PT1726658E - Processo para a preparação de di-hidroxiésteres e os seus derivados - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DI-HIDROXIÉSTERES E OS SEUS DERIVADOS" A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de determinados hidroxiésteres e os seus derivados.

De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção, é proporcionado um processo de preparação de um composto de fórmula (4) Fórmula 4 que compreende a esterificação de um composto de fórmula (2\

OH O hovAA(X)_cor Fórmula 2 na presença de composto de fórmula R"-0-C0R' e uma enzima lipase ou hidrolase para, deste modo, formar o composto de fórmula (4); em que X representa um qrupo de liqação hidrocarbilo opcionalmente substituído 1 R e R", cada independentemente, representam um grupo hidrocarbilo opcionalmente substituído e

Rf representa um hidrocarbilo opcionalmente substituído, de um modo preferido, um grupo alquilo opcionalmente substituído.

Os compostos de fórmula 4 podem sofrer redução estereosselectiva para produzir um composto de fórmula (1)

OH OH

Fórmula 1 em que X, R, R" e R' sao como definidos acima.

Os grupos de hidrocarbilo representados por X, R, R' ou R" podem ser substituídos com um ou mais substituintes e podem ser per-substituídos, por exemplo, per-halogenados. Os exemplos de substituintes incluem halo, especialmente fluoro e cloro, alcoxilo, tal como alcoxiloCi-4 e oxo.

De um modo preferido, X representa um grupo de fórmula -(CH2)rw em que n é de 1 a 4 e, de um modo muito preferido, X representa um grupo de fórmula -CH2-. R" pode ser um grupo alquilo, tal como um grupo alquilo Ci_6 ou um grupo alquilcarbonilo, tal como um grupo alquilCi_6carbonilo, por exemplo, um grupo CH3(C=0)- ou CF3(C=0)-. R" é, de um modo muito preferido, um grupo vinilo ou isopropenilo. 2

De um modo preferido, R representa um grupo alquilo Ci_6, o qual pode ser linear ou ramificado e pode ser substituído com um ou mais substituintes. De um modo muito preferido, R representa um grupo t-butilo. R' pode representar um alquilo substituído, frequentemente um grupo alquilo Ci-6, tais como um grupo CF3- ou CF3CH2-, mas é, de um modo preferido, um grupo alquilo Ci_6 não substituído e muito especialmente um grupo metilo. A redução estereosselectiva dos compostos de fórmula (4) utiliza, de um modo preferido, métodos de redução químicos ou microbianos, tais como hidrogenação, hidrogenação por transferência, redução com hidreto metálico ou desidrogenases.

Os exemplos de um processo de hidrogenação adequado, tal como o descrito em Helv. Chim. Acta 69, 803, 1986, incluem a utilização entre 0, ,01 e 10% (p/p) de catalisadores, tais como platina, paládio ou ródio em suportes heterogéneos, tais como carbono, alumina, sílica, utilizando hidrogénio molecular entre 1 e 10 bar num solvente, tais como metanol, etanol, t-butanol, dimetilformamida, éter t-butilmetílico, tolueno ou hexano. Alternativamente podem ser utilizados catalisadores de hidrogenação homogénea, tal como os descritos no documento EP 0583171.

Os exemplos de processos de hidrogenação por transferência química adequados incluem os descritos em Zassinovich, Mestroni e Gladiali, Chem. Rev. 1992, 92, 1051 ou por Fuji et al. em J. Am. Chem. Soc. 118, 2521, 1996 . Os processos preferidos de hidrogenação por transferência química utilizam complexos ligados quirais dos metais de transição, tais como ruténio ou ródio, especialmente complexos de ruténio neutros aromáticos 3 essa ligados a diamina quirais. De um modo preferido, hidrogenação por transferência química utiliza um ácido, especialmente um sal de formiato, tal como formiato de trietilamónio, como fonte de hidrogénio.

Podem ser utilizados reagentes de hidreto metálico, tais como os descritos em Tet. 1993, 1997, Tet. Asymm. 1990, 1, 307 ou J. Am. Chem. Soc. 1998, 110, 3560.

Os exemplos de reduções microbianas adequadas incluem fazer contactar o composto de fórmula (4) com um organismo possuindo as propriedades de um microrganismo seleccionado de Beauveria, de um modo preferido, Beauveria bassiana, Pichia, de um modo preferido, Pichia angusta ou Pichia pastoris, trehalophila, haplophila ou membranefaciens, Cândida, de um modo preferido, Candida humicola, solani, guillermondii, diddenssiae ou friedrichii, Kluyveromyces, de um modo preferido, Kluyveromyces drosophilarum ou Torulaspora, de um modo preferido, Torulaspora hansenii. A redução pode ser realizada fazendo contactar os compostos de fórmulas (4) com uma enzima extraída dos microrganismos anteriores. De um modo muito preferido, são feitos contactar os compostos de fórmulas (4) com um microrganismo seleccionado de Pichia angusta, Pichia pastoris, Candida guillermondii, Saccharomyces carlsbergensis, Pichia trehalophila, Kluyveromyces drosopllarum e Torulospora hansenii ou com um extracto dos organismos anteriores. A redução é, de um modo muito preferido, realizada utilizando células inteiras dos organismos, dado que isto evita a necessidade de separar a enzima pretendida e proporciona co-factores para a reacção. 4

Pode ser utilizada qualquer das espécies acima, mas foi verificado que podem ser obtidas conversões elevadas e selectividade elevada pela utilização da enzima ou de células inteiras de Pichia angusta.

Em geral, é utilizado um co-factor, normalmente NAD(P)H (dinucleótido de nicotinamida adenina ou dinucleótido de nicotinamida adenina fosfato) e um sistema para regenerar o co-factor, por exemplo, glucose e desidrogenase de glucose, com as enzimas para realizar a reacção. Como estão presentes co-factores e mecanismos de redução adequados nas células inteiras, é preferido utilizar as células inteiras num meio nutritivo, o qual, de um modo preferido, contém uma fonte de carbono adequada, a qual pode incluir um ou mais dos seguintes: açúcar, e. g., maltose, sacarose ou, de um modo preferido, glucose, um poliol, e. g., glicerol ou sorbitol, ácido cítrico ou um álcool inferior, por exemplo, metanol ou etanol.

Se for pretendido cultivar células inteiras durante a reacção, devem estar presentes no meio fontes de azoto e de fósforo e microelementos. Estes podem ser os normalmente utilizados na cultura do organismo. 0 processo pode ser realizado adicionando um composto de fórmula (4) a uma cultura do organismo em crescimento, num meio capaz de suportar o crescimento, ou a uma suspensão de células vivas num meio que, de um modo preferido, contenha uma fonte de carbono mas que não contenha um ou mais nutrientes necessários para o crescimento. Podem ser, também, utilizadas células mortas, desde que estejam presentes as enzimas e os co-factores necessários; se necessário estes podem ser adicionados às células mortas. 5

Se pretendido as células podem ser imobilizadas num suporte que é feito contactar com um composto de fórmula (4), de um modo preferido, na presença de uma fonte de carbono adequada como previamente descrito. 0 pH é, adequadamente, 3,5 a 9, por exemplo, 4 a 9, de um modo preferido, no máximo 6,5 e, de um modo mais preferido, no máximo 5,5. Muito adequadamente, é utilizado um pH de 4 a 5. 0 processo pode ser adequadamente realizado a uma temperatura de 10 a 50 °C, de um modo preferido, 20 a 40 °C e, de um modo mais preferido, 25 a 35 °C. É preferido operar sob condições aeróbias se estiverem presentes células inteiras vivas dos organismos anteriormente referidos. É, adequadamente, utilizada uma velocidade de arejamento equivalente a 0,01 a 1,0 volumes de ar, medidos à temperatura e pressão padrão, por volume de meio de cultura por minuto, nas condições anteriormente referidas de pH e temperatura, mas será tido em consideração que é possível uma variação considerável. Podem ser utilizadas condições de pH, temperatura e arejamento semelhantes durante o crescimento dos organismos se este for realizado separadamente do processo.

As enzimas purificadas podem ser isoladas por meios conhecidos, adequadamente por centrifugação de uma suspensão de células desintegradas e separação de uma solução límpida dos detritos, separação da enzima pretendida da solução, por exemplo, por cromatografia de troca iónica, adequadamente com eluição da coluna com um liquido com força iónica, crescente e/ou por precipitação selectiva por adição de um material iónico, por exemplo, sulfato de amónio. Essas operações podem ser repetidas se for pretendido aumentar a pureza. 6 É particularmente preferida a redução microbiana de compostos de fórmula (4).

Na esterificação de compostos de fórmula (2) é preferida a transesterificação com outro éster, o qual esteja presente em, pelo menos, equivalência molar em relação ao álcool e é adequadamente um éster vinílico (dado que o subproduto, o acetaldeido, não está envolvido numa retro-reacção). Alternativamente, podem ser utilizados um anidrido, tais como anidrido acético ou anidrido trifluoroacético ou um éster, tal como acetato de etilo, ou um éster fluorado, tal como trifluoroacetato de etilo. É preferido que a reacção de esterificação regioespecífica seja realizada num solvente orgânico contendo água a menos de 1% (p/p) , tais como acetonitrilo, acetato de etilo, tetra-hidrofurano, éter terc-butilmetilico, tolueno, butanona, pentanona ou hexanona a uma temperatura, de um modo preferido, 20 a 75 °C, de um modo mais preferido, 25 a 50 °C. Os ésteres são, de um modo preferido, ésteres de ácidos alcanóicos inferiores tendo 2 a 8 átomos de carbono ou seus derivados substituídos. Opcionalmente, pode ser utilizada uma atmosfera inerte, por exemplo, pode ser passado um fluxo de azoto através da solução.

As enzimas podem ser proporcionadas como tal ou como células inteiras que as compreendem. É preferido que estas sejam imobilizadas, para facilitar a sua separação do produto e, se pretendido, a reutilização.

As enzimas preferidas incluem lipases, tais como lipase pancreática Porcina, lipase de Candida cilindracea, lipase de Pseudomonas fluorescens, fracção B de Candida antárctica, tal como a disponível sob a marca Chirazyme L2, as de Humicola 1 lanuginosa, por exemplo, a comercializada sob a Marca Comercial Lipolase ou as de Pseudomonas, por exemplo, a comercializada sob a Marca SAM II e, de um modo mais preferido, as de Candida antarctica, por exemplo, a comercializada sob a Marca Chirazyme.

Os compostos de fórmula (1), em que R' é CH3, R é hidrocarbilo opcionalmente substituído, X é -(CH2)n- e n é 1 a 4, são adequadamente preparados a partir dos compostos de fórmula (4) . De um modo preferido, R é t-butilo e, de um modo muito preferido, X é -CH2-.

Os compostos de fórmula (1) são intermediários úteis para a preparação de compostos farmacêuticos. Normalmente, estes são feitos reagir com um grupo de protecção para partes 1,3-di-hidroxilo, tal como 2,2-dimetoxipropano, para formar uma acetonida, como descrito em Synthesis 1998, 1713. 0 grupo > 1 o II 0 1 pode ser, depois, removido selectivamente por tratamento com solução alcoólica fracamente básica, e. g., solução de K2C03, como descrito no documento US5278313 , ou com uma lipase em solução aquosa ou em solução orgânica contendo água suficiente para suportar a hidrólise, para formar um composto de fórmula (5):

X Fórmula 5

Exemplo Ilustrativo 1

Preparação de (3R, 5S) 3,5,6-tri-hidroxi-hexanoato de t-butilo.

Foram adicionados 20 mL de acetonitrilo, 0,405 g (0, 662 mmoles) de di-mu-clorobis[(p-cimeno)clororruténio (II)] e 0,492 g (1,34 mmoles) de (IS, 2S)-( + )-N-(4-toluenossulfonil) -1,2-difeniletilenodiamina a um frasco de fundo redondo de 250 mL agitado. A solução foi desoxigenada por borbulhamento com azoto e mantendo, seguidamente, um fluxo. Foi adicionada uma solução desoxigenada de 26 g (0,119 mol) de (5S) 3-ceto-5,6-di-hidroxi-hexanoato de t-butilo opticamente puro, em 15 mL de acetonitrilo, ao recipiente de reacção e a solução foi agitada, à temperatura ambiente, durante 20 minutos. Foram, depois, adicionados 65 mL de uma mistura 5:2 (mol/mol) de ácido fórmico destilado e trietilamina ao longo de um período de 10 minutos e a mistura de reacção foi agitada, à temperatura ambiente, durante 48 horas. Foram, lentamente, adicionados 80 mL de diclorometano e 120 mL de bicarbonato de sódio saturado a esta solução. Foram adicionadas 70 g de cloreto de amónio à camada aquosa e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi lavada três vezes mais com 90 mL de acetato de etilo, as fracções orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio e o solvente foi removido, para originar 21,1 g de um óleo bruto contendo principalmente, (3R, 5S) 3,5,6-tri-hidroxi-hexanoato de t-butilo. A proporção de diastereómeros foi determinada por RMN de 13C como sendo 5,2: 1 (3R:5S) : (3S:5S) . 0 material foi utilizado bruto na reacção seguinte, mas pode ser purificado por cromatografia em coluna. 9

Preparação de (3R, 5S) 6-acetoxi-3,5-di-hidroxi-hexanoato de t-butilo.

Foram adicionados 700 mL de tetra-hidrof urano e 70,7 g (0,32 mol) de (3R, 5S) 3,5,6-tri-hidroxi-hexanoato de t-butilo, 41 mL (0,46 mol) de acetato de vinilo e 6,3 g da lipase suportada Chirazyme L2™ a um frasco de fundo redondo de 1 L agitado. Após 3 horas de mistura, à temperatura ambiente, a lipase foi removida por filtração e os voláteis foram removidos por destilação sob vácuo. A massa de óleo bruto foi de 78,7 g e o componente principal foi determinado como sendo (3R, 5S) 6-acetoxi-3,5-di-hidroxi-hexanoato de t-butilo. Este material foi utilizado directamente na etapa seguinte.

Preparação de éster 1, 1-dimetiletílico do ácido (4R,6S)-6-[(acetiloxi)metil]-2,2-dimetil-1,3-dioxano-4-acético.

Foram adicionados 78,7 g (3R, 5S) de 6-acetoxi-3,5-di- hidroxi-hexanoato de t-butilo, 800 mL de 2,2-dimetoxipropano e 5,7 g de ácido ρ-toluenossulfónico a um frasco de fundo redondo de 1 litro agitado. Após 35 minutos, a massa de reacção foi concentrada para metade do volume e foram adicionados 300 mL de diclorometano e 300 mL de bicarbonato de sódio a 1 Μ. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi lavada três vezes mais com 150 mL de acetato de etilo. As fracções orgânicas foram combinadas, foram secas sobre sulfato de sódio e os voláteis forma removidos por destilação sob vácuo. Foi obtido 92 g de um óleo bruto. Este foi purificado passando inicialmente por uma coluna curta da sílica flash, eluindo com hexano e, depois, hexano:acetato de etilo 85:15 (v/v) e, depois, cristalizando o material 3 vezes com hexano, para originar 22,17 g de éster 10 6 S)—6 —[(acetiloxi)metil]-2,2-foi determinado como sendo 1,1-dimetiletílico do ácido (4R, dimetil-1,3-dioxano-4-acético que 99,9% de por GC quiral.

Preparação de éster 1,1-dimetiletílico do ácido (4R, 6S)-6- (hidroximetil]-2,2-dimetil-1,3-dioxano-4-acético .

Foram adicionadas 22,17 g de éster 1,1-dimetiletílico do ácido (4R,6S)-6-[(acetiloxi)metil]-2,2-dimetil-1,3-dioxano-4- acético, 250 mL metanol e 5,05 g de carbonato de potássio esmagado, a um frasco de fundo redondo de 500 mL agitado. A reacção foi agitada durante 35 minutos, até à hidrólise estar completa, de seguida, o carbonato de potássio foi removido por filtração, a massa de reacção foi concentrada e foram adicionados 150 mL de solução salina 5% (p/p) e 150 mL de tolueno. A camada orgânica foi separada e a aquosa foi lavada duas vezes mais com 250 mL de tolueno. As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas três vezes com solução salina 15% (p/p) e o solvente foi removido por destilação sob vácuo, para originar 17,78 g de óleo límpido, o qual foi determinado como sendo éster 1,1-dimetiletí lico do ácido ( 4R, 6S)-6-(hidroximetil]-2,2-dimetil-1,3-dioxano-4-acético >9 9%.

Exemplo 2

Preparação de (5S) 6-acetoxi-5-hidroxi-3-ceto-hexanoato de terc-butilo.

