EA046146B1 - Антитела против сортилина и способы их применения - Google Patents

Антитела против сортилина и способы их применения Download PDF

Info

Publication number
EA046146B1
EA046146B1 EA201992335 EA046146B1 EA 046146 B1 EA046146 B1 EA 046146B1 EA 201992335 EA201992335 EA 201992335 EA 046146 B1 EA046146 B1 EA 046146B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
amino acid
sortilin
acid sequence
seq
Prior art date
Application number
EA201992335
Other languages
English (en)
Inventor
Тина Швабе
Майкл Карнеллас
Арнон Розенталь
Роберт Пейхал
Энтони Б. Купер
Original Assignee
ЭЛЕКТОР ЭлЭлСи
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ЭЛЕКТОР ЭлЭлСи filed Critical ЭЛЕКТОР ЭлЭлСи
Publication of EA046146B1 publication Critical patent/EA046146B1/ru

Links

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки
Данная заявка заявляет приоритет по предварительной заявке США № 62/698007, поданной 13 июля 2018 г., предварительной заявке США № 62/860184, поданной 11 июня 2019 г., и предварительной заявке США № 62/868849, поданной 28 июня 2019 г., которые в полном объеме включены в данный документ посредством ссылок.
Заявление касательно федерально спонсируемых исследований или разработок
Данное изобретение было выполнено при поддержке правительства по гранту № R44AG050363, выданному Национальными институтами здравоохранения (National Institutes of Health). Правительство имеет определенные права на данное изобретение.
Подача перечня последовательностей в виде текстового файла в формате ASCII
Содержание следующего представленного текстового файла в формате ASCII включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме: машиночитаемая форма (CRF) Перечня последовательностей (имя файла: 735022001940SEQLIST.TXT, дата создания: 10 июля 2019 г., размер: 153 кб).
Область техники
Данное изобретение относится к антителам против сортилина, и терапевтическим применениям таких антител.
Известный уровень техники
Сортилин представляет собой трансмембранный белок типа I, который выступает в роли как рецептора нескольких лигандов, так и участвует в сортировке выбранного груза (cargo) из сети трансГольджи (TGN) в поздние эндосомы и лизосомы для деградации. Сортилин содержит большой внеклеточный домен, входящий в состав семейства VPS10, гомологичный VPS10P дрожжей, и содержит 10лопастную бета-пропеллерную структуру и богатый цистеином модуль 10CC (Nykjaer, A et al., (2012) Trends Neurosci 35: 261-270; и Zheng, Y et al., (2011) PLoS One 6: e21023). Небольшая часть сортилина (<5%) может сбрасываться с поверхности (shed) в результате активности ADAM10 или гамма-секретазы (Nykjaer, A et al., (2012) Trends Neurosci 35: 261-270; и Willnow, TE et al., (2011) Curr Opin Lipidol 22: 7985).
Сортилин связывает секретируемый белок програнулин (PGRN) и нацеливает его для лизосомальной деградации, тем самым негативно регулируя внеклеточные уровни PGRN (Hu, F et al. (2010) Neuron 68, 654-667). Соответственно, дефицит сортилина значительно увеличивает уровни PGRN плазмы как в мышиных моделях in vivo, так и в человеческих клетках in vitro (Carrasquillo, M.M et al., (2010) Am J Hum Genet 87, 890-897; Lee, W.C et al., (2014) Hum Mol Genet 23, 1467-1478). Более того, было показано, что полиморфизм сортилина сильно связан с уровнями PGRN сыворотки у людей (Carrasquillo MM et al., (2010), Am J Hum Genet. 10; 87(6):890-7).
Програнулин (PGRN) представляет собой секретируемый подобный фактору роста, трофический, и противовоспалительный белок, который также играет роль адипокина, участвующего в вызываемом рационом питания ожирении и инсулинорезистентности (Nguyen DA et al., (2013). Trends in Endocrinology and Metabolism, 24, 597- 606). На дефицит програнулина приходится примерно 25% всех наследственных форм лобно-височной деменции (ЛВД), представляющей собой нейродегенеративную болезнь с ранним началом. Пациенты с гетерозиготными мутациями потери функции PGRN имеют сниженные на около 50% внеклеточные уровни белка, и у них неизбежно развивается ЛВД, что делает PGRN геном, ответственным за это заболевание (Baker, M et al., (2006) Nature 442, 916-919; Carecchio M et al., (2011) J Alzheimers Dis 27, 781-790; Cruts, M et al., (2008) Trends Genet 24, 186-194; Galimberti, D et al., (2010) J Alzheimers Dis 19, 171-177). Кроме того, мутантные аллели PGRN были идентифицированы у пациентов с болезнью Альцгеймера (Seelaar, H et al., (2011). Journal of neurology, neurosurgery, and psychiatry 82, 476486). Важно отметить, что PGRN оказывает защитное действие в нескольких моделях заболеваний с повышенными уровнями PGRN, ускоряя поведенческое восстановление при ишемии (Tao, J et al., (2012) Brain Res 1436, 130-136; Egashira, Y. et al., (2013). J Neuroinflammation 10, 105), подавляя локомоторные дефициты в модели болезни Паркинсона (Van Kampen, J.M et al. (2014). PLoS One 9, e97032), ослабляя патологию в модели амиотрофического (amyotriphic) бокового склероза (Laird, A.S et al., (2010). PLoS One 5, e13368.) и артрита (Tang, W et al., (2011). Science 332, 478-484) и предотвращая дефициты памяти в модели болезни Альцгеймера (Minami, S.S et al., (2014). Nat Med 20, 1157-1164).
Сортилин также связывается непосредственно с пронейротрофинами, такими как про-фактор роста нервов (про-NGF), про-BDNF (про-нейротрофический фактор головного мозга), пронейротрофин-3 и т.д., которые содержат (harbor) про-домен и типично являются проапоптотическими. Такие прекурсоры пронейротрофина высвобождаются при стрессе, и сортилин участвует в регуляции их высвобождения, а также связывании на принимающей клетке и стимуляции апоптоза в сочетании с p75NTR (Willnow, TE et al., (2008) Nat Rev Neurosci 9: 899-909; Nykjaer, A et al., Trends Neurosci 35: 261-270; и Nykjaer, A et al., (2004) Nature 427: 843-848; Hiroko Yano et al., (2009) J Neurosci. 29: 14790-14802.Teng H.K., et al., J. Neurosci. 25:5455-5463(2005)). Сортилин также непосредственно связывается с p75NTR (Skeldal S et al., (2012) J Biol Chem.; 287:43798). Сортилин также связывается с нейротензином в области, частично перекрывающейся со связыванием програнулина (Quistgaard, EM et al., (2009) Nat Struct Mol Biol 16: 96-98; и Zheng, Y et al., PLoS One 6: e21023). Сортилин также взаимодействует с Trk-рецепторами NTRK1,
- 1 046146
NTRK2, и NTRK3; и может регулировать их антероградный аксональный транспорт и сигнализацию (Vaegter, CB et al., (2011) Nat. Neurosci. 14:54-61). Сортилин также взаимодействует с, и регулирует, процессинг и направленную миграцию белка-предшественника амилоида и происходящее в результате этого продуцирование патологических бета-амилоидных пептидов (Gustafsen C et al., (2013). J Neurosci. 2;33(1):64-71).
Было также показано, что сортилин связывается с аполипопротеинами и липопротеинлипазой; таким образом, дефицит приводит к пониженному высвобождению VLDL (липопротеинов очень низкой плотности) из печени и сниженному холестерину (Willnow, TE et al., (2011) Curr Opin Lipidol 22: 79-85; Kjolby, M et al., (2010) Cell Metab 12: 213-223; Nilsson, SK et al., (2007) Biochemistry 46: 3896-3904; Nilsson, SK et al., (2008) J Biol Chem 283: 25920-25927; и Klinger, SC et al., (2011) J Cell Sci 124: 1095-1105). Недавно было высказано предположение, что сортилин также непосредственно участвует в связывании с APP (предшественник бета-амилоидного белка) (Gustafsen, C et al., (2013) J. Neurosc. 33:64-71), а также с ферментом процессинга APP BACE1 (бета-секретаза) (Gustafsen, C et al., (2013) J. Neurosc. 33:64-71; и Finan, GM et al., J Biol Chem 286: 12602-12616). Сортилин также связывается с аполипопротеином E (APOE), с бета-амилоидным (A beta) пептидом (Carlo, AS et al., (2013) J. Neurosc, 33: 358-370), и с PCSK9 (пропротеиновая конвертаза субтилизин-кексинового типа 9) (Gustafsen et al., (2014) Cell Metab, 19:310318). Было также показано, что сортилин связывается с, и регулирует внеклеточные уровни, PCSK9, которая направляет рецептор липопротеина низкой плотности для деградации в лизосомы, что приводит к повышенным уровням холестерина LDL (Gustafsen C et al., (2014). Cell Metab. 2014 Feb 4; 19(2):310-8).
В случае присутствия во внутриклеточных везикулах, таких как эндосомы, аминоконцевой внеклеточный домен сортилина направлен к полости, где находится груз везикулы. Карбоксиконцевой внутриклеточный/цитоплазматический домен сортилина, однако, связывается с рядом адаптерных белков, которые регулируют его направленную миграцию с поверхности и во внутриклеточные компартменты. Они включают AP2 (адаптер клатрина, для модулирования эндоцитоза с поверхности клетки), и комплекс ретромер/AP1, который модулирует перемещение из ранних эндосом в аппарат Гольджи для рециркуляции; и взаимодействие с белками семейства GGA (локализующиеся в аппарате Гольджи, содержащие гамма-ear, связывающие фактор АДФ-рибозилирования) для перемещения из аппарата Гольджи непосредственно в ранние эндосомы, обычно для последующей деградации посредством лизосом. Таким образом, сортилин может связываться с лигандами своим люминальным доменом, в то же время сцепляясь с цитоплазматическими адаптерами, которые определяют его назначение для определения внутриклеточной судьбы, такой как деградация, для програнулина и других факторов.
Было продемонстрировано, что благодаря своим различным взаимодействиям с белками, такими как програнулин, сортилин и его многочисленные лиганды участвуют в различных заболеваниях, расстройствах и состояниях, таких как лобно-височная деменция, боковой амиотрофический склероз, фенотипы бокового амиотрофического склероза-лобно-височной деменции, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, депрессия, нейропсихиатрические расстройства, сосудистая деменция, эпилептические припадки, дистрофия сетчатки, возрастная макулярная дегенерация, глаукома, травматическое повреждение головного мозга, старение, эпилептические припадки, заживление ран, инсульт, артрит и атеросклеротические болезни сосудов.
Соответственно, существует потребность в терапевтических антителах, которые специфически связывают белки сортилина и блокируют связывание сортилина с его лигандами, такими как програнулин, или иначе модулируют эффективную концентрацию лигандов, для лечения одной или нескольких болезней, расстройств и состояний, связанных с активностью сортилина.
Все источники, упоминаемые в данном документе, включая патенты, патентные заявки и публикации, настоящим включены посредством ссылок в полном объеме.
Сущность изобретения
Данное изобретение в общем относится к композициям, которые содержат антитела, например, моноклональные, химерные, гуманизированные антитела, фрагменты антител и т.д., которые специфически связывают человеческий сортилин, и к способам использования таких композиций.
В некоторых аспектах, данное изобретение предусматривает антитело, которое связывается с белком сортилином, при этом антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, содержащий SEQ ID NO: 1, HVR-H2, содержащий SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, и HVR-H3, содержащий SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6; и вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1 содержащий любые из SEQ ID NO: 8-27, HVR-L2, содержащий SEQ ID NO: 29 или SEQ ID NO: 30, и HVR-L3, содержащий SEQ ID NO: 32.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2,
- 2 046146 содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRVS (SEQ ID NO: 30), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLES (SEQ ID NO: 3), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых аспектах, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых аспектах, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых аспектах, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 10), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых аспектах, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 21), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность
- 3 046146
ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 26), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQGLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 27), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых аспектах, данное изобретение предусматривает антитело, которое связывается с белком сортилином, при этом антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), и HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVRL3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых аспектах, данное изобретение предусматривает антитело, которое связывается с белком сортилином, при этом антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи с HVR-H1, содержащим аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащим аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), и HVR-H3, содержащим аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых вариантах реализации любых из вышеуказанных аспектов, антитело против сортилина: (a) снижает уровни сортилина клеточной поверхности больше, чем уровень снижения, вызываемый антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79; (b) повышает внеклеточные уровни програнулина большее, чем уровень повышения, вызываемый антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79; (c) ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином больше, чем уровень ингибирования, вызываемый антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79; или (d) обеспечивает любую комбинацию (a)-(c). В некоторых вариантах реализации любых из вышеуказанных аспектов, антитело против сортилина: (a) снижает уровни сортилина клеточной поверхности больше, чем уровень снижения, вызываемый антителом против сортилина, выбранным из группы, состоящей из S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, или S60-8; (b) повышает внеклеточные уровни програнулина большее, чем уровень повышения, вызываемый антителом против сортилина, выбранным из группы, состоящей из S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, или S-60-8; (c) ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином больше, чем уровень ингибирования, вызываемый антителом против сортилина, выбранным из группы, состоящей из S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, или S-60-8; или (d) обеспечивает любую комбинацию (a)-(c).
Определенные аспекты данного изобретения предусматривают антитело против сортилина с вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54-56; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 57-58, 60-78, или 80.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59.
- 4 046146
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80.
В некоторых аспектах, данное изобретение предусматривает антитело, которое связывается с белком сортилином, при этом антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57.
В определенных аспектах, данное изобретение предусматривает антитело, которое связывается с белком сортилином, при этом антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.
В определенных аспектах, данное изобретение предусматривает антитело, которое связывается с белком сортилином, при этом антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61.
В определенных аспектах, данное изобретение предусматривает антитело, которое связывается с белком сортилином, при этом антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72.
В некоторых вариантах реализации, которые могут быть объединены с любыми из предшествующих аспектов, антитело против сортилина по данному изобретению принадлежит к классу IgG, классу IgM, или классу IgA. В определенных конкретных вариантах реализации, антитело против сортилина принадлежит к классу IgG и имеет изотип IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения, предусматривается антитело против сортилина изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, при этом (a) антитело представляет собой изотип IgG1 или IgG2 и Fc-область содержит аминокислотную замену в положении P331S, при этом нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU; (b) антитело представляет собой изотип IgG1 и Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях L234A, L235A и P331S, при этом нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU; (c) антитело представляет собой изотип IgG1, IgG2, или IgG4 и Fc-область содержит аминокислотную замену в положении N297A, при этом нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU; или (d) Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях S267E и L328F, при этом нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU. В некоторых вариантах реализации, антитело представляет собой изотип IgG1 и Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях L234A, L235A и P331S, при этом нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU.
В некоторых аспектах, данное изобретение предусматривает антитело, которое связывается с белком сортилином, при этом антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142.
В некоторых аспектах, данное изобретение предусматривает антитело, которое связывается с белком сортилином, при этом антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения, белок сортилин представляет собой чело
- 5 046146 веческий белок. В некоторых вариантах реализации, белок сортилин представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации, белок сортилин представляет собой природный вариант. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению специфически связывается с человеческим белком сортилином. В некоторых вариантах реализации, которые могут быть объединены с любыми из предшествующих вариантов реализации, антитело представляет собой человеческое антитело, биспецифическое антитело, моноклональное антитело, поливалентное антитело, конъюгированное антитело или химерное антитело. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению представляет собой моноклональное антитело.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению представляет собой биспецифическое антитело, распознающее первый антиген и второй антиген. В некоторых вариантах реализации, биспецифические антитела по данному изобретению распознают как сортилин, так и антиген, облегчающий транспорт через гематоэнцефалический барьер. В некоторых конкретных вариантах реализации, первый антиген представляет собой сортилин и второй антиген представляет собой сортилин, рецептор трансферрина (TR), рецептор инсулина (HIR), рецептор инсулиноподобного фактора роста (IGFR), белки 1 и 2, родственные рецептору липопротеина низкой плотности (LPR-1 и 2), рецептор дифтерийного токсина, CRM197, однодоменное антитело ламы, TMEM 30(A), домен белковой трансдукции, TAT, Syn-B, пенетратин, полиаргининовый пептид, пептид angiopep, басигин (basigin), Glut1, CD98hc, или ANG1005.
В некоторых вариантах реализации данного изобретения, антитело против сортилина представляет собой фрагмент антитела, который связывается с человеческим белком сортилином. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой фрагмент антитела, который связывается с одним или несколькими человеческими белками, выбранными из группы, состоящей из человеческого сортилина, природного варианта человеческого сортилина, и варианта болезни человеческого сортилина. В некоторых вариантах реализации, которые могут быть объединены с любым из предшествующих вариантов реализации, фрагмент антитела против сортилина представляет собой Fab-, Fab'-, Fab'-SH-, F(ab')2-, Fv- или scFv-фрагмент.
В некоторых вариантах реализации, данное изобретение предусматривает антитело против сортилина, при этом (a) антитело против сортилина повышает внеклеточные уровни програнулина, снижает клеточные уровни сортилина, ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином, или обеспечивает любую их комбинацию; (b) антитело против сортилина снижает уровни сортилина клеточной поверхности, повышает внеклеточные уровни програнулина, ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином, или обеспечивает любую их комбинацию; (c) антитело против сортилина снижает уровни сортилина клеточной поверхности, снижает внутриклеточно уровни сортилина, снижает общие уровни сортилина, или обеспечивает любую их комбинацию; (d) антитело против сортилина индуцирует деградацию сортилина, расщепление сортилина, интернализацию сортилина, снижение экспрессии сортилина, или обеспечивают любую их комбинацию; (e) антитело против сортилина снижает клеточные уровни сортилина и ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином; (f) антитело против сортилина снижает клеточные уровни сортилина и повышает клеточные уровни програнулина; и/или (g) антитело против сортилина повышает эффективную концентрацию програнулина.
В некоторых вариантах реализации, данное изобретение предусматривает антитело против сортилина, при этом антитело против сортилина снижает уровни сортилина клеточной поверхности, повышает внеклеточные уровни програнулина, ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином, или обеспечивает любую их комбинацию. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина имеет константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая имеет значение до 2,5 раз ниже, чем у антитела против сортилина, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79, при этом KD определяют методом FACS (см., например, пример 1). В некоторых вариантах реализации, антитело имеет константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая имеет значение от более чем 1 раза и до примерно 2,1 раза ниже, чем у антитела против сортилина, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79, при этом KD определяют методом FACS. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина имеет константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая имеет значение в диапазоне от примерно 1,10E-8 М до примерно 4,68E-10 М, при этом KD определяют методом FACS (см., например, пример 1), или от примерно 270 до примерно 2910 пМ, при этом KD определяют методом интерферометрии биослоев (см., например, пример 4). В некоторых вариантах реализации, антитело имеет константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая имеет значение в диапазоне от примерно 5,0E-10 М до примерно 1,0E-9 М, при этом KD определяют методом FACS, или примерно 250-500 пМ, при этом KD определяют методом интерферометрии биослоев.
В некоторых вариантах реализации, которые могут быть объединены с любыми из предшествующих вариантов реализации, антитело против сортилина по данному изобретению (a) снижает уровни сортилина клеточной поверхности с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей
- 6 046146 менее 150 пМ, при измерении методом проточной цитометрии; (b) снижает уровни сортилина клеточной поверхности на более чем примерно 50% при 1,25 нМ IgG, на более чем примерно 80% при 0,63 нМ IgG, или на более чем примерно 69% при 150 нМ IgG по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; повышает секрецию програнулина более чем в примерно 1,13 раза по сравнению с контролем при 0,63 нМ IgG, или более чем в примерно 1,22 раза по сравнению с контролем при 50 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА; блокирует связывание програнулина с сортилином с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 0,325 нМ, при измерении методом проточной цитометрии; (e) блокирует связывание програнулина с сортилином на более чем примерно 88% при 50 нМ IgG, или на более чем примерно 27,5% при 150 нМ IgG по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; или (f) обеспечивает любую их комбинацию.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению (a) снижает уровни сортилина клеточной поверхности с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 681 пМ, при измерении методом проточной цитометрии; (b) снижает уровни сортилина клеточной поверхности на более чем примерно 40% при 1,25 нМ IgG, на более чем примерно 29% при 0,6 нМ IgG, или на более чем примерно 62% при 150 нМ IgG по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; (c) повышает секрецию програнулина более чем в примерно 1,11 раза по сравнению с контролем при 0,63 нМ IgG, или более чем в примерно 1,75 раза по сравнению с контролем при 50 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА; (d) блокирует связывание програнулина с сортилином с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 0,751 нМ, при измерении методом проточной цитометрии; (e) блокирует связывание програнулина с сортилином на более чем примерно 90% при 50 нМ IgG, или на более чем примерно 95% при 150 нМ IgG по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; или (f) обеспечивает любую их комбинацию.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению конкурирует за связывание с сортилином с антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи антитела, выбранные из группы, состоящей из S-60-10, S-60-11, S-60-12, S60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt) (дикого типа)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19, S-60-24, и любой их комбинации. В некоторых вариантах реализации, которые могут быть объединены с любыми из предшествующих вариантов реализации, антитело против сортилина по данному изобретению связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и антитело, содержащее вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19 и S-60-24.
В другом аспекте, данное изобретение относится к антителу, продуцируемому любым из способов, описанных в данном документе. В некоторых аспектах, данное изобретение предусматривает выделенную нуклеиновую кислоту, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело против сортилина по любому из предшествующих аспектов и вариантов реализации. Соответственно, некоторые аспекты предусматривают вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело против сортилина, и некоторые аспекты предусматривают выделенную клетку-хозяина, содержащую такой вектор. В определенных аспектах, данное изобретение предусматривает способ продуцирования антитела против сортилина, которое связывается с сортилином, включающий культивирование такой выделенной клетки-хозяина таким образом, чтобы при этом продуцировалось антитело против сортилина. В некоторых вариантах реализации, способ дополнительно включает выделение антитела, продуцируемого клеткой. В некоторых аспектах, данный документ предусматривает выделенное антитело, которое связывается с сортилином и продуцируется способом по данному изобретению.
В другом аспекте, данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей любое из антител против сортилина, описанных в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах реализации, данное изобретение относится к использованию любых антител или композиций, описанных в данном документе, для приготовления или производства лекарственного средства. В некоторых вариантах реализации, данное изобретение относится к использованию любых антител или композиций, описанных в данном документе, для приготовления или производства лекарственного средства для лечения лобно-височной деменции, прогрессирующего надъядерного паралича, болезни Альцгеймера, сосудистой деменции, эпилептических припадков, дистрофии сетчатки, бокового амиотрофического склероза, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, нейропатической боли, деменции, инсульта, болезни Паркинсона, острого рассеянного энцефаломиелита, дегенерации сетчатки, возрастной макулярной дегенерации, глаукомы, рассеянного склероза, септического шока, бактериальной инфекции, артрита или остеоартрита. Некоторые варианты реализации предусматривают антитело или композицию, описанные в данном документе, для использования в способе лечения. Некоторые варианты реализации предусматривают антитело или композицию, описанные в данном документе, для использования в способе лечения лобно-височной деменции, прогрессирующего надъядерного паралича, болезни Альцгеймера, сосудистой деменции, эпилептических припадков, дистрофии сетчатки, бокового амиотрофического склероза, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, нейропатической боли, деменции, инсульта, болезни
- 7 046146
Паркинсона, острого рассеянного энцефаломиелита, дегенерации сетчатки, возрастной макулярной дегенерации, глаукомы, рассеянного склероза, септического шока, бактериальной инфекции, артрита или остеоартрита.
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ предотвращения, снижения риска или лечения индивидуума с болезнью, расстройством или поражением, включающий введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, болезнь, расстройство или поражение выбирают из группы, состоящей из лобно-височной деменции, прогрессирующего надъядерного паралича, болезни Альцгеймера, сосудистой деменции, эпилептических припадков, дистрофии сетчатки, бокового амиотрофического склероза, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, нейропатической боли, деменции, инсульта, болезни Паркинсона, острого рассеянного энцефаломиелита, дегенерации сетчатки, возрастной макулярной дегенерации, глаукомы, рассеянного склероза, септического шока, бактериальной инфекции, артрита и остеоартрита. В некоторых вариантах реализации, болезнь, расстройство или поражение выбирают из лобно-височной деменции, прогрессирующего надъядерного паралича, болезни Альцгеймера и бокового амиотрофического склероза.
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ ингибирования чего-то одного или нескольких из нейровоспаления, аксонопатии, характеризующейся коротким аксональным разрастанием и аберрантным ветвлением, микроглиальной активации, и воспалительного ответа, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению.
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ усиления чего-то одного или нескольких из заживления ран, аутофагии, и клиренса агрегированных белков, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению.
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ предотвращения, снижения риска или лечения индивидуума с артритом, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению.
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ снижения экспрессии одного или нескольких провоспалительных медиаторов, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, один или несколько провоспалительных медиаторов выбирают из группы, состоящей из IL6, IL12p70, IL12p40, IL-Τβ, TNF-α, CXCL1, CCL2, CCL3, CCL4 и CCL5.
В некоторых аспектах, данный документ предусматривает способ ингибирования взаимодействия между сортилином и програнулином, включающий воздействие на клетку, экспрессирующую сортилин, антителом против сортилина или фармацевтической композицией по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, клетка находится в условиях in vitro. В некоторых вариантах реализации, клетка находится в условиях in vivo. В некоторых вариантах реализации, способ дополнительно включает снижение уровня сортилина, экспрессируемого на поверхности клетки. В некоторых вариантах реализации, внеклеточные уровни програнулина повышены.
В некоторых аспектах, данный документ предусматривает способ повышения уровней програнулина у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина или фармацевтической композиции по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, уровни програнулина повышаются в плазме. В некоторых вариантах реализации, уровни програнулина повышаются в цереброспинальной жидкости. В некоторых аспектах, данный документ предусматривает способ снижения уровней сортилина у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина или фармацевтической композиции по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, уровни сортилина понижаются в лейкоцитах периферической крови. В некоторых вариантах реализации, индивидуум имеет одну или несколько мутаций в гене, кодирующем програнулин. В некоторых вариантах реализации, индивидуум является гетерозиготным по одной или нескольким мутациям потери функции в гене, кодирующем програнулин. В некоторых вариантах реализации, индивидуум имеет экспансию гексануклеотидных повторов c9orf72 (открытая рамка считывания 72 хромосомы 9). Индивидуум имеет лобно-височную деменцию, болезнь Альцгеймера, или боковой амиотрофический склероз, или риск их развития.
В некоторых вариантах реализации, которые могут быть объединены с любыми из предшествующих аспектов или вариантов реализации, данное изобретение предусматривает способ, в котором антитело против сортилина содержит два или больше антител против сортилина.
- 8 046146
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1A-1C демонстрируют фармакокинетические и фармакодинамические исследования не являющихся человеком приматов, получавших разовые дозы антител против сортилина S-60-15.1 [N33T] LALAPS (S-60-15.1 [N33T] с huIgG1 с мутациями L234A/L235A/P331S). На фиг. 1A представлены уровни SORT1 в лейкоцитах периферической крови в процентах от базовой линии в указанные моменты времени после введения (часов) доз указанного антитела против сортилина. Экспрессия SORT1 снижается для всех тестируемых доз антитела против сортилина. Более высокие дозы антитела (60 мг/кг, 200 мг/кг) приводили как к более раннему, так и к более длительному снижению уровней SORT1 по сравнению с более низкими дозами антитела против сортилина (5 мг/кг, 20 мг/кг). На фиг. 1B представлены уровни PGRN в плазме в процентах от базовой линии в указанные моменты времени после введения (часов) указанных доз антитела против сортилина. Уровни PGRN повышаются время- и дозозависимым образом. В частности, уровни PGRN плазмы повышаются от 3 до 4 раз при Cmax, по сравнению с уровнями базовой линии, для всех тестируемых доз антитела против сортилина и остаются повышенными на протяжении более длительных периодов времени при более высоких дозах антитела. На фиг. 1C представлены уровни PGRN в ЦСЖ в процентах от базовой линии в указанные моменты времени после введения (часов) указанных доз антитела против сортилина. Уровни PGRN ЦСЖ повышаются от 2 до 3 раз по сравнению с базовой линией у животных, получивших 20 мг/кг, 60 мг/кг, или 200 мг/кг. Аналогично уровням PGRN плазмы (фиг. 1B), уровни PGRN ЦСЖ остаются повышенными по прошествии длительного времени в группах более высоких доз антитела. Для фиг. 1A-1C, n=3 животных на дозу.
Фиг. 2A-2C демонстрируют фармакокинетические и фармакодинамические исследования не являющихся человеком приматов, получавших повторные дозы антитела против сортилина S-60-15.1 [N33T] LALAPS. Животным (2 самца и 2 самки) вводили антитело против сортилина S-60-15.1 [N33T] LALAPS в дозе 60 мг/кг раз в неделю в течение четырех недель. Дни введения доз отмечены вертикальными пунктирными линиями. На фиг. 2A представлены средние (+/- стандартное отклонение) концентрации SORT1 в лейкоцитах периферической крови (WBC) в процентах от исходного уровня в указанные моменты времени (дней). Уровни SORT1 в лейкоцитах периферической крови оставались сниженными на протяжении исследований. На фиг. 2B представлены средние (+/-стандартное отклонение) концентрации PGRN в плазме в процентах от исходного уровня (нормированные) в указанные моменты времени (дней). Уровни PGRN плазмы повышались от 5 до 6 раз выше базовой линии при пиковых уровнях. Снижение PGRN в плазме наблюдали после четвертого и последнего введения антитела против сортилина; однако, уровни PGRN плазмы остаются повышенными в 2 раза от базовой линии. На фиг. 2C представлены средние (+/- стандартное отклонение) концентрации PGRN в ЦСЖ в процентах от исходного уровня (нормированные) в указанные моменты времени (дней). Уровни PGRN ЦСЖ были повышены в 34 раза от базовой линии (фиг. 2C).
Подробное описание сущности изобретения
Определения.
В используемом в данном документе значении, термин предотвращение включает обеспечение профилактики по отношению к проявлению или рецидивированию конкретного заболевания, расстройства или состояния у индивидуума. Индивидуум может быть предрасположен к, восприимчив к конкретной болезни, расстройству или состоянию, или иметь риск развития такой болезни, расстройства или состояния, но еще без установленного диагноза болезни, расстройства или состояния.
В используемом в данном документе значении, индивидуум с риском развития конкретной болезни, расстройства или состояния может иметь или не иметь детектируемую болезнь или симптомы болезни, и может иметь или не иметь детектируемые проявления болезни или симптомов болезни до проведения способов лечения, описанных в данном документе. С риском означает, что индивидуум имеет один или несколько факторов риска, которые представляют собой измеримые параметры, коррелирующие с развитием конкретной болезни, расстройства или состояния, как известно специалистам. Индивидуум с одним или несколькими такими факторами риска имеет более высокую вероятность развития конкретной болезни, расстройства или состояния, чем индивидуум без одного или нескольких таких факторов риска.
В используемом в данном документе значении, термин лечение относится к клиническому вмешательству, направленному на изменение естественного хода событий для индивидуума, получающего лечение в ходе клинической патологии. Желательные эффекты лечения включают снижение скорости прогрессирования, улучшение или облегчение патологического состояния, и ремиссия или улучшенный прогноз конкретной болезни, расстройства или состояния. Индивидуум успешно проходит лечение, например, если один или несколько симптомов, связанных с конкретной болезнью, расстройством или состоянием, смягчаются или устраняются.
Эффективное количество относится к по меньшей мере количеству, являющемуся эффективным, в дозировках и на протяжении периодов времени, необходимых для достижения желательного терапевтического или профилактического результата. Эффективное количество может быть обеспечено за одно или несколько введений. Эффективное количество в данном документе может меняться в зависимости от таких факторов, как болезненное состояние, возраст, пол и вес индивидуума, и способности лечения вызывать желательный ответ у индивидуума. Эффективное количество является также таким, при котором
- 9 046146 терапевтически полезные эффекты превышают любое токсическое или вредное воздействие лечения. Для профилактического применения, полезные или желательные результаты включают такие результаты, как устранение или снижение риска, ослабление тяжести, или задержка начала проявления болезни, включая биохимические, гистологические и/или поведенческие симптомы болезни, ее осложнения и промежуточные патологические фенотипы, наблюдаемые в ходе развития болезни. Для терапевтического применения полезные или желательные результаты включают клинические результаты, такие как уменьшение одного или нескольких симптомов, вызванных болезнью, повышение качества жизни особ, страдающих болезнью, уменьшение дозы других лекарственных препаратов, требующихся для лечения болезни, усиление действия другого лекарственного препарата, например, посредством направленной доставки, замедление прогрессирования болезни, и/или увеличение выживаемости. Эффективное количество лекарственного препарата, соединения, или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для проведения профилактического или терапевтического лечения, прямо или косвенно. Как подразумевается в клиническом контексте, эффективное количество лекарственного препарата, соединения, или фармацевтической композиции может достигаться или не достигаться в сочетании с другим лекарственным препаратом, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, эффективное количество может рассматриваться в контексте введения одного или нескольких терапевтических агентов, и может считаться, что один агент был введен в эффективном количестве, если, в сочетании с одним или несколькими другими агентами, может быть достигнут или был достигнут желательный результат
В используемом в данном документе значении, введение в сочетании с другим соединением или композицией включает одновременное введение и/или введение в другое время. Введение в сочетании также охватывает введение в виде совместной композиции или введение в виде отдельных композиций, включая разные частоты или интервалы введения доз, и использование одного и того же пути введения или разных путей введения.
Индивидуум, в целях лечения, предотвращения или снижения риска, относится к любому животному, классифицируемому как млекопитающее, включая людей, одомашненных и сельскохозяйственных животных, и животных в зоопарках, спортивных животных или домашних питомцев, таких как собаки, лошади, кролики, крупный рогатый скот, свиньи, хомячки, песчанки, мыши, хорьки, крысы, кошки и т.п. Предпочтительно, индивидуум представляет собой человека.
Термины сортилин или полипептид сортилина используются взаимозаменяемо в данном документе по отношению к любому нативному сортилину из любого источника, относящегося к млекопитающих, включая приматов (например, людей и яванских макаков (cynos)) и грызунов (например, мышей и крыс), если не указано иное. В некоторых вариантах реализации, термин охватывает как последовательности дикого типа, так и природные варианты последовательностей, например, варианты сплайсинга или аллельные варианты. В некоторых вариантах реализации, термин охватывает полноразмерный, непроцессированный сортилин, а также любую форму сортилина, которая образуется в результате процессинга в клетке. В некоторых вариантах реализации, сортилин представляет собой человеческий сортилин. В некоторых вариантах реализации, аминокислотная последовательность типичного примера человеческого сортилина представляет собой SEQ ID NO: 81.
Термины антитело против сортилина, антитело, которое связывается с сортилином, и антитело, которое специфически связывает сортилин относятся к антителу, которое способно связывать сортилин с достаточной аффинностью таким образом, чтобы антитело было пригодно для использования в качестве диагностического и/или терапевтического агента при нацеливании на сортилин. В одном варианте реализации, степень связывания антитела против сортилина с неродственным, не относящимся к сортилину полипептидом, составляет менее примерно 10% от связывания антитела с сортилином, при измерении, например, методом радиоиммуноанализа (РИА). В некоторых вариантах реализации, антитело, которое связывается с сортилином, имеет константу диссоциации (KD) < 1 мкМ, < 100 нМ, < 10 нМ, < 1 нМ, < 0,1 нМ, < 0,01 нМ, или < 0,001 нМ (например, 10-8 М или меньше, например, от 10-8 М до 10-13 М, например, от 10-9 М до 10-13 М). В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина связывается с эпитопом сортилина, который является консервативным для сортилина от разных видов.
Термин иммуноглобулин (Ig) используется в данном документе взаимозаменяемо с антителом. Термин антитело используется в данном документе в самом широком смысле и особо охватывает моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), включая образованные по меньшей мере двумя интактными антителами, и фрагменты антител, при условии, что они проявляют желательную биологическую активность.
Нативные антитела представляют собой обычно гетеротетрамерные гликопротеины размером примерно 150000 Дальтон, состоящие из двух идентичных легких (L) цепей и двух идентичных тяжелых (H) цепей. Каждая легкая цепь связана с тяжелой цепью одной ковалентной дисульфидной связью, в то время как число дисульфидных связей в тяжелых цепях разных изотипов иммуноглобулина меняется. Каждая тяжелая и легкая цепь также имеет расположенные с равномерными промежутками внутрицепочечные дисульфидные мостики. Каждая тяжелая цепь имеет на одном конце вариабельный домен (VH), за которым следует ряд константных доменов. Каждая легкая цепь имеет вариабельный домен на
- 10 046146 одном конце (VL) и константный домен на другом ее конце; константный домен легкой цепи прилегает к первому константному домену тяжелой цепи, и вариабельный домен легкой цепи прилегает к вариабельному домену тяжелой цепи. Считается, что конкретные аминокислотные остатки образуют поверхность раздела между вариабельными доменами легкой цепи и тяжелой цепи.
Структура и свойства разных классов антител описаны, например, в Basic and Clinical Immunology, 8th Ed., Daniel P. Stites, Abba I. Terr и Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, страница 71 и глава 6.
Легкая цепь любого вида позвоночных может быть отнесена к одному из двух четко различающихся типов, обозначенных каппа (к) и лямбда (λ), на основании аминокислотных последовательностей их константных доменов. В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей (CH), иммуноглобулины могут быть отнесены к разным классам или изотипам. Существует пять классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG, и IgM, имеющих тяжелые цепи, обозначаемые альфа (α), дельта (δ), эпсилон (ε), гамма (γ), и мю (μ), соответственно. Классы γ и α дополнительно делятся на подклассы (изотипы) на основании относительно незначительных различий в последовательности и функции CH, например, человек экспрессирует следующие подклассы: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, и IgA2. Структуры и трехмерные конфигурации субъединиц разных классов иммуноглобулинов хорошо известны и описаны в общем, например, в Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders Co., 2000).
Вариабельная область или вариабельный домен антитела, такого как антитело против сортилина по данному изобретению, относится к аминоконцевым доменам тяжелой или легкой цепи антитела. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи могут быть обозначены VH и VL, соответственно. Эти домены обычно являются наиболее вариабельными частями антитела (по сравнению с другими антителами того же класса) и содержат антигенсвязывающие сайты.
Термин вариабельный относится к тому факту, что определенные сегменты вариабельных доменов в значительной степени отличаются по последовательности у разных антител, таких как антитела против сортилина по данному изобретению. Вариабельный домен медиирует связывание антигена и определяет специфичность конкретного антитела к его конкретному антигену. Однако, изменчивость не распределена равномерно по всей протяженности вариабельных доменов. Вместо этого, она сконцентрирована в трех сегментах, называемых гипервариабельными участками (HVR) вариабельных доменов как легкой, так и тяжелой цепей. Более высококонсервативные участки вариабельных доменов называются каркасными участками (FR). Вариабельные домены нативных тяжелых и легких цепей содержат каждый четыре FR-участка, преимущественно принимающих конфигурацию бета-листов, соединенных тремя HVR, которые образуют петли, соединяющие, и в некоторых случаях образующие часть структуры беталистов. HVR в каждой цепи удерживаются на близком расстоянии друг к другу каркасными участками (FR) и, вместе с HVR другой цепи, участвуют в образовании антигенсвязывающего сайта антител (см. Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)). Константные домены не принимают непосредственного участия в связывании антитела с антигеном, но проявляют различные эффекторные функции, такие как участие антитела в антителозависимой клеточной токсичности.
Выделенное антитело, такое как антитело против сортилина по данному изобретению, представляет собой антитело, которое было идентифицировано, отделено и/или извлечено из компонента среды его продуцирования (например, естественным путем или рекомбинантно). Предпочтительно, выделенный полипептид не связан со всеми другими загрязняющими компонентами из среды его продуцирования. Загрязняющие компоненты из среды его продуцирования, такие как образуемые рекомбинантными трансфицированными клетками, представляют собой материалы, которые будут обычно препятствовать исследовательскому, диагностическому или терапевтическому применению антитела, и могут включать ферменты, гормоны, и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В предпочтительных вариантах реализации, полипептид будет очищен: (1) до более чем 95 мас.% антитела при определении, например, методом Лоури, и в некоторых вариантах реализации, до более чем 99 мас.%; (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней части аминокислотной последовательности при использовании секвенатора с вращающимся стаканом, или (3) до состояния гомогенности по методу ДСН-ПААГ в невосстанавливающих или восстанавливающих условиях с использованием окрашивания кумасси голубым или, предпочтительно, серебром. Выделенное антитело включает антитело in situ в рекомбинантных T-клетках, поскольку по меньшей мере один компонент природной среды антитела будет отсутствовать. Обычно, однако, выделенный полипептид или антитело будут получены с использованием по меньшей мере одной стадии очистки.
Термин моноклинальное антитело, в используемом в данном документе значении, относится к антителу, такому как моноклональное антитело против сортилина по данному изобретению, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. индивидуальные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных природных мутаций и/или посттрансляционных модификаций (например, изомеризации, амидирования и т.д.), которые могут присутствовать в не
- 11 046146 значительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифическими, будучи направленными против одного антигенного сайта. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые типично включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одного детерминанта on антиген. В дополнение к своей специфичности, моноклональные антитела имеют то преимущество, что они синтезируются гибридомной культурой, незагрязненными другими иммуноглобулинами. Определение моноклональный указывает на характер антитела как полученного из по существу гомогенной популяции антител, и не подразумевает требования продуцирования антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела для использования в соответствии с данным изобретением могут быть приготовлены различными способами, включая, без ограничений, один или несколько из следующих способов - методы иммунизации животных включая, без ограничений, крыс, мышей, кроликов, морских свинок, хомячков и/или кур, чем-то одним или несколькими из ДНК, вирусоподобных частиц, полипептида (polypeptide) (полипептидов), и/или клетки (клеток), гибридомные методы, методы клонирования B-клеток, методы рекомбинантных ДНК, и технологии продуцирования человеческих или человекоподобных антител у животных, имеющих часть или все локусы человеческого иммуноглобулина или гены, кодирующие последовательности человеческого иммуноглобулина.
Термины полноразмерное антитело, интактное антитело или цельное антитело используются взаимозаменяемо по отношению к антителу, такому как антитело против сортилина по данному изобретению, в его по существу интактной форме, в отличие от фрагмента антитела. Более конкретно, цельные антитела включают антитела с тяжелыми и легкими цепями, включая Fc-область. Константные домены могут быть константными доменами с нативными последовательностями (например, человеческими константными доменами с нативными последовательностями) или вариантами их аминокислотных последовательностей. В некоторых случаях, интактное антитело может иметь одну или несколько эффекторных функций.
Фрагмент антитела содержит часть интактного антитела, предпочтительно, антигенсвязывающую и/или вариабельную область интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают Fab-, Fab'-, F(ab')2. и Fv-фрагменты; диатела; линейные антитела (см. патент США 5641870, пример 2; Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); одноцепочечные молекулы антител и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.
Папаиновый гидролиз антител, таких как антитела против сортилина по данному изобретению, дает два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, называемых Fab''-фрагментами, и остаточный Fcфрагмент, название которого отображает способность легко кристаллизоваться. Fab-фрагмент состоит из легкой (L) цепи вместе с доменом вариабельной области тяжелой (H) цепи (VH), и первым константным доменом одной тяжелой цепи (CH1). Каждый фрагмент Fab является моновалентным по связыванию антигена, т.е. он имеет один антигенсвязывающий сайт. Обработка антитела пепсином дает один большой F(ab')2-фрагмент, который соответствует приблизительно двум дисульфидно-связанным Fab-фрагментам, имеющим разную антигенсвязывающую активность и сохраняющим способность к перекрестному связыванию антигена. Fab'-фрагменты отличаются от Fab-фрагментов наличием нескольких дополнительных остатков на карбоксильном конце домена CH1, включая один или несколько цистеинов из шарнирной области антитела. Fab'-SH используется в данном документе для обозначения Fab', в котором цистеиновый остаток (остатки) константных доменов несет свободную тиольную группу. F(ab')2-фрагменты антител первоначально получали в виде пар Fab'-фрагментов, между которыми расположены шарнирные цистеины. Известны также другие химические сочетания фрагментов антител.
Fc-фрагмент содержит карбоксиконцевые участки обоих H-цепей, удерживаемые вместе дисульфидными связями. Эффекторные функции антител определяются последовательностями в Fc-области, в области, которую распознают также Fc-рецепторы (FcR), присутствующие на определенных типах клеток.
Fv представляет собой минимальный фрагмент антитела, который содержит полный антигенраспознающий и -связывающий сайт. Этот фрагмент состоит из димера доменов вариабельной области одной тяжелой и одной легкой цепей с сильными нековалентными связями. При укладке этих двух доменов образуются шесть гипервариабельных петель (по 3 петли в каждой из H- и L-цепей), аминокислотные остатки которых участвуют в связывании антигена и придают антителу антигенсвязывающую специфичность. Однако, даже один вариабельный домен (или половина Fv, содержащая только три HVR, специфичных к антигену) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя и с более низкой аффинностью, чем целый связывающий сайт.
Одноцепочечный Fv, также сокращенно обозначаемый sFv или scFv, обозначает фрагменты антител, которые содержат домены VH и VL антитела, соединенные в одну полипептидную цепь. Предпочтительно, полипептид sFv дополнительно содержит полипептидный линкер между VH и VL доменами, который дает возможность sFv образовывать желательную для связывания антигена структуру. Обзор sFv приведен Pluckthun в The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).
Функциональные фрагменты антител, таких как антитела против сортилина по данному изобрете- 12 046146 нию, содержат часть интактного антитела, как правило, включая антигенсвязывающую или вариабельную область интактного антитела или F-участок антитела, который сохраняет или имеет модифицированную FcR-связывающую способность. Примеры фрагментов антител включают линейное антитело, одноцепочечные молекулы антител и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.
Термин ''диатела'' относится к малым фрагментам антител, полученным путем конструирования фрагментов sFv (см. предыдущий абзац) с короткими линкерами (примерно 5-10 остатков) между VH и VL-доменами таким образом, чтобы обеспечивалась межцепочечное, но не внутрицепочечное спаривание вариабельных доменов, с образованием в результате бивалентного фрагмента, т.е. фрагмента, имеющего два антигенсвязывающих сайта. Биспецифические диатела представляют собой гетеродимеры двух 'кроссинговерных' фрагментов sFv, в которых домены VH и VL двух антител находятся в разных полипептидных цепях.
В используемом в данном документе значении, химерное антитело относится к антителу (иммуноглобулину), такому как химерное антитело против сортилина по данному изобретению, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующей последовательности антител, полученных от определенного вида или принадлежащих к определенному классу или подклассу антител, в то время как остальная цепь (цепи) идентична или гомологична соответствующим последовательностям антител, полученных от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител, а также фрагментам таких антител, при условии, что они проявляют желательную биологическую активность. Химерные антитела, представляющие интерес для данного изобретения, включают антитела PRIMATIZED®, в которых антигенсвязывающий участок антитела получают из антитела, продуцируемого путем, например, иммунизации макак антигеном, представляющим интерес. В используемом в данном документе значении, гуманизированное антитело используется как подмножество (is used a subset) химерных антител.
Гуманизированные' формы не принадлежащих человеку (например, мышиных) антител, таких как гуманизированные формы антител против сортилина по данному изобретению, представляют собой химерные антитела, содержащие аминокислотные остатки из не принадлежащих человеку HVR и аминокислотные остатки из человеческих FR. В некоторых вариантах реализации, гуманизированное антитело будет содержать по существу полностью по меньшей мере один, и типично два, вариабельных домена, в которых все или по существу все HVR (например, CDR) соответствуют не принадлежащему человеку антителу, и все или по существу все FR соответствуют человеческому антителу. Гуманизированное антитело необязательно может содержать по меньшей мере часть константной области антитела, полученной из человеческого антитела. Гуманизированная форма антитела, например, не принадлежащего человеку антитела, относится к антителу, которое было подвергнуто гуманизации.
Человеческое антитело представляет собой антитело, имеющее аминокислотную последовательность, соответствующую антителу, такому как антитело против сортилина по данному изобретению, продуцируемое человеком и/или приготовленное с использованием любых методов получения человеческих антител, как раскрыто в данном документе. Это определение человеческого антитела прямо исключает гуманизированное антитело, содержащее не принадлежащие человеку антигенсвязывающие остатки. Человеческие антитела могут продуцироваться с использованием различных методов, известных специалистам, включая библиотеки фагового дисплея и технологии на платформе использования дрожжей. Человеческие антитела могут быть получены путем введения антигена трансгенному животному, которое было модифицировано для продуцирования таких антител в ответ на антигенный стимул, но с заблокированными эндогенными локусами, например, иммунизированным ксеномышам, а также посредством технологии человеческой B-клеточной гибридомы.
Термин гипервариабельный участок, HVR, или HV, при использовании в данном документе относится к областям вариабельного домена антитела, такого как антитела против сортилина по данному изобретению, которые являются гипервариабельными по последовательностям и/или образуют структурно определенные петли. Как правило, антитела содержат шесть HVR; три в VH (H1, H2, H3), и три в VL (L1, L2, L3). В нативных антителах, H3 и L3 демонстрируют наибольшее разнообразие шести HVR, и H3, в частности, как считается, играет уникальную роль в придании антителам тонкой специфичности. Природные антитела верблюдовых, состоящие только из тяжелой цепи, являются функциональными и стабильными в отсутствие легкой цепи.
Используется ряд определений HVR, которые включены в данный документ. В некоторых вариантах реализации, HVR могут быть областями, определяющими комплементарность (CDR), по Кабату (Kabat), основанными на изменчивости последовательностей и наиболее часто используемыми (Kabat et al., выше). В некоторых вариантах реализации, HVR могут представлять собой CDR по Чотиа (Chothia). Система Чотиа отличается использованием расположения структурных петель (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). В некоторых вариантах реализации, HVR могут представлять собой HVR согласно AbM. AbM HVR являются компромиссом между CDR по Кабату и структурными петлями Чотиа, и используются в программе моделирования антител AbM фирмы Oxford Molecular. В некоторых вариантах реализации, HVR могут быть контактными HVR. Контактные HVR основаны на анализе дос
- 13 046146 тупных структур сложных кристаллов. Остатки каждого из этих HVR указаны ниже.
Петля Кабат АЬМ Чотиа Контакт
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
Н1 Н31-Н35В Н26-Н35В Н26-Н32 Н30-Н35В (нумерация по Кабату)
Н1 Н31-Н35 Н26-Н35 Н26-Н32 Н30-Н35 (нумерация по Чотиа)
Н2 Н50-Н65 Н50-Н58 Н53-Н55 Н47-Н58
ИЗ Н95-Н102 Н95-Н102 Н96-Н101 Н93-Н101
HVR могут включать расширенный HVR (extended HVR) следующим образом: 24-36 или 24-34 (L1), 46-56 или 50-56 (L2), и 89-97 или 89-96 (L3) в VL, и 26-35 (H1), 50-65 или 49-65 (предпочтительный вариант реализации) (H2), и 93-102, 94-102, или 95-102 (H3) в VH. Остатки вариабельного домена пронумерованы в соответствии с Kabat et al., выше, для каждого из этих определений расширенных HVR.
Каркасные или FR остатки представляют собой остатки вариабельного домена, отличные от остатков HVR, как было определено в данном документе.
Человеческий каркас-акцептор, в используемом в данном документе значении, представляет собой каркас, содержащий аминокислотную последовательность каркаса VL или VH, полученную из каркаса человеческого иммуноглобулина или человеческого консенсусного каркаса. Человеческий каркасакцептор, полученный из каркаса человеческого иммуноглобулина или человеческого консенсусного каркаса, может содержать ту же самую его аминокислотную последовательность, или же он может содержать заданные изменения аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах реализации, число заданных аминокислотных изменений составляет 10 или меньше, 9 или меньше, 8 или меньше, 7 или меньше, 6 или меньше, 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. В тех случаях, когда заданные аминокислотные изменения присутствуют в VH, предпочтительно, такие изменения находятся только в трех, двух или одном из положений 71H, 73H и 78H; например, аминокислотными остатками в этих положениях могут быть (may by) 71A, 73T и/или 78A. В одном варианте реализации, человеческий каркас-акцептор VL является идентичным по последовательности с каркасной последовательностью VL человеческого иммуноглобулина или человеческой консенсусной каркасной последовательностью.
Человеческий консенсусный каркас является каркасом, который представляет наиболее часто встречающиеся аминокислотные остатки в выбранных каркасных последовательностях VL или VH человеческого иммуноглобулина. Как правило, выбор последовательностей VL или VH человеческого иммуноглобулина проводят из подгруппы последовательностей вариабельного домена. Как правило, подгруппа последовательностей представляет собой подгруппу согласно Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). Примеры включают для VL подгруппу, которая может быть подгруппой каппа I, каппа II, каппа III или каппа IV, как в Kabat et al., выше. Дополнительно, для VH, подгруппа могут быть подгруппой I, подгруппой II или подгруппой III, как в Kabat et al., выше.
Аминокислотная модификация в определенном положении, например, антитела против сортилина по данному изобретению, относится к замене или делеции определенного остатка, или инсерции по меньшей мере одного аминокислотного остатка рядом с определенным остатком. Инсерция рядом с определенным остатком означает инсерцию на расстоянии от одного до двух остатков от него. Инсерция может быть N-концевой или C-концевой по отношению к определенному остатку. Предпочтительная аминокислотная модификация в данном документе представляет собой замену.
Антитело с созревшей аффинностью, такое как антитело против сортилина по данному изобретению, представляет собой антитело с одним или несколькими изменениями в одном или нескольких его HVR, которые приводят к повышению аффинности антитела к антигену, по сравнению с исходным антителом, не имеющим такого изменения (изменений). В одном варианте реализации, антитело с созревшей аффинностью имеет наномолярную или даже пикомолярную аффинность к антигену-мишени. Антитела с созревшей аффинностью получают с использованием процедур, известных специалистам. Например, Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992) описывает созревание аффинности путем перетасовки VHи VL-доменов. Неспецифический мутагенез HVR и/или каркасных остатков описаны, например, в Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); и Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992).
В используемом в данном документе значении, термин специфически распознает или специфически связывается относится к измеримым и воспроизводимым взаимодействиям, таким как притяжение или связывание между мишенью и антителом, таким как антитело против сортилина по данному
- 14 046146 изобретению, которое позволяет определять присутствие мишени в присутствии гетерогенной популяции молекул, включая биологические молекулы. Например, антитело, такое как антитело против сортилина по данному изобретению, которое специфически или предпочтительно связывается с мишенью или эпитопом, представляет собой антитело, которое связывает эту мишень или эпитоп с большей аффинностью, авидностью, более легко, и/или на более длительный период времени, чем оно скязывается с другими мишенями или другими эпитопами мишени. Это определение также подразумевает, что, например, антитело (или фрагмент), которое специфически или предпочтительно связывается с первой мишенью, может специфически или предпочтительно связываться со второй мишенью, или не связываться с ней таким образом. По существу, специфическое связывание или предпочтительное связывание не требует обязательно (хотя оно может включать) исключительного связывания. Антитело, которое специфически связывается с мишенью, может иметь константу ассоциации, равную по меньшей мере примерно 103 М-1 или 104 М-1, иногда примерно 105 М-1 или 106 М-1, в других случаях примерно 106 М-1 или 107 М-1, примерно от 108 М-1 до 109 М-1, или от примерно 1010 М-1 до 1011 М-1 или выше. Различные форматы иммуноанализов могут быть использованы для выбора антител, специфически иммунореактивных по отношению к конкретному белку. Например, твердофазные ИФА-иммуноанализы обычно используются для выбора моноклональных антител, специфически иммунореактивных по отношению к белку. См., например, Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York, где описаны форматы и условия иммуноанализов, которые могут быть использованы для определения специфической иммунореактивности.
В используемом в данном документе значении, взаимодействие между белком сортилином и вторым белком охватывает, без ограничений, белок-белковое взаимодействие, физическое взаимодействие, химическое взаимодействие, связывание, ковалентное связывание и ионное связывание. В используемом в данном документе значении, антитело ингибирует взаимодействие между двумя белками, когда антитело нарушает, ослабляет или полностью устраняет взаимодействие между этими двумя белками. Антитело по данному изобретению, или его фрагмент, ингибирует взаимодействие между двумя белками, когда антитело или его фрагмент связывается с одним из двух белков.
Агонистическое антитело или активирующее антитело представляет собой антитело, такое как агонистическе антитело против сортилина по данному изобретению, которое индуцирует (например, усиливает) одну или несколько активностей или функций антигена после связывания антитела с антигеном.
Блокирующее антитело, антагонистическое антитело, или ингибирующее антитело представляет собой антитело, такое как антитело против сортилина по данному изобретению, которое ингибирует или ослабляет (например, снижает) связывание антигена с одним или несколькими лигандами после связывания антитела с антигеном, и/или ингибирует или ослабляет (например, снижает) одну или несколько активностей или функций антигена после связывания антитела с антигеном. В некоторых вариантах реализации, блокирующие антитела, антагонистические антитела, или ингибирующие антитела в значительной степени или полностью ингибируют связывание антигена с одним или несколькими лигандами и/или одну или несколько активностей или функций антигена.
Эффекторные функции антитела относятся к тем биологическим активностям, которые могут быть приписаны Fc-участку (нативной последовательности Fc-участка или варианту аминокислотной последовательности Fc-участка) антитела, и меняются в зависимости от изотипа антитела.
Термин Fc-область используется в данном документе для определения C-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, включая Fc-области с нативной последовательностью и варианты Fcучастков. Хотя границы Fc-участка тяжелой цепи иммуноглобулина могут меняться, Fc-область тяжелой цепи человеческого IgG обычно определяют как протяженный от аминокислотного остатка в положении Cys226, или от Pro230, до его карбоксильного конца. C-концевой лизин (остаток 447 в соответствии с системой нумерации EU) Fc-участка может быть удален, например, при продуцировании или очистке антитела, или путем рекомбинантного модифицирования нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь антитела. Соответственно, композиция интактных антител может содержать популяции антител с полностью удаленными остатками K447, популяции антител с неудаленными остатками K447, и популяции антител со смесью антител, содержащих остаток K447 и без него. Пригодные Fc-области с нативной последовательностью для использования в антителах по данному изобретению включают человеческие IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4.
Fc-областъ с нативной последовательностью содержит аминокислотную последовательность, идентичную природной аминокислотной последовательности Fc-участка. Человеческие Fc-области с нативными последовательностями включают Fc-область человеческого IgG1 с нативной последовательностью (аллотипы не-A и A); Fc-область человеческого IgG2 с нативной последовательностью; Fc-область человеческого IgG3 с нативной последовательностью; и Fc-область человеческого IgG4 с нативной последовательностью, а также их природные варианты.
Вариант Fc-участка содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности Fc-участка вследствие по меньшей мере одной аминокислотной модификации, предпочтительно, одной или нескольких аминокислотных замен. Предпочтительно, вариант Fc
- 15 046146 участка имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с нативной последовательностью Fc-участка или с Fc-участком исходного полипептида, например, от примерно одной до примерно десяти аминокислотных замен, и предпочтительно, от примерно одной до примерно пяти аминокислотных замен, в нативной последовательности Fc-участка или в Fc-области исходного полипептида. Вариант Fc-участка в данном документе будет предпочтительно обладать по меньшей мере примерно 80% гомологии с нативной последовательностью Fc-участка и/или Fc-участком исходного полипептида, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере примерно 90% гомологии с ними, более предпочтительно, по меньшей мере примерно 95% гомологии с ними.
Fc рецептор или FcR описывает рецептор, который связывается с Fc-участком антитела. Предпочтительный FcR представляет собой человеческий FcR с нативной последовательностью. Кроме того, предпочтительным является FcR, который связывает антитело IgG (гамма-рецептор) и включает рецепторы подклассов FcyRI, FcyRII и FcyRIII, включая аллельные варианты и формы альтернативного сплайсинга этих рецепторов, FcyRII рецепторы включают FcyRIIA (активирующий рецептор) и FcyRIIB (ингибирующий рецептор), которые имеют схожие аминокислотные последовательности, различающиеся преимущественно в их цитоплазматических доменах. Активирующий рецептор FcyRIIA содержит иммунорецепторный тирозин-активируемый мотив (ITAM) в своем цитоплазматическом домене. Ингибирующий рецептор FcyRIIB содержит иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив (ITIM) в своем цитоплазматическом домене. Термин FcR в данном документе охватывает другие FcR, включая те, которые будут идентифицированы в будущем. FcR могут также увеличивать период полувыведения антител сыворотки. В используемом в данном документе значении, процент (%) идентичности аминокислотных последовательностей и гомология по отношению к последовательности пептида, полипептида или антитела относится к процентному содержанию в последовательности-кандидате аминокислотных остатков, идентичных аминокислотным остаткам в определенной пептидной или полипептидной последовательности, после выравнивания последовательностей и введения гэпов, если это необходимо для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и без учета каких-либо консервативных замен при определении идентичности последовательностей. Выравнивание в целях определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть проведено различными способами, доступными специалистам в данной области техники, например, с использованием общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программы BLAST, BLAST-2, ALIGN или MEGALIGN™ (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить соответствующие параметры для измерения выравнивания, включая любые алгоритмы, известные специалистам, необходимые для достижения максимального выравнивания по полной длине сравниваемых последовательностей.
Выделенная клетка представляет собой молекулу или клетку (cell is a molecule or a cell), которая была идентифицирована и отделена от по меньшей мере одной загрязняющей клетки, с которой она обычно ассоциирована в среде ее продуцирования. В некоторых вариантах реализации, выделенная клетка освобождена от всех компонентов, связанных со средой продуцирования. Выделенная клетка находится в форме, отличной от формы или условий, в которых она существует в природе. Выделенные клетки отличаются от клеток, существующих в природных условиях в тканях, органах или индивидуумах. В некоторых вариантах реализации, выделенная клетка представляет собой клетку-хозяина по данному изобретению.
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело, такое как антитело против сортилина по данному изобретению, представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которую идентифицируют и отделяют от по меньшей мере одной загрязняющей молекулы нуклеиновой кислоты, с которой она обычно ассоциирована в среде, в которой ее продуцируют. Предпочтительно, выделенная нуклеиновая кислота не связана со всеми компонентами, ассоциированными со средой продуцирования. Молекулы выделенной нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды и антитела по данному изобретению, находятся в форме, отличной от формы или условий, в которых они существуют в природе. Молекулы выделенной нуклеиновой кислоты, таким образом, отличаются от нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептиды и антитела по данному изобретению, присутствующей в клетках в естественных условиях.
Термин вектор, в используемом в данном документе значении, должен относиться к молекуле нуклеиновой кислоты, способной транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она была связана. Один тип вектора представляет собой плазмиду, которая относится к кольцевым двухцепочечным ДНК, в которые могут быть лигированы дополнительные сегменты ДНК. Другой тип вектора представляет собой фаговый вектор. Другой тип вектора представляет собой вирусный вектор, в котором дополнительные сегменты ДНК могут быть лигированы в вирусный геном. Некоторые векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую их вводят (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальную точку начала репликации, и эписомальные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, неэписомальные векторы млекопитающих) могут быть интегрированы в геном клетки-хозяина при введении в клетку-хозяина и, таким образом, реплицируются вместе с геномом хозяина.
- 16 046146
Кроме того, некоторые векторы способны направлять экспрессию генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы называются в данном документе рекомбинантные экспрессионные векторы, или просто экспрессионные векторы. В общем, экспрессионные векторы, пригодные для использования в методах рекомбинантных ДНК, часто имеют форму плазмид. В данном описании, плазмида и вектор могут использоваться взаимозаменяемо, поскольку плазмида является наиболее широко применяемой формой вектора.
Полинуклеотид, или нуклеиновая кислота, используемые в данном документе взаимозаменяемо, относятся к полимерам нуклеотидов любой длины, и включают ДНК и РНК. Нуклеотиды могут быть дезоксирибонуклеотидами, рибонуклеотидами, модифицированными нуклеотидами или основаниями, и/или их аналогами, или любым субстратом, который может быть включен в полимер ДНК- или РНКполимеразой или с помощью реакции синтеза.
Клетка-хозяин включает индивидуальную клетку или клеточную культуру, которая может быть или была реципиентом вектора (векторов) для включения полинуклеотидных вставок. Клетки-хозяева включают потомство одной клетки-хозяина, и потомство не обязательно будет полностью идентичным (по морфологии или по комплементу геномной ДНК) исходной родительской клетке вследствие природной, случайной или преднамеренной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные in vivo полинуклеотидом (полинуклеотидами) по данному изобретению.
Носители в используемом в данном документе значении включают фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы, которые являются нетоксичными для клетки или млекопитающего, подвергнутых их воздействию, в используемых дозировках и концентрациях.
Термин примерно в используемом в данном документе значении относится к обычному диапазону ошибки для соответствующего значения, хорошо известному специалистам в данной области техники. Указание примерно для значения или параметра в данном документе включает (и описывает) варианты реализации, которые касаются данного значения или параметра per se.
В используемом в данном документе значении и в приложенной формуле изобретения, формы в единственном числе включают указания на множественное число, если контекст четко не указывает иное. Например, ссылка на антитело представляет собой ссылку на от одного до множества антител, такого как молярные количества, и включает их эквиваленты, известные специалистам в данной области техники, и т.д.
Следует понимать, что аспект и варианты реализации данного изобретения, описанные в данном документе, включают содержащие, состоящие из, и состоящие по существу из аспекты и варианты реализации.
Обзор.
Данное изобретение относится, частично, к антителам против сортилина, которые демонстрируют одну или несколько улучшенных и/или повышенных функциональных характеристик по сравнению с антителом против сортилина, S-60, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, как описано в WO2016164637. Неограничительные улучшенные и/или повышенные функциональные свойства включают, например, антитела, способные связывать сортилин с более высокой аффинностью, уменьшать уровни сортилина клеточной поверхности, уменьшать полумаксимальную эффективную концентрацию (EC50) для снижения уровней сортилина клеточной поверхности, улучшать максимальное снижение уровней сортилина клеточной поверхности, повышать внеклеточную секрецию лиганда сортилина: например, програнулина (PGRN), уменьшать полумаксимальную эффективную концентрацию (EC50) для блокирования связывания програнулина (PGRN) с сортилином, улучшать максимальное блокирование связывания програнулина (PGRN) с сортилином, или любые их комбинации. В данном документе также предусматриваются антитела против сортилина с разными вариантами Fc, которые демонстрируют одну или несколько улучшенных и/или повышенных функциональных характеристик, включая уменьшение полумаксимальной эффективной концентрации (EC50) для снижения уровней сортилина клеточной поверхности, увеличение максимального снижения уровней сортилина клеточной поверхности, повышение внеклеточной секреции лиганда сортилина: например, програнулина (PGRN), уменьшение полумаксимальной эффективной концентрации (EC50) для блокирования связывания програнулина (PGRN) с сортилином, и увеличение максимального блокирования связывания програнулина (PGRN) с сортилином.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению обладают более высокой активностью снижения уровней сортилина клеточной поверхности по сравнению с антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60. В некоторых вариантах реализации, активность измеряют по полумаксимальной эффективной концентрации (EC50) при снижении уровней клеточной поверхности SORT1.
Данное изобретение дополнительно относится к способам получения и применения антитела против сортилина, как описано в данном документе; фармацевтический композициям, содержащим такие антитела; нуклеиновым кислотам, кодирующим такие антитела; и клеткам-хозяевам, содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие такие антитела.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению могут
- 17 046146 иметь одну или несколько активностей, которые вызваны, по крайней мере частично, способностью антител снижать уровни (например, уровни клеточной поверхности) сортилина путем индуцирования деградации, снижения экспрессии (down regulation), расщепления, десенсибилизации рецептора, и/или лизосомального нацеливания сортилина. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина проявляют одно или несколько из следующих свойств: a) имеют константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая имеет более низкое значение, чем у антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60; b) Снижение уровней сортилина клеточной поверхности (например, снижение уровней сортилина клеточной поверхности на рекомбинантных клетках, экспрессирующих человеческий сортилин in vitro) с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50) имеющей более низкое значение, чем у антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60; c) имеют константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая может находиться в диапазоне значений от примерно 0,560 нМ до примерно 1,63 нМ, например, при определении KD методом сортировки клеток с активацией флуоресценции (FACS); d) имеют константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая может находиться в диапазоне значений от примерно 0,270 нМ до примерно 2,910 нМ, например, при определении KD методом интерферометрии биослоев; е) снижают уровни сортилина клеточной поверхности (например, снижают уровни сортилина клеточной поверхности на рекомбинантных клетках, экспрессирующих человеческий сортилин in vitro) с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), которая может находиться в диапазоне значений от примерно 72,58 пМ до примерно 103,6 пМ, например, при определении EC50 in vitro методом FACS; f) снижают уровни сортилина клеточной поверхности с максимальной величиной снижения, которая может находиться в диапазоне значений от примерно 51,33% до 88,76%; g) увеличивают внеклеточную секрецию PGRN сильнее, чем антитела против сортилина, имеющие вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60; h) блокируют связывание PGRN с сортилином (например, блокируют связывание PGRN для сортилина на рекомбинантных клетках, экспрессирующих человеческий сортилин in vitro) с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), которая может находиться в диапазоне значений от примерно, 325 нМ до примерно 2,27 нМ, например, при определении EC50 in vitro методом FACS; и/или i) увеличивают максимальное блокирование связывания програнулина (PGRN) с сортилином сильнее, чем антитела против сортилина, имеющие вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60.
Предпочтительно, антитела против сортилина по данному изобретению сильнее (например, с более низким значением EC50) снижают уровни сортилина клеточной поверхности (например, до приблизительно 3,02 раз) по сравнению с контрольным антителом против сортилина (например, контрольным антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60) (см., например, пример 2). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению сильнее снижают связывание PGRN с сортилином, с более низким значением EC50 (до приблизительно 5,36 раз) по сравнению с контрольным антителом против сортилина (например, контрольным антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60) (см., например, пример 3). Кроме того, предпочтительно, антитела против сортилина по данному изобретению имеют более высокую аффинность (например, до приблизительно 2,79 раз более высокую аффинность) к сортилину (например, более низкое значение KD при измерении методом FACS или интерферометрии биослоев) по сравнению с контрольным антителом против сортилина (например, контрольным антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60 (см., например, примеры 1 и 4). Неожиданно, более высокая аффинность к сортилину не обязательно коррелирует ни с увеличением способности или активности снижения уровней сортилина клеточной поверхности (см., например, примеры 2 и 4), ни с увеличением способности или активности блокирования связывания PGRN с сортилином (см., например, примеры 3 и 4).
Данное изобретение дополнительно относится к антителам против сортилина с улучшенной стабильностью при производстве, хранении, и in vivo введении. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют улучшенную стабильность при различных стрессовых условиях (см., например, пример 4).
Белки сортилина.
В одном аспекте, данное изобретение предусматривает антитела, такие как выделенные (например, моноклональные) антитела, которые взаимодействуют с, или иначе связываются с областью, такой как эпитоп, в белке сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, антитела взаимодействуют с, или иначе связываются с областью, такой как эпитоп, в белке сортилина по данному изобретению с улучшенной/повышенной кинетикой (например, по сравнению с антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела взаимодействуют с, или иначе связываются с областью, такой как эпитоп, в человеческом белке сортилина, с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), которая ниже значения для контрольного антитела (например, по сравнению с антителом
- 18 046146 против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с белком сортилином и модулируют одну или несколько активностей сортилина после связывания с белком сортилином, например, активность, связанную с экспрессией сортилина на клетке. Белки сортилина по данному изобретению включают, без ограничений, белок сортилин млекопитающих, человеческий белок сортилин, мышиный белок сортилин, и белок сортилин крысы. Типичные примеры последовательностей белка сортилина приведены в табл. 32.
Сортилин по-разному называется сортилин 1, SORT1, 100 кДа NT (нейротензин) рецептор, гликопротеин 95 (GP95), рецептор програнулина (PGRN-R), и рецептор нейротензина-3 (NT-3 или NTR-3). Сортилин представляет собой белок размером 831 аминокислот, который кодирует мембранный рецептор типа I. Известны различные гомологи сортилина, включая, без ограничений, человеческий сортилин, сортилин крысы, и мышиный сортилин. Аминокислотная последовательность человеческого сортилина приведена ниже как SEQ ID NO: 81 (ключевые аминокислотные остатки, прогнозируемо участвующие в связывании програнулина, выделены жирным шрифтом, и прогнозируемый участок связывания про-NGF (фактор роста нервной ткани) выделен подчеркиванием 10 20 30 40 50
MERPWGAADG LSRWPHGLGL LLLLQLLPPS TLSQDRLDAP PPPAAPLPRW
70 80 90 100
SGPIGVSWGL RAAAAGGAFP RGGRWRRSAP GEDEECGRVR DFVAKLANNT
ПО 120 130 140 150
HQHVFDDLRG SVSLSWVGDS TGVILVLTTF HVPLVIMTFG QSKLYRSEDY
160 170 180 190 200
GKNFKDITDL INNTFIRTEF GMAIGPENSG KVVLTAEVSG GSRGGRIFRS
210 220 230 240 250
SDFAKNFVQT DLPFHPLTQM MYSPQNSDYL LALSTENGLW VSKNFGGKWE
260 270 280 290 300
EIHKAVCLAK WGSDNTIFFT TYANGSCKAD LGALELWRTS DLGKSFKTIG
310 320 330 340 350
VKIYSFGLGG RFLFASVMAD KDTTRRIHVS TDQGDTWSMA QLPSVGQEQF
360 370 380 390 400
YSILAANDDM VFMHVDEPGD TGFGTIFTSD DRGIVYSKSL DRHLYTTTGG
410 420 430 440 450
ETDFTNVTSL RGVYITSVLS EDNSIQTMIT FDQGGRWTHL RKPENSECDA
460 470 480 490 500
TAKNKNECSL HIHASYSISQ KLNVPMAPLS EPNAVGIVIA HGSVGDAISV
510 520 530 540 550
MVPDVYISDD GGYSWTKMLE GPHYYTILDS GGIIVAIEHS SRPINVIKFS
560 570 580 590 600
- 19 046146
TDEGQCWQTY TFTRDPIYFT GLASEPGARS MNISIWGFTE SFLTSQWVSY
610 620 630 640 650
TIDFKDILER NCEEKDYTIW LAHSTOPEDY EDGCILGYKE QFLRLRKSSV
660 670 680 690 700
CQNGRDYVVT KQPSICLCSL EDFLCDFGYY RPENDSKCVE QPELKGHDLE
710 720 730 740 750
FCLYGREEHL TTNGYRKIPG DKCQGGVNPV REVKDLKKKC TSNFLSPEKQ
760 770 780 790 800
NSKSNSVPII LAIVGLMLVT VVAGVLIVKK YVCGGRFLVH RYSVLQQHAE
810 820 830
ANGVDGVDAL DTASHTNKSG YHDDSDEDLL E
Аминокислотная последовательность мышиного сортилина представлена SEQ ID NO: 82:
MERPRGAADG LLRWPLGLLL LLQLLPPAAV GQDRLDAPPP
PAPPLLRWAG
PVGVSWGLRA
AAPGGPVPRA
GRWRRGAPAE
HVFDDLSGSV
SLSWVGDSTG
NFKDITNLIN
NTFIRTEFGM
VILVLTTFQV
AIGPENSGKV
DQDCGRLPDF PLVIVSFGQS ILTAEVSGGS
IAKLTNNTHQ
KLYRSEDYGK
RGGRVFRSSD
FAKNFVQTDL
HKAVCLAKWG
PFHPLTQMMY PNNIIFFTTH
SPQNSDYLLA
VNGSCKADLG
LSTENGLWVS
ALELWRTSDL
KNFGEKWEEI
GKTFKTIGVK
IYSFGLGGRF
LFASVMADKD
TTRRIHVSTD
ILAANEDMVF
MHVDEPGDTG
FGTIFTSDDR
QGDTWSMAQL
GIVYSKSLDR
PSVGQEQFYS
HLYTTTGGET
DFTNVTSLRG
VYITSTLSED
KNKNECSLHI
PDVYISDDGG
HASYSISQKL
YSWAKMLEGP
NSIQSMITFD
NVPMAPLSEP
QGGRWEHLRK
NAVGIVIAHG
PENSKCDATA
SVGDAISVMV
HYYTILDSGG
IIVAIEHSNR
PINVIKFSTD
EGQCWQSYVF
DFKDILERNC
TQEPIYFTGL
EEDDYTTWLA
ASEPGARSMN
HSTDPGDYKD
ISIWGFTESF
NGRDYVVAKQ
LYGKEEHLTT
PSVCPCSLED
FLCDFGYFRP
NGYRKIPGDK
KSNSVPIILA IVGLMLVTVV
CQGGMNPARE
AGVLIVKKYV
GCILGYKEQF ENASECVEQP VKDLKKKCTS
CGGRFLVHRY
ITRQWVSYTV LRLRKSSVCQ ELKGHELEFC
NFLNPTKQNS
SVLQQHAEAD
GVEALDSTSH AKSGYHDDSD EDLLE
Аминокислотная последовательность сортилина крысы представлена SEQ ID NO: 83:
MERPRGAADG LLRWPLGLLL LLQLLPPAAV GQDRLDAPPP PAPPLLRWAG
PVGVSWGLRA AAPGGPVPRA GRWRRGAPAE DQDCGRLPDF IAKLTNNTHQ
HVFDDLSGSV SLSWVGDSTG VILVLTTFQV PLVIVSFGQS KLYRSEDYGK
NFKDITNLIN NTFIRTEFGM AIGPENSGKV ILTAEVSGGS RGGRVFRSSD
FAKNFVQTDL PFHPLTQMMY SPQNSDYLLA LSTENGLWVS KNFGEKWEEI
HKAVCLAKWG PNNIIFFTTH VNGSCKADLG ALELWRTSDL GKTFKTIGVK
IYSFGLGGRF LFASVMADKD TTRRIHVSTD QGDTWSMAQL PSVGQEQFYS
ILAANDDMVF MHVDEPGDTG FGTIFTSDDR GIVYSKSLDR HLYTTTGGET
DFTNVTSLRG VYITSTLSED NSIQSMITFD QGGRWEHLQK PENSKCDATA
KNKNECSLHI HASYSISQKL NVPMAPLSEP NAVGIVIAHG SVGDAISVMV
PDVYISDDGG YSWAKMLEGP HYYTILDSGG IIVAIEHSNR PINVIKFSTD
EGQCWQSYVF SQEPVYFTGL ASEPGARSMN ISIWGFTESF LTRQWVSYTI
DFKDILERNC EENDYTTWLA HSTDPGDYKD GCILGYKEQF LRLRKSSVCQ
NGRDYVVAKQ PSICPCSLED FLCDFGYFRP ENASECVEQP ELKGHELEFC
LYGKEEHLTT NGYRKIPGDR CQGGMNPARE VKDLKKKCTS NFLNPKKQNS
KSSSVPIILA ] CVGLMLVTVV AGVLIVKKYV CGGRFLVHRY SVLQQHAEAD
GVEALDTASH AKSGYHDDSD EDLLE
В некоторых вариантах реализации, сортилин представляет собой препротеин, включающий сигнальную последовательность. В некоторых вариантах реализации, сортилин представляет собой зрелый белок. В некоторых вариантах реализации, зрелый белок сортилин не включает сигнальную последовательность. В некоторых вариантах реализации, зрелый белок сортилин экспрессируется на клетке.
Белки сортилина по данному изобретению включают несколько доменов, включая, без ограничений, сигнальную последовательность, пропептид, люминальный домен, домен Vps10p, домен 10 CC, трансмембранный домен и цитоплазматический домен. Дополнительно, белки по данному изобретению экспрессируются с высокими уровнями в ряде тканей, включая, без ограничений, головной мозг, спинной мозг, сердечную и скелетные мышцы, щитовидную железу, плаценту и яички.
Соответственно, в используемом в данном документе значении белок сортилина по данному изобретению включает, без ограничений, белок сортилин млекопитающих, человеческий белок сортилин, белок сортилин приматов, мышиный белок сортилин, и белок сортилин крысы. Дополнительно, антитела против сортилина по данному изобретению могут связывать эпитоп одного или нескольких из белка сор
- 20 046146 тилина млекопитающих, человеческого белка сортилина, сортилина приматов, мышиного белка сортилина, и белка сортилина крысы.
Домены белка сортилина.
Белки сортилина по данному изобретению содержат несколько доменов, таких как домен Vps10p, который содержит мотив Asp-бокс, десятилопастную структуру бета-пропеллера, и гидрофобную петлю; и домен 10 CC.
Как раскрыто в данном документе, взаимодействия между белками сортилина по данному изобретению и пронейротрофинами или нейротрофинами опосредуются доменом Vps10p, который содержит структуру десятилопастного бета-пропеллера и мотив Asp-бокса. В некоторых вариантах реализации, белки сортилина по данному изобретению содержат домен Vps10p, который включает структуру десятилопастного бета-пропеллера и расположен в аминокислотных остатках 78-611 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81) или в аминокислотных остатках сортилина млекопитающих, которые соответствуют аминокислотным остаткам 78-611 SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах реализации, аминокислотные остатки 190-220 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81) или аминокислотные остатки сортилина млекопитающих, которые соответствуют аминокислотным остаткам 190-220 SEQ ID NO: 81, расположены в домене Vps10p.
Домены Vps10p по данному изобретению могут включать мотив Asp-бокса. В используемом в данном документе значении, мотивы Asp-бокса имеют следующую последовательность: (S/T)-X-(D/N)-X-XX-X-(W/F/Y) (SEQ ID NO: 84), или X-X-(S/T)-X-(D/N)-X-G-X-(T/S)-(W/F/Y)-X (SEQ ID NO: 85), где X представляет собой любую аминокислоту. В человеческом сортилине, мотив Asp-бокса представляет собой SSDFAKNF (SEQ ID NO: 86), и расположен в аминокислотных остатках 200-207 человеческого сортилина. Соответственно, в некоторых вариантах реализации, мотив Asp-бокса расположен в аминокислотных остатках 200-207 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81) или аминокислотных остатках сортилина млекопитающих, которые соответствуют аминокислотным остаткам 200-207 SEQ ID NO: 81.
Как раскрыто в данном документе, взаимодействиям между белками сортилина по данному изобретению и p75 опосредуются доменом 10CC гидрофобной петли домена Vps10p.
В некоторых вариантах реализации, белки сортилина по данному изобретению содержат домен 10CC, который расположен в аминокислотных остатках 610-757 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81) или аминокислотных остатках сортилина млекопитающих, которые соответствуют аминокислотным остаткам 610-757 SEQ ID NO: 81. В предпочтительных вариантах реализации, аминокислотные остатки 592-593, 610-660, и/или 667-749 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81) или аминокислотные остатки сортилина млекопитающих, которые соответствуют аминокислотным остаткам 592-593, 610-660, и/или 667-749 SEQ ID NO: 81, расположены в домене 10CC сортилина.
В других вариантах реализации, белки сортилина по данному изобретению содержат гидрофобную петлю в домене Vps10p, который расположен в аминокислотных остатках 130-141 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81) или аминокислотных остатках сортилина млекопитающих, которые соответствуют аминокислотным остаткам 130-141 SEQ ID NO: 81.
Специалисту в данной области техники будет понятно, что начальные и конечные остатки доменов по данному изобретению могут меняться в зависимости от используемой программы компьютерного моделирования или способа, используемого для определения домена.
Партнеры связывания сортилина.
Белки сортилина по данному изобретению может взаимодействовать с (например, связываться с) одним или несколькими белками, включая, без ограничений, белок програнулина (PGRN); нейротрофины, такие как пронейротрофины, пронейротрофин-3, нейротрофин-3, пронейротрофин-4/5, нейротрофин4/5, про-фактор роста нервов (про-NGF), фактор роста нервов (NGF), про-мозговой нейротрофический фактор (про-BDNF), и мозговой нейротрофический фактор (BDNF); нейротензин, p75, липопротеинлипазу (LpL), аполипопротеин AV (APOA5), аполипопротеин E (APOE), белок-предшественник амилоида, амилоидный бета-пептид (A beta), PCSK9, p75NTR, и рецептор-ассоциированный белок (RAP).
Програнулин (PGRN).
Было продемонстрировано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связываются) непосредственно с програнулином и опосредуют деградацию програнулина (например, Zheng, Y et al., (2011) PLoS ONE 6(6): e21023).
Програнулин по другому называется PGRN, проэпителин, гранулин-эпителиновый прекурсор, фактор роста клеток PC (рак простаты) (PCDGF), и акрогранин. Програнулин представляет собой белок размером 593 аминокислот, кодирующий секретируемый гликопротеин 68,5 кДа, имеющий 7,5 повторов меньших мотивов гранулина (эпителина), в диапазоне размеров 6-25 кДа, который может быть протеолитически отщеплен от прекурсора PGRN. Примеры продуктов расщепления програнулина включают, без ограничений, гранулин A/эпителины 1, гранулин B/эпителины 2, гранулин C, гранулины D, гранулин E, гранулин F, гранулин G и любые другие известные пептидные продукты, полученные из програнулина.
Соответственно, антитела против сортилина по данному изобретению, которые повышают уровни програнулина, снижают уровни сортилина клеточной поверхности, и/или блокируют взаимодействие (например, связывание) между сортилином и програнулином, будут полезны для предотвращения, сни
- 21 046146 жения риска или лечения состояний и/или болезней, связанных с пониженными уровнями экспрессии и/или активности програнулина, гибелью клеток (например, гибелью нейронных клеток), лобновисочной деменцией, болезнью Альцгеймера, сосудистой деменцией, эпилептическими припадками, дистрофией сетчатки, травматическим повреждением головного мозга, повреждением спинного мозга, длительной депрессией, атеросклеротическими болезнями сосудов, нежелательными симптомами нормального старения, деменцией, смешанной деменцией, болезнью Крейтцфельда-Якоба, нормотензивной гидроцефалией, боковым амиотрофическим склерозом, болезнью Гентингтона, таупатией, инсультом, острой травмой, хронической травмой, волчанкой, острым и хроническим колитом, болезнью Крона, воспалительной болезнью кишечника, неспецифическим язвенным колитом, малярией, эссенциальным тремором, волчанкой центральной нервной системы, болезнью Бехчета, болезнью Паркинсона, деменцией с тельцами Леви, мультисистемной атрофией, дегенерацией межпозвоночных дисков, синдромом Шая-Дрейджера, прогрессирующим надъядерным параличем, кортикобазальной ганглионарной дегенерацией, острым рассеянным энцефаломиелитом, гранулематозными расстройствами, саркоидозом, болезнями старения, возрастной макулярной дегенерацией, глаукомой, пигментным ретинитом, дегенерацией сетчатки, инфекцией дыхательных путей, сепсисом, глазной инфекцией, системной инфекцией, воспалительными расстройствами, артритом, рассеянным склерозом, метаболическим нарушением, ожирением, инсулинорезистентностью, диабетом типа 2, повреждением ткани или сосудов, травмой, и/или одним или несколькими нежелательными симптомами нормального старения. Дополнительно, антитела против сортилина по данному изобретению, которые повышают уровни програнулина, снижают уровни сортилина клеточной поверхности, и/или блокируют взаимодействие (например, связывание) между сортилином и програнулином, могут ингибировать взаимодействие между сортилином и програнулином, могут индуцировать одну или несколько активностей програнулина, могут снижать эндосомальную интернализацию програнулина или его фрагментов, и/или могут увеличивать эффективную концентрацию програнулина.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению, которые повышают уровни програнулина, снижают уровни сортилина клеточной поверхности, и/или блокируют взаимодействие (например, связывание) между сортилином и програнулином, связываются с одной или несколькими аминокислотами из аминокислотных остатков 131-138, 175-181, 190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207, 207-231, 207-227, 212-221, 233-243, 237-247, 237-260, 297-317, 314338, 367-391, 429-443, 623-632, и/или 740-749 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81); или с аминокислотными остатками сортилина млекопитающих, которые соответствуют аминокислотным остаткам 131-138, 175-181, 190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207, 207-231, 207-227, 212221, 233-243, 237-247, 237-260, 297-317, 314-338, 367-391, 429-443, 623-632, и/или 740-749 SEQ ID NO: 81. В других вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению, которые повышают уровни програнулина, снижают уровни сортилина клеточной поверхности, и/или блокируют взаимодействие (например, связывание) между сортилином и програнулином, могут связывать одну или несколько аминокислот из аминокислотных остатков His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595, и/или Glu700 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81); или аминокислотных остатков сортилина млекопитающих, которые соответствуют одному или нескольким аминокислотным остаткам His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595, и/или Glu700 SEQ ID NO: 81.
Другие лиганды сортилина.
Было показано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связываются) непосредственно с пронейротрофинами (например, про-NGF), которые несут про-домен и типично являются про-апоптотическими. Такое связывание может медиироваться через линейный эпитоп на сортилине, который соответствует аминокислотным остаткам 163-174 SEQ ID NO: 81. Также было показано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связываются) с нейротензином в бета-пропеллерной структуре сортилина, и было показано, что важный контакт приходится на серин в положении 283 человеческого сортилина.
Было также показано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связываются) с низкоаффинным рецептором фактора роста нервов (NGF) (p75) в домене 10CC сортилина или гидрофобной петле домена Vps10p сортилина. Как раскрыто в данном документе, белки сортилина по данному изобретению могут функционировать как корецептор с p75 для пронейротрофинов, которые индуцируют апоптотическую сигнализацию. Дополнительно было показано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связываются) с белком-предшественником амилоида (APP).
Было показано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связы
- 22 046146 ваются) с липопротеинлипазой (LpL). Как раскрыто в данном документе, белки сортилина по данному изобретению связываются с и модифицируют деградацию LpL. Было показано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связываются) с аполипопротеином AV (APOA5). Как раскрыто в данном документе, белки сортилина по данному изобретению связываются с и модифицируют деградацию APOA5.
Было показано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связываются) с аполипопротеином E (APOE, APOE2, APOE3, APOE4). Как раскрыто в данном документе, белки сортилина по данному изобретению связываются с и модифицируют деградацию и транспорт APOE а также агентов, которые переносит APOE, таких как амилоидный бета-пептид (A beta). Кроме того, было показано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связываются) с рецептор-ассоциированным белком (RAP). Кроме того, было показано, что белки сортилина по данному изобретению взаимодействуют (например, связываются) с пропротеиновой конвертазой субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9), и секретируют ее в циркуляцию.
В некоторых вариантах реализации любого из антител против сортилина, антитела против сортилина по данному изобретению могут также ингибировать (например, блокировать) взаимодействие между сортилином и одним или несколькими другими лигандами сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, один или несколько других лигандов представляют собой один или несколько из пронейротрофинов, нейротензина, низкоаффинного рецептора фактора роста нервов (NGF) (p75), белка-предшественника амилоида, липопротеинлипазы, аполипопротеина AV, аполипопротеина, рецептор-ассоциированного белка, и/или пропротеиновой конвертазы субтилизин/кексинового типа 9. Такие антитела могут быть полезны для предотвращения, снижения риска или лечения состояний и/или болезней, связанных с пониженными уровнями экспрессии и/или активности одного или нескольких других лигандов сортилина, гибелью клеток (например, гибелью нейронных клеток). В некоторых вариантах реализации, один или несколько других лигандов представляют собой один или несколько из пронейротрофинов, нейротензина, низкоаффинного рецептора фактора роста нервов (NGF) (p75), белкапредшественника амилоида, липопротеинлипазы, аполипопротеина AV, аполипопротеина, рецепторассоциированного белка, и/или пропротеиновой конвертазы субтилизин/кексинового типа 9.
Антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют (например, блокируют) взаимодействие между сортилином и одним или несколькими другими лигандами сортилина по данному изобретению, могут также предотвращать гибель клеток (например, апоптоз), индуцируемую одним или несколькими другими лигандами сортилина. В некоторых вариантах реализации, один или несколько других лигандов представляют собой один или несколько из пронейротрофинов, нейротензина, низкоаффинного рецептора фактора роста нервов (NGF) (p75), белка-предшественника амилоида, липопротеинлипазы, аполипопротеина AV, аполипопротеина, рецептор-ассоциированного белка, и/или пропротеиновой конвертазы субтилизин/кексинового типа 9.
В некоторых вариантах реализации любого из антител против сортилина, антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют (например, блокируют) взаимодействие между сортилином и одним или несколькими лигандами сортилина по данному изобретению, связывают одну или несколько аминокислот в аминокислотных остатках 131-138, 175-181, 190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207, 207-231, 207-227, 212-221, 233-243, 237-247, 237-260, 297-317, 314-338, 367391, 429-443, 623-632, и/или 740-749 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81); или в аминокислотных остатках сортилина млекопитающих, которые соответствуют аминокислотным остаткам 131-138, 175181, 190-220, 199-220, 190-211, 196-207, 196-199, 200-207, 203-207, 207-231, 207-227, 212-221, 233-243, 237-247, 237-260, 297-317, 314-338, 367-391, 429-443, 623-632, и/или 740-749 SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах реализации, один или несколько других лигандов представляют собой один или несколько из пронейротрофинов, нейротензина, низкоаффинного рецептора фактора роста нервов (NGF) (p75), белка-предшественника амилоида, липопротеинлипазы, аполипопротеина AV, аполипопротеина, рецептор-ассоциированного белка, и/или пропротеиновой конвертазы субтилизин/кексинового типа 9.
В других вариантах реализации любого из антител против сортилина, антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют (например, блокируют) взаимодействие между сортилином и одним или несколькими лигандами сортилина по данному изобретению, связывают одну или несколько аминокислот из аминокислотных остатков His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595, и/или Glu700 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81); или аминокислотных остатков сортилина млекопитающих, которые соответствуют одному или нескольким аминокислотным остаткам His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595, и/или Glu700 SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах реализации, один или несколько других лигандов представляют собой один или несколько из пронейротрофинов, нейротензина, низкоаффинного рецептора фактора роста нер
- 23 046146 вов (NGF) (p75), белка-предшественника амилоида, липопротеинлипазы, аполипопротеина AV, аполипопротеина, рецептор-ассоциированного белка, и/или пропротеиновой конвертазы субтилизин/кексинового типа 9.
Антитела сортилина.
Определенные аспекты данного изобретения относятся к антителам против сортилина, имеющим одну или несколько улучшенных и/или повышенных функциональных характеристик. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют одну или несколько улучшенных и/или повышенных функциональных характеристик по сравнению с антителом против сортилина, S-60, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, как описано в WO2016164637. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют аффинность к сортилину (например, человеческому сортилину), которая выше, чем у контрольного антитела против сортилина (например, контрольного антитела против сортилина, содержащего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению снижают клеточные уровни (например, уровни клеточной поверхности) сортилина в большей степени и с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), которая ниже значения для контрольного антитела (например, контрольного антитела против сортилина, содержащего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению увеличивают максимальное снижение уровней сортилина клеточной поверхности по сравнению с антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению увеличивают секрецию внеклеточного програнулина (PGRN) по сравнению с антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению блокируют связывание PGRN с сортилином в большей степени и с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), которая ниже значения для контрольного антитела (например, контрольного антитела против сортилина, содержащего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению увеличивают максимальное блокирование связывания програнулина (PGRN) с сортилином по сравнению с антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60.
В данном документе также предусматриваются антитела против сортилина с разными вариантами Fc, которые демонстрируют одну или несколько улучшенных и/или повышенных функциональных характеристик по сравнению с антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60, включая уменьшение полумаксимальной эффективной концентрации (EC50) для снижения уровней сортилина клеточной поверхности, увеличение максимального снижения уровней сортилина клеточной поверхности, повышение внеклеточной секреции PGRN, уменьшение полумаксимальной эффективной концентрации (EC50) для блокирования связывания програнулина (PGRN) с сортилином, и увеличение максимального блокирования связывания програнулина (PGRN) с сортилином.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению представляет собой человеческое антитело, биспецифическое антитело, моноклональное антитело, поливалентное антитело, конъюгированное антитело или химерное антитело
В предпочтительном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению представляет собой моноклональное антитело.
Связывающий эпитоп антитела против сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с белком сортилином по данному изобретению и/или природными вариантами. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с белком сортилином, при этом белок сортилин представляет собой человеческий белок. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с белком сортилином, при этом белок сортилин представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с белком сортилином, при этом белок сортилин представляет собой природный вариант.
В определенных предпочтительных вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению специфически связываются с человеческим белком сортилином.
Определенные аспекты данного изобретения предусматривают антитела против сортилина, которые связывают прерывистый эпитоп сортилина. В некоторых вариантах реализации, прерывистый эпитоп сортилина содержит два или больше пептидов, три или больше пептидов, четыре или больше пептидов, пять или больше пептидов, шесть или больше пептидов, семь или больше пептидов, восемь или больше пептидов, девять или больше пептидов, или 10 или больше пептидов. В некоторых вариантах реализа
- 24 046146 ции, каждый из пептидов содержит пять или больше, шесть или больше, семь или больше, восемь или больше, девять или больше, 10 или больше, 11 или больше, 12 или больше, 13 или больше 14 или больше, 15 или больше, 16 или больше, 17 или больше, 18 или больше, 19 или больше, 20 или больше, 21 или больше, 22 или больше, 23 или больше, 24 или больше, 25 или больше, 26 или больше, 27 или больше, 28 или больше, 29 или больше, или 30 или больше аминокислотных остатков аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 81; или пять или больше, шесть или больше, семь или больше, восемь или больше, девять или больше, 10 или больше, 11 или больше, 12 или больше, 13 или больше 14 или больше, 15 или больше, 16 или больше, 17 или больше, 18 или больше, 19 или больше, 20 или больше, 21 или больше, 22 или больше, 23 или больше, 24 или больше, 25 или больше, 26 или больше, 27 или больше, 28 или больше, 29 или больше, или 30 или больше аминокислотных остатков на белке сортилина млекопитающих, соответствующих аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 81. Другие аспекты данного изобретения предусматривают антитела против сортилина, которые связываются с конформационным эпитопом сортилина.
Определенные аспекты данного изобретения предусматривают антитела против сортилина, которые связываются с одной или несколькими аминокислотами из аминокислотных остатков 207-231 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81); или с аминокислотными остатками сортилина млекопитающих, соответствующими аминокислотным остаткам 207-231 SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина связываются с одной или несколькими аминокислот аминокислотных остатков Thr218, Tyr222, Ser223, и/или Ser227 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81); или аминокислотных остатков сортилина млекопитающих, соответствующих аминокислотным остаткам Thr218, Tyr222, Ser223, и/или Ser227 SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина связываются с одной или несколькими аминокислотами аминокислотных остатков F105, L108, R109, G110, I537, F569, E590, F592, L593, S595, и/или W597 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81); или аминокислотных остатков сортилина млекопитающих, соответствующих аминокислотным остаткам F105, L108, R109, G110, I537, F569, E590, F592, L593, S595, и/или W597 SEQ ID NO: 81. Другие аспекты данного изобретения предусматривают антитела против сортилина, которые связываются с эпитопом, содержащим аминокислотные остатки (S/T)-X-(D/N)-X-X-X-X-(W/F/Y), где X представляет собой любую аминокислоту (SEQ ID NO: 84).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с белком сортилином по данному изобретению, экспрессируемым на поверхности клетки, и голые антитела ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином и белком, выбранным из програнулина (PGRN), пронейротрофина, нейротрофина, пронейротрофина-3, нейротрофина-3, пронейротрофина-4/5, нейротрофина-4/5, про-фактора роста нервов (про-NGF), фактора роста нервов (NGF), про-мозгового нейротрофического фактора (про-BDNF), мозгового нейротрофического фактора (BDNF), нейротензина, p75, пропептида сортилина (Sort-pro), белка-предшественника амилоида (APP), бета-амилоидного (A beta) пептида, липопротеинлипазы (LpL), аполипопротеина AV (APOA5), аполипопротеина E (APOE), PCSK9, и рецептор-ассоциированного белка (RAP). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с белком сортилином по данному изобретению, экспрессируемым на поверхности клетки, и голые антитела ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином и PGRN.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению, которые связываются с белком сортилином по данному изобретению, ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином и програнулином, пронейротрофином, нейротрофином, пронейротрофином-3, нейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, нейротрофином-4/5, про-фактором роста нервов (про-NGF), фактором роста нервов (NGF), про-мозговым нейротрофическим фактором (про-BDNF), мозговым нейротрофическим фактором (BDNF), нейротензином, p75, пропептидом сортилина (Sort-pro), белком-предшественником амилоида (APP), бета-амилоидным (A beta) пептидом, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), аполипопротеином E (APOE), PCSK9, и рецепторассоциированным белком (RAP) путем снижения эффективных уровней сортилина, доступного для взаимодействия с этими белками на поверхности клетки или внутри клетки.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению, которые связываются с белком сортилином по данному изобретению, ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином и програнулином, пронейротрофином, нейротрофином, пронейротрофином-3, нейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, нейротрофином-4/5, про-фактором роста нервов (про-NGF), фактором роста нервов (NGF), про-мозговым нейротрофическим фактором (про-BDNF), мозговым нейротрофическим фактором (BDNF), нейротензином, p75, пропептидом сортилина (Sort-pro), белком-предшественником амилоида (APP), бета-амилоидным (A beta) пептидом, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), аполипопротеином E (APOE), PCSK9, и рецепторассоциированным белком (RAP) путем индуцирования деградации сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с человеческим сортилином или его гомологом, включая, без ограничений, белок сортилин млекопитающих, или белок сортилин не являющегося человеком примата. В некоторых вариантах реализации,
- 25 046146 антитела против сортилина по данному изобретению специфически связываются с человеческим сортилином. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с человеческим сортилином и не являются перекрестно реактивными с ортологами или гомологами сортилина других видов.
Конкурентное связывание антитела против сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению конкурентно ингибируют связывание по меньшей мере одного другого антитела против сортилина, выбранного из любых антител, указанных в табл. 1-29. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению конкурентно ингибируют связывание по меньшей мере одного антитела, выбранного из: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt) (дикого типа)], S-6015.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; и любой их комбинации.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению конкурирует с одним или несколькими антителами против сортилина, выбранными из: S-60, S-60-1, S-60-2, S-603, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-6015.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-6015.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24 и любой их комбинации, за связывание с сортилином, когда антитело против сортилина снижает связывание одного или нескольких антител, выбранных из: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; и любой их комбинации, с сортилином на величину, составляющую от примерно 50% до 100%, по сравнению со связыванием с сортилином в отсутствие антитела против сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению конкурирует с одним или несколькими антителами против сортилина, выбранными из: S-60, S-60-1, S-60-2, S-603, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-6015.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-6015.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, и любой их комбинации, за связывание с сортилином, когда антитело против сортилина снижает связывание одного или нескольких антител, выбранных из: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; и любой их комбинации, с сортилином на по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, или 100%, по сравнению со связыванием с сортилином в отсутствие антитела против сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению, которое снижает связывание одного или нескольких антител, выбранных из: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-6015.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, и любой их комбинации, с сортилином на 100% указывает на то, что антитело против сортилина по существу полностью блокирует связывание одного или нескольких антител, выбранных из S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-6013, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A],
- 26 046146
S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, и любой их комбинации, с сортилином. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина и одно или несколько антител, выбранных из S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S60-18, S-60-19, S-60-24, и любой их комбинации, присутствуют в количествах, которые соответствуют соотношению 10:1, соотношению 9:1, соотношению 8:1, соотношению 7:1, соотношению 6:1, соотношению 5:1, соотношению 4:1, соотношению 3:1, соотношению 2:1, соотношению 1:1, соотношению 0,75:1, соотношению 0,5:1, соотношению 0,25:1, соотношению 0,1:1, соотношению 0,075:1, соотношению 0,050:1, соотношению 0,025:1, соотношению 0,01:1, соотношению 0,0075:1 (0,0075: ratio), соотношению 0,0050:1, соотношению 0,0025:1, соотношению 0,001:1 (0,001: ratio), 0,00075:1, соотношению 0,00050:1, соотношению 0,00025:1, соотношению 0,0001:1 (0,0001: ratio), соотношению 1:10, соотношению 1:9, соотношению 1:8, соотношению 1:7, соотношению 1:6, соотношению 1:5, соотношению 1:4, соотношению 1:3, соотношению 1:2, соотношению 1:0,75, соотношению 1:0,5, соотношению 1:0,25, соотношению 1:0,1, соотношению 1:0,075, соотношению 1:0,050, соотношению 1:0,025, соотношению 1:0,01, соотношению 1:0,0075, соотношению 1:0,0050, соотношению 1:0,0025, соотношению 1:0,001, соотношению 1:0,00075, соотношению 1:0,00050, соотношению 1:0,00025, или соотношению 1:0,0001 антитела против сортилина к одному или нескольким антителам выбранным из S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-6015.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-6015.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, и любой их комбинации. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина присутствует в количественном избытке в диапазоне значений от примерно 1,5-кратного до 100-кратного, или больше 100-кратного, по сравнению с количеством одного или нескольких антител, выбранных из S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-6014, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, и любой их комбинации. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина присутствует в количестве, являющимся примерно 2кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 15-кратным, 20-кратным, 25-кратным, 30-кратным, 35-кратным, 40-кратным, 45-кратным, 50-кратным, 55-кратным, 60-кратным, 65-кратным, 70-кратным, 75-кратным, 80-кратным, 85-кратным, 90-кратным, 95-кратным, или 100-кратным избытком по сравнению с количеством одного или нескольких антител, выбранных из S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S60-15.13 [N331], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S60-18, S-60-19, S-60-24, и любой их комбинации.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с эпитопом человеческого сортилина, который является таким же или перекрывается с эпитопом сортилина, связываемым по меньшей мере одним антителом, выбранным из любых антител, указанных в табл. 1-29. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с эпитопом человеческого сортилина, который является таким же или перекрывается с эпитопом сортилина, связываемым по меньшей мере одним антителом, выбранным из: S-60, S-60-1, S-60-2, S60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-6015.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-6015.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; и любой их комбинации. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связывают по существу тот же эпитоп сортилина, что и связываемый по меньшей мере одним антителом, выбранным из любых антител, указанных в табл. 1-29. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связывают по существу тот же эпитоп сортилина, что и связываемый по меньшей мере одним антителом, выбранным из: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-6014, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5
- 27 046146
[N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24; и любой их комбинации. Подробное описание типичных методов картирования эпитопа, с которым связывается антитело, приведены в Morris (1996) Epitope Mapping Protocols, в Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
Любой пригодный конкурентный анализ или анализ связывания сортилина, известный специалистам, такой как анализ BIAcore, анализы ИФА, или проточная цитометрия, могут быть использованы для определения того, конкурирует ли антитело против сортилина с одним или несколькими антителами, выбранными из S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 (описанных в WO2016164637); или S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S60-18, S-60-19, S-60-24; и любой их комбинации, за связывание с сортилином. В типичном примере конкурентного анализа, иммобилизованный сортилин или клетки, экспрессирующие сортилин на клеточной поверхности, инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, которое связывается с сортилином (например, человеческое или принадлежащее не являющемуся человеком примату), и второе немеченое антитело, которое тестируют на его способность конкурировать с первым антителом за связывание с сортилином. Второе антитело может присутствовать в супернатанте гибридомы. В качестве контроля, иммобилизованный сортилин или клетки, экспрессирующие сортилин, инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, но не второе немеченое антитело. После инкубации в условиях, пермиссивных для связывания первого антитела с сортилином, избыток несвязанного антитела удаляют, и измеряют количество метки, связанной с иммобилизованным сортилином или клетками, экспрессирующими сортилин. Если количество метки, связанной с иммобилизованным сортилином или клетками, экспрессирующими сортилин, существенно снижено в тестируемом образце по сравнению с контрольным образцом, то это указывает, что второе антитело конкурирует с первым антителом за связывание с сортилином. См., Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению конкурирует за связывание с сортилином с антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из S-60-10, S-60-11, S-60-12, S60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19, S-60-24, и любой их комбинации.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и антитело, содержащее вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из S-60-10, S-60-11, S-6012, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19, и S-60-24.
Дополнительные антитела против сортилина, например, антитела, которые специфически связываются с белком сортилином по данному изобретению, могут быть идентифицированы, подвергнуты скринингу, и/или охарактеризованы по их физическим/химическим свойствам и/или биологическим активно стям различными методами анализа, известными специалистам.
Вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи антитела против сортилина.
A. HVR тяжелой цепи.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению включают вариабельную область тяжелой цепи, содержащую один или несколько (например, один или больше, два или больше, или все три) HVR, выбранные из HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 (как указано в табл. 14-16). В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 (как указано в табл. 14-16).
В некоторых вариантах реализации, HVR-H1 содержит последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1). В некоторых вариантах реализации, HVR-H2 содержит последовательность в соответствии с формулой I: TIYHSGSTYYNPSLX1S (SEQ ID NO: 4), где X1 представляет собой K или E. В некоторых вариантах реализации, HVR-H2 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2-3. В некоторых вариантах реализации, HVR-H3 содержит последовательность в соответствии с формулой II: ARQGSIX1QGYYGMDV (SEQ ID NO: 7). В некоторых вариантах реализации, HVR-H3 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 5-6.
В некоторых вариантах реализации, HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID
NO: 1. В некоторых вариантах реализации, HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность, со держащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с амино- 28 046146 кислотной последовательностью SEQ ID NO: 1), но сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, до 1, до 2, до 3, до 4, или до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности HVR-H1 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации, HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 2-3. В некоторых вариантах реализации, HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность, содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 2-3), но сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, до 1, до 2, до 3, до 4, или до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности HVR-H2, выбранной из SEQ ID NO: 2-3. В некоторых вариантах реализации, HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 5-6. В некоторых вариантах реализации, HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность, содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 5-6), но сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, до 1, до 2, до 3, до 4, или до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности HVR-H3, выбранной из SEQ ID NO: 5-6.
В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, содержащий последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий последовательность в соответствии с формулой I, и HVR-H3, содержащий последовательность в соответствии с формулой II.
В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 1, HVR-H2, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2-3, и HVR-H3, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 5-6.
В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, HVRH2 и HVR-H3 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S60-18, S-60-19, S-60-24, или любой их комбинации (как указано в табл. 14-16).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, при этом вариабельная область тяжелой цепи содержит один или несколько из: (a) HVR-H1, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-H1 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-6015.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24; (b) HVR-H2, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-H2 антитела S-60-10, S-60-11, S60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-6015.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-6015.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24; и (c) HVRH3, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-H3 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-6013, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R],
- 29 046146
S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), и HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6).
B. HVR легкой цепи.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую один или несколько (например, один или больше, два или больше, или все три) HVR, выбранных из HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 (как указано в табл. 17-19). В некоторых вариантах реализации, вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, HVR-L2 и HVRL3 (как указано в табл. 17-19).
В некоторых вариантах реализации, HVR-L1 содержит последовательность в соответствии с формулой III: RSSQX1LLX2SX3GYNYLD (SEQ ID NO: 28), где X1 представляет собой S или G, X2 представляет собой R или H, и Х3 представляет собой N, T, S, G, R, D, H, K, Q, Y, E, W, F, I, V, A, M, или L. В некоторых вариантах реализации, HVR-L1 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 8-27. В некоторых вариантах реализации, HVR-L1 содержит последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), RSSQS LLRSSGYNYLD (SEQ ID NO: 10), RSSQSLLRSGGYNYLD (SEQ ID NO: 11), RSSQSLLRSRG YNYLD (SEQ ID NO: 12),
RSSQSLLRSDGYNYLD (SEQ ID NO: 13), RSSQSLLRSHGYNYLD (SEQ ID NO: 14),
RSSQSLLRSKGYNYLD (SEQ ID NO: 15), RSSQSLLRSQGYNYLD (SEQ ID NO: 16), RSSQSLLRSYGYNYLD (SEQ ID NO: 17), RSSQSLLRSEGYNYLD (SEQ ID NO: 18), RSSQSLLRSWGYNYLD (SEQ ID NO: 19), RSSQSLLRSFGYNYLD (SEQ ID NO: 20), RSSQSL LRSIGYNYLD (SEQ ID NO: 21), RSSQSLLRSVGYNYLD (SEQ ID NO: 22), RSSQSLLRSAG YNYLD (SEQ ID NO: 23), RSSQSLLRSMGYNYLD (SEQ ID NO: 24), RSSQSLLRSLGYNYLD (SEQ ID NO: 25), RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 26), или RSSQGLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 27). В одном конкретном варианте реализации, HVR-L1 содержит последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8). В другом конкретном варианте реализации, HVR-L1 содержит последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9) (как указано в табл. 19).
В некоторых вариантах реализации, HVR-L2 содержит последовательность в соответствии с формулой IV: LGSNRX1S (SEQ ID NO: 31), где X1 представляет собой A или V. В некоторых вариантах реализации, HVR-L2 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 29-30.
В некоторых вариантах реализации, HVR-L3 содержит последовательность в соответствии с формулой V: MQQQEX1PLT (SEQ ID NO: 34), где X1 представляет собой A или T. В некоторых вариантах реализации, HVR-L3 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 32-33.
В некоторых вариантах реализации, HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 8-27. В некоторых вариантах реализации, HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность, содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 8-27), но сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, до 1, до 2, до 3, до 4, или до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности HVR-L1, выбранной из SEQ ID NO: 8-27. В некоторых вариантах реализации, HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 29-30. В некоторых вариантах реализации, HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность, содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 2930), но сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, до 1, до 2, до 3, до 4, или до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности HVR-L2, выбранной из SEQ ID NO: 29-30. В некоторых вариантах реализации, HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 32-33. В некоторых вариантах реализа
- 30 046146 ции, HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность, содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 32-33), но сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, до 1, до 2, до 3, до 4, или до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности HVR-L3, выбранной из SEQ ID NO: 32-33.
В некоторых вариантах реализации, вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, содержащий последовательность в соответствии с формулой III, HVR-L2, содержащий последовательность в соответствии с формулой IV, и HVR-L3, содержащий последовательность в соответствии с формулой V. В некоторых вариантах реализации, вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 8-27, HVR-L2, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 29-30, и HVR-L3, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 32-33.
В некоторых вариантах реализации, вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S60-18, S-60-19, S-60-24, или любой их комбинации (как указано в табл. 17-19).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, при этом вариабельная область легкой цепи содержит один или несколько из: (a) HVR-L1, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-L1 антитела S-60-10, S60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24; (b) HVR-L2, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-L2 антитела S-60-10, S-60-11, S60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-6015.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-6015.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24; и (c) HVRL3, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-L3 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-6013, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
C. HVR тяжелой цепи и HVR легкой цепи.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую один или несколько (например, один или больше, два или больше, или все три) HVR, выбранных из HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 (как указано в табл. 14-16), и вариабельную область легкой цепи, содержащую один или несколько (например, один или больше, два или больше, или все три) HVR, выбранных из HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 (как указано в табл. 17-19). В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, HVR-H2 и
- 31 046146
HVR-H3 (как указано в табл. 14-16), и вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 (как указано в табл. 17-19).
В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, содержащий последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий последовательность в соответствии с формулой I, и HVR-H3, содержащий последовательность в соответствии с формулой II, и вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, содержащий последовательность в соответствии с формулой III, HVR-L2, содержащий последовательность в соответствии с формулой IV, и HVR-L3, содержащий последовательность в соответствии с формулой V. В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 1, HVRH2, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2-3, и HVR-H3, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 5-6, и вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 8-27, HVR-L2, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 29-30, и HVR-L3, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 32-33.
В некоторых аспектах, вариабельная область тяжелой цепи содержит HVR-H1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 1, HVR-H2, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2-3, и HVR-H3, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 5-6, и вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 8-27, HVRL2, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 29-30, и HVR-L3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 32.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-10, S-6011, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, или любой их комбинации (как указано в табл. 14-16); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-6015.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, S-60-24, или любой их комбинации (как указано в табл. 17-19).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3, при этом антитело содержит HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24 (как указано в табл. 14-19).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, при этом вариабельная область тяжелой цепи содержит один или несколько из: (a) HVR-H1, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-H1 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S60-18, S-60-19, или S-60-24; (b) HVR-H2, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-H2 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-6015.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24; и (c) HVR-H3, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-H3 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60
- 32 046146
13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24; и вариабельная область легкой цепи содержит один или несколько из: (a) HVR-L1, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVRL1 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-6015.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S60-19, или S-60-24; (b) HVR-L2, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-L2 антитела S-60-10, S60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24; и (c) HVR-L3, содержащего аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью HVR-L3 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-6013, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRVS (SEQ ID NO: 30), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLES (SEQ ID NO: 3), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых аспектах, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых аспектах, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность
- 33 046146
YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIQQGYYGMDV (SEQ ID NO: 5); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 26), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQETPLT (SEQ ID NO: 33).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQGLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 27), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
D. Вариабельная область тяжелой цепи.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 54-56. В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 54-56. В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 54-56), но сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, до 1, до 2, до 3, до 4, до 5, до 6, до 7, до 8, до 9, или до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в вариабельной области тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 54-56.
В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24 (как указано в табл. 30).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), и HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6).
E. Вариабельная область легкой цепи.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 57-80. В некоторых вариантах реализации, вариабельная область легкой цепи содержит ами
- 34 046146 нокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 57-80. В некоторых вариантах реализации, вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 57-80), но сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, до 1, до 2, до 3, до 4, до 5, до 6, до 7, до 8, до 9, или до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в вариабельной области легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 57-80.
В некоторых вариантах реализации, вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24 (как указано в табл. 31).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
F. Вариабельная область тяжелой цепи и вариабельная область легкой цепи.
В некоторых аспектах, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54-56; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 57-80. В некоторых вариантах реализации, вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 54-56, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 91%, по меньшей мере примерно 92%, по меньшей мере примерно 93%, по меньшей мере примерно 94%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 57-80. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 54-56), и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 57-80), но сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, до 1, до 2, до 3, до 4, до 5, до 6, до 7, до 8, до 9, или до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в вариабельной области тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 54-56; и до 1, до 2, до 3, до 4, до 5, до 6, до 7, до 8, до 9, или до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в вариабельной области легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 57-80.
В некоторых аспектах, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54-56; и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 57-58, 60-78, и 80.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению связыва
- 35 046146 ется с белком сортилином, при этом антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78; вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79; или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80.
В одном аспекте, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57.
В одном аспекте, антитело против сортилина по данному изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24 (как указано в табл. 30), и вариабельную область легкой цепи антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-6015.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S60-19, или S-60-24 (как указано в табл. 31).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 56 и 60. В некоторых вариантах реализации, антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи of S-60-15 [N33 (wt)] (как указано в табл. 30), и вариабельную область легкой цепи антитела S-60-15 [N33 (wt)] (как указано в табл. 31). В некоторых вариантах реализации, антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи S-60-15.1 [N33T] (как указано в табл. 30), и вариабельную область легкой цепи антитела S-60-15.1 [N33T] (как указано в табл. 31)
Типичные примеры антител против сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела, выбранного из S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19 или S-60-24. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь антитела, выбранного из S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24.
(1) S-60-10.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат
- 36 046146 вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-10 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-10 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-10 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-10. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-10 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 57, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-10. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-10 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-10 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-10 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-10 или SEQ ID NO: 54, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-10, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-10, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-10. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-10 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 57, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6010 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-10 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-10 или SEQ ID NO: 57, включая посттрансляционные модификации этой
- 37 046146 последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-10, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-10, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-10.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139.
(2) S-60-11.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-11 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-11 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-11 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-11. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-11 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 58, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-11. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-11 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-11 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-11 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-11 или SEQ ID NO: 54, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-11, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-11, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-11. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности
- 38 046146 с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-11 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 58, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6011 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-11 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-11 или SEQ ID NO: 58, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-11, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-11, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-11.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140.
(3) S-60-12.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-12 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-12 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 59. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-12 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-12. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-12 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 59, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-12. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-12 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-12 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5
- 39 046146 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-12 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-12 или SEQ ID NO: 54, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-12, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-12, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-12. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-12 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 59, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6012 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 59. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-12 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 59. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-12 или SEQ ID NO: 59, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-12, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-12, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-12.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141.
(4) S-60-13.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-13 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 55; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-13 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-13 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 55, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-13. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-13 или с аминокис
- 40 046146 лотной последовательностью SEQ ID NO: 57, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-13. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-13 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 55, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-13 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-13 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-13 или SEQ ID NO: 55, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-13, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-13, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-13. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-13 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 57, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6013 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-13 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-13 или SEQ ID NO: 57, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-13, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-13, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-13.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135 или SEQ ID NO: 136. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135 или SEQ ID NO: 136 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139.
(5) S-60-14.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-14 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 55; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-14 или с амино
- 41 046146 кислотной последовательностью SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-14 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 55, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-14. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-14 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 58, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-14. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-14 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 55, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-14 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-14 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-14 или SEQ ID NO: 55, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-14, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-14, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-14. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-14 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 58, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6014 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-14 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 58. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-14 или SEQ ID NO: 58, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-14, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-14, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-14.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135 или SEQ ID NO: 136. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135 или SEQ ID NO: 136 и легкую цепь, содержащую
- 42 046146 аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140.
(6) S-60-15.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-15 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-15 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-15 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-15. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-15 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 57, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-15. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-15 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-15 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-15 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-15 или SEQ ID NO: 56, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-15, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-15, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-15. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-15 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 57, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6015 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-15 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 57. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции располо
- 43 046146 жены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-15 или SEQ ID NO: 57, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-15, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-15, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-15.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139.
(7) S-60-15.1.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-15.1 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-15.1 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-15.1 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-15.1. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-6015.1 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 60, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-15.1. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-15.1 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-15.1 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-15.1 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-15.1 или SEQ ID NO: 56, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-15.1, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-15.1, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-15.1. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному
- 44 046146 изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-15.1 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 60, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-15.1 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-15.1 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-15.1 или SEQ ID NO: 60, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVRL1 антитела S-60-15.1, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-15.1, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S-60-15.1.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142.
(8) S-60-16.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-16 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-16 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-16 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-16. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-16 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 77, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-16. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-16 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализа
- 45 046146 ции, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-16 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-16 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-16 или SEQ ID NO: 56, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-16, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-16, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-16. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-16 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 77, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6016 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-16 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-16 или SEQ ID NO: 77, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-16, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-16, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-16.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 131. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 131.
(9) S-60-18.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-18 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-18 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-18 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-18. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей
- 46 046146 мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-18 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 78, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-18. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-18 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-18 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-18 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-18 или SEQ ID NO: 56, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-18, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-18, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-18. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-18 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 78, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6018 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-18 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-18 или SEQ ID NO: 78, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-18, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-18, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-18.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 132. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 132.
(10) S-60-19.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-19 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по
- 47 046146 меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-19 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-19 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-19. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-19 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 79, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-19. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-19 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-19 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-19 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-19 или SEQ ID NO: 54, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-19, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-19, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-19. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-19 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 79, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6019 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-19 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-19 или SEQ ID NO: 79, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-19, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-19, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-19.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат лег
- 48 046146 кую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133.
(11) S-60-24.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S60-24 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56; и/или вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-24 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-24 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, при этом вариабельный домен тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 антитела S-60-24. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-24 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 80, при этом вариабельный домен легкой цепи содержит аминокислотные последовательности HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3 антитела S-60-24. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-24 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-24 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи антитела S-60-24 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VH антитела S-60-24 или SEQ ID NO: 56, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-H1 антитела S-60-24, (b) аминокислотной последовательности HVR-H2 антитела S-60-24, и (c) аминокислотной последовательности HVR-H3 антитела S-60-24. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или 100% идентичности с аминокислотной последовательностью вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-24 или с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 80, и содержащую замены (например, консервативные замены, инсерции или делеции по сравнению с референсной последовательностью), но антитело против сортилина, содержащее такую последовательность, сохраняет способность связываться с сортилином. В некоторых вариантах реализации, в общей сложности, от 1 до 10 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-6024 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах реализации, в об
- 49 046146 щей сложности, от 1 до 5 аминокислот было замещено, вставлено и/или удалено в аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи антитела S-60-24 или аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены в областях вне HVR (т.е. на FR-участках). В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции расположены на FR-участках. Необязательно, антитело против сортилина содержит последовательность VL антитела S-60-24 или SEQ ID NO: 80, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном варианте реализации, VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) аминокислотной последовательности HVR-L1 антитела S-60-24, (b) аминокислотной последовательности HVR-L2 антитела S-60-24, и (c) аминокислотной последовательности HVR-L3 антитела S60-24.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 или SEQ ID NO: 138 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и антитело, содержащее вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из S-60-10, S-60-11, S-6012, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-16, S-60-18, S-60-19, и S-60-24.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-10. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-10. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-10. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-10. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6010.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-11. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-11. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-11. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-11. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6011.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-12. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-12. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-12. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-12. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6012.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-13. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-13. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-13. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-13. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6013.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональ
- 50 046146 ное антитело против сортилина S-60-14. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-14. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-14. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-14. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6014.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-15. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-15. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-15. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-15. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6015.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-15.1. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-15.1. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-6015.1. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-15.1. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-15.1.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-16. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-16. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-16. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-16. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6016.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-18. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-18. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-18. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-18. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6018.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-19. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и S-60-19. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-19. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-19. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6019.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой моноклональное антитело против сортилина S-60-24. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, которое связывает по существу тот же эпитоп сортилина, что и
- 51 046146
S-60-24. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи моноклонального антитела S-60-24. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-60-24. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой выделенное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела S-6024.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой антагонистическое антитело. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина представляет собой агонистическое антитело. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению принадлежат к классу IgG, классу IgM, или классу IgA. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению принадлежат к классу IgG и имеют изотип IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
Дополнительные антитела против сортилина, например, антитела, которые специфически связываются с белком сортилином по данному изобретению, могут быть идентифицированы, подвергнуты скринингу, и/или охарактеризованы по их физическим/химическим свойствам и/или биологическим активностям различными методами анализа, известными специалистам.
Определенные аспекты данного изобретения относятся к использованию двух или больше антител против сортилина, которые при совместном использовании проявляют аддитивные или синергические эффекты, по сравнению с использованием соответствующего отдельного антитела против сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению представляет собой фрагмент антитела, который связывается с человеческим белком сортилином.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению представляет собой фрагмент антитела, который связывается с одним или несколькими человеческими белками, выбранными из группы, состоящей из человеческого сортилина, природного варианта человеческого сортилина, и варианта болезни человеческого сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению представляет собой фрагмент антитела, при этом фрагмент антитела представляет собой Fab-, Fab'-, Fab'-SH-, F(ab')2-, Fv- или scFv-фрагмент.
Каркасы антител.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую один или несколько (например, один или больше, два или больше, три или больше, или все четыре) каркасных участков, выбранных из VH FR1, VH FR2, VH FR3, и VH FR4 (как указано в табл. 20-23). В некоторых вариантах реализации, VH FR1 содержит последовательность QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSG (SEQ ID NO: 35). В некоторых вариантах реализации, VH FR2 содержит последовательность WIRQPPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 36). В некоторых вариантах реализации, VH FR3 содержит последовательность, соответствующую Формуле VI: XjVTISVDTSKNQFSLX2LSSVTAADTAVYYC (SEQ ID NO: 39), где X1 представляет собой Q или R, и X2 представляет собой E или K. В некоторых вариантах реализации, VH FR3 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 37-38. В некоторых вариантах реализации, VH FR4 содержит последовательность WGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 40). В некоторых вариантах реализации, антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую VHFR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 35, VH FR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, VH FR3 в соответствии с формулой VI, и VH FR4, содержащий последовательность SEQ ID NO: 40.
В некоторых вариантах реализации, антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую VH FR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 35, VH FR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, VH FR3 содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 37-38, и VH FR4, содержащий последовательность SEQ ID NO: 40.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую VH FR1, VH FR2, VH FR3, и VH FR4 антитела S-6010, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-6015.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24 (как указано в табл. 20-23).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую один или несколько (например, один или больше, два или больше, три или больше, или все четыре) каркасных участков, выбранных из VL FR1, VL FR2, VL FR3, и VL FR4 (как указано в табл. 24-27). В некоторых вариантах реализации, VL FR1 содержит последовательность в соответствии с формулой VII: DIVMTQSPLSLPVTPGXiX2ASISC (SEQ ID NO: 44), где X1 представляет собой E или G, и X2 представляет собой P или S. В некоторых вариантах реализации, VL FR1 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 41-43. В некоторых
- 52 046146 вариантах реализации, VL FR2 содержит последовательность в соответствии с формулой VIII: WYLQKPGQX1PQLLIY (SEQ ID NO: 47), где X1 представляет собой S или P. В некоторых вариантах реализации, VL FR2 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4546. В некоторых вариантах реализации, VL FR3 содержит последовательность в соответствии с формулой IX: GVPDRX1SGSGSGT DFTLKISRX2EAEDVGX3YYC (SEQ ID NO: 52), где X1 представляет собой F или L, X2 представляет собой A или V, и Х3 представляет собой V или A. В некоторых вариантах реализации, VL FR3 содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48-51. В некоторых вариантах реализации, VL FR4 содержит последовательность FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 53). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую VL FR1, содержащий последовательность, соответствующую Формуле VII, VL FR2, содержащий последовательность, соответствующую Формуле VIII, VL FR3, содержащий последовательность, соответствующую Формуле IX, и VL FR4, содержащий последовательность SEQ ID NO: 53.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую VL FR1, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 41-43, VL FR2, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45-46, VL FR3, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 48-51, и VL FR4, содержащий последовательность SEQ ID NO: 53.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую VL FR1, VL FR2, VL FR3, и VL FR4 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-6015.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24 (как указано в табл. 24-27).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую один или несколько (например, один или больше, два или больше, три или больше, или все четыре) каркасных участков, выбранных из VH FR1, VH FR2, VH FR3, и VH FR4 (как указано в табл. 20-23), и вариабельную область легкой цепи, содержащую один или несколько (например, один или больше, два или больше, три или больше, или все четыре) каркасных участков, выбранных из VL FR1, VL FR2, VL FR3, и VL FR4 (как указано в табл. 24-27). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую VH FR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 35, VH FR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, VH FR3 в соответствии с формулой VI, и VH FR4, содержащий последовательность SEQ ID NO: 40; и вариабельную область легкой цепи, содержащую VL FR1, содержащий последовательность, соответствующую Формуле VII, VL FR2, содержащий последовательность, соответствующую Формуле VIII, VL FR3, содержащий последовательность, соответствующую Формуле IX, и VL FR4, содержащий последовательность SEQ ID NO: 53. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую VH FR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 35, VH FR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, VH FR3 содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 37-38, и VH FR4, содержащий последовательность SEQ ID NO: 40; вариабельную область легкой цепи, содержащую VL FR1, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 41-43, VL FR2, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45-46, VL FR3, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 48-51, и VL FR4, содержащий последовательность SEQ ID NO: 53.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую VH FR1, VH FR2, VH FR3, и VH FR4 антитела S-6010, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-6015.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S-60-19, или S-60-24 (как указано в табл. 20-23), и вариабельную область легкой цепи, содержащую VL FR1, VL FR2, VL FR3, и VL FR4 антитела S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-6015.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16; S-60-18, S60-19, или S-60-24 (как указано в табл. 24-27).
Активности антитела против сортилина.
В определенных аспектах любого из антител против сортилина, антитела против сортилина по данному изобретению могут ингибировать одну или несколько активностей белка сортилина, включая, без ограничений, снижение клеточных уровней сортилина (например, уровней сортилина клеточной поверхности, внутриклеточных уровней сортилина, и/или общих уровней сортилина); повышение уровней про
- 53 046146 гранулина (например, внеклеточных уровней програнулина и/или клеточных уровней програну лина); и ингибирование взаимодействия (например, связывания) между програнулином и сортилином. Как предусматривается в данном документе, антитела против сортилина по данному изобретению могут ингибировать дополнительные активности белка сортилина, включая, без ограничений, ингибирование взаимодействия (например, связывания) с одним или несколькими пронейротрофинами по данному изобретению (пронейротрофин-3, пронейротрофин-4/5, про-NGF, про-BDNF и т.д.), нейротрофинами по данному изобретению (нейротрофин-3, нейротрофин-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, p75, пропептидом сортилина (Sort-pro), белком-предшественником амилоида (APP), бета-амилоидным (A beta) пептидом, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), аполипопротеином E (APOE), и рецепторассоциированным белком (RAP), снижение секреции PCSK9, снижение (deacreasing) продуцирования бета-амилоидного пептида.
В некоторых вариантах реализации, данное изобретение предусматривает антитело против сортилина, при этом (a) антитело против сортилина повышает внеклеточные уровни програнулина, снижает клеточные уровни сортилина, ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином, или обеспечивает любую их комбинацию; (b) антитело против сортилина снижает уровни сортилина клеточной поверхности, повышает внеклеточные уровни програнулина, ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином, или обеспечивает любую их комбинацию; (c) антитело против сортилина снижает уровни сортилина клеточной поверхности, снижает внутриклеточные уровни сортилина, снижает общие уровни сортилина, или обеспечивает любую их комбинацию; (d) антитело против сортилина индуцирует деградацию сортилина, расщепление сортилина, интернализацию сортилина, снижение экспрессии сортилина, или обеспечивают любую их комбинацию; (e) антитело против сортилина снижает клеточные уровни сортилина и ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином; (f) антитело против сортилина снижает клеточные уровни сортилина и повышает клеточные уровни програнулина; и/или (g) антитело против сортилина повышает эффективную концентрацию програнулина.
В некоторых вариантах реализации, данное изобретение предусматривает антитело против сортилина, при этом антитело против сортилина снижает уровни сортилина клеточной поверхности, повышает внеклеточные уровни програнулина, ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином, или обеспечивает любую их комбинацию.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению (a) снижает уровни сортилина клеточной поверхности с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 150 пМ, при измерении методом проточной цитометрии; (b) снижает уровни сортилина клеточной поверхности на более чем примерно 50% при 1,25 нМ IgG, на более чем примерно 80% при 0,63 нМ IgG, или на более чем примерно 69% при 150 нМ IgG по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; повышает секрецию програнулина более чем в примерно 1,13 раза по сравнению с контролем при 0,63 нМ IgG, или более чем в примерно 1,22 раза по сравнению с контролем при 50 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА; блокирует связывание програнулина с сортилином с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 0,325 нМ, при измерении методом проточной цитометрии; (e) блокирует связывание програнулина с сортилином на более чем примерно 88% при 50 нМ IgG, или на более чем примерно 27,5% при 150 нМ IgG по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; или (f) any комбинация thereof (см., например, примеры 2-4).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению (a) снижает уровни сортилина клеточной поверхности с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 681 пМ, при измерении методом проточной цитометрии; (b) снижает уровни сортилина клеточной поверхности на более чем примерно 40% при 1,25 нМ IgG, на более чем примерно 29% при 0,6 нМ IgG, или на более чем примерно 62% при 150 нМ IgG по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; (c) повышает секрецию програнулина более чем в примерно 1,11 раза по сравнению с контролем при 0,63 нМ IgG, или более чем в примерно 1,75 раза по сравнению с контролем при 50 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА; (d) блокирует связывание програнулина с сортилином с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 0,751 нМ, при измерении методом проточной цитометрии; (e) блокирует связывание програнулина с сортилином на более чем примерно 90% при 50 нМ IgG, или на более чем примерно 95% при 150 нМ IgG по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; или (f) обеспечивает любую их комбинацию (см., например, примеры 2-4).
Снижение уровней сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с белком сортилином по данному изобретению, экспрессируемым на поверхности клетки, и модулируют (например, индуцируют или ингибируют) одну или несколько активностей сортилина по данному изобретению после связывания с поверхностно экспрессируемым белком сортилином.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению снижают клеточные уровни сортилина in vitro. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению могут снижать клеточные уровни сортилина in vivo (например, в головном мозге,
- 54 046146 и/или периферических органах индивидуума). В некоторых вариантах реализации, снижение клеточных уровней сортилина включает снижение уровней сортилина клеточной поверхности. В используемом в данном документе значении, антитело против сортилина снижает уровни сортилина клеточной поверхности, если оно индуцирует снижение при насыщающей концентрации антитела (например, 0,6 нМ, 0,63 нМ, 1,25 нМ, 50 нМ или 150 нМ) и/или по сравнению с контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60) уровней сортилина клеточной поверхности при измерении с помощью любых in vitro клеточных анализов или пригодной in vivo модели, описанных в данном документе или известных специалистам. В некоторых вариантах реализации, снижение клеточных уровней сортилина включает снижение внутриклеточных уровней сортилина. Как предусматривается в данном документе, антитело против сортилина снижает внутриклеточные уровни сортилина, если оно индуцирует снижение при насыщающей концентрации антитела и/или по сравнению с контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60) внутриклеточных уровней сортилина при измерении с помощью любых in vitro клеточных анализов или пригодной in vivo модели, описанных в данном документе или известных специалистам. В некоторых вариантах реализации, снижение клеточных уровней сортилина включает снижение общих уровней сортилина. Как предусматривается в данном документе, антитело против сортилина снижает общие уровни сортилина, если оно индуцирует снижение при насыщающей концентрации антитела и/или по сравнению с контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60) общих уровней сортилина при измерении с помощью любых in vitro клеточных анализов или пригодной in vivo модели, описанных в данном документе или известных специалистам.
В используемом в данном документе значении, уровни сортилина могут относиться к уровням экспрессии гена, кодирующего сортилин; к уровням экспрессии одного или нескольких транскриптов, кодирующих сортилин; к уровням экспрессии белка сортилина; и/или к количеству белка сортилина, присутствующего внутри клеток и/или на поверхности клеток. Любые известные специалистам способы измерения уровней генной экспрессии, транскрипции, трансляции, и/или относительного содержания или локализации белка могут быть использованы для определения уровней сортилина.
Клеточные уровни сортилина могут относиться, без ограничений, к уровням сортилина клеточной поверхности, внутриклеточным уровням сортилина, и общим уровням сортилина. В некоторых вариантах реализации, снижение клеточных уровней сортилина включает снижение уровней сортилина клеточной поверхности. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению, которые снижают клеточные уровни сортилина (например, уровни сортилина клеточной поверхности) имеют одну или несколько из следующих характеристик: (1) ингибируют или снижают одну или несколько активностей сортилина; (2) способность ингибировать или снижать связывание сортилина с одним или несколькими из его лигандов; (3) способность понижать экспрессию сортилина в экспрессирующих сортилин клетках; (4) способность взаимодействовать, связывать или распознавать белок сортилин; (5) способность специфически взаимодействовать с или связываться с белком сортилином; и (6) способность исцелять, ослаблять или предотвращать любой аспект болезни или расстройства, описанных или предусматриваемых в данном документе.
В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению индуцирует снижение экспрессии сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению индуцирует расщепление сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению индуцирует интернализацию сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению индуцирует шеддинг сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению индуцирует деградацию сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению индуцирует десенсибилизацию сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению действует как миметик лиганда, транзиентно активируя сортилин. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению действует как миметик лиганда и транзиентно активирует сортилин перед индуцированием снижения клеточных уровней сортилина и/или ингибированием взаимодействия (например, связывания) между сортилином и одним или несколькими лигандами сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению действует как миметик лиганда и транзиентно активирует сортилин перед индуцированием деградации сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению действует как миметик лиганда и транзиентно активирует сортилин перед индуцированием расщепления сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению действует как миметик лиганда и транзиентно активирует сортилин перед индуцированием интернализации сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению действует как миметик лиганда и транзиентно активирует сортилин перед индуцированием шеддинга сортилина. В некоторых
- 55 046146 вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению действует как миметик лиганда и транзиентно активирует сортилин перед индуцированием снижения экспрессии сортилина. В некоторых вариантах реализации, выделенное антитело против сортилина по данному изобретению действует как миметик лиганда и транзиентно активирует сортилин перед индуцированием десенсибилизации сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению могут снижать клеточные уровни сортилина (например, уровни сортилина клеточной поверхности, внутриклеточные уровни сортилина, и/или общие уровни сортилина) путем индуцирования деградации сортилина. Соответственно, в некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению индуцируют деградацию сортилина.
Антитела против сортилина по данному изобретению могут снижать клеточные уровни (например, уровни клеточной поверхности) сортилина с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50) (например, при измерении in vitro) в пикомолярном диапазоне значений. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет менее примерно 680,9 пМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет от примерно 72,58 пМ до примерно 680,9 нМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет от примерно 103,6 пМ до примерно 680,9 нМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет менее примерно 600 пМ, 500 пМ, 400 пМ, 300 пМ, 200 пМ, 100 пМ, 50 пМ, 40 пМ, 30 пМ, 20 пМ, 10 пМ, 1 пМ или 0,5 пМ.
В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела имеет значение, меньшее чем примерно, или равное примерно 675 пМ, 650 пМ, 625 пМ, 600 пМ, 575 пМ, 550 пМ, 525 пМ, 500 пМ, 475 пМ, 450 пМ, 425 пМ, 400 пМ, 375 пМ, 350 пМ, 325 пМ, 300 пМ, 275 пМ, 250 пМ, 225 пМ, 200 пМ, 175 пМ, 150 пМ, 125 пМ, 100 пМ, 90 пМ, 80 пМ, 70 пМ, 60 пМ, 50 пМ, 40 пМ, 30 пМ, 20 пМ, 10 пМ, 9 пМ, 8 пМ, 7 пМ, 6 пМ, 5 пМ, 4 пМ, 3 пМ, 2 пМ, 1 пМ или 0,5 пМ.
В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет менее примерно 680,9 пМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела имеет значение, большее чем примерно, или равное примерно 0,1 пМ, 0,5 пМ, 1 пМ, 10 пМ, 20 пМ, 30 пМ, 40 пМ, 50 пМ, 60 пМ, 70 пМ, 80 пМ, 90 пМ, 100 пМ, 125 пМ, 150 пМ, 175 пМ, 200 пМ, 225 пМ, 250 пМ, 275 пМ, 300 пМ, 325 пМ, 350 пМ, 375 пМ, 400 пМ, 425 пМ, 450 пМ, 475 пМ, 500 пМ, 525 пМ, 550 пМ, 575 пМ, 600 пМ, 625 пМ, 650 пМ, 675 пМ. Другими словами, EC50 антитела может иметь любое значение в диапазоне, имеющем верхний предел, равный примерно 675 пМ, 650 нМ, 650 пМ, 625 пМ, 600 пМ, 575 пМ, 550 пМ, 525 пМ, 500 пМ, 475 пМ, 450 пМ, 425 пМ, 400 пМ, 375 пМ, 350 пМ, 325 пМ, 300 пМ, 275 пМ, 250 пМ, 225 пМ, 200 пМ, 175 пМ, 150 пМ, 125 пМ, 100 пМ, 90 пМ, 80 пМ, 70 пМ, 60 пМ, 50 пМ, 40 пМ, 30 пМ, 20 пМ, 10 пМ, 1 пМ или 0,5 пМ, и независимо выбранный нижний предел, равный примерно 0,1 пМ, 0,5 пМ, 1 пМ, 10 пМ, 20 пМ, 30 пМ, 40 пМ, 50 пМ, 60 пМ, 70 пМ, 80 пМ, 90 пМ, 100 пМ, 125 пМ, 150 пМ, 175 пМ, 200 пМ, 225 пМ, 250 пМ, 275 пМ, 300 пМ, 325 пМ, 350 пМ, 375 пМ, 400 пМ, 425 пМ, 450 пМ, 475 пМ, 500 пМ, 525 пМ, 550 пМ, 575 пМ, 600 пМ, 625 пМ, 650 пМ или 675 пМ, при этом нижний предел имеет меньшее значение, чем верхний предел. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела имеет любое значение из примерно 1 пМ, 2 пМ, 3 пМ, 4 пМ, 5 пМ, 6 пМ, 7 пМ, 8 пМ, 9 пМ, 10 пМ, 15 пМ, 20 пМ, 25 пМ, 30 пМ, 35 пМ, 40 пМ, 45 пМ, 50 пМ, 55 пМ, 60 пМ, 65 пМ, 70 пМ, 75 пМ, 80 пМ, 85 пМ, 90 пМ, 95 пМ, 100 пМ, 105 пМ, 110 пМ, 115 пМ, 120 пМ, 125 пМ, 130 пМ, 135 пМ, 140 пМ, 145 пМ, 150 пМ, 155 пМ, 160 пМ, 165 пМ, 170 пМ, 175 пМ, 180 пМ, 185 пМ, 190 пМ, 195 пМ или 200 пМ.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению снижает уровни сортилина клеточной поверхности с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 150 пМ, при измерении методом проточной цитометрии. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела против сортилина по данному изобретению имеет значение, равное примерно 103,6 пМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела против сортилина по данному изобретению имеет значение, равное примерно 72,58 пМ.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению снижает уровни сортилина клеточной поверхности на более чем примерно 40% при 1,25 нМ IgG, или на более чем примерно 80% при 0,63 нМ IgG, при измерении методом проточной цитометрии. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению снижает уровни сортилина клеточной поверхности на примерно 60,92% при 1,25 нМ IgG, при измерении методом проточной цитометрии. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению снижает уровни сортилина клеточной поверхности на примерно 69,3% при 150 нМ IgG, при измерении методом проточной цитометрии. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению снижает уровни сортилина клеточной поверхности на примерно 70,3% при 150 нМ IgG, при измерении методом проточной цитометрии.
Специалистам известны различные способы измерения значений EC50 антитела, включая, например, метод проточной цитометрии (см., например, пример 2). В некоторых вариантах реализации, EC50 измеряют in vitro с использованием клеток, модифицированных для экспрессии человеческого сортилина. В некоторых вариантах реализации, EC50 измеряют при температуре приблизительно 4°C. В некоторых вариантах реализации, EC50 измеряют при температуре приблизительно 25°C. В некоторых вариантах
- 56 046146 реализации, EC50 измеряют при температуре приблизительно 35°C. В некоторых вариантах реализации, EC50 измеряют при температуре приблизительно 37°C. В некоторых вариантах реализации, EC50 определяют с использованием моновалентного антитела (например, Fab) или полноразмерного антитела в моновалентной форме. В некоторых вариантах реализации, EC50 определяют с использованием антитела, содержащего константные области, которые демонстрируют повышенное связывание Fc-рецептора. В некоторых вариантах реализации, EC50 определяют с использованием антитела, содержащего константные области, которые демонстрируют пониженное связывание Fc-рецептора.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению обладают более высокой активностью снижения уровней сортилина клеточной поверхности по сравнению с контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению снижают клеточные уровни (например, уровни клеточной поверхности) сортилина с более низким значением EC50 (например, путем измерения in vitro), чем контрольное антитело (например, антитело против сортилина, имеющее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению снижают клеточные уровни (например, уровни клеточной поверхности) сортилина с EC50, которая имеет значение на по меньшей мере примерно 5%, по меньшей меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере мере примерно примерно примерно примерно примерно
10%, 25%, 40%, 55%, 70%, по по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере мере примерно примерно примерно примерно примерно
15%, 30%, 45%, 60%, 75%, по по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере мере примерно примерно примерно примерно примерно
20%, 35%, 50%, 65%, 80%, по по по по по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, или по меньшей мере примерно 99% ниже, чем EC50 контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению снижают клеточные уровни (например, уровни клеточной поверхности) сортилина с EC50, которая имеет значение в по меньшей мере примерно 1 раз, по меньшей мере примерно 1,1 раза, по меньшей мере примерно 1,5 раза, по меньшей мере примерно 2 раза, по меньшей мере примерно 3 раза, по меньшей мере примерно 4 раза, по меньшей мере примерно 5 раз, по меньшей мере примерно 6 раз, по меньшей мере примерно 7 раз, по меньшей мере примерно 8 раз, по меньшей мере примерно 9 раз, по меньшей мере примерно 10 раз, по меньшей мере примерно 12,5 раз, по меньшей мере примерно 15 раз, по меньшей мере примерно 17,5 раз, по меньшей мере примерно 20 раз, по меньшей мере примерно 22,5 раза, по меньшей мере примерно 25 раз, по меньшей мере примерно 27,5 раз, по меньшей мере примерно 30 раз, по меньшей мере примерно 50 раз, или по меньшей мере примерно 100 раз ниже, чем EC50 контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют EC50, которая по меньшей мере в 1,5 раза ниже, чем у контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют EC50, которая по меньшей мере в 1,1 раза ниже, чем у контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению (a) снижает уровни сортилина клеточной поверхности с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 681 пМ, при измерении методом проточной цитометрии; (b) снижает уровни сортилина клеточной поверхности на более чем примерно 40% при 1,25 нМ IgG, на более чем примерно 29% при 0,6 нМ IgG, или на более чем примерно 62% при 150 нМ IgG, по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; (c) повышает секрецию програнулина более чем в примерно 1,11 раза по сравнению с контролем при 0,63 нМ IgG, или более чем в примерно 1,75 раза по сравнению с контролем при 50 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА; (d) блокирует связывание програнулина с сортилином с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50), составляющей менее 0,751 нМ, при измерении методом проточной цитометрии; (e) блокирует связывание програнулина с сортилином на более чем примерно 90% при 50 нМ IgG, или на более чем примерно 95% при 150 нМ IgG, по сравнению с контролем, при измерении методом проточной цитометрии; или (f) обеспечивает любую их комбинацию (см., например, примеры 2-4).
Повышение уровней програнулина.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению увеличивают внеклеточные уровни програнулина in vitro. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению могут увеличивать клеточные уровни програнулина или in vivo (например, в головном мозге, крови, и/или периферических органах индивидуума). В используемом в дан- 57 046146 ном документе значении, антитело против сортилина повышает внеклеточные уровни програнулина, если оно индуцирует увеличение при насыщающих концентрациях антитела (например, 0,6 нМ, 0,63 нМ, 1,25 нМ, 50 нМ или 150 нМ) и/или по сравнению с контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60) внеклеточных уровней програнулина при измерении с помощью любых in vitro клеточных анализов или тканевых (таких как тканей головного мозга) анализов, описанных в данном документе или известных специалистам. Как предусматривается в данном документе, антитело против сортилина повышает клеточные уровни програнулина, если оно индуцирует увеличение, при насыщающей концентрации антитела (например, 0,6 нМ, 0,63 нМ, 1,25 нМ, 50 нМ или 150 нМ) и/или по сравнению с контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60) клеточных уровней програнулина при измерении с помощью любых in vitro клеточных анализов или тканевых (таких как тканей головного мозга) анализов, описанных в данном документе или известных специалистам.
В используемом в данном документе значении, уровни програнулина могут относиться к уровням экспрессии гена, кодирующего програнулин; к уровням экспрессии одного или нескольких транскриптов, кодирующих програнулин; к уровням экспрессии белка програнулина; и/или к количеству белка програнулина, секретируемого клетками и/или присутствующего в клетках. Любые известные специалистам способы измерения уровней генной экспрессии, транскрипции, трансляции, относительного содержания белка, секреции белка, и/или локализации белка, могут использоваться для определения уровней програнулина.
В используемом в данном документе значении, уровни програнулина могут относиться к, без ограничений, внеклеточным уровням програнулина, внутриклеточным уровням програнулина, и общим уровням програнулина. В некоторых вариантах реализации, увеличение уровней програнулина включает увеличение внеклеточных уровней програнулина.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению повышает секрецию програнулина более чем в примерно 1,11 раза по сравнению с контролем при 0,63 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению повышает секрецию програнулина в примерно 1,42 раза по сравнению с контролем при 0,63 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению повышает секрецию програнулина более чем в примерно 1,75 раза по сравнению с контролем при 50 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению повышает секрецию програнулина в примерно 1,97 раза по сравнению с контролем при 50 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению повышает секрецию програнулина в примерно 2,29 раза по сравнению с контролем при 50 нМ IgG, при измерении методом стандартного ИФА.
Различные способы измерения секреции програнулина известны специалистам, включая, например, методом ИФА (см., например, примеры 2 и 4). В некоторых вариантах реализации, EC50 измеряют in vitro с использованием клеток, экспрессирующих человеческий сортилин. В некоторых вариантах реализации, секрецию програнулина определяют с использованием моновалентного антитела (например, Fab) или полноразмерного антитела в моновалентной форме. В некоторых вариантах реализации, секрецию програнулина определяют с использованием антитела, содержащего константные области, которые демонстрируют повышенное связывание Fc-рецептора. В некоторых вариантах реализации, секрецию програнулина определяют с использованием антитела, содержащего константные области, которые демонстрируют пониженное связывание Fc-рецептора.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению обладают более высокой активностью повышения уровней програнулина по сравнению с контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению повышают уровни (например, внеклеточные уровни) програнулина с более низким значением EC50 (например, при измерении in vitro), чем контрольное антитело (например, антитело против сортилина, имеющее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению повышают уровни (например, внеклеточные уровни) програнулина на по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей примерно примерно примерно примерно примерно
20%, 35%, 50%, 65%, 80%, по по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей меньшей примерно 95%, мере мере мере мере мере примерно примерно примерно примерно примерно
25%, 40%, 55%, 70%, 85%, по по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере мере примерно примерно примерно примерно примерно
30%, 45%, 60%, 75%, 90%, по по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере мере мере или по меньшей мере примерно 99% по сравнению с (than) контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную
- 58 046146 область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению повышают уровни (например, внеклеточные уровни) програнулина в примерно 1 раз, в по меньшей мере примерно 1,1 раза, в по меньшей мере примерно 1,5 раза, в по меньшей мере примерно 2 раза, в по меньшей мере примерно 3 раза, в по меньшей мере примерно 4 раза, в по меньшей мере примерно 5 раз, в по меньшей мере примерно 6 раз, в по меньшей мере примерно 7 раз, в по меньшей мере примерно 8 раз, в по меньшей мере примерно 9 раз, в по меньшей мере примерно 10 раз, в по меньшей мере примерно 12,5 раз, в по меньшей мере примерно 15 раз, в по меньшей мере примерно 17,5 раз, в по меньшей мере примерно 20 раз, в по меньшей мере примерно 22,5 раз, в по меньшей мере примерно 25 раз, в по меньшей мере примерно 27,5 раз, в по меньшей мере примерно 30 раз, в по меньшей мере примерно 50 раз, или в по меньшей мере примерно 100 раз сильнее, чем контрольное антитело (например, антитело против сортилина, имеющее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению повышают уровни програнулина в примерно 1,1 раза сильнее, чем контрольное антитело (например, антитело против сортилина, имеющее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению повышают уровни програнулина в примерно 1,3 раза сильнее, чем контрольное антитело (например, антитело против сортилина, имеющее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению увеличивают эффективную концентрацию програнулина. Эффективная концентрация програнулина относится к концентрации програнулина в плазме или цереброспинальной жидкости. В некоторых вариантах реализации, увеличение эффективной концентрации програнулина представляет собой увеличение в более чем 1,5 раза. В некоторых вариантах реализации, эффективная концентрация програнулина остается повышенной на протяжении 7-28 дней.
Уменьшение взаимодействия между сортилином и партнером по связыванию.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и одним или несколькими белками, выбранными из програнулина, пронейротрофина, нейротрофина, пронейротрофина-3, нейротрофина-3, пронейротрофина-4/5, нейротрофина-4/5, про-фактора роста нервов (про-NGF), фактора роста нервов (NGF), про-мозгового нейротрофического фактора (про-BDNF), мозгового нейротрофического фактора (BDNF), нейротензина, p75, пропептида сортилина (Sort-pro), белка-предшественника амилоида (APP), бета-амилоидного (A beta) пептида, липопротеинлипазы (LpL), аполипопротеина AV (APOA5), аполипопротеина E (APOE), PCSK9, и рецептор-ассоциированного белка (RAP), и/или природных вариантов. В конкретном варианте реализации, антитела против сортилина по данному изобретению ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и програнулином.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и нейротрофином по данному изобретению, таким как пронейротрофин, пронейротрофин-3, пронейротрофин-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофин-3, нейротрофин-4/5, NGF, и BDNF. В других вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и нейротензином. В других вариантах реализации, антитела против сортилина ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и p75. В других вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и Sort-pro. В других вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и APP. В других вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать продуцирование бета-амилоидного пептида. В других вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать транспорт и секрецию PCSK9. В других вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и LpL. В других вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и APOA5. В других вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и APOE. В других вариантах реализации, антитела против сортилина могут ингибировать взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином по данному изобретению и RAP.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению связываются с белком сортилином по данному изобретению, экспрессируемым на поверхности клетки, и голые антитела ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином и одним или несколькими лигандами сортилина. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по
- 59 046146 данному изобретению, которые связываются с белком сортилином по данному изобретению (of the present), ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином и одним или несколькими лигандами сортилина путем снижения эффективных уровней сортилина, доступного для взаимодействия с этими белками на поверхности клетки или внутри клетки. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению, которые связываются с белком сортилином по данному изобретению, ингибируют взаимодействие (например, связывание) между белком сортилином и одним или несколькими лигандами сортилина путем индуцирования деградации сортилина.
A. Уменьшение взаимодействия между сортилином и програнулином.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению повышают уровни програнулина и/или снижают клеточные уровни сортилина, в то же время блокируя (например, ингибируя) взаимодействие (например, связывание) между сортилином и програнулином. Соответственно, в некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению блокируют взаимодействие (например, связывание) между сортилином и програнулином. В используемом в данном документе значении, антитело против сортилина блокирует взаимодействие (например, связывание) между сортилином и програнулином, если оно снижает связывание програнулина с сортилином по сравнению с контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60) при насыщающей концентрации антитела (например, 0,6 нМ, 0,63 нМ, 1,25 нМ, 50 нМ или 150 нМ) в любом in vitro анализе или анализе клеточной культуры, описанных в данном документе или известных специалистам.
Антитела против сортилина по данному изобретению могут снижать связывание програнулина с сортилином с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50) (например, при измерении in vitro) в пикомолярном диапазоне значений. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет менее примерно 2,2 нМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет менее примерно 1,22 нМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет менее примерно 751 пМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет от примерно 325 пМ до примерно 751 нМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет от примерно 405 пМ до примерно 751 нМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет от примерно 588 пМ до примерно 751 нМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела составляет менее примерно 2,2 нМ, 2,1 нМ, 2,0 нМ, 1,9 нМ, 1,8 нМ, 1,7 нМ, 1,6 нМ, 1,5 нМ, 1,4 нМ, 1,3 нМ, 1,2 нМ, 1,1 нМ, 1,0 нМ, 900 пМ, 800 пМ, 700 пМ, 600 пМ, 500 пМ, 400 пМ, 300 пМ, 200 пМ, 100 пМ, 50 пМ, 40 пМ, 30 пМ, 20 пМ, 10 пМ, 1 пМ или 0,5 пМ.
В некоторых вариантах реализации, величина EC50 антитела при снижении связывания програнулина с сортилином составляет менее примерно или равна примерно 2,2 нМ, 2,1 нМ, 2,0 нМ, 1,9 нМ, 1,8 нМ, 1,7 нМ, 1,6 нМ, 1,5 нМ, 1,4 нМ, 1,3 нМ, 1,2 нМ, 1,1 нМ, 1,0 нМ, 900 пМ, 800 пМ, 700 пМ, 600 пМ, 500 пМ, 475 пМ, 450 пМ, 425 пМ, 400 пМ, 375 пМ, 350 пМ, 325 пМ, 300 пМ, 275 пМ, 250 пМ, 225 пМ, 200 пМ, 175 пМ, 150 пМ, 125 пМ, 100 пМ, 90 пМ, 80 пМ, 70 пМ, 60 пМ, 50 пМ, 40 пМ, 30 пМ, 20 пМ, 10 пМ, 9 пМ, 8 пМ, 7 пМ, 6 пМ, 5 пМ, 4 пМ, 3 пМ, 2 пМ, 1 пМ или 0,5 пМ.
В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела против сортилина по данному изобретению составляет примерно 1,22 нМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела против сортилина по данному изобретению составляет примерно 588 пМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела против сортилина по данному изобретению составляет примерно 405 пМ. В некоторых вариантах реализации, EC50 антитела против сортилина по данному изобретению составляет примерно 325 пМ.
Различные способы измерения значений EC50 антитела известны специалистам, включая, например, метод проточной цитометрии (см., например, пример 3). В некоторых вариантах реализации, EC50 при снижении связывания програнулина с сортилином (Sortlin) измеряют in vitro с использованием клеток, экспрессирующих человеческий сортилин. В некоторых вариантах реализации, EC50 измеряют при температуре приблизительно 4°C. В некоторых вариантах реализации, EC50 измеряют при температуре приблизительно 25°C. В некоторых вариантах реализации, EC50 измеряют при температуре приблизительно 35°C. В некоторых вариантах реализации, EC50 измеряют при температуре приблизительно 37°C. В некоторых вариантах реализации, EC50 при снижении связывания програнулина с сортилином определяют с использованием моновалентного антитела (например, Fab) или полноразмерного антитела в моновалентной форме. В некоторых вариантах реализации, EC50 определяют с использованием антитела, содержащего константные области, которые демонстрируют повышенное связывание Fc-рецептора. В некоторых вариантах реализации, EC50 при снижении связывания програнулина с сортилином определяют с использованием антитела, содержащего константные области, которые демонстрируют пониженное связывание Fc-рецептора.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению обладают более высокой активностью в снижении связывания програнулина с сортилином (Sortlin) по сравнению с контрольным антителом (например, антителом против сортилина, имеющим вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению снижают связывание програнулина с сортилином с более низким значением EC50 (например, при измерении in vitro), чем контрольное антитело (например, антитело против сортилина, имеющее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную об
- 60 046146 ласть легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению снижают связывание програнулина с сортилином с EC50, которая имеет значение на по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 45%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, или по меньшей мере примерно 99% ниже, чем EC50 контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению снижают связывание програнулина с сортилином с EC50, которая имеет значение в по меньшей мере примерно 1 раз, по меньшей мере примерно 1,1 раза, по меньшей мере примерно 1,5 раза, по меньшей мере примерно 2 раза, по меньшей мере примерно 3 раза, по меньшей мере примерно 4 раза, по меньшей мере примерно 5 раз, по меньшей мере примерно 6 раз, по меньшей мере примерно 7 раз, по меньшей мере примерно 8 раз, по меньшей мере примерно 9 раз, по меньшей мере примерно 10 раз, по меньшей мере примерно 12,5 раз, по меньшей мере примерно 15 раз, по меньшей мере примерно 17,5 раз, по меньшей мере примерно 20 раз, по меньшей мере примерно 22,5 раза, по меньшей мере примерно 25 раз, по меньшей мере примерно 27,5 раз, по меньшей мере примерно 30 раз, по меньшей мере примерно 50 раз, или по меньшей мере примерно 100 раз ниже, чем EC50 контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют EC50 которая по меньшей мере в 1,3 раза ниже, чем у контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют EC50 которая по меньшей мере в 1,8 раза ниже, чем у контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют EC50 которая по меньшей мере в 1,9 раза ниже, чем у контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют EC50 которая по меньшей мере в 2,3 раза ниже, чем у контрольного антитела (например, антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60).
Любые in vitro клеточные анализы или пригодная in vivo модель, описанные в данном документе или известные специалистам, могут быть использованы для измерения ингибирования или снижения взаимодействия (например, связывания) между сортилином и одним или несколькими лигандами сортилина. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению ингибируют или снижают взаимодействие (например, связывание) между сортилином и одним или несколькими лигандами сортилина путем снижения экспрессии сортилина (например, путем снижения уровней сортилина клеточной поверхности). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению ингибируют или снижают взаимодействие (например, связывание) между сортилином и одним или несколькими лигандами сортилина на по меньшей мере 21%, по меньшей мере 22%, по меньшей мере 23%, по меньшей мере 24%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 26%, по меньшей мере 27%, по меньшей мере 28%, по меньшей мере 29%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 31%, по меньшей мере 32%, по меньшей мере 33%, по меньшей мере 34%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 36%, по меньшей мере 37%, по меньшей мере 38%, по меньшей мере 39%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 41%, по меньшей мере 42%, по меньшей мере 43%, по меньшей мере 44%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 46%, по меньшей мере 47%, по меньшей мере 48%, по меньшей мере 49%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 51%, по меньшей мере 52%, по меньшей мере 53%, по меньшей мере 54%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 56%, по меньшей мере 57%, по меньшей мере 58%, по меньшей мере 59%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 61%, по меньшей мере 62%, по меньшей мере 63%, по меньшей мере 64%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 66%, по меньшей мере 67%, по меньшей мере 68%, по меньшей мере 69%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 71%, по меньшей мере 72%, по меньшей мере 73%, по меньшей мере 74%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 76%, по меньшей мере 77%, по меньшей мере 78%, по меньшей мере 79%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или больше при насыщающей концентрации антитела при использовании любого in vitro ана
- 61 046146 лиза или анализа клеточной культуры, описанных в данном документе или известных специалистам.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению блокирует связывание програнулина с сортилином (Sortlin) на более чем примерно 90% при 50 нМ IgG, или на более чем примерно 96% при 150 нМ IgG, при измерении методом проточной цитометрии. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению блокирует связывание програнулина с сортилином на примерно 90,74% при 50 нМ IgG, при измерении методом проточной цитометрии. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению блокирует связывание програнулина с сортилином на примерно 96,5% при 150 нМ IgG, при измерении методом проточной цитометрии. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению блокирует связывание програнулина с сортилином на примерно 96,9% при 150 нМ IgG, при измерении методом проточной цитометрии.
Снижение экспрессии провоспалительных медиаторов.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению могут снижать экспрессию провоспалительных медиаторов после связывания с белком сортилином, экспрессируемым в клетке.
В используемом в данном документе значении, провоспалительные медиаторы представляют собой белки, участвующие прямо или косвенно (например, через пути провоспалительной сигнализации) в механизме, который индуцирует, активирует, усиливает или иначе снижает воспалительный ответ. Может быть использован любой известный специалистам способ идентификации и характеризации провоспалительных медиаторов.
Примеры провоспалительных медиаторов включают, без ограничений, цитокины, такие как интерфероны типа I и II, IL-6, IL12p70, IL12p40, IL-1e, TNF-α, IL-8, CRP, члены семейства IL-20, IL-33, LIF, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18 и CRP. Дополнительные примеры провоспалительных медиаторов включают, без ограничений, хемокины, такие как CXCL1, CCL2, CCL3, CCL4 и CCL5.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению могут снижать функциональную экспрессию и/или секрецию провоспалительных медиаторов, IL-6, IL12p70, IL12p40, IL-1e, TNF-α, CXCL1, CCL2, CCL3, CCL4 и CCL5. В некоторых вариантах реализации, пониженная экспрессия провоспалительных медиаторов происходит в макрофагах, дендритных клетках, моноцитах, остеокластах, клетках Лангеранса кожи, купферовых клетках, T-клетках, и/или микроглиальных клетках. Пониженная экспрессия может включать, без ограничений, снижение генной экспрессии, снижение транскрипционной экспрессии, или снижение экспрессии белка. Может быть использован любой известный специалистам способ определения экспрессии гена, транскрипта (например, мРНК), и/или белка. Например, нозерн-блоттинг может быть использован для определения уровней генной экспрессии провоспалительного медиатора, ОТ-ПЦР может быть использована для определения уровня транскрипции провоспалительного медиатора, и вестерн-блоттинг может быть использован для определения уровней белка провоспалительного медиатора.
В используемом в данном документе значении, провоспалительный медиатор может иметь пониженную экспрессию, если его экспрессия в одной или нескольких клетках субъекта, получившего сортилиновый агент, такой как агонистическое антитело против сортилина по данному изобретению, является более высокой, чем экспрессия этого же провоспалительного медиатора, экспрессируемого в одной или нескольких клетках соответствующего субъекта, не получавшего агонистическое антитело против сортилина. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению может снижать экспрессию провоспалительного медиатора в одной или нескольких клетках субъекта на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 100%, по меньшей мере 110%, по меньшей мере 115%, по меньшей мере 120%, по меньшей мере 125%, по меньшей мере 130%, по меньшей мере 135%, по меньшей мере 140%, по меньшей мере 145%, по меньшей мере 150%, по меньшей мере 160%, по меньшей мере 170%, по меньшей мере 180%, по меньшей мере 190%, или по меньшей мере 200%, например, по сравнению с экспрессией провоспалительного медиатора в одной или нескольких клетках соответствующего субъекта, не получавшего антитело против сортилина. В других вариантах реализации, антитело против сортилина может снижать экспрессию провоспалительного медиатора в одной или нескольких клетках субъекта в по меньшей мере 1,5 раза, по меньшей мере 1,6 раза, по меньшей мере 1,7 раза, по меньшей мере 1,8 раза, по меньшей мере 1,9 раза, по меньшей мере 2,0 раза, по меньшей мере 2,1 раза, по меньшей мере 2,15 раза, по меньшей мере 2,2 раза, по меньшей мере 2,25 раза, по меньшей мере 2,3 раза, по меньшей мере 2,35 раза, по меньшей мере 2,4 раза, по меньшей мере 2,45 раза, по меньшей мере 2,5 раза, по меньшей мере 2,55 раза, по меньшей мере 3,0 раза, по меньшей мере 3,5 раза, по меньшей мере 4,0 раза, по меньшей мере 4,5 раза, по меньшей мере 5,0 раз, по меньшей мере 5,5 раз, по меньшей мере 6,0 раз, по меньшей мере 6,5 раз, по меньшей мере 7,0 раз, по меньшей мере 7,5 раз, по меньшей мере 8,0 раз, по мень
- 62 046146 шей мере 8,5 раз, по меньшей мере 9,0 раз, по меньшей мере 9,5 раз, или по меньшей мере 10 раз, например, по сравнению с экспрессией провоспалительного медиатора в одной или нескольких клетках соответствующего субъекта, не получавшего антитело против сортилина.
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов реализации может содержать любые из признаков, по отдельности или в комбинации, как описано в Разделах 1-7 ниже.
(1) Аффинность связывания антитела против сортилина.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело имеет константу диссоциации (Kd), составляющую <1 мкМ, <100 нМ, <10 нМ, <1 нМ, <0,1 нМ, <0,01 нМ, или <0,001 нМ (например, 10-8 М или меньше, например, от 10-8 М до 10-13 М, например, от 10-9 М до 10-13 М).
Антитела против сортилина по данному изобретению могут иметь наномолярные или даже пикомолярные аффинности к антигену-мишени (например, человеческому сортилину или сортилину млекопитающих). В некоторых вариантах реализации, аффинность связывания антитела против сортилина по данному изобретению к антигену-мишени (например, человеческому сортилину или сортилину млекопитающих) измеряют по константе диссоциации, KD. Константы диссоциации могут быть определены с помощью любой аналитической методики, включая любые биохимические или биофизические методы, такие как сортировка клеток с активацией флуоресценции (FACS), проточная цитометрия, иммуноферментный анализ (ИФА), поверхностный плазмонный резонанс (SPR), интерферометрия биослоев (см., например, Octet System фирмы ForteBio), технология мезомасштабного обнаружения (meso scale discover) (см., например, MSD-SET), калориметрия изотермического титрования (ITC), дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC), круговой дихроизм (CD), анализ методом остановленного потока, и колориметрические или флуоресцентные анализы плавления белков; или анализ связывания клеток. В некоторых вариантах реализации, KD для сортилина определяют при температуре приблизительно 25°C. В некоторых вариантах реализации, константа диссоциации (KD) может быть измерена при 4°C или при комнатной температуре, с использованием, например, анализа FACS или интерферометрии биослоев (BioLlayer).
В некоторых вариантах реализации, KD сортилина определяют при температуре приблизительно 4°C. В некоторых вариантах реализации, KD определяют с использованием моновалентного антитела (например, Fab) или полноразмерного антитела в моновалентной форме. В некоторых вариантах реализации, KD определяют с использованием бивалентного антитела и мономерного рекомбинантного белка сортилина.
В некоторых вариантах реализации, KD антитела против сортилина по данному изобретению для человеческого сортилина, сортилина млекопитающих, или обоих, измеряют с использованием FACS, как описано в данном документе (см., например, примеры 1 и 4). В некоторых вариантах реализации, KD антитела против сортилина по данному изобретению для человеческого сортилина, сортилина млекопитающих, или обоих, измеряют с использованием интерферометрии биослоев, как описано в данном документе (см., например, пример 4).
В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина имеет константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая имеет значение до 2,5 раз ниже, чем у антитела против сортилина, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79, при этом KD определяют методом FACS (см., например, пример 1). В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина имеет константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая имеет значение в диапазоне от примерно 1,10E-8 М до примерно 4,68Е-10 М, при этом KD определяют методом FACS (см., например, пример 1), или от примерно 270 до примерно 2910 пМ, при этом KD определяют методом интерферометрии биослоев (см., например, пример 4).
В некоторых вариантах реализации, KD антитела против сортилина по данному изобретению для человеческого сортилина, сортилина млекопитающих, или обоих, может составлять менее 100 нМ, менее 90 нМ, менее 80 нМ, менее 70 нМ, менее 60 нМ, менее 50 нМ, менее 40 нМ, менее 30 нМ, менее 20 нМ, менее 10 нМ, менее 9 нМ, менее 8 нМ, менее 7 нМ, менее 6 нМ, менее 5 нМ, менее 4 нМ, менее 3 нМ, менее 2 нМ, менее 1 нМ, менее 0,5 нМ, менее 0,1 нМ, менее 0,09 нМ, менее 0,08 нМ, менее 0,07 нМ, менее 0,06 нМ, менее 0,05 нМ, менее 0,04 нМ, менее 0,03 нМ, менее 0,02 нМ, менее 0,01 нМ, менее 0,009 нМ, менее 0,008 нМ, менее 0,007 нМ, менее 0,006 нМ, менее 0,005 нМ, менее 0,004 нМ, менее 0,003 нМ, менее 0,002 нМ, менее 0,001 нМ, или менее 0,001 нМ.
Константы диссоциации (KD) антител против сортилина для человеческого сортилина, сортилина млекопитающих, или обоих, могут составлять менее 10 нМ, менее 9,5 нМ, менее 9 нМ, менее 8,5 нМ, менее 8 нМ, менее 7,5 нМ, менее 7 нМ, менее 6,9 нМ, менее 6,8 нМ, менее 6,7 нМ, менее 6,6 нМ, менее 6,5 нМ, менее 6,4 нМ, менее 6,3 нМ, менее 6,2 нМ, менее 6,1 нМ, менее 6 нМ, менее 5,5 нМ, менее 5 нМ, менее 4,5 нМ, менее 4 нМ, менее 3,5 нМ, менее 3 нМ, менее 2,5 нМ, менее 2 нМ, менее 1,5 нМ, менее 1 нМ, менее 0,95 нМ, менее 0,9 нМ, менее 0,89 нМ, менее 0,88 нМ, менее 0,87 нМ, менее 0,86 нМ, менее 0,85 нМ, менее 0,84 нМ, менее 0,83 нМ, менее 0,82 нМ, менее 0,81 нМ, менее 0,8 нМ, менее 0,75 нМ, ме- 63 046146 нее 0,7 нМ, менее 0,65 нМ, менее 0,64 нМ, менее 0,63 нМ, менее 0,62 нМ, менее 0,61 нМ, менее 0,6 нМ, менее 0,55 нМ, менее 0,5 нМ, менее 0,45 нМ, менее 0,4 нМ, менее 0,35 нМ, менее 0,3 нМ, менее 0,29 нМ, менее 0,28 нМ, менее 0,27 нМ, менее 0,26 нМ, менее 0,25 нМ, менее 0,24 нМ, менее 0,23 нМ, менее 0,22 нМ, менее 0,21 нМ, менее 0,2 нМ, менее 0,15 нМ, менее 0,1 нМ, менее 0,09 нМ, менее 0,08 нМ, менее 0,07 нМ, менее 0,06 нМ, менее 0,05 нМ, менее 0,04 нМ, менее 0,03 нМ, менее 0,02 нМ, менее 0,01 нМ, менее 0,009 нМ, менее 0,008 нМ, менее 0,007 нМ, менее 0,006 нМ, менее 0,005 нМ, менее 0,004 нМ, менее 0,003 нМ, менее 0,002 нМ, или менее 0,001 нМ.
В некоторых вариантах реализации, константа диссоциации (KD) антитела к сортилину составляет от примерно 0,560 нМ до примерно 1,63 нМ, например, при определении KD методом FACS. В некоторых вариантах реализации, константа диссоциации (KD) антитела к сортилину составляет от примерно 0,270 нМ до примерно 2,910 нМ, например, при определении KD методом интерферометрии биослоев. В некоторых вариантах реализации, антитело имеет константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, мышиным сортилином, или обоими, которая имеет значение в диапазоне от примерно 0,36 нМ до примерно 0,43 нМ, или менее 1,02 нМ. В некоторых вариантах реализации, константа диссоциации имеет значение менее 1,02 нМ. В некоторых вариантах реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет константу диссоциации с человеческим сортилином, равную 0,560 нМ или меньше.
В одном конкретном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет константу диссоциации для человеческого сортилина, равную примерно 0,560 нМ. В одном конкретном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет константу диссоциации для человеческого сортилина, равную примерно 0,423 нМ. В одном конкретном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет константу диссоциации для человеческого сортилина, равную примерно 0,365 нМ. В одном конкретном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет константу диссоциации для человеческого сортилина, равную примерно 0,344 нМ. В одном конкретном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет константу диссоциации для человеческого сортилина, равную примерно 0,298 нМ. В одном конкретном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет константу диссоциации для человеческого сортилина, равную примерно 0,270 нМ. В другом конкретном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет константу диссоциации для человеческого сортилина, равную примерно 0,260 нМ.
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют более низкую константу диссоциации (KD) для сортилина, чем контрольное антитело против сортилина (например, контрольное антитело против сортилина, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют KD для мишени (например, человеческого сортилина), значение которой на по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно примерно примерно примерно
30%,
45%,
60%,
75%, по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере примерно примерно примерно примерно
35%, 50%, 65%, 80%, по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере примерно примерно примерно примерно
40%, 55%, 70%, 85%, по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, или по меньшей мере примерно 99% ниже, чем KD контрольного антитела против сортилина для мишени (например, контрольного антитела против сортилина, содержащего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60). В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют KD для мишени (например, человеческого сортилина), значение которой в по меньшей мере примерно 1 раз, по меньшей мере примерно 1,1 раза, по меньшей мере примерно 1,5 раза, по меньшей мере примерно 2 раза, по меньшей мере примерно 3 раза, по меньшей мере примерно 4 раза, по меньшей мере примерно 5 раз, по меньшей мере примерно 6 раз, по меньшей мере примерно 7 раз, по меньшей мере примерно 8 раз, по меньшей мере примерно 9 раз, по меньшей мере примерно 10 раз, по меньшей мере примерно 12,5 раз, по меньшей мере примерно 15 раз, по меньшей мере примерно 17,5 раз, по меньшей мере примерно 20 раз, по меньшей мере примерно 22,5 раза, по меньшей мере примерно 25 раз, по меньшей мере примерно 27,5 раз, по меньшей мере примерно 30 раз, по меньшей мере примерно 50 раз, по меньшей мере примерно 100 раз, по меньшей мере примерно 200 раз, по меньшей мере примерно 300 раз, по меньшей мере примерно 400 раз, по меньшей мере примерно 500 раз, по меньшей мере примерно 600 раз, по меньшей мере примерно 700 раз, по меньшей мере примерно 800 раз, по меньшей мере примерно 900 раз, или по меньшей мере примерно 1000 раз ниже, чем KD контрольного антитела против сортилина для мишени (например, контрольного антитела против сортилина, содержащего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60).
В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют KD для человеческого сортилина, которая по меньшей мере в 100 раз ниже, чем у антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению
- 64 046146 имеют KD для человеческого сортилина, которая по меньшей мере в 50 раз ниже, чем у антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют KD для человеческого сортилина, которая по меньшей мере в 10 раз ниже, чем у антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют KD для человеческого сортилина, которая по меньшей мере в 5 раз ниже, чем у антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60. В некоторых вариантах реализации, антитела против сортилина по данному изобретению имеют KD для человеческого сортилина, которая по меньшей мере в 2 раз ниже, чем у антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60.
В конкретном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет KD для человеческого сортилина, которая примерно в 2,79 раз ниже, чем у антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S60. В другом конкретном варианте реализации, антитело против сортилина по данному изобретению имеет KD для человеческого сортилина, которая примерно в 2,05 раз ниже, чем у антитела против сортилина, имеющего вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответствующие S-60.
(2) Фрагменты антител.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело (antibody antibodies) представляет собой фрагмент антитела. Фрагменты антител включают, без ограничений, Fab-, Fab'-, Fab'-SH-, F(ab')2-, Fv- и scFv-фрагменты, и другие фрагменты, описанные ниже. Обзор некоторых фрагментов антител приведен в Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). Обзор scFvфрагментов приведен, например, в WO 93/16185; и патентах США № 5571894 и 5587458. Обсуждение Fab- и F(ab')2-фрагментов, содержащих остатки эпитопа связывания рецептора реутилизации и имеющих повышенный in vivo период полувыведения, приведено в патенте США № 5869046.
Диатела представляют собой фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут быть бивалентными или биспецифическими. См., например, EP404097; WO 1993/01161; Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). Триатела (triabodies) и тетратела (tetrabodies) также описаны в Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антител, содержащие весь или часть вариабельного домена тяжелой цепи, или весь или часть вариабельного домена легкой цепи антитела. В некоторых вариантах реализации, однодоменное антитело представляет собой однодоменное антитело человека (см., например, патент США № 6248516).
Фрагменты антител могут быть получены различными методами, включая, без ограничений, протеолитический гидролиз интактного антитела, а также продуцирование рекомбинантными клеткамихозяевами (например, E. coli или фагом), как описано в данном документе.
В некоторых вариантах реализации, фрагмент антитела используется в комбинации со вторым антителом к сортилину и/или с одним или несколькими антителами, которые специфически связывают патогенный белок, выбранный из: бета-амилоида или его фрагментов, тау-белка (Tau), IAPP, альфасинуклеина, TDP-43, белка FUS, прионного белка, PrPSc, хантингтина, кальцитонина, супероксиддисмутазы, атаксина, телец Леви, предсердного натриуретического фактора, островкового амилоидного полипептида, инсулина, аполипопротеина AI, сывороточного амилоида A, медина, пролактина, транстиретина, лизоцима, бета-2-микроглобулина, гелсолина, кератоэпителина, цистатина, иммуноглобулина легкой цепи AL, белка S-IBM, связанных с не-ATG повторами (RAN) продуктов трансляции, пептидов с дипептидными повторами (DPR), пептидов с повторами глицин-аланин (GA), пептидов с повторами глицинпролин (GP), пептиды с повторами глицин-аргинин (GR), пептиды с повторами пролин-аланин (PA), пептидов с повторами пролин-аргинин (PR), и любой их комбинации.
(3) Химерные и гуманизированные антитела.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело представляет собой химерное антитело. Некоторые химерные антитела описаны, например, в патенте США № 4816567. В одном примере, химерное антитело содержит не-человеческую вариабельную область (например, вариабельную область, полученную от мышей, крыс, хомячков, кроликов или не являющегося человеком примата, такого как обезьяны) и человеческую константную область. В другом примере, химерное антитело представляет собой антитело с переключением класса, класс или подкласс которого был изменен по сравнению с исходным антителом. Химерные антитела включают их антигенсвязывающие фрагменты.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело представляет собой гуманизированное антитело. Типично, нечеловеческое антитело гуманизируют с целью снижения иммуногенности для людей, при сохранении специфичности и аффинности исходного нечеловеческого антитела. В некоторых вариантах реализации, гуманизированное антитело является существу неиммуногенным для людей. В некоторых вариантах реализации, гуманизированное антитело
- 65 046146 имеет по существу такую же аффинность к мишени, как и антитело другого вида, из которого было получено гуманизированное антитело. См., например, патенты США № 5530101, 5693761; 5693762; и 5585089. В некоторых вариантах реализации, идентифицируют аминокислоты вариабельного домена антитела, которые могут быть модифицированы без снижения нативной аффинности антигенсвязывающего домена, при снижении его иммуногенности. См., например, патенты США № 5766886 и 5869619. Как правило, гуманизированное антитело содержит один или несколько вариабельных доменов, в которых HVR (или их части) получены из нечеловеческого антитела, и FR (или их части) получены из последовательностей человеческого антитела. Гуманизированное антитело, необязательно, будет также содержать по меньшей мере часть человеческой константной области. В некоторых вариантах реализации, некоторые остатки FR гуманизированного антитела замещают на соответствующие остатки нечеловеческого антитела (например, антитела, из которого получают остатки HVR), например, для восстановления или повышения специфичности или аффинности антитела.
Обзор гуманизированных антител и способов их получения приведен, например, в Almagro et al. Front. Biosci. 13:161 9-1633 (2008), и дополнительные описания приведены, например, в патентах США № 5821337, 7527791, 6982321 и 7087409. Человеческие каркасные участки, которые могут быть использованы для гуманизации, включают, без ограничений: каркасные участки, выбранные с использованием метода наилучшего соответствия (см., например, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)); каркасные участки, полученные из консенсусной последовательности человеческих антител с конкретной подгруппой вариабельных областей легкой или тяжелой цепей (см., например, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285 (1992); и Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993)); человеческие зрелые (соматически мутированные) каркасные участки или каркасные участки человеческой зародышевой линии (см., например, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); и каркасные участки, полученные в результате скрининга библиотек FR (см., например, Baca et al. J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) и Rosok et al. J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)).
(4) Человеческие антитела.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело представляет собой человеческое антитело. Человеческие антитела могут продуцироваться с использованием различных методов, известных специалистам. Человеческие антитела описаны в общем в van Dijk et al. Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001) и Lonberg Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).
Человеческие антитела могут быть получены путем введения иммуногена трансгенному животному, которое было модифицировано для продуцирования интактных человеческих антител или интактных антител с человеческими вариабельными областями в ответ на антигенный стимул. Можно сконструировать мышиные штаммы, дефицитные по продуцированию мышиных антител, с большими фрагментами локусов человеческого Ig, в расчете на то, что такие мыши будут продуцировать человеческие антитела в отсутствие мышиных антител. Большие фрагменты человеческого Ig могут сохранять большое разнообразие изменчивого гена, а также надлежащую регуляцию продуцирования и экспрессии антитела. Используя мышиные механизмы диверсификации и селекции антител и отсутствие иммунологической толерантности к человеческим белкам, репертуар человеческих антител, воспроизводимый такими мышиными штаммами, может содержать высокоаффинные полностью человеческие антитела против любого антигена, представляющего интерес, включая человеческие антигены. Используя гибридомные технологии, можно продуцировать и селектировать антигенспецифические человеческие MAb с желательной специфичностью. Некоторые типичные примеры способов описаны в патенте США № 5545807, ЕР 546073, и ЕР 546073. См. также, например, патенты США № 6075181 и 6150584, описывающие технологию XENOMOUSE™; патент США № 5770429, описывающий технологию HUMAB®; патент США № 7041870, описывающий технологию K-M MOUSE®, и публикацию патентной заявки США № US 2007/0061900, описывающую технологию VELOCIMOUSE®. Человеческие вариабельные области из интактных антител, генерируемых такими животными, могут быть дополнительно модифицированы, например, путем комбинирования с другой человеческой константной областью.
Человеческие антитела также могут быть получены методами на основе гибридом. Были описаны человеческие миеломные и мышино-человеческие гетеромиеломные клеточные линии для продуцирования человеческих моноклональных антител, (см., например, Kozbor J. Immunol. 133:3001 (1984), и Boerner et al. J. Immunol. 147:86 (1991)). Человеческие антитела, сгенерированные по технологии человеческой B-клеточной гибридомы, также описаны в Li et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1 03:3557-3562 (2006). Дополнительные способы включают описанные, например, в патенте США № 7189826 (описывающем продуцирование моноклональных человеческих антител IgM из гибридомных клеточных линий). Технология человеческих гибридом (технология Tmioma) также описана в Vollmers et al. Histology and Histopathology 20(3):927-937 (2005), и Vollmers et al. Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(3):185-91 (2005). Человеческие антитела могут быть также получены путем выделения последовательностей вариабельного домена клона Fv, выбранных из человеческих библиотек фагового дисплея. Такие последовательности вариабельного домена могут быть затем объединены с желательным человеческим константным доменом. Методы селекции человеческих антител из библиотек антител опи
- 66 046146 саны ниже.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело представляет собой человеческое антитело, выделенное in vitro методами и/или скринингом комбинаторных библиотек антител с желательной активностью или активностями. Пригодные примеры включают, без ограничений, фаговый дисплей (CAT, Morphosys, Dyax, Biosite/Medarex, Xoma, Symphogen, Alexion (ранее Proliferon), Affimed) рибосомный дисплей (CAT), платформы на основе дрожжей (Adimab) и т.п. В определенных методах фагового дисплея, репертуары генов VH и VL раздельно клонируют методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и рекомбинируют случайным образом в фаговые библиотеки, которые могут быть затем подвергнуты скринингу на антиген-связывающий фаг, как описано Winter et al. Ann. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994). Например, специалистам известны различные способы получения библиотек фагового дисплея и скрининга таких библиотек на антитела, обладающие желательными характеристиками связывания. См. также Sidhu et al. J. Mol. Biol. 338(2):299-310, 2004; Lee et al. J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093, 2004; Fellouse Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004); и Lee et al. J. Immunol. Methods 284( -2):1 19-132 (2004). Фаг типично отображает фрагменты антител, в виде одноцепочечных Fv- (scFc-)фрагменmов или в виде Fab-фрагментов. Библиотеки от иммунизированных источников дают высокоаффинные антитела к иммуногену без необходимости конструирования гибридом. Альтернативно, может быть клонирован наивный репертуар (например, человека) для обеспечения единого источника антител к широкому спектру чужеродных, а также собственных антигенов, без какойлибо иммунизации, как описано Griffiths et al. EMBO J. 12: 725-734 (1993). Наконец, наивные библиотеки также могут быть получены искусственно путем клонирования нереаранжированных сегментов V-гена из стволовых клеток, и использования праймеров для ПЦР, содержащих случайные последовательности для кодирования высоковариабельных областей HVR3 и для проведения реаранжировки in vitro, как описано Hoogenboom et al. J. Mol. Biol., 227:381-388, 1992. Патентные публикации, описывающие фаговые библиотеки человеческого антитела, включают, например: патент США № 5750373, и патентные публикации США № 2007/0292936 и 2009/0002360. Антитела, выделенные из библиотек человеческих антител, считаются в данном документе человеческими антителами или фрагментами человеческих антител.
(5) Константные области, содержащие Fc-области.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело содержит Fc. В некоторых вариантах реализации, Fc имеет изотип человеческого IgG1, IgG2, IgG3 и/или IgG4. В некоторых вариантах реализации, антитело принадлежит к классу IgG, классу IgM, или классу IgA.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело имеет изотип IgG2. В некоторых вариантах реализации, антитело содержит константную область человеческого IgG2. В некоторых вариантах реализации, константная область человеческого IgG2 содержит Fc-область. В некоторых вариантах реализации, антитело индуцирует одну или несколько активностей сортилина или (or) независимо от связывания с Fc-рецептором. В некоторых вариантах реализации, антитело связывает ингибирующий Fc-рецептор. В некоторых вариантах реализации, ингибирующий Fc-рецептор представляет собой ингибирующий Fc-гамма-рецептор IIB (FcyIIB).
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело имеет изотип IgG1. В некоторых вариантах реализации, антитело содержит константную область мышиного IgG1. В некоторых вариантах реализации, антитело содержит константную область человеческого IgG1. В некоторых вариантах реализации, константная область человеческого IgG1 содержит Fcобласть. В некоторых вариантах реализации, антитело связывает ингибирующий Fc-рецептор. В некоторых вариантах реализации, ингибирующий Fc-рецептор представляет собой ингибирующий Fc-гаммарецептор IIB (FcyIIB).
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело имеет изотип IgG4. В некоторых вариантах реализации, антитело содержит константную область человеческого IgG4. В некоторых вариантах реализации, константная область человеческого IgG4 содержит Fc-область. В некоторых вариантах реализации, антитело связывает ингибирующий Fc-рецептор. В некоторых вариантах реализации, ингибирующий Fc-рецептор представляет собой ингибирующий Fcгамма-рецептор IIB (FcyIIB).
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело имеет гибридный изотип IgG2/4. В некоторых вариантах реализации, антитело содержит аминокислотную последовательность, содержащую аминокислоты 118-260 человеческого IgG2 в соответствии с нумерацией EU и аминокислоты 261-447 человеческого IgG4 в соответствии с нумерацией EU (WO 1997/11971; WO 2007/106585).
В некоторых вариантах реализации, Fc-область повышает кластеризацию без активации комплемента по сравнению с соответствующим антителом, содержащим Fc-область, не содержащую аминокислотных замен. В некоторых вариантах реализации, антитело индуцирует одну или несколько активностей мишени, специфически связываемой антителом. В некоторых вариантах реализации, антитело связывается с сортилином.
- 67 046146
Также может быть желательной модификация антитела против сортилина по данному изобретению с целью модификации эффекторной функции и/или для увеличения периода полувыведения антитела из сыворотки. Например, связывающий сайт рецептора Fc в константной области может быть модифицирован или мутирован для устранения или уменьшения аффинности связывания с определенными рецепторами Fc, такими как FcyRI, FcyRII, и/или FcyIIIB для снижения антителозависимой клеточномедиируемой цитотоксичности. В некоторых вариантах реализации, эффекторную функцию нарушают путем удаления N-гликозилирования Fc-участка (например, в домене CH2 IgG) антитела. В некоторых вариантах реализации, эффекторную функцию нарушают путем модификации таких участков, как 233236, 297 и/или 327-331 человеческого IgG, как описано в WO 99/58572 и Armour et al. Molecular Immunology 40:585-593 (2003); Reddy et al. J. Immunology 164:1925-1933 (2000). В других вариантах реализации, также может быть желательной модификация антитела против сортилина по данному изобретению с целью модификации эффекторной функции для увеличения селективности обнаружения по отношению к ITIM-содержащему FcgRIIb (CD32b) для повышения кластеризации антител сортилина на прилегающих клетках без активации гуморальных ответов, включая антителозависимую клеточно-медиируемую цитотоксичность и антителозависимый клеточный фагоцитоз.
Для увеличения периода полувыведения антител сыворотки, можно включить в антитело эпитоп связывания рецептора реутилизации (особенно фрагмент антитела), как описано, например, в патенте США № 5739277. В используемом в данном документе значении, термин эпитоп связывания рецептора реутилизации относится к эпитопу Fc-участка молекулы IgG (например, IgGi, IgG2, IgG3, или IgG4), ответственному за увеличение in vivo периода полувыведения молекулы IgG из сыворотки. Другие модификации аминокислотной последовательности.
(6) Мультиспецифические антитела.
Мультиспецифическими являются антитела, которые обладают специфичностью связывания по отношению к по меньшей мере двум разным эпитопам, включая расположенные на одном или на разных полипептидах (например, одном или нескольких полипептидах сортилина по данному изобретению). В некоторых вариантах реализации, мультиспецифическое антитело может быть биспецифическим антителом. В некоторых вариантах реализации, мультиспецифическое антитело может быть триспецифическим антителом. В некоторых вариантах реализации, мультиспецифическое антитело может быть тетраспецифическим антителом. Такие антитела могут быть получены из полноразмерного антитела или фрагментов антител (например, F(ab')2 биспецифических антител). В некоторых вариантах реализации, мультиспецифическое антитело содержит первый антигенсвязывающий участок, который связывается с первым сайтом сортилина, и содержит второй антигенсвязывающий участок, который связывается со вторым сайтом сортилина. В некоторых вариантах реализации, мультиспецифические антитела содержат первый антигенсвязывающий участок, который связывается с сортилином, и второй антигенсвязывающий участок, который связывается со вторым полипептидом.
В данном документе предусматриваются мультиспецифические антитела, содержащие первый антигенсвязывающий участок, при этом первый антигенсвязывающий участок содержит шесть HVR антитела, описанного в данном документе, которое связывается с сортилином, и второй антигенсвязывающий участок, который связывается со вторым полипептидом. В некоторых вариантах реализации, первый антигенсвязывающий участок содержит VH или VL антитела, описанного в данном документе.
В некоторых вариантах реализации любого из мультиспецифических антител, второй полипептид представляет собой (a) антиген, облегчающий транспорт через гематоэнцефалический барьер; (b) антиген, облегчающий транспорт через гематоэнцефалический барьер, выбранный из рецептора трансферрина (TR), рецептора инсулина (HIR), рецептора инсулиноподобного фактора роста (IGFR), белков 1 и 2, родственных рецептору липопротеина низкой плотности (LPR-1 и 2), рецептора дифтерийного токсина, CRM197, однодоменного антитела ламы, TMEM 30(A), домена белковой трансдукции, TAT, Syn-B, пенетратина, полиаргининового пептида, пептида angiopep и ANG1005; (c) патогенный белок, выбранный из бета-амилоида, олигомерного бета-амилоида, бета-амилоидных бляшек, белка-предшественника амилоида или его фрагментов, тау-белка (Tau), IAPP, альфа-синуклеина, TDP-43, белка FUS, C9orf72 (открытая рамка считывания 72 хромосомы 9), белка c9RAN, прионного белка, PrPSc, хантингтина, кальцитонина, супероксиддисмутазы, атаксина, атаксина 1, атаксина 2, атаксина 3, атаксина 7, атаксина 8, атаксина 10, телец Леви, предсердного натриуретического фактора, островкового амилоидного полипептида, инсулина, аполипопротеина AI, сывороточного амилоида A, медина, пролактина, транстиретина, лизоцима, бета-2-микроглобулина, гелсолина, кератоэпителина, цистатина, легкой цепи иммуноглобулина AL, белка S-IBM, связанных с не-ATG повторами (RAN) продуктов трансляции, пептидов с дипептидными повторами (DPR), пептидов с повторами глицин-аланин (GA), пептидов с повторами глицинпролин (GP), пептидов с повторами глицин-аргинин (GR), пептидов с повторами пролин-аланин (PA), убиквитина, и пептидов с повторами пролин-аргинин (PR); (d) лиганды и/или белки, экспрессируемые на иммунных клетках, при этом лиганды и/или белки выбирают из CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27 , GITR, PD-L1, CTLA-4, PD-L2, PD-1, B7-H3, В7-Н4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG-3, и фосфатидилсерина; и/или (e) белок, липид, полисахарид или гликолипид, экспрессируемый на одной или нескольких опухолевых клетках, и любую их комбинацию.
- 68 046146
Специалистам известны многочисленные антигены, которые облегчают транспорт через гематоэнцефалический барьер (см., например, Gabathuler R. Neurobiol. Dis. 37:48-57 (2010)). Такие вторые антигены включают, без ограничений, рецептор трансферрина (TR), рецептор инсулина (HIR), рецептор инсулиноподобного фактора роста (IGFR), белки 1 и 2, родственные рецептору липопротеина низкой плотности (LPR-1 и 2), рецептор дифтерийного токсина, включая CRM197 (нетоксичный мутант дифтерийного токсина), однодоменные антитела ламы, такие как TMEM 30(A) (флиппаза), домены белковой трансдукции, такие как TAT, Syn-B, или пенетратин, полиаргинин или вообще положительно заряженные пептиды, пептиды angiopep, такие как ANG1005 (см., например, Gabathuler, 2010), и другие белки клеточной поверхности, присутствующие в повышенном количестве на эндотелиальных клетках гематоэнцефалического барьера (см., например, Daneman et al. PLoS One 5(10):e13741 (2010)).
Поливалентные антитела могут распознавать антиген сортилина, а также, без ограничений, дополнительные антигены - антиген Ae пептида, или антиген белка α-синуклеина, или антиген тау-белка, или антиген белка TDP-43, или антиген прионного белка, или антиген белка хантингтина, или антиген продуктов трансляции RAN, включая дипептидные повторы (пептиды DPR), состоящие из глицина-аланина (GA), глицина-пролина (GP), глицина-аргинина (GR), пролина-аланина (PA) или пролина-аргинина (PR), рецептор инсулина, рецептор инсулиноподобного фактора роста. Рецептор трансферрина или любой другой антиген, облегчающий перемещение антитела через гематоэнцефалический барьер. В некоторых вариантах реализации, второй полипептид представляет собой трансферрин. В некоторых вариантах реализации, второй полипептид представляет собой тау-белок (Tau). В некоторых вариантах реализации, второй полипептид представляет собой Ae (бета-амилоидный пептид). В некоторых вариантах реализации, второй полипептид представляет собой TREM2. В некоторых вариантах реализации, второй полипептид представляет собой α-синуклеин.
Поливалентное антитело содержит по меньшей мере одну полипептидную цепь (предпочтительно две полипептидные цепи), при этом полипептидная цепь или цепи содержат два или больше вариабельных доменов. Например, полипептидная цепь или цепи могут содержать VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc, где VD1 представляет собой первый вариабельный домен, VD2 представляет собой второй вариабельный домен, Fc представляет собой одну полипептидную цепь Fc-участка, X1 и X2 представляют собой аминокислоту или полипептид, и n равен 0 или 1. Аналогично, полипептидная цепь или цепи могут содержать цепь V||-C.'ii 1-гибкий линкер-VH-CH1-Fc-область; или цепь VH-CH1-VH-CH1-Fc-область. Поливалентное антитело по данному документу предпочтительно дополнительно содержит по меньшей мере два (и предпочтительно - четыре) полипептида вариабельных доменов легкой цепи. Поливалентное антитело по данному документу может, например, содержать от примерно двух до примерно восьми полипептидов вариабельных доменов легкой цепи. Полипептиды вариабельных доменов легкой цепи, предусматриваемые в данном документе, содержат вариабельный домен легкой цепи и, необязательно, дополнительно содержат CL-домен.
Методы получения мультиспецифических антител включают, без ограничений, рекомбинантную коэкспрессию двух пар тяжелая цепь-легкая цепь иммуноглобулина, имеющих разные специфичности (см. Milstein and Cuello Nature 305:537 (1983), WO 93/08829, и Traunecker et al. EMBO J. 10:3655 (1991)), и технологию knob-in-hole (выступ-во-впадину) (см., например, патент США № 5731168). См. также WO 2013/026833 (CrossMab). Мультиспецифические антитела могут также быть получены по технологии направляющего эффекта электростатических взаимодействий для получения Fc-гетеродимерных молекул антитела (WO 2009/089004A1); путем перекрестного связывания двух или больше антител (см., например, патент США № 4676980); с использованием лейцина; с использованием технологии диатела для получения биспецифических фрагментов антител (см., например, Hollinger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)); и путем использования димеров одноцепочечных Fv (scFv) (см., например, Gruber et al. J. Immunol. 152:5368 (1994)); и путем получения триспецифических антител, как описано, например, в Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991).
Рекомбинантные антитела с тремя или больше функциональными антигенсвязывающими сайтами, включая антитела Octopus (антитела-осьминоги с тремя или более антигенсвязывающими сайтами и двумя или более вариабельными областями), также включены в данный документ (см., например, US 2006/0025576). Антитело в данном документе включает также FAb двойного действия или DAF (Dual Acting FAb), содержащие антигенсвязывающий сайт, который связывается с множеством сортилинов (см., например, US 2008/0069820).
(7) Антитела с улучшенной стабильностью.
Также предусматриваются модификации аминокислотной последовательности антител против сортилина по данному изобретению, или фрагменты таких антител, для улучшения стабильности при производстве, хранении, и in vivo введении. Например, может быть желательным снизить деградацию антител или фрагментов антител по данному изобретению различными путями, включая, без ограничений, окисление и деамидирование. Варианты аминокислотных последовательностей антител или фрагменты антител получают путем введения соответствующих нуклеотидных изменений в нуклеиновую кислоту, кодирующую антитела или фрагменты антител, или путем пептидного синтеза. Такие модификации включа
- 69 046146 ют, например, делеции, и/или инсерции, и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антитела. Может быть проведена любая комбинация делеций, инсерций и замен для получения готового конструкта, при условии, что готовый конструкт обладает желательными характеристиками (т.е. пониженной чувствительностью к деградации).
В некоторых вариантах реализации, сайт аспарагина (N33) в области HVR-L1 антитела против сортилина по данному изобретению может быть восприимчивым к деградации посредством деамидирования. В некоторых вариантах реализации, сайт аспарагина (N33) в области HVR-L1 S-60-15 (SEQ ID NO: 8) может быть восприимчивым к деамидированию. После деамидирования, сайт аспарагина (N33) в области HVR-L1 S-60-15 приводит к замене Asn на Asp/u30-Asp (IsoAsp). В некоторых вариантах реализации, сайт аспарагина (N33) в области HVR-L1 S-60-15 может быть замещен для предотвращения или уменьшения деамидирования. Неограничительные примеры вариантов аминокислотных последовательностей S-60-15, имеющих аминокислотные замены в сайте аспарагина (N33) области HVR-L1 включают S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M] или S-6015.17 [N33L].
(8) Варианты антител.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предложенных в данном документе, предусматриваются варианты аминокислотных последовательностей антител. Например, может быть желательным улучшение аффинности связывания и/или других биологических свойств антитела.
(i) Варианты замен, инсерций и делеций.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предложенных в данном документе, предусматриваются варианты антитела, имеющие одну или несколько аминокислотных замен. Варианты аминокислотных последовательностей антитела могут быть получены путем введения соответствующих модификаций в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, или путем пептидного синтеза. Такие модификации включают, например, делеций и/или инсерций и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антитела.
Таблица 37
Аминокислотные замены
Исходный остаток Типичные примеры замен Предпочтительные замены
Ala (А) Vai; Leu; He Vai
Arg (R) Lys; Gin; Asn Lys
Asn (N) Gin; His; Asp, Lys; Arg Gin
Asp (D) Glu; Asn Glu
Cys (C) Ser; Ala Ser
Gln(Q) Asn; Glu Asn
Glu (E) Asp; Gin Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn; Gin; Lys; Arg Arg
He (I) Leu; Vai; Met; Ala; Phe; норлейцин Leu
Leu (L) норлейцин; He; Vai; Met; Ala; Phe He
Lys (K) Arg; Gin; Asn Arg
Met (M) Leu; Phe; He Leu
Phe (F) Leu; Vai; He; Ala; Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser(S) Thr Thr
Thr(T) Ser Ser
Trp (W) Tyr; Phe Tyr
Tyr(Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe
Vai (V) He; Leu; Met; Phe; Ala; норлейцин Leu
Значительные модификации биологических свойств антитела осуществляются путем выбора замен, значительно отличающихся по своему влиянию на поддержание (a) структуры полипептидного скелета
- 70 046146 на участке замены, например, с конформацией листа или спирали, (b) заряда или гидрофобности молекулы в сайте-мишени, или (c) объема боковой цепи. Природные остатки делятся на группы по общим свойствам боковых цепей:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) кислотные: Asp, Glu;
(4) основные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: Gly, Pro; и (6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.
Например, неконсервативные замены могут включать обмен какого-либо члена одного из этих классов на член из другого класса. Такие замещенные остатки могут быть введены, например, в области человеческого антитела, являющиеся гомологичными с не-человеческими антителами, или в негомологичные области молекулы.
При введении изменений в полипептид или антитело, описанные в данном документе, в соответствии с определенными вариантами реализации, может приниматься во внимание индекс гидропатичности аминокислот. Каждой аминокислоте был присвоен индекс гидропатичности на основе ее характеристик гидрофобности и заряда. Они имеют следующие значения: изолейцин (+4,5); валин (+4,2); лейцин (+3,8); фенилаланин (+2,8); цистеин/цистин (+2,5); метионин (+1,9); аланин (+1,8); глицин (-0,4); треонин (-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тирозин (-1,3); пролин (-1,6); гистидин (-3,2); глутамат (-3,5); глутамин (3,5); аспартат (-3,5); аспарагин (-3,5); лизин (-3,9); и аргинин (-4,5).
Специалистам понятна важность индекса гидропатичности аминокислот в придании белку биологической функции взаимодействия. Kyte et al. J. Mol. Biol., 157:105-131 (1982). Известно, что определенные аминокислоты могут быть замещены на другие аминокислоты, имеющие схожий индекс или количественную оценку гидропатичности, и сохранять при этом схожую биологическую активность. При внесении изменений на основе индекса гидропатичности, некоторые варианты реализации включают замену аминокислот, имеющих индексы гидропатичности, отличающиеся не более чем на ±2. Некоторые варианты реализации включают отличие не более чем на ±1, и некоторые варианты реализации включают отличие не более чем на ±0,5.
Специалистам также понятно, что замена схожих аминокислот может быть эффективно проведены на основе гидрофильности, в частности, когда образующийся при этом биологически функциональный белок или пептид предназначен для использования в иммунологических вариантах реализации, как в данном случае. В некоторых вариантах реализации, наибольшая локальная средняя гидрофильность белка, определяемая гидрофильностью его смежных аминокислот, коррелирует с егео иммуногенностью и антигенностью, т.е. с биологическими свойствами белка.
Аминокислотным остаткам были присвоены следующие значения гидрофильности: аргинин (+3,0); лизин (+3,0±1); аспартат (+3,0±1); глутамат (+3,0±1); серии (+0,3); аспарагин (+0,2); глутамин (+0,2); глицин (0); треонин (-0,4); пролин (-0,5±1); аланин (-0,5); гистидин (-0,5); цистеин (-1,0); метионин (-1,3); валин (-1,5); лейцин (-1,8); изолейцин (-1,8); тирозин (-2,3); фенилаланин (-2,5) и триптофан (-3,4). При внесении изменений на основе схожих значений гидрофильности, некоторые варианты реализации включают замену аминокислот, имеющих значения гидрофильности, отличающиеся не более чем на ±2, некоторые варианты реализации включают значения, отличающиеся не более чем на ±1, и некоторые варианты реализации включают значения, отличающиеся не более чем на ±0,5. На основе гидрофильности можно также идентифицировать эпитопы первичных аминокислотных последовательностей. Такие участки также называются эпитопные коровые области.
В некоторых вариантах реализации, замены, инсерции или делеции могут быть расположены в одном или нескольких HVR, при условии, что такие изменения не снижают существенно способность антитела связывать антиген. Например, консервативные изменения (например, консервативные замены, как предусматривается в данном документе), которые не снижают существенно аффинность связывания, могут быть выполнены в HVR. Такие изменения могут, например, быть расположены за пределами контактирующих с антигеном остатков в HVR. В некоторых вариантах реализации вариантов последовательностей VH и VL, указанных выше, каждый HVR является неизменным, или содержит не более одной, двух или трех аминокислотных замен.
Инсерции аминокислотных последовательностей включают амино- и/или карбокси-терминальные слияния, имеющие длину от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или больше остатков, а также внутрицепочечные инсерции одного или множества аминокислотных остатков. Примеры терминальных инсерций включают антитело с N-концевым остатком метионила. Другие инсерционные варианты молекул антитела включают слияние антитела на N- или C-конце с ферментом (например, для ADEPT (антитело-опосредованная терапия с использованием ферментов и пролекарств)) или полипептидом, который увеличивает период полувыведения антител сыворотки.
Любой остаток цистеина, не участвующий в поддержании надлежащей конформации антитела, также может быть замещен, как правило, на серин, для повышения окислительной стабильности молеку
- 71 046146 лы и предотвращения аберрантного сшивания. Наоборот, цистеиновая связь (связи) могут быть добавлены в антитело для повышения его стабильности (в частности, в тех случаях, когда антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как Fv-фрагмент).
(ii) Варианты гликозилирования.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело изменяют с целью увеличения или снижения степени гликозилирования антитела. Добавление или делецию сайтов гликозилирования в антителе можно удобно осуществлять путем изменения аминокислотной последовательности таким образом, чтобы создать или удалить один или несколько сайтов гликозилирования.
Гликозилирование антител обычно является N-связанным или O-связанным. N-связанное относится к присоединению углеводного фрагмента к боковой цепи остатка аспарагина. Трипептидные последовательности аспарагин-X-серин и аспарагин-X-mреонин, где X представляет собой любую аминокислоту, за исключением пролина, являются распознающими последовательностями для ферментативного присоединения углеводного фрагмента к боковой цепи аспарагина. Таким образом, присутствие любой из этих трипептидных последовательностей в полипептиде создает потенциальный сайт гликозилирования. Oсвязанное гликозилирование относится к присоединению одного из Сахаров N-ацетилгалактозамина (aceylgalactosamine), галактозы или ксилозы к оксиаминокислоте, чаще всего серину или треонину, хотя также могут быть использованы 5-гидроксипролин или 5-гидроксилизин.
Добавление сайтов гликозилирования в антитело удобно осуществлять путем изменения аминокислотной последовательности таким образом, чтобы она содержала одну или несколько вышеописанных трипептидных последовательностей (для N-связанных сайтов гликозилирования). Изменения могут также быть выполнены путем добавления или замены одного или нескольких остатков серина или треонина к последовательности исходного антитела (для O-связанных сайтов гликозилирования).
В тех случаях, когда антитело содержит Fc-область, может быть изменен присоединенный к нему углевод. Нативные антитела, продуцируемые клетками млекопитающих, типично содержат разветвленный биантенный олигосахарид, как правило, присоединенный с помощью N-связи к Asn297 в соответствии с нумерацией по Кабату домена CH2 Fc-участка. Олигосахарид может включать различные углеводы, например, маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу, и сиаловую кислоту, а также фукозу, присоединенную к GlcNAc в стебле биантенной олигосахаридной структуры. В некоторых вариантах реализации, модификации олигосахарида в антителе по изобретению могут быть проведены с целью создания вариантов антитела с определенными улучшенными свойствами.
В одном варианте реализации, предусматриваются варианты антитела, имеющие углеводную структуру с отсутствием фукозы, присоединенной (прямо или опосредованно) к Fc-участку. См., например, патентные публикации США № 2003/0157108 и 2004/0093621. Примеры публикаций, касающихся дефукозилированных или фукоза-дефицитных вариантов антитела, включают: US 2003/0157108; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614 (2004). Примеры клеточных линий, способных продуцировать дефукозилированные антитела, включают клетки CHO Led 3, дефицитные по фукозилированию белка (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); US 2003/0157108), и нокаутные клеточные линии, такие как нокаутные по гену альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8, клетки CHO (см., например, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004) и Kanda et al. Biotechnol. Bioeng. 94(4):680-688 (2006)).
(iii) Модифицированные константные области.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, Fc антитела представляет собой изотипы и/или модификации Fc антитела. В некоторых вариантах реализации, изотип и/или модификация Fc антитела способны связываться с Fc-гамма-рецептором.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, модифицированная Fc антитела представляет собой модифицированную Fc IgG1 (IgG1 modified Fc). В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит одну или несколько модификаций. Например, в некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит одну или несколько аминокислотных замен (например, по сравнению с Fc-областью дикого типа того же изотипа). В некоторых вариантах реализации, одну или несколько аминокислотных замен выбирают из N297A (Bolt S et al. (1993) Eur JImmunol 23:403-411), D265A (Shields et al. (2001) R. J. Biol. Chem. 276, 6591-6604), L234A, L235A (Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984; Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A (Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al. (2000) Cell Immunol, 200:16-26), C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E (McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P331S (Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105:20167-20172), S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, и/или T256E, где положения аминокислот соответствуют схеме нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, антитело относится к изотипу IgG1 и Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях L234A, L235A и P331S, при этом нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU.
- 72 046146
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутацию N297A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации D265A и N297A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутацию D270A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит мутации L234A и L235A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации L234A и G237A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации L234A, L235A и G237A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит одну или несколько (включая все) из мутаций P238D, L328E, E233, G237D, H268D, P271G и A330R в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит одну или несколько из мутаций S267E/L328F в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G и A330R в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации P238D, L328E, G237D, H268D, P271G и A330R в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации P238D, S267E, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G и A330R в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации P238D, S267E, L328E, G237D, H268D, P271G и A330R в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации C226S, C229S, Е233Р, L234V и L235A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации L234F, L235E, и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутации S267E и L328F в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит мутацию S267E в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит замену константной области тяжелой цепи 1 (CH1) и шарнирной области IgG1 на CH1 и шарнирную область IgG2 (аминокислоты 118-230 IgG2 в соответствии с системой нумерации EU) с каппа-легкой цепью.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, Fc содержит две или больше аминокислотных замен, которые увеличивают кластеризацию антитела без активации комплемента по сравнению с соответствующим антителом, имеющим Fc-область, не содержащую двух или больше аминокислотных замен. Соответственно, в некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, модифицированная Fc IgG1 представляет собой антитело, содержащее Fc-область, при этом антитело содержит аминокислотную замену в положении E430G и одну или несколько аминокислотных замен в Fc-области в положении остатка, выбранном из: L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, и любой их комбинации, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит аминокислотные замены в положениях E430G, L243A, L235A и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит аминокислотные замены в положениях E430G и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит аминокислотные замены в положениях E430G и K322A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит аминокислотные замены в положениях E430G, A330S и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит аминокислотные замены в положениях E430G, K322A, A330S и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит аминокислотные замены в положениях E430G, K322A и A330S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG1 содержит аминокислотные замены в положениях E430G, K322A и P331S в соответствии с системой нумерации EU.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, модифицированная Fc IgG1 может дополнительно содержать и сочетаться с мутацией A330L (Lazar et al. Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010 (2006)), или одной или несколькими мутациями L234F, L235E и/или P331S (Sazinsky et al. Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172 (2008)), в соответствии с системой нумерации EU, для устранения активации комплемента. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, модифицированная Fc IgG1 может дополнительно содержать одну или несколько из A330L, A330S, L234F, L235E, и/или P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, модифицированная Fc IgG1 может дополнительно содержать одну или несколько мутаций для увеличения периода полувыведения антитела сыворотки человека (например, одну или несколько (включая все) из мутаций M252Y, S254T, и T256E в соответствии с системой нумерации EU). В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1, модифи
- 73 046146 цированная Fc IgG1 может дополнительно содержать одну или несколько из E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, E345Q, E345R, E345Y, S440Y, и/или S440W в соответствии с системой нумерации EU.
Другие аспекты данного изобретения относятся к антителам, имеющим модифицированные константные области (т.е. Fc-области). Антитело, зависимое от связывания с рецептором FcgR для активации рецепторов-мишеней, может терять свою агонистическую активность в результате модификации для устранения связывания FcgR (см., например, Wilson et al. Cancer Cell 19:101-113 (2011); Armour at al. Immunology 40:585-593 (2003); и White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015)). По существу, считается, что антитело против сортилина по данному изобретению с соответствующей специфичностью эпитопа может активировать антиген-мишень с минимальными нежелательными эффектами, когда антитело имеет домен Fc человеческого изотипа IgG2 (CH1 и шарнирная область) или другой тип домена Fc, способный предпочтительно связывать ингибирующие рецепторы FcgRIIB, или его вариант.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, модифицированная Fc антитела представляет собой модифицированную Fc IgG2. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG2 содержит одну или несколько модификаций. Например, в некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG2 содержит одну или несколько аминокислотных замен (например, по сравнению с Fc-областью дикого типа того же изотипа). В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, одну или несколько аминокислотных замен выбирают из V234A (Alegre et al. Transplantation 57:1537-1543 (1994); Xu et al. Cell Immunol, 200:16-26 (2000)); G237A (Cole et al. Transplantation, 68:563-571 (1999)); H268Q, V309L, A330S, P331S (US 2007/0148167; Armour et al. Eur J Immunol 29: 2613-2624 (1999); Armour et al. The Haematology Journal l (Suppl.1):27 (2000); Armour et al. The Haematology Journal 1(Suppl.1):27 (2000)), C219S, и/или C220S (White et al. Cancer Cell 27, 138-148 (2015)); S267E, L328F (Chu et al. Mol Immunol, 45:3926-3933 (2008)); и M252Y, S254T, и/или T256E, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях V234A и G237A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях C219S или C220S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях A330S и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях S267E и L328F в соответствии с системой нумерации EU.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc содержит аминокислотную замену C127S в соответствии с системой нумерации EU (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138148; Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010); и WO 2008/079246). В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, антитело имеет изотип IgG2 с константным доменом каппалегкой цепи, который содержит аминокислотную замену C214S в соответствии с системой нумерации EU (White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015); Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010); и WO 2008/079246).
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc содержит аминокислотную замену C220S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, антитело имеет изотип IgG2 с константным доменом каппа-легкой цепи, который содержит аминокислотную замену C214S в соответствии с системой нумерации EU.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc содержит аминокислотную замену C219S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, антитело имеет изотип IgG2 с константным доменом каппа-легкой цепи, который содержит аминокислотную замену C214S в соответствии с системой нумерации EU.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc содержит константный домен 1 тяжелой цепи изотипа IgG2 (CH1) и шарнирную область (White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015)). В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, CH1 изотипа IgG2 и шарнирная область содержат аминокислотную последовательность 118-230 в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc-область антитела содержит аминокислотную замену S267E, аминокислотную замену L328F, или обе, и/или аминокислотную замену N297A или N297Q в соответствии с системой нумерации EU.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc дополнительно содержит одну или несколько аминокислотных замен в положениях E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, E345Q, E345R, E345Y, S440Y, и S440W в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc может дополнительно содержать одну или несколько мутаций для увеличения периода полувыведения антитела сыворотки человека (например, одну или несколько (включая все) из мутаций M252Y, S254T, и Т256Е в соответствии с системой нумерации EU). В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc может дополнительно содержать A330S и P331S.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc представляет собой гибридную Fc IgG2/4. В некоторых вариантах реализации, гибридная Fc IgG2/4 содержит аминокислоты
- 74 046146 (aa) 118-260 IgG2 и аминокислоты 261-447 IgG4. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG2, Fc содержит одну или несколько аминокислотных замен в положениях H268Q, V309L, A330S и P331S в соответствии с системой нумерации EU.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит одну или несколько дополнительных аминокислотных замен, выбранных из A330L, L234F; L235E или P331S, в соответствии с системой нумерации EU; и любой их комбинации.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит одну или несколько аминокислотных замен в положении остатка, выбранном из C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, E345R, E430G, S440Y, и любой их комбинации, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G, L243A, L235A и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G и K322A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G, A330S и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G, K322A, A330S и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G, K322A и A330S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G, K322A и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях S267E и L328F в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотную замену в положении C127S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG1 и/или IgG2, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E345R, E430G и S440Y в соответствии с системой нумерации EU.
В некоторых вариантах реализации любых антител, предусматриваемых в данном документе, модифицированная Fc антитела представляет собой модифицированную Fc IgG4. В некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG4 содержит одну или несколько модификаций. Например, в некоторых вариантах реализации, модифицированная Fc IgG4 содержит одну или несколько аминокислотных замен (например, по сравнению с Fc-областью дикого типа того же изотипа). В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, одну или несколько аминокислотных замен выбирают из L235A, G237A, S229P, L236E (Reddy et al. J Immunol 164:1925-1933(2000)), S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, и/или T256E в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc может дополнительно содержать L235A, G237A, и E318A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc может дополнительно содержать S228P и L235E в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, модифицированная Fc IgG4 может дополнительно содержать S267E и L328F в соответствии с системой нумерации EU.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, модифицированная Fc IgG4 содержит и может сочетаться с мутацией S228P в соответствии с системой нумерации EU (Angal et al. Mol Immunol. 30:105-108 (1993)) и/или одной или несколькими мутациями, описанными в (Peters et al. J Biol Chem. 287(29):24525-33 (2012)) для повышения стабилизации антитела.
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, модифицированная Fc IgG4 может дополнительно содержать одну или несколько мутаций для увеличения периода полувыведения антитела сыворотки человека (например, одну или несколько (включая все) из мутаций M252Y, S254T, и T256E в соответствии с системой нумерации EU).
В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc содержит L235E в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc содержит одну или несколько аминокислотных замен в положении остатка, выбранном из C127S, F234A, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, E345R, E430G, S440Y, и любой их комбинации, в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G, L243A, L235A и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G и P331S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E430G и K322A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc содержит аминокислотную за
- 75 046146 мену в положении E430 в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях E430G и K322A в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc содержит аминокислотные замены в положениях S267E и L328F в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc содержит аминокислотную замену в положении C127S в соответствии с системой нумерации EU. В некоторых вариантах реализации любой из модифицированных Fc IgG4, Fc содержит аминокислотные замены в положениях E345R, E430G и S440Y в соответствии с системой нумерации EU.
(9) Другие модификации антитела.
В некоторых вариантах реализации любых из антител, антитело представляет собой производное. Термин производное относится к молекуле, которая содержит химическую модификацию, отличную от инсерции, делеции, или замены аминокислот (или нуклеиновых кислот). В некоторых вариантах реализации, производное содержит ковалентные модификации, включая, без ограничений, химическую связь с полимерами, липидами, или другими органическими или неорганическими фрагментами. В некоторых вариантах реализации, химически модифицированный антигенсвязывающий белок может иметь больший период полувыведения из циркуляции, чем антигенсвязывающий белок, который не был химически модифицирован. В некоторых вариантах реализации, химически модифицированный антигенсвязывающий белок может иметь улучшенную способность к нацеливанию на желательные клетки, ткани, и/или органы. В некоторых вариантах реализации, дериватизированный антигенсвязывающий белок ковалентно модифицируют для включения одного или нескольких присоединенных фрагментов водорастворимых полимеров, включая, без ограничений, полиэтиленгликоль, полиоксиэтиленгликоль, или полипропиленгликоль. См., например, патенты США № 4640835, 4496689, 4301144, 4670417, 4791192 и 4179337. В некоторых вариантах реализации, дериватизированный антигенсвязывающий белок содержит один или несколько полимеров, включая, без ограничений, монометоксиполиэтиленгликоль, декстран, целлюлозу, сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон, поли1,3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимер этилена/малеинового ангидрида, полиаминокислоты (гомополимеры или статистические сополимеры), поли-(№винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропиленгликоля, сополимер полипропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин) и поливиниловый спирт, а также смеси таких полимеров.
В некоторых вариантах реализации, производное ковалентно модифицируют субъединицами полиэтиленгликоля (ПЭГ). В некоторых вариантах реализации, один или несколько водорастворимых полимеров присоединяют в одном или нескольких определенных положениях, например, на аминоконце производного. В некоторых вариантах реализации, один или несколько водорастворимых полимеров присоединяют случайным образом к одной или нескольким боковым цепям производного. В некоторых вариантах реализации, ПЭГ используют для улучшения терапевтических свойств антигенсвязывающего белка. В некоторых вариантах реализации, ПЭГ используют для улучшения терапевтических свойств гуманизированного антитела. Некоторые такие способы описаны, например, в патенте США № 6133426, который настоящим включен посредством ссылки для любых целей.
Пептидные аналоги широко применяются в фармацевтической промышленности в качестве непептидных лекарственных средств со свойствами, аналогичными служащему матрицей пептиду. Эти типы непептидных соединений называются миметиками пептидов или пептидомиметиками. Fauchere, J. Adv. Drug Res., 15:29 (1986); и Evans et al. J. Med. Chem., 30:1229 (1987), которые включены в данный документ посредством ссылки для любых целей. Такие соединения часто разрабатывают с помощью компьютерного молекулярного моделирования. Пептидомиметики, структурно схожие с терапевтически полезными пептидами, могут быть использованы для создания схожего терапевтического или профилактического эффекта. Как правило, пептидомиметики структурно похожи на взятый за образец полипептид (т.е. полипептид, обладающий биохимическими свойствами или фармакологической активностью), такой как человеческое антитело, но необязательно имеют замену одной или нескольких пептидных связей на связь, выбранную из: -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=cH- (цис- и транс-), -COCH2-, -CH(OH)CH2-, и CH2SO-, с использованием способов, хорошо известных специалистам. Систематическая замена одной или нескольких аминокислот консенсусной последовательности на D-аминокислоту такого же типа (например, D-лизин вместо L-лизина) может быть использована в некоторых вариантах реализации для получения более стабильных пептидов. Кроме того, конформационно затрудненные (constrained) пептиды, содержащие консенсусную последовательность или по существу идентичный вариант консенсусной последовательности, могут быть получены способами, известными специалистам (Rizo and Gierasch Ann. Rev. Biochem., 61:387 (1992), включена в данный документ посредством ссылки для любых целей); например, путем добавления внутренних остатков цистеина, способных образовывать внутримолекулярные дисульфидные мостики, которые циклизуют пептид.
Конъюгация с лекарственным средством включает сочетание биологически активной цитотоксической (противораковой) полезной нагрузки или лекарственного средства с антителом, которое специфически нацелено на определенный опухолевый маркер (например, полипептид, который, идеально, присутствует только в или на опухолевых клетках). Антитела находят эти белки в организме и присоединяются
- 76 046146 к поверхности раковых клеток. Биохимическая реакция между антителом и белком-мишенью (антигеном) инициирует сигнал в опухолевой клетке, которая затем поглощает или интернализирует антитело вместе с цитотоксином. После интернализации конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), цитотоксическое лекарственной средство высвобождается и уничтожает рак. Благодаря такому нацеливанию лекарственное средство, идеально, имеет более низкие побочные эффекты и создает более широкое терапевтическое окно, чем другие химиотерапевтические агенты. Технические основы конъюгации антител раскрыты и известны специалистам (см., например, Jane de Lartigue, OncLive July 5, 2012; ADC Review on antibody-drug conjugates; и Ducry et al. Bioconjugate Chemistry 21 (1):5-13 (2010).
Анализы связывания и другие анализы.
Антитела против сортилина по данному изобретению могут быть протестированы на антигенсвязывающую активность, например, известными способами, такими как ИФА, поверхностный плазмонный резонанс (SPR), вестерн-блоттинг, проточная цитометрия, FACS, интерферометрия биослоев и т.д.
В некоторых вариантах реализации, конкурентные анализы могут быть использованы для идентификации антитела, которое конкурирует с любым антителом, описанным в данном документе. В некоторых вариантах реализации, конкурентные анализы могут быть использованы для идентификации антитела, которое конкурирует с любым из антител, перечисленных в табл. 1-30, или содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела, выбранного из S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-6015.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16, S-60-18, S-60-19, и S-60-24, за связывание с сортилином. В некоторых вариантах реализации, такое конкурирующее антитело связывается с тем же эпитопом (например, линейным или конформационным эпитопом), что и связывающийся с любым из антител, которые перечислены в табл. 1-30, или содержат вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела, выбранного из S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-60-15.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16, S-60-18, S-60-19, и S-60-24. Подробное описание типичных методов картирования эпитопа, с которым связывается антитело, приведено в Morris (1996) Epitope Mapping Protocols, в Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
В типичном примере конкурентного анализа, иммобилизованный сортилин или клетки, экспрессирующие сортилин на клеточной поверхности, инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, которое связывается с сортилином, (например, человеческое или принадлежащее не являющимуся человеком примату), и второе немеченое антитело, которое тестируют на его способность конкурировать с первым антителом за связывание с сортилином. Второе антитело может присутствовать в супернатанте гибридомы. В качестве контроля, иммобилизованный сортилин или клетки, экспрессирующие сортилин, инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, но не второе немеченое антитело. После инкубации в условиях, пермиссивных для связывания первого антитела с сортилином, избыток несвязанного антитела удаляют, и измеряют количество метки, связанной с иммобилизованным сортилин или клетками, экспрессирующими сортилин. Если количество метки, связанной с иммобилизованным сортилином или клетками, экспрессирующими сортилин, существенно снижено в тестируемом образце по сравнению с контрольным образцом, то это указывает, что второе антитело конкурирует с первым антителом за связывание с сортилином. См., Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
Анализы связывания лигандов.
В данном документе дополнительно предусматриваются способы скрининга для антител против сортилина, которые связывают His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350,Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595, и/или Glu700 человеческого сортилина (SEQ ID NO: 81); или аминокислотные остатки сортилина млекопитающих, которые соответствуют одному или нескольким аминокислотным остаткам из His131, Val132, Pro133, Leu 134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser305, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350, Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595, и/или Glu700 SEQ ID NO: 81, тем самым блокируя взаимодействия между сортилином и лигандом сортилина (например, програнулином, пронейротрофином, про-NGF, про-BDNF, про-ОТ3, p75, APP, LpL, APOA5, APOE). В некоторых вариантах реализации, может быть синтезирована библиотека пептидов, в которой белок сортилин расчленяют на последовательные 15-мерные и 25-мерные пептиды, разделенные одним аминокислотным остатком, и затем наносят точечно на фильтры. Затем может проводиться тестирование связывания лиганда сортили
- 77 046146 на для определения его способности взаимодействовать с рецепторным пептидом или с пептидами библиотеки человеческого сортилина, которые были мутированы, например, в положениях His131, Val132, Pro133, Leu134, Val135, Ile136, Met137, Thr138, Arg196, Phe198, Arg199, Phe203, Lys205, Phe207, Thr210, Thr218, Tyr222, Ser223, Ser227, Ser242, Lys243, Lys248, Lys254, Lys260, Ser3O5, Phe306, Gly307, Arg311, Phe314, Ser316, Arg325, Arg326, Ile327, Phe350,Tyr351, Ser352, Ile353, Asn373, Ser379, Arg382, Tyr386, Ser595, и/или Glu700, в присутствии или отсутствии антител против сортилина путем спот-анализа связывания (SPOT) (например, Frank, R and Overwin, H (1996) Methods. Mol. Biol. 66, 149-169; Reineke, U et al., (2002) J. Immunol. Methods 267, 13-26; и Andersen, OS et al., (2010) J. Biological Chemistry 285, 1221012222).
В данном документе дополнительно предусматриваются способы скрининга для антител против сортилина, которые блокируют взаимодействия (например, связывание) сортилина и лиганда сортилина (например, програнулина, пронейротрофина, про-NGF, про-BDNF, προ-ΝΤ3, p75, APP, LpL, APOA5, APOE). В некоторых вариантах реализации, взаимодействие между сортилином и лигандами сортилина (например, програнулином, пронейротрофином, про-NGF, про-BDNF, npo-NT3, p75, APP, LpL, APOA5, APOE) могут быть охарактеризованы с использованием анализа методом поверхностного плазмонного резонанса (например, Skeldal, S et al., (2012) J Biol Chem., 287:43798; и Andersen, OS et al., (2010) The Journal Of Biological Chemistry, 285,12210-12222, pulldown-анализа (например, Andersen, OS et al., (2010) The Journal Of Biological Chemistry, 285,12210-12222, целлюлоза-связанных белков (например, Andersen, OS et al., (2010) The Journal Of Biological Chemistry, 285,12210-12222), анализа близкого лигирования (proximity ligation) (например, Gustafsen, C et al., (2013) The Journal of Neuroscience, 33:64-71), и/или лигандов, меченых щелочной фосфатазой, в клеточных анализах связывания (например, Hu, F et al., (2010) Neuron 68, 654-667).
Клеточные анализы.
В данном документе дополнительно предусматриваются способы скрининга для антагониста связывания сортилина, такого как антитело против сортилина, которые включают введение в контакт агента (например, антитела против сортилина) с клеткой, экспрессирующей белок сортилин на клеточной поверхности. В некоторых вариантах реализации, агент и клетку дополнительно вводят в контакт с лигандом сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, клетка сама экспрессирует лиганд сортилина по данному изобретению. Клеточные методы, в частности, пригодны для скрининга и валидации антагонистов связывания сортилина (например, антитела против сортилина) путем оценки влияния на взаимодействие между сортилином и лигандом сортилина в контексте клетки.
Соответственно, определенные аспекты данного изобретения относятся к клетке, экспрессирующей белок сортилин по данному изобретению на своей клеточной поверхности. В некоторых вариантах реализации, клетка эндогенно экспрессирует белок сортилин по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, клетка является рекомбинантно модифицированной для экспрессии белка сортилина по данному изобретению. В любом из этих вариантов реализации, белок сортилин по данному изобретению (эндогенный или рекомбинантный), кодируемый полинуклеотидом, будет предпочтительно содержать по меньшей мере белковые домены, необходимые для посттрансляционного процессинга, мембранной транслокации, и нацеливания на поверхность клетки, включая, без ограничений, сигнальный пептид и трансмембранный домен. В некоторых вариантах реализации, сигнальный пептид и/или трансмембранный домен могут относиться к сигнальному пептиду и/или трансмембранному домену эндогенного сортилина. В других вариантах реализации, сигнальный пептид и/или трансмембранный домен могут относиться к экзогенному сигнальному пептиду и/или трансмембранному домену, про которые известно, что они усиливают экспрессию на клеточной поверхности в желательной клетке-хозяине. В предпочтительных вариантах реализации, белок сортилин будет также содержать домен, достаточный для связывания лиганда сортилина по данному изобретению.
В таких вариантах реализации может быть использована любая клетка, которая экспрессирует белок сортилин по данному изобретению на своей клеточной поверхности. В некоторых вариантах реализации, клетка эндогенно экспрессирует белок сортилин по данному изобретению на своей клеточной поверхности. В некоторых вариантах реализации, клетка является рекомбинантно модифицированной для экспрессии белка сортилина по данному изобретению на своей клеточной поверхности. Любой пригодный лиганд сортилина по данному изобретению может быть использован таким образом, чтобы он сохранял способность связываться с белком сортилином, экспрессируемым на поверхности клетки. Лиганд сортилина не должен обязательно быть флуоресцентно меченым. Уровни лиганда сортилина могут детектироваться с помощью любого анализа, известного специалистам, включая, без ограничений, ИФА, SPR (поверхностный плазмонный резонанс), вестерн-блоттинг, масс-спектрометрию, иммунопреципитацию, пептидные микрочипы и т.д.
В некоторых вариантах реализации, способы, раскрытые в данном документе, включают культивирование клетки, которая экспрессирует как белок сортилин на своей клеточной поверхности, так и лиганд сортилина в среде, в условиях, при которых белок сортилин и лиганд сортилина экспрессируются и лиганд сортилина высвобождается в среду; введение в контакт клетки с агентом (например, антителом против сортилина) в условиях, при которых белок сортилин способен связываться с лигандом сортилина;
- 78 046146 и детектирование увеличения уровня лиганда сортилина в среде, по сравнению с уровнем лиганда сортилина в среде в отсутствие указанного агента. Увеличение уровень лиганда сортилина указывает на то, что агент является антагонистом связывания сортилина. Не желая ограничиваться теорией, укажем, что, как считается, взаимодействие между белком сортилином, экспрессируемым на поверхности клетки, и секретируемым лигандом сортилина будет приводить к эндоцитозу и лизосомальной деградации лиганда сортилина. Поэтому, считается, что уменьшение этого взаимодействия (например, путем добавления антагониста связывания сортилина по данному изобретению) приводит со временем к увеличению уровня лиганда сортилина в среде.
В таких вариантах реализации может быть использована любая клетка, которая экспрессирует белок сортилин по данному изобретению на своей клеточной поверхности и экспрессирует и секретирует лиганд сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, клетка может эндогенно экспрессировать белок сортилин по данному изобретению на своей клеточной поверхности. В некоторых вариантах реализации, клетка может эндогенно экспрессировать и секретировать лиганд сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, клетка представляет собой клетку U-251, и лиганд сортилина представляет собой белок програнулина. В некоторых вариантах реализации, клетка может быть рекомбинантно модифицирована для экспрессии белка сортилина по данному изобретению на своей клеточной поверхности. В некоторых вариантах реализации, клетка может быть рекомбинантно модифицирована для экспрессии и секретирования лиганда сортилина по данному изобретению.
В любом из клеточных анализов, описанных в данном документе, может быть использован лиганд сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, лиганд сортилина представляет собой белок програнулина. Лиганд сортилина может быть полноразмерным белком, или можкт быть его сортилинсвязывающим пептидным фрагментом.
Нуклеиновые кислоты, векторы и клетки-хозяева.
Антитела против сортилина по данному изобретению могут быть получены с использованием рекомбинантных способов и композиций, например, как описано в патенте США № 4816567. В некоторых вариантах реализации предусматриваются выделенные нуклеиновые кислоты, содержащие нуклеотидную последовательность, кодирующую любое из антител против сортилина по данному изобретению. Такие нуклеиновые кислоты могут кодировать аминокислотную последовательность, содержащую VL, и/или аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела против сортилина (например, легкие и/или тяжелые цепи антитела). В некоторых вариантах реализации предусматриваются один или несколько векторов (например, экспрессионных векторов), содержащих такие нуклеиновые кислоты. В некоторых вариантах реализации, также предусматривается клетка-хозяин, содержащая такую нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах реализации, клетка-хозяин содержит (например, была трансдуцирована): (1) вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела, или (2) первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислоты последовательность, содержащую VL антитела, и второй вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела. В некоторых вариантах реализации, клетка-хозяин является эукариотической, например, клеткой яичника китайского хомячка (CHO) или лимфоидной клеткой (например, клеткой YO, NSO, Sp20). Клетки-хозяева по данному изобретению также включают, без ограничений, выделенные клетки, in vitro культивируемые клетки, и ex vivo культивируемые клетки.
Предусматриваются способы получения антитела против сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, способ включает культивирование клетки-хозяина по данному изобретению, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело против сортилина, в условиях, пригодных для экспрессии антитела. В некоторых вариантах реализации, антитело затем выделяют из клетки-хозяина (или культуральной среды клетки-хозяина).
Для рекомбинантного продуцирования антитела против сортилина по данному изобретению, нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело против сортилина, выделяют и вставляют в один или несколько векторов для дальнейшего клонирования и/или экспрессии в клетке-хозяине. Такая нуклеиновая кислота может быть легко выделена и секвенирована с использованием обычных процедур (например, путем использования олигонуклеотидных зондов, способных к специфическому связыванию с генами, кодирующими тяжелые и легкие цепи антитела).
Пригодные векторы, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую любые полипептиды антител против сортилина по данному изобретению, или их экспрессируемые на клеточной поверхности фрагменты или полипептиды (включая антитела), описанные в данном документе, включают, без ограничений, клонирующие векторы и экспрессионные векторы. Пригодные клонирующие векторы могут быть сконструированы в соответствии со стандартными методиками, или могут быть выбраны из большого числа доступных клонирующих векторов. Хотя выбранный клонирующий вектор может меняться в зависимости от клетки-хозяина, которая должна использоваться, пригодные клонирующие векторы, как правило, обладают способностью к саморепликации, могут иметь единственную мишень для конкретной эндонуклеазы рестрикции, и/или могут нести гены для маркера, который может быть
- 79 046146 использован при селекции клонов, содержащих вектор. Пригодные примеры включают плазмиды и бактериальные вирусы, например, pUC18, pUC19, Bluescript (например, pBS SK+) и его производные, mp18, mp19, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, фаговые ДНК, и челночные векторы, такие как pSA3 и pAT28. Эти и многие другие клонирующие векторы доступны от коммерческих поставщиков, таких как BioRad, Strategene, и Invitrogen.
Пригодные клетки-хозяева для клонирования или экспрессии кодирующих антитела векторов включают прокариотические или эукариотические клетки. Например, антитела против сортилина по данному изобретению могут продуцироваться в бактериях, в частности, если не требуются гликозилирование и Fc-эффекторная функция. Для экспрессии фрагментов антител и полипептидов в бактериях (например, патенты США № 5648237, 5789199 и 5840523). После экспрессии, антитело может быть выделено из бактериальной клеточной пасты в растворимой фракции и может быть дополнительно очищено.
В дополнение к прокариотам, эукариотические микроорганизмы, такие как нитчатые грибы или дрожжи, также являются пригодными хозяевами для клонирования или экспрессии кодирующих антитело векторов, включая грибковые и дрожжевые штаммы, пути гликозилирования которых были гуманизированы для обеспечения продуцирования антитела с частично или полностью человеческим характером гликозилирования (например, Gerngross Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004); и Li et al. Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)).
Пригодные клетки-хозяева для экспрессии гликозилированного антитела также могут быть получены из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных). Примеры клеток беспозвоночных включают клетки растений и насекомых. Были идентифицированы многочисленные бакуловирусные штаммы, которые могут быть использованы в сочетании с клетками насекомых, в частности, для трансфекции клеток Spodoptera frugiperda (кукурузная листовая совка). Растительные клеточные культуры также могут быть использованы в качестве хозяев (например, патенты США № 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 и 6417429, описывающие технологию продуцирования антител PLANTIBODIES™ в трансгенных растениях).
Клетки позвоночных также могут быть использованы в качестве хозяев. Например, могут быть использованы клеточные линии млекопитающих, адаптированные для выращивания в суспензии. Другими примерами пригодных линий клеток-хозяев млекопитающих являются линия почки обезьян CV1, трансформированная с помощью SV40 (COS-7); линия почки человеческого эмбриона (293 или клетки 293, как описано, например, в Graham et al. J. Gen Virol. 36:59 (1977)); клетки почки детеныша хомячка (BHK); мышиные клетки Сертоли (клетки TM4, как описано, например, в Mather, Biol. Reprod. 23:243251 (1980)); клетки почки обезьян (CV1); клетки почки африканских зеленых мартышек (VERO-76); клетки карциномы шейки матки человека (HELA); клетки почки собаки (MDCK); клетки печени серой крысы (buffalo rat) (BRL 3A); клетки легкого человека (W138); клетки печени человека (Hep G2); мышиная опухоль молочной железы (MMT 060562); клетки TRI, как описано, например, в Mather et al. Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982); клетки MRC 5; и клетки FS4. Другие пригодные линии клеток-хозяев млекопитающих включают клетки яичника китайского хомячка (CHO), включая клетки DHFR-CHO (Urlaub et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); и клеточные линии миеломы, такие как Y0, NS0 и Sp2/0. Обзор некоторых линий клеток-хозяев млекопитающих, пригодных для продуцирования антител, приведен, например, в Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
Фармацевтические композиции.
В данном документе предусматриваются фармацевтические композиции и/или фармацевтические составы, содержащие антитела против сортилина по данному изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтически приемлемый носитель предпочтительно является нетоксичным для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях. Антитела, описанные в данном документе, могут быть приготовлены в виде препаратов твердой, полутвердой, жидкой или газообразной формы. Примеры таких составов включают, без ограничений, таблетки, капсулы, порошки, гранулы, мази, растворы, суппозитории, инъекции, лекарственные формы для ингаляции, гели, микросферы и аэрозоли. Фармацевтически приемлемые носители могут включать, в зависимости от желательного состава, фармацевтически приемлемые нетоксичные носители или (of) разбавители, которые представляют собой вещества, широко применяемые для составления фармацевтических композиций для введения животным или человеку. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция может включать вспомогательные материалы для модификации, поддержания или сохранения, например, значения pH, осмолярности, вязкости, прозрачности, окраски, изотоности, запаха, стерильности, стабильности, скорости растворения или высвобождения, адсорбции или проницаемости композиции.
В некоторых вариантах реализации, фармацевтически приемлемые носители включают, без ограничений, аминокислоты (такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин); антимикробные средства; антиоксиданты (такие как аскорбиновая кислота, сульфит натрия или гидросульфит натрия); буферы (такие как борат, бикарбонат, Tris-HCl, цитраты, фосфаты или другие органические кислоты); инертные наполнители (такие как маннит или глицин); хелатирующие агенты (такие как этилендиаминтетра
- 80 046146 уксусная кислота (ЭДТА)); комплексообразующие агенты (такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин); наполнители; моносахариды; дисахариды; и другие углеводы (такие как глюкоза, манноза или декстрины); белки (такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины); красящие, вкусовые вещества и разбавители; эмульгаторы; гидрофильные полимеры (такие как поливинилпирролидон); низкомолекулярные полипептиды; солеобразующие противоионы (такие как натрий); консерванты (такие как бензалкония хлорид, бензойная кислота, салициловая кислота, тимеросал, фенетиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или перекись водорода); растворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль); сахароспирты (такие как маннит или сорбит); суспендирующие агенты; поверхностно-активные вещества или смачивающие агенты (такие как плюроники, ПЭГ, сложные эфиры сорбитана, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат 80, тритон, трометамин, лецитин, холестерин, тилоксапол (tyloxapal)); средства, повышающие стабильность (такие как сахароза или сорбит); средства, повышающие тоничность (такие как галогениды щелочных металлов, предпочтительно, хлорид натрия или калия, маннит, сорбит); средства доставки; разбавители; эксципиенты и/или фармацевтические адъюванты. Дополнительные примеры композиций, пригодных для различных типов введения, приведены в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Pharmaceutical Press 22nd ed. (2013). Краткий обзор способов доставки лекарственных средств приведен в Langer, Science 249:1527-1533 (1990).
Композиции, пригодные для парентерального введения, включают водные и неводные изотонические стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, делающие состав изотоническим с кровью предполагаемого реципиента, и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие агенты, солюбилизаторы, загустители, стабилизаторы и консерванты.
Сосотвы могут быть оптимизированы для удерживания и стабилизации в головном мозге или центральной нервной системе. В тех случаях, когда агент вводят в краниальный компартмент, желательно, чтобы агент сохранялся в компартменте, и не диффундировал или иначе проходил через гематоэнцефалический барьер. Методики стабилизации включают перекрестное связывание, мультимеризацию, или связывание с такими группами, как полиэтиленгликоль, полиакриламид, нейтральные белковые носители и т.д., для увеличения молекулярного веса.
Другие стратегии увеличения удерживания включают включение антитела, такого как антитело против сортилина по данному изобретению, в биодеградируемый или биоэродируемый имплантат. Скорость высвобождения терапевтически активного агента контролируется скоростью транспорта через полимерную матрицу, и биодеградацией имплантата. Имплантаты могут быть частицами, листами, пластырями (patches), накладками (plaques), волокнами, микрокапсулами и т.п., и могут иметь любой размер или форму, совместимые с выбранным местом введения. Биодеградируемые полимерные композиции, пригодные для использования, могут быть органическими сложными эфирами или простыми эфирами, которые при деградации дают физиологически приемлемые продукты деградации, включая мономеры. Могут находить применение ангидриды, амиды, сложные ортоэфиры и т.п., отдельно взятые или в комбинации с другими мономерами. Полимеры будут конденсационными полимерами. Полимеры могут быть сшитыми или несшитыми. Особый интерес представляют полимеры оксиалифатических карбоновых кислот, будь то гомо- или сополимеры, и полисахариды. Сложные полиэфиры, представляющие интерес, включают полимеры D-молочной кислоты, L-молочной кислоты, рацемической молочной кислоты, гликолевой кислоты, поликапролактон, и их комбинации. Полисахаридами, представляющими интерес, являются альгинат кальция и функционализированные целлюлозы, в частности, сложные эфиры карбоксиметилцеллюлозы, характеризующиеся нерастворимостью в воде, с молекулярным весом от примерно 5 кДа до 500 кДа, и т.д. Биодеградируемые гидрогели также могут быть использованы в имплантатах по данному изобретению. Гидрогели типично представляют собой сополимерный материал, характеризующийся способностью поглощать жидкость.
Фармацевтические дозировки.
Антитело, предусматриваемое в данном документе (и любой дополнительный терапевтический агент), может быть введено любыми пригодными средствами, включая парентеральное, внутрилегочное, интраназальное, внутриочаговое введение, интрацереброспинальный, интракраниальный, интраспинальный, интрасиновиальный, интратекальный, пероральный, местный пути, или ингаляцию. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное введение в виде болюса или путем непрерывной инфузии на протяжении некоторого периода времени, интраартериальное, внутрисуставное, интраперитонеальное или подкожное введение. В некоторых вариантах реализации, введение представляет собой внутривенное введение. В некоторых вариантах реализации, введение является подкожным. Введение доз может осуществляться любым пригодным путем, например, инъекциями, такими как внутривенные или подкожные инъекции, в зависимости, частично, от того, является введение кратковременным или хроническим. В данном документе предусматриваются различные схемы приема, включая, без ограничений, разовое или многократное введения в различные моменты времени, болюсное введение, и импульсная инфузия.
Композиции антител, предусматриваемых в данном документе, будут составляться, дозироваться и
- 81 046146 вводиться в соответствии с принципами надлежащей медицинской практики. Факторы, требующие учета в этом контексте, включают конкретное расстройство, лечение которого проводится, конкретное млекопитающее, лечение которого проводится, клиническое состояние индивидуального пациента, причину расстройства, место доставки агента, способ введения, график введения, и другие факторы, известные практикующим врачам. Композиция антитела не должна обязательно, но необязательно составляется с одним или несколькими агентами, используемыми в настоящее время для предотвращения или лечения рассматриваемого расстройства. Эффективное количество таких других агентов зависит от количества присутствующего в композиции антитела, типа расстройства или лечения, и других факторов, указанных выше. Они, как правило, используются в таких же дозировках и с путями введения, описанными в данном документе, или в количествах примерно от 1 до 99% от дозировок, описанных в данном документе, или в любой дозе и с любым путем введения, которые эмпирически/клинически будут определены как подходящие.
Дозировки для конкретного антитела против сортилина могут быть определены эмпирически для индивидуумов, которым осуществляют одно или несколько введений антитела против сортилина. Индивидуумам вводят возрастающие дозы антитела против сортилина. Для оценки эффективности антитела против сортилина может контролироваться клинический симптом любых болезней, расстройств или состояний по данному изобретению (например, лобно-височной деменции, болезни Альцгеймера, сосудистой деменции, эпилептических припадков, дистрофии сетчатки, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, длительной депрессии, атеросклеротических болезней сосудов, и нежелательных симптомов нормального старения).
Для предотвращения или лечения болезни, пригодная дозировка антитела по данному изобретению (при использовании отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими дополнительными терапевтическими агентами) будет зависеть от типа болезни, требующей лечения, типа антитела, тяжести и течения болезни, от того, вводится антитело в профилактических или в терапевтических целях, предшествующей терапии, истории болезни пациента и ответа на антитело, и мнения лечащего врача. Антитело может быть введено пациенту за раз или на протяжении ряда сеансов лечения.
В зависимости от типа и тяжести болезни, примерно от 1 мкг/кг до 15 мг/кг (например, 0,1 мг/кг-10 мг/кг) антитела может быть начальной пробной дозировкой для введения пациенту, например, посредством одного или нескольких отдельных сеансов введения, или путем непрерывной инфузии. Одна типичная суточная доза может составлять от примерно 1 мкг/кг до 100 мг/кг или больше, в зависимости от указанных выше факторов. Для повторного введения на протяжении нескольких дней или более длительного периода времени, в зависимости от состояния, лечение будет, как правило, будет продолжаться до достижения желательного подавления симптомов болезни. Одна типичная доза антитела будет иметь значение в диапазоне от примерно 0,05 мг/кг до примерно 10 мг/кг. Таким образом, пациенту может быть введена одна или несколько доз, равных примерно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг или 10 мг/кг (или любая их комбинация). Такие дозы могут вводиться периодически, например, раз в неделю или раз в три недели (например, таким образом, чтобы пациент получил от примерно двух до примерно двадцати или, например, примерно шесть доз антитела). В некоторых вариантах реализации, частота введения доз составляет три раза в день, два раза в день, раз в день, раз в два дня, раз в неделю, раз в две недели, раз в четыре недели, раз в пять недель, раз в шесть недель, раз в семь недель, раз в восемь недель, раз в девять недель, раз в десять недель, или раз в месяц, раз в два месяца, раз в три месяца, или реже. Может быть введена высокая начальная ударная доза, с последующими одной или несколькими более низкими дозами. Однако, могут быть полезны другие схемы введения. Прогресс такой терапии легко контролируется обычными методами и анализами.
Терапевтическое применение.
В определенных аспектах, антитела против сортилина по данному изобретению могут быть использованы для предотвращения, снижения риска или лечения индивидуума с болезнью, расстройством или поражением. Антитела против сортилина по данному изобретению могут быть использованы для предотвращения, снижения риска или лечения гибели клеток (например, гибели нейронных клеток), лобновисочной деменции, болезни Альцгеймера, сосудистой деменции, эпилептических припадков, дистрофии сетчатки, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, длительной депрессии, атеросклеротических болезней сосудов, нежелательных симптомов нормального старения, деменции, смешанной деменции, болезни Крейтцфельда-Якоба, нормотензивной гидроцефалии, бокового амиотрофического склероза, болезни Гентингтона, таупатии, инсульта, острой травмы, хронической травмы, волчанки, острого и хронического колита, болезни Крона, воспалительной болезни кишечника, неспецифического язвенного колита, малярии, эссенциального тремора, волчанки центральной нервной системы, болезни Бехчета, болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, мультисистемной атрофии, дегенерации межпозвоночных дисков, синдрома Шая-Дрейджера, прогрессирующего надъядерного паралича, кортикобазальной ганглионарной дегенерации, острого рассеянного энцефаломиелита, гранулематозных расстройств, саркоидоза, болезней старения, возрастной макулярной дегенерации, глаукомы, пигментного ретинита, дегенерации сетчатки, инфекции дыхательных путей, сепсиса, глазной инфекции, системной инфекции, воспалительных расстройств, артрита, рассеянного склероза, метаболического на
- 82 046146 рушения, ожирения, инсулинорезистентности, диабета типа 2, повреждения ткани или сосудов, травмы, и/или одного или нескольких нежелательных симптомов нормального старения.
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ предотвращения, снижения риска или лечения индивидуума с болезнью, расстройством или поражением, включающий введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, болезнь, расстройство или поражение выбирают из группы, состоящей из лобно-височной деменции, прогрессирующего надъядерного паралича, болезни Альцгеймера, сосудистой деменции, эпилептических припадков, дистрофии сетчатки, бокового амиотрофического склероза, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, деменции, инсульта, болезни Паркинсона, острого рассеянного энцефаломиелита, дегенерации сетчатки, возрастной макулярной дегенерации, глаукомы, рассеянного склероза, септического шока, бактериальной инфекции, артрита и остеоартрита.
Определенные аспекты данного изобретения предусматривают способы повышения уровней програнулина у нуждающегося в этом индивидуума, таких как в головном мозге, крови, и/или периферических органах индивидуума, путем введения индивидууму терапевтически эффективного количества одного или нескольких антител против сортилина по данному изобретению. Другие аспекты данного изобретения предусматривают способы повышения внеклеточных уровней програнулина, путем введения в контакт одной или нескольких клеток с одним или несколькими антителами против сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, уровни програнулина повышают без снижения клеточных уровней сортилина. Другие аспекты данного изобретения предусматривают способы снижения клеточных уровней сортилина у нуждающегося в этом индивидуума, таких как в головном мозге и/или периферических органах индивидуума, путем введения индивидууму терапевтически эффективного количества одного или нескольких антител против сортилина по данному изобретению. Другие аспекты данного изобретения предусматривают способы снижения клеточных уровней сортилина одной или нескольких клеток, включающие введение в контакт одной или нескольких клеток с одним или несколькими антителами против сортилина по данному изобретению.
Дополнительные аспекты данного изобретения предусматривают способы повышения эффективных концентраций програнулина и/или снижения эффективных концентраций нейротрофина по данному изобретению (например, пронейротрофина-3, пронейротрофина-4/5, пронейротрофинов, про-NGF, проBDNF, нейротрофина-3, нейротрофина-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензина, p75, пропептида сортилина (Sort-pro), белка-предшественника амилоида (APP), бета-амилоидного (A beta) пептида, липопротеинлипазы (LpL), аполипопротеина AV (APOA5), аполипопротеина E (APOE), PCSK9, и рецепторассоциированного белка (RAP) у нуждающегося в этом индивидуума путем введения индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению для ингибирования взаимодействия между сортилином и програнулином, нейротрофином по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, p75, пропептидом сортилина (Sort-pro), белком-предшественником амилоида (APP), бета-амилоидным (A beta) пептидом, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), аполипопротеином E (APOE), и/или рецепторассоциированным белком (RAP).
Данное изобретение также предусматривает способы ингибирования взаимодействия между сортилином и програнулином, нейротрофином по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, p75, пропептидом сортилина (Sort-pro), белком-предшественником амилоида (APP), бета-амилоидным (A beta) пептидом, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), аполипопротеином E (APOE), PCSK9, и/или рецептор-ассоциированным белком (RAP); а также одной или нескольких активностей сортилина, програнулина, нейротрофина по данному изобретению (например, пронейротрофинов, пронейротрофина-3, пронейротрофина-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофина-3, нейротрофина-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензина, p75, пропептида сортилина (Sortpro), белка-предшественника амилоида (APP), бета-амилоидного (A beta) пептида, липопротеинлипазы (LpL), аполипопротеина AV (APOA5), аполипопротеина E (APOE), и/или рецептор-ассоциированного белка (RAP) у индивидуума путем введения индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению.
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ предотвращения, снижения риска или лечения индивидуума с болезнью, расстройством или поражением, включающий введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению.
Как раскрыто в данном документе, антитела против сортилина по данному изобретению могут быть использованы для предотвращения, снижения риска или лечения лобно-височной деменции, болезни Альцгеймера, сосудистой деменции, эпилептических припадков, дистрофии сетчатки, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, длительной депрессии, атеросклеротических болезней сосудов, нежелательных симптомов нормального старения, деменции, смешанной демен
- 83 046146 ции, болезни Крейтцфельда-Якоба, нормотензивной гидроцефалии, бокового амиотрофического склероза, болезни Гентингтона, таупатии, инсульта, острой травмы, хронической травмы, волчанки, острого и хронического колита, болезни Крона, воспалительной болезни кишечника, неспецифического язвенного колита, малярии, эссенциального тремора, волчанки центральной нервной системы, болезни Бехчета, болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, мультисистемной атрофии, дегенерации межпозвоночных дисков, синдрома Шая-Дрейджера, прогрессирующего надъядерного паралича, кортикобазальной ганглионарной дегенерации, острого рассеянного энцефаломиелита, гранулематозных расстройств, саркоидоза, болезней старения, возрастной макулярной дегенерации, глаукомы, пигментного ретинита, дегенерации сетчатки, инфекции дыхательных путей, сепсиса, глазной инфекции, системной инфекции, воспалительных расстройств, артрита, рассеянного склероза, метаболического нарушения, ожирения, инсулинорезистентности, диабета типа 2, повреждения ткани или сосудов, травмы, и одного или нескольких нежелательных симптомов нормального старения.
В некоторых вариантах реализации, данное изобретение предусматривает способы предотвращения, снижения риска или лечения индивидуума с лобно-височной деменцией, болезнью Альцгеймера, сосудистой деменцией, эпилептическими припадками, дистрофией сетчатки, травматическим повреждением головного мозга, повреждением спинного мозга, длительной депрессией, атеросклеротическими болезнями сосудов, нежелательными симптомами нормального старения, деменцией, смешанной деменцией, болезнью Крейтцфельда-Якоба, нормотензивной гидроцефалией, боковым амиотрофическим склерозом, болезнью Гентингтона, таупатией, инсультом, острой травмой, хронической травмой, волчанкой, острым и хроническим колитом, болезнью Крона, воспалительной болезнью кишечника, неспецифическим язвенным колитом, малярией, эссенциальным тремором, волчанкой центральной нервной системы, болезнью Бехчета, болезнью Паркинсона, деменцией с тельцами Леви, мультисистемной атрофией, дегенерацией межпозвоночных дисков, синдромом Шая-Дрейджера, прогрессирующим надъядерным параличом, кортикобазальной ганглионарной дегенерацией, острым рассеянным энцефаломиелитом, гранулематозными расстройствами, саркоидозом, болезнями старения, возрастной макулярной дегенерацией, глаукомой, пигментным ретинитом, дегенерацией сетчатки, инфекцией дыхательных путей, сепсисом, глазной инфекцией, системной инфекцией, воспалительными расстройствами, артритом, рассеянным склерозом, метаболическим нарушением, ожирением, инсулинорезистентностью, диабетом типа 2, поврежденим ткани или сосудов, травмой, и одним или несколькими нежелательными симптомами нормального старения, у нуждающегося в этом индивидуума, путем введения индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению с целью: (i) ингибирования взаимодействия между сортилином и програнулином, нейротрофином по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, p75, пропептидом сортилина (Sort-pro), белком-предшественником амилоида (APP), бета-амилоидным (A beta) пептидом, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), аполипопротеином E (APOE), и/или рецепторассоциированным белком (RAP); и/или (ii) ингибирования одной или нескольких активностей сортилина, програнулина, нейротрофина по данному изобретению (например, пронейротрофинов, пронейротрофина-3, пронейротрофина-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофина-3, нейротрофина-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензина, p75, пропептида сортилина (Sort-pro), белка-предшественник амилоида (APP), бетаамилоидного (A beta) пептида, липопротеинлипазы (LpL), аполипопротеина AV (APOA5), аполипопротеина E (APOE), и/или рецептор-ассоциированного белка (RAP). В некоторых вариантах реализации, данное изобретение предусматривает способы индуцирования заживления ран у нуждающегося в этом индивидуума путем введения индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению.
Данное изобретение также предусматривает способы стимулирования выживания клеток, такого как выживание нейронных клеток, путем введения антитела против сортилина по данному изобретению для ингибирования взаимодействия между сортилином и програнулином, нейротрофином по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, p75, белкомпредшественником амилоида (APP), и бета-амилоидным (A beta) пептидом. Антитело против сортилина может быть введено в клетки in vitro для стимулирования выживания клеток. Альтернативно, антитело против сортилина может быть введено in vivo (например, путем введения антитела индивидууму) для стимулирования выживания клеток.
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ ингибирования чего-то одного или нескольких из нейровоспаления, аксонопатии, характеризующейся коротким аксональным разрастанием и аберрантным ветвлением, микроглиальной активации, и воспалительного ответа, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению.
Данное изобретение предусматривает способы ингибирования нейровоспаления, аксонопатии, характеризующейся коротким аксональным разрастанием и аберрантным ветвлением, микроглиальной активации, и воспалительного ответа, и усиления заживления ран, аутофагии и клиренса агрегированных
- 84 046146 белков путем введения антитела против сортилина по данному изобретению для ингибирования взаимодействия между сортилином и програнулином, нейротрофином по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, p75, белком-предшественником амилоида (APP), и бета-амилоидным (A beta) пептидом. Антитело против сортилина может быть введено в клетки in vitro. Альтернативно, антитело против сортилина может быть введено in vivo (например, путем введения антитела индивидууму).
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ усиления чего-то одного или нескольких из заживления ран, аутофагии, и клиренса агрегированных белков, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению.
В определенных аспектах, данный документ предусматривает способ предотвращения, снижения риска или лечения индивидуума с артритом, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела против сортилина по данному изобретению.
Данное изобретение также предусматривает способы снижения экспрессии одного или нескольких провоспалительных медиаторов путем введения индивидууму, нуждающемуся в этом, антитела против сортилина по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, один или несколько провоспалительных медиаторов выбирают из IL-6, IL12p70, IL12p40, IL-1e, TNF-α, CXCL1, CCL2, CCL3, CCL4, и CCL5.
В некоторых вариантах реализации, способ по данному изобретению включает антитело против сортилина, содержащее два или больше антител против сортилина.
Деменция.
Деменция представляет собой неспецифический синдром (т.е. набор признаков и симптомов) проявляющийся у ранее незатронутой особы в виде серьезной потери общей познавательной способности, выходящей за пределы ожидаемого при нормальном старении. Деменция может быть статической, в результате уникальной глобальной травмы мозга. Альтернативно, деменция может быть прогрессирующей, приводящей к длительному ухудшению вследствие соматического поражения или болезни. Хотя деменция значительно более распространена в гериатрической популяции, она может также возникать у людей в возрасте до 65 лет. Когнитивные области, поражаемые при деменции, включают, без ограничений, память, объем внимания, речь и решение задач. Как правило, симптомы должны проявляться на протяжении по меньшей мере шести месяцев до постановки индивидууму диагноза деменции.
Типичные примеры форм деменции включают, без ограничений, лобно-височную деменцию, болезнь Альцгеймера, сосудистую деменцию, семантическую деменцию и деменцию с тельцами Леви.
Без желания ограничиваться теорией укажем, что, как считается, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить деменцию. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может индуцировать одну или несколько активностей програнулина у индивидуума с деменцией (например, нейротрофическую и/или активность выживания нейронов, и противовоспалительную активность.
Лобно-височная деменция.
Лобно-височная деменция (ЛВД) представляет собой состояние, возникающее в результате прогрессирующей дегенерации лобной доли головного мозга. Со временем, дегенерация может захватывать височную долю. На долю ЛВД, уступающей по распространенности только болезни Альцгеймера (AD), приходится 20% случаев пресенильной деменции. Клинические признаки ЛВД включают дефициты памяти, поведенческие аномалии, изменения личности и языковые нарушения (Cruts, M. & Van Broeckhoven, C., Trends Genet. 24:186-194 (2008); Neary, D., et al., Neurology 51:1546-1554 (1998); Ratnavalli, E., Brayne, C., Dawson, K. & Hodges, J. R., Neurology 58:1615-1621 (2002)).
Значительная часть случаев ЛВД наследуется аутосомно-доминантным образом, но даже в одной семье симптомы могут охватывать спектр от ЛВД с поведенческими расстройствами до первичной прогрессирующей афазии, и до кортикобазальной ганглионарной дегенерации. ЛВД, как и большинство нейродегенеративных заболеваний, может характеризоваться патологическим присутствием специфических белковых агрегатов в пораженном болезнью мозге. Исторически, в первых описаниях ЛВД отмечалось присутствие внутринейронных скоплений гиперфосфорилированного тау-белка в нейрофибриллярных клубках или тельцах Пика. Причинная роль ассоциированного с микротрубочками тау-белка была подтверждена путем идентификации мутаций в гене, кодирующем тау-белок в нескольких семействах (Hutton, M., et al., Nature 393:702-705 (1998). Однако, в мозге большинства людей, пораженных ЛВД, не было выявлено накопления гиперфосфорилированного тау-белка, продемонстрирована иммунореактивность к убиквитину (Ub) и ДНК-связывающему белку TAR (TDP43) (Neumann, M., et al., Arch. Neurol. 64:1388-1394 (2007)). Было показано, что большинство таких случаев ЛВД с включениями Ub (ЛВД-U) несут мутации в гене програнулина.
Мутации програнулина приводят к гаплонедостаточности и, как известно, присутствуют в почти 50% случаев семейной ЛВД, что делает мутацию програнулина важным генетическим фактором, благоприятствующим ЛВД. Без желания ограничиваться теорией укажем, что, как считается, гетерозиготный
- 85 046146 характер с потерей функции мутаций програнулина свидетельствует о том, что у здоровых индивидуумов, экспрессия програнулина играет дозозависимую критическую роль в защите здоровых индивидуумов от развития ЛВД. Соответственно, повышение уровней програнулина путем ингибирования взаимодействия между сортилином и програнулином может предотвращать, снижать риск, и/или лечить ЛВД.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить ЛВД. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с ЛВД.
Болезнь Альцгеймера.
Болезнь Альцгеймера (AD) является наиболее распространенной формой деменции. Не существует способа лечения заболевания, которое ухудшается по мере прогрессирования, и постепенно приводит к смерти. Чаще всего AD диагностируется у людей в возрасте старше 65 лет. Однако, менее распространенная форма болезни Альцгеймера с ранними проявлениями может возникать значительно раньше.
Обычные симптомы болезни Альцгеймера включают поведенческие симптомы, такие как трудность запоминания недавних событий; когнитивные симптомы, спутанность сознания, раздражительность и агрессию, эмоциональную лабильность, проблемы с языком, и потерю долговременной памяти. По мере прогрессирования болезни утрачиваются телесные функции, что в конечном счете приводит к смерти. Болезнь Альцгеймера развивается на протяжении неизвестного и непостоянного периода времени до полного ее проявления, и может прогрессировать, годами оставаясь недиагностированной.
Было показано, что сортилин связывается с белком-предшественником амилоида (APP) и ферментом процессинга APP ВАСЕ1. Без желания ограничиваться теорией укажем, что, как считается, эти взаимодействия вовлечены в болезнь Альцгеймера. Соответственно, и без желания ограничиваться теорией, считается, что антитела против сортилина по данному изобретению могут быть использованы для ингибирования таких взаимодействий, и предотвращают, снижают риск или лечат болезнь Альцгеймера у нуждающихся в этом индивидуумов.
В некоторых вариантах реализации, и без желания ограничиваться теорией, считается, что антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют взаимодействие между сортилином и нейротрофинами по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), p75, белком-предшественником амилоида (APP), и/или бета-амилоидным (A beta) пептидом, или которые ингибируют одну или несколько активностей сортилина, могут быть использованы для предотвращения, снижения риска или лечения болезни Альцгеймера у нуждающихся в этом индивидуумов.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить болезнь Альцгеймера. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с болезнью Альцгеймера.
Сосудистая деменция.
Сосудистая деменция (VaD) представляет собой малозаметно прогрессирующее ухудшение памяти и других когнитивных функций, которое считается вызываемым цереброваскулярным заболеванием (сосудистым заболеванием в головном мозге). Цереброваскулярное заболевание представляет собой прогрессирующее изменение наших кровеносных сосудов (сосудистой сети) в головном мозге (большом мозге). Наиболее распространенным сосудистым изменением, связанным с возрастом, является накопление холестерина и других веществ в стенках кровеносных сосудов. Это приводит к утолщению и склерозированию стенок, а также к сужению сосудов, что может приводить к уменьшению или даже полному прекращению кровотока в области мозга, снабжаемые пораженной артерией. Пациенты с сосудистой деменцией часто демонстрируют симптомы, похожие на наблюдающиеся у пациентов с болезнью Альцгеймера (AD). Однако, связанные с ней изменения в головном мозге вызваны не патологией болезни Альцгеймера, а хронически сниженным кровотоком в головном мозге, постепенно приводящим к деменции. Сосудистая деменция считается одним из наиболее распространенных типов деменции у пожилых людей. Симптомы сосудистой деменции включают затруднения с памятью, затруднения с организацией и решением сложных задач, замедленное мышление, дистракцию или отсутствие сосредоточенности, затруднения с вспоминанием слов, изменения настоения или поведения, такие как депрессия, раздражительность или апатия, и галлюцинации или бред.
Без желания ограничиваться теорией укажем, что, как считается, одна или несколько активностей сортилина, или одно или несколько взаимодействий между сортилином и програнулином, нейротрофинами по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, липопротеинлипазой, аполипопротеином AV, и/или рецептор-ассоциированным белком вовлечены в сосудистую деменцию. Соответственно, и без желания ограничиваться теорией, считается, что антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют взаимодействие между сортилином и нейротрофинами по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.),
- 86 046146 нейротензином, p75, пропептидом сортилина (Sort-pro), белком-предшественником амилоида (APP), бета-амилоидным (A beta) пептидом, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), аполипопротеином E (APOE), и/или рецептор-ассоциированным белком (RAP); или которые ингибируют одну или несколько активностей сортилина, могут быть использованы для предотвращения, снижения риска или лечения сосудистой деменции у нуждающихся в этом индивидуумов.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить сосудистую деменцию. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с сосудистой деменцией.
Припадки, дистрофия сетчатки, травматические повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга и длительная депрессия.
В используемом в данном документе значении, дистрофия сетчатки относится к любому заболеванию или состоянию, которое связано с дегенерацией сетчатки. Такие заболевания или состояния могут приводить к потере зрения или полной слепоте.
В используемом в данном документе значении, припадки также включают эпилептические припадки, и относятся к транзиентному симптому аномально избыточной или синхронной нейронной активности в головном мозге. Внешние проявления могут быть драматичными, такими как нанесение резких ударов, или слабыми, такими как кратковременная потеря восприятия действительности. Припадки могут проявляться в изменении психического состояния, тонических или клонических движениях, судорогах, и различных других психических симптомах.
Травматические повреждения головного мозга (TBI), могут также называться внутричерепными травмами. Травматические повреждения головного мозга происходят при травматическом повреждении головного мозга под действием внешней силы. Травматические повреждения головного мозга могут классифицироваться по тяжести, механизму (закрытая или проникающая травма головы), или по другим признакам (например, происходящие в определенном месте или в обширной области).
Повреждения спинного мозга (SCI) включают любые повреждения спинного мозга, вызванные травмой, а не болезнью. В зависимости от места повреждения спинного мозга и нервных корешков, симптомы могут изменяться в широких пределах, от боли до паралича и недержания. Повреждения спинного мозга описываются как имеющие разные степени, и могут варьироваться от неполных, с отсутствием влияния на пациента, до полного повреждения, означающего полную потерю функции.
Длительная депрессия (LTD) представляет собой зависимое от активности снижение эффективности нейронных синапсов, продолжающееся в течение нескольких часов или дольше, после низкочастотной (long patterned) стимуляции. Длительная депрессия может возникать во многих областях центральной нервной системы с различными механизмами, в зависимости от области головного мозга и процесса развития. Длительная депрессия может возникать в гиппокампе, мозжечке, и в разных типах нейронов, которые высвобождают различные нейротрансмиттеры. Без желания ограничиваться теорией укажем, что, как считается, длительная депрессия может быть связана с нейродегенерацией, деменцией и болезнью Альцгеймера.
Было показано, что пронейротрофины (например, пронейротрофин-4/5, нейротрофин-4/5, про-NGF, про-BDNF и т.д.) играют определенную роль в припадках, дистрофии сетчатки, травматическом повреждении головного мозга, повреждении спинного мозга и длительной депрессии.
Соответственно, и без желания ограничиваться теорией, считается, что антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют взаимодействие между сортилином и нейротрофинами по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.); или которые ингибируют одну или несколько активностей сортилина, могут быть использованы для предотвращения, снижения риска или лечения припадков, дистрофии сетчатки, травматических повреждений головного мозга, повреждений спинного мозга, и/или длительной депрессии у нуждающихся в этом индивидуумов.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить припадки, дистрофию сетчатки, травматические повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, и/или длительную депрессию. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с припадками, дистрофией сетчатки, травматическими повреждениями головного мозга, повреждениями спинного мозга, и/или длительной депрессией.
Атеросклеротические болезни сосудов.
В используемом в данном документе значении, атеросклеротическая болезнь сосудов, ASVD, и атеросклероз используются взаимозаменяемо и относятся к любому состоянию, в котором стенка артерии утолщается в результате накопления жировых материалов, таких как холестерин, липиды и триглицерид. Атеросклеротические болезни сосудов включают, без ограничений, любое связанное с атеросклеротической болезнью сосудов состояние, расстройство или болезнь, включая, без ограничений, тромбоэмболию, инсульт, ишемию, инфаркты, коронарный тромбоз, инфарккт миокарда (например, сердечный приступ), и перемежающуюся хромоту.
- 87 046146
Как раскрыто в данном документе, белки сортилина по данному изобретению участвуют в регуляции липидов путем связывания липид-ассоциированных белков, таких как рецептор-ассоциированный белок, липопротеинлипаза и аполипопротеины APOA5 и APOE.
Соответственно, и без желания ограничиваться теорией, считается, что антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют взаимодействие между сортилином и липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), аполипопротеином E (APOE), и/или рецепторассоциированным белком (RAP); или которые ингибируют одну или несколько активностей сортилина, могут быть использованы для предотвращения, снижения риска или лечения одной или нескольких атеросклеротических болезней сосудов у нуждающихся в этом индивидуумов.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить атеросклеротическую болезнь сосудов. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с атеросклеротической болезнью сосудов.
Нежелательные симптомы старения.
В используемом в данном документе значении, нежелательные симптомы старения включают, без ограничений, потерю памяти, поведенческие изменения, деменцию, болезнь Альцгеймера, дегенерацию сетчатки, атеросклеротические болезни сосудов, потерю слуха, и разрушение клеток.
В некоторых вариантах реализации, и без желания ограничиваться теорией, считается, что антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют взаимодействие между сортилином и програнулином, нейротрофинами по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, p75, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), и/или рецептор-ассоциированным белком (RAP); или которые ингибируют одну или несколько активностей сортилина, могут быть использованы для предотвращения, снижения риска или лечения одного или нескольких нежелательных симптомов старения.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить один или несколько нежелательных симптомов старения. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с одним или несколькими нежелательными симптомами старения.
Боковой амиотрофический склероз (БАС).
В используемом в данном документе значении, боковой амиотрофический склероз (БАС), или болезнь моторных нейронов, или болезнь Лу Герига используются взаимозаменяемо и относятся к истощающему заболеванию различной этиологии, характеризующемуся быстро прогрессирующей слабостью, атрофией мышц и фасцикулярным дрожанием, спастичностью мышц, трудностями при разговоре (дизартрия), трудностями при глотании (дисфагия), и трудностями при дыхании (одышка).
Гаплонедостаточность PGRN (програнулина) вследствие гетерозиготных мутаций с потерей функции в гене GRN приводит к снижению уровней PGRN в ЦСЖ и является причиной развития лобновисочной деменции (ЛВД) с патологией TDP-43 (Sleegers et al., (2009) Ann Neurol 65:603; Smith et al., (2012) Am J Hum Genet 90:1102). TDP-43 был также идентифицирован как важный патологический белок при БАС, что позволяет предположить сходство между БАС и ЛВД.
Например, более двадцати доминантных мутаций TDP-43 было идентифицировано у пациентов со спорадическим и семейным БАС (Lagier-Tourenne et al., (2009) Cell 136:1001) и TDP-43-положительные агрегаты находят в приблизительно 95% случаев БАС (Prasad et al., (2019) Front Mol Neurosci 12:25). Кроме того, гены риска БАС, такие как MOBP, C9ORF72, MOBKL2B, NSF и FUS, могут также вызывать ЛВД (Karch et al., (2018) JAMA Neurol 75:860). Кроме того, мутации как PGRN, так и C9ORF72 связаны с аномальной микроглиальной активацией, которая, по-видимому, является еще одной общей патологией ЛВД и БАС (Haukedal et al., (2019) J Mol Biol 431:1818). Другие данные также позволяют предположить, что БАС и ЛВД представляют собой тесно связанные состояния с перекрывающимися генетическими, нейропатологическими и клиническими признаками (Weishaupt et al., (2016) Trends Mol Med 22:769; McCauley et al., (2018) Acta Neuropathol 137:715). Все вместе, эти результаты позволяют предположить, что для обоих болезней полезный эффеккт может быть достигнут при совместном лечении, и что генетическая изменчивость PGRN выступает в роли модификатора течения БАС.
В некоторых вариантах реализации, и без желания ограничиваться теорией, считается, что антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют взаимодействие между сортилином и програнулином, нейротрофинами по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, p75, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), и/или рецептор-ассоциированным белком (RAP); или которые ингибируют одну или несколько активностей сортилина, могут быть использованы для предотвращения или лечения одного или нескольких нежелательных симптомов БАС.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению
- 88 046146 может предотвращать, снижать риск, и/или лечить БАС. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с БАС.
Депрессия.
В используемом в данном документе значении, депрессия или большое депрессивное расстройство (БДР), клиническая депрессия, большая депрессия, униполярная депрессия, униполярное расстройство, рецидивирующая депрессия или дистимия, используются взаимозаменяемо и относятся к психическому расстройству, характеризующемуся эпизодами всеохватывающего подавленного настроения, сопровождающимися низкой самооценкой и потерей интереса к, или удовольствия от, нормально доставляющей удовольствие деятельности.
Соответственно, и без желания ограничиваться теорией, считается, что антитела против сортилина по данному изобретению, которые ингибируют взаимодействие между сортилином и програнулином, нейротрофинами по данному изобретению (например, пронейротрофинами, пронейротрофином-3, пронейротрофином-4/5, про-NGF, про-BDNF, нейротрофином-3, нейротрофином-4/5, NGF, BDNF и т.д.), нейротензином, p75, липопротеинлипазой (LpL), аполипопротеином AV (APOA5), и/или рецепторассоциированным белком (RAP); или которые ингибируют одну или несколько активностей сортилина, могут быть использованы для предотвращения или лечения одного или нескольких нежелательных симптомов депрессии.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить депрессию. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с депрессией.
Болезнь Паркинсона.
Болезнь Паркинсона, которая может называться идиопатическим или первичным паркинсонизмом, гипокинетически-ригидным синдромом (FIRS), или дрожательным параличом, представляет собой нейродегенеративное расстройство головного мозга, которое поражает контроль за моторной системой. Прогрессирующая гибель продуцирующих допамин клеток головного мозга приводит к значительным симптомам болезни Паркинсона. Чаще всего, болезнь Паркинсона диагностируется у людей старше 50 лет. Болезнь Паркинсона является идиопатической (не имеет известной причины) у большинства людей. Однако, генетические факторы также играют определенную роль в заболевании.
Симптомы болезни Паркинсона включают, без ограничений, тремор кистей рук, предплечий, ног, нижней челюсти и лица, ригидность мышц конечностей и туловища, замедленные движения (брадикинезия), постуральную неустойчивость, трудности при ходьбе, психоневрологические проблемы, изменения речи или поведения, депрессию, беспокойство, боль, психоз, деменцию, галлюцинации и проблемы со сном.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить болезнь Паркинсона. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может индуцировать одну или несколько активностей програнулина у индивидуума с болезнью Паркинсона. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с болезнью Паркинсона.
Болезнь Гентингтона.
Болезнь Гентингтона (HD) представляет собой наследственное нейродегенеративное заболевание, вызываемое аутосомно-доминантной мутацией гена хантингтина (HTT). Экспансия триплетного повтора цитокин-аденин-гуанин (CAG) в гене хантингтина приводит к продуцированию мутантной формы белка хантингтина (Htt), кодируемого геном. Этот мутантный белок хантингтина (mHtt) является токсичным и участвует в гибели нейронов. Симптомы болезни Гентингтона чаще всего появляются в возрасте от 35 до 44 лет, хотя они могут возникать в любом возрасте.
Симптомы болезни Гентингтона, включают, без ограничений, проблемы моторного контроля, прерывистые, хаотичные движения (хорея), аномальные движения глаз, нарушения равновесия, эпилептические припадки, трудности при жевании, трудности при глотании, когнитивные проблемы, измененную речь, дефициты памяти, затруднения при мышлении, бессонницу, усталость, деменцию, изменения личности, депрессию, беспокойство, и компульсивное поведение.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить болезнь Гентингтона. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может индуцировать одну или несколько активностей програнулина у индивидуума с болезнью Гентингтона. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с болезнью Гентингтона.
Таупатия.
Таупатии (taupathy diseases или tauopathies), представляют собой класс нейродегенеративных заболеваний, вызываемых агрегацией ассоциированного с микротрубочками тау-белка в головном мозге. Бо
- 89 046146 лезнь Альцгеймера (AD) является самым известным заболеванием из группы таупатий и включает накопление тау-белка в нейронах в форме нерастворимых нейрофибриллярных клубков (NFT). Другие таупатий и расстройства включают прогрессирующий надъядерный паралич, боксерскую деменцию (хроническую травматическую энцефалопатию), лобно-височную деменцую и паркинсонизм, связанные с хромосомой 17, болезнь литико-бодиг (Lytico-Bodig) (комплекс паркинсонизм-деменция на Гуаме), деменцию с преобладанием клубков, ганглиоглиому и ганглиоцитому, менингоангиоматоз, подострый склерозирующий панэнцефалит, свинцовую энцефалопатию, туберозный склероз, болезнь ГаллерворденаШпатца, липофусциноз, болезнь Пика, кортикобазальную дегенерацию, болезнь аргирофильных зерен (AGD), болезнь Гентингтона, и фронтотемпоральную лобарную дегенерацию.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить таупатию. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может индуцировать одну или несколько активностей програнулина у индивидуума с таупатией. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с таупатией.
Рассеянный склероз.
Рассеянный склероз (PC) также может называться диссеминированным склерозом или диссеминированным энцефаломиелитом. PC представляет собой воспалительное заболевание, при котором повреждаются жирные миелиновые оболочки вокруг аксонов головного и спинного мозга, что приводит к демиелинизации и рубцеванию, а также широкому спектру признаков и симптомов.
Симптомы PC включают, без ограничений, изменения ощущений, такие как потеря чувствительности или покалывание; колющую боль или онемение, такие как гипестезия и парестезия; мышечную слабость; клонус; мышечные спазмы; трудности при движении; осложнения с координацией и равновесием, такие как атаксия; проблемы с речью, такие как дизартрия, или с глотанием, такие как дисфагия; проблемы зрения, такие как нистагм, ретробульбарный неврит, включая фосфен (phosphenes), и диплопия; усталость; острую или хроническую боль; и проблемы с мочевым пузырем и кишечником; когнитивные нарушения разной степени; эмоциональные симптомы депрессии или нестабильное настроение; феномен Утхоффа, который представляет собой обострение наблюдающихся симптомов под воздействием температур, превышающих обычную температуру окружающей среды; и симптом Лермитта, который представляет собой электрическое ощущение, пробегающее по спине при сгибании шеи.
В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить рассеянный склероз. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может индуцировать одну или несколько активностей програнулина у индивидуума с рассеянным склерозом. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с рассеянным склерозом.
Глаукома и макулярная дегенерация.
Глаукома описывает, без ограничений, группу заболеваний, ккоторые характеризуются повреждением зрительного нерва, приводящим к потере зрения и слепоте. Глаукома обычно вызывается повышенным давлением жидкости (= внутриглазное давление) в передней камере глаза под роговицей. Г лаукома приводит к последовательной потере ганглиозных клеток сетчатки, которые являются важными для зрения. Возрастная макулярная дегенерация обычно поражает людей старшего возраста и в основном вызывает потерю зрения в желтом пятне, центральном поле зрения. Макулярная дегенерация вызывает, без ограничений, друзы, изменения пигментации, искажения ззрения, глазные кровотечения, атрофию, снижение остроты зрения, затуманенное зрение, центральные скотомы, сниженное цветовое зрение и пониженную контрастную чувствительность.
Без желания ограничиваться теорией укажем, что, как считается, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить глаукому и макулярную дегенерацию. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может индуцировать одну или несколько активностей програнулина у индивидуума с глаукомой или макулярной дегенерацией. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с глаукомой или макулярной дегенерацией.
Дегенеративное заболевание межпозвонковых дисков (DDD).
Дегенеративное заболевание межпозвонковых дисков (DDD) описывает, без ограничений, группу заболеваний, при которых межпозвонковый диск (IVD) подвергается значительным морфологическим, а также биомеханическим изменениям, и обычно проявляется клинически у пациентов с болью в пояснице. Дегенеративные диски типично демонстрируют дегенеративную волокнистую хрящевую ткань и кластеры хондроцитов, предполагающие репарацию. Воспаление может присутствовать или нет. Патологические данные при DDD включают протрузию, спондилолиз, и/или подвывих позвонков (спондилолистез (sponylolisthesis)) и спинальный стеноз.
Без желания ограничиваться теорией укажем, что, как считается, введение антитела против сортилина по данному изобретению может предотвращать, снижать риск, и/или лечить дегенеративное забо
- 90 046146 левание межпозвонковых дисков. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может индуцировать одну или несколько активностей програнулина у индивидуума с дегенеративным заболеванием межпозвонковых дисков. В некоторых вариантах реализации, введение антитела против сортилина может модулировать одну или несколько активностей сортилина у индивидуума с дегенеративным заболеванием межпозвонковых дисков.
Боль.
Боль описывает, без ограничений, нейропатическую боль, возникающую вследствие повреждения нерва, например, вследствие травмы или болезни. Такие повреждения могут включать повреждения периферических нервов и/или спинного мозга. Было показано, что антагонисты сортилина облегчают нейропатическую боль. (Richner M et al. (2019) Sci. Adv. 5: eaav9946.)
Наборы/изделия.
В данном документе предусматриваются изделия (например, наборы), содержащие антитело против сортилина, описанное в данном документе. Изделие может включать один или несколько контейнеров, содержащих антитело, описанное в данном документе. Контейнеры могут быть любой пригодной упаковкой, включая, без ограничений, флаконы, бутылки, банки, гибкую упаковку (например, запечатанные лавсановые (Mylar) или пластиковые пакеты) и т.п. Контейнеры могут быть унифицированными дозами, многодозовыми (bulk packages) (например, многодозовыми (multi-dose) упаковками) или содержать дозы меньше разовых (sub-unit).
В некоторых вариантах реализации, наборы могут дополнительно содержать второй агент. В некоторых вариантах реализации, второй агент представляет собой фармацевтически приемлемый буфер или разбавитель, включая, без ограничений, бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. В некоторых вариантах реализации, второй агент представляет собой фармацевтически активный агент.
В некоторых вариантах реализации любых изделий, изделия дополнительно включают инструкции по использованию в соответствии со способами по данному изобретению. Инструкции, как правило, включают информацию, касающуюся дозировки, схемы приема и пути введения предполагаемого лечения. В некоторых вариантах реализации, такие инструкции включают описание введения выделенного антитела по данному изобретению (например, антитела против сортилина, описанного в данном документе) для предотвращения, снижения риска или лечения индивидуума с болезнью, расстройством или поражением, выбранным из деменции, лобно-височной деменции, болезни Альцгеймера, болезни Гоше, сосудистой деменции, эпилептических припадков, дистрофии сетчатки, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, атеросклеротических болезней сосудов, нежелательных симптомов нормального старения, бокового амиотрофического склероза (БАС), длительной депрессии, болезни Паркинсона, болезни Гентингтона, таупатии, рассеянного склероза, возрастной макулярной дегенерации, глаукомы, дегенеративного заболевания межпозвонковых дисков (DDD), болезни Крейтцфельда-Якоба, нормотензивной гидроцефалии, болезни Насу-Хакола, инсульта, острой травмы, хронической травмы, волчанки, острого и хронического колита, болезни Крона, воспалительной болезни кишечника, неспецифического язвенного колита, малярии, эссенциального тремора, волчанки центральной нервной системы, болезни Бехчета, смешанной деменции, деменции с тельцами Леви, мультисистемной атрофии, синдрома Шая-Дрейджера, прогрессирующего надъядерного паралича, кортикобазальной ганглионарной дегенерации, острого рассеянного энцефаломиелита, гранулематозных расстройств, саркоидоза, болезней старения, пигментного ретинита, дегенерации сетчатки, инфекции дыхательных путей, сепсиса, глазной инфекции, системной инфекции, волчанки, артрита и заживления ран, в соответствии с любыми способами по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, болезнь, расстройство или поражение представляет собой лобно-височную деменцию. В некоторых вариантах реализации, инструкции включают инструкции по использованию антитела против сортилина и второго агента (например, второго фармацевтически активного агента).
Диагностические применения.
Выделенные антитела по данному изобретению (например, антитело против сортилина, описанное в данном документе) также пригодны для использования в диагностике. Данное описание, таким образом, предусматривает способы использования антитела по данному изобретению, или его функциональных фрагментов, в целях диагностики, таких как детектирование белка сортилина у индивидуума, или в образцах тканей, полученных от индивидуума.
В некоторых вариантах реализации, индивидуум представляет собой человека. В некоторых вариантах реализации, индивидуум представляет собой пациента, страдающего от, или с риском развития, болезни, расстройства или поражения по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации, диагностические методы предусматривают детектирование белка сортилина в биологическом образце, таком как образец биопсии, ткани, или клеток. Антитело против сортилина, описанное в данном документе, вводят в контакт с биологическим образцом и детектируют связанное антигеном антитело. Например, образец биопсии может быть окрашен антителом против сортилина, описанным в данном документе, для того, чтобы детектировать и/или провести количественное определение связанных с заболеванием клеток. Способ детектирования может включать количественное определение связанного с антигеном анти
- 91 046146 тела. Детектирование антитела в биологических образцах может проводиться любым способом, известным специалистам, включая иммунофлуоресцентную микроскопию, иммуноцитохимию, иммуногистохимию, ИФА, анализ FACS (сортировка клеток с активацией флуоресценции), иммунопреципитацию, или микро-позитронно-эмиссионную томографию. В некоторых вариантах реализации, антитело метят радиоактивным изотопом, например, 18F, и затем детектируют с использованием анализа методом микропозитронно-эмиссионной томографии. Связывание антитела можно также количественно определять у пациента неинвазивными методами, такими как позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ), рентгеновская компьютерная томография, однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ), компьютерная томография (КТ), и аксиальная компьютерная томография (АКТ).
В других вариантах реализации, выделенное антитело по данному изобретению (например, антитело против сортилина, описанное в данном документе) может быть использовано для детектирования и/или количественного определения, например, микроглии в образце головного мозга, взятом в модели доклинической болезни (например, не-человеческой модели болезни). По существу, выделенное антитело по данному изобретению (например, антитело против сортилина, описанное в данном документе) может быть полезным для оценки терапевтического ответа после лечения в модели заболевания или поражения нервной системы, такого как лобно-височная деменция, болезнь Альцгеймера, сосудистая деменция, эпилептические припадки, дистрофия сетчатки, атеросклеротические болезни сосудов, болезнь Насу-Хакола, или рассеянный склероз, по сравнению с контролем.
Данное изобретение будет более понятным со ссылками на следующие Примеры. Однако, они не должны рассматриваться как ограничивающие объем данного изобретения. Все документы, упоминаемые в данном описании, настоящим прямо включены в данный документ посредством ссылок.
Примеры
Примеры 1-3 описывают получение вариантов антитела против человеческого сортилина, S-60, с созревшей аффинностью, и характеризацию этих вариантов не только по их аффинности связывания SORT1, но также по их биологической активности в снижении экспрессии SORT1, повышении секреции PGRN, и блокировании связывания PGRN-SORT1. Неожиданно было обнаружено, что повышенная биологическая активность не обязательно коррелирует с повышенной аффинностью.
Пример 1. Получение вариантов S-60 и измерение аффинности связывания SORT1.
Целью следующего Примера было получение вариантов антитела против человеческого сортилина, S-60, с созревшей аффинностью, и характеризация связывания антител с созревшей аффинностью с человеческим сортилином (SORT1).
Варианты S-60 с созревшей аффинностью.
Были получены антитела против человеческого сортилина (SORT1) с созревшей аффинностью и измерено их связывание с SORT1. Антитело против SORT1, S-60, а также S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-5, S-60-6, S-60-7, S-60-8, и S-60-9 были описаны в WO2016164637. Последовательности VH и VL S60-9 и S60 в WO2016164637 являются идентичными, и S-60 будет использоваться в данном документе по отношению к антителу. Последовательности VH и VL S-60-5, S-60-6 и S-60-7 в WO2016164637 идентичны, и S-60-7 будет использоваться в данном документе по отношению к антителу. Было обнаружено, что S-60 является как сильным регулятором, понижающим уровни SORT1, так и сильным блокатором связывания между SORT1 и PGRN (см., например, табл. 8-10 и фиг. 6A и 10D в WO2016164637). Поэтому S-60 был выбран для дальнейшего созревания аффинности.
Направленные против SORT1 варианты S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13, S-60-14, S-60-15, S-6016, S-60-18, S-60-19, и S-60-24 были получены, как описано ниже.
Продуцирование вариантов S-60 с созревшей аффинностью.
Антитело S-60 против SORT1 имело созревшую аффинность. Вкратце, были созданы диверсифицированные библиотеки антитела в дрожжах для каждого первичного исходного антитела. Многообразие в первом раунде созревания аффинности создавали путем использования стандартных методик молекулярного клонирования для объединения исходной тяжелой цепи HVR-H3 и легкой цепи (LC) с заданным генетическим разнообразием в областях HVR-H1 и HVR-H2 тяжелой цепи (HC) (названных оптимизацией H1/H2). Для второго раунда созревания аффинности, оптимизировали последовательности как вариабельной области тяжелой цепи (VH), так и вариабельной области легкой цепи (VL), с особым фокусом на HVR-H3.
Селекционное давление, используемое для скрининга библиотеки, включало равновесное титрование антигена человеческого SORT1, конкурентную кинетику Fab исходного антитела, и использование деселекции реагента полиспецифичности. Затем использовали метод FACS-проточной цитометрии для визуализации и выбора антител, с использованием стандартных методик (см., например, Chao et al. Nature Protocols, 2006). Желательную популяцию затем отбирали для проведения дополнительных раундов селекции.
Анти-SORT! антитела с созревшей аффинностью очищали следующим образом: клоны выращивали до насыщения и затем индуцировали в течение 48 ч при 30°C со встряхиванием. После индукции, дрожжевые клетки осаждали центрифугированием и супернатанты собирали для очистки. Иммуноглобулины очищали с использованием колонки с белком А и элюировали уксусной кислотой, pH 2,0. Fab
- 92 046146 фрагменты были получены путем гидролиза папаином и очищены на аффинной матрице CaptureSelect IgG-CH1 (LifeTechnologies).
Измерение аффинности связывания с SORT 1.
Антитело против SORT1 S-60 и его варианты с созревшей аффинностью тестировали и сравнивали с помощью анализа связывания SORT1. Для анализа связывания, стабильные клетки HEK293T, экспрессирующие человеческий SORT1, собирали путем трипсинизации, промывали PBS (фосфатно-солевым буфером), подсчитывали и высевали на 96-луночные планшеты с U-образным дном по 1x105 клеток/лунку. Планшеты центрифугировали при 1400 об/мин в течение 3 минут и добавляли первичные анти-SORTI или контрольные антитела в буфере для FACS (PBS+2 FBS (сыворотка плода коровы)) и инкубировали на льду в течение одного часа. Клетки затем центрифугировали, как описано ранее, и промывали трижды буфером для FACS. Клетки затем инкубировали с конъюгированным вторичным антителом против человеческого APC (BD Biosciences) в буфере для FACS в течение 30 минут на льду. Клетки снова промывали три раза буфером для FACS и анализировали с помощью BD FACS Canto или проточного цитометра Intellicyt. Связывание измеряли как медианную флуоресцентную интенсивность (MFI) в канале PE популяции GFP-положительных клеток.
Результаты.
Аффинности связывания анти-SORT1 антитела с SORT1 приведены ниже в табл. 1. Все антитела тестировали на каркасе huIgG1.
* Примечание: значения KD представляют собой среднее для двух экспериментов.
Анти-SORTI антитела S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8, S-60-10, S-60-11, S-60-13, S-60-15, S-60-16, S60-19, и S-60-24 продемонстрировали значимо повышенную аффинность связывания с SORT1 по сравнению с S-60. В частности, S-60-8 и S-60-15 продемонстрировали наивысшие аффинности связывания с SORT1 из протестированных вариантов, с 2,46- и 2,05-кратно повышенными значениями, соответственно, по сравнению с аффинностью связывания исходного антитела, S-60.
Пример 2. Влияние вариантов S-60 на экспрессию SORT1 и секрецию PGRN.
Целью следующего Примера было охарактеризовать влияние вариантов антитела S-60 человека против SORT1 с созревшей аффинностью на экспрессию SORT1 и внеклеточные уровни програнулина (PGRN).
Анализы экспрессии SORT1 и секреции PGRN.
Варианты S-60 со зрелой аффинностью были получены, как описано в примере 1, и затем подвергнуты скринингу методом FACS на их способность снижать экспрессию SORT1 и повышать внеклеточные уровни PGRN. Для оценки эффекта анти-SORT1 антител на экспрессию SORT1 и секрецию PGRN, клетки U251, которые эндогенно экспрессируют SORT1 и секретируют PGRN, инкубировали с антителом S-60 против SORT1 и вариантами с созревшей аффинностью. Уровни клеточной поверхности SORT1 при разных концентрациях антитела измеряли методом FACS следующим образом: антитело S-60 против
- 93 046146
SORT1 и варианты с созревшей аффинностью добавляли к клеткам U251, посеянным при 3х103 клеток/лунку в 96-луночные планшеты, с серийными разбавлениями от 0,023 нМ до 150 нМ. Через 72 ч, клетки собирали с трипсином, промывали PBS и метили конъюгированным с Dylight-650 анти-SORT1 антителом S-2-11 (описанным в WO2016164637) для количественного определения уровней остаточного белка SORT1. После инкубации клеток с 5 мкг/мл S-2-11, конъюгированного с DyLight-650 (Invitrogen) в течение одного часа на льду, клетки промывали три раза в PBS+ 2 FBS и связывание определяли количественно с использованием FACSCanto™ или проточного цитометра Intellicyt как медианную интенсивность флуоресценции (MFI) APC.
Количество PGRN, секретируемого в клеточный супернатант на протяжении 72 ч, измеряют методом стандартного ИФА следующим образом: собирали клетки и собирали среду; концентрацию PGRN в образцах среды измеряли с использованием набора Duoset для ИФА человеческого PGRN фирмы R&D Systems, в соответствии с инструкциями производителя. Данные анализировали в программах Microsoft Excel и GraphPad Prism.
Результаты.
Полумаксимальная эффективная концентрация (EC50) понижающей регуляции (DR) уровней SORT1 клеточной поверхности для каждого из протестированных вариантов S-60 приведена в табл. 2. Снижение экспрессии (DR) SORT1 определяли количественно для каждого протестированного варианта S-60 и выражали в процентах от контроля (необработанные клетки) (табл. 2-4). Дополнительно, определяли количественно уровень внеклеточной секреции PGRN и выражали в виде кратности изменений по сравнению с необработанным контролем, как указано в табл. 2-4. Результаты независимых экспериментов приведены в отдельных табл. (табл. 2-4). Все антитела тестировали на каркасе huIgG1 WT (дикого типа).
Таблица 2
Процент снижения экспрессии (DR) SORT1 и секреция PGRN для S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7 и S-60-8
Обозначение антитела ЕС50 снижения экспрессии (М) Снижение экспрессии при 0,6 нМ антитела (IgG) Секреция PGRN (кратность по сравнению с контролем) 0,62 или 0,63 нМ антитела (IgG)
S-60 6.81Е-10 29,3 1,38
S-60-1 2.73Е-10 50,4 1,60
S-60-2 4.20Е-10 40,3 1,75
S-60-3 2.69Е-10 43,0 1,77
S-60-4 4.18Е-10 39,6 1,61
S-60-7 4.47Е-10 32,6 1,40
S-60-8 5.76Е-10 32,0 1,54
Таблица 3
Процент снижения экспрессии (DR) SORT1 и секреция PGRN для S-60, S-60-3, S-60-24, S-60-15, S-60-16, S-60-18 и S-60-19
Обозначение антитела Снижение экспрессии при 1,25 нМ антитела (IgG) Секреция PGRN (кратность по сравнению с контролем), 0,63 нМ антитела (IgG)
S-60 40,17 1,11
S-60-3 61,50 1,32
S-60-24 65,20 1,35
S-60-15 60,92 1,42
S-60-16 70,14 1,42
S-60-18 51,33 1,13
S-60-19 55,46 1,35
- 94 046146
Таблица 4
Процент снижения экспрессии (DR) SORT1 и секреция PGRN для S-60-24, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13 и S-60-14
Обозначение антитела Снижение экспрессии при 0,63 нМ антитела (IgG) Секреция PGRN (кратность по сравнению с контролем), 0,63 нМ антитела (IgG)
S-60-24 81,48 1,62
S-60-10 85,41 1,85
S-60-11 88,76 1,89
S-60-12 87,38 1,89
S-60-13 82,33 1,77
S-60-14 80,47 1,81
В первом эксперименте с анализом EC50 снижения экспрессии SORT1, процента снижения экспрессии SORT1 при использовании насыщающей концентрации антитела, равной 0,6 нМ IgG, и секреции PGRN при использовании насыщающей концентрации антитела, равной 0,62 или 0,63 нМ IgG, были протестированы следующие варианты: S-60, S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, и S-60-8. Как указано в табл. 2, S-60-3 продемонстрировал наименьшее EC50 снижения экспрессии (0,269 нМ) и наивысшую секрецию PGRN, в 1,77 раза больше по сравнению с контролем, и лучше, чем у S-60, который продемонстрировал увеличение в 1,38 раза по сравнению с контролем. При использовании 0,6 нМ IgG, S-60-1 продемонстрировал наиболее значительный эффект на экспрессию SORT1 протестированных вариантов, снижая экспрессию SORT1 на 50,4% по сравнению с контролем, в то время как S-60 снижал экспрессию SORT1 на 29,3%.
В следующем эксперименте, процент снижения экспрессии при использовании насыщающей концентрации антитела, равной 1,25 нМ IgG, и секрецию PGRN при использовании насыщающей концентрации антитела, равной 0,63 нМ IgG, проанализировали для следующих вариантов: S-60, S-60-3, S-6024, S-60-15, S-60-16, S-60-18, и S-60-19. Как указано в табл. 3, как S-60-15, так и S-60-16 продемонстрировали наивысшие уровни внеклеточной секреции PGRN с 1,42-кратным увеличением по сравнению с контролем, что превышало показатели S-60, который продемонстрировал 1,11-кратное увеличение по сравнению с контролем. Действительно, эти два варианта также значительно снижали экспрессию SORT1 по сравнению с S-60, понижая экспрессию SORT1 на 60,92% и 70,14%, соответственно, по сравнению с контролем, в то время как S-60 снижал экспрессию SORT1 всего на 40,17%.
В третьем эксперименте, анализировали процент снижения экспрессии при использовании насыщающей концентрации антитела, равной 0,63 нМ IgG, и секрецию PGRN при использовании насыщающей концентрации антитела, равной 0,63 нМ IgG, для следующих вариантов: S-60-24, S-60-10, S-60-11, S60-12, S-60-13 и S-60-14. Как указано в табл. 4, S-60-11 и S-60-12 продемонстрировали наивысшую величину внеклеточной секреции PGRN с 1,89-кратным увеличением по сравнению с контролем. S-60-11 также продемонстрировал наивысшее снижение экспрессии SORT1 при 0,63 нМ IgG, уменьшая экспрессию SORT1 на 88,76% по сравнению с контролем.
Выводы.
Как указано в табл. 1 в примере 1, S-60-8 и S-60-15 продемонстрировали наивысшие аффинности связывания с SORT1 по сравнению с S-60 и другими S-60 протестированными вариантами, с наименьшими значениями KD, равными 4,68Е-1ОМ и 5,60E-10, соответственно. Однако, при сравнении с конкретным вариантом, S-60-3, имеющим более высокое значение KD, равное 8,56Е-1ОМ (табл. 1), S-60-8 продемонстрировал меньшее увеличение секреции PGRN (табл. 2), в то время как S-60-15 продемонстрировал большую кратность увеличения секреции PGRN, чем S-60-3 (табл. 3). Дополнительно, S-60-8 (при насыщающей концентрации, равной 0,6 нМ IgG) продемонстрировал меньший процент снижения экспрессии SORT1 (табл. 2) по сравнению с S-60-3 и S-60-15 (при насыщающей концентрации, равной 1,25 нМ IgG), которые уменьшали экспрессию SORT1 на 61,50% и 60,92%, соответственно (табл. 3). Таким образом, S-60-15 продемонстрировал лучшие результаты, чем S-60-3, по отношению к повышению секреции PGRN, и показал схожий с S-60-3 эффект снижения уровней клеточной поверхности SORT1, в то время как результаты для S-60-8 были хуже, чем для S-60-3, по показателям увеличения секреции PGRN и снижения уровней клеточной поверхности SORT1.
Результаты этого исследования показывают, что относительную эффективность вариантов антиSORT1 антитела S-60 по показателям снижения экспрессии SORT1 или увеличения секреции PGRN нельзя спрогнозировать по их относительной аффинности связывания с сортилином.
Кроме того, S-60-15 продемонстрировал наибольшее увеличение секреции PGRN по сравнению с S60 и определенными вариантами S-60 (табл. 3, последняя колонка), включая S-60-3. S-60-3, в свою очередь, продемонстрировал повышенную секрецию PGRN по сравнению с S-60-1, -2, -4, -7, и -8 (табл. 2, последняя колонка). Таким образом, S-60-15 представляет собой эффективное антитело для увеличения
- 95 046146 секреция PGRN по сравнению с этими вариантами S-60. Способность увеличивать секрецию PGRN является важным свойством при выборе терапевтического антитела для лечения болезней, таких как ЛВД и другие патологии, в которых дефицит PGRN играет роль непосредственной причины. Такое антитело будет полезно для восстановления уровней PGRN до, или близко к, уровням дикого типа, тем самым излечивая болезнь. Кроме того, это свойство является важным фармакодинамическим параметром при оценке активности антитела in vivo (см. ниже, пример 5).
Пример 3. Варианты S-60 блокируют связывание PGRN с SORT1.
Целью следующего Примера было охарактеризовать влияние вариантов антитела S-60 против SORT1 человека с созревшей аффинностью на связывающее взаимодействие между SORT1 и природным лигандом PGRN.
Анализ блокирования SORT1-PGRN.
Была также протестирована способность вариантов S-60 блокировать связывание PGRN с SORT1. Рекомбинантный человеческий PGRN (PGRN) (Adipogen) биотинилировали с помощью набора EZ-Link Micro NHS-PEG4 фирмы ThermoScientific/Pierce в соответствии с инструкциями производителя. Стабильная клеточная линия, экспрессирующая полноразмерный немеченый человеческий SORT1 (SORT1) была получена путем вирусной инфекции клеток HEK293T и положительной селекции гигромицином (специальный проект Genscript). В качестве контрольных клеток использовали исходные клетки HEK293T.
Экспрессирующие SORT1 клетки или контрольные клетки собирали и промывали PBS. Добавляли биотинилированный человеческий PGRN в PBS+2% FBS с титрованными анти-SORT1 антителами или контрольными человеческими антителами изотипа IgG1 или без них и инкубировали на льду в течение 2 ч. После промывки клеток 3 раза в PBS+2% FBS, клетки инкубировали в стрептавидине-APC (BD Biosciences, 1:100) на льду в течение 30 мин. Затем клетки снова промывали, ресуспендировали в PBS+2% FBS и анализировали на проточном цитометре FACSCanto™ (BD Biosciences, Mississauga, ON). Связывание PGRN измеряли как медианную интенсивность флуоресценции (MFI) APC в популяции клеток, экспрессирующих SORT1. Связывание биотинилированного PGRN с SORT1, экспрессируемым на клетках HEK293T, измеряют методом FACS в отсутствие или в присутствии антитела S-60 и его вариантов.
Результаты.
Полумаксимальная эффективная концентрация (EC50) для блокирования связывания PGRN с SORT1 для каждого из протестированных вариантов S-60 приведена в табл. 5-7. Дополнительно, максимальный уровень блокирования PGRN с SORT1 определяли количественно и выражали в процентах от максимального блокирования, достигнутого при использовании насыщающей концентрации, равной 50 нМ IgG или 150 нМ IgG (табл. 5-7). Независимые эксперименты приведены в отдельных таблицах ниже.
Таблица 5
Блокирование связывания програнулина (PGRN) с SORT1, экспрессируемым на клетках HEK293T, ____________для S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8 и S-60____________
Обозначение антитела ЕС50 блокирования связывания PGRN (нМ) Блокирование связывания PGRN (% от максимального при 150 нМ антитела (IgG))
S-60-1 5,986 95,2
S-60-2 7,509 94,5
S-60-3 0,733 95,5
S-60-4 0,584 95,7
S-60-7 0,944 96,5
S-60-8 0,985 95,6
S-60 0,751 95,9
- 96 046146
Таблица 6 Блокирование связывания програнулина (PGRN) с SORT1, экспрессируемым на клетках HEK293T, _________для S-60, S-60-3, S-60-24, S-60-15, S-60-16, S-60-18 и S-60-19_________
Обозначение антитела EC50 блокирования связывания PGRN (M) Блокирование связывания PGRN (% от максимального при 50 нМ антитела (IgG))
S-60 2.20E-09 90,13
S-60-3 1.76E-09 90,44
S-60-24 1.11E-09 88,94
S-60-15 1.22E-09 90,74
S-60-16 1.20E-09 90,44
S-60-18 2.27E-09 89,33
S-60-19 1.53E-09 90,15
Таблица 7 Блокирование связывания програнулина (PGRN) с SORT1, экспрессируемым на клетках HEK293T, ___________для S-60-24, S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-13 и S-60-14___________
Обозначение антитела EC50 блокирования связывания PGRN (M) Блокирование связывания PGRN (% от максимального при 50 нМ антитела (IgG))
S-60-24 4.70E-10 95,64
S-60-10 4.60E-10 93,84
S-60-11 4.10E-10 94,97
S-60-12 6.10E-10 93,26
S-60-13 5.60E-10 93,83
S-60-14 6.00E-10 93,67
В первом эксперименте, анализирующем EC50 блокирования связывания PGRN и процент блокирования связывания програнулина (PGRN) с SORT1 при насыщающей концентрации 150 нМ IgG, были протестированы следующие варианты: S-60-1, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7, S-60-8, и S-60. Как указано в табл. 5, S-60-4 продемонстрировал наименьшее значение EC50 (0,584 нМ), достигая 95,7% блокирования связывания програнулина (PGRN) с SORT1. Из проанализированных вариантов, S-60-7 продемонстрировал наибольшее снижение связывания PGRN, блокируя 96,5% связывания програнулина (PGRN) с SORT1, хотя и продемонстрировал более низкую эффективность блокирования связывание PGRN (более высокое значение EC50), чем S-60 и варианты S-60-3 и S-60-4.
В следующем эксперименте, анализирующем локирование связывания PGRN EC50 и процент блокирования связывания програнулина (PGRN) с SORT1 при насыщающей концентрации 50 нМ IgG, были протестированы следующие варианты: S-60, S-60-3, S-60-24, S-60-15, S-60-16, S-60-18, и S-60-19. Как указано в табл. 6, S-60-24, S-60-15 и S-60-16 продемонстрировали наименьшие EC50 по сравнению с S-60, со значениями в диапазоне от 1,11 нМ до 1,22 нМ. Кроме того, вариант S-60-15 продемонстрировал наибольшую активность по сравнению с S-60, достигая 90,74% блокирования связывания програнулина (PGRN) с SORT1.
В третьем эксперименте, были протестированы следующие варианты: S-60-24, S-60-10, S-60-11, S60-12, S-60-13 и S-60-14. Как указано в табл. 7, S-60-11 продемонстрировал наименьшее EC50 (0,410 нМ), достигая 94,97% блокирования связывания програнулина (PGRN) с SORT1. Из проанализированных вариантов, S-60-24 продемонстрировал наибольшее снижение связывания PGRN, блокируя 95,64% связывания програнулина (PGRN) с SORT1.
Выводы.
Как указано в табл. 1 в примере 1, как S-60-8, так и S-60-15 продемонстрировали наивысшие аффинности связывания с SORT1 по сравнению с S-60 и другими тестируемыми вариантами S-60, причем S-60-8 имел наивысшую аффинность к SORT1. Однако, при сравнении с S-60, S-60-8 продемонстрировал более низкую эффективность блокирования связывания с PGRN (более высокое значение EC50 по сравнению с S-60) (табл. 5), в то время как S-60-15 продемонстрировал более высокую эффективность блокирования связывания с PGRN (пониженное значение EC50 по сравнению с S-60) (табл. 6). Кроме того, S
- 97 046146
60-8 продемонстрировал меньший процент максимального блокирования связывания програнулина (PGRN) с SORT1 по сравнению с S-60 (табл. 5), в то время как S-60-15 продемонстрировал более высокий процент максимального блокирования связывания програнулина (PGRN) с SORT1 по сравнению с S60 (табл. 6). Таким образом, S-60-15 продемонстрировал лучшие результаты, чем S-60-8, по сравнению с S-60 по показателям значения EC50 при блокировании связывания PGRN с SORT1 и максимальному проценту блокирования связывания PGRN с SORT1, несмотря на то, что S-60-8 показал более высокую аффинность связывания с SORT1 по сравнению с S-60-15.
Таким образом, результаты этих исследований неожиданно показали, что относительную эффективность вариантов анти-SORT1 антитела S-60 по показателю блокирования степени связывания програнулина (PGRN) с SORT1 нельзя предсказать по их относительной аффинности связывания с SORT1.
Пример 4. Стабильность S-60-15 и анализ методом стресс-тестов.
Целью следующего Примера было определение стабильности S-60-15, представляющего собой вариант S-60 с созревшей аффинностью, описанный в предыдущих Примерах, в разных условиях стресстестов.
Стабильность терапевтического антитела важна для клинической эффективности. В процессе производства, хранения и in vivo введения, терапевтические антитела подвержены риску деградации различными путями. Факторы, ответственные за такую деградацию, остаются малоизученными. Учитывая, что S-60-15 продемонстрировал высокую аффинность связывания с SORT1 (см. Пример 1), эффективно снижал уровни SORT1 клеточной поверхности и повышал внеклеточную секрецию PGRN (см. Пример 2), а также существенно блокировал связывание PGRN с SORT1 (см. Пример 3), и неожиданно прошел эти функциональные тесты с лучшими результатами, чем S-60-8, который продемонстрировал более высокую аффинность к SORT1, S-60-15 был дополнительно проанализирован на стабильность.
pH- и температурное стресс-тестирование.
Для измерения стабильности аминокислотных остатков в S-60-15, образцы S-60-15 подвергали воздействию стрессовых условий pH и температуры для имитации стрессовых условий, которые могут возникать при производстве, хранении, и in vivo введении. Вкратце, индивидуальные образцы S-60-15 подвергали стресс-тестированию при pH 3,5 или pH 5,0 и при 40°C или 50°C. Образцы тестировали в разные моменты времени - 0, 1, 3 и 5 дней для двух условий pH, и 0, 7, 14 и 30 дней для условий высокотемпературного стресса - путем обработки DTT (дитиотреитол) и IAA (индолилуксусная кислота) с последующим гидролизом трипсином. Гидролизованные образцы анализировали методом жидкостной хроматографии с масс-спектроскопическим детектированием с помощью Waters ACQUITY UPLC, сопряженного с масс-спеектрометром Xevo G2-XS QTOF с использованием колонки BEH C18. Результаты приведены в табл. 8.
Таблица 8
Таблица стехиометрического процентного содержания (% каждого пептида с модификацией). Deamid (деамидирование); Oxid (окисление); CAM (карбамидометил)
S-60-15 Пептид Модификация Без стресс pH5 (10 pH5 dl pH5 (13 pH5 d5 pH3,5 dO pH3:5 dl pH3,5 (13 pH3,5 d5 T4G d7 T40 dl4 T40 (130 T50 d7 T50 dl4 T50 d30
NQFSLK (SEQ ID NO:87) Deamid 1,3 1,5 1,5 1,5 0,9 1,5 1,4 1,5 1,4 1,3 1,3 1,3 1,3 1,3 1,4
QGYYGMDVWGQGTTVTVSSASTK (SEQIDNO:88) Oxid M(l) 62 6,8 6,2 6,6 8,8 6,2 6,8 6,6 6,4 5,7 5,1 5,6 5,1 5,4 1,3
QGYYGMDVWGQGTTVT VSSASTK (SEQ ID NO :88) Deamid Q(i) θ,5 0,6 0,6 0,6 0,7 0,6 0,6 0,6 0,6 0,8 1,0 1,0 1,4 2,3 3,6
DYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSWTV PSSSLGIK (SEQ ID NO:89) Deamid N(l) Oxid W(l) 3,3 3,3 3,3 3,3 3,8 3,4 3,4 3,4 3,2 3,2 3,1 0,0 3,2 3,1 3,2
DYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSWTV PSSSLGIK (SEQ ID NO:89) Deamid N(l) 0,3 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,3 0,3 0,4 0,5 0,8 0,7 1,0 1,5
DTLMISR (SEQ ID NO:90) Oxid M(l) 3,1 3,6 3,4 3,5 3,5 3,6 3,1 3,4 3,3 4,0 4,4 5,8 5,2 7,2 12,2
TPEVTCVWDVSQEDPEV QFNWYVDGVEVHNAK (SEQIDNO:91) Deamid N(l) 1,4 1,1 1,2 1,3 1,7 1,5 1,2 1,4 1,3 0,2 0,3 1,3 1,1 0,2 5,2
WSVLTVLHQDWLNGK (SEQIDNO:92) Deamid N(l) 7,8 7,2 6,7 6,9 6,5 7,0 6,9 7,0 6,8 8,1 8,4 9,2 9,3 12,6 12,0
EPQVYTLPPSQEEMTK (SEQIDNO:93) Oxid. M(l) 0,3 0,3 0,0 0,0 1,5 0,2 0,4 0,4 0,5 0,8 0,0 0,0 0,8 1,3 1,1
- 98 046146
NQVSLTCLVK (SEQ ID NO:94) Deamid N(l) CAM €(1) 1,9 2,1 2,0 2,0 1,7 2,0 2,0 2,0 1,9 1,9 2,1 1,9 2,1 2,5 2,0
GFYPSDIAVEWESNGQPENNYK (SEQIDNO:95) Deamid N(l) V 4,9 5,1 5,0 6,4 5,0 5,0 5,2 4,9 7,0 8,9 9,6 H,1 19,0 45,9
WQEGNVFSCSVMHEALH NHYTQK (SEQ ID NO:96) Deamid N(l) CAM €(1) 3,8 4,0 4,0 4,0 4,4 3,9 3,0 4,0 3,9 3,7 3,7 3,9 3,9 4,4 6,7
WQEGNVFSCSVMHEALH NHYTQK (SEQ ID NO:96) CAM €(1), Oxid. M(l) 1,6 1,8 1,8 1,8 1,9 1,8 1,8 1,9 1,8 1,8 1,9 2,6 2,2 2,6 5,1
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCR (SEQIDNO:97) CAM €(1), Oxid. M(l) 0,7 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,7 0,8 0,7 0,8 0,8 1,1 0,8 0,8 2,0
SSQSLLR (SEQ ID NO:98) Deamid QCD 6,8 6,1 5,2 5,4 6,5 6,0 5,4 6,7 5,8 7,3 6,9 7,0 6,8 7,2 6,6
SNGYNYLDWYLQKPGQSP QLLIYLGSNR (SEQ ID NO:99) Deamid N(l) 11,2 9,3 9,4 9,3 12,4 9,8 9,7 9,8 9,6 15,7 2O?3 21,9 30,7 45,4 65,6
AEAEDVGVYYCMQQQEAP LTFGGGTK (SEQ ID NO: 100) CAM C(l), Oxid. M(l) 0,5 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 0,5 0,6 1,1 0,8 1,1 2,1
SGTASWCLLNNEYPR (SEQ ID NOT 01) Deamid N(l) 2,6 2,8 2,9 2,8 3,1 2,8 2,7 2,8 2,7 2,6 2,7 2,5 2,6 3,0 3,4
VDNALQSGNSQESVTEQDSK (SEQIDNO:102) Deamid N(l) 0,3 0,4 0,4 0,4 0,4 0,3 0,4 0,4 0,4 0,5 0,5 0,5 0,6 0,8 1,3
Были идентифицированы аминокислоты, потенциально подверженные посттрансляционным модификациям (PTM) при стрессе, и соответствующие пептидные фрагменты, полученные из подвергнутых стрессу образцов, отслеживали кинетически. Результаты подтвердили, что два сайта аспарагин-глицин, один в Fc-области тяжелой цепи (SEQ ID NO: 11) и один в Fab-области легкой цепи (SEQ ID NO: 15) S60-15, были наиболее восприимчивыми к PTM, демонстрируя 45,9% и 65,6% деамидирования, соответственно, после хранения при 50°C в течение 30 дней. Ни одна другая посттрансляционная модификация или сайт расщепления не демонстрировали значительных посттрансляционных модификаций или деградации при стресс-тестах.
Деамидирование сайта аспарагина (N33).
Никакое деамидирование в Fc-области тяжелой цепи S-60-15 не должно влиять на аффинность связывания S-60-15 с SORT1, поскольку этот участок не взаимодействует непосредственно с SORT1. Однако, сайт аспарагина (N33) в Fab-области S-60-15 расположен в HVR-L1 (SEQ ID NO: 8), участке, определяющем комплементарность легкой цепи, который участвует в связывании антигена. Таким образом, деамидирование сайта аспарагина (N33) в Fab-области S-60-15 может влиять на аффинность связывания S-60-15 с SORT1. При деамидировании, сайт аспарагина (N33) в Fab-области S-60-15 подвергается замене Asn на Asp/u30-Asp.
Сайт-направленный мутагенез был использования для тестирования эффектов деамидирования сайта аспарагина (N33) в Fab-области S-60-15 и потенциальной аминокислотной замены на снижение вероятности деградации и деамидирования и вызываемых этим производственных последствий. Было получено семнадцать разных точковых мутаций в положении N33 HVR-L1 S-60-15 huIgG1 и подвергнуто секвенированию с использованием стандартных процедур. Аллотип Glm3 или Glm(f) с мутациями L234A/L235A/P331S (мотив LALAPS) использовали в качестве фонового уровня (Jefferis R and Lefranc M-P, Mabs, 2009 Jul-Aug; 1(4): 332-338). Точковые мутации LALAPS предназначены для повышения общей безопасности путем минимизации эффекторных функций, таких как связывание Fc-гаммарецептора, активация комплемента, и опосредованная антителами клеточная цитотоксичность (ADCC). Уменьшение связывания Fc-гамма-рецептора, активация комплемента и ADCC в результате мутаций LALAPS наблюдались в различных экспериментах (данные не приведены). Данные интерферометрии биослоев (BLI) собирали при частоте 5 Гц при 25°C на инструменте Pall ForteBio Octet RED96. Анализ данных проводили с использованием прикладной программы анализа данных ForteBio Data Analysis Software, version 9.0. Стандартный кинетический буфер (PBS, 0,1 BSA, 0,02 Tween-20, pH 7,2) использовали для анализа и для приготовления реагентов. Для всех анализов, кончики датчиков уравновешивали в буфере перед проведением анализа.
Для первичного скрининга по скорости диссоциации, мутанты S-60-15 LALAPS N33 и N33X (1
- 99 046146 мкг/мл, время загрузки 300 с) захватывали на биодатчиках Anti-Human IgG Fc Capture Dip and Read Biosensors (Pall ForteBio, Menlo Park, CA). Затем связывали с захваченным на поверхности анти-SORT1 20 нМ меченого гистидином человеческого SORT1 (R&D Systems, Minneapolis, MN) (время связывания 200 с, время диссоциация 1200 с). Результирующий сигнал BLI получали в виде разности с ответом эталонного датчика (1 мкг/мл S60-15+0 нМ SORT1). Контроль без лиганда (0 мкг/мл IgG+20 нМ SORT1) продемонстрировал отсутствие измеримого неспецифического связывания антигена с поверхностью кончика датчика. Применяли полную и локальную аппроксимацию с использованием модели взаимодействия 1: 1 для получения констант скорости ассоциации и диссоциации (ka и kd, соответственно) для каждого мутанта N33. Константы аффинности (KD) рассчитывали как соотношение kd/ka. Были выполнены разные аминокислотные замены в положении N33 и протестированы на связывание с SORT1 путем скрининга по константе диссоциации (в условиях отсутствия стресса), как указано в табл. 9.
Таблица 9
Расчетные ka, kd и KD для связывания мутантов S-60-15 N33X с SORT1
Варианты S-60-15 ka (M c)1 kd (c1) KD (nM)
S-60-15 [N33 (дикого типа (wt))] 5.12E+0 5 1.41E-04 270
S-60-15.1 [N33T] 4.7E+05 1.67E-04 344
S-60-15.2 [N33S] 5.63E+0 5 2.47E-04 440
S-60-15.3 [N33G] 4.98E+0 5 4.11E-04 825
S-60-15.4 [N33R] 5.24E+0 5 4.60E-04 880
S-60-15.5 [N33D] 5.90E+0 5 6.10E-04 1000
S-60-15.6 [N33H] 5.48E+0 5 4.60E-04 823
S-60-15.7 [N33K] 5.63E+0 5 5.47E-04 965
S-60-15.8 [N33Q] 6.09E+0 5 6.53E-04 905
S-60-15.9 [N33Y] 5.11E+0 5 6.75E-04 1285
S-60-15.10 [N33E] 6.76E+0 5 4.30E-03 2007
S-60-15.11 [N33W] 6.01E+0 5 5.79E-04 960
S-60-15.12 [N33F] 2.80E+0 8.16E-04 2910
5
S-60-15.13 [N33I] 4.91E+0 5 2.28E-04 460
S-60-15.14 [N33V] 4.45E+0 5 3.06E-04 690
S-60-15.15 [N33A] 4.93E+0 5 3.15E-04 625
S-60-15.16 [N33M] 4.95E+0 5 4.23E-04 850
S-60-15.17 [N33L] 4.12E+0 5 4.25E-04 1030
Примечание: ka, kd, и KD представляют собой средние значения для множества экспериментов.
Скрининг этой панели №3Х-мутантов показал, что антитело S-60-15.5 (N33D), которое имитирует деамидирование N33, приводило к значительному снижению связывания, с KD, равным 1000 пМ, по сравнению с 270 пМ для N33 дикого типа (wt) (табл. 9). В отличие от него, антитело S-60-15.1 (N33T) имело наилучшую аффинность удерживания S-60-15 с SORT1, демонстрируя наименьшую разницу KD с
- 100 046146 диким типом в панели (табл. 9).
Кроме того, был проведен полный кинетический анализ с использованием множества концентраций SORT1 для S-60-15.1 [N33T] в формате huIgG1 и huIgG1 LALAPS в независимом эксперименте. Кинетические данные представлены в табл. 10. Кинетические данные демонстрируют, что S60-15,1 [N33T] представляет собой высокоаффинное антитело в формате как huIgG1, так и huIgG1 LALAPS.
Таблица 10
Кинетические данные связывания , SORT1 для S-60-15.1 [N33T] в формате huIgG1 и huIgG 1 LALAP S
Обозначение антитела ка (М с)1 Me1) KD (пМ)
S-60-15.1 [N33T] 5.99Е+05 1.79Е-04 298
S-60-15.1 [N33T] LALAPS 4.79Е+05 1.27Е-04 260
Клеточное связывание и функциональность.
После этого тестировали S-60-15.1 [N33T], в формате как huIgG1, так и huIgG1 LALAPS, и S-6015.5 [N33D] на связывание с клетками и функциональность, как описано ниже.
Антитела S-60, S-60-15.1 [N33T] и S-60-15.5 [N33D] со зрелой аффинностью тестировали параллельно на связывание с человеческим SORT1, экспрессируемым на клетках HEK293T, как описано выше. Результаты представлены в табл. 11. S-60-15.1 [N33T] в формате huIgG1 или huIgG1 LALAPS продемонстрировал более высокую аффинность, чем S-60 (табл. 11), с более низким Kd и более высоким Bmax. Fcвариант, по-видимому, не влиял на аффинность, имея лишь незначительные различия в KD и Bmax между S-60-15.1 [N33T] huIgG1 и huIgG1 LALAPS. Полностью деамидированный вариант S-60-15.5 [N33D] не продемонстрировал сколько-либо значимого связывания (табл. 11, N.B. (нет связывания)) с клетками, экспрессирующими человеческий SORT1, что позволяет предположить, что амидирование остатка N33 является существенным для связывания мишени.
Таблица 11
Значения аффинности связывания клеток, измеренные методом FACS
Обозначение антитела АДнМ) Bmax (MFI)
S60 1.02 758381
S-60-15.5 [N33D] N.B. N.B.
S-60-15.1 [N33T] 0.3651 791996
S-60-15.1 [N33T] LALAPS 0.4231 792791
Клетки U251, которые эндогенно экспрессируют SORT1 и секретируют PGRN, инкубировали с антителом S-60 против SORT1, S-60-15.1 [N33T] или S-60-15.5 [N33D] в разных концентрациях, и уровни SORT1 клеточной поверхности измеряли методом FACS, как описано в примере 2. Контролем были необработанные клетки. Для количественного определения процента снижения экспрессии сортилина использовали насыщающую концентрацию IgG антитела 150 нМ. Для количественного определения секреции PGRN использовали насыщающую концентрацию IgG антитела 50 нМ. Результаты приведены в табл. 12. S-60-15.1 [N33T] в формате huIgG1 или huIgG1 LALAPS приводил к значительному снижению экспрессии SORT1 и увеличению секреции PGRN. Как уровень снижения экспрессии SORT1, так и уровень увеличения секреции PGRN значительно улучшались для S-60-15.1 [N33T] в формате huIgG1 или huIgG1 LALAPS по сравнению с S-60. S-60-15.1 [N33T] в формате huIgG1 продемонстрировал только незначительное снижение EC50 и процент снижения экспрессии SORT1, имея незначительную кратность увеличения секреции PGRN по сравнению с S-60-15.1 [N33T] в формате huIgG1 LALAPS. В отличие от этого, полностью деамидированный вариант S-60-15.5 [N33D] имел более низкие характеристики, чем S60, в каждом из этих функциональных анализов; он не продемонстрировал значимого снижения экспрессии SORT1 и имел лишь минимальные изменения уровней секретируемого PGRN.
- 101 046146
Таблица 12
Снижение экспрессии (DR) SORT1 клеточной поверхности вариантами антитела S60
Обозначение антитела EC50 (hM) % DR при 150 нМ антитела (IgG) Секреция PGRN, кратность по сравнению с контролем при 50 нМ антитела (IgG)
S-60 680,9 62,5 1,75
S-60-15.5 [N33D] n.d. (не определено) 3,4 1,22
S-60-15.1 [N33T] 72,58 69,3 2,29
S-60-15.1 [N33T] LALAPS 103,6 70,3 1,97
Связывание биотинилированного PGRN с SORT1, экспрессируемым на клетках HEK293T, измеряют методом FACS в отсутствие или в присутствии антитела S-60 против SORT1, S-60-15.1 [N33T] и S-6015.5 [N33D], как описано в примере 3. Результаты приведены в табл. 13. Насыщающую концентрацию антитела, равную 150 нМ IgG, использовали для количественного определения процента блокирования связывания програнулина (PGRN) с SORT1.
Таблица 13
Блокирование связывания PGRN с SORT1, экспрессируемым на клетках HEK293T
Обозначение антитела EC50 (hM) Процент блокирования при 150 нМ антитела (IgG)
S60 0,751 95,9
S-60-15.5 [N33D] 0,588 27,5
S-60-15.1 [N33T] 0,325 96,5
S-60-15.1 [N33T] LALAPS 0,405 96,9
Варианты S-60-15.1 [N33T], как с LALAPS, так и без него, продемонстрировали наименьшие значения EC50 и наивысший уровень блокировки связывания PGRN с SORT1 по сравнению с S-60-15.5, а также по сравнению с S-60. Таким образом, S-60-15.1 [N33T] имел лучшие результаты, чем S-60 и S-60-15.5, в блокировании связывания PGRN с SORT1.
В общем, было обнаружено, что S-60-15 подвергается значительному деамидированию в положении N33 в условиях стресса при хранении (см. табл. 8), что увеличивает вероятность деградации и приводит к последствиям для производства. Ранее описанное антитело S-60 против SORT1 и варианты S-601, S-60-2, S-60-3, S-60-4, S-60-7 и S-60-8 также содержат аспарагин в положении 33 в VL. В частности, положение сайта деамидирования N33 в сайте HVR-L1, вероятно, будет влиять на связывание S-60-15 с SORT1. S-60-15.1 [N33T], один из нескольких протестированных вариантов S-60-15, сохранял значительную аффинность связывания с SORT1 по сравнению с S-60-15 (см. табл. 9) и демонстрировал значительно повышенную аффинность связывания с SORT1 по сравнению с S-60 (см. табл. 11; сравните с S60-15 WT в табл. 1). Такое сохранение высокой аффинности связывания было неожиданным для антитела, имеющего не являющуюся предпочтительной замену в HVR-L1, потому что остатки HVR-L1 могут контактировать с антигеном. Также, неожиданно, вариант S-60-15.1 [N33T] сохранял повышенную степень снижения экспрессии SORT1, повышенную секрецию PGRN, и повышенное блокирование связывания програнулина (PGRN) с SORT1 по сравнению с S-60 (см. табл. 12 и 13). Эти результаты также были неожиданными, потому что ожидалось, что не-предпочтительная замена в последовательности HVR будет, аналогично, негативно влиять на функциональные характеристики антитела. Вместо этого, S-60-15.1 [N33T] сохраняет желательные свойства снижения экспрессии SORT1 клеточной поверхности, увеличения секреции PGRN, и блокирования связывания PGRN с SORT1, в дополнение к тому, что он более стабилен, чем ранее описанные антитела, вследствие удаления чувствительного к производственным условиям остатка (manufacturing liability) в положении 33 VL.
Пример 5. Фармакокинетика и фармакодинамика антитела против сортилина у не являющихся человеком приматов.
В этом примере определяли фармакокинетику (PK) и фармакодинамику (PD) внутривенно (IV) вводимого антитела против сортилина S-60-15.1 [N33T] LALAPS у не являющихся человеком приматов.
Материалы и методы.
Фармакокинетические и фармакодинамические исследования разовой дозы.
Для фармакокинетических исследований разовой дозы, яванским макакам вводили антитело против сортилина в виде разовой внутривенной (IV) дозы 5 мг/кг, 20 мг/кг, 60 мг/кг, или 200 мг/кг в День 0 (n=3
- 102 046146 животных на дозу). После этого у животных брали в разные моменты времени кровь и ЦСЖ для определения концентраций антитела против сортилина в плазме и цереброспинальной жидкости (ЦСЖ), необходимых для фармакокинетических измерений антитела против сортилина. Также определяли концентрацию програнулина (PGRN) и уровни сортилина (SORT1) на лейкоцитах (WBC), необходимые для фармакодинамических измерений.
Концентрации антитела против сортилина оценивали с использованием анализа ИФА со специфическими к антителу против сортилина антиидиотипическими антителами. Концентрации PGRN оценивали с помощью коммерчески доступного набора для ИФА. Уровни SORT1 на лейкоцитах анализировали с использованием ИФА, и нормировали к концентрации белка.
Результаты.
В табл. 14 приведены средние Cmax плазмы, средние ППК (площадь под кривой, AUC), и t1/2 для каждой из протестированных доз антитела против сортилина.
Таблица 14
Cmax, средние ППК и t1/2 для указанных доз антитела против сортилина (n=3 для каждой дозы)
Доза антитела Средние Стах (мкг/мл) Средние ППК (AUC) (мкг х ч/мл) t%, часов
5 мг/кг 156 2,870 4,7
20 мг/кг 697 26,500 13,3
60 мг/кг 2,570 118,000 42
200 мг/кг 7,910 366,000 73,6
Как продемонстрировано на фиг. 1A, уровни экспрессии SORT1 в лейкоцитах периферической крови снижались после введения не являющимся человеком приматам любых тестируемых доз антитела против сортилина. Более высокие дозы антитела против сортилина (60 мг/кг, 200 мг/кг) приводили к как более раннему, так и более длительному снижению уровней SORT1 в лейкоцитах периферической крови по сравнению с более низкими дозами антитела против сортилина (5 мг/кг, 20 мг/кг).
Уровни PGRN в плазме повышались у не являющихся человеком приматов, получивших разовую внутривенную инъекцию антитела против сортилина время- и дозозависимым образом (фиг. 1B). В частности, уровни PGRN плазмы повышались в 3-4 раза при Cmax, по сравнению с уровнями базовой линии, для всех тестируемых доз антитела против сортилина. Уровни PGRN плазмы оставались повышенными на протяжении более длительных периодов времени при более высоких дозах антитела. Дополнительно, повышенные уровни PGRN плазмы коррелировали с пониженными уровнями экспрессии SORT1 в лейкоцитах периферической крови.
Уровни PGRN в ЦСЖ также повышались у не являющихся человеком приматов, получивших разовую внутривенную инъекцию антитела против сортилина. Как показано на фиг. 1C, уровни PGRN ЦСЖ повышались в 2-3 раза выше базовой линии у животных, получивших 20 мг/кг, 60 мг/кг или 200 мг/кг. Как и для уровней PGRN плазмы, уровни PGRN ЦСЖ оставались повышенными на протяжении определенного времени в группах более высоких доз антитела.
В табл. 15 приведены средние Cmax ЦСЖ, средние ППК, и t1/2 для каждой из протестированных доз антитела против сортилина у не являющихся человеком приматов. Концентрации антитела против сортилина в ЦСЖ составляли в среднем около 0,1% от количества, наблюдавшегося в плазме.
Таблица 15
Фармакокинетические параметры антитела против сортилина в ЦСЖ и расчетный период __________полувыведения у не являющихся человеком приматов__________
[1] Уровень дозы Стах (МКГ/МЛ) AUCall (ч*мкг/мл) CL (мл/ч/кг) й/2, часов (суток)
5 мг/кг 20 184 20692 32,3 (1,34)
20 мг/кг 2243 35717 745 23,8(1)
60 мг/кг 6842 113573 623 38,3 (1,6)
200 мг/кг 4595 349187 1037 72,4 (3,02)
Фармакокинетические и фармакодинамические исследования с повторными дозами.
Дополнительные фармакокинетические и фармакодинамические исследования были проведены у не являющихся человеком приматов, получавших антитело против сортилина по схеме с введением повторных доз. В этих исследованиях, животным (2 самцам и 2 самкам) вводили антитело против сортилина в дозе 60 мг/кг раз в неделю в течение четырех недель. После этого определяли в различные моменты времени уровни экспрессии SORT1 в лейкоцитах периферической крови. Кроме того, определяли также
- 103 046146 уровни антитела против сортилина плазмы и ЦСЖ.
Как показано на фиг. 2A, уровни SORT1 в лейкоцитах периферической крови оставались пониженными на протяжении исследований. Уровни PGRN плазмы повышались при пиковых значениях в 5-6 раз выше уровней базовой линии (фиг. 2B). Снижение PGRN плазмы наблюдали после четвертого и последнего введения антитела против сортилина; однако, уровни PGRN плазмы оставались повышенными в 2 раза по сравнению с базовой линией. Дополнительно, уровни PGRN ЦСЖ были повышены в 3-4 раза от базовой линии (фиг. 2C).
Системная экспозиция антитела против сортилина, при оценке по средним Cmax и AUC0-168, составляла 2100 мкг/мл и 114000 мкг/млхч в День 1, и 3020 мкг/мл и 174000 мкг/млхч в День 22. Эти результаты показывают, что экспозиция в День 22 была выше, чем в День 1, указывая на некоторое накопление антитела.
Концентрация антитела против сортилина в ЦСЖ у этих животных находилась в диапазоне значений от 0,03% до 0,12% от наблюдаемых в плазме, что согласуется с распределением других антител в ЦСЖ (Pestalozzi et al., (2000) J Clin Oncol 18(11):2349-51; Petereit et al., (2009) Mult Scler 15(2):189-92).
Взятые вместе, эти результаты показывают, что вариант S-60-15.1 [N33T], несмотря на относительно короткий период полувыведения, проявляет продолжительную активность in vivo, снижая уровни SORT1 в лейкоцитах периферической крови и повышая уровни PGRN плазмы и ЦСЖ.
Кроме того, внутривенное (IV) введение S-60-15.1 [N33T] яванским макакам в ходе токсикологических исследований повторных доз продолжительностью как 4 недели, так и 26 недель, хорошо переносилось при дозах до 200 мг/кг еженедельно, и не наблюдалось нежелательных результатов, которые исключали бы возможность проведения клинических исследований у людей на основании этих и других токсикологических исследований, которые включали оценку высвобождения цитокина, смертности, веса тела, частоты и глубины дыхания, и локальной переносимости в месте инъекции. Поэтому, S-60-15.1 [N33T] является пригодным для тестирования в клинических исследованиях у людей с ЛВД и другими показаниями, как указано в данном документе.
Отсутствие неблагоприятных результатов, касающихся токсичности при введении антитела против сортилина, было неожиданным с учетом того, что сортилин выступает в роли рецептора нескольких лигандов и выполняет многочисленные функции в клеточном транспорте и сигнализации (Nykjaer, A et al., (2012) Trends Neurosci 35:261-270). Ожидалось, что из-за разнообразия лигандов и функциональных ролей сортилина, введение антитела против сортилина может вызывать нежелательные эффекты; однако антитело S-60-15.1 [N33T] хорошо переносилось во введенных дозах.
Последовательности VH-областей вариантов антитела S-60, выравнивание с S-60, и положения HVR.
S-60 (SEQ Ш NO:56)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-1 (SEQ ID NO:107)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSVRYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYHSGSTY Y60
S-60-2 (SEQ ID NO:108)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSVRYWGWIRQPPGKGLEWIGAIYPSGST YY60
S-60-3 (SEQ ID NO:109)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST YY60
S-60-4 (SEQ ID NO:110)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-7 (SEQ ID NO: 111)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-8 (SEQ ID NO: 112)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
- 104 046146
S-60-10 (SEQ ID NO:54)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-11 (SEQ ID NO:54)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST YY60
S-60-12 (SEQ ID NO:54)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-13 (SEQ ID NO:55)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-14 (SEQ ID NO:55)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-15 (SEQ ID NO:56)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-15.1 (SEQ ID NO:56)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-16 (SEQ ID NO:56)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-18 (SEQ ID NO:56)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-19 (SEQ ID NO:54)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60
S-60-24 (SEQ ID NO:56)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGST
YY60 ^^Ь1рс1ВНИВс1НИе
S-60 HVR Hl (SEQ ID NO: 1)YSISSGYYWGS-60 HVR H2 (SEQ ID NO: 2)--------------------------------------------------TIYHSGSTYY
S-60 (SEQ ID NO: 56 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT
VTVSS 122
S-60-1 (SEQ ID NO: 107 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-2 (SEQ ID NO: 108 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-3 (SEQ ID NO: 109 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT
- 105 046146
VTVSS 122
S-60-4 (SEQ ID NO: 110 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-7 (SEQ ID NO: 111 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-8 (SEQ ID NO: 112 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-10 (SEQ ID NO: 54 продолж.)
NPSLKSQVTISVDTSKNQFSLELSSVTAADTAVYYCARQGSIQQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-11 (SEQ ID NO: 54 продолж.)
NPSLKSQVTISVDTSKNQFSLELSSVTAADTAVYYCARQGSIQQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-12 (SEQ ID NO: 54 продолж.)
NPSLKSQVTISVDTSKNQFSLELSSVTAADTAVYYCARQGSIQQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-13 (SEQ ID NO: 55 продолж.)
NPSLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIQQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-14 (SEQ ID NO: 55 продолж.)
NPSLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIQQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-15 (SEQ ID NO: 56 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-15.1 (SEQ ID NO: 56 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-16 (SEQ ID NO: 56 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-18 (SEQ ID NO: 56 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-19 (SEQ ID NO: 54 продолж.)
NPSLKSQVTISVDTSKNQFSLELSSVTAADTAVYYCARQGSIQQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
S-60-24 (SEQ ID NO: 56 продолж.)
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQGSIKQGYYGMDVWGQGTT VTVSS 122
Выравнивание
S-60 HVR H2 (SEQ ID NO: 2 продолж.) NPSLKS---------------------------------------------------S-60 HVR H3 (SEQ ID NO: 6)------------------------------------ARQGSIKQGYYGMDV-------- 106 046146
Последовательности VL-областей вариантов антитела S-60, выравнивание с S-60, и положения HVR.
S-60 (SEQ ID NO: 79)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR
A 60
S-60-1 (SEQ ID NO: 113)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR А 60
S-60-2 (SEQ ID NO:114)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR А 60
S-60-3 (SEQ ID NO:115)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQPPQLLIYLGSNR V60
S-60-4 (SEQ ID NO:116)
DIVMTQSPLSLPVTPGESASISCRSSQGLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-7 (SEQ ID NO:117)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-8 (SEQ ID NO:118)
- 107 046146
DIVMTQSPLSLPVTPGGPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-10 (SEQ ID NO:57)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-11 (SEQ ID NO:58)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-12 (SEQ ID NO:59)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQPPQLLIYLGSNR
V60
S-60-13 (SEQ ID NO:57)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-14 (SEQ ID NO:58)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-15 (SEQ ID NO:57)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-15.1 (SEQ Ш NO:60)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSTGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-16 (SEQ ID NO:77)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-18 (SEQ ID NO:78)
DIVMTQSPLSLPVTPGGPASISCRSSQSLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-19 (SEQ ID NO:79)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
S-60-24 (SEQ ID NO:80)
DIVMTQSPLSLPVTPGESASISCRSSQGLLRSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR A 60
- 108 046146 βыравнивание
S-60 HVR LI (SEQ Ш NO: 27)S-60 HVR L2 (SEQ ID NO: 29)RSSQSLLHSNGYNYLD-------------------------------------------LGSNRA
S-60 (SEQ ID NO: 79 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-1 (SEQ ID NO: ИЗ продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-2 (SEQ ID NO: 114 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-3 (SEQ ID NO: 115 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-4 (SEQ ID NO: 116 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-7 (SEQ ID NO: 117 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-8 (SEQ ID NO: 118 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-10 (SEQ ID NO: 57 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQQEAPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-11 (SEQ ID NO: 58 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQEAPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-12 (SEQ ID NO: 59 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-13 (SEQ ID NO: 57 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQQEAPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-14 (SEQ ID NO: 58 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQEAPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-15 (SEQ ID NO: 57 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQQEAPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-15.1 (SEQ ID NO: 60 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQQEAPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-16 (SEQ ID NO: 77 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGAYYCMQQQEAPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-18 (SEQ ID NO: 78 продолж.)
SGVPDRLSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-19 (SEQ ID NO: 79 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQETPLTFGGGTKVEIK 112
S-60-24 (SEQ ID NO: 80 продолж.)
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQQQEAPLTFGGGTKVEIK 112
S-60 Выравнивание
S-60 HVR L2 (SEQ ID NO: 29 продолж.)8S-60 HVR L3 (SEQ ID NO: 33)-------------MQQQETPLT- 109 046146
Таблица 16
Последовательности H1 HVR тяжелой цепи анти-SORTl антител
Антитело (антитела) HVR Hl SEQ ID NO:
S-60; S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-13; S-60-14; S-60-15 [N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S-60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-60-15.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-60-15.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S60-18; S-60-19; S-60-24 Таблица 17 Последовательности H2 HVR тяжелой цепи ан YSISSGYYWG [ти-SORTI анти 1 гел
Антитело (антитела) HVRH2 SEQ ID NO:
S-60; S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-15 [N33 (wt)]; S-6015.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S-60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-60-15.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-60-15.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-18; S-60-19; S-6024 TIYHSGSTYYN PSLKS 2
S-60-13; S-60-14 TIYHSGSTYYN PSLES 3
Формула I TIYHSGSTYYN PSLXiS Xx представляет собой К или Е 4
Таблица 18
Последовательности H3 HVR тяжелой цепи анти-SORT1 антител
Антитело (антитела) HVRH3 SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-13; S-60-14; S-60-19 ARQGSIQQGYYGMD V 5
S-60; S-60-15 [N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S-60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-6015.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S60-15.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-18; S-60-24 ARQGSIKQGYYGMD V 6
Формула II ARQGSIXxQGYYGM DV Xx представляет собой Q или К 7
- 110 046146
Таблица 19
Последовательности L1 HVR легкой цепи анти-SORTl антител
Антитело (антитела) HVR LI SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-13; S60-14; S-60-15 [N33 (wt)]; S-60-16; S- RSSQSLLRSNGYNYLD 8
60-18 S-60-15.1 [N33T] RSSQSLLRSTGYNYLD 9
S-60-15.2 [N33S] RSSQSLLRSSGYNYLD 10
S-60-15.3 [N33G] RSSQSLLRSGGYNYLD И
S-60-15.4 [N33R] RSSQSLLRSRGYNYLD 12
S-60-15.5 [N33D] RSSQSLLRSDGYNYLD 13
S-60-15.6 [N33H] RSSQSLLRSHGYNYLD 14
S-60-15.7 [N33K] RSSQSLLRSKGYNYLD 15
S-60-15.8 [N33Q] RSSQSLLRSQGYNYLD 16
S-60-15.9 [N33Y] RSSQSLLRSYGYNYLD 17
S-60-15.10 [N33E] RSSQSLLRSEGYNYLD 18
S-60-15.11 [N33W] RSSQSLLRSWGYNYLD 19
S-60-15.12 [N33F] RSSQSLLRSEGYNYLD 20
S-60-15.13 [N33I] RSSQSLLRSIGYNYLD 21
S-60-15.14 [N33V] RSSQSLLRSVGYNYLD 22
S-60-15.15 [N33A] RSSQSLLRSAGYNYLD 23
S-60-15.16 [N33M] RSSQSLLRSMGYNYLD 24
S-60-15.17 [N33L] RSSQSLLRSEGYNYLD 25
S-60; S-60-19 RSSQSLLHSNGYNYLD 26
S-60-24 RSSQGLLRSNGYNYLD 27
Формула III RSSQXALX2SX3GYNYLD Xi представляет собой S или G X2 представляет собой R или Η 28
Хз представляет собой Ν, Т, S, G, R, D, Н, К, Q, Υ, Е, W, F, I, V, А, М, или L
Таблица 20
Последовательности L2 HVR легкой цепи анти-SORT1 антител
Антитело (антитела) HVRL2 SEQ ID NO:
S-60; S-60-10; S-60-11; S-60-13; S-60-14; S-60-15 [N33 (wt)]; S60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S-60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-6015.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-60-15.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-18; S-60-19; S-60-24 LGSNRAS 29
S-60-12 LGSNRVS 30
Формула IV LGSNRXxS Xi представляет собой А или V 31
- 111 046146
Таблица 21
Последовательности L3 HVR легкой цепи анти-SORTl антител
Антитело (антитела) HVRL3 SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-11; S-60-13; S-60-14; S-60-15 [N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S-60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-6015.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-60-15.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-60-15.14 MQQQEAPLT 32
[N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-24
S-60; S-60-12; S-60-18; S-60-19 MQQQETPLT 33
Формула V MQQQEX^L T Xi представляет собой А или T 34
Таблица 22
Последовательности каркасного участка 1 тяжелой цепи анти-SORT1 , антител
Антитело (антитела) VH ERI SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-13; S-60-14; S60-15 [N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S60-15.5 [N33D]; S-60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S60-15.10 [N33E]; S-60-15.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-60-15.14 [N33V]; S60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-18; S-60-19; S-60-24 QVQLQESGPGLVKPSETLS LTCAVSG 35
Таблица 23
Последовательности каркасного участка 2 тяжелой цепи анти-SORT1 . антител
Антитело (антитела) VHFR2 SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-13; S-60-14; S-60-15 [N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S-60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-6015.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-60-15.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-18; S-60-19; S-60-24 WIRQPPGK GLEWIG 36
- 112 046146
Таблица 24
Последовательности каркасного участка 3 тяжелой цепи анти-SORTl антител
Антитело (антитела) VH FR3 SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-19 QVTISVDTSKNQFSLELSSVTA ADTAVYYC 37
S-60-13; S-60-14; S-60-15 [N33 (wt)]; S-6015.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S-60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-60-15.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-60-15.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-18; S-60-24 RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTA ADTAVYYC 38
Формула VI X1VTISVDTSKNQFSLX2LSSVT AADTAVYYC Xi представляет собой Q или R X2 представляет собой E или К 39
Таблица 25
Последовательности каркасного участка 4 тяжелой цепи анти-SORT1 антител
Антитело (антитела) VHFR4 SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-13; S-60-14; S-60-15 [N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S-60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-6015.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-60-15.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-18; S-60-19; S-60-24 WGQGTTV TVSS 40
- 113 046146
Таблица 26
Последовательности каркасного участка 1 легкой цепи анти-SORTl антител
Антитело (антитела) VLFR1 SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-13; S-60-14; S-60-15 DIVMTQ SPLSLPVTPG 41
[N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60- EPASISC
15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-60-15.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-6015.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-19
S-60-18 DIVMTQSPLSLPVTPG GPASISC 42
S-60-24 DIVMTQSPLSLPVTPG ESASISC DIVMTQSPLSLPVTPG X|X2ASISC 43
Формула VII Xi представляет собой E или G X2 представляет собой P или S 44
Таблица 27 Последовательности каркасного участка 2 ле! Антитело (антитела) S-60-10; S-60-11; S-60-13; S-60-14; S-60-15 [N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S-60- 15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S- кой цепи анти-SORTl а VLFR2 штител SEQ ID NO:
60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-60-15.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-6015.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-18; S-6019; S-60-24 WYLQKPGQSPQLLIY 45
S-60-12 WYLQKPGQPPQLLIY 46
WYLQKPGQXiPQLLIY
Формула VIII Xi представляет собой S 47
или P
- 114 046146
Таблица 28
Последовательности каркасного участка 3 легкой цепи анти-SORTl антител
Антитело (антитела) VL FR3 SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-13; S-60-15 [N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-60-15.3 [N33G]; S-6015.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-6015.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-60-15.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-6015.16 [N33M]; S-60-15.17 [N33L] GVPDRF SGSGSGTDFTLKISRAEAEDV GVYYC 48
S-60-11; S-60-12; S-60-14; S-60-19; S-60-24 GVPDRF SGSGSGTDFTLKISRVEAEDV GVYYC 49
S-60-16 GVPDRF SGSGSGTDFTLKISRVEAEDV GAYYC 50
S-60-18 GVPDRLSGSGSGTDFTLKISRVEAEDV GVYYC 51
Формула IX gvpdrx1sgsgsgtdftlkisrx2eaed VGX3YYC Xi представляет собой F или L X2 представляет собой А или V X3 представляет собой V или А 52
Таблица 29
Последовательности каркасного участка 4 легкой цепи анти-SORT1 антител
Антитело (антитела) VLFR4 SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-11; S-60-12; S-60-13; S-60-14; S-60-15 [N33 (wt)]; S-60-15.1 [N33T]; S-60-15.2 [N33S]; S-6015.3 [N33G]; S-60-15.4 [N33R]; S-60-15.5 [N33D]; S60-15.6 [N33H]; S-60-15.7 [N33K]; S-60-15.8 [N33Q]; S-60-15.9 [N33Y]; S-60-15.10 [N33E]; S-60-15.11 [N33W]; S-60-15.12 [N33F]; S-60-15.13 [N33I]; S-6015.14 [N33V]; S-60-15.15 [N33A]; S-60-15.16 [N33M]; FGGGTKVEIK 53
S-60-15.17 [N33L]; S-60-16; S-60-18; S-60-19; S-60-24
- 115 046146
Таблица 30
Последовательности вариабельной области тяжелой цепи анти-SORTl антител
Антитело (антитела) HCVR SEQ ID NO:
S-60-10, S-60-11, S-60-12, S-60-19 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSG YYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYYNP SLKSQVTISVDTSKNQFSLELSSVTAADTAV YYC ARQGSIQQGY YGMD VWGQGTT VT VS S 54
S-30-13, S-60-14 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSG YYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYYNP SLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAV YYC ARQGSIQQGY YGMD VWGQGTT VT VS S 55
S-60, S-60-15 [N33 (wt)], S-60-15.1 [N33T], S-6015.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-60-15.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-60-15.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-60-15.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-60-15.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-60-15.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-60-15.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60-15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-60-16, S-60-18, S-60-24 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSG YYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYYNP SLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAV YYC ARQGSIKQGY YGMD VWGQGTT VT VS S 56
- 116 046146
Таблица 31
Последовательности вариабельной области легкой цепи анти-SORTl антител
Антитело (антитела) LCVR SEQ ID NO:
S-60-10; S-60-13; S-60- 15 [N33 (wt)] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 57
S-60-11; S-60-14 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRVEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 58
S-60-12 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQPPQLLIYLGSNRVSGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRVEAED VGVYYCMQ QQETPLTFGGGTKVEIK 59
S-60-15.1 [N33T] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSTG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIK 60
S-60-15.2 [N33S] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSSG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIK 61
S-60-15.3 [N33G] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSG GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 62
S-60-15.4 [N33R] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSRG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIK 63
S-60-15.5 [N33D] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSD GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 64
S-60-15.6 [N33H] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSH GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP 65
- 117 046146
DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK
S-60-15.7 [N33K] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSK GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 66
S-60-15.8 [N33Q] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSQ GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 67
S-60-15.9 [N33Y] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSY GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 68
S-60-15.10 [N33E] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSEG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIK 69
S-60-15.11 [N33W] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSW GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 70
S-60-15.12 [N33F] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSFG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIK 71
S-60-15.13 [N33I] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSIG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIK 72
S-60-15.14 [N33V] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSV GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 73
- 118 046146
S-60-15.15 [N33A] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSA GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 74
S-60-15.16 [N33M] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSM GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRAEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 75
S-60-15.17 [N33L] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSLG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIK 76
S-60-16 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRVEAED VGAYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 77
S-60-18 DIVMTQSPLSLPVTPGGPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRLSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQ QQETPLTFGGGTKVEIK 78
S-60, S-60-19 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRVEAED VGVYYCMQ QQETPLTFGGGTKVEIK 79
S-60-24 DIVMTQSPLSLPVTPGESASISCRSSQGLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRF SGSGSGTDFTLKISRVEAED VGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIK 80
- 119 046146
Таблица 32
Аминокислотные последовательности сортилина
Описание Последовательность SEQ ID NO
Человеческий сортилин 10 20 30 40 50 MERPWGAADG LSRWPHGLGL LLLLQLLPPS TLSQDRLDAP PPPAAPLPRW 60 70 80 90 100 SGPIGVSWGL RAAAAGGAFP RGGRWRRSAP GEDEECGRVR DFVAKLANNT 110 120 130 140 150 IIQIIVFDDLRG SVSLSWVGDS TGVILVLTTF IIVPLVIMTFG QSKLYRSEDY 160 170 180 190 200 GKNFKDITDL INNTFIRTEF GMAIGPENSG KVVLTAEVSG GSRGGR1FRS 210 220 230 240 250 SDFAKNFVQT DLPFHPLTQM MYSPQNSDYL LALSTENGLW VSKNFGGKWE 260 270 280 290 300 EIHKAVCLAK WGSDNTIFFT TYANGSCKAD LGALELWRTS DLGKSFKTIG 310 320 330 340 350 VKIYSFGI.GG RFLFASVMAD KDTTRRIHVS TDQGDTWSMA QLPSVGQEQF 360 370 380 390 400 YSILAANDDM VFMHVDEPGD TGFGTIFTSD DRGIVYSKSL DRHT.YTTTGG 410 420 430 440 450 ETDFTNVTSL RGVYITSVLS EDNSIQTMIT FDQGGRWTHL RKPENSECDA 460 470 480 490 500 TAKNKNECSL H1HASYS1SQ KLNVPMAPES EPNAVG1V1A HGSVGDAISV 510 520 530 540 550 MVPDVY1SDD GGYSWTKMLE GPHYY'HLDS GG11VA1EHS SRPINVIKFS 560 570 580 590 600 TDEGQCWQTY 1’FTRDPIYFT GLASEPGARS MN1S1WGF1E SFLTSQWVSY 81
- 120 046146
Мышиный сортилин Сортилип крысы 610 620 630 640 650 TIDFKDTLER NCEEKDYTIW LAHSTDPEDY EDGCTLGYKE QFLRLRKSSV 660 670 680 690 700 CQNGRDYVVT KQPS1CLCSL EDFLCDFGYY RPENDSKCVE QPELKGHDLE 710 720 730 740 750 FCLYGREEHL TTNGYRKIPG DKCQGGVNPV REVKDLKKKC TSNFLSPEKQ 760 770 780 790 800 NSKSNSVPII LAIVGLMLVT VVAGVLIVKK YVCGGRFLVH RYSVLQQHAE 810 820 830 ANGVDGVDAL DTASHTNKSG YHDDSDEDLL Е MERPRGAADG LLRWPLGLLL LLQLLPPAAV GQDRLDAPPP PAPPLLRWAG PVGVSWGLRA AAPGGPVPRA GRWRRGAPAE DQDCGRLPDF IAKLTNNTHQ HVFDDLSGSV SLSWVGDSTG VILVLTTFQV PLVIVSFGQS KLYRSEDYGK NFKDITNLIN NTFIRTEFGM AIGPENSGKV ILTAEVSGGS RGGRVFRSSD FAKNFVQTDL PFHPLTQMMY SPQNSDYLLA LSTENGLWVS KNFGEKWEEI HKAVCLAKWG PNNIIFFTTH VNGSCKADLG ALELWRTSDL GKTFKTIGVK IYSFGLGGRF LFASVMADKD TTRRIHVSTD QGDTWSMAQL PSVGQEQFYS ILAANEDMVF MHVDEPGDTG FGTIFTSDDR GIVYSKSLDR HLYTTTGGET DFTNVTSLRG VYITSTLSED NSIQSMITFD QGGRWEHLRK PENSKCDATA KNKNECSLHI HASYSISQKL NVPMAPLSEP NAVGIVIAHG SVGDAISVMV PDVYISDDGG YSWAKMIEGP HYYTILDSGG IIVAIEHSNR PINVKFSTD EGQCWQSYVF TQEPIYFTGL ASEPGARSMN ISIWGFTESF ITRQWVSYTV DFKDILERNC EEDDYTTWLA HSTDPGDYKD GCILGYKEQF LRLRKSSVCQ NGRDYVVAKQ PSVCPCSLED FLCDFGYFRP ENASECVEQP ELKGHELEFC LYGKEEHLTT NGYRKIPGDK CQGGMNPARE VKDLKKKCTS NFLNPTKQNS KSNSVPIILA IVGLMLVTW AGVLIVKKYV CGGRFLVHRY SVLQQHAEAD GVEALDSTSH AKSG YHDDSE EDLEE MERPRGAADG LLRWPLGLLL LLQLLPPAAV GQDRLDAPPP PAPPLLRWAG PVGVSWGLRA AAPGGPVPRA GRWRRGAPAE DQDCGRLPDF IAKLTNNTHQ HVFDDLSGSV SLSWVGDSTG VILVLTTFQV PLVIVSFGQS KLYRSEDYGK NFKDITNLIN NTFIRTEFGM AIGPENSGKV ILTAEVSGGS RCiGRVFRSSD FAKNFVQTDL PFHPLTQMMY SPQNSDYLLA LSTENGLWVS KNFGEKWEEI HKAVCLAKWG PNNIIFFTTH VNGSCKADLG ALELWRTSDL GKTFKTIGVK IYSFGLGGRF LFASVMADKD TTRRIHVSTD QGDTWSMAQL PSVGQEQFYS ILAANDDMVF MHVDEPGDTG FGTIFTSDDR GIVYSKSLDR HLYTTTGGET DFTNVTSLRG VYITSTLSED NSIQSMITFD QGGRWEHLQK PENSKCDATA KNKNECSLHI HASYSISQKL NVPMAPLSEP NAVGIVIAHG SVGDAISVMV PDVYISDDGG YSWAKMLEGP HYYTILDSGG IIVAIEHSNR PINVKFSTD EGQCWQSYVF SQEPVYFTGL ASEPGARSMN ISIWGFTESF LTRQWVSYH DFKDILERNC EENDYTTWLA HSTDPGDYKD GCILGYKEQF LRLRKSSVCQ NGRDYVVAKQ PSICPCSLED FLCDFGYFRP ENASECVEQP ELKGHELEFC LYGKEEHLTT NGYRKIPGDR CQGGMNPARE VKDLKKKCTS NFLNPKFCQNS KSSSVPIILA IVGLMLVTW AGVLIVKKYV CGGRFLVHRY SVLQQHAEAD GVEALDTASH AKSGYHDDSD EDLLE 82 83
- 121 046146
Таблица 33
Пептидные последовательности S-60-15
Описание Последовательность SEQ ID NO
Мотив Asp-бокс (S/T)-X-(D/N)-X-X-X-X-(W/F/Y) X представляет собой любую аминокислоту 84
Мотив Asp-бокс X-X-(S/T)-X-(D/N)-X-G-X-(T/S)-(W/F/Y)-X X представляет собой любую аминокислоту 85
Мотив Asp-бокс в человеческом сортилине (остатки 200-207) SSDFAKNF 86
Пептид S-60-15 NQFSLK 87
Пептид S-60-15 QGYYGMD VWGQGTTVT VS S ASTK 88
Пептид S-60-15 DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTK 89
Пептид S-60-15 DTLMISR 90
Пептид S-60-15 TPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHN А К 91
Пептид S-60-15 VVSVLTVLHQDWLNGK 92
Пептид S-60-15 EPQVYTLPPSQEEMTK 93
Пептид S-60-15 NQVSLTCLVK 94
Пептид S-60-15 GFYPSDIAVEWESNGQPENNYK 95
Пептид S-60-15 WQEGNVF SC S VMHE ALHNHYTQK 96
Пептид S-60-15 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCR 97
Пептид S-60-15 SSQSLLR 98
Пептид S-60-15 SNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNR 99
Пептид S-60-15 AEAEDVGVYYCMQQQEAPLTFGGGTK 100
Пептид S-60-15 SGTASVVCLLNNFYPR 101
Пептид S-60-15 VDNALQSGNSQESVTEQDSK 102
- 122 046146
Таблица 34
Аминокислотные последовательности Fc-домена
Описание Последовательность SEQ ID NO
huIgGl LALAPSFc ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQP REPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPGK 103
huIgGl LALAPS Fc без C- концевого лизина ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQP REPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPG 104
- 123 046146
Таблица 35
Аминокислотные последовательности полноразмерной тяжелой цепи
Описание S-60-10, S-60- Последовательность QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWI SEQ ID NO 105
11, S-60-12, S60-19 с__Fc LALAPS с Сконцевым лизином RQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYYNPSLKSQVTISVDTSKN QF SLELS SVTAADTAVYYCARQGSIQQGYYGMDVWG QGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK THTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVI<FNWYVDGVEVHNAI<TI<PREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
S-60-10, S-6011, S-60-12, S60-19 с__Fc LALAPS без С-концевого лизина QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWI RQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYYNPSLKSQVTISVDTSKN QF SLELS SVT AADTAVYYCARQGSIQQGYYGMD VWG QGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK THTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 106
S-60-13, S-6014 с Fc LALAPS с Сконцевым лизином QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWI RQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYYNPSLESRVTISVDTSKN QF SLKL S SVT AADTAVYYCARQGSIQQGYYGMD VWG QGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK THTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVI<FNWYVDGVEVHNAI<TI<PREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 135
- 124 046146
S-60-13, S-6014 c Fc LALAPS без С-концевого лизина QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWI RQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYYNPSLESRVTISVDTSKN QF SLKL S S VT AADT AVYYC ARQGSIQQGYYGMD VWG QGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK THTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVI<FNWYVDGVEVHNAI<TI<PREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 136
S-60, S-60-15 [N33 (wt)], S60-15.1 [N33T], S-6015.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-6015.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-6015.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-6015.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-6015.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-6015.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-6015.14 [N33V], QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWI RQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKN QF SLKL S SVT AADT AVYYC ARQGSIKQGYYGMD VWG QGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK THTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVI<FNWYVDGVEVHNAI<TI<PREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 137
- 125 046146
S-60-15.15 [N33A], S-6015.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-6016, S-60-18, S- 60-24 c__Fc LALAPS с Cконцевым лизином
S-60, S-60-15 [N33 (wt)], S60-15.1 [N33T], S-6015.2 [N33S], S-60-15.3 [N33G], S-6015.4 [N33R], S-60-15.5 [N33D], S-6015.6 [N33H], S-60-15.7 [N33K], S-6015.8 [N33Q], S-60-15.9 [N33Y], S-6015.10 [N33E], S-60-15.11 [N33W], S-6015.12 [N33F], S-60-15.13 [N33I], S-6015.14 [N33V], S-60-15.15 [N33A], S-60- QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWI RQPPGKGLEWIGTIYHSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKN QF SLKL S S VT AADT AVYYC ARQGSIKQGYYGMD VWG QGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK THTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVI<FNWYVDGVEVHNAI<TI<PREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 138
15.16 [N33M], S-60-15.17 [N33L], S-6016, S-60-18, S60-24 c__Fc LALAPS без С-концевого лизина
- 126 046146
Таблица 36
Аминокислотные последовательности полноразмерной легкой цепи
Описание Последовательность SEQ ID NO
S-60-10; S60-13; S-6015 [N33 (wt)] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 139
S-60-11; S60-14 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 140
S-60-12 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQPPQLLIYLGSNRVSGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQ QQETPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 141
S-60-15.1 [N33T] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSTG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ 142
- 127 046146
L1<SGTASVVCLLNNFYPREAI<VQWI<VDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
S-60-15.2 [N33S] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSSG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ L1<SGTASVVCLLNNFYPREAI<VQWI<VDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 143
S-60-15.3 [N33G] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSG GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 144
S-60-15.4 [N33R] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSR GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 145
S-60-15.5 [N33D] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSD GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 146
S-60-15.6 [N33H] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSH GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE 119
- 128 046146
QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
S-60-15.7 [N33K] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSK GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 120
S-60-15.8 [N33Q] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSQ GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 121
S-60-15.9 [N33Y] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSY GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 122
S-60-15.10 [N33E] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSEG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ L1<SGTASVVCLLNNFYPREAI<VQWI<VDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 123
S-60-15.11 [N33W] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSW GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE 124
- 129 046146
QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
S-60-15.12 [N33F] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSFG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ L1<SGTASVVCLLNNFYPREAI<VQWI<VDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 125
S-60-15.13 [N33I] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSIG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ L1<SGTASVVCLLNNFYPREAI<VQWI<VDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 126
S-60-15.14 [N33V] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSV GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 127
S-60-15.15 [N33A] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSA GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 128
S-60-15.16 [N33M] DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSM GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQ QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE 129
- 130 046146
QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSLG YNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPD
S-60-15.17 [N33L] RFSGSGSGTDFTLKISRAEAEDVGVYYCMQQ QEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ L1<SGTASVVCLLNNFYPREAI<VQWI<VDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGAYYCMQ 130
S-60-16 QQEAPLTFGGGTKVEIKRT VAAP S VFIFPP SDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC DIVMTQSPLSLPVTPGGPASISCRSSQSLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRLSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQ 131
S-60-18 QQETPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP 132
S-60, S-60- Ί 0 DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQ QQETPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE 133
1 27 QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
DIVMTQSPLSLPVTPGESASISCRSSQGLLRSN GYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQ
S-60-24 QQEAPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 134
- 131 046146
Перечень Gпоследовательностей <110> Alector LLC <120> АНТИТЕЛА ПРОТИВ СОРТИЛИНА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ <130> 73502-20019.41 <140> Еще не присвоен <141> Одновременно с данным документом <150> US 62/868,849 <151> 2019-06-28 <150> US 62/860,184 <151> 2019-06-11 <150> US 62/698,007 <151> 2018-07-13 <160> 146 < 170> FastSEQ для Windows версия 4.0 < 210> 1 < 211> 10 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность < 220>
< 223> Синтетический конструкт < 400> 1
Tyr Ser Ile Ser Ser Gly Tyr Tyr Trp Gly
5 10 < 210> 2 < 211> 16 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность < 220>
< 223> Синтетический конструкт < 400> 2
Thr Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
5 10 15 < 210> 3 < 211> 16 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность < 220>
< 223> Синтетический конструкт < 400> 3
Thr Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Glu Ser
5 10 15
- 132 046146 <210> 4 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <220>
<221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = Lys или Glu <400> 4
Thr Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Xaa Ser
5 10 15 <210> 5 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 5
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Gln Gln Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 6 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 6
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Lys Gln Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 7 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <220>
<221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Gln или Lys <400> 7
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Xaa Gln Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 8
- 133 046146 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 8
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 9 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 9
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Thr Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 10 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 10
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Ser Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 11 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 11
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Gly Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 12 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 12
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Arg Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15
- 134 046146 <210> 13 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 13
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 14 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 14
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser His Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 15 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 15
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Lys Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 16 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 16
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Gln Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 17 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 17
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Tyr Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
- 135 046146
5 10 15 <210> 18 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 18
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Glu Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 19 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 19
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Trp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 20 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 20
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Phe Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 21 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 21
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 22 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт
- 136 046146 <400> 22
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Val Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 23 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 23
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Ala Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 24 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 24
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Met Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 25 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 25
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser Leu Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 26 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 26
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 27 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
- 137 046146 <223> Синтетический конструкт <400> 27
Arg Ser Ser Gln Gly Leu Leu Arg Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 28 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <220>
<221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = Ser или Gly <220>
<221> VARIANT <222> 8 <223> Xaa = Arg или His <220>
<221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = Asn, Thr, Ser, Gly, Arg, Asp, His, Lys, Gln, Tyr, Glu, Trp, Phe, Ile, Val, Ala, Met, или Leu <400> 28
Arg Ser Ser Gln Xaa Leu Leu Xaa Ser Xaa Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
5 10 15 <210> 29 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 29
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
5 <210> 30 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 30
Leu Gly Ser Asn Arg Val Ser
5 <210> 31
- 138 046146 <211> 7 <212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Синтетический конструкт <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> Xaa = Ala или Val < 400> 31
Leu Gly Ser Asn Arg Xaa Ser
5 <210> 32 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 32
Met Gln Gln Gln Glu Ala Pro Leu Thr
5 <210> 33 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 33
Met Gln Gln Gln Glu Thr Pro Leu Thr
5 <210> 34 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <220>
<221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Ala или Thr <400> 34
Met Gln Gln Gln Glu Xaa Pro Leu Thr
5 <210> 35 <211> 26
- 139 046146 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 35
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly
25 <210> 36 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 36
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
5 10 <210> 37 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 37
Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 38 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 38
Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30
Glu
Glu
Lys <210> 39 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт
- 140 046146 <220>
<221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Gln или Arg <220>
<221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa = Glu или Lys <400> 39
Xaa Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
Xaa <210> 40 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 40
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
5 10 <210> 41 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 41
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 42 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 42
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 1 5 10 15
Gly Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20
Gly
Gly <210> 43 <211> 23
- 141 046146 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 43
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Ser Ala Ser Ile Ser Cys <210> 44 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <220>
<221> VARIANT <222> 17 <223> Xaa = Glu или Gly <220>
<221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = Pro или Ser <400> 44
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Xaa Xaa Ala Ser Ile Ser Cys <210> 45 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 45
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 46 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 46
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15
- 142 046146 <210> 47 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <220>
<221> VARIANT <222> 9 <223> Xaa = Ser или Pro <400> 47
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Xaa Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 48 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 48
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 49 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 49
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 50 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 50
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ala Tyr Tyr Cys 20 25 30
- 143 046146 <210> 51 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 51
Gly Val Pro Asp Arg Leu Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 52 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <220>
<221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Phe или Leu <220>
<221> VARIANT <222> 22 <223> Xaa = Ala или Val <220>
<221> VARIANT <222> 29 <223> Xaa = Val или Ala <400> 52
Gly Val Pro Asp Arg Xaa Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Xaa Glu Ala Glu Asp Val Gly Xaa Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 53 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 53
Phe Gly Gly Gly Thr
5 последовательность конструкт
Lys Val Glu Ile Lys <210> 54 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
- 144 046146 <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 54
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val 20
Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln 3540
Ile Gly Thr Ile Tyr His Ser Gly 5055
Lys Ser Gln Val Thr Ile Ser Val 6570
Leu Glu Leu Ser Ser Val Thr Ala 85
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Gln Gln 100
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115120
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1015
Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 2530
Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 45
Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 60
Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 7580
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 105110
Ser Ser <210> 55 <211> 122 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 55
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val 20
Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln 3540
Ile Gly Thr Ile Tyr His Ser Gly 5055
Glu Ser Arg Val Thr Ile Ser Val 6570
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala 85
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Gln Gln 100
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115120
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1015
Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 2530
Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 45
Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 60
Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 7580
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 105110
Ser Ser <210> 56 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223>
<400> 56
Gln Val Gln Leu 1
Thr Leu Ser Leu
Синтетический конструкт
Gln Glu Ser Gly 5
Thr Cys Ala Val
Pro Gly Leu Val 10
Ser Gly Tyr Ser 25
Lys Pro Ser Glu 15
Ile Ser Ser Gly 30
- 145 046146
Tyr Tyr Trp Gly 35
Ile Gly Thr Ile
Lys Ser Arg Val 65
Leu Lys Leu Ser
Ala Arg Gln Gly 100
Gly Gln Gly Thr 115
Trp Ile Arg Gln Pro Pro 40
Tyr His Ser Gly Ser Thr 55
Thr Ile Ser Val Asp Thr 70
Ser Val Thr Ala Ala Asp 85 90
Ser Ile Lys Gln Gly Tyr 105
Thr Val Thr Val Ser Ser 120
Gly Lys Gly Leu Glu Trp 45
Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 60
Ser Lys Asn Gln Phe Ser 75 80
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95
Tyr Gly Met Asp Val Trp 110 <210> 57 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 57
Asp Ile Val Met 1
Glu Pro Ala Ser
Asn Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Ala Glu
Gln Glu Ala Pro
100
Thr Gln Ser Pro 5
Ile Ser Cys Arg
Tyr Leu Asp Trp 40
Ile Tyr Leu Gly 55
Gly Ser Gly Ser 70
Ala Glu Asp Val 85
Leu Thr Phe Gly
Leu Ser Leu Pro 10
Ser Ser Gln Ser 25
Tyr Leu Gln Lys
Ser Asn Arg Ala 60
Gly Thr Asp Phe 75
Gly Val Tyr Tyr 90
Gly Gly Thr Lys 105
Val Thr Pro Gly 15
Leu Leu Arg Ser 30
Pro Gly Gln Ser 45
Ser Gly Val Pro
Thr Leu Lys Ile 80
Cys Met Gln Gln 95
Val Glu Ile Lys 110 <210> 58 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 58
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110
- 146 046146 <210> 59 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 59
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Val Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110 <210> 60 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 60
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 20
Thr Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp 3540
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly 5055
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 6570
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val 85
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly 100
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 10 15
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 25 30
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 45
Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 60
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 7580
Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 9095
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 105110 <210> 61 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 61
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser
- 147 046146
Ser Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Ala Glu
Gln Glu Ala Pro
100
2530
Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 4045
Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 5560
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 7075
Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln 85 9095
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 105110
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys <210> 62 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 62
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 20
Gly Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp 3540
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly 5055
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 6570
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val 85
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly 100
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 10 15
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 25 30
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 45
Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 60
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 7580
Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 9095
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 105110 <210> 63 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 63
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Arg Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110
- 148 046146 <210> 64 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 64
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110 <210> 65 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 65
Asp Ile Val Met 1
Glu Pro Ala Ser 20
His Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Ala Glu
Gln Glu Ala Pro 100
Thr Gln Ser Pro 5
Ile Ser Cys Arg
Tyr Leu Asp Trp 40
Ile Tyr Leu Gly 55
Gly Ser Gly Ser 70
Ala Glu Asp Val 85
Leu Thr Phe Gly
Leu Ser Leu Pro 10
Ser Ser Gln Ser 25
Tyr Leu Gln Lys
Ser Asn Arg Ala 60
Gly Thr Asp Phe 75
Gly Val Tyr Tyr 90
Gly Gly Thr Lys 105
Val Thr Pro Gly 15
Leu Leu Arg Ser 30
Pro Gly Gln Ser 45
Ser Gly Val Pro
Thr Leu Lys Ile 80
Cys Met Gln Gln 95
Val Glu Ile Lys 110 <210> 66 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223>
<400> 66
Asp Ile Val Met 1
Glu Pro Ala Ser
Синтетический конструкт
Thr Gln Ser Pro 5
Ile Ser Cys Arg
Leu Ser Leu Pro 10
Ser Ser Gln Ser 25
Val Thr Pro Gly 15
Leu Leu Arg Ser 30
- 149 046146
Lys Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Ala Glu
Gln Glu Ala Pro
100
Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Ile Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Gly Ser Gly Ser Gly Thr 70
Ala Glu Asp Val Gly Val 85 90
Leu Thr Phe Gly Gly Gly 105
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile
110
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys <210> 67 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 67
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 20
Gln Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp 3540
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly 5055
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 6570
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val 85
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly 100
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 10 15
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 25 30
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 45
Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 60
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 7580
Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 9095
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 105110 <210> 68 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 68
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Tyr Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110 <210> 69
- 150 046146 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 69
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Glu Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110 <210> 70 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 70
Asp Ile Val Met 1
Glu Pro Ala Ser
Trp Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Ala Glu
Gln Glu Ala Pro
100
Thr Gln Ser Pro 5
Ile Ser Cys Arg
Tyr Leu Asp Trp 40
Ile Tyr Leu Gly 55
Gly Ser Gly Ser 70
Ala Glu Asp Val 85
Leu Thr Phe Gly
Leu Ser Leu Pro 10
Ser Ser Gln Ser 25
Tyr Leu Gln Lys
Ser Asn Arg Ala 60
Gly Thr Asp Phe 75
Gly Val Tyr Tyr 90
Gly Gly Thr Lys 105
Val Thr Pro Gly 15
Leu Leu Arg Ser 30
Pro Gly Gln Ser 45
Ser Gly Val Pro
Thr Leu Lys Ile 80
Cys Met Gln Gln 95
Val Glu Ile Lys 110 <210> 71 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 71
Asp Ile Val Met 1
Glu Pro Ala Ser 20
Phe Gly Tyr Asn
Thr Gln Ser Pro 5
Ile Ser Cys Arg
Tyr Leu Asp Trp
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
15
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser
30
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
- 151 046146
Pro Gln Leu 50
Asp Arg Phe 65
Ser Arg Ala
Gln Glu Ala
4045
Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 5560
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 70 7580
Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 85 9095
Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110 <210> 72 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 72
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 20
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp 3540
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly 5055
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 6570
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val 85
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly 100
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 10 15
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 25 30
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 45
Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 60
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 7580
Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 9095
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 105110 <210> 73 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 73
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Val Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110 <210> 74 <211> 112
- 152 046146 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 74
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Ala Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110 <210> 75 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 75
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg 20
Met Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp 3540
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly 5055
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 6570
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val 85
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly 100
Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 10 15
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 25 30
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 45
Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 60
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 7580
Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 9095
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 105110 <210> 76 <211> 112 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 76
Asp Ile Val Met 1
Glu Pro Ala Ser
Leu Gly Tyr Asn 35
Thr Gln Ser Pro 5
Ile Ser Cys Arg
Tyr Leu Asp Trp 40
Leu Ser Leu Pro 10
Ser Ser Gln Ser 25
Tyr Leu Gln Lys
Val Thr Pro Gly 15
Leu Leu Arg Ser 30
Pro Gly Gln Ser 45
- 153 046146
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu
100
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 7075
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln 9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
105110
Pro
Ile 80 Gln
Lys <210> 77 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 77
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Val Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu
100 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 1015
Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg 2530
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 4045
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 7075
Glu Asp Val Gly Ala Tyr Tyr Cys Met Gln 9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 105110
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys <210> 78 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 78
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Gly Pro Ala Ser Ile 20
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Leu Ser Gly 65
Ser Arg Val Glu Ala 85
Gln Glu Thr Pro Leu
100 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 1015
Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg 2530
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 4045
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 7075
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln 9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 105110
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys <210> 79 <211> 112 <212> БЕЛОК
- 154 046146 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 79
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 2530
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100
105
110 <210> 80 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 80
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Gly Leu Leu Arg Ser 20 2530
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100
105
110 <210> 81 <211> 831 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 81
Met Glu Arg Pro Trp Gly Ala Ala Asp Gly Leu Ser Arg Trp Pro His 1 5 1015
Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Gln Leu Leu Pro Pro Ser Thr Leu 20 2530
Ser Gln Asp Arg Leu Asp Ala Pro Pro Pro Pro Ala Ala Pro Leu Pro 35 4045
Arg Trp Ser Gly Pro Ile Gly Val Ser Trp Gly Leu Arg Ala Ala Ala 50 5560
Ala Gly Gly Ala Phe Pro Arg Gly Gly Arg Trp Arg Arg Ser Ala Pro 65 70 7580
- 155 046146
Gly Glu Asp Glu Glu 85
Ala Asn Asn Thr His 100
Ser Leu Ser Trp Val 115
Thr Phe His Val Pro 130
Tyr Arg Ser Glu Asp 145
Ile Asn Asn Thr Phe 165 Glu Asn Ser Gly Lys 180
Arg Gly Gly Arg Ile 195
Gln Thr Asp Leu Pro 210
Gln Asn Ser Asp Tyr 225
Val Ser Lys Asn Phe 245 Cys Leu Ala Lys Trp 260
Ala Asn Gly Ser Cys 275
Thr Ser Asp Leu Gly 290
Ser Phe Gly Leu Gly 305
Lys Asp Thr Thr Arg 325
Trp Ser Met Ala Gln 340
Ile Leu Ala Ala Asn 355
Gly Asp Thr Gly Phe 370
Val Tyr Ser Lys Ser 385
Glu Thr Asp Phe Thr 405 Ser Val Leu Ser Glu 420
Gln Gly Gly Arg Trp 435
Asp Ala Thr Ala Lys 450
Ser Tyr Ser Ile Ser 465
Glu Pro Asn Ala Val 485 Ala Ile Ser Val Met 500
Tyr Ser Trp Thr Lys 515
Asp Ser Gly Gly Ile 530
Asn Val Ile Lys Phe 545
Thr Phe Thr Arg Asp 565
Gly Ala Arg Ser Met
Cys Gly Arg Val Arg 90
Gln His Val Phe Asp 105
Gly Asp Ser Thr Gly 120
Leu Val Ile Met Thr
135
Tyr Gly Lys Asn Phe 150
Ile Arg Thr Glu Phe 170
Val Val Leu Thr Ala 185
Phe Arg Ser Ser Asp 200
Phe His Pro Leu Thr
215
Leu Leu Ala Leu Ser 230
Gly Gly Lys Trp Glu 250
Gly Ser Asp Asn Thr 265
Lys Ala Asp Leu Gly 280
Lys Ser Phe Lys Thr 295
Gly Arg Phe Leu Phe 310
Arg Ile His Val Ser 330
Leu Pro Ser Val Gly 345
Asp Asp Met Val Phe 360
Gly Thr Ile Phe Thr 375
Leu Asp Arg His Leu 390
Asn Val Thr Ser Leu 410
Asp Asn Ser Ile Gln 425
Thr His Leu Arg Lys 440
Asn Lys Asn Glu Cys 455
Gln Lys Leu Asn Val 470
Gly Ile Val Ile Ala 490
Val Pro Asp Val Tyr 505
Met Leu Glu Gly Pro 520
Ile Val Ala Ile Glu
535
Ser Thr Asp Glu Gly 550
Pro Ile Tyr Phe Thr 570
Asn Ile Ser Ile Trp
Asp Phe Val Ala Lys 95
Asp Leu Arg Gly Ser 110
Val Ile Leu Val Leu 125
Phe Gly Gln Ser Lys 140
Lys Asp Ile Thr Asp 155
Gly Met Ala Ile Gly 175
Glu Val Ser Gly Gly 190
Phe Ala Lys Asn Phe 205
Gln Met Met Tyr Ser 220
Thr Glu Asn Gly Leu 235
Glu Ile His Lys Ala 255 Ile Phe Phe Thr Thr 270
Ala Leu Glu Leu Trp 285
Ile Gly Val Lys Ile 300
Ala Ser Val Met Ala 315
Thr Asp Gln Gly Asp 335
Gln Glu Gln Phe Tyr 350
Met His Val Asp Glu 365
Ser Asp Asp Arg Gly 380
Tyr Thr Thr Thr Gly 395
Arg Gly Val Tyr Ile 415 Thr Met Ile Thr Phe 430
Pro Glu Asn Ser Glu 445
Ser Leu His Ile His 460
Pro Met Ala Pro Leu 475
His Gly Ser Val Gly 495
Ile Ser Asp Asp Gly 510
His Tyr Tyr Thr Ile 525
His Ser Ser Arg Pro 540
Gln Cys Trp Gln Thr 555
Gly Leu Ala Ser Glu 575
Gly Phe Thr Glu Ser
Leu
Val
Thr
Leu
Leu 160 Pro
Ser
Val
Pro
Trp 240 Val
Tyr
Arg
Tyr
Asp 320 Thr
Ser
Pro
Ile
Gly 400 Thr
Asp
Cys
Ala
Ser 480 Asp
Gly
Leu
Ile
Tyr 560 Pro
Phe
- 156 046146
580
Leu Thr Ser Gln 595
Glu Arg Asn Cys 610
Thr Asp Pro Glu 625
Gln Phe Leu Arg
Tyr Val Val Thr
660
Phe Leu Cys Asp 675
Val Glu Gln Pro 690
Gly Arg Glu Glu 705
Asp Lys Cys Gln
Lys Lys Lys Cys
740
Lys Ser Asn Ser 755
Val Thr Val Val 770
Gly Arg Phe Leu 785
Ala Asn Gly Val
Asn Lys Ser Gly
820
Trp
Glu
Asp
Leu 645 Lys
Phe
Glu
His
Gly 725 Thr
Val
Ala
Val
Asp 805 Tyr
585590
Val Ser Tyr Thr Ile Asp Phe Lys Asp Ile Leu 600605
Glu Lys Asp Tyr Thr Ile Trp Leu Ala His Ser 615620
Tyr Glu Asp Gly Cys Ile Leu Gly Tyr Lys Glu 630 635640
Arg Lys Ser Ser Val Cys Gln Asn Gly Arg Asp 650655
Gln Pro Ser Ile Cys Leu Cys Ser Leu Glu Asp 665670
Gly Tyr Tyr Arg Pro Glu Asn Asp Ser Lys Cys 680685
Leu Lys Gly His Asp Leu Glu Phe Cys Leu Tyr 695700
Leu Thr Thr Asn Gly Tyr Arg Lys Ile Pro Gly 710 715720
Gly Val Asn Pro Val Arg Glu Val Lys Asp Leu 730735
Ser Asn Phe Leu Ser Pro Glu Lys Gln Asn Ser 745750
Pro Ile Ile Leu Ala Ile Val Gly Leu Met Leu 760765
Gly Val Leu Ile Val Lys Lys Tyr Val Cys Gly 775780
His Arg Tyr Ser Val Leu Gln Gln His Ala Glu 790 795800
Gly Val Asp Ala Leu Asp Thr Ala Ser His Thr 810815
His Asp Asp Ser Asp Glu Asp Leu Leu Glu 825830 <210> 82 <211> 825 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 82
Met Glu Arg Pro 1
Gly Leu Leu Leu
Asp Arg Leu Asp 35
Ala Gly Pro Val 50
Gly Pro Val Pro 65
Asp Gln Asp Cys
Asn Thr His Gln
100
Ser Trp Val Gly 115
Gln Val Pro Leu 130
Ser Glu Asp Tyr 145
Asn Thr Phe Ile
Ser Gly Lys Val
180
Arg Gly Ala Ala 5
Leu Leu Gln Leu
Ala Pro Pro Pro 40
Gly Val Ser Trp 55
Arg Ala Gly Arg 70
Gly Arg Leu Pro 85
His Val Phe Asp
Asp Ser Thr Gly
120
Val Ile Val Ser 135
Gly Lys Asn Phe 150
Arg Thr Glu Phe 165
Ile Leu Thr Ala
Asp Gly Leu Leu 10
Leu Pro Pro Ala 25
Pro Ala Pro Pro
Gly Leu Arg Ala 60
Trp Arg Arg Gly 75
Asp Phe Ile Ala 90
Asp Leu Ser Gly 105
Val Ile Leu Val
Phe Gly Gln Ser
140
Lys Asp Ile Thr 155
Gly Met Ala Ile 170
Glu Val Ser Gly 185
Arg Trp Pro Leu 15
Ala Val Gly Gln 30
Leu Leu Arg Trp 45
Ala Ala Pro Gly
Ala Pro Ala Glu 80
Lys Leu Thr Asn 95
Ser Val Ser Leu
110
Leu Thr Thr Phe 125
Lys Leu Tyr Arg
Asn Leu Ile Asn
160
Gly Pro Glu Asn 175
Gly Ser Arg Gly 190
- 157 046146
Gly Arg Val Phe 195
Asp Leu Pro Phe 210
Ser Asp Tyr Leu 225
Lys Asn Phe Gly
Ala Lys Trp Gly 260
Gly Ser Cys Lys 275
Asp Leu Gly Lys 290
Gly Leu Gly Gly 305
Thr Thr Arg Arg
Met Ala Gln Leu
340
Ala Ala Asn Glu 355
Thr Gly Phe Gly 370
Ser Lys Ser Leu 385
Asp Phe Thr Asn
Leu Ser Glu Asp 420
Gly Arg Trp Glu 435
Thr Ala Lys Asn 450
Ser Ile Ser Gln 465
Asn Ala Val Gly
Ser Val Met Val 500
Trp Ala Lys Met 515
Gly Gly Ile Ile 530
Ile Lys Phe Ser 545
Thr Gln Glu Pro
Arg Ser Met Asn 580
Arg Gln Trp Val 595
Asn Cys Glu Glu 610
Pro Gly Asp Tyr 625
Leu Arg Leu Arg
Val Ala Lys Gln 660
Cys Asp Phe Gly 675
Gln Pro Glu Leu
Arg
His
Leu
Glu 245 Pro
Ala
Thr
Arg
Ile 325 Pro
Asp
Thr
Asp
Val 405 Asn
His
Lys
Lys
Ile 485 Pro
Leu
Val
Thr
Ile 565 Ile
Ser
Asp
Lys
Lys 645 Pro
Tyr
Lys
Ser Ser Asp Phe Ala Lys Asn Phe Val Gln 200205
Pro Leu Thr Gln Met Met Tyr Ser Pro Gln 215220
Ala Leu Ser Thr Glu Asn Gly Leu Trp Val 230235
Lys Trp Glu Glu Ile His Lys Ala Val Cys 250255
Asn Asn Ile Ile Phe Phe Thr Thr His Val 265270
Asp Leu Gly Ala Leu Glu Leu Trp Arg Thr 280285
Phe Lys Thr Ile Gly Val Lys Ile Tyr Ser 295300
Phe Leu Phe Ala Ser Val Met Ala Asp Lys 310315
His Val Ser Thr Asp Gln Gly Asp Thr Trp 330335
Ser Val Gly Gln Glu Gln Phe Tyr Ser Ile 345350
Met Val Phe Met His Val Asp Glu Pro Gly 360365
Ile Phe Thr Ser Asp Asp Arg Gly Ile Val 375380
Arg His Leu Tyr Thr Thr Thr Gly Gly Glu 390395
Thr Ser Leu Arg Gly Val Tyr Ile Thr Ser 410415
Ser Ile Gln Ser Met Ile Thr Phe Asp Gln 425430
Leu Arg Lys Pro Glu Asn Ser Lys Cys Asp 440445
Asn Glu Cys Ser Leu His Ile His Ala Ser 455460
Leu Asn Val Pro Met Ala Pro Leu Ser Glu 470475
Val Ile Ala His Gly Ser Val Gly Asp Ala 490495
Asp Val Tyr Ile Ser Asp Asp Gly Gly Tyr 505510
Glu Gly Pro His Tyr Tyr Thr Ile Leu Asp 520525
Ala Ile Glu His Ser Asn Arg Pro Ile Asn 535540
Asp Glu Gly Gln Cys Trp Gln Ser Tyr Val 550555
Tyr Phe Thr Gly Leu Ala Ser Glu Pro Gly 570575
Ser Ile Trp Gly Phe Thr Glu Ser Phe Ile 585590
Tyr Thr Val Asp Phe Lys Asp Ile Leu Glu 600605
Asp Tyr Thr Thr Trp Leu Ala His Ser Thr 615620
Asp Gly Cys Ile Leu Gly Tyr Lys Glu Gln 630635
Ser Ser Val Cys Gln Asn Gly Arg Asp Tyr 650655
Ser Val Cys Pro Cys Ser Leu Glu Asp Phe 665670
Phe Arg Pro Glu Asn Ala Ser Glu Cys Val 680685
Gly His Glu Leu Glu Phe Cys Leu Tyr Gly
Thr
Asn
Ser 240 Leu
Asn
Ser
Phe
Asp 320 Ser
Leu
Asp
Tyr
Thr 400 Thr
Gly
Ala
Tyr
Pro 480
Ile
Ser
Ser
Val
Phe 560 Ala
Thr
Arg
Asp
Phe 640 Val
Leu
Glu
Lys
- 158 046146
690 695
Glu Glu His Leu Thr Thr Asn 705 710
Cys Gln Gly Gly Met Asn Pro 725
Lys Cys Thr Ser Asn Phe Leu 740
Asn Ser Val Pro Ile Ile Leu 755
Val Val Ala Gly Val Leu Ile 770 775
Phe Leu Val His Arg Tyr Ser 785 790
Gly Val Glu Ala Leu Asp Ser 805
Asp Asp Ser Asp Glu Asp Leu 820
700
Gly Tyr Arg Lys Ile Pro Gly Asp Lys 715720
Ala Arg Glu Val Lys Asp Leu Lys Lys 730735
Asn Pro Thr Lys Gln Asn Ser Lys Ser 745750
Ala Ile Val Gly Leu Met Leu Val Thr 760765
Val Lys Lys Tyr Val Cys Gly Gly Arg 780
Val Leu Gln Gln His Ala Glu Ala Asp 795800
Thr Ser His Ala Lys Ser Gly Tyr His 810815
Leu Glu
825 <210> 83 <211> 825 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 83
Met Glu Arg Pro Arg Gly Ala Ala 15
Gly Leu Leu Leu Leu Leu Gln Leu 20
Asp Arg Leu Asp Ala Pro Pro Pro 3540
Ala Gly Pro Val Gly Val Ser Trp 5055
Gly Pro Val Pro Arg Ala Gly Arg 6570
Asp Gln Asp Cys Gly Arg Leu Pro 85
Asn Thr His Gln His Val Phe Asp 100
Ser Trp Val Gly Asp Ser Thr Gly 115120
Gln Val Pro Leu Val Ile Val Ser 130135
Ser Glu Asp Tyr Gly Lys Asn Phe 145150
Asn Thr Phe Ile Arg Thr Glu Phe 165
Ser Gly Lys Val Ile Leu Thr Ala 180
Gly Arg Val Phe Arg Ser Ser Asp 195200
Asp Leu Pro Phe His Pro Leu Thr 210215
Ser Asp Tyr Leu Leu Ala Leu Ser 225230
Lys Asn Phe Gly Glu Lys Trp Glu 245
Ala Lys Trp Gly Pro Asn Asn Ile 260
Gly Ser Cys Lys Ala Asp Leu Gly 275280
Asp Leu Gly Lys Thr Phe Lys Thr 290295
Asp Gly Leu Leu Arg Trp Pro Leu 1015
Leu Pro Pro Ala Ala Val Gly Gln 2530
Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Trp 45
Gly Leu Arg Ala Ala Ala Pro Gly 60
Trp Arg Arg Gly Ala Pro Ala Glu 7580
Asp Phe Ile Ala Lys Leu Thr Asn 9095
Asp Leu Ser Gly Ser Val Ser Leu 105110
Val Ile Leu Val Leu Thr Thr Phe 125
Phe Gly Gln Ser Lys Leu Tyr Arg 140
Lys Asp Ile Thr Asn Leu Ile Asn 155160
Gly Met Ala Ile Gly Pro Glu Asn 170175
Glu Val Ser Gly Gly Ser Arg Gly 185190
Phe Ala Lys Asn Phe Val Gln Thr 205
Gln Met Met Tyr Ser Pro Gln Asn 220
Thr Glu Asn Gly Leu Trp Val Ser 235240
Glu Ile His Lys Ala Val Cys Leu 250255
Ile Phe Phe Thr Thr His Val Asn
265270
Ala Leu Glu Leu Trp Arg Thr Ser 285
Ile Gly Val Lys Ile Tyr Ser Phe 300
- 159 046146
Gly Leu Gly Gly Arg 305
Thr Thr Arg Arg Ile 325
Met Ala Gln Leu Pro
340
Ala Ala Asn Asp Asp 355
Thr Gly Phe Gly Thr 370
Ser Lys Ser Leu Asp 385
Asp Phe Thr Asn Val 405
Leu Ser Glu Asp Asn 420
Gly Arg Trp Glu His 435
Thr Ala Lys Asn Lys 450
Ser Ile Ser Gln Lys 465
Asn Ala Val Gly Ile 485
Ser Val Met Val Pro 500
Trp Ala Lys Met Leu 515
Gly Gly Ile Ile Val 530
Ile Lys Phe Ser Thr 545
Ser Gln Glu Pro Val
565
Arg Ser Met Asn Ile 580
Arg Gln Trp Val Ser 595
Asn Cys Glu Glu Asn 610
Pro Gly Asp Tyr Lys 625
Leu Arg Leu Arg Lys 645
Val Ala Lys Gln Pro 660
Cys Asp Phe Gly Tyr 675
Gln Pro Glu Leu Lys 690
Glu Glu His Leu Thr 705
Cys Gln Gly Gly Met 725
Lys Cys Thr Ser Asn 740
Ser Ser Val Pro Ile 755
Val Val Ala Gly Val 770
Phe Leu Val His Arg 785
Gly Val Glu Ala Leu
Phe Leu Phe Ala Ser 310
His Val Ser Thr Asp
330
Ser Val Gly Gln Glu 345
Met Val Phe Met His 360
Ile Phe Thr Ser Asp 375
Arg His Leu Tyr Thr 390
Thr Ser Leu Arg Gly 410
Ser Ile Gln Ser Met 425
Leu Gln Lys Pro Glu 440
Asn Glu Cys Ser Leu 455
Leu Asn Val Pro Met 470
Val Ile Ala His Gly
490
Asp Val Tyr Ile Ser 505
Glu Gly Pro His Tyr 520
Ala Ile Glu His Ser 535
Asp Glu Gly Gln Cys 550
Tyr Phe Thr Gly Leu 570
Ser Ile Trp Gly Phe 585
Tyr Thr Ile Asp Phe 600
Asp Tyr Thr Thr Trp 615
Asp Gly Cys Ile Leu 630
Ser Ser Val Cys Gln 650
Ser Ile Cys Pro Cys 665
Phe Arg Pro Glu Asn 680
Gly His Glu Leu Glu 695
Thr Asn Gly Tyr Arg 710
Asn Pro Ala Arg Glu 730
Phe Leu Asn Pro Lys 745
Ile Leu Ala Ile Val 760
Leu Ile Val Lys Lys 775
Tyr Ser Val Leu Gln 790
Asp Thr Ala Ser His
Val Met Ala Asp Lys 315
Gln Gly Asp Thr Trp 335
Gln Phe Tyr Ser Ile 350
Val Asp Glu Pro Gly 365
Asp Arg Gly Ile Val 380
Thr Thr Gly Gly Glu 395
Val Tyr Ile Thr Ser 415
Ile Thr Phe Asp Gln 430
Asn Ser Lys Cys Asp 445
His Ile His Ala Ser 460
Ala Pro Leu Ser Glu 475
Ser Val Gly Asp Ala 495
Asp Asp Gly Gly Tyr 510
Tyr Thr Ile Leu Asp 525
Asn Arg Pro Ile Asn 540
Trp Gln Ser Tyr Val 555
Ala Ser Glu Pro Gly 575
Thr Glu Ser Phe Leu
590
Lys Asp Ile Leu Glu 605
Leu Ala His Ser Thr 620
Gly Tyr Lys Glu Gln 635
Asn Gly Arg Asp Tyr 655
Ser Leu Glu Asp Phe 670
Ala Ser Glu Cys Val 685
Phe Cys Leu Tyr Gly 700
Lys Ile Pro Gly Asp 715
Val Lys Asp Leu Lys 735
Lys Gln Asn Ser Lys 750
Gly Leu Met Leu Val 765
Tyr Val Cys Gly Gly 780
Gln His Ala Glu Ala 795
Ala Lys Ser Gly Tyr
Asp 320 Ser
Leu
Asp
Tyr
Thr 400 Thr
Gly
Ala
Tyr
Pro 480 Ile
Ser
Ser
Val
Phe 560 Ala
Thr
Arg
Asp
Phe 640 Val
Leu
Glu
Lys
Arg 720 Lys
Ser
Thr
Arg
Asp 800 His
- 160 046146
805 810
Asp Asp Ser Asp Glu Asp Leu Leu Glu 820 825
815 <210> 84 <211> 8 <212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Синтетический конструкт <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> Xaa = Ser или Thr <220>
< 221> VARIANT < 222> 2 < 223> Xaa = любая аминокислота <220>
< 221> VARIANT < 222> 3 < 223> Xaa = Asp или Asn <220>
< 221> VARIANT < 222> 4, 5, 6, 7 < 223> Xaa = любая аминокислота <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> Xaa = Trp, Phe, или Tyr < 400> 84
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
5 <210> 85 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <220>
<221> VARIANT <222> 1, 2 <223> Xaa = любая аминокислота <220>
<221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Ser или Thr <220>
<221> VARIANT
- 161 046146 <222> 4 <223> Xaa = любая аминокислота <220>
<221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = Asp или Asn <220>
<221> VARIANT <222> 6, 8 <223> Xaa = любая аминокислота <220>
<221> VARIANT <222> 9 <223> Xaa = Thr или Ser <220>
<221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = Trp, Phe, или Tyr <220>
<221> VARIANT <222> 11 <223> Xaa = любая аминокислота <400> 85
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa
5 10 <210> 86 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 86
Ser Ser Asp Phe Ala Lys Asn Phe
5 <210> 87 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 87
Asn Gln Phe Ser Leu Lys
5 <210> 88 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
- 162 046146 <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 88
Gln Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 1 5 10 15
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys <210> 89 <211> 49 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 89
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
1 5 10 15
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
20 25 30
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
35 40 45
Lys <210> 90 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 90
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
5 <210> 91 <211> 33 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 91
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
1 5 10 15
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
20 25 30
Lys <210> 92 <211> 16 <212> БЕЛОК
- 163 046146 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 92
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
5 10 15 <210> 93 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 93
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr 1 5 10 15 <210> 94 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 94
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
5 10 <210> 95 <211> 22 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 95
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 1 5 10 15
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 20 <210> 96 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 96
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 1 5 10 15
His Asn His Tyr Thr Gln Lys
Lys
Lys
Gln
Leu
- 164 046146 <210> 97 <211> 24 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 97
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg <210> 98 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 98
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg
5 <210> 99 <211> 28 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 99
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 1 5 10 15
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg 20 25 <210> 100 <211> 26 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 100
Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gln Gln Glu 1 5 10 15
Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
25 <210> 101 <211> 16
- 165 046146 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 101
Ser Gly Thr Ala Ser
5 последовательность конструкт
Val Val Cys Leu Leu
Asn Asn Phe Tyr Pro
Arg <210> 102 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 102
Val Asp Asn Ala Leu 1 5
Gln Asp Ser Lys последовательность конструкт
Gln Ser Gly Asn Ser
Gln Glu Ser Val Thr
Glu <210> 103 <211> 330 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 103
Ala Ser Thr Lys Gly 1 5
Ser Thr Ser Gly Gly 20
Phe Pro Glu Pro Val 35
Gly Val His Thr Phe 50
Leu Ser Ser Val Val 65
Tyr Ile Cys Asn Val 85
Lys Val Glu Pro Lys 100
Pro Ala Pro Glu Ala
115
Lys Pro Lys Asp Thr 130
Val Val Val Asp Val 145
Tyr Val Asp Gly Val 165
Glu Gln Tyr Asn Ser 180
His Gln Asp Trp Leu 195
Lys Ala Leu Pro Ala 210 последовательность конструкт
Pro Ser Val Phe Pro 10
Thr Ala Ala Leu Gly 25
Thr Val Ser Trp Asn 40
Pro Ala Val Leu Gln 55
Thr Val Pro Ser Ser 70
Asn His Lys Pro Ser 90
Ser Cys Asp Lys Thr 105
Ala Gly Gly Pro Ser 120
Leu Met Ile Ser Arg 135
Ser His Glu Asp Pro 150
Glu Val His Asn Ala 170
Thr Tyr Arg Val Val 185
Asn Gly Lys Glu Tyr 200
Ser Ile Glu Lys Thr 215
Leu Ala Pro Ser Ser 15
Cys Leu Val Lys Asp 30
Ser Gly Ala Leu Thr 45
Ser Ser Gly Leu Tyr 60
Ser Leu Gly Thr Gln 75
Asn Thr Lys Val Asp 95
His Thr Cys Pro Pro 110
Val Phe Leu Phe Pro 125
Thr Pro Glu Val Thr 140
Glu Val Lys Phe Asn 155
Lys Thr Lys Pro Arg 175
Ser Val Leu Thr Val 190
Lys Cys Lys Val Ser 205
Ile Ser Lys Ala Lys 220
Lys
Tyr
Ser
Ser
Thr 80 Lys
Cys
Pro
Cys
Trp 160 Glu
Leu
Asn
Gly
- 166 046146
Gln 225 Leu
Pro
Asn
Leu
Val 305 Gln
Pro Arg Glu Pro Gln 230
Thr Lys Asn Gln Val 245
Ser Asp Ile Ala Val 260
Tyr Lys Thr Thr Pro 275
Tyr Ser Lys Leu Thr 290
Phe Ser Cys Ser Val 310
Lys Ser Leu Ser Leu 325
Val Tyr Thr Leu
Ser Leu Thr Cys 250
Glu Trp Glu Ser 265
Pro Val Leu Asp 280
Val Asp Lys Ser 295
Met His Glu Ala
Ser Pro Gly Lys 330
Pro Pro Ser Arg Asp 235
Leu Val Lys Gly Phe 255
Asn Gly Gln Pro Glu 270
Ser Asp Gly Ser Phe 285
Arg Trp Gln Gln Gly 300
Leu His Asn His Tyr 315
Glu 240 Tyr
Asn
Phe
Asn
Thr 320 <210> 104 <211> 329 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 104
Ala Ser Thr Lys Gly 1 5
Ser Thr Ser Gly Gly 20
Phe Pro Glu Pro Val 35
Gly Val His Thr Phe 50
Leu Ser Ser Val Val 65
Tyr Ile Cys Asn Val 85
Lys Val Glu Pro Lys 100
Pro Ala Pro Glu Ala
115
Lys Pro Lys Asp Thr 130
Val Val Val Asp Val 145
Tyr Val Asp Gly Val 165
Glu Gln Tyr Asn Ser 180
His Gln Asp Trp Leu 195
Lys Ala Leu Pro Ala 210
Gln Pro Arg Glu Pro 225
Leu Thr Lys Asn Gln 245
Pro Ser Asp Ile Ala 260
Asn Tyr Lys Thr Thr 275 Leu Tyr Ser Lys Leu 290 последовательность конструкт
Pro Ser Val Phe Pro 10
Thr Ala Ala Leu Gly 25
Thr Val Ser Trp Asn 40
Pro Ala Val Leu Gln 55
Thr Val Pro Ser Ser 70
Asn His Lys Pro Ser 90
Ser Cys Asp Lys Thr 105
Ala Gly Gly Pro Ser 120
Leu Met Ile Ser Arg 135
Ser His Glu Asp Pro 150
Glu Val His Asn Ala 170
Thr Tyr Arg Val Val 185
Asn Gly Lys Glu Tyr 200
Ser Ile Glu Lys Thr 215
Gln Val Tyr Thr Leu 230
Val Ser Leu Thr Cys 250
Val Glu Trp Glu Ser 265
Pro Pro Val Leu Asp 280
Thr Val Asp Lys Ser 295
Leu Ala Pro Ser Ser 15
Cys Leu Val Lys Asp 30
Ser Gly Ala Leu Thr 45
Ser Ser Gly Leu Tyr 60
Ser Leu Gly Thr Gln 75
Asn Thr Lys Val Asp 95
His Thr Cys Pro Pro 110
Val Phe Leu Phe Pro 125
Thr Pro Glu Val Thr
140
Glu Val Lys Phe Asn 155
Lys Thr Lys Pro Arg 175
Ser Val Leu Thr Val 190
Lys Cys Lys Val Ser 205
Ile Ser Lys Ala Lys 220
Pro Pro Ser Arg Asp 235
Leu Val Lys Gly Phe 255
Asn Gly Gln Pro Glu 270
Ser Asp Gly Ser Phe 285
Arg Trp Gln Gln Gly 300
Lys
Tyr
Ser
Ser
Thr 80 Lys
Cys
Pro
Cys
Trp 160 Glu
Leu
Asn
Gly
Glu 240 Tyr
Asn
Phe
Asn
- 167 046146
Val Phe Ser Cys 305
Gln Lys Ser Leu
Ser Val Met His Glu Ala
310
Ser Leu Ser Pro Gly
325
Leu His Asn His Tyr 315
Thr
320 <210> 105 <211> 452 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 105
Gln Val Gln Leu Gln 1 5
Thr Leu Ser Leu Thr 20
Tyr Tyr Trp Gly Trp 35
Ile Gly Thr Ile Tyr 50
Lys Ser Gln Val Thr 65
Leu Glu Leu Ser Ser 85
Ala Arg Gln Gly Ser 100
Gly Gln Gly Thr Thr 115 Ser Val Phe Pro Leu 130
Ala Ala Leu Gly Cys 145
Val Ser Trp Asn Ser 165
Ala Val Leu Gln Ser 180
Val Pro Ser Ser Ser 195
His Lys Pro Ser Asn 210
Cys Asp Lys Thr His 225
Gly Gly Pro Ser Val 245
Met Ile Ser Arg Thr 260
His Glu Asp Pro Glu 275
Val His Asn Ala Lys 290
Tyr Arg Val Val Ser 305
Gly Lys Glu Tyr Lys 325
Ile Glu Lys Thr Ile 340
Val Tyr Thr Leu Pro 355
Ser Leu Thr Cys Leu 370 последовательность конструкт
Glu Ser Gly Pro Gly 10
Cys Ala Val Ser Gly 25
Ile Arg Gln Pro Pro 40
His Ser Gly Ser Thr 55
Ile Ser Val Asp Thr 70
Val Thr Ala Ala Asp 90
Ile Gln Gln Gly Tyr 105
Val Thr Val Ser Ser 120
Ala Pro Ser Ser Lys 135
Leu Val Lys Asp Tyr 150
Gly Ala Leu Thr Ser 170
Ser Gly Leu Tyr Ser 185
Leu Gly Thr Gln Thr 200
Thr Lys Val Asp Lys 215
Thr Cys Pro Pro Cys 230
Phe Leu Phe Pro Pro 250
Pro Glu Val Thr Cys 265
Val Lys Phe Asn Trp 280
Thr Lys Pro Arg Glu 295
Val Leu Thr Val Leu 310
Cys Lys Val Ser Asn 330
Ser Lys Ala Lys Gly 345
Pro Ser Arg Asp Glu 360
Val Lys Gly Phe Tyr 375
Leu Val Lys Pro Ser 15
Tyr Ser Ile Ser Ser 30
Gly Lys Gly Leu Glu 45
Tyr Tyr Asn Pro Ser 60
Ser Lys Asn Gln Phe 75
Thr Ala Val Tyr Tyr 95
Tyr Gly Met Asp Val 110
Ala Ser Thr Lys Gly 125
Ser Thr Ser Gly Gly 140
Phe Pro Glu Pro Val 155
Gly Val His Thr Phe 175
Leu Ser Ser Val Val 190
Tyr Ile Cys Asn Val 205
Lys Val Glu Pro Lys 220
Pro Ala Pro Glu Ala 235
Lys Pro Lys Asp Thr 255
Val Val Val Asp Val 270
Tyr Val Asp Gly Val 285
Glu Gln Tyr Asn Ser 300
His Gln Asp Trp Leu 315
Lys Ala Leu Pro Ala 335
Gln Pro Arg Glu Pro 350
Leu Thr Lys Asn Gln 365
Pro Ser Asp Ile Ala 380
Glu
Gly
Trp
Leu
Ser 80 Cys
Trp
Pro
Thr
Thr 160 Pro
Thr
Asn
Ser
Ala 240 Leu
Ser
Glu
Thr
Asn 320 Ser
Gln
Val
Val
- 168 046146
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390395
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440445
Ser Pro Gly Lys
450
Pro 400 Thr
Val
Leu <210> 106 <211> 451 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 106
Gln Val Gln Leu Gln 1 5
Thr Leu Ser Leu Thr
Tyr Tyr Trp Gly Trp 35
Ile Gly Thr Ile Tyr 50
Lys Ser Gln Val Thr 65
Leu Glu Leu Ser Ser 85
Ala Arg Gln Gly Ser 100
Gly Gln Gly Thr Thr 115
Ser Val Phe Pro Leu
130
Ala Ala Leu Gly Cys 145
Val Ser Trp Asn Ser 165
Ala Val Leu Gln Ser 180
Val Pro Ser Ser Ser 195
His Lys Pro Ser Asn 210
Cys Asp Lys Thr His 225
Gly Gly Pro Ser Val 245
Met Ile Ser Arg Thr 260
His Glu Asp Pro Glu 275
Val His Asn Ala Lys 290
Tyr Arg Val Val Ser 305
Gly Lys Glu Tyr Lys
325 последовательность конструкт
Glu Ser Gly Pro Gly 10
Cys Ala Val Ser Gly 25
Ile Arg Gln Pro Pro 40
His Ser Gly Ser Thr 55
Ile Ser Val Asp Thr 70
Val Thr Ala Ala Asp 90
Ile Gln Gln Gly Tyr 105
Val Thr Val Ser Ser 120
Ala Pro Ser Ser Lys 135
Leu Val Lys Asp Tyr 150
Gly Ala Leu Thr Ser 170
Ser Gly Leu Tyr Ser 185
Leu Gly Thr Gln Thr 200
Thr Lys Val Asp Lys 215
Thr Cys Pro Pro Cys 230
Phe Leu Phe Pro Pro 250
Pro Glu Val Thr Cys 265
Val Lys Phe Asn Trp 280
Thr Lys Pro Arg Glu 295
Val Leu Thr Val Leu 310
Cys Lys Val Ser Asn 330
Leu Val Lys Pro Ser 15
Tyr Ser Ile Ser Ser 30
Gly Lys Gly Leu Glu 45
Tyr Tyr Asn Pro Ser 60
Ser Lys Asn Gln Phe 75
Thr Ala Val Tyr Tyr 95
Tyr Gly Met Asp Val 110
Ala Ser Thr Lys Gly 125
Ser Thr Ser Gly Gly 140
Phe Pro Glu Pro Val 155
Gly Val His Thr Phe 175
Leu Ser Ser Val Val 190
Tyr Ile Cys Asn Val 205
Lys Val Glu Pro Lys 220
Pro Ala Pro Glu Ala 235
Lys Pro Lys Asp Thr 255
Val Val Val Asp Val 270
Tyr Val Asp Gly Val 285
Glu Gln Tyr Asn Ser 300
His Gln Asp Trp Leu 315
Lys Ala Leu Pro Ala 335
Glu
Gly
Trp
Leu
Ser 80
Cys
Trp
Pro
Thr
Thr 160 Pro
Thr
Asn
Ser
Ala 240 Leu
Ser
Glu
Thr
Asn 320 Ser
- 169 046146
Ile Glu Lys Thr Ile 340
Val Tyr Thr Leu Pro 355
Ser Leu Thr Cys Leu 370
Glu Trp Glu Ser Asn 385
Pro Val Leu Asp Ser 405
Val Asp Lys Ser Arg 420
Met His Glu Ala Leu 435
Ser Pro Gly 450
Ser Lys Ala Lys Gly 345
Pro Ser Arg Asp Glu 360
Val Lys Gly Phe Tyr 375
Gly Gln Pro Glu Asn 390
Asp Gly Ser Phe Phe 410
Trp Gln Gln Gly Asn 425
His Asn His Tyr Thr 440
Gln Pro Arg Glu Pro 350
Leu Thr Lys Asn Gln 365
Pro Ser Asp Ile Ala 380
Asn Tyr Lys Thr Thr 395
Leu Tyr Ser Lys Leu 415
Val Phe Ser Cys Ser 430
Gln Lys Ser Leu Ser 445
Gln
Val
Val
Pro 400 Thr
Val
Leu <210> 107 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 107
Gln Val Gln Leu Gln 1 5
Thr Leu Ser Leu Thr
Arg Tyr Trp Gly Trp 35
Ile Gly Ser Ile Tyr 50
Lys Ser Arg Val Thr 65
Leu Lys Leu Ser Ser 85
Ala Arg Gln Gly Ser 100
Gly Gln Gly Thr Thr 115 последовательность конструкт
Glu Ser Gly Pro Gly 10
Cys Ala Val Ser Gly 25
Ile Arg Gln Pro Pro 40
His Ser Gly Ser Thr 55
Ile Ser Val Asp Thr 70
Val Thr Ala Ala Asp 90
Ile Lys Gln Gly Tyr 105
Val Thr Val Ser Ser 120
Leu Val Lys Pro Ser 15
Tyr Ser Ile Ser Ser 30
Gly Lys Gly Leu Glu 45
Tyr Tyr Asn Pro Ser 60
Ser Lys Asn Gln Phe 75
Thr Ala Val Tyr Tyr 95
Tyr Gly Met Asp Val 110
Glu
Val
Trp
Leu
Ser 80 Cys
Trp <210> 108 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 108
Gln Val Gln Leu Gln 1 5
Thr Leu Ser Leu Thr
Arg Tyr Trp Gly Trp 35
Ile Gly Ala Ile Tyr
Lys Ser Arg Val Thr последовательность конструкт
Glu Ser Gly Pro Gly 10
Cys Ala Val Ser Gly 25
Ile Arg Gln Pro Pro 40
Pro Ser Gly Ser Thr 55
Ile Ser Val Asp Thr
Leu Val Lys Pro Ser 15
Tyr Ser Ile Ser Ser 30
Gly Lys Gly Leu Glu 45
Tyr Tyr Asn Pro Ser 60
Ser Lys Asn Gln Phe
Glu
Val
Trp
Leu
Ser
- 170 046146
70
Leu Lys Leu Ser Ser Val 85
Ala Arg Gln Gly Ser Ile 100
Gly Gln Gly Thr Thr Val 115
7580
Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Lys Gln Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 105110
Thr Val Ser Ser
120 <210> 109 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 109
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val 20
Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln 3540
Ile Gly Thr Ile Tyr His Ser Gly 5055
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val 6570
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala 85
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Lys Gln 100
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115120
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1015
Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 2530
Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 45
Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 60
Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 7580
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 105110
Ser Ser <210> 110 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 110
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 1015
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 20 2530
Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 4045
Ile Gly Thr Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 5560
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln PheSer
70 7580
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Lys Gln Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 100 105110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115120
- 171 046146 <210> 111 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 111
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 1015
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 20 2530
Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 4045
Ile Gly Thr Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 5560
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln PheSer
70 7580
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Lys Gln Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 100 105110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115120 <210> 112 <211> 122 <212> БЕЛОК <213>
Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 112
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val 20
Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln 3540
Ile Gly Thr Ile Tyr His Ser Gly 5055
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val
6570
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala 85
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Lys Gln 100
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115120
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1015
Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 2530
Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 45
Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 60
Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 7580
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 105110
Ser Ser <210> 113 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 113
- 172 046146
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Val Glu Ala 85
Gln Glu Thr Pro Leu 100
Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 1015
Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His 2530
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 4045
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 7075
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln 9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 105110
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80
Gln
Lys <210> 114 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223>
<400> 114
Asp Ile Val 1
Glu Pro Ala
Asn Gly Tyr 35
Pro Gln Leu 50
Asp Arg Phe 65
Ser Arg Val
Gln Glu Thr
Синтетический конструкт
Met Thr Gln 5
Ser Ile Ser 20
Asn Tyr Leu
Leu Ile Tyr
Ser Gly Ser 70
Glu Ala Glu 85
Pro Leu Thr 100
Ser Pro Leu
Cys Arg Ser 25
Asp Trp Tyr 40
Leu Gly Ser 55
Gly Ser Gly
Asp Val Gly
Phe Gly Gly
105
Ser Leu Pro 10
Ser Gln Ser
Leu Gln Lys
Asn Arg Ala 60
Thr Asp Phe 75
Val Tyr Tyr 90
Gly Thr Lys
Val Thr Pro 15
Leu Leu His 30
Pro Gly Gln 45
Ser Gly Val
Thr Leu Lys
Cys Met Gln 95
Val Glu Ile
110
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80
Gln
Lys <210> 115 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 115
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Val Glu Ala 85
Gln Glu Thr Pro Leu последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser 10
Ser Cys Arg Ser Ser 25
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly
Leu Pro Val Thr Pro 15
Gln Ser Leu Leu Arg 30
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Val Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile
Gly
Ser
Pro
Pro
Ile 80
Gln
Lys
- 173 046146
100 105 110
116
112
БЕЛОК
Искусственная <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<400> 116
Asp Ile Val Met 1
Glu Ser Ala Ser
Asn Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Val Glu
Gln Glu Thr Pro
100
Синтетический последовательность конструкт
Pro
Arg
Thr Gln Ser 5
Ile Ser Cys
Tyr Leu Asp Trp 40
Ile Tyr Leu Gly 55
Gly Ser Gly Ser 70
Ala Glu Asp Val 85
Leu Thr Phe Gly
Leu Ser Leu Pro 10
Ser Ser Gln Gly 25
Tyr Leu Gln Lys
Ser Asn Arg Ala 60
Gly Thr Asp Phe 75
Gly Val Tyr Tyr 90
Gly Gly Thr Lys 105
Val Thr Pro Gly 15
Leu Leu Arg Ser 30
Pro Gly Gln Ser 45
Ser Gly Val Pro
Thr Leu Lys Ile 80
Cys Met Gln Gln 95
Val Glu Ile Lys 110
117
112
БЕЛОК
Искусственная <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<400> 117
Asp Ile Val Met 1
Glu Pro Ala Ser
Asn Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Val Glu
Gln Glu Thr Pro
100
Синтетический последовательность конструкт
Pro
Arg
Thr Gln Ser 5
Ile Ser Cys
Tyr Leu Asp Trp 40
Ile Tyr Leu Gly 55
Gly Ser Gly Ser 70
Ala Glu Asp Val 85
Leu Thr Phe Gly
Leu Ser Leu Pro 10
Ser Ser Gln Ser 25
Tyr Leu Gln Lys
Ser Asn Arg Ala 60
Gly Thr Asp Phe 75
Gly Val Tyr Tyr 90
Gly Gly Thr Lys 105
Val Thr Pro Gly 15
Leu Leu Arg Ser 30
Pro Gly Gln Ser 45
Ser Gly Val Pro
Thr Leu Lys Ile 80
Cys Met Gln Gln 95
Val Glu Ile Lys 110 <210> 118 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 118
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
- 174 046146
Gly Pro Ala Ser 20
Asn Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Val Glu
Gln Glu Thr Pro 100
Ile Ser Cys Arg
Tyr Leu Asp Trp 40
Ile Tyr Leu Gly 55
Gly Ser Gly Ser 70
Ala Glu Asp Val 85
Leu Thr Phe Gly
15
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg 25 30
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 45
Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 60
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 75
Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln 90 95
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 105 110
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys <210> 119 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 119
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
His Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln
165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser 10
Ser Cys Arg Ser Ser 25
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val
135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu
170
Ser Thr Leu Thr Leu
185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu 215
Leu Pro Val Thr Pro 15
Gln Ser Leu Leu Arg 30
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp 175
Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser <210> 120 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 120
- 175 046146
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Lys Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala LeuGln
145 150 155160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys AspSer
165 170175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
215 <210> 121 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 121
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Gln Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala LeuGln
145 150 155160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys AspSer
165 170175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180
185
190
- 176 046146
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
200205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
215 <210> 122 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 122
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile
Tyr Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1015
Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 2530
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 4045
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 70 7580
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 105110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 120125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 135140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 150 155160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 185190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 200205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 <210> 123 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 123
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile
Glu Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1015
Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 2530
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 4045
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
- 177 046146
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val 135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu
170
Ser Thr Leu Thr Leu 185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu 215
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp 175
Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys
Gln
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser <210> 124 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 124
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Trp Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser 10
Ser Cys Arg Ser Ser 25
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val 135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu 170 Ser Thr Leu Thr Leu 185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu 215
Leu Pro Val Thr Pro 15
Gln Ser Leu Leu Arg 30
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp 175
Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser <210> 125 <211> 219 <212> БЕЛОК
- 178 046146 <213> Искусственная последовательно <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 125
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser 2025
Phe Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr 3540
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser 5055
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 6570
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly 85
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly 100105
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 115120
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 130135
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
145150
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr 165
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 180185
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val 195200
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly 210215 <210> 126 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательно <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 126
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser 2025
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr 3540
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser 5055
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 6570
Ser Arg Ala Glu Ala Glu Asp Val Gly 85
Gln Glu Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly 100105
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 115120
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 130135
Leu Pro Val Thr Pro Gly 15
Gln Ser Leu Leu Arg Ser 30
Gln Lys Pro Gly Gln Ser 45
Arg Ala Ser Gly Val Pro 60
Asp Phe Thr Leu Lys Ile 75 80
Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile Lys 110
Phe Pro Pro Ser Asp Glu 125
Cys Leu Leu Asn Asn Phe 140
Val Asp Asn Ala Leu Gln 155 160
Gln Asp Ser Lys Asp Ser 175
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 190
His Gln Gly Leu Ser Ser 205
Cys
Leu Pro Val Thr Pro Gly 15
Gln Ser Leu Leu Arg Ser 30
Gln Lys Pro Gly Gln Ser 45
Arg Ala Ser Gly Val Pro 60
Asp Phe Thr Leu Lys Ile 75 80
Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile Lys 110
Phe Pro Pro Ser Asp Glu 125
Cys Leu Leu Asn Asn Phe 140
- 179 046146
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys AspSer
165 170175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210215 <210> 127 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 127
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Val Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser Leu 10
Ser Cys Arg Ser Ser Gln 25
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln 40
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg 55
Ser Gly Ser Gly Thr Asp 70 75
Glu Asp Val Gly Val Tyr 90
Thr Phe Gly Gly Gly Thr 105
Pro Ser Val Phe Ile Phe 120
Thr Ala Ser Val Val Cys 135
Lys Val Gln Trp Lys Val 150 155
Glu Ser Val Thr Glu Gln 170
Ser Thr Leu Thr Leu Ser 185
Ala Cys Glu Val Thr His 200
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215
Pro Val Thr Pro Gly 15
Ser Leu Leu Arg Ser 30
Lys Pro Gly Gln Ser 45
Ala Ser Gly Val Pro 60
Phe Thr Leu Lys Ile 80
Tyr Cys Met Gln Gln 95
Lys Val Glu Ile Lys 110
Pro Pro Ser Asp Glu 125
Leu Leu Asn Asn Phe 140
Asp Asn Ala Leu Gln 160
Asp Ser Lys Asp Ser 175
Lys Ala Asp Tyr Glu 190
Gln Gly Leu Ser Ser 205 <210> 128 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 128
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser
- 180 046146
Ala Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu
100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln
165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly
105
Pro Ser Val Phe Ile
120
Thr Ala Ser Val Val
135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu
170
Ser Thr Leu Thr Leu
185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu 215
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile
110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp 175
Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser <210> 129 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 129
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Met Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser 10
Ser Cys Arg Ser Ser 25
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val 135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu 170 Ser Thr Leu Thr Leu 185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu
Leu Pro Val Thr Pro 15
Gln Ser Leu Leu Arg 30
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp 175
Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser
- 181 046146
210
215 <210> 130 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 130
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Leu Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser Leu 10
Ser Cys Arg Ser Ser Gln 25
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln 40
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg 55
Ser Gly Ser Gly Thr Asp 70 75
Glu Asp Val Gly Val Tyr 90
Thr Phe Gly Gly Gly Thr 105
Pro Ser Val Phe Ile Phe 120
Thr Ala Ser Val Val Cys 135
Lys Val Gln Trp Lys Val 150 155
Glu Ser Val Thr Glu Gln 170
Ser Thr Leu Thr Leu Ser 185
Ala Cys Glu Val Thr His 200
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215
Pro Val Thr Pro Gly 15
Ser Leu Leu Arg Ser 30
Lys Pro Gly Gln Ser 45
Ala Ser Gly Val Pro 60
Phe Thr Leu Lys Ile 80
Tyr Cys Met Gln Gln 95
Lys Val Glu Ile Lys 110
Pro Pro Ser Asp Glu 125
Leu Leu Asn Asn Phe 140
Asp Asn Ala Leu Gln 160
Asp Ser Lys Asp Ser 175
Lys Ala Asp Tyr Glu 190
Gln Gly Leu Ser Ser 205 <210> 131 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 131
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 1015
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 20 2530
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 4045
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu LysIle
70 7580
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ala Tyr Tyr Cys Met GlnGln
9095
- 182 046146
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val
135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu 170
Ser Thr Leu Thr Leu 185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu 215
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp 175
Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser <210> 132 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 132
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Gly Pro Ala Ser Ile 20
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Leu Ser Gly 65 Ser Arg Val Glu Ala 85
Gln Glu Thr Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser 10
Ser Cys Arg Ser Ser 25
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val 135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu 170 Ser Thr Leu Thr Leu 185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu 215
Leu Pro Val Thr Pro 15
Gln Ser Leu Leu Arg 30
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp 175
Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys <210> 133 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
последовательность
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser
- 183 046146 <223> Синтетический <400> 133
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Val Glu Ala 85
Gln Glu Thr Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser 10
Ser Cys Arg Ser Ser 25
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val 135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu 170
Ser Thr Leu Thr Leu 185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu 215
Leu Pro Val Thr Pro 15
Gln Ser Leu Leu His 30
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp 175
Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser <210> 134 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 134
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Ser Ala Ser Ile 20
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Val Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser 10
Ser Cys Arg Ser Ser 25
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val 135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu
Leu Pro Val Thr Pro 15
Gln Gly Leu Leu Arg 30
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln
160
Ser
- 184 046146
165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210
170175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
185190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
200205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
215
Glu
Ser <210> 135 <211> 452 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 135
Gln Val Gln Leu Gln
5
Thr Leu Ser Leu Thr
Tyr Tyr Trp Gly Trp 35
Ile Gly Thr Ile Tyr 50
Glu Ser Arg Val Thr 65
Leu Lys Leu Ser Ser 85
Ala Arg Gln Gly Ser 100
Gly Gln Gly Thr Thr 115
Ser Val Phe Pro Leu
130
Ala Ala Leu Gly Cys 145
Val Ser Trp Asn Ser 165
Ala Val Leu Gln Ser 180
Val Pro Ser Ser Ser 195
His Lys Pro Ser Asn 210
Cys Asp Lys Thr His 225
Gly Gly Pro Ser Val
245
Met Ile Ser Arg Thr 260
His Glu Asp Pro Glu 275
Val His Asn Ala Lys 290
Tyr Arg Val Val Ser 305
Gly Lys Glu Tyr Lys
325
Ile Glu Lys Thr Ile 340
Val Tyr Thr Leu Pro последовательность конструкт
Glu
Cys
Ile
His
Ile 70
Val
Ile
Val
Ala
Leu 150 Gly
Ser
Leu
Thr
Thr 230 Phe
Pro
Val
Thr
Val 310 Cys
Ser
Pro
Ser Gly Pro
Ala Val Ser 25
Arg Gln Pro 40
Ser Gly Ser 55
Ser Val Asp
Thr Ala Ala
Gln Gln Gly 105
Thr Val Ser 120
Pro Ser Ser 135
Val Lys Asp
Ala Leu Thr
Gly Leu Tyr 185
Gly Thr Gln 200
Lys Val Asp 215
Cys Pro Pro
Leu Phe Pro
Glu Val Thr
265
Lys Phe Asn 280
Lys Pro Arg 295
Leu Thr Val
Lys Val Ser
Lys Ala Lys
345
Ser Arg Asp
Gly Leu Val 10
Gly Tyr Ser
Pro Gly Lys
Thr Tyr Tyr 60
Thr Ser Lys 75
Asp Thr Ala 90
Tyr Tyr Gly
Ser Ala Ser
Lys Ser Thr
140
Tyr Phe Pro 155
Ser Gly Val 170
Ser Leu Ser
Thr Tyr Ile
Lys Lys Val
220
Cys Pro Ala 235
Pro Lys Pro 250
Cys Val Val
Trp Tyr Val
Glu Glu Gln
300
Leu His Gln 315
Asn Lys Ala 330
Gly Gln Pro
Glu Leu Thr
Lys Pro Ser 15
Ile Ser Ser 30
Gly Leu Glu 45
Asn Pro Ser
Asn Gln Phe
Val Tyr Tyr 95
Met Asp Val 110
Thr Lys Gly 125
Ser Gly Gly
Glu Pro Val
His Thr Phe 175
Ser Val Val 190
Cys Asn Val 205
Glu Pro Lys
Pro Glu Ala
Lys Asp Thr 255
Val Asp Val 270
Asp Gly Val 285
Tyr Asn Ser
Asp Trp Leu
Leu Pro Ala
335
Arg Glu Pro 350
Lys Asn Gln
Glu
Gly
Trp
Leu
Ser 80
Cys
Trp
Pro
Thr
Thr 160 Pro
Thr
Asn
Ser
Ala 240 Leu
Ser
Glu
Thr
Asn 320 Ser
Gln
Val
- 185 046146
355 360365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr ThrPro
385 390 395400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys LeuThr
405 410415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440445
Ser Pro Gly Lys
450 <210> 136 <211> 451 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 136
Gln Val Gln Leu Gln 1 5
Thr Leu Ser Leu Thr
Tyr Tyr Trp Gly Trp 35
Ile Gly Thr Ile Tyr 50
Glu Ser Arg Val Thr 65
Leu Lys Leu Ser Ser 85
Ala Arg Gln Gly Ser 100
Gly Gln Gly Thr Thr 115
Ser Val Phe Pro Leu
130
Ala Ala Leu Gly Cys 145
Val Ser Trp Asn Ser
165
Ala Val Leu Gln Ser 180
Val Pro Ser Ser Ser 195
His Lys Pro Ser Asn 210
Cys Asp Lys Thr His 225
Gly Gly Pro Ser Val
245
Met Ile Ser Arg Thr 260
His Glu Asp Pro Glu 275
Val His Asn Ala Lys 290
Tyr Arg Val Val Ser последовательность конструкт
Glu Ser Gly Pro Gly Leu 10
Cys Ala Val Ser Gly Tyr 25
Ile Arg Gln Pro Pro Gly 40
His Ser Gly Ser Thr Tyr 55
Ile Ser Val Asp Thr Ser 70 75
Val Thr Ala Ala Asp Thr 90
Ile Gln Gln Gly Tyr Tyr 105
Val Thr Val Ser Ser Ala 120
Ala Pro Ser Ser Lys Ser 135
Leu Val Lys Asp Tyr Phe 150 155
Gly Ala Leu Thr Ser Gly 170
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 185
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 200
Thr Lys Val Asp Lys Lys 215
Thr Cys Pro Pro Cys Pro 230 235
Phe Leu Phe Pro Pro Lys 250
Pro Glu Val Thr Cys Val 265
Val Lys Phe Asn Trp Tyr 280
Thr Lys Pro Arg Glu Glu 295
Val Leu Thr Val Leu His
Val Lys Pro Ser Glu 15
Ser Ile Ser Ser Gly 30
Lys Gly Leu Glu Trp 45
Tyr Asn Pro Ser Leu 60
Lys Asn Gln Phe Ser 80
Ala Val Tyr Tyr Cys 95
Gly Met Asp Val Trp 110
Ser Thr Lys Gly Pro 125
Thr Ser Gly Gly Thr 140
Pro Glu Pro Val Thr
160
Val His Thr Phe Pro 175
Ser Ser Val Val Thr 190
Ile Cys Asn Val Asn 205
Val Glu Pro Lys Ser 220
Ala Pro Glu Ala Ala
240
Pro Lys Asp Thr Leu 255
Val Val Asp Val Ser 270
Val Asp Gly Val Glu 285
Gln Tyr Asn Ser Thr 300
Gln Asp Trp Leu Asn
- 186 046146
305
Gly Lys Glu Tyr Lys 325
Ile Glu Lys Thr Ile 340
Val Tyr Thr Leu Pro 355
Ser Leu Thr Cys Leu 370
Glu Trp Glu Ser Asn 385
Pro Val Leu Asp Ser 405
Val Asp Lys Ser Arg 420
Met His Glu Ala Leu 435
Ser Pro Gly 450
310 315
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 330
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 345
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 360
Val Lys 375 Gly Phe Tyr Pro Ser 380
Gly Gln 390 Pro Glu Asn Asn Tyr 395
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 410
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 425
His Asn His Tyr Thr Gln Lys 440
320
Leu Pro Ala Ser 335
Arg Glu Pro Gln 350
Lys Asn Gln Val 365
Asp Ile Ala Val
Lys Thr Thr Pro
400
Ser Lys Leu Thr 415
Ser Cys Ser Val 430
Ser Leu Ser Leu 445 <210> 137 <211> 452 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 137
Gln Val Gln Leu Gln 1 5
Thr Leu Ser Leu Thr 20
Tyr Tyr Trp Gly Trp 35
Ile Gly Thr Ile Tyr 50
Lys Ser Arg Val Thr 65
Leu Lys Leu Ser Ser 85
Ala Arg Gln Gly Ser 100
Gly Gln Gly Thr Thr 115
Ser Val Phe Pro Leu 130
Ala Ala Leu Gly Cys 145
Val Ser Trp Asn Ser 165
Ala Val Leu Gln Ser 180
Val Pro Ser Ser Ser
195
His Lys Pro Ser Asn 210
Cys Asp Lys Thr His 225
Gly Gly Pro Ser Val
245
Met Ile Ser Arg Thr последовательность конструкт
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1015
Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 2530
Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 4045
His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 5560
Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 70 7580
Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Ile Lys Gln Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 105110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 120125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 135140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 150 155160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 170175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 185190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 200205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 215220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 230 235240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 250255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
- 187 046146
260
His Glu Asp Pro Glu 275
Val His Asn Ala Lys 290
Tyr Arg Val Val Ser 305
Gly Lys Glu Tyr Lys
325
Ile Glu Lys Thr Ile 340
Val Tyr Thr Leu Pro 355
Ser Leu Thr Cys Leu 370
Glu Trp Glu Ser Asn 385
Pro Val Leu Asp Ser
405
Val Asp Lys Ser Arg 420
Met His Glu Ala Leu 435
Ser Pro Gly Lys 450
265
Val Lys Phe Asn Trp Tyr 280
Thr Lys Pro Arg Glu Glu 295
Val Leu Thr Val Leu His 310 315
Cys Lys Val Ser Asn Lys 330
Ser Lys Ala Lys Gly Gln 345
Pro Ser Arg Asp Glu Leu 360
Val Lys Gly Phe Tyr Pro 375
Gly Gln Pro Glu Asn Asn 390 395
Asp Gly Ser Phe Phe Leu 410
Trp Gln Gln Gly Asn Val 425
His Asn His Tyr Thr Gln 440
270
Val Asp Gly Val Glu 285
Gln Tyr Asn Ser Thr 300
Gln Asp Trp Leu Asn
320
Ala Leu Pro Ala Ser
335
Pro Arg Glu Pro Gln 350
Thr Lys Asn Gln Val 365
Ser Asp Ile Ala Val 380
Tyr Lys Thr Thr Pro
400
Tyr Ser Lys Leu Thr 415
Phe Ser Cys Ser Val 430
Lys Ser Leu Ser Leu 445 <210> 138 <211> 451 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 138
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val 20
Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln 3540
Ile Gly Thr Ile Tyr His Ser Gly 5055
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val
6570
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala 85
Ala Arg Gln Gly Ser Ile Lys Gln 100
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val 115120
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 130135
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 145150
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 165
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 180
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
195200
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1015
Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 2530
Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 45
Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 60
Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 7580
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 105110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 155160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 170175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 185190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
- 188 046146
210
Cys Asp Lys Thr His 225
Gly Gly Pro Ser Val
245
Met Ile Ser Arg Thr 260
His Glu Asp Pro Glu 275
Val His Asn Ala Lys 290
Tyr Arg Val Val Ser 305
Gly Lys Glu Tyr Lys
325
Ile Glu Lys Thr Ile 340
Val Tyr Thr Leu Pro 355
Ser Leu Thr Cys Leu 370
Glu Trp Glu Ser Asn 385
Pro Val Leu Asp Ser
405
Val Asp Lys Ser Arg 420
Met His Glu Ala Leu 435
Ser Pro Gly
450
215
Thr Cys Pro Pro Cys 230
Phe Leu Phe Pro Pro
250
Pro Glu Val Thr Cys 265
Val Lys Phe Asn Trp 280
Thr Lys Pro Arg Glu 295
Val Leu Thr Val Leu 310
Cys Lys Val Ser Asn 330
Ser Lys Ala Lys Gly 345
Pro Ser Arg Asp Glu 360
Val Lys Gly Phe Tyr 375
Gly Gln Pro Glu Asn 390
Asp Gly Ser Phe Phe 410
Trp Gln Gln Gly Asn 425
His Asn His Tyr Thr 440
220
Pro Ala Pro Glu Ala 235
Lys Pro Lys Asp Thr 255
Val Val Val Asp Val 270
Tyr Val Asp Gly Val 285
Glu Gln Tyr Asn Ser 300
His Gln Asp Trp Leu 315
Lys Ala Leu Pro Ala
335
Gln Pro Arg Glu Pro 350
Leu Thr Lys Asn Gln 365
Pro Ser Asp Ile Ala 380
Asn Tyr Lys Thr Thr 395
Leu Tyr Ser Lys Leu 415
Val Phe Ser Cys Ser 430
Gln Lys Ser Leu Ser 445
Ala 240 Leu
Ser
Glu
Thr
Asn 320 Ser
Gln
Val
Val
Pro 400 Thr
Val
Leu <210> 139 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 139
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser 10
Ser Cys Arg Ser Ser 25
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val 135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu
Leu Pro Val Thr Pro 15
Gln Ser Leu Leu Arg 30
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln
160
Ser
- 189 046146
165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210
170175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
185190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
200205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
215 <210> 140 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 140
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Val Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1015
Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 2530
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 4045
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 70 7580
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gln 9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 105110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 120125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 135140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 150 155160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 185190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 200205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 <210> 141 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 141
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile
Asn Gly Tyr Asn Tyr 35 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1015
Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser 2530
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 4045
- 190 046146
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Val Glu Ala 85
Gln Glu Thr Pro Leu
100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln
165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val 135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu
170
Ser Thr Leu Thr Leu
185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu 215
Arg Val Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp
175
Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser <210> 142 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 142
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Thr Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser 10
Ser Cys Arg Ser Ser 25
Leu Asp Trp Tyr Leu 40
Tyr Leu Gly Ser Asn 55
Ser Gly Ser Gly Thr 70
Glu Asp Val Gly Val 90
Thr Phe Gly Gly Gly 105
Pro Ser Val Phe Ile 120
Thr Ala Ser Val Val 135
Lys Val Gln Trp Lys 150
Glu Ser Val Thr Glu 170 Ser Thr Leu Thr Leu 185
Ala Cys Glu Val Thr 200
Phe Asn Arg Gly Glu 215
Leu Pro Val Thr Pro 15
Gln Ser Leu Leu Arg 30
Gln Lys Pro Gly Gln 45
Arg Ala Ser Gly Val 60
Asp Phe Thr Leu Lys 75
Tyr Tyr Cys Met Gln 95
Thr Lys Val Glu Ile 110
Phe Pro Pro Ser Asp 125
Cys Leu Leu Asn Asn 140
Val Asp Asn Ala Leu 155
Gln Asp Ser Lys Asp 175 Ser Lys Ala Asp Tyr 190
His Gln Gly Leu Ser 205
Cys
Gly
Ser
Ser
Pro
Ile 80 Gln
Lys
Glu
Phe
Gln 160 Ser
Glu
Ser
- 191 046146 <210> 143 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 143
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 Glu Pro Ala Ser 5 Ile Ser Cys Arg Ser 10 Ser Gln Ser Leu Leu 15 Arg Ser
Ser Gly Tyr 20 Asn Tyr Leu Asp Trp 25 Tyr Leu Gln Lys Pro 30 Gly Gln Ser
Pro Gln 35 Leu Leu Ile Tyr Leu 40 Gly Ser Asn Arg Ala 45 Ser Gly Val Pro
Asp 50 Arg Phe Ser Gly Ser 55 Gly Ser Gly Thr Asp 60 Phe Thr Leu Lys Ile
65 Ser Arg Ala Glu Ala 70 Glu Asp Val Gly Val 75 Tyr Tyr Cys Met Gln 80 Gln
Gln Glu Ala Pro 85 Leu Thr Phe Gly Gly 90 Gly Thr Lys Val Glu 95 Ile Lys
Arg Thr Val 100 Ala Ala Pro Ser Val 105 Phe Ile Phe Pro Pro 110 Ser Asp Glu
Gln Leu 115 Lys Ser Gly Thr Ala 120 Ser Val Val Cys Leu 125 Leu Asn Asn Phe
Tyr 130 Pro Arg Glu Ala Lys 135 Val Gln Trp Lys Val 140 Asp Asn Ala Leu Gln
145 Ser Gly Asn Ser Gln 150 Glu Ser Val Thr Glu 155 Gln Asp Ser Lys Asp 160 Ser
Thr Tyr Ser Leu 165 Ser Ser Thr Leu Thr 170 Leu Ser Lys Ala Asp 175 Tyr Glu
Lys His Lys 180 Val Tyr Ala Cys Glu 185 Val Thr His Gln Gly 190 Leu Ser Ser
Pro Val 210 195 Thr Lys Ser Phe Asn 215 200 Arg Gly Glu Cys 205
144
219
БЕЛОК
Искусственная <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<400> 144
Asp Ile Val Met 1
Glu Pro Ala Ser
Gly Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Ala Glu
Gln Glu Ala Pro
100
Arg Thr Val Ala
Синтетический последовательность конструкт
Pro
Arg
Thr Gln Ser 5
Ile Ser Cys
Tyr Leu Asp Trp
Ile Tyr Leu Gly 55
Gly Ser Gly Ser 70
Ala Glu Asp Val 85
Leu Thr Phe Gly
Ala Pro Ser Val
Leu Ser Leu Pro 10
Ser Ser Gln Ser 25
Tyr Leu Gln Lys
Ser Asn Arg Ala 60
Gly Thr Asp Phe 75
Gly Val Tyr Tyr 90
Gly Gly Thr Lys 105
Phe Ile Phe Pro
Val Thr Pro Gly 15
Leu Leu Arg Ser 30
Pro Gly Gln Ser 45
Ser Gly Val Pro
Thr Leu Lys Ile 80
Cys Met Gln Gln 95
Val Glu Ile Lys 110
Pro Ser Asp Glu
- 192 046146
115 120125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala LeuGln
145 150 155160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys AspSer
165 170175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210215 <210> 145 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетический <400> 145
Asp Ile Val Met Thr 1 5
Glu Pro Ala Ser Ile 20
Arg Gly Tyr Asn Tyr 35
Pro Gln Leu Leu Ile 50
Asp Arg Phe Ser Gly 65
Ser Arg Ala Glu Ala 85
Gln Glu Ala Pro Leu 100
Arg Thr Val Ala Ala 115
Gln Leu Lys Ser Gly 130
Tyr Pro Arg Glu Ala 145
Ser Gly Asn Ser Gln 165
Thr Tyr Ser Leu Ser 180
Lys His Lys Val Tyr 195
Pro Val Thr Lys Ser 210 последовательность конструкт
Gln Ser Pro Leu Ser Leu 10
Ser Cys Arg Ser Ser Gln 25
Leu Asp Trp Tyr Leu Gln 40
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg 55
Ser Gly Ser Gly Thr Asp 70 75
Glu Asp Val Gly Val Tyr 90
Thr Phe Gly Gly Gly Thr 105
Pro Ser Val Phe Ile Phe 120
Thr Ala Ser Val Val Cys 135
Lys Val Gln Trp Lys Val 150 155
Glu Ser Val Thr Glu Gln 170
Ser Thr Leu Thr Leu Ser 185
Ala Cys Glu Val Thr His 200
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215
Pro Val Thr Pro Gly 15
Ser Leu Leu Arg Ser 30
Lys Pro Gly Gln Ser 45
Ala Ser Gly Val Pro 60
Phe Thr Leu Lys Ile 80
Tyr Cys Met Gln Gln 95
Lys Val Glu Ile Lys 110
Pro Pro Ser Asp Glu 125
Leu Leu Asn Asn Phe 140
Asp Asn Ala Leu Gln 160
Asp Ser Lys Asp Ser 175
Lys Ala Asp Tyr Glu 190
Gln Gly Leu Ser Ser 205 <210> 146 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический конструкт <400> 146
- 193 046146
Asp Ile Val Met 1
Glu Pro Ala Ser
Asp Gly Tyr Asn 35
Pro Gln Leu Leu 50
Asp Arg Phe Ser 65
Ser Arg Ala Glu
Gln Glu Ala Pro
100
Arg Thr Val Ala 115
Gln Leu Lys Ser 130
Tyr Pro Arg Glu 145
Ser Gly Asn Ser
Thr Tyr Ser Leu
180
Lys His Lys Val 195
Pro Val Thr Lys 210
Thr Gln Ser Pro 5
Ile Ser Cys Arg
Tyr Leu Asp Trp 40
Ile Tyr Leu Gly 55
Gly Ser Gly Ser 70
Ala Glu Asp Val 85
Leu Thr Phe Gly
Ala Pro Ser Val
120
Gly Thr Ala Ser 135
Ala Lys Val Gln 150
Gln Glu Ser Val 165
Ser Ser Thr Leu
Tyr Ala Cys Glu
200
Ser Phe Asn Arg 215
Leu Ser Leu Pro 10
Ser Ser Gln Ser 25
Tyr Leu Gln Lys
Ser Asn Arg Ala 60
Gly Thr Asp Phe 75
Gly Val Tyr Tyr 90
Gly Gly Thr Lys 105
Phe Ile Phe Pro
Val Val Cys Leu
140
Trp Lys Val Asp 155
Thr Glu Gln Asp 170
Thr Leu Ser Lys 185
Val Thr His Gln
Gly Glu Cys
Val Thr Pro Gly 15
Leu Leu Arg Ser 30
Pro Gly Gln Ser 45
Ser Gly Val Pro
Thr Leu Lys Ile 80
Cys Met Gln Gln 95
Val Glu Ile Lys 110
Pro Ser Asp Glu 125
Leu Asn Asn Phe
Asn Ala Leu Gln
160
Ser Lys Asp Ser 175
Ala Asp Tyr Glu 190
Gly Leu Ser Ser 205

Claims (54)

1. Антитело, которое связывается с белком сортилином, где антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где:
(a) вариабельная область тяжелой цепи содержит
HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVRH2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), и HVRH3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельная область легкой цепи содержит
HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32); или (b) вариабельная область тяжелой цепи содержит
HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVRH2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), и HVRH3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельная область легкой цепи содержит
HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
2. Антитело по п.1, где антитело:
(a) снижает уровни сортилина клеточной поверхности более, чем уровень снижения, вызываемый антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79;
(b) повышает внеклеточные уровни програнулина более, чем уровень повышения, вызываемый антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79;
(c) ингибирует взаимодействие между сортилином и програнулином более, чем уровень ингибирования, вызываемый антителом против сортилина, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79; или
- 194 046146 (d) обеспечивает любую комбинацию (a)-(c).
3. Антитело по п.1 или 2, где антитело имеет константу диссоциации (KD) с сортилином человека, которая имеет значение от более чем 1 раза и до примерно 2,1 раза ниже, чем у антитела против сортилина, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 79, где KD определяют методом флуоресцентно-активированного клеточного сортинга (FACS).
4. Антитело по любому из пп.1-3, где антитело имеет константу диссоциации (KD) с человеческим сортилином, которая имеет значение в диапазоне от примерно 5,0E-10 М до примерно 1,0E-9 М, где KD определяют методом FACS, или примерно 250-500 пМ, где KD определяют методом интерферометрии биослоев.
5. Антитело по любому из пп.1-4, где вариабельная область тяжелой цепи содержит
HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVRH2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), и HVRH3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельная область легкой цепи содержит
HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSTGYNYLD (SEQ ID NO: 9), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
6. Антитело по любому из пп.1-4, где вариабельная область тяжелой цепи содержит
HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность YSISSGYYWG (SEQ ID NO: 1), HVRH2, содержащий аминокислотную последовательность TIYHSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 2), и HVRH3, содержащий аминокислотную последовательность ARQGSIKQGYYGMDV (SEQ ID NO: 6); и вариабельная область легкой цепи содержит HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность RSSQSLLRSNGYNYLD (SEQ ID NO: 8), HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность LGSNRAS (SEQ ID NO: 29), и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность MQQQEAPLT (SEQ ID NO: 32).
7. Антитело, которое связывается с белком сортилином, где указанное антитело содержит:
(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57; или (b) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.
8. Антитело по любому из пп.1-5 и 7, где указанное антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.
9. Антитело по любому из пп.1-5 и 7, где указанное антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57.
10. Антитело, которое связывается с белком сортилином, где указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142.
11. Антитело, которое связывается с белком сортилином, где указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142.
12. Антитело по любому из пп.1-9, где антитело принадлежит к классу IgG, классу IgM или классу IgA.
13. Антитело по п.12, где антитело принадлежит к классу IgG и имеет изотип IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
14. Антитело по п.13, где:
(a) антитело относится к изотипу IgG1 или IgG2, и Fc-область содержит аминокислотную замену в положении P331S, где нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU;
(b) антитело относится к изотипу IgG1, и Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях L234A, L235A и P331S, где нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU;
(c) антитело относится к изотипу IgG1, IgG2 или IgG4, и Fc-область содержит аминокислотную замену в положении N297A, где нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU; или (d) Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях S267E и L328F, где нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU.
15. Антитело по п.14, где антитело относится к изотипу IgG1 и Fc-область содержит аминокислотные замены в положениях L234A, L235A и P331S,
- 195 046146 где нумерация положения остатков соответствует системе нумерации EU.
16. Антитело по любому из пп.1-15, где белок сортилин представляет собой белок сортилин человека.
17. Антитело по п.16, где белок сортилин человека содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81.
18. Антитело по любому из пп.1-16, где белок сортилин представляет собой белок дикого типа, природный вариант, или вариант, связанный с заболеванием.
19. Антитело по любому из пп.1-18, где антитело представляет собой человеческое антитело или моноклональное антитело.
20. Конъюгат, содержащий антитело по любому из пп.1-19, где антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом.
21. Биспецифическое антитело, содержащее антитело по любому из пп.1-19, где биспецифическое антитело связывается с белком сортилином и со вторым антигеном.
22. Поливалентное антитело, содержащее антитело по любому из пп.1-19, где поливалентное антитело связывается с белком сортилином и по меньшей мере со вторым антигеном.
23. Биспецифическое антитело по п.21 или поливалентное антитело по п.22, где указанный второй антиген представляет собой антиген, облегчающий транспорт через гематоэнцефалический барьер.
24. Биспецифическое антитело по п.23, где второй антиген выбран из группы, состоящей из рецептора трансферрина (TR), рецептора инсулина (HIR), рецептора инсулиноподобного фактора роста (IGFR), белков 1 и 2, родственных рецептору липопротеина низкой плотности (LPR-1 и 2), рецептора дифтерийного токсина, CRM197, однодоменного антитела ламы, TMEM 30(A), домена белковой трансдукции, TAT, Syn-B, пенетратина, полиаргининового пептида, пептида ангиопеп, басигина, Glut1, CD98hc и ANG1005.
25. Фрагмент антитела по любому из пп.1-9, где фрагмент антитела связывается с белком сортилином человека.
26. Фрагмент антитела по п.25, где фрагмент антитела представляет собой Fab-, Fab'-, Fab'-SH-, F(ab')2-, Fv- или scFv-фрагмент.
27. Выделенная нуклеиновая кислота, которая кодирует белок, который связывается с сортилином, где нуклеиновая кислота содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело по любому из пп.1-19, антитело конъюгата по п.20, антитело биспецифического антитела по п.21 и 23-24, антитело поливалентного антитела по любому из пп.22-24 или фрагмент антитела по п.25 или 26.
28. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.27.
29. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор по п.28.
30. Способ получения антитела, которое связывается с сортилином, где способ включает культивирование клетки-хозяина по п.29 так, что продуцируется антитело.
31. Способ по п.30, дополнительно включающий выделение антитела, продуцируемого клеткойхозяином.
32. Выделенное антитело, которое связывается с сортилином, продуцируемое способом по п.30 или 31.
33. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп.1-19, конъюгат по п.20, биспецифическое антитело по п.21 и 23-24, поливалентное антитело по любому из пп.22-24 или фрагмент антитела по п.25 или 26.
34. Способ профилактики, снижения риска или лечения индивидуума с болезнью, расстройством или поражением, выбранным из группы, состоящей из лобно-височной деменции, болезни Альцгеймера, сосудистой деменции, эпилептических припадков, дистрофии сетчатки, бокового амиотрофического склероза, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, деменции, инсульта, болезни Паркинсона, дегенерации сетчатки, артрита и остеоартрита, где способ включает введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1-19, конъюгата по п.20, биспецифического антитела по п.21 и 23-24, поливалентного антитела по любому из пп.22-24 или фрагмента антитела по п.25 или 26, или фармацевтической композиции по п.33.
35. Способ по п.34, где болезнь, расстройство или поражение выбраны из группы, состоящей из лобно-височной деменции, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера и бокового амиотрофического склероза.
36. Способ ингибирования одного или нескольких из нейровоспаления, аксонопатии, характеризующейся коротким аксональным разрастанием и патологическим ветвлением, микроглиальной активации, и воспалительного ответа у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1-19, конъюгата по п.20, биспецифического антитела по п.21 и 23-24, поливалентного антитела по любому из пп.22-24 или фрагмента антитела по п.25 или 26 или фармацевтической композиции по п.33.
37. Способ усиления одного или нескольких из заживления ран, аутофагии, и клиренса агрегированных белков у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1-19, конъюгата по п.20, биспецифического ан
- 196 046146 титела по п.21 и 23-24, поливалентного антитела по любому из пп.22-24 или фрагмента антитела по п.25 или 26 или фармацевтической композиции по п.33.
38. Способ профилактики, снижения риска или лечения артрита у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1-19, конъюгата по п.20, биспецифического антитела по п.21 и 23-24, поливалентного антитела по любому из пп.22-24 или фрагмента антитела по п.25 или 26 или фармацевтической композиции по п.33.
39. Способ снижения экспрессии одного или нескольких провоспалительных медиаторов у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1-19, конъюгата по п.20, биспецифического антитела по п.21 и 23-24, поливалентного антитела по любому из пп.22-24 или фрагмента антитела по п.25 или 26 или фармацевтической композиции по п.33.
40. Способ по п.39, где один или несколько провоспалительных медиаторов выбраны из группы, состоящей из IL-6, IL12p70, IL12p40, JL-ίβ, TNF-α, CXCL1, CCL2, CCL3, CCL4 и CCL5.
41. Способ ингибирования взаимодействия между сортилином, экспрессируемым на клетке, и програнулином, включающий приведение в контакт клетки, экспрессирующей сортилин и антитела против сортилина по любому из пп.1-19, конъюгата по п.20, биспецифического антитела по п.21 и 23-24, поливалентного антитела по любому из пп.22-24 или фрагмента антитела по п.25 или 26 или фармацевтической композиции по п.33.
42. Способ по п.41, где клетка находится в условиях in vitro.
43. Способ по п.41, где клетка находится в условиях in vivo.
44. Способ по любому из пп.41-43, дополнительно включающий снижение уровня сортилина, экспрессируемого на поверхности клетки.
45. Способ по любому из пп.41-44, где внеклеточные уровни програнулина повышаются.
46. Способ повышения уровней програнулина у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1-19, конъюгата по п.20, биспецифического антитела по п.21 и 23-24, поливалентного антитела по любому из пп.2224 или фрагмента антитела по п.25 или 26 или фармацевтической композиции по п.33.
47. Способ по п.46, где повышаются уровни програнулина в плазме.
48. Способ по п.46, где повышаются уровни програнулина в цереброспинальной жидкости.
49. Способ снижения уровней сортилина у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1-19, конъюгата по п.20, биспецифического антитела по п.21 и 23-24, поливалентного антитела по любому из пп.22-24 или фрагмента антитела по п.25 или 26 или фармацевтической композиции по п.33.
50. Способ по п.49, где снижаются уровни сортилина в лейкоцитах периферической крови.
51. Способ по любому из пп.34-40 и 46-50, где индивидуум имеет одну или несколько мутаций в гене, кодирующем програнулин.
52. Способ по п.51, где индивидуум является гетерозиготным по одной или нескольким мутациям потери функции в гене, кодирующем програнулин.
53. Способ по п.51 или 52, где индивидуум болен или имеет риск развития лобно-височной деменции, болезни Альцгеймера или бокового амиотрофического склероза.
54. Способ по любому из пп.34-53, где способ включает применение двух или более антител против сортилина.
EA201992335 2018-07-13 2019-07-12 Антитела против сортилина и способы их применения EA046146B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US62/698,007 2018-07-13
US62/860,184 2019-06-11
US62/868,849 2019-06-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EA046146B1 true EA046146B1 (ru) 2024-02-09

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11396546B2 (en) Anti-Sortilin antibodies and methods of use thereof
US20200392229A1 (en) Methods of use of anti-sortilin antibodies
US11440957B2 (en) Anti-TMEM106B antibodies and methods of use thereof
JP2022542964A (ja) 抗ｍｓ４ａ４ａ抗体、及びその使用方法
US20240101681A1 (en) Methods of use of anti-sortilin antibodies
EA046146B1 (ru) Антитела против сортилина и способы их применения
US20240132597A1 (en) Methods of use of anti-sortilin antibodies
US20240174746A1 (en) Anti-tmem106b antibodies and methods of use thereof
CN116964089A (zh) 使用抗分拣蛋白抗体的方法