KR100955726B1 - 혈중 지질개선, 체지방감소 또는 혈행개선 효과를 갖는블렌시아 살미언티 추출물 - Google Patents
혈중 지질개선, 체지방감소 또는 혈행개선 효과를 갖는블렌시아 살미언티 추출물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 블렌시아 살미언티(Bulnesia sarmienti)의 추출물 및 이에 단삼 또는 상백피를 단독 또는 복합 추가한 혼합추출물의 용도에 관한 것으로, 상기 추출물은 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈행개선 효과를 나타내는바, 비만 억제 내지 혈전증 예방용 식품 또는 약제학적 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
블렌시아 살미언티(Bulnesia sarmienti), 체지방, 혈중지질개선, 혈행개선, 혈전증, 콜레스테롤
Description
본 발명은 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈행개선 효과를 갖는 블렌시아 살미언티(B. sarmienti) 추출물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 블렌시아 살미언티의 추출물 또는 이에 단삼 또는 상백비를 단독 또는 복합 추가한 혼합추출물의 체지방 감소 용도, 혈중지질개선 용도, 혈행개선에 따른 혈전증 예방 및 치료 용도에 관한 것이다.
서구 식생활이 도입되면서 동물성 식품 및 가공식품 등을 통하여 열량의 섭취가 증가하고 있고, 성인병으로 비만, 당뇨병, 고혈압, 동맥경화 및 심혈관계질환 등이 늘어나고 있다. 특히 동물성 지방의 과다한 섭취로 인한 혈액내의 고 콜레스테롤과 고 중성지방이 만성 성인병의 발병에 중요한 원인으로 여겨지고 있다.
혈중 콜레스테롤 농도는 콜레스테롤 섭취량에 따라 생합성이 조절되어 일정 하게 유지되나 과량으로 섭취 시 여러 가지 대사성 질환을 유발한다. 고지방의 과도한 섭취는 가장 먼저 고지혈증으로 이어져 동맥경화를 유발하게 된다. 고지혈증(hyperlipedemia)은 혈액중의 콜레스테롤, 중성지방(트리글리세라이드), 인지질 및 유리지방산 등의 농도가 비정상적으로 증가한 상태로서 가장 직접적으로 영향을 미치는 인자는 혈중 콜레스테롤과 저밀도지단백(LDL)-콜레스테롤을 들 수 있으며, 특히 고콜레스테롤혈증(hypercholesterolemia)은 죽상동맥경화증(atherosclerosis)을 유발하는 것으로 알려져 있다.
죽상동맥경화증은 혈관벽을 따라 지질이 두껍게 쌓여 혈류를 감소시켜 허혈성 심장질환과 협심증, 심근경색의 원인이 되므로 임상적으로 중요한 문제가 되고 있다. 동맥경화란 동맥내벽에 지방질 및 섬유조직 쌓여 혈관벽이 좁아지거나 막히게 되는 것으로, 고혈압, 고지혈증 및 흡연은 동맥경화 발생을 촉진시키는 3대 위험 요소이며, 이외에도 운동부족, 당뇨병, 비만증, 스트레스 등에 의해 발생률이 높아진다. 동맥경화가 가벼우면 활동에 지장은 없으나 동맥경화로 관상조직 50~70%이상 좁아지거나 막히면 동맥경화성 심장병이 야기된다. 동맥 경화증은 심한 경우 동맥의 파열이 일어나는 것으로 여러 순환계 질환, 즉 고혈압, 협심증, 뇌혈관질환(뇌일혈)등의 주요 원인이 되고 있다.
따라서 혈액내의 이들 지질 수준을 저하시키기 위한 치료 및 예방책의 일환으로 식생활에 대한 관심이 모아지고 있다. 식품에 대한 관심 역시 영양적인 측면이나 기호성을 고려한 1차적, 2차적 기능보다 질병의 치료 및 예방에 관계되는 3차적 기능인 측면에 더 관심이 높다.
민간요법은 과거의 개인적 경험에서 효과가 구전되어 지는 것으로 대부분 과학적 근거가 희박하며 과량 섭취로 인한 독성이나 제조공정 및 보관상의 오염, 변질의 위험성을 가지고 있다. 따라서 민간요법으로 쓰이는 약물에 대한 과학적인 접근이 요구된다.
블렌시아 살미언티(Bulnesia sarmienti)는 아메리카 대륙의 깊은 오지에서 야생 형태로만 자생하며 원주민(Native 인디언)들에 의해 신비의 약초라고 하여 질병치유에 많이 이용되어 왔다. 현재 블렌시아 살미언티에서 추출된 구아이악우드 오일(guaiacwood oil)이 미국에서 상품화되어 향기 등으로 판매되고 있으며, 이는 LD50가 5000mg/kg 이상으로 독성이 거의 없는 것으로 확인되었다.
최근 들어 이러한 블렌시아 살미언티 추출물의 항산화 및 항암효과가 밝혀진바 있으나, 혈중 콜레스테롤과 관련된 질환에 대한 효과에 대해서는 아직까지 밝혀진 바 없다.
따라서 본 발명자들은 상기와 같은 관점에서 예의 연구를 거듭하여, 동물실험을 통해 제1형 및 제2형 당뇨모델과 고지방식이로 유도한 고지혈증에 대해 블렌시아 살미언티가 체중 및 혈중 지질 성분변화에 미치는 영향을 조사하고, 그의 혈중지질 개선 효능을 검증하는 한편, 아울러 혈액응고 혈전관련 지표에 대한 효과를 검증함으로써 본 발명에 이르게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈행개선 효과를 갖는 식품 또는 약제학적 조성물을 제공하고자 하는 것으로, 특히 블렌시아 살미언티 추출물의 새로운 용도를 제공하고자 하는데 있다.
본 발명의 상기 목적은 블렌시아 살미언티(Bulnesia sarmienti)의 추출물 및 상기 추출물에 단삼 또는 상백피 추출물을 혼합한 혼합추출물을 제조하고, 상기 추출물들의 체지방감소효과, 혈중지질개선효과 및 혈행개선효과를 확인함으로써 달성하였다.
본 발명은 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈행개선 효과를 갖는 블렌시아 살미언티(Bulnesia sarmienti) 추출물을 제공함을 특징으로 한다. 상기 추출물은 바람직하게는 열수 또는 에탄올 추출하여 제조될 수 있다. 또한 상기 추출물은 0.75 내지 3mg/mL의 농도로 제조될 수 있다.
본 발명은 상기 블렌시아 살미언티 추출물에 단삼 및 상백피로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 추출물을 혼합하여 제조되는 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈행개선 효과를 갖는 혼합추출물을 제공함을 특징으로 한다.
또한 본 발명은 블렌시아 살미언티 추출물 또는 상기 추출물에 단삼 및 상백피로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 추출물을 혼합하여 제조되는 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈전증 예방·치료용 식품조성물을 제공함을 특징으로 한다.
상기 식품조성물은 통상적인 식품 형태(음료, 과자 등)로 제조될 수 있으며, 건강 보조식품형태로 제조될 수 있다.
본 발명은 또한 제 1항 또는 제3항 기재의 추출물을 유효성분으로 함유하는 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈전증 예방·치료용 약제학적 조성물을 제공함을 특징으로 한다. 상기 약제학적 조성물은 통상적인 형태인 정제, 환, 캡슐, 과립 등 다양한 형태로 제조될 수 있다.
본 발명은 체지방감소, 지질개선 또는 혈행개선 효과를 갖는 블렌시아 살미언티 추출물에 관한 것으로, 본 발명의 블렌시아 살미언티 추출물 및 이에 단삼 또는 상백피를 첨가한 추출물은 혈중 지질 감소 및 체지방 감소 효과를 나타내는 바 비만억제용 식품 또는 약제학적 조성물로 유용하게 이용될 수 있다. 또한 상기 추출물은 혈행개선 효과를 나타내는 바, 혈전증 예방, 치료에 유용하게 이용될 수 있으므로, 건강식품 또는 의약산업상 뛰어난 발명이라 할 것이다.
이하 본 발명이 구체적인 실시예를 들어 상세히 설명하고자 하지만, 본 발명의 권리범위는 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.
실시예 1:
블렌시아
살미언트
추출물의 제조
블렌시아 살미언티는 (주)럭키약품에서 구입하여 사용하였다. 블렌시안 살미언티는 0.75 mg/mL, 1.5 mg/mL, 3 mg/mL의 농도로 물과 에탄올로 각각 추출하여 추출물을 제조하였다.
블렌시아 살미언티에 증류수를 가하여 100℃에서 3시간 동안 추출 한 후 여과하여 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 제조하였다. 또한, 블렌시아 살미언트에 에탄올을 가하여 80℃에서 3시간 동안 추출한 후 여과하여 블렌시아 살미언트 에탄올 추출물을 제조하였다.
실험예
1: 당뇨모델에서
블렌시아
살미언트의
혈중지질 개선효과
1. 실험동물 및 사육조건
실험동물로서 생후 4주령 수컷 흰쥐(Sprague Dawley)를 (주)샘타코 바이오코리아(경기도 오산)로부터 구입하여 고형사료와 물을 공급하면서 일주일간 적응시킨 후, 평균체중 281±10.3 g인 것을 사용하였다. 음수로는 자외선으로 멸균된 물을 급여하였고. 사료(pellet diet, 삼양사료 주식회사)를 자유롭게 섭취케 하였다. 실험기간 동안 물과 사육환경은 온도 20-22℃, 상대습도 50±1%, 환기횟수 10~15회/hr, 명암주기는 12시간 간격으로 조도 150~300 lux로 유지하였다.
2. I형 당뇨 유발 및
실험군
구성
I형 당뇨유발은 실험동물을 16시간 절식시킨 후 췌장이 β-세포에만 특이적으로 작용하여 다른 기관에 영향을 미치지 않는다고 알려진 스트렙토조토신(streptozotocin; STZ, S0130, Sigma Chemiacl Co., USA)을 0.1M 시트레이트 완충액(pH 4.5)에 용해시켜 50-65 mg/kg/bw 농도로 꼬리정맥에 주사하여 당뇨를 유도하였다.
정상군은 0.1M 시트레이트 완충액을 당뇨 유발군과 같은 방법으로 주사하였다. 당뇨병의 유발확인은 스트렙토조토신을 주사 24시간 후부터 꼬리정맥으로부터 채취한 혈액을 혈당계(Acctrend GC, Boehringer Mannhein Germany)로 측정하여 혈당이 300 mg/dL 이상인 것을 당뇨 쥐로 간주하였다. 실험군은 평균체중이 유사하도록 6마리씩 정상(정상군-Nondiabetic), 당뇨대조군(대조군-Diabetic), 열수 추출물군(Diabetic- Hot water extract), 에탄올 추출물군(Diabetic-Ethanol extract)으로 나누어 사육하였다. 당뇨 유도 후 시료투여와 함께 8주간 사육하면서 1주일 간격으로 체중을 측정하여 동물의 체중변화 상태를 나타내었다.
3. Ⅱ형 당뇨 유발 및
실험군
구성
Ⅱ형 당뇨유발은 생후 1-2일된 SD래트의 신생자에 STZ를 체중 kg당 60 mg을 복강 내로 단회 투여한 후 8주령에서 혈중 글루코스를 측정하여 혈당이 110 이상인 개체만 선발하여 실험군으로 분리하고, 이를 8 주 동안 사육하면서 1주일 간격으로 혈당과 체중변화를 관찰하였다.
실험군은 평균체중이 유사하도록 6마리씩 정상(정상군-Nondiabetic), 당뇨대 조군(대조군-Diabetic), 열수 추출물 군(Diabetic-Hot water extract)으로 나누어 사육하였다. 실험기간 동안 물과 사료(pellet diet, 삼양사료 주식회사)는 자유롭게 섭취케 하였다. 사육환경은 온도 20-22℃, 습도 50±1%, 명암주기는 12시간 간격을 유지하였다.
4. 당뇨 증세 및
식이효율
측정
체중 증가량 및 식이 섭취량은, 실험 개시일을 시작으로 충분한 양의 사료와 물을 급여하면서 일주일 간격으로 측정하였으며, 급여량에서 잔량을 감하여 계산하였다. 식이효율(Food efficiency ration: FER)은 실험 기간 동안 체중증가량을 같은 기간의 식이 섭취량으로 나누어 환산하였다.
시료투여 8주 후 수분 섭취량, 뇨 배설량들을 측정하기 위해서 한 마리씩 대사 케이지에 수용하여 충분한 양의 물을 제한 없이 급여하였다. 수분의 급여량과 잔여량의 차이로 1일 평균 수분섭취량을 측정하였고, 뇨 배설량은 대사 케이지로부터 수집된 소변의 총량을 배설량으로 계산하였다.
5. 혈당측정
혈당은 자유롭게 물을 섭취하도록 하면서 16시간 절식한 후 매주 같은 시간대에 꼬리 정맥혈에서 혈액을 채취하여 액트랜트(Acctrend) GC(Boehringer Mannhein, Germany)로 측정하였다. 채취 후 채취부위를 압박하여 지혈한다.
6. 실험동물 처치 및 장기 적출
실험 사육한 래트를 16시간 동안 절식 시킨 후 에테르 마취 하에 복부대동맥에서 혈액을 채취하고, 실온에 30분 방치한 후, 3000 rpm에서 30분간 원심 분리하여 혈청을 분리한 후, 글루코스 및 혈중지질 성분인 총 콜레스테롤(total cholesterol), HDL-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, 트리글레세라이드를 측정하였다. 그리고 시료투여로 인한 간 기능에 미치는 영향을 알아 보기위해 AST, ALT, GGT, 크레아티닌 측정에 이용하였다.
장기는 채혈 후 즉시 간장, 심장, 신장, 췌장 및 비장을 적출하여 4℃ 생리식염수로 씻어내고 수분을 여과지로 제거한 후 무게를 칭량하였다.
7. 혈중 지질 및 혈청 생화학 검사
당뇨에 있어 혈당량 이외의 중요한 대사산물로는 총 콜레스테롤, 트리글리세라이드, LDL-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 등이 있다. 그리고 시료투여로 인한 간 기능에 미치는 영향을 알아보기 위해 간 기능 지표인 AST, ALT, GGT, 크레아티닌을 측정하였다. 글루코스 측정은 GOD-POD법, 총 콜레스테롤 측정은 CHOD, 트라인더법(Trinder)법, 트리글리세라이드는 효소적-트라인더법(Enzymatic-Trinder), LDL-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤은 직접 방법(Direct method)를 이용하였으며, AST, ALT는 피리독살 포스페이트를 사용하지 않는 개선된 IFCC법(modified IFCC without pyridoxal phosphate), GGT는 IFCC법, 크레아틴은 개선된 jaff-1 시약법(modifed jaff-1 reagent method)을 이용하여 생화학 자동분석기(KONELAB 20XT, Finland)를 이용하여 분석하였다.
8. 실험결과의 통계처리
모든 실험결과에 대한 통계처리는 각 실험군별로 평균차이가 있는가를 검증하기 위하여 분산분석(ANOVA 검증)을 수행하였으며, 군간의 유의성은 던컨 시험(Dunncan test)을 이용하여 검증하였다.
실시예 2:
블렌시아
살미언티
혼합추출물의 제조
실험재료는 블렌시아 살미언티[(주)럭키약품], 단삼[Salvia miltiorrhiza Bunge, 옴니허브(주)], 상백피[Mori radicis Cortex, 옴니허브(주)]를 시중 판매사로부터 구입하여 사용하였다.
각각 블렌시아 살미언티 42 mg과 단삼 14 mg을 혼합하여 혼합물(BS-S), 블렌시아 살미언티 42 mg과 상백피 14 mg을 혼합하여 혼합물(BS-M) 및 블렌시아 살미언티 42 mg과 단삼 14mg 및 상백피 14mg을 혼합하여 혼합물(BS-SM)을 제조하고, 여기에 증류수를 가하여 100℃에서 3시간 동안 추출 후 여과하여 각각 블렌시아 살미언티-단삼 혼합추출물(BS-S 열수 추출물), 블렌시아 살미언티-상백피 혼합추출물(BS-M 열수 추출물) 및 블렌시아 살미언티-단삼-상백피 혼합추출물(BS-SM 열수 추출물)을 제조하였다.
실험예
2:
고지방식이로
유발된 비만 및
고지혈
모델에서
블렌시아
살미언티의
체 지방 감량 및 혈청 중 지질 개선효과
1. 실험동물 및 사육조건
실험동물은 생후 4주령 수컷 흰쥐(Sprague Dawley)를 (주)샘타코 바이오코리아(경기도 오산)로부터 구입하여 고형사료와 물을 공급하면서 일주일간 적응시킨 후 평균체중 205.2±4.3 g인 것을 사용하였다. 음수는 자외선으로 멸균된 물을 사용하였고, 사료(pellet diet, 삼양사료 주식회사)를 자유롭게 섭취케 하였다. 실험기간동안 물과 사육환경은 온도 20-22℃, 상대습도 50±1%, 환기횟수 10~15회/hr, 명암주기는 12시간 간격으로 조도 150~300 lux로 유지하였다.
2.
고지혈
유발 및 실험식이
식이성 유도 비만(Diet-induced obesity)을 유도하기 위하여 고지방 식이를 6주 동안 먹이면서 2주 간격으로 체중 및 혈중지질 수준이 높게 나타났을 때 시험물질을 투여하였다. 실험식이의 조성은 표 1과 같았다. 표준식이(AIN-76)(Dytes Inc., Bethleham, PA, USA)를 기준으로 비만 및 고지혈을 유도하기 위하여 라드(lard)를 20%, 고콜레스테롤혈증을 유도하기 위하여 콜레스테롤을 1% 첨가하여 실험용 사료를 제조하여 사용하였다.
| 조성 | 표준 식이 | 고지방 식이 |
| 카제인 옥수수 전분 당 라드(Lard) 옥수수 오일 셀룰로오스 미네랄 혼합물* 비타미 혼합물* 콜레스테롤 DL-메티오닌 콜린 | 20 26 0 0 9 5.0 3.5 1.0 1.0 0.3 0.2 | 29 10 10 35 5.0 5.0 3.5 1.0 1.0 0.3 0.2 |
* AIN76 혼합물(Nurtitional Biochemicals, ICN Life science Group, Cleverland, Ohio)
실험군은 표준식이를 기준으로 한 정상군과 실험쥐에 고지방, 고콜레스테롤 식이를 공급한 대조군, 고지방, 고콜레스테롤 식이를 기준으로 실험군에 따라 블렌시아 살미언티를 투여한 군(BS)과 혼합추출물로 블렌시아 살미언티-단삼 열수 추출물을 투여한 군(BS-S), 블렌시아 살미언티-상백피 열수 추출물을 투여한 군(BS-M), 블렌시아 살미언티-단삼-상백피 열수 추출물을 기준농도로 투여한 군(BS-SM1), 블렌시아 살미언티-단삼-상백피 열수추출물을 기준농도의 두 배로 투여한 군(BS-SM2)으로 7가지 처리군으로 나누어 고지혈 유발을 위해 8주간 사육하였다.
3.
식이효율
측정
체중증가량 및 식이 섭취량은 실험 개시일을 시작으로 충분한 양의 사료와 물을 급여하면서 일주일 간격으로 측정하였으며, 급여량에서 잔량을 감하여 계산하였다. 식이효율은 실험 기간 동안 체중증가량을 같은 기간의 식이 섭취량으로 나누어 환산하였다.
4. 실험동물 처치 및 장기 적출
실험 사육한 래트를 16시간 동안 절식 시킨 후 에테르 마취 하에 복부대동맥에서 혈액을 채취하여 실온에 30분방치 후 3000 rpm에서 30분간 원심 분리하여 혈청을 분리한 후 글루코스 및 혈중지질 성분인 총 콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, 트리글리세라이드를 측정하였다. 그리고 시료투여로 인한 간 기능에 미치는 영향을 알아 보기위해 AST, ALT, GGT, 크레아티닌측정에 이용하였다.
장기는 채혈 후 즉시 간장, 심장, 신장, 비장, 고환을 적출하였으며, 지방량 측정을 위해 후 복강 지방조직과 부고환 지방조직을 적출하여 4℃ 생리식염수로 씻어내고 수분을 여과지로 제거한 후 무게를 칭량하였다.
5. 혈중 지질 및 혈청 생화학 검사
혈중지질 성분의 주요지표가 되는 대사산물로는 총 콜레스테롤, 트리글리세라이드, LDL-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 등이 있다. 그리고 시료투여로 인한 간 기능에 미치는 영향을 알아보기 위해 간 기능 지표인 AST, ALT, GGT, 크레아티닌을 측정하였다. 글루코스 측정은 GOD-POD법, 총 콜레스테롤 측정은 CHOD, 트라인더법(Trinder)법, 트리글리세라이드는 효소적-트라인더법(Enzymatic-Trinder), LDL-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤은 직접 방법(Direct method)를 이용하였으며, AST, ALT는 피리독살 포스페이트를 사용하지 않는 개선된 IFCC법(modified IFCC without pyridoxal phosphate), GGT는 IFCC법, 크레아틴은 개선된 jaff-1 시약법(modifed jaff-1 reagent method)을 이용하여 생화학 자동분석기(KONELAB 20XT, Finland)를 이용하여 분석하였다.
6. 실험결과의 통계처리
모든 실험결과에 대한 통계처리는 각 실험군별로 평균차이가 있는가를 검증하기 위하여 분산분석(ANOVA 검증)을 수행하였으며, 군 간의 유의성은 던컨 시험을 이용하여 검증하였다.
실험예
3: 혈액응고 및 혈전관련 지표에 대한
블렌시아
살미언티의
효과
1. 혈행개선의
in
vitro
검색
7주령의 웅성 SD 래트를 대상으로 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 체중 kg 당 30과 300 mg을 매일 8주간 처리한 실험군과 처리하지 않은 대조군의 래트에서 에테르로 마취 후 복대동맥에서 2.5% 시트르산 소듐을 넣은 주사기를 이용하여 채혈하고 각종 혈액응고 및 혈전관련인자를 측정하였다.
2. 혈행개선의
in
vivo
검색
가. 엔도톡신에 의한 혈전증 모델동물에서 블렌시아 살미언티의 항혈전효과 검색
- 엔도톡신은 그람음성간균의 세포외벽의 지질다당체(LPS)로 체내에 주입되면 혈장에서 LPS 결합 단백질과 함께 백혈구나 내피세포에 손상을 초래하여 혈소판 활성화 인자(platelet activating factor), 프로스타글란딘(prostaglandins), 류코트리엔(leukotriens) 등의 사이토카인을 유리시키거나 보체(complement) 등의 혈장 단백을 활성화시키게 되고 심근의 억제, 응고계의 호라성화, 혈관확장, 여러 기관의 기능부전 등을 초래한다.
- 엔도톡신으로 유발한 혈전증 모델동물은 직접적으로 응고기전에 관여하여 파종성 혈관내응고증(Disseminated Intravascular Coagulation;DIC)을 유발하는 질환모델로 가장 널리 이용되고 있는 모델로 알려져 있다.
- SD 래트 5두씩을 한 군으로 하여 정상군, 엔도톡신 투여 혈전대조군, BS 투여군으로 분류하였다.
- 정상군에는 멸균생리식염수를 BS투여군은 경구용 주사기를 이용하여 위내에 투여하였다.
- 엔도톡신에 의한 혈전유발 1주일 전부터 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 3, 30 및 300 mg/kg으로 경구투여를 실시한 실험군과 동량의 증류수를 경구투여한 대조군으로 분류하였다.
- 정제한 엔도톡신(Escherichia coli 055: B5, Sigma) 0.5mg/kg을 미정맥에 주사하여 혈전증을 유발하였고 정상군은 동일한 양의 생리식염수를 미정맥에 주사하였다.
- 엔도톡신 투여 4시간 후 래트를 에테르로 가볍게 마취시킨 상태에서 복대동맥에서 전채혈을 실시하여 3.8% 시트르산 소듐 채혈병에 분류하여 혈장을 분리하였다.
- 혈장에서 PT, aPTT, TT, 피브리노겐, 혈소판 응집 등을 측정하였다.
나. 정맥 혈전형성에 의한 혈전증 모델동물에서 블렌시아 살미언티의 항혈전효과 검색
- SD 래트 5두씩을 한 군으로 하여 정상군, 엔도톡신 투여 혈전대조군, BS투여군으로 분류하였다.
- 정상군에는 멸균생리식염수를 BS투여군은 경구용 주사기를 이용하여 위내에 투여하였다.
- 정맥 혈전유발 1주일전부터 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 3, 30, 300 mg/kg으로 경구투여를 실시한 실험군과 동량의 증류수를 경구투여한 대조군으로 분류하였다.
- 정맥 혈전증은 SD 래트를 펜토바르비탈(pentobarbital) 마취상태에서 개복하고 전대정맥을 주변 조직으로부터 조심스럽게 분리하고 좌측 신정맥의 바로 아래 부분에 면사로 단단하게 결찰하였다.
- 연속적으로 복부를 폐쇄하고 이중봉합(근육과 복막, 피부를 분리하여 봉합)을 실시하였다.
- 2시간 경과 후 동물을 재마취시킨 다음 복부를 다시 개복하여 전대정맥을 조심스럽게 분리하고 혈전의 형성을 확인하였다.
- 형성된 혈전을 분리하고 37℃에서 건조시키고 24시간이 경과된 후 무게를 측정하였다.
- 혈전분리 직전 복대동맥에서 전채혈을 실시하여 3.8% 시트르산 소듐 채혈병에 분류하여 혈장을 분리하였다.
- 혈장에서 PT, aPTT, TT, 피브리노겐, 혈소판 응집 등을 측정하였다.
상기와 같은 실험을 통해 다음과 같은 결과를 얻었다.
1.
블렌시아
살미언티의
항당뇨
및 혈중지질 개선 효과
(1) Ⅰ형 당뇨모델에서의
블렌시아
살미언티
열수
추출물에 대한 효과
가. 사료섭취량과 체중 및 식이효율
1일 평균 사료섭취량은 정상군 30.8±2.36 g, 대조군 50.4±4.26 g, BW0 49.4±1.95 g, BW1 47.7±2.56 g, BW2 54.1±4.73 g으로 당뇨 유발에 따라 사료섭취량이 증가하였다. 시험기간 8주 동안 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 인한 사료섭취량에 변화는 관찰되지 않았다.
당뇨유발 후 1일 체중증가량은 정상군 3.50±0.33 g, 대조군 1.45±0.20 g, BW0 1.07±0.45 g, BW1 0.75±0.19 g, BW2 1.20±0.31 g으로 정상군에 비해 당뇨 유발군이 유의적으로 감소하였으며, 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 인한 체중변화에는 영향이 없는 것으로 나타났다.
식이효율은 정상군 11.35±0.63%, 대조군 2.97±0.70%, BW0 2.12±0.90%, BW1 1.52±0.50%, BW2 2.17±0.45%로 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 식이효율의 개선은 없는 것으로 나타났다. 당뇨유발 후 1일 평균 음수 섭취량은 정상군 52.7±3.8 mL, 대조군 274.4±12.6 mL, BW0 271.5±3.7 mL, BW1 271.4±31.1 mL, BW2 304.6±24.8 mL로 당뇨유발에 따른 급격한 음수섭취량 증가현상이 있었으나, 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 인한 음수섭취량 변화는 관찰할 수 없었다(도 1참조).
당뇨가 유발되지 않은 정상군에서는 체중이 지속적으로 증가하였으나, 당뇨가 유발된 당뇨대조군과 당뇨 실험군에서는 감소하였다. 이러한 당뇨시의 체중감소 현상은 췌장 내 β-세포의 파괴로 인해 인슐린의 생성과 그 작용이 저하되어 골격근으로부터의 아미노산 유입을 촉진하고 단백질의 합성을 증가시키는 단백질 대사 작용이 저하되기 때문이다. 또한 이 경우 당대사도 원활하지 않으므로 에너지의 생산이 부족하게 된다고 보고된 바와 같다. 이러한 세포 내에서는 포도당 이용률이 감소하므로 간, 근육 및 지방조직의 지방과 단백질로부터 부족한 에너지를 생산하게 되며, 이로 인해 체중이 감소하게 되는 것으로 사료된다.
| 군4 ) | 일 당 섭취량 (g/day) | 체중(g) | FER3 ) (%) | ||
| 초기 | 최종 | 증체량(g/day) | |||
| 정상군 | 30.8±2.36b,1) | 321.3±24.1a,2) | 493.0±30.3a | 3.50±0.33a | 11.35±0.63a |
| 대조군 | 50.4±4.26a | 237.8±16.0b | 303.8±15.5b | 1.45±0.20b | 2.97±0.70b |
| BW0 | 49.4±1.95a | 243.8±9.3b | 295.3±25.2b | 1.07±0.45bc | 2.12±0.90bc |
| BW1 | 47.7±2.56a | 267.8±18.2b | 303.3±23.6b | 0.75±0.19c | 1.52±0.50c |
| BW2 | 54.1±4.73a | 260.3±5.1b | 318.8±11.5b | 1.20±0.31bc | 2.17±0.45bc |
1) 값은 평균 ± S.D.이고, n=6임.
2) 동일한 컬럼 내에 상이한 상첨자를 갖는 값은 p<0.05에서 현저하게 상이함
3) FER(식이효율; Food efficiency ratio) = (체중/섭취량) × 100
4) BW0: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 0.75 mg/mL, BW1: 블렌시아 살미언티 열수 추춤물 1.5 mg/mL, BW2: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 3 mg/mL.
나. 혈당에 미치는 영향
당뇨유발 후 8주 동안 혈중 글루코스 함량을 분석하여 도 2에 나타내었다. 모든 당뇨 유발군이 정상군에 비하여 유의적으로 높은 수준을 보였으나, 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 혈중 글루코스 함량의 변화는 당뇨대조군과 유의적인 변화 없이 계속 지속되었다. 따라서 혈중 글루코스함량 변화에는 영향을 미치지 않는 것으로 판단된다.
실험기간 동안 계속해서 증가추세를 보였던 당뇨대조군은 수준이 현저하게 증가한 것으로 나타났다. STZ으로 유도한 당뇨 흰쥐에서 현저한 고혈당과 저인슐린 혈증은 간장의 인슐린 저항으로 당의 이용이 현저한 감소를 나타내고, 상승된 혈당 수준은 혈관의 산화 대사에 이상을 초래하며 산소가 불완전하게 산화되어 생성된 유리기의 활성화로 β-세포의 자동면역기능이 파괴되어 당뇨 증상을 보이게 된다고 알려졌다.
다. 혈청 생화학 검사
당뇨유발 후 8주까지 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 투여한 동물의 혈중 ALT활성도는 당뇨 유발군에서 급격히 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. 정상군 31.2±2.9 unit/L, 대조군 116.7±11.5 unit/L, BW0 100.4±7.4 unit/L, BW1 99.5±7.3 unit/L, BW2 85.7±8.2 unit/L로 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여군이 대조군과 비교할 때 유의적으로 감소하는 현상을 나타내었다. 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여가 정상군보다 높게 나타났으나 대조군과는 유의적으로 감소하는 경향을 나타내었다.
AST 활성도 또한 정상군 143.5±10.7 unit/L, 당뇨유발군인 대조군 143.5±10.7 unit/L, BW0 244.9±26.3 unit/L, BW1 250.1±9.5 unit/L, BW2 223.1±39.7 unit/L로 나타났다. 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 투여로 대조군과 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다.
혈액 중 GGT는 대조군 12.8±2.0 unit/L, BW0 10.7±1.7 unit/L, BW1 11.2±2.8 unit/L BW2 9.2±1.9 unit/L로 정상군 5.4±0.3 unit/L에 비해 상대적 높게 나타났다. 신장 기능을 평가하는 중요한 지표가 되는 크레아티닌은 정상군, 대조군, BW0, BW1, BW2에서 유의적인 변화를 나타내지 않았다. 혈청단백의 양을 조사하여 간과 신장의 건강 유무를 가늠할 수 있는 혈청 총 단백의 양은 정상군에 비해 대조군, BW0, BW1, BW2에서 감소하는 경향을 볼 수 있었다.
따라서 AST, ALT는 간을 비롯하여 장기에 존재하는 아미노산 합성효소로서 정상적인 세포파괴에 의해서도 혈액 중에 일정 수치정도가 존재하나 간과 특정장기의 손상으로 수치가 상승하는 효소이다. 본 실험에서는 당뇨유발로 인해 모두 혈청 생화학적 검사수치가 급격히 증가하였다. 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 정상군과 비교할 때 활성도는 높았으나, 대조군과는 유의적으로 감소하는 경향을 나타내었다.
| 군4 ) | ALT (unit/L) | AST (unit/L) | GGT (unit/L) | CREA (mg/dL) | T PROT (mg/dL) |
| 정상군 | 31.2±2.9d,1) | 143.5±10.7b,2) | 5.4±0.33c | 0.42±0.05NS,3) | 6.3±0.2a |
| 대조군 | 116.7±11.5a | 253.4±31.2a | 12.8±2.0a | 0.40±0.08 | 5.3±0.3c |
| BW0 | 100.4±7.4b | 244.9±26.3a | 10.7±1.7ab | 0.45±0.05 | 5.5±0.2bc |
| BW1 | 99.5±7.3b | 250.1±9.5a | 11.2±2.8ab | 0.45±0.05 | 5.8±0.4bc |
| BW2 | 85.7±8.2c | 223.1±39.7a | 9.2±1.9b | 0.45±0.04 | 5.8±0.2ab |
1) 값은 평균 ± S.D.이고, n=6임
2) 동일한 컬럼 내에 상이한 상첨자를 갖는 값은 p<0.05에서 현저하게 상이함
3) NS: at p<0.05에서 현저하지 않음
4) BW0: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 0.75 mg/mL, BW1: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 1.5 mg/mL, BW2: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 3 mg/mL.
γ-GT(γ-glutamine trans) 효소는 글루타민산을 다른 아미노산이나 펩타이드로 전이 시키는 일을 한다. 주로 심장, 간장 췌장 혈구등에 분포하며 신장에는 고농도로 분포하게 된다. 신장에 이상이 있으면 혈액중으로 유출되어 이상치가 나오는 GGT의 경우 당뇨 유발군에서 급격히 증가하는 현상을 나타내었으나, 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 대조군과 비교할 때 BW2 투여군에서 감소하는 경향을 나타내었다.
라. 혈중지질 측정
콜레스테롤은 세포막형성, 호르몬 생성 등에 중요한 역할을 한다. 그러나 혈 중에 고농도로 존재하는 상태를 고지혈증이라 하는데, 이는 CHD(coronary 심장 disease)의 주요 위험인자이다. 리프딘트(Rifdind)는 혈중 콜레스테롤 농도를 낮추는 것이 CHD의 발병율을 낮추는데 효과적이라 하면서 많은 역학조사에서 얻은 결과로서 혈장 콜레스테롤을 1% 낮추면 CHD 발병율을 2% 감소시킬 수 있다고 하였다.
혈 중 높은 수준의 콜레스테롤과 중성지방 농도로 특징되는 고지혈증은 당뇨병에 수반되는 합병증이다. 당뇨가 조절되지 않은 상태에서 간장의 하이드록실메틸 글루타릴-CoA(hydroxymethyl glutaryl-CoA; HMG-CoA) 리덕타제의 활성이 감소되고, 장의 HMG-CoA reductase은 활성이 증가되어 순환혈액으로 콜레스테롤 이동이 증가되어 나타난다(O'meara등, 1990).
본 발명에서 당뇨유발 후 8주 동안 사육하면서 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 투여하여 혈청 중 총-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤을 분석한 결과를 표 4에 나타내었다.
혈청 중 총콜레스테롤 수준은 대조군 123.2±16.8 mg/dL로서 정상군의 85.5±12.53 mg/dL에 비해 유의적인 증가를 나타내었으며, BW0 86.3±10.02 mg/dL, BW1 97.2±6.3 mg/dL, BW2 89.1±3.2 mg/dL로 대조군에 비해 유의적인 감소현상을 나타내었다. HDL-콜레스테롤 농도 또한 대조군 93.5±6.1 mg/dL로서 정상군의 69.8±5.0 mg/dL에 비해 유의적인 증가를 나타내었으며, BW0 75.9±7.3 mg/dL, BW1 81.5±4.5 mg/dL, BW2 79.4±6.6 mg/dL로 대조군에 비해 유의적인 감소현상을 나타내었다. LDL-콜레스테롤 함량 농도는 대조군 10.17±1.9 mg/dL로서 정상군의 15.5±1.6 mg/dL에 비해 유의적인 증가를 나타내었으며, BW0 11.2±0.5 mg/dL, BW1 10.6±1.8 mg/dL, BW2 12.1±1.4 mg/dL로 대조군과 유의성 있는 차이를 나타내었다. 혈청 중 중성지방의 농도는 BW0 37.6±3.5 mg/dL, BW1 29.1±5.3 mg/dL, BW2 30.9±3.1 mg/dL로 정상군과 대조군에 비해 투여농도와 관계없이 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여군 모두 유의적인 감소현상을 나타내었다.
따라서 Ⅰ형 당뇨유발로 인한 혈청중 총-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤이 정상군에 비해 상대적으로 많이 증가하였으며, 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 농도에 관계없이 정상군에 가까운 혈중농도를 나타내었다.
발명에서 당뇨군의 정상군에 비하여 유의적으로 높은 혈 중 콜레스테롤 농도는 간장 내 콜레스테롤 대사의 감소와 장내 콜레스테롤 합성 증가로 순환혈액으로의 콜레스테롤 이동이 증가되어 나타난 것으로 생각된다.
| 군3 ) | T-Chol | HDL-Chol | LDL-Chol | TG |
| 정상군 | 85.5±12.53b,1) | 69.8±5.0b,2) | 10.7±1.9b | 61.8±11.2a |
| 대조군 | 123.2±16.8a | 93.5±6.1a | 15.5±1.6a | 62.9±4.3a |
| BW0 | 86.3±10.2b | 75.9±7.3b | 11.2±0.5b | 37.6±3.5b |
| BW1 | 97.2±6.3b | 81.5±4.5b | 10.6±1.8b | 29.1±5.3b |
| BW2 | 89.1±3.2b | 79.4±6.6b | 12.1±1.4b | 30.9±3.1b |
1) 값은 평균 ± S.D.이고, n=6임
2) 동일한 컬럼 내에 상이한 상첨자를 갖는 값은 p<0.05에서 현저하게 상이함
3) BW0: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 0.75 mg/mL, BW1: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 1.5 mg/mL, BW2: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 3 mg/mL.
마. 장기무게
당뇨 유발로 인한 대조군, BW0, BW1, BW2가 정상군에 비해 간, 췌장, 신장, 심장의 무게가 상대적으로 증가하는 현상을 보였으며, 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 인한 장기무게의 유의성 있는 변화를 관찰 할 수 없었다(표 5 참조). 따라서 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 인한 장관 기능에 미치는 영향은 없을 것으로 판단된다.
| 군3 ) | 간 | 췌장 | 신장 | 심장 |
| 정상군 | 3.41±0.19b,1) | 0.42±0.02c,2) | 0.70±0.04b | 0.32±0.01b |
| 대조군 | 4.53±0.19a | 0.67±0.05a | 1.28±0.13a | 0.38±0.02a |
| BW0 | 4.66±0.23a | 0.55±0.07b | 1.25±0.11a | 0.39±0.01a |
| BW1 | 4.52±0.35a | 0.57±0.05ab | 1.22±0.89a | 0.38±0.02a |
| BW2 | 4.29±0.10a | 0.61±0.02ab | 1.19±0.25a | 0.42±0.03a |
1) 값은 평균 ± S.D.이고, n=6임
2) 동일한 컬럼 내에 상이한 상첨자를 갖는 값은 p<0.05에서 현저하게 상이함
3) BW0: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 0.75 mg/mL, BW1: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 1.5 mg/mL, BW2: 블렌시아 살미언티 열수 추출물 3 mg/mL.
(2) Ⅰ형 당뇨모델에서의
블렌시아
살미언티
에탄올 추출물에 대한 효과
가. 사료섭취량과 체중 및 식이효율
1일 평균 사료섭취량은 정상군 30.8±2.36 g, 대조군 50.4±4.26 g, BE0 50.3±1.64 g, BE1 48.9±0.37 g, BE2 52.6±0.49 g으로 당뇨 유발에 따라 사료섭취량이 증가하였다. 시험기간 8주 동안 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 인한 사료섭취량에 변화는 관찰되지 않았다.
당뇨유발 후 1일 체중증가량은 정상군 3.50±0.33 g, 대조군 1.45±0.20 g, BE0 1.17±0.01 g, BE1 1.57±0.15 g, BE2 1.27±0.12 g으로 정상군에 비해 당뇨 유발군이 유의적으로 감소하였으며, 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 인한 체중변화에는 영향이 없는 것으로 나타났다. 식이효율은 정상군 11.35±0.63%, 대조군 2.97±0.70%, BE0 2.40±0.21%, BE1 1.80±0.62%, BE2 2.37±0.28%로 블렌시아 살미언티 열수 추출물 투여로 식이효율의 개선은 없는 것으로 나타났다(표 6 참조).
당뇨유발 후 1일 평균 음수 섭취량은 정상군 52.7±3.8 mL, 대조군 274.4±12.6 mL, BE0 302.0±50.3 mL, BE1 303.6±48.9 mL, BE2 293.1±52.6 mL로 당뇨유발에 따른 급격한 음수섭취량 증가현상이 있었으나, 블렌시아 살미언티 에탄올 추출물 투여로 인한 음수섭취량 변화는 관찰할 수 없었다(도 3 참조).
| 군1 ) | ALT (unit/L) | AST (unit/L) | GGT (unit/L) | CREA (mg/dL) | T PROT (mg/dL) |
| 정상군 | 37.36±1.95b,2) | 112.8±7.87ab ,3) | 67.48±4.12NS ) | 0.53±0.05a) | 6.60±0.34NS ) |
| 대조군 | 34.76±1.83ab ) | 125.7±13.5b) | 71.06±9.61 | 0.55±0.06ab ) | 6.54±0.11 |
| BS | 35.96±1.83ab ) | 118.3±11.2ab ) | 65.36±6.22 | 0.55±0.03ab ) | 6.50±0.21 |
| BS-S | 38.06±1.43b) | 111.9±7.15ab ) | 68.46±10.0 | 0.62±0.02c) | 6.70±0.23 |
| BS-M | 32.70±2.38a) | 115.1±12.0ab ) | 69.9±9.04 | 0.61±0.02bc) | 6.60±0.31 |
| BS-SM1 | 35.38±1.14ab ) | 112.0±14.6ab ) | 64.0±6.03 | 0.57±0.01abc ) | 6.70±0.12 |
| BS-SM2 | 33.6±1.85a) | 105.7±8.1a) | 72.0±10.17 | 0.54±0.05a) | 6.56±0.15 |
1) 표 14 참조
2) 모든 값은 평균± S.D.이고, n=6임
2) 동일한 컬럼 내에 상이한 상첨자를 갖는 값은 p<0.05에서 현저하게 상이함
4) NS: p<0.05에서 유의적이지 않음
(3) 혈중지질 측정
콜레스테롤은 세포막형성, 호르몬 생성 등에 중요한 역할을 한다. 그러나 혈 중에 고농도로 존재하는 상태를 고지혈증이라 하는데, 이는 CHD(coronary heart disease)의 주요 위험인자이다. Rifdind는 혈중 콜레스테롤 농도를 낮추는 것이 CHD의 발병율을 낮추는데 효과적이라 하면서 많은 역학조사에서 얻은 결과로서 혈장 콜레스테롤을 1% 낮추면 CHD 발병율을 2% 감소시킬 수 있다고 하였다.
본 실험에서 고지혈 유발 후 8주 동안 사육하면서 블렌시아 살미언티 열수 추출물 및 복합추출물을 투여하여 혈청중 total-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, AI(Atherogenic Index) 분석 결과를 Table 4에 나타내었다.
혈청 중 총콜레스테롤 수준은 고지방식이로 대조군 95.7±16.7 mg/dL로 정상군의 84.3±7.3 mg/dL와 비교하여 증가하였으며, 시험군인 BS 80.9±4.5 mg/dL, BS-S 95.6±6.9 mg/dL, BS-M 77.0±6.3 mg/dL, BS-SM1 88.18±7.6 mg/dL, BS-SM2 88.2±6.6 mg/dL로 나타났다. 총콜레스테롤 수준이 전반적으로 감소하였으며, BS와 BS-M에서는 유의적인 감소현상을 나타내었다.
혈중 HDL-콜레스테롤 수준은 대조군 54.6±9.5 mg/dL로서 정상군의 66.5±5.2 mg/dL에 비해 유의적인 감소현상이 나타내었으며, BS 47.3±5.0 mg/dL, BS-S 61.3±5.9mg/dL, BS-M 53.5±4.0 mg/dL, BS-SM1 54.4±2.3 mg/dL, BS-SM2 54.1±3.4 mg/dL로 전반적으로 정상군에 비해 유의적인 감소현상을 나타내었다.
LDL-콜레스테롤 수준은 대조군 27.5±6.6 mg/dL로서 정상군의 11.0±2.6 mg/dL에 비해 유의적인 감소현상을 나타내었으며, BS 19.0±3.4 mg/dL, BS-S 27.0±10.0 mg/dL, BS-M 21.5±12.1 mg/dL, BS-SM1 24.3±5.2 mg/dL, BS-SM2 23.3±6.8 mg/dL로 정상군과 비교할 때 전반적으로 증가하였다. 그 중 BS군이 정상군과 비교할 때 LDL-콜레스테롤 수준이 가장 작게 증가하는 것으로 나타났다.
혈중 중성지방의 농도는 고지방식이로 인한 모든 시험군에서 유의적인 증가현상을 나타내었다. 시험물질 투여로 인한 혈중 중성지방 농도는 대조군 117.2±32.3 mg/dL, BS 68.0±13.7 mg/dL, BS-S 107.2±11.1 mg/dL, BS-M 44.1±7.0 mg/dL, BS-SM1 96.4±5.4 mg/dL, BS-SM2 100.2±11.4 mg/dL로 BS군과 BS-M군에서 유의적인 감소현상을 나타내었다.
총콜레스테롤과 HDL-콜레스테롤의 차이를 HDL-콜레스테롤에 대한 백분비를 나타내는 동맥경화지수(AI, Atherogenic Index)는 고지방 식이에 의해 정상군 0.27±0.04에 비하여 대조군 0.75±0.07, BS 0.54±0.01, BS-S 0.63±0.10, BS-M 0.56±0.08, BS-SM1 0.63±0.04, BS-SM2 0.67±0.04로 모든 실험군에서 유의적인 증가를 나타내었다. 시험물질 투여로 인한 동맥경화 지수의 변화는 BS와 BS-M 투여군에서 가장 많은 감소현상을 나타내었다.
따라서 고지방식이에 의해 혈중 total-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, 트리글리세라이드가 정상군에 비해 상대적으로 많이 증가하였으며, 시험물질 투여로 인한 혈중지질 변화는 BS투여와 BS-M투여군에서 정상군에 가까운 혈중농도를 나타내었다.
| 군1 ) | T-Chol | HDL-Chol | LDL-Chol | TG | AI4 ) |
| 정상군 | 84.3±7.3ab ,2) | 66.5±5.2c,3) | 11.0±2.6a) | 58.3±7.4a) | 0.27±0.04a) |
| 대조군 | 95.7±16.7b) | 54.6±9.5ab ) | 27.5±6.6b) | 117.2±32.3c) | 0.75±0.07e) |
| BS | 80.9±4.5a) | 47.3±5.0a) | 19.0±3.4ab ) | 68.0±13.7b) | 0.54±0.01b) |
| BS-S | 95.6±6.9b) | 61.3±5.9bc ) | 27.0±10.0b) | 107.2±11.1c) | 0.63±0.10cd ) |
| BS-M | 77.0±6.3a) | 53.5±4.0ab ) | 21.5±12.1b) | 44.1±7.0ab ) | 0.56±0.08bc ) |
| BS-SM1 | 88.18±7.6ab ) | 54.4±2.3ab ) | 24.3±5.2b) | 96.4±5.4c) | 0.63±0.04cd ) |
| BS-SM2 | 88.2±6.6ab ) | 54.1±3.4ab ) | 23.3±6.8b) | 100.2±11.4c) | 0.67±0.04d) |
1) 표 14 참조
2) 모든 값은 평균± S.D.이고, n=6임
2) 동일한 컬럼 내에 상이한 상첨자를 갖는 값은 p<0.05에서 현저하게 상이함
4) AI(Atherogenic Index) = (총 콜레스테롤-HDL-콜레스테롤)/HDL-콜레스테롤
(4) 장기무게 측정
고지방식이로 유발된 고지혈증과 시험물질 투여로 인한 간, 비장, 신장, 폐, 심장의 장기무게 변화를 관찰하였다(표 5 참조). 고지방식이 섭취에 따라 간 장기의 무게가 정상군에 비해 상대적으로 증가하는 현상을 보였나, 시험물질 투여로 인한 간 조직 무게변화는 관찰되지 않았다. 심장은 정상군에 비하여 상대적으로 감소하는 경향을 나타났으나, 시험물질 투여로 유의성은 없었으나 정상군에 가까운 장기무게를 나타내었다. 그리고 비장, 신장, 폐의 장기무게는 고지방식이나 시험물질 투여로 인한 변화는 관찰되지 않았다.
따라서 장기무게 변화는 간의 무게가 증가하였으며 이러한 결과는 고지방식이로 인해 간의 무게가 지질 축척으로 인해 증가한 것으로 보여 진다. 그러나 심장은 고지방 식이로 인해 정상군에 비해 시험군에서 감소하였으나, 시험물질 투여로 정상군에 가깝게 증가하는 경향을 나타내었다.
| 군1 ) | 간 | 지라 | 신장 | 폐 | 심장 |
| 정상군 | 2.44±0.09a,2) | 0.14±0.00NS ,4) | 0.61±0.01NS) | 0.37±0.01NS ) | 0.28±0.01c,3) |
| 대조군 | 2.74±0.08b) | 0.14±0.01 | 0.58±0.02 | 0.37±0.02 | 0.25±0.00a) |
| BS | 2.81±0.19b) | 0.14±0.00 | 0.57±0.04 | 0.36±0.02 | 0.26±0.00ab ) |
| BS-S | 2.79±0.06b) | 0.14±0.00 | 0.58±0.01 | 0.36±0.01 | 0.27±0.01ab ) |
| BS-M | 2.64±0.18ab ) | 0.14±0.01 | 0.57±0.04 | 0.36±0.02 | 0.26±0.01bc ) |
| BS-SM1 | 3.14±0.22c) | 0.14±0.01 | 0.57±0.05 | 0.36±0.01 | 0.27±0.00abc ) |
| BS-SM2 | 3.48±0.14d) | 0.13±0.01 | 0.57±0.02 | 0.35±0.01 | 0.25±0.01a) |
1) 표 14 참조
2) 모든 값은 평균± S.D.이고, n=6임
2) 동일한 컬럼 내에 상이한 상첨자를 갖는 값은 p<0.05에서 현저하게 상이함
4) NS: p<0.05에서 유의적이지 않음
(5) 지방조직 무게변화
체내지방조직에 미치는 영향은 복부지방조직의 대표적인 백색 지방조직인 후 복강 지방조직(retroperitoneal adipose tissue)와 부고환 지방조직인(epididymal adipose tissue) 량의 합을 내장지방조직(visceral adipose tissue) 량으로 계산하였다. 지방식이 급여로 총 복강지방조직의 량이 증가하였으며 후복강 지방조직 및 부고환 주위 지방조직 량 역시 증가하였다. 후 복강 지방조직 변화는 대조군과 비교할 때 BS, BS-M 투여군에서 가장 많은 무게 변화를 나타내었고, 부고환 지방조직에서는 BS, BS-S 투여군에서 가장 많은 무게 변화를 나타 내었다. 그리고 총 내장지방은 BS 투여군에서 가장 작은 복강지방 량을 나타내었다. 따라서 전반적으로 대조군과 비교할 때 지방조직 량은 BS 투여군에서 가장 많은 감소현상을 보이는 것으로 나타났다(표 6 참조).
| 군1 ) | 지방 조직 | ||
| 후복막 | 부고환 | 내장 | |
| 정상군 | 2.05±0.21a,2) | 1.86±0.22a,3) | 3.92±0.31a) |
| 대조군 | 3.39±0.47c) | 3.14±0.65c) | 6.53±1.08cd ) |
| BS | 2.87±0.14ab ) | 2.15±0.34ab ) | 5.02±0.45b) |
| BS-S | 4.25±0.83c) | 2.98±0.38b) | 7.24±1.18d) |
| BS-M | 3.65±0.58bc ) | 2.65±0.31bc ) | 6.30±0.38cd ) |
| BS-SM1 | 3.48±0.81ab ) | 2.29±0.21ab ) | 5.77±0.69bc ) |
| BS-SM2 | 3.80±0.58c) | 2.94±0.48c) | 6.75±1.06cd ) |
1) 표 14 참조
2) 모든 값은 평균± S.D.이고, n=6임
3) 동일한 컬럼 내에 상이한 상첨자를 갖는 값은 p<0.05에서 현저하게 상이함
상기한 바와 같이, 고지방식이로 비만 및 고지혈이 유발된 실험동물에서 체중, 혈중지질, 체지방, 혈청생화학적 검사 및 장기무게를 측정하여 블렌시아 살미언티 열수추출물 및 블렌시아 살미언티 복합추출물 투여로 인한 혈중지질 개선, 체지방 감량 및 시험물질의 간기능 및 장기무게 변화에 미치는 영향에 대해 조사하였다.
고지방식이에 의한 시험군간 사료섭취량에는 차이가 없었으나, 체중 및 식이효율은 정상군과 비교할 때 유의한 증가를 나타내었다. 시험기간 동안 시험물질 투여로 인한 체중증가 및 식이효율에는 영향이 미치지 않는 것으로 나타났다. 혈청 생화학적 검사에서 고지방식이에 의해 혈중 ALT, AST, 크레아티닌의 변화가 나타났으나, γ-GT, 총 단백질의 변화는 관찰되지 않았다.
ALT, AST, 크레아티닌은 시험물질 BS와 BS-M 투여로 정상군에 가깝게 유지되었다. 고지방식이에 의한 장기무게 변화는 비장, 신장, 폐에서는 변화를 보이지 않았으나, 정상군에 비해 간은 증가하고 심장은 감소하였다. 시험기간중 혈중지질 변화는 총 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, 트리글리세라이드, 동맥경화지수(AI) 모두 고지방식이에 의해 유의적인 증가현상을 나타내었다.
시험물질 투여로 인하여 전반적으로 혈중지질 및 동맥경화지수 감소현상을 보였으며, 특히 BS 투여군에서 현저한 감소현상이 유의적으로 나타났다. 고지방 식이에 의한 체지방 변화는 정상군과 비교할 때 유의적인 증가현상을 보였으며, 시험물질 투여로 후 복강 지방조직 및 부고환 주위 지방조직에서 BS, BS-SM1 투여군이 유의적인 지방조직 감소현상을 보였다(도 11 참조).
따라서 고지방식이에 의해 정상군과 비교할 때 유의적인 체중증가 현상과 혈중지질 상승현상을 관찰할 수 있었으며, 시험물질 투여로 인한 체중감소은 나타나지 않았다. BS 투여군에서 혈중지질 감소현상 및 동맥경화지수도 유의적인 감소현상이 나타났다. 체지방 변화에서도 BS 및 BS-SM1 투여군에서 유의적인 감소현상이 나타났다. 종합적으로 블렌시아 살미언티 추출물 및 블렌시아 살미언티 복합추출물에 대한 혈중지질 및 체지방 감소효과에서 단삼, 상백피 등의 복합추출물 보다 블렌시아 살미언티 단일추출물이 혈중지질감소, 체지방, 동맥경화지수, 체지방감소에 더 효과적인 것으로 조사되었다.
3) 혈액응고 및 혈전관련 지표에 대한
블렌시아
살미언티의
효과
(1)
APTT
(
Activated
Partial
Thromboplastin
Time
)의 변화
블렌시아 살미언티를 투여한 실험군은 정상대조군에 비하여 APTT가 별다른 변화가 없었으나, 블렌시아 살미언티300 mg/kg 투여군에서는 8주간의 투여후 다소 증가하는 경향을 나타냈다. APTT응고시간의 단축은 내인성 응고기전이 활성화되어 있어 혈전발생의 높을 수 있음을 의미하며 블렌시아 살미언티의 투여로 응고시간이 연장이나 이상을 초래하지 않는 다는 사실을 확인할 수 있었다(도 12 참조).
(2)
PT
(
Prothrombin
time
)의 변화
PT는 트롬보플라스틴이 VII 인자를 활성화시켜 VII-트롬보플라스틴 복합체를 형성하고 X, V, II 및 I 인자들을 활성화하여 피브린을 형성하는 시간을 측정하는 것이다. PT는 도 13에 나타낸 바와 같이 정상군에 비하여 증가하는 양상을 보여주었다.
(3)
TT
(
Thrombin
time
)의 변화
TT는 정상군에 비하여 블렌시아 살미언티의 투여에 의하여 경미하게 증가되었다. TT는 피브리노겐의 기능을 측정할 수 있는 항목중 하나로 블렌시아 살미언티의 투여에 의하여 피브리노겐의 활성이 다소 증가되거나 다른 부작용이 없다는 것을 알 수 있었다(도 14 참조).
(4)
TBT
(
Tail
-
Bleeding
Time
)의 변화
TBT는 혈소판과 혈액응고계를 관찰할 수 있는 검사항목으로 특히 혈소판 결핍과 기능이상 및 혈액응고인자의 결핍 등에 의해 일어날 수 있는 질환들을 판정하는데 유용한 방법이다. TBT는 정상군에 비하여 블렌시아 살미언티의 투여에 의하여 증가되는 경향을 나타내었다.(도 15 참조) 이로서 혈액상의 혈액응고인자의 변화뿐만 아니라 혈액의 지혈에 미치는 블렌시아 살미언티의 작용을 직접 관찰할 수 있었다. BS의 투여에 의하여 연장되는 경향을 보인 점으로 혈액의 응고를 블렌시아 살미언티가 억제하고 이러한 효과는 혈전의 형성을 억제할 수 있는 가능성이 있다고 생각된다.
(5) 혈장의
트롬복산
B2 함량
트롬복산 A2(TXA2)는 혈소판 응집의 강력한 유도제이며 혈관수축인자로 작용하는데, 반감기가 30초 정도로 매우 빠르게 가수분해되어 비교적 안정한 형태인 트롬복산 B2(TXB2)를 형성하므로 TXB2의 측정은 TXA2의 좋은 지표가 된다.
블렌시아 살미언티투여군은 정상군에 비하여 혈장내 TXB2의 함량이 4주경과 후에는 차이가 거의 없었으며 8주 후에는 경미하게 낮아지는 경향을 나타내었다. 이러한 결과는 혈소판응집의 개시자인 TXB2의 활성이 블렌시아 살미언티에 의해서 억제되는 형태를 보여주는 것으로 혈전의 억제 및 혈행개선의 효과가 있을 수 있음을 확인할 수 있었다(도 16 참조).
(6) 혈장의 6-
ketprostaglandin
F1α 함량
프로스타글란딘 (PGI2)은 TXA2와 생리적으로 반대작용을 하며, 불안정하여 자발적 가수분해 과정을 거쳐 6-케토프로스타글란딘 F1α가 된다. 따라서 6-케토프로스타글란딘 F1α의 측정은 PGI2형성량을 측정하는 것이다. 6-케토프로스타글란딘 F1α치는 BS투여에 의하여 정상군에 비하여 다소 증가되거나 동일한 수준을 보여주었다.(도 17 참조) 이는 혈관의 이완인자의 유리에 블렌시아 살미언티 자체는 이상을 초래하지 않는 다는 점을 확인할 수 있었다.
(7)
Platelet
Aggregation
의 변화
In vitro에서 블렌시아 살미언티의 혈소판응집억제작용을 도 18에 나타내었다. 응집유도물질로 ADP를 첨가함으로서 응집이 일어나는 것을 관찰할 수 있었다. 이러한 응집유도물질을 처치하고 블렌시아 살미언티를 처치하면 혈소판의 응집정도가 대조군과 유의성은 인정되지 않았으나 다소 증가되는 양상을 나타내었다. 이러한 결과는 블렌시아가 혈소판 응집을 억제할 수 있다라는 가정에서 시작된 본 연구의 예상된 바와 반대의 효과가 나타났으나 정상 래트의 혈액을 대상으로 실험을 진행하였고 생체내 대사 및 기능은 다를 수도 있기 때문에 혈행장애 모델동물에서 재확인할 필요가 있다고 판단된다.
도 1은 8 주 동안 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 급여한 당뇨병 래트의 수분 섭취량 및 음식 섭취량을 나타낸 그래프이다.
도 2는 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 급여한 STZ-유도 당뇨병 래트의 플라즈마 글루코스 수준을 나타낸 그래프이다.
도 3은 블렌시아 살미언티 에탄올 추출물을 8 주 동안 급여한 당뇨병 래트의 수분 섭취량 및 사료 섭취량을 나타낸 그래프이다.
도 4는 블렌시아 살미언티 에탄올 추출물을 급여한 STZ-유도 당뇨병 래트의 플라즈마 글루코스 수준을 나타낸 그래프이다.
도 5는 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 8 주 동안 급여한 신생자 STZ-유도 당뇨병 래트의 수분섭취량 및 사료섭취량을 나타낸 그래프이다.
도 6은 블렌시아 살미언티 열수 추출물을 급여한 신생자 STZ-유도 당뇨병 래트의 플라즈마 글루코스 수준을 나타낸 그래프이다.
도 7은 블렌시아 살미언티 열수 및 에탄올 추출물을 급여한 STZ-유도 당뇨병 래트에서의 혈청 총 콜레스테롤 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8은 블렌시아 살미언티 열수 및 에탄올 추출물을 급여한 STZ-유도 당뇨병 래트에서의 혈청 HDL-콜레스테롤 수준을 나타낸 그래프이다.
도 9는 블렌시아 살미언티 열수 및 에탄올 추출물을 급여한 STZ-유도 당뇨병 래트 에서의 혈청 LDL-콜레스테롤 수준을 나타낸 그래프이다.
도 10은 블렌시아 살미언티 열수 및 에탄올 추출물을 급여한 STZ-유도 당뇨 병 래트에서의 혈청 트리글리세라이드 수준을 나타낸 그래프이다
도 11은 SD-래트에서 체내 지방 축적에 대한 블렌시아 살미언티 및 블렌시아 살미언티 혼합물의 추출의 효과를 나타낸 그래프이다.
도 12는 APTT(Activated Partial Thromboplastin Time)에 대한 블렌시아 살미언티의 영향을 나타낸 그래프이다.
도 13은 PT(Prothrombin time)에 대한 블렌시아 살미언티의 영향을 나타낸 그래프이다.
도 14는 TT(Thrombin time)에 대한 블렌시아 살미언티의 영향을 나타낸 그래프이다.
도 15는 TBT(Tail-Bleeding Time)에 대한 블렌시아 살미언티의 영향을 나타낸 그래프이다.
도 16은 혈장의 트롬복산 B2 함량에 대한 블렌시아 살미언티의 영향을 나타낸 그래프이다.
도 17은 혈장의 6-케토프로스타글란딘 F1α 함량에 대한 블렌시아 살미언티의 영향을 나타낸 그래프이다.
도 18은 혈소판 응집에 대한 블렌시아 살미언티의 영향을 나타낸 그래프이다.
Claims (5)
- 블렌시아 살미언티(Bulnesia sarmienti) 추출물을 유효성분으로 함유함을 특징으로 하는 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈전증 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 추출물이 열수 또는 에탄올 추출인 것을 특징으로 하는 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈전증 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
- 블렌시아 살미언티(Bulnesia sarmienti) 추출물과 단삼 및 상백피로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 추출물이 혼합된 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈전증 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
- 블렌시아 살미언티(Bulnesia sarmienti) 추출물을 유효성분으로 함유함을 특징으로 하는 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈전증 예방 및 개선용 식품조성물.
- 블렌시아 살미언티(Bulnesia sarmienti) 추출물과 단삼 및 상백피로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 추출물이 혼합된 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 체지방감소, 혈중지질개선 또는 혈전증 예방 및 개선용 식품조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020080014334A KR100955726B1 (ko) | 2008-02-18 | 2008-02-18 | 혈중 지질개선, 체지방감소 또는 혈행개선 효과를 갖는블렌시아 살미언티 추출물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020080014334A KR100955726B1 (ko) | 2008-02-18 | 2008-02-18 | 혈중 지질개선, 체지방감소 또는 혈행개선 효과를 갖는블렌시아 살미언티 추출물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20090089024A KR20090089024A (ko) | 2009-08-21 |
| KR100955726B1 true KR100955726B1 (ko) | 2010-05-03 |
Family
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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| KR101390366B1 (ko) * | 2012-07-03 | 2014-04-29 | 벤처진흥원(주) | 카테킨을 함유하는 블렌시아 살미언티 추출물의 제조방법, 이에 의해 제조된 카테킨을 함유하는 블렌시아 살미언티 추출물, 이를 포함하는 고농도 카테킨 과립차 및 이를 포함하는 체내 활성산소 제거, 비만조절 및 체지방개선용 식품 조성물 |
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| Title |
|---|
| 논문1;계명대 석사학위 논문* |
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