CN1054981A

CN1054981A - 治疗核苷

Info

Publication number: CN1054981A
Application number: CN91100671A
Authority: CN
Inventors: 苏珊·玛丽·达卢格
Original assignee: Wellcome Foundation Group
Current assignee: Wellcome Foundation Group; Wellcome Foundation Ltd
Priority date: 1989-12-22
Filing date: 1990-12-21
Publication date: 1991-10-02
Anticipated expiration: 2005-12-21
Also published as: NL990028I1; DE69033197T2; DE19975058I1; HU9008407D0; HU9902543D0; SK280216B6; CA2033044A1; ES2133138T3; TW371660B; SK658390A3; IL96748A0; GR3031100T3; RU2068849C1; IL96748A; EP0434450A3; FI906367A0; TW473466B; DE69033197D1; HK1009600A1; JPH11158160A

Abstract

本发明涉及6-取代嘌呤碳环核苷及其在医疗上的用途，特别是对HIV和HBV感染的治疗作用。本发明环涉及药物制剂和制备本发明化合物的方法。

Description

本发明涉及含有不饱和碳环代替糖基的嘌呤核苷类似物，它的药理学上可以接受的衍生物及其在医疗上的应用，尤其是用于治疗某些病毒性感染。

AIDS（获得性免疫缺乏综合症）是一种使患者易受致死性偶然感染的免疫抑制性或免疫破坏性疾病。其特点是，AIDS与T-细胞的，尤其是携带OKT⁴表面标记的辅助诱发物亚群的进行性衰竭相联系。

从AIDS患者或时常有先于AIDS症状的患者体内，可再生地分离出了人类免疫缺乏病毒（HIV）。HIV是细胞病毒，似乎优先感染并破坏带有OKT⁴标记的T-细胞，现在普遍认为HIV是AIDS的病原物。

自从发现HIV是AIDS的病原物，已经提出过许多可能对治疗AIDS患者有效的抗-HIV化学治疗剂。例如，美国专利4，724，232公开了3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷（它具有已被审定的名称：叠氮胸苷），它的药理学上可接受的衍生物及其在治疗人类逆病毒感染，它包括AIDS及有关的临床病症。Vin等（Antiviral Research，9（1/2），120（1988））公开了一些碳环核苷类似物及其抗HIV的作用。在第二届抗病毒研究国际会议上（VA，1988年4月10-14日），Willia-msburg公开了（±）-9-（顺-4-（羟甲基）-2-环戊烯基）鸟嘌呤（NSC-614846），它也被称作Carbovir。

在世界范围内，乙型肝炎病毒（HBV）是另一个能产生严重后果的病毒病原体。它在亚洲国家最为普遍，并在非洲亚撒哈拉地区流行。从病原学上来讲，这种病毒与原发性肝细胞癌有关。

据估计美国现有50万至1百万的传染性携带者人群。25%以上的携带者会发展成慢性活动性肝炎，而且常发展为肝硬化。据估计，在美国每年有5千人死于与HBV有关的肝硬化，而且，可能有1千人是死于与HBV有关的肝癌。即使有了通用的HBV疫苗，对抗-HBV有效化合物的需求也仍然存在。据估计，世界上有2亿个持久性感染携带者，这一庞大的寄主群将不能从接种疫苗中获益，并继续处于发生HBV诱发的肝病的高危状态。该携带者群体作为易受感染个体的感染源，使这种疾病的影响永久存在，尤其是在疾病的流行地区或高危人群中，如IV药物滥用者和同性恋者。因此，对于控制慢性感染和减少发展成肝细胞癌二者来说，都亟需有效的抗病毒制剂。

感染HBV病毒的临床表现有：头痛、发烧、不适、恶心、呕吐、厌食和腹痛。病毒的复制通常会受到免疫响应的控制，对于人类，有一个持续数周或数月的复原过程。但是，感染可能更为严重，会导致如上所述的持久的慢性肝病。

欧洲专利说明书No.349242中公开了一些6-取代嘌呤碳环核苷及其在医疗方面的应用，尤其是在治疗HIV和HBV感染方面的用途。这类核苷中有（±）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇和（±）-顺-4-〔2-氨基-6-环丙基甲氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇这两种化合物，即，每一种化合物都以它的相关对映体的外消旋混合物形式存在。

现在，我们已经发现，上面提及的两种化合物分离的单个对映体及其药用衍生物具有有益的抗病毒活性，尤其是抗HIV和HBV感染，并具有低细胞毒性和/或用它作为制备具有这种活性的化合物的中间体。

根据本发明的一个特征，提供了具有下列通式的对映体化合物：

（其中，R表示环丙氨基或N-环丙基-N-甲氨基基团，而A表示（1S，4R）或（1R，4S）构型的2-环戊烯-1-甲醇-4-基）及其衍生物（如酯，盐和酯的盐），所述化合物及其衍生物是以基本上不含（例如，低于10%（W/W），低于5%（W/W）更好）相应对映体的一种对映体形式存在。

应理解，式（Ⅰ）化合物包括具有下列构型的化合物：

（这里R是如前面所定义的基团）。

式（Ⅰ）的对映体化合物，即基本上不含相应对映体，包括：

1）（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇;

2）（1R，4S）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇;

3）（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（N-环丙基-N-甲氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇;

4）（1R，4S）-顺-4-〔2-氨基-6-（N-环丙基-N-甲氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇。

上述化合物1）和3），以下被称作式（Ⅰ）的（1S，4R）对映体化合物，具有负（-）旋光性，发现它具有抗HIV和HBV感染的特别有效的活性，而且，这些化合物及其药理学上可接受的衍生物代表了本发明的优选实施方案。该化合物还具有另外的优点：使用后，能够透过血-脑障碍，为中枢神经系统提供高含量的该化合物或它的活性代谢物，特别使HIV感染现象减弱。考虑到它的抗HIV和HBV感染的异常有效的活性，特别优选的是上述化合物1）。还发现，该化合物对骨髓原细胞的毒性明显比上述3′-叠氮-3′-脱氧胸苷（叠氮胸苷）的低。

我们还发现上述化合物2）和4）的磷酸酯衍生物，以下称作式（Ⅰ）的（1R，4S）对映体化合物，具有正（+）旋光性，并有抗病毒感染的有效活性，如上所述。因此，这些磷酸酯衍生物代表本发明另一个优选实施方案。

式（Ⅰ）的（1R，4S）对映体化合物的“磷酸酯衍生物”在这里是指那些磷酸基团与式（Ⅰ）的1-甲醇基团相连的衍生物，包括一磷酸、二磷酸和三磷酸酯衍生物。

式（Ⅰ）的母体（1R，4S）对映体化合物及其非磷酸酯衍生物，可用作制备上述磷酸酯衍生物的中间体。

上述式（Ⅰ）的（1S，4R）对映体化合物及其药理学上可接受的衍生物，以及式（Ⅰ）的（1R，4S）对映体化合物的磷酸酯衍生物以下被称作本发明的抗病毒化合物。

根据本发明的其它特征，我们还提供了：

a）用于医疗，尤其是用于治疗或预防逆病毒感染或乙肝病毒感染的本发明的抗病毒化合物;

b）一种治疗或预防逆病毒和乙肝病毒对发病体，例如哺乳动物如人感染的方法，包括用治疗学上有效量的本发明的抗病毒化合物处理发病体;以及

c）本发明抗病毒化合物在生产用于治疗或预防上述任何感染或症状的药剂方面的用途。

能用本发明方法治疗和预防的逆病毒感染的例子，包括人的逆病毒感染，如人类免疫缺乏病毒（HIV）、HIV-1、HIV-2和人的T-细胞亲淋巴病毒（HLTV），例如HTLV-Ⅰ或HTLV-Ⅱ感染。本发明的抗病毒化合物对AIDS和有关的临床症状，如与AIDS相关的综合症（ARC）、进行性全面淋巴结病（PGL），与AIDS相关的神经病，如多发性硬化或热带下身轻瘫，以及抗-HIV抗体阳性和HIV阳性无症状病人，和血小板减少紫斑症的治疗特别有用。该化合物还可用于牛皮癣的治疗和预防。

与式（Ⅰ）的（1S，4R）对映体化合物有关的“药理学上可接受的衍生物”，是指式（Ⅰ）的（1S，4R）对映体化合物的任何药理学上可接受的盐、酯或酯的盐，或其它任何在受体使用以后，能够生成（直接地或间接地）这样一种对映体化合物，或它的有抗病毒活性的代谢物或残余物的化合物。

优选的式（Ⅰ）的（1S，4R）对映体化合物的酯包括羧酸酯类，其中酯基的非羰基部分选自直链或支链烷基，例如正丙基、叔丁基、正丁基，烷氧基烷基（例如甲氧基甲基），芳烷基（如苄基），芳氧基烷基（如苯氧基甲基），芳基（如，选择性地被卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基或氨基取代的苯基）;磺酸酯类，如烷基-或芳烷基磺酰酯（例如，甲基磺酰酯）;氨基酸酯类（例如，L-缬氨酰酯或异亮氨酰酯）;以及一磷酸、二磷酸或三磷酸酯类。

式（Ⅰ）化合物的磷酸酯，可以通过C_1-20醇或其活性衍生物进一步酯化，或通过2，3-二（C_6-24）酰基甘油，如2，3-双-（己酰氧基）丙基磷酸氢酯和2，3-双-（十六酰氧基）丙基磷酸氢酯衍生物进一步酯化。除了这些进一步酯化的式（Ⅰ）化合物的磷酸酯衍生物之外，本发明还包括式（Ⅰ）的外消旋化合物的衍生物。

至于上述酯类，除非有其它说明，存在的任何烷基部分以含有1～18个碳原子为宜，尤其是含有1-4个碳原子更好。存在于这种酯上的任何芳基部分以包括一个苯基为宜。

式（Ⅰ）的（1S，4R）对映体化合物的药理学上可接受的酸加成盐，包括与合适的酸，例如有机羧酸，如乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、羟乙磺酸、乳糖酸和琥珀酸;有机磺酸，如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸，和无机酸，如盐酸、硫酸、磷酸、和硫酸盐、甲磺酸盐、氨基磺酸产生的一代盐或二代盐。特别优选的是盐酸盐（即，一代和二代盐酸盐）。

本发明的上述抗病毒化合物可以与其它治疗剂一起使用，用于治疗上述感染和病症。这类其他治疗剂的例子包括对治疗病毒感染或相关的病症有效的药剂，如3′-叠氮-3′-脱氧胸苷（叠氮胸苷）、2′，3′-二脱氧核苷，如2′，3′-二脱氧胞苷、2′，3′-二脱氧腺苷和2′，3′-二脱氧肌苷，无环核苷（例如，无环鸟苷），干扰素，如α-干扰素，肾排泄抑制剂，如内磺舒，核苷转移抑制剂，如潘生丁、克冠二氮

、迈阿氟嗪、利多氟嗪或索罗氟嗪、或克冠二胺，免疫调节剂，如白细胞间素Ⅱ和粒性白细胞巨噬细胞刺激因子，可溶的CD₄或它的遗传工程衍生物，以及膦酰基甲酸。这种综合治疗的化合物组分可以以单个制剂或混合制剂的形式同时使用，或者在不同时间，例如顺续地使用，以取得综合效果。

本发明的抗病毒化合物在此处还被称作活性成份，可采用任何适当途径在治疗时使用，包括口服、直肠使用、鼻吸、局部使用（包括在面颊和舌下使用），阴道和非经肠道使用（包括皮下、肌内、静脉和真皮内的）。可以知道优选的使用途径是随着受治疗者的病情和年龄、感染的性质及选择的活性成分而改变的。

一般，上述每种情况（例如AIDS）的合适剂量是在每天每公斤受体（例如人）体重使用3.0～120毫克范围内，在每天每公斤体重6～90毫克范围内更好，在每天每公斤体重15-60毫克范围内最好。最好将需要的剂量再分成2、3、4、5、6或更多的次分剂量，在一天中以适当的间隔使用。这些次分剂量可以单位剂量的形式使用，例如，每单位剂量形式含活性成份10～1500毫克，20～1000毫克更好，50～700毫克最好。理想地，活性成份的使用以能获得活性化合物的峰血浆浓度在大约1～75μM范围内，在大约2～50μM范围内更好，在大约3～30μM范围内最好。这可以通过静脉注射0.1～5%的活性成份溶液（可选择盐水溶液），或口服含有大约1～100毫克/公斤活性成份的大药丸来实现。可以通过连续输液以提供每小时每公斤约0.01～5.0毫克活性成份或通过间歇输液输入每公斤含有约0.4～15毫克活性组分的液体来维持理想的血液含量。

尽管可以单独使用活性成份，但最好将它制成药物制剂形式。本发明的制剂包括至少一种上述活性成份，和至少一种药理学上可接受的载体或赋形剂。制剂包括适于口服、直肠、鼻吸、局部（包括面颊和舌下）、阴道或非肠道（包括皮下、肌内、静脉和真皮内）使用的制剂。这些制剂可很方便地制成单位剂量形式，并能用药学领域任何熟知的方法制备。这些方法包括将活性成份同构成一种或一种以上附属成份的载体混合的步骤。一般，该配方通过将活性成份同液态载体或细碎的固体载体或二者均一而紧密的混合在一起来制备，然后，如果必要，使产品成型。

本发明用于口服的制剂可以制成分离的单位，如含有预定量的活性成份的胶囊剂和片剂;粉剂和颗粒剂;溶解在水溶液或非水液体里的溶液和悬浮液;水包油型乳状液或油包水型乳状液。还可将活性成份制成大药丸、药糖剂或软膏。

片剂可以通过压缩和模制生产，可有选择地含有一种或一种以上的附加成份。压缩的片剂可以通过在一台合适的机器里压缩自由流动形式的活性成份，如粉或颗粒来制备，并有选择地同粘合剂（例如，聚烯吡酮、明胶、羟丙基甲基纤维素）、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂（例如，羟基乙酸淀粉钠、交联的聚烯吡酮、交联的羧基甲基纤维素钠）、表面活性剂或分散剂混合。

通过在一台合适的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物的混合物，可生产出模制片剂。可以有选择的将片剂包衣或刻痕并可以调配，以便使活性成份能缓慢地或有控制的释放出来，例如，用不同比例的羟丙基甲基纤维素，能产生理想的释放形式。可以有选择地让药片具有肠涂层，以使其在肠子里部分释放，而不是在胃里。

适于在口腔局部使用的制剂，包括由活性成份在香料基质，通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍胶里组成的锭剂，由活性成份在惰性基质，如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯树胶里组成的软锭剂;以及由活性成份在适当的液体载体里形成的嗽口剂。

适于直肠使用的制剂可制成具有合适基质，包括如可可油或水杨酸盐的栓剂。

适于阴道使用的制剂可制成除含有活性成份之外还含有本领域已知的合适载体的阴道药栓、棉塞、乳膏、凝胶、软膏、泡沫或喷雾剂。

适于非肠道使用的制剂，包括水的和非水的等渗灭菌注射溶液，它可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和使得制剂与预计的受体血液等渗的溶解物;和水的和非水的灭菌悬浮液，它可以含有悬浮剂和增稠剂。该制剂可制成单剂量或多剂量密封容器形式，例如，安瓿或管形瓶，并能在冷冻干燥（冻干）条件下保存，使用之前，只需马上加入灭菌的液体载体，如注射用水。临时的注射溶液和悬浮液，可以由前文所述的灭菌粉剂、颗粒剂和片剂制备。

优选的单位剂量制剂，是如上文所述的那些含有供一天用的有效成份的剂量或单位，供一天用的次分剂量，或这种剂量的合适的分装。

应当理解，除了上面特别提到的那些成份以外，本发明制剂还包括本领域常见的其他剂，这涉及所述制剂的类型，例如，适于口服的那些制剂可进一步包括增甜剂、增稠剂和调味剂。

本发明还包括下列用于制备上述式（Ⅰ）的对映体化合物及其衍生物的方法。如下文所述，在本方法的反应中用到的对映体原材料和它的前体都是以基本上不含（例如，纯到上面在讲述化合物（Ⅰ）时所说的那种程度）另外的对映体的一种对映体形式存在。本发明的方法包括：

A）用一种试剂或在一定条件下处理式（Ⅱ）的对映体化合物：

（其中，A如上文所定义，而Z表示式（Ⅰ）中所定义的所述的R基团的前体基团）或它的衍生物以便将前体Z基团转化为需要的R基团;或

B）将式（Ⅲ）的对映体化合物：

（其中，A和R如上文所定义，R²表示氢或甲酰基，而R³则表示氨基保护基团，例如，酰基，如C_1-6链烷酰基，例如，甲酰基、乙酰基或异丁酰基）或其衍生物与一种试剂起反应，以生成在需要的式（Ⅰ）化合物上的咪唑环，随后除去R³氨基保护基团;或

C）将式（Ⅳ）的对映体化合物：

（其中，A和R如上文所定义，R³是氨基保护基团，例如，上述与式（Ⅲ）有关的保护基）或它的衍生物与一种试剂起反应，以便除去R³氨基保护基团，并有选择地，以任何需要的顺序进行下列转化的一个或二个：

ⅰ）形成式（Ⅰ）化合物后，将该化合物转化成它的衍生物;或

ⅱ）形成式（Ⅰ）化合物的衍生物后，将其转化成式（Ⅰ）的母体化合物或其他的衍生物。

方法A）可以用常规方法完成，例如，用一种合适的胺，即环丙胺或N-环丙基-N-甲胺，处理式（Ⅱ）化合物，其中，Z表示离去基团（例如，卤基团，如氯基团）。最好引入过量的上述氨基R基团，最好在回流或高于50℃的温度下，在有机溶剂，如甲醇或乙醇存在条件下反应。

方法B）可以通过将式（Ⅲ）化合物与甲酸或甲酸的活性衍生物（例如，原甲酸三乙酯或乙酸二乙氧基甲酯），并有选择地用共溶剂，如二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺，在高温下最好在75-90℃起反应来完成。通过加入1当量多一点的强无水酸，例如，每当量式（Ⅲ）化合物用1.1当量的乙基磺酸，该反应就可以很方便地在较低温度（例如25℃）下得以完成。

方法C）可以通过将式（Ⅳ）的对映体化合物与一种酸性剂，如稀的含水盐酸起反应来实现。

在方法A）中被用作原料的式（Ⅱ）化合物，可以用与方法B）类似的方法制备，即通过将式（Ⅴ）的相应的对映体化合物：

（其中，A、Z、R²和R³均如上文所定义）或它的衍生物与一种试剂起反应，以形成所需要的式（Ⅱ）化合物中的咪唑环，并除去R³氨基保护基团。可以采用上面讲述方法B）的那些试剂或条件完成该反应。

在方法B）中被用作原料的式（Ⅲ）化合物，可以通过与上述方法A）类似的方法，用一种试剂或在一定条件下处理式（Ⅴ）的对映体化合物，以便将前体基团Z转化为需要的R基团来制备。

上文中提到的式（Ⅳ）化合物，可以通过将式（Ⅵ）的对映体化合物：

（其中，A、Z和R³如上文所定义）与一种试剂或在一定条件下反应，以便将前体基团Z转化为需要的R基团来制备，即与方法A）所述方法类似。

上述式（Ⅵ）化合物，可以通过将式（Ⅴ）的对映体化合物与一种试剂起反应，以便形成需要的式（Ⅵ）化合物中咪唑环。例如，用甲酸或甲酸的活性衍生物进行处理，如在上述方法B）中所述。

上述式（Ⅱ）、（Ⅲ）、（Ⅳ）、（Ⅴ）和（Ⅵ）的对映体化合物，尤其是其中的R²表示甲酰基和/或R³表示C_1-6链烷酰基，特别是乙酰基或异丁酰基，和/或Z表示卤基，如氯基团的那些化合物，是本发明的另外的特征。

用于制备（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇，即上述优选的化合物1）的特别优选的中间体包括：

a）（1R，4S）-顺-N-〔6-（环丙氨基）-9-（4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基）-9H-嘌呤-2-基〕异丁酰胺;

b）（1R，4S）-顺-N-〔4-氯-5-甲酰胺基-6-（（4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基）氨基）-2-嘧啶基〕异丁酰胺;

c）（1R，4S）-顺-N-〔4-氯-5-甲酰胺基-6-（（4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基）氨基）-2-嘧啶基〕乙酰胺;

d）（1S，4R）-顺-（2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇;

e）（1R，4S）-顺-N-〔6-氯-9-（4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基）-9H-嘌呤-2-基〕异丁酰胺。

如上所述，被用作原料的式（Ⅴ）的对映体化合物，可以通过将式（Ⅶ）化合物：

（其中，Z、R²和R³如上文定义，而R⁴表示离去基团，例如，卤基，象氯基团）或它的衍生物与式（ⅧA）或（ⅧB）的对映体化合物或它的衍生物起反应来制备。

刚刚提到的反应，最好在有碱，如叔胺，象三乙胺或三甲胺存在条件下，在有机溶剂，如二甲氧基乙烷或乙醇中进行。

具有合适对映体构型的式（ⅧA）或（ⅧB）化合物，可以通过将相应的外消旋化合物，即（±）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇与旋光活性羧酸（例如，联苯甲酰-D-酒石酸）络合，然后分级结晶所得非对映体盐而获得。另一方面，也可以采用在J.Med.Chem.，1987，30，746和J.Med.Chem.，1985，28，1385中所述的酶催化方法。

式（ⅧA）或（ⅧB）的对映体化合物或它的衍生物，尤其是它与旋光活性羧酸，如联苯甲酰-D-酒石酸所形成的盐，例如（1S，4R）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇和它的联苯甲酰-D-酒石酸盐，是本发明的又一个特点。

被用作上述原料的式（Ⅶ）化合物，可以用常规方法制备，例如，通过还原式（Ⅸ）化合物：

（其中，Z，R³和R⁴如上文定义）以进行NO₂基团向NH₂基团的转化，并有选择地将所得NH₂基团转化为甲酰胺基，例如，通过用甲酸/乙酸酐处理。

可以用常规方法制备式（Ⅸ）化合物。例如，可以通过用磷酰氯卤化相应于式（Ⅹ）的化合物来制备这些化合物，其中Z表示卤，如氯基团。

（其中，R³和R⁴如上文定义）。

式（Ⅹ）化合物也可以用常规方法制备，例如，通过将式（Ⅺ）化合物：

（其中，R⁴如上文所定义）与一种合适的试剂反应，以便引入氨基保护基团，例如，通过与合适的羧酸或它的功能等同物，如异丁酸酐起反应。式（Ⅺ）化合物可以通过硝化相应的式（Ⅻ）化合物来制备。

（其中，R⁴如上文所定义）。

式（Ⅶ）、（Ⅸ）、（Ⅹ）、和（Ⅺ）的化合物，尤其是其中的Z表示卤基，如氯基团，和/或R³表示C_1-6链烷酰基，特别是乙酰基或异丁酰基，和/或R⁴表示卤基，如氯基团的那些化合物，是本发明的另一些特点。

本发明特别优选的式（Ⅶ）、（Ⅸ）和（Ⅹ）化合物包括：

N-（4，6-二氯-5-甲酰胺基-2-嘧啶基）异丁酰胺;

N-（4，6-二氯-5-硝基-2-嘧啶基）异丁酰胺;和

N-（4-氯-1，6-二氢-5-硝基-6-氧代-2-嘧啶基）异丁酰胺。

一般，式（Ⅰ）化合物通过与合适的酯化剂，例如酰基卤或酐起反应，可转化成它的酯。用常规方法，例如用合适的酸处理，可将式（Ⅰ）化合物，包括它的酯转化成它的盐。式（Ⅰ）化合物的酯或盐也可以转化成母体化合物，例如通过水解。

因此，可以通过用磷酰化剂，例如磷酰氯处理母体制备式（Ⅰ）化合物的O-单磷酸酯，如M.Yoshikawa，T.Kato和T.Takenishi在Bulletin Chem.Soc.Japan，1969，42，3505中所述。通过K.H.Sheit，在“Nucleot-ide Analogs”（John Wiley and Sons，New York，1980，pp.211-215）一书中和D.E.Hoard和D.G.Ott.在J.Amer.Chem.Soc.（1965，87，1785）中所讲述的方法，可制备出相应的O-二磷酸酯和O-三磷酸酯。例如，通过制成相关的O-单磷酸酯的咪唑化衍生物，并通过将这种衍生物依次与磷酸酯起反应生成O-二磷酸酯或与焦磷酸酯反应生成O-三磷酸酯。为了制备上面提到的酯化磷酸酯衍生物，可以用合适的二-烷酰基磷脂酰胆碱衍生物在合适的磷脂酶，例如磷脂酶D存在的条件下处理式（Ⅰ）的母体化合物，如S.Shuto等在Nucleic Acid Research（1988，20，page 35）中所述;或者通过将式（Ⅰ）化合物与一种合适的磷酰化剂，如磷酰氯起反应，接着再用合适的醇处理，如A.Rosowsky和S.Kim在Nucleic Acid Chemistry，第3册（编者：L.B.Townsend & R.S.Tipson，JohnWiley & Sons，New York，1986，255）中所述。

式（Ⅰ）的对映体化合物可以用常规方法溶解或分离，例如，通过色谱分离用合适的旋光性羧酸衍生物，如甲氧基甲基萘乙酸（J.Org.Chem.1986，51，1287）酰化环戊烯基部分的羟基所制备的非对映体酯类。

以下的实施例只是用来说明本发明的，从任何意义上讲都不是用来限制本发明范围的。在这些实施例中，旋光度是在20℃相对于钠D线（589nm）测定的。实施例A-G中所用的术语“活性成份”是指本发明的抗病毒化合物，尤其是上述化合物1）。

例 1

（±）-顺-4-〔（2-氨基-4-氯-6-嘧啶基）氨基〕-2-环戊烯-1-甲醇

在氮气保护下，顺-4-乙酰氨基环戊-2-烯甲基乙酸酯〔美国专利4，268，672〕（14.88g，0.073mol）和氢氧化钡八水合物（46.19g，0.146mol）在水（300ml）中回流加热18小时。所得溶液用CO₂中和。沉淀物先用水洗，后用乙醇洗。合并的滤洗液蒸发成浆状（11.16g），用2-氨基-4，6-二氯嘧啶（23.91g，0.146mol）和三乙胺（30.5ml，0.219mol）在回流的1-丁醇（100ml）里缩合1.5小时。在加入1N NaOH（73ml）后，将所得混合物蒸发干燥，并将残留固体混入CHCl₃（200ml）中。将未反应的2-氨基-4，6-二氯嘧啶滤出，并用氯仿（100ml）洗涤。将氯仿的滤洗液浓缩，并在硅胶柱上进行色谱分离。多余的嘧啶原材料用2.5%的甲醇-氯仿洗脱。标题化合物用3.5%的甲醇-氯仿洗脱，产物呈灰白色固体泡沫体状（15.90%，91%）¹H-NMR：（Me₂SO-d₆）δ 1.15-1.28和2.26-2.41（2m，2，CH₂）;2.60-2.71（m，1，1′-H）;3.4（m，重叠，H₂O，CH₂OH）;4.625（t，J＝5.3，1，CH₂OH）;4.95（brs，1，CH-N）;5.67-5.87（m，2，CH＝CH）;6.38（brs，1，NH₂）;7.12（brs，1，NH）;MS（CI）M+1，241，243。

元素分析：

计算值（C₁₀H₁₃N₄OCl 0.2H₂O）：

C，48.99;H，5.55;N，22.85;Cl，14.46。

测定值：C，49.10;H，5.57;N，22.81;Cl，14.40。

例 2

（±）-顺-4-〔（2-氨基-6-氯-5-〔（4-氯苯基）偶氮〕-4-嘧啶基〕-氨基〕-2-环戊烯-1-甲醇

将来自例1的（±）-顺-4-〔（2-氨基-4-氯-6-嘧啶基）氨基〕-2-环戊烯-1-甲醇（11.58g，48.1mmol）和三水合乙酸钠（97g）溶解在冰醋酸（225ml）和水（225ml）中。由4-氯苯胺（6.74g，52.8mol）、浓盐酸（14.7ml）、水（52ml）和亚硝酸钠（4.01g，58.2mmol）在47ml水中的溶液）制备氯化4-氯重氮苯冷溶液（0-5℃）。在5分钟内将该冷溶液滴加到第1个溶液中去。18小时以后过滤所得的黄色沉淀，用水洗涤，并用乙醇萃取，得到标题化合物，暗黄色粉末（12.56g，69%），m.p.（熔点）218～220℃。

¹H-NMR：（Me₂SO-d₆）δ 10.25（d，1，NH）;7.69和7.54（二者d，J＝8.9，C₆H₄）重叠7.6（br，6，NH₂）;5.80-5.95（m，2，CH＝CH）;5.24（m，1，CHN）;4.75（t，1，CH₂OH）;3.41（t，2，CH₂OH）;2.75（m，1，CH）;2.41（m，1，CH）;1.41-1.53（m，1，CH）。

元素分析：

计算值（C₁₆H₁₆N₆Cl₂O）：

C，50.67;H，4.25;N，22.16;Cl，18.70。

测定值：C，50.59;H，4.29;N，22.10;Cl，18.66。

例 3

（±）-顺-4-〔（2，5-二氨基-4-氯-6-嘧啶基）-氨基〕-2-环戊烯-1-醇

将例2的标题化合物（11.67g）悬浮于乙醇（235ml）、冰醋酸（30ml）和水（235ml）中。在氮气保护下加热该混合物至回流。在30分钟内将锌粉（13.5g）一小部分一小部分地加入，在此期间化合物被溶解。反应混合物再加热另外20分钟，然后将多余的锌从热溶液中滤出，并用乙醇洗涤。蒸发滤液，残余物在硅胶柱上纯化，用氯仿（1L）和氯仿∶甲醇/4∶1（1.8L）洗脱。将含有产物的级分合并，在减压条件下除去溶剂，以得到呈红黄色油状的标题化合物（11.2g，产率＞100%）。在另一个小型反应中获得了纯的样品，浅黄色固体产物，产率76%。

¹H-NMR：（Me₂SO-d₆）δ 1.29和2.39（m，2，CH₂）;2.69（t，1，1′-H）;3.37（d，2，CH₂OH）;3.91（br，2，NH₂）;4.60（br，1，CH₂OH）;5.02（m，1，CHNH）;5.56（brS，2，NH₂）;5.74（m，1，＝CH）;5.86（m，1，＝CH）;6.36（d，1，CHNH）。

例 4

（±）-顺-4-（2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇

将例3的标题化合物（大约9.7g）溶解于乙酸二乙氧基甲酯（100g）中，回流加热2天。在高真空和50℃条件下除去溶剂，并加入二噁烷（40ml）和0.5N HCl（60ml）。在室温下，搅拌反应混合物1.25小时，然后冷却。用冷的5N NaOH将反应混合物中和至pH7，然后用氯仿∶甲醇/3∶1萃取几次。有机层用MgSO₄干燥，过滤，并蒸发。残余物通过色谱法在硅胶柱上纯化，用2%MeOH-CHCl₃洗脱，得到3.7克标题化合物（产率46%），m.p.138-139℃。

¹H-NMR：（Me₂SO-d₆）δ 1.63和2.61（m，2，CH₂）;2.87（m，1，1′-H）;3.44（d，2，CH₂OH）;5.44（m，1，CH-N）;5.89（m，1，＝CH）;6.14（m，1，＝CH）;6.82（brs，2，NH₂）;8.02（s，1，8-H）;（CH₂OH看不见-在H₂O峰下）。UV：pH1 λ max 315（ξ 7370）;218（26200）;λ sh 239.5（5650）pH7.4 λ max 307（ξ8000）;245.5（4600）;223（26400）。MS（EI）265，267（m）266，268（m+1）。

元素分析：

计算值（C₁₁H₁₂N₅Cl 0.2H₂O）

C，43.79;H，5.35;N，23.21;Cl，11.75。

测定值：C，43.67;H，5.29;N，23.05;Cl，11.70。

例 5

（±）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇

将例4的标题化合物（0.50g）溶解于乙醇（40ml）里，并加入环丙胺（0.65ml，5当量）。在氮气保护下，回流反应混合物6小时。另外加入0.65ml环丙胺，再回流反应混合物5.5小时。蒸发溶剂，并加入氯仿（25ml）和饱和碳酸氢钠溶液（5ml）。水层用CHCl₃萃取数次，获得粗制品。将其在硅胶柱上纯化，用3%的甲醇-乙酸乙酯洗脱，得到0.43克（80%）的（±）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇。将其从乙腈中重结晶，得到0.30克白色粉末;m.p.在93-130℃崩遗;在165℃熔化。

¹H-NMR：（Me₂SO-d₆）δ0.56和0.63（2m，4，2-环丙基CH₂）;1.56和2.60（2m，2，环戊烯-CH₂）;2.85（m，1，1′-H）;3.02（m，1，环丙基CH-NH）;3.43（m，2，CH₂OH）;4.71（t，1，CH₂OH）;5.40（m，1，4′-H）;5.77（S，2，NH₂），重叠5.84（m，1，＝CH₂）;6.09（m，1，＝CH），7.23（d，1，NH-CH）;7.58（s，1，嘌呤-8-H）;ms（CI）287（m+1）。UV：PH1：λ max 296（ξ 14000），255（10700）;pH7.0：λ max 284（15900）;259（9200）;PH13 λmax284（15800），259（9100）。

元素分析：

计算值（C₁₄H₁₈N₆O 0.25H₂O）：

C，57.82;H，6.41;N，28.90

测定值：C，57.84;H，6.45;N，28.86。

例 6

（±）-顺-4-（2-氨基-6-（环丙基甲氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇

将例4的（±）-顺-4-（2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇（0.53g，2mmol），N-甲基-N-环丙胺（Karl Industries，Aurora，OH;0.8477g，12mmol）和甲醇（20ml）放入帕尔瓶（Parr bomb）中，并加热至62℃，保持5小时。将该溶液浓缩，然后，在用乙醇稀释之后通过加入1.0N NaOH将pH调至12。将该溶液浓缩，残余物用3%的甲醇-氯仿从硅胶柱上洗脱纯化（0.547g，91.2%）。该样品从水-乙醇中结晶得到白色粉末，m.p.130-131℃。

¹H-NMR：（Me₂SO-d₆）δ 7.61（s，1H，嘌呤H-8）;6.10（m，1H，CH＝）;5.84（m，1H，CH＝）;5.7（brs，2H，NH₂）;5.40（m，1H，CHN）;4.70（brt，1H，OH）;3.43（m，2H，CH₂OH）;3.24（brs，4H，CH₃，NCH环丙基）;2.85（m，1H，CH），2.66-2.57和1.61-1.51（m，2，环戊烯CH₂）;0.90～0.65（m，4H，环丙基的2CH₂）。

元素分析：

计算值（C₁₅H₂₀N₆O 0.5H₂O）：

C，58.24;H，6.84;N，27.16。

测定值：C，58.15;H，6.86;N，27.14。

例 7

（-）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇

将例5的标题化合物（0.600g，2.00mmol）溶解于1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2-（1H）-嘧啶酮（Aldrich，12ml）中。将磷酰氯（0.76ml，8.0mmol）加入经搅拌的，冷却的（-10℃）该溶液中。3分钟之后加入冷水（100ml），并用3M NH₄OH中和所得溶液。中和的溶液用水稀释至1升，加入用50mM碳酸氢铵预平衡过的2.5×20cm的DEAE Sephadex A25柱（pharmacia）中。该柱首先用4升50mM的碳酸氢铵洗脱。然后，用2升50～300mM的碳酸氢铵梯度溶液洗脱（±）顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇的O-单磷酸酯。将含有核苷酸（即，上述的O-单磷酸酯）的级分蒸发成白色粉状，以除去碳酸氢铵;通过UV吸收算出含量为71%;HPLC测试（参见下文）有一个峰。将来自大响尾蛇（Crotalus atrox）的蛇毒5′-核苷酸酶（EC 3.1.3.5）（1000IU，Sigma）加入溶解在水（20ml）里的1.4mmol核苷酸溶液中。该溶液在37℃下保温22小时，在此时还要加入额外的酶（1000IU）。再继续保温3天。此时的HPLC分析（0.4×10cm Whatman Partisil 10强阴离子交换柱;用pH5.5，含有5%甲醇20mM-1M的磷酸铵梯度液洗脱，在284nM处进行UV测试）表明，50%的起始核苷酸已被脱磷酸化，变成了母体核苷。该混合物再加入前面所说的那种DEAE Sephadex柱中。用4升50mM的碳酸氢铵洗脱，得到含有标题化合物的级分。将水分蒸发，剩下白色粉末。该物质通过硅胶柱色谱进一步纯化，用MeOH∶CHCl₃/1∶9洗脱，生成无色玻璃状产物。该玻璃状产物在乙腈中固化，得到（-）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇，白色胶质状固体，在68℃，0.5毫米汞柱压力下将其干燥成固体泡沫体（260mg，86%外消旋物）;在DMSO-d₆ ¹H-NMR（DMSO-d₆）分析和质谱分析结果与外消旋物（例5的标题化合物）的相同;〔α〕²⁰ _D-59.7°，〔α〕²⁰ ₄₃₆-127.8°;〔α〕²⁰ ₃₆₅-218.1°;（C＝0.15，甲醇）。

元素分析

计算值（C₁₄H₁₈N₆O-0.8H₂O）：

C，55.91;H，6.57;N，27.94。

测定值：C，56.05;H，6.65;N，27.88。

接着用2升50～300mM的碳酸氢铵的梯度溶液洗脱上述的Sephadex柱，得到对5′-核苷酸酶稳定的（与标题化合物相应的（+）对映体的）邻-单磷酸酯;在例9中对这种单磷酸酯的制备有更详细的说明。

例 8

（-）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇O-单磷酸酯

将例7的标题中化合物（0.35g，1.2mmol）溶解在1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2-（1H）-嘧啶酮（Aldrich，5ml）里。将磷酰氯（Aldrich，0.43ml，4.6mmol）加入经搅拌和冷却（-10℃）后的该溶液中。3分钟之后，加入冷水（20ml），所得溶液用3M氢氧化铵中和。在水分蒸发以后，进行如例7中所述的离子交换色谱分离，得到二铵盐形式的核苷酸，白色粉末（产率95%，通过UV测定）;进行例7中所述的HPLC分析表现出一个峰;UV λmax nM（0.1MHCl）：254，297;（pH7的磷酸盐缓冲液）：259，284;（0.1M NaOH）：259，284。通过B.Ames的方法（Methods in Enzymology 8∶115，1966）确定的碱/磷酸酯比例为1.0/1.3。〔α〕²⁰ _D-69.9°，〔α〕²⁰ ₅₇₈-73.0°，〔α〕²⁰ ₅₄₆-84.0（C＝0.52，MeOH∶H₂O/4∶1）。

例 9

（+）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇）-单磷酸酯

在与5′-核苷酸酶保温以后，用2升50-300mM的梯度碳酸氢铵洗脱例7中所述的DEAE Sephadex柱，得到含有核苷酸的级分，将水蒸发掉之后，得到标题化合物的二铵盐;白色粉末（56%例5的标题化合物）;与例7中相同的HPLC分析表现出一个峰;UV λmax nM（0.1MHCl）：254，297;（PH7的磷酸盐缓冲液）：259，284;（0.1MNaOH）：259，284，碱/磷酸酯之比为1.0/0.98。〔α〕²⁰D+62.0°，〔α〕²⁰ ₅₇₈+65.2°，〔α〕²⁰ ₅₄₆+75.0（C＝0.54，MeOH∶H₂O/4∶1）。

例 10

（+）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇

将例9的标题化合物（0.67mmol）溶解于水（20ml）中，并加入得自小牛肠子的碱性磷酸酶（EC 3.1.3.1）（3000IU，Boehringer Mannheim）。该溶液在37℃保温19小时，此时的HPLC分析（与例7相同）表明，所有核苷酸都被脱去了磷酸。将该溶液蒸发干燥，残余固体物用回流的乙醇（100ml）萃取。将乙醇可溶的物质吸附到硅胶上，并装入硅胶柱中，用甲醇∶氯仿/1∶9洗脱标题化合物。蒸发乙腈-乙醇溶液，得到白色固体泡沫体（164mg，79%），¹H-NMR（DMSO-d₆）分析和质谱分析结果与外消旋物（例5的标题化合物）的相同;〔α〕²⁰D+58.7°，〔α〕²⁰ ₄₃₆+126.2°，〔α〕²⁰ ₃₆₅+217.5°，（C＝0.10，甲醇）。

元素分析：

计算值（C₁₄H₁₈N₆O-0.6H₂O-0.15EtOH）：

C，56.49;H，6.66;N，27.64。

测定值：C，56.60;H，6.63;N，27.55。

例 11

（-）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙基甲氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇

将例6的标题化合物（2.00g，6.50mmol）溶解于1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2（1H）-嘧啶酮（Aldrich，20ml）里。将磷酰氯（2.28ml，24.0mmol）加进经搅拌的、冷却（-10℃）的该溶液里。3分钟之后，加入冷水（80ml）。该溶液用氯仿（3×80ml）萃取。水层用乙醇（400ml）稀释，并用饱和NaOH水溶液将pH调整至6。将沉淀的无机盐滤出。滤液进一步用乙醇稀释至1升的体积，并用另外的NaOH将pH调整至8。将所得的沉淀滤出，并干燥，得到（±）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙基甲氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇的O-单磷酸酯，白色粉末（4.0mmoles，通过UV吸收测定的含量为62%），与例7相同的HPLC分析出现一个峰。将这种外消旋的O-单磷酸酯溶解在水（200ml）中，并加入得自大响尾蛇（Crotalus atrox）的蛇毒5′-核苷酸酶（EC 3.1.3.5）（5，000IU，Sigma）。在37℃保温10天以后，进行的与例7中相同的HPLC分析表明，原始核苷酸的50%已被脱去磷酸变成了核苷。将其在用50mM碳酸氢铵预平衡的5×14cm的DEAE Sephadex A25柱（Pharmacia）上分离。标题化合物用2升50mM的碳酸氢铵洗脱。将水蒸发，得到白色粉末，再将其溶解于甲醇里，吸附到硅胶上，并装入硅胶柱中。标题化合物用甲醇∶氯仿/1∶9洗脱，产物呈无色玻璃状。将乙腈溶液蒸发，得到白色固体泡沫体，在P₂O₅上以0.3mmHg的压力干燥，得到649mg产物（72%外消旋物）;¹H-NMR（DMSO-d₆）分析和质谱分析结果与外消旋物（例6的标题化合物）的相同;〔α〕²⁰ _D-48.0°，〔α〕²⁰ ₄₃₆-97.1°，〔α〕²⁰ ₃₆₅-149°（C＝0.14，甲醇）。

元素分析：

计算值（C₁₅H₂₀N₆O-0.10CH₃CN）：

C，59.96;H，6.72;N，28.06。

实际值：C，59.93;H，6.76;N，28.03。

接着，用2升100mM的碳酸氢铵洗脱上述Sephadex柱，然后再用2升200mM的碳酸氢铵洗脱，获得与标题化合物相应的（+）对映体的O-单磷酸酯，它是对5′-核苷酸酶稳定的。

例 12

（+）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙基甲氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇

合并从例11的Sephadex柱洗脱的含有（+）对映体的O-单磷酸酯的级分，并加入得自小牛肠的碱性磷酸酶（E C 3.1.3.1）（4800IU，Boehringer Mannheim）。该溶液在25℃保温18小时，此时的HPLC分析表明，所有的核苷酸都被脱磷酸化。将该溶液蒸发干燥，残余的固体用回流的乙醇（100ml）萃取。将溶于乙醇的物质吸附到硅胶上，并装入硅胶柱。标题化合物用甲醇∶氯仿/1∶9洗脱，产物呈无色玻璃状。将乙腈溶液蒸发，得到白色固体泡沫体，在0.3mmHg压力下，在P₂O₅上干燥;得到659mg产物（73%外消旋物）;¹HNMR（DMSO-d₆分析和质谱分析结果与外消旋物（例6的标题化合物）的相同;〔α〕²⁰ _D+47.0°，〔α〕²⁰ ₄₃₆+93.0°，〔α〕²⁰ ₃₆₅+141.3°（C＝0.11，甲醇）。

元素分析：

计算值（C₁₅H₂₀N₆O-0.1CH₃CN）：

C，59.95;H，6.72;N，28.06。

测定值：C，59.92;H，6.80;N，27.96。

例 13

（1S，4R）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇二苯甲酰基-D-酒石酸盐

（±）-顺-4-乙酰氨基环戊-2-烯甲基乙酸酯〔美国专利：4，268，672〕（14.88g，0.073mol）和氢氧化钡的八水合物（46.19g，0.146mol），在氮气保护下，在水中（300ml）回流加热18小时。所得溶液用CO₂中和。沉淀先用水洗涤，后用乙醇洗涤。合并的洗滤液蒸发成浆状（（±）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇的乙酸盐），通过与过量的Amberlite IRA-400（OH^-）树脂一起在水中搅拌，将其转变成游离胺。将树脂滤出去，用水洗涤，并将滤洗液蒸发成淡黄色浆体，通过将乙醇部分蒸发而使其干燥。将这种胺的试样（2.26g 20.0mmol）和二苯甲酰-D-酒石酸（Aldrich，3.62g，10.0mmol，99%）溶解于热无水乙醇（35ml）中。将回流的乙腈（大约150ml）加入使至浊点，并使该溶液缓慢冷却至室温。所形成的白色针状结晶从相同的溶剂混合物中重结晶3次，得到标题化合物，白色片状体（1.07g，37%）;m.p.160-162℃;〔α〕²⁰D+66.9°，〔α〕²⁰ ₄₃₆+165°〔α〕²⁰ ₃₆₅+325°（C＝0.28，甲醇）。对这种盐的X-射线结晶衍射，使得阳离子的绝对构型能通过D-二苯甲酰酒石酸二价阴离子的已知构型来确定。这种盐在间隔基团C₂上结晶，有一个C₆H₁₂NO阳离子和1/2个C₁₈H₁₄O₈二价阴离作为不对称单元。

元素分析：

计算值（C₆H₁₁NO-1/2（C₁₈H₁₄O₈））：

C，61.63;H，6.21;N，4.79。

测定值：C，61.56;H，6.24，N;4.74。

例 14

（1R，4S）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇二苯甲酰-L-酒石酸盐

按照实施例13中所述方法一样生成这种盐，并结晶，只是所采用的是二苯甲酰-L-酒石酸。从乙醇-乙腈中重结晶3次，得到标题化合物，白色片状体（1.00g，34%）;m.p.160-162°;〔α〕²⁰D-68.2°，〔α〕²⁰ ₄₃₆-169°，〔α〕²⁰ ₃₆₅-333°，（C＝0.24，甲醇）。

元素分析：

计算值（C₆H₁₁NO-1/2（C₁₈H₁₄O₈））：

C，61.63;H，6.21;N，4.79。

测定值：C，61.59;H，6.21;N，4.76。

例 15

（±）-顺-N-〔4-氯-5-甲酰胺基-6-〔〔4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基〕氨基〕-2-嘧啶基〕乙酰胺

通过向溶解在乙酐（20ml）里的N-（5-氨基-4，6-二氯嘧啶-2-基）乙酰胺（J.Org.Chem.1975，40，3141）（0.75g，3.4mmol）溶液中加入96%的甲酸（20ml），将其甲酰化。所得溶液在25℃下搅拌1小时，然后蒸发得到N-（4，6-二氯-5-甲酰氨基-2-嘧啶基）乙酰胺的褐色粉末（0.77g，91%）;通过¹H-NMR和质谱分析确定其结构。

在氮气保护下，这种褐色粉末（840mg，3.37mmol）、（±）-顺-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇（940mg，8.2mmol）和三乙胺（0.80g，8.0mmol）在乙醇（50ml）里置于油浴（70-80℃）中加热50分钟，蒸发成暗色油状物，然后在硅胶上进行色谱分析。标题化合物用5%的甲醇-氯仿洗脱，产物为粉红色固定泡沫体（840mg）。从甲醇中结晶得到白色颗粒（575mg，52%）;m.p.189-193°;¹H-NMR（DMSO-d₆）δ 10.23（br，1.0，NHAc），9.3（br，1.0，NHCHO），8.15和7.90（二者s，总1.0，HC＝0来自两种构象体，在60℃峰结合），7.42和7.22（二者d，J＝8.3，总1.0，CH-NH来自两种构象体，在60℃峰结合，5.9和5.7（二者m，2.0，CH＝CH），5.05（m，1，CH-N），4.73（m，1，OH），3.39（m，2，CH₂OH），2.72（m，1，CH），2.40（m，1，1/2CH₂），1.36（m，1，1/2CH₂）。

元素分析：

计算值（C₁₃H₁₆N₅O₃Cl）：

C，47.93;H，4.95;N，21.50;Cl，10.88。

测定值：C，47.99;H，4.96;N，21.42;Cl，10.96。

例 16

将例15的标题化合物（0.91g，2.79mmol）溶解于无水DMF（1ml）中。加入原甲酸三乙酯（10ml）和乙基磺酸（0.29ml，3.4mmol），并将该溶液在65℃加热24小时。将该溶液蒸发成浆体。该浆体溶解于1N HCl（15ml）中，并搅拌3小时。用5N NaOH将pH调整到7，所得到的混合物（油状）用异丙醇∶氯仿/1∶3（3×100ml）萃取。将合并的有机层干燥（MgSO₄），并蒸发成红色玻璃体（0.93g）将这种玻璃体的甲醇（20ml）溶液与环丙胺（2ml）一起在帕尔瓶中于70℃加热18小时。所得溶液被蒸发成暗色玻璃体，并吸附到硅胶上。用7%的甲醇-乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物（148mg，19%），用乙腈研制，得到白色粉末;¹H-NMR（DMSO-d₆）分析结果与例5标题中化合物的相同。

例 17

（+）-（1R，4S）-顺-N-〔4-氯-5-甲酰胺基-6-｛〔4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基〕氨基｝-2-嘧啶基〕乙酰胺

按照例13中所述方法制备的（1S，4R）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇二苯甲酰-D-酒石酸盐（2.76g，9.02mmol）溶解于水（20ml）中，并装入65ml的Amberlite IA-400（OH^-型）阴离子交换树脂柱中。该柱用水洗脱。碱性级分被合并，蒸发成残油，通过无水乙醇蒸发干燥，然后在0.5mmHg压力下干燥，得到（1S，4R）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇（1.2g）的浅黄色油状体（在空气中很快变黑），该产物要马上使用。将该油状体溶解于乙醇（5L）里，并加入到N-（4，6-二氯-5-甲酰胺基-2-嘧啶基）乙酰胺（2.07g，8.31mmol）（按照例15所述方法制备）和三乙胺（2.50g，24.8mmol）的溶液中。所得黑色溶液在氮气保护下加热（油浴75-80℃）50分钟。将该溶液蒸发成浆状物，并装入硅胶柱。用3-5%的甲醇-氯仿洗脱标题化合物，产物为一种浅黄色固体泡沫体（1.59g，54%）;¹H-NMR分析结果与结晶样品的相同。这种样品从乙醇中结晶，得到白色颗粒，m.p.194-195℃;¹H-NMR（DMSO-d₆）分析结果与例15标题化合物的相同;〔α〕²⁰ _D+2.7°，〔α〕²⁰ ₅₇₈+3.6°，〔α〕²⁰ ₅₄₆+2.9°，〔α〕²⁰ ₄₃₆-2.5°;〔α〕²⁰ ₃₆₅-41.2°（C＝0.238，甲醇）。

例 18

（-）-（1S，4R）-顺-（2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇

在氮气保护下，例17的标题化合物（1.15g，3.53mmol）在乙酸二甲氧基甲基酯（45ml）中轻轻回流3.5小时。所得浅黄色溶液在0.5mmHg压力下浓缩成黄色浆状体。在1N HCl（50ml）里搅拌该浆体1.0小时。该溶液用碳酸氢钠中和，并蒸发至干燥。残余固体物用甲醇萃取，并将可溶于甲醇的物质装入硅胶柱。该柱用10%甲醇-乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物，浅黄色固体泡沫体（730mg，78%）;¹H-NMR（DMSO-d₆）分析结果与外消旋物（例4的标题化合物）的相同;〔α〕²⁰D-114.9°（C＝0.26，MeOH）。-114.9°（C＝0.26，MeOH）。

例 19

（-）-（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇

将溶解在甲醇（12ml）里的例18的标题化合物（560mg，2.11mmol）与环丙胺（2.4ml）一起在帕尔瓶中于78℃加热17小时。将溶剂蒸发，残余物在硅胶上进行色谱分离。用5-7%的甲醇-乙酸乙酯洗脱标题化合物，产物是无色固体泡沫体（367mg，59%）;¹H-NMR（DMSO-d₆）分析结果与例7的相同，〔α〕²⁰ _D-59.0°，（C＝0.28，MeOH）证实为例7标题化合物的绝对构型。

例 20

（1S，4R）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇二苯甲酰-D-酒石酸盐

将2-氮杂双环〔2.2.1〕庚-5-烯-3-酮〔Daluge和Vince，J.Org.Chem.1978，43，2311和美国专利4，268，672〕（44.0g，0.400mole）在2N HCl的甲醇溶液（0.5L）里于25℃搅拌1.5小时。将挥发性物蒸发掉，剩下（±）-顺-甲基-4-氨基-2-环戊烯-1-羧酸酯盐酸盐的灰白色粉末（71.1g）。用乙醚研制这种样品，得到白色粉末，m.p.92.5-95℃〔J.Org.Chem 1981，46，3271;m.p.82-83℃〕;¹H-NMR（DMSO-d₆）δ 8.25（brs，3，NH+₃），6.1和5.9（二者m，2，CH＝CH），3.64（s）重叠，3.75-3.6（m，总4，OMe和CH），2.65-2.45和2.05-1.85（二者m，2，CH₂）。

元素分析

计算值（C₇H₁₁NO₂-HCl）：

C，47.33;H，6.81;N，7.89;Cl，19.96。

测定值：C，47.41;H，6.84;N，7.85;Cl，19.89。

将（±）-顺-甲基-4-氨基-2-环戊烯-1-羧酸酯盐酸盐（17.7g，0.100mole）和氢化二异丁基铝（0.500mole，为1M的己烷溶液）在己烷（200ml）中回流6小时。将所得溶液冷却，加入10ml 1M氯化铵水溶液，然后再加入甲醇（200ml）。混合物回流30分，并加入MgSO₄（10g）。将固体滤出，并用另外的甲醇冲洗。将滤洗液蒸发成黑色油状物（15.5g）;¹H-NMR（DMSO-d₆）分析结果与在例13中制备的（±）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲基的相同。这种样品在通过硅胶色谱纯化以（EtOH∶CHCl₃∶NH₄OH/10∶90∶1）后，再用二苯甲酰-D-酒石酸结晶，得到标题化合物。

例 21

〔顺-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-基〕甲基R-2，3-双-（十六烷酰氧基）丙基磷酸氢酯

将溶解于6ml氯仿里的L-α-二（十六烷酰）磷脂酰胆碱（150mg，0.2mmol Sigma）溶液加入装有（±）-顺-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇（300mg，1.03mmol）磷脂酶D（Ⅶ型）（由链丝菌属菌（Streptomyces）制备，1.0mg，比活性：185单位/mg，Sigma）和pH4.5的缓冲液（1.5ml，250mM CaCl₂，200mM NaOAc，用加入0.1N HCl调至pH4.5）的烧瓶中。所得双相在45℃（油浴）下搅拌1小时。分离水层和有机层，并用氯仿（3×6ml）萃取水层。合并的有机层用1N HCl洗涤，干燥并浓缩。通过用12%的甲醇-氯仿从2个硅胶柱上洗脱将这种样品纯化，得到标题化合物120mg（47%）。该物质用乙酸乙酯-乙腈固化，生成浅黄色粉末，m.p.155-157℃;¹H-NMR（CD₃CD-CDCl₃）δ 7.78（s，重叠溶剂，嘌呤H-8），6.12和5.88（m，2，HC＝CH），5.53（m，1，CHN环戊烯），5.22（m，1，CO₂CH）4.37（dd，J＝3，12;1，0.5POCH₂甘油），4.12（m，1，0.5POCH₂甘油），3.42（m，4，OCH₂甘油，OCH₂），3.11（brm，1，CH），2.90（m，1，NCH），2.78（m，1，0.5CH₂环戊烯），2.27（m，4，2CH₂CO₂），1.70（m，1，0.5CH₂环戊烯），1.56（brm，4，2CH₂CH₂CO₂），1.27（brm，38，24CH₂），0.88（m，6，2CH₃），0.83（m，2，CH₂环丙基），0.60（m，2，CH₂环丙基）。

元素分析：

计算值（C₄₉H₈₅N₆O₈P-2.4H₂O）：

C，61.28;H，9.42;N，8.75;P，3.22。

测定值：C，60.97;H，9.12;N，8.78;P，2.96。

例 22

〔顺-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-基〕甲基R-2，3-双-（己酰氧基）丙基磷酸氢酯

将溶解在15ml CHCl₃里的L-α-二己酰磷脂酰胆碱（300mg，0.66mmol，Sigma）的溶液加入盛有（±）-顺-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇（378mg，1.32mmol），磷脂酶D，TypeⅦ（由链丝菌属菌制备，1.04mg，比活：185单位/mg，Sigma），pH4.5的缓冲液（4.5ml，250mM CaCl₂，200mM NaOAc，用HCl调至pH4.5）和CHCl₃的烧瓶中。所产生的双相在45℃（油浴）下搅拌4小时。将水层和有机层分离，并用1N HCl（2×4ml）洗涤有机层。合并的水层用氯仿（10ml）洗涤。将合并的有机层干燥（MgSO₄）并浓缩。残余物放在硅胶柱上，标题化合物用16%的甲醇-氯仿洗脱，并浓缩，得到细的黄色粉末。将该物质溶解于乙醇中并浓缩（3×50ml），然后在高真空下干燥，得到103mg（产率21%）浅黄色粉末，m.p.182-185℃。

¹H-NMR（DMSO-d₆）α 7.61（s，1，嘌呤H8），7.22（brs，1，NH），6.09（m，1，0.5CH＝CH），5.89（m，在5.83处重叠brs，3，0.5CH＝CH，NH₂），5.41（brm，1，CHN），5.09（brm，1，CO₂CH），4.30（dd，J＝2.7，12;1，0.5POCH₂甘油），4.08（m，1，0.5POCH₂甘油），3.80（brm，在3.75处重叠brm，4，OCH₂甘油，OCH₂），3.02（brm，2，CH，NCH环丙基），2.65（m，1，0.5CH₂环戊烯），2.23（+，J＝7.5，4，2CH₂CO₂），1.48（brm，5，2CH₂CH₂CO₂，0.5CH₂环戊烯），1.23（brm，8，2（CH₂）₂），0.84（m，6，2CH₃），0.67和0.58（m，4，2CH₂环丙基）。

元素分析：

计算值（C₂₉H₄₅N₆O₈P-3.9H₂O，0.2CHCl₃，0.05EtOH）：

C，48.00;H，7.33;N，11.46;Cl，2.9。

测定值：C，48.65;H，6.61;N，10.81;Cl，2.5。

上述实施例是Satoshi Shuto等的方法（TetrahedronLetters，Vol.28，No.2，pp.199-202，1987）的改进。

例 23

N-（4-氯-1，6-二氢-5-硝基-6-氧代-2-嘧啶基）异丁酰胺

通过在异丁酸酐（250ml）和浓硫酸（3-4滴）里加热6-氯-5-硝基异胞嘧啶黄色固体（14.88g，78.09mmol）至100℃，1小时，将其保护起来。所得溶液用无水甲醇（100ml）处理，在50℃下搅拌半小时，浓缩至原体积的1/3，标题化合物通过过滤收集（14.97g，74%），为淡黄色结晶;m.p.196-199℃（分解）;

¹H-NMR（DMSO-d₆）δ 1.12（d，J＝6.9Hz，6H，（CH₃）₂OH），2.75（m，J＝6.9Hz，1H，（CH₃）₂CH），12.41（brs，1H）。

元素分析：

计算值（C₈H₉N₄O₄Cl）：

C，36.87;H，3.48;N，21.50;Cl，13.60。

测定值：C，36.94;H，3.48;N，21.44;Cl，13.53。

例 24

N-（4，6-二氯-5-硝基-2-嘧啶基）异丁酰胺

在氮气保护下，将例23的标题化合物（10.0g，38.37mmol）在磷酰氯（200ml）和N，N-二乙基苯胺（3-4滴）里加热回流5小时。然后将该溶液冷却至室温，浓缩至干燥，并将浆体溶解于冷的（约-10℃）二氯甲烷（200ml）中。在强力搅拌下，有机层用饱和碳酸氢钠水溶液（100ml）处理，当固体碳酸氢钠一部分一部分地加入把pH升高到5-7之间时温度保持在5℃以下。将有机层和水层分离，并用二氯甲烷萃取水相。合并的有机层在分相器纸上过滤，浓缩，并在真空下干燥，得到标题化合物黄白色固体（7.71g，72%），在下一步骤中使用是足够纯的。将该固体从己烷/二氯甲烷中重结晶得到分析样品，m.p.166-169℃;¹H-NMR（DMSO-d₆）δ 1.09（d，J＝6.9Hz，6H，（CH₃）₂CH），2.79（m，J＝6.9Hz，1H，（CH₃）₂CH），11.61（S，1H）。

元素分析

计算值（C₈H₈N₄O₃Cl₂）

C，34.43;H，2.89;N，20.08;Cl，25.41。

测定值：C，34.53;H，2.89;N，20.02;Cl，25.40。

例 25

N-（4，6-二氯-5-甲酰胺基-2-嘧啶基）异丁酰胺

将例24的标题化合物（6.77g，24.26mmol）加入在氢气（40 psi）下预先摇动了10分钟的盛有220ml无水乙醇和10.0g（湿重）阮内镍催化剂的帕尔瓶中。该混合物在氢气（40psi）下摇动1小时，通过硅藻土过滤，将滤液浓缩成黄白色固体，在真空下干燥过夜。在0℃下，在1，2-二氯乙烷（250ml）里搅拌该固体。在氮气保护下滴加乙酐（30ml），接着再滴加甲酸（30ml）。所得到的混合物在室温下搅拌2小时，浓缩至原体积的1/2，与甲苯共沸，以除去残余的甲酸乙酸。将粗制固体用甲醇研制，得到标题化合物的灰白色固体（4.92g，73%）;m.p.206-209℃（分解）;¹H-NMR（DMSO-d₆）δ 1.08（d，J＝6.8Hz，6.0（CH₃）₂CH），2.74（m，J＝6.8Hz，1.0（CH₃）₂CH），8.18（d，J＝10.3Hz），10.26（brs）〔总1.0，NHCHO来自两种构象体〕，11.17（brs，1.0）

元素分析

计算值（C₉H₁₀N₄O₂Cl₂）：

C，39.01;H，3.64;N，20.22;Cl，25.59

测定值：C，39.13;H，3.68;N，20.12;Cl，25.67

例 26

（+）（1R，4S）-顺-N-〔4-氯-5-甲酰胺基-6-｛〔4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基〕氨基｝-2-嘧啶基〕异丁酰胺

将用例13所述方法制备的（1S，4R）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇二苯甲酰-D-酒石酸盐（2.44g，8.15mmol）溶解于90%的乙醇（20ml）中，并将所得溶液加进Amberlite IRA-400（OH^-）柱中，该柱曾用相同溶剂预先洗过。用90%的乙醇洗脱，得到碱性级分，将其浓缩，并蒸发掉甲苯-乙醇部分，留下浅黄色油状的（1S，4R）-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇（1.4g）。该化合物立即与按照例25中所述方法制备的N-（4，6-二氯-5-甲酰胺基-2-嘧啶基异丁酰胺（2.26g，8.15mmol），在1，2-二甲氧基乙烷（100ml）和三乙胺（2.3ml，16.3mmol）里，在95-110℃下缩合1.5小时。所得溶液被蒸发成暗黄色浆状物，在硅胶柱上进行色谱分离。用5-7.5%的甲醇-氯仿洗脱，得到标题化合物的浅黄色固体（2.45g，84%）。该样品从乙腈中结晶，可得到标题化合物的细的白色结晶，m.p.194.5-195.5℃。

¹H-NMR（DMSO-d₆）δ 10.21（s，1，NHCOCHMe₂），9.29（s，1，NHCHO），8.12（s，1，CHO），7.18（d，J＝7.9，1，CHNH），5.8和5.7（二者m，2，CH＝CH），5.08（m，1，CHN），4.71（t，J＝5.06，1，OH），3.37（m，2，CH₂OH），2.9-2.6（m，2，CHMe₂和CH），2.40（m，1，0.5CH₂），1.33（m，1，0.5CH₂）;〔α〕²⁰ _D+4.4°，〔α〕²⁰ ₃₆₅-20.7°（C＝0.237，MeOH）。

元素分析：

计算值（C₁₅H₂₀N₅ClO₃）：

C，50.92;H，5.70;N，19.79;Cl，10.02。

测定值：C，50.67;H，5.78;N，19.62;Cl，9.92。

例 27

（-）-（1R，4S）-顺-N-〔6-（环丙氨基）-9-（4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基）-9H-嘌呤-2-基〕异丁酰胺

把按照例26的方法制备的（+）-（1R，4S）-顺-N-〔4-氯-5-甲酰氨基-6-｛〔4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基〕氨基｝-2-嘧啶基〕异丁酰胺（1.949g，5.44mmol）与原甲酸三乙酯（30ml）一起在冰水浴中搅拌，与此同时，用2分钟时间把浓盐酸（2.0ml）滴加进去。所得的透明溶液在环境温度下搅拌过夜。在真空下除去挥发性物质，残余浆状物（含有（1R，4S）-顺-N-〔6-氯-9-（4-羟甲基）-2-环戊烯-1-基）-9H-嘌呤-2-基〕异丁酰胺原酸酯共轭物）在乙醇（30ml）里与环丙胺（10g）一起回流2.5小时。蒸发后留下浆状体，将其溶解于10%的异丙醇-氯仿（200ml）里。将该溶液与饱和碳酸氢钠水溶液（25ml）一起强力搅拌。分离有机层，并用另外的10%异丙醇-氯仿洗涤水层。干燥（MgSO₄）合并的有机层。蒸发后留下浅黄色玻璃体（2.4g），将其在硅胶柱上进行色谱分离。标题化合物用2-3%的甲醇-乙酸乙酯洗脱，产物为白色固体（1.02g，53%）;这种样品从甲醇-乙腈中重结晶，得到标题化合物的白色针状结晶;m.p.197.5-198.5℃。

¹H-NMR（DMSO-d₆）δ 9.75（s，1，NHCO）7.93（s，1，嘌呤H-8），7.82（br，1，NH-环丙基），6.12和5.92（二者m，2，CH＝CH），5.50（m，1，CH-N），4.73（t，J＝5.3，1，OH），3.46（m，2，CH₂-O），3.25-3.00（m，2，CHMe₂和CH），2.91（m，1，CH），2.75-2.6（m，1，0.5CH₂），1.7-1.6（m，1，0.5CH₂）1.07（d，J＝6.8，6，CHMe₂），0.75-0.6（m，4，2环丙基，CH₂），〔α〕²⁰ _D-70.7，〔α〕²⁰ ₄₃₆-159.0°（C＝1.02，MeOH）。

元素分析：

计算值（C₁₈H₂₄N₆O₂）：

C，60.66;H，6.79;N，23.58。

测定值：C，60.62;H，6.83;N，23.51。

接着用5%的甲醇-乙酸乙酯洗脱柱，得到混杂有约10%的（-）-（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇的标题化合物的浅黄色固体泡沫体（928mg）。

例 28

将用例27的方法制备出的（-）-（1S，4R）-顺-N-〔6-（环丙氨基）-9-（4-（羟甲基）-2-环戊烯-1-基）-9H-嘌呤-2-基〕异丁酰胺（1.33g，3.73mmol）与1N盐酸（40ml）一起在环境温度下搅拌2天。用氢氧化钠将pH调整至7.0，并将混合物蒸发至干燥。残余固体物用热乙醇（3×25ml）研制。将乙醇蒸发，留下黄色玻璃体，在硅胶柱上进行色谱分离。标题化合物用3%甲醇-乙酸乙酯洗脱，产物是无色固体泡沫体（857mg，80%），¹H-NMR和〔α〕²⁰ _D结果与例19标题化合物的相同。

例 29

（-）-（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇盐酸盐

将（-）-（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇（1.90g，约6.3mmol，通过¹H-NMR测定）溶解于1N盐酸（7.0ml）和乙醇里。将该溶液蒸发至干燥，残余物溶解在乙醇（15ml）里。缓慢加入乙酸乙酯至总体积为80ml。将产生的灰白色粉末滤出，并在真空下干燥，得到标题化合物（2.07g，97%）;m.p.在125-130℃塌陷，138℃以上分解，〔α〕²⁰ ₅₈₉-27.1°〔α〕²⁰ ₄₃₆-52.3°（C＝0.199，MeOH）。

元素分析：

计算值（C₁₄H₁₈N₆O.HCl.0.8H₂O）：

C，49.87;H，6.16;N，24.92;Cl，10.51。

测定值：C，49.91;H，6.16;N，24.96;Cl，10.52。

例 30

（-）-（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇二盐酸盐

将（-）-（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇（857mg，3.00mmol）溶解于乙醇-乙酸乙酯里，并加入1N乙醚盐酸（12ml）。精细白色沉淀用乙酸乙酯洗涤，并在真空下干燥，得到标题化合物（642mg，75%）;m.p.176-180°，分解。

元素分析：

计算值（C₁₄H₁₈N₆0.2HCl）：

C，46.81;H，5.61;N，23.39;Cl，19.74。

测定值：C，46.82;H，5.64;N，23.33;Cl，19.67。

例 31

（1R，4S）-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇O-二磷酸酯

通过把含有0.5mmol用例9方法制备的（+）-（1R，4S）-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇O-单磷酸酯的溶液与10ml 0.5M碳酸氢三乙基铵结合，将这种单磷酸酯转化成三乙基铵盐

在真空下干燥，接着，再加入10ml 0.5M碳酸氢三乙基铵，再干燥。然后，3次加入10ml乙腈，并在真空下干燥。将其溶解于10ml的1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2（1H）-嘧啶酮（Aldrich）里，加入0.43g的1，1′-羰基二咪唑（Aldrich，2.6mmol），并在室温下搅拌2小时。加入甲醇（0.18ml，4.5mmol）并搅拌30分钟。加入焦磷酸三丁基铵（Sigma，1.2g，2.6mmol），在室温下搅拌18小时，再加入1g焦磷酸三丁基铵（2.2mmol）并在40℃下搅拌8小时;然后加入50ml的水。由于焦磷酸三丁基铵中含有正磷酸盐杂质，所以产生了O-二磷酸酯和O-三磷酸酯两种酯。

反应产物通过DEAE Sephadex离子交换色谱法在一个用50mM碳酸氢铵（ABC）平衡的2.5×18cm的DEAE Sephadex A25柱（Pharmacia）上分离。该柱先用1升50mM的ABC冲洗，然后再用2升线性梯度的50-800mM的ABC洗脱标题中的化合物，接下来洗脱三磷酸酯，这将在例32中作更详细说明。将含有二磷酸酯的级分合并，在真空下干燥;重新溶解于水中，并再次干燥，得到标题化合物的铵盐（0.077mmol，产率15%）。UV扫描：在0.1M HCl中，λ_max＝254和298nm;在pH7时，λ_max＝259和284nm;在0.1M NaOH，λ_max＝259和284nm。

将二磷酸酯的等分试样用碱性磷酸酯（小牛肠，Boehringer Mannheim）处理;在不同时间取样，并在薄层色谱上展开（PEI-纤维素，Brinkman，1M LiCl/1M甲酸1∶1）。观察到了由二磷酸酯到一磷酸酯再到核苷的连续转化。释放出的磷酸的最终量通过Bencini的方法确定（Bencini，D.A.，Wild，J.R.，and O′Donovan，G.A.Analytical Biochemistry，132：254-258（1983）），测定的碱/磷酸酯之比为1.0/11.5，说明有无机磷酸酯存在，在分析HPLC上的UV纯度为99.8%（强阴离子交换柱，用10mM-1M的梯度磷酸铵溶液洗脱，pH5.5）。

例 32

（+）-（1R，4S）-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇O-三磷酸酯

继续洗脱例31中所述的色谱柱，将所得洗脱液蒸发后得到标题化合物的铵盐。通过Dowex AG50W-X8（Bio-Rad）树脂柱（钠型，20ml）将这种盐转化成钠盐。将含有核苷酸的级分在真空中浓缩，得到0.31mmol的产物（61%）。UV扫描：在0.1M HCl中，λ_max＝254和299nm;在pH7时，λ_max＝259和284nm;在0.1M NaOH中，λ_max＝259和284nm。在水中，浓度为3.83g/100ml时的旋光度为〔α〕²⁰＝+43.2°（589nm）。在分析HPLC上的UV纯度为99.1%（强阴离子交换柱，用10mM-1M的梯度磷酸铵溶液洗脱，pH5.5），混杂有0.9%的二磷酸酯。将三磷酸酯等分试样用碱性磷酸酶（小牛肠，Boehringer Mannheim）处理，在不同时间取样，并在薄层色谱上展开（PEI-纤维素，Brinkman，1M LiCl/1M甲酸1∶1）。观察了由三磷酸酯到二磷酸酯到一磷酸酯再到核苷的连续转化。释出的磷酸的最终量通过Bencini的方法测定（Bencini，D，A.Wild，J.R.，和O′Donovan，G.A.Analytical Biochemistry 132：254-258（1983）），并测定碱/磷酸酯之比为1.0/2.7。

例 33

（1S，4R）-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇O-二磷酸酯

通过把含有0.49mmol的用例8所述方法制备的（-）-（1S，4R）-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇0-单磷酸酯的溶液与5ml 0.5M碳酸氢三乙基铵结合，将这种单磷酸酯转化为三乙基铵盐。并在真空下干燥，接着再用5ml 0.5M碳酸氢三乙基铵处理，并再重复2次。然后，重复3次，加入5ml乙腈并在真空下干燥。将其溶解于7ml的1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2（1H）-嘧啶酮（Aldrich）中，然后加入0.39克1，1′-羰基二咪唑（Aldrich，2.4mmol），并在室温下搅拌30分钟。加入甲醇（0.16ml，4.0mmol）并搅拌30分钟。加入焦磷酸三丁基铵（通过在离子交换树脂上将焦磷酸四钠的盐交换成氢，然后用三丁胺中和并干燥而制成，2.4mmol），在室温下搅拌18小时，然后加入50ml水。由于焦磷酸三丁基铵中含有正磷酸盐杂质，所以，形成了O-二磷酸酯和O-三磷酸酯。

反应产物通过DEAE Sephadex离子交换色谱法在一个用50mM碳酸氢铵（ABC）平衡的、2.5×18cm的DEAE Sephadex A25柱（Pharmacia）中分离。该柱先用1升100mM的ABC洗涤，然后用2升100-800mM的ABC线性梯度溶液洗脱标题化合物，接下来的是洗脱三磷酸酯，这一点将在例34中作更详细的说明。将含有二磷酸酯的级分合并，在真空下干燥，重新溶于水中，然后重复2次，以生成标题化合物的铵盐（0.032mmol，产率6%。UV扫描：在0.1M HCl中，λ_max＝254和298nm;在pH7时，λ_max＝259和284nm;在0.1M NaOH中λ_max＝258和284nm。

将二磷酸酯的等分试样用碱性磷酸酯（小牛肠，Boehringer Mannheim）处理，在不同的时间取样，并在薄层色谱上展开（PEI纤维素，Brinkman，1M Licl/甲酸1∶1）。观察到了由二磷酸酯到一磷酸酯再到核苷的连续转化。释出的磷酸的最终量通过Bencini的方法（Bencini，D.A.，Wild，J.R.，和O′Donovan，G.A.Analytical Biochemistry 132：254-258（1983））测定，并测定碱/磷酸酯之比为1.0/4.7，表明有无机磷酸酯存在。在分析HPLC（强阴离子交换柱，用10mM-1M的磷酸铵梯度溶液洗脱，pH5.5）上的UV纯度为97%。

例 34

（1S，4R）-4-（2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇O-三磷酸酯

继续洗脱例33中所述的色谱柱，将所得洗脱液蒸发后得到标题化合物的铵盐。通过一个Dowex AG 50W-X8（Bio-Rad）树脂柱（钠型，20ml）将这种盐转化成钠盐。将含有核苷酸的级分在真空中浓缩，得到0.4mmol的产物（81%）。UV扫描：在0.1M HCl中，λ_max＝254和299nm;在pH7时，λ_max＝259和284nm;在0.1M NaOH中，λ_max＝259和284。在水中，浓度为6.14g/100ml时在589nm旋光度〔α〕²⁰＝-47.1°在分析HPLC（强阴离子交换柱，用10mM-1M磷酸铵梯度溶液洗脱，pH5.5）上的UV纯度为99.5%，有0.5%的二磷酸酯存在。将等分的三磷酸酯用碱性磷酸酶（小牛肠，Boehringer Mannheim）处理，在不同时间取样，并在薄层色谱上展开（PEI-纤维素，Brinkman，1M LiCl/1M甲酸1∶1）。观察到了由三磷酸酯到二磷酸酯到一磷酸酯再到核苷的连续转化。释出的磷酸的最终量通过Bencini的方法（Bencini，D.A.，Wild，J.R.，和O′Donovan，G.A.Analytical Biochemistry，132：254-258（1983））测定，并测定出碱/磷酸酯之比为1.0/2.8。

例 35

（1S，4R）-4-〔2-氨基-6-（环丙基甲氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇

（1S，4R）-4-〔2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基）-2-环戊烯-1-甲醇（274mg，1.00mmol），N-环丙基-N-甲胺（0.71g，10mmol）和无水乙醇（6ml）。将残余物在硅胶柱上进行色谱分离。标题化合物用10%的甲醇-氯仿洗脱，产物为无色玻璃体。将乙醇溶液蒸发，并在0.2mmHg压力下用五氧化二磷干燥，得到标题化合物，白色固体泡沫体（293mg，98%）;¹H-NMR和〔α〕²⁰ ₅₈₉结果与例11标题化合物的相同。

例 A

片剂

下面的制剂A、B、C是通过各种成份与聚烯吡酮的湿成粒，随后加入硬脂酸镁并压缩而制成的。

制剂A mg/片 mg/片

（a）活性成份 250 250

（b）乳糖B.P 210 26

（c）聚烯吡酮B.P. 15 9

（d）羟基乙酸淀粉钠 20 12

（e）硬脂酸镁 5 3

500 300

制剂B mg/片 mg/片

（a）活性成份 250 250

（b）乳糖 150 -

（c）微晶纤维素pH101 60 26

（d）聚烯吡酮B.P. 15 9

（e）羟基乙酸淀粉钠 20 12

（f）硬脂酸镁 5 3

500 300

制剂C mg/片

活性成份 100

乳糖 200

淀粉 50

聚烯吡酮 5

硬脂酸镁 4

359

下面的制剂D、E是通过直接压缩混合好的成分而制备的。用在制剂E中的乳糖是直接压缩型的（Dairy Crest-“Zeparox”）。

制剂D mg/片

活性成份 250

预胶化淀粉NF15 150

400

制剂E mg/片

活性成份 250

乳糖 150

微晶纤维素 100

500

制剂F（控制释放制剂）

该制剂是通过以下成份与聚烯吡酮溶液的湿成粒，随后加入硬脂酸镁并压缩而制成的。

mg/片

（a）活性成份 500

（b）羟丙基甲基纤维素 112

（甲基纤维素K4M，

优级）

（c）乳糖B.P. 53

（d）聚烯吡酮B.P. 28

（e）硬脂酸镁 7

700

药物释放持续6-8小时，在12小时以后完全释放。

例 B

胶囊剂

制剂A

胶囊剂，是通过将上述例A制剂D的成份混合并装入由两部分组成的硬胶囊中制成的。制剂B（见下文）是用类似方法制备的。

制剂B mg/胶囊

（a）活性成份 250

（b）乳糖B.P. 143

（c）羟基乙酸淀粉钠 25

（d）硬脂酸镁 2

420

制剂C mg/胶囊

（a）活性成份 250

（b）聚乙二醇4000B.P. 350

600

制剂C是通过熔化聚乙二醇4000B.P.，将活性成份分散在熔化物里，并将熔化物装入由两部分组成的硬质明胶囊中。

制剂D mg/胶囊

活性成份 250

卵磷脂 100

花生油 100

450

制剂D的胶囊，是通过将活性成分分散在卵磷脂和花生油中，并将分散体装入柔软、弹性的明胶囊中而制备的。

制剂E（控制释放胶囊）

下列控制释放胶囊剂的制备，是通过用挤压机挤压成份a、b和c，随后是压出物的球化和干燥，干燥的小球用释放控制膜（d）包覆，并装进由两部分组成的硬明胶囊中。

mg/胶囊

（a）活性成份 250

（b）微晶纤维素 125

（c）乳糖B.P. 125

（d）乙基纤维素 13

513

例 C

注射剂

制剂A

活性成份 0.200g

盐酸溶液，0.1M或氢氧化钠 4.0～7.0

溶液，0.1M适量，至pH

无菌水，适量至 10ml

活性成份溶解在大部分水中（35-40℃），并用适量的盐酸或氢氧化钠溶液将pH调整到4.0～7.0之间。用水将溶液调至定量，并通过无菌微孔过滤器，装入无菌的10ml琥珀玻璃瓶（1型）中，并用无菌密封物和包缝物密封。

制剂B

活性成份 0.125g

灭菌的，不含焦精，

pH7的磷酸盐缓冲液，适量至 25ml

例 D

肌内注射剂

活性成份 0.20g

苄醇 0.10g

四氢呋喃醇聚乙二醇醚75 1.45g

注射用水，适量至 3.00ml

活性成份溶解在四氢呋喃醇聚乙二醇醚中，然后加入苄醇并溶解，加水至3ml。混合物通过无菌微孔过滤器，并密封在无菌的3ml琥珀色玻璃瓶内（1型）。

例 E

糖浆剂

活性成份 0.25g

山梨醇溶液 1.50g

甘油 2.00g

苯甲酸钠 0.005g

香料，Peach17.42.3169 0.0125ml

净化水，适量至 5.00ml

将活性成份溶解于甘油和大部是净化水的混合物里。然后加入苯甲酸钠水溶液，接着加入山梨醇溶液，最后加入香料。用净化水调到规定的体积，并充分混合。

例 F

栓剂 mg/栓

活性成份 250

硬脂，BP（Witepsol H15 1770

-Dynamit NOBEL

2020

在最高45℃，于蒸气夹套锅里将1/5的Witepsol H15熔化。活性成份用200微米的筛子筛分，加入熔化的基质中，同时用一支装有切割头的银棒搅拌（Silverson）混合，直至达到均匀分散。将混合物保持在45℃温度，把其余的Witepsol H15加入悬浮液并搅拌，达到均匀混合。所有悬浮液通过250微米的不锈钢筛，连续搅拌使其冷却至40℃。在温度38-40℃，将2.02克的该混合物填入合适的，2ml的塑膜中。让栓剂冷却至室温。

例 G

阴道栓 mg/栓

活性成份 250

脱水右旋糖 380

马铃薯淀粉 363

硬脂酸镁 7

1000

将上述成份直接混合，通过直接压缩所得混合物制成阴道栓。

抗病毒活性

a）抗HIV活性

按照Averett，D.R.所述方法（J.Virol.Methods 23，1989，263-276），在MT₄细胞上试验了（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇的抗HIV活性，发现IC₅₀值为4.0±1.4μM（10次测定的平均值）。

b）抗HBV活性

由Sells等所描述和表征的人类HBV发生细胞系Hep G2，2.2.15（PNAS84：1005，1987和J，Virol.，62：2836，1988）已被证实具有许多HBV慢性感染肝细胞的特征。它被证实具有引起黑猩猩发病的感染能力。

为了试验这类化合物抗HBV活性，用试验化合物（50-200μM）处理单层培养物10天。在第3、6和10天，收集含有胞外病毒粒子DNA（Dane粒子）的上清介质，用蛋白酶K（1mg/ml）和十二烷基磺酸钠（1%）处理，在50℃保温1小时。用等体积的苯酚萃取DNA，接着用氯仿萃取，然后用乙酸铵和丙醇沉淀。用Schleicher和Schuell的方法（S & S，10 Optical Ave.，Keene，NH03431，Publication^＃700，1987）将DNA沉淀溶解并收集到硝化纤维素上，并用Southern所描述的方法（J.Mol.Biol.，98，503，1975）进行处理。采集细胞，在用异硫氰酸胍将细胞裂解以后得到胞内DNA。以与处理胞外DNA相同的方式处理胞内DNA。在用乙酸铵和丙醇沉淀之后，将胞内DNA沉淀溶解，用限制性核酸内切酶HindⅢ酶切，装入琼脂糖凝胶中，然后按Southern所述方法处理以确定复制的中间体的量。通过测定渗入培养基里的Dane颗粒量下降了至少100倍，以及胞内复制中间体的类似的减少，测定了这种药物的抗病毒活性。

用上述方式试验了（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（N-环丙基-N-甲氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇，发现它在浓度为100μM时具有高效抗HBV活性。

Claims

1、制备下列通式

(其中，R表示环丙氨基或N-环丙基-N-甲氨基，而A表示(1S，4R)或(1R，4S)构型的2-环戊烯-1-甲醇-4-基)的对映体化合物及其衍生物的方法，所说化合物及其衍生物都是以基本上不含相应的对映体的一种对映体形式存在，包括：

A)用一种试剂或在一定条件下处理式(Ⅱ)的对映体化合物：

(其中，A如上文所定义，而Z表示在式(Ⅰ)中定义的R基因的前体基团)或它的衍生物，以便将前体Z基团转化成需要的R基团；或

B)将式(Ⅲ)的对映体化合物：

(其中，A和R如上文所定义，R²表示氢或甲酰基，而R³表示氨基保护基团)或它的衍生物与一种试剂反应，以便生成在需要的式(Ⅰ)化合物上的咪唑环，并除去R³氨基保护基团；或

C)将式(Ⅳ)的对映体化合物：

(其中，A和R如上文所定义，R³表示氨基保护基团)或它的衍生物与一种试剂起反应，以便除去R³保护基团，并有选择地、按任何需要的顺序进行下列转化的一个或两个：

i)形成式(Ⅰ)化合物后，将该化合物转化为它的衍生物；或

ii)形成式(Ⅰ)化合物的衍生物后，将该衍生物转化为式(Ⅰ)的母体化合物或其化的衍生物。

2、根据权利要求1所述的方法，其中式（Ⅰ）的对映体化合物是基本上不含相应的（1R，4S）对映体的（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（环丙氨基）-9H-嘌呤-9基〕-2-环戊烯-1-甲醇。

3、根据权利要求1所述的方法，其中式（Ⅰ）的对映体化合物是基本上不含相应的（1R，4S）对映体的（1S，4R）-顺-4-〔2-氨基-6-（N-环丙基-N-甲氨基）-9H-嘌呤-9-基〕-2-环戊烯-1-甲醇。

4、根据权利要求1所述的方法，用于制备式（Ⅰ）的（1S，4R）对映体化合物的药理学上可接受的盐、酯或酯的盐。

5、根据权利要求1所述的方法，用于制备式（Ⅰ）的（1R，4S）对映体化合物的磷酸酯衍生物。

6、制备式（Ⅳ）（如权利要求1中所定义）的对映化合物的方法，包括将式（Ⅵ）的对映体化合物

（其中A和R³如权利要求1中所定义，而Z表示如在式（Ⅰ）中所定义的R基团的前体基团）与一种试剂或在一定条件下反应，以便将前体基团Z转化为需要的R基团。

7、制备式（Ⅵ）（如权利要求6中所定义）的对映体化合物的方法，包括将式（Ⅴ）的对映体化合物

（其中，A，Z和R³如权利要求6中所定义，而R²表示氢或甲酰基）与一种试剂反应，以便在需要的式（Ⅵ）化合物上形成咪唑环。

8、制备式（Ⅴ）（如权利要求7中所定义）的对映体化合物的方法，包括将式（Ⅶ）的化合物

（其中，Z，R²和R³如权利要求7中所定义，而R⁴表示离去基团）与式（ⅧA）或（ⅧB）的对映体化合物

或它的衍生物反应。

9、制备式（Ⅶ）（如权利要求8中所定义）的化合物的方法，包括还原式（Ⅸ）化合物：

（其中，Z、R³和R⁴如权利要求8中所定义），以将NO₂基团转化为NH₂基团，并有选择地将所得到的NH₂基团转化为甲酰胺基。