HU224591B1 - Fokozott cinkmegkötő-képességgel rendelkező inzulinszármazékok, azokat tartalmazó komplexek és gyógyszerkészítmények, valamint elővegyületeik - Google Patents
Fokozott cinkmegkötő-képességgel rendelkező inzulinszármazékok, azokat tartalmazó komplexek és gyógyszerkészítmények, valamint elővegyületeik Download PDFInfo
- Publication number
- HU224591B1 HU224591B1 HU9701299A HUP9701299A HU224591B1 HU 224591 B1 HU224591 B1 HU 224591B1 HU 9701299 A HU9701299 A HU 9701299A HU P9701299 A HUP9701299 A HU P9701299A HU 224591 B1 HU224591 B1 HU 224591B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- insulin
- amino acid
- formula
- residue
- gly
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 8
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 title description 5
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 176
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 68
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 68
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 68
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 44
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 42
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims description 33
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims description 31
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims description 29
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 26
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 26
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 19
- CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N His-His-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CN=CN1 CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 15
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 13
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 claims description 11
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- STOOMQFEJUVAKR-KKUMJFAQSA-N His-His-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 STOOMQFEJUVAKR-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 16
- HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N 0.000 description 15
- GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N Cys-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 15
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 15
- YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 13
- KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N Cys-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- FQNUWOHNGJWNLM-QWRGUYRKSA-N Tyr-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O FQNUWOHNGJWNLM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 11
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 11
- MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 10
- LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 10
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N Gly-Ile-Val Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 8
- GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N Phe-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 8
- 239000002585 base Substances 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 7
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 7
- CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N Tyr-Leu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 7
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 6
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 6
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000740205 Homo sapiens Sal-like protein 1 Proteins 0.000 description 6
- 102100037204 Sal-like protein 1 Human genes 0.000 description 6
- XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N Thr-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N 0.000 description 6
- ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N Thr-Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N Leu-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N Phe-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 5
- WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N Pro-Lys-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 5
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 101500025353 Homo sapiens Insulin A chain Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- -1 halogen cyanide Chemical class 0.000 description 4
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N Cys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JIUYRPFQJJRSJB-QWRGUYRKSA-N His-His-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CN=CN1 JIUYRPFQJJRSJB-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- IEVXCWPVBYCJRZ-IXOXFDKPSA-N Lys-Thr-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IEVXCWPVBYCJRZ-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 2
- NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N Thr-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 108010013359 miniproinsulin Proteins 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 2
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- BMLMGCPTLHPWPY-REOHCLBHSA-N (4R)-2-oxo-4-thiazolidinecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CSC(=O)N1 BMLMGCPTLHPWPY-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010076441 Ala-His-His Proteins 0.000 description 1
- ATAKEVCGTRZKLI-UWJYBYFXSA-N Ala-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 ATAKEVCGTRZKLI-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 101001012217 Conus geographus Con-Ins G3 Proteins 0.000 description 1
- 101001012221 Conus tulipa Con-Ins T3 Proteins 0.000 description 1
- WTXCNOPZMQRTNN-BWBBJGPYSA-N Cys-Thr-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O WTXCNOPZMQRTNN-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 101000976092 Gallus gallus Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241001071795 Gentiana Species 0.000 description 1
- IOUQWHIEQYQVFD-JYJNAYRXSA-N Glu-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O IOUQWHIEQYQVFD-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N His-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 101500025354 Homo sapiens Insulin B chain Proteins 0.000 description 1
- DURWCDDDAWVPOP-JBDRJPRFSA-N Ile-Cys-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N DURWCDDDAWVPOP-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- 101710186630 Insulin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101710186643 Insulin-2 Proteins 0.000 description 1
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- 108090000988 Lysostaphin Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZXXNPJQYDFJX-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound CC#N.OC(=O)C(F)(F)F PMZXXNPJQYDFJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940043430 calcium compound Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002641 glycemic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002681 magnesium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
- A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
A találmány fokozott cinkmegkötő képességgel rendelkező inzulinszármazékra, ezt tartalmazó gyógyszerkészítményre és az inzulinszármazék proinzulinjára vonatkozik.
A szubkután adagolt inzulin farmakokinetikája an- 5 nak asszociációs viselkedésétől függ. Az inzulin semleges vizes oldatban hexamert képez. Amikor az inzulin a szövetből a véráramba, és onnan a hatás helyére akar eljutni, akkor az inzulinnak először a kapillárisok falán kell áthatolnia. Feltételezik, hogy ez csak a mono- 10 mer vagy dimer inzulinnak sikerül, és nem vagy legfeljebb kevésbé a hexamer inzulinnak, vagy nagyobb molekulájú asszociátumoknak [Brange és munkatársai: Diabetes Care, 13, 923-954 (1990); Kang és munkatársai: Diabetes Care, 14, 942-948 (1991)]. A hexamer 15 disszociációja ezért a bőr alatti szövetből a véráramba történő gyors átmenet feltétele.
Az inzulin asszociációs és aggregációs viselkedését a cink++-ion befolyásolja, ami stabilizálja a hexamert, és a semlegeshez közeli pH-értékeken nagyobb 20 molekulájú aggregátumok vagy akár csapadék kialakulásához vezethet. A puffer nélküli humán inzulinoldathoz (pH=4) cink++-iont adagolva azonban a hatásprofil csak kevéssé változik. Egy ilyen oldat az injektálás után a bőr alatti szövetben gyorsan semlegessé válik, és inzulin/cink komplex alakul ki, de a humán inzulin természetes cinkmegkötő képessége nem elegendő ahhoz, hogy stabilizálódjanak a hexamer és ennél nagyobb aggregátumok. Ezért cink++ hozzáadásával a humán inzulin felszabadulása lényegesen nem késleltethető, és erős depothatás nem érhető el. Az ismert inzulinhexamerek mintegy 2 mól cink++-iont tartalmaznak 1 mól inzulinhexamerre vonatkoztatva [Blundell és munkatársai: Adv. Protein Chem., 26, 323-328 (1972)]. Egy inzulinhexamerre számolva két cinkion szilárdan kötődik az inzulinhexamerhez, és a szokásos dialízissel nem távolíthatók el. Ismertek úgynevezett 4-cink-inzulin-kristályok, ezek azonban átlagban kevesebb, mint 3 mól cink++-iont tartalmaznak 1 mól inzulinhexamerre vonatkoztatva (G. D. Smith és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 7093-7097).
A találmány feladata olyan inzulinszármazék kidolgozása, amely fokozott cinkmegkötő képességgel rendelkezik, stabil inzulinhexamer/cink++ komplexet képez, és szubkután injekció esetén a humán inzulinhoz viszonyítva késleltetett hatásprofilt mutat.
A találmány tárgya tehát (I) általános képletű inzulinszármazék és ennek fiziológiailag alkalmazható sói,
(Bl) (B7) (B19) (B30) a képletben
R1 jelentése fenil-alanin-maradék vagy hidrogénatom,
R3 jelentése genetikailag kódolható aminosavmaradék, 60
Y jelentése genetikailag kódolható aminosavmaradék (B30 helyzetben),
Z jelentése (a) hisztidinmaradék vagy
HU 224 591 Β1 (b) 2-35 genetikailag kódolható aminosavmaradékból álló, és 1-5 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid, ahol az A2-A20 maradékok a humán inzulin, állati inzulin vagy inzulinszármazék A-láncában található aminosavszekvenciának, és a B2-B29 maradékok a humán inzulin, állati inzulin vagy inzulinszármazék B-láncában található aminosavszekvenciának felelnek meg.
A találmány szerinti új inzulinszármazék és ennek fiziológiailag alkalmazható sói meglepő módon kielégítik a fenti kritériumokat.
