PL188617B1 - Nowe pochodne insuliny, nowe kompleksy i środek farmaceutyczny - Google Patents
Nowe pochodne insuliny, nowe kompleksy i środek farmaceutycznyInfo
- Publication number
- PL188617B1 PL188617B1 PL97321343A PL32134397A PL188617B1 PL 188617 B1 PL188617 B1 PL 188617B1 PL 97321343 A PL97321343 A PL 97321343A PL 32134397 A PL32134397 A PL 32134397A PL 188617 B1 PL188617 B1 PL 188617B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- insulin
- amino acid
- ala
- gly
- sequence
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 160
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 72
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 72
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 66
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical group [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims abstract description 22
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 43
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 41
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 28
- 108010076441 Ala-His-His Proteins 0.000 claims description 21
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 18
- ATAKEVCGTRZKLI-UWJYBYFXSA-N Ala-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 ATAKEVCGTRZKLI-UWJYBYFXSA-N 0.000 claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 12
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 9
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 8
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N His-His-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CN=CN1 CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 5
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 5
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 28
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 20
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 17
- TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N His-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 13
- YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N Phe-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 11
- XTHUKRLJRUVVBF-WHFBIAKZSA-N Cys-Gly-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XTHUKRLJRUVVBF-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 10
- IWUFOVSLWADEJC-AVGNSLFASA-N Gln-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IWUFOVSLWADEJC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 10
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 10
- XMVLTPMCUJTJQP-FXQIFTODSA-N Glu-Gln-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N XMVLTPMCUJTJQP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 10
- FQNUWOHNGJWNLM-QWRGUYRKSA-N Tyr-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O FQNUWOHNGJWNLM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 10
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 10
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 10
- WTXCNOPZMQRTNN-BWBBJGPYSA-N Cys-Thr-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O WTXCNOPZMQRTNN-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N Gly-Ile-Val Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 9
- DURWCDDDAWVPOP-JBDRJPRFSA-N Ile-Cys-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N DURWCDDDAWVPOP-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 9
- VHTIZYYHIUHMCA-JYJNAYRXSA-N Leu-Tyr-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O VHTIZYYHIUHMCA-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 9
- CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N Tyr-Leu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 101500025353 Homo sapiens Insulin A chain Proteins 0.000 description 8
- 101710186643 Insulin-2 Proteins 0.000 description 8
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 8
- 239000002585 base Substances 0.000 description 8
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 7
- GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N Cys-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 7
- 101500025354 Homo sapiens Insulin B chain Proteins 0.000 description 7
- 101710186630 Insulin-1 Proteins 0.000 description 7
- 229940023064 escherichia coli Drugs 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 6
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 6
- 101001012217 Conus geographus Con-Ins G3 Proteins 0.000 description 6
- 101001012221 Conus tulipa Con-Ins T3 Proteins 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 6
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 6
- DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N Gly-Glu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N Phe-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N Leu-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- HUKLXYYPZWPXCC-KZVJFYERSA-N Met-Ala-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HUKLXYYPZWPXCC-KZVJFYERSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N Pro-Lys-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N Thr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 4
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 4
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 4
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 description 4
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N Cys-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 3
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 3
- NLKVNZUFDPWPNL-YUMQZZPRSA-N Glu-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O NLKVNZUFDPWPNL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N Tyr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- FAAHJOLJYDXKKU-ZHDGNLTBSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-1-[(2s,3r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)CN)C1=CC=C(O)C=C1 FAAHJOLJYDXKKU-ZHDGNLTBSA-N 0.000 description 2
- YWWATNIVMOCSAV-UBHSHLNASA-N Ala-Arg-Phe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YWWATNIVMOCSAV-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- RGQCNKIDEQJEBT-CQDKDKBSSA-N Ala-Leu-Tyr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 RGQCNKIDEQJEBT-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N Ala-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N His-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N Thr-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N 0.000 description 2
- GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N Thr-Pro-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 2
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- -1 cyanogen halide Chemical class 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 108010013359 miniproinsulin Proteins 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- BMLMGCPTLHPWPY-REOHCLBHSA-N (4R)-2-oxo-4-thiazolidinecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CSC(=O)N1 BMLMGCPTLHPWPY-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N Arg-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 1
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- NXTYATMDWQYLGJ-BQBZGAKWSA-N Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS NXTYATMDWQYLGJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- WYVKPHCYMTWUCW-YUPRTTJUSA-N Cys-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O WYVKPHCYMTWUCW-YUPRTTJUSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N Gly-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- PLOUVAYOMTYJRG-JXUBOQSCSA-N Lys-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PLOUVAYOMTYJRG-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- 108090000988 Lysostaphin Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- GXAZTLJYINLMJL-LAEOZQHASA-N Val-Asn-Gln Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N GXAZTLJYINLMJL-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229940043430 calcium compound Drugs 0.000 description 1
- LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N caninsulin Chemical compound [Zn].C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC3N=CN=C3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1C=NC=N1 LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940091908 glycerin 20 mg/ml Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N glycolonitrile Natural products N#CC#N JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 150000002681 magnesium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
- A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
1 . Nowe pochodne insuliny o ogólnym wzorze 1 , w którym R1 oznacza reszte fenyloalaniny, R3 oznacza reszte aminokwasu wybrana z grupy obejmujacej Asn, Gly, Ser, Thr, Ala, Asp, Glu i Gln, Y oznacza reszte ami nokwasu wybrana z grupy obejmujacej Ala, Thr, Ser i His, a Z oznacza reszte histydyny lub ugrupowanie peptydu zawierajace 2-7 genetycznie kodowalnych reszt amino kwasów, w tym 1 lub 2 reszty histydyny, przy czym reszty A2-A20 odpowiadaja sekwencji aminokwasów lancucha A insuliny ludzkiej, insuliny zwierzecej lub pochodnej insuliny, a reszty B2-B29 odpowiadaja sekwencji amino kwasów lancucha B insuliny ludzkiej, insuliny zwierzecej lub pochodnej insuliny, a takze ich fizjologicznie zgodne sole 6 Nowe kompleksy zawierajace heksamer insuliny i 5-9 moli cynku na heksamer insuliny, a zwlaszcza 5-7 moli cynku na heksamer insuliny, przy czym heksamer insuliny sklada sie z szesciu czasteczek insuliny o wzorze 1 zdefiniowanej w zastrz 1 7 Srodek farmaceutyczny zawierajacy substancje czynna oraz farmaceutycznie dopuszczalny nosnik 1 ewen tualnie substancje pomocnicze, znamienny tym, ze jako substancje czynna zawiera w skutecznej ilosci co najmniej jedna pochodna insuliny o wzorze 1 i/lub co najmniej jeden kompleks i/lub co najmniej jedna z ich fizjologicz nie zgodnych soli, zdefiniowane w zastrz 1 w rozpusz czonej, amorficznej i/lub krystalicznej postaci Wzór 1 PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku są nowe pochodne insuliny, nowe kompleksy i środek farmaceutyczny.
Farmakokinetyka podawanej podskórnie insuliny zalezy od jej zdolności do asocjacji. W obojętnych roztworach wodnych insulina tworzy heksamery. Podawana podskórnie, zanim dotrze do krwioobiegu i do miejsca działania, musi najpierw przedostać się przez ścianki naczyń krwionośnych. Przyjmuje się, że jest to możliwe tylko w przypadku monomerów i dimerów insuliny, a nie jest możliwe lub jest możliwe tylko w małym stopniu w przypadku heksamerów insuliny lub wielkocząsteczkowych asocjatów (Brange i inni, Diabetes Care: 13
188 617 (1990), str. 923-954, Kang i inni, Diabetes Care: 14 (1991), str. 942-948). Dysocjacja heksameru jest warunkiem szybkiego przejścia insuliny z tkanki podskórnej do krwioobiegu.
Na zdolność insuliny do asocjacji i agregacji wpływają kationy Zn2+, powodujące stabilizację heksameru i tworzenie się, przy wartości pH bliskiej odczynowi obojętnemu, wielkocząsteczkowych agregatów az do ich wytrącenia. Dodatek kationów ZTC*' do niebuforowanego roztworu insuliny ludzkiej (pH 4) wpływa w znikomym stopniu na jej profil działania. Taki roztwór, po wstrzyknięciu w tkankę podskórną, ulega szybko zobojętnieniu tworząc kompleks insuliny z cynkiem, jednakże naturalne wiązanie insuliny ludzkiej z cynkiem jest niewystarczające dla stabilizacji heksamerów i wyższych agregatów. Tak więc dodatek Zn2+ nie opóźnia znacząco uwalniania insuliny ludzkiej i nie zapewnia uzyskania silnego efektu depot. Znane heksamery insuliny zawierają około dwa mole Zn2+ na jeden mol heksameru insuliny (Blundell i inni, Adv. Protein Chem.: 26 (1972), str. 323-328). Dwa jony cynku przypadające na jeden heksamer insuliny są mocno z nim związane i nie można ich usunąć drogą zwykłej dializy. Opisano wprawdzie tak zwane kryształy czterocynkowej insuliny, lecz zawierają one jednak średnio mniej niz 3 mole Ztr+ na mol heksameru insuliny (G.D. Smith i inni, Proc. Natl. Acad. Sci USA: 81, str. 7093-7097).
Istniała potrzeba wynalezienia pochodnych insuliny o zwiększonej zdolności wiązania cynku, tworzących trwałe kompleksy heksameru insuliny z Zn2 * i wykazujących opóźniony profil działania w porównaniu z insuliną ludzką.
Nieoczekiwanie stwierdzono, że te wymagania spełniają nowe pochodne insuliny o ogólnym wzorze 1, w którym R1 oznacza resztę fenyloalaniny, R’ oznacza resztę aminokwasu wybraną z grupy obejmującej Asn, Gly, Ser, Thr, Ala, Asp, Glu i Gin, Y oznacza resztę aminokwasu wybraną z grupy obejmującej Ala, Thr, Ser i His, a Z oznacza resztę histydyny lub ugrupowanie peptydu zawierające 2-7 genetycznie kodowalnych reszt aminokwasów, w tym 1 lub 2 reszty histydyny, przy czym reszty A2-A20 odpowiadają sekwencji aminokwasów łańcucha A insuliny ludzkiej, insuliny zwierzęcej lub pochodnej insuliny, a reszty B2-B29 odpowiadają sekwencji aminokwasów łańcucha B insuliny ludzkiej, insuliny zwierzęcej lub pochodnej insuliny, a także ich fizjologicznie zgodne sole.
Korzystne są związki o wzorze 1, w którym Z oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 1-5 reszt aminokwasów, w tym 1 lub 2 reszty histydyny.
Szczególnie korzystne są związki o wzorze 1, w którym R1 oznacza resztę fenyloalaniny, R3 oznacza resztę aminokwasu wybraną z grupy obejmującej Asn i Gly, Y oznacza resztę aminokwasu wybraną z grupy obejmującej Thr i His, a Z oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 1-5 reszt aminokwasów, w tym 1 lub 2 reszty histydyny.
Wyjątkowo korzystne są związki, w którym R1 oznacza resztę fenyloalaniny, R3 oznacza resztę glicyny, Y oznacza resztę treoniny, a Z oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 1 -5 reszt aminokwasów.
Najkorzystniejsze są związki o wzorze 1, w którym Z oznacza ugrupowanie peptydu 0 sekwencji His His, His His Arg, Ala His His, Ala His His Arg, Ala Ala His His Arg lub Ala Ala His His.
Wynalazek dotyczy również nowych kompleksów zawierających heksamer insuliny i 5-9 moli cynku na heksamer insuliny, a zwłaszcza 5-7 moli cynku na heksamer insuliny, przy czym heksamer insuliny składa się z sześciu cząsteczek insuliny o wzorze 1 zdefiniowanej powyżej.
Środek farmaceutyczny według wynalazku zawiera substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i ewentualnie substancje pomocnicze, a cechą tego środka jest to, że jako substancję czynną zawiera w skutecznej ilości co najmniej jedną pochodną insuliny o wzorze 1 i/lub co najmniej jeden kompleks i/lub co najmniej jedną z ich fizjologicznie zgodnych soli, zdefiniowane powyżej, w rozpuszczonej, amorficznej i/lub krystalicznej postaci.
Korzystnie środek farmaceutyczny według wynalazku dodatkowo zawiera 1 (ig - 2 mg cynku/ml, a zwłaszcza 5 - 200 |ig cynku/ml.
Korzystnie środek farmaceutyczny według wynalazku wykazuje wartość pH 2,5 - 8,5, a zwłaszcza wartość pH 2,5 - 4,5.
188 617
Korzystnie środek farmaceutyczny dodatkowo zawiera niemodyfikowaną insulinę, korzystnie niemodyfikowaną insulinę ludzką, lub modyfikowaną insulinę, korzystnie Gly(A21)Arg(B31)-Arg(B32)-ludzką insulinę.
Sekwencję aminokwasów w peptydach i białkach określa się od N-końca ^^ić^uc^lia aminokwasów. Symbole podane w nawiasach we wzorze 1, np. A1, A6, A7, A11, A20, BI, B7, B19 lub B30, odpowiadają pozycji reszt aminokwasów w łańcuchach A lub B insuliny.
Określenie „genetycznie kodowalna reszta aminokwasu” oznacza reszty aminokwasów Gly, Ala, Ser, Thr, Val, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Arg, Lys, His, Tyr, Phe, Trp, Pro i selenocysteiny. Określenia „reszty A2-A20” i „reszty B2-B29” insuliny zwierzęcej oznaczają np. sekwencje aminokwasów insuliny wołowej, wieprzowej i drobiowej. Określenia reszty A2-A20 i B2-B29 pochodnych insuliny oznaczają sekwencje aminokwasów insuliny ludzkiej, tworzone poprzez wymianę aminokwasów na inne kodowalne aminokwasy.
Łańcuch A insuliny ludzkiej ma następującą sekwencję aminokwasów (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 1):
Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Asn.
Łańcuch B insuliny ludzkiej ma następującą sekwencję aminokwasów (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 2):
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu
Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr
Thr Pro Lys Thr.
Pochodną insuliny o wzorze 1 można wytworzyć w mikroorganizmach za pomocą konstruktów genetycznych (EP 0 489 780, EP 0 347 781, EP 0 368 187, EP 0 453 969). Genetyczne konstrukty są eksprymowane w mikroorganizmach, takich jak Escherichia coli lub Streptomyces, podczas fermentacji. Utworzone białka odkładają się w mikroorganizmach (EP 0 489 780) lub są wydalane do roztworu fermentacyjnego.
Przykładami insuliny o wzorze 1 są:
Gly(A21)-ludzka insulina-His(B31)-His(B32)-OH
Gly(A21)-ludzka insulina-His(B31)-His(B32)-Arg(B33)-OH
Gly(A21)-ludzka insulina-Ala(B31)iHis(B32)-His(B33)-OH
Gly(A21)-ludzka insulina-Ala(B31)-His(B32)-His(B33)-Arg(B34)-OH
Gly(A21)-ludzka msulina-Ala(B31)-Ala(B32)-His(B33)-His(B34)-OH
Gly(A21)-ludzka insulina-Ala(B31)-Ala(B32)-His(B33)-His(B34)-Arg(B35)-OH.
Pochodne insuliny o wzorze 1 wytwarza się głównie metodami inżynierii genetycznej drogą ukierunkowanej miejscowo mutagenezy zgodnie ze znanymi sposobami. Strukturę genową kodującą odpowiednią pochodną insuliny o wzorze 1 konstruuje się w komórce gospodarzu, korzystnie w bakterii, takiej jak E. coli, lub w drożdżach, szczególnie Saccharomyces cerevisiae, umożliwia ekspresję i jeśli struktura genowa koduje białko fuzyjne, to wówczas pochodna insuliny o wzorze 1 jest uwalniana z białka fuzyjnego. Analogiczne sposoby opisano np. w EP-A-0 211 299, EP-A-0 227 938, EP-A-0 229 998, EP-A-0 286 956 i w zgłoszeniu patentowym DE P 38 21 159.
Rozszczepienie części fuzyjnej białka następuje wskutek rozpadu komórki albo na drodze chemicznej pod działaniem halogenku cyjanu (EP-A-0 180 920), albo enzymatycznej pod działaniem lizostafiny lub trypsyny (DE-A-37 39 347).
Prekursor insuliny poddaje się oksydacyjnej siarczynolizie np. sposobem opisanym przez R.C. Marshalla i A.S. Inglisa w „Practical Protein Chemistry - A HandbooE” (wydawca A. Darbre) 1986, str. 49-53) i następnie poddaje się renaturacji w obecności tiolu z utworzeniem prawidłowych mostków disiarczkowych, np. sposobem opisanym przez G.H. Dixona i A.C. Wardlowa w Nature (1960), str. 721-724.
Prekursory insuliny można również bezpośrednio składać (EP-A-0 600 372, EP-A-0 668 292).
C-Peptyd, jeśli występuje presekwencja (R2 we wzorze 2), usuwa się drogą rozszczepia się z użyciem trypsyny, np. sposobem opisanym przez Kemmlera i innych, J.B.C. (1971), str. 6786-6791, po czym pochodną insuliny o wzorze 1 oczyszcza się znanymi sposobami, takimi jak chromatografia (np. EP-A-0 305 760) i krystalizacja.
188 617
Nowe insuliny o wzorze 1 tworzą kompleksy zawierające heksamer insuliny i około 5-9 moli cynku na heksamer insuliny.
Wiązanie cynku do insuliny jest tak mocne, że drogą zwykłej dializy przez 40 godzin, np. z użyciem wodnego roztworu buforowego 10 mM Tris/HCl, pH 7,4, nie można usunąć 5-9 moli Zn2+ na 1 mol heksameru insuliny.
Insuliny o wzorze 1, w środku farmaceutycznym wolnym od cynku (pH 1), po podaniu podskórnym wykazują małe opóźnienie działania w porównaniu z insuliną ludzką. Po dodaniu około 20 jtg Zn2+/ml środka, po podaniu podskórnym zaobserwowano opóźnienie wystąpienia działania. Korzystne opóźnienie działania zaobserwowano przy 40 (tg Zn2+/ml. Efekt ten ulega wzmocnieniu przy wyższych wartościach stężenia cynku.
Insuliny o wzorze 1 można wytwarzać z użyciem preproinsulin o wzorze 2, w którym R3 i Y mają takie same znaczenie jak we wzorze 1, R1 oznacza resztę fenyloalaniny lub wiązanie kowalencyjne, R2 oznacza genetycznie kodowalną resztę aminokwasu lub ugrupowanie peptydu zawierające 2-45 reszt aminokwasów, A2-A20 i B2-B29 odpowiadają sekwencjom aminokwasów łańcuchów A i B insuliny ludzkiej, insuliny zwierzęcej lub pochodnej insuliny, a Z1 oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 2-40 genetycznie kodowalnych reszt aminokwasów, w tym 1-5 reszt histydyny (His).
Korzystne są proinsuliny o wzorze 2, w którym R2 oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 2-25 reszt aminokwasów.
Szczególnie korzystne są proinsuliny o wzorze 2, w którym R2 oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 2-15 reszt aminokwasów, gdzie przy C-końcu występuje reszta aminokwasu z wybrana z grupy obejmującej Met, Lys i Arg.
Zgodne z wynalazkiem pochodne insuliny o wzorze 1 i/lub ich kompleksy zawierające heksamer insuliny i 5-9 moli Zn2+ na heksamer i/lub ich fizjologicznie zgodne sole (np. sole metali alkalicznych i sole amonowe) stosowane są przede wszystkim jako substancja czynna środka farmaceutycznego przeznaczonego do leczenia cukrzycy, a zwłaszcza Diabetes mellitus.
Środek farmaceutyczny ma korzystnie postać roztworu lub zawiesiny do iniekcji. Zawiera on substancję czynną w postaci rozpuszczonej, amorficznej i/lub krystalicznej, korzystnie w postaci rozpuszczonej.
Środek ten korzystnie wykazuje wartość pH 2,5 - 8,5, a zwłaszcza 4,0 - 8,5, zawiera odpowiedni środek nadający izotoniczność, odpowiedni środek konserwujący i ewentualnie odpowiedni bufor, a także ma określone stężenie jonów cynkowych, w jałowym roztworze wodnym. Wszystkie składniki środka, oprócz substancji czynnej, tworzą roztwór stanowiący nośnik tego środka.
Środki zawierające roztwory insuliny o wzorze 1 wykazują wartość pH 2,5 - 4,5, korzystnie 3,5 - 4.5, a zwłaszcza 4,0. Środki zawierające zawiesiny insuliny o wzorze 1 wykazują wartość pH 6,5 - 8,5, korzystnie 7,0 - 8,0, a zwłaszcza 7,4.
Odpowiednimi środkami nadającymi izotoniczność są np. gliceryna, glukoza, mannit, NaCl, związki wapna lub magnezu, takie jak CaCb lub MgCl2.
Dobierając odpowiedni środek nadający izotoniczność i/lub środek konserwujący wpływa się na rozpuszczalność pochodnej insuliny lub jej fizjologicznie dopuszczalnej soli, przy wartościach pH odpowiadających odczynowi lekko kwaśnemu.
Odpowiednimi środkami konserwującymi są np. fenol, m-krezol, alkohol benzylowy i/lub ester kwasu p-hydroksyben-zoesowego.
Jako substancje buforowe, szczególnie służące do nastawiania wartości pH 4,0 - 8,5, można stosować np. octan sodu, cytrynian sodu lub fosforan sodu. Do nastawiania wartości pH można tez użyć fizjologicznie tolerowanych, rozcieńczonych kwasów (zwykle HC1) lub zasad (zwykle NaOH).
Środek z dodatkiem cynku zawiera od 1 |ig do 2 mg Zif+Zml, korzystnie 5-200 pg Zn2+/ml.
Dla zmiany profilu działania środka farmaceutycznego według wynalazku można do niego dodać niemodyfikowanej insuliny, korzystnie insuliny wołowej, wieprzowej lub ludzkiej, a zwłaszcza insuliny ludzkiej, albo modyfikowanych insulin, np. insulin w postaci monomerów, szybko działających insulin lub Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-ludzkiej insuliny.
188 617
Środek farmaceutyczny zawiera substancję czynną korzystnie w stężeniu około 1-1500, bardziej korzystnie około 5-1000, a zwłaszcza około 40-400 międzynarodowych jednostek/ml.
Przykład 1
Wytwarzanie Gly(A21)-ludzkiej insuliny-His(B31)-His(B32)-OH
Układ ekspresyjny wytworzono sposobem według US 5 358 857, gdzie opisano również wektory pINT 90d i pINT 91d (patrz przykład 17) oraz startery TIR i Insul 1 reakcji PCR. Te cztery składniki służą między innymi jako materiał wyjściowy dla następnie opisanych konstrukcji wektorów.
Najpierw do sekwencji kodującej mini-proinsulinę wprowadzono kodon dla Gly(A21). Do tego celu jako szablonu użyto pINT 91d i przeprowadzono reakcję PCR z wykorzystaniem starterów TIR i Insu31.
Insu31 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 10):
5'TTT TTT GTC GAC CTA TTA GCC GCA GTA GTT CTC GAG CTG 3'
Cykl PCR przeprowadzono następująco: pierwsza minuta 94°C, druga minuta 55°C, trzecia minuta 72°C. Cykl ten powtórzono 25 razy, po czym prowadzono inkubację przez 7 minut w 72°C i przez noc w 4°C.
Fragment powstały w reakcji PCR oczyszczono wytrąciwszy z etanolu, wysuszono i następnie poddano trawieniu odpowiednio do zaleceń producenta za pomocą enzymu restrykcyjnego NcOl i Sal l w buforze restrykcyjnym. Następnie mieszaninę reakcyjną rozdzielono drogą elektroforezy w żelu i wyizolowano fragment NcOl-pre-proinsulina-Sall. DNA plazmidu pINT 90d rozszczepiono również za pomocą NcOl i Sall i w ten sposób uwolniono fragment małpiej proinsuliny od końcowego plazmidu pINT. Obydwa fragmenty rozdzielono drogą elektroforezy w żelu i wyizolowano plazmid końcowy DNA. Ten DNA poddano ligacji z fragmentem NcOl-Sall-PCR. Otrzymano plazmid pINT 150d, który po transformacji komórek E. coli namnażano w nich, a następnie ponownie wyizolowano.
DNA plazmidu pINT 150d służył jako materiał wyjściowy dla plazmidu pINT 302, umożliwiający wytworzenie żądanego wariantu insuliny.
Do konstrukcji tego plazmidu wybrano sposób opisany w US 5 358 857 (patrz przykład 6). Przeprowadzono dwie od siebie niezależne reakcje PGR, dla których jako szablon służył DNA plazmidu pINT 150d. Pierwszą reakcję przeprowadzono z parą starterów TIR i pINT B5 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 11):
5' GAT GCC GCG GTG GTG GGT CTT GGG TGT GTAG 3' a drugą reakcję przeprowadzono z parą starterów Insul 1 i pINT B6 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 12):
5' A CCC AAG ACC CAC CAC CGC GGC ATC GTG GAG 3'
Fragmenty powstałe w reakcji PCR były częściowo komplementarne, toteż w trzeciej reakcji PCR utworzyły jeden fragment kodujący Gly(A21) miniproinsulinę przedłużoną o pozycje B31 i B32. Fragment ten rozszczepiono za pomocą NcOl i Sall i następnie poddano ligazie z DNA opisanego końcowego plazmidu pINT90d z wytworzeniem plazmidu pINT302. Następnie stransformowane tym plazmidem komórki E. coli K12 W3110 poddano fermentacji i obróbce tak jak w przykładzie 4 w US 5 227 293. Jako produkt przejściowy otrzymano pochodną preproinsuliny (przed rozszczepieniem trypsyną) o następującej sekwencji aminokwa-sów:
Preproinsulina 1 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 3):
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
His His Arg
Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser
Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Gly.
