PL207930B1 - Zastosowanie wyizolowanego probiotycznego szczepu bakterii kwasu mlekowego o aktywności probiotycznej, kompozycja pokarmowa i izolowany szczep bakterii kwasu mlekowego - Google Patents
Zastosowanie wyizolowanego probiotycznego szczepu bakterii kwasu mlekowego o aktywności probiotycznej, kompozycja pokarmowa i izolowany szczep bakterii kwasu mlekowegoInfo
- Publication number
- PL207930B1 PL207930B1 PL359182A PL35918201A PL207930B1 PL 207930 B1 PL207930 B1 PL 207930B1 PL 359182 A PL359182 A PL 359182A PL 35918201 A PL35918201 A PL 35918201A PL 207930 B1 PL207930 B1 PL 207930B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- lactobacillus
- cncm
- composition
- strain
- dog
- Prior art date
Links
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 40
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims description 86
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 73
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims abstract description 39
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 230000036541 health Effects 0.000 claims abstract description 16
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims description 117
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 104
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 76
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 70
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 claims description 67
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 57
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 44
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims description 39
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims description 34
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 34
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 claims description 32
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 claims description 24
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 claims description 13
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 claims description 13
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 11
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 10
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 claims description 10
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 10
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 claims description 8
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims description 8
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 claims description 7
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 claims description 7
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 7
- 241000186712 Lactobacillus animalis Species 0.000 claims description 6
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 5
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 5
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 5
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 4
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 4
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000223935 Cryptosporidium Species 0.000 claims description 3
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 claims description 3
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 claims description 3
- 241000224539 Pentatrichomonas hominis Species 0.000 claims description 3
- 241000244031 Toxocara Species 0.000 claims description 3
- 230000036449 good health Effects 0.000 claims description 3
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 3
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 3
- 210000000515 tooth Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000224432 Entamoeba histolytica Species 0.000 claims description 2
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 claims description 2
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 claims description 2
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 claims description 2
- 241000186870 Lactobacillus ruminis Species 0.000 claims description 2
- 241000186610 Lactobacillus sp. Species 0.000 claims description 2
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 claims description 2
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 2
- 229940007078 entamoeba histolytica Drugs 0.000 claims description 2
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 2
- 241000224466 Giardia Species 0.000 claims 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 34
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 31
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 45
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 25
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 18
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 15
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 14
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 11
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 11
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 10
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 8
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 8
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 244000298479 Cichorium intybus Species 0.000 description 7
- 235000007542 Cichorium intybus Nutrition 0.000 description 7
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 7
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 7
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 7
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 7
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 7
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 7
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 6
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 6
- 241001607429 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium str. SL1344 Species 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 6
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 6
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 5
- 241000131482 Bifidobacterium sp. Species 0.000 description 5
- JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N D-lactic acid Chemical compound C[C@@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 5
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 5
- 241000224467 Giardia intestinalis Species 0.000 description 5
- VLSOAXRVHARBEQ-UHFFFAOYSA-N [4-fluoro-2-(hydroxymethyl)phenyl]methanol Chemical compound OCC1=CC=C(F)C=C1CO VLSOAXRVHARBEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 5
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 5
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 5
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 5
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 5
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 5
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 4
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- 108010033737 Pokeweed Mitogens Proteins 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- IOUUIFSIQMVYKP-UHFFFAOYSA-N Tetradecyl acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCOC(C)=O IOUUIFSIQMVYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 4
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 210000003812 trophozoite Anatomy 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 3
- 208000001840 Dandruff Diseases 0.000 description 3
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 3
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 3
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 3
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 3
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 150000004633 phorbol derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N (1aR,1bS,4aR,7aS,7bS,8R,9R,9aS)-4a,7b,9,9a-tetrahydroxy-3-(hydroxymethyl)-1,1,6,8-tetramethyl-1,1a,1b,4,4a,7a,7b,8,9,9a-decahydro-5H-cyclopropa[3,4]benzo[1,2-e]azulen-5-one Chemical compound C1=C(CO)C[C@]2(O)C(=O)C(C)=C[C@H]2[C@@]2(O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@]3(O)C(C)(C)[C@H]3[C@@H]21 QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 2
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000001775 anti-pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N phorbol Natural products C[C@@H]1[C@@H](O)[C@]2(O)[C@H]([C@H]3C=C(CO)C[C@@]4(O)[C@H](C=C(C)C4=O)[C@@]13O)C2(C)C QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N 0.000 description 2
- AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N taurodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- JCLFHZLOKITRCE-UHFFFAOYSA-N 4-pentoxyphenol Chemical compound CCCCCOC1=CC=C(O)C=C1 JCLFHZLOKITRCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 241001148536 Bacteroides sp. Species 0.000 description 1
- 241001655328 Bifidobacteriales Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000004484 Briquette Substances 0.000 description 1
- 102100023705 C-C motif chemokine 14 Human genes 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 241000193464 Clostridium sp. Species 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 206010017943 Gastrointestinal conditions Diseases 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 1
- 101100382874 Homo sapiens CCL14 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000014158 Interleukin-12 Subunit p40 Human genes 0.000 description 1
- 108010011429 Interleukin-12 Subunit p40 Proteins 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N L-cysteine hydrochloride Chemical compound Cl.SC[C@H](N)C(O)=O IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001147693 Staphylococcus sp. Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000194022 Streptococcus sp. Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 101150063325 ab gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L ammonium ferric citrate Chemical compound [NH4+].[Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 235000019728 animal nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 235000021336 beef liver Nutrition 0.000 description 1
- 239000007621 bhi medium Substances 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000010473 blackcurrant seed oil Substances 0.000 description 1
- 235000021324 borage oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- QSHQKIURKJITMZ-BRPMRXRMSA-N cholane Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCC)[C@@]1(C)CC2 QSHQKIURKJITMZ-BRPMRXRMSA-N 0.000 description 1
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 235000020940 control diet Nutrition 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 235000008524 evening primrose extract Nutrition 0.000 description 1
- 239000010475 evening primrose oil Substances 0.000 description 1
- 229940089020 evening primrose oil Drugs 0.000 description 1
- 230000003636 fecal output Effects 0.000 description 1
- 229960004642 ferric ammonium citrate Drugs 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 229940013317 fish oils Drugs 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 229960000308 fosfomycin Drugs 0.000 description 1
- YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N fosfomycin Chemical compound C[C@@H]1O[C@@H]1P(O)(O)=O YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 229940098330 gamma linoleic acid Drugs 0.000 description 1
- VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N gamma-Linolensaeure Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N gamma-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 1
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 1
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 1
- 244000000053 intestinal parasite Species 0.000 description 1
- 244000000074 intestinal pathogen Species 0.000 description 1
- 235000000011 iron ammonium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004313 iron ammonium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000006180 nutrition needs Nutrition 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000008855 peristalsis Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 1
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000011962 puddings Nutrition 0.000 description 1
- 235000021251 pulses Nutrition 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 108700022487 rRNA Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 1
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 1
- 239000001984 sorbitol MacConkey agar Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 description 1
- 229960005404 sulfamethoxazole Drugs 0.000 description 1
- JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N sulphamethoxazole Chemical compound O1C(C)=CC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- BHTRKEVKTKCXOH-BJLOMENOSA-N taurochenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 BHTRKEVKTKCXOH-BJLOMENOSA-N 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 239000005028 tinplate Substances 0.000 description 1
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001082 trimethoprim Drugs 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
- A23K50/42—Dry feed
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
- A23K50/48—Moist feed
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/23—Lactobacillus acidophilus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S426/00—Food or edible material: processes, compositions, and products
- Y10S426/805—Pet food for dog, cat, bird, or fish
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Birds (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Physiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie wyizolowanego szczepu bakterii kwasu mlekowego o aktywności probiotycznej, kompozycja pokarmowa i izolowany szczep bakterii kwasu mlekowego.
Niniejszy wynalazek dotyczy zastosowania nowych bakterii kwasu mlekowego rodzaju Lactobacillus, Bifidobacterium i Streptococcus (Enterococcus), do wytwarzania kompozycji dla domowych zwierząt poprawiającej ich stan zdrowia, oraz kompozycji je zawierających. Niniejszy wynalazek dotyczy również nowych mikroorganizmów z rodzaju Lactobacillus które wyizolowano i wyselekcjonowano ze względu na ich probiotyczny potencjał.
Dobre samopoczucie zwierząt domowych jest ściśle związane z ich odżywianiem.
W wyniku prawidłowego odżywiania uzyskuje się sprawność fizyczną i zdrowie zwierząt.
Skład pożywienia oprócz dostarczania wartości odżywczych, dodatkowo wpływa na równowagę mikroflory jelitowej i może prowadzić do/lub zapobiegać zaburzeniom żołądkowo-jelitowym. Zatem, wiedza na temat przewodu pokarmowego i procesów trawiennych u zdrowych zwierząt jest nieodłączna dla zrozumienia praktycznych sposobów karmienia. Koty i psy, jako zwierzęta mięsożerne, charakteryzują się krótkim przewodem trawiennym i szybkim przepływem przełkniętego pożywienia.
Spośród składników mikroflory żołądkowo-jelitowej kotów i psów można odzyskać Bacteroides sp., Clostridium sp., Enterobacteriaceae, Bifidobacterium sp., Lactobacillus sp., Streptococcus sp., Staphylococcus sp. i drożdże.
Ilość i skład tej endogennej flory dąży raczej do stabilności, chociaż wiek i w mniejszym stopniu pokarm mogą ją modyfikować. Kwasowość żołądkowa, żółć, perystaltyka jelitowa i odporność miejscowa są czynnikami uważanymi za ważne w regulowaniu flory bakteryjnej w jelicie cienkim u człowieka i różnych innych ssaków.
Psie i kocie zaburzenia żołądkowo-jelitowe są często połączone z przerostem bakteryjnym i produkcją enterotoksyn wytwarzanych przez patogenne bakterie.
Podczas ostatnich kilku lat badania naukowe skupiały się na niektórych wartościowych szczepach bakterii kwasu mlekowego i ich potencjalnym zastosowaniu, jako czynników probiotycznych. Probiotyki są brane pod uwagę jako zdolne do życia drobnoustrojowe preparaty, które poprawiają zdrowie ssaków przez ochronę ich naturalnej mikroflory w jelicie. Probiotyki uważa się za zdolne do przylegania do śluzówki jelita, kolonizowania przewodu jelitowego i przez to zapobiegania przywieraniu do niego szkodliwych mikroorganizmów. Podstawowy dla ich działania warunek polega na tym, że muszą one osiągnąć śluzówkę jelita we właściwej, zdolnej do życia postaci i nie ulegać zniszczeniu, przede wszystkim, pod wpływem niskiego pH panującego w żołądku. W szczególności, fizjologia przewodu trawiennego kotów i psów różni się od ludzkiej. Na przykład, przeciętne pH w żołądku psów wynosi około 3,4, a kotów 4,2.
Chociaż w opisie patentowym USA nr 5968569 ujawniono zawartość probiotycznych mikroorganizmów w zbożowym pożywieniu domowych zwierząt, to ani ten opis ani cała pozostała dostępna wiedza nie dostarczają informacji dotyczących szczepów szczególnie przeznaczonych dla zdrowia domowych zwierząt.
Dlatego też, istnieje potrzeba dostarczenia nowych bakteryjnych szczepów, które są szczególnie przystosowane do zwierząt domowych, i które wyselekcjonowano ze względu na ich wysoce probiotyczne właściwości korzystne dla zdrowia tych zwierząt i włączenia tych szczepów do kompozycji pokarmowych dla zwierząt.
Niniejszy wynalazek dotyczy zastosowania wyizolowanego probiotycznego szczepu bakterii kwasu mlekowego wybranego z rodzajów Lactobacillus, Bifidobacterium lub Enterococcus do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do poprawy stanu zdrowia lub utrzymania w dobrym stanie zdrowia psa i kota, w tym ich układu pokarmowego, skóry, sierści, zębów, kości i układu odpornościowego.
Korzystnie szczep ma zdolność do wzrostu produkując przynajmniej 1,0E+06 cfu/ml w obecności do 2% soli żółci.
Korzystnie szczep ma zdolność do wytwarzania co najmniej 1,0E+06 cfu/ml po 2 godzinach przy zakresie pH 3,4 do 4,2.
Korzystnie szczep jest wybrany z grupy składającej się z Lactobacillus reuteri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus animalis, Lactobacillus ruminis, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus fermentum, Bifidobacterium sp. Enterococcus faecium, Enterococcus sp, korzystniej szczep jest Lactobacillus reuteri NCC2581 (CNCM I-2448), Lactobacillus reuteri NCC2592 (CNCM I-2450), Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449),
PL 207 930 B1
Lactobacillus reuteri NCC2603 (CNCM I-2451), Lactobacillus reuteri NCC2613 (CNCM I-2452, Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) lub Enterococcus faecium SF 68 (NCIMB 10415).
Korzystnie szczep jest zawarty w kompozycji w ilości od 1,0E±04 cfu/zwierzę i dzień do 1,0 E±12 cfu/zwierzę i dzień, a kompozycja jest przeznaczona do leczenia i/lub profilaktyki zaburzeń związanych z kolonizacją przewodu pokarmowego kotów i/lub psów przez patogenne mikroorganizmy, a zwłaszcza szczepy Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Schigella dysenteriaea lub inne patogenne enterobakterie kolonizujące koty i/lub psy lub pasożyty, takie jak glisty (Toxocara spp.), pierwotniaki (Cryptosporidium spp., Glardia spp., Pentatrichomonas hominis, Entamoeba histolytica, Toxoplasma gonidii) lub drożdże.
Korzystnie kompozycja jest przeznaczona do regulacji układu odpornościowego kota lub psa, a bardziej korzystnie kompozycja jest przeznaczona do leczenia zaburzeń immunologicznych, takich jak alergia lub choroba zapalna jelit.
Korzystnie kompozycja jest również przeznaczona do utrzymania lub poprawy stanu zdrowia skóry i/lub sierści kotów lub psów.
Korzystnie kompozycja jest przeznaczona do łagodzenia lub zmniejszania objawów starzenia się kota lub psa.
W zakres wynalazku wchodzi również kompozycja pokarmowa dla zwierząt domowych zawierająca przynajmniej jeden wyizolowany szczep bakterii kwasu mlekowego wybrany z grupy składającej się z Lactobacillus animals, Lactobacillus ruminie, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus reuteri NCC2581 (CNCM I-2448), Lactobacillus reuteri NCC2592 (CNCM2592 (CNCM I-2450), Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449), Lactobacillus reuteri NCC2603 (CNCM I-2451), Lactobacillus reutheri NCC2613 (CNCM I-2452) i Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453 związany z nadającym się do spożycia nośnikiem.
Korzystnie kompozycja zachowuje lub poprawia funkcje układu pokarmowego kota lub psa lub zachowuje lub poprawia stan zdrowia skóry i/lub sierści kota lub psa.
Korzystnie kompozycja reguluje układ odpornościowy kota lub psa.
Korzystnie kompozycja łagodzi lub zmniejsza objawy starzenia się kota lub psa.
Korzystnie w kompozycji wyizolowany szczep jest w ilości od około 1,0E+04 cfu/zwierzę i dzień do 1,0E+12cfu/zwierzę i dzień.
Korzystnie kompozycja dodatkowo zawiera prebiotyk.
Korzystnie kompozycja występuje w postaci:
i) kompletnego odżywczo pokarmu dla domowych zwierząt w sproszkowanej, suchej lub wilgotnej postaci, schłodzonej lub nadającej się do przechowywania lub, ii) w postaci dietetycznego dodatku lub suplementu.
Ponadto wynalazek dotyczy izolowanego szczepu bakterii kwasu mlekowego, który jest wybrany z grupy składającej się z Lactobacillus reuteri NCC2581 (CNCM I-2448), Lactobacillus reuteri NCC2592 (CNCM I-2450), Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449), Lactobacillus reuteri NCC2603 (CNCM I-2451), Lactobacillus reuteri NCC2613 (CNCM I-2452) i Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453).
Jeśli tylko kontekst jasno nie wskazuje inaczej, odnoszenie się do „szczepu powinno być rozumiane, jako obejmujące supernatant z jego hodowli i /lub jego metabolit.
Przez określenie „regulowanie odpowiedzi odpornościowej rozumie się, że szczepy bakteryjne opisane powyżej mają zdolności do stymulowania pewnych funkcji odpornościowych ważnych dla zdrowia zwierząt albo modulowania innych odpornościowych funkcji, które potencjalnie mogłyby mieć znaczenie dla zaburzeń immunologicznych, takich jak zapalenie, alergia itp. Stymulację lub modulację tych funkcji odpornościowych można osiągnąć przez zastosowanie różnych kombinacji szczepów bakteryjnych opisanych powyżej.
Te wyselekcjonowane mikroorganizmy mają szczególnie korzystny wpływ na przewód pokarmowy zwierząt, na ich skórę i/lub sierść, na ich układ odpornościowy i na efekty starzenia.
Mają one szczególnie korzystny wpływ na zahamowanie rozwoju patogenów jelitowych, takich jak: szczepy Salmonella thyphimurium, Escherichia coli, Shigella dysenteriaea lub innych patogennych enterobakterii zasiedlających zwierzęta lub pasożyty, takie jak pasożyt jelitowy (Toxocara spp.), pierwotniaki (Cryptosporidium spp, Giardia spp., Pentatrichomonas hominis, Enteamoeba histolytica, Toxoplasma gondii) lub drożdże.
W połączeniu z pożywieniem, mikroorganizmy te wywierają szczególnie korzystne probiotyczne działanie na walory smakowe, trawienie i stan zdrowia jelita, funkcje odpornościowe i warunki sanitar4
PL 207 930 B1 ne, te ostatnie przez wkład w zmniejszenie objętości kału i przynajmniej częściowe odwonnienie psiego kału.
Zgodnie z innym wykonaniem wynalazku, kompozycja pokarmowa dla zwierząt domowych zawiera mikroorganizm mający wysoką probiotyczną aktywność dla zwierząt i zdolny do przeżywania i kolonizacji przewodu pokarmowego przyjmujących go zwierząt.
Zgodnie z powyższym, wynalazek dotyczy kompozycji pokarmowej dla zwierząt przeznaczonej do poprawy stanu zdrowia przewodu pokarmowego zwierząt, zawierającej przynajmniej jeden probiotyczny szczep wyizolowany jak opisano powyżej związany z nadającym się do spożycia nośnikiem lub matrycą farmaceutyczną.
W jednej postaci wykonania, nadający się do spożycia nośnik zawiera zrównoważoną pod względem odżywczym kompozycję pokarmową dla zwierząt domowych. Niniejsza kompozycja korzystnie zawiera wystarczającą ilość izolowanego szczepu, skuteczną w dostarczaniu profilaktycznych efektów, gdy kompozycja jest podawana zwierzęciu jako kompletny posiłek.
W następującym opisie, skrót cfu („jednostka tworząca kolonie) oznacza liczbę komórek bakteryjnych, jaką wykazano przez mikrobiologiczne liczenie na płytkach agarowych.
„NCC oznacza Kolekcję Kultur w Nestle (Nestle Research Center, Vers-chez-les-Blanc, Lozanna, Szwajcaria).
laktobacillusów i 18 bifidobakterii wyizolowanych z kałów kotów i psów, przebadano i wyselekcjonowano w odniesieniu do ich technologicznych i fizjologicznych parametrów.
Pierwsze badanie przesiewowe na potencjalnie probiotyczne zastosowania przeprowadzono in vitro (patrz przykład 1 i 2): dotyczyło ono charakterystyki wzrostu, tolerancji na kwasowość żołądkową przy różnych pH i różnych stężeniach soli żółciowych obecnych w dwunastnicy, podobnie jak to ma miejsce u kotów i psów.
Ponadto, dobre przeżycie komórek liofilizowanych w dwóch różnych krioochronnych podłożach było wyraźnie wykazane w 4°C i 20°C, jak pokazano w teście przyspieszonego przechowywania.
Szczepy te mogą charakteryzować się krótkim czasem generacji, dużą ilością bakterii (więcej niż 1,0E+08 cfu/ml) podczas ich fazy stacjonarnej i stabilnością ilości bakterii po 8 i 24 godzinach po inokulacji, odpornością na liofilizację, po której następują różne warunki przechowywania, odpornością na fizjologiczne stężenie żółci znalezionej w dwunastnicy (2% żółci) i ich niewielkim zahamowaniem w obecności do 4% żółci. Ponadto, aby wyselekcjonować bakterie reprezentatywne dla badanej różnorodności, wzięto pod uwagę wyniki analizy DNA.
Szczepy wpływające na kocie i psie zdrowie były zdolne do wzrostu do przynajmniej 1,0E+ 06 cfu/ml w obecności do 2% soli żółciowych. Szczepy te mogą również rosnąć do przynajmniej 1,0E = 06 cfu/ml po około 2 godzinach w zakresie pH od 3,4 do około 4,2.
Szczepy bakteryjne według wynalazku są wyselekcjonowane z grupy składającej się z Lactobacillus reuteri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus,.
Następujące szczepy Lactobacillus reuteri NCC2581, Lactobacillus rhamnosus NCC2583, Lactobacillus reuteri NCC2592, Lactobacillus reuteri NCC2603, Lactobacillus reuteri NCC2613 i Lactobacillus acidophilus NCC2628 zdeponowano, jako przykład, zgodnie z Traktatem Budapesztańskim w Narodowych Zbiorach Kultur Mikroorganizmów, 25 rue du docteur Roux, 75724 Paryż, Francja w dniu 19 kwietnia 2000 pod następującymi numerami CNCM I-2448, CNCM I-2449, CNCM I-2450, CNCM I-2451, CNCM I-2452 i CNCM I-2453 odpowiednio.
Wszelkie ograniczenia dotyczące dostępności tych depozytów będą wycofane po pierwszej publikacji niniejszego zgłoszenia lub innego zgłoszenia, korzystającego z pierwszeństwa niniejszego zgłoszenia.
Biochemiczna charakterystyka wybranych szczepów Lactobacillus reuteri CNCM 1-2448
- Gram-dodatni mikroorganizm, nieruchliwy, niezarodnikujący,
- dość grube małe pałeczki
- mikroaerofliny mikroorganizm z hetero fermentacyjnym metabolizmem, produkcja L(+) i D(-) kwasu mlekowego
- katalaza (-), produkcja CO2 z glukozy, hydroliza argininy, =produkcja NH3
- wzrost w 5% i 10% NaCl
- fermentacja cukrów: L-arabinozy, galaktozy, D-glukozy, laktozy, sacharozy, D-rafinozy
Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-2449
- Gram-dodatni mikroorganizm, nieruchliwy, niezarodnikujący,
- dość grube małe pałeczki
PL 207 930 B1
- mikroaerofliny mikroorganizm z hetero fermentacyjnym metabolizmem, produkcja L(+) kwasu mlekowego
- katalaza (-),
- fermentacja wszystkich cukrów typowych dla Lb. rhamnosus
Lactobacillus reuteri CNCM 1-2450
Gram-dodatni mikroorganizm, nieruchliwy, niezarodnikujący,
- dość grube małe pałeczki
- mikroaerofilny mikroorganizm z heterofermentacyjnym metabolizmem, produkcja L(+) i D(-) kwasu mlekowego
- katalaza (-), produkcja CO2 z glukozy, hydroliza argininy, = produkcja NH3
- wzrost w 5% i 10% NaCl
- fermentacja cukrów: L-arabinozy, galaktozy, D-glukozy, D-ksylozy, laktozy, sacharozy, D-rafinozy
Lactobacillus reuteri CNCM 1-2451
Gram-dodatni mikroorganizm, nieruchliwy, niezarodnikujący
- dość grube małe pałeczki
- mikroaerofilny mikroorganizm z hetero fermentacyjnym metabolizmem, produkcja L(+) i D(-) kwasu mlekowego
- katalaza (-), produkcja CO2 z glukozy, hydroliza argininy = produkcja NH3
- wzrost w 5% i 10% NaCl
- fermentacja wszystkich cukrów typowych dla Lb. reuteri Lactobacillus reuteri CNCM I-2452
- Gram-dodatni mikroorganizm, nieruchliwy, niezarodnikujący,
- dość grube małe pałeczki
- mikroaerofilny mikroorganizm z heterofermentacyjnym metabolizmem, produkcja L(+) i D(-) kwasu mlekowego
- katalaza (-), produkcja CO2 z glukozy, hydroliza argininy, =produkcja NH3
- wzrost w 5% i 10% NaCl
- fermentacja cukrów: L-arabinozy, D-glukozy, laktozy, sacharozy, D-rafinozy
Lactobacillus reuteri CNCM 1-2453
Gram-dodatni mikroorganizm, nieruchliwy, niezarodnikujący
- dość grube małe pałeczki
- mikroaerofilny mikroorganizm z heterofermentacyjnym metabolizmem, produkcja L(+) i D(-) kwasu mlekowego
- katalaza (-),
- fermentacja cukrów; D-glukozy, laktozy, sacharozy, D-rafinozy
Trzy laktobacillusy wyizolowane od kotów (NCC2581, NCC2592, NCC2583), trzy laktobacillusy wyizolowane od psów (NCC2603, NCC2613, NCC2628), jedną bifidobakterię od kotów (NCC2627) i jedną bifidobakterię od psów (NCC2657) testowano dalej na ich aktywność potencjału probiotycznego na zwierzętach domowych (patrz przykład 3 i 4).
Szczepy bakteryjne mogą być stosowane w postaci zdolnej do życia, postaci inaktywowanej, jako supernatant z ich hodowli lub frakcji np. ścian komórkowych, peptydoglikanu, cytoplazmy, oczyszczonych białek, funkcjonalnych metabolitów, cząsteczek bioaktywnych.
Korzystnie stosowane są w ilości od około 1,0E+04 cfu/g do około 1,0E+11cfu/g, korzystniej od 1,0E+05 cfu/g do około 1,0E+10 cfu/g, najbardziej korzystnie od 1,0E+06 cfu/g do około 1,0E+09 cfu/g.
W korzystnym wykonaniu mogą być stosowane jako dodatki dietetyczne w celu poprawienia jakości pożywienia dla zwierząt i mogą być dodawane w ilości od około 1,0E+04 cfu/g do około 1,0E+11 cfu/g. Jako dodatki dietetyczne mogą być w postaci suchej bądź uwodnionej, zakapsułkowane, lub podawane w formie proszku, i pakowane w połączeniu z głównym pokarmem, bądź osobno. Dla przykładu, proszek zawierający wyselekcjonowane mikroorganizmy według wynalazku lub komponenty lub reszty supernatantów z ich hodowli lub wyselekcjonowane metabolity, może być pakowany w saszetki w postaci sproszkowanej lub do żelu, lub lipidu, lub innego odpowiedniego nośnika. Te oddzielnie pakowane porcje mogą być podawane razem z głównym posiłkiem lub w wieloporcjowych opakowaniach do stosowania z głównym posiłkiem lub przekąską, zgodnie z instrukcją użytkownika. W innym przykładzie, probiotyczne szczepy mogą być dostarczane w wielokomorowych opakowaniach razem z drugim spożywanym składnikiem, na przykład, jako mieszanka mokrej lub średnio wilgotnej zbrylonej karmy lub stała porcja suchych granulek w elastycznej torbie. Pierwsza komora w torbie powinna zawierać szczep probiotyku, a druga, oddzielnie uszczelniona komora, drugi składnik jadalny.
PL 207 930 B1
Te wyselekcjonowane mikroorganizmy mają szczególnie korzystny wpływ na domowe zwierzęta, na ich przewód pokarmowy, na ich skórę i/lub sierść, na ich układ odpornościowy, stan zdrowia jamy gębowej i zębów, na ich kości i na proces starzenia.
Stwierdzono również, że poprawiają one smak pożywienia, trawienie, funkcje odpornościowe i stan sanitarny zwierzęcia (zmniejszają ilości fekaliów i częściowo odwadniają psi kał).
Niniejszy wynalazek dotyczy także kompozycji pokarmowej dla zwierząt poprawiającej lub podtrzymującej stan zdrowia zwierząt, zawierającej przynajmniej jeden probiotyczny szczep mający powyższe cechy połączone z nadającym się do spożycia nośnikiem lub matrycą farmaceutyczną.
Co najmniej jeden szczep bakteryjny mający powyższe cechy i/lub supernatant z jego hodowli, lub jego frakcji, i/lub jego metabolitów, może być podawany zwierzęciu jako uzupełnienie jego normalnej diety, lub jako składnik pełnego pod względem odżywczym pokarmu dla zwierząt.
Pełne pod względem odżywczym kompozycje pokarmowe dla zwierząt według wynalazku mogą być w sproszkowanej, wysuszonej postaci lub w postaci wilgotnego, chłodzonego i nadającego się do składowania produktu żywnościowego dla zwierząt. Te pokarmy dla zwierząt mogą być wytwarzane w sposób znany w stanie techniki pod warunkiem, że w przypadku gdy wymagana jest aktywność mikroorganizmów dokłada się szczególnej staranności dla zabezpieczenia ich przeżywalności. Oprócz szczepów bakteryjnych i/lub ich sfermentowanego podłoża, te zwierzęce pokarmy mogą zawierać jakiekolwiek jedno lub więcej źródło skrobi, źródło białka i źródło tłuszczu.
Odpowiednimi źródłami skrobi są, na przykład, zboża i rośliny strączkowe, takie jak kukurydza, ryż, pszenica, jęczmień, owies, soja i ich mieszanki.
Odpowiednie źródła białka mogą być wybrane z dowolnego odpowiedniego zwierzęcego lub warzywnego źródła białka, na przykład, mięsa i mąki, mączki drobiowej, mączki rybnej, białkowych koncentratów soi, białek mleka, glutenu itp. Dla starszych zwierząt zaleca się, aby źródło białka zawierało białka wysokiej jakości.
Odpowiednie źródła lipidów zawierają mięsa, tłuszcze zwierzęce i tłuszcze roślinne.
Wybór źródeł skrobi, białka i lipidów będzie w dużym stopniu określony przez pokarmowe potrzeby zwierzęcia, preferencje smakowe i typ zastosowanych produktów. Dla starszych zwierząt, pokarm zawiera proporcjonalnie mniej tłuszczu niż karma dla młodszych zwierząt. Co więcej, źródła skrobi mogą obejmować ryż, jęczmień, pszenicę i kukurydzę, pojedynczo lub razem.
Dodatkowo, różne inne składniki, na przykład, cukier, sól, przyprawy korzenne, przyprawy, witaminy, minerały, substancje zapachowe, tłuszcze itp. mogą być także dodawane do pokarmu zwierzęcego zgodnie z potrzebami.
Dla suchych pokarmów zwierzęcych odpowiednim procesem jest wytłaczanie, chociaż pieczenie i inne odpowiednie sposoby mogą być również zastosowane. Podczas wytłaczania sucha karma dla zwierząt domowych jest dostarczana w postaci śruty. Przy zastosowaniu prebiotycznego węglowodanu, prebiotyk przed przetwarzaniem może być zmieszany z innymi składnikami suchej karmy. Odpowiedni proces opisano w europejskim zgłoszeniu patentowym nr 0850569. Jeśli probiotyczny mikroorganizm jest stosowany i w produkcie końcowym wymagana jest jego aktywność, najlepiej gdy organizm ten jest otoczkowany lub wkładany do suchej karmy dla zwierząt. Odpowiedni proces jest opisany w europejskim zgłoszeniu patentowym nr 0862863. Gdy przeżycie mikroorganizmów nie jest wymagane, mogą one być dodane do mieszaniny przed wytłaczaniem, podobnie jak supernatant z ich hodowli lub metabolit, jeśli jest to celowe.
Dla mokrej karmy, procesy opisane w opisach patentowych USA nr 4,781,939 i 5,132,137 mogą być wykorzystane do wytwarzania naśladujących mięso produktów. Inne procedury dla wytwarzania produktów w formie brykietów mogą być również stosowane; na przykład, gotowanie w piecyku parowym. Alternatywnie, produkty w kształcie bochenka mogą być wytwarzane przez emulgowanie odpowiedniego materiału mięsnego w celu wytworzenia emulsji mięsnej, z dodatkiem odpowiedniego czynnika żelującego, i podgrzewanie mięsnej emulsji przed napełnieniem puszek lub innych pojemników. W przypadku wytwarzania suchej karmy dla zwierząt, gdzie przeżycie wybranych probiotycznych gatunków nie jest istotne, mogą one być dodawane do mieszanki pokarmowej przed gotowaniem lub ogrzewaniem, lub podczas jakiegokolwiek stosownego lub wygodnego etapu w procesie wytwarzania. Ilość probiotyku w pokarmie dla zwierząt domowych jest korzystnie mniejsza niż około 20% wagowych i dodatkowo, korzystnie mniejsza niż około 10% wagowych. Przykładowo probiotyk może obejmować od około 0,1% do około 5% wagowych pokarmu dla zwierząt. Do pokarmów zwierzęcych, w których zastosowano cykorię jako probiotyk, cykoria może być włączona w ilości od około 0,5% do 10% wagowych mieszanki pokarmowej; bardziej korzystnie od około 1% do około 5% wagowych.
PL 207 930 B1
Pokarmy dla zwierząt domowych mogą zawierać inne aktywne czynniki, takie jak długołańcuchowe kwasy tłuszczowe. Odpowiednie długołańcuchowe kwasy tłuszczowe zawierają kwas alfalinolowy, gamma linolowy, kwas linolowy, kwas eikozapentanowy, i kwas dokozaheksanowy. Oleje z ryb są odpowiednim źródłem kwasu eikozapentanowego, i dokozaheksanowego. Olej z ogórecznika, olej z nasion czarnej porzeczki i olej z wiesiołka dwuletniego są odpowiednim źródłem kwasu gammalinolowego. Olej z szafranu łąkowego, olej ze słonecznika, olej z kukurydzy i olej sojowy są odpowiednimi źródłami kwasu linolowego.
Jeśli potrzeba, pokarmy dla zwierząt uzupełnia się minerałami i witaminami, dlatego są one kompletne pod względem odżywczym.
Co więcej, jeżeli trzeba szczep bakteryjny może być zakapsułkowany, na przykład, w matrycy z cukru, tłuszczu lub polisacharydu. Może być także powleczony jak opisano w EP 862 863.
Nowy probiotyczny szczep korzystnie stosuje się w taki sposób, aby karma dla zwierząt zawierała około 1,0E+0,4 do około 1,0E+10 komórek probiotycznego mikroorganizmu na gram karmy zwierzęcej; bardziej korzystnie około 1,0E+06 do około 1,0E+08 komórek probiotycznego mikroorganizmu na gram. Pokarm dla zwierząt może zawierać od około 0,005% do około 10% wagowych mieszanki probiotycznego mikroorganizmu. Korzystnie zawiera on około 0,02% do około 6% wagowych, najbardziej korzystnie około 1% do około 6% wagowych. Ilość pokarmu do spożycia przez zwierzę w celu uzyskania korzystnego efektu będzie zależała od wielkości zwierzęcia, jego typu i wieku. Jednakże, ilość pokarmu dla dostarczenia dziennej ilości około 1,0E+03-1,0E+14 cfu co najmniej jednego szczepu bakterii kwasu mlekowego i/lub równoważnej pożywki fermentacyjnej byłaby zazwyczaj odpowiednia. Korzystnie około 1,0E+09 do 1,0E+11 cfu/dzień podaje się psom lub 1,0E+07 do 1,0E+10 cfu/dzień kotom.
Kompozycja według wynalazku ma wysoką probiotyczną aktywność i/lub jest postrzegana jako szczególnie skuteczna dla poprawy stanu zdrowia zwierząt domowych i/lub utrzymania funkcji trawiennych zwierząt w stanie zdrowia, poprawy i utrzymania przewodu pokarmowego, skóry i/lub sierści, i/lub układu odpornościowego. Kompozycja ta ma także korzystny wpływ na proces starzenia psów i kotów.
Poniższe przykłady ilustrują niniejszy wynalazek bez ograniczenia jego zakresu. Przykłady są poprzedzone krótkim opisem figur rysunku.
Figury
Figura 1: Proliferacja limfocytów jednojądrzastych komórek psiej krwi obwodowej (PMBC) pod wpływem stymulacji mitogenami lub estrami forbolu. PMBC od dorosłych psów karmionych przez 4 tygodnie z (Czarne słupki) lub bez (Białe słupki) L. acidophilus NCC2628 stymulowano różnymi mitogenami w dawkach (pg/ml) wskazanych na wykresie. Mitogenami są PHA (fitohemaglutynina,) ConA (konkawalina A), PWM (mitogen szkarłatki) i ester forbolu są to PMA/iono (Octan mirystylowy forbolu i jonomycyna). *=P<0.05, t-Test Studenta
Figura 2: Cytokiny produkowane przez psie leukocyty stymulowano różnymi szczepami probiotyków. Leukocyty od normalnego dorosłego psa stymulowano przez 18 godzin różnymi szczepami laktobacillusów wyizolowanych od zwierząt. Kultury kontrolne zawierały samą pożywkę (kontrola ujemna) lub izolaty ludzkich laktobacillusów STU (kontrola dodatnia). Identyfikacji cytokin dokonano przez RT-PCR. Ich określenie ilościowe przeprowadzono przez skanowanie barwionych bromkiem etydyny żeli agarozowych i określanie odpowiednim pikselem każdego prążka z zastosowaniem przetwarzania obrazu NIH Image software. Wyniki są wyrażone w dowolnych jednostkach, jako średnie z dwóch niezależnych eksperymentów (A) IL-12, (B) IL-10, (C) IFNy, (D) TGF3.
P r z y k ł a d y
P r z y k ł a d 1: Szczepy i warunki kultury
Liczne szczepy (z Kolekcji Kultur w Nestle = NCC) przeszukiwano pod kątem ich potencjalnego probiotycznego zastosowania u kotów i psów. W szczególności oceniono 20 laktobacillusów i 18 bifidobakterii wyizolowanych z kałów kotów i psów ze względu na ich potencjały wzrostowe, odporność na liofilizację z późniejszym przechowywaniem, tolerancję na kwasowość żołądkową i różne stężenia soli żółciowych występujących w przewodzie pokarmowym tych zwierząt, wyniki przedstawiono w tabeli 1.
PL 207 930 B1
T a b e l a 1:
Kody i charakterystyki bakterii wyselekcjonowanych do badań Laktobacillusy:
Kod NCC | Kod CNCM | Kod | Pochodzenie gatunkowe zwierząt | Typ przyjmowanej diety | NH3 z argininy | Kwas mlekowy | Identyfikowane z API50CH |
2578 | LB1-1 | Kot | Mieszana | L | L. animalis/ruminis | ||
2581 | I-2448 | LB-2 | Kot | Mieszana | + | D/L | L. reuteri |
2583 | I-2449 | LK1-1 | Kot | Mieszana | - | D/L | L. rhamnosus |
2586 | LK1-2 | Kot | Mieszana | + | D/L | L. reuteri | |
2590 | LH2-1 | Kot | Sucha | D/L | L. acidophilus | ||
2592 | I-2450 | LR1-1 | Kot | Mieszana | + | D/L | L. reuteri |
2594 | - | LS1-1 | Kot | Mieszana | L | L. animalis/ruminis | |
2597 | - | LA2-5 | Pies | Mokra | L | L. animalis | |
2600 | - | LC2-5 | Pies | Mokra | D/L | L. fermentum/reuteri | |
2603 | I-2451 | LE2-5 | Pies | Mokra | L | L. reuteri | |
2606 | LF2-6 | Pies | Sucha | + | D/L | L. reuteri | |
2609 | LH2-6 | Pies | Sucha | + | D/L | L. reuteri | |
2613 | I-2452 | LH2-7 | Pies | Sucha | + | D/L | L. reuteri |
2616 | L1-1-1 | Pies | Mieszana | + | D/L | L. reuteri/ferment tum | |
2619 | L1-1-2 | Pies | Mieszana | D/L | L. acidophilus | ||
2621 | L3-1-2 | Pies | Mieszana | L | L. animals/ruminis | ||
2625 | L7-1-3 | Pies | Mieszana | L | L. animals/ruminis | ||
2628 | I-2453 | LA1-5 | Pies | Mieszana | D/L | L. acidophilus | |
2632 | LA1-6 | Pies | Mieszana | + | D/L | L. reuteri/fermentum | |
2536 | LB1-5 | Pies | Mieszana | L | L. animalis/ruminis |
Bifidobakterie:
Kod NCC | Kod | Pochodzenie gatunkowe zwierząt | Typ przyjmowanej diety | Identyfikowane z API50CH |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
2623 | CO2-5 | Kot | Sucha | Bifidobacterium |
2627 | CG2-5 | Kot | Sucha | Bif. adolescentis |
2630 | CH2-5 | Kot | Sucha | Bif. adolescentis |
2633 | CE3-1 | Kot | Sucha | Bif. adolescentis |
2635 | CC1-5 | Kot | Mieszana | Bif. longum/suis |
2637 | CE4-1 | Kot | Sucha | Bif. adolescentis |
2640 | CB3-5 | Kot | Sucha | Bif. adolescentis |
2643 | CJ2-6 | Kot | Sucha | Bif. adolescentis |
2647 | D5-3-5 | Pies | Mokra | Bif. adolescentis |
2651 | D8-3-6 | Pies | Sucha | Bif. animalis/lactis |
2654 | D9-3-7 | Pies | Sucha | Bif. animalis/lactis |
PL 207 930 B1 cd. tabeli
1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
2657 | D6-3-6 | Pies | Sucha | Bifidobacterium |
2660 | D7-3-5 | Pies | Sucha | Bifidobacterium |
2663 | DB3-1 | Pies | Sucha | Bifidobacterium |
2667 | DC3-1 | Pies | Sucha | Bifidobacterium |
2671 | DA1-3 | Pies | Mieszana | Bif. animalis/lactis |
2674 | DA3-1 | Pies | Sucha | Bifidobacterium |
2677 | 5DD3-1 | Pies | Sucha | Bif. adolescentis |
Wszystkie 20 laktobacillusów i 18 bifidobakterii wyizolowano od kotów i psów trzymanych na różnych dietach, jak pokazano w tabeli 1. Początkową identyfikację określono za pomocą cech morfologicznych i fizjologicznych. Posłużono się systemami API-50CH i Rapid-ID32A (BioMerieux) odpowiednio dla laktobacillusów i bifidobakterii. Czyste szczepy zamrożono i zdeponowano w temperaturze -80°C w Nestec Culture Collection (NCC)
Wszystkie bakterie do testów hodowano w pożywce bulionowej. Próbkę każdego reaktywowanego szczepu przechowywano w temperaturze -80°C w 1 ml pożywki krioochronnej (40% glicerolu+60%LL). Kultury utrzymywano przez prowadzenie subkultury na słabo zasadowym 1% inokulum w 10 ml pożywki wzrostowej i w warunkach beztlenowej inkubacji w 37°C.
Laktobacillusy hodowano w pożywce MRS przez 18 godzin. Bifidobakterię hodowano albo w podłożu MRS+0,05% (wag./obj.) chlorowodorku L-cysteiny (MRS-C) przez 32 godziny lub w pożywce BHI+ 0,05% chlorowodorku L-cysteiny (BHI-C) przez 48 godzin rozpoczynając od 5% inokulum.
Między różnymi pasażami wszystkie kultury przechowywano w +4°C. Beztlenowość uzyskiwano stosując głównie układ wodór - ditlenek węgla (GasPak, Becton Dickinson, USA). Bifidobakterię podczas przechowywania były zawsze trzymane w tych słojach.
P r z y k ł a d 2: Wybór szczepów bakteryjnych
To badanie przesiewowe in vitro opierano na produkcyjnych cechach charakterystycznych dla zastosowań przemysłowych zdolnych do życia komórek, ich zdolności do przeżycia hamujących lub szkodliwych warunków żołądkowo-jelitowych i ich genomowej różnorodności. Różnorodność szczepową lub genomowe podobieństwo tych niescharakteryzowanych szczepów brano pod uwagę stosując RAPD i badanie różnic we wzorze restrykcyjnym genów rRNA (rybotypowanie ang. ribotyping).
Materiały i metody
Bakteryjny wzrost
Szczepy, które są zdolne do szybkiego wytwarzania dużej liczby komórek muszą być zidentyfikowane. Ich bakteryjny cykl wzrostowy można scharakteryzować krótką fazą przygotowawczą (zastoju), krótkim czasem namnażania się, wysoką maksymalną liczbą i długą fazą stacjonarną. Dlatego szczepy te porównano przez rozważanie trzech zmiennych,: długości ich faz przygotowawczych, ich czasu namnażania (w godzinach) i ich maksymalnej liczby, które odpowiadają najważniejszym parametrom.
Dla Laktobacillusów:
200 ml pożywki MRS wcześniej inkubowanej w 37°C zainokulowano 1% świeżej subkultury. Co godzinę przez 8 godzin po inokulacji pobierano 1 - mililitrowe próbki. Próbkę końcową pobrano po 24 godzinach. Jeden mililitr każdej próbki był 10-krotnie kolejno rozcieńczany w TS w celu policzenia. Hodowle rosły beztlenowe w 37°C, przez 48 godzin na agarze MRS (metodą płytek lanych). Wszystkie płytki z liczbą kolonii między 30 a 350 zarejestrowano jako jednostki tworzące kolonie (cfu) na ml hodowli i brano pod uwagę w celu wyliczenia.
Dla Bifidobakterii w (MRS-C):
We wstępnych testach wszystkie szczepy wyliczano po 24 godzinach wzrostu w pożywkach bulionowych MRS-C i TPYG. Wyniki wyrażano w cfu/ml. Krzywe wzrostowe ustalano przez określenie liczby komórek rosnących w MRS-C po 0, 4, 12, 24, 32, i 48 godzinach według protokołu opisanego dla laktobacillusów. Test ten przeprowadzono, aby określić wpływ pożywki subkultury i optymalizację odgazowania pożywki wzrostowej:
PL 207 930 B1 • z subkultury, w BHI-C przechowywanej przez 48 godzin w 4°C i inokulowanej w MRS-C.
• z subkultury, w BHI-C przechowywanej 48 godzin w 4°C i zainokulowanej w MRS-C dobrze odgazowanej (usuwanie tlenu optymalizowano przez dwukrotnie autoklawowanie pożywki i przechowywanie jej bezpośrednio w beztlenowych słojach).
• ze świeżej subkultury, w MRS, i zainokulowanej w MRS-C dobrze odgazowanej i przechowywanej w warunkach beztlenowych przed doświadczeniem.
T a b e l a 2:
Pożywki testowe do bakteryjnego wzrostu
Dla laktobacillusów | ||||
Substrat | Skład | pH | Odnośniki | |
MRS | MRS bez cukru (Difco) | 35 g l-1 | 6,5 | De Man i wsp. (1960) |
Glukoza | 20 g l-1 | |||
Woda destylowana | 1000 ml | |||
Dla bifidobakterii | ||||
Substrat | Skład | PH | Odnośniki | |
MRS-C | MRS bez cukru | 35 g l-1 | 6,0 | Pacher i Kneifel (1996) |
Glukoza | 20 g l-1 | |||
Chlorowodorek L-cysteiny (Fluka) | 0,5 g l-1 | |||
Woda destylowana | 1000 ml | |||
TPYG (Tryptikazowy Peptonowy Wyciąg drożdżowy) | Tryptykaza (BBL) | 50 g l-1 | 7,0 | |
Pepton (Difco) | 5 g l-1 | |||
Wyciąg drożdżowy (Difco) | 20 g l-1 | |||
Glukoza | 4 g l-1 | |||
(Merck) | ||||
Chlorowodorek L-cysteiny (Fluka) | 1 g l-1 | |||
Woda destylowana | 1000 ml |
Pożywkę stałą uzyskiwano przez dodanie Difco Bactoagar (15 g/l-1). Pożywki autoklawowano w 121°C przez 15 min. Pożywki ciekłe dla bifidobakterii albo przechowywano w warunkach beztlenowych albo odgazowywano przed wykorzystaniem.
Odporność na pH żołądkowe i żółć
Po spożyciu, aby utrzymać zdolność do wywierania korzystnej aktywności w przewodzie pokarmowym zwierzęcia, mikroorganizmy muszą przetrwać warunki żołądkowe i dwunastnicze. Głównymi składnikami odpowiedzialnymi za regulację flory bakteryjnej są pH żołądka i sole żółciowe. Dlatego musiał być przetestowany też stopień odporności szczepów na kwasowość żołądkową i żółć.
Fizjologia przewodu trawiennego kotów i psów różni się od ludzkiej. Przeciętne pH wynosiło odpowiednio 3,4 u psów i 4,2 u kotów. Do testów polecono zrekonstytuowaną żółć zwierząt domowych (tabela 4). Stężenie żółci w jelicie cienkim w trakcie trawienia pokarmu jest w zakresie od 0,5 do 2%.
PL 207 930 B1
Stosownie do wartości ekstremalnego pH znalezionego u kotów i u psów, liczba zdolnych do życia bakterii po 10 minutach w pH 2,6 i po dwóch godzinach w pH 3,4 (szczepy izolowane od psów) albo w pH 4,2 (szczepy izolowane od kotów) nie powinna wynosić poniżej 1,0E+06 cfu/ml.
Odporność na pH żołądkowe
Wszystkie laktobacillusy inokulowano w ilości 1% w podłożu MRS i hodowano beztlenowo w 37°C przez noc. Bifidobakterię zainokulowane w ilości 5% w BHI-C hodowano w warunkach beztlenowych przez 48 godzin w 37°C. Hodowle rozdzielano do dwumililitrowych probówek reakcyjnych (Eppendorf) i wirowano przy 3500 xg/10 min/20°C. Komórki przemywano trzy razy płynem Ringera. Odporność na kwasowe warunki żołądka testowano in vitro w trzech symulowanych sokach żołądkowych o poziomach pH 2,6; 3,4; i 4,2 doprowadzanych kwasem solnym (Merck). Do wszystkich sterylizacji przez filtrowanie stosowano jednorazowe filtry (Nalgene). Przeżywalność każdej zawiesiny bakteryjnej badano przez dodanie 1 ml do pięciomililitrowych serii symulowanego soku żołądkowego (różne pH) uzupełnionych 1,5 ml 0,5% roztworu NaCl. Próbki inkubowano w 37°C i zdolne do życia organizmy obliczano po:
• 0, 1,5, 10 minutach w pH 2,6 soku żołądkowego • 0, 1, 30, 60, 120, 180 minutach, gdy sok żołądkowy miał pH albo 3,4 (dla szczepów izolowanych od psów) albo 4,2 (dla szczepów izolowanych od kotów).
Próbki rozcieńczano buforem fosforanowym (pH 7,0), wysiewano na agar MRS-C i określano ich liczbę.
T a b e l a 3
Symulowany sok żołądkowy
Nazwa substratu | Skład | PH |
Sok żołądkowy | 0,3% wag./obj. świńskiej pepsyny (Sigma) | 2,1; 3,4 lub 4,2 |
0,5% wag./obj. NaCl | ||
HCl (Merck): do doprowadzania pH |
Odporność na sole żółciowe
Określano liczby zdolnych do życia laktobacillusów hodowanych przez 18 godzin w obecności różnych stężeń rekonstytuowanej żółci zwierzęcej.
Dwie liczby zdolnych do życia bakterii uważano za istotnie różne, gdy odchylenie ich log10, wynosiło powyżej 0,25. Każdy szczep scharakteryzowano dwiema zmiennymi:
• maksymalnym stężeniem testowanych soli żółci, przy którym nie znaleziono istotnej różnicy z kontrolą • szybkością spadku żywotności przy zwiększeniu stężenia żółci w podłożu.
Szczepy charakteryzowane utratą przewagi log10 ich liczby zdolnych do życia bakterii, gdy stężenie żółci rosło w 1% etapach były uważane za wrażliwe. Przyjmowano za akceptowalne, jeżeli zmniejszenie między komórkami rosnącymi w obecności 0 i 2% żółci przewyższało jeden log10, i wynosiło do jednego log10 przy dodatkowym procencie żółci (powyżej 2%). Ponadto, należy wybrać tylko szczepy wytwarzające więcej niż 1,0E+06 cfu/ml w trakcie wzrostu w obecności do 2% soli żółci, wyselekcjonowane w celu wywołania działania w przewodzie pokarmowym.
