CZ289099B6 - Imunokonjugát, způsob jeho výroby a pouľití a farmaceutický přípravek na jeho bázi - Google Patents
Imunokonjugát, způsob jeho výroby a pouľití a farmaceutický přípravek na jeho bázi Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289099B6 CZ289099B6 CZ19943306A CZ330694A CZ289099B6 CZ 289099 B6 CZ289099 B6 CZ 289099B6 CZ 19943306 A CZ19943306 A CZ 19943306A CZ 330694 A CZ330694 A CZ 330694A CZ 289099 B6 CZ289099 B6 CZ 289099B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- antibody
- immunoconjugate
- fragment
- mab
- tumor
- Prior art date
Links
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 title claims abstract description 61
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 54
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 21
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 17
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 15
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims abstract description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 claims abstract description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 32
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 31
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 14
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 13
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 13
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 8
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 5
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 4
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 59
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 30
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 26
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 23
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 15
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 13
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 12
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 12
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 11
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 10
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 7
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 6
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 210000003810 lymphokine-activated killer cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 4
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 4
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 3
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 3
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 3
- 101100112677 Mus musculus Ccnd3 gene Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000959820 Homo sapiens Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 2
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 231100000050 cytotoxic potential Toxicity 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001002709 Homo sapiens Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 208000003788 Neoplasm Micrometastasis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000037534 Progressive hemifacial atrophy Diseases 0.000 description 1
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000005889 cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000011037 discontinuous sequential dilution Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000006334 disulfide bridging Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000055229 human IL4 Human genes 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000019171 interleukin-1 alpha production Effects 0.000 description 1
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 238000012017 passive hemagglutination assay Methods 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 108010086662 phytohemagglutinin-M Proteins 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000903 polyhydroxyalkanoate Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5406—IL-4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5418—IL-7
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/028—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a herpesvirus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Imunokonjug t, obsahuj c 1) monoklon ln protil tku nebo jej fragment sm rovan² k n dorov bu ce nesouc antigenn epitop receptoru epiderm ln ho r stov ho faktoru (EGFR) a 2) biologicky aktivn ligand, kter² je f·zov n k uveden protil tce nebo fragmentu protil tky a maj c cytotoxickou kapacitu pro l²zi n dorov²ch bun k specificky in situ nebo indukuj c n dorov specifickou imunitn odezvu, kde biologicky aktivn m ligandem je cytokin. Zp sob v²roby tohoto imunokonjug tu, p°i n m se vz jemn f·zuj DNA sekvence, k duj c protil tku nebo fragment protil tky a biologicky aktivn ligand, v²sledn² konstrukt se um st do expresn ho vektoru, kter² se transformuje do hostitelsk ho organismu, hostitelsk bu ky se kultivuj v ivn m roztoku a exprimuje se f·zn protein. Pou it tohoto imunokonjug tu pro p° pravu protin dorov ho l iva a farmaceutick² p° pravek s obsahem tohoto imunokonjug tu.\
Description
Vynález se týká určitého imunokonjugátu, způsobu jeho výroby a použití a farmaceutického přípravku na jeho bázi. Konkrétněji se vynález týká nových fúzních proteinů které zahrnují s nádorem spojený cílový element, výhodně monoklonální protilátku nebo její fragment, rozpoznávající molekulu, která je výhodně exprimována na lidských nádorových buňkách jako je receptor lidského epidermálního růstového faktoru (EGFR), a biologicky aktivní ligand jako je růstový a/nebo diferenciační faktor. Výsledný fúzní protein může být použit k doručení biologicky aktivního ligandu ke specifické cílové buňce nebo tkáni. Tyto nové imunokonjugáty mohou být použity v terapii nádorů.
Dosavadní stav techniky
Mnoho různých terapeutických konceptů bylo použito pro léčbu pacientů s rakovinou.
V posledních letech byly provedeny klinické pokusy s monoklonálními protilátkami, které rozpoznávají specificky nebo preferenčně molekuly buněčného povrchu exprimované na maligních buňkách. Cílem tohoto přiblížení je indukce na protilátce závislé celulámí cytotoxicity (ADCC) nebo komplementem zprostředkované cytotoxicity (CDC) pro eliminování nádorových buněk. Druhým přiblížením je cytokinem zprostředkovaná aktivace imunitní odezvy. Cytokinem indukovaná protinádorová aktivita může být zprostředkována:
1) přímým cytotoxickým/cytostatickým účinkem cytokinu na růst nádoru,
2) nádor-antigen-nespecifickým mechanismem jako je LAK aktivita nebo monocyty/makrofágy zprostředkovaná cytotoxicita,
3) nádor-antigen specifickými imunitními odezvami zprostředkovanými CD4 a CD8-pozitivními T buňkami. V této situaci byla systémová imunitní odezva vůči nádoru pozorována ve Zvířecích modelech.
Naneštěstí je systémová aplikace cytokinů jako je IL-2 nebo TNF ztížena jejich toxicitou (Rubin, Cancer Invest, 11:460-472, 1990; Balkwill, Nátuře 361:206-207, 1993). K dosažení dostatečné cytokinové koncentrace na místě nádoru by měly být podávány spíše vysoké dávky a maximální tolerovatelná dávka je pod dávkou, která je vyžadována pro dosažení účinnosti. Proto jsou negativní účinky cytokinů hlavním následkem systémové aplikace, ale jejich klinická relevance v nádorové terapii je nepochybná. Na zvířecích modelech bylo demonstrováno, že in sítu přítomnost cytokinu buď při intranádorové injekci nebo při sekreci transfektovaných nádorových buněk může vést k regresi nádorů (Hock a kol., PNAS 90:2774-2778, 1993; Colombo a kol., Cancer Res. 52:4853-4857, 1992; McBride a kol., Cancer Res. 52:3931-3937, 1992; Tepper a kol., Science 257:548-551, 1992; Mullen a kol., Cancer Res. 52:6020-6024,1992; Blankenstein a kol., J. Exp. Med 173:1047-1052, 1991; Gansbacher a kol., J. Exp. Med. 172:1217-1224, 1990).
V těchto systémech cytokiny nezhoršují nádorovou proliferaci, ale jsou schopny aktivace rychlé a účinné protinádorové reakce. Proto fyzická kombinace efektorové molekuly a cílového elementu představuje prostředek redukce periferní přítomnosti a zvýšení protinádorové dostupnosti biologicky aktivního ligandu. Dále mohou být jednotlivé nádorové buňky nebo mikrometastázy také cíleny těmito molekulami.
Biologicky aktivní ligand pro protilátkou řízené cílení by měl indukovat destrukci cílové buňky buď přímo nebo vytvořením prostředí, které je pro tyto buňky letální. Biologicky aktivním ligandem může být cytokin jako je IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-10, IL-13, IFN, TNF nebo CSF. Tyto cytokiny jsou uváděny jako elicitující protinádorové účinky buď přímo nebo aktivací hostitelova obranného mechanismu (Mire-Sluis, TIBTECH 11:74-77, 1993; Colombo a kol., Cancer Res. 52: 4853-4857, 1992; Thomas and Balkwill, Pharmac. Ther. 52:307-330, 1991).
-1 CZ 289099 B6
Například je IL-2 považován za centrální mediátor imunitní odezvy. IL-2 byl uváděn jako stimulující proliferaci T buněk a NK buněk a jako indukující lymfokinem aktivované zabíječské buňky (lymphokine-activated killer cells - LAK). Nádor infíltrující T lymfocyty proliferují v odezvě na IL-2. Dále zvyšuje IL-2 cytotoxicitu T buněk a monocytů. Navíc IL-2 indukuje cytokinovou kaskádu sekretovanou T buňkami, NK buňkami a monocyty, což dále potencuje imunitní odezvu.
TNFa nachází rozsáhlou aplikaci v tumorové terapii, zejména díky jeho přímé cytotoxicitě pro určité nádorové buňky a indukci hemorrhagické regrese nádorů. Dále TNAa potencuje imunitní odezvu: je kostimulantem T buněčné proliferace, indukuje expresi NHC třídy I a třídy II antigenů a TNFa, IFN a IL-1 sekreci makrofágů. IL-4 nejprve byl popsán jako B buněčný růstový faktor.
V dalších studiích bylo uvedeno, že stimuluje antigen-specifické cytotoxické T buňky a působí specificky na T-buňkám podobné LAK buňky spíše než NK buňkám podobné LAK buňky. IL-4 inhibuje růst buněk lidského melanomu zvyšováním exprese jejich MHC třídy I a Π. Indukce makrofágem mediovaných protinádorových efektů u IL-4 je ještě kontroverzní.
IL-7 je růstový faktor pro pre-B buňky jakož i pro lidské periferní a CD8 pozitivní T buňky. IL7 přímo zvyšuje produkci IL-1, IL-6 a TNFa periferními monocyty. In vitro může být protinádorová aktivita monocyty/makrofágy stimulována IL-7, možná zprostředkována cytokiny, jako je TNFa.
Epidermální růstový faktor (EGF) je polypeptidový hormon, který je mitogenní pro epidermální a epiteliální buňky. Jestliže EGF interaguje s citlivými buňkami, váže se k membránovým receptorům (EGFR). EGFR je transmembránový glykoprotein asi 170kDa a je genovým produktem c-erb-B proto-onkogenu.
Myší monoklonální protilátka MAb 425 byla zvýšena proti lidské A431 nádorové buněčné linii (ATCC CRL 1555) a byla nalezena jako vázající se k polypeptidovému epitopu na vnější doméně EGFR. Bylo nalezeno, že inhibuje vazbu k EGF a zprostředkuje nádorovou cytotoxicitu in vitro a potlačuje růst nádorových buněk buněčných linií odvozených z epidermálního a kolonrektálního karcinomu in vitro (Rodeck a kol., 1987, Cancer Res. 47,3692). Humanizované a chimemí verze MAb 425 jsou známy z WO 92/15683.
Protilátka-cytokin imunokonjugáty v různých kombinacích pro přímé doručení aktivních proteinů byly popsány dříve. IL-2 byl kombinován s lidskou specifickou protilátkou L6 (Fell a kol., 1991., J. Immunol. 146:2446-2452, EP-OS-0439095), nebo s antigangliosidovou GD2 protilátkou (Gillies a kol., 1992, PNAS 89:1428-1432, WO 92/08495). Imunokonjugáty obsahující anti-dansyl protilátku a IGF1 byly generovány pro přímé doručení hormonů (Shin and Morrison, 1990, PNAS 87:5322-5326, WO 91/14438).
