CN116420078A - 用于治疗和监测额颞痴呆的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了用于筛选化合物或监测受试者对用于治疗额颞痴呆(FTD)的化合物或给药方案的反应的方法和材料。还提供了用于鉴定和治疗患有FTD的受试者的方法和材料。

Description

用于治疗和监测额颞痴呆的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年10月14日提交的美国临时申请号63/091,815和2021年4月30日提交的美国临时申请号63/182,567的优先权，出于所有目的，所述申请的公开内容特此以引用的方式整体并入。
背景技术
额颞痴呆(FTD)是一种进行性神经变性病症，占所有痴呆患者的5％-10％，并且占65岁前痴呆发作患者的10％-20％(Rademakers等人,Nat Rev Neurol.8(8):423-34,2012)。虽然有几个基因与FTD相关联，但FTD中最频繁突变的基因之一是GRN，其映射到人类染色体17q21并编码富含半胱氨酸的蛋白质颗粒体蛋白前体(PGRN)(也称为上皮蛋白前体(proepithelin)和顶颗粒体蛋白(acrogranin))。GRN中的高渗透突变在2006年首次报道为家族性FTD的常染色体显性形式的原因(Baker等人,Nature.442(7105):916-9,2006；Cruts等人,Nature.2006年8月24日；442(7105):920-4；Gass等人,Hum.Mol.Genet.15(20):2988-3001,2006)。最近的估计表明，GRN突变占具有阳性家族史的FTD患者的5％-20％和散发病例的1％-5％(Rademakers等人,同上)。需要新方法来评价用于治疗FTD的化合物和相关疗法，包括监测患者对此类治疗的反应，以及鉴定可从这些病症的治疗中受益的受试者。
发明内容
在一方面，本公开提供了一种用于鉴定患有额颞痴呆(FTD)或处于患有额颞痴呆(FTD)的风险中的受试者的方法，所述方法包括：
(a)测量来自受试者的测试样品中的葡糖基鞘氨醇(GlcSph)的丰度；
(b)比较在(a)中测量的GlcSph与一个或多个参考值之间的丰度差异；以及
(c)根据所述比较确定受试者是否患有FTD或处于患有FTD的风险中。
在这个方面的一些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用用于改善GlcSph水平以治疗FTD的化合物。
在另一方面，本公开提供了一种用于评价用于治疗FTD的化合物或监测受试者对用于治疗FTD的化合物、其药物组合物或给药方案的反应的方法，所述方法包括：
(a)测量来自患有FTD的受试者的测试样品中GlcSph的丰度，其中所述测试样品或受试者已经用所述化合物或其药物组合物治疗；
(b)比较在(a)中测量的GlcSph与一个或多个参考值之间的丰度差异；以及
(c)根据所述比较确定所述化合物、其药物组合物或给药方案是否改善用于治疗FTD的GlcSph水平。
在这个方面的一些实施方案中，所述方法还包括用另一种化合物处理另一个测试样品或治疗另一个受试者，以及选择改善GlcSph水平的候选化合物。
在这个方面的一些实施方案中，所述方法还包括：
(d)保持或调节向测试样品或受试者施用化合物的量或频率；以及
(e)向所述测试样品或所述受试者施用所述化合物。
在本文所述方法的一些实施方案中，化合物是分拣蛋白抑制剂。在某些实施方案中，分拣蛋白抑制剂是抗分拣蛋白抗体。
在一些实施方案中，患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者与参考值相比具有增加的GlcSph水平。在某些实施方案中，患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者的测试样品中GlcSph的丰度是参考值的至少约1.2倍至约5倍。在一些实施方案中，改善的GlcSph水平是相对于治疗前的GlcSph水平的改善，并且改善的GlcSph水平比治疗前的GlcSph水平更接近参考值。在特定实施方案中，改善的GlcSph水平与参考值相比具有小于15％、10％或5％的差异。
在一些实施方案中，参考值是在受试者接受治疗之前受试者的测试样品中的GlcSph水平。在一些实施方案中，参考值是在从参考受试者或参考受试者群体获得的参考样品中测得的。在某些实施方案中，参考受试者或参考受试者群体是健康对照。在特定实施方案中，参考受试者或参考受试者群体不患有FTD或不具有降低水平的PGRN。
在一些实施方案中，本文所述方法的步骤(a)还包括测量一种或多种双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)物种的丰度。在某些实施方案中，一种或多种BMP物种包括BMP(16:0_18:1)、BMP(16:0_18:2)、BMP(18:0_18:0)、BMP(18:0_18:1)、BMP(18:1_18:1)、BMP(16:0_20:3)、BM P(18:1_20:2)、BMP(18:0_20:4)、BMP(16:0_22:5)、BMP(20:4_20:4)、BMP(22:6_22:6)、BMP(20:4_20:5)、BMP(18:2_18:2)、BMP(16:0_20:4)、BMP(18:0_18:2)、BMP(18:0e_22:6)、BMP(18:1e_20:4)、BMP(20:4_22:6)、BMP(18:0e_20:4)、BMP(18:2_20:4)、BMP(18:1_22:6)、BM P(18:1_20:4)、BMP(18:0_22:6)和/或BMP(18:3_22:5)。
在一些实施方案中，测试样品或一个或多个参考值包括或涉及全血、血浆、细胞、组织、血清、脑脊液、间质液、痰液、尿液、淋巴液或其组合。在特定实施方案中，测试样品或一个或多个参考值包括或涉及血浆。在某些实施方案中，细胞是血细胞、脑细胞、外周血单核细胞(PBMC)、骨髓源性巨噬细胞(BMDM)、视网膜色素上皮(RPE)细胞、红细胞、白细胞、神经细胞、小胶质细胞、大脑皮层细胞、脊髓细胞、骨髓细胞、肝细胞、肾细胞、脾细胞、皮肤细胞、成纤维细胞、心脏细胞、淋巴结细胞或其组合。在某些实施方案中，组织包括淋巴结、骨髓、皮肤组织、血管组织、肺组织、脾组织、瓣膜组织或其组合。
在一些实施方案中，测试样品包括内体、溶酶体、细胞外囊泡、外泌体、微囊泡或其组合。
在一些实施方案中，使用液相色谱质谱(LC-MS)、液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)、气相色谱质谱(GC-MS)、气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)、酶联免疫吸附测定(ELISA)或其组合来测量GlcSph的丰度。
在一些实施方案中，测量GlcSph的丰度时使用内部GlcSph标准品。在某些实施方案中，内部GlcSph标准品包括受试者中不天然存在的GlcSph物种。在特定实施方案中，内部GlcSph标准品包括氘标记的GlcSph。
在一些实施方案中，受试者在颗粒体蛋白(GRN)基因中具有一个或多个突变。在一些实施方案中，FTD与PGRN表达、加工、糖基化、细胞摄取、运输和/或功能相关。在一些实施方案中，FTD与降低的PGRN水平相关。
在一些实施方案中，受试者和/或参考受试者是人或非人灵长类动物。在一些实施方案中，受试者是PGRN敲除小鼠或PGRN敲除大鼠。
在另一方面，本公开提供了一种用于测试用于治疗受试者的FTD的化合物或其给药方案的试剂盒，所述试剂盒包括用于测量来自所述受试者的测试样品中的GlcSph丰度的GlcSph标准品。
在这个方面的一些实施方案中，GlcSph标准品包括受试者中不天然存在的GlcSph物种。在特定实施方案中，GlcSph标准品包括氘标记的GlcSph。
在一些实施方案中，试剂盒还包括用于从受试者获得测试样品、处理测试样品、测量GlcSph丰度或其组合的试剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括使用说明书。
附图说明
图1示出了与不携带任何遗传突变的临床正常对照相比，GRN相关FTD患者的血浆样品中GlcSph显著增加，但在非GRN FTD患者中显著增加。
图2示出了用PGRN衍生物(融合体1)处理后，与未接受PGRN衍生物的Grn KO小鼠中的GlcSph水平相比，Grn KO小鼠血浆中的GlcSph水平显著降低。
图3A示出了给药6周后，融合体1拯救了Grn KO/hTfR.KI小鼠脑中的GlcSph水平，而融合体2仅显示出部分作用。使用的剂量是以5mpk每周注射，持续6周。统计分析是单因素ANOVA与Dunnett多重比较检验(n＝7-10只小鼠)。**，P<0.01；****，P<0.0001。
图3B示出了在给药6周后，融合体1和融合体2均完全拯救了Grn KO/hTfR.KI小鼠肝中的GlcSph水平。使用的剂量是以5mpk每周注射，持续6周。统计分析是单因素ANOVA与Dunnett多重比较检验(n＝7-10只小鼠)。**，P<0.01；****，P<0.0001。
图3C示出了在给药6周后，融合体1和融合体2均拯救了Grn KO/hTfR.KI小鼠血浆中的GlcSph水平。使用的剂量是以5mpk每周注射，持续6周。统计分析是单因素ANOVA与Dunnett多重比较检验(n＝7-10只小鼠)。**，P<0.01；****，P<0.0001。
