NO317666B1 - Insulinderivater med forhoyet sinkbinding, kompleks og farmasoytiske tilberedninger inneholdende disse samt proinsulin. - Google Patents
Insulinderivater med forhoyet sinkbinding, kompleks og farmasoytiske tilberedninger inneholdende disse samt proinsulin. Download PDFInfo
- Publication number
- NO317666B1 NO317666B1 NO19973438A NO973438A NO317666B1 NO 317666 B1 NO317666 B1 NO 317666B1 NO 19973438 A NO19973438 A NO 19973438A NO 973438 A NO973438 A NO 973438A NO 317666 B1 NO317666 B1 NO 317666B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- insulin
- amino acid
- stands
- formula
- residue
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 184
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims description 9
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 title claims description 8
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 title description 5
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 82
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 82
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 81
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 40
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims description 33
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims description 32
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 30
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 26
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 26
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 18
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims description 13
- 108010076441 Ala-His-His Proteins 0.000 claims description 11
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 8
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 8
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- ATAKEVCGTRZKLI-UWJYBYFXSA-N Ala-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 ATAKEVCGTRZKLI-UWJYBYFXSA-N 0.000 claims description 5
- CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N His-His-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CN=CN1 CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 claims description 2
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims 9
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 101710186630 Insulin-1 Proteins 0.000 description 8
- 101710186643 Insulin-2 Proteins 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 6
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 6
- 101001012217 Conus geographus Con-Ins G3 Proteins 0.000 description 6
- 101001012221 Conus tulipa Con-Ins T3 Proteins 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010013359 miniproinsulin Proteins 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- -1 halogen cyanide Chemical class 0.000 description 3
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000007169 ligase reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- BMLMGCPTLHPWPY-REOHCLBHSA-N (4R)-2-oxo-4-thiazolidinecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CSC(=O)N1 BMLMGCPTLHPWPY-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940043430 calcium compound Drugs 0.000 description 1
- LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N caninsulin Chemical class [Zn].C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC3N=CN=C3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1C=NC=N1 LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940091908 glycerin 20 mg/ml Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002681 magnesium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006177 thiolation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
- A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører insulinderivater med forhøyet sinkbinding, kompleks og farmasøytiske tilberedninger inneholdende disse samt proinsulin.
Farmakokinetikken til subkutant applisert insulin er avhengig av dets assosiasjonsfor-hold. Inuslin danner, i nøytral vandig oppløsning, heksamerer. Når insulinet fra vevet skal komme ut i blodstrømmen og til virkestedet, må insulinet først passere kapillærveg-gene. Man antar at dette kun er mulig for monomert og for dimert insulin, - ikke eller bare kun lite mulig for heksamert insulin eller høyeremolekylært assosiert insulin (Brange et al., Diabetes Care: 13 (1990), sidene 923-954; Kang et al., Diabetes Care: 14
(1991), sidene 942-948). Dissosiasjonen ved heksameren er således forutsetning for rask overgang fra det subkutane vevet til blodstrømmen.
Assosiasjons- og aggregeringsforholdene til insulin blir påvirket av sink<++>, som fører til en stabilisering av heksameren og ved pH-verdien omkring det nøytrale punktet for dan-nelsen av høymolekylære aggregater som fører til utfellingen. Sink"<*>"<*>" som tilsetning til en ubuffret humaninsulinoppløsning (pH 4) påvirker imidlertid virkeprofilen lite. Selv om en slik oppløsning etter injeksjon raskt blir nøytralisert i det subkutane vevet og det danner seg insulin-sink-komplekser, rekker den naturlige sinkbindingen til humaninsulinet ikke til for å stabilisere heksamerer og høyere aggregater. Således blir ved tilset-ningen av sink±± frigivingen av humaninsulinet ikke vesentlig forsinket, og en sterk depoteffekt blir ikke oppnådd. Kjente insulinheksamerer viser et innhold på omkring 2 mol sink±±pr. mol insulinheksamer (Blundell et al., Adv. Protein Chem.: 26 (1972), sidene 323-328). To sinkioner pr. insulinheksamer er fast forbundet med insulinheksameren og kan ikke bli fjernet ved vanlig dialyse. Det er også blitt beskrevet såkalt 4-sink-insulinkrystaller, imidlertid inneholder disse krystallene gjennomsnittlig kun mind-re enn 3 mol sink±± pr. insulinheksamer (G.D. Smith et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA: 81, sidene 7093-7097)..
Målet med foreliggende oppfinnelse er å fremskaffe et insulinderivat som viser en for-høyet sinkbindingsevne, danner et stabilt kompleks inneholdende insulinheksamer og sink±± og viser en forsinket virkeprofil ved den subkutane injeksjonen sammenlignet med humaninsulin.
Det er nå funnet insulin med formelen I,
eller fysiologisk akseptable salter av insulinet med formel I, hvor
og restene A2-A20 tilsvarer aminosyresekvensen i A-kjeden til humaninsulin, animalsk insulin eller et insulinderivat og restene B2 - B29 tilsvarer aminosyreseekvensen i B-kjeden til humaninsulin, animalsk insulin eller et insulinderivat.
Spesielt foretrukket er et insulin med formel I, hvor
Videre foretrukket er et insulin med formelen I, hvor Spesielt foretrukket er et insulin med formelen I, hvor Helt spesielt foretrukket er et insulin med formelen I, hvor
Videre er et insulin med formel I foretrukket, hvor
Ri står for en fenylalaninrest, R.3 står for en glycinrest, Y står for en treoninrest og Z står for et peptid med 1 til 5 aminosyrerester.
Spesielt foretrukket er et insulin med formelen I, hvor
Z står for et peptid med sekvensen His His, His His Arg, Ala His His, Ala His His Arg, Ala Ala His His Arg eller Ala Ala His His.
