具体实施方式
下面结合具体实施例对本申请作出详细说明。
一、中间反应物的合成
反应物(A)和反应物(B)可以直接购买或者自主研发,自主研发能够显著降低成本。自主研发反应物(A)和反应物(B)的具体制备方法如下:
(1)6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)苯并噻唑(A-1)的合成
步骤一,6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊烷-2-基)苯并噻唑的合成:6-溴苯并噻唑(0.43g,2.0mmol)溶于DMF(10mL),然后加入频哪醇硼酸酯(0.53g,2.1mmol),Pd(dppf)Cl2(22mg,0.06mmol),醋酸钾(0.59g,6.0mmol),置换氩气三次,加热至80℃,反应24h。冷却过滤浓缩,快速硅胶柱纯化得到化合物6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊烷-2-基)苯并噻唑(0.47g,90%产率)。
1HNMR(300MHz,CDCl3)δ9.07(s,1H),8.46(s,1H),8.14(d,J=8.2Hz,1H),7.94(dd,J=8.2,1.1Hz,1H),1.38(s,12H)。
步骤二,6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)苯并噻唑(A-1)的合成:称取化合物2,4-二氯-5-氟嘧啶(0.23g,1.4mmol)加入250mL三颈烧瓶,之后加入Pd(PPh3)2Cl2(21mg,0.03mmol),碳酸钠(0.27g,2.5mmol),乙二醇二甲醚(10mL)和H2O(0.25mL),置换氩气三次,加热至80℃。化合物6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊烷-2-基)苯并噻唑(0.26g,1.0mmol)溶于乙二醇二甲醚(5mL),滴加到三颈烧瓶中,反应16h。冷却过滤浓缩,快速硅胶柱纯化得到化合物6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)苯并噻唑(0.22g,82%产率)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ9.17(s,1H),8.84(d,J=1.7Hz,1H),8.58(d,J=3.1Hz,1H),8.37–8.24(m,2H)。
(2)6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-2-甲基苯并噻唑(A-2)的合成
参照化合物(A-1)的合成方法,产率分别为90%和84%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(d,J=1.9Hz,1H),8.55(d,J=3.1Hz,1H),8.28–8.25(m,1H),8.07(d,J=8.6Hz,1H),2.90(s,3H)。
(3)6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-N-环戊基苯并噻唑-2-胺(A-3)的合成
步骤一,6-溴-N-环戊基苯并噻唑-2-胺的合成:6-溴-2-氯苯并噻唑(0.50g,2.0mmol)溶于DMSO(10mL),加入环戊胺(0.19g,2.2mmol)和N-乙基二异丙胺(0.39g,3.0mmol),置换氩气三次,加热至80℃,反应12h。冷却过滤浓缩,快速硅胶柱纯化得到化合物6-溴-N-环戊基苯并噻唑-2-胺(0.53g,90%产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(d,J=1.7Hz,1H),7.38–7.33(m,2H),6.28(s,1H),3.98–3.93(m,1H),2.14–2.04(m,2H),1.72–1.54(m,6H)。
步骤二,6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-N-环戊基苯并噻唑-2-胺(A-3)的合成:参照化合物(A-1)的合成方法,产率分别为88%和83%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.49(d,J=1.9Hz,1H),8.46(d,J=3.5Hz,1H),8.17–8.14(m,1H),7.58(d,J=8.6Hz,1H),5.88(s,1H),4.13–4.07(m,1H),2.19–2.11(m,2H),1.77–1.61(m,6H)。
(4)6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺(A-4)的合成
步骤一,6-溴-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺的合成:称取4-溴-2-碘苯胺(0.60g,2.0mmol),二水二甲基二硫代氨基甲酸钠(0.72g,4.0mmol),醋酸铜(0.36g,2.0mmol)和碳酸钾(0.55g,4.0mmol)溶于DMF(10mL),加热至120℃,反应6h。冷却过滤浓缩,快速硅胶柱纯化得到化合物6-溴-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺(0.44g,85%产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69(d,J=1.9Hz,1H),7.41–7.35(m,2H),3.20(s,6H)。
步骤二,6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺(A-4)的合成:参照化合物(A-1)的合成方法,产率88%和80%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.49(d,J=1.9Hz,1H),8.45(d,J=3.6Hz,1H),8.17–8.14(m,1H),7.62(d,J=8.7Hz,1H),3.27(s,6H)。
(5)6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-N,N-二乙基苯并噻唑-2-胺(A-5)的合成
步骤一,6-溴-N,N-二乙基苯并噻唑-2-胺的合成:称取4-溴-2-碘苯胺(0.60g,2.0mmol),三水二乙基二硫代氨基甲酸钠(0.90g,4.0mmol),醋酸铜(0.36g,2.0mmol)和碳酸钾(0.55g,4.0mmol)溶于DMF(10mL),加热至120℃,反应6h。冷却过滤浓缩,快速硅胶柱纯化得到化合物6-溴-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺(0.46g,80%产率)。
步骤二,6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-N,N-二乙基苯并噻唑-2-胺(A-5)的合成:参照化合物(A-1)的合成方法,产率90%和82%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.44(dd,J=8.8,2.7Hz,2H),8.13(d,J=8.6Hz,1H),7.58(d,J=8.7Hz,1H),3.61(q,J=7.2Hz,4H),1.32(t,J=7.2Hz,6H)。
(6)(6-氨基吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B-1)的合成
称取6-氨基烟酸(0.28g,2.0mmol),N,N'-羰基二咪唑(0.39g,2.4mmol)溶于DMF(5mL),70℃反应10min,室温再搅拌1h,加入N-乙基哌嗪(0.46g,4.0mmol),室温反应过夜,浓缩,快速硅胶柱纯化得到化合物6-氨基吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(0.40g,85%产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.19–8.17(m,1H),7.57–7.54(m,1H),6.51–6.48(m,0.9Hz,1H),4.79(s,2H),3.73–3.60(m,4H),2.49–2.42(m,6H),1.13–1.08(m,3H)。
(7)5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(B-2)的合成
2-氨基-5-醛基吡啶(0.32g,2.6mmol)和N-乙基哌嗪(0.45g,3.9mmol)溶于1,2-二氯乙烷(20mL),室温搅拌2h,随后加入三乙酰基硼氢化钠(0.87g,4.1mmol),室温搅拌8h。加入1M NaOH(30mL)淬灭,DCM(20mL×3)萃取,无水硫酸钠干燥,浓缩后柱层析(DCM/MeOH=10:1)得到化合物5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(0.52g,91%)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.94(d,J=2.3Hz,1H),7.40(dd,J=8.3,2.4Hz,1H),6.46(d,J=8.3Hz,1H),4.57(s,2H),3.36(s,2H),2.47–2.37(m,10H),1.07(t,J=7.2Hz,3H)。
(8)叔丁基4-((6-胺基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(B-3)的合成
参考化合物(B-2)的合成方法,产率为89%。1HNMR(300MHz,CDCl3):δ7.94(d,J=2.3Hz,1H),7.40(dd,J=8.4,2.3Hz,1H),6.48(d,J=8.4Hz,1H),4.54(s,2H),3.40(t,J=5.1Hz,4H),3.36(s,2H),2.35(t,J=5.1Hz,4H),1.45(s,9H)。
(9)叔丁基4-(6-胺基烟碱酰基)哌嗪-1-羧酸酯(B-4)的合成
参考化合物(B-1)的合成方法,产率为87%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.18(d,J=2.2Hz,1H),7.56(dd,J=8.5,2.2Hz,1H),6.51(d,J=8.5Hz,1H),4.76(s,2H),3.65–3.56(m,4H),3.48–3.42(m,4H),1.48(s,9H)。
(10)叔丁基4-(6-胺基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(B-5)的合成
步骤一,叔丁基4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成:称取5-溴-2-硝基吡啶(0.41g,2.0mmol),叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(0.48g,2.6mmol)和三乙胺(0.41g,4.0mmol)溶于DMSO(5mL),加热至60℃,反应18h。冷却过滤浓缩,快速硅胶柱纯化得到化合物叔丁基4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.49g,80%产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17–8.13(m,2H),7.22(dd,J=9.2,3.1Hz,1H),3.66–3.64(m,4H),3.49–3.46(m,4H),1.49(s,9H)。
步骤二,叔丁基4-(6-胺基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成:称取叔丁基4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.31g,1.0mmol),还原铁粉(0.17g,3.0mmol)和氯化铵(0.49g,9.0mmol)溶于70%乙醇(10mL),加热至70℃,反应6h。冷却过滤浓缩,快速硅胶柱纯化得到化合物叔丁基4-(6-胺基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.24g,85%产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.78(d,J=2.9Hz,1H),7.17(dd,J=8.8,2.9Hz,1H),6.49(d,J=8.8Hz,1H),4.19(s,2H),3.59–3.55(m,4H),2.98–2.94(m,4H),1.48(s,9H)。
(11)5-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(B-6)的合成
参考化合物(B-2)的合成方法,产率为90%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10–7.79(m,1H),7.40(d,J=8.3Hz,1H),6.57(s,1H),4.55(s,2H),3.41(s,2H),3.22(t,J=4.9Hz,4H),2.77(s,3H),2.53(t,J=5.0Hz,4H)。
(12)乙基4-((6-胺基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(B-7)的合成
参考化合物(B-2)的合成方法,产率为86%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.87(d,J=2.2Hz,1H),7.43(dd,J=8.5,2.3Hz,1H),6.51(d,J=8.5Hz,1H),5.71(s,2H),4.12(q,J=7.1Hz,2H),3.46(t,J=5.1Hz,4H),3.36(s,2H),2.37(t,J=5.1Hz,4H),1.25(t,J=7.1Hz,3H)。
(13)5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(B-8)的合成
参考化合物(B-2)的合成方法,产率为81%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88(d,J=2.2Hz,1H),7.43(dd,J=8.4,2.2Hz,1H),6.48(d,J=8.4Hz,1H),4.95(s,2H),3.39(s,2H),2.88–2.80(m,1H),2.72–2.51(m,8H),1.10(d,J=6.6Hz,6H)。
(14)(6-氨基吡啶-3-基)(4-异丙基哌嗪-1-基)甲酮(B-9)的合成
参考化合物(B-1)的合成方法,产率为85%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.18(s,1H),7.55(d,J=8.4Hz,1H),6.49(dd,J=8.6,2.1Hz,1H),4.86(s,2H),3.67–3.61(m,4H),2.77–2.71(m,1H),2.55–2.51(m,4H),1.05(d,J=6.0Hz,6H)。
二、化合物I-1-I-53的合成
实施例1:
(6-((4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(I-1)的合成:
化合物6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)苯并噻唑(133mg,0.5mmol)和6-氨基吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(141mg,0.6mmol)溶于二氧六环(5mL),然后加入Pd2(dba)3(23mg,0.025mmol),Xantphos(58mg,0.1mmol),碳酸铯(326mg,1.0mmol),置换氩气三次,加热至100℃,反应12h。冷却过滤浓缩柱层析(DCM~DCM/MeOH=10:1)得到化合物(6-((4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(88mg,38%收率)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ9.68(s,1H),9.15(s,1H),8.76–8.75(m,1H),8.61–8.58(m,2H),8.52(dd,J=8.7,0.9Hz,1H),8.33–8.26(m,2H),7.86(dd,J=8.7,2.3Hz,1H),3.80–3.61(m,4H),2.51–2.44(m,6H),1.12(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例2:
4-(苯并噻唑-6-基)-N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺(I-2)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为43%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),9.11(s,1H),8.78–8.76(m,1H),8.54(d,J=3.5Hz,1H),8.41(d,J=8.6Hz,1H),8.35–8.26(m,3H),7.73(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),3.52(s,2H),2.58–2.47(m,10H),1.14(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例3:
叔丁基4-((6-((4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(I-3)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为52%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),8.83(s,1H),8.77(d,J=1.5Hz,1H),8.52(d,J=3.5Hz,1H),8.41(d,J=8.6Hz,1H),8.34–8.27(m,3H),7.75–7.73(m,1H),3.50(s,2H),3.45–3.43(m,J=5.2Hz,4H),2.43–2.40(m,4H),1.46(s,9H)。
实施例4:
4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(I-4)的合成:
叔丁基4-((6-((4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯溶于二氯甲烷中,0℃条件下通入HCl气体反应2h。反应结束后,浓缩得到化合物4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺盐酸盐,产率为100%。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.17(s,1H),10.08(s,1H),9.62(s,1H),8.95(t,J=2.7Hz,2H),8.71(s,1H),8.53(d,J=8.8Hz,1H),8.30(q,J=8.7Hz,2H),7.99(d,J=9.0Hz,1H),4.57(s,2H),3.54–3.42(m,10H)。
实施例5:
叔丁基4-(6-((4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)烟碱酰基)哌嗪-1-羧酸酯(I-5)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为52%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.16(s,1H),8.78–8.78(m,1H),8.52–8.49(m,2H),8.44(dd,J=2.4,0.8Hz,1H),8.34–8.28(m,3H),7.84(dd,J=8.7,2.3Hz,1H),3.70–3.44(m,8H),1.48(s,9H)。
实施例6:
6-((4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐(I-6)的合成:
6-((4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐的制备方法参照化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.25(s,1H),9.60–9.58(m,3H),8.93(d,J=1.6Hz,1H),8.88(d,J=3.3Hz,1H),8.51(d,J=2.2Hz,1H),8.32–8.25(m,2H),8.19–8.09(m,2H),3.79–3.76(m,4H),3.18–3.16(m,4H)。
实施例7:
叔丁基4-(6-((4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(I-7)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为47%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.77–8.76(m,1H),8.45(d,J=3.4Hz,1H),8.33–8.26(m,3H),8.04–8.02(m,2H),7.38(dd,J=9.1,3.0Hz,1H),3.63–3.60(m,4H),3.11–3.09(m,4H),1.49(s,9H)。
实施例8:
4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(I-8)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.43(s,1H),9.60(s,1H),9.33(s,2H),8.91(s,1H),8.87(d,J=3.3Hz,1H),8.33–8.23(m,2H),8.07(d,J=9.4Hz,1H),8.01(d,J=2.9Hz,1H),7.85(d,J=9.4Hz,1H),3.44(t,J=5.1Hz,4H),3.27–3.25(m,4H)。
实施例9:
4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟-N-(5-((4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(I-9)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为45%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.78–8.77(m,1H),8.48(d,J=3.4Hz,1H),8.40(dd,J=8.5,0.8Hz,1H),8.34–8.29(m,2H),8.25–8.25(m,1H),8.18(s,1H),7.70(dd,J=8.6,2.4Hz,1H),3.53(s,2H),3.25(t,J=4.9Hz,4H),2.78(s,3H),2.58(t,J=5.0Hz,4H)。
实施例10:
乙基4-((6-((4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(I-10)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为55%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.78–8.77(m,1H),8.48(d,J=3.4Hz,1H),8.39(dd,J=8.6,0.8Hz,1H),8.34–8.27(m,2H),8.25–8.24(m,2H),7.72(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),4.13(q,J=7.1Hz,2H),3.50–3.47(m,6H),2.42(t,J=5.0Hz,4H),1.26(t,J=7.1Hz,3H)。
实施例11:
4-(苯并噻唑-6-基)-5-氟-N-(5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(I-11)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为48%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.78(d,J=1.6Hz,1H),8.48(d,J=3.5Hz,1H),8.38(dd,J=8.5,0.8Hz,1H),8.35–8.32(m,1H),8.30–8.27(m,1H),8.25–8.23(m,2H),7.73(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),3.50(s,2H),2.68–2.44(m,9H),1.06(d,J=6.5Hz,6H)。
实施例12:
(4-乙基哌嗪-1-基)(6-((5-氟-4-(2-甲基苯并噻唑-6-基)嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲酮(I-12)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为40%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.25(s,1H),8.63(d,J=1.8Hz,1H),8.56–8.54(m,2H),8.51(d,J=8.7Hz,1H),8.24(dt,J=8.7,1.3Hz,1H),8.09(d,J=8.6Hz,1H),7.86(dd,J=8.7,2.4Hz,1H),3.78–3.64(m,4H),2.90(s,3H),2.51–2.46(m,6H),1.13(t,J=7.1Hz,3H)。
实施例13:
N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(2-甲基苯并噻唑-6-基)嘧啶-2-胺(I-13)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为52%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.63(d,J=1.8Hz,1H),8.49–8.47(m,2H),8.38(d,J=8.6Hz,1H),8.28–8.24(m,2H),8.08(d,J=8.7Hz,1H),7.72(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),3.51(s,2H),2.90(s,3H),2.55–2.45(m,10H),1.11(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例14:
叔丁基4-((6-((5-氟-4-(2-甲基苯并噻唑-6-基)嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(I-14)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为55%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.63(s,1H),8.46(d,J=3.5Hz,1H),8.39(d,J=8.6Hz,1H),8.32(s,1H),8.27–8.24(m,2H),8.08(d,J=8.7Hz,1H),7.72(d,J=8.4Hz,1H),3.49(s,2H),3.43(t,J=4.8Hz,4H),2.91(s,3H),2.42–2.39(m,4H),1.46(s,9H)。
实施例15:
5-氟-4-(2-甲基苯并噻唑-6-基)-N-(5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(I-15)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.67(s,1H),9.90(s,2H),8.89(d,J=3.3Hz,1H),8.80(d,J=1.7Hz,1H),8.64(d,J=2.2Hz,1H),8.40(dd,J=9.0,2.2Hz,1H),8.21(dt,J=8.6,1.3Hz,1H),8.13(d,J=8.6Hz,1H),8.04(d,J=8.9Hz,1H),4.50(s,2H),3.50–3.45(m,8H),2.88(s,3H)。
实施例16:
叔丁基4-(6-((5-氟-4-(2-甲基苯并噻唑-6-基)嘧啶-2-基)胺)烟碱酰基)哌嗪-1-羧酸酯(I-16)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为40%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.11(s,1H),8.63(s,1H),8.55–8.51(m,3H),8.24(d,J=8.6Hz,1H),8.09(dd,J=8.7,3.3Hz,1H),7.86(dt,J=8.9,2.6Hz,1H),3.67–3.46(m,8H),2.91(s,3H),1.48(s,9H)。
实施例17:
(6-((5-氟-4-(2-甲基苯并噻唑-6-基)嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐(I-17)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.04(s,1H),9.85(s,2H),8.92(d,J=2.9Hz,1H),8.81(s,1H),8.60(s,1H),8.28(d,J=9.1Hz,1H),8.21(d,J=8.7Hz,1H),8.13(d,J=8.6Hz,1H),8.06(d,J=9.0Hz,1H),3.83–3.77(m,4H),3.20–3.14(m,4H),2.88(s,3H)。
实施例18:
