DE3901502C2

DE3901502C2 - Didesoxydehydrocarbocyclische Nucleoside, diese enthaltende pharmazeutische Formulierungen und Pyrimidinylamino-cyclopentenylcarbinol-Derivate

Info

Publication number: DE3901502C2
Application number: DE3901502A
Authority: DE
Inventors: Robert Vince; Mei Hua; Peter Leslie Myers; Richard Storer
Original assignee: University of Minnesota
Current assignee: University of Minnesota
Priority date: 1988-01-20
Filing date: 1989-01-19
Publication date: 2002-06-13
Anticipated expiration: 2009-01-20
Also published as: NO890253L; NO169123C; FI93546B; HU203755B; KR0127137B1; AU2867189A; IT8947546A0; NL8900122A; NZ227663A; CH679152A5; SE505213C2; GB8901187D0; BE1003815A4; FR2626002A1; GR890100033A; CA1339896C; PT89482A; DE3901502A1; MY103801A; DK23489A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft didesoxycarbocyclische Nucleosid-Analoga. Insbesondere betrifft sie carbocyclische 2',3'-Didesoxy-2',3'-didehydropurinnucleosid-Analoga und diese enthaltende pharmazeutische Formulierungen, insbesondere zur Behandlung einer viralen Infektion, und Pyrimidinylamino-cyclopentenylcarbinol-Derivate.

Im Hinblick auf die Ähnlichkeit zwischen viralen und Gastzellen-Funktionen ist es schwierig, ein Virus selektiv anzugreifen, während die Gastzelle intakt gelassen wird. So gibt es verhältnismäßig wenige Mittel, die gegen Viren per se wirksam sind, und es ist schwierig, antivirale Mittel zu finden, die einen annehmbaren therapeutischen Index haben, d. h. Mittel, die einen bedeutenden, antiviralen Effekt bei einer Dosis haben, bei der das Mittel im Durchschnitt eine annehmbare Toxizität und keine Nebenwirkung aufweist.

Eine Gruppe von Viren, welche kürzlich große Bedeutung erlangten, sind die Retroviren, die für das "human acquired immunodeficiency syndrome" (AIDS) verantwort lich sind. Solche Viren wurden früher verschiedenen Ter minologien zugewiesen, jedoch werden sie nun allgemein als "menschliche Immunschwäche-Viren" (human immuno deficiency viruses) (HIV's) bezeichnet; zwei solcher Viren, HIV-I und HIV-II, wurden reproduzierbar aus Pa tienten isoliert, die an AIDS und verwandten Zuständen, wie AIDS-verwandtem Komplex (ARC) und anhaltender, all gemeiner Lymphadenopathie litten, isoliert.

Obzwar eine Anzahl von Nucleosiden als nützlich bei der Behandlung von Zuständen, die mit HIV-Infektionen zu sammenhängen, bezeichnet wurde, hat nur Zidovudin (AZT, Retrovir) die behördliche Genehmigung zur Behandlung solcher Zustände erhalten. Es ist jedoch bekannt, daß Zidovudin schwere Nebenwirkungen hat, welche die Ver drängung des Knochenmarks verursacht, was zu einem Ab fall der Zahl der weißen Blutkörperchen führt mit nach folgender, ausgeprägter Anämie, und es besteht daher ein Bedürfnis an wirksamen Mitteln, die weniger cytotoxisch sind.

Es wurde nun eine neue Klasse von Nucleosid-Analoga ge funden, die eine antivirale Aktivität haben. Gemäß einem ersten Merkmal der Erfindung wird eine Verbindung der Formel (I)

worin
X Wasserstoff, NRR¹, SR, OR oder Halogen ist,
Z Wasserstoff, OR² oder NRR¹ ist;
R, R¹ und R² können gleich oder verschieden sein und sind ausgewählt aus Wasserstoff, C_1-4-Alkyl und Phenyl, Tolyl, Xylyl, Anisyl und Phen-(C_1-4)-alkyl;
sowie deren pharmazeutisch annehmbare Salze, Ester oder Salze dieser Ester, geschaffen.

Für den Fachmann ist es klar, daß die Verbindungen der Formel (I) cis-Verbindungen sind, und weiterhin, daß der Cyclopentenring der Verbindungen der Formel (I) zwei chirale Zentren enthält [in Formel (I) durch das Stern chen * gezeigt] und so in der Form von zwei optischen Iso meren (d. h. Enantiomeren) und Mischungen davon ein schließlich racemischer Mischungen existieren kann. Alle derartigen Isomeren und Mischungen davon einschließlich der racemischen Mischungen sind in den Bereich der Er findung eingeschlossen. Demnach ist in den Verbindun gen der Formel (I) entweder das chirale Zentrum, an das die Base geknüpft ist, in der R-Konfiguration und das chirale Zentrum, an das die CH₂OH-Hälfte geknüpft ist, ist in der S-Konfiguration (im folgenden das D-Isomere) oder das chirale Zentrum, an das die Base geknüpft ist, ist in der S-Konfiguration und das, an das die CH₂OH- Hälfte geknüpft ist, ist in der R-Konfiguration (im fol genden das L-Isomere). Zweckmäßig werden die Verbindun gen entweder in Form einer racemischen Mischung oder im wesentlichen als das reine D-Isomere vorliegen. Die D- Isomeren können durch die Formel (Ia)

dargestellt werden, worin X und Z wie in Formel (I) defi niert sind. Die weitere Bezugnahme auf Verbindungen der Formel (I) schließt Verbindungen der Formel (Ia) ein.

Der Fachmann wird ebenfalls erkennen, daß verschiedene der Verbindungen der Formel (I) als eine Anzahl von tautomeren Formen existieren können, und alle derartigen Tautomeren sind in den Bereich der Erfindung eingeschlos sen.

Der hier verwendete Ausdruck "Halogen" bezieht sich auf Fluor, Chlor, Brom und Jod; wenn X Halogen ist, ist es vorzugsweise Chlor.

Der hier verwendete Ausdruck "C_1-4-Alkyl" bezieht sich auf gerade oder verzweigte Alkylgruppen, beispielsweise Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, sek.-Butyl und tert.-Butyl. C_1-4-Alkyl ist zweckmäßig Methyl.

Der hierin verwendete Ausdruck Phen-(C_1-4)-alkyl umfaßt beispielsweise Benzyl oder Phenethyl.

In den Verbindungen der Formel (I) ist Z vorzugsweise Amino.

In einer bevorzugten Klasse von Verbindungen der Formel (I) ist X = OR, besonders OH.

In einer weiter bevorzugten Klasse von Verbindungen der Formel (I) steht X für NRR¹, insbesondere NH₂, oder Wasserstoff.

Besonders bevorzugte Verbindungen der Formel (I) sind solche, worin Z = NH₂ und X = H, NH₂ oder besonders OH. Insbesondere solche Verbindungen haben besonders er wünschte therapeutische Indices als antivirale Mittel.

Unter dem Ausdruck "ein pharmazeutisch annehmbares Salz, Ester oder Salz eines solchen Esters einer Verbindung der For mel (I)" soll eine jede derartige Verbindung verstanden werden, die bei Verabreichung an den Patienten in der Lage ist, (direkt oder indirekt) eine Verbindung der Formel (I) oder einen antiviral wirksamen Metaboliten oder Rest davon zu liefern.

Bevorzugte Ester der Verbindungen der Formel (I) umfas sen Carbonsäureester, worin die Nicht-Carbonyl-Hälfte der Estergruppe ausgewählt ist aus Wasserstoff, geradem oder verzweigtem Alkyl (z. B. Methyl, Ethyl, n-Propyl, tert.-Butyl, n-Butyl), Alkoxyalkyl (z. B. Methoxymethyl), Aralkyl (z. B. Benzyl), Aryloxyalkyl (z. B. Phenoxymethyl), Aryl (z. B. Phenyl, gegebenenfalls substituiert durch Halogen, C_1-4-Alkyl oder C_1-4-Alkoxy); Sulfonatester, wie Alkyl- oder Aralkylsulfonyl (z. B. Methansulfonyl); Aminosäureester (z. B. L-Valyl oder L-Isoleucyl) und Mono-, Di- oder Triphosphatester.

Bezüglich der oben beschriebenen Ester enthält irgend welche vorhandene Alkylhälfte vorteilhaft 1 bis 18 Koh lenstoffatome, besonders 1 bis 4 Kohlenstoffatome, sofern nicht anders angegeben. Irgendeine in solchen Estern vor handene Arylhälfte umfaßt vorteilhaft eine Phenylgruppe.

Pharmazeutisch annehmbare Salze der Verbindungen der For mel (I) umfassen solche, die von pharmazeutisch annehmba ren, anorganischen und organischen Säuren und Basen ab geleitet sind. Beispiele geeigneter Säuren umfassen Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpe tersäure, Perchlorsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Phos phorsäure, Glykolsäure, Milchsäure, Salicylsäure, Bern steinsäure, Toluol-p-sulfonsäure, Weinsäure, Essigsäure, Citronensäure, Methansulfonsäure, Ameisensäure, Benzoe säure, Malonsäure, Naphthalin-2-sulfonsäure und Benzol sulfonsäure. Andere Säuren, wie Oxalsäure, können, ob zwar sie selbst pharmazeutisch nicht annehmbar sind, bei der Herstellung von Salzen nützlich sein, die als Zwi schenprodukte bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Säure additionssalze brauchbar sind.

Salze geeigneter Basen umfassen Alkalimetall (z. B. Natri um)-, Erdalkalimetall(z. B. Magnesium)-, Ammonium- und NR₄ ⁺(R=C_1-4-Alkyl)-Salze.

Die folgenden Bezugnahmen auf eine Verbindung gemäß der Erfindung schließen sowohl Verbindungen der Formel (I) als auch ihre pharmazeutisch annehmbaren Derivate ein.

Spezielle Verbindungen der Formel (I) schließen ein:
(1α,4α)-4-(6-Chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopen tenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Amino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopen tenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Mercapto-9H-purin-9-yl)-2-cyclopen tenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2-Amino-6-chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyc lopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2- cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-2-cyclo pentenyl-carbinol;
in Form eines racemischen Gemisches oder eines einzelnen Enantiomeren.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen entweder selbst antivirale Aktivität und/oder sind zu solchen Ver bindungen metabolisierbar. Insbesondere sind diese Ver bindungen wirksam bei der Inhibierung der Replikation von Retroviren einschließlich menschlicher Retroviren, wie menschliche Immunschwäche-Viren (HIV's), die verur sachenden Mittel von AIDS.

Gewisse Verbindungen gemäß der Erfindung besitzen Antikrebs-Aktivität, insbesondere solche, worin Z Wasserstoff ist.

Demnach betrifft die Erfindung auch eine pharmazeutische Formulierung, enthaltend eine Verbindung der Formel (I) oder deren pharmazeutisch annehmbares Salz, pharmazeutisch annehmbaren Ester oder pharmazeutisch annehmbares Salz dieses Esters, insbesondere zur Behandlung einer viralen Infektion, beispielsweise zur Behandlung retroviraler Infektionen, oder als Antikrebs-Mittel.

So kann die erfindungsgemäße Formulierung eingesetzt werden zur Behandlung einer viralen Infektion, insbesondere einer Infektion, die durch ein Retrovirus, wie HIV, in einem Säugetier einschließlich des Menschen verursacht wird, welche die Verabreichung einer wirksamen Menge einer antiviralen Verbindung der Formel (I) oder von deren pharmazeutisch annehmbarem Salz, Ester oder Salz dieses Esters umfaßt.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung, die antivirale Aktivität besitzen, sind auch nützlich bei der Behandlung von AIDS-verwandten Zuständen, wie AIDS-verwandtem Komplex (ARC), anhaltender, allgemeiner Lymphadenopathie (PGL), AIDS-verwandten, neurologischen Zuständen (wie Schwachsinn oder tropische Paraparese), Anti-HIV- Antikörper-positive und HIV-positive Zustände, Kaposi-Sarkom und thrombopenische Purpura.

Die antiviralen Verbindungen gemäß der Erfindung sind auch wertvoll bei der Vorbeugung der Weiterentwicklung zur klinischen Erkrankung von Individuen, die Anti-HIV-Anti körper- oder HIV-Antigen-positiv sind, und bei der Prophylaxe infolge HIV-Ausgesetztsein.

Die antiviralen Verbindungen der Formel (I) oder ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze, Ester oder Salze dieser Ester können auch zur Vor beugung von viraler Verunreinigung physiologischer Flüssigkeiten, wie Blut oder Samen, in vitro dienen.

Gewisse Verbindungen der Formel (I) sind auch wertvoll als Zwischenprodukte bei der Herstellung anderer Verbin dungen der Erfindung. Für den Fachmann wird ersichtlich, daß die hier erwähnte Behandlung sich sowohl auf die Prophylaxe als auch auf die Behandlung von bestehenden Infektionen oder Symptomen erstreckt.

Es sei weiter erwähnt, daß die Menge der erfindungsge mäßen Verbindung, die zur Verwendung bei der Behandlung erforderlich ist, nicht nur mit der besonderen, ausge wählten Verbindung, sondern auch mit dem Verabreichungs weg, der Natur der zu behandelnden Krankheit und dem Al ter und dem Zustand des Patienten variieren wird und schließlich der Beurteilung des behandelnden Arztes oder Veterinärs überlassen bleibt. Im allgemeinen wird jedoch eine geeignete Dosis im Bereich von etwa 1 bis etwa 750 mg/kg, z. B. von etwa 10 bis etwa 750 mg/kg Körper gewicht/Tag sein, wie 3 bis etwa 120 mg/kg Körpergewicht des Empfängers pro Tag, vorzugsweise im Bereich von 6 bis 90 mg/kg/Tag, besonders bevorzugt im Bereich von 15 bis 60 mg/kg/Tag.

Die gewünschte Dosis kann zweckmäßig in einer einzigen Dosis dargeboten werden oder als unterteilte Dosierun gen, die in geeigneten Intervallen verabreicht werden, beispielsweise zwei, drei, vier oder mehr Unterdosie rungen pro Tag.

Die Verbindung wird zweckmäßig in Einheitsdosisform ver abreicht; beispielsweise enthaltend 10 bis 1500 mg, zweckmäßig 20 bis 1000 mg, am zweckmäßigsten 50 bis 700 mg aktiven Bestandteil pro Einheitsdosisform.

In idealer Weise sollte der aktive Bestandteil verab reicht werden, um Spitzenplasmakonzentrationen der akti ven Verbindung von etwa 1 bis etwa 75 µM, vorzugsweise etwa 2 bis 50 µM, besonders bevorzugt etwa 3 bis etwa 30 µM, zu erreichen. Dies kann beispielsweise durch intravenöse Injektion einer 0,1- bis 5%igen Lösung des aktiven Bestandteils, gegebenenfalls in Salzlösung, oder oral verabreicht als Bolus, enthaltend etwa 1 bis etwa 100 mg/kg aktiven Bestandteil, erreicht werden. Wün schenswerte Blutspiegel können durch eine kontinuierli che Infusion aufrechterhalten werden, um etwa 0,01 bis etwa 5,0 mg/kg/h oder durch intermittierende Infusionen, enthaltend etwa 0,4 bis etwa 15 mg/kg aktiven Bestand teil, zu erzielen.

Während es möglich ist, daß zur Verwendung in der Thera pie eine Verbindung gemäß der Erfindung als Rohchemikal verabreicht werden kann, ist es vorzuziehen, den aktiven Bestandteil als pharmazeutische Formulierung darzubieten.

Demnach schafft die Erfindung eine pharmazeutische For mulierung, umfassend eine Verbindung der Formel (I) oder deren pharmazeutisch annehmbares Salz, pharmazeutisch annehmbaren Ester oder pharmazeutisch annehmbares Salz dieses Esters zusammen mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Trägern und gegebenenfalls anderen therapeutischen und/oder pro phylaktischen Bestandteilen. Der oder die Träger müssen "annehmbar" sein in dem Sinne, daß sie mit den anderen Bestandteilen der Formulierung verträglich sind und nicht nachteilig für den Empfänger.

Pharmazeutische Formulierungen umfassen solche, die für orale, rektale, nasale, topische (einschließlich bukkal und sub-lingual), vaginale oder parenterale (einschließ lich intramuskulär und intravenös) Verabreichung geeig net sind, oder in einer Form, die zur Verabreichung durch Inhalation oder Insufflation geeignet ist. Die Formulie rungen können, wo es angebracht ist, zweckmäßig in ein zelnen Dosierungseinheiten dargeboten werden und können durch irgendwelche in der pharmazeutischen Industrie be kannte Methoden hergestellt werden. Alle Methoden umfas sen den Schritt, daß die aktive Verbindung mit flüssigen Trägern oder feinverteilten, festen Trägern oder beiden zusammengebracht werden und dann erforderlichenfalls das Produkt in die gewünschte Formulierung geformt wird.

Pharmazeutische Formulierungen, geeignet zur oralen Ver abreichung, können zweckmäßig als einzelne Einheiten, wie Kapseln, Oblatenkapseln oder Tabletten, angeboten werden, wobei jede eine vorbestimmte Menge des aktiven Bestandteils enthält; als Pulver oder Granulate; als Lösung, Suspension oder Emulsion. Der aktive Bestandteil kann auch als Bolus, Latwerge oder Paste dargeboten wer den. Tabletten und Kapseln zur oralen Verabreichung können übliche Exzipienten, wie Bindemittel, Füllstoffe, Gleitmittel, Zerteilungsstoffe oder Netzmittel, enthal ten. Die Tabletten können nach üblichen Methoden überzogen sein. Orale, flüssige Präparate können in Form von beispielsweise wäßrigen oder öligen Suspensionen, Lösun gen, Emulsionen, Sirupen oder Elixieren vorliegen oder können als Trockenprodukt zur Aufbereitung mit Wasser oder einem geeigneten anderen Träger vor der Verwendung vorliegen. Solche flüssigen Präparate können übliche Zu sätze, wie Suspendiermittel, Emulgiermittel, nicht- wäßrige Trägerstoffe (die eßbare Öle einschließen) oder Konservierungsmittel, enthalten.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung können auch zur par enteralen Verabreichung (z. B. durch Injektion, beispiels weise Bolusinjektion oder kontinuierliche Infusion) for muliert sein und können in Einheitsdosisform in Ampul len, vorgefüllten Spritzen oder Mehrfachbehältern mit zugesetztem Konservierungsmittel vorliegen. Die Zusam mensetzungen können solche Formen, wie Suspensionen, Lö sungen oder Emulsionen in öligen oder wäßrigen Trägern, haben und können Formulierungsmittel enthalten, wie Sus pendier-, Stabilisier- und/oder Dispergiermittel. Alter nativ kann der aktive Bestandteil in Pulverform vorlie gen, erhalten durch aseptische Isolierung des sterilen Feststoffs oder durch Lyophilisierung aus Lösung, zur Zubereitung mit einem geeigneten Träger, z. B. sterilem, pyrogenfreiem Wasser, vor der Verwendung.

Zur topischen Verabreichung an die Epidermis können die Verbindungen gemäß der Erfindung als Salben, Cremes oder Lotionen oder als transdermales Pflaster bzw. Lappen vorliegen. Sal ben und Cremes können beispielsweise mit einer wäßrigen oder öligen Basis unter Zusatz von geeigneten Verdic kungs- und/oder Geliermitteln formuliert werden. Loti onen können mit einer wäßrigen oder öligen Basis for muliert werden und werden im allgemeinen auch ein oder mehrere Emulgiermittel, Stabilisiermittel, Dispergier mittel, Suspendiermittel, Verdickungsmittel oder Färbe mittel enthalten.

Formulierungen, die zur topischen Verabreichung im Mund geeignet sind, umfassen Pastillen, die den aktiven Be standteil in einem aromatisierten Grundstoff, gewöhnlich Saccharose und Akaziengummi oder Tragant, enthalten; Pastillen, umfassend den aktiven Bestandteil in einer inerten Basis, wie Gelatine und Glycerin oder Saccharose und Akaziengummi; und Mundwässer, umfassend den aktiven Bestandteil in einem geeigneten, flüssigen Träger.

Pharmazeutische Formulierungen, die zur rektalen Verab reichung geeignet sind, worin der Träger ein Feststoff ist, sind bevorzugt Einheitsdosissuppositorien. Geeigne te Träger umfassen Kakaobutter und andere üblicherweise verwendete Materialien, und die Suppositorien können zweckmäßig durch Vermischen der aktiven Verbindung mit den erweichten oder geschmolzenen Trägern, nachfolgendes starkes Abkühlen und Ausformen in Formen gebildet werden.

Zur vaginalen Verabreichung geeignete Formulierungen kön nen als Pessare, Tampons, Cremes, Gele, Pasten, Schäume oder Sprays vorliegen, enthaltend zusätzlich zu dem ak tiven Bestandteil solche Träger, wie sie in der Fachwelt als geeignet bekannt sind.

Zur intra-nasalen Verabreichung können die Verbindungen gemäß der Erfindung als flüssiger Spray oder in Form von Tropfen verwendet werden.

Tropfen können mit einer wäßrigen oder nicht-wäßrigen Basis formuliert werden, die auch ein oder mehrere Dispergiermittel, löslichmachende Mittel oder Suspendier mittel enthalten. Flüssige Sprays werden zweckmäßig aus Druckpackungen geliefert.

Zur Verabreichung durch Inhalation können die Verbindungen gemäß der Erfindung zweckmäßig aus einem Inhalator bzw. Einblasapparat, Zerstäuber oder Druckpackung oder anderem geeigneten Mittel zur Lieferung eines Aerosolsprays geliefert wer den. Druckpackungen können ein geeignetes Treibgas, wie Dichlordifluormethan, Trichlorfluormethan, Dichlortetra fluorethan, Kohlendioxid oder ein anderes geeignetes Gas, enthalten. Im Falle eines Aerosols unter Druck kann die Dosiseinheit bestimmt werden, indem ein Ventil vorgesehen wird, das eine abgemessene Menge liefert.

Alternativ können die Verbindungen gemäß der Erfindung zur Verabreichung durch Inhalation oder Einblasen die Form einer trockenen Pulverzusammensetzung haben, bei spielsweise ein Pulvergemisch der Verbindung und einer geeigneten Pulverbasis, wie Lactose oder Stärke. Die Pul verzusammensetzung kann in Einheitsdosierungsform vor liegen, beispielsweise in Kapseln oder Patronen oder z. B. Gelatine- oder Pflasterpackungen, woraus das Pulver mit Hilfe eines Inhalators oder Einblasegeräts verab reicht werden kann.

Gewünschtenfalls können die obigen Formulierungen ange paßt werden, daß eine Dauerabgabe bzw. Langzeitwirkung (sustained release) des aktiven Bestandteils erfolgt.

Die pharmazeutischen Zusammensetzungen gemäß der Erfin dung können auch andere aktive Bestandteile, wie anti mikrobielle Mittel oder Konservierungsstoffe, enthal ten.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung können auch in Kom bination mit anderen therapeutischen Mitteln, beispiels weise mit anderen Anti-Infektionsmitteln, verwendet wer den. Insbesondere können die erfindungsgemäßen Verbin dungen zusammen mit bekannten antiviralen Mitteln ange wandt werden.

Die Erfindung schafft so gemäß einem weiteren Aspekt eine Kombination, umfassend eine Verbindung der Formel (I) oder deren physiologisch annehmbares Salz, Ester oder Salz dieses Esters zusam men mit einem anderen therapeutisch aktiven Mittel, ins besondere einem antiviralen Mittel.

Die oben erwähnten Kombinationen können zweckmäßig zur Verwendung in Form einer pharmazeutischen Formulierung vorliegen, und so umfassen pharmazeutische Formulierun gen, die eine Kombination, wie oben definiert, zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger dafür ent halten, einen weiteren Aspekt der Erfindung.

Geeignete, therapeutische Mittel zur Verwendung in sol chen Kombinationen umfassen acyclische Nucleoside, wie Aciclofir, Interferone, wie α-Interferon, Nierenaus scheidungsinhibitoren, wie Probenicid, Nucleosidtrans portinhibitoren, wie Dipyridamol, 2',3'-Didesoxynucleo side, wie 2',3'-Didesoxycytidin, 2',3'-Didesoxyadenosin, 2',3'-Didesoxyinosin, 2',3'-Didesoxythymidin und 2',3'- Didesoxy-2',3'-didehydrothymidin, und Immunomodulatoren, wie Interleukin II (IL2) und Granulocytmakrophagenkolo nien-stimulierender Faktor (GM-CSF), Erythropoetin und Ampligen.

Die individuellen Komponenten solcher Kombinationen kön nen entweder nacheinander oder gleichzeitig in getrennten oder kombinierten, pharmazeutischen Formulierungen ver abreicht werden.

Wenn die Verbindung der Formel (I) oder ihr pharmazeu tisch annehmbares Salz, Ester oder Salz dieses Esters in Kombination mit ei nem zweiten therapeutischen Mittel, das gegen das glei che Virus aktiv ist, verwendet wird, kann die Dosierung jeder Verbindung von derjenigen differieren, wenn die Verbindung allein genommen wird. Geeignete Dosierungen werden leicht durch den Fachmann festgestellt.

Die Verbindungen der Formel (I) und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze, Ester oder Salze dieser Ester können durch irgendeine bekannte Methode zur Herstellung von Verbindungen analoger Struk tur hergestellt werden.

Geeignete Methoden zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze, Ester oder Salze dieser Ester sind weiter unten beschrieben. Die Gruppen X und Z sind wie oben definiert, sofern nicht anders angegeben. Es sei erwähnt, daß die folgenden Reaktionen die Verwendung von Ausgangsmaterialien mit geschützten funktionellen Gruppen erforderlich machen oder zweckmäßig angewandt werden können und die Abspaltung der Schutzgruppen kann demnach als Zwischenschritt oder Endschritt erforder lich sein, um die gewünschte Verbindung zu erhalten. Der Schutz der funktionellen Gruppen und Abspaltung der Schutzgruppen kann unter Anwendung üblicher Mittel er folgen. So können beispielsweise Aminogruppen durch eine Gruppe, ausgewählt aus Aralkyl (z. B. Benzyl), Acyl oder Aryl (z. B. 2,4-Dinitrophenyl), geschützt werden; die an schließende Entfernung der Schutzgruppe wird, falls er wünscht, durch Hydrolyse oder Hydrogenolyse, je nach Zweckmäßigkeit, unter Verwendung von Standardbedingungen durchgeführt. Hydroxylgruppen können geschützt werden unter Verwendung irgendeiner üblichen Hydroxyl-Schutz gruppe, beispielsweise wie in "Protective Groups in Organic Chemistry", Herausgeber J. F. W. McOmie (Plenum Press, 1973), oder "Protective Groups in Organic Synthesis" von Theodora W. Greene (John Wiley and Sons, 1981) beschrieben. Beispiele geeigneter Hydroxyl-Schutz gruppen schließen ein: Gruppen, ausgewählt aus Alkyl (z. B. Methyl, tert.-Butyl oder Methoxymethyl), Aralkyl (z. B. Benzyl, Diphenylmethyl oder Triphenylmethyl), hete rocyclische Gruppen, wie Tetrahydropyranyl, Acyl (z. B. Acetyl oder Benzoyl)- und Silylgruppen, wie Trialkyl silyl (z. B. tert.-Butyldimethylsilyl). Die Hydroxyl- Schutzgruppen können durch übliche Techniken entfernt werden. So können beispielsweise Alkyl-, Silyl-, Acyl- und heterocyclische Gruppen durch Solvolyse entfernt werden, z. B. durch Hydrolyse unter sauren oder basischen Bedin gungen. Aralkylgruppen, wie Triphenylmethyl, können in ähnlicher Weise durch Solvolyse entfernt werden, z. B. durch Hydrolyse unter sauren Bedingungen. Aralkylgruppen, wie Benzyl, können durch Hydrogenolyse in Anwesenheit eines Edelmetallkatalysators, wie Palladium-auf-Kohle, abgespalten werden. Silylgruppen können auch zweckmäßig entfernt werden unter Verwendung einer Quelle für Fluorid ionen, wie Tetra-n-butylammoniumfluorid.

In einem ersten Verfahren (A) können Verbindungen der Formel (I) und deren pharmazeutisch annehmbare Salze, Ester und Salze dieser Ester hergestellt werden durch Reaktion einer Verbindung der Formel (II)

(worin X und Z Substituenten mit der Bedeutung in Formel (I) oder geschützte Formen davon sind und die Hydroxyl gruppe in der Cyclopentenylcarbinol-Gruppe kann in ge schützter Form sein) oder eines ihrer pharmazeutisch annehmba ren Salze, Ester oder Salze dieser Ester mit einem Reagens, ausgewählt aus Ameisensäure und reaktiven Derivaten davon, und nach folgend, falls notwendig, Entfernung unerwünschter Grup pen, die durch dieses Reagens eingeführt wurden, und/ oder Entfernung irgendwelcher vorhandener Schutzgruppen.

Beispiele für geeignete Derivate der Ameisensäure, welche in dem obigen Verfahren (A) verwendet werden können, schließen ein: Orthoformiate (z. B. Triethylorthoformiat), Dialkoxymethylacetate (z. B. Diethoxymethylacetat), Di thioameisensäure, Formamid, s-Triazin oder Formamidin acetat.

Unerwünschte Gruppen, die durch Ameisensäure oder ein re aktives Derivat davon eingeführt werden, können zweck mäßig durch milde Hydrolyse entfernt werden, beispiels weise unter Verwendung einer anorganischen Säure, wie wäßrige Salzsäure.

Wird ein Trialkylorthoformiat, wie Triethylorthoformiat, verwendet, ist dies zweckmäßig auch das Lösungsmittel für die Reaktion. Andere Lösungsmittel, welche verwendet werden können, umfassen Amide (z. B. Dimethylformamid oder Dimethylacetamid), chlorierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Dichlormethan), Ether (z. B. Tetrahydrofuran) oder Nitrile (z. B. Acetonitril).

In einigen Fällen (z. B. wenn ein Trialkylorthoformiat, wie Triethylorthoformiat, verwendet wird) kann die Reak tion bevorzugt in Anwesenheit eines Katalysators, wie einer starken Säure (z. B. konzentrierte Salzsäure, Salpetersäure oder Schwefelsäure) durchgeführt werden. Die Reaktion kann bei einer Temperatur im Bereich von -25 bis +150°C, z. B. 0 bis 100°C, und zweckmäßig bei Umgebungstemperatur erfolgen.

Bei einem anderen Verfahren (B) werden Verbindungen der Formel (I) und ihre pharmazeutisch annehmbaren Derivate oder eine geschützte Form davon einer inneren Umwand lungsreaktion unterworfen, wodurch der ursprünglich vor handene Substituent X durch einen anderen Substituenten X ersetzt wird und/oder die ursprünglich vorhandene Gruppe Z wird durch eine andere Gruppe Z ersetzt, und anschließend, falls notwendig, Entfernung irgendwelcher vorhandener Schutzgruppen.

Bei einer Ausführungsform des Verfahrens (B) können Ver bindungen der Formel (I), worin X eine Gruppe RR¹ dar stellt (wobei R und R¹ wie vorstehend definiert sind), hergestellt werden durch Aminierung einer entsprechenden Verbindung der Formel (I), worin X ein Halogenatom (z. B. Chlor) darstellt. Die Aminierung kann bewirkt werden durch Reak tion mit einem Reagens HNRR¹ (worin R und R¹ wie vorste hend definiert sind), zweckmäßig in einem Lösungsmittel, wie einem Alkohol (z. B. Methanol). Die Reaktion kann bei irgendeiner geeigneten Temperatur durchgeführt werden und zweckmäßig bei einer erhöhten Temperatur, wie unter Rückfluß oder, wenn flüssiges Ammoniak verwendet wird, in einem verschlossenen Rohr bei etwa 50 bis 80°C. Ge eignete Bedingungen für die Umwandlung der Halogenide zu sekundären und tertiären Aminen wurden auch von I. T. Harrison et al., Compendium of Organic Synthetic Methods, Wiley-Interscience, New York (1971) auf den Seiten 250 bis 252 beschrieben.

Bei einer anderen Ausführungsform des Verfahrens (B) können Verbindungen der Formel (I), worin X eine Gruppe OR darstellt (R ist wie vorstehend definiert), durch Aus tausch des Halogen-(z. B. Chlor-)atoms mit einem geeigne ten Anion RO^- hergestellt werden. Wenn R ein Wasserstoff atom bedeutet, kann die Austauschreaktion durch Hydrolyse durchgeführt werden, die in Wasser oder in einem Gemisch von Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel, wie einem Alkohol (z. B. Methanol oder Ethanol), einem Ether (z. B. Dioxan oder Tetrahydrofuran), einem Keton (z. B. Aceton), einem Amid (z. B. Dimethylformamid) oder einem Sulfoxid (z. B. Dimethylsulfoxid), zweckmäßig in Anwesenheit einer Säure oder Base, bewirkt werden kann. Geeignete Säuren umfassen organische Säuren, wie p-Tolu olsulfonsäure, und anorganische Säuren, wie Salz-, Salpe ter- oder Schwefelsäure. Geeignete Basen umfassen anorga nische Basen, wie Alkalimetallhydroxide oder -carbonate (z. B. Natrium- oder Kaliumhydroxid oder -carbonat). Wäßrige Säure oder Base kann auch als Reaktionslösungs mittel verwendet werden. Die Hydrolyse kann zweckmäßig bei einer Temperatur im Bereich von -10 bis +150°C, z. B. unter Rückfluß, durchgeführt werden. Bedeutet R eine C_1-4-Alkyl- oder Arylgruppe, wird das Anion RO^- zweck mäßig gebildet aus einem entsprechenden Alkohol ROH un ter Verwendung einer anorganischen Base, wie einem Alka limetall (z. B. metallisches Natrium) oder einem Alkali metallhydrid (z. B. Natriumhydrid). Die Reaktion mit dem in situ gebildeten Anion kann zweckmäßig bei Umgebungs temperatur bewirkt werden.

Bei einer weiteren Durchführungsform des Verfahrens (B) können Verbindungen der Formel (I), worin X eine Gruppe SH bedeutet, hergestellt werden durch Reaktion der Halogenverbindung der Formel (I) mit Thioharnstoff in einem geeigneten Lösungsmittel, wie einem Alkohol (z. B. n- Propanol), bei erhöhter Temperatur (z. B. Rückfluß) und nachfolgende alkalische Hydrolyse. Geeignete Basen, die verwendet werden können, umfassen Alkalimetallhydroxide (z. B. Natriumhydroxid). Die Reaktion kann zweckmäßig durchgeführt werden gemäß der Methode von G. G. Urquart et al., Org. Syn. Coll., Band 3, 363 (1953), z. B. durch Er hitzen des Zwischenprodukts mit wäßriger NaOH während etwa 0,25 bis etwa 5 Stunden unter Rückfluß.

Bei einer anderen Ausführungsform des Verfahrens (B) können Verbindungen der Formel (I), worin X ein Wasser stoffatom bedeutet, hergestellt werden durch Reduktion der Halogenverbindung der Formel (I) unter Verwendung eines reduzierenden Systems, das den Rest des Moleküls nicht angreift. Geeignete Reduktionsmittel, die verwen det werden können, um die gewünschte Enthalogenierungs reaktion zu bewirken, umfassen metallisches Zink/Wasser unter Verwendung der von J. R. Marshall et al., J. Chem. Soc., 1004 (1951), beschriebenen Methode. Alternativ kann die Reaktion durch Photolyse in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Tetrahydrofuran, enthaltend 10% Tri ethylamin, und zweckmäßig in einem Rayonet-photochemi schen Reaktor (2537A) gemäß dem Verfahren von V. Nair et al., J. Org. Chem., 52, 1344 (1987), durchgeführt wer den.

Bei noch einer weiteren Durchführungsform des Verfahrens (B) können Verbindungen der Formel (I), worin X ein Halogenatom ist, hergestellt werden aus einer anderen Halogenverbindung der Formel (I) durch übliche Methoden von Halogenid-Halogenid-Austausch. Alternativ kann, wenn X Chlor bedeutet, dieser Substituent durch ein anderes Halogenatom ersetzt werden unter Verwendung ver schiedener p-(Halo)-benzoldiazoniumchloride nach be kannten Verfahren.

Verbindungen der Formel (I), worin X eine Gruppe SH ist, wobei R für eine C_1-4-Alkyl- oder Arylgruppe steht, kön nen aus den entsprechenden Thiolen unter Anwendung von Standardmethoden der Alkylierung oder Arylierung, bei spielsweise wie in US-PS 4 383 114 beschrieben, herge stellt werden.

Verbindungen der Formel (I), worin Z eine Hydroxylgruppe bedeutet, können zweckmäßig hergestellt werden aus einer entsprechenden Verbindung der Formel (I), worin Z für NH₂ steht, durch Reaktion mit Salpetrigsäure, beispiels weise unter Anwendung der von J. Davoll in J. Amer. Chem. Soc., 73, 3174 (1951), beschriebenen Verfahrensweise.

Viele der oben beschriebenen Reaktionen wurden ausführ lich im Zusammenhang mit der Purinnucleosid-Synthese be schrieben, beispielsweise in Nucleoside Analogs - Chemistry, Biology and Medical Applications, R. T. Walker et al., Herausgeb., Plenum Press, New York (1979) auf den Seiten 193-223, deren Offenbarungsgehalt durch die hier angegebene Bezugnahme miteinbezogen ist.

Pharmazeutisch annehmbare Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen können hergestellt werden gemäß US-PS 4 383 114, deren Offenbarungsgehalt durch die hier ange gebene Bezugnahme miteinbezogen ist. So kann beispiels weise, wenn es gewünscht wird, ein Säureadditionssalz einer Verbindung der Formel (I) herzustellen, das Pro dukt irgendeines der obigen Verfahren in ein Salz überführt werden durch Behandlung der enstandenen, freien Base mit einer geeigneten Säure unter Anwendung üblicher Methoden. Pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze können hergestellt werden durch Umsetzung der freien Base mit einer geeigneten Säure, gegebenenfalls in An wesenheit eines geeigneten Lösungsmittels, wie eines Esters (z. B. Ethylacetat) oder eines Alkohols (z. B. Methanol, Ethanol oder Isopropanol). Anorganische Basen salze können hergestellt werden durch Reaktion der freien Base mit einer geeigneten Base, wie einem Alkoxid (z. B. Natriummethoxid), gegebenenfalls in Anwesenheit eines Lösungsmittels, wie eines Alkohols (z. B. Methanol). Phar mazeutisch annehmbare Salze können auch aus anderen Sal zen hergestellt werden einschließlich anderer pharmazeu tisch annehmbarer Salze der Verbindungen der Formel (I) unter Verwendung üblicher Methoden.

Eine Verbindung der Formel (I) kann in ein pharmazeutisch annehmbares Phosphat oder anderen Ester überführt werden durch Reaktion mit einem phosphorylierenden Mittel, wie POCl₃, oder einem geeigneten veresternden Mittel, wie einem Säurehalogenid oder -anhydrid, wie es zweckmäßig ist. Ein Ester oder Salz einer Verbindung der Formel (I) kann in die Stammverbindung beispielsweise durch Hydro lyse umgewandelt werden.

Die Verbindungen der Formel (II) und Salze davon sind neue Verbindungen und bilden ein weiteres Merkmal der vorliegenden Erfindung.

Die Verbindungen der Formel (II), worin Z für Wasserstoff oder Hydroxyl steht, können direkt aus der Verbindung 2a

hergestellt werden durch Reaktion mit einem Überschuß eines Pyrimidins der Formel (III)

(worin Y ein Halogenatom, z. B. Chlor, ist und Z für Was serstoff oder Hydroxyl steht) in Anwesenheit einer Amin base, wie Triethylamin, und in einem alkoholischen Lö sungsmittel (z. B. n-Butanol), zweckdienlich unter Rück fluß.

Verbindungen der Formel (II), worin Z für NH₂ steht, kön nen hergestellt werden unter Verwendung der Verbindung der Formel 2a durch Reaktion mit einem Überschuß eines Pyrimidins der Formel (IV)

[worin Y wie in der obigen Formel (III) definiert ist] unter ähnlichen Bedingungen, wie sie eben vorstehend für die Herstellung von Verbindungen der Formel (II), worin Z für Wasserstoff oder Hydroxyl steht, beschrieben sind, um eine Verbindung der Formel (V)

zu erhalten, die diazotiert werden kann unter Verwendung eines Diazoniumsalzes ArN₂ ⁺E^- (worin Ar eine aromatische Gruppe bedeutet, z. B. p-Chlorphenyl, und E^- ein Anion, z. B. ein Halogenid, wie Chlorid, bedeutet) in einem Lösungsmittel, wie Wasser, einer organischen Säure, wie Essigsäure, oder einem Gemisch davon, zweckmäßig bei etwa Umgebungstemperatur, um eine Verbindung der Formel (VI)

zu ergeben (worin Ar wie zuvor definiert ist), die in die gewünschte Verbindung der Formel (II) durch Redukti on unter Verwendung von beispielsweise einem reduzieren den Metall, wie Zink, in Anwesenheit einer Säure, z. B. Essigsäure, überführt werden kann. Es sei festgestellt, daß die Auswahl des reduzierenden Mittels von der Natur der Gruppe X abhängen wird.

Die Verbindung 2a kann aus dem Versatil-Vorläufer, 1α- Acetylamino-3α-acetoxy-methylcyclopent-2-en (1a) durch Hydrolyse in Anwesenheit einer schwachen Base, wie eines Erdalkalimetallhydroxids, hergestellt werden.

Eine besonders zweckmäßige Synthese der Verbindungen der Formel (I) über 6-Chlorverbindungen der Formel (II) ist im folgenden aufgeführt.

Die Verbindung 2a und Verbindungen der Formeln (V) und (VI) sind Zwischenprodukte. Diejenigen der Formel (VI) bilden einen weiteren Gegen stand der vorliegenden Erfindung.

Die Verbindung 1a ist eine bekannte Verbindung, die in der US-PS 4 138 562 beschrieben ist.

Wenn die Verbindung der Formel (I) als einziges Isomeres gewünscht ist, kann sie erhalten werden entweder durch Aufspaltung des Endprodukts oder durch stereospezifische Synthese aus isomer-reinem Ausgangsmaterial oder irgend einem geeigneten Zwischenprodukt.

Die Aufspaltung des Endprodukts oder eines Zwischenpro dukts oder Ausgangsmaterials kann daher durch irgendeine in der Fachwelt bekannte Methode bewirkt werden: siehe beispielsweise "Stereochemistry of Carbon Compounds" von E. L. Eliel (McGraw Hill, 1962), und "Tables of Resolving Agents" von S. H. Wilen.

Eine zweckmäßige Methode zur Erzielung chiral-reiner Ver bindungen der Formel (I) besteht in der enzymatischen Um wandlung eines racemischen Gemisches der Verbindung oder eines Vorläufers davon. Durch eine solche Methode kön nen sowohl (+)- als auch (-)-Verbindungen der Formel (I) in optisch reiner Form erhalten werden. Geeignete Enzyme umfassen Desaminasen, wie Adenosindesaminase.

Die Erfindung wird weiterhin unter Bezugnahme auf die folgenden, detaillierten Beispiele beschrieben, worin die Elementaranalysen durch M-H-W Laboratories, Phoenix, AZ, durchgeführt wurden. Die Schmelzpunkte wurden auf einem Mel-Temp-Apparat bestimmt und sind korrigiert. Die kernmagnetischen Resonanzspektren wurden auf Jeol FX 90QFT- oder Nicollet NT300-Spektrometern erhalten und in DMSO-D₆ bestimmt. Chemische Verschiebungen sind aus gedrückt in ppm Abwärtsfeld von Me₄Si. IR-Spektren wur den als KBr-Pellets mit einem Nicollet 50XC FT-IR-Spek trometer bestimmt, und UV-Spektren wurden am Beckmann DU-8-Spektrophotometer gemessen. Die Massenspektren wur den mit einem AEI Scientific Apparatus Limited MS-30- Massenspektrometer erhalten. Die Dünnschichtchromato graphie (TLC) wurde an 0,25 mm Schichten von Merck- Silicagel (230-400 mesh) durchgeführt. Alle Chemikalien und Lösungsmittel sind Reagens-Reinheitsgrad, sofern nicht anders angegeben. Der Ausdruck "aktiver Bestand teil", wie er in den Beispielen verwendet wird, bedeutet eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon.

Beispiel 1 (+)-(1α,4α)-4-[(5-Amino-6-chlor-4-pyrimidinyl)-amino]- 2-cyclopentenylcarbinol (3a)

Ein Gemisch von 1α-Acetylamino-3α-acetoxymethyl-cyclo pent-2-en (1a) (3,0 g, 15 mMol) und wäßrigem Barium hydroxid (0,5 N, 300 ml) wurde über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde es mit Trockeneis neu tralisiert. Der Niederschlag wurde abfiltriert und die wäßrige Lösung wurde zur Trockene eingeengt. Der Rück stand wurde mit absolutem Ethanol extrahiert und erneut eingeengt und ergab 2a als farblosen Sirup, 1,6 g (14 mMol).

Zu diesem Sirup wurden 5-Amino-4,6-dichlorpyrimidin (4,59 g, 28 mMol), Triethylamin (4,2 g, 42 mMol) und n- Butanol (50 ml) gegeben, und die Mischung wurde 24 h unter Rückfluß erhitzt. Die flüchtigen Lösungsmittel wurden entfernt, der Rückstand wurde an Silicagel (7 g) absorbiert, das in einer Flash-Säule (flash column) (4,0 × 12 cm) gepackt war, und mit CHCl₃-MeOH (20/1) eluiert und ergab 2,69 g (74%) der Verbindung 3a; Fp. 130-132°C. Eine analytische Probe wurde durch Umkristal lisieren aus Ethylacetat (EtOAc) erhalten; Fp. 134-135°C.
MS (30 ev, 200°C); m/e 240 und 242 (M⁺ und M⁺ +2), 209 (M⁺ ^-31), 144 (B⁺);
IR: 3600-2600 (OH), 1620, 1580 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₀H₁₃ClN₄O) C, H, N.

Beispiel 2 (+)-(1α,4α)-4-[(2-Amino-6-chlor-4-pyrimidinyl)-amino]- 2-cyclopentenylcarbinol (4a)

Zu 14 mMol rohem 2a (Beispiel 1) wurden 2-Amino-4,6-di chlorpyrimidin (3,74 g, 22,8 mMol), Triethylamin (15 ml) und n-Butanol (75 ml) gegeben und die Mischung wurde 48 h unter Rückfluß erhitzt. Die flüchtigen Lösungsmit tel wurden entfernt, der Rückstand mit Methanol behan delt, um das ungelöste Nebenprodukt (das doppelte Pyrimi dinnucleosid) abzutrennen. Die methanolische Lösung wurde an Silicagel (8 g), das in eine Säule (4,0 × 14 cm) ge packt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (40/1) eluiert und ergab 1,52 g (42%) rohes 4a. Das Produkt wurde aus Ethylacetat umkristallisiert und ergab 4a; Fp. 132-134°C.
MS (30 ev, 200°C); m/e 240 und 242 (M⁺ und M⁺ +2), 209 (M⁺ ^-31), 144 (B⁺);
IR: 3600-3000 (NH₂, OH), 1620, 1580 (C=C, C=N);
Analyse (C₁₀H₁₃ClN₄) C, H, N.

Beispiel 3 (+)-(1α,4α)-4-([(2-Amino-6-chlor-5-(4-chlorphenyl)-azo]- 4-pyrimidinyl-amino)-2-cyclopentenylcarbinol (5a)

Eine kalte Diazoniumsalz-Lösung wurde hergestellt aus p-Chloranilin (1,47 g, 11,5 mMol) in 3 N HCl (25 ml) und Natriumnitrit (870 mg, 12,5 mMol) in Wasser (10 ml). Diese Lösung wurde zu einem Gemisch von 4a (2,40 g, 10 mMol), Essigsäure (50 ml), Wasser (50 ml) und Natri umacetat-trihydrat (20 g) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Der gelbe Niederschlag wurde filtriert und mit kaltem Wasser bis zur Neutralität gewaschen, dann wurde er im Abzug luft- getrocknet, um 3,60 g (94%) 5a zu ergeben, Fp. 229°C (Zers.). Die analytische Probe wurde aus Aceton-Methanol (1/2) erhalten, Fp. 241-243°C (Zers.).
MS (30 ev, 260°C): m/e 378 und 380 (M⁺ und M⁺ +2), 282 (B⁺);
IR: 3600-3000 (NH₂, OH), 1620, 1580 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₆H₁₆Cl₂N₆O) C, H, N.

Beispiel 4 (+)-(1α,4α)-4-[(2,5-Diamino-6-chlor-4-pyrimidinyl)-ami no]-2-cyclopentenylcarbinol (6a)

Ein Gemisch von 5a (379 mg, 1 mMol), Zinkstaub (0,65 g, 10 mMol), Essigsäure (0,32 ml), Wasser (15 ml) und Etha nol (15 ml) wurde 3 h unter Stickstoff zum Rückfluß er hitzt. Das Zink wurde entfernt und die Lösungsmittel wur den verdampft. Der Rückstand wurde an Silicagel (2 g), das in eine Säule von 2,0 × 18 cm gepackt war, absor biert und mit CHCl₃-MeOH (15/1) eluiert. Es wurde ein rosa Sirup erhalten. Weitere Reinigung aus Methanol- Ether lieferte 6a als rosa Kristalle, 170 mg (66%), Fp. 168-170°C.
MS (30 ev, 220°C): m/e 255 und 257 (M⁺ und M⁺ +2), 224 (M⁺ ^-31), 159 (B⁺);
IR: 3600-3000 (NH₂, OH), 1620, 1580 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₀H₁₄ClN₅) C, H, N.

Beispiel 5 (+)-(1α,4α)-4-(6-Chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol (7a)

Ein Gemisch von 3a (1,30 g, 5,4 mMol), Triethylortho formiat (30 ml) und Salzsäure (12 N, 0,50 ml) wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wur de bei 35°C im Vakuum eingedampft. Zu dem Rückstand wur de wäßrige Salzsäure (0,5 N, 30 ml) gegeben und die Mi schung wurde 1 h gerührt. Das Gemisch wurde mit 1 N Na triumhydroxid auf pH 7-8 neutralisiert und an Silicagel (8 g), das in eine Säule (4,0 × 8 cm) gepackt war, ab sorbiert und mit CHCl₃-MeOH (20/1) eluiert und ergab weiße Kristalle von 7a, 1,12 g (82%). Das Rohprodukt wurde aus Ethylacetat unkristallisiert und lieferte 7a, Fp. 108-110°C.
MS (30 ev, 200°C); m/e 250 und 252 (M⁺ und M⁺ +2); 219 (M⁺ ^-31), 154 (B⁺);
IR: 3600-2800 (OH), 1600 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₁ClN₄O) C, H, N.

Beispiel 6 (+)-(1α,4α)-4-(6-Hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol (8a)

Ein Gemisch von 7a (251 mg, 1 mMol) und wäßrigem Natri umhydroxid (0,2 N, 10 ml) wurde 3 h zum Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde die Reaktionsmischung mit Essig säure auf pH 5-6 eingestellt. Die Reaktionsmischung wur de an Silicagel (2 g), das in eine Säule (2,0 × 11 cm) gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (10/1) elu iert und ergab 105 mg (45%) 8a. Das weiße Rohprodukt wurde aus Wasser-Methanol (3/1) unkristallisiert und lieferte 8a, Fp. 248-250°C (Zers.).
MS (30 ev, 300°C); m/e 232 (M⁺), 214 (M⁺ ^-18), 136 (B⁺);
IR: 3600-2600 (OH), 1680, 1600 (C=O, C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₂N₄O₂) C, H, N.

Beispiel 7 (+)-(1α,4α)-4-(6-Amino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol (9a)

Flüssiges Ammoniak wurde in eine Bombe geleitet, die eine Lösung von 7a (250 mg, 1 mMol) in Methanol (5 ml) bei -80°C enthielt. Die Bombe wurde verschlossen und 24 h bei 60°C erhitzt. Ammoniak und Methanol wurden einge dampft und der Rückstand aus Wasser umkristallisiert und ergab weißliche Kristalle von 9a, 187 mg (81%), Fp. 198-200°C.
MS (30 ev, 210°C): m/e 231 (M⁺), 213 (M⁺ ^-18), 135 (B⁺);
IR: 3600-2600 (NH₂, OH), 1700, 1600 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₃N₅O) C, H, N.

Beispiel 8 (+)-(1α,4α)-4-(6-Mercapto-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol (10a)

Ein Gemisch von 7a (125 mg, 0,5 mMol), Thioharnstoff (40 mg, 0,64 mMol) und n-Propanol (5 ml) wurde 2 h zum Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde der Nieder schlag durch Filtrieren isoliert, mit n-Propanol gewa schen und in Natriumhydroxid (1 N, 5 ml) gelöst. Die Lö sung wurde mit Essigsäure auf pH 5 eingestellt. Das rohe 10a (90 mg, 73%) wurde erneut isoliert, Fp. 260-262°C (Zers.), und aus N,N-Dimethylformamid umkristallisiert und ergab 10a, Fp. 263-265°C (Zers.).
MS (30 ev, 290°C): m/e 248 (M⁺), 230 (M⁺ ^-18), 152 (B⁺);
IR: 3600-3200 (OH), 3100, 2400 (Sch), 1600 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₂N₄OS) C, H, N.

Beispiel 9 (+)-(1α,4α)-4-(2-Ainino-6-chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyclo pentenyl-carbinol (13a)

Eine Mischung von 6a (1,41 g, 5,5 mMol), Triethylortho formiat (30 ml) und Salzsäure (12 N, 1,40 ml) wurde über Nacht gerührt. Die Suspension wurde im Vakuum getrock net. Verdünnte Salzsäure (0,5 N, 40 ml) wurde zugesetzt und die Mischung 1 h bei Raumtemperatur umgesetzt. Die Mischung wurde mit 1 N Natriumhydroxid auf pH 8 neutrali siert und an Silicagel (7,5 g), das in eine Säule (4,0 × 10 cm) gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (20/1) eluiert und ergab weißliche Kristalle von 13a, 1,18 g (80%). Das Rohprodukt wurde aus Ethanol umkristallisiert und lieferte 13a, Fp. 145-147°C.
MS (30 ev, 220°C): m/e 265 und 267 (M⁺ und M⁺ +2), 235 (m⁺ ^-30), 169 (B⁺);
IR: 3600-2600 (NH₂, OH), 1620-1580 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₂N₅OCl.3/4H₂O) C, H, N.

Beispiel 10 (+)-(1α,4α)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclo pentenyl-carbinol (14a)

Ein Gemisch von 13a (266 mg, 1 mMol) und wäßrigem Natri umhydroxid (0,33 N) wurde 5 h zum Rückfluß erhitzt, an Silicagel (2 g), das in eine Säule (2,0 × 7,5 cm) ge packt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (5/1) eluiert. Das Rohprodukt wurde aus Methanol-Wasser (1/4) umkristal lisiert und ergab weiße Kristalle von 14a, 152 mg (61%), Fp. 254-256°C (Zers.).
MS (30 ev, 200°C): m/e 247 (M⁺), 217 (M⁺ ^-30), 151 (B⁺);
IR: 3600-2600 (NH₂, OH), 1700, 1600 (C=O, C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₃N₅O₂.3/4H₂O) C, H, N.

Beispiel 11 (+)-(1α,4α)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-2-cyclo pentenyl-carbinol (15a)

Flüssiges Ammoniak wurde in eine Lösung von 13a (265 mg, 1 mMol) in Methanol (10 ml) bei -80°C in einer Bombe ge leitet. Die Bombe wurde verschlossen und 48 h auf 75°C erhitzt. Ammoniak und Methanol wurden eingedampft. Der Rückstand wurde an Silicagel (2 g), das in eine Säule (2,0 × 10 cm) gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃- MeOH (15/1) eluiert. Das Rohprodukt wurde aus Ethanol umkristallisiert und ergab 196 mg (80%) 15a, Fp. 152-155°C.
MS (30 ev, 200°C): m/e 246 (M⁺), 299 (M⁺ ^-17), 216 (M⁺ ^-30), 150 (B⁺);
IR: 3600-3000 (NH₂, OH), 1700, 1650, 1600 (C=O, C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₄N₆O) C, H, N.

Beispiel 12 (1S,4R)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol [(1S,4R)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopenten- methanol] (a) Zwischenverbindung 1

(1R,2S,3R,5R)-3-[6-Amino-9H- purin-9-yl]-5-[((1,1-dimethylethyl)-dimethylsilyloxy)- methyl]-1,2-cyclopentandiol (-) Aristeromycin¹ (12,505 g), tert.-Butyldimethylsilylchlorid (7,8 g) und Imidazol (12,96 g) in trockenem Dimethylformamid (85 ml) wurden 2 1/2 h bei Umgebungstemperatur gerührt. Die erhaltene Lösung wurde mit Ethylacetat (500 ml) verdünnt, dann mit Wasser (3 × 100 ml) und Salzlösung (50 ml) gewaschen, be vor ein weißer Feststoff auskristallisierte. Dieser wurde durch Filtrieren gesammelt, mit Ethylacetat gewa schen, dann im Vakuum getrocknet und ergab das Titel produkt (3,92 g).
¹H-NMR (DMSO-d₆) 8,15 (1H), 8,09 (1H), 7,19 (2H), 5,00 (1H), 4,72 (1H), 4,69 (1H), 4,36 (1H), 3,85 (1H), 3,67 (2H), 2,23 (1H), 2,09 (1H), 1,79 (1H), 0,89 (9H), 0,07 (6H).
¹ Journal of the American Chemical Society 1983, Band 105, 4049-4055.

(b) Zwischenverbindung 2 (4R,3aS,6R,6aR)-4-[6-Amino- 9H-purin-9-yl]-6-[((1,1-dimethylethyl)-dimethylsilyl oxy)-methyl]-3a,5,6,6a-tetrahydro-4H-cyclopenta-1,3- dioxol-2-thion

Eine gerührte Suspension von Zwischenverbindung 1 (3,45 g) in trockenem Dimethylformamid (56 ml) wurde mit 1,1'-Thiocarbonyldiimidazol (3,3 g) behandelt und ergab eine gelbe Lösung. Nach 15 1/2 h bei Umgebungstem peratur wurde die entstandene Lösung mit der von einem vorhergehenden Experiment (6% Einwaage) kombiniert und das Lösungsmittel wurde durch Verdampfen entfernt. Das zurückbleibende Öl wurde mit Ethylacetat (100 ml) ver dünnt, dann mit Wasser (2 × 20 ml) und Salzlösung (2 × 20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und zu einem gelben Fest stoff eingedampft. Dieser wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen, dann durch Filtrieren gesammelt, weiter mit Ether (25 ml) gewaschen, dann im Vakuum getrocknet und ergab das Titelprodukt als blaß-cremefarbenen Feststoff (3,61 g);
λ_max (Ethanol) 240,0 nm (E 1%|1cm 459);
¹H-NMR (DMSO-d₆) 8,27 (1H), 8,13 (1H), 7,33 (2H), 5,81 (1H), 5,37 (1H), 5,28 (1H), 3,78 (2H), 2,60 (1H), 2,28 (2H), 0,90 (9H), 0,09 (6H).

(c) Zwischenverbindung 3 (1'R,4'S)-9-[4-(((1,1-Dime thylethyl)-dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1- yl]-9H-purin-6-amin

Eine Lösung von Zwischenverbindung 2 (3,57 g) in trocke nem Tetrahydrofuran (25 ml) wurde mit einer Lösung von 1,3-Dimethyl-2-phenyl-1,3,2-diazaphospholidin (4,94 g) in trockenem Tetrahydrofuran (10 ml) behandelt, dann 8 3/4 h bei Umgebungstemperatur gerührt. Das Lösungsmit tel wurde durch Eindampfen entfernt. Das zurückbleibende Öl wurde mit dem aus einem vorherigen Experiment (40% Einwaage) vereinigt, dann der Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (200 g, Merck 7734) unterworfen, mit Chloroform, dann mit Chloroform-Ethanol-Gemischen elu iert und ergab einen weißen Feststoff. Dieser Feststoff wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen und dann durch Filtrieren gesammelt. Der Feststoff wurde weiter mit Ether (10 ml) gewaschen, dann im Vakuum getrocknet und lieferte das Titelprodukt (1,47 g).
λ_max (Ethanol) 261,4 nm (E 1%|1cm 443)
¹H-NMR (DMSO-d₆) 8,14 (1H), 8,00 (1H), 7,20 (2H), 6,12 (1H), 5,95 (1H), 5,60 (1H), 3,66 (2H), 2,96 (1H), 2,69 (1H), 1,65 (1H), 0,74 (9H), 0,02 (6H).

(d) Zwischenverbindung 4 (1'R,4'S)-9-[4-(((1,1-Dimethyl ethyl)-dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1-yl]-9H- purin-6-amin, 1-Oxid

Eine Lösung von Zwischenverbindung 3 (1,37 g) in Chloro form (30 ml) wurde mit 80- bis 90%iger m-Chlorperoxy benzoesäure (1,29 g) behandelt, dann 3 h bei Umgebungs temperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Ver dampfen entfernt und das verbleibende Gummi wurde in Ethylacetat (10 ml) gelöst. Es kristallisierte ein weißer Feststoff aus. Dieser Feststoff und das durch Eindampfen des Filtrats gewonnene Material wurden in Chloroform (100 ml) gelöst, dann mit gesättigter, wäßriger Natri umbicarbonat-Lösung (3 × 10 ml) und Salzlösung (2 × 10 ml) ge waschen. Die Waschwässer wurden mit Chloroform (50 ml) rückextrahiert. Die vereinigten, organischen Lösungen wurden getrocknet (MgSO₄) und dann zu einem Feststoff eingedampft. Dieser Feststoff wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen und dann durch Filtrieren gesammelt. Der weiße Feststoff wurde weiter mit Ether (10 ml) ge waschen, dann im Vakuum getrocknet und ergab das Titel pro dukt (1,16 g).
λ_max (Ethanol) 235,4 nm (E 1%|1cm 1324), 263,2 nm (E 1%|1cm 248), 300,2 nm (E 1%|1cm 75);
¹H-NMR (CDCl₃) 8,72 (1H), 8,02 (1H), 7,16 ( 2H,), 6,21 (1H), 5,87 (1H), 5,72 (1H), 3,68 (2H), 3,04 (1H), 2,82 (1H), 1,74 (1H), 0,89 (9 H), 0,06 (6H).

(e) Zwischenverbindung 5 (1'R,4'S)-7-[4-(((1,1-Dime thylethyl)-dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1-yl]- 2-imino-1,2-dihydro[1,2,4]oxadiazolo[3,2-i]-9H-purin- hydrobromid

Eine gerührte, eisgekühlte Suspension von Zwischen verbindung 4 (1,08 g) in Methanol (20 ml) wurde mit ei ner Lösung von Cyanbromid (0,34 g) in Methanol (20 ml), die während 5 min zugesetzt wurde, behandelt. Nach 15 min konnte sich die Suspension auf Umgebungstempera tur erwärmen und lieferte eine Lösung. Nach 90 min wur de das Lösungsmittel durch Eindampfen entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen und dann durch Filtrieren gesammelt. Der Feststoff wurde weiter mit Ether (25 ml) gewaschen, dann im Vakuum ge trocknet und ergab das Titelprodukt (1,37 g).
λ_max (Ethanol) 228,2 nm (E 1%|1cm 530), 285,2 nm (E 1%|1cm 445);
¹H-NMR (CDCl₃) 10,20 ( 1H), 10,02 (1H), 8,37 (1H), 6,25 (1H), 6,01 (1H), 5,90 (1H), 3,69 (2H), 3,05 (1H), 2,86 (1 H), 1,73 (1H), 0,86 (9H), 0,03 ( 6H).

(f) Zwischenverbindung 6 (1'R,4'S)-9-[4-(((1,1-Dime thylethyl)-dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1- yl]-6-cyanoimino-1,6-dihydro-1-methoxy-9H-purin

Eine Lösung von Zwischenverbindung 5 (1,36 g) in Dime thylformamid (10 ml) wurde bei Umgebungstemperatur ge rührt und dann mit Triethylamin (1,2 ml) behandelt. Nach 40 min wurde Jodmethan (0,54 ml) zugesetzt, was eine gelbe Lösung ergab. Nach 3 3/4 h wurde das Lösungs mittel durch Verdampfen entfernt. Der Rückstand wurde zwischen Ethylacetat (100 ml) und Wasser (20 ml) ver teilt. Die organische Lösung wurde weiter mit Wasser (2 × 20 ml) und Salzlösung (20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und zu einem Feststoff eingedampft. Dieser Fest stoff wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen und dann durch Filtrieren gesammelt. Dieser weiße Feststoff wurde weiter mit Ether (10 ml) gewaschen, dann im Vakuum ge trocknet und ergab das Titelprodukt (0,865 g).
λ_max (Ethanol) 227,2 nm (E 1%|1cm 449), 287,0 nm (E 1%|1cm544);
¹H-NMR: 8,23 (1H), 7,96 (1H ), 6,24 (1H), 5,85 (1H), 6,65 (1H), 4,21 (3H), 3,66 (2H), 3,04 (1H), 2,77 (1H), 1,68 (1 H), 0,88 (9H), 0,05 (6H).

(g) Zwischenverbindung 7 (1'R,4'S)-9-[4-(((1,1-Dime thylethyl)-dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1-yl]- 6-methoxyamino-9H-purin-2-amin

Eine Lösung von Zwischenverbindung 6 (802 mg) und 1,8- Diazabicyclo[5,4,0]undec-7-en (0,45 ml) in Ethanol (80 ml) wurde gerührt und zum Rückfluß erhitzt. Nach 9 h wurde das Erhitzen gestoppt und die Lösung über Nacht bei Umgebungstemperatur stehengelassen. Das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen entfernt. Das verbleibende Öl wurde mit dem aus einem vorhergehenden Experiment (4% Einwaage) vereinigt, dann der Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (40 g, Merck 9385) unterzogen, mit Chloroform, dann mit Chloroform-Ethanol-Gemischen elu iert und ergab einen Schaum. Dieser Schaum wurde mit Di ethylether (10 ml) verrieben und der entstandene Fest stoff durch Filtrieren gesammelt. Der Feststoff wurde weiter mit Ether (5 ml) gewaschen, dann im Vakuum ge trocknet und lieferte das Titelprodukt (594 mg).
λ_max (Ethanol) 282,2 nm (E 1%|1cm 409);
¹H = NMR (DMSO-d₆) 9,76 (1H), 7,32 (1H), 6,53 (2H), 6,08 (1 H), 5,88 (1H), 5,26 (1H), 3,72 ( 3H), 3,61 (2H), 2,90 (1H), 2,50 (1H), 1,52 (1H), 0,83 (9H), 0,02 (6H).

(h) Zwischenverbindung 8 (1S,4R)-4-[2-Amino-6-methoxy amino-9H-purin-9-yl]-2-cyclopenten-methanol

Eine Lösung von Zwischenverbindung 7 (356 mg) in Tetra hydrofuran (35 ml) wurde bei Umgebungstemperatur gerührt und dann mit Tetrabutylammoniumfluorid (1,0 M Lösung in Tetrahydrofuran, 1,4 ml) behandelt. Nach 90 min wur de die Reaktionsmischung mit Wasser (1 ml) abgeschreckt, dann wurden die Lösungsmittel durch Eindampfen entfernt. Das zurückbleibende Öl wurde der Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (20 g, Merck 7734) unterzogen, mit Chloroform, dann mit Chloroform-Ethanol-Gemischen elu iert und ergab das Titelprodukt als Feststoff (243 mg).
λ_max(pH6-Puffer) 280,2 nm (E 1%|1cm 534);
¹H-NMR (DMSO-d₆) 9,75 (1H), 7,39 (1H), 6,52 (2H), 6,10 (1 H), 5,84 (1H), 5,27 (1H), 4,73 ( 1H), 3,40 (2H), 2,83 (1H), 2,55 (1H), 1,52 (1H).

(1S,4R)-4-[2,6-Diamino-9H-purin-9-yl]-2-cyclopenten- carbinol

Eine gerührte, eisgekühlte Lösung von Zwischenverbin dung 8 (210 mg) in Wasser (10 ml) und Tetrahydrofuran (50 ml) wurde mit Aluminiumamalgam [aus Aluminium (237 mg) und 0,5%iger wäßriger Quecksilber(II)-chlorid- Lösung] behandelt, das in kleinen Stücken während 15 min zugesetzt wurde. Nach 40 min konnte sich die gerührte Mischung auf Umgebungstemperatur erwärmen. Nach 15 h wurde das entstandene Gemisch durch Kieselgur zur Entfernung von Unlöslichkeiten filtriert. Diese wurden mit Wasser/Tetrahydrofuran (1/5, 60 ml) gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden eingedampft. Der Rückstand wurde der Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (10 g, Merck 9385) unterzogen, mit Chloroform-Ethanol-Gemischen eluiert und ergab das Titelprodukt als Schaum (159 mg); [α]_D = -81° (c = 1,04, Methanol).
λ_max(pH6-Puffer) 255,0 nm (E 1%|1cm 302) 280,8 nm (E 1%|1cm 381)
¹H-NMR (DMSO-d₆) 7,61 ( 1H), 6,66 (2H), 6,10 (1H), 5,87 ( 1H), 5,76 (2H), 5,38 (1H), 4,76 (1H), 3,45 (2H), 2,87 (1H), 2,60 (1H), 1,60 (1H).

Beispiel 13 (1S,4R)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclo pentenyl-carbinol (1'R,4'S)-2-Amino-1,9-dihydro-9-[4-hydroxymethyl-2- cyclopenten-1-yl]-6H-purin-6-on

Eine trübe Lösung der Titelverbindung von Beispiel 12 (144 mg) in 0,1 M pH6-Puffer (10 ml) (aus 28,4 g Dina triumorthophosphat in 2 l Wasser, mit Orthophosphor säure eingestellt) wurde mit einer Lösung von Adenosin desaminase (0,5 ml, 778 Einheiten) in 50% Glycerin- 0,01 M Kaliumphosphat (pH 6,0) behandelt, dann gerührt und auf 37°C erwärmt. Nach 18 1/2 h wurde die entstande ne Suspension abgekühlt. Der gesammelte Feststoff wurde aus Wasser umkristallisiert und lieferte das Ti telprodukt als weißen Feststoff (86 mg); [α]_D = -49° (c = 0,5, Dimethylsulfoxid).
λ_max (pH6-Puffer) 252,6 nm (E 1%|1cm 531);
¹H-NMR (DMSO-d₆) 10,60 (1H), 7,60 (1H), 6,47 (2H), 6,10 (1 H), 5,86 (1H), 5,33 (1H), 4,72 ( 1H), 3,45 (2H), 2,59 (1H), 1,58 (1H).

Beispiel 14 Herstellung von Enantiomeren des (1α,4α)-4-(2-Amino-6- hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinols (a) (1S,4R)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2- cyclopentenyl-carbinol

Das Diamino-Analoge (100 mg) (Beispiel 11) wurde in 3 ml 0,05 M K₂PO₄-Puffer (pH 7,4) unter Erhitzen (50°C) ge löst. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mit 40 Einheiten Adenosin-desaminase (Sigma, Typ VI, Kalbsdarmschleimhaut) versetzt. Nach 3tägiger Inkubation bei Raumtemperatur bildete sich ein Niederschlag, der durch Filtrieren entfernt wurde, Ausbeute 18,2 mg. Das Filtrat wurde auf 1,5 ml eingeengt und 2 Tage gekühlt. Zusätzlicher Feststoff wurde durch Filtrieren erhalten, Ausbeute 26,8 mg. Die beiden Feststoff-Fraktionen wur den aus Wasser umkristallisiert und ergaben das reine Titelprodukt, Fp. 269-272°C; [α] 24|D = -62,1°(c = 0,3, MeOH).

(b) (1R,4S)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclo pentenyl-carbinol

Die Filtrate aus der Herstellung des 1S,4R-Isomeren (Beispiel 14a) wurden kombiniert und zur Trockene einge dampft. Das unveränderte Diamino-Ausgangsmaterial wurde an einer Silicagel-Flashsäule unter Verwendung von 10% Methanol/Chloroform abgetrennt. Die Diaminoverbindung wurde in 0,05 M K₂PO₄-Puffer (pH 7,4) (15 ml) gelöst und mit 800 Einheiten Adenosin-desaminase versetzt. Die Lösung wurde 96 h bei 37°C inkubiert. TLC zeigt an, daß einiges nichtumgesetztes Produkt verblieben war. Die Lösung wurde 3 min in siedendem Wasser erhitzt und fil triert, um denaturiertes Protein zu entfernen. Weitere 800 Einheiten Adenosin-desaminase wurden zugegeben und das Verfahren wurde wiederholt. Die entproteinierte Lösung wurde zur Trockene eingedampft und das Produkt aus Wasser kristallisiert. Das Titelprodukt wurde als weißer Feststoff durch Filtration aus Wasser gesammelt, Fp. 265-270°C; [α] 24|D = +61,1° (c = 0,3, MeOH).

Beispiel 15 (+)-(1α,4α)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclo pentenylacetoxy-carbinol

Zu einer Suspension des Produkts von Beispiel 10 (130 mg, 0,50 mMol) und 4-Dimethylaminopyridin (5 mg, 0,04 mMol) in einem Gemisch von Acetonitril (6 ml) und Triethyl amin (0,09 ml, 0,66 mMol) wurde Essigsäureanhydrid (0,06 ml, 0,6 mMol) gegeben. Die Mischung wurde 3 h bei Raumtemperatur gerührt. Methanol (1 ml) wurde zugesetzt, um die Reaktionsmischung abzuschrecken. Die Lösung wurde eingeengt und an Silicagel (1,5 g), das auf einer Säule (2,0 × 12 cm) gepackt war, absorbiert, mit CHCl₃-MeOH (20/1) eluiert. Die Produktfraktionen wurden gesammelt und konzentriert und ergaben einen weißen Feststoff. Das Feststoffprodukt wurde mit MeOH-AcOEt gewaschen, Ausbeute 123 mg (85%). Weitere Reinigung aus Methanol ergab das Titelprodukt als nadelartige Kristalle, Fp. 237-239°C.
Analyse: (C₁₃H₁₅N₅O₃) C, H, N.

Beispiel 16 (1S,4R)-4-[2-Amino-9H-purin-9-yl]-2-cyclopentenyl- carbinol

Eine gerührte, eisgekühlte Lösung von (1 S,4R)-4-[2- Amino-6-methoxyamino-9H-purin-9-yl]-2-cyclopenten- methanol (Zwischenverbindung 8, Beispiel 12) (1,202 g) in Tetrahydrofuran (250 ml) und Wasser (50 ml) wurde mit Aluminiumamalgam [aus Aluminium (1,761 g) und 0,5%iger wäßriger Quecksilber(II)-chlorid-Lösung], das in kleinen Stücken während 1 h 47 min zugesetzt wurde, behandelt. Nach 35 min konnte sich die gerührte Mischung auf Umge bungstemperatur erwärmen. Nach 16 h 50 min wurde weite res Aluminiumamalgam (aus 235 mg Aluminium) im Verlauf von 14 min zugesetzt. Nach weiteren 4 h 10 min wurde das entstandene Gemisch durch Kieselgur filtriert, um Unlöslichkeiten zu entfernen. Diese wurden mit Tetra hydrofuran/Wasser (5 /1) (300 ml) gewaschen. Die vereinig ten Filtrate wurden zu einem gelben Schaum eingedampft. Der Schaum wurde der Säulenchromatographie an Silicium dioxid (33,8 g, Merck 7734), hergestellt in Chloroform, unterzogen und mit Chloroform-Ethanol-Gemischen eluiert und ergab mehrere Fraktionen (578 mg, 420 mg und 40 mg). Die beiden größeren Fraktionen wurden getrennt aus Iso propanol kristallisiert. Die Filtrate wurden mit der kleinsten Säulenfraktion vereinigt und der präparativen Dünnschichtchromatographie (Merck 5717), dreimal in 10/1 Chloroform/Methanol entwickelt, unterworfen. Die Platten wurden mit Ethylacetat und Ethylacetat/Ethanol (1/1) elu iert und ergaben einen braunen Feststoff (45 mg). Der Feststoff wurde der Säulenchromatographie an Silicium dioxid (2,7 g, Merck 7734), hergestellt in Chloroform, unterzogen und mit Chloroform-Methanol-Triethylamin- Gemischen eluiert und ergab ein Gummi (17 mg). Im Anschluß an eine erfolglose Kristallisation aus Isopropa nol und Holzkohlen-Behandlung in Methanol wurde eine wäßrige Lösung des gewonnenen Materials gefriergetrock net und ergab die Titelverbindung (15 mg).
¹H-NMR (DMSO-d₆) 1,62 ( 1H), 2,63 (1H), 2,89 (1H), 3,45 ( 2H), 4,73 (1H), 5,48 (H), 5,91 (H), 6,14 (H), 6,50 (2H), 7,98 (1H), 8,57 (1 H);
MS [MH]⁺ 232.

Beispiel 17 Tablettenformulierungen

A) Die folgende Formulierung wird durch Naßgranula tion der Bestandteile mit einer Lösung von Povidone in Wasser, Trocknen und Sieben und anschließende Zugabe von Magnesiumstearat sowie Verpressen hergestellt.

mg/Tablette

(a) Aktiver Bestandteil 250

(b) Lactose B. P. 210

(c) Povidone B. P. 15

(d) Natriumstärkeglykolat 20

(e) Magnesiumstearat 5

500
B) Die folgende Formulierung wird durch direktes Verpressen hergestellt; die Lactose ist vom Typ für direktes Verpressen.

mg/Tablette

Aktiver Bestandteil 250

Lactose 145

Avicel 100

Magnesiumstearat 5

500
C) (Formulierung mit gesteuerter Freigabe). Die Formulierung wird hergestellt durch Naßgranulation der Bestandteile (unten) mit einer Lösung von Povidone in Wasser, Trocknen und Sieben, anschließend Zugabe von Magnesiumstearat und Verpressen.

mg/Tablette

(a) Aktiver Bestandteil 500

(b) Hydroxypropylmethylcellulose (Methocel K4M Premium) 112

(c) Lactose B. P. 53

(d) Povidone B. P. 28

(e) Magnesiumstearat 7

700

Beispiel 18 Kapselformulierung

Eine Kapselformulierung wird hergestellt durch Vermi schen der folgenden Bestandteile und Einfüllen in eine zweiteilige Hartgelatinekapsel.


mg/Kapsel
Aktiver Bestandteil	125,0
Lactose	72,5
Avicel	50,0
Magnesiumstearat	2,5
250,0

Beispiel 19 Injizierbare Formulierung

Aktiver Bestandteil 0,200 g
Natriumhydroxidlösung, 0,1 M Auffüllen auf pH von etwa 11 steriles Wasser Auffüllen auf 10 ml.

Der aktive Bestandteil wird in etwas von dem Wasser suspendiert (das erwärmt sein kann) und das pH auf etwa 11 mit einer Lösung von Natriumhydroxid eingestellt. Der Ansatz wird dann auf das Volumen gebracht und durch ein Membranfilter mit Sterilisationsreinheit in eine sterile 10 ml Glasflasche filtriert und mit sterilen Verschlüssen und Versiegelungen versehen.

Beispiel 20

Suppositorium
mg/Suppositorium
Aktiver Bestandteil (63 µm)	250
Hartfett, BP	1770
2020

Ein Fünftel des Hartfetts wird in einem dampfummantel ten Tiegel bei höchstens 45°C geschmolzen. Der aktive Bestandteil wird durch ein 200 µm Sieb gestreut und zu der geschmolzenen Basis unter Vermischen zugegeben unter Verwendung eines Hochleistungsscherrührers, bis eine glatte Dispersion erreicht ist. Unter Aufrechterhaltung der Mischung bei 45°C wird das restliche Hartfett zu der Suspension gegeben und gerührt, daß eine homogene Mi schung erreicht wird. Die gesamte Suspension wird durch ein 250 µm Sieb aus rostfreiem Stahl geleitet und unter fortgesetztem Rühren auf 40°C abkühlen gelassen. Bei ei ner Temperatur von 38 bis 40°C werden 2,02 g des Gemi sches in geeignete 2 ml-Plastikformen gefüllt. Die Suppositorien werden auf Raumtemperatur abkühlen gelas sen.

Beispiel 21 - Antivirale Aktivität (A) Anti-HIV-Prüfung

Verbindungen der Formel (I) wurden auf Anti-HIV-Aktivi tät bei dem National Cancer Institute, Frederick Cancer Research Facility, Frederick, Maryland (FCRF), geprüft. Die folgenden sind die geläufigen Screening-Methoden, die bei FCRF verwendet werden. Das Protokoll besteht aus drei Bereichen, (I) Herstellung der infizierten Zellen und Verteilung auf Testplatten, (II) Her stellung der Arzneimittel-Verdünnungsplatten und Vertei lung auf die Testplatten und (III) XTT-Prüfverfahren; vergl. D. A. Scudiero et al., "A New Simplified Tetrazolium Assay for Cell Growth and Drug Sensitivity in Culture", Cancer Res., 48, 4827 (1988).

I. Infektion und Verteilung von ATH8-Zellen auf Mikro titerplatten

Die zu infizierenden Zellen (eine normale lampho blastoide Zell-Linie, welche CD4 ausdrückt) werden in 50 ml konische Zentrifugengläser gegeben und 1 h mit 1 bis 2 µg/ml Polybrene bei 37°C behandelt. Die Zellen werden dann 8 min bei 1200 U/min pelletiert. HIV-Virus, verdünnt 1 : 10 in Medien (RMP1-1640, 10% Humanserum oder 15% fötales Kalbserum (FCS), mit IL-2 und Antibiotika), wird zugesetzt, um ein MOI von 0,001 zu erzielen. Medium allein wird zu virusfreien Kontrollzellen gegeben. Unter Annahme eines Infektionsvirustiters von 10^-4, stellt ein MOI von 0,001 8 infektiöse Virusteilchen/10000 Zel len dar. Etwa 500000 Zellen/Glas werden den 400 µl der Virusverdünnung ausgesetzt. Das entstandene Gemisch wird 1 h bei 37°C in Luft-CO₂ inkubiert. Die infizier ten oder nichtinfizierten Zellen werden verdünnt, um 1 × 10^-4 (mit Humanserum) oder 2 × 10^-4 (mit fötalem Kalb serum) Zellen/100 µl zu ergeben.

Infizierte oder nichtinfizierte Zellen (100 µl) werden auf geeignete Vertiefungen einer Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen und U-Boden verteilt. Jede Verdünnung einer Verbindung wird doppelt mit infizierten Zellen ge testet. Nichtinfizierte Zellen werden auf Arzneimittel empfindlichkeit in einer einzigen Vertiefung für jede Verdünnung einer Verbindung geprüft. Arzneimittelfreie Kontrolzellen, infiziert und nichtinfiziert, laufen in Dreifach. Die Vertiefungen B2 bis G2 dienten als Re agenskontrollen und erhielten nur Medium. Die Platten werden bei 37°C in Luft-CO₂ inkubiert, bis das Arznei mittel zugesetzt wird.

II. Arzneimittelverdünnung und -zugabe

Verdünnungsplatten (flacher Boden mit 96 Vertiefungen, Mikrotiterplatten) werden über Nacht mit Phosphat-ge pufferter Salzlösung (PBS) oder Medien behandelt, die mindestens 1% FCS oder 1% Humanserum (abhängig von dem in dem Test verwendeten Medium) enthielten, beginnend am Tag vor der Prüfung. Dieses "Blockierungsverfahren" wird verwendet, um die Adsorption des Arzneimittels an die Mikrotiterplatte während des Verdünnungsprozesses zu begrenzen. Die Vertiefungen werden vollständig mit der blockierenden Lösung gefüllt und bei Raumtemperatur in einer feuchten Kammer unter einer Abzugshaube stehengelassen.

Das Verdünnungsverfahren wird begonnen, indem die Test verbindung zuerst 1 : 20 verdünnt wird. Blockierte Ver dünnungsplatten werden hergestellt, indem die blockie rende Lösung ausgekippt und auf steriler Gaze troc kengelöscht wird. Alle Vertiefungen jeder Platte wer den dann mit 225 µl des geeigneten Mediums unter Ver wendung eines Cetus Flüssig-Behandlungssystems ge füllt. 25 µl jeder 1 : 20 verdünnten Verbindung werden dann manuell zu Reihe A einer blockierten und gefüll ten Verdünnungsplatte gegeben. Vier Verbindungen, aus reichend, um zwei Testplatten zu füllen, werden pro Verdünnungsplatte zugesetzt. Die vier Verbindungen werden dann seriell 10fach verdünnt von Reihe A bis Reihe H unter Verwendung des Cetus liquid handling Systems. Die Ausgangsverdünnung jeder Verbindung in Reihe A ist an diesem Punkt 1 : 200. Die Verdünnungs platten werden auf Eis gehalten, bis sie gebraucht wer den.

Unter Verwendung eines Multikanal-Pipettors mit 6 Mikrospitzen werden 100 µl jeder Arzneimittelverdünnung auf die Testplatte übertragen, die bereits 100 µl Me dium plus Zellen enthält. Die Endverdünnung in der Test platte beginnt bei 1 : 400 (Vertiefungen B4 bis G4). Diese Verdünnung (auf 0,25% DMSO) hindert den DMSO-Träger, das Zellwachstum zu stören. Arzneimittelfreie, infizierte oder nichtinfizierte Zellen (Vertiefungen B3 bis G3) und Reagenskontrollen (B2 bis G2) erhalten das Medium allein. Die letzten 2 Verbindungen werden dann von den Vertie fungen H7 bis H12 auf eine zweite Testplatte unter Be folgung des gleichen Verfahrens übertragen. Die Test platten werden bei 37°C in Luft-CO₂ während 7 bis 14 Ta gen oder bis die Viruskontrollproben lysiert sind, was makroskopisch bestimmt wird, inkubiert.

III. Quantitative Bestimmung der viralen Cytopathogeni tät und Arzneimittelaktivität A. Materialien

1. Eine Lösung von 2,3-Bis-[2-methoxy-4-nitro-5- sulfophenyl]-5-[(phenylamino)-carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxid. (XTT) - 1 mg/ml Lösung in Medien ohne FCS. Lagerung bei 4°C. Wöchentlich zubereiten.
2. Phenazinmethosulfonat(PMS)-Vorratslösung - Diese kann hergestellt und gefroren gehalten werden bei -20°C bis zum Gebrauch. Sie sollte in PBS mit einer Konzen tration von 15,3 mg/ml hergestellt sein.

B. Mikrokultur-Tetrazolium-Untersuchung (MTA)

1. Herstellung von XTT-PMS-Lösung - Das XTT-PMS wird unmittelbar vor seiner Zugabe zu den Vertiefungen der Kulturschalen hergestellt. Die PMS-Vorratslösung wird 1 : 100 (0,153 mg/ml) verdünnt. Verdünnte PMS wird zu je dem ml XTT gegeben, das benötigt wird, um eine PMS-End konzentration von 0,02 mM zu ergeben. Ein 50 µl Aliquot der XTT-PMS-Mischung wird zu jeder der geeigneten Ver tiefungen gegeben und die Platte 4 h bei 37°C inku biert. Die Plattendeckel werden entfernt und durch haf tende Plattenverschlüsse (Dynatech cat 001-010-3501) ersetzt. Die verschlossene Platte wird auf einem Mikro kultur-Plattenmixer geschüttelt und die Absorption wird bei 450 nm bestimmt.

IV. Ergebnisse

Man erstellt eine graphische Darstellung der Prozente der Testzellen gegenüber nichtinfizierten Zellen (%) sowohl für infizierte als auch nichtinfizierte Zellen als Funktion der steigenden Konzentration an Verbin dung von Beispiel 10.

Die aufgetragenen Daten ermöglichen die Be rechnung einer effektiven Konzentration (EC₅₀) in bezug auf infizierte Zellen von etwa 0,15 µg/ml, eine inhibi torische Konzentration (IC₅₀) in bezug auf normale Zel len von etwa 100 µg/ml und einen therapeutischen Index (TI₅₀) von etwa 667. Ein früherer Versuch, der an dem Southern Research Institute durchgeführt worden war, er gab bei TI₅₀ etwa 200, wenn MT-2-Zellen mit H9/HTLV- IIIB gezüchtet waren.

Die Hemmkonzentrationen gegenüber HIV, die, wie oben be schrieben, für die Verbindungen der Beispiele 7, 9, 10, 11 und 14(b) bestimmt wurden, sind in Tabelle 1 gezeigt.

Tabelle 1

Die Verbindungen der Beispiele 5 und 8 zeigten ebenfalls antivirale Aktivität bei diesem Screening.

(B) Aktivität gegenüber Katzenleukämie-Virus

Das antivirale Screening auf Aktivität gegenüber FeLV- FAIDS wurde in Platten mit 96 Vertiefungen (Corning) un ter Verwendung von 81C-Indikatorzellen in Iscove's Modified Dulbecco's Medium, ergänzt mit 10% hitze-inak tiviertem fötalem Rinderserum (FBS), durchgeführt. 20 h vor dem Versuch wurden die Platten mit den 81C-Zellen bei 5 × 10³ Zellen/Vertiefung beimpft. Am Tage des Ver suchs wurden die Zellen 30 min bei 37°C mit DEAE- Dextran (25 µg/ml) in 0,1 ml Hanks ausgeglichener Salz lösung vorbehandelt. Diese wurde entfernt und dann 0,1 ml Wachstumsmedium, enthaltend 32 TCID₅₀ von FeLV-FAIDS, oder 0,1 ml Wachstumsmedium allein in jede Vertiefung gegeben. Das Virus wurde 1 h adsorbieren gelassen, dann wurden 0,1 ml Test- oder positive Kontrollverbindung (2',3'-Didesoxycytidin; ddC) oder Wachstumsmedium zugesetzt. Die Platten wurden bei 37°C inkubiert. Die Zel len wurden mit frischem Wachstumsmedium mit einem Gehalt der Verbindung am 4. Tag nach der Infektion beschickt. Das Kulturmedium wurde vollständig ausgetauscht und durch frisches Medium mit einem Gehalt der Verbindung am Tag 7 nach der Infektion ersetzt. Am Tag 10 nach der In fektion wurden die Zellen mit Formalin fixiert, mit 0,1% Coomassie Brilliant Blue R-250 gefärbt und mikro skopisch auf CPE und Arzneimittelcytotoxizität beobachtet.

Die Verbindung des Beispiels 10 hatte eine ED₅₀ von 1,9 µg/ml

(C) Aktivität gegenüber Mäuse-AIDS

Falcon Gewebekulturplatten mit 6 Vertiefungen wurden mit 1,75 × 10⁵ Zellen/Vertiefung in einem Gesamtvolumen von 2,5 ml EMEM, enthaltend 5% hitze-inaktivierte FBS, be impft. 20 h nach der Zellbeimpfung wurde das Medium dekantiert und 2,5 ml DEAE-Dextran (25 µg/ml in Phos phat-gepufferter Salzlösung) wurden in jede Vertiefung gegeben. Die Kulturen wurden 1 h bei 37°C bebrütet, wo nach die DEAE-Dextran-Lösung dekantiert wurde und die Zellschichten einmal mit 2,5 ml PBS gespült wurden. Normale Zellkontrollen wurden wieder mit 2,5 ml Medium allein (kein Virus oder Arzneimittel) beschickt. Die Arzneimittel-Kontrollkulturen erhielten 2,5 ml Medium, enthaltend das Arzneimittel, jedoch kein Virus. Die Virus-infizierten Kontrollkulturen erhielten 0,5 ml der geeigneten Verdünnung des Vorrats CAS-BR-M zur Erzeugung zählbarer Plaques plus 2,0 ml Medium. Die Testproben erhielten 0,5 ml der geeigneten Virusverdünnung plus 2,0 ml Medium der Arzneimittelverdünnung. Sechs Konzen trationen der Testverbindung, verdünnt in seriellen halb- log₁₀-Verdünnungen wurden getestet. Drei Konzentrationen des positiven Kontroll-Arzneimittels, ddC, wurden unter sucht. Drei Vertiefungen für jede Konzentration der Testverbindung und 6 Virus- und 6 Zell-Kontrollkul turen wurden in jeden Versuch eingeschlossen. Am 3. Tag nach der Virusbeimpfung wurde die Toxizität des Arznei mittels für die SC-1-Zellen durch mikroskopische Prüfung von gefärbten Duplikatzellen und Arzneimittel-Kontroll kulturen bestimmt. Die verbleibenden Test- und Kontroll kulturen wurden 20 sec mit einer Ultraviolettlampe bestrahlt und XC-Zellen wurden zu jeder Kultur gegeben (5 × 10⁵ Zellen/Vertiefung in 2,5 ml EMEM, enthaltend 10% hitze-inaktiviertes FBS). Am 3. Tag nach der UV-Be strahlung wurden die Kulturen mit Formalin fixiert und mit Kristallviolett gefärbt. Die Plaques wurden mit Hilfe eines Präpariermikroskops gezählt.

Die Verminderung an antiviraler Aktivität in dem CAS-BR- M-Plaque wurde ausgedrückt als Verminderung in der mitt leren Anzahl der Plaques, die in den arzneimittelbehan delten, virusinfizierten Kulturen gezählt wurden, ver glichen mit der mittleren Anzahl der Plaques, die in den nichtbehandelten, virusinfizierten Kontrollkulturen gezählt wurden (Prozent der Kontrolle). Die Verbindung von Beispiel 10 hatte eine ED₅₀ von 1,1 µg/ml

(D) Aktivität gegenüber Affen-Retrovirus SAIDS (SRV-2)

Das antivirale Screening gegen den SAIDS-Virus (D/Washington) wurde durch einen Syncytium-Inhibie rungsversuch an Raji-Zellen durchgeführt. Das Arznei mittel wurde in komplettem Iscove's Medium verdünnt und dann wurden 100 µl jeder Verdünnung in geeignete Vertiefungen einer Platte mit 96 Vertiefungen gegeben.

Aktiv wachsende Raji-Zellen, 5 × 10³ Zellen in 50 µl komplettem Iscove's Medium, wurden dann in jede Vertie fung gegeben. Darauf erfolgte die Zugabe von 50 µl geklärtem Überstand aus einer SRV-2/Raji-Zell-Co-Kul tur. DDC wurde bei diesem Versuch als positives Kontroll- Arzneimittel eingeschlossen. Die Platten wurden bei 37°C in feuchter Atmosphäre, enthaltend 5% CO₂, inku biert. Syncytien wurden am 7. Tag nach der Infektion ge zählt. Die Arzneimitteltoxizität wurde bestimmt durch Vergleich von Zählungen lebensfähiger Zellen der nicht infizierten, arzneimittelbehandelten Probe zu der Le bensfähigkeit der nichtinfizierten, unbehandelten Kon trollprobe. Die Verbindung des Beispiels 10 hatte eine ED₅₀ von 2,8 µg/ml

(E) Aktivität gegenüber Visna Maedi-Virus

Die antivirale Aktivität gegenüber Visna Maedi-Virus (VMV) Stamm WLC-1 wurde bestimmt durch Messung der Ver minderung der virusspezifischen, immunohistochemischen Verfärbung. Monoschichten von Schaf-Choroidplexus- Zellen wurden mit VMV infiziert und mit Reihenverdün nungen der Testverbindungen überzogen. Nach der Inkuba tion während 5 Tagen wurden die Monoschichten weiter in kubiert mit virusspezifischen Antiseren, konjugiert an Meerrettichperoxidase (HRP). Anschließende In kubierung der Monoschichten mit einem chromagenen Substrat von HRP ergibt Flächen von Virusreplikation. Diese einzelnen Herde wurden gezählt und die Konzentra tion der Testverbindung, die zur Verminderung der An zahl der Herde auf 50% derjenigen der nicht mit Arznei mittel behandelten Kontrollproben erforderlich ist, wur de berechnet. Die Verbindung des Beispiels 13 hatte eine ED₅₀ von 0,2 µg/ml.

Beispiel 22 Cytotoxische Aktivität

Die Verbindungen der Beispiele 5, 7 und 8 zeigten cyto toxische Aktivität, wenn sie getestet wurden gegen P388 Mäuse-Leukämie im Zellkulturversuch wie von R. G. Alonquist und R. Vince, J. Med. Chem., 16, 1396 (1973), be schrieben. Die erhaltenen ED₅₀-Werte (µg/ml) waren:

Beispiel 5	12
Beispiel 7	40
Beispiel 8	3

Claims

1. Didesoxydehydrocarbocyclische Nucleoside der Formel I:
worin
X Wasserstoff, NRR¹, SR, OR oder Halogen ist; und
Z Wasserstoff, OR² oder NRR¹ ist;
wobei R, R¹ und R² gleich oder verschieden sein können und ausgewählt sind aus Wasserstoff, C_1-4-Alkyl, Phenyl, Tolyl, Xylyl, Anisyl und Phen-(C_1-4)-alkyl;
und deren pharmazeutisch annehmbare Salze, Ester oder Salze dieser Ester.

2. Verbindung gemäß Anspruch 1, worin in der Verbindung der Formel (I) Z = H, OH oder NH₂.

3. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 oder 2, worin X = Wasserstoff, Chlor, NH₂, SH oder OH.

4. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, worin X = OH.

5. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, worin X = H oder NH₂.

6. (1α,4α)-4-(6-Chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Amino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Mercapto-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2-Amino-6-chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2-Amino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol; und
(1α,4α)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol.

7. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6 in Form einer im wesentlichen racemischen Mischung.

8. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, die im wesentlichen aus einem optischen Isomeren besteht.

9. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, die im wesentlichen aus dem D-Isomeren besteht.

10. Pharmazeutische Formulierung, umfassend eine Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 9 definiert, oder deren pharmazeutisch annehmbares Salz, Ester oder Salz dieses Esters.

11. Pharmazeutische Formulierung gemäß Anspruch 10 zur Behandlung einer viralen Infektion.

12. Pyrimidinylamino-cyclopentenylcarbinol-Derivate der Formel (II)
worin
X für Wasserstoff, NRR¹, SR, OR, Halogen oder geschützte Formen davon steht;
Y OH oder eine geschützte Form davon bedeutet;
Z Wasserstoff, OR², NRR¹ oder geschützte Formen davon bedeutet;
wobei R, R¹ und R² gleich oder verschieden sein können und ausgewählt sind aus Wasserstoff, C_1-4-Alkyl, Phenyl, Tolyl, Xylyl, Anisyl und Phen-(C_1-4)-alkyl;
und pharmazeutisch annehmbare Salze davon.