KR20160049078A - 퀘르세틴-3-o-글루코시드를 포함하는 비알콜성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)를 포함하는 비알콜성 지방간(nonalcoholic fatty liver disease; NAFLD) 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 조성물은 종래 합성 약제 조성물이 유발하는 심혈관작용, 중추작용, 간장장애 및 신장장애 등 여러 부작용이 없으며, 비알코올성 지방간의 원인이 되는 체중을 감소시키고, 비알콜성 지방간의 성장을 억제할 수 있으며, 총콜레스테롤(Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드(Triglyceride)를 효과적으로 감소시킬 수 있다. 또한, SREBP-1c, MGAT1, PPAR-γ의 활성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 비알코올성 지방간 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물 또는 비알코올성 및/또는 개선용 건강기능성 식품 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.

Description

퀘르세틴-3-O-글루코시드를 포함하는 비알콜성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical Compositions for Prevention or Treatment of nonalcoholic fatty liver disease Comprising Quercetin-3-O-glucoside}
본 발명은 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)를 포함하는 비알콜성 지방간(nonalcoholic fatty liver disease; NAFLD) 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 간과 부고환 지방 조직의 지질의 수와 크기를 감소시키고, 비알콜성 지방간 발달 과정에 중요한 인자들을 효과적으로 조절할 수 있는 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효 성분으로 포함하는 지질 축적 및 크기 감소를 통한 비알콜성 지방간 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
지방간 질환(fatty liver disease) 이란, 간세포에 중성지방이 이상 축적되는 것으로 간에 장애가 생기는 질환을 말한다. 정상 간의 경우 지방이 차지하는 비율은 5% 정도인데, 이보다 많은 지방이 축적된 상태를 말하며, 최근 영양상태가 좋아지고 성인병이 늘어감에 따라 지방간 환자가 늘어나는 추세에 있다. 지방간의 경우 초기 단순 지방 침착에서 그 이후 지방간염, 간경변이나 간세포암으로 진행되는 것으로 알려져 있다.
지방간은 크게 과음으로 인한 알코올성 지방간 (Alcoholic fatty liver disease)과 비만, 당뇨병, 고지혈증, 약물 등으로 인한 비알코올성 지방간 (nonalcoholic fatty liver disease: NAFLD)으로 나눌 수 있다. 그 중, 알코올성 지방간은 알코올을 많이 섭취하게 되면 간에서 지방 합성이 촉진되고 정상적인 에너지 대사가 이루어지지 않아 발생하게 된다. 반면, 비알콜성 지방간은 만성 간 질환 중에서 가장 흔한 질환으로, 제2형 당뇨병, 비만 및 대사증후군과 밀접한 관계가 있다고 알려져 있다. 지역마다 다소 빈도의 차이는 있으나 전 세계적으로 적게는 6.3%, 많게는 33%, 평균 약 20%의 환자가 이 질환에 이환된 것으로 보고되어 있으며, 이 중 일부에서는 지방간염의 단계를 거쳐 간경변으로 진행하는 것으로 밝혀져 있다. 서구화된 식습관 및 비만, 당뇨병 인구의 증가로 우리나라에서도 비알코올성 지방간질환 환자가 급격하게 증가하고 있어 이로 인한 막대한 사회적 비용 또한 증가하고 있는 추세이다.
비알콜성 지방간 질환은 대부분 비만, 당뇨병, 인슐린 저항성 및 고지혈증 등의 합병증을 동반하게 되며, 이를 치료하기 위해서는 식사요법이나 운동요법 등이 권장되고 있지만, 실행하기 어렵다는 단점이 있다. 이러한 이유로 인해 보다 적극적인 약물 치료가 필요하다.
현재까지, 지방간의 약물치료제로는 메타독신(metadoxine), 베타인 글루쿠론산(betaine glucuronate), 메티오닌(methionine), 콜린(choline), 리포트로픽(lipotropic) 제제가 보조적으로 사용되기도 하지만, 이러한 제제의 효과가 의학적으로 확실히 증명된 것은 아니며, 피브레이트계 약제는 일반적으로 간 기능 장애 등의 부작용이 있는 것으로 알려져 있다. 따라서, 부작용이 없고 저렴하면서도 치료 효과가 우수한 새로운 비알콜성 지방간의 예방 및 치료를 위한 치료제의 개발이 필요한 실정이다.
한편, 식물 유래의 여러 가지 파이토케미칼, 특히 플라보노이드(flavonoid)는 자유라디칼 소거능, 활성산소 생성 억제, 세포내 지질, 단백질 등의 산화 방지 등 높은 항산화능력을 비롯, 인체에 대한 다양한 생물학적 기능을 수행하는 것으로 알려져 있다. 특히, 4000여 가지가 넘는 이들 플라보노이드 가운데 양파, 사과 등에 많은 쿼세틴은 항산화 능력 이외에도 암세포에 대한 세포 독성 및 자연사멸 효과 및 그 기작에 대해 세포주를 이용한 생체외(in vitro) 실험, 동물 실험, 인체 실험, 역학 조사 등을 통한 항암 효과에 관한 연구가 수행되어 왔다.
퀘르세틴(Quercetin: 3,3′,4′,5,7-펜타하이드록시플라본(3,3′,4′,5,7-pentahydroxyflavone))은 플라보노이드 가운데 플라보놀(falvonol) 계열에 속하며, 캠페롤(kaempferol), 미리세틴(myricetin) 등과 함께 이들을 대표하는 비배당체(aglycone) 중 하나이다. 그러나, 식물체 내에서 퀘르세틴은 비배당체 형태 보다는 글루코오스(glucose), 람노오스(rhamnose), 갈락토오스(galactose), 아라비노오스(arabinose) 등 여러 종류의 단일 또는 다수의 당과 결합된 배당체(glycone)의 형태로 존재한다. 차와 메밀 등에 풍부하게 함유되어 있는 루틴(rutin)의 경우도, 쿼세틴에 글루코오스(glucose)와 람노오스(rhamnose)로 이루어진 루티노오스(rutinose)가 결합된 배당체의 하나이다.
퀘르세틴은 강력한 항산화활성(Middlton EJ. et al ., Pharmacol Rev ., 52:673, 2000)외에, 혈소판의 응집 억제 및 접착 억제 작용, 혈관 확장 작용, 항암 작용 등 다양한 생리기능을 갖는 것이 알려져 있다. 이 퀘르세틴에 대해서도, 양파에 많이 함유된 퀘르세틴 배당체(퀘르세틴-4′-β-D-글루코사이드(Quercetin-4′-β-D-glucoside), 퀘르세틴-3,4′-β-D-글루코사이드(Quercetin-3,4′-β-D-glucoside)) 쪽이 흡수성이 우수한 것으로 보고되어 있다(Hollman PC et al ., Arch Toxicol Suppl ., 20:237, 1998).
또한, 유사하게 퀘르세틴의 3위치에 글루코오스가 β결합한 이소퀘르시트린(퀘르세틴-3-β-D-글루코사이드(Quercetin-3-β-D-glucoside))은 퀘르세틴이나 루틴보다도 흡수성이 높은 것으로 보고되어 있다(Morand C et al ., Free Raf Res ., 33:667, 2000). 퀘르세틴-3-글루코사이드는 퀘르세틴이 체내에 흡수된 후 생성되는 퀘르세틴 대사물 중 가장 많이 존재하며, 퀘르세틴-3`-β-설페이트와 함께 체내에서 중요한 역할을 하는 활성물질로 알려져 있다.
이에, 본 발명자들은 부작용이 없고 저렴하면서도 치료 효과가 우수한 비알콜성 지방간의 예방 또는 치료를 위한 천연물질을 선별하기 위해 예의 노력한 결과, 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)이 간과 부고환 지방조직이 지질의 수 및 크기를 감소시키고, 비알콜성 지방간 발달 과정에 중요한 인자들을 효과적으로 조절하는 효과를 가지고 있어, 지질 축적 및 크기 감소를 통한 비알콜성 지방간 예방 및 치료용 약학적 조성물로 활용될 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로, 본 발명의 첫번째 해결하려는 과제는 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 두번째 해결하려는 과제는 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상술한 본 발명의 과제를 해결하기 위하여 본 발명은, 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 포함한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 조성물은 체중감소, 간 무게 감소 또는 지방간 크기를 감소시킬 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 실시예에 따르면, 상기 조성물은 간 조직 또는 부고환 지방조직의 지질 축적을 감소시킬 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 조성물은 총콜레스테롤(Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드(Triglyceride)를 감소시킬 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 조성물은 SREBP-1c (sterol regulatory element-binding protein 1), MGAT1 (Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase) 및 PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptors-γ)로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 mRNA 또는 단백질의 발현을 감소시킬 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 조성물은 5 내지 20 μM의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 조성물은 비알코올성 지방 예방 및 치료를 위해 20 내지 40 mg/kg으로 투여될 수 있다.
본 발명의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 조성물은 종래 합성 약제 조성물이 유발하는 심혈관작용, 중추작용, 간장장애 및 신장장애 등 여러 부작용이 없으며, 비알코올성 지방간의 원인이 되는 체중을 감소시키고, 비알콜성 지방간의 성장을 억제할 수 있으며, 총콜레스테롤(Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드(Triglyceride)를 효과적으로 감소시킬 수 있다. 또한, SREBP-1c, MGAT1, PPAR-γ의 활성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 비알코올성 지방간 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물 또는 비알코올성 및/또는 개선용 건강기능성 식품 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.
도 1은 실시예 1에서 확인한, 퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 마우스의 체중 및 장기 무게 변화를 측정한 데도 1은 실시예 1에서 확인한, 퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 마우스의 체중 및 장기 무게 변화를 측정한 데이터이다.
도 2는 실시예 2에서 확인한, 퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 마우스의 혈액 지표변화를 측정한 데이터이다.
도 3은 실시예 3에서 확인한, 퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 간 조직의 지질축적 정도를 측정한 데이터이다.
도 4는 실시예 4에서 확인한, 퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 부고환 지방 조직의 지질축적 정도를 측저한 데이터이다.
도 5는 실시예 5에서 확인한, 퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 SREBP-1c(A), MGAT1(B), PPAR-γ(C)의 단백질 농도 변화를 측정한 데이터이다.
도 6은 실시예 6에서 확인한, 퀘르세틴 및 퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 SREBP-1c(A), MGAT1(B), PPAR-γ(C)의 단백질 농도 변화를 측정한 데이터이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
상술한 바와 같이, 비알콜성 지방간 질환은 대부분 비만, 당뇨병, 인슐린 저항성 및 고지혈증 등의 합병증을 동반하게 되며, 이를 치료하기 위해서는 식사요법이나 운동요법 등이 권장되고 있지만, 실행하기 어려운 단점이 있어 부작용이 없고 저렴하면서도 치료 효과가 우수한 새로운 비알콜성 지방간의 예방 및 치료를 위한 치료제의 개발이 필요한 실정이다.
본 발명은 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공함으로써 상술한 문제의 해결을 모색하였다. 이를 통해 종래 약학적 조성물에서 나타났던 부작용인 심혈관작용, 중추작용, 간장장애 및 신장장애 등 여러 부작용이 없으면서, 종래 생약제 추출물에서는 확인이 힘들었던 비알콜성 지방간의 지질축적을 저해하고 지방간세포 내 중성지방의 크기와 수를 감소시키는 효과가 있는 비알콜성 지방간 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 비알콜성 지방간 예방 및 개선용 건강기능성 식품을 제공하는 효과가 있다.
따라서, 본 발명은 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 포함한다.
본 발명의 '퀘르세틴-3-O-글루코시드'는 플라보노이드 계열의 물질로 퀘르세틴(Quercetin)의 배당체로 알려져 있다. 퀘르세틴은 플라보노이드계 화합물들처럼 열에 대한 불안정성, 산화 조건에 대한 불안정성 및 물에 대한 불용성 등의 문제점이 있으나, 퀘르세틴의 배당체는 이러한 문제가 감소하고 생물학적 이용성이 증가는 것으로 알려져 있으며, 식물체 내에서도 비배당체 형태보다는 글루코오스(glucose), 람노오스(rhamnose), 갈락토오스(galactose) 및 아라비노오스(arabinose) 등 여러 종류의 단일 또는 다수의 당과 결합된 배당체의 형태로 존재한다. 특히 퀘르세틴-3-O-글루코시드는 퀘르세틴보다 일반적으로 3배 내지 10배까지 생물학적 이용성이 증가하는 것으로 알려져 있다 (Hollman P.C. et al ., inman Free Radic Res ., 31(6):569, 1999; Margreet R. Olthof et al ., J. Nutr ., 130:1200, 2000).
상기 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)는 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면, 특별히 제한되지 않는다. 또한, 본 발명에서는 퀘르세틴과 퀘르세틴-3-O-글루코시드와의 비교실험을 통해 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 비알콜성 지방간 예방 또는 치료 효능이 더 우수한 것을 확인하였다.
본 발명의 '비알코올성 지방간'이란, 비알코올성 지방성 간질환간 및 비알코올성 간지방증과 동일 의미이다. 비알코올성 지방간에는, 비알코올성 지방간염(비알코올성 지방성 간염, nonalcoholic steatohepatitis; NASH) 및 단순성 지방간이 포함된다. 비알코올성 지방성 간질환(NAFLD)은, 예를 들면, 분명한 음주력이 없음에도 불구하고, 간조직 소견은 알코올성 간장애와 유사한 주로 대적성의 간지방 침착을 특징으로 하는 간 장애로, 예후 양호한 단순성 지방간과 진행성의 NASH를 포함하는 질환 개념으로 정의된다.
본 발명에서, 상기 조성물은 5 내지 20 μM의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 포함할 수 있다. 상기 조성물의 용매로는 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 비알코올성 지방간 예방, 개선 또는 치료 효과를 방해하지 않는 것이라면 특별히 제한되지 않으나, 보다 바람직하게는 물, 에탄올, 프로필 알코올, DMSO 등일 수 있다. 5 μM 보다 낮은 농도의 퀘르세틴-3-O-글루코시드가 포함되는 경우, 비알코올성 지방간의 예방 또는 치료 효능이 감소할 수 있으며, 20 μM 농도이상의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 사용할 수 있지만, 농도 증가에 따른 효능이 월등하게 증가하지 않으며, 오히려, 퀘르세틴-3-O-글루코시드에 의한 세포 독성이 발생할 수도 있다. 또한, 상기 범위로 퀘르세틴-3-O-글루코시드가 포함되는 경우, 지방세포내 중성지반의 함량 감소율이 최대 50%, 지질축적 감소율이 최대 60%, aP2의 mRNA 발현량 감소율이 최대 45%, PPAR-γ의 mRNA 발현량 감소율이 최대 50% 정도 감소하는 효과가 있다.
또한, 비알코올성 지방간의 예방, 개선 또는 치료를 위해 상기 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 조성물을 20 내지 40 mg/kg으로, 바람직하게는 30 mg/kg으로 투여할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 체중감소, 간 무게 감소 또는 지방간의 크기를 감소시킬 수 있다.
본 발명의 일실시예에서는, 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 체중 및 장기 무게에 대한 영향을 측정하기 위해 고지방 식이를 유도한 마우스에 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 처리한 다음, 마우스의 체중 및 장기(간, 신장) 무게를 측정하였다.
도 1에 나타난 바와 같이, 고지방 식이군(HFD; 양성대조군) 및 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취군(HFP-Q; 실험군)에서 마우스의 체중은 각각 28.13 ± 0.50 g 및 23.43 ± 0.67 g, 간의 무게는 각각 1.59 ± 30.41 g 및 1.44 ± 41.00 g으로 나타났으며, 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취한 실험군에서 마우스의 체중 및 간(liver)의 무게가 각각 90%이상 감소한 것을 확인하였다.
또한, 신장(kidney)의 무게는 일반식이군(LFD; 음성대조군), 고지방 식이군(HFD; 양성대조군) 및 고지방 식이에 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취한 군(HFP-Q) 모두 유사한 것을 확인하였으며, 이는 퀘르세틴-3-O-글루코시드에 의한 다른 장기 독성은 유발되지 않는 것을 의미한다.
즉, 본 발명에서는 퀘르세틴-3-O-글루코시드에 의한 체중 및 간 무게 감소 효과를 확인하였으며, 이러한 결과로 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취에 의해 비알콜성 지방간이 예방될 수 있다는 것을 확인하였다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 총콜레스테롤(Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드(Triglyceride)를 감소시킬 수 있다.
본 발명의 다른 실시예에서, 퀘르세틴-3-O-글루코시드에 의한 지방간의 예방 또는 치료효과가 있는지 확인하기 위해, 실시예 1에서 실험한 마우스의 혈청지방인 총콜레스테롤 (Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 및 중성지방 (Triglyceride)의 농도 변화를 측정하였다.
도 2에 나타난 바와 같이, 고지방 식이군(HFD; 양성대조군)에서 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 중성지방의 농도는 각각 170.33 ± 8.41 mg/dl, 16.00 ± 1.15 mg/dl, 34.33 ± 3.71 mg/dl으로 나타났으며, 고지방 식이에 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취한 군(HFP-Q; 실험군)에서는 각각 156.00 ± 2.52 mg/dl, 13.33 ± 0.67 mg/dl, 23.33 ± 1.76 mg/dl으로 확인되어, 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취한 실험군에서 LDL-콜레스테롤 및 중성지방의 농도가 양성대조군에 비해 각각 80% 및 67%로 감소한 것을 확인하였다.
또한, GOT (Gulutamicoxaloacetic transninas) 및 GPT (Gulutanicpyruvictransninas) 수치를 측정한 결과, 고지방 식이에 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취한 군(HFP-Q; 실험군)은 각각 130.67 ± 31.47 U/L 및 36.37 ± 1.76 U/L으로 양성대조군에 비해 현저히 감소되는 것을 확인하였다. 특히, 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 섭취에 의해 GOT 수치가 음성대조군(130.00 ± 29.28 U/L)과 유사한 수준으로 감소하는 것으로 관찰하였다.
상기 GOT 및 GPT는 간 세포 속에 포함되어 있는 효소로, 간 세포가 파괴되면 혈액으로 나오게 되어 그 혈중치가 높아지게 되므로, 간 세포의 파괴정도를 측정하는데 활용되고 있다. 간에 염증이 생기거나 다른 이유로 간세포가 많이 파괴되면 혈액 속에 GOT, GPT 농도가 올라가나, 간세포가 더 이상 파괴되지 않으면 정상을 돌아가게 된다. 즉, 본 발명의 퀘르세틴-3-O-글루코시드가 간세포를 보호함으로 써, 혈중 GOT 및 GPT의 농도가 감소된 것으로 볼 수 있다.
상기 결과로, 퀘르세틴-3-O-글루코시드에 의해 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 중성지방 등의 혈청지방 농도를 현저하게 감소시키고, 간 세포를 보호하는 것을 확인하였으며, 이는 퀘르세틴-3-O-글루코시드가 비알콜성 지방간에 영향을 미치는 요인들을 차단하여, 비알콜성 지방간을 예방 또는 치료할 수 있다는 것을 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 간 조직 또는 부고환 지방조직의 지질 축적을 감소시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 실시예 1에서 실험한 마우스의 간 조직 및 부고환 지방조직에 대한 H&E 염색을 수행하여 세포 내 축적된 지방방울(lipid drop) 또는 지방세포의 크기와 수를 확인하였다.
도 3에 나타난 바와 같이, 간 조직의 지방방울(lipid drop) 수와 크기를 확인한 결과, 고지방 식이군에 비해 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취군에서 지방방울(lipid drop) 수와 크기가 감소한 것을 확인하였다. 또한, 도 4에 나타난 바와 같이, 부고환 지방 조직을 관찰한 결과, 고지방 식이군에 비해 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취군의 지방세포 크기가 현저하게 감소하였으며, 지방의 수는 약 39% 감소한 것을 확인하였다.
즉, 퀘르세틴-3-O-글루코시드는 비알코올성 지방간에 영향을 미치는 간 조직의 지방방울(lipid drop)의 크기 및 수의 증가를 억제하여 비알코올성 지방간을 예방 또는 치료할 수 있다는 것을 확인하였다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 SREBP-1c (sterol regulatory element-binding protein 1), MGAT1 (Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase) 및 PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptors-γ)로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 발현을 감소시킬 수 있다.
상기 SREBP-1c는 지방함성을 조절하는 유전자로,간에서 지방을 축적하는 경로와 연관이 있는 것으로 알려져 있으며, MGAT1은 간에 중성지방이 축적되는 정상적인 경로와는 달리 모노아실 글리세롤에서직접 중성지방을 합성하는 효소이다. 특히, MGAT1은 정상적인 간에서는 거의 나타나지 않지만, 지방간이 유발되면 이 효소로 지방 축적이 크게 증가하는 것으로 보고되고 있다. 또한, 고지방 식이에 의해 핵수용체인 PPAR-γ에 의해 MGAT1이 증가하는 것이 보고되었으며, 고지방 식품을 섭취하면 PPAR-γ에 의해 MGAT1이 증가하게 되고, 지방간의 지방축적을 촉진할 수 있다 (Yoo Jeong Lee et al ., PANS , 109(34):13656, 2012).
본 발명의 또 다른 실시예에서, 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 비알코올성 지방간 예방 또는 치료 효능에 대한 관련 기전을 조사하기 위해 실시예 1의 일반식이군(NFD), 고지방식이군(HFD) 및 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취군(HFP-Q)의 마우스 간조직에서 단백질을 추출한 다음, SREBP-1c, MGAT1 및 PPAR-γ의 발현량을 웨스턴블랏방법으로 측정하였다.
도 5에 나타난 바와 같이, 고지방 식이군(HFD; 양성대조군)에 비해 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취군(HFP-Q; 실험군)에서 SREBP-1c(도 5A), MGAT1(도 5B) 및 PPAR-γ(도 5C)의 발현정도는 각각 47%, 41% 및 39% 감소한 것을 확인하였으며, 일반식이군과 유사한 수준으로 발현량이 현저하게 감소하는 것을 확인하였다.
또한, 본 발명에서는 퀘르세틴 보다 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 비알콜성 지방간 예방 또는 치료 효능이 더 우수한 것을 확인하기 위해, 퀘르세틴과 퀘르세틴-3-O-글루코시드와의 비교실험을 수행하였으며, 세포실험을 통해 지방간 축적과 밀접한 관련이 있는 SREBP-1c, MGAT1와 연관성이 있는 PPAR-γ의 단백질 발현량을 측정하였다.
도 6에 나타난 바와 같이, 퀘르세틴의 경우 최대 20 μM에서도 PPAR-γ의 발현량이 감소하지 않은 것을 확인한 반면, 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 경우 퀘르세틴에 비해 20 μM 농도에서 PPAR-γ 의 발현량을 56% 감소시킨 것을 확인하였다.
상기 결과로, 퀘르세틴에 비해 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 지방간의 지방축적을 촉진할 수 있는 PPAR-γ의 발현량을 감소시키는 효과가 우수한 것을 확인하였으며, 이는 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 비알콜성 지방간 예방 또는 치료 효능이 퀘르세틴 보다 더 우수한 것을 의미한다.
따라서, 본 발명의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 조성물은 종래 합성 약제 조성물이 유발하는 심혈관작용, 중추작용, 간장장애 및 신장장애 등 여러 부작용이 없고, 비알코올성 지방간의 원인이 되는 체중을 감소시키고, 비알콜성 지방간의 성장을 억제할 수 있으며, 총콜레스테롤(Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드(Triglyceride)를 효과적으로 감소시킬 수 있다. 또한, SREBP-1c, MGAT1, PPAR-γ의 활성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 비알코올성 지방간 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물 또는 비알코올성 지방간 예방 및/또는 개선용 건강기능성 식품 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.
본 발명에 따른 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 비알코올성 지방간을 예방 및/또는 치료 효능을 가진 다른 천연물질 또는 화합물을 추가로 포함할 수 있으며, 본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 여러 가지 제형으로 제제화할 수 있다. 제제화할 경우에는 통상적으로 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 및 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제제화할 수 있다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 퀘르세틴-3-O-글루코시드에 적어도 하나 이상의 부형제(예를 들면, 전분, 수크로스, 락토오스 및 젤라틴) 등이 섞여 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등을 들 수 있는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 포함하는 비알콜성 지방간 예방 및 치료용 약학적 조성물은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 0.01 내지 50 ㎎/㎏의 양, 바람직하게는 0.1 내지 10 ㎎/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 또한 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 포함하는 조성물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 인체에 투여하는 경우, 천연 추출물인 관계로 다른 합성 의약품에 비하여 부작용의 우려가 적어 안심하고 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다. 본 발명의 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물은 상기에 기재된 비알코올성 지방간 예방 또는 개선 효과를 가진다.본 발명의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 포함하는 건강기능식품의 종류는 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등일 수 있다.
상기 건강식품은 상기 퀘르세틴-3-O-글루코시드 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방용 음료는 퀘르세틴-3-O-글루코시드가 유효성분으로 포함되는 것 이외에 칼슘, 가시오가피 농축액, 액상과당, 정제수 등을 첨가 혼합하여 드링크용 병에 충진하여 살균한 후 실온으로 냉각하여 음료를 제조할 수 있다. 또한, 상기 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방용용 건강보조제는 퀘르세틴-3-O-글루코시드에 영양보조성분(비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드), 올리고당, 50% 에탄올, 정제수를 첨가 혼합하여 과립상으로 성형하여 진공건조기에서 건조시킨 후, 12~14 메쉬(mesh)를 통과시켜 균일하게 과립을 제조하여 적당량으로 압출 성형하여 정제 또는 분말로 하거나 경질캡슐에 충전하여 경질캡슐제품으로 제조할 수 있다.
상기 건강식품에 함유된 상기 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 유효용량은 상기 약학조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으며, 유효성분의 혼합양은 예방 또는 치료적 처치 등의 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있다.
이하 본 발명을 바람직한 실시예를 참고로 하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되는 것은 아니다.
퀘르세틴-3-O-글루코시드의 체중 및 장기 무게에 대한 영향 측정
퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)의 체중 및 장기 무게에 대한 영향을 알아보기 위해, 퀘르세틴-3-O-글루코시드(#17793 ; Sigma-Aldrich, 미국)를 섭취한 동물의 체중 및 장기의 무게를 측정하였다.
먼저, 고지방 식이로 유도된 비만 동물을 유도하기 위해, 4주령의 수컷 C57BL/6 마우스 12마리(코아텍, 한국)를 준비하여 일주일간 적응기간을 준 다음 평균체중이 비슷하도록 난괴법으로 분리하여 일반식이군(NFD; 음성 대조군), 고지방식이군(HFD; 양성 대조군) 및 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취군(HFD-Quercetin-3-O-glucoside, HFD-Q; 실험군)의 세 그룹으로 4마리씩 나누었다.
6주간의 고지방식을 통해 마우스의 비만을 유도한 다음, 퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리군에만 5주 동안 매일 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 30 mg/kg BW (body weight) 수준으로 구강투여 하였다. 상기 방법으로 식이를 섭취하게 하여 각 마우스들의 체중을 일주일 간격으로 주 1회 측정하여 퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 체중의 변화를 관찰하였으며, 실험이 종료된 후, 간(liver) 및 신장(kidney)를 적출하여 인산완충식염수(phosphate buffered saline ; PBS)로 세척한 다음, 물기를 제거하고 장기의 무게를 측정하였다.
퀘르세틴-3-O-글루코시드의 체중 및 장기 무게에 대한 영향
Group LFD HFD HFD-Q
Initial body weight (g) 20.74 ± 0.42 21.02 ± 0.27 20.65 ± 0.26
Final body weight (g) 34.37 ± 0.11 49.04 ± 0.35 44.22 ± 0.40
Body weight gain (g) 13.92 ± 0.49 28.13 ± 0.50 23.43 ± 0.67
Liver (g) 1.30 ± 44.18 1.59 ± 30.41 1.44 ± 41.00
Kidney (g) 0.52 ± 32.10 0.56 ± 11.99 0.54 ± 22.40
그 결과, 도 1 및 표 1에 나타난 바와 같이, 고지방 식이군에서 마우스의 체중 및 간 무게는 각각 28.13 ± 0.50 g 및 1.59 ± 30.41 g으로 나타났으며, 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취군에서 마우스의 체중 및 간 무게는 각각 23.43 ± 0.67 g 및 1.44 ± 41.00 g으로, 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취한 실험군에서 마우스의 체중 및 간(liver)의 무게가 감소한 것을 확인하였다.
즉, 본 발명에서는 퀘르세틴-3-O-글루코시드에 의한 체중 및 간 무게 감소 효과를 확인하였으며, 이러한 결과로 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취에 의해 비알콜성 지방간이 예방될 수 있다는 것을 확인하였다.
퀘르세틴-3-O-글루코시드의 혈액 지표 변화에 대한 영향 측정
퀘르세틴-3-O-글루코시드에 의한 지방간의 예방 또는 치료효과가 있는지 확인하기 위해, 실시예 1에서 실험한 마우스의 혈청지방인 총콜레스테롤 (Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 및 중성지방 (Triglyceride)의 농도 변화를 측정하였다.
먼저, 실시예 1에서 식이 섭취 6주가 지난 후, 마우스를 12시간 동안 절식시키고, 동물실험용으로 허가받은 Zoletil/Rompun 마취액으로 마취한 다음, 주사기로 심장에서 채혈하였다. 혈액은 3,000 × ｇ에서 15분간 원심 분리하여 혈청을 수집한 후 -70 ℃에서 보관하였다가 분석하였다.
퀘르세틴-3-O-글루코시드에 따른 혈액 지표 변화
Group 　LFD HFD 　HFD-Q
TG (㎎/㎗) 18.67 ± 0.67 34.33 ± 3.71 23.33 ± 1.76
Total-c (㎎/㎗) 96.00 ± 2.00 170.33 ± 8.41　 156.00 ± 2.52　
HDL-c (㎎/㎗) 87.17 ± 1.23 106.87 ± 5.75 013.33 ± 1.54　
LDL-c (㎎/㎗) 10.33 ± 0.33 16.00 ± 1.15 13.33 ± 0.67
GOT (U/ℓ) 130.00 ± 29,28 221.33 ± 37.89 130.67 ± 31.47
GPT (U/ℓ) 28.33 ± 1.67 67.67 ± 6.17 36.67 ± 1.76　
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 고지방 식이군에서 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 중성지방의 농도는 각각 170.33 ± 8.41 ㎎/㎗, 16.00 ± 1.15 ㎎/㎗, 34.33 ± 3.71 ㎎/㎗으로 나타났으며, 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취군에서는 각각 156.00 ± 2.52 ㎎/㎗, 13.33 ± 0.67 ㎎/㎗, 23.33 ± 1.76 ㎎/㎗으로 확인되어, 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취한 실험군에서 LDL-콜레스테롤 및 중성지방의 농도가 일반식이군인 음성대조군을 기준으로 양성대조군에 비해 각각 80% 및 67%로 감소한 것을 확인하였다.
또한, GOT (Gulutamicoxaloacetic transninas) 및 GPT (Gulutanicpyruvictransninas) 수치를 측정한 결과, 고지방 식이에 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취한 군(HFP-Q; 실험군)은 각각 130.67 ± 31.47 U/L 및 36.37 ± 1.76 U/ℓ으로 양성대조군에 비해 현저히 감소되는 것을 확인하였다. 특히, 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 섭취에 의해 GOT 수치가 음성대조군(130.00 ± 29.28 U/ℓ)과 유사한 수준으로 감소하는 것으로 관찰하였다.
퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 간 조직의 지질축적 정도 확인
퀘르세틴-3-O-글루코시드가 간 조직의 지질 축적 개선에 효과가 있는지 확인하기 위해, 실시예 1에서 실험한 마우스의 간 조직에 대한 H&E 염색을 수행하였다.
먼저, 실시예 1에서 식이 섭취 6주가 지난 마우스의 간조직을 빠르게 적출하여 4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde) 용액을 처리한 다음, 4℃에서 6시간 고정시킨 후, PBS로 세척하였다. 그 다음, 수분을 제거하기 위하여 탈수 과정을 거친 후, 파라핀(paraffin)을 이용하여 조직에 강도를 부여하고 박절 과정을 거쳐 H&E 염색을 수행하였다. 최종적으로 현미경을 이용하여 지방 조직의 지방방울(lipid drop)의 수와 크기를 확인하였다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 간 조직의 지방방울(lipid drop) 수와 크기를 확인한 결과, 고지방 식이군(HFD; 양성대조군)에 비해 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취군(HFP-Q; 실험군)에서 지방방울(lipid drop) 수와 크기가 감소한 것을 확인하였다.
즉, 퀘르세틴-3-O-글루코시드는 비알코올성 지방간에 영향을 미치는 간 조직의 지방방울(lipid drop)의 크기 및 수의 증가를 억제하여 비알코올성 지방간을 예방 또는 치료할 수 있다는 것을 확인하였다.
퀘르세틴-3-O-글루코시드 처리에 따른 부고환 지방조직의 지질축적 정도 확인
퀘르세틴-3-O-글루코시드가 부고환 지방조직의 지질 축적 개선에 효과가 있는지 확인하기 위해, 실시예 1에서 실험한 마우스의 부고환 지방조직에 대한 H&E 염색을 수행하였다.
먼저, 실시예 1에서 식이 섭취 6주가 지난 마우스의 부고환 지방 조직을 빠르게 적출하여 실시예 3과 동일한 방법으로 H&E 염색을 수행한 다은, 최종적으로 현미경을 이용하여 지방 조직의 지방방울(lipid drop)의 수와 크기를 확인하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 부고환 지방 조직을 관찰한 결과, 고지방 식이군에 비해 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 섭취군의 지방세포 크기가 현저하게 감소하였으며, 지방의 수는 약 39% 감소한 것을 확인하였다.
퀘르세틴-3-O-글루코시드에 의한 지방간 관련 단백질 발현 기전 측정
퀘르세틴-3-O-글루코시드의 비알코올성 지방간 예방 또는 치료 효능에 대한 관련 기전을 조사하기 위해 실시예 1의 일반식이군(NFD), 고지방식이군(HFD) 및 퀘르세틴-3-O-글루코시드 섭취군(HFP-Q)의 마우스 간조직에서 단백질을 추출한 다음, SREBP-1c (sterol regulatory element-binding protein 1), MGAT1 (Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase) 및 PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptors-γ)의 단백질 발현량 변화를 웨스턴블랏(Western blot) 방법으로 측정하였다.
구체적으로, 실시예 1에서 실험이 종료된 마우스의 간 조직을 용해버퍼(lysis buffer)에 넣은 후 초음파 분쇄기를 이용하여 조직을 잘게 분쇄 한 다음, 30분 동안 얼음 상에서 반응시키고, 12,000 rpm에서 30분 동안 원심분리 하여 단백질을 수득하였다.
이후 수득한 단백질을 브래드포드 방법(Bradford assay)를 이용하여 단백질을 정량 한 다음, SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) 수행을 위한 샘플 버퍼(sample buffer)를 첨가한 후 95 ℃에서 5분 동안 변성시킨 뒤에 SDS-PAGE 겔을 이용하여 전기영동 하였다.
전기영동 후 니트로셀룰로오스 막(Nitrocellulose membrane)에 옮긴 후, 항-SREBP-1c(anti-SREBP-1c) 항체(Cell Signaling, 미국), 항-MGAT1(anti-MGAT1)항체(Cell Signaling, 미국) 및 항-PPAR-γ(anti-PPAR-γ)항체(Cell Signaling, 미국)를 1차 항체(로 하여 5% 탈지분유 (skim milk)에 희석하여(1:1000, v/v) 니트로셀룰로오스 막에 넣고 4℃에서 24시간 반응시켰다. 이후 TBST(Tris-Buffered Saline와 Tween 20의 혼합액, 0.1% Tween 20)로 10분마다 3번 세척한 다음, HRP(horeseradish peroxidase)-conjugated 2차 항체(anti-mouse lgG-HRP, anti-rabbit lgG-HRP, and anti-goat lgG-HRP; Cell Signaling, 미국)를 5% 탈지분유에 1:2000(v/v)으로 희석하여 5 ㎕ 첨가한 후 25 ℃에서 2시간 동안 반응시켰다.
위와 같은 방법으로 TBST를 이용하여 3차례 세척한 후 ECL(enchanced chemiluminescence) 기질 용액을 처리하여 1분 동안 반응시킨 후에 X-ray 필름에 현상하였다. 얻어진 결과를 Image J 프로그램을 이용하여 수치화하였다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 고지방 식이군(HFD; 양성대조군)에 비해 퀘르세틴-3-O-글루코시드퀘르세틴-3-O-글루코시드서 SREBP-1c(도 5A), MGAT1(도 5B) 및 PPAR-γ(도 5C)의 발현정도는 각각 47%, 41% 및 39% 감소한 것을 확인하였으며, 일반식이군과 유사한 수준으로 발현량이 현저하게 감소하는 것을 확인하였다.
퀘르세틴과 퀘르세틴 -3-O-글루코시드에 의한 지방간 관련 단백질 발현 기전 측정
퀘르세틴 보다 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 비알콜성 지방간 예방 또는 치료 효능이 더 우수한 것을 확인하기 위해, 세포실험을 통해 지방간 축적과 밀접한 관련이 있는 SREBP-1c, MGAT1와 연관성이 있는 PPAR-γ의 단백질 발현량을 측정하였다..
구체적으로, 3T3-L1 지방세포를 6-웰 플레이트(6-well plate)에 7 × 104 cells/㎖의 농도로 시딩(seeding) 후 37℃에서 8일 동안 분화시키면서 퀘르세틴과 퀘르세틴-3-O-글루코사이드를 0 μM, 5 μM, 10 μM, 또는 20 μM 의 농도로 처리하였다. 8일 후 인산완충식염수(phosphate buffered saline; PBS buffer)로 세척하고, 획득한 세포에 50 ㎕의 용해 버퍼(lysis buffer)를 첨가 후, 30분 동안 얼음 상에서 반응시키고, 12,000 rpm에서 10분 동안 원심분리 하여 단백질을 수득하였다. 이후 수득한 단백질을 브래드퍼드 분석법(Bradford 분석법)을 이용하여 단백질을 정량 후 샘플 버퍼(sample buffer)를 넣고 95 ℃에서 5분 동안 변성시킨 뒤에 SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) 겔을 이용하여 전기영동 하였다. 전기영동 후 니트로셀룰로오스 막(Nitrocellulose membrane)에 옮긴 후, 1차 항체(PPAR-γ, Cell signaling, 미국)(1:1000, v/v)를 5% 탈지분유 (skim milk)에 희석하여 니트로셀룰로오스 막에 넣고 4℃에서 12시간 반응시켰다. 이후 TBST(Tris-Buffered Saline와 Tween 20의 혼합액, 0.1% Tween 20)로 10분마다 3번 세척하고 HRP(horeseradish peroxidase)-conjugated 2차 항체 (anti-rabbit lgG-HRP, Cell signaling, 미국)를 5% 탈지분유에 1:2000(v/v)으로 희석하여 5 ㎕ 첨가한 후 25 ℃에서 2시간 동안 반응시켰다.
위와 같은 방법으로 TBST를 이용하여 3차례 세척한 후 ECL(enchanced chemiluminescence) 기질 용액을 막아 1분 동안 반응시킨 후에 X-ray 필름에 현상하였다. 얻어진 결과를 이미지 J 프로그램을 이용하여 수치화하였다.
그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, 세포실험을 통해 지방간 축적과 밀접한 관련이 있는 SREBP-1c, MGAT1 과 연관성이 있는 PPAR-γ 의 단백질 발현량을 비교한 결과 퀘르세틴의 경우 최대 20 μM 에서도 효과가 없는 반면, 퀘르세틴-3-O-글루코시드의 경우 퀘르세틴에 비해 20 μM 농도에서 PPAR-γ 의 발현량을 56% 감소시킨 것을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 유효성분으로 포함하는 조성물은 비알코올성 지방간의 원인이 되는 체중을 감소시키고, 비알콜성 지방간의 성장을 억제할 수 있으며, 총콜레스테롤(Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드(Triglyceride)를 효과적으로 감소시킬 수 있다. 또한, SREBP-1c, MGAT1, PPAR-γ의 활성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 비알코올성 지방간 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물 또는 비알코올성 지방간 예방 및/또는 개선용 건강기능성 식품 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.
이상으로, 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (14)

  1. 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 5 내지 20 μM의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 포함하는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 비알코올성 지방 예방 및 치료를 위해 20 내지 40 mg/kg으로 투여되는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 체중감소, 간 무게 감소 또는 지방간 크기를 감소시키는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 간 조직 또는 부고환 지방조직의 지질 축적을 감소시키는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 총콜레스테롤(Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드(Triglyceride)를 감소시키는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 SREBP-1c (sterol regulatory element-binding protein 1), MGAT1 (Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase) 및 PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptors-γ)로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 퀘르세틴-3-O-글루코시드(Quercetin-3-O-glucoside)를 유효성분으로 포함하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 5 내지 20 μM의 퀘르세틴-3-O-글루코시드를 포함하는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 비알코올성 지방 예방 및 치료를 위해 20 내지 40 mg/kg으로 투여되는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  11. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 체중감소, 간 무게 감소 또는 지방간 크기를 감소시키는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  12. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 간 조직 또는 부고환 지방조직의 지질 축적을 감소시키는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  13. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 총콜레스테롤(Total-cholesterol), LDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드(Triglyceride)를 감소시키는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  14. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 SREBP-1c (sterol regulatory element-binding protein 1), MGAT1 (Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase) 및 PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptors-γ)로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
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