PT96321B - Processo para a preparacao de nucleosidos de purina - Google Patents

Processo para a preparacao de nucleosidos de purina Download PDF

Info

Publication number
PT96321B
PT96321B PT96321A PT9632190A PT96321B PT 96321 B PT96321 B PT 96321B PT 96321 A PT96321 A PT 96321A PT 9632190 A PT9632190 A PT 9632190A PT 96321 B PT96321 B PT 96321B
Authority
PT
Portugal
Prior art keywords
group
general formula
compound
amino
methanol
Prior art date
Application number
PT96321A
Other languages
English (en)
Other versions
PT96321A (pt
Inventor
Susan Mary Daluge
Original Assignee
Wellcome Found
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US07/455,201 external-priority patent/US5034394A/en
Application filed by Wellcome Found filed Critical Wellcome Found
Publication of PT96321A publication Critical patent/PT96321A/pt
Publication of PT96321B publication Critical patent/PT96321B/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/42—One nitrogen atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C215/00—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C215/42—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having amino groups or hydroxy groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/47—One nitrogen atom and one oxygen or sulfur atom, e.g. cytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/50—Three nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/06—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring
    • C07C2601/10—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring the ring being unsaturated

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Descrição referente à patente de invenção de THE WELLCOME FOUNDATION LIMITED, britânica, industrial e comercial, com se de em Unicom House, 160 Euston Road, London NW1 2BP, Inglaterra, (inventor: Susan Mary Daluge, residente nos E.U. A.), para PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NÚCLEOSIDOS DE PURINA .
DESCRIÇÃO
I A presente invenção refere-se a análogos de si nucleosido de purina contendo um anel carbocíclico insaturado ij no lugar do radical de açúcar, seus derivados farmaceuticamente aceitáveis, e sua utilização em terapia médica, particularmente para o tratamento de determinadas infecções virais.
A SIDA (sindroma da imunodeficiência adquirida) é uma doença imuno-supressiva ou imuno-destrutiva que preíí dispõe os indivíduos a infecções oportunísticas fatais. Caracte !Í risticamente, a SIDA estã associada com uma falta progressiva H de células T, especialmente a sub-série inductora auxiliar su! portando o marcador de superfície OKT^.
i i
vírus da imunodeficiência humana (HIV) tem sido isolado de forma reproductível a partir de pacientes com ! SIDA ou com os sintomas que, frequentemente, precedem a SIDA. O : HIV é citopático e parece infectar, preferencialmente, e des1
. - 4 truir células T suportando o marcador OKT , e e agora geralmen: te conhecido que o HIV é o agente etiológico da SIDA.
Desde que se descobriu que o HIV é o agente I etiológico da SIDA, têm sido propostos vários agentes quimiote! rápicos anti-HIV que podem ser eficazes no tratamento dos doeni tes da SIDA. Assim, por exemplo, a Patente Norte Americana
724 232 descreve 31-azido-3'desoxitimidina (que possui o nome aprovado zidovudine), os seus derivados farmaceuticamente acei.· táveis e a sua utilização no tratamento de infecções por rectro vírus humanos, incluindo sida e as condições clínicas associadas. Vince et., Antiviral Research, 9 (1/2), 120 (1988) descreve determinados análogos nucleosidos carbocíclicos e sua utili. zação contra o HIV. Na Second Internacional conference on AntiJ virai Research, Williamburg, VA, Abril 1-0-14, 1988, foi descriij to o (±) -9- (cis-4- (hidroxi-metil) -2-ciclo-pentenil) -guanidina li
J (NSC-614846), também conhecido como carbovir.
j i
! Em todo o mundo, o vírus de hepatite B (HBV) !i é outro agente virai patogénico de consequências importantes. É mais comum nos paises asiáticos, e prevalecente na África subj| -saariana. 0 vírus está etiologicamente associado com o carcino ma hepatocelular primário.
Estima-se que nos Estados Unidos existem, nor malmente, 500.000-1 milhão de veículos infectados. A hepatite activa crónica desenvolve-se em, aproximadamente, 25% dos porta jdores e muitas vezes progride para a cirrose. Calcula-se · que.
[ 5 000 pessoas morrem ee cirrose relaccionada com HBV < .env cada iiano, nos Estados Unidos da América, e que talvez, 1 000 morram ;í de cancro do fígado relacionado com o HBV.
ij
I
Mesmo depois de existir uma vacina HBV univer sal, continua a existir a necessidade de compostos anti-HBV efi
II
Icazes. O maior reservatório de portadores persistentemente inífectados, estimado em 220 milhões em todo o mundo, não recebem • !
. qualquer benefício da vacinação e continua aser de alto risco i
ii para doenças do fígado induzidas por HBV. Esta população portadora serve com uma fonte de infecção de indivíduos susceptíveis perpetuando a incidência da doença particularmente nas áreas endémicas ou grupos de alto risco tais como abusadores de dro; gas I.V. e homossexuais. Há, assim, uma grande necessidade de i
: agentes eficazes antivirais, para o controlo da infecção crõnica e para reduzir a progressão do carcinoma hepatocelular.
Os efeitos clínicos da infecção com o vírus ;; HBV variam de dores de cabeça, febre, mal estar, náuseas, vómitos, anorexia e dores abdominais. A replicação do vírus é, normalmente, controlada pela resposta imune com o decurso de recuperação nas últimas semanas ou meses nos homens, mas a infecção : pode ser mais grave levando a doenças do fígado crónicas persis ; tentes, como atrás referido.
!Í ; 0 Pedido de Patente Europeia NQ 349242 descre ! ve determinados nucleosidos carbocíclicos de purina substituíi dos em 6 e sua utilização em terapia médica particularmente no i' tratamento de infecções HIV e HBV. Entre tais nucleosidos estão h os compostos (±)-cis-4-[2-amino-6-(-ciclo-propil-amino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol e (í)-cis-4-[2-amino-6' -(ciclo-propil-metil-amino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol, isto é, cada im na forma de uma mistura racémica dos p seus enantiómeros relevantes.
p
Verificou-se que os enantiómeros individuais ! isolados dos dois compostos referidos atrãs e seus derivados h farmacêuticos possuem actividade antiviral vantajosa, particu|í larmente contra infecções por HIV e HBV, em associação com bai) xa citotoxicidade e/ou são adequados como intermediários para a ii preparação de compostos possuindo tal actividade.
De acordo com o aspecto da presente invenção ; proporcionam-se compostos enantiomêricos de fórmula geral
em que R representa um grupo ciclo-propil-ammo ou N-ciclopro; pil-N-metil-amino e A representa o grupo 2-ciclo-penteno-l-meli ; tanol-4-ilo na configuração (1S,4R) ou (1R,4S) e seus derivados (por exemplo ésteres, sais e sais de ésteres), e estando os re1 feridos compostos e seus derivados na forma de um enantiómero essencialmente livre (por exemplo, até à extensão de menos do : que 10% p/p, de preferencia, j ro correspondente.
É de notar Ί cluem os compostos possuindo menos do que 5% p/p) do enantiomeque os compostos de fórmula (I) in as configurações seguintes:
(em que R é como atrás definido).
Os compostos enantioméricos de fórmula I, isto é, essencialmente livres do enantiómero correspondente, incluem assim:
2)
3)
4)
(IS,4R)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propil-amino)-9H-purin-9-il]2-ciclo-penteno-l-metanol (IR,4S)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il] -2-ciclo-penteno-l-metanol (lS,4R-cis-4-[2-amino-6-(N-ciclo-propil-N-metil-amino)-9H-purin-9-ilo]-2-ciclo-penteno-l-metanol (1R,4S)-cis-4-[2-amino-6-(N-ciclo-propil-N-metil-amino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol
Verificou-se que os compostos 1) e 3) ante' riores, daqui em diante referidos como os compostos enantioméri cos (1S,4R) de fórmula I, com uma rotação óptica negativa (-),
I i possuem actividade especialmente potente contra as infecções HIV e HBV e estes compostos e os seus derivados farmaceuticamen te aceitáveis representam formas de realização preferidas da ί presente invenção. Os compostos possuem ainda a vantagem que, ί depois de administração, são susceptíveis de penetrarem a bar' reira do sangue no cérebro para proporcionar níveis elevados
- dos compostos ou seus metabolitos activos no sistema nervoso ; central, quando as manifestações das infecções por HIV são particularmente debilitantes. 0 composto 1) anterior é especialmen te preferido devido à sua actividade excepcionalmente potente
- contra as infecções por HIV e HBV. Verificou-se também que o com posto possui uma toxicidade significativamente inferior, contra as células progenitoras da medula óssea, à da 3'-azido-31-desI oxitimidina (zidovudina) atras referida.
Verificou-se que os derivados fosfato dos com postos 2) e 4) anteriores, daqui em diante referidos como enanI tiómeros (1R,4S) de fórmula I, com uma rotação óptica positiva (+), possuem actividade potente contra infecções virais tais co mo as atrás referidas. Estes derivados de fosfato representam j assim uma outra forma de realização preferida da presente inven i ção.
A referência, aqui, a derivados fosfato dos
compostos enantioméricos (1R,4S) de fórmula I indica derivados ! em que um grupo fosfato está ligado ao grupo 1-metanol de fórmu la I e inclui mono-, di e tri-fosfatos.
Os compostos enantioméricos (1R,4S) semelhan[ tes de fórmula I e os seus derivados não fosfatos são adequados ίί como intermediários para a preparação dos referidos derivados !! fosfato.
Os compostos enantioméricos anteriores (1S,4R) de fórmula I e seus derivados farmaceuticamente aceitáveis e os
Í[ derivados fosfato dos compostos enantioméricos (1R,4S) de fórmu la I, são daqui em diante referidos como os compostos antivirais ! de acordo com esta invenção.
De acordo com outros aspectos da presente invenção proporcionam-se:
a) Compostos antivirais, de acordo com esta invenção, para utii I ί lizaçao em terapia médica, particularmente no tratamento ou ji i' profilaxia de uma infecção rectroviral ou de uma infecção vi jt b ral hepatite B;
‘I í b) um método para o tratamento ou profilaxia de infecções reí[ trovirais e infecções de hepatite B num indivíduo, por exemj pio, um mamífero, tal como o homem, que inclui o tratamento ; do indivíduo com uma quantidade terapeuticamente eficaz de í um composto antiviral de acordo com esta invenção; e ;i li c) a utilização de um composto antiviral de acordo com esta in,f ~ vençao no fabrico de um medicamento para o tratamento ou pro filaxia de quaisquer das infecções atrás referidas.
Os exemplos das infecções retrovirais que se podem tratar ou evitar de acordo com esta invenção incluem iníi fecçoes retrovirais humanas, tais como, o vírus da imunodeficiI
Iência humana (HIV), HIV-1, HIV-2 e o vírus linfotrõpico humano [das células (HLTV), por exemplo infecções HTVL-I ou HTVL-II. Os ί
• compostos antivirais de acordo com esta invenção são especial• , , mente adequados para o tratamento da SIDA e estados clínicos re
lacionados, tais como o complexo relacionado com a SIDA (ARC),
I : linfadenopatia generalizada progressiva (PGL), estados neuroló' gicos relacionados com a SIDA, tais como, esclerose múltipla ou
I paraparese ou tropical e estados positivos anticorpos, anti-HIV j e positivos-HIV, por exemplo em pacientes assintomáticos e púrJ pura trombocitopénica. Os compostos podem também ser utilizados |! no tratamento ou prevenção da psoríase.
jí :: Um derivado farmaceuticamente aceitável re ' lativamente aos compostos enantioméricos (IS, 4R) de fórmula I ' significa qualquer sal, éster ou sal de tal éster farmaceutica? mente aceitável, de compostos enantioméricos (1S,4R) de fórmula 1 I, ou qualquer outro composto que, depois de administração ao recipiente, seja susceptível de proporcionar (directa ou indij rectamente), um tal composto enantiomérico, ou um seu metabolito ou radical antiviralmente activo.
i i Os ésteres preferidos dos compostos enantiomé :i ricos (1R,4S) de fórmula I incluem ésteres de ácido carboxílico ! em que o radical não carbonilo do grupo éster é seleccionado de - alquilo, de cadeia linear ou ramificada, por exemplo, n-propilo, í t-butilo, n-butilo, alcoxi-alquilo (por exemplo metoxi-etilo), !i aralquilo (por exemplo benzilo) , ariloxi-alquilo (por exemplo ;; fenoximetilo) ; arilo (por exemplo, fenilo) opcionalmente substi l· — j: tuido por halogéneo, alquilo (C^-C^) ou alcoxi (C^-C^) ou amino;
. ésteres sulfonato tais como alquil- ou aralquil-sulfonilo (por 'ί exemplo metano-sulfonilo) ; ésteres de amino-ácidos (por exemplo |j L-valilo ou L-isoleucilo) ; e ésteres mono-, di- ou tri-fosfato.
lj
H
Os ésteres fosfato de compostos de fórmula I,
I : podem ainda ser esterifiçados, por exemplo, um álcool (C^-C2q) } ou seu derivado reactivo, ou por um 2,3-di-acil (Cg_2^)-glicerol, por exemplo derivados hidrogeno-fosfato de 2,3-bis-(hexaí
J noiloxi)propilo e hidrogeno-fosfato de 2,3-bis-(hexadeclniloxi)propilo. Além dos derivados fosfatos esterifiçados dos compostos de fórmula I, a presente invenção inclui ainda tais derivaI 1 , dos dos compostos racémicos de fórmula I.
Relativamente aos ésteres atrás descritos, ex cepto se se especificar de outro modo, qualquer radical amquilo ‘ presente contém, com vantagem, de 1 a 18 átomos de carbono, par L ticularmente de 2 a 4 átomos de carbono. Qualquer radical arilo Γ presente em tais ésteres inclui, com vantagem, um grupo fenilo.
I í Os sais de adição de ãcido farmaceuticamente aceitáveis dos compostos enantioméricos (1S,4R) de fórmula I in cluem sais mono- ou di-básicos com o ácido apropriado, por exem i; pio ácidos carboxílicos orgânicos tais como os ácidos acético, láctico, tartárico, mãlico, isetiónico, lactobiónico e succínico; ácidos sulfónicos orgânicos, tais como, ácidos metano-sulfónico, etano-sulfónico, benzeno-sulfónico e p-tolueno-sulfónii co e ácidos inorgânicos, tais como, ácidos clorídrico, sulfúri‘ co, fosfórico e sulfato-metano-sulfonato sulfâmico. Os sais de ácido clorídrico (por exemplo o mono- e di-cloridratos) são par í ticularmente preferidos.
ι ,í
Os compostos antivirais anteriores, de acordo com esta invenção, podem utilizar-se, em associação com outros agentes terapêuticos, para o tratamento das infecções ou restados anteriores. Os exemplos de tais agentes terapêuticos incluί em agentes que são eficazes no tratamento de infecções virais í ou estados associados como 31-azido-31-desoxitimidina (zidovu[ dina) , 21,31-desoxinucleosidos, tal como, 2 ' ,31-didesoxicitidi na, 2’,3-didesoxi-adenosina e 2',3’-didesoxi-inosina, nucleosidos acíclicos (por exemplo aciclovir), interferons, tais como, j 0t-interferon, inibidores de excreção renal, tais como probeniI cide, inibidores do transporte de nucleosido, tais como, dipidi i damol, dilazepo, mio-, lido- ou soluflazina, ou hexobendina,imu H no-moduladores, tais como interleucina e factores estimulantes i· de colónia macrofágica de granulocitos, CD^ solúvel ou seus de ! rivados de engenharia genética e ácido fosfonofórmico. Os comí j postos componentes de tais combinações de terapia podem adminis
I \ trar-se simultaneamente, em formações separadas ou combinadas, ! ou em alturas diferentes, por exemplo sequencialmente, de tal • I . forma que se obtém um efeito combinado. Os compostos antivirais,
de acordo com esta invenção, também aqui referidos como os ingredientes activos, podem administrar-se para terapia, por qual jquer via adequada, incluindo a via oral, rectal, nasal, tópica ‘(incluindo bocal e sublingual), vaginal e parentérica (incluinI do subscutânea, intramuscular, intravenosa e intradermal). É de , notar que a via preferida varia com o estado e a idade do paci(iente, a natureza da infecção e o ingrediente activo escolhido.
