PT765308E - Inibidores de enzimas - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "INIBIDORES DE ENZIMAS" A presente invenção refere-se a derivados de amidino sulfona, aos métodos para o seu fabrico, às composições farmacêuticas que os contêm e à sua utilização em terapia, em particular à sua utilização como inibidores selectivos da sintase induzivel de óxido nitrico.

Sabe-se desde o principio dos anos 80 que a relaxação vascular provocada pela acetilcolina está dependente da presença do endotélio e esta actividade foi atribuída a um factor humoral lábil denominado factor de relaxação derivado do endotélio (EDRF). A actividade do trinitrato de glicerilo como vasodilatador é bem conhecida há bem mais de 100 anos e sabe-se que o NO é o componente activo do amilnitrito, gliceriltrinitrito e outros nitrovasodilatadores. A identificação recente do EDRF como NO coincidiu com a verificação do caminho bioquímico pelo qual o NO é sintetizado a partir do amino ácido L-arginina pela enzima sintase NO. 0 NO é o estimulador endógeno da enzima guanilato ciclase solúvel e está envolvido em várias acções biológicas para além da relaxação dependente do endotélio incluindo a citotoxicidade das células fagócitas e da comunicação célula para célula no sistema nervoso central (ver Moncada et al, Biochemical Pharmacology, _38, 1709-1715 (1989) e Monacada et al, Pharmacological Reviews, _43, 109-142 (1991). Actualmente pensa--se que o excesso de produção de NO pode estar envolvido em várias situações, incluindo as situações que envolvem hipotensão 1 ρ ^ ^-Ç* sistémica como ο choque séptico e a terapia com determinadas citocinas, e muitas doenças inflamatórias como a artrite. A síntese do NO a partir da L-arginina pode ser inibida pelo análogo da L-arginina, NG-monometil-L-arginina (L-NMMA), e a utilização terapêutica da L-NMMA para o tratamento do choque séptico (tóxico) e têm sido propostos outros tipos de hipotensão sistémica (WO 91/04 024 e GB-A-2 240 041) . Tem sido proposta a utilização terapêutica de determinados inibidores da sintase de NO excepto a L-NMMA para o mesmo objectico na WO 91/04 024 e na EP-A-0 446 699.

Recentemente tornou-se manifesto que há pelo menos três isoenzimas da sintase de NO (revisto em Knowles e Moncada, Biochem. J. (1994), 298, 249-258) como se segue: (i) uma enzima constitutiva, dependente de

Ca++/calmodulino (eNOS) que está presente nas células vasculares endoteliais, e que libertam NO na resposta ao receptor ou estimulação física. (ii) uma enzima constitutiva, dependente de

Ca++/calmodulino (nNOS), localizada no cérebro e em alguns sistemas nervosos periféricos, que liberta NO em resposta ao receptor ou à estimulação física. (iii) uma enzima independente de Ca++ (iNOS) que é induzida após activação do músculo vascular liso, macrófagos, células endoteliais, e várias outras células pela endotoxina e citocinas. Uma vez expressa esta sintase de NO induzível sintetiza NO durante longos períodos. 2

0 NO libertado pelas eNOS e pelas nNOS actua como um mecanismo de transdução reforçando várias respostas fisiológicas. O NO libertado pelas iNOS actua como uma molécula de citotoxina para os microrganismos invasores. Também parece que os efeitos adversos do excesso de produção de NO, em particular a vasodilatação patológica, a perda vascular e os danos nos tecido, pode resultar largamente dos efeitos do NO sintetizado pelas iNOS.

Os inibidores da sintase NO propostos para utilização terapêutica utilizados largamente, como a L-NMMA e a nitroarginina, são não selectivos porque inibem todas as isoenzimas da sintase de NO! a utilização de um inibidor da sintase de NO não selectivo requer que se tenha mais cuidado com vista a evitar as consequências potencialmente sérias da sobre--inibição das eNOS incluindo a hipertensão e a possível trombose e danificação do tecido. Em particular, no caso da utilização terapêutica do L-NMMA para o tratamento do choque séptico e/ou tóxico tem sido recomendado que o doente deva ser sujeito a monitorização continua da pressão do sangue durante o tratamento. Assim, enquanto os inibidores da sintase de NO não selectivos têm utilidade terpêutica desde que sejam tomadas precauções apropriadas, os inibidores da sintase de NO que são selectivos no sentido de inibirem as iNOS numa extensão consideravelmente superior do que as eNOS teriam benefícios terapêuticos ainda superiores e maior facilidade de utilização. 0 pedido de patente WO 93/13 055 apresenta um grupo de derivados amidino da fórmula (O) R1

NH2 3 (0) r e sais, e ésteres farmaceuticamente aceitáveis e amidas destes, nos quais: R1 é um grupo alquilo Ci-6 de cadeia linear ou ramificada, um grupo alcenilo C2_6, um grupo alcinilo C2-6, um grupo cicloalquilo C3-6 ou um grupo cicloalquilo C3-6 grupo alquilo Ci-βί Q é um grupo alquileno, alcenileno ou alcinileno tendo 3 a 6 átomos de carbono e que pode ser opcionalmente substituído por um ou mais grupos alquilo Ci-3; ou Q é um grupo com a fórmula -- (CH2) PX (CH2) q- em que p é 2 ou 3, qélou2eXéS(0)x, em que x é 0, 1 ou 2, O ou NR2 em que R2 é H ou alquilo Ci_6; ou Q é um grupo com a fórmula - (CH2) rA(CH2) s- em que réO, 1 ou 2, séO, 1 ou 2 e A é uma anel carbocíclico ou heterocíclico de 3 a 6 membros que pode opcionalmente ser substituído por um ou mais substituintes adequados como o alquilo C1-6, o alcoxi C1-6, o hidroxi, o halo, o nitro, o ciano, o trifluoroalquilo C1-6, o amino, o aminoalquiloCi-6 ou o aminodialquiloCi-6 que têm actividade como inibidores da enzima sintase de NO.

Os presentes inventores verificaram que havia um grupo particular de compostos que são inibidores selectivos das iNOS, tendo pouco ou nenhum efeito nas eNOS. Em conformidade a presente invenção apresenta compostos com a fórmula (I)

R1 HN

nh2

C02H (I) em que pró-medicamento deste R1 é metil ou fluorometil ou um sal, éster, amida ou fisiologicamente aceitável. 4

V φ

Em alternativa, a presente invenção apresenta um composto seleccionado entre o ácido 2-amino-6-(1-iminoetilamino)-4,4--dioxo-4-tiahexanóico e o ácido 2-amino-6-(l-imino-2-fluoroetil-amino)-4,4-dioxo-4-tiahexanóico. De preferência os compostos estão na configuração R.

Os compostos com a fórmula (I) podem incluir vários centros assimétricos na molécula dependendo do significado preciso dos vários grupos e fórmula (I) tem a intenção de incluir todos os possíveis isómeros. Os compostos com a fórmula (I) incluem todos um centro assimétrico no grupo YC02h NH2 e embora a quiralidade L natural da arginina seja preferida, tem novamente a intenção de que a fórmula deve incluir todos os possíveis isómeros, que individualmente quer em mistura em quaisquer proporções.

Os sais adequados incluem os formados quer com ácidos orgânicos quer inorgânicos. Estes sais de adição de ácido serão normalmente farmaceuticamente aceitáveis embora sais não farmaceuticamente aceitáveis possam ser de utilidade na preparação e purificação do composto em questão. Assim, os sais preferidos incluem os formados a partir de ácidos clorídrico, bromídrico, sulfúrico, cítrico, tartárico, fosfórico, láctico, pirúvico, acético, trifluoroacético, succínico, oxálico, fumárico, maleíco, oxaloacético, metanossulfónico, etanossulfónico, p-toluenossulfónico, benzenossulfónico e isetiónico. Os sais dos compostos com a fórmula (I) podem ser feitos por reacção do composto apropriado na forma da base livre com o ácido apropriado. 5

U t

Os ésteres e amidas farmaceuticamente aceitáveis dos compostos com a fórmula (I) podem ter o grupo ácido substituído por -C02R3 em que R3 é por exemplo alquiloCi_6, arilo ou arilalquiloCi-3 ou -COR4 em que R4 é o resíduo de um amino ácido natural ou sintético.

Pelo termo promedicamento fisiologicamente aceitável entenda-se derivados dos compostos com a fórmula (I) que têm a mesma função fisiológica que o composto livre com a fórmula (I), por exemplo, sendo convertível no corpo a este. Estes promedicamentos podem ou não ter actividade por si própria.

Um outro aspecto da presente invenção também apresenta compostos com a fórmula (I) como definido aqui e todos os sais, ésteres, amidas e promedicamentos destes fisiologicamente aceitáveis, para utilização em medicina, em particular para o tratamento de situações em que há uma vantagem em inibir a produção de NO a partir da L-arginina por acção da sintase de NO e mais especificamente de situações em que há uma vantagem em inibir a produção de NO pelas isoenzimas iNOS sobre a produção de eNOS.

Em conformidade com um outro aspecto, a presente invenção apresenta a utilização de um composto com a fórmula (I) e todos os sais, ésteres, amidas e pró-medicamentos destes fisiologicamente aceitáveis, no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma situação em que há uma vantagem em inibir a produção de NO a partir da arginina por acção da sintase NO e, mais especificamente, por acção dos iNOS. 6 t-

Num outro aspecto, apresenta-se a utilização de um composto com a fórmula (I) ou um sal, éster, amida ou pro-medicamento destes fisiologicamente aceitável no fabrico de um medicamento para o tratamento de estados de choque resultantes da sobreprodução de NO pelas iNOS como o choque séptico, ou choque causado pela falha hepática fulminante ou pela terapia com citocinas como a TNF, IL-1 e IL-2 ou terapia com agentes indutores da citocina, por exemplo o ácido 5,6-dimetilxantenona acético.

Um outro aspecto da presente invenção apresenta a utilização de um composto com a fórmula (I) ou um sal, éster, amida ou pró-medicamento destes fisiologicamente aceitável no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma situação inflamatória, como a artrite.

Outras situações em que há vantagem em inibir selectivamente as iNOS incluem uma grande variedade de doenças auto-imunes e/ou inflamatórias, como as das articulações (e.g. artrite reumatóide, osteoartrite), do tracto gastro-intestinal (e.g. colite ulcerosa e outras doenças inflamatórias dos intestinos, gastrites e inflamações das mucosas resultantes de infecção, a enteropatia provocada por medicamentos anti-infla-matórios não esteróides), dos pulmões (síndroma da distensão respiratória do adulto, asma), do coração (miocardite), do tecido nervoso (e.g. esclerose múltipla) do pâncreas (e.g. diabetes melitus), dos rins (e.g. glomerulonefrite), da pele (e.g. dermatite, psoríase, urticária) assim como dos orgãos transplantados (rejeição) e doenças multi-orgãos (e.g. eritematose do lúpus sistémico). Para além disso há evidência sobre a sobreprodução de NO pelas iNOS na aterosclerose. Desta forma, um outro aspecto da presente invenção apresenta a 7

utilização de um composto com a fórmula (I) ou um sal, um éster, uma amida ou um pró-medicamento deste fisiologicamente aceitável no fabrico de um medicamento para utilização no tratamento das situações acima. A inibição das nNOS e/ou iNOS é benéfica no tratamento de doenças do sistema nervoso devido à sobreprodução de NO por esta isoenzima, particularmente o tratamento da isquémia cerebral. Outras doenças incluem o trauma CNS, a epilepsia, a demência da SIDA, a doença neurodegenerativa crónica e a dor crónica, e situações nas quais o nervo não colinérgico não adrenérgico pode estar implicado como o priapismo, a obesidade e a hiperfagia. Em conformidade a presente invenção também apresenta a utilização de um composto com a fórmula (I) ou um sal, éster, amida ou um pró-medicamento fisiologicamente aceitável destes no fabrico de um medicamento para utilização no tratamento das situações acima.

Para além disso a inibição da sintase de NO pode ser vantajosa na prevenção da perda de linfócitos associada à infecção HIV, no aumento da radiosensibilidade de tumores durante a radioterapia e na redução do crescimento de tumores e metástases. A inibição quer das iNOS quer das nNOS pode ser benéfica no tratamento de determinadas situações em que quer as isoenzimas desempenham um papel, por exemplo situações de CNS como a isquémia cerebral.

Como utilizado aqui, a referência a "tratamento" de um doente tem a intenção de incluir a profilaxia; o termo "mamífero" tem a intenção de incluir um humano ou um animal. 8 U, ^^ A actividade dos compostos com a fórmula (I) e de todos os sais, ésteres, amidas e pró-medicamentos fisiologicamente aceitáveis destes como os inibidores da sintase de NO podem ser determinados utilizando enzimas isoladas de humanos ou de roedores, o anel aórtico do rato ou in vivo nos ratos de acordo com os métodos descritos aqui à frente.

Enquanto pode ser possível para os compostos com a fórmula (I) e todos os sais, ésteres, amidas e pró-medicamentos fisiologicamente aceitáveis destes a ser administrados como a matéria prima, é preferível apresentá-los como uma formulação farmacêutica. Em conformidade com um outro aspecto, a presente invenção apresenta uma formulação farmacêutica compreendendo um composto com a fórmula (I) e todos os sais, ésteres, amidas e pró-medicamentos destes fisiologicamente aceitáveis, em conjunto com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis deste e opcionalmente um ou mais de outros ingredientes terapêuticos. 0(s) veículo (s) têm que ser "aceitáveis" no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não prejudiciais para o seu receptor.

As formulações incluem as adequadas para administração oral, parenteral (incluindo a subcutânea, a intradermal, a intramuscular, a intravenosa e a intraarticular), rectal e tópica (incluindo a dermal, a bucal, a sublingual e a intraocular) embora o caminho mais adequado possa depender por exemplo da situação e da doença do receptor. As formulações podem convenientemente ser apresentadas numa forma de dose unitária e podem ser preparadas por qualquer dos métodos bem conhecidos na técnica farmacêutica. Todos os métodos incluem o passo de levar em associação um composto com a fórmula (I) e 9 \ 1—^,ΐ Λ,

t todos os sais, ésteres, araidas e pró-medicamentos fisiologicamente aceitáveis destes ("ingrediente activo") com o veiculo que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral as formulações são preparadas levando uniforme e infimamente em associação com o ingrediente activo com os veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou ambos e em seguida, se necessário, enformando o produto na formulação desejada.

As formulações da presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades discretas como cápsulas, pílulas ou comprimidos contendo cada um uma quantidade pré-determinada de ingrediente activo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou uma suspensão num líquido aquoso ou num líquido não aquoso; ou como uma emulsão líquida de óleo em água ou uma emulsão líquida de água em óleo. 0 ingrediente activo pode também estar presente como uma pílula grande, electuário ou pasta.

Um comprimido pode ser feito por compressão ou por moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Os comprimidos que são comprimidos podem ser preparados por compressão numa máquina, adequada do ingrediente activo numa forma de fluxo livre como um pó ou grânulos, opcionalmente misturados com um agente ligante, lubrificante, diluente inerte, lubrificante, tensioactivo ou dispersante. Os comprimidos moldados podem ser feitos por moldagem numa máquina adequada de uma mistura do composto em pó humidificado com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem opcionalmente ser revestidos ou marcados com riscas e podem ser formulados de forma a apresentarem uma libertação lenta ou controlada do ingrediente activo que contêm. 10 ί ί

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As formulações para administração parenteral incluem soluções estéreis para injecção aquosas e não aquosas que podem conter anti-oxidantes, tampões, bacteriostatos e solutos que tornem a formulação isotónica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As formulações podem ser apresentadas em contentores com doses unitárias ou com doses múltiplas, por exemplo ampolas ou pequenos frascos selados, e podem ser armazenadas numa forma congelada-seca (liofilizada) necessitando somente de adição de veiculo liquido estéril, por exemplo, salino ou água para injecção, imediatamente antes da utilização. As soluções para injecção extemporâneas e as suspensões podem ser preparadas a partir de pós estéreis, grânulos e comprimidos do género anteriormente descrito.

As formulações para administração rectal podem estar presentes como um supositório com os veículos usuais como a manteiga de cacau ou o polietileno glicol.

As formulações para administração tópica na boca, por exemplo bucal ou sub-lingualmente, incluem os losangos compreendendo o ingrediente activo numa base aromatizada como a sacarose e a acácia ou o tragacanto, e pastilhas compreendendo o ingrediente activo numa base como a gelatina e a glicerina ou a sacarose e a acácia.

As formulações de dosagem unitária preferidas são as que contêm uma dose efectiva, como referido aqui em baixo, ou uma fracção apropriada desta, do ingrediente activo. 11

Deve entender-se que para além dos ingredientes particularmente os mencionados acima, as formulações da presente invenção podem incluir outros agentes convencionais na técnica tendo em atenção o tipo de formulação em questão, por exemplo as adequadas para administração oral podem incluir agentes aromatizantes.

Os compostos da invenção podem ser administrados oralmente ou via injecção numa 'dose entre 0,1 e 1500 mg/kg por dia, preferivelmente 0,1 a 500 mg/kg por dia. O intervalo de dosagem para humanos adultos é geralmente entre 5 mg e 35 g/dia e preferivelmente 5 mg a 2 g/dia. Os comprimidos ou as outras formas da apresentação fornecidas em unidades discretas podem convenientemente conter uma quantidade de composto da invenção que é efectiva numa dosagem destas ou como uma múltipla da mesma, no caso, unidades contendo 5 mg a 500 mg, normalmente à volta de 10 mg a 200 mg.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados em combinação com um mais outros ingredientes activos. Estes outros ingredientes activos adequados para administração concorrente serão claros para um médico, mas poderão ser por exemplo ser um agente anti-inflamatório como um corticosteróide, e.g. a metilprednisolona. Os compostos com a fórmula (I) são inibidores competitivos em relação à L-arginina e desta forma pode não ser apropriado é claro tratar os doentes concorrentemente com preparações (e.g. nutrição parenteral total) que tenham um elevado conteúdo em l-arginina.