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je imunokonjugát, obsahující 1) monoklonální protilátku nebo její fragment směrovaný k nádorové buňce nesoucí antigenní epitop receptorů epidermálního růstového faktoru (EGFR) a 2) biologicky aktivní ligand, který je fúzován k uvedené protilátce nebo fragmentu protilátky a mající cytotoxickou kapacitu pro lýzi nádorových buněk specificky in šitu nebo indukující nádorově specifickou imunitní odezvu, kde biologicky aktivním ligandem je cytokin.
Ve výhodném provedení imunokonjugátu podle vynálezu je cytokin vybrán ze skupiny TNFa, IL-2, IL-4 a IL-7.
V dalším výhodném provedení imunokonjugátu podle vynálezu může být protilátkou Fab fragment nebo F(ab')2 fragment, sestávající alespoň z variabilní oblasti těžkého řetězce protilátky, CH1 domény konstantní oblasti a vhodného lehkého řetězce.
V jiném výhodném provedení imunokonjugátu podle vynálezu může být protilátkou fragment protilátky, sestávající alespoň z variabilní oblasti těžkého řetězce protilátky, CH1 a CH2 domény konstantní oblasti a vhodného lehkého řetězce.
-2CZ 289099 B6
Ještě v jiném výhodném provedení imunokonjugátu podle vynálezu může protilátka sestávat z alespoň variabilní oblasti těžkého řetězce protilátky, CH1, CH2 a CH3 domény konstantní oblasti a vhodného lehkého řetězce.
V imunokonjugátu podle vynálezu je přednostně protilátka nebo fragment protilátky odvozen od myší, humanizované nebo chimérické MAb 425.
Zvláště výhodný imunokonjugát podle vynálezu je vybrán ze skupiny MAb 425-CHl-TNF-a, MAb 425-CH2-TNF-a, MAb 425-CH3-TNF-a, MAb 425-CH1-IL2, MAb 425-CH2-IL2 a MAb 425-CH3-IL2.
Předmětem vynálezu je také způsob výroby imunokonjugátu uvedeného výše, jehož podstata spočívá vtom, že se vzájemně fúzují DNA sekvence, kódující protilátku nebo fragment protilátky a biologicky aktivní ligand, výsledný konstrukt se umístí do expresního vektoru, který se transformuje do hostitelského organismu, hostitelské buňky se kultivují v živném roztoku a exprimuje se fúzní protein.
Ve výhodném provedení způsobu podle vynálezu se fúzují DNA sekvence kódující protilátku nebo fragmenty protilátky a biologicky aktivní ligand na jednořetězcovou DNA pomocí oligonukleotidu, který je komplementární k požadované fúzní DNA-sekvenci.
Jako hostitele pro expresi konjugátu protilátka-CHl se s výhodou používá E.coli a jako hostitele pro expresi konjugátu protilátka-CH2 nebo protilátka-CH3 se s výhodou používá eukaryotického hostitele.
Předmětem vynálezu je dále také farmaceutický přípravek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje alespoň jeden imunokonjugát popsaný výše a fyziologicky přijatelný nosič.
Konečně je předmětem vynálezu také použití imunokonjugátu popsaného výše pro přípravu protinádorového léčiva.
Objektem vynálezu tak je vytvoření protilátek nebo jejich fragmentů, obsahujících 1) epitop řízený kEGFR antigenu na povrchu nádorové buňky a 2) biologicky aktivní ligand, mající vysokou schopnost indukce cytotoxicity a tím zesílení protinádorového účinku in šitu.
Bylo nalezeno zejména v případě konjugátů protilátka-CH2 a protilátka-CH3, jako například MAb 425-CH2-TNFa a MAb 425-CH3-TNFa, vyvolání celulámí cytotoxicity vynikající ve srovnání s nekopulovaným TNFa. Toto je pravděpodobně způsobeno kombinací vazebných vlastností a indukce ADCC konstantními regiony monoklonální protilátky a aktivit cytokinu.
Konjugáty protilátka-CHl podle předloženého vynálezu jsou výhodné vzhledem k malé molekulové velikosti a možnosti exprese v prokaryotech. Dále bude malá velikost usnadňovat penetraci tkání (nádorovou).
Imunokonjugáty podle vynálezu vykazují dále dobré vazebné a proliferační vlastnosti ve srovnání s monoklonální protilátkou, výhodně MAb 425 jako takovým nebo jeho fragmentem.
Materiály a metody
Monoklonální protilátky
MAb 425 je myší monoklonální protilátka směrovaná proti lidské A431 nádorové buněčné linii (ATCC CRL 1555). MAb 425 se váže k polypeptidovému epitopu vnější domény lidského EGF receptorů a soutěží s vazbou EGF. MAb byl nalezen jako zprostředkující nádorovou cytotoxicitu in vitro a potlačující buněčný růst epidermoidní a kolorektální nádorové odvozené buněčné linie in vitro (Rodeck a kol., 1987, Cancer Res. 47:3692). Humanizované a chimémí verze MAb 425 byly popsány ve WO 92/15683.
Cytokiny
Cytokin kódující cDNA byly buď dostupné od British Biotechnology Limited (Herrmann Biermann GMBH, Bad Nauheim SRN: lidský IL-2 BBG30, lidský IL-4 BBG15, lidský IL7BBG43, lidský TNFa BBG18). Komerčně dostupné cDNA postrádají signální sekvenci
-3CZ 289099 B6 nezbytnou pro sekreci proteinu. Cytokin kódující cDNA mohou být generovány z mRNA izolované z buněk, produkujících cytokin.
Vektory pUC19 patří do série vysoce kopiových členů E.coli plazmid klonujících vektorů a obsahuje části pBR322 a M13mpl9. pUC19 obsahuje indukční bakteriální lac promotor-operátor, následovaný násobným klonovacím místem (Yanish-Perron a kol., Gene 33:103-109, 1985). pUC vektory jsou obchodně dostupné (např. New England Biolabs). pBluescript KS/SK+ a KS/SK- fágové vektory jsou odvozeny od pUC19. Vektory jsou komerčně dostupné (Stratagene).
Eukaryotický expresní vektor pHCMV (Gillies a kol., 1983, Cell 33:717) obsahuje počátek replikace opičího viru 40 (SV40) a promotorovou a zesilovačovou oblast lidského cytomegaloviru. Oblast promotor/zesilovač je následována multiklonovacím místem (mcs) pro zavedení genů, které mají být exprimovány. V tomto vektoru jsou chimémí forma mAB425 variabilní oblasti těžkého řetězce a SacIIc 1 oblast fúzovány sefektorovou molekulou na konci CH1, CH2 nebo CH3 domény, kombinovány pro generování MAb 425 fuzního proteinu těžkého řetězce. Fůzní Ig řetězec může být sestaven do imunokonjugátu kombinováním se vhodným lehkým řetězcem za vzniku monovalentní antigen vázající oblasti, která pak může být asociována za vzniku divalentního imunokonjugátu specifického pro cílový antigen (obr. 1). Konstrukty těžkého a lehkého řetězce mohou být umístěny ve stejných nebo separátních vektorech.
Prokaryotický expresní vektor je založen na pSWl vektoru (Ward a kol., Nátuře 341:544-546, 1989), který je derivátem pUC19 vektoru. pSWl obsahuje sekvenci, kódující vedoucí peptid bakteriálního pelB genu zErwinia carotovora (Lei a kol., J. Bact. 169:4379-4383, 1987). Cizí DNA mohou být zavedeny do rámečku za pelB vedoucí sekvenci k přímé proteinové expresi do periplazmy.
Popis obrázků a tabulek
Tabulka I: PCR primery použité pro generování MAb425-cytokin fuzních proteinů (eukaryotická exprese).
*Reverzní primer hybridizující ke Stratagen pBluescript vektorům SK+/- a KS+/(komerčně dostupný).
Tento primer hybridizuje k Cgl konstantní oblasti, obsahující unikátní SacII místo. ‘Reverzní primer hybridizující k ml3 odvozeným vektorům (komerčně dostupný).
Tabulka II: PCR primery použité pro generování MAb425-cytokin fúzních proteinů (prokaryotická exprese).
Obr. 1: Model imunokonjugátů protilátka-cytokin
C = cytokin, VH - variabilní oblast těžkého řetězce, VL = variabilní oblast lehkého řetězce, CH = konstantní oblast těžkého řetězce, CK = konstantní oblast lehkého řetězce, (a) konjugát protilátka-CHl, (b) konjugát protilátka-CH2, konjugát protilátka-CH3.
Obr. 2: Vazba imunokonjugátů k EGF-R v EGF-R specifické ELISA
Supematanty přechodně transfektovaných COS-7 buněk byly testovány na obsah imunokonjugátu. Vertikální osa: % absorbance při 490 nm, horizontální osa: ředění supematantu (log2).
MAb425CHl-TNFa (plné kroužky), MAb425CH2-THFa (plné čtverečky), MAb425CH3-THFa (plné trojúhelníčky), MAb425-FAb-kontrola (obrácené plné trojúhelníčky), MAb425F(ab')2 přetvařovaný (čištěný protein) (plné kosodélníky).
Obr. 3: IL-2 aktivita MAb425-CHl-IL-2-imunokonjugátu exprimovaného v COS-7 buňkách
CTLL-2 buňky byly použity jako indikátorová buněčná linie. Proliferativní aktivita postupného ředění COS supematantu, obsahujícího MAb425-CHl-IL-2, je uvedena v
-4CZ 289099 B6 levé části (plné kroužky). COS supernatant, obsahující MAb425Fab-kontrolu, byl použit jako kontrola (prázdné kroužky). Proliferativní odezva CTLL.2 buněk po aktivaci rekombinantním komerčním IL-2 proteinem nebo bez IL-2 (KO) je uvedena v pravé části.
Obr. 3B: IL-2 aktivita MAb425-CH-l-IL-2 imunokonjugátu exprimovaného v E.coli
CTLL-2 buňky byly použity jako indikátorová buněčná linie. Proliferativní aktivita postupně ředěného MAb-425-CHl-IL-2 exprimovaného v E.coli a afinita čištěného přes anti-MAb425 idiotypickou kolonu je uvedena na levém panelu (plné trojúhelníčky). COS supernatant, obsahující MAb425-CHl-IL-2, byl použit jako kontrola (uzavřené kroužky). Dialyzační pufr (uzavřené čtverečky). Pro zajištění, že pufr neovlivňuje IL-2 aktivitu byl dialyzační pufr titrován za přítomnosti konstantní koncentrace IL-2 (1 J/ml) (obrácené plné trojúhelníčky). Proliferativní odezva CTLL.2 buněk po aktivaci s rekombinantním komerčně dostupným IL-2 proteinem nebo bez IL-2 (KO) je uvedena na pravém panelu.
Obr. 3C: Indukce TIL proliferace u MAb425-CHl-IL-2-imunokonjugátu
Melanomový nádor infiltrující lymfocyty byly kultivovány bez (KO) nebo za přítomnosti postupně ředěných COS supematantú, obsahujících 425-CH1-IL-2 imunokonjugát (levý panel). Proliferativní odezva TIL po aktivaci rekombinantním komerčním IL-2 je uvedena na pravém panelu.
Obr. 4: Indukce HPBL proliferace u MAb425-IL-4 imunokonjugátů
PHA aktivované HPBL byly kultivovány za přítomnosti postupně ředěných COSsupematantů, obsahujících MAb425-CH2-IL-4 (plné kroužky), MAb425-CH3-IL-4 (plné trojúhelníky) fúzní proteiny. Supernatanty, obsahující MAb425 (plné čtverečky), IL-4 (plné kosodélníky) a vektorová kontrola (plné obrácené trojúhelníčky) byly použity jako kontrola. Proliferativní odpověď HPBL po aktivaci s rekombinantním komerčním IL—4 a bez růstového faktoru je (KO) uvedena na pravém panelu.
Obr. 5: MAb425-TNFa imunokonjugátová cytotoxicity na WEHI164 buňkách
TNFAa citlivé buněčné linie WEHI 164 myšího fibrosarkomu byly kultivovány po 48 hodin za přítomnosti postupně ředěných COS supematantú (levý panel), obsahujících 425-CHl-TNFa imunokonjugát (plné čtverečky) nebo 425-CH2-TNFa imunokonjugát (plné trojúhelníčky) nebo MAb425Fab-kontrolu (plné kroužky). Inhibice růstu indikátorových buněk indukovaná komerčním rekombinantním lidským TNFa je uvedena na pravém panelu.
Obr. 6: MAb425-TNFa imunokonjugátem zprostředkovaná nádorová cytolýza u PBMC
Neaktivované lymfocyty lidské periferní krve /PBMC byly použity jako efektorové buňky a kokultivovány salogenními EGF-R-pozitivní 51Cr-značenými C8161 cílovými buňkami při poměru efektor/cíl 30:1. Procenta specifické lýze jsou uvedena po 18 h kokultivace bez nebo za přítomnosti sériově ředěného supematantú, obsahujícího MAb 425-CH3-TNFa imunokonjugát (šrafované sloupce). Rekombinantní TNF (Genzyme) byl exprimován jako 36 kDa dimer v E.coli (tečkované sloupce).
Podrobný popis vynálezu
Obecně
Jiné mikroorganismy, buněčné linie, plazmidy, promotory, markéry rezistence, počátky replikace, restrikční místa nebo jiné fragmenty vektorů, které jsou v přihlášce zmíněny jsou komerčně dostupné nebojsou dostupné jinak. Pokud zde jsou uváděny jsou míněny pouze jako příklady a nejsou podle vynálezu podstatné a mohou být nahrazeny jinými vhodnými nástroji a biologickými materiály.
-5CZ 289099 B6
Techniky, které jsou podle vynálezu podstatné jsou popsány podrobněji dále. Jiné techniky, které nejsou podrobně popsány odpovídají známým standardním metodám, které jsou odborníkům v oboru dobře známé nebo jsou podrobněji popsány v citovaných odkazech a patentových přihláškách a ve standardní literatuře (např. „Antibodies, A Laboratory Manual“, Harlow, Lané, Cold Spring Harbor, 1988).
Exprese fuzních proteinů v eukaryotických buňkách
Konstrukce eukaryotických expresních vektorů pro expresi Fab425-cytokin fuzního proteinu
Fúze MAb425 a cytokinů smyčkovou technologií
Generování TNFa konstruktů:
SacII/Xbal fragment ASacII cyl klonu byl inzertován do Bluescript SK+, obsahujícího cytokin kódující sekvence jako je TNFa cDNA. TNFa cDNA byla zavedena mezi Smál a EcoRI místo. Výsledný konstrukt byl připraven jako jednořetězcová DNA přídavkem vhodného pomocného fágu. CH2 nebo CH3 doména byly fúzovány v rámečku k 5' konci TNFa kódující sekvence. Oligonukleotidy
5'CGAAGATGATCTGACCAT TTTGGCTTTGGAGATGGT 3'
TNFa | cgl CH2 doména
5'CGAAGATGATCTGACCAT TTTACCCGGAGACAGGGA 3'
TNFa | cgl CH3 doména jsou homologní u 3'konce CH2 domény a CH3 domény a 5'konce TNF kódující sekvence. Jednořetězcové DNA sekvence jsou zachovány společně u oligonukleotidu a neočekávané sekvence mezi jsou odstraněny z konstruktu. Oligonukleotidy mají opačnou orientaci, protože horní řetězec byl generován jako jednořetězcová DNA.
DNA byla doplněna na dvojřetězcovou formu polymerázou sequenázou. Tento enzym není tak náchylný k chybám jako Amplitaq DNA polymeráza a proto byla stanovena pouze DNA sekvence spojení izolovaných klonů. Tyto klony se správnou sekvencí byly kombinovány se sekvencí nezbytnou pro vytvoření kompletního mAb425 fuzního proteinu a klonovány do pHCMV vektoru pro expresi v eukaryotických buňkách.
Generování IL-4 konstruktů:
Pro tyto konstrukty byl kompletní SacII c 1 klon inzertován do Bluescript KS+ as KpnI/SalI fragmentu. IL-4 byl klonován jako HindlII/EcoRI fragment do téhož vektoru. Fúze byla provedena jak je popsáno pro TNF konstrukty s oligonukleotidy
5'GATATCGCACTTGTGCAT TTTGGCTTTGGAGATGGT 3'
IL-4 | cgl CH2 doména
5'GATATCGCACTTGTGCAT TTTACCCGGAGACAGGGA 3'
IL-4 | cgl CH3 doména pro fúzi k CH2 nebo CH3 doméně.
Klony se správnou sekvencí byly kombinovány se sekvencemi nezbytnými pro generování kompletního mAb425 fuzního proteinu a klonovány do pHCMV vektoru pro expresi v eukaryotických buňkách.
Fůze MAb425 a cytokinů PCR technologií
Amplitaq DNA polymeráza je náchylná k chybám a pro ujištění, že nebyly do sekvencí těchto segmentů amplifikovaných PCR inkorporovány žádné chyby, bylo provedeno stanovení. Primery použité v těchto pokusech jsou shrnuty v tabulce I.
Generování CH1 fúzních proteinů
-6CZ 289099 B6 pUH5 plazmid obsahuje sekvence pro fragment těžkého řetězce FAb425 pro prokaryotickou expresi s N-terminální pel 8 vedoucí sekvencí odvozenou zErwinia carotovora (Lei a kol., J. Bact. 169:4379-4383, 1987) pro zajištění sekrece proteinu. HindlII/Notl fragment byl reklonován do Bluescript KS+ vektoru. Cytokiny IL-4 a IL-7 byly amplifikovány PCR technologií pro zavedení 5'Ncol a 3'BamHI restrikčního místa. IL-2 a TNFa vždy obsahují 5'Ncol a 3'BamHI restrikční místa. Všechny cytokiny byly klonovány jako NcoI/BamHI fragmenty za CH1 doménu. V těchto konstruktech nebyly cytokinové sekvence v rámečku. Proto byl adaptor (5'TCGAACAAGAAAG3') zaveden mezi Sall a Ncol restrikční místa. Ve výsledných konstruktech jsou těžký řetězec a cytokin exprimovány jako fuzní protein s jednou další aminokyselinou (Ala) zavedenou u adaptorové sekvence. DralII/BamHI fragmenty byly klonovány do pHCMV expresního vektoru, obsahujícího kompletní MAb425 klon MAb425 těžkého řetězce cDNA. V tomto konstruktu pelB vedoucí sekvence byla zaměněna za vedoucí sekvenci MAb425 těžkého řetězce cDNA.
Generování CH2 a CH3 fúzních proteinů
ASacII cyl DNA byla amplifikována PCR technologií ve dvou separátních reakcích za použití CH2-3'koncových primerů, které přesahují, v rámečku s 5'koncem odpovídajícího cytokinu jako je IL-2 a IL-7. IL-2 a IL-7 cDNA klony byly také amplifikovány PCR. Na 3'konci unikátního Notl a Sall místa byla inkorporována do IL-2 konstruktu unikátní Kbal místo do IL-7 konstruktu pro usnadnění subklonování do SK+ vektoru a následně do pHCMV expresního vektoru. Fúze IL-2 a IL-7 PCR produktů s kompletní ASacII cyl oblastí byla provedena PCR rekombinací. Výsledný BamHI/Notl ASacII cyl CH-2-IL-2 fragment byl subklonován do SK+, obsahujícího variabilní oblast mAb425 těžkého řetězce. SacII/Xbal ASacII cyl CH2 IL-7 fragment byl subklonován do SK+ vektoru, obsahujícího variabilní oblast mAb425 těžkého řetězce a ASacII cyl oblast až k SacII místu. Tento postup generuje kompletní mAb425-CH2 IL-2 a IL7 fuzní geny. Kompletní mAb425-CH3 IL-2 fuzní gen byl generován s tím rozdílem, že ASacII cyl byl amplifikován z unikátního SacII místa jako 5'konec. SacII/Pstl fragment mAb425-CH2 IL-2 v Sk+, obsahujícím CH2 IL-2 fúzi byl pak zaměněn s SacII/Pstl fragmentem, obsahujícím CH3 IL-2 fúzi. Kompletní mAb425 fúzní geny byly pak klonovány do pHCMV vektoru pro expresi v eukaryotických buňkách.
