CN104910137B - Cdk激酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及通式(Ⅰ)所示的CDK激酶抑制剂、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中R1、R2、R3、R4、R5、n如说明书中所定义。本发明还涉及这些化合物的制备方法，含有这些化合物的药物制剂和药物组合物，以及该化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体在制备治疗和/或预防由CDK激酶介导的癌症相关疾病的药物中的应用。

Description

CDK激酶抑制剂
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及CDK激酶抑制剂、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，含有这些化合物的药物制剂和药物组合物，以及该化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，在制备治疗和/或预防由CDK激酶介导的癌症相关疾病的药物中的应用。
背景技术
细胞周期依赖性蛋白激酶(Cyclin-Dependent-Kinases，CDKs)，是一组丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，CDK通过对丝氨酸/苏氨酸蛋白的化学作用驱动细胞周期，和周期蛋白cyclin协同作用，是细胞周期调控中的重要因子。CDK可以和cyclin结合形成异二聚体，其中CDK为催化亚基，cyclin为调节亚基，不同的cyclin-CDK复合物，通过CDK活性，催化不同底物磷酸化，而实现对细胞周期不同时相的推进和转化作用。CDK的活性依赖于其正调节亚基cyclin的顺序性表达和其负调节亚基CDI(cyclin dependent kinase inhibitor，CDK抑制因子)的浓度。同时，CDK的活性还受到磷酸化和去磷酸化，以及癌基因和抑癌基因的调节。很多疾病与由上述蛋白激酶-介导的事件触发的异常细胞应答相关。这些疾病包括但不限于自身免疫性疾病、炎性疾病、骨疾病、代谢性疾病、神经疾病和神经变性疾病、癌症、心血管疾病、变态反应和哮喘、阿尔茨海默病、病毒性疾病和激素相关疾病。因此，为寻找作为治疗剂有效的蛋白激酶抑制剂，CDK已经成为研究的热门靶点。
CDK家族目前有13个成员(CDK1～CDK13)，根据其细胞内功能不同，分为两大类：控制细胞周期的CDKs(CDK1、CDK2、CDK4、CDK6等)和控制转录的CDKs(CDK7、CDK9等)。周期蛋白有11种亚型，分别以A-I，k和T命名，他们的表达均受转录调控，在细胞周期中呈规律性波动。在参与细胞周期的CDK亚型中，CDK4/6发挥着不可替代的作用。与癌症有关的细胞周期突变主要存在于G1期和G1/S期转化过程中，CDK4/6与CyclinD结合形成有激酶活性的复合物，通过是抑癌基因Rb产物pRb磷酸化，释放结合的转录因子E2F，启动与S期有关的基因转录，促使细胞通过检验点，并从G1期向S期转移。CDK4/6特异性的激活与一些肿瘤的增殖密切相关，大约80%的人类肿瘤中有cyclin D-CDK4/6-INK4-Rb通路的异常。这条通路的改变，加速了G1期进程，使得肿瘤细胞增殖加快而获得生存优势。因此，对其干预成为一种治疗策略，CDK4/6因此成为抗肿瘤的靶点之一。
CDK9跟其它CDK一样，是一种丝/苏氨酸激酶，最早是在人类cDNA文库筛选中发现，它与对应cyclin(s)结合形成正性转录延长因子b(Positivetranseriptionelongationfaetorb，p-TEFb)。该复合物能够磷酸化RNA聚合酶II(RNApolymeraseII)和一些负性转录延长因子从而使转录从起始部位得以延伸。CDK9/cyclinT的异常表达与很多疾病的发生有密切关系。cyclinT1/CDK9与雌激素受体阳性乳腺癌细胞，在这类细胞中雌激素能够下调HEXIMI的表达，HEXIMI也被称为雌激素下调基因(EDGI)，HEXIMI/EDG1既能与雌激素受体结合，又能与cyclinT1结合。在乳腺细胞过表达HEXIMI/EDGI时能够抑制细胞增殖和生长。同时考虑到HEXIMI在细胞中能够抑制P-TEFb的激酶活性，并且可在多种赘生性细胞中利用六亚甲基二乙酸胺(HMBA)诱导表达，细胞内cyclinT1/CDK9活性水平影响了肿瘤细胞的成瘤能力。在淋巴瘤细胞，在T细胞周期激活时发现cyclinT1/CDK9含量发生上调,而cyclinT1/CDK9表达的上调影响这类细胞的激活与分化。除了在肿瘤方面的功能，cyclinT1/CDK9形成的复合物是HIV-1Tat蛋白的主要靶点，Tat能与P-TEFb的CyclinT1亚基的结合而形成Tat-cyclinT1-CDK9复合物，通过CDK9激酶活性磷酸化RNApolymeraseII及N-TEF，使HIV-1的转录得以完成。药理学研究发现CDK9的抑制性化合物能够有效抑制HIV-1的转录和复制。除此之外CDK9在抗炎、镇痛、心肌肥大等方面都有显著的生物学功能。
CDKs是肿瘤治疗颇具潜力的的靶点。目前报道过50种以上的CDK抑制剂，其中一些具有潜在的抗肿瘤活性，某些广谱CDK抑制剂已经被开发为抗肿瘤药物，另有一些正在进行临床前或临床实验，而新的CDK抑制剂也在不断被研发。目前针对CDK的抑制剂，Flavopiridol(夫拉平度)，又称为L86-8275或HMR1275，它是第一代CDK抑制剂的代表，因为药效不明显而且显示较高毒性而一直未能进入Ⅲ期临床。
目前，包括辉瑞，礼来和诺华等在内的一些医药公司陆续报道一系列选择性较好的CDK抑制剂，正在临床试验阶段。其中，特别值得关注的是辉瑞公司开发的PD0332991(Palbociclib)和礼来公司的LY2835219。
体外实验中，PD0332991不仅能抑制荷瘤小鼠肿瘤(包括乳腺癌，肺癌，结肠癌等)的生长，还能使肿瘤退缩，并且毒副作用小。但是这种抑制作用依赖于Rb基因的存在，如果肿瘤细胞本身缺失Rb基因，则CDK抑制剂对其无效。PD0332991目前已经进入Ⅲ期临床实验阶段，I期试验显示中性粒细胞减少是最重要的副作用。II期试验涉及多种类型的肿瘤，如乳腺癌，脂肪肉瘤，非小细胞肺癌，肝癌，卵巢癌，胶质母细胞瘤，套细胞淋巴瘤等。2013年4月，辉瑞的CDK抑制剂PD0332991在乳腺癌的临床试验中良好的表现，使其获得FDA重大突破药物认定。这对CDK抑制剂的开发起着非常正面的作用。LY2835219是一种口服有效的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，靶向作用于CDK4(cyclin D1)和CDK6(cyclin D3)细胞周期通路，具有潜在的抗肿瘤活性。LY2835219特异性抑制CDK4/6，从而在早G1期抑制视网膜母细胞瘤(Rb)蛋白磷酸化。抑制Rb磷酸化，防止CDK介导的G1-S期转换，从而使细胞周期停滞在G1期，抑制DNA合成，且抑制癌细胞生长。某些类型的癌症中丝/苏氨酸激酶CDK4/6的过表达，导致细胞周期调节失控。
与PD0332991相比，LY2835219可以透过血脑屏障，在人类胶质母细胞瘤皮下和颅内模型(U87MG)中，LY2835219无论是单独用药还是和替莫唑胺联用，都能以剂量依赖的方式抑制肿瘤的生长。目前，该靶点处于世界前沿，国内处于早期研究阶段，因此CDK靶向小分子抑制剂具有很高的开发价值，发展空间大，对于我们在该领域内探索新的抗肿瘤药物具有重大的意义。
因为CDKs在所有细胞包括健康和肿瘤细胞的增殖与死亡中所起的关键作用，广谱的CDK抑制剂，尤其是针对未经过基因筛选的患者很难展现较高的治疗窗口。剂量大了毒性太高，而小了又没有药效。所以选择地抑制部分CDK就变得格外重要。鉴于CDK4/6与CDK9在肿瘤信号通路上的不同功能，我们相信二者协同作用抑制剂能够取得更好的疗效。目前并未有CDK4/6/9类化合物的公开报道，因此开发CDK4/6/9抑制剂具有很好的前景，对于我们在该领域内探索新的抗肿瘤药物具有重大的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一类靶向CDK4/6/9激酶抑制剂，具体的技术方案为如下：
1.下述式(Ⅰ)所示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
其中
R1选自C1-6烷基或任选被Q1取代的3～8元环烷基，Q1选自C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R2选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基、氨基甲酰基或C1-6烷基羰基氨基；
R3和R5分别独立的选自卤素、氢、羟基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或C1-6烷基羰基，且R3和R5至少一个为卤素；
R4选自任选被Q2取代的3～8元杂环基、6～14元稠杂环基、5～8元杂芳基、6～14元稠杂芳基、苯基、萘基、6～12元桥杂环基或6～12元螺杂环基；
n为0～3；
Q2选自氨基、羟基、卤素、三氟甲基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、3～8元杂环基或6～9元桥杂环基。
2.上述1中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
R1选自C1-4烷基或C1-4烷氧基；
R2选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、氰基、氨基甲酰基或C1-4烷基羰基氨基；
R3和R5分别独立的选自卤素；
R4选自任选被Q2取代的4～7元杂环基、6～11元稠杂环基、6～11元桥杂环基或6～11元螺杂环基；
n为0～3；
Q2选自氨基、羟基、三氟甲基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、5～6元杂环基或7～9元桥杂环基。
3.上述2中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
R1是异丙基；
R2选自甲基、甲氧基、氰基、氨基甲酰基或乙酰氨基；
R3和R5各自是氟；
n为1；
R4选自任选被Q2取代的4～6元杂环基，Q2选自氨基、羟基、三氟甲基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、6元杂环基或8元桥杂环基。
4.上述3中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
R4选自任选被Q2取代的Q2选自C1-4烷基或8元桥杂环基。
5.上述2中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
R1是异丙基；
R2选自甲基、甲氧基、氰基、氨基甲酰基或乙酰氨基；
R3和R5各自是氟；
n为1；
R4选自任选被Q2取代的7～9元桥杂环基，Q2选自氨基、羟基、三氟甲基、氰基、C1-4烷基、6元杂环基或8元桥杂环基。
6.上述5中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
R4选自任选被Q2取代的Q2选自C1-4烷基或6元杂环基。
7.上述2中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
R1是异丙基；
R2选自甲基、甲氧基、氰基、氨基甲酰基或乙酰氨基；
R3和R5各自是氟；
n为1；
R4选自任选被Q2取代的6～10元稠杂环基，Q2选自氨基、羟基、三氟甲基、氰基、C1-4烷基、6元杂环基或8元桥杂环基。
8.上述7中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
R4选自任选被Q2取代的Q2选自氨基或C1-4烷基。
9.上述2中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
R1是异丙基；
R2选自甲基、甲氧基、氰基、氨基甲酰基或乙酰氨基；
R3和R5各自是氟；
n为1；
R4选自任选被Q2取代的7～11元螺杂环基，Q2选自氨基、羟基、三氟甲基、氰基、C1-4烷基、6元杂环基或8元桥杂环基。
10.上述9中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体，其中，
R4选自任选被Q2取代的Q2选自C1-4
烷基。
表1本发明的部分化合物
发明详述
本发明所述的“卤素原子”包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。
本发明所述的“C1-6烷基”可以为直链或支链状，包括例如“C1-4烷基”、“C1-3烷基”等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-甲基丙基、1-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。
本发明所述的“C1-6烷氧基、C1-6烷基羰基、C1-6烷基羰基氨基”是指以C1-6烷基-O-、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)NH-方式形成的基团，其中“C1-6烷基”的定义如前文所述。
本发明所述的“C1-4烷氧基、C1-4烷基羰基氨基”是指以C1-4烷基-O-、C1-4烷基-C(O)NH-、方式形成的基团，其中“C1-4烷基”的定义如前文所述。
本发明所述的“3～8元环烷基”，是指3～8个碳原子的烷烃部分去除一个氢原子衍生的环状烷基，包括例如“3～6元环烷基”、“4～6元环烷基”等。其实例包括但不限于：环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、环辛烷基等。
本发明所述的“3～8元杂环基”，包括例如“3～7元杂环基”、“3～6元杂环基”、“4～7元杂环基”、“4～6元杂环基”、“5～7元杂环基”、“5～6元杂环基”、“6元杂环基”等。具体实例包括但不仅限于：氮杂环丙烷基、2H-氮杂环丙烷基、二氮杂环丙烷基、3H-二氮杂环丙烯基、氮杂环丁烷基、1,4-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、1,4-二氧杂环己二烯基、四氢呋喃基、二氢吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氢咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氢吡唑基、2,5-二氢噻吩基、四氢噻吩基、4,5-二氢噻唑基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基基、4,5-二氢噁唑基、4,5-二氢异噁唑基、2,3-二氢异噁唑基、2H-1,2-噁嗪基、6H-1,3-噁嗪基、4H-1,3-噻嗪基、6H-1,3-噻嗪基、2H-吡喃基、2H-吡喃-2-酮基、3,4-二氢-2H-吡喃基等，优选为“5-6元杂环基”。
本发明所述的“6～14元稠杂环基”，包括例如“6～11元稠杂环基”、“6～10元稠杂环基”、“7～10元稠杂环基”、“9～10元稠杂环基”等。具体实例包括但不仅限于：四氢咪唑并[4,5-c]吡啶基、3,4-二氢喹唑啉基、1,2-二氢喹喔啉基、苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯基、1,3-二氢异苯并呋喃基、2H-色原烯基、2H-色原烯-2-酮基、4H-色烯基、4H-色烯-4-酮基、色满基、4H-1,3-苯并噁嗪基、4,6-二氢-1H-呋喃并[3,4-d]咪唑基、3a,4,6,6a-四氢-1H-呋喃并[3,4-d]咪唑基、4,6-二氢-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑基、4,6-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]咪唑基、4,5,6,7-四氢-1H-苯并[d]咪唑基等。
本发明所述的“5～8元杂芳基”，包括例如“5～7元杂芳基”、“5～6元杂芳基”等。具体实例包括但不仅限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮、4-吡啶酮、嘧啶基、1,4-二氧杂环己二烯基、2H-1,2-噁嗪基、4H-1,2-噁嗪基、6H-1,2-噁嗪基、4H-1,3-噁嗪基、6H-1,3-噁嗪基、4H-1,4-噁嗪基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氮杂环庚三烯基、1,3-二氮杂环庚三烯基、氮杂环辛四烯基等，优选为“5～6元杂芳基”。
本发明所述的“6～14元稠杂芳基”，包括例如“6～10元稠杂芳基”、“7～10元稠杂芳基”、“9～10元稠杂芳基”等。具体实例包括但不限于：苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、喹啉基、2-喹啉酮、4-喹啉酮、1-异喹啉酮、异喹啉基、吖啶基、菲啶基、苯并哒嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、酚嗪基、喋啶基、嘌呤基、萘啶基、吩嗪、吩噻嗪等。
本发明所述的“6～12元桥杂环基”，是指任意两个环共用两个不相邻的原子形成的至少含有一个杂原子的6～12个环原子的环状结构，所述的杂原子选自N、S、O、CO、SO和/或SO2等。其中包括例如“6～11元桥杂环基”、“6～9元桥杂环基”、“7-10元桥杂环基”、“7-9元桥杂环基”、“7-8元桥杂环基”、“8元桥杂环基”等。其实例包括但不限于例如：
本发明所述的“6～12元螺杂环基”，是指至少有两个环共享一个原子形成的至少含有一个杂原子的6～12个环原子的环状结构，所述的杂原子选自N、S、O、CO、SO和/或SO2等。其中包括例如“6～11元螺杂环基”、“7～11元螺杂环基”、“7-10元螺杂环基”、“7-9元螺杂环基”、“7-8元螺杂环基”等。其实例包括但不仅限于例如：
本发明还提供了式(I)化合物的制备方法，但不仅限于下列方法：
下述缩写所代表的定义如下：
工艺路线：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、n如前文所述，X代表卤素，选自氟、氯、溴、碘；卤化试剂
选自：I2、Br2。
方法：
1、中间体1的制备
将原料1和原料2溶于适当有机溶剂中，加入无机碱，加热回流反应过夜，冷却至室温加水淬灭，加入有机溶剂萃取，有机相干燥，浓缩得到中间体1，其中有机溶剂优选乙腈或乙酸乙酯，无机碱优选碳酸钾、碳酸钠或碳酸氢钠。
2、中间体2的制备
取二异丙胺加入到有机溶剂中，将正丁基锂、原料3溶于适当有机溶剂中，氮气保护下将其先后加入到反应体系中，搅拌反应。称取卤化试剂溶于适当有机溶剂中，缓慢滴加到上述反应液中，加入水、饱和硫代亚硫酸钠，分层得有机相，萃取，合并有机相，干燥，分离浓缩后得中间体2，其中有机溶剂优选THF、乙酸乙酯或二氯甲烷。
3、中间体3的制备
将中间体2溶于有机溶剂中，加入氨水搅拌，加入适当有机溶剂，分层得有机相，干燥，分离浓缩后得中间体3，其中有机溶剂优选DMSO、乙酸乙酯或二氯甲烷。
4、中间体4的制备
将原料4、联硼酸频哪醇酯、醋酸钯、三环己基磷、醋酸钾加入到DMSO中，氮气保护下升温反应。加适量水和适当有机溶剂，萃取得有机相，水相用适当有机溶剂洗涤，合并有机相，干燥，分离浓缩后得中间体4，其中有机溶剂优选乙酸乙酯或二氯甲烷。
5、中间体5的制备
将中间体3、中间体4、碳酸铯和四(三苯基膦)钯溶于适当有机溶剂和水，加热过夜反应。加水和适当有机溶剂分离得有机相，干燥，分离浓缩后得中间体5，其中有机溶剂优选二氧六环或乙酸乙酯。
6、式(I)所示化合物的制备
将中间体5、中间体1和2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯、无机碱和三(二亚苄基丙酮)二钯加入到烧瓶中，加入适当有机溶剂，氮气保护下反应完毕，过滤、分离浓缩后得式(I)所示化合物，其中有机溶剂优选1,4-二氧六环或四氢呋喃，无机碱优选碳酸铯。
本发明式(I)所示化合物的“药学上可接受的盐”是指式(I)化合物中存在的酸性官能团(例如-COOH、-OH、-SO3H等)与适当的无机或者有机阳离子(碱)形成的盐，包括与碱金属或碱土金属形成的盐、铵盐，以及与含氮有机碱形成的盐；以及式(I)化合物中存在的碱性官能团(例如-NH2等)与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐，包括与无机酸、与有机羧酸。
本发明式(I)所示化合物的“酯”是指，当式(I)化合物存在羧基时，可以与醇发生酯化反应而形成的酯，当式(I)化合物存在羟基时，可以与有机酸、无机酸、有机酸盐等发生酯化反应而形成的酯。酯在酸或者碱存在的条件下，可以发生水解反应生成相应的酸或醇。
本发明式(I)所示化合物的“溶剂化物”是指其与溶剂分子缔合形成的物质。所述溶剂可以是有机溶剂(例如甲醇、乙醇、丙醇、乙腈等)、水等。例如本发明式(I)化合物可以与乙醇形成乙醇化物，与水形成水合物。
本发明式(I)所示化合物的“立体异构体”是指当式(I)化合物存在不对称碳原子时，会产生对映异构体，当化合物存在碳碳双键或环状结构时，会产生顺反异构体，当化合物存在酮或肟时，会产生互变异构体，所有式(I)化合物的对映异构体、非对映异构体、消旋异构体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物，均包括在本发明范围中。
本发明进一步要求保护包括式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体与一种或多种药用载体和/或稀释剂的药物组合物，可以制成药学上可接受的任一剂型。以口服、肠胃外、直肠或经肺给药等方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服给药时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。用于肠胃外给药时，可制成注射剂，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，可制成栓剂等。用于经肺给药时，可制成吸入剂或喷雾剂等。
本发明进一步要求保护包括式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体与其它一种或多种抗肿瘤剂和免疫抑制剂的药物组合物。所述的抗肿瘤剂和免疫抑制剂，包括但不限于甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特。
本发明还提供了本发明式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体在制备治疗和/或预防由CDK4/6激酶介导的癌症相关疾病的药物中的应用。所述癌症相关的疾病选自脑瘤、肺癌、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、直肠癌、肝癌、肾癌、食管腺癌、食管鳞状细胞癌、前列腺癌、雌性生殖道癌、原位癌、淋巴瘤、神经纤维瘤、甲状腺癌、骨癌、皮肤癌、脑癌、结肠癌、睾丸癌、胃肠道间质瘤、前列腺肿瘤、肥大细胞肿瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、胶质瘤或肉瘤。
本发明化合物具有以下优点：
(1)本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体具有优异的CDK4/6激酶抑制活性；
(2)本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及他们的立体异构体显示出良好的生物稳定性，作用更持久，生物利用度高。
以下通过体外酶学抑制活性实验进一步阐述本发明化合物有益效果，但不应将此理解为本发明化合物仅具有下列有益效果。
实验例1本发明化合物的体外酶学活性实验
测试物：本发明部分化合物，其化学名称和制备方法见各个化合物的制备实施例。
对照药：LY2835219，结构式见背景技术部分，购于武汉永璨生物科技有限公司。
下述中实验的缩写所代表的含义如下：
实验方法：采用Caliper Mobility Shift方法进行CDK4/6/9激酶的抑制活性测定
1.1倍激酶缓冲液配制：
1)1倍CDK4/9激酶缓冲液的配制
分别取母液浓度为1000mM的pH7.5的HEPES、母液浓度为10%的Triton X-100，加入超纯水混匀，使HEPES的终浓度为20mM，Triton X-100的终浓度为0.01%。
2)1倍CDK6激酶缓冲液的配制
分别取母液浓度为1000mM的pH7.5的HEPES、母液浓度为30%的Brij-35，加入超纯水混匀，使HEPES的终浓度为50mM，Brij-35的终浓度为0.0015%。
2.终止液的配制
分别取母液浓度为4%的包被液Coating Reagent#3(Caliper仪器所使用的12-sipper chip中自带包被液)、母液浓度为1000mM pH7.5的HEPES、母液浓度为0.5M的EDTA、母液浓度为30%的Brij-35，加入超纯水混匀，使Coating Reagent#3终浓度为0.2%，HEPES终浓度为100mM，EDTA终浓度为50mM，Brij-35终浓度为0.015%。
3.2.5倍激酶溶液的配制
1)2.5倍CDK4/D3激酶溶液的配制
分别取母液浓度为6.421μM的CDK4/D3酶溶液、母液浓度为1M的DTT，加入1倍CDK4激酶缓冲液混匀，使CDK4/D3酶终浓度为25nM，DTT终浓度为5mM。
2)2.5倍CDK6/D3激酶溶液的配制
分别取母液浓度为9.719μM的CDK6/D3酶溶液、母液浓度为1M的DTT，加入1倍CDK6激酶缓冲液混匀，使CDK6/D3酶终浓度为62.5nM，DTT终浓度为5mM。
3)2.5倍CDK9/T1激酶溶液的配制
分别取母液浓度为7.096μM的CDK9/T1酶溶液、母液浓度为1M的DTT，加入1倍CDK9激酶缓冲液混匀，使CDK9/T1酶终浓度为37.5nM，DTT终浓度为5mM。
4.2.5倍多肽溶液的配制
1)2.5倍CDK4/D3多肽溶液的配制
分别取母液浓度为100mM的ATP溶液、母液浓度为1M的MgCl2，母液浓度为300μMFAM标记的多肽8，加入1倍CDK4激酶缓冲液混匀，使ATP终浓度为552.5μM，MgCl2终浓度为25mM，多肽8终浓度为7.5μM。
2)2.5倍CDK6/D3多肽溶液的配制
分别取母液浓度为100mM的ATP溶液、母液浓度为1M的MgCl2，母液浓度为300μMFAM标记的多肽8，加入1倍CDK6激酶缓冲液混匀，使ATP终浓度为755μM，MgCl2终浓度为25mM，多肽8终浓度为7.5μM。
3)2.5倍CDK9/T1多肽溶液的配制
分别取母液浓度为10mM的ATP溶液、母液浓度为1M的MgCl2，母液浓度为300μMCTD3多肽，加入1倍CDK9激酶缓冲液混匀，使ATP终浓度为57.5μM，MgCl2终浓度为25mM，CTD3多肽终浓度为7.5μM。
5.5倍测试物溶液配制：
取10mM测试物的DMSO储备液，用DMSO稀释制成浓度为50μM的溶液，作为母液。用DMSO将上述母液四倍逐级稀释，然后每个浓度分别用1倍激酶缓冲液稀释10倍，制成5倍化合物溶液。
6.CDK4/6/9酶学反应：
1)384孔板中相对应的孔中分别加入5μL配制好的5倍测试物溶液、10μL配制好的2.5倍激酶溶液，室温孵育10分钟。
2)相对应的孔中再分别加入10μL配制好的2.5倍多肽溶液，使测试物终浓度为1000nM、250nM、63nM、16nM、4nM、1nM、0.2nM、0.1nM、0.02nM、0.004nM。启动酶反应，28℃孵育5小时。
7.酶学检测：
每个相对应的孔中分别加入25μL终止液，终止反应。
8.Caliper仪器读取数据，并通过数据计算抑制率，
抑制率=(最大值-样本值)/(最大值-最小值)×100，采用GraphPad5.0软件进行曲线拟合，得出IC50值。
最大值：不加测试物的阳性对照，最小值：不加酶的阴性对照。
实验结果和结论：
表1本发明化合物的体外酶学抑制活性
表2本发明化合物的体外酶学抑制活性
表3本发明化合物的体外酶学抑制活性
表4本发明化合物的体外酶学抑制活性
表5本发明化合物的体外酶学抑制活性
表6本发明化合物的体外酶学抑制活性
表7本发明化合物的体外酶学抑制活性
由上表可知，本发明化合物对于CDK4和CDK6激酶具有良好的抑制活性，且与对照药相当。
实验例2本发明化合物的体外细胞学抑制活性
测试物本发明部分化合物，其化学名称和制备方法见各个制备实施例。
对照药：LY2835219，结构式见背景技术部分，购于武汉永璨生物科技有限公司。下述实验中所有缩写字母代表的含义如下：
实验方法：采用BrdU方法(Cell Signaling Technology公司试剂盒)进行细胞增殖检测
1.试剂和化合物配制
1.11倍洗液配制：
将母液浓度为20倍的洗液用超纯水稀释成1倍洗液。
1.21倍检测抗体溶液配制：
将母液浓度为100倍的BrdU检测抗体用检测抗体稀释液稀释成1倍检测抗体溶液。1.31倍HRP标记的二抗溶液配制：
将母液浓度为100倍的抗小鼠IgG，HRP标记抗体用HRP标记抗体稀释液稀释成1倍HRP标记的二抗溶液。
1.410倍BrdU溶液：
将母液浓度为1000倍的BrdU溶液用细胞对应的培养基稀释成10倍BrdU溶液。
1.5配制测试化合物：
配制测试化合物母液：用100%DMSO配制成10mM的母液。
配制测试化合物梯度稀释溶液：取10mM的测试化合物储液用DMSO4倍连续梯度稀释，浓度分别为2.5mM，625μM，156μM，39μM，9.8μM，2.5μM。分别取2μL的DMSO稀释的化合物加到198μL含10%胎牛血清(FBS)的培养液中配制成10倍测试物，测试物最高浓度为100μM，DMSO浓度为1%，共7个浓度梯度。
1.6培养基配制：
Colo205、H1299、K562培养基：RPMI-1640+10%FBS
MDA-MB-468培养基：L-15+10%FBS
MDA-MB-435S培养基：L-15+10%FBS+0.01mg/mL胰岛素
MCF-7培养基：DMEM+10%FBS+0.01mg/mL胰岛素
U87MG培养基：MEM+10%FBS
2.试验步骤
2.1胰酶消化生长至80%的细胞(对数生长期)，离心收集细胞；用不含FBS的培养基重悬，计数并调整到浓度为3000细胞/孔/81μL接种到96孔板，3复孔，置于37℃细胞培养箱中培养；
2.224小时后每孔添加9μL FBS，使FBS终浓度为10%；
2.3每孔加入10μL不同浓度的10倍测试物，使测试物终浓度分别为10μM,2.5μM,625nM,156nM,39nM,9.8nM,2.5nM，3复孔/组，37℃培养72小时；
空白对照：只加培养基，没有细胞
正常细胞对照：没有任何处理的正常细胞
2.4每孔加入10μL10倍BrdU溶液，37℃孵育4小时后弃去培养基；
2.5每孔加入100μL固定/变性液，室温孵育30分钟，弃去溶液；
2.6每孔加入100μL1倍检测抗体溶液，室温孵育1小时，弃去溶液，用1倍洗液200μL/孔洗3次；
2.7每孔加入100μL1倍HRP标记的二抗溶液，室温孵育30分钟，弃去溶液，用1倍洗液200μL/孔洗3次；
2.8每孔加入100μL TMB底物溶液，室温孵育30分钟；
2.9每孔加入100μL终止液，酶标仪450nm检测OD值。
3.数据处理
1)细胞存活率(%)=(OD测试物-OD空白)/(OD正常细胞-OD空白)×100%，
OD空白为只加培养基孔读数，OD正常细胞为正常细胞孔读数；
2)数据使用GraphPad Prism5软件作图，得到曲线及IC50值。
实验结果
表8本发明化合物的体外细胞学活性
表9本发明化合物的体外细胞学活性
表10本发明化合物的体外细胞学活性
表11本发明化合物的体外细胞学活性
表12本发明化合物的体外细胞学活性
由上表可知，本发明化合物对于体外细胞具有良好的抑制作用，优于对照药。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(化合物1)的制备
(1)2,5-二氟-4-碘吡啶的制备
量取二异丙胺(17mL,122mmol)加入到220mL THF中，降温至-20℃，氮气保护下缓慢加入正丁基锂(49mL,122.5mmol)，加料完毕后，-20℃搅拌0.5h，降温至-78℃，缓慢滴加2,5-二氟吡啶(13.3g,115mmol)的四氢呋喃溶液30mL后在该温度下搅拌4h。称取碘(32g,126mmol)溶于100mL THF，-78℃下缓慢滴加到上述反应液中，滴加完毕后搅拌1h。加入水(10mL)和THF(30mL)后升至室温，加入饱和硫代亚硫酸钠，分层得有机相，水相用EA(3×100mL)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA=50:1)得标题化合物(13.5g,产率48%)。
(2)5-氟-4-碘吡啶-2-胺的制备
将2,5-二氟-4-碘吡啶(4.82g,20mmol)溶于40mL DMSO，搅拌条件下加入40mL氨水，90℃封管条件下搅拌12h。加入EA(150mL)，分层得有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩后经硅胶柱层析(DCM:MeOH=30:1)得标题化合物(2.38g,产率50%)。
(3)4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的制备
将6-溴-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑(9.0g,33.2mmol)、联硼酸频哪醇酯(12.65g,49.8mmol)，醋酸钯(840mg)，三环己基磷(1.63g)和醋酸钾(9.78g，99.8mmol)加入到60mL DMSO中，氮气保护下升温至80℃反应6h。加水和EA各200mL，萃取得有机相，水相用EA洗涤两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA=1:2)得标题化合物(6.0g,产率56.8%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-氨基吡啶的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(3.18g,10mmol)、5-氟-4-碘吡啶-2-胺(2.38g,10mmol)、碳酸钾(2.76g,20mmol)和四(三苯基膦)钯(1.15g,1mmol)加入到35mL微波管中，加入15mL二氧六环和3mL水，微波120℃反应1h。加水和EA得有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA=1:1)得标题化合物(2.1g,产率69.5%)。
(5)1-((6-氯吡啶-3-基)羰基)-4-乙基哌嗪的制备
将6-氯烟酸(15.7g,0.1mol)和N-乙基哌嗪(11.4g,0.1mmol)溶于100mL DCM中，搅拌条件下加入HATU(57g,0.15mol)和DIPEA(38.7g,0.3mol)，室温反应1h后加20mL水，分层得有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA=1:10)得标题化合物(22.4g,产率88%)。
(6)1-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪的制备
将1-((6-氯吡啶-3-基)羰基)-4-乙基哌嗪(12.65g,0.05mol)溶于70mL四氢呋喃，降温至0℃，缓慢加入四氢铝锂(5.7g,0.15mol)，加料完毕后升至室温搅拌12h。TLC检测原料消失，加入1mL水淬灭反应，抽滤，滤液减压蒸干得标题化合物(11g,产率92%)。
(7)N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将实施例1步骤(6)制备所得的5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-氨基吡啶(70mg,0.232mmol)，1-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪(55.4mg,0.232mmol)，Xant-phos(22.1mg)，碳酸铯(226mg,0.696mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(21.2mg)加入到100mL茄型瓶中，加入1,4-二氧六环(20mL)，氮气保护下110℃反应4h，抽滤，滤液浓缩后经硅胶柱层析(DCM:MeOH=15:1)得标题化合物(10mg,产率8.5%)。
分子式：C28H33F2N7 分子量：505.3 LC-MS(m/e)：506.3(M+H+)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:8.19(m,2H),7.91(m,1H),7.60(s,2H),7.37(m,1H),7.22(m,2H),4.72(m,1H),3.55(s,2H),2.85～3.0(m,10H),2.69(s,3H),1.69(d,J=6.8Hz,6H),1.26(m,3H).
实施例25-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((7-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物2)的制备
(1)2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯的制备
将2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯盐酸盐(395mg,1.5mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(243mg，1.5mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(621mg,4.5mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色油状标题化合物(500mg,产率95%)。
(2)2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷的制备
将2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(500mg,1.4mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得黄色油状标题化合物360mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(3)2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-7-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷的制备
将2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(360mg粗品,1.4mmol)溶于甲醇(50mL)中，室温下加入甲醛水溶液(37%,681mg,8.4mmol)，反应2小时，加入氰基硼氢化钠(529mg,8.4mmol)，室温下搅拌17小时，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:20)得到淡黄色油状标题化合物(305mg,2步产率82%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(5)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((7-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(346mg,1.1mmol)和2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-7-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(305mg,1.1mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(101mg,0.11mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(105mg,0.22mmol)和碳酸铯(2.15g,6.6mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水淬灭，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:50，加0.2%三乙胺)纯化得到淡黄色固体标题化合物(250mg,产率43%)。
分子式：C30H35F2N7 分子量：531.6 LC-MS(m/z)：532.3(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.13-8.18(m,2H),7.90-7.92(m,1H),7.68(s,1H),7.58-7.62(m,2H),7.36(d,J=8.4Hz,1H),7.19-7.23(m,1H),4.69-4.73(m,1H),3.61(s,2H),3.05-3.08(m,4H),2.68(s,3H),2.34-2.47(m,4H),2.35-2.47(m,4H),1.88-1.92(m,4H),1.66-1.69(m,6H).
实施例35-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((2-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物3)的制备
(1)7-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯的制备
将2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯盐酸盐(400mg,1.5mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(243mg，1.5mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(621mg,4.5mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色油状标题化合物(480mg,产率90%)。
(2)7-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷的制备
将7-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(480mg,1.37mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得黄色油状标题化合物360mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(3)7-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷的制备
将7-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(360mg粗品,1.37mmol)溶解于甲醇(50mL)中，室温下加入甲醛水溶液(37%,666mg,8.2mmol)，反应2小时，加入氰基硼氢化钠(517mg,8.2mmol)，室温下搅拌17小时，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1/20)得到淡黄色油状标题化合物(280mg,2步产率77%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(5)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((2-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(320mg,1.06mmol)和7-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(280mg,1.05mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(92mg,0.1mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(95mg,0.2mmol)和碳酸铯(2.09g,6.4mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水淬灭，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:50，加0.2%三乙胺)纯化得到淡黄色固体标题化合物(280mg,产率50%)。
分子式：C30H35F2N7 分子量：531.6 LC-MS(m/z)：532.3(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.18(d,J=2.4Hz,1H),8.12(d,J=2.0Hz,1H),7.91-7.93(m,1H),7.56-7.59(m,2H),7.34(s,1H),7.29-7.32(m,1H),7.20-7.23(m,1H),4.69-4.73(m,1H),3.40(s,2H),3.18-3.28(m,4H),2.69(s,3H),2.49(s,3H),2.25-2.40(m,4H),1.75-1.85(m,4H),1.66-1.69(m,6H).
实施例45-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物4)的制备
(1)6-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯的制备
将2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯草酸盐(400mg,1.39mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(225mg,1.39mmol)溶解于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(966mg,7.0mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色油状标题化合物(400mg,产率89%)。
(2)2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷的制备
将6-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(400mg,1.23mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得黄色油状标题化合物300mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(3)2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷的制备
将2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷(300mg粗品,1.23mmol)溶解于甲醇(50mL)中，室温下加入甲醛水溶液(37%,600mg,7.4mmol)，反应2小时，加入氰基硼氢化钠(466mg,7.4mmol)，室温下搅拌17小时，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:20)得到淡黄色油状标题化合物(233mg,2步产率80%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(5)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(302mg,1.0mmol)和2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷(233mg,0.98mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(92mg,0.1mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(95mg,0.2mmol)和碳酸铯(2.09g,6.4mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水淬灭，分液，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1/50，加0.2%三乙胺)纯化得到淡黄色固体标题化合物(300mg,产率61%)。
分子式：C28H31F2N7 分子量：503.6 LC-MS(m/z)：504.3(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.18(d,J=2.4Hz,1H),8.10-8.11(d,J=2.0Hz,1H),7.89-7.91(m,1H),7.51-7.58(m,3H),7.31-7.33(m,1H),7.19-7.22(m,1H),4.69-4.73(m,1H),3.49(s,2H),3.42(s,4H),3.31(s,4H),2.68(s,3H),2.35(s,3H),1.67-1.69(m,6H).
实施例55-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((9-甲基-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物5)的制备
(1)9-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯的制备
将3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯盐酸盐(400mg,1.38mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(224mg,1.38mmol)溶解于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(952mg,6.9mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色油状标题化合物(450mg,产率86%)。
(2)3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷的制备
将9-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(450mg,1.18mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得黄色油状标题化合物350mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(3)3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-9-甲基-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷的制备
将3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(350mg粗品,1.18mmol)溶解于甲醇(50mL)中，室温下加入甲醛水溶液(37%,576mg,7.1mmol)，反应2小时，加入氰基硼氢化钠(447mg,7.1mmol)，室温下搅拌17小时，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:20)得到淡黄色油状标题化合物(250mg,2步产率72%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(5)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((9-甲基-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(257mg,0.85mmol)和3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-9-甲基-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷(250mg,0.85mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(83mg,0.09mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(86mg,0.18mmol)和碳酸铯(1.66g,5.1mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:50，加0.2%三乙胺)纯化得到淡黄色固体标题化合物(180mg,产率38%)。
分子式：C32H39F2N7 分子量：559.7 LC-MS(m/z)：560.4(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.19(d,J=2.4Hz,1H),8.14(d,J=1.6Hz,1H),7.90-7.91(m,1H),7.50-7.58(m,3H),7.35-7.37(m,1H),7.20-7.23(m,1H),4.70-4.74(m,1H),3.47(s,2H),2.58-2.72(m,7H),2.48(s,3H),2.35-2.45(m,4H),1.67-1.70(m,10H),1.45-1.56(m,4H).
实施例65-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((5-甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物6)的制备
(1)5-((6-氯吡啶-3-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯的制备
将六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(318mg,1.5mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(243mg,1.5mmol)溶解于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(621mg,4.5mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色油状标题化合物(450mg,产率：89%)。
(2)2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯的制备
将5-((6-氯吡啶-3-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(450mg,1.33mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得黄色油状标题化合物390mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(3)2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯的制备
将2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯(390mg粗品,1.33mmol)溶解于甲醇(50mL)中，室温下加入甲醛水溶液(37%,649mg,8.0mmol)，反应2小时，加入氰基硼氢化钠(504mg,8.0mmol)，室温下搅拌17小时，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:20)得到淡黄色油状标题化合物(255mg,2步产率76%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(5)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((5-甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(302mg,1.0mmol)和2-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-5-甲基八氢吡咯基[3,4-c]吡咯(255mg,1.0mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(92mg,0.1mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(95mg,0.2mmol)和碳酸铯(1.96g,6.0mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:50，加0.2%三乙胺)纯化得到灰白色固体标题化合物(190mg,产率37%)。
分子式：C29H33F2N7 分子量：517.6 LC-MS(m/z)：518.3(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.19(d,J=2.4Hz,1H),8.17(d,J=2.0Hz,1H),7.93-7.94(m,1H),7.58-7.62(m,2H),7.27-7.30(m,1H),7.21-7.25(m,2H),4.70-4.74(m,1H),3.54(s,2H),2.68-2.72(m,7H),2.45-2.55(m,2H),2.29-2.39(m,7H),1.67-1.70(m,6H).
实施例75-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-6(2H)-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物7)的制备
(1)4-苄基6-叔丁基顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-4,6-二甲酸酯的制备
将顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-6(2H)-甲酸叔丁酯(342mg,1.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(581mg,4.5mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，冰浴下滴加氯甲酸苄酯(358mg,2.1mmol)，滴加完毕后室温反应4小时。加入水(30mL)，分液，水相用二氯甲烷萃取(50mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色油状标题化合物600mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(2)顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-4(4aH)-甲酸苄酯的制备
将4-苄基6-叔丁基顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-4,6-二甲酸酯(600mg粗品,1.5mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得黄色油状标题化合物450mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(3)苄基6-((6-氯吡啶-3-基)甲基)顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-4(4aH)-甲酸酯的制备
将顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-4(4aH)-甲酸苄酯(450mg粗品,1.5mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(243mg,1.5mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(828mg,6.0mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和(50mL)水，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:100)纯化得到淡黄色油状标题化合物(350mg,3步产率60%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(5)苄基6-((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-4(4aH)-甲酸酯的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(273mg,0.9mmol)和苄基6-((6-氯吡啶-3-基)甲基)顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-4(4aH)-甲酸酯(350mg,0.9mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(83mg,0.09mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(86mg,0.18mmol)和碳酸铯(1.17g,3.6mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:100，加0.2%三乙胺)纯化得到淡黄色固体标题化合物(430mg,产率73%)。
(6)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-6(2H)-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备
将苄基6-((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)顺式-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]恶嗪-4(4aH)-甲酸酯(430mg,0.66mmol)和钯碳(50mg)悬浮于甲醇(40mL)和氨水(6mL)中。体系抽真空，置换氢气，室温下反应16小时，硅藻土过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:20，加0.2%三乙胺)纯化得到白色固体标题化合物(210mg,产率61%)。
分子式：C28H31F2N7O 分子量：519.6 LC-MS(m/z)：520.3(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.16-8.18(m,2H),7.91-7.92(m,1H),7.61-7.64(m,1H),7.58(s,1H),7.40-7.50(m,1H),7.32-7.34(m,1H),7.20-7.23(m,1H),4.69-4.74(m,1H),3.92-3.95(m,1H),3.75-3.79(m,1H),3.60-3.69(m,2H),3.43-3.48(m,1H),3.31-3.33(m,1H),3.00-3.08(m,1H),2.84-3.00(m,2H),2.64-2.70(m,6H),1.64-1.70(m,6H).
实施例8外型-3-((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-胺(化合物8)的制备
(1)外型-6-((苄氧羰基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯的制备
将外型-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(396mg,2.0mmol)和N,N-二异丙基乙胺(774mg,6.0mmol)溶解于二氯甲烷(30mL)中，冰浴下滴加氯甲酸苄酯(409mg,2.4mmol)，滴加完毕后室温下反应4小时。加入水(30mL)，分液，水相用二氯甲烷萃取(50mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色油状标题化合物700mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(2)外型-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-氨基甲酸苄酯的制备
将外型-6-((苄氧羰基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(700mg粗品,2.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得黄色油状标题化合物(600mg粗品)，不经纯化直接用于下一步反应。
(3)外型-3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酸苄酯的制备
将外型-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-氨基甲酸苄酯(600mg粗品,2.0mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(324mg,2.0mmol)溶解于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(828mg,6.0mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:100)纯化得到淡黄色油状标题化合物(450mg,3步产率63%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(5)外型-3-((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酸苄酯的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(381mg,1.26mmol)和外型-3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酸苄酯(450mg,1.26mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(119mg,0.13mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(124mg,0.26mmol)和碳酸铯(1.64g,5.04mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:100，加0.2%三乙胺)纯化得到淡黄色固体标题化合物(450mg,产率57%)。
(6)外型-3-((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-胺的制备
将外型-3-((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基氨基甲酸苄酯(450mg,0.72mmol)和钯碳(50mg)悬浮于甲醇(40mL)和氨水(6mL)中。体系抽真空，置换氢气，室温下反应16小时，硅藻土过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:20，加0.2%三乙胺)纯化得到白色固体标题化合物(260mg,产率74%)。
分子式：C27H29F2N7 分子量：489.6 LC-MS(m/z)：490.3(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.18(s,1H),8.10(d,J=2.0Hz,1H),7.92-7.94(m,1H),7.58(s,1H),7.51-7.54(m,1H),7.27-7.29(m,2H),7.20-7.25(m,1H),4.68-4.75(m,1H),3.48(s,2H),2.92-2.95(m,2H),2.69(s,3H),2.62(s,1H),2.36-2.39(m,2H),1.60-1.70(m,6H),1.20-1.25(m,2H).
实施例95-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((反式-六氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-6(7H)-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物9)的制备
(1)1-苄基6-叔丁基反式-六氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-1,6(7H)-二甲酸酯的制备
将反式-六氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-6(7H)-甲酸叔丁酯(363mg,1.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(581mg,4.5mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，冰浴下滴加氯甲酸苄酯(358mg,2.1mmol)，滴加完毕后室温下反应4小时。加入水(30mL)，分液，水相用二氯甲烷萃取(50mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色油状标题化合物620mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(2)反式-八氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-1-甲酸苄酯的制备
将1-苄基6-叔丁基反式-六氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-1,6(7H)-二甲酸酯(620mg粗品,1.5mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得黄色油状标题化合物460mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(3)反式-6-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-八氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-1-甲酸苄酯的制备
将反式-八氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-1-甲酸苄酯(460mg粗品,1.5mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(243mg,1.5mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(828mg,6.0mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:100)纯化得到淡黄色油状标题化合物(380mg,3步产率63%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(5)反式-6-((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-八氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-1-甲酸苄酯的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(263mg,0.87mmol)和反式-6-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-八氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-1-甲酸苄酯(350mg,0.87mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(83mg,0.09mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(86mg,0.18mmol)和碳酸铯(1.14g,3.5mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:100，加0.2%三乙胺)纯化得到淡黄色固体标题化合物(400mg,产率69%)。
(6)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((反式-六氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-6(7H)-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备
将反式-6-((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-八氢-1H-吡啶并[3,4-b][1,4]恶嗪-1-甲酸苄酯(400mg,0.6mmol)和钯碳(40mg)悬浮于甲醇(40mL)和氨水(6mL)中。体系抽真空，置换氢气，室温下反应16小时，硅藻土过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:20，加0.4%三乙胺)纯化得到白色固体标题化合物(285mg,产率89%)。
分子式：C29H33F2N7O 分子量：533.6 LC-MS(m/z)：267.7(M/2+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.13-8.18(m,2H),7.91-7.93(m,1H),7.56-7.61(m,2H),7.39(s,1H),7.30-7.32(m,1H),7.20-7.24(m,1H),4.69-4.74(m,1H),3.82-3.87(m,1H),3.62-3.66(m,1H),3.48-3.50(m,2H),3.20-3.22(m,1H),2.84-3.04(m,4H),2.68(s,3H),2.35-2.42(m,1H),2.08-2.10(m,1H),1.92-1.97(m,1H),1.63-1.69(m,6H),1.45-1.55(m,1H),1.25-1.35(m,1H).
实施例105-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((8-吗啉-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物11)的制备
(1)8-吗啉-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯的制备
将8-氧代-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(338mg,1.5mmol)和吗啉(783mg,9.0mmol)溶解于四氢呋喃(30mL)和甲醇(30mL)中，加入醋酸(180mg,3.0mmol)，室温下搅拌2小时，加入氰基硼氢化钠(567mg,9.0mmol)，室温下搅拌17小时，倒入150mL水中，用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色固体状标题化合物(400mg,产率：90%)。
(2)4-(3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吗啉的制备
将8-吗啉-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(400mg，1.35mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得淡黄色油状标题化合物330mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(3)4-(3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吗啉的制备
将4-(3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吗啉(330mg粗品,1.35mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(219mg,1.35mmol)溶解于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(745mg,5.4mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，过滤，滤液真空浓缩，粗品硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:15)得到淡黄色油状标题化合物(360mg,2步产率83%)。
(4)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(5)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((8-吗啉-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(332mg,1.1mmol)和4-(3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吗啉(360mg,1.1mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(101mg,0.11mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(105mg,0.22mmol)和碳酸铯(1.08g,3.3mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:20，加0.1%三乙胺)纯化得到灰白色固体标题化合物(200mg,产率31%)。
分子式：C33H39F2N7O 分子量：587.7 LC-MS(m/z)：588.4(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.17-8.18(m,2H),7.94-7.96(m,1H),7.58-7.63(m,2H),7.34(s,1H),7.21-7.24(m,2H),4.68-4.75(m,1H),3.70-3.73(m,4H),3.46(s,2H),2.68(s,3H),2.61-2.65(m,2H),2.35-2.45(m,3H),2.30-2.33(m,2H),2.07-2.12(m,3H),1.77-1.82(m,2H),1.63-1.72(m,9H).
实施例115-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((3-吗啉-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺(化合物12)的制备
(1)3-氧代-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯的制备
将8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-酮盐酸盐(648mg,4mmol)溶于二氯甲烷中(100mL)，加入三乙胺(1.21g,12mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.05g,4.8mmol)，室温下反应5小时，浓缩，粗品硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=1:2)得到淡黄色油状标题化合物(855mg,产率95%)。
(2)3-吗啉-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯的制备
将3-氧代-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(855mg,3.8mmol)和吗啉(992mg,11.4mmol)溶于四氢呋喃(50mL)和甲醇(50mL)中，加入醋酸(342mg,5.7mmol)，室温下搅拌2小时，加入氰基硼氢化钠(718mg,11.4mmol)，室温下搅拌17小时，倒入200mL水中，用乙酸乙酯萃取(200mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色固体状标题化合物(1.0g,产率89%)。
(3)4-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吗啉的制备
将3-吗啉-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(1.0g，3.38mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入三氟乙酸(15mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得淡黄色油状标题化合物900mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(4)4-(8-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吗啉的制备
将4-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吗啉(900mg粗品,3.38mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(548mg，3.38mmol)溶于乙腈(80mL)中，加入碳酸钾(1.87g,13.5mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，过滤，真空浓缩，粗品硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=1:15)得到淡黄色固体状标题化合物(849mg,2步产率78%)。
(5)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(6)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(5-((3-吗啉-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(453mg,1.5mmol)和4-(8-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)吗啉(483mg,1.5mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(138mg,0.15mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(143mg,0.3mmol)和碳酸铯(1.47g,4.5mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:20，加0.1%三乙胺)纯化得到灰白色固体标题化合物(350mg,产率40%)。
分子式：C33H39F2N7O 分子量：587.7 LC-MS(m/z)：588.4(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.17-8.19(m,2H),7.93-7.95(m,1H),7.65-7.75(m,1H),7.58(s,1H),7.27-7.29(m,2H),7.20-7.23(m,1H),4.69-4.75(m,1H),3.70-3.73(m,4H),3.52(s,2H),3.25-3.31(m,2H),2.69(s,3H),2.42-2.50(m,4H),1.97-2.05(m,1H),1.57-1.70(m,14H).
实施例12N-(5-((3-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(化合物13)的制备
(1)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(2)8-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯的制备
将3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(318mg,1.5mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(243mg，1.5mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(414mg,3.0mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到淡黄色油状标题化合物(480mg,产率95%)。
(3)8-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷的制备
将8-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(480mg，1.4mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得黄色油状标题化合物360mg粗品，不经纯化直接用于下步反应。
(4)8-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷的制备
将8-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(360mg粗品,1.4mmol)和溴乙烷(763mg，7.0mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(966mg,7.0mmol)，40℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×4)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:20)得到淡黄色油状标题化合物(300mg,2步产率81%)。
(5)N-(5-((3-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(302mg,1.0mmol)和8-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(265mg,1.0mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(46mg,0.05mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(48mg,0.1mmol)和碳酸铯(978mg,3.0mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:20，加0.1%三乙胺)纯化得到灰白色固体标题化合物(300mg,产率56%)。
分子式：C30H35F2N7 分子量：531.6 LC-MS(m/z)：532.3(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.19(m,2H),7.95-7.97(m,1H),7.71(s,1H),7.59(s,1H),7.28-7.30(m,2H),7.21-7.24(m,1H),4.68-4.75(m,1H),3.40-3.55(m,2H),3.08-3.18(m,2H),2.60-2.69(m,5H),2.20-2.45(m,4H),1.85-1.98(m,4H),1.64-1.69(m,6H),0.97-1.06(m,3H).实施例13N-(5-((8-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(化合物14)的制备
(1)5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4g,4.4mmol)，5-氟-4-碘吡啶-2-胺(1.05g，4.4mmol)和四(三苯基膦)钯(140mg，0.12mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(10mL)中，加入碳酸铯(4.3g,13.2mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚=0～1:3)得到淡黄色固体状标题化合物(1.1g，产率83%)。
(2)8-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯的制备
将3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(320mg,1.5mmol)和溴乙烷(817mg，7.5mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(1.03mg,7.5mmol)，40℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×4)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到无色油状标题化合物(350mg，产率97%)。
(3)8-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷的制备
将8-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(350mg，1.46mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时，减压蒸除溶剂得淡黄色油状标题化合物340mg粗品)，不经纯化直接用于下步反应。
(4)3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-8-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷的制备
将8-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(340mg粗品,1.46mmol)和2-氯-5-(氯甲基)吡啶(243mg，1.5mmol)溶解于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(414mg,3.0mmol)，70℃反应16小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:15)得到淡黄色油状标题化合物(300mg，产率78%)。
(5)N-(5-((8-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺的制备
将5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)吡啶-2-胺(302mg,1.0mmol)和3-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-8-乙基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(265mg,1.0mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(46mg,0.05mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(48mg,0.1mmol)和碳酸铯(978mg,3.0mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷=0～1:20，加0.1%三乙胺)纯化得到淡黄色固体标题化合物(320mg,产率60%)。
分子式：C30H35F2N7 分子量：531.6 LC-MS(m/z)：532.3(M+1)
1H-NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ:8.18-8.19(d,J=2.4Hz,1H),8.14-8.15(d,J=1.6Hz,1H),7.93-7.95(m,1H),7.56-7.58(m,2H),7.29-7.32(m,2H),7.21-7.24(m,1H),4.68-4.75(m,1H),3.43(s,2H),3.15-3.25(m,2H),2.69(s,3H),2.57-2.61(m,2H),2.30-2.50(m,4H),1.74-1.86(m,4H),1.67-1.69(m,6H),1.05-1.16(m,3H).

Claims (9)

1.通式(Ⅰ)所示的化合物、其药学上可接受的盐以及他们的立体异构体，
其中
R1是异丙基；
R2选自甲基、甲氧基、氰基、氨基甲酰基或乙酰氨基；
R3和R5各自是氟；
n为1；
R4选自任选被Q2取代的Q2选自C1-4烷基或6元杂环基。
2.如权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐以及他们的立体异构体，所述化合物选自：
3.通式(Ⅰ)所示的化合物、其药学上可接受的盐以及他们的立体异构体，
其中，
R1是异丙基；
R2选自甲基、甲氧基、氰基、氨基甲酰基或乙酰氨基；
R3和R5各自是氟；
n为1；
R4选自任选被Q2取代的 Q2选自氨基或C1-4烷基。
4.如权利要求3所述的化合物、其药学上可接受的盐以及他们的立体异构体，所述化合物选自：
5.通式(Ⅰ)所示的化合物、其药学上可接受的盐以及他们的立体异构体，
R1是异丙基；
R2选自甲基、甲氧基、氰基、氨基甲酰基或乙酰氨基；
R3和R5各自是氟；
n为1；
R4选自任选被Q2取代的Q2选自C1-4烷基。
6.如权利要求5所述的化合物、其药学上可接受的盐以及他们的立体异构体，所述化合物选自：
7.药物组合物，包含权利要求1-6任一权利要求所述的化合物、其药学上可接受的盐以及他们的立体异构体与一种或多种药用载体和/或稀释剂。
8.如权利要求7所述的药物组合物，还含有一种或多种抗肿瘤剂和免疫抑制剂，所述的抗肿瘤剂和免疫抑制剂选自甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6‐巯基嘌呤、6‐硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特。
9.权利要求1-6任一权利要求所述的化合物、其药学上可接受的盐以及他们的立体异构体在制备用于治疗和/或预防由CDK4/6激酶介导的癌症相关疾病的药物中的应用，所述癌症相关的疾病选自脑瘤、肺癌、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、直肠癌、肝癌、肾癌、食管腺癌、食管鳞状细胞癌、前列腺癌、雌性生殖道癌、原位癌、淋巴瘤、神经纤维瘤、甲状腺癌、骨癌、皮肤癌、脑癌、结肠癌、睾丸癌、胃肠道间质瘤、前列腺肿瘤、肥大细胞肿瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、胶质瘤或肉瘤。
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Address after: 570105 Tianyi International Building, 85 Binhai Avenue, Longhua District, Haikou City, Hainan Province, 27th Floor

Patentee after: Xuanzhu (Hainan) Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Address before: 570105 Tianyi International Building, 85 Binhai Avenue, Longhua District, Haikou City, Hainan Province, 27th Floor

Patentee before: Hainan Xuanzhu Pharma Co.,Ltd.

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Address after: 050000 Beijing Tianjin Hebei Collaborative Innovation Demonstration Park, 769 Taihang street, high tech Zone, Shijiazhuang City, Hebei Province 203c507

Patentee after: Xuanzhu Biotechnology Co., Ltd

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Patentee before: Xuanzhu (Hainan) Pharmaceutical Technology Co.,Ltd.

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Patentee after: Xuanzhu Biotechnology Co.,Ltd.

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