Os compostos com a fórmula (I) e todos os sais, ésteres, amidas e pró-medicamentos destes fisiologicamente aceitáveis são preferivelmente administrados oralmente ou por injecção

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(intravenosa ou sub-cutânea). A quantidade precisa de composto administrado a um doente será da responsabilidade do médico acompanhante. Contudo a dose empregue dependerá de vários factores, incluindo a idade e o sexo do doente, a doença precisa a ser tratada, e a sua gravidade. Também o caminho da administração pode variar dependendo na situação e da sua gravidade.

Os compostos com a fórmula (I) são novos e em conformidade com outro aspecto da presente invenção apresenta-se um processo para a sua preparação.

Os compostos com a fórmula (I) podem ser preparados: (a) por oxidação de um composto com a fórmula (II):

NH2 (II) A oxidação pode ser realizada por métodos conhecidos na técnica, por exemplo por tratamento com um composto rico em oxigénio, como o peróxido de hidrogénio a 30% e o molibdato de amónio 0,5 M em ácido perclórico.

Os compostos com a fórmula (II) podem ser preparados pela reacção de um amino ácido com a fórmula (III)

NH2 (III) ou um derivado deste protegido, com um composto com a fórmula (IV) 13 ι

Em que L é um grupo de saída e R1 é como definido aqui anteriormente, seguido de remoção de quaisquer grupos protectores presentes, para dar um composto com a fórmula (II).

Os grupos de saída adequados L incluem o -0R5 e o -SR5 em que R5 é um grupo alquilo inferior, e.g. alquiloCi-4, de preferência metilo ou etilo.

Os compostos com a fórmula (III) serão geralmente utilizados numa forma que a função amino ácido está protegida por grupos protectores adequados e em relação a isto pode ser feita referência por T.W. Greene e P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition, John Wiley and Sons Inc., 1991. Os grupos protectores podem em seguida ser removidos de uma forma convencional (loc. cit.) como a fase final do processo para dar o composto com a fórmula (II) . Por exemplo a função amino ácido pode ser protegida como o sal de cobre com desprotecção tendo lugar numa coluna de permuta iónica que é empregue para remover os iões inorgânicos da mistura da reacção.

Os compostos com a fórmula (IV) podem ser utilizados na forma da base livre ou como um sal de adição de ácido, e.g. o sal de clorídrico ou de iodídrico. A reacção é geralmente feita num solvente adequado na presença de base, e.g. um hidróxido de metal alcalino como o hidróxido de sódio, de preferência a pH de aproximadamente 9 a 11 e geralmente a uma temperatura entre 0°C até à temperatura de refluxo do solvente, de preferência 0°C a 50°C. 0 solvente 14 ι J. preferido é a água embora a reacção possa ser realizada num solvente polar como um álcool inferior, e.g. metanol ou etanol, ou uma amida, e.g. dimetilformamida, quer sozinha quer em mistura com água, e isto pode ser vantajoso em determinadas circunstâncias.

Os compostos com a fórmula (III) são em geral compostos conhecidos que podem ser convertidos em derivados protegidos apropriados de uma forma conhecida. Os imidatos e os tioimidatos com a fórmula (IV) (L é -0R5 e -SR5 respectivamente) estão também nos compostos conhecidos em geral e a reacção destes compostos com uma amina primária é discutida por exemplo no The Chemistry of Amidines and Imidates, Vol. 2, Eds. Saul Patai and Zvi Rappaport, John Wiley and Sons Inc., 1991. (b) por desprotecçâo de um composto com a fórmula (V) R1

em que R1 é como definido aqui anteriormente, Q é hidrogénio ou um grupo protector carboxilo e Q' é um grupo protector, opcionalmente seguido de conversão em outro composto com a fórmula (I). Os exemplos de grupos protectores adequados incluem o terbutoxicarbonilo, o benziloxicarbonilo, o alquilo, o terc--butilo, o benzilo, etc. Outros grupos adequados que podem ser utilizados serão conhecidos de um especialista na técnica. Quando o grupo protector é um ácido lábil, por exemplo como no caso em que Q é alquilo, a reacção pode ser realizada por hidrólise ácida, por exemplo por reacção com cloreto de hidrogénio em dioxano, HBr/ácido acético em ácido acético glacial ou ácido trifluoroacético em diclorometano, a uma 15 ι temperatura não extrema entre -5°C e 100°C, de preferência à temperatura ambiente. Quando o grupo protector é clivável por hidrogenólise, por exemplo benziloxicarbonilo, a desprotecção pode ser feita utilizando hidrogénio sobre um catalisador, por exemplo paládio/carvão.

Os compostos com a fórmula (V) podem ser preparados pela reacção de um composto com a fórmula (VI)

H2N

T NHQ ’

C02Q (VI) em que Q e Q' são como definidos aqui anteriormente, com um composto com a fórmula (VII) R1 (VII)

HtvT YR16 em que R1 é como definido aqui anteriormente, Y é 0 ou S e R16 é alquilo Ci-6, fenilalquilo Ci-6, ou naftilalquilo Ci_6 por exemplo benzilo. A reacção pode adequadamente ser realizada num solvente polar, por exemplo um álcool Ci_6 como o metanol ou o etanol, a uma temperatura não extrema entre -50°C e 150°C, por exemplo -5°C a 50°C como a temperatura ambiente.

Determinados compostos com a fórmula (VII) em que Y é S são novos, e podem ser preparados como descrito aqui a seguir.

Os compostos com a fórmula (VI) podem ser preparados pela oxidação de um composto com a fórmula (VIII)

Q

HN _(CH2), CH Co2q I NHQ' (VIII) 16

em que Q e Q' são como definido aqui anteriormente, e Q'' é um grupo protector adequado, por exemplo benziloxicarbonilo, seguido de remoção do grupo protector Q''. A reacção de oxidação pode ser realizada pelos métodos padrão conhecidos na técnica, por exemplo em conformidade com o método descrito em Tet. Lett. (1981) 22 (14), 1287, ou por reacção como ácido m-clorobenzóico para dar o produto sulfóxido, seguido por reacção com "Oxona" se o produto sulfona for necessário. A reacção é adequadamente realizada num solvente polar, por exemplo água ou álcool inferior, como o etanol, ou uma mistura destes. A remoção do grupo protector pode ser feita pelos métodos padrão por um especialista na técnica, por exemplo condições de hidrogenação de transferência catalítica utilizando, por exemplo, ácido fórmico em álcool, como o metanol, na presença de um catalisador adequado, como paládio a 10% em carvão.

Os compostos com a fórmula (VIII) podem ser preparados pela reacção de (i) um composto com a fórmula

NH2 (IX) em que M+ é um catião adequado e.g. Na+, com um composto com a fórmula (X) ^(CH2)2\ Q ’ * HlSr T)S02R17 (X) em que Q'' é definido como aqui anteriormente, e R17 é um grupo alquilo Ci_6 ou um grupo arilo, seguido de protecção dos 17

grupos carboxi e amino com os grupos de protecção Q e Q', ou vice versa.

Os compostos com a fórmula (IX) não são normalmente isolados e podem ser preparados por clivagem redutora de um composto com a fórmula (XI):

NH

NH2 A clivagem pode ser realizada através de métodos conhecidos na especialidade, e.g. por utilização de sódio em amónia líquida a uma temperatura entre -78°C e 0aC, e preferivelmente à volta de -40°C.

Os compostos com a fórmula (IX) podem também ser formados pelo tratamento de um composto com a fórmula (XII)

com uma base inorgânica adequada, e.g. hidrogeno carbonato de sódio. A reacção é realizada num solvente adequado, e.g. DMF. (ii) Pela reacção de um composto com a fórmula (XII) como definido aqui anteriormente com uma base orgânica adequada, e.g. DBU. A reacção é realizada num solvente adequado e.g. tolueno a uma temperatura não extrema entre 0 e 100°C, de preferência à temperatura ambiente. 18

Os compostos com a fórmula (X), (XI) e (XII) estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados por métodos facilmente conhecidos de um especialista na técnica.

Os intermediários com a fórmula (VII') podem ser preparados por reacção de um composto com a fórmula (XIII) R1

(XIII) com um reagente com a fórmula R16L' , adequadamente PhCHaL' , em que R16 é como definido aqui anteriormente e L' é um grupo de saída adequado, por exemplo um átomo halo como o cloro.

Os compostos com a fórmula (XIII) estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados pelos métodos conhecidos de um especialista na técnica. A presente invenção será agora ilustrada pelos exemplos seguintes:

Intermediário A

Preparação de sal t-Butil-6-amino-2-t-butoxicarbonilamino-4,4-dioxo-4-tiahexanoato formato t-Butil-6-benziloxicarbonilamino-2-t-butoxicarbonilamino--4,4-dioxo-4-tiahexanoato (152 mg) em ácido fórmico a 5%/metanol (8 ml) foi adicionado gota a gota a uma suspensão agitada de Pd a 10%/C em ácido fórmico a 5%/metanol (2 ml) a 0°C. A mistura da reacção foi agitada a 0°C durante 1 h e em seguida à temperatura ambiente durante 1-2 horas. A mistura da reacção foi filtrada através de um hyflo, e lavou-se o catalisador com metanol (25 ml) e água (25 ml) . Concentrou-se o filtrado para um quarto 19 p L·, ^ do volume em vácuo e diluiu-se com água (25 ml) . Este processo foi repetido duas vezes, e em seguida evaporado até à secagem em vácuo. Dissolveu-se o resíduo em água e liofilizou-se para dar um sólido branco (111 mg).

Intermediário 1B

Preparação de bromidrato de S-benzil-2-fluoroacetimidato

Puseram-se en refluxo fluorotioacetamida (3,39 g) e brometo de benzilo (6,23 g) em clorofórmio (40 ml), sob azoto, durante 16 h. Após arrefecimento, diluiu-se a mistura em éter (200 ml) e filtrou-se o sólido laranja resultante. Lavou-se o sólido com mais éter e secou-se sobre P205 em vácuo para dar 5,19 g do produto desejado.

Intermediário C

Preparação de cloridrato de S-benziltioacetimidato (intermediário)

Aqueceu-se sob refluxo uma mistura de tioacetamida (15,0 g, 0,20 mol) e cloreto de benzilo (25,3 g, 0,20 mol) em clorofórmio (75 ml) durante 90 minutos (a tioacetamida precisa de ~40 minutos para ficar em solução). Deixou-se arrefecer a mistura da reacção até à temperatura ambiente e deixou-se em seguida em repouso a 0°C durante a noite, formando-se cristais incolores como uma camada na superfície. Filtrou-se o produto, lavou-se com éter a 10%-clorofórmio frio e secou-se por extracção para dar o composto do titulo (25,55 g) como prismas incolores. Pf. = 161-163°C. 0 sal de bromidrato foi feito por um método análogo com rendimento de 85%, pf = 184-186°C dec. 20

Exemplo 1

Preparação de dibromidrato de ácido 2-amino-6-(l-imino-2— fluoroetilamino)-4,4-dioxo-4-tiahexanóico (a) Bromidrato de t-butil-2-t-butoxicarbonilamino-6-(1-i-mino-2-fluoroetilamino)-4,4-dioxo-4-tiahexanoato

Ao Intermediário A (609 mg) em etanol (10 ml) a 0°C adicionou-se o Intermediário 1B (407 mg) numa porção. Agitou-se a mistura a 0°C durante 1 h, e em seguida à temperatura ambiente durante 2h. Removeu-se o solvente em vácuo e fez-se a partição do residuo entre água e éter. Lavou-se a camada aquosa duas vezes mais com éter, e em seguida concentrou-se em vácuo. A goma residual foi purificada por cromatografia em coluna com sílica, eluindo com diclorometano-metanol (8:1), dando uma espuma incolor (317 mg). (b) Bromidrato de ácido 2-amido-6-(l-imino-2-fluoroetilamino) -4,4-dioxo-4-tiahexanóico

Dissolveu-se bromidrato de t-butil-2-t-butoxicarbonilami-no-6- (l-imino-2-fluoroetilamino) -4., 4-dioxo-4-tihexanoato (300 mg) em ácido acético glacial (4.5 ml), e arrefeceu-se enquanto se adicionou HBr em ácido acético (45% p/v, 1,5 ml). Em seguida agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2h. Evaporaram-se os materiais voláteis in vacuo e dissolveu-se o resíduo em água. Evaporou-se a solução até à secagem in vacuo, e repetiu-se o processo mais duas vezes. Adicionou-se etanol ao resíduo e concentrou-se a mistura in vacuo até se obter uma espuma branca. 0 material pode depois ser purificado por dissolução num mínimo de etanol quente e precipita-se o produto 21 p L· —ç. com éter para dar um sólido higroscópico branco (220 mg) como diidrato.

Exemplo 2

Preparação de ácido 2-amino-6-(1-iminoetilamino)-4,4-dioxo--4-tiahexanóico

Método A (a) S-[2-(1-iminoetil amino) etil] cisteína

Dissolveu-se bromidrato de S-(2-aminoetil)cisteína (12,25 g, 50 mraol) em água quente (50 ml) e tratou-se com carbonato de cobre básico (5,85 g). Arrefeceu-se a solução, e filtrou-se atrvés de Hyflo, e lavou-se o resíduo com água.

Agitou-se e arrefeceu-se até 10°C a solução azul do derivado de cisteína protegido com cobre. Ajustou-se o pH para 10 a 11 por adição de hidróxido de sódio 2 N durante o que se adicionou às porções cloridrato de etilacetimidato (9.375 g, 75 mmol). Deixou-se a temperatura aumentar até à temperatura ambiente e ajustou-se o pH da solução para 3 por adição de ácido clorídrico 2 N. Aplicou-se a solução a uma coluna Dowex AG50WX8 (volume do leito de 100 ml), lavou-se com água, e eluiu-se com solução de amónia 0,2 N. Recolheram-se as fracções positivas de ninidrina e removeu-se a solução de amónia por evaporação em vácuo. Ajustou-se o pH da solução restante para 4 por adição de ácido clorídrico 2 N. Evaporou-se a solução até à secagem num evaporador rotativo para dar 3 g de cloridrato de S-[2-(l-imi-noetil amino) etil] cisteína que se secou num excicador com vácuo. 22 r

Lcj (b) Ácido 2-amino-6-(1-iminoetilamino)-4,4-dioxo-4-tiaexa- nóico

Tratou-se uma solução de S-[2-(1-iminoetil amino) etil] cisteina (3,25 g, 10 mmol) em ácido perclórico 1 M (20 ml) com solução de peróxido de hidrogénio a 30% (6,8 ml, 60 mmol) e molibdato de amónio 0,5 Μ (1 ml). Manteve-se a temperatura da reacção resultante a 30°C por arrefecimento com água. Agitou-se a mistura da reacção a 25°C durante 2 horas, tempo após o qual se colocou numa coluna de permuta iónica AG 1X8 (acetato) (50 ml, 60 mmol). Eluiu-se o amino ácido da coluna com água e evaporou-se o solvente das fracções positivas de ninidrina para dar um óleo. Tratou-se o óleo com etanol e evaporou-se em vácuo. Purificou-se o óleo residual (aproximadamente 4 g) por cromatografia flash em coluna utilizando metanol/amónia (9.1) como eluente para dar 0,8 g de ácido 2-amino-6- (1-iminoetilamino) -4,4-dioxo-4-tiaexanóico.

Método B (a) Sulfato de S-(2-benziloxicarbonilaminoetil) cisteina

Agitou-se amónia liquida (6 1) no reactor e adicionou-se cuidadosamente L-cisteina (300 g, 1,25 mol). Agitou-se a mistura da reacção durante 1 hora. Adicionou-se sódio (115 g, 5 mol) uma peça de cada vez durante 2 horas. Formou-se uma solução cinzenta. Adicionou-se às porções durante 15 min sulfonato de 2-(benziloxicarbonilamino) etano fenil (836 g, 2,5 mol). Agitou--se a mistura da reacção com amónia sob refluxo durante a noite. Deixou-se a amónia evaporar desligando a circulação. Deixou-se a reacção durante a noite, em seguida adicionou-se 9 litros de 23 água, e aqueceu-se a reacção até 40°C com agitação. Arrefeceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e filtrou-se. Neutralizou-se o filtrado com ácido sulfúrico diluído. Removeu--se um sólido branco amarelado por filtração e secou-se num forno a vácuo a 80°C. Obteve-se 715 g do composto do titulo. Pf = 220-221,5°C. (b) S-(2-benziloxicarbonil amino etil)-N-butiloxicarbonil- cisteína

Adicionou-se anidrido de butiloxicarbonilo (24 g, 0,11 mol) em 3 porções durante 1 ^ hora a uma suspensão agitada e arrefecida em gelo de sulfato de S-(2-benziloxicarbonilamino etil)cisteína finamente moído (39,5 g, 0,1 mol) em dioxano (400 ml) e água (200 ml) ajustando o pH para 9,5 com a adição de aproximadamente 200 ml de hidróxido de sódio 1 M. Removeu-se o dioxand em vácuo e adicionou-se acetato de etilo à solução aquosa. Ajustou-se o pH da camada aquosa para 2,8 por adição de ácido sulfúrico aquoso e filtrou-se. Extraiu-se o filtrado com acetato de etilo. Combinaram-se os extractos de acetato de etilo, lavou-se com água e salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se. Evaporou-se o solvente em vácuo para dar 42,95 g do composto do título. (c) Éster de ter-butilo da S-(2-benziloxicarbonilamino etil)-N-butiloxi-carbonilcisteína

Aqueceu-se até ao refluxo uma solução de S-(2-benziloxicarbonil amino etil)-N-butiloxicarbonil cisteína (3,98 g, 10 mmol) em benzeno seco (15 ml) e um pouco de benzeno destilado para remover os últpmos traços de humidade. À solução acima em refluxo adicionou-se gota a gota durante 20 minutos acetal de 24 N,N-dimetilformamida di-terc-butilo (8,2 g, 40 mmol). Em seguida aqueceu-se a mistura da reacção sob refluxo durante 30 minutos até não se observar mais alteração por tlc. Arrefeceu-se a mistura da reacção até à temperatura ambiente, tratou-se com água (15 ml) e agitou-se . Separaram-se as fases e lavou-se a camada orgânica com KHC03 a 10% (3x10 ml) e salmoura (2x10 ml). Lavaram-se as fases aquosas com éter-benzeno fresco (1:1) (2x15 ml) e os 4 extractos combinados secaram-se sobre Na2S04, tratado com carvão, filtrou-se e evaporou-se até à secagem para dar um óleo castanho-amarelado pálido. O material em bruto foi purificado por cromatografia "flash" sobre SÍO2 utilizando ciclohexano 65%-acetato de etilo como eluente. Obteve-se 2,56 g do composto do título como um óleo quase incolor. (d) Éster de terc-butilo do ácido 2-(butiloxicarbonil-amino)-6-(benziloxi-carbonilamino)-4,4-dioxo-4-tiahexanóico A éster de terc-butilo da S-(2-benziloxicarbonilamino etil)-N-butiloxi-carbonilcisteína (454 mg, 1,0 mmol) em metanol (5 ml) a 0°C adicionou-se gota a gota uma solução de "Oxona" (925 mg, 3,0 mmol) em água (5 ml) durante 10 minutos. Durante a adição, observou-se uma reacção exotérmica e manteve-se a temperatura abaixo de 2°C com arrefecimento externo com gelo. Agitou-se a mistura reaccional a 0°C durante 4 h e em seguida deixou-se aquecer até 15°C durante 10 horas. Por a mistura da reacção se ter tornado muito viscosa, adicionaram-se alíquotas adicionais de metanol (4 ml) e água (2 ml) para facilitar a agitação. Adicionou-se uma outra porção de "Oxona" (308 mg, 1,0 mmol) em água (1,5 ml) e agitou-se a mistura durante mais 14 horas à temperatura ambiente. Em seguida tratou-se a mistura da reacção com éter (3x25 ml) e a solução etérea separou-se do resíduo sólido. Os extractos etéreos combinados foram secos 25 ,1 p U, ^ sobre Na2SC>4, f.iltrou-se e evaporou-se até à secagem para dar 0,428 g do composto do título sob a forma de um óleo incolor que solidificou rapidamente num sólido branco. Pf. = 116-118°C. (e) Éster de terc-butilo do ácido 2-(butiloxicarbonil-amino)-6-amino-4,4-dioxo-4-tia-hexanóico A uma solução de éster de terc-butilo do ácido 2-(butil-oxicarbonilamino)-6-(benziloxicarbonilamino)-4,4-dioxo-4-tia--hexanóico (200 mg) em metanol (5 ml) adicionou-se Pd/C (50%) (tipo Degussa) (200 mg) e hidrogenou-se a mistura à temperatura ambiente até não se observar mais alterações. A mistura reaccional foi em seguida filtrada através de uma almofada de Hyflo e lavou-se o resíduo com metanol fresco (2x2 ml) . Evaporaram-se os filtrados combinados até à secagem para dar 119 mg do composto do título sob a forma de um vidro quase incolor. (f) Cloridrato de éster de terc-butilo do ácido 2-(bu-tiloxicarbo-nilamino)-6-(1-iminoetilamino)-4,4-dioxo-4-tia-hexa-nóico A uma solução de éster de terc-butilo do ácido 2-(butil-oxicarbonilamino)-6-amino-4,4-dioxo-4-tia-hexanóico (340 mg) em metanol (10 ml.) adicionou-se às porções o Intermediário C (202 mg) . Após agitação a 0°C durante 30 minutos, deixou-se a mistura reaccional aquecer até à temperatura ambiente e em seguida evaporou-se até à secagem. Tratou-se o resíduo oleoso com água (2 ml) e extraiu-se com éter (4x4 ml) para remover o benzil mercaptano. Lavaram-se os extractos orgânicos com água fresca (2 ml) e evaporaram-se os extractos combinados em vácuo 26

V

U para dar 396 mg do composto do título sob a forma de um vidro incolor. (g) Dicloridrato de ácido 2-amino-6-(l-iminoetilamino)--4,4-dioxo-4-tia-hexanóico A uma solução de cloridrato de éster de terc-butilo do ácido 2-(bu-tiloxicarbonilamino)-6-(l-iminoetilamino)-4,4-dioxo-4-tia-hexanóico (300 mg) em dioxano (15 ml) adicionou-se HC1 4N/dioxano (10 ml) e deixou-se repousar a mistura à temperatura ambiente durante 24 horas. Em seguida deixou-se a mistura evaporar até à secagem e tratou-se o resíduo semi-sólido com água (2 ml) e evaporou-se para dar um vidro incolor. O produto em bruto foi purificado por cromatografia "flash" em Si02 utilizando CH3CN : CH3C02H : H20 (5:2:2) como eluente para dar 172,5 mg do composto do título.

Exemplo 3

Actividade Biológica A inibição das sintases de NO humanas purificadas foi determinada seguindo a preparação das nNOS humanas (Furfine et al. (1993) Biochem. 32, 8512-8517), iNOS (Sherman et al. (1993)

Biochem. 3_2, 11600-11605) e eNOS (Garvey et al. (1994) Arch.

Bioch. Biophys., na impressa) como descrito. A sua actividade foi monitorizada por conversão de [14C]-L-arginina em citrulina como descrito por Schmidt et al. ((1991) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 8_8, 365-369) em misturas reaccionais (100 μΐ) contendo 50 mM de HEPES pH 7,0, tetrahidrobiopterina 8 μΜ, NADPH 1 mM e [140]-Ε--arginina 0,5 μΜ (30 000 cpm) a 30°C. Os resultados são mostrados na Tabela 1 abaixo. 27

V

Tabela 1 : Inibição das Isoenzimas NOS Humanas Purificadas

Exemplo N° Enzima Humana Purificada Ki (μΜ) Selectividade para as iNOS vs. eNOS (em relação à LNMMA) iNOS eNOS NNOS 1 1,9 23 2, 6 12(33) 2 2,9* 79 18 27(73) * Esta inibição foi muito dependente do tempo das iNOS, um valor de Kd de 0,1 μΜ foi determinado sugerindo uma selectividade iNOS vs eNOS de 790 (>2000 vezes superior à L-NMMA)

A inibição da recombinação da iNOS humana foi determinada seguindo a expressão num sistema de células baculovirus/insecto (Charles et al (1994) In : The Biology of Nitric Oxide 4, Moncada S., Feelisch M., Busse R. e Higgs E.A., eds., Portland Press, London, pg 316-320), ensaiando o insecto citosol em relação à sintase NO num ensaio de pratos de microtitulo baseado no ensaio de espectrofotometria descrito anteriormente (Knowles et al (1990) Biochem. Biophys. Res. Commun. 172, 1042-1048). O ensaio foi conduzido a 37 °C em misturas reaccionais contendo HEPES (100 mM) , DTT (0,1 mM), tetrahidrobiopterina (5 μΜ), NADPH (100 μΜ) , hemoglobina (5μΜ), L-arginina (30 μΜ) e inibidor (0-300 μΜ), medindo a alteração da absorvância a 405-420 nm, e determinando a inibição no estado estacionário entre 15 e 30 minutos de incubação. Os resultados são mostrados na Tabela 2 abaixo. A inibição das eNOS e das iNOS in situ nos anéis aórticos do rato foi obtida por medição do aumento da tensão do anel

Cn causada pela inibição da sintase NO. Para os estudos da 28 \

U elasticidade basal (reflectindo eNOS), foram preparados anéis da aorta toráxica com endotélio intacto como descrito anteriormente (Rees et al. (1989) Br. J. Pharmacol. 9_6, 418-424) e curvas de concentração cumulativa obtidas para os inibidores na presença de uma concentração de entrada de fenileprina (EDio « 10 nM) . Para os estudos da elasticidade do músculo liso induzido (reflectindo as iNOS), os anéis do endotélio desnudados foram expostos a LPS (0,1 μς/ιηΐ de S. typhosa) na presença de fenileprina a aproximadamente ED90 durante 6 h como descrito anteriormente (Rees et al. (1990) Biochem. Biophys. Res. Commun. 173, 541-547). Durante este tempo ocorreu uma perda progressiva da elasticidade devido à indução pelas iNOS. As curvas de concentração cumulativa foram obtidas para os inibidores. Os resultados são mostrados na Tabela 2 abaixo.

Exemplo N° IC50 (μΜ) Selectividade para iNOS iNOS Recombinan-tes Humanas iNOS nos anéis aórticos dos ratos eNOS nos anéis aórticos dos ratos 1 5, 5±0,55 (3) 1,7+0,7 (3) »300(3) (8% de inibição a 300 μΜ) »200-vezes 2 1,4+0,6 (3) 1,5+0,3 (6) 101+21 (6) 67-vezes

Os dados da eficácia e da selectividade da sintase de NO são médias±SEM entre (n) experiências. A inibição das eNOS e das iNOS in vivo foi obtida pelos efeitos inibidores na tensão do sangue quer no ratinho cônscio 2 9 r normal (eNOS) quer com choque de endotoxina (iNOS). Os ratos fêmea CD-I (25-35 g) foram brevemente anestesiados com isofluorano (2%) . As linhas da cânula foram implantadas na veia femoral, em túnel subcutâneo para sair no cimo das costas e ligadas a um sistema de torniquete de corrente para monitorização continua da tensão sanguínea e para a administração de inibidor respectivamente. A seguir à recuperação da cirurgia, os animais com tensões sanguíneas médias no intervalo normal (90-110 mmHg) foram utilizados para obter as curvas de concentração cumulativa para os inibidores na pressão sanguínea quer sem mais tratamento ("ratos normais") quer 7 h após a administração de lipopolissacarídeo (12,5 mg/kg de LPS de E. coli 026:B6 intravenosamente durante 30 s) para induzir choque ("ratos que sofreram choque") . Nos ratos normais do Exemplo 2 não houve qualquer efeito na tensão sanguínea num intervalo de dosagem de 1-1000 mg/kg. Contudo nos ratos que sofreram choque do Exemplo 2 foi possível restabelecer completamente a pressão sanguínea para o intervalo normal.

Os efeitos do Exemplo 2 na perda vascular induzida pela endotoxina por foram obtidos em ratos como descrito por Laszlo et al ((1994) Brit. J. Pharmacol. 111 1309-1315). O exemplo 2, em doses até 5 mg/kg, quando administradas concorrentemente com a endotoxina não provocou um agravamento da perda de plasma induzida pela endotoxina, apesar dos inibidores não selectivos como a L-NMMA. Contudo, o Exemplo 2 não aboliu a dependência de iNOS arrastada pela perda de plasma, com ED50 de 1 mg/kg.

Lisboa, 20 de Junho de 2000

O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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Claims (2)

1. REIVINDIVCAÇÕES Composto com a fórmula (I) R1

   em que R1 é metilo ou fluorometilo ou um sal, éster, amida ou pró-medicamento fisiologicamente aceitável deste. Composto com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1 em que o composto é seleccionado entre Ácido 2-amino-6-(1-iminoetilamino)-4,4-dioxo-4-tiahexanói-co; e Ácido 2-amino-6-{l-imino-2-fluoroetilamino)-4,4-dioxo-4--tiahexanóico ou um sal, éster, amida ou pró-medicamento fisiologicamente aceitável destes. Ácido 2-amino-6-(1-iminoetilamino)-4,4-dioxo-4-tiahexanói-co. Ácido (R)-2-amino-6-(1-iminoetilamino)-4,4-dioxo-4-tiahexa-nóico. Composto com a fórmula (I) definido de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 ou um sal, éster, amida ou pró-medicamento fisiologicamente aceitável deste para utilização em medicina. I

   6. Utilização de um composto com a fórmula (I) definido de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 ou um sal, éster, amida ou pró-medicamento fisiologicamente aceitável deste para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma situação em que há uma vantagem em inibir a produção de óxido nítrico a partir de arginina por acção da sintase de NO.

   7. Formulação farmacêutica compreendendo um composto com a fórmula (I) de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 ou um sal, éster, amida ou pró-medicamento fisiologicamente aceitável deste, em conjunto com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis deste e opcionalmente um ou mais ingredientes terapêuticos.

   8. Processo para a preparação de um composto com a fórmula (I) definido de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 ou um sal, éster, amida ou promedicamento fisiologicamente aceitável deste que compreende: (a) oxidação de um composto com a fórmula (II):

   nh2 em que R1 é como definido aqui anteriormente; ou (b) desprotecção de um composto com a fórmula (V)
2. 2 (V) em que R1, é como definido aqui anteriormente, Q é hidrogénio ou um grupo protector carboxilo e Q' é um grupo protector, opcionalmente seguido por conversão em outro composto com a fórmula (I). Lisboa, 20 de Junho de 2000 O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL í---- t»-T 3