Foram adicionadas 2,32 g (0,0106 moles) de (5S) 5,6-di-hidroxi-3-ceto-hexanoato de terc-butilo, 40 mL de 11 tetra-hidrofurano, 0,98 mL (0,0106 moles) de acetato de vinilo e 0,22 g de lipase suportada Chirazyme L2™, a um frasco de fundo redondo de 250 mL agitado. Após 20 minutos a lipase foi removida por filtração e os voláteis foram removidos por destilação sob vácuo, para originar 2,96 g de um óleo bruto que foi caracterizado por RMN como (5S) 6-acetoxi-5-hidroxi-3-ceto-hexanoato de terc-butilo.

Exemplo Ilustrativo 3

Preparação de (3R,5S) 3,5,6-tri-hidroxi-hexanoato de t-butilo.

Foi cultivada Pichia angusta NCYC R230 (depositada sob as disposições do Tratado de Budapeste no dia 18 de Maio de 1995) num sistema Braun Biostat Q multi-fermenter no meio seguinte (por litro): glucose 40 g; MgS04, 1,2 g; K2S04, 0,21 g; KH2P04, 0,69 g; Η3Ρ04 (concentrado), 1 mL; extracto de levedura (Oxoid) , 2 g; FeS04.7H20, 0, 05 g; antiespuma (EEA 142

Foammaster), solução de microelementos, 1 mL (esta solução continha por litro CuS04.5H20, 0, 02 g; MnS04.4H20, 0,1 g;

ZnS04.7H20, 0,1 g; CaC03, 1,8 g.

Cada dos 4 fermentadores foi adicionado de 250 mL de meio e foi esterilizado por autoclavagem. 0 pH foi ajustado para 4,5 utilizando solução de hidróxido de amónio 7 molar, a temperatura foi regulada para 28 °C, o fluxo de ar foi regulado para 300 mL/minuto e a velocidade do agitador foi regulada para 1200 rpm. Os fermentadores foram inoculados com células retiradas de placas de ágar (ágar a 2%) compreendendo o mesmo meio que descrito acima, excepto por a concentração de glucose ter sido 12 de 20 g/litro. Após 22 horas de crescimento nos fermentadores a reacção de biorredução foi iniciada por adição de (5S) 3-ceto-5,6-di-hidroxi-hexanoato de t-butilo; dois dos fermentadores foram adicionados de 3,75 mL cada e os outros dois foram adicionados com 5 mL cada. A reacção prossegui durante mais 78 horas até a conversão de 100% do substrato. Durante este período a cultura foi abastecida com uma solução de glucose a 50%, a uma velocidade de 1-3 gramas de glucose/litro de cultura/hora, para manter a viabilidade celular e proporcionar uma fonte de poder redutor. As reacções foram terminadas por remoção das células por centrifugação. Foi adicionado cloreto de sódio a uma concentração final de 20% p/v ao sobrenadante isento de células recuperado e a mistura foi extraída três vezes com um volume igual de acetonitrilo. Os extractos de acetonitrilo reunidos foram secos com sulfato de sódio anidro e o solvente foi removido sob pressão reduzida num evaporador rotativo (temperatura do banho de água de 45 °C) , para originar um óleo amarelo pálido viscoso. A identidade do produto de cada reacção foi confirmada como (3R,5S) 3,5,6-tri-hidroxi-hexanoato de t-butilo e na tabela abaixo é proporcionado o excesso diastereomérico de cada uma das amostras. experiência excesso diastereomérico (%) 1 99,6 2 9 9,6 3 99, 4 4 9 9,6 13

Exemplo Ilustrativo 4

Preparação de (3R,5S) 3,5,6-tri-hidroxi-hexanoato de t-butilo.

Foi cultivada Pichia angusta NCYC R320 (depositada sob as disposições do Tratado de Budapeste no dia 18 de Maio de 1995) num sistema Braun Biostat Q multi-fermenter no meio seguinte (contendo, por litro) : glucose, 20 g; sulfato de amónio, 10 g; extracto de levedura (Oxoid) , 2 g; MgS04.7H20, 1,2 g; KH2P04, 0,69 g; K2S04, 0,21 g; FeS04.7H20, 0,05 g; H3P04 (concentrado), 1 mL; EEA 142 antiespuma "foammaster", 0,5 mL; solução de microelementos, 1 mL (esta solução continha por litro

Ca (CH3C02) 2, 2,85 g; ZnS04.7H20, 0,1 g; MnS04.H20 0,075 g;

CuS04.5H20, 0,02 g; ácido sulfúrico (concentrado), 1 mL).

Foram adicionados 250 mL de meio a um fermentador e foi esterilizado por autoclavagem. O pH foi ajustado para 5,0, utilizando uma solução de hidróxido de sódio 2 molar. A temperatura foi estabelecida em 28 °C, o fluxo de ar foi estabelecido em 250 mL minuto-1 e a velocidade do agitador foi estabelecida em 1200 rpm. 0 fermentador foi inoculado com 2,5 mL de uma suspensão de células em água desionizada estéril, preparada a partir de uma placa de ágar de Pichia angusta NCYC R320. Após crescimento durante 17 horas, a biorredução foi iniciada por adição de 6,36 g de 5(S) 3-ceto-5,6-di-hidroxi- hexanoato de t-butilo, sob a forma de uma solução aquosa. Simultaneamente, foi iniciado o fornecimento de glucose ao fermentador, a uma velocidade de 2 g de glucose L-1 h-1. A reacção prossegui durante mais 78 horas até um ponto que foi obtida uma conversão de 96% do substrato. O material inicial 14 e o produto foram detectados por HPLC (Hichrom S5 coluna CN-250A, temperatura 35 °C, fase móvel: TFA aquoso (0,1%) : acetonitrilo 95:5, velocidade de fluxo 1 mL minuto-1, volume de injecção 5 mL, detector de indice de refracção). A reacção foi terminada pela remoção das células centrif ugando a 4000 x g durante 20 minutos. O pH do sobrenadante isento de células recuperado foi ajustado para 7,5 utilizando NaOH a 2 M. Foi dissolvido MgS04.l,6H20 (15% p/v baseado em anidro) no sobrenadante isento de células e a solução resultante foi extraida duas vezes com um volume igual de 2-pentanona. As fases de solvente foram reunidas e o solvente foi removido sob pressão reduzida em evaporador rotativo a 45 °C, produzindo um óleo viscoso cor de laranja. Este foi redissolvido em 50 mL de 2-pentanona destilada seca e o solvente foi novamente removido por evaporação rotativa para originar 3,5,6-tri-hidroxi-hexanoato de t-butilo (5,08 g, 80% de rendimento isolado). O excesso de diastereomérico foi determinado como se segue; foi derivatizada uma amostra de 3,5,6-tri-hidroxi-hexanoato de t-butilo (30 mg), por reacção durante, pelo menos, 10 minutos, à temperatura ambiente, num excesso de anidrido trifluoroacético, o excesso de anidrido foi removido sob uma corrente do azoto seco e o óleo residual foi diluído com diclorometano (1 mL) . A amostra foi analisada utilizando uma coluna Chiralcel Dex CB (25 metros) a uma temperatura de 140 °C (isotérmica) . O diastereómero eluiu em 14,4 minutos (diastereómero 3R,5S) e 15,7 minutos (diastereómero 3S,5S). O excesso diastereomérico da amostra foi verificado por este método como sendo 99,7%.

Lisboa, 8 de Abril de 2010 15

Claims (5)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Processo para a preparação de um composto de fórmula (4)

   O Fórmula 4 que compreende a esterificaçao de um composto de fórmula (2) OH O

   Fórmula 2 na presença de composto de fórmula R"-0-C0R' e uma enzima lipase ou hidrolase para, deste modo, formar o composto de fórmula (4); em que X representa um grupo de ligação hidrocarbilo opcionalmente substituído R e R", cada independentemente, representam um grupo hidrocarbilo opcionalmente substituído, e R' representa um hidrocarbilo opcionalmente substituído. 1
2. 2. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que R' representa um grupo alquilo opcionalmente substituído.
3. 3. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, em que R' é CH3, R é t-butilo e X é -CH2-.
4. 4. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que R" é um grupo vinilo ou isopropenilo.
5. 5. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que a enzima é seleccionada do grupo consistindo de lipase pancreática Porcina, lipase de Candida cilindracea, lipase de Pseudomonas fluorescens, fracção B de Candida antarctica e lipase de Humicola lanuginosa. Lisboa, 8 de Abril de 2010 2