Preproinsulina 1 odpowiada związkowi o wzorze 2, w którym R2 oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 11 reszt aminokwasów, R1 oznacza Phe(B1), Y oznacza Thr(B30), Z1 oznacza His His Arg(B31-B33), R3 oznacza Gly(A21), A2-A20 stanowi sekwencję amino188 617 kwasów łańcucha A ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-20) a B2-B29 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha B ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-29).
Preproinsulinę 1 rozszczepiono za pomocą trypsyny według US 5 227 293 tak jak w przykładzie 4. Uzyskany produkt następnie poddano reakcji z karboksypeptydazą B według przykładu 11 z wytworzeniem insuliny o wzorze 1. Insulina 1 odpowiada związkowi o wzorze 1, w którym R1 oznacza Phe(B1), Y oznacza Thr(BSO), Z oznacza His His (B31-B32), R oznacza Gly(A21), A2-A20 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha A ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-20), a B2-B29 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha B ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-29).
Insulina 1 ma następującą sekwencję aminokwasów:
Insulina 1 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 4):
Łańcuch B: Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val
Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr
Pro Lys Thr His His
Łańcuch A: Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser
Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Gly (mostki disiarczkowe takie jak we wzorze 1)
Przykład 2
Wytwarzanie Gly(A21)-ludzkiej insuliny-Ala(B31)-His(B32)-His(B33)Arg(B34)-OH
Wektor ekspresyjny skonstruowano według przykładu 1. Plazmid pINT150d służył jako szablon dla dwóch od siebie niezależnych reakcji PCR z parami starterów TIR i płNT B7 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 13):
5' GAT GCC GCG GTG GTG CGC GGT CTT GGG TGT GTAG 3' albo Insull i pINT B8 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 14):
5' ACCC AAG ACC GCG CAC CAC CGC GGC ATC GTG GAG 3'.
Fragmenty PCR, do których doprowadziły obie reakcje, były częściowo komplementarne i dały w trzeciej reakcji PCR kompletną sekwencję kodującą żądany wariant insuliny. Fragment ten potraktowano enzymem NcOl i Sall i następnie poddano ligacji z otwartym końcowym plazmidem NcOl/Sall pINT 90d DNA. W wyniku tego powstał plazmid pINT303, który po transformacji komórek E. coli K12 W3110 służył jako podstawa dla ekspresji odpowiedniej pre-miniinsuliny. Fermentację i obróbkę przeprowadzono tak jak w przykładzie 1, pominąwszy reakcję z karboksypeptydazą B. Otrzymano pochodną preproinsuliny o następującej sekwencji reszt aminokwasów:
Preproinsulina 2 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 5):
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Ala His His Arg
Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser
Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Gly
Preproinsulina 2 odpowiada związkowi o wzorze 2, w którym R1 oznacza Phe(B1), R2 oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 11 reszt aminokwasów, Y oznacza Thr(B30), Z1 oznacza Ala His His Arg(B31-B34), R3 oznacza Gly(A21), A2-A20 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha A ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-20), a B2-B29 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha B ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-29).
Preproinsulinę 2 następnie rozszczepiono za pomocą trypsyny do insuliny 2. Insulina 2 odpowiada związkowi o wzorze 1, w którym R r oznacza Phe(B1), Y oznacza Thr(B30), Z1 oznacza Ala His His Arg (B31-B34), r3 oznacza Gly(A21), A2-A20 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha A ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-20), a B2-B29 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha B ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-29).
Insulina 2 ma następującą sekwencję aminokwasów:
Insulina 2 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 6):
Łańcuch B: Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val
Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr
Pro Lys Thr Ala His His Arg
188 617
Łańcuch A: Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser
Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Gly (mostki disiarczkowe takie jak we wzorze 1)
Przykład 3
Wytwarzanie Gly(A2i)-ludzkiej insuliny-Ala(B31)-Ala(B32)-His(B33)-His(B34)-OH
Wektor ekspresyjny skonstruowano według przykładu 1. Plazmid pINT150 służył jako szablon dla dwóch od siebie niezależnych reakcji PCR z parami starterów TIR i pINT 316a (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 15):
5' GAT GCC GCG ATG ATG CGC CGC GGT CTT GGG TGT GTA G 3' albo Insull i pINT 316b (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 16):
5' A CCC AAG ACC GCG GCG CAT CAT CGC GGC ATC GTG GAG 3'.
Fragmenty PCR, do których doprowadziły obie reakcje, były częściowo komplementarne i dały w trzeciej reakcji PCR kompletną sekwencję kodującą żądany wariant insuliny. Fragment ten potraktowano enzymem NcOl i Sall, a następnie poddano ligacji z otwartym końcowym plazmidem NcOl/Sall pINT 90d DNA. W wyniku tego powstał plazmid pINT316, który po transformacji E. coli K12 W3110, służył jako podstawa dla ekspresji żądanej pre-miniinsuliny. Fermentację i obróbkę przeprowadzono tak jak w przykładzie 1, pominąwszy reakcję z karboksypeptydazą B. Otrzymano pochodną preproinsuliny 3 o następującej sekwencji reszt aminokwasów:
Preproinsulina 3 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 7):
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Ala Ala His His Arg
Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser
Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Gly
Preproinsulina 3 odpowiada związkowi o wzorze 2, w którym r1 oznacza Phe(B1), R3 oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 11 reszt aminokwasów, Y oznacza Thr(B30), Z1 oznacza Ala Ala His His Arg(B31-B35), R3 oznacza Gly(A21), A2-A20 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha A ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-20), a B2-B29 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha B ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-29).
Preproinsulinę 3 następnie rozszczepiono za pomocą trypsyny i karboksypeptydazy B do insuliny 3 tak jak w przykładzie 11. Insulina 3 odpowiada związkowi o wzorze 1, w którym R1 oznacza Phe(B1), Y oznacza Thr(B30), Z1 oznacza Ala Ala His His (B31-B34), R3 oznacza Gly(A21), A2-A20 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha A ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-20), a B2-B29 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha B ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-29).
Insulina 3 ma następującą sekwencję aminokwasów:
Insulina 3 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 8):
Łańcuch B: Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val
Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr
Pro Lys Thr Ala Ala His His
Łańcuch A: Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser
Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Gly (mostki disiarczkowe takie jak we wzorze 1)
Przykład 4
Insulinę 2 wytworzoną według przykładu 2 poddano reakcji z karboksypeptydazą B tak jak w przykładzie 11 z wytworzeniem insuliny 4. Insulina 4 odpowiada związkowi o wzorze 1, w którym R1 oznacza Phe(B1), Y oznacza Thr(B30), Z oznacza Ala His His (B31-B33), R3 oznacza Gly(A21), A2-A20 oznacza sekwencję aminokwasów łańcucha A ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-20), B2-B29 stanowi sekwencję aminokwasów łańcucha B ludzkiej insuliny (reszty aminokwasów 2-29).
Insulina 4 ma następującą sekwencję aminokwasów:
Insulina 4 (sekwencja o numerze identyfikacyjnym 9):
Łańcuch B: Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val
188 617
Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr
Pro Lys Thr Ala His His
Łańcuch A: Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser
Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Gly (mostki disiarczkowe takie jak we wzorze 1)
Przykład 5
Wiązanie cynku przez pochodne insuliny
Preparat insuliny (0,243 mM ludzka insulina, 0,13 M NaCl, 0,1% fenol, 80 pg/ml (1,22 mM) Zn2+, 10 mM Tris/HCl, pH 7,4) poddano dializie w 15°C względem 10 mM Tris/HCl, pH 7,4, przez 40 h (zmiana buforu po 16 h i 24 h). Po zakwaszeniu dializatów oznaczono stężenie insuliny drogą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) i stężenie cynku metodą spektroskopii absorpcji atomowej. Wartości stężenia cynku skorygowano uwzględniając zawartość cynku w próbce kontrolnej, nie zawierającej insuliny. Wyniki podano w tabeli 1.