Aminosyresekvensen til peptider og proteiner blir angitt fra den N-terminale enden av aminosyrekjeden. Angivelsene i parentes i formel I, f.eks. Al, A6, A7, Al 1, A20, Bl, B7, B19 eller B30 tilsvarer posisjonen til aminosyrerestene i A- eller B-kjedene i insulinet.
Begrepet "genetisk kodbar aminosyrerest" står for restene av aminosyrene Gly, Ala, Ser, Thr, Val, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Arg, Lys, His, Tyr, Phe, Trp, Pro og selenocystein.
Under begrepene "rester A2 - A20" og rester B2 - B29" fra animalsk insulin blir det eksempelvis forstått aminosyresekvensene til insulin fra storfe, svin eller høns. Begrepet restene A2 - A20 og B2 - B29 av insulinderivater står for de tilsvarende aminosyresekvensene til humaninsulin, som er blitt dannet ved utbytting av aminosyrer med andre genetisk kodbare aminosyrer.
A-kjeden til humaninsulin har følgende sekvens (sek. Id nr. 1):
Gly, Ile, Val, Glu, Gin, Cys, Cys, Thr, Ser, Ile, Cys, Ser, Leu, Tyr, Gin, Leu, Glu, Asn, Tyr, Cys, Asn.
B-kjeden til humaninsulin har følgende sekvens (sek. Id nr. 2):
Phe, Val, Asn, Gin, His, Leu, Cys, Gly, Ser, His, Leu, Val, Glu, Ala, Leu, Tyr, Leu, Val, Cys, Gly, Glu, Arg, Gly, Phe, Phe, Tyr, Thr, Pro, Lys, Thr.
Insulinderivatet med formelen I kan bli fremstilt i mikroorganismer ved hjelp av et fler-tall genetiske konstrukter (EP 0.489.780, EP 0.347.781, EP 0.368.187, EP 0,453.969). De genetiske konstrukter blir uttrykt i mikroorganismer som Escherichia coli eller Streptomyceter under fermentering. De dannede proteinene blir lagret inne i mikro-organismene (EP 0.489.780) eller blir utskilt i fermenteringsoppløsningen.
Eksempelvise insuliner med formelen I, er: Gly(A21 )-humaninsulin-His(B3 l)-His(B32)-OH
Gly(A21 )-humaninsulin-His(B31 )-His(B32)-Arg(B33)-OH
Gly(A21 )-humaninsulin-Ala(B31 )-His(B32)-His(B33)-OH
Gly(A21 )-humaninsulin-Ala(B3 l)-His(B32)-His(B33)-Arg(B34)-OH Gly(A21)-humaninsulin-Ala(B31)-Ala(B32)-His(B33)-His(B34)-OH Gly(A21)-humaninsulin-Ala(B31)-Ala(B32)-His(B33)-HisB34)-Arg(B35)-OH
Fremstillingen av insulinderivatet med formelen I skjer hovedsakelig genteknologisk ved hjelp av sete-rettet mutagenese ifølge standardmetoder. For dette blir genstrukturen som koder for det ønskede insulinderivatet med formelen I konstruert og brakt inn i en vertscelle - fortrinnsvis en bakterie som E.coli eller en sopp, spesielt Saccharomyces cerevisiae - for ekspresjon og - dersom genstrukturen koder for et fusjonsprotein - frigis insulinderivatet med formelen 1 fra fusjonsproteinet; analoge metoder er f.eks. beskrevet i EP-A-0.211.299, EP-A-0.227.938, EP-A-0.229.998, EP-A-0.286.956 og DE-patent-søknadP 38.21.159.
Avspaltningen av fusjonsproteinandelen skjer etter fjerning av celler enten kjemisk ved hjelp av halogencyan - se EP-A-0.180.920 - eller enzymatisk ved hjelp av lysostatin eller trypsin - se DE-A-37.39.347.
Insulinforløperen blir så underkastet den oksydative sulfitolysen ifølge f.eks. R.C. Marshall og A.S. Inglis i "Practical Protein Chemistry - A Handbook" (utgiver A. Darbre) 1986, sidene 49-53, og deretter denaturert i nærvær av tiol eller dannelse av de korrekte disulfidbroene, f.eks. ifølge metoden beskrevet av G.H. Dixon og A.C. Ward-low i Nature (1960), sidene 721-724.
Insulinforløperne kan også bli utfelt direkte (EP-A-0.600.372; EP-A-0.668.292). C-peptidet og - dersom tilstede - presekvensen (R^ i formel II) blir fjernet ved hjelp av tryptisk spalting - f.eks. ifølge metoden til Kemmler et al., J.B.C. (1971), sidene 6786-6791 og insulinderivatet i formelen I blir renset ved hjelp av kjente teknikker som kro-matografi - f.eks. EP-A-0.305.760 - og krystallisering.
Oppfinnelsen angår videre komplekser, kjennetegnet ved at de inneholder en insulinheksamer og 5 til 9 mol sink pr. insulinheksamer, spesielt 5 til 7 mol. sink±± pr. insulinheksamer, hvor insulinheksameren består av seks insulinmolekyler av formel I, som omtalt ovenfor.
Sinkbindingen til insulinheksameren er så fast at 5 til 9 mol sinkii pr. mol insulinheksamer ikke kan bli fjernet ved 40 timers vanlig dialyse, eksempelvis med en vandig 10 mM Tris/HCl-buffer, pH 7,4.
Insulin med formelen I viser, etter subkutan applikasjon i en vesentlig sinkfri tilberedning (pH 4), en lav virksomhetsforsinkelse sammenlignet med humaninsulin. Etter tilsetning av omkring 20 ug sink <2+>/ml tilberedning, ble det observert en senere start av virksomheten etter subkutan applikasjon. Virksomhetsforsinkelsen blir fortrinnsvis observert ved 40 ug sink^<+>Anl. Høyere sinkkonsentrasjoner forsterker denne effekten.
Oppfinnelsen angår dessuten proinsulin kjennetegnet ved vedformel II,
hvor R<3> og Y er som definert i formel I ifølge ett eller flere av kravene 1 til 7, og
Z<l> står for et peptid med 2 til 40 genetisk kodbare aminosyreestere med 1 til 5 histidin (His)-rester.