Előnyös az olyan (I) általános képletű inzulinszármazék, amelynek képletében R1 jelentése fenil-alanin-maradék,
R3 jelentése Asn, Gly, Ser, Thr, Alá, Asp, Glu vagy Gin aminosavmaradék,
Y jelentése Alá, Thr, Ser vagy His aminosavmaradék, Z jelentése (a) hisztidinmaradék vagy (b) 4-7 aminosavmaradékból álló és 1 vagy 2 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
Előnyös továbbá az olyan (I) általános képletű inzulinszármazék, amelynek képletében R1 jelentése fenil-alanin-maradék,
R3 jelentése Asn, Gly, Ser, Thr, Alá, Asp, Glu vagy Gin aminosavmaradék,
Y jelentése Alá, Thr, Ser vagy His aminosavmaradék, Z jelentése (a) hisztidinmaradék vagy (b) 2-7 aminosavmaradékból álló és 1 vagy 2 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
Különösen előnyös az olyan (I) általános képletű inzulinszármazék, amelynek képletében Z jelentése 1-5 aminosavmaradékból álló és 1 vagy hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
Különösen előnyös az olyan (I) általános képletű inzulinszármazék, amelynek képletében R1 jelentése fenil-alanin-maradék,
R3 jelentése Asn vagy Gly aminosavmaradék,
Y jelentése Thr vagy His aminosavmaradék,
Z jelentése 1-5 aminosavból álló és 1 vagy 2 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
Különösen előnyös továbbá az olyan (I) általános képletű inzulinszármazék, amelynek képletében R1 jelentése fenil-alanin-maradék,
R3 jelentése glicinmaradék,
Y jelentése treoninmaradék,
Z jelentése 1-5 aminosavmaradékból álló és 1 vagy 2 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
Külön kiemeljük az olyan (I) általános képletű inzulinszármazékot, amelynek képletében
Z jelentése His His, His His Arg, Alá His His, Alá His His Arg, Alá Alá His His Arg vagy Alá Alá His His szekvenciájú peptid.
A peptidek és fehérjék aminosavszekvenciáját az aminosavlánc N-terminális végétől kiindulva ábrázoljuk. Az (I) általános képletben zárójelben megadott jelölések, például (A1), (A6), (A7), (A11), (A20), (B1), (B7), (B19) vagy (B30), az inzulin A- vagy B-láncában található aminosavmaradékok pozícióját jelölik.
A genetikailag kódolható aminosavmaradék a Gly, Alá, Ser, Thr, Val, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gin, Cis, Met, Arg, Lys, His, Tyr, Phe, Trp, Pro és szelenocisztein aminosavakra vonatkozik. Az A2-A20 maradék és a B2-B29 maradék állati inzulin esetében például szarvasmarha-, sertés- vagy tyúkinzulin aminosavszekvenciájára vonatkozik. Az A2-A20 és B2-B29 maradékok inzulinszármazékok esetében a humán inzulin megfelelő aminosavszekvenciájára vonatkoznak, amit aminosavak más genetikailag kódolható aminosavakra történő kicserélésével képeztünk.
A humán inzulin A-láncának szekvenciája (1. számú szekvencia):
Gly, Ile, Val, Glu, Gin, Cys, Cys, Thr, Ser, Ile, Cys, Ser, Leu, Tyr, Gin, Leu, Glu, Asn, Tyr, Cys, Asn.
A humán inzulin B-láncának szekvenciája (2. számú szekvencia):
Phe, Val, Asn, Gly, His, Leu, Cys, Gly, Ser, His, Leu, Val, Glu, Alá, Leu, Tyr, Leu, Val, Cys, Gly, Glu, Arg, Gly, Phe, Phe, Tyr, Thr, Pro, Lys, Thr.
Az (I) általános képletű inzulinszármazék számos géntechnológiai szerkezet felhasználásával mikroorganizmusokban előállítható (EP 489.780, EP 347.781, EP 368.187, EP 453.969 számú irat). A géntechnológiai szerkezet a mikroorganizmusban, így Escherichia coli vagy Streptomyces mikroorganizmusban a fermentáció során kifejeződik. A képződött fehérje a mikroorganizmus belsejében lerakódik (EP 489.780 számú irat), vagy a fermentációs elegybe kiválik.
Az (I) általános képletű inzulinszármazékra példaként említhetők a következők:
Gly(A21 )-humán inzulin-His(B31 )-His(B32)-OH Gly(A21 )-humán inzulin-His(B31 )-His(B32)-Arg(B33)OH
Gly(A21 )-humán inzulin-Ala(B31 )-His(B32)-His(B33)OH
Gly(A21 )-humán inzulin-Ala(B31 )-His(B32)-His(B33)Arg(B34)-OH
Gly(A21 )-humán inzulin-Ala(B31 )-Ala(B32)-His(B33)His(B34)-OH
Gly(A21 )-humán inzulin-Ala(B31 )-Ala(B32)-His(B33)His(B34)-Arg(B35)-OH.
Az (I) általános képletű inzulinszármazékot elsősorban géntechnológiai módszerekkel helyspecifikus mutációval állítjuk elő a szokásos módon. Ehhez a kívánt (I) általános képletű inzulinszármazékot kódoló génszerkezetet állítunk elő, és egy gazdasejtben, előnyösen baktériumsejtben, így E. coli-sejtben vagy élesztősejtben, így Saccharomyces cerevisiae-sejtben kifejezzük, majd - abban az esetben, ha a génszerkezet fúziós fehérjét kódol - a fúziós fehérjéből az (I) általános képletű inzulinszármazékot felszabadítjuk. Analóg módszereket ismertet például az EP 211.299, EP 227.938, EP 229.998, EP 286.956 és DE 3.821.159 számú irat.
A fúziós fehérje hasítását a sejt feltárása után kémiailag végezzük például halogén-cián segítségével (például EP 180.920 számú irat), vagy enzimatikusan végezzük például lizosztafin vagy tripszin segítségével (DE 3.739.347 számú irat).
HU 224 591 Β1
A nyersinzulint ezután oxidatív szulfitolízissel [például R. C. Marshall és A. S. Inglis: Practical Protein Chemistry - A Handbook [A. Darbre kiadó) 49-53. (1986)], és ezt követően tiol jelenlétében a korrekt diszulfidhidak kialakításával renaturáljuk [például G. H. Dixon és A. C. Wardlow: Natúré, 721-724 (1960)].
Eljárhatunk azonban úgy is, hogy a nyersinzulint közvetlenül hajtogatjuk (EP 600.372 és EP 668.292 számú irat).
A C-peptidet és az adott esetben előforduló preszekvenciát [a (II) általános képletben R2] triptikus hasítással eltávolítjuk [például Kemmler és munkatársai: J. B. C. 6786-6791 (1971)], és az (I) általános képletű inzulinszármazékot a szokásos módon, így kromatográfiásan (például EP 305.760 számú irat) és kristályosítással tisztítjuk.
A találmány tárgya továbbá komplex, amely inzulinhexamert és az inzulinhexamerre vonatkoztatva mintegy 5-9 mól, előnyösen 5-7 mól cink++-iont tartalmaz, ahol az inzulinhexamer hat (I) általános képletű inzulinmolekulából áll.
A cink olyan erősen kötődik az inzulinhexamerhez, hogy 1 mól inzulinhexamerre vonatkoztatva 5-9 mól cink a szokásos dialízissel, például vizes 10 mmol/l Trisz-HCI-pufferrel (pH=7,4) 40 óra alatt nem távolítható el.
Az (I) általános képletű inzulinszármazék szubkután adagolás esetén lényegében cinkmentes készítményben (pH=4) csak csekély hatáskésleltetést mutat a humán inzulinhoz vonatkoztatva. 1 ml készítményre vonatkoztatva mintegy 20 pg cink++ hozzáadása után szubkután adagolás esetén a hatás később jelentkezik. A hatás késleltetése előnyösen 40 pg cink++/ml értéknél figyelhető meg. Nagyobb cinkkoncentrációnál ez a hatás erősödik.
A találmány tárgya továbbá (II) általános képletű preproinzulin,
R2-R1-B2-B29-Y-Z1-Gly-A2-A20-R3 (II) a képletben
R3 és Y jelentése az (I) általános képlet vonatkozásában az 1-7. igénypontok bármelyikében megadott,
R1 jelentése fenil-alanin-maradék vagy kovalens kötés,
R2 jelentése (a) genetikailag kódolható aminosavmaradék vagy (b) 2-45 aminosavmaradékból álló, és a humán inzulin, állati inzulin vagy inzulinszármazék A- és B-láncában található A2-A21 és B2-B29 aminosavszekvenciának megfelelő peptid,
Z1 jelentése 2-40 genetikailag kódolható aminosavból álló és 1-5 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
A (II) általános képletű proinzulin köztitermékként alkalmazható az (I) általános képletű inzulinszármazék előállítása során. Előnyös az olyan (II) általános képletű proinzulin, amelynek képletében
R2 jelentése 2-25 aminosavmaradékból álló peptid. Különösen előnyös az olyan (II) általános képletű proinzulin, amelynek képletében
R2 jelentése 2-15 aminosavmaradékból álló, és karboxiterminális végén Met, Lys vagy Arg aminosavmaradékot tartalmazó peptid.
A találmány szerinti (I) általános képletű inzulinszármazék és/vagy az inzulinhexamert és a hexamerre vonatkoztatva 5-9 mól cink++-iont tartalmazó komplex és/vagy ezek fiziológiailag alkalmazható sói (például alkálifém- vagy ammóniumsói) hatóanyagként alkalmazhatók diabetes, elsősorban diabetes mellitus kezelésére alkalmazható gyógyszerkészítményekben.
A gyógyszerkészítmény előnyösen injekciós célokra alkalmas oldat vagy szuszpenzió, és legalább egy, (I) általános képletű inzulinszármazékot és/vagy találmány szerinti komplexet és/vagy ezek fiziológiailag alkalmazható sóját tartalmazza oldott, amorf és/vagy kristályos, előnyösen oldott formában.
A készítmény előnyösen mintegy pH=2,5-8,5, elsősorban mintegy pH=4,0-8,5 értéket mutat, megfelelő izotonizálószert, konzerválószert és adott esetben puffért, valamint előnyösen meghatározott cinkion-koncentrációt tartalmaz, természetesen steril vizes oldatban. A készítmény egyes komponensei a hatóanyagtól eltekintve hordozóanyagnak minősülnek.
Az (I) általános képletű inzulin oldatából álló készítmény pH=2,5-4,5, előnyösen pH=3,5-4,5, különösen előnyösen pH=4,0 értéket mutat. Az (I) általános képletű inzulin szuszpenzióját tartalmazó készítmény pH=6,5-8,5, előnyösen pH=7,0-8,0, különösen előnyösen pH=7,4 értéket mutat.
Izotonizálószerként alkalmazható például glicerin, glükóz, mannit, nátrium-klorid, valamint kalcium- vagy magnéziumvegyületek, így kalcium-klorid vagy magnézium-klorid.
Az izotonizálószer és/vagy konzerválószer kiválasztásával befolyásolhatjuk az inzulinszármazék vagy annak fiziológiailag alkalmazható sója oldékonyságát enyhén savas pH-értékek mellett.
Konzerválószerként alkalmazható például fenol, m-krezol, benzil-alkohol és/vagy p-hidroxibenzoesav-észter.
Pufferanyagként, elsősorban mintegy pH=4,0-8,5 értékek között, alkalmazható például nátrium-acetát, nátrium-citrát vagy nátrium-foszfát. A pH-érték beállításához felhasználhatók ezenkívül fiziológiailag alkalmazható hígított savak (például sósav) vagy lúgok (például nátrium-hidroxid).
Ha a készítmény cinket tartalmaz, akkor a cink mennyisége 1 ml-re vonatkoztatva általában 1 pg és 2 mg közötti, előnyösen 5-200 pg közötti.
A hatásprofil változtatásához a találmány szerinti készítmény további komponensként tartalmazhat módosítatlan inzulint, előnyösen szarvasmarha-, sertésvagy humán inzulint, különösen előnyösen humán inzulint, valamint módosított inzulint, például monomer inzulint, gyorsan ható inzulint vagy Gly(A21)-Arg(B31)Arg(B32)-humán inzulint.
A hatóanyag-koncentráció általában mintegy 1-1500 nemzetközi egység/ml (NE/ml), előnyösen mintegy 5-1000 NE/ml, különösen előnyösen mintegy 40-400 NE/ml.
A találmányt közelebbről az alábbi példákkal mutatjuk anélkül, hogy az oltalmi kör a példákra korlátozódna.
HU 224 591 Β1
1. példa
Gly(A21)-humán inzulin-His(B31)-His(B32)-OH előállítása
A kifejezőrendszert az US 5.358.857 számú iratban ismertetett módon állítjuk elő. A vektorszerkezet kiindulási anyagaként az idézett iratban ismertetett pl NT 90d és pINT 91 d vektorokat (lásd a 17. példát) és a TIR és Insu11 PCR-primereket használjuk.
Először a miniproinzulint kódoló szekvenciába Gly(A21) kodont viszünk be. Ehhez templátként a pINT 91d vektort használjuk, és a PCR reakciót TIR és Insu31 primerekkel végezzük. Az Insu31 primer szekvenciája (10. számú szekvencia):
5’TTT TTT GTC GAC CTA TTA GCC GCA GTA GTT CTC CAG CTG 3’
A PCR-ciklus paraméterei: 1 perc 94 °C, 2 perc 55 °C, 3 perc 72 °C. Ezt a ciklust 25-ször ismételjük, majd 7 percen keresztül 72 °C, végül egy éjszakán keresztül 4 °C hőmérsékleten inkubálunk.
A kapott PCR-fragmenst a tisztításhoz etanolban kicsapjuk, szárítjuk, és restrikciós pufferben NcO1 és Sah restrikciós enzimekkel a gyártó előírásai szerint hasítjuk. A reakcióelegyet gélelektroforézissel szétválasztjuk, és az NcO1 preproinzulin Sal1 fragmenst izoláljuk. A pINT 90d plazmid DNS-ét szintén NcO1 és Sal1 enzimekkel hasítjuk, és így a pINT maradék plazmidból felszabadítjuk a majom proinzulin fragmenst. Mindként fragmenst gélelektroforézissel szétválasztjuk, és a maradék plazmid DNS-t izoláljuk. Ezt a DNS-t azNcOI Sah PCR-fragmenssel ligáljuk. így pINT 150d plazmidot kapunk, amit E. coliba transzformálunk, elszaporítjuk, és ismét izoláljuk.
A pINT 150d plazmid DNS-e kiindulási anyagként szolgál a kívánt inzulinszármazék előállításához szükséges pINT 302 plazmidhoz.
A fenti plazmidot az US 5.358.857 számú iratban ismertetett módon állítjuk elő (lásd a 6. példát). Ennek során két, egymástól független PCR reakciót végzünk, amelynek során templátként a pINT 150d plazmid DNS-ét használjuk. Az egyik reakciót Tyr és pINT B5 primerpárral végezzük, ahol a pINT B5 primer szekvenciája (11. számú szekvencia):
5’GAT GCC GCG GTG GTG GGT CTT GGG TGT GTAG 3’ a másik reakciót Insul 1 és pINT B6 primerpárral végezzük, ahol a pINT B6 primer szekvenciája (12. számú szekvencia):
5Ά CCC AAG ACC CAC CAC CGC GGC ATC GTG GAG 3’
A kapott PCR-fragmensek részben komplementerek, és így egy harmadik PCR reakcióban egy fragmenst eredményeznek, amely a B31 és B32 pozícióban meghosszabbított Gly(A21) miniproinzulint kódol. Ezt a fragmenst NcO1 és Sal1 enzimekkel hasítjuk, majd a pINT 90d maradék plazmid DNS-ével ligáivá pINT 302 plazmiddá alakítjuk. Az említett plazmiddal transzformált E. coli K12 W3110 törzset az US 5.227.293 számú irat 4. példájában leírt módon fermentáljuk és feldolgozzuk. A köztitermékként kapott preproinzulinszármazék (tripszinhasítás előtt) aminosavszekvenciája a következő:
1. számú preproinzulin (3. számú szekvencia):
Met Alá Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Alá Arg
Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu
Alá Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr His His Arg
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Gys Gly.
Az 1. számú preproinzulin olyan (II) általános képletű vegyület, amelyben
R2 jelentése 11 aminosavmaradékból álló peptid,
R1 jelentése Phe(B1),
Y jelentése Thr(B30),
Z1 jelentése His His Arg (B31-B33),
R3 jelentése Gly(A21) és
A2-A20 a humán inzulin A-láncában található aminosavszekvencia (2-20 aminosavmaradék) és
B2-B29 a humán inzulin B-láncában található aminosavszekvencia (2-29 aminosavmaradék).
Az 1. számú preproinzulint az US 5.227.293 számú irat 4. példájában leírt módon tripszinnel hasítjuk. A kapott terméket karboxi-peptidáz B-vel a 11. példában leírt módon 1. számú inzulinná alakítjuk. Az 1. számú inzulin olyan (I) általános képletű vegyület, amelyben
R1 jelentése Phe(B1),
Y jelentése Thr(B30),
Z jelentése His His (B31-B32),
R3 jelentése Gly(A21),
A2-A20 jelentése a humán inzulin A-láncában található aminosavszekvencia (2-20 aminosavmaradék) és
B2-B29 jelentése a humán inzulin B-láncában található aminosavszekvencia (2-29 aminosavmaradék). Az 1. számú inzulin aminosavszekvenciája (4. számú szekvencia):
B-lánc:
Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Alá Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr His His A-lánc:
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Gly.
[A diszulfidhidak az (I) képletben ábrázolt módon találhatók.]
