MX2011006757A - Inhibidores de proteina cinasa. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable la cual es útil en el tratamiento de enfermedades proliferativas celulares. ( ver fórmula (I)).

Description

INHIBIDORES DE PROTEÍNA CINASA Las cinasas dependientes de Ciclina altamente homologas (Cdks) CDK4 y CDK6 en combinación con Ciclina D son reguladores clave de la transición a través del punto de restricción R entre las fases Gi (crecimiento) y S (replicación de DNA) del ciclo celular. Las CDK4/6 ejercen sus efectos vía fosforilación de la proteína retinoblastoma (pRb) . Una vez fosforilada, la pRb pierde su efecto inhibidor en la transcripción de genes que promueven la entrada en la fase S.

Por el contrario, la inhibición específica de la actividad de cinasa CDK4/6 por el modulador de la proteína endógena pl6INK4 o por inhibidores de molécula pequeña resulta en pRb fosforilado y detención de las células en el punto de restricción Gi. Como el mecanismo primario de regulación del punto de restricción Gi, la trayectoria regulada por estas cinasas es alterada en un amplio espectro de tumores humanos y de este modo la inhibición de CD 4/CDK6 en estos tumores tiene beneficio terapéutico previniendo la división celular.

La Pim-1 es una serina/treonina cinasa que regula diversas funciones biológicas, que incluyen progreso del ciclo celular, trayectorias de transducción de señal/transcripcionales y apoptosis cuya expresión ha sido ligada a varios cánceres que incluyen tumores hematológicos, de próstata y orales (Bachmann, M. and T. oroy, Int. J. Biochem. Cell Biol . , 2005. 37(4): p. 726-30) .

Se conocen en la técnica inhibidores de cinasa. El documento WO 98/11095 describe una serie de 2-pirimidinaminas sustituidas y las describe como inhibidores de cinasa, en particular las cinasas p56lck, ZAP-70 y proteina cinasa C. El documento WO 98/11095 no describe la inhibición de Cdks .

Una serie de 2- (piridin-2-ilamino) -pirido [ 2 , 3-d] pirimidin-7-onas descritas por tener actividad inhibidora de CDK4/6 se describen en el documento WO 03/062236. Estos compuestos se describen por ser útiles en el tratamiento de trastornos proliferativos celulares tales como cáncer y restenosis. Sin embargo, los compuestos son escasamente solubles en solución acuosa y no muestran actividad inhibidora apreciable a otros objetivos de cinasas (no Cdk) .

Permanece una necesidad de proporcionar inhibidores de CDK4/6 los cuales puedan ser usados en el tratamiento de trastornos proliferativos celulares tales como cáncer. La presente invención proporciona inhibidores de CDK4/6. Ciertos compuestos de la presente invención son inhibidores más potentes de CDK4/6 que ciertos compuestos conocidos en la técnica .

Adicionalmente, existe una necesidad de proporcionar inhibidores de CDK4/6 los cuales son selectivos para CDK4/6 comparados con otras Cdks y son de este modo capaces de producir detención de Gi especifica cuando se presentan a concentraciones farmacológicamente relevantes. La presente invención proporciona inhibidores de CDK4/6 que son capaces de producir detención de Gi especifica cuando se presentan a concentraciones farmacológicamente relevantes.

También permanece una necesidad de proporcionar inhibidores de CDK4/6 con solubilidad mejorada en solución acuosa. Ciertos compuestos de la presente invención tienen solubilidad mejorada en solución acuosa comparada con ciertos compuestos en la técnica.

Además, existe una necesidad de proporcionar inhibidores de CDK4/6 los cuales tienen distribución mejorada en el tejido cerebral y puedan de este modo ser usados para tratar trastornos que ocurren dentro del cerebro, por ejemplo tumores cerebrales primarios y metastásicos . Ciertos compuestos de la presente invención tienen distribución mejorada en el tejido cerebral.

Existe también una necesidad de proporcionar inhibidores de CDK4/6 con buenas propiedades farmacocinéticas tales como disponibilidad oral. Ciertos compuestos de la presente invención tienen disponibilidad oral mejorada cuando se comparan con ciertos compuestos conocidos en la técnica.

Además, existe una necesidad de proporcionar inhibidores de cinasa que tengan actividad inhibidora secundaria en otras cinasas no Cdk, por ejemplo cinasa Pim-1.

Ciertos compuestos de la presente invención tienen actividad inhibidora de cinasa Pim-1 y CDK4/6 dual.

La presente invención proporciona compuestos de la fórmula : Formula I (I) en donde, Rl es alquilo C3-C5, cicloalquilo C3-C5 o ciclopropil-metilo; R2 y R3 son H o flúor, en donde al menos uno de R2 o R3 es flúor; R4 es H o CH3; R5 es alquilo Ci-Ce o -NR6R7 en donde R6 and R7 son alquilo C1-C3; Q es CH2, O, S o un enlace directo; y y Y son C o N, en donde al menos uno de W o Y es N y en donde, cuando Q es 0 u S, W es C; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable .

La presente invención proporciona un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para uso en terapia.

La presente invención proporciona un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para uso en el tratamiento de cáncer. En particular aquellos cánceres seleccionados del grupo que consiste de cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, especialmente cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) , cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de células manto (MCL) , leucemia mieloide crónica (CML) y leucemia mieloide aguda (A L) .

Esta invención además proporciona un método para tratar cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, especialmente cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) , cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de células manto, leucemia mieloide crónica y leucemia mieloide aguda en un mamífero que comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable .

Adicionalmente, esta invención proporciona el uso de un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cáncer. En particular aquellos cánceres que son seleccionados del grupo que consiste de cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, especialmente cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) , cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de células manto, leucemia mieloide crónica y leucemia mieloide aguda.

Además, esta invención proporciona una formulación farmacéutica para uso en terapia que comprende un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. La invención también proporciona una formulación farmacéutica para tratar cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, especialmente cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) , cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de células manto, leucemia mieloide crónica y leucemia mieloide aguda que comprende un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los términos químicos generales usados en las fórmulas anteriores tienen sus significados usuales. Por ejemplo, el término "alquilo C3-C5" se refiere a una cadena alifática saturada, recta o ramificada, monovalente, de tres a cinco átomos de carbono e incluye, pero no se limita a n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo y ter-¿utilo.

El término cicloalquilo C3-C5 se refiere a un sistema de anillo de carbono saturado que contiene tres a cinco átomos de carbono.

Se entenderá por los lectores expertos que pocos o todos los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales. Los compuestos de la presente invención son aminas, y por consiguiente reaccionan con cualquiera de un número de ácidos orgánicos e inorgánicos para formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables. Tales sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables y metodología común para prepararlos se conocen bien en la técnica. Véase, por ejemplo, P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); L.D. Bighley, S.M. Berge, D.C. Monkhouse, en "Encyclopedia of Pharmaceutical Technology'. Eds . J. Swarbrick and J.C. Boylan, Vol. 13, Marcel Dekker, Inc., New York, Basel, Hong Kong 1995, pp. 453-499; S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, January 1977. Las sales de clorhidrato y mesilato son preferidas. La sal de mesilato es especialmente preferida.

Preferiblemente, la presente invención comprende compuestos de la Fórmula I en donde Rl es isopropilo, ciclopropilo, ciclopentilo o ciclopropil-metilo . Más preferiblemente, Rl es isopropilo.

Preferiblemente, la presente invención comprende compuestos de la Fórmula I en donde R2 es flúor y R3 es hidrógeno. Preferiblemente, la presente invención comprende compuestos de la Fórmula I en donde R2 es hidrógeno y R3 es fluoro. Muy preferiblemente tanto R2 como R3 son flúor.

Preferiblemente, la presente invención comprende compuestos de la Fórmula I en donde R4 es hidrógeno. En una alternativa, R4 es preferiblemente metilo. Muy preferiblemente R4 es hidrógeno.

Preferiblemente, la presente invención comprende compuestos de la Fórmula I en donde R5 es alquilo C1-C3 o -NR6R7, en donde R6 y R7 son alquilo C1-C3. Más preferiblemente, R6 y R7 son etilo. Más preferiblemente R5 es alquilo C1-C3. Muy preferiblemente R5 es etilo.

Preferiblemente, la presente invención comprende compuestos de la Fórmula I en donde Q es CH2 o un enlace directo. Muy preferiblemente Q es CH2.

Preferiblemente, la presente invención comprende compuestos de la Fórmula I en donde Y es N.

Preferiblemente, la presente invención comprende compuestos de la Fórmula I en donde W es N.

Preferiblemente, la presente invención comprende compuestos de la Fórmula I en donde tanto W como Y son N.

Compuestos preferidos de la invención incluyen aquellos de la fórmula: Fórmula II en donde: Rl es isopropilo, ciclopropilo, ciclopentilo o cielopropil-metilo; R4 es H o CH3; R5 es alquilo C1-C3; Q es CH2, O, o un enlace directo; y W es C o N en donde, cuando Q es O, W es C; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Especialmente preferidos son los compuestos ejemplificados en la presente o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. Más especialmente preferido es el compuesto [5- ( -Etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- ( 7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il] -amina o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. [ 5- ( 4-Etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il] -amina puede ser nombrado en la alternativa como 2-Pirimidinamina, N- [5- [ ( -etil-l-piperazinil ) metil ] -2-piridinil] -5-fluoro-4- [ 4-fluoro-2-metil- 1- ( 1-metiletil) -líT-benzimidazol-6-il ] - .

Particularmente preferido es [ 5- ( 4-Etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- ( 7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il ] -amina forma cristalina III, caracterizada por un patrón de difracción en polvo de rayos-X (radiación CUKOÍ, .? = 1.54056 Á) que comprende un pico a 21.29 (2T ± 0.1°) y opcionalmente uno o más picos seleccionados del grupo que comprende 11.54, 10.91, y 12.13 (2T ± 0.1°) . [5- (4-Etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin- 2-il] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] -amina forma cristalina III, puede ser además caracterizada por un espectro de 13C NMR que tiene picos de cambios químicos v(Fl) [ppm] a 112.7, 127.3 y 129.4.

Los compuestos de la presente invención son inhibidores específicos de CDK4 y CDK6 y son por lo tanto útiles en el tratamiento de una enfermedad o trastorno caracterizado por proliferación celular anormal. En particular, los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de cáncer.

CDK4 y CDK6 modulan sus efectos en el ciclo celular a través de la fosforilación de pRb. Los compuestos de la presente invención, los cuales son inhibidores potentes de la actividad de CDK4/6 y de este modo de la fosforilación de pRb, se espera inhiban la proliferación celular (y por lo tanto el crecimiento del tumor) en cualquier tipo de cáncer en donde las células están proliferando y contienen un gene Rbl intacto, funcional (el cual codifica a pRb) . Los compuestos de la invención son por lo tanto útiles en el tratamiento de cánceres de pRb+ tales como cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, leucemia mieloide crónica, leucemia mieloide aguda (Fry, D.W. et al. Mol. Cáncer Ther. (2004), 3(11), 1427), linfoma de células manto (Marzec, M. et al., Blood (2006), 108(5), 1744) cáncer de ovario (Kim, T. M. et al., Cáncer Research (1994), 54, 605), cáncer pancreático (Schutte, M. et al., Cáncer Research (1997), 57, 3126) melanoma maligno y melanoma maligno metastásico ( aelandsmo, G.M. et al., British Journal of Cáncer (1996), 73, 909) en mamíferos. Los compuestos de la invención también se espera sean útiles en el tratamiento de rabdomiosarcoma (Saab, R. et al., Mol. Cáncer Ther. (2006), 5(5), 1299) y mieloma múltiple (Baughn, L.B. et al., Cáncer Res. (2006), 66(15), 7661) en mamíferos. Se prefiere que el mamífero a ser tratado sea un humano.

Adicionalmente, compuestos preferidos de la presente invención exhiben la propiedad ventajosa que tienen distribución mejorada en el tejido cerebral. Por ejemplo, cuando se administran en un modelo de rata, la relación de exposición cerebro : plasma del compuesto del Ejemplo 16 (determinada usando el área bajo la curva (AUC) o concentraciones máximas cerebrales y de plasma (Cmax) , véase Tabla 6C) es aproximadamente 1, indicando que el compuesto del Ejemplo 16 se distribuye bien en el cerebro. Por el contrario, los presentes inventores han determinado que un compuesto preferido del documento WO 03/062236 (6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2- ( 5-piperazin-l-il-piridin-2-ilamino) -8íf-pirido [2, 3-d] pirimidin-7-ona ) exhibe relaciones de distribución cerebro : plasma de 0.17 (AUC) y 0.1 (Cmax), indicando que el compuesto se distribuye relativamente pobre en el tejido cerebral en este modelo. Los compuestos preferidos de la presente invención son por lo tanto capaces de penetrar el cerebro y son de este modo, útiles en el tratamiento de tumores cerebrales primarios y metastásicos en donde las células están proliferando y contienen un gene Rbl intacto, funcional. Ejemplos de tales tumores cerebrales pRb+ incluyen glioblastoma asi como también meduloblastoma y astrocitoma (Lee, W.-H. et al., Science (1987), 235, 1394). La Temozolomida es un agente alquilante de DNA, citotóxico, usado para el tratamiento de tumores cerebrales que incluyen glioblastoma y astrocitoma (Friedman, H. S. et al. (2000), Clin. Cáncer Res. 6(7) : 2585-97) que incluyen metástasis cerebral de melanoma, cáncer de mama y NSCLC (Siena, S. et al. (2009) Annals of Oncology, doi : 10.1093/annonc/mdp343 ) . La Temozolomida interactúa con DNA causando modificación/daño químico (Marchesi, F., et al. (2007), Pharmacol. Res. 56(4) : 275-87) . Los compuestos de la presente invención pueden ser usados en combinación con temozolomida para el tratamiento de tumores cerebrales de pRb+ primarios y metastásicos tales como glioblastoma y astrocitoma, por ejemplo en donde tales metástasis se derivan de melanoma, cáncer de mama o NSCLC.

El HC1 de gemcitabina, un análogo nucleósido que exhibe actividad antitumoral, es monoclorhidrato de 2'-desoxi-2 ' , 2 ' -difluorocotidina (ß-isómero) , también conocido como monoclorhidrato de 2' , 2' -difluoro-2' -desoxicitidina, o como 1- (4-amino-2-oxo-lH-pirimidin-l-il) -2-desoxi-2' , 2' -difluororibosa . El HC1 de Gemcitabina se describe en la Patente Estadounidense 5,464,826. La fórmula estructural se representa abajo: El HCl de gemcitabina es efectivo en el tratamiento de cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) (Sandler, A. y Ettinger, D.S., (1999), The Oncologist, 4, 241), cáncer pancreático (Pino, S.M. et al., (2004), Current Gastroenterology Reports, 6, 119) , cáncer de ovario (Pfisterer, J. et al., (2006), Journal of Clinical Oncology, 24(29), 4699) y cáncer de mama metastásico (Chan, S., et al., (2009), Journal of Clinical Oncology, 27(11), 1753) . Los compuestos de la presente invención pueden ser usados en combinación con HCl de gemcitabina para el tratamiento de NSCLC, cáncer pancreático, cáncer de ovario y cáncer de mama metastásico.

Los compuestos de la presente invención pueden ser usados en un método para tratar cáncer, en particular los cánceres descritos anteriormente, en un mamífero que comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención. En una modalidad preferida, los compuestos de la presente invención pueden ser usados en un método para tratar un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, linfoma de células manto, cáncer de mama, glioblastoma, leucemia mieloide aguda y cáncer de pulmón, especialmente NSCLC. En otra modalidad preferida, los compuestos de la presente invención pueden ser usados en un método para tratar un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, glioblastoma, leucemia mieloide aguda y cáncer de pulmón. En otra modalidad preferida, un compuesto de la presente invención puede ser usado en un método para tratar glioblastoma o astrocitoma en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad del mismo una combinación terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención y temozolomida . En otra modalidad preferida, un compuesto de la invención puede ser usado en un método para tratar NSCLC, cáncer pancreático, cáncer de ovario o cáncer de mama metastásico en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad del mismo una combinación terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención y HC1 de gemcitabina.

Los compuestos de la presente invención pueden ser usados para el tratamiento de cáncer, en particular, los cánceres descritos anteriormente. En una modalidad preferida, los compuestos de la presente invención pueden ser usados para el tratamiento de un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, linfoma de células manto, cáncer de mama, glioblastoma, leucemia mieloide aguda y cáncer de pulmón, especialmente NSCLC. En otra modalidad preferida, los compuestos de la presente invención pueden ser usados para el tratamiento de un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, glioblastoma, leucemia mieloide aguda y cáncer de pulmón. En otra modalidad preferida, la invención proporciona un compuesto de la presente invención para uso en combinación simultánea, separada o secuencial con temozolomida en el tratamiento de glioblastoma o astrocitoma. En otra modalidad preferida, la invención proporciona un compuesto de la presente invención para uso en combinación simultánea, separada o secuencial con HC1 de gemcitabina en el tratamiento de NSCLC, cáncer pancreático, cáncer de ovario o cáncer de mama metastásico.

Además, los compuestos de la presente invención pueden ser usados en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cáncer, en particular, los cánceres descritos anteriormente. En una modalidad preferida, los compuestos de la presente invención pueden ser usados en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, linfoma de células manto, cáncer de mama, glioblastoma, leucemia mieloide aguda y cáncer de pulmón, especialmente NSCLC. En otra modalidad preferida, los compuestos de la presente invención pueden ser usados en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, glioblastoma, leucemia mieloide aguda y cáncer de pulmón. En otra modalidad preferida, la invención proporciona el uso de un compuesto de la invención en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de glioblastoma o astrocitoma, en donde el medicamento también comprende temozolomida o es administrado simultáneamente, separadamente o secuencialmente con temozolomida. En otra modalidad preferida, la invención proporciona el uso de un compuesto de la invención en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de NSCLC, cáncer pancreático, cáncer de ovario o cáncer de mama metastásico, en donde el medicamento también comprende HCl de gemcitabina o es administrado simultáneamente, separadamente o secuencialmente con HCl de gemcitabina.

También se proporciona una formulación farmacéutica para tratar cáncer, en particular los cánceres descritos anteriormente que comprenden un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable junto con un portador farmacéuticamente aceptable. En una modalidad preferida, también se proporciona una formulación farmacéutica para tratar un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, linfoma de células manto, cáncer de mama, glioblastoma, leucemia mieloide aguda y cáncer de pulmón, especialmente NSCLC, que comprende un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable junto con un portador farmacéuticamente aceptable. En una modalidad preferida, también se proporciona una formulación farmacéutica para tratar un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, glioblastoma, leucemia mieloide aguda y cáncer de pulmón, que comprende un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable junto con un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad preferida, la invención proporciona una formulación farmacéutica para tratar glioblastoma o astrocitoma, que comprende un compuesto de la invención y temozolomida, junto con un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad preferida, la invención proporciona una formulación farmacéutica para tratar NSCLC, cáncer pancreático, cáncer de ovario o cáncer de mama metastásico, que comprende un compuesto de la invención y HC1 de gemcitabina, junto con un portador farmacéuticamente aceptable.

La invención también proporciona una formulación farmacéutica, que comprende un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable y temozolomida, junto con un portador farmacéuticamente aceptable, diluyente, o excipiente.

La invención también proporciona una formulación farmacéutica, que comprende un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable y HC1 de gemcitabina, junto con un portador farmacéuticamente aceptable, diluyente, o excipiente.

La invención además proporciona una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable junto con un portador farmacéuticamente aceptable y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos.

Además, compuestos ejemplificados preferidos son también inhibidores de Pim-1. Como se indicó anteriormente, la Pim-1 es una serina/treonina cinasa que está involucrada en la regulación de diversas funciones biológicas, que incluyen progreso del ciclo celular, trayectorias de transducción de señal/transcripcionales y apoptosis y cuya expresión ha sido ligada a varios cánceres. En particular, la inhibición de Pim-1 por el inhibidor de molécula pequeña K00135 ha sido mostrada por deteriorar el crecimiento clonogénico y supervivencia de un panel de células de leucemia aguda humana (Pogacic, V., et al., Cáncer Res. (2007) . 67(14) : p. 6916-24) . Además, la Pim-1 ha sido mostrada por ser expresada en la neointima de arterias carótidas de rata lesionadas con balón y en aortas torácicas humanas y arterias coronarias que muestran adelgazamiento íntimo. Además, la inhibición específica de la función de Pim-1 marcadamente suprime tanto la formación de neoíntoma después de la lesión con balón como también la proliferación de células del músculo liso vasculares cultivadas (VSMCs), sugiriendo que la Pim-1 juega un papel crucial en la proliferación de tales células. La proliferación de VSMCs se ha implicado en la patogénesis de enfermedades vasculares oclusivas tales como aterosclerosis y restenosis y por lo tanto, la inhibición de Pim-1 se espera suprima la proliferación de VSMC y de este modo sea útil para el tratamiento de enfermedades vasculares oclusivas (Katakami . , et al., JBC (2004), 279(52), 54742-54749).

Por consiguiente, compuestos preferidos de la presente invención, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, pueden ser usados en un método para tratar enfermedad vascular oclusiva tal como aterosclerosis o restenosis en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención. Compuestos preferidos de la presente invención, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, pueden ser usados en el tratamiento de enfermedad vascular oclusiva tal como aterosclerosis o restenosis. Además, compuestos preferidos de la presente invención, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, pueden ser usados en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de enfermedad vascular oclusiva tal como aterosclerosis o restenosis. También se proporciona una formulación farmacéutica para tratar enfermedad vascular oclusiva tal como aterosclerosis o restenosis, que comprende un compuesto preferido de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable .

Como se usa en la presente, ¾h' se refiere a hora u horas, 'min' se refiere a minutos o minutos, 'Cdk' se refiere a cinasa dependiente de ciclina, ^Rb' se refiere a proteína de retinoblastoma, MCL' se refiere a linfoma de células manto, ???? se refiere a leucemia mieloide aguda, 'CML' se refiere a leucemia mieloide crónica, 'Boc' se refiere a N-ter-butoxicarbonilo, ???' se refiere a acetato de etilo, 'DCM' se refiere a diclorometano, ^DMSO' se refiere a dimetilsulfóxido, ? DMA' se refiere a dimetilacetamida, ,rTHF' se refiere a tetrahidrofurano, 'MtBE' se refiere a metil ter-butil éter, ???' se refiere a trietilamina, ? FBS' se refiere a suero bovino fetal, 'PBS' se refiere a salina amortiguada con fosfato, XBSA' se refiere a albúmina de suero bovino, R1" se refiere a temperatura ambiente, 'mpk' significa miligramos por kilogramo, ???' se refiere a per os (oral), *qd' significa dosificación una vez diariamente, 'HPLC significa cromatografía líquida de alta presión, q2d' significa una dosis única cada 2 días, ,q2dxl0 significa una dosis única cada 2 días 10 veces, ¾VSMC se refiere a células del músculo liso vasculares y 'XRD' se refiere a difracción de rayos-X.

Los compuestos de la Fórmula I pueden ser preparados por uno de habilidad ordinaria en la técnica siguiendo las técnicas y procedimientos reconocidos en el arte. Más específicamente, compuestos de la Fórmula I pueden ser preparados como se expone en los esquemas de reacción, métodos y ejemplos expuestos abajo. Se reconocerá por uno de habilidad en la técnica que las etapas individuales en los siguientes esquemas de reacción pueden ser variados para proporcionar los compuestos de la Fórmula I. Los reactivos y materiales de partida son fácilmente disponibles por uno de habilidad ordinaria en la técnica. Todos los sustituyentes, a menos que se especifique de otro modo, son como se definen previamente .

Los nombres de compuestos de las siguientes preparaciones y ejemplos son generados usando ChemDraw® Ultra 5.0.

Esquemas de Reacción Las síntesis de compuestos de la Fórmula I se ilustran en tanto las preparaciones, ejemplos y esquemas de reacción, en donde R1, R2, R3, R4, R5, Q, W, y Y son como se definen anteriormente.

Esquema de reacción 1 Se preparan compuestos de la Fórmula I por reacciones de acoplamiento de paladio (0) como se muestra en el esquema de reacción 1: (Fórmula I) (Fórmula I) En la reacción superior del esquema de reacción 1 y cuando Z = R5, un cloruro de pirimidinil-bencimidazol (A) se hace reaccionar con una piridinil amina (B) en una reacción de acoplamiento catalizada por paladio para formar compuestos de la Fórmula I directamente.

En la reacción inferior del esquema de reacción 1 y cuando Y-Z es N-ter-butoxicarbonilo (Boc) , un haluro de pirimidinilo (A) también es acoplado con una piridinil amina (B) , pero el grupo Boc es removido en ácido fuerte para producir la amina libre (C) . Finalmente, la amina (C) es alquilada bajo condiciones de reducción para producir compuestos de la Fórmula I .

Esquema de reacción 2 Preparación de pirimidinil-bencimidazoles Se preparan pirimidinil-bencimidazoles (A) por reacciones de acoplamiento catalizadas por paladio(II) de dicloruros de pirimidinilo comercialmente disponibles (D) y bencimidazol boronatos (E) .

Esquema de reacción 3 Preparación de bencimidazol boronatos Se prepararon bencimidazol boronatos (E) vía boronilación catalizada por Pd(II) del bromuro en bencimidazoles (H) con bis (pinacolato) diboro . Los bencimidazoles (H) en cambio son preparados por ciclización de las amidinas (F) con t-butóxido de potasio o condensación de las bencendiaminas (G) con ácido acético/trietilortoacetato.

Se preparan amidinas (F) como se conoce por un experto en la técnica de síntesis orgánica condensando 4-bromo-2, 6-difluoro-fenilamina con el derivado mono-acetamida de aminas RI-NH2 en la presencia de cloruro de fosforilo. Se preparan bencendiaminas (G) en dos etapas como se conoce por un experto en la técnica de síntesis orgánica por el desplazamiento del bromo en la posición-2 en 2,4-dibromo-nitrobenceno por aminas R1-NH2 seguido por reducción del grupo nitro a un grupo amina.

Esquema de reacción 4 Preparación de piridinil aminas (B) , En donde Q es S u O y W es C La síntesis de piridinilo aminas (B) en donde Q es S u 0 y W es C, se logra por desplazamiento de un 5-haluro en piridina (I) por el tiol o alcohol (J) comercialmente disponible. Si una nitropiridina (I) es necesaria, el producto de desplazamiento además sufre una etapa de reducción nitro para producir (B) . Se debe observar que los compuestos (I) son reactivos versátiles a través de estos esquemas de reacción, pero solamente algunos son comercialmente disponibles como piridilaminas y algunos como nitropiridinas . Los comercialmente disponibles (I) son sin embargo, convertibles vía reducciones de oxidación de amina o reducción nitro conocidas en la técnica para las secuencias descritas en la presente y posteriormente.

Esquema de reacción 5 Preparación de piridinil aminas (B) , En donde Q es CH2 La síntesis de piridinil aminas (B) en donde Q es CH2 se logra en dos formas: 1) los carbaldehídos comercialmente disponibles (K) sufren aminación reductiva con la amina libre (L) seguido por reemplazamiento del bromuro de piridina por aminación catalizada por Pd(0) con 1,1,1,3,3,3-hexametil-disilazano de litio o amoníaco líquido y óxido cuproso. 2) ácido 1-piperidincarboxílico comercialmente disponibles, 4-metileno, 1, 1-dimetiletiléter (M) sufre hidroboración seguido por acoplamiento de Pd(II) con piridil amina ( I ) .

Esquema de reacción 6 Preparación de piridinil aminas (B), En donde Q es un enlace directo 2. reducción de grup o nitro La síntesis de piridinil aminas (B) en donde Q es un enlace directo se logra en dos formas: 1) ácido 1(2H)-piridincarboxílico comercialmente disponible, 3, 6-dihidro-4- (4,4,5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan-2-il ) -, 1,1-dimetiletil éster (N) sufre acoplamiento de paladio (II) con nitropiridina (I) seguido por reducción de tanto el grupo nitro como el enlace doble. 2) El bromuro en nitropiridina (I) es desplazado por la amina libre (L) seguido por reducción del grupo nitro.

Preparación 1 Éster ter-butílico del ácido 4- ( 6-Amino-piridin-3- ilsulfanil) -piperidin-l-carboxí lico Se agregó tolueno seco (6.06 mL) a una mezcla de 2, 9-dimetil-l , 10-fenantrolina (76.52 mg) , yoduro de cobre (I) (69.27 mg) , ter-butóxido de sodio (475.59 mg) , éster ter-butílico del ácido 4-mercapto-piperidin-l-carboxí lico (583.5 mg) , magnesio (49.10 mg) y 2-amino-5-yodopiridina (550 mg) . Se burbujeó nitrógeno en la mezcla con ultrasonido y agitó la suspensión a 110 °C en un tubo sellado por 24 h. Se enfrió y filtró a través de celite. Se lavó con tolueno y el solvente se removió bajo vacio. Se agregó hexano/EA (1/1) y filtró a través de una almohadilla de gel de silice/celite, lavando dos veces con hexano/EA (1/1) y después EA. El solvente se removió bajo vacio. Se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con hexano/EA (50-75%) para proporcionar 630 mg del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 310 (M+H)+ Preparación 2 5-Fluoro-2-nitro-piridina A ácido sulfúrico (46 mL) a 0 °C se agregó 25% de peróxido de hidrógeno (26.98 mL) al aire libre. Después de 5 min se agregó una solución fría de 2-amino-5-fluoropiridina (9 g) en ácido sulfúrico concentrado (46 mL) por goteo con un embudo de adición. Se agitó la solución oscura resultante a 0 °C a RT en el baño durante la noche. Se vertió sobre 200 mL de agua helada y se extrajo con DCM. Se lavaron las capas orgánicas combinadas con 5% de solución acuosa de bisulfito de sodio y secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente se removió bajo vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con DCM para proporcionar 7.5 g del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 143 (M+H)+.

Se preparó lo siguiente esencialmente como se describe para 5-fluoro-2-nitro-piridina usando la amina correspondiente: Preparación 4 l-Isopropil-4- ( 2-metil-6-nitro-piridin-3-il ) -piperazina Se agitó 3-bromo-2-metil-6-nitro-piridina (2.46 g) , 1-isopropil-piperazina (2.74 g) , yoduro de tetra-n-butil amonio (418.69 mg) y carbonato de potasio (1.72 g) en dimetil sulfóxido (DMSO, 20 mL) a 65 °C durante la noche. Se agregó EA y agua, las fases se separaron y la capa orgánica se secó sobre magnesio sulfate y el solvente se removió bajo vacio. Se purificó por cartucho de intercambio catiónico fuerte eluyendo con metanol y después metanol-NH3 2N para proporcionar 2.58 g del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 265 (M+H)+ Se prepararon los siguientes intermediarios esencialmente como se describe para l-isopropil-4- (2-metil-6-nitro-piridin-3-il ) -piperazina usando el derivado bromo correspondiente: MS (ES+) : Preparación Compuesto m/z (M+H)+ éster ter-butilico del ácido (2'- etil-6 ' -nitro-3, ,5, 6-tetrahidro- 5 337 2H- [1, 3 ' ]bipiridinil-4-il) - carbámico éster ter-butilico del ácido (6'- 6 Nitro-3, , 5, 6-tetrahidro-2H- 323 [1,3'] ipiridinil-4-il ) -carbámico Preparación 7 5- ( 4-Isopropil-piperazin-l-il ) -6-metil-piridin-2-ilamina Se agitó l-isopropil-4- (2-metil-6-nitro-piridin-3-il ) -piperazina (2.52 g) y paladio sobre carbono 10% (600 mg) en metanol (38 mL) y EA (38 mL) bajo H2 (balón) durante la noche. Se filtró sobre una almohadilla de celite y el solvente se removió bajo vacio. Se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con DCM/metanol (0-10%) para proporcionar 2.23 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 143 (M+H)+.

Se prepararon los siguientes intermediarios esencialmente como se describe para 5- ( 4-isopropil-piperazin-1-il) -6-metil-piridin-2-ilamina usando el derivado nitro correspondiente : MS (ES+) : m/z Preparación Compuesto (M+H) + éster ter-butilico del ácido (6'- 8 Amino-2 ' -meti1-3, 4,5, 6-tetrahidro- 307 2H- [1,3' ] bipiridinil-4-il ) -carbámico éster ter-butilico del ácido (6'- 9 Amino-3, 4, 5, 6-tetrahidro-2H- 293 [1,3* ]bipiridinil-4-il) -carbámico Preparación 10 Éster ter-butilico del ácido 4- ( 6-Nitro-piridin-3-iloxi ) - piperidin-l-carboxí lico Se agregó ter-butóxido de potasio (4.84 g) a una solución de 4-hidroxi-l-piperidin-carboxilato de ter-butilo (8.76 g) en dimetilacetamida (DMA, 39 mL) a 0°C bajo nitrógeno. Se agitó por 1 h y se agregó por goteo una solución de 5-fluoro-2-nitro-piridina (5 g) en DMA (78 mL) . La reacción se dejó agitar a RT durante la noche. Se agregó agua y reposó por 1 h. Se filtró, se lavó con agua. Se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con DCM/EA (0-15%) para proporcionar 5.65 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 324 (?+?)+' Preparación 11 Éster ter-butílico del ácido 4- ( 6-Amino-piridin-3-iloxi ) - piperidin-l-carboxílico Se agregó paladio sobre carbono 10% (0.6 g) a una suspensión de éster ter-butilico del ácido 4-(6-nitro-piridin-3-iloxi ) -piperidin-l-carboxilico (5.65 g) en una mezcla de tetrahidrofurano (THF) /metanol (30/30 mL/mL) . Se hidrogenó en un aparato Parr a 2 atm durante la noche. Se filtró a través de una almohadilla de celite, se lavó con DCM y metanol. Se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con DCM/metanol ( 10% ) /amoníaco (1%) para proporcionar 5 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 294 ( +H) +.

Preparación 12 Éster ter-butílico del ácido 6-Amino-2-metil-3 ' , 61 -dihidro- 2?- [3, 41 ]bipiridinil-l' -carboxílico burbujeó nitrógeno en una mezcla de éster ter butílico del ácido 4- ( 4 , , 5, 5-tetrametil- [ 1 , 3 , 2 ] dioxaborolan-2-il) -3, 6-dihidro-2H-piridina-l-carboxílico (2.46 g) y 5-bromo-6-metil-piridin-2-ilamina (1.49 g) en 1, -dioxano (31.82 mL) por 5 min, después se agregó N-hidrato tribásico de fosfato de potasio (5.07 g) , acetato de paladio (35.72 mg) , diciclohexil- (2 ' , 6 ' -dimetoxi-bifenil-2-il ) -fos fano (134.69 mg] ) , agua (7.96 mL) y se agitó a 90 °C por 3 h. Se diluyó con DCM y se lavó con agua. Se secó sobre sulfato de sodio y el solvente se removió bajo vacío. Se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con DCM/etanol 5%/NH3 0.1%, seguido por cartucho de intercambio catiónico fuerte (SCX) eluyendo con metanol y después metanol-NH3 2 M para proporcionar 2.12 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 292 (M+H)+> Preparación 13 Ester ter-butílico del ácido 6-Amino-2-metil-3 ' , 41 , 5 ' , 61 - tetrahidro-2 'H-[3,4']bipiridinil-l' -carboxílico Se agitó una mezcla de éster ter-butílico del ácido 6-amino-2-metil-3 ' , 61 -dihidro-2 ' H- [3, ' ] bipiridinil-l ' -carboxílico (2.12 g) y paladio en carbono 10% húmedo (330 mg) en metanol (29.30 mL) bajo H2 (45 psi) por 48 h. Se filtró sobre una almohadilla de celite y el solvente se removió bajo vacío para proporcionar 2.07 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 292 (M+H)+.

Preparación 14 Éster ter-butílico del ácido 6-nitro-31 , 61 -dihidro-2 ?- [3,4'] bipiridinil-l ' -carboxílico Se burbujeó nitrógeno en una mezcla de éster ter-butílico del ácido 4- ( 4, 4 , 5, 5-tetrametil- [ 1, 3, 2 ] dioxaborolan-2-il) -3, 6-dihidro-2H-piridina-l-carboxílico (19.6 g) , 5-bromo-2-nitropiridina (12.87 g), carbonato de sodio 2M en agua (63.39 mL) y cloruro de bis ( trifenilfosfina) paladio (II) (4.45 g) en 1,4-dioxano (316.94 mL) por 5 min y se agitó a 80 °C por 5 h. Se diluyó con DCM y se lavó con agua. Se secó sobre sulfato de magnesio y el solvente se removió bajo vacio. Se purificó por cromatografía en gel de sílice eluyendo con DCM/EA (0-40%) para proporcionar 8.72 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 306 (M+H)+.

Preparación 15 Éster ter-butílico del ácido 6-Amino-31 , 4 ' , 5 ' , 6 ' -tetrahidro- 2 ?- [3, 4 ' ] bipiridinil-1 ' -carboxílico Se disolvió éster ter-butílico del ácido 6-nitro-31 , 6 ' -dihidro-2 ?- [3, 1 ] bipiridinil-1 ' -carboxílico (1.89 g) en etanol (123.80 mL) . Se hidrogenó con paladio en carbono (Instrumento H-Cube, 70 bar, 50 °C, 1 mL/min) para proporcionar 1.72 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 278 (M+H)+.

Preparación 16 Éster ter-butílico del ácido 4- ( 6-Amino-piridin-3-ilmetil) - piperidin-1-carboxílico Se agitó por 5 min éster ter-butílico del ácido 4-metilen-piperidin-l-carboxílico (5.10 g) bajo nitrógeno y se agregó a 0.5 M THF una solución de 9-borabiciclo [ 3.3.1 ] nonano (77.49 mL) . Se agitó a 75 °C bajo nitrógeno por 1 h. Se enfrió y se agregó 2-amino-5-bromopiridina (3.8 g) , carbonato de potasio (3.87 g) , y cloruro de 1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno) paladio ( II ) (538.10 mg) y una mezcla desgasificada de DMF (47.83 mL) y agua (4.78 mL) . Se agitó a 60 °C durante 4 h, después a RT durante el fin de semana. Se agregó agua y EA. La capa acuosa se separó y extrajo con EA. Las capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio y el solvente se removió bajo vacio. Se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con DCM/metanol ( 1% ) /amoníaco (0.1%) a DCM/metanol (3% ) /amoníaco (0.3%) . El residuo se trituró con EA para proporcionar 1.85 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 292 (M+H) +" Se preparó lo siguiente esencialmente como se describe para éster ter-butílico del ácido 4-(6-amino-piridin-3-ilmetil ) -piperidin-l-carboxí lico usando el derivado bromo correspondiente: Preparación 18 1- ( 6-Bromo-piridin-3-ilmetil ) -4-etil-piperazina Se agregó 1-etilpiperazina pura (221.44 mL) a una mezcla de 6-bromo-piridina-3-carbaldehído (300 g) y DCM (5000 mL) . Después, se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (372.09 g) en porciones y se agitó a RT por 12 h. Se agregó DCM (1000 mL) y solución acuosa de hidróxido de sodio 2 N (1500 mL) . Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces con DCM (600 mL) . Las capas orgánicas se combinaron y el solvente se removió bajo vacio, se agregó EA y evaporó para proporcionar 451.3 g del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 285 (M+H)+.

Se preparó lo siguiente esencialmente como se describe para 1- ( 6-bromo-piridin-3-ilmetil ) -4-etil-piperazina usando la amina correspondiente: Preparación 20 5- (4-Etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-ilamina Se agregó 1, 1, 1, 3, 3, 3-hexametil-disilazano de litio (1055 mL) lentamente a una mezcla desgasificada de l-(6-bromo-piridin-3-ilmetil ) -4-etil-piperazina (250 g) , diciclohexilfosfino) bifenilo (18.50 g) , tris (dibencilidenacetona) dipaladio (24.17 g) y THF (250 mL) a 50 °C. Se calentó la mezcla a 65 °C durante la noche. Se enfrió a 37 °C y se agregó agua (500 mL) . Se removió la mitad del solvente bajo vacio y se agregó DCM (2.5 L) . Se filtró sobre una almohadilla de celite y removió parte del solvente. Se agregó metanol (300 mL) y metil ter-butil éter (MtBE, 600 mL) a la mezcla y se enfrió en un baño de hielo. Después, se agregó ácido clorhídrico 2 M en éter etílico (800 mL) y a 32% de solución acuosa de ácido clorhídrico (100 mL) . Se removió la capa orgánica, y se agregó una solución acuosa de hidróxido de sodio 2 M (2500 mL) . Se extrajo la fase acuosa tres veces con DCM y el solvente se removió bajo vacío. Se disolvió en 90 mL de tolueno a 50 °C hasta la disolución completa y después se agregó 80 mL de MtBE. Se agitó durante la noche a RT . Se agregó MtBE adicional (100 mL) para precipitación completa. Se filtró el sólido y se secó para proporcionar 108.24 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 221 (M+H)+.

Se preparó lo siguiente esencialmente como se describe para 5- ( 4-etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-ilamina usando el derivado 2-bromo-piridina correspondiente: MS (ES+) : Preparación Compuesto m/z (M+H)+ éster ter-butílico del ácido 4- 21 ( 6-Amino-piridin-3-ilmetil ) - 293 piperazina-l-carboxí 1ico Preparación 22 2, 4-Dibromo-l-nitro-benceno Se agregó por goteo ácido nítrico fumante (101.40 mL) a una solución de 1,3-dibromo benceno (102.51 mL) en ácido sulfúrico concentrado (322.79 mL) y agua (62.39 mL) a 0 °C. Se calentó a RT y se agitó por 12 h. Se vertió la reacción en agua helada (1500 mL) . Se filtró el sólido amarillo resultante bajo vacío y se secó para proporcionar 178.46 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 281 (M+H)+.

Preparación 23 ( 5-Bromo-2-nit o-fenil) -ciclopentil-amina Se agregó ciclopentanamina (32 mL) a una solución de 2 , 4-dibromo-l-nitro-benceno (20 g) en 1-butanol (160 mL) . Se calentó la mezcla a 100 °C durante la noche. El solvente se removió bajo vacío, se agregó agua y se extrajo con EA. Se lavó la capa orgánica secuencialmente con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y después agua. Se secó sobre sulfato de magnesio y el solvente se removió bajo vacío para proporcionar 22 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 286 (M+H)+.

Preparación 24 4-Bromo-N2-ciclopentil-benceno-l , 2 -diamina Se agregó ditionita de sodio (107.47 g) a una solución de 5-bromo-2-nitro-fenil ) -ciclopentil-amina (22 g) , THF (150 mL) , agua (150 mL) e hidróxido de amonio (30 mL) . Se agitó la mezcla a RT durante la noche. Se extrajo dos veces con EA, se secó sobre sulfato de magnesio y el solvente se removió bajo vacio para proporcionar 14.80 g del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 256 ( +H)+.

Preparación 25 6-Bromo-l-ciclopentil-2-metil-lH-benzoimidazol Se calentó una mezcla de 4-bromo-N2-ciclopentil-benceno-1, 2-diamina (10.6 g) , ortoacetato de trietilo (9.5 mi) y ácido acético (6.3 mL) a 100 °C por 2.5 h. Se diluyó con DCM y se vertió sobre una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Se secó sobre sulfato de sodio y el solvente se removió bajo vacio. Se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con DC /etanol-10% NH3 (0-3%) para proporcionar 10.67 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 280 (M+H) + .

Preparación 26 N-Isopropil-acetamida Se agregó TEA (23.58 mL) a una solución de 2-propanamina (10 g) en DCM (100 mL) a 0 °C. Después, cuidadosamente se agregó por goteo anhídrido de ácido acético (16.15 mL) . Se agitó a RT durante la noche. El solvente se removió bajo vacío, se diluyó con éter etílico (éter) y se filtró el sólido. El solvente se removió bajo vacío. Se diluyó el aceite con éter, se agregó carbonato de potasio y se agitó durante la noche a RT . Se filtró el sólido y el solvente se removió bajo vacío para proporcionar 15.62 g del compuesto del título. NMR (CDC13) 4.06 (m, 1H) , 1.94 (s, 3H) , 1.14 (d, 6H) .

Se prepararon las siguientes amidas esencialmente como se describe para N-isopropil-acetamida usando la amina correspondiente: Preparación 30 N- ( 4-Bromo-2 , 6-difluoro-fenil) -N ' -isopropil-acetamidina Se agregó TEA (10.05 mL) a una mezcla de 4-bromo-2, 6-difluoro-fenilamina (10.0 g) , N-isopropil acetamida (9.73 g) , cloruro de fosforilo (6.70 mL) en tolueno (150 mL) . Se calentó la mezcla a reflujo por 3 h. Se enfrió la mezcla y el solvente se removió bajo vacío. Se disolvió lo crudo en DCM, se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio varias veces para remover todos los restos de ácido. Se secó sobre sulfato de sodio y el solvente se removió bajo vacio para proporcionar 14 g del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 292 (M+H) +.

Se prepararon los siguientes intermediarios esencialmente como se describe para N- ( 4-bromo-2 , 6-difluoro-fenil ) - ' -isopropil-acetamidina usando la acetamida correspondiente : Preparación 34 6-Bromo-4-fluoro-l-isopropil-2-metil-lH-benzoimidazol Se agregó ter-butóxido de potasio (811.43 mg) a una solución de N- (4-bromo-2, 6-difluoro-fenil) -N ' -isopropil-acetamidina (2 g) en N-metil formamida (20 mL) . Se calentó la mezcla a 100 °C por 2 h. Se enfrió a RT, se agregó DCM (150 mL) , se lavó tres veces con cloruro de sodio acuoso saturado (salmuera, 300 mL) , se secó sobre sulfato de magnesio y el solvente se removió bajo vacio. Se agregó hexano y sacudió sobre ultrasonido por algunos minutos. Se filtró el sólido, se repitió la adición de hexano/filtración dos veces para proporcionar 1.86 g del compuesto del titulo. S (ES+) : m/z= 272 (M+H)+.

Se prepararon los siguientes intermediarios esencialmente como se describe para 6-bromo-4-fluoro-1-isopropil-2-metil-lH-benzoimidazol usando la acetamidina correspondiente : Preparación 38 4-Fluoro-l-isopropil-2-metil-6- (4, , 5, 5-tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan-2-il ) -lH-benzoimidazol Se burbujeó nitrógeno en una mezcla de 6-bromo-4-fluoro-l-isopropil-2-metil-lH-benzoimidazol (30.0 g) , bis (pinacolato) diboro (42.15 g) , triciclohexilfos ina (5.43 g) , acetato de potasio (32.58 g) , y DMSO (200 mL) . Se agregó acetato de paladio (2.8 g) y se calentó en un baño de aceite precalentado a 90 °C por 1 h. Se diluyó con EA (200 mL) y se filtró sobre una almohadilla de celite. Se lavó la mezcla con salmuera (100 mL) , se secó sobre sulfato de sodio y el solvente se removió bajo vacio. Se trituró con hexano y se filtró el sólido para proporcionar 27 g del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 319 (M+H) + .

Se prepararon los siguientes intermediarios esencialmente como se describe para 4-fluoro-l-isopropil-2-metil-6- (4, 4, 5, 5-tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan-2-il ) -1H-benzoimidazol usando los derivados 6-bromo-benzoimidazol correspondientes : MS (ES+) : Preparación Compuesto m/z (M+H) + l-Ciclopropil-4-fluoro-2-metil- 6- (4, 4, 5, 5-tetrametil- 39 [1, 3, 2] dioxaborolan-2 -il) -1H- 317 benzoimidazol l-Ciclopentil-2-metil-6- (4,4,5, 5-tetrametil- 40 [1, 3, 2] dioxaborolan-2- il) -1H- 327 benzoimidazol l-Ciclopropilmetil-4-fluoro-2- metil-6- (4,4,5, 5-tetrameti1- 41 [1, 3, 2] dioxaborolan-2 -il) -1H- 331 benzoimidazol l-Ciclopentil-4-fluoro-2-metil- 6- ( 4 , 4 , 5 , 5-tetrametil- 42 345 [1, 3, 2] dioxaborolan-2- il) -1H- benzoimidazol Preparación 43 6- (2-Cloro-5-fluoro-pirimidin-4-il ) -4-fluoro-l-isopropil-2- metil-lH-benzoimidazol Se burbujeó nitrógeno en una mezcla de 2,4-dicloro-5-fluoro-pirimidina (12.7 g) , cloruro de bis ( trifenilfosfina) paladio (II) (4.9 g) , carbonato de sodio 2 M en agua (103.7 mL) y 1 , 2-dimetoxietano (120 mL) . Se calentó en un baño de aceite pre-calentado a 80 °C y se agregó por goteo una solución de 4-fluoro-l-isopropil-2-metil-6- (4,4,5, 5-tetrametil- [1, 3, 2 ] dioxaborolan-2-il ) -1H-benzoimidazol (22 g) en 1 , 2-dimetoxietano (200 mL) . Se agitó la mezcla a 84 °C por 1 h. Se enfrió a RT, se agregó EA (800 mL) y se lavó dos veces con salmuera (100 mL) . Se secó sobre sulfato de magnesio y el solvente se removió bajo vacio. Se trituró con acetonitrilo para proporcionar 14.4 g del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 323 (M+H) + .

Se prepararon los siguientes intermediarios esencialmente como se describe para 6- ( 2-cloro-5-fluoro-pirimidin-4-il) -4-fluoro-l-isopropil-2-metil-lH-benzoimidazol usando los derivados dicloro-pirimidina y boronato correspondientes : MS (ES+): Preparación Compuesto m/z (M+H) + 6- ( 2-Cloro-5-fluoro-pirimidin- 44 4-il) -l-ciclopropil-4-fluoro-2- 321 metil-lH-benzoimidazol 6- ( 2-Cloro-5-fluoro-pirimidin- 45 4-il) -l-ciclopentil-2-metil-lH- 331 benzoimidazol 6- ( 2-Cloro-5-fluoro-pirimidin- 46 4-il) -l-ciclopropilmetil-4- 335 fluoro-2-metil-lH-benzoimidazol 6- (2-Cloro-pirimidin-4-il) -1- 47 ciclopentil-4-fluoro-2-metil- 331 lH-benzoimidazol 6- (2-Cloro-pirimidin-4-il ) -4- 48 fluoro-l-isopropil-2-meti1-1H- 305 benzoimidazol Se prepararon los siguientes intermediarios esencialmente como se describe para [5- (4-etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il] - [5-fluoro-4- ( 7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il ] -amina abajo usando los derivados amina y cloro-pirimidina correspondientes : MS (ES+) : Preparación Compuesto m/z (M+H) + éster ter-butilico del ácido 4- {6- [5-Fluoro-4- (7-fluoro-3- isopropil-2-metil-3H- 49 579 benzoimidazol-5-il) -pirimidin- 2-ilamino] -piridin-3-ilmetil } - piperazina-l-carboxilico MS (ES+ ) : Preparación Compuesto m/z (M+H) + éster ter-butilico del ácido 4- { 6- [ 4- ( 3-Ciclopropil-7-fluoro- 2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) - 50 576 5-fluoro-pirimidin-2-ilamino] - piridin-3-ilmetil } -piperidin-l- carboxilico éster ter-butilico del ácido 4- { 6- [5-Fluoro-4- (7-fluoro-3- isopropil-2-metil-3H- 51 benzoimidazol-5-il ) -pirimidin- 592 2-ilamino] -2-metil-piridin-3- ilmetil } -piperidin-l- carboxilico éster ter-butilico del ácido 6- [4- (3-Ciclopentil-2-metil-3H- benzoimidazol-5-il ) -5-fluoro- 52 pirimidin-2-ilamino] - 572 31 , 4 ' , 5 ' , 6 ' -tetrahidro-2 ' H- [3, 4 ' ]bipiridinil-l'- carboxilico éster ter-butilico del ácido 6- [5-Fluoro-4- (7-fluoro-3- isopropil-2-metil-3H- benzoimidazol-5-il ) -pirimidin- 53 578 2-ilamino] -2-metil-3 ' , 4 ' , 51 , 6 ' - tetrahidro-2 ' H- [3, ' ]bipiridinil-l'- carboxilico éster ter-butilico del ácido 4- { 6- [5-Fluoro-4- (7-fluoro-3- isopropil-2-metil-3H- 54 580 benzoimidazol-5-il ) -pirimidin- 2-ilamino] -piridin-3-iloxi } - piperidin-l-carboxilico éster ter-butilico del ácido {6'- [ 5-Fluoro-4- ( 7-fluoro-3-isopropil- 2-metil-3H-benzoimidazol-5-il) - 55 pirimidin-2-ilamino] -2 ' -metil- 593 3,4,5, 6-tetrahidro-2H- [1,3'] ipiridinil-4-il } -carbámico MS (ES+) : Preparación Compuesto m/z (M+H) + éster ter-butilico del ácido {6'- [4- (3-Ciclopentil-7-fluoro- 2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) - 56 pirimidin-2-ilamino] -3, 4,5,6- 587 tetrahidro-2H- [1,3 ' ]bipiridinil-4-il}- carbámico éster ter-butilico del ácido 4- { 6- [ 4- ( 7-Fluoro-3-isopropil-2- metil-3H-benzoimidazol-5-il ) - 57 578 pirimidin-2-ilamino] -piridin-3- ilsulfanil} -piperidin-1- carboxilico Preparación 58 [5-Fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5- il ) -pirimidin-2-il ] - ( 5-piperazin-l-ilmetil-piridin-2-il ) - amina A una mezcla de éster ter-butilico del ácido 4-{6-[5-fluoro-4- ( 7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-ilamino] -piridin-3-ilmetil } -piperazina-1-carboxilico (150 mg) en DCM (10 mL) y metanol (10 mL) se agregó cloruro de hidrógeno 4M en dioxano (194 ]iL) . Se agitó 10 min y el solvente se removió bajo vacio. Se purificó por cartucho de intercambio catiónico fuerte (SCX) eluyendo con metanol y después metanol-NH3 2M seguido por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con DCM/metanol-NH3 2M (3%) para proporcionar 120 mg del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 479 (M+H)+.

Se prepararon los siguientes intermediarios esencialmente como se describe para [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] - (5-piperazin-l-ilmetil-piridin-2-il ) -amina : Ejemplo 1 [5- (4-Etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- (7 fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il] -amina Se burbujeó nitrógeno en una mezcla de 6-(2-cloro 5-fluoro-pirimidin-4-il ) -4-fluoro-l-isopropil-2-metil-lH-benzoimidazol (15.9 g) , 5- ( -etil-piperazin-l-ilmetil ) piridin-2-ilamina (10.85 g) , carbonato de cesio (32.10 g) , tris (dibencilidenacetona) dipaladio (1.82 g) , 4,5-bis (difenilfosfino) -9, 9-dimetilxanteno (2.35 g) en 1,4-dioxano (197.06 mL) . Se calentó la mezcla en un baño de aceite pre-calentado a 110 °C por 2 h. Se enfrió a RT, se diluyó con DCM y se filtró sobre una almohadilla de celite. El solvente se removió bajo vacio y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con DCM/metanol (2%) y después DCM/metanol-NH3 2 M 2% para proporcionar 22.11 g del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 507 (M+H)+.

Se prepararon los siguientes ejemplos esencialmente como se describe para [ 5- ( 4-etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-il] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] -amina usando los derivados amina y cloro-pirimidina correspondientes: MS Nombre de (ES+) : Ejemplo Estructura Compuesto m/z (M+H) + [4-(3- Ciclopropilmetil- 7-fluoro-2-metil- 3H-benzoimidazol- 5-il ) -5-fluoro- 3 533 pirimidin-2-il] - [5- ( 4-isopropil- piperazin-l-il ) -6- metil-piridin-2- il ] -amina Ejemplo 4 [5-Fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-il ) -pirimidin-2-il ] - [ 5- ( 4-isopropil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-il ] -amina Se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (299.9 mg) a una mezcla de [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] - ( 5-piperazin-l-ilmetil-piridin-2-il ) -amina (130 mg) , acetona (31.6 xL) , 1,2-dicloroetano (9 mL) y ácido acético (16.3 pL) . Se calentó a 60 °C por 1 h. El solvente se removió bajo vacio. Se purificó por cartucho de intercambio catiónico fuerte (SCX) eluyendo con metanol y después metanol-NH3 2 M seguido por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con DCM/metanol-NH3 2 M (3%) para proporcionar 115 mg del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 521 (M+H)+.

Se prepararon los siguientes ejemplos esencialmente como se describe para [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] - [5- ( 4-isopropil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il] -amina usando la amina correspondiente : MS Nombre de (ES+) : Ejemplo Estructura Compuesto m/ z (M+H) + [5-Fluoro-4- (7- fluoro-3- isopropi 1-2-metí1- 3H-benzoimidazol- 5 5-il) -pirimidin-2- 506 il] - [6-metil-5- (1- metil-piperidin-4- ilmetil) -piridin- 2-il ] -amina [5-Fluoro-4- (7- fluoro-3- isopropil-2-metil- 3H-benzoimidazol- 5-il) -pirimidin-2- 6 il]-[5-(l- 534 isopropil- piperidin-4- ilmetil) -6-metil- piridin-2-il ] - amina Ejemplo 9 [4- (3-Ciclopropil-7-fluoro-2-metil-3H-benzoimidazol-5- fluoro-pirimidin-2-il] - [5- (l-etil-piperidin-4-ilmetil) piridin-2-il ] -amina Se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (720 mg) mezcla de [4- (3-ciclopropil-7-fluoro-2-metil-3H benzoimidazol-5-il ) -5-fluoro-pirimidin-2-il ] - ( 5-piperidin-4-ilmetil-piridin-2-il ) -amina (110 mg) , 1,2 dicloroetano (1.14 mL) y ácido acético (2709 ]iL) . Se calentó a 60 °C por 1 h. El solvente se removió bajo vacio. Se purificó por cartucho de intercambio catiónico fuerte (SCX) eluyendo con metanol y después metanol-NH3 2M seguido por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con DCM/metanol-NH3 2M (3%) para proporcionar 80 mg del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 504 (M+H)+.

Se prepararon los siguientes ejemplos esencialmente como se describe para [4- (3-ciclopropil-7-fluoro-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -5-fluoro-pirimidin-2-il ] - [5- (1-etil-piperidin-4-ilmetil) -piridin-2-il] -amina usando la amina correspondiente : MS (ES+) : Ej emplo Estructura Nombre de Compuesto m/z (M+H) + [5- (1-Etil- piperidin-4- ilmetil) -6-metil- piridin-2-il] - [5- 10 fluoro-4- (7-fluoro- 520 3-isopropil-2-metil- 3H-benzoimidazol-5- il) -pirimidin-2-il ] - amina MS (ES+) : Ej emplo Estructura Nombre de Compuesto m/ z (M+H) + [5- (1-Etil- "-O piperidin-4- ilsulfanil) -piridin- 2-il] - [4- (7-fluoro- 15 3-isopropil-2-metil- 506 3H-benzoimidazol-5- il) -pirimidin-2-il ] - amina Ejemplo 16 Metanosulfonato de [5- (4-Etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il] -amina Se agregó ácido metanosulfónico (63.59 mL) a una solución de [ 5- ( 4-etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-il ]-[ 5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] -amina (17.3 g) en una mezcla de DCM (100 mL) y metanol (100 mL) . Se agitó la solución por 1 h y el solvente se removió bajo vacio. Se trituró con MtBE y filtró el sólido para proporcionar 20.4 g del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 507 (M+H)+.

Se prepararon los siguientes ejemplos esencialmente como se describe para metanosulfonato de [5- (4-etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] - amina : MS (ES+) : Ej emplo Compuesto m/z ( +H)+ metanosulfonato de [ 5-Fluoro-4- ( 7- fluoro-3-isopropil-2-metil-3H- 17 benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] - 521 [5- ( -isopropil-piperazin-l-il ) -6- metil-piridin-2-il ] -amina metanosulfonato de [4- (3- Ciclopropilmetil-7-fluoro-2-metil- 3H-benzoimidazol-5-il ) -5-fluoro- 18 533 pirimidin-2-il ] - [5- (4-isopropil- piperazin-l-il) -6-metil-piridin-2- il ] -amina metanosulfonato de [ 5-Fluoro-4- ( 7- fluoro-3-isopropil-2-metil-3H- 19 benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il] - 521 [5- ( 4-isopropil-piperazin-l- ilmetil) -piridin-2-il ] -amina metanosulfonato de [5-Fluoro-4- (7- fluoro-3-isopropil-2-metil-3H- 20 benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] - 506 16-metil-5- ( l-metil-piperidin-4- ilmetil) -piridin-2-il ] -amina metanosulfonato de [5-Fluoro-4- (7- fluoro-3-isopropil-2-metil-3H- 21 benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] - 534 [5- ( l-isopropil-piperidin-4- ilmetil ) -6-metil-piridin-2-il ] -amina metanosulfonato de [4-(3- Ciclopentil-2-metil-3H- benzoimidazol-5-il ) -5-fluoro- 22 514 pirimidin-2-il] - ( 11 -isopropil- 1', 2' ,3' ,4', 5' ,6' -hexahidro- [3, 4 ' ] bipiridinil- 6-il ) -amina metanosulfonato de [5-Fluoro-4- (7- fluoro-3-isopropil-2-metil-3H- 23 benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] - 522 [5- ( l-isopropil-piperidin-4-iloxi ) - piridin-2-il ] -amina MS (ES+): Ejemplo Compuesto m/z (M+H)+ metanosulfonato de [4- (3- Ciclopropil-7-fluoro-2-metil-3H- benzoimidazol-5-il ) -5-fluoro- 24 504 pirimidin-2-il] -[5-(l-etil- piperidin-4-ilmetil ) -piridin-2-il] - amina metanosulfonato de [5-(l-Etil- piperidin-4-ilmetil) -6-metil- piridin-2-il]- [ 5-flúoro- - ( 7-fluoro- 25 520 3-isopropi1-2-metí1-3H- benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il ] - amina metanosulfonato de ( 11 -Etil-2-metil- 1*, 2' ,3', 4' ,5', 6' -hexahidro- [3,4' ]bipiridinil-6-il) - [5-fluoro-4- 26 506 (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H- benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il ] - amina metanosulfonato de [5-(l-Etil- piperidin-4-iloxi ) -piridin-2-il ] - [5- 27 fluoro-4- ( 7-fluoro-3-isopropi1-2- 508 metil-3H-benzoimidazol-5-il ) - pirimidin-2-il ] -amina metanosulfonato de N4 , N4-Dietil-N61 - [ 5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropi1-2- metil-3H-benzoimidazol-5-il ) - 28 549 pirimidin-2-il] -2 ' -metil-3, ,5,6- tetrahidro-2H- [1, 3' Jbipiridinil- 4,6' -diamina metanosulfonato de N6'-[4-(3- Ciclopentil-7-fluoro-2-metil-3H- 29 benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] - 543 N4, 4-dietil-3, 4, 5, 6-tetrahidro-2H- [1,3'] bipiridinil-4 , 6 ' -diamina metanosulfonato de [5-(l-Etil- piperidin-4-ilsulfanil ) -piridin-2- 30 il ] - [ 4- (7-fluoro-3-isopropi1-2- 506 metil-3H-benzoimidazol-5-il) - pirimidin-2-il] -amina Ejemplo 31 [5- ( 4-Etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-il]- [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropi1-2-metíl-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] -amina Forma cristalina I Se mezcló 102.1 mg de [ 5- ( 4-etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- ( 7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il] -amina amorfa con 2 mL acetona. Se aisló el sólido precipitado por filtración a vacío, produciendo una torta ligeramente amarilla y se secó en su lugar en el aparato de filtración por 30 min, proporcionando 72.1 mg de un sólido. Se colocó el sólido en un horno a vacío a 100°C por 3 h.

Picos de XRD representativos de la forma I se muestran en la Tabla 1.

Ejemplo 32 [5- (4-Etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il] -amina Forma cristalina III Se mezcló 208 mg de [ 5- ( 4-etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] -amina amorfa con 4 mL acetona. La suspensión se formó en pasta aguada por 2 h a 60 °C mientras se agita a 1000 rpm, y después se aisló el sólido por filtración a vacio, produciendo una torta ligeramente amarilla. Se secó en su lugar en el aparato de filtración por 30 min, proporcionando 112 mg de un sólido (54% de rendimiento) . Se colocó en un horno a vacio a 80°C por 3 h.

Picos de XRD representativos de la forma III se muestran en la Tabla 2. Las posiciones del pico se verificaron usando un estándar interno.

Difracción en Polvo de Rayos-X Los patrones de XRD de los cristales se obtuvieron en un difractómetro en polvo de rayos-X Bruker D8 Advance, equipado con una fuente CuK (? = 1.54056 Á) y un detector Vantec, que opera a 50 kV y 40 mA. Cada muestra es barrida entre 4 y 40° en 2T, con un tamaño de etapa de 0.02° en 2T y una velocidad de exploración de 9.0 segundos/etapa, y con 1 mm de divergencia y ranuras de recepción y una ranura detectora de 0.1 mm. El polvo seco se envasó en un retenedor de muestra de carga superior ahuecado y se obtiene una superficie lisa usando laminillas de vidrio. Los patrones de difracción de forma de cristal son recolectados a temperatura ambiente y humedad relativa. El antecedente para el cristal Forma III se remueve previo a elección de picos mientras el antecedente no se remueve para la Forma I.

Es bien sabido en la técnica cristalográfica que, para cualquier forma de cristal dado, las intensidades relativas de los picos de difracción pueden variar debido a la orientación preferida que resulta de factores tales como morfología de cristal y hábitat. En donde los efectos de orientación preferida están presentes, las intensidades pico son alteradas, pero las posiciones pico características del polimorfo están sin cambios. Véase, por ejemplo, La Farmacopea Estadounidense #23, Formulario Nacional #18, páginas 1843-1844, 1995. Además, es también bien sabido en la técnica cristalográfica que para cualquier forma de cristal dada las posiciones pico angulares pueden variar ligeramente. Por ejemplo, las posiciones pico pueden cambiar debido a una variación en la temperatura o humedad en la cual una muestra es analizada, desplazamiento de muestra, o la presencia o ausencia de un estándar interno. En el presente caso, una variabilidad de posición pico de ± 0.1 en 2T tomará en cuenta estas variaciones potenciales sin obstaculizar la identificación inequívoca de la forma de cristal indicada.

La confirmación de una forma de cristal se puede hacer con base en cualquier combinación única de picos de distinción (en unidades de °2T), típicamente los picos más prominentes. De este modo, una muestra preparada de [5- (4-etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il) -pirimidin- 2-il] -amina forma cristalina I se caracteriza por un patrón de XRD usando radiación CuKoc por tener picos de difracción (valores 2-teta) como se describe en la Tabla 1 abajo, y en particular que tienen picos a 4.51 en combinación con uno o más de los picos seleccionados del grupo que consiste de 13.09, 16.31, y 18.82; con una tolerancia para los ángulos de difracción de 0.1 grados.

Tabla 1: Picos de difracción en polvo de rayos-X de [5- (4 etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-il ] -[5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il] -amina forma cristalina I.

Una muestra preparada de [ 5- ( -etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- ( 7-fluoro-3-isopropil-2- metil-3H-benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il ] -amina forma cristalina III es caracterizada por un patrón XRD usando radiación CuKa ya que tiene picos de difracción (valores 2-teta) como se describe en la Tabla 2 abajo, y en particular que tiene picos a 21.29 en combinación con uno o más de los picos a 11.54, 10.91, y 12.13; con una tolerancia para los ángulos de difracción de 0.1 grados.

Tabla 2: Picos de difracción en polvo de rayos-X de [5- (4 etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il] -amina forma cristalina III. Ángulo valor d % de Intensidad °2T Angstrom 7.44 11.87 8 10.91 8.11 19 11.54 7.66 38 12.13 7.29 18 13.89 6.37 25 14.91 5.94 20 15.63 5.67 27 16.06 5.52 11 18.59 4.77 21 18.94 4.68 26 20.43 4.34 21 21.29 4.17 100 21.91 4.05 37 22.13 4.01 12 22.45 3.96 8 23.12 3.84 6 23.42 3.80 9 25.95 3.43 17 29.42 3.03 9 1JC N R de Estado Sólido Se obtiene el espectro de Polarización cruzada/giro de ángulo mágico (CP/MAS) NMR (NMR o SSNMR de estado sólido) en un espectrómetro de NMR de grueso calibre 400 Bruker Avance III 400 que opera a frecuencias de 1H y 13C de 400.131 y 100.623 MHz, respectivamente, y usando una sonda de doble resonancia Bruker 4 mm. La velocidad MAS se ajusta a 5 o 10 kHz usando un controlador Bruker MAS-II; las velocidades de giro se mantienen dentro de 2 Hz del punto de ajuste. El desacoplamiento SPINAL64 de una frecuencia de mutación de protón de 100 kHz se usa para desacoplamiento heteronuclear . Las bandas laterales de giro se eliminan por una secuencia de supresión de banda total de cinco pulsos (TOSS) . El tiempo de contacto CP para transferencia de magnetización de protones a carbonos se ajusta a 4 ms y una rampa de energía lineal de 93.5 a 46.9 kHz se usa en el canal 1H para mejorar la eficiencia de CP. El tiempo de adquisición se ajusta a 34 ms y se adquieren espectros sobre una amplitud espectral de 30 kHz con un retardo de ciclo de 5 s. La temperatura de la muestra es regulada a 297 ± 1 K para minimizar el calentamiento friccional causado por el giro de la muestra. Los cambios químicos de 13C son externamente referenciados (+ 0.05 ppm) al pico 13C desacoplado de protón de tetrametilsilano puro (líquido) vía la resonancia de alto campo de adamantina (d = 29.5 ppm).

Una lista pico de cambios fijos para [5-(4-etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il] -amina forma cristalina III es como sigue: 13C-NMR: v(Fl) (ppm) 11.7, 12.9, 20.5, 48.6, 52.5, 59.4, 108.9, 110.0, 112.7, 127.3, 129.4, 135.5, 136.4, 148.8, 150.1, 152.2, 154.5, 156.3.

Ejemplo 33 [5- (4-Etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il]- [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] -amina Forma cristalina III - Ruta B a . 1- ( 6-Bromo-piridin-3-ilmetil ) -4-etil- piperazina Se agregó 1-etilpiperazina pura (5.6 kg) a una mezcla de 6-bromo-piridina-3-carbaldehído (8.3 kg) y DCM (186 kg) . Después, se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (10.9 kg) en porciones y se agitó a 20-30 °C por 12 h. Se apagó la reacción en una mezcla de DCM (36 kg) y solución acuosa de hidróxido de sodio 2 N (46 kg) . Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces con DCM (24 X 2 kg) . Las capas orgánicas se combinaron, se lavó con salmuera (50 X 2 kg) y el solvente se removió bajo vacio para proporcionar 11.5 kg del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 285 (M+H)+. . 5- ( 4-Etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2- ilamina Se agregó amoniaco liquido (50.0 kg) a una mezcla desgasificada de 1- ( 6-bromo-piridin-3-ilmetil ) -4-etil-piperazina (14.2 kg) , óxido cuproso (200 g) , y MeOH (57 kg) a T = 40°C. Se calentó la mezcla a 65-75 °C durante la noche. Se enfrió a 20-30 °C y se filtró sobre una almohadilla de Celite®. Se concentró lo filtrado y se agregó DCM (113 kg) y ajustó el pH a 12-14 con hidróxido de sodio 2N (23 kg) las fases se separaron y se lavó la fase orgánica con DCM (58 X 2 kg) y las capas orgánicas se combinaron. Se filtró la mezcla a través de Celite® y concentró. Se disolvió el residuo en tolueno (9.7 kg) y cristalizó por la adición de MtBE (8.3 kg) para dar 6.0 kg del compuesto del titulo. Se obtuvo purificación adicional a través de una recristalización de tolueno. MS (ES+) : m/z= 221 (M+H) + . c. N-Isopropil-acetamida Se agregó carbonato de potasio (28 kg) a una solución de 2-propanamina (12 kg) en acetato de etilo (108 kg) a <20 °C. Se enfrió la mezcla a 5~0 °C y se agregó cloruro de acetilo (16.7 kg) a aproximadamente 2-3 kg/h. Se agitó hasta completarla por cromatografía de gas. Se apagó la reacción con agua (0.8 kg) y se filtró la mezcla de reacción y concentró para proporcionar 13.4 kg del compuesto del título. NMR (CDC13) 4.06 (m, 1H) , 1.94 (s, 3H) , 1.14 (d, 6H) . d. N- ( 4 -Bromo-2 , 6-difluoro-fenil ) -N 1 -isopropil-acetamidina Se agregó cloruro de fosforilo (16.0 kg) a una mezcla de 4-bromo-2 , 6-difluoro-fenilamina (14.5 kg) , N-isopropil acetamida (8.5 kg) , TEA (10.6 kg) en tolueno (115 kg) a <20 °C. Se agitó a 10-20 °C hasta completarla por HPLC. El solvente se removió bajo vacío y se agregó MtBE (64 kg) . Se ajustó el pH de la mezcla con 10% de carbonato de sodio acuoso (250 kg) . Se filtró la mezcla y enjuagó la torta con MtBE (11 X 2 kg) . Las fases se separaron y se lavó la capa acuosa con MtBE (22 X 2 kg) . Las capas orgánicas se combinaron y concentraron, se filtró y se lavó con ciclohexano (0.6 kg) y se secó para proporcionar 17.2 kg del compuesto del título. MS (ES+) : m/z= 292 (M+H) + . e. 6-Bromo-4-fluoro-l-isopropil-2-metil-lH- benzoimidazol Se agregó ter-butóxido de potasio (6.9 kg) en porciones a una solución de N- ( 4-bromo-2, 6-difluoro-fenil ) -N ' -isopropil-acetamidina (16.2 kg) en N-metil formamida (76 kg) mientras se mantiene la temperatura a T<30°C. Se calentó la mezcla a 70-75 °C hasta completarla por HPLC. Se enfrió a 20-30 °C y apagó agregando en agua (227 kg) después se extrajo con MtBE (37 X 4 kg) . Se lavaron las fases combinadas con salmuera (49 X 2 kg) y concentraron a 25-30L, se agregó n-hexano (64 kg) y se filtró la pasta aguada para dar 11 kg del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 272 (M+H)+.

Se obtiene purificación adicional disolviendo el compuesto crudo en DCM y filtrando a través de una almohadilla de Celite® y gel de sílice seguido por aislamiento de una mezcla de MtBE/hexano. f . 4-Fluoro-l-isopropil-2-metil-6- (4,4,5,5- tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan-2-il ) -lH-benzoimidazol Se burbujeó nitrógeno en una mezcla de 6-bromo-4-fluoro-l-isopropil-2-metil-lH-benzoimidazol (600 g) , bis (pinacolato) diboro (843 g) , triciclohexilfosfina (106 g) , acetato de potasio (652 g) , y DMSO (3.6 L) . Se agregó acetato de paladio (49 g) y se calentó a 100 °C hasta completarla por HPLC. Se enfrió la mezcla de reacción y se diluyó con agua (18 L) , después se filtró para aislar el sólido. Se disolvió el material crudo en 1 , 2-dimetoxietano (450 mL) y se filtró a través de Celite®. Se usó lo filtrado directamente en parte g- g. 6- (2-Cloro-5-fluoro-pirimidin-4-il) -4-fluoro-l-isopropil-2-metil-lH-benzoimidazol Se burbujeó nitrógeno en una mezcla de 2,4-dicloro-5-fluoro-pirimidina (517 g) , carbonato de sodio (586 g) en agua (1.7 L) y 1, 2-dimetoxietano (3.4 L) . Se agregó cloruro de bis ( trifenilfosfina) paladio (II) (4.9 g) y se calentó la reacción a 80+3 °C y se agregó por goteo una solución de 4-fluoro-l-isopropil-2-metil-6- (4,4,5, 5-tetrametil-[1, 3, 2] dioxaborolan-2-il ) -lH-benzoimidazol en 1,2-dimetoxietano de la parte f (5.1 L) . Se agitó la mezcla a 80±3 °C hasta completarla por HPLC. Se enfrió a RT y se diluyó con agua fría (2.1 L, 5 °C) . Se agitó por 1 hora después se aisló el sólido crudo por filtración. Se logró la purificación adicional del sólido por trituración con IPA para dar 472 g del compuesto del titulo. MS (ES+) : m/z= 323 (M+H)+. h. [5- (4-Etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il ] -[5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il ] -amina Forma cristalina III Se burbujeó nitrógeno en una mezcla de 6-(2-cloro-5-fluoro-pirimidin-4-il ) -4-fluoro-l-isopropil-2-metil-lH-benzoimidazol (465 g) , 5- ( 4-etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-ilamina (321 g) , carbonato de potasio (403 g) , 4,5-bis (difenilfosfino) -9, 9-dimetilxanteno (17 g) en alcohol t-amilico (2.3 L) . Se calentó tris (dibencilidenacetona) dipaladio (13.2 g) y la mezcla a 100±5 °C hasta completarla por HPLC. Se enfrió a RT, se diluyó con DCM (1.2 L) y se filtró sobre una almohadilla Celite®. Se extrajo lo filtrado con 4 HC1 (2.3 L X 2) . Se combinaron las capas acuosas y se agitaron con carbón vegetal (32 g) . Se filtró a través de Celite®, se agregó DCM (1.7 L) y ajustó el pH con NaOH (28% ac, 1.5 L) . Se recolectó la capa orgánica y se lavó la capa acuosa con DCM (1.7 L) . Se combinaron las capas orgánicas se lavaron con salmuera (1 1), y se secaron sobre sulfato de magnesio. Se usó un tratamiento de Si-Tiol con soporte sólido para remover paladio residual y el solvente se intercambió por acetona. La pasta aguada se filtró y se secó para dar 605 g del producto crudo como Forma I. Se mezcló 605 g de la Forma I y .3 1 de acetona seca. La pasta aguada se formó en suspensión a 56-57°C (reflujo) por al menos 18 horas y después a temperatura ambiente por 4 horas. Se aisló lo sólido por filtración a vacio, produciendo una pasta amarilla ligera. Lo sólido se secó en un horno a vacio a 35°C hasta que se obtuvo un peso constante de 570 g. El material se confirmó por XRPD por ser la Forma III del compuesto del titulo. EM (ES+) : m/z = 507 ( +H)+.

Los resultados de los siguientes ensayos demostraron evidencia que los compuestos ejemplificados en la presente son útiles como inhibidores CDK 4/6 específicos y como agentes anticancerígenos. Como se usan en la presente, "IC50" se refiere a la concentración de un agente el cual produce 50% de la respuesta inhibitoria máxima posible para el agente y "EC50" se refiere a la concentración de un agente el cual produce 50% de la respuesta máxima posible para el agente .

Ensayo de Inhibición CDK4 Para demostrar que los compuestos incluidos dentro de la presente invención exhiben afinidad para cinasa CDK4, se realiza un ensayo CDK4. Los ensayos funcionales proporcionan soporte a los compuestos de la presente invención que exhiben la capacidad para inhibir la actividad de cinasa CDK4. Todos los ligandos, radioetiquetas, solventes y reactivos empleados en los siguientes ensayos están fácilmente disponibles a partir de fuentes comerciales, o pueden ser fácilmente sintetizados por un experto en la técnica .

Se mezclaron 10 µ? del compuesto de prueba en DMSO al 20%, 20 µ? de adenosina 5' -trifosfato (ATP) y solución Fragmento Retinoblastoma C-terminal (CTRF) (Catálogo Upstate #12-439) y 10 µ? de solución enzimática en una placa de 96 cavidades. Se preparó la solución ATP y CRTF a partir de una mezcla de 40 µ? de ATP, 0.16 pCi [33P]-ATP y 1 µ? de CTRF se diluyó en amortiguador de cinasa de 68 mM de ácido 4- (2-hidroxietil ) -1-piperazinetansulfónico (HEPES) pH 7.4, 6.72 mM de MgCl2, 6.72 mM de ditiotreitol (DTT) y 0.013% de TRITON™ X-100. Se prepara la solución enzimática de 8 ng de enzima CDK4 (Cat Proqinase #0142-0373-1) diluida en el amortiguador de cinasa descrito anteriormente. Los compuestos de prueba son serialmente diluidos 1:3 en 20% de DMSO para crear una curva de 10 puntos a una concentración inicial de 20 µ?. Se emplea 20% de amortiguador DMSO solo sin agregar el compuesto de prueba como un control, se usa 500 mM de ácido etilen diamina tetraacético (EDTA) para determinar el nivel de 33P antecedente en la ausencia de actividad enzimática. Los reactivos se mezclan e incuban por 90 minutos a 20°C. La reacción se termina por la adición de 80 µ? de H3P04 al 10% (v/v) y una precipitación de material en placas de filtro de fibra de vidrio (Millipore, MAFC N0B 50) . Las cavidades se lavan cuatro veces con 0.5% de H3P04 y la radioactividad incorporada se determina con un contador de centelleo de microplaca (Microbeta Trilux, Wallac) .

La diferencia entre el valor medio de control alto y bajo se toma como 100% de actividad. Una curva logística de cuatro parámetros fija se usa para generar los valores IC50 usando el software ActivityBase™ (IDBS, Alameda CA) . Todas las sales de mesilato de los compuestos ejemplificados exhiben un IC50 de < 10 nM en el ensayo anterior. El compuesto del Ejemplo 25 tiene un IC50 de 3 nM en el ensayo anterior. Esto demuestra que las sales de mesilato de los compuestos ejemplificados son inhibidores potentes de CDK .

Ensayo de Inhibición CDK6 Se mezclaron 10 µ? del compuesto de prueba en 20% de DMSO, 20 µ? de ATP y solución CTRF (Catálogo Upstate # 12-439), y 10 µ? de solución enzimática en una placa de 96 cavidades. La solución ATP y CRTF se prepara para dar una concentración final de 100 µ? de ATP, 0.5 ]iCi [33P]-ATP y 0.8 µ? de CTRF diluido en amortiguador de cinasa de 68 mM de HEPES pH 7.4, 6.72 mM de MgCl2, 2.64 mM de DTT y 0.004% de TRITON™ X-100. La solución enzimática se prepara para una concentración final de 1.7 ng/µ? de enzima CDK6 (Cat Proqinase #7533) diluido en el amortiguador cinasa descrito anteriormente en el ensayo de inhibición CDK4. Los compuestos de prueba son serialmente diluidos 1:3 en 20% de DMSO para crear una curva de 10 puntos a una concentración de partida de 20 µ?. 20% de amortiguador DMSO solo sin agregar el compuesto de prueba se emplea como un control, se usa 500 mM de EDTA para determinar el nivel de 33P antecedente en la ausencia de actividad enzimática. Los reactivos se mezclan e incuban por 90 minutos a 20°C. La reacción se termina por la adición de 80 µ? 10% (v/v) de H3P04 y precipitación del material en placas de filtro de fibra de vidrio (Millipore, MAFC N0B 50) . Las cavidades se lavan cuatro veces con 0.5% de H3PO4 y la radioactividad incorporada se determina con un contador de centelleo de microplaca (Microbeta Trilux, Wallac) .

Los datos se analizan en la misma manera como para CDK4. Los compuestos ejemplificados preferidos exhiben un IC50 de < 30 nM en el ensayo anterior. El compuesto del Ejemplo 19 tiene un IC50 de 5 nM en el ensayo anterior. Esto demuestra que los compuestos ejemplificados preferidos son potentes inhibidores de CDK6.

Ensayo de Inhibición de Cinasa PIMl Se incuba Pim-1 (humano, 0.46 nM de concentración final) con 8 mM de MOPS, pH 7.0, 0.2 mM de EDTA, 100 µ? de un péptido de sustrato apropiado (véase protocolo de ensayo de inhibición de cinasa Pim-1 como se describe en Chen, L.S. et al (2009) Blood, DOI : 10.1182/blood-2009-03-212852 ) , 10 mM de Acetato Mg y [?-33?-???] (actividad especifica aproximada 500 cpm/pmol, concentración como se requiera) . La reacción se inicia por la adición de la mezcla MgATP y después se incuba por 40 minutos a temperatura ambiente. La reacción se detuvo por la adición de 3% de solución de ácido fosfórico. Después se salpica en un filtermat P30 y se lava tres veces por 5 minutos en 75 mM de ácido fosfórico y una vez en metanol antes del secado y conteo por centelleo. Para probar la inhibición del compuesto, los compuestos proporcionados como 10 mM de bases en 100% de DMSO se diluyen 1:10 en 100% de DMSO para dar 50x de base de la concentración superior de la curva. Los 50x de base después se diluyen serialmente 1:3 en 100% de DMSO para crear una curva de respuesta a la concentración de 10 puntos y se diluye 1:50 (20 µ? a 0.001 µ? de final en 2% de concentración DMSO final) en la mezcla de reacción para determinar la actividad del compuesto. Las cavidades de control contienen DMSO únicamente mientras la linea base se establece en cavidades de control detenidas con ácido a un tiempo de 0 minutos. El porcentaje de inhibición determinada de los controles en cada placa y los datos de concentración del compuesto de diez puntos después se fijan a una ecuación logística de cuatro parámetros usando ACTIVITYBASE 4.0.

Compuestos ejemplificados preferidos exhiben un IC50 de < 0.01 µ?. El compuesto del Ejemplo 25 tiene un IC5o de 0.003 µ en el ensayo descrito anteriormente. Esto demuestra que los compuestos ejemplificados preferidos son inhibidores potentes de cinasa Pim-1.

Ensayo de Solubilidad Las cantidades apropiadas del compuesto de prueba se pesan en viales cromatográficos separados. El volumen requerido de amortiguador de Fosfato 0.05M, pH 8.0 (6.7 g disuelto de Fosfato de Sodio Dibásico X 7H20 en 500 mi de agua grado HPLC, se ajusta a pH 8.0 con Ácido Fosfórico 85%) se agrega a 1 vial de muestra para lograr una concentración objetivo de 2.0 mg/ml. Se prepara una solución estándar apropiada en DMSO agregando el volumen requerido de DMSO al vial estándar para lograr una concentración objetivo de 2.0 mg/ml. Los viales se tapan seguramente y se colocan en un dispositivo de rotación. Los viales se rotaron hasta 360° por al menos 16 horas a temperatura ambiente con una velocidad angular de aproximadamente 50 rpm. Un examen visual de los viales individuales se realiza después de la rotación. Se filtran 250 µ? de cada vial a través de un filtro de vidrio de 0.7 µp?. Lo filtrado de muestra y lo filtrado estándar se recolectaron en cavidades separadas de placas de 96 cavidades profundas. Se prepara una serie de dilución (2000 µg/ml, 200 g/ml, 20 µg/ml, 2.0 µg/ml más una muestra DMSO de blanco) por dilución serial apropiada en D SO de 2.0 mg/ml de la solución estándar.

La muestra y soluciones estándar se analizan por HPLC (Columna LC : XTerra MS, C18, 2.1 X 50 mm, 3.5 µ?? a 50°C; fases móviles: A-0.2% de Ácido Fórmico en Agua; B - 0.2% de Ácido Fórmico en acetonitrilo; Gradiente: 5-100% de B durante 3 minutos, se mantiene a 100% de B por 0.5 minutos; velocidad de flujo: 750 µ?/min; volumen de inyección: 1 µ?; exploración de detector de arreglo de diodo de 200 nm a 400 nm. La longitud de onda extraída y usada para cuantificación se selecciona para proporcionar la estimación más exacta de las preparaciones de muestra) . El tiempo de retención usado para asignación de pico para el compuesto de prueba se obtiene del cromatograma de preparación estándar 200 µg/ml.

Los valores de solubilidad se calculan usando una curva de calibración de cuatro niveles. Se usa la línea mejor fijada para el área del pico de estándares de calibración calculados por sistema de datos de manejo cromatográfico usando lineal o cuadrático hasta cero fijo. Los resultados de solubilidad se reportan en mg/ml. Compuestos ejemplificados preferidos exhiben una solubilidad de al menos 2 mg/ml en amortiguador de fosfato a pH 8 usando el ensayo anterior. El compuesto del Ejemplo 16 exhibe una solubilidad de 2.099 mg/ml en amortiguador de fosfato a pH 8 usando el ensayo anterior. Estos datos así demuestran que los compuestos ejemplificados preferidos de la invención son fácilmente solubles en una solución acuosa.

Ensayo de Biodisponibilidad Oral de Rata Ratas Sprague Dawley machos (intervalo de peso corporal 250-320 g) que tiene en el interior cánulas arteriales femorales, se obtienen de Charles River, Wilmington, MA 01887, USA. El compuesto de prueba se administra intravenosamente en solución (2 mL/kg) en: 10% N-metil pirrolidona/18% Captisol® en 22.5 mM de amortiguador de fosfato, pH 3. La concentración de fármaco final es 0.25 mg/mL (equivalentes de base libre) . Se obtienen muestras de sangre usando la cánula interior durante 24 h. Los animales son después administrados con una dosis oral del compuesto de prueba en suspensión (5 mL/kg) en 1% p/v de hidroxietilcelulosa/0.25% v/v polisorbato 80/0.05% v/v antiespuma en agua purificada. La concentración de fármaco final es 0.2 mg/mL (equivalentes de base libre) . Muestras de sangre adicionales son recolectadas vía la cánula interior durante 24 h. Las muestras de plasma se obtuvieron por centrifugación y almacenaron congeladas (-20 °C) previo al análisis .

Se agregó un compuesto estándar interno (para normalización) en acetonitrilo/metanol (1:1, v/v) a las muestras de plasma para precipitar la proteína y las muestras son centrifugadas previo al análisis. Los sobrenadantes son analizados por inyección y elución rápida de gradiente en una columna C18 Javelin Betasil (cartucho 20 x 2.1 mm, fase Móvil A: Agua/1 M bicarbonato de amonio, 2000:10 v/v, Fase Móvil B: MeOH/1 M bicarbonato de amonio, 2000:10 v/v). Los analitos eluidos son detectados por análisis LC-MS-MS usando un espectrómetro de masas cuadrupolo triple Sciex API 4000. Las concentraciones de compuestos en plasma son determinadas de estándares preparados bajo condiciones idénticas.

La biodisponibilidad oral se obtiene dividiendo el área bajo la curva de tiempo de concentración de plasma después de la administración oral por el área bajo la curva después de la administración intravenosa (después de la normalización por dosis administrada) . Los resultados se presentan como Fracción biodisponible con relación a la dosis intravenosa (%F) . Los compuestos ejemplificados preferidos exhiben un % de valor F de >20% en el ensayo mencionado anteriormente. El compuesto del Ejemplo 22 exhibe un % de valor F de 48.5% en el ensayo mencionado anteriormente. Esto demuestra que compuestos ejemplificados preferidos tienen buena biodisponibilidad oral.

Inhibición de Fosforilación de Proteina de Retinoblastoma (pRb) y Ensayo de Contenido de DNA Células COLO 205 de la American Type Culture Collection (ATCC) se plaquearon a 2000 células/cavidad en placas de 96 cavidades Beckman Dickinson BIOCOAT™, y se incubaron en medio RPMI 1640 (por ejemplo, GIBCO, catálogo # 52400-025) con 10% de Suero Bovino Fetal (FBS por ejemplo, catálogo Gibco #11000-144) y 1% de piruvato de sodio (Gibco catálogo #11360-070) en 37 °C, 5% C02 por 24 h. Las células se trataron agregando el compuesto de prueba al medio, dosificando a 10 puntos de diluciones 1:3 a través del intervalo de 20 µ a 0.001 µ?, y con concentración final de DMSO a 0.25%. Después de 24 h de exposición a los compuestos, las células se fijaron con el fijador PREFER™ [Anatech LTD., Cat # 414] por 30 min a RT, después son impermeabilizadas con 0.1% TRITON® X100 en solución salina amortiguada con fosfato (PBS) por 15 min a RT . Las células se lavaron dos veces con PBS después se digirieron con 50 ug/mL de RNAse (Ribonucleasa A, Sigma cat# R-6513) en incubadora a 37 °C por 60 min. Las células fijas son bloqueadas con 1% de albúmina de suero bovino (BSA, Amersham cat # RPN412V) por 30 min. Anticuerpo primario, anticuerpo monoclonal de ratón purificado anti-fosfoRB (BD Pharmigen cat# 558385), se agrega a 1:2000 en PBS con 1% BSA a las células e incuba durante la noche a 4 °C. Después de 3 lavados con PBS, las células son incubadas con anticuerpo secundario etiquetado con Alexa488, IgG de ratón anti cabra Alexa 488 (Invitrogen cat # A11017) por 1 h a RT. Nuevamente son lavadas 3 veces con PBS, y después se agregan 15 µ? de yoduro de propidio (dilución 1:100 con PBS de la solución original, Invitrogen cat # P3566) para teñir el núcleo. Las placas fluorescentes son barridas con ACUMEN EXPLORER™ [citómetro de microplaca fluorescente de barrido láser (que comprende 488 irun de excitación láser de ión argón y detección de tubo fotomultiplicador múltiple), manufacturada por TTP LABTECH LTD] para medir la fosforilación de la proteina Rb y contenido de DNA. El análisis de imagen se basa en las señales fluorescentes celulares para identificar células en diferentes subpoblaciones . Los resultados de ensayo son porcentajes de cada una de las subpoblaciones identificadas, % de fosfoRB positivo, % 2 N y% 4 N. Los valores IC50 y EC50 son determinados por ajuste de curva a una logística de cuatro parámetros para cada resultado usando ACTIVITY BASE™. Todas las sales de mesilato de los compuestos ejemplificados exhiben un IC50 de < 200 nM en el ensayo anterior. El compuesto del Ejemplo 25 tiene actividad de aproximadamente 100 nM en el ensayo anterior. Esto demuestra que las sales de mesilato de los compuestos ejemplificados son inhibidores potentes de la actividad de cinasa CDK4/6 (como se mide por un bajo nivel de fosforilación de pRb) en un ensayo a base de célula completa in vitro.

Además, todas las sales de mesilato de los compuestos ejemplificados son capaces de inducir detención específica en la fase Gl del ciclo celular aún cuando se presentan a concentraciones de al menos 2 µ?. La detención Gl específica está indicada por >90% de células que tienen un genotipo 2N. La detención Gl específica aún a concentraciones fisiológicamente relevantes de compuesto activo demuestra que los compuestos de la invención son inhibidores específicos de CDK4/6 y que no se minimiza la inhibición específica de otras Cdks, lo cual podría resultar en detención del ciclo celular en otras fases.

Modelos de Injerto Heterólogo Subcutáneo Humano Células de cáncer colorrectal humano (colo-205), células de leucemia mieloide aguda humana (AML) (MV4-11), células de glioblastoma humano (U87MG) , y células de cáncer de pulmón humano (NCI H460 y calu 6) se expanden en cultivo (colo-205 y NCI H460 crecen en medio RPMI 1640 con L-glutamina, 25 mM HEPES, 1 mM piruvato de Na, 10% FBS; MV4-11 crece en medio Dulbecco modificado con Iscove con L-glutamina, 25 mM HEPES , 10% FBS; U87MG y calu 6 crecen en MEM Eagle con sales Earle, L-glutamina y aminoácidos no esenciales, 1 mM piruvato de Na y 10% FBS recolectado (colo-205, U87-MG, calu 6 y NC1-H460 tripsinizado (Catálogo invitrogen 25200-056); MV4-11 por centrifugación), y se inyectan subcutáneamente (5 millones de células/animal mezclado 1:1 en Matrigel, BD Biosciences) en el flanco trasero de ratones desnudos atimicos. El compuesto de prueba se prepara en un vehículo apropiado (1% hidroxietil celulosa, en 25 mM amortiguador de fosfato pH 2) y se administra por alimentación oral diariamente (a 25, 50 o 100 mg/kg (mpk) ) por 21 días cuando los tumores se establecen (11-29 días después del implante) . La respuesta de tumor se determina por la medición de volumen del tumor realizada dos veces a la semana durante el transcurso del tratamiento.

El método estadístico para evaluar el Retraso de Crecimiento del Tumor (TGD - Método de interpolación individual) es como sigue: Para cada animal, el tiempo para alcanzar un volumen de tumor específico (umbral) se calcula interpolando entre la última medición antes de alcanzar el umbral y la siguiente medición. La interpolación es lineal usando logio (volumen) contra tiempo. Si un animal nunca alcanza el umbral, su tiempo de cruce se reporta en ">t" donde T es el último día medido para este animal. Estos tiempos de cruce se analizan como datos de "tiempo al evento" con censura directa usando una distribución de Weibull. Se determinan una media y desviación estándar para cada grupo de tratamiento. El retraso de crecimiento del tumor (TGD) es la diferencia de tiempo de cruce medio entre un grupo tratado y el grupo de control de vehículo. Las pruebas t se realizan usando las medias y desviaciones estándar del análisis de Weibull. El peso corporal se toma como una medición general de toxicidad.

Después de un protocolo esencialmente como se describe anteriormente, el compuesto del Ejemplo 16 demuestra actividad anti-tumor en estos modelos como se muestra en la Tabla 3, mostrando asi que el compuesto del Ejemplo 16 tiene potente actividad in vivo contra un intervalo de tumores Rb+.

Además, en los injertos heterólogos AML MV4-11, la regresión de tumor se observa a una dosis de 100 mg por kg (mpk) , indicativo de la actividad inhibitoria proapoptótica Pim-1 del compuesto del Ejemplo 16, ver Tabla 4.

Tabla 3: Retraso de Crecimiento del Tumor en diferentes modelos de injerto heterólogo humano Tabla 4: Actividad anti-tumor del compuesto del Ejemplo 16 en el modelo MV4-11 Mediciones de volumen de tumor. El valor P es la significancia estadística en comparación con el grupo de control de vehículo (Ctrl) en el día de la medición - NS, no significativo; ***: p <= 0.001.

Modelo de Injerto Heterologo de Cerebro Ortopédico Modelo de tumor de cerebro in vivo: Ratas macho NIH-RNU que pesan entre 225 y 300 g se anestesian con isoflurano y se colocan en un armazón estereotáxico (David Kopf Instruments, Tujunga, CA) . Se hace una incisión de linea media y un agujero de 1 mm se perfora 2 mm lateral de la linea media y 3 mm anterior a la sutura coronal. Una suspensión celular de 5 x 105 células de tumor de glioblastoma humano U87 MG (crecidas en MEM Eagle con Sales Earle, L-glutamina y aminoácidos no esenciales, 1 mM piruvato de Na y 10% FBS) en 10 \i (5 x 105 células para dosificación qd y 1 x 106 para dosificación q2d) se inyecta a una profundidad de 3 mm por medio de una jeringa Hamilton de 25 o 50 µ? durante un período de aproximadamente 2 min usando una bomba de jeringa de montaje estereotáxico (Nano-Injector, modelo #53310 y Stereotaxic Adapter Clamp, pieza #51681, Stoelting Co, Wood Dale, IL) con la jeringa dejada en su lugar por 1 min adicional para prevenir el contraflujo y la jeringa se retira lentamente. El agujero se sella con cera para huesos, el campo operatorio se lava con solución salina y la incisión se cierra con suturas o sujetadores para heridas .

El compuesto de prueba se formula en vehículo (1% p/v de hidroxietilcelulosa/O .25% v/v de polisorbato 80/0.05% v/v de antiespuma en agua purificada) y se administra cada día por 21 días a 20, 40 y 80 mpk (qdx21) y 80 mpk q2dxl0 iniciando el día 4 después del implante de tumor.

La variable de resultado primaria es la supervivencia. Los animales se monitorean diariamente hasta la muerte y, en consulta con el personal veterinario y en adherencia con la política del implante de tumor, se eutaniza si el animal llega a estar moribundo. Las células se implantan en el lóbulo frontal para minimizar la disfunción cerebral potencial tal como déficit motriz y control de las funciones vitales . Se dice que los tumores del lóbulo frontal en humanos son "silenciosos", es decir los síntomas presentes más comunes incluyen cefalea, náusea, vómito, y déficit cognitivo. La morbidez, por lo tanto, es muy probable que se manifieste como letargía y pérdida de peso corporal. Los datos de supervivencia se analizan por el método de Kaplan-Meier para el análisis de supervivencia media usando JMP v6.0.2 (SAS Institute) .

Después de un protocolo esencialmente como se describe anteriormente, el compuesto del Ejemplo 16 resulta en un incremento estadísticamente significativo de supervivencia media (cuando se compara con los animales tratados con vehículo) a las siguientes dosis; 40 mpk qd, 80 mpk qd y 80 mpk q2d, (ver Tabla 5) demostrando así que el compuesto del Ejemplo 16 es capaz de cruzar la barrera hematoencefálica y tiene potente actividad inhibitoria in vivo en un modelo de injerto heterólogo de tumor de glioblastoma ortotópico.

Tabla 5: Supervivencia Media y Mediana (días) resultante de la administración del compuesto del Ejemplo 16 Supervivencia Error rango Log Supervivencia Grupo de Media Es ándar de valor Media Tratamiento (días) (días) P (días) Vehículo PO qd 25.1 2.8 - 27 PO 20mg/kg qd 29.8 0.7 0.5 31 PO 40mg/kg qd 34.3 1.7 0.0316 37 PO 80mg/kg qd 36.9 1.3 0.0006 37 Vehículo PO q2d 23.0 3.5 - 24 PO 80mg/kg q2d 33.0 1.2 0.0295 34 En un experimento separado, para determinar los niveles de plasma en el compuesto y exposición del cerebro, ratas Sprague Dawley macho que no portan tumor se administran con una dosis única del compuesto del Ejemplo 16 oralmente a 30 mg/kg. Se toman muestras durante 48 h para determinar las concentraciones en plasma y cerebro. Los animales se sacrifican, y la sangre entera se colecta por punción cardiaca y el plasma se aisla por centrifugación. El cerebro completo se colecta y se congela instantáneamente en nitrógeno líquido.

Las muestras de cerebro se preparan por homogenización en 80% metanol/20% H20. Un compuesto estándar interno en acetonitrilo/metanol (1:1, v/v) se adiciona a las muestras de homogeneizado de cerebro o plasma para precipitar las proteínas y las muestras se centrifugan antes del análisis. Los sobrenadantes se analizan por inyección y rápida elución de gradiente en una columna C18 Javelin Betasil (cartucho de 20 x 2.1 mm, Fase móvil A: Agua/NH4HC03 1 M, 2000:10 v/v, Fase Móvil B: MeOH/NH4HC03 1 M, 2000:10 v/v). Los analitos eluidos se detectan por análisis de LC-MS-MS usando un espectrómetro de masas triple cuadrupolo Sciex API 4000. Las concentraciones de los compuestos en plasma o cerebro se determinan de los estándares preparados bajo condiciones idénticas.

Las concentraciones en plasma y cerebro se determinan en este estudio a partir de un grupo de tres ratas en cada punto temporal (ver Tablas 6a y 6b) y se usan para calcular el área bajo la curva de concentración en plasma/tiempo o la curva de concentración en cerebro/tiempo desde 0 a 48 horas. La examinación de la relación de exposición en el cerebro usando ya sea el área bajo la curva (AUC) o concentraciones máximas en plasma y cerebro (Cmax) , ver Tabla 6c, demuestra que el compuesto se distribuye bien en el cerebro con una relación de cerebro/plasma de aproximadamente 1. Las concentraciones máximas (Tmax) se detectan a 4 h. Estos experimentos demuestran que el compuesto del Ejemplo 16 es capaz de cruzar la barrera hematoencefálica y se distribuye bien en el cerebro. En contraste, los presentes inventores han determinado que un compuesto preferido de O 03/062236 ( 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2- ( 5-piperazin-l-il-piridin-2-ilamino) -8i¥-pirido [2,3-d]pirimidin-7-ona) exhibe relaciones de distribución cerebro : plasma de 0.17 (AUC) y 0.1 (Cmax) en el mismo ensayo, indicando que el compuesto relativamente contribuye pobremente en el tejido cerebral en este modelo.

Tabla 6a: Concentraciones en plasma del compuesto del Ejemplo 16 (ng/mL) determinadas en Ratas SD macho Tabla 6b: Concentraciones en cerebro del compuesto del Ejemplo 16 (ng/mL) determinadas en Ratas SD macho Tabla 6c: Exposición media al compuesto del Ejemplo 16 en plasma y cerebro determinada en Ratas SD macho Estudios de Combinación con Temozolomida Injertos Heterólogos subcutáneos U87 MG crecen y se miden como se describe previamente. El compuesto del Ejemplo 16 se formula y administra como se describe previamente y se dosifica oralmente una vez al día desde los días 11-31. La temozolomida (Schering Corporation) se formula en 1% p/v hidroxietilcelulosa/O .25% v/v polisorbato 80 en agua purificada y se administra por inyección intraperitoneal en los días 11 y 18. Una comparación de la actividad de agente único de temozolomida con un tratamiento de combinación con el compuesto del Ejemplo 16 se muestra en la Tabla 7. El crecimiento del tumor se analiza por análisis de interacción de 2 vías; los volúmenes de tumor transformados logarítmicamente se analizan con un análisis de mediciones repetidas de varianza (ANOVA) usando un modelo de correlación de energía espacial en SAS, versión 9.1 (Cary, NC) . Una estructura factorial 2 x 2 se usa para estimar los efectos del tratamiento y el efecto de interacción entre los dos tratamientos. El efecto de interacción se prueba a través de todos los puntos temporales (prueba "total") y en cada punto temporal. La inhibición incrementada del crecimiento de tumor vista en los grupos de combinación en comparación con los que reciben temozolomida sola indica que la temozolomida y el compuesto del Ejemplo 16 demuestran potente actividad antitumor in vivo en combinación en un modelo de injerto heterólogo de tumor de glioblastoma subcutáneo.

Tabla 7: Combinación del Estudio de Injerto Heterologo U87- G del Compuesto del Ejemplo 16 y Temozolomida Mediciones de volumen de tumor. El valor P es la significancia estadística en comparación con el grupo de control de vehículo (Ctrl) en el día de la medición - **: 0.001 < p <= 0.01; ***: p <= 0.001.

Los injertos heterólogos de cerebro ortotópicos U87 MG crecen y la supervivencia se mide como se describe previamente. Los grupos de animales se tratan con temolozomida (TMZ), o una combinación del Ejemplo 16 (dosificación cada dia o cada dos días) más temozolomida. Como se muestra en la Tabla 8, el incremento de supervivencia media en los grupos de combinación en comparación con los que reciben temozolomida sola indica que la temozolomida y el compuesto del Ejemplo 16 tienen potente actividad inhibitoria in vivo en combinación en un modelo de injerto heterologo de tumor de glioblastoma ortotópico. La ausencia de mortalidad y pérdida de peso corporal (ver Tabla 9) para los tratamientos de combinación indican que son bien tolerados y que no hay toxicidades superpuestas.

Tabla 8: Supervivencia media y mediana (días) resultantes de la administración del compuesto del Ejemplo 16 en combinación con Temozolomida Tabla 9: Mortalidad y peso corporal de los animales del estudio de temozolomida/compuesto del Ejemplo 16 Estudios de Combinación con Gemcitabina Los injertos heterólogos cutáneos Calu-6 (pulmón) crecen y se miden como se describe previamente. La gemcitabina se formula en solución salina (0.9% cloruro de sodio en agua purificada) y se administra vía inyección intraperitoneal q3dx7. El compuesto de prueba se administra qdx21. Una comparación de la actividad de agente único de gemcitabina con tratamientos de combinación que contienen tanto gemcitabina como el compuesto del Ejemplo 16 se muestra en la Tabla 10. El crecimiento del tumor se analiza por análisis de interacción de 2 vías. La inhibición incrementada del crecimiento de tumor vista en los grupos de combinación en comparación con los que reciben gemcitabina indica que los fármacos demuestran potente actividad anti-tumor in vivo en combinación en un modelo de injerto heterólogo de cáncer de pulmón subcutáneo. La baja incidencia de mortalidad y pérdida de peso corporal para los tratamientos de combinación indica que son bien tolerados y no sugieren toxicidades sobrepuestas (ver Tabla 11) .

Tabla 10: Combinación del estudio de injerto heterólogo Calu- 6 del compuesto del ejemplo 16 y gemcitabina Mediciones de volumen de tumor. El valor p es la significancia estadística en comparación con el grupo de control de vehículo (Ctrl) en el día de la medición - **: 0.001 < p <= 0.001; ***: p <= 0.001.

Tabla 11: Mortalidad y peso corporal de los animales del estudio de gemcitabina/compuesto del Ejemplo 16 prefiere la administración oral de los compuestos de la presente invención. También se prefiere la administración intravenosa de los compuestos de la presente invención. Dependiendo de las circunstancias, otras rutas de administración se pueden usar o aún preferir. Por ejemplo, la administración transdérmica puede ser muy deseable para pacientes quiénes son olvidadizos o petulantes acerca de tomar medicina oral. Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar por la ruta percutánea, intramuscular, intranasal o intrarrectal en circunstancias particulares. La ruta de administración se puede variar en alguna forma, limitada por las propiedades físicas de los fármacos, la conveniencia del paciente y el médico, y otras circunstancias relevantes (Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 18a edición, Mack Publishing Co. (1990)) .

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Un compuesto de fórmula caracterizado porque, Rl es alquilo C3-C5, cicloalquilo C3-C5 o ciclopropil-metilo; R2 y R3 son H o flúor, en donde al menos uno de R2 o R3 es flúor; R4 es H o CH3; R5 es alquilo Ci-C6 o -NR6R7 en donde R6 y R7 son alquilo C1-C3; Q es CH2, O, S o un enlace directo; y W y Y son C o N, en donde al menos uno de W o Y es N y en donde, cuando Q es O u S, W es C; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque Rl es isopropilo, ciclopropilo, ciclopentilo o ciclopropil-metilo . 3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 2, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque Rl es isopropilo. 4. Un compuesto de conformidad con cualquier reivindicación precedente, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque R2 y R3 son cada uno flúor. 5. Un compuesto de conformidad con cualquier reivindicación precedente, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque R4 es H. 6. Un compuesto de conformidad con cualquier reivindicación precedente, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque R5 es alquilo C1-C3. 7. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque R5 es -NR6R7 y R6 y R7 son cada uno etilo. 8. Un compuesto de conformidad con cualquier reivindicación precedente, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque Q es CH2 o un enlace directo. 9. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 8, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque Q es CH2. 10. Un compuesto de conformidad con cualquier reivindicación precedente, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque Y es N. 11. Un compuesto de conformidad con cualquier reivindicación precedente, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque W es N. 12. Un compuesto de conformidad con cualquier reivindicación precedente, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque es seleccic nado del grupo que consiste de : ?? ?? ?? ?? una sal del mismo farmacéuticamente aceptable 14. Un compuesto de conformidad con cualquier reivindicación precedente caracterizado porque es la sal de mesilato. 15. [5- ( -Etil-piperazin-l-ilmetil ) -piridin-2-il] - [5-fluoro-4- ( 7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il ) -pirimidin-2-il] -amina forma cristalina III, caracterizada por un patrón de difracción en polvo de rayos-X (radiación CUKOÍ, .? = 1.54056 Á) que comprende un pico a 21.29 (2T ± 0.1°) y opcionalmente uno o más picos seleccionados del grupo que comprende 11.54, 10.91, y 12.13 (2T ± 0.1°) . 16. [5- (4-Etil-piperazin-l-ilmetil) -piridin-2-il ] - [5-fluoro-4- (7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il) -pirimidin-2-il] -amina forma cristalina III como se reivindica de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada porque además por un espectro de 13C NMR que comprende picos de cambio químico v(Fl) [ppm] a 112.7, 127.3 y 129.4. 17. Una formulación farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. 18. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en terapia. 19. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de células manto, leucemia mieloide crónica y leucemia mieloide aguda. 20. Un método para tratar un cáncer seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, glioblastoma, linfoma de células manto, leucemia mieloide crónica y leucemia mieloide aguda en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.