Exprese imunokonjugátů
Zavedení vektorových konstruktů pro expresi monovalentního imunokonjugátu, obsahujícího pouze CH1 doménu nebo divalentních imunokonjugátů, obsahujících CH2 a CH2 plus CH3 domény do hostitelských buněk mohlo být dosaženo elektroporací, DEAE dextranem, fosforečnanem vápenatým nebo Lipofectinem nebo fúzí protoplastů. Jakékoliv hostitelské buňky mohou být použity s tou podmínkou, že rekombinantní DNA sekvence kódující imunokonjugáty a vhodný lehký řetězec jsou správně transkribovány do mRNA v takovém typu buňky. Hostitelské buňky mohou být buňky myšího myelomu jako je Sp2/0-AG14 (ATCC CRL 1581), P3X63Ag8.653 (ATCC CRL 1580) nebo křečci buňky jako je CHO-K1 (ATCC CCL61) nebo CHO/dhFr- (ATCC CRL 9096) nebo BHK-21 (ATCC CCL 10). Pro přechodnou expresi mohou být použity COS-1 (ATCC CRL 1650) nebo COS-7 (ATCC CRL 1651).
Přechodná exprese imunokonjugátů
Expresní vektor pHCMV obsahuje počátek replikace opičího viru 40 (SV40). Buněčná linie COS-7 je derivátem opičí buněčné linie CV-1, která byla transformována s napočátku defektním SV40 virem. Proto plazmidy, obsahující SV40 počátek replikace budou amplifikovány a produkce imunokonjugátů bude zlepšena. Supematanty byly sklizeny o 72 hodin později a testovány na EGF-receptor vazbu a koncentraci cytokinu.
Permanentní exprese imunokonjugátů
Vektory, obsahující rekombinantní konstrukty pro expresi imunokonjugátů byly zavedeny do vhodných hostitelských buněk. Konstrukty těžkého a lehkého řetězce mohou být umístěny do stejných nebo separátních vektorů: V posledně uvedeném případě mohou oba vektory nést
-7CZ 289099 B6 shodný selekční markér jako je neomycinová rezistence nebo dhFr, nebo dva rozdílné markéry pro selekci přítomnosti obou vektorů. Selekce na dhFr markér může být provedena pouze v dhFr negativních buněčných liniích jako je CHO/dhFr-. Klony jsou analyzovány na expresi imunokonjugátů pomocí Egf-receptor-specifické ELISA. Selektované klony se pak dále čistí klonováním v limitujícím ředění.
Konstrukce prokaryotických expresních vektorů pro expresi fuzního proteinu MAb425-CHlcytokin
DNA sekvence, kódující MAb425 lehký řetězec a Fd fragment těžkého řetězce byly zavedeny do násobného klonovacího místa pSWl vektoru. Zralá, lehký řetězec kódující sekvence a zralá, těžký řetězec kódující sekvence mají před sebou vedoucí peptid bakteriálního pelB genu. Sekvence, kódující těžký řetězec, obsahuje 3'Ncol místo. Cytokin kódující cDNA byly modifikovány PCR pro zavedení Ncol (3'konec) restrikčních míst. Cytokinové geny byly fúzovány v rámečku přímo k CH1 doméně těžkého řetězce. Příměry použité v těchto pokusech jsou shrnuty v tabulce II.
Tyto vektory umožňují účinnou expresi funkčních Fab-cytokin fuzních proteinů v E.coli. Fúzní protein lehkého řetězce a těžkého řetězce-cytokinu jsou umístěny na dicistronní nosičové RNA umístěné pod kontrolou indukujícího lac promotoru (Skerra a Pluckthun, Science 242:1038-104, 1988). Takto může být exprese Fab-fuzního proteinu indukována podle požadavků na kultivační podmínky. Translace obou proteinů z dicistronní nosičové RNA usnadňuje syntézu stejných množství Fd-IL-2 fuzního proteinu a lehký řetězec tak zvyšuje šance na správné zařazení se do Fab-fúzních proteinů. Tyto dva polypeptidy jsou sekretovány do periplazmy E. coli, kde skládáním, tvorbou disulfidových vazeb a sestavením vzniká funkční fuzní protein FAb425CHl. Při prodloužené kultivaci bakterií jsou proteiny exprimovány do kultivačního média.
Exprese fúzního proteinu MAb425-CHl-IL-2 v E.coli a čištění
E.coli kmeny vhodné pro expresi byly transformovány expresními plazmidy. Buňky rostly na OD58oO,5 a byly indukovány s IPTG (1 mM). Buňky rostly přes noc a supematanty a buňky byly sklizeny. Supematant byl aplikován na antiMAb425 antiidiotypickou kolonu. Kolona byla promyta fosfátem pufrovaným 0,5 N NaCl a navázané proteiny byly eluovány 10 mM glycinem 0,5 M NaCl, pH2,5. Eluát byl ihned neutralizován Tris 2,5 M pH 8. MAb425-CHl-IL-2obsahující frakce byly spojeny, koncentrovány a dialyzovány proti PBS.
Vazebné vlastnosti MAb425 imunokonjugátů
Vazebné vlastnosti MAb425 imunokonjugátů byly stanoveny EGF-receptor-specifickou ELISA. Mikrotitrační plotny byly potaženy přes noc při 4 °C čištěným EGF-receptorem a promyty pro odstranění nenavázaného proteinu. Plotny byly inkubovány se supematanty, obsahujícími fúzní protein nebo supematanty, obsahujícími nekonjugovaný MAb nebo Fab fragmenty nebo proteiny v čištěné formě. Plotny byly promyty a inkubovány s kozím-anti-humánním IgG a IgM (těžký a lehký řetězec) konjugovanými k peroxidáze. Byl přidán substrát a množství vazby EGFreceptor-specifický protein bylo stanoveno měřením při 450 nm (obr. 2). Koncentrace cytokinu byla stanovena komerčně dostupnou ELISA specifickou pro každý cytokin podle instrukcí výrobce (data neuvedena).
Proliferace leukocytů
Nádorově specifické efektorové buňky
Mononukleámí leukocyty periferní krve a nádor infiltrující lymfocyty (TIL) izolované z pacientů s melanomem byly společně kultivovány s ozářenými (30 Gy) autologními nádorovými buňkami v médiu (RPMI 1640, 1 % penicilin/streptomycin, 1 % glutamin, 20 mM Hepes, 50 mM β merkaptoethanolu, 10% fetálního telecího séra, 20 J/ml IL-2, 20J/ml IL-4). Odpovídající buňky byly týdně stimulovány s autologními nádorovými buňkami.
Stanovení proliferace
Cytokinem zprostředkovaná proliferace může být stanovena se
-8CZ 289099 B6
a) Vhodnou indikátorovou buněčnou linií. V případě 11-2 IL-2-závisející myší buněčnou linií CTLL-2 (ATCC TIB 241) (obr. 3 A) nebo jiné IL-2-závislé buněčné linie mohou být použity.
b) In vitro expandovanými nádor infiltrujícími lymfocyty (obr. 3B).
c) Čerstvě izolovanými monojademými buňkami předem ošetřenými s PHA-M(Sigma). V tomto případě byl experiment proveden s MAb425-IL4 fúzními proteiny (obr. 4).
Čerstvě připravené leukocyty periferní krve od zdravých dárců nebo pacientů s melanomem nebo TIL izolované z pacientů s melanomem byly kultivovány in vitro (viz výše). Pro zkoušení fúzních proteinů byly lymfocyty kultivovány v 96jamkové mikrotitrační destičce s plochým dnem při hustotě lxlO5 buněk na jamku v konečném objemu 200 μΐ. Buňky byly inkubovány s fúzní protein obsahujícími supematanty nebo supematanty, obsahujícími nekonjugovaný MAb nebo supematanty, obsahujícími nekonjugované cytokiny nebo proteiny v čištěné formě. Po 72 hodinách byly buňky pufrovány s 0,5 pCi 3H-thymidinem. Inkorporování radioaktivity bylo stanoveno po inkubaci přes noc spočtením kapalinové scintilace β-plotny. Výsledky jsou vyjádřeny jako průměr cpm.
Stanovení cytotoxicity MAb425-TNFa imunokonjugátů
Stanovení TNFa-zprostředkované cytotoxicity
TNF byl popsán jako přímo toxický pro určité buňky, zahrnující různé nádorové buňky. Přímý cytotoxický potenciál TNF může být stanoven s L929 myšími fibroblasty (ATCC CCL1) nebo WEHI 164 (ATCC CRL 1751) nebo jinými TNF -citlivými buněčnými liniemi jak bylo popsáno (Flick a Gifford, 1984, J. Immunol. Meth. 68:167). Na obr. 4 jsou cytotoxické potenciály MAb425CHl-TNFa a MAb425CH2-TNF demonstrovány na WEHI 164 buňkách jako indikátorové buněčné linii.
Stanovení TNFa-indukované cytotoxicity
EGF-receptor-pozitivní buněčná linie jako vysoce invazivní a spontánně metastatická, EGFreceptor-pozitivní buněčná linie C8161 (Welch a kol., 1991, Int. J. Cancer 47:227 a zde citované odkazy) může být použita jako cílové buňky pro cytolýzu alogenních nádor infiltrujících lymfocytů nebo čerstvě izolovaných lymfocytů periferní krve z pacientů s melanomem nebo od zdravých dárců. Kultivační podmínky pro nádorové buňky a TIL byly dříve popsány (Shimizu a kol., Cancer Res. 51:6153).
In vitro studie cytotoxicity se provádějí za použití 5lCr nádorových cílových buněk. Cílové buňky byly značeny s 51Cr /100 pCi/107 buněk/ po 1 hodinu s následujícím trojnásobným promytím pro odstranění přebytku 51Cr. 2x103 cílových buněk bylo koinkubováno s efektorovými buňkami v 96jamkových mikrotitračních destičkách za přítomnosti fuzní protein obsahujících supematantů nebo supematantů, obsahujících nekonjugovaný MAb nebo supematantů, obsahujících nekonjugované cytokiny (kontroly) nebo proteiny v čištěné formě. Supematanty nebo čištěné proteiny byly postupně ředěny v kultivačním médiu a trojnásobně zkoušeny. Plotny byly inkubovány po 4 hodiny při 37 °C v atmosféře s 10 % CO2. Buňky pak byly odstraněny odstředěním a radioaktivita v supematantech byla stanovena v čítači. Procenta 51Cr-uvolnění byla vypočtena podle vzorce:
(experimentální uvolnění - spontánní uvolnění) % specifického 51Cr-uvolnění = --------------------------------------------- xlOO (maximální uvolnění - spontánní uvolnění)
Terapeutické použití imunokonjugátů
Imunokonjugáty podle vynálezu mohou být podávány lidským pacientům jako léčebné. Proto je objektem vynálezu poskytnutí farmaceutického přípravku, obsahujícího jako účinnou složku alespoň jeden fúzní protein definovaný výše a v nárocích, spojený s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči, přísadami nebo ředidly.
-9CZ 289099 B6
Typicky mohou být imunokonjugáty podle vynálezu injektovány intravenózně nebo parenterálně. Obecně dávková rozmezí pro podání imunokonjugátů jsou dostatečně velká pro produkci požadovaného potlačení nádoru a uskutečnění lýze nádoru. Dávka bude záviset na věku, stavu, pohlaví a rozsahu pacientovy choroby a může se měnit od 0,1 mg/kg do 200 mg/kg, výhodně od 5 0,2 mg/kg do 100 mg/kg/dávka v jednom nebo více denních podáních, po jeden nebo několik dnů.
Přípravky pro parenterální podání obsahují sterilní vodné nebo nevodné roztoky, suspenze a emulze. Příklady nevodných rozpouštědel jsou propylenglykol, polyethylenglykol, rostlinné oleje jako jsou olivové oleje a injektovatelné organické estery jako je ethyloleát a jiná rozpouštědla 10 známá v oboru, která jsou vhodná pro tyto účely. Imunokonjugáty podle vynálezu mohou být použity v přípravku, obsahujícím fyziologicky přijatelný nosič. Příklady takových vhodných nosičů jsou salinický roztok, PBS, Ringerův roztok nebo Ringerův roztok s laktátem. Ve farmaceutických přípravcích mohou být také použity ochranné látky a jiné přísady jako jsou antibiotika, antioxidanty a chelatační činidla.
Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou vhodné pro léčbu všech typů nádorů, zahrnujících melanomy, gliomy a karcinomy, jakož i krevní tumory a pevné tumory.
Tabulka I. PCR primery použité pro generaci MAb425-cytokin fuznich proteinů
konstrukt | primer | primer DNA sekvence |
CH2-IL-2 | cyl 5' primer* | 5'AACAGCTATGACCATG 3' |
cyl 3' primer | 5'ACTTGAAGTAGGTGCCATTTTGGCTTTGGAGATGGT3' | |
cytokin 5'primer | 5'ATGGCACCTACTTCAAGT 3' | |
cytokin 3'primer | 5'TATAGCGGCCGCGTCGACTCAAGTTAGTGTTGAGATG 3' | |
CH3-IL-2 | cyl 5' primer*’ | 5'CAAGACAAAGCCGCGGGAG 3' |
cyl 3' primer | 5'ACTTGAAGTAGGTGCCATTTTACCCGGAGACAGGGAG 3' | |
cytokin 5'primer | 5'ATGGCACCTACTTCAAGT 3' | |
cytokin 3' primer | 5'CTTCTTCTAGACACTGCAG 3' | |
CH1-IL-4 | cytokin 5' primer | 5'ATCACCATGGTAATGCACAAGTGCGATATCACC 3' |
cytokin 3' primer*** | 5'CAGGAAACAGCTATGAC 3' | |
CH1-IL-7 | cytokin 5' primer | 5'CTTACCTGCCATGGATTG 3' |
cytokin 3' primer | 5'CAGAATTCGGATCCTTATCAGTG 3' | |
CH2-IL-7 | cyl 5' primer* | 5'AACAGCTATGACCATG 3' |
cyl 3' primer | 5'TTCGATATCACAATCCATTTTGGCTTTGGAGATGGT3' | |
cytokin 5' primer | 5'ATGGATTGTGATATCGAA 3' | |
cytokin 3' primer | 5'TAATTCTAGATCAGTGTTCTTTAGTGC 3' |
Tabulka II. PCR primery použité pro generaci FAb425-cytokin fuznich proteinů (prokaiyotická exprese)
konstrukt | primer | primer DNA sekvence |
CH2-IL-2 | cytokin 5' primer | 5'CTTACCTGCCATGGCACCT 3' |
cytokin 3' primer | 5'TGGTAGCGGCCGCTTATCAAGTTAGTGTTGA 3' | |
CH1-IL-4 | cytokin 5' primer | 5'ATCACCATGGTAATGCACAAGTGCGATATCACC 3' |
cytokin 3' primer | 5'GGTAGCGGCCGCTTATCAGCTCGAACACTT 3' | |
CH1-IL-7 | cytokin 5' primer | 5'CTTACCTGCCATGGATTG 3' |
cytokin 3' primer | 5'TGGTAGCGGCCGCTTATCAGTGTTCTTTAGT 3' |
Claims (13)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Imunokonjugát, obsahující 1) monoklonální protilátku nebo její fragment směrovaný k nádorové buňce nesoucí antigenní epitop receptoru epidermálního růstového faktoru, EGFR, a 2) biologicky aktivní ligand, který je fúzován k uvedené protilátce nebo fragmentu protilátky a mající cytotoxickou kapacitu pro lýzi nádorových buněk specificky in šitu nebo indukující nádorově specifickou imunitní odezvu, kde biologicky aktivním ligandem je cytokin.
- 2. Imunokonjugát podle nároku 1, kde cytokin je vybrán ze skupiny TNFa, IL-2, IL-^4 a IL-7.
- 3. Imunokonjugát podle nároku 1 nebo 2, kde protilátkou je Fab fragment nebo F(ab')2 fragment, sestávající alespoň z variabilní oblasti těžkého řetězce protilátky, CH1 domény konstantní oblasti a vhodného lehkého řetězce.
- 4. Imunokonjugát podle nároku 1 nebo 2, kde protilátkou je fragment protilátky, sestávající alespoň z variabilní oblasti těžkého řetězce protilátky, CH1 a CH2 domény konstantní oblasti a vhodného lehkého řetězce.
- 5. Imunokonjugát podle nároku 1 nebo 2, kde protilátka sestává z alespoň variabilní oblasti těžkého řetězce protilátky, CH1, CH2 a CH3 domény konstantní oblasti a vhodného lehkého řetězce.
- 6. Imunokonjugát podle některého z nároků 1 až 4, kde je protilátka nebo fragment protilátky odvozen od myší, humanizované nebo chimérické MAb 425.
- 7. Imunokonjugát podle nároku 6, vybraný ze skupiny MAb 425-CHl-TNFa, MAb 425CH2-TNFa, MAb 425-CH3-TNFa, MAb 425-CH1-IL2, MAb 425-CH2-IL2 a MAb 425CH3-IL2.
- 8. Způsob výroby imunokonjugátu podle některého z nároků laž7, vyznačující se tím, že se vzájemně fúzují DNA sekvence, kódující protilátku nebo fragment protilátky a biologicky aktivní ligand, výsledný konstrukt se umístí do expresního vektoru, který se transformuje do hostitelského organismu, hostitelské buňky se kultivují v živném roztoku a exprimuje se fúzní protein.
- 9. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že se fúzují DNA sekvence kódující protilátku nebo fragmenty protilátky a biologicky aktivní ligand na jednořetězcovou DNA pomocí oligonukleotidu, který je komplementární k požadované fúzní DNA-sekvenci.
- 10. Způsob podle nároku 8 nebo 9, vyznačující se tím, že konjugáty protilátka-CHl se exprimují v hostiteli E.coli.
- 11. Způsob podle nároku 8 nebo 9, vy zn ač u j í c í se t í m, že konjugáty protilátka-CH2 nebo protilátka-CH3 se exprimují v eukaryotickém hostiteli.
- 12. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden imunokonjugát podle nároků 1 až 7 a fyziologicky přijatelný nosič.
- 13. Použití imunokonjugátu podle některého z nároků 1 až 7 pro přípravu léčiva směrovaného proti nádorům.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP93120865 | 1993-12-24 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ330694A3 CZ330694A3 (en) | 1995-10-18 |
CZ289099B6 true CZ289099B6 (cs) | 2001-11-14 |
Family
ID=8213530
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ19943306A CZ289099B6 (cs) | 1993-12-24 | 1994-12-27 | Imunokonjugát, způsob jeho výroby a pouľití a farmaceutický přípravek na jeho bázi |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6979726B1 (cs) |
EP (1) | EP0659439B1 (cs) |
JP (2) | JPH07223968A (cs) |
KR (1) | KR950016781A (cs) |
AT (1) | ATE207366T1 (cs) |
AU (1) | AU688817B2 (cs) |
CA (1) | CA2138928C (cs) |
CZ (1) | CZ289099B6 (cs) |
DE (1) | DE69428764T2 (cs) |
DK (1) | DK0659439T3 (cs) |
ES (1) | ES2166368T3 (cs) |
HU (1) | HU219680B (cs) |
NO (1) | NO315903B1 (cs) |
PL (1) | PL178793B1 (cs) |
PT (1) | PT659439E (cs) |
RU (1) | RU2129018C1 (cs) |
SK (1) | SK283494B6 (cs) |
UA (1) | UA41888C2 (cs) |
ZA (1) | ZA9410282B (cs) |
Families Citing this family (173)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CU22545A1 (es) * | 1994-11-18 | 1999-03-31 | Centro Inmunologia Molecular | Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico |
WO1998011241A1 (en) * | 1996-09-16 | 1998-03-19 | Merck Patent Gmbh | Oligocistronic expression system for the production of heteromeric proteins |
EP2112167A3 (en) | 1999-06-25 | 2010-12-22 | Genentech, Inc. | Humanized ANTI-ERBB2 antibodies and treatment with ANTI-ERBB2 antibodies |
MXPA05000403A (es) | 2002-07-15 | 2005-07-22 | Genentech Inc | Metodos para identificar tumores que responden al tratamiento con anticuerpos contra erbb2. |
KR101438983B1 (ko) | 2003-11-06 | 2014-09-05 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물 |
RU2369616C2 (ru) | 2003-12-30 | 2009-10-10 | Мерк Патент Гмбх | Слитые белки il-7 |
WO2005070020A2 (en) | 2004-01-23 | 2005-08-04 | The Regents Of The University Of Colorado | Gefitinib sensitivity-related gene expression and products and methods related thereto |
EP1737489B1 (en) | 2004-04-08 | 2012-01-11 | David B Agus | ErbB2 antagonists for tumor pain therapy |
AU2005249492B2 (en) | 2004-05-27 | 2011-09-22 | The Regents Of The University Of Colorado | Methods for prediction of clinical outcome to epidermal growth factor receptor inhibitors by cancer patients |
AU2005249490B2 (en) | 2004-06-01 | 2010-07-29 | Genentech, Inc. | Antibody drug conjugates and methods |
PL1791565T3 (pl) | 2004-09-23 | 2016-10-31 | Modyfikowane cysteiną przeciwciała i koniugaty | |
JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
CN101141981A (zh) | 2005-01-21 | 2008-03-12 | 健泰科生物技术公司 | Her抗体的固定剂量给药 |
EP2399605A1 (en) | 2005-02-23 | 2011-12-28 | Genentech, Inc. | Extending time to disease progression or survival in cancer patients |
AR053272A1 (es) | 2005-05-11 | 2007-04-25 | Hoffmann La Roche | Determinacion de responsivos a la quimioterapia |
KR101397290B1 (ko) | 2005-12-30 | 2014-05-21 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 감소한 면역원성을 가지는 항-cd19 항체 |
JP5175214B2 (ja) | 2005-12-30 | 2013-04-03 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 改良された安定性を有するインターロイキン−12p40変種 |
EP2030984B1 (en) * | 2006-06-16 | 2011-05-11 | Onco Therapy Science, Inc. | Sparc-derived cancer rejection antigen peptide and pharmaceutical comprising the same |
US20100008910A1 (en) | 2006-09-12 | 2010-01-14 | John Chant | Methods and compositions for the diagnosis and treatment of cancer |
WO2008109440A2 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Genentech, Inc. | Predicting response to a her dimerisation inhibitor based on low her3 expression |
CA3006428A1 (en) | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Genentech, Inc. | Gene expression markers of tumor resistance to her2 inhibitor treatment |
TWI472339B (zh) | 2008-01-30 | 2015-02-11 | Genentech Inc | 包含結合至her2結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物 |
KR20130080871A (ko) | 2009-03-20 | 2013-07-15 | 제넨테크, 인크. | 이중특이적 항-her 항체 |
US9345661B2 (en) | 2009-07-31 | 2016-05-24 | Genentech, Inc. | Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof |
SG178443A1 (en) * | 2009-08-17 | 2012-04-27 | Roche Glycart Ag | Targeted immunoconjugates |
CA2781682A1 (en) | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Genentech, Inc. | Multispecific antibodies, antibody analogs, compositions, and methods |
TW201129565A (en) | 2010-01-12 | 2011-09-01 | Hoffmann La Roche | Tricyclic heterocyclic compounds, compositions and methods of use thereof |
SI2536748T1 (sl) | 2010-02-18 | 2014-12-31 | Genentech, Inc. | Nevrogulinski antagonisti in njihova uporaba pri zdravljenju raka |
WO2011112935A2 (en) * | 2010-03-12 | 2011-09-15 | The Regents Of The University Of California | Antibody fusion proteins with disrupted heparin-binding activity |
CA2793024A1 (en) | 2010-03-17 | 2011-09-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Imidazopyridine compounds, compositions and methods of use |
CA2793892A1 (en) | 2010-04-16 | 2011-10-20 | Elizabeth Punnoose | Foxo3a as predictive biomarker for pi3k/akt kinase pathway inhibitor efficacy |
WO2011146568A1 (en) | 2010-05-19 | 2011-11-24 | Genentech, Inc. | Predicting response to a her inhibitor |
US20120089541A1 (en) | 2010-08-31 | 2012-04-12 | Genentech, Inc. | Biomarkers and methods of treatment |
AR082974A1 (es) | 2010-09-15 | 2013-01-23 | Hoffmann La Roche | Derivados de azabenzotiazol, composiciones farmaceuticas que los contienen, metodo para prepararlos y uso de los mismos para tratar enfermedades inflamatorias |
AR083495A1 (es) | 2010-10-22 | 2013-02-27 | Esbatech Alcon Biomed Res Unit | Anticuerpos estables y solubles |
BR112013010569A2 (pt) | 2010-10-29 | 2017-07-04 | Immunogen Inc | moléculas de ligação de egfr não antagonísticas e imunoconjugados das mesma |
EA201390472A1 (ru) | 2010-10-29 | 2014-02-28 | Иммьюноджен, Инк. | Новые молекулы, связывающиеся с egfr, и их иммуноконъюгаты |
US9309322B2 (en) | 2010-11-12 | 2016-04-12 | Scott & White Healthcare (Swh) | Antibodies to tumor endothelial marker 8 |
BR112013011520A2 (pt) | 2010-11-19 | 2019-09-24 | Hoffmann La Roche | pirazolo piridinas e pirazolo piridinas e seu uso como inibidores de tyk2 |
WO2012085176A1 (en) | 2010-12-23 | 2012-06-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tricyclic pyrazinone compounds, compositions and methods of use thereof as janus kinase inhibitors |
WO2013007768A1 (en) | 2011-07-13 | 2013-01-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tricyclic heterocyclic compounds, compositions and methods of use thereof as jak inhibitors |
WO2013007765A1 (en) | 2011-07-13 | 2013-01-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fused tricyclic compounds for use as inhibitors of janus kinases |
BR112014003237A2 (pt) | 2011-08-12 | 2017-04-25 | Hoffmann La Roche | compostos de indazol, composições e métodos de uso |
BR112014003431A2 (pt) | 2011-08-17 | 2017-06-13 | Genentech Inc | anticorpo, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, agente farmacêutico, uso do anticorpo, método de tratamento de um indivíduo que tem câncer e método de aumento de tempo para recorrência de tumor |
WO2013041539A1 (en) | 2011-09-20 | 2013-03-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Imidazopyridine compounds, compositions and methods of use |
AU2012340686A1 (en) | 2011-11-21 | 2014-06-19 | Immunogen, Inc. | Method of treatment of tumors that are resistant to EGFR therapies by EGFR antibody cytotoxic agent conjugate |
AU2012346540C1 (en) | 2011-11-30 | 2019-07-04 | Genentech, Inc. | ErbB3 mutations in cancer |
BR112014024017A8 (pt) | 2012-03-27 | 2017-07-25 | Genentech Inc | Métodos de tratamento de um tipo de câncer, de tratamento do carcinoma, para selecionar uma terapia e para quantificação e inibidor de her3 |
CN104994879A (zh) | 2013-02-22 | 2015-10-21 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 治疗癌症和预防药物抗性的方法 |
BR112015021423A2 (pt) | 2013-03-06 | 2017-07-18 | Genentech Inc | métodos de tratamento de câncer, de células de câncer e de câncer resistente a antagonista de egfr, métodos de aumento da sensibilidade e da eficácia de tratamento de câncer e métodos de atraso, de tratamento de indivíduos com câncer e de extensão |
BR112015022545A2 (pt) | 2013-03-13 | 2017-07-18 | Constellation Pharmaceuticals Inc | compostos de pirazolo e os usos disso |
RU2015139054A (ru) | 2013-03-14 | 2017-04-19 | Дженентек, Инк. | Способы лечения рака и профилактики лекарственной резистентности рака |
AU2014239903A1 (en) | 2013-03-14 | 2015-09-17 | Genentech, Inc. | Combinations of a MEK inhibitor compound with an HER3/EGFR inhibitor compound and methods of use |
KR20150130451A (ko) | 2013-03-15 | 2015-11-23 | 제넨테크, 인크. | 암 치료 방법 및 항암제 내성 예방을 위한 방법 |
TW201945032A (zh) * | 2013-03-15 | 2019-12-01 | 德商艾伯維德國有限及兩合公司 | 抗-egfr抗體藥物結合物調配物 |
CN104250302B (zh) * | 2013-06-26 | 2017-11-14 | 上海君实生物医药科技股份有限公司 | 抗pd‑1抗体及其应用 |
EP3041474B1 (en) | 2013-09-05 | 2020-03-18 | Genentech, Inc. | Antiproliferative compounds |
TW201605857A (zh) | 2013-10-03 | 2016-02-16 | 赫孚孟拉羅股份公司 | Cdk8之醫療性抑制劑及其用途 |
US20150147333A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-05-28 | Genentech, Inc. | Anti-rspo antibodies and methods of use |
KR20160099092A (ko) | 2013-12-17 | 2016-08-19 | 제넨테크, 인크. | Ox40 결합 효능제 및 pd-1 축 결합 길항제를 포함하는 조합 요법 |
KR20240017102A (ko) | 2013-12-17 | 2024-02-06 | 제넨테크, 인크. | Pd-1 축 결합 길항제 및 탁산을 이용한 암 치료 방법 |
JP2017516458A (ja) | 2014-03-24 | 2017-06-22 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | c−met拮抗剤による癌治療及びc−met拮抗剤のHGF発現との相関 |
MX2016012779A (es) | 2014-03-31 | 2017-04-27 | Genentech Inc | Terapia de combinacion con agentes antiangiogénesis y agonistas de unión a ox40. |
PT3126394T (pt) | 2014-03-31 | 2019-12-19 | Hoffmann La Roche | Anticorpos anti-ox40 e métodos de utilização |
CA2944528C (en) * | 2014-04-03 | 2021-08-10 | Cellectis | Cd33 specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy |
CN107074823B (zh) | 2014-09-05 | 2021-05-04 | 基因泰克公司 | 治疗性化合物及其用途 |
WO2016044694A1 (en) | 2014-09-19 | 2016-03-24 | Genentech, Inc. | Use of cbp/ep300 and bet inhibitors for treatment of cancer |
EP3204379B1 (en) | 2014-10-10 | 2019-03-06 | Genentech, Inc. | Pyrrolidine amide compounds as histone demethylase inhibitors |
EP3215850B1 (en) | 2014-11-03 | 2019-07-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof |
US20160160290A1 (en) | 2014-11-03 | 2016-06-09 | Genentech, Inc. | Methods and biomarkers for predicting efficacy and evaluation of an ox40 agonist treatment |
US20160152720A1 (en) | 2014-11-06 | 2016-06-02 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors |
MA40943A (fr) | 2014-11-10 | 2017-09-19 | Constellation Pharmaceuticals Inc | Pyrrolopyridines substituées utilisées en tant qu'inhibiteurs de bromodomaines |
MA40940A (fr) | 2014-11-10 | 2017-09-19 | Constellation Pharmaceuticals Inc | Pyrrolopyridines substituées utilisées en tant qu'inhibiteurs de bromodomaines |
CN107108613B (zh) | 2014-11-10 | 2020-02-25 | 基因泰克公司 | 布罗莫结构域抑制剂及其用途 |
AU2015350242A1 (en) | 2014-11-17 | 2017-06-29 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising OX40 binding agonists and PD-1 axis binding antagonists |
JP6771464B2 (ja) | 2014-11-27 | 2020-10-21 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | Cbpおよび/またはep300インヒビターとしての、4,5,6,7−テトラヒドロ−1h−ピラゾロ[4,3−c]ピリジン−3−アミン化合物 |
EP3229836B1 (en) | 2014-12-09 | 2019-11-13 | Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) | Human monoclonal antibodies against axl |
MX2017006864A (es) | 2014-12-23 | 2017-08-28 | Genentech Inc | Composiciones y métodos para tratar y diagnosticar cánceres resistentes a la quimioterapia. |
EP3240908A2 (en) | 2014-12-30 | 2017-11-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods and compositions for prognosis and treatment of cancers |
JP6855379B2 (ja) | 2015-01-09 | 2021-04-07 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 癌の処置のためのヒストンデメチラーゼkdm2bのインヒビターとしての(ピペリジン−3−イル)(ナフタレン−2−イル)メタノン誘導体および関連化合物 |
JP6659703B2 (ja) | 2015-01-09 | 2020-03-04 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ピリダジノン誘導体および癌の処置におけるそれらの使用 |
JP6889661B2 (ja) | 2015-01-09 | 2021-06-18 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 4,5−ジヒドロイミダゾール誘導体およびヒストンジメチラーゼ(kdm2b)インヒビターとしてのその使用 |
US20180318414A1 (en) | 2015-01-12 | 2018-11-08 | Children's Medical Center Corporation | Pro-Inflammatory and Adjuvant Functions of Toll-Like Receptor 4 Antagonists |
JP6709792B2 (ja) | 2015-01-29 | 2020-06-17 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 治療用化合物およびその使用 |
CN107438593B (zh) | 2015-01-30 | 2020-10-30 | 基因泰克公司 | 治疗化合物及其用途 |
CN107249641B (zh) * | 2015-02-18 | 2021-07-09 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于特异性诱导针对靶细胞的t细胞细胞毒性的免疫缀合物 |
MA41598A (fr) | 2015-02-25 | 2018-01-02 | Constellation Pharmaceuticals Inc | Composés thérapeutiques de pyridazine et leurs utilisations |
WO2016135041A1 (en) | 2015-02-26 | 2016-09-01 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis |
WO2016164480A1 (en) | 2015-04-07 | 2016-10-13 | Genentech, Inc. | Antigen binding complex having agonistic activity and methods of use |
IL255312B (en) | 2015-05-12 | 2022-08-01 | Genentech Inc | Therapeutic and diagnostic methods for cancer containing a pd–l1 binding antagonist |
EP3708681A1 (en) | 2015-05-29 | 2020-09-16 | F. Hoffmann-La Roche AG | Therapeutic and diagnostic methods for cancer |
CN107810011A (zh) | 2015-06-08 | 2018-03-16 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 使用抗ox40抗体治疗癌症的方法 |
EP3303397A1 (en) | 2015-06-08 | 2018-04-11 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists |
CA2986263A1 (en) | 2015-06-17 | 2016-12-22 | Genentech, Inc. | Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes |
DK3341376T3 (da) | 2015-08-26 | 2021-03-29 | Fundacion Del Sector Publico Estatal Centro Nac De Investigaciones Oncologicas Carlos Iii F S P Cnio | Kondenserede tricykliske forbindelser som proteinkinase-inhibitorer |
RU2732591C2 (ru) | 2015-09-25 | 2020-09-21 | Дженентек, Инк. | Анти-tigit антитела и способы применения |
WO2017106647A1 (en) | 2015-12-16 | 2017-06-22 | Genentech, Inc. | Process for the preparation of tricyclic pi3k inhibitor compounds and methods for using the same for the treatment of cancer |
CN108368179B (zh) | 2016-01-08 | 2022-08-23 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 使用pd-1轴结合拮抗剂和抗cea/抗cd3双特异性抗体治疗cea阳性癌症的方法 |
AU2017225854B2 (en) | 2016-02-29 | 2020-11-19 | Foundation Medicine, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for cancer |
WO2017180864A1 (en) | 2016-04-14 | 2017-10-19 | Genentech, Inc. | Anti-rspo3 antibodies and methods of use |
CA3019921A1 (en) | 2016-04-15 | 2017-10-19 | Genentech, Inc. | Methods for monitoring and treating cancer |
WO2017180581A1 (en) | 2016-04-15 | 2017-10-19 | Genentech, Inc. | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
CN109154027A (zh) | 2016-04-15 | 2019-01-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于监测和治疗癌症的方法 |
US20190151346A1 (en) | 2016-05-10 | 2019-05-23 | INSERM (Institute National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Combinations therapies for the treatment of cancer |
WO2017205536A2 (en) | 2016-05-24 | 2017-11-30 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and uses thereof |
WO2017205538A1 (en) | 2016-05-24 | 2017-11-30 | Genentech, Inc. | Pyrazolopyridine derivatives for the treatment of cancer |
CN109312407A (zh) | 2016-06-08 | 2019-02-05 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的诊断和治疗方法 |
EP3494139B1 (en) | 2016-08-05 | 2022-01-12 | F. Hoffmann-La Roche AG | Multivalent and multiepitopic anitibodies having agonistic activity and methods of use |
CN109476748B (zh) | 2016-08-08 | 2023-05-23 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的治疗和诊断方法 |
KR20190072528A (ko) | 2016-10-06 | 2019-06-25 | 제넨테크, 인크. | 암에 대한 치료 및 진단 방법 |
EP3532091A2 (en) | 2016-10-29 | 2019-09-04 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Anti-mic antibidies and methods of use |
TW201837467A (zh) | 2017-03-01 | 2018-10-16 | 美商建南德克公司 | 用於癌症之診斷及治療方法 |
SG11201908929VA (en) * | 2017-03-31 | 2019-10-30 | Univ Leland Stanford Junior | Synthekine compositions and methods of use |
BR112019021411A2 (pt) | 2017-04-13 | 2020-05-05 | Hoffmann La Roche | métodos para tratar ou retardar a progressão do câncer e para melhorar a função, usos de um imunoconjugado, de um agonista, de um antagonista, composições, kit e invenção |
AU2018316343A1 (en) | 2017-08-11 | 2020-02-13 | Genentech, Inc. | Anti-CD8 antibodies and uses thereof |
AU2018329925A1 (en) | 2017-09-08 | 2020-03-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
EP3710001A4 (en) | 2017-10-27 | 2021-07-14 | University Of Virginia Patent Foundation | COMPOUNDS AND PROCEDURES FOR REGULATING, LIMITING OR INHIBITING AVIL EXPRESSION |
EP3707510B1 (en) | 2017-11-06 | 2024-06-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
CA3092108A1 (en) | 2018-02-26 | 2019-08-29 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
WO2019226514A2 (en) | 2018-05-21 | 2019-11-28 | Nanostring Technologies, Inc. | Molecular gene signatures and methods of using same |
CA3103017A1 (en) | 2018-06-23 | 2019-12-26 | Genentech, Inc. | Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor |
MX2021000558A (es) | 2018-07-18 | 2021-04-13 | Genentech Inc | Metodos para tratar el cancer de pulmon con un antagonista de fijacion al eje pd-1, un antimetabolito y un agente de platino. |
WO2020051099A1 (en) | 2018-09-03 | 2020-03-12 | Genentech, Inc. | Carboxamide and sulfonamide derivatives useful as tead modulators |
WO2020061060A1 (en) | 2018-09-19 | 2020-03-26 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer |
CA3111809A1 (en) | 2018-09-21 | 2020-03-26 | Genentech, Inc. | Diagnostic methods for triple-negative breast cancer |
CA3116324A1 (en) | 2018-10-18 | 2020-04-23 | Genentech, Inc. | Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer |
CN112166122A (zh) * | 2018-12-13 | 2021-01-01 | 丁邦 | 抗体-肿瘤坏死因子α融合蛋白及其制法和应用 |
WO2020163589A1 (en) | 2019-02-08 | 2020-08-13 | Genentech, Inc. | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
CN113677994A (zh) | 2019-02-27 | 2021-11-19 | 外延轴治疗股份有限公司 | 用于评估t细胞功能和预测对疗法的应答的方法和药剂 |
JP2022521773A (ja) | 2019-02-27 | 2022-04-12 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗tigit抗体と抗cd20抗体又は抗cd38抗体とによる処置のための投薬 |
WO2020223233A1 (en) | 2019-04-30 | 2020-11-05 | Genentech, Inc. | Prognostic and therapeutic methods for colorectal cancer |
WO2020226986A2 (en) | 2019-05-03 | 2020-11-12 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody |
CN112300279A (zh) | 2019-07-26 | 2021-02-02 | 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 | 针对抗cd73抗体和变体的方法和组合物 |
MX2022002738A (es) | 2019-09-04 | 2022-06-27 | Genentech Inc | Agentes de union a cd8 y uso de los mismos. |
AU2020351734A1 (en) | 2019-09-27 | 2022-04-14 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-TIGIT and anti-PD-L1 antagonist antibodies |
WO2021083949A1 (en) | 2019-10-29 | 2021-05-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bifunctional compounds for the treatment of cancer |
KR20220092580A (ko) | 2019-11-06 | 2022-07-01 | 제넨테크, 인크. | 혈액암의 치료를 위한 진단과 치료 방법 |
KR20220101138A (ko) | 2019-11-13 | 2022-07-19 | 제넨테크, 인크. | 치료적 화합물 및 사용 방법 |
AU2020403145A1 (en) | 2019-12-13 | 2022-07-07 | Genentech, Inc. | Anti-Ly6G6D antibodies and methods of use |
WO2021127404A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Erasca, Inc. | Tricyclic pyridones and pyrimidones |
WO2021194481A1 (en) | 2020-03-24 | 2021-09-30 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
WO2021177980A1 (en) | 2020-03-06 | 2021-09-10 | Genentech, Inc. | Combination therapy for cancer comprising pd-1 axis binding antagonist and il6 antagonist |
CN115698717A (zh) | 2020-04-03 | 2023-02-03 | 基因泰克公司 | 癌症的治疗和诊断方法 |
WO2021222167A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-04 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy |
EP3915576A1 (en) | 2020-05-28 | 2021-12-01 | Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron | Chimeric antigen receptors specific for p95her2 and uses thereof |
AU2021293038A1 (en) | 2020-06-16 | 2023-02-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer |
IL298946A (en) | 2020-06-18 | 2023-02-01 | Genentech Inc | Treatment with anti-TIGIT antibodies and PD-1 spindle-binding antagonists |
US20230235408A1 (en) | 2020-06-30 | 2023-07-27 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for predicting the risk of recurrence and/or death of patients suffering from a solid cancer after preoperative adjuvant therapies |
US20230266322A1 (en) | 2020-06-30 | 2023-08-24 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for predicting the risk of recurrence and/or death of patients suffering from a solid cancer after preoperative adjuvant therapy and radical surgery |
EP3939999A1 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-19 | Fundación del Sector Público Estatal Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas Carlos III (F.S.P. CNIO) | Interleukin 11 receptor alpha subunit (il11ra) neutralizing antibodies and uses thereof |
US11787775B2 (en) | 2020-07-24 | 2023-10-17 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and methods of use |
CN116568824A (zh) | 2020-08-03 | 2023-08-08 | 基因泰克公司 | 淋巴瘤的诊断和治疗方法 |
WO2022036146A1 (en) | 2020-08-12 | 2022-02-17 | Genentech, Inc. | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
CA3193952A1 (en) | 2020-10-05 | 2022-04-14 | Bernard Martin Fine | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
US20230107642A1 (en) | 2020-12-18 | 2023-04-06 | Erasca, Inc. | Tricyclic pyridones and pyrimidones |
JP2024506339A (ja) | 2021-02-12 | 2024-02-13 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | がんの治療のための二環式テトラヒドロアゼピン誘導体 |
KR20240026948A (ko) | 2021-05-25 | 2024-02-29 | 에라스카, 아이엔씨. | 황 함유 헤테로방향족 트리사이클릭 kras 억제제 |
WO2022266206A1 (en) | 2021-06-16 | 2022-12-22 | Erasca, Inc. | Kras inhibitor conjugates |
TW202321261A (zh) | 2021-08-10 | 2023-06-01 | 美商伊瑞斯卡公司 | 選擇性kras抑制劑 |
US20230203062A1 (en) | 2021-11-24 | 2023-06-29 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and methods of use |
TW202332429A (zh) | 2021-11-24 | 2023-08-16 | 美商建南德克公司 | 治療性化合物及其使用方法 |
EP4253418A1 (en) | 2022-03-29 | 2023-10-04 | Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron | Immune cells expressing chimeric antigen receptors and bispecific antibodies and uses thereof |
WO2023191816A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
WO2023219613A1 (en) | 2022-05-11 | 2023-11-16 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
WO2023240058A2 (en) | 2022-06-07 | 2023-12-14 | Genentech, Inc. | Prognostic and therapeutic methods for cancer |
WO2024015897A1 (en) | 2022-07-13 | 2024-01-18 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
WO2024020432A1 (en) | 2022-07-19 | 2024-01-25 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
WO2024033458A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydroazepine derivatives |
WO2024033388A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives |
WO2024033389A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives |
WO2024033457A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives |
WO2024085242A2 (en) | 2022-10-21 | 2024-04-25 | Kawasaki Institute Of Industrial Promotion | Non-fouling or super stealth vesicle |
WO2024091991A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-02 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5470571A (en) * | 1988-01-27 | 1995-11-28 | The Wistar Institute | Method of treating human EGF receptor-expressing gliomas using radiolabeled EGF receptor-specific MAB 425 |
IE63847B1 (en) * | 1989-05-05 | 1995-06-14 | Res Dev Foundation | A novel antibody delivery system for biological response modifiers |
CA2066428C (en) * | 1989-09-08 | 2000-11-28 | Bert Vogelstein | Structural alterations of the egf receptor gene in human gliomas |
US5314995A (en) * | 1990-01-22 | 1994-05-24 | Oncogen | Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins |
ATE218889T1 (de) * | 1990-11-09 | 2002-06-15 | Stephen D Gillies | Cytokine immunokonjugate |
ES2204890T3 (es) * | 1991-03-06 | 2004-05-01 | Merck Patent Gmbh | Anticuerpos monoclonales humanizados. |
JPH06509563A (ja) * | 1991-07-05 | 1994-10-27 | セラゲン・インコーポレイテッド | 炎症性関節炎の治療用の表皮細胞成長因子受容体を標的とする分子 |
DE69327620T2 (de) * | 1992-08-18 | 2000-08-03 | Immunologia Molecular Ciudad D | Monoklonale Antikörper gegen den epidermalen Wachstumsfaktorrezeptor, Zellen und Verfahren zur ihrer Herstellung und sie erhaltende Zusammensetzungen |
DK139193D0 (da) | 1993-09-24 | 1993-12-13 | Hartmann As Brdr | Rektangulaer aegbakke |
EP0699237B1 (en) * | 1994-03-17 | 2003-02-19 | MERCK PATENT GmbH | Anti-egfr single-chain fvs and anti-egfr antibodies |
-
1994
- 1994-12-14 DE DE69428764T patent/DE69428764T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 EP EP94119712A patent/EP0659439B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 DK DK94119712T patent/DK0659439T3/da active
- 1994-12-14 AT AT94119712T patent/ATE207366T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-12-14 ES ES94119712T patent/ES2166368T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 PT PT94119712T patent/PT659439E/pt unknown
- 1994-12-19 SK SK1562-94A patent/SK283494B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-12-20 AU AU81593/94A patent/AU688817B2/en not_active Ceased
- 1994-12-21 UA UA94129229A patent/UA41888C2/uk unknown
- 1994-12-22 PL PL94306474A patent/PL178793B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-12-22 JP JP6320978A patent/JPH07223968A/ja active Pending
- 1994-12-22 CA CA002138928A patent/CA2138928C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-22 ZA ZA9410282A patent/ZA9410282B/xx unknown
- 1994-12-22 NO NO19944980A patent/NO315903B1/no not_active IP Right Cessation
- 1994-12-23 KR KR1019940036168A patent/KR950016781A/ko not_active Application Discontinuation
- 1994-12-23 US US08/362,951 patent/US6979726B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-23 RU RU94045281A patent/RU2129018C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-12-23 HU HU9403784A patent/HU219680B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-12-27 CZ CZ19943306A patent/CZ289099B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-06-28 JP JP2006178409A patent/JP2006298936A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HU9403784D0 (en) | 1995-02-28 |
EP0659439A3 (en) | 1996-12-04 |
KR950016781A (ko) | 1995-07-20 |
NO944980L (no) | 1995-06-26 |
AU688817B2 (en) | 1998-03-19 |
EP0659439B1 (en) | 2001-10-24 |
CZ330694A3 (en) | 1995-10-18 |
HUT70471A (en) | 1995-10-30 |
DE69428764D1 (de) | 2001-11-29 |
RU94045281A (ru) | 1996-11-10 |
JPH07223968A (ja) | 1995-08-22 |
ZA9410282B (en) | 1995-08-29 |
DK0659439T3 (da) | 2002-01-14 |
PL306474A1 (en) | 1995-06-26 |
DE69428764T2 (de) | 2002-06-20 |
AU8159394A (en) | 1995-06-29 |
ATE207366T1 (de) | 2001-11-15 |
ES2166368T3 (es) | 2002-04-16 |
SK283494B6 (sk) | 2003-08-05 |
JP2006298936A (ja) | 2006-11-02 |
US6979726B1 (en) | 2005-12-27 |
EP0659439A2 (en) | 1995-06-28 |
UA41888C2 (uk) | 2001-10-15 |
HU219680B (hu) | 2001-06-28 |
NO315903B1 (no) | 2003-11-10 |
PT659439E (pt) | 2002-04-29 |
CA2138928C (en) | 2009-02-17 |
NO944980D0 (no) | 1994-12-22 |
CA2138928A1 (en) | 1995-06-25 |
RU2129018C1 (ru) | 1999-04-20 |
PL178793B1 (pl) | 2000-06-30 |
SK156294A3 (en) | 1995-07-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ289099B6 (cs) | Imunokonjugát, způsob jeho výroby a pouľití a farmaceutický přípravek na jeho bázi | |
AU702184B2 (en) | Immunoconjugates II | |
JP4793971B2 (ja) | 複合サイトカイン−抗体複合体 | |
AU763719B2 (en) | Heterodimeric fusion proteins useful for targeted immune therapy and general immune stimulation | |
US20210369857A1 (en) | Il2 and tnf mutant immunoconjugates | |
US20070003514A1 (en) | Mono-and bi-functional antibody conjugates as effective adjuvants of protein vaccination | |
ES2284209T3 (es) | Citolisis de celulas diana por conjugados de superantigenos que inducen la activacion de celulas t. | |
JP7423607B2 (ja) | インターロイキン 2突然変異タンパク質およびi型インターフェロンで構成される融合タンパク質 | |
JP2002511432A (ja) | 新脈管形成インヒビターの同時投与による抗体−サイトカイン融合タンパク質媒介性免疫応答の増強 | |
US20160200789A1 (en) | Il4 conjugated to antibodies against extracellular matrix components | |
WO2020070150A1 (en) | Il2 immunoconjugates | |
Di Trani et al. | Overcoming the limitations of cytokines to improve cancer therapy | |
WO1997030089A1 (en) | Novel antibody-cytokine fusion protein, and methods of making and using the same | |
EP1731531B1 (en) | Multiple cytokine-antibody complexes | |
CA3194929A1 (en) | Modified cxcl10 for immunotherapy of cancer diseases | |
Harvill | Properties of an IgG3-IL-2 fusion protein: Enhanced binding to the IL-2R alpha subunit and stimulation of LAK activity in vitro; improved half-life; adjuvant properties and anti-tumor activity in vivo |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20101227 |