PL178793B1 - Białko fuzyjne, sposób wytwarzania białka fuzyjnego i środek farmaceutyczny - Google Patents
Białko fuzyjne, sposób wytwarzania białka fuzyjnego i środek farmaceutycznyInfo
- Publication number
- PL178793B1 PL178793B1 PL94306474A PL30647494A PL178793B1 PL 178793 B1 PL178793 B1 PL 178793B1 PL 94306474 A PL94306474 A PL 94306474A PL 30647494 A PL30647494 A PL 30647494A PL 178793 B1 PL178793 B1 PL 178793B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- antibody
- mab
- fragment
- fusion protein
- tnf
- Prior art date
Links
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 title description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 75
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 67
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 67
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 67
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 66
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 41
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims abstract description 8
- -1 IL-4i Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims abstract description 4
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 claims description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 14
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 13
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 claims description 12
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 claims description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 11
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 8
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 6
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 6
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 5
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 5
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 5
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 4
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 claims description 3
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 42
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 19
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 29
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 28
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 14
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 14
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 7
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 7
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 4
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 4
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 4
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 3
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 3
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 3
- 101100112677 Mus musculus Ccnd3 gene Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 210000003810 lymphokine-activated killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 2
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 2
- 231100000050 cytotoxic potential Toxicity 0.000 description 2
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 108040006852 interleukin-4 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150076489 B gene Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 210000004366 CD4-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001002709 Homo sapiens Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 101001043807 Homo sapiens Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 208000003788 Neoplasm Micrometastasis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000009215 host defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000055229 human IL4 Human genes 0.000 description 1
- 102000052622 human IL7 Human genes 0.000 description 1
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 101150044611 pel gene Proteins 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 108010086662 phytohemagglutinin-M Proteins 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5406—IL-4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5418—IL-7
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/028—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a herpesvirus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
1. Bialko fuzyjne, zawierajace mysie lub humanizowane przeciwcialo Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej z epitopem antygenowym receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i biologicznie aktywna cytokine wybrana z grupy TNF a , IL-2, IL-4i, IL-7, która jest polaczona przez fuzje do wspomnianego przeciwciala lub jego fragmentu i wykazuje wlasciwosc cytotoksyczna wywolywania swoiscie lizy komórki nowotworowej. 6. Sposób wytwarzania bialka fuzyjnego zawierajacego mysie lub humanizowane przeciwcialo Mab 425 lub jego frag- ment skierowany przeciw komórce nowotworowej z epitopem antygenowym receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i biologicznie aktywna cytokine wybrana z grupy TNF a , IL-2, IL-4i, IL-7, która jest polaczona przez fuzje do wspo- mnianego przeciwciala lub jego fragmentu i wykazuje wlasciwosc cytotoksyczna wy woly wania swoiscie lizy komórki no- wotworowej, znamienny tym, ze dokonuje sie fuzji sekwencji DNA kodujacych przeciwcialo Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej zawierajacej epitop antygenowy receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) z sekwencjaDNAkodujacabiologicznie aktywna cytokine wybranaz grupy TNFa , IL-2, IL-4 i, IL-7, umieszcza sie otrzymany konstrukt w wektorze ekspresyjnym, który jest transformowany do organizmu gospodarza, hoduje sie komórke gospodarza w roztworze pozywki i przeprowadza sie ekspresje bialka fuzyjnego. 10. Srodek farmaceutyczny zawierajacy bialko fuzyjne obejmujace przeciwcialo i cytokine oraz fizjologicznie dopusz- czalne nosniki, znamienny tym, ze zawiera co najmniej jedno bialko fuzyjne zawierajace mysie lub humanizowane przeciw- cialo Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej zawierajacej epitop antygenowy receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i biologicznie aktywna cytokine wybranaz grupy TNF a , IL-2, IL4 i, IL-7, która jest polaczona przez fuzje do wspomnianego przeciwciala lub jego fragmentu i wykazuje wlasciwosc cytotoksyczna wywolywania swoiscie lizy komórki nowotworowej oraz dopuszczalny fizjologicznie nosnik. PL PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest białko fuzyjne, sposób wytwarzania białka fuzyjnego i środek farmaceutyczny. Przedmiotem wynalazku jest zwłaszcza białko fuzyjne składające się z wiążącego się z nowotworem elementu docelowego, korzystnie przeciwciała monoklonalnego lub jego fragmentu, rozpoznającego cząsteczkę preferencyjnie wytwarzaną na ludzkich komórkach nowotworowych, taką jak receptor ludzkiego naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i z aktywnego biologicznie ligandu, takiego jak czynnik wzrostu i/lub czynnik różnicowania. Uzyskane białko fuzyjne może być użyte do dostarczania aktywnego biologicznie ligandu do określonej, docelowej komórki lub tkanki. Te nowe immunokoniugaty mogą być stosowane do leczenia nowotworów. Do leczenia pacjentów cierpiących na nowotwory stosuje się wiele różnych podejść terapeutycznych. W ostatnich latach prowadzi się próby kliniczne z przeciwciałami monoklonalnymi, które swoiście albo preferencyjnie rozpoznają cząsteczki wytwarzane na powierzchni komórek złośliwych. W niniejszym podejściu, w celu wyeliminowania komórek nowotworowych indukuje się cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciała (ADCC) lub cytotoksyczność przy współudziale dopełniacza (CDC). W tym drugim podejściu aktywuje się odpowiedź immunologiczną w której pośredniczą cytokiny. Na indukowaną cytokinami aktywność przeciwnowotworową można wpływać przez:
1) bezpośredni cytotoksyczny/cytostatyczny wpływ cytokiny na wzrost nowotworu;
2) nieswoiste mechanizmy reakcji: nowotwór - antygen, takie jak aktywność aktywowanych limfokinami komórek K (komórek LAK) albo cytotoksyczność, w której uczestniczą monocyty i makrofagi;
3) swoiste odpowiedzi immunologiczne: nowotwór - antygen, z udziałem CD4 i CD8 dodatnich limfocytów T. W tej sytuacji, odporność ogólną na nowotwór obserwowano na modelach zwierzęcych.
Przeszkodą w ogólnym stosowaniu cytokin, takich jak interleukina IL-2 czy czynnik martwicy nowotworu alfa. (TNFa) jest ich toksyczność (Rubin, Cancer Invest. 11, 460-472, 1990; Balkwill, Naturę, 361, 206-207, 1993). W celu uzyskania wystarczającego stężenia cytokiny w miejscu nowotworu należałoby podawać wysokie jej dawki, tymczasem maksymalna tolerowana dawka cytokiny jest niższa niż dawka wymagana dla wykazania skuteczności. Tak więc, ujemne skutki działania cytokin są w głównej mierze wynikiem podawania ogólnego, jednak ich kliniczna przydatność w terapii nowotworów jest niepodważalna. Na modelach zwierzęcych wykazano, że cytokina obecna in situ, wprowadzona przez injekcję do nowotworu bądź obecna w wyniku sekrecji poddanych transfekcji komórek nowotworowych, może pro
178 793 wadzić do regresji nowotworu (Hock i wsp., PNAS 90: 2774 - 2778, 1993; Colombo i wsp., Cancer Res. 52: 4853 - 4857, 1992; McBride i wsp., Cancer Res.52: 3931 - 3937, 1992;Tepper i wsp., Science 257: 548 - 551, 1992; Mullen i wsp., Cancer Res. 52: 6020 - 6024. 1992; Blankenstein i wsp., J.Exp. Med. 173: 1047 - 1052, 1991; Gansbacher i wsp. J.Exp. Med. 172. 1217 - 1224, 1990). W tych układach, cytokiny nie zaburzają proliferacji nowotworu ale mają zdolność aktywowania szybkiej i silnej reakcji antynowotworowej. Tak więc, fizyczna kombinacja cząsteczki efektorowej i elementu kierującego na cel jest sposobem obniżania stężenia poza nowotworem i zwiększania wewnątrz-nowotworowej dostępności biologicznie aktywnego ligandu. Ponadto, celem dla tych cząsteczek mogą być również pojedyncze komórki nowotworowe i mikroprzerzuty.
Biologicznie aktywny ligand w połączeniu z celowaniem kierowanym za pomocą przeciwciała, powinien wywoływać destrukcję docelowej komórki, bądź bezpośrednio bądź przez wytworzenie środowiska śmiertelnego dla tej komórki. Takim biologicznie aktywnym ligandem może być cytokina, a więc, interleukiny: IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-10, IL-13, interferony (IFN), czynnik martwicy nowotworu (TNFa) lub czynniki stymulujące tworzenie kolonii (CSF). Wykazano, że powyższe cytokiny wykazują działanie przeciw-nowotworowe albo bezpośrednio albo poprzez aktywowanie mechanizmów obronnych gospodarza (Mire-Sluis, TIBTECH H: 74 - 77, 1993; Colombo i wsp., Cancer Res. 52: 4853 - 4857, 1992; Thomas i Balkwill, Pharmac. Ther. 52: 307 - 330, 1991).
Przykładowo, uważa się że IL-2 jest centralnym mediatorem odpowiedzi immunologicznej. Wykazano, że stymuluje ona proliferację limfocytów T i komórek NK i indukuje aktywowane limfokinami komórki K (LAK). W odpowiedzi na IL-2 zachodzi proliferacja przenikających do nowotworu limfocytów T (komórek TIL). Ponadto, IL-2 wzmaga cytotoksyczność limfocytów T i monocytów. Indukuje ona również kaskadę cytokin wydzielanych przez limfocyty T, komórki NK i monocyty, co następnie potęguje odpowiedź immunologiczną.
TNFa znalazł szerokie zastosowanie do leczenia nowotworów, głównie z powodu bezpośredniej cytotoksyczności w stosunku do pewnych typów komórek nowotworowych i indukowania krwotocznej regresji nowotworów. Ponadto, TNFa potęguje odpowiedź immunologiczną: jest kostymulatorem proliferacji limfocytów T,.indukuje ekspresję antygenów głównego układu zgodności tkankowej klasy I i klasy II i pobudza sekrecję TNFa, interferonu i IL-1 przez makrofagi. Interleukinę IL-4 początkowo opisano jako czynnik wzrostu limfocytów B. W dalszych badaniach wykazano, że IL-4 stymuluje swoiste antygenowo cytotoksyczne limfocyty T i działa swoiście na limfocyto T - podobne komórki LAK a nie na NK - podobne komórki LAK. IL-4 hamuje wzrost ludzkich komórek czerniaka, wzmaga w nich ekspresję antygenów klas I i II głównego układu zgodności tkankowej. Wciąż kontrowersyjne jest działanie IL-4 polegające na indukowaniu efektów przeciwnowotworowych, w których pośredniczą makrofagi.
IL-7 jest czynnikiem wzrostu dla komórek pre-β oraz dla ludzkich CD4 i CD8 dodatnich limfocytów T. IL-7 bezpośrednio wzmaga cytotoksyczność subpopulacji limfocytów T CD8-dodatnich. Ponadto, IL-7 indukuje wytwarzanie IL-1, IL-6 i TNFa przez monocyty obwodowe. W doświadczeniach in vitro, aktywność przeciwnowotworową monocytów/makrofagów można stymulować interleukiną IL-7; prawdopodobnie w procesie uczestniczą cytokiny takie jak TNFa. Naskórkowy czynnik wzrostu (EGF) jest hormonem polipeptydowym, mitogennym dla komórek naskórka i nabłonka. Kiedy EGF wchodzi w reakcję z komórkami wrażliwymi, wówczas wiąże się z receptorami błonowymi (EGFR). EGFR jest glikoproteiną trans-błonową o wielkości około 170 kD, produktem genu c-erb-B proto onkogen.
Mysie przeciwciało monoklonalne Mab 425 jest przeciwciałem przeciw ludzkiej linii komórek raka A431 (ATCC CRL 1555). Wiąże się ono z polipeptydowym epitopem na zewnętrznej domenie EGFR. Hamuje wiązanie EGF, pośredniczy w cytotoksyczności nowotworowej in vitro i hamuje wzrost komórek nowotworowych w liniach pochodzących z raka
178 793 naskórka i raka odbytu i okrężnicy in vitro (Rodeck i wsp., Cancer Res. 47: 3692, 1987). Humanizowane i chimerowe wersje Mab 425 są znane z opisu patentowego PCT, WO 92/15683.