Rekonstytuowaną żółć zwierzęcą kotów lub psów spreparowano jak pokazano w tabeli 4, i przed użyciem wysterylizowano metodą filtracji. W pierwszym teście, laktobacillusy rosły beztlenowe przez 24 godziny w podłożu MRS w 37°C i były przenoszone do świeżego bulionu MRS z dodatkiem 0, 0,1; 0,3; 0,5; 1;2; 4% sterylnie rekonstytuowanej żółci zwierzęcej na dodatkowe 18 godzin. Próbki 10-krotnie kolejno rozcieńczano w TS w celu przeliczenia. Rozcieńczenia 1,0E-03 i 1,0E-05 wysiewano na agar MRS używając WASP (Whitley Automatic Spiral Plater); Don Whitney Scientific Limited, England). Podczas suszenia płytki odwracano i inkubowano 48 godzin w temperaturze 37°C w beztlenowych słojach.
Floch i wsp. (1972) określili zahamowanie jako znaczące, gdy w teście występowało zmniejszenie wzrostu o przynajmniej 2 logarytmy w porównaniu ze wzrostem w probówce kontrolnej. Opierając się na tym wszystkie laktobacillusy wrażliwe na stężenia żółci w pierwszym teście i dwa laktobacillusy odporne na 4% żółć testowano podobnie w obecności 0; 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4% żółci. Następny test przeprowadzono dla zmierzenia powtarzalności i ustalenia, czy liczba żywotnych bakterii spadła dramatycznie ze wzrostem stężenia żółci.
PL 207 930 B1
Z drugiej strony, wykazano, że szczepy te są żółcio-oporne podczas tego 18-godzinnego okresu. Krzywe wzrostu ustalano w obecności soli żółci, aby określić, czy faza przygotowawcza i tempo wzrostu oddziałują na nie czy nie. Testy przeprowadzono z laktobacillusami rosnącymi w bulionie MRS wzbogaconym 1% rekonstutuowaną żółcią zwierząt, według protokołu opisanego dla wcześniejszych pomiarów wzrostu.
Prowadzono subkultury Bifidobakterii, które rosły beztlenowo 32 godziny/37°C, z zastosowaniem bulionu MRS-C z 0; 1; 2; 3 i 4% rekonstytuowanej żółci zwierząt. Zastosowano tę samą metodę wyliczania przy rozcieńczeniach 1,0E-03, 1,0E-04 i 1,0E-05 jak dla laktobacillusów.
T a b e l a 4
Rekonstytuowana żółć zwierząt
Składniki | ąmol/ml | mg/ml | % całkowity |
Taurodeoksycholan (Sigma) | 14,00 | 7,00 | 18,00 |
Taurocholan (Sigma) | 59,00 | 30,40 | 74,0 |
Cholan (Fulka) | 0,14 | 0,06 | 0,2 |
Taurachenodeoksycholan (Sigma) | 6,90 | 3,45 | 8,0 |
Przeżywalność przez szczepy Lactobacillus liofilizacji i następującego po niej przechowywania
Wyliczano ewolucję przeżywania. Liczba zdolnych do życia komórek niższa niż 10E+05 CFU/ml uważana była za zbyt niską.
Dla każdego szczepu, 200 ml MRS pożywki inokulowano 3% świeżej subkultury. Hodowle rosły przez 16 godzin w 37°C. Warunki nienatlenienia (szczelne pojemniki) przyjmowano za zasadniczo beztlenowe. Zdolne do życia komórki obliczano stosując metodę lanych płytek opisaną wcześniej.
Kultury zbierano przez odwirowanie w 3500 xg/+7°C/20 minut (RC3C Sorvall Instrument Centrifuge) i zawieszano w 10 ml dwóch różnych pożywek krioochronnych. Każdy szczep był ponownie zawieszany w dwóch różnych pożywkach krioochronnych. Stężone zawiesiny bakteryjne wyliczano (metodą lanych płytek) i rozlewano do fiolek (0,5 ml na ampułkę). Próbki mrożono w temperaturze -196°C w ciekłym azocie i suszono pod ciśnieniem przez 18 godzin. Po liofilizacji azot wprowadzano przez zawór powietrzny dopuszczeniowy w liofilizatorze wszystkie ampułki zatapiano. Wszystkie fiolki przechowywano w temperaturze +4 i +20°C przez sześć miesięcy. Co miesiąc określano (dla każdej bakterii i pożywki zawieszającej) liczbę zdolnych do życia komórek w ampułce.
WYNIKI
W ramach selekcji potencjalnych probiotyków dla kotów i psów wyniki z badań przesiewowych in vitro 20 laktobacillusów i 18 bifidobakterii, oparte na ich potencjałach wzrostowych, odporności na liofilizację z późniejszym przechowywaniem, odporności na pH żołądka i stężenie żółci znalezione w przewodzie pokarmowym kotów i psów przedstawiono w tabeli 5.
Dwadzieścia Lactobacillusów sklasyfikowano w odniesieniu do kryteriów, które spełniły w aktualnym badaniu. Cztery szczepy wykazały dobre wyniki dotyczące ich cech wzrostu, odporności na pH żołądka, odporności na żółć i zdolność przeżycia podczas przechowywania po liofilizacji: L. reuteri NCC2581 (CNCM I-2448), L. reuteri NCC2592 (CNCM I-2450), L. reuteri NCC2603 (CNCM I-2451) i L. reuteri NCC2613 (CNCM I-2452). Zestawiono następujące cechy:
- okres namnażania się bakterii był mniejszy niż jedna godzina, kiedy rosły w MRS
- faza przygotowawcza była krótka (mniejsza niż dwie godziny)
- liczba bakterii była wysoka (więcej niż 1,0E+08 CFU/ml) w stacjonarnej fazie cyklu wzrostu i stabilna w 8 i 24 godzinie po inokulacji
- szczepy były stabilne podczas liofilizacji i późniejszego sześciomiesięcznego przechowywania w temperaturze 4°C i 20°C
- szczepy były odporne na ekstremalne stężenie żółci możliwe do znalezienia w przewodzie pokarmowym kotów i psów (2%)
- żadnego znaczącego zahamowania w obecności do 4% żółci w pożywce
- szczepy wykazały tolerancję pH 2,6 przez co najmniej 10 minut i mogłyby pozostawać na poziomie wyższym niż 1,0E+08 CFU/ml
- szczepy były odporne na średnie pH żołądka przez co najmniej dwie godziny.
PL 207 930 B1
Dlatego też, dwa laktobacillusy wyizolowane od kotów (L. reuteri NCC2581 i L. reuteri NCC2592) i dwa wyizolowane od psów (L. reuteri NCC2603 i L. reuteri NCC2613J wyselekcjonowano dla zbadania ich potencjalnej probiotycznej aktywności. Szczepy NCC2581, NCC2592, NCC2603 i NCC2613 zidentyfikowano jako L. reuteri dzięki identyfikacji API 50CH.
Jednak badanie różnic we wzorze restrykcyjnym w genach rRNA (rybotypowanie ang. ribotyping) ujawniło, że NCC2581 i NCC2592 miały bardzo podobne wzory, tak samo jak NCC2603 i NCC2613, tym samym wskazując prawdopodobne bliskie pokrewieństwo. Szczep NCC2581 miał bardzo dobre charakterystyki wzrostu, a NCC2603 miał lepszą odporność na żółć niż NCC2613.
Wyniki dotyczące ośmiu bifidobakterii wyizolowanych z kociego kału umożliwiały ich selekcję w oparciu o ich parametry wzrostowe, odporności na pH żołądka i wrażliwości na żółć. Szczep NCC2623 wcale nie miał żadnej z pożądanych cech i dlatego nie byłby zalecany do dalszych badań. Z drugiej strony szczep NCC2627 spełniał wszystkie kryteria:
- jego okres podwajania wynosił mniej niż jedną godzinę podczas wzrostu w MRS-C
- faza przygotowawcza była tak krótka jak dla laktobacillusów
- liczebność była wysoka i stabilna podczas stacjonarnej fazy cyklu wzrostu
- szczep był odporny na ekstremalne stężenie żółci podobne do znalezionej w przewodzie pokarmowym kotów i psów (2%)
- nie występowało żadne znaczące zahamowanie w obecności do 4% żółci w pożywce
- szczep wykazywał tolerancję na pH 2,6 przez co najmniej 10 minut i mógł pozostawać na poziomie wyższym niż 1,0E+0,6 CFU/ml
- szczepy były odporne na średnie pH żołądka przez co najmniej dwie godziny
Szczep NCC2627 był znacznie bardziej odporny niż NCC2623 i NCC2635, podczas gdy te trzy szczepy miały bliski wzór w rybotypowaniu, wskazując tym samym prawdopodobne bliskie pokrewieństwo (trawienie dwoma restrykcyjnymi enzymami: EcoRl i EcoRV).
Dziesięć bifidobakterii wyizolowanych od psów wykazywało tylko dwa różne wzory podczas charakteryzowania przez rybotypowanie. Dlatego też, próby odporności na żółć przeprowadzono tylko z czterema szczepami (po dwa z każdej grupy): NCC2657, NCC2660, NCC2671 i NCC2677. Te wszystkie cztery szczepy były odporne na maksymalne stężenie żółci mogącej występować in vivo (2% żółci), a szczepy NCC2660 i NCC2657 nie wykazywały żadnego spadku żywotności, gdy traktowano je maksymalną wartością 4% żółci. W następstwie czego, wszystkie bifidobacterie wyizolowane z psiego kału są raczej odporne na wysokie stężenia żółci.
Odnośnie do charakterystyk wzrostu, te dziesięć bakterii można by podzielić na dwie grupy:
- szczepy odporne na żółć i z dobrymi charakterystykami wzrostu: NCC2657, NCC2651, NCC2663 i NCC2667
- szczepy odporne na żółć, ale z charakterystykami wzrostu, które muszą być zoptymalizowane do produkcji przemysłowej: NCC2660, NCC2671, NCC2677, NCC2647, NCC2654 i NCC2674
Pełne wyniki odporności na ekstremalne pH żołądka znalezione podczas trawienia u kotów i psów powinny umożliwić lepsze określenie szczepów wybranych do dalszych badań. Tylko szczep NCC2651 nie spełnił kryteriów selekcji na odporność na pH.
T a b e l a 5 Podsumowanie
Kod NCC | Kod | Kryteria wzrostu | Odporność na sok żołądkowy | Odporność na żółć | Stabilność po liofilizacji |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
2578 | LB1-1 | + | + | - | |
2581 | LB1-2 | + | + | + | + |
2583 | LK1-1 | + | + | + | - |
2586 | LK1-2 | - | + | - | - |
2590 | LH2-1 | + | + | + | - |
2592 | LR1-1 | + | + | + | + |
2594 | LS1-1 | - | + | - | - |
2597 | LA2-5 | - | + | + | + |
PL 207 930 B1 cd. tabeli
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
2600 | LC2-5 | - | - | + | - |
2603 | LE2-5 | + | + | + | + |
2606 | LF2-6 | - | + | + | - |
2609 | LH2-6 | + | + | + | - |
2613 | LH2-7 | + | + | + | + |
2616 | L1-M | - | + | + | - |
2619 | L1-1-2 | - | + | + | - |
2621 | L3-1-2 | + | + | - | + |
2625 | L7-1-3 | + | + | - | + |
2628 | LA1-5 | + | + | + | - |
2632 | LA1-6 | - | + | + | - |
2636 | LB1-5 | + | + | + |
Nawiązując do obecnych wyników jeden bifidobakteryjny szczep wyizolowany od kotów i trzy bifidobakterię wyizolowane od psów (odpowiednio NCC2627, NCC2657, NCC2663, NCC2667) mogły by być wyselekcjonowane.
T a b e l a 6 Podłoża rozcieńczające
Substrat | Skład | PH | |
Bufor fosforanowy | K2PO4 KH2PO4 Woda destylowana | 72 g l-1 48 g l-1 | 7,0 |
Roztwór Ringera | NaCl Woda destylowana | 9 g l-1 1000 ml | 7,0 |
TS (Trypton w roztworze soli fizjologicznej) | NaCl Trypton Woda destylowana | 8.5 g l-1 1 g l-1 1000 ml | 7,0 |
W probówkach przygotowano 9-cio mililitrowe porcje i autoklawowano w 121°C przez 15 minut
Ostatecznie, do dalszych badań wyselekcjonowano 8 z 38 szczepów (patrz przykład 3): trzy laktobacillusy wyizolowane od kotów (NCC2581, NCC2592, NCC2583), trzy laktobacillusy od psów (NCC2603, NCC2613, NCC2628), jedna bifidobakteria od kotów (NCC2627), jedna bifidobakteria od psów (NCC2657),
Szczepy te charakteryzują się krótkim okresem namnażania, dużą liczebnością (więcej niż 1,0E+08 cfu/ml) podczas ich fazy stacjonarnej i wysoką liczebną stabilnością po 8 i 24 godzinach od inokulacji, trwałością po liofilizacji, po której następowało przechowywanie, odpornością na ekstremalne stężenia żółci znalezionej w dwunastnicy (2% żółci) i słabym zahamowaniem podczas wzrostu w obecności do 4% żółci. Ponadto, przy selekcjonowaniu reprezentatywnych bakterii spośród badanej różnorodności brano pod uwagę wyniki analiz DNA.
P r z y k ł a d 3: Skuteczność kolonizacji u kotów
L. reuteri NCC2581, L. reuteri NCC2592, L. rhamnosus NCC2583 i Bifidohacterium sp. NCC2627 testowano w próbach żywieniowych w celu oszacowania ich zdolności do przetrwania w czasie przemieszczania się w przewodzie żołądkowo-jelitowym kota. 16 samców i samic kotów, możliwie podobnych, poddawano 3-dniowej adaptacji z „Friskies Grand Menu boeuf. Protokół żywieniowy składał się w ciągu 7 dni testów z „Friskies Grand Menu i 7 dni testów z „Friskies Grand Menu zawierającym jeden z wyżej wymienionych szczepów:
L. reuteri NCC 2581 (dieta A), L. reuteri NCC 2592 (dieta B) L. rhamnosus NCC2583 (dieta C) i Bifidobacterium sp. NCC2627 (dieta D). Oznaczenie diet było następujące:
PL 207 930 B1
Koty nr | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 |
Okres 1 | A | D | C | B | D | A | A | C | B | A | B | C | B | D | C | D |
Okres 2 | B | A | D | A | C | C | D | A | C | B | C | D | D | A | B | B |
Szczepy te wytworzono w dostatecznej ilości i w stabilnej liofilizowanej formie w celu stosowania tych ośmiu różnych bakterii z uwzględnieniem ich szczepowej przeżywalności w układzie pokarmowym testowanych zwierząt. Wszystkie szczepy mieszano z 4 g trehalozy w celu dodania dostatecznej objętości nośnika do zmiksowania wytworzonych szczepów z matrycą pokarmową dla zwierząt. Szczepy bakterii przygotowuje się w pojedynczych plastikowych probówkach (1,0E+09 cfu/dzień) i codziennie dodaje do porcji pokarmu, tak aby mieć pewność, że całość bakterii zostanie zjedzona.
Świeże próbki kału otrzymuje się do analizy liczby populacji bakteryjnej i porównuje z linią podstawową (bez dodanych bakterii)
Fekalia zbiera się 7 i 8 dnia (linia podstawowa) 14 i 15 dnia i 22 (linia podstawowa) i 29 dnia
Sterylną sondę doodbytniczą stosuje się do otrzymania co najmniej 0,1 g próbki kału.
Tę próbkę waży się dokładnie i 0,1 g miesza się z 10 ml fizjologicznego roztworu (Ringer) zawierającego 10% glicerolu. Roztwór ten następnie przenosi się do 1 ml krioprobówek i zamraża w ciekłym azocie. Następnie wszystkie próbki przechowuje się w -80°C aż do analiz.
Policzono endogenne populacje Lactobacillus, Bacteroides, Enterobacteriaceae, enterokoków, bifidobakterii i Clostridium perfringens. Bakterie wykrywano na selektywnej lub półselektywnej pożywce. Stukrotne seryjne rozcieńczenia wykonano w roztworze Ringera zawierającym 0,5% cysteiny, od rozcieńczeń w zakresie -2 do -8. Szalki Petriego z różnymi selektywnymi pożywkami zainokulowano i inkubowano (patrz tabela poniżej).
Bakterie | Pożywka | T (°C) | Czas (godz.) | Atmosfera |
Enterobacteriaceae | Drigalski (Sanofi) Diagnostics Pasteur, | 37 | 24 | Tlenowa |
Bifidobacterie | Francja Eugon Tomato* | 37 | 48 | Beztlenowa |
Laktobacillusy | MRS (Difco, MI.USA)+ antybiotyki** | 37 | 48 | Beztlenowa |
Cl.perfringens | NNAgar*** | 37 | 48 | Beztlenowa |
Bacteroides | Schedler Neo-Vanco (BioMerieux, MarcyL'Etoile, Francja | 37 | 48 | Beztlenowa |
*: Wadsworth Anaerobic Bacteriology Manual, V. Suter, D. Citron i S. Finegold Third ed. **: fosfomycyna (79,5 mg/l) + Sulfametoksazol (0,93 mg/l + Trimetoprim (5 mg/l) ***NN agar z Lowbury i Lilly, 1995
Wyniki: Liczebności bakterii są wyrażone jako logarytm dziesiętny i przedstawione w tabeli 7.
T a b e l a 7
Liczebność bakterii w kale kocim (średnia± odch. St, n=8)
NCC2581 | NCC 2592 | NCC 2583 | NCC 2627 | |||||
przed | podczas | przed | podczas | przed | podczas | przed | podczas | |
Laktobacillusy | 6,38 | 7,63 | 6,12 | 7,62 | 5,31 | 7,47 | 6,69 | 7,65 |
±2,25 | ±1,23 | ±2,45 | ±1,58 | ±2,04 | ±1,23 | ±1,44 | ±1,45 | |
Bifidobakterie | 7,17 | 7,64 | 7,57 | 6,31 | 6,43 | 6,80 | 8,04 | 6,07 |
±1,82 | ±0,42 | ±1,68 | ±2,26 | ±2,25 | ±2,19 | ±1,03 | ±2,32 | |
Enterobacteria- | 4,25 | 4,27 | 4,37 | 4,58 | 5,09 | 4,40 | 4,59 | 3,64 |
ceae | ±1,71 | ±1,20 | ±1,35 | ±1,45 | ±1,50 | ±0,63 | ±1,42 | ±0,64 |
Bacteroides | 6,05 | 5,54 | 5,94 | 6,15 | 6,19 | 5,52 | 6,00 | 5,48 |
±1,38 | ±0,49 | ±0,99 | ±1,43 | ±0,97 | ±0,46 | ±1,11 | ±0,50 | |
C. perfr. | 4,09 | 3,84 | 3,61 | 3,30 | 4,16 | 3,34 | 3,84 | 3,57 |
±1,22 | ±1,00 | ±0,57 | ±0,00 | ±1,64 | ±0,11 | ±0,89 | ±0,56 |
PL 207 930 B1
Podczas traktowania obserwujemy wzrost liczebności laktobacillusów w kale z powodu spożycia wspomnianej probiotycznej bakterii. Nie zaobserwowaliśmy żadnego drastycznego wzrostu liczebności Enterobacteriaceae odzwierciedlającego, iż nie ma żadnego uszkodzenia w ekosystemie jelitowym w związku z zastosowaniem wyselekcjonowanych probiotyków.
P r z y k ł a d 4: Skuteczność kolonizacji u psów
L. reuteri NCC2603, L. reuteri NCC2613, L. acidophilus NCC2628 i Bifidobacterium sp. NCC2657 testowano w próbach pokarmowych, ażeby oszacować ich zdolność do przeżycia w trakcie przechodzenia przez układ pokarmowy psa.
psów, 5 samców i 5 samic w wieku od 4 do 7 lat poddano tym specyficznym próbom. Protokół karmienia składał się z 5 dni adaptacji z „Friskies Vitality z/bez cykorii i 5 dni testu z „Friskies Vitality z/bez cykorii i 3 dni adaptacji, 5 dni testu z „Friskies Vitality z/bez cykorii + bakterie: L. reuteri NCC2603 (dieta E), L. reuteri KTCC2 613 (dieta F), L. acidophilus NCC2 62 8 (dieta G) i Bifidobacterium sp. NCC2657 (dieta H).
Oznaczenie diet było następujące:
pies nr° | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
okres 1 | E | E | E | E | E | F | F | F | F | F |
okres 2 | G | G | G | G | G | H | H | H | H | H |
Szczepy wytwarzano w dostatecznych ilościach i w stabilnej liofilizowanej formie w celu zastosowania tych ośmiu różnych bakterii z uwzględnieniem szczepowej przeżywalności w układzie pokarmowym testowanych zwierząt. Wszystkie szczepy mieszano z 4 g trehalozy w celu dodania dostatecznej objętości nośnika do zmieszania wytworzonych szczepów bakteryjnych z matrycą pokarmową dla zwierząt. Szczepy bakteryjne wytwarza się w pojedynczych plastikowych probówkach (5,0E +09 cfu/dzień) i codziennie dodaje do części pokarmu dla pewności, że całość bakterii zostanie zjedzona.
Otrzymuje się świeże próbki kału do analizy liczebności bakteryjnych populacji i porównuje z linią podstawową (bez dodanych bakterii). Kały zbiera się w 7 i 8 dniu (linia podstawowa) i 15 dni i 22 (linia podstawowa) i 29 dni.
Do otrzymania co najmniej 0,1 g próbki kału stosuje się sterylną doodbytniczą sondę. Tę próbkę waży się dokładnie i 0,1 g miesza z 10 ml roztworu fizjologicznego (Ringer) zawierającego 10% glicerolu. Roztwór ten następnie przenosi się do 1 ml kriprobówek i zamraża w ciekłym azocie. Wszystkie próbki następnie przechowuje się w - 80°C aż do analiz. Bakterie liczono na tej samej pożywce jaką opisano w przykładzie 3.
Wyniki: Liczebności bakterii, wyrażone jako logarytm dziesiętny, przedstawiono w tabeli 8.
T a b e l a 8
NCC 2603 | NCC 2613 | NCC 2628 | NCC 2657 | |||||
przed | podczas | przed | podczas | przed | podczas | przed | podczas | |
Laktobacillusy | 5,25 | 3,92 | 4,0 | 3,40 | 7,93 | 8,30 | 6,47 | 7,00 |
±1,34 | ±1,5 | ±1,56 | ±0,21 | ±1,75 | ±0,99 | ±1,27 | ±1,35 | |
Bifidobakterie | 7,32 | 4,48 | 6,09 | 4,55 | 7,70 | 7,20 | 5,72 | 6,78 |
±2,06 | ±2,64 | ±2,10 | ±2,79 | ±2,57 | ±1,88 | ±2,51 | ±2,39 | |
Enterobacteria- | 4,10 | 4,62 | 3,62 | 4,34 | 4,58 | 4,04 | 4,51 | 4,85 |
ceae | ±0,89 | ±0,61 | ±0,72 | ±0,94 | ±1,54 | ±0,76 | ±1,51 | ±1,45 |
Bacteroides | 7,82 | 6,70 | 6,92 | 6,69 | 7,88 | 7,53 | 7,92 | 7,66 |
±0,53 | ±1,25 | ±1,37 | ±1,19 | ±1,13 | ±0,61 | ±0,63 | ±0,86 | |
C.perfr. | 3,70 | 3,84 | 3,50 | 3,30 | 3,70 | 3,30 | 3,93 | 3,70 |
±0,89 | ±0,87 | ±0,45 | ±0 | ±0,62 | ±0 | ±1,25 | ±0,89 |
PL 207 930 B1
Podczas podawania nie obserwowaliśmy znaczących zmian w liczebności laktobacillusów w kale, związanych ze spożywanymi wyselekcjonowanymi probiotycznymi bakteriami z wyjątkiem przypadku szczepu L. acidophlilus NCC2628. W testowanych warunkach efekt hamowania C. perfringens nie był istotny, ponieważ podstawowy poziom C. perfringens był bardzo niski. Nie obserwujemy znacznego wzrostu liczby Enterobacteriaceae odzwierciedlającego, że nie występują żadne zakłócenia ekosystemu jelitowego wynikające z użycia wyselekcjonowanych probiotyków.
P r z y k ł a d 5: Wpływ laktobacillusów i ich metabolitów na żywotność Giardia intestinalis
Badaliśmy działanie filtrowanych supernatantów szczepów Lactobacillusów wyizolowanych od kotów i psów.
Materiał i metody
Szczepy i kultury bakteryjne: Mikroorganizmy należące do rodzaju Lactobacillus pochodziły ze Zbiorów Kultur Nestle. Bakterie rosły na pożywce MTYI. Supernatanty zawierające metabolity laktobacillusów neutralizowano przy pH 6 i wyjaławiano przez filtrację.
Kontrole przeprowadzano przez zakwaszanie pożywki MTYI kwasem mlekowym do tego samego pH, jak jedna z kultur bakteryjnych. Oprócz tego, pH doprowadzano 0,1 N NaOH do pH o wartości 6. Pochodzenie badanych szczepów i pH supernatantów i kontroli przedstawia tabela 9.
T a b e l a 9
Szczep | Pochodzenie | pH supernatantu | pH kontroli |
L .reuteri NCC2581 | Kot | 6,63 | 6,63 |
L .rhamnosus NCC2583 | Kot | 6,50 | 5,97 |
L. reuteri CC2592 | Kot | 6,04 | 5,98 |
L. reuteri NCC2603 | Pies | 6,04 | 5,99 |
L. reuteri NCC2613 | Pies | 6,07 | 5,95 |
L. acidophilus NCC2628 | Pies | 6,01 | 5,93 |
Pasożyty: Szczep Giardia intestinalis WB (ATCC 30957) nabyto w American Type Culture Collection (Rockville, USA). Trofozoity rosły w pożywce TYI- S-33 zmodyfikowanej przez Keistera zawierającej w litrze: strawioną kazeinę (Difco) 20g; wyciąg z drożdży (BBL) 10 g; dekstrozę (Merck) 10 g; żółć wołową (Difco) 0.75 g; NaCl (Merck) 2g; L-cysteinę HCl (Sigma) 2g; sól sodową kwasu askorbinowego (Fluka) 0,2 g; K2HPO4 (Merck) 0,6 g; cytrynian amonowo-żelazowy (Sigma) 22,8g; surowicę wołową dorosłego zwierzęcia (Sigma) 100 ml; penicylinę/streptomycynę (Gibco, 100 IU/ml,1000 ąg/ml) 15 ml. Przed sterylizacją przez filtrowanie (wielkość porów 0,22 /ąm) pH doprowadzono 5N NaOH do wartości 6,9.
Pasożyty hodowano w polistyrenowych kolbach przeznaczonych dla kultur tkankowych(LUX, Miles Laboratories, Inc. Naperville IL 60540) wypełnionych 40 ml podłoża hodowlanego.
Subkultury prowadzono przez odrzucenie supernatantu z nieprzylegającymi pasożytami, dodając 5 ml chłodzonej lodem pożywki hodowlanej, inkubowano w łaźni lodowej przez 10 min, aby odłączyć przylegające trofozoity i zainokuluowano świeżą pożywkę 0,2 ml powstałej zawiesiny. Inkubacje przeprowadzano w ciemności w 37°C.
5
Analizy proliferacji komórek: Dwieście mikrolitrów zawiesiny trofozoitów (1,4 X 105 pasoży3 tów/ml) wymieszano ze 100 ąl supernatantów lub kontroli i dodano 1 ąCi 3H tymidyny. Próbki inkubowano w 37°C przez 24 godziny w 96-studzienkowych płytkach dla kultur tkankowych (Nunc Brand Products). Następnie pasożyty zbierano i oceniano włączenie tymidyny.
Wyniki
Przyłączanie tymidyny pokazane jest w tabeli 10. Szczep NCC 2628 wyizolowany od psów powodował silne hamowanie proliferacji szczepu WB (91%). Inne badane szczepy nie hamowały wzrostu trofozoitów.
PL 207 930 B1
T a b e l a 10
Wpływ supernatantów uzyskanych po filtracji hodowli na proliferację szczepu Giardia intestinalis
Szczep | Proliferacja Giardia intestinalis wCMP |
L. reuteri NCC 2581 | 1720 |
Kontrola | 2000 |
L. rhamnosus NCC 2583 | 2500 |
Kontrola | 1720 |
L. reuteri NCC 2592 | 1800 |
Kontrola | 1970 |
L. reuteri NCC 2603 | 2100 |
Kontrola | 1900 |
L. reuteri NCC 2613 | 2510 |
Kontrola | 1950 |
L. acidophilus NCC 2628 | 150 |
Kontrola | 1610 |
MTYI | 1870 |
W tym doświadczeniu można było dowieść, że funkcjonalne metabolity wytwarzane w trakcie wzrostu L. acidophilus NCC 2628 mają bardzo silny wpływ hamujący na wzrost Giardia intestinalis.
P r z y k ł a d y 6 do 8: Efekty hamowania patogennych bakterii jelitowych przez szczepy Laktobacillus według wynalazku
Aby zidentyfikować szczepy o silnych antagonistycznych właściwościach wobec patogenów jelita cienkiego, przeprowadzono eksperymenty kohodowli w modelowym układzie symulującym warunki psiego jelita cienkiego (pH, skład i stężenie żółci, śluz, pankreatyna) Symulowany sok jelita cienkiego psa zawierał rekonstytuowaną żółć (0,345 g/l taurochenodeoksycholanu. Sigma, Niemcy; 0,7 g/l taurodeoksycholanu. Sigma, Niemcy; 3,04 g/l taurocholanu. Sigma Niemcy; 0,006 g/l cholanu Fulka, Szwajcaria), świńskiego śluzu (1,9 g/l Sigma, Niemcy), świńską pankreatynę (2,42 g/l. Sigma, Niemcy) i roztwór elektrolitowy (5 g/l NaCl, 0,6 g/l KCl, 0,25 g/l CaCl2 wszystkie Merck, Niemcy). pH soku doprowadzano 0,1 N NaOH do wartości 6,5 ± 0,5.
Szczepy i warunki hodowli
Patogeny jelita cienkiego
Wyselekcjonowano cztery potencjalnie patogenne szczepy: S. typhimurium SLI344, E. coli 08:H9 i E. coli 0149:K88 (patogenne psie izolaty) i kliniczne izolaty Sh. dysenteriae (pochodzenia ludzkiego, uzyskane dzięki uprzejmości Centre Hospitalier Universitaire Vaudoise - CHUV Lozanna, Szwajcaria) Za wyjątkiem S. typhimurium SLI344 namnażanej w bulionie Luria Bertani (Difco, USA), wszystkie Enterobacteriaceae rosły w bulionie Brain Heart Infusion (Difco, USA) wstrząsane (240 obr./min) w temp. 37°C.
Bakterie kwasu mlekowego
Szeroki zakres laktobacillusów pochodzenia psiego i kociego włączając L. acidophilus NCC2628 (CNCN I-2453J; L. rhamnosus NCC2583 (CNCMI-2449) L. reuteri NCC2581 (CNCM I-2448), L. reuteri NCC2592 (CNCM I-2450) wybrano z Kolekcji Kultur w Nestle (NCC, Nestec, Szwajcaria) i przebadano w modelu psiego jelita cienkiego na przeżycie, aktywność fizjologiczną i działanie hamujące na wyżej wspomniane patogeny jelita cienkiego. Laktobacillusy hodowano beztlenowe (anaerokult, Oxoid, Anglia) w bulionie Man Rogosa Sharp (Difco, USA) w 37°C.
Określanie liczby zdolnych do życia bakterii
Próbki rozcieńczano w sterylnym buforze (NaH2PO4, pH 7,0,2 M) i wysiewano powierzchniowo w dziesięciokrotnych rozcieńczeniach na płytki agarowe: MRS agar (Difco, USA) dla laktobacillusów, Salmonella-Shigella agar (Oxoid, Anglia) dla S. typhimurium i Sh. dysenteriae, i agar Sorbitol Mac Conkey (Oxoid, Anglia) dla E. coli. Płytki agarowe z laktobacillusami inkubowano beztlenowe przez 48 godzin w temperaturze 37°C, a z Enterobacteriaceae przez 24 godziny w 37°C.
Dla prób kohodowli, wzrost Enterobakteriaceae na agarze MRS hamowano przez dodatek polimyksyny (Oxoid, Anglia)
Doświadczenia kohodowli między bakteriami kwasu mlekowego (LAB) i patogenami
Doświadczenia kohodowli z potencjalnie probiotycznymi LAB i patogennymi szczepami prowadzono w 37°C w 20 ml (probówki Palcon) symulowanego soku jelita cienkiego psa wzbogaconego
PL 207 930 B1 różnymi źródłami węgla (cukier, pokarm zwierzęcy), aby sprzyjać metabolicznej aktywności kultur. LAB inokulowano przy 10E+08 cfu/ml, patogeny przy 10E+02 cfu/ml, 10E+04 cfu/ml i 10E+06 cfu/ml.
Próbki pobierano w różnych punktach czasowych w przedziale do 8 godzin i określano ilość zdolnych do życia komórek przez wysiewanie 10-krotnych rozcieńczeń na powierzchnię odpowiednich pożywek.
Próby kohodowli przeprowadzono w różnych warunkach obejmujących wzbogacenie symulowanego soku jelita cienkiego psa dekstrozą (5 g/ml) i różnymi stężeniami handlowo dostępnego prażonego suchego psiego pokarmu (5,25 lub 100 g/l); Friskies ALPO Complete, USA) Ten ostatni homogenizowano (Stomacher Lab Blender) i zawieszano w roztworze elektrolitowym. Wszystkie doświadczenia wykonano podwójnie.
P r z y k ł a d 6
Doświadczenia kohodowli między laktobacillusami i czterema potencjalnie patogennymi szczepami E. coli ETEC 08:H9, E. coli 0149:K88, S. typhimurium SLI344 i Sh. dysenteriae przeprowadzono w symulowanym psim soku dwunastniczym wzbogaconym 5 g/l dekstrozy (Difco). Laktobacillusy inokulowano przy 10E+08 cfu/ml, a Gram-ujemne szczepy wskaźnikowe przy 10E+02 cfu/ml. Wyniki są zebrane w tabeli 11.
T a b e l a 11
Kohodowla między LAB i potencjalnie patogennymi bakteriami w symulowanym soku psiego jelita cienkiego wzbogaconego dekstrozą
Patogen | E. coli ETEC 08:H9 | E. coli 0149:K88 | S typhimurium SL1344 | Sh. dysenteriae |
PROBIOTYK | ||||
L. acidophilus NCC2628 | +++ | +++ | -H-+ | +++ |
L. rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449) | +-H- | +-H- | +++ | +++ |
L. ratferi NCC2581 (CNCM I-2448) | Brak zahamowania | ++ | Brak zahamowania | +++ |
L. reutheri NCC2592 (I-2450) | Brak zahamowani | ++ | Brak zahamowania | + |
+ zahamowanie wzrostu ++ zahamowanie wzrostu i częściowa inaktywacja +++ zahamowanie wzrostu i całkowita inaktywacja
Wszystkie cztery badane laktobacillusy wykazywały aktywność przeciwdrobnoustrojową, ale tylko L. acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) i L. rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449) wykazały wysoką aktywność wobec wszystkich testowanych patogenów. Oba szczepy były nie tylko zdolne do hamowania wzrostu, ale także były zdolne do zupełnej inaktywacji patogenów zawartych w układzie testowym (brak pozostałych zdolnych do życia bakterii).
P r z y k ł a d 7
Doświadczenia z kohodowlą przeprowadzono między laktobacillusami (L. acidophilus NCC2628(CNCM 1-2453), L. rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449)) i S. typhimurium SLI344 w symulowanym psim dwunastniczym soku wzbogaconym w dostępny w handlu wysuszony przez prażenie pokarm zwierzęcy (5,25 lub 100g/l Friskies ALPO Complete, USA). Laktobacillusy inokulowano przy 10E+08 cfu/ml, a Gram-ujemne szczepy wskaźnikowe przy 10E+02 cfu/ml. Wyniki zebrano w tabeli 12.
T a b e l a 12
Kohodowla między LAB i potencjalnie patogennymi bakteriami w symulowanym soku psiego jelita cienkiego wzbogaconego suchym pokarmem zwierząt domowych
Patogen | Wzbogacenie zwierzęcym pokarmem | S. typhimurium SL1344 |
Probiotyk | ||
L. acidophilus NCC2628 | 5 g/l | -H-+ |
(CNCM I-2453) | 25 g/l | -H-+ |
100 g/l | +-H- | |
L. rhamnosus NCC25S3 | 5 g/l | Brak zahamowania |
(CNCM I-2449) | 25 g/l | + |
100 g/l | ++ |
+ Zahamowanie wzrostu ++ zahamowanie i częściowa inaktywacja +++ Zahamowanie wzrostu i całkowita inaktywacja
PL 207 930 B1
Wyniki przedstawiają wysoki potencjał szczególnie L. acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) do hamowania wzrostu i nawet do całkowitej inaktywacji patogenów jelita cienkiego w bardzo praktycznych warunkach, takich jak mieszanina symulowanego soku jelita cienkiego i zwierzęcego pokarmu. Aktywność przeciwdrobnoustrojowa L. acidophilus NCC2628 była bardzo wysoka nawet przy niskich poziomach wzbogacania handlowym pokarmem zwierzęcym służącym organizmowi jako źródło fermentujących cukrów. W przeciwieństwie, do obserwacji zrobionej dla L. acidophilus, efektywność L. rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449) zależała od poziomu wzbogacenia pokarmem zwierzęcym, w taki sposób, że wzrastanie aktywności przeciwdrobnoustrojowej obserwowano wraz ze wzrostem ilości zwierzęcego pokarmu dodawanego do systemu testowego.
P r z y k ł a d 8
Doświadczenia kohodowli między L. acidophilus NCC2628 (CNCM I-24 53) i różnymi poziomami inokulacji S. typhimurium SL1344 przeprowadzono w symulowanym psim soku dwunastniczym wzbogaconym dekstrozą (5g/l, Difco). L. acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) inokulowano przy 10E+08 cfu/ml, S. typhimurium SL1344 inokulowano przy 10E+04 cfu/ml i 10E+06 cfu/ml. Wyniki zebrano w tabeli 13.
T a b e l a 13
Kohodowla L. acidophilus NCC2628 (CNCM 1-2453) i różnych poziomów inokulacji S. typhimurium SL1344
Patogen | Poziom inokulacji patogena | S. typhimurium SL1344 |
Probiotyk | ||
L. acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) | 10E+02 cfu/ml | +++ |
10E+04 cfu./ml | +++- | |
10E+06 cfu/ml | +++- |
+ zahamowanie wzrostu ++ zahamowanie i częściowa inaktywacja +++ Zahamowanie wzrostu i całkowita inaktywacja
Aktywność przeciwdrobnoustrojowa L. acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) była wystarczająco wysoka, aby całkowicie inaktywować nawet wysokie początkowe stężenia S. typhimurium SL1344.
P r z y k ł a d 9: Imunostymulacja in vivo u psów
Potencjał immunostymulacyjny szczepów probiotycznych izolowanych od zwierząt testowano w próbach klinicznych stosując szczep L. acidophilus NCC2628.
Metody:
Proliferacja jednojądrzastych komórek psiej krwi obwodowej (PBMC) pod wpływem stymulacji różnymi mitogenami:
Próbom tym poddano 20 psów 4- do 7 - letnich. Protokół żywieniowy polegał na jednotygodniowej adaptacji z Friskies Vitality z/bez cykorii i 4- tygodniowych testach z Friskies Vitality z/bez cykorii plus bakterie L. acidophilus NCC2628 L. acidophilus NCC2628 przygotowano w dostatecznej ilości i stabilnej liofilizowanej postaci w związku ze szczepową przeżywalnością w przewodzie pokarmowym testowanych zwierząt.
Bakterie mieszano z 4g trehalozy w celu dodania odpowiedniej objętości nośnika do miksowania przygotowanych bakterii z matrycą pokarmową dla zwierząt. Bakterie przygotowywano w oddzielnych plastikowych probówkach (5,0E+09 cfu/dzień) i codziennie dodawano do części pokarmu, aby być pewnym, że wszystkie bakterie zostaną spożyte.
Krew pobierano od psów po czterech tygodniach od podania probiotyku. Krew frakcjonowano na kolumnie Vaccutainer ™ (Becton Dickinson, Mountain View, CA), PBMC odzyskiwano zgodnie z zaleceniami wytwórcy.
Komórki stymulowano różnymi mitogenami lub estrami forbolu, które indukują silną proliferację limfocytów T (konkanawalina A (con A), fitohemaglutynina (PHA)), limfocytów B (mitogen szkarłatki) (PWM)), i wszystkich komórek (octan mirystylowy forbolu /Jonomycyna (PMA/Iono)). Z mitogenami i estrami forbolu (odpowiednie dawki wskazano na figurze 1) w końcowej objętości 200 μ! RPMI-1640 pożywki hodowlanej uzupełnionej 10% cielęcej surowicy płodowej i antybiotykami inkubowano 105 komórek na studzienkę w 96-studziankowych płaskodennych płytkach do prowadzenia kultur. (Nunc)
Komórki utrzymywano w atmosferze wilgotnego 5% CO2 w 37°C przez 48 godzin. Komórki znakowano pulsowo 1 uCi 3H tymidyny (Amersham Pharmacia Biotech, Switzerland) przez dalsze 18 godzin.
PL 207 930 B1 3
Następnie komórki zbierano na mikrocelulozowych filtrach (Packard) i mierzono związanie z [3H]tymidyną za pomocą liczenia scyntylacyjnego (Top Count; Packard, Szwajcaria). Proliferację komórek obliczano jako średnią (impulsów/minutę (c.p.m.) (±SD) z trzech pomiarów.
Wyniki
Figura 1: Był wyraźny wzrost proliferacji komórek w odpowiedzi na wszystkie mitogeny w grupie psów karmionych L. acidophilus NCC2628 w porównaniu z grupą kontrolną. Ten wzrost był znaczący w kulturach stymulowanych estrami forbolu PMA+ jonomycyna. Wyniki te pokazują, że limfatyczne komórki u psów karmionych probiotycznie były bardziej reaktywne na aktywację in vitro i sugeruje to stymulację odporności u psów karmionych probiotycznie.
P r z y k ł a d 10: Modulowanie in vitro funkcji immunologicznych przez wyizolowane od zwierząt domowych szczepy laktobacillusów
Przeszukiwanie in vitro różnych szczepów laktobacillusów izolowanych od zwierząt opisane powyżej zainicjowano, aby określić ich potencjał modulacji odporności. Na końcu mierzyliśmy ich zdolność do indukowania prozapalnych cytokin (IL-12, IFNy) i/lub przeciwzapalnych cytokin (IL-10, TGF-(3) (Anand A.C. Adya CM. 1999, Trop. Gastroenterol, 20 (3): 97-106; Spelleberg B., Edwards J.E.Jr 2001, Clin. Infect, Dis.:32 (1): 76-102). To zmierza do selekcjonowania szczepów potencjalnych kandydatów do silnych funkcji odpornościowych przeciwpatogennych lub antyrakowych, jak również antagonistycznych funkcji w stosunku do patologii psiego jelita cienkiego, takich jak alergia i zapalenie (zapalne choroby jelit). Dodatkowo kultury są umieszczone z samą pożywką (kontrola ujemna) lub z Enterococcus faecium szczep SF68 (NCIMB10415, Cerbios-Pharma, Szwajcaria) i z ludzkim izolatem laktobacillusa STU(NCC2461,CNCM I-2116) (kontrola dodatnia)
Metoda:
Profile cytokin w psich leukocytach indukowane przez różne szczepy probiotyczne
Krew uzyskaną od normalnych dorosłych psów traktowano przez 5 minut w temperaturze pokojowej buforem lizującym ACK (150 mM NH4CI, 1 mM KHCO3 i 0,1 mM NA2EDTA w wodzie, pH -7,4). Leukocyty dwukrotnie przemywano pożywką RPMI (bez antybiotyków) i wysiewano przy 2-106 komórek/ml do 24-studzienkowych płytek do kultur tkankowych. Do każdej studzienki dodawano 1 ml zawiesiny bakteryjnej (opisanej poniżej) zawierającej 106CFU.
Jako kontrolę do leukocytów dodawano samą pożywkę. Próbki inkubowano przez 18 godzin w temperaturze 37°C i 5% CO2. Następnie leukocyty pobierano, przemywano PBS i wirowano. Osad komórkowy zlizowano w 500 ul odczynnika Trizol (Gibco BRL). RNA ekstrahowano z lizatów komórkowych używając zestawu RNA Nucleospin (Macherey-Nagel). RT-PCR dla amplifikacji psich cytokin przeprowadzono używając zestawu genu AB (Merck). Referencje starterów (wszystkie wytwarzane przez Microsynth) wskazano poniżej. Analizę densytometryczną prążków PCR ujawnionych na żelu agarozowym barwionym bromkiem etydyny przeprowadzono stosując przetwarzanie obrazu NIH Image software. Wszystkie prążki normalizowano z odpowiednim prążkiem β-aktyny, produktem PCR, otrzymanym w każdej próbce (kontrola wewnętrzna) i wyniki przedstawiono jako jednostki arbitralne odzwierciedlające piksel gęstości każdego prążka będącego produktem PCR dla cytokiny (figura 2). - Preparatyka bakterii: różne szczepy laktobacillusów rosły w pożywce MRS w przybliżeniu przez 8 godzin, dopóki nie osiągnęły identycznej gęstości. Bakterie rozcieńczano pożywką RPMI bez antybiotyków do końcowego stężenia 106 CFU/ml.
Startery użyte dla cytokin -RT-PCR:
Cytokiny | Referencje |
IL-12p40 | Buttner M., i wsp. 1998, Cytokine;10(4); 241-248 |
IFNy | Buttner M., i wsp. 1998, Cytokine;10(4); 241-248 |
TGFβ-1 | Grone A., i wsp. 1998, Vet, Immunol, Immunopathol,;65:11-27 |
IL-10 | Pinelli E., i wsp. 1999, Vet. Immunol, lmmunopathol,;69:121-126. |
Wyniki:
Figura 2: Wyniki pokazują, że profile cytokinowe indukowane przez laktobacillusy są zależne od szczepu. Na przykład, szczep NCC2628 indukował wysoki poziom IL-10 i TGF-β, podkreślając potencjał tego szczególnego szczepu dla modulacji odporności zapalnych zaburzeń, takich jak alergia i choroby zapalne jelit. Przeciwnie, szczep NCC2583 indukował silne poziomy IFNy i IL-12, co sprawia, że ten szczep jest dobrym kandydatem dla antypatogennej lub antyrakowej aktywności.
PL 207 930 B1
P r z y k ł a d 11
Do tego badania użyto trzech suchych zwierzęcych pokarmów. Będą one określane jako „A, B, C. Zwierzęcy pokarm „A jest kompletnym odżywczym suchym zwierzęcym pokarmem dostępnym pod znakiem firmowym ALPO (ALPO jest zarejestrowaną szwajcarską marką handlową SOCITE DES PRODUITS NESTLE S.A).
Pokarm zwierzęcy B jest tak samo kompletnym odżywczo suchym pokarmem jak zwierzęcy pokarm A, lecz jest uzupełniony sproszkowaną mieszaniną wyselekcjonowanych probiotycznych mikroorganizmów w saszetkach. Mieszanina obejmuje zasadniczo równe ilości L. acidophilus NCC2628 i Bifidobacterium sp. NCC2657. Jest ona rozpryskiwana nad pokarmem przy każdym podawanym posiłku, stosowana dawka wynosiła 1,0E8 cfu/dzień.
Pokarm zwierzęcy C jest odżywczo kompletnym suchym pokarmem, który jest identyczny ze zwierzęcym pokarmem A, lecz zawiera 1,2% wagowych suchego supernatantu hodowli Enterococcus faecium SF68(NCIMB 10415).
Do tego badania użyto 30 psów. Psy wstępnie karmiono przez 8 tygodni zwierzęcym pokarmem A. Następnie psy podzielono na trzy grupy po 10 psów w każdej, grupy oznaczono A, B, C i karmiono odpowiednio nazwanymi dietami przez 8 tygodni.
Psy miały wolny dostęp do wody i karmiono je raz dziennie. Rozprzestrzenienie łupieżu w sierści określano przy pomocy składu sędziowskiego obejmującego 30 członków, oceny dokonano na początku, a następnie po 7 tygodniach.
Psy zostały przygotowywane przed oceną przez zespół i członkowie zespołu nie porównywali notatek w czasie oceny.
W tej ocenie psy są prezentowane każdemu z indywidualnych członków zespołu w 20 różnych parach. Członkowie zespołu są proszeni o wskazanie w notatkach, który pies z prezentowanych par wyróżniał się (1) mniejszym łupieżem, (2) większym połyskiem sierści (3) mniejszym zapachem sierści.
Przeciętna kondycja sierści wszystkich psów jest wizualnie i dotykowo dobra, jak można się spodziewać u normalnych, zdrowych psów. Jednakże u psów karmionych dietą C stwierdzono zauważalnie mniej łupieżu, niż u tych, które były na diecie kontrolnej A. Te, karmione dietą B miały zauważalnie bardziej połyskliwą sierść i wykazywały mniej zauważalny odór sierści, niż te na diecie A. Nie stwierdza się, aby te charakterystyki różniły się w statystycznie znaczący sposób, gdy się je porównuje z charakterystyką dla psów grupy B.
P r z y k ł a d 12
Mieszankę żywieniową wytwarza się z około 58% wagowych ziarna, około 6% wagowych glutenu z ziarna, około 23% wagowych mięsa i mąki, a sole, witaminy i minerały stanowią pozostałość
Mieszankę żywieniową dostarcza się do wstępnego mieszalnika fluktuacyjnego i nawilża. Do tej mieszanki dodaje się proszek zawierający mieszaninę następujących szczepów Lactobacillus: Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449), Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) i Enterococcus faecium SF68 (NCIMB 10415) Proszek jest jednorodnie zawieszany w całej mieszance. Ta nawilżona pokarmowa mieszanina jest następnie dostarczana do wytłaczarki na gorąco i żelowana. Żelowana matryca opuszczająca wytłaczarkę jest wypychana przez dyszę i wytłaczana. Półwyrób jest cięty na kawałki odpowiednie do karmienia psów, suszony w około 110°C przez około 20 minut, schładzany w celu uformowania kulek. Wytłoczone kawałki sprawdzano na bakteryjną aktywność dodanych szczepów. Żadnych nie wykryto.
P r z y k ł a d 13
To badanie przeprowadzono na 24 psach. Grupa obejmowała młodsze i starsze psy, te drugie w wieku od 8 do 12 lat. Wybrane starsze psy wykazywały zewnętrzne oznaki zapalenia stawów proporcjonalne do ich wieku i czasami wydawało się, że mają trudności w poruszaniu się. Pewne ruchy wyglądały na bolesne. Symptomy te są często obserwowane u starszych psów i przypuszcza się, że wiążą się ze stanem artretycznym.
W badaniach stosuje się trzy suche zwierzęce pokarmy oznaczone A, B i C. Zwierzęca karma A jest kompletnym odżywczo suchym pokarmem (ALPO Beefy Dinner). Jest to pokarm kontrolny.
Wszystkich wybranych 24 członków wstępnie karmi się przez 8 tygodni stosując Psi Pokarm A. Następnie psy dzieli się na trzy grupy: A, B i C, każda po 8 psów młodszych i starszych w tej samej proporcji w obrębie grupy. Następnie każdą grupę karmi się przez 8 tygodni następującymi odpowiednimi dietami:
PL 207 930 B1
Grupa | Zwierzęcy pokarm |
A | A |
B | B |
C | C |
Zwierzęca karma B jest odżywczo kompletnym suchym pokarmem, zasadniczo identycznym z pokarmem zwierzęcym A, lecz który dodatkowo zawiera warstwę stanowiącą do 2% jego wagi. Warstwa ta obejmuje mikroorganizmy Enterococcus faecium SF68 (NCIMB 10415). Ilość pokarmu dostarczaną dziennie każdemu psu oblicza się zależnie od indywidualnego ciężaru ciała, pod warunkiem, że dawka wynosi 1,0E+09cfu/dzień.
Dieta C obejmuje wytłaczane granulki wytwarzane powyżej w przykładzie 12. Ilość pokarmu dostarczaną dziennie każdemu psu oblicza się zależnie od indywidualnego ciężaru ciała, tak aby dawka mikroorganizmu wynosiła 1,0E+llcfu/dzień.
Psy mają wolny dostęp do wody i są karmione raz dziennie. Licznik aktywności jest przywiązywany każdemu psu do obroży i codziennie dokonuje się pomiaru. Aktywność psów jest także oceniana wizualnie przez opiekujący się nimi personel.
Stan wszystkich psów jest wizualnie i dotykowo dobry, jak można się spodziewać po normalnych, zdrowych psach. Chociaż psy w grupach, które otrzymują psi pokarm B i C są zauważalnie bardziej aktywne niż ich odpowiedniki na diecie A. Odczyty licznika potwierdzają te obserwacje.
Dodatkowo, starsze psy w grupach B i C po dostarczaniu diety B i C przez próbny okres, wydają się wykazywać nieliczne oznaki miejscowego stanu zapalnego. Ponadto, wydaje się, że psy odczuwają niższy poziom bólu przy fizycznym ruchu i poruszają się swobodniej niż wcześniej. Można wnioskować, że diety B i C dostarczają ulgi w odniesieniu do pewnych oznak starzenia i polepszają ruchliwość starszych zwierząt.
P r z y k ł a d 14: Suchy pokarm koci
Mieszankę pokarmową wytwarza się z około 58% wagowych zboża, około 6% wagowych zbożowego glutenu, około 23% wagowych mięsa kurcząt, a sole, witaminy i minerały stanowią pozostałość
Mieszanka pokarmowa jest dostarczana do wstępnego mieszalnika fluktuacyjnego i nawilżana. Następnie nawilżona karma jest dostarczana do wytłaczarki na gorąco i żelowana. Żelowana matryca opuszczająca wytłaczarkę jest wypychana przez dyszę i wytłaczana. Półprodukt jest cięty na kawałki odpowiednie do karmienia kotów, suszony w około 110°C i oziębiany w celu uformowania kulek. Na tym etapie do kulek dodaje się jeden lub więcej szczepów Lactobacillus: Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449), Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) lub Enterococcus faecium SF68 (NCIMB 10415). Następnie odpowiedni proszek dostarczany jest w taki sposób, aby ilość właściwego dietetycznego dopływu wynosiła od 1,0E+07-1,0E+9 cfu/dzień. Trochę proszku miesza się z pierwszą masą kulek i wsypuje do worka. Dodatkową ilość proszku odmierza się i miksuje z nośnikiem lipidowym, którym następnie opryskuje się pozostałą masę granulek. Kulki po pokryciu są workowane i suszone w 50-60°C przez kilka minut.
P r z y k ł a d 15: Puszkowany pokarm zwierzęcy i suplement
Mieszankę wytwarza się z 73% zanieczyszczonej padliny, płuc świńskich i wątroby wołowej (podstawa), 16% mąki pszennej, 2% barwników, witamin i soli nieorganicznych. Taką mieszaninę emulguje się w 12°C i wypraża w formie puddingu, który wypieka się w temperaturze 90°C. Oziębia się do 30°C i tnie na kawałki. 45% kawałków miksuje się z 55% dodatków smakowych przygotowanych z 98% wody, 1% barwnika i 1% gumy guar. Puszki z blachy ocynowanej wypełnia się i sterylizuje w 125°C przez 40 minut. Jako probiotyczny dodatek do zmieszania z pokarmem zwierzęcym przed podaniem, dostarcza się opakowanie w formie saszetki ze szczepami następujących gatunków Lactobacillus: podaje się Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-244 9), Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) lub Enterococcus faecium SF68 (NCIMB 10415). Odpowiednia ilość dla zwierząt wynosi od około 106-1012 cfu/dzień, w zależności od tego, czy jest to kot czy pies i od czynników fizycznych, takich jak masa ciała. Jest to dostarczane jako dodatek w sposób usuwalny przymocowany do puszki, zgodnie z zaleceniami karmienia.
Claims (21)
1. Zastosowanie wyizolowanego probiotycznego szczepu bakterii kwasu mlekowego wybranego z rodzajów Lactobacillus, Bifidobacterium lub Enterococcus do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do poprawy stanu zdrowia lub utrzymania w dobrym stanie zdrowia psa i kota, w tym ich układu pokarmowego, skóry, sierści, zębów, kości i układu odpornościowego.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że szczep ma zdolność do wzrostu produkując przynajmniej 1,0E+06 cfu/ml w obecności do 2% soli żółci.
3. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że szczep ma zdolność do wytwarzania co najmniej 1,0E+06 cfu/ml po 2 godzinach przy zakresie pH 3,4 do 4,2.
4. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że szczep jest wybrany z grupy składającej się z Lactobacillus reuteri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus animalis, Lactobacillus ruminis, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus fermentum, Bifidobacterium sp. Enterococcus faecium, Enterococcus sp.
5. Zastosowanie według zastrz. 4, znamienne tym, że szczep jest Lactobacillus reuteri NCC2581 (CNCM I-244 8), Lactobacillus reuteri NCC2592 (CNCM I-2450), Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449), Lactobacillus reuteri NCC2603 (CNCM I-2451), Lactobacillus reuteri NCC2613 (CNCM I-2452, Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) lub Enterococcus faecium SF 68 (NCIMB 10415).
6. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że szczep jest zawarty w kompozycji w ilości od 1,0 E±04cfu/zwierzę i dzień do 1,0 E± 12 cfu/zwierzę i dzień.
7. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że kompozycja jest przeznaczona do leczenia i/lub profilaktyki zaburzeń związanych z kolonizacją przewodu pokarmowego kotów i/lub psów przez patogenne mikroorganizmy.
8. Zastosowanie według zastrz. 7, znamienne tym, że patogenne mikroorganizmy są szczepami Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Schigella dysenteriaea lub innymi patogennymi enterobakteriami kolonizującymi koty i/lub psy lub pasożytami, takimi jak glisty (Toxocara spp.), pierwotniaki (Cryptosporidium spp., Giardia spp., Pentatrichomonas hominis, Entamoeba histolytica, Toxoplasma gonidii) lub drożdżami.
9. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że kompozycja jest przeznaczona do regulacji układu odpornościowego kota lub psa.
10. Zastosowanie według zastrz. 9, znamienne tym, że kompozycja jest przeznaczona do leczenia zaburzeń immunologicznych, takich jak alergia lub choroba zapalna jelit.
11. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że kompozycja jest przeznaczona do utrzymania lub poprawy stanu zdrowia skóry i/lub sierści kotów lub psów.
12. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że kompozycja jest przeznaczona do łagodzenia lub zmniejszania objawów starzenia się kota lub psa.
13. Kompozycja pokarmowa dla zwierząt domowych, znamienna tym, że zawiera przynajmniej jeden wyizolowany szczep bakterii kwasu mlekowego wybrany z grupy składającej się z Lactobacillus animals, Lactobacillus ruminie, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus reuteri NCC2581 (CNCM I-2448), Lactobacillus reuteri NCC2592 (CNCM2592 (CNCM I-2450), Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449), Lactobacillus reuteri NCC2603 (CNCM I-2451), Lactobacillus reutheri NCC2613 (CNCM I-2452) i Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) związany z nadającym się do spożycia nośnikiem.
14. Kompozycja pokarmowa według zastrz. 13, znamienna tym, że zachowuje lub poprawia funkcje układu pokarmowego kota lub psa.
15. Kompozycja pokarmowa według zastrz. 13, znamienna tym, że zachowuje lub poprawia stan zdrowia skóry i/lub sierści kota lub psa.
16. Kompozycja pokarmowa według zastrz. 13, znamienna tym, że reguluje układ odpornościowy kota lub psa.
17. Kompozycja pokarmowa według zastrz. 13, znamienna tym, że łagodzi lub zmniejsza objawy starzenia się kota lub psa.
18. Kompozycja według zastrz. 13-17, znamienna tym, że wyizolowany szczep jest w ilości od około 1,0E+04 cfu/zwierzę i dzień do 1,0E+12cfu/zwierzę i dzień.
19. Kompozycja pokarmowa według zastrz. 13-18, znamienna tym, że dodatkowo zawiera prebiotyk.
PL 207 930 B1
20. Kompozycja pokarmowa według zastrz. 13-19, znamienna tym, że występuje w postaci:
i) kompletnego odżywczo pokarmu dla domowych zwierząt w sproszkowanej, suchej lub wilgotnej postaci, schłodzonej lub nadającej się do przechowywania lub, ii) w postaci dietetycznego dodatku lub suplementu.
21. Izolowany szczep bakterii kwasu mlekowego, znamienny tym, że jest wybrany z grupy składającej się z Lactobacillus reuteri NCC2581 (CNCM I-2448), Lactobacillus reuteri NCC2592 (CNCM I-2450), Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449), Lactobacillus reuteri NCC2603 (CNCM I-2451), Lactobacillus reuteri NCC2613 (CNCM I-2452) i Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453).
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP00201867 | 2000-05-25 | ||
EP01201503 | 2001-04-25 | ||
PCT/EP2001/006039 WO2001090311A1 (en) | 2000-05-25 | 2001-05-22 | Novel probiotics for pet food applications |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL359182A1 PL359182A1 (pl) | 2004-08-23 |
PL207930B1 true PL207930B1 (pl) | 2011-02-28 |
Family
ID=26072297
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL359182A PL207930B1 (pl) | 2000-05-25 | 2001-05-22 | Zastosowanie wyizolowanego probiotycznego szczepu bakterii kwasu mlekowego o aktywności probiotycznej, kompozycja pokarmowa i izolowany szczep bakterii kwasu mlekowego |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US7189390B2 (pl) |
EP (2) | EP1290136B1 (pl) |
JP (2) | JP4343477B2 (pl) |
KR (1) | KR100796963B1 (pl) |
CN (1) | CN100396769C (pl) |
AR (1) | AR029100A1 (pl) |
AT (1) | ATE325864T1 (pl) |
AU (2) | AU2001278432B2 (pl) |
BR (1) | BR0111275B1 (pl) |
CA (1) | CA2409286C (pl) |
DE (2) | DE60119515T2 (pl) |
EA (1) | EA006428B1 (pl) |
ES (2) | ES2262667T3 (pl) |
HU (1) | HU230800B1 (pl) |
IL (2) | IL152695A0 (pl) |
MX (1) | MXPA02011595A (pl) |
MY (1) | MY138070A (pl) |
NO (1) | NO330276B1 (pl) |
NZ (1) | NZ523010A (pl) |
PE (1) | PE20020232A1 (pl) |
PL (1) | PL207930B1 (pl) |
UY (1) | UY26734A1 (pl) |
WO (1) | WO2001090311A1 (pl) |
ZA (1) | ZA200210302B (pl) |
Families Citing this family (123)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8563522B2 (en) * | 1997-07-08 | 2013-10-22 | The Iams Company | Method of maintaining and/or attenuating a decline in quality of life |
US20060116330A1 (en) * | 1997-07-08 | 2006-06-01 | The Iams Company | Methods of mimicking the metabolic effects of caloric restriction by administration of mannoheptulose |
US20020035071A1 (en) * | 1997-07-08 | 2002-03-21 | Josef Pitha | Mimicking the metabolic effects of caloric restriction by administration of glucose antimetabolites |
US7608291B2 (en) * | 2000-03-10 | 2009-10-27 | Mars, Inc. | Treatment of infection in animals |
WO2001090311A1 (en) * | 2000-05-25 | 2001-11-29 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Novel probiotics for pet food applications |
US20040028665A1 (en) | 2002-01-08 | 2004-02-12 | Garner Bryan E. | Compositions and methods for inhibiting pathogenic growth |
GB0212975D0 (en) * | 2002-06-06 | 2002-07-17 | Mars Uk Ltd | Mammalian animal composition |
US8168170B2 (en) * | 2002-10-03 | 2012-05-01 | The Procter And Gamble Company | Compositions having an inner core and at least three surrounding layers |
AU2003300208A1 (en) | 2003-01-06 | 2004-08-10 | Nutrition Physiology Corporation | Compositions and methods for reducing the pathogen content of meat and meat products |
US20040197304A1 (en) * | 2003-04-01 | 2004-10-07 | The Procter & Gamble Company And Alimentary Health, Ltd. | Methods of determining efficacy of treatments of inflammatory diseases of the bowel |
US8877232B2 (en) | 2003-06-20 | 2014-11-04 | Nutrinia Ltd. | Bioactive compounds protection method and compositions containing the same |
US20050100559A1 (en) * | 2003-11-07 | 2005-05-12 | The Procter & Gamble Company | Stabilized compositions comprising a probiotic |
US20050119222A1 (en) | 2003-12-01 | 2005-06-02 | The Iams Company | Compositions comprising fermentable fiber which are adapted for use by a companion animal and kits and methods of their use |
US20050118234A1 (en) * | 2003-12-01 | 2005-06-02 | The Iams Company | Methods and kits related to administration of a fructooligosaccharide |
AU2004315890A1 (en) * | 2003-12-04 | 2005-09-01 | Burwell, Steve Mr. | Methods and compositions for preventing biofilm formations, reducing existing biofilms, and for reducing existing biofilms, and for reducing populations of bacteria |
US8877178B2 (en) * | 2003-12-19 | 2014-11-04 | The Iams Company | Methods of use of probiotic bifidobacteria for companion animals |
US8894991B2 (en) | 2003-12-19 | 2014-11-25 | The Iams Company | Canine probiotic Lactobacilli |
US20050158294A1 (en) * | 2003-12-19 | 2005-07-21 | The Procter & Gamble Company | Canine probiotic Bifidobacteria pseudolongum |
US7785635B1 (en) * | 2003-12-19 | 2010-08-31 | The Procter & Gamble Company | Methods of use of probiotic lactobacilli for companion animals |
US20050152884A1 (en) | 2003-12-19 | 2005-07-14 | The Procter & Gamble Company | Canine probiotic Bifidobacteria globosum |
JP2005224108A (ja) * | 2004-02-10 | 2005-08-25 | Yamahisa:Kk | ペット用スナックフード |
GB0406654D0 (en) * | 2004-03-24 | 2004-04-28 | Mars Inc | Foodstuff |
EP1758464A4 (en) * | 2004-05-24 | 2012-10-24 | Nutrinia Ltd | NUTRITIONAL FOOD AND SUPPLEMENT, ITS COMPOSITION, PROCESSING AND METHOD FOR ITS USE |
KR100595528B1 (ko) * | 2004-08-21 | 2006-07-03 | 전덕영 | 내산성, 내산소성 및 내염성이 우수한 비피도박테리움 아니말리스 dy-64 및 이를 함유한 식품 |
EP1634948A1 (en) | 2004-09-10 | 2006-03-15 | Basf Aktiengesellschaft | Means and methods for preventing and/or treating caries |
EP1637041B1 (en) * | 2004-09-21 | 2008-04-30 | Nestec S.A. | Improving longevity of elderly cats |
US20060228448A1 (en) * | 2005-04-11 | 2006-10-12 | The Iams Company | Pet food compositions comprising two components |
US20100233312A9 (en) * | 2005-04-11 | 2010-09-16 | The Procter & Gamble Company | Compositions comprising probiotic and sweetener components |
JP4938006B2 (ja) * | 2005-05-31 | 2012-05-23 | ザ・アイムス・カンパニー | ネコ科動物プロバイオティク・ビフィドバクテリア |
AU2011202947B2 (en) * | 2005-05-31 | 2011-11-03 | Alimentary Health Ltd | Feline probiotic lactobacilli |
BRPI0611493B1 (pt) | 2005-05-31 | 2022-04-05 | Alimentary Health Ltd. | Lactobacilos probióticos felinos |
ITMI20051137A1 (it) * | 2005-06-17 | 2006-12-18 | Ista S P A | Metodo per prevenire l'inattivazione da parte di batteriofagi specifici di miscele di ceppi probiotici utilizzati negli allevamenti animali |
KR100720025B1 (ko) * | 2005-09-27 | 2007-05-21 | (주)바이오토피아 | 프로바이오틱 유산균 및 이를 포함하는 조성물 |
ES2346693T3 (es) * | 2005-10-06 | 2010-10-19 | Nestec S.A. | Enterococos probioticos que permiten mejorar la unidad. |
US20070280964A1 (en) * | 2005-10-06 | 2007-12-06 | Ruth Knorr | Compositions and methods useful for modulating immunity, enhancing vaccine efficacy, decreasing morbidity associated with chronic FHV-1 infections, and preventing or treating conjunctivitis |
JP4897426B2 (ja) * | 2005-10-18 | 2012-03-14 | 花王株式会社 | ペットフード |
AU2006304913A1 (en) * | 2005-10-19 | 2007-04-26 | Hill's Pet Nutrition, Inc. | Methods and compositions for improving gastrointestinal health |
ATE541469T1 (de) * | 2005-12-29 | 2012-02-15 | Hills Pet Nutrition Inc | Verfahren zum modifizieren der darmflora bei tieren |
PL2004201T3 (pl) * | 2006-03-29 | 2019-02-28 | Nestec S.A. | Suplementy diety zawierające probiotyki |
KR101355770B1 (ko) * | 2006-05-31 | 2014-02-03 | 가부시키가이샤 메이지 | 면역조절 활성이 높은 유산균의 배양법 |
FR2903574B1 (fr) * | 2006-07-13 | 2008-09-05 | Gervais Danone Sa | Granules de cysteine et leurs utilisations a titre d'activateurs de croissance de bifidobacterium animalis lactis. |
KR100720024B1 (ko) * | 2006-12-20 | 2007-05-18 | (주)바이오토피아 | 프로바이오틱 비피도박테리움 보움 r5 균주 및 이를포함하는 조성물 |
CA2673465A1 (en) | 2007-02-01 | 2008-08-07 | The Iams Company | Method for decreasing inflammation and stress in a mammal |
US7910127B2 (en) * | 2007-03-02 | 2011-03-22 | Biogaia Ab | Use of lactic acid bacteria for improving food lysine absorption of pet animals |
JP2010537646A (ja) * | 2007-08-29 | 2010-12-09 | マーズ インコーポレーテッド | 完食サイズのキャットフード製品およびその方法 |
US9771199B2 (en) | 2008-07-07 | 2017-09-26 | Mars, Incorporated | Probiotic supplement, process for making, and packaging |
US9232813B2 (en) * | 2008-07-07 | 2016-01-12 | The Iams Company | Probiotic supplement, process for making, and packaging |
MX2011007190A (es) | 2009-01-02 | 2011-07-19 | Nestec Sa | Composiciones alimenticias que tienen una aparencia, sensacion y textura semejantes a carne real. |
US9474773B2 (en) | 2009-02-18 | 2016-10-25 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Lactobacillus supplement for alleviating type 1 diabetes |
US20100233347A1 (en) | 2009-03-13 | 2010-09-16 | Uhrhan Richard B | Food compositions having a realistic meat-like appearance, feel, and texture |
DE102009032712A1 (de) * | 2009-05-22 | 2010-11-25 | Growth Finance Plus Ag | Tierfutter |
US20110027417A1 (en) * | 2009-07-31 | 2011-02-03 | Patrick Joseph Corrigan | Process for Dusting Animal Food |
US9210945B2 (en) * | 2009-07-31 | 2015-12-15 | The Iams Company | Animal food having low water activity |
US20110027420A1 (en) * | 2009-07-31 | 2011-02-03 | Haile Mehansho | Moisture migration reduction layer for a food product |
US8691303B2 (en) * | 2009-07-31 | 2014-04-08 | The Iams Company | Dusted animal food |
US9173423B2 (en) * | 2009-07-31 | 2015-11-03 | The Iams Company | Animal food kibble with electrostatically adhered dusting |
US10104903B2 (en) | 2009-07-31 | 2018-10-23 | Mars, Incorporated | Animal food and its appearance |
FI122247B (fi) | 2009-08-12 | 2011-10-31 | Vetcare Oy | Probioottinen valmiste koiran maha- ja suolistokanavassa ilmenevien häiriöiden ennaltaehkäisemiseksi tai hoitamiseksi |
CN103037875B (zh) | 2009-11-11 | 2014-11-05 | 食物营养健康有限公司 | 双歧杆菌菌株 |
WO2011075138A1 (en) | 2009-12-18 | 2011-06-23 | Hill's Pet Nutrition, Inc. | Pet food compositions including probiotics and methods of manufacture and use thereof |
MX347263B (es) | 2010-05-26 | 2017-04-20 | Nestec Sa | Metodos para incrementar la produccion o actividad de catalasa. |
WO2012039745A1 (en) * | 2010-09-23 | 2012-03-29 | Nestec S.A. | Methods and compositions for preventing or treating osteoarthritis |
WO2012060884A1 (en) * | 2010-11-04 | 2012-05-10 | Nestec S.A. | Methods and compositions for preventing and treating osteoarthritis |
EP2449890A1 (en) * | 2010-11-05 | 2012-05-09 | Nestec S.A. | Powdered cereal compositions comprising non-replicating probiotic microorganisms |
ES2565407T3 (es) * | 2010-11-05 | 2016-04-04 | Nestec S.A. | Procedimiento para la preparación de un producto alimenticio para animales de compañía, el cual contiene microorganismos probióticos |
EP2452576A1 (en) * | 2010-11-11 | 2012-05-16 | Nestec S.A. | Extruded non-replicating probiotic micro-organisms and their health benefits |
RU2013133998A (ru) * | 2010-12-21 | 2015-01-27 | Нестек С.А. | Способы и композиции для предотвращения и лечения остеоартрита |
CN103442725A (zh) | 2011-01-25 | 2013-12-11 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 治疗、减轻或预防动物的视觉系统衰退的方法和组合物 |
MX359453B (es) | 2011-03-18 | 2018-09-28 | Nestec Sa | Composiciones y métodos útiles para aliviar los padecimientos relacionados con la edad. |
CN103596563A (zh) | 2011-04-15 | 2014-02-19 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 用于调控sirtuin基因表达的方法 |
CN102250799B (zh) * | 2011-06-22 | 2013-09-11 | 南京农业大学 | 草酸降解菌njode1及其应用 |
WO2013026033A2 (en) * | 2011-08-18 | 2013-02-21 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Strains and methods useful for mycotoxins |
US9113653B2 (en) | 2011-08-19 | 2015-08-25 | Steven J Maranz | Methods of administering probiotic organisms that synthesize carotenoid compounds in situ to enhance human health and nutrition |
CN102399733B (zh) * | 2011-12-14 | 2014-07-09 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 约氏乳杆菌及其菌剂、应用和预混料 |
CN102578415B (zh) * | 2012-02-23 | 2016-01-20 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 约氏乳杆菌在制备提高禽类产蛋性能和蛋品质饲料中的应用 |
US9585925B1 (en) * | 2012-05-04 | 2017-03-07 | Vetnique Labs LLC | Pet food supplement |
JP6452607B2 (ja) | 2012-09-25 | 2019-01-16 | アキロン セイエレ エセ.エレ. | プロバイオティクス組成物及びプレバイオティクス組成物 |
US10413577B2 (en) * | 2013-02-22 | 2019-09-17 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for promoting growth of beneficial microbes to treat or prevent disease or prolong life |
CN104286408B (zh) * | 2014-06-13 | 2017-10-24 | 杨雄 | 一种嗜酸乳杆菌xd13r制备的生物制剂在减少宠物体内抗药性细菌比例的应用方法 |
WO2016083959A1 (en) | 2014-11-25 | 2016-06-02 | Nestec Sa | Methods and compositions for promoting lean body mass and minimize body fat gain and managing weight |
AU2015352099B2 (en) | 2014-11-25 | 2020-08-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Methods and compositions for preserving lean body mass and promoting fat loss during weight loss |
WO2016130498A1 (en) | 2015-02-10 | 2016-08-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Isolated mucins and different microoorganisms, and methods of use |
WO2016130981A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Mars, Incorporated | Pet food feeding system |
CN107635408B (zh) | 2015-02-16 | 2021-05-25 | 马斯公司 | 连锁的粗磨物 |
MX2017013715A (es) | 2015-04-28 | 2018-03-02 | Mars Inc | Proceso de preparacion de un producto de alimento para mascotas humedo esterilizado. |
GB201520497D0 (en) * | 2015-11-20 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
RS57471B1 (sr) | 2015-12-17 | 2018-09-28 | Institut Za Molekularnu Genetiku I Geneticko Inzenjerstvo Univerzitet U Beogradu | Nova probiotička starter kultura za humanu i animalnu primenu |
WO2017109623A1 (en) * | 2015-12-22 | 2017-06-29 | Nestec Sa | Immune health for companion animals |
US11071760B2 (en) | 2015-12-24 | 2021-07-27 | Dairy A Day Inc. | Compositions and methods of use of novel strains of Lactobacillus fermentum |
CA3018215C (en) | 2016-03-24 | 2023-10-03 | Nutrinia Ltd. | Use of insulin for promoting gastric emptying |
WO2018167032A1 (en) * | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Nestec S.A. | Branched alpha glucans |
US11357803B2 (en) | 2017-09-22 | 2022-06-14 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Probiotic compositions for production of dopamine |
CN107821753A (zh) * | 2017-11-20 | 2018-03-23 | 江苏雅博动物健康科技有限责任公司 | 一种宠物用益生菌颗粒制剂及其制备方法 |
WO2019118843A1 (en) * | 2017-12-14 | 2019-06-20 | Pure Cultures, Inc. | Probiotics and fermentation metabolites for the prevention and treatment of disease conditions in animals |
FI128916B (en) | 2018-02-05 | 2021-03-15 | Vetcare Oy | Health-promoting composition and method for its preparation |
KR102079794B1 (ko) * | 2018-09-18 | 2020-02-20 | 전북대학교산학협력단 | 신규한 엔테로코커스 패시움 균주 및 이의 용도 |
CA3114836A1 (en) | 2018-10-18 | 2020-04-23 | Hill's Pet Nutrition, Inc. | Pet food compositions |
EP3893661A1 (en) | 2018-12-13 | 2021-10-20 | Société des Produits Nestlé S.A. | Methods for enhancing metabolic health in an animal |
AU2019398887A1 (en) | 2018-12-13 | 2021-05-20 | Societe Des Produits Nestle Sa | Methods for increasing fat oxidation or energy expenditure or satiety in an animal |
CN111172055B (zh) * | 2019-03-14 | 2022-06-10 | 南京农业大学 | 副干酪乳杆菌lhz-1及其在去除脱氧雪腐镰刀菌烯醇中的应用 |
US20220305063A1 (en) * | 2019-05-30 | 2022-09-29 | New York University | Probiotic compositions and methods of use |
EP3958690A4 (en) * | 2019-05-31 | 2023-04-19 | South Dakota Board of Regents | PROBIOTICS FOR INHIBITING ENTERIC PATHOGENS |
US20230063695A1 (en) * | 2019-09-13 | 2023-03-02 | Aquilon Cyl S.L. | Fermented milk product for administration in canids such as dogs, and uses thereof |
CL2019003739A1 (es) * | 2019-12-18 | 2020-06-19 | Univ Concepcion | Cepas probióticas de lactobacillus sp. y de pediococcus sp. y su uso en la elaboración de una formulación probiótica para prevención de diarreas causadas por patógenos bacterianos que afectan a perros y gatos. |
MX2022006412A (es) | 2019-12-19 | 2022-08-02 | Nestle Sa | Composiciones y metodos para proporcionar un beneficio de salud a un animal en crecimiento. |
JP2021136951A (ja) * | 2020-03-06 | 2021-09-16 | 学校法人麻布獣医学園 | 乳酸菌含有組成物 |
MX2022014829A (es) * | 2020-05-29 | 2023-01-16 | Nestle Sa | Composiciones y metodos para la salud digestiva en un animal. |
US20220062344A1 (en) | 2020-09-03 | 2022-03-03 | Société des Produits Nestlé S.A. | Compositions and methods for providing health benefits in an animal |
MX2023002627A (es) | 2020-09-04 | 2023-03-17 | Nestle Sa | Composiciones y metodos para proporcionar beneficios de salud en un animal. |
CN112266876A (zh) * | 2020-11-02 | 2021-01-26 | 湖南海路生物科技有限公司 | 用于分离粪便中菌群的智能分离系统 |
KR102554078B1 (ko) * | 2020-12-08 | 2023-07-10 | 건국대학교 산학협력단 | 애완동물을 위한 대사체 전환능 기반 유산균 조합 정보 제공 장치 및 방법 |
EP4228427A1 (en) | 2020-12-11 | 2023-08-23 | Société des Produits Nestlé S.A. | Compositions and methods for pet food |
US20230165281A1 (en) | 2021-11-29 | 2023-06-01 | Société des Produits Nestlé S.A. | Methods and compositions for providing a health benefit in an animal |
CN114437959B (zh) * | 2021-11-29 | 2022-11-18 | 内蒙古普泽动保生物技术有限公司 | 一种动物双歧杆菌及其在抗氧化和提升免疫中的应用 |
US20230165277A1 (en) | 2021-11-29 | 2023-06-01 | Société des Produits Nestlé S.A. | Methods and compositions for providing a health benefit in an animal |
WO2023104887A1 (en) * | 2021-12-09 | 2023-06-15 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactobacillus acidophilus to increase agmatine production by microbiota |
CN114292779A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-04-08 | 清远西周生物医药科技有限公司 | 一种副干酪乳杆菌冻干粉、其应用及制备方法 |
WO2023247472A1 (en) * | 2022-06-22 | 2023-12-28 | Cerbios-Pharma Sa | Probiotic for use in the treatment of inflammatory alterations of the intestinal mucosa, particularly obesity |
US20240085431A1 (en) | 2022-09-13 | 2024-03-14 | Société des Produits Nestlé S.A. | Methods for providing and determining an efficacious weight loss diet for a canine |
WO2024057117A1 (en) | 2022-09-14 | 2024-03-21 | Societe Des Produits Nestle Sa | Compositions and methods utilizing southern ocean mackerel oil for providing health benefits in an animal |
KR102554206B1 (ko) * | 2022-12-01 | 2023-07-13 | (주)에이앤바이오 | 구강 항산화 증진을 통한 반려동물 치석 제거, 구취 개선, 잇몸 보호에 도움을 주는 카탈라아제 함유 반려동물 구강 건강 증진용 조성물 |
CN116333922A (zh) * | 2023-02-10 | 2023-06-27 | 宁波希诺亚海洋生物科技有限公司 | 一株来源于深海大鱿鱼的鼠李糖乳杆菌菌株及其应用 |
KR102625196B1 (ko) * | 2023-04-19 | 2024-01-15 | 박종호 | 기호도가 우수한 반려동물용 유산균 영양제 조성물 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4160038A (en) * | 1976-08-09 | 1979-07-03 | Microlife Technics, Inc. | Lactic acid fermentate flavored pet food |
JPH07194317A (ja) * | 1993-12-29 | 1995-08-01 | Nichinichi Seiyaku Kk | ペットフード |
AUPM823094A0 (en) | 1994-09-16 | 1994-10-13 | Goodman Fielder Limited | Probiotic compositions |
DK0862863T4 (da) * | 1997-01-09 | 2008-12-01 | Nestle Sa | Kornprodukt indeholdende probiotika |
US5986569A (en) * | 1997-03-20 | 1999-11-16 | Micron Communications, Inc. | Radio frequency identification system, radio frequency identification device package, and method of use of radio frequency identification device |
WO1999017788A1 (en) | 1997-10-06 | 1999-04-15 | Abbott Laboratories | Composition of treatment of candidiasis |
US5902743A (en) * | 1998-03-20 | 1999-05-11 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Probiotic bifidobacterium strain |
JP4227690B2 (ja) * | 1998-10-29 | 2009-02-18 | 株式会社バイオテックジャパン | ペットフード |
EP1034787A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria |
WO2000053202A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-14 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Lactobacillus strains capable of preventing diarrhoea caused by pathogenic bacteria and rotaviruses |
WO2001090311A1 (en) * | 2000-05-25 | 2001-11-29 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Novel probiotics for pet food applications |
-
2001
- 2001-05-22 WO PCT/EP2001/006039 patent/WO2001090311A1/en active IP Right Grant
- 2001-05-22 BR BRPI0111275-9B1A patent/BR0111275B1/pt active IP Right Grant
- 2001-05-22 AU AU2001278432A patent/AU2001278432B2/en not_active Expired
- 2001-05-22 ES ES01956446T patent/ES2262667T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 AT AT01956446T patent/ATE325864T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-05-22 DE DE60119515T patent/DE60119515T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 AU AU7843201A patent/AU7843201A/xx active Pending
- 2001-05-22 MX MXPA02011595A patent/MXPA02011595A/es active IP Right Grant
- 2001-05-22 JP JP2001587107A patent/JP4343477B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 NZ NZ523010A patent/NZ523010A/en not_active Application Discontinuation
- 2001-05-22 IL IL15269501A patent/IL152695A0/xx unknown
- 2001-05-22 DE DE60127731T patent/DE60127731T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 US US10/296,070 patent/US7189390B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 CA CA2409286A patent/CA2409286C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 EP EP01956446A patent/EP1290136B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 ES ES05001029T patent/ES2284089T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 EP EP05001029A patent/EP1541673B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 CN CNB018132618A patent/CN100396769C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-05-22 PL PL359182A patent/PL207930B1/pl unknown
- 2001-05-22 HU HU0301939A patent/HU230800B1/hu unknown
- 2001-05-22 EA EA200201284A patent/EA006428B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-05-22 KR KR1020027015880A patent/KR100796963B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-05-24 MY MYPI20012465A patent/MY138070A/en unknown
- 2001-05-24 PE PE2001000477A patent/PE20020232A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-05-24 AR ARP010102512A patent/AR029100A1/es active IP Right Grant
- 2001-05-25 UY UY26734A patent/UY26734A1/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-11-07 IL IL152695A patent/IL152695A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-11-18 NO NO20025528A patent/NO330276B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-12-19 ZA ZA200210302A patent/ZA200210302B/en unknown
-
2004
- 2004-09-02 US US10/934,236 patent/US7381406B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-02-02 US US11/701,916 patent/US7771982B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-03-21 US US12/053,037 patent/US8771675B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-12-11 JP JP2008316125A patent/JP4456649B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2010
- 2010-06-25 US US12/823,659 patent/US8124070B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7189390B2 (en) | Probiotics for pet food applications | |
CA2607949C (en) | Feline probiotic bifidobacteria | |
US7998473B2 (en) | Methods of treatment or prevention of gastrointestinal disorders using canine probiotic bifidobacterium | |
ES2366542T3 (es) | Lactobacillus probióticos caninos. | |
EP1880001B1 (en) | Feline probiotic lactobacilli | |
AU2001278432A1 (en) | Novel probiotics for pet food applications | |
CA2550307C (en) | Canine probiotic bifidobacteria globosum | |
AU2011202947B2 (en) | Feline probiotic lactobacilli |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RECP | Rectifications of patent specification |