具体实施方式
I.引言
GRN基因的功能丧失突变与额颞痴呆(FTD)的常见形式相关联。GRN编码可溶性蛋白颗粒体蛋白前体(PGRN)，其与神经突增生、神经元存活、溶酶体功能和炎症有关。随着GRN相关FTD的治疗方法的开发，主要集中在增强PGRN的脑水平，重要的是鉴定体液诸如血浆和CSF中的疾病相关生物标志物，以促进候选治疗剂的发现。在FTD病例中，研究通常与FTD相关或特定于GRN相关FTD的生物标志物也是重要的。重要的是，生物标志物发现还可通过揭示与PGRN和/或其功能丧失相关的新的生物学和生物化学途径来了解疾病机制。
我们通过LC-MS进行了靶向脂质组学/代谢物组学分析，并发现与不携带任何遗传突变的临床正常对照相比，来自GRN相关FTD患者的生物样品(例如血浆样品)中的葡糖基鞘氨醇(GlcSph)显著增加(Δ25％，p<0.01)，但在散发FTD患者中没有显著增加，表明GlcSph是与GRN相关FTD相关的疾病生物标志物和PGRN功能拯救的途径生物标志物。我们的结果显示，相对于临床正常对照，GlcSph水平降低约20％将使GRN相关FTD患者样品中发现的GlcSph水平增加正常化。
II.定义
如本文所用，单数形式“一种”、“一个”和“所述”包括复数个指代物，除非上下文中另外明确指示。因此，例如，提及“细胞”可包括两个或更多个这样的细胞等。
如本文所用，术语“约”和“大约”当用于修饰在数值或范围中指定的量时，表示所述数值以及与本领域技术人员已知的值的合理偏差，例如±20％、±10％或±5％在所列举值的预期含义内。
术语“丰度”是指分子、化合物或剂(例如GlcSph)的量或浓度。所述术语包括绝对量或浓度，以及相对量或浓度。在一些实施方案中，参考标准品(例如，内部GlcSph标准品)用于校准以确定(例如，在样品中)存在的分子、化合物或剂的绝对量或浓度和/或归一化为对照以确定存在的分子、化合物或剂的相对量或浓度。
术语“葡糖基鞘氨醇”或“GlcSph”是指具有式I中所描绘结构的溶多糖鞘脂：
Figure BDA0004175601260000071
术语“双(单酰基甘油)磷酸酯”或“BMP”是指带负电荷的甘油磷脂(例如在晚期内体和溶酶体中通常存在的pH下)，其具有式II所描绘的结构：
Figure BDA0004175601260000072
BMP分子包含两个脂肪酸侧链。式II中的R和R'代表独立选择的饱和或不饱和脂族链，每条链通常含有14、16、18、20或22个碳原子。当脂肪酸侧链不饱和时，其可含有1、2、3、4、5、6或更多个碳-碳双键。此外，BMP分子可含有一个或两个烷基醚取代基，其中一个或两个脂肪酸侧链的羰基氧被两个氢原子替换。本文用于描述特定BMP物种的命名法是指具有两个脂肪酸侧链的物种，其中脂肪酸侧链的结构在BMP格式的括号内指示(例如BMP(18:1_18:1))。数字遵循“脂肪酸碳原子数:双键数”的标准脂肪酸符号格式。“e-”前缀用于表示存在烷基醚取代基，其中脂肪酸侧链的羰基氧被两个氢原子替换。例如，“BMP(16:0e_18:0)”中的“e”表示具有16个碳原子的侧链是烷基醚取代基。
术语“PGRN水平”是指受试者或样品(例如，从受试者获得的样品)中存在的颗粒体蛋白前体的量、浓度和/或活性水平。PGRN水平可指存在的PGRN的绝对量、浓度和/或活性水平，或者可指相对量、浓度和/或活性水平。所述术语还指存在的(例如，从GRN基因表达的)PGRN多肽和/或PGRN mRNA的量或浓度。
术语“颗粒体蛋白前体”或“PGRN”(也称为“上皮蛋白前体”或“顶颗粒体蛋白”)是指由映射到人类染色体17q21的基因GRN编码的富含半胱氨酸的蛋白质。PGRN是一种溶酶体蛋白，也是一种分泌蛋白，由保守的颗粒体蛋白肽的七个半串联重复序列组成(其中每个串联重复序列长约60个氨基酸)，并且可通过各种细胞外蛋白酶(例如弹性蛋白酶)和溶酶体蛋白酶(例如组织蛋白酶L)的裂解而释放(Kao等人,Nat Rev Neurosci.18(6):325-333,2017)。一般来说，PGRN被认为在控制先天免疫以及溶酶体的功能中既可发挥细胞自主作用，也可发挥非细胞自主作用，在溶酶体中，PGRN调节各种组织蛋白酶和其他水解酶的活性和水平(Kao等人,同上)。PGRN还具有神经营养功能并促进神经突生长和神经元存活(Kao等人,同上)。PGRN多肽可包含人PGRN序列。PGRN多肽可以是未成熟的PGRN，例如其中前17个氨基酸组成信号肽。PGRN多肽也可以是成熟的PGRN，例如其中17个氨基酸的信号肽被裂解。作为其他非限制性实例，PGRN多肽可包含来自处于未成熟或成熟的形式的非人物种，诸如小鼠(NCBI参考号NP_032201.2)、大鼠(NCBI参考号NP_058809.2或NP_001139314.1)或黑猩猩(NCBI参考号XP_016787144.1或XP_016787145.1)的序列。
术语“颗粒体蛋白前体衍生物”或“PGRN衍生物”是指修饰的PGRN。可进行用于增加PGRN的成药性的修饰，诸如将PGRN靶向到体内特定区域和/或改善其药代动力学或药效学特性的修饰。可进行用于帮助PGRN的制造和/或保存期其他修饰。PGRN衍生物可包括包含与Fc多肽二聚体连接的PGRN的Fc-融合蛋白。
术语“骨髓源性巨噬细胞”或“BMDM”是指在体外从哺乳动物骨髓(例如，从受试者获得的骨髓)产生或衍生的巨噬细胞。作为非限制性实例，BMDM可通过在细胞因子诸如巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)存在下培养未分化的骨髓细胞产生。
本文使用的术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等通常表示获得所需的药理作用和/或生理作用。“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”可指在治疗或改善额颞痴呆(FTD)中的任何成功指标，包括任何客观或主观参数，诸如消减、缓解、患者生存的改善、生存时间或生存率的增加、症状的减轻或使患者更耐受所述病症、退化或衰退速率的减慢，或患者的身体或精神健康的改善。症状的治疗或改善可基于客观或主观参数。可将治疗的效果与未接受治疗的个体或个体集合进行比较，或与治疗前或治疗期间不同时间的同一患者进行比较。
如本文可互换使用的术语“受试者”、“个体”和“患者”是指哺乳动物，包括但不限于人、非人灵长类动物、啮齿类动物(例如大鼠、小鼠和豚鼠)、兔、狗、牛、猪、马和其他哺乳动物物种。在一个实施方案中，受试者是人。
如本文所用，剂的“治疗量”或“治疗有效量”是治疗受试者的疾病症状的剂的量。
术语“施用”是指将剂、化合物或组合物递送至所需生物作用部位的方法。这些方法包括但不限于局部递送、胃肠外递送、静脉内递送、皮内递送、肌肉内递送、皮下递送、鞘内递送、口服递送、结肠递送、直肠递送或腹膜内递送。
III.本公开的方法
额颞痴呆(FTD)
额颞痴呆(FTD)是一种进行性神经变性疾病。FTD包括一系列临床上、病理学上和遗传上异质的疾病，表现出额叶和颞叶的选择性累及(Gazzina等人,Eur JPharmacol.817:76-85,2017)。FTD的临床表现包括行为和人格改变、额叶执行缺陷和语言功能障碍。基于临床表型的多样性，已经鉴定了不同表现形式，诸如FTD的行为变异型(bvFTD)和原发性进行性失语症(PPA)，所述原发性进行性失语症可以是非流利性/语法缺失变异型PPA(avPPA)或语义变异型PPA(svPPA)。这些临床表现也可与非典型的帕金森病诸如皮质基底综合征(CBS)、进行性核上性麻痹(PSP)和肌萎缩性侧索硬化症(ALS)重叠(Gazzina等人,同上)。FTD与各种神经病理学标志相关，包括神经元和星形胶质细胞中的τ病理或神经元中的胞质泛素包涵体。分子量为43kDa的反式激活DNA结合蛋白(TDP-43)是在大多数FTD和ALS病例中积聚的最突出的泛素化蛋白病理(Petkau和Leavitt,TrendsNeurosci.37(7):388-98,2014)。FTD是高达80％的病例在45岁与64岁之间表现出早发型痴呆的重要原因。所述疾病还表现出显著的家族性成分，约30％-50％的病例报告有所述疾病的家族史(Petkau和Leavitt,同上)。
FTD以家族和散发形式发生。家族性FTD的一些形式没有已知的原因，而其他形式由遗传突变引起。许多基因中的突变与FTD相关联。诸如GRN、MAPT和C9ORF72的基因中的突变是遗传性FTD的最常见原因。在其他基因诸如VCP、TARDBP、CHMP2B、SQSTM1、UBQLN1、UBQLN2、TBK1和CHCHD10中已经鉴定出罕见的突变。还已在FTD受试者中鉴定了通常与FTD不相关的神经变性疾病基因诸如PSEN1、PSEN2、CTSF、CYP27A1中的突变(Blauwendraat等人,Genetics in Medicine 20:240-249,2018)。
葡糖基鞘氨醇(GlcSph)
本文提供了用于鉴定患有额颞痴呆(FTD)或处于患有额颞痴呆(FTD)的风险中的受试者和/或用于评估化合物或监测受试者对用于治疗FTD的化合物、其药物组合物或给药方案的反应的方法，其中所述方法包括测量来自所述受试者的测试样品中的葡糖基鞘氨醇(GlcSph)的丰度。
