギン残基の側鎖に対する炭水化物部分の付着のことを指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリン、及び、アスパラギン－Ｘ－スレオニンがあり、式中、Ｘは、プロリン以外のあらゆるアミノ酸であり、これらの配列は、アスパラギン側鎖に対する炭水化物部分の酵素的付着の認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作り出す。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、または、キシロースの１つが、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリン、または、スレオニンに対して付着することを指すが、５－ヒドロキシプロリン、または、５－ヒドロキシリジンも使用し得る。
抗体に対するグリコシル化部位の付加は、（Ｎ－結合グリコシル化部位に関する）上記したトリペプチド配列の１つ以上を含むようにアミノ酸配列を改変することを、好都合に達成する。また、当該改変は、（Ｏ－結合型グリコシル化部位に関しては）当初の抗体の配列に対して、１つ以上のセリン、または、スレオニン残基を追加または置換しても達成し得る。
当該抗体が、Ｆｃ領域を含む場合、そこに付着した炭水化物を改変し得る。哺乳動物細胞が生成するネイティブ抗体は、一般的に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＫａｂａｔ付番法でのＡｓｎ２９７に対するＮ結合で一般的に付着している分岐した二分岐オリゴ糖を含む。このオリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及び、シアル酸、ならびに、二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含み得る。一部の実施形態では、本開示の抗体でのオリゴ糖の修飾を、特定の改善した特性を有する抗体変異体を作り出すために行い得る。
ある実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的に、または、間接的に）付着したフコースを欠いた炭水化物構造を有する抗体変異体を提供する。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号、及び、第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フチコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例として：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）がある。脱フコシル化抗体を生産することができる細胞株の例として、タンパク質フコシル化を欠損したＬｅｄ ３ ＣＨＯ細胞がある（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；ＵＳ２００３／０１５７１０８）、及び、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、及び、Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０－６８８（２００６）を参照されたい）がある。
（ｉｉｉ）修飾した定常領域
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃとは、抗体Ｆｃアイソタイプ、及び／または、修飾である。一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃアイソタイプ、及び／または、修飾は、Ｆｃガンマ受容体に対して結合することができる。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該修飾した抗体Ｆｃは、ＩｇＧ１修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換を、そのアミノ酸位置をＥＵ付番法で定めている、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ Ｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ２３：４０３－４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，６５９１－６６０４）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９２：１１９８０－１１９８４；Ａｌｅｇｒｅｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１；Ｘｕ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５－１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ，（２００８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ２００８，１０５：２０１６７－２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択する。
あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＮ２９７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＤ２６５Ａ、及び、Ｎ２９７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＮ２９７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＫ３２２Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＮ２９７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ３３１Ｓ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＤ２７０Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、及び、Ｌ２３５Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、及び、Ｇ２３７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｇ２３７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異の（すべてを含む）１つ以上を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での１つ以上のＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＮ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ変異（Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ）を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法によるＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、及び、Ｌ２３５Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ１の定常重鎖１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を、ＣＨ１で置換すること、及び、ＩｇＧ２のヒンジ領域（ＥＵ付番法によるＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２３０）を、カッパ軽鎖で置換することを含む。
あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、２つ以上のアミノ酸置換を含まないＦｃ領域を有する対応する抗体と比較して、補体を活性化せずに、抗体クラスター形成を高める２つ以上のアミノ酸置換を含む。したがって、あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、Ｆｃ領域を含む抗体であり、当該抗体は、位置Ｅ４３０Ｇでのアミノ酸置換、及び、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及び、これらのあらゆる組み合わせから選択した残基位置でのＦｃ領域における１つ以上のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ａ３３０Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。
あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、本明細書では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃをさらに含み、かつ、補体の活性化を回避するために、ＥＵ付番規定でのＡ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０３：４００５－４０１０（２００６））、または、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／または、Ｐ３３１Ｓ変異の１つ以上（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０５：２０１６７－２０１７２（２００８））と組み合わせ得る。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＡ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／または、Ｐ３３１Ｓの１つ以上をさらに含み得る。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番でのＥ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び／または、Ｓ４４０Ｗの１つ以上をさらに含み得る。
本開示のその他の態様は、修飾した定常領域（すなわち、Ｆｃ領域）を有する抗体に関する。ＦｃｇＲ受容体に対する結合に依存して標的化受容体を活性化させる抗体を、ＦｃｇＲ結合を解消するように遺伝子操作すると、そのアゴニスト活性を喪失し得る（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １９：１０１－１１３（２０１１）；Ａｒｍｏｕｒ ａｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）；及び、Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）を参照されたい）。したがって、当該抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ（ＣＨ１、及び、ヒンジ領域）由来のＦｃドメイン、または、阻害性ＦｃｇＲＩＩＢｒ受容体、または、その変異体を優先的に結合することができる別のタイプのＦｃドメインを有していれば、適正なエピトープ特異性を有する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、最小限の副作用で、標的抗原を活性化できると考えられる。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該修飾抗体Ｆｃは、ＩｇＧ２修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換を、ＥＵ付番規定でのＶ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３（１９９４）；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６（２０００））；Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６８：５６３－５７１（１９９９））；Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：２６１３－２６２４（１９９９）；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００）；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈｅａｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００））、Ｃ２１９Ｓ、及び／または、Ｃ２２０Ｓ（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７，１３８－１４８（２０１５））；Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６－３９３３（２００８））；及び、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択する。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｖ２３４Ａ、及び、Ｇ２３７Ａでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ２１９Ｓ、または、Ｃ２２０Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ１２７Ｓアミノ酸置換を含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７、１３８－１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．ＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）；及び、ＷＯ２００８／０７９２４６）。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）；Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）；及び、ＷＯ２００８／０７９２４６）。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ２１９Ｓアミノ酸置換を含む。あらゆるＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）と、ヒンジ領域とを含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５））。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの特定の実施形態では、当該ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１、及び、ヒンジ領域は、ＥＵ付番法での１１８～２３０のアミノ酸配列を含む。あらゆるＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃ領域は、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、または、その両方、及び／または、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含む。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び、Ｓ４４０Ｗに１つ以上のアミノ酸置換をさらに含む。あらゆるＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓをさらに含み得る。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃは、ＩｇＧ２アミノ酸１１８～２６０、及び、ＩｇＧ４アミノ酸２６１～４４７を含む。あらゆるＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓに１つ以上のアミノ酸置換を含む。
あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、または、Ｐ３３１Ｓ；及び、それらのあらゆる組み合わせから選択した１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含む。
あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの特定の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＣ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及びそれらのあらゆる組み合わせから選択する残基位置に１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＡ３３０Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ１２７Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及びＳ４４０Ｙでのアミノ酸置換を含む。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該修飾抗体Ｆｃは、ＩｇＧ４修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換は、ＥＵ付番規定でのＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２９Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：１９２５－１９３３（２０００））、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択する。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及び、Ｅ３１８Ａをさらに含み得る。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２２８Ｐ、及び、Ｌ２３５Ｅをさらに含み得る。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆをさらに含み得る。
あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２２８Ｐ変異（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５－１０８（１９９３））、及び／または、（Ｐｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８７（２９）：２４５２５－３３（２０１２））に記載されている１つ以上の変異と組み合わせて、抗体安定性を高め得る。
あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。
あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３５Ｅを含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２２８Ｐ変異を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆ変異を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの特定の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＣ１２７Ｓ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択した残基位置に１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０にアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ１２７Ｓにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｓ４４０Ｙにアミノ酸置換を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
一部の実施形態では、抗体は、Ｃ末端リジンを持たないヒトＩｇＧ１重鎖を有する。一部の実施形態では、抗体は、Ｐ３３１Ｓ変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖を有する。一部の実施形態では、抗体は、Ｐ３３１Ｓ変異を有し、Ｃ末端リジンを持たないヒトＩｇＧ１重鎖を有する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ変異（Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ）を有するヒトＩｇＧ１重鎖を有する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ変異を有し、Ｃ末端リジンを持たないヒトＩｇＧ１重鎖を有する。一部の実施形態では、抗体は、Ｋ３２２Ａ変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖を有する。一部の実施形態では、抗体は、Ｋ３２２Ａ変異を有し、Ｃ末端リジンを持たないヒトＩｇＧ１重鎖を有する。前出の実施形態では、変異を、ＥＵ付番法に従って示す。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３７のアミノ酸配列を含む重鎖アミノを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３４０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３４１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３４２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３４３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２９のアミノ酸配列を含む重鎖アミノを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２１のアミノ酸配列を含む重鎖アミノを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
（８）その他の抗体修飾
あらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、誘導体である。用語「誘導体」とは、アミノ酸（または、核酸）の挿入、欠失、または、置換以外の化学修飾を含む分子のことを指す。特定の実施形態では、誘導体は、ポリマー、脂質、または、その他の有機もしくは無機部分を有する化学結合などであるが、これらに限定されない共有結合修飾を含む。特定の実施形態では、化学修飾した抗原結合タンパク質は、化学修飾を受けていない抗原結合タンパク質よりも循環半減期を長くすることができる。特定の実施形態では、化学修飾した抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織、及び／または、臓器に対する標的化能力を改善することができる。一部の実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、または、ポリプロピレングリコールなどであるが、これらに限定されない１つ以上の水溶性ポリマー付着を含むように共有結合的に修飾する。例えば、米国特許第４６４０８３５号、第４４９６６８９号、第４３０１１４４号、第４６７０４１７号、第４７９１１９２号、及び、第４１７９３３７号を参照されたい。特定の実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質は、モノメトキシポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー、または、ランダムコポリマーのいずれか）、ポリ－（Ｎ－ビニルピロリドン）－ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、及び、ポリビニルアルコール、ならびに、そのようなポリマーの混合物などであるが、これらに限定されない１つ以上のポリマーを含む。
特定の実施形態では、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に修飾する。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーを、誘導体の１つ以上の特定の位置、例えば、アミノ末端に対して結合する。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１つ以上の側鎖に対してランダムに結合する。特定の実施形態では、ＰＥＧを、抗原結合タンパク質の治療能力を改善するために使用する。特定の実施形態では、ＰＥＧを、ヒト化抗体の治療能力を改善するために使用する。このような特定の方法は、例えば、米国特許第６１３３４２６号で論じられており、本明細書の一部を構成するものとして、同文献を、あらゆる目的のために援用する。
ペプチド類似体は、製薬業界では、テンプレートペプチドの特性に類似した特性を有する非ペプチド薬として一般的に使用されている。これらのタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」または「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と称されている。本明細書の一部を構成するものとして、あらゆる目的のために援用する、Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．ＤｒｕｇＲｅｓ．，１５：２９（１９８６）；及び、Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７）。このような化合物は、コンピューター化した分子モデリングを利用して、開発されることが多い。治療的に有用なペプチドと構造的に類似しているペプチド模倣物を使用して、類似の治療効果、または、予防効果を得ることができる。一般的に、ペプチド模倣物は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的特性、または、薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に似ているが、当該技術分野で周知の方法で：－ＣＨ２ＮＨ－、－ＣＨ２Ｓ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（シス、及び、トランス）、－ＣＯＣＨ２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、及び、－ＣＨ２ＳＯから選択する結合で任意に置換した１つ以上のペプチド結合を有する。特定の実施形態では、コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸を、同じタイプのＤ－アミノ酸（例えば、Ｌ－リジンの代わりにＤ－リジン）で体系的に置換すると、安定性が高まったペプチドを生成することができる。加えて、コンセンサス配列、または、実質的に同一のコンセンサス配列変異を含む固定化したペプチドは、当該技術分野で公知の方法（Ｒｉｚｏ ａｎｄ Ｇｉｅｒａｓｃｈ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６１：３８７（１９９２）、本明細書の一部を構成するものとして、あらゆる目的のために援用する）、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を加えることで、生成することができる。
薬物コンジュゲーションは、生物学的活性細胞毒性（抗がん）ペイロード、または、特定の腫瘍マーカーを特異的に標的とする抗体（例えば、理想的には、腫瘍細胞内、または、腫瘍細胞上にだけ認められるポリペプチド）に対する薬物のカップリングに関与する。抗体は、これらのタンパク質を体内で追跡し、そして、がん細胞の表面に付着する。当該抗体と標的タンパク質（抗原）との間の生化学的反応は、当該腫瘍細胞においてシグナルを発生させ、次いで、当該抗体を、細胞毒素とともに、吸収し、または、内部に取り込む。ＡＤＣを内部に取り込んだ後に、細胞毒性薬を放出して、がんを死滅させる。この標的作用により、理想的には、当該薬物の副作用が小さくなり、かつ、その他の化学療法剤よりも治療ウィンドウが広くなる。抗体をコンジュゲートする技術は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｊａｎｅ ｄｅ Ｌａｒｔｉｇｕｅ ＯｎｃＬｉｖｅ Ｊｕｌｙ ５，２０１２；ＡＤＣ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；及び、Ｄｕｃｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１（１）：５－１３（２０１０）を参照されたい。
ＩＩＩ．核酸、ベクター、及び、宿主細胞
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載の組換え方法、及び、組成物を使用して生産し得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離した核酸を提供する。かかる核酸は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／または、ＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、当該抗体の軽鎖、及び／または、重鎖）をコードし得る。一部の実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。一部の実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞も提供する。一部の実施形態では、当該宿主細胞は、（１）当該抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び、当該抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または、（２）当該抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び、当該抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、形質導入している）。一部の実施形態では、当該宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または、リンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。また、本開示の宿主細胞として、単離した細胞、インビトロで培養した細胞、及び、エクスビボで培養した細胞があるが、これらに限定されない。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を作り出す方法を提供する。一部の実施形態では、当該方法は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をコードする核酸を含有する本開示の宿主細胞を、当該抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。一部の実施形態では、当該抗体を、その後に、宿主細胞（または、宿主細胞培養培地）から回収する。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を組換え生産するために、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をコードする核酸を単離し、そして、宿主細胞でのさらなるクローニング、及び／または、発現のために、１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、当該抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に対して特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）、容易に単離を行い、そして、配列決定し得る。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、または、細胞表面で発現したそのフラグメント、または、ポリペプチド、本明細書に記載したポリペプチド（抗体を含む）のいずれかをコードする核酸配列を含有する好適なベクターとして、クローニングベクター、及び、発現ベクターがあるが、これらに限定されない。好適なクローニングベクターは、標準的技法に従って構築することができ、または、当該技術分野において入手可能な数多くのクローニングベクターから選択し得る。選択するクローニングベクターは、使用予定の宿主細胞に応じて変わり得るが、有用なクローニングベクターは、一般的に、自己複製能を有しており、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を有することができ、及び／または、当該ベクターを含むクローンの選択に用いることができるマーカーの遺伝子を保持し得る。好適な例として、プラスミド、及び、細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）、及び、その誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびに、ｐＳＡ３、及び、ｐＡＴ２８などのシャトルベクターがある。これらのクローニングベクター、及び、数多くのその他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及び、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの業者から入手可能である。
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞として、原核細胞または真核細胞がある。例えば、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、特に、グリコシル化、及びＦｃエフェクター機能を必要としない場合には、細菌において生産し得る。細菌での抗体フラグメント、及び、ポリペプチドの発現については、（例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号、及び、第５８４０５２３号。発現の後に、当該抗体を、可溶性画分での細菌細胞ペーストから単離し、そして、さらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物も、抗体をコードするベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、このようなものとして、グリコシル化経路を「ヒト化」して、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体を生産する真菌株及び酵母株がある（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）；及び、Ｌｉ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６））。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物、及び、脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例として、植物細胞、及び、昆虫細胞がある。昆虫細胞とともに、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションに使用することができる、数多くのバキュロウイルス株が同定されている。また、植物細胞培養物も、宿主として利用することができる（例えば、トランスジェニック植物で抗体を生産するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載している米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号、及び、第６４１７４２９号）。
また、脊椎動物細胞も、宿主として使用し得る。例えば、懸濁液で成長するように適合させた哺乳動物細胞株が有用である。有用な宿主哺乳動物細胞株のその他の例として、ＳＶ４０で形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）；ヒト胚性腎臓株（２９３細胞、または、例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されたＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ科腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞がある。その他の有用な宿主哺乳動物細胞株として、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））などのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびに、Ｙ０，ＮＳ０、及び、Ｓｐ２／０などの骨髄腫細胞株がある。抗体生産に好適な特定の宿主哺乳動物細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。
ＩＶ．医薬組成物／製剤
本明細書では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、及び、医薬として許容可能な担体を含む医薬組成物、及び／または、医薬製剤を提供する。
一部の実施形態では、医薬として許容可能な担体は、好ましくは、使用する用量、及び、濃度でレシピエントに対して無毒である。本明細書に記載の抗体は、固体、半固体、液体、または、気体の形態の調製物に製剤し得る。このような製剤の例として、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェア、及び、エアロゾル剤があるが、これらに限定されない。医薬として許容可能な担体は、所望の製剤に応じて、動物またはヒト投与のための医薬組成物を製剤するために一般的に使用するビヒクルである、医薬として許容可能な非毒性の希釈剤の担体を含み得る。特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解または放出の速度、吸着または浸透を改変、維持、または、保存するための製剤材料を含むことができる。
特定の実施形態では、医薬として許容可能な担体として、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、または、リジンなど）；抗菌剤；酸化防止剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または、亜硫酸水素ナトリウム）；緩衝剤（ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、または、その他の有機酸など）；増量剤（マンニトール、または、グリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン、または、ヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリンなど）；増量剤；単糖類；二糖類；及び、その他の炭水化物（グルコース、マンノース、または、デキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または、免疫グロブリンなど）；着色剤、矯味矯臭剤、及び、希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩を形成する対イオン（ナトリウムなど）；防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または、過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコール、または、ポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトール、または、ソルビトールなど）；懸濁剤；界面活性剤、または、湿潤剤（プルロニック（登録商標）、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパルなど）；安定性増強剤（スクロース、または、ソルビトールなど）；等張化増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトールソルビトールなど）；送達媒体；希釈剤；賦形剤、及び／または、医薬用アジュバントがあるが、これらに限定されない。様々な種類の投与に適した製剤のさらななる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ２２ｎｄ ｅｄ．（２０１３）に認められる。薬物送達法の簡潔な総説については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３（１９９０）を参照されたい。
非経口投与に好適な製剤として、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び、製剤を対象のレシピエントの血液と等張にする溶質を含むことができる水性及び非水性の等張性無菌注射液剤と、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び、防腐剤を含むことができる水性及び非水性の無菌懸濁剤とがある。
製剤を、脳または中枢神経系で保持し、そして、安定させるように最適化し得る。作用物質を頭蓋区画に投与すると、その作用物質が、その区画内に保持され、拡散せず、または、拡散しても血液脳関門を通過しないことが望ましい。安定化技法として、分子量の増大を達成するために、架橋、多量体化、または、ポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性タンパク質担体などの基への結合などがある。
保持を確実ならしめるためのその他の方策として、生分解性または生体侵食性インプラントへの本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の封じ込めがある。治療的活性物質の放出速度は、ポリマーマトリックスを介した輸送速度、及び、インプラントの生分解速度によって制御される。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プラーク、繊維、マイクロカプセルなどとし得るものであり、また、選択した挿入部位に適合するあらゆるサイズまたは形状とし得る。使用し得る生分解性ポリマー組成物は、分解したときにモノマーなど、生理学的に許容可能な分解生成物を生成する有機エステルまたはエーテルとし得る。無水物、アミド、オルトエステルなどを、単独で、または、その他のモノマーと組み合わせて使用し得る。これらのポリマーを、縮合ポリマーとし得る。これらのポリマーは、架橋したもの、または、未架橋のものとし得る。特に対象となるものは、ホモポリマーまたはコポリマーのいずれかであるヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー、それに、多糖である。対象となるポリエステルとして、Ｄ－乳酸、Ｌ－乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトン、及び、これらの組み合わせのポリマーがある。対象となる多糖として、アルギン酸カルシウム、及び、官能化セルロース、特に、非水溶性であり、分子量が約５ｋＤ～５００ｋＤであることを特徴とするカルボキシメチルセルロースエステルなどがある。生分解性ヒドロゲルも、本開示のインプラントに採用し得る。ヒドロゲルとは、一般的に、液体を吸収する能力を特徴とするコポリマー材料である。
Ｖ．治療用途
本明細書で開示したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、疾患及び障害を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを治療するために使用し得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び認知障害を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれらを治療する上で有効である。
疾患標的としてのＭＳ４Ａ４Ａ
ゲノムワイド関連研究は、ＭＳ４Ａファミリーの様々なメンバーが、アルツハイマー病に関連していることを確認している。これらは、ＭＳ４Ａ２、ＭＳ４Ａ３、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＭＳ４Ａ４Ｅ、ＭＳ４Ａ６Ａ、及び、ＭＳ４Ａ６Ｅである。関連するＳＮＰは、ＭＳ４Ａ６Ａの３’ＵＴＲ（ｒｓ６１０９３２）、及び、ＭＳ４Ａ４ＥとＭＳ４Ａ６Ａとの間の遺伝子間領域（ｒｓ６７０１３９）で認められる。ＭＳ４Ａ遺伝子クラスターの３つのＳＮＰは、遅発性アルツハイマー病のリスクの高まりと関連している。これらには、ＭＳ４Ａ４Ａのｒｓ４９３８９３３、ＭＳ４Ａ４Ｅのｒｓ６７０１３９、及び、ＭＳ４Ａ６Ａのｒｓ６１０９３２などがある（Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４３：４２９－４３５；Ｎａｊ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４３：４３６－４４１；Ａｎｔｕｎｅｚ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３、ａｒｔｉｃｌｅ ３３）。加えて、ＭＳ４Ａ４Ａ遺伝子座のＳＮＰ（ｒｓ２３０４９３３、及び、ｒｓ２３０４９３５）は、ＭＳ４Ａ４Ａのレベルが高くまること、また、遅発性アルツハイマー病（ＬＯＡＤ）などのアルツハイマー病のリスクが高くなることと関連していた（Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７９：２２１－２２８）。
本明細書で提供する方法は、神経変性疾患、障害、または、病態の予防、そのリスクの抑制、またはそれを有する個体の治療における用途を見出す。一部の実施形態では、本開示は、神経変性障害を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本開示は、アルツハイマー病を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本開示は、遅発性アルツハイマー病を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本開示は、軽度認知機能障害を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａの過剰発現または活性の増大に関連する疾患、障害、または、病態を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本開示は、ＣＳＦ１Ｒ欠損疾患または障害を予防する、そのリスクを抑制する、または、それを有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ欠損疾患または障害は、軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症性白質脳症（ＡＬＳＰ）またはスフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）である。
本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、軽度認知機能障害、血管性認知症、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の損傷、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落などであるが、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択する疾患、障害、または、損傷を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法であって、当該個体に対して、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の治療有効量を投与することを含む、当該方法に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の損傷、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落などであるが、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択する疾患、障害、または、損傷の予防、そのリスクの抑制、またはそれを有する個体の治療における使用のための前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。本開示のその他の態様は、転移の予防または抑制のために使用するための前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。本開示のその他の態様は、がんの予防、そのリスクの抑制、またはそれを有する個体の治療に使用するための前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。
本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、軽度認知機能障害、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の損傷、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落などであるが、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択する疾患、障害、または、損傷を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療するための医薬の製造における、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の使用に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、軽度認知機能障害、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択する疾患、障害、または、損傷を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法に関に関するものであり、当該方法は、個体に対して、前出の実施形態のいずれか治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、軽度認知機能障害、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択する疾患、障害、または、損傷の予防、そのリスクの抑制、またはそれを有する個体の治療のために使用する前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択する疾患、障害、または、損傷を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する医薬の製造における、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の使用に関する。
一部の実施形態では、対象または個体は、哺乳動物である。哺乳動物として、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及び、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、そして、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、齧歯類（例えば、マウス、及び、ラット）があるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、当該対象または個体は、ヒトである。
本明細書で提供する抗体（及び、あらゆるさらなる治療薬）を、非経口、肺内、鼻腔内、病巣内投与、脳脊髄内、頭蓋内、髄腔内、滑膜内、髄腔内、経口、局所、または、吸入経路などのあらゆる適切な手段で投与することができる。非経口注入として、ボーラスとしての筋肉内、静脈内投与、または、一定期間にわたる持続注入、動脈内、関節内、腹腔内、または、皮下投与がある。一部の実施形態では、当該投与は、静脈内投与である。一部の実施形態では、当該投与を、皮下にする。投与時間の長短をも加味して、投与は、適切な経路、例えば、静脈内注射または皮下注射などの注射で実施できる。本明細書では、単回投与、または、様々な時点に及ぶ複数回投与、ボーラス投与、及び、パルス注入などであるが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールを企図している。
本明細書で提供する抗体は、優れた医療行為と一致する方法で、製剤、投薬、及び、投与する。この関連で考慮すべき要素として、治療する特定の障害、治療を受ける特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、作用物質の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び、開業医に公知のその他の要素がある。当該抗体は、必須ではないが、問題の障害の予防または治療のために現在利用されている１つ以上の作用物質を用いて、任意に製剤する。そのようなその他の作用物質の有効量は、製剤に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び、先述した考察でのその他の要素によって定まる。これらは、一般的には、本明細書に記載したのと同じ用量、及び、投与経路で、または、本明細書に記載した用量の約１～９９％、または、あらゆる用量で、かつ、経験的／臨床的に適切であると決定したあらゆる経路で使用する。
疾患の予防または治療のための（単独で、または、１つ以上のその他のさらなる治療剤と組み合わせて使用する場合の）本開示の抗体の適切な用量は、治療する疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度と経過、当該抗体を予防または治療のいずれの目的で投与するのかの区別、従前の治療、患者の病歴と抗体に対する反応、及び、主治医の裁量によって定まる。当該抗体を、一度に、または、一連の治療において、適切に患者に対して投与する。
疾患の種類、及び、重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの抗体を、例えば、１回以上の別々の投与、または、持続注入のいずれかで、当該患者に対して投与する最初の候補用量とすることができる。上記した要素に応じて、ある一般的な１日用量を、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲とし得る。病態に応じて、数日以上の反復投与に関しては、一般的に、治療は、疾患症状に所望の抑制が認められるまで続ける。当該抗体のある例示的な用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、そのような用量を、断続的に、例えば、毎週、または、３週間ごと（例えば、当該患者が、約２～約２０用量、または、例えば、約６用量の抗体の投与を受けるよう）に投与し得る。特定の実施形態では、投薬頻度は、１日３回、１日２回、１日１回、隔日１回、週１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、または、月１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、または、それ以上である。最初に高負荷用量を、続いて、１回以上の低用量を投与し得る。しかしながら、その他の投与計画も有用であり得る。この治療法の進行状況は、従来の技術とアッセイで容易にモニターできる。
ＶＩ．診断用途
あらゆる抗体の一部の実施形態では、本明細書で提供するあらゆる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、試料または個体でのＭＳ４Ａ４Ａの存在を検出する上で有用である。本明細書で使用する用語「検出する」とは、定量的または定性的検出を含む。本明細書では、個体、または、個体に由来する組織試料でのＭＳ４Ａ４Ａの検出など、診断目的で本開示の抗体を使用する方法を提供する。一部の実施形態では、当該個体は、ヒトである。
当該検出方法は、抗原に結合した抗体の定量が関与し得る。生物学的試料での抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ分析、免疫沈降、または、マイクロ陽電子放射断層撮影など、当該技術分野で公知のあらゆる方法で行い得る。特定の実施形態では、当該抗体を、例えば、１８Ｆで放射性標識し、次いで、マイクロ陽電子放出断層撮影分析を利用して検出する。また、抗体結合も、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピューター断層撮影、単一光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、及び、コンピューター断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲的手法で、患者において定量し得る。
ＶＩＩ．製造物
本明細書では、本明細書で説明した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を含む製造物（例えば、キット）を提供する。製造物は、本明細書に記載した抗体を含む１つ以上の容器を含み得る。容器は、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封したＭｙｌａｒ、または、プラスチックバッグ）などであるが、これらに限定されない、あらゆる適切な包装とし得る。これらの容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）、または、サブユニット用量とし得る。
一部の実施形態では、これらのキットは、第２の作用物質をさらに含み得る。一部の実施形態では、当該第２の作用物質は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及び、デキストロース溶液などであるが、これらに限定されない、医薬として許容可能な緩衝剤または希釈剤である。一部の実施形態では、当該第２の作用物質は、医薬として活性な作用物質である。
あらゆる製造物の一部の実施形態では、当該製造物は、本開示の方法に従って使用するための指示書をさらに含む。一般的に、当該指示書は、意図した治療のための用量、投薬スケジュール、及び、投与経路に関する情報を含む。一部の実施形態では、これらの指示書は、本開示のあらゆる方法に従って、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、認知障害または認識機能障害、軽度認知機能障害、血管性認知症、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の損傷、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落などであるが、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状から選択する疾患、障害、または、損傷を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療するための、本開示の単離した抗体（例えば、本明細書で説明した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体）の投与であって、当該個体に対して、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の治療有効量を投与することを含む、当該投与に関する説明を含む。
一部の実施形態では、当該指示書は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、及び、第２の作用物質（例えば、医薬として活性な第２の作用物質）の使用に関する説明を含む。
以下の実施例を参照することで、本開示の理解は十分に深まる。しかしながら、それらを、本開示の範囲を限定するものとして解釈すべきではない。本開示全体でのすべての引用を、本明細書の一部を構成するものとして、明示的に援用する。
実施例１：マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａマウス抗体のヒト化
本実施例の目的は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１６１５６号で開示されている特定の親マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のヒト化バリアントの生成であった。
親マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２は：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＴＨＰＧＨＧＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＫＡＴＬＳＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＮＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＥＥＶＹＹＧＦＲＳＹＷＹＦＤＶＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６４）
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＶＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＱＧＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＭＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣＱＱＳＫＥＶＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６５）
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
親マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ４Ａ－１８は：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＴＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＮＩＮＰＴＮＧＧＴＮＹＮＥＲＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＡＹＹＹＧＳＳＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６６）
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦＭＳＴＴＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡＷＳＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＴＮＭＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＴＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６７）
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
親マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１は：
ＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＹＧＬＳＷＶＫＱＴＰＧＫＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＮＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＴＹＬＲＩＮＮＬＫＮＤＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＬＶＤＹＷＧＱＧＴＰＬＴＶＳＳ（配列番号１６８）
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
ＤＶＶＭＴＱＴＰＦＴＬＳＶＴＩＧＱＳＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＧＫＴＹＬＳＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＩＤＦＨＱＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６９）
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
親マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２５は：
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＦＳＬＲＴＳＤＭＧＶＧＷＶＲＱＰＳＧＥＧＬＥＷＬＡＤＩＷＷＤＤＮＫＹＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＳＮＱＶＦＬＫＩＴＳＶＤＴＡＤＴＡＴＹＹＣＡＲＲＡＮＹＧＮＬＦＤＹＷＧＱＧＴＡＶＴＶＳＳ（配列番号１７０）
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
ＤＩＶＭＴＱＳＬＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＲＳＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＶＬＩＹＷＡＳＮＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＬＱＨＷＮＹＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１７１）
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
非ヒト抗体をヒト化する１つの方法は、非ヒト（例えば、マウス）抗体由来のＣＤＲを、ヒト抗体アクセプターフレームワークに移植することである。そのようなＣＤＲ移植を行うと、そのフレームワークの変動に起因して、その標的に対するヒト化抗体の親和性の減弱または完全な喪失を招き得る。結果として、ヒトフレームワークでの特定のアミノ酸残基を、マウス抗体フレームワークの対応する位置のアミノ酸残基で置換（逆変異）して、低下または喪失した親和性を回復させる必要があり得る。したがって、選択したヒト抗体生殖細胞系列アクセプターフレームワークの関連で置換するアミノ酸残基は、ヒト化抗体が機能及びパラトープを実質的に保持しておくように決定しなければならない。加えて、良好な製造可能性及び下流発達のための、熱安定性及び溶解性の保持または改善が望まれる。
したがって、ＭＯＥ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）のＢｉｏＭＯＥモジュールを使用して、構造ベースの抗体モデリングを、マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａモノクローナル抗体４Ａ－２０２、４Ａ－１８、４Ａ－２１、及び４Ａ－２５をヒト化するプロセスに適用した。簡潔に説明すると、ヒト化するマウスモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を、ＩＭＧＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）から取得したヒトＶＬ、ＶＨ、ＬＪ、ＨＪ機能性生殖細胞系列アミノ酸配列と比較した。偽遺伝子とＯＲＦは分析から除外した。１つのマウスモノクローナル抗体（クエリー）ごとに、最も類似した５つのＶＬと、最も類似した５つのＶＨ生殖細胞系列アミノ酸配列を選択し、そして、最も類似したＶＪ及びＨＪ遺伝子を組み合わせると、２５個のヒト化アミノ酸配列が生成された。ヒトのフレームワークに移植するＣＤＲは、ＡｂＭの定義（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ。Ｕｋ／ａｂｓ／＃ｃｄｒｄｅｆ）に従って定義した。
このクエリーと、２５個のヒト化アミノ酸配列を使用して、ＢｉｏＭＯＥモジュールまたはＭＯＥのＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｄｅｌｅｒモジュール（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）を利用して、Ｆｖ相同性モデルを作成した。ＡＭＢＥＲ１０：ＥＨＴ力場分析は、抗体相同性モデリングプロセスを介したエネルギー最小化のために使用した。得たＦｖ相同性モデルに基づいて、ＶＬとＶＨとの間の相互作用エネルギー、座標をベースとした等電点（３Ｄｐｉ）、疎水性パッチ、及び帯電表面積などの分子記述子を、ＭＯＥが提供するスコアリングメトリクスによって計算、分析、及び選別した。これらの分子記述子を利用して、タンパク質発現、精製、結合親和性研究、及び機能アッセイなどの下流の実験手順に向けてヒト化モノクローナル抗体に優先順位を付けた。
ＭＯＥのＢｉｏＭＯＥモジュールは、逆変異の可能性のある残基を視覚化及び分類するためのツールであるＭｕｔａｔｉｏｎ Ｓｉｔｅ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓを提供する。これに関連して、逆変異を、ヒト化したアミノ酸配列を置き換える当初のクエリーアミノ酸配列に戻すアミノ酸置換として定義する。このツールを使用して、当初のクエリー（リファレンス）を、３Ｄ Ｆｖ相同性モデルの１次アミノ酸配列と３Ｄ構造の両方について選択したヒト化バリアントと個別に比較した。
リファレンス（すなわち、親）抗体とヒト化バリアントとの間の変化を、アミノ酸タイプの差異、ＣＤＲ残基との相互作用ポテンシャル、ＶＬ／ＶＨペアリングについての影響ポテンシャル、ならびにＣＤＲの内部及び近傍での疎水性及び荷電表面積の潜在的な変化に基づいて分類した。
有意な電荷の差異を有する、または強いＨ結合相互作用を含むＣＤＲまたはＶＬ／ＶＨ界面の近傍での変異を個別に評価し、そして、有意に攪乱を示す変異を、当初のクエリー残基に戻した。その結果、ヒト化アミノ酸配列は、最大で５つの逆変異を含み得る。可変重鎖及び可変軽鎖クエリーマウスモノクローナル抗体（マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２、マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８、マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１、及びマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２５）、ならびに逆変異を有する、または有していないヒト化モノクローナル抗体のアミノ酸配列を、以下の表１～４に示す。表１～４では、ＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔ）に、下線を付けている。
Figure 2022542964000003
Figure 2022542964000004
Figure 2022542964000005
Figure 2022542964000006
Figure 2022542964000007
Figure 2022542964000008
Figure 2022542964000009
Figure 2022542964000010
Figure 2022542964000011
Figure 2022542964000012
Figure 2022542964000013
Figure 2022542964000014
Figure 2022542964000015
Figure 2022542964000016
Figure 2022542964000017
Figure 2022542964000018
Figure 2022542964000019
Figure 2022542964000020
Figure 2022542964000021
Figure 2022542964000022
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関して、ＫａｂａｔによるＣＤＲ配列を、以下の表５～８に提供する。
Figure 2022542964000023
Figure 2022542964000024
Figure 2022542964000025
Figure 2022542964000026
Figure 2022542964000027
Figure 2022542964000028
Figure 2022542964000029
Figure 2022542964000030
Figure 2022542964000031
Figure 2022542964000032
Figure 2022542964000033
Figure 2022542964000034
Figure 2022542964000035
実施例２：組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドの調製
ヒトＭＳ４Ａ４Ａの一次アミノ酸配列（配列番号１）を分析して、その二次及び三次構造に関する情報を提供した。ヒトＭＳ４Ａ４Ａタンパク質には４つの膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）があり、それぞれのＴＭＤは、２１個のアミノ酸で構成されている。アミノ酸組成、残基数、及び脂質二重層の厚みから考えて、ＭＳ４Ａ４Ａは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＭＤ１とＴＭＤ２、及びＴＭＤ３とＴＭＤ４のそれぞれを接続する２つの余分な細胞ループ（ＥＣＬ）を備えた４ヘリックスバンドル（４ＨＢ）を含むものと予測される（図１を参照されたい）。図１は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの一次アミノ酸配列を示しており。細胞内ドメインをイタリック体で記載しており、膜貫通ドメインには下線を付けており、また、２つの細胞外ループは、太字のイタリック体で記載している。
可溶性４ＨＢスキャホールドタンパク質（これらは、ＭＳ４Ａ４Ａの形状と構成を模倣すると考えられている）の２つのテンプレート構造を、ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｒｃｓｂ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／）を使用して識別した。これらのタンパク質スキャホールドのＰＤＢ＿ＩＤは、１Ｐ６８と１Ｍ６Ｔである。図２Ａ、図２Ｂ、及び図２Ｃは、２つの可溶性４ヘリックスバンドルスキャホールド（ＰＤＢ＿ＩＤ：１Ｐ６８及びＰＤＢ＿ＩＤ：１Ｍ６Ｔ）の構造と一次アミノ酸配列を示す。図２Ａでは、膜貫通ドメインは、螺旋状の構造になっている；図２Ｂ及び図２Ｃでは、膜貫通ドメインは、１Ｐ６８及び１Ｍ６Ｔの対応するアミノ酸配列において下線を付けている。
ヒトＭＳ４Ａ４Ａの２つのＥＣＬのアミノ酸配列を、１Ｐ６８に組換え的に配置して、ポリペプチドＪＳ１及びポリペプチドＪＳ４（ポリペプチドＪＳ１のネガティブコントロール）をもたらし、また、１Ｍ６Ｔに配置して、ポリペプチドＪＳ５、ポリペプチドＪＳ６；及び、ポリペプチドＪＳ１０（ポリペプチドＪＳ５及びポリペプチドＪＳ６のネガティブコントロールとして機能する）をもたらした。（図３を参照されたい。）図３Ａは、ポリペプチドＪＳ１、ポリペプチドＪＳ５、及びポリペプチドＪＳ６のアミノ酸配列を示す。図３Ｂは、ネガティブコントロールポリペプチドＪＳ４及びネガティブコントロールポリペプチドＪＳ１０のアミノ酸配列を示す。これらのタンパク質／ポリペプチドスキャホールドをコードする核酸を、それぞれ、３’ｈｉｓタグとＡｖｉタグを備えたｐｃＤＮＡ３．４発現ベクターに挿入した。得たクローンをＥｘｐｉ２９３細胞で発現させ、そして、製造業者のプロトコルを使用して、Ｎｉ－ＮＴＡアガロース（ＱＩＡＧＥＮカタログ番号３０２３０）で精製した。抗体結合の特徴決定のための可溶性試薬として使用するためのＭＳ４Ａ４Ａの２つのＥＣＬの構造と機能を模倣する可溶性タンパク質を得るために、これらの組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチド（別名、ループグラフト抗原）を製造した。
実施例３：ペプチド結合による抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のエピトープ決定
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１のエピトープ結合の特徴を、次のようにして決定した。まず、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ（配列番号１）の細胞外ループ（ＥＣＬ）に由来する重複ペプチドのパネルを、ＪＰＴペプチド（Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で合成した。これらのペプチドは、１５アミノ酸長であり、それぞれに、２個のアミノ酸を補った。これらのペプチドを、Ｎ末端でビオチン化した。ペプチド４Ａ．１～４Ａ．４は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１と、その周辺領域に由来するものであった。ペプチド４Ａ．５～４Ａ．１２は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ２と、その周辺領域に由来するものであった。
当該ペプチドライブラリーを、Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（ＣＦＭ）を使用して、ストレプトアビジンでコーティングしたチップ（Ｘａｎｔｅｃ ＳＡＤ５０Ｍ，Ｄｕｓｓｅｌｄｏｒｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に印刷した。まず、このチップを、１００ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５、１００μＬ ＥＤＣ（最終濃度１３３ｍＭ）、１００μＬのＳ－ＮＨＳ（最終濃度３３．３ｍＭ）を用いて活性化した。当該ペプチドライブラリーを、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、及び、１μｇ／ｍｌマウスＩｇＧ－ビオチンを含むＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝剤（Ｔｅｋｎｏｖａカタログ番号Ｈ８０２２）で希釈した２５０ｎＭ／ペプチドで、チップに固定化した。固定化の後に、当該チップの表面を、１Ｍエタノールアミンで、ｐＨ８．５で、１０分間かけて不活性化した。ハイブリドーマ上清、及び、精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡを含むＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝剤で希釈し、そして、チップに注入した。再現性を確保するために、それぞれの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の重複測定を行った。それぞれのペプチド－抗体の組み合わせに対して結合の特徴決定を行い、それぞれの抗体が相互作用する線形ペプチド領域のマッピングを可能にする。
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１、及び、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２は、以下の表９において太字で示したように、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ２の領域に対応するペプチドに対して強固な結合を示した。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１は、ペプチド４Ａ．５～４Ａ．９に結合し、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５５～１７７に及ぶ。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２は、ペプチド４Ａ．６～４Ａ．９に結合し、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５７～１７７に及ぶ。これら２つの抗体の結合領域は、重複しているが同一ではなく、このことは、ヒトＭＳ４Ａ４ＡのＥＣＬ２内での異なる残基と相互作用することを示している。これらの２つの抗体のいずれも、上記した方法論を使用しても、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１に対する結合を示さなかった。
Figure 2022542964000036
実施例４：ヒトＭＳ４Ａ４Ａ細胞外ドメインに対応するペプチドに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体
抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマ上清（原体）、または、精製したｍＩｇＧ（５μｇ／ｍｌ）を、ＥＣＬ１（配列番号１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基８６～９８）、及び、ＥＣＬ２（配列番号１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５９～１７９）に対応するヒトＭＳ４Ａ４Ａペプチドに対する結合に関して、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して試験した。簡潔に説明すると、９６ウェルポリスチレンプレートを、２または１０μｇ／ｍｌの合成物不含ペプチド、または、ＢＳＡコンジュゲートペプチドを含むコーティング緩衝剤（０．０５Ｍ炭酸塩緩衝剤、ｐＨ９．６，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｃ３０４１）で、４℃で、一晩、コーティングした。次いで、コーティングしたプレートを、ＥＬＩＳＡ希釈剤（ＰＢＳ＋０．５％ ＢＳＡ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）で、１時間、ブロックし、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号２８３５２）の３×３００μＬで洗浄した後に、これらの抗体を、プレートに加えた（５０μｌ／ウェル）。３０分間インキュベーション（室温、震盪）した後に、これらのプレートを、ＰＢＳＴの３×３００μＬで洗浄した。二次抗マウスＨＲＰ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１１５－０３５－００３）を、ＥＬＩＳＡ希釈剤（５０μｌ／ウェル）で、１：１０００希釈で、そして、震盪しながら、室温で、３０分間、インキュベーションした。最後の洗浄セット（ＰＢＳＴで３×３００μＬ）の後に、５０μＬのＴＭＢ基質（ＢｉｏＦｘカタログ番号ＴＭＢＷ－１０００－０１）を加え、そして、５～１０分後に、５０μＬの反応停止液（ＢｉｏＦｘカタログ番号ＢＳＴＰ－１０００－０１）で反応を停止させた。反応停止させた反応ウェルを、ＧＥＮ５ ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙマイクロプレートリーダーで、６５０ｎｍの吸光度で検出した。
精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａマウス抗体、及び３つの市販のマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（５Ｃ１２、３Ｆ２、及び、４Ｈ２）を試験した。マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（４Ａ－２１、４Ａ－２５、４Ａ－２０２、及び、４Ａ－２１４）は、無関係のネガティブペプチドコントロールであるＢＳＡマウスＤＡＰ１２で認められたものと比較して、ｈｕＭＳ４Ａ４Ａ－ＥＬＣ２不含ペプチドに対して強力に結合した。３つの市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１、及びＥＣＬ２ペプチドに対する結合を示さなかった。
実施例５：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のエピトープ決定
ＭＳ４Ａ４Ａの一次アミノ酸配列は、その二次及び三次構造に関する重要な情報を提供する。当該ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、４回膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）を有しており、それぞれのＴＭＤは、２１個のアミノ酸から構成されている。一般的なＴＭＤは、厚さが約４０Åのホスホジエステル脂質二重層からなる。当該リン酸の頭部は、細胞外、または、細胞質スペースのいずれかで、親水性環境と相互作用する親水性層を作り出しており、また、当該脂質の尾部は、ＴＭＤの親油性残基と相互作用する内部脂質二重層を作り出す。当該ＴＭＤ脂質二重層の厚さは、約３２～３４Åである。アミノ酸組成、残基数、及び、脂質二重層の厚みから予測すると、ＭＳ４Ａ４Ａは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、それぞれ、ＴＭＤ１とＴＭＤ２、そして、ＴＭＤ３とＴＭＤ４とを接続している２つの余分な細胞ループ（ＥＣＬ）を有する４ヘリックスバンドル（４ＨＢ）を含むものと考えられる。４ヘリックスバンドルは、ヘリックス－脂質二重層相互作用と、ヘリックス－ヘリックス相互作用から得られる有意なエンタルピーゲインによって、膜内のＭＳ４Ａ４Ａを安定させる。
ＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬの主要なアミノ酸配列と組成は、エピトープと動的特性に関連する重要な特徴を示す。ＥＣＬ１は、１つのシステイン、１つのメチオニン、１つのアラニン、３つのセリン、１つのスレオニン、２つのアスパラギン、１つのチロシン、１つのプロリン、１つのイソロイシン、及び、唯一のグリシン残基（複数可）を含む、１３個のアミノ酸からなる。ＥＣＬ２は、２つのシステイン残基を含む２１個のアミノ酸で構成されており、それらは、３つのセリン、１つのスレオニン、１つのフェニルアラニン、３つのヒスチジン、１つのプロリン、３つのチロシン、４つのアスパラギン、１つのメチオニンの８種のアミノ酸と、２つだけのグリシン残基で分けられる。ＥＣＬ１及びＥＣＬ２には、グリシン残基はほとんどなく、幾つかの大きなベータ分岐アミノ酸残基と、プロリン残基が認められる。さらに、ＥＣＬ２は、構造内エントロピーをさらに減少させるループ内ジスルフィド結合を生成すると考えられる２つのシステイン残基を含む。その結果、ＥＣＬ１及びＥＣＬ２は、剛体タイプの内部運動で互いに相互作用する立体配座異性体の個数が大幅に減少する傾向がある。
Ｃ末端ＧＦＰタグを含むヒトＭＳ４Ａ４Ａ（ＮＭ＿０２４０２１）をコードする発現プラスミドを、Ｏｒｉｇｅｎｅ（カタログ番号ＲＧ２２３５５７）から購入し、そして、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ループ１（ＥＣＬ１）のコード領域に単一のアラニンスキャン変異を生成するためのテンプレートとして使用した（以下の表１０での４Ａ．Ａｌａ１－Ａｌａ１３；ＥＣＬ１に対応する配列番号１のＣ６７～Ｓ７９；ＣＭＡＳＮＴＹＧＳＮＰＩＳ；ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ループ２（ＥＣＬ２）のコード領域内（以下の表１０での４Ａ．Ａｌａ１４－Ａｌａ３４；ＥＣＬ２に対応する配列番号１のＳ１４０～Ｓ１６０；ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳ；及び、以下の表１１でのＥＣＬ２欠失変異（４Ａ．Ａｌａ３５（ＥＣＬ２での配列番号１のアミノ酸残基１５０～１５２の欠失）、及び、４Ａ．Ａｌａ３６（ＥＣＬ２での配列番号１のアミノ酸残基１４８～１５２の欠失））。これらの突然変異は、当該技術分野で標準的な重複ポリメラーゼ連鎖反応技術を使用して行った。それぞれのポリメラーゼ連鎖反応ポリ核酸フラグメントを精製し、そして、ＭｌｕＩとＡｓｉＳＩ制限部位を使用して、発現ベクターにサブクローニングした。
アラニンスキャニング技術を使用してエピトープ決定を行う前に、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞での上記した発現構築物の一時的トランスフェクションを使用して、以下のようにして、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の相対的ＥＣ５０を決定した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、６ウェルプレートに播種し、そして、一晩、増殖させた。翌日、製造業者のプロトコルに従って、Ｆｕｇｅｎｅ ＨＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、または、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、４：１の比率のＦｕｇｅｎｅとＤＮＡ、または３：１の比率のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅとＤＮＡで細胞をトランスフェクトした。トランスフェクションの約２４時間後に、トリプシン－ＥＤＴＡを使用して細胞を回収し、そして、ＦＡＣＳ染色のために処理した。
ＦＡＣＳ染色については、１５０，０００個の細胞を、９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに加え、次いで、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の滴定を、ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ ＦＢＳ）に対して加え、そして、氷上で、６０分間、インキュベーションした。プレートを遠心分離し（１，４００ｒｐｍ、３分間）、上清をデカントして、細胞を、２００μｌのＦＡＣＳ緩衝剤で３回洗浄した後に、それぞれを、遠心分離とデカントの工程に供した。抗体を、ｍｓＩｇＧ１、または、ｈｕＩｇＧ１キメラとして試験し、そして、ヤギ抗ヒトＰＥ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０４０－０９、１：２００）、または、ヤギ抗マウスＡＰＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５０８２６、１：１００）のいずれかを、氷上で、３０分間、ＦＡＣＳ緩衝剤に加えた。続いて、細胞を、２００μｌのＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、ｉＱｕｅサイトメーターで画像化した。蛍光強度の中央値（ＭＦＩ）を、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞を表すＧＦＰポジティブ集団で測定した。
最初に試験した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のうちの６つは、野生型（ＷＴ）ＭＳ４Ａ４Ａ－ＧＦＰを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞に結合する；このようなものとして、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８、４Ａ－２１、４Ａ－２０２、ならびに、公開されたマウスモノクローナル抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ｈ２（Ｋｅｒａｆａｓｔ）、５Ｃ１２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、３Ｆ２（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）がある。それぞれの抗体の滴定曲線を決定して、その後のエピトープマッピング研究に最適な抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体濃度を確立した。
エピトープマッピング実験については、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、異なるヒトＭＳ４Ａ４Ａ発現構築物（上記した通り、以下の表１０を参照されたい）でトランスフェクトし、そして、６つの異なる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体：４Ａ－２１、４Ａ－１８、４Ａ－２０２、４Ｈ２、５Ｃ１２、及び、３Ｆ５を使用して、抗体結合を測定した。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体結合は、野生型ヒトＭＳ４Ａ４Ａ発現構築物でトランスフェクトした細胞に対する結合でのＭＦＩの％として計算した。当該ＭＳ４Ａ４Ａポリペプチドでのアミノ酸変異が、抗体結合を、野生型ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合の２０％未満にまで低下させていれば、当該変異したアミノ酸は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合に必要な重要なアミノ酸と考えられる。当該ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の一部のアミノ酸変異が、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体結合を、（野生型ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合と比較して）５１％未満から２０％を超えるまで抑制していれば、そのようなアミノ酸を、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合に寄与するアミノ酸として定義した。
ＭＳ４Ａ４Ａの一部のアミノ酸は、ＭＳ４タイプのタンパク質でシステイン架橋を形成すると考えられている２つのシステイン、Ｃ１６５及びＣ１７４など、試験したすべての抗体の結合に影響を及ぼした。そのようなアミノ酸は、構造アミノ酸であると考えられた。
これらの実験の結果を、以下の表１０に示す。上記したように、Ａｌａ．１～Ａｌａ．１３とは、ＥＣＬ１でのＭＳ４Ａ４Ａ変異のことを指す；Ａｌａ．１４～Ａｌａ．３６とは、ＥＣＬ２でのＭＳ４Ａ４Ａ変異のことを指す。データは、野生型ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合と比較して、様々なアラニンスキャン変異に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の％結合として示している。これらのマッピング実験は、独立して、２回繰り返しており、非常に類似した結果が得られた。１つの差異は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１及び４Ａ－１８が、２つの濃度で、ｈｕＩｇＧ１として１度目の試験を、そして、ｍｓＩｇＧ１として２度目の試験をしたことであった。以下の表１１は、これらの抗体のｍｓＩｇＧ１試験の結果を示している。その他のすべての抗体について、表１０は、両方の実験における平均抗体結合を示している。ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を示す数値の内、野生型ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合についての測定値の２０％未満のものを、以下の表１０では、太字で示している。
すべての変異は、約２２～３３％の同等のトランスフェクション効率を示した（データは示さず）。細胞内の平均抗体結合とＧＦＰレベルとの間に相関関係は認められず、このことは、ＧＦＰレベルが、ＭＳ４Ａ４Ａ細胞表面発現の予測因子として使用できないことを示唆している。
Figure 2022542964000037
Figure 2022542964000038
上記した結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ＭＳ４Ａ４Ａでの別個の線形エピトープ、及び／または、３Ｄ構造エピトープを認識することを示唆している。
これらの実験から得た抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体結合データに基づいて、ヒトＭＳ４Ａ４Ａでの次のループアミノ酸残基を、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質での構造アミノ酸とみなしたが、これは、それらのそれぞれを変異させると、試験した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体：Ｍ８７、Ｃ１６５、Ｙ１６７、Ｙ１６８、Ｃ１７４（ヒトＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に基づく；配列番号１）の結合に影響を及ぼしたためである。アミノ酸残基Ｃ１６５及びＣ１７４は、ＥＣＬ２にてループを形成するシステイン架橋を確立すると考えられた。このシステイン架橋がないと、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合せず、このことは、ＭＳ４Ａ４ＡのＥＣＬ２でのループ構造が、抗体結合に重要であることを示唆している。ループ構造が重要であるとのさらなる証拠は、これらの抗体の結合にも強く影響する２つのループ欠失変異体（Ａｌａ．３５、及び、Ａｌａ．３６）から得られる。
これらの結果は、アミノ酸残基Ｙ１６７及びＹ１６８が、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１、４Ａ－１８、４Ｈ２、５Ｃ１２、及び、３Ｆ２の結合に強く影響することをさらに示した。これらのアミノ酸残基は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２の結合には、あまり影響しなかった。加えて、ＥＣＬ１でのアミノ酸残基Ｐ９６、Ｉ９７、及び、Ｓ９８は、試験したすべての抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を、ある程度は抑制した。これらの結果は、これらの５つのアミノ酸残基のいずれかの変異が、抗体の認識と結合において重要な細胞外ドメインの構造を改変すること、あるいは、これらのアミノ酸残基が、列挙した６つの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のそれぞれの相互作用と結合において重要であることを示唆した。プロリンは、最も抑制を受けたアミノ酸残基であり、ポリペプチドの二次、及び、三次構造において重要である。例えば、プロリンは、アルファヘリックスやベータシートのものなど、通常の二次構造要素の中央で攪乱物質として機能する；しかしながら、通常、プロリンは、アルファヘリックスの最初のアミノ酸残基として、かつ、ベータシートの端において認められる。チロシン、イソロイシン、及び、セリン残基は、例えば、ファンデルワールス相互作用（複数可）、パイ－パイスタッキング、及び、パイ－フェイシアル水素結合相互作用、及び／または、水素結合など、複数の抗原抗体相互作用を提供する。したがって、チロシン、プロリン、イソロイシン、または、セリン残基のいずれかは、明確に定義した構造エピトープを作り出すことができる。これらの４つのアミノ酸残基の微妙な変化は、抗体の結合親和性を著しく損ないかねない。
ＭＳ４Ａ４Ａでのアミノ酸残基Ｍ８７Ａの変異は、試験したすべての抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を、大幅に抑制または解消した。ＥＣＬ１とＥＣＬ２は、明確に定義した堅牢な構造を使用しており、また、互いに相互作用し得るという予測に基づいて、Ｍ８７Ａ結合結果は、Ｍ８７の側鎖が、主鎖－側鎖、及び／または、主鎖－主鎖相互作用を介して、ファンデワールス接触と水素結合によって、ＥＣＬ１、及び／または、ＥＣＬ２の１つ以上のベータ分岐アミノ酸と相互作用できるので、Ｍ８７アミノ酸残基が、ＭＳ４Ａ４Ａの堅牢なループ構造を維持する上で最も重要な残基の１つであると考えられることを示した。
以下の表１１は、本明細書に開示した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の独特の結合アミノ酸残基を列挙している。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに対して結合するにあたって、ＥＣＬ２にＮ１６６を必要とする。このデータは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８及び５Ｃ１２が、ヒトＭＳ４Ａ４ＡのＥＣＬ１ならびにＥＣＬ２に結合することを示した。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２では、アミノ酸残基Ｙ１６４が、結合において多少なりとも寄与した。
３つの市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、すべてＰ１６３に結合するが、ここで開示し、かつ、この研究で試験した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、いずれも結合しなかった。ヒトＭＳ４Ａ４ＡのこのプロリンＰ１６３は、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａタンパク質では、アルギニンに置換されている。そのような知見は、このプロリンからアルギニンへの変化が、市販のＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合特性が示すように、カニクイザルの交差反応性、または、その欠如を決定する上で重要である、ことを示唆している。プロリンは、構造的に最も抑制を受けたアミノ酸残基であり、そして、（カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａでの）アルギニンは、生理的ｐＨで、正に帯電したアミノ酸である。ヒトとカニクイザルのＭＳ４Ａ４Ａにおけるプロリンとアルギニンの差異は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の立体配座に大きな影響を与え得るものであり、したがって、市販のＭＳ４Ａ４Ａ抗体との結合を妨げる。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８、４Ａ－２１、及び、４Ａ－２０２は、結合については、このアミノ酸に依存しておらず、したがって、カニクイザルタンパク質に対する結合には影響がなかったと考えられた。
まとめると、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１、４Ａ－１８、及び、４Ａ－２０２は、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のものとは異なるＭＳ４Ａ４Ａでのエピトープに結合した（下記の表１１）。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ｈ２及び３Ｆ２は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２のエピトープと大半が重複している同一のエピトープを示した。対照的に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８、４Ａ－２１、及び、４Ａ－２０２は、それぞれが、互いに相違しており、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体とは異なる独自のエピトープ結合特性を示した。結合特性でのこれらの差異を、表１０に示す。加えて、これらの結果は、試験した２つの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ヒトＭＳ４Ａ４Ａでの同一のエピトープに結合しないことを示した；しかしながら、一部の、または、すべての抗体で、アミノ酸結合残基（例えば、アミノ酸残基Ｙ１６７、及び、Ｙ１６８、Ｙ１６４、Ｎ１７０、Ｔ１７７）が共有されている。
Figure 2022542964000039
実施例６：組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、実施例２に記載したようにして、異なる組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドに対して結合するそれら抗体の能力について、次のようにして試験した。本開示のヒト化抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のＶＨ及びＶＬドメインをコードする核酸を、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン、またはヒトカッパ定常ドメインのいずれかを含むｐｃＤＮＡ３．４ベクターにクローニングした。ヒト化抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、Ｅｘｐｉ２９３細胞で発現し、そして、Ｍａｂ選択抗体精製樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号１７５１９９０２）によって、製造業者のプロトコルに従って精製した。ＥＬＩＳＡで実施して、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドに対する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を測定した。１μｇ／ｍｌのビオチン化抗原を、ストレプトアビジンでコーティングしたＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＰＩ１５１２０）で、１時間、プレインキュベーションした。プレートを３回洗浄した後に、抗体（１μｇ／ｍｌ、０．３３μｇ／ｍｌ、及び０．１１μｇ／ｍｌ抗体）を加えた。プレートを、室温で、１時間振とうしながらインキュベーションを行い、３回洗浄した後に、ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ヒトカッパ抗体の１／２５００希釈液を加えた（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ａ７１６４－１ＭＬ）。
図４は、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ１、ＪＳ４、ＪＳ５、ＪＳ６、及びＪＳ１０に対して結合する特定のヒト化抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のＥＬＩＳＡでの結合の結果を示す。図４に示したように、特定の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（４Ａ－１８．ｈＦｃ、４Ａ－２１．ｈＦｃ、４Ａ－２０２．ｈＦｃ、４Ａ－２２０．ｍＦｃ、４Ａ－２１４．ｍＦｃ、４Ａ－２０４．ｍＦｃ’ｈＦｃは、ヒトＦｃのことを指し；ｍＦｃは、マウスＦｃのことを指す））は、ＥＬＩＳＡで、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの２つのＥＣＬを含む組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ１、ＪＳ５、及びＪＳ６に対する結合を示した。本発明の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ネガティブコントロールポリペプチドであり、かつ、ＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ領域配列を含まない組換え可溶性ポリペプチドＪＳ４及びＪＳ１０には結合しなかった。２つの市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、５Ｃ１２及び４Ｈ２は、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドのいずれにも結合を示さなかった（図４を参照されたい）。図４において、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１４は、すでに国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１６１５６号に開示されており、また、
ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡＥＩＲＬＫＳＮＮＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＳＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＳＳＭＩＩＶＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１７９）
の重鎖可変領域アミノ酸配列と、
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＴＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＴＹＳＹＬＨＷＹＱＱＲＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＶＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＴＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＭＫ（配列番号１８０）
の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを有する。
図４に提示した結果は、表１２に示すデータから導き出した：
Figure 2022542964000040
図５は、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ１に対するマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１のヒト化バージョンのＥＬＩＳＡでの結合の結果を示す。これらの抗体は、１μｇ／ｍｌの濃度で使用した。図５に示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１のヒト化バージョンの多くは、この組換えポリペプチドに対して結合する能力を保持していた。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１の特定のヒト化バージョンでは、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ１に対する結合が低下したことが示された。
図５に提示した結果は、表１３に示すデータから導き出した：
Figure 2022542964000041
図６は、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ１に対するマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２のヒト化バージョンのＥＬＩＳＡでの結合の結果を示す。これらの抗体は、１μｇ／ｍｌの濃度で使用した。図６に示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２のヒト化バージョンは、この組換えポリペプチドに対して結合することができた。
図６に提示した結果は、表１４に示すデータから導き出した：
Figure 2022542964000042
マウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２、及びマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１の様々なヒト化バージョンを、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドに対して結合するそれら抗体の能力について、さらに試験した。ヒト化抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３３２、及びヒト化抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３０２は、妥当な結合を示しており、そして、以下のように、さらなる親和性の改善のために選択した。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３２２、及び抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３０２の６つのＣＤＲに対して、オーバーラップＰＣＲ法を使用して、無作為に変異を導入した。ビオチン化組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ５を、これらの抗体バリアントのファージディスプレイパニングに使用した。３ラウンドのパニングの後に、約１９０の変異型抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体バリアントを選択し、そして、ＴＧＩ細胞で発現させて、それらの溶解物を、ＥＬＩＳＡでスクリーニングした。２２個のヒト化抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１バリアントと、１５個のヒト化抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２バリアントを選択し、組換えにより完全ヒトＩｇＧに変換し、そして、Ｅｘｐｉ２９３細胞で発現させた。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，カタログ番号１７５１９９０２）によって、製造業者のプロトコルに示されるように精製した。続けて、ＥＬＩＳＡとフローサイトメトリー実験を反復した。
ヒト化した、及び親和性成熟した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、及び４Ａ－３１４は、ＥＬＩＳＡによって、様々な抗体濃度（１μｇ／ｍｌ、０．３３μｇ／ｍｌ、及び０．１１μｇ／ｍｌ）で、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ５に対する結合を示し（図７を参照されたい）、そして、さらなる機能分析のために選択した。
図７に提示した結果は、表１５に示すデータから導き出した：
Figure 2022542964000043
ヒト化した、及び親和性成熟した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３５１及び４Ａ－３７６（０．４μｇ／ｍｌ）は、ＥＬＩＳＡによって、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ５に対して良好な結合を示した（図８を参照されたい）。次いで、これらの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、ＣＤＲ－Ｌ１でのアミノ酸Ｄ２８にアミノ酸置換を行うためのテンプレートとして使用するために選択した；そのようなアミノ酸置換として、Ｄ２８Ｇ、Ｄ２８Ｅ、Ｄ２８Ｓ、Ｄ２８Ａ、及びＤ２８Ｑが含まれた。
図８に提示した結果は、表１６に示すデータから導き出した：
Figure 2022542964000044
これらのさらなる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体として、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、及び４Ａ－３８１が含まれ、そして、ＥＬＩＳＡによって、３つの異なる抗体濃度（１μｇ／ｍｌ、０．３３μｇ／ｍｌ、及び０．１１μｇ／ｍｌ）で、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ５に対するそれらの結合について試験した。これらの研究の結果を、図９に示す。図９に示したように、これらのさらなる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、組換えＭＳ４Ａ４Ａ可溶性ポリペプチドＪＳ５に対して結合したことを示した。
図９に提示した結果は、表１７に示すデータから導き出した：
Figure 2022542964000045
実施例７：ヒトＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現するＵ９３７細胞に対するヒト化した、及び親和性成熟した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のヒト化した、及び親和性成熟したバージョンを、次のようにして、ヒトＭＳ４Ａ４Ａを発現するＵ９３７細胞に対するそれらの結合について評価した。
試験した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ハイブリドーマ上清から精製したマウスＩｇＧ、またはＥｘｐｉ２９３細胞で組換え産生したヒトＩｇＧ１Ｆｃキメラのいずれかであった。細胞に対する親和性結合は、次のようにして決定した。簡潔に説明すると、細胞を回収し、洗浄し、そして、生死判別のためにＡｑｕａ Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄで標識した。ＰＢＳで洗浄した後に、２×１０∧４個の細胞を、９６ウェルＵ底プレートでウェルごとに分注し、そして、様々な濃度（１０μｇ／ｍＬから開始する３倍希釈）の精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を含む５０μＬのＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋１ｍＭ ＥＤＴＡ）とともにインキュベーションした。この一次インキュベーションを行った後に、上清を遠心分離で除去し、１５０μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、氷上で、適切な二次抗体とともに１５分間インキュベーションした。二次抗体のインキュベーションの後に、これらの細胞を、再び氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積が２００μＬであるＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行った。結合データを、蛍光強度の中央値（Ｍｅｄｉａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）（ＭＦＩ）として表した。
これらの結合実験の結果を、以下の表１８及び表１９に示す。表１８は、組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現するＵ９３７細胞に対する本開示の特定の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を示す。これらの実験は、５μｇ／ｍｌの濃度の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を使用して行っており、また、細胞結合に関しては、フローサイトメトリーでアッセイした。
Figure 2022542964000046
表１９は、組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現するＵ９３７細胞に対する本開示の特定の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を示す。これらの実験は、５μｇ／ｍｌの濃度の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を使用して行っており、また、細胞結合に関しては、フローサイトメトリーでアッセイした。このアッセイでは、二次抗体だけで染色した細胞のＭＦＩ値は、約２００であった。
Figure 2022542964000047
実施例８：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、初代ヒト骨髄細胞のＴＲＥＭ２タンパク質を調節する
ＭＳ４Ａ遺伝子座でのＳＮＰが、ヒトの可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）レベル、一般的には、ＴＲＥＭ２経路、そして、アルツハイマー病の感受性に対して影響を及ぼすことが報告されている。アルツハイマー病保護ＭＳ４Ａ４Ａ対立遺伝子は、脳脊髄液でのｓＴＲＥＭ２レベルの増大に関連している。これらの経路が合わさると、アルツハイマー病や、その他の神経変性疾患の予防において役割を果たし得る。加えて、ヒトマクロファージの培養物を、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理すると、ｓＴＲＥＭ２レベルが低下することが報告されている（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ．ａｌ．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ ２０１６、１３１：９２５－９３３）。マクロファージでのｓＴＲＥＭ２及び原形質膜／細胞表面ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）レベルを調節する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を調べるために、以下の研究を行った。
初代ヒトマクロファージを、９６ウェルプレートに播種し、そして、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のパネル（１０μｇ／ｍｌ）を含む完全ＲＰＭＩで処理した。４８時間のインキュベーションの後に、上清を回収し、そして、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）を使用して、ｓＴＲＥＭ２レベルを測定した。簡潔に説明すると、ＭＳＤプレート（カタログ番号ＬＩ５ＸＡ－３）のウェルを、オービタルシェーカーで、４℃で、５００ＲＰＭで、一晩、１μｇ／ｍｌの捕捉抗体とインキュベーションした。ウェルを洗浄した後に、オービタルシェーカーで、５００ＲＰＭで、２０℃で、１時間、結合緩衝剤（１％熱不活性化高品質ＢＳＡ）を含むＰＢＳ）でブロックした。標準（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｔｒｅｍ２ Ｆｃ １８２８－Ｔ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ））、及び、未知の試料を、適切な濃度で、結合緩衝剤で調製し、ウェルに加え、次いで、オービタルシェーカーで、５００ＲＰＭで、２０℃で、１時間、インキュベーションした。これらのウェルを洗浄した後に、オービタルシェーカーで、５００ＲＰＭで、２０℃で、１時間、１００ｎｇ／ｍｌの二次抗体（ビオチン化ヤギ抗ヒトＴＲＥＭ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＢＡＦ１８２８））とインキュベーションした。ウェルを洗浄し、次いで、０．２μｇ／ｍｌの検出試薬（Ｓｕｌｆｏ Ｔａｇ－Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ；ＭＳＤカタログ番号Ｒ３２ＡＤ）を含む結合緩衝剤でインキュベーションした。次いで、ウェルを洗浄し、１５０μｌの読取り緩衝剤（ｒｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ）（１×、ＭＳＤ）をそれぞれのウェルに加え、そして、それらのプレートを、Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒで読み取った。
これとは別に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した細胞（前出）を回収し、そして、フローサイトメトリーに供して、アロフィコシアニンまたは類似のフルオロフォアとコンジュゲートした抗ＴＲＥＭ２抗体（Ａｌｅｃｔｏｒ）を使用して、ｍＴＲＥＭ２レベルを決定した。
表２０に示すように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、様々なドナーから得た培養ヒト初代マクロファージの上清でのｓＴＲＥＭ２のレベルを引き上げた。本明細書に記載した結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ヒト初代マクロファージの上清でのｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げる、またはアップレギュレーションすることを示した。表２０で報告している数値は、１００に設定したアイソタイプコントロール抗体を使用して得た数値に関連するものである。
Figure 2022542964000048
以下の表２１に示すように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、様々なドナーから得た培養ヒト初代マクロファージの原形質膜／細胞表面ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）のレベルを引き上げた。これらの結果は、上記した表２０に示すように、これらの細胞の上清で認められたｓＴＲＥＭ２の対応する増大と一致していた。表２１で報告している数値は、１００に設定したアイソタイプコントロール抗体を使用して得た数値に関連するものである。
Figure 2022542964000049
これらのデータは、本発明の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体でヒト初代マクロファージを処理することで、骨髄細胞系列でのこれらの細胞でのｓＴＲＥＭ２及びｍＴＲＥＭ２レベルの双方が増大したことを示した。これらの結果は、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２が、培養したヒトマクロファージの上清でのｓＴＲＥＭ２レベルを抑制したことを示す従前の報告とは符合しない（Ｄｅｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ、前掲）。
可溶性ＴＲＥＭ２及び膜ＴＲＥＭ２に関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を調べる前出の実験は、低レベルのエンドトキシンを有するように調製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を使用して反復して行った。培養上清で測定したｓＴＲＥＭ２のレベルを、以下の表２２に示す。本開示の大抵の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、高度に精製しており、かつ、本質的にエンドトキシンを含んでいなければ、ｓＴＲＥＭ２レベルを様々な程度にまで引き上げた。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体３Ｆ２、４Ｈ２、及び５Ｃ１２も、ｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げたが、低レベルのものでしかなかった。これらの結果は、これらの市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、培養物においてｓＴＲＥＭ２レベルを下げることを示した従前に公開されたデータとは対照的である。このことは、市販の製剤に存在するエンドトキシン、不純物、及び凝集体による汚染が原因であると考えられる。表２２のデータは、ｎｇ／ｍｌを単位とするｓＴＲＥＭ２のレベルを示しており、また、アイソタイプコントロール抗体で認められたものに正規化している。
認められたｓＴＲＥＭ２の増加は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した後の膜結合ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）レベルの増加と平行していた（以下の表２３）。ドナー間の反応性のばらつきがあるにもかかわらず、ほとんどの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、試験した３名のドナーのうち２名または３名で、ｍＴＲＥＭ２のレベルを引き上げた。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（３Ｆ２、４Ｈ２及び５Ｃ１２）と比較した場合、本開示の多くの抗体は、同等または優れた活性を示している。以下の表２３に示すレベルは、フローサイトメトリーによって決定した平均蛍光強度（Ｍｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）として表しており、また、アイソタイプコントロール抗体を使用して認められたものに正規化されている。
Figure 2022542964000050
Figure 2022542964000051
遺伝学的研究は、アルツハイマー病保護ＭＳ４Ａ４Ａ対立遺伝子とアルツハイマー病患者でのｓＴＲＥＭ２のレベルの増加とを関連付けているので、これらの結果は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ＴＲＥＭ２活性と機能を調節する（すなわち、高める）ことによる、アルツハイマー病、及びその他の神経変性障害の効果的な治療法であることを示唆した。
ｓＴＲＥＭ２及び膜結合ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）に関する本開示のヒト化抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果も決定した。このことを調べるために、２名のドナーに由来するヒト初代マクロファージを、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で、４８時間処理した。培養上清を回収し、そして、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙアッセイを使用して、可溶性ＴＲＥＭ２のレベルをアッセイした。細胞表面のＴＲＥＭ２は、フルオロフォアとコンジュケートした抗ＴＲＥＭ２抗体で染色した後に、フローサイトメトリーで別々に処理した細胞で測定した。Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙシステム（ＭＳＤ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用して、マクロファージの培養上清での可溶性ＴＲＥＭ２を測定した。
以下の表２４は、可溶性ＴＲＥＭ２レベルの変化に関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果の結果を示す。表２４では、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、ｎｇ／ｍｌの単位で示す。表２４に示したように、本開示の大抵の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト初代マクロファージでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げた。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２、４Ｈ２、及び３Ｆ２では、本開示の多くの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で認められたレベルと比較して、可溶性ＴＲＥＭ２レベルの有意な増大は認められず、また、５Ｃ１２、４Ｈ２、及び３Ｆ２の効果は、アイソタイプコントロールと同等であった。
Figure 2022542964000052
Figure 2022542964000053
以下の表２５は、細胞表面（例えば、膜）でのＴＲＥＭ２レベルの変化に関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果の結果を示す。表２５では、細胞表面ＴＲＥＭ２レベルを、フローサイトメトリー手順で測定した平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示す。表２５に示したように、本発明の大抵の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト初代マクロファージでの細胞表面ＴＲＥＭ２レベルを引き上げた。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２、４Ｈ２、及び３Ｆ２では、本開示の多くの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で認められたレベルと比較して、細胞表面ＴＲＥＭ２レベルの有意な増大は認められず、また、５Ｃ１２、４Ｈ２、及び３Ｆ２の効果は、アイソタイプコントロールと同等であった。
Figure 2022542964000054
表２４及び表２５に示したように、膜ＴＲＥＭ２レベル、及び可溶性ＴＲＥＭ２レベルの双方が、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理するとアップレギュレーションされた。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２、４Ｈ２、及び３Ｆ２は、ＴＲＥＭ２の発現を、有意な程度にまで誘導しなかった。
実施例９：マクロファージ細胞表面マーカーに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
様々なＭ１及びＭ２マクロファージ細胞表面マーカーに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を、以下のようにして調べた。ヒト初代マクロファージを、様々な抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（１０μｇ／ｍｌ）を含む完全ＲＰＭＩ１６４０で、４８時間、処理した。次いで、これらの細胞を回収し、そして、Ｍ１マーカー（ＣＤ１６、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８６）、Ｍ２マーカー（ＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＣＤ１６３）、及び、汎マクロファージマーカーＣＤ１４に特異的な抗体を使用して、フローサイトメトリーに供した。
これらの研究の結果を、以下の表２６に示す。細胞表面マーカーの発現レベルを、フローサイトメトリーでアッセイし、そして、１００％に設定したアイソタイプコントロール抗体で処理した細胞で得たレベルに正規化した。ＣＤ８６やＭＨＣ－ＩＩなどの特定のＭ１マーカーの細胞表面発現は変化しておらず、あるいは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処理の影響をわずかに受けていた。対照的に、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３、及びＤｅｃｔｉｎ－１などの特定のＭ２マーカーの細胞表面発現は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理すると顕著に抑制された。
Figure 2022542964000055
まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、マクロファージ分極に影響を及ぼしており、Ｍ２表現型から離れた細胞に影響を及ぼすことを示した。これらの結果は、ＣＮＳにおいて、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体治療が、神経変性疾患及び障害に関連する神経保護機能を強化、増大、または、回復することで、ミクログリア活性の有益な改善を提供し得ることを示唆した。健康状態での恒常性ミクログリアは、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３、及び、ＣＤ１１５などのＭ２マーカーをさらに発現するので、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ミクログリア細胞の生理学的状態を、進行した炎症状態または活性化状態など、より保護的な表現型の状態への改変に影響を及ぼすことを示唆した。アルツハイマー病マウスモデル、及びヒトアルツハイマー病における疾患関連ミクログリア（ＤＡＭ）は、炎症誘発性または活性化状態にあり、アルツハイマー病において有益であると考えられており、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アルツハイマー病及びその他の神経変性障害の治療において有用である。
実施例１０：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、オステオポンチン及びゲルゾリンの発現を高める
ＭＳ４Ａ遺伝子クラスターが関係するアルツハイマー病に関連する遺伝的バリアント（ＳＮＰ）が特定されている。それらのバリアント対立遺伝子の１つは、ｒｓ１５８２７６３であり、これはは、ＣＳＦ ｓＴＲＥＭ２レベルの増大、アルツハイマー病のリスクの低下、及び発症年齢の遅延に関連している。（Ｄｅｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ，２０１８，ｂｉｏＲｘｉｖ，ｄｏｉ：ｄｘｄｏｉｏｒｇ／１０．１１０１／３５２１７９）。このｒｓ１５８２７６３対立遺伝子は、血中ＭＳ４Ａ４ＡｍＲＮＡレベルを低下させる。これらの知見は、ｒｓ１５８２７６３対立遺伝子が、ＭＳ４Ａ４Ａレベルを低下させ、アルツハイマー病のリスクまたは重症度を潜在的に抑制することで、保護的な役割を果たしていることを示唆している。
ヒトマクロファージでのこの保護対立遺伝子の効果を示すＲＮＡ発現プロファイルは、公開されたＲＮＡ発現データから導き出した。ＳＰＰ１（オステオポンチン）及びＧＳＮ（ゲルゾリン）のｍＲＮＡは、倍率変化（「ＦＣ」）及びｐ値（表２７の「ｒｓ１５８２７６３」の下方にある列を参照されたい。また、表２８にも同様に記載した）で示したように、発現の増加を示すその他のマーカー（図示せず）と比較して、最も有意な発現の高まりを示した。このデータは、ＳＰＰ１とＧＳＮが、ｒｓ１５８２７３対立遺伝子に関連する保護的生物活性の薬力学的マーカーであることを示した。
親のＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、保護対立遺伝子を表現型模写する能力について試験した。ヒトＰＢＭＣ由来のマクロファージを、表２７及び表２８に示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で、２４時間処理した（最大で３回の反復）。ＲＮＡを抽出し、そして、ＲＮＡライブラリーを調製して配列を決定した後に、ゲノムマッピングと定量を行った。結果は、示したすべての親の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、１つ（４Ａ－２２０）を除いて、ＳＰＰ１及びＧＳＮの発現の増大に関して、保護ｒｓ１５８２７６３対立遺伝子を表現型模写することを示した（表２７及び表２８）。これらの結果は、ＳＰＰ１及びＧＳＮの発現を高める上で有効な本開示のＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、保護対立遺伝子と同様に、アルツハイマー病のリスク及び／または重症度を抑制する点に関して、生物学的に活性であることを示唆した。
Figure 2022542964000056
Figure 2022542964000057
実施例１１：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体によるｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞の誘導及び刺激
あらゆる組織に由来する成体細胞を、幹細胞に関連する転写因子の混合物を導入することで、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に変換できる（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｃｅｌｌ（ｄｏｔ）ｃｏｍ／ｉＰＳＣで入念に検討が行われている）。ｉＰＳＣはいつまでも維持することができ、そして、適切な成長因子が与えられると、様々な成熟細胞型に向けて分化するように駆動することができる。ｉＰＳＣからニューロンを誘導する方法は、かねてより確立されていた（Ｓａｌｉｍｉ ｅｔ．ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．Ｒｅｐ．２０１４；４１：１７１７－１７２１；Ｅｎｇｌｅ ｅｔ．ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ ２０１８；１００：７８３－７９７）。最近では、ｉＰＳＣを使用して、星状細胞（Ｊｕｌｉａ ｅｔ．ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔ ２０１７；９：６００－６１４）、及びミクログリア（Ｐｏｃｏｃｋ ａｎｄ Ｐｉｅｒｓ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１８；１９：４４５－４５２で検討されている）を誘導している。これらの培養システムは、その他の方法では実現し得ない制御環境下において、これらの細胞の生物学的研究と機能面での研究を可能にする。さらに、ｉＰＳＣは、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集などの様々な方法で遺伝子操作することができ、それにより、これらの細胞型で目的の遺伝子の機能的関連性をさらに詳しく分析することができる。
ｉＰＳＣから誘導した後に、ミクログリアをインビトロで単独で培養を行い、そこで、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で刺激を与える。刺激を与えた後に、細胞生存率を、細胞内ＡＴＰレベルを定量して評価する。細胞表面でのＴＲＥＭ２発現の変化、または可溶性ＴＲＥＭ２レベルの変化に関する効果は、上記したようにして測定する。これらの培養物から得た上清を、ＥＬＩＳＡ、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙアッセイ（ＭＳＤ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）、Ｌｅｇｅｎｄｐｌｅｘ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）、またはＣＢＡ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）などの方法を使用して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理して得られる、様々なサイトカインまたはケモカインの発現またはレベルの変化について分析する。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処理に起因するこれらのｉＰＳＣミクログリアでの食作用能力、オートファジー率、表面マーカー発現、及び遺伝子発現プロファイルの変化を測定し、そして、様々な方法、例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング、定時イメージング及びリアルタイムイメージング、及びＲＮＡｓｅｑ分析を使用して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した単球由来マクロファージで認められた変化と比較する。
実施例１２：マクロファージ細胞表面マーカーに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
ＣＮＳ及び末梢器官の双方での骨髄細胞は、表現型と機能が本質的に一定していない。このことは、Ｍ１型とＭ２型のマクロファージに分けることができるマクロファージによって、インビトロでモデル化することができ、多様な食作用と炎症の潜在性、表現型、及び活性を示す。末梢器官では、Ｍ１表現型に関連するマクロファージは、炎症誘発性が大きく、抗菌性であると考えられるが、Ｍ２様マクロファージは、恒常性が大きく、抗炎症性である。ＣＮＳ内では、恒常性状態のミクログリアは、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３などのＭ２マーカーも発現しており、このことは、この細胞型での調節機能を示唆している。ＭＳ４Ａ４Ａの発現は、インビトロで、Ｍ２マクロファージにおいて上昇している。
様々なＭ１及びＭ２マクロファージ細胞表面マーカーに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を、以下のようにして調べる。ヒト初代マクロファージを、完全ＲＰＭＩ１６４０において、様々な抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（例えば、１０μｇ／ｍｌ）で４８時間処理する。次に、これらの細胞を回収し、そして、Ｍ１マーカー（ＣＤ１６、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８６など）、Ｍ２マーカー（ＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＣＤ１６３など）、及び汎マクロファージマーカー、例えば、ＣＤ１４などに対して特異的な抗体を使用して、フローサイトメトリーに供する。
実施例１３：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の動態特徴決定
ＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１及びＥＣＬ２ペプチドに対する精製した抗体の結合動態の特徴を、以下のようにして、独自のアレイ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）装置（ＭＸ－９６）を使用して、Ｃａｒｔｅｒｒａ（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）で決定した。Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（ＣＦＭ）を使用して、抗体を、ＣＭＤ５００Ｄチップ（Ｘａｎｔｅｃ ＃ＳＰＭＸ ＣＭＤ５００Ｄ ロット番号ＳＣ ＣＭＤ５００Ｄ０１１７．ａ Ｅｘｐ３１．１２．１８）に印刷した。まず、このチップを、１００ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５、１００μＬ ＥＤＣ（最終濃度１３３ｍＭ）、１００μＬのＳ－ＮＨＳ（最終濃度３３．３ｍＭ）を用いて、７分間かけて活性化した。抗マウスＩｇＧ－Ｆｃのローン（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１１５－００５－０７１）を、１５分間かけて注射して、１００００～１２０００ＲＵの表面密度を確立した後に、チップ表面を、１Ｍエタノールアミン、ｐＨ８．５で、１０分間かけて不活性化した。対象となる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝剤（Ｔｅｋｎｏｖａカタログ番号Ｈ８０２２）で２：１に希釈し、次いで２０分間と５分間かけて印刷して、同じ試料溶液から２つ組を印刷した。コントロール抗体は、印刷のために２０μｇ／ｍｌに希釈した。
動態分析を実行するために、対象となるペプチドを、２０００ｎＭ、４００ｎＭ、８０ｎＭ、１６ｎｍＭ、及び、３．２ｎＭの最終アッセイ濃度で、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝剤で調製した。次に、これらを、チップに５分間かけて注入した後に、非再生的な動態シリーズで、毎秒８ｕＬで、７分間の解離時間を設けた。再現性を確保するために、それぞれの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の２つ組を測定した。
実施例１４：一過性かつネイティブに発現する細胞株に対するＭＳ４Ａ４Ａ抗体の親和性測定
精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、様々なＭＳ４Ａ４Ａ発現細胞株に対する結合親和性について評価する。この細胞として、上記した実施例８に記載したトランスフェクト細胞、そして、ＭＳ４Ａ４Ａを内因的に発現する骨髄細胞株及び初代細胞がある。試験する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ハイブリドーマ上清から精製したマウスＩｇＧ、または、Ｅｘｐｉ２９３細胞で組換え産生したヒトＩｇＧ１ Ｆｃキメラのいずれかである。細胞に対する親和性結合は、以下のようにして決定する。簡潔に説明すると、細胞を回収し、洗浄し、そして、Ａｑｕａ Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄで標識して、生死を識別する。ＰＢＳで洗浄した後に、２×１０∧５個の細胞を、９６ウェルＵ底プレートのウェルごとに等分に分注し、そして、様々な濃度（１０μｇ／ｍＬから始める３倍希釈）の５０μＬの精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を含むＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋１ｍＭ ＥＤＴＡ）で、インキュベーションする。一次インキュベーションの後に、遠心分離で上清を除去し、１５０μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、適切な二次抗体と、氷上で、３０分間、インキュベーションした。二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積が２００μＬであるＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行う。結合データを、蛍光強度の中央値を使用して分析し、そして、曲線を、Ｐｒｉｓｍ（非線形回帰：４つのパラメーターを使用したｌｏｇ阻害剤対用量反応）にあてはめて、ＥＣ５０値を決定した。
実施例１５：ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のダウンレギュレーション
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、様々な細胞株及び初代細胞におけるＭＳ４Ａ４Ａの細胞表面及び総細胞タンパク質のレベルを下げる能力を評価する。いずれかのコンパートメントでのＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の減少は、それら細胞でのＭＳ４Ａ４Ａ活性の低下を示す。
細胞を、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体と一緒に、様々な時間をかけてインキュベーションを行い、次いで、それら細胞に関連して残存しているＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のレベルを、ＦＡＣＳ（細胞表面）、または、ウェスタンブロット（総タンパク質のレベル）のいずれかを使用してアッセイする。ＦＡＣＳアッセイについては、残存するＭＳ４Ａ４Ａの検出を、直接にアロフィコシアニン（ＡＰＣ）をコンジュケートした非競合抗体を使用して実行する。ウェスタンブロット検出については、５０μＬの溶解緩衝剤（ＲＩＰＡ溶解緩衝剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号８９９００）＋１：１００ ＨＡＬＴプロテアーゼ阻害剤カクテル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号８７７８６）を加えて細胞を溶解し、１４，０００×ｇで、１５分間の遠心分離を行って、不溶性の細胞片を除去した。可溶性画分を、タンパク質定量のために、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）試薬でアッセイする。それぞれの試料から得た等量のタンパク質を、４～１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｐｌｕｓポリアクリルアミドゲル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＮＷ０４１２０）にロードし、電気泳動分離を行った後に、当該ゲルでのタンパク質を、ｉＢｌｏｔ２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＩＭ２１００１）、及びＴｒａｎｓｆｅｒ Ｓｔａｃｋｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＩＢ２４００２）を使用して、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜に転写する。この膜を、１％ウシ血清アルブミン、または５％脱脂乳のいずれかでブロックして、非特異的結合を防ぐ。次に、この膜を、独自のまたは市販の検出抗体とインキュベーションし、洗浄し、ＨＲＰ結合二次抗体（ウサギ、Ａｂｃａｍ＃２０５７１８、マウス、Ａｂｃａｍ＃２０５７１９）とインキュベーションする。ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏ Ｐｌｕｓ化学発光基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃３４５７７）で現像して結合を視覚化し、そして、ｉＢｒｉｇｈｔ ＦＬ１０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ３２７５２）、または、その他の互換システムでデジタル記録する。
ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のレベルのダウンレギュレーションは、例えば、アンチセンス方法論、遺伝子治療など、当業者に公知で、かつ利用可能な方法を使用して、ＭＳ４Ａ４Ａ核酸発現またはレベルのダウンレギュレーションでも達成し得る。
実施例１６：老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及びアルツハイマー病の動物モデルを用いる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の活性の特徴決定
前出の説明の通り、老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及びアルツハイマー病の動物モデルにおいて、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の治療上の有用性も試験することができる（例えば、Ｂｅａｔｔｉｅ，ＭＳ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｎｅｕｒｏｎ ３６，３７５－３８６；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２６，７７５６－７７６６；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１５，４９－５７；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９－１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０－９８７９；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８，２１０－２２０；Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｋ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．１４，１５５２－１５５４；Ｙｕｎｅ，Ｔ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１１８３，３２－４２；Ｗｅｉ，Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．４２９，１６９－１７４；Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ，ＭＪ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ １１８，８７－９３；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｎａｔｕｒｅ ４２７，８４３－８４８；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＡＷ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１，６２２６－６２３０；Ｔｅｎｇ，ＨＫ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５４５５－５４６３；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９－１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０－９８７９；Ｆａｎ，ＹＪ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２３８０－２３９０；Ａｌ－Ｓｈａｗｉ，Ｒ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２１０３－２１１４；及び、Ｙａｎｏ，Ｈ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９，１４７９０－１４８０２）。
実施例１７：腫瘍学用動物モデルを用いる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果の特徴決定
骨髄細胞は、大抵の固形腫瘍に存在する免疫細胞の主成分である。腫瘍生物学におけるそれらの役割は、状況に依存する。つまり、それらは、腫瘍の根絶において重要な役割を果たす可能性があるが、それらは、大抵の場合、宿主腫瘍により吸収されて、腫瘍促進性の表現型の提供を補助する。このことは、例えば、骨髄細胞が、Ｍ２表現型へ分極することで達成される場合があり、これは、一般的には、免疫抑制性であるので、当該免疫系が、当該腫瘍を根絶することをブロックする。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞の再分極を介して、この免疫抑制表現型を逆転させ、そして、抗腫瘍免疫応答を促し得る。
数多くの動物腫瘍モデルが存在する。関連する動物モデルの例には、ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）など、マウスの免疫系を遺伝的に欠失したヒト化マウスモデルがある。これらのマウスは、ヒト免疫細胞の受容宿主として機能し、ヒトの適応性及び自然免疫細胞の生着をもたらす。次いで、これらの動物に対して、通常は、脇腹の皮下に腫瘍細胞を接種する。経時的な腫瘍サイズは、腫瘍細胞の成長と、宿主免疫系によるそれらの根絶との間のバランスを表す。期間全体を通して、これらの動物を抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理すると、アイソタイプ処理動物と比較して、腫瘍の進行が修正される。処理期間の終わりに、腫瘍を抽出し、そして、様々な分析を行って、腫瘍細胞及び浸潤免疫細胞に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を決定する。腫瘍を、切片にし、スライドに載置すると、顕微鏡下で組織学的変化を分析することができる。ｍＲＮＡを、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＮＡＳｅｑ、またはマイクロアレイで分析して、遺伝子発現の変化を決定することができる。腫瘍及び浸潤性免疫細胞の単一細胞懸濁液を調製し、様々な細胞表面マーカーに対する抗体で染色し、そして、フローサイトメトリーで分析すると、特に、マクロファージ及びＴ細胞などの免疫細胞における細胞表面表現型の変化を表すことができる。これらの分析のいずれかにおいて、抗ＭＳ４Ａ４Ａ処理の結果として認められた変化は、これらの抗体の免疫調節機能を示す。
実施例１８：ＴＲＥＭ２転写及びｍＲＮＡに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
ＴＲＥＭ２転写レベルとｍＲＮＡに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果は、以下のようにして評価する。培養細胞を、様々な濃度の本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で、様々な時間をかけて処理する。その後、細胞内のＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡレベルの変化を、ｍＲＮＡレベルを測定及び／または定量するための当業者に周知の標準的な方法論を使用して決定する。
実施例１９：ＴＲＥＭ２の再利用及び分解に関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
増大したｓＴＲＥＭ２及びｍＴＲＥＭ２のレベルに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果の理解をさらに深めるために、ＴＲＥＭ２の再利用及び／または分解を調べる以下の研究を行う。これらの研究では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処理に関連する新たなＴＲＥＭ２合成をさらに防ぐために、細胞のシクロヘキシミド処理を使用する。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した細胞と比較して、コントロール細胞におけるＴＲＭＥ２の再利用と分解を調べるために、当該技術分野で公知の様々な方法が利用可能である。
実施例２０：さらなる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体
前出の実施例１に記載した通り、親抗体４Ａ－２１から２つのさらなる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をヒト化及び親和性成熟させて、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０、及び抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４１９を得た。これらの抗体のそれぞれの可変重鎖及び可変軽鎖配列を、以下の表２９に示しており、それらの対応するＣＤＲ（Ｋａｂａｔによる）に下線を付けた。重鎖ＣＤＲ配列を、表３０に示す；軽鎖ＣＤＲ配列を、表３１に示す。
Figure 2022542964000058
Figure 2022542964000059
Figure 2022542964000060
実施例２１：ｓＴＲＥＭレベルに関するインビボでの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
血清及び脳脊髄液（ＣＳＦ）でのｓＴＲＥＭレベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のインビボでの効果を調べるために、次のようにして研究を行った。
カニクイザルに対して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２またはアイソタイプコントロール（ｈｕＩｇＧ１）を、８０ｍｇ／ｍｌの単回静脈内注入により投与した。血清試料は、抗体の投与前、投与から０．５、４、１０、２４、４８、９６、１９２、３１２、４８０、及び６４８時間後に動物から回収した。ＣＳＦ試料は、抗体の投与前、投与から４８、９６、１９２、及び３３６時間後に動物から回収した。
血清及びＣＳＦでのｓＴＲＥＭレベルは、次のようにして測定した。シングルスポットＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プレート（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、捕捉抗体を含むＰＢＳで、４℃で、一晩コーティングした。サルの血清及びＣＳＦ試料（ならびに、サルのＴＲＥＭ２－Ｆｃ標準）を結合緩衝剤で希釈し、室温で１時間かけてウェルに加えた。ビオチン化ヤギ抗ヒトＴＲＥＭ２ポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、結合緩衝剤で１：２，０００に希釈して加え、室温で１時間インキュベーションした後に、スルホタグストレプトアビジン（ＭＳＤ）で検出した。１５０μＬの１×読取り緩衝剤（Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ）をプレートに加え、そして、これらのプレートを、Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＭＳＤ）で分析した。
血清では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２を投与した後に、ｓＴＲＥＭ２レベルが、ベースラインの約１．５倍高まっていた（ベースラインから約５０％増えた）（図１０Ａ～１０Ｂ）。カニクイザルに対して抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２を単回投与した後の血清ｓＴＲＥＭ２レベルは、少なくとも４８０時間（２０日間）は上昇したレベルを維持していた（ベースラインレベルを上回っている）。
ＣＳＦでは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２を投与した後に、ｓＴＲＥＭ２レベルが、ベースラインの約２～４倍高まっていた（ベースラインから約３００％増えた）（図１１Ａ～１１Ｂ）。カニクイザルに対して抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２を単回投与した後のＣＳＦ ｓＴＲＥＭ２レベルは、少なくとも９６時間（４日間）上昇したレベルを維持していた（ベースラインレベルを上回っている）。
これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、インビボで、血清及びＣＳＦにおいて、ｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げる上で有効であることを示した。
実施例２２：組換えＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現するＵ９３７細胞に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合
ヒト組換えＭＳ４Ａ４Ａを発現するＵ９３７細胞に対する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合親和性について、評価を行った（これらの細胞の生成については、すでに説明している）。これらの細胞に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合親和性を、以下のようにして決定した。簡潔に説明すると、組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを発現するＵ９３７細胞を回収し、洗浄し、そして、Ａｑｕａ Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄで標識して、生死を識別した。２×１０∧４個の細胞を、ＰＢＳで洗浄した後に、９６ウェルＵ底プレートのウェルごとに分注し、そして、様々な濃度の５０μＬの精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を含むＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋１ｍＭ ＥＤＴＡ）で、インキュベーションした。この一次インキュベーションの後に、遠心分離で上清を除去し、１５０μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で細胞を２回洗浄し、そして、適切な二次抗体と、氷上で、１５分間、インキュベーションした。この抗体の二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積が２００μＬであるＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁した。次いで、フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行った。結合データを、平均蛍光強度（Ｍｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）（ＭＦＩ）として表した。フローサイトメーターで測定したＭＦＩ値を、Ｋｕｅｋ，ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ．９４：１１－２３に基づいた次の方程式（または、同様の４パラメーターフィットを使用することができる）を使用して、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ）ソフトウェアで測定した：
Ｙ＝（（Ｆｍａｘ－Ｂ）／（ｎ＊（Ｃ／６．０２ｅ２３）／（Ｖ＊１ｅ－６）））＊［［（ａｐｔＫＤ＋Ｘ＋ｎ＊（（Ｃ／６．０２ｅ２３）／（Ｖ＊１ｅ－６）））－ＳＱＲＴ｛（（ａｐｔＫＤ＋Ｘ＋ｎ＊（（Ｃ／６．０２ｅ２３）／（Ｖ＊１ｅ－６）））∧２）－４＊（ｎ＊（（Ｃ／６．０２ｅ２３）／（Ｖ＊１ｅ－６））＊Ｘ）｝］／２］＋Ｂ）
これらの分析では、以下の数値を、実験条件に従って制約した：Ｃ＝細胞数／ウェル（２０，０００）；Ｖ＝マイクロリットル単位の染色する総体積；ｎ＝細胞表面の受容体の数、細胞につき１００，０００個の受容体を推定している。これらの結合研究の結果を、図１２に示す。
図１２に示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１は、Ｕ９３７細胞で発現した組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａに対して、約２．８ｅ－１０の結合親和性を示しており、一方で、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１は、このアッセイで、３．８ｅ－０９の結合親和性を示した。
実施例２３：ＭＳ４Ａ４Ａ過剰発現細胞株の生成
組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを発現する、安定的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞株を生成することの困難性を考慮して、その他のＤＮＡベクター及び細胞株を調べて、組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａの発現により適合性があるかどうかを判定した。安定したトランスフェクションのために、ＭＳ４Ａ４Ａコード配列を、発現ベクターｐＤ２５３３－Ｇ４１８またはｐＤ３５３９－ｐｕｒｏ（Ａｔｕｍ，Ｎｅｗａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）に導入した。
ＭＳ４Ａ４Ａは、インビボでは骨髄細胞にネイティブに発現している。したがって、上記した細胞を使用して認められた毒性を克服するために、幾つかの骨髄由来細胞株を、最小限の毒性を有する、または毒性が認められない組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを発現する能力について試験した。これらの研究で使用した骨髄由来細胞株のパネルには、ＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ２０２）、Ｕ９３７細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５９３．２）、Ｋ５６２細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ２４３）、ＨＬ６０細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ２４０）、及びＫａｓｕｍｉ－１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２７２４）が含まれた。マウスｐｒｅ－Ｂ細胞株である３００．１９細胞（Ｔｕｆｔｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｔ０００７１０）は、組換えタンパク質の発現目的で一般的に使用されているので、これらの細胞も試験した。選択効率及びトランスフェクション効率に関して、Ｇ４１８またはピューロマイシンの適切な用量を決定するために、これらの細胞株のそれぞれを、抗生物質感受性についてスクリーニングした。Ｕ９３７細胞、Ｋ５６２細胞、及び３００．１９細胞からのトランスフェクタントが、組換えヒトコードＭＳ４Ａ４Ａ発現プラスミドトランスフェクション及び抗生物質選択の後も生存していることが認められた。限界希釈でこれらの細胞をクローニングした後に、個々のクローンが生成し、続いて、フローサイトメトリーを使用してヒトＭＳ４Ａ４Ａタンパク質細胞表面発現についてスクリーニングした。
実施例２４：ヒト化した、及び親和性成熟した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、初代ヒト骨髄細胞においてＴＲＥＭ２タンパク質を調節する
ヒト遺伝学研究でのデータは、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＴＲＥＭ２経路、及びアルツハイマー病（ＡＤ）感受性の間の関連性を特定している（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１３１：９２５－９３３；ｄｏｉ：ｈｔｔｐｓ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／３５２１７９）。例えば、ＡＤ保護ＭＳ４Ａ４Ａ対立遺伝子は、脳脊髄液でのｓＴＲＥＭ２レベルの増大に関連している。これらの保護経路に関する理解を得るために、以下の研究を行った。ヒト初代マクロファージを、様々な濃度の本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で、４８時間処理した。これらの研究では、次の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を試験した：野生型ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ（ＷＴ）を有する４Ａ－４５０、ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）を有する４Ａ－４５０、ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ Ｋ３２２Ａを有する４Ａ－４５０、４Ａ－３１３ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、及び４Ａ－３１３ Ｋ３２２Ａ ｈｕＩｇＧ１。次いで、細胞を、フルオロフォアとコンジュケートした抗ＴＲＥＭ２抗体で染色した後に、ＴＲＥＭ２の細胞表面（膜結合）発現を、フローサイトメトリーで測定した。Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙシステム（ＭＳＤ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用して、細胞の培養上清での可溶性ＴＲＥＭ２レベルを測定した。
図１３及び１４に示したように、膜ＴＲＥＭ２レベルは、細胞に対して抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後に、ヒト初代マクロファージにおいて用量依存的に高まった。異なるｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ配列に関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体－野生型ｈｕＩｇＧ１、ｈｕＩｇＧ１でのＮ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、及びｈｕＩｇＧ１でのＫ３２２Ａアミノ酸置換はすべて、膜ＴＲＥＭ２発現レベルを引き上げることができた。以下の表３２及び３３は、膜結合ＴＲＥＭ２レベルの変化について、抗ＭＳ４Ａ４Ａ処理細胞で認められたＭＦＩの比率に関する数値を示しており、それぞれ、図１３及び１４から得た未処理のコントロール細胞で認められたものと比較している。
図１５及び１６は、野生型ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ主鎖における抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０及び４Ａ－３１３が（それぞれ）、初代ヒトマクロファージの上清において、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを用量依存的に高めたことを示す。以下の表３４及び３５は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ処理細胞で認められた可溶性ＴＲＥＭ２の倍数を示しており、それぞれ、図１５及び１６から得たプレートベースラインレベルとして測定したものと比べている。
Figure 2022542964000061
Figure 2022542964000062
Figure 2022542964000063
Figure 2022542964000064
これらの結果は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１（２．５μｇ／ｍｌ）が、未処理の細胞と比較して、初代ヒトマクロファージのｓＴＲＥＭレベルを約１．４倍引き上げたことを示した。また、これらの結果は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＷＴ ｈｕＩｇＧ１が、未処理の細胞と比較して、初代ヒトマクロファージのｓＴＲＥＭレベルを約１．５倍～約１．７倍引き上げたことを示した。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、インビトロで、ｓＴＲＥＭレベルを引き上げる上で有効であり、したがって、アルツハイマー病の発症を防御するＭＳ４Ａ４Ａ対立遺伝子の効果を模倣して、インビボで、血漿及びＣＳＦでのｓＴＲＥＭレベルを引き上げる効果的な手段を提供し得ることを示した。
実施例２５：細胞ＡＴＰレベルに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
ヒト単球を、製造業者のプロトコルに従って、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒト単球濃縮カクテル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及びＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して全血から分離した。ＡＣＫ溶解緩衝剤で赤血球を溶解した後に、単球を完全培地（ＲＰＭＩ、１０％ＦＢＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、Ｌ－グルタミン、ＨＥＰＥＳ、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム）に再懸濁した。これらの単離した単球からマクロファージを得るために、１００ｎｇ／ｍｌのヒトＭ－ＣＳＦ、及び８％ｖ／ｖのヒト血清を、５～７日間かけて細胞に加えた。次いで、細胞を、５０，０００個の細胞／ウェルを含む完全ＲＰＭＩ－１６４０でプレートに播種し、そして、様々な濃度の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（４Ａ－３１３ＮＳＬＦ、４Ａ－３１３ＰＳ、４Ａ－４５０ＮＳＬＦ、及び４Ａ－４５０ＰＳ）の存在下または非存在下で２日間培養した、または様々な濃度のアイソタイプコントロール抗体を含む溶液で４８時間培養した。次いで、製造業者のプロトコルに従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ細胞生死判別キット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７１）を使用して、細胞内のＡＴＰ含有量を定量した。
図１７に示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－３１３ ＰＳ ｈｕＩｇＧ１、４Ａ－４５０ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１、及び４Ａ－４５０ ＰＳ ｈｕＩｇＧ１は、初代ヒトマクロファージのＡＴＰレベルを、用量依存的に高めた。ＦｃγＲＩＩＩａ結合を無効にするＮ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換を含むｈｕＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１４，２８９：１５３０９－１５３１８）、または、Ｃ１ｑ結合を無効にするＰ３３１Ｓアミノ酸置換を含むｈｕＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０００，１６４：４１７８－４１８４）は、両方とも、ヒトマクロファージのＡＴＰレベルを引き上げる上で効果的であった。ＡＴＰレベルが増大は、ヒトマクロファージの生存率の増大を示した。
以下の表３６は、これらの研究で決定した（図１７に関連する）ＡＴＰレベルの数値を示しており、これらの数値は、未処理のマクロファージで認められた数値に正規化している。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、用量依存的にヒトマクロファージのＡＴＰレベルを引き上げる上で有効であることを示した。ＡＴＰレベルは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０を使用した未処理細胞で認められたレベルの約１．２倍（０．０１６μｇ／ｍｌの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を使用）から約１．４倍（１．０μｇ／ｍｌの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を使用）引き上げられた。ＡＴＰレベルは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３を使用した未処理細胞で認められたレベルの約１．３倍（０．００８μｇ／ｍｌの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を使用）から約１．７倍（１．０μｇ／ｍｌの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を使用）引き上げられた。
Figure 2022542964000065
実施例２６：マクロファージ細胞表面マーカーに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
ＣＮＳ及び末梢器官の双方での骨髄細胞は、表現型と機能は本質的に一定していない。末梢器官では、Ｍ１様の表現型を有するマクロファージは、より炎症誘発性で、抗菌性があり、Ｍ２様の表現型を有するマクロファージは、恒常性が大きく、抗炎症性である。ＣＮＳ内では、恒常性状態のミクログリアは、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３などのＭ２様マーカーも発現する。ＭＳ４Ａ４Ａの発現は、インビトロで、Ｍ２様マクロファージにおいて上昇しており、このことは、ＭＳ４Ａ４Ａが、Ｍ２様マクロファージの新規の細胞表面マーカーであることを示唆している（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１７，９５：６１１－６１９）。
様々なマクロファージ細胞表面マーカーに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を、以下のようにして調べた。ヒト初代マクロファージを、様々な濃度（１０μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ）の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１または４Ａ－４１９野生型（ＷＴ）ｈｕＩｇＧ１を含む完全ＲＰＭＩ１６４０で、４８時間処理した。次に、これらの細胞を回収し、そして、Ｍ１様マーカー（例えば、ＣＤ１６、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８６）、Ｍ２様マーカー（例えば、ＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＣＤ１６３）、及び汎マクロファージマーカーＣＤ１４に対して特異的な抗体を使用するフローサイトメトリーに供した。
図１８Ａ、１８Ｂ、及び１８Ｃに示したように、初代ヒトマクロファージに対して抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えると、未処理細胞で認められたものと比較して、用量依存的に、ＣＤ１４及びＣＤ１６３細胞表面マーカーが抑制された（抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＮＳＬＦ ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ（それぞれのペアのグラフの右側の棒）、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４１９野生型ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ（ＷＴ）（それぞれのペアのグラフの左側の棒）。初代ヒトマクロファージに対して抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＮＳＬＦを加えると、未処理細胞で認められたレベルよりも低いレベルのＣＤ２００Ｒ細胞表面マーカーが認められた。対照的に、初代ヒトマクロファージに対して抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４１９を加えると、未処理細胞で認められたレベルよりも高いレベルのＣＤ２００Ｒ細胞表面マーカーが認められた。この結果は、上記した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３ ＮＳＬＦで得た結果、及びＣＤ２００ＲなどのＭ２様細胞表面マーカーを抑制する本開示のその他の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で得た結果を考慮すると、この特定の実験にあっては例外的なものと考えられる（上記実施例９及び表２６を参照されたい）。以下の表３７は、図１８Ａ、１８Ｂ、及び１８Ｃのグラフから得た細胞表面マーカーの倍数変化の（未処理細胞を超える）数値を示す。データは、２名のドナーからのもので、３つのウェルで平均化している。
Figure 2022542964000066
これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、Ｍ２様マクロファージ細胞表面マーカーを抑制する上で有効であることを示した。
実施例２７：補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）アッセイでのヒトＩｇＧ１ Ｆｃバリアント
ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃドメインは、例えば、Ｃ１ｑ、Ｆｃガンマ受容体、及び新生児Ｆｃ受容体など、複数の下流エフェクター分子との相互作用によってエフェクター機能に影響を与える。補体沈着に影響を与えるバリアントｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の能力を、以下のようにして、Ｃ３ｂ沈着／細胞死滅アッセイを使用して測定した。
上記したようにして生成した組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現するＵ９３７細胞を、これらの研究の標的細胞として使用した。細胞を回収し、ＰＢＳで１回洗浄し、ＲＰＭＩ １６４０培地で２×１０６個の細胞／ｍＬに希釈した。丸底９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ ＃３５１１７７）に、ウェルあたり５０μＬの標的細胞（１×１０５個の細胞／ウェル）を分注した。これらの細胞に対して、同じ培地で調製した２５μＬの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、所定の濃度の４倍で加えた。細胞－抗体混合物を、３７℃で、１５分間インキュベーションし、次いで、プールした補体ヒト血清（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＩＰＬＡ－ＣＳＥＲ）の２５μＬを、補体供給源としてそれぞれのウェルに加え、そして、それらのプレートを、３７℃で、さらに２時間インキュベーションした。その後、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋１ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄し、次いで、それぞれのウェルに、１００μＬの１：５０で希釈した抗Ｃ３ｂ－ＡＰＣ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ８４６１０６）を加え、そして、氷上で３０分間インキュベーションした。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、８０μＬのＦＡＣＳ緩衝剤＋０．２５μＬ／ウェルのヨウ化プロピジウム（Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＢＤ５５６４６３）に再懸濁してから、ｉＱｕｅフローサイトメーター（ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔ）で分析した。補体活性は、ＣＤＣで媒介した細胞死の程度を特定する高ＰＩ（ＰＩ－ｈｉｇｈ）細胞のパーセンテージ、またはＣ３ｂ沈着を測定するＡＰＣチャネル内の細胞のＭＦＩの２つの方法で測定した。
図１９は、様々なｈｕＩｇＧ１ Ｆｃバリアントを有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３で処理した組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを発現するＵ９３７細胞でのＰＩ（ヨウ化プロピジウム）取り込み％を示す。図１９に示したように、野生型ｈｕＩｇＧ１を有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３は、細胞によるＰＩ取り込みの増加として認められる、補体沈着及び標的発現細胞の死滅を促す能力に優れている。この効果は、用量依存的であった。Ｆｃ領域にｈｕＩｇＧ１ Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換（Ｃ１ｑ結合を大幅に弱める）を有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３、このアッセイでは、ＣＤＣはほぼ完全になくなっていた。加えて、Ｆｃ領域にｈｕＩｇＧ１ Ｋ３２２Ａアミノ酸置換を有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３は、このアッセイでは、ＣＤＣ活性が認められないとの同様の効果を示した。
以下の表３８は、図１９に示すグラフに関連した数値を示す。
Figure 2022542964000067
これらの結果は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、補体依存性細胞傷害性については有効であるのに対して、Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換またはＫ３２２Ａアミノ酸置換のいずれかのヒトＩｇＧ１ Ｆｃバリアントを有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、補体依存性細胞傷害性については有効ではないことを示した。
実施例２８：抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）におけるヒトＩｇＧ１ Ｆｃバリアント
抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を媒介する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の能力を、ＡＤＣＨ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｂｉｏａｓｓａｙシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｇ９９０１）を使用して評価した。このシステムは、ＦｃγＲＩＩａ受容体（Ｈ１３１バリアント）を安定して発現する遺伝子操作したＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株、及びホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ応答エレメントを利用している。このアッセイの活性は、エフェクター細胞（この事例では、骨髄細胞）によるＡＤＣＰ活性と相関している。本明細書で使用した標的細胞は、組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現するＵ９３７細胞、または単球に由来しており、かつ、ｈＩＬ－４（２０ｎｇ／ｍｌ）及びデキサメタゾン（２０ｎＭ）で極性化した初代ヒトマクロファージのいずれかであった。
細胞を、アッセイ緩衝剤（ＲＰＭＩ＋４％低ＩｇＧ血清）で、１．２×１０６／ｍＬの濃度に希釈し、そして、２５μＬの細胞（３０，０００個／ウェル）を、９６ウェルホワイトアッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ ３９２２）の内部ウェルに分注した。プレートの外側のウェルを、細胞や抗体を含まない７５μＬのアッセイ緩衝剤で満たした。細胞を含むウェルに対して、アッセイ緩衝剤で希釈も行った所望の最終濃度の３倍の濃度の２５μＬの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた。標的細胞に抗体を加えた後に、このアッセイシステムで提供したエフェクター細胞（２×１０７／ｍＬで凍結したもの）を、３７℃で解凍し、そして、６３０μＬを、３．６ｍＬの予め温めておいた（３７℃）アッセイ緩衝剤に加え、そして、ゆっくりと混合した。２５μＬのエフェクター細胞（７５，０００個／ウェル、２．５のＥ：Ｔ比）を、標的細胞と抗体を含むウェルに直ちに加えた。次いで、このプレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で、６時間インキュベーションして、受容体細胞の活性化と、ルシフェラーゼの発現を可能にした。このインキュベーションの後に、このプレートを、室温に平衡化させ（１５分）、その後、７５μＬのルシフェラーゼアッセイ試薬を、それぞれのウェルに加えた。次いで、このプレートを、プレートシェーカーで、２０分間、インキュベーションし、そして、ＢｉｏＴｅｋプレートリーダーで発光を測定した。
図２０に示したように、野生型ｈｕＩｇＧ１（Ｉｓｏ Ｃｔｒｌ ＩｇＧ１）は、このアッセイで、ルシフェラーゼ活性を強力に駆動しており、これは、ＦｃγＲＩＩａ－Ｈ１３１の活性化を示している。Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換を有するｈｕＩｇＧ１ Ｆｃを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３は、Ｉｓｏ Ｃｔｌｒ ＩｇＧ１で認められたものと比較して、ＦｃγＲＩＩａ－Ｈ１３１活性化の実質的な喪失を示した；Ｋ３２２Ａアミノ酸置換を有するｈｕＩｇＧ１ Ｆｃを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３は、このアッセイにおいて、同様の効果を有した。
以下の表３９は、図２０に示すグラフに関連した数値を示す。
Figure 2022542964000068
これらの結果は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、抗体依存性細胞食作用に有効であることを示した。加えて、これらの結果は、Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、またはＫ３２２Ａアミノ酸置換のいずれかのヒトＩｇＧ１ Ｆｃバリアントを有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体も、程度は低くなるものの、抗体依存性細胞食作用において有効であることを示した。
実施例２９：抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）でのヒトＩｇＧ１ Ｆｃバリアント
標的細胞に結合した抗体は、主に、ナチュラルキラー細胞に関するＦｃγＲＩＩＩａの活性化により駆動すると考えられている活性であるＡＤＣＣを媒介することができる。本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を引き起こす能力を、ＡＤＣＣ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｂｉｏａｓｓａｙシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｇ７０１０）を使用して評価した。このアッセイシステムは、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体（Ｖ１５８バリアント）を安定して発現する遺伝子操作したＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株、及びホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ応答エレメントを利用している。本明細書で使用した標的細胞は、組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現するＵ９３７細胞、または単球に由来しており、かつ、ｈＩＬ－４（２０ｎｇ／ｍｌ）及びデキサメタゾン（２０ｎＭ）で極性化した初代ヒトマクロファージのいずれかであった。標的細胞を、アッセイ緩衝剤（ＲＰＭＩ＋４％低ＩｇＧ血清）で、１．２×１０６／ｍＬの濃度に希釈し、そして、２５μＬの細胞（３０，０００個／ウェル）を、９６ウェルホワイトアッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ ３９２２）の内部ウェルに分注した。プレートの外側のウェルを、細胞や抗体を含まない７５μＬのアッセイ緩衝剤で満たした。細胞を含むウェルに対して、アッセイ緩衝剤で希釈も行った、所望の最終濃度の３倍の濃度の２５μＬの抗体を加えた。標的細胞に抗体を加えた後に、提供したエフェクター細胞（２×１０７／ｍＬで凍結したもの）を、３７℃で解凍し、そして、６３０μＬを、３．６ｍＬの予め温めておいた（３７℃）アッセイ緩衝剤に加え、ゆっくりと混合を行い、そして、２５μＬのエフェクター細胞（７５，０００個／ウェル、２．５のＥ：Ｔ比）を、標的細胞と抗体を含むウェルに直ちに加えた。次いで、このプレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で、６時間インキュベーションして、受容体細胞の活性化と、ルシフェラーゼの発現を可能にした。このインキュベーションの後に、このプレートを、室温に平衡化させ（１５分）、その後、７５μＬのルシフェラーゼアッセイ試薬を、それぞれのウェルに加えた。次いで、このプレートを、プレートシェーカーで２０分間インキュベーションし、そして、ＢｉｏＴｅｋプレートリーダーで発光を測定した。
図２１に示したように、野生型ｈｕ ＩｇＧ１（Ｉｓｏ Ｃｔｒｌ ＩｇＧ１）は、このアッセイで、ルシフェラーゼ活性を強力に駆動しており、このことは、ＦｃγＲＩＩＩａ－Ｖ１５８の活性化を示している。Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換を有するｈｕＩｇＧ１ Ｆｃを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３は、Ｉｓｏ Ｃｔｌｒ ＩｇＧ１で認められたものと比較して、ＦｃγＲＩＩａ－Ｈ１３１活性化の実質的な喪失を示した；Ｋ３２２Ａアミノ酸置換を有するｈｕＩｇＧ１ Ｆｃを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３は、このアッセイにおいて、同様の効果を有した。
以下の表４０は、図２１に示すグラフに関連した数値を示す。
Figure 2022542964000069
これらの結果は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、抗体依存性細胞傷害に有効であるが、その一方で、Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、またはＫ３２２Ａアミノ酸置換のいずれかのヒトＩｇＧ１ Ｆｃバリアントを有する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、抗体依存性細胞傷害において有効でないことを示した。
実施例３０：初代ヒトマクロファージでの膜及び可溶性ＴＲＥＭ２レベルに関するＭＳ４Ａ４Ａノックアウトの効果
マクロファージにおけるＭＳ４Ａ４Ａノックアウトが膜及び可溶性ＴＲＥＭ２レベルに及ぼす効果を、次のようにして調べた。ＣＲＩＳＰＲ技術を使用して、初代ヒトマクロファージにおけるＭＳ４Ａ４Ａの発現をノックアウトした。簡潔に説明すると、ノックアウトマクロファージを、Ｃａｓ９タンパク質（ＩＤＴ）を用いたエレクトロポレーションで生成しており、当該タンパク質は、ｔｒａｃｒＲＮＡ（ＩＤＴ）にアニーリングした遺伝子座特異的ｃｒＲＮＡ（ＩＤＴ；ＮＴ１、ＩＤＴネガティブコントロールｃｒＲＮＡ＃１及び＃２；ＮＴ２，ＧＴＡＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＴＣＴＣＴＡＣ（配列番号３４５）及びＡＡＣＣＣＣＴＧＡＴＴＧＴＡＴＣＣＧＣＡ（配列番号３４６）；ＭＳ４Ａ４Ａ＃１，ＡＡＴＴＧＴＧＴＡＣＣＣＧＡＴＡＴＡＣＡ（配列番号３４７）；ＭＳ４Ａ４Ａ＃２，ＡＡＣＣＡＴＧＣＡＡＧＧＡＡＴＧＧＡＡＣ（配列番号３４８）；ＭＳ４Ａ４Ａ＃３，ＴＡＴＴＣＡＴＴＣＣＴＡＧＡＣＴＡＣＣＴ（配列番号３４９）；ＭＳ４Ａ４Ａ＃４，ＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＧＧＣＴＧＣＡＴＣＡ（配列番号３５０））からなる非標的（ＮＴ）またはＭＳ４Ａ４Ａ特異的ｇＲＮＡと複合体を形成した。ＭＳ４Ａ４Ａノックアウト効率を、フローサイトメトリー分析で評価を行ったところ、９０％超であった（データは示さず）。
図２２Ａ及び２２Ｂは、膜ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）レベル、及び可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）レベルに関するＭＳ４Ａ４Ａノックアウトの効果を示す。図２２Ａ及び２２Ｂでは、ＮＴ１及びＮＴ２は、非標的ＣＲＩＳＰＲコントロールである；ｇＲＮＡ２＋３とｇＲＮＡ１＋４とは、ＭＳ４Ａ４Ａをノックアウトするために使用する異なるガイドのことを指す。
図２２Ａ及び２２Ｂに示したように、初代ヒトマクロファージにおけるＭＳ４Ａ４Ａのノックアウトは、ｍＴＲＥＭ２及びｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げた。ＭＳ４Ａ４Ａノックアウトの際に認められたｍＴＲＥＭ２及びｓＴＲＥＭ２のレベルの増大は、ＮＴ１及びＮＴ２コントロール細胞に対して抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３を加えた時のｍＴＲＥＭ２及びｓＴＲＥＭ２レベルの増大に匹敵していた。ＭＳ４Ａ４Ａノックアウト初代ヒトマクロファージを抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理しても、ｍＴＲＥＭ２またはｓＴＲＥＭ２レベルのさらなる増大は認められず、このことは、ヒトマクロファージに対して本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた際に認められたｍＴＲＥＭ２及びｓＴＲＥＭ２レベルの増大が、細胞のＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体によるものであることを示唆している。
実施例３１：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体による膜及び可溶性ＴＲＥＭ２調節の動態
ＴＲＥＭ２タンパク質の細胞表面発現は、原形質膜に対する、及び原形質膜からのＴＲＥＭ２のエンドサイトーシス／エキソサイトーシスで調節しており、また、膜結合プロテアーゼによるＴＲＥＭ２の調節された開裂で調節している（Ｔｈｏｒｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７，ＥＭＢＯ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．９：１３６６－１３７８；ｄｏｉ：１０．１５２５２／ｅｍｍｍ．２０１７０７６７３）。先の実施例で説明したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で、ヒトマクロファージを処理すると、膜及び可溶性ＴＲＥＭ２レベルの両方が増大した。以下の研究は、膜及び可溶性ＴＲＥＭ２のレベルの変化の動態の理解をさらに深めるために実施した。
可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）レベルの変化を評価するために、初代ヒトマクロファージを、２４ウェルまたは９６ウェルプレートのいずれかに播種し、続いて、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、４Ａ－４５０．ＮＳＬＦ、またはアイソタイプコントロール抗体（すべて、１μｇ／ｍｌ）を加えた。抗体の存在下、細胞培養の０．５、１、４、２４、及び４８時間後に上清を回収し、そして、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙを使用して、ｓＴＲＥＭ２レベルを決定した。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の初代ヒトマクロファージでの膜ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）レベルの増加の動態は、以下のようにして評価した。初代ヒトマクロファージを、分析の３日前（Ｔマイナス７２時間）に、９６ウェルＵ底プレートに、１００，０００個の細胞／ウェルで播種した。様々な時点（Ｔマイナス４８時間、Ｔマイナス２４時間、Ｔマイナス４時間、Ｔマイナス１時間）で、アイソタイプコントロール抗体（ＩｓｏＣｏｎｔｒｏｌ．ＮＳＬＦ）、及び抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦなどの抗体を、播種した細胞に対して加えた。播種して７２時間後に、ＴＲＥＭ２の細胞表面（膜結合）発現レベルを、フルオロフォアとコンジュケートした抗ＴＲＥＭ２抗体で細胞を染色した後に、フローサイトメトリーで測定した。
図２３Ａに示したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、様々なドナーから得た培養した初代ヒトマクロファージの上清でのｓＴＲＥＭ２のレベルを急速に引き上げた。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦは、アイソタイプコントロール抗体で処理した細胞で認められたレベルの約０．５倍、ｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げた（約５０％の増加）。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦは、アイソタイプコントロール抗体で処理した細胞で認められたレベルの約２．５倍、ｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げた（約２５０％の増加）。
図２３Ｂに示したように、初代ヒトマクロファージに対して抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを加えて１時間及び４時間後の膜ＴＲＥＭ２レベルは、アイソタイプコントロール抗体を加えた後に認められたレベルと比較して低下していた。図２３Ｂにおいて、点線は、アイソタイプコントロール抗体で処理した細胞でのｍＴＲＥＭ２のレベルを表す。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを加えて２４時間及び４８時間後のｍＴＲＥＭ２のレベルは、アイソタイプコントロール抗体で処理した細胞で認められたレベルを超えて増大していた。膜ＴＲＥＭ２の初期の減少は、図２３Ａに示したように、試験した全時点でのＴＲＥＭ２のシェディングの拡大と一致している。
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、初代ヒトマクロファージにおけるＴＲＥＭ２タンパク質のレベルを引き上げたので、以下の実験を実施して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後のＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡレベルに及ぶ影響について調べた。初代ヒトマクロファージを、２４ウェルプレートまたは９６ウェルプレートのいずれかに播種し、そして、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ及びアイソタイプ（１μｇ／ｍｌ）を含む完全ＲＰＭＩで処理した。０．５、１、４、２４、及び４８時間のインキュベーション後に、細胞ペレットを回収し、そして、定量ＰＣＲ分析（ｑＰＣＲ）を使用して、ＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡレベルを決定した。簡潔に説明すると、ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｅ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して抽出し、ｃＤＮＡを、ＱｕａｎｔｉＮｏｖａ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して全ＲＮＡから調製した。遺伝子発現レベルは、ＴＲＥＭ２（Ｈｓ００２１９１３２＿ｍ１）及びＧＡＰＤＨ（Ｈｓ０２７８８６６２４＿ｇ１）のＴａｑＭａｎアッセイを使用して、リアルタイムＰＣＲで分析した。それぞれの試料のＣＴ値を、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨのＣＴ値に対して正規化した。
図２３Ｃに示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦは、様々なドナーから得た培養ヒト初代マクロファージのＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡレベルに影響を与えなかった；ｍＲＮＡレベルのわずかな変化が認められた（アイソタイプコントロールで認められたレベルの０．５倍未満）。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、培養ヒト初代マクロファージでのＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡレベルに影響を与えずに、ＴＲＥＭ２タンパク質のレベルを高めたことを示した。
実施例３２：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、初代ヒトマクロファージでのＳＰＰ１及びＩＬ１ＲＮ分泌を増やす
初代ヒトマクロファージでのオステオポンチン（ＳＳＰ１）、及びインターロイキン－１受容体アンタゴニスト（ＩＬ１ＲＮ）の分泌レベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を調べ、そして、以下のようにして、ＭＳ４Ａ４Ａ発現をノックアウトするように遺伝子操作して改変した初代ヒトマクロファージで認められたものと比較した。
初代ヒトマクロファージでのＭＳ４Ａ４Ａ遺伝子ノックアウトを、Ｃａｓ９タンパク質を用いたエレクトロポレーションで生成した。このタンパク質は、単一のｇＲＮＡ分子またはｇＲＮＡ二重鎖のいずれかの形態のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と複合体を形成しており、当該ガイドＲＮＡは、標準的な方法を使用して、ｔｒａｃｒＲＮＡにアニーリングしたｃｒＲＮＡ：非標的ＮＴ１（ＩＤＴネガティブコントロールＲＮＡ＃１及び＃２）；ＮＴ２（ＧＴＡＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＴＣＴＣＴＡＣ［配列番号３４５］及びＡＡＣＣＣＣＴＧＡＴＴＧＴＡＴＣＣＧＣＡ［配列番号３４６］）；ＭＳ４Ａ４Ａ＃１（ＡＡＴＴＧＴＧＴＡＣＣＣＧＡＴＡＴＡＣＡ［配列番号３４７］）；ＭＳ４Ａ４Ａ＃２（ＡＡＣＣＡＴＧＣＡＡＧＧＡＡＴＧＧＡＡＣ［配列番号３４８］）；ＭＳ４Ａ４Ａ＃３（ＴＡＴＴＣＡＴＴＣＣＴＡＧＡＣＴＡＣＣＴ［配列番号３４９］）；ＭＳ４Ａ４Ａ＃４（ＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＧＧＣＴＧＣＡＴＣＡ［配列番号３５０］）（すべて、ＩＤＴ，Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，Ｉｏｗａ，ＵＳＡから得た）からなる。次に、細胞を、５０，０００個の細胞／ウェルで、完全ＲＰＭＩ－１６４０に播種し、そして、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ（０．１μｇ／ｍｌ）、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦ（０．１μｇ／ｍｌ）、またはアイソタイプコントロール抗体の存在下で、４８時間培養した。細胞から上清を回収し、そして、ＩＬ１ＲＮ及びＳＰＰ１のレベルを、Ｒ＆Ｄ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡキット（ＩＬ１ＲＮカタログ番号ＤＹ２８０、ＳＰＰ１カタログ番号ＤＹ１４３３）を使用して分析した。
ＮＴコントロール細胞を、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦまたは４Ａ－４５０．ＮＳＬＦのいずれかで処理すると、分泌したＳＰＰ１のレベルが高まった。これらの細胞でのＭＳ４Ａ４Ａの遺伝子ノックアウトも、ＭＳ４Ａ４Ａ抗体治療で認められるものに匹敵する分泌ＳＰＰ１レベルの増大をもたらした。これらの研究でのＳＰＰ１のレベルは：ＮＴコントロール細胞にアイソタイプコントロール抗体を加えた後での約１００ｎｇ／ｍｌ；ＮＴコントロール細胞に抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを加えた後での約２００ｎｇ／ｍｌ；ＮＴコントロール細胞に抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを加えた後での約２７５ｎｇ／ｍｌ；及びＭＳ４Ａ４Ａノックアウト細胞での約２２５ｎｇ／ｍｌであった。本開示のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後での分泌したＳＰＰ１レベルの増大は、ＭＳ４Ａ４Ａ発現を遺伝的にノックアウトした細胞で認められたものと同等であった。
ＮＴコントロール細胞を、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦまたは４Ａ－４５０．ＮＳＬＦのいずれかで処理すると、分泌したＩＬ１ＲＮのレベルが高まった。これらの細胞でのＭＳ４Ａ４Ａの遺伝子ノックアウトも、ＭＳ４Ａ４Ａ抗体治療で認められるものに匹敵する分泌ＩＬ１ＲＮレベルの増大をもたらした。これらの研究でのＩＬ１ＲＮのレベルは：ＮＴコントロール細胞にアイソタイプコントロール抗体を加えた後での約８ｎｇ／ｍｌ；ＮＴコントロール細胞に抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを加えた後での約１２ｎｇ／ｍｌ；ＮＴコントロール細胞に抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを加えた後での約１６ｎｇ／ｍｌ；及びＭＳ４Ａ４Ａノックアウト細胞での約１４ｎｇ／ｍｌであった。本開示のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後での分泌したＩＬ１ＲＮレベルの増大は、ＭＳ４Ａ４Ａ発現を遺伝的にノックアウトした細胞で認められたものと同等であった。
まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、初代ヒトマクロファージにおけるＳＰＰ１及びＩＬ１ＲＮの分泌レベルを引き上げる上で有効であることを示した。加えて、これらの結果は、分泌したＳＰＰ１及びＩＬ１ＲＮのレベルの増大に関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果が、ＭＳ４Ａ４Ａの発現を遺伝的にノックアウトしたときに認められたものと類似していることを示しており、このことは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、これらの細胞におけるＭＳ４Ａ４Ａの活性を抑制またはブロックし、その結果、ＳＰＰ１及びＩＬ１ＲＮレベルの増大が認められたことを示唆している。
実施例３３：ヒトマクロファージでの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体誘導性生存率は、ＴＲＥＭ２非依存性である
上記したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後の初代ヒトマクロファージの生存率（総細胞ＡＴＰの増加について測定する）を高める上で有効であった。加えて、上記したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、細胞での膜ＴＲＥＭ２レベルを引き上げた。本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、膜ＴＲＥＭ２レベルを高め、そして、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、細胞生存率を高めたので、一連の実験を実施して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体添加に応答して認められた細胞生存率の増大が、少なくとも部分的には、ＴＲＥＭ２に依存しているかどうかを調べた。このことを調査するために、ＣＲＩＳＰＲ技術を使用して、ヒト初代マクロファージでＴＲＥＭ２を遺伝的にノックアウトして、ＴＲＥＭ２発現を遺伝的に欠失している初代ヒトマクロファージの細胞生存率に関する、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を調べた。
ＴＲＥＭ２ノックアウトマクロファージは、Ｃａｓ９タンパク質を利用したエレクトロポレーションによって生成した。このタンパク質は、単一のｇＲＮＡ分子またはｇＲＮＡ二重鎖のいずれかの形態のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と複合体を形成しており、当該ガイドＲＮＡは、ｔｒａｃｒＲＮＡにアニーリングしたｃｒＲＮＡ：非標的ＮＴ１（ＮＴ１）（ＩＤＴネガティブコントロールｃｒＲＮＡ＃１及び＃２）；ＮＴ２（ＧＴＡＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＴＣＴＣＴＡＣ［配列番号３４５］及びＡＡＣＣＣＣＴＧＡＴＴＧＴＡＴＣＣＧＣＡ［配列番号３４６］）；ＴＲＥＭ２＃１（ＧＣＣＡＴＣＡＣＡＧＡＣＧＡＴＡＣＣＣＴ［配列番号３５１］）；ＴＲＥＭ２＃２（ＡＴＡＧＧＧＧＣＡＡＧＡＣＡＣＣＴＧＣＡ［配列番号３５２］）；ＴＲＥＭ２＃３（ＣＡＧＣＡＴＣＣＣＧＧＴＧＡＴＣＣＡＧＧ［配列番号３５３］）；ＴＲＥＭ２＃４，ＴＧＧＡＧＡＴＣＴＣＴＧＧＴＴＣＣＣＣＧ［配列番号３５４］）（すべて、ＩＤＴ，Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，Ｉｏｗａ，ＵＳＡから得た）からなる。
次に、細胞を、５０，０００個の細胞／ウェルで、完全ＲＰＭＩ－１６４０に播種し、そして、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（４Ａ－３１３ＮＳＬＦ、４Ａ－４５０ＮＳＬＦ）、またはアイソタイプコントロール抗体（すべて、０．１μｇ／ｍｌ）を含む溶液の存在下で、４８時間培養した。次いで、製造業者のプロトコルに従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ細胞生死判別キット（Ｐｒｏｍｅｇａ，カタログ番号Ｇ７５７１）を使用して、細胞内のＡＴＰ含有量を定量した。
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦまたは抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを加えると、アイソタイプコントロール抗体で認められたレベルと比較して、ＮＴコントロール細胞のＡＴＰレベルを約２０％引き上げた。加えて、ＴＲＥＭ２ノックアウト細胞に対して抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えると、アイソタイプコントロール抗体で認められたレベルよりもＡＴＰレベルが約１５％～２０％引き上げた。まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、少なくとも部分的には、ＴＲＥＭ２に依存せずに、細胞ＡＴＰレベル（したがって、細胞生存率）を高めることを示した。
実施例３４：ＭＳ４Ａ４ＡのｓｉＲＮＡノックダウンは、初代ヒトマクロファージでの膜及び可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる
上記したように、ＣＲＩＳＰＲ技術を使用してＭＳ４Ａ４Ａ発現の遺伝子を除去すると、ヒトマクロファージでの膜及び可溶性ＴＲＥＭ２レベルが増大した。これらの知見をさらに裏付けるために、独立した実験的手法を使用して、ＴＲＥＭ２レベルに関してＭＳ４Ａ４Ａ発現の喪失が及ぼす影響を評価した。これらの研究では、初代ヒトマクロファージでのＭＳ４Ａ４ＡのｓｉＲＮＡノックダウンを実施して、膜及び可溶性ＴＲＥＭ２レベルに及ぼすその影響を測定した。
ＭＳ４Ａ４Ａノックダウンマクロファージを、Ｎ－ＴＥＲ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉＲＮＡ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）を使用して、コントロール（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，ＳＩＣ００１）、及びＭＳ４Ａ４Ａ標的ｓｉＲＮＡ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，ＳＡＳＩ＿Ｈｓ０１＿００１５０９５５）をトランスフェクトして生成した。ＭＳ４Ａ４Ａノックアウト効率は、フローサイトメトリー分析で評価した（データ示さず）。ＴＲＥＭ２の細胞表面（膜結合）発現は、フルオロフォアとコンジュゲートした抗ＴＲＥＭ２抗体で細胞を染色した後に、フローサイトメトリーで測定した。
図２４Ａ及び図２４Ｂに示したように、ＭＳ４Ａ４Ａ発現のｓｉＲＮＡノックダウンは、膜ＴＲＥＭ２レベル及び可溶性ＴＲＥＭ２レベルをそれぞれを引き上げた。図２４Ａ及び図２４Ｂでは、つなぎ合わせたドットのそれぞれのセットは、ｓｉＲＮＡノックダウンが有る場合とない場合での１名の個々のドナー（合計で６名のドナー）での平均結果を表す。これらのデータは、上記した遺伝子操作したＭＳ４Ａ４Ａノックアウト細胞でのｍＴＲＥＭ２及びｓＴＲＥＭ２レベルの増大を示す同様の結果と一致している。まとめると、これらの結果は、ＭＳ４Ａ４Ａの発現または活性を欠失させると、初代ヒトマクロファージでの可溶性ＴＲＥＭ２レベルと膜ＴＲＥＭ２レベルの両方を引き上げることを示した。
実施例３５：ｍＴＲＥＭ２、ｓＴＲＥＭ２、及びＡＴＰレベルの増大に関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のインビトロでの効力
ｍＴＲＥＭ２、ｓＴＲＥＭ２、及びＡＴＰレベルの増大に関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の（上記した実施例２４及び２５で説明した）効果を、３名の別々のドナーから得た初代ヒトマクロファージでさらに調べた。初代ヒトマクロファージを、様々な濃度の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ及び４Ａ－４５０．ＮＳＬＦで、４８時間処理した。次いで、ｍＴＲＥＭ２、ｓＴＲＥＭ２、及びＡＴＰのレベルの変化を測定した。
図２５Ａ、図２５Ｂ、及び図２５Ｃに示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ及び抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦは、それぞれ３名の異なるドナーから得た初代ヒトマクロファージにおいて、用量依存的にｍＴＲＥＭ２のレベルを引き上げた。図２５Ａ、図２５Ｂ、及び図２５Ｃのデータは、アイソタイプコントロール抗体を使用して認められたレベルに対するｍＴＲＥＭ２のレベルの増加倍数として表されている（ｘ軸は、抗体濃度（μｇ／ｍｌ）を示しており、ｙ軸は、１．０に設定したコントロールを超える増加倍数を示す）。これらのグラフのデータを分析して、ＥＣ５０値と最大応答を決定した；これらの結果を、以下の表４１に示す（平均＋／－ＳＥＭとして示した）。
Figure 2022542964000070
図２６Ａ、図２６Ｂ、及び図２６Ｃに示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ及び抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦは、それぞれ３名の異なるドナーから得た初代ヒトマクロファージにおいて、用量依存的にｓＴＲＥＭ２のレベルを引き上げた。図２６Ａ、図２６Ｂ、及び図２６Ｃのデータは、アイソタイプコントロール抗体を使用して認められたレベルに対するｓＴＲＥＭ２のレベルの増加倍数として表されている（ｘ軸は、抗体濃度（μｇ／ｍｌ）を示しており、ｙ軸は、１．０に設定したコントロールを超える増加倍数を示す）。これらのグラフのデータを分析して、ＥＣ５０値と最大応答を決定した；これらの結果を、以下の表４２に示す（平均＋／－ＳＥＭとして示した）。
Figure 2022542964000071
図２７Ａ、図２７Ｂ、及び図２７Ｃに示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ及び抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦは、それぞれ３名の異なるドナーから得た初代ヒトマクロファージにおいて、用量依存的に細胞ＡＴＰのレベルを引き上げた。図２７Ａ、図２７Ｂ、及び図２７Ｃのデータは、アイソタイプコントロール抗体を使用して認められたレベルに対する細胞ＡＴＰのレベルの増加倍数として表されている（ｘ軸は、抗体濃度（μｇ／ｍｌ）を示しており、ｙ軸は、１．０に設定したコントロールを超える増加倍数を示す）。これらのグラフのデータを分析して、ＥＣ５０値と最大応答を決定した；これらの結果を、以下の表４３に示す（平均＋／－ＳＥＭとして示した）。
Figure 2022542964000072
まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を加えた後のｍＴＲＥＭ２、ｓＴＲＥＭ２、及び細胞ＡＴＰのレベルが増大していることから明らかなように、当該抗体が、初代ヒトマクロファージの機能的変化を誘発したことを示した。
実施例３６：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＣＳＦ１Ｒ阻害によって誘導する細胞死を救済する
ＣＳＦ１Ｒ阻害後のヒトマクロファージの生存を維持するＭＳ４Ａ４Ａの能力を評価するために、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＰＬＸ３３９７の存在下で細胞生存を高める当該抗体の能力について研究した（ＤｅＮａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ（２０１１）１（１）：５４－６７．２２０３９５７６）；Ｐｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ｏｆ Ｅｘｐ Ｃａｎｃ Ｒｅｓ（２０１９）３８（１）：３７２．ＰＭＩＤ：３１４３８９９６を参照されたい）。
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、全血からヒト単球を分離した。ヒト単球由来のマクロファージを調製するために、単球を計数し、そして、完全ＲＰＭＩ培地（Ｇｌｕｔａｍａｘ、ペニシリン／ストレプトマイシン、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、及び１０％熱不活化ウシ胎児血清を補充したＲＰＭＩ）、及び５０ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）に接種した。６日後に、分化した単球（マクロファージ）を回収し、そして、５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦを含む完全ＲＰＭＩ培地において、０．１×１０６個の細胞／ウェルの密度で、９６ウェルプレートに播種した。マクロファージを、一晩かけて、回復させた。７日目に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ及び４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを、ＰＬＸ３３９７（１μＭ）を含む、または含まない培養マクロファージに対して加えた。すべての抗体を、１μｇ／ｍｌの最終濃度で加えた。細胞生存率を、死滅細胞を標識するＤＮＡ色素であるＣｙｔｏｔｏｘ ｒｅｄ試薬（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して決定した。Ｃｙｔｏｔｏｘ ｒｅｄ試薬のレベルを、ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌイメージングシステム（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、数日間にわたって蛍光シグナルを測定して決定した。
図２８Ａに示したように、ＰＬＸ３３９７及び抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦで処理したヒトマクロファージのＣｙｔｏｔｏｘ ｒｅｄ計数は、ＰＬＸ３３９７とアイソタイプコントロール抗体とで処理した細胞で認められた計数よりも少なかった。図２８Ａのデータは、平均±ＳＥＭとしてグラフ化している；Ｎ＝３名のヒトドナーの３。
図２８Ｂに示したように、ＰＬＸ３３９７及び抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦで処理したヒトマクロファージのＣｙｔｏｔｏｘ ｒｅｄ計数は、ＰＬＸ３３９７とアイソタイプコントロール抗体とで処理した細胞で認められた計数よりも少なかった。図２８Ｂのデータは、平均±ＳＥＭとしてグラフ化している；Ｎ＝３名のヒトドナーの３。
まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ＣＳＦ１Ｒ阻害後のヒトマクロファージの細胞死を抑制し、その生存を持続させることを示した。したがって、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＡＬＳＰまたはＨＤＬＳなどのＣＳＦ１Ｒ欠損疾患または障害を有する個体を治療する上で有用である。
実施例３７：カニクイザル血清での抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の薬物動態
血清での本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の薬物動態（ＰＫ）をインビボで調べるために、以下の研究を行った。
カニクイザル（ｃｙｎｏ）に対して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴ、４Ａ－２５．ＷＴ、４Ａ－１８．ＷＴ、またはアイソタイプコントロール（ｈｕＩｇＧ１）を、８０ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内ボーラス注射して投与した。それぞれの動物群に、合計で５回の投与を行った：１回目と２回目の投与は２８日の間隔を設け、残りの４回の投与は、それぞれの投与間隔を７日間とした。
血清試料は、抗体の投与前、抗体を投与して０．５、４、６、１０、１２、２４、４８、９６、１６８、１９２、２６４、３１２、３３６、４８０、５０４、６４８、６７２、６７２．５、６８４、７２０、８４０、８４０．５、８５２、８８８、１００８、１００８．５、１０１４、１０２０、１０３２、１０５６、１１０４、１１７６、１１８８、及び１２２４時間後に動物から回収した。
カニクイザル血清での抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴ、４Ａ－２５．ＷＴ、及び４Ａ－１８．ＷＴのレベルを、捕捉試薬であるビオチン標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（カタログ番号ＮＢＰ１－７４９８３；Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、及び検出試薬であるＡｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７標識抗ヒトＩｇＧ（カタログ番号２０４９－３１；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いた段階的サンドウィッチ方式に基づいたカスタムＧｙｒｏｌａｂアッセイを使用して測定した。標準、品質コントロール、及び試料を、Ｒｅｘｘｉｐ ＨＮ緩衝剤（カタログ番号Ｐ０００４９９６，Ｇｙｒｏｌａｂ）で希釈した。試料に存在する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、ｇｙｒｏｌａｂ ｂｉｏａｆｆｙ ２００ＣＤのストレプトアビジンでコーティングしたアフィニティーカラムに結合したビオチン化抗ヒトＩｇＧで捕捉した。捕捉した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、蛍光標識した抗ヒトＩｇＧ抗体で検出した。生成した蛍光シグナルの強度は、試料に存在する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の量に比例していた。Ｇｙｒｏｌａｂ ｘＰとＥｘｃｅｌを使用してデータを分析した。
動物に対して８０ｍｇ／ｋｇの用量を投与した後に、血清での抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体濃度は、認められた平均最大濃度（Ｃｍａｘ）に達した後に着実に低下しており、投与１日目（初回投与日）の後での平均半減期（ｔ１／２）値（平均±ＳＤ）は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴでは１４０±５４．５時間、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２５．ＷＴでは２６９±１１４時間、そして、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８．ＷＴでは１９３±２６．８時間であった。クリアランス（ＣＬ）はｔ１／２に反比例しており、１日目の平均ＣＬ（平均±ＳＤ）は、抗体４Ａ－２１．ＷＴでは０．６２５±０．１０７ｍＬ／時間／ｋｇ、抗体４Ａ－２５．ＷＴでは０．１２４±０．０２５ｍＬ／時間／ｋｇ、そして、抗体４Ａ－１８．ＷＴでは０．４０２±０．０９ｍＬ／時間／ｋｇであった。１日目の定常状態の分布体積（Ｖｓｓ）値は、抗体４Ａ－２１．ＷＴ、４Ａ－２５．ＷＴ、４Ａ－１８．ＷＴ群では、それぞれ、３０．８～５１．４ｍＬ／ｋｇ、２２．６～４１．７ｍＬ／ｋｇ、及び２４．９～４１．３ｍＬ／ｋｇの範囲であった。
曝露を、Ｃｍａｘと、投与後０～１６８時間の濃度－時間曲線下の面積（ＡＵＣ０－１６８）で評価した。１日目に、抗体４Ａ－２５．ＷＴの平均Ｃｍａｘが最も高く（６．２６×１０６ｎｇ／ｍＬ）、次いで、抗体４Ａ－１８．ＷＴ（４．８１×１０６ｎｇ／ｍＬ）が続いた。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴ（３．５３×１０６ｎｇ／ｍＬ）は、試験対象の中で最も低いＣｍａｘを示した。
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２５．ＷＴ、及び４Ａ－１８．ＷＴは、同様のＡＵＣ０－１６８（それぞれ、３．４７×１０８ｎｇ＊時間／ｍＬ、及び３．３５×１０８ｎｇ＊時間／ｍＬ）を示しており、この数値は、抗体４Ａ－２１のもの（１．１５×１０８ｎｇ＊時間／ｍＬ）よりも有意に大きかった。
実施例３８：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、血清及びＣＳＦ ｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げる
血清及び脳脊髄液（ＣＳＦ）でのｓＴＲＥＭ２レベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果をインビボで調べるために、以下の研究を行った。
カニクイザルに対して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴ、４Ａ－２５．ＷＴ、４Ａ－１８．ＷＴ、またはアイソタイプコントロール（ｈｕＩｇＧ１）を、８０ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内ボーラス注射して投与した。それぞれの群に、合計で５回の投与を行った：１回目と２回目の投与は２８日の間隔を設け、残りの４回の投与は、それぞれの投与間隔を７日間とした。
血清試料は、抗体の投与前、抗体を投与して０．５、４、６、１０、１２、２４、４８、９６、１６８、１９２、２６４、３１２、３３６、４８０、５０４、６４８、６７２、６７２．５、６８４、７２０、８４０、８４０．５、８５２、８８８、１００８、１００８．５、１０１４、１０２０、１０３２、１０５６、１１０４、１１７６、１１８８、及び１２２４時間後に動物から回収した。ＣＳＦ試料も、抗体の投与前、抗体を投与して０．５、４、６、１０、１２、２４、４８、９６、１６８、１９２、２６４、３１２、３３６、４８０、５０４、６４８、６７２、６７２．５、６８４、７２０、８４０、８４０．５、８５２、８８８、１００８、１００８．５、１０１４、１０２０、１０３２、１０５６、１１０４、１１７６、１１８８、及び１２２４時間後に動物から回収した。
血清では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２５．ＷＴ、４Ａ－１８．ＷＴ、及び４Ａ－２１．ＷＴを投与すると、ｓＴＲＥＭ２レベルは、ベースラインの２倍超引き上げられており、第１の抗体を投与して４８～９６時間後に、それぞれ、投与前のベースラインレベルの２３２％、２６１％、及び２８７％のピークレベルを示した。さらに、２９、３６、４３、及び５０日目に抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、毎週反復投与すると、血清でのｓＴＲＥＭ２のレベルは上昇を続け、平均ｓＴＲＥＭ２レベルは、投与前のベースラインレベルで認められたレベルの約２倍であった（２１４％、４Ａ－２５．ＷＴ；２２６％、４Ａ－１８．ＷＴ；１９９％、４Ａ－２１．ＷＴ）。アイソタイプコントロールは、投与期間を通して投与前のレベル（ベースラインの１０７％）をほぼ保っていた。
ＣＳＦでは、アイソタイプコントロール処理動物で認められたレベルと比較して、それぞれ抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ．２１．ＷＴ（ｐ＝０．０００８、二元配置分散分析）及び４Ａ－２５．ＷＴ（ｐ＝０．００４、二元配置分散分析）の投与から２４時間及び９６時間後でのｓＴＲＥＭ２レベルが有意に上昇した。４Ａ－１８．ＷＴで処理した群でのｓＴＲＥＭ２レベルは、アイソタイプコントロール群で認められたレベルと同様のままであった。
まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、インビボで、血清及びＣＳＦの両方において、ｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げる上で有効であることを示した。
実施例３９：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、ＣＳＦオステオポンチンレベルを引き上げる
ＣＳＦでのオステオポンチンレベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果をインビボで調べるために、以下の研究を行った。
カニクイザルに対して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴ、４Ａ－２５．ＷＴ、４Ａ－１８．ＷＴ、またはアイソタイプコントロール（ｈｕＩｇＧ１）を、８０ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内ボーラス注射して投与した。それぞれの群に、合計で５回の投与を行った：１回目と２回目の投与は２８日の間隔を設け、残りの４回の投与は、それぞれの投与間隔を７日間とした。ＣＳＦ試料を、抗体の投与前、抗体を投与して０．５、４、６、１０、１２、２４、４８、９６、１６８、１９２、２６４、３１２、３３６、４８０、５０４、６４８、６７２、６７２．５、６８４、７２０、８４０、８４０．５、８５２、８８８、１００８、１００８．５、１０１４、１０２０、１０３２、１０５６、１１０４、１１７６、１１８８、及び１２２４時間後に動物から回収した。
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２５．ＷＴ、４Ａ－１８．ＷＴ、及び４Ａ－２１．ＷＴは、アイソタイプコントロール抗体で認められたレベルと比較して、ＣＳＦでのオステオポンチンレベルを有意に高めた。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴを反復投与すると、アイソタイプコントロールと比較して、初回投与の１２時間後にピークに達したＣＳＦオステオポンチンレベルを、約２８０ｎｇ／ｍｌ（ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析）にまで大きく引き上げ、続く投与後の１２～２４時間、ピークレベルを示し続けた。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ２５．ＷＴ及び抗体４Ａ－１８．ＷＴを反復投与すると、アイソタイプコントロールと比較して、各投与の１２～２４時間後、ＣＳＦオステオポンチンレベルが（約５０～８０ｎｇ／ｍｌのレベルまで）上昇する傾向が示された。
これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、インビボで、ＣＳＦでのオステオポンチンレベルを引き上げる上で有効であることを示した。
実施例４０：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、様々な脳領域のオステオポンチンレベルを引き上げる
カニクイザルの前頭葉及び海馬でのオステオポンチンレベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果をインビボで調べるために、以下の研究を行った
カニクイザルに対して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴ、４Ａ－２５．ＷＴ、４Ａ－１８．ＷＴ、またはアイソタイプコントロール（ｈｕＩｇＧ１）を、８０ｍｇ／ｍｌの用量で、静脈内ボーラス注射して投与した。それぞれの群に、合計で５回の投与を行った：１回目と２回目の投与は２８日の間隔を設け、残りの４回の投与は、それぞれの投与間隔を７日間とした。これらの動物を、５回目の投与の４８時間後に安楽死させ、そして、前頭葉と海馬を取り出して凍結した。
脳組織でのオステオポンチンレベルを、次のようにして測定した。凍結した脳試料を、Ｎ－Ｐｅｒ Ｎｅｕｒｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（カタログ番号８７７９２、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及びＨａｌｔ Ｐｒｏｔｅａｓｅ阻害剤（カタログ番号１８６１２７８）を使用して、製造業者の指示に従って、氷上で、２０分間かけて溶解した。試料を遠心分離し、そして、上清を新しいチューブに移し、さらなる分析に供するまで－８０℃で保存した。それぞれの試料の総タンパク質濃度を、製造業者の指示に従って、ＢＣＡタンパク質分析キット（カタログ番号２３２２５、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。タンパク質濃度値は、脳組織で測定した分析物濃度を正規化するために使用した。
カニクイザルの脳組織でのオステオポンチンレベルは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴで処理した後に上昇していた。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴを、カニクイザルに対して反復投与すると、アイソタイプコントロール抗体で認められたレベルと比較して、カニクイザルの前頭葉でのオステオポンチンレベルが有意に上昇した（それぞれ、ｐ＜０．０３５及びｐ＝０．０００３；一元配置分散分析）。特に、抗体を投与した後の前頭葉で測定した平均オステオポンチンレベルは次の通りであった：約０．６ｎｇ／ｍｇ（アイソタイプコントロール抗体）；約１．２ｎｇ／ｍｇ（４Ａ－２１．ＷＴ）；約０．７ｎｇ／ｍｇ（４Ａ－２５．ＷＴ及び４Ａ－１８．ＷＴ）。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を反復投与すると、アイソタイプコントロール抗体で認められたレベルと比較して、カニクイザルの海馬でのオステオポンチンレベルが上昇する傾向が認められた。特に、抗体を投与した後に海馬で測定した平均オステオポンチンレベルは次の通りであった：約１．３ｎｇ／ｍｇ（アイソタイプコントロール抗体）；約１．８ｎｇ／ｍｇ（４Ａ－２１．ＷＴ及び４Ａ－１８．ＷＴ）；及び約２．４ｎｇ／ｍｇ（４Ａ－２５．ＷＴ）。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、非ヒト霊長類の前頭葉及び海馬でのオステオポンチンレベルを引き上げる上で有効であることを示した。
実施例４１：ＣＳＦタンパク質バイオマーカーに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴ（８０ｍｇ／ｋｇ）を末梢注射で投与したカニクイザルから得た脳脊髄液を、タンパク質バイオマーカー発現の変化について、インビボで、さらに分析した。これらの研究では、抗体注射の２４時間後に動物から得たＣＳＦ試料に対してＳｏｍａｌｏｇｉｃ Ｓｏｍａｓｃａｎ １．３ｋアッセイを用いて、ＣＳＦでのタンパク質発現レベルの変化の測定を行った。
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴをカニクイザルに投与した後に、ＣＳＦでのタンパク質変化が認められた。図２９は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１．ＷＴ（８０ｍｇ／ｋｇ）を末梢注射した後のカニクイザルから得た３つのＣＳＦ試料でのプロテオームワイドの効果を示すボルケーノプロットである。このボルケーノプロットでのそれぞれのドットは、１つのタンパク質を表している。測定したそれぞれのタンパク質について、ｘ軸の値は、抗体処理動物とコントロール動物との間のＣＳＦでのタンパク質のレベルの倍率変化の差を表している；ｙ軸の値は、認められたこれらの差異の有意性を表しており、分散分析（ＡＮＯＶＡ）で評価した差次的発現のｐ値のマイナスｌｏｇ１０として表している。図２９のタンパク質記号は、ｐ値が、＜１Ｅ－３である抗体処理動物とコントロール動物において差次的に発現するタンパク質を示す。
図２９に示したように、オステオポンチン（ＳＳＰ１）及びＩＬ１ＲＮ（２つのミクログリアマーカー）のＣＳＦレベルの増大が、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した動物で認められた。まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、非ヒト霊長類のＣＳＦ及び血清の両方において、ＩＬ１ＲＮ及びオステオポンチンタンパク質のレベルを高めたことを示した。
実施例４２：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、血清ｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げる
血清及び脳脊髄液（ＣＳＦ）でのｓＴＲＥＭ２レベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のインビボでの効果を、非ヒト霊長類で実施した別の一連の実験でさらに調べた。
カニクイザルに対して、８０ｍｇ／ｍｌの用量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、４Ａ－３１３．ＷＴ、及び４Ａ－４５０．ＮＳＬＦ、２５０ｍｇ／ｍｌの用量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、またはビヒクルコントロールを、静脈内ボーラス注射して投与した。それぞれの群に、合計で４回の投与を行った：１回目と２回目の投与は７日の間隔を設け、２回目と３回目の投与は１４日の間隔を設け、そして、３回目と４回目の投与は２８日の間隔を設けた。
血清試料は、抗体の投与前、抗体を投与して０．５、２、６、１０、２４、３４、４８、７２、９６、１６８、１６８．５、１７０、１７４、１７８、１９２、２１６、２４０、２６４、３３６、４０８、５０４、５０４．５、５０６、５１０、５１４、５２８、５５２、５７６、６００、６７２、７４４、８４０、９１２、１００８、１１７６、１１８６、１２００、及び１２２４時間後に動物から回収した；ＣＳＦ試料も、抗体の投与前、抗体を投与して０．５、２、６、１０、２４、３４、４８、７２、９６、１６８、１６８．５、１７０、１７４、１７８、１９２、２１６、２４０、２６４、３３６、４０８、５０４、５０４．５、５０６、５１０、５１４、５２８、５５２、５７６、６００、６７２、７４４、８４０、９１２、１００８、１１７６、１１８６、１２００、及び１２２４時間後に動物から回収した。
血清でのｓＴＲＥＭレベルを、次のようにして測定した。Ｓｉｎｇｌｅ ｓｐｏｔ Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プレート（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、捕捉抗体を含むＰＢＳで、４℃で、一晩コーティングした。サル血清試料（ならびに、サルＴＲＥＭ２－Ｆｃ標準）を、結合緩衝剤で希釈し、そして、室温で、１時間かけて、ウェルに加えた。ビオチン化ヤギ抗ヒトＴＲＥＭ２ポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、結合緩衝剤で１：２，０００に希釈したものを加え、そして、室温で１時間インキュベーションした後に、スルホタグストレプトアビジン（ＭＳＤ）で検出した。１５０μｌの１×読取り緩衝剤（Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ）をプレートに加え、そして、プレートを分析した。
これらの研究の結果を図３０に示す。血清でのｓＴＲＥＭ２レベルは、８０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを投与して２４時間後に、ベースラインで認められたレベルの約１．５倍（投与前のベースラインレベルの約１５０％）上昇した。ｓＴＲＥＭ２のレベルは、時間の経過とともに上昇を続け、８０ｍｇ／ｋｇで複数回投与した後では、ベースラインで認められたレベルの３倍の最大レベル（投与前のベースラインレベルの約３００％）に達した。
血清ｓＴＲＥＭ２レベルは、２５０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを投与して２４時間後に、ベースラインで認められたレベルの約１．５倍上昇し、また、時間の経過とともに上昇を続け、２５０ｍｇ／ｋｇで複数回投与した後では、ベースラインで認められたレベルの４．８倍の最大レベルに達した。
８０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＷＴを投与して２４時間後から、血清ｓＴＲＥＭ２レベルは、ベースラインで認められたレベルの約１．５倍上昇した。８０ｍｇ／ｋｇの４Ａ－３１３．ＷＴの反復投与では、血清ｓＴＲＥＭ２レベルは、ベースラインで認められたレベルの最大３倍にまで引き上げられた。
８０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを投与して２４時間後に、血清ｓＴＲＥＭ２レベルは、ベースラインで認められたレベルの約２倍上昇し、また、時間の経過とともに上昇を続け、８０ｍｇ／ｋｇの４Ａ－４５０．ＮＳＬＦで複数回投与した後では、ベースラインで認められたレベルの３倍の最大レベルに達した。
まとめると、これらの結果は、本発明の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、非ヒト霊長類の血清でのｓＴＲＥＭ２レベルを引き上げる上で有効であることを示した。
実施例４３：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、ＣＳＦオステオポンチンレベルを引き上げる
脳脊髄液（ＣＳＦ）でのオステオポンチンレベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のインビボでの効果を調べるために、以下の研究を行った。
カニクイザルに対して、８０ｍｇ／ｍｌの用量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、４Ａ－３１３．ＷＴ、４Ａ－４５０．ＮＳＬＦ、２５０ｍｇ／ｍｌの用量の４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、またはビヒクルコントロールを、静脈内ボーラス注射して投与した。それぞれの群に、合計で４回の投与を行った：１回目と２回目の投与は７日の間隔を設け、２回目と３回目の投与は１４日の間隔を設け、そして、３回目と４回目の投与は２８日の間隔を設けた。
ＣＳＦ試料を、抗体の投与前、抗体を投与して０．５、２、６、１０、２４、３４、４８、７２、９６、１６８、１６８．５、１７０、１７４、１７８、１９２、２１６、２４０、２６４、３３６、４０８、５０４、５０４．５、５０６、５１０、５１４、５２８、５５２、５７６、６００、６７２、７４４、８４０、９１２、１００８、１１７６、１１８６、１２００、及び１２２４時間後に動物から回収した。
ＣＳＦでのオステオポンチンレベルを、次のようにして測定した。Ｓｉｎｇｌｅ ｓｐｏｔ Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プレート（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、捕捉抗体を含むＰＢＳで、４℃で、一晩コーティングした。サルＣＳＦ試料を、結合緩衝剤で希釈し、そして、室温で、１時間かけて、ウェルに加えた。ビオチン化ヤギ抗ヒトオステオポンチンポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、結合緩衝剤で１：２，０００に希釈したものを加え、そして、室温で１時間インキュベーションした後に、スルホタグストレプトアビジン（ＭＳＤ）で検出した。１５０μｌの１×読取り緩衝剤（Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ）をプレートに加え、そして、プレートを、Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＭＳＤ）で分析した。
カニクイザルのＣＳＦでのオステオポンチンレベルは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後に増大した。８０ｍｇ／ｋｇ及び２５０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを投与した後に、ＣＳＦオステオポンチンレベルは、初回投与の２４時間後に、それぞれ、平均で、ベースラインで認められたものの約１３倍及び６倍のピークに達しており、その後に、ベースラインレベルの１．５倍にまで低下した（図３１Ａ及び３１Ｂ）。８０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを反復投与すると、ＣＳＦオステオポンチンレベルは、各投与の１０～２４時間後にピークに達しており、ベースラインレベルで認められたものの３倍～５倍のピークレベルに達した（図３１Ａ）。２５０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを反復投与すると、ＣＳＦオステオポンチンレベルは増加して、２回目の投与の１６８時間後には、ベースラインで認められたものの１４倍のピークレベルに達しており（図３１Ｂ）、続く投与の２４～４８時間後には、ベースラインで認められたものの４倍～５倍のピークレベルに達した（図３１Ｂ）。
８０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを投与した後に、ＣＳＦオステオポンチンレベルは、初回投与の２４時間後に、ベースラインで認められたものの約１３倍のピークに達し、その後、ベースラインレベルにまで低下した（図３１Ｃ及び３１Ｄ）。８０ｍｇ／ｋｇの４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを反復投与すると、ＣＳＦオステオポンチンレベルは、各投与の２４時間後にピークに達し、ベースラインレベルで認められたものの６倍～９倍のピークレベルに達した（図３１Ｃ）。
８０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＷＴを反復投与した後に、ＣＳＦオステオポンチンレベルは、各投与の２４時間後に、ベースラインで認められたものの約１．５倍のピークに達し、その後、ベースラインレベルにまで低下した（図３１Ｄ）。
まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、非ヒト霊長類のＣＳＦでのオステオポンチンレベルを引き上げる上で有効であることを示した。
実施例４４：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、様々な脳領域のオステオポンチンレベルを引き上げる
前頭葉及び海馬でのオステオポンチンレベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のインビボでの効果を調べるために、以下の研究を行った。
カニクイザルに対して、８０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、４Ａ－３１３．ＷＴ、及び４Ａ－４５０．ＮＳＬＦ、ならびに２５０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、またはビヒクルコントロールを、静脈内ボーラス注射して投与した。それぞれの群に、合計で４回の投与を行った：１回目と２回目の投与は７日の間隔を設け、２回目と３回目の投与は１４日の間隔を設け、そして、３回目と４回目の投与は２８日の間隔を設けた。これらの動物を、４回目の投与の４８時間後に安楽死させ、そして、前頭葉と海馬を取り出して凍結した。
脳組織でのオステオポンチンレベルを、次のようにして測定した。凍結した脳試料を、Ｎ－Ｐｅｒ Ｎｅｕｒｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（カタログ番号８７７９２、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及びＨａｌｔ Ｐｒｏｔｅａｓｅ阻害剤（カタログ番号１８６１２７８）を使用して、製造業者の指示に従って、氷上で、２０分間かけて溶解した。試料を遠心分離し、そして、上清を新しいチューブに移し、さらなる分析に供するまで－８０℃で保存した。それぞれの試料の総タンパク質濃度を、製造業者の指示に従って、ＢＣＡタンパク質分析キット（カタログ番号２３２２５、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。タンパク質濃度値は、脳組織で測定した分析物濃度を正規化するために使用した。
カニクイザルの脳組織でのオステオポンチンレベルは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦの投与後に上昇した。８０ｍｇ／ｋｇの抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを反復投与すると、コントロール動物で認められたレベルと比較して、カニクイザルの前頭葉でのオステオポンチンレベルが有意に上昇した（ｐ＝０．０２７；ｔ－検定）（図３２Ａ）。同様に、８０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを反復投与すると、コントロール処理動物で認められたレベルと比較して、カニクイザルの海馬でのオステオポンチンレベルが有意に上昇した（ｐ＝０．０２７；ｔ－検定）（図３２Ｂ）。
まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、非ヒト霊長類の脳組織（例えば、前頭葉及び海馬）でのオステオポンチンレベルを引き上げる上で有効であることを示した。
実施例４５：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、様々な脳領域のＣＳＦ１Ｒレベルを引き上げる
前頭葉及び海馬でのコロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）レベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のインビボでの効果を調べるために、以下の研究を行った。
カニクイザルに対して、８０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、４Ａ－３１３．ＷＴ、及び４Ａ－４５０．ＮＳＬＦ、２５０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、またはビヒクルコントロールを、静脈内注射して投与した。それぞれの群に、合計で４回の投与を行った：１回目と２回目の投与は７日の間隔を設け、２回目と３回目の投与は１４日の間隔を設け、そして、３回目と４回目の投与は２８日の間隔を設けた。これらの動物を、４回目の投与の４８時間後に安楽死させ、そして、前頭葉と海馬を取り出して凍結した。
脳組織でのＣＳＦ１Ｒレベルを、次のようにして測定した。凍結した脳試料を、Ｎ－Ｐｅｒ Ｎｅｕｒｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（カタログ番号８７７９２、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及びＨａｌｔ Ｐｒｏｔｅａｓｅ阻害剤（カタログ番号１８６１２７８）を使用して、製造業者の指示に従って、氷上で、２０分間かけて溶解した。試料を遠心分離し、そして、上清を新しいチューブに移し、さらなる分析に供するまで－８０℃で保存した。それぞれの試料の総タンパク質濃度を、製造業者の指示に従って、ＢＣＡタンパク質分析キット（カタログ番号２３２２５、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。タンパク質濃度値は、脳組織で測定した分析物濃度を正規化するために使用した。
カニクイザルの脳組織でのＣＳＦ１Ｒレベルは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦの投与後に上昇した。２５０ｍｇ／ｋｇの抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを反復投与すると、コントロール処理動物で認められたレベルと比較して、カニクイザルの前頭葉でのＣＳＦ１Ｒレベルが有意に上昇した（ｐ＝０．０４６；ｔ－検定）（図３３Ａ）。同様に、８０ｍｇ／ｋｇの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－４５０．ＮＳＬＦを反復投与すると、コントロール動物で認められたレベルと比較して、カニクイザルの海馬でのＣＳＦ１Ｒレベルが有意に上昇した（ｐ＝０．０１３；ｔ－検定）（図３３Ｂ）。
まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、非ヒト霊長類の脳組織（例えば、前頭葉及び海馬）でのＣＳＦ１Ｒレベルを引き上げる上で有効であることを示した。
実施例４６：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、インビボで、様々な脳領域の総ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる
前頭葉及び海馬での可溶性ＴＲＥＭ２及び膜ＴＲＥＭ２（総ＴＲＥＭ２）レベルに関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のインビボでの効果を調べるために、以下の研究を行った。
カニクイザルに対して、８０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、４Ａ－３１３．ＷＴ、４Ａ－４５０．ＮＳＬＦ、２５０ｍｇ／ｋｇの用量の４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、またはビヒクルコントロールを、静脈内ボーラス注射して投与した。それぞれの群に、合計で４回の投与を行った：１回目と２回目の投与は７日の間隔を設け、２回目と３回目の投与は１４日の間隔を設け、そして、３回目と４回目の投与は２８日の間隔を設けた。これらの動物を、４回目の投与の４８時間後に安楽死させ、そして、前頭葉と海馬を取り出して凍結した。総ＴＲＥＭ２レベルを、これらの脳領域で測定した。
カニクイザルの脳組織での総ＴＲＥＭ２レベルは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、４Ａ－３１３．ＷＴ、及び４Ａ－４５０．ＮＳＬＦで処理した後に上昇した。２５０ｍｇ／ｋｇの抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦを反復投与すると、コントロール処理動物で認められたレベルと比較して、カニクイザルの海馬での総ＴＲＥＭ２レベルが統計的に有意に上昇した（ｐ＝０．０１４；一元配置分散分析）（図３４Ａ）。２５０ｍｇ／ｋｇの抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、及び８０ｍｇ／ｋｇの抗体４Ａ－３１３．ＷＴを反復投与すると、コントロール処理動物で認められたレベルと比較して、カニクイザルの前頭葉でのＴＲＥＭ２レベルが上昇する傾向が示された（図３４Ｂ）。
まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、非ヒト霊長類の脳組織（例えば、前頭葉及び海馬）でのＴＲＥＭ２レベルを引き上げる上で有効であることを示した。
実施例４７：ミクログリアでの遺伝子発現プロファイルに関する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のインビボでの効果
上記したようにして、カニクイザルに対して本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与した後のミクログリアＲＮＡｓｅｑ分析で測定する遺伝子発現の変化を、以下のように行った。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体には、抗体４Ａ－３１３．ＷＴ（８０ｍｇ／ｋｇ）、４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ（８０ｍｇ／ｋｇ及び２５０ｍｇ／ｋｇ）、及び４Ａ－４５０．ＮＳＬＦ（８０ｍｇ／ｋｇ）が含まれた。動物に終末期処置（ｔｅｒｍｉｎａｌ ｔａｋｅ ｄｏｗｎ）を施した後に、容易な手作業の解離プロトコルに沿って前頭葉試料を解離させ、続いて、Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配分離を行って細片を除去した。細胞ペレットを、Ｃｄ１１ｂ抗体で２０分間染色し、洗浄し、ＤＡＰＩで標識し、そして、ミクログリアのＦＡＣＳ分離のために処理した。ＤＡＰＩ－：Ｃｄ１１ｂ＋細胞を、３５０ｕｌまたはＲＬＴプラス緩衝剤（Ｑｉａｇｅｎ）に直接選別し、そして、ＲＮＡ分離のために細胞を直ちに処理した。ＲＮＡの品質を、テープステーションを使用して決定し、そして、Ｌｅｘｏｇｅｎ ＱｕａｎｔＳｅｑの低入力プロトコルに若干の変更を加えたものを使用してライブラリーを作成した。ライブラリーを、テープステーションを使用して定量し、そして、Ｎｅｘｔ Ｓｅｑを使用して配列決定した。配列決定したデータを、Ｌｅｘｏｇｅｎ多重エラー訂正ツールを使用して逆多重化し、分析した。
図３５Ａ、３５Ｂ、及び３５Ｃに示したように、カニクイザルに本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を末梢注射すると、これらの非ヒト霊長類の前頭葉から単離したＦＡＣＳ選別ミクログリアでのＲＮＡｓｅｑ分析で測定したミクログリアでの遺伝子発現の変化がもたらされた。ミクログリアにおける抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処置による強力な誘導を示す遺伝子として、ミクログリア活性化のマーカー（Ｃ型レクチンドメインファミリー７メンバーＡ、ＣＬＥＣ７Ａ）、ミクログリア遊走（イノシトール１，４，５－三リン酸受容体２、ＩＴＰＲ２）、及びミクログリア増殖（抗原ＫＩ－６７（ＭＫＩ６７））がある（図３５Ａ）。ミクログリア活性化のさらなるマーカーの変化も認められており、図３５Ｂ、図３５Ｃに示したように、ミクログリア活性化マーカーＩＬ１ＲＮ、ＳＰＰ１、及び１－ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスフェートホスホジエステラーゼガンマ－２（ＰＬＣＧ２）がある。２つの恒常性ミクログリアマーカー（プリン作動性受容体Ｐ２ＲＹ１２、及びＣＸ３Ｃケモカイン受容体１（ＣＸ３ＣＲ１））に関する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を、図３５Ｃに示しており、それによると、これら２つの恒常性ミクログリアマーカーの発現レベルは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処理の後に低下した。図３５Ａ、３５Ｂ、及び３５Ｃのデータは、ｌｏｇ２スケールの平均として示しており、エラーバーはＳＥＭであり、そして、実験グループ及び時点あたりＮ＝５である。
まとめると、これらの結果は、ミクログリアの活性化、遊走、及び増殖に関連するタンパク質の様々なｍＲＮＡレベルの増大；及びミクログリアの恒常性に関連するタンパク質の様々なｍＲＮＡレベルの低下により証明されるように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ミクログリアをインビボで活性化する上で有効であることを示した。
実施例４８：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、Ｕ９３７細胞でのＨＡ－シュノーケル（Ｓｎｏｒｋｅｌ）タグが付いたＭＳ４Ａ４Ａの表面発現を抑制する
Ｕ９３７細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５９３．２）を、シュノーケルタグ（膜貫通ドメインと、それに続いて、ＨＡタグを、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞質Ｃ末端に結合させたもの）でタグ付けしたヒトＭＳ４Ａ４Ａをコードする発現プラスミドでトランスフェクトした。このようにして、タグを、細胞外に出現させるが、膜タンパク質から構造的に分離されている。トランスフェクトしたＵ９３７細胞は、プラスミドトランスフェクションと抗生物質の選択を経ても生存していた。次いで、フローサイトメトリーを使用して、細胞をヒトＭＳ４Ａ４Ａタンパク質細胞表面発現に関してスクリーニングし、そして、次の研究で使用するために、最も陽性度が顕著な５％の細胞だけを回収した。
上記したようにして生成した組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａ－シュノーケルを過剰発現するＵ９３７細胞を、これらの研究での標的細胞として使用した。細胞を、ＰＭＡ（２５ｎｇ／ｍｌ）で２４時間前処理した後に、回収し、そして、ＰＭＡ及び抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、ならびにアイソタイプコントロール抗体を、０．０１、０．１、及び１ｕｇ／ｍｌの最終濃度で含むＲＰＭＩ１６４０完全培地が入った丸底９６ウェルプレートに、１００，０００個の細胞／ウェルで播種した。細胞を、４８時間インキュベーションした。細胞を、冷ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、そして、１ウェルあたり５０μＬの１：２００に希釈した抗ＨＡタグモノクローナル抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ａ－２１２８７）を加え、そして、氷上で３０分間インキュベーションし、生死判別のためにＡｑｕａ Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄで標識した。細胞を、冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁した。フローサイトメトリー分析は、ＦＡＣＳＣａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行った。結合データを、蛍光強度の中央値を使用して分析した。
図３６に示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ、及び４Ａ－４５０．ＮＳＬＦは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ－シュノーケルタグが付いたタンパク質を用量に関連した方法で発現するＵ９３７細胞での原形質膜ＭＳ４Ａ４Ａのレベルを抑制した。１μｇ／ｍｌの最大の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体濃度では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦ及び４Ａ－４５０．ＮＳＬＦは、アイソタイプコントロール抗体で処理した細胞で認められたレベルと比較して、表面ＭＳ４Ａ４Ａレベルを約５０％減少させた。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａ－シュノーケルを発現するＵ９３７細胞での細胞表面ＭＳ４Ａ４Ａレベルを抑制またはダウンレギュレーションしたことを示した。
実施例４９：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、初代ヒト骨髄細胞での糖タンパク質非転移性黒色腫タンパク質Ｂ（ＧＰＮＭＢ）タンパク質のレベルを調節する
ＧＰＮＭＢは、組織マクロファージやミクログリアなどの複数の細胞型で発現する表面糖タンパク質である。幾つかの遺伝的バリアントが、パーキンソン病（ＰＤ）のリスクに関連している。ＧＰＮＭＢタンパク質のレベルは、ＰＤ患者の黒質で上昇しており、また、ＧＰＮＭＢレベルは、リソソームストレスを受けた後に上昇する（Ｍｏｌｏｎｅｙ ｅｔ．ａｌ．，２０１８，Ｎｅｕｒｏｂｉｏ Ｄｉｓ．１２０：１－１１）。加えて、ＧＰＮＭＢの発現の増大は、ＳＮＰ ｒｓ１９９３４７に関連しており、このリスクＳＮＰは、ＧＰＮＭＢ遺伝子内に位置している（Ｍｕｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ，２０１７，１８：１２１－１３３）。ＭＳ４Ａ４Ａが、ＧＰＮＭＢの発現レベルを調節し得るか否かを決定するために、２名のドナー（ドナー＃１１１７及び＃１１１８）から得たヒト初代マクロファージを、様々な濃度の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－３１３．ＮＳＬＦで、４８時間処理した。細胞表面（膜結合）ＧＰＮＭＢは、細胞をフルオロフォアとコンジュケートした抗ＧＰＮＭＢ抗体で染色した後に、フローサイトメトリーで測定した。
図３７に示したように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ．３１３．ＮＳＬＦを細胞に加えた後に、膜ＧＰＮＭＢレベルは、ヒト初代マクロファージにおいて低下した。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処理に応答したＧＰＮＭＢレベルの低下は、用量依存的であった。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、骨髄細胞、例えば、マクロファージでのＧＰＮＭＢの細胞表面発現レベルを下げる上で有効であることを示した。
野生型ｈｕＩｇＧ１、または野生型ｈｕＩｇＧ１のＦｃバリアントを有する例示的な抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体重鎖アミノ酸配列：
４Ａ－４５０（ｈｕＩｇＧ１重鎖）（配列番号３２０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－４５０（Ｃ末端Ｋを持たないｈｕＩｇＧ１重鎖）（配列番号３２１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
４Ａ－４５０（ｈＩｇＧ１重鎖；Ｐ３３１Ｓ）（配列番号３２２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－４５０（Ｃ末端Ｋを持たないｈＩｇＧ１重鎖Ｐ３３１Ｓ）（配列番号３２３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
４Ａ－４５０（ｈｕＩｇＧ１重鎖Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ）（配列番号３２４）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－４５０（Ｃ末端Ｋを持たないｈＩｇＧ１重鎖Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ）（配列番号３２５）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
４Ａ－４５０（ｈｕＩｇＧ１重鎖Ｋ３２２Ａ）（配列番号３２６）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－４５０（Ｃ末端Ｋを持たないｈｕＩｇＧ１重鎖Ｋ３２２Ａ）（配列番号３２７）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ

＊＊＊＊＊＊＊＊
４Ａ－４１９（ｈｕＩｇＧ１重鎖）（配列番号３２８）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＲＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－４１９（Ｃ末端Ｋを持たないｈｕＩｇＧ１重鎖）（配列番号３２９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＲＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
４Ａ－４１９（ｈＩｇＧ１重鎖Ｐ３３１Ｓ）（配列番号３３０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＲＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－４１９（Ｃ末端Ｋを持たないｈＩｇＧ１重鎖Ｐ３３１Ｓ）（配列番号３３１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＲＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
４Ａ－４１９（ｈｕＩｇＧ１重鎖Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ）（配列番号３３２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＲＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－４１９（Ｃ末端Ｋを持たないｈＩｇＧ１重鎖Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ）（配列番号３３３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＲＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
４Ａ－４１９（ｈｕＩｇＧ１重鎖Ｋ３２２Ａ）（配列番号３３４）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＲＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－４１９（Ｃ末端Ｋを持たないｈｕＩｇＧ１重鎖Ｋ３２２Ａ）（配列番号３３５）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＲＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＱＧＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＡＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ

＊＊＊＊＊＊＊＊
４Ａ－３１３（ｈｕＩｇＧ１重鎖定常領域）（配列番号３３６）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－３１３（Ｃ末端Ｋを持たないｈｕＩｇＧ１重鎖定常領域）（配列番号３３７）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
４Ａ－３１３（ｈＩｇＧ１重鎖定常領域Ｐ３３１Ｓ）（配列番号３３８）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－３１３（Ｃ末端Ｋを持たないｈＩｇＧ１重鎖定常領域Ｐ３３１Ｓ）（配列番号３３９）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
４Ａ－３１３（ｈｕＩｇＧ１重鎖定常領域Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ）（配列番号３４０）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－３１３（Ｃ末端Ｋを持たないｈＩｇＧ１重鎖定常領域Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ）（配列番号３４１）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
４Ａ－３１３（ｈｕＩｇＧ１重鎖定常領域Ｋ３２２Ａ）（配列番号３４２）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４Ａ－３１３（Ｃ末端Ｋを持たないｈｕＩｇＧ１重鎖定常領域Ｋ３２２Ａ）（配列番号３４３）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ

＊＊＊＊＊＊＊＊
ヒトＩｇＧ１軽鎖定常領域（配列番号３４４）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

＊＊＊＊＊＊＊＊
Figure 2022542964000073
Figure 2022542964000074
Figure 2022542964000075
Figure 2022542964000076
Figure 2022542964000077
Figure 2022542964000078
Figure 2022542964000079
Figure 2022542964000080
 ＊＊＊＊＊＊＊＊
Figure 2022542964000081
Figure 2022542964000082
Figure 2022542964000083

Claims (85)

  1. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であって、前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が：配列番号：９４、１０８、１１６、１４６、１４７、３０８、及び３１１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号９６、９７、９８、９９、１１０、１１１、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、３０９、及び３１２からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号１０２、１００、１０１、１０２、１１２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１５４、３１０、及び３１３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、前記軽鎖可変領域が：配列番号１０４、１０３、１１３、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１５６、１５７、１５８、３１４、及び３１７からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０５、１０６、１１４、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１５９、１６０、１６１、３１５、及び３１８からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１０７、１１５、１４４、１４５、１６３、３１６、及び３１９配列番号からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。
  2. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が：配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号９６～９９からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号１０２、１００、及び１０１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、前記軽鎖可変領域が：配列番号１０４及び１０３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０５～１０６からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が：配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号１１０～１１１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、前記軽鎖可変領域が；配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  4. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が：配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号１１８～１２２からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号１２３～１２９からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、かつ、前記軽鎖可変領域が；配列番号１３０～１３８からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１３９～１４３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１４４～１４５からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  5. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が：配列番号１４６～１４７からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号１４９～１５３からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、前記軽鎖可変領域が；配列番号１５６～１５８からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１５９～１６１からなる群から選択するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  6. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が：配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、前記軽鎖可変領域が；配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  7. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が：配列番号３０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号３０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号３１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、前記軽鎖可変領域が；配列番号３１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号３１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号３１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  8. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が：配列番号３１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び配列番号３１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、前記軽鎖可変領域が；配列番号３１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  9. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、抗体４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－４１９、または４Ａ－４５０のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む、前記抗体。
  10. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、また、前記軽鎖可変領域は、抗体４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－４１９、または４Ａ－４５０のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。
  11. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含み、前記抗体は、抗体４Ａ－３０１、４Ａ－３０２、４Ａ－３０３、４Ａ－３０４、４Ａ－３０５、４Ａ－３０６、４Ａ－３０７、４Ａ－３０８、４Ａ－３０９、４Ａ－３１０、４Ａ－３１１、４Ａ－３１２、４Ａ－３１３、４Ａ－３１４、４Ａ－４１９、または４Ａ－４５０のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。
  12. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、抗体４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、または４Ａ－３３１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む、前記抗体。
  13. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、抗体４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、または４Ａ－３３１のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。
  14. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含み、前記抗体は、抗体４Ａ－３１５、４Ａ－３１６、４Ａ－３１７、４Ａ－３１８、４Ａ－３１９、４Ａ－３２０、４Ａ－３２１、４Ａ－３２２、４Ａ－３２３、４Ａ－３２４、４Ａ－３２５、４Ａ－３２６、４Ａ－３２７、４Ａ－３２８、４Ａ－３２９、４Ａ－３３０、または４Ａ－３３１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。
  15. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、抗体４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６２、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、または４Ａ－３８１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む、前記抗体。
  16. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、抗体４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６２、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、または４Ａ－３８１のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。
  17. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含み、前記抗体は、抗体４Ａ－３３２、４Ａ－３３３、４Ａ－３３４、４Ａ－３３５、４Ａ－３３６、４Ａ－３３７、４Ａ－３３８、４Ａ－３３９、４Ａ－３４０、４Ａ－３４１、４Ａ－３４２、４Ａ－３４３、４Ａ－３４４、４Ａ－３４５、４Ａ－３４６、４Ａ－３４７、４Ａ－３４８、４Ａ－３４９、４Ａ－３５０、４Ａ－３５１、４Ａ－３５２、４Ａ－３５３、４Ａ－３５４、４Ａ－３５５、４Ａ－３５６、４Ａ－３５７、４Ａ－３５８、４Ａ－３５９、４Ａ－３６０、４Ａ－３６１、４Ａ－３６２、４Ａ－３６３、４Ａ－３６４、４Ａ－３６５、４Ａ－３６６、４Ａ－３６７、４Ａ－３６８、４Ａ－３６９、４Ａ－３７０、４Ａ－３７１、４Ａ－３７２、４Ａ－３７３、４Ａ－３７４、４Ａ－３７５、４Ａ－３７６、４Ａ－３７７、４Ａ－３７８、４Ａ－３７９、４Ａ－３８０、または４Ａ－３８１のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。
  18. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、抗体４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、または４Ａ－３９０のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む、前記抗体。
  19. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、また、前記軽鎖可変領域は、抗体４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、または４Ａ－３９０のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。
  20. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する抗体であって、前記抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、及びＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含み、前記抗体は、抗体４Ａ－３８２、４Ａ－３８３、４Ａ－３８４、４Ａ－３８５、４Ａ－３８６、４Ａ－３８７、４Ａ－３８８、４Ａ－３８９、または４Ａ－３９０のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。
  21. 前記抗体は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号５～１５、３０４、及び３０６からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項９に記載の抗体。
  22. 前記抗体は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号２４～３０からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１２に記載の抗体。
  23. 前記抗体は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号４０～５３からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１５に記載の抗体。
  24. 前記抗体は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号７６～８４からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１８に記載の抗体。
  25. 前記抗体は、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１７～２２、３０５、及び３０７からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１０に記載の抗体。
  26. 前記抗体は、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３２～３６からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１３に記載の抗体。
  27. 前記抗体は、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号５５～７４からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１６に記載の抗体。
  28. 前記抗体は、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号８６～９３からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１９に記載の抗体。
  29. 前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号５～１５、３０４、及び３０６からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１７～２２、３０５、及び３０７からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１１に記載の抗体。
  30. 前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号２４～３０からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３２～３６からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１４に記載の抗体。
  31. 前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号４０～５３からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号５５～７４からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項１７に記載の抗体。
  32. 前記抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号７６～８４からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号８６～９３からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項２０に記載の抗体。
  33. 前記抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号３２０～３４３からなる群から選択するアミノ酸配列を含む、請求項１、２、４、６～１１、２１、２５、及び２９のいずれか１項に記載の抗体。
  34. 前記抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号３３６～３４３からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、任意に、前記軽鎖は、配列番号３４４のアミノ酸配列を含む定常領域をさらに含む、請求項１、２、６、９～１１、２１、２５、２９のいずれか１項に記載の抗体。
  35. 前記抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号３２０～３２７からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、配列番号３０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、任意に、前記軽鎖は、配列番号３４４のアミノ酸配列を含む定常領域をさらに含む、請求項１、７、９～１１、２１、２５、及び２９のいずれか１項に記載の抗体。
  36. 前記抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号３２８～３３５からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、配列番号３０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、任意に、前記軽鎖は、配列番号３４４のアミノ酸配列を含む定常領域をさらに含む、請求項１、８～１１、２１、２５、及び２９のいずれか１項に記載の抗体。
  37. 前記抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号３５５～３６２からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖は、配列番号３６５のアミノ酸配列を含む、請求項１、２、６、９～１１、２１、２５、及び２９のいずれか１項に記載の抗体。
  38. 前記抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号３２０～３２７からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖は、配列番号３６３のアミノ酸配列を含む、請求項１、７、９～１１、２１、２５、及び２９のいずれか１項に記載の抗体。
  39. 前記抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖は、配列番号３２８～３３５からなる群から選択するアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖は、配列番号３６４のアミノ酸配列を含む、請求項１、８～１１、２１、２５、及び２９のいずれか１項に記載の抗体。
  40. 前記抗体が：
    ａ．重鎖可変領域及び軽鎖可変領域であって、前記重鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、前記軽鎖可変領域は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域；
    ｂ．重鎖可変領域及び軽鎖可変領域であって、前記重鎖可変領域は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域；または
    ｃ．重鎖及び軽鎖であって、前記重鎖は、配列番号３５９または３６０のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖は、配列番号３６５のアミノ酸配列を含む、前記重鎖及び軽鎖、
    を含む、請求項２に記載の抗体。
  41. 前記抗体が：
    ａ．重鎖可変領域及び軽鎖可変領域であって、前記重鎖可変領域は、配列番号３０４のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域は、配列番号３０５のアミノ酸配列を含む、前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域；または
    ｂ．重鎖及び軽鎖であって、前記重鎖は、配列番号３２４または３２５のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖は、配列番号３６３のアミノ酸配列を含む、前記重鎖及び軽鎖、
    を含む、請求項７に記載の抗体。
  42. 前記抗体が：
    ａ．重鎖可変領域及び軽鎖可変領域であって、前記重鎖可変領域は、配列番号３０６のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域は、配列番号３０７のアミノ酸配列を含む、前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域；または
    ｂ．重鎖及び軽鎖であって、前記重鎖は、配列番号３３２または３３３のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖は、配列番号３６４のアミノ酸配列を含む、前記重鎖及び軽鎖、
    を含む、請求項８に記載の抗体。
  43. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であって、前記抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合に関して、請求項１～４２のいずれか１項に記載の１つ以上の抗体との結合を競合的に阻害する、前記抗体。
  44. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であって、前記抗体は、請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体と本質的に同じである、または重複するＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する、前記抗体。
  45. 前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳ（配列番号１７８）の１つ以上のアミノ酸残基に対して結合し、前記抗体は、配列番号１のアミノ酸残基プロリン１６３に結合しない、請求項４４に記載の抗体。
  46. 前記抗体が、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン１に対して結合する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体。
  47. 前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列ＣＭＡＳＮＴＹＧＳＮＰＩＳ（配列番号１７７）の１つ以上のアミノ酸残基に対して結合する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体。
  48. 前記抗体が、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン２に対して結合する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体。
  49. 前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳ（配列番号１７８）の１つ以上のアミノ酸残基に対して結合する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体。
  50. 前記抗体が、ヒトのもの、またはヒト化したものである、請求項１～４９のいずれか１項に記載の抗体。
  51. 前記抗体が、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞表面レベルを下げる、またはＭＳ４Ａ４Ａの細胞内レベルを下げる、請求項１～５０のいずれか１項に記載の抗体。
  52. 前記抗体が、骨髄細胞において、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる、膜ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる、または可溶性ＴＲＥＭ２を増やし、膜ＴＲＥＭ２レベルを引き上げる、請求項１～５１のいずれか１項に記載の抗体。
  53. 前記抗体が、骨髄細胞でのＭ２細胞表面マーカーの発現を抑制する、請求項１～５２のいずれか１項に記載の抗体。
  54. 前記抗体が、骨髄細胞でのＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、またはＣＤ１６３の発現を抑制する、請求項５３に記載の抗体。
  55. 前記抗体が、骨髄細胞でのゲルゾリン及び／またはオステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の発現を高める、請求項１～５０のいずれか１項に記載の抗体。
  56. ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合する単離した抗体であって、前記抗体は、骨髄細胞でのゲルゾリン及び／またはオステオポンチンのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の発現を高める、前記抗体。
  57. 前記骨髄細胞が、ヒトマクロファージである、請求項５６に記載の抗体。
  58. 前記抗体が、ヒトのもの、またはヒト化したものである、請求項５６または５７に記載の抗体。
  59. 前記抗体は、４Ａ－１８、４Ａ－２５、４Ａ－２１４、４Ａ－２１、及び４Ａ－２０２からなる群から選択する抗体と同じエピトープに対して結合する、請求項５６～５８のいずれか１項に記載の抗体。
  60. 前記抗体が、骨髄細胞でのＭ２マーカーの発現を抑制する、請求項５６～５９のいずれか１項に記載の抗体。
  61. 前記骨髄細胞が、ヒトマクロファージである、請求項６０に記載の抗体。
  62. 前記Ｍ２マーカーが、ＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、及び／またはＣＤ１６３である、請求項６１に記載の抗体。
  63. 前記抗体が、ヒトマクロファージでの膜ＴＲＥＭ２を、少なくとも５０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、または２５０％増やす、請求項５６～６２のいずれか１項に記載の抗体。
  64. 前記抗体が、ヒトマクロファージ上清での可溶性ＴＲＥＭ２を、少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、または７０％増やす、請求項５６～６３のいずれか１項に記載の抗体。
  65. 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１～６４のいずれか１項に記載の抗体。
  66. 前記抗体が、配列番号１のヒトＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する、請求項１～６５のいずれか１項に記載の抗体。
  67. 前記抗体が、配列番号３のカニクイザルＭＳ４Ａ４Ａに対してさらに結合する、請求項６６に記載の抗体。
  68. 前記抗体が、ＩｇＧクラスに属し、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１～６７のいずれか１項に記載の抗体。
  69. 前記抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを有する、請求項６８に記載の抗体。
  70. 前記抗体が、ＥＵ付番法で定めたＮ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ変異を含む改変したＦｃを含む、請求項６９に記載の抗体。
  71. 前記抗体が、抗体フラグメントである、請求項１～７０のいずれか１項に記載の抗体。
  72. 前記抗体フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、請求項７１に記載の抗体。
  73. 前記抗体が、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、請求項１～７２のいずれか１項に記載の抗体。
  74. 前記第１の抗原がＭＳ４Ａ４Ａであり、かつ、前記第２の抗原が：
    （ａ）血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；
    （ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択する、血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；
    （ｃ）病原ペプチドまたはタンパク質、または、病原核酸からなる群から選択する病原作用物質であって、前記病原核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡張ＲＮＡであり、前記病原タンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、または、そのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチド反復（ＤｉＰｅｐｔｉｄｅ ｒｅｐｅａｔ）（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及び、プロリン－アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択する、前記病原作用物質；
    （ｄ）免疫細胞で発現するリガンド、及び／または、タンパク質であって、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ－３、及び、ホスファチジルセリンからなる群から選択する、前記リガンド、及び／または、タンパク質；または
    （ｅ）１つ以上の腫瘍細胞で発現するタンパク質、脂質、多糖、または、糖脂質、
    である、請求項７３に記載の抗体。
  75. 先行請求項のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸配列を含む単離した核酸。
  76. 請求項７５に記載の核酸を含むベクター。
  77. 請求項７５に記載の核酸、または請求項７６に記載のベクターを含む単離した宿主細胞。
  78. ヒトＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する抗体を製造する方法であって、前記抗体を製造するために、請求項７７に記載の細胞を培養することを含む、前記方法。
  79. 細胞が産生した抗体を回収することをさらに含む、請求項７８に記載の方法。
  80. 請求項１～７４のいずれか１項に記載の抗体と、医薬として許容可能な担体とを含む医薬組成物。
  81. アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び、認知障害からなる群から選択する疾患、障害、または、損傷を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、治療有効量の請求項１～７４のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記方法。
  82. ＭＳ４Ａ４Ａの過剰発現、または、高まった活性に起因する、または、それらと関連する疾患、障害、病態、または、損傷を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、治療有効量の請求項１～７４のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記方法。
  83. ＣＳＦ１Ｒ欠損疾患または障害を予防する、そのリスクを抑制する、またはそれを有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、請求項１～７４のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
  84. 前記ＣＳＦ１Ｒ欠損疾患または障害が、軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症性白質脳症（ＡＬＳＰ）または遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）である、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記抗体の投与の前及び／または後でのオステオポンチン、ゲルゾリン、膜ＴＲＥＭ２、及び／または可溶性ＴＲＥＭ２のレベルを検出することをさらに含む、請求項８１～８４のいずれか１項に記載の方法。
JP2022506146A 2019-07-31 2020-07-30 抗ｍｓ４ａ４ａ抗体、及びその使用方法 Pending JP2022542964A (ja)