(6-((4-(2-(环戊胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(I-18)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为45%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.90(s,1H),8.50(d,J=8.7Hz,1H),8.46(d,J=2.2Hz,1H),8.43(d,J=3.6Hz,1H),8.40(d,J=1.8Hz,1H),8.07(dd,J=8.7,1.8Hz,1H),7.84(dd,J=8.7,2.3Hz,1H),7.64(d,J=8.5Hz,1H),6.08(s,1H),3.80–3.65(m,4H),2.52–2.47(m,6H),2.18–2.12(m,2H),1.81–1.64(m,6H),1.13(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例19:
N-环戊基-6-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)胺)-5-氟嘧啶-4-基)苯并噻唑-2-胺(I-19)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为51%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(s,1H),8.43–8.35(m,3H),8.23(d,J=2.2Hz,1H),8.08–8.05(m,1H),7.71(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),7.64(d,J=8.6Hz,1H),6.12(d,J=6.7Hz,1H),4.08–4.04(m,1H),3.50(s,2H),2.54–2.42(m,10H),2.19–2.11(m,2H),1.79–1.64(m,6H),1.10(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例20:
叔丁基4-((6-((4-(2-(环戊胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(I-20)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为57%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43–8.40(m,2H),8.38(d,J=3.7Hz,1H),8.22(s,2H),8.11(d,J=7.8Hz,1H),7.79(s,1H),7.63(d,J=8.4Hz,1H),5.71(s,1H),4.13–4.05(m,1H),3.60–3.45(m,6H),2.57–2.43(m,4H),2.20–2.12(m,2H),1.80–1.61(m,6H),1.46(s,9H)。
实施例21:
N-环戊基-6-(5-氟-2-((5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)苯并噻唑-2-胺盐酸盐(I-21)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.31(s,1H),9.80(s,2H),9.40(s,1H),8.79(d,J=3.6Hz,1H),8.60(d,J=2.2Hz,1H),8.53(d,J=1.8Hz,1H),8.32(dd,J=9.1,2.2Hz,1H),8.10–8.06(m,2H),7.65(d,J=8.6Hz,1H),4.44(s,2H),4.29–4.24(m,1H),3.46–3.38(m,8H),3.17(s,1H),2.06–1.99(m,2H),1.73–1.59(m,6H)。
实施例22:
叔丁基4-(6-((4-(2-(环戊胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)烟碱酰基)哌嗪-1-羧酸酯(I-22)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为53%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.82(s,1H),8.51(d,J=8.4Hz,1H),8.46–8.41(m,3H),8.09(d,J=8.3Hz,1H),7.85–7.82(m,1H),7.63(d,J=8.3Hz,1H),6.20(s,1H),4.09–4.03(m,1H),3.68–3.45(m,8H),2.18–2.12(m,2H),1.80–1.62(m,6H),1.48(s,9H)。
实施例23:
(6-((4-(2-(环戊胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐(I-23)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),9.70(s,1H),9.52(s,2H),8.80(s,1H),8.56–8.50(m,2H),8.15–8.09(m,3H),7.69(d,J=8.6Hz,1H),4.32–4.25(m,1H),3.80–3.74(m,4H),3.33(s,1H),3.20–3.14(m,4H),2.05–1.99(m,2H),1.76–1.59(m,6H)。
实施例24:
乙基4-((6-((4-(2-(环戊胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(I-24)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为56%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.82(s,1H),8.42–8.38(m,3H),8.25–8.24(m,1H),8.05(d,J=8.3Hz,1H),7.73(d,J=8.4Hz,1H),7.64(d,J=8.3Hz,1H),6.25(s,1H),4.14(q,J=7.0Hz,2H),4.08–4.02(m,1H),3.54–3.47(m,6H),2.46–2.42(m,4H),2.19–2.11(m,2H),1.79–1.61(m,6H),1.26(t,J=7.0Hz,3H)。
实施例25:
N-环戊基-6-(5-氟-2-((5-((4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)苯并噻唑-2-胺(I-25)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为53%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.54(s,1H),8.42–8.39(m,3H),8.24(d,J=2.3Hz,1H),8.10–8.07(m,1H),7.69(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),7.64(d,J=8.6Hz,1H),5.96(d,J=6.8Hz,1H),4.09–4.04(m,1H),3.52(s,2H),3.25(t,J=4.9Hz,4H),2.79(s,3H),2.58(t,J=4.9Hz,4H),2.19–2.11(m,2H),1.80–1.70(m,6H)。
实施例26:
叔丁基4-(6-((4-(2-(环戊胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(I-26)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为44%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.48(s,1H),8.39(d,J=1.8Hz,1H),8.36(d,J=3.7Hz,1H),8.31(d,J=9.1Hz,1H),8.08–8.05(m,1H),8.03(d,J=2.9Hz,1H),7.63(d,J=8.5Hz,1H),7.37(dd,J=9.1,3.0Hz,1H),6.10(d,J=6.6Hz,1H),4.08–4.03(m,1H),3.61(t,J=5.1Hz,4H),3.09(t,J=5.0Hz,4H),2.17–2.11(m,2H),1.77–1.64(m,6H),1.49(s,9H)。
实施例27:
N-环戊基-6-(5-氟-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)苯并噻唑-2-胺盐酸盐(I-27)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.97(s,1H),10.53(s,1H),9.86(s,2H),8.83(d,J=3.3Hz,1H),8.57(d,J=1.7Hz,1H),8.27(dd,J=9.6,2.6Hz,1H),8.11–8.09(m,1H),8.05(d,J=2.6Hz,1H),7.86(d,J=9.5Hz,1H),7.77(d,J=8.6Hz,1H),4.41–4.35(m,1H),3.52–3.50(m,4H),3.26–3.23(m,4H),2.08–2.02(m,2H),1.76–1.60(m,6H)。
实施例28:
N-环戊基-6-(5-氟-2-((5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)苯并噻唑-2-胺(I-28)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为50%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),8.40–8.38(m,3H),8.23(d,J=2.2Hz,1H),8.05(dd,J=8.5,1.8Hz,1H),7.71(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),7.65(d,J=8.6Hz,1H),6.32(d,J=6.2Hz,1H),4.07–4.02(m,1H),3.49(s,2H),2.70–2.55(m,9H),2.18–2.11(m,2H),1.80–1.64(m,6H),1.06(d,J=6.5Hz,6H)。
实施例29:
(6-((4-(2-(环戊胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(4-异丙基哌嗪-1-基)甲酮(I-29)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为48%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.04(s,1H),8.52–8.39(m,4H),8.05(dd,J=8.4,1.9Hz,1H),7.85(dt,J=8.6,2.2Hz,1H),7.64(dd,J=8.6,1.8Hz,1H),6.19(s,1H),4.09–4.04(m,1H),3.73–3.62(m,4H),2.79–2.75(m,1H),2.60–2.55(m,4H),2.18–2.13(m,2H),1.78–1.64(m,6H),1.08(d,J=6.6Hz,6H)。
实施例30:
6-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)胺)-5-氟嘧啶-4-基)-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺(I-30)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为42%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(d,J=1.8Hz,1H),8.38–8.36(m,2H),8.21(d,J=2.3Hz,1H),8.15(dt,J=8.7,1.2Hz,1H),7.94(s,1H),7.71(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),7.65(d,J=8.6Hz,1H),3.49(s,2H),3.27(s,6H),2.60–2.36(m,10H),1.09(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例31:
(6-((4-(2-(二甲胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(I-31)的合成:
6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺(154mg,0.5mmol)和6-氨基吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(141mg,0.6mmol)溶于二氧六环(5mL),然后加入Pd2(dba)3(23mg,0.025mmol),BINAP(31mg,0.05mmol),叔丁醇钠(96mg,1.0mmol),置换氩气三次,加热至100℃,反应12h.冷却过滤浓缩柱层析(DCM~DCM/MeOH=10:1)得到化合物(6-((4-(2-(二甲胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(139mg,55%产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.27(s,1H),8.69(d,J=3.8Hz,1H),8.52(d,J=2.0Hz,1H),8.35(d,J=2.4Hz,1H),8.31(d,J=8.7Hz,1H),8.06(d,J=8.6Hz,1H),7.86(dd,J=8.6,2.4Hz,1H),7.59(d,J=8.6Hz,1H),3.59–3.47(m,4H),3.21(s,6H),2.44–2.34(m,6H),1.01(t,J=7.1Hz,3H)。
实施例32:
叔丁基4-((6-((4-(2-(二甲胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(I-32)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为48%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(d,J=1.8Hz,1H),8.40–8.36(m,2H),8.20(d,J=2.2Hz,1H),8.15(dt,J=8.8,1.2Hz,1H),7.94(s,1H),7.71(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),7.65(d,J=8.6Hz,1H),3.48(s,2H),3.45–3.42(m,4H),3.27(s,6H),2.41–2.39(m,4H),1.46(s,9H)。
实施例33:
6-(5-氟-2-((5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺盐酸盐(I-33)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.44(s,1H),9.83(s,2H),8.79(d,J=2.9Hz,1H),8.59(d,J=11.9Hz,2H),8.35(d,J=8.9Hz,1H),8.07(dd,J=14.1,8.8Hz,2H),7.65(d,J=8.6Hz,1H),4.46(s,2H),3.49–3.41(m,8H),3.24(s,6H)。
实施例34:
叔丁基4-(6-((4-(2-(二甲胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)烟碱酰基)哌嗪-1-羧酸酯(I-34)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为50%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(s,1H),8.53(dd,J=8.6,0.8Hz,1H),8.50(dd,J=2.4,0.8Hz,1H),8.45(d,J=3.8Hz,1H),8.44(d,J=1.8Hz,1H),8.16–8.13(m,1H),7.84(dd,J=8.7,2.4Hz,1H),7.66(d,J=8.6Hz,1H),3.70–3.59(m,4H),3.51–3.46(m,4H),3.27(s,6H),1.48(s,9H)。
实施例35:
(6-((4-(2-(二甲胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐(I-35)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为100%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ11.70(s,1H),9.84(s,1H),9.71(s,1H),8.83(s,1H),8.58(d,J=17.9Hz,2H),8.21(d,J=8.9Hz,1H),8.14–8.05(m,2H),7.70(d,J=8.6Hz,1H),3.35–3.32(m,4H),3.28(s,6H),3.20–3.15(m,4H)。
实施例36:
6-(5-氟-2-((5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺(I-36)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为52%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(d,J=1.8Hz,1H),8.38(dd,J=6.3,2.4Hz,2H),8.23(d,J=2.3Hz,1H),8.16–8.14(m,2H),7.71(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),7.65(d,J=8.6Hz,1H),3.49(s,2H),3.27(s,6H),2.68–2.54(m,9H),1.05(d,J=6.5Hz,6H)。
实施例37:
6-(5-氟-2-((5-((4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺(I-37)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为43%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44–8.35(m,3H),8.21(d,J=7.7Hz,1H),8.16–8.07(m,2H),7.71(s,1H),7.66–7.61(m,1H),3.55(s,2H),3.29–3.25(m,10H),2.79(s,3H),2.63–2.57(m,4H)。
实施例38:
乙基4-((6-((4-(2-(二甲胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(I-38)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为53%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44–8.36(m,3H),8.31–8.23(m,2H),8.15(d,J=8.3Hz,1H),7.73(s,1H),7.65(d,J=8.3Hz,1H),4.13(q,J=7.1Hz,2H),3.52–3.49(m,6H),3.27(s,6H),2.46–2.41(m,4H),1.26(t,J=7.3Hz,3H)。
实施例39:
(6-((4-(2-(二甲胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(4-异丙基哌嗪-1-基)甲酮(I-39)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为44%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.73(s,1H),8.52–8.48(m,2H),8.45–8.44(m,2H),8.16–8.13(m,1H),7.85(dd,J=8.7,2.4Hz,1H),7.65(d,J=8.6Hz,1H),3.75–3.63(m,4H),3.27(s,6H),2.79–2.75(m,1H),2.62–2.55(m,4H),1.08(d,J=6.5Hz,6H)。
实施例40:
叔丁基4-(6-((4-(2-(二甲胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(I-40)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为40%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),8.36–8.33(m,2H),8.25(s,1H),8.14(dd,J=8.7,1.6Hz,1H),8.00(d,J=2.8Hz,1H),7.64(dd,J=8.6,1.2Hz,1H),7.40(dd,J=9.3,2.9Hz,1H),3.61(t,J=5.0Hz,4H),3.27(s,3H),3.09(t,J=5.0Hz,4H)。
实施例41:
6-(5-氟-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)-N,N-二甲基苯并噻唑-2-胺盐酸盐(I-41)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),9.77(s,2H),8.81(d,J=3.5Hz,1H),8.57(d,J=1.8Hz,1H),8.28(dd,J=9.7,2.8Hz,1H),8.12–8.05(m,1H),8.02(d,J=2.9Hz,1H),7.82(d,J=9.6Hz,1H),7.69(d,J=8.6Hz,1H),3.49(t,J=5.1Hz,4H),3.27(s,6H),3.25–3.23(m,4H)。
实施例42:
(6-((4-(2-(二乙胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(I-42)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为44%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.56(s,1H),8.50(d,J=8.7Hz,1H),8.47(d,J=2.3Hz,1H),8.43–8.41(m,2H),8.13(dd,J=8.7,1.7Hz,1H),7.84(dd,J=8.7,2.4Hz,1H),7.62(d,J=8.6Hz,1H),3.80–3.60(m,8H),2.54–2.47(m,6H),1.33(t,J=7.1Hz,6H),1.13(t,J=7.1Hz,3H)。
实施例43:
N,N-二乙基-6-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)胺)-5-氟嘧啶-4-基苯并噻唑-2-胺(I-43)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为38%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(s,1H),8.43–8.39(m,3H),8.29(d,J=2.3Hz,1H),8.15–8.12(m,1H),7.71(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),7.62(d,J=8.6Hz,1H),3.63(q,J=7.2Hz,4H),3.50(s,2H),2.53–2.42(m,10H),1.33(t,J=7.1Hz,6H),1.10(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例44:
叔丁基4-((6-((4-(2-(二乙胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(I-44)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为48%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(s,1H),8.43–8.39(m,3H),8.26(d,J=2.2Hz,1H),8.15–8.12(m,1H),7.73(d,J=8.2Hz,1H),7.62(d,J=8.6Hz,1H),3.63(q,J=7.1Hz,4H),3.51(s,2H),3.46–3.44(m,4H),2.44–2.41(m,4H),1.46(s,9H),1.33(t,J=7.1Hz,6H)。
实施例45:
N,N-二乙基-6-(5-氟-2-((5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)苯并噻唑-2-胺盐酸盐(I-45)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(s,1H),9.94(s,2H),8.80(d,J=3.6Hz,1H),8.65(d,J=2.2Hz,1H),8.56(d,J=1.8Hz,1H),8.42(dd,J=8.9,2.2Hz,1H),8.11–8.08(m,1H),8.01(d,J=8.9Hz,1H),7.65(d,J=8.6Hz,1H),4.51(s,2H),3.63(q,J=7.1Hz,4H),3.50–3.44(m,8H),1.26(t,J=7.1Hz,6H)。
实施例46:
叔丁基4-(6-((4-(2-(二乙胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)烟碱酰基)哌嗪-1-羧酸酯(I-46)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为40%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.99(s,1H),8.53(dd,J=8.7,0.8Hz,1H),8.51(dd,J=2.4,0.9Hz,1H),8.45(d,J=3.8Hz,1H),8.42(d,J=1.9Hz,1H),8.15–8.12(m,1H),7.84(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.64(d,J=8.6Hz,1H),3.67–3.61(m,8H),3.50–3.47(m,4H),1.48(s,9H),1.34(t,J=7.1Hz,6H)。
实施例47:
(6-((4-(2-(二乙胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(哌嗪-1-基)甲酮(I-47)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.78(s,1H),10.03(s,1H),9.88(s,2H),8.83(d,J=3.6Hz,1H),8.60(d,J=1.8Hz,1H),8.58(d,J=2.1Hz,1H),8.23(dd,J=8.9,2.2Hz,1H),8.13–8.07(m,2H),7.71(d,J=8.6Hz,1H),3.86–3.78(m,3H),3.67(q,J=7.1Hz,4H),3.19–3.15(m,3H),1.27(t,J=7.1Hz,6H)。
实施例48:
N,N-二乙基-6-(5-氟-2-((5-((4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)苯并噻唑-2-胺(I-48)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为44%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.92(s,1H),8.44–8.42(m,3H),8.32–8.21(m,1H),8.13(d,J=8.6Hz,1H),7.70(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),7.62(d,J=8.7Hz,1H),3.63(q,J=7.2Hz,4H),3.52(s,2H),3.25(t,J=4.8Hz,3H),2.78(s,3H),2.58(t,J=4.7Hz,4H),1.33(t,J=7.1Hz,6H)。
实施例49:
乙基4-((6-((4-(2-(二乙胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸酯(I-49)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为50%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.82(s,1H),8.45–8.42(m,3H),8.30(d,J=2.2Hz,1H),8.13(d,J=8.6Hz,1H),7.74(d,J=8.6Hz,1H),7.62(d,J=8.6Hz,1H),4.13(q,J=7.2Hz,2H),3.63(q,J=7.2Hz,4H),3.53–3.49(m,6H),2.46–2.42(m,4H),1.33(t,J=7.1Hz,6H),1.26(t,J=7.1Hz,3H)。
实施例50:
N,N-二乙基-6-5-氟-2-((5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)苯并噻唑-2-胺(I-50)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为48%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.05(s,1H),8.45–8.40(m,3H),8.32(d,J=2.3Hz,1H),8.14(d,J=8.6Hz,1H),7.71(dd,J=8.7,2.3Hz,1H),7.61(d,J=8.7Hz,1H),3.62(q,J=7.2Hz,4H),3.49(s,2H),2.68–2.55(m,9H),1.32(t,J=7.1Hz,6H),1.05(d,J=6.4Hz,6H)。
实施例51:
(6-((4-(2-(二乙胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)(4-异丙基哌嗪-1-基)甲酮(I-51)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为47%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.69(s,1H),8.60(d,J=2.3Hz,1H),8.54(d,J=8.7Hz,1H),8.50(d,J=3.7Hz,1H),8.41(s,1H),8.12(d,J=8.6Hz,1H),7.86(dd,J=8.7,2.3Hz,1H),7.62(d,J=8.6Hz,1H),3.77–3.59(m,8H),2.78–2.72(m,1H),2.59–2.54(m,4H),1.32(t,J=7.1Hz,6H),1.07(d,J=6.4Hz,6H)。
实施例52:
叔丁基4-(6-((4-(2-(二乙胺)苯并噻唑-6-基)-5-氟嘧啶-2-基)胺)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(I-52)的合成:
参考化合物(I-1)的合成方法,产率为49%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.58(s,1H),8.41(d,J=1.8Hz,1H),8.37(d,J=4.0Hz,1H),8.34(d,J=9.1Hz,1H),8.14–8.10(m,1H),8.06(d,J=2.9Hz,1H),7.61(d,J=8.6Hz,1H),7.38(dd,J=9.1,3.0Hz,1H),3.66–3.58(m,8H),3.09(t,J=5.1Hz,4H),1.49(s,9H),1.32(t,J=7.1Hz,6H)。
实施例53:
N,N-二乙基-6-(5-氟-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺)嘧啶-4-基)苯并噻唑-2-胺盐酸盐(I-53)的合成:
参考化合物(I-4)的合成方法,产率为100%。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),10.04(s,2H),8.79(s,1H),8.57(s,1H),8.34(d,J=9.3Hz,1H),8.08–8.05(m,2H),7.87(d,J=8.9Hz,1H),7.71(d,J=8.4Hz,1H),3.69–3.67(m,4H),3.56–3.53(m,4H),3.27–3.23(m,4H),1.30–1.25(m,6H)。
上述实施例中对应的药学上可接受的盐通过将主产物溶于二氯甲烷中,0℃条件下通入HCl气体反应2h。反应结束后,浓缩得到其盐酸盐。
三、生物学评价实验
(1)CDK6激酶活性分析检测方法
本实验采用PerkinElmer公司的Lance Ultra方法进行检测。在检测板中,将蛋白激酶、Ulight标记的多肽底物、ATP及化合物混合,并孵育反应。之后,加入EDTA终止反应,并加入铕(Eu)螯合物标记的抗体进行检测。本实验采用PerkinElmer公司的Envision仪器进行分析,模式为TR-FRET。在320/340nm波长激发后,可以发射665nm和615nm波长的荧光信号。Eu可以至能量转移至相邻的荧光物质ULight受体上,再对该发射光进行检测。
测得的IC50值如下表1,从实验结果可以看出,本发明实例化合物对CDK6激酶活性具有很强的抑制活性。
表1本发明化合物对CDK6激酶活性的IC50测量值
实施例 |
IC50(nM) |
实施例 |
IC50(nM) |
实施例 |
IC50(nM) |
1 |
144 |
19 |
96 |
37 |
>10000 |
2 |
244 |
20 |
>10000 |
38 |
>1000 |
3 |
272 |
21 |
201 |
39 |
57 |
4 |
268 |
22 |
>10000 |
40 |
>1000 |
5 |
111 |
23 |
116 |
41 |
61 |
6 |
104 |
24 |
>10000 |
42 |
14 |
7 |
>10000 |
25 |
>10000 |
43 |
15 |
8 |
129 |
26 |
>1000 |
44 |
>1000 |
9 |
>1000 |
27 |
139 |
45 |
45 |
10 |
169 |
28 |
132 |
46 |
443 |
11 |
175 |
29 |
74 |
47 |
39 |
12 |
127 |
30 |
254 |
48 |
>10000 |
13 |
210 |
31 |
18 |
49 |
>10000 |
14 |
>10000 |
32 |
>10000 |
50 |
31 |
15 |
464 |
33 |
59 |
51 |
8 |
16 |
86 |
34 |
>10000 |
52 |
>10000 |
17 |
93 |
35 |
41 |
53 |
23 |
18 |
90 |
36 |
142 |
/ |
/ |
(2)DYRK2激酶活性分析检测方法
本发明中的化合物对DYRK2激酶抑制活性的进行测定。方法简述如下(具体方法参见:Banerjee S,Wei T,Wang J,et al.Inhibition of dual-specificity tyrosinephosphorylation-regulated kinase 2perturbs 26S proteasome-addicted neoplasticprogression[J].Proceedings of the National Academy of Sciences,2019,116(49):24881-24891):
1)在384孔实验板上加入不同浓度的化合物,复孔,之后加入DYRK2蛋白,底物Woodtide(KKISGRLSPIMTEQ)和33P-γATP,混合均匀;
2)室温孵育30分钟;
3)0.5M(3%)正磷酸溶液终止反应,然后转移到P81板上,再用50mM的正磷酸溶液洗涤;
4)IC50结果用GraphPad Prism软件计算。
测得的IC50值如下表2,从实验结果可以看出,本发明实例化合物对DYRK2激酶活性具有很强的抑制活性。
表2本发明化合物对DYRK2激酶活性的IC50测量值
实施例 |
IC50(nM) |
实施例 |
IC50(nM) |
实施例 |
IC50(nM) |
1 |
35 |
29 |
106 |
43 |
197 |
8 |
85 |
31 |
9 |
45 |
290 |
11 |
263 |
39 |
16 |
47 |
39 |
17 |
27 |
42 |
14 |
51 |
15 |
(3)对多种癌细胞增殖抑制作用测定
化合物对人乳腺癌(MCF-7、三阴性乳腺癌MDA-MB-231)细胞系、多发性骨髓瘤(RPMI8226)细胞系、白血病(K562)细胞系、胃癌(MGC-803)细胞系、卵巢癌(SK-OV-3)细胞系、结肠癌(HT-29)细胞系、肝癌(HepG2)细胞系、胰腺癌(Panc-1)细胞系、人神经胶质瘤(U251)细胞系、肺癌(A-549、非小细胞肺癌NCI-H1299)细胞系和前列腺癌(PC-3、Du-145)细胞系等14种细胞增殖抑制作用通过以下的方法进行测试。
实验步骤:
按照MTT法进行测定化合物对多种癌细胞增殖的抑制作用,并得出化合物抑制细胞增殖活性的半数抑制浓度IC50。
1)将对数生长期细胞以1×105cells/孔接种于96孔板,置于37℃,5%CO2条件下培养,直至细胞90%融合后,用无血清的DMEM培养基或RPMI-1640培养基或L-15培养基或F12K培养基或MEM培养基或F-12培养基或IMDM培养基孵育2h使细胞同步化(每种细胞采用对应的培养基);
2)向培养板加入梯度稀释的不同浓度的待测化合物溶液100μL,将培养板在37℃,5%CO2培养箱条件下孵育72小时;
3)孵育结束前4h,每孔加入20μL MTT溶液(5mg/mL)。孵育结束后,弃去各孔上清液,每孔加入150μL DMSO,细胞振荡仪上振荡10min,待结晶物充分溶解后用酶标仪测定OD570,抑制率=(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值×100%;
4)得出数据后,GraphPad Prism 6拟合得出IC50。
实施例31的化合物(I-31)和上市药物CDK4/6抑制剂Palbociclib对多种癌症细胞增殖活性的试验进行测定,测得的IC50值见表3。可以看出化合物I-31对人乳腺癌(MCF-7、三阴性乳腺癌MDA-MB-231)细胞系、多发性骨髓瘤(RPMI8226)细胞系、白血病(K562)细胞系、胃癌(MGC-803)细胞系、卵巢癌(SK-OV-3)细胞系、结肠癌(HT-29)细胞系、肝癌(HepG2)细胞系、胰腺癌(Panc-1)细胞系、人神经胶质瘤(U251)细胞系、肺癌(A-549、非小细胞肺癌NCI-H1299)细胞系和前列腺癌(PC-3、Du-145)细胞系等14种细胞增殖抑制作用,并且对于这14种细胞的增殖抑制作用都明显强于上市药物CDK4/6抑制剂Palbociclib。
表3化合物(I)对多种癌症细胞增殖活性抑制IC50
(4)化合物急性毒性测定
受试动物:ICR小鼠;18-22g;雌雄各半;共40只。
组别剂量设置:(1)对照组:灌胃等量生理盐水,给药1次,10只小鼠,雌雄各半;(2)2500mg/kg组:灌胃药物,给药1次,10只小鼠,雌雄各半;(3)5000mg/kg组:灌胃药物,给药1次,10只小鼠,雌雄各半;(4)10000mg/kg组:灌胃药物,给药1次,10只小鼠,雌雄各半。
表4组别剂量设置
试验室环境:室温24±2℃,相对湿度60~70%。观察指标:将受试药物(实施例31所制得的化合物)按表4的剂量给药1次,记录小鼠中毒症状及死亡情况,死亡动物进行尸检。观察期为14天。结果表明:各组小鼠给药后12h之内,动物未见异常。给药24h内未见动物死亡,给药第14天后动物未见死亡。未见其他明显异常。
体重变化如图1,与对照组相比,灌胃给予2500mg/kg,5000mg/kg,10000mg/kg未见明显毒性反应。
HE染色结果如图2,实施例31所制得的化合物(I-31)对心、肝、脾、肺、肾等主要器官未见明显毒性。
(5)化合物药代动力学测定
称取供试品置于无菌小瓶中,加入250μLDMSO,再加入10μL甲磺酸,溶解后,加入4.78mL 5%葡萄糖注射液,超声、振荡混匀,配制成2mg/mL的供试品溶液,以此溶液作为灌胃给药制剂。另外,取0.5mL 2mg/mL的供试品溶液,加入4.5mL的5%葡萄糖注射液,振荡混匀,配制成0.2mg/mL的供试品溶液,作为静脉注射给药制剂。
将6只SD大鼠分为两组,分别尾静脉注射(1mg/kg)和灌胃(10mg/kg)给予实施例31,静脉注射组于给药后2min、5min、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、12h;灌胃组于给药后5min、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h自眼眶后静脉丛采集血样约0.25mL。采用LC-MS/MS法测定SD大鼠血浆样本中实施例31的浓度,用WinNolin软件计算药代动力学参数,结果如表5。
结果表明,本发明实施例31的化合物(I-31)在大鼠体内代谢较好,有较好的吸收和暴露量,生物利用度较高。
表5药代动力学参数记录
(6)化合物抗肺癌活性测定
药物为实施例31所制得的化合物(I-31)与上市药物CDK4/6抑制剂Palbociclib。细胞株为人非小细胞肺癌细胞株A-549于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养。受试动物为SPF级BALB/c裸小鼠;雄性;每组5只。药物剂量设置如表6。
表6药物剂量配置
药物配制方法:
实施例31(150mg/kg):称取30mg待测试化合物粉末溶于2mL生理盐水,配成浓度为15mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL20g。
实施例31(300mg/kg):称取60mg待测试化合物粉末溶于2ml生理盐水,配成浓度为30mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL/20g。
Palbociclib(150mg/kg):称取30mg待测试化合物粉末溶于2mL生理盐水,配成浓度为15mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL/20g。
实验方法:人肺癌裸鼠移植瘤模型,由人肺癌细胞株A549接种于裸鼠腋窝皮下而建立。取对数生长期的A549细胞,在无菌条件下,接种于30只裸小鼠右侧腋窝皮下,细胞接种量为5×106个/只。用游标卡尺测量移植瘤直径,待肿瘤生长至80mm3左右时挑选生长状态良好且肿瘤大小均一的荷瘤裸鼠20只,随机分成4组,每组5只,即模型组、实施例31(150mg/kg)低剂量组、实施例31(300mg/kg)高剂量组,阳性药Palbociclib(150mg/kg)组。受试药实施例31低剂量和高剂量组、阳性药组Palbociclib均灌胃给药,2天给药一次,模型组灌胃给予等容量的溶媒对照。使用测量瘤径的方法,动态观察受试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为隔天一次,测量肿瘤直径的同时称量裸鼠体重。第22天时处死小鼠,手术剥取瘤块分别使用10%甲醛固定、液氮保存备用。
实验结果显示:受试药实施例31(150mg/kg)低剂量组、实施例31(300mg/kg)高剂量组与模型组对比相对肿瘤增殖率T/C(%)分别44.8%,35.9%,肿瘤生长抑制率分别为55.2%、64.1%。阳性药Palbociclib以150mg/kg剂量灌胃给药,相对肿瘤增殖率T/C(%)为39.6%,抑瘤率为60.4%。
因此,实施例31制得的受试药对人肺癌A549裸鼠异种移植瘤生长有明显的抑制作用,且效果好于阳性对照药物Palbociclib。
(7)化合物抗前列腺癌(PC3)活性测定
药物为实施例31所制得的化合物(I-31)与上市药物CDK4/6抑制剂Palbociclib。细胞株为人前列腺癌PC-3细胞。受试动物为SPF级BALB/c裸小鼠;雄性;每组8只。药物剂量设置如表7。
表7药物剂量配置
药物配制方法:
实施例31(100mg/kg):称取20mg待测试化合物粉末溶于2mL生理盐水,配成浓度为10mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL20g。
实施例31(200mg/kg):称取40mg待测试化合物粉末溶于2mL生理盐水,配成浓度为20mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL20g。
Palbociclib(100mg/kg):称取20mg待测试化合物粉末溶于2mL生理盐水,配成浓度为10mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL20g。
实验方法:人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,由人前列腺癌PC-3细胞接种于裸鼠腋窝皮下而建立。取对数生长期的PC-3细胞,在无菌条件下,接种于40只裸小鼠右侧腋窝皮下,细胞接种量为5×106个/只。用游标卡尺测量移植瘤直径,待肿瘤生长至90mm3左右时挑选生长状态良好且肿瘤大小均一的荷瘤裸鼠32只,随机分成4组,每组8只,即模型组、实施例31(100mg/kg)低剂量组、实施例31(200mg/kg)高剂量组,阳性药Palbociclib(100mg/kg)组。受试药实施例31低剂量和高剂量组、阳性药组Palbociclib均灌胃给药,每天给药一次,模型组灌胃给予等容量的溶媒对照。使用测量瘤径的方法,动态观察受试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为隔天一次,测量肿瘤直径的同时称量裸鼠体重。第29天时处死小鼠,手术剥取瘤块分别使用10%甲醛固定、液氮保存备用。
实验结果显示:受试药实施例31(100mg/kg)低剂量组、实施例31(200mg/kg)高剂量组与模型组对比相对肿瘤增殖率T/C(%)分别35.7%,23.4%,肿瘤生长抑制率分别为64.3%、76.6%。阳性药Palbociclib以100mg/kg剂量灌胃给药,相对肿瘤增殖率T/C(%)为35.5%,抑瘤率为64.5%。
因此,实施例31制得的受试药对人前列腺癌PC3裸鼠异种移植瘤生长有明显的抑制作用,且效果好于阳性对照药物Palbociclib。
(8)化合物抗前列腺癌(Du-145)活性测定
药物为实施例31所制得的化合物(I-31),上市药物CDK4/6抑制剂Palbociclib和前列腺癌一线治疗药物Enzalutamide。细胞株为人前列腺癌Du-145细胞。受试动物为SPF级BALB/c裸小鼠;雄性;每组10只。药物剂量设置如表8。
表8药物剂量配置
药物配制方法:
实施例31(100mg/kg):称取20mg待测试化合物粉末溶于2mL生理盐水,配成浓度为10mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL/20g。
实施例31(200mg/kg):称取40mg待测试化合物粉末溶于2mL生理盐水,配成浓度为20mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL/20g。
Palbociclib(100mg/kg):称取20mg待测试化合物粉末溶于2mL生理盐水,配成浓度为10mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL/20g。
Enzalutamide(100mg/kg):称取20mg待测试化合物粉末溶于2mL生理盐水,配成浓度为10mg/mL药物,口服灌胃给药,给药体积为0.2mL/20g。
实验方法:人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,由人前列腺癌Du-145细胞接种于裸鼠腋窝皮下而建立。取对数生长期的Du-145细胞,在无菌条件下,接种于60只裸小鼠右侧腋窝皮下,细胞接种量为5×106个/只。用游标卡尺测量移植瘤直径,待肿瘤生长至90mm3左右时挑选生长状态良好且肿瘤大小均一的荷瘤裸鼠50只,随机分成5组,每组10只,即模型组、实施例31(100mg/kg)低剂量组、实施例31(200mg/kg)高剂量组,阳性药Palbociclib(100mg/kg)组,阳性药Enzalutamide(100mg/kg)组。受试药实施例31低剂量和高剂量组、阳性药组Palbociclib、阳性药组Enzalutamide均灌胃给药,每天给药一次,模型组灌胃给予等容量的溶媒对照。使用测量瘤径的方法,动态观察受试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为隔天一次,测量肿瘤直径的同时称量裸鼠体重。第35天时处死对照组小鼠,手术剥取瘤块分别使用10%甲醛固定、液氮保存备用。第49天时处死剩余小鼠,手术剥取瘤块分别使用10%甲醛固定、液氮保存备用。
实验结果如图3所示:受试药实施例31(100mg/kg)低剂量组对肿瘤生长的抑制优于阳性药Palbociclib(100mg/kg)组,受试药实施例31(100mg/kg)低剂量组和阳性药Enzalutamide(100mg/kg)组对肿瘤生长的抑制效果相似,实施例31(200mg/kg)高剂量组明显抑制肿瘤的生长,对肿瘤生长的抑制优于阳性药Palbociclib(100mg/kg)组和阳性药Enzalutamide(100mg/kg)组,并且在第31天开始使肿瘤体积减小。
因此,实施例31制得的受试药对人前列腺癌Du-145裸鼠异种移植瘤生长有明显的抑制作用,且效果好于阳性对照药物CDK4/6抑制剂Palbociclib和前列腺癌一线治疗药物Enzalutamide。