GlcSph是葡糖脑苷脂酶(GCase)的底物，并且发现其在表现出降低的GCase活性的人戈谢病(Gaucher disease)患者和小鼠模型的细胞和组织中积聚。GlcSph的积聚涉及在戈谢病中观察到的内脏和神经元病理。
在一些实施方案中，GlcSph的丰度可与参考值进行比较。在一些实施方案中，患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者与参考值相比具有增加的GlcSph水平，例如受试者的测试样品中GlcSph的丰度可以是参考值的至少约1.2倍至约5倍或至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍、8倍、8.1倍、8.2倍、8.3倍、8.4倍、8.5倍、8.6倍、8.7倍、8.8倍、8.9倍、9倍、9.1倍、9.2倍、9.3倍、9.4倍、9.5倍、9.6倍、9.7倍、9.8倍、9.9倍或10倍。在一些实施方案中，参考值是在受试者接受治疗之前患有FTD或处于患有FTD风险中的受试者的测试样品中的GlcSph水平。
在本公开的方法的一些实施方案中，在从参考受试者或参考受试者群体获得的参考样品中测量参考值。参考受试者或参考受试者群体可以是健康对照受试者或健康对照受试者群体。参考受试者或参考受试者群体可以是不患有FTD或不具有降低水平的PGRN的受试者或受试者群体。在一些实施方案中，在患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者接受治疗后，来自受试者的测试样品中的GlcSph水平可改善超过来自接受任何治疗的受试者之前的受试者的测试样品中的GlcSph水平。在一些实施方案中，与在接受治疗的受试者之前患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者中的GlcSph水平相比，改善的GlcSph水平更接近参考值(例如，在从健康对照受试者或健康对照受试者群体获得的参考样品中测量的参考值)，例如，改善的GlcSph水平与参考值相比具有小于15％、10％或5％的差异。
在一些情况下，在患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者中，与参考值相比增加的GlcSph水平可在例如受试者的全血、血浆、细胞、组织、血清、脑脊液、间质液、痰液、尿液、淋巴液或其组合中发现。在特定实施方案中，增加的GlcSph水平可在受试者的血浆中发现。在本公开的方法的一些实施方案中，取自患有FTD或具有一个或多个参考值或处于患有FTD或具有一个或多个参考值的风险中的受试者的测试样品可包括血浆或与血浆有关。
此外，在患有FTD或处于患有FTD风险中的受试者中，与参考值相比增加的GlcSph水平可在受试者的脑中发现，例如在脑的额叶和/或颞叶中。在特定实施方案中，增加的GlcSph水平可在额叶的一个或多个区域中发现，例如，额上回、额中回、额下回和/或中央前回。
在本文所述的方法中使用的取自患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者的测试样品可包括细胞，诸如血细胞、脑细胞、外周血单核细胞(PBMC)、骨髓源性巨噬细胞(BMDM)、视网膜色素上皮(RPE)细胞、红细胞、白细胞、神经细胞、小胶质细胞、大脑皮层细胞、脊髓细胞、骨髓细胞、肝细胞、肾细胞、脾细胞、肺细胞、眼细胞、绒毛膜绒毛细胞、肌肉细胞、皮肤细胞、成纤维细胞、心脏细胞、淋巴结细胞或其组合。在一些实施方案中，测试样品包括血细胞。在一些实施方案中，测试样品包括脑细胞。
在本文所述的方法中使用的取自患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者的测试样品可包括组织，诸如脑组织、大脑皮层组织、脊髓组织、肝组织、肾组织、肌肉组织、心脏组织、眼组织、视网膜组织、淋巴结、骨髓、皮肤组织、血管组织、肺组织、脾组织、瓣膜组织或其组合。在一些实施方案中，测试样品包括脑组织，诸如来自受试者大脑的额叶或颞叶的脑组织。在特定实施方案中，测试样品中使用的脑组织可来自额上回、额中回、额下回和/或中央前回。
在本文所述的方法中使用的取自患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者的测试样品可包括内体、溶酶体、细胞外囊泡、外泌体、微囊泡或其组合。
在一些实施方案中，内部GlcSph标准品用于测量来自患有FTD或处于患有FTD风险中的受试者的测试样品中GlcSph的丰度和/或确定参考值(例如，测量参考样品中GlcSph的丰度)。例如，可将已知量的内部GlcSph标准品添加到样品(例如，测试样品和/或参考样品)中以用作校准点，从而可确定样品中存在的GlcSph的量。在一些实施方案中，在用于从样品中提取或分离GlcSph的试剂(例如，甲醇)中“掺加”内部GlcSph标准品。通常，内部GlcSph标准品是在受试者中非天然存在的GlcSph。在一些实施方案中，内部GlcSph是氘标记的GlcSph，诸如实施例中使用的GlcSph(d5)。
使用GlcSph鉴定患有FTD或处于患有FTD风险中的受试者
在一些实施方案中，当来自受试者的测试样品中GlcSph的丰度高于参考值时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。可在从参考受试者或参考受试者群体，例如健康对照或不患有FTD或不具有降低水平的PGRN的受试者获得的参考样品中测量参考值。在其他实施方案中，当受试者在颗粒体蛋白(GRN)基因中具有一个或多个突变时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。在一些实施方案中，来自受试者的测试样品可以是血浆样品。
在一些实施方案中，当GlcSph的丰度(例如，在测试样品中测量的)是参考值(例如，在从参考受试者或参考受试者群体获得的参考样品中测量的参考值)的至少约1.2倍(例如，约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、5.5倍、6倍、6.5倍、7倍、7.5倍、8倍、8.5倍、9倍、9.5倍、10倍或更多)时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。
在一些实施方案中，当GlcSph的丰度(例如，在测试样品中测量的)是参考值(例如，在从参考受试者或参考受试者群体获得的参考样品中测量的参考值)的至少约1.2倍至约5倍(例如，至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍或5倍)时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。在一些实施方案中，当GlcSph的丰度是参考值(例如，在从参考受试者或参考受试者群体获得的参考样品中测量的参考值)的约2倍至约3倍(例如，约2倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍或3倍)时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。
双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)
在一些实施方案中，除了在用于鉴定患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者和/或用于评估化合物或监测受试者对本文所述的用于治疗FTD的化合物、其药物组合物或给药方案的反应的方法中测量GlcSph的丰度之外，所述方法还包括测量来自受试者的测试样品中一种或多种双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)物种的丰度。在一些实施方案中，本文提供的方法还包括向受试者施用用于改善用于治疗FTD的一种或多种BMP物种水平的化合物。
在所述方法的一些实施方案中，GlcSph的丰度和一种或多种BMP物种的丰度都可从来自受试者的相同测试样品中测量。在其他实施方案中，可从受试者中取两个测试样品(例如，同时取两个测试样品)，其中一个测试样品可用于测量GlcSph的丰度，而另一个测试样品可用于测量一种或多种BMP物种的丰度。两个测试样品可取自受试者的相同流体、细胞或组织(例如，全血、血浆、细胞、组织、血清、脑脊液、间质液、痰液、尿液或淋巴液)。在其他实施方案中，两个测试样品可取自受试者的不同流体、细胞或组织，例如一个样品可以是血浆，而另一个样品可以是脑组织。
在一些实施方案中，除了测量GlcSph的丰度之外，还测量单个BMP物种的丰度。在一些实施方案中，测量两种或更多种BMP物种的丰度。在一些实施方案中，测量表1中至少两种、三种、四种、五种或更多种BMP物种的丰度。当测量两种或更多种BMP物种的丰度时，可使用不同BMP物种的任何组合。
表1
Figure BDA0004175601260000151
Figure BDA0004175601260000161
