NO300759B1 - Fremgangsmåte for fremstilling av et kovalent konjugat av et oligosakkarid og et bærerprotein - Google Patents
Fremgangsmåte for fremstilling av et kovalent konjugat av et oligosakkarid og et bærerprotein Download PDFInfo
- Publication number
- NO300759B1 NO300759B1 NO913812A NO913812A NO300759B1 NO 300759 B1 NO300759 B1 NO 300759B1 NO 913812 A NO913812 A NO 913812A NO 913812 A NO913812 A NO 913812A NO 300759 B1 NO300759 B1 NO 300759B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- oligosaccharide
- protein
- crm197
- pneumoniae
- reacting
- Prior art date
Links
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 120
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 title claims abstract description 120
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 title claims description 35
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 title claims description 35
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 65
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 63
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 58
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 claims abstract description 9
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 49
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 claims description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 25
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 22
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 claims description 18
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 claims description 18
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 claims description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 10
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 claims description 10
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 claims description 10
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 claims description 9
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 claims description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 9
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- NNTOJPXOCKCMKR-UHFFFAOYSA-N boron;pyridine Chemical compound [B].C1=CC=NC=C1 NNTOJPXOCKCMKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 6
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 5
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 claims description 5
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims description 4
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 claims description 3
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010000916 Fimbriae Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 claims description 3
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims description 3
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims description 3
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 claims description 3
- 101000764294 Homo sapiens Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 claims description 3
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 claims description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 3
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 3
- 108700012261 Rotavirus VP7 Proteins 0.000 claims description 3
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 claims description 3
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 claims description 3
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 claims description 3
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 claims description 3
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 claims description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 claims 1
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 claims 1
- 101710169972 Menin Proteins 0.000 claims 1
- 102100030550 Menin Human genes 0.000 claims 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 29
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 14
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 abstract description 9
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 abstract description 9
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 38
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 38
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 37
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 34
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 20
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 20
- 229960000250 adipic acid Drugs 0.000 description 18
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 18
- -1 dinitrophenyl group Chemical group 0.000 description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 12
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 9
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 9
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 7
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 6
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 5
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 5
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 4
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011969 continuous reassessment method Methods 0.000 description 4
- 101150044687 crm gene Proteins 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 3
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 3
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 3
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 2-Amino-2-Deoxy-Hexose Chemical compound NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 2
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 2
- 108010088833 dinitrophenyl gamma globulin Proteins 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- RTWNYYOXLSILQN-UHFFFAOYSA-N methanediamine Chemical compound NCN RTWNYYOXLSILQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 2
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 229960001973 pneumococcal vaccines Drugs 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOXOZOPLBFXYLM-UHFFFAOYSA-N 2-(4-nitrophenyl)ethanamine Chemical compound NCCC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IOXOZOPLBFXYLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 101100004408 Arabidopsis thaliana BIG gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000027775 Bronchopulmonary disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241001478240 Coccus Species 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 101100485279 Drosophila melanogaster emb gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100029095 Exportin-1 Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000767943 Hemus Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- VAYOSLLFUXYJDT-RDTXWAMCSA-N Lysergic acid diethylamide Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N(CC)CC)C2)=C3C2=CNC3=C1 VAYOSLLFUXYJDT-RDTXWAMCSA-N 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010036242 Post vaccination syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 101100485284 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CRM1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 101150094313 XPO1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009833 antibody interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009831 antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 238000006149 azo coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000987 azo dye Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012867 bioactive agent Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 108010089616 dinitrophenol-ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 1
- CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N dmso dimethylsulfoxide Chemical compound CS(C)=O.CS(C)=O CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940023064 escherichia coli Drugs 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 108700002148 exportin 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 230000022244 formylation Effects 0.000 description 1
- 238000006170 formylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940045808 haemophilus influenzae type b Drugs 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009033 hematopoietic malignancy Effects 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002621 immunoprecipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229950002454 lysergide Drugs 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000001785 maturational effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000007248 oxidative elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940066827 pertussis vaccine Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229940049548 pneumovax Drugs 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000032361 posttranscriptional gene silencing Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
- A61K39/092—Streptococcus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/831—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving capsular polysaccharide of bacterium, e.g. polyribosyl ribitol phosphate
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/832—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving bacterial toxin that has modified amino acid sequence
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/807—Hapten conjugated with peptide or protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse vedrører en forbedret fremgangsmåte for fremstilling av oligosakkaridkonjugatvaksiner.
I et ytterligere trekk ifølge oppfinnelsen fremstilles oligosakkaridvaksiner som fremkaller en monospesifikk og homogen immunrespons på kapsulært polysakkarid. En spesiell utførelse av oppfinnelsen tilveiebringer vaksiner som induserer immunitet mot alminnelig utbredte serotyper av Streptococcus <p>neumoniae som kan være spesielt viktige for anvendelse hos pediatriske pasienter så vel som eldre og dem med redusert immunitet på grunn av svake-lighet eller sykdom (omfattende f.eks. AIDS-pasienter).
Pneumococcus ( Streptococcus pneumoniae) er en gram-positiv innkapslet kokkus som vanligvis vokser i par eller korte kjeder.
I den diplokokke formen er de nærliggende marginer avrundet, og de motsatte ender noe tilspisset, hvilket gir organismene en lansett-lignende form.
Pneumokokkene kan deles opp i serotyper basert på de komplekse polysakkarider som danner deres kapsler. 84 serotyper er blitt identifisert ved eksponering for typespesifikt antiserum, den såkalte Neufeld quelling-reaksjon. Alle er patogene for mennesker, men i klinisk praksis støter man hyppigst på typene 1, 3, 4, 7, 8 og 12. Typene 6, 14-, 19 og 23 forårsaker ofte pneumoni og otitismedia hos barn, men er mindre vanlige hos voksne (Austrian, 1983, i " Harrison' s Principles of Internal Medicine", Petersdorf et al., utgivere, 10. utgave, McGraw Hill Book Co.,
New York, pp. 918-922). Det bemerkes at pneumokokkene er en av
de tre primære patogener som er ansvarlige for pneumoni, sepsis og meningitt hos barn (McMillan, 1982, i " Core Textbook of Pediatrics". Kaye et al., utgivere, 2. utgave, J.B. Lippincott Co., Philadelphia, p. 498).
Individer med høyere enn gjennomsnittlig risiko for utvikling av penumokokkinfeksjoner omfatter pasienter med kroniske systemiske sykdommer såsom hjertesykdom, kronisk bronkopulmonær sykdom, hepatitt sykdom, nyresvikt og malignitet. Det anbefales at disse individer blir vaksinert mot pneumokokkinfeksjon. For dette formål er det tilgjengelig 23 vaksiner omfattende de kapsulære polysakkarider av pneumokokktypene 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F og 33F (som omfatter serotyper eller grupper ansvarlige for 90% av alvorlig pneumokokksykdom i USA og resten av verden) (Pneumovax<® >Merck, Snarpe & Dohme, og Pnulmmune<®>, Lederle Laboratories). Effektiviteten av denne vaksine hos barn er tvilsom, ettersom evnen til immunologisk respons på forskjellige kapsulære antigener hos barn som er yngre enn 6 år utvikler seg på forskjellige tider som resultat av immunsystemets modningsegenskaper, og beskyttelsen kan være av kortere varighet enn den som observeres hos voksne (Harrison et al., ibid). Selv om relativt få pneumokokkserotyper antas å være ansvarlige for majoriteten av pediatriske pneumo-kokkinfeksjoner (Gray et al., 1979, J. Infect. Disease 140:979-983), innbefatter disse noen typer for hvilke modningen av den humane antistoffrespons på rensede kapsulære polysakkarider som anvendes som vaksiner, er langsomst (Anderson og Betts, 1989, Pediatric Infec. Dis. J. 8:S50-S53; Borgono et al., 1978, Proe. Soc. Exp. Biol. Med. 157:148-154).
Evne til immunrespons hos barn på Haemophilus influenzae b kapsulært polysakkarid er blitt oppnådd ved kobling av det kapsulære antigen til bærerproteiner for å frembringe en "konjugat"-vaksine; det blir antatt at T-lymfocytthjelpereffekter blir indusert av bærerproteinet og er ansvarlige for utviklingen av immunitet (Robbins et al., 1984, i " Bacterial Vaccines", Germanier, utgiver Academic Press, New York, pp. 289-316) . Se også: Cruse & Lewis, 1989, i "Conjugate Vaccines" utgivere Cruse & Lewis, Karger, Base, pp. 1-10. En lignende metode er blitt forsøkt for fremstilling av pneumokokkvaksiner.
Forskjellige forskere har isolert og renset intakte kapsulære polymerer som kan være nyttige i eller som vaksiner. F.eks. beskriver U.S. patent nr. 4.220.717 en fremgangsmåte for isolering og rensing av immunologisk aktivt polyribosylribitolfosfat (PRP) fra den kapsulære polymer fra H. influenzae b. Dessuten vedrører U.S. patent nr. 4.210.641 polysakkaridekstrakter fra H. influenzae som har en tilsynelatende molekylvekt høyere enn 200.000 dalton og er sammensatt hovedsakelig av galaktose, glukose og mannose og inneholder en liten mengde osaminer.
Flere forskere har anvendt disse og andre intakte kapsulære polymerer i preparater for å oppnå bedre immunologisk respons. F.eks. beskriver U.S. patent nr. 4.196.192 en vaksine inneholdende renset intakt PRP og et helcelle Bordetella pertussis-vaksine-preparat. Denne vei til å øke immunogenisiteten førte til forhøyet nivå av anti-PRP og anti-pertussis-antisoffer hos unge pattedyr.
Bærerproteiner kan gjøre mer enn å øke immunogenisiteten for konjugerte kapsulære polymerer; de kan også gjøre haptener immunogene. Haptener defineres som molekyler som kan binde seg spesifikt til et antistoff eller en lymfocyttreseptor, men som ikke selv kan indusere en immunrespons (dvs. at de ikke er immunogene). For å fremkalle en immunrespons, må små/lavmolekylære eller dårlig immunogene molekyler, som kalles haptener, vanligvis først bli koblet til et større molekyl, eller en bærer, som vanligvis er et heterologt protein. Injeksjon av haptenbærer-komplekset i et dyr vil så gi opphav til fremstilling av antistoffer ved hjelp av B-lymfocytter, hvorav noen vil være i stand til spesifikt å binde seg til det frie, ukoblede haptenmolekyl.
Blant de tidligste haptener som ble studert, var azo-fargestoff-forbindelser såsom anilin og o-aminobenzosyre. Landsteiner og Lampl (1918, Z. Immun. Forsch 26.: 293) koblet disse forbindelser ved diazotering til serumproteiner. Når kaniner ble injisert med disse kunstig fremstilte azo-proteiner, utviklet de presipiterende antistoffer som var spesifikke for de tilknyttede kjemiske grupper.
Andre eksempler på haptenforbindelser er dinitrofenol, som blir immunogent ved kobling som dinitrofenylgruppen (DNP) til bovint serumalbumin eller til bovint gammaglobulin (BGG), og lyserginsyredietylamid. Endog fontialdehyd er blitt vist å oppføre seg som et hapten; personer eksponert for formaldehyddamper fra produkter eller i laboratorier er blitt "overfølsomme" for forbindelsen, etter formylering av sine endogene makromolekyler in vivo.
Haptenets oppførsel er ikke begrenset til små organiske molekyler, og polypeptidhormoner opp til størrelsen av insulin er ofte dårlig, om i det hele tatt immunogene. For å oppnå høy antistofftiter for disse hormoner, er det således nødvendig å konjugere dem til et bærermolekyl (eller å skape større molekyler ved kryssbinding av mange av disse polypeptider).
Medvirkningen av bærermolekylet er spesielt interessant ved at bæreren spiller mer enn utelukkende en transportrolle. Ovary og Benaceraff (1963, Proe. Soc. Exp. Biol. Med. 114:723) viste dette ved å injisere kaniner med DNP-BGG. Injisering av mange immunogene stoffer i dyr vil frembringe et immunologisk "minne" om eksponeringen. Når det senere blir gitt en andre injeksjon, er det således en mye kraftigere immunrespons. Når Ovary og Benaceraff injiserte DNP-BGG igjen, var det i virkeligheten en sterk, sekundær respons som førte til markert forhøyet nivå av antistoffer rettet mot både DNP og BGG. Men når den andre injeksjon isteden ble utført med DNP-eggalbumin, merket man seg en mye svakere anti-DNP antistoffrespons. Forskjellen i respons skyldtes det som er blitt kalt bærereffekten, og den synes å involvere hjelper-T-lymfocytter.
Preliminære funn antyder at ikke alle proteiner kan være like effektive bærerproteiner for et gitt hapten. Robbins et al., (Infect. Immun. 4_0:245-256) har gitt data for eksperimentelle protein-polysakkaridkonjugatvaksiner, hvori det samme poly-sakkaridhapten ble konjugert til forskjellige proteinbærere, og antistoffresponsen på haptenet ble kvantifisert. Signifikante forskjeller ble bemerket i den dannede mengde av anti-hapten-antistoff, som viser at bæreren har en hovedrolle.
Med hensyn til pneumokokkvaksiner spesielt, har Lin og Lee (1982, Immunology 4_6:333) studert immunrespons hos voksne og unge mus eksponert for type 6A- og 19F-polysakkarider så vel som 19F konjugert til protein. Signifikant høyere IgM- og IgG2-antistofftiter ble indusert hos mus som fikk 19F-polysakkaridprotein-konjugater, enn i kontrollgruppen som fikk 19F-polysakkarid alene.
Andre forskere har studert konjugasjon av kapsulære polymerer til bærerproteiner i et forsøk på å øke antistoffdannelsen ved den såkalte "bærereffekt". F.eks. beskriver Schneerson et al.,
Journal of Experimental Medicine 152:361-376 (1980) H. influenzae b polymer-proteinkonjugater som viste seg å gi immunitet mot invasive sykdommer forårsaket av H. influenzae b. Referansen dokumenterer den alders-relaterte immunologiske oppførsel av kapsulære polymerer hos barn, og søker å overvinne denne alders-avhengighet ved å konjugere den intakte kapsulære polymer med forskjellige proteiner, omfattende serumalbuminer, Limulus <p>olv<p>hemus hemocyanin og difteritoksin. Konjugeringsmetoden medfører anvendelse av et sammenbindingsmiddel såsom adipindihydrazid.