2. példa
Gly(A21)-humán inzulin-Ala(B31)-His(B32)-His(B33)-Arg(B34)-OH előállítása
A kifejezővektort az 1. példában leírt módon állítjuk elő. A pINT 150d plazmidot templátként használva két, egymástól független PCR reakciót végzünk, az egyiket a Tyr és pINT B7 primerpárral, ahol a pINT B7 primer szekvenciája (13. számú szekvencia):
5’GAT GCC GCG GTG GTG CGC GGT CTT GGG TGT GTAG 3’
HU 224 591 Β1 a másikat Insu11 és pINT B8 primerpárral, ahol a pINT B8 primer szekvenciája (14. számú szekvencia): 5'ACCC AAG ACC GCG CAC CAC CGC GGC ATC GTG GAG 3'.
A két reakcióval végzett PCR-fragmensek részben komplementerek, és egy harmadik PCR reakcióban komplett szekvenciát eredményeznek, amely a kívánt inzulinszármazékot kódolja. A reakcióban kapott fragmenst Nc01 és Sal1 enzimekkel kezeljük, majd az NcO1 és Sah enzimekkel felnyitott pINT 90d maradék plazmiddal ligáljuk. A kapott pINT 303 plazmidot E. coli K12 W3110 törzsbe transzformáljuk, és expresszálásával előállítjuk a kívánt preminiproinzulint. A fermentálást és a feldolgozást az 1. példában leírt módon végezzük azzal a különbséggel, hogy elmarad a karboxi-peptidáz B-vel végzett reakció.
A kapott 2. számú preproinzulinszármazék szekvenciája (5. számú szekvencia):
Met Alá Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Alá Arg
Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu
Alá Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Alá His His Arg
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Gly
A 2. számú preproinzulin olyan (II) általános képletű vegyület, amelyben R1 jelentése Phe(B1),
R2 jelentése 11 aminosavmaradékból álló peptid,
Y jelentése Thr(B30),
Z1 jelentése Alá His His Arg (B31-B34),
R3 jelentése Gly(A21),
A2-A20 jelentése a humán inzulin A-láncában található aminosavszekvencia (2-20 aminosavmaradék),
B2-B29 jelentése a humán inzulin B-láncában található aminosavszekvencia (2-29 aminosavmaradék).
A 2. számú preproinzulint ezután tripszinnel 2. számú inzulinná alakítjuk. A 2. számú inzulin olyan (II) általános képletű vegyület, amelyben R1 jelentése Phe(B1),
Y jelentése Thr(B30),
Z1 jelentése Alá His His Arg (B31-B34),
R3 jelentése Gly(A21),
A2-A20 jelentése a humán inzulin A-láncában található aminosavszekvencia (2-20 aminosavmaradék) és
B2-B29 jelentése a humán inzulin B-láncában található aminosavszekvencia (2-29 aminosavmaradék).
A 2. számú inzulin aminosavszekvenciája (6. számú szekvencia):
B-lánc:
Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Alá Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Alá His His Arg
A-lánc:
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Gly [A diszulfidhidak az (I) képletben ábrázolt módon helyezkednek el.]
3. példa
Gly(A21)-humán inzulin-Ala(B31)-Ala(B32)-His(B33)-His(B34)-OH előállítása
A kifejezővektort az 1. példában leírt módon állítjuk elő. Templátként pINT 150d plazmidot használva két, egymástól független PCR reakciót végzünk. Az egyiket TIR és pINT 316a primerpárral, ahol a pINT 316a primer szekvenciája (15. számú szekvencia):
5’GAT GCC GCG ATG ATG CGC CGC GGT CTT GGG TGT GTA G 3’ a másikat Insu11 és pINT 316b primerpárral, ahol a pINT 316b primer szekvenciája (16. számú szekvencia):
5A CCC AAG ACC GCG GCG CAT CAT CGC GGC ATC GTG GAG 3’
A két reakcióval kapott PCR-fragmensek részben komplementerek, és egy harmadik PCR reakcióban komplett szekvenciát eredményeznek, amely a kívánt inzulinszármazékot kódolja. A reakció során kapott fragmenst NcO1 és Sal1 enzimekkel hasítjuk, majd NcO1 és Sal1 enzimekkel felnyitott pINT 90d maradék plazmiddal ligáljuk. így pINT 316 plazmidot kapunk, amit E. coli K12 W3110 törzsbe transzformálunk, és ezt kifejezve előállítjuk a kívánt preminiproinzulint. A fermentálást és a feldolgozást az 1. példában leírt módon végezzük azzal a különbséggel, hogy karboxi-peptidáz B-vel történő reagáltatást nem végzünk.
A kapott 3. számú preproinzulin aminosavszekvenciája (7. számú szekvencia):
Met Alá Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Alá Arg
Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu
Alá Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Alá Alá His His Arg
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Gly
A 3. számú preproinzulin olyan (II) általános képletű vegyület, amelyben R1 jelentése Phe(B1),
R2 jelentése 11 aminosavmaradékból álló peptid,
Y jelentése Thr(B30),
Z1 jelentése Alá Alá His His Arg (B31-B35),
R3 jelentése Gly(A21),
A2-A20 jelentése a humán inzulin A-láncában előforduló aminosavszekvencia (2-20 aminosavmaradék), és
B2-B29 jelentése a humán inzulin B-láncában előforduló aminosavszekvencia (2-29 aminosavmaradék).
A 3. számú preproinzulint tripszinnel és karboxi-peptidáz B-vel kezeljük a 11. példában leírt módon, amelynek során 3. számú inzulint kapunk. A 3. számú inzulin olyan (I) általános képletű vegyület, amelyben R1 jelentése Phe(B1),
Y jelentése Thr(B30),
HU 224 591 Β1
Z jelentése Alá Alá His His (B31-B34),
R3 jelentése Gly(A21),
A2-A20 jelentése a humán inzulin A-láncában előforduló aminosavszekvencia (2-20 aminosavmaradék), és
B2-B29 jelentése a humán inzulin B-láncában előforduló aminosavszekvencia (2-29 aminosavmaradék).
A 3. számú inzulin aminosavszekvenciája (8. számú szekvencia):
B-lánc:
Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Alá Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Alá Alá His His
A-lánc:
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Gly.
[A díszulfidhidak az (I) képletben ábrázolt módon helyezkednek el.]
4. példa
A 2. példa szerint előállított 2. számú inzulint karboxi-peptidáz B-vel kezelve a 11. példában leírt módon 4. számú inzulint kapunk. A 4. számú inzulin olyan (I) általános képletű vegyület, amelyben
R1 jelentése Phe(B1),
Y jelentése Thr(B30),
Z jelentése Alá His His (B31-B33),
R3 jelentése Gly(A21),
A2-A20 jelentése a humán inzulin A-láncában előforduló aminosavszekvencia (2-20 aminosavmaradék) és
B2-B29 jelentése a humán inzulin B-láncában előforduló aminosavszekvencia (2-29 aminosavmaradék).
A 4. számú inzulin aminosavszekvenciája (9. szá5 mú szekvencia):
B-lánc:
Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Alá Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro 10 Lys Thr
Alá His His A-lánc:
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Gly.
[A díszulfidhidak az (I) képletben ábrázolt módon helyezkednek el.]
5. példa
Inzulinszármazékok cinkmegkötő képessége 20 Inzulinkészítményt [0,243 mmol/l humán inzulin,
0,13 mol/l nátrium-klorid, 0,1 tömeg% fenol, 80 pg/ml (1,22 mmol/l) cink++, 10 mmol/l Trisz-HCI, pH=7,4] 15 °C hőmérsékleten 10 mmol/l Trisz-HCI-dal szemben (pH=7,4) összesen 40 órán keresztül dializálunk. (A puffért 16 óra és 24 óra elteltével kicseréljük.) Ezután a dializátumot megsavanyítjuk, az inzulinkoncentrációt HPLC eljárással és a cinkkoncentrációt atomabszorpciós spektroszkópiával meghatározzuk. A cinkértékeket az inzulinmentes kontrollelegy cinktartalmához vi30 szonyítjuk. Az eredményeket az 1. táblázatban adjuk meg.
1. táblázat
| Összehasonlító inzulin | Mól Zn/mol inzulinhexamer |
| Humán inzulin (Hl) | 1,98 |
| Gly(A21)-Des(B30)-HI | 1,8 |
| Gly(A21 )-Arg(B31 )-Arg(B32)-H I | 2,1 |
| Találmány szerinti inzulin [(I) általános képlet] | Mól Zn/mol inzulinhexamer |
| Gly(A21 )-His(B31 )-His(B32)-HI | 6,53 |
| Gly(A21 )-His(B31 )-His(B32)-Arg(B33)-HI | 5,29 |
| Gly(A21 )-Ala(B31 )-His(B32)-His(B33)-H I | 6,73 |
| Gly(A21 )-Ala(B31 )-His(B32)-His(B33)-Arg(B34)-H I | 5,01 |
6. példa 0,3 NE/kg humán inzulint pH=4,0 értékű készítHumán inzulin kutyában mért hatásprofiljának cink- ményben szubkután adagolunk 6 kutyának. A vér glüfűggősége 50 kózszintjét a kiindulási érték %-ában a 2. táblázatban adjuk meg.