在一些实施方案中，一种或多种BMP物种包括两种或更多种BMP物种。在一些实施方案中，一种或多种BMP物种包括BMP(16:0_18:1)、BMP(16:0_18:2)、BMP(18:0_18:0)、BMP(18:0_18:1)、BMP(18:1_18:1)、BMP(16:0_20:3)、BMP(18:1_20:2)、BMP(18:0_20:4)、BM P(16:0_22:5)、BMP(20:4_20:4)、BMP(22:6_22:6)、BMP(20:4_20:5)、BMP(18:2_18:2)、BMP(16:0_20:4)、BMP(18:0_18:2)、BMP(18:0e_22:6)、BMP(18:1e_20:4)、BMP(18:3_22:5)、BMP(20:4_22:6)、BMP(18:0e_20:4)、BMP(18:2_20:4)、BMP(18:1_22:6)、BMP(18:1_20:4)、BM P(18:0_22:6)或其组合。
在一些实施方案中，一种或多种BMP物种包括BMP(18:1_18:1)、BMP(18:0_20:4)、BMP(20:4_20:4)、BMP(22:6_22:6)、BMP(20:4_22:6)、BMP(18:1_22:6)、BMP(18:1_20:4)、BMP(18:0_22:6)、BMP(18:3_22:5)或其组合。
在一些实施方案中，测试样品包括培养细胞，并且一种或多种BMP物种包括BMP(18:1_18:1)。在一些实施方案中，测试样品包括血浆、组织、尿液、脑脊液(CSF)和/或脑或肝组织，并且一种或多种BMP物种包括BMP(22:6_22:6)。在一些实施方案中，测试样品包括肝组织，并且一种或多种BMP物种包括BMP(22:6_22:6)、BMP(18:3_22:5)或其组合。在一些实施方案中，测试样品包括CSF或尿液，并且一种或多种BMP物种包括BMP(22:6_22:6)。在一些实施方案中，测试样品包括小胶质细胞，并且一种或多种BMP物种包括BMP(18:3_22:5)。
在一些实施方案中，可将多于一种BMP物种的丰度求和，并将总丰度与参考值进行比较。例如，可将1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147或更多种BMP物种(例如，表1中列出的BMP物种)中每一种的丰度求和，并且然后将总丰度与参考值进行比较。
在一些情况下，一种类型的样品与另一种样品相比，诸如例如基于细胞的样品(例如培养的细胞)与基于组织的或血液样品相比，一种或多种BMP物种可差异表达(例如更丰富或更不丰富)。因此，在一些实施方案中，一种或多种BMP物种的选择(即，用于测量丰度)取决于样品的类型。在一些实施方案中，例如当样品(例如测试样品和/或参考样品)是骨髓源性巨噬细胞(BMDM)时，一种或多种BMP物种包括BMP(18:1_18:1)。在其他实施方案中，例如当样品包括组织(例如脑组织、肝组织)或血浆、尿液或CSF时，一种或多种BMP物种包括BMP(22:6_22:6)。
在一些实施方案中，内部BMP标准品(例如，BMP(14:0_14:0))用于测量样品中一种或多种BMP物种的丰度和/或确定参考值(例如，测量参考样品中一种或多种BMP物种的丰度)。例如，可将已知量的内部BMP标准品添加到样品(例如，测试样品和/或参考样品)中以用作校准点，从而可确定样品中存在的一种或多种BMP物种的量。在一些实施方案中，在用于从样品中提取或分离BMP的试剂(例如，甲醇)中“掺加”内部BMP标准品。通常，内部BMP标准品将是受试者中非天然存在的BMP。
使用BMP物种鉴定患有FTD或处于患有FTD风险中的受试者
在本文所述方法的一些实施方案中，除了使用GlcSph的丰度来鉴定患有FTD或处于患有FTD风险中的受试者之外，还可使用一种或多种BMP物种的丰度来鉴定此类受试者。当测试样品中的至少一种(例如，至少1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145或更多)BMP物种(例如，表1中列出的BMP物种)的丰度在测试样品是BMDM时高于或在测试样品是肝、脑、脑脊液、血浆或尿液时低于从参考受试者或参考受试者群体获得的对应细胞、组织或流体参考样品中测量的参考值时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。
在一些实施方案中，当与在从参考受试者或参考受试者群体获得的对应细胞、组织或流体参考样品中测量的参考值相比，选自由BM P(16:0_18:1)、BMP(16:0_18:2)、BMP(18:0_18:0)、BMP(18:0_18:1)、BMP(18:1_18:1)、BMP(16:0_20:3)、BMP(18:1_20:2)、BMP(18:0_20:4)、BMP(16:0_22:5)、BMP(20:4_20:4)、BMP(22:6_22:6)、BMP(20:4_20:5)、BMP(18:2_18:2)、BMP(16:0_20:4)、BMP(18:0_18:2)、BMP(18:0e_22:6)、BMP(18:1e_20:4)、BMP(20:4_22:6)、BMP(18:0e_20:4)、BMP(18:2_20:4)、BMP(18:1_22:6)、BMP(18:1_20:4)、BMP(18:0_22:6)和BMP(18:3_22:5)组成的组的至少一种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或全部23种)BMP物种的丰度在BMDM中升高或在肝、脑、脑脊液、血浆或尿液中降低时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGR N。
在一些实施方案中，当与在从参考受试者或参考受试者群体获得的对应细胞、组织或流体参考样品中测量的参考值相比，选自由BMP(18:1_18:1)、BMP(18:0_20:4)、BMP(20:4_20:4)、BMP(22:6_22:6)、BMP(20:4_22:6)、BMP(18:1_22:6)、BMP(18:1_20:4)、BMP(18:0_22:6)和BMP(18:3_22:5)组成的组的至少一种(例如，1、2、3、4、5、6、7或全部8种)BMP物种的丰度在BMDM中升高或在肝、脑、脑脊液、血浆或尿液中降低时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。
在一些实施方案中，当与在从参考受试者或参考受试者群体获得的对应BMDM参考样品中测量的参考值相比，BMP(18:1_18:1)在BMDM中升高时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。在其他实施方案中，当与在从参考受试者或参考受试者群体获得的对应细胞、组织或流体参考样品中测量的参考值相比，BMP(22:6_22:6)在血浆、尿液、脑脊液(CSF)和/或脑或肝组织中降低时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。在其他实施方案中，当BMP(22:6_22:6)和/或BMP(18:3_22:5)水平在肝组织中降低时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。在其他实施方案中，当BMP(18:3_22:5)水平在小胶质细胞中降低时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。
在一些实施方案中，当与在从参考受试者或参考受试者群体获得的对应细胞、组织或流体参考样品中测量的参考值相比，至少一种BMP物种的丰度(例如，在测试样品中测量)在BMDM中高或在肝、脑、脑脊液、血浆或尿液中低至少约1.2倍(例如，约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、5.5倍、6倍、6.5倍、7倍、7.5倍、8倍、8.5倍、9倍、9.5倍、10倍或更多)时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。
在一些实施方案中，当至少一种BMP物种的丰度(例如，在测试样品中测量)是参考值(例如，在从参考受试者或参考受试者群体获得的对应细胞、组织或流体参考样品中测量的对应参考值)的至少约1.2倍至约5倍(例如，至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍或5倍)时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。在一些实施方案中，当与在从参考受试者或参考受试者群体获得的对应细胞、组织或流体参考样品中测量的参考值相比，至少一种BMP物种的丰度在BMDM中高或在肝、脑、脑脊液、血浆或尿液中低约2倍至约3倍(例如，约2倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍或3倍)时，确定受试者患有FTD或具有降低水平的PGRN。
检测技术
在一些实施方案中，根据本公开的方法使用质谱分析法(MS)检测和/或测量GlcSph和/或BMP的丰度。可使用任何合适的MS技术。此类技术包括但不限于，使用单个质量分析器(例如，四极杆)的单一质谱(MS)和使用一系列质量分析器(例如，三个质量分析器)的串联质谱(MS/MS)来执行多轮质谱，其中通常在每轮之间具有分子片段化步骤。MS和MS/MS技术可与液相色谱(LC)(例如，高效液相色谱(HPLC)或超高效液相色谱(UHPLC))或气相色谱(GC)技术联用。这样的液相色谱质谱(LC-MS)、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)、气相色谱-质谱(GC-MS)和气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)方法可实现与用单独MS或MS/MS通常可实现的质量分辨和质量测定相比增强的质量分辨和质量测定。