Geyer et al., Med. Microbiol. Immunol. 165:171-288 (1979) fremstilte konjugater av visse Klebsiella <p>neumoniae kapsulære polysykkaridfragmenter med en nitrofenyletylaminlinker ved reduktiv aminering, og det derivatiserte sukker ble deretter bundet til proteiner ved anvendelse av azo-kobling.
U.S. patent nr. 4.057.685 til Mclntire, registrert 9. mai 1974, vedrører et Escherichia coli-lipopolysakkarid med redusert toksisitet, kovalent koblet til et proteinantigen ved omsetning med halogenacylhalogenid.
U.S. patent nr. 4.356.170 til Jennings et al., registrert 27. mai 1981, gitt 26. oktober 1982, vedrører fremstilling av polysakkarid-proteinkonjugater ved reduktiv aminering.
Anderson (1983, Infection and Immunity 39:233-238) vedrører konjugater mellom oligosakkarider fra Haemophilus influenzae type b kapsulært polysakkarid og CRM197, en ikke-toksisk, men antigenisk identisk variant av difteritoksin.
Snippe et al., (1983, Infection and Immunity 42.:842-844) , beskriver en semisyntetisk vaksine mot Streptococcus <p>neumoniae type 3 hvori et heksasakkarid isolert fra et partielt syrehydro-lysat av det kapsulære polysakkarid S3 ble koblet til stearylamin ved reduktiv aminering, og deretter inkorporert i liposomer. Den resulterende konjugat/liposomvaksine ble observert å indusere beskyttelse mot S. pneumoniae type 3 hos mus.
U.S. patent nr. 4.663.160 til Tsay et al., registrert 14. mars 1983, gitt 5. mai 1987, vedrører bakterier hvori et detoksifisert polysakkarid fra en gram-negativ bakterie blir kovalent koblet til et detoksifisert protein fra den samme art av gram-negative bakterier, ved hjelp av en 4-12 karbongruppe.
U.S. patent nr. 4.619.828 til Gordon, registrert 5. januar 1984, gitt 28. oktober 1986, vedrører konjugater mellom poly-sakkaridmolekyler fra patogene bakterier såsom Haemophilus influenzae b, Stre<p>tococcus pneumoniae. Neisseria meninaitidis. og Escherichia coli og T-celleavhengige antigener såsom difteri- og tetanustoksoider.
U.S. patent nr. 4.808.700 til Anderson og elements, registrert 10. august 1984, gitt 28. februar 1989, og U.S.
patent nr. 4.761.283 til Anderson, registrert 28. mars 1985,
gitt 2. august 1988, vedrører den kovalente binding av kapsulære polymerfragmenter til bakterietoksiner, toksoider, eller sammenbinding av underenheter ved hjelp av reduktiv aminering.
U.S. patent nr. 4.711.779 til Porro et al., registrert
2. juli 1986, gitt 8. desember 1987, vedrører glykoprotein-konjugatvaksiner som har treverdig immunogen aktivitet og omfatter antigendeterminanter fra de kapsulære polysakkarider fra en gram-positiv bakterie og en gram-negativ bakterie, så vel som enten CRM197, tetanustoksoid, eller pertussistoksin..
Fremstillingen av konjugatvaksiner, hvori kapsulære poly-sakkaridhaptener blir bundet til bærerproteiner, omfatter følgende fremgangsmåter:
(i) kapsulært polysakkarid må fremstilles
(ii) dersom det skal anvendes et fragment av polysakkaridet, må dette separeres fra intakt polysakkarid (iii) sakkaridet må aktiveres, eller gjøres mottagelig for konjugasjon, dvs. at det må dannes grupper som er i
stand til å binde seg kovalent til protein
(iv) sakkaridet konjugeres med protein.
Forskjellige metoder som er kjent i teknologien for gjennom-føring av disse fire trinn er oppført i Tabell 1.
Den foreliggende oppfinnelse vedrører fremgangsmåte for fremstilling av et kovalent konjugat av et oligosakkarid og et bærerprotein som er karakterisert ved trinnene: (i) å omsette et oligosakkarid som har en terminal reduserende gruppe med diaminoetan i nærvær av pyridinboran slik at det foregår reduktiv aminering ved en temperatur på ca. 100°C i minst 15 minutter og at omsetningen med pyridinboran gjennomføres ved en
temperatur på ca. 50<*>C i minst 48 timer; og
(ii) å omsette det aminerte oligosakkaridprodukt fra (i) med et molekyl omfattende to funksjonelle grupper, hvorav en er i stand til å reagere med den terminale gruppe i det aktiverte oligosakkarid, og den andre som er i stand til å reagere med nevnte bærerprotein valgt fra gruppen bestående av CRM197, Salmonella flagellin, Haemo<p>hilus pilin, Haemophilus 15 kDa, 28-30 kDa eller 40 kDa membranprotein, Escherichia coli varmelabilt enterotoksin LTB, difteritoksin, tetanustoksin, koleratoksin, rotavirus VP7-protein, og respiratorisk synsytialt virus
F-eller G-protein; og
(iii) å omsette det aktiverte oligosakkaridprodukt fra (ii)
med nevnte bærerprotein slik at konjugering finner sted.
Denne fremgangsmåte tillater effektiv syntese av glykokonjugater ved produksjonshastigheter som er signifikant raskere enn de metoder som for tiden anvendes. Glykokonjugatene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan anvendes i vaksinepreparater, og er blitt vist å være immunogene.
I en spesiell utførelse vedrører den foreliggende oppfinnelse fremstilling av glykokonjugater som inkorporerer oligosakkarider avledet fra Stre<p>tococcus pneumoniae kapsulære polysakkarider. Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen fører til effektiv fremstilling med høyt utbytte av S. <p>neumoniae-<g>lvkokoniu<g>ater som kan anvendes i vaksinepreparater med spesiell relevans til den pediatriske befolkning, i hvilken en stor andel av de viktigste sykdommer har sammenheng med infeksjon med S. pneumoniae. Immunogene konjugater er blitt funnet å være mindre aldersavhengige enn kapsulære polymerer alene, og er nyttige for den aktive immunisering av svært unge varmblodige pattedyr mot systemiske infeksjoner med de respektive innkapslede bakterier.
I et videre trekk av oppfinnelsen har glykokonjugatene fremstilt ifølge oppfinnelsen overraskende blitt funnet å fremkalle en monospesifikk og homogen immunrespons, som fordelaktig kan unngå dannelse av autoimmune reaksjoner og beslektede post-vaksinasj onssyndromer.
Det er viktig at de immunogene konjugater fremstilt ifølge opfinnelsen ikke inneholder potensielt toksiske sammenbindings-midler, såsom adipindihydrazid eller p-nitro-fenyletylamin, som er blitt anvendt ved konjugering av karbohydrat til protein.
CRM197 et ikke-toksisk protein antigenisk kryssreaktivt med
difteritoksin
DMSO dimetylsulfoksyd
DP polymerisasjonsgrad
MIC minimum inhiberende konsentrasjon
SD substitusjonsgrad
SIDEA suksinimidyldiester av adipinsyre
SIDES suksinimidyldiester av ravsyre
Kort beskrivelse av figurene
Figur 1. Generell strategi for syntese av oligosakkarid-pro-teinkonj ugater.
A. Høymolekylære polysakkarider blir syrehydrolysert for å gi oligosakkarider med en gjennomsnittlig molekylvekt på
2,5 x IO<3>.
B. Oligosakkarider blir (1) aktivert ved omsetning med diaminoetan [H2N (CH2) 2NH2] ved pH = 9, redusert med pyridinborhydrid (PyBH3) , deretter (2) omsatt med suksinimidyldiesteren og adipinsyren (SIDEA) i
dimetylsulfoksyd (DMSO).
C. Aktiverte oligosakkarider blir koblet til bærerprotein via
lysinrester.
Figur 2. Anvendelse av en "skreddersydd" spacer i koblings-fremgangsmåten.
A. Glykokonjugat dannet ved tidligere fremgangsmåte som beskrevet av Porro et al., (1985), Mol. Immunol. 22:907-919, med amidbinding (pil) mellom oligosakkarid og adipinsyre fire karbonlinker. Samlet lengde av spacer er ca. 10,4 Å.
B. Glykokonjugat dannet ifølge den foreliggende oppfinnelse hvori en to karbonrest (pil, dannet med diaminoetan), og en amidbinding, eksisterer mellom oligosakkarid og ravsyre to karbonlinkere dannet ved omsetning med SIDES. Samlet lengde
av spacer er ca. 10 Å.
C. Glykokonjugat dannet ifølge den foreliggende oppfinnelse hvori en to karbonrest (pil, dannet med diaminoetan), og en amidbinding, eksisterer mellom oligosakkarid og adipinsyre fire karbonrest dannet ved omsetning med SIDEA.
Samlet lengde av spacer er ca. 14,5 Å.
Figur 3. Effektivitet av konjugering av CRM197 til aktiverte oligosakkarider inneholdende adipinsyre versus ravsyrederivat-spacere. SDS-polyakrylamidgelelektroforese av produkter fra konjugeringsreaksjoner (sølvfarget).
A. Spor 1: Molekylvektstandarder (92,5 K, 66,2 K, 45,0 K,
31,0 K, 21,5 K).
Spor 2: CR<M>197 (1 jug) referanse.
Spor 3: Konjugert oligosakkarid 6A-CRM197 med ravsyre som spacer (2 jug) (forhold 1:1 monoester/samlede aminogrupper av CRM197 i 50% DMSO) .
Spor 4: Konjugert oligosakkarid 6A-CRM197 med ravsyre som spacer (2 ^g) (forhold: 1:2 monoester/samlede aminogrupper av CRM197 i 5 0% DMSO) .
Spor 5: Konjugert oligosakkarid 6A-CRM197 med adipinsyre som spacer (2 jug) (forhold: 1:2 monoester/samlede aminogrupper i CR<M>197 i 50% DMSO) .
Spor 6: Konjugert oligosakkarid 14-CRM197 med ravsyre som spacer (2 ug) (forhold: 1:4 monoester/samlede aminogrupper i CR<M>197 i 50% DMSO) .
Spor 7: Konjugert oligosakkarid 19F-CRM197 med ravsyre som spacer (2 tzg) (forhold: 1:4 monoester/totale aminogrupper i CR<M>197 i fravær av 50% DMSO) .
Spor 8: Konjugert oligosakkarid 23F-CRM197 med ravsyre som spacer (2 /xg) (forhold: 1:2 monoester/samlede aminogrupper i CR<M>197 i 50% DMSO) .
Spor 9: CRM197 (1 Mg) referanse.
B. Spor 1: CR<M>197 (1 ^g) referanse.
Spor 2: CRM197 referanse (1 fig, forskjellig parti sammenlignet med spor 1).
Spor 3: Konjugert oligosakkarid 23F-CRM197 med adipinsyre som spacer (2 fig) (forhold: 1:2 monoester/ samlede aminogrupper i CRM197 i 50% DMSO) .
Spor 4: Molekylvektstandarder (92,5 K, 66,2 K, 45,0 K,
31,0 K, 21,5 K).
Spor 5: Konjugert oligosakkarid 2 3F-CRM197 med adipin syre som spacer (2 fig) (forhold: 1:2 monoester/samlede aminogrupper i CRM:M197 i 50%
DMSO).
Spor 6: CRM197 (1 fig) referanse.
CRM197 referanse (1 fig, forskjellig parti sammenlignet med spor 1).
Spor 7: Konjugert oligosakkarid 6A-CRM197 med adipinsyre som spacer (2 jig) . C. Spor 1: Molekylvektstandarder (92,5 K, 66,2 K, 45,0 K,
31,0 K, 21,5 K).
Spor 2: CR<M>197 (1 iig) referanse.
Spor 3: Konjugert oligosakkarid 6A-CRM197 med adipinsyre
som spacer (2 fig) .
Spor 4: Konjugert oligosakkarid 14-CRM197 med adipinsyre
som spacer (2 ug).
Spor 5: Konjugert oligosakkarid 19F-CRM197 med adipinsyre
som spacer (2 fig) .
Spor 6: Konjugert oligosakkarid 23F-CRM197 med adipinsyre
som spacer (2 fig) .
Spor 7: Molekylvektmarkører (92,5 K, 66,2 K, 45,0 K,
31,0 K, 21,5 K).•
Figur 4. Kanin IgG-respons på S. <p>neumoniae-oligosakkarid 6A-CRM197-konjugater. Inhiberings-ELISA-analyse av affinitetsverdi av IgG-isotype indusert til de kapsulære polysakkarider.
A. Type 6A kapsulært polysakkarid.
B. Type 6A oligosakkarid (DP = 10) i fri form eller konjugert
til CRM197.
C. Type 14 oligosakkarid (DP = 12) aktivert med molekylspacer eller konjugert til CR<M>197.
Den foreliggende oppfinnelse vedrører fremgangsmåte for kovalent binding av oligosakkarider avledet fra bakterielle kapsulære polysakkarider til bærerproteiner; metoden ifølge oppfinnelsen danner nye glykokonjugater via en ny fremgangsmåte.
For klargjøring av beskrivelsen, og ikke for begrensning, er den detaljerte beskrivelse av oppfinnelsen oppdelt i følgende avsnitt:
Fremstilling av oligosakkarider.
Aktivering av oligosakkarider.
Konjugering av oligosakkarider til protein.
Immunokjemisk karakterisering av glykokonjugater. Vaksineformulering og administrasjon.
Brukbarhet av oligosakkaridkonjugatvaksiner mot pneumokokker.
FREMSTILLING AV OLIGOSAKKARIDER
Høymolekylært kapsulært polysakkarid kan anskaffes kommersielt (American Type Culture Collection (ATCC) (Rockville, MD)), eller oppnås ved fremgangsmåtene beskrevet av Porro et al., 1983, J. Biol. Stand. 11:65-71. Et hvilket som helst polysakkarid kan anvendes, omfattende, men ikke begrenset til dem som finnes i kapslene av Streptococcus <p>neumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria meninaitidis. Escherichia coli. Salmonella typhi, Streptococcus mutans, Cry<p>tococcus neoformans, Klebsiella pneumoniae, Staphvococcus aureus, og Pseudomonas aeruginosa.
Antigenfragmenter med minst en reduserende ende kan dannes ut i fra kapsulære polymerer ved forskjellige metoder, avhengig av den spesielle kapsulære polymerens strukturelle trekk. Begrenset oksydativ spalting med periodat (eller beslektede reagenser) vil etterlate aldehydtermini; en slik metode vil være begrenset til polymerer som har dihydroksynabogrupper på en ikke-syklisk rest. Hydrolyse av en glykosidbinding frembringer en reduserende sukkerterminus. Slik hydrolyse kan mest spesifikt gjennomføres enzymatisk ved glykosidaser, men denne anvendelse ville være begrenset til relativt få kapsulære polymerer, f.eks. Streptococcus pneumoniae 8, som det er kjent glykosidaser for. Sur hydrolyse anvendes vanligvis for hydrolyse av glykosid-bindinger. Anvendbarheten av denne metode ville være begrenset dersom polymeren inneholder syrefølsomme, ikke-glykosidiske bindinger, eller dersom polymeren inneholder syrefølsomme grenbindinger som er viktige for den antigene spesifisitet.
I spesielle utførelser kan S. <p>neumoniae type 6A kapsulært polysakkarid hydrolyseres i ca. 10"<2>M eddiksyre ved ca. 100°C i ca. 3 0 timer; S. pneumoniae type 14 kapsulært polysakkarid kan hydrolyseres i ca. 0,5 M trifluoreddiksyre ved ca. 70°C i ca. 7 timer; S. pneumoniae type 19F polysakkarid kan hydrolyseres i ca. 10"<2>M eddiksyre ved ca. 50°C i ca. 4 8 timer; og S. pneumoniae type 23F polysakkarid kan hydrolyseres i ca. 0,25 M trifluoreddiksyre ved ca. 70°C i ca. 3 timer.
Ifølge oppfinnelsen består oligosakkarider som skal konjugeres til protein fortrinnsvis av mellom tre og seks repeterende enheter (eller mellom 10 og 30 monosakkaridrester), og mere fortrinnsvis består de av mellom tre og fire repeterende enheter (eller ca. 15 monosakkaridrester) ettersom oligosakkarider av denne lengde, inkorporert i glykokonjugater, er blitt vist å være optimalt immunogene.
AKTIVERING AV OLIGOSAKKARIDER
Oligosakkarider kan aktiveres ved en fremgangsmåte med reduktiv aminering etterfulgt av omsetning med et bifunksjonelt molekyl, såsom, men ikke begrenset til, en diester. En skisse av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er vist i Figur 1 og Tabell II, som sammenligner fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse med den fremgangsmåte som er beskrevet i Porro et al., 1985, Mol. Immunol. 22.: 907-919. Bemerk at aktiveringstiden ved anvendelse av den førstnevnte fremgangsmåte var 7-14 døgn; denne er blitt avkortet, ifølge den foreliggende oppfinnelse, til 15 minutter. Bemerk også at reduksjonstiden ved anvendelse av den førstnevnte fremgangsmåte var 7-14 døgn; denne er blitt avkortet, ifølge den foreliggende oppfinnelse, til 48 timer. Den foreliggende oppfinnelse krever følgelig 12-26 færre døgn for gjennomføring enn den førstnevnte fremgangsmåte. Dette er en viktig fordel ettersom eksponering av karbohydrater til forhøyet temperatur, såsom 50°C, kan føre til nedbrytning.
I samsvar med fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen gjennomføres reduktiv aminering av den endereduserende enhet i et oligosakkarid ved anvendelse av et molekyl inneholdende to aminogrupper. I en foretrukket utførelse ifølge oppfinnelsen gjennomføres reduktiv aminering ved omsetning av en gitt molar mengde av oligosakkarid med en diaminoetanløsning i 10X molart overskudd i 0,2 M KH2P04 ved ca. pH = 9 ved en temperatur på ca. 100 °C i fortrinnsvis ca. 15 minutter. Etter dette kan det tilsettes en molar mengde av pyridinboran tilsvarende 25 ganger den molare konsentrasjon av oligosakkarid i preparatet, og reaksjonen gjennomføres ved mellom ca. 50°C i fortrinnsvis ca. 48 timer.
Det resulterende produkt av den reduktive amineringsreaksjon kan deretter omsettes med et bifuksjonelt molekyl, idet hver funksjonell gruppe er i stand til å reagere med enten den terminale aminogruppe i det aktiverte oligosakkarid eller aminogrupper som er tilstede i bærerproteinets struktur, slik at det bifunksjonelle molekyl kan tjene til å binde sammen oligosakkaridet og bærerproteinet. I en foretrukket utførelse ifølge oppfinnelsen er den bifunksjonelle gruppe en diester, og er mere spesielt en diester av adipinsyre, som er blitt vist å ha sammenheng med mer effektiv glykosylering av protein. I en foretrukket spesiell utførelse ifølge oppfinnelsen blir et oligosakkarid, som er blitt underkastet reduktiv aminering som beskrevet ovenfor, videre omsatt med en suksinimidyldiester av ravsyre eller mer fortrinnsvis, adipinsyre; denne omsetning kan best gjennom-føres med det aminerte oligosakkarid ved en molar konsentrasjon (som aminogrupper) tilsvarende ca. 1/5 av den molare konsentrasjon av SIDEA (eller SIDES) i en løsning av dimetylsulfoksyd (DMSO) ved mellom 0 og 25°C, og fortrinnvis ca. 4'C i mellom 0,5 og 5 timer og fortrinnsvis ca. 2 timer. Det aktiverte oligosakkarid kan deretter oppsamles ved utfelling ved anvendelse av 1,4 dioksan (80% v/v), som også etterlater overskuddet av SIDEA (eller SIDES) i supernatanten.
KONJUGERING AV OLIGOSAKKARIDER TIL PROTEIN
Ifølge fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er egnede bærerproteiner valgt fra gruppen bestående av: CRM197, Salmonella flagellin, Hemophilus pilin, Hemorjhilus 15 kDa, 28-30 kDa og 40 kDa membranproteiner, Escherichia coli varmelabilt enterotoksin LTB, difteritoksin, tetanustoksin, koleratoksin, og virusproteiner omfattende rotavirus VP7 og respiratorisk syncytial virus F- og G-proteiner.
I "bærereffekten" blir et svakt antigen, ved å bli bundet til et sterkere antigen som bærer (dvs. et heterologt protein), mere immunogent enn om det ble presentert alene. Dersom et dyr er blitt immunisert tidligere med bæreren alene, kan dyret være "primet" og frembringe en forsterket immunrespons ikke bare på bærerantigen, men også på tilknyttede haptengrupper. Barn immuniseres rutinemessig med tetanus- og difteritoksoider.
De ville således være primet for påfølgende presentasjon av et kapsulært polymert antigen konjugert til hvilket som helst av disse toksoider.
Generelt kan et hvilket som helst heterologt protein tjene som bærerantigen. Visse bakterietoksiner såsom tetanus og difteri kan imidlertid ha en ytterligere fordel ved at de er sammensatt av to deler, hvorav en (den "bindende"-underenhet) har sterk affinitet for binding til celleoverflater hos pattedyr. Konjugering til et slikt "bindings"-protein ville forståelig nok tillate det bårede antigen mere effektivt å initiere respons i immunsystemets celler.
Bærerproteinene som den kapsulære polymer er konjugert med, kan være naturlig toksin eller detoksifisert toksin (toksoid). Ved relativt nye mutasjonsteknikker kan man også fremstille genetisk forandrede proteiner som antigenisk ligner på toksinet, men som allikevel er ikke-toksiske. Disse kalles "kryssreagerende stoffer", eller CRM'er. CRM197 er bemerkelsesverdig siden det har en enkelt aminosyreforandring i forhold til det naturlige difteritoksin og er immunologisk umulig å adskille fra dette.
Konjugering av kapsulær polymer til naturlig toksin kan redusere toksisiteten, men signifikant toksisitet kan fremdeles være tilbake. Ytterligere detoksifisering av proteintoksiner anvender således formalin, som reagerer med proteinets frie aminogrupper. Resttoksisiteten kan fremdeles være et problem. Dessuten er spontan detoksifisering mulig med et hvilket som helst parti av vaksine, og forblir et bekymringsfullt punkt ved denne metode.
Alternativt kan naturlig toksin detoksifiseres med formalin for å frembringe konvensjonelt toksoid før konjugering med kapsulær polymer. Den tidligere formalinbehandling reduserer imidlertid det antall frie aminogrupper som er tilgjengelige for reaksjon med de reduserende grupper på det kapsulære polymer-fragment. CRM'er har således signifikante fordeler ved at de ikke har noen iboende toksisitet, enda ingen av deres aminogrupper er opptatt av formalinet. En ytterligere fordel er at ingen bio-risiko eksisterer ved arbeid med CRM'er.
Når det gjelder CRM197, som er immunologisk identisk med naturlig toksin, vil behandling med formalin (selv om det ikke er noe behov for å detoksifisere) betydelig forsterke den immunologiske respons. Man forestiller seg at dette skyldes stabilis-ering av molekylet mot nedbrytning ved mekanismer i kroppen og/eller aggregasjon ved kryssbinding (partiklenes immunogenisitet øker med størrelsen).
Av alle grunnene ovenfor er tetanus- og difteritoksiner hovedkandidater for bærerproteiner, men allikevel er det andre som også kan være egnet. Selv om disse andre kanskje ikke har den sikkerhetshistorie man finner hos difteri og tetanus, kan det være andre overveiende grunner til å anvende dem. F.eks. kan de være enda mer effektive som bærere, eller produksjonsøkonomien kan være betydelig. Andre kandidater for bærere kan omfatte toksiner av pseudomonas, staphylococcus, streptococcus, pertussis og Eschrichia coli.
I en spesiell utførelse av oppfinnelsen kan aktiverte oligosakkarider bindes til CRM197-protein som er blitt renset på følgende måte: CRM197, fremstilt av stammen Corvnebacterium di<p>htheriae, kan separeres fra kulturmediet ved å lede bakterie-kulturen gjennom en Millipore-membran, utfelling av protein fra filtratet, og rensing av CRM197 ved ionebyttekromatografi, som beskrevet i avsnitt 6, nedenfor. Alternativt kan i alt vesentlig rent CRM197 oppnås ved en hvilken som helst fremgangsmåte som er kjent i teknologien.
Aktivert oligosakkarid kan bindes kovalent til bærerprotein i nærvær av et organisk løsningsmiddel, og eventuelt et hvilket som helst annet middel (såsom et kondenseringsmiddel) for å befordre bindingen av den terminale funksjonelle gruppe i det aktiverte oligosakkarid til proteinet. I en spesiell, foretrukket utførelse ifølge oppfinnelsen kan aktivert oligosakkarid som bærer en terminal estergruppe bindes kovalent til frie aminogrupper som er tilstede på bærerproteinet på følgende måte: Aktivert oligosakkarid kan løses i dimetylsulfoksyd og deretter tilsettes til en vandig løsning av bærerprotein (f.eks., men ikke begrenset til CRM197 ved en konsentrasjon på ca. 2 mg/ml) slik at molforholdet monoester-aktivert oligosakkarid/samlede aminogrupper på bærerproteinet er ca. 1:2, og sluttkonsentrasjonen av DMSO er ca. 50% v/v. Konjugeringsreaksjonen gjennomføres ved 4°C, og selv om omsetningen er nesten fullstendig på ca. 2 timer, er det beleilig å la omsetningen gå videre over natten for å øke reaksjonsutbyttet til de høyest mulige verdier for hver type spesifikt glykokonjugat. De således oppnådde glykokonjugater blir deretter renset ved gelkromatografi.
For syntese av en enverdig vaksine kan oligosakkarider avledet fra en enkelt serotype av bakterie konjugeres til protein. For syntese av en flerverdig vaksine kan det fremstilles glykokonjugater ved binding av en blanding av oligosakkarider avledet fra bakterier av forskjellige arter eller forskjellige serotyper til et bærerprotein; alternativt kan det blandes sammen glykokonjugater fremstilt ved omsetning av en enkelt type oligosakkarid med bærerprotein i separate reaksjoner ved anvendelse av forskjellige oligosakkarider. En flerverdig vaksine kan således omfatte et bærerprotein som bærer en homogen eller en heterogen populasjon av bundede oligosakkarider.
IMMUNOKJEMISK KARAKTERISERING AV GLYKOKONJUGATER
Verifikasjon av immunogenisiteten for de glykokonjugater som er fremstilt ved fremgangsmåten ovenfor, kan testes i et hvilket som helst egnet animalsk system før administrasjon til mennesker, omfattende, men ikke begrenset til kaniner, griser, marsvin, mus, rotter eller geiter. I en spesiell utførelse kan kaniner (med en vekt på ca. 2 kg) inokuleres subkutant med glykoproteinkonjugat i nærvær eller fravær av aluminiumfosfat eller -hydroksyd.
Ca. 2,5 y. q oligosakkarid ville være en egnet dose for en 2 kg kanin. Antistofftitere kan deretter evalueres ved "enzymelinked immunosorbent assay" (ELISA) eller en hvilken som helst annen fremgangsmåte kjent i teknologien. Siden de dannede antistoffer mot glykokonjugatene fremstilt ifølge oppfinnelsen kanskje kan være ute av stand til å immunopresipitere antigen, anbefales ikke antistoffundersøkelser som er avhengige av immunopresipitering for bestemmelse av titer.
VAKSINEFORMULBRING OG ADMINISTRASJON
Egnede bærermedier for formulering av en vaksine omfatter natriumfosfat-bufret saltløsning (pH 7,4) eller 0,125 M alu-miniumfosfatgel oppslemmet i natriumfosfat-bufret saltløsning ved pH 6 og andre konvensjonelle medier.
Vanligvis er vaksiner inneholdende fra 5 til 100 /ig, fortrinnsvis 10 til 50 jiq oligosakkarid, passende for å fremkalle et effektivt antistoffnivå mot den kapsulære polymer i unge varmblodige pattedyr Naturligvis ville den nøyaktige dosering bli bestemt ved rutinemessige dose/responseksperimenter. Konsentrasjonen av glykoproteinkonjugatene for fremstilling av vaksiner for barn ligger innenfor området 25 til 200 jug oligosakkarid. Høyere doser kan administreres på basis av kroppsvekt. Flere små doser gitt i rekkefølge ville forventes å være overlegne sammenlignet med samme konjugatmengde gitt som en enkelt injeksjon.
Vaksinene kan administreres til varmblodige pattedyr av en hvilken som helst alder, og er spesielt tilpasset til å indusere aktiv immunisering mot systemiske infeksjoner hos unge pattedyr, forårsaket av patogenene Haemo<p>hilus influenzae type b, Escherichia coli. Streptococcus pneumoniae, Neisseria meninaitidis og Pseudomonas aeruginosa.
Vaksinen avgis subkutant, intravenøst, intramuskulært, intraperitonealt, oralt eler intranasalt. Vaksinen kan omfatte glykokonjugat i løselig eller mikropartikkelform, eller inkorpo-reres i mikrokuler eller mikrovesikler, inbefattet liposomer.
ANVENDBARHET AV OLIGOSAKKARIDKONJUGATVAKSINER
I foretrukne utførelser anvendes glykokonjugatvaksiner fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse rettet mot innkapslede patogene bakterier til å beskytte mottagelige individer mot utvikling av infeksjoner forårsaket av disse agenser. Mottagelige individer omfatter små barn med umodent immunsystem, individer uten milt, så vel som et hvilket som helst individ med et kompromitert immunsystem eller kronisk sykdom, spesielt ervervet immunsviktsyndrom (A.I.D.S.), hematopoietisk malignitet, diabetes, kronisk hjertesykdom, kronisk lungesykdom og sigdcelleanemi. Glykokonjugatene fremstilt ifølge oppfinnelsen, i kraft av sin konjugasjon til et bærerprotein, forsterker immunogenisiteten til de oligosakkarider som de bærer.
Glykokonjugatene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan således anvendes ved vaksinasjoner for å gi beskyttelse mot infeksjon med en hvilken som helst bakterie som har en polysakkaridkapsel, omfattende Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Escherichia coli, Neisseria meningitidis, Salmonella tvphi, Streptococcus mutans, Crv<p>tococcus neoformans, Klebsiella pneumoniae . Staphvlococcus aureus, og Pseudomonas aeru<g>inosa. Stammer av S. pneumoniae som er spesielt virulente hos barn, og som tilveiebringes spesielt av den foreliggende oppfinnelse, omfatter typene 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23 og 33F.
I spesielle utførelser kan vaksinene fremstilt ifølge oppfinnelsen anvendes til å indusere en monospesifikk og homogen immunrespons. En monospesifikk immunrespons medfører flere fordeler, omfattende tilveiebringelse av antistoffer med (i) homogen spesifisitet, hvori i alt vesentlig alle antistoffer er rettet mot en spesifikk epitop og karakteriseres ved den samme konstante affinitetsverdi; (ii) en høy konstant affinitetsverdi med overlegen antibakteriell aktivitet; (iii) øket målspesifisitet og fravær av kryssreaktivitet med vertsrelaterte antigener, hvilket fører til en sikrere vaksine; og (iv) redusert komple-mentaktivering på grunn av redusert presipiteringsaktivitet for monospesifikke antistoffer, hvilket også fører til en sikrere vaksine.
I ytterligere utførelser kan den foreliggende oppfinnelse anvendes til fremstilling av vaksiner som anerkjenner peptider eller lipooligosakkarid- eller andre overflateoligosakkarid-haptener som er bundet, ved fremgangsmåter ifølge oppfinnelsen, til bærerproteiner. Slike vaksiner kan anvendes f.eks. ved induksjon av immunitet mot tumorceller, eller ved fremstilling av antitumor-antistoffer konjugert med et kjemoterapeutikum eller bioaktivt agens; slik antitumoraktivitet kunne induseres ved binding av et tumorspesifikt antigen, eller en epitop derav, til et bærerprotein ved anvendelse av fremgangsmåter ifølge denne oppfinnelse.
EKSEMPEL:
UTVIKLING AV EN FLERVERDIG PNEUMOKOKK OLIGOSAKKARIDKONJUGATVAKSINE FREMSTILLING AV POLYSAKKARID
S. pneumoniae type 6A kapsulært polysakkarid, S. <p>neumoniae type 14 kapsulært polysakkarid, S. pneumoniae type 19F kapsulært polysakkarid, og S. pneumoniae type 23F kapsulært polysakkarid ble levert fra the American Type Culture Collection.
HYDROLYSE AV POLYSAKKARID
HYDROLYSE AV S. PNEUMONIAE TYPE 6A- P0LYSAKKARID
2 mg av type 6A S. pneumoniae kapsulært polysakkarid ble løst i 1 ml vandig løsning inneholdende 10 mM eddiksyre ved pH = 3,4, fikk deretter hydrolysere i forseglede ampuller dyppet i oljebad ved en temperatur på 100°C i 30 timer. De resulterende oligosakkarider ble deretter adskilt fra reaksjonsblandingen ved kromatografi over Sephadex G15 (Pharmacia, Uppsala) kondisjonert med en 15 mM løsning av NaCl ved pH 7,0 ved 4°C.
De kromatografiske avløp ble deretter analysert ifølge fremgangsmåtene rapportert av Kabat (1964 i "Experimental Immunochemistry", utgiver E.A. Rabat og Mayer, pp. 538-541), Chen et al., (1956, anal. Chem. 28:1756-1758), og Porro et al. (1981, Anal. Biochem. 118:301-306) for å bestemme tilstedeværelsen av metylpentoser, fosfor og reduserende grupper, f.eks. aldehyd-grupper. Analysen viste et forhold pentose/aldehyd på 3,96, et forhold metylpentose/fosfor på 0,96, og et forhold fosfor/aldehyd på 4,12.
Gelkromatografi på Sephadex G-50 Superfine (Pharmacia) ved anvendelse av buffer, ga en fordelingskonstant (kd) på 0,538 (med heksose), tilsvarende en molekylvekt på ca. 2500.
N.M.R., gasskromatografi og støkiometrisk analyse viste at oligosakkaridene besto av ca. 3-4 repeterende basisenheter, hvorav ble funnet galaktose, som var det immunodominerende sukker.
HYDROLYSE AV S. PNEUMONIAE TYPE 14 POLYSAKKARID
2 mg av type 14 S. pneumoniae kapsulært polysakkarid ble lost i 1 ml vandig løsning inneholdende 0,5 M trifluoreddiksyre, og fikk deretter hydrolysere i forseglede ampuller dyppet i oljebad ved en temperatur på 7 0°C i 7 timer. De resulterende oligosakkarider ble deretter separert fra reaksjonsblandingen ved kromatografi over Sephadex G15 (Pharmacia, Uppsala) kondisjonert med en 15 mM løsning av NaCl ved pH 7,0 ved 4°C.
De kromatografiske avløp ble deretter analysert på heksosamin- og aldehydinnhold, og funnet å ha et heksosamin til aldehydforhold på 3,17. Gasskromatografi og støkiometrisk analyse viste en molekylstørrelse tilsvarende tre til fire repeterende basisenheter. Avgreningen av galaktose, som bestemt ved gasskromatografi, var innenfor 10%. Gelkromatografi på Sephadex G-50 Superfine (Pharmacia) ved anvendelse av 15 mM NaCl ved pH 7,0, viste for oligosakkaridet en fordelingskonstant (Kd) på 0,30 som bestemt ved total heksose.
HYDROLYSE AV S. PNEUMONIAE TYPE 19F POLYSAKKARID
2 mg av type 19F S. pneumoniae kapsulært polysakkarid ble løst i 1 ml vandig løsning inneholdende 10 mM eddiksyre ved pH = 3,4, og fikk deretter hydrolysere i forseglede ampuller dyppet i oljebad ved en temperatur på 50°C i 48 timer. De resulterende oligosakkarider ble deretter adskilt fra reaksjonsblandingen ved kromatografi over Sephadex G-15 (Pharmacia, Uppsala) kondisjonert med en 15 mM løsning av NaCl ved pH = 7,0 ved 4°C.
De kromatografiske avløp ble deretter analysert ifølge fremgangsmåten rapportert av Kabat (1964, i "Experimental Immunochemistry", utgivere E.A. Rabat og Mayer, pp. 538-541), Chen et al., (1956, Anal. Chem. 28:1756-1758), 0g Porro et al., (1981, Anal. Biochem. 118:301-306) for å bestemme tilstedeværelsen av metylpentoser, fosfor og reduserende grupper, f.eks. aldehyd-grupper. Analysen ga et metylpentose/redusert metylpentoseforhold på 3,5, og et metylpentose/fosforforhold på 3,2.
Gelkromatografi på Sephadex G-50 Superfine (Pharmacia) ga for oligosakkaridet en Kd = 0,46 (ved total heksose) og kombinert analyse ved gasskromatografi og støkiometri, viste en størrelse tilsvarende tre til fire repeterende basisenheter.
HYDROLYSE AV S. PNEUMONIAE TYPE 23F POLYSAKKARID
2 mg av type 23F S. pneumoniae kapsulært polysakkarid ble løst i 1 ml vandig løsning av 0,25 M trifluoreddiksyre, og fikk deretter hydrolysere i forseglede ampuller dyppet i oljebad ved en temperatur på 70°C i 3 timer. De resulterende oligosakkarider ble deretter adskilt fra reaksjonsblandingen ved kromatografi over Sephadex G-15 (Pharmacia, Uppsala) kondisjonert med en 15 mM løsning av NaCl ved pH = 7,0 ved 4°C.
De kromatografiske avløp ble deretter analysert ifølge fremgansmåtene rapportert av Kabat (1964, i "Experimental Immunochemistry", utgivere E.A. Rabat og Mayer, pp. 538-541), Chen et al., (1956, Anal. Chem. 28:1756-1758), og Porro et al., (1981, Anal. Biochem. 118:301-306) for å bestemme tilstedeværelsen av metylpentoser, fosfor og reduserende grupper, f.eks. aldehyd-grupper. Analysen åpenbarte et heksose/aldehydforhold på 4,5-4,5, et heksose/metylpentoseforhold på 2,3, og et fosfor/aldehydforhold på 2,9.
Gasskromatografi og støkiometrisk analyse viste tilstede-værelse av mellom 3,5 og 4,5 repeterende basisenheter. Avgrening av ramnose, som bestemt ved gasskromatografi, var mindre enn 8%.
Gelkromatografi på Sephadex G-50 Superfine (Pharmacia) ga en fordelingskonstant (Kd) på 0,38 (ved heksose).
IMMUNOKJEMISK KARAKTERISERING
AV S. PNEUMONIAEOLIGOSAKKARIDHAPTENER
Evnen til S. pneumoniae type 6A, 14, 19F og 23F oligosakkarider til å samvirke med antistoffer rettet mot intakte kapsulære polysakkarider ble testet som beskrevet hos Porro et al.
(1985, Mol. Immunol. ,22:907-919) ved anvendelse av en teknikk som måler evnen til et hapten (dvs. oligosakkaridet) til å inhibere den homologe antigen (kapsulært polysakkarid) til antistoff-immunopresipiteringsreaksjon (lavmolekylære haptener gir ingen immunopresipiteringsreaksjon når de testes mot homologe antistoffer) .
Denne fremgangsmåte som betegnes "differensial immunoelektroforese", ble gjennomført som følger: et plastplateunderlag for immunoeleketroforese inneholdt tre 1% (w/v) agarosekammere (Agarose M-LKB, Bromma, Sverige). Det første kammer inneholdt
0,05% (v/v) av referanseantiserum mot kapsulært polysakkarid.
Det andre kammer inneholdt 0,05% (v/v) av referanseantiserum mot kapsulært polysakkarid som tidligere var blitt inkubert med en kjent mengde av referansekapsulært polysakkarid ved 37°C i 15 minutter. Det tredje kammer inneholdt 0,05% (v/v) av referanseantiserum mot kapsulært polysakkarid som tidligere var blitt inkubert med en kjent mengde oligosakkaridhapten. Elektroforese-separasjon av kapsulært polysakkarid i fire to gangers serie-fortynninger ble deretter gjennomført ved 70 V/cm i 20 mM Tris-barbituratbuffer, pH = 8,8, i 90 minutter. Etter elektroforesen ble platene sølvfarget, tørket og kvantifisert. Inhibering ved oligosakkaridmolekylene ble tydeliggjort ved at det fremkom høyere "rakett"-immunopresipitater i det kammer som inneholdt referanseantiserum forinkubert med hapten. Den minimalt inhiberende konsentrasjon av et hapten ble beregnet som
hvor CHa = konsentrasjonen av haptenet undersøkt i gelen hAg = avskjæringen av den rette linje bestemt ved høyden av "rakett"-immunopresipitatene oppnådd når referanseantigenet var i gelen, og hjja = avskjæringen av den rette linje bestemt ved høyden av "rakett"-immunopresipitatene oppnådd når det undersøkte hapten var i gelen. På lignende måte,
Oligosakkaridhaptener av forskjellige størrelser ble testet.