Tabela 1
| Insuliny porównawcze | Liczba moli Zn/mol heksameru insuliny |
| Ludzka insulina (LI) | 1,98 |
| Gly(A21)Des(B30)-LI | 1,8 |
| Gly (A21)Arg (B31)-Arg (B32)-LI | 2,1 |
| Insuliny o wzorze 1 | Liczba moli Zn/mol heksameru insuliny |
| Gly(A21 )His(B31 )His(B32)-LI | 6,53 |
| Gly(A21)His(B31)His(B32)Arg (B33) -LI | 5,29 |
| Gly( A21 )Ala(B31 )His(B32)His (B33)-LI | 6,73 |
| Gly(A21)AIa(B31)His (B32)His(B33)Arg(B34)-LI | 5,01 |
Przykład 6
Wpływ cynku na profil działania ludzkiej insuliny w próbach na psach
Podawanie: podskórne
Dawka: 0,3 IE/kg, pH preparatu 4,0
Liczba psów (n) w próbie: 6
W tabeli 2 podano procentową zawartość glukozy we krwi w % wartości wyjściowej.
Tabela 2
| Czas (h) | bez cynku | 80 pg Zn/ml | 160 pg Zn/ml |
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| 0 | 100 | 100 | 100 |
| 0,5 | 88,66 | 94,06 | 101,48 |
| 1 | 59,73 | 72,31 | 76,87 |
| 1,5 | 50,61 | 58,6 | 67,44 |
| 2 | 54,32 | 54,05 | 61,49 |
| 3 | 61,94 | 58,84 | 62,8 |
| 4 | 85,59 | 70,03 | 71,32 |
188 617 cd. tabeli 2
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| 5 | 100,46 | 78,97 | 81,65 |
| 6 | 105,33 | 94,63 | 96,19 |
| 7 | 106 | 102,46 | 100,27 |
| 8 | 108,39 | 106,12 | 104,34 |
| 10 | 102,72 | 105,11 | 105,1 |
| 12 | 105,03 | 107,14 | 103,02 |
Przykład 7
Profil działania Gly(A21)Ala(B31)His(B32)His(B33)-Arg(B34)-ludzkiej insuliny w próbach na psach (insulina 2)
Insulinę 2 wytworzoną według przykładu 2 zastosowano w następującej postaci: gliceryna 20 mg/ml, m-krezol 2,7 mg/ml, insulina 2 40 IE/ml.
IE oznacza międzynarodową jednostkę i odpowiada około 6 nmolom insuliny, np. insuliny ludzkiej lub insuliny o wzorze 1.
Wartość pH nastawiono za pomocą NaOH lub HCl.
Podawanie: podskórne
Dawka: 0,3 IE/kg; pH preparatu 4,0
Liczba testowanych psów: 6.
W tabeli 3 podano procentową zawartość glukozy we krwi w % wartości wyjściowej.
Tabela 3
| Czas (h) | bez cynku | 20 gg Zn/ml | 40 gg Zn/ml | 80 gg Zn/ml |
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 1 | 74,38 | 95,24 | 95,6 | 102,06 |
| 2 | 48,27 | 90,11 | 78,74 | 97,44 |
| 3 | 57,67 | 89,96 | 84,81 | 90,44 |
| 4 | 74,2 | 81,35 | 74,66 | 88,69 |
| 5 | 91,68 | 74,43 | 75,71 | 79,7 |
| 6 | 100,79 | 71,61 | 67,37 | 65,26 |
| 7 | 98,5 | 67,73 | 66,05 | 62,17 |
| 8 | 100,54 | 68,92 | 64,97 | 47,71 |
Przykład 8
Profil działania Gly(A21)Ala(B31)His(B32)His(B33)-ludzkiej insuliny w próbach na psach (insulina 4)
Insulinę 4 wytworzoną według przykładu 4 sformułowano i zastosowano tak jak w przykładzie 7.
Podawanie: podskórne
Dawka: 0,3 IE/kg, n=6, pH preparatu 4,0.
W tabeli 4 podano procentową zawartość glukozy we krwi w % wartości wyjściowej.
188 617
Tabela 4
| Czas (h) | bez cynku | 20 gg Zn/ml | 40 gg Zn/ml | 80 gg Zn/ml |
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 1 | 61,51 | 70 | 96,52 | 101,77 |
| 2 | 49,82 | 52,55 | 89,28 | 90,01 |
| 3 | 55,66 | 60,13 | 80,23 | 70,79 |
| 4 | 78,09 | 78,46 | 73,03 | 68,48 |
| 5 | 94,27 | 97,7 | 70,3 | 74,94 |
| 6 | 103,69 | 105,27 | 61,86 | 74,1 |
| 7 | 105,51 | 106,48 | 62,28 | 76,42 |
| 8 | 108,05 | 104,51 | 81,68 | 88 |
Przykład 9
Profil działania Gly(A21)His(B31)His(B32)-ludzkiej insuliny w próbach na psach (insulina 1)
Insulinę 1 wytworzoną według przykładu 1 sformułowano i zastosowano tak jak w przykładzie 7.
Podawanie: podskórne
Dawka: 0,3 IE/kg, n=6, pH preparatu 4,0.
W tabeli 5 podano procentową zawartość glukozy we krwi w % wartości wyjściowej.
Tabela 5
| Czas (h) | bez cynku | 20 gg Zn/ml | 40 gg Zn/ml | 80 gg Zn/ml |
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 1 | 60,71 | 73,16 | 100,25 | 102,86 |
| 2 | 52,29 | 55,43 | 94,86 | 100,19 |
| Λ | 61,74 | 61,6 | 89,37 | 89,12 |
| 4 | 79,93 | 81,53 | 81,55 | 79,19 |
| 5 | 96,17 | 96,84 | 73,06 | 70,67 |
| 6 | 103,2 | 102,43 | 74,58 | 75,75 |
| 7 | 110,86 | 104,75 | 77,68 | 79,36 |
| 8 | 113,42 | 108,14 | 84,87 | 78,74 |
Przykład 10
Profil działania Gly(A21)Ala(B31)Ala(B32)His(B33)-His(B34)-ludzkiej insuliny w próbach na psach (insulina 3)
Insulinę 3 wytworzoną według przykładu 1 sformułowano i zastosowano tak jak w przykładzie 7.
Podawanie: podskórne
Dawka: 0,3 IE/kg, n=6, pH preparatu 4,0.
W tabeli 4 podano procentową zawartość glukozy we krwi w % wartości wyjściowej.
188 617
Tabela 6
| Czas (h) | bez cynku | 20 μ g Zn/ml | 40 pg Zn/ml | 80 pg Zn/ml |
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 1 | 75 | 99 | 101 | 99 |
| 2 | 57 | 77 | 96 | 91 |
| 3 | 58 | 64 | 84 | 80 |
| 4 | 82 | 65 | 73 | 79 |
| 5 | 94 | 70 | 68 | 77 |
| 6 | 100 | 74 | 72 | 76 |
| 7 | 96 | 81 | 80 | 69 |
| 8 | 100 | 90 | 88 | 75 |
| 9 | 100 | 96 | 94 | 83 |
| 10 | 95 | 98 | 92 | 87 |
| 12 | 98 | 99 | 95 | 94 |
| 14 | 95 | 100 | 94 | 93 |
Przykład 11
Wytwarzanie insuliny 1 z preproinsuliny 1
Insulinę (200 mg) z grupą Arg przy C-końcu łańcucha B, wytworzoną według przykładu 1, rozpuszczono w 95 ml 10 mM HcI. Do roztworu dodano 5 ml 1 M Tris/HCl (Tris to 2-amino-2-hydroksymetylo-1,3-propanodiol) i odczyn doprowadzono do pH 8 za pomocąHCi lub NaOH, po czym dodano 0,1 mg karboksypeptydazy B. Po upływie 90 minut nastąpiło całkowite odszczepienie argininy. Odczyn roztworu doprowadzono do wartości pH 3,5 dodawszy HCl, po czym podawano go za pomocą pompy do kolumny z odwróconymi fazami (PLRP-S RP 300 10 pm, 2,5x30 cm, Polymer Laboratories Amherst, MA, USA). Fazę ruchomą A stanowiła woda z dodatkiem 0,1% kwasu trifiurooctowego, a fazę B stanowił acetonitryl z dodatkiem 0,09% kwasu trifiurooctowego. Kolumna pracowała przy przepływie 5 ml/min. Po naniesieniu związku kolumnę przemyto 150 mi fazy A. Stosując liniowy gradient 22,5-40% fazy B w czasie 400 minut prowadzono frakcyjne wymywanie. Frakcje analizowano pojedynczo metodą HPLC z odwróconymi fazami i połączono frakcje zawierające des-Arg-insulinę o wystarczającej czystości. Nastawiono wartość pH 3,5 za pomocą NaOH, a acetonitryl usunięto w wyparce obrotowej. Następnie zwiększywszy wartość pH do 6,5 wytrącono des-Arg-insulinę. Osad odwirowano, przemyto dwukrotnie 50 ml wody i zliofilizowano. Otrzymano insulinę 1 z wydajnością 60-80%.
188 617
Zestawienie sekwencji (1) Informacje ogólne:
(i) Zgłaszający:
(A) Nazwa: Hoechst Aktiengesellschaft (B) Ulica: (C) Miasto: Frankfurt nad Menem (D) Kraj Federalny: (E) Kraj: Niemcy (F) Kod pocztowy: 65926 (G) Telefon: 069-305-6047 (H) Teleks: 069-35-7175 (I) (I) Telex: 041234-700 hod (ii) Tytuł zgłoszenia: Pochodne insuliny o zwiększonej zdolności wiązania cynku (iii) Liczba sekwencji: 16 (iv) Postać odczytywana komputerowo:
(A) Nośnik: Dyskietka (B) Komputer: Kompatybilny z IBM PC (C) System operacyjny: PC-DOS/MS-DOS (D) Oprogramowanie: Patentln Release #1.0, Version #1.25 (EPA) (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 1:
(i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 21 aminokwasów (B) Typ: aminokwas (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: białko (vi) Pochodzenie pierwotne:
188 617 (A) Organizm: Escherichia coli (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..21 (ii) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 1:
Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu 15 10 15
Glu Asn Tyr Cys Asn 20 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 2:
(i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 30 aminokwasów (B) Typ: aminokwas (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: białko (vi) Pochodzenie pierwotne:
(A) Organizm: Escherichiacoli (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..30 (xi) Opis sekwencji.: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 2:
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr 15 10 15
Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr 20 25 30 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 3:
(i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 65 aminokwasów (B) Typ: aminokwas (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa
188 617 (ii) Typ cząsteczki: białko (vi) Pochodzenie pierwotne:
(A) Organizm: Escherichia coli (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..65 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 3:
| Met 1 | Ala | Thr | Thr | Ser 5 | Thr | Gly | Asn | Ser | Ala ie | Arg | Phe | Val | Asn | Gln 15 | His |
| Leu | Cys | Gly | Ser 20 | His | Leu | Val | Glu | Ala 25 | Leu | Tyr | Leu | Val | Cys 30 | Gly | Glu |
| Arg | Gly | Phe 35 | Phe | Tyr | Thr | Pro | Lys 40 | Thr | Hie | His | Arg | Gly 45 | Ile | Val | Glu |
| Gln | Cys 50 | Cys | Thr | Ser | Ile | Cys 55 | Ser | LeU | Tye | Gln | Leu 60 | Glu | Asn | Tyr | Cys |
Gly (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 4:
(i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 53 aminokwasów (B) Typ: aminokwas (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: białko (vi) Pochodzenie pierwotne:
(A) Organizm: Escherichia coli (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..53 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 4:
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr 15 10 15
188 617
| Leu | Val | Cys | Gly 20 | Glu Arg | Gly | Phe | Phe 25 | Tyr | Thr | Pro Lys | Thr 30 | His | HHS |
| Gly | Ile | Val 35 | Glu | Gln Cys | Cys | Thr 40 | Ser | Ile | Cys | Ser Leu 45 | Tyr | Gln | Leu |
| Glu | Asn | Tyr | Cye | Gly |
(2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 5:
(i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 66 aminokwasów (B) Typ: aminokwas (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: białko (vi) Pochodzenie pierwotne:
(A) Organizm: Ezcherśchir c.oii (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..66 (xi) ipis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 5:
| Met | Ala | Thr | Thr | Ser | Thr | Gly | Asn | Ser | Ala | Arg | Phe | Val | Asn | Gln | His |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Leu | Cys | Gly | Ser | Hse | e eu | is e | Gle | Ala | Leu | Tyr | Leu | V al | Lys | Gly | G lu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro | Lys | Thr | Ala | His | His | Arg | Gly | He | Val |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Glu | Gln | Cys | Cys | Thr | Ser | Ile | Cy s | ee r | Leu | Tyr | Gln | Leu | Glu | Asn | Tyr |
| 50 | 55 | 60 |
Cys Gly (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 6: (i) CCoarikteystykk eeewencji:
(A) Długość: 55 aminokwasów (B) Typ: ^inokwas
188 617 (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: białko (vE) Pochodzenie pierwotne:
(A) Organizm: Escherichia coli (Ex) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..55 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 6:
| Phe | Val | Asn | Gln | His | Leu | Cys | Gly | Ser | His | Leu | Val | Glu | Ala | Leu | Tyr |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Leu | Val | Cys | Gly | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro | Lys | Thr | Ala | Hie |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| His | Arg | Gly | Ile | Val | Glu | Gln | Cys | Cys | Thr | Ser | Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Gln | Leu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Gly |
55 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 7:
(i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 67 aminokwasów (B) Typ: aminokwas (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: białko (vi) Pochodzenie pierwotne:
(A) Organózm: Escherschia coii (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..67 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 7:
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg Phe Val Asn Gln His 15 10 15
188 617
| Leu | Cys | Gly | Ser 20 | His | Leu | Val | Glu | Ala 25 | Leu | Tyr | Leu | Val | Cys 30 | Gly | Glu |
| Arg | Gly | Phe 35 | hhe | Ty z | Thr | Pro | Lys 40 | TOz | Ala | Ala | His | Hse 55 | Arg | Gly | Ul |
| Val | Glu | Gln | Cys | Cys | Thr | Ser | Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr | Gln | Leu | Glu | Asn |
55 60
Tyr Cys Gly 65 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 8:
(i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 55 aminokwasów (B) Typ: aminokwas (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: białko (vi) Pochodzenie pierwotne:
CA) Organizm: EscheEschia coii (ix) Cechy:
CA) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..55 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 8:
| Phe 1 | Val Asn | Gln | His 5 | Leu Cys | Gly | Ser | His 10 | Leu | Val | Glu | Ala | Leu 15 | Tyr | ||
| Leu | Val | Cys | Gly 20 | Glu | Arg | Gly | Phi | Pili; 25 | (Tyr | Thr | Pro | Ly s | Th r 30 | lOL a | Ala |
| His | His | GGy 35 | Ile | Val | Glu | Gln | Cys 40 | Cys | ΤΖγ | Sz r | li e | Cy s 45 | Ser | Leu | Tyr |
| Gln | Leu | GLu | Asn | Tyr | Cys | Gly |
55 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 9: (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 54 aminokwasów
188 617 (B) Typ: aminokwas (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: białko (vi) Pochodzenie pierwotne:
(A) Organizm: Escherichia coli (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..54 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 9:
| Phe 1 | Val | Asn | Gln | His 5 | Leu | Cys | Gly | Ser | His 10 | Leu | Val | Glu | Ala | Leu 15 | Tyr |
| Leu | Val | Cys | Gly 20 | Glu | Arg | Gly | Phe | Phe 25 | Tyr | Thr | Pro | Lys | Thr 30 | Ala | His |
| His | Gly | Ile 35 | Val | Glu | Gln | Cys | Cys 40 | Thr | Ser | Ile | Cys | Ser 45 | Leu | Tyr | Gln |
| Leu | Glu 50 | Asn | Tyr | Cys | Gly |
(2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 10:
(i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 39 par zasad (B) Typ: kwas nukleinowy (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNS (genomowa) (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: egzon (B) Długość: 1..39 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 10:
TTTTTTGTCG ACCTATTAGC CGCAGTAGTT CTCCAGCTG 39 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 11:
188 617 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 31 par zasad (B) Typ: kwas nukleinowy (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNS (genomowa) (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: egzon (B) Długość: 1..31 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 11:
GATGCCGCGG TGGTGGGTCT TGGGTGTGTA G 31 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 12 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 31 par zasad (B) Typ: kwas nukleinowy (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNS (genomowa) (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: agzon (B) Długość: 1..31 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 12:
ACCCAAGACC CACCACCGCG GCATCGTGGA G 31 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 13 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 34 par zasad (B) Typ: kwas nukleinowy (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNS (genomowa)
188 617 (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: egzon (B) Długość: 1..34 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 13:
GATGCCGCGG TGGTGCGCGG TCTTGGGTGT GTAG 34 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 14:
(i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 34 par zasad (B) Typ: kwas nukleinowy (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNS (genomowa) (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: egzon (B) Długość: 1..34 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 14:
ACCCAAGACC GCGCACCACC GCGGCATCGT GGAG 34 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 15:
(i) Charakterystyka sekwencji.:
(A) Długość: 37 par zasad (B) Typ: kwas nukleinowy (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNS (genomowa) (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: egzon (B) Długość: 1..37 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 15:
GATGCCGCGA TGATGCGCCG CGGTCTTGGG TGTGTAG 37 (2) Informacja dotycząca sekwencji o numerze identyfikacyjnym 16:
188 617 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 37 par zasad (B) Typ: kwas nukleinowy (C) Niciowość: pojedyńcza (D) Topologia: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNS (genomowa) (ix) Cechy:
(A) Nazwa/klucz: białko (B) Długość: 1..37 (xi) Opis sekwencji: sekwencja o numerze identyfikacyjnym 16:
ACCCAAGACC GCGGCGCATC ATCGCGGCAT CGTGGAG 37
188 617
188 617
R(B 1)
Gly(A1)
S (A 20)
-Cys-Cys~ (A11) |
S
S r3-oh
Cys-Cys- (B 7) (B19)
Wzór 1
Y-Z (B 30)
R2- R1- B2 - B29 - Y - Z - Gly - A2 - A20 Wzór 2
Departament Wydawnictw UP RP Nakład 50 egz. Cena 4,00 zł.
Claims (11)
- Zastrzeżenia patentowe1. Nowe pochodne insuliny o ogólnym wzorze 1, w którym R1 oznacza resztę fenyloalaniny, R3 oznacza resztę aminokwasu wybraną z grupy obejmującej Asn, Gly, Ser, Thr, Ala, Asp, Glu i Gin, Y oznacza resztę aminokwasu wybraną z grupy obejmującej Ala, Thr, Ser i His, a Z oznacza resztę histydyny lub ugrupowanie peptydu zawierające 2-7 genetycznie kodowalnych reszt aminokwasów, w tym 1 lub 2 reszty histydyny, przy czym reszty A2-A20 odpowiadają sekwencji aminokwasów łańcucha A insuliny ludzkiej, insuliny zwierzęcej lub pochodnej insuliny, a reszty B2-B29 odpowiadają sekwencji aminokwasów łańcucha B insuliny ludzkiej, insuliny zwierzęcej lub pochodnej insuliny, a także ich fizjologicznie zgodne sole.
- 2. Związek według zastrz. 1, w którym Z oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 1-5 reszt aminokwasów, w tym 1 lub 2 reszty histydyny.
- 3. Związek według zastrz. 1 albo 2, w którym R1 oznacza resztę fenyloalaniny, R3 oznacza resztę aminokwasu wybraną z grupy obejmującej Asn i Gly, Y oznacza resztę aminokwasu wybraną z grupy obejmującej Thr i His, a Z oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 1-5 reszt aminokwasów, w tym 1 lub 2 reszty histydyny.
- 4. Związek według zastrz. 1, w którym R1 oznacza resztę fenyloalaniny, r3 oznacza resztę glicyny, Y oznacza resztę treoniny, a Z oznacza ugrupowanie peptydu zawierające 1-5 reszt aminokwasów.
- 5. Związek według zastrz. 4, w którym Z oznacza ugrupowanie peptydu o sekwencji His His, His His Arg, Ala His His, Ala His His Arg, Ala Ala His His Arg lub Ala Ala His His.
- 6. Nowe kompleksy zawierające heksamer insuliny i 5-9 moli cynku na heksamer insuliny, a zwłaszcza 5-7 moli cynku na heksamer insuliny, przy czym heksamer insuliny składa się z sześciu cząsteczek insuliny o wzorze 1 zdefiniowanej w zastrz. 1.
- 7. Środek farmaceutyczny zawierający substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i ewentualnie substancje pomocnicze, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera w skutecznej ilości co najmniej jedną pochodną insuliny o wzorze 1 i/lub co najmniej jeden kompleks i/lub co najmniej jedną z ich fizjologicznie zgodnych soli, zdefiniowane w zastrz. 1 w rozpuszczonej, amorficznej i/lub krystalicznej postaci.
- 8. Środek farmaceutyczny według zastrz. 7, znamienny tym, że dodatkowo zawiera 1 pg - 2 mg cynku/ml, a zwłaszcza 5 - 200 pg cynku/ml.
- 9. Środek farmaceutyczny według zastrz. 7 albo 8, znamienny tym, ze wykazuje wartość pH 2,5 - 8,5.
- 10. Środek farmaceutyczny według zastrz. 9, znamienny tym, ze wykazuje wartość pH 2,5-4,5. ,
- 11. Środek farmaceutyczny według zastrz. 7 albo 8, znamienny tym, że dodatkowo zawiera niemodyfikowaną insulinę, korzystnie niemodyfikowaną insulinę ludzką, lub modyfikowaną insulinę, korzystnie Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-ludzką insulinę.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19630242 | 1996-07-26 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL321343A1 PL321343A1 (en) | 1998-02-02 |
| PL188617B1 true PL188617B1 (pl) | 2005-03-31 |
Family
ID=7800962
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97321343A PL188617B1 (pl) | 1996-07-26 | 1997-07-25 | Nowe pochodne insuliny, nowe kompleksy i środek farmaceutyczny |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6221837B1 (pl) |
| EP (1) | EP0821006B1 (pl) |
| JP (1) | JP4046388B2 (pl) |
| KR (1) | KR100547922B1 (pl) |
| CN (2) | CN1158305C (pl) |
| AR (1) | AR008269A1 (pl) |
| AT (1) | ATE264871T1 (pl) |
| AU (1) | AU725201B2 (pl) |
| BR (1) | BR9704117B1 (pl) |
| CA (1) | CA2207078C (pl) |
| CZ (1) | CZ292274B6 (pl) |
| DE (1) | DE59711533D1 (pl) |
| DK (1) | DK0821006T3 (pl) |
| ES (1) | ES2218622T3 (pl) |
| HK (1) | HK1048125A1 (pl) |
| HU (1) | HU224591B1 (pl) |
| IL (2) | IL121382A0 (pl) |
| NO (1) | NO317666B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ328421A (pl) |
| PL (1) | PL188617B1 (pl) |
| PT (1) | PT821006E (pl) |
| RU (1) | RU2176646C2 (pl) |
| TR (1) | TR199700685A2 (pl) |
| TW (1) | TW474944B (pl) |
| ZA (1) | ZA976645B (pl) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19825447A1 (de) * | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
| DE19838097A1 (de) | 1998-08-24 | 2000-03-02 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Verfahren zur chromatographischen Reinigung von Insulinen |
| DE19947456A1 (de) * | 1999-10-02 | 2001-04-05 | Aventis Pharma Gmbh | C-Peptid zur verbesserten Herstellung von Insulin und Insulinanaloga |
| WO2003020201A2 (en) * | 2001-08-28 | 2003-03-13 | Eli Lilly And Company | Pre-mixes of glp-1 and basal insulin |
| MXPA04003569A (es) * | 2001-10-19 | 2004-07-23 | Lilly Co Eli | Mezclas bifasicas de glp-1 e insulina. |
| KR100769183B1 (ko) * | 2001-12-28 | 2007-10-23 | 엘지.필립스 엘시디 주식회사 | 면발광 램프 |
| AU2004234345A1 (en) * | 2003-04-29 | 2004-11-11 | Eli Lilly And Company | Insulin analogs having protracted time action |
| MXPA06001283A (es) * | 2003-08-05 | 2006-04-11 | Novo Nordisk As | Derivados de insulina novedosos. |
| EP2626368B1 (en) | 2004-07-19 | 2016-12-21 | Biocon Limited | Insulin-oligomer conjugates, formulations and uses thereof |
| US7833513B2 (en) | 2004-12-03 | 2010-11-16 | Rhode Island Hospital | Treatment of Alzheimer's Disease |
| WO2007074133A2 (en) | 2005-12-28 | 2007-07-05 | Novo Nordisk A/S | Compositions comprising an acylated insulin and zinc and method of making the said compositions |
| CN101573133B (zh) * | 2006-07-31 | 2014-08-27 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | Peg化延长的胰岛素 |
| EP2404934A1 (en) * | 2006-09-22 | 2012-01-11 | Novo Nordisk A/S | Protease resistant insulin analogues |
| WO2008132224A2 (en) * | 2007-04-30 | 2008-11-06 | Novo Nordisk A/S | Method for drying a protein composition, a dried protein composition and a pharmaceutical composition comprising the dried protein |
| JP5675347B2 (ja) * | 2007-06-01 | 2015-02-25 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | 安定した非水性薬学的組成物 |
| ES2744384T3 (es) * | 2007-06-13 | 2020-02-24 | Novo Nordisk As | Formulación farmacéutica que comprende un derivado de insulina |
| RU2453332C2 (ru) * | 2007-10-16 | 2012-06-20 | Байокон Лимитид | Твердая фармацевтическая композиция (варианты) и способ контроля концентрации глюкозы с ее помощью, способ получения твердой фармацевтической композиции (варианты), таблетка (варианты) и способ получения амфорных частиц |
| WO2009112583A2 (en) * | 2008-03-14 | 2009-09-17 | Novo Nordisk A/S | Protease-stabilized insulin analogues |
| AU2009226910B2 (en) | 2008-03-18 | 2014-02-06 | Novo Nordisk A/S | Protease stabilized, acylated insulin analogues |
| AU2009309623B9 (en) * | 2008-10-30 | 2014-10-02 | Novo Nordisk A/S | Treating diabetes melitus using insulin injections with less than daily injection frequency |
| RU2013123515A (ru) | 2010-10-27 | 2014-12-10 | Ново Нордиск А/С | Лечение сахарного диабета с помощью инъекций инсулина, вводимых с различными интервалами |
| AU2013247047A1 (en) | 2012-04-11 | 2014-10-23 | Novo Nordisk A/S | Insulin formulations |
| JP2016519127A (ja) | 2013-04-30 | 2016-06-30 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | 新規投与レジメン |
| JP6499184B2 (ja) | 2013-10-07 | 2019-04-10 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | インスリン類似体の新規な誘導体 |
| FR3013049B1 (fr) | 2013-11-14 | 2015-11-13 | You-Ping Chan | Analogue de l'insuline glargine |
| BR112019011761A2 (pt) | 2016-12-16 | 2019-11-05 | Novo Nordisk As | composições farmacêuticas contendo insulina |
| US10335464B1 (en) | 2018-06-26 | 2019-07-02 | Novo Nordisk A/S | Device for titrating basal insulin |
Family Cites Families (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI78616C (fi) * | 1982-02-05 | 1989-09-11 | Novo Industri As | Foerfarande foer framstaellning av en foer infusionsaendamaol avsedd stabiliserad insulinloesning, som har en foerhoejd zinkhalt. |
| DE3326472A1 (de) | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327709A1 (de) * | 1983-07-29 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| DE3440988A1 (de) | 1984-11-09 | 1986-07-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur spaltung von peptiden und proteinen an der methionyl-bindung |
| US4569794A (en) | 1984-12-05 | 1986-02-11 | Eli Lilly And Company | Process for purifying proteins and compounds useful in such process |
| US5008241A (en) * | 1985-03-12 | 1991-04-16 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin peptides |
| DE3526995A1 (de) | 1985-07-27 | 1987-02-05 | Hoechst Ag | Fusionsproteine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE3636903A1 (de) | 1985-12-21 | 1987-07-02 | Hoechst Ag | Fusionsproteine mit eukaryotischem ballastanteil |
| DE3541856A1 (de) | 1985-11-27 | 1987-06-04 | Hoechst Ag | Eukaryotische fusionsproteine, ihre herstellung und verwendung sowie mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
| CA1340522C (en) | 1987-03-10 | 1999-05-04 | Heinz Dobeli | Fusion proteins containing neighbouring histidines for improved purification |
| DE3805150A1 (de) | 1987-04-11 | 1988-10-20 | Hoechst Ag | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von polypeptiden |
| DE4012818A1 (de) | 1990-04-21 | 1991-10-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von fremdproteinen in streptomyceten |
| DE3726655A1 (de) | 1987-08-11 | 1989-02-23 | Hoechst Ag | Verfahren zur isolierung basischer proteine aus proteingemischen, welche solche basischen proteine enthalten |
| DE3739347A1 (de) | 1987-11-20 | 1989-06-01 | Hoechst Ag | Verfahren zur selektiven spaltung von fusionsproteinen |
| ES2061797T3 (es) | 1988-06-23 | 1994-12-16 | Hoechst Ag | Mini-proinsulina, su preparacion y empleo. |
| DE3827533A1 (de) * | 1988-08-13 | 1990-02-15 | Hoechst Ag | Pharmazeutische zubereitung zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3837825A1 (de) * | 1988-11-08 | 1990-05-10 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung |
| NZ232375A (en) * | 1989-02-09 | 1992-04-28 | Lilly Co Eli | Insulin analogues modified at b29 |
| DE3921447A1 (de) * | 1989-06-30 | 1991-01-17 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von n-alkyl-halogenanilinen |
| US5358857A (en) | 1989-08-29 | 1994-10-25 | The General Hospital Corp. | Method of preparing fusion proteins |
| US5227293A (en) | 1989-08-29 | 1993-07-13 | The General Hospital Corporation | Fusion proteins, their preparation and use |
| IL95495A (en) | 1989-08-29 | 1996-10-16 | Hoechst Ag | Fusion proteins their preparation and use |
| CZ342492A3 (en) * | 1991-11-26 | 1993-06-16 | Lilly Co Eli | Derivatives of tri-arginine insulin, process of their preparation and a pharmaceutical composition in which said derivatives are comprised |
| DE59305396D1 (de) | 1992-12-02 | 1997-03-20 | Hoechst Ag | Verfahren zur Gewinnung von Proinsulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
| DE4405179A1 (de) | 1994-02-18 | 1995-08-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur Gewinnung von Insulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
| CA2195557C (en) * | 1994-08-12 | 2006-10-17 | Shui-On Leung | Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells |
-
1997
- 1997-07-17 AT AT97112197T patent/ATE264871T1/de active
- 1997-07-17 DK DK97112197T patent/DK0821006T3/da active
- 1997-07-17 EP EP97112197A patent/EP0821006B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-17 ES ES97112197T patent/ES2218622T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-17 PT PT97112197T patent/PT821006E/pt unknown
- 1997-07-17 DE DE59711533T patent/DE59711533D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-24 TW TW086110516A patent/TW474944B/zh not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 IL IL12138297A patent/IL121382A0/xx unknown
- 1997-07-24 AR ARP970103352A patent/AR008269A1/es active IP Right Grant
- 1997-07-24 IL IL12138197A patent/IL121381A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 CZ CZ19972370A patent/CZ292274B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 NZ NZ328421A patent/NZ328421A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 AU AU30171/97A patent/AU725201B2/en not_active Ceased
- 1997-07-24 RU RU97112742/04A patent/RU2176646C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 TR TR97/00685A patent/TR199700685A2/xx unknown
- 1997-07-25 US US08/900,574 patent/US6221837B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 CN CNB971046751A patent/CN1158305C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 NO NO19973438A patent/NO317666B1/no not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 CA CA002207078A patent/CA2207078C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 JP JP20000297A patent/JP4046388B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 ZA ZA9706645A patent/ZA976645B/xx unknown
- 1997-07-25 KR KR1019970034958A patent/KR100547922B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 HU HU9701299A patent/HU224591B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 PL PL97321343A patent/PL188617B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-07-28 BR BRPI9704117-3A patent/BR9704117B1/pt not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-12-17 CN CN01143664A patent/CN1362417A/zh active Pending
-
2003
- 2003-01-07 HK HK03100149.7A patent/HK1048125A1/zh unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL188617B1 (pl) | Nowe pochodne insuliny, nowe kompleksy i środek farmaceutyczny | |
| US4608364A (en) | Pharmaceutical agent for the treatment of diabetes mellitus | |
| JP3676573B2 (ja) | 迅速な作用発現を示す新規インスリン誘導体 | |
| EP0309050B1 (en) | Human insulin-like growth factor analogs with reduced binding to serum carrier proteins and their production in yeast | |
| AU720966B2 (en) | Insulin derivatives | |
| HU203371B (en) | Process for producing new insulin derivatives and injection solutions comprising same | |
| IE66564B1 (en) | Novel insulin compounds | |
| JPH0691834B2 (ja) | インシュリン誘導体の製法 | |
| CA2330183C (en) | Novel insulin analogs with enhanced zinc binding | |
| MXPA97005667A (en) | Insulin derivatives with zinc increment | |
| MXPA98004945A (en) | New insulin derivatives with rapid initiation of efe |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20140725 |