NL8800025A

NL8800025A - Gelyofiliseerde of geprecipiteerde cefalosporine zwitterion en zoutcombinatie.

Info

Publication number: NL8800025A
Application number: NL8800025A
Authority: NL
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1987-01-09
Filing date: 1988-01-07
Publication date: 1988-08-01
Also published as: GB2199746B; NL193266B; GR871860B; DK166404B1; CA1307464C; AU606361B2; SE467910B; SE8800036L; CY1679A; FR2609396A1; NL193266C; OA08796A; FI875122A; US4808617A; ATA341687A; BE1002114A3; HU199686B; IL84346A; SG114792G; HK5593A

Description

% VO 9408

Titel: Gelyofiliseerde of geprecipiteerde cefalosporine zwitterion en • zoutcombinatie.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op semi-synthetische cefalosporinesamenstellingen die bij verhoogde temperaturen stabiel zijn.

In het Amerikaanse octrooischrift 4.406.899 van Aburaki et al wordt 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-methoxyiminoacetamido]-3-5 [ (l-inethyl-l-pyrrolidinio}-methyl] -3-cephem-4-carboxylaat beschreven in de zwitterionvorm en worden overeenkomstige zuuradditiezouten vermeld.

Verder wordt getoond dat de zwitterionvorm een breder spectrumactiviteit dan ceftazidime en cefotaxime bezit.Naar het zwitterion wordt verwezen als 7-[(Z)-2-methoxyimino-2-(2-aminothiazol-4-y1)acetamido]-3-[(1-methyΙ-ΙΟ 1-pyrrolidinium)methyl]-3-cephem-4-carboxylaat.

Door Kessler et al., "Comparison of a New Cephalosporin, BMY-28142, with Other Broad-Spectrum β-Lactam Antibiotics", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 27, No. 2, biz. 207-216, februari 1985 wordt het sulfaatzout genoemd.

15 In een op 5 augustus 1985 ingediende Amerikaanse octrooiaanvrage 762.235 van Kaplan et al worden verscheidene zuuradditiezouten genoemd.

Het zwitterion en de zuuradditiezouten daarvan zijn gedurende ongeveer 8-16 uur als injecteerbare preparaten in waterige oplossing bij 24°C stabiel. Het zwitterion is zelfs als droog poeder instabiel 20 bij kamertemperatuur en verliest 30% of meer van zijn activiteit wanneer het bij verhoogde temperaturen (bijvoorbeeld 45°C en hoger) gedurende zelfs maar één week wordt bewaard en moet dan ook voor een adequate stabiliteit bij -30°C worden bewaard. Het kan derhalve niet geschikt worden geacht voor gebruik onder normale gekoelde condities zoals de 25 condities die voor geneesmiddelen ter beschikking staan.

Hoewel de bovengenoemde zuuradditiezouten een betere tempera-tuurstabiliteit in de vorm van een droog poeder bezitten dan het zwitterion, zijn zij te zuur voor intramusculaire en intraveneuze toepassing en moeten derhalve met basen en/of buffers op een pH van 3,5 - 6,5 voor 30 een dergelijk gebruik worden samengesteld.

Thans is gevonden dat de amorfe vaste stof, die gevormd wordt door lyofilisatie of co-solvensprecipitatie van een waterige oplossing 8 c ί ~ ' '· .· # V w» v* * - 2 - van het zwitterion, dat wil zeggen 7-[a-(2-amino-thiazol-4-yl)-α-(Z)-methoxyiminoacetamido]-3-[(l-methyl-l-pyrrolidinio)-methyl]-3-cephem- 4-carboxylaat zwitterion, en een zout of mengsel van twee of meer zouten, gekozen uit een bepaalde groep, de brede spectrumantibioticumactiviteit 5 van het zwitterion behoudt maar een betere temperatuurstabiliteit in de vorm van een droog poeder bezit en bij verdunning tot injecteerbare concentraties een pH geeft van ongeveer 3,5 tot ongeveer 7 en daardoor geschikt is voor gebruik voor intramusculaire en intraveneuze injectie zonder dat buffers of basen worden gebruikt.

10 De volgens de uitvinding te gebruiken zouten zijn die waarin het kation gekozen wordt uit de groep bestaande uit natrium, lithium, calcium, en magnesium, en het anion gekozen wordt uit de groep bestaande uit chloride, bromide en jodide. De zouten worden gekozen om een amorf vast produkt te verkrijgen met een zodanige temperatuurstabiliteit 15 dat het minder dan ongeveer 15 - 20% van zijn activiteit verliest bij bewaren in de vorm van een droog poeder gedurende 2-4 weken bij 45°C (1—2 weken bij 56°C), zoals bepaald met behulp van een HPLC-test.

De molverhouding van zwitterion tot zout in de aan lyofilisatie of aan co-solvensprecipitatie onderworpen oplossing varieert van onge-20 veer 0,5 : 1 tot ongeveer 2:1.

De samenstellingen volgens de uitvinding omvatten zowel de sul-faatvrije vorm als de sulfaatvorm.

Een geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vaste stof, gevormd uit zwitterion en natriumchloride. Een meer geprefereerde samen-25 stelling omvat de bovengenoemde vaste stof, waarin het zwitterion en het natriumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van 1:1. Een nog meer geprefereerde samenstelling omvat de bovenstaand beschreven samenstelling met een molverhouding van 1:1, gevormd door lyofilisatie van een waterige oplossing van het zwitterion en natriumchloride.

30 Een andere geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vaste stof, gevormd uit zwitterion en calciumchloride. Meer geprefereerde samenstellingen omvatten de bovengenoemde vaste stof waarin het zwitterion en het calciumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van 1 : 0,5 of 1 : 1. Nog meer geprefereerde samenstellingen omvatten de 35 bovenstaand beschreven 1 : 0,5 en 1 : 1 samenstellingen, gevormd door . fc : * - 3 - lyofilisatie van een waterige oplossing van het zwitterion en calcium-chloriöe.

Andere geprefereerde samenstellingen omvatten amorfe vaste stoffen, gevormd uit zwitterion en een mengsel van natriumchloride en 5 calciumchloride.

Een meest geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vaste stof, gevormd uit zwitterion, calciumchloride en natriumchloride waarbij het zwitterion, het calciumchloride en het natriumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van (a) 1 : 0,5 : 0,5 of (b) 1 : 0,1 - 0,2 : 10 0,8-1,0. Het liefst is een dergelijke vaste stof verkregen door lyofilisatie van een waterige oplossing van zwitterion, calciumchloride en natriumchloride.

1 Een meest geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vasté stof gevormd (liefst door lyofilisatie) uit zwitterion, calciumchloride 15 en natriumchloride waarbij het zwitterion, het calciumchloride en het natriumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van 1 : 0,2 : 1.

Deze vaste stof blijkt de beste combinatie van stabiliteit als droog poeder en in waterige oplossing alsmede farmaceutische aanvaardbaarheid te bezitten. In het bijzonder bezit hij een uitstekende stabiliteit als 20 droog poeder bij kamertemperatuur en bij verhoogde temperaturen en heeft hij tevens medisch aanvaardbare calciumgehaltes voor gebruik bij de mens.

Een ander meest geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vaste stof, gevormd (liefst door lyofilisatie) uit zwitterion, calciumchloride en natriumchloride waarbij het zwitterion, het calciumchloride 25 en het natriumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van 1 : 0,5 : 0,5. Deze vaste stof blijkt zowel in de vorm van een droog poeder als bij reconstitutie een uitstekende stabiliteit te bezitten.

De hier gebruikte terminologie "co-solvensprecipitatie” duidt op toevoeging van een non-solvens aan een waterige oplossing van 30 zwitterion en zout waardoor deze gezamenlijk precipiteren (co-precipi-tatie).

De hier gebruikte terminologie "droog poeder" duidt op een vochtgehalte van minder dan 5 gew.%.

Wanneer bij het beschrijven van samenstellingen binnen de om-35 vang van de uitvinding de terminologie "temperatuurstabiel" wordt , b 4 - 4 - gebruikt, wordt gedoeld op een zodanige temperatuursstabiliteit dat minder dan ongeveer 15 - 20% activiteit verloren gaat bij bewaren gedurende 2-4 weken bij 45°C in de vorm van een droog poeder (1-2 weken bij 56°C) zoals bepaald met een HPLC test.

5 De terminologie "zonder gebruik te maken van buffers of basen" betekent dat de vaste stof gereconstitueerd wordt met steriel water en/of zoutoplossing zonder dat de heersende pH verder met behulp van een pH instellende stof wordt bijgesteld.

Het voor het vormen van de hierin beschreven samenstellingen 10 gebruikte zwitterion beantwoordt aan de structuurformule 1 van het formuleblad. Dit zwitterion kan gemakkelijk worden bereid op de wijze die beschreven is in het Amerikaanse octrooischrift 4.406.899 van Aburaki et al.

Geschikte zouten voor gebruik in het vormen van de samenstel-15 lingen volgens de uitvinding omvatten bijvoorbeeld natriumchloride, natriumbromide, natriumjodide, lithiurachloride, lithiumjodide, calcium-chloride, calciumbromide, calciumjodide en magnesiumchloride.

De molverhouding van zwitterion tot zout varieert bij voorkeur van ongeveer 1 : 1 tot ongeveer 2 : 1 en bedraagt liefst ongeveer 20 1:1.

Gevonden is ook dat geschikte samenstellingen gevormd kunnen worden uit mengsels van de vermelde zouten alsmede uit de individuele zouten op zichzelf. De stabiliteitseigenschappen van dergelijke samenstellingen zullen ergens tussen de stabiliteiten van de samenstellingen, 25 gevormd uit de individuele zouten van het mengsel, gelegen zijn. Bijvoorbeeld kan een vaste stof worden bereid uit zwitterion, calciumchlo-ride en natriumchloride, en deze vaste stof zal stabiliteitseigenschappen hebben die gelegen zijn tussen die van de zwitterion:NaCl en de zwitterionsCaC^ samenstellingen. Gebruik van een mengsel kan voordelen 30 bieden wanneer men in hoge mate de gunstige stabiliteitseigenschappen van een zout wenst te realiseren maar om fysiologische redenen de hoeveelheid van het zout in de toedieningsvorm wilt beperken. Voor het bereiden van samenstellingen uit twee of meer zouten worden eenvoudigweg de zouten gebruikt in hoeveelheden waardoor de totale molverhouding 35 in het bovenstaand vermelde bereik ligt, dat wil zeggen het bereik van Ω (· ·- . n r * & ! - I' i - 5 - zwitterion:zout = 0,5 : 1 tot 2 : 1.

Zoals eerder opgemerkt wordt een voorkeurssamenstelling verkregen door lyofilisatie van een waterige oplossing van het zwitterion en natriumchloride in een molverhouding van 1:1. Deze samenstelling 5 heeft een IR dat niet significant verschilt van dat van het zwitterion.

Hij heeft echter een ontledingspunt volgens differentiële aftastcalorie-metrie met een exotherm bij ongeveer 197,4°C, vergeleken met 173,84°C voor het zwitterion, hetgeen wijst op de aanwezigheid van een andere verbinding dan het zwitterion. Zonder aan enige theorie gebonden te 10 willen zijn wordt vermoed dat de stof die aanwezig is, een complex is met Na+ dat het COO van het zwitterion neutraliseert en Cl dat door het N+ van het zwitterion is geneutraliseerd, dat wil zeggen een verbinding met de structuur volgens formule 2 van het formuleblad. In verband met deze theoretische speculatie, zal de hierin beschreven samenstelling, 15 gevormd uit een oplossing van zwitterion en natriumchloride in een molverhouding van 1:1, soms worden aangeduid als het zwitterion:NaCl - 1:1 complex, hoewel het bestaan van dit complex niet ondubbelzinnig is aangetoond.

Het zwitterion:NaCl 1 : 1 complex is farmaceutisch zeer aan-20 vaardbaar. Het heeft een breed spectrum antibioticumactiviteit die nagenoeg gelijk is aan die van het zwitterion. Het heeft een bevredigende stabiliteit in oplossing gedurende tenminste 24 uur bij 25°C (bij een concentratie van 250 mg/ml zwitterion in steriel water treedt minder dan 10% verlies in activiteit op zoals bepaald met HPCL), en heeft in tegen-25 stelling tot zwitterion een bevredigende stabiliteit bij verhoogde temperaturen in de vorm van een droog poeder (ongeveer 10% verlies bij bewaren gedurende 4 weken bij 45°C, zoals bepaald met HPLC) en een exceptionele stabiliteit in de vorm van een droog poeder bij normale koelkasttemperaturen (geen verlies in een periode van 6 maanden bij 4°C).

30 Gedurende een volledige 24 uur1s-periode na zijn reconstitutie tot een injecteerbare samenstelling (dat wil Zeggen na reconstitutie tot een injecteerbare concentratie), behoudt de injecteerbare samenstelling een bevredigende pH , dat wil zeggen van ongeveer 4,2 tot ongeveer 6,2 zonder gebruik van buffers of basen en is de samenstelling iets minder 35 toxisch dan het zwitterion.

c c 5 - 6 -

Thans zal de bereiding van de samenstellingen nader worden toegelicht.

Zoals eerder is aangegeven bestaat één methode voor het bereiden van de samenstellingen volgens de uitvinding uit het lyofiliseren 5 onder aseptische omstandigheden van een waterige oplossing van zwitterion en zout. Dit kan gemakkelijk worden uitgevoerd door bijvoorbeeld het zwitterion op te lossen in steriel water tot een concentratie van ongeveer 100 tot ongeveer 400 mg/ml, daarna de waterige zwitterion-oplossing in een vat te brengen dat voorzien is van een roerder en daar-10 mee te roeren, vervolgens het zout of mengsel van zouten in een hoeveelheid volgens de gekozen molverhouding toe te voegen en het roeren voort te zetten totdat het oplossen voltooid is, bijvoorbeeld ongeveer 15 minuten tot ongeveer 1 uur, vervolgens te filtreren, waarbij bij-' voorbeeld een gesteriliseerd filterinrichting wordt gebruikt, daarna 15 de gefiltreerde oplossing in flesjes te vullen en deze in lyofilisatie-bakken te plaatsen die in een lyofilisator worden gebracht, vervolgens bij -30 tot -40°C in te vriezen gedurende een periode van ongeveer 4 uur tot ongeveer 16 uur, daarna een vacuum van 10 tot 100 millitorr te creëren en de temperatuur in te stellen op -10 tot -20°C gedurende 15 20 tot 20 uur en vervolgens bij 20 tot 30°C gedurende 40 tot 60 uur, en sublimaat te condenseren in een condensor bij een temperatuur van bijvoorbeeld -40 tot -60°C.

Zoals eerder is aangegeven bestaat de andere methode voor het bereiden van de hier beschreven samenstellingen uit een co-solvens 25 precipitatie van een waterige oplossing van zwitterion en zout. Dit kan gemakkelijk onder aseptische condities worden uitgevoerd, bijvoorbeeld door een waterige oplossing te vormen op de wijze die bovenstaand in verband met de lyofilisatiemethode is beschreven, maar waarbij in plaats van lyofilisatie uit te voeren een non-solvens wordt bijgemengd 30 om het zwitterion-zoutcomplex te precipiteren en het precipitaat wordt afgescheiden en gedroogd. Normaal kan men vrijelijk kiezen of men de oplossing van zwitterion en zout toevoegt aan het non-solvens of het non-solvens toevoegt aan de oplossing van zwitterion en zout. Het precipitaat kan gemakkelijk worden afgescheiden, bijvoorbeeld door 35 filtratie waarbij een gesteriliseerd vacuumfilterinrichting wordt 15 ' - 7 - gebruikt. Het drogen kan gemakkelijk worden uitgevoerd door drogen onder hoog vacuum, bijvoorbeeld bij 40 tot 60°C. Het non-solvens is bij voorkeur aceton of isopropanol, maar kan elk farmaceutisch veilig non-solvens voor het zwitterion een zout zijn dat niet met deze stoffen 5 reageert.

De samenstellingen volgens de uitvinding worden gevormd tot injecteerbare samenstellingen door ze te verdunnen met steriel water en/of zoutoplossing tot een samenstelling met een zwitterionactiviteit basisconcentratie van ongeveer 1 tot ongeveer 400 mg/ml zoals bepaald 10 met HPLC tests, bij voorkeur ongeveer 2,5 tot ongeveer 250 mg/ml zoals bepaald met HPLC tests. Bij voorkeur wordt verdunning tot 250 mg/ml uitgevoerd met behulp van steriel water voor injectie, USP, en wanneer een verdere verdunning nodig is met behulp vein 0,9% natriumchloride-' injectie-vloeistof, USP. Voor intramusculaire of intraveneuze toediening 15 aan een volwassen mens, is normaliter een totale dosering van ongeveer 750 tot ongeveer 3000 mg per dag in onderverdeelde doses voldoende.

De hierin beschreven samenstellingen worden bij voorkeur vervoerd en bewaard in droge vorm onder normale koelkastcondities (bijvoorbeeld bij 4°C), waarbij ze voor tenminste 1-2 jaren voor meer dan 2Q 90% actief zouden moeten blijven. Ze worden gemakkelijk omgezet in injecteerbare samenstellingen door reconstitutie, bijvoorbeeld door een verpleegster of dokter, vlak voor gebruik.

De uitvinding wordt hier nader toegelicht aan de hand van de volgende uitvoeringsvoorbeelden.

25 VOORBEELD I

Synthese en testen van zwitterion:NaCl 1:1 complex

Aan een vat, voorzien van een roerder, werden 800 ml van een waterige oplossing toegevoegd, die 250 g zwitterion bevatte. Terwijl de roerder met middelmatige snelheid werd geroteerd, werd 30,41 g NaCl 30 toegevoegd om een molverhouding zwitterion:NaCl van 1 : 1 te verkrijgen. Water voor injectie USP werd toegevoegd qs tot 1 1. Het roeren van de oplossing werd vervolgens nog 15 minuten voortgezet en met tussenpozen van 5-10 minuten daarna totdat monsters, verkregen tussen de roer-perioden, geen significante hoeveelheid onopgeloste deeltjes meer ver- - 8 -

toonden. De verkregen oplossing werd overgebracht in een roestvrijstalen drukvat en werd daaruit onder toepassing van stikstofgasdruk gevoerd door een steriliserende filterinrichting, voorzien van een voorfilter en een steriliserend filter, in een schone gesteriliseerde hou-5 der. Vervolgens werden porties van 4 ml (met 1 g zwitterionactiviteit) aseptisch gevuld in glazen flesjes van 10 cm3. Na het vullen werden de flesjes op losse wijze afgesloten met lyofilisatiestoppen. De flesjes werden daarna in lyofilisatiebakken geplaatst die in een lyofilisator werden gebracht waarin het product gedurende 4 uur bij -30 tot -40°C

10 werd ingevroren. Daarna werd de condensor op de lyofilisator op -60°C t 3°C ingesteld en werd de vrieseenheid uitgeschakeld. Toen de conden-sortemperatuur een waarde van -50°C bereikte, werd de vacuumpomp aangezet. Nadat het vacuum een niveau van 200 micron had bereikt, werd de planktemperatuur ingesteld op -13°C - 3°C,welke temperatuur 16 - 18 uur

15 werd gehandhaafd. Daarna werd de planktemperatuur ingesteld op +25°C

+ en gedurende 48 uur werd een temperatuur van 25°C _ 2°C gehandhaafd.

De lyofilisator werd daarna geïnactiveerd en de flesjes werden verwijderd. Het product was een amorfe vaste stof welke gekarakteriseerd werd als zwitterion:NaCl 1 : 1 complex.

20 Analyse : berekend voor C.nH„^N.O-S^ClNa: %C, 42,34; %H, 4,49; 19 ^4 o o z %N, 15,59; %S, 11,90; %H20 (KF) , geen; %Na (sulf aathoudende as), 4,27; %C1, 6,58. Gevonden (gecorrigeerd voor ^O) : %C, 41,96; %H, 4,57; %N, 14,73; %S, 12,28; %H2<0 (KF) , 1,80; %Na (sulfaathoudende as), 3,15; %C1, 6,85.

25 Met IR werden geen significante verschillen waargenomen tussen het hier beschreven product en het zwitterion. Het ontledingspunt volgens differentiële aftastcaloriemetrie bleek echter bij meting een exotherm bij 197,4°C te zijn die duidelijk verschilde van die van het zwitterion (173,84°C), hetgeen erop duidde dat het verkregen product 30 een van het zwitterion verschillende verbinding is.

In essentie hetzelfde product werd verkregen door 10 - 20 volu-mehoeveelheden isopropanol toe te voegen aan de schone gesteriliseerde houder die de waterige oplossing van zwitterion en natriumchloride bevatte, onder vorming van een precipitaat, het precipitaat met behulp • 6 V. i - 9 - van vacuumfiltratie af te scheiden, het precipitaat te wassen met iso-propanol en bij hoogvacuum te drogen waarbij een product werd verkregen in hoofdzaak droge vorm»

Voor een evaluatie van de breedspectrumactiviteit van het hier 5 verkregen product, werden de minimale remmende concentraties (MIC's) van het beschreven product en van het zwitterion bepaald met behulp van de tweevoudige seriegewijze agaroplossingsmethode in Mueller-Hinton agar en de gegevens zijn in onderstaande tabel A verzameld (hierin duidt de kolom Bristol A No. een bepaalde microörganismestam aan).

t .8600025

- 10 -rH

Ο 55 S ·· rt CP vo οο να να να να OE ho inHrovo HWHfOHinrt •ho ο ο να m in ο ο ο ooooqmo h Ο · ·Η *ΗΗΗ · « *Η · ♦ » ♦ · · ·ΗΜ 41 0 0.0 οοο οοοοοοο Ρ f-i Ρ ·· •Η «Η * Ν

C

Ο •Η ρ να οο να να να να οα οο 4) ΗΟ ιηΗΗΗ HrtOrtOrtrt’ Ρ οονοιη NooomoooooHoin Ρ · ·Η · Η «Η Η *·········· · <Ν mri οο ο ^οοοοοοοοοοοο •Η Μ ^ 7 θ' «Η οο βί ΑΦΗ α άνηθον «(ο g Ο ^ ιη'ί·α3Γ'Γ^νααν.Η’^·'ί·νασννοοΐΛιΛίΝ*Η<ηίΝ ν- ρ I «οΦπηοΦΗηνί'ίΐηίΛοιηι-ρτο'ί'α

< W I iAvaominvaoinovoovavo0\rHm(Nooo/H

," -η 3 avaviNaimmn^cscrvcicncnovfNrHiNfNmiS

CP <ΰ Λ < ι< μ · Β S υ · § ο V) α> α> υ «Μ « Η s β Ρ · ΙΛ Λ Μ «Λ 4) Ρ 4) 4» « «4 W « Ο • \ fjfi · XJ 4 4

4» Ο C Ρ 4)4) WWW

4 in β) αι 44 ω c ο ο

•Η ΙΑ W + Λ χ ·Η ·Η ·Η (Λ ·Η ·Η a) G C

C 4) ·Η \ W Π C 4) 4) rl ·Η ·Η Ρ Ο ·Η ·Η Ο C rl V) V) 1/1 VI 0O44*HPG4)W0>lft

Ë 4) 4 3 3 CJ Π t=nUUP44Cïv(UPP

3 Ο» ü 4) 4) 4) 4) ·Η ·Η Si Ρ 4 4 lil Ο* 0» Ρ Ο Ρ Ρ 4) Ο 4) Ρ Ρ Ρ Ρ ιΗ γ-Ι 4> 4) Ο Ο Ρ «-Ι Ρ Ρ Ρ 4) 4) G >% 4 Ρ Ρ Ρ Ρ Ο 0 G Π Η Η ·Η Ρ Ο 4) 4 4 4 ρ, am 4444οοΡιΡι υ υ ë > fi ρ 0 • · • · · * ......«*·«·«·· W V) (Λ (Λ ΙΛ V) W (Ο 10 Η Μ 14 Ui Μ Μ At At 1’. A* 10 At At ....... · · ο Η N n s’ ιΛ Ό h ω o> o HMM'iVPOfMOdlrlrlHHHHrlHrlHn 8r f- ?v Ί E <· 8J *' ; ·· - - 11 - . De bovenstaand versterkte gegevens laten zien dat het hier gevormde product, dat wil zeggen het zwitterion :NaCl 1 : 1 complex nagenoeg een equivalente microbiologische activiteit bezit, in vergelijking tot zwitterion. In het Amerikaanse octrooischrift 4.406.899 van 5 Aburaki et al is aangetoond dat zwitterion een breedspectrumactiviteit heeft, vergeleken met ceftazidime en cefotaxime.

De toxociteit van het zwitterion:NaCl 1 : 1 complex werd getest door toediening in de vorm van een enkele intraveneuze bolusinjectie aan Sprague-Dawley ratten. De LD voor gecombineerde gegevens van 50 10 twee onderzoeken was 796 mg/kg met 95% betrouwbaarheidsgrenzen tussen 759 en 832 mg/kg. Dit kan worden vergeleken met een van 669 mg/kg met 95% betrouwbaarheidsgrenzen van 618 en 732 mg/kg voor het zwitterion. De responskrommen waren parallel, maar de sterkteverhouding wees erop dat het hier beschreven product iets minder toxisch was dan het 15 zwitterion.

Stabiliteiten bij verhoogde temperaturen werden bepaald door het zwitterion:NaCl 1:1 complex en het zwitterion in de vorm van een droog poeder te bewaren en de sterkteverliezen met HPLC te bepalen.

De sterkteverliezen zijn in onderstaande tabel B vermeld. De vermelding van een bereik duidt op de uiterste waarden in meerdere proeven.

.860002* - 12 - Η °.

(J η Λ X Λ _ kj Ζ 0) <Λ Ο c π <« "> d* ο cn uj α> Γ' Μ^° Ο § ? « V°rJV <su>o "Λ* η μ Q ο C ΗΡΧΟ (Α ΙΟ Η Ok UI β Η . d Η Ν Η Ν 1*1 0\ 4) +· Η 4·» ..

•Η 1-4 Ν Μ (I) •Η r-i u 0)' >

ÓP R

* Ο •Η VI ,-Ι VO V Γ4 ΓΊ 0) . · · · · Ο σ> -μ -φ γΗ σι «»· νο ιη ο ο -Μ ρ» ί· μ<ιίλ ^ 2 ·£ Ώ ί*

CQ

•U

J ·Η W 0) CQ 4-> < ·Η Ε-1 ·—ι •Η

-Q

<0

-U

Μ

C C

α) α c α)

ι Τ3Τ3 Tl C 11 1300)¾ CC CÖ CG

ι C a ¢1 1) Μ C 1) Ai C X V Ο X Ο Ο i 0) 0) Ό ns ns to χ α) <β .¾ ο> <ο α χ χ ο λ* λ; ρ θ' t' ö' •ΓΊ <0 <0 <0 0) 3 <0 0) 3 <0 0)(1)0) Φ0)0) <003(0 <0 Ί=» SS SS SS S SS3 333 13¾¾ ¾

00 (N

Η ΙΛ Η ΙΛ H r) ΙΛ H «r rlN^ r-i C**r rH Cl ΓΊ ·"* I I · · · * * 3 U (J L> · O U <-* u 3 0 * O » ® 0 0

« in r* m VO o O

Ή fsj η Μ* m r» o

0 . H

& 0) . 8 e o c c s t - 13 -

De stabiliteit in waterige oplossing werd voor het zwitterion:NaCl 1 : 1 complex bepaald door reconstitutie in verscheidene concentraties en bewaren bij 25°C gedurende de vermelde tijdsperiode. De reconstitutie tot 250 mg/ml (nominaal) werd uitgevoerd 5 met steriel water voor injectie ÜSP. Een verdere verdunning werd uitgevoerd met 0,9% waterig NaCl. De gegevens staan in onderstaande tabel C waarin een bereik duidt op de uiterste waarden in meerdere proeven.

TABEL C

.Stabiliteit in waterige oplossing.

10 concentratie Tijd (ma/ml) (uren) % resterend. £Ë 250 0 5.04-5.22 3 100-102 5.03-5.24 6 100-101 5.03-5.24 15 24 52.7-96.0 5.14-5.39 50 ' 0 5.0-5.17 3 99.4 5.07-5.31 6 97-99.4 5.06-5.31 24 93.2-94.7 5.30-5.60' 20 10 0 4.94-5.12 3 99.5-100.1 5.05-5.34 6 99.3-99.4 5.11-5.47 24 95.2-97.0 5.44-5.78 2.5 0 5.00-5.19 25 3 100.0 5.28-5.66 6 99.6-100.0 * 5.47-5.92 24 96.2-96.8 5.87-6.18

De stabiliteitsgegevens tonen een bevredigende stabiliteit in waterige oplossing gedurende tenminste 24 uur bij 25°C (kamertempera-30 tuur).

.· -05 ·. v- 3 - 14 -

VOORBEELD II

Synthese en testen van samenstelling uit zwitterion en calciumchloride.

4,6 g zwitterion werd opgelost in 14 ml water voor injectie dat 950 mg CaCl2 bevatte (1 mol equivalent) , 5 De verkregen oplossing werd door een 0,22 micron steriel filter gevoerd.

Het filtraat werd onder aseptische condities onder snel roeren in een testperiode van 5 minuten toegevoegd aan 400 ml absolute ethanol. Een amorf precipitaat vormde zich. Het mengsel werd gedurende 0,5 uur 10 gesuspendeerd.

De vaste stoffen werden door vacuumfiltratie afgescheiden en gewassen met 40 ml ethanol dat aan het filtraat werd toegevoegd (dat hierin als filtraat A wordt aangeduid).

De met ethanol bevochtigde vaste stoffen werden in 0,5 uur in 15 100 ml absolute ethanol gesuspendeerd. De verkregen amorfe vaste stoffen werden door vacuumfiltratie afgescheiden, gewassen met 20 ml ethanol,

50 ml ether en vervolgens onder hoogvacuum gedurende vier uur bij 50°C

gedroogd, waarbij 2,2 g product werd verkregen dat zwitterion en

CaCl·^ bevatte in een molverhouding van ongeveer 2:1.

20 Analyse: berekend voor C. Η N O S (Cl,Ca) · %c, 42,56; %H, 4,51; iy λ4 o j ^ £ o r5 %N, 15,68; %S, 11,96; %C1, 6,6; %Ca als as, 3,73; gevonden: %C, 38,4; %H, 4,85; %N, 13,76; %S, 8,82; %C1, 5,44; %Ca als as, 3,59; %H20 (KF), 7,79, gevonden (op droge basis): %C, 41,65; %N,14,92; %S, 9,57; 25 %C1, 5,9; %Ca als as, 3,89.

Het bovenvermelde filtraat A werd onder verminderde druk bij 35°C tot 30 ml geconcentreerd. Een zeer dicht kübusachtig microdeeltje zonder dubbele breking werd verkregen.

De dichte vaste stoffen werden door vacuumfiltratie afgeschei-30 den, gewassen met 15 ml absolute ethanol en daarna met 20 ml ether en op de bovenstaand beschreven wijze gedroogd waarbij 2,0 g amorf vast product werd verkregen met een zwitterion:CaCl2 molverhouding van ongeveer 1,5 : 1 (sesqui-zwitterion).

, 6 v ü l- 0 2. 5 3 ι Η - 15 -

Analyse voor 1 5 %C' 41'1? %H/ 4^5' %N' 14/7; %S , 10,8; %C1, 8,33; %Ca als as, 4,8.

Gevonden : %C, 37,35,- %H, 5,17,- %N, 12,37,- %S, 10,24; en %C1, 7,84; %Ca als as, 4,47; %H20 (KF) , 3,24; % ethanol, 0,5 mol.

5 Gevonden (H20 en ethanol-vrije basis); %C, 40,01; %H, 4,88; %N, 13,3; %S, 10,57; en %C1, 8,3; %Ca als as, 4,7.

De in ethanol oplosbare en onoplosbare complexen vertoonden geen significante verschillen in HPLC en UV-spectra indien vergeleken met het zwitterion.

10 In een evalutatie van de breedspectrumactiviteit van het hierin beschreven product, werden de minimale inhibitore concentraties ' (MIC's) van het hier beschreven 1,5 ; 1 molverhouding zwitterion:CaCl2 product en van het zwitterion bepaald met de tweevoudige seriegewijze agarverbindingsmethode in Mueller-Hinton agar en de gegevens staan in 15 onderstaande tabel D, waarin de kolom Bristol A No. een bepaalde microörganismestam aanduidt.

.6 - 16 - H J2 ρ ut Ü Λ ® 3 U > Ό ·· η O umo 10 cq a u>

COP HH rl Η (Ί HinomonH

O 2 Ai 0 0 u> m roooo orsoooaom •Η · ·ΗΗ ·ΗΌ,· · »H · » · ; .··*('!

P r-i _ _ OOO OOOOOOO

Q) .. b 00 0 +Jifl 5 .. Ϊ c 0

•H V£> to VO 00 CO

μ U)H ΙΛΗΜΜ H (*» O (*> O m <D o 0 vo in γί ο ο 0 OiHoooooin

P · »Hr) *Hrl,· * ,r< «·····»· (N

P OO O OOO 00000000 ^ ·Η

>”j £ H

0 N I

\ 00 tft on cn /H 00 aw«) av id a>

0 rH , ui'i«hr*ft>oiH'«),N,«)(nu)oini0(NHrtN

g 0 £ moi0(ft<«iovoH(>u0'rinu)oinrl'i|o^u)

a w p | mu)oininu)oino<0OftM0O)Winno(0H

. (ft § <ncn(SOHn<MNHr)O)(N0UnoUNHM(NO)N

« c H .

<3 a) ¢0 < O

Eh Ό ^ 0 Ü “ (Ö 00 ♦

10 ίΜ (A

s ^ a) U · Λ w fl w s 3 . M · M VtAj Λ a) a) I p ui K · <0

1 ra . O

«p · t* \ a) o q M <ua) (A«J4 id in ο) S idid w c (ft (ft •Η ΙΑ II) + P4 « ·Η ·Ρ ·Η W ·Η ·Η ft) Ο Ο

C 4) ·Η \\\ CCOIllH'H-HiiUQC

0 C Η (ft (ft (ft (A Ο O id id ·η P q 0) (Λ ·Ρ ·Ρ

Ë4ioppap e 6 u ολ nJ «j tPii) ouA

ptjiüdimotiii-HHpaidiüidotDwiupp 0)OQ>PPPPiH«-IO)ft)OOPi-<PPPPP OildPiPPOOC CHH'H p 0 ft) id 01(1 a 0,»ρ (did UidUOaftUüG >β μβί)Λ Wü)ün/)tftü)ü)WWWW(i)W(iiA(2PiWPiAi • · · · * · · · •OiHiNfO'j'imor-ajoxo

HNPI'ilftlftr'WtnHHHHHHHHHrlN

. it l - $ $> - 17 -

De stabiliteiten bij verhoogde temperatuur werden bepaald door het zwitterionsCaC^ met een molverhouding van 1,5 : 1 en het zwitterion in de vorm van een droog poeder te bewaren en de sterkteverliezen met HPLC te bepalen. De sterkteverliezen worden getoond in tabel E. In 5 tabel E duidt een bereik op de uiterste waarden in meerdere proeven.

N H i O §

« 2 4J

O ï ü r» u> m o « O «J * · · ·

C ·* Ό O «Λ WW u» O

oh o II · I r* I λ •hom» invd mr- · r* i

MS Pi · »· » ·<» * O

ai m om o»hh n M

M r-i 4-> ·· O'

•rl UI C

* · g

MH

O* o -i—i i—i u > o e» *rt of ' ai »h u> *«r m m

O 4J · · · · · O

h +J «H iJ\ Uï m o

d -H m r· v rt Ί1 trt H

K £ il ►C Φ Ή -μ

03 -H

<—i Λ

* O

u

CO

c

Ό C C C C CC

C ^ J) Ji ^ il II ΦΦ Ό <Ö OJAiAi O' O' O' O' τ' rö φφφ Cf Cf Cf ctf ιϋ t0 ιϋ •Η - S 5¾¾ SSS Ό Ώ t Ό E* (Μ <Η Μ *¥ HN'f ΗΝΛ «Η L · · # · * 3 υ ο o u o 3 · · · · · % r- m vo o o ^ m ‘ ui p* o

o H

n.

s e< £ V * Vi V : - 18 -

VOORBEELD III

Testen van andere samenstellingen

Stabiliteiten bij verhoogde temperatuur werden bepaald door zwitterion: zoutproducten met een molverhouding 1 : 1 en het zwitterion 5 in de vorm van een droog poeder te bewaren en de sterkteverliezen met HPLC te bepalen. De sterkteverliezen worden getoond in de onderstaande tabellen F en G. In de tabellen F en G duidt de vermelding van een bereik op de uiterste waarden in meerdere proeven.

£ W ' * * w -19-.

** c CL) · 5s P' ^|t ^

O

. s ?

u * « « * J> H

£ JN SS ** ΙΛ ™ « ___ « o • » °. ® " Ί *. m °! ? ολ o «r o H 10 I ^ ^ r4 *r CS r-ί cn «r *r o ------------—“ o , 4 S e in

Q tfl (1) „ — r\j oO

00 6' cs r* m cn <n o , .

Μ -Ή « . .·*· «U» * — S ï Q m j* «* ,-« cs <*» · ^ ® 111 ï n in Hesjes u> co H ^ i*3 4*4 ^ _ _____*—r—— W -H -' — 03 2> «#* .0 < 4J * 0) Λ E< j ΙΛ 1-1 _ <0 . * r· -M · Q · ,Λ t Λ O w> *2 (Λ <e r- cs sr ·”* 4-> _ - - --- - — t/3 -5----- ' ------- §>' <r ^ ® Ω J « ^ ^ ”j r-i r-i <n ____ - - .- ------- “ o • • ui

Up,· *<r o a o * i H rH S ÜÜ_

G

O

'H .

TJ »4 «J « O' Q) * » »

o" +J C S· ip MtM

>3 4J O) O O o r| CS ΓΊ cu o e . . « 1, 1Λ CA in U H « ®" ï > 3 fl H w w M _·» U H o υ 3 |°s?lglB"g5 3gg - . è '

* A

- 20 - l c

(U

ό in S *

n· !o M

s

G

• $ ° O c · o m 5 ^ £ § ΓΟ . __________ Ö 0) Λ τι ο CN Ö , ·

£ ! H

s ^ . \ --,. 1 O' o 1 ö u> 'O tn *"* g C — o> 6 •H ^

iJ -P (—I

W -P P----- " m α> Q) '

< 4-1 > I

eh ή a σι m 'I ^ xi· S · » vf Λ Φ rH 00 m (Ö S Μ Μ Ά +> w _________________ : in g r* u> in · (\| £ · *q· · · ID Hf

. a; ο · H in σι I

o 5 fH co CN CN Η Ο O

a _____ I - ...

m „ qi ^ Η ΟΙ ΙΟ ft <*> H u · cn σι · · · ο M · d) Μ* · · σι (N UQ * · o S m co r*· »-4 rN «-Ν σι o co ή c ο τι ·*Ν ω H «I ΛΙ .

ο η 01 55 55 >3 4J ^ (Λ Μ ωο 4JC Ο Ο Ο r-N. <Ν (Ν <u c*hSm ΙΛΙΛΙΛΟΗ Η Η

ο ffl Μ W m <Ν Ν· U Η U U

^ 2 ν ri «ι «ι «I w tu w η η ϋι c

_jtP^t055g5SU55 5S^^ZN

. b ,- 1 -, , - - $ - 21 -

Producten die de volgende zouten op basis van een 1 : 1 mol-verhouding bevatten, gaven procentuele verliezen van meer dan 15 - 20% indien ze gedurende 2-4 weken bij 45°C werden bewaard of 1 - 2 weken bij 56°C werden bewaard, en werden daarom niet binnen de omvang van de 5 uitvinding opgenomen: NaF, NaH^PO^, NaHCO^, NaPO,^, HOC^CH^SO^Na, KC1, LiF en FeCl3.

VOORBEELD IV

Samenstellingen waarin zoutmengsels worden gebruikt.

Verscheidene gelyofiliseerde samenstellingen, gevormd uit 10 zwitterion alsmede mengsels van NaCl en CaCl^, werden bereid en hun . temperatuurstabiliteiten werden bepaald zoals in de voorbeelden I - III.

Onderstaande tabel H toont de sterkte die overblijft volgens HPLC tests van dergelijke samenstellingen, vergeleken met de samenstellingen die uit enkele zouten zijn gevormd.

. δ v v - - 22 - TABEL Η

Stabiliteit (droog)

Formuleringen

Percentage sterkte dat overblijft

Zwitterion Zwitterion/NaCl

Tijd/ 1:1

Temperatuur,- PH5.1 . -.-BH _· 1<S-70*C 66 85.2 3d-?0*C 54 76*€ 1» - 5€*C 45-58 81,9 2» - 56 *C 35-43 73·9 4» - 56*C — $7.7 8» - 56 *C — 55.9 1» - 45*C 70 91,7 2» - 45*C 49 8’*5 4» - 45*C 39 M·2

Bv - 45*C — 76·2 13v - 45*C — 67·4 4v - 37*C 69 90*4 8» - 37*C · — 85.4 13» - 37*C — 80.9 13» - 25*C 93·7 W = weken d = dagen * 8 8 Q ^ C L ^ - 23 -

Vervolg tabel Η

ZwitteriomCaClj ZwitterionjCaCl^

Tijd/ 1 ï 1 1:0.5

Temperatuur pB 4.9 pH 4.6_ lfl-70*C 94.2 88.7 3ö»70*C 88.8 80.8 1» - 56*C 92.3 86.6 2» - 5€*C 88.9 78·* 4» - K*C 84.4 71*5 8» - 56*C 79.0 62*5 2» - 45*C 96.2 94.3 2» - 45*C 93.0 89.2 4» - 45*C 92.9 85.8 8v - 45*C 88.9 80.4 13» - 4S*C 86.3 75.3 4» - 37*C 95.2 92.0 8» - 37*C 93.5 87.3 23» - 37*0 91.1 85.8 13» - 2E*C 96.4 95.6 . δ. v - 24 -

CN

r-i u (0 o

H

rft (N

O* ««0 OOmn ® "ï °! "ï "ï ® ®. "I ^ «1 o J ‘ ' ' ui««P«0V Λ O ««· ί 2 .. . £222*5 οί 5 ® » n o» * · * ..00 ^ G ·

O o W

•ft ·· ft

M H

0) -μ ft •rl $

N

rH

o <o z Η™ p- ca « w « « Ί ^ "I "i * *ί Ί * U o Jm 5 n g s S λ2λ £ ¢..,-, * S o» ® » r* λ βι θ\ e » λο»λ o* O m \ · lf>

G O

O ·· S3 •ft r-i ft ft 0) ft ft •ft pj κ u u u UUUUUUUU· O O e · ni UU ω ψ ω u> wi m m m * r^r^ro r*

H 2 po III

ϋ 3 P r» I I I I till i 4J «Ό * » » g * g > £ £ » k £ 1¾ cn (0 r-i Λ Η n « « «-* C* » « <-1 « ® r-< r-i

I—I M

0 \ 0) > Ό &

^ -η S

<U -H OJ

> ^ &H.

. 8 E G L ' t - 25 - s

<N

H

u <0 o ·· rl u

Ιβ (N W

Z * o 9 0 β O' ^ N f* Ift e- * rt m 10 H r« · I * * > ♦ · « · * · · · « | G ·· mm 2 ï ίο o; η n m m o «90 r» O h !S οι ® ω eo r» to etoioBO <h δ» 3Ï ot •h ·· ci M t-H Φ +» +>

•H

tQ

CN

H

u <0 o

·. CN

r-1 * O o o« r» r» « O « n o mo » οι n o» id >· o\ ·· ·«·· ·····*·* ·

Km . γη η α n h o « ιί e « ^ ; o o ς λ >" o' co α οι h it O' o' co is α o> β« O' O' .· I N1 GO 0 ·· ® rl H 0,

M

Q)

P

-P

•ri

N

K - .-1 la ‘ fl ί rj fl fi -M G UUUUUUUUOUUO· * · « · · · · · in · · r- in n id jj U ip to is ίο n « « m t~ r~ m « ^ U ·· rt. 31«««»«·« mm

> ^ § ? ? · * 1 · · * * i * · I I

Andere variaties zullen duidelijk zijn voor de deskundigen.

. i> V

Claims

1. Temperatuurstabiele breedspectrum-antibioticumsamenstelling, die bij verdunning tot een injecteerbare concentratie een pH van ongeveer 3,5 tot ongeveer 7 geeft, zonder gebruik van buffers of basen, welke samenstelling in essentie bestaat uit (a) de amorfe vaste stof gevormd 5 door lyofilisatie of co-solvensprecipitatie van een waterige oplossing van (i) 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-methoximinoacetamido]-3- [(1-methyl-1-pyrrolidino)-methyl]-3-cephem-4-carboxylaat zwitterion en (ii) een zout waarin het kation gekozen wordt uit de groep bestaande uit natrium, lithium, calcium, en magnesium en het anion gekozen wordt uit 10 de groep bestaande uit chloride, bromide, en jodide, waarbij de molver-houding van zwitterion tot zout in de oplossing varieert van ongeveer 0,5 : 1 tot ongeveer 2 : 1, of (b) solvaten daarvan.

2. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 1, waarin het kation natrium is.

3. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 2, waarin het zout natriumchloride is.

4. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 3, waarin de mol-verhouding van zwitterion tot zout ongeveer 1 : 1 tot 2 : lis.

5. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 4, waarin de 20 amorfe vaste stof gevormd wordt door lyofilisatie.

6. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 5, met een ontle-dingspunt volgens differentiële aftastcaloriemetrie met een exotherm bij ongeveer 197,4°C.

7. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 1, waarin het 25 anion chloride is.

8. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 1, waarin de mol-verhouding van zwitterion tot zout ongeveer 1 : 1 tot 2 : 1 bedraagc.

9. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 1, waarin de amorfe vaste stof gevormd wordt door'lyofilisatie.

10. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 8, waarin een zout gekozen wordt uit de groep bestaande uit natriumchloride, natriumbromide, natriumjodide, lithiumchloride, lithiumjodide, calciumchloride, calcium-bromide, calciumjodide en magnesiumchloride. .sc c, . 3 τ - 27 -

11. Temperatuurstabiele breedspectrum-antibioticumsamenstelling die bij verdunning tot injecteerbare concentraties een pH van ongeveer 3,5 tot ongeveer 7 geeft, zonder gebruik van buffers of basen, welke samenstelling in essentie bestaan uit (a) de amorfe vaste stof, gevormd door 5 lyofilisatie of co-solvensprecipitatie van een waterige oplossing van (i) 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-methoximinoacetamido]-3-Γ(1-methyl-1-pyrrolidino)-methyl]-3-cephem-4-carboxyiaat zwitterion en (ii) een mengsel van twee of meer zouten waarin de kationen gekozen worden uit de groep bestaande uit natrium, lithium, calcium en magnesium en de 10 anionen gekozen worden uit de groep bestaande uit chloride, bromide, en jodide, waarbij de molverhouding van zwitterion tot totaal zout in de oplossing varieert van ongeveer 0 , 5 : 1 tot ongeveer 2 : 1 ,of (b) so If a ten daarvan.

12. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 11, waarin de mol verhouding van zwitterion tot zout ongeveer 1 : 1 tot 2 : 1 bedraagt.

13. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 11 of 12, waarin het mengsel van zouten gekozen wordt uit de groep bestaande uit natrium-chloride, natriumbromide, natriumjodide, lithiumchloride, lithiumjodide, calciumchloride, calciumbromide, calciumjodide en magnesiumchloride.

14. Antibioticumsamenstelling volgens conclusies, 11, 12 of 13, 20 waarin de amorfe vaste stof gevormd door lyofilisatie.

15. Temperatuurstabiele breedspectrum-antibioticumsamenstelling die bij verdunning tot injecteerbare concentraties een pH van ongeveer 3,5 tot ongeveer 7 geeft,zonder gebruik van buffers of basen, welke samenstelling in essentie bestaat uit (a) de amorfe vaste stof gevormd 25 door lyofilisatie of co-solvensprecipitatie van een waterige oplossing van (i) 7-[et-(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-methoximinoacetamido]-3- [(1-methyl-l-pyrrolidino)-methyl]-3-cephem-4-carboxylaat zwitterion en (ii) een mengsel van natriumchloride en calciumchloridezouten, waarbij de molverhouding van zwitterion, calciumchloride en natriumchloride in 30 de oplossing (a) ongeveer 1 : 0,5 : 0,5 of (b) ongeveer 1 : 0,1 -0,2 : 0,8 - 1,0 bedraagt.

16. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 15, waarin de molverhouding van zwitterion, calciumchloride en natriumchloride 1 : 0,5 : 0,5 bedraagt. . δ . « - 28 -

17. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 15, waarin de mol-verhouding van zwitterion, calciumchloride en natriumchloride 1 : 0,1 -0,2 : 1,0 bedraagt.

18. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 15, waarin de mol-5 verhouding van zwitterion, calciumchloride en natriumchloride 1 s 0,1 - 0,2 : 0,8 - 0,9 bedraagt.

19. Antibioticumsamenstelling volgens conclusie 15, waarin de mol-verhouding van zwitterion, calciumchloride en natriumchloride 1 : 0,2 : 1 bedraagt.

20. Antibioticumsamenstelling volgens een van de conclusies 15 - 19, waarin de amorfe vaste stof gevormd door lyofilisatie. • 8C 0 0"25