在一些实施方案中，基于抗体的方法用于检测和/或测量GlcSph和/或BMP的丰度。合适方法的非限制性实例包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫荧光和放射免疫测定(RIA)技术。用于执行ELISA、免疫荧光和RIA技术的方法是本领域已知的。
在本公开的方法中，可使用任何数量的样品类型作为测试样品和/或参考样品，只要所述样品包含足以用于检测的量的GlcSph和/或BMP从而可测量丰度即可。非限制性实例包括血液(例如，全血、血浆、血清)、细胞、组织、流体(例如，脑脊液、尿液、细支气管肺泡灌洗液、淋巴液、精液、母乳、羊水)、粪便、痰液或其任何组合。合适的细胞类型的非限制性实例包括血细胞(例如，外周血单核细胞(PBMC)、红细胞、白细胞)、神经细胞(例如，脑细胞、大脑皮层细胞、脊髓细胞)、骨髓源性巨噬细胞(BMDM)、骨髓细胞、肝细胞、肾细胞、脾细胞、肺细胞、眼细胞(例如，视网膜细胞诸如视网膜色素上皮(RPE)细胞)、绒毛膜绒毛细胞、肌肉细胞、皮肤细胞、成纤维细胞、心脏细胞、淋巴结细胞或其组合。在一些实施方案中，样品包括细胞的一部分。在一些实施方案中，样品从细胞或组织中纯化。纯化样品的非限制性实例包括内体、溶酶体、细胞外囊泡(例如，外泌体、微囊泡)及其组合。
在一些实施方案中，样品(例如测试样品和/或参考样品)包括血浆。
在一些实施方案中，样品(例如测试样品和/或参考样品)包括脑细胞或组织。脑细胞或组织可来自脑的额叶或颞叶。在特定实施方案中，脑细胞或组织可来自脑的额叶的额上回、额中回、额下回或中央前回。
在一些实施方案中，样品(例如，测试样品和/或参考样品)包括作为培养细胞的细胞。非限制性实例包括BMDM和RPE细胞。BMDM可例如通过获得包括PBMC的样品并培养其中所含的单核细胞而获得。
合适的组织样品类型的非限制性实例包括神经组织(例如，脑组织、大脑皮层组织、脊髓组织)、肝组织、肾组织、肌肉组织、心脏组织、眼组织(例如，视网膜组织)、淋巴结、骨髓、皮肤组织、血管组织、肺组织、脾组织、瓣膜组织及其组合。在一些实施方案中，测试样品和/或参考样品包括脑组织或肝组织。
监测对治疗的反应
在一个方面，本公开提供了用于监测受试者中PGRN水平的方法。在另一方面，提供了用于监测受试者对化合物、其药物组合物或给药方案的反应或对用于治疗FTD的任何疗法或治疗剂的反应的方法。
通常，可将来自患有FTD或处于患有FTD风险中的受试者的测试样品中的GlcSph丰度与一个或多个参考值(例如，对应的参考值)进行比较。除了GlcSph的丰度之外，还可在来自患有FTD或处于患有FTD风险中的受试者的测试样品中测量一种或多种BMP物种的丰度，并与一种或多种参考值(例如，对应的参考值)进行比较。在一些实施方案中，在受试者接受治疗之前和在受试者接受治疗之后的一个或多个稍后时间点测量GlcSph值和/或BMP值。可将治疗后稍后时间点取得的丰度值与治疗前的所述值进行比较，以确定受试者对治疗的反应。也可将在稍后时间点取得的丰度值与参考值(诸如健康对照的丰度值)进行比较，以确定受试者对治疗的反应。参考值可来自与受试者的测试样品的细胞、组织或流体对应的健康对照的细胞、组织或流体。
在一些实施方案中，参考值是在参考样品中测量的GlcSph的丰度。在一些实施方案中，参考值是在参考样品中测量的一种或多种BMP物种的丰度。参考值可以是测量的丰度值(例如，在参考样品中测量的丰度值)，或者可从测量的丰度值推导或外推。在一些实施方式中，例如，当参考值从多个样品或受试者群体获得时，参考值是值的范围。此外，参考值可表示为具有或不具有标准偏差或误差标准的单个值(例如，测量的丰度值、平均值或中值)或值的范围。
当(例如，从受试者)获得两个或更多个测试样品时，获得它们的时间点可间隔约1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或更多分钟；约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或更多小时；约1、2、3、4、5、6、7或更多天；约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多周；或甚至更长。当获得三个或更多个测试样品时，获得每个测试样品之间的时间间隔可全部相同，间隔可全部不同，或其组合。
在一些实施方案中，在受试者已经治疗FTD之前获得第一测试样品(即，治疗前测试样品)，并且在受试者已经治疗FTD之后获得第二测试样品(即，治疗后测试样品)。在一些实施方案中，第一测试样品和第二测试样品均在受试者已经接受后从受试者获得，即，第一测试样品相比于第二测试样品是在治疗期间的较早时间点从受试者获得。在一些实施方案中，从受试者获得多于一个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)治疗前和/或治疗后测试样品。此外，获得的治疗前和治疗后测试样品的数量不需要相同。
在所述方法的一些实施方案中，GlcSph的丰度和一种或多种BMP物种的丰度都可从来自受试者的相同测试样品中测量。在其他实施方案中，可从受试者中取得两个测试样品(例如，同时采集两个测试样品，或在不同时间采集两个测试样品)，其中一个测试样品可用于测量GlcSph的丰度，而另一个测试样品可用于测量一种或多种BMP物种的丰度。两个测试样品可取自受试者的相同流体、细胞或组织(例如，全血、血浆、细胞、组织、血清、脑脊液、间质液、痰液、尿液或淋巴液)。在其他实施方案中，两个测试样品可取自受试者的不同流体、细胞或组织，例如一个样品可以是血浆，而另一个样品可以是脑细胞或脑组织。
在一些实施方案中，当测量的GlcSph的丰度在接受任何治疗的受试者之前取自所述受试者的参考样品中的参考值的约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％内时，可确定所述受试者对所述治疗没有反应。
在一些实施方案中，当测量的GlcSph的丰度在取自健康对照受试者的参考样品中的参考值的约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％时，可确定受试者对治疗有反应。
在一些实施方案中，当测量的一种或多种BMP物种的丰度在受试者接受任何治疗之前取自受试者的参考样品中的参照值的约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％内时，可确定受试者对治疗没有反应。
在一些实施方案中，当测量的一种或多种BMP物种的丰度在取自健康对照受试者的参考样品中的参考值的约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％内时，可确定受试者对治疗有反应。
在一些实施方案中，当测量的一种或多种BMP物种的丰度比参考值高或低约30％、35％、40％、45％或50％时，可确定受试者对治疗没有反应。
当受试者对针对FTD的治疗没有反应时，在一些实施方案中，改变(例如，增加)一种或多种治疗剂(例如，PGRN)的剂量和/或改变给药间隔(例如，减少剂量之间的时间)。在一些实施方案中，当受试者对治疗没有反应时，选择不同的治疗剂。在一些实施方案中，当受试者对治疗没有反应时，停用一种或多种治疗剂。
用于治疗FTD的化合物
在本文所公开的方法的一些实施方案中，用于治疗FTD的化合物可以是PGRN或PGRN衍生物。PGRN衍生物是指PGRN的修饰形式，其被修饰以增加PGRN的成药性，将PGRN靶向体内特定区域，改善其药代动力学或药效学特性，帮助其制造和/或保存期。
PGRN衍生物可包括包含与Fc多肽二聚体连接的PGRN的Fc-融合蛋白。在此类融合蛋白中，在一些实施方案中，融合蛋白可含有一个PGRN分子和Fc多肽的二聚体。例如，PGRN可直接或经由接头与二聚体中Fc多肽的N末端或C末端融合。在其他实施方案中，融合蛋白可含有两个PGRN分子和Fc多肽的二聚体。例如，第一PGRN可直接或经由接头与二聚体中第一Fc多肽的N末端或C末端融合，并且第二PGRN可直接或经由接头与二聚体中第二Fc多肽的N末端或C末端融合。此类融合蛋白在国际专利公布号WO 2019/246071中详细描述，其公开内容特此以引用的方式整体并入。
在本文所公开的方法的一些实施方案中，用于治疗FTD的化合物可以是在基因治疗方法中包含编码野生型PGRN的转基因的表达构建体，其可导致在颗粒体蛋白(GRN)基因中具有一个或多个突变的受试者的PGRN水平增加。例如，包含表达构建体的重组腺相关病毒载体可用于向受试者递送不具有任何突变的野生型GRN基因。此类基因治疗描述于例如美国专利公布号US 2020/0071680中，其公开内容特此以引用的方式整体并入。
在其他实施方案中，用于治疗FTD的化合物可以是分拣蛋白抑制剂，例如抗分拣蛋白抗体。分拣蛋白是I型跨膜蛋白，它是几种配体的受体，并且还起到从反式高尔基体网络中分拣选择的货物到晚期内体和溶酶体以进行降解的作用。分拣蛋白结合PGRN并靶向其进行溶酶体降解，从而负调节PGRN的水平。用于治疗FTD的分拣蛋白抑制剂是指可抑制分拣蛋白与PGRN之间的相互作用，防止分拣蛋白与PGRN结合和/或降低分拣蛋白水平的化合物。在一些实施方案中，分拣蛋白抑制剂可以是抗分拣蛋白抗体。抗分拣蛋白抗体及其变体描述于例如国际专利公布号WO2016/164637和WO2020/014617中，其公开内容特此以引用的方式整体并入。WO 2016/164637中描述的特定抗体包括命名为S-2、S-5、S-6、S-8、S-14、S-15、S-15-10-7、S-15-6、S-18、S-19、S-20、S-21、S-22、S-29、S-30、S-45、S-49、S-51、S-57、S-60、S-60-1、S-60-2、S-60-3、S-60-4、S-60-5、S-60-6、S-60-7、60-8、S-60-9、S-61、S-63、S-64、S-65、S-72、S-82和S-83的克隆。WO 2020/014617中描述的特定抗分拣蛋白抗体包括命名为S-60、S-60-1、S-60-2、S-60-3、S-60-4、S-60-7、S-60-8、S-60-10、S-60-11、S-60-12、S-60-13、S-60-14、S-60-15[N33(wt)]、S-60-15.1[N33T]、S-60-15.2[N33S]、S-60-15.3[N33G]、S-60-15.4[N33R]、S-60-15.5[N33D]、S-60-15.6[N33H]、S-60-15.7[N33K]、S-60-15.8[N33Q]、S-60-15.9[N33Y]、S-60-15.10[N33E]、S-60-15.11[N33W]、S-60-15.12[N33F]、S-60-15.13[N33I]、S-60-15.14[N33V]、S-60-15.15[N33A]、S-60-15.16[N33M]、S-60-15.17[N33L]、S-60-16、S-60-18、S-60-19、S-60-24的克隆以及重链具有含和不含末端赖氨酸的Fc LALAPS的变体(例如，S-60-15.1[N33T])。在一些实施方案中，抗分拣蛋白抗体是AL101或AL100。
IV.试剂盒
在另一方面，本公开提供了用于监测受试者(例如，测试受试者和/或参考受试者或参考受试者群体)中的PGRN水平的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒用于测量或校准GlcSph的丰度(例如，在从受试者获得的测试样品和/或从参考受试者或参考受试者群体获得的参考样品中)。在一些实施方案中，试剂盒包括GlcSph标准品(例如，内部GlcSph标准品)，其可用于测量或校准GlcSph的丰度(例如，在诸如测试和/或参考样品的样品中)。在一些实施方案中，GlcSph标准品包括受试者中不天然存在的GlcSph。在一些实施方案中，GlcSph标准品包括在人、非人灵长类动物、啮齿类动物、狗和/或猪中不天然存在的GlcSph。在一些实施方案中，GlcSph标准品包括人中不天然存在的GlcSph。在一些实施方案中，GlcSph标准品可以是氘标记的GlcSph，诸如实施例中使用的GlcSph(d5)。
此外，除了测量或校准GlcSph的丰度之外，在一些实施方案中，试剂盒还用于测量或校准一种或多种双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)物种的丰度(例如，在从受试者获得的测试样品和/或从参考受试者或参考受试者群体获得的参考样品中)。在一些实施方案中，试剂盒包括BMP标准品(例如，内部BMP标准品)，其可用于测量或校准一种或多种BMP物种的丰度(例如，在诸如测试和/或参考样品的样品中)。在一些实施方案中，BMP标准品包括受试者中不天然存在的BMP物种。在一些实施方案中，BMP标准品包括在人、非人灵长类动物、啮齿类动物、狗和/或猪中不天然存在的BMP物种。在一些实施方案中，BMP标准品包括人中不天然存在的BMP物种。在一些实施方案中，BMP标准品包括BMP(14:0_14:0)。
在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种试剂。例如，在一些实施方案中，试剂盒包括用于获得测试样品(例如，来自受试者)和/或参考样品(例如，来自参考受试者或参考受试者群体)，处理样品(例如，从测试样品和/或参考样品分离或纯化GlcSph和/或BMP)，测量样品(例如，测试样品和/或参考样品)中GlcSph和/或BMP的丰度，和/或校准样品(例如，测试样品和/或参考样品)中GlcSph和/或BMP的丰度的试剂。
在一些实施方案中，试剂盒还包括说明材料，所述说明材料包含用于实施本文所述的方法的指导(例如，方案)(例如，对使用试剂盒监测受试者(例如，测试受试者和/或参考受试者或参考受试者群体)中的PGRN水平的说明书)。虽然说明资料一般包含书面或打印资料，但它们并不限于这些。本公开涵盖能够存储此类说明书并且将它们传达给最终用户的任何介质。这样的介质包括但不限于，电子存储介质(例如，磁盘、磁带、盒式磁带(cartridge)、芯片)、光学介质(例如，CD-ROM)等等。这样的介质可包括提供此类说明材料的互联网网站的网址。
V.实施例
仅出于说明目的提供以下实施例，并且不旨在以任何方式限制本公开。
一般程序：使用LC-MS/MS量化人血浆中的葡糖基鞘氨醇(GlcSph)
为了制备用于LC-MS/MS分析的样品，将20μL校准标准品(STD)，质量控制样品(QC)和未知血浆样品的等分试样转移至干净的96孔板中。将20μL 1％牛血清白蛋白(BSA)水溶液添加到STD和QC中，同时将20μL甲醇添加到血浆样品和血浆基质QC中。将10μL内标工作溶液(在乙腈/异丙醇/水92.5/5/2.5中的5ng/mL GlcSph-d5，含有0.5％甲酸和5mM甲酸铵)添加到每个样品中，之后添加150μL1％氢氧化铵水溶液以调节pH。混合后，将样品上样到
Figure BDA0004175601260000281
SLE+200μL Supported Liquid Extraction Plate(Biotage,San Jose,CA)上。样品完全吸收在板吸附剂中后，使用乙酸乙酯将分析物洗脱到干净的收集板中。将洗脱液在纯化的氮气流下在40℃下完全干燥并在含有0.5％甲酸和5mM甲酸铵的150μL乙腈/异丙醇/水92.5/5/2.5中复原，然后将样品注入LC-MS/MS以供分析。
在与Sciex API 6500三重四极杆(Triple Quad)质谱仪(AB Sciex,RedwoodCity,CA)偶联的ExionLC AD UHPLC系统上进行LC-MS/MS分析。GlcSph和GlcSph-d5的MRM跃迁分别是462.3到282.1和467.6到287.4。电喷雾电离以正离子模式进行。去簇电压为60v，并且碰撞能为31v。在Acquity BEH HILIC柱(1.7μm，100×2.1mm)(Waters Co.,Milford,MA)上建立HPLC色谱，并且在运行期间将柱保持在55℃。
对于GlcSph从基质干扰中的LC分离，所使用的两种流动相是0.1％甲酸和10mM甲酸铵水溶液(流动相A)和0.1％甲酸的乙腈溶液(流动相B)。流速为0.4mL/min。流动相B浓度最初设定为93％并保持6.5min，并且然后在6.51min降低至50％并保持0.99min，然后在7.51min增加至93％。在93％ B下保持2.49min后，梯度在10min时结束。
实施例1.GlcSph作为GRN相关FTD的生物标志物
在这项研究中使用了来自根据美国国家老龄研究所(NIA)授予的合作协议基金(U24 AG21886)获得政府支持的阿尔茨海默病国家细胞库(National Cell Repositoryfor Alzheimer’s Disease，NCRAD)的样品。获得来自散发FTD患者(n＝26)，GRN突变FTD患者(n＝16)和临床正常对照受试者(n＝20)的血浆样品。
将血浆样品设盲，随机化，并且用甲醇进行代谢物/脂质提取，并在定量LC-MS/MS平台上进行分析。用可靠化合物确认分析物身份，并将每个分析物的信号归一化为对应的内标。通过生物统计学家分析生物标志物数据。
如图1所示，与不携带任何遗传突变的临床正常对照相比，来自GRN相关FTD患者的血浆样品中GlcSph显著增加(P<0.01)，但在非GRN FTD患者中没有显著增加。
实施例2.各种样品中GlcSph的液相色谱-质谱(LC-MS)分析称重组织样品(20mg)，并且然后用TissueLyser均质机(Qiagen,Valencia,CA,USA)在掺有氘标记的GlcSph，GlcSph(d5)的200mL甲醇中均质化。将匀浆在4℃下以14,000rpm旋转20min。然后将上清液转移至LC-MS小瓶中以供进一步分析。然后将甲醇提取物在氮气流下干燥4h，并重悬于100μL 92.5/5/2.5ACN/IPA/H2O(含有5mM甲酸铵和0.5％甲酸)中，以供通过LC-MS进一步分析。
将生物流体(10μL)用含有GlcSph(d5)的100μL甲醇进行蛋白质沉淀，并在4℃下以14,000rpm旋转20min。然后将上清液转移至LC-MS小瓶中以供进一步分析。然后将甲醇提取物在氮气流下干燥4h，并重悬于100μL 92.5/5/2.5ACN/IPA/H2O(含有5mM甲酸铵和0.5％甲酸)中，以供通过LC-MS进一步分析。
用PBS充分洗涤细胞，并用掺有GlcSph(d5)作为内标的水:甲醇[1:9，体积:体积]混合物提取GlcSph。将样品涡旋混合并在4℃下以14,000rpm离心20min。然后将上清液转移至LC-MS小瓶中以供进一步分析。然后将甲醇提取物在氮气流下干燥4h，并重悬于100μL92.5/5/2.5ACN/IPA/H2O(含有5mM甲酸铵和0.5％甲酸)中，以供通过LC-MS进一步分析。
通过与电喷雾质谱(QTRAP 6500+)偶联的液相色谱(UHPLC Nexera X2)进行GlcSph分析。对于每次分析，在45℃下使用0.48mL/min的流速将2-5μL样品注射到HALOHILIC 2.0μm，3.0×150mm柱(Advanced Materials Technology，PN 91813-701)上。流动相A由含有5mM甲酸铵和0.5％甲酸的92.5/5/2.5ACN/IPA/H2O组成。流动相B由含有5mM甲酸铵和0.5％甲酸的92.5/5/2.5H2O/IPA/ACN组成。梯度如下编程：在100％ B下0.0-2.0min，在95％ B下2.1min，在85％ B下4.5min，在85％ B下保持6.0min，在6.1min下降到0％B并保持到7.0min，并且在7.1min时回升至100％并保持到8.5min。电喷雾电离以正离子或负离子模式进行。应用以下设置：气帘气体处于30psi；将碰撞气体设定为中等；离子喷雾电压处于5500V；温度处于400℃；离子源气体1处于50psi；离子源气体2处于60psi；入口电势处于10V；以及碰撞室出口电势处于12.5V。表2示出了用于GlcSph和GlcSph物种的LC-MS分析的采集参数和保留时间(RT)信息。
GlcSph基于可商购获得的参考标准品(Avanti Polar Lipids,Birmingham,AL,USA)的保留时间和MRM特性来鉴定。使用MultiQuant 3.02(Sciex)对内标GlcSph(d5)进行量化。将代谢物归一化为总蛋白量、组织重量或体积。
表2
名称 内标 RT Q1 m/z Q3 m/z 时间(毫秒) DP CE
GlcSph GlcSph(d5) 6.57 462.2 282.3 200 45 16
GlcSph(d5) N/A 6.58 467.2 287.3 15 30 16
半乳糖基鞘氨醇 GlcSph(d5) 6.68 462.2 282.3 200 45 16
实施例3.Grn KO/hTfR.KI小鼠血浆中GlcSph的分析
用于脂质提取和GlcSph分析的血浆收集和处理
如国际专利公布号WO 2019/246071中所述产生Grn KO/hTfR.KI小鼠。
经由尾静脉将融合体1注射到Grn KO/hTfR.KI小鼠中。在使用致死剂量的三溴乙醇麻醉Grn KO/hTfR.KI小鼠后，使用与25号针(参考号SS-01T2516)连接的1mL Terumo结核菌素注射器经由心脏穿刺收集全血。然后将血液转移至EDTA包被的试管(SarstedtMicrovette500K3E，参考号201341102)中并倒转约10次。然后将样品在4℃和12700RPM下旋转7分钟。然后将上清液转移至具有低蛋白结合的新试管中并闪速冷冻。为了提取脂质，将血浆在冰上解冻，并将10μL转移至96孔V形底半深孔板(Waters，参考号186005837)中。将200μL LC-MS级甲醇(包括内标)添加到血浆样品中，并将血浆样品在室温下以650rpm振荡5分钟。然后将样品在-20℃下储存1小时以沉淀蛋白质。在此孵育之后，将板在4℃下以4,000xg旋转20min。然后提取50μL上清液并转移至具有玻璃插入物的96孔板(AnalyticalSales&Services，参考号27350)中。然后将样品在氮气流下干燥约2小时，并重悬于含有5mM甲酸铵和0.5％甲酸的100μL乙腈/异丙醇/水(92.5/5/2.5，v/v/v)中。
GlcSph的LC-MS测定
GlcSph分析通过与电喷雾质谱(Sciex QTRAP 6500+Sciex,Framingham,MA,USA)偶联的液相色谱(Shimadzu Nexera X2系统,Shimadzu Scientific Instrument,Columbia,MD,USA)进行。对于每次分析，在45℃下使用0.45mL/min的流速将10μL样品注射到HALO HILIC 2.0μm，3.0×150mm柱(Advanced Materials Technology，PN 91813-701)上。流动相A由含有5mM甲酸铵和0.5％甲酸的92.5/5/2.5ACN/IPA/H2O组成。流动相B由含有5mM甲酸铵和0.5％甲酸的92.5/5/2.5H2O/IPA/ACN组成。梯度如下编程：在100％ B下0.0-3.1min，在95％ B下3.2min，在85％ B下5.7min，在85％ B下保持到7.1min，7.25min下降到0％ B并保持到8.75min，并且在10.65min时回升至100％并保持到11min。电喷雾电离以正离子模式进行，应用以下设置：气帘气体处于25；将碰撞气体设定为中等；离子喷雾电压处于5500；温度处于350℃；离子源气体1处于55；离子源气体2处于60。使用Analyst 1.6(Sciex)以多反应监测模式(MRM)进行数据采集，参数如下：停留时间(毫秒)和碰撞能量(CE)；入口电势(EP)处于10；以及碰撞室出口电势(CXP)处于12.5。使用同位素标记的内标GlcSph(d5)量化GlcSph。使用MultiQuant 3.02(Sciex)进行量化。
血浆中GlcSph的结果
评估了Grn KO/hTfR.KI小鼠(图2中的Grn KO)、同窝对照(图2中的Grn WT)和接受5mg/kg融合体1的IV剂量的Grn KO/hTfR.KI小鼠(图2中的Grn KO+Fus.1)的血浆中GlcSph的水平。融合体1是含有与Fc多肽的二聚体融合的PGRN分子的PGRN衍生物。具体而言，融合体1含有(1)经由(G4S)2接头与二聚体中的第一Fc多肽的C末端融合PGRN分子，和(2)二聚体中的第二Fc多肽。融合体1中的第一Fc多肽用臼突变T366S、L368A和Y407V(根据EU编号方案)修饰以促进异二聚化，以及用L234A和L235A突变(根据EU编号方案)修饰以降低效应子功能；并且第二Fc多肽用使转铁蛋白受体(TfR)能够结合的突变、杵突变T366W以及L234A和L235A突变修饰。融合体1在国际专利公布号WO2019/246071(对应于其中的融合体11)中详细描述，其公开内容特此以引用的方式整体并入。
在Grn KO小鼠中，血浆中的GlcSph水平是Grn WT小鼠中的2.4倍(分别为0.456±0.065ng/μL和0.190±0.021ng/μL，p＝0.002)。然而，融合体1治疗后7天，Grn KO小鼠血浆中的GlcSph水平与未接受融合体1的Grn KO小鼠中的GlcSph水平相比降低71％(0.2661±0.05218ng/μL，p＝0.030)。
实施例4.Grn KO/hTfR.KI小鼠脑和肝中GlcSph的分析
为了确定Grn KO/hTfR.KI小鼠中GlcSph上调是否对血浆具有特异性或是否也在组织中发现，在以每周注射5mpk的融合体1或融合体2给药达6周的Grn KO/hTfR.KI小鼠中进行了体内实验。融合体1在上述实施例3和国际专利公布号WO 2019/246071(对应于其中的融合体11)中进行了描述。融合体2类似于融合体1，不同之处在于融合体2中的第二Fc多肽未被修饰以结合TfR。融合体2含有(1)经由(G4S)2接头与第一Fc多肽的C末端融合的PGRN分子，其中第一Fc多肽用臼突变T366S、L368A和Y407V(根据EU编号方案)修饰以促进异二聚化，以及用L234A和L235A突变(根据EU编号方案)修饰以降低效应子功能(国际专利公开号WO 2019/246071中的SEQ ID NO:215)；和(2)用杵突变T366W以及L234A和L235A突变修饰的第二Fc多肽(国际专利公开号WO 2019/246071中的SEQ ID NO:262)。尽管融合体1能够结合人TfR，但融合体2不能。测量Grn KO/hTfR.KI小鼠的脑、肝和血浆中的GlcSph水平，并测试融合体1和融合体2拯救此表型的能力。
如实施例3所述进行用于GlcSph分析的血浆收集和制备。用于GlcSph分析的脑和肝组织收集和制备如下所述。
用于GlcSph分析的脑和肝组织收集和处理
对于组织LC-MS制备，在组织收集期间，将约20mg(即20±2mg)的大脑皮层或肝组织解剖、称重并闪速冷冻。将掺有内标的400μL甲醇添加到每个样品中，并通过在25Hz下振荡30秒用3mm碳化钨珠均质化。然后经由在4℃下以14,000g离心20分钟分离甲醇级分，之后将上清液转移至96孔板，在-20℃下孵育1h，之后在4℃下以4,000g再离心20min，并转移至玻璃小瓶中以供LC-MS分析。
对于GlcSph的分析，将甲醇级分的等分试样在N2气下干燥，并且然后重悬于含有5mM甲酸铵(MS级)和0.5％甲酸(MS级)的100μL92.5/5/2.5CAN/IPA/H2(MS级)中。将样品涡旋，然后离心并转移至玻璃小瓶中。如实施例3所述进行GlcSph的LC-MS测定。
脑、肝和血浆中GlcSph的结果
发现Grn KO/hTfR.KI小鼠与对照小鼠相比具有更高的脑和肝GlcSph水平，如对于血浆所观察到的。在以5mpk每周给药融合蛋白6周后，发现融合体1完全拯救了Grn KO/hTfR.KI小鼠脑中的GlcSph水平，而融合体2仅部分拯救此表型(图3A)，表明结合TfR的能力增加融合体1的体内功效。相比之下，融合体1和融合体2均同样能够拯救Grn KO/hTfR.KI小鼠的肝(外周组织)中的GlcSph水平(图3B)。融合体1和融合体2还都拯救了Grn KO/hTfR.KI小鼠血浆中的GlcSph水平(图3C)。
这些数据共同表明，在Grn KO/hTfR.KI小鼠中，包括在脑组织中广泛观察到GlcSph水平的增加，并且能够结合人TfR的重组PGRN融合蛋白可在慢性给药后纠正Grn KO/hTfR.KI小鼠的血浆、肝和脑中的这种异常。
应当理解的是，本文所述的实施例和实施方案仅出于说明性目的，并且根据其产生的各种修改或变化将能被本领域技术人员想到，并且将被包括在本申请的精神和范围以及随附权利要求书的范围内。本文引证的序列登录号的序列特此以引用的方式并入。

Claims (37)

1.一种用于鉴定患有额颞痴呆(FTD)或处于患有额颞痴呆(FTD)的风险中的受试者的方法，所述方法包括：
(a)测量来自受试者的测试样品中的葡糖基鞘氨醇(GlcSph)的丰度；
(b)比较在(a)中测量的所述GlcSph与一个或多个参考值之间的丰度差异；以及
(c)根据所述比较确定所述受试者是否患有FTD或处于患有FTD的风险中。
2.如权利要求1所述的方法，其还包括向所述受试者施用用于改善所述GlcSph水平以治疗FTD的化合物。
3.一种用于评价化合物或监测受试者对用于治疗额颞痴呆(FTD)的化合物、其药物组合物或给药方案的反应的方法，所述方法包括：
(a)测量来自患有FTD的受试者的测试样品中GlcSph的丰度，其中所述测试样品或受试者已经用所述化合物或其药物组合物治疗；
(b)比较在(a)中测量的所述GlcSph与一个或多个参考值之间的丰度差异；以及
(c)根据所述比较确定所述化合物、其药物组合物或给药方案是否改善所述GlcSph水平以治疗FTD。
4.如权利要求3所述的方法，其还包括用另一种化合物处理另一个测试样品或治疗另一个受试者，以及选择改善所述GlcSph水平的候选化合物。
5.如权利要求3或4所述的方法，其还包括：
(d)保持或调节向所述测试样品或所述受试者施用所述化合物的量或频率；以及
(e)向所述测试样品或所述受试者施用所述化合物。
6.如权利要求2至5中任一项所述的方法，其中所述化合物是PGRN、PGRN衍生物或其药物组合物。
7.如权利要求2至5中任一项所述的方法，其中所述化合物是分拣蛋白抑制剂。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述分拣蛋白抑制剂是抗分拣蛋白抗体。
9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者与所述参考值相比具有增加的GlcSph水平。
10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中患有FTD或处于患有FTD的风险中的受试者的所述测试样品中所述GlcSph的丰度是所述参考值的至少约1.2倍至约5倍。
11.如权利要求2至10中任一项所述的方法，其中所述改善的GlcSph水平是相对于治疗前的所述GlcSph水平的改善，并且其中所述改善的GlcSph水平比治疗前的所述GlcSph水平更接近所述参考值。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述改善的GlcSph水平与所述参考值相比具有小于15％、10％或5％的差异。
13.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述参考值是在所述受试者接受治疗之前所述受试者的测试样品中的所述GlcSph水平。
14.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述参考值在从参考受试者或参考受试者群体获得的参考样品中测量。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述参考受试者或参考受试者群体是健康对照。
16.如权利要求14或15所述的方法，其中所述参考受试者或参考受试者群体不患有FTD或具有降低水平的PGRN。
17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中步骤(a)还包括测量一种或多种双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)物种的丰度。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述一种或多种BMP物种包括BMP(16:0_18:1)、BMP(16:0_18:2)、BMP(18:0_18:0)、BMP(18:0_18:1)、BMP(18:1_18:1)、BMP(16:0_20:3)、BMP(18:1_20:2)、BMP(18:0_20:4)、BMP(16:0_22:5)、BMP(20:4_20:4)、BMP(22:6_22:6)、BMP(20:4_20:5)、BMP(18:2_18:2)、BMP(16:0_20:4)、BMP(18:0_18:2)、BMP(18:0e_22:6)、BMP(18:1e_20:4)、BMP(20:4_22:6)、BMP(18:0e_20:4)、BMP(18:2_20:4)、BMP(18:1_22:6)、BMP(18:1_20:4)、BMP(18:0_22:6)和/或BMP(18:3_22:5)。
19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述测试样品或一个或多个参考值包括或涉及全血、血浆、细胞、组织、血清、脑脊液、间质液、痰液、尿液、淋巴液或其组合。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述测试样品或一个或多个参考值包括或涉及血浆。
21.如权利要求19所述的方法，其中所述细胞是血细胞、脑细胞、外周血单核细胞(PBMC)、骨髓源性巨噬细胞(BMDM)、视网膜色素上皮(RPE)细胞、红细胞、白细胞、神经细胞、小胶质细胞、大脑皮层细胞、脊髓细胞、骨髓细胞、肝细胞、肾细胞、脾细胞、皮肤细胞、成纤维细胞、心脏细胞、淋巴结细胞或其组合。
22.如权利要求19所述的方法，其中所述组织包括淋巴结、骨髓、皮肤组织、血管组织、肺组织、脾组织、瓣膜组织或其组合。
23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述测试样品包括内体、溶酶体、细胞外囊泡、外泌体、微囊泡或其组合。
24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中使用液相色谱质谱(LC-MS)、液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)、气相色谱质谱(GC-MS)、气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)、酶联免疫吸附测定(ELISA)或其组合来测量所述GlcSph的丰度。
25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中当测量所述GlcSph的丰度时使用内部GlcSph标准品。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述内部GlcSph标准品包括所述受试者中不天然存在的GlcSph物种。
27.如权利要求25或26所述的方法，其中所述内部GlcSph标准品包括氘标记的GlcSph。
28.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述受试者在颗粒体蛋白(GRN)基因中具有一个或多个突变。
29.如权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述FTD与PGRN表达、加工、糖基化、细胞摄取、运输和/或功能相关。
30.如权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述FTD与PGRN水平降低相关。
31.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中所述受试者和/或所述参考受试者是人或非人灵长类动物。
32.如权利要求3至30中任一项所述的方法，其中所述受试者是PGRN敲除小鼠或PGRN敲除大鼠。
33.一种用于测试用于治疗受试者的FTD的化合物或其给药方案的试剂盒，所述试剂盒包括用于测量来自所述受试者的测试样品中的GlcSph丰度的GlcSph标准品。
34.如权利要求33所述的试剂盒，其中所述GlcSph标准品包括所述受试者中不天然存在的GlcSph物种。
35.如权利要求33或34所述的试剂盒，其中所述GlcSph标准品包括氘标记的GlcSph。
36.如权利要求33至35中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括用于从所述受试者获得所述测试样品、处理所述测试样品、测量所述GlcSph丰度或其组合的试剂。
37.如权利要求33至36中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括使用说明书。
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