CN110403981A - 一种中药萃取物在制备治疗脂肪肝的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种中药萃取物在制备治疗脂肪肝的药物中的应用，所述中药萃取物为丹参超临界萃取物。本发明采取超临界萃取工艺提取丹参，其分离效率高、提取彻底；低温提取，有效防止丹参酮因温度过高降解；采用无毒无污染的二氧化碳做溶剂，乙醇为夹带剂，环保且节能；更重要的是，本发明利用丹参的超临界萃取物进行脂肪肝的药效实验，证明丹参超临界萃取物能显著改善脂肪肝，其药效比传统的乙醇提取法得到的丹参提取物更优。

Description

一种中药萃取物在制备治疗脂肪肝的药物中的应用
技术领域
本发明涉及中药领域，具体涉及一种中药萃取物在制备治疗脂肪肝的药物中的应用。
背景技术
丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效。丹参中主要活性成分为丹参酮，包括二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA等，其具有较显著的抗菌、消炎、活血化瘀、促进伤口愈合等活性。
国内在丹参酮的提取工艺方面进行了大量研究，目前多集中于回流提取法、超声提取法、微波提取法等传统提取方法，传统方法具有以下问题亟待解决：1、分离效率较低，提取不彻底。2、提取温度较高，丹参酮易因温度过高而降解。3、使用化学溶剂提取，不节能环保。
脂肪性肝病(fatty liver)是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变，是一种常见的肝脏病理改变。随着人民生活水平提高、饮食习惯和生活方式的改变，脂肪肝成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，发病率在不断升高，且发病年龄日趋年轻化，严重威胁国人的健康。中药在脂肪肝的治疗中占据较大优势，据报道，丹参、山楂、草决明、泽泻、柴胡汤、五苓散等均具有脂肪肝治疗作用，但目前上市的治疗脂肪肝的中成药寥寥无几，传统的中药提取方法也成为新型中成药发明的一大难点。
发明内容
因此，本发明提供一种中药萃取物在制备治疗脂肪肝的药物中的应用，所述中药萃取物为丹参超临界萃取物。
在一种具体的实施方式中，制备所述丹参超临界萃取物时，超临界萃取夹带剂为85～99wt％的乙醇，优选为90～95％的乙醇。
在一种具体的实施方式中，制备所述丹参超临界萃取物之前，先将丹参粉碎为颗粒状，再用乙醇浸泡颗粒状丹参20分钟以上，优选1小时以上，然后超临界萃取丹参得到丹参提取液。
在一种具体的实施方式中，在超临界萃取丹参后，还包括将所述丹参提取液浓缩和干燥至膏状或粉末状的过程。
在一种具体的实施方式中，所述超临界萃取时间为1小时以上，优选2小时以上。
在一种具体的实施方式中，所述治疗脂肪肝的药物中包括丹参超临界萃取物和用于溶解丹参超临界萃取物的溶剂。
在一种具体的实施方式中，所述溶剂包括植物油。
在一种具体的实施方式中，所述溶剂包括水、玉米油和羧甲基纤维素。
在一种具体的实施方式中，所述溶剂包括大豆油。
在一种具体的实施方式中，所述夹带剂与丹参的质量比为1:0.5～2，超临界萃取温度为40～50℃，超临界萃取压力为20～30Mpa。
本发明采取超临界萃取工艺提取丹参，与传统提取方法相比，超临界萃取至少具有下述优点：1、分离效率高、提取彻底。2、低温提取，有效防止丹参酮因温度过高降解。3、采用无毒无污染的二氧化碳做溶剂，乙醇为夹带剂，环保且节能。更重要的是，4、本发明利用丹参的超临界萃取物进行脂肪肝的药效实验，证明丹参超临界萃取物能显著改善脂肪肝，其药效比传统的乙醇提取法得到的丹参提取物更优。
附图说明
图1为实施例1和对比例中使用水提、95％乙醇提和超临界萃取提取物对肝细胞脂肪沉积的影响图。
图2为实施例2中的甘油三酯标准曲线。
图3为实施例2中40只大鼠的肝脏照片。
图4为实施例3中的甘油三酯标准曲线。
图5为实施例4中的甘油三酯标准曲线。
具体实施方式
本发明首先通过正交试验法优选丹参超临界萃取工艺参数，确定最佳提取条件，并利用三次重复试验进一步验证该工艺。
具体地，在下述实施例中使用的丹参超临界萃取工艺参数为：药材粉碎粒度：粗颗粒。浸泡时间：每100g丹参用25ml 95％乙醇浸润1小时。超临界萃取夹带剂为95％乙醇，夹带剂与丹参的质量比为1:1，萃取温度为45℃，萃取压力为25Mpa，萃取时间为3小时。
超临界萃取的丹参提取液经浓缩和干燥后用于实施例中。其中，浓缩是指将丹参提取液50℃悬蒸至浓稠液体，干燥是指将浓缩后的浓稠液体于50℃鼓风干燥箱中干燥至膏状。
实施例1和对比例
本实施例和对比例中考察丹参不同提取工艺对肝细胞脂肪沉积抑制活性比较。其中，实施例1为对生药丹参的超临界萃取，对比例为水提和醇提，且水提和醇提具体是10倍量的蒸馏水、95％乙醇分别对已浸泡12h的100g丹参粗颗粒进行提取，共提取两次，每次1h，合并两次滤液，浓缩后放入鼓风干燥箱中50℃干燥至膏状。
一个实施例样品和两个对比例样品共三个样品进行肝细胞脂肪沉积抑制活性测定，结果如图1所示。从图1的数据结果可见，水提物对肝细胞脂肪沉积抑制率基本无影响，95％的醇提具有一定的影响，但明显实施例1中使用超临界萃取后得到的样品对肝细胞脂肪沉积抑制率影响最大。由于脂肪肝是肝细胞内脂肪堆积过多引起的病变，所以“肝细胞脂肪沉积抑制率”数据越高，预期样品用于治疗脂肪肝时能产生更好的效果。
图1为实施例1和对比例中使用水提、95％乙醇提和超临界萃取提取物对肝细胞脂肪沉积的影响图。图1中横坐标的浓度是指按照超临界萃取物和醇提取物或水提取物的浓度折算成生药丹参之后的浓度。
本领域技术人员知晓的，药学实验都是先做体外实验，再做动物实验。从图1可知，体外实验已经可以明确判断出药物“丹参95％乙醇提取物”的效果并不优异，因而没必要对它做体内实验。而本发明中的丹参超临界提取物在体外实验中说明它对脂肪肝有非常不错的效果。因而需要进而对其采用不同品系动物的体内实验来验证该药物在体内的药效是否也像体外实验一样优异。本发明下述实施例2～4三个体内实验的实施例都是根据超临界提取物折算回生药丹参之后的用量数据，例如相应的生药为4.5g丹参。
实施例2
实施例2中考察丹参对喂饲高脂饲料10周SD大鼠肝脏甘油三酯含量的影响。
一、试验材料
1、动物：健康SD大鼠40只，雌雄各半，体重180-200g。由维通利华实验动物技术有限公司提供。许可证号为SCXK(京)2016-0006。动物饲养在本所SPF级动物房内。H10045高脂饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证号为SCXK(京)2014-0008。
2、受试物：丹参超临界萃取样品的得率为1.58wt％，为粘稠液体。用含25％玉米油的0.5％羧甲基纤维素溶解。
3、器材：Multiskan Ascent酶标仪(美国Thermo Electron公司)，德国SartoriusBT125D电子天平，移液器德国Eppendorf，MS1 Minishaker微型振荡器广州，微孔板恒温振荡器杭州奥盛仪器有限公司，匀浆器，高速冷冻离心机(Sigma)酶标板Costar3599，Corning Incorporated。
4、肝匀浆甘油三酯(TG)测定试剂盒：北京普利莱基因技术有限公司。
二、试验方法
健康大鼠40只，雌雄各半，体重180-200g。分为5个试验组，每组8只，分别为给药组、正常组和模型组，给药组包括丹参1.125，2.25，4.5g生药/kg体重三个组，每天按0.5ml/100g灌胃给予药物，药物用含25％玉米油的0.5％羧甲基纤维素溶解(其余74.5wt％为水)，模型组用等体积含25％玉米油的0.5％羧甲基纤维素(其余74.5wt％为水)代替药物。正常组给予同体积的0.5％羧甲基纤维素(其余99.5wt％为水)。正常组给予普通饲料，模型组和给药组给予高脂饲料。实验结束时，将肝脏用试剂盒提供的液体匀浆，取匀浆液测定，具体实验方法按试剂盒说明书进行。
三、实验结果
1、甘油三酯标准曲线：图2为实施例2中的甘油三酯标准曲线。
2、丹参对喂饲高脂饲料10周大鼠肝脏TG含量的影响(μmol/g肝脏X±SD，n＝8)见表1。
表1
正常组 模型组 1.125g生药/kg 2.25g生药/kg 4.5g生药/kg
8.31±1.45 14.94±3.30## 13.77±3.84 11.80±2.58* 10.51±2.73**
注：##为模型组与正常组比较P≤0.01，差异有非常显著性。
*为给药组与模型组比较P≤0.05，差异有显著性。
**为给药组与模型组比较P≤0.01，差异有非常显著性。
3、肝脏照片：图3为实施例2中40只大鼠的肝脏照片。
实施例3
实施例3中考察丹参对喂饲高脂饲料13周C57BL/6N小鼠肝脏甘油三酯含量的影响。
一、试验材料
1、动物：健康C57BL/6N小鼠30只，雌雄各半，6-8周龄。由维通利华实验动物技术有限公司提供。许可证号为SCXK(京)2016-0011。动物饲养在本所SPF级动物房内。
H10045高脂饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证号为SCXK(京)2014-0008。
2、受试物：丹参超临界萃取样品由上述方法制备得到，得率为1.58％，为粘稠液体。用加工H10045饲料的原料大豆油溶解后均匀混入饲料中。
3、器材：Multiskan Ascent酶标仪(美国Thermo Electron公司)，德国SartoriusBT125D电子天平，移液器德国Eppendorf，MS1 Minishaker微型振荡器广州，微孔板、恒温振荡器、杭州奥盛仪器有限公司，匀浆器、高速冷冻离心机(Sigma)、酶标板Costar3599、Corning Incorporated。
4、肝匀浆TG测定试剂盒：北京普利莱基因技术有限公司。
二、实验方法
健康C57BL/6N小鼠30只，雌雄各半，6-8周龄，分为3组，标准饲料组，高脂模型组及高脂+100g生药/kg饲料组(即给药组)。给药组为在1kg的饲料中另加丹参超临界萃取提取物1.58g(相当于丹参受试物生药100g)。各组动物正常进食(各组饲料)进水，每周测定体重、摄食量。实验结束时，将肝脏用试剂盒提供的液体匀浆，取匀浆液测定，具体实验方法按试剂盒说明书进行。
三、实验结果
1、甘油三酯标准曲线，实施例3的甘油三酯标准曲线见图4。
2、丹参对喂食高脂饲料13周C57BL/6N小鼠肝脏甘油三酯含量的影响(μmol/g肝脏X±SD，n＝10)见表2。
表2
标准饲料组 高脂模型组 100g生药/kg饲料
9.70±2.11 19.52±3.67## 10.53±2.68**
注：##为模型组与正常组比较P≤0.01,差异有非常显著性。
**为给药组与模型组比较P≤0.01，差异有显著性。
实施例4
实施例4中考察丹参对喂食高脂饲料5周Babl/c小鼠肝脏甘油三酯含量的影响。
一、试验材料
1、动物：健康Babl/c小鼠30只，雌雄各半，6-8周龄。由维通利华实验动物技术有限公司提供。许可证号为SCXK(京)2016-0011。动物饲养在本所SPF级动物房内。H10045高脂饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证号为SCXK(京)2014-0008。
2、受试物：丹参超临界萃取样品由上述方法制备得到，得率为1.58％，为粘稠液体。用加工H10045饲料的原料大豆油溶解后均匀混入饲料中。
3、器材：Multiskan Ascent酶标仪(美国Thermo Electron公司)，德国SartoriusBT125D电子天平，移液器德国Eppendorf，MS1 Minishaker微型振荡器广州，微孔板、恒温振荡器、杭州奥盛仪器有限公司，匀浆器、高速冷冻离心机(Sigma)、酶标板Costar3599、Corning Incorporated。
4、肝匀浆TG测定试剂盒：北京普利莱基因技术有限公司。
二、实验方法
健康Babl/c小鼠30只，雌雄各半，6-8周龄，分为3组，标准饲料组，高脂模型组及高脂+100g生药/kg饲料组(即给药组)。给药组为在1kg的饲料中另加丹参超临界萃取提取物1.58g(相当于丹参受试物生药100g)。各组动物正常进食(各组饲料)进水，每周测定体重、摄食量。实验结束时，将肝脏用试剂盒提供的液体匀浆，取匀浆液测定，具体实验方法按试剂盒说明书进行。
三、实验结果
1、甘油三酯标准曲线，实施例4的甘油三酯标准曲线见图5。
2、丹参对喂食高脂饲料5周Babl/c小鼠肝脏甘油三酯含量的影响(μmol/g肝脏X±SD，n＝10)见表3。
表3
标准饲料组 高脂模型组 100g生药/kg饲料
7.56±1.36 11.54±2.70## 7.86±1.42**
注：##为模型组与正常组比较P≤0.01,差异有非常显著性。
**为给药组与模型组比较P≤0.01，差异有显著性。
从实施例2～4的动物喂养实验(分别针对SD大鼠、C57BL/6N小鼠和Babl/c小鼠)可见，本发明的丹参超临界萃取提取物在不同品系的动物体内实验均作出考察，有利于全面了解不同品系的动物对高脂饲料和药物的敏感程度。从上述实验可见，对本发明所述药物采用不同品系动物的体内实验的药效都像体外实验一样优异。另外，图2、图4和图5针对不同品系动物的甘油三酯标准曲线，主要是为了计算每一种动物肝脏中甘油三酯含量用。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演和替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种中药萃取物在制备治疗脂肪肝的药物中的应用，所述中药萃取物为丹参超临界萃取物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，制备所述丹参超临界萃取物时，超临界萃取夹带剂为85～99wt％的乙醇，优选为90～95％的乙醇。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，制备所述丹参超临界萃取物之前，先将丹参粉碎为颗粒状，再用乙醇浸泡颗粒状丹参20分钟以上，优选1小时以上，然后超临界萃取丹参得到丹参提取液。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在超临界萃取丹参后，还包括将所述丹参提取液浓缩和干燥至膏状或粉末状的过程。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述超临界萃取时间为1小时以上，优选2小时以上。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗脂肪肝的药物中包括丹参超临界萃取物和用于溶解丹参超临界萃取物的溶剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述溶剂包括植物油。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述溶剂包括水、玉米油和羧甲基纤维素。
9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述溶剂包括大豆油。
10.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述夹带剂与丹参的质量比为1:0.5～2，超临界萃取温度为40～50℃，超临界萃取压力为20～30Mpa。
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