Oligosakkaridenes evne til å blokkere immunopresipitering av kapsulære polysakkarider med spesifikt antistoff ble også testet ved ikke-elektroforesefremgangsmåten for radioimmunodiffusjon. Ifølge denne fremgangsmåte ble inhiberingen av oligosakkarid-molekyler tydeliggjort ved en større radius på det immuno-presipitat som ble dannet ved diffusjon av antigen (kapsulært polysakkarid) gjennom 1% w/v agarose inneholdende det spesifikke antistoff tidligere inkubert med en gitt mengde inhibitor (oligosakkarid) . Når den minimale kombinasjonskonsentrasjon (MCC) for det gitte hapten er funnet eksperimentelt, beregnes spesifisiteten ifølge den tidligere nevnte formel:
AKTIVERING AV DEN ENDEREDUSERENDE ENHET
PÅ S. PNEUMONIAE- OLIGOSAKKARIPENE
Oligosakkaridhaptener, oppnådd som beskrevet i avsnittet om hydrolyse av polysakkarider ovenfor, ble løst i vann til en slutt-konsentrasjon på ca. 5 mg/ml. Til hver løsning ble tilsatt 0,1 ml av 0,2 M KH2P04 for hver milliliter løsningsvolum, og pH hevet til 9,2-9,4 med den nødvendige mengde diaminometan (vanligvis kreves det et volum på 2 iil diaminometan for hver milliliter løsning) . Blandingen ble holdt ved 100°C i 15 minutter, hvoretter en mengde på ca. 4 fil pyridinboran ble tilsatt for hver milliliter løsnings-volum. pH ble justert på 9,2 med IN NaOH. Blandingen ble deretter overført i forseglet ampulle til et oljebad ved 50'C for de neste 48 timer. Deretter ble den aminoaktiverte oligosakkaridløsning nøytralisert med IN HCl og renset på Sephadex G-15 Superfine (15 mM NaCl, pH 7,01). De oppsamlede kromatografiske fraksjoner ble slått sammen og frysetørket. Deretter ble den frysetørkede rest løst ved 10 mg/ml i DMSO og tilsatt til en molar mengde av SIDEA (eller SIDES) tilsvarende et 5:1 mol/molforhold med hensyn til den mengde av aminogrupper som er tilstede i den frysetørkede forbindelse. Omsetningen foregikk ved romtemperatur i 4 timer, og deretter ble det tilsatt til løsningen 4 volumer av 1,4 dioksan (sluttkonsen-trasjon 80% i 1,4 dioksan) for å felle ut det esteraktiverte oligosakkarid. Bunnfallet, oppsamlet ved sentrifugering, ble vasket tre ganger med 1,4 dioksan og holdt ved -2 0°C eller lavere, dersom det ikke ble anvendt i konjugasjonsprosessen. Utbyttet av aktiverings-prosessen for hvert av de fire oligosakkarider er vist i Tabell IV.
KONJUGERING AV AKTIVERT OLIGOSAKKARID TIL CRM1?7- PROTEIN FREMSTILLING AV CRMr7- PROTEIN
CR<M>197, fremstilt av Corvnebacterium diphteriae C7 (Btx"197) , ble utskilt fra kulturmediet ved molekylfiltrering ved anvendelse av en Millipore XM-50 membran (NMWL 5 x IO"4) . Proteinet ble deretter utfelt ved tilsetting til filtratet av en mettet løsning av ammoniumsulfat (opp til 65% vekt/volum). Utfelt protein ble oppsamlet ved sentrifugering, og løst igjen i 0,01 M fosfatbuffer (pH = 7,2).
Ytterligere rensing av CRM197 ble oppnådd ved ionebyttekromatografi ved anvendelse av en 2,5 x 100 cm DEAE-Sepharose 6B/CL-kolonne (Pharmacia, Uppsala) kondisjonert i 0,01 M fosfatbuffer ved pH 7,2, ved anvendelse av 0,09 M NaCl i 0,01 M fosfatbuffer som elueringsmiddel.
SDS-polyakrylamidgelelektroforese under reduserende betingelser (Pappenheimer et al., 1972, Immunochem. 9:891-906) viste at 80% av det oppnådde CRM197 var i sin naturlige molekylform. Renheten av proteinet ble funnet å være en flokkuleringsgrense (Lf) på ca. 400 pr. mg.
KONJUGASJON AV AKTIVERTE OLIGOSAKKARIDER
Konjugeringsfremgangsmåten besto av kobling av de monosuksinimidylester-aktiverte oligosakkaridhaptener til epsilon-aminogruppen på lysinrestene i bærerproteinet CRM197.
Dimetylsulfoksydholdige monosuksinimidylester (av adipinsyre) aktiverte oligosakkarider av S. <p>neumoniae type 6A, 14, 19F og 23F kapsulære polysakkarider ble deretter tilsatt til en 0,1 M hydrogenkarbonatløsning pH = 8,0 inneholdende 2 mg/ml av CRM197 for å frembringe en løsning som var 50% i vann, og hvori molforholdet av esteraktivert oligosakkarid til totale aminogrupper i bærer-proteinet er 1:2.
Den således oppnådde blanding ble holdt under forsiktig omrøring ved 4°C i 15 timer. Oligosakkarider fra hver av de fire serotyper ble konjugert til protein i separate reaksjoner. En sammenstilling av den fysiokjemiske karakterisering av de oppnådde glykokonjugater er gitt i Tabell V.
SAMMENLIGNING AV KONJUGERINGSEFFEKTIVITETEN
VED ANVENDELSE SOM LINKER AV SUKSINIMIDYLDIESTEREN
AV ADIPINSYRE VERSUS SUKSINIMIDYLDIESTEREN AV RAVSYRE
De aktiverte oligosakkarider dannet ved omsetning med suksinimidyldiesteren av ravsyre (SIDES) hadde strukturen
mens de som ble dannet ved omsetning med suksinimidyldiesteren av adipinsyre (SIDEA) hadde strukturen
og frembringer derved linkere av forskjellige størrelser mellom oligosakkarid og konjugert protein (se Fig. 2). Konjugeringseffektiviteten ved anvendelse av SIDES- versus SIDEA-aktiverte oligosakkarider ble evaluert. Som vist i Fig. 3A, B og C syntes proteinet å være i fullstendig glykosylert form bare når linkeren var avledet fra SIDEA (hvor lite eller intet fritt bånd av CRM197 var påvisbart) .
IMMUNOGENISITET AV S. PNEUMONIAE- GLYKOKONJUGATER
Flere preparater av de fire glykokonjugatantigenene ble fremstilt og testet på kaniner (ifølge det detaljerte program i Tabell VI): typespesifikke glykokonjugater i enverdig preparat (2,5 eller 5,0 fig oligosakkarid pr. dose) eller flerverdig preparat (2,5 /xg av hvert oligosakkarid pr. dose) med og uten aluminiumhydroksyd [A1(0H)3] som mineralhjelpemiddel (bare i det flerverdige preparat ved 1 mg pr. dose) ble administrert. Full-under de angitte betingelser siden bearbeiding av supernatanten over det flerverdige preparat med enten SDS-polyakrylamidgelelektroforese eller rakett-immunoelektroforese ikke åpenbarte noen påvisbar mengde av fritt protein. En gjennomsnittlig dose av hvert glykokonjugat inneholdt ca. 2,5 fig oligosakkarid og 13 fig bærerprotein CRM197 (som er sammenlignbar med den gjennomsnittlige humane vaksinasjonsdose av difteritoksoid). Immuniseringsprogrammet innbefattet en priming-dose og to booster-doser med fire ukers mellomrom. Avblødning ble gjennomført ved uke 0, 4, 6 og 10.
Tabell VII viser den RIA (FARR-metoden) estimerte mengde av typespesifikke antistoffer, samt antallet respondere over det antall dyr som ble immunisert. Forholdet (R) angir det antall gangers økning som ble oppnådd etter hver immuniseringsdose.
Tabell VIII viser ELISA-titerne i form av igG-isotype Ab samt antallet respondere versus antallet av immuniserte dyr. Forholdene R1 og R2 og R3 angir antallet gangers økning i titerne etter hver immuniseringsdose, mens forholdene R2' og R3' angir antallet gangers økning i titerne for en gitt immuniseringsdose i forhold til pre-titeren. Tabell IX gjengir de kvalitative resultater i form av funksjonalitet av de induserte IgG-antistoffer i gjenkjenningen av polysakkaridkapselen på levende streptokokker (Quellung-reaksjon eller Neufeld-test).
Tabell X viser de difteritoksinnøytraliserende titere indusert i kaniner med bærerproteinet CRM197, som anslått ved Vero-celleundersøkelse. Siden det ble anvendt et referanse FDA-antiserum som kontroll, er titerne uttrykt i /i/ml også tatt med.
OLIGOSAKKARIDER MED KJEDELENGDE DP = 10- 20
ER SUBQPTIMALT IMMUNOGENE
To grupper av glykokonjugatvaksiner ble syntetisert ifølge det synteseskjema som er beskrevet ovenfor, men ved anvendelse av sakkarider av type 6A, 14, 19F og 23F S. pneumoniae med to forskjellige "områdeverdier" for kjedelengden, nemlig DP = 3-5 og DP =
10-20. Spørsmålet ble da hvorvidt et oligosakkarid med en kjedelengde på DP = 20 eller større også ville være det optimale immunogen (etter konjugering med det valgte bærerprotein CRM197) med hensyn til priming- og boosting-evne sammenlignet med en mye kortere kjedelengde, såsom en DP = 3 oligosakkarider.
Kaniner ble immunisert ved anvendelse av den protokoll som er gjengitt i Tabell XI. Som vist ved sammenligning av resultatene gitt i Tabellene XII og XIII, som vedrører ELISA-resultaer av IgG-isotype antistofftitere indusert med løselige S. <p>neumoniae-oli<g>o-sakkarider med henholdsvis DP = 10-14 og DP = 3-6, samt de som er vist i Tabellene XIV og XV, som vedrører ELISA-resultater av IgG-isotype antistofftitere indusert med S. pneumoniae-oli<g>o-sakkarider med henholdsvis DP = 10-14 og DP = 3-6, adsorbert til A1(0H)3, var en DP = 10-14 ikke forbundet med økt immunogenisitet. I virkeligheten var IgG priming- og boosting-aktivitetene for DP = 3-5 oligosakkaridkonjugater langt høyere enn aktivitetene observert ved anvendelse av DP = 10-14 oligosakkaridkonjugater. Ikke til-feldigvis var alle fire undersøkte karbohydratstrukturer forbundet med lignende resultater. Videre ble det funnet at nøytralisering av difteritoksin med glykokonjugater med DP = 10-14 var mindre effektiv enn den som ble oppnådd ved anvendelse av glykokonjugater med DP = 3-6 (Tabell XVI). Oligosakkarider med kjedelengde DP = 10-20 er således funksjonelle i konjugater ifølge den foreliggende oppfinnelse selv om oligosakkarider med DP = 3-6 fremkaller høyere titere av antistoff.
IMMUNRESPONSEN PÅ GLYKOKONJUGATENE ER MONOSPESIFIKK OG HOMOGEN
Sammenligning av de resultater som er gjengitt i Tabellene VII og VIII, som vedrører antistofftitere bestemt ved radio-immunoassay (RIA) og enzyme linked immunosorbant assay (ELISA), viser at de RIA-estimerte titere var konsistent lavere enn ELISA-estimerte titer. Denne observasjon, sammen med fraværet av immunopresipitater i agarosegel anvendt for radioimmunodiffusjon-og rakettelektroforeseanalyse av antiglykokonjugatantiserum, viser at kanin-antisera mot S. <p>neumoniae-oli<q>osakkarid-CRM197-konjugater inneholdt høyt spesifikke IgG-isotype-antistoffer som var ute av stand til å presipitere de respektive rensede karbohydratpolymerer som ble anvendt til å danne oligosakkaridene.
Fraværet av presipiterende antistoffer i et antiserum er en indikasjon på monospesifisitet, dvs. antistoffgjenkjenning av bare en epitop i antigenrepertoaret i et gitt molekyl (Berzofsky-Schechter, 1981, Molecular Immunol. 18:751-763). Presipitering av antigenantistoffkomplekser krever gitterdannelse for å skape et tredimensjonalt, forgrenende nettverk av sammenbundede antigen- og antistoffmolekyler. For at dette skal foregå kreves flerverdighet av både antigen og antistoff, ettersom mer enn ett antistoff må være i stand til å binde seg til et enkelt antigenmolekyl samtidig. Mangelen på obsrverbar immunopresipitering som foregår mellom kaninantiserum mot S. pneumoniae-oligosakkarid-CRM1?7-koniugater og homologt renset høymolekylært, kapsulært polysakkarid er således en sterk indikasjon på at disse antisera inneholdt antistoffer spesifikke for karbohydratpolymeren (som vist ved ELISA- og hemmings-ELISA-analyser), men rettet mot bare en av polysakkaridets determinanter (epitoper).
I tillegg til å vise immunopresipiterende aktivitet er en heterogen populasjon av antistoffer også vanligvis forbundet med følgende egenskap: en enkelt epitop av det antigen som anvendes til å fremkalle antistoffresponsen kan ikke fullstendig inhibere bindingen av hele antistoffpopulasjonen til fullstendig antigen, men vil bare inhibere de antistoffer som binder seg til denne ene epitop, og etterlate de andre antistoffer til fritt å binde seg til de gjenværende epitoper som er tilstede på fullstendig antigen. En populasjon av antistoffer kan evalueres for heterogenitet ved en ELISA-inhiberingsundersøkelse. I denne undersøkelse kan man måle evnen hos en populasjon av antistoffer til å binde seg til fullstendig antigen i nærvær av inhibitorer for antigen/antistoff-binding, såsom isolerte epitoper av antigenet. Fremstilt grafisk, når bindingen av antistoff til merket fullstendig antigen blir målt i nærvær av økende konsentrasjoner av umerket fullstendig antigen, fremkommer en sigmoidal kurve som kan anvendes som standardkurve for antistoff/antigenbinding. Dersom antistoffpopulasjonen er heterogen, kan bindingen mellom antistoff og fullstendig antigen ikke inhiberes fullstendig ved tilsetning av en enkelt antigenepitop, og standardkurven for antistoff/antigen-bindingen blir bare delvis forskjøvet (delvis overlappet eller delvis parallellisert) ettersom andre antigen/antistoff-interaksjoner, forskjellige fra dem i forbindelse med den epitop som blir testet, dominerer. Motsatt, kan binding av en homogen populasjon av antistoffer til antigen inhiberes fullstendig ved tilsetning av en isolert epitop; standard sigmoidal antigen/ antistoffbindingskurven for en homogen populasjon av antistoffer vil bli overlappet eller parallellisert av den kurve som dannes ved tilsetning av isolert epitop tilsvarende populasjonens spesifisitet.
Eksperimentelt, ved testing av det S. penumoniae-glvko-konjugatinduserte kanin-IgG på denne måte ble det observert et affinitetsmønster tilsvarende det som ble forutsett for en homogen populasjon av antistoffer (Figur 4). S. <p>neumoniae 6A-oligosakkaridet (enten i ikke-konjugert eller konjugert form), ble forbundet med den sigmoidale bindingsinhiberingskurve omtrent parallell med en som ble avledet ved anvendelse av serotype 6A høymolekylært kapsulært polysakkarid. Som ventet ville et heterologt (type 14) oligosakkarid, i enten fri (linkeraktivert) eller konjugert form, ikke inhibere IgG-isotypepopulasjonen som er spesifikk for type 6A antigenet.
Claims (6)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av et kovalent konjugat av et oligosakkarid og et bærerprotein,
karakterisert ved følgende trinn: (i) å omsette et oligosakkarid som har en terminal reduserende gruppe med diaminoetan i nærvær av pyridinboran slik at det foregår reduktiv aminering ved en temperatur på ca. 100°C i minst 15 minutter og at omsetningen med pyridinboran gjennomføres ved en temperatur på ca. 50"C i minst 48 timer; og (ii) å omsette det aminerte oligosakkaridprodukt fra (i) med et molekyl omfattende to funksjonelle grupper, hvorav en er i stand til å reagere med den terminale gruppe i det aktiverte oligosakkarid, og den andre som er i stand til å reagere med nevnte bærerprotein valgt fra gruppen bestående av CRM197, Salmonella flagellin, Haemophilus pilin, Haemophilus 15 kDa, 28-30 kDa eller 40 kDa membranprotein, Escherichia coli varmelabilt enterotoksin LTB, difteritoksin, tetanustoksin, koleratoksin, rotavirus VP7-protein, og respiratorisk synsytialt virus F-eller G-protein; og (iii) å omsette det aktiverte oligosakkaridprodukt fra (ii) med nevnte bærerprotein slik at konjugering finner sted.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at det anvendes et molekyl omfattende to funksjonelle grupper i trinn (ii) som er en diester.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at det anvendes et molekyl omfattende to funksjonelle grupper i trinn (ii) som er en diester av adipinsyre eller en diester av ravsyre.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, 2, eller 3, karakterisert ved at det anvendes et oligosakkarid som stammer fra Streptococcus pneumoniae kapselpoly-sakkarid.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert ved at det anvendes et oligosakkarid som er avledet fra Streptococcus pneumoniae med en utvalgt serotype valgt fra gruppen bestående av typene 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F og 33F.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 1, 2, 3, 4 eller 5, karakterisert ved at det anvendes et oligosakkarid som er avledet fra kapsulært polysakkarid fra en bakterie valgt fra gruppen bestående av Haemophilus influenzae. Neisseria menin<q>itidis. Pseudomonas aeru<q>inosa. Salmonella tvphi. Escherichia coli, Streptococcus mutans, Cryptococcus neoformans, Klebsiella pneumoniae og Staphylococcus aureus.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/590,649 US5153312A (en) | 1990-09-28 | 1990-09-28 | Oligosaccharide conjugate vaccines |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO913812D0 NO913812D0 (no) | 1991-09-27 |
NO913812L NO913812L (no) | 1992-03-30 |
NO300759B1 true NO300759B1 (no) | 1997-07-21 |
Family
ID=24363087
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO913812A NO300759B1 (no) | 1990-09-28 | 1991-09-27 | Fremgangsmåte for fremstilling av et kovalent konjugat av et oligosakkarid og et bærerprotein |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US5153312A (no) |
EP (1) | EP0477508B1 (no) |
JP (1) | JP3027452B2 (no) |
KR (1) | KR100217317B1 (no) |
CN (1) | CN1034054C (no) |
AT (1) | ATE124868T1 (no) |
AU (1) | AU634663B2 (no) |
CA (1) | CA2052323C (no) |
CZ (1) | CZ285650B6 (no) |
DE (1) | DE69111168T2 (no) |
FI (1) | FI104046B1 (no) |
HU (1) | HU211210B (no) |
IE (1) | IE71671B1 (no) |
IL (1) | IL99119A (no) |
NO (1) | NO300759B1 (no) |
NZ (1) | NZ239878A (no) |
PL (1) | PL169926B1 (no) |
PT (1) | PT99067B (no) |
SK (1) | SK280112B6 (no) |
TW (1) | TW324664B (no) |
ZA (1) | ZA917771B (no) |
Families Citing this family (216)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5153312A (en) * | 1990-09-28 | 1992-10-06 | American Cyanamid Company | Oligosaccharide conjugate vaccines |
US7279162B1 (en) | 1990-10-22 | 2007-10-09 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Isolated broadly reactive opsonic immunoglobulin for treating a pathogenic coagulase-negative staphylococcus infection |
US5622649A (en) * | 1991-06-27 | 1997-04-22 | Emory University | Multiple emulsions and methods of preparation |
FR2682388B1 (fr) * | 1991-10-10 | 1995-06-09 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal. |
AU685047B2 (en) * | 1992-02-11 | 1998-01-15 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Dual carrier immunogenic construct |
US7141244B1 (en) * | 1992-03-02 | 2006-11-28 | Chiron Srl | Helicobacter pylori proteins useful for vaccines and diagnostics |
US5445817A (en) * | 1992-08-21 | 1995-08-29 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Pertussis toxin used as a carrier protein with non-charged saccharides in conjugate vaccines |
EP0618813B1 (en) * | 1992-09-16 | 2002-01-09 | The University Of Tennessee Research Corporation | Antigen of hybrid m protein and carrier for group a streptococcal vaccine |
US6531156B1 (en) | 1994-04-15 | 2003-03-11 | Temple University | Aqueous solven encapsulation method, apparatus and microcapsules |
EP0769019A1 (en) * | 1994-07-01 | 1997-04-23 | Rican Limited | Helicobacter pylori antigenic protein preparation and immunoassays |
US5565204A (en) * | 1994-08-24 | 1996-10-15 | American Cyanamid Company | Pneumococcal polysaccharide-recombinant pneumolysin conjugate vaccines for immunization against pneumococcal infections |
KR19990007777A (ko) * | 1995-06-07 | 1999-01-25 | 듀크두플레시스 | 면역성 및 면역자극성 올리고당 조성물 및 이를 제조하고 이용하는 방법 |
US6284884B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-09-04 | North American Vaccine, Inc. | Antigenic group B streptococcus type II and type III polysaccharide fragments having a 2,5-anhydro-D-mannose terminal structure and conjugate vaccine thereof |
US5866132A (en) * | 1995-06-07 | 1999-02-02 | Alberta Research Council | Immunogenic oligosaccharide compositions |
US5695768A (en) * | 1995-06-07 | 1997-12-09 | Alberta Research Council | Immunostimulating activity of Streptococcus pneumoniae serotype 8 oligosaccharides |
ATE433329T1 (de) | 1995-06-23 | 2009-06-15 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Impfstoff bestehend aus auf aluminium-phosphat adsorbiertem, konjugiertem polysaccharid antigen |
US6872398B2 (en) * | 1995-12-22 | 2005-03-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Conjugate vaccine against gram-negative bacterial infections |
EP0909323B1 (en) | 1996-01-04 | 2007-02-28 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Helicobacter pylori bacterioferritin |
ZA97248B (en) * | 1996-01-18 | 1997-07-18 | Rohm & Haas | Method for identifying and quantifying polymers utilizing immunoassay techniques |
US6207157B1 (en) | 1996-04-23 | 2001-03-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Conjugate vaccine for nontypeable Haemophilus influenzae |
US6309646B1 (en) | 1996-05-09 | 2001-10-30 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Protein-polysaccharide conjugate vaccines and other immunological reagents prepared using homobifunctional and heterobifunctional vinylsulfones, and processes for preparing the conjugates |
DE69708318T3 (de) * | 1996-08-27 | 2006-11-16 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc., Emeryville | Neisseria meningitidis serogruppe b glykokonjugate und verfahren zu deren verwendung |
US6299881B1 (en) * | 1997-03-24 | 2001-10-09 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts |
US6610293B1 (en) | 1997-06-16 | 2003-08-26 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Opsonic and protective monoclonal and chimeric antibodies specific for lipoteichoic acid of gram positive bacteria |
US5847110A (en) * | 1997-08-15 | 1998-12-08 | Biomedical Frontiers, Inc. | Method of reducing a schiff base |
JP2001518556A (ja) | 1997-10-03 | 2001-10-16 | ガレニカ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | イミン形成ポリサッカライド、その調製、ならびにアジュバントおよび免疫刺激剤としてのその使用 |
WO1999039739A1 (en) | 1998-02-05 | 1999-08-12 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Simplified method for removing free protein during preparation of protein-polysaccharide conjugates and vaccines using restricted-access media |
BR9907884A (pt) * | 1998-02-12 | 2000-10-24 | American Cyanamid Co | Composição de vacina, processos para gerar uma resposta imune em um antìgeno pneumocócico, para aumentar resposta de ifn-gama em uma vacina pneumocócica, e para gerar anticorpos de fixação complementar para uma resposta protetora a um patógeno, composição imunogênica, e, processo para gerar uma resposta imune em um antìgeno meningocócico |
US7018637B2 (en) * | 1998-02-23 | 2006-03-28 | Aventis Pasteur, Inc | Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines |
EP1073667A2 (en) | 1998-04-28 | 2001-02-07 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Polysaccharide-antigen conjugates |
US7250494B2 (en) * | 1998-06-15 | 2007-07-31 | Biosynexus Incorporated | Opsonic monoclonal and chimeric antibodies specific for lipoteichoic acid of Gram positive bacteria |
US6858211B1 (en) * | 1998-07-20 | 2005-02-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccines against Escherichia coli O157 infection |
DE69941574D1 (de) * | 1998-08-19 | 2009-12-03 | Baxter Healthcare Sa | Immunogenes beta-propionamido-gebundenes polysaccharid-protein konjugat geeignet als impfstoff und hergestellt bei verwendung von n-acryloyliertem polysaccharid |
US6797275B1 (en) * | 1998-12-04 | 2004-09-28 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of immunizing humans against Salmonella typhi using a Vi-rEPA conjugate vaccine |
US6146902A (en) * | 1998-12-29 | 2000-11-14 | Aventis Pasteur, Inc. | Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions |
GB9928196D0 (en) * | 1999-11-29 | 2000-01-26 | Chiron Spa | Combinations of B, C and other antigens |
FR2806304B1 (fr) * | 2000-03-17 | 2002-05-10 | Aventis Pasteur | Conjugues polysaccharidiques du pneumocoque a usage vaccinal contre le tetanos et la diphterie |
US7749511B2 (en) * | 2000-04-18 | 2010-07-06 | Endobiologics, Incorporated | Anti-sepsis conjugate vaccine |
JP2004515450A (ja) * | 2000-04-18 | 2004-05-27 | エンドバイオロジックス, インコーポレイテッド | 敗血症処置のためのリポ多糖結合体ワクチン |
JP2004506086A (ja) * | 2000-08-25 | 2004-02-26 | アベンティス、パストゥール、リミテッド | インフルエンザ菌感染症の予防用ワクチンとしてのインフルエンザ菌リポ多糖内部コアオリゴ糖エピトープ |
US7723296B2 (en) | 2001-01-18 | 2010-05-25 | Genzyme Corporation | Methods for introducing mannose-6-phosphate and other oligosaccharides onto glycoproteins and its application thereof |
PL226184B1 (pl) | 2001-01-23 | 2017-06-30 | Aventis Pasteur | Poliwalentna sprzezona szczepionka meningokokowa polisacharyd- bialko |
GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
GB0118249D0 (en) | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Chiron Spa | Histidine vaccines |
GB0121591D0 (en) | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
WO2003018054A1 (en) * | 2001-08-31 | 2003-03-06 | Chiron Srl. | Helicobacter pylori vaccination |
GB0129007D0 (en) * | 2001-12-04 | 2002-01-23 | Chiron Spa | Adjuvanted antigenic meningococcal compositions |
WO2003070909A2 (en) | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Chiron Corporation | Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules |
EP1476197B1 (en) * | 2002-02-22 | 2009-01-07 | National Research Council Of Canada | Synthesis of lipopolysaccharide-protein conjugate vaccines via the lipid a region following removal of the glycosidic phosphate residue |
AU2002309259A1 (en) * | 2002-05-09 | 2003-11-11 | Massimo Porro | Improved polysaccharide and glycoconjugate vaccines_____________ |
DE60328481D1 (de) | 2002-05-14 | 2009-09-03 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Schleimhautapplizierter impfstoff, der das adjuvanz chitosan und menigokokkenantigene enthält |
GB0211118D0 (en) * | 2002-05-15 | 2002-06-26 | Polonelli Luciano | Vaccines |
PT2255826E (pt) | 2002-08-02 | 2016-06-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composições de vacina de neisseria compreendendo uma combinação de antigénios |
SI1549338T1 (sl) | 2002-10-11 | 2011-04-29 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Polipeptidna cepiva za ĺ iroko zaĺ äśito pred hipervirulentnimi miningokoknimi rodovi |
AU2003278166B2 (en) | 2002-11-01 | 2009-01-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
WO2004060396A2 (en) | 2002-12-27 | 2004-07-22 | Chiron Corporation | Immunogenic compositions containing phospholpid |
FR2850106B1 (fr) | 2003-01-17 | 2005-02-25 | Aventis Pasteur | Conjugues obtenus par amination reductrice du polysaccharide capsulaire du pneumocoque de serotype 5 |
CA2514328C (en) | 2003-01-30 | 2020-01-14 | Chiron Srl | Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups |
US7893096B2 (en) | 2003-03-28 | 2011-02-22 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Use of small molecule compounds for immunopotentiation |
EP2386313A1 (en) | 2003-05-07 | 2011-11-16 | Sanofi Pasteur, Inc. | Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine |
WO2005004909A2 (en) | 2003-05-07 | 2005-01-20 | Aventis Pasteur, Inc. | Method of enhanced immunogenicity to meningococcal vaccination |
WO2005020964A1 (en) | 2003-06-02 | 2005-03-10 | Chiron Corporation | Immunogenic compositions based on microparticles comprising adsorbed toxoid and a polysaccharide-containing antigen |
GB0313916D0 (en) | 2003-06-16 | 2003-07-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine composition |
EP2851088A1 (en) * | 2003-06-23 | 2015-03-25 | Baxter International Inc. | Vaccines against group Y Neisseria meningitidis and meningoccal combinations thereof |
MXPA05014171A (es) | 2003-06-23 | 2007-02-21 | Sanofi Pasteur Inc | Metodo de inmunizacion contra neisseria meningitidis serogrupos a y c. |
GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
EP1961426B1 (en) | 2003-10-02 | 2011-04-27 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Combined meningitis vaccines |
US8574596B2 (en) | 2003-10-02 | 2013-11-05 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Pertussis antigens and use thereof in vaccination |
UA93854C2 (ru) | 2003-12-17 | 2011-03-25 | Вайет Ллк | Иммуногенный конъюгат и способ его получения |
MY144231A (en) | 2003-12-17 | 2011-08-15 | Wyeth Corp | Aß IMMUNOGENIC PEPTIDE CARRIER CONJUGATES AND METHODS OF PRODUCING SAME |
US7422755B2 (en) * | 2004-01-15 | 2008-09-09 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Antimultiorganism glycoconjugate vaccine |
US20050169941A1 (en) * | 2004-01-29 | 2005-08-04 | Andrew Lees | Use of amino-oxy functional groups in the preparation of protein-polysaccharide conjugate vaccines |
GB0406013D0 (en) | 2004-03-17 | 2004-04-21 | Chiron Srl | Analysis of saccharide vaccines without interference |
GB0408978D0 (en) | 2004-04-22 | 2004-05-26 | Chiron Srl | Meningococcal fermentation for preparing conjugate vaccines |
SI1740217T1 (sl) | 2004-04-30 | 2011-10-28 | Novartis Ag | Konjugirano meningokokno cepljenje |
GB0500787D0 (en) | 2005-01-14 | 2005-02-23 | Chiron Srl | Integration of meningococcal conjugate vaccination |
GB0409745D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Compositions including unconjugated carrier proteins |
GB0411387D0 (en) | 2004-05-21 | 2004-06-23 | Chiron Srl | Analysis of saccharide length |
GB0413868D0 (en) | 2004-06-21 | 2004-07-21 | Chiron Srl | Dimensional anlaysis of saccharide conjugates |
EP1768662A2 (en) | 2004-06-24 | 2007-04-04 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Small molecule immunopotentiators and assays for their detection |
EP2277595A3 (en) | 2004-06-24 | 2011-09-28 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Compounds for immunopotentiation |
EP2612679A1 (en) | 2004-07-29 | 2013-07-10 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Immunogenic compositions for gram positive bacteria such as streptococcus agalactiae |
KR20070101207A (ko) | 2004-08-30 | 2007-10-16 | 사노피 파스퇴르 인크 | 다가 수막구균 유도체화된 다당류-단백질 접합체 및 백신 |
GB0420466D0 (en) * | 2004-09-14 | 2004-10-20 | Cassone Antonio | Anti-glucan antibodies |
MX2007003292A (es) | 2004-09-21 | 2007-09-07 | Sanofi Pasteur Inc | Conjugados y vacuna con proteinas de polisacarido derivadas meningococales multivalentes. |
GB0502095D0 (en) | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Conjugation of streptococcal capsular saccharides |
GB0502096D0 (en) | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Purification of streptococcal capsular polysaccharide |
GB0505518D0 (en) | 2005-03-17 | 2005-04-27 | Chiron Srl | Combination vaccines with whole cell pertussis antigen |
GB0505996D0 (en) | 2005-03-23 | 2005-04-27 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Fermentation process |
AU2011253684B8 (en) * | 2005-04-08 | 2013-07-11 | Wyeth Llc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
US7709001B2 (en) * | 2005-04-08 | 2010-05-04 | Wyeth Llc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
CN113198012A (zh) * | 2005-04-08 | 2021-08-03 | 惠氏有限责任公司 | 多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物 |
US7955605B2 (en) | 2005-04-08 | 2011-06-07 | Wyeth Llc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
US20070184072A1 (en) | 2005-04-08 | 2007-08-09 | Wyeth | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
CN103083657B (zh) | 2005-06-27 | 2016-06-08 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 免疫原性组合物 |
EP1931380A2 (en) | 2005-09-01 | 2008-06-18 | Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH & Co. KG | Multiple vaccination including serogroup c meningococcus |
JP5044754B2 (ja) * | 2005-09-21 | 2012-10-10 | アメリカ合衆国 | カンピロバクター・ジェジュニに対するワクチン成分として使用される免疫原莢膜組成物 |
US9999591B2 (en) * | 2005-09-21 | 2018-06-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Immunogenic composition against Campylobacter jejuni |
US7700578B2 (en) * | 2005-09-21 | 2010-04-20 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Capsule composition for use as immunogen against Campylobacter jejuni |
GB0522303D0 (en) | 2005-11-01 | 2005-12-07 | Chiron Srl | Culture method |
ES2514316T3 (es) | 2005-11-22 | 2014-10-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Partículas similares a virus (VLPs) de Norovirus y Sapovirus |
GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
GB0607088D0 (en) | 2006-04-07 | 2006-05-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
AR058707A1 (es) | 2005-12-22 | 2008-02-20 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna, procedimiento para fabricarla y su uso |
JP4822854B2 (ja) * | 2006-01-18 | 2011-11-24 | 株式会社有沢製作所 | フレキシブルプリント配線板用ポリアミドイミド樹脂、並びに該樹脂を用いた金属張り積層板、カバーレイ、フレキシブルプリント配線板、及び樹脂組成物 |
GB0605757D0 (en) | 2006-03-22 | 2006-05-03 | Chiron Srl | Separation of conjugated and unconjugated components |
TR201807355T4 (tr) | 2006-03-22 | 2018-06-21 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Meningokokkal konjugatlarla immünizasyon rejimleri. |
CA2647100A1 (en) * | 2006-03-23 | 2007-09-27 | Novartis Ag | Methods for the preparation of imidazole-containing compounds |
WO2007109812A2 (en) | 2006-03-23 | 2007-09-27 | Novartis Ag | Immunopotentiating compounds |
ES2536426T3 (es) | 2006-03-23 | 2015-05-25 | Novartis Ag | Compuestos de imidazoquinoxalina como inmunomoduladores |
US8808707B1 (en) | 2006-05-08 | 2014-08-19 | Wyeth Llc | Pneumococcal dosing regimen |
EP2035035A2 (en) | 2006-06-09 | 2009-03-18 | Novartis AG | Immunogenic compositions for streptococcus agalactiae |
ES2658851T3 (es) | 2006-08-07 | 2018-03-12 | President And Fellows Of Harvard College | Vacunas de matriz de proteína y métodos de preparación y administración de tales vacunas |
CN101553246B (zh) * | 2006-08-07 | 2019-05-21 | 哈佛大学校长及研究员协会 | 蛋白质基质疫苗及这种疫苗的制备和给药方法 |
NZ575273A (en) | 2006-09-07 | 2012-02-24 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method for making combination vaccine comprising inactivated poliovirus type 1, diptheria toxoid and tetanus toxoid |
GB0700136D0 (en) | 2007-01-04 | 2007-02-14 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process for manufacturing vaccines |
GB0700562D0 (en) | 2007-01-11 | 2007-02-21 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modified Saccharides |
CN101631794B (zh) * | 2007-01-18 | 2013-01-02 | 建新公司 | 包含氨基氧基基团的寡糖及其轭合物 |
US20100074918A1 (en) | 2007-05-02 | 2010-03-25 | Jan Poolman | Vaccine |
NZ581367A (en) | 2007-06-04 | 2012-05-25 | Novartis Ag | Formulation of meningitis vaccines containing haemophilus influenzae and neisseria meningitidis |
EP2167121B1 (en) | 2007-06-26 | 2015-09-02 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates |
RU2471497C2 (ru) | 2007-09-12 | 2013-01-10 | Новартис Аг | Мутантные антигены gas57 и антитела против gas57 |
GB0818453D0 (en) | 2008-10-08 | 2008-11-12 | Novartis Ag | Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom |
CN101977926B (zh) | 2007-12-21 | 2014-10-08 | 诺华股份有限公司 | 链球菌溶血素o的突变形式 |
HUE029265T2 (en) | 2008-10-27 | 2017-02-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Method of purifying carbohydrates from the group streptococci |
GB0822633D0 (en) | 2008-12-11 | 2009-01-21 | Novartis Ag | Formulation |
US8585505B2 (en) | 2008-12-15 | 2013-11-19 | Tetris Online, Inc. | Inter-game interactive hybrid asynchronous computer game infrastructure |
LT2889043T (lt) | 2008-12-16 | 2019-07-10 | Genzyme Corporation | Sintetiniai tarpiniai junginiai oligosacharido-baltymo konjugatų gamybai |
WO2010079464A1 (en) | 2009-01-12 | 2010-07-15 | Novartis Ag | Cna_b domain antigens in vaccines against gram positive bacteria |
US9050283B2 (en) | 2009-01-16 | 2015-06-09 | University Of Maryland, Baltimore | Broad spectrum vaccine against non-typhoidal Salmonella |
US20120135037A1 (en) | 2009-06-01 | 2012-05-31 | Mizel Steven B | Flagellin fusion proteins and conjugates comprising pneumococcus antigens and methods of using the same |
US8647621B2 (en) | 2009-07-27 | 2014-02-11 | Fina Biosolutions, Llc | Method of producing protein-carbohydrate vaccines reduced in free carbohydrate |
BR112012009014B8 (pt) | 2009-09-30 | 2022-10-04 | Novartis Ag | Processo para preparar conjugado de polissacarídeo capsular de s. aureus tipo 5 ou tipo 8 e molécula de transporte crm197, conjugado e composição imunogênica |
GB0917647D0 (en) | 2009-10-08 | 2009-11-25 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Expression system |
EP3199177A1 (en) | 2009-10-30 | 2017-08-02 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Purification of staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular saccharides |
MX2012006961A (es) | 2009-12-17 | 2012-10-03 | Fina Biosolutions Llc | Reactivos quimicos para la activacion de polisacaridos en la preparacion de vacunas conjugadas. |
JP5781542B2 (ja) | 2009-12-30 | 2015-09-24 | ノバルティス アーゲー | E.coliキャリアタンパク質に結合体化した多糖免疫原 |
GB201003922D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Conjugation process |
GB201003924D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
JP2013521326A (ja) | 2010-03-10 | 2013-06-10 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 免疫原性組成物 |
JP2013522287A (ja) | 2010-03-18 | 2013-06-13 | ノバルティス アーゲー | 血清群b髄膜炎菌のためのアジュバント添加ワクチン |
JP2013529894A (ja) | 2010-04-07 | 2013-07-25 | ノバルティス アーゲー | パルボウイルスb19のウイルス様粒子を生成するための方法 |
US20130116423A1 (en) | 2010-04-23 | 2013-05-09 | A. Stewart Campbell | Synthetic Oligosaccharides for Staphylococcus Vaccine |
NZ602971A (en) | 2010-04-23 | 2014-11-28 | Serum Inst India Ltd | Simple method for simultaneous removal of multiple impurities from culture supernatants to ultralow levels |
US8716469B2 (en) | 2010-04-27 | 2014-05-06 | Ancora Pharmaceuticals, Inc. | Synthetic oligosaccharides for Moraxella vaccine |
WO2011149778A1 (en) | 2010-05-26 | 2011-12-01 | Ancora Pharmaceuticals Inc. | Synthetic oligosaccharides for neisseria meningitis vaccine |
WO2012006293A1 (en) | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Novartis Ag | Norovirus derived immunogenic compositions and methods |
GB201015132D0 (en) | 2010-09-10 | 2010-10-27 | Univ Bristol | Vaccine composition |
GB201101665D0 (en) | 2011-01-31 | 2011-03-16 | Novartis Ag | Immunogenic compositions |
EP2655389A2 (en) | 2010-12-24 | 2013-10-30 | Novartis AG | Compounds |
CN102068690A (zh) * | 2010-12-31 | 2011-05-25 | 北京民海生物科技有限公司 | 多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗及其制备方法 |
CN103533954B (zh) | 2011-03-02 | 2015-09-09 | 诺华股份有限公司 | 含较低剂量的抗原和/或佐剂的联合疫苗 |
EP2691431B1 (en) | 2011-03-29 | 2017-06-21 | Covestro Deutschland AG | Use of an aqueous preparation for the coating of wood surfaces to achieve a natural-touch effect |
WO2012130764A1 (en) | 2011-03-29 | 2012-10-04 | Bayer Materialscience Ag | Use of an aqueous preparation for the coating of wood surfaces to achieve a natural-touch effect |
GB201106225D0 (en) | 2011-04-13 | 2011-05-25 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Fermentation process |
CN103764171B (zh) | 2011-07-08 | 2016-08-17 | 诺华股份有限公司 | 酪氨酸连接方法 |
US10030052B2 (en) | 2011-07-25 | 2018-07-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Parvovirus Vp1 unique region polypeptides and compositions thereof |
EP2755683B1 (en) | 2011-09-14 | 2019-04-03 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Methods for making saccharide-protein glycoconjugates |
WO2013068949A1 (en) | 2011-11-07 | 2013-05-16 | Novartis Ag | Carrier molecule comprising a spr0096 and a spr2021 antigen |
DE102011118371B4 (de) | 2011-11-11 | 2014-02-13 | Novartis Ag | Zur Impfung von Menschen geeignete Zusammensetzung, die ein Diphtherie-Toxoid umfasst, sowie Verfahren zu deren Herstellung |
EP2592137A1 (en) | 2011-11-11 | 2013-05-15 | Novartis AG | Fermentation media free of animal-derived components for production of diphtheria toxoids suitable for human vaccine use |
GB2495341B (en) | 2011-11-11 | 2013-09-18 | Novartis Ag | Fermentation methods and their products |