W literaturze są opisane immunokoniugaty: przeciwciało-cytokina w różnych połączeniach przeznaczonych do bezpośredniego dostarczania aktywnych białek. Interleukinę IL-2 łączono z ludzkim nowotworo-swoistym przeciwciałem L6 (Feli i wsp., J. Immunol. 146: 2446 - 2452, 1991; publikacja zgłoszenia patentowego europejskiego EP 0439095) albo z przeciwciałem anty-gangliozydowym GD2 (Gillies i wsp., PNAS 89: 1428 - 1432, 1992; publikacja zgłoszenia patentowego PCT, WO 92/08495). Immunokoniugaty zawierające przeciwciało „anty-dansyl” (przeciw grupie dansylowej) i IgFj zaprojektowano do celów bezpośredniego dostarczania hormonów (Shin i Morrison, PNAS 87: 5322 - 5326, 1990; publikacja zgłoszenia patentowego PCT, WO 91/14438).
Tak więc, celem wynalazku było skonstruowanie przeciwciał lub ich fragmentów, zawierających (1) epitop skierowany przeciw antygenowi EGFR na powierzchni komórki nowotworowej i (2) biologicznie aktywny ligand o wysokim potencjale indukowania cytotoksyczności, wykazujących zwiększone działanie przeciwnowotworowe in situ.
Przedmiotem wynalazku jest białko fuzyjne łączące w sobie część przeciwciała monoklonalnego, co najmniej miejsce rozpoznawania antygenu albo całkowite przeciwciało monoklonalne i biologicznie aktywny ligand. Konstrukcje genowe kodujące to białko fuzyjne wytwarza się technikami rekombinacji DNA. Takie białko fuzyjne zawiera rejon zmienny łańcucha ciężkiego przeciwciała oraz domenę CHI rejonu stałego (koniugat: przeciwciało CHI) albo domenę CHI i CH2 rejonu stałego (koniugat: przeciwciało - CH2) lub domenę CHI, CH2 i CH3 rejonu stałego (koniugat: przeciwciało - CH3), połączone poprzez fuzję z biologicznie aktywnym ligandem. Przez addycję odpowiedniego łańcucha lekkiego można wytwarzać immunokoniugaty, które kierują się do komórek posiadających antygen i dostarczają aktywny ligand do określonego miejsca w organizmie (fig. 1 a-c).
Dzięki użyciu białka fuzyjnego według wynalazku można z powodzeniem wykrywać i leczyć nowotwory takie jak czerniak, glejak i rak.
Przedmiotem wynalazku jest białko fuzyjne, zawierające mysie lub humanizowane przeciwciało Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej z epitopem antygenowym receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i biologicznie aktywną cytokinę wybraną z grupy TNFa, IL-2, IL-4i, IL-7, która jest połączona przez fuzję do wspomnianego przeciwciała lub jego fragmentu i wykazuje właściwość cytotoksyczną wywoływania swoiście lizy komórki nowotworowej.
Korzystnie białko fuzyjne charakteryzuje się tym, że jako przeciwciało zawiera fragment Fab lub fragment Ffyb^ złożony w zasadzie ze zmiennego regionu łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domeny CHI rejonu stałego i odpowiedniego łańcucha lekkiego (koniugat przeciwciało-CH 1).
W innej korzystnej postaci wynalazku białko fuzyjne jako przeciwciało zawiera fragment przeciwciała składający się zasadniczo z rejonu zmiennego łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domen CHI i CH2 rejonu stałego i odpowiedniego łańcucha lekkiego (koniugat przeciwciało-CH2).
Również korzystnie białko fuzyjne według wynalazku jako przeciwciało zawiera zasadniczo rejon zmienny łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domeny CHI, CH2 i CH3 rejonu stałego i odpowiedni łańcuch lekki (koniugat przeciwciało-CH3).
Przedmiotem wynalazku jest także białko fuzyjne wybrane z grupy: Mab 425-CH1-TNF Mab 425-CH2-TNFa, Mab 425-CH3-TNFa, Mab 425-CH1-IL-2, Mab 425-CH2-IL-2 i Mab 425-CH3-IL-2.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania białka fuzyjnego zawierającego mysie lub humanizowane przeciwciało Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej z epitopem antygenowym receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i biologicznie aktywną cytokinę wybraną z grupy TNFa, IL-2, IL-4i, IL-7, która jest połączona przez fuzję do wspomnianego przeciwciała lub jego fragmentu i wykazuje
178 793 właściwość cytotoksyczną wywoływania swoiście lizy komórki nowotworowej, polegający na tym, że dokonuje się fuzji sekwencji DNA kodujących przeciwciało Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej zawierającej epitop antygenowy receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) z sekwencją DNA kodującą biologicznie aktywną cytokinę wybraną z grupy TNF^ IL-2, IL-4i, IL-7, umieszcza się otrzymany konstrukt w wektorze ekspresyjnym, który jest transformowany do organizmu gospodarza, hoduje się komórkę gospodarza w roztworze pożywki i przeprowadza się ekspresję białka fuzyjnego.
W korzystnym wykonaniu sposobu według wynalazku dokonuje się fuzji sekwencji DNA kodujących przeciwciało lub fragmenty przeciwciała z sekwencjami DNA kodującymi biologicznie aktywną cytokinę, na jednoniciowym DNA, stosując oligonukleotyd komplementarny do żądanej fuzyjnej sekwencji DNA. Korzystnie dokonuje się ekspresji białka fuzyjnego przeciwciało-CH 1 w E.coli jako komórce gospodarza, ewentualnie dokonuje się ekspresji białek fuzyjnych: przeciwciało-CH2 albo przeciwciało-CH3 w gospodarzu eukariotycznym.
Przedmiotem wynalazku jest także środek farmaceutyczny zawierający białko fuzyjne obejmujące przeciwciało i cytokinę oraz fizjologicznie dopuszczalne nośniki, charakteryzujący się tym, że zawiera co najmniej jedno białko fuzyjne zawierające mysie lub humanizowane przeciwciało Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej zawierającej epitop antygenowy receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i biologicznie aktywną cytokinę wybraną z grupy TNF^ IL-2, IL-4i, IL-7, która jest połączona przez fuzję do wspomnianego przeciwciała lub jego fragmentu i wykazuje właściwość cytotoksyczną wywoływania swoiście lizy komórki nowotworowej oraz dopuszczalny fizjologicznie nośnik.
Jako przeciwciało, środek farmaceutyczny według wynalazku zawiera fragment Fab lub fragment F^b^ złożony w zasadzie ze zmiennego regionu łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domeny CHI rejonu stałego i odpowiedniego łańcucha lekkiego (koniugat przeciwciało-CHl).
Środek farmaceutyczny, korzystnie charakteryzuje się tym również, że jako przeciwciało może zawierać fragment przeciwciała składający się w zasadzie z rejonu zmiennego łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domen CHI i CH2 rejonu stałego i odpowiedniego łańcucha lekkiego (koniugat przeciwciało-CH2), a także jako przeciwciało może zawierać zasadniczo rejon zmienny łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domeny CHI, CH2 i CH3 rejonu stałego i odpowiedni łańcuch lekki (koniugat przeciwciało-CH3). Najbardziej korzystnie środek farmaceutyczny zawiera białko fuzyjne wybrane z grupy: Mab 425-CHl-INFa, Mab 425-CH2-INFa, Mab 425-CH3-TNFa, Mab 425-CH1-IL-2, Mab 425-CH2-IL-2 i Mab 425-CH3-IL-2.
Okazało się, że zwłaszcza w przypadku immunokoniugatów: przeciwciało-CH2 i przeciwciało-CH3, takich jak na przykład Mab 425-CH2-TNF;x i Mab 425-CH3-TNFa, indukcja toksyczności komórkowej jest silniejsza w porównaniu z niesprzężonym TNFa. Prawdopodobnie wynika to z połączenia cech odnośnie właściwości wiązania i indukcji ADCC przez rejony stałe przeciwciała monoklonalnego z aktywnością cytokin.
Białka fuzyjne: przeciwciało-CH 1 według wynalazku są korzystne ze względu na małe wymiary cząsteczek oraz możliwość ekspresji w organizmach prokariotycznych. Małe wymiary cząsteczek ułatwiają ponadto penetrację do tkanki (nowotworowej).
Białka fuzyjne według wynalazku wykazują przy tym korzystne właściwości wiązania i proliferacji w porównaniu z przeciwciałem monoklonałnym, korzystnie Mab 425, stosowanym jako takim lub w postaci fragmentów.
Materiały i metody
Przeciwciała monoklonalne. Mab 425 jest mysim przeciwciałem monoklonałnym IgGl przeciw ludzkiej linii komórkowej raka A431 (ATCC CRL 1555). Mab 425 wiąże się z polipeptydem epitopem na zewnętrznej domenie receptora ludzkiego EGF i współzawodniczy w wiązaniu z EGF. Wykazano, że przeciwciało to uczestniczy w procesie powstawania cyto
178 793
Ί toksyczności wobec nowotworu in vitro i hamuje in vitro wzrost komórek nowotworowych w liniach pochodzących z raka naskórka-podobnego i okrężniczo-odbytniczego (Rodeck i wsp., Cancer Res. 47: 3692, 1987). Odmiany humanizowane i chimerowe Mab 425 są ujawnione w opisie zgłoszenia patentowego PCT WO 92/15683.
Cytokiny. cDNA kodujące cytokiny uzyskano z firmy British Biotechnology Limited (Herrmann Biermann GmbH, Bad Nauheim, Republika Federalna Niemcy). Są to: cDNA dla ludzkiej IL-2 BBG30, ludzkiej IL-4 BBG15, ludzkiej IL-7 BBG43, ludzkiego TNFa BBG18. Dostępne w handlu cDNA nie mają sekwencji sygnalnej niezbędnej do wydzielania białka z komórki. cDNA kodujące cytokiny można również uzyskiwać z mRNA wyizolowanego z komórek wytwarzających cytokiny.
Wektory. Plazmid pUC19 należy do serii plazmidowych wektorów do klonowania, występujących w dużej ilości kopii w E. coli. Zawiera on części plazmidu pBR322 i plazmidu M13mpl9. pUC19 zawiera indukowalny, bakteryjny promotor/generator lac a za nim miejsce wielokrotnego klonowania (Yanisch-Perron i wsp., Gene 33: 103-109, 1985). Wektory pUC są dostępne w handlu (na przykład z firmy New England Biolabs). Wektory fagemidowe pBluescript KS/KS+ i KS/KS- pochodzą od pUC19. Są one dostępne w handlu, na przykład z firmy Stratagene).
Eukariotyczny wektor ekspresyjny pHCMV, (Gillies i wsp., Celi 33: 717, 1983) zawiera źródło replikacji z wirusa Simiana 40 (SV40) i rejon promotora i wzmacniacza z cytomegalowirusa ludzkiego. Za tym rejonem promotora/wzmacniacza znajduje się miejsce multiklonowania (mes) dla wprowadzania genów, które mają podlegać ekspresji. W tym wektorze łączy się chimerową formę rejonu zmiennego ciężkiego łańcucha Mab 425 z rejonem ASacII cyl związanym przez fuzję z cząsteczką efektorową na końcu odpowiednio domeny CHI, CH2 lub CH3, generując białko fuzyjne łańcucha ciężkiego Mab 425. Ten fuzyjny łańcuch Ig można włączyć do immunokoniugatu przez połączenie go z odpowiednim łańcuchem lekkim, z utworzeniem jednowartościowego rejonu wiązania antygenu, który z kolei można łączyć, wytwarzając dwuwartościowy immunokoniugat swoisty względem docelowego antygenu (fig. 1). Konstrukcje łańcuchów ciężkich i lekkich można umieszczać w tych samych lub w oddzielnych wektorach.
Prokariotyczny wektor ekspresyjny jest oparty na opisanym przez Ward’a wektorze pSWl (Ward i wsp., Naturę 341: 544-546, 1989), będącym pochodną wektora pUC19. Wektor pSWl zawiera sekwencję kodującą peptyd liderowy bakteryjnego genu pel/B z Erwinia carotovora (Lei i wsp., J. Bacteriol. 169: 4379-4383, 1987). W celu bezpośredniej ekspresji białka do periplazmy można wprowadzać obce DNA w zgodnej fazie odczytu za sekwencją liderową pelB.
Na załączonych rysunkach tabela 1 przedstawia primery do reakcji łańcuchowej polimerazy (reakcji PCR) stosowane do wytwarzania białek fuzyjnych Mab 425-cytokina (ekspresja eukariotyczna).
Znak oznacza odwrotny primer hybrydyzujący z wektorami Stratagene pBluescript SK+/- i KS+/- ((dostępne w handlu);
Znak ”**” oznacza primer hybrydyzujący ze stałym rejonem Cgl łącznie z unikalnym miejscem SacII;
Znak ”***” oznacza odwrotny primer hybrydyzujący z wektorami pochodzącymi od Ml3 (dostępnymi w handlu).
Tabela 2 przedstawia primery reakcji łańcuchowej polimerazy (reakcji PCR) stosowane do wytwarzania białek fuzyjnych Mab 425-cytokina (ekspresja prokariotyczna)
Figura 1 przedstawia model immunokoniugatów: przeciwciało-cytokina
C oznacza cytokinę, VH oznacza rejon zmienny łańcucha ciężkiego, VL oznacza rejon zmienny łańcucha lekkiego, CH oznacza łańcuch ciężki rejonu stałego, CL oznacza łańcuch lekki rejonu stałego.
(a) = koniugat: przeciwciało-CHl, (b) = koniugat: przeciwciało-CH2, (c) = koniugat: przeciwciało-CH3,
178 793
Figura 2 przedstawia wiązanie immunokoniugatów z receptorem EGF w próbie wykonanej techniką ELISA swoistej wobec EGF-R.
Supematanty przejściowo zakażonych metodą transfekcji komórek COS-7 testowano na obecność immunokoniugatu. Oś pionowa: procent absorbancji przy długości fali 490 nm; oś pozioma: rozcieńczenie supematantu (log 2). Na krzywych, wypełnione kółka oznaczają Mab425CHl-TNFct, wypełnione kwadraty oznaczają Mab425CH2-TNFct, wypełnione trójkąty oznaczają Mab425CH3-TNFa, wypełnione romby oznaczają kontrolę Mab425, odwrócone wypełnione trójkąty oznaczają Mab425Fab, wypełnione sześciokąty oznaczają przekształcone Mab425F(ab')2 (oczyszczone białko).
Figura 3A przedstawia aktywność IL-2 immunokoniugatów Mab425-CHl-IL-2 wytwarzanych w komórkach COS-7.
Jako linię indykatorową użyto komórki CTLL-2. Na lewej części wykresu przedstawiona jest aktywność proliferacyjna seryjnych rozcieńczeń supematantu komórek COS zawierającego Mab425CHl-IL-2 (wypełnione kółka). Jako kontrolę użyto supematanty COS zawierające Mab425Fab (kontrola; niewypełnione kółka). Na prawej części wykresu przedstawiona jest odpowiedź proliferacyjna komórek CTLL.2 w wyniku aktywacji handlowym, rekombinantowym białkiem IL-2 albo bez dodatku IL-2 (KO).
Figura 3B przedstawia aktywność IL-2 immunokoniugatu Mab425CHl-IL-2 wytwarzanego w E. coli.
lako linię indykatorową użyto komórki CTLL-2. Na lewej części wykresu przedstawiona jest aktywność proliferacyjna seryjnych rozcieńczeń Mab425CHI-IL-2 wytwarzanego w E. coli i oczyszczonego metodą powinowactwa na kolumnie idiotypowej anty-Mab425 (wypełnione trójkąty). Jako kontrolę użyto supematanty COS zawierające Mab425-CHl-IL-2 (zamknięte kółka). Wypełnionymi kwadratami oznaczona jest krzywa buforu do dializy. Dla stwierdzenia, że ten bufor nie wpływa na aktywność IL-2, bufor do dializy miareczkuje się wobec stałego stężenia IL-2 (1 jednostka/ml) (odwrócone wypełnione trójkąty). Na prawej części wykresu przedstawiona jest odpowiedź proliferacyjna komórek CTLL.2 na aktywację handlowym, rekombinantowym białkiem IL-2 albo bez dodatku IL-2 (KO).
Figura 3C obrazuje indukowanie proliferacji limfocytów TIL przez immunokoniugat Mab425-CHl-IL-2.
Limfocyty przenikające do czerniaka hodowano bez (KO) albo w obecności seryjnych rozcieńczeń supematantów COS zawierających immunokoniugat 425-CH1-IL-2 (lewa część wykresu). Odpowiedź proliferacyjna komórek TIL po aktywacji rekombinantową handlową IL-2 jest przedstawiona na prawej części wykresu.
Figura 4 przedstawia indukcję proliferacji HPBL przez immunokoniugaty Mab425-IL-4.
Aktywowane przez PHA komórki HPBL hodowano w obecności seryjnych rozcieńczeń supematantów COS zawierających białka fuzyjne Mab425-CH2-IL-4 (zamknięte kółka), Mab425-CH3-IL-4 (zamknięte trójkąty). Jako kontrolę zastosowano supematanty zawierające Mab425 (zamknięte kwadraty), IL-4 (zamknięte romby) i kontrolne wektory (zamknięte odwrócone trójkąty). Odpowiedź proliferacyjna komórek HPBL w wyniku aktywacji handlową rekombinantową IL-4 i bez dodatku czynnika wzrostu (KO) jest zobrazowana na prawej części wykresu.
Figura 5 obrazuje cytotoksyczność immunokoniugatu Mab425-TNFa wobec komórek WEHI 164.
Wrażliwą na TNFa mysią linię komórkową włókniakomięsaka WEHI 164 hodowano przez 48 godzin w obecności seryjnych rozcieńczeń supematantów COS (lewa część wykresu) zawierających immunokoniugat 425-CHl-TNFa (wypełnione kwadraty) albo 425-CH2-TNFa (wypełnione trójkąty) albo Mab425Fab - kontrola (wypełnione kółka). Na prawej części wykresu przedstawione jest hamowanie wzrostu komórek indykatorowych, indukowanych handlowym, rekombinantowym ludzkim TNFa.
Figura 6 obrazuje cytolizę nowotworu przez PBMC z udziałem immunokoniugatu Mab425-TNFa.
178 793
Jako komórki efektorowe użyto nieaktywowane, ludzkie limfocyty krwi obwodowej (PBMC) i hodowano je razem, z allogenicznymi EGF-R-dodatnimi komórkami docelowymi C8161 znakowanymi izotopem chromu 51Cr w proporcji komórek efektorowych do docelowych wynoszącej 30:1. Na wykresie podany jest procent specyficznej lizy po 18 godzinach wspólnej hodowli bez lub w obecności seryjnych rozcieńczeń supematantów COS zawierających immunokoniugat Mab425CH3-TNFa (słupki zakreskowane). Rekombinantowy TNFa (Genzyme) był wytwarzany w E. coli w postaci dimeru o wielkości 36 kDaltonów (słupki kropkowane).
Inne mikroorganizmy, linie komórkowe, plazmidy, promotory, markery oporności, źródła replikacji, miejsca restrykcyjne lub inne fragmenty wektorów wzmianowane w niniejszym opisie są handlowo lub w inny sposób ogólnie dostępne. O ile nie są one w inny sposób opisane, użyto je tylko przykładowo i nie stanowią one istoty wynalazku; można je zastąpić innymi odpowiednimi środkami i materiałami biologicznymi.
Techniki mające zasadnicze znaczenie dla istoty wynalazku opisane są szczegółowo poniżej. Inne techniki, które nie są opisane szczegółowo, odpowiadają znanym metodom standardowym, ogólnie znanym specjalistom lub są opisane bardziej szczegółowo w cytowanym piśmiennictwie, cytowanych opisach zgłoszeń patentowych i w literaturze klasycznej (na przykład „Antibodies, A Labotatory Manuał”, Harlow, Lane, Cold Spring Harbor, 1988). Ekspresja białek fuzyjnych w komórkach eukariotycznych.
Konstruowanie eukariotycznych wektorów ekspresyjnych do ekspresji białka fuzyjnego Fab425-cytokina.
Fuzja Mab 425 z cytokinami za pomocą technologii „loop-out”
Generowanie konstrukcji kodujących TNFa: Fragment SacII/Xbal z klonu ASacII cyl wprowadza się przez insercję do plazmidu Bluescript SK+ zawierającego sekwencje kodujące cytokinę, przykładowo sekwencję cDNA dla TNFa. Ten cDNA dla TNFa wprowadza się między miejsce Smal i miejsce EcoRI. Powstałą konstrukcję przygotowuje się w postaci jednoniciowego DNA przez dodanie odpowiedniego faga pomocniczego. Następnie dokonuje się fuzji w zgodnej fazie odczytu, sekwencji kodujących domeny CH2 lub CH3 z końcem 5' sekwencji kodującej TNFa. Oligonukleotydy:
1 CGAAGATGATCTGACCAT TTTGGCTTTGGAGATGGT 3 1
TNFa I domena cgl CH2
5’ CGAAGATGATCTGACCAT TTTACCCGGAGACAGGGA 3
TNFa 1 domena cgl CH3 są homologiczne odpowiednio z końcem 3' domeny CH2 i domeny CH3 i z końcem 5' sekwencji kodującej TNF^ Te jednoniciowe sekwencje DNA łączy się za pomocą oligonukleotydu, po czym z tej konstrukcji usuwa się znajdujące się pomiędzy nimi sekwencje niepożądane. Oligonukleotydy mają orientację przeciwną, ponieważ nić górna była generowana j ako DNA j ednoniciowy.
178 793
Do tego DNA dobudowuje się drugi łańcuch komplementarny stosując do tego celu sekwenazo-polimerazę. Ten enzym nie jest tak skłonny do błędów jak polimeraza DNA Amplitaq, a zatem oznacza się jedynie sekwencja DNA z połączenia izolowanych klonów. Klony zawierające prawidłową sekwencję łączono z sekwencjami niezbędnymi do generowania całkowitego białka fuzyjnego Mab 425 i klonowano do wektora pHCMV w celu ekspresji w komórkach eukariotycznych.
Generowanie konstrukcji kodujących IL-4
W celu wytworzenia tych konstrukcji, dokonuje się insercji całkowitego klonu ASacII cy 1 do plazmidu Bluescript KS+ w formie fragmentu Kpnl/Sall. Do tego samego wektora klonuje się sekwencję kodującą IL-4 w formie fragmentu HIndlll/EcoRI. Fuzję prowadzi się w taki sam sposób jak dla konstrukcji TNF^ stosując do fuzji z sekwencją dla domeny CH2 i domeny CH3 odpowiednio oligonukleotydy:
5' GATATCGCACTTGTGCAT TTTGGCTTTGGAGATGGT 3' IL-4 cgl domena CH2 i
5' GATATCGCACTTGTGCAT TTTACCCGGAGACAGGGA 3'
IL-4 cgl domena CH3
Klony zawierające prawidłową sekwencję łączono z sekwencjami niezbędnymi do generowania całkowitego białka fuzyjnego Mab425 i klonowano do wektora pHCMV w celu ekspresji w komórkach eukariotycznych.
Fuzja sekwencji kodujących Mab 425 i cytokiny z zastosowaniem technologii reakcji łańcuchowej polimerazy
DNA polimeraza Amplitaq jest skłonna do błędów, więc aby się upewnić, że nie wprowadzono błędów, oznaczano sekwencje tych segmentów, które były amplifikowane techniką reakcji łańcuchowej polimerazy. Primery użyte w tych doświadczeniach są podane w tabeli 1.
Tabela 1
Primery reakcji PCR stosowane do wytwarzania białek fiizyjnych Mab425-cytokina
| Konstrukcja | Primer | Sekwencja DNA primera |
| 1 | 2 | 3 |
| CH2-1L-2 | cyl 5' primer* | 5 'AACAGCTATGACCATG 3' |
| cyl 3' primer | 5 'ACTTGAAGTAGGTGCCATTTTGGCTTTGGAGA | |
| cytokina 5' primer | 5 'ATGGCACCTACTTCAAGT 3' | |
| cytokina 3' primer | 5 'TATAGCGGCCGCGTCGACTCAAGTTAGTGTTGAGATG 3' | |
| CH-3IL-2 | cyl 5' primer ** | 5 'CAAGACAAAGCCGCGGGAG 3' |
| cyl 3' primer | 5 'ACTTGAAGTAGGTGCCATTTTACCCGGAGACAGGGAG 3' | |
| cytokina 5' primer | 5 'ATGGCACCTACTTCAAGT 3' | |
| cytokina 3' primer | 5 'CTTCTTCTAGACACTGCAG 3' | |
| CHI-IL-4 | cytokina 5' primer | 5' ATCACCATGGTAATGCACAAGTGCGATATCACC 3' |
| cytokina 3' primer*** | 5' CAGGAAACAGCTATGAC 3' |
178 793 ciąg dalszy tabeli 1
| 1 | 2 | 3 |
| CHI-IL-7 | cytokina 5' primer | 5' CTTACCTGCCATGGATTG 3' |
| cytokina 3' primer | 5' CAGAATTCGGATCCTTATCAGTG 3' | |
| CH2-IL-7 | cyl 5' primer* | 5' AACAGCTATGACCATG 3' |
| cyl 3' primer | 5' TTCGATATCACAATCCATTTTGGCTTTGGAGATGGT 3' | |
| cytokina 5' primer | 5' ATGGATTGTGATATCGAA 3' | |
| cytokina 3' primer | 5' TAATTCTAGATCAGTGTTCTTTAGTGC 3' |
Generowanie sekwencji kodujących białka fuzyjne CHI
Plazmid pUH5 zawiera sekwencje kodujące fragment ciężkiego łańcucha FAb425 do ekspresji w organizmach prokariotycznych z N-terminalną sekwencją liderową pelB pochodzącą z Erwinia carotovora (Lei i wsp., J.Bact. 169: 4379-4383. 1987), zapewniającą sekrecję białka. Fragment Hindin/Notl sklonowano do wektora Bluescript KS+. Sekwencje kodujące cytokiny IL-4 i IL-7 amplifikowano techniką reakcji łańcuchowej polimerazy, wprowadzając odpowiednio miejsca restrykcyjne 5' Ncol i 3' BamHI. Po tym procesie, sekwencje kodujące IL-2 i TNFa zawierają miejsca restrykcyjne 5' Ncol i 3' BamHI. Sekwencje dla wszystkich cytokin klonowano w formie fragmentów Ncol/BamHI za domeną CHI. W tych konstrukcjach sekwencje dla cytokin nie występują w zgodnej fazie odczytu, dlatego, pomiędzy miejsca restrykcyjne Sali i Ncol wprowadzono sekwencję adapterową 5' TCGACAAGAAAG 3'. W wyniku ekspresji uzyskanych konstrukcji, wytwarzany jest łańcuch ciężki i cytokina jako białko fuzyjne z jednym dodatkowym aminokwasem (Ala) wprowadzonym przez sekwencję adaptorową. Fragmenty Dralll/BamHI klonowano do wektora ekspresyjnego pHCMV zawierającego klon cDNA dla całkowitego ciężkiego łańcucha Mab 425. W tej konstrukcji, sekwencję liderową pelB zamieniono na sekwencję liderową cDNA ciężkiego łańcucha Mab 425.
Generowanie sekwencji kodujących białka fuzyjne CH2 i CH3
Amplifikuje się ASacII cyl DNA techniką reakcji łańcuchowej polimerazy, prowadząc dwie oddzielne reakcje z zastosowaniem primerów dla końca 3' sekwencji kodującej CH2, zachodzących w zgodnej fazie na końce 5'sekwencji kodującej odpowiednią cytokinę, takąjak IL-2 i IL-7. Klony cDNA dla IL-2 i IL-7 również amplifikowano techniką PCR. Do konstrukcji IL-2, do końca 3' wprowadzano unikalne miejsca Notl i Sali a do konstrukcji IL-7 wprowadzano unikalne miejsce Xbal, dla ułatwienia subklonowania do wektora SK+ i następnego klonowania do wektora ekspresyjnego pHCMV.
Fuzji produktów reakcji PCR dla IL-2 i IL-7 z całkowitym rejonem Δ SacII cy 1 dokonano przez rekombinację PCR. Uzyskany fragment BarnHI/Notl DSacII cyl CH2-IL-2 subklonowano do SK+ zawierającego sekwencję kodującą zmienny rejon łańcucha ciężkiego mAb425. Fragment SacII/XbaI DSacII cyl CH2-IL-7 subklonowano do wektora SK+ zawierającego sekwencję kodującą rejon zmienny łańcucha ciężkiego mAb425 i rejon DSacII cyl aż do miejsca SacII. W tej procedurze generowano całkowite geny fuzyjne kodujące mAb425-CH2- IL-2 i IL-7. Całkowity gen fuzyjny mAb425-CH3 IL-2 generowano w podobny sposób, z tym że DSacII cyl amplifikowano od unikalnego miejsca SacII jako koniec 5'. Fragment SacII/Pstl z mAB 425-CH2 IL-2 w wektorze SK+ zawierającym fuzję CH2-IL-2 wymienia się następnie na fragment SacII/Pstl zawierający fuzję CH3-IL-2. W celu ekspresji w komórkach eukariotycznych, całkowite geny fuzyjne mAb425 klonowano do wektora pHCMV.
178 793
Ekspresja immunokoniugatów
Konstrukcje wektorowe do ekspresji jedno wartościowego immunokoniugatu zawierającego jedynie domenę CHI lub immunokoniugatów dwuwartościowych zawierających domeny CH2 i CH2 plus CH3 można wprowadzać do komórek gospodarza technikami elektroporacji, z użyciem DEAE dekstranu, fosforanu wapniowego, lipofektyny lub przez fuzję protoplastów. Do tego celu można użyć każdy typ komórek gospodarza, pod warunkiem, że rekombinantowe sekwencje DNA kodujące immunokoniugaty i odpowiedni łańcuch lekki podlegają prawidłowej transkrypcji do mRNA w tym typie komórki. Jako komórki gospodarza można zwłaszcza użyć mysie komórki szpiczaka, które nie wytwarzają immunoglobuliny, przykładowo Sp2/0-AG14 (ATCC CRL 1581), P3X63Ag8. 653 (ATCC CRL 1580) albo komórki chomika, takie jak CHO-K1 (ATCC CCL 61), albo CHO /dhFr- (ATCC CRL 9096) lub BHK-21 (ATCC CCL 10). Do przejściowej ekspresji można użyć komórki COS-1 (ATCC CRL 1650) albo COS-7 (ATCC CRL 1651).
Przejściowa ekspresja immunokoniugatów
Wektor ekspresyjny pHCMV zawiera źródło replikacji z wirusa Simiana 40 (SV40). Linia komórkowa COS-7 pochodzi z linii komórek Simiana CV-1, którą transformowano defektywnym wirusem SV40. Tak więc, plazmidy zawierające źródło replikacji z SV40 będą ulegać amplifikacji i będą się charakteryzować ulepszonym wytwarzaniem immunokoniugatów. Po 72 godzinach hodowli zbierano supematanty i oznaczano w nich wiązanie EGF-receptor i stężenie cytokiny.
Trwała ekspresja immunokoniugatów
Wektory zawierające konstrukcje rekombinantowe do ekspresji immunokoniugatów wprowadzano do odpowiednich komórek gospodarza. Konstrukcje zawierające kod dla łańcucha ciężkiego i konstrukcje zawierające sekwencje dla łańcucha lekkiego można umieszczać w tym samym wektorze lub w wektorach odrębnych. W tym ostatnim przypadku, obydwa wektory mogą posiadać identyczny marker selekcyjny, taki jak gen oporności na neomycynę albo dhFr lub też dwa różne markery selekcyjne, co umożliwia zróżnicowanie obecności obydwu wektorów. Selekcję według markera dhFr można prowadzić jedynie w dhFr-ujemnych liniach komórkowych, takich jak CHO/dhFr-. Analizę klonów na ekspresję immunokoniugatów prowadzi się techniką ELISA swoistą dla receptora EGF. Wyselekcjonowane klony oczyszcza się metodą klonowania w ograniczonych rozcieńczeniach.
Konstruowanie prokariotycznych wektorów ekspresyjnych do ekspresji białka fuzyjnego Mab 425-CHl-cytokina
Sekwencje DNA kodujące łańcuch lekki Mab 425 i fragment Fd łańcucha ciężkiego wprowadzano do wielomiejscowego wektora klonującego pSWl. Sekwencja kodująca dojrzały łańcuch lekki i sekwencja kodująca dojrzały łańcuch ciężki są poprzedzone peptydem liderowym z bakteryjnego genu pelB. Sekwencja kodująca łańcuch ciężki zawiera miejsce 3' Ncol. DNA kodujące cytokiny modyfikuje się w reakcji PCR w celu wprowadzenia miejsc restrykcyjnych Ncol (koniec 53 i Notl (koniec 3^. Geny cytokin łączy się w zgodnej fazie odczytu, bezpośrednio z genami dla domeny CHI łańcucha ciężkiego. Primery użyte w tych doświadczeniach są podane w tabeli 2.
178 793
Tabela 2
Primery reakcji PCR stosowane do wytwarzania białek fuzyjnych FAb425-cytokina (ekspresja prokariotyczna)
| Konstrukcja | Primer | Sekwencja DNA primera |
| CH1-IL-2 | cytokiną 5' primer | 5' CTTACCTGCCATGGCACCT 3' |
| cytokiną 3' primer | 5' TGGTAGCGGCCGCTTATCAAGTTAGTGTTGA 3' | |
| CH1-IL-4 | cytokiną 5' primer | 5' ATCACCATGGTAATGCACAAGTGCGATATCACC 3' |
| cytokiną 3' primer | 5' GGTAGCGGCCGCTTATCAGCTCGAACACTT 3' | |
| CH-IL-7 | cytokiną 5' primer | 5' CTTACCTGCCATGGATTG 3' |
| cytokiną 3' primer | 5' TGGTAGCGGCCGCTTATCAGTGTTCTTTAGT 3' |
Wektory te umożliwiają wydajną ekspresję funkcjonalnych białek fuzyjnych Fab-cytokina w E. coli. Białka fuzyjne łańcucha lekkiego i łańcucha ciężkiego z cytokiną są zlokalizowane na dicistronicznym, informacyjnym RNA, pod kontrolą indukowanego promotora lac (Skerra i Pluckthun, Science, 242: 1038-104, 1988). Tak więc, można indukować ekspresję białka fiizyjnego-Fab zgodnie z wymaganiami dla warunków hodowli. Translacja obydwu białek z dicistronicznego mRNA sprzyja syntezie równych ilości białka fuzyjnego Fd-IL-2 i białka fuzyjnego zawierającego łańcuch lekki, co zwiększa szansę prawidłowego złożenia zapewniającego zachowanie cech funkcjonalnych wytwarzanych białek fuzyjnych Fab. Te dwa polipeptydy wydzielane są do periplazmy E. coli, gdzie zachodzi fałdowanie, tworzenie mostków dwusiarczkowych i składanie do funkcjonalnego białka fuzyjnego Fab425CHl. Przy dłuższej hodowli bakterii, białka wydzielane są do podłoża hodowli.
Ekspresja białka fuzyjnego Mab 425-CH1-IL-2 w E. coli i oczyszczanie
Szczepy E. coli nadające się do ekspresji białka transformuje się plazmidami ekspresyjnymi. Komórki hoduje się do fazy OD580 = 0.5 i indukuje przez dodanie IPTG (1 mM). Komórki hoduje się przez dobę, po czym zbiera się supematanty i komórki. Następnie supematant podaje się na antyidiotypową kolumnę anty-Mab 425. Kolumnę przemywa się buforowanym fosforanem 0,5 M roztworem NaCl, po czym eluuje się związane białka roztworem zawierającym 100 mM glicyny i 0,5 M NaCl (pH - 2,5). Eluat niezwłocznie zobojętnia się 2.5 M roztworem Tris (pH = 8). Frakcje zawierające Mab 425-CH1-IL-2 zbiera się, zatęża i dializuje wobec PBS.
Właściwości wiążące immunokoniugatów Mab 425
Właściwości wiążące immunokoniugatów Mab 425 oznaczano techniką ELISA swoistą wobec receptorów EGF. Metoda w zarysie polega na tym, że płytki do mikromianowania powleka się oczyszczonym receptorem EGF przez dobę w temperaturze 4°C, po czym przemywa się w celu usunięcia niezwiązanego białka. Następnie płytki indukuje się z zawierającymi białko fuzyjne supematantami albo z supematantami zawierającymi nieskoniugowane Mab lub fragmenty Fab bądź też białka w formie oczyszczonej. Po tej inkubacji płytki przemywa się i inkubuje z anty-ludzką IgG i IgM kozła (łańcuch ciężki i lekki) skoniugowaną z peroksydazą. Dodaje się substrat i oznacza się ilość związanego białka swoistego względem receptora EGF przez pomiar przy długości fali 450 nm (fig. 2). Stężenie cytokiny oznaczano w dostępnych w handlu zestawach ELISA swoistych względem każdej cytokiny, postępując według instrukcji podanej przez producenta (dane nie są przytoczone).
Proliferacja leukocytów Nowotworowo-swoiste komórki efektorowe
Leukocyty jednojądrzaste z krwi obwodowej i limfocyty przechodzące do nowotworu (TIL) izolowane od pacjentów z czerniakiem hoduje się wspólnie z napromieniowanymi (30 grejow) autologicznymi komórkami nowotworowymi w pożywce RPMI 1640 o składzie: 1% penicyliny/streptomycyny, 1% glutaminy, 20 mM Hepes, 50 mM β-merkaptoetanol,
178 793
10% płodowej surowicy bydlęcej, 20 jednostek/ml IL-2, 20 jednostek/ml IL-4). Komórki odpowiadające były słabo stymulowane autologicznymi komórkami nowotworowymi.
Oznaczanie proliferacji
Proliferację, w której pośredniczą cytokiny można oznaczać przez:
a) użycie odpowiednich wskaźnikowych linii komórkowych.
Dla IL-2 można użyć IL-2 zależną mysią linię komórkową CTLL-2 (ATCC TIB 241; fig. 3 A) albo inną IL-2-zależną linię komórkową.
b) oznaczanie ekspandowanych in vitro limfocytów przechodzących do nowotworu (fig. 3B).
c) oznaczanie świeżo wyizolowanych jednojądrzastych limfocytów krwi uprzednio traktowanych odczynnikiem PHA-M (Sigma). W tym przypadku doświadczenie wykonano z użyciem białek fuzyjnych Mab 425-IL-4 (fig. 4).
Świeżo wyizolowane leukocyty z krwi obwodowej od zdrowych dawców krwi lub od pacjentów z czerniakiem albo limfocyty TIL wyizolowane od pacjentów z czerniakiem namnażano in vitro (w sposób podany powyżej). W celu oznaczenia białek fuzyjnych, limfocyty hodowano w 96-dołkowych płytkach do mikromiareczkowania z płaskimi dnami dołków przy gęstości lxl05 komórek/dołek w końcowej objętości 200 μΐ. Komórki indukowano z supematantami zawierającymi białko fuzyjne lub z supematantami zawierającymi nieskoniugowane Mab lub supematantami zawierającymi nieskoniugowane cytokiny bądź te białka w postaci oczyszczonej. Po 72 godzinach komórki znakowano ilością 0.5 pCi 3H-tymidyny. Wprowadzoną aktywność oznaczano po dobowej inkubacji przez zliczanie w cieczowym liczniku scyntylacyjnym z beta-elektrodą. Wyniki wyrażono jako średnią liczbę impulsów na minutę (cpm).
Oznaczenie cytotoksyczności immunokoniugatów Mab 425-TNFa Oznaczenie cytotoksyczności, w której pośredniczy TNFa
Z piśmiennictwa wiadomo, że TNFa wykazuje bezpośrednią cytotoksyczność w stosunku do pewnych komórek, w tym do licznych komórek nowotworowych. Bezpośredni potencjał cytotoksyczny TNFa można oznaczyć na mysich fibroblastach L929 (ATCC CCL 1) albo WEHI 164 (ATCC CRL 1751) lub na innych wrażliwych na TNFa liniach komórkowych (Flick i Gifford, J. Immunol. Meth. 68: 167, 1984). Cytotoksyczny potencjał Mab 425CHl-TNFa Mab 425 CH2-TNFa oznaczony na linii komórkowej WEHI 164 jako linii wskaźnikowej jest przedstawiony na fig. 4.
Oznaczanie cytotoksyczności indukowanej przez TNFa
Jako komórki docelowe do cytolizy przez allogeniczne limfocyty przenikające do nowotworu albo przez świeżo wyizolowane ludzkie limfocyty krwi obwodowej pobranej od pacjentów z czerniakiem lub od zdrowych dawców, można użyć EGFR-dodatnie linie komórkowe, takie jak wysoce inwazyjną i samorzutnie przerzutową EGFR-dodatnią linię komórkową C8161 (Welch i wsp., Int. J. Cancer 47: 227, 1991 i cytowane tam piśmiennictwo). Warunki hodowli komórek nowotworowych i limfocytów TIL zostały opisane przez Shimizu i wsp. (Cancer Res. 51: 6153, 1991).
Badania cytotoksyczności in vitro prowadzono stosując znakowane 51Cr, docelowe komórtki nowotworowe. Znakowanie komórek docelowych chromem 5'Cr (100 pCi/107 komórek) prowadzono w czasie godziny, następnie prowadzono trzy etapy przemywania usuwając nadmiar 5'Cr. Ilość 2 χ 103 komórek docelowych /dołek inkubowano z komórkami efektorowymi w 96 dołkowych płytkach do mikromianowania, w obecności supematantów zawierających białko fuzyjne, supematantów zawierających nieskoniugowane przeciwciała monoklonalne, supematantów zawierających nieskoniugowane cytokiny (kontrole) lub tych białek w formie oczyszczonej. Zarówno supematanty jak i białka oczyszczone były seryjnie rozcieńczane w pożywce hodowlanej i oznaczane w trzech doświadczeniach. Płytki inkubowano przez 4 godziny w temperaturze 37°C w atmosferze zawierającej 10% CO2. Następnie komórki usuwano przez odwirowanie i oznaczano radioaktywność w supematantach w liczniku promieniowania γ. Procentowe, specyficzne uwolnienie 5'Cr wyliczano według wzoru:
178 793 η . . . , _ η (uwalnianie doświadczalne - uwalnianie samorzutne)
Procentowe swoiste uwalnianie 51Cr = 100x---------r (uwalnianie maksymalne - uwalnianie samorzutne)
Zastosowanie lecznicze immunokoniugatów
Immunokoniugaty według wynalazku mogąbyć stosowane do leczenia ludzi. Tak więc, celem wynalazku było opracowanie środka farmaceutycznego zawierającego jako składnik aktywny co najmniej jedno białko fuzyjne zdefiniowane powyżej i w zastrzeżeniach oraz jeden lub więcej niż jeden dopuszczalny farmaceutycznie nośnik, środek pomocniczy lub rozcieńczalnik.
W zasadzie, immunokoniugaty według wynalazku będą podawane dożylnie lub inną drogą parenteralną. Na ogół, zakres dawkowania tych immunokoniugatów będzie na tyle szeroki, aby wywołać żądane supresyjne działanie na nowotwór i lizę nowotworu. Dawkowanie będzie zależeć od wieku, stanu chorego, płci i stopnia zaawansowania choroby u pacjenta. Może się ono wahać od 0.1 mg/kg do 200 mg/kg, korzystnie od 0.1 mg/kg do 100 mg/kg/dawkę. Lek będzie mógł być podawany raz lub kilka razy dziennie przez jeden lub wiele dni.
Preparaty do podawania parenteralnego stanowią wodne lub niewodne roztwory, zawiesiny lub emulsje. Przykładami rozpuszczalników niewodnych są: glikol propylenowy, glikol polietylenowy, oleje roślinne, na przykład oleje z oliwek a także injekcyjne estry organiczne, między innymi oleinian etylowy i inne rozpuszczalniki znane w technologii farmaceutycznej, odpowiednie do tych celów. Immunokoniugaty według wynalazku mogą być stosowane w kompozycji zawierającej fizjologicznie dopuszczalny nośnik. Przykładami takich nośników są: sól fizjologiczna, PBS, płyn Ringera lub płyn Ringera z dodatkiem mleczanu. W środkach farmaceutycznych według wynalazku mogą również występować środki konserwujące i inne dodatki, takie jak antybiotyki, środki antyutleniające i środki chelatujące.
Środki farmaceutyczne według wynalazku są przeznaczone do leczenia wszystkich rodzajów nowotworów, w tym czerniaków, glejaków i raków, jak również nowotworów krwi i nowotworowych guzów litych.
178 793
TNFa (ng/mD
178 793 ccpm ccpm
450000
400000
350000
300000
250000
200000
150000
100000
50000 0
450000
400000
350000
300000
250000
200000
150000
100000
50000 0
2 3 β 13 25 60 100
Fig. 5
178 793
200000
150000 ccpm ccpm
100000
50000
200000
150000
100000
50000
KO 3 6 13 25 50 100 2 20
KO 1/128 1/64 1/32 1/16 1/8 1/4 1/2
Fig. 4
Fig. 3
178 793
Fig. 2
178 793
(a)
Fig. 1
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 4,00 zł.
Claims (14)
- Zastrzeżenia patentowe1. Białko fuzyjne, zawierające mysie lub humanizowane przeciwciało Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej z epitopem antygenowym receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i biologicznie aktywną cytokinę wybraną z grupy TNFa, IL-2, IL-4i, IL-7, która jest połączona przez fuzję do wspomnianego przeciwciała .lub jego fragmentu i wykazuje właściwość cytotoksyczną wywoływania swoiście lizy komórki nowotworowej.
- 2. Białko fuzyjne według zastrz. 1, znamienne tym, że jako przeciwciało zawiera fragment Fab lub fragment F^b^ złożony w zasadzie ze zmiennego regionu łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domeny CHI rejonu stałego i odpowiedniego łańcucha lekkiego (koniugat przeciwciało-CH 1).
- 3. Białko fuzyjne według zastrz. 1, znamienne tym, że jako przeciwciało zawiera fragment przeciwciała składający się zasadniczo z rejonu zmiennego łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domen CHI i CH2 rejonu stałego i odpowiedniego łańcucha lekkiego (koniugat przeciwciało-CH2).
- 4. Białko fuzyjne według zastrz. 1, znamienne tym, że jako przeciwciało zawiera zasadniczo rejon zmienny łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domeny CHI, CH2 i CH3 rejonu stałego i odpowiedni łańcuch lekki (koniugat przeciwciało-CH3).
- 5. Białko fuzyjne wybrane z grupy: Mab 425-CHl-TNFa, Mab-425-CH2-TNFa, Mab 425-CH3-TNFa, Mab 425-CH1-IL-2, Mab 425-CH2-IL-2, i Mab 425-CH3-IL-2.
- 6. Sposób wytwarzania białka fuzyjnego zawierającego mysie lub humanizowane przeciwciało Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej z epitopem antygenowym receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i biologicznie aktywną cytokinę wybraną z grupy TNF^ IL-2, IL-4i, IL-7, która jest połączona przez fuzję do wspomnianego przeciwciała lub jego fragmentu i wykazuje właściwość cytotoksyczną wywoływania swoiście lizy komórki nowotworowej, znamienny tym, że dokonuje się fuzji sekwencji DNA kodujących przeciwciało Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej zawierającej epitop antygenowy receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) z sekwencją DNA kodującą biologicznie aktywną cytokinę wybraną z grupy TNFa, IL-2, IL-4 i, IL-7, umieszcza się otrzymany konstrukt w wektorze ekspresyjnym, który jest transformowany do organizmu gospodarza, hoduje się komórkę gospodarza w roztworze pożywki i przeprowadza się ekspresję białka fuzyjnego.
- 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że dokonuje się fuzji sekwencji DNA kodujących przeciwciało lub fragmenty przeciwciała z sekwencjami DNA kodującymi biologicznie aktywną cytokinę, na jednoniciowym DNA, stosując oligonukleotyd komplementarny do żądanej fuzyjnej sekwencji DNA.
- 8. Sposób według zastrz. 6 albo 7, znamienny tym, że dokonuje się ekspresji białka fuzyjnego przeciwciało-CH 1 wE. coli jako komórce gospodarza.
- 9. Sposób według zastrz. 6 albo 7, znamienny tym, że dokonuje się ekspresji białek fuzyjnych: przeciwciało-CH2 albo przeciwciało-CH3 w gospodarzu eukariotycznym.
- 10. Środek farmaceutyczny zawierający białko fuzyjne obejmujące przeciwciało i cytokinę oraz fizjologicznie dopuszczalne nośniki, znamienny tym, że zawiera co najmniej jedno białko fuzyjne zawierające mysie lub humanizowane przeciwciało Mab 425 lub jego fragment skierowany przeciw komórce nowotworowej zawierającej epitop antygenowy receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) i biologicznie aktywną cytokinę wybraną z grupy TNF^ IL-2, IL4 i, IL-7, która jest połączona przez fuzję do wspomnianego przeciwciała lub jego178 793 fragmentu i wykazuje właściwość cyto toksyczną wywoływania swoiście lizy komórki nowotworowej oraz dopuszczalny fizjologicznie nośnik.
- 11. Środek farmaceutyczny według zastrz. 10, znamienny tym, że jako przeciwciało zawiera fragment Fab lub fragment F(ab')2 złożony w zasadzie ze zmiennego regionu łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domeny CHI rejonu stałego i odpowiedniego łańcucha lekkiego (koniugat przeciwciało-CHl).
- 12. Środek farmaceutyczny według zastrz. 11, znamienny tym, że jako przeciwciało zawiera fragment przeciwciała składający się w zasadzie z rejonu zmiennego łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domen CHI i CH2 rejonu stałego i odpowiedniego łańcucha lekkiego (koniugat przeciwciało-CH2).
- 13. Środek farmaceutyczny według zastrz. 12, znamienny tym, że jako przeciwciało zawiera zasadniczo rejon zmienny łańcucha ciężkiego tego przeciwciała, domeny CHI, CH2 i CH3 rejonu stałego i odpowiedni łańcuch lekki (koniugat przeciwciało-CH3).
- 14. Środek farmaceutyczny według zastrz. 13, znamienny tym, że zawiera białko fuzyjne wybrane z grupy: Mab 425-CHl-TNFa, Mab 425-CH2-TNFa, Mab 425-CH3-TNFa, Mab 425-CH1-IL-2, Mab 425-CH2-IL-2 i Mab 425-CH3-IL-2.* * *
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93120865 | 1993-12-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL306474A1 PL306474A1 (en) | 1995-06-26 |
| PL178793B1 true PL178793B1 (pl) | 2000-06-30 |
Family
ID=8213530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL94306474A PL178793B1 (pl) | 1993-12-24 | 1994-12-22 | Białko fuzyjne, sposób wytwarzania białka fuzyjnego i środek farmaceutyczny |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6979726B1 (pl) |
| EP (1) | EP0659439B1 (pl) |
| JP (2) | JPH07223968A (pl) |
| KR (1) | KR950016781A (pl) |
| AT (1) | ATE207366T1 (pl) |
| AU (1) | AU688817B2 (pl) |
| CA (1) | CA2138928C (pl) |
| CZ (1) | CZ289099B6 (pl) |
| DE (1) | DE69428764T2 (pl) |
| DK (1) | DK0659439T3 (pl) |
| ES (1) | ES2166368T3 (pl) |
| HU (1) | HU219680B (pl) |
| NO (1) | NO315903B1 (pl) |
| PL (1) | PL178793B1 (pl) |
| PT (1) | PT659439E (pl) |
| RU (1) | RU2129018C1 (pl) |
| SK (1) | SK283494B6 (pl) |
| UA (1) | UA41888C2 (pl) |
| ZA (1) | ZA9410282B (pl) |
Families Citing this family (176)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CU22545A1 (es) * | 1994-11-18 | 1999-03-31 | Centro Inmunologia Molecular | Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico |
| WO1998011241A1 (en) * | 1996-09-16 | 1998-03-19 | Merck Patent Gmbh | Oligocistronic expression system for the production of heteromeric proteins |
| WO2001000245A2 (en) | 1999-06-25 | 2001-01-04 | Genentech, Inc. | HUMANIZED ANTI-ErbB2 ANTIBODIES AND TREATMENT WITH ANTI-ErbB2 ANTIBODIES |
| DK1585966T3 (da) | 2002-07-15 | 2012-02-20 | Hoffmann La Roche | Behandling af cancer med anti-ErbB2-antistoffet rhuMab 2C4 |
| KR101438983B1 (ko) | 2003-11-06 | 2014-09-05 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물 |
| WO2005063820A2 (en) | 2003-12-30 | 2005-07-14 | Merck Patent Gmbh | Il-7 fusion proteins |
| WO2005070020A2 (en) | 2004-01-23 | 2005-08-04 | The Regents Of The University Of Colorado | Gefitinib sensitivity-related gene expression and products and methods related thereto |
| US20060034840A1 (en) | 2004-04-08 | 2006-02-16 | Agus David B | ErbB antagonists for pain therapy |
| WO2005117553A2 (en) | 2004-05-27 | 2005-12-15 | The Regents Of The University Of Colorado | Methods for prediction of clinical outcome to epidermal growth factor receptor inhibitors by cancer patients |
| EP1753463A2 (en) | 2004-06-01 | 2007-02-21 | Genentech, Inc. | Antibody drug conjugates and methods |
| RU2412947C2 (ru) | 2004-09-23 | 2011-02-27 | Дженентек, Инк. | Антитела, сконструированные на основе цистеинов, и их конъюгаты |
| JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
| UA94899C2 (ru) | 2005-01-21 | 2011-06-25 | Дженентек, Инк. | Фиксированное дозирование антител к her |
| RS53128B (en) | 2005-02-23 | 2014-06-30 | Genentech Inc. | Extending the time of disease progression or survival in patients with ovarian cancers using PERTUZUMAB |
| AR053272A1 (es) | 2005-05-11 | 2007-04-25 | Hoffmann La Roche | Determinacion de responsivos a la quimioterapia |
| WO2007076933A1 (en) | 2005-12-30 | 2007-07-12 | Merck Patent Gmbh | Interleukin-12p40 variants with improved stability |
| ES2426468T3 (es) | 2005-12-30 | 2013-10-23 | Merck Patent Gmbh | Anticuerpos anti-CD19 con inmunogenicidad reducida |
| CA2655361C (en) * | 2006-06-16 | 2014-10-07 | Kumamoto University | Sparc-derived tumor rejection antigenic peptides and medicaments comprising the same |
| EP2061906B1 (en) | 2006-09-12 | 2011-08-31 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for the diagnosis and treatment of lung cancer using pdgfra, kit or kdr gene as genetic marker |
| SI2132573T1 (sl) | 2007-03-02 | 2014-07-31 | Genentech, Inc. | Napovedovanje odziva na inhibitor dimerizacije HER na osnovi nizke ekspresije HER3 |
| DK2171090T3 (da) | 2007-06-08 | 2013-06-10 | Genentech Inc | Genekspressionsmarkører for tumorresistens over for HER2-inhibitorbehandling |
| TWI472339B (zh) | 2008-01-30 | 2015-02-11 | Genentech Inc | 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物 |
| SG10201402742YA (en) | 2009-03-20 | 2014-08-28 | Genentech Inc | Bispecific anti-her antibodies |
| US9345661B2 (en) | 2009-07-31 | 2016-05-24 | Genentech, Inc. | Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof |
| EP2467165B1 (en) * | 2009-08-17 | 2015-01-07 | Roche Glycart AG | Targeted immunoconjugates |
| WO2011069104A2 (en) | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Genentech, Inc. | Multispecific antibodies, antibody analogs, compositions, and methods |
| WO2011086053A1 (en) | 2010-01-12 | 2011-07-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tricyclic heterocyclic compounds, compositions and methods of use thereof |
| MY160556A (en) | 2010-02-18 | 2017-03-15 | Genentech Inc | Neuregulin antagonists and use thereof in treating cancer |
| US8617557B2 (en) | 2010-03-12 | 2013-12-31 | The Regents Of The University Of California | Antibody fusion with IL-12 proteins with disrupted heparin-binding activity |
| RU2012141536A (ru) | 2010-03-17 | 2014-04-27 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Имидазопиридины, композиции и способы применения |
| CN103038643A (zh) | 2010-04-16 | 2013-04-10 | 基因泰克公司 | 作为pi3k/akt激酶途径抑制剂效能的预测性生物标记的foxo3a |
| WO2011146568A1 (en) | 2010-05-19 | 2011-11-24 | Genentech, Inc. | Predicting response to a her inhibitor |
| JP2013537966A (ja) | 2010-08-31 | 2013-10-07 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | バイオマーカー及び治療の方法 |
| WO2012035039A1 (en) | 2010-09-15 | 2012-03-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Azabenzothiazole compounds, compositions and methods of use |
| UY33679A (es) | 2010-10-22 | 2012-03-30 | Esbatech | Anticuerpos estables y solubles |
| EP2632490A4 (en) | 2010-10-29 | 2014-10-22 | Immunogen Inc | NOVEL MOLECULES BINDING TO THE EGF RECEPTOR AND IMMUNOCONJUGATES THEREOF |
| EA201390575A1 (ru) | 2010-10-29 | 2014-01-30 | Иммьюноджен, Инк. | Неантагонистические egfr-связывающие молекулы и их иммуноконъюгаты |
| WO2012065161A2 (en) | 2010-11-12 | 2012-05-18 | Scott & White Healthcare | Antibodies to tumor endothelial marker 8 |
| RU2013126041A (ru) | 2010-11-19 | 2014-12-27 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Пиразолопиридины и пиразолопиридины и их применение в качестве ингибиторов tyk2 |
| WO2012085176A1 (en) | 2010-12-23 | 2012-06-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tricyclic pyrazinone compounds, compositions and methods of use thereof as janus kinase inhibitors |
| WO2013007765A1 (en) | 2011-07-13 | 2013-01-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fused tricyclic compounds for use as inhibitors of janus kinases |
| WO2013007768A1 (en) | 2011-07-13 | 2013-01-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tricyclic heterocyclic compounds, compositions and methods of use thereof as jak inhibitors |
| ES2573336T3 (es) | 2011-08-12 | 2016-06-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Compuestos de indazol, composiciones y métodos de uso |
| BR112014003431A2 (pt) | 2011-08-17 | 2017-06-13 | Genentech Inc | anticorpo, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, agente farmacêutico, uso do anticorpo, método de tratamento de um indivíduo que tem câncer e método de aumento de tempo para recorrência de tumor |
| CN103827115A (zh) | 2011-09-20 | 2014-05-28 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 咪唑并吡啶化合物、组合物和使用方法 |
| RU2014121820A (ru) | 2011-11-21 | 2015-12-27 | Иммьюноджен, Инк. | Способ лечения опухолей, устойчивых к анти-egfr терапиям, с помощью конъюгата антитела egfr с цитотоксическим средством |
| KR20140098834A (ko) | 2011-11-30 | 2014-08-08 | 제넨테크, 인크. | 암에서의 erbb3 돌연변이 |
| WO2013148315A1 (en) | 2012-03-27 | 2013-10-03 | Genentech, Inc. | Diagnosis and treatments relating to her3 inhibitors |
| WO2014128235A1 (en) | 2013-02-22 | 2014-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods of treating cancer and preventing drug resistance |
| BR112015021423A2 (pt) | 2013-03-06 | 2017-07-18 | Genentech Inc | métodos de tratamento de câncer, de células de câncer e de câncer resistente a antagonista de egfr, métodos de aumento da sensibilidade e da eficácia de tratamento de câncer e métodos de atraso, de tratamento de indivíduos com câncer e de extensão |
| KR20150130491A (ko) | 2013-03-13 | 2015-11-23 | 제넨테크, 인크. | 피라졸로 화합물 및 그것의 용도 |
| CA2905070A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance |
| AU2014239903A1 (en) | 2013-03-14 | 2015-09-17 | Genentech, Inc. | Combinations of a MEK inhibitor compound with an HER3/EGFR inhibitor compound and methods of use |
| PT2968588T (pt) * | 2013-03-15 | 2019-05-08 | Abbvie Inc | Formulações de conjugado de fármaco-anticorpo anti-egfr |
| CN105339001A (zh) | 2013-03-15 | 2016-02-17 | 基因泰克公司 | 治疗癌症和预防癌症耐药性的方法 |
| CN104250302B (zh) * | 2013-06-26 | 2017-11-14 | 上海君实生物医药科技股份有限公司 | 抗pd‑1抗体及其应用 |
| JP6336598B2 (ja) | 2013-09-05 | 2018-06-06 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 抗増殖性化合物 |
| AR097894A1 (es) | 2013-10-03 | 2016-04-20 | Hoffmann La Roche | Inhibidores terapéuticos de cdk8 o uso de los mismos |
| TW201940514A (zh) | 2013-10-18 | 2019-10-16 | 美商建南德克公司 | 抗-rspo抗體及使用方法 |
| MX2016007965A (es) | 2013-12-17 | 2016-10-28 | Genentech Inc | Terapia de combinacion que comprende agonistas de union a ox40 y antagonistas de union al eje pd-1. |
| LT3083686T (lt) | 2013-12-17 | 2020-01-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Vėžinių ligų gydymo būdai naudojant pd-1 ašies rišimosi antagonistus ir taksanus |
| CN107002119A (zh) | 2014-03-24 | 2017-08-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 使用c‑met拮抗剂的癌症治疗及前者与hgf表达的关联 |
| RU2016142476A (ru) | 2014-03-31 | 2018-05-07 | Дженентек, Инк. | Комбинированная терапия, включающая антиангиогенезные агенты и агонисты, связывающие ох40 |
| EP3632934A1 (en) | 2014-03-31 | 2020-04-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-ox40 antibodies and methods of use |
| KR102170533B1 (ko) * | 2014-04-03 | 2020-10-27 | 셀렉티스 | 암 면역요법을 위한 cd33 특이적 키메라 항원 수용체들 |
| WO2016036873A1 (en) | 2014-09-05 | 2016-03-10 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and uses thereof |
| CN107073125A (zh) | 2014-09-19 | 2017-08-18 | 基因泰克公司 | Cbp/ep300和bet抑制剂用于治疗癌症的用途 |
| EP3204379B1 (en) | 2014-10-10 | 2019-03-06 | Genentech, Inc. | Pyrrolidine amide compounds as histone demethylase inhibitors |
| US20160161485A1 (en) | 2014-11-03 | 2016-06-09 | Genentech, Inc. | Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof |
| EP3215637B1 (en) | 2014-11-03 | 2019-07-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods and biomarkers for predicting efficacy and valuation of an ox40 agonist treatment |
| AU2015343494A1 (en) | 2014-11-06 | 2017-04-27 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising OX40 binding agonists and TIGIT inhibitors |
| WO2016077375A1 (en) | 2014-11-10 | 2016-05-19 | Genentech, Inc. | Bromodomain inhibitors and uses thereof |
| MA40940A (fr) | 2014-11-10 | 2017-09-19 | Constellation Pharmaceuticals Inc | Pyrrolopyridines substituées utilisées en tant qu'inhibiteurs de bromodomaines |
| MA40943A (fr) | 2014-11-10 | 2017-09-19 | Constellation Pharmaceuticals Inc | Pyrrolopyridines substituées utilisées en tant qu'inhibiteurs de bromodomaines |
| RU2017121096A (ru) | 2014-11-17 | 2018-12-19 | Дженентек, Инк. | Комбинированная терапия, включающая применение ох40-связывающих агонистов и антагонистов связывания оси pd-1 |
| JP6771464B2 (ja) | 2014-11-27 | 2020-10-21 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | Ｃｂｐおよび／またはｅｐ３００インヒビターとしての、４，５，６，７−テトラヒドロ−１ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−アミン化合物 |
| US10398774B2 (en) | 2014-12-09 | 2019-09-03 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Human monoclonal antibodies against AXL |
| RU2710735C2 (ru) | 2014-12-23 | 2020-01-10 | Дженентек, Инк. | Композиции и способы лечения и диагностики резистентного к химиотерапии рака |
| CN107208138A (zh) | 2014-12-30 | 2017-09-26 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症预后和治疗的方法和组合物 |
| CN107406429B (zh) | 2015-01-09 | 2021-07-06 | 基因泰克公司 | 哒嗪酮衍生物及其在治疗癌症中的用途 |
| WO2016112284A1 (en) | 2015-01-09 | 2016-07-14 | Genentech, Inc. | (piperidin-3-yl)(naphthalen-2-yl)methanone derivatives and related compounds as inhibitors of the histone demethylase kdm2b for the treatment of cancer |
| JP6889661B2 (ja) | 2015-01-09 | 2021-06-18 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | ４，５−ジヒドロイミダゾール誘導体およびヒストンジメチラーゼ（ｋｄｍ２ｂ）インヒビターとしてのその使用 |
| JP2018501322A (ja) | 2015-01-12 | 2018-01-18 | チルドレンズ メディカル センター コーポレーション | トール様受容体４アンタゴニストの炎症促進性およびアジュバント機能 |
| CN107531692B (zh) | 2015-01-29 | 2020-12-25 | 基因泰克公司 | 治疗化合物及其用途 |
| EP3250552B1 (en) | 2015-01-30 | 2019-03-27 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and uses thereof |
| MX361695B (es) | 2015-02-18 | 2018-12-13 | Hoffmann La Roche | Inmunoconjugados para la inducción específica de citotoxicidad de células t contra una célula blanco. |
| MA41598A (fr) | 2015-02-25 | 2018-01-02 | Constellation Pharmaceuticals Inc | Composés thérapeutiques de pyridazine et leurs utilisations |
| WO2016135041A1 (en) | 2015-02-26 | 2016-09-01 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis |
| CA2981183A1 (en) | 2015-04-07 | 2016-10-13 | Greg Lazar | Antigen binding complex having agonistic activity and methods of use |
| CN107667119A (zh) | 2015-05-12 | 2018-02-06 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的治疗和诊断方法 |
| EP4335931A3 (en) | 2015-05-29 | 2024-06-19 | F. Hoffmann-La Roche AG | Therapeutic and diagnostic methods for cancer |
| EP3303399A1 (en) | 2015-06-08 | 2018-04-11 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies |
| WO2016200835A1 (en) | 2015-06-08 | 2016-12-15 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists |
| WO2016205320A1 (en) | 2015-06-17 | 2016-12-22 | Genentech, Inc. | Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes |
| DK3341376T3 (da) | 2015-08-26 | 2021-03-29 | Fundacion Del Sector Publico Estatal Centro Nac De Investigaciones Oncologicas Carlos Iii F S P Cnio | Kondenserede tricykliske forbindelser som proteinkinase-inhibitorer |
| CN113956358A (zh) | 2015-09-25 | 2022-01-21 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗tigit抗体和使用方法 |
| EP3978500B1 (en) | 2015-12-16 | 2023-11-22 | Genentech, Inc. | Process for the preparation of tricyclic pi3k inhibitor compounds |
| KR20180097615A (ko) | 2016-01-08 | 2018-08-31 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | Pd-1 축 결합 길항물질 및 항-cea/항-cd3 이중특이성 항체를 사용하는 cea-양성 암의 치료 방법 |
| KR102500659B1 (ko) | 2016-02-29 | 2023-02-16 | 제넨테크, 인크. | 암에 대한 치료 및 진단 방법 |
| EP3865511A1 (en) | 2016-04-14 | 2021-08-18 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-rspo3 antibodies and methods of use |
| MX2018012471A (es) | 2016-04-15 | 2019-02-21 | Genentech Inc | Metodos de diagnostico y terapeuticos para el cancer. |
| KR20190003958A (ko) | 2016-04-15 | 2019-01-10 | 제넨테크, 인크. | 암의 치료 및 모니터링 방법 |
| AU2017248766A1 (en) | 2016-04-15 | 2018-11-01 | Genentech, Inc. | Methods for monitoring and treating cancer |
| EP3454863A1 (en) | 2016-05-10 | 2019-03-20 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Combinations therapies for the treatment of cancer |
| WO2017205536A2 (en) | 2016-05-24 | 2017-11-30 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and uses thereof |
| JP7014736B2 (ja) | 2016-05-24 | 2022-02-01 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | がんの処置のためのピラゾロピリジン誘導体 |
| CN109312407A (zh) | 2016-06-08 | 2019-02-05 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的诊断和治疗方法 |
| JP2019530434A (ja) | 2016-08-05 | 2019-10-24 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | アゴニスト活性を有する多価及び多重エピトープ抗体ならびに使用方法 |
| WO2018029124A1 (en) | 2016-08-08 | 2018-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Therapeutic and diagnostic methods for cancer |
| CN110418851A (zh) | 2016-10-06 | 2019-11-05 | 基因泰克公司 | 癌症的治疗和诊断方法 |
| EP3532091A2 (en) | 2016-10-29 | 2019-09-04 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Anti-mic antibidies and methods of use |
| ES2953595T3 (es) | 2017-03-01 | 2023-11-14 | Hoffmann La Roche | Procedimientos diagnósticos y terapéuticos para el cáncer |
| CN110582293A (zh) * | 2017-03-31 | 2019-12-17 | 小利兰·斯坦福大学托管委员会 | 合成因子组合物及使用方法 |
| CN110505883A (zh) | 2017-04-13 | 2019-11-26 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 供治疗癌症的方法中使用的白介素-2免疫缀合物,cd40激动剂,和任选地pd-1轴结合拮抗剂 |
| MX2020000604A (es) | 2017-07-21 | 2020-09-10 | Genentech Inc | Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer. |
| KR102713874B1 (ko) | 2017-08-11 | 2024-10-10 | 제넨테크, 인크. | 항-cd8 항체 및 이의 용도 |
| EP3679159A1 (en) | 2017-09-08 | 2020-07-15 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
| US11369608B2 (en) | 2017-10-27 | 2022-06-28 | University Of Virginia Patent Foundation | Compounds and methods for regulating, limiting, or inhibiting AVIL expression |
| CN111213059B (zh) | 2017-11-06 | 2024-01-09 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的诊断和治疗方法 |
| CN111836831A (zh) | 2018-02-26 | 2020-10-27 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于抗tigit拮抗剂抗体和抗pd-l1拮抗剂抗体治疗的给药 |
| EP3797173A2 (en) | 2018-05-21 | 2021-03-31 | Nanostring Technologies, Inc. | Molecular gene signatures and methods of using same |
| AU2019288728A1 (en) | 2018-06-23 | 2021-01-14 | Genentech, Inc. | Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor |
| CN112839644A (zh) | 2018-07-18 | 2021-05-25 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用pd-1轴结合拮抗剂、抗代谢物和铂剂治疗肺癌的方法 |
| TW202024023A (zh) | 2018-09-03 | 2020-07-01 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 治療性化合物及其使用方法 |
| JP2022501332A (ja) | 2018-09-19 | 2022-01-06 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 膀胱がんの治療方法および診断方法 |
| EP3857230B1 (en) | 2018-09-21 | 2023-06-07 | F. Hoffmann-La Roche AG | Diagnostic methods for triple-negative breast cancer |
| CN113196061A (zh) | 2018-10-18 | 2021-07-30 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 肉瘤样肾癌的诊断和治疗方法 |
| US20220098262A1 (en) * | 2018-12-13 | 2022-03-31 | Bang DING | ANTIBODY-TUMOR NECROSIS FACTOR alpha FUSION PROTEIN AND ITS PREPARATION AND APPLICATIONS |
| JP2022519649A (ja) | 2019-02-08 | 2022-03-24 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | がんの診断および治療方法 |
| WO2020172712A1 (en) | 2019-02-27 | 2020-09-03 | Epiaxis Therapeutics Pty Ltd | Methods and agents for assessing t-cell function and predicting response to therapy |
| CA3130695A1 (en) | 2019-02-27 | 2020-09-03 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-cd20 or anti-cd38 antibodies |
| WO2020223233A1 (en) | 2019-04-30 | 2020-11-05 | Genentech, Inc. | Prognostic and therapeutic methods for colorectal cancer |
| TW202108616A (zh) | 2019-05-03 | 2021-03-01 | 美商建南德克公司 | 用抗pd-l1抗體治療癌症之方法 |
| CN112300279A (zh) | 2019-07-26 | 2021-02-02 | 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 | 针对抗cd73抗体和变体的方法和组合物 |
| TW202124439A (zh) | 2019-09-04 | 2021-07-01 | 美商建南德克公司 | Ｃｄ８結合劑及其用途 |
| EP4048693A1 (en) | 2019-09-27 | 2022-08-31 | F. Hoffmann-La Roche AG | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
| CN114728936A (zh) | 2019-10-29 | 2022-07-08 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于治疗癌症的双功能化合物 |
| MX2022005400A (es) | 2019-11-06 | 2022-05-24 | Genentech Inc | Metodos de diagnostico y terapeuticos para el tratamiento de canceres hematologicos. |
| EP4058435A1 (en) | 2019-11-13 | 2022-09-21 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and methods of use |
| TW202128767A (zh) | 2019-12-13 | 2021-08-01 | 美商建南德克公司 | 抗ly6g6d抗體及其使用方法 |
| EP4076667A1 (en) | 2019-12-20 | 2022-10-26 | Erasca, Inc. | Tricyclic pyridones and pyrimidones |
| WO2021194481A1 (en) | 2020-03-24 | 2021-09-30 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
| WO2021177980A1 (en) | 2020-03-06 | 2021-09-10 | Genentech, Inc. | Combination therapy for cancer comprising pd-1 axis binding antagonist and il6 antagonist |
| WO2021202959A1 (en) | 2020-04-03 | 2021-10-07 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for cancer |
| JP2023523450A (ja) | 2020-04-28 | 2023-06-05 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 非小細胞肺がん免疫療法のための方法及び組成物 |
| EP3915576A1 (en) | 2020-05-28 | 2021-12-01 | Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron | Chimeric antigen receptors specific for p95her2 and uses thereof |
| MX2022015877A (es) | 2020-06-16 | 2023-01-24 | Genentech Inc | Metodos y composiciones para tratar cancer de mama triple negativo. |
| EP4168118A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-04-26 | Genentech, Inc. | Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists |
| CN115997123A (zh) | 2020-06-30 | 2023-04-21 | 国家医疗保健研究所 | 用于预测实体癌患者在术前辅助治疗后复发和/或死亡风险的方法 |
| JP2023531290A (ja) | 2020-06-30 | 2023-07-21 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 術前補助療法及び根治手術後の固形がんを患っている患者の再発及び／又は死亡のリスクを予測するための方法 |
| EP3939999A1 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-19 | Fundación del Sector Público Estatal Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas Carlos III (F.S.P. CNIO) | Interleukin 11 receptor alpha subunit (il11ra) neutralizing antibodies and uses thereof |
| US11787775B2 (en) | 2020-07-24 | 2023-10-17 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and methods of use |
| WO2022031749A1 (en) | 2020-08-03 | 2022-02-10 | Genentech, Inc. | Diagnostic and therapeutic methods for lymphoma |
| WO2022036146A1 (en) | 2020-08-12 | 2022-02-17 | Genentech, Inc. | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
| AU2021358031A1 (en) | 2020-10-05 | 2023-05-04 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
| US20230107642A1 (en) | 2020-12-18 | 2023-04-06 | Erasca, Inc. | Tricyclic pyridones and pyrimidones |
| PE20231505A1 (es) | 2021-02-12 | 2023-09-26 | Hoffmann La Roche | Derivados de tetrahidroazepina biciclicos para el tratamiento del cancer |
| KR20240026948A (ko) | 2021-05-25 | 2024-02-29 | 에라스카, 아이엔씨. | 황 함유 헤테로방향족 트리사이클릭 kras 억제제 |
| US20240293558A1 (en) | 2021-06-16 | 2024-09-05 | Erasca, Inc. | Kras inhibitor conjugates |
| TW202321261A (zh) | 2021-08-10 | 2023-06-01 | 美商伊瑞斯卡公司 | 選擇性ｋｒａｓ抑制劑 |
| EP4436957A1 (en) | 2021-11-24 | 2024-10-02 | Genentech, Inc. | Therapeutic indazole compounds and methods of use in the treatment of cancer |
| TW202340212A (zh) | 2021-11-24 | 2023-10-16 | 美商建南德克公司 | 治療性化合物及其使用方法 |
| EP4253418A1 (en) | 2022-03-29 | 2023-10-04 | Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron | Immune cells expressing chimeric antigen receptors and bispecific antibodies and uses thereof |
| AU2022450448A1 (en) | 2022-04-01 | 2024-10-10 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
| WO2023219613A1 (en) | 2022-05-11 | 2023-11-16 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
| WO2023240058A2 (en) | 2022-06-07 | 2023-12-14 | Genentech, Inc. | Prognostic and therapeutic methods for cancer |
| WO2024015897A1 (en) | 2022-07-13 | 2024-01-18 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
| TW202413433A (zh) | 2022-07-19 | 2024-04-01 | 美商建南德克公司 | 用抗ｆｃｒｈ５／抗ｃｄ３雙特異性抗體進行治療之給藥 |
| WO2024033389A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives |
| WO2024033458A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydroazepine derivatives |
| WO2024033388A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives |
| TW202417439A (zh) | 2022-08-11 | 2024-05-01 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 雙環四氫噻吖呯衍生物 |
| WO2024085242A2 (en) | 2022-10-21 | 2024-04-25 | Kawasaki Institute Of Industrial Promotion | Non-fouling or super stealth vesicle |
| WO2024091991A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-02 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma |
| EP4406973A1 (en) | 2023-01-27 | 2024-07-31 | Fundació Privada Institut de Recerca de la SIDA-Caixa | Antibodies and uses thereof for the treatment of infections caused by enveloped viruses |
| WO2024173842A1 (en) | 2023-02-17 | 2024-08-22 | Erasca, Inc. | Kras inhibitors |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5470571A (en) * | 1988-01-27 | 1995-11-28 | The Wistar Institute | Method of treating human EGF receptor-expressing gliomas using radiolabeled EGF receptor-specific MAB 425 |
| ZA902949B (en) * | 1989-05-05 | 1992-02-26 | Res Dev Foundation | A novel antibody delivery system for biological response modifiers |
| ATE135373T1 (de) * | 1989-09-08 | 1996-03-15 | Univ Johns Hopkins | Modifikationen der struktur des egf-rezeptor-gens in menschlichen glioma |
| US5314995A (en) * | 1990-01-22 | 1994-05-24 | Oncogen | Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins |
| DE69133036T2 (de) * | 1990-11-09 | 2003-02-06 | Stephen D. Gillies | Cytokine immunokonjugate |
| US5558864A (en) * | 1991-03-06 | 1996-09-24 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung | Humanized and chimeric anti-epidermal growth factor receptor monoclonal antibodies |
| EP0603194A4 (en) * | 1991-07-05 | 1994-12-07 | Seragen Inc | TO THE RECEPTOR OF THE EPIDERMAL GROWTH FACTOR TARGETED MOLECULES FOR TREATING INFLAMMABLE ARTHRITIS. |
| EP0586002B1 (en) * | 1992-08-18 | 2000-01-19 | CENTRO de IMMUNOLOGIA MOLECULAR | Monoclonal antibodies recognizing the epidermal growth factor receptor, cells and methods for their production and compositions containing them |
| DK139193D0 (da) | 1993-09-24 | 1993-12-13 | Hartmann As Brdr | Rektangulaer aegbakke |
| HU221001B1 (hu) * | 1994-03-17 | 2002-07-29 | Merck Patent Gmbh. | Egyláncú anti-EGFR Fv-k és anti-EGFR ellenanyagok |
-
1994
- 1994-12-14 DE DE69428764T patent/DE69428764T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 DK DK94119712T patent/DK0659439T3/da active
- 1994-12-14 EP EP94119712A patent/EP0659439B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 PT PT94119712T patent/PT659439E/pt unknown
- 1994-12-14 ES ES94119712T patent/ES2166368T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 AT AT94119712T patent/ATE207366T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-12-19 SK SK1562-94A patent/SK283494B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-12-20 AU AU81593/94A patent/AU688817B2/en not_active Ceased
- 1994-12-21 UA UA94129229A patent/UA41888C2/uk unknown
- 1994-12-22 NO NO19944980A patent/NO315903B1/no not_active IP Right Cessation
- 1994-12-22 ZA ZA9410282A patent/ZA9410282B/xx unknown
- 1994-12-22 JP JP6320978A patent/JPH07223968A/ja active Pending
- 1994-12-22 CA CA002138928A patent/CA2138928C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-22 PL PL94306474A patent/PL178793B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-12-23 RU RU94045281A patent/RU2129018C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-12-23 HU HU9403784A patent/HU219680B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-12-23 KR KR1019940036168A patent/KR950016781A/ko not_active Application Discontinuation
- 1994-12-23 US US08/362,951 patent/US6979726B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-27 CZ CZ19943306A patent/CZ289099B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-06-28 JP JP2006178409A patent/JP2006298936A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07223968A (ja) | 1995-08-22 |
| NO315903B1 (no) | 2003-11-10 |
| AU8159394A (en) | 1995-06-29 |
| RU2129018C1 (ru) | 1999-04-20 |
| KR950016781A (ko) | 1995-07-20 |
| RU94045281A (ru) | 1996-11-10 |
| CZ330694A3 (en) | 1995-10-18 |
| SK283494B6 (sk) | 2003-08-05 |
| AU688817B2 (en) | 1998-03-19 |
| EP0659439B1 (en) | 2001-10-24 |
| DE69428764D1 (de) | 2001-11-29 |
| HU9403784D0 (en) | 1995-02-28 |
| US6979726B1 (en) | 2005-12-27 |
| CA2138928C (en) | 2009-02-17 |
| PL306474A1 (en) | 1995-06-26 |
| ATE207366T1 (de) | 2001-11-15 |
| UA41888C2 (uk) | 2001-10-15 |
| CZ289099B6 (cs) | 2001-11-14 |
| EP0659439A3 (en) | 1996-12-04 |
| NO944980D0 (no) | 1994-12-22 |
| DK0659439T3 (da) | 2002-01-14 |
| JP2006298936A (ja) | 2006-11-02 |
| CA2138928A1 (en) | 1995-06-25 |
| PT659439E (pt) | 2002-04-29 |
| SK156294A3 (en) | 1995-07-11 |
| ES2166368T3 (es) | 2002-04-16 |
| EP0659439A2 (en) | 1995-06-28 |
| ZA9410282B (en) | 1995-08-29 |
| HU219680B (hu) | 2001-06-28 |
| DE69428764T2 (de) | 2002-06-20 |
| NO944980L (no) | 1995-06-26 |
| HUT70471A (en) | 1995-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL178793B1 (pl) | Białko fuzyjne, sposób wytwarzania białka fuzyjnego i środek farmaceutyczny | |
| AU702184B2 (en) | Immunoconjugates II | |
| US11274133B2 (en) | IL2 and TNF immunoconjugates | |
| US8455625B2 (en) | Fusion protein of antibody L19 against fibronectin ED-B and interleukin 12 | |
| US20210369857A1 (en) | Il2 and tnf mutant immunoconjugates | |
| JPH09506761A (ja) | サイトカインの免疫複合体 | |
| AU2003228057B2 (en) | Immunoconjugates for the treatment of tumours | |
| EP3660039A1 (en) | Il2 immunoconjugates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20041222 |