Applications Claiming Priority (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962881187P 2019-07-31 2019-07-31
US62/881,187 2019-07-31
US201962892467P 2019-08-27 2019-08-27
US62/892,467 2019-08-27
US201962947449P 2019-12-12 2019-12-12
US62/947,449 2019-12-12
US202062960606P 2020-01-13 2020-01-13
US62/960,606 2020-01-13
US202063057142P 2020-07-27 2020-07-27
US63/057,142 2020-07-27
PCT/US2020/044335 WO2021022083A2 (en) 2019-07-31 2020-07-30 Anti-ms4a4a antibodies and methods of use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022542964A true JP2022542964A (ja) 2022-10-07
JPWO2021022083A5 JPWO2021022083A5 (ja) 2023-08-07

Family

ID=72139691

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022506146A Pending JP2022542964A (ja) 2019-07-31 2020-07-30 抗ｍｓ４ａ４ａ抗体、及びその使用方法

Country Status (17)

Country Link
US (2) US11667699B2 (ja)
EP (1) EP4003519A2 (ja)
JP (1) JP2022542964A (ja)
KR (1) KR20220058540A (ja)
CN (1) CN114341181A (ja)
AU (1) AU2020321969A1 (ja)
BR (1) BR112022001733A2 (ja)
CA (1) CA3145885A1 (ja)
CL (1) CL2022000230A1 (ja)
CO (1) CO2022000832A2 (ja)
CR (1) CR20220078A (ja)
EC (1) ECSP22015044A (ja)
IL (1) IL289952A (ja)
MX (1) MX2022001260A (ja)
PE (1) PE20220487A1 (ja)
TW (1) TW202120547A (ja)
WO (1) WO2021022083A2 (ja)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019152715A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Alector Llc Anti-ms4a4a antibodies and methods of use thereof
CN114341181A (zh) 2019-07-31 2022-04-12 艾莱克特有限责任公司 抗ms4a4a抗体及其使用方法
TW202415679A (zh) * 2022-07-29 2024-04-16 美商阿列克特有限責任公司 抗ｇｐｎｍｂ抗體及其使用方法
WO2024026472A2 (en) * 2022-07-29 2024-02-01 Alector Llc Transferrin receptor antigen-binding domains and uses therefor
WO2024086796A1 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Alector Llc Anti-ms4a4a antibodies with amyloid-beta therapies

Family Cites Families (74)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
DE68913658T3 (de) 1988-11-11 2005-07-21 Stratagene, La Jolla Klonierung von Immunglobulin Sequenzen aus den variablen Domänen
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2103887C (en) 1991-12-13 2005-08-30 Gary M. Studnicka Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
AU7378096A (en) 1995-09-28 1997-04-17 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Porcine cell interaction proteins
US6133426A (en) 1997-02-21 2000-10-17 Genentech, Inc. Humanized anti-IL-8 monoclonal antibodies
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
PT1222292E (pt) 1999-10-04 2005-11-30 Medicago Inc Metodo para regulacao da transcricao de genes exogenos na presenca de azoto
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
EP1272647B1 (en) 2000-04-11 2014-11-12 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
PT1354034E (pt) 2000-11-30 2008-02-28 Medarex Inc Roedores transgénicos transcromossómicos para produção de anticorpos humanos
AU2002251692A1 (en) 2000-12-08 2002-08-19 Duke University Identification of novel ms4a gene family members expressed by hematopoietic cells
AU2002337935B2 (en) 2001-10-25 2008-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
ES2362419T3 (es) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa.
WO2003085107A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules à génome modifié
AU2003236017B2 (en) 2002-04-09 2009-03-26 Kyowa Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition
EP1498490A4 (en) 2002-04-09 2006-11-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION
GB0324888D0 (en) * 2003-10-24 2003-11-26 Novartis Ag Organic compounds
JP5128935B2 (ja) 2004-03-31 2013-01-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化抗ＴＧＦ−β抗体
JP2008506637A (ja) 2004-06-14 2008-03-06 ザ・ボード・オブ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・イリノイ 胎児起源の細胞に対する抗体
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
HUE066795T2 (hu) 2006-03-15 2024-09-28 Alexion Pharmaceuticals Inc Paroxysmalis nocturnalis haemoglobinuriában szenvedõ betegek kezelése egy komplement inhibitorral
JP2009536527A (ja) 2006-05-09 2009-10-15 ジェネンテック・インコーポレーテッド 最適化されたスキャフォールドを備えた結合ポリペプチド
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
GB0624500D0 (en) * 2006-12-07 2007-01-17 Istituto Superiore Di Sanito A novel passive vaccine for candida infections
UY30776A1 (es) 2006-12-21 2008-07-03 Medarex Inc Anticuerpos cd44
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
HUE028536T2 (en) 2008-01-07 2016-12-28 Amgen Inc Method for producing antibody to FC heterodimer molecules using electrostatic control effects
EP2108701A1 (en) * 2008-04-10 2009-10-14 Ganymed Pharmaceuticals AG Methods involving MS4A12 and agents targeting MS4A12 for therapy, diagnosis and testing
PE20141521A1 (es) 2011-08-23 2014-10-25 Roche Glycart Ag Moleculas biespecificas de union a antigeno activadoras de celulas t
CN104774264B (zh) 2014-01-15 2018-09-14 上海易乐生物技术有限公司 抗人proBDNF单克隆抗体及其在疼痛中的作用
CA2874083C (en) * 2014-12-05 2024-01-02 Universite Laval Tdp-43-binding polypeptides useful for the treatment of neurodegenerative diseases
US20190321443A1 (en) 2016-02-16 2019-10-24 President And Fellows Of Harvard College Modulators of MS4A activity
CN105759057A (zh) 2016-04-12 2016-07-13 上海凯璟生物科技有限公司 一种检测阿尔兹海默综合症ms4a6a的干式免疫荧光试剂盒和制备方法
WO2019152715A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Alector Llc Anti-ms4a4a antibodies and methods of use thereof
CN112204050A (zh) 2018-01-31 2021-01-08 艾莱克特有限责任公司 抗ms4a6a抗体及其使用方法
CN114341181A (zh) 2019-07-31 2022-04-12 艾莱克特有限责任公司 抗ms4a4a抗体及其使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
KR20220058540A (ko) 2022-05-09
BR112022001733A2 (pt) 2022-06-28
EP4003519A2 (en) 2022-06-01
MX2022001260A (es) 2022-04-18
ECSP22015044A (es) 2022-03-31
CO2022000832A2 (es) 2022-04-29
CN114341181A (zh) 2022-04-12
IL289952A (en) 2022-03-01
WO2021022083A3 (en) 2021-03-11
WO2021022083A2 (en) 2021-02-04
PE20220487A1 (es) 2022-04-04
CR20220078A (es) 2022-06-24
AU2020321969A1 (en) 2022-03-17
US11667699B2 (en) 2023-06-06
US20210079074A1 (en) 2021-03-18
US20240076362A1 (en) 2024-03-07
CL2022000230A1 (es) 2022-10-07
TW202120547A (zh) 2021-06-01
CA3145885A1 (en) 2021-02-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7268038B2 (ja) 抗ｍｓ４ａ４ａ抗体及びその使用方法
KR20210015872A (ko) 항-sirpa 항체 및 그의 사용 방법
EP3618928B1 (en) Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof
TW202342547A (zh) 抗trem2抗體及其使用方法
US11667699B2 (en) Anti-MS4A4A antibodies and methods of use thereof
US20230303681A1 (en) Anti-tmem106b antibodies and methods of use thereof
US20220380455A1 (en) Anti-ms4a6a antibodies and methods of use thereof
US20240101681A1 (en) Methods of use of anti-sortilin antibodies
US20240174746A1 (en) Anti-tmem106b antibodies and methods of use thereof
EA044134B1 (ru) Анти-trem2 антитела и способы их применения

Legal Events

Date Code Title Description
RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20220907

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20220914

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230728

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230728

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20230830

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20240708

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20241003