FI105813B - Enantiomeerisia välituotteita - Google Patents

Description

105813

Enantiomeerisia välituotteita

Jakamalla erotettu suomalaisesta patenttihakemuksesta 906367 5 Tämä keksintö koskee tyydyttymättömän karbosyklisen renkaan sokerijäännöksen asemesta sisältävien puriininuk-leosidianalogien valmistuksessa käyttökelpoisia välituotteita. Tarkemmin sanottuna keksintö koskee jäljempänä mää-10 riteltyjä kaavojen V ja VI mukaisia enantiomeerisiä yhdisteitä. Mainitut puriininukleosidianalogit ovat käyttökelpoisia lääketieteellisessä hoidossa, erityisesti eräiden virusinfektioiden hoitamiseksi.

AIDS (hankittu immuunikato-oireyhtymä) on immuuni-15 vastetta heikentävä tai immuunijärjestelmää tuhoava sai raus, joka altistaa potilaat kohtalokkaille opportunistisille infektioille. AIDSille on tunnusomaista, että siihen liittyy etenevä T-solujen häviäminen elimistöstä, erityi-. sesti auttaja-indusoija-alaryhmän, jolla on OKT4-pintamerk- • i '···' 20 kiaine.

i

Ihmisen immuunikatovirus (HIV) on eristetty tois- :.i.· tettavasti potilailta, joilla on AIDS tai oireet, jotka • · · usein edeltävät AIDSia. HIV on sytopaattinen ja näyttää ensisijaisesti infektoivan ja tuhoavan OKT4-merkkiaineen 25 omaavia T-soluja, ja nykyään tunnustetaan yleisesti, että HIV on AIDSin aiheuttaja.

.···. Sen jälkeen kun on saatu selville, että HIV on • · AIDSin aiheuttaja, on tehty lukuisia ehdotuksia HIV:n vas- "* täisiksi kemoterapeuttisiksi aineiksi, jotka voivat olla • • 30 tehokkaita AIDSista kärsivien hoidossa. Siten esimerkiksi . US-patentissa 4 724 232 kuvataan 3 '-atsido-3 '-deoksitymi- diini (jonka nimeksi on hyväksytty zidovudiini) , sen far- « ...

- maseuttisesti hyväksyttäviä johdannaisia ja niiden käyttöä • «· * * ihmisen retrovirusinfektioiden, mukaan lukien AIDS ja sii- 35 hen liittyvät kliiniset tilat, hoidossa. Vince et ai., 105813 2

Antiviral Research, 9 (1/2) (1988) 120, kuvaavat eräitä karbosyklisiä nukleosidin analogeja ja niiden käyttöä HIV:tä vastaan. Konferenssissa the Second International Conference on Antiviral Research, Williamsburg, VA, 10. -5 14. huhtikuuta 1988, esiteltiin (+)-9-(cis-4-(hvdroksime- tyyli)-2-syklopentenyyli)guaniini (NSC-614846), joka tunnetaan myös karboviirinä.

Hepatiitti B -virus (HBV) on maailmanlaajuisesti toinen hyvin tärkeä viruspatogeeni. Se on erittäin taval-10 linen Aasian maissa ja laajalle levinnyt Saharan eteläpuolella olevassa Afrikassa. Virus liittyy etiologisesti primaariseen maksasolukarsinoomaan.

Yhdysvalloissa on nykyään arviolta 500 000 - l miljoonan suuruinen tartunnankantajien joukko. Krooninen ak-15 tiivinen hepatiitti kehittyy yli 25 %:lle kantajista ja etenee usein kirroosiksi. On arvioitu, että 5 000 ihmistä kuolee HBV:een liittyvään kirroosiin joka vuosi USA:ssa ja että ehkä 1 000 kuolee HBV:een liittyvään maksasyöpään. Silloinkin kun yleistä HBV-rokotetta voidaan käyttää, te- • · 2 0 hokkaiden HBV:n vastaisten yhdisteiden tarve jatkuu. Pysy- västi tartunnan saaneiden kantajien suuri joukko, jonka :.i.: arvioidaan käsittävän maailmanlaajuisesti 220 miljoonaa, • · · ei hyödy rokotuksesta ja on jatkuvasti suuressa vaarassa saada HBV:n aiheuttama maksasairaus. Tämä kantajajoukko * 25 toimii tartunnan lähteenä alttiille henkilöille säilyttäen sairauden esiintymistiheyden erityisesti endeemisillä .···, alueilla tai riskiryhmissä, kuten lääkkeiden väärinkäyttä- • · VA' jien ja homoseksuaalisten joukossa. Tehokkaiden virusvas- *" täisten aineiden tarve on siten suuri, sekä kroonisen in- • · •’·· 30 fektion hillitsemiseksi että vähentämään etenemistä maksa- : : solukarsinoomaksi.

·· · HBV-infektion kliinisiä vaikutuksia ovat päänsärky, kuume, huono olo, pahoinvointi, oksentaminen, ruokahalut- « « « * * tomuus ja vatsakivut. Viruksen lisääntymistä hillitsee 35 yleensä immuunivaste ja toipuminen kestää ihmisillä viik koja tai kuukausia, mutta infektio voi olla ankarampi ja 3 105813 johtaa pysyvään krooniseen maksasairauteen, kuten yllä on esitetty pääpiirteittäin.

EP-patenttijulkaisussa 349 242 esitetään eräitä 6-substituoituja puriini-karbosyklisiä nukleosideja ja 5 niiden käyttö lääketieteellisessä hoidossa, erityisesti HIV- ja HBV-infektioiden hoidossa. Näiden nukleosidien joukossa ovat yhdisteet (±) -cis-4- [2-amino-6- (syklopropyy-liamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanoli ja (±)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyylimetyyliamio)-9H-purin-10 9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanoli, toisin sanoen kumpikin niiden asiaan kuuluvien enantiomeerien raseemisen seoksen muodossa.

Kahden yllä mainitun yhdisteen yksittäisillä eristetyillä enantiomeereilla ja niiden farmaseuttisilla joh-15 dannaisilla on havaitttiz olevan edullinen virusvastainen aktiivisuus, erityisesti HIV- ja HBV-infektioita vastaan, yhdistyneenä vähäiseen myrkyllisyyteen soluille, ja/tai ne ovat hyödyllisiä välituotteina sellaisen aktiivisuuden omaavien yhdisteiden valmistamista varten.

* t

'"·* 20 Näillä enantiomeerisillä yhdisteillä on kaava I

I jV\

• HoN^N

• · · 1

A

jossa R on sykiopropyyliamino- tai N-syklopropyyli-N-me- • · HI tyyliaminoryhmää ja A on 2-syklopenteeni-l-metanol-4-yyli- *;* ryhmää (1S,4R) -konfiguraatiossa. Kaavan I mukaisilla yh- v ------------------- j 30 disteillä ja niiden johdannaisilla, esimerkiksi estereil- lä, suoloilla ja estereiden suoloilla, jotka yhdisteet ja \# niiden johdannaiset ovat kukin yhden enantiomeerin muodos- - sa oleellisesti vapaana vastaenantiomeerista (esimerkiksi t » t ’’ *· sisältäen sitä joukossaan alle 10 paino/paino-%, edulli- 35 sesti alle 5 paino/paino-%).

105813 4

Kantahakemuksessa (FI-906367) kuvataan menetelmä kaavan I mukaisten enantiomeeristen yhdisteiden ja niiden johdannaisten valmistamiseksi. Enantiomeeriset lähtöaineet ja edeltäjät sellaisia aineita varten, joita käytetään 5 menetelmän yhteydessä, ovat kukin yhden enantiomeerin muodossa oleellisesti vapaana toisesta enantiomeerista (esim. sisältäen sitä korkeintaan edellä kaavan I mukaisten yhdisteiden yhteydessä mainitun määrän). Kyseisessä menetelmässä joko:

10 A) enantiomeerista yhdistettä, jolla on kaava II

A

jossa A on edellä määritelty ryhmä ja Z on kaavan I yhteydessä määritellyn ryhmän R edeltäjäryhmä, tai sen suolaa tai esteriä tai esterin suolaa käsitellään aineella • ·

20 tai olosuhteissa, jotka saavat aikaan edeltäj äryhmän Z

« muuttumisen halutuksi R-ryhmäksi; tai

B) enantiomeerinen yhdiste, jolla on kaava III

Ml •

*·' R

• · I

25 n^Vnhr2 L Jl (III)

... R3NiIs' N

• · · • · *

··· A

·»· • ♦ *”* jossa A ja R ovat edellä määriteltyjä ryhmiä, R2 on vety ·· • 30 tai formyyliryhmä ja R3 on aminon suojaryhmä, tai sen suola tai esteri tai esterin suola saatetaan reagoimaan aineen

• M

kanssa, joka saa aikaan halutussa kaavan I mukaisessa yh- · · disteessä olevan imidatsolirenkaan muodostumisen ja aminon « · • " suojaryhmän R3 poistumisen; tai

35 C) enantiomeerinen yhdiste, jolla on kaava IV

5 105813 t*Y\ JL '1 / <Iv> r3nh^n -"\i/

5 A

jossa A ja R ovat edellä määriteltyjä ryhmiä ja R3 on ami-non suojaryhmä, tai sen suola tai esteri tai esterin suola saatetaan reagoimaan aineen kanssa, joka saa aikaan aminon suojaryhmän R3 poistumisen, ja mahdollisesti suoritetaan 10 toinen tai kummatkin seuraavista muutoksista missä tahansa halutussa järjestyksessä: i) kun on muodostettu kaavan I mukainen yhdiste, mainittu yhdiste muutetaan suolaksi tai esteriksi tai esterin suolaksi; tai 15 ii) kun on muodostettu kaavan I mukaisen yhdisteen suola tai esteri tai esterin suola, tämä muutetaan kaavan I mukaiseksi lähtöyhdisteeksi tai muuksi suolaksi tai esteriksi tai esterin suolaksi.

R3, joka on aminon suojaryhmä, on esimerkiksi asyy-20 liryhmä, kuten C^j-alkanoyyliryhmä, esim. formyyli, asetyy-’·,·/· li tai isobutyryyli.

: ϊ : Menetelmä A) voidaan suorittaa tavanomaisesti, esi- IM ' merkiksi käsittelemällä kaavan II mukaista yhdistettä, * · * • jossa Z edustaa poistuvaa ryhmää (esim. halogeeni-, kuten t 25 klooriryhmää) , sopivalla amiinilla, toisin sanoen syklo-propyyliamiinilla tai N-syklopropyyli-N-metyyliamiinilla, ... jota on edullisesti ylimäärin, yllä määritellyn mukaisen • · ;** amino-R-ryhmän lisäämiseksi, edullisesti kuumentaen palau- • · ”·* tusjäähdyttäen tai lämpötilassa, joka on korkeampi kuin j ·.. 30 50 °C, edullisesti orgaanisen liuottimen, esimerkiksi me- :***: tanolin tai etanolin, läsnä ollessa.

···

Menetelmä B) voidaan suorittaa esimerkiksi antamal- ··· ....

- "·*. la kaavan III mukaisen yhdisteen reagoida muurahaishapon '· " tai muurahaishapon reaktiivisen johdannaisen (esim. tri- 35 etyyliortoformiaatin tai dietoksimetyyliasetaatin) kanssa 105813 6 valinnaisesti käyttäen lisäliuotinta kuten dimetyyliaset-amidia tai dimetyyliformamidia kohotetussa lämpötilassa, edullisesti 75 - 90 °C:ssa. Tämä reaktio suoritetaan sopivasti lisäämällä hiukan enemmän kuin yksi ekvivalentti 5 vahvaa vedetöntä happoa, esim. 1,1 ekvivalenttia etaani-sulfonihappoa ekvivalenttia kohden kaavan III mukaista yhdistettä, jossa tapauksessa käytetään alempia lämpötiloja (esim. 25 °C).

Menetelmä C) voidaan suorittaa esimerkiksi antamal-10 la kaavan IV mukaisen enantiomeerisen yhdisteen reagoida happaman aineen, esimerkiksi laimean kloorivetyhapon vesi-liuoksen kanssa.

Kaavan II mukaiset yhdisteet, joita käytetään lähtöaineina menetelmässä A) , voidaan valmistaa esimerkiksi 15 menetelmää B) vastaavalla tavalla, toisin sanoen antamalla vastaavan kaavan V mukaisen enantiomeerisen yhdisteen

Z

nX/NHR2 ·.:.· 20 i II {v) : ; ; 3 r3nh n nh : : : | ::: a • · • « • * • · • · · .·;·. 25 jossa A, Z, R2 ja R3 ovat edellä määritellyn mukaisia, tai • · · sen johdannaisen reagoida sellaisen aineen kanssa, joka ... sopii aiheuttamaan halutussa kaavan II mukaisessa yhdis- • *··’ teessä olevan imidatsolirenkaan muodostumisen ja aikaan- • » · • · ···* saamaan aminon suojaryhmän R3 poistumisen. Reaktio voidaan 3 0 suorittaa käyttäen niitä aineita ja olosuhteita, jotka on kuvattu yllä menetelmää B) varten.

• · · ·. Kaavan III mukaiset yhdisteet, joita käytetään läh- ··· töaineina menetelmässä B) , voidaan valmistaa esimerkiksi • · • · * '· “ käsittelemällä yllä olevaa kaavan V mukaista enantiomee- 35 rista yhdistetä sellaisella aineella tai olosuhteilla, 7 105813 jotka sopivat muuttamaan edeltäjäryhmän Z halutuksi ryhmäksi R, vastaavalla tavalla kuin on kuvattu menetelmää A) varten.

Kaavan IV mukaiset yhdisteet, joihin on viitattu 5 yllä, voidaan valmistaa esimerkiksi antamalla kaavan VI mukaisen enantiomeerisen yhdisteen

Z

10 1 M

JUL>

R3NH^‘N''AvN

A

15 jossa A, Z ja R3 ovat edellä määritellyn mukaisia, reagoida sellaisen aineen kanssa tai sellaisissa olosuhteissa, jotka sopivat muuttamaan edeltäjäryhmän Z halutuksi ryhmäksi 20 R, toisin sanoen vastaavalla tavalla kuin on kuvattu mene- • : : telmää A) varten.

«M

: Yllä olevat kaavan VI mukaiset yhdisteet voidaan

• M

valmistaa esimerkiksi antamalla yllä olevan kaavan V mu- • « » kaisen enantiomeerisen yhdisteen reagoida sellaisen aineen .·;·, 25 kanssa, joka sopii aikaansaamaan halutussa kaavan VI mu- • · · kaisessa yhdisteessä olevan imidatsolirenkaan muodostumi- ... sen esimerkiksi käsittelemällä muurahaishapolla tai reak- • · ’···* tiivisella muurahaishapon johdannaisella, kuten on kuvattu ···* yllä menetelmän B) yhteydessä.

« ·'·.. 30 Tämä keksintö koskee kaavojen V ja VI mukaisia • .....-------------- .**·. enantiomeerisiä yhdisteitä, joissa A on 2-syklopenteeni-l- ·«· - ·. metanol-4-yyli (IS, 4R)-koniiguraatiossa, R2 on formyyli, R3

• M

.···’ on Cj.g-alkanoyyliryhmä, joka on formyyli, asetyyli tai iso- • t i « » *. ” butyryyli, ja Z on halogeeni, kuten kloori.

105813 8

Erityisen edullisia välituotteita kaavan I mukaisen (IS,4R)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanolin, toisin sanoen dullisim-pana pidetyn kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamista 5 varten ovat: a) (1R,4S)-cis-N-[6-(syklopropyyliamino)-9-(4-(hydroksimetyyli)-2-syklopenten-l-yyli)-9H-purin-2-yyli]-isobutyyriamidi; b) (1R,4S)-cis-N-[4-kloori-5-formamido-6-((4-(hyd- 10 roksimetyyli)-2-syklopenten-l-yyli)amino)-2-pyrimidinyy- li]isobutyyriamidi; c) (1R,4S)-cis-N-[4-kloori-5-formamido-6-((4-(hyd-roksimetyyli)-2-syklopenten-l-yyli)amino)-2-pyrimidinyy-li]asetamidi; 15 d) (1S.4R)-cis-(2-amino-6-kloori-9H-purin-9-yyli)- 2-syklopenteeni-l-metanoli; e) (1R,4S)-cis-N-[6-kloori-9-(4-(hydroksimetyyli)- 2-syklopenten-l-yyli)-9H-purin-2-yyli]isobutyyriamidi.

Kaavan V mukaiset enantiomeeriset yhdisteet, joita M.1 20 käytetään lähtöaineina kuten yllä on kuvattu, voidaan vai- « mistaa esimerkiksi antamalla kaavan VII mukaisen yhdisteen i I I • 1 » · » '··· n^VNHR' 25 \ |l (vii) R^H^^N^R4 ··♦ • · f · • »t ««1 • · ·;·1 jossa Z, R2 ja R3 ovat edellä määritellyn mukaisia ja R4 Γ·.. 30 edustaa poistuvaa ryhmää, esim. halogeeni-, kuten kloori- :”1· ryhmää tai sen johdannaisen reagoida kaavan VIHA tai

• M

VIIIB mukaisen enantiomeerisen yhdisteen

III

* • » · · « I 1 « I · • · 9 105813 5 (VIHA) (VIIIB) tai sen johdannaisen kanssa.

Viimeksi mainittu reaktio suoritetaan edullisesti emäksen kuten tertiäärisen amiinin, esimerkiksi trietyyli-amiinin tai trimetyyliamiinin, läsnä ollessa edullisesti 10 orgaanisessa liuottimessa kuten dimetoksietaanissa tai etanolissa.

Sopivan enantiomeerisen konfiguraation omaavat kaavan VIIIA tai VIIIB mukaiset yhdisteet voidaan saada antamalla vastaavan raseemisen yhdisteen, toisin sanoen (±)-15 4-amino-2-syklopenteeni-l-metanolin, muodostaa kompleksi optisesti aktiivisen karboksyylihapon (esimerkiksi dibent-soyyli-D-viinihapon) kanssa ja suorittamalla sitten tulokseksi saatujen diästereomeeristen suolojen jakokiteytys. Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää entsymaattista erottamis- * 20 ta kuten on kuvattu esimerkiksi julkaisussa J. Med. Chem. 30 (1987) 746 ja J. Med. Chem. 28 (1985) 1385.

!.·[· Yllä lähtöaineina käytetyt kaavan VII mukaiset yh- disteet voidaan valmistaa tavanomaisesti esimerkiksi pel-

• M

• kistämällä kaavan (IXj mukainen yhdiste 9 • ·· 2 5 • · * z ... I (IX) ·:::· , ΛΑ, r3nh n r4 30 9 ··♦ . · 9 ' · · ··· \ jossa Z, R3 ja R4 ovat edellä määritellyn mukaisia, N02-ryh- män muuttamiseksi NH2-ryhmäksi ja valinnaisesti muuttamalla • t · ' tulokseksi saatu NH2-ryhmä formamidoryhmäksi, esimerkiksi 35 käsittelemällä muurahaishapolla/etikkahappoanhydridillä.

10 105813

Kaavan IX mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa tavanomaisesti. Ne yhdisteet, joissa Z on halogeeni, esimerkiksi kloori, voidaan valmistaa esimerkiksi halo-genoimalla, esimerkiksi käyttäen fosforioksikloridia, vas-5 taava kaavan X mukainen yhdiste

O

Hkj 10 i R3*o»T * jossa R3 ja R4 ovat edellä määritellyn mukaisia.

Kaavan X mukaiset yhdisteet voidaan myös valmistaa 15 tavanomaisesti, esimerkiksi antamalla kaavan XI mukaisen yhdisteen

O

HiJ | 20 JL (XI) • « m '···’ jossa R4 on edellä määritellyn mukainen, reagoida tarkoi- ·...· tuksenmukaisen aineen kanssa, joka sopii lisäämään aminon • · • '·· 25 suojaryhmän, esimerkiksi antamalla reagoida sopivan kar- : : : boksyylihapon tai sen funktionaalisen vastineen, esim.

isovoihappoanhydridin kanssa. Kaavan XI mukainen yhdiste .·**. voidaan valmistaa nitraamalla vastaava kaavan XII mukainen » · • · · ,···. yhdiste

30 O

h n | (XII)

35 L

. 105813 11 jossa R4 on edellä määritellyn mukainen.

Erityisen edullisia kaavojen VII, IX ja X mukaisia yhdisteitä ovat: N-(4,6-dikloori-5-formamido-2-pyrimidinyyli)isobutyyri-5 amidi; N-(4,6-dikloori-5-nitro-2-pyrimidinyyli)isobutyyriamidi ja N-(4-kloori-l,6-dihydro-5-nitro-6-okso-2-pyrimidinyyli)-isobutyyriamidi.

Kaavan I mukainen yhdiste voidaan ylensä muuttaa 10 sen esteriksi antamalla sen reagoida sopivan esteröivän aineen, esim. happohalogenidin tai -anhydridin kanssa.

Kaavan I mukainen yhdiste, mukaan lukien niiden esterit, voidaan muuttaa niiden suoloiksi tavanomaisesti, esimerkiksi käsittelemällä sopivalla hapolla. Kaavan (I) mukai-15 sen yhdisteen esteri tai suola voidaan muuttaa lähtöyhdis- teeksi esimerkiksi hydrolyysin avulla.

Siten voidaan kaavan I mukaisen yhdisteen O-mono-fosfaatti valmistaa käsittelemällä lähtöyhdistettä sopivalla fosforyloivalla aineella, esim. fosforioksi- ,·, 20 kloridilla kuten julkaisussa M. Yoshikawa, T. Kato ja • · « T. Takenishi, Bulletin Chem. Soc. Japan, 42 (1969) 3505.

• · «

Vastaavat O-di- ja Ö-trifosfaatit voidaan valmistaa käyt- • · « *”·' täen menetelmiä, jotka on kuvattu julkaisuissa K. H.

• · ’···* Sheit, "Nucleotide Analogs", John Wiley and Sons, New York • · : '·* 25 1980, s. 211 - 215, ja D. E. Hoard ja D. G. Ott, J. Amer.

:.· * Chem. Soc. 87 (1965) 1785, esim. valmistamalla asianmukai sen O-monofosfaatin imidatsolaattijohdannainen ja antamal- :***: la sen jälkeen tämän johdannaisen reagoida fosfaatin kans- • · · - .....

·’**. sa O-difosfaatin saamiseksi tai pyrofosfaatin kanssa ··· ,.· 3 0 O-trifosfaatin saamiseksi. Yllä mainittujen esteröityjen • « fosfaattijohdannaisten valmistamiseksi kaavan I mukaista • · *···* lähtöyhdistettä voidaan käsitellä sopivalla dialkanoyyli- ·· fosfatidyylikoliinijohdannaisella sopivan fosfolipaasin, « · « · .’. j esimerkiksi fosfolipaasi D:n, läsnä ollessa kuten on ku- • « 35 vattu julkaisussa S. Shuto et ai., Nucleic Acid Research, 12 105813 20 (1988) sivu 35, tai antamalla kaavan I mukaisen yhdisteen reagoida sopivan fosforyloivan aineen kuten fosfo-rioksikloridin kanssa ja käsittelemällä sen jälkeen sopivalla alkoholilla kuten on kuvattu teoksessa A. Rosowsky & 5 S. Kim, Nucleic Acid Chemistry, osa 3, L. B. Townsend & R. S. Tipson (toimittajat), John Wiley & Sons, New York, 1986, 255.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden enantiomeerit voidaan erottaa tai eristää tavanomaisesti, esim. erottamalla 10 kromatografisesti diastereomeeriset esterit, jotka on val mistettu asyloimalla syklopentenyyliosassa oleva hydrok-syyli sopivien optisesti aktiivisten karboksyylihappojohdannaisten, esim. naprokseenin, avulla (J. Org. Chem.) 51 (1986) 1287).

15 Huomataan, että kaavan I mukaisiin yhdisteisiin, jotka ovat enantiomeerisia yhdisteitä, jotka ovat oleellisesti vapaita vastaenantiomeerista, sisältyy (IS,4R)-cis-4- [2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanoli.

. 20 Mainituilla yhdisteillä, joihin viitataan tässä • · · kaavan I mukaisena (IS,4R)-enantiomeerisena yhdisteenä ja *·”' joilla on negatiivinen (-) optinen kierto, on todettu ole- • · · M.· van erityisen tehokas aktiivisuus HIV- ja HBV-infektioita „.· vastaan. Kyseisillä yhdisteillä ja niiden farmaseuttisesti • ’·· 25 hyväksyttävillä johdannaisilla on se lisäetu, että ne an- nettaessa kykenevät läpäisemään veri-aivoesteen aikaansaaden yhdisteiden tai niiden aktiivisten metaboliittien kor- .**·. keitä tasoja keskushermostossa, jossa HIV-infektioiden • · · ,···, vaikutukset ovat erityisen heikentäviä. Yllä olevaa yhdis- *** 30 tettä I pidetään aivan erityisen hyvänä sen poikkeukselli- i ’· sen tehokkaan aktiivisuuden HIV- ja HBV-infektioita vas- • # · taan johdosta. Yhdisteen on myös todettu olevan merkittä-västi vähemmän myrkyllinen luuytimen kantasoluille kuin ,·, : 3 '-atsido-3 '-deoksitymidiinin (zidovudiini) , johon yllä on • · · 35 viitattu.

13 105813

Kaavan I mukaisten (IS,4R)-enantiomeeristen yhdisteiden ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien johdannaisten virusvastainen aktiivisuus todettiin seuraavasti: Virusvastainen aktiivisuus 5 a) HIV:n vastainen aktiivisuus (IS,4R)-cis-4- [2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanolin HIV:n vastainen aktiivisuus testattiin MT4-soluissa noudattaen menetelmää, jonka on kuvannut Averett, D. R., J. Virol. Methods, 23 10 (1989) 263 - 276, ja sen IC50-arvon todettiin olevan 4,0 ± 1,4 μΜ (10 määrityksen keskiarvo).

b) HBV:n vastainen aktiivisuus

Ihmisen HBV-tuottajasolulinjalla HepG2, 2.2.15, jonka ovat kuvanneet ja karakterisoineet Sells et ai., 15 PNAS 84 (1987) 1005 ja J. Virol. 62 (1988) 2836, on osoitettu olevan monia yhteisiä ominaisuuksia HBV:n kroonisesti infektoiman maksasolun kanssa. Se on tartuttava kuten osoittaa kyky aiheuttaa sairaus simpansseissa.

Yhdisteiden HBV:n vastaisen aktiivisuuden testaa-20 miseksi yhden solukerroksen viljemiä käsiteltiin koeyhdis- t"if teellä: 50 - 200 μΜ kymmenen päivän ajan. Solujen yllä • « · "i olevia elatusaineita, jotka sisälsivät solun ulkopuolista • · t ;;; virion-DNA:ta (Dane-hiukkasia), koottiin päivinä kolme, j;··' kuusi ja kymmenen, käsiteltiin proteinaasi K: 11a (1 mg/ml) • · " 25 ja natriumdodesyylisulfaatilla (1 %) ja inkuboitiin • « · V · 50 °C:ssa yhden tunnin ajan. DNA uutettiin yhtä suurilla tilavuuksilla fenolia ja sen jälkeen kloroformilla ja saostettiin sitten ammoniumasetaatin ja propanolin avulla.

• · · •'"j DNA-saostuma liuotettiin ja koottiin nitroselluloosalle • · · .......- .

30 käyttäen Schleicherin ja Schuellin menetelmää (S & S, 10 • · - *^1* Optical Ave., Keene, NH 03431, julkaisu # 700, 1987) ja • · ’···* käsiteltiin kuten on kuvannut Southern, J. Mol. Biol., 98 ··· (1975) 503. Solut koottiin ja solun sisäinen DNA saatiin I ·*» sen jälkeen kun oli aiheutettu solulyysi guanidiini-iso-35 tiosyanaatilla. Solun sisäistä DNA:ta käsiteltiin samalla 105813 14 tavalla kuin solun ulkopuolista DNA:ta. Sen jälkeen kun oli saostettu ammoniumasetaatilla ja propanolilla, solun sisäisen DNA:n saostuma liuotettiin, pilkottiin restrik-tioendonukleaasilla Hind III, lisättiin agaroosigeeliin ja 5 käsiteltiin sitten kuten on kuvannut Southern replikoivien välimuotojen määrän määrittämiseksi. Lääkkeen virusvastai- nen vaikutus määritettiin mittaamalla viljelyaineeseen työntyneiden Dane-hiukkasten määrän vähintään 100-kertainen pieneneminen ja samankaltainen solun sisäisten repli-10 koivien välimuotojen väheneminen.

(1S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(N-syklopropyyli-N-metyy-liamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanoli testattiin yllä olevan menetelmän avulla ja sillä todettiin olevan tehokkaan HBV:n vastaisen aktiivisuuden pitoisuute-15 na 100 μΜ.

Esimerkkejä retrovirusinfektioista, joita voidaan hoitaa tai ehkäistä kaavan I mukaisilla yhdisteillä, ovat ihmisen retrovirusinfektiot, kuten ihmisen immuunikatovirus (HIV), HIV-1, HIV-2 ja ihmisen T-solulle lymfotrooppi-20 nen virus (HTLV), esim. HTLV-I tai HTLV-II-infektiot. Kaa-van I mukaiset virusvastaiset yhdisteet ovat erityisen • « · hyödyllisiä hoidettaessa AIDSia ja siihen liittyviä klii- • · · ;;; nisiä tiloja, kuten AIDSiin liittyvää kompleksia (ARC) , ’·>' etenevää yleistä lymfadenopatiaa (PGL) , AIDSiin liittyviä « m : ” 25 neurologisia tiloja kuten multippeliskleroosia tai troop- « « « : pistä alaraajojen osittaista halvausta ja anti-HIV-vasta- aine-positiivisia ja HIV-positiivisia tiloja esimerkiksi oireettomilla potilailla ja trombosytopeenista purppuraa.

• · · .**·. Yhdisteitä voidaan myös käyttää psoriaasin hoidossa tai • · · ,,· 30 ehkäisyssä.

• · • " "Farmaseuttisesti hyväksyttävällä johdannaisella" tarkoitetaan kaavan I mukaisten (IS,4R)-enantiomeeristen ·)· yhdisteiden yhteydessä mitä tahansa farmaseuttisesti hy- väksyttävää, kaavan I mukaisten (IS, 4R)-enantiomeeristen 35 yhdisteiden suolaa, esteriä tai sellaisen esterin suolaa 15 105813 tai mitä tahansa muuta yhdistettä, joka vastaanottajalle annettuna kykenee tarjoamaan (suoraan tai välillisesti) tällaisen enantiomeerisen yhdisteen tai sen viruksia vastaan aktiivisen metaboliitin tai jäännöksen.

5 Erityisen edullisina pidetyt kaavan I mukaisten (IS,4R)-enantiomeeristen yhdisteiden esterit käsittävät karbosyylihappojen estereitä, joissa esteriryhmän ei-kar-bonyyliosa on suoraketjuinen tai haarautunut alkyyli, esim. n-propyyli, t-butyyli, n-butyyli, alkoksialkyyli 10 (esim. metoksimetyyli), aralkyyli (esim. bentsyyli), aryl-oksialkyyli (esim. fenoksimetyyli) tai aryyli (esim. fe-nyyli, joka on valinnaisesti substituoitu halogeenilla, C^-alkyylillä tai C^-alkoksilla tai aminolla); sulfonaat-tiestereitä, kuten älkyyli- tai aralkyylisulfonyyli (esim. 15 metaanisulfonyyli); aminohappojen estereitä (esim. L-va-lyyli tai L-isoleusyyli); ja mono-, di- tai trifosfaatti-estereitä.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden fosfaattiesterit voivat olla lisäksi esteröityjä esimerkiksi Cj.^-alkoholil-20 la tai sen reaktiivisella johdannaisella tai 2,3-di (C6.24) -asyyliglyserolilla, esimerkiksi 2,3-bis (heksanoyylioksi) p- • · « ropyylivetyfosf aatti- ja 2,3-bis (heksadekanyylioksi) pro- I I | pyylivetyfosf aatti johdannaisia.

« · · ·...' Ellei ole erityisesti määritetty toisin, yllä ku- • · • ’·· 25 vattujen esterien tapauksessa mikä tahansa läsnä oleva :T: alkyyliryhmä sisältää edullisesti 1-18 hiiliatomia, eri tyisesti 1-4 hiiliatomia. Mikä tahansa sellaisissa este- .·**. reissä läsnä oleva ~ä tyyli, ryhmä sisältää edullisesti fenyy- • ♦ « .···, liryhmän.

"·* 30 Kaavan I mukaisten (IS, 4R)-enantiomeeristen yhdis- ·*· * - : ** teiden farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat • · · ·,,,· käsittävät yksi- tai kaksiemäksisiä suoloja sopivan hapon • ...... — .......

kanssa, esimerkiksi orgaanisten karboksyylihappojen, kuten .·,: etikka-, maito-, viini-, omena-, isetioni-, laktobioni- 35 tai meripihkahapon; orgaanisten sulfonihappojen, kuten me- 105813 16 taanisulfoni-, etaanisulfoni-, bentseenisulfoni- tai p-tolueenisulfonihapon tai epäorgaanisten happojen, kuten kloorivety-, rikki-, fosfori- ja sulfaattimetaanisul-fonaattisulfamidihapon kanssa. Erityisen edullisina pide-5 tään kloorivetyhapposuoloja (toisin sanoen mono- ja dihy-droklorideja).

Yllä mainittuja kaavan I mukaisia virusvastaisia yhdisteitä voidaan käyttää yhdessä muiden terapeuttisten aineiden kanssa yllä mainittujen infektioiden tai tilojen 10 hoitoon. Esimerkkejä sellaisista muista terapeuttisista aineista ovat aineet, jotka ovat tehokkaita virusinfektioiden tai niihin liittyvien tilojen hoidossa, kuten 3'-atsido-3'-deoksitymidiini (zidovudiini), 2',3'-dideok-sinukleosidit kuten 2',3'-dideoksisytidiini, 21,3'-dideok-15 siadenosiini ja 2',3'-dideoksi-inosiini, asykliset nukleo-sidit (esim. asikloviiri), interferonit, kuten «-interferoni, munuaisten erityksen ehkäisijät, kuten probenesidi, nukleosidien kuljetuksen ehkäisijät, kuten dipyridamoli, dilatseppi, mio-, lido- tai soluflatsiini tai heksobendii-20 ni, immunomodulaattorit, kuten interleukiini II, ja granu-losyytti-makrofagikolonioita stimuloivat tekijät, liukoi- *” nen CD4 tai sen geenitekniikan avulla saadut johdannaiset • · « ja fosfonomuurahaishappo. Sellaisen yhdistelmähoidon yh- • · *··* distekompontentit voidaan antaa samanaikaisesti, joka • t : *· 25 erillisissä tai yhdistelmävalmisteissa, tai eri aikoina, • · · ί,ί · esim. peräkkäin siten, että aikaansaadaan yhdistetty vai kutus .

:*”· Kaavan I mukaiset virusvastaiset yhdisteet, joihin • · · .***. viitataan tässä myös aktiivisena aineosana (aineosina) , • · · 30 voidaan antaa hoidoksi mikä tahansa sopivaa reittiä mukaan • · : ** lukien suun kautta, peräsuolen kautta, nenän kautta, pai- • · · • · kallisesti (mukaan lukien posken sisälle 3a kielen alle) , ··· emättimen kautta ja ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta - : (mukaan lukien ihon alle, lihakseen, laskimoon ja ihon 35 sisään). On selvää, että edullisin reitti vaihtelee saajan 17 105813 tilan ja iän, infektion luonteen ja valitun aktiivisen aineosan mukaan.

Yleensä sopiva annos kutakin yllä mainittua tilaa (esim. AIDS) varten on 3,0 - 120 mg kilogrammaa saajan 5 (esim. ihminen) ruumiinpainoa kohden päivää kohden, edullisesti 6 - 90 mg kilogrammaa ruumiinpainoa kohden päivässä ja edullisimmin.....15 - 60 mg kilogrammaa ruumiinpainoa kohden päivässä. Haluttu annos tarjotaan edullisesti kahtena, kolmena, neljänä, viitenä, kuutena tai useampana 10 osa-annoksena, jotka annetaan sopivin väliajoin päivän kuluessa. Nämä osa-annokset voidaan antaa annostusyksikkö-muodoissa, jotka sisältävät esimerkiksi 10-1 500 mg, edullisesti 20-1 000 mg ja kaikkein edullisimmin 50 -700 mg aktiivista aineosaa annostusyksikkömuotoa kohden. 15 Ihanteellisesti aktiivista aineosaa tulisi antaa siten, että aikaansaadaan aktiivisen yhdisteen sellaisia huippupitoisuuksia plasmassa, jotka ovat suuruudeltaan noin 1-75 μΜ, edullisesti noin 2-50 μΜ, kaikkein edullisimmin noin 3-30 μΜ. Tämä voidaan aikaansaada esimer-20 kiksi antamalla ruiskeena laskimoon 0,1 - 5 % aktiivisen aineosan liuos, valinnaisesti suolaliuoksessa, tai antaen « · « 1 *·' suun kautta annos, joka sisältää noin 1 - noin 100 mg/kg aktiivista aineosaa. Toivottavia tasoja veressä voidaan * > · ...

·...· ylläpitää jatkuvan infuusion avulla tarjoten noin 0,01 - « | 25 5,0 mg/kg/tunti tai ajoittaisten infuusioiden avulla, jottei’: ka sisältävät noin 0,4 - 15 mg/kg aktiivista aineosaa.

Vaikka on mahdollista antaa aktiivinen aineosa yk-.*·*. sin, on edullista tarjota se farmaseuttisena valmisteena.

.··· Tällaiset valmisteet sisältävät vähintään yhden yllä mää- 30 ritellyn mukaisen aktiivisen aineosan yhdessä vähintään 2 · ; *·· yhden farmaseuttisesti hyväksyttävän kantaja-aineen tai täyteaineen kanssa. Valmisteet käsittävät sellaisia, jotka sopivat annettaviksi suun, peräsuolen, nenän kautta, pai-V*. kallisesti (mukaan lukien posken sisälle ja kielen alle), 35 emättimen kautta tai ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti 105813 18 (mukaan lukien ihon alle, lihakseen, laskimoon ja ihon sisään) . Valmisteet voidaan sopivasti tarjota annostusyksik-kömuodossa ja voidaan valmistaa minkä tahansa farmasian alalla tunnettujen menetelmien avulla. Sellaiset menetel-5 mät sisältävät vaiheen, jossa aktiivinen aineosa yhdistetään kantaja-aineeseen, joka käsittää yhden tai useampia apuaineosia. Yleensä valmisteet valmistetaan yhdistämällä tasaisesti ja perusteellisesti aktiivinen aineosa nestemäisten kantaja-aineiden tai hienojakoisten kiinteiden 10 kantaja-aineiden tai kumpienkin kanssa ja sitten mikäli tarpeellista muovaamalla tuote.

Seuraavat esimerkit on tarkoitettu ainoastaan valaisemaan keksintöä eikä niiden ole tarkoitus rajoittaa keksinnön piiriä millään tavoin. Esimerkeissä optiset 15 kierrot on ilmoitettu koskien natriumin D-viivaa (589 nm) 20 °C:ssa.

Esimerkki 1 (±) -cis-4-[(2-amino-4-kloori-6-pyrimidinyyli)amino] -2-syklopenteeni-l-metanoli .·. 20 cis-4-asetamidosvklopent-2-eenimetvvliasetaattia t « ( >"‘.i [US-patentti 4 268 672] (14,88 g, 0,073 moolia) ja barium- 1 · « hydroksidioktahydraattia (46,19 g, 0,146 moolia) kuumen- • · | ··; nettiin palautus jäähdyttäen vedessä (300 ml) typpi-ilmake- ·>** hässä 18 tunnin ajan. Tulokseksi saatu liuos neutraloitiin ί ’·· 25 hiilidioksidilla. Saostuma pestiin vedellä, sitten etano- • · · V J lilla. Yhdistetty suodos-pesuliuos haihdutettiin siirapik si (11,16 g), jota kondensoitiin 2-amino-4,6-diklooripyri- t'**: midiinin (23,91 g, 0,146 moolia) ja trietyyliamiinin .***5 (30,5 ml, 0,219 moolia) kanssa palautus jäähdyttäen kuumen- * 30 netussa 1-butanolissa (100 ml) 1,5 tunnin ajan. Sen jäl- keen kun oli lisätty 1 N NaOH (73 ml) , tulokseksi saatu • · *···* seos haihdutettiin kuiviin ja jäljelle jäänyt kiinteä aine ·(· sekoitettiin lietteeksi CHCl3:iin (200 ml) . Reagoimaton 2-amino-4,6-diklooripyrimidiini suodatettiin pois ja pes-35 tiin kloroformilla (100 ml). Kloroformisuodos-pesuliuos 19 105813 konsentroitiin ja kromatografoitiin silikageelipylväässä. Ylimääräinen pyrimidiinilähtöaine eluoitiin 2,5 % metano-li-kloroformilla. Otsikon yhdiste eluoitui 3,5 % metanoli-kloroformilla likaisen valkeana kiinteänä vaahtona 5 (15,90 g, 91 %).

"H-NMR: (Me2SO-d6) δ 1,15 - 1,28 ja 2,26 - 2,41 (2m, 2, CH2) ; 2,60 - 2,71 (m, 1, 1'-H); 3,4 (m peittäen H20, CH2OH) ; 4,625 (t, J = 5,3, 1, CH20H) ; 4,95 (leveä s, 1, CH-N) ; 5,67 - 5,87 (m, 2, CH=CH) ; 6,38 (leveä s, 1, NH2) ; 7,12 10 (leveä S, 1, NH); MS‘ (CI) M+l, 241, 243.

Analyysi laskettuna yhdisteelle C10H13N4OC1 *0,2 H20: C 48,99; H 5,55; N 22,85; Cl 14,46 Saatu: C 49,10; H 5,57; N 22,81; Cl 14,40 Esimerkki 2 15 (±)-cis-4-([2-amino-6-kloori-5-[(4-kloorifenyyli)- atso]-4-pyrimidinyyli]amino)-2-syklopenteeni-l-metanoli (±) -cis-4-[(2-amino-4-kloori-6-pyrimidinyyli)amino]-2-syklopenteeni-l-metanolia esimerkistä l (11,58 g, 48,1 millimoolia) ja natriumasetaattitrihydraattia (97 g) 20 liuotettiin jääetikkaan (225 ml) ja veteen (225 ml) . Kylmä "! liuos (0-5 °C) , jossa oli 4-klooribentseenidiatsonium- «Il ”1 kloridia, valmistettiin 4-kloorianiliinista (6,74 g, · * *”·" 52,8 moolia), väkevästä kloorivetyhaposta (14,7 ml), ve- '···' destä (52 ml) ja natriumnitriitistä (4,01 g, 58,2 milli- • » : *·* 25 moolia 47 ml: ssa vettä). Tämä kylmä liuos lisättiin ti- • · · : poittain viiden minuutin aikana ensimmäiseen liuokseen.

Tulokseksi saatu keltainen saostuma suodatettiin 18 tunnin :***· kuluttua, pestiin vedellä ja uutettiin etanolilla, jolloin * 9# ,·**. saatiin otsikon yhdiste tummankeltaisena jauheena 30 (12,56 g, 69 %), sp. 218 - 220 °C (hajoaa).

. ϊ hi-NMR: (Me2SO-d6) δ 10,25 (d, 1, NH) ; 7,69 ja 7,54 (kummat- «·» kin, d, J = 8,9, C6H4) peittäen 7,6 (leveä, 6, NH2) ; 5,80 -Ί· 5,95 (m, 2, CH=CH) ; 5,24 (m, 1, CHN) ; 4,75 (t 1, CH20H) ; : 3,41 (t, 2, CH20H) ; 2,75 (m, 1, CH) ; 2,41 (m, 1, CH) ; 35 1,44-1,53 (m, 1, CH).

20 105813

Analyysi laskettuna yhdisteelle C16H16N6C120: C 50,67; H 4,25; N 22,16; Cl 18,70 Saatu: C 50,59; H 4,29; N 22,10; Cl 18,66 Esimerkki 3 5 (±)-cis-4-[(2,5-diamino-4-kloori-6-pyrimidinyyli)- amino]-2 -syklopenteeni-1-metanoii

Esimerkin 2 otsikon yhdistettä (11,67 g) suspendoi-tiin etanoliin (235 ml) , jääetikkaan (30 ml) ja veteen (235 ml). Seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen typpi-10 ilmakehässä. Sinkkipölyä (13,5 g) lisättiin pieninä annoksina 30 minuutin kuluessa, jona aikana yhdiste liukeni. Reaktioseosta kuumennettiin vielä 20 minuutin ajan, ja sitten ylimäärä sinkkiä suodatettiin kuumasta liuoksesta, ja sitä pestiin etanolilla. Suodokset haihdutettiin, ja 15 jäännös puhdistettiin silikageelipylvään avulla eluoiden kloroformilla (1 1) ja kloroformi:metanolilla/4:1 (1,8 1) . Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin, ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin otsikon yhdiste punaoranssina öljynä (11,2 g, > 100 % saanto).

. 20 Puhdas näyte saatiin toisen pienessä mittakaavassa suori- • · · tetun reaktion aikana, jolloin saatiin tuote vaaleankel- « « · ’···’ täisenä kiinteänä aineena 76 %:n saantona.

1H-NMR: (Me2SO-d6) δ 1,29 ja 2,39 (m, 2, CH2) ; 2,69 (t, 1, 11 -H) ; 3,37 (d, 2, CH2OH) ; 3,91 (leveä, 2, NHa) ; 4,60 (le- • ’·· 25 veä, 1, CH2OH) ; 5,02 (m, 1, CHNH) ; 5,56 (leveä s, 2, NH2) ; 5,74 (m, l, =CH) ; 5,86 (m, 1, =CH) ; 6,36 (d, 1, CHNH). Esimerkki 4 (±)-cis-4-(2-amino-6-kloori-9H-purin-9-yyli)-2-syk- • · · ,···, lopenteeni-l-metanoli *** 30 Esimerkin 3 otsikon yhdistettä (noin 9,7 g) liuo- • * : ’** tettiin dietoksimetyyliasetaattiin (100 g) ja kuumennet- • *...· tiin palautus jäähdyttäen kahden päivän ajan. Liuotin pois- tettiin suurtyhjössä 50 °C:ssa, ja dioksaania (40 ml) ja ; 0,5 N HCl (60 ml) lisättiin. Reaktioseosta sekoitettiin

« I I

35 huoneenlämpötilassa 1,25 tunnin ajan, ja se jäähdytettiin 21 105813 sitten. Reaktioseos neutraloitiin pH-arvoon 7 kylmän 5 N natriumhydroksidin avulla, ja sitä uutettiin sitten kloroformi :metanolilla (3:1) useita kertoja. Orgaaniset kerrokset kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, suodatettiin ja 5 haihdutettiin. Jäännös puhdistettiin kromatografiän avulla käyttäen silikageelipylvästä ja eluoiden seoksella 2 % MeOH-CHCl3, jolloin saatiin 3,7 g (46 % saanto) otsikon yhdistettä, sp. 138 - 139 °C.

'H-NMR: (Me2SO-d6) δ 1,63 ja 2,61 (m, 2, CH2) ,· 2,87 10 (m, 1, 1' -H) ; 3,44 (d, 2, CH2OH) ; 5,44 (m, 1, CH-N) ; 5,89 (m, 1, =CH) ; 6,14 (m, 1, =CH); 6,82 (leveä s, 2, NH2) ; 8,02 (s, 1, 8-H) ; (CH20H ei näkynyt - H20-piikin alla).

UV: pH 1 λ max 315 (e 7370); 218 (26200); λ sh 239,5 (5650). pH 7,4 λ max 307 (e 8000); 245,5 (4600); 223 15 (26400). MS (EI) 265,267 (m) CI) 266,268 (m + 1).

Analyysi laskettuna yhdisteelle CnH^NsClO *2H20: C 43,79; H 5,35; N 23,21; Cl 11,75 Saatu: C 43,67; H 5,29; N 23,05; Cl 11,70 Esimerkki 5 .·. 20 (±)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin- 9-yyli] -2-syklopenteeni-l-metanoli • · · ”! Esimerkin 4 otsikon yhdistettä (0,50 g) liuotettiin • # * * · · ;;; etanoliin (40 ml), ja syklopropyyliamiinia (0,65 ml, 5 ek- * · I;··’ vivalenttia) lisättiin. Reaktioseosta kuumennettiin palau- • * • *' 25 tusjäähdyttäen typpi-ilmakehässä kuuden tunnin ajan. Vielä * · * · 0,65 ml syklopropyyliamiinia lisättiin, ja reaktioseosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen vielä 5,5 tunnin ajan. Liuottimet haihdutettiin, ja kloroformia (25 ml) ja kyl-

Ml ·***: lästettyä natriumbikarbonaattiliuosta (5 ml) lisättiin.

• · · 30 Vesikerrosta uutettiin useita kertoja CHCl3:lla, jolloin saatiin raakatuote. Tämä puhdistettiin käyttäen silikagee- • · -_- '···' lipylvästä ja eluoiden seoksella 3 % metanoli-etyy- ·;· liasetaatti, jolloin saatiin 0,43 g (80 %) ( + ) -cis-4- Γ2- «IM "" amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli] -2-syklopen- • » -------- ·· - · 35 teeni-l-metanolia. Tämä uudelleenkiteytettiin asetonitrii- 105813 22 lista, jolloin saatiin 0,30 g valkeaa jauhetta; sp. luhistuu 93 -130 °C:ssa; sulaa 165 °C:ssa.

XH-NMR: (Me2SO-d6) δ 0,56 ja 0,63 (2m, 4, 2-syklopropyyli- CH2) ; 1,56 ja 2,60 (2m, 2, syklopentenyyli-CH2) ; 2,85 (m, 5 1, 11 -H) ; 3,02 (m, 1, syklopropyyli-CH-NH); 3,43 (m, 2, CH2OH); 4,71 (t, 1, CH20H); 5,40 (m, 1, 4'-H); 5,77 (s, 2, NH2) ; peittäen 5,84 (m, 1, =CH2) ; 6,09 (m, 1, =CH) ; 7,23 (d, 1, NH-CH) ; 7,58 (s, 1, puriini-8-H) ; MS (CI) 287 (m + 1) . UV: pH 1: λ max 296 (€ 14000), 255 (10700); 10 pH 7,0: λ max 284 (15900); 259 (9200); pH 13 max 284 (15800), 259 (9100).

Analyysi laskettuna yhdisteelle C14H18N60 *0,25 H20: C 57,82; H 6,41; N 28,90 Saatu: C 57,84; H 6,45; N 28,86 15 Esimerkki 6 (±) -cis-4-(2-amino-6-(syklopropyylimetyyliamino)-9H-purin-9-yyli)-2-syklopenteeni-l-metanoli (±)-cis-4-(2-amino-6-kloori-9H-purin-9-yyli)-2-syk-lopenteeni-l-metanolia (0,53 g, 2 millimoolia) esimerkistä 20 4, N-metyyli-N-syklopropyyliamiinia (Karl Industries, • ; Aurora, OH; 0,8477 g, 12 millimoolia) ja metanolia (20 ml) II» pantiin Parr-pommiin ja kuumennettiin 62 °C:seen viiden * · * · « · · · M.* tunnin ajan. Liuos konsentroitiin ja laimennettiin sitten • i i etanolilla ennen sen pH-arvon säätämistä 12:ksi lisäämällä • · j *·· 25 1,0 N NaOH. Tämä liuos konsentroitiin, ja jäännös puhdis- {*:*: tettiin eluoimalla silikageelipylväästä seoksella 3 % me- tanoli-kloroformi (0,547 g, 91,2 %) . Kiteyttämällä tällai-.···, nen näyte vesi-etanolista saatiin valkea jauhe, sp. 130 - • t 131 °C.

*" 30 XH-NMR: (Me2SO-d6) δ 7,61 (s, 1H, puriini-H-8) , 6,10 : *·· (m, 1H, CH=) , 5,84 (m, 1H, CH=) , 5,7 (leveä s, 2H, NH2) , 5,40 (m, 1H, CHN) , 4,70 (leveä t, 1H, OH), 3,43 (m, 2H, CH;OH) . 3,24 (leveä s, 4H, CH3, NCH syklopropyyli) , 2,85 [·": (m, 1H, CH) , 2,66 - 2,57 ja 1,61 - 1,51 (m, 2, syklopen- 35 tenyyli-CH2) , 0,90 - 0,65 (m, 4H, syklopropyylin 2 CH2) .

23 105813

Analyysi laskettuna yhdisteelle C15H20N6O-0,5 H20: C 58,24; H 6,84; N 27,16 Saatu: C 58,15; H 6,86; N 27,14 Esimerkki 7 5 (-)-cis-4-Γ2-amino-6-(svklopropvvliamino)-9H-purin- 9-yyli]-2 -syklopenteeni-1-metanoii

Esimerkin 5 otsikon yhdistettä (0,600 g, 2,00 m-illimoolia) liuotettiin 1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2-(1H)-pyrimidinoniin (Aldrich, 12 ml) . Fosforyylikloridia 10 (0,76 ml, 8,0 millimoolia) lisättiin sekoitettuun, jäähdy tettyyn (-10 °C) liuokseen. Kolmen minuutin kuluttua lisättiin kylmää vettä (100 ml) ja tulokseksi saatu liuos neutraloitiin 3 M ammoniumhydroksidilla. Neutraloitu liuos laimennettiin 1 litraksi vedellä ja lisättiin kooltaan 15 2,5 x 20 cm olevaan DEAE-Sephadex A25 (Pharmacia) -pylvää seen, joka oli ennalta tasapainotettu 50 mM ammoniumbikarbonaatilla. Pylvästä pestiin ensin neljällä litralla 50 mM ammoniumbikarbonaattia. (±)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyy-liamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-1-metanolin O-20 monofosfaatti eluoitiin sitten kahden litran gradientilla, > » · ") jonka muodosti 50 - 300 mM ammoniumbikarbonaatti. Nukle- • · · ·”' otidia (toisin sanoen yllä olevaa O-monofosfaattia) sisäl- * * · '···’ tävät fraktiot haihdutettiin valkeaksi jauheeksi ammonium- • 4 * bikarbonaatin poistamiseksi; 71 % laskettuna UV-absorbans- « · • *·· 25 sin avulla; yksi piikki HPLC:ssa (katso alempana) . Käärii : meen myrkyn 5'-nukleotidaasia (EC 3.1.3.5) lajilta Crota- lus atrox (1 000 IU, Sigma) lisättiin 1,4 millimoolin joukkoon nukleotidiä, joka oli liuotettu veteen (20 ml) .

• · ·

Liuosta inkuboitiin 37 °C:ssa 22 tunnin ajan, jonka jäi- 9 ’·’ 30 keen lisättiin vielä entsyymiä (1 000 IU) . Inkubointia • · ί ** jatkettiin vielä kolmen päivän ajan. HPLC-analyysi (kool- • · · .....

taan 0,4 x 10 cm oleva Whatman Partisil 10 vahva anionin-vaihtopylväs; eluointi gradientilla, jonka muodosti 20 mM - • ♦ * * ,·. ; IM ammoniumfosfaatti, pH 5,5, joka sisälsi 5 % me-

• M

35 tanolia; UV-toteaminen aallonpituudella 284 nm) osoitti 24 105813 tässä vaiheessa, että 50 % nukleotidilähtöaineesta oli defosforyloitunut lähtönukleosidiksi. Tämä seos lisättiin jälleen yllä kuvattua tyyppiä olevaan DEAE-Sephadex -pylvääseen. Eluoimalla neljällä litralla 50 mM ammoniumbikar-5 bonaattia saatiin otsikon yhdistettä sisältäviä fraktioita. Haihdutettaessa vesi jäi jäljelle valkea jauhe. Tätä materiaalia puhdistettiin lisäksi kromatografiän avulla käyttäen silikageeliä ja seosta MeOH:CHCl3 (1:9), jolloin saatiin väritön lasi. Lasi jähmetettiin asetonitriilissä, 10 jolloin saatiin (-)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli] -2-syklopenteeni-l-metanoli valkeana kumi-maisena kiinteänä aineena, joka kuivattiin kiinteäksi vaahdoksi paineessa 0,5 mm Hg 68 °C:ssa (260 mg, 86 % ra-semaatista); 15 XH-NMR DMSO-d6:ssa ja massaspektri identtiset rasemaatille (esimerkin 5 otsikon yhdiste) saatujen kanssa; [a]2p -59,7°, [a] 4326° -127,8° , [a] 3 |s° -218,1°, (c = 0,15 metanoli) .

Analyysi laskettuna yhdisteelle C14H18N60 *0,8 H20: C 55,91; H 6,57; N 27,94 . 20 Saatu: C 56,05; H 6,65; N 27,88 • >

Jatkamalla viimeksi mainitun Sephadex-pylvään elu- • « « ointia kahden litran gradientilla, jonka muodosti 50 - 300 mM ammoniumbikarbonaatti, saatiin O-monofosfaatti (otsikon • I « yhdistettä vastaava ( + )-enantiomeeri) , joka oli stabiili I’.. 25 51 -nukleotidaasin suhteen; tämän monofosfaatin valmistus on kuvattu yksityiskohtaisemmin esimerkissä 9.

t

Esimerkki 8 ,···, (-) -cis-4- [2-amino-6- (syklopropyyliamino) -9H-purin- ,*"t 9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanoli-0-monofosfaatti 30 Esimerkin 7 otsikon yhdistettä (0,35 g, 1,2 milli- • · • *·· moolia) liuotettiin 1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2- (1 (H)-pyrimidinoniin (Aldrich, 5 ml). Fosforyylikloridia .:, (Aldrich, 0,43 ml, 4,6 millimoolia) lisättiin sekoitet- « ]·”. tuun, jäähdytettyyn (-10 °C) liuokseen. Kolmen minuutin • · · 35 kuluttua lisättiin kylmää vettä (20 ml) , ja tulokseksi 25 105813 saatu liuos neutraloitiin 3 M ammoniumhydroksidilla. Esimerkissä 7 kuvatun mukaisen ioninvaihtokromatografiän avulla saatiin nukleotidi diammoniumsuolana veden haihduttamisen jälkeen, valkea jauhe (95 %:n saanto, määrä määri-5 tetty UV: n avulla); HPLC-analyysi kuten esimerkissä 7 osoittaa yhden huipun; UV λ max nM (0,1 M HC1): 254, 297; (pH-arvon 7 fosfaattipuskuri): 259, 284; (0,1 M NaOH): 259, 284. Emäs/fosfaatti-suhde oli 1,0/1,3 määritettynä B. Amesin menetelmän avulla [Methods in Enzymology 8 (1966) 10 115]. [CL ]2d° -69,9°, [ a ] 5728° -73,0°, [a] 5426° -84,0° (c = 0,52,

MeOH :H20/4 :1) .

Esimerkki 9 (+)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanoli-O-monofosfaatti 15 Eluoimalla esimerkissä 7 kuvattua DEAE-Sephadex- pylvästä, sen jälkeen kun oli inkuboitu 5'-nukleotidaasin kanssa, kahden litran gradientilla, jonka muodosti 50 -300 mM ammoniumbikarbonaatti, saatiin nukleotidia sisältäviä fraktioita, joista veden haihduttamisen jälkeen saa-, 20 tiin otsikon yhdiste diammoniumsuolana, valkea jauhe (56 % i ‘•j’ esimerkin 5 otsikon yhdisteestä) ; HPLC-analyysi kuten esi- I f i •I·* merkissä 7 osoittaa yhden huipun; UV λ max nM (0,1 M HCl) :

254, 297; (pH-arvon 7 fosfaattipuskuri): 259, 284; (0,1 M

NaOH): 259, 284. Emäs/fosfaatti-suhde oli 1,0/0,98. [α]2β j’·.. 25 +62,0°, [a] 5728 +65,2°, [a]2D5 +75,0°, (c = 0,54, :T: MeOH: H20/4:1).

• - ·

Esimerkki 10 ,···. ( + ) -cis-4- [2-amino-6- (syklopropyyliamino) -9H-purin- • · V··' 9-yyli] -2-syklopenteeni-l-metanoli *” 30 Esimerkin 9 otsikon yhdistettä (0,67 millimoolia) ·· : *·· liuotettiin veteen (20 ml) ja alkalista fosfataasia ί,,,ί (EC 3.1.3.1), joka oli peräisin vasikan suolesta, )·. (3 000 IU, Boehringer Mannheim) lisättiin. Liuosta inku- « boitiin 37 °C:ssa 19 tunnin ajan, minkä jälkeen HPLC-ana-• «· ............

‘ * 35 lyysi, kuten on kuvattu esimerkissä 7, osoitti, että kaik- 26 105813 ki nukleotidi oli defosforyloitunut. Liuos haihdutettiin kuiviin ja jäljelle jääneitä kiinteitä aineita uutettiin palautusjäähdyttäen kuumennetulla etanolilla (100 ml). Etanoliin liukoinen aine adsorboitiin silikageeliin ja 5 lisättiin silikageelipylvääseen. Otsikon yhdiste eluoitiin seoksella metanoli:kloroformi (1:9). Haihduttamalla ase-tonitriili-etanoliliuos saatiin valkea kiinteä vaahto (164 mg, 79 %) ; 1H-NMR DMSO-d6:ssa ja massaspektri olivat identtiset rasemaatille (esimerkin 5 otsakkeen yhdiste) 10 saatujen kanssa; [a]2D° +58,7°, [a]436° +126,2°, [α]3|5° +217,5°, (c = 0,10, metanoli).

Analyysi laskettuna yhdisteelle C14H18N60 -0,60 H2O-0,15 EtOH: C 56,49; H 6,66; N 27,64 Saatu: C 56,60; H 6,63; N 27,55 15 Esimerkki 11 (-) -c i s -4 -[2-amino-6-(syklopropyylimetyyliamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-1-metanoli

Esimerkin 6 otsikon yhdistettä (2,00 g, 6,50 milli-moolia) liuotettiin 1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-20 2(1H)-pyrimidinoniin (Aldrich, 20 ml). Fosforyylikloridia c « i (2,28 ml, 24,0 millimoolia) lisättiin sekoitettuun, jääh- • i dytettyyn (-10 °C) liuokseen. 3 minuutin kuluttua lisät- * · i tiin kylmää vettä (80 ml) . Liuosta uutettiin kloroformilla • · *···* (3 x 80 ml) . Vesikerros laimennettiin etanolilla (400 ml) • f I25 ja pH-arvo säädettiin 6:ksi kyllästetyllä NaOH:n vesi-« · · V i liuoksella. Saostuneet epäorgaaniset suolat suodatettiin pois. Suodos laimennettiin lisäksi etanolilla 1 litran tilavuudeksi ja pH-arvo säädettiin 8:ksi lisämäärällä ··· ·***. NaOH. Tulokseksi saatu saostuma suodatettiin ja kuivat- ··· 30 tiin, jolloin saatiin (±)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyyli- • · * metyyliamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-1-metanolin • · *···* O-monofosfaatti valkeana jauheena (4,0 millimoolia, 62 % ·· määritettynä kvantitatiivisesti UV-absorbanssin avul- • · · i j'.t| la) ; HPLC-analyysi kuten esimerkissä 7 osoittaa yh- • · 35 den huipun. Tämä raseeminen O-monofosfaatti liuotettiin 27 105813 veteen (200 ml) ja käärmeen myrkyn 5'-nukleotidaasia (EC 3.1.3.5), joka oli peräisin lajilta Crotalus atrox, (5 000 IU, Sigma) lisättiin. Sen jälkeen kun oli inkuboitu 37 °C:ssa 10 päivän ajan, esimerkissä 7 kuvatun mukainen 5 HPLC-analyysi osoitti, että 50 % lähtönukleotidista oli defosforyloitunut nukleosidiksi. Nämä erotettiin käyttäen kooltaan 5 x 14 cm olevaa DEAE-Sephadex A25 (Pharmacia) -pylvästä, joka oli ennalta tasapainotettu 50 mM ammonium-bikarbonaatilla. _Otsikon yhdiste eluoitiin 2 litralla 10 50 mM ammoniumbikarbonaattia. Haihduttamalla vesi saatiin valkea jauhe, joka liuotettiin metanoliin, adsorboitiin silikageeliin ja lisättiin silikageelipylvääseen. Otsikon yhdiste eluoitiin seoksella metanoli:kloroformi/l:9 värittömänä lasina. Haihdutettiin asetonitriililiuos, jolloin 15 saatiin valkea kiinteä vaahto, joka kuivattiin paineessa 0,3 mmHg P2Os:n avulla; 649 mg (72 % rasemaatisa) ; ^-NMR DMS0-d6:ssa ja massaspektri olivat identtiset rasemaatille (esimerkin 6 otsikon yhdiste) saatujen kanssa; [a] 3625° -149° (c = 0,14, metanoli).

• i 20 Analyysi laskettuna koostumukselle C15H20N6O *0,10 CH3CN: ί.·.: C 59,96; H 6,72; N 28,06 ,·]: Saatu: C 59,93; H 6,76; N 28,03 : ^ : Jatkamalla Sephadex-pylvään eluointia 2 litralla

100 mM ammoniumbikarbonaattia ja sitten 2 litralla 200 mM

;*j\ 25 ammoniumbikarbonaattia saatiin otsikon yhdistettä vastaa- van (+)-enantiomeerin O-monofosfaatti, joka oli stabiili ·.. 5 ' -nukleotidaasin suhteen.

• · • · III Esimerkki 12 • · _ . ......

*;· ( + ) -cis-4- [2-amino-6- (sykiopropyylimetyyliamino) - • · j *·· 30 9H-purin-9-yyli] -2-syklopenteeni-1-metanoli

Esimerkin 11 Sephadex-pylväästä eluoidut ( + ) -enan-• · > *._ tiomeerin O-monofosfaattia sisältävät fraktiot yhdistet- Ί". tiin ja alkalista fosfataasia (EC 3.1.3.1), joka oli pe- • · · .........

"· " räisin vasikan suolesta (4 800 IU, Boehringer Mannheim) 35 lisättiin. Liuosta inkuboitiin 25 °C:ssa 18 tunnin ajan, 105813 28 jonka jälkeen HPLC-analyysi osoitti, että kaikki nukleotidi oli defosforyloitunut. Liuos haihdutettiin kuiviin ja jäljelle jääneitä kiinteitä aineita uutettiin palautus-jäähdyttäen kuumennetulla etanolilla (100 ml) . Etanoliin 5 liukoinen aine adsorboitiin silikageeliin ja lisättiin silikageelipylvääseen. Otsikon yhdiste eluoitiin seoksella metanoli:kloroformi/l:9 värittömänä lasina. Haihdutettiin asetonitriililiuos, jolloin saatiin valkea kiinteä vaahto, joka kuivattiin paineessa 0,3 mmHg P2Os:n avulla,· 659 mg 10 (73 % rasemaatista) ; ^-NMR DMSO-£l6:ssa ja massaspektri olivat identtiset rasemaatille (esimerkin 6 otsakkeen yhdiste) saatujen kanssa; [a]2D° +47,0°, [a]43S° +93,0°, [a] 3625° = +141,3° (c = 0,11, metanoli).

Analyysi laskettuna koostumukselle C15H20N6O-0,1 CH3CN: 15 C 59,95; H 6,72; N 28,06

Saatu: C 59,92; H 6,80; N 27,96 Esimerkki 13 (IS,4R)-4-amino-2-syklopenteeni-1-metanolidibentso-yyli-D-tartraatti 20 ( + )-cis.-4-asetamidosyklopent-2-eenimetyyliasetaat- tia [US-patentti 4 268 672] (14,88 g, 0,073 moolia) ja ·,·,· bariumhydroksidioktahydraattia (46,19 g, 0,146 moolia) : t : kuumennettiin palautus jäähdyttäen vedessä (300 ml) typpi- ilmakehässä 18 tunnin ajan. Tulokseksi saatu liuos neutra-25 loitiin hiilidioksidilla. Saostuma pestiin vedellä, sitten > etanolilla. Yhdistetty suodos-pesuliuos haihdutettiin sii-rapiksi ((+)-4-amino-2-syklopenteeni-l-metanolin etikka- • » happosuola) , joka muutettiin vapaaksi amiiniksi sekoitta- *** maila ylimäärän kanssa Amberlite IRA-400 (OH') -hartsia • · • *·· 30 vedessä. Hartsi suodatettiin pois, pestiin vedellä ja suo- dos-pesuliuos haihdutettiin vaalean keltaiseksi siirapik- si, joka kuivattiin haihduttamalla etanoliannoksia. Täi- *1". lainen näyte amiinia (2,26 g, 20,0 millimoolia) ja dibent- « · · * * ' soyyli-D-viinihappoa (Aldrich, 3,62 g, 10,0 millimoolia 35 99 %) liuotettiin kuumaan absoluuttiseen etanoliin 29 105813 (35 ml) . Palautusjäähdyttäen kuumennettua asetonitriiliä (noin 150 ml) lisättiin samennuspisteeseen asti ja liuoksen annettiin jäähtyä hitaasti huoneenlämpötilaan. Muodostuneet valkeat neulaset uudelleenkiteytettiin kolme kertaa 5 samasta liuotinyhdistelmästä, jolloin saatiin otsikon yhdiste valkeina levyinä (1,07 g, 37 %) ; sp. 160 - 162 °C; [a]2D +66,9°, [α] 4326° +165°, [a] 3625° +325° (c = 0,28, metanoli) .

Tämän suolan röntgensädekristallografisessa tutkimuksessa saatiin kationin absoluuttinen konfiguraatio mää-10 ritettyä D-dibentsoyyliviinihapon dianionin tunnetun konfiguraation avulla. Tämä suola kiteytyi avaruusryhmässä C2, jolloin yksi C6H12NO-kationi ja puolet C18H1408-dianionis-ta oli asymmetrisenä yksikkönä.

Analyysi laskettuna koostumukselle C6H1:lN0 *1/2 (C18H1408) : 15 C 61,63; H 6,21; N 4,79

Saatu: C 61,56; H 6,24; N 4,74 Esimerkki 14 (1R,4S)-4-amino-2-syklopenteeni-l-metanolidibentso- . yyli-L-tartraatti • · . ______ _________ 20 Tämä suola muodostettiin ja kiteytettiin kuten on • · · kuvattu esimerkissä 13, paitsi että käytettiin dibentsoyy-li-L-viinihappoa. Suorittamalla kolme kiteytystä etanoli-asetonitriilistä saatiin otsikon yhdiste valkeina levyinä (1,00 g, 34 %) ; sp. 160 - 162 °C; [a]2D° -68,2°, [a] 4326° -169°; 25 [α] 3625° -333°, (c = 0,24, metanoli).

Analyysi laskettuna koostumukselle CgHnNO *1/2 (C18H1408) : C 61,63; H 6,21; N 4,79 * ·

Saatu: C 61,59; H 6,21; N 4,76 *!' Esimerkki 15 • · i *·· 30 ( + ) -cis-N- [4-kioori-5-formamido-6- [ [4- (hydroksime- • · · ϊ.,,ϊ tyyli)-2-syklopenten-l-yyli] amino]-2-pyrimidinyyli] aset- ]·. amidi . "!*. N-(5-amino-4,6-diklooripyrimidin-2-yyli) asetamidi (J. Org. Chem. 40 (1975) 3141) formyloitiin lisäämällä 35 96 % muurahaishappoa (20 ml) liuokseen, jossa oli (0,75 g, 105813 30 3,4 millimoolia) liuotettuna etikkahappoanhydridiin (20 ml). Tulokseksi saatua liuosta sekoitettiin 25 °C:ssa yhden tunnin ajan ja se haihdutettiin sitten, jolloin saatiin N-(4,6-dikloori-5-formamido-2-pyrimidinyyli)asetamidi 5 nahanruskeana jauheena (0,77 g, 91 %) ; rakenne vahvistettiin ^-NMRtn ja massaspektrin avulla. Tätä nahanruskeaa jauhetta (840 mg, 3,37 millimoolia), (+)-cis-4-amino-2-syklopenteeni-l-metanolia (940 mg, 8,2 millimoolia) ja trietyyliamiinia (0,80 g, 8,0 millimoolia) lämmitettiin 10 etanolissa (50 ml) öljyhauteessa (70 - 80 °C) typpi-ilma-kehässä 50 minuutin ajan ja haihdutettiin tummaksi öljyksi, joka kromatografoitiin käyttäen silikageeliä. Otsikon yhdiste eluoitiin seoksella 5 % metanoli-kloroformi persikan värisenä kiinteänä vaahtona (84 0 mg) . Kiteyttämällä 15 metanolista saatiin valkeita rakeita (575 mg, 52 %); sp. 189 - 193 °C; 1H-NMR (DMSO-d6) 6 10,23 (leveä, 1,0, NHAc) , 9,3 (leveä, 1,0, NHCHO) , 8,15 ja 7,90 (kummatkin s, kaik kiaan 1,0, HC=0 kahdesta konformeerista, piikit yhtyvät , 60 °C:ssa), 7,42 ja 7,22 (kummatkin d, J = 8,3, kaikkiaan • « 20 1,0, CH-NH kahdesta konformeerista, piikit yhtyvät ’·!·' 60 °C:SSa) , 5,9 ja 5,7 (kummatkin m, 2,0, CH=CH) , 5,05 (m, 1, CH-N) , 4,73 (m, 1, OH), 3,39 (m, 2, CH2OH) , 2,72 (m, 1, CH) , 2,40 (m, 1, 1/2 CH2) , 1,36 (m, 1, 1/2 CH2) .

Analyysi laskettuna koostumukselle ^•13^16^5^3^·-^- * 25 C 47,93; H 4,95; N 21,50; Cl 10,88

Saatu: C 47,99; H 4,96; N 21,42; Cl 10,96 ,···. Esimerkki 16 • t (±) -cis-4- [2-amino-6- (syklopropyyliamino) -9H-purin-9-yyli] -2-syklopenteeni-l-metanoli ·· • *·· 30 Esimerkin 15 otsikon yhdistettä (0,91 g,2,79 milliini moolia) liuotettiin kuivaan DMFtiin (1 ml). Trietyylior- toformiaattia (10 ml) ja etaanisulfonihappoa (0,29 ml, ♦ *!'*. 3,4 millimoolia) lisättiin ja liuosta kuumennettiin » i · « «· ' * 65 °C:ssa 24 tunnin ajan. Liuos haihdutettiin siirapiksi.

35 Siirappi liuotettiin 1 N HCl:oon (15 ml) ja sekoitet- 31 105813 tiin kolmen tunnin ajan. pH-arvo säädettiin 7:ksi 5 N natriumhydroksidilla ja tulokseksi saatua seosta (muodostunutta öljyä) uutettiin i-propanoli:kloroformilla/l:3 (3 x 100 ml) . Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivattiin 5 (MgS04) ja haihdutettiin punaiseksi lasiksi (0,93 g). Li uosta, jossa oli tämä lasi metanolissa (20 ml) , kuumennettiin syklopropyyliamiinin (2 ml) kanssa Parr-pommissa 70 °C:ssa 18 tunnin ajan. Tulokseksi saatu liuos haihdutettiin tummaksi lasiksi, joka adsorboitiin silikageeliin. 10 Eluoimalla seoksella 7 % metanoli-etyyliasetaatti saatiin otsikon yhdiste (148 mg, 19 %) valkeana jauheena sen jälkeen kun oli hierretty asetonitriilin kanssa,· ^-NMR (DMSO-d6) identtinen esimerkin 5 otsakkeen yhdisteelle saadun kanssa.

15 Esimerkki 17 (±)- (1R,4S)-cis-N-[4-kloori-5-formamido-6-{[4- (hyd-roksimetyyli)-2-syklopenten-l-yyli]amino}-2-pyrimidinyy-li]asetamidi (IS,4R)-4-amino-2-syklopenteeni-l-metanolidibentso- • · · "! 20 yyli-D-tartraattia, joka oli valmistettu kuten on kuvattu • · i esimerkissä 13, (2,76 g, 9,02 millimoolia) liuotettiin

• · I

veteen (20 ml) ja lisättiin pylvääseen, jossa oli 65 ml

• · I

• i

Amberlite IA-400 (OH' -muoto) -anioninvaihtohartsia. Pyi- • • '· västä pestiin vedellä. Emäksiset fraktiot yhdistettiin ja • « : 25 haihdutettiin jäännösöljyksi, joka kuivattiin haihdutta malla absoluuttista etanolia ja sitten 0,5 mm:n paineessa, jolloin saatiin (IS,4R)-4-amino-2-syklopenteeni-l-metanoli ··· .···. (1,2 g) vaalean keltaisena öljynä (tummenee nopeasti il- • · · massa), joka käytettiin välittömästi. Tämä öljy liuotet- • · • ** 30 tiin etanoliin (5 ml) ja lisättiin liuokseen, jossa oli • ·· - N- (4,6 - di kloori - 5 - f ormamido- 2 -pyrimidinyyli) as et amidi a (2,07 g, 8,31 millimoolia) , joka oli valmistettu kuten on « · · . .·. : kuvattu esimerkissä 15, ja trietyyliamiinia (2,50 g, I ti 24,8 millimoolia). Tulokseksi saatua tummaa liuosta kuu-35 mennettiin (öljyhaude 75 - 80 °C) typpi-ilmakehässä 50 mi- 32 105813 nuutin ajan. Liuos haihdutettiin siirapiksi, joka lisättiin silikageelipylvääseen. Otsikon yhdiste eluoitiin 3 -5 % metanoli-kloroformilla vaalean keltaisena kiinteänä vaahtona (1,59 g, 54 %) ; 1H-NMR identtinen kiteytetylle 5 näytteelle saadun kanssa. Tällainen näyte kiteytettiin etanolista, jolloin saatiin valkeita rakeita, sp. 194 -195 °C; ^-NMR (DMSO-d6) identtinen esimerkin 15 otsikon yhdisteelle saadun kanssa; [a]2jJ +2,7°, [a] 5¾0 +3,6°, [a] s2® +2,9°, [a] 4326° -2,5°, [a]3|5° -41,2° (c = 0,238 meta- 10 noli).

Esimerkki 18 (-)-(1S,4R)-cis-(2-amino-6-kloori-9H-purin-9-yyli)-2-syklopenteeni-1-metanoli

Esimerkin 17 otsikon yhdistettä (1,15 g, 3,53 mil-15 limoolia) kuumennettiin varovaisesti palautusjäähdyttäen dietoksimetyyliasetaatissa (45 ml) typpi-ilmakehässä 3,5 tunnin ajan. Tulokseksi saatu vaalean keltainen liuos konsentroitiin paineessa 0,5 mm Hg keltaiseksi siirapiksi. Siirappia sekoitettiin 1 N HCl:ssa (50 ml) 1,0 tunnin • · '.h* 20 ajan. Tämä liuos neutraloitiin natriumbikarbonaatilla ja haihdutettiin kuiviin. Jäljelle jääneitä kiinteitä aineita ί .* ·’ uutettiin metanolilla ja metanoliin liukoinen aine lisät- tiin silikageelipylvääseen. Eluoimalla pylvästä seoksella »t · •\t 10 % metanoli-etyyliasetaatti saatiin otsikon yhdiste vaa-

25 lean keltaisena kiinteänä vaahtona (730 mg, 78 %) ; 1H-NMR

« 1 1 (DMSO-d6) : identtinen rasemaatille (esimerkin 4 otsikon yh-diste) saadun kanssa; [a]2D° -114,9° (c = 0,26, MeOH) .

I” Esimerkki 19 • v ·;·' (-) - (IS,4R) -cis-4- [2-amino-6- (syklopropyyliamino) - j 30 9H-purin-9-yyli] -2-syklopenteeni-1-metanoli

Esimerkin 18 otsikon yhdistettä (560 amg, 2,11 mil- • · · *. limoolia), joka oli metanolissa (12 ml) , kuumennettiin • · · ··". syklopropyyliamiinin kanssa (2,4 ml) Parr-pommissa * * · *· ” 78 °C:ssa 17 tunnin ajan. Liuotin haihdutettiin ja jäännös 35 kromatografoitiin käyttäen silikageeliä. Otsikon yhdiste 33 105813 eluoitiin 5 - 7 % metanoli-etyyliasetaatilla värittömänä kiinteänä vaahtona (367 mg, 59 %) ; ^i-NMR (DMSO-d6) identtinen esimerkille 7 saadun kanssa; [a]2^ -59,0° (c = 0,28,

MeOH) vahvistaa esimerkin 7 otsakkeen yhdisteen absoluut-5 tisen konfiguraation.

Esimerkki 20 (IS,4R)-4-amino-2-syklopenteeni-1-metanoiidibent so-yyli-D-tartraatti 2-atsabisyklo[2.2.1]hept-5-en-3-onia [Daluge ja 10 Vince, J. Org. Chem. 43 (1978) 2311 ja US-patentti 4 268 672] (44,0 g, 0,400 moolia) sekoitettiin 2 N HCl:ssa metanolissa (0,5 1) 25 °C:ssa 1,5 tunnin ajan. Haihtuvat aineet haihdutettiin, jolloin jäljelle jäi (+)-cis-metyy-1i-4 -amino-2 -syklopenteeni-1-karboksylaattihydrokloridi 15 likaisen valkeana jauheena (71,1 g). Hiertämällä tällaista näytettä dietyylieetterin kanssa saatiin valkea jauhe, sp. 92,5 - 95 °C [J. Org. Chem. 46 (1981) 3271; sp. 82 - 83 °C] ; ^-NMR (DMSO-d6) δ 8,25 (leveä s, 3, NH3+) , 6,1 ja 5,9 (kummatkin m, 2, CH=CH), 3,64 (s) peittäen 3,75 - 3,6 ’··’' 20 (m, kaikkiaan 4, OMe ja CH) , 2,65 - 2,45 ja 2,05 - 1,85 ;.i.' (kummatkin m, 2, CH2) .

!,j.: Analyysi laskettuna koostumukselle Ο,Η-^ΝΟ^ *HC1: C 47,33; H 6,81; N 7,89; Cl 19,96 t «

Saatu: C 47,41; H 6,84; N 7,85; Cl 19,89 25 ( + ) -cis-metyyli-4-amino-2-svklopenteeni-l-karboksy- laattihydrokloridia (17,7 g, 0,100 moolia) ja di-isobutyy- #..»t lialumiinihydridiä (0,500 moolia 1 M liuoksena heksaanis- • · sa) kuumennettiin palautus jäähdyttäen heksaanissa (200 ml) • · ·;· 6 tunnin ajan. Tulokseksi saatu liuos jäähdytettiin ja • · ____ ! *·· 30 10 ml 1 M ammoniumkloridin vesiliuosta ja sitten metanolia - (200 ml) lisättiin. Tätä seosta kuumennettiin palautus- » · 9 jäähdyttäen 30 minuutin ajan ja MgS04 (10 g) lisättiin. Kiinteät aineet suodatettiin pois ja pestiin lisäämällä • * · '· ” metanolia. Suodos-pesuliuos haihdutettiin tummaksi öljyksi 35 (15,5 g); ^-NMR (DMSO-dJ identtinen esimerkissä 13 kuva- 105813 34 tulla tavalla valmistetulle (±)-4-amino-2-syklopenteeni-1-metanolille saadun kanssa. Sen jälkeen kun tällainen näyte oli puhdistettu kromatografiän avulla käyttäen silikagee-liä (EtOH:CHC13 :NH4OH/lO:90:1), se kiteytettiin dibentsoyy-5 li-D-viinihapon kanssa, jolloin muodostui otsikon yhdiste.

Esimerkki 21 [cis-4-(2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli)-2-syklopenten-l-yyli]metyyli-R-2,3-bis-(heksadekano-yloksi)propyylivetyfosfaatti 10 Liuos, jossa oli L-a-dipalmitoyylifosfatidyyliko- liinia (150 mg, 0,2 millimoolia, Sigma) 6 ml:ssa kloroformia, lisättiin kolviin, joka sisälsi ( + )-cis-4-(2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli)-2-syklopenteeni-1-metanolia (300 mg, 1,03 millimoolia), tyyppiä VII olevaa 15 fosfolipaasi D:tä (lajilta Streptomyces, 1,0 mg, spesifinen aktiivisuus 185 yksikköä/mg, Sigma) ja pH-arvon 4,5 puskuriliuosta (1,5 ml, 250 mM CaCl2, 200 mM NaOAc säädettynä pH-arvoon 4,5 lisäämällä 0,1 N HCl). Tulokseksi saatua kaksifaasista seosta sekoitettiin 45 °C:ssa (öljyhau- • » · 20 de) 1 tunnin ajan. Kerrokset erotettiin ja vesikerrosta • · · uutettiin kloroformilla (3x6 ml). Yhdistetyt orgaaniset 1 · 1 kerrokset pestiin 1 N HCl :11a, kuivattiin ja konsentroi- • · · tiin. Tällainen näyte puhdistettiin eluoimalla 2 silika- • 1 • ’*· geelipylväästä 12 % metanoli-kloroformilla, jolloin saa- :T: 25 tiin otsikon yhdiste, 120 mg (47 %). Tämä materiaali jäh

metettiin käyttäen etyyliasetaatti-asetonitriiliä, jolloin saatiin vaalean keltainen jauhe, sp. 155 - 157 °C; ^-NMR

··· .···, (CD3CD-CDCI3) δ 7,78 (s, peittävä liuotin, purii-ni-H-8) , 6,12 ja 5,88 (m, 2, HC=CH), 5,53 (m, 1, CHN syklopentee- : ’*· 30 ni) , 5,22 (m, 1, C02CH) , 4,37 (dd, J = 3, 12; 1, 0,5 POCH2 ··· glyseroli), 4,12 (m, 1, 0,5 POCH2 glyseroli), 3,42 (m, 4, OCH2 glyseroli, 0CH2) , 3,11 (leveä m, 1, CH) , 2,90 (m, 1, *·”; NCH) , 2,78 (m, 1, 0,5 CH2 syklopenteeni) , 2,27 (m, 4, • · · 2CH2C02) , 1,70 (m, 1, 0,5 CH2 syklopenteeni), 1,56 (leveä m, 35 4, 2CH2CH2C02) , 1,27 (leveä m, 38, 24 CH2) , 0,88 (m, 6, 35 105813 2CH3) , 0,83 (m, 2, CH2 syklopropyyli) , 0,60 (m, 2, CH2 syk-lopropyyli).

Analyysi laskettuna koostumukselle C49H85N608P-2,4 H20: C 61,28; H 9,42; N 8,75; P 3,22 5 Saatu: C 60,97; H 9,12; N 8,78; P 2,96 Esimerkki 22 icis-4- (2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli)-2-syklopenten-l-yyli]metyyli-R-2,3-bis-(heksanoylok-si)propyylivetyfosfaatti 10 Liuos, jossa oli L-a-dikaproyylifosfatidyylikolii- nia (300 mg, 0,66 millimoolia, Sigma) 15 ml:ssa CHC13, lisättiin kolviin, joka sisälsi (±)-cis-4-(2-amino-6-(syklopropyyliamino) -9H-purin-9-yyli)-2-syklopenteeni-l-metano-lia (378 mg, 1,32 millimoolia), tyyppiä VII olevaa fosfo-15 lipaasi D:tä (lajilta Streptomyces, 1,04 mg, spesifinen aktiivisuus 185 yksikköä/mg, Sigma), pH-arvon 4,5 puskuri-liuosta (4,5 ml, 250 mM CaCl2, 200 mM NaOAc säädettynä pH-arvoon 4,5 HCl:lla) ja CHC13 (3 ml). Tulokseksi saatua kaksifaasista seosta sekoitettiin 45 °C:ssa (öljyhaude)

• I

20 4 tunnin ajan. Kerrokset erotettiin ja orgaanista kerrosta * pestiin 1 N HClrlla (2x4 ml). Yhdistettyjä vesikerroksia ....

i.jj takaisinpestiin kloroformilla (10 ml) . Yhdistetyt orgaani- set kerrokset kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin. Jäännös • · · j*»ti pantiin silikageelipylvääseen ja otsikon yhdiste eluoitiin 25 16 % metanoli-kloroformilla ja konsentroitiin, jolloin « _ __ saatiin hieno keltainen jauhe. Tämä aine liuotettiin ... etanoliin ja konsentroitiin (3 x 50 ml) ennen kuivaamista *·.' suurtyhjössä, jolloin saatiin 103 mg (21 % saanto) vaalean • · ·;·* keltaista jauhetta, sp. 182 - 185 °C.

30 1H-NMR: (DMSO-d6) δ 7,61 (s, 1, puriinin H8) , 7,22 (le-veä :***: s, 1, NH) , 6,09 (m, 1, 0,5 CH=CH) , 5,89 (m, peittävä leveä s kohdalla 5,83, 3, 0,5 CH=CH, NH2) , 5,41 (leveä m, 1, ··· •;‘:f CHN) ; 5,09 (leveä m, 1, C02CH) , 4,30 (dd, J = 2,7, 12; « · ’ ” 1, 0,5 POCH2 glyseroli), 3,80 (leveä m peittäen leveän m:n 35 kohdalla 3,75, 4, OCH2 glyseroli, OCH2) , 3,02 (leveä m, 105813 36 2, CH, NCH syklopropyyli) , 2,65 (m, 1, 0,5 CH2 syklopentee-ni) , 2,23 ( + , J = 7,5, 4, 2, CH2C02) , 1,48 (leveä m, 5, 2 CH2CH2C02, 0,5 CH2 syklopenteeni) , 1,23 (leveä m, 8, 2 (CH2)2), 0,84 (m, 6, 2 Ch3) , 0,67 ja 0,58 (m, 4, 2 CH2 syk-5 lopropyyli).

Analyysi laskettuna koostumukselle C29H45N608P-3,9 H20, 0,2 CHC13, 0,05 EtOH: C 48,00; H 7,33; N 11,46; Cl 2,9 Saatu: C 48,65; H 6,61; N 10,81; Cl 2,5 10 Edellä oleva esimerkki on sovellutus Satoshi Shuton et ai. menetelmästä, Tetrahedron Letters, Voi. 28, No. 2 (1987) 199 - 202.

Esimerkki 23 N- (4-kloori-1,6-dihydro-5-nitro-6-okso-2-pyrimidi-15 nyyli)isobutyyriamidi 6-kloori-5-nitroisosytosiini (J. Chem. Soc. 1960, 5041; J. Org. Chem. 40 (1975) 3141) suojattiin kuumenta malla keltaista kiinteää ainetta (14,88 g, 78,09 millimoo-lia) 100 °C:seen yhden tunnin ajan liuoksessa, jossa oli 20 isovoihappoanhydridiä (250 ml) ja väkevää rikkihappoa (3 - « f i 4 tippaa) . Tulokseksi saatua liuosta käsiteltiin vedettö- • 1 e *«'··' mällä metanolilla (100 ml, sekoitettiin 50 °C:ssa puolen • f tunnin ajan, se konsentroitiin kolmasosaksi sen alkuperäi- • * • *«« sestä tilavuudesta ja otsikon yhdiste (14,97 g, 74 %) 25 koottiin suodattamalla vaalean keltaisina kiteinä; sp. 196 -199 °C (haj.); ^-NMR (DMSO-d6) δ 1,12 (d, J = 6,9 Hz, 6H, .·**. (CH3)2CH), 2,75 (m, J = 6,9 Hz, 1H, (CH3)2CH), 12,41 (leveä .**·. s, 1H) .

m • Analyysi laskettuna koostumukselle C8H9N404C1: : ’·· 30 C 36,87; H 3,48; N 21,50; Cl 13,60 • ·· ϊ...1 Saatu: C 36,94; H 3,48; N 21,44; Cl 13,53 ··· • · t · • * • · « « · · • · 37 105813

Esimerkki 24 N- (4,6-dikloori-5-nitro-2-pyrimidinyyli)isobutyyri- amidi

Esimerkin 23 otsakkeen yhdistetä (10,0 g, 38,37 5 millimoolia) kuumennettiin palautusjäähdyttäen seoksessa, jossa oli fosforioksikloridia (200 ml) ja N,N-dietyyliani-liinia (3-4 tippaa), 5 tunnin ajan typpj. - ilmakehässä. Liuos jäähdytettiin sitten huoneenlämpötilaan, konsentroitiin kuiviin ja siirappi liuotettiin kylmään (n. -10 °C) 10 metyleenikloridiin (200 ml). Orgaanista kerrosta käsiteltiin kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella (100 ml) sekoittaen voimakkaasti ja lämpötila pidettiin 5 °C:n alapuolella, kun kiinteää natriumbikarbonaattia lisättiin annoksittain pH-arvon nostamiseksi välille 5 -15 7. Kerrokset erotettiin ja vesifaasia uutettiin metyleeni- kloridilla. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset suodatettiin faasinerottajapaperin kautta, konsentroitiin ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin otsakkeen yhdiste (7,71 g, 72 %) kellanvalkeana kiinteänä aineena, joka oli riittävän puh-20 dasta käytettäväksi seuraavassa vaiheessa. Uudelleenko- ! teyttämällä kiinteä aine heksaani/metyleenikloridista saa- : tiin analyysinäyte, sp. 166 - 169 °C; ^-NMR (DMSO-d6) ; δ 1,09 (d, J = 6,9 Hz, 6H, (CH3)2CH), 2,79 (m, J = 6,9 Hz,

IM

.···. 1H, (CH3)2CH), 11,61 (s, 1H) .

«t · :·. 25 Analyysi laskettuna koostumukselle C8H8N403C12: C 34,43; H 2,89; N 20,08; Cl 25,41 ’ Saatu: C 34,53; H 2,89; N 20,02; Cl 25,40

Esimerkki 25 » · '···* N- (4,6-dikloori-5-formamido-2-pyrimidinyyli) isobu- ...· 30 tyyriamidi *·’·.. Esimerkin 24 otsikon yhdistettä (6,77 g, 24,26 mil- .···. limoolia) pantiin Parr-pulloon, joka sisälsi 220 ml abso- • *t luuttista EtOH ja 10,0 g (märkää) Raney-nikkelikatalyyt-

• M

···· tiä, jota oli ennalta ravistettu vedyn alla (40 psi) • · 35 10 minuutin ajan. Seosta ravistettiin vedyn alla (40 psi) 38 105813 tunnin ajan, se suodatettiin seliitin kautta ja suodos konsentroitiin kellanvalkeaksi kiinteäksi aineeksi, jota kuivattiin tyhjössä yön ajan. Tätä kiinteää ainetta sekoitettiin 1,2-dikloorietaanissa (250 ml) 0 °C:ssa. Etikka-5 happoanhydridiä (30 ml) lisättiin ja sen jälkeen muurahaishappoa (30 ml) , tipoittain typpi-ilmakehässä. Tulokseksi saatua seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 2 tunnin ajan, konsentroitiin puoleen alkuperäisestä tilavuudesta ja haihdutettiin atseotrooppisesti tolueenin 10 kanssa jäljellä olevan muurahais/etikkahapon poistamiseksi. Raakaa kiinteää ainetta hierrettiin metanolin kanssa, jolloin saatiin otsikon yhdiste (4,92 g, 73 %) likaisen valkeana kiinteänä aineena; sp. 206 - 209 °C (haj.); 1H-NMR (DMSO-d6) δ 1,08 (d, J = 6,8 Hz, 6,0 (CH3)2CH), 2,74 (m, J = 15 6,8 Hz, 1,0 (CH3)2CH), 8,18 (d, J = 10,3 Hz) ja 10,26 (le veä s) [kaikkiaan 1,0, NHCHO kahdesta konformeerista], 11,17 (1.eveä s, 1,0).

Analyysi laskettuna koostumukselle C9H10N4O2Cl2: C 39,01; H 3,64; N 20,22; Cl 25,59 20 Saatu C 39,13; H 3,68; N 20,12; Cl 25,67 ·*; Esimerkki 26 t · · . ,·, ( + ) - (1R, 4S)-cis-N-[4-kloori-5-formamido-6-{ [4-(hyd- « · « roksimetyyli) -2-syklopenten-l-yyli] amino}-2-pyrimidinyy- • · * li] isobutyyriamidi .;** 25 (IS, 4R) -4-amino-2-syklopenteeni-1 -metanoiidibentso- • · yyli-D-tartraattia (2,44 g, 8,15 millimoolia), joka oli *·* ’ valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 12, liuotettiin 90 % etanoliin (20 ml) ja liuos lisättiin Amberlite • · · IRA-400 (OH') -hartsi (30 ml) -pylvääseen, jota oli esipes-30 ty samalla liuottimena. Eluoimalla 90 % etanolilla saa-tiin emäksisiä fraktioita, joista konsentroimalla ja haih- • · · *... duttamalla tolueeni-etanoli-annoksia saatiin jäännökseksi • « (IS, 4R) -4-amino-2-syklopenteeni-l-metanoli vaalean keltai-sena öljynä (1,4 g), jota kondensoitiin välittömästi 35 N- (4,6-dikloori-5-formamido-2-pyrimidinyyli -isobutyyriami- • · i 39 105813 din (2,26 g, 8,15 millimoolia) kanssa, joka oli valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 25, 1,2-dimetoksietaanissa (100 ml) trietyyliamiinin kanssa (2,3 ml, 16,3 millimoolia) 95 - 110 °C:ssa 1,5 tunnin ajan. Tulokseksi saatu 5 liuos haihdutettiin tumman keltaiseksi siirapiksi, joka kromatografoitiin käyttäen silikageeliä. Eluoimalla pylvästä 5 - 7,5 % metanoli-kloroformilla saatiin otsikon yhdiste vaalean keltaisena kiinteänä aineena (2,45 g, 84 %). Kiteyttämällä tällainen näyte asetonitriilistä 10 saatiin otsikon yhdiste hienoina valkeina kiteinä, sp. 194,5 - 195,5 °C.

'H-NMR (DMSO-d6) δ 10,21 (s, 1, NHCOCHMe2) , 9,29 (s, 1, NHCHO), 8,12 (s, 1, CHO), 7,18 (d, J = 7,9, 1, CHNH), 5,8 ja 5,7 (kummatkin m, 2, CH=CH) , 5,08 (m, 1, CHN) , 4,71 15 (t, J = 5,06, 1, OH), 3,37 (m, 2, CH2OH) , 2,9 - 2,6 (m, 2, CHMe2 ja CH) , 2,40 (m, 1, 0,5 CH2) , 1,33 (m, 1, 0,5 CH2) ; [a]2D° +4,4°, [a] 3625° -20,7° (c = 0,237, MeOH) .

Analyysi laskettuna koostumukselle C15H20N5ClO3: C 50,92; H 5,70; N 19,79; Cl 10,02 20 Saatu: C 50,67; H 5^78; N 19,62; Cl 9,92 •.i,' Esimerkki 27 (-) - (1R, 4S) -cis-N- [6- (sykiopropyyliamino) - 9- (4-: : : (hydroksimetyyli)-2-syklopenten-l-yyli)-9H-purin-2-yyli]- isobutyyriamidi 25 ( + ) - (1R, 4S) -cis-N- [4-kloori-5-formamido-6-{ [4-(hyd- roksimetyyli) -2-syklopenten-l-yyli] amino} -2-pyrimidinyy-li]isobutyyriamidia Cl,949 g, 5,44 millimoolia), joka oli ... valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 26, sekoitettiin • · __ ____________ l” trietyyliortoformiaatirT~ (30 ml) kanssa jäävesihauteessa • · ”·* 30 samalla kun väkevää kloorivetyhappoa (2,0 ml) lisättiin tipoittain kahden minuutin aikana. Tulokseksi saatua kir- :***; kasta liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön ajan.

* · ·

Haihtuvat aineet poistettiin tyhjössä ja jäljelle jäänyttä * « · ;·\ siirappia (joka sisälsi (1R.4S) -cis-N- i6-kloori-9- (4-hvd- '· " 35 roksimetyyli)-2-syklöpenten-l-yyli)-9H-purin-2-yyli]isobu- 105813 40 tyyriamidiortoesterikonjugaattia) kuumennettiin palautus-jäähdyttäen etanolissa (30 ml) syklopropyyliamiinin (10 g) kanssa 2,5 tunnin ajan. Haihdutettaessa jäi jäljelle siirappi, joka liuotettiin 10 % isopropanolikloroformiin 5 (200 ml) . Tätä liuosta sekoitettiin voimakkaasti kylläste tyn natriumbikarbonaatin vesiliuoksen (25 ml) kanssa. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerrosta pestiin lisämäärällä 10 % isopropanoli-kloroformia. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivattiin (MgS04) . Haihdutettaessa jäi jäl-10 jelle vaalean keltainen lasi (2,4 g), joka kromatografoi-tiin käyttäen silikageeliä. Otsikon yhdiste eluoitiin 2 -3 % metanoli-etyyliasetaatilla valkeana kiinteänä aineena (1,02 g, 53 %) ; uudelleenkiteyttämällä tällainen näyte metanoli-asetonitriilistä saatiin otsakkeen yhdiste val-15 keina neulasina; sp. 197,5 - 198,5 °C.

Ή-NMR (DMSO-d6) δ 9,75 (s, 1, NHCO) , 7,93 (s, 1, puriinin H-8) , 7,82 (leveä S, 1, NH-syklopropyyli), 6,12 ja 5,92 (kummatkin m, 2, CH=CH), 5,50 (m, 1, CH-N), 4,73 (t, J = 5,3, 1, OH), 3,46 (m, 2, CH2-0) , 3,25 - 3,00 (m, 2, CHMe2 20 ja CH) , 2,91 (m, 1, CH) , 2,75 - 2,6 (m, 1, 0,5 CH2) , 1,7 - 1,6 (m, 1, 0,5 CH2) , 1,07 (d, J = 6,8, 6, CHMe,) . 0,75 - : 0,6 (m, 4, 2 syklopropyyli, CH2) ; [α]2ο -10,1°, : [α] 4326° -159,0° (c = 1,02, MeOH) .

(Il

Analyysi laskettuna koostumukselle C1BH24N602: 25 C 60,66; H 6,79; N 23,58 I < r *... Saatu: C 60,62; H 6,83; N 23,51 • · · • · · * Jatkamalla pylvään eluointia 5 % metanoli-etyyliasetaatilla saatiin lisää otsikon yhdistettä, jonka jou- *···* kossa oli epäpuhtautena noin 10 % (-) - (1S.4R) -cis-4- • · · *...· 30 [2-amino-6- (syklopropyyliamino) -9H-purin-9-yyli] -2-syklo- •\e penteeni-l-metanolia vaalean keltaisena kiinteänä vaahtona .*··. (928 mg) .

• 9 •( Esimerkki 28 f i · (-) - (IS, 4R) -cis-4- [2-amino-6- (syklopropyyliamino) - 35 9H-purin-9-yyli] -2-syklopenteeni-l-metanoli 41 105813 (-) -(1R,4S)-cis-N-[6-(syklopropyyliamino)-9- (4-(hydroksimetyyli)-2-syklopenten-l-yyli)-9H-purin-2-yyli]-isobutyyriamidia (1,33 g, 3,73 millimoolia) , joka oli valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 27, sekoitettiin 1 N 5 kloorivetyhapon (40 ml) kanssa 2 päivän ajan huoneenlämpö-tilassa. pH säädettiin arvoon 7,0 natriumhydroksidilla ja seos haihdutettiin kuiviin. Jäljelle jääneitä kiinteitä aineita hierrettiin kuuman EtOH:n (3 x 25 ml) kanssa. Etanoli haihdutettiin, jolloin jäljelle jäi keltainen lasi, 10 joka kromatografoitiin käyttäen silikageeliä. Otsikon yhdiste eluoitiin 3 % metanoli-etyyliasetaatilla värittömänä kiinteänä vaahtona (857 mg, 80 %) , 1H-NMR ja [ identtiset esimerkin 19 otsikon yhdistelle saatujen kanssa .

15 Esimerkki 29 (-)-(1S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyyliamino)- 9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanolihydrokloridi (-)-(IS,4R)-cis-4-[2-amino-6-sykloprpopyyliamino)- 9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanolia (1,90 g, noin 20 6,3 millimoolia ^-NMRin perusteella) liuotettiin 1 N kloo- . rivetyhappoon (7,0 ml) ja etanoliin. Liuos haihdutettiin • · * . kuiviin ja jäännös liuotettiin uudelleen etanoliin . (15 ml) . Etyyliasetaattia lisättiin hitaasti kokonaistila- I I < vuudeksi 80 ml. Muodostunut likaisen valkea jauhe suoda-

* V

25 tettiin pois ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin ot-*.// sikon yhdiste (2,07 g, 97 %) ,- sp. luhistuu 125 - ’·* ’ 130 °C:ssa, hajoaa 138 °C:n yläpuolella, [α]5β29° -27,1°, [a] 4326° -52,3° (C = 0,199, MeOH) .

···

Analyysi laskettuna koostumukselle C14HiaN60 *HC1-0,8 H20: \”ϊ 30 C 49,87; H 6,16; N 24,92; Cl 10,51 ;·] Saatu: C 49,91; H 6,16; H 24,96; Cl 10,52 • ·· *... Esimerkki 30 • · ”* (-)-(IS,4R)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyyliamino)- 9H-purin-9-yyli] -2-syklopenteeni-l-metanolidihydrokloridi < · « · « i i « < 105813 42 (-)-(1S,4R)-cis-4-[2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanolia (857 mg, 3,00 millimoolia) liuotettiin etanoli-etyyliasetaattiin ja 1 N kloorivetyhapon eetteriliuosta (12 ml) lisättiin. Hieno 5 valkoinen saostuma pestiin etyyliasetaatilla ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (642 mg, 75 %); sp. 176 - 180 °C hajoaa.

Analyysi laskettuna koostumukselle C14H18N60 10,2 HC1: C 46,81; H 5,61; N 23,39; Cl 19,74 10 Saatu: C 46,82; H 5,64; N 23,33; Cl 19,67 Esimerkki 31 (1R,4S)-4-(2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli)-2-syklopenteeni-l-metanoli-O-difosfaatti (+)-(1R,4S)-4-(2-amino-6-(syklopropyyliamino)-SHIS purin-9-yyli)-2-syklopenteeni-l-metanoli-O-monofosfaatti, joka oli valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 9, muutettiin trietyyliammoniumsuolaksi ottamalla liuos, joka sisälsi 0,5 millimoolia monofosfaattia ammoniumsuolana, yhdistämällä se 10 ml:n kanssa 0,5 M trietyyliammoniumbi-20 karbonaattia ja kuivaamalla tyhjössä, lisäämällä sen jäl- keen vielä 10 ml 0,5 M trietyyliammoniumbikarbonaattia ja i « . .·, kuivaamalla sitten. Sitten kolme kertaa 10 ml asetonitrii- I I 4 f i r liä lisättiin ja kuivattiin tyhjössä. Tämä liuotettiin 10 ml:aan 1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H)-pyrimidi-25 nonia (Aldrich), sitten 0,43 g 1,1'-karbonyylidi-imidat- « i ·' “ solia (Aldrich, 2,6 millimoolia) lisättiin ja sekoitettiin • · · *·1 1 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Metanolia (0,18 ml, 4,5 millimoolia) lisättiin ja sekoitettiin 30 minuutin • · · ajan. Tributyyliammoniumpyrofosfaattia (Sigma, 1,2 g, ·’2: 30 2,6 millimoolia) lisättiin, sekoitettiin 18 tunnin ajan ./ huoneenlämpötilassa, sitten vielä 1 g tributyyliammonium- pyrofosfaattia (2,2 millimoolia) lisättiin ja sekoitettiin ’··/1 8 tunnin ajan 40 °C:ssa, sitten lisättiin 50 ml vettä.

*:· Muodostui sekä O-difosfaattia että O-trifosfaattia, koska • · · 1 · « · · 2 • M I · 43 105813 tributyyliammoniumpyrofosfaatti sisälsi epäpuhtautena or-tofosfaattia.

Reaktiotuotteet erotettiin DEAE-Sephadex-ioninvaih-tokromatografiän avulla kooltaan 2,5 x 18 cm olevassa 5 DEAE-Sephadex A25 (Pharmacia) -pylväässä, joka oli tasapainotettu 50 mM ammoniumbikarbonaatilla (ABC). Pylvästä pestiin 1 litralla 50 mM ABC, sitten 2 litran lineaarisella gradientlla, jonka muodosti 50 - 800 mM ABC, otsikon yhdisteen ja sen jälkeen trifosfaatin eluoimiseksi, kuten 10 on kuvattu yksityiskohtaisemmin esimerkissä 32. Difosfaat-tia sisältävät fraktiot yhdistettiin, kuivattiin tyhjössä, liuotettiin uudelleen veteen, kuivattiin sitten jälleen, jolloin saatiin otsikon yhdisteen ammoniumsuola (0,077 millimoolia, 15 % saanto). UV: 0,1 M HClrssa λ 15 max = 254 ja 298 nm; pH-arvossa 7 λ max = 259 ja 284 nm; 0,1 M NaOH:ssa λ max = 259 ja 284 nm.

Osaa difosfaatista käsiteltiin alkalisella fosfa-taasilla (vasikan suolen, Boehringer Mannheim), otettiin näytteitä eri aikoina ja niille suoritettiin ohutkerros-20 kromatografia (PEI-selluloosa, Brinkman, 1 M LiCl/l M muu- rahaishappo 1:1). Havaittiin peräkkäinen muuttuminen di- ij,.' fosfaatista monofosfaatiksi ja siitä nukleosidiksi. Vapau- ; tuneen fosfaatin lopullinen määrä määritettiin käyttäen « · ·

Bencinin menetelmää (Bencini, D. A., Wild, J. R. ja 0'Do- • · * _ 25 novan, G. A. , Analytical Biochemistry 132 (1983) 254 -258) • . _ „ .

.···, ja emäs/fosfaattisuhteen määritettiin olevan 1,0/11,5 mikä • · · ______________ osoitti, että tämä oli epäorgaanista fosfaattia. UV-puh- ... taus oli 99,8 % analyyttinen HPLC:n perusteella (vahva • · anioninvaihtopylväs eluoituna gradientilla, jonka muodosti • · ··' 30 10 mM - 1 M ammoniumfosfaatti, pH 5,5).

- Esimerkki 32 .***. (+)-(1R,4S)-4-(2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H- • · · purin-9-yyli)-2-syklopenteeni-l-metanoli-O-trifosfaatti • · «

Jatkamalla esimerkissä 31 kuvatun pylvään eluointia .·. t ....._________________ U 35 saatiin haihduttamisen jälkeen otsikon yhdisteen ammonium- 105813 44 suola. Tämä suola muutettiin natriumsuolaksi antamalla kulkea Dowex AG 50W-X8 (Bio-Rad) -hartsipylvään (natrium-muoto, 20 ml) lävitse. Nukleotidia sisältävät fraktiot konsentroitiin tyhjössä, jolloin saatiin 0,31 millimoolia 5 (61 %).UV: 0,1 M HCl:ssa λ max = 254 ja 299 nm; pH-arvossa 7 λ max =259 ja 284 nm; 0,1 M NaOH:ssa λ max = 259 ja 284 nm; 0,1 M NaOH:ssa max = 259 ja 284 nm. Optinen kierto vedessä pitoisuutena 3,83 g/100 ml oli [a]20 = +43,2° aallonpituudella 589 nm. UV-puhtaus oli 99,1 % ana-10 lyyttisen HPLC:n perusteella (vahva anioninvaihtopylväs eluoituna gradientilla, jonka muodosti 10 mM - IM ammoniumfosfaatti, pH 5,5) ja läsnä oli 0,9 % difosfaat-tia. Osaa trifosfaatista käsiteltiin alkalisella fosfataa-silla (vasikan suolen, Boehringer Mannheim), otettiin 15 näytteitä eri aikoina ja niille suoritettiin ohutkerros-kromatografia (PEI-selluloosa, Brinkman, 1 M LiCl/1 M muurahaishappo 1:1). Havaittiin peräkkäinen muuttuminen trifosf aatista difosfaatiksi ja siitä monofosfaatiksi. Vapautuneen fosfaatin lopullinen määrä määritettiin käyttäen 20 Bencinin menetelmää (Bencini, D. A., Wild, J. R. ja 0'Donovan, G. A., Analytical Biochemistry 132 (1983) 254 - « 258) ja emäs/fosfaatti-suhteen määritettiin olevan ll[; 1,0/2,7.

:"': Esimerkki 33 ί*·4> 25 (IS, 4R)-4-(2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin- 9-yyli) -2-syklopenteeni-l-metanoli-O-difosfaatti (-) -(IS, 4R)-4-(2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin-9-yyli)-2-syklopenteeni-l-metanoli-O-monofosfaatti, joka oli valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 8, muu- • · ···* 3 0 tettiin trietyyliammoniumsuolaksi ottamalla liuos, joka sisälsi 0,49 millimoolia monofosfaattia ammoniumsuolana, l*”; yhdistämällä 5 ml:n kanssa 0,5 M trietyyliammoniumbikarbo- * · « naattia ja kuivaamalla tyhjössä, mitä seurasi toiset 5 ml • « · ;·\ 0,5 M trietyyliammoniumbikarbonaattia, ja toistamalla sit- < i · '> 35 ten kaksi kertaa. Sitten kolme kertaa 5 ml asetonitriiliä 45 105813 lisättiin ja kuivattiin tyhjössä. Tämä liuotettiin 7 ml:aan 1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H)-pyrimidi-nonia (Aldrich), sitten lisättiin 0,39 g 1,1'-karbonyyli-di-imidatsolia (Aldrich, 2,4 millimoolia) ja sekoitettiin 5 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Metanolia (0,16 ml, 4,0 millimoolia) lisättiin ja sekoitettiin 30 minuutin ajan. Tributyyliammoniumpyrofosfaattia (valmistettu vaihtamalla tetranatriumpyrofosfaatin suola vetyyn ioninvaih-tohartsin avulla, neutraloimalla sitten tributyyliamiinil- 10 la ja kuivaamalla, 2,4 millimoolia) lisättiin, sekoitettiin 18 tunnin ajan huoneenlämpötilassa, sitten lisättiin 50 ml vettä. Muodostui sekä O-difosfaattia että O-trifos-faattia, koska tributyyliammoniumpyrofosfaatti sisälsi epäpuhtautena ortofosfaattia.

15 Reaktiotuotteet erotettiin DEAE-Sephadex-ioninvaih- tokromatografiän avulla käyttäen kooltaan 2,5 x 18 cm olevaa DEAE-Sephadex A25 (Pharmacia) -pylvästä, joka oli tasapainotettu 50 mM ammoniumbikarbonaatilla (ABC). Pylvästä pestiin 1 litralla 100 mM ABC ja sitten 2 litran lineaari- 20 sella gradientilla, jonka muodosti 100 - 800 mM ABC, ot- . sikon yhdisteen ja sen jälkeen trifosfaatin eluoimiseksi « · · .kuten on kuvattu yksityiskohtaisemmin esimerkissä 34. Di-.,·, fosfaattia sisältävät fraktiot yhdistettiin, kuivattiin • i i t'·"^ tyhjössä, liuotettiin uudelleen veteen, sitten toistettiin • ·

25 kaksi kertaa, jolloin saatiin otsikon yhdisteen ammo-niumsuola (0,032 mlTIimöolia, 6 % saanto). UV: 0,1 M

• · · '·* ' HCl:ssa λ max = 254 ja 298 nm; pH-arvossa 7 λ max = 259 ja 284 nm; 0,1 M NaOH:ssa λ max = 258 ja 284 nm.

• * ·

Osaa difosfaatista käsiteltiin alkalisella fosfa- « · · ____ ^ a jni 3 0 taasilla (vasikan suolen, Boehringer Mannheim) , otettiin . ··* näytteitä eri aikoina ja niille suoritettiin ohutkerros- • · · - - - *... kromatografia (PEI-selluiöosa, Brinkman, 1 M LiCl/l M muu- • · . ”* rahaishappo 1:1). Havaittiin peräkkäinen muuttuminen ..]·* difosfaatista monofosfaatiksi ja siitä nukleosidiksi.

:\j 35 Vapautuneen fosfaatin lopullinen määrä määritettiin Benci- 105813 46 nin menetelmän avulla (Bencini, D. A., Wild, J. R. ja 0'Donovan, G. A., Analytical Biochemistry 132 (1983) 254 -258) ja emäs/fosfaatti-suhteen määritettiin olevan 1,0/4,7, mikä osoitti läsnä olevan epäorgaanista fosfaat-5 tia.

UV-puhtaus oli 97 % analyyttinen HPLC:n perusteella (vahva anioninvaihtopylväs eluoituna gradientilia, jonka muodosti 10 mM - 1 M ammoniumfosfaatti, pH 5,5).

Esimerkki 34 10 (IS,4R)-4-(2-amino-6-(syklopropyyliamino)-9H-purin- 9-yyli)-2-syklopenteeni-l-metanoli-O-trifosfaatti

Jatkamalla esimerkissä 33 kuvatun pylvään eluointia saatiin haihduttamisen jälkeen otsikon yhdisteen ammonium-suola. Tämä suola muutettiin natriumsuolaksi antamalla 15 kulkea Dowex AG 50W-X8 (Bio-Rad) -hartsipylvään (natrium- muoto, 20 ml) lävitse. Nukleotidia sisältävät fraktiot konsentroitiin tyhjössä, jolloin saatiin 0,4 millimoolia (81 %) . UV: 0,1 M HCl:ssa λ max = 254 ja 299 nm; pH-arvos-sa 7 λ max = 259 ja 284 nm; 0,1 M NaOH:ssa λ max = 259 ja 20 284 nm. Optinen kierto vedessä pitoisuutena 6,14 g/100 ml •tj.: oli [aj° = -47,1° aallonpituudella 589 nm. UV-puhtaus oli 99,5 % analyyttisen HPLC:n perusteella (vahva anioninvaih-: topylväs eluoituna gradientilla, jonka muodosti 10 mM - 1 M ammoniumfosfaatti, pH 5,5) ja läsnä oli 0,5 % difos- « · « 25 faattia. Osaa trifosfaatista käsiteltiin alkalisella fos- « € fataasilla (vasikan suolen, Boehringer Mannheim) , otettiin • · · näytteitä eri aikoina ja niille suoritettiin ohutkerros- tt> kromatografia (PEI-selluloosa, Brinkman, 1 M LiCl/1 M muu- • · *···’ rahaishappo 1:1). Havaittiin peräkkäinen muuttuminen tri- 30 fosfaatista difosfaatiksi, siitä monofosfaatiksi ja siitä ·*·.. nukleosidiksi. Vapautuneen fosfaatin lopullinen määrä mää- ,···. ritettiin Bencinin menetelmän avulla (Bencini, D. A., t ·

Wild, J. R. ja 0'Donovan, G. A., Analytical Biochemistry ···' 132 (1983) 254 - 258) ja emäs/fosfaatti-suhteen määritet- « · *. *: 35 tiin olevan 1,0/2,8.

47 105813

Esimerkki 35 (IS,4R)-4-[2-amino-6-(syklopropyylimetyyliamino)-9H-purin-9-yyli]-2-syklopenteeni-l-metanoli (1S,4R)-4-(2-amino-6-kloori-9H-purin-9-yyli)-2-syk-5 lopenteeni-l-metanolia (274 mg, 1,00 millimoolia), N-syk-lopropyyli-N-metyyliamiinia (0,71 g, 10 millimoolia) ja absoluuttista etanolia (6 ml) . Jäännös kromatografoitiin käyttäen silikageeliä. Otsikon yhdiste eluoitiin 10 % me-tanoli-kloroformilla värittömänä lasina. Haihduttamalla 10 etanoliliuos ja kuivaamalla fosforipentoksidin avulla paineessa 0,2 mmHg saatiin otsakkeen yhdiste valkeana kiinteänä vaahtona (293 mg, 98 %) ; 1H-NMR ja [a] 5829° identtiset esimerkin 11 otsikon yhdisteelle saatujen kanssa.

• · « * · * • · · • · • t · * · · • · # • » · • · » • · $ · * · · » · • · • · · .....

·*· « · · • « · « · · t · • ·

Ml

• M

• · • · · • · . · · f · · • ·· • · • ·

• M

V

« · · • « « « « · « # · V ·

Claims (5)

105813

1. Enantiomeeriset yhdisteet, joilla on kaava VI XjO <vi> R^H N N k jossa A on 2-syklopenteeni-l-metanol-4-yyli (IS,4R)-konfi-10 guraatiossa, R3 on isobutyryyli, asetyyli tai formyyli ja Z on halogeeni, kuten kloori.

2. Enantiomeeriset yhdisteet, joilla on kaava V Z

15 N^VNHR! , ^ (V) R“NH N NH A jossa A on 2-syklopenteeni-l-metanol-4-yyli (IS,4R)-konfi-20 guraatiossa, R2 on formyyli, R3 on isobutyryyli, asetyyli .·. tai formyyli ja Z on halogeeni, kuten kloori. « f * »» · • · · • · * • * · « · f • · • · • · · « · « • t* t« · * · · • · » ··· • · 9 · f · · • · * • · • · · ·· 9 ·

9 M • • ·· • ♦ · • · · , m « « · Ml· • · • · · • « · • * « f 105813