2. táblázat
| Idő (h) | Cinkmentes | 80 pg Zn/ml | 160 pg Zn/ml |
| 0 | 100 | 100 | 100 |
| 0,5 | 88,66 | 94,06 | 101,48 |
| 1 | 59,73 | 72,31 | 76,87 |
| 1,5 | 50,61 | 58,6 | 67,44 |
HU 224 591 Β1
2. táblázat (folytatás)
| Idő (h) | Cinkmentes | 80 gg Zn/ml | 160 gg Zn/ml |
| 2 | 54,32 | 54,05 | 61,49 |
| 3 | 61,94 | 58,84 | 62,8 |
| 4 | 85,59 | 70,03 | 71,32 |
| 5 | 100,46 | 78,97 | 81,65 |
| 6 | 105,33 | 94,63 | 96,19 |
| 7 | 106 | 102,46 | 100,27 |
| 8 | 108,39 | 106,12 | 104,34 |
| 10 | 102,72 | 105,11 | 105,1 |
| 12 | 105,03 | 107,14 | 103,02 |
7. példa lintartalma 40 NE/ml, ami mintegy 6 nmol inzulinnak feGly(A21)-Ala(B31)-His(B32)-His(B33)-Arg(B34)-hu- lel meg. A készítményt nátrium-hidroxiddal vagy sósavmán inzulin hatásprofilja kutyában val pH=4,0 értékre állítjuk. Ezután szubkután 0,3 NE/kg
A 2. példa szerint előállított 2. számú inzulint 20 dózisban adagoljuk kutyáknak hat párhuzamosban.
mg/ml glicerint és 2,7 mg/ml m-krezolt tartalmazó A vér glükózszintjét a kiindulási érték százalékában a készítmény formájában adagoljuk. A készítmény inzu- 3. táblázatban adjuk meg.
3. táblázat
| Idő (h) | Cinkmentes | 20 gg Zn/ml | 40 gg Zn/ml | 80 gg Zn/ml | |
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | |
| 1 | 74,38 | 95,24 | 95,6 | 102,06 | |
| 2 | 48,27 | 90,11 | 78,74 | 97,44 | |
| 3 | 57,67 | 89,96 | 84,81 | 90,44 I | |
| 4 | 74,2 | 81,35 | 74,66 | 88,69 I | |
| 5 | 91,68 | 74,43 | 75,71 | 79,7 I | |
| 6 | 100,79 | 71,61 | 67,37 | 65,26 | | |
| 7 | 98,5 | 67,73 | 66,05 | 62,17 j | |
| 8 | 100,54 | 68,92 | 64,97 | 47,77 1 |
8. példa
Gly(A21)-Ala(B31)-His(B32)-His(B33)-humán inzulin hatásprofilja kutyában
A 4. példa szerint előállított 4. számú inzulint a 7.
példában leírt módon készítménnyé alakítjuk, és pH=4,0 értékű készítménnyel 0,3 NE/kg dózisban szubkután kutyáknak adagoljuk. A vér glükózszintjét a kiindulási érték százalékában a 4. táblázatban adjuk meg.
4. táblázat
| Idő (h) | Cinkmentes | 20 gg Zn/ml | 40 gg Zn/ml | 80 gg Zn/ml |
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 1 | 61,51 | 70 | 96,52 | 101,77 |
| 2 | 49,82 | 52,55 | 89,28 | 90,01 I |
| 3 | 55,66 | 60,12 | 80,23 | 70,79 |
| 4 | 78,09 | 78,46 | 73,03 | 68,48 |
| 5 | 94,27 | 97,7 | 70,3 | 74,94 |
| 6 | 103,69 | 105,27 | 61,86 | 74,1 |
| 7 | 105,51 | 106,48 | 62,28 | 76,42 |
| 8 | 108,05 | 104,51 | 81,68 | 88 |
HU 224 591 Β1
9. példa
Gly(A21)-His(B31)-His(B32)-humán inzulin hatásprofilja kutyában
Az 1. példa szerint előállított 1. számú inzulint a 7.
példában leírt módon készítménnyé alakítjuk. A pH=4,0 értékű készítményt 0,3 NE/kg dózisban szubkután adagoljuk. A vér glükózszintjét a kiindulási érték százalékában az 5. táblázatban adjuk meg.
5. táblázat
| Idő (h) | Cinkmentes | 20 pg Zn/ml | 40 pg Zn/ml | 80 pg Zn/ml |
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 1 | 60,71 | 73,16 | 100,25 | 102,86 |
| 2 | 52,29 | 55,43 | 94,86 | 100,19 |
| 3 | 61,74 | 61,6 | 89,37 | 89,12 |
| 4 | 79,93 | 81,53 | 81,55 | 79,19 |
| 5 | 96,17 | 96,84 | 73,06 | 70,67 |
| 6 | 103,2 | 102,43 | 74,58 | 75,75 |
| 7 | 110,86 | 104,75 | 77,68 | 79,36 |
| 8 | 113,42 | 108,14 | 84,87 | 78,74 |
10. példa példában leírt módon készítménnyé alakítjuk.
Gly(A21)-Ala(B31)-Ala(B32)-His(B33)-His(B34)-hu- A pH=4,0 értékű készítményt 0,3 NE/kg dózisban mán inzulin hatásprofilja kutyára szubkután adagoljuk. A vér glükózszintjét a kiindulási
Az 1. példa szerint előállított 3. számú inzulint a 7. 25 érték százalékában a 6. táblázatban adjuk meg.
6. táblázat
| Idő (h) | Cinkmentes | 20 pg Zn/ml | 40 pg Zn/ml | 80 pg Zn/ml |
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 1 | 75 | 99 | 101 | 99 |
| 2 | 57 | 77 | 96 | 91 |
| 3 | 58 | 64 | 84 | 80 |
| 4 | 82 | 65 | 73 | 79 |
| 5 | 94 | 70 | 68 | 77 |
| 6 | 100 | 74 | 72 | 76 |
| 7 | 96 | 81 | 80 | 69 |
| 8 | 100 | 90 | 88 | 75 |
| 9 | 100 | 96 | 94 | 83 |
| 10 | 95 | 98 | 92 | 87 |
| 12 | 98 | 99 | 95 | 94 |
| 14 | 95 | 100 | 94 | 93 |
11. példa
1. számú inzulin előállítása 1. számú preproinzulinból
200 mg, B-láncában Arg-am karboxiterminálist tar- 50 talmazó inzulint (1. példa szerint előállítva) 95 ml 10 mmol/l sósavban oldunk. Hozzáadunk 5 ml 1 mol/l Trisz-HCI-puffert [trisz(hidroxi-metil)-amino-metán, pK=8], majd az elegyet sósavval vagy nátrium-hidroxiddal pH=8 értékre állítjuk. Ezután 0,1 mg karboxi-pepti- 55 dáz B-t adunk hozzá. Az arginin lehasítása 90 perc alatt teljes. A reakcióelegyet sósavval pH=3,5 értékre állítjuk, majd reverz fázisú oszlopra (PLRP-S RP 300, 10 pm, 2,5x30 cm, Polymer Laboratories Amherst, MA, USA) visszük. Az A mobilfázis 0,1 tömeg% trifluor-ecetsavat 60 tartalmazó víz, a B mobilfázis 0,09 tömeg% trifluor-ecetsavat tartalmazó acetonitril. Az oszlopot 5 ml/perc áramlási sebességgel működtetjük. Felvitel után az oszlopot 150 ml A fázissal mossuk. A frakcionált eluáláshoz 22,5-40% B fázist adagolunk lineáris gradienssel 400 perc alatt. A frakciókat egyenként analitikus reverz fázisú HPLC eljárással vizsgáljuk, és a megfelelő tisztaságú Des-Arg-inzulint tartalmazó frakciókat egyesítjük. Ezeket nátrium-hidroxiddal pH=3,5 értékre állítjuk, és az acetonitrilt forgó vákuumbepárlóban eltávolítjuk. Ezután a Des-Arg-inzulint pH=6,5 értékre történő állítással kicsapjuk. A csapadékot centrifugáljuk, kétszer 50 ml vízzel mossuk, majd fagyasztva szárítjuk. Az 1. számú inzulin kitermelése 60-80%.
HU 224 591 Β1
Szekvencialista (2) Információ az 1. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 21 aminosav (B) típus: aminosav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: fehérje (vi) Eredet:
(A) organizmus: Escherichia coli (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: fehérje (B) fekvés: 1...21 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 1
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr 15 10
Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Asn 15 20 (2) Információ a 2. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 30 aminosav (B) típus: aminosav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: fehérje (vi) Eredet:
(A) organizmus: Escherichia coli (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: fehérje (B) fekvés: 1...30 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 2
| Phe Val 1 | Asn | Gin His 5 | Leu | Cys | Gly | Ser | His 10 | Leu | Val | ||
| Leu | Tyr | Leu | Val | Cys | Gly | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr |
| 15 | 20 | 25 | |||||||||
| Pro | Lys | Thr | |||||||||
| 30 |
Glu Alá
Thr (2) Információ a 3. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 65 aminosav (B) típus: aminosav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: fehérje (vi) Eredet:
(A) organizmus: Escherichia coli (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: fehérje (B) fekvés: 1...65 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 3
| Met 1 | Alá | Thr | Thr | Ser 5 | Thr | Gly Asn | Ser | Alá 10 | Arg | Phe | Val | Asn | |
| Gin | His | Leu | Cys | Gly | Ser | His | Leu | Val | Glu | Alá | Leu | Tyr | Leu |
| 15 | 20 | 25 | |||||||||||
| Val | Cys | Gly | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro | Lys | Thr | His |
| 30 | 35 | 40 |
HU 224 591 Β1
| His Arg Gly | Ile | Val | Glu Gin | Cys | Cys Thr Ser | Ile Cys |
| 45 | 50 | 55 | ||||
| Leu Tyr Gin | Leu | Glu | Asn Tyr | Cys | Gly | |
| 60 | 65 | |||||
| (2) Információ a 4. | számú szekvenciáról |
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 53 aminosav (B) típus: aminosav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: fehérje (vi) Eredet:
(A) organizmus: Escherichia coli (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: fehérje (B) fekvés: 1...53 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 4
| Phe 1 | Val | Asn | Gin | His 5 | Leu | Cys | Gly | Ser | His 10 | Leu | Val | Glu |
| Leu | Tyr | Leu | Val | Cys | Gly | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr |
| 15 | 20 | 25 | ||||||||||
| Pro | Lys | Thr | His | His | Gly | Ile | Val | Glu | Gin | Cys | Cys | Thr |
| 30 | 35 | 40 | ||||||||||
| Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Gly | |
| 45 | 50 |
(2) Információ az 5. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 66 aminosav (B) típus: aminosav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: fehérje (vi) Eredet:
(A) organizmus: Escherichia coli (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: fehérje (B) fekvés: 1...66
| (x | i)Asz | ekveni | cia leír | ása: a | szekv | encia | azono | sítási száma: | : 5 | ||||
| Met | Alá | Thr | Thr | Ser | Thr | Gly | Asn | Ser | Alá | Arg | Phe | Val | Asn |
| 1 | 5 | 10 | |||||||||||
| Gin | His | Leu | Cys | Gly | Ser | His | Leu | Val | Glu | Alá | Leu | Tyr | Leu |
| 15 | 20 | 25 | |||||||||||
| Val | Cys | Gly | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro | Lys | Thr | Alá |
| 30 | 35 | 40 | |||||||||||
| His | His | Arg | Gly | Ile | Val | Glu | Gin | Cys | Cys | Thr | Ser | Ile | Cys |
| 45 | 50 | 55 | |||||||||||
| Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Gly | ||||
| 60 | 65 |
(2) Információ a 6. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 55 aminosav (B) típus: aminosav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: fehérje (vi) Eredet:
(A) organizmus: Escherichia coli
HU 224 591 Β1 (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: fehérje (B) fekvés: 1...55 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 6
| Phe Val Asn Gin 1 | His 5 | Leu Cys | Gly | Ser His 10 | Leu | Val | Glu | Alá | |||||
| Leu | Tyr | Leu | Val | Cys | Gly | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | |
| 15 | 20 | 25 | |||||||||||
| Pro | Lys | Thr | Alá | His | His | Arg | Gly | Ile | Val | Glu | Gin | Cys | Cys |
| 30 | 35 | 40 | |||||||||||
| Thr | Ser | Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Gly |
| 45 | 50 | 55 |
(2) Információ a 1. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 67 aminosav (B) típus: aminosav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: fehérje (vi) Eredet:
(A) organizmus: Escherichia coli (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: fehérje (B) fekvés: 1...67 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 7
| Met 1 | Alá | Thr | Thr | Ser 5 | Thr | Gly | Asn | Ser | Alá 10 | Arg | Phe | Val | Asn |
| Gin | His | Leu | Cys | Gly | Ser | His | Leu | Val | Glu | Alá | Leu | Tyr | Leu |
| 15 | 20 | 25 | |||||||||||
| Val | Cys | Gly | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro | Lys | Thr | Alá |
| 30 | 35 | 40 | |||||||||||
| Alá | His | His | Arg | Gly | Ile | Val | Glu | Gin | Cys | Cys | Thr | Ser | Ile |
| 45 | 50 | 55 | |||||||||||
| Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Gly | |||
| 60 | 65 |
(2) Információ a 8. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 55 aminosav (B) típus: aminosav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: fehérje (vi) Eredet:
(A) organizmus: Escherichia coli (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: fehérje (B) fekvés: 1 ...55 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 8
| Phe Val 1 | Asn | Gin | His 5 | Leu | Cys | Gly | Ser | His 10 | Leu | Val | Glu | Alá | |
| Leu | Tyr | Leu | Val | Cys | Gly | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | |
| 15 | 20 | 25 | |||||||||||
| Pro | Lys | Thr | Alá | Alá | His | His | Gly | Ile | Val | Glu | Gin | Cys | Cys |
| 30 | 35 | 40 | |||||||||||
| Thr | Ser | Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Gly |
| 45 | 50 | 55 |
HU 224 591 Β1 (2) Információ a 9. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 54 aminosav (B) típus: aminosav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: fehérje (vi) Eredet:
(A) organizmus: Escherichia coli (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: fehérje (B) fekvés: 1...54 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 9
| Phe 1 | Val | Asn | Gin | His 5 | Leu | Cys | Gly | Ser | His 10 | Leu | Val | Glu | Alá |
| Leu | Tyr | Leu | Val | Cys | Gly | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | |
| 15 | 20 | 25 | |||||||||||
| Pro | Lys | Thr | Alá | His | His | Gly | Ile | Val | Glu | Gin | Cys | Cys | Thr |
| 30 | 35 | 40 | |||||||||||
| Ser | Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Gly | |
| 45 | 50 |
(2) Információ a 10. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 39 bázispár (B) típus: nukleinsav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: exon (B) fekvés: 1 ...39 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 10 TTTTTTGTCG ACCTATTAGC CGCAGTAGTT CTCCAGCTG 39 (2) Információ a 11. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 31 bázispár (B) típus: nukleinsav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: exon (B) fekvés: 1...31 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 11
GATGCCGCGG TGGTGGGTCT TGGGTGTGTA G 31 (2) Információ a 12. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 31 bázispár (B) típus: nukleinsav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: exon (B) fekvés: 1...31 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 12
ACCCAAGACC CACCACCGCG GCATCGTGGA G 31
HU 224 591 Β1 (2) Információ a 13. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 34 bázispár (B) típus: nukleinsav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: exon (B) fekvés: 1 ...34 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 13
GATGCCGCGG TGGTGCGCGG TCTTGGGTGT GTAG 34 (2) Információ a 14. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 34 bázispár (B) típus: nukleinsav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: exon (B) fekvés: 1...34 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 14
ACCCAAGACC GCGCACCACC GCGGCATCGT GGAG 34 (2) Információ a 15. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 37 bázispár (B) típus: nukleinsav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: exon (B) fekvés: 1 ...37 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 15
GATGCCGCGA TGATGCGCCG CGGTCTTGGG TGTGTAG 37 (2) Információ a 16. számú szekvenciáról (i) A szekvencia jellemzői:
(A) hosszúság: 37 bázispár (B) típus: nukleinsav (C) szál: egyes (D) topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) név/kulcs: exon (B) fekvés: 1...37 (xi) A szekvencia leírása: a szekvencia azonosítási száma: 16
ACCCAAGACC GCGGCGCATC ATCGCGGCAT CGTGGAG 37
Claims (16)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. (I) általános képletű inzulinszármazék és ennek fiziológiailag alkalmazható sói, (Bl) (B7) a képletbenR1 jelentése fenil-alanin-maradék vagy hidrogénatom,R3 jelentése genetikailag kódolható aminosavmaradék, 35Y jelentése genetikailag kódolható aminosavmaradék (B30 helyzetben),Z jelentése (a) hisztidinmaradék vagy (b) 2-35 genetikailag kódolható aminosavmaradék- 40 ból álló, és 1-5 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid, ahol az A2-A20 maradékok a humán inzulin, állati inzulin vagy inzulinszármazék A-láncában található aminosavszekvenciának, és a B2-B29 maradékok a hu- 45 mán inzulin, állati inzulin vagy inzulinszármazék B-láncában található aminosavszekvenciának felelnek meg.
- 2. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű inzulin, a képletbenR1 jelentése fenil-alanin-maradék, 50R3 jelentése Asn, Gly, Ser, Thr, Alá, Asp, Glu vagy Gin aminosavmaradék,Y jelentése Alá, Thr, Ser vagy His aminosavmaradék,Z jelentése (a) hisztidinmaradék vagy 55 (b) 4-7 aminosavmaradékból álló és 1 vagy 2 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
- 3. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű inzulin, a képletbenR1 jelentése fenil-alanin-maradék, 60 (B19) (B30)R3 jelentése Asn, Gly, Ser, Thr, Alá, Asp, Glu vagy Gin aminosavmaradék,Y jelentése Alá, Thr, Ser vagy His aminosavmaradék, Z jelentése (a) hisztidinmaradék vagy (b) 2-7 aminosavmaradékból álló és 1 vagy 2 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
- 4. A 3. igénypont szerinti (I) általános képletű inzulin, a képletbenZ jelentése 1-5 aminosavmaradékból álló és 1 vagy 2 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti (I) általános képletű inzulin, a képletbenR1 jelentése fenil-alanin-maradék,R3 jelentése Asn vagy Gly aminosavmaradék,Y jelentése Thr vagy His aminosavmaradék,Z jelentése 1-5 aminosavból álló és 1 vagy 2 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
- 6. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű inzulin, a képletbenR1 jelentése fenil-alanin-maradék,R3 jelentése glicinmaradék,Y jelentése treoninmaradék,Z jelentése 1-5 aminosavmaradékból álló peptid.
- 7. A 6. igénypont szerinti (I) általános képletű inzulin, a képletbenZ jelentése His His, His His Arg, Alá His His, Alá His His Arg, Alá Alá His His Arg vagy Alá Alá His His szekvenciájú peptid.HU 224 591 Β1
- 8. Komplex, azzal jellemezve, hogy egy inzulinhexamert és az inzulinhexamerre vonatkoztatva 5-9 mól, előnyösen 5-7 mól cinket tartalmaz, ahol az inzulinhexamer hat, az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti (I) általános képletű inzulinmolekulából áll.
- 9. Gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy hatékony mennyiségben legalább egy, 1-8. igénypontok bármelyike szerinti (I) általános képletű inzulinszármazékot és/vagy ennek fiziológiailag alkalmazható sóját tartalmazza, oldott, amorf és/vagy kristályos formában.
- 10. A 9. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy további komponensként 1 ml-re vonatkoztatva 1 pg és 2 mg közötti, előnyösen 5-200 pg közötti mennyiségű cinket tartalmaz.
- 11. A 9. vagy 10. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy pH=2,5-8,5 értékkel rendelkezik.
- 12. A 9-11. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy pH=2,5—4,5 értékkel rendelkezik.
- 13. A 9-12. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy további komponensként módosítatlan inzulint, előnyösen módosítatlan humán inzulint vagy módosított inzulint, előnyösen Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-humán inzulint tartalmaz.
- 14. (II) általános képletű proinzulin, R2-R1-B2-B29-Y-Z1-Gly-A2-A20-R3 (II) a képletbenR3 és Y jelentése az (I) általános képlet vonatkozásában az 1-7. igénypontok bármelyikében megadott,R1 jelentése fenil-alanin-maradék vagy kovalens kötés,R2 jelentése (a) genetikailag kódolható aminosavmaradék vagy (b) 2-45 aminosavmaradékból álló, és a humán inzulin, állati inzulin vagy inzulinszármazék A- és B-láncában található A2-A21 és B2-B29 aminosavszekvenciának megfelelő peptid,Z1 jelentése 2-40 genetikailag kódolható aminosavból álló és 1-5 hisztidinmaradékot tartalmazó peptid.
- 15. A 14. igénypont szerinti (II) általános képletű proinzulin, a képletbenR2 jelentése 2-25 aminosavmaradékból álló peptid.
- 16. A 14. vagy 15. igénypont szerinti (II) általános képletű proinzulin, a képletbenR2 jelentése 2-15 aminosavmaradékból álló és karboxiterminális végén Met, Lys vagy Arg aminosavmaradékot tartalmazó peptid.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19630242 | 1996-07-26 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9701299D0 HU9701299D0 (en) | 1997-09-29 |
| HUP9701299A1 HUP9701299A1 (hu) | 1998-11-30 |
| HUP9701299A3 HUP9701299A3 (en) | 2001-04-28 |
| HU224591B1 true HU224591B1 (hu) | 2005-11-28 |
Family
ID=7800962
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9701299A HU224591B1 (hu) | 1996-07-26 | 1997-07-25 | Fokozott cinkmegkötő-képességgel rendelkező inzulinszármazékok, azokat tartalmazó komplexek és gyógyszerkészítmények, valamint elővegyületeik |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6221837B1 (hu) |
| EP (1) | EP0821006B1 (hu) |
| JP (1) | JP4046388B2 (hu) |
| KR (1) | KR100547922B1 (hu) |
| CN (2) | CN1158305C (hu) |
| AR (1) | AR008269A1 (hu) |
| AT (1) | ATE264871T1 (hu) |
| AU (1) | AU725201B2 (hu) |
| BR (1) | BR9704117B1 (hu) |
| CA (1) | CA2207078C (hu) |
| CZ (1) | CZ292274B6 (hu) |
| DE (1) | DE59711533D1 (hu) |
| DK (1) | DK0821006T3 (hu) |
| ES (1) | ES2218622T3 (hu) |
| HK (1) | HK1048125A1 (hu) |
| HU (1) | HU224591B1 (hu) |
| IL (2) | IL121381A (hu) |
| NO (1) | NO317666B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ328421A (hu) |
| PL (1) | PL188617B1 (hu) |
| PT (1) | PT821006E (hu) |
| RU (1) | RU2176646C2 (hu) |
| TR (1) | TR199700685A3 (hu) |
| TW (1) | TW474944B (hu) |
| ZA (1) | ZA976645B (hu) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19825447A1 (de) * | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
| DE19838097A1 (de) | 1998-08-24 | 2000-03-02 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Verfahren zur chromatographischen Reinigung von Insulinen |
| DE19947456A1 (de) | 1999-10-02 | 2001-04-05 | Aventis Pharma Gmbh | C-Peptid zur verbesserten Herstellung von Insulin und Insulinanaloga |
| CA2452044A1 (en) * | 2001-08-28 | 2003-03-13 | Eli Lilly And Company | Pre-mixes of glp-1 and basal insulin |
| JP2005508360A (ja) * | 2001-10-19 | 2005-03-31 | イーライ・リリー・アンド・カンパニー | Ｇｌｐ−１およびインスリンの二相混合物 |
| KR100769183B1 (ko) * | 2001-12-28 | 2007-10-23 | 엘지.필립스 엘시디 주식회사 | 면발광 램프 |
| BRPI0409600A (pt) * | 2003-04-29 | 2006-04-18 | Lilly Co Eli | análogo de insulina, composição, método de tratamento de hiperglicemia, e, análogo de pró-insulina |
| EP2264065B1 (en) * | 2003-08-05 | 2017-03-08 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin derivatives |
| CN101027318B (zh) | 2004-07-19 | 2016-05-25 | 比奥孔有限公司 | 胰岛素-低聚物共轭物，制剂及其用途 |
| US7833513B2 (en) | 2004-12-03 | 2010-11-16 | Rhode Island Hospital | Treatment of Alzheimer's Disease |
| CN101389650B (zh) | 2005-12-28 | 2012-10-10 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | 包含酰化胰岛素和锌的组合物以及制备所述组合物的方法 |
| EP2049149B1 (en) | 2006-07-31 | 2015-04-15 | Novo Nordisk A/S | Pegylated extended insulins |
| JP5864834B2 (ja) * | 2006-09-22 | 2016-02-17 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | プロテアーゼ耐性のインスリンアナログ |
| US9387176B2 (en) * | 2007-04-30 | 2016-07-12 | Novo Nordisk A/S | Method for drying a protein composition, a dried protein composition and a pharmaceutical composition comprising the dried protein |
| US20100190706A1 (en) * | 2007-06-01 | 2010-07-29 | Novo Nordisk A/S | Stable Non-Aqueous Pharmaceutical Compositions |
| JP5552046B2 (ja) * | 2007-06-13 | 2014-07-16 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | インスリン誘導体を含有する薬学的製剤 |
| WO2009050738A2 (en) * | 2007-10-16 | 2009-04-23 | Biocon Limited | An orally administerable solid pharmaceutical composition and a process thereof |
| JP5762001B2 (ja) * | 2008-03-14 | 2015-08-12 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | プロテアーゼ安定化インスリンアナログ |
| PT2254906T (pt) | 2008-03-18 | 2017-01-03 | Novo Nordisk As | Análogos de insulina acilados, estabilizados contra proteases |
| US9603904B2 (en) * | 2008-10-30 | 2017-03-28 | Novo Nordisk A/S | Treating diabetes melitus using insulin injections with less than daily injection frequency |
| RU2013123515A (ru) | 2010-10-27 | 2014-12-10 | Ново Нордиск А/С | Лечение сахарного диабета с помощью инъекций инсулина, вводимых с различными интервалами |
| CA2870313A1 (en) | 2012-04-11 | 2013-10-17 | Novo Nordisk A/S | Insulin formulations |
| EP2991672A1 (en) | 2013-04-30 | 2016-03-09 | Novo Nordisk A/S | Novel administration regime |
| AU2014333979B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-02-15 | Novo Nordisk A/S | Novel derivative of an insulin analogue |
| FR3013049B1 (fr) | 2013-11-14 | 2015-11-13 | You-Ping Chan | Analogue de l'insuline glargine |
| CN110087674B (zh) | 2016-12-16 | 2023-01-03 | 诺和诺德股份有限公司 | 含胰岛素的药物组合物 |
| US10335464B1 (en) | 2018-06-26 | 2019-07-02 | Novo Nordisk A/S | Device for titrating basal insulin |
Family Cites Families (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI78616C (fi) * | 1982-02-05 | 1989-09-11 | Novo Industri As | Foerfarande foer framstaellning av en foer infusionsaendamaol avsedd stabiliserad insulinloesning, som har en foerhoejd zinkhalt. |
| DE3326472A1 (de) | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327709A1 (de) * | 1983-07-29 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| DE3440988A1 (de) | 1984-11-09 | 1986-07-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur spaltung von peptiden und proteinen an der methionyl-bindung |
| US4569794A (en) | 1984-12-05 | 1986-02-11 | Eli Lilly And Company | Process for purifying proteins and compounds useful in such process |
| US5008241A (en) * | 1985-03-12 | 1991-04-16 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin peptides |
| DE3526995A1 (de) | 1985-07-27 | 1987-02-05 | Hoechst Ag | Fusionsproteine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE3636903A1 (de) | 1985-12-21 | 1987-07-02 | Hoechst Ag | Fusionsproteine mit eukaryotischem ballastanteil |
| DE3541856A1 (de) | 1985-11-27 | 1987-06-04 | Hoechst Ag | Eukaryotische fusionsproteine, ihre herstellung und verwendung sowie mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
| CA1340522C (en) | 1987-03-10 | 1999-05-04 | Heinz Dobeli | Fusion proteins containing neighbouring histidines for improved purification |
| DE3805150A1 (de) | 1987-04-11 | 1988-10-20 | Hoechst Ag | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von polypeptiden |
| DE4012818A1 (de) | 1990-04-21 | 1991-10-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von fremdproteinen in streptomyceten |
| DE3726655A1 (de) | 1987-08-11 | 1989-02-23 | Hoechst Ag | Verfahren zur isolierung basischer proteine aus proteingemischen, welche solche basischen proteine enthalten |
| DE3739347A1 (de) | 1987-11-20 | 1989-06-01 | Hoechst Ag | Verfahren zur selektiven spaltung von fusionsproteinen |
| ATE101620T1 (de) | 1988-06-23 | 1994-03-15 | Hoechst Ag | Mini-proinsulin, seine herstellung und verwendung. |
| DE3827533A1 (de) * | 1988-08-13 | 1990-02-15 | Hoechst Ag | Pharmazeutische zubereitung zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3837825A1 (de) * | 1988-11-08 | 1990-05-10 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung |
| NZ232375A (en) * | 1989-02-09 | 1992-04-28 | Lilly Co Eli | Insulin analogues modified at b29 |
| DE3921447A1 (de) * | 1989-06-30 | 1991-01-17 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von n-alkyl-halogenanilinen |
| US5227293A (en) | 1989-08-29 | 1993-07-13 | The General Hospital Corporation | Fusion proteins, their preparation and use |
| US5358857A (en) | 1989-08-29 | 1994-10-25 | The General Hospital Corp. | Method of preparing fusion proteins |
| GR1005153B (el) | 1989-08-29 | 2006-03-13 | The General Hospital Corporation | Πρωτεινες συντηξεως, παρασκευη τους και χρηση τους. |
| TW224471B (hu) * | 1991-11-26 | 1994-06-01 | Lilly Co Eli | |
| EP0600372B1 (de) | 1992-12-02 | 1997-02-05 | Hoechst Aktiengesellschaft | Verfahren zur Gewinnung von Proinsulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
| DE4405179A1 (de) | 1994-02-18 | 1995-08-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur Gewinnung von Insulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
| CA2195557C (en) * | 1994-08-12 | 2006-10-17 | Shui-On Leung | Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells |
-
1997
- 1997-07-17 DK DK97112197T patent/DK0821006T3/da active
- 1997-07-17 ES ES97112197T patent/ES2218622T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-17 PT PT97112197T patent/PT821006E/pt unknown
- 1997-07-17 EP EP97112197A patent/EP0821006B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-17 DE DE59711533T patent/DE59711533D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-17 AT AT97112197T patent/ATE264871T1/de active
- 1997-07-24 AR ARP970103352A patent/AR008269A1/es active IP Right Grant
- 1997-07-24 RU RU97112742/04A patent/RU2176646C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 AU AU30171/97A patent/AU725201B2/en not_active Ceased
- 1997-07-24 NZ NZ328421A patent/NZ328421A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 IL IL12138197A patent/IL121381A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 TR TR97/00685A patent/TR199700685A3/tr unknown
- 1997-07-24 CZ CZ19972370A patent/CZ292274B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 IL IL12138297A patent/IL121382A0/xx unknown
- 1997-07-24 TW TW086110516A patent/TW474944B/zh not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 NO NO19973438A patent/NO317666B1/no not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 CN CNB971046751A patent/CN1158305C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 KR KR1019970034958A patent/KR100547922B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 CA CA002207078A patent/CA2207078C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 US US08/900,574 patent/US6221837B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 ZA ZA9706645A patent/ZA976645B/xx unknown
- 1997-07-25 JP JP20000297A patent/JP4046388B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 HU HU9701299A patent/HU224591B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 PL PL97321343A patent/PL188617B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-07-28 BR BRPI9704117-3A patent/BR9704117B1/pt not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-12-17 CN CN01143664A patent/CN1362417A/zh active Pending
-
2003
- 2003-01-07 HK HK03100149.7A patent/HK1048125A1/zh unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU224591B1 (hu) | Fokozott cinkmegkötő-képességgel rendelkező inzulinszármazékok, azokat tartalmazó komplexek és gyógyszerkészítmények, valamint elővegyületeik | |
| JP3676573B2 (ja) | 迅速な作用発現を示す新規インスリン誘導体 | |
| US4608364A (en) | Pharmaceutical agent for the treatment of diabetes mellitus | |
| KR940000756B1 (ko) | 인슈린 유사체의 제조방법 | |
| NZ231272A (en) | Insulin derivatives with basic group on b-chain c-terminal; pharmaceutical compositions | |
| JPH01156998A (ja) | 血清担体タンパク質との結合力が減少しているヒトインスリン様成長因子類以体及び酵母におけるそれらの産生 | |
| JP2000504732A (ja) | インスリン誘導体類とその使用 | |
| HU203371B (en) | Process for producing new insulin derivatives and injection solutions comprising same | |
| KR19980703039A (ko) | 인슐린 유도체 | |
| US6686177B1 (en) | Insulin analogs with enhanced zinc binding | |
| MXPA97005667A (en) | Insulin derivatives with zinc increment | |
| MXPA98004945A (en) | New insulin derivatives with rapid initiation of efe |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20051003 |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |