DE3901502A1 - Didesoxydehydrocarbocyclische nucleoside - Google Patents

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft didesoxycarbocyclische Nucleosid-Analoga. Insbesondere betrifft sie carbocyclische 2′,3′-Didesoxy-2′,3′-didehydropurinnucleosid- Analoga und ihre Verwendung in der Therapie, insbesondere als antivirale Mittel.

Im Hinblick auf die Ähnlichkeit zwischen viralen und Gastzellen-Funktionen ist es schwierig, ein Virus selektiv anzugreifen, während die Gastzelle intakt gelassen wird. So gibt es verhältnismäßig wenige Mittel, die gegen Viren per se wirksam sind, und es ist schwierig, antivirale Mittel zu finden, die einen annehmbaren therapeutischen Index haben, d. h. Mittel, die einen bedeutenden, antiviralen Effekt bei einer Dosis haben, bei der das Mittel im Durchschnitt, eine annehmbare Toxizität und keine Nebenwirkung aufweist.

Eine Gruppe von Viren, welche kürzlich große Bedeutung erlangten, sind die Retroviren, die für das "human acquired immunodeficiency syndrome" (AIDS) verantwortlich sind. Solche Viren wurden früher verschiedenen Terminologien zugewiesen, jedoch werden sie nun allgemein als "menschliche Immunschwäche-Viren" (human immunodeficiency viruses) (HIV's) bezeichnet; zwei solcher Viren, HIV-I und HIV-II, wurden reproduzierbar aus Patienten isoliert, die an AIDS und verwandten Zuständen, wie AIDS-verwandtem Komplex (ARC) und anhaltender, allgemeiner Lymphadenopathie litten, isoliert.

Obzwar eine Anzahl von Nucleosiden als nützlich bei der Behandlung von Zuständen, die mit HIV-Infektionen zusammenhängen, bezeichnet wurde, hat nur Zidovudin (AZT, Retrovir) die behördliche Genehmigung zur Behandlung solcher Zustände erhalten. Es ist jedoch bekannt, daß Zidovudin schwere Nebenwirkungen hat, welche die Verdrängung des Knochenmarks verursacht, was zu einem Abfall der Zahl der weißen Blutkörperchen führt mit nachfolgender, ausgeprägter Anämie, und es besteht daher ein Bedürfnis an wirksamen Mitteln, die weniger cytotoxisch sind.

Es wurde nun eine neue Klasse von Nucleosid-Analoga gefunden, die eine antivirale Aktivität haben. Gemäß einem ersten Merkmal der Erfindung wird eine Verbindung der Formel (I)

worin

X Wasserstoff, NRR¹, SR, OR oder Halogen ist,
Z Wasserstoff, OR² oder NRR¹ ist;
R, R¹ und R² können gleich oder verschieden sein und sind ausgewählt aus Wasserstoff, C_1-4-Alkyl und Aryl,

sowie pharmazeutisch annehmbare Derivate davon, geschaffen.

Für den Fachmann ist es klar, daß die Verbindungen der Formel I cis-Verbindungen sind, und weiterhin, daß der Cyclopentenring der Verbindungen der Formel I zwei chirale Zentren enthält [in Formel I durch das Sternchen* gezeigt] und so in der Form von zwei optischen Isomeren (d. h. Enantiomeren) und Mischungen davon einschließlich racemischer Mischungen existieren kann. Alle derartigen Isomeren und Mischungen davon einschließlich der racemischen Mischungen sind in den Bereich der Erfindung eingeschlossen. Demnach ist in den Verbindungen der Formel I entweder das chirale Zentrum, an das die Base geknüpft ist, in der R-Konfiguration und das chirale Zentrum, an das die CH₂OH-Hälfte geknüpft ist, ist in der S-Konfiguration (im folgenden das D-Isomere) oder das chirale Zentrum, an das die Base geknüpft ist, ist in der S-Konfiguration und das, an das die CH₂OH-Hälfte geknüpft ist, ist in der R-Konfiguration (im folgenden das L-Isomere). Zweckmäßig werden die Verbindungen entweder in Form einer racemischen Mischung oder im wesentlichen als das reine D-Isomere vorliegen. Die D- Isomeren können durch die Formel Ia

dargestellt werden, worin X und Z wie in Formel I definiert sind. Die weitere Bezugnahme auf Verbindungen der Formel I schließt Verbindungen der Formel Ia ein.

Der Fachmann wird ebenfalls erkennen, daß verschiedene der Verbindungen der Formel I als eine Anzahl von tautomeren Formen existieren können, und alle derartigen Tautomeren sind in den Bereich der Erfindung eingeschlossen.

Der hier verwendete Ausdruck "Halogen" bezieht sich auf Fluor, Chlor, Brom und Jod; wenn X Halogen ist, ist es vorzugsweise Chlor.

Der hier verwendete Ausdruck "C_1-4-Alkyl" bezieht sich auf gerade oder verzweigte Alkylgruppen, beispielsweise Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, sek.-Butyl und tert.-Butyl. C_1-4-Alkyl ist zweckmäßig Methyl.

Der hierin verwendete Ausdruck "Aryl" bezieht sich auf irgendeine mono- oder polycyclische, aromatische Hälfte und umfaßt unsubstituiertes und substituiertes Aryl (wie Phenyl, Tolyl, Xylyl, Anisyl) und unsubstituiertes und substituiertes Aralkyl einschließlich Ar-(C_1-4)- alkyl, wie Phen-(C_1-4)-alkyl, beispielsweise Benzyl oder Phenethyl.

In den Verbindungen der Formel I ist Z vorzugsweise Amino.

In einer bevorzugten Klasse von Verbindungen der Formel I ist X = OR, besonders OH.

In einer weiter bevorzugten Klasse von Verbindungen der Formel I steht X für NRR¹, insbesondere NH₂, oder Wasserstoff.

Besonders bevorzugte Verbindungen der Formel I sind solche, worin Z = NH₂ und X = H, NH₂ oder besonders OH. Insbesondere solche Verbindungen haben besonders erwünschte therapeutische Indices als antivirale Mittel.

Unter dem Ausdruck "ein pharmazeutisch annehmbares Dervivat" soll jedes pharmazeutisch annehmbares Salz, Ester oder Salz eines solchen Esters einer Verbindung der Formel I oder einer anderen Verbindung verstanden werden, die bei Verabreichung an den Patienten in der Lage ist, (direkt oder indirekt) eine Verbindung der Formel I oder einen antiviral wirksamen Metaboliten oder Rest davon zu liefern.

Bevorzugte Ester der Verbindungen der Formel I umfassen Carbonsäureester, worin die Nicht-Carbonyl-Hälfte der Estergruppe ausgewählt ist aus Wasserstoff, geradem oder verzweigtem Alkyl (z. B. Methyl, Ethyl, n-Propyl, tert.-Butyl, n-Butyl), Alkoxyalkyl (z. B. Methoxymethyl), Aralkyl (z. B. Benzyl), Aryloxyalkyl (z. B. Phenoxymethyl), Aryl (z. B. Phenyl, gegebenenfalls substituiert durch Halogen, C_1-4-Alkyl oder C_1-4-Alkoxy); Sulfonatester, wie Alkyl- oder Aralkylsulfonyl (z. B. Methansulfonyl); Aminosäureester (z. B. L-Valyl oder L-Isoleucyl) und Mono-, Di- oder Triphosphatester.

Bezüglich der oben beschriebenen Ester enthält irgendwelche vorhandene Alkylhälfte vorteilhaft 1 bisd 18 Kohlenstoffatome, besonders 1 bis 4 Kohlenstoffatome, sofern nicht anders angegeben. Irgendeine in solchen Estern vorhandene Arylhälfte umfaßt vorteilhaft eine Phenylgruppe.

Pharmazeutisch annehmbare Salze der Verbindungen der Formel I umfassen solche, die von pharmazeutisch annehmbaren, anorganischen und organischen Säuren und Basen abgeleitet sind. Beispiele geeigneter Säuren umfassen Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Perchlorsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Glykolsäure, Milchsäure, Salicylsäure, Bernsteinsäure, Toluol-p-sulfonsäure, Weinsäure, Essigsäure, Citronensäure, Methansulfonsäure, Ameisensäure, Benzoesäure, Malonsäure, Naphthalin-2-sulfonsäure und Benzolsulfonsäure. Andere Säuren, wie Oxalsäure, können, obzwar sie selbst pharmazeutisch nicht annehmbar sind, bei der Herstellung von Salzen nützlich sein, die als Zwischenprodukte bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze brauchbar sind.

Salze geeigneter Basen umfassen Alkalimetall (z. B. Natrium)-, Erdalkalimetall (z. B. Magnesium)-, Ammonium- und NR₄⁺(R = C_1-4-Alkyl)-Salze.

Die folgenden Bezugnahmen auf eine Verbindung gemäß der Erfindung schließen sowohl Verbindungen der Formel I als auch ihre pharmazeutisch annehmbaren Derivate ein.

Spezielle Verbindungen der Formel I schließen ein:

(1α,4a)-4-(6-Chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Amino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Mercapto-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2-Amino-6-chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;

in Form eines racemischen Gemisches oder eines einzelnen Enantiomeren.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen entweder selbst antivirale Aktivität und/oder sind zu solchen Verbindungen metabolisierbar. Insbesondere sind diese Verbindungen wirksam bei der Inhibierung der Replikation von Retroviren einschließlich menschlicher Retroviren, wie menschliche Immunschwäche-Viren (HIV's), die verursachenden Mittel von AIDS.

Gewisse Verbindungen gemäß der Erfindung besitzen Antikrebs- Aktivität, insbesondere solche, worin Z Wasserstoff ist.

Demnach wird nach einem weiteren Aspekt der Erfindung eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon geschaffen zur Verwendung als aktives, therapeutisches Mittel, insbesondere als antivirales Mittel, beispielsweise bei der Behandlung retroviraler Infektionen, oder als Antikrebs-Mittel.

Gemäß einem weiteren oder alternativen Aspekt wird eine Methode zur Behandlung einer viralen Infektion geschaffen, insbesondere einer Infektion, die durch ein Retrovirus, wie HIV, in einem Säugetier einschließlich des Menschen verursacht wird, welche die Verabreichung einer wirksamen Menge einer antiviralen Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Derivats davon umfaßt.

Gemäß einem weiteren oder alternativen Aspekt wird die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Derivats davon zur Erzeugung eines Arzneimittels zur Behandlung einer viralen Infektion oder Verwendung als Antikrebs-Mittel geschaffen.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung, die antivirale Aktivität besitzen, sind auch nützlich bei der Behandlung von AIDS-verwandten Zuständen, wie AIDS-verwandtem Komplex (ARC), anhaltender, allgemeiner Lymphadenopathie (PGL), AIDS-verwandten, neurologischen Zuständen (wie Schwachsinn oder tropische Paraperese), Anti-HIV-Antikörper- positive und HIV-positive Zustände, Kaposi-Sarkom und thrombopenische Purpura.

Die antiviralen Verbindungen gemäß der Erfindung sind auch wertvoll bei der Vorbeugung der Weiterentwicklung zur klinischen Erkrankung von Individuen, die Anti-HIV-Antikörper- oder HIV-Antigen-positiv sind, und bei der Prophylaxe infolge HIV-Ausgesetztsein.

Die antiviralen Verbindungen der Formel I oder ihre pharmazeutisch annehmbaren Derivate können auch zur Vorbeugung von viraler Verunreinigung physiologischer Flüssigkeiten, wie Blut oder Samen, in vitro dienen.

Gewisse Verbindungen der Formel I sind auch wertvoll als Zwischenprodukte bei der Herstellung anderer Verbindungen der Erfindung. Für den Fachmann wird ersichtlich, daß die hier erwähnte Behandlung sich sowohl auf die Prophylaxe als auch auf die Behandlung von bestehenden Infektionen oder Symptomen erstreckt.

Es sei weiter erwähnt, daß die Menge der erfindungsgemäßen Verbindung, die zur Verwendung bei der Behandlung erforderlich ist, nicht nur mit der besonderen, ausgewählten Verbindung, sondern auch mit dem Verabreichungsweg, der Natur der zu behandelnden Krankheit und dem Alter und dem Zustand des Patienten variieren wird und schließlich der Beurteilung des behandelnden Arztes oder Veterinärs überlassen bleibt. Im allgemeinen wird jedoch eine geeignete Dosis im Bereich von etwa 1 bis etwa 750 mg/kg, z. B. von etwa 10 bis etwa 750 mg/kg Körpergewicht/ Tag sein, wie 3 bis etwa 120 mg/kg Körpergewicht des Empfängers pro Tag, vorzugsweise im Bereich von 6 bis 90 mg/kg/Tag, besonders bevorzugt im Bereich von 15 bis 60 mg/kg/Tag.

Die gewünschte Dosis kann zweckmäßig in einer einzigen Dosis dargeboten werden oder als unterteilte Dosierungen, die in geeigneten Intervallen verabreicht werden, beispielsweise zwei, drei, vier oder mehr Unterdosierungen pro Tag.

Die Verbindung wird zweckmäßig in Einheitsdosisform verabreicht; beispielsweise enthaltend 10 bis 1500 mg, zweckmäßig 20 bis 1000 mg, am zweckmäßigsten 50 bis 700 mg aktiven Bestandteil pro Einheitsdosisform.

In idealer Weise sollten der aktive Bestandteil verabreicht werden, um Spitzenplasmakonzentrationen der aktiven Verbindung von etwa 1 bis etwa 75 µM, vorzugsweise etwa 2 bis 50 µm, besonders bevorzugt etwa 3 bis etwa 30 µM, zu erreichen. Dies kann beispielsweise durch intravenöse Injektion einer 0,1- bis 5%igen Lösung des aktiven Bestandteils, gegebenenfalls in Salzlösung, oder oral verabreicht als Bolus, enthaltend etwa 1 bis etwa 100 mg/kg aktiven Bestandteil, erreicht werden. Wünschenswerte Blutspiegel können durch eine kontinuierliche Infusion aufrechterhalten werden, um etwa 0,01 bis etwa 5,0 mg/kg/h oder durch intermittierende Infusionen, enthaltend etwa 0,4 bis etwa 15 mg/kg aktiven Bestandteil, zu erzielen.

Während es möglich ist, daß zur Verwendung in der Therapie eine Verbindung gemäß der Erfindung als Rochemikal verabreicht werden kann, ist es vorzuziehen, den aktiven Bestandteil als pharmazeutische Formulierung darzubieten.

Demnach schafft die Erfindung eine pharmezeutische Formulierung, umfassend eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon zusammen mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Trägern und gegebenenfalls anderen therapeutischen und/oder prophylaktischen Bestandteilen. Der oder die Träger müssen "annehmbar" sein in dem Sinne, daß sie mit den anderen Bestandteilen der Formulierung verträglich sind und nicht nachteilig für den Empfänger.

Pharmazeutische Formulierungen umfassen solche, die für orale, rektale, nasale, topische (einschließlich bukkal und sub-lingual), vaginale oder parenterale (einschließlich intramuskulär und intravenenös) Verabreichung geeignet sind, oder in einer Form, die zur Verabreichung durch Inhalation oder Insufflation geeignet ist. Die Formulierungen können, wo es angebracht ist, zweckmäßig in einzelnen Dosierungseinheiten dargeboten werden und können durch irgendwelche in der pharmazeutischen Industrie bekannte Methoden hergestellt werden. Alle Methoden umfassen den Schritt, daß die aktive Verbindung mit flüssigen Trägern oder feinverteilten, festen Trägern oder beiden zusammengebracht werden und dann erforderlichenfalls das Produkt in die gewünschte Formulierung geformt wird.

Pharmazeutische Formulierungen, geeignet zur oralen Verabreichung, können zweckmäßig als einzelne Einheiten, wie Kapseln, Oblatenkapseln oder Tabletten, angeboten werden, wobei jede eine vorbestimmte Menge des aktiven Bestandteils enthält; als Pulver oder Granulate; als Lösung, Suspension oder Emulsion. Der aktive Bestandteil kann auch als Bolus, Latwerge oder Paste dargeboten werden. Tabletten und Kapseln zur oralen Verabreichung können übliche Exzipienten, wie Bindemittel, Füllstoffe, Gleitmittel, Zerteilungsstoffe oder Netzmittel, enthalten. Die Tabletten können nach üblichen Methoden überzogen sein. Orale, flüssige Präparate können in Form von beispielsweise wäßrigen oder öligen Suspensionen, Lösungen, Emulsionen, Sirupen oder Elixieren vorliegen oder können als Trockenprodukt zur Aufbereitung mit Wasser oder einem geeigneten anderen Träger vor der Verwendung vorliegen. Solche flüssigen Präparate können übliche Zusätze, wie Suspendiermittel, Emulgiermittel, nichtwäßrige Trägerstoffe (die eßbare Öle einschließen) oder Konservierungsmittel, enthalten.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung können auch zur parenteralen Verabreichung (z. B. durch Injektion, beispielsweise Bolusinjektion oder kontinuierliche Infusion) formuliert sein und können in Einheitsdosisform in Ampullen, vorgefüllten Spritzen oder Mehrfachbehältern mit zugesetztem Konservierungsmittel vorliegen. Die Zusammensetzungen können solche Formen, wie Suspensionen, Lösungen oder Emulsionen in öligen oder wäßrigen Trägern, haben und können Formulierungsmittel enthalten, wie Suspendier-, Stabilisier- und/oder Dispergiermittel. Alternativ kann der aktive Bestandteil in Pulverform vorliegen, erhalten durch aseptische Isolierung des sterilen Feststoffs oder durch Lyophilisierung aus Lösung, zur Zubereitung mit einem geeigneten Träger, z. B. sterilem, pyrogenfreiem Wasser, vor der Verwendung.

Zur topischen Verabreichung an die Epidermis können die Verbindungen gemäß der Erfindung als Salben, Cremes oder Lotionen oder als transdermales Pflaster bzw. Lappen vorliegen. Salben und Cremes können beispielsweise mit einer wäßrigen oder öligen Basis unter Zusatz von geeigneten Verdickungs- und/oder Geliermitteln formuliert werden. Lotionen können mit wäßrigen oder öligen Basis formuliert werden und werden im allgemeinen auch ein oder mehrere Emulgiermittel, Stabilisiermittel, Dispergiermittel, Suspendiermittel, Verdickungsmittel oder Färbemittel enthalten.

Formulierungen, die zur topischen Verabreichung im Mund geeignet sind, umfassen Pastillen, die den aktiven Bestandteil in einem aromatisierten Grundstoff, gewöhnlich Saccharose und Akaziengummi oder Tragant, enthalten; Pastillen, umfassend den aktiven Bestandteil in einer inerten Basis, wie Gelatine und Glycerin oder Saccharose und Akaziengummi; und Mundwasser, umfassend den aktiven Bestandteil in einem geeigneten, flüssigen Träger.

Pharmazeutische Formulierungen, die zur rektalen Verabreichung geeignet sind, worin der Träger ein Feststoff ist, sind bevorzugt Einheitsdosissuppositorien. Geeignete Träger umfassen Kakaobutter und andere üblicherweise verwendeten Materialien, und die Suppositorien können zweckmäßig durch Vermischen der aktiven Verbindung mit den erweichten oder geschmolzenen Trägern, nachfolgendes starkes Abkühlen und Ausformen in Formen gebildet werden.

Zur vaginalen Verabreichung geeignete Formulierungen können als Pessare, Tampons, Cremes, Gele, Pasten, Schäume oder Sprays vorliegen, enthaltend zusätzlich zu dem aktiven Bestandteil solche Träger, wie sie in der Fachwelt als geeignet bekannt sind.

Zur intra-nasalen Verabreichung können die Verbindungen gemäß der Erfindung als flüssiger Spray oder in Form von Tropfen verwendet werden.

Tropfen können mit einer wäßrigen oder nicht-wäßrigen Basis formuliert werden, die auch ein oder mehrere Dispergiermittel, löslichmachende Mittel oder Suspendiermittel enthalten. Flüssige Sprays werden zweckmäßig aus Druckpackungen geliefert.

Zur Verabreichung durch Inhalation können die Verbindungen gemäß der Erfindung zweckmäßig aus einem Inhalator bzw. Einblasapparat, Zerstäuber oder Druckpackung oder anderem geeigneten Mittel zur Lieferung eines Aerosolsprays geliefert werden. Druckpackungen können ein geeignetes Treibgas, wie Dichlordifluormethan, Trichlorfluormethan, Dichlortetrafluorethan, Kohlendioxid oder ein anderes geeignetes Gas, enthalten. Im Falle eines Aerosols unter Druck kann die Dosiseinheit bestimmt werden, indem ein Ventil vorgesehen wird, das eine abgemessene Menge liefert.

Alternativ können die Verbindungen gemäß der Erfindun zur Verabreichung durch Inhalation oder Einblasen die Form einer trockenen Pulverzusammensetzung haben, beispielsweise ein Pulvergemisch der Verbindung und einer geeigneten Pulverbasis, wie Lactose oder Stärke. Die Pulverzusammensetzung kann in Einheitsdosierungsform vorliegen, beispielsweise in Kapseln oder Patronen oder z. B. Gelatine- oder Pflasterpackungen, woraus das Pulver mit Hilfe eines Inhalators oder Einblasegeräts verabreicht werden kann.

Gewünschtenfalls können die obigen Formulierungen angepaßt werden, daß eine Dauergabe bzw. Langzeitwirkung (sustained release) des aktiven Bestandteils erfolgt.

Die pharmazeutischen Zusammensetzungen gemäß der Erfindung können auch andere aktive Bestandteile, wie antimikrobielle Mittel oder Konservierungsstoffe, enthalten.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung können auch in Kombination mit anderen therapeutischen Mitteln, beispielsweise mit anderen Anti-Infektionsmitteln, verwendet werden. Insbesondere können die erfindungsgemäßen Verbindungen zusammen mit bekannten antiviralen Mitteln angewandt werden.

Die Erfindung schafft so gemäß einem weiteren Aspekt eine Kombination, umfassend eine Verbindung der Formel I oder ein physiologisch annehmbares Derivat davon zusammen mit einem anderen therapeutisch aktiven Mittel, insbesondere einem aktiven antiviralen Mittel.

Die oben erwähnten Kombinationen können zweckmäßig zur Verwendung in Form einer pharmazeutischen Formulierung vorliegen, und so umfassen pharmazeutische Formulierungen, die eine Kombination, wie oben definiert, zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger dafür enthalten, einen weiteren Aspekt der Erfindung.

Geeignete, therapeutische Mittel zur Verwendung in solchen Kombinationen umfassen acyclische Nucleoside, wie Aciclofir, Interferone, wie α-Interferon, Nierenausscheidungsinhibitoren, wie Probenicid, Nucleosidtransportinhibitoren, wie Dipyridamol, 2′,3′-Didesoxynucleoside, wie 2′,3′-Didesoxycytidin, 2′,3′-Didesoxyadenosin, 2′,3′-Didesoxyinosin, 2′,3′-Didesoxythymidin und 2′,3′- Didesoxy-2′,3′-didehydrothymidin, und Immunomodulatoren, wie Interleukin II (II 2) und Granulocytmakrophagenkolonien- stimulierender Faktor (GM-CSF), Erythropoetin und Ampligen.

Die individuellen Komponenten solcher Kombinationen können entweder nacheinander oder gleichzeitig in getrennten oder kombinierten, pharmazeutischen Formulierungen verabreicht werden.

Wenn die Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon in Kombination mit einem zweiten therapeutischen Mittel, das gegen das gleiche Virus aktiv ist, verwendet wird, kann die Dosierung jeder Verbindung von derjenigen differieren, wenn die Verbindung allein genommen wird. Geeignete Dosierungen werden leicht durch den Fachmann festgestellt.

Die Verbindungen der Formel I und ihre pharmazeutisch annehmbaren Derivate können durch irgendeine bekannte Methode zur Herstellung von Verbindungen analoger Struktur hergestellt werden.

Geeignete Methoden zur Herstellung der Verbindungen der Formel I und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Derivate sind weiter unten beschrieben. Die Gruppen X und Z sind wie oben definiert, sofern nicht anders angegeben. Es sei erwähnt, daß die folgenden Reaktionen die Verwendung von Ausgangsmaterialien mit geschützten funktionellen Gruppen erforderlich machen oder zweckmäßig angewandt werden können und die Abspaltung der Schutzgruppen kann demnach als Zwischenschritt oder Endschritt erforderlich sein, um die gewünschte Verbindung zu erhalten. Der Schutz der funktionellen Gruppen und Abspaltung der Schutzgruppen kann unter Anwendung üblicher Mittel erfolgen. So können beispielsweise Aminogruppen durch eine Gruppe, ausgewählt aus Aralkyl (z. B. Benzyl), Acyl oder Aryl (z. B. 2,4-Dinitrophenyl), geschützt werden; die anschließende Entfernung der Schutzgruppe wird, falls erwünscht, durch Hydrolyse oder Hydrogenolyse, je nach Zweckmäßigkeit, unter Verwendung von Standardbedingungen durchgeführt. Hydroxylgruppen können geschützt werden unter Verwendung irgendeiner Hydroxyl-Schutzgruppe, beispielsweise wie in "Protective Groups in Organic Chemistry", Herausgeber J. F. W. McOmie (Plenum Press, 1973), oder "Protective Groups in Organic Synthesis" von Theodora W. Greene (John Wiley and Sons, 1981) beschrieben. Beispiele geeigneter Hydroxyl-Schutzgruppen schließen ein: Gruppen, ausgewählt aus Alkyl (z. B. Methyl, tert.-Butyl oder Methoxymethyl), Aralkyl (z. B. Benzyl, Diphenylmethyl oder Triphenylmethyl), heterocyclische Gruppen, wie Tetrahydropyranyl, Acyl (z. B. Acetyl oder Benzoyl)- und Silylgruppen, wie Trialkylsilyl (z. B. tert.-Butyldimethylsilyl). Die Hydroxyl- Schutzgruppen können durch übliche Techniken entfernt werden. So können beispielsweise Alkyl-, Silyl-, Acyl- und heterocyclische Gruppen durch Solvolyse entfernt werden, z. B. durch Hydrolyse unter sauren oder basischen Bedingungen. Aralkylgruppen, wie Triphenylmethyl, können in ähnlicher Weise durch Solvolyse entfernt werden, z. B. durch Hydrolyse unter sauren Bedingungen. Aralkylgruppen, wie Benzyl, können durch Hydrogenolyse in Anwesenheit eines Edelmetallkatalysators, wie Palladium-auf-Kohle, abgespalten werden. Silylgruppen können auch zweckmäßig entfernt werden unter Verwendung einer Quelle für Fluoridionen, wie Tetra-n-butylammoniumfluorid.

In einem ersten Verfahren (A) können Verbindungen der Formel I und pharmazeutisch annehmbare Derivate davon hergestellt werden durch Reaktion einer Verbindung der Formel II

(worin X und Z Substituenten mit der Bedeutung in Formel I oder geschützte Formen davon sind und die Hydroxylgruppe in der Cyclopentenylcarbinol-Gruppe kann in geschützter Form sein) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Derivats davon mit einem Reagens, ausgewählt aus Ameisensäure und reaktiven Derivaten davon, und nachfolgend, falls notwendig, Entfernung unerwünschter Gruppen, die durch dieses Reagens eingeführt wurden, und/ oder Entfernung irgendwelcher vorhandener Schutzgruppen.

Beispiele für geeignete Derivate der Ameisensäure, welche in dem obigen Verfahren (A) verwendet werden können, schließen ein: Orthoformiate (z. B. Triethylorthoformiat), Dialkoxymethylacetate (z. B. Diethoxymethylacetat), Dithioameisensäure, Formamid, s-Triazin oder Formamidinacetat.

Unerwünschte Gruppen, die durch Ameisensäure oder ein reaktives Derivat davon eingeführt werden, können zweckmäßig durch milde Hydrolyse entfernt werden, beispielsweise unter Verwendung einer anorganischen Säure, wie wäßrige Salzsäure.

Wird ein Trialkylorthoformiat, wie Triethylorthoformiat, verwendet, ist dies zweckmäßig auch das Lösungsmittel für die Reaktion. Andere Lösungsmittel, welche verwendet werden können, umfassen Amide (z. B. Dimethylformamid oder Dimethylacetamid), chlorierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Dichlormethan), Ether (z. B. Tetrahydrofuran) oder Nitrile (z. B. Acetonitril).

In einigen Fällen (z. B. wenn ein Trialkylorthoformiat, wie Triethylorthoformiat, verwendet wird) kann die Reaktion bevorzugt in Anwesenheit eines Katalysators, wie einer starken Säure (z. B. konzentrierte Salzsäure, Salpetersäure oder Schwefelsäure) durchgeführt werden. Die Reaktion kann bei einer Temperatur im Bereich von -25 bis +150°C, z. B. 0 bis 100°C, und zweckmäßig bei Umgebungstemperatur erfolgen.

Bei einem anderen Verfahren (B) werden Verbindungen der Formel I und ihre pharmazeutisch annehmbaren Derivate oder eine geschützte Form davon einer inneren Umwandlungsreaktion unterworfen, wodurch der ursprünglich vorhandene Substituent X durch einen anderen Substituenten X ersetzt wird und/oder die ursprünglich vorhandene Gruppe Z wird durch eine andere Gruppe Z ersetzt, und anschließend, falls notwendig, Entfernung irgendwelcher vorhandener Schutzgruppen.

Bei einer Ausführungsform des Verfahrens (B) können Verbindungen der Formel I, worin X eine Gruppe RR¹ darstellt (wobei R und R¹ wie vorstehend definiert sind), hergestellt werden durch Aminierung einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin X ein Halogenatom (z. B. Chlor) darstellt. Die Aminierung kann bewirkt werden durch Reaktion mit einem Reagens HNRR¹ (worin R und R¹ wie vorstehend definiert sind), zweckmäßig in einem Lösungsmittel, wie einem Alkohol (z. B. Methanol). Die Reaktion kann bei irgendeiner geeigneten Temperatur durchgeführt werden und zweckmäßig bei einer erhöhten Temperatur, wie unter Rückfluß oder, wenn flüssiges Ammoniak verwendet wird, in einem verschlossenen Rohr bei etwa 50 bis 80°C. Geeignete Bedingungen für die Umwandlung der Halogenide zu sekundären und tertiären Aminen wurden auch von I. T. Harrison et al., Compendium of Organic Synthetic Methods, Wiley-Interscience, New York (1971) auf den Seiten 250 bis 252 beschrieben.

Bei einer anderen Ausführungsform des Verfahrens (B) können Verbindungen der Formel I, worin X eine Gruppe OR darstellt (R ist wie vorstehend definiert), durch Austausch des Halogen- (z. B. Chlor-)atoms mit einem geeigneten Anion RO^- hergestellt werden. Wenn R ein Wasserstoffatom bedeutet, kann die Austauschreaktion durch Hydrolyse durchgeführt werden, die in Wasser oder in einem Gemisch von Wasser und einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel, wie einem Alkohol (z. B. Methanol oder Ethanol), einem Ether (z. B. Dioxan oder Tetrahydrofuran), einem Keton (z. B. Aceton), einem Amid (z. B. Dimethylformamid) oder einem Sulfoxid (z. B. Dimethylsulfoxid), zweckmäßig in Anwesenheit einer Säure oder Base, bewirkt werden kann. Geeignete Säuren umfassen organische Säuren, wie p- Toluolsulfonsäure, und anorganische Säuren, wie Salz-, Salpeter- oder Schwefelsäure. Geeignete Basen umfassen anorganische Basen, wie Alkalimetallhydroxide oder -carbonate (z. B. Natrium- oder Kaliumhydroxid oder -carbonat). Wäßrige Säure oder Base kann auch als Reaktionslösungsmittel verwendet werden. Die Hydrolyse kann zweckmäßig bei einer Temperatur im Bereich von -10 bis +150°C, z. B. unter Rückfluß, durchgeführt werden. Bedeutet R eine C_1-4-Alkyl- oder Arylgruppe, wird das Anion RO^- zweckmäßig gebildet aus einem entsprechenden Alkohol ROH unter Verwendung einer anorganischen Base, wie einem Alkalimetall (z. B. metallisches Natrium) oder einem Alkalimetallhydrid (z. B. Natriumhydrid). Die Reaktion mit dem in situ gebildeten Anion kann zweckmäßig bei Umgebungstemperatur bewirkt werden.

Bei einer weiteren Durchführungsform des Verfahrens (B) können Verbindungen der Formel I, worin X eine Gruppe SH bedeutet, hergestellt werden durch Reaktion der Halogenverbindungen der Formel I mit Thioharnstoff in einem geeigneten Lösungsmittel, wie einem Alkohol (z. B. n-Propanol), bei erhöhter Temperatur (z. B. Rückfluß) und nachfolgende alkalische Hydrolyse. Geeignete Basen, die verwendet werden können, umfassen Alkalimetallhydroxide (z. B. Natriumhydroxid). Die Reaktion kann zweckmäßig durchgeführt werden gemäß der Methode von G. G. Urquart et al., Org. Syn. Coll., Band 3, 363 (1953), z. B. durch Erhitzen des Zwischenprodukts mit wäßriger NaOH während etwa 0,25 bis etwa 5 Stunden unter Rückfluß.

Bei einer anderen Ausführungsform des Verfahrens (B) können Verbindungen der Formel I, worin X ein Wasserstoffatom bedeutet, hergestellt werden durch Reduktion der Halogenverbindung der Formel I unter Verwendung eines reduzierenden Systems, das den Rest des Moleküls nicht angreift. Geeignete Reduktionsmittel, die verwendet werden können, um die gewünschte Enthalogenierungsreaktion zu bewirken, umfassen metallische Zink/Wasser unter Verwendung der von J. R. Marshall et al., J. Chem. Soc., 1004 (1951), beschriebenen Methode. Alternativ kann die Reaktion durch Photolyse in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Tetrahydrofuran, enthaltend 10% Triethylamin, und zweckmäßig in einem Rayonet-photochemischen Reaktor (2537A) gemäß dem Verfahren von V. Nair et al., J. Org. Chem., 52, 1344 (1987), durchgeführt werden.

Bei noch einer weiteren Durchführungsform des Verfahrens (B) können Verbindungen der Formel I, worin X ein Halogenatom ist, hergestellt werden aus einer anderen Halogenverbindung der Formel I durch übliche Methoden von Halogenid-Halogenid-Austausch. Alternativ kann, wenn X Chlor bedeutet, dieser Substituent durch ein anderes Halogenatom ersetzt werden unter Verwendung verschiedener p-(Halo)-benzoldiazoniumchloride nach bekannten Verfahren.

Verbindungen der Formel I, worin X eine Gruppe SH ist, wobei R für eine C_1-4-Alkyl- oder Arylgruppe steht, können aus den entsprechenden Thiolen unter Anwendung von Standardmethoden der Alkylierung oder Arylierung, beispielsweise wie in US-PS 43 83 114 beschrieben, hergestellt werden.

Verbindungen der Formel I, worin Z eine Hydroxylgruppe bedeutet, können zweckmäßig hergestellt werden aus einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin Z für NH₂ steht, durch Reaktion mit Salpetersäure, beispielsweise unter Anwendung der von J. Davoll in J. Amer. Chem. Soc., 73, 3174 (1951), beschriebenen Verfahrensweise.

Viele der oben beschriebenen Reaktionen wurden ausführlich im Zusammenhang mit der Purinnucleosid-Synthese beschrieben, beispielsweise in Nucleoside Analogs - Chemistry, Biology and Medical Applications, R. T. Walker et al., Herausgeb., Plenum Press, New York (1979) auf den Seiten 193-223, deren Offenbarungsgehalt durch die hier angegebene Bezugnahme miteinbezogen ist.

Pharmazeutisch annehmbare Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen können hergestellt werden gemäß US-PS 43 83 114, deren Offenbarungsgehalt durch die hier angegebene Bezugnahmed miteinbezogen ist. So kann beispielsweise, wenn es gewünscht wird, ein Säureadditionssalz einer Verbindung der Formel I herzustellen, das Produkt irgendeines der obigen Verfahren in ein Salz überführt werden durch Behandlung der entstandenen, freien Base mit einer geeigneten Säure unter Anwendung üblicher Methoden. Pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze können hergestellt werden durch Umsetzung der freien Base mit einer geeigneten Säure, gegebenenfalls in Anwesenheit eines geeigneten Lösungsmittels, wie eines Esters (z. B. Ethylacetat) oder eines Alkohols (z. B. Methanol, Ethanol oder Isopropanol). Anorganische Basensalze können hergestellt werden durch Reaktion der freien Base mit einer geeigneten Base, wie einem Alkoxid (z. B. Natriummethoxid), gegebenenfalls in Anwesenheit eines Lösungsmittels, wie eines Alkohols (z. B. Methanol). Pharmazeutisch annehmbare Salze können auch aus anderen Salzen hergestellt werden einschließlich anderer pharmazeutisch annehmbarer Salze der Verbindungen der Formel I unter Verwendung üblicher Methoden.

Eine Verbindung der Formel I kann in ein pharmazeutisch annehmbares Phosphat oder anderen Ester überführt werden durch Reaktion mit einem phosphorylierenden Mittel, wie POCl₃, oder einem geeigneten veresternden Mittel, wie eine Säurehalogenid oder -anhydrid, wie es zweckmäßig ist. Ein Ester oder Salz einer Verbindung der Formel I kann in die Stammverbindung beispielsweise durch Hydrolyse umgewandelt werden.

Die Verbindungen der Formel II und Salze davon sind neue Verbindungen und bilden ein weiteres Merkmal der vorliegenden Erfindung.

Die Verbindungen der Formel II, worin Z für Wasserstoff oder Hydroxyl steht, können direkt aus der Verbindung 2a

hergestellt werden durch Reaktion mit einem Überschuß eines Pyrimidins der Formel III

(worin Y ein Halogenatom, z. B. Chlor, ist und Z für Wasserstoff oder Hydroxyl steht) in Anwesenheit einer Aminbase, wie Triethylamin, und in einem alkoholischen Lösungsmittel (z. B. n-Butanol), zweckdienlich unter Rückfluß.

Verbindungen der Formel II, worin Z für NH₂ steht, können hergestellt werden unter Verwendung der Verbindung der Formel 2a durch Reaktion mit einem Überschuß eines Pyrimidins der Formel IV

[worin Y wie in der obigen Formel III definiert ist] unter ähnlichen Bedingungen, wie sie eben vorstehend für die Herstellung von Verbindungen der Formel II, worin Z für Wasserstoff oder Hydroxyl steht, beschrieben sind, um eine Verbindung der Formel V

zu erhalten, die diazotiert werden kann unter Verwendung eines Diazoniumsalzes ArN₂⁺E^- (worin Ar eine automatische Gruppe bedeutet, z. B. p-Chlorphenyl, und E^- ein Anion, z. B. ein Halogenid, wie Chlorid, bedeutet) in einem Lösungsmittel, wie Wasser, einer organischen Säure, wie Essigsäure, oder einem Gemisch davon, zweckmäßiger bei etwa Umgebungstemperatur, um eine Verbindung der Formel VI

zu ergeben (worin Ar wie zuvor definiert ist), die in die gewünschte Verbindung der Formel II durch Reduktion unter Verwendung von beispielsweise einem reduzierenden Metall, wie Zink, in Anwesenheit einer Säure, z. B. Essigsäure, überführt werden kann. Es sei festgestellt, daß die Auswahl des reduzierenden Mittels von der Natur der Gruppe X abhängen wird.

Die Verbindung 2a kann aus dem Versatil-Vorläufer, 1α- Acetylamino-3α-acetoxy-methylcyclopent-2-en (1a) durch Hydrolyse in Anwesenheit einer schwachen Base, wie eines Erdalkalimetallhydroxids, hergestellt werden.

Eine besonders zweckmäßige Synthese der Verbindung der Formel I über 6-Chlorverbindungen der Formel II ist im folgenden aufgeführt.

Die Verbindung 2a und Verbindungen der Formeln V und VI sind neue Zwischenprodukte und bilden weitere Gegenstände der vorliegenden Erfindung.

Die Verbindung 1a ist eine bekannt Verbindung, die in der US-PS 41 38 562 beschrieben ist.

Wenn die Verbindung der Formel I als einziges Isomeres gewünscht ist, kann sie erhalten werden entweder durch Aufspaltung des Endprodukts oder durch stereospezifische Synthese aus isomer-reinem Ausgangsmaterial oder irgendeinem geeigneten Zwischenprodukt.

Die Aufspaltung des Endprodukts oder eines Zwischenprodukts oder Ausgangsmaterials kann daher durch irgendeine in der Fachwelt bekannte Methode bewirkt werden: siehe beispielsweise "Stereochemistry of Carbon Compounds" von E. L. Eliel (McGraw-Hill, 1962), und "Tables of Resolving Agents" von S. H. Wilen.

Eine zweckmäßige Methode zur Erzielung chiral-reiner Verbindungen der Formel I besteht in der enzymatischen Umwandlung eines racemischen Gemisches der Verbindung oder eines Vorläufers davon. Durch eine solche Methode können sowohl (+)- als auch (-)-Verbindungen der Formel I in optisch reiner Form erhalten werden. Geeignete Enzyme umfassen Desaminasen, wie Adenosindesaminase.

Die Erfindung wird weiterhin unter Bezugnahme auf die folgenden, detaillierten Beispiele beschrieben, worin die Elementaranalysen durch M-H-W Laboratories, Phoenix, AZ, durchgeführt wurden. Die Schmelzpunkte wurden auf einem Mel-Temp-Apparat bestimmt und sind korrigiert. Die kernmagnetischen Resonanzspektren wurden auf Jeol FX 90 QFT- oder Nicollet NT 300-Spektrometern erhalten und in DMSO-D₆ bestimmt. Chemische Verschiebungen sind ausgedrückt in ppm Abwärtsfeld von Me₄Si. IR-Spektren wurden als KBr-Pellets mit einem Nicollet 50 XC FT-IR-Spektrometer bestimmt, und UV-Spektren wurden am Beckmann DU-8-Spektrophotometer gemessen. Die Massenspektren wurden mit einem AEI Scientific Apparatus Limited MS-30- Massenspektrometer erhalten. Die Dünnschichtchromatographie (TLC) wurde an 0,25 mm Schichten von Merck- Silicagel (230-400 mesh) durchgeführt. Alle Chemikalien und Lösungsmittel sind Reagens-Reinheitsgrad, sofern nicht anders angegeben. Der Ausdruck "aktiver Bestandteil", wie er in den Beispielen verwendet wird, bedeutet eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon.

Beispiel 1 (±)-(1α,4α)-4-[(5-Amino-6-chlor-4-pyrimidinyl)-amino]- 2-cyclopentenylcarbinol (3a)

Ein Gemisch von 1α-Acetylamino-3α-acetoxymethyl-cyclopent- 2-en (1a) (3,0 g, 15 mMol) und wäßrigem Bariumhydroxid (0,5 N, 300 ml) wurde über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde es mit Trockeneis neutralisiert. Der Niederschlag wurde abfiltriert und die wäßrige Lösung wurde zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde mit absolutem Ethanol extrahiert und erneut eingeengt und ergab 2a als farblosen Sirup, 1,6 g (14 mMol).

Zu diesem Sirup wurden 5-Amino-4,6-dichlorpyrimidin (4,59 g, 28 mMol), Triethylamin (4,2 g, 42 mMol) und n- Butanol (50 ml) gegeben, und die Mischung wurde 24 h unter Rückfluß erhitzt. Die flüchtigen Lösungsmittel wurden entfernt, der Rückstand wurde an Silicagel (7 g) absorbiert, das in einer Flash-Säule (flash column) (4,0 × 12 cm) gepackt war, und mit CHCl₃-MeOH (20,1) eluiert und ergab 2,69 g (74%) der Verbindung 3a; Fp. 130-132°C. Eine analytische Probe wurde durch Umkristallisieren aus Ethylacetat (EtOAc) erhalten; Fp. 134-135°C.
MS (30 ev, 200°C); m/e 240 und 242 (M⁺ und M⁺+2), 209 (M⁺ ^-31), 144 (B⁺);
IR: 3600-2600 (OH), 1620, 1580 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₀H₁₃ClN₄O) C, H, N.

Beispiel 2 (±)-(1α,4α)-4-[(2-Amino-6-chlor-4-pyrimidinyl)-amino]- 2-cyclopentenylcarbinol (4a)

Zu 14 mMol rohem 2a (Beispiel 1) wurden 2-Amino-4,6-dichlorpyrimidin (3,74 g, 22,8 mMol), Triethylamin (15 ml) und n-Butanol (75 ml) gegeben und die Mischung wurde 48 h unter Rückfluß erhitzt. Die flüchtigen Lösungsmittel wurden entfernt, der Rückstand mit Methanol behandelt, um das ungelöste Nebenprodukt (das doppelte Pyrimidinnucleosid) abzutrennen. Die methanolische Lösung wurde an Silicagel (8 g), das in eine Säule (4,0 × 14 cm) gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (40/1) eluiert und ergab 1,52 g (42%) rohes 4a. Das Produkt wurde aus Ethylacetat umkristallisiert und ergab 4a; Fp. 132-134°C.
MS (30 ev, 200°C); m/e 240 und 242 (M⁺ und M⁺+2), 209 (M^+-31), 144 (B⁺);
IR: 3600-3000 (NH₂, OH), 1620, 1580 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₀H₁₃ClN₄) C, H, N.

Beispiel 3 (±)-(1α,4α)-4-([(2-Amino-6-chlor-(4-chlorphenyl)-azo]- 4-pyrimidinyl-amino)-2-cyclopentenylcarbinol (5a)

Eine kalte Diazoniumsalz-Lösung wurde hergestellt aus p-Chloranilin (1,47 g, 11,5 mMol) in 3 N HCl (25 ml) und Natriumnitrit (870 mg, 12,5 mMol) in Wasser (10 ml). Diese Lösung wurde zu einem Gemisch von 4a (2,40 g, 10 mMol), Essigsäure (50 ml), Wasser (50 ml) und Natriumacetat- trihydrat (20 g) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Der gelbe Niederschlag wurde filtriert und mit kaltem Wasser bis zur Neutralität gewaschen, dann wurde er im Abzug luftgetrocknet, um 3,60 g (94%) 5a zu ergeben, Fp. 229°C (Zers.). Die analytische Probe wurde aus Aceton-Methanol (1/2) erhalten, Fp. 241-243°C (Zers.).
MS (30 ev, 260°C): m/e 378 und 380 (M⁺ und M⁺ + 2), 282 (B⁺);
IR: 3600-3000 (NH₂, OH), 1620, 1580 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₆H₁₆Cl₂N₆O) C, H, N.

Beispiel 4 (±)-(1α,4α)-4-[(2,5-Diamino-6-chlor-4-pyrimidinyl)-amino]- 2-cyclopentenylcarbinol (6a)

Ein Gemisch von 5a (379 mg, 1 mMol), Zinkstaub (0,65 g, 10 mMol), Essigsäure (0,32 ml), Wasser (15 ml) und Ethanl (15 ml) wurde 3 h unter Stickstoff zum Rückfluß erhitzt. Das Zink wurde entfernt und die Lösungsmittel wurden verdampft. Der Rückstand wurde an Silicagel (2 g), das in eine Säule von 2,0 × 18 cm gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (15/1) eluiert. Es wurde ein rosa Sirup erhalten. Weitere Reinigung aus Methanol- Ether lieferte 6a als rosa Kristalle, 170 mg (66%), Fp. 168-170°C.
MS (30 ev, 220°C): m/e 255 und 257 (M⁺ und M⁺ + 2), 224 (M^+-31), 159 (B⁺).
IR: 3600-3000 (NH₂, OH), 1620, 1580 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₀H₁₄ClN₄) C, H, N.

Beispiel 5 (±)-(1α,4α)-4-(6-Chlor-9H-purin-9yl)-2-cyclopentenyl-carbinol (7a)

Ein Gemisch von 3a (1,30 g, 5,4 mMol), Triethylorthoformiat (30 ml) und Salzsäure (12 N, 0,50 ml) wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde bei 35°C im Vakuum eingedampft. Zu dem Rückstand wurde wäßrige Salzsäure (0,5 N, 30 ml) gegeben und die Mischung wurde 1 h gerührt. Das Gemisch wurde mit 1 N Natriumhydroxid auf pH 7-8 neutralisiert und an Silicagel (8 g), das in eine Säule (4,0 × 8 cm) gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (20/1) eluiert und ergab weiße Kristalle von 7a, 1,12 g (82%). Das Rohprodukt wurde aus Ethylacetat umkristallisiert und lieferte 7a, Fp. 108-110°C.
MS (30 ev, 200°C); m/e 250 und 252 (M⁺ und M⁺ + 2), 219 (M^+-31), 154 (B⁺);
IR: 3600-2800 (OH), 1600 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₁ClN₄O) C, H, N.

Beispiel 6 (±)-(1α,4α)-4-(6-Hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenylcarbinol (8a)

Ein Gemisch von 7a (251 mg, 1 mMol) und wäßrigem Natriumhydroxid (0,2 N, 10 ml) wurde 3 h zum Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde die Reaktionsmischung mit Essigsäure auf pH 5-6 eingestellt. Die Reaktionsmischung wurde an Silicagel (2 g), das in eine Säule (2,0 × 11 cm) gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (10/1) eluiert und ergab 105 mg (45%) 8a. Das weiße Rohprodukt wurde aus Wasser-Methanol (3/1) umkristallisiert und lieferte 8a, Fp. 248-250°C (Zers.).
MS (30 ev, 300°C); m/e 232 (M⁺), 214 (M^+-18), 136 (B⁺);
IR: 3600-2600 (OH), 1680, 1600 (C=O, C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₂N₄O₂) C, H, N.

Beispiel 7 (±)-(1α,4α)-4-(6-Amino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenylcarbinol (9a)

Flüssiges Ammoniak wurde in eine Bombe geleitet, die eine Lösung von 7a (250 mg, 1 mMol) in Methanol (5 ml) bei -80°C enthielt. Die Bombe wurde verschlossen und 24 h bei 60°C erhitzt. Ammoniak und Methanol wurden eingedampft und der Rückstand aus Wasser umkristallisiert und ergab weißliche Kristalle von 9a, 187 mg (81%), Fp. 198-200°C.
MS (30 ev, 210°C); m/e 231 (M⁺), 213 (M^+-18), 135 (B⁺);
IR: 3600-2600 (NH₂, OH), 1700, 1600 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₃N₅O) C, H, N.

Beispiel 8 (±)-(1α,4α)-4-(6-Mercapto-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenylcarbinol (10a)

Ein Gemisch von 7a (125 mg, 0,5 mMol), Thioharnstoff (40 mg, 0,64 mMol) und n-Propanol (5 ml) wurde 2 h zum Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde der Niederschlag durch Filtrieren isoliert, mit n-Propanol gewaschen un in Natriumhydroxid (1 N, 5 ml) gelöst. Die Lösung wurde mit Essigsäure auf pH 5 eingestellt. Das rohe 10a (90 mg, 73%) wurde erneut isoliert, Fp. 260-262°C (Zers.), und aus N,N-Dimethylformamid umkristallisiert und ergab 10a, Fp. 263-265°C. (Zers.).
MS (30 ev, 290°C): m/e 248 (M⁺), 230 (M^+-18), 152 (B⁺), IR: 3600-3200 (OH), 3100, 2400 (Sch), 1600 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₂N₄OS) C, H, N.

Beispiel 9 (±)-(1α,4α)-4-(2-Amino-6-chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol (13a)

Eine Mischung von 6a (1,41 g, 5,5 mMol), Triethylorthoformiat (30 ml) und Salzsäure (12 N, 1,40 ml) wurde über Nacht gerührt. Die Suspension wurde im Vakuum getrocknet. Verdünnte Salzsäure (0,5 N, 40 ml) wurde zugesetzt und die Mischung 1 h bei Raumtemperatur umgesetzt. Die Mischung wurde mit 1 N Natriumhydroxid auf pH 8 neutralisiert und an Silicagel (7,5 g), das in eine Säule (4,0 × 10 cm) gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (20/1) eluiert und ergab weißliche Kristalle von 13a, 1,18 g (80%). Das Rohprodukt wurde aus Ethanol umkristallisiert und lieferte 13a, Fp. 145-147°C.
MS (30 ev, 220°C): m/e 265 und 267 (M⁺ und M⁺ + 2), 235 (m^+-30), 169 (B⁺);
IR: 3600-2600 (NH₂, OH), 1620-1580 (C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₂N₅OCl · 3/4 H₂O) C, H, N.

Beispiel 10 (±)-(1α,4α)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol (14a)

Ein Gemisch von 13a (266 mg, 1 mMol) und wäßrigem Natriumhydroxid (0,33 N) wurde 5 h zum Rückfluß erhitzt, an Silicagel (2 g), das in eine Säule (2,0 × 7,5 cm) gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃-MeOH (5/1) eluiert. Das Rohprodukt wurde aus Methanol-Wasser (1/4) umkristallisiert und ergab weiße Kristalle von 14a, 152 mg (61%), Fp. 254-256°C (Zers.).
MS (30 ev, 200°C); m/e 247 (N⁺), 217 (M^+-30), 151 (B⁺);
IR: 3600-2600 (NH₂, OH), 1700, 1600 (C=O, C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₃N₅O₂ · 3/4 H₂O) C, H, N.

Beispiel 11 (±)-(1α,4α)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-cyclopentenyl- carbinol (15a)

Flüssiges Ammoniak wurde in eine Lösung von 13a (265 mg, 1 mMol) in Methanol (10 ml) bei -80°C in einer Bombe geleitet. Die Bombe wurde verschlossen und 48 h auf 75°C erhitzt. Ammoniak und Methanol wurden eingedampft. Der Rückstand wurde an Silicagel (2 g), das in eine Säule (2,0 × 10 cm) gepackt war, absorbiert und mit CHCl₃- MeOH (15/1) eluiert. Das Rohprodukt wurde aus Ethanol umkristallisiert und ergab 196 mg (80%) 15a, Fp. 152-155°C.
MS (30 ev, 200°C): m/e 246 (M⁺), 299 (M^+-17), 216 (M^+-30), 150 (B⁺);
IR: 3600-3000 (NH₂, OH), 1700, 1650, 1600 (C=O, C=C, C=N);
Analyse: (C₁₁H₁₄N₆O) C, H, N.

Beispiel 12 (1S,4R)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-cyclopentenyl- carbinol [(1S,4R)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopenten- methanol] (a) Zwischenverbindung 1

(1R,2S,3R,5R)-3-[6-Amino-9H- purin-9-yl]-5-[((1,1-dimethylethyl)-dimethylsilyloxy)- methyl]-1,2-cyclopentandiol (-) Aristeromycin¹ (12,505 g), tert.-Butyldimethylsilylchlorid (7,8 g) und Imidazol (12,96 g) in trockenem Dimethylformamid (85 ml) wurden 2½ h bei Umgebungstemperatur gerührt. Die erhaltene Lösung wurde mit Ethylacetat (500 ml) verdünnt, dann mit Wasser (3 × 100 ml) und Salzlösung (50 ml) gewaschen, bevor ein weißer Feststoff auskristallisierte. Dieser wurde durch Filtrieren gesammelt, mit Ethylacetat gewaschen, dann im Vakuum getrocknet und ergab das Titelprodukt (3,92 g).
¹H-NMR (DMSO-d₆) 8,15 (1 H), 8,09 (1 H), 7,19 (2 H), 5,00 (1 H), 4,72 (1 H), 4,69 (1 H), 4,36 (1 H), 3,85 (1 H), 3,67 (2 H), 2,23 (1 H), 2,09 (1 H), 1,79 (1 H), 0,89 (9 H), 0,07 (6 H).
¹Journal of the American Chemical Society 1983, Band 105, 4049-4055.

(b) Zwischenverbindung 2 (4R,3aS,6R,6aR)-4-[6-Amino- 9H-purin-9-yl-6-[((1,1-dimethylethyl)-dimethylsilyloxy)- methyl]-3a,5,6,6a-tetrahydro-4H-cyclopenta-1,3- dioxol-2-thion

Eine gerührte Suspension von Zwischenverbindung 1 (3,45 g) in trockenem Dimethylformamid (56 ml) wurde mit 1,1′-Thiocarbonyldiimidazol (3,3 g) behandelt und ergab eine gelbe Lösung. Nach 15½ h bei Umgebungstemperatur wurde die entstandene Lösung mit der von einem vorhergehenden Experiment (6% Einwaage) kombiniert und das Lösungsmittel wurde durch Verdampfen entfernt. Das zurückbleibende Öl wurde mit Ethylacetat (100 ml) verdünnt, dann mit Wasser (2 × 20 ml) und Salzlösung (2 × 20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und zu einem gelben Feststoff eingedampft. Dieser wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen, dann durch Filtrieren gesammelt, weiter mit Ether (25 ml) gewaschen, dann im Vakuum getrocknet und ergab das Titelprodukt als blaß-cremefarbenen Farbstoff (3,61 g);
λ _max (Ethanol) 240,0 nm (E 459);
¹H-NMR (DMSO-d₆) 8,27 (1 H), 8,13 (1 H), 7,33 (2 H), 5,81 (1 H), 5,37 (1 H), 5,28 (1 H), 3,78 (2 H), 2,60 (1 H), 2,28 (2 H), 0,90 (9 H), 0,09 (6 H).

(c) Zwischenverbindung 3: (1′R,4′S)-9-[4-(((1,1-Dimethylethyl)- dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1- yl]-9H-purin-6-amin

Eine Lösung von Zwischenverbindung 2 (3,57 g) in trockenem Tetrahydrofuran (25 ml) wurde mit einer Lösung von 1,3-Dimethyl-2-phenyl-1,3,2-diazophospholidin (4,94 g) in trockenem Tetrahydrofuran (10 ml) behandelt, dann 8¾ h bei Umgebungstemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen entfernt. Das zurückbleibende Öl wurde mit dem aus einem vorherigen Experiment (40% Einwaage) vereinigt, dann der Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (200 g, Merck 7734) unterworfen, mit Chloroform, dann mit Chloroform-Ethanol-Gemischen eluiert und ergab einen weißen Feststoff. Dieser Feststoff wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen und dann durch Filtrieren gesammelt. Der Feststoff wurde weiter mit Ether (10 ml) gewaschen, dann im Vakuum getrocknet und lieferte das Titelprodukt (1,47 g).
λ _max (Ethanol) 261,4 nm (E 443)
¹H-NMR (DMSO-d₆) 8,14 (1 H), 8,00 (1 H), 7,20 (2 H), 6,12 (1 H), 5,95 (1 H), 5,60 (1 H), 3,66 (2 H), 2,96 (1 H), 2,69 (1 H), 1,65 (1 H), 0,74 (9 H), 0,02 (6 H).

(d) Zwischenverbindung 4: (1′R,4′S)-9-[4-(((1,1-Dimethylethyl)- dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1-yl]-9H- purin-6-amin, 1-Oxid

Eine Lösung von Zwischenverbindung 3 (1,37 g) in Chloroform (30 ml) wurde mit 80- bis 90%iger m-Chlorphenoxybenzoesäure (1,29 g) behandelt, dann 3 h bei Umgebungstemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Verdampfen entfernt und das verbleibende Gummi wurde in Ethylacetat (10 ml) gelöst. Es kristallisierte ein weißer Feststoff aus. Dieser Feststoff und das durch Eindampfen des Filtrats gewonnene Material wurden in Chloroform (100 ml) gelöst, dann mit gesättigter, wäßriger Natriumbicarbonat- Lösung (3 × 10 ml) und Salzlösung (2 × 10 ml) gewaschen. Die Waschwässer wurden mit Chloroform (50 ml) rückextrahiert. Die vereinigten, organischen Lösungen wurden getrocknet (MgSO₄) und dann zu einem Feststoff eingedampft. Dieser Feststoff wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen und dann durch Filtrieren gesammelt. Der weiße Feststoff wurde weiter mit Ether (10 ml) gewaschen, dann im Vakuum getrocknet und ergab das Titelprodukt (1,16 g).
λ _max (Ethanol) 235,4 nm (E 1324), 263,2 nm (E 248), 300,2 nm (E 75);
¹H-NMR (CDCl₃) 8,72 (1 H), 8,02 (1 H), 7,16 (2 H), 6,21 (1 H), 5,87 (1 H), 5,72 (1 H), 3,68 (2 H), 3,04 (1 H), 2,82 (1 H), 1,74 (1 H), 0,89 (9 H), 0,06 (6 H).

(e) Zwischenverbindung 5: (1′R,4′S)-7-[4-(((1,1-Dimethylethyl)- dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1-yl]- 2-imino-1,2-dihydro[1,2,4]oxadiazolo[3,2-i-]-9H-purinhydrobromid

Eine gerührte, eisgekühlte Suspension von Zwischenverbindung 4 (1,08 g) in Methanol (20 ml) wurde mit einer Lösung von Cyanbromid (0,34 g) in Methanol (20 ml), die während 5 min zugesetzt wurde, behandelt. Nach 15 min konnte sich die Suspension auf Umgebungstemperatur erwärmen und lieferte eine Lösung. Nach 90 min wurde das Lösungsmittel durch Eindampfen entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen und dann durch Filtrieren gesammelt. Der Feststoff wurde weiter mit Ether (25 ml) gewaschen, dann im Vakuum getrocknet und ergab das Titelprodukt (1,37 g).
λ _max (Ethanol) 228,2 nm (E 530), 285,2 nm (E 445);
¹H-NMR (CDCl₃) 10,20 (1 H), 10,02 (1 H), 8,37 (1 H), 6,25 (1 H), 6,01 (1 H), 5,90 (1 H), 3,69 (2 H), 3,05 (1 H), 2,86 (1 H), 1,73 (1 H), 0,86 (9 H), 0,03 (6 H).

(f) Zwischenverbindung 6: (1′R,4′S)-9-[4-(((1,1-Dimethylethyl)- dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1- yl]-6-cyanoimino-1,6-dihydro-1-methoxy-9H-purin

Eine Lösung von Zwischenverbindung 5 (1,36 g) in Dimethylformamid (10 ml) wurde bei Umgebungstemperatur gerührt und dann mit Triethylamin (1,2 ml) behandelt. Nach 40 min wurde Jodmethan (0,54 ml) zugesetzt, was eine gelbe Lösung ergab. Nach 3¾ h wurde das Lösungsmittel durch Verdampfen entfernt. Der Rückstand wurde zwischen Ethylacetat (100 ml) und Wasser (20 ml) verteilt. Die organische Lösung wurde weiter mit Wasser (2 × 20 ml) und Salzlösung (20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und zu einem Feststoff eingedampft. Dieser Feststoff wurde mit Diethylether (25 ml) gewaschen und dann durch Filtrieren gesammelt. Dieser weiße Feststoff wurde weiter mit Ether (10 ml) gewaschen, dann im Vakuum getrocknet und ergab das Titelprodukt (0,865 g).
λ _max (Ethanol) 227,2 nm (E 449, 287,0 nm (E 544);
¹H-NMR 8,23 (1 H), 7,96 (1 H), 6,24 (1 H), 5,85 (1 H), 6,65 (1 H), 4,21 (3 H), 3,66 (2 H), 3,04 (1 H), 2,77 (1 H), 1,68 (1 H), 0,88 (9 H), 0,05 (6 H).

(g) Zwischenverbindung 7: (1′R,4′S)-9-[4-(((1,1-Dimethylethyl)- dimethylsilyloxy)-methyl)-2-cyclopenten-1-yl]- 6-methoxyamino-9H-purin-2-amin

Eine Lösung von Zwischenverbindung 6 (802 mg) und 1,8- Diazabicyclo[5,4,0]undec-7-en (0,45 ml) in Ethanol (80 ml) wurde gerührt und zum Rückfluß erhitzt. Nach 9 h wurde das Erhitzen gestoppt und die Lösung über Nacht bei Umgebungstemperatur stehengelassen. Das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen entfernt. Das verbleibende Öl wurde mit dem aus einem vorhergehenden Experiment (4% Einwaage) vereinigt, dann der Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (40 g, Merck 9385) unterzogen, mit Chloroform, dann mit Chloroform-Ethanol-Gemischen eluiert und ergab einen Schaum. Dieser Schaum wurde mit Diethylether (10 ml) verrieben und der entstandene Feststoff durch Filtrieren gesammelt. Der Feststoff wurde weiter mit Ether (5 ml) gewaschen, dann im Vakuum getrocknet und lieferte das Titelprodukt (594 mg).
λ _max (Ethanol) 282,2 nm (E 409)
¹H-NMR (DMSO-d₆) 9,76 (1 H), 7,32 (1 H), 6,53 (2 H), 6,08 (1 H), 5,88 (1 H), 5,26 (1 H), 3,72 (3 H), 3,61 (2 H), 2,90 (1 H), 2,50 (1 H), 1,52 (1 H), 0,83 (9 H), 0,02 (6 H).

(h) Zwischenverbindung 8: (1S,4R)-4-[2-Amino-6-methoxy- amino-9H-purin-9-yl]-2-cyclopenten-methanol

Eine Lösung von Zwischenverbindung 7 (356 mg) in Tetrahydrofuran (35 ml) wurde bei Umgebungstemperatur gerührt und dann mit Tetrabutylammoniumfluorid (1, 0 M Lösung in Tetrahydrofuran, 1,4 ml) behandelt. Nach 90 min wurde die Reaktionsmischung mit Wasser (1 ml) abgeschreckt, dann wurden die Lösungsmittel durch Eindampfen entfernt. Das zurückbleibende Öl wurde der Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (20 g, Merck 7734) unterzogen, mit Chloroform, dann mit Chloroform-Ethanol-Gemischen eluiert und ergab das Titelprodukt als Feststoff (243 mg).
λ _max (pH6-Puffer) 280,2 nm (E 534);
¹H-NMR (DMSO-d₆) 9,75 (1 H), 7,39 (1 H), 6,52 (2 H), 6,10 (1 H), 5,84 (1 H), 5,27 (1 H), 4,73 (1 H), 3,40 (2 H), 2,83 (1 H), 2,55 (1 H), 1,52 (1 H).

(1S,4R)-4-[2,6-Diamino-9H-purin-9-yl]-2-cyclopenten- carbinol

Eine gerührte, eisgekühlte Lösung von Zwischenverbindung 8 (210 mg) in Wasser (10 ml) und Tetrahydrofuran (50 ml) wurde mit Aluminiumamalgam [aus Aluminium (237 mg) und 0,5%iger wäßriger Quecksilber(II)-chlorid- Lösung] behandelt, das in kleinen Stücken während 15 min zugesetzt wurde. Nach 40 min konnte sich die gerührte Mischung auf Umgebungstemperatur erwärmen. Nach 15 h wurde das entstandene Gemisch durch Kieselgur zur Entfernung von Unlöslichkeiten filtriert. Diese wurden mit Wasser/Tetrahydrofuran (1/5, 60 ml) gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden eingedampft. Der Rückstand wurde der Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (10 g, Merck 9385) unterzogen, mit Chloroform-Ethanol-Gemischen eluiert und ergab das Titelprodukt als Schaum (159 mg);
[α] _D = -81° (c = 1,04, Methanol).
λ _max (pH6-Puffer) 255,0 nm (E 302) 280,8 nm (E 381)
¹H-NMR (DMSO-d₆) 7,61 (1 H), 6,66 (2 H), 6,10 (1 H), 5,87 (1 H), 5,76 (2 H), 5,38 (1 H), 4,76 (1 H), 3,45 (2 H), 2,87 (1 H), 2,60 (1 H), 1,60 (1 H).

Beispiel 13 (1S,4R)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol (1′R,4′S)-2-Amino-1,9-dihydro-9-[4-hydroxymethyl-2- cyclopenten-1-yl]-6H-purin-6-on

Eine trübe Lösung der Titelverbindung von Beispiel 12 (144 mg) in 0,1 M pH6-Puffer (10 ml) (aus 28,4 g Dinatriumorthophosphat in 2 l Wasser, mit Orthophosphorsäure eingestellt) wurde mit einer Lösung von Adenosindesaminase (0,5 ml, 778 Einheiten) in 50% Glycerin- 0,01 M Kaliumphosphat (pH 6,0) behandelt, dann gerührt und auf 37°C erwärmt. Nach 18½ h wurde die entstandene Suspension abgekühlt. Der gesammelte Feststoff wurde aus Wasser umkristallisiert und lieferte das Titelprodukt als weißen Feststoff (86 mg);
[α] _D = -49° (c = 0,5, Dimethylsulfoxid).
λ _max (pH6-Puffer) 252,6 nm (E 531);
¹H-NMR (DMSO-d₆) 10,60 (1 H), 7,60 (1 H), 6,47 (2 H), 6,10 (1 H), 5,86 (1 H), 5,33 (1 H), 4,72 (1 H), 3,45 (2 H), 2,59 (1 H), 1,58 (1 H).

Beispiel 14 Herstellung von Enantiomeren des (1α,4α)-4-(2-Amino-6- hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinols (a) (1S,4R)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2- cyclopentenyl-carbinol

Das Diamino-Analoge (100 mg) (Beispiel 11) wurde in 3 ml 0,05 M K₂PO₄-Puffer (pH 7,4) unter Erhitzen (50°C) gelöst. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mit 40 Einheiten Adenosin-desaminase (Sigma, Typ VI, Kalbsdarmschleimhaut) versetzt. Nach 3tägiger Inkubation bei Raumtemperatur bildete sich ein Niederschlag, der durch Filtrieren entfernt wurde, Ausbeute 18,2 mg. Das Filtrat wurde auf 1,5 ml eingeengt und 2 Tage gekühlt. Zusätzlicher Feststoff wurde durch Filtrieren erhalten, Ausbeute 26,8 mg. Die beiden Feststoff-Fraktionen wurden aus Wasser umkristallisiert und ergaben das reine Titelprodukt, Fp. 269-272°C;
[α] = -62,1° (c = 0,3, MeOH).

b) (1R,4S)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl- carbinol

Die Filtrate aus der Herstellung des 1S,4R-Isomeren (Beispiel 14a) wurden kombiniert und zur Trockene eingedampft. Das unveränderte Diamino-Ausgangsmaterial wurde an einer Silicagel-Flashsäule unter Verwendung von 10% Methanol/Chloroform abgetrennt. Die Diaminoverbindung wurde in 0,05 M K₂PO₄-Puffer (pH 7,4) (15 ml) gelöst und mit 800 Einheiten Adenosin-desaminase versetzt. Die Lösung wurde 96 h bei 37°C inkubiert. TLC zeigt an, daß einiges nichtumgesetztes Produkt verblieben war. Die Lösung wurde 3 min in siedendem Wasser erhitzt und filtriert, um denauturiertes Protein zu entfernen. Weitere 800 Einheiten Adenosin-desaminase wurden zugegeben und das Verfahren wurde wiederholt. Die entproteinierte Lösung wurde zur Trockene eingedampft und das Produkt aus Wasser kristallisiert. Das Titelprodukt wurde als weißer Feststoff durch Filtration aus Wasser gesammelt, Fp. 265-270°C;
[α] = +61,1° (c = 0,3, MeOH).

Beispiel 15 (±)-(1α,4α)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenylacetoxy-carbino-l

Zu einer Suspension des Produktes von Beispiel 10 (130 mg, 0,50 mMol) und 4-Dimethylaminopyridin (5 mg, 0,04 mMol) in einem Gemisch von Acetonitril (6 ml) und Triethylamin (0,09 ml, 0,6 mMol) wurde Essigsäureanhydrid (0,06 ml, 0,6 mMol) gegeben. Die Mischung wurde 3 h bei Raumtemperatur gerührt. Methanol (1 ml) wurde zugesetzt, um die Reaktionsmischung abzuschrecken. Die Lösung wurde eingeengt und an Silicagel (1,5 g), das auf einer Säule (2,0 × 12 cm) gepackt war, absorbiert, mit CHCl₃-MeOH (20/1) eluiert. Die Produktfraktionen wurden gesammelt und konzentriert und ergaben einen weißen Feststoff. Das Feststoffprodukt wurde mit MeOH-AcOEt gewaschen, Ausbeute 123 mg (85%). Weitere Reinigung aus Methanol ergab das Titelprodukt als nadelartige Kristalle, Fp. 237-239°C.
Analyse: (C₁₃H₁₅N₅O₃) C, H, N.

Beispiel 16 (1S,4R)-4-[2-Amino-9H-purin-9-yl]-2-cyclopentenylcarbinol

Eine gerührte, eisgekühlte Lösung von (1S,4R)-4-[2- Amino-6-methoxyamino-9H-purin-9-yl]-2-cyclopentenmethanol (Zwischenverbindung 8, Beispiel 12) (1,202 g) in Tetrahydrofuran (250 ml) und Wasser (50 ml) wurde mit Aluminiumamalgam [aus Aluminium (1,761 g) und 0,5%iger wäßriger Quecksilber(II)-chlor-Lösung], das in kleinen Stücken während 1 h 47 min zugesetzt wurde, behandelt. Nach 35 min konnte sich die gerührte Mischung auf Umgebungstemperatur erwärmen. Nach 16 h 50 min wurde weiteres Aluminiumamalgam (aus 235 mg Aluminium) im Verlauf von 14 min zugesetzt. Nach weiteren 4 h 10 min wurde das entstandene Gemisch durch Kieselgur filtriert, um Unlöslichkeiten zu entfernen. Diese wurden mit Tetrahydrofuran/ Wasser (5/1) (300 ml) gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden zu einem gelben Schaum eingedampft. Der Schaum wurde der Säulenchromatographie an Siliciumdioxid (33,8 g, Merck 7734), hergestellt in Chloroform, unterzogen und mit Chloroform-Ethanol-Gemischen eluiert und ergab mehrere Fraktionen (578 mg, 420 mg und 40 mg). Die beiden größeren Fraktionen wurden getrennt aus Isopropanol kristallisiert. Die Filtrate wurden mit der kleinsten Säulenfraktion vereinigt und der präparativen Dünnschichtchromatographie (Merck 5717), dreimal in 10/1 Chloroform/Methanol entwickelt, unterworfen. Die Platten wurden mit Ethylacetat und Ethyllacetat/Ethanol (1/1) eluiert und ergaben einen braunen Feststoff (45 mg). Der Feststoff wurde der Säulenchromatographie an Silciumdioxid (2,7 g, Merck 7734), hergestellt in Chloroform, unterzogen und mit Chloroform-Methanol-Triethylamin- Gemischen eluiert und ergab ein Gummi (17 mg). Im Anschluß an eine erfolglose Kristallisation aus Isopropanol und Holzkohlen-Behandlung in Methanol wurde eine wäßrige Lösung des gewonnenen Materials gefriergetrocknet und ergab die Titelverbindung (15 mg).
¹H-NMR (DMSO-d₆) 1,62 (1 H), 2,63 (1 H), 2,89 (1 H), 3,45 (2 H), 4,73 (1 H), 5,48 (1 H), 5,91 (1 H), 6,14 (1 H), 6,50 (2 H), 7,98 (1 H), 8,57 (1 H).
MS [MH]⁺ 232.

Beispiel 17 Tablettenformulierungen

A. Die folgende Formulierung wird durch Naßgranulation der Bestandteile mit einer Lösung von Povidone in Wasser, Trocknen und Sieben und anschließende Zugabe von Magnesiumstearat sowie Verpressen hergestellt.

mg/Tablette
(a) Aktiver Bestandteil
250
(b) Lactose B. P.	210
(c) Povidone B. P.	15
(d) Natriumstärkeglykolat	20
(e) Magnesiumstearat	5
	500

B. Die folgende Formulierung wird durch direktes Verpressen hergestellt; die Lactose ist vom Typ für direktes Verpressen.

mg/Tablette
Aktiver Bestandteil
250
Lactose	145
Avicel	100
Magnesiumstearat	5
	500

C. (Formulierung mit gesteuerter Freigabe). Die Formulierung wird hergestellt durch Naßgranulation der Bestandteile (unten) mit einer Lösung von Povidone in Wasser, Trocknen und Sieben, anschließend Zugabe von Magnesiumstearat und Verpressen

mg/Tablette
(a) Aktiver Bestandteil
500
(b) Hydroxypropylmethylcellulose (Methocel K4M Premium)	112
(c) Lactose B. P.	53
(d) Povidone B. P.	28
(e) Magnsesiumstearat	7
	700

Beispiel 18 Kapselformulierung

Eine Kapselformulierung wird hergestellt durch Vermischen der folgenden Bestandteile und Einfüllen in eine zweiteilige Hartgelatinekapsel.

mg/Kapsel
Aktiver Bestandteil
125
Lactose	72,5
Avicel	50
Magnesiumstearat	2,5
	250

Beispiel 19 Injizierbare Formulierung

Aktiver Bestandteil 0,200 g
Natriumhydroxidlösung, 0,1 M
Auffüllen auf pH von etwa 11
steriles Wasser Auffüllen auf 10 ml.

Der aktive Bestandteil wird in etwas von dem Wasser suspendiert (das erwärmt sein kann) und das pH auf etwa 11 mit einer Lösung von Natriumhydroxid eingestellt. Der Ansatz wird dann auf das Volumen gebracht und durch ein Membranfilter mit Sterilisationsreinheit in eine sterile 10-ml-Glasflasche filtriert und mit sterilen Verschlüssen und Versiegelungen versehen.

Beispiel 20 Suppositorium

mg/Suppositorium
Aktiver Bestandteil (63 µm)
250
Hartfett, BP	1770
	2020

Ein Fünftel des Hartfetts wird in einem dampfummantelten Tiegel bei höchstens 45°C geschmolzen. Der aktive Bestandteil wird durch ein 200-µm-Sieb gestreut und zu der geschmolzenen Basis unter Vermischen zugegeben unter Verwendung eines Hochleistungsscherrührers, bis eine glatte Dispersion erreicht ist. Unter Aufrechterhaltung der Mischung bei 45°C wird das restliche Hartfett zu der Suspension gegeben und gerührt, daß eine homogene Mischung erreicht wird. Die gesamte Suspension wird durch ein 250-µm-Sieb aus rostfreiem Stahl geleitet und unter fortgesetztem Rühren auf 40°C abkühlen gelassen. Bei einer Temperatur von 38 bis 40°C werden 2,02 g des Gemisches in geeignete 2-ml-Plastikformen gefüllt. Die Suppositorien werden auf Raumtemperatur abkühlen gelassen.

Beispiel 21 Antivirale Aktivität (A) Anti-HIV-Prüfung

Verbindungen der Formel I werden auf Anti-HIV-Aktivität bei dem National Cancer Institute, Frederick Cancer Research Facility, Frederick, Maryland (FCRF), geprüft. Die folgenden sind die geläufigen Screening-Methoden, die bei FCRF verwendet werden. Das Protokoll besteht aus drei Bereichen, (I) Herstellung der infizierten Zellen und Verteilung auf Testplaten (II) Herstellung der Arzneimittel-Verdünnungsplatten und Verteilung auf die Testplatten und (III) XTT-Prüfverfahren; vergl. D. A. Scudiero et al., "A New Simplified Tetrazolium Assay for Cell Growth and Drug Sensitivity in Culture", Cancer Res., 48, 4827 (1988).

I. Infektion und Verteilung von ATH8-Zellen auf Mikrotiterplatten

Die zu infizierenden Zellen (eine normale lamphoblastoide Zell-Linie, welche CD 4 ausdrückt) werden in 50 ml konische Zentrifugengläser gegeben und 1 h mit 1 bis 2 µg/ml Polybrene bei 37°C behandelt. Die Zellen werden dann 8 min bei 1200 U/min pelletiert. HIV-Virus, verdünnt 1 : 10 in Medien (RMP1-1640, 10% Humanserum oder 15% fätales Kalbserum (FCS), mit IL-2 und Antibiotika), wird zugesetzt, um eine MOI von 0,001 zu erzielen. Medium allein wird zu virusfreien Kontrollzellen gegeben. Unter Annahme eines Infektionsvirustiters von 10^-4, stellt ein MOI von 0,001 8 infektiöse Virusteilchen/10 000 Zellen dar. Etwa 500 000 Zellen/Glas werden den 400 µl der Virusverdünnung ausgesetzt. Das entstandene Gemisch wird 1 h bei 37°C in Luft-CO₂ inkubiert. Die infizierten oder nichtinfizierten Zellen werden verdünnt, um 1 × 10^-4 (mit Humanserum) oder 2 × 10^-4 (mit fötalem Kalbserum) Zellen/100 µl zu ergeben.

Infizierte oder nichtinfizierte Zellen (100 µl) werden auf geeignete Vertiefungen einer Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen und U-Boden verteilt. Jede Verdünnung einer Verbindung wird doppelt mit infizierten Zellen getestet. Nichtinfizierte Zellen werden auf Arzneimittelempfindlichkeit in einer einzigen Vertiefung für jede Verdünnung einer Verbindung geprüft. Arzneimittelfreie Kontrollzellen, infiziert und nichtinfiziert, laufen in Dreifach. Die Vertiefungen B 2 bis G 2 dienten als Reagenskontrollen und erhielten nur Medium. Die Platten werden bei 37°C in Luft-CO₂ inkubiert, bis das Arzneimittel zugesetzt wird.

II. Arzneimittelverdünnung und -zugabe

Verdünnungsplatten (flacher Boden mit 96 Vertiefungen, Mikrotiterplatten) werden über Nacht mit Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) oder Medien behandelt, die mindestens 1% FCS oder 1% Humanserum (abhängig von dem in dem Test verwendeten Medium) enthielten, beginnend am Tag vor der Prüfung. Dieses "Blockierungsverfahren" wird verwendet, um die Adsorption des Arzneimittels an die Mikrotiterplatte während des Verdünnungsprozesses zu begrenzen. Die Vertiefungen werden vollständig mit der blockierenden Lösung gefüllt und bei Raumtemperatur in einer feuchten Kammer unter einer Abzugshaube stehengelassen.

Das Verdünnungsverfahren wird begonnen, indem die Testverbindung zuerst 1 : 20 verdünnt wird. Blockierte Verdünnungsplatten werden hergestellt, indem die blockierende Lösung ausgekippt und auf steriler Gaze trockengelöscht wird. Alle Vertiefungen jeder Platte werden dann mit 225 µl des geeigneten Mediums unter Verwendung eines Cetus Flüssig-Behandlungssystems gefüllt. 25 µl jeder 1 : 20 verdünnten Verbindung werden dann manuell zu Reihe A einer blockierten und gefüllten Verdünnungsplatte gegeben. Vier Verbindungen, ausreichend, um zwei Testplatten zu füllen, werden pro Verdünnungsplatte zugesetzt. Die vier Verbindungen werden dann seriell 10fach verdünnt von Reihe A bis Reihe H unter Verwendung des Cetus liquid handling Systems. Die Ausgangsverdünnung jeder Verbindung in Reihe A ist an diesem Punkt 1 : 200. Die Verdünnungsplatten werden auf Eis gehalten, bis sie gebraucht werden.

Unter Verwendung eines Multikanal-Pipettors mit 6 Mikrospitzen werden 100 µl jeder Arzneimittelverdünnung auf die Testplatte übertragen, die bereits 100 µl Medium plus Zellen enthält. Die Endverdünnung in der Testplatte beginnt bei 1 : 400 (Vertiefungen B 4 bis G 4). Diese Verdünnung (auf 0,25% DMSO) hindert den DMSO-Träger, das Zellwachstum zu stören. Arzneimittelfreie, infizierte oder nichtinfizierte Zellen (Vertiefungen B 3 bis G 3) und Reagenskontrollen (B 2 bis G 2) erhalten das Medium allein. Die letzten 2 Verbindungen werden dann von den Vertiefungen H 7 bis H 12 auf eine zweite Testplatte unter Befolgung des gleichen Verfahrens übertragen. Die Testplatten werden bei 37°C in Luft-CO₂ während 7 bis 14 Tagen oder bis die Viruskontrollproben lysiert sind, was makroskopisch bestimmt wird, inkubiert.

III. Quantitative Bestimmung der viralen Cytopathogenität und Arzneimittelaktivität A. Materialien

1. Eine Lösung von 2,3-Bis-[2-methoxy-4-nitro-5- sulfophenyl]-5-[(phenylamino)-carbonyl]-2H-tetrazoliumhydroxid. (XTT) - 1 mg/ml Lösung in Medien ohne FCS. Lagerung bei 4°C. Wöchentlich zubereiten.

2. Phenazinmethosulfonat(PMS)-Vorratslösung - Diese kann hergestellt und gefroren gehalten werden bei - 20°C bis zum Gebrauch. Sie sollte in PBS mit einer Konzentration von 15,3 mg/ml hergestellt sein.

B. Mikrokultur-Tetrazolium-Untersuchung (MTA)

1. Herstellung von XTT-PMS-Lösung - Das XTT-PMS wird unmittelbar vor seiner Zugabe zu den Vertiefungen der Kulturschalen hergestellt. Die PMS-Vorratslösung wird 1 : 100 (0,153 mg/ml) verdünnt. Verdünnte PMS wird zu jedem ml XTT gegeben, das benötigt wird, um eine PMS-Endkonzentration von 0,02 mM zu ergeben. Ein 50-µl-Aliquot der XTT-PMS Mischung wird zu jeder der geeigneten Vertiefungen gegeben und die Platte 4 h bei 37°C inkubiert. Die Plattendeckel werden entfernt und durch haftende Plattenverschlüsse (Dynatech cat 001-010-3501) ersetzt. Die verschlossene Platte wird auf einem Mikrokultur- Plattenmixer geschüttelt und die Absorption wird bei 450 nm bestimmt.

IV. Ergebnisse

Fig. 1 zeigt eine graphische Darstellung der Prozente der Testzellen gegenüber nichtinfizierter Zellen (%) sowohl für infizierte als auch nichtinfizierte Zellen als Funktion der steigenden Konzentration an Verbindung von Beispiel 10.

Die in Fig. 1 aufgetragenen Daten ermöglichen die Berechnung einer effektiven Konzentration (EC₅₀) in bezug auf infizierte Zellen von etwa 0,15 µg/ml, eine inhibitorische Konzentration (IC₅₀) in bezug auf normale Zellen von etwa 100 µg/ml und einen therapeutischen Index (TI₅₀) von etwa 667. Ein früherer Versuch, der an dem Southern Research Institute durchgeführt worden war, ergab bei TI₅₀ etwa 200, wenn MT-2-Zellen mit H9/HTLV- IIIB gezüchtet waren.

Die Hemmkonzentrtionen gegenüber HIV, die, wie oben beschrieben, für die Verbindungen der Beispiele 7, 9, 10, 11 und 14(b) bestimmt wurden, sind in Tabelle 1 gezeigt.

Tabelle 1

Die Verbindungen der Beispiele 5 und 8 zeigten ebenfalls antivirale Aktivität bei diesem Screening.

(B) Aktivität gegenüber Katzenleukämie-Virus

Das antivirale Screening auf Aktivität gegenüber FeLV- FAIDS wurde in Platten mit 96 Vertiefungen (Corning) unter Verwendung von 81C-Indikatorzellen in Iscove's Modified Dulbecco's Medium, ergänzt mit 10% hitze-inaktiviertem fötalem Rinderserum (FBS), durchgeführt. 20 h vor dem Versuch wurden die Platten mit den 81C-Zellen bei 5 × 10³ Zellen/Vertiefung beimpft. Am Tage des Versuchs wurden die Zellen 30 min bei 37°C mit DEAE- Dextran (25 µg/ml) in 0,1 ml Hanks ausgeglichener Salzlösung vorbehandelt. Diese wurden entfernt und dann 0,1 ml Wachstumsmedium, enthaltend 32 TCID₅₀ von FeLV-FAIDS, oder 0,1 ml Wachstumsmedium allein in jede Vertiefung gegeben. Das Virus wurde 1 h adsorbieren gelassen, dann wurden 0,1 ml Test- oder positive Kontrollverbindung (2′,3′-Didesoxycytidin; ddC) oder Wachstumsmedium zugesetzt. Die Platten wurden bei 37°C inkubiert. Die Zellen wurden mit frischem Wachstumsmedium mit einem Gehalt der Verbindung am 4. Tag nach der Infektion beschickt. Das Kulturmedium wurde vollständig ausgetauscht und durch frisches Medium mit einem Gehalt der Verbindung am Tag 7 nach der Infektion ersetzt. Am Tag 10 nach der Infektion wurden die Zellen mit Formalin fixiert, mit 0,1% Coomassie Brilliant Blue R-250 gefärbt und mikroskopisch auf CPE und Arzneimittelcytotoxizität beobachtet.

Die Verbindung des Beispiels 10 hatte eine ED₅₀ von 1,9 µg/ml

(C) Aktivität gegenüber Mäuse-AIDS

Falcon Gewebekulturplatten mit 6 Vertiefungen wurden mit 1,75 × 10⁵ Zellen/Vertiefung in einem Gesamtvolumen von 2,5 ml EMEM, enthaltend 5% hitze-inaktivierte FBS, beimpft. 20 h nach der Zellbekämpfung wurde das Medium dekantiert und 2,5 ml DEAE-Dextran (25 µg/ml in Phosphat- gepufferter Salzlösung) wurden in jede Vertiefung gegeben. Die Kulturen wurden 1 h bei 37°C bebrütet, wonach die DEAE-Dextran-Lösung dekantiert wurde und die Zellschichten einmal mit 2,5 ml PBS gespült wurden. Normale Zellkontrollen wurden wieder mit 2,5 ml Medium allein (kein Virus oder Arzneimittel) beschickt. Die Arzneimittel-Kontrollkulturen erhielten 2,5 ml Medium, enthaltend das Arzneimittel, jedoch kein Virus. Die Virus-infizierten Kontrollkulturen erhielten 0,5 ml der geeigneten Verdünnung des Vorrats CAS-BR-M zur Erzeugung zählbarer Plaques plus 2,0 ml Medium. Die Testproben erhielten 0,5 ml der geeigneten Virusverdünnung plus 2,0 ml Medium der Arzneimittelverdünnung. Sechs Konzentrationen der Testverbindung, verdünnt in seriellen halblog₁₀-Verdünnungen wurden getestet. Drei Konzentrationen des positiven Kontroll-Arzneimittels, ddC, wurden untersucht. Drei Vertiefungen für jede Konzentration der Testverbindung und 6 Virus- und 6 Zell-Kontrollkulturen wurden in jeden Versuch eingeschlossen. Am 3. Tag nach der Virusbeimpfung wurde die Toxizität des Arzneimittels für die SC-1-Zellen durch mikroskopische Prüfung von gefärbten Duplikatzellen und Arzneimittel-Kontrollkulturen bestimmt. Die verbleibenden Test- und Kontrollkulturen wurden 20 sec mit einer Ultraviolettlampe bestrahlt und XC-Zellen wurden zu jeder Kultur gegeben (5 × 10⁵ Zellen/Vertiefung in 2,5 ml EMEM, enthaltend 10% hitze-inaktiviertes FBS). Am 3. Tag nach der UV- Bestrahlung wurden die Kulturen mit Formalin fixiert und mit Kristallviolett gefärbt. Die Plaques wurden mit Hilfe eines Präpariermikroskops gezählt.

Die Verminderung an antiviraler Aktivität in dem CAS-BR- M-Plaque wurde ausgedrückt als Verminderung in der mittleren Anzahl der Plaques, die in den arzneimittelbehandelten, virusinfizierten Kulturen gezählt wurden, verglichen mit der mittleren Anzahl der Plaques, die in den nichtbehandelten, virusinfizierten Kontrollkulturen gezählt wurden (Prozent der Kontrolle). Die Verbindung von Beispiel 10 hatte eine ED₅₀ von 1,1 µg/ml.

(D) Aktivität gegenüber Affen-Retrovirus SAIDS (SRV-2)

Das antivirale Screening gegen den SAIDS-Virus (D/Washington) wurde durch einen Syncytium-Inhibierungsversuch an Raji-Zellen durchgeführt. Das Arzneimittel wurde in komplettem Iscove's Medium verdünnt und dann wurden 100 µl jeder Verdünnung in geeignete Vertiefungen einer Platte mit 96 Vertiefungen gegeben. Aktiv wachsende Raji-Zellen, 5 × 10³ Zellen in 50 µl komplettem Iscove's Medium, wurden dann in jede Vertiefung gegeben. Darauf erfolgte die Zugabe von 50 µl geklärtem Überstand aus einer SRV-2/Raji-Zell-Co-Kultur. DDC wurde bei diesem Versuch als positives Kontroll- Arzneimittel eingeschlossen. Die Platten wurden bei 37°C in feuchter Atmosphäre, enthaltend 5% CO₂, inkubiert. Syncytien wurden am 7. Tag nach der Infektion gezählt. Die Arzneimitteltoxizität wurde bestimmt durch Vergleich von Zählungen lebensfähiger Zellen der nicht- infizierten, arzneimittelbehandelten Probe zu der Lebensfähigkeit der nichtinfizierten, unbehandelten Kontrollprobe. Die Verbindung des Beispiels 10 hatte eine ED₅₀ von 2,8 µg/ml.

(E) Aktivität gegenüber Visna Maedi-Virus

Die antivirale Aktivität gegenüber Visna Maedi-Virus (VMV) Stamm WLC-1 wurde bestimmt durch Messung der Verminderung der virusspezifischen, immunohistochemischen Verfärbung. Monoschichten von Schaf-Choroidplexus- Zellen wurden mit VMV infiziert und mit Reihenverdünnungen der Testverbindungen überzogen. Nach der Inkubation während 5 Tagen wurden die Monoschichten weiter inkubiert mit virusspezifischen Antiseren, konjugiert an Meerrettichperoxidase (HRP). Anschließende Inkubierung der Monoschichten mit einem chromagenen Substrat von HRP ergibt Flächen von Virusreplikation. Diese einzelnen Herde wurden gezählt und die Konzentration der Testverbindung, die zur Verminderung der Anzahl der Herde auf 50% derjenigen der nicht mit Arzneimittel behandelten Kontrollproben erforderlich ist, wurde berechnet. Die Verbindung des Beispiels 13 hatte eine ED₅₀ von 0,2 µg/ml.

Beispiel 22 Cytotoxische Aktivität

Die Verbindungen der Beispiele 5, 7 und 8 zeigten cytotoxische Aktivität, wenn sie getestet wurden gegen P388 Mäuse-Leukämie im Zellkulturversuch wie von R. G. Alonquist und R. Vince, J. Med. Chem., 16, 1396 (1973), beschrieben. Die erhaltenen ED₅₀-Werte (µg/ml) waren:

Beispiel 5  12
Beispiel 7  40
Beispiel 8  3.

Claims (18)

1. Verbindung der Formel I worinX ist Wasserstoff, NRR¹, SR, OR oder Halogen;
Z ist Wasserstoff, OR² oder NRR¹;
wobei R, R¹ und R² gleich oder verschieden sein können und ausgewählt sind aus Wasserstoff, C_1-4-Alkyl und Aryl;und pharmazeutisch annehmbare Derivate davon.

2. Verbindung der Formel I gemäß Anspruch 1 und pharmazeutisch annehmbare Salze davon.

3. Verbindung gemäß Anspruch 1 oder Anpruch 2, worin in der Verbindung der Formel I Z = H, OH oder NH₂.

4. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, worin Z = NH₂.

5. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, worin X = Wasserstoff, Chlor, NH₂, SH oder OH.

6. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, worin X = OH.

7. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, worin X = H oder NH₂.

8. Verbindung, ausgewählt aus (1α,4a)-4-(6-Chlor-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Hydroxy-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Amino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(6-Mercapto-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2,6-Diamino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;
(1α,4α)-4-(2-Amino-6-chlor-9H-purin-9-yl)-2- cyclopentenyl-carbinol; und
(1α,4α)-4-(2-Amino-9H-purin-9-yl)-2-cyclopentenyl-carbinol;

9. (1α,4α)-4-(2-Amino-6-hydroxy-9H-purin-9-yl)-2- cyclopentenyl-carbinol;

10. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9 in Form einer im wesentlichen racemischen Mischung.

11. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9, die im wesentlichen aus einem optischen Isomeren besteht.

12. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9, die im wesentlichen aus dem D-Isomeren besteht.

13. Verbindung der Formel I, wie in einem der Ansprüche 1 bis 12 definiert, oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon zur Verwendung als aktives, therapeutisches Mittel.

14. Verbindung der Formel I, wie in einem der Ansprüche 1 bis 12 definiert, oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon zur Verwendung in der Erzeugung eines Arzneimittels zur Behandlung einer viralen Infektion.

15. Pharmazeutische Formulierung, umfassend eine Verbindung der Formel I, wie in einem der Ansprüche 1 bis 12 definiert, oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger dafür.

16. Pharmazeutische Formulierung, umfassen eine Verbindung der Formel I, wie in einem der Ansprüche 1 bis 12 definiert, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger dafür.

17. Pharmazeutische Formulierung gemäß Anspruch 14, die zusätzlich ein weiteres therapeutisches Mittel enthält.

8. Verbindung der Formel II worin
X für Wasserstoff, NRR¹, SR, OR, Halogen oder geschützte Formen davon steht;
Y bedeutet OH oder eine geschützte Form davon;
Z bedeutet Wasserstoff, OR², NRR¹ oder geschützte Formen davon;
wobei R, R¹ und R² gleich oder verschieden sein können und ausgewählt sind aus Wasserstoff, C_1-4-Alkyl und Aryl,und pharmazeutisch annehmbare Derivate davon.