Proinsulinet med formelen n egner seg som mellomforbindelse ved fremstillingen av insulinet med formelen I.
Foretrukket er proinsulinene med formelen II, hvor
Spesielt foretrukket er proinsuliner med formelen II, hvor
Oppfinnelsens insulinderivater med formelen I og/eller kompleksene inneholdende en insulinheksamer og 5 til 9 mol sink±± pr. heksamer og/eller deres fysiologisk akseptable salter (f.eks. alkali- eller ammoniumsalter), blir hovedsakelig anvendt som virke-stoff for en farmasøytisk tilberedning for behandling av diabetes, spesielt Diabetes mellitus.
Den farmasøytiske tilberedningen er fortrinnsvis en oppløsning eller suspensjon for injeksjonsformål; den er kjennetegnet ved at den innholder en virksom mengde av minst ett insulin med formel I og/eller et fysiologisk akseptabelt salt av insulinet med formel I, som omtalt ovenfor, i oppløst, amorf og/eller krystallinsk form.
Tilberedningen som fortrinnsvis har en pH-verdi på 2,5 til 8,5, spesielt fra 2,5 til 4,5, inneholder et egnet isotonmiddel, et egnet konserveringsmiddel og eventuelt en egnet buffer, såvel som fortrinnsvis også en bestemt sinkionkonsentrasjon, alle naturligvis i steril vandig oppløsning. Totaliteten av tilberedninsbestanddeler foruten virkestoffet, danner bæreroppløsningen til tilberedningen.
Tilberedningen inneholdende oppløsninger av insulin med formel I, har en pH-verdi på fra 2,5 til 4,5, spesielt fra 3,5 til 4,5, fortrinnsvis 4,0. Tilberedningen som inneholder suspensjoner av insulin med formel I, har en pH-verdi på fra 6,5 til 8,5, spesielt foretrukket fra 7,0 til 8,0, foretrukket 7,4.
Egnede isotonmidler er f.eks. glyserol, glykose, mannitt, NaCl, kalsium- eller magnesiumforbindelser som CaCl2 eller MgCl2.
Ved valg av isotonmidlet og/eller konserveringsstoffet påvirker man oppløseligheten til insulinderivatet eller dets fysiologisk akseptable salter ved de svakt sure pH-verdiene.
Egnede konserveringsmidler er f.eks. fenol, m-cresol, benzylalkohol og/eller p-hydroksybenzosyreester.
Som bufferstoffer, spesielt for innstilling av en pH-verdi mellom omkring 4,0 og 8,5, kan det f.eks. bli anvendt natriumacetat, natriumcitrat eller natriumfosfat. Spesielt er for innstillingen av pH-verdien også fysiologisk akseptable fortynnede syrer (typisk HC1) eller lut (typisk NaOH) egnet.
Når tilberedningen har et sinkinnhold, er foretrukket et slikt på fra 1 ug til 2 mg sink±±/ml, spesielt fra 5 ug til 200 ug sink/ml.
For variasjon av virkningsprofilen til oppfinnelsens tilberedning, kan det også bli tilsatt ikke-modifisert insulin, fortrinnsvis storfe-, svi- eller humaninsulin, spesielt humaninsulin eller modifisert insulin, eksempelvis monomert insulin, hurtigvirkende insulin eller Gly(A21)-Arg(B3 l)-Arg(B32)-humaninsulin.
Foretrukne virkestoffkonsentrasjoner er slike tilsvarende omkring 1-1500, videre foretrukket omkring 5-1000 og spesielt omkring 40-400 internasjonale enheter/ml.
EKSEMPEL 1
Fremstilling av Gly(A21)-humaninsulin-His(B31)-His(B32)-OH
Fremstillingen av ekspresjonssystemet skjedde i det vesentlige ifølge US 5.358.857. Der ble også vektorene pINT 90d og pINT 91 d (se eksempel 17) og PCR-primeren TIR og
Insul 1 beskrevet. Disse fire komponenter tjener bl.a. som utgangsmateriale for de ne-denfor beskrevne vektorkonstruksjonene.
Deretter blir kodonet for Gly(A21) innført i den mini-proinsulinkodende sekvensen. For dette blir pINT 91 d anvendt som templat, og det blir gjennomført en PCR-reaksjon med primerne TIR og Insu31
Insu31 (sek. Id nr. 10):
PCR-syklusen blir gjennomført som følger: 1. minutt 94°C, 2. minutt 55°C, 3. minutt 72°C. Denne syklusen blir gjentatt 25 ganger, så blir det inkubert i 7 minutter ved 72°C og tilslutt over natten ved 4°C.
Det dannede PCR-fragmentet blir felt i etanol for rensing, tørket og deretter kuttet ifølge angivelsen til produsenten med restriksjonsenzymene NcOl og Sali. Reaksjonsbland-ingen blir deretter gelelektroforetisk skilt og NcOl-pre-proinsulin-Sall-rfagmentet isolert. DNA av plasmidet pINT90d blir også spaltet med NcOl og Sali og apeproinsulin-fragmentet ble på denne måten frigitt fra pINT-restplasmidet. Begge fragmentene blir skilt gelelektroforetisk og restplasmid-DNA isolert. Dette DNA blir omsatt med NcOl-Sall-PCR-fragmentet i en ligasereaksjon. Man fikk således plasmidet pINT150d, som etter transformasjonen til E. coli blir formert der og deretter reisolert.
DNA fra plasmidet pINTlSOd tjener som utgangsmateriale for plasmidet pINT302, som tillater fremstillingen av de ønskede insulinvarianter.
For konstruksjon av dette plasmidet blir det benyttet den i US 5.358.857 (se eksempel 6) beskrevne vei. To av hverandre uavhengige PCR-reaksjoner blir gjennomført for dette, hvor DNA fra plasmidet pINTlSOd tjener som templat. Den ene reaksjonen blir gjen-nomført med primerparene TIR og pINT B5
(sek. Id nr. 11):
og den andre reaksjonen blir gjennomført med primerparet Insul 1 og pINT B6 (sek. Id nr. 12):
PCR-fragmentene som dannes er delvis komplementære, slik at de i en tredje PCR-reaksjon fører til et fragment som koder for et Gly (A21) miniproinsulin forlenget omkring posisjonen B31 og B32. Dette fragmentet blir spaltet med NcOl og Sali og deretter omsatt med DNA fra det beskrevne pINT90d-restplasmidet i en ligasereaksjon til plasmid plNT302. En med dette plasmidet transformert E.coli K12 W3110 blir deretter fermentert og opparbeidet som i eksempel 4 i US 5.227.293. Det som mellompro-dukt oppnådde preproinsulinderivatet (før trypsinspalting) hadde den følgende aminosyresekvensen:
Preproinsulin 1 (sek. Id nr. 3):
Preproinsulin 1 tilsvarer formelen n, her er
R<2> et peptid med 11 aminosyrerester,
R1 Phe (Bl),
Y Thr (B30),
Z<1> His His Arg(B31-B33),
R3 Gly(A21)og
A2-A20 er aminosyresekvensen til A-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 20) og B2-B29 er aminosyresekvensen til B-kjeden i humaninsulin (aminosyrerester 2 til 29).
Preproinsulet 1 blir spaltet som i US 5.227.293 ifølge eksempel 4 med trypsin. Det dannede produktet blir deretter omsatt med karboksypeptidase B ifølge eksempel 11 til Insulin 1. Insulin 1 tilsvarer formelen I, hvor
R1 er Phe (Bl),
Y erThr(B30),
Z erHisHis(B31-B32),
R3 erGly(A21)og
A2-A20 er aminosyresekvensen til A-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 20) og B2-B29 er aminosyresekvensen til B-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 29).
Insulin 1 har den følgende aminosyresekvens:
Insulin 1 (seq Id nr. 4):
( disulfidbroer er som i formel D
EKSEMPEL 2
Fremstilling av Gly(A21)-humaninsulin-Ala(B3 l)-His(B32)-His(B33)-Arg(B34)-OH Ekspresjonsvektoren blir konstruert tilsvarende eksempel 1. Plasmid pINT150d tjener som templater for to av hverandre uavhengige PCR-reaksjoner med primerparene TIR og pINT B7 (sek. Id nr. 13): hhv. Insul 1 og pINT B8 (sek. Ind nr. 14):
PCR-fragmentene som begge reaksjonene fører til, er delvis komplementære og gir i en tredje PCR-reaksjon den komplette sekvensen som koder for den ønskede insulinvari-anten. Fragmentet fra reaksjonen blir behandlet med enzymene NcOl og Sali og deretter ligert inn i restplasmidet pINT90d DNAet og åpnet med NcOl/Sali. Det dannede plasmidet pINT303, som etter transformasjon i E. coli Kl 2 W3110 tjener som basis for ekspresjonen av det ønskede pre-miniproinsulinet. Fermenteringen og opparbeidingen skjedde som i eksempel l, hvor karboksypeptidase B-reaksjonen bortfaller. Det dannede preproinsulinderivatet har den følgende aminosyresekvens:
Preproinsulin 1 (sek. Id nr. 5):
Preproinsulin 2 tilsvarer formelen II, hvor
Ri er Phe (Bl),
R<2> er et peptid med 11 aminosyrerester,
Y erThr(B30),
Z<1> erAlaHisHisArg(B31-B34).
R3 erGly(A21)og
A2-A20 er aminosyresekvensen til A-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 20) og B2-B29 er aminosyresekvensen til B-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 29).
Preinsulinet 2 blir deretter omsatt med trypsin til insulin 2. Insulin 2 tilsvarer formelen II, hvor
Ri er Phe (Bl),
Y erThr(B30),
Z<l> erAlaHisHisArg(B31-B34),
R3 erGly(A21)og
A2-A20 er aminosyresekvensen til A-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 20) og B2-B29 er aminosyresekvensen til B-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 29).
Insulin 2 har den følgende amonosyresekvens:
Insulin 2 (sek. Ind nr. 6):
( disulfidbroer er som i formel I)
EKSEMPEL 3
Fremstilling av Gly(A21 )-humaninsulin-Ala(B3l)-Ala(B32)-His(B33)-His(B34)-OH Ekspresjonsvektoren blir konstruert tilsvarende eksempel 1.
Plasmid pINTl 50d tjener som templater for to av hverandre uavhengige PCR-reaksjoner med primerparene TIR og pINT 316a (sek. Ind nr. 15): hhv. Insul 1 og pINT 316b (sek. Ind nr. 16):
PCR-fragmentene som begge reaksjonene fører til, er delvis komplementære og gir i en tredje PCR-reaksjon den komplette sekvensen, som koder for de ønskede insulinvarian-tene. Fragmentet fra reaksjonen blir behandlet med enzymene NcOl og Sali og deretter ligert inn i restplasmidet pEMT90d DNA, åpnet med NcOl/Sali. Det dannede plasmidet pINT316 tjener etter transformering av E.coli Kl 2 W3110 som basis for ekspresjonen av det ønskede pre-miniproinsulinet. Fermenteringen og opparbeidingen skjer som i eksempel 1, hvor karboksypeptidase B-reaksjonen bortfaller.
Det oppnådde preproinsulinet 3 har den følgende aminosyresekvens:
Preproinsulin 3 (sek. Id nr. 7):
Preinsulin 3 tilsvarer formelen n, hvor
Ri er Phe (Bl),
R<2> er et peptid med 11 aminosyrerester,
Y er Thr (B30),
Zi er Ala Ala His His Arg (B31-B35).
R3 erGly(A21)og
A2-A20 er aminosyresekvensen til A-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 20) og B2-B29 er aminosyresekvensen til B-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 29).
Preproinsulinet 3 blir deretter omsatt med trypsin og karboksypeptidase B som i eksempel 11 til Insulin 3,
Insulin 3 tilsvarer formelen I, hvor
R1 er Phe (Bl),
Y er Thr (B30),
Z er Ala Ala His His (B31-B34),
R3 erGly(A21)og
A2-A20 er aminosyresekvensen til A-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 20) og B2-B29 er aminosyresekvensen til B-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 29).
Insulin 3 har den følgende aminosyresekvensen:
Insulin 3 (sek. Ind nr. 8):
( disulfidbroer er som i formelen D
EKSEMPEL 4
Insulin 2 fremstilt ifølge eksempel 2, blir omsatt med karboksypeptidase B ifølge eksempel 11 til Insulin 4.
Insulin 4 tilsvarer formelen I, hvor
R1 er Phe (Bl),
Y er Thr (B30),
Z er Ala His His (B31-B33),
R3 erGly(A21)og
A2-A20 er aminosyresekvensen til A-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 20) og B2-B29 er aminosyresekvensen til B-kjeden til humaninsulin (aminosyrerester 2 til 29).
Insulin 4 har den følgende aminosyresekven:
Insulin 4 (sek. Ind nr. 9):
EKSEMPEL 5
Sinkbinding til insulinderivater
En tilberedning til insulin (0,243 mM human-insulin, 0,13 M NaCl, 0,1% fenol, 80 ug/ml (1,22 mM) sink±±, 10 mM Tris/HCl, pH 7,4) blir ved 15°C dialysert mot 10 mM Tris/HCl pH 7,4 i totalt 40 timer (bufferskift etter 16 timer og 24 timer). Deretter ble dialysatet surgjort, konsentrasjonen til insulin bestemt ved HPLC og sink ved atom-absorpsjons-spektroskopi. Sinkverdiene blir korrigert med sinkinnholdet i en kontroll-blanding, som ikke inneholder noe insulin. Tabell 1 viser resultatene:
EKSEMPEL 6
Sinkavhengighet til virkeprofilen til human-insulin på hund Applikasjon: Subkutan
Dose: 0,3 IE/kg; pH i tilberedningen 4,0
Antall hunder (n) pr. forsøk er 6
Tabell 2 viser blodglukosen i % av utgangsverdiene.
EKSEMPEL 7
Virkeprofil til Gly(A21)Ala(B31)His(B32)His(B33)Arg(B34)-human-insulin på hund
(insulin 2)
Insulin 2 fremstilt ifølge eksempel 2, blir anvendt i følgende formulering:
Glyserin 20 mg/ml, m-kresol 2,7 mg/ml, insulin 2 40 IE/ml
IE står for internasjonale enheter og tilsvarer omkring 6 nmol insulin, f.eks. human-insulin eller insulin med formelen I. pH blir innstilt med NaOH eller HC1. Applikasjon: subkutan; dose; 0,3 IE/kg;
antallet testede hunder er 6; pH i tilberedningen 4,0.
Tabell 3 viser blodglukosen i % av utgangsverdien.
EKSEMPEL 8
Virkeprofil av Gly(A21)Ala(B31)His(B32),His(B33)-human-insulin på hund (insulin 4) Insulin 4 fremstilt ved eksempel 4, blir formulert som i eksempel 7 og benyttet. Applikasjon: subkutan; dose: 0,3 IE/kg;
n = 6; pH i tilberedningen 4,0
Tabell 4 viser blodglukosen i % av utgangsverdien.
EKSEMPEL 9
Virkeprofil av Gly(A21)His(B31),His(B32)-human-insulin på hund (insulin 1) Insulinet 1 fremstilt ifølge eksempel 1, blir formulert som i eksempel 7 og benyttet. Applikasjon: subkutan; dose: 0,3 IE/kg;
n = 6; pH til tilberedning 4,0
Tabell 5 viser blodglukosen i % av utgangsverdien.
EKSEMPEL 10
Virkeprofil til Gly(A21)AIa(B31)Ala(B32)His(B33)His(B34)-human-insulin på hund
(insulin 3)
Insulinet 3 fremstilt ifølge eksempel 1, blir formulert som i eksempel 7 og benyttet. Applikasjon: subkutan; dose: 0,3 IE/kg;
n = 6; pH til tilberedning 4,0
Tabell 6 viser blodglukosen i % av utgangsverdien.
EKSEMPEL 11
Fremstilling av insulin 1 fra preproinsulin 1
200 mg av insulinet med Arg-i karboksy-enden i B-kjeden, fremstilt ifølge eksempel 1, blir oppløst i 95 ml 10 mM HC1. Etter tilsetting av 5 ml IM Tris/HCl (Tris(hydroksyme-tyl)aminometan) pH 8, innstiller man pH-verdien med HC1 eller NaOH til 8.
Det ble tilsatt 0,1 mg karboksypeptidase B. Etter 90 minutter er avspaltingen av argini-net fullstendig. Blandingen blir stilt til en pH på 3,5 med tilsetting av HC1 og pumpet på en reversfasekolonne (PLRP-S RP 300 10 u, 2,5 x 30 cm, Polymer Laboratories Am-herst, MA, (USA). Den mobile fasen A er vann med 0,1% trifluoreddiksyre. Fase B består av acetonitril med 0,09% trifluoreddiksyre. Kolonnen blir drevet med en gjen-nomstrømning på 5 ml/min. Etter påføring ble kolonnen vasket med 150 ml A. Den fraksjonerte elueringen skjedde ved påføring av en lineær gradient på 22,5 til 40% B i løpet av 400 minutter. Fraksjonene ble analysert enkeltvis ved analytisk revers fase HPLC, og alle som inneholdt Des-Arg-insulinet med tilstrekkelig renhet, ble slått sammen. pH-verdien blir innstilt på 3,5 NaOH og acetonitrilet blandet i rotasjonsfor-damperen. Deretter blir Des-Arg-insulinet utfelt ved innstilling til pH 6,5. Utfellingen blir avsentrifugert, vasket to ganger med 50 ml vann og til sist frysetørket. Utbyttet var 60 til 80% insulin 1.
Claims (16)
1.
Insulin, karakterisert ved formelen I
elter et fysiologisk akseptabelt salt av insulinet med formelen I, hvor R.<1> står for en fenylalaninrest eller et hydrogenatom,
r<3> står for en genetisk kodbar aminosyrerest,
Y står for en genetisk kodbar aminosyrerest,
Z står for a) en histidinrest eller b) et peptid med 2 til 35 genetisk kodbare aminosyrerester, inneholdende 1 til 5 histidinrester,
og
restene A2-A20 tilsvarer aminosyresekvensen til A-kjeden av humaninsulin, animalsk insulin eller et insulinderivat og restene B2-B29 tilsvarer aminosyresekvensen til B-kjeden til humaninsulin, animalsk insulin eller et insulinderivat.
2.
Insulin med formel I ifølge krav 1, karakterisert ved at Ri står for en fenylalaninrest,
R<3> står for en aminosyrerest fra gruppen Asn, Gly, Ser, Thr, Ala, Asp, Glu
og Gin,
Y står for en aminosyrerest fra gruppen Ala, Thr, Ser og His,
Z står for a) histidinresten eller b) et peptid med 4 til 7 aminosyrerester, inneholdende 1 eller 2 histidinrester.
3.
Insulin med formel I ifølge krav 1, karakterisert ved at R.<1> står for en fenylalaninrest,
R<3> står for en aminosyrerest fra gruppen Asn, Gly, Ser, Thr, Ala,
Asp, Glu og Gin,
Y står for en aminosyrerest fra gruppen Ala, Thr, Ser og His,
Z står for a) histidinresten eller b) et peptid med 2 til 7 aminosyrerester, inneholdende 1 eller 2 histidinrester.
4.
Insulin med formel I ifølge krav 3, karakterisert ved at Z står for et peptid med 1 til 5 aminosyrerester, inneholdende 1 eller 2
histidinrester.
5.
Insulin med formel I ifølge ett eller flere av kravene 1 til 4, karakterisert ved at
Ri står for en fenylalaninrest,
R<3> står for en aminosyrerest fra gruppen Asn og Gly,
Y står for en aminosyrerest fra gruppen Thr og His, og Z står for et peptid med 1 til 5 aminosyrerester, inneholdende 1 eller 2
histidinrester.
6.
Insulin med formel I ifølge krav 1, karakterisert ved at Ri står for en fenylalaninrest, R<3> står for en glysinrest, Y står for en treoninrest og Z står for et peptid med 1 til 5 aminosyrerester.
7.
Insulin med formel I ifølge krav 6, karakterisert ved at Z står for et peptid med sekvensen His His, His His Arg, Ala His His,
Ala His His Arg, Ala Ala His His Arg eller Ala Ala His His.
8.
Kompleks, karakterisert ved at det inneholder en insulinheksamer og 5 til 9 mol sink pr. insulinheksamer, spesielt 5 til 7 mol sink pr. insulinheksamer, hvor insulinheksameren består av seks insulinmolekyler med formelen I ifølge ett eller flere av kravene 1 til 7.
9.
Farmasøytisk tilberedning, karakterisert ved at den inneholder en virksom mengde av minst ett insulin med formel I og/eller et fysiologisk akseptabelt salt av insulinet med formel I ifølge ett eller flere av kravene 1 til 8, i opp-løst, amorf og/eller krystallinsk form.
10.
Farmasøytisk tilberedning ifølge krav 9, karakterisert ved ved et ytterligere innhold av 1 ug til 2 mg, fortrinnsvis til 5 ug sink/ml.
11.
Farmasøytisk tilberedning ifølge krav 9 eller 10, karakterisert v e d at den har en pH på 2,5 til 8,5.
12.
Farmasøytisk tilberedning ifølge ett av kravene 10 til 11, karakterisert ved at den har en pH på 2,5 til 4,5.
13.
Farmasøytisk tilberedning ifølge ett av kravene 9 til 12, karakterisert vedet ytterligere innhold av ikke-modifisert insulin, fortrinnsvis ikke-modifisert humaninsulin eller modifisert insulin, fortrinnsvis Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-humaninsulin.
14.
Proinsulin, karakterisert ved formel n,
hvor R<3> og Y er definert som i formel I ifølge ett eller flere av kravene 1 til 7, R<*> står for en fenylalaninrest eller en kovalent binding,
R<2> står for a) en genetisk kodbaraminosyrerest eller b) et peptid med 2 til 45 aminosyrerester, og restene A2 - A20 og B2 - B29 tilsvarer aminosyresekvensen i A- og B-kjeden til humaninsulin, animalsk insulin eller et insulinderivat, og Z<*> står for et peptid med 2 til 40 genetisk kodbare aminosyrerester med 1 til 5 histidinrester.
15.
Proinsulin med formel II ifølge krav 14, karakterisert v e d R.<2> står for et peptid med 2 til 25 aminosyrerester.
16.
Proinsulin med formel II ifølge krav Heller 15, karakterisert ved at
R<2> står for et peptid med 2 til 15 aminosyrerester, hvor det i karboksylenden er en aminosyrerest fra gruppen Met, Lys og Arg.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19630242 | 1996-07-26 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO973438D0 NO973438D0 (no) | 1997-07-25 |
| NO973438L NO973438L (no) | 1998-01-27 |
| NO317666B1 true NO317666B1 (no) | 2004-11-29 |
Family
ID=7800962
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19973438A NO317666B1 (no) | 1996-07-26 | 1997-07-25 | Insulinderivater med forhoyet sinkbinding, kompleks og farmasoytiske tilberedninger inneholdende disse samt proinsulin. |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6221837B1 (no) |
| EP (1) | EP0821006B1 (no) |
| JP (1) | JP4046388B2 (no) |
| KR (1) | KR100547922B1 (no) |
| CN (2) | CN1158305C (no) |
| AR (1) | AR008269A1 (no) |
| AT (1) | ATE264871T1 (no) |
| AU (1) | AU725201B2 (no) |
| BR (1) | BR9704117B1 (no) |
| CA (1) | CA2207078C (no) |
| CZ (1) | CZ292274B6 (no) |
| DE (1) | DE59711533D1 (no) |
| DK (1) | DK0821006T3 (no) |
| ES (1) | ES2218622T3 (no) |
| HK (1) | HK1048125A1 (no) |
| HU (1) | HU224591B1 (no) |
| IL (2) | IL121382A0 (no) |
| NO (1) | NO317666B1 (no) |
| NZ (1) | NZ328421A (no) |
| PL (1) | PL188617B1 (no) |
| PT (1) | PT821006E (no) |
| RU (1) | RU2176646C2 (no) |
| TR (1) | TR199700685A3 (no) |
| TW (1) | TW474944B (no) |
| ZA (1) | ZA976645B (no) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19825447A1 (de) * | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
| DE19838097A1 (de) | 1998-08-24 | 2000-03-02 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Verfahren zur chromatographischen Reinigung von Insulinen |
| DE19947456A1 (de) | 1999-10-02 | 2001-04-05 | Aventis Pharma Gmbh | C-Peptid zur verbesserten Herstellung von Insulin und Insulinanaloga |
| CN1635900A (zh) * | 2001-08-28 | 2005-07-06 | 伊莱利利公司 | Glp－1和基础胰岛素的预混合物 |
| CA2463803A1 (en) * | 2001-10-19 | 2003-05-01 | Eli Lilly And Company | Biphasic mixtures of glp-1 and insulin |
| KR100769183B1 (ko) * | 2001-12-28 | 2007-10-23 | 엘지.필립스 엘시디 주식회사 | 면발광 램프 |
| AU2004234345A1 (en) * | 2003-04-29 | 2004-11-11 | Eli Lilly And Company | Insulin analogs having protracted time action |
| EP2264065B1 (en) * | 2003-08-05 | 2017-03-08 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin derivatives |
| CN105801686B (zh) | 2004-07-19 | 2020-04-07 | 比奥孔有限公司 | 胰岛素-低聚物共轭物、制剂及其用途 |
| US7833513B2 (en) | 2004-12-03 | 2010-11-16 | Rhode Island Hospital | Treatment of Alzheimer's Disease |
| CN101389650B (zh) | 2005-12-28 | 2012-10-10 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | 包含酰化胰岛素和锌的组合物以及制备所述组合物的方法 |
| ES2542146T3 (es) * | 2006-07-31 | 2015-07-31 | Novo Nordisk A/S | Insulinas extendidas PEGiladas. |
| WO2008034881A1 (en) * | 2006-09-22 | 2008-03-27 | Novo Nordisk A/S | Protease resistant insulin analogues |
| US9387176B2 (en) * | 2007-04-30 | 2016-07-12 | Novo Nordisk A/S | Method for drying a protein composition, a dried protein composition and a pharmaceutical composition comprising the dried protein |
| EP2514407A1 (en) * | 2007-06-01 | 2012-10-24 | Novo Nordisk A/S | Stable non-aqueous pharmaceutical compositions |
| WO2008152106A1 (en) * | 2007-06-13 | 2008-12-18 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation comprising an insulin derivative |
| EP2203181B1 (en) * | 2007-10-16 | 2018-02-14 | Biocon Limited | An orally administerable solid pharmaceutical composition and a process thereof |
| WO2009112583A2 (en) * | 2008-03-14 | 2009-09-17 | Novo Nordisk A/S | Protease-stabilized insulin analogues |
| JP5749155B2 (ja) | 2008-03-18 | 2015-07-15 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | プロテアーゼ安定化アシル化インスリンアナログ |
| ES2607003T3 (es) * | 2008-10-30 | 2017-03-28 | Novo Nordisk A/S | Tratamiento de diabetes mellitus utilizando inyecciones de insulina con una frecuencia de inyección inferior a la diaria |
| BR112013010345A2 (pt) | 2010-10-27 | 2017-07-25 | Novo Nordisk As | tratamento de diabetes melitus usando as injeções de insulina administradas com intervalos de variação da injeção |
| MX2014012096A (es) | 2012-04-11 | 2014-11-21 | Novo Nordisk As | Formulaciones de insulina. |
| EP2991672A1 (en) | 2013-04-30 | 2016-03-09 | Novo Nordisk A/S | Novel administration regime |
| US9896496B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-02-20 | Novo Nordisk A/S | Derivative of an insulin analogue |
| FR3013049B1 (fr) | 2013-11-14 | 2015-11-13 | You-Ping Chan | Analogue de l'insuline glargine |
| ES2886837T3 (es) | 2016-12-16 | 2021-12-21 | Novo Nordisk As | Composiciones farmacéuticas que contienen insulina |
| US10335464B1 (en) | 2018-06-26 | 2019-07-02 | Novo Nordisk A/S | Device for titrating basal insulin |
Family Cites Families (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI78616C (fi) * | 1982-02-05 | 1989-09-11 | Novo Industri As | Foerfarande foer framstaellning av en foer infusionsaendamaol avsedd stabiliserad insulinloesning, som har en foerhoejd zinkhalt. |
| DE3326472A1 (de) | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327709A1 (de) * | 1983-07-29 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| DE3440988A1 (de) | 1984-11-09 | 1986-07-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur spaltung von peptiden und proteinen an der methionyl-bindung |
| US4569794A (en) | 1984-12-05 | 1986-02-11 | Eli Lilly And Company | Process for purifying proteins and compounds useful in such process |
| US5008241A (en) * | 1985-03-12 | 1991-04-16 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin peptides |
| DE3526995A1 (de) | 1985-07-27 | 1987-02-05 | Hoechst Ag | Fusionsproteine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE3636903A1 (de) | 1985-12-21 | 1987-07-02 | Hoechst Ag | Fusionsproteine mit eukaryotischem ballastanteil |
| DE3541856A1 (de) | 1985-11-27 | 1987-06-04 | Hoechst Ag | Eukaryotische fusionsproteine, ihre herstellung und verwendung sowie mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
| CA1340522C (en) | 1987-03-10 | 1999-05-04 | Heinz Dobeli | Fusion proteins containing neighbouring histidines for improved purification |
| DE3805150A1 (de) | 1987-04-11 | 1988-10-20 | Hoechst Ag | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von polypeptiden |
| DE4012818A1 (de) | 1990-04-21 | 1991-10-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von fremdproteinen in streptomyceten |
| DE3726655A1 (de) | 1987-08-11 | 1989-02-23 | Hoechst Ag | Verfahren zur isolierung basischer proteine aus proteingemischen, welche solche basischen proteine enthalten |
| DE3739347A1 (de) | 1987-11-20 | 1989-06-01 | Hoechst Ag | Verfahren zur selektiven spaltung von fusionsproteinen |
| DE58906966D1 (de) | 1988-06-23 | 1994-03-24 | Hoechst Ag | Mini-Proinsulin, seine Herstellung und Verwendung. |
| DE3827533A1 (de) * | 1988-08-13 | 1990-02-15 | Hoechst Ag | Pharmazeutische zubereitung zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3837825A1 (de) | 1988-11-08 | 1990-05-10 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung |
| PT93057B (pt) * | 1989-02-09 | 1995-12-29 | Lilly Co Eli | Processo para a preparacao de analogos da insulina |
| DE3921447A1 (de) * | 1989-06-30 | 1991-01-17 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von n-alkyl-halogenanilinen |
| US5358857A (en) | 1989-08-29 | 1994-10-25 | The General Hospital Corp. | Method of preparing fusion proteins |
| IL95495A (en) | 1989-08-29 | 1996-10-16 | Hoechst Ag | Fusion proteins their preparation and use |
| US5227293A (en) | 1989-08-29 | 1993-07-13 | The General Hospital Corporation | Fusion proteins, their preparation and use |
| CZ342492A3 (en) * | 1991-11-26 | 1993-06-16 | Lilly Co Eli | Derivatives of tri-arginine insulin, process of their preparation and a pharmaceutical composition in which said derivatives are comprised |
| DK0600372T3 (da) | 1992-12-02 | 1997-08-11 | Hoechst Ag | Fremgangsmåde til fremstilling af proinsulin med korrekt forbundne cystinbroer. |
| DE4405179A1 (de) | 1994-02-18 | 1995-08-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur Gewinnung von Insulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
| DE69534530T2 (de) * | 1994-08-12 | 2006-07-06 | Immunomedics, Inc. | Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper |
-
1997
- 1997-07-17 DE DE59711533T patent/DE59711533D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-17 EP EP97112197A patent/EP0821006B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-17 PT PT97112197T patent/PT821006E/pt unknown
- 1997-07-17 AT AT97112197T patent/ATE264871T1/de active
- 1997-07-17 DK DK97112197T patent/DK0821006T3/da active
- 1997-07-17 ES ES97112197T patent/ES2218622T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-24 RU RU97112742/04A patent/RU2176646C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 CZ CZ19972370A patent/CZ292274B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 IL IL12138297A patent/IL121382A0/xx unknown
- 1997-07-24 AU AU30171/97A patent/AU725201B2/en not_active Ceased
- 1997-07-24 IL IL12138197A patent/IL121381A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 TW TW086110516A patent/TW474944B/zh not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 TR TR97/00685A patent/TR199700685A3/tr unknown
- 1997-07-24 NZ NZ328421A patent/NZ328421A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 AR ARP970103352A patent/AR008269A1/es active IP Right Grant
- 1997-07-25 CA CA002207078A patent/CA2207078C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 HU HU9701299A patent/HU224591B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 US US08/900,574 patent/US6221837B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 PL PL97321343A patent/PL188617B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 JP JP20000297A patent/JP4046388B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 CN CNB971046751A patent/CN1158305C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 KR KR1019970034958A patent/KR100547922B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 ZA ZA9706645A patent/ZA976645B/xx unknown
- 1997-07-25 NO NO19973438A patent/NO317666B1/no not_active IP Right Cessation
- 1997-07-28 BR BRPI9704117-3A patent/BR9704117B1/pt not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-12-17 CN CN01143664A patent/CN1362417A/zh active Pending
-
2003
- 2003-01-07 HK HK03100149.7A patent/HK1048125A1/zh unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO317666B1 (no) | Insulinderivater med forhoyet sinkbinding, kompleks og farmasoytiske tilberedninger inneholdende disse samt proinsulin. | |
| AU2009203809B2 (en) | Novel insulin derivatives having an extremely delayed time-action profile | |
| US4608364A (en) | Pharmaceutical agent for the treatment of diabetes mellitus | |
| JP5695909B2 (ja) | 極度に遅延した時間作用プロファイルを有する新規なインスリン誘導体 | |
| Markussen et al. | Soluble, prolonged-acting insulin derivatives. I. Degree of protraction and crystallizability of insulins substituted in the termini of the B-chain | |
| NO177963B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av nye insulinderivater | |
| NO321720B1 (no) | Insulinderivater og forloperproteiner, fremgangsmate for fremstilling inkludert DNA-sekvenser, ekspresjonsbaerer og vertsceller, samt deres anvendelse spesielt i farmasoytiske preparater for behandling av diabetes. | |
| HU203371B (en) | Process for producing new insulin derivatives and injection solutions comprising same | |
| CA2330183C (en) | Novel insulin analogs with enhanced zinc binding | |
| MXPA97005667A (en) | Insulin derivatives with zinc increment | |
| MXPA97007056A (en) | Insulated derivatives |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |