KR100192994B1 - 치료용 뉴클레오시드 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 6-치환된 푸린 카르보시 클릭 뉴클레오시드와 HIV 및 HBV 감염치료에 특히 유용한 그 의학적 치료 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 약학적 제제와 본 발명의 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

치료용 뉴클레오시드
본 발명은 당 잔기 대신에 불포화 카르보시클릭 링(carbocyclic ring)을 함유하는 푸린 뉴클레오시드 유사체 및 그들의 약학적 허용 유도체, 그리고 특정 비루스 감염의 치료 등과 같은 의학 요법에 그들을 사용하는 방법에 관한 것이다.
AIDS(후천성 면역결핍 증후군)란 환자가 치사성 기회감염에 걸리기 쉽게 하는 면역 억제 또는 면역과의 질환이다. 특징적으로 AIDS는 T-세포, 특히 OKT4표면 마커를 함유하는 보조자-유도원(helper-inducer) 아군을 점진적으로 고갈시키는 것에 관련되어 있다.
인체 면역 결핍증 비루스(HIV)는 AIDS 또는 흔히 AIDS 에 선행하는 증세를 갖는 환자로부터 재생할 수 있는 상태로 분리되었다. HIV는 세포를 변성시키는 성질이 있으며, 우선적으로 OKT4마커 함유 T-세포를 감염시켜 파과하는 것으로 알려져 있으며, 현재 이 HIV가 AIDS의 병인학적 매개체로 일반적으로 알려져있다.
HIV가 AIDS의 병인학적 매개체로 밝혀진 이래, AIDS 치료에 유효한 항-HIV 화학 치료제에 대한 수많은 연구가 이루어졌다. 예를 들면, 미합중국 특허 제 4,724,232호에는 3'-아지도-3'-데옥시틴미딘(지도부딘이란 공인된 명칭을 가짐), 그것의 약학적 허용 유도체, 및 AIDS나 관련 임상질환을 포함한 인체의 레트로 비루스 감염증을 치료하는데 그들을 사용하는 방법이 기술되어 있다. Vince 등에 의한 문헌[Antiviral Research, 9(1/2), 120(1998)]은 특정의 카르보시클릭 뉴클레오시드 유사체와, HIV에 이들을 사용하는 것에 대해 기술하고 있다. 1998년 4월 10-14 일 버지니아 윌리암스버그에서 열렸던 항비루스 연구에 관한 제2차 국제회의에서는 카르보비르(Carbovir)로 알려진 (±)-9-(시스-4-(히드록시메틸)-2-시클로펜테닐) 구아닌(NSC-614846)이 개시되었다.
전세계적으로 분포하는 B형 간염 비루스(HBV)가 또다른 매우 중요한 비루스성 병원체이다.
HBV는 아시아 여러 국가에서 가장 만연하며, 사하라 이남 아프리카에서도 성행되고 있다. 이 비루스는 일차 간세포의 암과 병인학적으로 관련되어 있다.
현재 미합중국은 500,000 내지 백만의 감염 보균자 집단이 있는 것으로 추산되고 있다. 보균자의 25% 이상에서 만성 활성 간염이 진행하며 이는 흔히 경변증으로 진행된다. 미합중국에서는 매년 HBV 관련 경변증으로 5000명이 사망하고 있으며, 1000명은 HBV-관련 간암으로 인해 사망하는 것으로 추산된다. 현재 보편적인 HBV 백신이 있기는 하나, 유효한 항-HBV 화합물에 대한 요구는 지속될 것이다. 전세계적으로 2억2천만 명으로 추산되는 지속적인 감염 보균자들은 왁찐 요법으로 인한 혜택을 누릴 수 없으며, HBV-유도 간 질환에 대한 높은 위험은 계속된다. 이 보균자 집단은 풍토성 지역에서 또는 정맥 주사용 약물 중독자 및 동성 연애자 같은 고 위험군에게 있어서 질병의 발생을 영속화하는 민감성 개체의 감염원으로 작용한다. 따라서, 만성 감염을 조절하고 간세포의 암 진행을 감소시키기 위한 유효한 항비루스제가 필요하게 되었다.
HBV 비루스 감염의 임상적 증세는 두통, 열, 불쾌감, 구토, 오심, 식욕 결핍 및 복통등이 있다. 이 비루스의 복제는 인체내에서 수주 또는 여러달 동안 지속되는 회복과정을 가지면서 면역 반응에 의해 조절되지만, 이 감염으로 인해 상기에 개설한 지속적인 만성 간질환이 유발되므로 매우 심각한다.
유럽 특허 명세서 제 349242호에는 6-치환 푸린 카르보시클릭 뉴클레오시드와 이들은 HIV 및 HBV 감염질환 치료 등과 같은 의약 요법에 사용하는 방법이 기술되어 있다. 그러한 뉴클레오시드에는 (±)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필 아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 및 (±)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필메틸아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 화합물이 있는데, 이들은 이들의 관련 거울상 이성질체의 라세믹 혼합물 형태로 각각 존재한다.
본 발명자들은 상술한 화합물중에서 두 가지 화합물 및 이들의 약학적 유도체의 분리된 거울상 이성질체들이 HIV 및 HBV 감염 질환에 대해, 낮은 세포 독성도를 보이면서 바람직한 항비루스 작용을 나타낼 뿐 아니라, 이들 거울상 이성질체들이 그러한 작용을 갖는 화합물 제조의 중간 물질로서 유용하다는 것을 발견했다.
본 발명의 일 양태로서, 하기 일반식(I)의 거울상 이성질체 화합물(enantiomeric compound) 및 그들의 약학적 허용 유도체가 제공된다.
상기 식에서 R은 시클로프로필아미노 또는 N-시클로프로필-N-메틸아미노기이며, A는 (1S, 4R) 또는 (1R, 4S) 구조의 2-시클로펜텐-1-메탄올-4-일기이다. 여기서 상기 화합물과 그 유도체는 각각 상응하는 거울상 이성질체가 거의 없는(예를 들면, 10% w/w 이하, 바람직하게는 5% w/w 이하) 거울상 이성질체의 형태이다.
상기 일반식(I)의 화합물에는 다음 구조를 갖는 화합물이 있다.
R은 상기 정의한 것과 같다.
일반식(I)의 거울상 이성질체 화합물, 즉 상응하는 거울상 이성질체가 거의 없는 화합물은 다음과 같다 :
1) (1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올.
2) (1R,4S)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올.
3) (1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(N-시클로프로필-N-메틸아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올.
4) (1R,4S)-시스-4-[2-아미노-6-(N-시클로프로필-N-메틸아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올.
상기 화합물 1) 및 3) (이하 일반식(I)의 (1S, 4R) 거울상 이성질체 화합물로 언급하며, (-)의 광회전성을 가짐)이 HIV 및 HBV 감염 질환에 대해 특히 강력한 활성을 지니는 것으로 본 발명에 의해 밝혀졌으며, 이들 화합물과 이들의 약학적 허용 유도체가 본 발명의 바람직한 양태에 속한다. 또한 이들 화합물은 투여시에 뇌혈관을 침투하여 HIV 감염 질환의 증상이 감소하는 중추 신경계의 높은 수준의 상기 화합물 또는 이의 활성 대사물을 제공할 수 있다. HIV 및 HBV 감염에 대한 매우 강력한 활성을 고려하면 상기 화합물 1)이 특히 바람직하다. 상기 화합물 1)은 전술한 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(지도부딘)보다 골수 전구 세포에 대하여 상당히 낮은 독성을 지니고 있는 것이 본 발명에 의해 밝혀졌다.
본 발명자는 상기 화합물 2)와 4)의 포스페이트 유도체(이하 일반식 식(1)의 (1R,4S) 거울상 이성질체 화합물로 언급하며 (+)의 광 회전성을 가짐)가 상술한 바와 같은 비루스 감염 질환에 대해 강력한 활성을 지니는 것을 알아냈다. 따라서 이들 포스페이트 유도체는 본 발명의 또 다른 바람직한 양태에 속한다.
일반식(I)와 (1R,4S) 거울상 이성질체 화합물의 포스페이트 유도체란 포스페이트기가 일반식(I)의 1-메탄올기에 결합된 유도체로서 모노-, 디- 및 트리- 포스페이트가 있다.
일반식(I)의 (1R,4S) 거울상 이성질체 화합물 및 이것의 비-포스페이트 유도체는 상기 포스페이트 유도체 제조용 중간체로서 유용하다.
일반식(I)의 (1S,4R) 거울상 이성질체 화합물 및 이것의 약학적 허용 유도체와 일반식(I)의 (1R,4S) 거울상 이성질체 화합물의 포스페이트 유도체는 이하 본 발명의 항비루스 화합물로 지칭한다.
본 발명에 따라 다음과 같은 양태가 제공된다 :
a) 레트로비루스 감염질환 또는 B형 간염 비루스 감염 질환의 치료 및 예방 등과 같은 의약 요법용의 본 발명의 항 비루스 화합물.
b) 사람과 같은 포유류 환자를 본 발명에 의한 항비루스 화합물을 치료학적 유효량으로 치료하는 것으로 구성된 환자의 레트로비루스 감염, 및 B형 간염 감염의 예방 또는 치료 방법.
c) 상술된 감염 또는 증상 중 어느 하나를 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에 본 발명에 의한 항 비루스 화합물을 사용하는 방법.
본 발명에 의해 치료되거나 예방될 수 있는 레트로비루스 감염의 예로는 HIV-1 또는 HIV-2 같은 인체 면역 결핍증 비루스(HIV)에 의한 감염, 및 HITLV-1 또는 HITLV-2 와 같은 인체 T-세포 임파 친화성 비루스(HLTV)에 의한 감염을 포함한다. 본 발명에 의한 화합물은 특히 AIDS 및 AIDS 관련 임상증상, 예를 들면, AIDS-관련 복합증(ARC), 점진 범발성 임파선증(PGL), AIDS 관련 신경증상(예 : 다발성 경화증 또는 국소 대부전마비), 및 무증후성 환자에서와 같은 항-HIV 항체- 양성 및 HIV-양성증상과 혈소판 감소성 자반증의 치료에 유용하다. 상기 화합물들은 또한 건선의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다.
일반식(I)의 (1S,4R) 거울상 이성질체 화합물과 관련하여 약학적 허용 유도체란 일반식(I)의 (1S,4R) 거울상 이성질체 화합물 또는 수용체에게 투여시 상기 거울상 이성질체 화합물 또는 그것의 항 비루스 활성 대사물 또는 잔기를 제공(직접 또는 간접)할 수 있는 기타 화합물의 악학적 허용염, 에스테르 또는 그러한 에스테르의 염을 의미한다.
일반식(I)의 (1S,4R) 거울상 이성질체 화합물의 바람직한 에스테르로는 에스테르 군의 비카르보닐 부위가 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 가령 n-프로필, t-브틸, n-부틸, 알콕시 알킬( 예 ; 메톡시 메틸), 아르알킬( 예 ; 벤질), 아릴옥시 알킬( 예 ; 페녹시메틸), 아릴 (예 ; 할로겐, C1-4알킬 또는 C1-4알콕시 또는 아미노르 치환될 수도 있는 페닐)에서 선택된 카르복실산 에스테르; 알킬 - 또는 아르알킬설포닐( 예 ; 메탄설포닐) 같은 설포네이트 에스테르; 아미노산 에스테르( 예 ; L-발릴 또는 L-이소로이실); 및 모노-, 디- 또는 트리-포스페이트 에스테르가 있다.
일반식(I)의 화합물의 포스페이트 에스테르는 예를 들면, C1-20알코올 또는 그들의 반응성 유도체, 또는 2,3-디(C6-24)아실글리세롤 ( 예 ; 2,3-비스-(헥사노일옥시) 프로필 하이드로겐포스페이트 및 2,3-비스(헥사데칸일옥시)프로필 하이드로겐 포스페이트 유도체에 의해 에스테르화될 수 있다.
또한, 일반식(I)의 화합물의 에스테르화된 포스페이트 유도체외에 일반식(I)의 라세미 화합물의 유도체도 가능하다.
