MXPA06007621A

MXPA06007621A - Tratamiento de la obesidad y el sindrome metabolico con derivado de tanshinona que incrementan la actividad metabolica.

Info

Publication number: MXPA06007621A
Application number: MXPA06007621A
Authority: MX
Inventors: Taehwan Kwak; Myunggyu Park
Original assignee: Md Bioalpha Co Ltd
Priority date: 2003-12-30
Filing date: 2004-12-30
Publication date: 2007-01-30
Also published as: CA2552311C; KR20050071355A; US20070248698A1; EP1706108A4; CN102579460A; KR100818586B1; JP2007517025A; EP1706108A1; AU2004308874B2; US20100029760A1; KR20080015495A; WO2005063232A8; CA2552311A1; CN102579460B; WO2005063232A1; AU2004308874A1; US8029832B2

Abstract

La presente invencion se relaciona con una composicion para prevenir y tratar el sindrome metabolico, que contiene derivados de tanshinona como un ingrediente efectivo; mas especificamente, la presente invencion se relaciona con una composicion para prevenir y tratar el sindrome metabolico, que contiene derivados de tanshinona que exhiben una actividad superior en la mejora de la actividad metabolica, como un ingrediente efectivo.

Description

TRATAMIENTO DE LA OBESIDAD Y EL SÍNDROME METABOLICO CON DERIVADOS DE TANSHINONA QUE INCREMENTAN LA ACTIVIDAD METABOLICA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con una composición para prevenir y tratar el síndrome metabólico, que contiene derivados de tanshinona como un ingrediente efectivo. Más específicamente, la presente invención se relaciona con una composición para prevenir y tratar el síndrome metabólico, que contiene derivados de tanshinona que exhiben una actividad superior en la mejora de la actividad metabólica, como un ingrediente efectivo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El síndrome metabólico se refiere a un síndrome que involucra factores de riesgo de la salud tales como la hipertrigliceridemia, hipertensión, trastornos del glucometabolismo, trastorno de la coagulación de la sangre y obesidad. El síndrome metabólico por sí mismo, no es fatal, pero indica una predisposición a enfermedades severas tales como la diabetes y enfermedades cardiovasculares isquémicas, y han surgido como las enfermedades más amenazantes entre las personas modernas. El síndrome metabólico fue conocido una vez con varios otros nombres, incluyendo el Síndrome X, debido a una falta de conocimiento sobre las causas de tal síndrome, pero fue designado oficialmente como Síndrome Metabólico o Síndrome de Resistencia a la Insulina a través del Programa de Tratamiento de Adultos III (ATP III) aprobado por la WHO y el Instituto Nacional de Corazón, Pulmón y Sangre de NIH. Los criterios propuestos por el Tercer Reporte del Panel Experto del Programa Nacional de Educación para el Colesterol (NCEP) sobre la Detección, Evaluación y Tratamiento del Colesterol Sanguíneo Alto en Adultos (Panel de Tratamiento de Adultos III), publicado en el 2001 , son los más actuales y ampliamente utilizados para diagnosticar el síndrome metabólico. De acuerdo con el criterio del ATP III, los individuos son diagnosticados con el síndrome metabólico por la presencia de tres o más de estos componentes:1 ) una línea de la cintura de 102 cm (40 pulgadas) o más para los hombres y 88 cm (35 pulgadas) o más para las mujeres (obesidad central medida por la circunferencia de la cintura), 2) un nivel de triglicéridos por encima de 150mg/dl, 3) un nivel de lipoproteína de alta densidad (HDL) menor que 40 mg/dl (hombres) o debajo de 50 mg/dl (mujeres), 4) una presión sanguínea de 130/85 mm Hg o mayor y 5) un nivel de glucosa (azúcar) en sangre en ayuno mayor que 110mg/dl. Para las personas orientales, el criterio para la obesidad central se ajustó a una línea de la cintura de 90 cm o más para los hombres y de 80 cm o más para las mujeres. La investigación reciente ha reportado que bajo tales criterios, aproximadamente 25% de la gente coreana sufre del síndrome metabólico. La resistencia a la insulina se refiere a un fenómeno en donde, incluso aunque la insulina se secrete normalmente in vivo, a insulina no induce un suficiente suministro de glucosa a las células. Por lo tanto, la glucosa en la sangre no puede entrar en las células, causando hipergiucemia, y por lo tanto, las células no pueden realizar las funciones normales debido a una falta de glucosa, conduciendo a la manifestación del síndrome metabólico. En la actualidad, no hay fármacos disponibles para el tratamiento del síndrome metabólico. Se han hecho intentos por tratar el síndrome metabólico utilizando agentes terapéuticos para la diabetes, hiperlipidemia e hipertensión, pero estos fármacos tienen una efectividad limitada en el tratamiento del síndrome metabólico como el fármaco. Puesto que los fármacos actualmente disponibles, la metformina, los fármacos que pertenecen a la familia de las TZD (tiazolidindionas), los inhibidores de la glucosidasa, los agonistas dobles de PPAR ?/a e inhibidores de la DDP (Dipeptidil peptidasa) IV, se utilizan para el tratamiento de la diabetes, han recibido mucha atención como fármacos promisorios para tratar el síndrome metabólico. Además, se ha dirigido mucho interés a los ¡soformos de apoA-l y los péptidos relacionados con el mismo, que son objetivos de los fármacos antipresión sanguínea y los fármacos antihiperlipidémicos e inhibidores de la CETP (proteína de transporte del éster de colesterol). Los factores conocidos que están asociados de manera directa o indirecta con las causas y el tratamiento del síndrome metabólico incluyen el ejercicio físico, el tipo y hábito dietético, peso corporal, glucosa en sangre, niveles de triglicéridos, niveles de colesterol, resistencia a la insulina, adiponectina, leptina, actividad de la AMPK, hormonas sexuales tales como el estrógeno, factores genéticos y concentración in vivo de malonil-CoA. En la actualidad, la manera más efectiva conocida para tratar las condiciones asociadas con el síndrome metabólico, es hacer más ejercicio y perder peso y el control de la dieta. Todas las maneras actuales para combatir el síndrome metabólico comparten en común el hecho de que facilitan el metabolismo de la energía, resultando así en un consumo maximizado de la energía sobrante en el cuerpo, conduciendo a la prevención de acumulación de energía. Debido a la alta ingestión calórica de los alimentos procesados y la comida rápida, en comparación con el ejercicio insuficiente, la energía sobrante se acumula en forma de grasa y por lo tanto, se vuelve la causa subyacente de varias enfermedades, incluyendo los trastornos metabólicos. La eliminación efectiva de tal energía sobrante se considera un método para tratar los trastornos metabólicos. El incremento de la actividad metabólica es esencial para eliminar de manera efectiva la energía sobrante. Para este propósito, se cree que existe la necesidad esencial de la inhibición de la síntesis de las grasas, la inhibición de la gluconeogénesis, facilitar el consumo de la glucosa, facilitar la oxidación de las grasas, facilitar la biogénesis de las mitocondrias, que es un aparato central del metabolismo de la energía y la activación de factores involucrados en la activación del metabolismo. Los factores de activación ligados a la promoción del metabolismo incluyen, por ejemplo, la proteína cinasa activada por AMP (AMPK), el coactivador 1a del receptor gamma activado por el proliferador de la peroxisoma (PGC-la), el transportador de la glucosa 1 y 4 (GLUT 1 y 4), la carnitina palmitoiltransferasa 1 (CPT 1 ), la proteína de desacoplamiento 1 , 2 y 3 (UCP-1 , 2 y 3), y la acetil-CoA carboxilasa l y ll (ACC I y II), que juegan un papel importante en el metabolismo de la energía. Tales factores realizan las siguientes funciones principales en el metabolismo de la energía, con relación a los trastornos metabólicos. 1. Glucometabolismo En los tejidos del músculo y los tejidos del miocardio, la AMPK fomenta la contracción del músculo y por lo tanto facilita la captación de glucosa, lo cual a su vez, activa el GLUT 1 , o induce la migración de GLUT 4 a la membrana del plasma, sin importar la acción de la insulina, resultando en el transporte incrementado de la glucosa en las células (Arch. Biochem. Biophys. 380, 347-352, 2000, J. Appl. Physiol. 91 , 1073-1083, 2001). Después de incrementar la captación de glucosa, la AMPK activa la hexocinasa, incrementando por lo tanto el flujo de los procesos del glucometabolismo e inhibiendo simultáneamente la síntesis del glucógeno. Se sabe que los tejidos del miocardio durante la isquemia, la AMPK activa la 6-fosforofructo-2-cinasa (PFK-2) vía un proceso de fosforilación, resultando así en la activación de una cascada metabólica que conduce a un flujo incrementado del glucometabolismo (Curr. Biol. 10, 1247-1255, 2000). Además, la activación de la AMPK en el hígado, inhibe la liberación de la glucosa de los hepatocitos.

Mientras tanto, se confirmó que la actividad de la fosfoenolpiruvato carboxicinasa (PEPCK) y la glucosa-6-fosfatasa, que son enzimas de la gluconeogénesis, se detuvo por la AMPK (Diabetes 49, 896-903, 2000), indicando que la AMPK inhibe de manera independiente la liberación de la glucosa del hígado, sin importar la insulina, estando así involucrada en la modulación del nivel de glucosa en la sangre. 2. Biogénesis Mitocondrial Una función importante de la mitocondria es llevar a cabo la fosforilación oxidativa, que convierte la energía producid de los metabolitos de combustible tales como la glucosa y los ácidos grasos en ATP. Las alteraciones funcionales mitocondriales pueden afectar la patogénesis de las enfermedades degenerativas asociadas con la senescencia, tales como la diabetes mellitus, las enfermedades cardiovasculares, la enfermedad de Parkinson y la demencia senil (Curr. Opin. Cell Biol. 15, 706-716, 2003).

Peterson, et al (Science 300,1140-1142, 2003) han reportado que las funciones de la fosforilación oxidativa de las mitocondrias, se debilitaron por aproximadamente 40% en las personas mayores, sugiriendo la posibilidad de que la función mitocondrial deteriorada es una probable causa patogénica del síndrome de resistencia a la insulina. Lee et al (Diabetes Res. Clin. Pract. 42, 161-167, 1998) han confirmado que el contenido disminuido de ADN mitocondrial en la sangre periférica precede el desarrollo de la diabetes mellitus. La biogénesis de las mitocondrias en los músculos es bien conocida por ser fomentada por una reacción adaptativa en la cual la actividad metabólica de la fosforilación oxidativa de las células musculares se incrementa por el gasto continuo de energía y el ejercicio. Mientras tanto, el coactivador la del receptor gamma activado por el proliferador de la peroxisoma (PGC-1a) se conoce por ser un coactivador que fomenta la transcripción del ADN nuclear y se sabe que juega papeles importantes en el metabolismo de la glucosa, la biogénesis mitocondrial, la especialización de las fibras musculares y la termogénesis adaptativa como las funciones principales. Se confirmó que la expresión incrementada de PGC-1a facilita un incremento en el número de copias del ADN mitocondrial y la proliferación mitocondrial (Cell, 98, 115-124, 1999). Se sugirió que la sobreexpresión de UCP-2 y UCP-3 en el modelo de ratón resulta en un número disminuido de adipocitos, velocidad metabólica incrementada y consumo incrementado de oxígeno, y por lo tanto, UCP-2 y UCP-3 juegan un papel importante en el metabolismo de la energía y el control de la obesidad (Nutrition, 20, 139-144, 2004). 3. Control del metabolismo de las grasas Refiriéndose a un mecanismo en el cual la AMPK participa en el metabolismo de las grasas, la AMPK se conoce por inducir la fosforilación de la acetil-CoA carboxilasa que a su vez, inhibe la síntesis de los ácidos grasos, resultando así en concentraciones intracelulares disminuidas de malonil-CoA que es un intermediario en el proceso de la síntesis de los ácidos grasos y es un inhibidor de la carnitina palmitoiltransferase I (CPTI), conduciendo al fomento de la oxidación de los ácidos grasos. La CPT I es una enzima esencial para un proceso en donde los ácidos grasos entran a la mitocondria y se oxidan, y se sabe que son modulados por la concentración intracelular de la malonilCoA. Además, se sabe que la AMPK inhibe la actividad de la HMG-CoA reductasa y la glicerol fosfato acil transferasa (GPAT), involucrada en la síntesis del colesterol y el triacilglicerol, a través de la fosforilación (J. Biol. Chem. 277, 32571-32577, 2002, J. Appl. Physiol. 92, 2475-2482, 2002). Mientras tanto, se encontró que la activación de la AMPK en el hígado inhibe la actividad de la piruvato cinasa, la ácido graso sintasa y ACC a través de la fosforilación de la proteína de unión al elemento de respuesta al carbohidrato (ChREBP) (J. Biol. Chem. 277, 3829-3835, 2002). Como se describió anteriormente, los activadores relacionados con el metabolismo se conocen por jugar papeles centrales en el metabolismo de la energía de la glucosa, la proteína y la grasa in vitro e in vivo. Neil et al (Nature drug discovery, 3 (Abril), 340, 2004) afirmaron que la AMPK y la Malonil-CoA son objetivos para el tratamiento terapéutico del síndrome metabólico, y los pacientes que sufren del síndrome metabólico están caracterizados por resistencia a la insulina, obesidad, hipertensión, dislipidemia y disfunción de las células beta pancreáticas, la diabetes mellitus del tipo II y la manifestación de la arteriesclerosis. Se formuló la hipótesis de que una característica común que enlaza estas múltiples anormalidades es la desregulación de la detección del combustible de AMPK/Malonil-CoA y la red de señalización. Se propuso que tal desregulación conduce a alteraciones en el metabolismo celular de los ácidos grasos que a su vez, causa la acumulación anormal de lípidos, la disfunción celular y finalmente la enfermedad. También se presenta evidencia de que los factores que activan la AMPK y/o reducen los niveles de malonil-CoA pueden invertir estas anormalidades y síndromes para evitar que ocurran. Genevieve et al (J. Biol. Chem. 279, 20767-74, 2004) han reportado que la activación de la AMPK inhibe la actividad de una enzima ¡NOS que es un mediador de la inflamación en las condiciones inflamatorias crónicas o el choque por endotoxinas, incluyendo la diabetes relacionada con la obesidad, y por lo tanto, sería efectiva para desarrollar nuevas medicinas que tengan un mecanismo capaz de mejorar la sensibilidad a la insulina. Además, han reportado que la inhibición de la actividad de ¡NOS es afectada por la activación de la AMPK, y por lo tanto, este hallazgo es aplicable clínicamente a enfermedades tales como septicemia, esclerosis múltiple, infarto al miocardio, enfermedades inflamatorias del intestino y disfunción de las células beta pancreáticas. Zing-ping et al (FEBS Letters 443, 285-289, 1999) han reportado que la AMPK activa la NO sintasa endotelial a través de la fosforilación, en la presencia de la Ca-calmodulina en las células musculares y las células del miocardio de ratas. Esto representa que la AMPK está implicada en enfermedades cardiacas incluyendo angina de pecho. Alan D et al (Nature genetics, 34 (3), 244, 2003) han confirmado que el metabolismo respiratorio mitocondrial del músculo se redujo por el envejecimiento o la diabetes, resultando así en cambios coordinados en la expresión de genes involucrados en el proceso de la fosforilación oxidativa, y han reportado que el PGC-1a está a cargo de este cambio en la expresión del gen. Mary et al (PNAS 100, 8466, 2003) han reportado que la expresión disminuida del PGC-1a es la causa principal de la resistencia a la insulina y al dismetabolismo en pacientes diabéticos. Isabella et al (Am. J. Physiol. Cell Physiol. 284, c1669, 2003) han reportado que el PGC-1a es el factor clave que estimula la adaptación de las mitocondrias a los cambios en el medio ambiente, debidos a la hormona tiroidea, T3, y la contracción muscular. Kim et al (The Korean Journal of Biochemistry & Molecular Biology, 11 , 16, 2004) han reportado que a través de la relación causal entre el metabolismo de la glucosa/ácidos grasos, las anormalidades en la cantidad y la calidad de las mitocondrias induce la resistencia a la insulina y además, es la causa principal del síndrome metabólico. Los presentes inventores llevaron a cabo una investigación extensa de los fármacos que activan el metabolismo, basándose en la suposición de que los materiales que activan el metabolismo serán efectivos para el tratamiento de las enfermedades del síndrome metabólico, y como resultado, han confirmado que los derivados de tanshinona son ingredientes efectivos para los agentes terapéuticos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Por lo tanto, la presente invención se ha hecho para solucionar los problemas anteriores, y los problemas técnicos que se ha deseado solucionar en el pasado. Los presentes inventores han conducido una variedad de estudios y experimentaciones extensa e intensa. Como resultado de tal investigación extensa, los inventores han encontrado que los derivados de tanshinona, extraídos de Danshen {Salvia miltiorrhiza), tienen eficacia para activar el metabolismo en las células y los tejidos, y se encontró además que cuando los ratones ob/ob, un modelo de obesidad causado por una secreción desminuida de la lectina, ratones db/db, un modelo de obesidad/diabetes, y ratones DIO (obesidad inducida por la dieta), causada por condiciones dietéticas altas en grasa, se tratan con derivados de tanshinona, estos materiales son efectivos para prevenir y tratar el síndrome metabólico, incluyendo la obesidad y la diabetes mellitus. La presente invención se ha terminado basándose en estos hallazgos. Por lo tanto, un objeto de la presente invención es proporcionar una composición para prevenir y tratar el síndrome metabólico, que comprende, como un ingrediente efectivo, derivados de tanshinona que exhiben efectos profilácticos y terapéuticos en tal síndrome metabólico, a través de la activación de los activadores metabólicos, en las células C2C12 del mioblasto y en modelos animales de la enfermedad.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN De acuerdo con un aspecto de la presente invención, los anteriores y otros objetos pueden lograrse por la provisión de una composición para prevenir o tratar la obesidad y las enfermedades del síndrome metabólico, que comprende una cantidad terapéutica y/o profilácticamente efectiva de derivados de tanshinona del extracto de Danshen {Salvia miltiorrhiza) como un ingrediente efectivo. Las actividades fisiológicas de los derivados de tanshinona conocidos hasta ahora son como sigue. Toshiyuki et al (Planta Med. 2002. 68, 1103-1107) han reportado que la tanshinona VI atenúa la hipertrofia de los miocitos cardiacos e inhibe la síntesis del colágeno por los fibroblastos cardiacos, retardando por lo tanto la fibrosis de los fibroblastos cardiacos. Choi et al (Planta Med. 2004, 70, 178-180) han sugerido la posibilidad de utilizar los derivados de tanshinona como un agente antialérgico mediante la inhibición de la desgranulación de los mastocitos. Ip et al (Planta Med. 2002, 68, 1077-1081 ) demostraron los efectos hepatoprotectores de la dihidroisotanshinona I contra la citotoxicidad mediada por la menadiona en los hepatocitos. Ren et al (Planta Med. 2004, 70, 201-204) han confirmado que los derivados de tanshinona inhiben la actividad enzimática de la acetilcolinesterasa. Kyoko et al (Biochemical Pharmacology, 64, 745-750 (2002)) han reportado que el sulfonato de tanshinona NA atenúa la hipertrofia de los miocitos cardiacos, inducida por la angiotensina II. Lee et al (Biosci.

Bioteclinol. Biochem. 63 (12), 2236-2239, 1999) han reportado que los derivados de la tanshinona generan superóxidos y por lo tanto, inhiben la actividad antibacteriana. Kang et al (Immunopharmacology, 49, 355-361 , 2000) han reportado que los derivados de tanshinona inhiben la producción de IL-12 e INF-? en los inmunecitos. Ko et al (Arch. Pharm. Res. 25, 446-448, 2002) han reportado que los derivados de tanshinona inhiben la actividad enzimática de DGAT. Zhou et al (Biochemical Pharmacology, 65, 51-57, 2003) han reportado que el sulfonato de tanshinona HA facilita una reacción de transferencia de electrones en las mitocondrias. Wang et al (Antimicrobial Agent & Chemotherapy, Junio, 1836-1841 , 2003) han reportado que los derivados de tanshinona inhiben la formación de radicales libres inducida por aminoglucósido. Yun et al (Publicación de Patente Coreana, Disponible al Público No. 2000-0027306) han afirmado que los derivados de tanshinona son efectivos como un agente terapéutico para el tratamiento de la hepatitis B. Sohn et al (Publicación de Patente Coreana, Disponible al Público No. 2004-0084482) describe una composición terapéutica para la fibrosis hepática o hepatocirrosis, que contiene tanshinona I como un ingrediente efectivo. Sin embargo, ninguna de las publicaciones y patentes mencionadas anteriormente, describe o sugiere la prevención y el tratamiento de la obesidad y las enfermedades del síndrome metabólico, mejorando la actividad de la AMPK, como en la presente invención. Los derivados de tanshinona, que se utilizan como el ingrediente efectivo en la composición de la presente invención, están presentes principalmente en Danshen, utilizado como la sustancia del fármaco cruda, tal como Salvia miltiorrhiza y Perovskia abrotanoides. Los derivados de tanshinona están divididos ampliamente en derivados de tetrahidrofenantreno y derivados de fenantreno. De manera preferida, la composición de acuerdo con la presente invención comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de los derivados y mezclas de los mismos mencionados anteriormente. De manera preferida, el derivado de tetrahidrofenantreno es uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona (Fórmula 1 ) y tanshinona HA (Fórmula 2).

[Fórmula 1] [Fórmula 2] De manera preferida, el derivado de fenantreno es uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de tanshinona I (Fórmula 3) y 15,16-Dihidrotanshinona I (Fórmula 4). [Fórmula 3] [Fórmula 4] Los derivados de tanshinona contenidos en Danshen (raíces de Salvia miltiorrhiza), están compuestos de 0.29% de tanshinona HA, 0.23% de criptotanshinona, 0.11% de tanshinona I y 0.054% de 15,16-dihidrotanshinona I. Como el ingrediente principal de Danshen, los derivados de tanshinona son compuestos de diterpen o-quinona. Un procedimiento de biosíntesis de estos compuestos se lleva a cabo mediante la biosíntesis de la criptotanshinona del diterpeno y la biosíntesis de los derivados de tanshinona de Dancen, tales como la tanshinona HA, 15,16-dihidrotanshinona I y la tanshinona I, a través de un procedimiento de oxidación tal como desmetilación o deshidrogenación de la criptotanshinona. Los presentes inventores han encontrado que tales derivados de tanshinona activan el metabolismo y por lo tanto, fomentan el metabolismo de la glucosa, las proteínas y los lípidos en el cuerpo y también inhiben la acumulación de grasa en el cuerpo, siendo capaces así, de tratar el síndrome metabólico. Estos hallazgos y hechos también pueden demostrarse a través de de los siguientes ejemplos. Específicamente, los presentes inventores han medido la influencia de los derivados de tanshinona en la actividad de los activadores metabólicos y la expresión de proteínas y genes en las células del mioblasto (C2C12), y la supresión de la diferenciación celular de los preadipocitos (células 3T3-L1 y F442A) y como resultado, han confirmado que tales compuestos exhiben una excelente activación metabólica. Como puede observarse a través de los efectos de los derivados de tanshinona en la expresión de la proteína y el gen, tales compuestos de tanshinona pueden exhibir una actividad superior en la activación metabólica, solos o en cualquier combinación de los mismos. De manera simultánea, los presentes inventores han confirmado que la inhibición de la síntesis de los ácidos grasos, la facilidad de la oxidación del ácido graso y el nivel de expresión de los factores de la biogénesis mitocondrial, se correlacionan con las estructuras de los derivados de tanshinona.

Por lo tanto, la composición de acuerdo con la presente invención está comprendida de uno o más derivados de tanshinona seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona, tanshinona HA, tanshinona I y 15,16-dihidrotanshinona I. Tal composición incluye todos los casos como sigue: (i) Composición que contiene criptotanshinona como el ingrediente principal; (ii) Composición que contiene tanshinona HA como el ingrediente principal; (iii) Composición que contiene tanshinona I como el ingrediente principal; (iv) Composición que contiene 15,16-dihidrotanshinona I como el ingrediente principal; (v) Composición que contiene criptotanshinona como el ingrediente esencial, y opcionalmente, que contiene uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de tanshinona HA, tanshinona I y 15,16-dihidrotanshinona I; (vi) Composición que contiene tanshinona HA como el ingrediente esencial, y opcionalmente, que contiene uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona, tanshinona I y 15,16-dihidrotanshinona I; (vii) Composición que contiene tanshinona I como el ingrediente esencial, y opcionalmente, que contiene uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona, tanshinona HA y 15,16-dihidrotanshinona I; y (viii) Composición que contiene 15,16-dihidrotanshinona I como el ingrediente esencial, y opcionalmente, que contiene uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona, tanshinona HA y tanshinona I. Si se desea, las composiciones mencionadas anteriormente pueden además, comprender uno o más derivados de tanshinona seleccionados del grupo que consiste de 1ß-hidroxicriptotanshinona, 1-oxocriptotanshinona, tanshinol B, tanshinol IIB, przewaquinona A, dihidroisotanshinona I, sulfonato de tanshinona HA, 1 ,2-dihidrotanshinona I y tanshinona VI. De manera más sorprendente, los presentes inventores han confirmado que los efectos mejoradores de la criptotanshinona, tanshinona HA, tanshinona I y 15,16-dihidrotanshinona I sobre la actividad de la AMPK se han incrementado de manera significativa mediante el uso combinatorio de dos o más de estos compuestos. Tal efecto sinergístico significativo no se predijo totalmente y también se confirmó que tal efecto se exhibió, sin importar las clases de esos cuatro derivados de tanshinona. Por lo tanto, entre las combinaciones de las composiciones mencionadas anteriormente, las composiciones (v) hasta (viii) son particularmente preferidas. Como ejemplos específicos de las composiciones (v) hasta (viii), puede hacerse mención de las siguientes: Composición que comprende criptotanshinona y 15,16-dihidrotanshinona I; Composición que comprende criptotanshinona y tanshinona HA; - Composición que comprende tanshinona HA y 15,16-dihidrotanshinona I; Composición que comprende tanshinona HA y tanshinona I; Composición que comprende 15,16-dihidrotanshinona I y tanshinona I; y Composición que comprende tanshinona I y criptotanshinona. En las composiciones como se mencionó anteriormente, la relación entre los dos ingredientes está, de manera preferida, en el intervalo de 10:1 a 1 :10 (peso/peso), y de manera más preferida, en el intervalo de 5:1 a 1 :5. La composición de los derivados de tanshinona contenidos en el Dancen natural, puede exhibir diferentes distribuciones, dependiendo de la temporada de recolección o la región de cultivo. Considerando los efectos sinergísticos mencionados anteriormente, es necesario tener la relación de la composición óptima entre los derivados de tanshinona, para ejercer la eficacia de los mismos de manera uniforme. Los presentes inventores han confirmado los efectos de los derivados de tanshinona en la actividad de expresión de los genes y proteínas y las características de acuerdo con las diferencias estructurales entre los mismos. Al controlar opcionalmente la relación de la composición basándose en estos resultados, los presentes inventores han confirmado los efectos de ajustar la relación entre los derivados de tanshinona en la disminución del peso corporal y a continuación, se ha intentado obtener la relación de la composición óptima. Como se describió anteriormente, cuando la composición de acuerdo con la presente invención comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de derivados de tetrahidrofenantreno y derivados de fenantreno, y de manera preferida comprende ambos derivados, la relación de combinación preferida entre ellos puede estar en el intervalo de 10:1 a 1 :10 (en peso), de manera más preferida en el intervalo de 5:1 a 1 :5, y particularmente de manera preferida en el intervalo de 2.5:1 a 1 :2.5. De manera preferida, el componente del derivado de tetrahidrofenantreno contiene tanto criptotanshinona como tanshinona HA, y la relación entre ellos está en el intervalo de 5:1 a 1 :5. Además, el componente del derivado de fenantreno contiene tanto 15,16-dihidrotanshinona I como tanshinona I, y la relación entre ellos está en el intervalo de 5:1 a 1 :5. Los presentes inventores han confirmado además que los derivados de tanshinona tienen efectos profilácticos y terapéuticos superiores del síndrome metabólico, a través de experimentos profilácticos y terapéuticos extensos del síndrome metabólico in vivo, en los ratones ob/ob, un modelo de obesidad, los ratones db/db, un modelo de obesidad/diabetes, y los ratones DIO (obesidad inducida por la dieta) causada por una diete alta en grasas. Como resultado, la composición para prevenir y tratar el síndrome metabólico que comprende los derivados de tanshinona como el ingrediente efectivo puede prevenir y tratar el síndrome metabólico a través de la activación del metabolismo, y así, se predice que pueden desarrollarse como varios agentes terapéuticos para una variedad de enfermedades asociadas con el síndrome metabólico. La composición para prevenir y tratar el síndrome metabólico de acuerdo con la presente invención comprende los derivados de tanshinona anteriores y una mezcla opcional de los mismos como el ingrediente efectivo, y puede formularse en el agente profiláctico y terapéutico del síndrome metabólico, en conjunto con un portador farmacéuticamente aceptable, si es necesario. 1. Propiedades Farmacológicas La composición de acuerdo con la presente invención es útil para la profilaxis y/o el tratamiento de las condiciones clínicas asociadas con el síndrome metabólico. Estas condiciones clínicas incluyen, de manera no exclusiva, obesidad común, obesidad abdominal, hipertensión, arteriosclerosis, hiperinsulinemia, hipergiucemia, diabetes mellitus del tipo II y dislipidemia que aparecen de manera característica con resistencia a la insulina. La dislipidemia, también conocida como el perfil aterogénico de la proteína del fenotipo B, está caracterizada por ácidos grasos no esterificados elevados, lipoproteínas de muy baja densidad elevadas (VLDL), partículas ricas en triglicéridos, valores altos de ApoB, la presencia de partículas de lipoproteína de baja densidad (LDL) pequeñas, densas, altos valores de ApoB en la presencia del fenotipo B, y un bajo valor de lipoproteínas de alta densidad (HDL) asociados con un bajo valor de partículas ApoAI. Se espera que la composición de acuerdo con la presente invención sea útil para tratar pacientes que sufren de dislipidemia combinada o mezclada, o hipertriglicerimia que tiene o no otros signos del síndrome metabólico y que sufren de varios grados de dislipidemia después de los alimentos. Se espera que la composición de acuerdo con la presente invención tenga propiedades antiinflamatorias y también que disminuyan la morbilidad y mortalidad cardiovascular asociadas con la arteriosclerosis debido a la dislipidemia. Estas condiciones de la enfermedad cardiovascular incluyen macroangiopatías de varios órganos internos que causan infarto al miocardio, insuficiencia cardiaca, enfermedad cerebrovascular e insuficiencia arterias periféricas de las extremidades inferiores. Debido a sus efectos sensibilizantes a la insulina, también se espera que la composición de la presente invención evite o retarde el progreso de la diabetes del tipo II en el síndrome metabólico y el desarrollo de la diabetes durante el embarazo. Por lo tanto, también se espera que la composición de la presente invención retarde el progreso de las complicaciones crónicas asociadas con la hipergiucemia clínica en la diabetes, por ejemplo, las microangiopatías que causan la enfermedad renal, el daño retinal y las enfermedades vasculares periféricas de las extremidades inferiores. Además, la composición de la presente invención puede ser útil en el tratamiento de varias condiciones diferentes a las sistema cardiovascular, sin importar la asociación con la resistencia a la insulina, por ejemplo, síndrome del ovario poliquístico, obesidad, cánceres, enfermedades inflamatorias y enfermedades neurodegenerativas tales como la Disminución Cognoscitiva Leve (MCI), enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y esclerosis múltiple. La composición de la presente invención exhibe efectos inhibidores contra el desarrollo del hígado graso (esteatosis hepática) en el hígado y también activa la ß-oxidación de los ácidos grasos, jugando por lo tanto un papel para disminuir la concentración del triglicerol y por lo tanto, se espera que sea útil para prevenir o tratar el hígado graso y la hepatitis debido a un dismetabolismo de los lípidos del hígado alcohólico y no alcohólico. La composición de la presente invención varía la composición de los lípidos en varios tejidos. Además, puede variar el contenido y la distribución de la grasa y también reducir los niveles de colesterol y triacilglicerol en plasma. La composición de la presente invención es efectiva para la formación de NO en las células endoteliales y así, se espera que sea útil para prevenir o tratar enfermedades cardiacas, enfermedades vasculares, hipertensión y disfunción eréctil. Como las enfermedades que causan la hipertensión, puede hacerse mención a la insuficiencia cardiaca, infarto al miocardio, ruptura del sistema cerebrovascular, trombosis y daño al hígado. La composición de la presente invención es un material que provoca el fomento de la oxidación del ácido graso y el consumo de energía en los tejidos distales, y por lo tanto, se espera que sea útil para tratar o prevenir la obesidad común y también para eliminar los depósitos de grasa localizada tales como la grasa subcutánea y la abdominal. En consecuencia, se espera que la composición de la presente invención sea útil para suministrar fármacos en la forma de ungüentos, parches que incluyen parches antiinflamatorios y cremas cuando se desee, para eliminar la grasa de regiones particulares, en donde la grasa está depositada localmente, tal como para eliminar la grasa subcutánea de las partes protuberantes de los párpados, brazos y caderas, la grasa abdominal y la grasa de regiones particulares, por ejemplo, celulitis. Además, la composición de la presente invención puede utilizarse como un agente antidiabético disminuyendo el nivel de glucosa en sangre. Además, se confirmó que la composición de la presente invención mejora la sensibilidad disminuida a la insulina y por lo tanto, mejora los efectos de la insulina. La composición de la presente invención fomenta la biogénesisi mitocondrial, incrementando por lo tanto la capacidad activa de las mitocondrias y al mismo tiempo, induce la conversión de tejidos musculares en tejidos motores, resultando por lo tanto en una capacidad locomotora mejorada de los pacientes, resistencia reforzada, productividad de energía mejorada, recuperación de la fatiga, potencia vital incrementada, reducción de la agresión oxidativa a través de la capacidad incrementada para eliminar las especies de oxígeno reactivo (ROS) y los radicales libres, y por lo tanto, se espera que la composición sea efectiva para tratar las enfermedades relacionadas. Como las enfermedades que pueden causarse por las especies de oxígeno reactivo (ROS), puede hacerse mención de las siguientes: arteriosclerosis, diabetes mellitus, enfermedades neurológicas, enfermedades del riñon, hepatocirrosis, artritis, Retinopatía de la Premadurez, uveítis ocular, cataratas seniles, trastornos de efectos laterales por la radioterapia, daño bronquial debido a fumar, trastornos de efectos laterales por agentes carcinostáticos, edema cerebral, edema del pulmón, edema de los pies, infarto cerebral, anemia hemolítica, progeria, epilepsia, enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down, enfermedad de Crohn y enfermedad del colágeno. Como se mencionó anteriormente, la composición de la presente invención demostró proporcionar efectos benéficos para todas las condiciones y enfermedades mencionadas anteriormente, modulando la glucosa y la homeostasis de los lípidos. Por lo tanto, puede observarse que la composición de la presente invención es un material adecuado para el control del síndrome metabólico. La presente invención se relaciona con el uso de un compuesto para preparar una composición farmacéutica para la terapia y/o profilaxis del síndrome metabólico múltiple (síndrome metabólico), es decir, el síndrome metabólico que aparece de manera característica con hiperinsulinemia, resistencia a la insulina, obesidad, intolerancia a la glucosa, diabetes mellitus del tipo II, dislipidemia, enfermedades cardiovasculares o hipertensión, en particular. 2. Preparaciones farmacéuticas Las composiciones para prevenir y tratar el síndrome metabólico que comprenden derivados de tanshinona como el ingrediente efectivo, pueden prevenir y tratar el síndrome metabólico a través de la activación del metabolismo, y por lo tanto, se cree que pueden desarrollarse como varios fármacos para una variedad de enfermedades asociadas con el síndrome metabólico. La composición para prevenir y tratar el síndrome metabólico de acuerdo con la presente invención, comprende los derivados de tanshinona mencionados anteriormente como el ingrediente efectivo, y pueden formularse en el agente profiláctico y terapéutico para el síndrome metabólico, en conjunto con un portador farmacéuticamente aceptable, si es necesario. Una dosis adecuada de las composiciones farmacéuticas de la presente invención puede variar dependiendo de varios factores tales como el método de formulación, la manera de administración, la edad, peso y sexo de los pacientes, las condiciones patológicas, dieta, tiempo de administración, ruta de administración, velocidad de excreción y sensibilidad a la respuesta. La composición farmacéutica del agente profiláctico y terapéutico para el síndrome metabólico de acuerdo con la presente invención, comprende los derivados de tanshinona como el ingrediente efectivo. Los derivados de tanshinona pueden administrarse vía las rutas oral o parenteral tras la administración clínica, y pueden utilizarse en formas generales de formulaciones farmacéuticas. Esto es, la composición de acuerdo con la presente invención puede administrarse mediante varias formulaciones orales y parenterales, tras la administración de la práctica clínica. Cuando se formulan, las formulaciones se preparan utilizando agentes de relleno convencionales, extensores, agentes aglutinantes, agentes humectantes, agentes desintegrantes, diluyentes tales como tensioactivos o excipientes. Las formulaciones sólidas para la administración oral incluyen, por ejemplo, tabletas, pildoras, polvos, granulos y cápsulas, y se preparan mezclando los derivados de tanshinona con uno o más excipientes, tales como almidón, carbonato de calcio, sucrosa, lactosa y gelatina. Los agentes lubricantes tales como estearato de magnesio y talco pueden utilizarse también, excepto para los excipientes simples. Como las formulaciones líquidas para la administración oral, puede hacerse mención a las suspensiones, soluciones para uso interno, emulsiones y jarabes. Además a los diluyentes simples empleados generalmente tales como agua y parafina líquida, las formulaciones mencionadas anteriormente pueden contener varios excipientes, por ejemplo, agentes humectantes, agentes edulcorantes, agentes aromáticos y conservadores. Las formulaciones para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas esterilizadas, solventes no acuoso, suspensiones, emulsiones, formulaciones liofilizadas y supositorios. Como solventes no acuosos y suspensiones, pueden utilizarse el propilenglicol, polietilenglicol, aceite vegetal, tal como aceite de oliva, éster inyectable tal como etilolato, etc. Como materiales de base para supositorios, pueden utilizarse Witepsol, macrogol, Tween 61, manteca de cacao, manteca de laurina, glicerol y gelatina. Las unidades de dosificación pueden contener una, dos, tres o cuatro veces la cantidad de la dosis individual, o 1/2, 1/3 ó 1/4 de la cantidad de la dosis individual. De manera preferida, una dosis individual contiene una cantidad del fármaco efectivo que se administra una vez, y típicamente corresponde a la cantidad total administrada para un día, o 1/2, 1/3 ó 1/4 de la cantidad de la misma. Aunque las dosis efectivas de los derivados de tanshinona son dependientes de la concentración, están de manera preferida en el intervalo de 0.1 a 1 ,000 mg/kg, de manera más preferida de 0.4 a 500 mg/kg y pueden administrarse de 1 a 6 veces al día. Por lo tanto, los derivados de tanshinona pueden administrarse en el intervalo de 0.1 a 6,000 mg/día/kg de peso corporal, para adultos. De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición de alimento sano y funcional para prevenir y tratar el síndrome metabólico, que contiene derivados de tanshinona como un ingrediente efectivo. El término "un alimento sano y funcional", utilizado a través de la especificación de la presente invención, se refiere a un alimento en el cual los derivados de tanshinona se agregan a los alimentos generales para mejorar las funciones de los mismos. Los derivados de tanshinona pueden agregarse a los alimentos generales o pueden prepararse en la forma de cápsulas, polvos, suspensiones y lo similar. La ingesta de tales alimentos sanos y funcionales que contienen los derivados de tanshinona, proporciona efectos benéficos para la salud y exhibe las ventajas en que no hay efectos laterales causados por el uso prolongado de los fármacos, debido a que el material de alimento se utiliza como la materia prima, a diferencia de los fármacos convencionales. Si se desea utilizar los derivados de tanshinona de la presente invención como un aditivo para alimentos, estos derivados pueden agregarse solos o pueden utilizarse en conjunto con otros alimentos o ingredientes de alimentos, o pueden utilizarse de manera apropiada de acuerdo con otros métodos convencionales. La cantidad mezclada de los ingredientes efectivos puede determinarse de manera adecuada dependiendo del propósito de uso (tratamiento profiláctico, de la salud o terapéutico). Generalmente, en la producción de alimentos y bebidas en los cuales se mezclan los derivados de tanshinona, estos derivados pueden agregarse en una cantidad de 0.0001 a 10% en peso, y de manera preferida en una cantidad de 0.1 a 5% en peso, con relación al peso total de las materias primas. Sin embargo, cuando se pretende una ingesta prolongada para el propósito de la salud e higiene o para el control de la salud, la cantidad mencionada anteriormente de los derivados de tanshinona puede ajustarse por debajo del intervalo mencionado anteriormente. Además, el alimento sano de la presente invención contiene de manera preferida los derivados de tanshinona que caen dentro del intervalo de toxicidad determinado, cuando se emplea como una composición farmacéutica. No hay un límite particular a las clases de los alimentos mencionados anteriormente. Como ejemplos de alimentos a los cuales pueden agregarse los derivados de tanshinona, puede hacerse mención a carnes, salchichas, pan, chocolate, dulces, refrigerios, confitería, pizza, Ramen, otros fideos, goma, leche descremada, alimentos secos, alimentos crudos, productos lácteos incluyendo leche fermentada con bacterias de ácido láctico y helado, varias sopas, bebidas excepto agua, tés, bebidas, bebidas alcohólicas y preparaciones multivitamínicas. De manera específica, como los ejemplos de alimentos sanos que contienen los derivados de tanshinona, puede hacerse mención a alimentos sanos y a los productos favoritos especiales tales como líquido exprimido, té, jalea y jugo hecho de los derivados de tanshinona como los ingredientes principales. Además, puede hacerse mención a medicinas tradicionales para el edema, la nefritis y la uretritis como objetivos. Cuando se desea utilizar los derivados de tanshinona de la presente invención como materias primas cosméticas, estos derivados pueden agregarse por sí mismo o pueden utilizarse en conjunto con otros ingredientes cosméticos, o pueden utilizarse de manera apropiada de acuerdo con otros métodos convencionales. La cantidad mezclada de ingredientes efectivos puede determinarse de manera adecuada dependiendo del propósito de uso de los mismos. Generalmente, para producir cosméticos utilizando derivados de tanshinona, estos derivados pueden agregarse en una cantidad de 0.0001 a 10% en peso, y de manera preferida en la cantidad de 0.1 a 5% en peso, con relación al peso total de las materias primas. Los cosméticos incluyen, de manera no exclusiva, lociones para después de afeitarse, lociones, cremas, paquetes y cosméticos con color. Los derivados de tanshinona de acuerdo con la presente invención, pueden extraerse utilizando Danshen {Salvia miltiorrhiza) como el material del fármaco seco o el material del fármaco crudo, o pueden sintetizarse mediante métodos organoquímicos. Un procedimiento para extraer los derivados de tanshinona de Danshen comprende: a) someter el Danshen a extracción con agua o solvente orgánico para obtener los extractos crudos, b) filtrar los extractos crudos, seguido por concentración (a vacío), y c) opcionalmente eliminar el solvente. Por ejemplo, el Danshen se extrae con metanol, se concentra a vacío y a continuación se vuelve a extraer con cloruro de metileno para obtener una solución concentrada. La solución se purifica vía cromatografía en columna sobre gel de sílice para obtener los derivados puros de tanshinona. La presente invención se describirá con más detalle a manera de los ejemplos siguientes.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Los anteriores y otros objetos, características y otras ventajas de la presente invención, se entenderán más claramente a partir de la siguiente descripción detallada cuando se toma en conjunto con los dibujos acompañantes, en los cuales: La Figura 1 es una gráfica de barras que compara la actividad de la AMPK (proteína cinasa activada por AMP), entre el grupo de tratamiento y el grupo de control, después del tratamiento de la línea celular de mioblasto C2C12 con extracto de Danshen {Salvia mllfiorrhiza) y derivados de tanshinona; Las Figuras 2A-2B muestran los resultados del Western blotting para determinar los efectos de los derivados de tanshinona en la expresión de la proteína de AMPK, p-AMPK, p-ACC y GLUT4 totales, después del tratamiento de la línea celular del mioblasto C2C12 con los derivados de tanshinona; Las Figuras 3A-3G muestran los resultados del Western blotting para determinar los efectos de los derivados de tanshinona en la expresión del gen de ACC 1 y 2, UCP-2, CPT1 , PGC-1a y GLUT1 , después del tratamiento de la línea celular del mioblasto C2C12 con los derivados de tanshinona; La Figura 4 es una gráfica que compara los efectos de los derivados de tanshinona en la captación de la glucosa celular, entre el grupo de tratamiento y el grupo de control, después del tratamiento de la línea celular del mioblasto C2C12 con los derivados de tanshinona; Las Figuras 5A-5C son micrografías que muestran los resultados de los efectos de los derivados de tanshinona en la diferenciación del adiposito, después del tratamiento de la línea celular del preadipocito F442A con los derivados de tanshinona; Las Figuras 6A-6B son gráficas que comparan los resultados entre el grupo de tratamiento y el grupo de control en los efectos del derivado de tanshinona en la sensibilidad a la insulina, después del tratamiento de la línea celular del mioblasto C2C12 con los derivados de tanshinona; La Figura 7 es una gráfica que muestra los efectos de los derivados de tanshinona en los cambios del peso corporal con el tiempo, después del tratamiento de un modelo animal de la obesidad, ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob, con los derivados de tanshinona; La Figura 8 es una gráfica que compara los cambios en el tamaño de los adipositos entre el grupo de tratamiento y el grupo de control, después del tratamiento de un modelo animal de la obesidad, ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob, con los derivados de tanshinona; Las Figuras 9A-9B son gráficas que comparan la distribución de la grasa en términos de los valores numéricos para los órganos respectivos entre el grupo de tratamiento y el grupo de control, después del tratamiento de un modelo animal de la obesidad, ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob, con los derivados de tanshinona; Las Figuras 10A-10B son gráficas que comparan la distribución del tejido adiposo y la acumulación de grasa en los hígados entre el grupo de tratamiento y el grupo de control, por medio de tinción de los hígados después del tratamiento de un modelo animal de la obesidad, ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob, con los derivados de tanshinona; Las Figuras 11A-11D son micrografías que comparan los cambios en la distribución de la grasa visceral de ratones entre el grupo de tratamiento y el grupo de control, después del tratamiento de un modelo animal de la obesidad, ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob, con los derivados de tanshinona.

EJEMPLOS Ahora, la presente invención se describirá con más detalle con referencia a los siguientes Ejemplos. Estos ejemplos se proporcionan únicamente para ilustrar la presente invención y no deben considerarse como que limitan el alcance y espíritu de la presente invención.

EJEMPLO 1 Aislamiento de los derivados de tanshinona 5 kg de material de Danshen {Salvia miltiorrhiza), se compraron de la tienda de hierba medicinal China y otros materiales necesarios se recolectaron en el campo y las montañas o se compraron de la tienda. El Danshen se eluyó con 50 L de metanol durante 24 horas y se concentró bajo presión reducida. Se agregaron 1500 mL de agua al material resultante. A continuación, se agregó una cantidad igual de n-hexano, diclorometano (CH2CI2) y acetato de etilo (EtOAc), y se extrajo secuencialmente dos veces para obtener un extracto rojo gelatinoso. Cuando la actividad se examinó en las capas respectivas así obtenidas, la actividad fue más alta en la capa de diclorometano. El gel de sílice (Kíeselgel 60, 230 a 460 mallas, Merck), se hinchó de manera suficiente con n-hexano al 100% y a continuación se empacó en una columna (530 cm de alto). 50 g del extracto obtenido de la capa de CH2CI2 se disolvió en una cantidad en trazas de EtOAc y n-hexano y la muestra resultante se cargó en la columna. Después de cargar y eluir de manera suficiente la muestra, el eluato resultante se eluyó con un gradiente de EtOAc de 10 a 20%, y se eluyó secuencialmente con un gradiente de MeOH/CHCI3 de 0/100 (volumen/volumen) ~ 50/50 (volumen/volumen), para obtener los derivados de tanshinona. A través de la medición de la actividad de la AMPK, las fracciones activas se reunieron y concentraron bajo presión reducida. El material, que exhibió actividad en la primera columna, se separó nuevamente utilizando gel de sílice (Kieselgel 60, 230 a 460 mallas, Merck). Esto se siguió por el hinchamiento con n-hexano al 100% y el empaque en una columna (425 cm de alto). EtOAc/n-hexano = 0/100 (volumen/volumen) -»• 20/80 (volumen/volumen), se utilizó como el solvente de desarrollo. Las fracciones que exhiben actividad inhibidora se reunieron y concentraron bajo presión reducida. A continuación, se llevó a cabo la TLC Preparativa bajo el solvente de desarrollo, EtOAc/n-hexano = 30/70 (volumen/volumen). La TLC se llevó a cabo en cada paso y el grado de separación de las fracciones respectivas se observó. Como el solvente de desarrollo, se utilizó EtOAc/n-hexano = 80/20 (volumen/volumen) en una fase normal. La búsqueda por los materiales respectivos se realizó calentando y desarrollando una placa de TLC en una placa caliente utilizando un solvente de tinción con anisaldehído (H2SO al 5%, ácido acético al 2.5%, anisaldehído al 5%, y etanol al 87.5%). De esta manera, los derivados de tanshinona se extrajeron, se separaron y se purificaron.

EJEMPLO 2 Análisis estructural del material activo separado Se realizó en análisis con RMN para determinar las estructuras de la criptotanshinona, tanshinona I, tanshinona HA y 15,16-dihidrotanshinona I separadas en el Ejemplo 1 , respectivamente.

Criptotanshinona 1H-RMN (CDCI3): d 7.42 (2H, ABq, J=8.0 Hz), 4.83 (1 H, t, J=9.2 Hz), 4.31 (1 H, dd, J=9.2 y 6.0 Hz), 3.55 (1 H, m), 3.17 (2H, t amplio), 1.65 (4H, m), 1.40 (3H, d, J=6.8 Hz), 1.28 (6H, s) 13C-RMN (CDCI3): d 9.58 (C-1 ), 19.00 (C-2), 37.73 (C-3), 34.76 (C-4), 143.57 (C-5), 132.48 (C-6), 122.43 (C-7), 128.30 (C-8), 126.19 (C-9), 152.28 (C-10), 184.16 (C-11 ), 175.59 (C-12), 118.21 (C-13), 170.66 (C-14), 81.38 (C-15), 34.54 (C-16), 18.74 (C-17), 31.85 (C-18), 31.80 (C-19).

Tanshinona I I-A 1H-RMN (CDCI3, 300.40MHz) d 7.63 (1 H, d, J=8.2 Hz), 7.54 (1 H, d, J=8.2 Hz), 7.22 (1 H, s), 3.18 (2H, t, J=6.6 Hz), 2.26 (3H, s), 1.78 (2H, m), 1.65 (2H, m), 1.31 (6H, s). 13C-RMN (CDCI3, 75.45 MHz) d 184.29, 176.43, 162.38, 150.80, 145.14, 141.96, 134.13, 128.12, 127.16, 121.81 , 120.91 120.57, 38.52, 35.33, 32.51 , 30.56, 19.79, 9.46. 15,16-Dihidrotanshinona I 1H-RMN (CDCI3, 300.40MHz) d 9.24 (1 H, d, J=10.6 Hz), 8.24 (1 H, d, J=10.3 Hz), 7.69 (1 H, d, J=10.3 Hz), 7.54 (1 H, dd, J=10.6, 8.4 Hz), 7.41 (1 H, d, J=8.4 Hz), 4.95 (1 H, t, J=11.3 Hz), 4.41 (1 H, dd, J=11.3 Hz, 7.5 Hz), 3.62 (1 H, m), 2.66 (3H, s), 1.38 (3H, d, J=8.1 Hz). 13C-RMN (CDCI3, 75.45 MHz) d 184.26, 175.67, 170.56, 142.00, 134.95, 134.72, 132.06, 131.90, 130.38, 128.81 , 128.18, 126.01 , 124.99, 120.28, 118.32, 114.06, 81.62, 34.68, 19.85, 18.81.

Tanshinona I 1H-RMN (CDCI3, 300.40 MHz) d 9.19 (1 H, d, J=10.6 Hz), 8.23 (1 H, d, J=10.3 Hz), 7.73 (1 H, d, J=10.3 Hz), 7.50 (1 H, dd, J=10.6, 8.5 Hz), 7.30 (1 H, d, J=8.5 Hz), 7.26 (1 H, c, J=1.3 Hz), 2.64 (3H, s), 2.25 (3H, d, J=1.3 Hz). 13C-RMN (CDCI3, 75.45 MHz) d 183.38, 175.55, 161.13, 142.00, 135.18, 133.58, 132.90, 132.69, 130.63, 129.57, 128.31 , 124.73, 123.03, 121.72, 120.43, 118.69, 19.84, 8.79.

EJEMPLO 3 Determinación de la actividad de la AMPK Las células de mioblasto, C2C12, se cultivaron en DMEM que contiene 10% de suero de ternero bovino. Cuando la densidad celular alcanzó un intervalo de aproximadamente 85% a 90%, el medio de cultivo se reemplazó con 1 % de medio de suero de ternero bovino para inducir la diferenciación de las células. La actividad enzimática de la AMPK se determinó como sigue. Las células C2C12 se usaron para obtener los extractos de proteína y a continuación se agregó sulfato de amonio a una concentración final de 30%, seguida por la precipitación de las proteínas. Los precipitados de la proteína se disolvieron en un amortiguador (Hepes 62.5 mM, pH 7.2, NaCI 62.5 mM, NaF 62.5 mM, pirofosfato de Na 1.25 mM, EDTA 1.25 mM, DTT 1 mM, PMSF 0.1 mM y AMP 200 µM). Posteriormente, se agregó el péptido SAMS 200 µM (HMRSAMSGLHLVKRR: el residuo de serina subrayado es un sitio de fosforilación, como un sitio de fosforilación de la AMPK de la acetil-CoA carboxilasa) y [?-32P]ATP y los reactivos se hicieron reaccionar durante 10 minutos a 30°C. Esto se siguió por el manchado de la solución de reacción resultante en papel p81 de fosfocelulosa. El papel p81 se lavó con una solución al 3% de fosfato y se midió la radioactividad. Para cada condición de reacción, las reacciones que no involucran péptido SAMS se realizaron también y los valores básicos se sustrajeron de los valores totales. Como puede observarse de la Figura 1 , cuando las células del mioblasto, C2C12, se trataron con extractos de Danshen y derivados de tanshinona, esto conduce a una actividad enzimática incrementada de la AMPK.

EJEMPLO 4 Determinación de los niveles de expresión de las enzimas t-AMPK, p- AMPK, p-ACC y GLUT 4 Las células del mioblasto, C2C12, se cultivaron en DMEM que contiene suero de ternero bovino al 10%. Cuando la densidad celular alcanzó un intervalo de aproximadamente 85% a 90%, el medio de cultivo se reemplazó con medio de suero de ternero bovino al 1 % para inducir la diferenciación celular. Las células diferenciadas se trataron con derivados de tanshinona 30 µm, respectivamente. La actividad enzimática de la AMPK, se midió usando las células C2C12 para obtener los extractos de proteína y sometiendo los extractos de proteína a análisis de Western Blot para determinar la cantidad de proteínas de la AMPK, p-AMPK (AMPK fosforílada), p-ACC (acetil-CoA carboxilasa fosforilada) y GLUT4 (transportador 4 de la glucosa) totales. Como puede observarse de las Figuras 2A-2B, cuando se compara con el grupo de control, las células tratadas con el derivado de tanshinona exhibieron una cantidad incrementada de la proteína AMPK fosforilada, una cantidad incrementada de la proteína ACC fosforilada y un nivel de expresión incrementado de la proteína GLUT4, incluso aunque no hubo cambio en la cantidad total de la proteína AMPK.

EJEMPLO 5 Efectos del derivado de tanshinona en el metabolismo de los ácidos grasos y la biosíntesis de las mitocondrias Las células del mioblasto, C2C12, se cultivaron en DMEM que contiene suero de ternero bovino al 10%. Cuando la densidad celular alcanzó un intervalo de aproximadamente 85% a 90%, el medio de cultivo se reemplazó con medio de suero de ternero bovino al 1 % para inducir la diferenciación celular. Las células diferenciadas se trataron con derivados de tanshinona 30 µm, respectivamente. Los ARN se extrajeron de las células y se realizó la RT-PCR para observar los efectos de los derivados de tanshinona respectivos en la expresión del gen de ACC-1 (acetil-CoA carboxilasa-1 ), ACC-2, CPT1 (camitina palmitoiltransferasa I), PGC 1a (coactivador 1a del receptor gamma activado por el proliferados de la peroxisoma), GLUT1 (transportador 1 de la glucosa) y UCP-2 (proteína 2 de desacoplamiento). Como puede observarse de las Figuras 3A-3G, cuando se compara con el grupo de control, las células tratadas con el derivado de tanshinona exhibieron un nivel de expresión incrementada de genes para ACC-1 , ACC-2, CPT1 , PGC-1 a, UCP-2 y GLUT1.

EJEMPLO 6 Análisis del grado de la captación de la glucosa Las células de mioblasto, C2C12, se cultivaron en DMEM que contiene suero de ternero bovino al 10%. Cuando la densidad celular alcanzó un intervalo de aproximadamente 85% a 90%, el medio de cultivo se reemplazó con medio de suero de ternero bovino al 1 % para inducir la diferenciación celular. Las células completamente diferenciadas se cultivaron además en Amortiguador de Krebs-Ringer (KRB), que contiene glucosa 5 mM, durante 2 horas adicionales. Las células se trataron con los derivados de tanshinona durante un periodo de tiempo predeterminado, se agregó la 2-desoxiglucosa 0.2 µCi a las mismas, y se dejó reposar durante 2 minutos. Después de eliminar el amortiguador KRB, las células se lavaron en amortiguador de suero fisiológico enfriado con hielo, y las células se usaron utilizando NaOH 0.5 N, seguido por la determinación de los conteos por minuto (cpm), utilizando un contador de radiación. En este caso, la captación no específica de glucosa se determinó con el amortiguador KRB que contiene Citocalasina B 10 µM y se sustrajo del valor total. Como puede observarse de la Figura 4, cuando las células C2C12 se trataron con los derivados de tanshinona 30 µM, respectivamente, las células así tratadas exhibieron una captación incrementada de glucosa, en comparación con el grupo de control.

EJEMPLO 7 Determinación de la actividad inhibidora de la diferenciación del adipocito Los preadipocitos, 3T3-L1 y F442A, se cultivaron en DMEM que contiene suero de ternero bovino al 10%. Cuando la densidad celular de los preadipocitos respectivos alcanzó aproximadamente 90%, las células 3T3-L1 se trataron con Dexametasona, IBMX e insulina durante aproximadamente 48 a 55 horas para inducir la diferenciación de los adipocitos. A continuación, el medio de cultivo se reemplazó con un medio que contiene suero de ternero fetal e insulina cada 2 días. En el caso de las células F442A, cuando la densidad celular de los preadipocitos alcanzó aproximadamente 90%, el medio de cultivo se reemplazó con un medio que contiene suero de bovino fetal al 10% e insulina, y el medio de cultivo se reemplazó cada 2 días, para inducir la diferenciación de los adipocitos. Con el fin de determinar los efectos inhibidores de la diferenciación de los adipocitos, las células de las etapas tempranas de la diferenciación de adipocitos se trataron con los derivados de tanshinona, que se extrajeron de Danshen, en una concentración de 5 a 30 µM, y se compararon con el grupo de control. La diferenciación de más del 90% de las células en adipocitos toma aproximadamente 12 a 15 días. Con el fin de estudiar la actividad de las fracciones respectivas, las células se trataron durante el mismo periodo de tiempo que el grupo de control y se observaron bajo el microscopio para examinar la eficacia del tratamiento con el derivado de tanshinona. Las Figuras 5A-5C son micrografías que comparan la capacidad de diferenciación de los adipocitos entre el grupo tratado con derivados de tanshinona y el grupo de control, con respecto al tiempo de inducción de la diferenciación del adipocito. En el caso del grupo de control, la diferenciación de 80 a 90% de las células F442A en adipocitos tomo aproximadamente 11 días. Mientras tanto, en el caso del grupo tratado con un derivado de tanshinona, cuando las células se trataron con una concentración de derivados de tanshinona de 30 µM desde la etapa inicial de diferenciación, únicamente 5 a 10% de las células se diferenciaron en adipocitos en el mismo periodo de tiempo.

EJEMPLO 8 Efectos de los derivados de tanshinona en la sensibilidad de la insulina en las células musculares Las células de mioblasto, C2C12, se cultivaron en DMEM que contiene suero de ternero bovino al 10%. Cuando la densidad celular alcanzó un intervalo de aproximadamente 85% a 90%, el medio de cultivo se reemplazó con medio de suero de ternero bovino al 1 % para inducir la diferenciación celular. Tratando las células de mioblasto diferenciadas con insulina y derivados de tanshinona de manera separada, en combinación de los mismos, el grado de captación de glucosa con respecto a varias concentraciones de los derivados de tanshinona se determinó, y por lo tanto se examinaron los efectos de los derivados de tanshinona en la sensibilidad a la insulina. Como puede observarse en las Figuras 6A-6B, cuando los derivados de tanshinona se administraron a varias concentraciones en la presencia de insulina, esta exhibió una captación facilitada de glucosa dependiente de la concentración, en las células musculares, en comparación con el grupo al cual se le administró la insulina sola y el grupo de control.

EJEMPLO 9 Ensayo de los efectos profilácticos y terapéuticos de la obesidad en un modelos animal de la obesidad, ratones DIO Como el modelo de ratón más utilizado comúnmente para la obesidad inducida por la dieta (DIO), los ratones C57BL/6 machos de 4 semanas de edad, se alimentaron con una dieta alta en grasas (D12451 , 45% de kcal de grasa, Research Diets, New Brunswick, NJ). Como resultado, la grasa se acumuló de manera excesiva en el cuerpo del animal, y aproximadamente 3 después del nacimiento, los ratones mantenían entonces un peso corporal de más de 31 a 32 g, que es 1.4 veces el de los ratones normales. Con el fin de examinar los efectos de los derivados de tanshinona en el metabolismo de las grasas, los ratones DIO de 3 meses de edad (16 animales), que pesan 31 a 32 g, se dividieron en dos grupos, un grupo experimental y un grupo de control que consiste de 8 animales cada uno. A los 8 ratones del grupo experimental se les administraron derivados de tanshinona a una concentración de 100 mg/kg, durante 30 días, a un punto de medición predeterminado. Mientras tanto, al grupo de control se le administró una cantidad igual de agua destilada sola. Cuando los pesos corporales del grupo experimental y el grupo de control se midieron después de 30 días de administración, el grupo experimental al cual se le administraron los derivados de tanshinona, exhibió un peso corporal significativamente menor, en comparación con el grupo de control, como se muestra en el Cuadro 1.

CUADRO 1 Resultados de los efectos de la criptotanshinona en los cambios en el peso corporal con respecto al tiempo, después del tratamiento de un modelo animal de la obesidad, ratones DIO (obesidad inducida por la dieta), con criptotanshinona Peso corporal Peso corporal Disminución en inicial final el peso corporal (%) Control 33+0.27 32.4±0.2 2+0.2 Criptotanshinona 32±0.05 29.8±0.45 10±0.32 15,16-dihidrotanshinona 33±0.07 29±0.3 12±0.27 EJEMPLO 10 Efectos de la administración de los derivados de tanshinona en ratones obesos (ob/ob) Ratones machos C57BL/6JL Lep ob/Lep ob de 10 semanas de edad que tienen características de obesidad se compraron de Daehan Biolink Co., Ltd. (Chungchongbuk-do, Corea). Los animales se criaron en una sala de cría mantenida a una temperatura de 23°C, 55% de humedad, iluminación de 300 a 500 lux, un ciclo de luz-oscuridad de 12:12 horas y ventilación de 10 a 18 veces/hora. Los animales se alimentaron con granulos de Purina Rodent Laboratory Chow 5001 (comprado de Purina Mills Inc., St. Louis, MO, EUA) y agua ad libitum. Los ratones se dejaron aclimatar a su nuevo ambiente en la sala de cría durante dos semanas y se les administró 300 mg/kg de derivados de tanshinona durante 26 días. Se hicieron observaciones en los cambios del peso corporal, glucosa en la sangre e ingesta dietética, con respecto a los puntos de medición de la administración. Después de la terminación de la administración, se realizó una Tomografía computarizada (CT) para confirmar los cambios en la distribución del tejido de la grasa de los animales, los cambios en la distribución de la grasa de los tejidos en varios órganos, los cambios en el tamaño de los adipocitos, la glucosa en sangre y el hígado, y cambios en los lípidos y enzimas. El Cuadro 2 muestra los efectos de la pérdida del peso corporal de acuerdo con la administración de los derivados de tanshinona.

CUADRO 2 Peso corporal Peso corporal Disminución en inicial (g) final (g) el peso corporal (%) Control 50±0.23 52+0.5 -4±0.04 Criptotanshinona 53±0.073 48.8±0.22 8±0.32 15, 16-dihidrotanshinona 53±0.07 49+0.3 7+0.27 Tanshinona II A 52±0.25 47±0.3 9±0.01 Tanshinona I 54±0.4 50+0.05 7±0.24 La Figura 7 es una gráfica que compara los cambios en el peso corporal con respecto al tiempo, entre ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob, a los que se les administró derivados de tanshinona y un grupo de control. Como puede observarse de la Figura 7, la administración de derivados de tanshinona conduce a una reducción significativa en el peso corporal, en comparación con el grupo de control.

La Figura 8 es una gráfica que compara el tamaño del adiposito en términos de valores numéricos, entre ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob a los cuales se les administró los derivados de tanshinona y un grupo de control. Como puede observarse de la Figura 8, el grupo experimental al cual se le administró los derivados de tanshinona, exhibieron una reducción de más del 60% en el tamaño del adiposito, en comparación con el grupo de control. Las Figuras 9A-9B son una gráfica que compara la distribución de la grasa en términos de valores numéricos para los órganos respectivos entre los ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob a los cuales se les administró los derivados de tanshinona y un grupo de control. Como puede observarse de la Figura 9A-9B, el grupo experimental al cual se le administró los derivados de tanshinona, exhibió una reducción significativa en el contenido de grasa de los tejidos para todos los órganos, e incrementó el contenido de grasa marrón en comparación con el grupo de control, indicando que el metabolismo de las grasas se incrementó de manera significativa. Las Figuras 10A-10B son una gráfica que compara la distribución del tejido adiposo en el hígado mediante tinción H&E y tinción con Aceite Rojo O, para ratones normales, ratones obesos y ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob a los cuales se les administraron los derivados de tanshinona. Como se muestra en las Figuras 10A-10B, se confirmó a través de la tinción de los tejidos adiposos que la administración de los derivados de tanshinona resultó en una reducción pronunciada de la acumulación de grasa en el hígado, en comparación con el grupo de control de ratones obesos.

El Cuadro 3 muestra los resultados para los cambios en los materiales indicadores de la antioxidación en los tejidos del hígado de ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob a los cuales se les administraron los derivados de tanshinona y un grupo de control. Como puede observarse del Cuadro 3, el grupo al cual se le administró los derivados de tanshinona, exhibió reducciones significativas en el contenido de grasa total, triglicéridos, colesterol, GOT y GPT en el hígado, en comparación con el grupo de control.

CUADRO 3 Comparación de los cambios en los lípidos y los materiales indicadores de la antioxidación en los tejidos del hígado entre el grupo de tratamiento y el grupo de control, después del tratamiento de un modelo animal de la obesidad, ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob, con derivados de tanshinona Control Criptotanshinona 15,16-dihidrotanshinona Grasa (g/g. hígado) 0.21+0.03 0.15+0.08 0.18+0.06 Triglicérido (mg/g. 86.3±19.5ab 32.2±18.8° 37.2+17.2C hígado) GOT (u/dL) 62.5±23.1a 22.3±7.2a 27.3±7.2C GTP (u/dL) 47.0+10.6a 20.1±6.1 22.1±7.1 b Colesterol (mg/g. hígado) 5.8±1.6ab 5.5+2.9 5.6±2.9 El Cuadro 4 es un cuadro que compara los cambios en los lípidos y la glucosa en la sangre entre ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob a los cuales se les administró los derivados de tanshinona y un grupo de control.

Como puede observarse del Cuadro 4, el grupo al cual se administró los derivados de tanshinona exhibió reducciones significativas en los triglicéridos, colesterol, GOT y glucosa en sangre, en comparación con el grupo de control.

CUADRO 4 Comparación de los cambios en los lípidos y la glucosa entre el grupo de tratamiento y el grupo de control, después del tratamiento ce un modelo animal de la obesidad, ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob, con derivados de tanshinona Control Criptotanshinona 15,16-dihidrotanshinona Triglicérido (mg/dL) 260.6±24.3a 153.6±14.6b 167.2±14.6b Colesterol (mg/dL) 163.5±8.4a 120.1±72.1 135.1±73.1 Glucosa en sangre 168.4±55.0a 122.4±67.1 127.4±67.1 (mg/dL) Las Figuras 11A-11 D muestran los resultados analizados de la Tomografía computarizada (CT) de los ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob a los cuales se les administraron los derivados de tanshinona. Como puede observarse de las Figuras 11A-11D, el grupo experimental al cual se le administró los derivados de tanshinona exhibió una reducción significativa en la reducción de la grasa visceral, en comparación con el grupo de control.

EJEMPLO 11 Ensayo de los efectos profilácticos y terapéuticos en la diabetes en un modelo animal de la diabetes, ratones Lepr db/Lepr db Los ratones Lepr db/Lepr db macho carecen de receptores de la leptina, y por lo tanto de manera continua y excesiva, consumen alimento debido a su apetito no controlado. Como resultado, la grasa se acumula de manera excesiva en el cuerpo del animal y el nivel de glucosa en la sangre está elevado, resultando en aproximadamente 350 a 400 mg/dl de nivel de glucosa en la sangre, aproximadamente 10 a 11 semanas después del nacimiento. Con el fin de examinar los efectos profilácticos y terapéuticos de la diabetes por los derivados de tanshinona, los ratones Lepr db/Lepr db machos adultos con un nivel de glucosa en sangre de aproximadamente 350 a 400 mg/dl se dividieron en dos grupos, un grupo experimental y un grupo de control, que consisten de 10 animales cada uno. A 10 ratones del grupo experimental se les administraron derivados de tanshinona a una concentración de 300 mg/kg durante 12 días. Mientras que a 10 ratones del grupo de control se les administró una cantidad igual de agua destilada sola, en lugar de los derivados de tanshinona. El Cuadro 5 es un cuadro que muestra los cambios en la glucosa en sangre con respecto a la administración de los derivados de tanshinona y puede observarse que hay efectos que disminuyen la glucosa en sangre por los derivados de tanshinona.

CUADRO 5 Efectos de los derivados de tanshinona en los cambios en la glucosa en sangre, después del tratamiento de un modelo de obesidad animal, ratones Lepr db/Lepr db, con los derivados de tanshinona Glucosa en Glucosa en Disminución en sangre inicial sangre final la glucosa en (mg/dl) (mg/dl) sangre (%) Control 400±1.24 430±5.6 -7.5±0.2 Criptotanshinona 400±2.56 200±4.7 50±0.33 15,16-dihidrotanshinona 410±0.6 250±4.9 61±0.89 EJEMPLO 12 Efectos sinergísticos de la actividad de la AMPK con respecto a relación de combinación entre derivados de tanshinona Utilizando células musculares, este ejemplo se llevó a cabo para confirmar los efectos sinergísticos de la actividad de la AMPK con respecto a la relación de combinación entre derivados, que contiene tanshinona I, tanshinona HA, criptotanshinona y 15,16-dihidrotanshinona I, como ingredientes principales. Esto es, intentamos confirmar las funciones intercomplementarias entre derivados, de acuerdo con la expresión del gen, como se muestra en el Ejemplo 5, y por lo tanto, los efectos sinergísticos por cualquier combinación de los derivados de tanshinona a través de la actividad de la AMPK. Los ingredientes respectivos de tanshinona I, tanshinona HA, criptotanshinona y 15,16-dihidrotanshinona I se combinaron de manera doble o triple para preparar diferentes composiciones. La actividad de la AMPK de las composiciones preparadas y la actividad de la AMPK de los ingredientes respectivos incluidos en estas composiciones, se comparó para confirmar los efectos sinergísticos. Además, intentamos confirmar la actividad de la AMPK con respecto a los cambios en la relación de combinación, variando la relación entre los ingredientes en las composiciones, y para obtener los efectos sinergísticos de la actividad mediante cualquier combinación de derivados de tanshinona. El Cuadro 6 es un cuadro que compara la actividad de las composiciones mediante una combinación doble de derivados de tanshinona, el Cuadro 7 es un cuadro que muestra los cambios en la actividad con respecto a los cambios de la relación de ingredientes en combinaciones dobles, y el Cuadro 8 es un cuadro que compara la actividad de la AMPK de las composiciones mediante una combinación triple de los derivados de tanshinona.

CUADRO 6 Comparación de la actividad de las composiciones por una combinación doble de los derivados de tanshinona de acuerdo con la presente invención CUADRO 7 Cambios en la actividad con respecto a los cambios de la relación de ingredientes en las composiciones de la presente invención CUADRO 8 Comparación de la actividad de la AMPK de composiciones por una combinación triple de derivados de tanshinona de acuerdo con la presente invención Primero, como puede observarse de los Cuadros 6 y 7, las composiciones que contienen una combinación de dos o tres componentes de los derivados de tanshinona exhibieron una actividad significativamente mayor de la AMPK que aquéllas de los ingredientes respectivos, a la misma concentración. Puede observarse que tales efectos sinergísticos debidos a las combinaciones de los ingredientes del derivado son un fenómeno bastante único que no tiene relación con las clases de ingredientes. Como puede observarse del Cuadro 7, las diferencias en la relación de combinación entre los ingredientes respectivos en las mismas composiciones, resultó en una actividad específicamente diferente de la AMPK dependiendo de las clases de ingredientes.

EJEMPLO 13 Efectos sinergísticos de la reducción del peso corporal con respecto a la relación de combinación entre los derivados de tanshinona Ratones C57BL/6JL Lep ob/Lep ob machos de 10 semanas de edad, que tienen características de obesidad, se compararon de Darhan Biolink Co., Ltd. (Chungchongbuk-do, Corea). Los animales se criaron en una sala de cría mantenida a una temperatura de 23°C, 55% de humedad, iluminación de 300 a 500 lux, un ciclo de luz-oscuridad de 12:12 horas y ventilación de 10 a18 veces/hora. Los animales se alimentaron con granulos de Purina Rodent Laboratory Chow 5001 (comprado de Purina Mills Inc., St. Louis, MO, EUA) y agua ad libitum. Los ratones se dejaron aclimatar al nuevo ambiente de la sala de cría durante dos semanas y se les administraron los derivados de tanshinona. Los derivados de tanshinona contenidos en el extracto de Danshen se dividieron en dos grupos: un grupo del derivado de tetrahidrofenantreno (relación 1 :1 de criptotanshinona y tanshinona HA) y un grupo de derivado de fenantreno (relación 2:1 de tanshinona I y 15,16-dihidrotanshinona I), y la relación entre los derivados de tanshinona se ajustó opcionalmente. De esta manera, intentamos examinar los efectos de los cambios en la relación de ingredientes en el peso corporal y confirmar así los efectos de las acciones intercomplementarias. La relación de combinación entre el grupo del derivado de tetrahidrofenantreno y un grupo del derivado de fenantreno varió de 10:1 a 1 :10 y se les administró a los animales una dosis de 300 mg/kg durante 26 días. Los cambios en el peso corporal con la administración de los derivados se midió y los efectos de la reducción del peso corporal con respecto a los cambios en la relación del ingrediente se muestra en el Cuadro 9. Como puede observarse del Cuadro 9, los cambios en la relación de combinación entre el derivado de tetrahidrofenantreno y un derivado de fenantreno conducen a los cambios en la reducción (%) del peso corporal. En particular, se confirmaron excelentes efectos sinergísticos, cuando la relación de combinación (un derivado de tetrahidrofenantreno:derivado de fenantreno) estuvo en el intervalo de 5:1 a 1 :5 y de manera más preferida, en el intervalo de 2.5:1 a 1 :2.5.

CUADRO 9 Resultados de los efectos de la relación de combinación entre un grupo del derivado de tetrahidrofenantreno y un grupo del derivado de fenantreno de los derivados de tanshinona en los cambios del peso corporal, después del tratamiento de un modelo animal de la obesidad, ratones C57BL 6JL Lep ob/Lepo be, a varias relaciones de combinación EJEMPLO 14 Prueba de toxicidad aguad 1. Administración oral Los ratones ICR, que pesan 23±2 g y ratas Sprague-Dawley, que pesan 250±7g (Jung-Ang Lab Animal Inc., Seúl, Corea) se dividieron en 4 grupos, que consisten de 10 animales cada uno, y se les administraron oralmente los derivados de tanshinona de acuerdo con la presente invención a dosis de 100, 500 y 1 ,000 mg/kg, respectivamente. Después de la administración oral, tras observar durante 2 semanas si la toxicidad se exhibía o no, ninguno de los animales murió en los cuatro grupos y no se notaron síntomas observables visualmente en comparación con el grupo de control (excepto la pérdida de peso). 2. Administración peritoneal Los ratones ICR, que pesan 25±3 g y ratas Sprague-Dawley, que pesan 255±6g (Jung-Ang Lab Animal Inc., Seúl, Corea) se dividieron en 4 grupos, que consisten de 10 animales cada uno, y se les administraron peritonealmente los derivados de tanshinona de acuerdo con la presente invención a dosis de 10, 50 y 100 mg/kg, respectivamente. Después de la administración peritoneal, tras observar durante 2 semanas si se exhibía toxicidad o no, ninguno de los animales murió en los cuatro grupos y no se notaron síntomas observables visualmente en comparación con el grupo de control (excepto la pérdida de peso). Se confirmó de los resultados mencionados anteriormente que los derivados de tanshinona de acuerdo con la presente invención no tienen toxicidad aguda. Aquí posteriormente, se describirán los Ejemplos de Preparación de la composición farmacéutica de acuerdo con la invención. Estos ejemplos se proporcionan únicamente para ilustrar la presente invención y no deben considerarse como que limitan el alcance y espíritu de la presente invención.

EJEMPLO 15 Preparación de la tableta Derivados de tanshinona 200 g Proteína de suero de leche 640 g Celulosa cristalina 140 g Estearato de magnesio 10 g Hidroxipropilmetilcelulosa 10 g EJEMPLO 16 Preparación de la formulación en polvo Derivados de tanshinona 10 g Proteína de soya 50 g Carboxicelulosa 40 g Total 100 g EJEMPL0 17 Aplicación de los derivados de tanshinona en la leche Leche 99.9 % Derivados de tanshinona 0.1 % EJEMPLO 18 Aplicación de los derivados de tanshinona en jugo de naranja Fructosa líquida 5% Polidextrosa 1 % Acido cítrico 5% Vitamina C 0.02% Derivados de tanshinona 0.1 % Concentrados de jugo de naranja 25% Ester de ácido graso de sucrosa 0.2% Agua 63% EJEMPL0 19 Preparación de bebidas Lactato de calcio 50 mg Acido cítrico 5 mg Amida nicotínica 10 mg Clorhidrato de riboflavin sódica 3 mg Clorhidrato de piridoxina 2 mg Arginina 10 mg Ester de ácido graso de sucrosa 10 mg Derivados de tanshinona 10 mg Agua 200 mi EJEMPLO 20 Aplicación de los derivados de tanshinona para una loción cosmética 1 ,3-butilenglicol 5% Glicerina 5% EDTA-2Na 1.02% Trimetilglicina 2.0% Cetanol 1.0% Emulsificante de monoestearato de glicerilo 1.0% Polisorbato 60 1.2% Sesquioleato de sorbitan 0.3% 2-Etil-hexanoato de cetilo 4.0% Escualeno 5.0% Dimeticona 0.3% Estearato de glicerilo 0.5% Carbómero 0.15% Trietanolamina 0.5% Imidazolidinil urea 0.2% Derivados de tanshinona 1 % Agua purificada 71.8% EJEMPLO 21 Aplicación de los derivados de tanshinona para el cuidado cosmético de la piel 1 ,3-butilenglicol 4.0% Dipropilenglicol 5.0% EDTA-2Na 0.02% OctiIdodeceth-16 0.3% Aceite de ricino hidrogenado PEG60 0.2% Derivados de tanshinona 0.1% Agua purificada 90% Aplicabilidad industrial Como se describió anteriormente, una composición de acuerdo con la presente invención, reduce de manera efectiva el peso corporal a través de la activación metabólica, previene la acumulación de grasa en el cuerpo, disminuye el nivel de glucosa en sangre y disminuye de manera efectiva las cantidades de colesterol y triglicéridos, y por lo tanto, es útil para prevenir y tratar el síndrome metabólico. Además, las composiciones evitan la acumulación de grasa en el cuerpo, así como mejora la sensibilidad a la insulina, controlando así el nivel de glucosa en sangre y por lo tanto, pueden ser útiles en desarrollar alimentos, cosméticos y composiciones medicinales capaces de evitar o tratar varias enfermedades asociadas con el síndrome metabólico que resulta de la disfunción de la grasa y el metabolismo de la glucosa.

Aunque las modalidades preferidas de la presente invención se han descrito para propósitos ilustrativos, aquellos con experiencia en la técnica apreciarán que varias modificaciones, adiciones y sustituciones son posibles, sin apartarse del alcance y el espíritu de la invención, como se describe en las reivindicaciones acompañantes.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Una composición para prevenir o tratar la obesidad y las enfermedades del síndrome metabólico, que comprende una cantidad terapéuticamente y/o profilácticamente efectiva de extracto de Danshen {Salvia miltiorrhiza) como un ingrediente efectivo.

2.- La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el extracto de Danshen comprende uno o más compuestos seleccionados de un derivado de tetrahidrofenantreno y un derivado de fenantreno.

3.- La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el derivado de tetrahidrofenantreno comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona y tanshinona HA.

4.- La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el derivado de fenantreno comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de tanshinona I y 15,16-dihidrotanshinona I.

5.- La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el extracto de Danshen comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona, tanshinona HA, 15,16-dihidrotanshinona I y tanshinona I.

6.- La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque comprende: uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de 1ß-hidroxicriptotanshinona, 1-oxocriptotanshinona, tanshinol B, tanshinol IIB, przewaquinona A, dihidroisotanshinona I, sulfonato de tanshinona HA, 1 ,2dihidrotanshinona I y tanshinona VI.

7.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 hasta 6, caracterizada además porque la relación del derivado de tetrahidrofenantreno:derivado de fenantreno está en el intervalo de 10:1 a 1 :10 (peso/peso).

8.- La composición de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada además porque la relación del derivado de tetrahidrofenantreno:derivado de fenantreno está en el intervalo de 5:1 a 1 :5.

9.- La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada además porque la relación del derivado de tetrahidrofenantreno:derivado de fenantreno está en el intervalo de 2.5:1 a 1 :2.5.

10.- La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el un derivado de tetrahidrofenantreno incluye criptotanshinona y tanshinona HA, y la relación entre ellos está en el intervalo de 1 :5 a 5:1 (peso/peso).

11.- La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el un derivado de fenantreno incluye 15,16- dihidrotanshinona I y tanshinona I, y la relación entre ellos está en el intervalo de 1 :5 a 5:1 (peso/peso).

12.- La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque la composición comprende criptotanshinona como el ingrediente principal.

13.- La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque la composición comprende 15,16-dihidrotanshinona I como el ingrediente principal.

14.- La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque la composición comprende tanshinona HA como el ingrediente principal.

15.- La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque la composición comprende tanshinona I como el ingrediente principal.

16.- La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque la composición comprende criptotanshinona como el ingrediente esencial, y opcionalmente, comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de tanshinona HA, 15,16-dihidrotanshinona I y tanshinona I.

17.- La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque la composición comprende tanshinona HA como el ingrediente esencial, y opcionalmente, comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona, 15,16-dihidrotanshinona I y tanshinona l.

18.- La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque la composición comprende 15,16-dihidrotanshinona I como el ingrediente esencial, y opcionalmente, comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona, tanshinona HA y tanshinona I.

19.- La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque la composición comprende tanshinona I como el ingrediente esencial, y opcionalmente, comprende uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste de criptotanshinona, tanshinona HA y 15,16-dihidrotanshinona I.

20.- La composición de conformidad con la reivindicación 16 ó 18, caracterizada además porque la composición comprende tanto criptotanshinona como 15,16-dihidrotanshinona I.

21.- La composición de conformidad con la reivindicación 16 ó 17, caracterizada además porque la composición comprende tanto criptotanshinona como tanshinona HA.

22.- La composición de conformidad con la reivindicación 17 ó 18, caracterizada además porque la composición comprende tanto tanshinona HA como 15,16-dihidrotanshinona I.

23.- La composición de conformidad con la reivindicación 17 ó 19, caracterizada además porque la composición comprende tanto tanshinona HA como tanshinona I.

24.- La composición de conformidad con la reivindicación 18 ó 19, caracterizada además porque la composición comprende tanto 15,16-dihidrotanshinona I como tanshinona I.

25.- La composición de conformidad con la reivindicación 16 ó 19, caracterizada además porque la composición comprende tanto tanshinona I como criptotanshinona.

26.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 hasta 25, caracterizada además porque la relación de mezclado entre ambos ingredientes está en el intervalo de 10:1 a 1 :10 (peso/peso).

27.- La composición de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada además porque la relación de mezclado está en el intervalo de 5:1 a 1 :5.

28.- La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la enfermedad del síndrome metabólico es al menos una seleccionada del grupo que consiste de obesidad, diabetes, arteriosclerosis, hipertensión, hiperlipidemia, enfermedades hepáticas, apoplejía cerebral, infarto al miocardio, enfermedades isquémicas y enfermedades cardiovasculares.

29.- La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la composición incrementa la actividad de la proteína cinasa activada por 5' AMP (AMPK).

30.- La composición de conformidad con la reivindicación 29, caracterizada además porque la composición incrementa la actividad de la AMPK para fomentar la recaptación celular de la glucosa en la sangre, reduciendo por lo tanto el nivel de glucosa en la sangre.

31.- La composición de conformidad con la reivindicación 29, caracterizada además porque la composición incrementa la actividad de la AMPK para exhibir la actividad inhibidora en la obesidad.

32.- La composición de conformidad con la reivindicación 29, caracterizada además porque la composición incrementa la actividad de la AMPK para exhibir la actividad reductora de los lípidos en la sangre.

33.- La composición de conformidad con la reivindicación 29, caracterizada además porque la composición incrementa la actividad de la AMPK para exhibir la actividad de la inhibición del daño hepatocítico y la formación de grasa en el hígado.

34.- La composición de conformidad con la reivindicación 29, caracterizada además porque la composición incrementa la actividad de la AMPK para exhibir la actividad terapéutica en la arteriosclerosis, hipertensión, apoplejía cerebral, enfermedades isquémicas y enfermedades cardiovasculares.

35.- Una formulación farmacéutica para prevenir y/o tratar la obesidad y las enfermedades del síndrome metabólico, que comprende la composición que se define en la reivindicación 1 como el ingrediente activo y uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables.

36.- La formulación de conformidad con la reivindicación 35, caracterizada además porque el contenido del ingrediente activo está en el intervalo de 0.0001 a 10% en peso.

37.- La formulación de conformidad con la reivindicación 35, caracterizada además porque la formulación es una forma de dosificación múltiple o unitaria para la administración oral o parenteral, incluyendo tabletas, polvo, cápsulas duras o suaves, suspensiones, preparaciones inyectables y emulsiones.

38.- La formulación de conformidad con la reivindicación 35, caracterizada además porque el ingrediente activo en la formulación se administra en el intervalo de 0.1 a 6000 mg/día/kg de peso corporal, para adultos.

39.- La formulación de conformidad con la reivindicación 35, caracterizada además porque la formulación comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, de manera que puede prepararse en la forma de bebidas, alimentos o cosméticos.

40.- Un procedimiento para preparar un extracto de Danshen, que comprende: someter el Danshen {Salvia miltiorrhiza) a extracción con agua o un solvente orgánico para obtener extractos crudos; filtrando los extractos crudos, seguido por concentración (vacío); y opcionalmente, eliminación del solvente.

41.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 40, caracterizada además porque el Danshen es un material farmacológico seco o un material farmacológico sin tratar.