jí i
' Em geral, uma dose adequada para cada um dos : estados atrás referidos (por exemplo SIDA) estã compreendida en tre 3,0 e 120 mg por Kg de peso do corpo do recipiente (por exem pio o homem) por dia, de preferência entre 6 e 90 mg por Kg de i
peso do corpo por dia e, mais preferivelmente, entre 15 e 60 mg por Kg de peso do corpo por dia. A dose desejada é apresentada de preferência por duas, três, quatro, cinco, seis ou mais subjí doses administradas em intervalos de tempo apropriados durante jj jo dia. Estas subdoses podem ser administradas em formas unitá rias de dosagem, por exemplo contendo de 10 a 1500 mg, de prefe 'rência de 20 a 1000 mg e, mais preferivelmente, de 50 a 700 mg
I de ingrediente activo por forma de dosagem unitária.
s Idealmente, o ingrediente activo deve ser admi j nistrado de forma a obter uma concentração máxima, no plasma,do
I j! composto activo compreendida entre, aproximadamente 1 e aproximadamente 75 ^iM, de preferência entre aproximadamente 2 e 50 jtiM, !mais preferivelmente entre aproximadamente 3 e 30 )1M. Isto pode ! obter-se, por exemplo, por injecção intravenosa de uma solução ΐ ~ ide 0,1 a 5% do ingrediente activo, opcionalmente em solução saílina, ou administrado oralmente, como uma pílula grande contenij do entre aproximadamente 1 e aproximadamente 100 mg/Kg do ingre Hdiente activo. Podem manter-sé os níveis desejados no sangue por 'uma infusão contínua para proporcionar de aproximadamente 0,01
Ί ! a aproximadamente 5,0 mg/Kg/hora ou por infusões intermitentes
I ; contendo de aproximadamente 0,4 a aproximadamente 15 mg/Kg do j! ingrediente activo.
, Embora seja possível administrar o ingredien9
í te activo sozinho, é preferível apresentá-lo como uma formula1 ção farmacêutica. As formulações da presente invenção incluem, íí !! pelo menos, um ingrediente activo, como atras definido, em conjunto com, pelo menos, um veículo ou excipiente farmaceuticamen te aceitável. As formulações incluem as adaptadas para adminisI j tração oral, rectal, nasal, tópica (incluindo bocal e sublinli gual) , vaginal, patentérica (incluindo subcutânea, intramuscuii t ~ lar, intravenosa e intradermal). As formulações podem, > conveio nientemente, apresentar-se em forma unitárias e podem prepararii i; -se por qualquer dos processos conhecidos na especialidade fari macêutica. Tais processos incluem o passo de colocar em associa ção o ingrediente activo com o veículo que constitui um ou vãí ' rios ingredientes acessórios. Em geral, preparam-se as formula,· çÕes colocando uniforme e intimamente em associação o ingredien te activo com os veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou os dois e depois, se necessário, moldagem do produto.
As formulações da presente invenção adaptadas para administração oral podem apresentar-se como unidades disí ! cretas, tais como, cápsulas ou pastilhas contendo cada, uma quan ! tidade pré-determinada do ingrediente activo; como um pó ou grã : nulos; como uma solução ou uma suspensão num líquido aquoso ou i não aquoso; ou como uma emilsão líquida óleo em ãgua ou uma emul 1' são líquida ãgua em óleo. 0 ingrediente activo pode também es; tar presente como uma massa grande eletuãrio ou pasta.
! Pode fazer-se uma pastilha por compressão ou jmoldagem, opcionalmente com um ou vários ingredientes acessói· rios. As pastilhas comprimidas podem preparar-se por compressão numa máquina adequada do ingrediente activo numa forma de fluxo jí livre, tal como um pó ou grânulo, opcionalmente misturado com i um ligante (por exemplo povidona, gelatina, hidroxi-propil-metil I -celulose), um lubrificante, diluente inerte, conservante, desí integrante (por exemplo amido-glicolato de sódio, povidona reticulada, carboximetil celulose de sódio reticulada agentes ten • sioactivos ou dispersantes.
As pastilhas moldadas podem fazer-se por mol; dagem, numa máquina adequada, de uma mistura do composto em pó humedecido com um diluente líquido inerte. As pastilhas podem, j opcionalmente, ser revestidas ou entalhadas e podem ser formui‘ ladas de tal forma que proporcionem a libertação lenta ou con' trolada do ingrediente activo utilizando, por exemplo, hidroxiií -propil-metil-celulose em proporções variáveis para proporcionar o perfil de libertação desejado. As pastilhas podem, opcio: nalmente, proporcionarem-se com revestimento entérico, para pro porcionar a libertação em partes do intestino além do estômago.
As formulações adaptadas para administração ’ tópica na boca, incluem lozengos que incorporam o ingrediente ' activo numa base aromatizada, normalmente sacarose e acácia ou i alcantira; pastilhas que incorporam o ingrediente activo numa h base inerte, tal como gelatina e glicerina, ou sacarose e acá' cia; e lavagens de boca que incorporam num veículo líquido adeΪ quado.
1' As formulações adaptadas para administração i! rectal podem apresentar-se como um supositório com uma base ade quada incluindo, por exemplo, manteiga de cacau ou um salicila-
As formulações adaptadas para administração vaginal podem apresentar-se como pessãrios, tampões, cremes, ge les, pastas, espumas ou formulações de aspersão contendo, além do ingrediente activo, veículos que são conhecidos na especiali dade como sendo apropriados.
As formulações adaptadas para administração parentérica incluem soluções para injecção estéreis isotónicas Jaquosas e não aquosas que podem conter anti-axidantes, agentes '^tampão, bacteriostatos e solutos que tornam a formulação isotõinica com o sangue do recipiente pretendido; e suspensões estéreis aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As formulações podem apresentar-se em recipientes vedados de doses unitárias ou de multidose, por exemplo ampolas
í e frascos, e podem ser armazenadas numa condição seca por conge ! lação (liofilizadas), exigindo apenas a adição do veículo líqui j! _ ~ j1 do esteril, por exemplo agua para injecções, imediatamente an1' íi tes da utilização. As soluções e suspensões de injecção extempo râneas podem preparar-se a partir de pós, grânulos e pastilhas estéreis do tipo anteriormente descrito.
As formulações de dosagem unitárias preferi’ das são as que contêm uma dose ou unidade diária, sub-dose diária, como atrás referido, ou uma sua fracção apropriada, de um ' ingrediente activo.
' É de considerar que além dos ingredientes par j ticularmente referidos anteriormente as formulações desta in' venção podem incluir outros agentes convencionais na especiali, dade relativamente ao tipo de formulações em questão, por exemj pio os adequados para administração oral podem incluir agentes, tais como, agentes edulcorantes, espessantes e aromatizantes.
ί A presente invenção inclui ainda os processos seguintes para a preparação dos compostos enantioméricos de fõr mula I anteriores e seus derivados. Os materiais de partida ! enantioméricos e precursores para tais materiais, que se utili'zam como adiante descrito relativamente ao processo estão, cada um, na forma de um enantiomero essencialmente livre (por exemí pio na extensão referida atrás, em relação aos compostos de fõr
H imula I do outro enantiomero. 0 processo de acordo com esta iníi ~ ! vençao consxste em:
(ί A) Tratamento de um composto enantiomérico de fórmula II:
(ii)
(em que A é como atrás definido e Z representa um grupo pre cursor do referido grupo R como definido na fórmula I)ou um seu derivado, com um agente ou sob condições que convertem o grupo precursor Z no grupo R desejado; e
B) reacção de um composto enantiomérico de fórmula III:
_ 2 (em que A e R sao como atras definidos, R representa hidro
- . 3 .
gemo ou um grupo formilo e R representa um grupo amino, por exemplo um grupo acilo, tal como um grupo alcanoílo(C^-Cg), por exemplo formilo, acetilo ou isobutirilo) ou um seu derivado, com um agente de formação do anel imidazol no composto desejado de fórmula I, e em seguida remoção do gru 3 po de protecção amino R ; ou
C) reacção de um composto enantiomérico de fórmula IV:
(IV) (em que A e R são como atrãs definidos e R representa um grupo de protecção amino, como atrás descrito relativamente ã fórmula III) ou um seu derivado, com um agente de remoção 3 do grupo de protecção amino R , e opcionalmente, efectuando uma ou duas das conversões seguintes, por qualquer ordem de sejada:
i) se se forma um composto de fórmula I, conversão do referido con-
composto a um seu derivado; ou í
| ii) se se forma um derivado de um composto de fórmula I, 1 ** — j versão do referido derivado no composto semelhante de formu ί la I ou num seu derivado.
processo A) pode efectuar-se de forma convencional, por exemplo, por tratamento do composto de fórmula ' II em que Z representa um grupo removível (por exemplo um grupo halo, tal como um grupo cloro) com uma amina apropriada, isto é, í ciclo-propil-amina ou N-ciclo-propil-N-metil-amina, de preferên cia num excesso para introduzir o grupo amino R como atrás defi nido, com vantagem, ao refluxo ou a uma temperatura superior a
C, de preferencia na presença de um solvente orgânico, tal
I : como, por exemplo, metanol ou etanol.
processo B) pode efectuar-se, por exemplo, por reacção de um composto de fórmula III com um ácido fórmico ou um seu derivado de ácido fórmico reactivo (por exemplo ortoformiato de tri-etilo ou acetato de di-etoxi-metilo), opcionalmente com um co-solvente, tal como uma di-metil-acetamida ou di -metil-formamida a uma temperatura elevada, de preferência a 75 -90°C. Esta reacção efectua-se, convenientemente, por adição de, ligeiramente mais do que um equivalente de um ácido anidro forte, por exemplo com 1,1 equivalentes de ácido etano-sulfónico por equivalente do composto de fórmula III, no daso de se utili zarem temperaturas inferiores (por exemplo 25°C).
processo C) pode efectuar-se, por exemplo, por reacção de um composto enantiomérico de fórmula IV com um agente ácido, por exemplo ácido clorídrico aquoso diluido.
Os compostos de fórmula II utilizados como ma teriais de partida no processo A) podem preparar-se, por exemplo, de uma forma análoga à do processo Β), isto é, por reacção de um composto enantiomérico correspondente de fórmula V
3(em que A, Z, R e R sao como atras definidos) ou um seu derivado, com um agente que efectua a formação do anel imidazol no composto desejado de fórmula II e remoção do grupo de protecção 3 amino R . A reacçao pode efectuar-se utilizando os agentes e con dições descritas atrás para o processo B).
[ Os compostos de fórmula III utilizados como materiais de partida no processo B) podem preparar-se, por exem ί pio, por tratamento de um composto enantiomérico de fórmula V anterior com um agente ou condições que convertam o grupo pre/ cursor Z no grupo R desejado, de uma forma análoga à descrita
I para o processo A).
i í
Os compostos de fórmula IV atrãs referidos po j dem preparar-se, por exmeplo, por reacção de um composto enan1' í tiomérico de fórmula VI
H
I!
i! 3 (em que A, Z e R sao como atras definidos) com um agente ou h sob condições que convertam o grupo precursor Z no grupo R dese i!
j jado, isto é, de uma forma análoga à descrita no processo A).
: Os compostos de fórmula VI anteriores podem
preparar-se, por exemplo, por reacção de um composto enantiomérico de fórmula V anterior com um agente de formação do anel imidazol no composto de fórmula VI desejado, por exemplo, por tratamento com ácido fórmico ou um derivado de ácido fórmico re activo, como atrás descrito relativamente ao processo B).
Os compostos enantioméricos de fórmulas (II),
Ί (III), (IV), (V) e (VI) anteriores, representam aspectos da pre.
. ~ . 2 sente invenção, especialmente aqueles em que R representa um .3 i grupo formilo e/ou R representa um grupo alcanoílo (C^-Cg),par ; ticularmente acetilo ou isobutirilo, e/ou Z representa um grupo i: halo tal como um grupo cloro.
Os intermediários praticularmente preferidos para a preparação de (IS,4R)-cis-4-[2-amino-6-ciclo-propil-ami, no)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol, isto ê, o compos! to preferido anterior, incluem:
j :! a) (IR, 4S) -cis-N- [6- (ciclo-propil-amino) -9- (4- (hidroxi-metil) i!
-2-ciclo-penteno-l-il)-9H-purin-2-il]isobutiramida;
-b) (IR, 4S)-cis-N-[4-cloro-5-formamida-6-((4-hidroxi-metil)-2i -ciclo-penteno-l-il]amino)-2-pirimidinil]isobutiramida;
: c) (IR,4S)-cis-N-[4-cloro-5-formamido-6-((hidroxi-metil)-2-ciclo-penteno-l-il)-2-pirimidinil]acetamida;
í
d) (IS,4R)-cis-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-ciclo-pente|; -no-l-metanol.
j i !' e) (IR, 4S-cis-N- [6-cloro-9- (4- (hidroxi-metil) -2-ciclo-penteno-1-il) -9H-purin-2-il] isobutiramida.
ii j! Os compostos enantioméricos de fórmula V utii! . . . „ , || lizados como materiais de partida, como atras descrito, podem ;preparar-se, por exemplo, por reacção de um composto de fórmula
VII
Ί (em que Z, e são como atrás definidos e R^ representa um grupo removível, por exemplo um grupo halo, tal como um grupo cloro ou um seu derivado, com um composto enantiomérico de fór!; mula (VIIIA) ou (VIIIB)'
(VIIIB)
J (VIIIA)
J ou um seu derivado.
A reacção atrás referida efectua-se, com vant' ! tagem, na presença de uma base, tal como uma amina terciaria, lj ίpor exemplo trietil-amina ou tri-metil-amina, de preferência !num solvente orgânico, tal como di-metoxi-etano ou etanol.
J ' ; Os compostos de fórmula (VIIIA) ou (VIIIB) ί! possuindo a configuração enantiomérica apropriada podem obter;-se por complexação do composto racémico correspondente, isto é, ido (í)-4-amino-2-ciclo-penteno-l-metanol com um ácido carboxíli co opticamente activo (por exemplo o ãcido di-benzoil-D-tartári íco) e cristalização fraccionada, depois dos sais diastereo-isoméricos resultantes. Alternativamente, pode utilizar-se a reso! lução enzimãtica, como descrito, por exemplo em J- Med. Chem., jjl987, 30, 746 e J. Med. Chem., 1985, 28 1385.
íl i
it !
I Os compostos enantioméricos de fórmula (VIIIA) ’ ou (VIIIB) e seus derivados, particularmente os seus sais com
:ácidos carboxílicos opticamente activos tal como, ácido di-benzoil-D-tartárico, por exemplo (1S,4R)-4-amino-2-ciclo-penteno-1-metanol e o seu dibenzoil-D-tartarato representam mais um as i pecto da presente invenção.
í Os compostos de fórmula VII, utilizados como ] materiais de partida anteriores, podem preparar-se de uma forma convencional, por exemplo, por redução do composto de fórmula IX
! 3 4 j (em que Z, R e R sao como atras definidos) para efectuaracon versão do grupo NC^ no grupo NH^ e conversão opcional do grupo NH2 resultante num grupo formamido, por exemplo por tratamento i com ãcido fórmico/anidrido acético.
!
I j Os compostos de fórmula IX podem preparar-se
I de uma forma convencional. Os compostos em que Z representa um i
grupo halo, por exemplo o grupo cloro, podem preparar-se por ha logenação, por exemplo, utilizando oxicloreto de fósforo, de um
4 (em que R e R sao como anteriormente definidos).
Os compostos de fórmula X podem também preparar-se de forma convencional, por exemplo, por reacção de um composto de fórmula XI
Ί ** ί· (em que R - e como anteriormente definido) com um agente apro' I priado, para introduzir o grupo de protecção amino, por exemplo por reacção com um ácido carboxílico apropriado ou um seu equi! valente funcional, por exemplo anidro isobutírico. 0 composto ;í de fórmula XI pode preparar-se por nitração de um composto correspondente de fórmula XII
(XII) (em que R e como anteriormente definido)
Os compostos de fórmulas (VIII), (IX), (X) e (XI) representam aspectos da presente invenção, particularmente aqueles em que Z representa um grupo halo, tal como um grupo 3 cloro, e/ou R representa um grupo alcanoilo-(C.-C,), especial4 lo mente acetilo ou isobutirilo, e/ou R representa um grupo halo, tal como um grupo cloro.
!' Os compostos particularmente preferidos de [i fórmulas (VII) , (IX) e (X) , de acordo com esta invenção, ini| cluem:
! i
N-(4,6-di-cloro-5-formamido-2-pirimidinil)isobutiramida;
! N-(4,6-di-cloro-5-nitro-2-pirimidinil)isobutiramida; e !
N-(4-cloro-l,6-di-hidro-5-nitro-6-oxo-2-pirimidinil)isobutira. mida.
í Um composto de fórmula I pode, em geral, conj verter-se num seu éster, por reacção com um agente de esterifi'í j caçao apropriado, por exemplo, um halogeneto ou anidrido acido.
composto de fórmula I, incluindo seus ésteres, pode converter
-se nos seus sais, de forma convencional, por exemplo por trata 1 mento com um ácido apropriado. Pode converter-se um éster ou sal p de um composto de fórmula I num composto semelhante, por exem!í pio por hidrólise.
Assim, o O-mono-fosfato de um composto de fór ' mula I pode preparar-se por tratamento de um semelhante com um '! agente de fosforilação apropriado, por exemplo oxicloreto de ! fósforo, como em M. Yoshikawa, T. Kato e T. Takenishi, Bulletin ! I p Chem. Soc. Japan, 1969, 42, 3505. Os O-di- e O-tri-fosfatos cor | i respondentes podem preparar-se pelos métodos descritos em Nui cleotide Analogs por K.H. Sheit, John Wiley and Sons, New York ; 1980, pãgs. 211-215, e em D.E.Hoard e D.G.Ott, J.Amer.Chem.Soc. í 1965, 87, 1785, por exemplo fazendo o derivado imidazolato do | O-monofosfato relevante e reacção subsequente deste derivado ji com fosfato para proporcionar O-difosfato ou com pirofosfato pa ί I i! ra proporcionar O-tri-fosfato. Para a preparação dos derivados j; de fosfatos esterif içados atrás referidos, pode tratar-se o com ! i j posto semelhante de formulai com um derivado di-alcanoil-fosfai ' tidil-colina apropriado na presença de uma fosfolipase apropria da, por exemplo fosfolipase D, como descrito em S. Shuto et al, ; Nucleic Acid Teserarch, 1988, 20, página 35 ou por reacção de hum composto de fórmula I com um agente de fosforilação apropria ’ do, tal como oxicloreto de fósforo, seguido do processamento ' com um álcool apropriado como descrito em A. Rosowsky & S. Kim, i! h Nucleic Acid Chemistry, Parte 3, L.B.Townsend & R.S.Tipson (Edi íi tors) , John Wiley & Sons, New York, 1986, 255.
ii jl í; Os enantiómeros dos compostos de fórmula I po ί| ii dem resolver-se ou isolar-se, de forma convencional, por exemI ipio por separação cromatográfica de ésteres diastero-isoméricos i ~ , ! preparados por acilaçao do grupo hidroxilo no radical ciclo-pen
I ;
, tenilo, com derivados do ácido carboxilico opticamente activo
apropriado como por exemplo com naproxeno (J. Org. Chem., 1986, j 51, 1287). Os exemplos seguintes servem apenas para ilustrar e ! não são considerados como limitantes do âmbito desta invenção.
Π í Nos exemplos as rotações õpticas são assinaladas relativamente i ã linha de sódio (589 nm) a 20°C. 0 termo ingrediente activo como utilizado nos Exemplos A a G, significa um composto antil· virai, de acordo com esta invenção, especialmente o composto I
H ' anterior.
I ' is Exemplo 1 (í)-cis-4-[(2-amino-4-cloro-6-pirimidinil)amino]-2-ciclo-penj teno-1-metanol
Fez-se o refluxo de acetato de cis-4-acetami; do-ciclo-pent-2-enemetilo[Patente N. A. 4 268 672] (14,88 g,
0,073 moles) e hidróxido de bário octa-hidratado (46,19 g, i _ s 0,146 moles), em agua (300 ml), sob atmosfera de azoto, durante ; 18 horas. Neutralizou-se a solução resultante com dióxido de carbono. Lavou-se o precipitado com água e, depois, com etanol.
'! Evaporou-se o filtrado/lavagem combinado até um xarope (11,16 g) j condensou-se com 2-amino-4,6-di-cloro-pirimidina (23,91 g,
0,146 moles) e tri-etil-amina (30,5 ml, 0,219 moles), ao refluxo, em 1-butanol (100 ml), durante 1,5 horas. Depois da adição i, de NaOH IN (73 ml) , evaporou-se a mistura resultante até à seca ! gem e fluidificou-se o sólido residual em CHClg (200 ml) . Filtrou-se a 2-amino-4,6-di-cloro-pirimidina não reagida e lavou: -se com clorofórmio (100 ml). Concentrou-se o filtrado de cloro : formio e fez-se a cromatografia numa coluna de gel de sílica.
I·
P Diluiu-se o material de partida pirimidina adicional com 2,5% ί de metanol-clorofórmio. O composto em epígrafe foi eluido com í 3,5% de metanol-clorofórmio, com uma espuma sólida branca (15,90 ; g, 91%).
i q
RMN- H: (Me2SO-dg) 0 1,15-1,28 e 2,26-2,41 (2m, 2, CH2) ;
íí 2,60-2,71 (m, 1, l'-H); 3,4 (m sobrepondo HoO, CH„OH) ; 4,625 ii z z .! (t, J=5,3, 1, CH2OH); 4,95 (s lg, 1, CH-N) 5,67-5,87 (m, 2, , CH=CH) ; 6,38 (s lg, 1, NH2) ; 7,12 (s lg, 1, NH) ; MS (CI) M+l,
241, 243 j Anal. Calculado para Ο^θΗ^Ν^ΟΟΙ’Ο^ H20: C, 48,99; N, 22,85; i Cl, 14,46.
ι Encontrado: C, 49,10; H, 5,57; N, 22,81; Cl, 14,40.
Exemplo 2 (í)-cis-4-[[2-amino-6-cloro-5-[(4-cloro-fenil)azol]-4-pirimidinil]-amino]-2-ciclo-penteno-l-metanol ii Dissolveu-se (+) -cis-4- [ (2-amino-4-cloro-6n -pirimidinil)amino]-2-ciclo-penteno-l-metanol do Exemplo 1 (11,58 g, 48,1 mmoles) e acetato de sódio tri-hidratado (97 g) : em ácido acético glacial (225 ml) e água (225 ml). Preparou-se ; uma solução fria (0-5°C) de cloreto de 4-cloro-benzeno-diazó!
í nio a partir de 4-cloro-anilina (6,74 g, 52,8 moles), ãcido cio rídrico concentrado (14,7 ml), ãgua (52 ml), e nitrito de sódio ! (4,01 g, 58,2 mmoles em 47 ml de ãgua). Adicionou-se esta solui! ção fria, gota a gota, durante 5 minutos, à primeira solução. ^Filtrou-se o precipitado resultante amarelo depois de 18 horas, j lavou-se com ãgua e extraiu-se com etanol para proporcionar o ' composto em epígrafe como um pó amarelo escuro (12,56 g, 69%) ,
Ϊ p.f. 218-220°C dec.
l· RMN-H: (Me2SO-dg) ^10,25 (d, 1, NH) ; 7,69 e 7,54 (ambos, d, ί J=8,9, CgH4) sobrepondo 7,6 (mg, 6, NH2); 5,80-5,95 (m, 2, CH=
P=CH); 5,24 (m, 1, CHN); 4,75 (t, 1, CH2OH); 3,41 (t, 2, CH^OH); p2,75 (m, 1, CH); 2,41 (m, 1, CH); 1,44-1,53 (m, 1, CH).
i Anal. Calculado para cigHigNgcl20: C, 50,67; H, 4,25; N, 22,16 |[C1, 18,70.
pEncontrado: C, 50,59; H, 4,29; N, 22,10; Cl, 18,66.
í i
I !| Exemplo 3 ii
H ,' (í) cis-4-[(2,5-di-amino-4-cloro-6-pirimidinil)-amino]-2-ciclo1'-penteno-1-metanol
! Fez-se a suspensão do composto em epígrafe do ! Exemplo 2 (11,67 g) em etanol (235 ml), ácido acético glacial ' (30 ml), e água (235 ml). Aqueceu-se a mistura, ao refluxo, sob atmosfera de azoto. Adicionou-se zinco em pó (13,5 g), em peque h
I nas porções, durante 30 minutos, tempo durante o qual o composl • to se dissolveu. Aqueceu-se a reacçao durante mais 20 minutos e ! depois filtrou-se o zinco em excesso, da solução quente, e lavou-se com etanol. Evaporaram-se os filtrados e purificou-se o resíduo numa coluna de gel de sílica eluida com clorofórmio (1 ; 1) e clorofórmio:metanol 4:1 (1,8 1). Combinaram-se as fracções ij contendo o produto e removeu-se o solvente, sob pressão reduzida, para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo verme lho alaranjado (11,2 g, 100% de rendimento). Obteve-se uma amos ί tra pura durante uma outra reacção de pequena escala para se ob ter o produto como um sólido amarelo claro com um rendimento de ;í 76%.
ll q
RMN-H: (Me2SO-d6) β 1,29 e 2,39 (m, 2, CH2); 2,69 (t, 1, l'-H); 3,37 (d, 2, CH2OH); 3,91 (lg, 2, ΝΗ£) ; 4,60 (lg, 1, ί CH2OH) ,· 5,02 (m, 1, CHNH); 5,56 (s lg, 2, NH2) ; 5,74 (m, 1, = j CH); 5,86 (m, 1, = CH) ; 6,36 (d, 1, CHNH).
Exemplo 4
I
II 1 (í)-cis-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-ciclo-penteno-l-metanol η Dissolveu-se o composto em epígrafe no Exem; pio 3 (aproximadamente 9,7 g) em acetato de di-etoxi-metilo jj (100 g) , e fez-se o refluxo durante dois dias. Removeu-se o sol li vente, sob vácuo elevado, a 50°C, e adicionou-se dioxano (40 ml) e HC1 0,5 N (60 ml) . Agitou-se a reacção ã temperatura ambiente í durante 1,25 horas e depois arrefeu-se. Neutralizou-se a reacção a pH 7 com hidróxido de sódio 5 N frio, e depois extraiu-se p com clorofórmio:metanol/3:1, várias vezes. Secaram-se as camadas orgânicas com sulfato de magnésio, filtraram-se e rvapora1 ram-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna de • · . gel de sílica, eluído com 2% de MeOH-CHCl^ para proporcionar
j 3,7 g (46% de rendimento) do composto em epígrafe, p.f. 138[^ -139°C.
E RMN-H: Me2SO-d6) J 1,63 e 2,61 (m, 2, Οψ ; 2,87 (m, 1, l'-H);
^3,44 (d, 2, CH„OH); 5,44 (m, 1, CH-N); 5,89 (m, 1, = CH) ; 6,14 í z [ (m, 1, = CH); 6,82 (s lg, 2, NH2) ; 8,02 (s, 1, 8-H); (CH2OH não [ viso - sob pico H2O) . UV: pH 1 Xmax 315 ( £ 7370); 218 [[ (26200); λ curto 239,5 (5650). pH 7,4 Àmax 307 (ξ 8000); 245,5 • (4600); 223 (26400). SM (EI) 265,267 (m) (Cl) 266,268 (m + 1).
Anal. Calculado para C^^H^2N^C1O.2H20:
: C, 43,79; H, 5,35; N, 23,21; Cl, 11,75
J [Encontrado: C, 43,68; H, 5,29; N, 23,05; Cl, 11,70
Exemplo 5 ![ (í) -cis-4- [2-amino-6- (ciclo-propil-amino) -9H-purin-9-il] -2-cijclo-penteno-l-metanol [[ Dissolveu-se o composto em epígrafe no exem[j pio 4 (0,50 g) em etanol (40 ml), e adicionou-se ciclo-propil[amina (0,65 ml, 5 equivalente). Pez-se o refluxo da reacção, i! sob atmosfera de azoto, durante 6 horas. Adicionou-se mais 0,65 í;
[ ml de ciclo-propilamina e fez-se o refluxo da reacção durante [[mais 5,5 horas. Evaporaram-se os solventes e adicionou-se cloro :: fórmio (25 ml) e solução saturada de bicarbonato de sódio (5 ml) [, Extraiu-se a camada aquosa várias vezes com CHC13 para se obter o produto bruto. Purificou-se este numa coluna de gel de sílica [eluida com 3% demetanol-acetato de etilo para proporcionar 0,43 1 g (80%) de (í)cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9i[
-il]2-ciclo-penteno-l-metanol. Recristalizou-se este a partir de [[aoetonitrilo para proporcionar 0,30 g de um pó branco; p.f. co[ lapso a 93-130°C; funde a 165°C.
E 1 ií RMN-H: (Me2SO-d6) 0,56 e 0,63 (2m, 4, 2-ciclopropil CH^ ;
1,56 e 2,60 (2 m, 2, ciclopentenilo-CH2); 2,85 (m, 1, l'-H);
3,02 (m, 1, ciclopropilo CH-NH); 3,43 (m, 2, CtL^OH); 4,71 (t, • 1, CH2OH); 5,40 (m, 1, 4'-H); 5,77 (s, 2, NH2), sobreposição (d, 1, NH-CH); 7,58 pH 1: ^max 296 (15900); 259 (9200);
ί 5,84 (m, 1, = CH„); 6,09 (m, 1, =CH) ; 7,23 : (s, 1, purina-8-Η); ms (CI) 287 (m+1). UV:
’ ( έ 14000), 255 (10700); pH 7,0:Àmax 284 ' pH 13 ;Xmax 284 (15800), 259 (9100).
Anal. Calculado para Cn .H,nNr0.0,25 H„O:
- 14186 2
C, 57,82; H, 6,41; N, 28,90.
Encontrado: C, 57,84; H, 6,45; N, 28,86.
Exemplo 6 (í)-cis-4-(2-amino6-(ciclo-propil-metil-amino)-9H-purin-9-il)-2-ciclo-penteno-l-metanol
Colocou-se (í)-cis-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-ciclo-penteno-l-metanol (0,53 g, mmoles) do Exemplo
I 4, N-metil-N-ciclo-propilamina (Karl Industries, Aurora, OH;
0,8477 g, 12 mmoles) e metanol (20 ml) numa bomba Parr e aqueίceu-se a 62°C durante 5 horas. Concentrou-se a solução e diluiu i -se depois com etanol antes de se levar a um pH 12, por adição I de NaOH l,0N. Concentrou-se esta solução e purificou-se o resíduo por eluição a partir de uma coluna de gel de sílica com 3% de metanol-clorofórmio (0,547 g, 91,2%). A cristalização desta amostra a partir de ãgua/etanol proporcionou um pó branco, p.f. 130-131°C.
I ;l
RMN-1H; (Me2SO-d6) § 7,61 (s, ÍH, purina H-8), 6,10 (m, ÍH, líCHN), 4,70 (t lg, ΙΗ, 0H), 3,43 (m, 2H, CH2OH) 3,24 (s lg, 4H, iCH3, NCH ciclopropilo), 2,85 (m, ÍH, CH), 2,66-2,57 e 1,61-1,51 (m, 2, ciclopentenilo CH^I, 0,90-0,65 (m, 4H, 2CH2 de cicloproi: pilo) · liAnal. Calculado C^HOMH^0O,5 Ho0:
| - 15 20 6 2 ι C, 58,24; H, 6,84; N, 27,16 ^Encontrado: C, 58,15; H, 6,86; N, 27,14.
Η !Exemplo 7
; (-)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il]2-ciclo-penteno-1-metanol
Dissolveu-se o composto em epigrafe no Exemi pio 5 (0,600 g, 2,00 mmoles) em 1,3-di-metil-3,4,5,6-tetra-hij dro-2-(ÍH)-pirimidinona (Aldrich, 12 ml). Adicionou-se cloreto i| de fosforilo (0,76 ml, 8,0 mmoles) a solução agitada fria (-10°
II Ί C). Depois de 3 minutos, adicionou-se ãgua fria (100 ml) e neutralizou-se a solução resultante com hidroxido de amonio (3 M).
Dilui-se a solução neutralizada, ate 1 litro, com agua e aplii ii cou-se a uma coluna 2,5 x 20 cm de DEAE Sephadex A25 (Pharmacia)
I i 1 que tinha sido pre-equilibrada com bicarbonato de amonio 50 mM. Lavou-se primeiro a coluna com 4 litros de bicarbonato de amonio a 50 mM. Eluiu-se depois o O-monofosfato de (í) -cis-4- [2!| -amino-6- (ciclo-propilamino) -9H-purin-9-il] -2-ciclo-penteno-l: -metanol com um gradiente de 2 litros de bicarbonato de amonio
Ί ! de 50 a 300 mM. Evaporaram-se as fracções contendo nucleotido
J (isto e o O-monofosfato anterior) ate um po branco para remover i! o bicarbonato de amonio; 71%, calculado por absorvancia de UV;
1!
i um pico por HPLC (ver adiante). Adicionou-se veneno de cobra l· ' 5'-nucleotidase (EC 3.1.3.5) de Crotalus atrox (1000 IU, Sigma) | a 1,4 mmoles do nucleotido dissolvido em agua (20 ml). Incubou! -se a solução a 37°C durante 22 horas, altura em que se adicionou enzima (1000 IU). Continuou-se a incubaçao durante 3 dias.
I .
; A analise de HPLC (coluna permutadora de ioes forte, 0,4 x 10 i cm, Whatman Partisil 10; eluiçao com um gradiente de 20 mM a 1
M de fosfato de amónia, pH 5,5, contendo 5% de metanol; deteci çao de UV a 284 nM) néste ponto mostrou que 50% do nucleosido
H de partídá tinha sido desfosforilado no nucleosido semelhante.
ii Aplicou-se de novo, esta mistura, a uma coluna DEAE Sephadex do tipo atras descrito. A eluiçao com 4 litros de bicarbonato de íí amonio 50 mM proporcionou fracções contendo o composto em epi!i grafe. A evaporaçao da agua proporcionou um põ branco. Este ma? terial foi purificado por cromatografia em gel de silica com jMeOH:CHCl3/l:9 para proporcionar um vidro incolor. Solidificou-se o vidro em acetonitrilo para proporcionar (-)-cis-4-L2-ami• . no-6-(ciclõ-propil-amino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-me26
Anal. Calculado i Encontrado:
atras referida,
tanol como um sólido gomoso branco que se secou ate uma espuma solida a 0,5 mm Hg a 68°C (260 mg, 86% do racemato);
RMN-^H em DMSO-d^ e espectro de massa idêntico ao do racemato (composto em epígrafe no Exemplo 5); [tf]2θβ-59,7°, [ 2°436-127,8°C, [2°365~218'10' (c = °'ii * * * 15 * * * *' metanol), para C^^H^gN^O-O,8 ^0:
C, 55,91; H, 6,57; N, 27,94.
C, 56,05; H, 6,65; N, 27,88.
Continuou-se a eluição na coluna Sephadex, com um gradiente de 2 litros de bicarbonato de amonio de 50 a 300 mM o que proporcionou o O-monofosfato (do / enantiómero (+) correspondente ao composto em epígrafe) que se i estabilizou a 51-nucleotidase. A preparação deste monofosfato e descrita, com mais pormenor, no Exemplo 9.
i
Exemplo 8 í
O-monofosfato de (-)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H|j -purin-9-il] -2-ciclo-penteno-l-metanol ii Dissolveu-se o composto em epígrafe no Exemplo 7 (0,35 g, 1,2 mmoles) em 1,3-di-metil-3,4,5,6-tetra-hidro; -2-(ÍH)-pirimidinona (Aldrich, 5 ml). Adicionou-se cloreto de h fosforilo (Aldrich, 0,43 ml, 4,6 mmoles) ã solução agitada ar, refecida (-10°C). Depois de 3 minutos, adicionou-se agua fria j (20 ml) e neutralizou-se a solução resultante com hidróxido de amonio 3M. A cromatografia por permuta ionica, como descrita no \ exmeplo 7, proporcionou o nucleotido como o sal di-amonio, dei i ! pois da evaporação da agua com um po branco (rendimento de 95%, |í quantificado por UV) . A analise de HPLC, como no Exemplo 7, mos íj trou um pico; UV max mM (0,1 M HCl): 254, 297; (tampao fosfato ;|pH 7): 259, 284; (0,1 M NaOH): 259,284. Aproporçao entre a ba j se e o fosfato foi de 1,0/1,3 como determinado pelo método de ,!, B. Ames (Methods in Enzymology 8:115, 1966). [õe ]2θ^-69,9°, [<< ] 20578~73,0° [tf ] 2054684,0° (c=0,52, MeOH: H2O/4:1).
Exemplo 9
O-monofosfato de (+)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol
j.
A eluição da coluna DEAE Sephadex descrita no !; Exemplo 7, depois da incubaçao de 5'-nucleotidase com um gra; diente de 2 litros de bicarbonato de amonio de 50 a 300 mM, pro 'porcionou fracções contendo nucleotido que, depois da evapora ção da agua, proporcionou o composto em epígrafe, como o sal di , -amónio; po branco (56% do composto em epígrafe no Exemplo 5);
Η A a analise HPLC, como no Exemplo 7 mostrou um pico; UV 4;max nM (0,1 M HCl): 254, 297; (pH 7 tampao fosfato): 259, 284; (0,1 M hNaOH): 259, 284. A proporção base/fosfato foi de 1,0/0,98.
L <J2°d +62,0°, [^]2θ57θ +65,2°, [*]20546 +75,0°, (c=0,54,
Ί MeOH:H,0/4:1)].
h £ •I Exemplo 10
H (+)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propil-amino)-9H-purin-9-il]-2-cijí clo-penteno-l-metanol
Dissolveu-se o composto em epígrafe no Exemplo 9 (0,67 mmoles) em água (20 ml) e adicionou-se fosfatase al calina (EC 3.1.3.1) de intestino de vitelo (3000 IU, Boehringer Mannheim). Incubou-se a solução a 37°C, durante 19 horas, altura em que a analise HPLC, como descrita no Exemplo 7, mostrou que o nucleotido tinha sido desfosforilado. Evaporou-se a solução ate a secagem e extrairam-se os solidos residuais em etanol ao refluxo (100 ml). Absorveu-se o material solúvel em etanol. em gel de sílica e aplicou-se a uma coluna de gel de silica. Eluiu-se o composto em epígrafe com etanol:cloroformio/1:9. A evaporação de uma solução de acetonitrilo-etanol proporcionou uma espuma solida branca (164 mg, 79%);
RMN- H em DMSO-d, e espectro de massa idênticas aos do racemato ** 2 0 o 2 0 (composto em epígrafe do Exemplo 5); [<X,]Z D +58,7°, [ < ] z 4^g +126,2°, [^]2°365 +217,5°, (c = 0,10, metanol).
I
Anal. Calculado para ΰ^Η^θΝ^Ο-0,60 ^0-.15 EtOH:
C, 56,49; H, 6,66; N, 27,64. Encontrado: C, 56,60; H, 6,63; N, 27,55.
Exemplo 11 (-)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propil-metilamino)-9H-purin-il]-2-ciclopenteno-l-metanol ·, Dissolveu-se o composto em epigrafe no Exem- pio 6, (2,00 g, 6,50 mmoles) em 1,3-di-metil-3,4,5,6-tetra-hi, dro-2(1H)-pirimidinona (Aldrich, 20 ml). Adicionou-se cloreto de fosforilo (2,28 ml, 24,0 mmoles) a solução agitada arrefeci! da (-10°C). Depois de 3 minutos, adicionou-se agua fria (80 ml).
Extraiu-se a solução com clorofórmio (3 x 80 ml). Diluiu-se a ί camada aquosa com etanol (400 ml) e ajustou-se o pH a 6 com NaOH í aquoso saturado. Filtraram-se os sais inorgânicos precipitados, íj Diluiu-se o filtrado com etanol ate um volume de 1 litro e ajus ii tou-se o pH a 8 com mais NaOH. Filtrou-se o precipitado resuli tante e secou-se para proporcionar o O-monofosfato de (±)-cis’ -4-[2-amino-6-(ciclo-propil-metilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo: -penteno-l-metanol como um po branco (4,0 mmoles, 62% quantifiI cado por absorvancia UV); a análise de HPLC, como no Exemplo 7,
I mostrou um pico. Dissolveu-se este O-monofosfato racèmico em Hágua (200 ml) e adicionou-se veneno de cobra. 5'-nucleotidase i (EC 3.1.3.5) de Crotalus atrox (5000 IU, Sigma). Depois de incu !i baçáo a 37°C durante 10 dias, a análise de HPLC, como descrita tl : no Exemplo 7, mostrou que 50% do nucleosido de partida tinha si ; do desfosforilado no nucleosido. Separaram-se numa coluna 5 x 14
I'cm de DEAE Sephadex A25 (pharmacia) que tinha sido pre-equiliSt
Η brada com bicarbonato de amonio 50 mM. Eluiu-se o composto em [
li epigrafe com 2 litros de bicarbonato de amonio 50 mM. A evapo1 j ração da ãgua proporcionou um põ branco que se dissolveu em eta [ nol, se absorveu em gel de sílica e se aplicou a uma coluna de gel de sílica. Eluiu-se o composto em epigrafe com metanol:clo.,rofórmio 1:9 como um vidro incolor. Evaporou-se uma solução de 'acetonitrilo para proporcionar uma espuma sólida branca, secou29
’ -se a 0,3 mm Hg sobre Ρ2°5? 649 mg (72% de raeemato);
[! Espectros de RMN-^H em DMSO-d, e de massa idênticos aos do race ί ό 2 0o j mato (composto em epigrafe do Exemplo 6); [<íQ D -48,0 , !; [^2θ436 -97,1°, [ -149° (c = 0,14, metanol).
i j’ Anal. Calculado para C^^gN^-O-0,10 CH^CN:
j C, 59,96; H, 6,72; N, 28,06.
Encontrado: C, 59,93; H, 6,76; N, 28,03.
Continuou-se a eluição da coluna Sephadex com 2 litros de bicarbonato de amónio 100 mM e depois com 2 litros de bicarbonato de amonio 200 mM que proporcionou o 0-mono-fosfato do enantiõmero (+) correspondente ao composto em epígrafe, que se estabilizou a 5'-nucleotidase.
Exemplo 12 l (+)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propil-metilamino)-9H-purin-9-il]: -2-ciclo-penteno-l-metanol ; Combinaram-se as fracções contendo o 0-monoI; fosfato do enantiõmero ( + ) eluídas a partir da coluna Sephadex ι do Exemplo 11 e adicionou-se fosfatase alcalina (EC 3.1.3.1) do p intestino de vitela (4800 IU, Boehringer Mannheim). Incubou-se l· a solução a 25°C durante 18 horas, altura em que a analise de : HPLC mostrou que todo o nucleotido tinha sido desfosforilado.
!! Evaporou-se a solução até ã secagem e extraíram-se os solidos ! residuais com etanol ao refluxo (100 ml). Absorveu-se o material p solúvel em etanol em gel de sílica e aplicou-se a uma coluna de íl gel de silica. Eluiu-se o composto em epígrafe com metanol:cioí!
I roformio/l:9 como um vidro incolor. Evaporou-se uma solução de
II acetonitrilo para proporcionar uma espuma sólida branca, secouii í -se a 0,3 mm Hg sobre 659 mg (73% do raeemato); Espectros ! de massa e de RMN-^H em DMSO-d, idênticos ao do raeemato (composto em epígrafe do Exemplo 6); [<?(]z D +47,0 , [<XL] 43θ
1+93,0°, [<3<] 20365 +141,3° (c = 0,11, metanol).
• . Anal. Calculado para Ο^^θΝθΟ-0,1 CH^CN:
Encontrado:
C, 59,95; H, 6,72; N, 28,06, C, 59,92; H, 6,80; N, 27,96,
Exmeplo 13
Dibenzoil-tartarato de (IS,4R)-4-amino-2-ciclo-penteno-l-metanol
Fez-se o refluxo de (í)-cis-4-acetamido-ciclo pent-2-enemetilo[Patente NA 4 268 672](14,88 g, 0,073 moles) e hidróxido de bário octo-hidratado (46,19 g, 0,146 moles) em ãgua (300 ml), sob atmosfera de azoto durante 18 horas. Neutralizou-se a solução resultante com diõxido de carbono. Lavou-se o pre cipitado com ãgua e depois com etanol. Evaporaram-se as lavagens do filtrado combinadas até um xarope (sal do ãcido acético de (í)-4 -amino-2-ciclo-penteno-l-metanol) que se converteu na amina livre, por agitação com um excesso de resina Amberlite IRA-400 (OH ) em água. Filtrou-se a resina, lavou-se com ãgua, e evaporou-se o filtrado-lavagem até um xarope amarelo claro que se secou por evaporaçao de porções de etanol. Dissolveu-se essa amostra da amina (2,26 g, 20,0 mmoles) e ãcido di-benzoil-D-tratárico (Aldrich, 3,62 g 10,0 mmoles a 99%) em etanol abso luto quente (35 ml), Adicionou-se acetonitrilo ao refluxo (àprox. 150 ml) no ponto do orvalho e permitiu-se que a solução arrefecesse lentamente atè ã temperatura ambiente. Recristalizaram-se as agulhas brancas que se formaram, três vezes) a partir da mes ma combinação de solventes para proporcionar o composto em epiD 436 , [<]ZU365 +325° (c = °'28/ metanol).
A cristalização de raios X deste sal permitiu fixar a configura çao absoluta do catião na configuração conhecida do di-aniao ãci do D-dibenzoil-tartãrico. Cristalizou-se este sal no grupõ de espaço C2 com um catião D^H^^NO e metade de um di-anião como a unidade assimétrica.
Anal. Calculado para CgH^^NO-1/2 (^θΗ-^Όθ):
grafe como placas brancas (107 g, 37%); p.f. 160-162°C;
+66,9°,
X]
Encontrado;
C, 61,63; H, 6,21; N, 4,79: C, 61,56; H, 624; N, 4,74.
: Formou-se este sal e cristalizou-se como descrito no Exemplo 13, com excepção de que se utilizou ãcido diJbenzoil-L-tertãrico. Trés cristalizações a partir de etanol-ace tonitrilo proporcionaram o composto em epígrafe como placas brancas (1,00 g, 34%); p.f. 160-162°C; [<%]2°D -68,2°,
H C^]2°436 _169°' [Λΐ]2θ365 _333°' (c = 0/24, metanol) .
Anal.Calculado para CgH^^NO- 1/2 (C18H 14°8] ι :
C, 61,63; H, 6,21; N, 4,79.
Encontrado: C, 61,59; H, 6,21; N, 4,76.
h Exemplo 15 (í)-cis-N-[4-cloro-5-formamido-6-[[4-hidroxi-metil)-2-cicloj -penteno-l-il]amino]-2-pirimidinil]acetamido
A N-(5-amino-4,6-di-cloro-pirimidin-2-il)acetamida (J. Org. Chem.1975, 40, 3141) foi formulada, por adição de ãcido fõrmico a 96% (20 ml) a uma solução de (0,75 g,
3,4 mmoles) dissolvida em anidrido acético (20 ml). Agitou-se a
I· solução resultante a 25°C, durante 1 hora, e depois evaporou-se • para proporcionar N-(4,6-di-cloro-5-formamido-2-pirimidinil)ace tamida como um põ castanho (0,77 g, 91%); a estrutura foi con1 !firmada por RMN- H e espectro de massa. Aqueceu-se este po casi- tanho (840 mg, 3737 mmoles), (í)-cis-4-amino-2-ciclo-penteno-li-metanol (940 mg, 8,2 mmoles), e tri-etilamina (0,80 g, 8,0 o dmmoles) em etanol (50 ml) num banho de óleo (70-80uC) sob atmos i “ 1 fera de azoto durante 50 minutos evãporou-se ate um oleo escuro iao qual se fez a cromatografia em gel de sílica. Eluiu-se o com hposto em epígrafe com 5% de metanol-cloroformio como uma espuma
Ij solida cor de pessego (840 mg). A cristaliza,ao a partir de me• tanol proporcionou grânulos brancos (575 mg, 52%); p.f. 189-193° ’ C; RMN-1H (DMSO-dg) 10,23 (lg, 1,0, NHAc), 9,3 (lg, 1,0,
p3,39 (m, 2, CH2C p (m, 1, 1/2 CH2). p Anal'. Calculado iNHCHO), 8,15 e 7,90 (dois s, total 1,0, HC=0 de dois conformes, íos picos cóalescemata 60°C), 7,42 e 7,22 (dois d, J=8,3, total 1,0, CH-NH de dois conformes, os picos cóalescemata 60°C), 5,9 e 5,7 (dois m, 2,0, CH=CH), 5,05 (m, 1, ch-N), 4,73 (m, 1, OH), H), 2,72 (m, 1, CH), 2,40 (m, 1, 1/2 CH2). 1,36 para C^H^N^Cl:
C, 47,93; H, 4,95; N, 21,50; Cl, 10,88.
C, 47,99; H, 4,96; N, 21,42; Cl, 10,96.
Encontrado:
,i Exemplo 16
I HM· it
P (í)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo
-penteno-1-metanol í
| Dissolveu-se o composto em epígrafe do Exemplo 15 (0,91 g, 2,79 mmoles) em. DMF seco (1 ml). Adicionou-se !orfoformiato de tri-etilo (10 ml) e ácido etano-sulfõnico (0,29 •íml, 3,4 mmoles) e aqueceu-se a solução a 65°C, durante 24 horas í| Evaporou-se a solução até um xarope. Dissolveu-se o xarope em !; HC1 IN (15 ml) e agitou-se durante 3 horas. Ajustou-se o pH a 7 íi com hidroxido de sodio 5N e extraiu-se a mistura resultante I1 (oleo formado) com i-propanol:cloroformio/l:3 (3 x 100 ml) . Secaram-se as camadas organicas combinadas (MgSO.) e evaporaramii p-se ate um vidro vermelho (0/93 g). Aqueceu-se uma solução desate vidro em metanol (20. ml) com ciclo-propilamina (2 ml) numa ίbomba Parr a 70°C durante 18 horas. Evaporou-se a solução resultante ate um vidro escuro que se absorveu em gel de silica.
| A eluiçao com 7% de metanol-acetato de etilo proporcionou o com ίposto em epigrafe (148 mg, 19%) como um põ branco, depois 'de 1 1 i tnturaçao com acetonitrilo; a RMN- H (DMSO-dr) idêntica a 'do 1 —o i composto em epigrafe no Exemplo 5.
i t| Exemplo 17 ί
*: (í) - (IR, 4S)-cis-N-[4-cloro-5-formamido-6-[[4-(hidroxi-metil)-2•;-cido-penteno-1-il]-amino]-2-pirimidinil]acetamida
Dissolveu-se dibenzoil-D-tartarato de (lí3,
4R)-4-amino-2-ciclo-penteno-l-metanol, preparado como descrito no Exemplo 13 (2,76 g, 9,02 mmoles), em ãgua (20 ml) e aplicou-se a uma coluna de (65 ml) de resina permutadora Amberlite IA-400 de aniões (forma OH ). Lavou-se a coluna com ãgua. Combinaram-se as fracções alcalinas e evaporaram-se ate um oleo residual que se secou por evaporação de etanol absoluto e depois a 0,5 mm para proporcionar (ÍS^, 4R)-4-amino-2-ciclo-penteno-l-metanol (1,2 g) como um óleo amarelo claro (que escurece rapidamenhte ao ar) que se utilizou imediatamente. Dissolveu-se este oleo 'em etanol (5 ml) e adicionou-se a uma solução de N-(4,6-di-cloiro-5-formamido-2-pirimidinil)-acetamida (2,07 g), 8,31 mmoles), ^preparada como descrita no Exemplo 15, e tri-etilamina (2,50 g, 24,8 mmoles). Aqueceu-se a solução escura resultante (banho de oleo 75-80°C) sob atmosfera de azoto durante 50 minutos. Evaporou-se a solução ate um xarope que se aplicou a uma coluna de gel de silica. Eluiu-se o composto em epígrafe com 3 a 5% de metanol-clorofórmio como uma espuma sólida amarela clara (1,59 g 54%); RMN- H idêntica a da amostra cristalizada. Cristalizou-se essa amostra a partir de etanol para proporcionar grânulos brancos, p.f. 194-195°C; RMN-^H (DMSO-dg) idêntica ao composto em epígrafe no Exemplo 15; [ ot] +2,9 [<]
436
-2,5
Kl
365 +2,7°, -41,2°
Kl20'™ +3,6°, [Λ]20
578 ' L^J 546 (c=0,238, metanol).
Exemplo 18 jj (-) - (IS, 4R) cis- (2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il) -2-ciclo-pentenoί-1-metanol t Fez-se o refluxo suave do composto em epígrafe iho Exemplo 17 (1,15 g, 3,53 mmoles) em acetato de di-etoxil-meti i^lo (45 ml), sob atmosfera de azoto durante 3,5 horas. Concentrou -se a solução amarelo claro resultante a 0,5 mm Hg até um xarope amarelo. Agirou-se o xarope em HCl IN (50 ml) durante 1 hora.
:Neutralizou-se esta solução com bicarbonato de sodio e evaporouise ate a secagem. Extrairam-se os sólidos residuais com metanol ’ ‘e aplicou-se o material solúvel em metanol a uma coluna de gel • ide sílica. A eluição da coluna com 10% de metanol-acetato de
: etilo proporcionou o composto em epigrafe como uma espuma solih 1
Ida amarela clara (730 mg), 78%; RMN- H (DMSO-dfi): idêntica â do θ 2 0 o racemato (composto em epigrafe no Exemplo 4); [04]z D-114,9° (=0,26, MeOH).
f ' Exemplo 19 ί (~)-(IS,4R)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol ; Í 'ί Aqueceu-se o composto em epigrafe no Exemplo í 18 (560 mg, 2,11 mmoles) em metanol (12 ml) com ciclo-propilami h na (2,4 ml) numa bomba Parr a 78° C, durante 17 horas. Evaporou
-se o solvente e fez-se a cromatografia do residuo em gel de si !;
' iica. Eluiu-se o composto em epigrafe com 5-7% de metanol-ace: tato de etilo como uma espuma sólida incolor (367 mg, 59%) ; li RMN-^H (DMSO-dg) idêntica a do Exemplo 7; [ Ο ^θ0~59,0° (c=0,28,
MeOH) confirma a configuração absoluta do composto em epigrafe i no Exemplo 7.
j
Exemplo 20 'Dibenzoil-tartarato de (IS,4R)-4-amino-2-ciclo-penteno-l-metanol f Agitou-se 2-azabiciclo[2,2,1]hept-5-en-3-ona 'i [Daluge and Vince, J.Org.Chem. 1978, 43,2311 e Patente N.A.
;4,268,672] (44,0 g, 0,400 moles) em HCl 2N em metanol (0,5 1) a
125° C durante 1,5 horas. Evaporaram-se as substancias voláteis para proporcionar cloridrato de (í)-cis-metil-4-amino-2-cicloI . 1 -II·» i -penteno-l-carboxilico como um pó branco (71,1 g). A trituração ι: dessa amostra com èter di-etilico proporcionou um po branco, jp.f. 92,5-95° C [J. Org. Chem. 1981, 46, 3271; p.f. 82-83° C];
! RMN-XH (DMSO-d, 8,25 (s br, 3, NH_+) , 6,1 e 5,9 (dois m, CH=
J =CH), 3,64 (s), sobreposição 3,75-3,6 (m, total 4, OMe e CH),
2,65-2,45 e 2,05-1,85 (dois m, 2, CH2). i Anal. Calculado para C^H^^NO2-HC1:
C, 47,33; H, 6,81; N, 7,89; Cl, 19,96. Encontrado: C, 47,41; H, 6,84; N, 7,85; Cl, 19,89.
í
I - 35 -
i Fez-se o refluxo de cloridrato de (í)-cis-metil-4-amino-2-ciclo-penteno-l-carboxilato (17,7 g, 0,100 moles) e hidreto de di-isobutil-alumínio (0,500 moles como uma so luçao IM em hexano) em hexano (200 ml) durante 6 horas. Arrefe; ceu-se a solução resultante e adicionaram-se 10 ml de cloreto de amonio aquoso 1M e, depois, metanol (200 ml). Fez-se o refluli xo desta mistura durante 30 minutos e ãdicionou-se MgSO^ (10
I g). Filtraram-se os solidos e lavaram-se com metanol. Evaporou! 1 -se a lavagem do filtrado atè um óleo escuro (15,5 g); RMN- H ' (DMSOdg) idêntica a do (í)-4-amino-2-ciclo-penteno-l-metanol ij preparado como descrito no Exemplo 13. Cristalizou-se essa amos tra, depois de purificação por cromatograf ia em gel de silica (EtOH:CHClg:NH^OH/10:90:1), com ãcido dibenzoil-D-tartãrico paji ra formar o composto em epigrafe.
íí
II h Exemplo 21 i
Hidrogeno-fosfato de [cis-4-(2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H; -purin-9-il)-2-ciclo-penten-l-il]metil R-2,3-bis-(hexadecanoil: oxi)propilo ji i· Adicionou-se uma solução de L-d-dipalmitoilίί -fosfatidil-colina (150 g, 0,2 mmoles, Sigma) em 6 ml de clo|; roformio a um balao contendo (1) -cis-4- (2-amino-6- (ciclo-propil í amino)-9H-purin-9-il)-2-ciclo-penteno-l-metanol (300 mg, 1,03 ’i mmoles) , fosfolipase D, Tipo VII (de Streptomyces, 1,0 mg, acti
1!
!' vidade especifica 185 unidades/mg, Sigma) e tampão pH (1,5 ml, ' 250 mM em CaCl2, 200 mM em NaOAc ajustado a pH 4,5 por adiçao ; de HC1 0,lN. Agitou-se a bi-fase resultante a 45° C (banho de | oleo) durante 1 hora. Separaram-se as camadas e extraiu-se a •ί camada aquosa com cloroformio (3x6 ml) . Lavaram-se as camadas J organicas combinadas com HC1 IN, secaram-se e concentraram-se. ί Purificou-se essa amostra por eluiçao a partir de duas colunas ! de gel de silica com 12% de metanol-clorofórmio para proporcio| nar o composto em epigrafe, 120 mg (47%). Solidificou-se este material usando acetato de etilo-acetonitrilo para produzir um ': pó amarelo claro p.f. 155-157°C; RMN-1H (CD3-CD-CDC13) 7,78
(s, solvente de sobreposição, purina H-8), 6,12 e 5,88 (m, 2,.
HC=CH), 5,53 (m, 1, CHN ciclopenteno), 5,22 (m, 1, CC^CH), 4,37 ί (dd, J=3, 12; 1, 0,5 POCH2 glicerol), 4,12 (m, 1, 0,5 POCH2 i glicerol), 3,42 (m, 4, OCH2 glicerol, OCH2), 3,11 (m lg, 1, CH),
2,90 (m, 1, NCH), 2,78 (m, 1, 0,5 CH2 ciclopenteno), 2,27 (m,
4, 2CH2CO2), 1,70 (m, 1, 0,5 CH2 ciclopenteno), 1,56 (m lg, 4, i 2CH2CH2CO2), 1,27 (m lg, 38, 24 CH2), 0,88 (m, 6, 2CH3), 0,83 ! (m, 2, CH2 ciclopropil), 0,60 (m, 2, CH2 ciclopropil.
Anal. Calculado para ^,^Ηθ^ΝθΟθΡ^,4 H2O:
C, 61,28; H, 9,42; N, 8,75; P, 3,22 Encontrado: C, 60,97; H, 9,12; N, 8,78; P, 2,96.
Exemplo 22 i Hidrogeno-fosfato de [cis-4-(2-amino-6-(ciclo-propilamino): -9H-purin-9-il)-2-ciclo-penten-l-il]metil R-2,3-bis-(hexanoiloxi)propilo
I ! Adicionou-se uma solução de L-^c-dicaproili| -fosfatidil-colina (300 mg, 0,66 mmoles', Sigma) em 15 ml de j! CHC13 a um balao contendo (í) -cis-4- (2-amino-6- (ciclo-propilami j; no)-9H-purin-9-il)-2-ciclopenteno-l-metanol (378 mg, 1,32 ramo!!
les) , fosfolipase D, Tipo VII (de Streptomyces, 1,04 mg, acti: vidade especifica 185 unidades/mg, Sigma), tampào pH 4,5 (4,5
:]ml, 250 mM em CaCl2, , 200 mM em NaOAc ajustados a pH 4,5 com i HC1) e CHC1., (3 ml) . Agitou-se a bi-fase resultante a 45°C (bali -j nho de oleo) durante 4 horas. Separaram-se as camadas e lavouI, -se a camada organica com HC1 IN (2 x 4 ml) . Lavaram-se, de novo, as camadas aquosas combinadas com cloroformio (10 ml). Se|caram-se as camadas organicas combinadas (MgSO4) e concentraram 'j-se. Colocou-se o residuo numa coluna de gel de silica e eluiuI -se o composto em epigrafe com 16% de metanol-cloroformio e con i
ι centrou-se para proporcionar um po fino amarelo. Dissolveu-se ι
II este material em etanol e concentrou-se (3 x 50 ml) antes de se il secar, sob vácuo elevado, para proporcionar 103 mg (rendimento •de 21%) de um po amarelo claro, p.f. 182-185°C.
! RMN-1H: (DMSO-άθ) /)0 7,61 (s, 1, purina H8) , 7,22 (s lg, 1, NH) , í 6,09 (m, 1, 0,5 CH=CH), 5,89 (m, sobreposição s lg a 5,83, 3,
I 0,5 CH=CH, NH2) , 5,41 (m lg, 1, CHN) , (m lg, 1, CC>2CH) , 4,30 , (dd; J=2,7, 12; 1, 0,5 POCIL, glicerol) , 4,08 (m, 1, 0,5 POCíb, l· glicerol), 3,80 (m lg sobreposição m lg a 3,75, 4, OCH2 glicerol, OCH2) , 3,02 (m lg, 2, CH, NCH ciclopropil) , 2,65 (m, 1,
P 0,5 CH2 ciclopenteno) , 2,23 ( + , J=7,5, 4, 2 CH2CC>2) , 1,48 (m lg, 5, 2 CH2CH2CC>2, 0,5 CH2 ciclopenteno), 1,23 (m lg, 8, 2 , (CH2)2), 0,84 (m, 6, 2 CHg), 0,67 e 0,58 (m, 4, 2 CH2 cicloproί Pil) · i I ! Anal. Calculado para C29H45H6°8P-^7H2O, 0,2 CHC13, 0,05 EtOH:
h C, 48,00; H, 7,33; N, 11,46; Cl, 2,9.
Encontrado: C, 48,65; H, 6,61; N, 10,81; Cl, 2,5.
exemplo precedente e uma adaptaçao do proce j dimento da Satoshi Shuto et al. Tetrahedron Letters, Vol. 28, ' NQ 2 pãgs. 199-202, 1987.
Ί í Exemplo 23
N-(4-cloro-l,6-di-hidro-5-nitro-6-oxo-pirimidinil)isobutiramida
I
Protegeu-se o 6-cloro-5-nitro-isocitosina
J í (J. Chem. Soc. 1960, 5041; J. Org. Chem., 1975, 40, 3141) por i o
P aquecimento do sólido amarelo (14,88 g 78,09 mmoles) a 100 C durante 1 hora em anidrido isobutirico (250 ml) e acido sulfurico concentrado (3-4 gotas) . Tratou-se a solução resultante t o j; com metanol anidro (100 ml) , agitou-se a 50 C, durante meia hoí ra, concentrou-se ate um terço do volume original, e recolheulj -se o composto em epigrafe (14,97 g, 75%) por filtraçao, como íj o 1 j| cristais amarelos claros; p.f. 196-199 C (dec): RMN- H (DMSO-dg) j é 1/12 (d, J=6,9, Hz, 6H, (CH^CH), 2,75 (m, J=6,9, Hz, 1H, í (CH3)2CH), 12,41 (s lg, 1H).
j ! Anal. Calculado para CgH9N4O4Cl:
.1 C, 36,87; H, 3,48; N, 21,50; Cl, 13,50.
Encontrado: C, 36,94; H, 3,48; N, 21,44; Cl, 13,53.
i1 Exemplo 24 !!
í
I ! N- (4,6-di-cloro-5-nitro-2-pirimidinil)isobutiramida
Aqueceu-se o composto em epígrafe no Exemplo i 23 (10,0 g, 38,37 mmoles) ao refluxo em oxicloreto de fosforo |l (200 ml) e N,N-di-etil-anilina (3-4 gotas) , durante 5 horas, sob atmosfera de azoto. Arrefeceu-se depois a solução a tempeII ratura ambiente, concentrou-se ate a secagem e dissolveu-se o ii xarope em cloreto de metileno (<>-10oC) frio (200 ml) . Tratou-se a camada orgânica com bicarbonato de sodio aquoso saturado (100 \ ml) com agitaçao vigorosa, e manteve-se a temperatura inferior ' a 5°C, e adicionou-se bicarbonato de sódio solido, porção a ll ΐ porção, para elevar o oH entre 5 e 7. Separaram-se as camadas e extraiu-se a fase aquosa com cloreto de metileno. Filtraramii -se as camadas organicas combinadas sobre papel de fase, concen ' traram-se e secaram-se, sob vácuo, para proporcionar o composto í em epígrafe (7,71 g, 72%) como um solido amarelo esbranquiçado ;[ suficientemente puro para se utilizar no passo seguinte. A recristalização do sólido a partir de hexano-cloreto de metileno ! proporcionou uma amostra analitica, p.f. 166-169°C; RMN-^H
I (DMSO-d^) «5 1,09 (d, J=6,9Hz, 6H, (CH^CH), 2,79 (m, J=6,9Hz, υ 1H, (CH3)2CH), 11,61 (s, 1H).
l· ! Anal. Calculado para CgHgN^O^C^:
ii C, 34,43; H, 2,89; N, 20,08; Cl, 25,41.
> Encontrado; C, 34,53; H, 2,89; N, 20,02; Cl, 25,40.
Exemplo 25
II i N-(4,6-di-cloro-5-formamido-2-pirimidinil)isobutiramida i !
Colocou-se o composto em epígrafe do Exemplo 24 (6,77 g, 24,26 mmoles) numa garrafa Parr contendo 220 ml de :! EtOH absoluto e 10,0 g de catalisador de niquel Raney (húmido) ! que tinha sido previamente agitado, sob atmosfera de hidrogénio . (40 psi) durante 10 minutos. Agitou-se a mistura sob atmosfera
' de hidrogénio (40 psi) durante 1 hora, filtrou-se sobre celite e concentrou-se o filtrado ate um solido amarelo esbranquiçado que se secou sob vácuo, durante a noite. Agitou-se este solido ! em 1,2-di-cloro-etano (250 ml) a 0°C. Adicionou-se anidrido ace ,i ' tico (30 ml) e, em seguida, acido fõrmico (30 ml) , gota a gota, sob atmosfera de azoto. Agitou-se a mistura resultante ã tempep ratura ambiente durante 2 horas, concentrou-se até metade do p volume original e tornou-se azeotropico com tolueno para remo ver o ácido fõrmico/acético residual. Tríturou-se o solido bruto com metanol para proporcionar o composto em epigrafe (4,92 g, 73%) como um sólido branco; p.f. 206-209° C (dec); RMN-^H
J (DMSO-dg) J 1,08 (d, J=6,8Hz, 6,0 (CH^CH), 2,74 (m, J=6,8Hz, 1,0 (CH3)2CH), 8,18 (d, J=10,3Hz) e 10,26 (s lg) [total 1,0, ι NHCHO de dois conformes], 11,17 (s lg, 1,0). i Anal. Calculado para CgH10N4O2Cl2:
' C, 39,01; H, 3,64; N, 20,22; Cl, 25,59.
p Encontrado: C, 39,13; H, 3,68; N, 20,12; Cl, 25,67.
I í
| Exemplo 2 6 ]
í (+)-(1R,4S)-cis-N-[4-cloro-5-formamido-6([4-(hidroximetil)-2p -ciclo-penteno-l-il]amino]-2-pirimidinil]isobutiramida , Dissolveu-se dibenzoil-D-tartarato de (1S,4R)-4-amino-2-ciclo-penteno-l-metanol (2,44 g, 8,15 mmoles), pre!; parado como descrito no Exemplo 13, em etanol a 90% (20 ml) e adicionou-se a solução a uma coluna de resina Amberlite IRA-400 ! (OH“) (30 ml) que tinha sido pre-lavada com o mesmo solvente, p A eluiçao com etanol a 90% proporcionou fracções amcalinas que p por concentração e evaporação de porçoes de tolueno-etanol, pro pporcionaram (1.S, 4R) -4-amino-2-ciclo-penteno-l-metanol como um óleo amarelo claro (1,4 g) que se condensou imediatamente com ρ N-(4,6-di-cloro-5-foemamido-2-pirimidinil-isobutiramida (2,26 pg, 8,15 mmoles) preparada como descrito no Exemplo 25, em 1,2-di-metoxi-etano (100 ml) com tri-etilamina (2,3 ml), 16,3 mmo•:les) a 95-110uC durante 1,5 horas. Evaporou-se a solução resul40
' tante ate um xarope amarelo escuro do qual se fez a cromatogra íi fia em gel de sílica. A eluição da coluna com 5-7,5% de metanol j -clorofórmio proporcionou o composto em epígrafe, como um sõlií do amarelo claro (2,45 g, 84%). A cristalizaçao dessa amostra a ! partir de acetonitrilo proporcionou o composto em epígrafe como j cristais finos brancos, p.f. 194,5-195,5°C.
H !l RMN-1H (DMSO-dJ £ 10,21 (s, 1, NHCOCHMe„) , 9,29 (s, 1, NHCHO),
8,12 (s, 1, CHO), 7,18 (d, J=7,9, 1, CHNH), 5,8 e 5,7 (dois m, ; 2, CH=CH), 5,08 (m, 1, CHN), 4,71 (t, J=5,06, 1, OH), 3,37 (m, i! 2, CH2OH) , 2,9-2,6 (m, 2, CHMe2 e CH) , 2,40 (m, 1, 0,5CH2),
1,33 (m, 1, 0,5CH2); [ «]2θβ + 4,4°, 12°365- 20.7° (c=0,237,
_) ; MeOH) .
„ Anal. Calculo analítico para C^^H^CIO^
Calculado: C, 50,92; H, 5,70; N, 19,79; Cl, 10,02.
i; Encontrado: C, 50, 67; H, 5,78; N, 19,62; Cl, 9,92.
I Exemplo 27 π
(-) -(1R,4S) -cis-N- [6- (ciclo-propilamino) -9- (4- (hidroxi-metil) ! -2-ciclo-penteno-l-il)-9H-purin-2-il]isobutiramida ij d
Agitou-se (+)-(IR, 4S)-cis-N-[4-cloro-5-for. < famido-6- ([4-hidroxi-metil)-2-ciclo-penteno-l-il]amino}-2-piri, midinil]isobutiramida (1,949 g, 5,44 mmoles), preparado como μ descrito no Exemplo 26, com ortoformiato de tri-etilo (30 ml) j num banho de ãgua gelada, ao mesmo tempo que se adicionou acido cloricrico concentrado (2,0 ml), gota a gota, durante 2 minutos.
!
li Agitou-se a solução transparente resultante a ij temperatura ambiente durante a noite. Removeram-se as substan' cias voláteis sob vacuo, e fez-se o refluxo do xarope residual (contendo um conjugado orto éster de (IR,4S)-cis-N-[6-cloro-9-(4-hidroxi-metil)-2-ciclo-penteno-l-il)-9H-purin-2-il]isobutii ramida); em etanol (30 ml) com ciclo-propilamina (10 g) durante
I . 2,5 horas. A evaporaçao proporcionou um xarope que se dissolveu i
* i em 10% de isopropanol-clorofórmio (200 ml). Agitou-se esta so41
ι luçáo, vigorosamente, com bicarbonato de sõdio aquoso saturado (25 ml). Separou-se a camada organica e lavou-se a camada aquosa com mais 10% de isopropanol-clorofòrmio. Secaram-se as cama!! das organicas combinadas (MgSO^) . A evaporaçao proporcionou um j' vidro amarelo claro (2,4 g) ao qual se fez a cromatografia em ! gel de silica. Eluiu-se o composto em epigrafe com 2-3% de meíi 'ί tanol-acetato de etilo como um solido branco (1,02 g, 53%); a recristalização dessa amostra a partir de metanol-acetonitrilo i| proporcionou o composto em epigrafe como agulhas brancas; p.f.
[ι 197,5-198,5°C.
I
RMN-1H (DMSO-dg) J 9,75 (s, 1, NHCO), 7,93 (s, 1, purina H-8), !Í 7,82 (s lg, 1, NH-ciclopropil), 6,12 e 5,92 (dois m, 2, CH=CH) , E 5,50 (m, 1, CH-N), 4,73 (t, J=5,3, 1, OH), 3,46 (m, 2, CH2~O), Í3,25-3,00 (m, 2, CHMe2 e CH), 2,91 (m, 1, CH), 2,75-2,6 (m, 1,
0,5 CH ), 1,7-1,6 (m, 1, 0,5 CH„), 1,07 (d, J=6,8, 6, CHMe9), \ ά Z 20 o 20 Z i 0,75-0,6 (m, 4,2 ciclopropilo, CH2; [<*] -70,7 , ; -159° (c=1.02, MeOH).
II i Cálculo analítico para cigH24N6°2: í Calculado: C, 60,66; H, 6,79; N, 23,58 j Encontrado: C, 60,62; H, 6,83; N, 23,51.
! i h
li ί' A continuação da eluição da coluna com 5% de í1 í metanol-acetato de etilo proporcionou mais composto em epigraíi fe contamina por ca. 10% de (-) - (IS, 4R) -cis-4- [2-amino-6- (ci![ clo-propilamino) -9H-purin-9-il] -2-ciclo-penteno-l-metanol como Euma espuma solida amarela clara (928 mg).
j I I i I:
! Exemplo 28
I, i >
ί (-)-(IS,4R)-cis-4-[amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol l
/ Agitou-se (-)-(lR, 4S)-cis-N-[6-(ciclo-pro:pilamina)-9-(4-(hidroxi-metil)-2-ciclo-penteno-l-il)-9H-purin*[—2—il]isobutiramida (1,33 g, 3,73 mmoles), preparada como des•ícrito no Exemplo 27, com ácido clorídrico IN (40 ml) durante 2
dias ã temperatura ambiente. Ajustou-se o pH a 7,0 com hidrõxi' do de sódio eevaporou-se a mistura atè ã secagem. Trituraram-se í
j os sólidos residuais com EtOH quente (3 x 25 ml). Evaporou-se o etanol para propoecionar um vidro amarelo ao qual se fez a croí' matografia em gel de silica. Eluiu-se o composto em epigrafe * com 3% de metanol-acetato de etilo como uma espuma sólida inco1 20
I lor (857 mg, 80%), RMN- He [ oo] 'idênticos ao composto em i u epigrafe no Exemplo 19.
I I Exemplo 29
II
Cloridrato de (-)-(1S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol
Dissolveu-se (-)-(IS,4R)-cis-4-[amino-6-(i! -ciclo-propilamino) -9H-purin-9-il] -2-ciclopenteno-l-metanol j (1,90 g, ca. 6,3 mmoles por RMN-^H) em ãcido clorídrico IN í
íj (7,0 ml) e etanol. Evaporou-se a solução até ã secagem e re‘I íí dissolveu-se o residuo em etanol (15 ml) . Adicionou-se, lentaí| η mente, acetato de etilo, até ao volume total de 80 ml. Filtrouií -se o põ branco que se formou e secou-se, sob vacuo, para prof. colapso a [<X] 243652,3° porcionar o composto em epigrafe (2,07 g, 97%); p. 125-130°, dec. superior a 138°C, [4. -27,1°, (c=0,199, MeOH).
Cálculo anãlitico para Ο^Η^θΝθΟ.ΗΌΙ. 0,8^0:
Calculado: C, 49,87; H, 6,16; N, 24,92;
Encontrado: C, 49,91; H, 6,16; N, 24,96;
Cl, 10,51.
Cl, 10,52.
j‘ Exemplo 30 í I ! Di-cloridrato de (-)-(IS,4R)-cis-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamií no)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol
H
Ji ’ Dissolveu-se (-)-(1S,4R)-cis-4-[2-amino-6 :-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol • I • (857 mg, 3,00 mmoles) em etanol-acetato de etilo e adicionou43
-se ãcido clorídrico IN etêrico (12 ml). Lavou-se o precipitado ; fino branco com acetato de etilo e secou-se, sob vácuo, para 'proporcionar o composto em epigrafe (642 mg, 75%); p.f. 176-180°
C dec.
Cálculo analítico para Ο^^Η^θΝθΟ,2HC1:
j: Calculado: C, 46,81; H, 5,61; N, 23,39; Cl, 19,74.
!> Encontrado: C, 46,82; H, 5,64; N, 23,33; Cl, 19,67.
N
Exemplo 31 i:
O-difosfato de (IR,4S)-4-(2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-pu‘ rin-9-il)-2-ciclo-penteno-l-metanol
Converteu-se o O-monofosfato de (+)-(lR,4S)-4-(2-amino-6-(ciclo-propil-amino)-9H-purin-9-il)-2-ciclo-penteno-l-metanol, preparado como descrito no Exemplo 9, no sal tri-etil-amónio, tomando uma solução contendo 0,5 mmoles de monofosfato como o sal amónio, combinando-a com 10 ml de bicarbonato de tri-etil-amónio 0,5 M e secando-a in vacuo e, em seguida, adicionando mais bicarbonato de tri-etil-amónio 0,5 M e depois secando-a. Em seguida adicionaram-se, trés vezes, 10 ml de acetonitrilo e secou-se in vácuo. Dissolveu-se este em 10 ml de 1,3-di-metil-3,4,5,6- tetra-hidro-2(1H)-pirimidinona (Aldrich) e depois adicionou-se 0,43 g de 1,1'-carbonil-di-imidazol (Aldrich, 2,6 mmoles) e agitou-se durante 2 horas ã temperatura am biente. Adicionou-se metanol (0,18 ml, 4,5 mmoles)e agitou-se durante 30 minutos. Adicionou-se pirofosfato de tri-butilamónio (Sigma, 1,2 g, 2,6 mmoles), agitou-se durante 18 horas a temperatura ambiente, e depois adicionou-se 1 g de pirofosfato de tri-butil-amonio (2,2 mmoles) e agítou-se durante 8 horas a 40° C, e depois adicionou-se 50 ml de agua. Formaram-se O-difosfato e O-trifosfato uma vez que o pirofosfato de tri-butil-amònio continha impurezas ortofosfato.
Separaram-se os produtos de reacção por croma •ítografia permutadora de ióes DEAE Sephadex numa coluna 2,5 x 18 •!cm de DEAE Sephadex A25 (Pharmacia) que tinha sido equilibrada
com bicarbonato de amonio 50 mM (ABC). Lavou-se a coluna com 1 1 de ABC 50 mM e depois com um gradiente linear de 2 1 de 50 a 800 mM de ABC para eluir o composto em epigrafe, seguido por ; trifosfato, como descrito com mais pormenor no Exemplo 32. Com ! binaram-se as fracções que continham o difosfato, secaram-se ) in vácuo, redissolveram-se em água e secaram-se de novo para
Il proporcionar sal de amónio do composto em epígrafe· (0,077 mmoi!
! les, 15% de rendimento). UV scan: em 0,1 M HCl A max = 254 e 298 nm; a pH 7 A max = 259 e 284 nm: em 0,1 M NaOH A max = 259 [| e 284 nm.
J Tratou-se uma aliquota de difosfato com fosfa i tase alcalina (intestino de vitelo, Boehringer Mannheim), fez -se a amostragem a várias alturas e desenvolveu-se em cromatoi; grafia fina (PEI-celulose, Brinkman, LiCl/lM ãcido fõrmico 1 M
1:1). Observou-se uma conversão sequencial de difosfato a moI nofosfato a nucleosido. Determinou-se a quantidade final de -fosfato libertado, pelo método de Bencini (Bencini, D.A.,Wild,
I J.R., e 0'Donovan, G.A. Analitical Biochemistry 132:254-258 . i ' (1983) e determinou-se a proporção base/fosfato como sendo de
II 1,0/11,5, o que indica a presença de fosfato inorgânico. A pu1' | reza UV era de 99,8% em HPLC analítica (coluna permutadora de aniões fortes eluída com um gradiente de fosfato de amonio de
I 10 mM a 1M, pH 5,5).
J II ii Exemplo 32
I|
I: O-trifosfato de (+)-(IR,4S)-4-(2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il)-2-ciclo-penteno-l-metanol i
I ij A continuação da eluição da coluna descrita j no Exemplo 31 proporcionou, por evaporação, o sal amonio do com ; posto em epigrafe. Converteu-se este sal no sal sódio, por passagem através de uma coluna de resina Dowex AG 50W-X8 (Bio-Rad) (forma sódio, 20 ml). Concentraram-se as fracções contendo nui cleotido, no vacuo, para proporcionar 0,31 mmoles (61%). UV * Scan: em 0,1 M HCl max = 254 e 299 nm; a pH 7 A. max = 259 e 284 •i nm: em 0,1 M NaOH Amax = 259 e 284 nm. A rotação óptica na
j ãgua a 3,83 g/18o ml foi [p{] 20 = +43,2° a 589 nm. A pureza UV í; foi de 99,1% em HPLC analítica (coluna permutadora de aniões ; fortes eluida com um gradiente de fosfato de amónio de 10 mM a í 1M, pH 5,5) com difosfato a 0,9% presente. Tratou-se uma alíquo i ta de trifosfato com fosfatase alcalina (intestino de vitelo, j Boehringer Mannheim), fez-se a amostragem a vãrios intervalos e desenvolveu-se em cromatografia de camada fina (PEI-celulose, Brinkman, LiC/ 1M ãcido fórmico 1:1). Observou-se uma conversão sequencial de trifosfato a difosfato a monofosfato a nucleosido. Determinou-se a quantidade final de fosfato libertado, pelo método de Bencini (Bencini, D.A., Wild, J.R., e O-Donovan, G.A. Analitical Biochemistry 132:254-258 (1983) e determinou-se a ! proporção base/fosfato como sendo de 1,0/2,7.
h Exemplo 33 i
' O-difosfato de (IS,4R)-4-(2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9HΊ ; -purin-9-il)-2-ciclo-penteno-l-metanol ii : i : I p Converteu-se o O-monofosfato de (-)-(lS,4R)-4-(2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il)-2-ciclo-pente' no-l-metanol, preparado como descrito no Exemplo 8, no sal triί -etil-amónio, tomando uma solução contendo 0,49 mmoles como sal amónio, combinando-a com 5 ml de bicarbonato de amónio e secan' do in vácuo, e em seguida adicionaram-se 5 ml de bicarbonato de tri-etil-amónio 0,5 M e depois repetiu-se duas vezes. Adicional· ram-se três vezes 5 ml de acetonitrilo e secou-se in vácuo. Dis i solveu-se este em 7 ml de 1,3-di-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2(ÍH)-pirimidinona (Aldrich) e depois adicionou-se 0,39 g de !i 1,1-carbonil-di-imidazol (Aldrich, 2,4 mmoles e agitou-se dup rante 30 minutos à temperatura ambiente. Adicionou-se metanol π (0,16 ml, 4,0 mmoles) e agitou-se durante 30 minutos. Adicionou , -se pirofosfato de tri-butil-amónio (feito por permuta do sal de pirofosfato de tetra-sódio por hidrogénio numa resina permuí tadora de iões e, depois, neutralização com tri-butilamina e se ' cagem, 2,4 mmoles), agitou-se durante 18 horas ã temperatura ara biente e depois adicionaram-se 50 ml de ãgua. Formaram-se o ΟΙ; -difosfato e O-trifosfato, uma vez que o pirofosfato de tribu46
j butil-amónio continha impurezas ortofosfato.
H !;
>1 ~ í Separaram-se os produtos de reacção por croma [í , ~ r tografia de permuta ionica DEAE Sephadex numa coluna de 2,5 x 1 18 cm de DEAE Sephadex A25 (Pharmacia) que tinha sido equilibra da com bicarbonato de amónio 50 mM (ABC). Lavou-se a coluna com ij 1 litro de ABC 100 mM e depois com gradiente 2 litros de 100 a ! 800 mM de ABC para eluir o composto em epígrafe e em seguida ' com o trifosfato como descrito com mais pormenor no Exemplo 34.
I : Combinaram-se as fracções contendo difosfato, secaram-se in váij cuo, redissolveram-se em água e depois repetiu-se duas vezes pa ! ra proporcionar o sal amónio do composto em epígrafe (0,032 mmo les, 6% de rendimento).
UV scan: em 0,1 M HCl A,max = 254 e 298 nm; a pH 7 Amax = 259 e 284 nm; em 0,1 M NaOH ^max = 258 e 284 nm.
i;
ί ι li ! [ H Tratou-se uma alíquota de difosfato com fosfa ί ί ' tase alcalina (intestino de vitelo, Boehringer Mannheim), amos! t
- tragem a-vários intervalos de tempo e desenvolvida em cromato:i grafia de camada fina (PEI-celulose, Brinkman, LiCl 1M ãcido i'
H fórmico 1M 1:1). Observou-se uma conversão sequencial de difosj| fato a monofosfato a nucleosido. Determinou-se a quantidade fiI i; nal de fosfato libertado pelo método de Bencini (Bencini, D.A., Wild,J.R., e ODonovan, G.A. Analytical Biochemistry 132:254-258 (1983) e determinou-se a proporção base/fosfato como sendo de ; 1,0/4,7, o que indica a presença de fosfato inorgânico. A pureί' za UV foi de 97% em HPLC analítica (coluna permutadora de ani: ões fortes eluida com um gradiente de fosfato de amónio 10 mM a j 1M, pH 5,5) .
Exemplo 34
O-trifosfato de (IS,4R)-4-(2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il)^-ciclo-penteno-l-metanol
A continuação da eluição da coluna descrita no Exemplo 33 proporcionou, por evaporação, o sal amónio do com47
I posto em epígrafe. Converteu-se este sal no sal sódio, por pas
{' sagem através de uma coluna de resina Doew AG 50W-X8 (Bio-Rad) ί· (forma sódio, 20 ml) . Concentraram-se as fracções contendo nuIj cleotido, in vácuo, para proporcionar 0,4 mmoles (81%) . p UV scan: em 0,1 M HCI \max = 254 e 299 nm; a pH 7 \max = 259 l;
: e 284 nm: em 0,1 M. NaOH 3cmax = 259 e 284 nm. A rotação óptica Ij na água a 6,14 g/100 ml foi [ ¢(] 20 = -47,1° a 589 nm. A pureza ' foi de 99,5% em HPLC analítica (coluna permutadora de anioes í
j: forte eluída com um gradiente de fosfato de amónio de 10 mM a I IM, pH 5,5) com difosfato a 0,5% presente. Tratou-se uma alíquo ta de trifosfato com fosfatase alcalina (intestino de vitelo, ( Boehringer Mannheim), fez-se a amostragem em vários intervalos de tempo e desenvolveu-se em cromatografia de camada fina (PEI, -celulose, Brinkman, LiCl IM/ácido fórmico IM 1:1). Observou-se ' uma conversão sequencial de trifosfato a difosfato a monofosfaj to. Determinou-se a quantidade final de fosfato libertado (Ben! cini,D.A., Wild, J.R., e 0'Donovan, G.A. Analitycal Biochemisj try 132:254-258 (1983) e determinou-se a proporção base/fosfato como sendo de 1,0/2,8.
!| Exemplo 35 (1S,4R)-4-[2-amino-6-(ciclo-propilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol
Processou-se (IS,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-ciclo-penteno-l-metanol (247 mg, 1,00 mmoles), j N-ciclo-propil-N-metilamina (0,71 g, 10 mmoles), e etanol absoI luto (6 ml). Fez-se a cromatografia do resíduo em gel de sílica. r Eluiu-se o composto em epígrafe com 10% de metanol-clorofórmio í; como um vidro incolor. A evaporação de uma solução de etanol e ij secagem com pentõxido de fósforo a 0,2 mm Hg proporcionou o com ! posto em epígrafe como uma espuma sólida branca (293 mg, 98%) o
; 1RMN-1H e [<χ] idêntica a do composto em epígrafe do Exemplo
II li.
• <
.' Exemplo A
Formulações de pastilhas
Prepararam-se as formulações seguintes A, B e C por granulação dos ingredientes com uma solução de povidona e, em seguida, adição de estearato de magnésio e compressão.
Íí Formulação A
mg/pastilha mg/pastilha
(a) Ingrediente activo 250 250
(b) Lactose B. P. 210 26
(c) Povidona B. P. 15 9
(d) Amido-glicolato de sódio 20 12
(e) Estearato de magnésio 5 3
500 300
Formulação B mq/pastilha mg/pastilha
(a) Ingrediente activo 250 250
(b) Lactose 150 -
(c) Avicel PH 101 60 26
(d) Povidona B.P. 15 9
(e) Amido-Glicolato de sódio 20 12
(f) Estearato de magnésio 5 3
i 500 300
Formulação C 1 mg/pastilha
Ingrediente activo 100
Lactose 200
i Amido 50
Povidona 5
Estearato de magnésio 4
359
' Prepararam-se as formulações seguintes, D e E • I •por compressão directa dos ingredientes misturados. A lactose
na formulação E é do tipo compressão directa (Dairy Crest - Ze parox).
I Formulação D i mg/pastilha
;Ingrediente activo 250
:Amido pregelativizado 150
400
Formulação E — mg/pastilha
Ingrediente activo 250
'Lactose 150
Avicel 100
! i 500
Formulação F (Formulação de Libertação Controlada | Prepara-se a formulação por granulação húmida idos ingredientes (adiante) com uma solução de povidona e, em se Iguida, adição de estearato de magnésio e compressão.
mg/pastilha
(a) Ingrediante activo 500
(b) Hidroxipropilmetilcelulose (Methocel K4M Premium) 112
(c) Lactose B.P. 53
(d) Povidona B.P. 28
(e) Estearato de magnésio 7
700 i! A libertação do fármaco tem lugar durante um i; período de aproximadamente 6-8 horas e completa-se durante 12 !horas.
• 1 • I • Exemplo B
ί! Formulações de cápsula ι;
j Formulação A
Prepara-se uma formulação de cápsula por mis! tura dos ingredientes da formulação D no Exemplo A anterior e enchimento numa cápsula de gelatina dura de duas partes. Prepara-se a formulação B (infra) de uma forma semelhante.
Formulação B (a) Ingrediente activo (b) Lactose B.P.
(c) Amido-Glicolato de sódio (d) Estearato de magnésio mg/cápsula
250
143 • 420 i Formulação C i mg/cápsula
Η (a) Ingrediente activo 250 : (b) Macrogol 4000 B.P. 350 i
ί’ 600
11
Efectuou-se a preparação de cápsulas da forma ι· ção C fundindo o macro-gol 4000 BP, dispersando o ingrediente activo no produto da fusão e enchendo com esse produto cápsulas '! de gelatina dura de duas peças.
I Formulação D í mg/cápsula
Ingrediente activo 250
Lecitina 100
óleo de Araquis 100
450 i: Prepararam-se as cápsulas de formulação D por • dispersão do ingrediente activo na lecitina e óleo de araquis e .deitando a dispersão em cápsulas de gelatina macia elástica.
Formulações E (Cápsulas de Libertação Controlada)
i Prepara-se a formulação de cápsulas de liber'! tação controlada seguinte por extrusão dos ingredientes a, b e c, utilizando um extrusor e, em seguida, por esferonização do extrudado e secagem. Revestem-se depois os grânulos secos como I membrana controladora da libertação(d) e deitam-se numa cápsula í de gelatina dura de duas unidades.
Ί ‘ mg/cápsula
(a) Ingrediente activo 250
(b) Celulose microcristalina 125
(c) Lactose B.P. 125
(d) Etil-celulose 13
Exemplo C Formulação Injectável 513
Formulação A.
Ingrediente activo 0,200
Solução de ãcido clorídrico, ou Solução de hidróxido de sódio, O,1M q.b. para pH 4,0 a
Água estéril q.b. até 10 ml
Dissolve-se o ingrediente activo numa grande quantidade de ãgua (35°-40°) e ajusta-se o pH entre 4,0 e 7,0 com o ácido clorídrico ou hidróxido de sódio, como apropriado. Leva-se depois a porção ao volume com água e filtra-se através
Η de um filtro microporo estéril num frasco de vidro cor de âmbar ide 10 ml estéril (tipo I) e veda-se com fechos e vedações estéí reis.
ί; j: Formulação B
0,125
Ingrediente activo
Tampão fosfato, estéril, livre de | hidrogénio, pH 7 q.b. até i
ji !' Exemplo D i , ~ ji Injecçao Intramuscular ml
Ingrediente activo 0,20 g
Álcool Benzílico 0,10 g
Glicofurol 75 1,45 g
Água para Injecção q.b. até 3,00 ml
J ·
Dissolve-se o ingrediente activo em glicofurol. Adiciona-se depois álcool benzílico e dissolve-se, e adiciona-se água até 3 ml. Filtra-se depois a mistura através de | um filtro microporo estéril e veda-se em frascos de vidro cor 1 de âmbar de 3 ml estéreis (Tipo 1).
J ii Exemplo E
Xarope
1' Ingrediente activo ί Solução de Sorbitol ' Glicerol í Benzoato de Sódio Aroma, Pêssego 17.42.3169
Ij Âgua Purificada q.b. até
0,25 g 1,50 g 2,00 g 0,005 g 0,0125 ml 5,00 ml
Dissolve-se o ingrediente activo numa mistura j de glicerol e água purificada. Adiciona-se depois uma solução ΐ aquosa de benzoato de sódio à solução e em seguida adiciona-se ; solução de sorbitol e finalmente o aromatizante. Faz-se o voluj i me com água purificada e mexe-se bem.
Exemplo F
Supositório i
mg/supositório
Ingrediente activo 250
Gordura Dura, BP (Witepsol H15 - Dynamit Nobel) 1770
2020 >1
H Fundiu-se um quinto do witepsol Hl5 num recipiente com invólucro de vapor a uma temperatura máxima de 45° : C. Peneirou-se o ingrediente activo através de um crivo de 200 /im depois adicionou-se à base fundida com mistura, utilizando um silverson equipado com uma cabeça cortante, até se obter uma hdispersão suave. Mantendo a mistura a 45°C, adicionou-se o rema nescente de Witepsol à suspensão e agitou-se para assegurar uma í! „ mistura homogenea. Passou-se a suspensão toda através de um cri
J vo de aço inoxidável de 250 jam e, com agitação contínua, permi| tiu-se que arrefecesse a 40°C. A uma temperatura compreendida ;entre 38°C e 40°C, deitaram-se 2,02 g de mistura em moldes de '! plástico de 2 ml, adequados. Permitiu-se que os supositórios ΐ arrefecessem à temperatura ambiente.
μ jj Exemplo G
Pessários
Ingrediente Activo Dextrose Anidra ! Amido de Batata
I;
ii Estearato de magnésio mg/pessário
250
380
363
1000 ;i Misturaram-se os ingredientes anteriores di: rectamente e prepararam-se pessários por compressão directa da I mistura resultante.
Actividade Antiviral i-* I' *! a) Actividade Anti-HIV • - —
células produtoras de HBV humanas caracterizadas por Sells et al.,
Ensaiou-se ο (IS,4R) -cis-4- [2-amino-6- (cicloji
H -propilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol para a actividade anti-HIV em células MT^ de acordo com o método descrito por Averetfc,D.R., J. Virol. methods, 23 1989, 263-276 e í verificou-se possuir um valor IC50 de 4,0 t 1,4 M (média de 10 j determinações). íi
b) Actividade Anti-HBV η A linha de ί de HepG2,2.2.15, desdritas e
J ' PNAS 84:1005, 1987 e J. Virol. 62:2836, 1988 mostraram compartilhar muitas das características do hepatocito infectado cro| nicamente HBV. É infeccioso como demonstrado pela capacidade em 'causar doenças em chimpanzés.
í Para ensaiar a actividade anti-HBV dos compos tos, trataram-se culturas monocamadas com o composto de ensaio: 50-200 μΜ durante 10 dias.
íí
Η Colheram-se os meios sobrenadantes contendo ! virion DNA extracelular (partículas Dane) nos dias 3, 6 e 10, í trataram-se com proteínas K (1 mg/ml) e dodecil-sulfato de só! dio (1%), e incubaram-se a 50θ C durante 1 hora. Extraiu-se o —i DNA com volumes iguais de fenol e em seguida com clorofórmio e
I i !depois precipitou-se com acetato de amónio e propanol. Dissolvi veu-se o precipitado de DNA e recolheu-se em nitrocelulose utilizando o procedimento de Schleicher e Schuell (S&S, 10 Optical Ave., Keene, NH 03431, Publication # 700, 1987), e tratou-se co 'mo descrito por Southern, J.Mol.Biol., 98, 503, 1075. Colheramj -se as células e obteve-se o DNA intracelular depois de se fa zer a lise da célula com isotiocianato de guanidina. Manipulouί -se o DNA intracelular da mesma forma que o DNA extracelular.
I Depois de precipitação por acetato de amónio e propanol, dissol ί veu-se o precipitado de DNA intracelular, cortou-se por restrição endonuclease, Hind III, aplicou-se a gel de agarose e de•i pois tratou-se, como descrito por Southern, para determinar a
quantidade de formas intermediárias replicativas. Determinou-se o efeito antiviral do fármaco por medição de, pelo menos, uma redução de 100 vezes a quantidade de partículas Dane extrudidas no meio de cultura e por um decréscimo semelhante nos intermediários replicativos intracelulares.
Ensaiou-se o (IS,4R)-cis-4-[2-amino-6-(N-ciclo-propil-N-metilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-l-metanol pelo procedimento anterior e verificou-se possuir uma actividade anti-HBV potente a 100 juM.

Claims (3)

  1. REIVINDICAÇÕES
    - lã Processo para a preparação de compostos enantioméricos de fórmula geral
    Íí li
    A (I) ' (em que R representa um grupo ciclopropil-amino ou um grupo N-ciclopropil-N-metil-amino e A representa o grupo 2-ciclopentei!
    !;. no-l-metanol-4-ilo em qualquer das configurações (1S,4R) ou 1' (1R,4S)) e seus derivados, estando qualquer desses compostos e • I : ·! seus derivados sob a forma de um.enantiómero essencialmente isen i to do correspondente enantiõmero, caracterizado por ! A) se tratar um composto enantiomérico de fórmula geral (II):
    A (II) (em que A possui as significações anteriormente definidas e Z representa um grupo precursor para o referido grupo R tal como definido para a fórmula geral (I)) ou um seu deri vado, com um agente, ou sob condições que sirvam para converter o grupo Z precursor no grupo R desejado; ou
    B) fazer-se reagir um composto enantiomérico de fórmula geral (III):
    (III) (em que A e R possuem as significações definidas antes, i ί 2 ll Rz representa o átomo de hidrogénio ou um grupo formilo li e R representa um grupo de protecção amino) ou um seu deI' rivado, com um agente que sirva para efectuar a formação do anel do imidazol no composto desejado de fórmula geral ί (I) e para efectuar a remoção do grupo de protecção amino
    I R2; ou ί C) fazer-se reagir um composto enantiomérico de fórmula geral i (IV):
    (IV) (em que A e R possuem as significações definidas antes e 3
    R representa um grupo de protecçao amino) ou um seu derivado, com um agente que sirva para efectuar a remoção do grupo de protecçao amino R e facultativamente se efectuar uma ou ambas as conversões seguintes por qualquer ordem de sejada:
    i) no caso de se formar um composto de fórmula geral (I), converte-se o referido composto num seu derivado; ou ii) no caso de se formar um derivado de um composto de fórmula geral (I), converte-se o referido derivado no com posto original de fórmula geral (I) ou num outro derivado.
    í Processo de acordo com a reivindicação 1, caí racterizado pelo facto de o composto enantiomérico de fórmula ' geral (I) ser o composto (IS,4R)-cis-4-[2-amino-6-(ciclopropilj í L
    P -amino)-9H-purin-il]-2-ciclopenteno-l-metanol substancialmente í do correspondente enantiómero (1R,4S).
    Π
    I 1
    H
    P
    P - 3ã ·! Processo de acordo com a reivindicação 1, ca.racterizado pelo facto de o composto enantiomerico de formula geral (I) ser o composto (IS, 4R) -cis-4- [2-amino-6-(N-cicloproÍ!
    | pil-N-metil-amino)-9H-purin-9-il]-2-ciclopenteno-l-metanol subs ! tancialmente isento do correspondente enantiõmero (1R,4S).
    - 4a i;
    Processo de acordo com a reivindicação 1, ca; racterizado por se obterem os sais, esteres e sais de esteres farmaceuticamente aceitáveis dos compostos enantioméricos (IS, 4R) de fórmula geral (I) .
    - 5ã (
    Processo de acordo com a reivindicação 1, ca; racterizado por se obterem os derivados fosfatos dos compostos enantioméricos (1R,4S) de fórmula geral (I).
    - 6ã '1
    J :
    h
    Processo para a preparação dos compostos enan I tioméricos de fórmula geral (IV), de acordo com a reivindicação i 1, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto enan tiomérico de fórmula geral (IV) , ί (em que A e R^ possuem as significações definidas na reivindi- 59 j cação 1 e Ζ repreenta um grupo precursor do referido grupo R ' conforme definido na fórmula geral (I), com um agente ou sob condições que sirvam para converter o grupo Z precursor no gru ; po R desejado.
    Processo para a preparaçao dos compostos enan tioméricos de fórmula geral (VI), de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto enan tiomérico de fórmula geral (V) (em que A, Z e R possuem as significações definidas na reivin~ 2 dicaçao 6 e R representa um atomo de hidrogénio ou um grupo formilo) com um agente que sirva para proporcionar a formação do anel do imidazol nos compostos desejados de fórmula geral (VI) .
    - 8§ P Processo para a formação de compostos enantio || méricos de fórmula geral V, de acordo com a reivindicação 7, ca racterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fórmu- la geral (VII)
  2. 2 3 (em que Z, R e R possuem as significações definidas na reivin dicação 7 e representa um grupo removível) com um composto enantiomérico de fórmulas gerais (VIIIA) ou (VIIIB) (VIIIB) ou um seu derivado.
    9a 1' Processo para a preparação de compostos de fórmula geral (VII), de acordo com a reivindicação 8, caracte; rizado pelo facto de se reduzir um composto de fórmula geral i (IX)
    NO,
    R' (IX)
  3. 3 4 (em que S, R e R possuem as significações definidas na reivin ! 'dicação 8) para se efectuar a conversão do grupo N0„ de modo a
    I proporcionar um grupo Ní^ e facultativamente se converter o gru po NH2 resultante num grupo formamido.
    ! A requerente reivindica a prioridade do pedii do norte-americano apresentado em 22 de Dezembro de 1989, sob ι o número de série 455,201.
PT96321A 1989-12-22 1990-12-21 Processo para a preparacao de nucleosidos de purina PT96321B (pt)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/455,201 US5034394A (en) 1988-06-27 1989-12-22 Therapeutic nucleosides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PT96321A PT96321A (pt) 1991-09-30
PT96321B true PT96321B (pt) 1998-06-30

Family

ID=23807819

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT96321A PT96321B (pt) 1989-12-22 1990-12-21 Processo para a preparacao de nucleosidos de purina

Country Status (30)

Country Link
EP (3) EP0921121A1 (pt)
JP (2) JPH11158160A (pt)
CN (1) CN1028106C (pt)
AP (1) AP196A (pt)
AT (1) ATE181917T1 (pt)
AU (1) AU633672B2 (pt)
CA (1) CA2033044C (pt)
CY (1) CY2145B1 (pt)
CZ (1) CZ283481B6 (pt)
DE (2) DE69033197T2 (pt)
DK (1) DK0434450T3 (pt)
ES (1) ES2133138T3 (pt)
FI (2) FI106461B (pt)
GR (1) GR3031100T3 (pt)
HK (1) HK1009600A1 (pt)
HU (3) HU220067B (pt)
IE (3) IE990826A1 (pt)
IL (1) IL96748A (pt)
LU (1) LU90426I2 (pt)
MX (1) MX9203215A (pt)
MY (1) MY104575A (pt)
NL (1) NL990028I2 (pt)
NZ (1) NZ236593A (pt)
PL (1) PL167097B1 (pt)
PT (1) PT96321B (pt)
RU (2) RU2068849C1 (pt)
SG (1) SG49685A1 (pt)
SK (2) SK280216B6 (pt)
TW (2) TW473466B (pt)
ZA (1) ZA9010365B (pt)

Families Citing this family (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH679152A5 (pt) * 1988-01-20 1991-12-31 Univ Minnesota
CA2001401A1 (en) * 1988-10-25 1990-04-25 Claude Piantadosi Quaternary amine containing ether or ester lipid derivatives and therapeutic compositions
GB9108376D0 (en) * 1991-04-19 1991-06-05 Enzymatix Ltd Cyclopentenes
GB9204015D0 (en) * 1992-02-25 1992-04-08 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
GB9205071D0 (en) * 1992-03-09 1992-04-22 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
DE69431596T4 (de) * 1993-06-10 2003-10-30 University Of North Carolina At Chapel Hill, Chapel Hill (phospho)lipide zum bekämpfen einer hepatitis b-infektion
GB9402161D0 (en) 1994-02-04 1994-03-30 Wellcome Found Chloropyrimidine intermediates
GB9417249D0 (en) * 1994-08-26 1994-10-19 Wellcome Found A novel salt
DE69535758D1 (de) 1994-08-29 2008-07-03 Univ Wake Forest Lipid-analoge zur behandlung von viralen infektionen
US7135584B2 (en) 1995-08-07 2006-11-14 Wake Forest University Lipid analogs for treating viral infections
US5977061A (en) * 1995-04-21 1999-11-02 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic N6 - substituted nucleotide analagues and their use
GB9600142D0 (en) * 1996-01-05 1996-03-06 Wellcome Found Chemical compounds
CZ429398A3 (cs) * 1996-06-25 1999-05-12 Glaxo Group Limited Kombinace účinných látek a farmaceutický prostředek
BR9709939A (pt) 1996-06-25 1999-08-10 Glaxo Group Ltd Combinação formulação farmacêutica processo de tratamento de uma infecção por hiv em um animal infectado usos de éster tetraidro-3-furanila do ácido 3s[3r*(1r*,2s*)]-[-3-[[4-amino-fenil)sulfonil](2-metilprop ril)-amino]-2-hidroxi-1-fenilmetil)propil]-carbâmico de zidovudina e de (2r,cis)-4-amino-1-(2-hidroximetil-1,3-oxatiolan-5-il)-(1h)-pirimidin-2-ona e pacote para paciente
SK285228B6 (sk) * 1997-05-13 2006-09-07 Lonza Ag Spôsob výroby racemického alebo opticky aktívnehoderivátu 4-(hydroxymetyl)-2-cyklopenténu a racemicky N-butyryl-1-amino-4- (hydroxymetyl)-2-cyklopentén
GB9709945D0 (en) * 1997-05-17 1997-07-09 Glaxo Group Ltd A novel salt
AU769660B2 (en) * 1997-05-17 2004-01-29 Glaxo Group Limited Carbocyclic nucleoside hemisulfate and its use in treating viral infections
GB9721780D0 (en) 1997-10-14 1997-12-10 Glaxo Group Ltd Process for the synthesis of chloropurine intermediates
AU2702899A (en) * 1997-10-24 1999-05-17 Glaxo Group Limited Process for preparing a chiral nucleoside analogue
JP2001522850A (ja) * 1997-11-12 2001-11-20 グラクソ グループ リミテッド キラルヌクレオシド類似体の製造法
CZ299083B6 (cs) * 1997-11-27 2008-04-16 Lonza Ag Zpusob výroby aminoalkoholu
YU44900A (sh) 1998-01-31 2003-01-31 Glaxo Group Limited Derivati 2-(purin-9-il)tetrahidrofuran-3,4-diola
GB9802472D0 (en) * 1998-02-06 1998-04-01 Glaxo Group Ltd Pharmaceutical compositions
GB9820417D0 (en) * 1998-09-18 1998-11-11 Glaxo Group Ltd Antiviral combinations
GB9821058D0 (en) 1998-09-28 1998-11-18 Univ Cardiff Chemical compound
AU1158000A (en) * 1998-10-30 2000-05-22 Lonza A.G. Method for producing 4- ((2',5'- diamino-6'- halopyrimidine- 4'-YL)amino)- cyclopent- 2-enylmethanols
DE59905679D1 (de) 1998-10-30 2003-06-26 Lonza Ag Verfahren zur herstellung von 4-[(2',5'-diamino-6'-halogenpyrimidin-4'-yl)amino]-cyclopent-2-enylmethanolen
GB9903091D0 (en) * 1999-02-12 1999-03-31 Glaxo Group Ltd Therapeutic nucleoside compound
US7026469B2 (en) 2000-10-19 2006-04-11 Wake Forest University School Of Medicine Compositions and methods of double-targeting virus infections and cancer cells
PE20010915A1 (es) * 1999-12-10 2001-09-29 Glaxo Group Ltd Analogos de (1s, cis)-4-(2-amino-9h-purin-9-il)-2-ciclopenten-1-metanol para uso en el tratamiento de infecciones virales
WO2001042255A1 (en) * 1999-12-10 2001-06-14 Glaxo Group Limited (1R,CIS)-4-(4-AMINO-7H-PYRROLO'2,3-I(D) &excl; PYRIMIDINE-7-YL)-2-CYCLOPENTENE-1-METHANOL DERIVATIVES AS ANTIVIRAL
DE10042655A1 (de) 2000-08-31 2002-03-14 Aventis Pharma Gmbh Verfahren zur Herstellung von Inhibitoren der Zell-Adhäsion
US7309696B2 (en) 2000-10-19 2007-12-18 Wake Forest University Compositions and methods for targeting cancer cells
CA2452036C (en) 2001-06-29 2009-09-29 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic 6-'2-(phosphonomethoxy) alkoxy pyrimidine derivatives having antiviral activity
MY169670A (en) 2003-09-03 2019-05-08 Tibotec Pharm Ltd Combinations of a pyrimidine containing nnrti with rt inhibitors
US7550261B2 (en) 2001-08-21 2009-06-23 Smithkline Beecham Corporation Method of screening for drug hypersensitivity reaction
AU2002323034A1 (en) * 2001-08-21 2003-03-10 Glaxo Group Limited Method of screening for drug hypersensitivity reaction
CN100469131C (zh) 2001-08-31 2009-03-11 汤姆森许可公司 实现条件存取系统和传输、接收及处理内容的方法和设备
US6780635B2 (en) 2001-12-27 2004-08-24 Council Of Scientific And Industrial Research Process for the preparation of optically active azabicyclo heptanone derivatives
US20060084627A1 (en) * 2002-06-27 2006-04-20 Medivir Ab Synergistic interaction of abacavir and alovudine
EA011948B1 (ru) 2003-06-16 2009-06-30 Инститьют Оф Оргэник Кемистри Энд Байокемистри, Экэдеми Оф Сайэнс Оф Зе Чек Рипаблик Фосфонатзамещенные пиримидиновые соединения (варианты), способ их получения (варианты), фармацевтическая композиция на их основе и способ лечения вирусной инфекции
GB0320738D0 (en) 2003-09-04 2003-10-08 Glaxo Group Ltd Novel process
EP1857458A1 (en) * 2006-05-05 2007-11-21 SOLMAG S.p.A. Process for the preparation of abacavir
EP1905772A1 (en) 2006-09-28 2008-04-02 Esteve Quimica, S.A. Process for the preparation of abacavir
WO2008037760A1 (en) * 2006-09-28 2008-04-03 Esteve Quimica, S.A. Process for the preparation of abacavir
EP1939196A1 (en) 2006-12-21 2008-07-02 Esteve Quimica, S.A. Process for the preparation of abacavir
EP2514750B1 (en) 2007-06-18 2013-11-20 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd Bromo-phenyl substituted thiazolyl dihydropyrimidines
EP2085397A1 (en) 2008-01-21 2009-08-05 Esteve Quimica, S.A. Crystalline form of abacavir
TWI444384B (zh) 2008-02-20 2014-07-11 Gilead Sciences Inc 核苷酸類似物及其在治療惡性腫瘤上的用途
AU2009292269B2 (en) * 2008-09-09 2012-11-01 Astrazeneca Ab A process for preparing [1S- [1-alpha, 2-alpha, 3-beta (1S*, 2R*) 5-beta] ] -3- [7- [2- (3, 4-dif luorophenyl) -cyclopropylamino] - 5- (propylthio) -3H-1, 2, 3-triazolo [4, 5-d] pyrimidin-3-yl] -5- (2- hydroxyethoxy) cyclopentane-1, 2-diol and to its intermediates
ES2607069T3 (es) * 2012-01-03 2017-03-29 Cellceutix Corporation Nucleósidos carbocíclicos y su uso farmacéutico y composiciones
JP6391561B2 (ja) 2013-02-27 2018-09-19 国立大学法人京都大学 がんの予防または治療用医薬組成物
IN2013MU03145A (pt) 2013-10-03 2015-07-03 Lupin Ltd
CN104558035B (zh) * 2013-10-22 2017-12-19 连云港恒运药业有限公司 一种替诺福韦前药的纯化方法
CN104788451A (zh) * 2014-01-21 2015-07-22 浙江九洲药业股份有限公司 一种阿巴卡韦的制备方法
CN109239253B (zh) * 2018-09-21 2021-07-09 江苏威奇达药业有限公司 一种阿巴卡韦的杂质的高效液相检测方法
WO2021209563A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT86377B (pt) * 1986-12-24 1990-11-20 Lilly Co Eli Processo para a preparacao de conjugados de imunoglobulinas com um difluoronucleosideo acilado
CH679152A5 (pt) * 1988-01-20 1991-12-31 Univ Minnesota
GB8815265D0 (en) * 1988-06-27 1988-08-03 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
JPH02164881A (ja) * 1988-10-24 1990-06-25 Wellcome Found Ltd:The 治療用ヌクレオシド化合物
NZ233197A (en) * 1989-04-13 1991-11-26 Richard Thomas Walker Aromatically substituted nucleotide derivatives, intermediates therefor and pharmaceutical compositions
US4939252A (en) * 1989-04-20 1990-07-03 Hoffmann-La Roche Inc. Novel intermediates for the preparation of Carbovir

Also Published As

Publication number Publication date
MY104575A (en) 1994-04-30
IE990825A1 (en) 2000-12-13
JPH11343292A (ja) 1999-12-14
DE69033197T2 (de) 1999-10-28
FI906367A (fi) 1991-06-23
NL990028I2 (nl) 2000-02-01
IL96748A0 (en) 1991-09-16
ES2133138T3 (es) 1999-09-01
CZ658390A3 (en) 1997-11-12
FI106461B (fi) 2001-02-15
SK280000B6 (sk) 1999-06-11
EP0434450A2 (en) 1991-06-26
TW473466B (en) 2002-01-21
AP9000234A0 (en) 1991-01-31
SG49685A1 (en) 1998-06-15
EP0921114A1 (en) 1999-06-09
CN1054981A (zh) 1991-10-02
ZA9010365B (en) 1992-08-26
CN1028106C (zh) 1995-04-05
AP196A (en) 1992-06-30
PL167097B1 (pl) 1995-07-31
HK1009600A1 (en) 1999-06-04
AU633672B2 (en) 1993-02-04
IE904652A1 (en) 1991-07-17
RU2091386C1 (ru) 1997-09-27
PL288403A1 (en) 1992-06-26
ATE181917T1 (de) 1999-07-15
FI906367A0 (fi) 1990-12-21
RU2068849C1 (ru) 1996-11-10
HU219454B (hu) 2001-04-28
DE69033197D1 (de) 1999-08-12
TW371660B (en) 1999-10-11
JPH11158160A (ja) 1999-06-15
EP0434450A3 (en) 1992-07-08
HU220630B1 (hu) 2002-03-28
GR3031100T3 (en) 1999-12-31
CA2033044A1 (en) 1991-06-23
IL96748A (en) 1995-07-31
MX9203215A (es) 1992-07-01
CY2145B1 (en) 2002-06-21
HU9008407D0 (en) 1991-07-29
AU6841990A (en) 1991-06-27
HU9902539D0 (en) 1999-10-28
CZ283481B6 (cs) 1998-04-15
EP0434450B1 (en) 1999-07-07
IE990826A1 (en) 2000-12-13
LU90426I2 (fr) 1999-10-06
HU9902543D0 (en) 1999-10-28
SK658390A3 (en) 1999-10-08
PT96321A (pt) 1991-09-30
FI20001175A (fi) 2000-05-16
CA2033044C (en) 1999-07-13
EP0921121A1 (en) 1999-06-09
HU220067B (hu) 2001-10-28
DK0434450T3 (da) 2000-01-31
NZ236593A (en) 1994-01-26
DE19975058I1 (de) 2007-01-25
SK247092A3 (en) 1999-06-11
SK280216B6 (sk) 1999-10-08
NL990028I1 (nl) 1999-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PT96321B (pt) Processo para a preparacao de nucleosidos de purina
US5087697A (en) Therapeutic nucleosides
KR100282584B1 (ko) 뉴클레오시드 치료제
EP0361831B1 (en) Antiviral nucleoside combination
EP0366385B1 (en) Guanine derivatives having antiviral activity and their pharmaceutically acceptable salts
JP3164361B2 (ja) 治療用ヌクレオシド
FI105813B (fi) Enantiomeerisia välituotteita
HU211577A9 (hu) Terápiás nukleozidok Az átmeneti oltalom az 1 -20. igénypontokra vonatkozik.

Legal Events

Date Code Title Description
BB1A Laying open of patent application

Effective date: 19910509

FG3A Patent granted, date of granting

Effective date: 19980330

TE3A Change of address (patent)

Owner name: WELLCOME FOUNDATION LIMITED, THE

Effective date: 19990924

PC4A Transfer of assignment

Owner name: VIIV HEALTHCARE UK LIMITED, GB

Effective date: 20120214

MM4A Annulment/lapse due to non-payment of fees, searched and examined patent

Free format text: MAXIMUM VALIDITY LIMIT REACHED

Effective date: 20130330