SU1575942A3

SU1575942A3 - Способ получени в аморфной форме термически устойчивых комплексов 7-/2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(Z)-метоксииминоацетамидо/-3-(1-метил-1-пирролидинио)метил-3-цефем-4-карбоксилата с галогенидами металлов

Info

Publication number: SU1575942A3
Application number: SU884355050A
Authority: SU
Inventors: Артур Каплан Муррей; Баллард Богардус Джозеф; Р.Палепу Нагесвара
Original assignee: Бристоль-Мейерз Компани (Фирма)
Priority date: 1987-01-09
Filing date: 1988-01-08
Publication date: 1990-06-30
Also published as: DK577387D0; US4808617A; HU199686B; LU87102A1; NL193266B; FR2609396A1; DD264614A5; AT388672B; SE8800036L; AU8085687A; SG114792G; DK577387A; FI89006C; IL84346A; JPS63208522A; ZA88114B; YU46689B; AU606361B2; DE3740588C2; ATA341687A

Abstract

Изобретение касаетс гетероциклических веществ, в частности получени термически устойчивых комплексов 7-[2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(Z)-метоксииминоацетамидо]-3-(1-метил-1-пирролидинио)метил-3-цефем-4-карбоксилата (X)) с галогенидами металлов - (NACL)_Z, где а)X и Y=1

Z*0

б)Y=0

X=1-1,5

Z=0,5-1, которые как антибиотики могут быть использованы в медицине. Цель - создание новых более термически стойких веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией водных растворов с концентрацией 100-400 мг/мл 7-[2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(Z)-метоксииминоацетамидо]-3-(1-метил-1-пирролидинио)метил-3-цефем-4-карбоксилата с соответствующим мол рным количеством NACL или CACL₂ с последующим выделением целевого продукта путем лиофилизации или косольвентного осаждени и, в случае необходимости, сушкой в вакууме. Воду дл исходных веществ используют после стерилизации. В этом случае образуютс вещества, способные при 4°С сохран ть активность на 90% в течение 1-2 лет. 6 табл.

Description

внутривенных инфекций без использовани буферов или оснований,

Примеры приведенные ниже, иллюстрируют изобретение.

Пример 1. Получение и испытание комплекса цвиттерион:хлорид натри 1:1.

В сосуд, снабженный мешалкой, внос т 800 мл водного раствора, содержа- щего 250 г цвиттериона, при перемешивании со средней скоростью, добавл ют 30,41 г хлорида натри дл обеспечени мол рного соотношени цвиттерион: :хлорид натри 1:1. Добавл ют воду дл инъекций, отвечающую требовани м Фармакопеи США (USP), до 1 л. Продолжают перемешивать раствор 15 мин, далее - с- интервалами 5-10 мин до тех пор, пока пробы, отобранные между ин- тервалами при перемешивании, не будут показывать существенного количества нерастворенных частиц. Полученный раствор перенос т в автоклав из нержавеющей стали дл работы при повышен ном давлении. Раствор выпускают из автоклава , пользу сь сжатым азотом, через установку со стерилизованным фильтром, снабженным предфильтром и фильтром дл стерилизации, в чистый стерилизованный сборник. Затем 4 мл порции (1 г активHOCTHJ обусловленной цвиттерионом) внос т асептически в стекл нные колбы 10 мл„ После заполнени колбы закрывают пробками, служащими дл лиофилизации. Колбы помещают на лотки дл лиофилизации, которые закладывают в лиофилизатор, где продукт вымораживают 4 ч при (-30) - (-iO)°C. Затем температуру в присое- динеином к лиофилизатору конденсаторе выдерживают при (-60) ± 3°С и установку дл вымораживани выключают. Когда температура в конденсаторе достигеет -50 С, вакуум-насос выключают. Когда уровень вакуума достигает 200 мкПз, температуру на полке устанавливают на уровне -13±3 С и поддерживают в течение 16-13 ч. Затем довод т температуру на полке до +25°С. Температуру +25±2°С поддерживают 48 ч. Цалее лиофилизатор выкпючают и вынимают колбы. Продукт - аморфное твердое вещество - характеризуетс как комплекс цвитте- рион:хлорид натри 1:1.

Вычислено, %: С 42,34; Н 4,49; N 15,59; S 11,60; HaO(KF) отсутствие; Na (сульфатированна зола) 4,27; С1 6,58.

0 « 5 п е

5

Cfg Н24NC 0,5-52ClNa.

Найдено (корректирование дл воды ) , %: С 41,96; Н 4,57; N 14,73; S 12,28; Н20 (KF) 1,80; Na (сульфатированна зола) 3,15; С1 6,85.

Никаких существенных различий при инфракрасном анализе между данным продуктом и цвиттерионом не отмечено. Однако определенна по методу дифференциальной сканирующей калориметрии точка разложени была измерена экзотермически при 197,4°С, что заметно отличаетс от таковой дл цвиттериона (173,84 С)о Это указывает на тоэ что данный продукт представл ет собой соединение , отличающеес от цвиттериона.

Тот же продукт получают добавлением 10-20 объемов изопропанола в сборник, содержащий водный раствор цвиттериона и хлорида натри , дл образовани осадка3 отделени его с применением вакуумного фильтровани , промывки осадка изопропанолом и высушивани в высоком вакууме. Продукт получают в сухой форме.

Дл оценки широкого спектра активности определ ют минимальные инги- бирующие концентрации (МИК) данного продукта и цвиттериона по методу двукратного серийного разбавлени агара (агар Мюллер-Хинтона). Полученные данные приведены в табл. 1 (Бристоль А N соответствует особому виду микроорганизма ) .

Приведенные в табл.1 данные указывают на то, что полученный продукт, т.е. комплекс цзиттерион:хлорид натри 1:1, имеет эквивалентную микробиологическую активность по сравнению с цвиттерионом.

Токсичность комплекса цвиттерион: :хлорид натри 1:1 испытывают на крысах Sprague-Dawley путем однократного внутривенного введени болюса. LD 50 дл комбинированных данных из 2 исследований составл ет 796 мг/кг с 95%-ны- ми лимитами, достоверность между 759 и 832 мк/кг„ Эти данные подлежат сравнению с ТЛ)50 669 мк/кг и 95%-ными лимитами достоверности между 618 и 732 мг/кг дл цвиттериона. Ответные кривые были параллельными, однако по эффективности действи данный продукт был менее токсичен, чем цвиттерион.

Стабильность при повышенной температуре определ ют после хранени комплекса цвиттерионiхлорид натри 1:1 и цвиттериона в сухом порошкообразном

состо нии по утрате эффективности действи путем анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Показатели утраты эффективности действи представлены в табл.2. Пределы показывают крайние значени дл множества опытов.

Стабильность водного раствора комплекса цвиттерион:хлорид натри 1:1 определ ют путем изменени структуры при различных концентраци х после хранени при 25°С в течение установленных периодов времени. Изменение структуры путем разбавлени до 250 мг/мл (номинально) провод т стерильной водой дл инъекций, отвечающей требовани м фармакопеи США (USP). Дл последующего разбавлени используют 0,9%-ный раствор хлорида натри . Данные представлены в табл.3. Пределы показывают крайние значени дл множества опытов.

Данные табл. 3 свидетельствуют об удовлетворительной стабильности водного раствора комплекса цвиттерион: :NaCl 1:1 по меньшей мере в течение 24 ч при 25°С (комнатна температура)

П р и м е р 2. Получение и испытание комплекса из цвиттериона и хлорида кальци .

4,6 г цвиттериона раствор ют в 14 мл воды дл инъекций, содержащей 950 мг хлорица кальци (1 мол.-экв).

Полученный раствор пропускают через 0,22 мк стерильный фильтр.

Фильтрат добавл ют при асептически услови х и быстром перемешивании с интервалом 5 мин к 400 мл абсолютного этанола, Образуетс аморфный осадок.

Смесь взмучивают в течение 0,5 ч.

Твердое вещество отдел ют вакуум- фильтрованием и промывают 40 мл этанола , который добавл ют к фильтрату (обозначен как фильтрат А).

Твердое вещество, влажное от этанола , взмучивают в 100 мл абсолютного этанола 0,5 ч. Полученное аморфное твердое вещество отдел ют вакуумным фильтрованием, промывают 20 мл этанола , 50 мл эфира, затем высушивают в высоком вакууме при 50°С 4 ч, что дает 2,2 г продукта, содержащего цвнт- терион и хлорид кальци в мол рном соотношении 2:1„

Вычислено, %: С 42,56; Н 4,51; N 15,68; S 11,96; С1 6,6; Са (в виде золы) 3,73.

5

0

5

,505S2(CljCa)0fi. . . Найдено, %: С 38,4; н 4,85; N 13,76; S 8,82; С1 5,44; Са (в виде золы) 3,59; HZ0 (KF) 7,79.

Найдено (сухое основание), %: С 41,65; N 14,92; S 9,57; С1 5,9, Са (в виде золы) 3,89.

Фильтрат А концентрируют в вакууме Q при 35°С до 30 мл. Получают весьма плотные, сходные с кубической формой микрочастицы, показывающие отсутствие двойного преломлени .

Плотные твердые частицы вещества 5 отдел ют вакуумным фильтрованием, промывают 15 мл абсолютного этанола, затем 20 мл эфира и высушивают, что дает 2,0 г аморфного твердого продукта, представл ющего собой цвиттерион с хлоридом кальци в мол рном соотношении 1,5:1 (сескви-цвиттерион).

Вычислено, %: С 41,1; Н 4,5; N 14,7; S 10,8; С1 8,33, Са (в виде золы) 4,8.

(Cf9H N605S) 1iS СаС12. Найдено, %: С 37,35; Н 5,17; N 12,37; S 10,24; С1 7,84; Са (в виде золы) 4,47; Н20 (KF) 3,24; этанол О,5 моль.

0 Найдено (НгО и основание, не содержащее этанол), %: С 40,01; Н 4,88; N 13,3; S 10,57; С1 8,3; Са (в виде золы) 4,7.

Растворимые и нерастворимые в этаноле комплексы не показывают существенного отличи по данным высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) и ультрафиолетовых спектров от цвиттериона.

Дл оценки широкого спектра активности данного продукта определ ют минимальные ингибирующие концентрации (МИК) дл продукта цвиттерион:хлорид кальци при мол рном соотношении 5 и цвиттериона по методу двукратного серийного разбавлени агара (агар Мюллер-Хинтона). Полученные данные представлены в табл.4, где особые виды микроорганизмов отмечены как 0 Бристоль A N:

Стабильности при повышенной температуре определ ют после хранени продукта цвиттерион:хлорид кальци при мол рном соотношении 1,5:1 и цвиттег 5 риона в сухой порошкообразной форме по утрате потенциальных свойств методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Утрата потенциальных свойств показана в табл.5, где

5

0

пределы указывают крайние значени дл множества опытов,

П р и м е р 3. Изучение термической стабильности.

Получают лиофилизированные композиции из цвиттериона и хлорида натри или хлорида кальци и определ ют их стабильность при различных температурах . В табл. 6 показаны значени остаточной активности по данным анализа таких композиций методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC).

Комплекс цвиттерион:хлорид натри 1:1 пригоден дл фармацевтического применени , обладает широким спектром действий, свойственным антибиотику, и в значительной степени равен таковому у цвиттериона о Как видно из пров«:ден- ных испытаний, данный комплекс имеет удовлетворительную стабильность з растворе, по меньшей степени равную 24 ч при 25°С (при концентрации 250 мг/мл цвиттериона в стерильной воде существует менее чем 10%-на утрата активности, определ ема анализом по методу высокоэффективной жидкостной хроматографии)„ В отличие от цвиттериона имеет удовлетворительную стабильность при повышенной температуре дл сухой порошкообразной формы (около 10%-ной утраты после 4-недель- ного хранени при 45°С), что определе но путем высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), и исключительную стабильность дл формы в виде сухого порошка при обычных дл холодильника температурах (утрата отсутст1 вует при 6-мес чном хранении при 4 С) во врем всего 24-часового периода, после которого упом нутый выше комплекс измен ет структуру, обеспечива пригодную дл инъекций композицию (т.е. после изменени структуры до обеспечени концентрации, пригодной дл инъекции). Композицию, пригодную

дл инъекции, поддерживают при удов-i летворительном значении рН, т.е. в пределах от 4,2 до 6,2, без применени буферов или оснований. Упом нутый выше комплекс менее токсичен, чем цвит- терион.

Рассматриваемые композиции перевод т в композиции, пригодные дл инъекции путем Разбавлени стерильной водой и/или физиологическим раствором дл обеспечени композиций с активностью цвиттериона, базирующейс на концентрации в пределах от 1 до 400 мг/мл,

как определено анализом по методу высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), предпочтительно в пределах от 2,5 до 250 мг/мл. Разбавление до 250 мг/мл целесообразно проводить,

Q использу стерильную воду дл инъекций , отвечающую требовани м Фармакопеи США (USP)р а если понадобитс дальнейшее разбавление,, то берут 0,9%-ный раствор хлорида натри по USP. Дл

5 внутримышечного или внутривенного введени с лечебной целью взрослому .человеку общую суточную дозировку в пределах от 750 до 3000 мг раздел ют на достаточные дозировки.

Композиции транспортируют и хран т в сухом состо нии в услови х обычного холодильника (например при 4°С), причем они должны оставатьс активными более чем на 90% в течение по меньшей мере 1-2 лет. Такие композиции легко превратить в композиции, пригодные дл инъекции.

ормула изобретени

Способ получени в аморфной форме термически устойчивых комплексов 7-С2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(г)-меток- сииминоацетамидо J-3-(1-метил-1-пирро- лидинио)метил-3-цефем-4-карбоксштата с галогенидами металлов общей формулы

N

C-CONH-T--f

N ОСН3

о

а -

(наС1)у(СаС12);

отличающийс тем, что, в стерилизованной воде раствор ют (2-аминотиазол-4-ил)-2-(г)-меток- сииминоацетамидо }-3-(1-метил-1-пирро- лидинис)метил-3-цефем-4-карбоксилат с получением его концентрации 100...

40 мг/мл и соответствующее мол рное количество хлористого натри или хлористого кальци и из раствора выдел ют целевой продукт путем лиофилизации

Значени МИК (мг/мл)

1.S.pneumoniae

2.S.pyogenese

3.S.faecalis

4.S. aureus

5.S aureus /+50%

6.S.aureus /Pen.

7.S.aureus/meth.

8.E.coli

9.E.edi

10.K. pneuraoniae

11.K. pneumoniae

12.E.cloacae

13.E.cloacae

14.P.mirabilis

15.P.vulgaris

16.M.morganii

17.P.rettgeri

18.S.marceseens

19.P.S.aeruginosa

20.P.S.aeruginosa

Стабильность сухого продукта

или косольвентного осазвдени с последующей , в случае необходимости, сушкой в вакууме.

Таблица 1

9585 9604 20688 9537 9537 9606 20699 15199 20341-1 9664 20468 9659 9656 9900 21559 15153 22424 20019 9843a 21628

0,016 0,008 16 0,5 1 1

Более 0,16 0,016 0,016 0,5 0,016 0,03 0,008 0,03 0,008 0,13 0,03 0,5 2

125

0,016 0,008 16 0,5 1 1

125 0,16 0,003 0,06 1

0,016 0,06 0,016 0,03 0,016 0,25 0,03 1 3

Таблица2

ТаблицаЗ Стабильность в водном растворе

Таблица4 Значени минимальной ингибирующей концентрации (МИК) (мг/мл)

Стабильность сухого продукта

Рецептуры и процент остаточной активности

1 Д

3Д

1н

2н

4н 8 н

1н

2н н 8 н

3 н

4 н

н

3 н

70°С 70°С 56°С 56°С 56°С 56°С 45 °С 45°С 45° С 45°С 45°С 37°С 37°С 37°С 25 °С

66 54

45-58 39-43

70 79 39

69

85,2 76,6 81,9 73,9 67,7 55,9 91,7 87,5 84,2 76,2 67,4 90,4 85,4 80,9 93,7

ТаблицаЗ

Таблицаб

88,7 80,7 86,6 78,4 71,5 62,5 94,3 89,2 85,8 80,4 75,3 92,0 87,3 85,8 95,6

Claims

Фо рмула изобретения

Способ получения в аморфной форме термически устойчивых комплексов 7-[ 2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(Ζ)-метоксииминоацетамидо ]-3-(1-метил-1-пирролидинио)метил-3-цефем-4-карбоксилата с галогенидами металлов общей формулы (маС1)у(СаС1₂)₂ отличающийся тем, что, в стерилизованной воде растворяют '

7-[2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(Ζ)-метоксииминоацетамидо 3-3-(1-метил-1-пирролидинио)метил-З-цефем-4-карбоксилат с получением его концентрации 100...

40 мг/мл и соответствующее молярное или косольвентного осаждения с после количество хлористого натрия или хло- дующей, в случае необходимости, сушристого кальция и из раствора выдели- кой в вакууме.

ют целевой продукт путем лиофилизации ;

Таблица 1

Значения МИК (мг/мл) Микроорганизм Бристоль Цвиттерион Комплекс, цвит- А N терион:ИаС1 1:1 1. З.рпеитопьае А 9585 0,016 0,016 2. 5.руо§епезе А 9604 0,008 0,008 3. З.ТаесаНз А 20688 16 16 4. 3. аигеиз А 9537 0,5 0,5 5. 8 аигеиз /+50% зегига А 9537 1 1 6. 3.аигеиз /Реп.Кез.. А 9606 1 1 7. 8.аигеиз/теРЦ. Кез. 28°С А 20699 Более 125 •125 8. Е.соЫ А 15199 0,16 0, 16 9. Е.есН А 20341-1 0,016 0,003 10. К. рпеитоп гае А 9664 0,016 0,06 11. К. рпеитопгае А 20468 0,5 1 12. Е.с1оасае А 9659 0,016 0,016 13. Е.с1оасае А 9656 0,03 0,06 14. Р.тггаЬхЫз А 9900 0,008 0,016 15. Р.чи1§аггз А 21559 0,03 0,03 16. М.гаогдапЫ А 15153 0,008 0,016 17. Р.геРР§ег1 А 22424 0,13 0,25 18. З.тагсезеепз А 20019 0,03 0,03 19. Р.5.аеги§1поза А 9843а 0,5 1 20. Р.8.аеги§1поза /СагЬ. Кез А 21628 2 3

Таёлица2

Стабильность сухого продукта

Температура, °С Время хранения Потеря эффективности, % Цвит- терион Комплекс цвиттерион :ЦаС1 1:1 4 1 мес - , 0-14 4 мес - Отсутствие 25 1 мес - 1-54 5 нед ·. - 3,0 18 нед - 6-10% 37 1 мес - 9-12,9 5 нед - 6,0 1 2 нед - 12,5 4 мес - 5-18,0 45 1 нед 34,1 5,6 2 нед - 8,3 4 нед 71 10,7 56 1 нед 45,6 12, 2 нед - 16 4 нед - 20 70 1 день 34,4 12,7-23,0 2 дня 46,2 21,7 3 дня 55,2 34,0 100 1 день 100 92

Таблица,3

Стабильность в водном растворе

Концентрация, мг/мл ' - Время, ч Остаток, % рН- 250 0 — ,·. 5,04-5,22 3 100-102 5,03-5,24 6 100-101 5,03-5,24 24 92,7-96,0 5,14-5,39 50 0 - •5,0-5,17 3 99,4 5,07-5,31 6 97-99,4 5,06-5,31 24 93,2-94,7 5,30-5,60 10 0 - 4,94-5,12 3 99,5-100,1 5,05-5,34 6 99,3-99,4 5,11-5,47 24 95,2-97,0 5,44-5,78 2,5 0 - 5,00-5,19 3 100,0 5,28-5,66 6 99,6-100,0 5,47-5,92 24 96,2-96,8 5,87-6,18

Таблица4

Значения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) (мг/мл)

Микроорганизм Бристоль Цвитте- Цвиттерион: А N рион :СаС1_г, моляр ное соотноше- ние 1,5:1 1. 3.рпеитопхае А 9585 0,06 0,016 2. 3. руо<>епе8 А 9604 0,016 0,016 3. З.ЬаесаНз А 20688 16 16 4 о З.аигеиз А 9537 1 1 5. З.аигеиз/+50% Зегига А 9537 0,5 0,5 6. З.аигеиз/Реп.-Кез. А 9606 1 3 7. З.аигеиз/(МЕТН.-РЕ5.128°С) А 20699 125 63 8. Е.соН А 15119 0,016 0,016 9. Е.соН А 20341-1 0,03 0,016 10. К.Рпеитоплае А 9664 0,03 0,03 11. К.Рпеитопгае · А 20468 1 1 12. Е.с1оасае А 9659 0,016 0,016 13. Е.с1оасае А 9656 0,13 0,25 14. Р.тНаЫНз А 9900 0,008 0,008 15. Р.уи1§аг18 А 21559 0,03 0,03 16. _чМ. тог§апН А 15153 0,008 0,008 17. Р.геРР^еН А 22424 0,03 0,03 18. З.тагсезсепз А 20019 0,03 0,016 19. Р.аеги§1поза А 9843а 0,5 0,5 20. Р.аеги§1Поза/СагЪ. Рез. А 21628 2 2

Таблица5

Стабильность сухого продукта

Температура, °С Время хранения Потеря свойств, % Цвитте- -I Цвиттерион:СаС1_г, . рион 1 молярное соотноше| ние 1,5:1 37 2 мес - 3,5 45 1 нед 34, 1 0,4-0 2 нед - 3,2-5,7 4 нед 71 56 1 нед 49,6 0-5,3 2 нед - 1,7-6,6 4 нед - 13,7 70 1 день 34,4 2 ДНЯ 46,2 3 ДНЯ 55,2 2,2-6,5 100 1 день 100 20-30,0

Таблицаб

Рецептуры и процент остаточной активности

Вр емя/температура Цвиттерион, Цвиттерион/ Цвиттерион: Цвиттерион:СаС1₂ рН 5,1, ос- /ЫаС1 1:1 :СаС1₂ 1:1 1 :0,5 таточная ак- рН 4,9, ос- тивность, % таточная ак- тивность, % 1 Д - 70°С 66 85,2 94,2 88,7 3 Д - 70°С 54 76,6 88,8 80,7 1 н - 56°С 45 -58 81,9 92,3 86,6 .2 н - 56°С 39 -43 73,9 86,9 78,4 4 н - 56°С - 67,7 84,4 71,5 8 н - 56°С - 55,9 79,0 62,5 1 н - 45°С 70 91,7 96,2 94,3 2 н - 45°С 79 87,5 93,0 89,2 4 н - 45°С 39 84,2 92,9 85,8 8 н - 45°С - 76,2 88,9 80,4 13 н - 45°С - 67,4 86,3 75,3 4 н - 37°С 69 ’90,4 95,2 92,0 8 н - 37°С - 85,4 93,5 87,3 13 н - 37°С - 80,9 91,1 85,8 13 н - 25 °С — 93,7 96,4 95,6

Примечание, н - недели, . д - дни.