CZ283481B6 - Enantiomerní purinové deriváty, způsob jejich výroby, farmaceutické prostředky s jejich obsahem a jejich použití - Google Patents

Abstract

Řešení se týká 6-substituovaných purinkarbocyklických nukleotidů obecného vzorce I, ve kterém R představuje cyklopropylaminoskupinu nebo N-cyklopropyl-N-methylaminoskupinu a A znamená 2-cyklopenten-1-methanol-4-ylovou skupinu buď v (1S, 4R) nebo (1R, 4S) konfiguraci, a jejich solí, esterů zvolených z esterů monodi-nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin a karboxylových kyselin s C.sub.1-18.n.alkylovou nebo fenylovou skupinou, jakož i solí takových esterů, přičemž tyto sloučeniny jako takové, a jejich soli, estery a soli esterů jsou vždy ve formě enantinomeru, který obsahuje méně než 10 % hmotnostních příslušného druhého enantinomeru. Tyto sloučeniny jsou určeny k použití v medicíně, zvláště pro ošetřování nebo profylaxi infekcí způsobených retroviry, nebo infekcí vyvolaných virem hepatitidy B. Sloučeniny se k tomu obvykle používají ve formě farmaceutických prostředků. Popisuje se také několik způsobů výroby sloučenin obecného vzorce I. ŕ

Description

(57) Anotace:

Řešení se týká 6-substituovaných purinkarbocyklických nukleosidů obecného vzorce I, ve kterém R představuje cyklopropylaminoskupinu nebo Ncylďopropyl-N-methylaminoskupinu a A znamená 2cyklopenten-l-methanol-4-ylovou skupinu buď v [ 1S, 4R] nebo [IR, 4S] konfiguraci, a jejich solí, esterů zvolených z esterů mono-, dl- nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin a karboxylových kyselin s Ci-ie alkylovou nebo fenylovou skupinou, Jakož i solí takových esterů, přičemž tyto sloučeniny Jako takové, a jejich soli, estery a soli esterů Jsou vždy ve formě enantiomeru, který obsahuje méně než 10 % hmotnostních příslušného druhého enantiomeru. Tyto sloučeniny jsou určeny k použití v medicíně, zvláště pro ošetřování nebo profylaxi Infekcí, způsobených retrovlry, nebo infekcí, vyvolaných virem hepatitidy B. Sloučeniny se k tomu obvykle používají ve formě farmaceutických prostředků. Popisuje se také několik způsobů výroby sloučenin obecného vzorce I.

Enantiomerní purinové deriváty, způsob jejich výroby, farmaceutické prostředky s jejich obsahem a jejich použití

Oblast techniky

Tento vynález se týká purinových nukleosidových analogů, které obsahují nenasycený karbocyklický kruh v místě cukrového zbytku, jejich derivátů, přijatelných z farmaceutického hlediska, a jejich použití v léčebné terapii, zvláště pro ošetřování určitých virových infekcí.

Dosavadní stav techniky

AIDS (syndrom získané imunitní nedostatečnosti) je choroba, potlačující imunitu, neboli imunodestruktivní choroba, která předurčuje pacienta k smrtící příležitostné infekci. AIDS je příznačně spojen s progresivním úbytkem T-buněk, zvláště pomoc vyvolávající podskupiny, která nese povrchový buněčný znak OKT⁴.

Virus lidské imunitní nedostatečnosti (HTV) byl reprodukovatelně izolován od pacientů, trpících AIDS nebo příznaky, které často předcházejí AIDS. HTV má cytopatický charakter a přednostně infikuje a ničí T-buňky, nesoucí buněčný znak OKT⁴, a nyní je obecně uznáváno, že HTV je hybnou silou která je příčinou AIDS.

Protože bylo nalezeno, že HTV je hybnou silou, způsobující AIDS, byla učiněna řada návrhů chemoterapeutických prostředků, působících proti HIV, které mohou být účinné při ošetřování poškození, které vyvolává AIDS. Tak například US patent č. 4 724 232 popisuje 3’-azido-3'deoxythymidin (pro který bylo schváleno označení zidovudin), jeho deriváty, přijatelné z farmaceutického hlediska, a jejich použití při ošetřování infekcí člověka, způsobených retroviry, včetně AIDS a souvisejících klinických stavů. Vince a kol. vAntiviral Research 9 (1/2), 120 /1988/ popisuje určité karbocyklické nukleosidové analogy ajejich použití proti HIV. Od druhé mezinárodní konference o výzkumu boje proti virům, konané ve Williamsburgu (VA, USA) ve dnech 10. až 14. dubna 1988, je znám (+)-9-[cis-4-(hydroxymethyl)-2-cyklopentenyljguanin, který je také známý pod označením carbovir.

Jiným světově rozšířeným virovým patogenem častého výskytu je virus hepatitidy B (HBV). Nejběžnější je v asijských zemích a převažuje v subsaharské Africe. Virus je z hlediska původu spojen s primárním hepatocelulámím karcinomem.

V USA se průběžně vyskytuje podle odhadu skupina, čítající 500 000 až 1 milion nosičů infekce. Chronická aktivní hepatitida se vyvine u více než 25 % nosičů a často dochází k cirhóze. Odhaduje se, že každoročně v USA umírá 5000 lidí na cirhózu, spojenou s HBV, a že patrně 1000 úmrtí pochází od zhoubného nádoru jater, souvisejícího sHBV. I když je k dispozici univerzální HBV vakcína, pokračuje potřeba nalézt sloučeniny, které jsou účinné proti HBV. Velké zásobárně trvale infikovaných nosičů, odhadované na 220 milionů lidí na celém světě, není možné pomoci vakcínou a pokračuje vysoké riziko jatemích chorob, vyvolaných HBV. Nosiči v populaci slouží jako zdroj infekce pro citlivé jedince a opakovaně vyvolávají choroby, zvláště v endemických oblastech nebo u vysoce rizikových skupin, jako jsou narkomani, navyklí na drogu IV, a homosexuálové. Tak se naskýtá vysoká potřeba účinných prostředků proti virům, jak k potlačování chronické infekce, tak ke snížení postupu vývoje hepatocelulámího karcinomu.

Klinické účinky infekcí, vyvolaných HBV virem, se projevují bolestí hlavy, horečkou, projevy zneklidnění, nucením k zvracení, dávením, anorexií a bolestmi břicha. Replikace viru se obvykle potlačuje imunitní odezvou s průběhem uzdravování, trvajícím týdny nebo měsíce u člověka, ale

- 1 CZ 283481 B6 infekce může ve vážnějších případech vést k neodstranitelným chronickým jatemím chorobám, jak bylo uvedeno výše.

Evropský patentový spis č. 349 242 popisuje určité purinové karbocyklické nukleosidy, substituované v poloze 6, a jejich použití v léčebné terapii, zvláště k ošetřování infekcí, vyvolaných HTV a HBV. Mezi takové nukleosidy náleží sloučeniny (±)-cis-4—[2-amino-6(cyklopropylamino)-9H-pirin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol a (±)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylmethylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol, to znamená každá z těchto sloučenin ve formě racemické směsi nebo svých příslušných enantiomerů.

Nyní bylo nalezeno, že jednotlivé izolované enantiomery obou sloučenin, uvedených výše, a jejich deriváty, přijatelné z farmaceutického hlediska, mají výhodnou protivirovou aktivitu, zvláště jsou účinné proti infekcím, vyvolaným HIV a HBV viry, přičemž tato účinnost je spojena s nízkou cytotoxicitou a/nebo tyto sloučeniny jsou vhodné jako meziprodukty pro výrobu sloučenin, které mají uvedenou aktivitu.

Podstata vynálezu

Jeden znak tohoto vynálezu se týká enantiomemích sloučenin obecného vzorce

ve kterém

R představuje cyklopropylaminoskupinu nebo N-cyklopropyl-N-methylaminoskupinu, a

A znamená 2-cyklopenten-l-methanol-4-ylovou skupinu, buď v[lS,4R] nebo [1R,4S] konfiguraci, a jejich solí, esterů zvolených z esterů mono-, di- nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin a karboxylových kyselin s Ci_i₈ alkylovou nebo fenylovou skupinou, jakož i solí takových esterů, přičemž tyto sloučeniny jako takové a jejich soli, estery a soli esterů jsou vždy ve formě enantiomerů, který obsahuje méně než 10 % hmotnostních příslušného druhého enantiomerů.

Sloučenina obecného vzorce I, její sůl, ester mono-, di- nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin a karboxylových kyselin s Ci_i₈ alkylovou nebo fenylovou skupinou nebo sůl esteru jsou vždy v podstatě zbaveny příslušného druhého enantiomerů, což znamená, že obsah tohoto druhého enantiomerů je menší než 10 % hmotnostních, s výhodou menší než 5 % hmotnostních.

Je zřejmé, že sloučeniny obecného vzorce I zahrnují sloučeniny, které mají konfiguraci vyjádřenou jak obecným vzorcem LA, tak obecným vzorcem IB.

-2 CZ 283481 B6

(ΙΑ)

ve kterých

R má výše uvedený význam.

Enantiomemí sloučeniny obecného vzorce I, to znamená sloučeniny v podstatě zbavené odpovídajícího druhého enantiomeru, zahrnují:

1. (1 S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol,

2. (1 R,4S)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol,

3. (1 S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(N-cyklopropyl-N-methylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopen20 ten-l-methanol, a

4. (1 R,4S)-cis-4-[2-amino-6-(N-cyklopropyl-N-methylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol.

Sloučeniny označené 1 a 3, které se zde dále uvádějí jako (1S,4R) enantiomemí sloučeniny obecného vzorce I, s negativní (-) optickou otáčivostí, byly nalezeny jako zvláště schopné účinkovat proti HIV a HBV infekcím. Tyto sloučeniny a jejich deriváty, přijatelné z farmaceutického hlediska, představují výhodné provedení tohoto vynálezu. Sloučeniny mají další výhodu v tom, že po podání jsou schopné proniknout v krvi mozkovou bariérou 30 a poskytnout vysokou hladinu sloučenin nebo jejich aktivních metabolitů v centrálním nervovém systému, kde se projevují HIV infekce zvláště velikým oslabením. Sloučenina, označená číslem 1 svrchu, je obzvláště výhodná s ohledem na její mimořádně vysoký účinek proti HIV a HBV infekcím. Také bylo zjištěno, že sloučenina má významně nižší toxicitu proti buňkám, pocházejícím z kostní dřeně, než svrchu uvedený 3’-azido-3'-deoxythymidin (zidovudin).

Autor tohoto vynálezu dále zjistil, že fosfátové deriváty sloučenin, označených výše čísly 2 a 4, které se dále značí jako (1R,4S) enantiomemí sloučeniny obecného vzorce I, skladnou (+) optickou otáčivostí, mají silný účinek proti virovým infekcím, které jsou uvedeny výše. Tyto fosfátové deriváty tak představují další výhodné provedení tohoto vynálezu.

Zde používaným výrazem fosfátové deriváty (1R,4S) enantiomemích sloučenin obecného vzorce I se označují deriváty, ve kterých je fosfátová skupina připojena k 1-methanolovému zbytku sloučeniny obecného vzorce I a zahrnují mono-, di- a trifosfáty.

Základní (1R,4S) enantiomemí sloučenina obecného vzorce I a její nefosfátové deriváty jsou vhodné jako meziprodukty pro výrobu těchto fosfátových derivátů.

Svrchu popsané (1S,4R) enantiomemí sloučeniny obecného vzorce I a jejich deriváty, které jsou přijatelné z farmaceutického hlediska, jakož i fosfátové deriváty (1R,4S) enantiomemích sloučenin obecného vzorce I, jsou zde dále označovány jako protivirově účinné sloučeniny podle tohoto vynálezu.

Podle dalších znaků přítomného vynálezu se berou v úvahu:

a) protivirově účinné sloučeniny podle tohoto vynálezu k použití v léčebné terapii, zvláště pro ošetřování nebo profylaxi infekcí, způsobených retroviry, nebo virových infekcí, vyvolaných hepatitidou B,

b) způsob ošetřování nebo profylaxe infekcí, způsobených retroviry, a virových infekcí, vyvolaných hepatitidou B u pacienta, například savce, jako je člověk, který spočívá v ošetřování pacienta terapeuticky účinným množstvím protivirově účinné sloučeniny podle tohoto vynálezu, a

c) použití protivirově účinné sloučeniny podle tohoto vynálezu k výrobě léčiva pro ošetřování nebo profylaxi některé ze svrchu uvedených infekcí nebo stavů.

Příklady infekcí, vyvolaných retroviry, které se mohou ošetřovat nebo kterým lze zabránit podle tohoto vynálezu, zahrnují infekce člověka, způsobené retroviry, jako virem imunitní nedostatečnosti člověka (HIV), HIV-1. HIV-2 a lymfotropním virem T-buněk člověka (HLTV), například infekce, vyvalané HTLV-I nebo HTLV-II. Protivirově účinné sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou zvláště vhodné pro ošetřování AIDS a příbuzných klinických stavů, jako je komplex, související s AIDS (ARC), progresivně generalizovaná lymfadenopatie (PGL), neurologické stavy související s AIDS, jako roztroušená skleróza nebo tropická paraparéza a stavy, pozitivní na anti-HIV protilátku a pozitivní HIV, například u asymptomatických pacientů, a trombocytopenická purpura. Tyto sloučeniny se také mohou používat k ošetřování nebo prevenci lupénky.

Výrazem deriváty, které jsou přijatelné z farmaceutického hlediska ve vztahu k(lS,4R) enantiomemím sloučeninám obecného vzorce I se rozumí libovolné soli, estery nebo soli esterů, které jsou farmaceuticky přijatelné a které tvoří (1S,4R) enantiomemí sloučeniny obecného vzorce I nebo některé jiné sloučeniny, které po podání příjemci jsou schopné (přímo nebo nepřímo) poskytnout takovou enantiomemí sloučeninu nebo její protivirově účinný metabolit nebo zbytek.

Výhodné estery (1S,4R) enantiomemích sloučenin obecného vzorce I zahrnují estery karboxylových kyselin, kde nekarboxylová část ester-skupiny je zvolena ze souboru, zahrnujícího alkylové skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem (například n-propylovou, terc.-butylovou nebo n-butylovou skupinu), alkoxyalkylové skupiny s přímým nebo

-4CZ 283481 B6 rozvětveným řetězcem (například methoxymethylovou skupinu), aralkylové skupiny (například benzylovou skupinu), aryloxyalkylové skupiny (například fenoxymethylovou skupinu), arylové skupiny (například fenylovou skupinu, která je popřípadě substituována atomem halogenu, alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku nebo aminoskupinou), sulfonát-esterové skupiny, jako alkylsulfonylovou skupinu nebo aralkylsulfonylovou skupinu (například methansulfonylovou skupinu), ester-skupiny aminokyselin (například Lvalylovou nebo L-isoleucylovou skupinu) a mono-, di- nebo trifosfátester-skupiny.

Fosfát-estery sloučenin obecného vzorce I mohou být dále esterifikovány například alkoholy, obsahujícími 1 až 20 atomů uhlíku, nebo jejich reaktivními deriváty, nebo 2,3-diacylglycerolem, obsahujícím 6 až 24 atomů uhlíku v každé acylové části. Jejich příkladem je 2,3-bis(hexanoyloxy)propylhydrogenfosfátový a 2,3-bis(hexadekanyloxy)propylhydrogenfosfátový deriváty Kromě toho takové dále esterifíkované fosfátové deriváty sloučenin obecného vzorce I podle tohoto vynálezu dále zahrnují takové deriváty racemických sloučenin obecného vzorce I.

S ohledem na svrchu popsané estery, pokud není uvedeno jinak, přítomná alkylová část s výhodou obsahuje 1 až 18 atomů uhlíku, zvláště 1 až 4 atomy uhlíku. Libovolná arylová část, přítomná v takových esterech, zahrnuje s výhodou fenylovou skupinu.

Farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami (1S,4R) enantiomemích sloučenin obecného vzorce I zahrnují soli jednomocných nebo dvojmocných bází s vhodnou kyselinou, například s organickou karboxylovou kyselinou, jako je kyselina octová, kyselina vinná, kyselina jablečná, kyselina isethionová, kyselina laktobionová, kyselina jantarová a kyselina mléčná, dále organickými sulfonovými kyselinami, jako je kyselina methansulfonová, kyselina ethansulfonová, kyselina benzensulfonová a kyselina p-toluensulfonová, a anorganickými kyselinami, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná a sulfát, methansulfonát a sulfamové kyseliny. Soli kyseliny chlorovodíkové (to jest monohydrochlorid a dihydrochlorid) jsou zvláště výhodné.

Svrchu popsané antivirově účinné sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou používat v kombinaci s jinými terapeutickými prostředky pro ošetřování infekcí a stavů, popsaných svrchu. Mezi příklady takových dalších terapeutických prostředků se zahrnují prostředky, které jsou účinné k ošetřování virových infekcí nebo snimi spojených stavů, jako je 3’-azido-3’deoxythymidin (zidovudin), 2’,3’-dideoxynukleosidy, jako je 2’,3’-dideoxycytidin, 2’,3’dideoxyadenosin a 2’,3’-dideoxyinosin, acyklické nukleosidy (například acyclovir), interferony, jako je a-interferon, inhibitory renální exkrece, jako je probenicid, inhibitory transportu nukleosidu, jako je dipyridamol, dilazep, mio-, lido- nebo soluflazin nebo hexobendin, imunomodulátory, jako je interleukin 11, a faktory, stimulující granulocytovou makrofágovou kolonii, rozpustné vCD₄ nebo jejich deriváty, získané genovým inženýrstvím, a kyselina fosfonomravenčí. Sloučeniny, tvořící složku takové terapeutické kombinace, se mohou podávat současně, bud’ v oddělených nebo kombinovaných formách, nebo v odlišných okamžicích, například postupně, aby se dosáhno kombinovaného účinku.

Protivirově účinné sloučeniny podle tohoto vynálezu, které se zde také označují jako účinná látka nebo účinné látky, se mohou podávat k terapeutickým účelům libovolnou vhodnou cestou, včetně perorálního, rektálního, nasálního, lokálního (včetně bukálního a sublinguálního), vaginálního a parenterálního (včetně subkutánního, intramuskulámího, intravenózního a intradermálního) podání. Je třeba uznat, že výhodná cesta podání se bude měnit v závislosti na stavu a věku příjemce, povaze infekce a zvolené účinné látce.

Obecně vhodná dávka pro každý ze svrchu uvedených stavů (například AIDS) bude v rozmezí od 3,0 do 120 mg na kilogram tělesné hmotnosti příjemce (například člověka) za den, výhodně bude činit 6 až 90 mg za den na kilogram tělesné hmotnosti příjemce a obzvláště výhodně bude činit

-5CZ 283481 B6 od 15 do 60 mg na kilogram tělesné hmotnosti za den. Požadovaná dávka se s výhodou podává jako dvě, tři, čtyři, pět, šest nebo větší počet dílčích dávek, které se podávají ve vhodných intervalech během dne. Tyto dílčí dávky se mohou podávat ve formě jednotkových dávek, které například obsahují 10 až 1500 mg, s výhodou 20 až 1000 mg, obzvláště výhodně 50 až 700 mg účinné látky na jednotkovou dávkovou formu. V ideálním případě by se účinná látka měla podávat k dosažení vrcholné koncentrace účinné látky v plazmě, která činí od zhruba 1 do 75 μΜ, s výhodou přibližně od 2 do 50 μΜ, obzvláště výhodně asi od 3 do 30 μΜ. Toho se může dosáhnout například intravenózní injekcí 0,1 až 5 % roztoku účinné látky, popřípadě ve fyziologickém roztoku, nebo perorálním podáním ve formě sousta, které obsahuje přibližně 1 až lOOmg/kg účinné látky. Požadovaná hladina v krvi se může dosáhnout nepřetržitou infúzí, poskytující asi 0,01 až 5,0 mg účinné látky na kilogram tělesné hmotnosti za hodinu, nebo přerušovanou infúzí roztoku, obsahujícího přibližně 0,4 až 15 mg účinné látky na kilogram tělesné hmotnosti.

I když je možné účinnou látku podávat samotnou, je výhodné předkládat ji jako farmaceutický prostředek. Prostředky podle tohoto vynálezu obsahují alespoň jednu účinnou látku, jako byla popsána svrchu, dohromady s alespoň jedním farmaceuticky přijatelným nosičem nebo pomocnou látkou. Prostředky zahrnují formulace, uzpůsobené pro podávání perorální, rektální, nasální, lokální (včetně bukální a sublinguální), vaginální nebo parenterální (včetně subkutánní, intramuskulámí, intravenózní a intradermální) cestou. Prostředky mohou být obvykle přítomny ve formě jednotkové dávky a mohou se připravovat způsoby, které jsou dobře známé v oblasti farmacie. Takové způsoby zahrnují stupeň, ve kterém se uvede do styku účinná látka s nosičem, který obsahuje alespoň jednu vedlejší látku. Obecně se prostředky vyrábějí rovnoměrným a důkladným spojením účinné látky s kapalnými nosiči nebo jemně rozmělněnými pevnými nosnými látkami nebo oběma těmito skupinami nosičů a potom, pokud je zapotřebí, tvarováním produktu.

Prostředky podle tohoto vynálezu, uzpůsobené kperorálnímu podávání, mohou být přítomné jako oddělené jednotky, jako jsou kapsle nebo tablety, z nichž každá obsahuje předem stanovené množství účinné látky, jako prášky nebo granule, jako roztok nebo suspenze ve vodné nebo nevodné kapalině, nebo jako emulze kapalin typu olej ve vodě nebo typu voda v oleji. Účinná látka může být také přítomna jako sousto, lektvar nebo pasta.

Tablety se mohou zhotovit lisováním nebo litím, popřípadě alespoň s jednou pomocnou látkou. Lisované tablety se mohou připravovat lisováním účinné látky ve volně tekoucí formě, jako prášku nebo granulí, popřípadě smísené s pojivém (například povidonem, želatinou nebo hydroxypropylmethylcelulózou), kluznou látkou, inertním ředidlem, ochranným prostředkem, látkou napomáhající rozpadu (například natriumglykolátem škrobu, zesíťovaným povidonem, zesíťovanou natriumkarboxymethylcelulózou), povrchově aktivní látkou nebo dispergačním prostředkem, a to ve vhodném strojí.

Lité tablety se mohou zhotovovat ve vhodném stroji ze směsi práškových sloučenin, zvlhčených inertním kapalným ředidlem. Tablety se mohou podle potřeby potahovat nebo opatřovat zářezem a mohou se zpracovávat tak, aby se dosáhlo pomalého nebo řízeného uvolňování účinné látky při jejich použití, například tím, že se použije hydroxypropylmethylcelulózy v měnících se poměrech k dosažení požadovaného profilu uvolňování. Tablety se popřípadě mohou opatřit enterálním povlakem, který umožňuje uvolnění části obsahu jinde než v žaludku. To může být zvláště výhodné v případě purinových nukleosidových derivátů podle tohoto vynálezu, jako sloučenin, které jsou často citlivé na hydrolýzu za kyselých podmínek.

Prostředky, upravené k lokálnímu podávání do úst, zahrnují pastilky, zahrnující účinnou látku v inertním základě, jako je želatina a glycerin nebo sacharóza a arabská guma, pokroutky,

-6CZ 283481 B6 obsahující účinnou látku v ochuceném základě, obvykle sacharóze a arabské gumě nebo tragantu, a ústní vody, zahrnující účinnou látku ve vhodné kapalné nosné látce.

Prostředky, upravené pro rektální podání, mohou být přítomny jako čípky s vhodným čípkovým základem, zahrnujícím například kakaové máslo nebo salicylát.

Prostředky, uzpůsobené pro vaginální podání, mohou být přítomny jako pesary, tampony, krémy, gely, pasty, pěny nebo spreje, tvořící prostředky, jež kromě účinné látky obsahují nosné prostředky, jaké jsou známé v oboru jako vhodné.

Prostředky, upravené k parenterálnímu podání, zahrnují vodné anevodné isotonické sterilní injekční roztoky, které mohou obsahovat antioxidanty, pufry, bakteriostatika a rozpuštěné látky, které způsobují, že prostředek je isotonický s krví zamýšleného příjemce, a dále zahrnují vodné a nevodné sterilní suspenze, které mohou zahrnovat suspendační prostředky a zahušťovadla. Prostředky mohou být přítomny v jednotkových dávkách nebo uzavřených zásobnících, obsahujících větší počet dávek, například v ampulích nebo láhvičkách a také mohou být skladovány v lyofilizovaném (vymrazeném) stavu, vyžadujícím přidání toliko sterilního kapalného nosiče, například vody, bezprostředně před použitím. Extemporální injekční roztoky a suspenze se mohou připravovat ze sterilních prášků, granulí a tablet svrchu popsaných druhů.

Výhodné jednotkové dávkové prostředky jsou takové, které obsahují denní dávku účinné látky nebo jednotku denní dílčí dávky, jak byla svrchu zmíněna, nebo příslušnou její část.

Je třeba rozumět, že v přísadě ke složkám zvláště vyjmenovaným svrchu mohou prostředky podle tohoto vynálezu zahrnovat jiné přísady běžné v oboru, které mají význam s ohledem na typ prostředku. Například takové vhodné přísady pro perorální podání mohou zahrnovat sladidla, zahušťovadla a ochucovadla.

Tento vynález dále zahrnuje následující způsoby výroby enantiomemích sloučenin obecného vzorce I, uvedeného svrchu, a jejich derivátů. Enantiomemí výchozí sloučeniny aprekurzory takových látek, které se používají, jak je popsáno dále v souvislosti s uvedenými způsoby, jsou vždy ve formě enantiomeru, který je v podstatě prost druhého enantiomeru (například v rozsahu uvedeném svrchu, v souvislosti se sloučeninami obecného vzorce I). Mezi způsoby podle tohoto vynálezu se zahrnuje:

A) Zpracování enantiomemí sloučeniny obecného vzorce II

ve kterém

A znamená 2-cyklopenten-l-methanol-4-ylovou skupinu, a

Z představuje prekurzorovou skupinu pro skupinu R, která je vymezena pod obecným vzorcem I, nebo jejího derivátu s činidlem a za podmínek, sloužících k převedení prekurzorové skupiny Z na požadovanou skupinu R, nebo

b) reakci enantiomemí sloučenny obecného vzorce III

(III).

ve kterém

A a R mají význam uvedený výše,

R² představuje atom vodíku nebo formylovou skupinu, a

R³ znamená skupinu chránící aminoskupinu, například acylovou skupinu, například alkanoylovou skupinu s I až 6 atomy uhlíku, jako je formylová skupina, acetylová skupina nebo isobutyrylová skupina, nebo jejího derivátu s činidlem, sloužícím k vytvoření imidazolového kruhu požadované sloučeniny obecného vzorce I, a potom odstranění skupiny chránící aminoskupinu R³, nebo

C) reakci enantiomemí sloučeniny obecného vzorce IV

(IV), ve kterém

A a R mají význam uvedený výše a

R³ znamená skupinu chránící aminoskupinu, například jako je popsána v souvislosti s obecným vzorcem III, nebo jejího derivátu s činidlem, sloužícím k účinnému odstranění skupiny, chránící aminoskupinu R³, a popřípadě se provede jedna nebo větší počet následujících konverzí v jakémkoli požadovaném pořadí:

i) pokud vznikla sloučenina obecného vzorce I, převede se tato sloučenina na svůj derivát, nebo

-8CZ 283481 B6 ii) pokud vznikl derivát sloučeniny obecného vzorce I, převede se tento derivát na základní sloučeninu obecného vzorce I nebo na jiný takový derivát.

Způsob A) se může provádět obvyklým postupem, například zpracováním sloučeniny obecného vzorce II, ve kterém Z představuje odštěpitelnou skupinu (například atom halogenu, jako atom chloru), s vhodným aminem, to je cyklopropylaminem nebo N-cyklopropyl-N-methylaminem, který se použije v přebytku k zavedení aminoskupiny R, vymezené výše při výhodném provedení, přednostně za teploty zpětného toku nebo za teploty vyšší než 50 °C. Způsob se účelně provádí v přítomnosti organického rozpouštědla, například methanolu nebo ethanolu.

Způsob B) se může provést například reakcí sloučeniny obecného vzorce IH s kyselinou mravenčí nebo jejím reaktivním derivátem (například triethylortoformiátem nebo diethoxymethylacetátem), popřípadě se spolurozpouštědlem, jako je dimethylacetamid nebo dimethylformamid, za zvýšené teploty, s výhodou za teploty od 75 do 90 °C. Tato reakce se obvykle provádí za přídavku silné bezvodé kyseliny, který je větší než 1 ekvivalent, například za přídavku 1,1 ekvivalentu kyseliny ethansulfonové na 1 ekvivalent sloučeniny obecného vzorce III. V tomto případě se používá nižších teplot (například 25OC).

Způsob C) se může provést například reakcí enantiomemí sloučeniny obecného vzorce IV s kyselým činidlem, například zředěnou kyselinou chlorovodíkovou.

Sloučeniny obecného vzorce II, používané jako výchozí látky pro způsob A), se mohou vyrobit například způsobem analogickým způsobu B), to znamená reakcí odpovídající enantiomemí sloučeniny obecného vzorce V

ve kterém

A, Z, R² a R³ mají význam uvedený výše, nebo jejího derivátu s činidlem, sloužícím k vytvoření imidazolového kruhu v požadované sloučenině obecného vzorce II a k účinnému odstraněné skupiny chránící aminoskupinu R³. Reakce se může provést za použití takových činidel a podmínek, jako jsou popsány svrchu pro způsob B).

Sloučeniny obecného vzorce III, používané jako výchozí látky pro způsob B), se mohou vyrobit například zpracováním enantiomemí sloučeniny obecného vzorce V, uvedené svrchu, s činidlem a za podmínek, sloužících k převedení prekurzorové skupiny Z na požadovanou aminoskupinu R, a to analogickým způsobem, jako je popsán pro způsob A).

Svrchu zmíněné sloučeniny obecného vzorce IV se mohou vyrobit například reakcí enantiomemí sloučeniny obecného vzorce VI

-9CZ 283481 B6

ve kterém

A, Z a R³ mají význam vymezený výše, s činidlem a za podmínek, sloužících k převedení prekurzorové skupiny Z na požadovanou skupinu R, to jest analogickým způsobem, jako je popsán pro způsob A).

Svrchu uvedené sloučeniny obecného vzorce VI se mohou vyrobit reakcí enantiomemí sloučeniny obecného vzorce V, uvedené svrchu, s činidlem, sloužícím k účinnému vytvoření imidazolového kruhu požadované sloučeniny obecného vzorce VI, například zpracováním s kyselinou mravenčí nebo jejím reaktivním derivátem, jak je popsáno výše v souvislosti se způsobem B).

Enantiomemí sloučeniny obecných vzorců II, III, IV, V a VI, které jsou uvedeny výše, představují další znak tohoto vynálezu, zvláště pokud v těchto vzorcích R² představuje formylovou skupinu a/nebo R³ znamená alkanoylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, zejména acetylovou skupinu nebo isobutyrylovou skupinu a/nebo Z představuje atom halogenu, jako atom chloru.

Mezi zvláště výhodné meziprodukty pro výrobu (lS,4R)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu, to znamená výhodné sloučeniny, označené číslem 1 svrchu, se zahrnuje

a) (1 R,4S)-cis-N-[6-(cyklopropylamino)-9-/4-(hydroxymethyl)-2-cyklopenten-l-yl/-9Hpurin-2-yl]isobutyramid,

b) (1 R,4S)-cis-N-[4-chlor-5-foramido-6-/4-(hvdroxymethyl)-2-cyklopenten-l-yl/amino)-2pyrimidinyljisobutyramid,

c) (1 R,4S)-cis-N-[4-chlor-5-formamido-6-/(4-(hydroxymethyl}-2-cyklopenten-l-yl)amino/2-pyrimidinyl]acetamid,

d) (1 S,4R)-cis-(2-amino-6-chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyklopenten-l-methanol, a

e) (1 R,4S)-cis-N-[6-chlor-9-/4-{hydroxymethyl)-2-cyklopenten-l-yl/-9H-purin-2-yl]isobutyramid.

Enantiomemí sloučeniny obecného vzorce V, používané jako výchozí látky, které jsou popsány svrchu, se mohou vyrobit například reakcí sloučeniny obecného vzorce VII

- 10CZ 283481 B6

ve kterém Z, R² a R³ mají význam vymezený výše, a

R⁴ představuje odštěpitelnou skupinu, například atom halogenu, jako atom chloru, nebo jejího derivátu s enantiomemí sloučeninou vzorce VIIIA nebo VIIIB

(VIIIA) (VIIIB) nebo jejím derivátem.

Tato reakce se s výhodou provádí v přítomnosti báze, jako terciárního aminu, například triethylaminu nebo trimethylaminu, v organickém rozpouštědle jako je dimethoxyethan nebo ethanol.

Sloučeniny vzorce VIIIA a VIIIB představují výhodné výchozí látky pro reakční sled, vedoucí k výrobě enantiomemích sloučenin obecného vzorce I. Sloučeniny vzorce VIIIA a VIIIB jsou blíže popsány ve vyloučené přihlášce vynálezu.

Deriváty enantiomemích sloučenin obecného vzorce VIILA a VIIIB jsou zvláště soli s opticky aktivními karbocyklickými kyselinami, jako je kyselina dibenzoyl-D-vinná. Jde tedy například o [lS,4R]-4-amino-2-cyklopenten-l-methanol a jeho dibenzoyl-D-tartrát a [1R,4SJ—4— amino-2-cyklopenten-l-methanol a jeho dibenzoyl-D-tartrát.

Sloučeniny obecného vzorce VII, používané jako výchozí látky, popsané svrchu, se mohou vyrobit obvyklým způsobem, například redukcí sloučeniny obecného vzorce IX

ve kterém

Z, R³ a R⁴ mají význam vymezený výše, (IX).

- 11 CZ 283481 B6 k převedení nitroskupiny na aminoskupinu a popřípadě převedením výsledné aminoskupiny na formamidoskupinu, například působením kyseliny mravenčí/anhydridu kyseliny octové.

Sloučeniny obecného vzorce IX se mohou vyrobit běžným způsobem. Sloučeniny, ve kterých Z představuje atom halogenu, například atom chloru, se mohou vyrobit například halogenací odpovídající sloučeniny obecného vzorce X

(X).

ve kterém

R³ a R⁴ mají význam vymezený výše, například za použití oxychloridu fosforečného.

Také sloučeniny obecného vzorce X se mohu vyrobit obvyklým způsobem, například reakcí sloučeniny obecného vzorce XI

NOz

R⁴ (XI), ve kterém

R⁴ má význam vymezený výše, s vhodným činidlem, sloužícím k zavedení skupiny chránící aminoskupinu, například reakcí s vhodnou karboxylovou kyselinou nebo jejím funkčním ekvivalentem, jako je isobutyranhydrid.

Sloučeniny obecného vzorce XI se mohou vyrobit nitrací odpovídající sloučeniny obecného vzorce XII

O

ve kterém

R⁴ má význam vymezený výše.

(XII),

- 12CZ 283481 B6

Sloučeniny obecných vzorců VII, IX, X a XI představují další znak tohoto vynálezu, zvláště pokud v těchto sloučeninách Z představuje atom halogenu, jako je atom chloru, a/nebo R³ znamená alkanoylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, zvláště acetylovou skupinu nebo isobutyrylovou skupinu a/nebo R⁴ představuje atom halogenu, jako je atom chloru.

Výhodné sloučeniny obecných vzorců VII, IX a X podle tohoto vynálezu zahrnují

N-(4,6-dichlor-5-formamido-2-pyrimidinyl)isobutyramid,

N-(4,6-dichlor-5-nitro-2-pyrimidinyl)isobutyramid, a

N-(4-chlor-l,6-dihydro-5-nitro-6-oxo-2-pyrimidinyl)isobutyramid.

Sloučenina obecného vzorce I se může obecně převést na svůj ester reakcí s vhodným esterifikačním činidlem, například halogenidem nebo anhydridem kyseliny. Sloučenina obecného vzorce I a její estery se mohou převést na své soli běžným způsobem, například zpracováním v příslušnou kyselinou. Ester nebo sůl se může převést na základní sloučeninu například hydrolýzou.

O-Monofosfát sloučeniny obecného vzorce I se může vyrobit zpracováním základní sloučeniny s vhodným fosforylačním činidlem, například oxychloridem fosforečným, jak popsal M. Yoshikawa. T. Kato aT. Takerishi v Bulletin Chem. Soc. Japan 42, 3505 /1969/. Odpovídající O-difosfáty a O-trifosfáty se mohou vyrobit způsoby, které popsal K. H. Sheit v Nucleotide Analogs, John Wiley and Sons. New York 1980 (str. 211 až 215) a D. E. Hoard a D. G. Ott v J. Amer. Chem. Soc. 87, 1785 965/, například výrobou imidizolátového derivátu odpovídajícího Omonofosfátu s následující reakcí tohoto derivátu s fosfátem, za vzniku O-difosfátu, nebo s difosfátem, za vzniku O-trifosfátu. Pro výrobu esterifikovaných derivátů fosfátu, uvedených výše, se základní sloučenina obecného vzorce I může zpracovat s příslušným dialkanoylfosfatidylcholinem v přítomnosti vhodné fosfolipázy, například fosfolipázy D, jak popsal S. Shuto a kol. v Nucleic Acid Research, 20, 35 /1988/, nebo se sloučenina obecného vzorce I může nechat reagovat s příslušným fosforylačním činidlem, jako je oxychlorid fosforečný, a potom zpracovat s vhodným alkoholem, jak popsal A. Rosowsky a S. Kim v Nucleic Acid Chemistry, část 3, str. 255, L. B. Townsend and R. S. Tipson (vydavatelé John Wiley and Sons. New York 1986.

Enantiomery sloučenin obecného vzorce I se mohou štěpit nebo izolovat obvyklým postupem, například chromatografickým dělením diastereomemích esterů, vyrobených acylací hydroxyskupiny cyklopentenylové části vhodným opticky aktivním derivátem karboxylové kyseliny, jako například naproxenem (J. Org. Chem. 51, 1287 /1986/).

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady jsou určeny toliko pro ilustraci a žádným způsobem nejsou zamýšleny jako omezení rozsahu vynálezu. Příklady optické otáčivosti jsou označovány s ohledem na čáru D sodíku (589 nm) za teploty 20 °C. Výraz účinná látka, používaný v příkladech A až G, znamená protivirově účinnou sloučeninu podle tohoto vynálezu, zvláště sloučeninu, označenou výše číslem 1.

- 13 CZ 283481 B6

Příklad 1

Způsob výroby (±)-cis-4-[(2-amino-4-chlor-6-pvrimidinyl)amino]-2-cyklopenten-l-methanolu

14,88 g (0,073 mol) cis-4-acetamidocyklopent-2-enmethylacetátu (US patent č. 4 268 672) a 46,19 g (0,146 mol) oktahydrátu hydroxidu bamatého se vaří pod zpětným chladičem ve 300 ml vody pod dusíkovou atmosférou po dobu 18 hodin. Výsledný roztok se neutralizuje oxidem uhličitým. Sraženina se promyje vodou a potom ethanolem. Spojené promyté filtráty se odpaří na sirup o hmotnosti 11,16 g, který se kondenzuje s 23,91 g (0,146 mol) 2-amino—4,6dichlorpyrimidinu a 30,5 ml (0,219 mol) triethylaminu za varu pod zpětným chladičem ve 100 ml 1-butanolu po dobu 1,5 hodiny. Po přidání 73 ml 1-normálního roztoku hydroxidu sodného se výsledná směs odpaří dosucha a získaná pevná látka se suspenduje ve 200 ml chloroformu. Nezreagovaný 2-amino-4,6-dichlorpyrimidin se odfiltruje a promyje 100 ml chloroformu. Chloroformem promytý filtrát se odpaří a chromatografuje na sloupci silikagelu. Dodatkový výchozí derivát pyrimidinu se eluuje 2,5 % methanolem v chloroformu. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje 3,5% methanolem v chloroformu. Získá se 15,90 g pevné pěny bělavé barvy. Výtěžek činí 91 % teorie.

*H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) δ: 1,15-1,28 a 2,26-2,41 (2 m, 2, CH₂), 2,60-2,71 (m, 1, Γ-Η), 3,4 (m překrývající H₂O, CHjOH), 4,625 (t, J = 5,3 Hz, 1, CH₂OH), 4,95 (široký singlet, 1, CH-N), 5,67-5,87(m,2,CH=CH), 6,38 (širokýsinglet, 1,NH₂), 7,12 (širokýsinglet, l,NH)ppm.

MS (Cl) M +1, 241,243.

Analýza pro Ci₀H t₃N4OC1.0,2 H₂0:

vypočteno: 48,99%C,5,55%H,22,85%N, 14,46% Cl, nalezeno: 49,10%C,5,57%H,22,81 %N, 14,40%CI.

Příklad 2

Způsob výroby (±)-cis-4-[[2-amino-6-chlor-5-/(4-chlorfenyl)azo/-4-pyrimidinyl]amino]-2cyklopenten-l-methanolu

11,58 g (48,1 mmol) (±)-cis-4-[(2-amino-4-chlor-6-pyrimidinyl)amino]-2-cyklopenten-lmethanolu z příkladu 1 a 97 g trihydrátu octanu sodného se rozpustí v 225 ml ledové kyseliny octové a 225 ml vody. Dále se připraví studený roztok (o teplotě 0 až 5 °C) 4-chlorbenzendiazoniumchloridu, vyrobený z 6,74 g (52,8 mol) 4-chloranilinu, 14,7 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové, 52 ml vody a 4,01 g (58,2 mmol) dusitanu sodného ve 47 ml vody. Tento studený roztok se přikape během 5 minut k prvnímu roztoku. Výsledná žlutá sraženina se odfitruje po 18 hodinách, promyje vodou a extrahuje ethanolem. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se získá jako tmavě žlutý prášek o hmotnosti 12,56 g, který má teplotu tání 218 až 220 °C (za rozkladu). Výtežek činí 69 % teorie.

’H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) δ: 10,25 (d, 1, NH), 7,69 a 7,54 (v obou případech d, J = 8,9 Hz, CďH»), překrývající se 7,6 (široký signál, 6, NH₂), 5,80 - 5,95 (m, 2, GH=CH), 5,24 (m, 1, CHN), 4,75 (t, 1, CH₂OH), 3,41 (t, 2, CETOH), 2,75 (m, 1, CH), 2,41 (m, 1, CH), 1,44 - 1,53 (m, 1, CH) ppm.

Anylýza pro C^H^^C^O:

vypočteno: 50,67 % C, 4,25 % Η, 22,16 % N, 18,70 % Cl, nalezeno: 50,59%C,4,29%H,22,10%N, 18,66 % CL

- 14CZ 283481 B6

Příklad 3

Způsob výroby (±)-cis-4- [(2,5-diamino-4-chlor-6-pyrimidinyl)amino]-2-cyklopenten-lmethanolu

11,67 g sloučeniny, pojmenované v názvu příkladu 2, se suspenduje v 235 ml ethanolu, 30 ml ledové kyseliny octové a 235 ml vody. Směs se zahřívá pod zpětným chladičem v dusíkové atmosféře. K. reakční směsi se po malých podílech během 30 minut přidá 13,5 g zinkového prachu a během uvedené doby se sloučenina rozloží. Reakční směs se zahřívá dalších 20 minut io a potom se přebytek zinku odfiltruje z horkého roztoku a promyje ethanolem. Filtráty se odpaří a odparek se čistí na sloupci silikagelu za eluování 1 litrem chloroformu a 1,8 litru směsi chloroformu s methanolem v poměru 4:1. Frakce, obsahující produkt, se spojí a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Získá se 11,2 g sloučeniny, pojmenované v nadpise, jako červeno oranžový olej. Výtěžek činí více než 100 % teorie.

Čistý vzorek se dostane během jiné reakce, prováděné v malém měřítku. Získá se produkt, tvořený světle žlutým olejem. Výtěžek činí 76 % teorie.

*H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) δ: 1,29 a2,39 (m, 2, CH₂), 2,69 (t, 1, l’-H), 3,37 (d, 2, CH₂OH), 20 3,91 (široký signál, 2, NH₂), 4,60 (široký signál, 1, CH₂OH), 5,02 (m, 1, CHNH), 5,56 (široký singlet, 2, NH₂), 5,74(m, l,=CH),5,86(m, l,=CH),6,36(d, 1,CHNH)ppm.

Příklad 4

Způsob výroby (±)-cis-4-(2-amino-6-chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyklopenten-l-methanolu

Zhruba 3,7 g sloučeniny, pojmenované v nadpise příkladu 3, se rozpustí v 100 g diethoxymethylacetátu a vaří pod zpětným chladičem po dobu 2 dnů. Rozpouštědlo se odpaří za vysokého 30 vakua při teplotě 50 °C a k odparku se přidá 40 ml dioxanu a 60 ml 0,5-normální kyseliny chlorovodíkové. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 1,25 hodiny a poté se ochladí. Potom se reakční směs neutralizuje na hodnotu pH 7 přídavkem 5-normálního roztoku hydroxidu sodného a poté několikrát extrahuje směsí chloroformu s methanolem v poměru 3:1. Organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým, filtrují a odpaří. Odparek se čistí chromato35 graficky na sloupci silikagelu, při eluování 2 % methanolem v chloroformu. Získá se 3,7 g sloučeniny, pojmenované v nadpise, která má teplotu tání 138 až 139 °C. Výtěžek činí 46% teorie.

*H NMR spektrum ((CH₃]₂SO-d₆) δ: 1,63 a 2,61 (m, 2, CH₂), 2,87 (m, 1, l’-H),3,44(d,2,CH₂OH), 40 5,44 (m, 1, CH-N), 5,89 (m, 1, -CH), 6,14 (m, 1, -CH), 6,82 (široký singlet, 2,NH₂), 8,02 (s, 1, 8-H), (CH₂OH nezřejmé, pod pikem H₂O) ppm.

UV: pH 1: 315 (ξ = 7370), 218 (26200), = 239,5 (5650), pH 7,4: 307 (ξ = 8000), 245,5 (4600),233(26400).

MS (El) 265,267 (m), (Cl) 266,268 (m+1).

Analýza proCnH₁₂N₅ClO.2 H₂O:

vypočteno: 43,79 %C, 5,35 %H, 23,21 %N, 11,75%C1 nalezeno: 43,67 % C, 5,29 % H, 23,05 %N, 11,70 % Cl

- 15 CZ 283481 B6

Příklad 5

Způsob výroby (+)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lmethanolu

0,50 g sloučeniny, pojmenované v nadpise příkladu 4, se rozpustí ve 40 ml ethanolu a přidá 0,65 ml (5 ekvivalentů) cyklopropylaminu. Reakční směs se vaří pod zpětným chladičem v dusíkové atmosféře po dobu 6 hodin. Poté se přidá dalších 0,65 ml cyklopropylaminu a reakční směs se vaří pod zpětným chladičem dalších 5,5 hodiny. Rozpouštědla se odpaří a k odparku se přidá 25 ml chloroformu a 5 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva se několikrát extrahuje chloroformem, aby se dostal surový produkt. Tento produkt se čistí na sloupci silikagelu za eluování 3 % methanolem v ethylacetátu. Získá se 0,43 g (±)-cis-4-[2amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu. Výtežek činí 80 % teorie.

Získaná látka se rekrystaluje z acetonitrilu. Dostane se 0,30 g bílého prášku, který se hroutí za teploty 93 až 130 °C a má teplotu tání 165 °C.

’H NMR spektrum ([CH3]₂SO-d₆) δ: 0,56 a 0,63 (2m, 4, 2-cyklopropyl CH₂), 1,56 a 2,60 (2m, 2, cyklopentyl-CH₂), 2,85 (m, 1, 1 ’-H), 3,02 (m, 1, cyklopropyl CH-NH), 3,43 (m, 2, CH₂OH), 4,71 (t, 1,CH₂OH), 5,40(m, 1,4’-H), 5,77 (s, 2,NH₂), překrývající se 5,84 (m, 1,=CH₂), 6,09(m, 1,=CH), 7,23 (d, 1,NH-CH), 7,58 (s, 1, purin-8-H) ppm.

MS(Cl)287(m + 1).

UV: pH 1: λ™» 296 (ξ = 14000), 255(10700), pH 7,0: 284 (15900), 259 (9200), pH 13: 284 (15800),259(9100).

Analýza pro Ci4H₁₈N₆O.0,25 H₂O: vypočteno: 57,82 % C, 6,41 % H, 28,90 %N, nalezeno: 57,84 % C, 6,45 % H, 28,86 % N.

Příklad 6

Způsob výroby (±)-cis-4- [2-amino-6-(cyklopropylmethylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-1 -methanolu

0,53 g (2 mmol) (+)-cis-4-(2-amino-6-ch!or-9H-purin-9-yl)-2-cyklopenten-l-methanolu z příkladu 4, 0,8477 g (12 mmol) N-methyl-N-cyklopropylaminu (Karl Industries, Aurora, OH) a 20 ml methanolu se umístí do Parrovy tlakové nádoby a zahřívá na teplotu 62 °C po dobu 5 hodin. Roztok se odpaří a poté zředí ethanolem. Dále se hodnota pH upraví na 12 přídavkem 1,0-normálního roztoku hydroxidu sodného. Získaný roztok se odpaří a odparek se čistí na sloupci silikagelu za eluování 3 % methanolem v chloroformu. Získá se 0,547 g látky, což odpovídá 91,2 % teorie. Krystalizací vzorku ze směsi vody s ethanolem se dostane bílý prášek, který má teplotu tání 130 až 131 °C.

'H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) δ: 7,61 (s, 1H, purinH-8), 6,10(m, 1H,CH=), 5,84 (m, 1H,CH=), 5,7 (široký singlet, 2H, NH₂), 5,40 (m, 1H, CHN), 4,70 (široký triplet, 1H, OH), 3,43 (m, 2H, CH₂OH), 3,24 (široký singlet, 4H, CH₃, NCH cyklopropyl), 2,85 (m, 1H, CH), 2,66 - 2,57 a 1,61 1,51 (m, 2, cyklopentenyl CH₂), 0,90 - 0,65 (m, 4H, 2CH₂ z cyklopropylu) ppm.

- 16CZ 283481 B6

Analýza pro C_t5 H₂₀N6O,0,5H₂O:

vypočteno:	58,24 % C, 6,84 % H, 27,16 % N,
nalezeno:	5 8,15 % C, 6,86 % H, 27,14 % N.

Příklad 7

Způsob výroby (-)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lmethanolu

0,600 g (2,00 mmol) sloučeniny, pojmenováno v nadpise příkladu 5, se rozpustí ve 12 ml 1,3— dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2-(lH)-pyrimidinonu (Aldrich). K míchanému, studenému roztoku o teplotě -10 °C se přidá 0,76 ml (8,0 mmol) fosforylchloridu. Po 3 minutách se přidá 100 ml studené vody a výsledný roztok se neutralizuje 3-moIámím hydroxidem amonným. Neutralizovaný roztok se doplní na 1 litr vodou a vnese na sloupec 2, 5 x 20 cm DEAE Sephadexu A25 (Pharmacia), který byl předem ekvilibrován 50 mM hydrogenuhličitanu amonného. Sloupec se nejprve promyje 4 litry 50 mmolámího roztoku hydrogenuhličitanu amonného. O-Monofosfát (±)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2cyklopenten-l-methanolu se potom eluuje 2 litry hydrogenuhličitanu amonného o gradientově koncentraci 50 až 300 mM. Frakce, obsahující nukleotid (to znamená svrchu uvedený Omonofosfát), se odpaří na bílý prášek k odstranění hydrogenuhličitanu amonného. Zjistí se 71 % vypočtené UV absorbance a jeden pík při vysokoúčinné kapalinové chromatografii (viz dále).

K 1,4 mmol nukleotidu, rozpuštěného ve 20 ml vody, se přidá hadí jed 5’-nukleotidáza (EC 3.1.3.5) zCrotalus atrox (1000 mezinárodních jednotek, Sigma). Roztok se inkubuje za teploty 37 °C po dobu 22 hodin a nato se přidá dalších 1000 mezinárodních jednotek enzymu. Inkubace pokračuje po další 3 dny.

Analýza, prováděná vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii (HPLC) (sloupec 0,4 x 10 cm Whatman Partisil 10, silná aniontoměničová pryskyřice, eluování fosforečnanem amonným o gradientově koncentraci 20 mM až 1 M, hodnota pH 5,5, obsah methanolu 5 %, UV detekce při 284 nm), přitom ukazuje, že 50 % výchozího nukleotidu se defosforylovalo na základní nukleotid. Tato směs se opět vnese na sloupec DEAE Sephadexu typu, který je popsán svrchu. Eluováním 4 litry 50 mmolámího hydrogenuhličitanu amonného se dostanou frakce, které obsahují sloučeninu, uvedenou v nadpise. Odpařením vody se dostane bílý prášek. Získaný materiál se dále čistí chromatografii na silikagelu při eluování směsí methanolu s chloroformem v poměru 1:9. Získá se bezbarvá látka sklovitého charakteru. Tato látka ztuhne v acetonitrilu. Získá se 260 mg (-)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lmethanolu jako bílé pevné látky charakteru gumy, která se vysuší na pevnou pěnu za teploty 68 °C při tlaku 67 Pa. Výtěžek činí 86 % z racemátu.

'H NMR spektrum v [CH₃]₂SO-d₆ a hmotové spektrum jsou identické s údaji pro racemát (sloučeninu, uvedenou v názvu příkladu 5).

[a]²⁰D -59,7°,[a]²⁰4j6 -127,8 °,[a]²⁰365 -218,l°(c = 0,15,methanol).

Analýza pro Ci4H₁₈N₆O.0,8H₂O:

vypočteno: 55,91 % C, 6,57 % H, 27,94 %N, nalezeno: 56,05 % C, 6,65 % H, 27,88 %N.

Pokračujícím eluováním sloupce posledně jmenovaného Sephadexu 2 litry hydrogenuhličitanu amonného o gradientově koncentraci 50 až 300 mM se dostane O-monofosfát (+)-enantiomeru,

- 17 CZ 283481 B6 odpovídajícího sloučenině, pojmenované v nadpise, který je stabilní k 5’-nukleotidáze. Výroba tohoto monofosfátu je podrobněji popsaná v příkladě 9.

Příklad 8

Způsob výroby O-monofosfátu (-}-cis-4-[2-amino-6-(cykloprolylamino)-9H-purin-9-yl]-2cyklopenten-l-methanolu ίο 0,35 g (1,2 mmol) sloučeniny, pojmenované v názvu pří kladu 7, se rozpustí v 5 ml 1,3— dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2-(lH)-pyrimidinonu (Aldrich). K míchanému, studenému roztoku o teplotě -10 °C se přidá 0,43 ml (4,6 mmol) fosforylchloridu. Po 3 minutách se k reakční směsi přidá 20 ml studené vody a výsledný roztok se neutralizuje 3-molámím roztokem hydroxidu amonného. Iontoměničovou chromatografií, popsanou v příkladě 7, se dostane nukleotid ve formě diamonné soli. Po odpaření vody se získá bílý prášek ve výtěžku 95 % teorie (hodnoceno podle UV absorbance).

Anylýza vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií, provedenou jako v příkladě 7, ukazuje jeden pík.

UV: (0,1 M HCI): 254,297, (pH 7, fosfátový pufr): 259,284, (0,1 M NaOH): 259,284 nm.

Poměr báze k fosfátu odpovídá 1,0:1,3, podle stanovení metodou, kterou popsal B. Ames (Methods in Enzymology 8,115 /1966/).

[a]²⁰D -69,9°, [a]²⁰578 -73,0°, [a]²⁰ ₅4₆ -84,0° (c = 0,52, směs methanolu a vody v poměru 4:1).

Příklad 9

Způsob výroby O-monofosfátu (+)-cis—4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2cyklopenten-1 -methanolu

Eluováním sloupce Sephadexu DEAE, popsaného v příkladě 7, po inkubaci 5’-nukleotidázou, s 2 litry hydrogenuhličitanu amonného o gradientově koncentraci 50 až 300 mM se dostanou frakce, obsahující nukleotid, které po odpaření vody skýtají sloučeninu, pojmenovanou v nadpise ve formě své diamonné soli. Látku tvoří bílý prášek. Výtěžek činí 56 % teorie, vztaženo na sloučeninu, uvedenou v nadpise příkladu 5.

Analýza vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií, provedenou jako v příkladě 7, ukazuje jeden pík.

UV: (0,1 M HCI): 254,297, (pH 7, fosfátový pufr): 259,284, (0,1 M NaOH): 259,284 nm.

Poměr báze k fosfátu činí 1,0:0,98.

[a]²°o +62,0°, [a]²°578 +65,2°, [a]²⁰ ₅4₆ +75,0° (c = 0,54, směs methanolu a vody v poměru 4:1).

Přiklad 10

Způsob výroby (+)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lmethanolu 0,67 mmol sloučeniny, pojmenované v nadpise příkladu 9, se rozpustí ve 20 ml vody

- 18CZ 283481 B6 a přidá 3000 mezinárodních jednotek alkalické fosfatázy (EC 3.1.3.1) z telecích střev (Boehringer Mannheim). Roztok se inkubuje za teploty 37 °C po dobu 19 hodin, kdy se provede analýza vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii, jak je popsáno v příkladě 7. Ukáže se, že veškerý nukleotid byl defosforylován. Roztok se odpaří dosucha a výsledný pevný odparek se extrahuje 100 ml ethanolu za varu pod zpětným chladičem. Materiál, rozpustný v ethanolu, se adsorbuje na silikagelu a vnese na sloupec silikagelu. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje směsí methanolu s chloroformem v poměru 1:9. Odpařením roztoku v acetonitrilu a ethanolu se dostane bílá pevná pěna o hmotnosti 164 mg. Výtěžek činí 79 % teorie.

'H NMR spektrum v [CH₃]₂SO-d₆ a hmotové spektrum jsou identické s údaji pro racemát (sloučeninu, pojmenovanou v nadpise příkladu 5).

[a]²⁰D +58,7°, [a]²⁰436 +126,2°, [a]²⁰ ₃₆₅ +217,5° (c = 0,10, methanol).

Analýza pro Ci4H|₈N₆0.0,60H₂0.0,15-C₂H₅OH: vypočteno: 56,49 % C, 6,66 % H, 27,64 % N, nalezeno: 56,60 % C, 6,63 % H, 27,55 % N.

Příklad 11

Způsob výroby (-)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylmethylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-1 -methanolu

2,00 g (6,50 mmol) sloučeniny, pojmenované v nadpise příkladu 6, se rozpustí v 20 ml 1,3— dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2(lH)-pyrimidinonu (Aldrich).

2,28 ml (24,0 mmol) fosforylchloridu se přidá k míchanému studeném roztoku o teplotě -10 °C a po 3 minutách se přidá 80 ml studené vody. Roztok se třikrát extrahuje vždy 80 ml chloroformu. Vodná vrstva se zředí 400 ml ethanolu a hodnota pH se upraví na 6 nasyceným vodným roztokem hydroxidu sodného. Vysrážená anorganická sůl se odfiltruje. Filtrát se dále zředí ethanolem na objem 1 litru a hodnota pH se upraví na 8 přidaným hydroxidem sodným. Výsledná sraženina se odfiltruje a vysuší. Dostane se 4,0 mmol O-monofosfátu (±)-cis-4-[2amino-6—(cyklopropylmethylamino)-9H—purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu ve formě bílého prášku. Výtěžek činí 62 % (stanoveno na základě UV absorbance).

Analýza vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii podle příkladu 7 ukazuje jeden pík.

Získaný racemický O-monofosfát se rozpustí ve 200 ml vody a přidá se 5000 mezinárodních jednotek hadího jedu 5’-nukleotidázy (EC 3.1.3.5) zCrotalus atrox (Sigma). Po desetidenní inkubaci za teploty 37 °C ukazuje analýza vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii, jak je popsána v příkladu 7, že 50 % výchozího nukleotidu bylo defosforylováno na nukleosid. Ten se oddělí na sloupci 5 x 14 cm DEAE Sephadexu A25 (Pharmacia), který byl předem ekvilibrován s 50 mM hydrogenuhličitanu amonného. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje 2 litry 50 mmolámího hydrogenuhličitanu amonného. Odpařením vody se dostane bílý prášek, který se rozpustí v methanolu, adsorbuje na silikagelu a vnese na sloupec silikagelu. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje směsí methanolu a chloroformu v poměru 1:9 jako bezbarvá látka sklovitého charakteru. Odpařením acetonitrilového roztoku se dostane bílá pevná látka charakteru pěny, která se vysuší nad oxidem fosforečným za tlaku 40 Pa. Její hmotnost činí 649 mg, což odpovídá 72 %, vztaženo na racemát.

H NMR spektrum v [CH₃]2SO-d₆ a hmotové spektrum jsou identické s údaji pro racemát (sloučeninu, pojmenovanou v nadpise příkladu 6).

- 19CZ 283481 B6 [a]²⁰D -48,0°, [α]²⁰436 -27,1°, [α]²⁰ ₃₆₅ -149° (c = 0,14, methanol).

Analýza pro C₁5H2oN₆0.0,10CH₃CN:

vypočteno: 59,96 % C, 6,72 % H, 28,06 % N, nalezeno: 59,93 % C, 6,76 % H, 28,03 % N.

Pokračujícím eluováním sloupce Sephadexu 2 litry 100 mM hydrogenuhličitanu amonného a potom 2 litry 200 mM hydrogenuhličitanu amonného se dostane O-monofosfát (+) enantioemí sloučeniny, pojmenované v nadpise, který je stabilní k 5’-nukleotidáze.

Příklad 12

Způsob výroby (+)-cis—4-[2-amino-6-(cyklopropylmethylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu

Frakce, obsahující O-monofosfát (+) enantiomerů, eluované ze sloupce Sephadexu v příkladě 11, se spojí a přidá se alkalická fosfatáza (EC 3.1.3.1) z telecích střev (4800 mezinárodních jednotek. Boehringer Mannheim). Roztok se inkubuje za teploty 25 °C po dobu 18 hodin, kdy analýza vysokoúčinnou kapalinovou chromatografíí ukáže, že veškerý nukleotid je defosforylován. Roztok se odpaří dosucha a výsledný pevný odparek se vaří pod zpětným chladičem se 100 ml ethanolu. Materiál, rozpustný v ethanolu, se adsorbuje na silikagelu a použije na sloupec silikagelu. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje směsí methanolu a chloroformu v poměru 1:9, jako bezbarvá látka sklovitého charakteru. Odpařením acetonitrilového roztoku se dostane bílá pevná látka chaakteru pěny, která se vysuší nad oxidem fosforečným za tlaku 40 Pa. Získá se 659 mg sloučeniny, což odpovídá 73 %, vztaženo na racemát, *H NMR spektrum a hmotové spektrum jsou identické s údaji pro racemát (sloučeninu, pojmenovanou v nadpise příkladu 6). Uvedené spektrální stanovení se provádí v [CE^SO-dé.

[a]²⁰D +47,0°, [a]²⁰436 +93,0°, [α]²°3₆₅ +141,3° (c - 0,11, methanol).

Analýza pro Ci₅H2oN₆0.0,1CH₃CN:

vypočteno: 59,95 % C, 6,72 % H, 28,06 % N, nalezeno: 59,92 % C, 6,80 % H, 27,96 % N.

Příklad 13

Způsob výroby (+)-cis-N-[4-chlor-5-formamido-6-[/4-(hydroxymethyl)-2-cyklopenten-lyl/amino]-2-pyrimidinyl]acetamidu

N-(5-Amino-4,6-dichlorpyrimidin-2-yl)acetamid (J. Org. Chem. 40, 3141 /1975/) se formyluje působením 20 ml 96% kyseliny mravenčí a získá se roztok 0,75 g (3,4 mmol) formylačního produktu, který se rozpustí ve 20 ml anhydridu kyseliny octové. Výsledný roztok se míchá za teploty 25 °C po dobu jedné hodiny a potom se odpaří. Dostane se 0,77 g N-(4,6-dichlor-5formamido-2-pyrimidinyl)acetamidu, který tvoří hnědě zbarvený prášek. Struktura sloučeniny je potvrzena 1 H NMR spektrem a hmotovým spektrem. Výtěžek činí 91 % teorie.

-20CZ 283481 B6

840 mg (3,37 mmol) získaného hnědého prášku, 940 mg (8,2 mmol) (±}-cis-4-amino-2cyklopenten-1-methanolu a 0,80 g (8,0 mmol) triethylaminu se zahřívá v 50 ml ethanolu na olejové lázní o teplotě 70 až 80 °C pod dusíkovou atmosférou po dobu 50 minut a poté se odpaří na tmavý olej, který se chromatografuje na silikagelu. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se 5 eluuje směsí 5 % methanolu s chloroformem. Dostane se 840 mg broskvově zbarvené pevné pěny. Krystalizací z methanolu se dostanou granule o hmotnosti 575 mg, které mají teplotu tání 189 až 193 °C. Výtěžek činí 52 % teorie.

*H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) δ: 10,23 (široký signál, 1,0, NHAc), 9,3 (široký signál, 1,0, ío NHCHO), 8,15a 7,90 (oba singlety, celkově 1,0, HC=0 ze dvou konformerů, píky za teploty 60 °C splývají), 7,42 a 7,22 (oba dublety, J = 8,3 Hz, celkově 1,0, CH-NH ze dvou konformerů, píky za teploty 60 °C splývají), 5,9 a 5,7 (obamultiplety, 2,0,CH=CH), 5,05 (m, 1,CH-N), 4,73 (m, 1,OH), 3,39(m,2, CH2OH), 2,72 (m, l,CH),2,40(m, 1,1/2 CH₂), 1,36 (m, 1, l/2CH₂)ppm.

Analýza pro C₁₃Hi₆N5O₃C1: % vypočteno: 47,93 % C, 4,95 % H, 21,50 % N, 10,88 %C1, nalezeno: 47,99 % C, 4,96 % H, 21,42 % N, 10,96 % Cl.

Příklad 14

Způsob výroby (±)-cis-4—[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lmethanolu

0,91 g (2,79 mmol) sloučeniny, pojmenované v nadpise příkladu 13, se rozpustí vl ml absolutního dimethylformamidu. Poté se k roztoku přidá 10 ml triethylortoformiátu a 0,29 ml (3,4 mmol) kyseliny ethansulfonové a roztok se zahřívá na teplotu 65 °C po dobu 24 hodin. Roztok se potom odpaří na sirup. Získaný sirup se rozpustí v 15 ml 1-normální kyseliny chlorovodíkové a míchá po dobu 3 hodin, hodnota pH se upraví na 7 pomocí 5-normálního roztoku hydroxidu sodného a výsledná směs (vzniklý olej) se třikrát extrahuje vždy 100 ml směsi isopropanolu s chloroformem v poměru 1:3. Spojené organické vrstvy se vysuší síranem horečnatým a odpaří na 0,93 g červené látky charakteru skla. Tato látka se převede pomocí 20 ml methanolu na roztok, který se zahřívá se 2 ml cyklopropylaminu v Parrově tlakové nádobě na teplotu 70 °C po dobu 18 hodin. Výsledný roztok se odpaří na tmavou látku charakteru skla, která se adsorbuje na silikagelu. Eluováním 7 % methanolem v ethylacetátu se dostane 148 mg sloučeniny, pojmenované v nadpise, kterou tvoří bílý prášek, po trituraci s acetonitrilem. Výtěžek činí 19 % teorie.

*H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) je identické se spektrem sloučeniny, pojmenované v nadpise 40 příkladu 5.

Příklad 15

Způsob výroby (+)-(lR,4S)-cis-N-[4-chlor-5-formamido~6-//4-(hydroxymethyl)-2-cyklopenten-l-yl/amino/-2-pyrimidinyl]acetamidu

2,76 g (9,02 mmol) (lS,4R)-4-amimo-2-cyklopenten-l-methytesteru kyseliny dibenzoyl-Dvinné se rozpustí ve 20 ml vody a vnese na sloupec 65 ml aniontoměničové pryskyřice Amberlite 50 IA-400 (OH' forma). Sloupec se promyje vodou. Bázické frakce se spojí a odpaří na výsledný olej. Tento zbytek se vysuší odpařením absolutního ethanolu a potom za tlaku 67 Pa poskytne 1,2 g (lS,4R)-4-amino-2-cyklopenten-l-methanolu, tvořeného světle žlutým olejem (rychle tmavne na vzduchu), který se bezprostředně použije. Tento olej se rozpustí v 5 ml ethanolu

-21 CZ 283481 B6 a přidá k roztoku 2,07 g (8,31 mmol) N-(4,6-dichlor-5-formamido-2-pyrimidinyl)acetamidu, vyrobeného, jak je popsáno v příkladě 13, a 2,50 g (24,8 mmol) triethylaminu. Výsledný tmavý roztok se zahřívá na olejové lázni o teplotě 75 až 80 °C pod dusíkovou atmosférou po dobu 50 minut. Roztok se odpaří na sirup, který se vnese na sloupec silikagelu. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje 3 až 5 % methanolem v chloroformu jako světle žlutá pevná pěna o hmotnosti 1,59 g. Výtěžek činí 54 % teorie.

H NMR spektrum je identické se spektrem krystalického vzorku. Takový vzorek se krystaluje z ethanolu a poskytne bílé granule, které mají teplotu tání 194 až 195 °C.

H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d6) je identické se spektrem sloučeniny, uvedené v příkladu 13.

[a]²⁰D +2,7°, [a]²⁰578 +3,6°, [a]²⁰546 +2,9° , [a]²⁰436 -2,5° (c = 0,238, methanol).

Příklad 16

Způsob výroby (-)-(1 S,4R)-cis-/2-amino-6-chlor-9H-purin-9-yl/—2-cyklopenten—1methanolu

1,15 g (3,53 mmol) sloučeniny, pojmenované v nadpise příkladu 15, se opatrně vaří pod zpětným chladičem ve 45 ml diethoxymethylacetátu pod dusíkovou atmosférou po dobu 3,5 hodiny. Výsledný světle žlutý roztok se odpaří za tlaku 67 Pa na žlutý sirup. Tento sirup se míchá s 50 ml 1-normální kyseliny chlorovodíkové po dobu 1,0 hodiny. Získaný roztok se neutralizuje hydrogenuhličitanem sodným a odpaří dosucha. Pevný zbytek se extrahuje methanolem a materiál, rozpuštěný v methanolu, se vnese na sloupec silikagelu. Eluováním sloupce 10% methanolem v ethylacetátu se dostane 730 mg sloučeniny, pojmenované v nadpise tohoto příkladu, kterou tvoří světle žlutá pevná pěna. Výtěžek činí 78 % teorie.

*H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) je identické s racemátem (sloučeninou, pojmenovanou v nadpise příkladu 4).

[a]²⁰ _D -114,9° (c = 0,26, methanol).

Příklad 17

Způsob výroby (-)-(1 S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-1 -methanolu

560 mg (2,11 mmol) sloučeniny, pojmenované v nadpisu příkladu 16, ve 12 ml methanolu se zahřívá s 2,4 ml cyklopropyl aminu v Parrově tlakové nádobě za teploty 78 °C po dobu 17 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se chromatografuje na silikagelu. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje 5 až 7 % methanolem v ethylacetátu. Jako bezbarvá pevná pěna se získá 367 mg sloučeniny. Výtěžek činí 59 % teorie.

’H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) je identické se spektrem, které je uvedeno v příkladě 7.

[a]²°o -59,0° (c - 0,28, methanol) potvrzuje absolutní konfiguraci sloučeniny, pojmenované v nadpise příkladu 7.

-22CZ 283481 B6

Příklad 18

Způsob výroby [cis—4-[2-amino-6-(cyklopropy lamino)—9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten— 1yl]methyl-[R-2,3-bis(hexadekanoyloxy)propylhydrogenfosfátu]

Roztok 150 mg (0,2 mmol) L-a-dipalmitoylfosfatidylcholinu (Sigma) v 6 ml chloroformu se přidá do baňky, která obsahuje 300 ml (±)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino}-9H-purin9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu (1,03 mmol), fosfolipázu D, typ VII (ze Streptomyces, 1,0 mg, specifická aktivita 185 jednotek na mg, Sigma) apufr o hodnotě pH 4,5 (1,5 ml, 250 mmol chloridu vápenatého, 200 mM octanu sodného, upraveno na hodnotu pH 4,5 přídavkem 1-normální kyseliny chlorovodíkové). Výsledná dvojfázová soustava se míchá za teploty 45 °C (na olejové lázni) po dobu jedné hodiny. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se třikrát extrahuje vždy 6 ml chloroformu. Spojené organické vrstvy se promyjí 1-normální kyselinou chlorovodíkovou, vysuší a odpaří. Vzorek se čistí eluováním na 2 sloupcích silikagelu 12 % methanolem v chloroformu. Získá se 120 mg sloučeniny, pojmenované v nadpise, což odpovídá výtěžku 47 % teorie. Tento materiál ztuhne působením směsi ethylacetátu s acetonitrilem na světle žlutý prášek, který má teplotu tání 155 až 157 °C.

'HNMR spektrum (CD₃CD-CDC1₃) δ: 7,78 (s, překrývající se rozpouštědlo, purin H-8), 6,12 a 5,88 (m, 2, HC=CH), 5,53 (m, ů, CHN cyklopenten), 5,22 (m, 1, CO₂CH), 4,37 (dd, J - 3,12 Hz, 1, 0,5 POCFL glycerol), 4,12 (m, 1, 0,5 POCIt glycerol), 3,42 (m, 4, OCH₂ glycerol, OCH₂), 3,11 (široký multiplet, 1, CH), 2,90 (m, 1 NCH), 2,78 (m, 1, 0,5 CH₂ cyklopenten), 2,27 (m, 4, 2CH₂CO₂), 1,70 (m, 1, 0,5 CH₂ cyklopenten), 1,56 (široký multiplet, 4, 2CH?CH₃CO>~). 1,27 (široký multiplet, 38,24 CH₂), 0,88 (m, 6. 2CH₃), 0,83 (m, 2, CH₂ cyklopropyl), 0,60 (m, 2, CH₂ cyklopropyl) ppm.

Analýza pro C49H₈5N₆O8P.2,4H₂O: vypočteno: 61,28 % C, 9,42 % H, 8,75 % N, 3,22 % P, nalezeno: 60á,97 % C, 9,12 % H, 8,78 % N, 2,96 % P.

Příklad 19

Způsob výroby [cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lyl]methyl-[R-2.3-bis(hexanoyloxy)propylhydrogenfosfátu]

Roztok 300 mg (0,66 mmol) L-a-dikaproylfosfatidylcholinu (Sigma) v 15 ml chloroformu se vnese do baňky, která obsahuje 378 mg (1,32 mmol) (±)-cis—4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu, 1,04 mg fosfolipázy D, typ VII, (ze Streptomyces, specifická aktivita 185 jednotek na mg, Sigma), pufr o hodnotě pH 4,5 (4,5 ml, 250 mM chloridu vápenatého, 200 mM octanu sodného, upraveno na hodnotu pH 4,5 pomocí kyseliny chlorovodíkové) a 3 ml chloroformu. Výsledná dvojfázová soustava se míchá za teploty 45 °C (na olejové lázni) po dobu 4 hodin. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se dvakrát promyje vždy 4 ml 1-normální kyseliny chlorovodíkové. Spojené vodné vrstvy se promyjí 10 ml chloroformu a poté se vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Odparek se vnese na sloupec silikagelu s sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje 16% methanolem v chloroformu a poté odpaří. Dostane se jemný žlutý prášek. Tato látka se rozpustí v ethanolu a třikrát koncentruje (50 ml), předtím než se vysuší za vysokého vakua. Získá se 103 mg světle žlutého prášku, který má teplotu tání 182 až 185 °C. Výtěžek činí 21 % teorie.

‘HNMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) δ: 7,61 (s, 1, purin H-8), 7,22 (široký singlet, l,NH),6,09 (m, 1, 0,5 CH=CH), 5,89 (m, překrývající se široký singlet při 5,83, 3, 0,5 CH=CH, NH₂), 5,41 (široký multiplet, 1, CHN), 5,09 (široký multiplet, 1, CO₂CH), 4,30 (dd, J = 2,7 Hz, 12; 1, 0,5 POCH? glycerol), 4,08 (m, 1, 0,5 POCH-> glycerol), 3,80 (široký multiplet překrývající široký multiplet při

-23 CZ 283481 B6

3,75, 4, OCH₂ glycerol, OCH₂), 3,02 (široký multiplet, 2, CH,NCH cyklopropyl), 2,65 (m, 1, 0,5 CH₂ cyklopenten), 2,23 (+, J = = 7,5 Hz, 4,2 CH₂CO₂), 1,48 (široký multiplet, 5,2 CH2CH2CO2, 0,5 CH₂ cyklopenten), 1,23 (široký multiplet, 8,2 (CH₂)2), 0,84 (m, 6,2 CH₃), 0,67 a 0,58 (m, 4,2 CH₂ cyklopropyl) ppm.

Analýza pro C2₉H45N₆O₈P.3,9H₂O.0,2CHC13.0,05C2H₅OH: vypočteno: 48,00 % C, 7,33 % Η, 11,46 % N, 2,9 % Cl nalezeno: 48,65 % C, 6,61 % Η, 10,81 % N, 2,5 % Cl

Svrchu uvedený příklad uvádí upravený postup, který popsal Satoshi Shuto a kol. v Tetrahedron Letters, sv. 28, č. 2, str. 199 až 202/1987/.

Příklad 20

Způsob výroby N-[4-chIor-l,6-dihydro-5-nitro-6-oxo-2-pyrimidinyl]isobutyramidu

6-Chlor-5-nitroisocytosin (J. Chem. Soc. 5041 /1960/, J. Org. Chem. 40, 3141 /1975/) se chrání, a to zahříváním 14,88 g (78,09 mmol) žluté pevné látky na teplotu 100 °C po dobu jedné hodiny ve 250 ml anhydridu kyseliny isomáselné a 3 nebo 4 kapkách koncentrované kyseliny sírové. Výsledný roztok se uvede do styku se 100 ml bezvodého methanolu, míchá za teploty 50 °C po dobu 30 minut, odpaří na třetinu původního objemu a sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se odfiltruje jako krystalická světle žlutá pevná látka o hmotnosti 14,97 g, která má teplotu tání 196 až 199 °C (za rozkladu). Výtěžek činí 74 % teorie.

'H NMR spektrum ([CHjhSO-de) 5: 1,12 (d, J = 6,9 Hz, 6H, (CP^zCH), 2,75 (m, J = 6,9 Hz, 1H, (CH₃)₂CH), 12,41 (širokýsinglet, lH)ppm.

Analýza pro CgHgN^Ci:

vypočteno: 36,87%C,3,48%H,21,50%N, 13,60%Cl, nalezeno: 36,94%C,3,48%H,21,44%N, 13,53%C1.

Příklad 21

Způsob výroby N-(4,6-dichlor-5-nitro-2-pyrimidinyl)isobutyramidu

10,0 g (38,37 mmol) sloučeniny, pojmenované v nadpise příkladu 20, se vaří pod zpětným chladičem ve 200 ml oxychloridu fosforečného a 3 nebo 4 kapkách Ν,Ν-diethylanilinu po dobu 5 hodin pod dusíkovou atmosférou. Roztok se potom ochladí na teplotu místnosti, odpaří dosucha a sirup se rozpustí ve 200 ml studeného methylenchloridu o teplotě asi -10 °C. Na organickou vrstvu se za intenzivního míchání působí 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Teplota se udržuje pod 5 °C, přičemž se po částech přidává pevný hydrogenuhličitan sodný ke zvýšení hodnoty pH na rozmezí od 5 do 7. Vrstvy se oddělí a vodná fáze se extrahuje methylenchloridem. Spojené organické vrstvy se filtrují přes papír k separaci fází, odpaří a vysuší za sníženého tlaku. Dostane se 7,71 g sloučeniny, pojmenované v nadpise, jako žluto bílé pevné látky, která je dostatečně čistá pro použití v následujícím stupni. Výtěžek činí 72 % teorie. Rekrystalizací pevné látky ze směsi hexanu s methylenchloridem se dostane analyticky čistý vzorek, který má teplotu tání 166 až 169 °C.

'H NMR spektrum ((CH₃]2SO-d₆) δ: 1,09 (d, J = 6,9 Hz, 6H, (CHjjjCH), 2,79 (m, J = 6,9 Hz, 1H, (CHjhCH), 11,61 (s, 1H) ppm.

-24CZ 283481 B6

Analýza pro CgHgN4O₃Cl₂:

vypočteno:	34,43 % C, 2,89 % H, 20,08 % N, 25,41 % Cl,
nalezeno:	34,53 % C, 2,89 % H, 20,02 % N, 25,40 % Cl.

Příklad 22

Způsob výroby N-(4,6-dichlor-5-formamido-2-pyrinidinyl)isobutyramidu

6,77 g (24,26 mmol) sloučeniny, pojmenované v nadpise příkladu 21, se umístí do Patrový tlakové nádoby, obsahující 220 ml absolutního ethanolu a 10,0 g (vlhkého) Raneyova niklu jako katalyzátoru, který se předem protřepával s vodíkem za tlaku 275 kPa po dobu 10 minut. Směs se třepe po dobu jedné hodiny s vodíkem za tlaku 275 kPa, filtruje přes vrstvu křemeliny (Celíte ochranná známka) a filtrát se odpaří na žluto bílou pevnou látku, která se přes noc vysuší za sníženého tlaku. Tato pevná látka se míchá s 250 ml 1,2-dichlorethanu za teploty 0 °C. Poté se přidá 30 ml anhydridu kyseliny octové a nato se pod dusíkovou atmosférou přikape 30 ml kyseliny mravenčí. Výsledná směs se míchá za teploty místnosti po dobu 2 hodin, odpaří na polovinu původního objemu a podrobí azeotropické destilaci s toluenem k odstranění zbývající kyseliny mravenčí a kyseliny octové. Surová pevná látka se trituruje s methanolem. Dostane se 4,92 g sloučeniny, pojmenované v nadpise, kterou tvoří bělavá pevná látka o teplotě tání 206 až 209 °C (za rozkladu). Výtěžek činí 73 % teorie.

'H NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) δ: 1,08 (d, J = 6,8 Hz, 6,0 (CH₃)₂CH), 2,74 (m, J = 6,8 Hz, 1,0 (CH₃)₂CH), 8,18 (d, J = 10,3 Hz) a 10,26 (široký singlet) [celkově 1,0, NHCHO pro dva konformery], 11,17 (široký singlet, 1,0) ppm.

Analýza pro C₉H|₀N4O₂Cl₂: vypočteno: 39,01 % C, 3,64 %H, 20,22 %N, 25,59% Cl, nalezeno: 39,13 % C, 3,68 % H, 20,12 % N, 25,67 % Cl.

Příklad 23

Způsob výroby (+)-(1 R,4S)-cis-N-[4-chlor-5-formamido-6-//4-(hydroxymethyl)-2-cyklopenten-l-yl/amino/-2-pyrimidinyl]isobutyramidu

2.44 g (8,15 mmol) (lS,4R)-4-amino-2-cyklopenten-l-methylesteru kyseliny dibenzoyl-Dvinné se rozpustí ve 20 ml 90 % ethanolu a roztok se vnese na sloupec pryskyřice Amberlite IRA-400 (OH‘ forma) o objemu 30 ml, který se předem promyl stejným rozpouětědlem. Eluováním 90 % ethanolem se dostanou bázické frakce, které po zahuštění a odpaření části toluenu s ethanolem poskytnou 1,4 g (1S,4R)—4-amino-2-cyklopenten-l-methanolu ve formě světle žlutého oleje, který kondenzuje s 2,26 g (8,15 mmol) N-(4,6-dichlor-5-formamido-2pyrimidinyl)isobutyramidu, vyrobeného jak je popsáno v příkladě 22, ve 100 ml 1,2dimethoxyethanu a 2,3 ml (16,3 mmol) triethylaminu za teploty 95 až 110°C po dobu 1,5 hodiny. Výsledný roztok se odpaří na tmavě žlutou sirupovitou látku, která se chromatografuje na silikagelu. Eluováním sloupce silikagelu 5 až 7,5 % methanolem v chloroformu se dostane

2.45 g sloučeniny, pojmenované v nadpise, kterou tvoří světle žlutá pevná látka. Výtěžek činí 84 % teorie. Krystalizací vzorku této sloučeniny z acetonitrilu se dostane sloučenina, pojmenovaná v nadpise, ve formějemných bílých krystalů, které mají teplotu tání 194,5 až 195,5 °C.

^lH NMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) δ: 10,21 (s, 1, NHCOCH(CH₃)₂), 9,29 (s, 1, NHCHO), 8,12(s, 1, CHO), 7,18 (d, J = 7,9 Hz, 1, CHNH), 5,8 a 5,7 (oba m, 2, CH=CH), 5,08 (m, 1, CHN), 4,71

-25CZ 283481 B6 (t, J = 5,06 Hz, 1, OH), 3,37 (m, 2, CF^OH), 2,9 - 2,6 (m, 2, CHfCHjh a CH), 2,40 (m, 1,0,5 CH₂), 1,33 (m, 1,0,5 CH₂)-ppm.

[a]²°D +4,4°, [a]²⁰365 -20,7°(c = 0,237, methanol).

Analýza pro CLH^NsClCb:

vypočteno:	50,92 % C, 5,70 % H, 19,79 % N, 10,02 % Cl,
nalezeno:	50,67 % C, 5,78 % H, 19,62 % N, 9,92 % Cl.

Příklad 24

Způsob výroby (-)-(1 R,4S)-cis-N-[6-(cyklopropylamino)-9-/(4-Hydroxymethyl)-2-cyklopenten-l-yl/-9H-purin-2-yl]isobutyramidu

1,949 g (5,44 mmol) (+)-(1 R,4S)-cis-N-[4-chlor-5-formamido-6-//4-(hydroxymethyl>-2cyklopenten-l-yl/amino/-2-pyrimidinyl]isobutyramidu, vyrobeného, jak je popsáno v příkladě 23, se míchá na ledové lázni s 30 ml triethylortoformiátu, přičemž během 2 minut se přikapou 2,0 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Výsledný čirý roztok se míchá za teploty místnosti přes noc. Těkavé složky se odpaří za sníženého tlaku a výsledná sirupovitá látka, která obsahuje konjugát ortoesteru s (lR,4S)-cis-N-[6-chlor-9-/(4-Hydroxymethyl)-2-cyklopentenl-yl/-9H-purin-2-yl]isobutyramidem, se vaří pod zpětným chladičem v 30 ml ethanolu s lOg cyklopropylaminu po dobu 2,5 hodiny. Odpařením se dostane sirupovitá látka, která se rozpustí v 200 ml 10% isopropanolu v chloroformu. Tento roztok se intenzivně promíchá s 25 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se oddělí a vodná vrstva se promyje další směsí 10% isopropanolu v chloroformu. Spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým. Odpařením se dostane 2,4 g světle žluté látky sklovitého charakteru, která se chromatografuje na silikagelu. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje 2 až 3 % methanolem v ethylacetátu a dostane se 1,02 g bílé pevné látky. Výtěžek činí 53% teorie. Rekrystalizací vzorku této sloučeniny ze směsi methanolu a acetonitrilu se dostane sloučenina, označená v nadpise, ve formějehliček, které mají teplotu tání 197,5 až 198,5 °C.

'HNMR spektrum ([CH₃]₂SO-d₆) δ: 9,75 (s, 1,NHCO), 7,93 (s, 1, purin H-8), 7,82 (široký singlet, 1, NH-cyklopropyl), 6,12 a 5,92 (oba m, 2, CH=CH), 5,50 (m, 1, CH-N), 4,73 (t, J = 5,3 Hz, 1, OH),

3,46 (m, 2, CH₂-O), 3,25 - 3,00 (m, 2, CH(CH₃)₂ aCH), 2,91 (m, 1, CH), 2,75-2,6 (m, 1, 0,5 CH₂), 1,7 - 1,6 (m, 1, 0,5 CH₂), 1,07 (d, J = 6,8 Hz, 6, CH(CHO2), 0,75 - 0,6 (m, 4, 2 cyklopropyl, CH₂) ppm.

[a]²⁰ _D -70,7°, [a]²⁰436 -159,0°(c = 1,02, methanol).

Analýza pro C1₈H₂4N₆O₂:

vypočteno: 60,66 % C, 6,79 % H, 23,58 %N, nalezeno: 60,62 %C, 6,83 %H, 23,51 %N.

Pokračujícím eluováním sloupce silikagelu 5 % methanolem v ethylacetátu se dostane další podíl sloučeniny, pojmenované v nadpise, která je znečistěná přibližně 10 % (-)-(lS,4R)-cis-4—[2amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu. Získaná látka o hmotnosti 928 mg má charakter světle žluté pevné pěny.

-26CZ 283481 B6

Příklad 25

Způsob výroby (-)-(1 S,4R)-cis-4~[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-1 -methano lu

1,33 g (3,73 mmol) (-)-(1 R,4S)-cis-N-[6-(cyklopropylamino)-9-/4-(hydroxymethyl)-2-cyklopenten-l-yl/-9H-purin-2-yllisobutyramidu, vyrobeného, jak je popsáno v příkladě 24, se míchá ve 40 ml 1-normální kyseliny chlorovodíkové za teploty místnosti po dobu 2 dnů. Poté se hodnota pH upraví na 7,0 přídavkem hydroxidu sodného a směs se odpaří dosucha. Pevný odparek se třikrát trituruje vždy 25 ml horkého ethanolu. Odpařením ethanolu se dojde k žluté látce charakteru skla, která se chromatografuje na silikagelu. Sloučenina, pojmenovaná v nadpise, se eluuje 3 % methanolem v ethylacetátu jako bezbarvá pevná pěna o hmotnosti 857 mg. Výtěžek činí 80 % teorie.

’H NMR spektrum a optická otáčivost [a]²⁰ _D jsou identické s hodnotami, které má sloučenina, popsaná v příkladě 17.

Příklad 26

Způsob výroby hydrochloridu (-)-(1 S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu

1,90 g (asi 6,3 mmol podle ’H NMR spektra) (-)-(1 S,4R)-cis—4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu se rozpustí v 7,0 ml 1-normální kyseliny chlorovodíkové a ethanolu. Roztok se odpaří dosucha a odparek se rozpustí v 15 ml ethanolu. K. vzniklému roztoku se pomalu přidává ethylacetát, až se dosáhne celkového objemu 80 ml. Vzniklá bělavá pevná látka se odfiltruje a vysuší za sníženého tlaku. Získá se 2,07 g sloučeniny, pojmenované v nadpise, která měkne za teploty 125 až 130 °C a rozkládá se za teploty vyšší než 138 °C. Výtěžek činí 97 % teorie.

[a]₅8₉ ²⁰ -27,1°, [a]₄₃6²⁽⁾ -52,3° (c = 0,199, methanol).

Analýza pro C14Hi_gN₆O.HC1.0,8H₂O:

vypočteno: 49,87 % C, 6,16 % H, 24,92 % N, 10,51 % Cl, nalezeno: 49,91 % C, 6,16 % H, 24,96 % N, 10,52 % Cl.

Příklad 27

Způsob výroby dihydrochloridu (-)-(1 S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin9-y l]-2-cyklopenten-1 -methanol u

857 mg (3,00 mmol) (-)-(1 S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2cyklopenten-l-methanolu se rozpustí ve směsi ethanolu a ethylacetátu a přidá se 12 ml 1normální etherické kyseliny chlorovodíkové. Vzniklá jemná bílá sraženina se promyje ethylacetátem a vysuší za sníženého tlaku. Získá se 642 mg sloučeniny, pojmenované v nadpise, která má teplotu tání 176 až 180 °C (za rozkladu). Výtěžek činí 75 % teorie.

Analýza pro Ci4H_lgN₆O.0,2HCl:

vypočteno: 46,81 % C, 5,61 % H, 23,39 % N, 19,74 % Cl, nalezeno: 46,82 % C, 5,64 % H, 23,33 % N, 19,67 % Cl.

-27CZ 283481 B6

Příklad 28

Způsob výroby O-difosfátu (lR,4S)-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2cyklopenten-1 -methanolu

O-monofosfát (+}-(1 R,4S)-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-1-methanolu, vyrobený jak je popsáno v příkladě 9, se převede na triethylamonnou sůl tím, že se protřepe s roztokem, který obsahuje 0,5 mmol monofosfátu ve formě amonné soli a 10 ml 0,5-molámího roztoku triethylamoniumhydrogenuhličitanu, poté vysuší za sníženého tlaku, dále se přidá dalších 10 ml 0,5-molámího roztoku triethylamoniumhydrogenuhličitanu a vše se opět vysuší. Poté se třikrát přidá vždy 10 ml acetonitrilu a provede vysušení za sníženého tlaku. Získaná látka se rozpustí v 10 ml l,3-dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2(lH)-pyrimidinonu (Aldrich), potom se přidá 0,43 g (2,6 mmol) Ι,Γ-karbonyldiimidazolu (Aldrich) a reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 2 hodin. K roztoku se přidá 0,18 ml (4,5 mmol) methanolu a v míchání se pokračuje 30 minut. Poté se přidá 1,2 g (2,6 mmol) tributylamoniumfosfátu (Sigma), reakční směs se míchá za teploty místnosti 18 hodin, přidá 1 g (2,2 mmol) tributylamoniumdifosfátu, v míchání se pokračuje během 8 hodin za teploty 40 °C a poté se přidá k reakční směsi 50 ml vody. Protože tributylamoniumdifosfát obsahuje jako nečistotu ortofosfát, vznikne jak O-difosfát, tak O-trifosfát.

Reakční produkty se dělí iontoměničovou chromatografií na DEAE Sephadexu A25 (Pharmacia), naplněném v koloně 2,5 x 18 cm, po předchozí ekvilibraci 50 mmol hydrogenuhličitanu amonného (ABC). Kolona se promyje 1 litrem 50-mmol ABC, potom 2 litry ABC s lineárním gradientem 50 až 800 mmol k eluování sloučeniny, pojmenované v nadpise, a poté trifosfátu, jak je podrobněji popsáno v příkladě 29. Frakce, obsahující difosfát, se spojí, vysuší za sníženého tlaku, opět rozpustí ve vodě a znovu vysuší. Získá se amonná sůl sloučeniny, pojmenované v nadpise, v množství 0,077 mmol. Výtěžek činí 15 % teorie.

UV: v 0,1-molámí kyselině chlorovodíkové: = 254 a 298 nm, při pH 7 = 259 a 284 nm, v 0,1-molámím roztoku hydroxidu sodného: = 259 a 284 mn.

Na alikvot difosfátu se působí alkalickou fosfatázou (ze střeva telete, Boehringer Mannheim), za různé časové období se odebírají vzorky a vyvolají se chromatografií na tenké vrstvě (PEIcelulóza. Brinkman, směs 1-molámího chloridu lithého a 1-molámí kyseliny mravenčí v poměru 1:1). Pozoruje se následná konverze difosfátu na monofosfát a nukleosid. Konečné množství fosfátu se stanoví metodou, kterou popsal Bencini (D. A. Bencini, J. R. Wild a G. A. 0'Donovan, Analytical Biochemistry 132. 254-258 /1983/). Přitom se zjistí, že poměr báze k fosfátu je 1,0:11,5, cožukazuje na přítomnost anorganického fosfátu. UV čistota je 99,8 %, na analytickém vzorku z vysoko účinné kapalinové chromatografíe (sloupec silné aniontoměničové pryskyřice, gradientově eluované 10-mmolámím až 1-molámím fosforečnanem amonným, hodnota pH 5,5).

Příklad 29

Způsob výroby O-trifosfátu (+)-(lR,4S)-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]2-cyklopenten-1 -methanolu

Pokračujícím eluováním sloupce, popsaného v příkladě 28, se po odpaření dostane amonná sůl sloučeniny, která je pojmenována v nadpise. Získaná sůl se převede na sůl sodnou tím, že se vede přes sloupec 20 ml pryskyřice Dowex AG 50W-XB (sodná forma, Bio-Rad). Frakce, obsahující nukleotid, se odpaří za sníženého tlaku a poskytnou 0,31 mmol sloučeniny. Výtěžek činí 61 % teorie.

-28CZ 283481 B6

UV: v 0,1-molámí kyselině chlorovodíkové: = 254 a 299 nm, při hodnotě pH 7 - 259 a 284 mn, v 0,1-molámím roztoku hydroxidu sodného: = 259 a 284 nm.

Optická otáčivost při koncentraci 3,83 g na 100 ml vody [ct]²⁰ činí +43,2° při vlnové délce 589 nm.

UV čistota je 99,1%, na analytickém vzorku z vysoko účinné kapalinové chromatografíe (sloupec silné aniontoměničové pryskyřice, graduentově eluované 10-mmolámím až 1molámím fosforačnanem amonným, hodnota pH 5,5) s 0,9 % difosfátu, který je přítomen.

Na alikvot trifosfátu se působí alkalickou fosfatázou (ze střeva telete, Boehringer Mannheim). Za různé časové období se odeberou vzorky a vyvolají se chromatografií na tenké vrstvě (PEIcelulóza. Birkman, směs 1-molámího chloridu líthného a 1-molámí kyseliny mravenčí v poměru 1:1). Pozoruje se následná konverze trifosfátu na difosfát, na monofosfát a na nukleotid. Konečné množství fosfátu se stanoví metodou, kterou popsal Bencini (D. A. Bencini, J. R. Wild aG. A. 0'Donovan, Analytical Biochemistry 132, 254-258 /1983/), a zjistí se poměr báze k fosfátu, který je 1,0:2,7.

Příklad 30

Způsob výroby O-difosfátu (lS,4R)-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2cyklopenten-1 -methanolu

O-Monofosfát (-)-(1 S,4R)-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-1-methanolu, vyrobeného, jak je popsáno v příkladě 8, se převede na triethylamonnou sůl za použití roztoku, obsahujícího 0,49 mmol monofosfátu ve formě amonné soli, společně s 5 ml 0,5-molámího roztoku triethylamoniumhydrogenuhličitanu, vysušením reakční směsi za sníženého tlaku, přidáním dalších 5 ml 0,5-molámího roztoku triethylamoniumhydrogenuhličitanu a dvojím opakováním tohoto postupu. Poté se třikrát přidá vždy 5 ml acetonitrilu a vše se vysuší za sníženého tlaku. Získaný produkt se rozpustí v 7 ml 1,3-dimethyl-3,4,5,6tetrahydro-2(lH)-pyrimidinonu (Aldrich), poté se přidá 0,39 g (2,4 mmol) 1,1’-karbonyldiimidazolu (Aldrich) a vše se míchá za teploty místnosti po dobu 30 minut. Poté se přidá 0,16 ml (4,0 mmol) methanolu a míchá po dobu 30 minut. K reakční směsi se přidá 2,4 mmol tributylamoniumdifosfátu (vyroben zpracováním difosforečnanu sodného na volnou kyselinu působením iontoměničové pryskyřice, potom neutralizací tributylaminem a vysušením), vše se míchá po dobu 18 hodin za teploty místnosti a poté se přidá 50 ml vody. Vznikne jak O-difosfát, tak O-trifosfát, protože tributylamoniumdifosfát obsahuje ortofosfát jako nečistotu.

Reakční produkty se dělí iontoměničovou chromatografií na DEAE Sephadexu A25 (Pharmacia), naplněném v koloně 2,5 x 18 cm, po předchozí ekvilibraci 50 mmol hydrogenuhličitanu amonného (ABC). Kolona se promyje 1 litrem 100-mmolámího ABC a potom 2 litry ABC s lineárním gradientem 100 až 800 mmol keluování sloučeniny, uvedené v nadpise, a potom trifosfátu, jak je podrobněji popsáno v příkladě 31. Frakce, obsahující difosfát, se spojí, vysuší za sníženého tlaku, opětovně rozpustí ve vodě a tento postup se dvakrát opakuje. Získá se 0,032 mmol amonné soli sloučeniny, pojmenované v nadpise.Výtěžek činí 6 % teorie.

UV: v 0,1-molámí kyselině chlorovodíkové:

Xmax = 254 a 298 nm, při hodnotě pH 7 = 259 a 284 nm, v 0,1-molámím roztoku hydroxidu sodného: = 258 a 284 nm.

-29CZ 283481 B6

Na alikvot difosfátu se působí alkalickou fosfatázou (ze střeva telete, Boehringer Mannheim). Za různé časové období se odeberou vzorky a vyvolají se chromatografii na tenké vrstvě (PEIcelulóza. Brinkman, 1-molámí chlorid lithný ve směsi s 1-molámí kyselinou mravenčí v poměru 1:1). Pozoruje se následná konverze difosfátu na monofosfát a na nukleotid. Konečné množství fosfátu se stanoví metodou, kterou popsal Bencini (D. A. Bencini, J. R. Wild a G. A. 0'Donovan, Analytical Biochemistry 132, 254-258 /1983/). Stanoví se poměr báze k fosfátu, odpovídající 1,0:4,7, cožukazuje na přítomnost anorganického fosfátu. UV čistota je 97% na analytickém vzorku z vysoko účinné kapalinové chromatografie (sloupec silné aniontoměničové pryskyřice, gradientově eluované 10-mmolámím až 1-molámím fosforečnanem amonným, hodnota pH 5,5).

Příklad 31

Způsob výroby O-trifosfátu (lS,4R)-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2cyklopenten-1 -methanolu

Pokračujícím eluováním sloupce, popsaného v příkladě 30, se po odpaření dostane amonná sůl sloučeniny, pojmenované v nadpise. Získaná sůl se převede na sůl sodnou tím, že se vede přes sloupec pryskyřice Dowex AG 50W-XB (Bio-Rad, sodná forma) o objemu 20 ml. Frakce, obsahující nukleotid, se odpaří za sníženého tlaku a poskytnou 0,4 mmol sloučeniny. Výtěžek činí 81 % teorie.

UV: v 0,1-molámí kyselině chlorovodíkové: = 254 a 299 nm, při hodnotě pH 7 = 259 a 284 nm, v 0,1-molámím roztoku hydroxidu sodného: λ™» - 259 a 284 nm.

Optická otáčivost při koncentraci 6,14 g na 100 ml vody [a]²⁰ činí -47,1° při vlnové délce 589 nm.

UV čistota je 99,5 % na analytickém vzorku z vysoko účinné kapalinové chromatografie (sloupec silné aniontoměničové pryskyřice, graduentově eluované 10-mmolámím až 1molámím fosforečnanem amonným, hodnota pH 5,5) s 0,5 % difosfátu, který je přítomen.

Na alikvot trifosfátu se působí alkalickou fosfatázou (ze střeva telete, Boehringer Mannheim). Za různá časová období se odeberou vzorky a vyvolají se chromatografii na tenké vrstvě (PEIcelulóza. Brinkman, 1-molámí chlorid lithný a 1-molámí kyselina mravenčí v poměru 1:1). Pozoruje se následná konverze trifosfátu na difosfát, na monofosfát a na nukleosid. Konečné množství uvolněného fosfátu se stanoví metodou, kterou popsal Bencini (D. A. Bencini, J. R. Wild a G. A. O'Donovan, Analytical Biochemistry 132) 254-258 /1983/). Stanoví se poměr báze k fosfátu, který odpovídá 1,0:2,8.

Příklad 32

Způsob výroby (1 S,4R)—4—[2-amino-6-(cyklopropylmethylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-1 -methano lu

274 mg (1,00 mmol) (lS,4R)-4-[2-amino-6-chlor-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanolu se zpracuje s0,71g (10 mmol) N-cyklopropyl-N-methylaminu a 6 ml absolutního ethanolu. Po obvyklém zpracování se odparek chromatografuje na silikagelu. Eluováním 10 % methanolem v chloroformu se dostane sloučenina, pojmenovaná v nadpise, kterou tvoří bezbarvá látka charakteru skla. Odpařením ethanolového roztoku a vysušením oxidem fosforečným za tlaku 27 Pa se získá sloučenina, uvedená v nadpisu, kterou tvoří bílá pevná pěna o hmotnosti

-30CZ 283481 B6

293 mg. Výtěžek činí 98 % teorie, Ih NMR spektrum a optická otáčivost [a]₅89²⁰ jsou identické s údaji pro sloučeninu, pojmenovanou v nadpise příkladu 11.

Příklad A

Prostředek ve formě tablet

Prostředky A, B a C se vyrábějí granulací za vlhka, které se podrobí dále uvedené složky s roztokem povidonu, poté se přidá stearát hořečnatý a hmota se slisuje.

Prostředek A	mg/tableta	mg/tableta
a) účinná látka	250	250
b) laktóza B. P.	210	26
c) povidon B. P.	15	9
d) natriumglykolát škrobu	20	12
e) stearát hořečnatý	5	3
celkem	500	300
Prostředek B	mg/tableta	mg/tableta
a) účinná látka	250	250
b) laktóza	150	-
c) Avicel PH 10	160	26
d) povidon B. P.	15	9
e) natriumglykolát škrobu	20	12
f) stearát hořečnatý	5	3
celkem	500	300
Prostředek C	mg/tableta
účinná látka	100
laktóza	200
škrob	50
povidon	5
stearát hořečnatý	4
celkem	359
Dále uvedené prostředky D a E	se vyrábějí přímým slisováním promísených složek.
s prostředku E je laktóza přímo slisovaného typu (mlékárenský produkt	Zeparox).
Prostředek D	mg/tableta
účinná látka	250
předželatinovaný škrob NF15	150
celkem	400
Prostředek E	mg/tableta
účinná látka	250
laktóza	150
Avicel	100
celkem	500

Laktóza

Prostředek F (prostředek s řízeným uvolňováním)

Prostředek se vyrábí granulací dále uvedených složek za mokra s roztokem povidonu, poté přidáním stearátu hořečnatého a slisováním.

-31 CZ 283481 B6 mg/tableta

a) účinná látka500

b) hydroxypropylmethylcelulóza (Methocel K4M Prémium)112

c) laktóza B. P.53

d) povidon B. P.28

e) stearát hořečnatý7 celkem700

Léčivo se uvolňuje během zhruba 6 až 8 hodin, přičemž k úplnému uvolnění dochází po 12 hodinách.

Příklad B

Prostředek ve formě kapslí

Prostředek ve formě kapslí se vyrobí smísením složek z prostředku D, uvedeného v příkladě A svrchu, a jejich naplněním do dvojdílné tvrdé želatinové kapsle. Prostředek B, popsaný dále, se vyrobí obdobným způsobem.

Prostředek B	mg/kapsle
a) účinná látka	250
b) laktóza B. P.	143
c) natriumglykolát škrobu	25
d) stearát hořečnatý	2
celkem	420
Prostředek C	mg/kapsle
a) účinná látka	250
b) Macrogol 4000 B. P.	350
celkem	600
Kapsle z prostředku C se	vyrábějí tím, že se roztaví Macrogol 4000 B. P., v tavenině se
disperguje účinná látka a tavenina se plní do dvojdílných tvrdých želatinových kapslí.
Prostředek D	mg/kapsle
účinná látka	250
lecithin	100
arašídový olej	100
celkem	450

Kapsle z prostředku D se vyrábějí tím, že se účinná látka disperguje v lecithinu a arašídovém oleji a disperze se plní do měkkých, elastických želatinových kapslí.

Prostředek E (kapsle s řízeným uvolňováním)

Prostředek ve formě kapsle s řízeným uvolňováním účinné látky se vyrobí průtlačným lisováním složek a, b a c za použití vytlačovacího lisu, poté se provede sferonizace výtlačku a jeho usušení. Usušené pelety se potom potáhnou membránou, řídící uvolňování (d) a plní do dvojdílných tvrdých želatinových kapslí.

	CZ 283481 B6 mg/kapsle
a) účinná látky b) mikrokrystalická celulóza c) laktóza B. P. d) ethylcelulóza celkem	250 125 125 13 513

Příklad C

Prostředky ve formě injekce

Prostředek A

účinná látka 0,1-molámí roztok kyseliny chlorovodíkové nebo 0,1-molámí roztok hydroxidu sod-

0,200 g

něho, podle potřeby k úpravě na pH 4,0 až 7,0

sterilní voda, k doplnění na

10 ml

Účinná látka se rozpustí ve větší části vody o teplotě 35 až 40 °C a hodnota pH se upraví na 4,0 až 7,0 pomocí kyseliny chlorovodíkové nebo hydroxidu sodného, jak je zapotřebí. Šarže se upraví na daný objem vodou a filtruje přes sterilní mikroporézní filtr do sterilních žlutohnědých skleněných lahviček o objemu 10 ml (typ 1), které se uzavřou sterilními uzávěry a ty se neprodyšně utěsní.

Prostředek B

účinná látka sterilní fosfátový pufr, neobsahující pyrogeny, o hodnotě pH 7, podle potřeby do

0,125 g 25 ml

Příklad D

Intramuskulámí injekce

účinná látka benzylalkohol Glukofurol 75 voda pro injekce, podle potřeby do

0,20 g 0,10 g 1,45 g 3,00 ml

Účinná látka se rozpustí v glukofurolu, poté se přidá a rozpustí benzylalkohol a roztok se doplní vodou na objem 3,00 ml. Směs se potom filtruje přes sterilní mikroporézní filtr a uzavře do sterilních žlutohnědých skleněných lahviček o objemu 3 ml (typ 1).

Příklad E

Sirup účinná látka 0,25 g roztok sorbitolu 1,50 g glycerol 2,00 g benzoát sodný 0,005 g aromatizační přísada,

Peach 17.42.3169 0,0125 ml vyčištěná voda, podle potřeby do 5,00 ml

Účinná látka se rozpustí ve směsi glycerolu a větší části vyčištěné vody. K roztoku se potom přidá vodný roztok benzoátu sodného, poté se přidá roztok sorbitolu a nakonec aromatizační přísada. Objem roztoku se upraví vyčištěnou vodou a roztok se dobře promíchá.

Příklad F

Čípky ________________________________mg/čípek______________ účinná látka (63 lm)⁺⁾250 tvrdý tuk B. P.

(Witepsol H15 - Dynamit NOBel)1770 celkem2020 ⁺⁾použije se účinná látka ve formě prášku, kde alespoň 90 % částic je průměru 631 m nebo méně.

Jedna pětina Witepsolu H15 se roztaví v pánvi, opatřené pláštěm, vyhřívaným párou na teplotu 45 °C. Účinná látka se prošije sítem s velikostí ok 200 pm a přidá k roztavenému základu, přičemž se provádí míchání za použití silversonova nástavce, opatřeného řeznou hlavou, dokud se nedosáhne jemné disperze. Směs se udržuje za teploty 45 °C, přidá se k ní zbývající Witepsol H15 a získaná suspenze se míchá, aby se zajistilo dosažení homogenní suspenze. Suspenze se vede sítem z nerezavějící oceli o velikosti ok 250 pm za nepřetržitého míchání a nechá se ochladit na teplotu 40 °C. Za teploty 38 až 40 °C se směs o hmotnosti 2,02 g vylije do vhodných forem z plastické hmoty o objemu 2 ml. Čípky se potom nechají ochladit na teplotu místnosti.

Příklad G

Pesary mg/pesar účinná látka250 anhydrát dextrózy380 bramborový škrob363 stearát hořečnatý7 celkem1000

Svrchu uvedené látky se přímo smíchají a pesary se vyrobí přímým slisováním výsledné směsi.

-34CZ 283481 B6

Protivirový účinek

a) Anti-HIV účinek (12,4R)-cis-4-[2-Amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol se testuje na anti-HIV účinek na buňkách MT4 metodou, kterou popsal D. R. Averett v J. Virol. Methods 23, 263-276 /1989/. Bylo nalezeno, že tato sloučenina má hodnotu IC₅₀ rovnou 4,0 ± 1,4 μΜ (průměr z 10 stanovení).

b) Antí-HBV účinek

Lidské buňky, produkující HBV linie HepG2.2.2.15, které popsal a charakterizoval Sells a kol. (PNAS 84, 1005 /1987/ a J. Virol. 62, 2836 /1988/), se podílejí na řadě charakteristických znaků HBV chronicky infikovaných hepatocytů. Ty jsou nakažlivé, cožse dokládá jejich schopností vyvolat onemocnění šimpanzů.

K testování sloučenin na anti-HBV účinek se monovrstvy kultur ošetřují 50 až 200 μΜ testované sloučeniny po dobu 10 dnů. Supematant prostředí, obsahující extracelulámí virion DNA (Dane částice), se získá třetího, šestého a desátého dne, uvede do styku s 1 mg/ml proteinázy K. a 1 % dodecylsulfátu sodného a inkubuje jednu hodinu za teploty 50 °C. DNA se extrahuje stejnými objemy fenolu a potom chloroformu a poté vysráží octanem amonným apropanolem. Precipitát DNA se rozpustí a zachytí na nitrocelulóze za použití postupu, který popsali Schleicher a Schuell (Schleicher, Schuell, 10 Optical Ave., Keene. NH 03431, Publication # 700 /1987/) a poté se zpracuje, jak popsal Southem v J. Mol. Biol. 98,503 /1975/. Dostanou se buňky a intracelulámí DNA se získá po buněčné lýze guanidin-isothiokyanátem. S intracelulámí DNA se zachází stejným způsobem jako s extracelulámí DNA. Po vysrážení octanem amonným apropanolem se precipitát intracelulámí DNA rozpustí, provede se restrikční řez endonukleázou Hind 111, aplikovanou na gelu agarózy, a poté se provede zpracování, které popsal Southem, k stanovení množství replikačních meziprodukčních forem. Protivirový účinek látky se určí při změření alespoň 100-násobného snížení množství částic Dane, vylučovaných do prostředí kultury, a podobném snížení intracelulámích replikačních meziproduktů.

Výše popsaným postupem se testoval (lS,4R)-cis-4-[2-amino-6-(N-cyklopropyl-Nmethylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol. Bylo zjištěno, že tato sloučenina má schopnost anti-HBV účinku při 100 μΜ.

Claims (5)

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Enantiomemí purinové deriváty obecného vzorce I dl ve kterém

-35CZ 283481 B6

R představuje cyklopropylaminoskupinu nebo N-cyklopropyl-N—methylaminoskupinu, a

A znamená 2-cyklopenten-l-methanol-4-ylovou skupinu, buď v[lS,4R] nebo [1R,4S] konfiguraci, a jejich soli, estery zvolené z esterů mono-, di- nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin a karboxylových kyselin sC|.|₈ alkylovou nebo fenylovou skupinou, jakož i soli takových esterů, přičemž tyto sloučeniny jako takové, a jejich soli, estery a soli esterů jsou vždy ve formě enantiomeru, který obsahuje méně než 10 % hmotnostních příslušného druhého enantiomeru.

2. Enantiomemí purinový derivát podle nároku 1, kterým je [lS,4R]-cis-4-[2-amino-6(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol, obsahující méně než 10% hmotnostních příslušného druhého enantiomeru.

3. Enantiomemí purinový derivát podle nároku 1, kterým je [lS,4R]-cis-4-[2-amino-6-(Ncyklopropyl-N-mentylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol, obsahující méně než 10 % hmotnostních příslušného druhého enantiomeru.

4. Farmaceuticky přijatelné soli, estery mono-, di- nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin a karboxylových kyselin s C|._l8 alkylovou nebo fenylovou skupinou a soli těchto esterů [1S,4R] enantiomemích purinových derivátů obecného vzorce I podle některého z předcházejících nároků 1 až 3.

5. Fosfátové estery [IR, 4S] enantiomemích purinových derivátů obecného vzorce I podle nároku 1.

6. Způsob výroby enantiomemích purinových derivátů vzorce I ve kterém

R představuje cyklopropylaminoskupinu nebo N-cyklopropyl-N-methylaminoskupinu, a

A znamená 2-cyklopenten-l-methanol; 1-4-ylovou skupinu, buď v[lS,4R] nebo [1R,4S] konfiguraci, a jejich soli, estery zvolené z esterů mono-, di- nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin karboxylových kyselin s Cpig alkylovou nebo fenylovou skupinou, jakož i soli takových esterů, přičemž tyto sloučeniny jako takové, a jejich soli, estery a soli esterů jsou vždy ve formě enantiomeru, který obsahuje méně než 10% hmotnostních příslušného drahého enantiomeru, vyznačující se tím, že

-36CZ 283481 B6 (II).

a) enantiomemí purinový derivát obecného vzorce II ve kterém

A má výše uvedený význam, a

Z představuje odštěpitelnou skupinu, jako je halogen, např. atom chloru, nebo jeho derivát se nechá reagovat se vhodným aminem, jako je cyklopropylamin nebo Ncyklopropyl-N-methylamin, při teplotě alespoň 50 °C k převedení prekurzorové skupiny Z na požadovanou skupinu R, nebo

b) enantiomemí pyrimidinový derivát obecného vzorce III (lil).

ve kterém

A a R mají výše uvedený význam,

R² představuje atom vodíku nebo formylovou skupinu, a

R³ znamená chránící skupinu aminoskupiny, nebo jeho derivát se nechá reagovat s činidlem, sloužícím k účinnému vzniku imidazolového kruhu v požadované sloučenině obecného vzorce I a k účinnému odstranění chránící skupiny R³ z aminoskupiny, jako je např. kyselina mravenčí nebo její reaktivní derivát, například triethylorthoformát nebo diethoxymethylacetát, nebo

-37CZ 283481 B6 (IV),

c) enantiomemí purinový derivát obecného vzorce IV ve kterém

A a R mají výše uvedený význam, a

R₃ představuje chránící skupinu aminoskupiny, nebo jeho derivát se nechá reagovat s činidlem, sloužícím k účinnému odstranění chránící skupiny R³ z aminoskupiny, a popřípadě se provede alespoň jedna z dále uvedených konverzí v libovolném pořadí:

i) pokud vznikla hydroxysloučenina obecného vzorce I, tato sloučenina se převede na svoji sůl nebo ester, zvolený z esterů mono-, di- nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin karboxylových kyselin s Ci_i₈ alkylovou nebo fenylovou skupinou, nebo ii) pokud vznikla sůl nebo ester purinového derivátu obecného vzorce I, tato sůl nebo tento ester se převede na základní hydroxysloučeninu obecného vzorce I nebo na další sůl nebo ester.

7. Farmaceutické prostředky pro ošetřování nebo profylaxi infekcí, způsobených retroviry, nebo infekcí, vyvolaných virem hepatitidy B, vyznačující se tím, že obsahují [1S,4R] enantiomemí purinový derivát obecného vzorce I podle nároku 1, jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, ester nebo fosfátový derivát [1R,RS] enantiomemího purinového derivátu obecného vzore I podle nároku 1, společně s alespoň jedním farmaceuticky přijatelným nosičem nebo pomocnou látkou.

8. Farmaceutické prostředky podle nároku 7, vyznačující se tím, že [1S,4R] enantiomemím purinovým derivátem je [lS,4R]-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9Hpurin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol.

9. [1S,4R] enantiomemí purinový derivát obecného vzorce I podle nároku 1, jeho farmaceuticky přijatelná sůl, ester mono-, di- nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin a karboxylových kyselin sC|.|₈ alkylovou nebo fenylovou skupinou, nebo fosfátový derivát [1R,4S] enantiomemího purinového derivátu obecného vzorce I podle nároku 1, k použití v léčebné terapii.

10. [1S,4R] enantiomemí purinový derivát obecného vzorce I podle nároku 1, jeho farmaceuticky přijatelná sůl, ester mono-, di- nebo trifosfátů, sulfonátů, aminokyselin a karboxylových kyselin sC|.|₈ alkylovou nebo fenylovou skupinou, nebo fosfát [1R,4S] enantiomemího purinového derivátu obecného vzorce I podle nároku 1 pro použití pro ošetřování nebo profylaxi infekcí, vyvolaných retrovirem, nebo infekční virové hepatitidy B.

-38CZ 283481 B6

11. [lS,4R]-cis-4-[2-amino-6-(cyklopropylamino}-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lmethanol pro použití pro ošetřování nebo profylaxi infekcí, vyvolaných retrovirem, nebo infekční virové hepatitidy B.

5 12. Purinové deriváty podle nároku 10 nebo 11 pro použití k ošetřování nebo profylaxi infekce, způsobené virem lidské imunitní nedostatečnosti (HIV).