특별한 언급이 없는 한 상술한 에스테르와 관련하여, 알킬 부분은 1내지18개의 탄소원자, 특히 1내지 4개의 탄소원자를 포함하는 것이 유리하다. 그와 같은 에스테르내에 존재하는 아릴 부분은 페닐기를 포함한다.
일반식(I)의 (1S,4R) 거울상 이성질체 화합물의 약학적 허용 산부가염은 아세트산, 락트산, 주석산, 말산, 이세티온산, 락토 비온산 및 숙신산 같은 유기카르복실산염; 메탄설폰산, 에탄 설폰산, 벤젠설폰산 및 p-톨루엔 설폰산과 같은 유기 설폰산의 염 및 염산, 황산, 인산 및 설페이트 메탄설포네이트 설파민산 같은 무기산의 염을 포함한다. 염산염(즉, 모노- 및 디-하이드로 클로라이드)이 특히 바람직하다.
본 발명에 의한 상기 항비루스 화합물은 상기 감염 또는 증상을 치료하기 위해 다른 체료제와 조합 상태로 사용될 수 있다.
그와 같은 치료제의 예로는 비루스 감염, 또는 관련 증상의 치료에 유효한 3'- 아지도-3'-데옥시티미딘(지도부딘); 2',3'-디데옥시시티딘, 2',3'-디데옥시아데노신 및 2',3'-디데옥시이노신 같은 2',3'-디데옥시뉴클레오시드; 비고리형 뉴클레오시드(예 ; 아시클로비르); α-인터페론 같은 인터페론 ; 프로베니시드 같은 신장 분비 역제제 ; 디피리다몰, 딜다젭, 미오-, 리도- 또는 솔루플라진 또는 헥소벤딘 같은 뉴클레오시드 운반 억제제; 뿐만 아니라, 인터류킨 II 및 과립구 대식 세포 콜로니 자극인자와 같은 면역 조절제; 가용성 CD4또는 유전 공학적인 그들의 유도체; 및 포스포토포름산 같은 작용제가 있다. 이와 같은 조합 치료의 성분 화합물들은 개별 또는 조합 제제 상태로 동시 또는 각기 다른 때에, 이를 테면 조합 효과가 얻어지도록 순서대로 투여할 수 있다.
본 명세서에서 활성 성분(들)으로도 기술되는 본 발명에 의한 항비루스 화합물은 경구, 직장, 코, 국소(예 : 구강 및 설하). 질 및 비경구 (예 : 피하, 근육내, 정맥 내 및 피내) 를 포함한 적절한 경로에 의해 치료용으로 투여된다. 또한 바람직한 경로는 수용체의 상태 및 연령, 감염의 특성 및 선택된 활성성분에 따라 변화될 수 있다.
일반적으로 전술한 상태들(예 : AIDS) 각각에 대해 적절한 투여량은 하루에 수용체 체중 1kg당 3.0내지 120mg의 범위, 바람직하게는 하루에 수용체 체중 1kg당 6내지 90mg이며, 가장 바람직하게는 하루에 체중 1kg 당 15내지 60mg 범위내이다. 바람직한 투여량은 일일동안 적절한 간격으로 2,3,4,5,6또는 그 이상의 분할 투여로 제공하는 것이 바람직하다. 이런 분할투여는 단위 투여 형태로, 예를 들면, 활성성분 10내지 1500mg, 바람직하게는 20내지 1000mg, 그리고 가장 바람직하게는 50내지 700mg 을 함유하는 단위 투여형태로 투여될 수 있다.
이상적으로 활성성분은 활성 화합물의 피크 혈장 농도가 약1내지 약75㎛, 바람직하게는 약 2 내지 50㎛, 가장 바람직하게는 약3내지 300㎛이 되도록 투여해야 한다. 이는 예를 들면 임의로는 염수중의 활성성분 0.1 내지 5% 용액을 정맥내 주사하거나 활성성분 약1내지 약 100mg/kg 을 함유한 거환 상태로 경구투여 함으로써 이루어질 수 있다. 바람직한 혈액 농도는 활성성분을 약 0.01내지 약 5.0mg/kg'시간으로 제공하도록 연속 주입시켜 유지하거나, 약 0.4내지 15mg/kg을 함유하는 주입액을 간헐적으로 주입하여 유지시킨다.
활성성분은 단독 투여할 수도 있는 반면, 약학적 제제로 투여하는 것도 바람직하다. 본 발명의 제제는 상술한 1종 이상의 활성 성분과 함께, 1종 이상의 약학적 허용담체 또는 부형제를 포함한다. 제제로는 경구, 직장, 코, 국소(구강 및 설하포함), 질 또는 비경구(피하, 근육내, 정맥내 및 피내 포함) 투여용으로 적절한 것이 있다. 이 제제들은 보통은 단위투여 형태로 제공할 수 있으며, 약학 기술분야에 공지된 방법으로 제조할 수도 있다. 이와 같은 방법은 1종 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 함께 활성성분을 혼합하는 단계를 포함한다. 일반적으로 이 제제는 활성성분을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 둘 모두와 화합 상태로 균질하게 혼합하고, 필요한 경우 그 생성물을 성형하여 제조된다.
경구 투여용으로 적합한 본 발명의 제제는 각각 소정량의 활성성분을 함유하는 캡슐 또는 정제 같은 개별단위로; 과립 또는 분말로; 수성 또는 비수성 액체중의 용액 또는 현탁액으로; 또는 유중수 상태의 액상 에멀젼 또는 수증유 상태의 액상 에멀젼 상태로 제공될 수 있다. 활성성분은 또한 거환, 지약 또는 페이스트 상태로 제공될 수 있다.
정제는 임의로 1종 이상의 보조성분과 함께 압착 또는 성형하여 제조될 수 있다. 압착 정제는 분말 또는 과립 같은 자유 유동상태의 활성성분을 임의로는 결합제(예, 포비돈, 젤라틴, 히드록시프로필메틸 셀룰로스), 윤활제, 불활성 희석제, 방부제, 분해제( 예 : 나트륨 스타치 글리콜레이드, 가교된 포비돈, 가교된 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스), 계면 활성제 또는 분산제와 혼합시켜 적절한 기계에서 압착시켜 제조할 수 있다.
성형된 정제는 불활성 액체 희석제로 습윤시킨 분말 화합물의 혼합물을 적절한 기계에서 성형하여 제조할 수 있다. 이 정제는 코팅할 수도 있고, 문자 등을 새길 수도 있으며, 목적하는 방출 형태를 제공하기 위해, 예를 들면 히드록시프로필 메틸 셀룰로스의 비율을 변화시킴으로써 활성성분을 서방성 또는 조절 방출성이 되도록 제제한다. 정제는 장용 코팅하므로써 위(胃)에서 보다 장 부분에서 방출되도록 할 수 있다.
구강내의 국소 투여용으로 적합한 제제는 향미기제, 통상 슈크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트 같은 기제중에 활성성분을 함유하고 있는 함당정제; 젤라틴 및 글리세린, 또는 슈크로즈 및 아카시아 같은 불활성 기제중에 활성성분을 함유한 향정; 및 적절한 액체 담체중에 활성성분을 함유한 함수제(含嗽劑)가 해당된다.
직장 투여용 제제는 예를 들면 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함한 적절한 기제를 사용한 좌약 형태로 제공될 수 있다.
질 투여용으로 적절한 제제는 활성성분 외에 본 기술분야에서 적절한 것으로 알려진 담체를 함유한 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 발포제제 또는 스프레이 제제 상태로 제공된다.
비경구 투여용으로 적절한 제제로는 항상화제, 완충제, 제균제, 및 제제가 수용체의 혈액과 등장성이 되도록 해주는 용질을 함유하는 수성 및 비수성 등장성 멸균 주사용액; 및 현탁제 및 점도부여제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액이 있다. 이 제제들은 단위 투여형태 또는 다중 투여용 밀봉 용기, 예를 들면 앰풀 및 바이알로 제공될 수 있고, 동결 건조 조건에서 보관되어 사용 직전에 주사용수 같은 멸균 액체 담체를 첨가하기만 하며 사용할 수 있다. 즉시 사용 가능한 주사용액 및 현탁액은 종래 기술된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
바람직한 단위 투여용 제제는 상술된 바와 같이 활성성분의 일일 투여량, 또는 단위, 일일 분할 투여량 또는 적절한 분획분을 함유하는 것들이다.
본 발명의 제제는 상술한 성분들 외에도 해당 유형의 제제에 대해 본 기술분야에 통상적인 기타 제제를 포함할 수 있는데, 예를 들면 경구 투여용으로 적절한 것은 추가로 감미제, 점도부여제 및 향미제를 포함할 수 있다.
하기에서는 본원 발명의 화합물의 독성 실험에 대해서 설명한다.
[CD래트(rat)의 급성 경구 독성 시험(리미트 테스트 ; Limit Test)]
5마리의 수컷 및 5마리의 암컷 찰스 리버(Charles River) CD 래트의 두 그룹 각각에 1592U89 숙시네이트(succinate)를 1800 또는 2000mg/kg 의 단일 경구 투여량 만큼 투여하였다. 투여 후 14일간의 관찰 기간 동안, 매일 임상 징후를 관찰하고, 체중을 1주일마다 측정하였다. 투여 후 14일 경에, 모든 동물을 희생하고 검사하였다.
사망율은 다음과 같다.
메디안 치사량(Median Lethal Dose)(mg/kg) : 2000
암컷에서 사망 전에 나타난 임상 징후에는 활동 감소, 눈물 분비, 하수증 및 타액 분비가 있다. 투여후 기간에는 어떤 징후도 나타나지 않았고, 약제에 연관된 체중 변화도 관찰되지 않았다. 투여 후 14일경 희생시에도, 약제 처리에 연관된 어떤 발견도 육안으로 보여지지 않았다.
본 발명은 또한 하기와 같이 상기 일반식(I)의 화합물 및 그것의 약학적 허용 유도체의 거울상 이성질체 화합물의 제조 방법을 포함한다. 거울상 이성질체 출발물질 및 이들 물질의 전구체(하기 제법에서 사용됨)는 각각 다른 거울상 이성질체가 거의 없는 (일반식(I)의 화합물과 관련하여 상기에서 언급한 정도로)형태로 존재한다.
본 발명의 방법은 다음과 같다 :
A) 하기 일반식(II)의 거울상 이성질체 화합물 또는 그것의 유도체를, 전구체 Z 기를 원하는 R기로 전환시키는 시약이나 조건하에서 처리하거나 ;
B) 하기 일반식(III)의 거울상 이성질체 화합물 또는 그것의 유도체를, 일반식(I)의 목적 화합물에 이미다졸링을 형성하고 R3아미노 보호기를 제거하는 시약과 반응시키거나; 또는 C) 하기 일반식(IV)의 거울상 이성질체 화합물 또는 그것의 유도체를, R3아미노 보호기를 제거하는 시약과 반응시켰고, 임의로 하기 전환 과정 i) 또는 ⅱ)중 하나 또는 둘 다를 수행한다; i) 일반식(I)의 화합물이 형성되는 경우, 이 화합물을 그것의 유도체로 전환시키거나; 또는 ⅱ) 일반식(I)의 화합물의 유도체가 형성되는 경우, 이 유도체를 일반식(I)의 모화합물로 또는 그 유도체로 전환시킨다.
상기 식에서, A와 R은 상기에 정의한 바와 같고, Z는 일반식(I)에 정의된 상기 R기의 전구체기이고, R2는 수소 또는 포르밀기이며, R3은 아실기(예 : 포르밀, 아세틸 또는 이소부티릴 같은 C1-6알카노일기)와 같은 아미노 보호기를 의미한다.
방법 A) 통상적인 방법으로 수행될 수 있다. 예를 들면, 일반식(II)의 화합물 [Z는 이탈기( 예 ; 염소기와 같은 할로기) 이다.]을 적절한 아민 (예 ; 시클로프로필아민 또는 N-시클로프로필-N-메틸아민)으로, 바람직하게는 과량으로 처리하여 상기 정의된 아미노 R기를 도입하는데, 바람직하게는 메탄올이나 에탄올 등의 유기 용매하에서 환류시키거나 50℃ 이상의 온도에서 수행하는 것이 유리하다.
방법 B)는 일반식(III)의 화합물을 고온에서(바람직하게는 75 내지 90℃에서) 임의로 디메틸 아세트아미드 또는 디메틸포름아미드등의 조용매와 함께 포름산이나 반응성 포름산 유도체(예 ; 트리에틸오르토포르메이트 또는 디에톡시메틸아세테이트)와 반응시키는 것이다. 이 반응은 통상 보다 저온(예 ; 25℃)을 이용할 경우에는 일반식(II)의 화합물1당량과 무수 강산을1보다 약 큰 당량, 예를 들면 1.1당량의 에탄설폰산을 첨가하여 수행한다.
방법 C)는 예를 들면, 일반식(IV)의 거울상 이성질체 화합물을 묽은 수성 염산 등의 산성시약과 반응시킴으로써 수행될 수 있다.
방법 A)에서 출발 물질로 사용된 일반식(II)의 화합물은 방법 B)와 유사한 방법, 즉 하기 일반식(V)의 거울상 이성질체 화합물 또는 그것의 유도체를 적절한 시약과 반응시켜서 일반식(II)의 목적 화합물에서 이미다졸링을 형성하고 R3아미노 보호기를 제거함으로써 제조될 수 있다. 상기 반응은 상술된 방법 B)에 기술된 시약과 조건하에서 수행할 수 있다.
상기식에서, A, Z, R2및 R3는 상기 정의와 동일하다.
방법 B)에서 출발물질로 사용된 일반식(III)의 화합물은 방법 A)와 유사한 방법에 의해 상기 일반식(V)의 거울상 이성질체 화합물을 전구체기 Z을 목적하는 R기로 전환시키는 시약 또는 조건으로 반응시켜서 제조할 수 있다.
일반식(IV)의 화합물은 방법 A)와 유사한 방법에 의해 하기 일반식(VI)의 거울상 이성질체 화합물을 전구체기 Z을 목적하는 R기로 전환시키는 시약 또는 조건으로 반응시켜서 제조할 수 있다.
상기식에서, A, Z는 R3는 상기 정의된 것과 동일하다.
상기 일반식(IV)의 화합물은 방법 B) 에 대해 상기에 기술한 대로, 상기 일반식(5)의 거울상 이성질체 화합물을 일반식(6)의 목적 화합물에 이미다졸링을 형성하는 시약 예컨대, 포름산이나 반응성 포름산 유도체등으로 처리하여 제조할 수 있다.
상기 일반식(II), (III), (IV), (V) 및 (VI)의 거울상 이성질체 화합물들은 본 발명의 또 다른 양태인데, 특히 R2가 포르밀기이고/이거나, R3는 C1-6알카노일기(특히, 아세틸 또는 이소부티릴)이고/이거나, Z는 염소기 같은 할로기이다.
(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올, 즉, 바람직한 상기 화합물 1)을 제조하기 위한 특히 바람직한 중간 생성물은 다음과 같다 :
a) (1R,4S)-시스-N-[6-(시클로프로필아미노)-9-(4(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일)-9H-푸린-2-일] 이소부티르아미드;
b) (1R,4S)-시스-N-[4-클로로-5-포름아미도-6-((4-(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일)-2-피리미디딜] 이소부티르아미드;
c) (1R,4S)-시스-N-[4-클로로-5-포름아미도-6-((4-(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일)아미노)-2-피리미니딜] 아세트아미드 ;
d) (1S,4R)-시스-(2-아미노-6-클로로-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올;
e) (1R,4S)-시스-N-[6-클로로-9-(4-(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일)-9H-푸린-2-일] 이소부티르아미드.
상기 기술된 출발 물질로 사용된 일반식(V)의 거울상 이성질체는 하기 일반식(VII)의 화합물 또는 그것의 유도체를 하기 일반식(VIIIa) 또는 하기 일반식(VIIIb)의 거울상 이성질체 화합물 또는 그것의 유도체와 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
상기 식에서, Z, R2및 R3는 상기 정의된 바와 동일하고, R4는 이탈기인데, 예로 염소기 같은 할로기이다.
마지막으로 언급한 반응은 트리에틸아민이나 트리메틸아민같은 3차 아민등의 염기 존재하에서 디메톡시에탄이나 에탄올 같은 유기 용매에서 수행하는 것이 유리하다.
적절한 거울상 이성질체 배열을 갖는 일반식(VIIIa) 또는 (VIIIb)의 화합물은 상응하는 라세믹 화합물, 예로, (±)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올을 임의의 활성 카르복실산(예; 디벤조일-D-타르타르산)과 혼합시키고 수득한 부분 입체 이성질체를 분별 결정함으로써 수득될 수 있다. 또한 효소 분석은 문헌[J. Med. Chem(1987. 30, 746) 및 J. Med. Chem. (1985, 28 1385)]에 기술된 바대로 이용될 수 있다.
일반식(VIIIa) 또는 (VIIIb)의 거울상 이성질체 화합물 및 그것의 유도체, 특히 그것의 염과(1S,4R)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올 같은 디벤조일-D-타르타르산 및 그것의 디벤조일-D-타르트레이트 등의 임의의 활성 카르복실산은 본 발명의 또 다른 양태이다.
상기 출발 물질로 사용된 일반식(VII)의 화합물은 통상적인 방법으로, 예를 들면, 하기 일반식(IX)의 화합물을 환원시켜 NO2기를 NH2기로 전환시키고, 생성된 NH2기를 임의로 포름아미도기로 전환(예 : 포름산/아세트산 무수물로 처리)시킴으로써 제조할 수 있다.
상기 식에서, Z, R3및 R4는 상기 정의와 같다.
일반식(IX)의 화합물은 통상의 방법으로 제조 가능하다. Z가 염소기등의 할로기인 화합물은 하기 일반식(X)의 화합물을 예를 들어, 포스포러스 옥시클로라이드를 사용하여 할로겐함으로써 제조할 수 있다.
상기 식에서, R3와 R4는 상기 정의한 바와 같다.
일반식(X)의 화합물은 통상적인 방법으로, 예를 들면, 하기 일반식(XI)의 화합물을 적절한 시약과 반응시켜서, 예를 들면, 적당한 카르복실산이나 그것의 기능적 등가물( 예 : 이소부티르산 무수물)과 반응시켜서 아미노 보호기를 도입함으로써 제조할 수도 있다.
상기 식에서, R4는 상기 정의와 동일하다.
일반식(XI)의 화합물은 하기 일반식(XII)의 화합물을 니트로화 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
상기 식에서, R4는 상기 정의와 같다.
일반식(VII),(IX), (X) 및 (XI)의 화합물은 본 발명의 또 다른 양태인데, 특히 Z는 염소기 같은 할로기이고/이거나 R3는 C1-6알카노일기(특히, 아세틸이나 이소부티릴기)이고/이거나 R4는 염소기 같은 할로기이다.
본 발명에 따른 일반식(VII), (IX) 및 (X)의 특히 바람직한 화합물은 다음과 같다.
N-(4,6-디클로로-5-포름아미도-2-피리미디닐)이소부티르아미드;
N-(4,6-디클로로-5-니트로-2-피리미디닐)이소부티르아미드; 및 N-(4-클로로-1,6-디히드로-5-니트로-6-옥소-2-피리미디닐)이소부티르 아미드.
일반식(I)의 화합물은 일반적으로 산할라이드나 산무수물 등의 적절한 에스테르화제와 반응시킴으로써 그것의 에스테르로 전환시킬 수 있다. 일반식(I)의 화합물 및 그것의 에스테르는 통상적인 방법에 의해, 예를 들면, 적절한 산으로 처리함으로써 그것의 염으로 전환시킬 수 있다. 일반식(I)의 화합물의 에스테르 또는 염은 예를 들어, 가수 분해시켜 모 화합물로 전환시킬 수 있다.
일반식(I)의 화합물의 O-모노포스페이트는 그것의 모화합물을 문헌[M. Yoshikawa, T. Kato 및 T. Takenishi 의 Bulletin Chem, Soc. (Japan, 1969, 42.3505)]에 기술된 대로 포스포러스 옥시클로라이드 같은 적절한 인산화제로 처리함으로써 제조할 수 있다. 상응하는 O-디 및 O-트리포스페이트는 문헌 [K. H. Sheit의 Nucleotide Analogs(John Wiley and Sons, New York 1980, pp. 211-215)] 및 [D. E. Hoard 와 D. G. Ott 의 J. Amer. Chem. Soc.(1965, 87, 1785)]에 기술된 방법으로 제조할 수 있다. 예를 들면, 관련 O-모노포스페이트의 이미디졸레이트 유도체를 제조하고, 이 유도체를 포스페이트와 반응시켜서 O-디포스페이트를 수득하거나 피로포스페이트와 반응시켜 O-트리포스페이트를 수득할 수 있다.
전술한 에스테르화된 포스페이트 유도체를 제조하기 위해, 일반식(I)의 모화합물을 문헌[S. Shuto 등의 Nucleic Acid Research(1988, 20, p.35)]에 기술된 적당한 포스포리파제 D등의 적절한 포스포리파제의 존재하에 적절한 디-알카노일 포스파티딜콜린 유도체로 처리하거나, 일반식(I)의 화합물을 포스포러스 옥시클로라이드 같은 적절한 인산화제와 반응시킨 후, 문헌[A. Rosowsky S. Kim 의 Nucleic Acid Chemistry, Part 3(L. B. Townsend R. S. Tipson(편집인), John Wiley Sons, New York 1986, 255)]에 기술된 적절한 알콜로 처리할 수 있다.
일반식(I)의 화합물의 거울상 이성질체는 통상적인 방법, 예를 들면 시클로펜테닐 부분의 히드록실기를 적절하게 임의의 활성 카르복실산 유도체 (예 : 나프록센(J. Org. Chem. 1986, 51, 1287))로 아실화 반응시켜 제조된 부분 입체 이성질체 에스테르를 크로마토그래피로 분리함으로써 분리될 수 있다.
하기 실시예는 설명을 목적으로 제시하는 것이지 본 발명의 영역을 제한하는 것은 아니다. 실시예에서, 광학 회전도는 20℃에서 나트륨 D 라인(589nm)에 대한 값이다. 실시예 A 내지 G 에서 사용된 '활성 성분'이란 본 발명의 항 비루스 화합물, 특히 상기 화합물 1)을 뜻한다.
[실시예 1]
[(±)-시스-4-[(2-아미노-4-클로로-6-피리미디닐)아미노]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
시스-4-아세트아미도시클로펜트-2-엔메틸 아세테이트[미합중국 특허 제 4,268,672호](14.88g, 0.073몰)와 바륨 하이드록사이드 옥타하이드레이트(46.19g, 0.146몰)을 질소하 물(300ml)중에서 18시간 동안 환류시켰다. 생성된 용액을 이산화탄소로 중화시켰다. 생성된 침전을 물로 세정한 후 에탄올로 세정했다. 합친 여과액-세정액을 증발시켜서 시럽(11.16g)을 수득했으며, 이것을 환류 1-부탄올(100ml)중의 2-아미노-4,6-디클로로피리미딘 (23.91g, 0.146몰) 및 트리에틸아민(30.5ml, 0.219몰)과 1.5시간동안 축합 반응시켰다. 1N NaOH(73ml)를 첨가한 후, 생성된 혼합물을 증발 건조시키고 잔여 고체를 CHCL3(200ml)중에 슬러리화했다. 미반응의 2-아미노-4,6-이클로로피리미딘을 여과하고 클로로포름(100ml)으로 세정했다. 클로로포름 여과액-세정액을 농축하여 실리카겔 컬럼으로 크로마토그래피했다. 또 다른 피리미딘 출발 물질을 2.5% 메탄올-클로로포름으로 용출시켰다. 3.5% 메탄올-클로로포름으로 용출시켜 표제 화합물을 회백색 고체 포옴(15.90g, 91%)으로 수득하였다.
[실시예 2]
[(±)-시스-4-[(2-아미노-6-클로로-5-[(4-클로로페닐)아조]-4-피리미디닐]-아미노]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 1로부터 수득한 (±)-시스-4-[(2-아미노-4-클로로-6-피리미디닐)아미노]-2-시클로펜텐-1-메탄올(11.58g, 48.1mmol)과 나트륨 아세테이트 트리하이드레이트(97g)을 빙초산(225ml)과 물(225ml) 중에 용해시켰다. 4-클로로벤젠 디아조늄클로라이드의 냉용액(0-5℃)을 4-클로로아닐린(6.74g, 52.8몰), 진한 염삼(14.7ml), 물(52ml) 및 아질산나트륨(물 47ml 중의 4.01g, 58.2mmol) 으로부터 제조하였다. 상기 냉용액을 처음 용액에 5분 동안 적가했다. 생성된 황색 침전을 18시간 후 여과하여 물로 세정하고 에탄올로 추출함으로써 표제 화합물을 진한 황색 분말로 수득했다. (12.56g, 69%) m.p. 218-220℃(분해)
[실시예 3]
[(±)-시스-4-[(2,5-아미노-4-클로로-6-피리미디닐)-아미노]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 2의 표제 화합물(11.67g)을 에탄올(235ml), 빙초산(30ml) 및 물(235ml)중에 현탁시켰다. 상기 혼합물을 질소하에 가열하여 환류시켰다. 아연 더스트(13.5g)를 30분 동안 소량씩 첨가하여 상기 화합물을 용해했다. 반응물을 20분 동안 더 가열한 후 과량의 아연을 고온 용액으로부터 여과하고 에탄올로 세정했다. 여과액을 증발시키고, 잔류물을 클로로포름(1ℓ)과 클로로포름 : 에탄올/4 : 1(1.8ℓ)로 용출하면서 실리카겔컬럼으로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 모아서 용매를 감암하에 제거하여 상기 표제 화합물을 적오렌지 빛깔의 오일(11.2g, 100% 수율)로서 수득했다. 소량 반응으로 정제된 샘플을 엷은 황색 고체로 수득했다(수율 : 76%)
[실시예 4]
[(±)-시스-4-[(2-아미노-6-클로로-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 3의 표제 화합물(약 9.7g)을 디에톡시메틸 아세테이트(100g)에 용해시키고 2일동안 환류시켰다. 용매를 50℃의 고진공하에서 제거하고, 디옥산(40ml)와 0.5N HCl(60ml)을 첨가했다. 반응물을 실온에서 1.25 시간동안 교반하고 냉각시켰다. 반응물을 5N 수산화나트륨 냉용액으로 pH7로 중성화한 후 클로로포름 : 메탄올/3 : 1로 여러회 추출했다. 유기층을 마그네슘 설페이트로 탈수하고, 여과한 후 증발시켰다. 잔류물을 2% 메탄올 - 클로로포름으로 용출하면서 실리카겔컬럼상에서 크로마토그래피로 정제함으로써 상기 표제 화합물 3.7g(수율 46%)을 수득했다. m.p. 138-139℃
[실시예 5]
[(±)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 4의 표제 화합물(0.50g)을 에탄올(40ml)에 용해시키고 시클로프로필아민(0.65ml, 5당량)을 첨가했다. 상기 반응물을 질소하에 6시간동안 환류시켰다. 시클로프로필아민 0.65ml 를 더 첨가한 후, 5.5시간동안 계속 환류시켰다. 용매를 증발시키고, 클로로포름(25ml)과 탄산수소나트륨 포화용액(5ml)을 첨가했다. 수성층을 CHCL3로 여러회 추출하여 미정제 생성물을 수득했다. 이것을 3% 메탄올-에틸아세테이트로 용출하면서 실리카겔 컬럼으로 정제함으로써 (±)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 0.43(80%)을 수득했다. 이것을 아세트 니트릴로 재결정하여 백색분말 0.30g을 수득했다.
m.p. 분해점 93-130℃
융점 : 165℃
[실시예 6]
[(±)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필메틸아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 4로부터 제조된 (±)-시스-4-[(2-아미노-6-클로로-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올(0.53g, 2mmol), N-메틸-N-시클로프로필아민(Karl Industries, Aurora, OH ; 0.8477g, 12mmol) 및 메탄올(20ml)을 Parr 봄(bomb)에 놓고 62℃로 5시간 동안 가열했다. 상기 용액은 농축시킨 후 에탄올로 희석하고 1.0N NaOH를 첨가하여 pH12로 조절했다. 이 용액을 농축하고 잔류물을 3% 메탄올-클로로포름으로 용출하면서 실리카겔컬럼으로 정제했다(0.547g, 91.2%). 상기 샘플을 물-에탄올로 결정화하여 백색분말을 수득했다.
m.p. 130-131℃
[실시예 7]
[(-)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 5의 표제 화합물(0.600g, 2.00mmol)을 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2-(1H)-피리미디논(Aldrich, 12ml)에 용해시켰다. 포스포릴클로라이드(0.76ml, 8.0mmol)을 교반된 냉각(-10℃) 용액에 첨가했다. 3분 후, 냉수(100ml)를 첨가하고, 생성된 용액을 3M 수산화암모늄으로 중화시켰다. 중화된 용액을 물로 1ℓ용량으로 희석한 후 50mM 탄산수소 암모늄으로 미리 평형을 유지한 DEAE Sephadex A 25(Pharmacia)의 2.5×20cm 컬럼에 적용했다. 상기 컬럼을 먼저 50mM 탄산수소 암모늄 4ℓ로 세정했다. (±)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올의 O-모노포스페이트를 50 내지 300mM의 탄산수소나트륨의 2ℓ구배로 용출시켰다. 뉴클레오티드(즉, 상기 0-모노포스페이트)를 함유한 분획물을 증발시킴으로써 탄산수소암모늄이 제거된 백색 분말을 수득했다 : UV 흡광도 측정, 71% ; HPLC에 의해 단일 피크(하기 참조).
크로탈러스 아트록스(Crotalus atrox)(1000 IU, Sigma)로부터의 뱀독 5'-뉴클레오티드 가수분해 효소(EC 3·1·3·5)를 몰(20ml)에 용해된 뉴클레오티드 1.4mmole에 첨가했다. 상기 용액을 37℃에서 22시간동안 항은 처리하고 효소(1000IU)를 더 첨가했다. 3일 더 계속 항온처리했다. 이 시점에서 HPLC 분석(0.4×10cm Whatman Partisil 10 강 음이온 교환 컬럼 ; 5% 메탄올을 함유하는 pH 5.5의 20mM 내지 1M 인산 암모늄의 구배로 용출함 ; 284mM에서 UV 검출) 결과 출발 뉴클레오티드의 50%가 모뉴클레오시드로 탈인산화 반응되었음을 알 수 있었다. 상기 혼합물을 다시 상술한 형태의 DEAE Sephadex 컬럼에 적용했다. 50mM 탄산수소 암모늄 4ℓ로 용출시킴으로써 상기 표제 화합물을 함유하는 분획물을 수득했다. 물을 증발시킨 결과, 백색 분말을 수득했다. 이 물젤을 MeOH : CHCL3/1 : 9로 용출시키면서 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 무색 유리질을 수득했다. 상기 유리질을 아세토니트릴중에서 고형화하여 백색 검형태의 고체로서 (-)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올을 수득했다. 상기 고체를 68℃, 0.5mmHg 하에서 건조하여 고체 포옴을 얻었다(260mg, 라세미체로부터 86%) ; 라세미체(실시예5의 표제 화합물)의 것과 동일한 DMSO-d6중의1H-NMR 및 질량 스펙트럼 ; [α]D 20-59.7°,
50내지 300mM의 탄산수소 암모늄 2ℓ의 구배로 전술한 Sephadex 컬럼을 계속 용출시킴으로써 O-모노포스페이트(표제 화합물에 상응하는 (+) 거울상 이성질체)를 수득했고, 이것은 5'-뉴클로오티드 가수분해 효소에 대해 안정하였다 ; 상기 모노포스페이트의 제법은 실시예 9에 더욱 상세하게 설명되어 있다.
[실시예 8]
[(-)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 O-모노포스페이트]
실시예 7의 표제 화합물(0.35g, 1.2mmol)을 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2-(1H)-피리미디논(Aldrich, 5ml)에 용해시켰다. 포스포릴 클로라이드(Aldrich, 0.43ml, 4.6mmol)을 교반된 냉각(-10℃) 용액에 첨가했다. 3분 후, 냉수(20ml)를 첨가하고 수득한 용액을 3M 수산화 암모늄으로 중화시켰다. 실시예 7에 기술한 이온 교환 크로마토그래피 함으로써 디암모늄염으로서 뉴클레오티드를 얻었는데, 물을 증발시켜서 백색 분말(95%, 수율, UV로 정량 분석)을 수득했다.
실시예 7에서와 마찬가지로 HPLC 분석했더니 단일 피크가 나타났다. UV λmax nM(0.1M HCL) : 254,297 ; (pH 7 인산염 완충 용액) : 259,284(0.1M NaOH) : 259,284. 염기/인산염 비율은 B. Ames(Methods in Enzymology 8 : 115, 1966)의 방법으로 측정된 1.0/1.3 이었다.
[실시예 9]
[(+)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 O-모노포스페이트]
5'-뉴클레오티드 가수분해 효소를 처리한 후 실시예 7의 DEAE Sephadex 컬럼을 50내지 300mM의 탄산수소 암모늄 2ℓ의 구배로 용출시킴으로써 뉴클레오티드를 함유하는 분획을 얻었고, 물을 증발하여 디암모늄염(백색 분말 : 실시예 5의 표제 화합물로부터 56%)으로서 상기 표제 화합물을 수득했고, 실시예 7의 HPLC 분석 결과 단일 피크가 나타났다 ; UV λmax nM(0.1M HCL) : 254,297 ; (pH 7 인산염 완충 용액) : 259,284(0.1M NaOH) : 259,284. 염기/인산염 비율은 1.0/0.98이었다.
[실시예 10]
[(+)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 ]
실시예 9의 표제 화합물(0.67 mmole)을 물(20 ml)에 용해시키고 송아지장 (3000 IU, Boehringer Mannheim)으로부터 취한 알카리 포스포타제(EC 3.1. 3.1)를 첨가했다. 상기 용액을 37℃에서 19시간 항은 처리한 후, 실시예 7과 마찬가지로 HPLC 분석한 결과 뉴클레오티드가 전부 탈인산화 되었음을 알았다. 상기 용액을 증발 건조시키고 잔류 고체를 환류 에탄올(100ml)로 추출했다. 에탄올-가용성 물질을 실리카겔에 흡착시켜서 실리카겔 컬럼에 적용했다. 표제 화합물을 메탄올 : 클로로포름/1:9로 용출시켰다. 아세트니트릴-에탄올 용액을 증발시켜서 백색 고체 포옴을 수득했다(164mg, 79%) ; 라세미체 (실시예 5의 표제 화합물)의 구조와 동일한 DMSO-D6중의1H-NMR 및 질량 스펙트럼을 얻었다 :
[실시예 11]
[(-)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 6의 표제 화합물(2.00g, 6.50mmol)을 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2-(1H)-피리미디논(Aldrich, 20ml)에 용해시켰다. 포스포릴 클로라이드(2.28ml, 24.0mmol)을 교반된 냉각(-10℃) 용액에 첨가했다. 3분 후, 냉수(80ml)을 첨가했다. 상기 용액을 클로로포름(3×80ml)으로 추출했다. 수성층을 에탄올(400ml)로 희석하고, NaOH 포화수용액으로 pH6으로 조절했다. 침전된 무기염을 여과했다. 여과액을 에탄올로 더욱 희석하여 1ℓ용량으로 맞추고, 추가의 NaOH를 첨가하여 pH8로 조절했다. 생성된 침전을 여과하여 건조시킴으로써 (±)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올의 O-모노포스페이트를 백색 분말(4.0mmole, UV 흡광도에 의한 정량 분석, 수율 62%)로 수득했다. 실시예 7의 HPLC 분석 결과 단일 피크로 나타났다. 라세믹 형태인 O-모노포스페이트를 물(20ml)에 용해시키고 크로탈러스 아트록스(5000 IU, Sigma)로부터 취한 뱀독 5'-뉴클레오티드 가수분해 효소(EC 3.1.3.5)를 첨가했다. 37℃에서 10일동안 항은 처리한 후 실시예 7에 기술된 HPLC 분석 결과 출발 뉴클레오티드의 50%가 뉴클레오시드로 탈인산화된 것으로 나타났다. 이들은 50mM 탄산수소 암모늄으로 미리 평행 상태로 유지된 DEAE Sephadex A25(Pharmacia)의 5×14cm 컬럼에서 분리하였다. 상기 표제 화합물은 50mM 탄산수소 암모늄 2ℓ로 용출시켰다. 물을 증발시킴으로써 백색 분말을 수득했고, 메탄올에 용해시켜서 실리카겔에 흡착시킨 후 실리카겔 컬럼에 적용했다. 상기 표제 화합물을 메탄올 : 클로로포름/1:9로 용출시켜서 무색 유리질을 얻었다. 아세토니트릴 용액을 증발시켜서 백색 고체 포옴을 수득했고, P2O5상에서 0.3mmHg 하에서 건조시켰다(649mg, 라세미체로부터 72%) ; 라세미체(실시예 6의 표제 화합물)의 구조와 동일한 DMSO-d6중의1H-NMR 및 질량 스펙트럼을 얻었다 :
100mM 탄산수소 암모늄 2ℓ와 200mM 탄산수소 암모늄 2ℓ로 Sephadex 컬럼을 계속 용출시켜서 상기 표제 화합물에 상응하는 (+) 거울상 이성질체의 O-모노포스페이트를 수득했으며, 이것은 5'-뉴클레오티드 가수분해 효소에 대해 안정하였다.
[실시예 12]
[(+)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필메틸아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 11의 Sephadex 컬럼으로부터 용출된 (+) 거울상 이성질체의 O-모노포스페이트를 함유하는 분획물을 모아서 송아지장(4800 IU, Boehringer Mannheim)으로부터 취한 알카리 포스파타제(EC 3.13.1)를 첨가했다. 상기 용액을 25℃에서 18시간 동안 항온 처리한 후 HPLC 분석 결과 뉴클레오티드가 전부 탈인산화된 것으로 나타났다. 용액을 증발 건조시키고 잔류 고체를 환류 에탄올(100ml)로 추출했다. 에탄올-가용성 물질을 실리카 겔에 흡착시켜서 실리카겔 컬럼에 적용했다. 표제 화합물을 메탄올 : 클로로포름/1:9로 용출시켜서 무색 유리질을 얻었다. 아세토니트릴 용액을 P2O5상에서 0.3mmHg 하에서 증발, 건조시켜 백색 고체 포옴을 수득했다(659mg, 라세미체로부터 73%) ; 라세미체(실시예 6의 표제 화합물)의 구조와 동일한 DMSO-d6의1H-NMR 및 질량 스펙트럼을 얻었다 :
[실시예 13]
[(1S,4R)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올 디벤조일-D-타르트레이트]
(±)-시스-4-아세트아미도시클로펜트-2-엔메틸 아세테이트[미합중국 특허 제4,268,672호](14.88g, 0.073mol)과 바륨 하이드록사이드 옥타하이드레이트 (46.19g, 0.146mol)을 질소하의 물(300ml)중에서 18시간 동안 환류시켰다. 생성된 용액을 이산화탄소로 중화시켰다. 상기 침전물을 물과 에탄올로 세정했다. 합친 여과액을 세정하고 증발시킴으로써 시럽(±)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올의 아세트산염을 얻었는데, 이것을 물중의 과량의 Amberlite IRA-400(CH-) 수지와 함께 교반 시켜서 유리아민으로 전환시켰다. 아민(2.26g, 20.0mmol)과 디벤조일-D-타르타르산(Aldrich, 3.62g, 10.0mmol, 수율 99%)의 샘플을 고온의 무수 에탄올(35ml)에 용해시켰다. 환류중인 아세토니트릴(약 150ml)을 혼탁해질때까지 첨가하고 용액을 실온으로 서서히 냉각시켰다. 형성된 백색 침상 결정체를 동일한 용매 배합으로 3회 재결정하여 상기 표제 화합물을 백색 플레이트로 수득했다(1.07g, 37%) ; m.p. 160-162° ;
; 상기 염의 X선 결정학으로 분석한 결과, 양이온의 절대구조가 D-디벤조일 타르타르산 2가 음이온의 공지된 구조에 의해 고정되는 것으로 나타났다. 상기 염은 비대칭 단위로서 하나의 C6H12NO 양이온과 1/2C18H14O82가 음이온으로 공간기 C2에서 결정화되었다.
[실시예 14]
[(1S,4R)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올 디벤조일-L-타르트레이트]
디벤조일-L-타르타르산을 사용한 것 외에는, 상기 염을 실시예 13에 기술한 바대로 제조하고 결정화했다. 에탄올-아세토니트릴로 3회 결정화하여 상기 표제 화합물을 백색 플레이트(1.00g, 34%)로서 수득했다. ; m.p. 160-162℃ ;
[실시예 15]
[(±)-시스-N-[4-클로로-5-포름아미도-6-[[4-(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일]아미노]-2-피리미디닐]아세트아미드]
96% 포름산(20ml)을 아세트산 무수물(20ml)에 용해된 용액(0.75g, 3.4mmole)에 첨가함으로써 포르밀화시켰다. 상기 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 증발시켜서 황갈색 분말(0.77g, 91%)로서 N-(4,6-디클로로-5-포름아미도-2-피리미디닐)아세트아미드를 수득했다 :1H-NMR과 질량 스펙트럼으로 구조를 확인했다. 상기 황갈색 분말(840mg, 3.37mmol), (±)-시스-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올(940mg, 8.2mmol), 및 트리에틸아민(0.80g, 8.0mmol)을 오일배쓰(70-80℃)내 에탄올(50ml)중에서 질소하에 50분 동안 가온하고, 증발시켜서 수득한 진한 오일을 실리카겔로 크로마토그래피 했다. 상기 표제화합물을 5% 메탄올-클로로포름으로 용출시켜서 복숭아 빛깔의 고체 포옴(840mg)을 수득했다. 메탄올로 결정화하여 백색 과립(575mg, 52%)을 수득했다.
[실시예 16]
[(±)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 15의 표제 화합물(0.91g, 2.79mmol)을 무수 DMF(1m)에 용해시켰다. 트리에틸오르토포르메이트(10ml)와 에탄술폰산(0.29ml, 3.4mmol)을 첨가하고 그 용액을 65℃에서 24시간 동알 가열했다. 이 시럽을 1N HCL(15ml)에 용해시키고 3시간 동안 교반했다. pH를 5N 수산화나트륨으로 7로 조절하고 생성된 혼합물(오일형성)을 i-프로판올:클로로포름/1:3(3×100ml)으로 추출했다. 유기층을 모아서 탈수(MgSO4)하고 증발시켜서 적색 유리질(0.93g)을 수득했다. 메탄올(20ml)중의 유리질 용액을 Parr 봄에서 시클로프로필아민(2ml)과 함께 70℃에서 18시간 동안 가열했다. 수득한 용액을 증발시켜서 진한 유리질을 얻었고, 실리카겔에 흡착시켰다. 7% 메탄올-에틸세테이트로 용출시켜서 아세토니트릴로 분쇄한 후 상기 표제 화합물(148mg, 19%)을 백색 분말로 수득했다. 실시예 5의 표제 화합물의 구조가 동일한1H-NMR(DMSO-d6)을 얻었다.
[실시예 17]
[(+)-(1R,4S)-시스-N-[4-클로로-5-포름아미도-6-{[4-(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일]아미노}-2-피리미디닐]아세트아미드]
실시예 13에 기술된 바대로 제조된(1S,4R)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올디벤조일-D-타르트레이트(2.76g, 9.02mmol)을 물(20ml)에 용해시키고 65ml의 Amberlite IA-400(OH-형태) 음이온 교환 수지 컬럼에 적용했다. 상기 컬럼을 물로 세정했다. 염기성 분획물을 모으고 증발시켜 수득한 오일잔류물을 무수 에탄올의 증발에 의해 그후 0.5mmHg에서 건조시켜(1S,4R)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올(1.2g)을 엷은 황색 오일(공기중에서 급속히 검어진다) 로서 수득한 즉시 사용했다. 상기 오일을 에탄올(5ml)에 용해시키고 실시예 15에 기술된 바대로 제조된 N-(4,6-디클로로-5-포름아미도-2-피리미디닐) 아세트아미드(2.07g, 8.31mmol)와 트리에틸아민(2.50g, 24.8mmol)의 용액에 첨가했다. 생성된 진한 용액을 질소하에서 50분 동안 가열(오일배쓰 75-80℃)했다. 상기 용액을 증발시켜서 수득한 시럽을 실리카겔 컬럼에 적용했다. 표제 화합물을 3내지 5% 메탄올-클로로포름으로 용출시켜서 엷은 황색 고체 포옴(1.59g, 54%)을 얻었다 ; 결정화된 샘플의 구조와 동일한1H-NMR을 얻었다. 상기 샘플을 에탄올로부터 결정화하여 백색 과립을 얻었다. m.p. 194-195℃ ; 실시예 15의 표제 화합물의 구조와 동일한1H-NMR(DMSO-d6)를 얻었다 ;
[실시예 18]
[(-)-(1S,4R)-시스-(2-아미노-6-클로로-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 17의 표제 화합물(1.15g, 3.53mmol)을 질소하에 디에톡실메틸 아세테이트(45ml)중에서 3.5시간 동안 완만하게 환류시켰다. 형성된 엷은 황색 용액을 0.5mmHg에서 농축하여 황색시럽을 수득했다. 상기 시럽을 1N HCL(50ml)중에서 1.0시간 동안 교반했다. 이 용액을 탄산수소나트륨으로 중화한 후 증발 건조시켰다. 고체 잔류물을 메탄올로 추출하고, 메탄올-가용성 물질을 실리카겔 컬럼에 적용했다. 컬럼을 10% 메탄올-에틸아세테이트로 용출시킴으로써 상기 표제 화합물을 엷은 황색 고체포옴(730mg, 78%)으로 수득했으며, 이것은 라세미체(실시예 4의 표제 화합물)의 구조와 동일한1H-NMR(DMSO-d6)을 나타냈다 ;
[실시예 19]
[(-)-(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로포로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
메탄올(12ml)중의 실시예 18의 표제 화합물(560mg 2.11mmol)을 78℃의 Parr 봄에서 시클로프로필아민(2.4ml)과 함께 17시간 동안 가열했다. 용매를 증발시켜서 수득한 잔류물을 실리카겔로 크로마토그래피했다. 표제 화합물을 5-7% 메탄올-에틸아세테이트로 용출시켜서 실시예 7의 화합물과 동일한1H-NMR(DMSO-d6)을 갖는 무색 고체 포옴(367mg, 59%)을 수득했다 ;은 실시예 7의 표제 화합물의 절대 구조를 확인했다.
[실시예 20]
[(1S,4R)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올디벤조일-D-타르트레이트]
2-아자바이시클로[2.2.1] 헵트-5-엔-3-온[Daluge and Vince, J.Org. Chem. 1978, 43, 2311 및 미합중국 특허 제 4,268,672호] (44.0g, 0.400mole)을 25℃에서 메탄올(0.5ℓ)중의 2N HCL에서 1.5시간 동안 교반했다. 휘발성 물질을 증발시켜서 (±)-시스-메틸-4-아미노-2-시클로펜텐-1-카르복실레이트 하이드로클로라이드를 회백색 분말(71.1g)로 수득했다. 상기 샘플을 디에틸에테르로 분쇄하여 m.p. 92.5-95℃인 백색 분말을 수득했다.
(±)-시스-메틸-4-아미노-2-시클로펜텐-1-카르복실레이트 하이드로클로라이드(17.7g, 0.100몰) 및 디이소부틸-알루미늄 하이드라이드 (헥산중의 1M 용액으로 0.500몰)을 헥산(200ml)중에서 6시간 동안 환류시켰다. 생성된 용액을 냉각한 후 1M 수성 염화암모늄(10ml)과 메탄올(200ml)을 차례로 첨가했다. 이 혼합물을 30분동안 환류한 후 MgSO4(10g)을 첨가했다. 고체를 여과하고 추가의 메탄올로 세정했다. 여과액-세정액을 증발시켜 실시예 13에 기술된 바대로 제조된 (±)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올과 동일한1H-NMR(DMSO-d6)을 갖는 진한 오일(15.5g)을 수득했다. 상기 샘플을 실리카겔로 크로마토그래피 정제한 후 (EtOH:CHCL3:NH4OH/10:90:1), 디벤조일-D-타르타르산으로 결정화하여 상기 표제 화합물을 수득했다.
[실시예 21]
[[시스-4-(2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-일)]메틴 R-2,3-비스-(헥사테카노일옥시)프로필하이드로겐 포스페이트]
클로로포름(6ml)중의 L-α-디팔미토일 포스파티딜 콜린(150mg, 0.2mmol)용액을 (±)-시스-4-(2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올(300mg, 1.03mmol), 포스포리파제 D, VII형[스트렙토마이세스(Streptomyces)에서 유래, 1.0mg, 특이활성 185유니트/mg, Sigma) 및 pH 4.5완층용액(0.1N HCL을 첨가하여 pH 4.5 로 조절된 1.5ml의 CaCl2중의 250mM, NaOAc 중의 200mM)을 포함하는 플라스크에 첨가했다. 생성된 두층을 45℃(오일배쓰)에서 1시간 동안 교반했다. 층을 분리하고 수성층을 클로로포름(3×6ml)로 추출했다. 합친 유기층을 1N HCL로 세정하고 탈수하여 농축했다. 상기 샘플을 12% 메탄올-클로로 포름으로 2개의 실리카겔 컬럼으로부터 용출시켜 정제함으로써 상기 표제 화합물(120mg, 수율 47%)을 수득했다. 이 물질을 에틸아세테이트-아세토니트릴로 고체화하여 m.p.가 155-157℃인 엷은 황색 분말을 생성시켰다.
[실시예 22]
[[시스-4-(2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-일]메틸 2,3-비스-(헥사노일옥시)프로필 하이드로겐 포스페이트]
CHCL315ml 중의 L-α-디카프로일 포스파티딜콜린(300mg, 0.66mmol, Sigma)의 용액을 (±)-시스-4-(2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올(378mg, 1.32mmol), 포스포리파제 D, VII형(스트렙토마이세스에서 유래, 1.04Mmg, 특이활성 185 유니트/mg, Sigma), pH 4.5완충액(HCL로 pH 4.5로 조절된 4.5ml의 CaCl2중의 250mM, NaOAc 중의 200mM) 및 CHCL3(3ml)를 포함하는 플라스크에 첨가했다. 생성된 두층을 45℃(오일 배쓰)에서 4시간 동안 교반했다. 층을 분리하고 유기층을 1N HCL(2×4ml)로 세정했다. 합친 수성층을 클로로포름(10ml)로 세척한다. 합친 유기층을 탈수(MgSO4)하고 농축했다. 잔류물을 실리카겔 컬럼에 적용한 후 상기 표제 화합물을 16% 메탄올-클로로포름으로 용출하여 농축함으로써 황색 미세분말을 수득했다. 이 물질을 에탄올에 용해시켜 농축한 후(3×50ml), 고진공하에서 건조시킴으로써 엷은 황색 분말(103mg, 수율 21%)을 수득했다. m.o. 182-185℃.
[실시예 23]
[N-(4-클로로-1,6-디히드로-5-니트로-6-옥소-2-피리미디닐)이소부티르아미드]
이소부티르산 무수물(250ml)와 진한 황산(3-4방울)중에서 상기 황색 고체(14.88g, 78.09mmol)를 100℃로 1시간 동안 가열함으로써 6-클로로-5-니트로이소시토신(J.Chem. Soc. 1960, 5041 ; J. Org. Chem. 1975, 40, 3141)을 보호했다. 생성된 용액을 무수 메탄올(100ml)로 처리하고 50℃에서 30분 동안 교반한 후 처음 부피의 1/3로 농축하고, 엷은 황색 결정질의 상기 표제 화합물(14.97g, 74%)을 여과에 의해 수집했다. m.p. 196-199℃(분해) :
[실시예 24]
[N-(4,6-디클로로-5-니트로-2-피리미디닐)이소부티르아미드]
실시예 23의 표제 화합물(10.0g, 38.37mmol)을 질소하에 포스포러스 옥시클로 라이드(200ml)와 N,N-디에틸아닐릴(3-4방울)중에서 5시간 동안 환류가열했다. 그 용액은 실온으로 냉각하고, 농축 건조하여, 수득한 시럽을 냉각된(약- 10℃) 메틸렌 클로라이드(200ml)에 용해시켰다. 유기층을 탄산수소 나트륨 포화 수용액(100ml)으로 격렬히 교반하면서 처리하고 온도를 5℃이하로 유지했다. 이때, 탄산수소나트륨 고체를 나누어서 첨가함으로써 pH를 5 내지 7로 올렸다. 층을 분리하고 수성층을 메틸렌 클로라이드로 추출했다. 합친 유기층을 상분리용 종이(phase-separator paper)로 여과하고 농축하여 진공하에서 증발시켜 상기 표제 화합물(7.71g, 72%)을 황백색 고체로 수득했으며, 순도가 높아서 정제 없이 다음 단계에 바로 사용했다. 헥산/메틸렌클로라이드로 상기 고체를 재결정하여 분석용 샘플을 제조했다. m.p. 166-169℃ :
[실시예 25]
[N-(4,6-디클로로-5-포름아미도-2-피리미디닐)이소부티르아미드]
실시예 24의 표제 화합물(6.77g, 24.26mmol)을 수소(40psi)압력하에서 미리 10분 동안 교반된, 무수 EtOH 220ml와 래니 니켈 촉매(10.0g, 습윤시)를 포함하는 parr 병에 넣었다. 그 혼합물을 1시간 동안 수소(40psi) 압력하에서 교반하고 셀라이트로 여과하고, 수득한 여과액을 농축함으로써 황백색 고체를 얻었고, 이것은 밤새 진공하에서 건조시켰다. 이 고체를 0℃에서 1,2-디클로로 에탄(250ml)중에서 교반했다. 아세트산 무수물(30ml)을 첨가한 후 포름산(30ml)을 질소하에서 적가했다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 처음 부피의 1/2로 농축하여 톨루엔과 공비시킴으로써 잔류 포름산/ 아세트산을 제거했다. 미정제 고체를 메탄올로 분쇄하여 상기 표제 화합물(4.92g, 73%)을 회백색 고체로 수득했다.
[실시예 26]
[(+)-(1R,4S)-시스-N-[4-클로로-5-포름아미도-6-{[4-(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일]아미노}-2-피리미디닐]이소부티르아미드]
실시예 13에 기술된 바대로 제조된(1S,4R)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올 디벤조일-D-타르트레이트(2.44g, 8.15mmol)을 90% 에탄올(20ml)에 용해시키고 그 용액을 동일 용매로 미리 세정된 Amberlite IRA-400(OH-) 수지(30ml)컬럼에 첨가했다.
90% 에탄올로 용출하여 수득한 염기성 분획물중 톨루엔-에탄올 부분을 농축하고 증발시킴으로써(1S,4R)-4-아미노-2-시클로펜텐-1-메탄올을 엷은 황색 오일(1.4g)로서 수득했고, 이것을 즉시 실시예 25에 기술된 바대로 제조된 N-(4,6-디클로로-5-포름아미도-2-피리미디닐 이소부티르아미드(2.26g, 8.15mmol)와 트리에틸아민(2.3ml, 16.3mmol)을 함유한 1,2-디메톡시에탄(100ml)중에서 95-110℃에서 1.5시간 동안 축합시켰다. 생성된 용액을 증발시켜서 수득한 진한 황색 시럽을 실리카겔상에서 크로마토그래피했다. 상기 컬럼을 5-7.5% 메탄올-클로로포름으로 용출시켜서 상기 표제 화합물을 엷은 황색 고체(2.45g, 84%)로 수득했다. 상기 샘플을 아세토니트릴로 결정화하여 상기 표제 화합물을 백색 미세결정으로 수득했다.
[실시예 27]
[(-)-(1R,4S)-시스-N-[6-(시클로프로필아미노)-9-(4-히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1일)-9H-푸린-2-일]이소부티르아미드]
실시예 26에 기술된 바대로 제조된(+)-(1R,4S)-시스-N-[4-클로로-5-포름아미드-6-{[4-(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일]아미도}-2-피리미디닐]이소부티르아미드(1.949g, 5.44mmol)을 얼음물 배쓰에서 트리에틸오르토포르메이트(30ml)와 교반하면서 진한 염산(2.0ml)을 2분 동안 적가했다. 수득한 맑은 용액을 밤새 주위 온도에서 교반했다. 휘발성 물질을 진공하에서 제거하고 잔류 시럽(1R,4S)-시스-N-[6-클로로-9-(4-히드록시메틸)-2-시클로 펜텐-1-일)-9H-푸린-2-일]이소부티르아미드 오르토에스테르 공역체를 함유함)을 에탄올(30ml)중에서 시클로프로필아민(10g)과 함께 2.5시간 동안 환류했다. 증발시켜 시럽을 얻고, 이것을 10% 이소프로판올-클로로포름(200ml)에 용해시켰다. 이 용액을 탄산수소나트륨 포화 수용액(25ml)과 격렬하게 교반했다. 유기층을 분리하고 수성층을 10% 이소프로판올-클로로포름으로 세정했다. 합친 유기층을 탈수(MgSO4)했다. 탈수한 용액을 증발시켜서 얻은 엷은 황색 유리질(2.4g)을 실리카겔로 크로마토그래피했다. 2-3% 메탄올-에틸아세테이트로 용출하여 상기 표제 화합물을 백색 고체(1.02g, 53%)로서 수득하고; 그 샘플을 메탄올-아세토니트릴로 재결정함으로써 표제 화합물을 백색 침상체로서 수득했다 ; m.p. 197.5-198.5°
상기 컬럼을 5% 메탄올-에틸아세테이트로 계속 용출하여 (-)-(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올이 약 10% 오염된 표제 화합물을 엷은 황색 고체 포옴(928mg)으로서 추가로 수득했다.
[실시예 28]
[(-)-(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올]
실시예 27에 기술된 바대로 제조된 (-)-(1R,4S)-시스-N-[6-(시클로프로필아미노)-9-(4-(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일)-푸린-2-일]이소부티르아미드(1,33g, 3.73mmol)를 1N 염산(40ml)과 주위 온도에서 2일 동안 교반했다. 수산화나트륨으로 pH7로 조절하고 혼합물을 증발 건조시켰다. 잔류 고체를 고온의 EtOH(3×25ml)로 분쇄했다. 에탄올을 증발시켜 남겨진 황색 유리질을 실리카겔로 크로마토그래피했다. 상기 표제 화합물을 3% 에탄올-에틸 아세테이트로 용출하여 무색 고체 포옴(857mg, 80%)으로 수득했는데/실시예 19의 표제 화합물과 동일한1H-NMR 및 [α]20 D를 나타냈다.
[실시예 29]
[(-)-(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 하이드로클로라이드]
(-)-(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올(1.90g,1H-NMR에 의해 약 6.3mol 확인)을 1N 염산(7.0ml)과 에탄올에 용해시켰다. 그 용액을 증발 건조시키고 잔류물을 에탄올(15ml)에 다시 용해시켰다. 에틸아세테이트를 서서히 첨가하여 전체 부피가 80ml이 되게 했다. 생성된 회백색 분말을 여과하여 진공하에서 건조 시킴으로써 상기 표제 화합물(2.07g, 97%)을 수득했따 : m.o.125-130℃에서 붕괴되기 시작하여 138℃이상에서 분해된다.
[실시예 30]
[(-)-(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 디하이드로클로라이드]
(-)-(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올(857mg, 3.00g)을 에탄올-에틸 아세테이트에 용해시키고, 1N 에테르성 염산(12ml)을 첨가했다. 백색 미세 침전을 에틸아세테이트로 세정하고, 진공하에서 건조하여 상기 표제 화합물(642mg, 75%)을 수득했다.
[실시예 31]
[(1S,4R)-4-(2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올 O- 디포스페이트]
실시예 9에 기술된 바대로 제조된 (+)-(1R,4S)-4-(2-아미노-6-(시클로 프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올 O-모노포스페이트를 다음과 같은 방법으로 트리에틸 암모늄염으로 전환시켰다. 상기 모노포스페이트 0.5mmol을 함유하는 용액을 암모늄염으로 취한 후 0.5M 트리에틸암모늄 탄산수소산염 10ml 과 혼합하고 진공해서 건조시킨 후 다시 0.5M 트리에틸암모늄 탄산수소산염 10ml 을 첨가하고 건조시켰다. 그 후, 10ml의 아세토니트릴을 3회 첨가하고, 진공에서 건조시켰다. 이것을 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2-(1H)-피리미디논(Aldrich)10ml에 용해시키고 1,1'-카르보닐 디이미다졸(Aldrich, 2.6mmol) 0.43g을 첨가하여 실온에서 2시간동안 교반했다. 메탄올(0.18ml, 4.5mmol)을 첨가하고 30분동안 교반했다. 트리부틸암모늄 피로포스페이트(Sigma, 1.2g, 2.6mmol)을 첨가하여 실온에서 18시간 교반한 후, 트리부틸암모늄 피로포스페이트(2.2 mmol) 1g을 추가로 첨가하여 40℃에서 8시간 교반하고, 물 50ml를 첨가했다. 트리부틸암모늄 피로포스페이트가 오르토포스페이트 불순물을 포함하고 있었기 때문에 0-디포스페이트와 0-트리포스페이트 둘다 생성되었다.
반응 생성물을 50mM 탄산수소 암모늄(ABC)으로 평형을 유지시킨 DEAE Sephadex A25(Pharmacia)의 2.5×1.8cm 컬럼에서 DEAE Sephadex 이온 교환 크로마토그래피에 의해 분리했다. 상기 컬럼을 50mM ABC 1로 세정하고, ABC의 농도를 50에서 800mM로 변화시키면서 2ℓ의 양으로 세정함으로써 상기 표제 화합물을 용출시킨 후 실시예 32에서 더욱 상세하게 설명되는 바와 같이 트리포스페이트를 용출시켰다. 디포스페이트를 포함하는 분획을 합치고, 진공에서 건조시키고, 물에 재용해시킨 후, 다시 건조시키므로써 상기 표제 화합물의 암모늄염(0.077mmol, 수율 15%)을 수득했다.
UV 스캔 : 0.1M HCL 에서, λmax=254 및 298mm ; pH 7에서, λmax=259 및 284 mm ; 01.M NaOH 에서, λmax=259 및 284mm
디포스페이트의 분취량을 알카리 포스파타제(송아지장, Boehringer Mannheim)으로 처리하여 다양한 시간 간격으로 샘플을 만들고 박막 크로마토그래피 (PEI-셀룰로오즈, Brinkman, IM LiCL/1M 포름산 1:1)상에 전개했다. 디포스페이트가 모노포스페이트로, 그리고 다시 뉴클레오시드로 연속 전환됨을 관찰했다. 방출된 포스페이트 최종양은 Bencini 법 (Bencini, D.A., Wild, J.R., 및 O'Donovan, G.A. Analytical Biochemistry 132:254-258(1983))에 의해 측정했고, 염기/포스페이트 비율이 1.0/11.5 인 것으로부터 무기 포스페이트가 존재함을 알 수 있었다. UV 순도는 HPLC 분석시 99.8% 였다. (pH가 5.5인 인산암모늄의 농도를 10mM에서 10M로 변화시키면서 용출시키는 강음이온 교환 컬럼.)
[실시예 32]
[(+)-(1S,4R)-4-(2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올 O - 트리포스페이트]
실시예 31에 기술된 컬럼을 계속 용출하고 증발시켜 상기 표제 화합물의 암모늄염을 수득하였다. 이 염은 Dowex AG 50W-X8 (Bio-Rad) 수지컬럼(나트륨 형태, 20ml)을 통과하여 나트륨 염으로 전환되었다. 뉴클레오티드를 함유하고 있는 분획물들은 진공 상태에서 농축함으로써 0.31 mmol(61%)를 수득하였다.
UV 스캔 : 0.1M HCL 에서, λmax=254 및 299nm ; pH 7에서, λmax=259 및 284 nm ; 01.M NaOH 에서, λmax=259 및 284nm, 3.83g/ 100ml 농도에서 물에서의 광학 회전은 589nm에서 [α]20=+43.2°였다. UV 순도는 분석용 HPLC(pH5.5인 인산암모늄의 농도를 10mM에서 1M로 변화시키면서 용출하는 강음이온 교환 컬럼)로 99.1% 였는데, 0.9%는 디포스페이트가 존재함을 암시한다. 소량의 트리포스페이트는 알카리 포스파타제(송아지 장, Boehringer Mannheim)로 처리한 후 다양한 시간 간격으로 샘플을 만들고, 박막 크로마토그래피 (PEI-셀룰로오스, Brinkman, 1M Licl/1M 포름산 1:1)상에 전개시켰다. 트리포스페이트에서 디포스페이트로, 디포스페이트에서 모노포스페이트로, 모노포스페이트에서 뉴클레오시드로 연속적 전환이 관찰되었다.
최종적으로 방출되는 포스페이트의 양은 Bencini 법 (Bencini, D.A., Wild, J.R., 및 O'Donovan, G.A. Analytical Biochemistry 132 : 254-258(1983))에 따라 결정되었으며, 측정된 염기/포스페이트의 비율은 1.0/2.7 이었다.
[실시예 33]
[(1S,4R)-4-(2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올 0-디포스페이트]
실시예 8과 같은 방법으로 제조된 (-)-(1S,4R)-4-(2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올 O- 모노포스페이트는 모노포스페이트 0.49mmol 을 함유하는 용액을 암모늄 염으로 취하여, 0.5M 트리에틸암모늄 탄산수소산염 5ml와 혼합시켜 진공상태에서 건조시킨 다음, 0.5M 트리에틸암모늄 탄산수소산염 5ml를 더 혼합시켜 상기 공정을 두 번 반복함으로써 트리에틸 암모늄염으로 전환시켰다. 그 후 아세토니트릴 5ml를 3회 첨가하여 진공상태에서 건조 시켰다. 이것을 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2(1H)-피리미디논(Aldrich) 7ml 에서 용해시킨 후, 0.39g의 1,1'-카르보닐 디이미다졸(Aldrich, 2.4mmol)을 가하여 실온에서 30분 동안 교반했다. 메탄올(0.16ml, 40 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 트리부틸암모늄 피로포스페이트(이온 교환 수지에서 테트라소듐 피로 포스페이트염을 수소로 교환한 후, 트리부틸아민으로 중화시켜 건조함, 2.4mmol)를 가하여 실온에서 18시간 교반시킨 후 50ml의 물을 가했다. 상기 트리부틸암모늄 피로포스페이트가 오로토포스페이트 불순물을 함유함으로 인해 0-디포스페이트와 0-트리포스페이트가 둘다 생성되었다.
상기 반응 생성물들은 50mM 암모늄 탄산수소산염(ABC)과 평형 상태를 이룬 DEAE Sephadex A25(Pharmacia)의 2.5×18cm 컬럼에서 DEAE Sephadex 이온 교환 크로마토그래피에 의해 분리하였다. 상기 컬럼을 10mM ABC 1ℓ로 세정한 후 ABC의 농도를 100에서 800mM로 비례 변화시키면서 세정(2ℓ)하여 상기 표제화합물을 용출하고 실시예 34에 더욱 상세히 기재하는 바와 같이 트리포스페이트를 용출했다. 디포스페이트를 함유하는 분획물을 합치고 진공에서 건조시키고 물에 재용해시킨 후 상기 과정을 2회 반복함으로써 상기 표제화합물의 암모늄염(0.032 mmol, 수율 6%)을 수득했다. UV 스캔: 0.1M HCL에서, λmax=254 및 298nm : pH 7에서, λmax=259 및 284 nm ; 01.M NaOH 에서, λmax=259 및 284nm
소량의 디포스페이트를 알카리 포스파타제(송아지장, Boehringer Mannheim)로 처리하고 다양한 시간 간격으로 샘플을 만들고 박막 크로마토그래피 (PEI-셀룰로오즈, Brinkman, IM LiCL/1M 포름산 1:1)상에 전개했다. 디포스페이트에서 모노포스페이트로, 모노포스페이트에서 뉴클레오시드로의 연속 전환이 관찰되었다. 최종적으로 방출된 포스페이트의 양은 Bencini (Bencini, D.A., Wild, J.R., 및 O'Donovan, G.A. Analytical Biochemistry 132 : 254-258 (1983))법에 의해 결정되었고 측정된 염기/포스페이트 비율이 1.0/4.7 이었는데, 이 것은 무기 포스페이트의 존재를 암시하는 것이다.
UV 순도는 분석용 HPLC (pH 5.5인 인산암모늄의 농도를 10mM에서 1M로 변화시키면서 용출하는 강음이온 교환컬럼)로 97%였다.
[실시예 34]
[(1S,4R)-4-(2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올 0-트리포스페이트]
실시예 33의 컬럼을 계속 용출하여 증발시킴으로써 상기 표제화합물의 암모늄염을 수득했따. Dowex AG 50W-X8(Bio-Rad) 수지컬럼(나트륨형태, 20ml)을 통과시킴으로써 상기 염을 나트륨염으로 전환시켰다. 뉴클레오티드를 함유하는 분획물을 진공하에서 농축하여 0.4mmol (81%)을 수득했다. UV 스캔: 0.1M HCL에서, λmax=254 및 299nm : pH 7에서, λmax=259 및 284 nm ; 01.M NaOH 에서, λmax=259 및 284nm, 6.14g/100ml의 농도에서 물중의 광학 회전은 589nm에서 [α]20=-47.1°였다. UV순도는 분석용 HPLC(pH 5.5인 인산암모늄의 농도를 10mM에서 1M로 변화시키면서 용출하는 강음이온 교환 컬럼)로 99.5%였는데 0.5%는 디포스페이트가 존재함을 암시한다. 소량의 트리포스페이트를 알카리 포스파타제(송아지장, Boehringer Mannheim)로 처리하고 다양한 시간 간격으로 샘플을 만들고 박막 크로마토그래피 (PEI-셀룰로오즈, Brinkman, IM LiCL/1M 포름산 1:1)상에 전개시켰다. 트리포스페이트에서 디포스페이트로, 디포스페이트에서 모노포스페이트로, 모노포스페이트에서 뉴클레오시드로의 연속 전환이 관찰되었다. 최종적으로 방출된 포스페이트의 양은 Bencini (Bencini, D.A., Wild, J.R., 및 O'Donovan, G.A. Analytical Biochemistry 132 : 254-258 (1983))법에 의해 결정되고 측정된 염기/포스페이트 비율이 1.0/2.8 이었다.
[실시예 A]
[정제용 제제]
하기 제제 A, B 및 C는 포비돈 용액에서 성분들을 습윤 과립화하고 마그네슘 스테아레이트를 첨가한 후 압축시킴으로써 제조된다.
하기 제제 D와 E는 혼합된 성분을 직접 압축함으로써 제조된다. 제제 E의 락토오즈는 직접 압축 형태이다(Dairy Grest - Zeparox)
제제 F(조절 방출 제제)
상기 제제는 포비돈 용액으로 하기 성분들을 습윤 과립화한 후 마그네슘 스테아레이트를 첨가하여 압축시킴으로써 제조된다.
익물은 약 6-8 시간에 걸쳐 방출되며 12시간 후에 종결된다.
[실시예 B]
[캡슐제제]
제제 A
캡슐제제는 상기 실시예 A의 제제 D의 성분을 혼합하여 2-부분 경질 젤라틴 캡슐에 충전시킴으로써 제조된다. 제제 B(상기)는 유사한 방법으로 제조된다.
제제 C의 캡슐은 마크로골 4000BP를 용융시키고 그 용융액에 상기 활성 성분을 분산시켜서 그 용융액을 2-부분 경질 젤라틴 캡슐에 충전시킴으로써 제조된다.
제제 D의 캡슐은 활성성분을 레시틴과 땅콩오일에 분산시키고 그 분산액을 연질 탄성 젤라틴 캡슐에 충전시킴으로써 제조된다.
제제 E (조절 방출 캡슐)
하기 조절 방출 캡슐 제제는 성분 a,b 및 c를 압출기로 압출한 후, 그 압출물을 타원체화하고 건조시킴으로써 제조된다. 건조된 펠릿을 방출 조절용 막(d)로 코팅하여 2-부분 경질 젤라틴 캡슐에 충전시킨다.
[실시예 C]
활성성분을 다량의 물(35°- 40℃)에 용해시키고, pH를 적당량의 염산이나 수산화나트륨으로 4.0내지 7.0으로 조절한다. 각 배치를 물로 일정 용량으로 제조한 후 멸균 미세공 필터로 여과시켜서 멸균된 10ml 호박색 유리병(유형 1)에 넣고 멸균 밀봉한다.
[실시예 D]
상기 활성성분을 글리코푸롤에 용해시킨다. 벤질알콜을 첨가하고 용해시킨다. 3ml가 될 때까지 물을 첨가한다. 상기 혼합물을 멸균 미세공 필터로 여과하여 멸균된 3ml 황갈색 유리병(유형 1)에 담고 밀봉한다.
[실시예 E]
상기 활성성분을 글리세롤과 다량의 정제수의 혼합물에 용해시킨다. 벤조산 나트륨의 수용액을 상기 용액에 첨가한 후, 소르비톨 용액과 향료를 차례로 첨가한다. 정제수로 일정용량을 제조하고 잘 혼합한다.
[실시예 F]
Witepsol H15의 5/1을 최대 45℃의 증기-제킷 팬에서 용융시킨다. 활성 성분을 200㎛체로 걸러서 용융물에 첨가하여 고른 분산액을 얻을 때까지 절단 헤드가 장착된 실버슨(Silverson)으로 혼합한다. 상기 혼합물을 45℃에서 유지하면서 남은 Witepsol H15를 현탁액에 첨가하고 균질한 혼합물이 되도록 교반한다. 현탁액 전체를 계속 교반하면서 250㎛ 스테인레스강 스크린으로 통과시킨 후 40℃로 냉각시킨다. 38℃내지 40℃의 온도에서 상기 혼합물 2.02g을 적당한 2ml 플라스틱 금형에 충전시킨다.
좌약을 실온에서 냉각시킨다.
[실시예 G]
페서리는 상기 성분을 직접 혼합하여 수득한 혼합물을 직접 압축시킴으로써 제조된다.
항 비루스 활성
a) 항 - HIV 활성
(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올을 문헌 [Averett, D.R.의 J. Virol. Methods (23, 1989, 263-276)]에 기술된 방법으로 MT4세포에서 항-HIV 활성에 대한 시험을 하여 IC50이 4.0± 1.4㎛ (10회 평균)임을 밝혀냈다.
b) 항 - HVB 활성
문헌 [Sells 등의 PNAS 84 : 1005, 1987와 J. Virol 62 : 2836, 1988]에 기술된 HepG2, 2.2.15의 인체 HBV 생산 세포주는 HBV 만성간염 간세포의 특징을 다수 공유하는 것으로 알려졌다. 침팬지에서 질병을 일으키는 능력으로 그 감염성이 입증되었다.
항-HBV 활성에 대해 화합물들을 시험하기 위해, 단일층 배양을 상기 시험 화합물로 (10일 동안 50-200㎛)처리했다. 세포의 비리온 DNA(Dane 입자)를 함유하는 상청액 배지를 3,6및 10일에 채집하여 단백질 분해효소 K (1mg/ml)와 나트륨 도데실 설페이트(1%)로 처리하고, 50℃에서 1시간 동안 배양했다. DNA를 동일 용량의 페놀로 추출한 후, 클로로포름으로 추출하고, 아세트산 암모늄과 프로판올로 침전을 형성했다. DNA 침전물을 용해시켜서, 문헌[Schleicher 와 Schuell(SS, 10 Optical Ave., Keene, NH 03431, Publication #700, 1987)]의 방법으로 니트로 셀룰로오즈상에 회수한 후, 문헌 [Southerm, J.Mol.Biol., (98, 503, 1975)]에 기술된 대로 처리했다. 세포들을 채집하여 구아니딘 이소티오시아네이트로 용해시킨 후 세포내 DNA를 수득했다. 세포내 DNA를 세포외 DNA와 동일한 방법으로 처리했다. 아세트산 암모늄과 프로판올로 침전시킨 후, 세포내 DNA 침전물을 용해시킨 후, 제한 엔도뉴클레아제 Hind III로 절단하여, 아가로즈 겔에 도포하고, Southern의 문헌에 기술된 대로 처리하여 복제 중간체 형태의 양을 측정했다. 배지로 압출되는 Dane 입자의 양의 적어도 100배의 감소 및 세포내 복제 중간체의 유사한 감소를 측정함으로써 약물의 항 비루스 효과를 측정하였다.
(1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(N-시클로프로필-N-메틸아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올을 상기 방법으로 시험했는데, 이것은 100㎛에서 강력한 항-HBV 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.

Claims (19)

  1. 상응하는 거울상 이성질체가 거의 없는 (1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(시클로프로필아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 화합물.
  2. 상응하는 거울상 이성질체가 거의 없는 (1S,4R)-시스-4-[2-아미노-6-(N-시클로프로필-N-메틸아미노)-9H-푸린-9-일]-2-시클로펜텐-1-메탄올 화합물.
  3. 제1항에 있어서, 상응하는 거울상 이성질체가 10% w/w 미만으로 존재하는 화합물.
  4. 제1항에 있어서, 상응하는 거울상 이성질체가 5% w/w 미만으로 존재하는 화합물.
  5. 제1항에 따른 화합물의 약학적 허용 염, 에스테르 또는 그 에스테르의 염으로서, 상기 에스테르는, 에스테르 기의 비-카르보닐 부위가 직쇄 또는 분지쇄 C1-18알킬, 알콕시알킬, 아르알킬, 아릴옥시알킬 또는 아릴에서 선택되는 카르복실산 에스테르; C1-18알킬-또는 아르알킬설포닐에서 선택되는 설포네이트 에스테르; 아미노산 에스테르; 및 모노-, 디- 또는 트리-포스페이트 에스테르에서 선택되는 약학적 허용 염, 에스테르 또는 그 에스테르의 염.
  6. 레트로비루스 감염된 예방 또는 치료용으로, 1종 이상의 약학적 허용 담체 또는 부형제와 함께, 제1항에 따른 화합물을 함유하는 약학적 제제.
  7. 제6항에 있어서, 상기 레트로비루스 감염이 인간 면역결핍증 비루스(HIV) 감염인 약학적 제제.
  8. 제7항에 있어서, 경구 투여에 적합한 약학제 제제.
  9. 제7항에 있어서, 비경구 투여에 적합한 약학적 제제.
  10. 제7항에 있어서, 사용자 체중 1kg 당 3.0 내지 120mg 범위의 일일 투여량을 갖는 약학적 제제.
  11. 하기 일반식(II)의 (1S, 4R) 거울상 이성질체 화합물을 시클로프로필아민으로 처리하여 시클로프로필아미노의 최종 목적 기를 도입하는 것을 포함하는, 제1항에 따른 화합물의 제조 방법.
    상기 식에서, A는 (1S,4R)형태의 시클로펜텐-1-메탄올-4-일 기를 나타내고, Z는 이탈기(leaving group)를 나타낸다.
  12. 하기 일반식(III)의 (1S,4R)거울상 이성질체 화합물을 포름산 또는 반응성 포름산 유도체와 반응시키는 것을 포함하는, 제1항에 따른 화합물의 제조 방법 :
    상기 식에서, A는 제11항에서 정의한 바와 같고, R은 시클로프로필아미노를 나타내고, R2는 수소 또는 포르밀기를 의미하며, R3은 아미노 보호기를 의미한다.
  13. 하기 일반식(IV)의 (1S,4R) 거울상 이성질체 화합물을 R3아미노 보호기를 제거하는 적용제와 반응시키는 것을 포함하는 제1항에 따른 화합물의 제조 방법 :
    상기 식에서, A 및 R은 제12항에서 정의한 바와 같고, R3은 아미노 보호기이다.
  14. 상응하는 거울상 이성질체가 거의 없는 (1S,4R)-시스-(2-아미노-6-클로로-9H-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올.
  15. 하기 일반식(III)의 (1S,4R) 및 (1R,4S) 거울상 이성질체 화합물 및 이것의 유도체 :
    상기 식에서, A는 (1S,4R)또는 (1R,4S) 형태의 시클로펜텐-1-메탄올-4-일 기를 나타내고, R은 시클로프로필아미노 또는 N-시클로프로필-N-메틸아미노를 나타내고, R2은 수소 또는 포르밀기를 나타내며, R3은 C1-6알카노일 기를 나타낸다.
  16. 하기 일반식(IV)의 (1S,4R) 또는 (1R,4S) 거울상 이성질체 화합물 및 이것의 유도체:
    상기 식에서, A 및 R은 제15항에서 정의한 바와 같고, R3은 C1-6알카노일기를 의미한다.
  17. 제16항에 있어서, 상응하는 (1S,4R) 거울상 이성질체가 거의 없는 (1R,4S)-시스-N-[6-(시클로프로필아미노)-9-(4-(히드록시메틸)-2-시클로펜텐-1-일)-9H-푸린-2-일] 이소부티르아미드인 화합물.
  18. 제2항에 따른 화합물의 약학적 허용 염, 에스테르 또는 그 에스테르의 염으로서, 상기 에스테르는, 에스테르 기의 비-카르보닐 부위가 직쇄 또는 분지쇄 C1-18알킬, 알콕시알킬, 아르알킬, 아릴옥시알킬 또는 아릴에서 선택되는 카르복실산 에스테르; C1-18알킬 - 또는 아르알킬설포닐에서 선택되는 설포네이트 에스테르; 아미노산 에스테르 ; 및 모노-, 디- 또는 트리-포스페이트 에스테르에서 선택되는 약학적 허용 염, 에스테르 또는 그 에스테르의 염.
  19. 제13항에 있어서, 추가로 하기 전환 반응 중 하나 또는 둘다를 어떤 원하는 순서로 수행하는 것을 포함하는 방법 : i) 제1항의 화합물이 형성되는 경우, 상기 화합물을 약학적으로 허용가능한 상기 화합물의 염, 에스테르 또는 그 에스테르의 염으로 전환시키는 반응 ; 또는 ⅱ) 제1항의 화합물의 약학적 허용 염, 에스테르 또는 그 에스테르의 염이 형성되는 경우, 상기 약학적 허용 염, 에스테르 또는 그 에스테르의 염을 제1항의 모(母) 화합물로 또는 추가의 약학적 허용 염, 에스테르 또는 그 에스테르의 염으로 전환시키는 반응 ; 여기서, 상기 에스테르는, 에스테르 기의 비-카르보닐 부위가 직쇄 또는 분지쇄 C1-18알킬, 알콕시알킬, 아르알킬, 아릴옥시알킬 또는 아릴에서 선택되는 카르복실산 에스테르 ; C1-18알킬- 또는 아르알킬설포닐에서 선택되는 설포네이트 에스테르 ; 아미노산 에스테르 ; 및 모노-, 디- 또는 트리-포스페이트 에스테르에서 선택된다.
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