DE102011122891B4 (de) | 2011-11-11 | 2014-12-24 | Novartis Ag | Fermentationsmedium, das frei von tierischen Bestandteilen ist, zur Herstellung von Diphtherie-Toxoiden zur Verwendung bei der Impfung von Menschen |
GB201121301D0 (en) | 2011-12-12 | 2012-01-25 | Novartis Ag | Method |
JP2015509963A (ja) | 2012-03-08 | 2015-04-02 | ノバルティス アーゲー | Tlr4アゴニストを含む混合ワクチン |
SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
MX2014014067A (es) | 2012-05-22 | 2015-02-04 | Novartis Ag | Conjugado de serogrupo x de meningococo. |
KR102057217B1 (ko) | 2012-06-20 | 2020-01-22 | 에스케이바이오사이언스 주식회사 | 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물 |
CA2882619A1 (en) | 2012-09-06 | 2014-03-13 | Novartis Ag | Combination vaccines with serogroup b meningococcus and d/t/p |
ES2672996T3 (es) | 2012-10-02 | 2018-06-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Conjugados de sacáridos no lineales |
SG10201702685WA (en) | 2012-10-03 | 2017-04-27 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
MX2015004652A (es) | 2012-10-12 | 2015-08-05 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Antigenos de pertusis acelulares no entrelazados para uso en vacunas de combinacion. |
KR20140075196A (ko) | 2012-12-11 | 2014-06-19 | 에스케이케미칼주식회사 | 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물 |
EP2743695A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-18 | Nanogap Sub NM Powder, S.A. | Methods and reagents for the detection of biomolecules using luminescence |
JP2016502994A (ja) | 2012-12-18 | 2016-02-01 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ジフテリア及び/又は破傷風から防御するためのコンジュゲート |
SI3363806T1 (sl) * | 2012-12-20 | 2023-04-28 | Pfizer Inc. | Postopek glikokonjugacije |
ITMI20130142A1 (it) * | 2013-01-31 | 2014-08-01 | Biosynth Srl | Vaccini glicoconiugati comprendenti unita' di base di un costrutto molecolare esprimente epitopi multipli incorporati |
BR112015021523A8 (pt) | 2013-03-08 | 2021-06-29 | Crucell Holland Bv | composição de uma vacina contra a tosse convulsa acelular, e, usos da composição e de antígenos da bordetella pertussis |
KR102250099B1 (ko) * | 2013-07-07 | 2021-05-10 | 막스-플랑크-게젤샤프트 츄어 푀르더룽 데어 비쎈샤프텐 에.파우. | 스트렙토코커스 뉴모니에 1형에 대한 합성 백신 |
JP6739333B2 (ja) | 2013-07-11 | 2020-08-12 | ノバルティス アーゲー | 部位特異的化学酵素的タンパク質修飾 |
CA2923129C (en) | 2013-09-08 | 2020-06-09 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
MX2020001138A (es) * | 2014-01-21 | 2021-09-30 | Pfizer | Polisacaridos capsulares de streptococcus pneumoniae y conjugados de los mismos. |
US9988426B2 (en) | 2014-09-18 | 2018-06-05 | University Of Maryland, Baltimore | Broad spectrum conjugate vaccine to prevent Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa infections |
US9815886B2 (en) | 2014-10-28 | 2017-11-14 | Adma Biologics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency |
JP2017537145A (ja) | 2014-11-05 | 2017-12-14 | ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ アズ レプレゼンティッド バイ ザ セクレタリー オブ ザ ネイビーThe United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | カンピロバクター・ジェジュニに対する合成抗原コンストラクト |
US10500261B2 (en) | 2014-11-05 | 2019-12-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Synthetic antigen constructs against campylobacter jejuni |
EP3034516A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-22 | Novartis AG | Purification of streptococcal capsular polysaccharide |
GB201518684D0 (en) | 2015-10-21 | 2015-12-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
EP3377098A1 (en) * | 2015-11-20 | 2018-09-26 | Pfizer Inc | Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines |
GB201610599D0 (en) | 2016-06-17 | 2016-08-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic Composition |
EP3269385A1 (en) | 2016-07-12 | 2018-01-17 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
EP3474890A1 (en) | 2016-06-22 | 2019-05-01 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften E. V. | Pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
KR102388325B1 (ko) | 2016-10-20 | 2022-04-18 | 케이엠 바이올로직스 가부시키가이샤 | 저분자화 PRP를 사용한 Hib 컨쥬게이트 백신의 제조방법 |
EP3551668A1 (en) | 2016-12-06 | 2019-10-16 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Purification process for capsular polysaccharide |
PE20191107A1 (es) | 2017-01-31 | 2019-08-26 | Pfizer | Composiciones de neisseria meningitidis y metodos respectivos |
KR20190108583A (ko) | 2017-01-31 | 2019-09-24 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | 다당류-단백질 접합체 제조 방법 |
US10259865B2 (en) | 2017-03-15 | 2019-04-16 | Adma Biologics, Inc. | Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection |
AU2019215216A1 (en) | 2018-02-05 | 2020-07-23 | Sk Bioscience Co., Ltd. | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
CN111989114A (zh) * | 2018-04-18 | 2020-11-24 | Sk生物科学株式会社 | 肺炎链球菌的荚膜多糖以及其免疫原性缀合物 |
CN112673054A (zh) | 2018-07-19 | 2021-04-16 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 用于制备干燥多糖的方法 |
WO2020043874A1 (en) | 2018-08-31 | 2020-03-05 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Conjugated haemophilus influenzae vaccine using bordetella outer membrane vesicle |
US20220054632A1 (en) | 2018-12-12 | 2022-02-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified carrier proteins for o-linked glycosylation |
EP3923982A1 (en) | 2019-02-11 | 2021-12-22 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidiscompositions and methods thereof |
EP3757217A1 (en) | 2019-06-27 | 2020-12-30 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Methods for protein purification |
EP3777884A1 (en) | 2019-08-15 | 2021-02-17 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
MX2022003682A (es) | 2019-09-27 | 2022-04-25 | Pfizer | Composiciones de neisseria meningitidis y metodos de las mismas. |
EP3799884A1 (en) | 2019-10-01 | 2021-04-07 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic compositions |
EP3900739A1 (en) | 2020-04-21 | 2021-10-27 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Synthetic streptococcus pneumoniae saccharide conjugates to conserved membrane protein |
EP3919076A1 (en) | 2020-06-02 | 2021-12-08 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Synthetic oligosaccharide vaccines against streptococcus pneumoniae with microparticle adjuvant formulations |
EP4164681A1 (en) | 2020-06-12 | 2023-04-19 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Bacterial immunization using nanoparticle vaccine |
US20230226175A1 (en) | 2020-06-25 | 2023-07-20 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified exotoxin a proteins |
JP2023548935A (ja) | 2020-11-13 | 2023-11-21 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 新規担体及びコンジュゲーション法 |
WO2023111826A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-22 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Bacterial immunization using qbeta hairpin nanoparticle constructs |
WO2023200704A1 (en) | 2022-04-11 | 2023-10-19 | Sanofi Pasteur Inc. | Protein-saccharide conjugation with sodium cyanoborohydride |
GB202215414D0 (en) | 2022-10-18 | 2022-11-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccine |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4057685A (en) * | 1972-02-02 | 1977-11-08 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
US4314988A (en) * | 1979-10-31 | 1982-02-09 | Baker Instruments Corp. | Folic acid derivatives and process for preparation |
US4356170A (en) * | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
US4619828A (en) * | 1982-07-06 | 1986-10-28 | Connaught Laboratories, Inc. | Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines |
US4557931A (en) * | 1982-12-02 | 1985-12-10 | Regents Of The University Of California | Antigenic compositions and methods for using same |
US4663160A (en) * | 1983-03-14 | 1987-05-05 | Miles Laboratories, Inc. | Vaccines for gram-negative bacteria |
US4761283A (en) * | 1983-07-05 | 1988-08-02 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates |
US4808700A (en) * | 1984-07-09 | 1989-02-28 | Praxis Biologics, Inc. | Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers |
NZ214503A (en) * | 1984-12-20 | 1990-02-26 | Merck & Co Inc | Covalently-modified neutral bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates |
IT1187753B (it) * | 1985-07-05 | 1987-12-23 | Sclavo Spa | Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente |
NZ223009A (en) * | 1986-12-31 | 1990-06-26 | Nl Rivm Of Thoven | Oligosaccharides containing d-ribose d-ribitol and phosphate units mimicing haemophilus influenzae type b antigens |
US5153312A (en) * | 1990-09-28 | 1992-10-06 | American Cyanamid Company | Oligosaccharide conjugate vaccines |
-
1990
- 1990-09-28 US US07/590,649 patent/US5153312A/en not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-08-06 EP EP91113163A patent/EP0477508B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-06 AT AT91113163T patent/ATE124868T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-08-06 DE DE69111168T patent/DE69111168T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-08-07 IL IL9911991A patent/IL99119A/en not_active IP Right Cessation
- 1991-08-29 TW TW080106853A patent/TW324664B/zh active
- 1991-09-20 NZ NZ239878A patent/NZ239878A/xx unknown
- 1991-09-24 JP JP3270517A patent/JP3027452B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-09-26 PT PT99067A patent/PT99067B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-09-26 CA CA002052323A patent/CA2052323C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-09-27 HU HU913103A patent/HU211210B/hu not_active IP Right Cessation
- 1991-09-27 CN CN91109424A patent/CN1034054C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1991-09-27 PL PL91291855A patent/PL169926B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1991-09-27 ZA ZA917771A patent/ZA917771B/xx unknown
- 1991-09-27 NO NO913812A patent/NO300759B1/no not_active IP Right Cessation
- 1991-09-27 CZ CS912969A patent/CZ285650B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-09-27 FI FI914564A patent/FI104046B1/fi not_active IP Right Cessation
- 1991-09-27 KR KR1019910016912A patent/KR100217317B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1991-09-27 IE IE339991A patent/IE71671B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-09-27 SK SK2969-91A patent/SK280112B6/sk unknown
- 1991-09-27 AU AU84833/91A patent/AU634663B2/en not_active Ceased
-
1992
- 1992-07-30 US US07/921,678 patent/US5306492A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0477508B1 (en) | Improved oligosaccharide conjugate vaccines | |
Paoletti et al. | Effects of chain length on the immunogenicity in rabbits of group B Streptococcus type III oligosaccharide-tetanus toxoid conjugates. | |
AU601742B2 (en) | Immunogenic conjugates | |
Schneerson et al. | Preparation, characterization, and immunogenicity of Haemophilus influenzae type b polysaccharide-protein conjugates. | |
US5360897A (en) | Immunogenic conjugates of streptococcus pneumonial capsular polymer and toxin or in toxiad | |
Chu et al. | Further studies on the immunogenicity of Haemophilus influenzae type b and pneumococcal type 6A polysaccharide-protein conjugates | |
Beuvery et al. | Comparison of the induction of immunoglobulin M and G antibodies in mice with purified pneumococcal type 3 and meningococcal group C polysaccharides and their protein conjugates | |
US4496538A (en) | Haemophilus influenzae b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccine | |
Chu et al. | Preparation, characterization, and immunogenicity of conjugates composed of the O-specific polysaccharide of Shigella dysenteriae type 1 (Shiga's bacillus) bound to tetanus toxoid | |
Lagergard et al. | Synthesis and immunological properties of conjugates composed of group B streptococcus type III capsular polysaccharide covalently bound to tetanus toxoid | |
US4711779A (en) | Glycoproteinic conjugates having trivalent immunogenic activity | |
AU2005316864B2 (en) | Glycoconjugate vaccines containing peptidoglycan | |
JP4001625B2 (ja) | 2,5−アンヒドロ−d−マンノース末端構造を持つ、抗原性グループb連鎖球菌2型および3型多糖断片とその複合ワクチン | |
US5097020A (en) | Immunogenic conjugates | |
US4644059A (en) | Haemophilus influenzae B polysaccharide-diptheria toxoid conjugate vaccine | |
US4762713A (en) | Boosting of immunogenic conjugate vaccinations by unconjugated bacterial capsular polymers | |
US7247307B2 (en) | Vaccines against Escherichia coli O157 infection | |
Porro et al. | A molecular model of artificial glycoprotein with predetermined multiple immunodeterminants for gram-positive and gram-negative encapsulated bacteria | |
Pichichero et al. | Serum antibody responses of weanling mice and two-year-old children to pneumococcal-type 6A–protein conjugate vaccines of differing saccharide chain lengths | |
Svenson et al. | Artificial salmonella vaccines | |
Paoletti et al. | Group B Streptococcus type III glycoconjugate vaccines | |
AU767047B2 (en) | Vaccines against (escherichia coli) O157 infection | |
Liao et al. | Characterization of a human monoclonal immunoglobulin M (IgM) antibody (IgMBEN) specific for Vi capsular polysaccharide of Salmonella typhi | |
Chi-Jen Lee et al. | BACTERIAL POLYSACCHARIDES AS VACCINES-IMMUNITY AND CHEMICAL CHARACTERIZATION | |
Polysaccharide-Protein | Safety and Immunogenicity of Improved |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |