MD3519401T2

MD3519401T2 - Modulator al regulatorului de conductanță transmembranară în fibroza chistică, compoziții farmaceutice, metode de tratament și procedeu pentru fabricarea modulatorului

Info

Publication number: MD3519401T2
Application number: MDE20190875T
Authority: MD
Inventors: Timothy Alcacio; Minson Baek; Peter Grootenhuis; Ruah Sara Sabina Hadida; Robert M Hughes; Ali Keshavarz-Shokri; Rachel Mcauley-Aoki; Jason Mccartney; Mark Thomas Miller; Goor Fredrick Van; Beili Zhang; Corey Anderson; Thomas Cleveland; Bryan A Frieman; Haripada Khatuya; Pramod Virupax Joshi; Paul John Krenitsky; Vito Melillo; Fabrice Jean Denis Pierre; Andreas P Termin
Original assignee: Vertex Pharma
Priority date: 2016-09-30
Filing date: 2017-09-29
Publication date: 2022-02-28
Also published as: LT3519401T; ES2900263T3; ECSP19028690A; JP7061115B2; IL265627B; MA46357A; CN109803962B; NZ752486A; KR20190067827A; US20180093969A1; CO2019004065A2; JOP20190042A1; KR102531491B1; SI3519401T1; CA3037986A1; GEP20217329B; PE20191147A1; IL265627A; WO2018064632A1; SA519401446B1

Abstract

Compuşii cu Formula I:sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, derivaţii deuteraţi ai oricărora dintre cei anteriori, şi metaboliţii oricărora dintre cei anteriori sunt divulgaţi. Compoziţiile farmaceutice care-i cuprind pe aceştia, metodele de tratare a fibrozei chistice utilizȃndu-i pe aceştia, şi metodele pentru fabricarea acestora sunt de asemenea divulgate.

Description

RULUI

Este divulgat aici un modulator al regulatorului de conductanţă transmembranară în fibroza chistică (CFTR), compoziţii farmaceutice conţinând modulatorul, utilizarea lor în metode de tratament ale fibrozei chistice, şi un procedeu pentru fabricarea modulatorului.

Fibroză chistică (CF) este a boală genetică recesivă care afectează aproximativ 70.000 copii şi adulţi în întreaga lume. În ciuda progresului în tratamentul CF, nu există vindecare.

La pacienţii cu CF, mutaţiile în CFTR exprimate endogen în epiteliul respirator conduc la secreţia redusă de anioni apicali determinând un dezechilibru în transportul ionilor şi fluidului. Scăderea rezultată în transportul anionilor contribuie la acumularea sporită a mucusului în plămân şi la infecţiile microbiene însoţitoare care în final cauzează moartea pacientilor cu CF. În plus faţă de boala respiratorie, pacienţii cu CF suferă de obicei de probleme gastrointestinale şi insuficienţă pancreatică care, dacă sunt lăsate netratate, conduc la moarte. În plus, majoritatea bărbaţilor cu fibroză chistică sunt infertili, şi fertilitatea este redusă printre femele cu fibroză chistică.

Analiza secvenţei genei CFTR a dezvăluit o varietate de mutaţii care determină boala (Cutting, G. R. şi colab. (1990) Nature 346:366-369; Dean, M. şi colab. (1990) Cell 61:863:870; şi Kerem, B-S. şi colab. (1989) Science 245:1073-1080; Kerem, B-S şi colab. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. SUA 87:8447-8451). Până în prezent, au fost identificate mai mult de 2000 de mutaţii în gena CF; în prezent, baza de date CFTR2 conţine informaţia numai despre 322 din aceste mutaţii identificate, cu suficiente dovezi pentru a defini 281 de mutaţii ca determinând boala. Mutaţia care determină cel mai preponderent boala este o deleţie de fenilalanină la poziţia 508 a secvenţei de aminoacizi CFTR, şi este numită în mod obişnuit mutaţia F508del. Această mutaţie are loc în aproximativ 70% din cazurile de fibroză chistică şi este asociată cu boala severă.

Deleţia reziduului 508 în CFTR împiedică proteina nascentă să se plieze corect. Acest lucru conduce la incapacitatea proteinei mutante de a parăsi reticulul endoplasmatic (ER) şi de trafica către membrana plasmatică. Ca rezultat, numărul de canale CFTR pentru transportul anionilor prezent în membrană este mult mai mic decât cel observat în celulele care exprimă CFTR de tip sălbatic, adică, CFTR care nu are nici o mutaţie. În plus faţă de traficarea alterată, mutaţia conduce la intrarea defectuoasă în canal. Împreună, numărul redus de canale în membrană şi intrarea defectuoasă conduc la transportul redus de anioni şi fluid prin epiteliu. (Quinton, P. M. (1990), FASEB J. 4: 2709-2727). Canalele care sunt defectuoase datorită mutaţiei F508del sunt încă funcţionale, cu toate că mai puţin funcţionale decât canalele CFTR de tip sălbatic. (Dalemans şi colab. (1991), Nature Lond. 354: 526-528; Pasyk şi Foskett (1995), J. Cell. Biochem. 270: 12347-50). În plus faţă de F508del, alte mutaţii care determină boala în CFTR, care conduc la traficul defectuos, sinteza, şi/sau intrarea canalului, ar putea fi supra sau sub reglate pentru a altera secreţia de anioni şi modifica progresul şi/sau severitatea bolii.

CFTR este un canal de anioni mediat de AMPc/ATP care este exprimat într-o varietate de tipuri de celule, incluzând celulele epiteliale absorbtive şi secretoare, unde el reglează fluxul de anioni prin membrană, precum şi activitatea altor canale de ioni şi proteine. În celule epiteliale, funcţionarea normală a CFTR este critică pentru întreţinerea transportului de electroliţi prin corp, incluzând ţesutul respirator şi digestiv. CFTR este compusă din aproximativ 1480 aminoacizi care codifică o proteină care este alcătuită dintr-o repetare în tandem a domeniilor transmembranare, fiecare conţinând şase elice transmembranare şi un domeniu de legare al nucleotidei. Cele două domenii transmembranare sunt legate de un (R)-domeniu mare, polar, regulator cu multiple situsuri de fosforilare care reglează activitatea canalului şi traficul celular.

Transportul de clorură are loc prin activitatea coordonată a ENaC şi CFTR prezent pe membrana apicală şi pompa Na+-K+-ATPază şi canalele Cl- exprimate pe suprafaţa bazolaterală a celulei. Transportul activ secundar de clorură din partea luminală conduce la acumularea de clorură intracelulară, care poate apoi părăsi pasiv celula prin canalele Cl-, conducând la un transport vectorial. Aranjamentul co-transportorului Na+/2Cl-/K+, pompei Na+-K+-ATPază şi canalelor K+ ale mambranei bazolaterale pe suprafaţa bazolaterală şi CFTR pe partea luminală coordonează secreţia de clorură prin CFTR pe partea luminală. Deoarece apa nu este probabil niciodată transportată activ de ea însuşi, curgerea ei prin epiteliu depinde de gradienţii osmotici transepiteliali minusculi generaţi de fluxul vrac de sodiu şi clorură.

US2016095858A1 se referă la un compus pentru tratamentul bolilor mediate de CFTR, şi se referă de asemenea la compoziţii farmaceutice, metode pentru tratare şi truse pentru tratamentul unor astfel de boli.

Corespunzător, există o necesitate pentru noi tratamente ale bolilor mediate de CFTR.

Sunt divulgaţi în acest document noi compuşi, incluzând compuşii cu Formulele I-IV şi săruri acceptabile farmaceutic ale acestora. De exemplu, compuşii cu Formula I pot fi reprezentaţi ca:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestora, în care:

• unul din Y1 şi Y2 este N şi celalalt este CH; • X este ales dintre O, NH, şi grupările N(alchil C1-C4); • R1 este ales dintre grupările -(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi

în care fiecare R este ales în mod independent dintre H, OH, şi grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu unul sau mai mulţi halogeni;

• fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; • fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; • fiecare R4 este în mod independent un halogen; • k este 0 sau 1; • r este 0 sau 1; • m este 0, 1, 2, sau 3; • n este 0 sau 1; • p este 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi • q este 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8. Sunt de asemenea divulgate în acest document compoziţii farmaceutice cuprinzând cel puţin unul dintre noii compuşi divulgaţi aici şi/sau cel puţin o sare acceptabilă farmaceutic a acestora, care compoziţii pot include în plus cel puţin un ingredient suplimentar activ farmaceutic şi/sau cel puţin un purtător. Sunt de asemenea divulgate metode pentru tratarea bolii de fibroză chistică medoată de CFTR cuprinzând administrarea a cel puţin unuia dintre noii compuşi divulgaţi aici şi/sau cel puţin a unei săruri acceptabile farmaceutic a acestuia, opţional ca parte a unei compoziţii farmaceutice cuprinzând cel puţin o componentă suplimentară, unui subiect care are nevoie de aceasta. Sunt de asemenea divulgate metode pentru tratarea bolii de fibroză chistică mediată de CFTR cuprinzând administrarea a cel puţin unuia dintre noii compuşi divulgaţi aici şi/sau cel puţin a unei săruri acceptabile farmaceutic a acestuia, (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă (Compus II), şi N-[2,4-bis(1,1-dimetiletil)-5-hidroxifenil]-1,4-dihidro-4-oxochinolin-3-carboxamidă (Compus III), opţional ca o parte din cel puţin o compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin o componentă suplimentară, unui pacient care are nevoie de aceasta.

Scurtă descriere a desenelor

FIG. 1 prezintă structuri de exemple nelimitative ale noilor compuşi divulgaţi aici.

FIG. 2 este o difractogramă cu raze X pe pulbere („XRPD«) a unei dispersii uscate pulverizate (SDD) a 50% din Compusul 1 în HPMCAS-HG.

FIG. 3 este un spectru prezentând un spectru modulat de calorimetrie cu scanare diferenţială (MDSC) al unei dispersii uscate pulverizate (SDD) a 50% din Compusul 1 în HPMCAS-HG.

FIG. 4 este o listă reprezentativă a mutaţiilor genetice CFTR.

FIG. 5 este o XRPD a unei mostre de sare de sodiu a Compusului 1 preparate cum s-a raportat în exemplul de sare de sodiu a Compusului 1.

Definiţii

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „alchil« se referă la o hidrocarbură alifatică, ramificată sau neramificată, saturată conţinând atomi de carbon (cum ar fi, de exemplu, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, sau 20 atomi de carbon). Grupările alchil pot fi substituite sau nesubstituite.

Termenul „alcoxi« aşa cum s-a utilizat în acest document se referă la un alchil sau cicloalchil legat covalent la un atom de oxigen. Grupările alcoxi pot fi substituite sau nesubstituite.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, „cicloalchil« se referă la o grupare hidrocarbură nearomatică ciclică, biciclică, triciclică, sau policiclică având 3 până la 12 atomi de carbon (cum ar fi, de exemplu 3-10 atomi de carbon). Grupările „cicloalchil« cuprind inele monociclice, biciclice, triciclice, în punte, fuzionate, şi spiro, incluzând inele monospiro şi dispiro. Exemple nelimitative de grupări cicloalchil sunt ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, adamantil, norbornil, şi dispiro[2,0,2,1]heptan. Grupările cicloalchil pot fi substituite sau nesubstituite.

„Substituit«, indiferent dacă este precedat de termenul „opţional« sau nu, indică faptul că cel puţin un hidrogen al grupării „substituite« este înlocuit cu un substituent. Dacă nu se indică altfel, o grupare „substituită opţional« poate avea un substituent adecvat la fiecare poziţie substituibilă a grupării, şi când mai mult de o poziţie din orice structură dată poate fi substituită cu mai mult de un substituent ales dintr-o grupare specificată, substituentul poate fi fie acelaşi sau diferit la fiecare poziţie.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, „derivat deuterat« înseamnă aceeaşi structură chimică, dar cu unul sau mai mulţi atomi de hidrogen înlocuiţi cu un atom de deuteriu.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, „CFTR« înseamnă regulator de conductanţă transmembranară în fibroza chistică.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, „mutaţii« se poate se referi la mutaţii în gena CFTR sau proteina CFTR. O „mutaţie genetică CFTR« se referă la o mutaţie în gena CFTR, şi o „mutaţie proteică CFTR« se referă la o mutaţie în proteina CFTR. Un defect genetic sau mutaţie, sau o modificare în nucleotidele dintr-o genă conduce în general la o mutaţie în proteina CFTR translatată din acea genă, sau la deplasarea unui cadru.

Termenul „F508del« se referă la o proteină CFTR mutantă căreia îi lipseşte aminoacidul fenilalanină în poziţia 508.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, un pacient care este „homozigot« pentru o mutaţie genetică particulară are aceeaşi mutaţie pe fiecare alelă.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, un pacient care este „heterozigot« pentru o mutaţie genetică particulară are această mutaţie pe o alelă, şi o mutaţie diferită pe cealaltă alelă.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „modulator« se referă la un compus care creşte activitatea unui compus biologic cum ar fi o proteină. De exemplu, un modulator CFTR este un compus care creşte activitatea CFTR. Creşterea în activitate care rezultă dintr-un modulator CFTR include dar nu este limitată la compuşii care corectează, potenţiază, stabilizează şi/sau amplifică CFTR.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „corector CFTR« se referă la un compus care facilitează procesarea şi traficul CFTR pentru a creşte cantitatea de CFTR la suprafaţa celulei. Compuşii cu Formulele (I), (II), (III), (IV), şi (V), şi Compusul II, şi sărurile lor acceptabile farmaceutic ale acestora divulgaţi în acest document sunt corectori CFTR.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „potentiator CFTR« se referă la un compus care creşte activitateaa canalului proteinei CFTR situat la suprafaţa celulei, conducând la un transport sporit de ioni. Compusul III divulgat aici este un potenţiator CFTR.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „ingredient activ farmaceutic« („API«) se referă la un compus biologic activ.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „sare acceptabilă farmaceutic« se referă la o formă de sare a unui compus al acestei divulgări în care sarea este netoxică. Sărurile acceptabile farmaceutic ale compuşilor acestei divulgări le includ pe cele derivate din acizi şi baze anorganice şi organice adecvate. Sărurile acceptabile farmaceutic sunt bine cunoscute în domeniu. De exemplu, S. M. Berge, şi colab. descriu săruri acceptabile farmaceutic în detaliu în J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „amorf« se referă la un material solid neavând o ordine lungă în poziţia moleculelor sale. Solidele amorfe sunt în general lichide superrăcite în care moleculele sunt dispuse într-o manieră aleatoare astfel încât nu există un aranjament bine definit, de exemplu, împachetare moleculară, şi nici o ordine lungă. Solidele amorfe sunt în general izotropice, adică prezintă proprietăţi similare în toate direcţiile şi nu au puncte de topire definite. De exemplu, un material amorf este un material solid care nu are nici un maxim cristalin caracteristic ascuţit în tiparul său de difracţie cu raze X pe pulbere (XRPD) (adică, nu este cristalin după cum s-a determinat prin XRPD). În schimb, unul sau câteva maxime mari (de exemplu, halouri) apar în tiparul său XRPD. Maximele mari sunt caracteristice unui solid amorf. Vezi, US 2004/0006237 pentru o comparaţie a XRPD-urlor unui material amorf şi material cristalin.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „substanţial amorf« se referă la un material solid având o ordine scurtă sau nu lungă în poziţia moleculelor sale. De exemplu, materialele substanţial amorfe au mai puţin de 15% cristalinitate (de exemplu, mai puţin de 10% cristalinitate sau mai puţin de 5% cristalinitate). Este de asemenea de observat că termenul „substanţial amorf« include descriptorul, „amorf«, care se referă la materiale care nu au nici o (0%) cristalinitate.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „dispersie« se referă la un sistem de dispersie în care o substanţă, faza dispersată, este distribuită, în unităţi discrete, printr-o a doua substanţă (fază continuă sau vehicul). Dimensiunea fazei dispersate poate varia considerabil (de exemplu particule coloidale de dimensiune nanometrică, până la dimensiuni de mai mulţi microni). În general, fazele dispersate pot fi solide, lichide, sau gazoase. În cazul unei dispersii solide, fazele dispersată şi continuă sunt ambele solide. În aplicaţiile farmaceutice, o dispersie solidă poate include un medicament cristalin (fază dispersată) într-un polimer amorf (faza continuă); sau alternativ, un medicament amorf (fază dispersată) într-un polimer amorf (fază continuă). În unele realizări, o dispersie solidă include polimerul care constituie faza dispersată, şi medicamentul care constituie faza continuă. Sau, o dispersie solidă include medicamentul care constituie faza dispersată, şi polimerul care constituie faza continuă.

Termenii „pacient« şi „subiect« sunt utilizaţi interschimbabil şi se referă la un animal incluzând oameni.

Termenii „doză eficientă« şi „cantitate eficientă« sunt utilizaţi interschimbabil aici şi se referă la acea cantitate dintr-un compus care produce efectul dorit pentru care este administrată (de exemplu, îmbunătăţirea CF sau a unui simptom de CF, sau atenuarea severităţii CF sau a unui simptom de CF). Cantitatea exactă dintr-o doză eficientă va depinde de scopul tratamentului, şi va fi constatabilă de către o persoană calificată în domeniu utilizând tehnici cunoscute (vezi, de exemplu, Lloyd (1999) The Art, Science şi Technology of Pharmaceutical Compounding).

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenii „tratament«, „tratarea«, şi alţii asemenea însemnând în general îmbunătăţirea CF sau a simptomelor sale sau atenuarea severităţii CF sau a simptomelor sale la un subiect. „Tratament«, aşa cum s-a utilizat în acest document, include, dar nu este limitat la, următoarele: creşterea dezvoltării subiectului, creşterea câştigului în greutate, reducerea mucusului în plămânii, funcţionare îmbunătăţită pancreatică şi/sau a ficatului, reducerea infecţiilor în piept, şi/sau reducerea tusei sau scurtarea respiraţiei. Îmbunătăţiri în, sau atenuarea severităţii oricărora din aceste simptome poate fi cu uşurinţă evaluată în conformitate cu metode standard şi tehnici cunoscute în domeniu.

Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „în combinaţie cu«, când se referă la doi sau mai mulţi compuşi, agenţi, sau ingrediente active farmaceutic suplimentare, înseamnă administrarea a doi sau mai mulţi compuşi, agenţi, sau ingrediente active farmaceutic pacientului înainte de, simultan cu, sau ulterior unul faţă de celălalt.

Termenii „în jur de« şi „aproximativ«, când s-au utilizat în legătură cu doze, cantităţi, sau procente de greutate ale ingredientelor unei compoziţii sau forme de dozare, includ valoarea unei doze specificate, cantităţi, sau procente de greutate sau un interval al dozei, cantităţii, sau procentelor de greutate care este recunoscut de cineva având calificare obişnuită în domeniu pentru a furniza un efect farmacologic echivalent cu cel obţinut de la doza specificată, cantitatea, sau procentele de greutate.

Fiecare din compuşii cu Formulele (I), (II), (III), (IV), şi (V), şi Compuşii II, III, IV, şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora descrise, şi derivaţii lor deuteraţi de aici pot fi administaraţi independent o dată zilnic, de două ori zilnic, sau de trei ori zilnic. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele (I), (II), (III), (IV), şi (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii lor deuteraţi sunt administraţi o dată zilnic. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele (I), (II), (III), (IV), şi (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii lor deuteraţi sunt administraţi de două ori zilnic. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre Compusul II şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia este administrat o dată zilnic. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre Compusul II şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia este administrat de două ori zilnic. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre Compusul III şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia este administrat o dată zilnic. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre Compusul III şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia este administrat de două ori zilnic. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre Compusul IV şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia este administrat o dată zilnic. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre Compusul IV şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia este administrat de două ori zilnic. În unele realizări, un derivat deuterat al Compusului II, III, şi/sau IV sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia sunt utilizate în oricare dintre aceste realizări.

În unele realizări, 10 mg până la 1.500 mg dintr-un compus divulgat aici, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al unui astfel de compus sau săruri sunt administrate zilnic.

Cineva având calificare obişnuită în domeniu ar recunoaşte că, atunci când o cantitate dintr-un „compus sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia« este divulgată, cantitatea de formă de sare acceptabilă farmaceutic a compusului este cantitatea echivalentă cu concentraţia de baza liberă a compusului. Se observă că cantităţile divulgate ale compuşilor sau ale sărurilor acceptabile farmaceutic ale acestora de aici sunt pe baza formei lor de bază liberă. De exemplu, „10 mg din cel puţin un compus ales dintre compuşii cu Formula (I) şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia« includ 10 mg dintr-un compus cu Formula (I) şi o concentraţie a unei săruri acceptabile farmaceutic a compuşilor cu Formula (I) echivalentă cu 10 mg de compuşi cu Formula (I).

Cum s-a afirmat mai sus, sunt divulgaţi în acest document compuşi cu Formula (I):

şi săruri acceptabile farmaceutic ale acestora, în care:

• unul dintre Y1 şi Y2 este N şi celalalt este CH; • X este ales dintre O, NH, şi grupările N(alchil C1-C4); • R1 este ales dintre grupările -(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1, în care fiecare Inel A este ales independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi în care fiecare R este ales în mod independent dintre H, OH, şi grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu unul sau mai mulţi halogeni; • fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; • fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; • fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; • k este 0 sau 1; • r este 0 sau 1; • m este 0, 1, 2, sau 3; • n este 0 sau 1; • p este 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi • q este 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8. Sunt de asemenea divulgaţi în acest document compuşii cu Formula (II):

şi săruri acceptabile farmaceutic ale acestora, în care:

• X este ales dintre O, NH, şi grupările N(alchil C1-C4); • R1 este ales dintre grupările -(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

• fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; • fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; • fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; • k este 0 sau 1; • r este 0 sau 1; • m este 0, 1, 2, sau 3; • n este 0 sau 1; • p este 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi • q este 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8. Cuprinşi în domeniul cu Formulele (I) şi (II) sunt compuşii cuprinzând o -

grupare (unde R' este H sau alchil C1-C4), adică, în care X este ales dintre grupările NH şi N(alchil C1-C4). Exemple nelimitative de astfel de compuşi includ compuşii având următoarea structură:

şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, fie ca amestec izomeric sau fie ca izomeri enantioîmbogăţiţi (de exemplu, >90% ee, >95% ee, sau >98% ee).

Sunt de asemenea divulgaţi în acest document compuşi cu Formula (III):

şi săruri acceptabile farmaceutic ale acestora, în care:

• R1 este ales dintre grupările -(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

• fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; • fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; • fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; • k este 0 sau 1; • r este 0 sau 1; • m este 0, 1, 2, sau 3; • n este 0 sau 1; • p este 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi • q este 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II), (III), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, dacă R2 este ciano, atunci R2 este meta sau para faţă de atomul de sulf. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II), (III), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora: • fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi • fiecare R este ales în mod independent dintre H şi OH; • fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, şi halogeni; • R4 este F; • k este 0; • p este 0, 1, sau 2; • q este 0, 1, 2, 3, sau 4; • r este 0; şi • m şi n nu sunt 0 în acelaşi timp. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II), (III), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora: • R1 este ales dintre grupările -O―(CR2)m-Inel A, în care Inel A este ales dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi • m este 1 sau 2. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II), (III), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, fiecare R3 este o grupare metil şi q este 3 sau 4. Sunt de asemenea divulgaţi în acest document compuşii cu formula (IV):

şi săruri acceptabile farmaceutic ale acestora, în care:

• Inelul A este ales dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni; şi • fiecare R2 este ales în mod independent dintre gruparile alchil C1-C2, OH, F, Cl, şi grupările alcoxi C1-C2; • m este 1 sau 2; şi • p este 0, 1, sau 2. În unele realizări, p este 0 sau 1. În unele realizări, p este 0. Sunt de asemenea divulgaţi în acest document compuşi cu formula V:

şi săruri acceptabile farmaceutic ale acestora, în care:

• Inelul A este ales dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni; şi • fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, F, Cl, şi grupările alcoxi C1-C2; • m este 1 sau 2; şi • p este 0, 1, sau 2. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II), (III), (IV), (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, fiecare R2 este ales în mod independent dintre CH3, OH, F, şi OCH3. În unele realizări, p este 0 sau 1. În unele realizări, p este 0. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II), (III), (IV), (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare alchil C1 halogenată sau cu o grupare alchil C2 halogenată. În unele realizări, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II), (III), (IV), (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, m este 1, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3, p este 0 sau 1, şi R2, dacă este prezent, este o grupare metil, o grupare hidroxi, sau o grupare metoxi. În unele realizări, m este 2, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3, şi p este 0. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II), (III), (IV), (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, m este 2, Inelul A este o grupare cicloalchil C3 substituită cu o grupare CF3, p este 0 sau 1, şi R2, dacă este prezent, este o grupare metil, o grupare hidroxi, sau o grupare metoxi. În unele realizări, m este 2, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3, şi p este 0. În unele realizări, m este 2, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3, şi p este 0. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II), (III), (IV), (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, Inelul A este ales dintre grupările bicicloalchil C5 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre gruparile alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni. În unele realizări, Inelul A este o grupare bicicloalchil C5 substituită opţional cu un halogen. În unele realizări, în compuşii cu Formula (I), (II),(III), (IV), (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, Inelul A este ales dintre grupările bicicloalchil C7 şi grupările tricicloalchil C7 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni. În unele realizări, Inelul A este o grupare tricicloalchil C7 nesubstituită. Sunt de asemenea divulgaţi în acest document compuşi având o formulă aleasă dintre oricare din formulele reprezentate în FIG. 1 şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora. Sunt de asemenea divulgaţi în acest document Compuşii 1-5, 8, 10-16, 18-30, 32, 33, 35-37, 39-60, 63, şi 64, şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora. Sunt de asemenea divulgaţi în acest document Compuşii 9, 31, 34, 38, 61, 62, şi 65, şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora. Sunt de asemenea divulgaţi în acest document Compuşii 6, 7, şi 17, şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora. Sunt de asemenea divulgaţi în acest document derivaţii deuteraţi ai oricăruia din compuşii 1-5, 8, 10-16, 18-65, şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora. Sunt de asemenea divulgaţi în acest document un compus având formula următoare:

şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia.

Sunt de asemenea divulgaţi în acest document un compus având formula următoare:

şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia.

În unele realizări, cel puţin un nou compus (şi/sau cel puţin o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia şi/sau cel puţin un derivat deuterat al unui astfel de compus sau sare) poate fi administrat în combinaţie cu cel puţin un ingredient suplimentar activ farmaceutic. În unele realizări, cel puţin un ingredient suplimentar activ farmaceutic este ales dintre:

(a) Compusul II:

şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia.

O denumire chimică pentru Compusul II este (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il) ciclopropancarboxamidă;

(b) Compusul III:

şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia.

O denumire chimică pentru Compusul III este N-(5-hidroxi-2,4-di-terţ-butil-fenil)-4-oxo-1H-chinolin-3-carboxamidă; şi

(c) Compusul IV:

şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia.

O denumire chimică pentru Compusul IV este acid 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropancarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoic.

Sărurile adecvate acceptabile farmaceutic sunt, de exemplu, cele divulgate în S. M. Berge, şi colab. J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. De exemplu, Tabelul 1 l acelui articol furnizează următoarele săruri acceptabile farmaceutic:

Tabelul 1:

Acetat Iodură Benzatină Benzensulfonat Isetionat Cloroprocaină Benzoat Lactat Colină Bicarbonat Lactobionat Dietanolamină Bitartrat Maleat Etilendiamină Bromură Maleat Meglumină Edetat de calciu Mandelat Procaină Camsilat Mesilat Aluminiu Carbonat Metilbromură Calciu Clorură Metilnitrat Litiu Citrat Metilsulfat Magneziu Diclorhidrat Mucat Potasiu Edetat Napsilat Sodiu Edisilat Nitrat Zinc Estolat Pamoat (Embonat) Esilat Pantotenat Fumarat Fosfat/difosfat Gluceptat Poligalacturonat Gluconat Salicilat Glutamat Stearat Glicolilarsanilat Subacetat Hexilresorcinat Succinat Hidrabamină Sulfat Bromhidrat Tanat Clorhidrat Tartrat Hidroxinaftoat Teociat Trietiodidă

Exemple nelimitative de săruri acceptabile farmaceutic derivate din acizi adecvaţi includ: săruri formate cu acizi anorganici, cum ar fi acid clorhidric, acid bromhidric, acid fosforic, acid sulfuric, sau acid percloric; săruri formate cu acizi organici, cum ar fi acid acetic, acid oxalic, acid maleic, acid tartric, acid citric, acid succinic sau acid malonic; şi săruri formate prin utilizarea altor metode utilizate în domeniu, cum ar fi schimbarea de ioni. Exemple nelimitative de săruri acceptabile farmaceutic includ săruri de adipat, alginat, ascorbat, aspartat, benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butirat, camforat, camforsulfonat, citrat, ciclopentanpropionat, digluconat, dodecilsulfat, etansulfonat, format, fumarat, glucoheptonat, glicerofosfat, gluconat, hemisulfat, heptanoat, hexanoat, iodhidrat, 2-hidroxi-etansulfonat, lactobionat, lactat, laurat, lauril sulfat, maleat, maleat, malonat, metansulfonat, 2-naftalinsulfonat, nicotinat, nitrat, oleat, oxalat, palmitat, pamoat, pectinat, persulfat, 3-fenilpropionat, fosfat, picrat, pivalat, propionat, stearat, succinat, sulfat, tartrat, tiocianat, p-toluensulfonat, undecanoat, şi valerat. Sărurile acceptabile farmaceutic derivate din baze adecvate includ metale alcaline, metale alcaline pământoase, şi săruri de amoniu, şi de N+(C1-4alchil)4. Această divulgare are în vedere de asemenea cuaternizarea oricăror grupări bazice care conţin azot ale compuşilor divulgaţi aici. Exemple nelimitative adecvate de săruri metalice alcaline şi alcaline pământoase inlud sodiu, litiu, potasiu, calciu, şi magneziu. Alte exemple nelimitative de săruri acceptabile farmaceutic includ amoniu, amoniu cuaternar, şi cationi de amină formaţi utilizând contraioni cum ar fi halogenură, hidroxid, carboxilat, sulfat, fosfat, nitrat, alchil sulfonat inferior şi aril sulfonat. Alte exemple nelimitative adecvate de săruri acceptabile farmaceutic includ sărurile de besilat şi glucozamină.

În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici, sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii deuteraţi ai celor anteriori, este administrat în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul II, sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, şi derivaţii deuteraţi ai celor anteriori. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici, sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii deuteraţi ai celor anteriori, este administrat în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul III şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici, sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii deuteraţi ai celor anteriori, este administrat în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul IV şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici, sărurile acceptabile farmaceutic, şi derivaţii deuteraţi ai celor anteriori acestuia, este administrat în combinaţie cu Compusul II sau o sare acceptabilă farmaceutic sau un derivat deuterat al acestuia şi cel puţin un compus ales dintre Compusul III, sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, şi derivaţii deuteraţi ai oricărora din cei anteriori. În unele realizări, cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici, sărurile acceptabile farmaceutic, şi derivaţii deuteraţi ai oricărora dintre cei anteriroi acestuia, este administrat în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul III, sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, şi derivaţii deuteraţi ai oricărora dintre cei anteriori şi cel puţin un compus ales dintre Compusul IV, sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, şi derivaţii deuteraţi ai oricărora dintre cei anteriori.

Oricare din noii compuşi divulgaţi aici, cum ar fi de exemplu, compuşii cu Formula (I), (II), (III), (IV), (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii deuteraţi ai unor astfel de compuşi şi săruri pot fi cuprinşi într-o singură compoziţie farmaceutică sau în compoziţii farmaceutice separate în combinaţie cu alte ingrediente suplimentare active farmaceutic (de exemplu, Compusul II, III, sau IV, sau sarea acceptabilă farmaceutic a acestora, sau un derivat deuterat al unui astfel de Compus sau sare). Astfel de compoziţii farmaceutice pot fi administrate o dată zilnic sau de mai multe ori zilnic, cum ar fi de două ori zilnic. În unele realizări, divulgarea prezintă o compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin un compus ales dintre oricare dintre compuşii divulgaţi aici şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.

În unele realizări, divulgarea prezintă o compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, cel puţin un compus ales dintre Compusul II şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, şi cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.

În unele realizări, divulgarea prezintă o compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, cel puţin un compus ales dintre Compusul III şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, şi cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.

În unele realizări, divulgarea prezintă o compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, cel puţin un compus ales dintre Compusul II şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, cel puţin un compus ales dintre Compusul III şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, şi cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.

În unele realizări, divulgarea prezintă o compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, cel puţin un compus ales dintre Compusul III şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, cel puţin un compus ales dintre Compusul IV şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia, şi cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.

În unele realizări, compoziţiile farmaceutice divulgate aici cuprind cel puţin un ingredient suplimentar activ farmaceutic. În unele realizări, acel cel puţin un ingredient suplimentar activ farmaceutic este un modulator CFTR. În unele realizări, acel cel puţin un ingredient suplimentar activ farmaceutic este un corector CFTR. În unele realizări, acel cel puţin un ingredient suplimentar activ farmaceutic este un potenţiator CFTR. În unele realizări, compoziţia farmaceutică cuprinde (i) un compus cu Formulele (I), (II), (III), (IV), sau (V), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestora, sau un derivat deuterat al unui astfel de compus sau sare; şi (ii) cel puţin dou ingrediente suplimentare active farmaceutic, din care unul este un corector CFTR şi unul este un potenţiator CFTR.

În unele realizări, cel puţin un ingredient suplimentar activ farmaceutic este selectat dintre agenţi mucolitici, bronhodilatatori, antibiotice, agenţi antiinfecţioşi, şi agenţi antiinflamatori.

O compoziţie farmaceutică poate cuprinde suplimentar cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic. În unele realizări, acel cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic este ales dintre vehiculele acceptabile farmaceutic şi adjuvanţii acceptabili farmaceutic. În unele realizări, acel cel puţin un acceptabil farmaceutic este ales dintre umpluturi, dezintegranţi, surfactanţi, lianţi, lubrifianţi acceptabili farmaceutic.

Se va aprecia de asemenea că o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări, incluzând o compoziţie farmaceutică care cuprinde combinaţii descrise anterior, poate fi utilizată în terapii de combinaţie; aceasta înseamnă că, compoziţiile pot fi administrate concomitent cu, înainte de, sau ulterior la, cel puţin un ingredient suplimentar activ farmaceutic sau proceduri medicale.

Compoziţiile farmaceutice cuprinzând aceste combinaţii sunt utile pentru tratarea fibrozei chistice.

Cum s-a descris mai sus, compoziţiile farmaceutice divulgate aici pot cuprinde opţional suplimentar cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic. Acel cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic poate fi ales dintr adjuvanţi şi vehicule. Acel cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic, aşa cum s-a utilizat în acest document, include oricare şi toţi solvenţii, diluanţii, alte vehicule lichide, ajutoare de dispersie, ajutoare de suspensie, agenţi activi de suprafaţă, agenţi izotonici, agenţi de îngroşare, agenţi de emulsionare, conservanţi, lianţi solizi, şi lubrifianţi, ca adecvaţi la forma de dozare particulară dorită. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, ediţia a 21-a, 2005, ed. D.B. Troy, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, şi Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick şi J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York, divulgă diferiţi purtători utilizaţi în formularea compoziţiilor farmaceutice şi tehnici cunoscute pentru prepararea acestora. Cu excepţia măsurii în care orice purtător convenţional este incompatibil cu compuşii acestei divulgări, cum ar fi prin producerea oricărui efect biologic nedorit sau care interacţionează altfel într-o manieră dăunătoare cu orice altă componentă a compoziţiei farmaceutice, utilizarea sa este avută în vedere ca fiind în domeniul acestei divulgări. Exemple nelimitative de purtători adecvaţi acceptabili farmaceutic includ, dar nu se limitează la, schimbătoare de ioni, alumina, stearat de aluminiu, lecitină, proteine din ser (cum ar fi albumină din ser uman), substanţe tampon (cum ar fi fosfaţi, glicină, acid sorbic, şi sorbat de potasiu), amestecuri parţiale de gliceride ale acizilor graşi vegetali saturaţi, apă, săruri, şi electroliţi (cum ar fi sulfat de protamină, fosfat acid disodic, fosfat acid de potasiu, clorură de sodiu, şi săruri de zinc), siliciu coloidal, trisilicat de magneziu, polivinil pirolidonă, poliacrilaţi, ceruri, polimeri bloc de polietilenă-polioxipropilenă, grăsime din lână, zaharuri (cum ar fi lactoză, glucoză şi zaharoză), amidonuri (cum ar fi amidonul din porumb şi amidonul din cartofi), celuloză şi derivaţii săi (cum ar fi carboximetil celuloză de sodiu, etil celuloză şi acetat de celuloză), pulbere de tragacant, malţ, gelatină, talc, excipienţi (cum ar fi unt de cacao şi ceruri pentru supozitoare), uleiuri (cum ar fi ulei de arahide, ulei din seminţe de bumbac, ulei de şofrănel, ulei de susan, ulei de măsline, ulei de porumb şi ulei de soia), glicoli (cum ar fi propilen glicol şi polietilen glicol), esteri (cum ar fi oleat de etil şi laurat de etil), agar, agenţi de tamponare (cum ar fi hidroxid de magneziu şi hidroxid de aluminiu), acid alginic, apă apirogenă, soluţie salină izotonică, soluţie Ringer, alcool etilic, soluţii tamponate cu fosfat, lubrifianţi compatibili netoxici (cum ar fi lauril sulfat de sodiu şi stearat de magneziu), agenţi de colorare, agenţi de eliberare, agenţi de acoperire, agenţi de îndulcire, agenţi de aromatizare, agenţi de parfumare, conservanţi, şi antioxidanţi.

Se va aprecia de asemenea că o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări, incluzând o compoziţie farmaceutică cuprinzând oricare din combinaţiile descrise anterior, poate fi utilizată în terapii de combinaţie; ceea ce înseamnă că, compoziţiile pot fi administrate concomitent cu, înainte de, sau ulterioară la, cel puţin un ingredient activ farmaceutic sau proceduri medicale.

În unele realizări, metodele din divulgare utilizează administrarea la un pacient care are nevoie de aceasta a cel puţin unui compus ales dintre oricare dintre compuşii divulgaţi aici şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compusul III, Compusul IV, şi sărurile acceptabile farmaceutic ale oricărora dintre cei anteriori.

Orice compoziţii farmaceutice adecvate cunoscute în domeniu pot fi utilizate pentru noii compuşi divulgaţi aici, Compusul II, Compusul III, Compusul IV, şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora. Unele exemple de compoziţii farmaceutice pentru Compusul 1 şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia sunt descrise în Exemple. Unele exemple de compoziţii farmaceutice pentru Compusul II şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia pot fi găsite în WO 2011/119984 şi WO 2014/015841. Unele exemple de compoziţii farmaceutice pentru Compusul III şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia pot fi găsite în WO 2007/134279, WO 2010/019239, WO 2011/019413, WO 2012/027731, şi WO 2013/130669. Unele exemple de compoziţii farmaceutice pentru Compusul IV şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia pot fi găsite în WO 2010/037066, WO 2011/127241, WO 2013/112804, şi WO 2014/071122.

În unele realizări, o compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, este administrată cu o compoziţie farmaceutică cuprinzând Compusul II şi Compusul III. Compoziţiile farmaceutice cuprinzând Compusul II şi Compusul III sunt divulgate în publicaţia PCT nr. WO 2015/160787. O realizare exemplificativă este prezentata în următorul tabel:

Tabelul 2. Tabletă exemplificativă cuprinzând 100 mg de Compus II şi 150 mg de Compus III.

Ingredient Cantitate pe tabletă (mg) Intra-granular Compus II SDD (dispersie uscată cu pulverizare) 125 (80 % din masă Compus II, 20 % din masă HPMC) Compus III SDD 187,5 (80 % din masă Compus III, 19,5 g% HPMCAS-HG; 0,5 g% lauril sulfat de sodiu) Celuloză microcristalină 131,4 Croscarmeloză de sodiu 29,6 Total 473,5 Extra-granular Celuloză microcristalină 112,5 Stearat de magneziu 5,9 Total 118,4 Total tabletă neacoperită 591,9 Acoperire cu film Opadry 17,7 Total tabletă acoperită 609,6

În unele realizări, o compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin un compus ales dintre noii compuşi divulgaţi aici şi sărurile farmaceutice ale acestora este administrată cu o compoziţie farmaceutică cuprinzând Compusul III. Compoziţiile farmaceutice cuprinzând Compusul III sunt divulgată în publicaţia PCT nr. WO 2010/019239. O realizare exemplificativă este prezentată în următorul tabel:

Tabelul 3: Ingrediente pentru tableta exemplificativă a Compusului III.

Formulare de tabletă Doză procentuală % g./g. Doză (mg) Lot (g) Compus III SDD 34,09% 187,5 23,86 (80 g% din masă Compus III, 19,5 g% HPMCAS-HG; 0,5 g% lauril sulfat de sodiu) Celuloză microcristalină 30,51% 167,8 21,36 Lactoză 30,40% 167,2 21,28 Croscarmeloză de sodiu 3,000% 16,50 2,100 SLS 0,500% 2,750 0,3500 Dioxid de siliciu coloidal 0,500% 2,750 0,3500 Stearat de magneziu 1,000% 5,500 0,7000 Total 100% 550 70

Compoziţii farmaceutice suplimentare cuprinzând Compusul III sunt divulgate în publicaţia PCT nr. WO 2013/130669. Exemple de mini-tablete (diametru de ~2 mm, grosime de ~2 mm, fiecare mini-tabletă cântărind aproximativ 6,9 mg) au fost formulate pentru a avea aproximativ 50 mg de Compus III la 26 mini-tablete şi aproximativ 75 mg de Compus III la 39 mini-tablete utilizând cantităţile de ingrediente enumerate în Tabelul 4, de mai jos.

Tabelul 4: Ingrediente pentru mini-tablete cu potenţă de 50 mg şi 75 mg

Formulare de tabletă Doză procentuală %g./g. Doză (mg) pentru potenţă de 50 mg Doză (mg) pentru potenţă de 75 mg Lot (g) Compus III SDD (80 g% Compus III, 19,5 g% HPMCAS-HG; 0,5 g% lauril sulfat de sodiu) 35 62,5 93,8 1753,4 Manitol 13,5 24,1 36,2 675,2 Lactoză 41 73,2 109,8 2050,2 Sucraloză 2,0 3,6 5,4 100,06 Croscarmeloză de sodiu 6,0 10,7 16,1 300,1 Dioxid de siliciu coloidal 1,0 1,8 2,7 50,0 Stearat de magneziu 1,5 2,7 4,0 74,19 Total 100 178,6 268 5003,15

În unele realizări, compoziţiile farmaceutice sunt o tabletă. În unele realizări, tabletele sunt adecvate pentru administrare orală.

Aceste combinaţii sunt utile pentru tratarea fibrozei chistice.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient, cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente din cel puţin o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un om, în care respectivul pacient are fibroză chistică şi este ales dintre pacienţii cu genotipuri F508del/funcţionare minimală (MF), pacienţii cu genotipuri F508del/F508del, pacienţii cu genotipuri F508del/intrare, şi pacienţii cu genotipuri F508del/funcţionare reziduală (RF).

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie care determină CF, şi este de aşteptat să fie şi/sau este răspunzătoare la orice combinaţii de (i) noi compuşi divulgaţi aici, cum ar fi Compusul 1, şi (ii) genotipuri de Compus II, şi/sau Compus III şi/sau Compus IV pe baza datelor in vitro şi/sau clinice.

Pacienţii cu un genotip F508del/funcţionare minimală sunt definiţi ca pacienţi care sunt heterozigoţi F508del-CFTR cu o a doua alelă CFTR conţinând o mutaţie care este predictată că conduce la o proteină CFTR cu funcţionare minimală şi că nu se aşteaptă să răspundă la Compusul II, Compusul III, sau la o combinaţie a Compusului II şi Compusului III. Aceste mutaţii CFTR au fost definite utilizând 3 surse principale:

• plauzibilitatea biologică ca mutaţia să răspundă (adică, clasa mutaţiei) • dovada severităţii clinice pe o bază de populaţie (pe registru de pacienţi CFTR2; accesat pe 15 Februarie 2016) ∘ clorura medie din transpiraţie >86 mmol/L, şi ∘ predominanţa insuficienţei pancreatice (PI) >50% • testare in vitro ∘ mutaţiile care conduc la transportul de clorură al liniei de bază <10% \tab\tabdin CFTR de tip sălbatic au fost considerate de funcţionare minimală ∘ mutaţiile care conduc la transportul de clorură <10% din CFTR de tip \tab\tabsălbatic după adăugarea Compusului II şi/sau Compusului III au fost \tab\tabconsiderate neresponsive. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient, cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un om, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR G551D. În unele realizări, pacientul este homozigot pentru mutaţia genetică G551D. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru mutaţia genetică G551D. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru mutaţia genetică G551D, având mutaţia G551D pe o alelă şi orice altă mutaţie care determină CF pe cealaltă alelă. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru mutaţia genetică G551D pe o alelă şi cealaltă mutaţie genetică care determină CF pe cealaltă alelă este oricare dintre F508del, G542X, N1303K, W1282X, R117H, R553X, 1717-1G->A, 621+1G->T, 2789+5G->A, 3849+10kbC->T, R1162X, G85E, 3120+1G->A, ΔI507, 1898+1G->A, 3659delC, R347P, R560T, R334W, A455E, 2184delA, sau 711+1G->T. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru mutaţia genetică G551D, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este F508del. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru mutaţia genetică G551D, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este R117H. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR F508del. În unele realizări, pacientul este homozigot pentru mutaţia genetică F508del. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru mutaţia genetică F508del în care pacientul are mutaţia genetică F508del pe o alelă şi orice mutaţie genetică care determină CF pe cealaltă alelă. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie care determină CF, incluzând, dar fără a se limita la, G551D, G542X, N1303K, W1282X, R117H, R553X, 1717-1G->A, 621+1G->T, 2789+5G->A, 3849+10kbC->T, R1162X, G85E, 3120+1G->A, ΔI507, 1898+1G->A, 3659delC, R347P, R560T, R334W, A455E, 2184delA, sau 711+1G->T. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este G551D. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este R117H. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient, cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R, S1251N, E193K, F1052V, G1069R, R117C, D110H, R347H, R352Q, E56K, P67L, L206W, A455E, D579G, S1235R, S945L, R1070W, F1074L, D110E, D1270N, D1152H, 1717-1G->A, 621+1G->T, 3120+1G->A, 1898+1G->A, 711+1G->T, 2622+1G->A, 405+1G->A, 406-1G->A, 4005+1G->A, 1812-1G->A, 1525-1G->A, 712-1G->T, 1248+1G->A, 1341+1G->A, 3121-1G->A, 4374+1G->T, 3850-1G->A, 2789+5G->A, 3849+10kbC->T, 3272-26A->G, 711+5G->A, 3120G->A, 1811+1,6kbA->G, 711+3A->G, 1898+3A->G, 1717-8G->A, 1342-2A->C, 405+3A->C, 1716G/A, 1811+1G->C, 1898+5G->T, 3850-3T->G, IVS14b+5G->A, 1898+1G->T, 4005+2T->C, 621+3A->G, 1949del84, 3141del9, 3195del6, 3199del6, 3905InsT, 4209TGTT->A, A1006E, A120T, A234D, A349V, A613T, C524R, D192G, D443Y, D513G, D836Y, D924N, D979V, E116K, E403D, E474K, E588V, E60K, E822K, F1016S, F1099L, F191V, F311del, F311L, F508C, F575Y, G1061R, G1249R, G126D, G149R, G194R, G194V, G27R, G314E, G458V, G463V, G480C, G622D, G628R, G628R(G->A), G91R, G970D, H1054D, H1085P, H1085R, H1375P, H139R, H199R, H609R, H939R, I1005R, I1234V, I1269N, I1366N, I175V, I502T, I506S, I506T, I601F, I618T, I807M, I980K, L102R, L1324P, L1335P, L138ins, L1480P, L15P, L165S, L320V, L346P, L453S, L571S, L967S, M1101R, M152V, M1T, M1V, M265R, M952I, M952T, P574H, P5L, P750L, P99L, Q1100P, Q1291H, Q1291R, Q237E, Q237H, Q452P, Q98R, R1066C, R1066H, R117G, R117L, R117P, R1283M, R1283S, R170H, R258G, R31L, R334L, R334Q, R347L, R352W, R516G, R553Q, R751L, R792G, R933G, S1118F, S1159F, S1159P, S13F, S549R(A->C), S549R(T->G), S589N, S737F, S912L, T1036N, T1053I, T1246I, T604I, V1153E, V1240G, V1293G, V201M, V232D, V456A, V456F, V562I, W1098C, W1098R, W1282R, W361R, W57G, W57R, Y1014C, Y1032C, Y109N, Y161D, Y161S, Y563D, Y563N, Y569C, şi Y913C. În unele realizări, pacientul are cel puţin o mutaţie combinată aleasă dintre: G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R, S1251N, E193K, F1052V, G1069R, R117C, D110H, R347H, R352Q, E56K, P67L, L206W, A455E, D579G, S1235R, S945L, R1070W, F1074L, D110E, D1270N, D1152H, 1717-1G->A, 621+1G->T, 3120+1G->A, 1898+1G->A, 711+1G->T, 2622+1G->A, 405+1G->A, 406-1G->A, 4005+1G->A, 1812-1G->A, 1525-1G->A, 712-1G->T, 1248+1G->A, 1341+1G->A, 3121-1G->A, 4374+1G->T, 3850-1G->A, 2789+5G->A, 3849+10kbC->T, 3272-26A->G, 711+5G->A, 3120G->A, 1811+1,6kbA->G, 711+3A->G, 1898+3A->G, 1717-8G->A, 1342-2A->C, 405+3A->C, 1716G/A, 1811+1G->C, 1898+5G->T, 3850-3T->G, IVS14b+5G->A, 1898+1G->T, 4005+2T->C, şi 621+3A->G. În unele realizări, pacientul are cel puţin o mutaţie combinată aleasă dintre: 1949del84, 3141del9, 3195del6, 3199del6, 3905InsT, 4209TGTT->A, A1006E, A120T, A234D, A349V, A613T, C524R, D192G, D443Y, D513G, D836Y, D924N, D979V, E116K, E403D, E474K, E588V, E60K, E822K, F1016S, F1099L, F191V, F311del, F311L, F508C, F575Y, G1061R, G1249R, G126D, G149R, G194R, G194V, G27R, G314E, G458V, G463V, G480C, G622D, G628R, G628R(G->A), G91R, G970D, H1054D, H1085P, H1085R, H1375P, H139R, H199R, H609R, H939R, I1005R, I1234V, I1269N, I1366N, I175V, I502T, I506S, I506T, I601F, I618T, I807M, I980K, L102R, L1324P, L1335P, L138ins, L1480P, L15P, L165S, L320V, L346P, L453S, L571S, L967S, M1101R, M152V, M1T, M1V, M265R, M952I, M952T, P574H, P5L, P750L, P99L, Q1100P, Q1291H, Q1291R, Q237E, Q237H, Q452P, Q98R, R1066C, R1066H, R117G, R117L, R117P, R1283M, R1283S, R170H, R258G, R31L, R334L, R334Q, R347L, R352W, R516G, R553Q, R751L, R792G, R933G, S1118F, S1159F, S1159P, S13F, S549R(A->C), S549R(T->G), S589N, S737F, S912L, T1036N, T1053I, T1246I, T604I, V1153E, V1240G, V1293G, V201M, V232D, V456A, V456F, V562I, W1098C, W1098R, W1282R, W361R, W57G, W57R, Y1014C, Y1032C, Y109N, Y161D, Y161S, Y563D, Y563N, Y569C, şi Y913C. În unele realizări, pacientul are cel puţin o mutaţie combinată aleasă dintre:

D443Y;G576A;R668C,

F508C;S1251N,

G576A; R668C,

G970R; M470V,

R74W;D1270N,

R74W;V201M, şi

R74W;V201M;D1270N.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R, S1251N, E193K, F1052V şi G1069R. În unele realizări, această divulgare furnizează o metodă de tratare a CFTR cuprinzând administrarea unui compus cu Formula (I), (II), (III), (IV), (V), sau a unei săruri acceptabile farmaceutic a acestuia la un pacient care posedă o mutaţie CFTR umană selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R şi S1251N. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratatre simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre E193K, F1052V şi G1069R. În unele realizări, metoda produce o creştere a transportului de clorură faţă de transportul de clorură al liniei de bază a pacientului.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre R117C, D110H, R347H, R352Q, E56K, P67L, L206W, A455E, D579G, S1235R, S945L, R1070W, F1074L, D110E, D1270N şi D1152H. În unele realizări, metoda produce o creştere a transportului de clorură peste transportul de clorură al liniei de bază a pacientului.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre 1717-1G->A, 621+1G->T, 3120+1G->A, 1898+1G->A, 711+1G->T, 2622+1G->A, 405+1G->A, 406-1G->A, 4005+1G->A, 1812-1G->A, 1525-1G->A, 712-1G->T, 1248+1G->A, 1341+1G->A, 3121-1G->A, 4374+1G->T, 3850-1G->A, 2789+5G->A, 3849+10kbC->T, 3272-26A->G, 711+5G->A, 3120G->A, 1811+1,6kbA->G, 711+3A->G, 1898+3A->G, 1717-8G->A, 1342-2A->C, 405+3A->C, 1716G/A, 1811+1G->C, 1898+5G->T, 3850-3T->G, IVS14b+5G->A, 1898+1G->T, 4005+2T->C şi 621+3A->G. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre 1717-1G->A, 1811+1,6kbA->G, 2789+5G->A, 3272-26A->G şi 3849+10kbC->T. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre 2789+5G->A şi 3272-26A->G.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R, S1251N, E193K, F1052V, G1069R, R117C, D110H, R347H, R352Q, E56K, P67L, L206W, A455E, D579G, S1235R, S945L, R1070W, F1074L, D110E, D1270N, D1152H, 1717-1G->A, 621+1G->T, 3120+1G->A, 1898+1G->A, 711+1G->T, 2622+1G->A, 405+1G->A, 406-1G->A, 4005+1G->A, 1812-1G->A, 1525-1G->A, 712-1G->T, 1248+1G->A, 1341+1G->A, 3121-1G->A, 4374+1G->T, 3850-1G->A, 2789+5G->A, 3849+10kbC->T, 3272-26A->G, 711+5G->A, 3120G->A, 1811+1,6kbA->G, 711+3A->G, 1898+3A->G, 1717-8G->A, 1342-2A->C, 405+3A->C, 1716G/A, 1811+1G->C, 1898+5G->T, 3850-3T->G, IVS14b+5G->A, 1898+1G->T, 4005+2T->C şi 621+3A->G, şi o mutaţie CFTR umană selectată dintre F508del, R117H, şi G551D.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R, S1251N, E193K, F1052V şi G1069R, şi o mutaţie CFTR umană selectată dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R şi S1251N, şi o mutaţie CFTR umană selectată dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre E193K, F1052V şi G1069R, şi o mutaţie CFTR umană selectată dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, metoda produce o creştere a transportului de clorură faţă de transportul de clorură al liniei de bază a pacientului.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre R117C, D110H, R347H, R352Q, E56K, P67L, L206W, A455E, D579G, S1235R, S945L, R1070W, F1074L, D110E, D1270N şi D1152H, şi o mutaţie CFTR umană selectată dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, metoda produce o creştere a transportului de clorură care este peste transportul de clorură al liniei de bază a pacientului.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratere simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre 1717-1G->A, 621+1G->T, 3120+1G->A, 1898+1G->A, 711+1G->T, 2622+1G->A, 405+1G->A, 406-1G->A, 4005+1G->A, 1812-1G->A, 1525-1G->A, 712-1G->T, 1248+1G->A, 1341+1G->A, 3121-1G->A, 4374+1G->T, 3850-1G->A, 2789+5G->A, 3849+10kbC->T, 3272-26A->G, 711+5G->A, 3120G->A, 1811+1,6kbA->G, 711+3A->G, 1898+3A->G, 1717-8G->A, 1342-2A->C, 405+3A->C, 1716G/A, 1811+1G->C, 1898+5G->T, 3850-3T->G, IVS14b+5G->A, 1898+1G->T, 4005+2T->C şi 621+3A->G, şi o mutaţie CFTR umană selectată dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre 1717-1G->A, 1811+1,6kbA->G, 2789+5G->A, 3272-26A->G şi 3849+10kbC->T, şi o mutaţie CFTR umană selectată dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre 2789+5G->A şi 3272-26A->G, şi o mutaţie CFTR umană selectată dintre F508del, R117H.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R, S1251N, E193K, F1052V şi G1069R. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţia genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R şi S1251N. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre E193K, F1052V şi G1069R. În unele realizări, metoda produce o creştere a transportului de clorură faţă transportul de clorură al liniei de bază a pacientului.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre R117C, D110H, R347H, R352Q, E56K, P67L, L206W, A455E, D579G, S1235R, S945L, R1070W, F1074L, D110E, D1270N şi D1152H. În unele realizări, metoda produce o creştere a transportului de clorură care peste transportul de clorură al liniei de bază a pacientului.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R, S1251N, E193K, F1052V, G1069R, R117C, D110H, R347H, R352Q, E56K, P67L, L206W, A455E, D579G, S1235R, S945L, R1070W, F1074L, D110E, D1270N, D1152H, 1717-1G->A, 621+1G->T, 3120+1G->A, 1898+1G->A, 711+1G->T, 2622+1G->A, 405+1G->A, 406-1G->A, 4005+1G->A, 1812-1G->A, 1525-1G->A, 712-1G->T, 1248+1G->A, 1341+1G->A, 3121-1G->A, 4374+1G->T, 3850-1G->A, 2789+5G->A, 3849+10kbC->T, 3272-26A->G, 711+5G->A, 3120G->A, 1811+1,6kbA->G, 711+3A->G, 1898+3A->G, 1717-8G->A, 1342-2A->C, 405+3A->C, 1716G/A, 1811+1G->C, 1898+5G->T, 3850-3T->G, IVS14b+5G->A, 1898+1G->T, 4005+2T->C şi 621+3A->G, şi o mutaţie CFTR umană selectată dintre F508del, R117H, şi G551D, şi una sau mai multe mutaţii CFTR umane selectate dintre F508del, R117H, şi G551D.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R, S1251N, E193K, F1052V şi G1069R, şi una sau mai multe mutaţii CFTR umane selectate dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre G178R, G551S, G970R, G1244E, S1255P, G1349D, S549N, S549R şi S1251N, şi una sau mai multe mutaţii CFTR umane selectate dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre E193K, F1052V şi G1069R, şi una sau mai multe mutaţii CFTR umane selectate dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, metoda produce o creştere a transportului de clorură faţă de transportul de clorură al liniei de bază a pacientului.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre R117C, D110H, R347H, R352Q, E56K, P67L, L206W, A455E, D579G, S1235R, S945L, R1070W, F1074L, D110E, D1270N şi D1152H, şi una sau mai multe mutaţii CFTR umane selectate dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, metoda produce o creştere a transportului de clorură care este peste transportul de clorură al liniei de bază a pacientului.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre 1717-1G->A, 621+1G->T, 3120+1G->A, 1898+1G->A, 711+1G->T, 2622+1G->A, 405+1G->A, 406-1G->A, 4005+1G->A, 1812-1G->A, 1525-1G->A, 712-1G->T, 1248+1G->A, 1341+1G->A, 3121-1G->A, 4374+1G->T, 3850-1G->A, 2789+5G->A, 3849+10kbC->T, 3272-26A->G, 711+5G->A, 3120G->A, 1811+1,6kbA->G, 711+3A->G, 1898+3A->G, 1717-8G->A, 1342-2A->C, 405+3A->C, 1716G/A, 1811+1G->C, 1898+5G->T, 3850-3T->G, IVS14b+5G->A, 1898+1G->T, 4005+2T->C şi 621+3A->G, şi una sau mai multe mutaţii CFTR umane selectate dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre 1717-1G->A, 1811+1,6kbA->G, 2789+5G->A, 3272-26A->G şi 3849+10kbC->T, şi una sau mai multe mutaţii CFTR umane selectate dintre F508del, R117H, şi G551D. În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre 2789+5G->A şi 3272-26A->G, şi una sau mai multe mutaţii CFTR umane selectate dintre F508del, R117H, şi G551D.

În unele realizări, pacientul este heterozigot având o mutaţie care determină CF pe o alelă şi o altă mutatie care determină CF pe cealaltă alelă. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie care determină CF, incluzând, dar fără a se limita la, F508del pe o alelă CFTR şi o mutaţie CFTR pe a doua alelă CFTR care este asociată cu funcţionarea CFTR minimală, funcţionarea CFTR reziduală, sau cu un defect în activitatea de intrare în canalul CFTR.

În unele realizări, mutaţia care determină CF este selectată din Tabelul 5A. În unele realizări, pacientul este heterozigot, având o mutaţie care determină CF pe o alelă CFTR selectată dintre mutaţiile listate în tabelul din Fig. 4 şi o altă mutaţie care determină CF pe cealaltă alelă CFTR este selectată dintre mutaţiile CFTR listate în Tabelul 5A.

Tabelul 5A.

Mutaţii CFTR Q39X W57X E60X R75X E92X Q98X Y122X L218X Q220X C276X Q290X G330X W401X Q414X S434X S466X S489X Q493X W496X Q525X G542X Q552X R553X E585X G673X R709X K710X L732X R764X R785X R792X E822X W846X R851X Q890X S912X W1089X Y1092X E1104X R1158X R1162X S1196X W1204X S1255X W1282X Q1313X 621+1G→T 711+1G→T 711+5G→A 712-1G→T 405+1G→A 405+3A→C 406-1G→A 621+1G→T 1248+1G→A 1341+1G→A 1717-1G→A 1811+1,6kbA→-G 1811+1G→C 1812-1G→A 1898+1G→A 2622+1G→A 3120+1G→A 3120G→A 3850-1G→A 4005+1G→A 4374+1G→T 663delT 2183AA→G CFTRdel2,3 3659delC 394delTT 2184insA 3905insT 2184delA 1078delT 1154insTC 2183delAA→G 2143delT 1677delTA 3876delA 2307insA 4382delA 4016insT 2347delG 3007delG 574delA 2711delT 3791delC CFTRdele22-23 457TAT→G 2043delG 2869insG 3600+2insT 3737delA 4040delA 541delC A46D T338I R347P L927P G85E S341P L467P I507del V520F A559T R560T R560S A561E Y569D L1065P R1066C R1066M L1077P H1085R M1101K N1303K 2789+5G→A 3849+10kbC→ T 3272-26A→-G 711+3A→-G E56K P67L R74W D110E D110H R117C L206W R347H R352Q A455E D579G E831X S945L S977F F1052V R1070W F1074L D1152H D1270N R117H G178R S549N S549R G551D G551S G1244E S1251N S1255P G1349D

Tabelul 5B: Mutaţii CFTR

Criterii Mutaţie Mutaţii trunchiate S4X C276X G542X R792X E1104X G27X Q290X G550X E822X R1158X • %PI >50% şi/sau SwCl- >86 mmol/L Q39X G330X Q552X W846X R1162X W57X W401X R553X Y849X S1196X E60X Q414X E585X R851X W1204X • proteină fără lungime completă R75X S434X G673X Q890X L1254X E92X S466X Q685X S912X S1255X Q98X S489X R709X Y913X W1282X Y122X Q493X K710X W1089X Q1313X E193X W496X L732X Y1092X E1371X L218X C524X R764X W1098X Q1382X Q220X Q525X R785X R1102X Q1411X Mutaţii îmbinate 185+1G→ T 711+5G→A 1717-8G→A 2622+1G→ A 3121-1G→A • %PI >50% şi/sau SwCl- >86mmol/L 296+1G→ A 712-1G→T 1717-1G→A 2790-1G→C 3500-2A→G • nici una sau puţin 405+1G-→ A 1248+1G→ A 1811+1G→C 3040G→C (G970R) 3600+2insT ARNm matur 405+3A→ C 1249-1G→A 1811+1,6kbA →G 3850-1G-→A 406-1G→A 1341+1G→ A 1812-1G→A 3120G→A 4005+1G→ A 621+1G→ T 1525-2A→G 1898+1G→A 3120+1G-→ A 4374+1G→ T 711+1G→ T 1525-1G-→A 1898+1G→C 3121-2A→G Mică (≤3 nucleotide) introducere/deleţie (ins/del) mutaţii de deplasare a cadrului 182delT 1119delA 1782delA 2732insA 3876delA 306insA 1138insG 1824delA 2869insG 3878delG 365-366insT 1154insTC 2043delG 2896insAG 3905insT 394delTT 1161delC 2143delT 2942insT 4016insT • %PI >50% şi/sau SwCl- >86 mmol/L 442delA 1213delT 2183AA→Ga 2957delT 4021dupT 444delA 1259insA 2184delA 3007delG 4040delA 457TAT→ G 1288insTA 2184insA 3028delA 4279insA • proteină confuză şi/sau trunchiată 541delC 1471delA 2307insA 3171delC 4326delTC 574delA 1497delGG 2347delG 3659delC 663delT 1548delG 2585delT 3737delA 935delA 1609del CA 2594delGT 3791delC 1078delT 1677delTA 2711delT 3821delT Nu mică (>3 nucleotide) introducere/deleţie (ins/del) mutaţii de deplasare a cadrului CFTRdele2,3 1461ins4 2991del32 CFTRdele22,23 1924del7 3667ins4 124del23bp 2055del9→A 2105- 4010del4 852del22 4209TGTT→AA 2117del13insAGAAA 991del5 2721del11 • %PI >50% şi/sau SwCl- >86 mmol/L • proteină confuză şi/sau trunchiată Mutaţii de clasă II, III, IV nerespondente la Compusul III singur sau în combinaţie cu Compusul II sau Compusul IV A46Db V520F Y569Db N1303K G85E A559Tb L1065P R347P R560T R1066C L467Pb R560S L1077Pb I507del A561E M1101K • %PI>50% şi/sau SwCl >86 mmol/L ŞI • Nerespondente in vitro la Compusul III singur sau în combinaţie cu Compusul II sau Compusul IV Notă: %PI: procentaj din pacienţii heterozigoţi F508del-CFTR din registrul pacienţilor cu CFTR2 care au insuficienţă pancreatică; SwCl-: clorura medie din transpiraţie a pacienţilor heterozigoţi F508del-CFTR din registrul pacienţilor cu CFTR2 a Cunoscută de asemenea ca 2183delAA→G. b Date nepublicate.

Tabelul 5B de mai sus include anumite exemple de mutaţii CFTR cu funcţionare minimală, care sunt detectabile printr-un test de genotip cu eliminarea FDA, dar nu include o listă exhaustivă.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cu genotipuri F508del/MF (F/MF) (heterozigot pentru F508del şi o mutaţie MF care nu se aşteaptă să răspundă la modulatorii CFTR, cum ar fi Compusul III); cu genotipul F508del/F508del (F/F) (homozigot pentru F508del); şi/sau cu genotipurile F508del/intrare (F/G) (heterozigot pentru F508del şi o mutaţie de intrare cunoscută a fi respondentă a modulatorului CFTR (de exemplu, respondentă la Compusul III). În unele realizări, un pacient cu genotipuri F508del/MF (F/MF) are o mutaţie MF care nu este de aşteptat să răspundă la Compusul II, Compusul III, şi la ambii Compusul II şi Compusul III. În unele realizări, un pacient cu genotipuri F508del/MF (F/MF) are oricare dintre mutaţiile MF din Tabelul 5B.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie care determină CF, incluzând mutaţiile trunchiate, mutaţiile îmbinate, mutaţii cu deplasarea cadrului de introducere sau deleţie mică (≤3 nucleotide) (ins/del); mutaţii cu deplasarea cadrului de introducere sau deleţie nu mică (>3 nucleotide) (ins/del); şi mutaţii de clasă II, III, IV care nu răspund la Compusul III singur sau în combinaţie cu Compusul II sau Compusul IV.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este o mutaţie trunchiată. În unele realizări specifice, mutaţia trunchiată este o mutaţie trunchiată listată în Tabelul 5B.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este o mutaţie îmbinată. În unele realizări specifice, mutaţia îmbinată este o mutaţie îmbinată listată în Tabelul 5B.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este o mutaţie cu deplasarea cadrului de introducere sau deleţie mică (≤3 nucleotide) (ins/del). În unele realizări specifice, mutaţia cu deplasarea cadrului de introducere sau deleţie mică (≤3 nucleotide) (ins/del) este o mutaţie cu deplasarea cadrului de introducere sau deleţie mică (≤3 nucleotide) (ins/del) listată în Tabelul 5B.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie care determină CF aşteptată a fi şi/sau este respondentă la, pe baza datelor in vitro şi/sau clinice, la orice combinaţie de (i) un nou compus ales dintre cei divulgaţi aici (de exemplu, compuşii cu Formula (I), (II), (III), (IV), sau (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii lor deuteraţi), şi (ii) Compusul II, şi/sau Compusul III, şi/sau Compusul IV.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie care determină CF aşteptată a fi şi/sau este respondentă, pe baza datelor in vitro şi/sau clinice, la combinaţia triplă a unui nou compus ales dintre cei divulgaţi aici (de exemplu, compuşii cu Formula (I), (II), (III), (IV), sau (V), şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii lor deuteraţi), şi Compusul II, şi Compusul III.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este o mutaţie cu deplasarea cadrului de introducere sau deleţie nu mică (>3 nucleotide) (ins/del). În unele realizări specifice, mutaţia cu deplasarea cadrului de introducere sau deleţie nu mică (>3 nucleotide) este o mutaţie cu deplasarea cadrului de introducere sau deleţie nu mică (>3 nucleotide) (ins/del) listată în Tabelul 5B.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este o mutaţie de Clasă II, III, IV care nu răspunde la Compusul III singur sau la o combinaţie cu Compusul II sau Compusul IV. În unele realizări specifice, mutaţiile de Clasă II, III, IV care nu răspund la Compusul III singur sau în combinaţie cu Compusul II sau Compusul IV este o mutaţie de Clasă II, III, IV care nu răspunde la Compusul III singur sau în combinaţie cu Compusul II sau Compusul IV listată în Tabelul 5B.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie listată în Tabelul 5B.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie listată în Tabelul 5A, 5B, şi FIG. 4.

În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie listată în Tabelul 5A. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie listată în Tabelul 5B. În unele realizări, pacientul este heterozigot pentru F508del, şi cealaltă mutaţie genetică CFTR este orice mutaţie listată în FIG. 4.

În unele realizări, pacientul este homozigot pentru F508del.

În unele realizări, pacientul este heterozigot având o mutaţie care determină CF pe o alelă CFTR selectată dintre mutaţiile listate în tabelul din Fig. 4 şi o altă mutaţie care determină CF pe cealaltă alelă CFTR este selectată dintre mutaţiile CFTR listate în Tabelul 5B.

Pacienţii cu un genotip de mutaţie F508del/intrare sunt definiţi ca pacienţi care sunt heterozigoţi F508del-CFTR cu o a doua alelă CFTR care conţine o mutaţie asociată cu un defect de intrare şi care au demonstrat clinic că răspund la Compusul III. Exemple de astfel de mutaţii includ: G178R, S549N, S549R, G551D, G551S, G1244E, S1251N, S1255P, şi G1349D.

Pacienţi cu un genotip F508del/funcţionare reziduală sunt definiţi ca pacienţi care sunt heterozigoţi F508del-CFTR cu o a doua alelă CFTR care conţine o mutaţie care conduce la o cantitate redusă de proteină sau funcţionare la suprafaţa celulei care poate produce activitate CFTR parţială. Mutaţiile genei CFTR cunoscute că conduc la un fenotip de funcţionare reziduală includ în unele realizări, o mutaţie de funcţionare reziduală CFTR selectată dintre 2789+5G→ A, 3849+10kbC→T, 3272-26A4→ G, 711+3A→ G, E56K, P67L, R74W, D110E, D110H, R117C, L206W, R347H, R352Q, A455E, D579G, E831X, S945L, S977F, F1052V, R1070W, F1074L, D1152H, D1270N, E193K, şi K1060T. În unele realizări, mutaţia de funcţionare reziduală CFTR este selectată dintre R117H, S1235R, I1027T, R668C, G576A, M470V, L997F, R75Q, R1070Q, R31C, D614G, G1069R, R1162L, E56K, A1067T, E193K, sau K1060T. În unele realizări, mutaţia de funcţionare reziduală CFTR este selectată dintre R117H, S1235R, I1027T, R668C, G576A, M470V, L997F, R75Q, R1070Q, R31C, D614G, G1069R, R1162L, E56K, sau A1067T.

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de tratare, atenuare a severităţii, sau de tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-o compoziţie farmaceutică a acestei divulgări pacientului, cum ar fi un mamifer, în care pacientul posedă o mutaţie genetică CFTR selectată dintre mutaţiile listate în FIG. 4.

În unele realizări, compoziţia divulgată aici este utilă pentru tratarea, atenuarea severităţii, sau tratarea simptomatică a fibrozei chistice la pacienţii care prezintă activitate CFTR reziduală în membrana apicală a epiteliului respirator şi non-respirator. Prezenţa activităţii CFTR reziduale la suprafaţa epitelială poate fi cu uşurinţă detectată utilizând metode cunoscute în domeniu, de exemplu, tehnici electrofiziologice, biochimice, sau histochimice standard. Astfel de metode identifică activitatea CFTR utilizând tehnici electrofiziologice in vivo sau ex vivo, măsurarea concentraţiilor de Cl-din transpiraţie sau salivă, sau tehnici biochimice sau histochimice ex vivo pentru a monitoriza densitatea suprafeţei celulare. Utilizând astfel de metode, activitatea CFTR reziduală poate fi cu uşurinţă detectat pentru pacienţii care sunt heterozigoţi sau homozigoţi pentru o varietate de diferite mutaţii, incluzând pacienţii heterozigoţi pentru cea mai comună mutaţie, F508del, precum şi pentru alte mutaţii cum ar fi mutaţia G551D, sau mutaţia R117H. În unele realizări, compoziţiile divulgate în acest document sunt utile pentru tratarea, atenuarea severităţii, sau tratrea simptomatică a fibrozei chistice la pacienţii care prezintă o mică pȃnă la nici o activitate CFTR reziduală. În unele realizări, compoziţiile divulgate în acest document sunt utile pentru tratarea, atenuarea severităţii, sau tratarea simptomatică a fibrozei chistice la pacienţii care prezintă o mică pȃnă la nici o activitate CFTR reziduală în membrana apicală a epiteliului respirator.

În unele realizări, compoziţiile divulgate în acest document sunt utile pentru tratarea sau atenuarea severităţii fibrozei chistice la pacienţii care prezintă activitate CFTR reziduală utilizând metode farmacologice. Astfel de metode cresc cantitatea de CFTR prezentă la suprafaţa celulei, inducȃnd prin urmare o activitate CFTR absentă pȃnă acum la un pacient sau augmentȃnd nivelul existent de activitate CFTR reziduală la un pacient.

În unele realizări, compoziţiile divulgate în acest document sunt utile pentru tratarea sau atenuarea severităţii fibrozei chistice la pacienţii cu anumite genotipuri care prezintă activitate CFTR reziduală.

În unele realizări, compoziţiile divulgate în acest document sunt utile pentru tratarea, atenuarea severităţii, sau tratarea simptomatică a fibrozei chistice la pacienţii cu anumite fenotipuri clinice, de exemplu, un fenotip clinic uşor pȃnă la moderat care de obicei se corelează cu cantitatea de activitate CFTR reziduală din membrana apicală a epiteliului. Astfel de fenotipuri includ pacienţii care prezintă suficienţă pancreatică.

În unele realizări, compoziţiile divulgate în acest document sunt utile pentru tratarea, atenuarea severităţii, sau tratarea simptomatică a pacienţilor diagnosticaţi cu suficienţă pancreatică, pancreatită idiopatică şi absenţa bilaterală congenitală a vasului deferent, sau boală pulmonară uşoară în care pacientul prezintă activitate CFTR reziduală.

În unele realizări, această divulgare se referă la o metodă de augmentare sau de inducere a activităţii canalului anionic in vitro sau in vivo, cuprinzând punerea în contact a canalului cu o compoziţie divulgată aici. În unele realizări, canalul anionic este un canal de clorură sau un canal de bicarbonat. În unele realizări, canalul anionic este un canal de clorură.

Cantitatea exactă unei compoziţii farmaceutice necesare va varia de la subiect la subiect, depinzând de specie, vârsta, şi afecţiunea generală a subiectului, severitatea bolii, agentul particular, modul său de administrare, şi altele asemenea. Compuşii acestei divulgări pot fi formulaţi într-o formă unitară de dozare pentru uşurinţa administrării şi uniformitatea dozajului. Expresia „formă unitară de dozare« aşa cum s-a utilizat în acest document se referă la o unitate discfretă fizic de agent adecvată pentru pacientul care trebuie tratat. Se va înţelege, totuşi, că utilizarea zilnică totală a compuşilor şi compoziţiilor acestei divulgări va fi decisă de medicul curant în domeniul raţionamentului medical. Nivelul specific al dozei eficiente pentru orice pacient particular sau organism va depinde de o varietate de factori incluzând tulburarea care este tratată şi severitatea tulburării; activitatea compusului specific utilizat; compoziţia specifică utilizată; vârsta, greutatea corporală, sănătatea generală, sexul şi dieta pacientului; momentul administrării, calea de administrare, şi rata de excreţie a compusului specific utilizat; durata tratamentului; medicamentele utilizate în combinaţie sau coincidental cu compusul specific utilizat, şi factori similari bine cunoscuţi în domeniul medical. Termenul „pacient«, aşa cum s-a utilizat în acest document, înseamnă un animal, cum ar fi un mamifer, şi chiar mai mult cum ar fi un om.

În unele realizări, divulgarea este direcţionată de asemenea spre compuşi şi compoziţii pentru utilizare în metode de tratament utilizând compuşi marcaţi izotopic ai compuşilor anterior menţionaţi, care au aceleaşi structuri cum s-a divulgat aici cu excepţia faptului că unul sau mai mulţi atomi ai acestora au fost înlocuiţi cu un atom sau atomi având o masă atomică sau număr de masă care diferă de masa atomică sau numărul de masă al atomului care uzual apare natural (marcat izotopic). Exemple de izotopi care sunt disponibili comercial şi adecvaţi pentru divulgare includ izotopi de hidrogen, carbon, azot, oxigen, fosfor, fluor şi clor, de exemplu 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F şi respectiv 36Cl.

Compuşii şi sărurile marcate izotopic pot fi utilizaţi într-un număr de moduri benefice. Ei pot fi adecvaţi pentru medicamente şi/sau diferite tipuri de teste, cum ar fi testele de distribuţie ale ţesutului substratului. De exemplu, compuşii marcaţi cu tritiu (3H)- şi/sau carbon-14 (14C) sunt în special utili pentru diferite tipuri de teste, cum ar fi testele de distribuţie ale ţesutului substratului, din cauza preparării relativ simple şi dectabilităţii excelente. De exemplu, cei marcaţi cu deuteriu (2H) sunt utili terapeutic cu potenţiale avantaje terapeutice faţă de compuşii neetichetaţi cu 2H. În general, compuşii etichetaţi cu deuteriu (2H) şi sărurile pot avea stabilitate metabolică mai ridicată în comparaţie cu cei care nu sunt marcaţi izotopic din cauza efectului cinetic al izotopului descris mai jos. Stabilitatea metabolică mai ridicată se translatează direct într-o perioadă de înjumătăţire in vivo crescută, sau dozaje mai scăzute, care ar putea fi dorite. Compuşii marcaţi izotopic şi sărurile pot fi preparate uzual prin efectuarea procedurile divulgate în schemele de sinteză şi descrierea asociată, în partea exemplificativă şi în partea de preparare din prezentul text, înlocuind un reactant marcat non-izotopic cu un reactant marcat izotopic disponibil cu uşurinţă.

În unele realizări, compuşii marcaţi izotopic şi sărurile sunt cei marcaţi cu deuteriu (2H). În unele realizări specifice, compuşii marcaţi izotopic şi sărurile sunt marcaţi cu deuteriu (2H), în care unul sau mai mulţi atomi de hidrogen ai acestora au fost înlocuiţi cu deuteriu. În structurile chimice, deuteriul este reprezentat ca „2H« sau „D«.

Compuşii marcaţi cu deuteriu (2H) şi sărurile pot manipula metabolismul oxidativ al compusului pe calea efectului primar al izotopului cinetic. Efectul primar al izotopului cinetic este o modificare a ratei pentru o reacţie chimică care rezultă din modificarea nucleelor izotopice, care în schimb este cauzată de modificarea energiilor stării fundamentale necesară pentru formarea legăturii covalente după această modificare izotopică. Modificarea unui izotop mai greu conduce de obicei la o scădere a energiei stării fundamentale pentru o legătură chimică şi astfel cauzează o reducere a ratei care limitează ruperea legăturii. Dacă are loc ruperea legăturii în, sau în vecinătatea unei regiuni a punctului de sprijin de-a lungul coordonatei unei reacţii multi-produs, rapoartele de distribuţie ale produsului pot fi alterate substanţial. Pentru explicaţie: dacă deuteriul este legat la un atom de carbon la o poziţie nemodificabilă, diferenţele ratei de kM/kD = 2-7 sunt tipice. Pentru o discuţie suplimentară, vezi S. L. Harbeson şi R. D. Tung, Deuterium In Drug Discovery and Development, Ann. Rep. Med. Chem. 2011, 46, 403-417; şi T.G. Gant „Using deuterium in drug discovery: leaving the label in the drug« J. Med. Chem. 2014, 57, 3595-3611.

Concentraţia de izotop (de exemplu, deuteriu) încorporat în compuşii marcaţi izotopic şi sarea din divulgare poate fi definită prin factorul de îmbogăţire izotopică. Termenul „factor de îmbogăţire izotopică« aşa cum s-a utilizat în acest document înseamna raportul între abundenţa izotopică şi abundenţa naturală a unui izotop specificat. În unele realizări, dacă un substituent într-un compus din divulgare este denumit deuteriu, un astfel de compus are un factor de îmbogăţire izotopică pentru fiecare atom denumit deuteriu de cel puţin 3500 (52,5% încorporare de deuteriu la fiecare atom denumit deuteriu), cel puţin 4000 (60% încorporare de deuteriu), cel puţin 4500 (67,5% încorporare de deuteriu), cel puţin 5000 (75% încorporare de deuteriu), cel puţin 5500 (82,5% încorporare de deuteriu), cel puţin 6000 (90% încorporare de deuteriu), cel puţin 6333,3 (95% încorporare de deuteriu), cel puţin 6466,7 (97% încorporare de deuteriu), cel puţin 6600 (99% încorporare de deuteriu), sau cel puţin 6633,3 (99,5% încorporare de deuteriu).

La descoperirea şi dezvoltarea de agenţi terapeutici, persoana calificată în domeniu încearcă să optimizeze parametrii farmacocinetici în timp ce menţine proprietăţile dorite in vitro. Poate fi rezonabil să se presupuna că mulţi compuşi cu profile farmacocinetice slabe sunt susceptibili la metabolism oxidativ.

Cineva având calificare obişnuită în domeniu ar înţelege că deuterarea uneia sau mai multor poziţii labile metabolic pe un compus sau metabolit activ poate conduce la îmbunătăţirea uneia sau mai multor proprietăţi DMPK superioare în timp ce se menţine activitatea biologică în comparaţie cu analogii corespunzători de hidrogen. Proprietatea sau proprietăţile DMPK superioare pot avea un impact asupra expunerii, perioadei de înjumătăţire, eliminării, metabolismului, şi/sau chiar a necesităţii de alimente pentru absorbţia optimă a produsului medicamentos. Deuterarea poate modifica de asemenea metabolismul la alte poziţii non-deuterate ale compusului deuterat.

În unele realizări, divulgarea include derivaţi deuteraţi ai noilor compuşi divulgaţi aici şi sărurile lor acceptabile farmaceutic. Exemple nelimitative de compuşi deuteraţi sunt divulgate în FIG. 1.

În unele realizări, „Compusul III« aşa cum s-a utilizat în acest document include compusul deuterat divulgat în brevetul S.U.A. nr. 8.865.902, şi CTP-656.

În unele realizări, „Compusul III« este:

Realizări exemplificative din divulgare includ: noii compuşi divulgaţi aici (de exemplu, compuşii cu Formulele (I) - (V), sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii deuteraţi ai oricărora din cei anteriori, incluzând compuşii din FIG. 1 şi pe cei reprezentaţi specific aici) care pot fi preparaţi prin metode adecvate cunoscute în domeniu. De exemplu, ei pot fi preparaţi în conformitate cu procedurile descrise în WO2016/057572 şi prin sintezele exemplificative descrise mai jos în Exemple. De exemplu, derivaţii deuteraţi ai noilor compuşi cu Formulele (I) - (V) şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora pot fi preparaţi într-o manieră similară ca cea pentru compuşii cu Formulele (I) - (V) şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora prin utilizarea de intermediari şi/sau reactivi unde unul sau mai mulţi atomi de hidrogen sunt înlocuiţi cu deuteriu. De exemplu, vezi T.G. Gant „Using deuterium in drug discovery: leaving the label in the drug« J. Med. Chem. 2014, 57, 3595-3611.

În unele realizări, compuşii cu Formulele (III), (IV) şi (V) şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, şi derivaţii deuteraţi ale oricărora dintre cei anteriori sunt preparaţi cum s-a reprezentat în Schemele 1-2, în care variabilele acestora sunt fiecare şi independent ca cele pentru Formula (I), (II), (III), (IV), sau (V) de mai sus, şi în care fiecare Ra este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C4; şi fiecare Xa este ales în mod independent dintre F sau Cl. Afecţiunile adecvate cunoscute în domeniu pot fi utilizate pentru fiecare etapă reprezentată în scheme. În unele realizări, fiecare Xa pentru Formulele B, C, D, F, B-1, C-1, D-1, şi F-1 din Schemele 2-4 este în mod independent Cl. În unele realizări, fiecare Xa pentru Formulele D, L, O, şi P din Schema 6 este în mod independent F.

În unele realizări, aşa cum se arată în Schema 1, metodele cuprind punerea în reacţie a unui compus cu formula (F) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu formula (G) sau cu o sare a acestuia pentru a genera un compus cu formula (IIIa), o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat din oricare din cei anteriori.

Pot fi utilizate orice condiţii adecvate, cum ar fi cele pentru o reacţie nucleofilică de amină, cunoscut în domeniu. În unele realizări, reacţia reprezentată în Schema 1 este efectuată în prezenţa unei baze, cum ar fi un carbonat metalic (de exemplu, Na2CO3 sau K2CO3).

În unele realizări, compuşii cu Formula (IIIa), sărurile acceptabile farmaceutic ale acestora, sau derivaţii deuteraţi din oricare dintre cei anteriori, în care Y2 este N şi Y1 este CH în fiecare din Formulele (F), (G) şi (IIIa), sunt preparaţi prin metodele din Schema 1.

În unele realizări, este utilizată o sare a unui compus cu formula (G). În unele realizări, este utilizată o sare HCl a unui compus cu formula (G).

Un compus cu formula (F) sau o sare a acestuia şi un compus cu formula (G) sau o sare a acestuia pot fi preparaţi prin orice metodă adecvată cunoscută în domeniu, de exemplu, cele din WO2016/57572 şi cele din sintezele exemplificative descrise mai jos în Exemple.

În unele realizări, aşa cum se arată în Schema 2, un compus cu formula (F), o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori este preparat printr-o metodă care cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu formula (D) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu formula (E) sau cu o sare a acestuia. În unele realizări, compuşii cu formula (D), sărurile acestora, sau derivaţii deuteraţi ai oricărora dintre cei anteriori sunt preparaţi printr-o metodă care cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu formula (A) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu formula (B) sau cu o sare a acestuia pentru a genera un compus cu formula (C) sau o sare a acestuia; şi hidrolizarea compusului -C(O)ORa cu formula (C) pentru a genera un compus cu formula (D) sau o sare a acestuia. Orice condiţii adecvate cunoscute în domeniu pot fi utilizate pentru etapele (a), (b), şi (c) din Schema 2 de mai jos, cum ar fi cele pentru o reacţie de cuplare între acidul carboxilic şi sulfonamidă sau cele pentru o acilare a sulfonamidei pentru etapa (a), cele pentru hidroliza esterului pentru etapa (b), şi cele pentru o reacţie nucleofilică a aminei pentru etapa (c).

În unele realizări, etapa (a) din Schema 2 de mai jos este efectuată în prezenţa unei baze. În unele realizări specifice, etapa (a) este efectuată în prezenţa unei baze non-nucleofilice. În unele realizări, în etapa (a), reacţia unui compus cu formula (D) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu formula (E) sau cu o sare a acestuia cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu formula (D) sau cu o sare a acestuia cu un reactiv de cuplare, cum ar fi carbonil diimidazol (CDI), şi ulterior cu un compus cu formula (E) sau cu o sare a acestuia în prezenţa unei baze, cum ar fi o bază non-nucleofilică. În unele realizări, un compus cu formula (D) sau o sare a acestuia este reacţionată cu CDI înainte de reacţia cu un compus cu formula (E) sau cu o sare a acestuia, şi apoi ulterior cu un compus cu formula (E) sau cu o sare a acestuia în prezenţa unei baze, cum ar fi DBU (1,8-Diazabiciclo(5,4,0)undec-7-enă).

În unele realizări, etapa (b) din Schema 2 de mai jos este efectuată în prezenţa unei baze. În unele realizări, etapa (b) este efectuată în prezenţa unui baze apoase, cum ar fi hidroxid apos. În unele realizări, etapa (b) este efectuată în prezenţa unui hidroxid apos de metal, cum ar fi NaOH apos.

În unele realizări, etapa (c) din Schema 2 de mai jos este efectuată în prezenţa unei baze. În unele realizări, etapa (c) este efectuată în prezenţa unui carbonat metalic (de exemplu, Na2CO3 sau K2CO3).

În unele realizări, este divulgată aici o metodă de preparare a unui compus cu formula următoare:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori. Metoda cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu formula (F-1) sau o sare a acestuia cu un compus cu formula (G-1) sau o sare a acestuia, în care Xa este F sau Cl, aşa cum se arată în Schema 3:

Pot fi utilizate orice condiţii adecvate cunoscute în domeniu, cum ar fi cele pentru o reacţie nucleofilică a aminei. În unele realizări, reacţia prezentată în Schema 3 este efectuată în prezenţa unei baze, cum ar fi un carbonat metalic (de exemplu, Na2CO3 sau K2CO3).

În unele realizări, este utilizată o sare a compusului cu formula (G-1). În unele realizări, este utilizată o sare HCl a unui compus cu formula (G-1).

Un compus cu formula (F-1) sau o sare a acestuia şi un compus cu formula (G-1) sau o sare a acestuia pot fi preparate prin orice metodă adecvată cunoscută în domeniu, de exemplu, cele din WO2016/57572 şi cele din sintezele exemplificative descrise mai jos în Exemple.

În unele realizări, aşa cum se arată în Schema 4, un compus cu formula (F-1) sau o sare a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori este preparat printr-o metodă care cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu formula (D-1) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu formula (E-1) sau cu o sare a acestuia. În unele realizări, compuşii cu formula (D-1) sau săruri ale acestora, sau derivaţii lor deuteraţi sunt preparaţi printr-o metodă care cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu formula (A-1) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu formula (B-1) sau cu o sare a acestuia pentru a genera un compus cu formula (C-1) sau o sare a acestuia; şi hidrolizarea compusului -C(O)ORa cu formula (C-1) sau sare a acesteia pentru a genera un compus cu formula (D-1) sau o sare a acestuia. Orice condiţii adecvate cunoscute în domeniu pot fi utilizate pentru etapele (a-1), (b-1), şi (c-1) din Schema 4 de mai jos, cum ar fi cele pentru o reacţie de cuplare între acidul carboxilic şi sulfonamidă sau cele pentru o acilare a sulfonamidei pentru etapa (a-1), cele pentru hidroliza esterului pentru etapa (b-1), şi cele pentru o reacţie nucleofilică a aminei pentru etapa (c-1).

În unele realizări, etapa (a-1) din Schema 4 de mai jos este efectuată în prezenţa unei baze. În unele realizări, etapa (a-1) din Schema 4 de mai jos este efectuată în prezenţa unei baze non-nucleofilice. În unele realizări, în etapa (a-1), reacţia unui compus cu formula (D-1) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu formula (E-1) sau cu o sare a acestuia cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu formula (D-1) sau a unei săruri a acestuia cu un reactiv de cuplare, cum ar fi carbonil diimidazol (CDI), şi ulterior cu un compus cu formula (E-1) sau cu o sare a acestuia în prezenţa unei baze, cum ar fi o bază non-nucleofilică. În unele realizări, (i) un compus cu formula (D-1) sau o sare a acestuia este reacţionată cu CDI înainte de reacţia cu un compus cu formula (E-1) sau cu o sare a acestuia, şi apoi ulterior (ii) produsul reacţiei din etapa (i) este reacţionat cu un compus cu formula (E-1) sau cu o sare a acestuia în prezenţa unei baze, cum ar fi DBU (1,8-Diazabiciclo(5,4,0)undec-7-enă).

În unele realizări, etapa (b-1) din Schema 4 de mai jos este efectuată în prezenţa unei baze. În unele realizări, etapa (b-1) este efectuată în prezenţa unei baze apoase, cum ar fi hidroxidul apos. În unele realizări, etapa (b-1) este efectuată în prezenţa unui hidroxid apos metalic, cum ar fi NaOH apos.

În unele realizări, etapa (c-1) din Schema 4 de mai jos este efectuată în prezenţa unei baze. În unele realizări, etapa (c-1) este efectuată în prezenţa unui carbonat metalic (de exemplu, Na2CO3 sau K2CO3).

În Schema 4, Ra este ales dintre grupările alchil C1-C4; şi fiecare Xa este în mod independent ales dintre F sau Cl.

În unele realizări, metodele de preparare a unui compus cu Formulele (I) şi (II), în care X este NH sau N(alchil C1-C4) sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestora, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, cuprind punerea în reacţie a unui compus cu formula (L) sau a unei săruri a acestuia cu NR∗ 3 unde R∗ este H sau alchil C1-C4, cum s-a reprezentat în Schemele 5 şi 6:

Orice condiţii adecvate cunoscute în domeniu pot fi utilizate pentru reacţia de sulfoxaminare, de exemplu, pentru cele pentru adăugări electrofilice de amine. În unele realizări, reacţia de sulfoxaminare este efectuată în prezenţa unui agent de clorinare sau oxidare, cum ar fi N-clorosuccinimida (NCS).

În unele realizări, un compus cu formula (L) sau o sare a acestuia este preparată printr-o metodă cuprinzând oxidarea unităţii de sulf a

grupării dintr-un compus cu formula (M) sau sare a acestuia aşa cum se arată în Schema 7 de mai jos:

Orice condiţii adecvate cunoscute în domeniu pot fi utilizate pentru reacţia de oxidare. În unele realizări, oxidarea este efectuată în prezenţa unui acid peroxicarboxilic, cum ar fi acidul meta-Cloroperoxibenzoic (m-CPBA).

În unele realizări, un compus cu formula (M) sau o sare a acestuia este preparată printr-o metodă cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu formula (O) cu un compus cu formula (G) sau cu o sare a acestuia. Orice condiţii adecvate cunoscute în domeniu pot fi utilizate.

În unele realizări, un compus cu formula (O) sau o sare a acestuia este preparată printr-o metodă cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu formula (P) sau a unei săruri a acestuia cu o fenil disulfură cu formula (Q):

În unele realizări, un compus cu formula (P) sau o sare a acestuia este preparată prin amidarea grupării -C(O)OH dintr-un compus cu formula (D) sau sare a acestuia. Orice condiţii adecvate cunoscute în domeniu pot fi utilizate.

Realizările suplimentare includ:

1. un compus cu Formula I:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care:

• unul dintre Y1 şi Y2 este N şi celalalt este CH; • X este ales dintre O, NH, şi grupările N(alchil C1-C4); • R1 este ales dintre grupările ―(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi fiecare ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi

• fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; • fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; • fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; • k este 0 sau 1; • r este 0 sau 1; • m este 0, 1, 2, sau 3; • n este 0 sau 1; • p este 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi • q este 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8.

2. Un compus din realizarea 1, în care compusul este cu Formula II:

• X este ales dintre O, NH, şi grupările N(alchil C1-C4); • R1 este ales dintre grupările ―(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

3. Un compus din realizarea 1, în care compusul este cu Formula III:

• R1 este ales dintre grupările ―(CR2)k-O―(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi fiecare aleşi în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi

4. Un compus în conformitate cu oricare din realizările 1-3, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care dacă R2 este ciano, atunci respectivul R2 este meta sau para faţă de atomul de sulf.

5. Un compus în conformitate cu oricare din realizările 1-3, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care:

• fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi • fiecare R este ales în mod independent dintre H şi OH; • fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, şi halogeni; • R4 este F; • k este 0; • p este 0, 1, sau 2; • q este 0, 1, 2, 3, sau 4; • r este 0; şi

în care m şi n nu sunt 0 în acelaşi timp.

6. Un compus în conformitate cu realizarea 5, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care:

• R1 este ales dintre grupările -O―(CR2)m-Inel A, în care Inelul A este ales dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi • m este 1 sau 2.

7. Un compus în conformitate cu realizarea 6, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care fiecare R3 este o grupare metil şi q este 3 sau 4.

8. Un compus în conformitate cu realizarea 7 având Formula IV:

• Inelul A este ales dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni; şi • fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, F, Cl, şi grupările alcoxi C1-C2; • m este 1 sau 2; şi • p este 0, 1, sau 2.

9. Un compus în conformitate cu realizarea 8, în care p este 0 sau 1.

10. Un compus în conformitate cu realizarea 8, în care p este 0.

11. Un compus în conformitate cu realizarea 8 având Formula V:

12. Un compus în conformitate cu oricare dintre realizările 1-11, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care fiecare R2 este ales în mod independent dintre CH3, OH, F, şi OCH3.

13. Un compus în conformitate cu realizarea 12, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care p este 0 sau 1.

14. Un compus în conformitate cu realizarea 13, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care p este 0.

15. Un compus în conformitate cu realizarea 11, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterated al oricăruia dintre cei anteriori, în care Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare alchil C1 halogenată sau cu o grupare alchil C2 halogenată.

16. Un compus în conformitate cu realizarea 15, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3.

17. Un compus în conformitate cu realizarea 11, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care m este 1, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3, p este 0 sau 1, şi R2, dacă este prezent, este o grupare metil, o grupare hidroxi, sau o grupare metoxi.

18. Un compus în conformitate cu realizarea 11, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care m este 2, Inelul A este o grupare cicloalchil C3 substituită cu o grupare CF3, p este 0 sau 1, şi R2, dacă este prezent, este o grupare metil, o grupare hidroxi, sau o grupare metoxi.

19. Un compus în conformitate cu realizarea 17 sau 18, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care m este 2, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3, şi p este 0.

20. Un compus în conformitate cu realizarea 11, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care Inelul A este ales dintre grupările bicicloalchil C5 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni.

21. Un compus în conformitate cu realizarea 20, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care Inelul A este o grupare bicicloalchil C5 substituită opţional cu un halogen.

22. Un compus în conformitate cu realizarea 11, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care Inelul A este ales dintre grupările bicicloalchil C7 şi grupările tricicloalchil C7 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni.

23. Un compus în conformitate cu realizarea 22, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care Inelul A este o grupare tricicloalchil C7 nesubstituită.

24. Un compus având o formulă aleasă dintre oricare din formulele reprezentate în FIG. 1, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori.

25. Un compus în conformitate cu realizarea 1 având formula următoare:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori.

26. Un compus în conformitate cu realizarea 1 având formula următoare:

27. Un compus în conformitate cu realizarea 1 având formula următoare:

28. Un compus în conformitate cu realizarea 1 având formula următoare:

29. Un compus în conformitate cu realizarea 1 având formula următoare:

32. Un compus în conformitate cu realizarea 1 având formula următoare:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia.

33. Un compus având formula următoare:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia.

34. Un compus în conformitate cu realizarea 1 având formula următoare:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia.

35. O compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin un compus ales dintre compuşii din oricare dintre realizările 1-34, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, şi opţional unul sau mai mulţi dintre:

(a) Compusul II:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori;

(b) Compusul III:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori; şi

(c) un purtător acceptabil farmaceutic.

36. O compoziţie farmaceutică în conformitate cu realizarea 35 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

37. O metodă de preparare a unui compus cu Formula (IIIa):

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu Formula (F) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (G) sau cu o sare a acestuia pentru a genera respectivul compus cu Formula (IIIa) sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori:

în care în fiecare din respectivele formule:

• unul dintre Y1 şi Y2 este N şi celălalt este CH; • fiecare R1 este ales în mod independent dintre grupările ―(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

• fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; • fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; • fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; • Xa este ales dintre F sau Cl; • fiecare k este în mod independent 0 sau 1; • fiecare r este în mod independent 0 sau 1; • fiecare m este în mod independent 0, 1, 2, sau 3; • fiecare n este în mod independent 0 sau 1; • fiecare p este în mod independent 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi • fiecare q este în mod independent 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8.

38. Metoda din realizarea 37, în care fiecare Y2 este în mod independent N; şi fiecare Y1 este în mod independent CH.

39. Metoda din realizarea 37 sau 38, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (F) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (G) sau cu o sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze.

40. Metoda din oricare dintre realizările 37-39, în care este utilizată o sare compusului cu Formula (G).

41. Metoda din realizarea 40, în care respectiva sare a compusului cu Formula (G) este o sare HCl a compusului cu Formula (G).

42. O metodă de preparare a unui compus cu Formula (F) sau a unei săruri a acestuia:

sau a unui derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu Formula (D) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (E) sau cu o sare a acestuia pentru a genera un compus cu formula (F) sau o sare a acestuia:

, în care în fiecare din respectivele formule:

• unul dintre Y1 şi Y2 este în mod independent N şi celălalt este în mod independent CH; • fiecare R1 este ales în mod independent dintre grupările ―(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

• fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; • fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; • Xa este ales dintre F sau Cl; • fiecare k este în mod independent 0 sau 1; • fiecare r este în mod independent 0 sau 1; • fiecare m este în mod independent 0, 1, 2, sau 3; • fiecare n este în mod independent 0 sau 1; şi • fiecare p este în mod independent 0, 1, 2, 3, 4, sau 5.

43. Metoda din realizarea 42, în care fiecare Y2 este în mod independent N; şi fiecare Y1 este în mod independent CH.

44. Metoda din realizarea 42 sau 43, în care respectiva puner în reacţie a unui compus cu Formula (D) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu formula (E) sau sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze.

45. Metoda din realizarea 42 sau 43, în care respectiva punerea în reacţie a unui compus cu Formula (D) sau sare a acestuia cu un compus cu Formula (E) sau sare a acestuia cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu Formula (D-1) cu un reactiv de cuplare şi ulterior cu un compus cu Formula (E-1) în prezenţa unei baze.

46. Metoda din realizarea 37 care este o metodă de preparare a unui compus cu formula următoare:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu Formula (F-1) sau a unei săruri a acestuia, în care Xa este ales dintre F sau Cl, cu un compus cu Formula (G-1) sau cu o sare a acestuia pentru a genera compusul menţionat sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori:

47. Metoda din realizarea 46, în care respectiva punerea în reacţie a unui compus cu Formula (F-1) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (G-1) sau cu o sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze.

48. Metoda din realizarea 46 sau 47, în care este utilizată o sare compusului cu Formula (G-1).

49. Metoda din realizarea 48, în care respectiva sare a compusului cu Formula (G-1) este o sare HCl a unui compus cu formula (G-1).

50. Metoda din realizarea 42 care este o metodă de preparare a unui compus cu Formula (F-1) sau a unei săruri a acestuia:

sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu Formula (D-1) şi a unui compus cu Formula (E-1) pentru a genera un compus cu Formula (F-1) sau o sare a acestuia:

în care fiecare Xa este ales în mod independent dintre F sau Cl.

51. Metoda din realizarea 50, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (D-1) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (E-1) sau cu o sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze.

52. Metoda din realizarea 50, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (D-1) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (E-1) sau cu o sare a acestuia cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu Formula (D-1) cu un reactiv de cuplare şi ulterior cu un compus cu Formula (E-1) în prezenţa unei baze.

53. O metodă de preparare a unui compus cu Formula (D) sau a unei săruri a acestuia:

sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, cuprinzând:

(i) punerea în reacţie a unui compus cu Formula (A) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (B) sau cu o sare a acestuia pentru a genera un compus cu Formula (C) sau o sare a acestuia:

şi

(ii) hidrolizarea grupării ―C(O)ORa dintr-un compus cu Formula (C) pentru a genera un compus cu Formula (D) sau o sare a acestuia, în care în fiecare din respectivele formule:

- unul dintre Y1 şi Y2 este în mod independent N şi celălalt este în mod \tabindependent CH; - fiecare R1 este ales în mod independent dintre grupările -(CR2)k-O-\tab(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

- fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni;

-fiecare Ra este ales în mod independent dintre alchil C1-C4;

- fiecare Xa este ales în mod independent dintre F sau Cl;

- fiecare k este în mod independent 0 sau 1;

- fiecare r este în mod independent 0 sau 1;

- fiecare m este în mod independent 0, 1, 2, sau 3;

- fiecare n este în mod independent 0 sau 1.

54. Metoda din realizarea 53, în care fiecare Y2 este în mod independent N; şi fiecare Y1 este în mod independent CH.

55. Metoda din realizarea 53 sau 54, în care hidroliza grupării -C(O)ORa este efectuată în prezenţa unei baze.

56. Metoda din oricare dintre realizările 53-55, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (A) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (B) sau cu o sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze.

57. Metoda din oricare dintre realizările 53-56, în care Ra este etil sau t-butil.

58. Metoda din realizarea 53 care este o metodă de preparare a unui compus cu Formula (D-1) sau o sare a acestuia:

sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, cuprinzând:

(i) punerea în reacţie a unui compus cu Formula (A-1) sau a unei săruri a acestuia şi unui compus cu formula (B-1) sau a unei săruri a acestuia pentru a genera un compus cu Formula (C-1) sau o sare a acestuia:

şi

(ii) hidrolizarea grupării ―C(O)OR3 dintr-un compus cu Formula (C-1) sau a unei săruri a acestuia pentru a genera un compus cu Formula (D-1) sau o sare a acestuia, în care fiecare Ra este ales în mod independent dintre alchil C1-C4; şi fiecare - Xa este ales în mod independent dintre F sau Cl.

59. Metoda din realizarea 58, în care hidroliza grupării ―C(O)ORa este efectuată în prezenţa unei baze.

60. Metoda din 58 sau 59, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (A-1) sau a unei săruri a acestuia şi a unui compus cu Formula (B-1) sau a unei săruri a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze.

61. Metoda din oricare dintre realizările 58-60, în care Ra este etil sau t-butil.

62. O metodă de preparare a unui compus cu Formula (I) sau a unei săruri acceptabile farmaceutic a acestuia, sau a unui derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu formula (L) sau a unei săruri a acestuia cu NR∗ 3 :

în care în fiecare din respectivele formule:

• X este NH sau N(alchil C1-C4); • unul dintre Y1 şi Y2 este în mod independent N şi celălalt este în mod independent CH; • fiecare R1 este ales în mod independent dintre grupările -(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1,

• fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; • fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; • fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; • R∗ este H sau alchil C1-C4. • Xa este ales dintre F sau Cl; • fiecare k este în mod independent 0 sau 1; • fiecare r este în mod independent 0 sau 1; • fiecare m este în mod independent 0, 1, 2, sau 3; • fiecare n este în mod independent 0 sau 1; • fiecare p este în mod independent 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi • fiecare q este în mod independent 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8.

63. Cel puţin un compus ales dintre compuşii din oricare dintre realizările 1-34, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, şi opţional unul sau mai mulţi dintre:

(a) Compusul II:

(b) Compusul III:

pentru tratarea fibrozei chistice.

Metode de prepararea compuşilor

Proceduri experimentale generale

Reactivii şi materiile prime au fost obţinute din surse comerciale dacă nu se afirmă altfel şi au fost utilizate fără purificare. Spectrele RMN ale protonului şi carbonului au fost obţinute fie pe un spectrometru FTNMR Bruker Biospin DRX 400 MHz care operează la o frecvenţă rezonantă cu 1H şi 13C de 400 şi respectiv 100 MHz, sau fie pe un spectrometru RMN 300 MHz. Un spectru dimensional al protonului şi carbonului a fost dobândit utilizând o sondă de observare de bandă largă (BBFO) cu rotaţia de 20 Hz a mostrei la o rezoluţie digitală de 0,1834 şi respectiv 0,9083 Hz/Pt. Toate spectrele protonului şi carbonului au fost obţinute cu controlul temperaturii la 30°C utilizând secvenţe de impuls standard, publicate anterior şi parametrii de procesare de rutină. Puritatea finală a compuşilor a fost determinată prin UPLC cu fază inversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, cu particulă de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare de gradient dual de la 1-99% fază mobilă B peste 3,0 minute. Faza mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Faza mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Debit = 1,2 mL/min, volum de injecţie = 1,5 µL, şi temperatura coloanei = 60°C. Puritatea finală a fost calculată prin medierea ariei de sub curbă (AUC) a celor două urme UV (220 nm, 254 nm). Spectrul de masă de rezoluţie scȃzută a fost raportat ca specii [M+H]+ obţinute utilizând un singur spectrometru de masă cvadripol echipat cu o sursă de ionizare prin electropulverizare (ESI) capabilă să obţină o precizie a masei de 0,1 Da şi o rezoluţie minimă de 1000 (nici o unitate pe rezoluţie) de-a lungul intervalului de detecţie. Puritatea optică a (2S)-2,4-dimetil-4-nitro-pentanoatului de metil a fost determinată utilizând analiza cromatografică chirală de gaz (GC) pe un instrument Agilent 7890A/MSD 5975C, utilizând o coloană Restek Rt-βDEXcst (30m × 0,25mm × 0,25um_df), cu un debit de 2,0 mL/min (gaz purtător de H2), la o temperatură de injecţie de 220°C şi o temperatură a cuptorului de 120°C, 15 minute.

Exemplul 1: Prepararea unei dispersii uscate pulverizate (SDD) a Compusului 1

O dispersie uscată pulverizată a Compusului 1 a fost preparată utilizând uscătorul cu pulverizare Buchi Mini B290. HPMCAS-HG (6,0 grame) a fost dizolvat în 200 mL de MeOH (metanol)/DCM (diclorometan) (1/1), şi s-a adăugat Compusul 1 (6,0 grame) şi s-a agitat timp de 30 minute formȃnd o soluţie clară. Soluţia rezultată a fost uscată pulverizat în următoarele condiţii conducând la o dispersie uscată pulverizată HG 50% Compus 1/50% HPMCAS (randament: 80%, încărcare solidă: 6%).

Condiţii Temperatură admisie (°C) 77 Temperatură evacuare (°C) 39 Presiune azot (PSI) 95 Aspirator (%) 100 Pompă (%) 30 Rotametru (mm) 60 Presiune filtrare (mBar) -50 Temperatură de condensare (°C) -10

Difracţie cu raze X pe pulbere

Măsurătorile de difracţie cu raze X pe pulbere au fost efectuate utilizând difractometrul PANalytical's X-pert Pro la temperatura camerei cu radiaţie de cupru (1,54060 Е). Fasciculul incident optic a fost cuprins într-o fantă de divergenţă variabilă pentru a asigura o lungime iluminată constantă pe mostră şi pe partea de fascicul difractat; a fost utilizat un detector rapid de stare solidă liniară cu o lungime activă de 2,12 grade 2 teta măsurată într-un mod scanare. Mostra de pulbere a fost ambalată pe aria indentată a unui suport cu zero fundal de siliciu şi rotaţia a fost efectuată pentru a obţine statistici mai bune. A fost măsurată o scanare simetrică de la 4-40 grade 2 teta cu o etapă de dimensionare de 0,017 grade şi un timp al etapei de scanare de 15,5s.

FIG. 2 prezintă spectrul XRPD al unui SDD de 50% Compus 1 în HPMCAS-HG, şi arată că Compusul 1 este amorf în SDD.

Calorimtrie modulată cu scanare diferenţială (MDSC)

MDSC a fost utilizată pentru a determina temperatura de tranziţie a sticlei materialului amorf. MDSC a fost efectuată utilizând calorimetrul cu scanare diferenţială TA Discovery DSC (TA Instruments, New Castle, DE). Instrumentul a fost calibrat cu indiu. Mostrele de aproximativ 1-3 mg au fost cântărite în tăvi ermetice care au fost sertizate utilizând capace cu o gaură. Mostra MDSC a fost scanată de la -20°C până la 210°C la o rată de încălzire de 2°C/min cu +/- 1°C de modulare într-un minut. Datele au fost colectate şi analizate cu software-ul TA Instruments Trios (TA Instruments, New Castle, DE).

FIG. 3 prezintă un spectru MDSC al unui SDD de 50% Compus 1 în HPMCAS-HG, şi arată că SDD are o temperatură de debut de aproximativ 75,6°C, o temperatură mediană de aproximativ 82,7°C, şi o temperatură de offset de aproximativ 89,7°C.

Exemplul 2: Sinteza compusului II: (R)-1-(2,2-Difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă

Etapa 1: (R)-Benzil 2-(1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropanoat şi ((S)-2,2-Dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil 2-(1-(((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropanoat

S-a adăugat carbonat de cesiu (8,23 g, 25,3 mmol) la un amestec de 2-(6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropanoat de benzil (3,0 g, 8,4 mmol) şi (S)-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil 4-metilbenzensulfonat (7,23 g, 25,3 mmol) în DMF (N,N-dimetilformamidă) (17 mL). Reacţia a fost agitată la 80°C timp de 46 ore sub o atmosferă de azot. Amestecul a fost apoi partiţionat între acetat de etil şi apă. Stratul apos a fost extras cu acetat de etil. Straturile combinate de acetat de etil au fost spălate cu saramură, uscate pe MgSO4, filtrate şi concentrate. Produsul brut, un ulei maro vâscos care conţine ambele produse prezentate mai sus, a fost luat direct în etapa următoare fără purificare suplimentară. (R)-Benzil 2-(1-((2,2-dimetil-1,3)-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropanoat, ESI-MS m/z calc. 470,2, găsit 471,5 (M+1)+ Timp de retenţie 2,20 minute. ((S)-2,2-Dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil 2-(1-(((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropanoat, ESI-MS m/z calc. 494,5, găsit 495,7 (M+1)+. Timp de retenţie 2,01 minute.

Etapa 2: (R)-2-(1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropan-1-ol

Amestecul de reacţie brut obţinut în etapa (A) a fost dizolvat în THF (tetrahidrofuran) (42 mL) şi răcit într-o baie de apă cu gheaţă. S-a adăugat în picătură LiAlH4 (16,8 mL de soluţie 1 M, 16,8 mmol). După ce adăugarea a fost completă, amestecul a fost agitat timp de încă 5 minute suplimentare. Reacţia a fost stinsă prin adăugare de apă (1 mL), 15% soluţie de NaOH (1 mL) şi apoi apă (3 mL). Amestecul a fost filtrat peste Celite, şi solidele au fost spălate cu THF şi acetat de etil. Filtratul a fost concentrat şi purificat prin cromatografie pe coloană (30-60% acetat de etil-hexani) pentru a obţine (R)-2-(1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropan-1-ol ca ulei maro (2,68g, 87 % în 2 etape). ESI-MS m/z calc. 366,4, găsit 367,3 (M+1)+. Timp de retenţie 1,68 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,34 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 4,94 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,64 - 4,60 (m, 1H), 4,52 - 4,42(m, 2H), 4,16 - 4,14 (m, 1H), 3,76 - 3,74 (m, 1H), 3,63 - 3,53 (m, 2H), 1,42 (s, 3H), 1,38 - 1,36 (m, 6H) şi 1,19 (s, 3H) ppm. (DMSO este dimetilsulfoxid).

Etapa 3: (R)-2-(5-amino-1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-1H-indol-2-il)-2-metilpropan-1-ol

(R)-2-(1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropan-1-ol (2,5 g. 6,82 mmol) a fost dizolvat în etanol (70 mL) şi reacţia a fost stropită cu N2. Apoi s-a adăugat Pd-C (250 mg, 5% g). Reacţia a fost stropită cu azot din nou şi apoi agitată sub H2 (atm). După 2,5 ore, prin LCMS s-a observat doar conversia parţială la produs. Reacţia a fost filtrată prin Celite şi concentrată. Reziduul a fost resupus condiţiilor de mai sus. După 2 ore LCMS a indicat finalizarea conversiei la produs. Amestecul de reacţie a fost filtrat prin Celite. Filtratul a fost concentrat pentru a da produsul (1,82 g, 79%). ESI-MS m/z calc. 336,2, găsit 337,5 (M+1)+. Timp de retenţie 0,86 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,17 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,03 (s, 1H), 4,79 - 4,76 (m, 1H), 4,46 (s, 2H), 4,37 - 4,31 (m, 3H),4,06 (dd, J = 6,1, 8,3 Hz, 1H), 3,70 - 3,67 (m, 1H), 3,55 - 3,52 (m, 2H), 1,41 (s, 3H), 1,32 (s, 6H) şi 1,21 (s, 3H) ppm.

Etapa 4: (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il) ciclopropancarboxamidă

S-a adăugat DMF (3 picături) pentru a agita un amestec de acid 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropancarboxilic (1,87 g, 7,7 mmol) şi clorură de tionil (1,30 mL, 17,9 mmol). După 1 oră s-a format o soluţie clară. Soluţia a fost concentrată sub vid şi apoi s-a adăugat toluen (3 mL) şi amestecul a fost concentrat din nou. Etapa cu toluen s-a repetat încă o dată şi reziduul a fost plasat în vid ridicat timp de 10 minute. Clorura acidă s-a dizolvat apoi în diclorometan (10 mL) şi a fost adăugată la un amestec de (R)-2-(5-amino-1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-1H-indol-2-il)-2-metilpropan-1-ol (1,8 g, 5,4 mmol) şi trietilamină (2,24 mL, 16,1 mmol) în diclorometan (45 mL). Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 1 oră. Reacţia a fost spălată cu soluţie 1N HCl, saturată cu soluţie de NaHCO3 şi saramură, uscată pe MgSO4 şi concentrată pentru a da produsul (3g, 100%). ESI-MS m/z calc. 560,6, găsit 561,7 (M+1)+. Timp de retenţie 2,05 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,31 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,42 - 7,40 (m, 2H), 7,34 - 7,30 (m, 3H), 6,24 (s, 1H), 4,51 - 4,48 (m, 1H), 4,39 - 4,34 (m,2H), 4,08 (dd, J = 6,0, 8,3 Hz, 1H), 3,69 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,58 - 3,51 (m, 2H), 1,48 - 1,45 (m, 2H), 1,39 (s, 3H), 1,34 - 1,33 (m, 6H), 1,18 (s, 3H) şi 1,14 - 1,12 (m, 2H) ppm

Etapa 5: (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă

(R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă (3,0 g, 5,4 mmol) a fost dizolvată în metanol (52 mL). S-a adăugat apă (5,2 mL) urmată de p-TsOH.H2O (acid hidrat p-toluensulfonic) (204 mg, 1,1 mmol). Reacţia a fost încălzită la 80°C timp de 45 minute. Soluţia a fost concentrată şi apoi partiţionată între acetat de etil şi solutie saturată de NaHCO3. Stratul de acetat de etil a fost uscat pe MgSO4 şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe coloană (50-100 % acetat de etil - hexani) pentru a da produsul. (1,3 g, 47 %, ee >98% by SFC). ESI-MS m/z calc. 520,5, găsit 521,7 (M+1)+. Timp de retenţie 1,69 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,31 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,42 - 7,38 (m, 2H), 7,33 - 7,30 (m, 2H), 6,22 (s, 1H), 5,01 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,90 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,75 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,40 (dd, J = 2,6, 15,1 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 8,7, 15,1 Hz, 1H), 3,90 (s, 1H), 3,65 - 3,54 (m, 2H), 3,48 - 3,33 (m, 2H), 1,48 - 1,45 (m, 2H), 1,35 (s, 3H), 1,32 (s, 3H) şi 1,14 - 1,11 (m, 2H) ppm.

Exemplul 3: Sinteza Compusului III: N-(2,4-di-terţ-butil-5-hidroxifenil)-4-oxo-1,4-dihidrochinolin-3-carboxamidă

Partea A: Sinteză de acid 4-oxo-1,4-dihidrochinolin-3-carboxilic

Etapa 1: ester dietilic al acidului 2-fenilaminometilen-malonic

Un amestec de anilină (25,6 g, 0,275 mol) şi dietil 2-(etoximetilen)malonat (62,4 g, 0,288 mol) a fost încălzit la 140-150°C timp de 2 ore. Amestecul a fost răcit la temperatura camerei şi uscat sub presiune redusă pentru a da esterul dietilic al acidului 2-fenilaminometilen-malonic ca solid, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. 1H RMN (DMSO-d6) δ 11,00 (d, 1H), 8,54 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 7,36-7,39 (m, 2H), 7,13-7,17 (m, 3H), 4,17-4,33 (m, 4H), 1,18-1,40 (m, 6H).

Etapa 2: ester etilic al acidului 4-hidroxichinolin-3-carboxilic

Un flacon de 1 L cu trei gȃturi dotat cu un agitator mecanic a fost încărcat cu ester dietil al acidului 2-fenilaminometilen-malonic (26,3 g, 0,100 mol), acid polifosforic (270 g) şi clorură de fosforil (750 g). Amestecul a fost încălzit la 70°C şi agitat timp de 4 ore. Amestecul a fost răcit la temperatura camerei şi filtrat. Reziduul a fost tratat cu soluţie apoasă de Na2CO3, filtrat, spălat cu apă şi uscat. Esterul etilic al acidului 4-hidroxichinolin-3-carboxilic a fost obţinut ca solid maro pal (15,2 g, 70%). Produsul brut a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară.

Etapa 3: acid 4-oxo-1,4-dihidrochinolin-3-carboxilic

Esterul etilic al acidului 4-hidroxichinolin-3-carboxilic (15 g, 69 mmol) a fost suspendat în soluţie de hidroxid de sodiu (2N, 150 mL) şi agitat timp de 2 ore la reflux. După răcire, amestecul a fost filtrat, şi filtratul a fost acidulat la pH 4 cu 2N HCl. Precipitatul rezultat a fost colectat prin filtrare, spălat cu apă şi uscat sub vid pentru a da acidul 4-oxo-1,4-dihidrochinolin-3-carboxilic ca solid alb pal (10,5 g, 92 %). 1H RMN (DMSO-d6) δ 15,34 (s, 1 H), 13,42 (s, 1 H), 8,89 (s, 1H), 8,28 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,88 (m, 1H), 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,60 (m, 1H).

Partea B: Sinteză de N-(2,4-di-terţ-butil-5-hidroxifenil)-4-oxo-1,4-dihidrochinolin-3-carboxamidă

Etapa 1: Ester metilic al esterului de 2,4-di-terţ-butil-fenil al acidului carbonic

S-a adăugat în picătură cloroformiat de metil (58 mL, 750 mmol) la o soluţie de 2,4-di-terţ-butil-fenol (103,2 g, 500 mmol), Et3N (139 mL, 1000 mmol) şi DMAP (3,05 g, 25 mmol) în diclorometan (400 mL) răcită într-o baie de apă cu gheaţă la 0°C. Amestecul a fost lăsat să se încălzească la temperatura camerei în timp ce s-a agitat peste noapte, apoi a fost filtrat prin gel de siliciu (aprox. 1L) utilizând 10% acetat de etil ― hexani (~ 4 L) ca eluent. Filtratele combinate au fost concentrate pentru a da esterul metilic al esterului de 2,4-di-terţ-butil-fenil al acidului carbonic ca ulei galben (132 g, cant.). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,35 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 8,5, 2,4 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 1,30 (s, 9H), 1,29 (s, 9H).

Etapa 2: Esterul metilic al esterului de 2,4-di-terţ-butil-5-nitro-fenil al acidului carbonic şi esterul metilic al esterului de 2,4-di-terţ-butil-6-nitro-fenil al acidului carbonic

La un amestec agitat de ester metilic al esterului de 2,4-di-terţ-butil-fenil al acidului carbonic (4,76 g, 180 mmol) în acid sulfuric conc. (2 mL), răcit într-o baie de apă cu gheaţă, s-a adăugat un amestec răcit de acid sulfuric (2 mL) şi acid azotic (2 mL). Adăugarea a fost făcută încet astfel încât temperatura reacţiei nu a depăşit 50°C. Reacţia a fost lăsată să se agite timp de 2 ore în timp ce s-a încălzit la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost apoi adăugat în apă cu gheaţă şi extras în dietil eter. Stratul de eter a fost uscat (MgSO4), concentrat şi purificat prin cromatografie pe coloană (0 ― 10% acetat de etil ― hexani) pentru a da un amestec de ester metilic de ester 2,4-di-terţ-butil-5-nitro-fenil al acidului carbonic şi ester metilic de ester 2,4-di-terţ-butil-6-nitro-fenil al acidului carbonic ca solid galben pal (4,28 g), care a fost utilizat direct în etapa următoare.

Etapa 3: 2,4-Di-terţ-butil-5-nitro-fenol şi 2,4-Di-terţ-butil-6-nitro-fenol

Amestecul de ester metilic de ester 2,4-di-terţ-butil-5-nitro-fenil al acidului carbonic şi de ester metilic de ester 2,4-di-terţ-butil-6-nitro-fenil al acidului carbonic (4,2 g, 14,0 mmol) a fost dizolvat în MeOH (65 mL) înaintesă se adauge KOH (2,0 g, 36 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 2 ore. Amestecul de reacţie a fost apoi făcut acidic (pH 2-3) prin adăugare de HCl conc. şi partiţionat între apă şi dietil eter. Stratul de eter a fost uscat (MgSO4), concentrat şi purificat prin cromatografie pe coloană (0 ― 5 % acetat de etil ― hexani) pentru a furniza 2,4-di-terţ-butil-5-nitro-fenol (1,31 g, 29% în 2 etape) şi 2,4-di-terţ-butil-6-nitro-fenol. 2,4-Di-terţ-butil-5-nitro-fenol: 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,14 (s, 1H, OH), 7,34 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,30 (s, 9H). 2,4-Di-terţ-butil-6-nitro-fenol: 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 11,48 (s, 1H), 7,98 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,34 (s, 9H).

Etapa 4: 5-Amino-2,4-di-terţ-butil-fenol

La o soluţie refluxată de 2,4-di-terţ-butil-5-nitro-fenol (1,86 g, 7,40 mmol) şi formiat de amoniu (1,86 g) în etanol (75 mL) s-a adăugat Pd-5% g. pe carbon activat (900 mg). Amestecul de reacţie a fost agitat la reflux timp de 2 ore, răcit la temperatura camerei şi filtrat prin Celite. Celitele au fost spălate cu metanol şi filtratele combinate au fost concentrate pentru a da 5-amino-2,4-di-terţ-butil-fenol ca solid gri (1,66 g, cant.). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,64 (s, 1H, OH), 6,84 (s, 1H), 6,08 (s, 1H), 4,39 (s, 2H, NH2), 1,27 (m, 18H); timp de ret. HPLC 2,72 min, 10-99 % CH3CN, 5 min run; ESI-MS 222,4 m/z [M+H]+.

Etapa 5: N-(5-hidroxi-2,4-di-terţ-butil-fenil)-4-oxo-1H-chinolin-3-carboxamidă

La o suspensie de acid 4-oxo-1,4-dihidrochinolin-3-carboxilic (35,5 g, 188 mmol) şi HBTU (85,7 g, 226 mmol) în DMF (280 mL) s-a adăugat Et3N (63,0 mL, 451 mmol) la temperatura ambiantă. Amestecul a devenit omogen şi a fost lăsat să se agite timp de 10 min înainte ca 5-amino-2,4-di-terţ-butil-fenol (50,0 g, 226 mmol) să fie adăugat în porţii mici. Amestecul a fost lăsat să se agite peste noapte la temperatura ambiantă. Amestecul a devenit eterogen pe parcursul reacţiei. După ce toţi acizii s-au consumat (analiza LC-MS, MH+ 190, 1,71 min), solventul a fost îndepărtat în vid. S-a aăugat EtOH (alcool etilic) la materialul solid oranj pentru a produce o suspensie. Amestecul a fost agitat pe un evaporator rotativ (temperatura băii 65°C) timp de 15 min fără plasarea sistemului în vid. Amestecul a fost filtrat şi solidul capturat a fost spălat cu hexani pentru a furniza un solid alb care a fost cristalat EtOH. Et2O (dietil eter) a fost adăugat la solidul obţinut mai sus până când s-a format o suspensie. Amestecul a fost agitat pe un evaporator rotativ (temperatura băi 25°C) timp de 15 min fără plasarea sistemul în vid. Amestecul a fost filtrat şi solidul capturat. Această procedură a fost efectuată în total de cinci ori. Solidul obţinut după cea de a cincea precipitare a fost plasat sub vid peste noapte pentru a furniza N-(5-hidroxi-2,4-di-terţ-butil-fenil)-4-oxo-1H-chinolin-3-carboxamidă (38 g, 52%). Timp de ret. HPLC 3,45 min, 10-99% CH3CN, 5 min rulare; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,88 (s, 1H), 11,83 (s, 1H), 9,20 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,33 (dd, J = 8,2, 1,0 Hz, 1H), 7,83-7,79 (m, 1H), 7,76 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,54-7,50 (m, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,37 (s, 9H); ESI-MS m/z calc'd 392,21; găsit 393,3 [M+H]+.

Exemplul 4: Sinteza compuşilor 1-65

Exemplul sintetic 1: Sinteză de N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compusul 1)

Partea A: Sinteză de clorhidrat de (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină

Etapa 1: Sinteză de metil-2,4-dimetil-4-nitro-pentanoat

S-a adăugat tetrahidrofuran (THF, 4,5 L) la un reactor de sticlă de 20 L şi s-a agitat sub N2 la temperatura camerei. S-au încărcat apoi în reactor 2-Nitropropan (1,5 kg, 16,83 mol) şi 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-enă (DBU) (1,282 kg, 8,42 mol), şi temperatura cămăşii a fost crescută până la 50°C. Odată ce conţinutul reactorului a fost aproape de 50°C, s-a adăugat încet metil metacrilat (1,854 kg, 18,52 mol) peste 100 de minute. Temperatura reacţiei a fost menţinut la, sau aproape de 50°C timp de 21 ore. Amestecul de reacţie a fost concentrat în vid apoi transferat înapoi în reactor şi diluat cu metil terţ-butil eter (MTBE) (14 L). S-au adăugat 2 M HCl (7,5 L), şi acest amestec a fost agitat timp de 5 minute apoi lăsat să se decanteze. Au fost vizibile două straturi clare - o fază apoasă galbenă inferioară şi o fază organică verde superioară. Stratul apos a fost îndepărtat, şi stratul organic a fost agitat din nou cu 2 M HCl (3 L). După separare, spălările cu HCl au fost recombinate şi agitate cu MTBE (3 L) timp de 5 minute. Stratul apos a fost îndepărtat, şi toate straturile organice au fost combinate în reactor şi agitate cu apă (3 L) timp de 5 minute. După separare, straturile organice au fost concentrate în vid pentru a da un ulei verde tulbure. Acesta a fost uscat cu MgSO4 şi filtrat pentru a da metil-2,4-dimetil-4-nitro-pentanoate ca ulei verde clar (3,16 kg, randament 99%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 3,68 (s, 3H), 2,56 - 2,35 (m, 2H), 2,11 - 2,00 (m, 1H), 1,57 (s, 3H), 1,55 (s, 3H), 1,19 (d, J= 6,8 Hz, 3H).

Etapa 2: Sinteză de (2S)-2,4-dimetil-4-nitro-pentanoat de metil

Un reactor a fost încărcat cu apă purificată (2090 L; 10 vol) şi apoi cu fosfat de potasiu monobazic (27 kg, 198,4 moli; 13 g/L pentru încărcarea apei). PH-ul conţinutului reactorului a fost ajustat la pH 6,5 (± 0,2) cu 20% (m/v) soluţie de carbonat de potasiu. Reactorul a fost încărcat cu metil-2,4-dimetil-4-nitropentanoat racemic (209 kg; 1104,6 moli), şi Palatază 20000L lipază (13 L, 15,8 kg; 0,06 vol).

Amestecul de reacţie a fost ajustat la 32 ±2°C şi agitat timp de 15-21 ore, şi pH-ul 6,5 a fost menţinut utilizând o stare a pH-ului cu adăugarea automată a 20% soluţie de carbonat de potasiu. Când materia primă racemică fost convertită la >98% ee din enantiomerul S, după cum s-a determinat prin GC chirală, încălzirea externă a fost oprită. Reactorul a fost apoi încărcat cu MTBE (35 L; 5 vol), şi stratul apos a fost extras cu MTBE (de 3 ori, 400-1000L). Extractele organice combinate au fost spălate cu Na2CO3 apoasă (de 4 ori, 522 L, 18 % g/g 2,5 vol), apă (523 L; 2,5 vol), şi 10% NaCl apoasă (314 L, 1,5 vol). Stratul organic a fost concentrat în vid pentru a da (2S)-2,4-dimetil-4-nitro-pentanoat de metil ca ulei galben mobil (>98% ee, 94,4 kg; randament 45%).

Etapa 3: Sinteză de (3S)-3,5,5-trimetilpirolidin-2-onă

Un reactor de 20 L a fost purjat cu N2. Vasul a fost încărcat secvenţial cu DI clătit cu apă, Ni Raney® umed (2800 grade, 250 g), (2S)-2,4-dimetil-4-nitro-pentanoat de metil (1741g, 9,2 mol), şi etanol (13,9 L, 8 vol). Reacţia a fost agitată la 900 rpm, şi reactorul a fost stropit cu H2 şi menţinut la ~2,5 bar. Amestecul de reacţie a fost apoi încălzit la 60°C timp de 5 ore. Amestecul de reacţie a fost răcit şi filtrat pentru a îndepărta nichelul Raney, şi turta solidă a fost clătită cu etanol (3,5 L, 2 vol). Soluţia etanolică a produsului a fost combinată cu un al doilea lot egal dimensionat şi concentrată în vid pentru a o reduce până la un volum minim de etanol (~1,5 volume). S-a adăugat heptan (2,5 L), şi suspensia a fost concentrată din nou la ~1,5 volume. Acest lucru a fost repetat de 3 ori; suspensia rezultată a fost răcită la 0-5°C, filtrată sub sucţiune, şi spălată cu heptan (2,5 L). Produsul a fost uscat sub vid timp de 20 minute apoi transferat în tăvi de uscare şi uscat într-un cuptor cu vid la 40°C peste noapte pentru a da (3S)-3,5,5-trimetilpirolidin-2-onă ca solid alb cristalin (2,042 kg, 16,1 mol, 87 %). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 6,39 (s, 1H), 2,62 (ddq, J = 9,9, 8,6, 7,1 Hz, 1H), 2,17 (dd, J = 12,4, 8,6 Hz, 1H), 1,56 (dd, J = 12,5, 9,9 Hz, 1H), 1,31 (s, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,20 (d, J = 7,1 Hz, 3H).

Etapa 4: Sinteză de clorhidrat de (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină

Un reactor de 120 L căptuşit din sticlă a fost încărcat cu granule de hidrură de aluminiu litiu (2,5 kg, 66 mol) şi THF uscat (60 L) şi încălzit la 30°C. Suspensia rezultată a fost încărcată cu (S)-3,5,5-trimetilpirolidin-2-onă (7,0 kg, 54 mol) în THF (25 L) în 2 ore în timp ce s-a menţinut temperatura reacţiei de la 30 până la 40°C. După finalizarea adăugării, temperatura reacţiei a fost crescut până la 60 - 63°C şi menţinută peste noapte. Amestecul de reacţie a fost răcit la 22°C, apoi stins cu grijă prin adăugarea de acetat de etil (EtOAc) (1,0 L, 10 moli), urmat de un amestec de THF (3,4 L) şi apă (2,5 kg, 2,0 eq), şi apoi un amestec de apă (1,75 kg) cu 50 % hidroxid de sodiu apos (750 g, 2 echiv apă cu 1,4 echiv hidroxid de sodiu faţă de aluminiu), urmat de 7,5 L apă. După ce adăugarea a fost finalizată, amestecul de reacţie a fost răcit la temperatura camerei, şi solidul a fost îndepărtat prin filtrare şi spălat cu THF (3 Ч 25 L). Filtratul şi spalările au fost combinate şi tratate cu 5,0 L (58 moli) de 37% HCl apos (1,05 echiv.) în timp ce s-a menţinut temperatura sub 30°C. Soluţia rezultantă a fost concentrată prin distilare în vid la o suspensie. S-a adăugat izopropanol (8 L) şi soluţia a fost concentrată aproape de uscare prin distilare în vid. S-a adăugat izopropanol (4 L), şi produsul a fost suspendat prin încălzire până la aproximativ 50°C. S-a adăugat MTBE (6 L), şi suspensia a fost răcită la 2-5°C. Produsul a fost colectat prin filtrare şi clătit cu 12 L MTBE şi uscat într-un cuptor cu vid (55°C/300 torr/N2 roşu) pentru a da (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină·HCl ca solid alb cristalin (6,21 kg, randament 75%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,34 (br d, 2H), 3,33 (dd, J = 11,4, 8,4 Hz, 1H), 2,75 (dd, J = 11,4, 8,6 Hz, 1H), 2,50 - 2,39 (m, 1H), 1,97 (dd, J = 12,7, 7,7 Hz, 1H), 1,42 (s, 3H), 1,38 (dd, J = 12,8, 10,1 Hz, 1H), 1,31 (s, 3H), 1,05 (d, J = 6,6 Hz, 3H).

Partea B: Sinteză de N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxilpirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Sinteză de materii prime:

Sinteză de 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil

O soluţie de acid 2,6-dicloropiridin-3-carboxilic (10 g, 52,08 mmol) în THF (210 mL) a fost tratată succesiv cu dicarbonat de di-terţ-butil (17 g, 77,89 mmol) şi 4-(dimetilamino)piridină (3,2 g, 26,19 mmol) şi agitată peste noapte la temperatura camerei. În acest punct, s-a adăugat HCl 1N (400 mL), şi amestecul a fost agitat viguros timp de aproximativ 10 minute. Produsul a fost extras cu acetat de etil (2Ч300mL), şi straturile organice combinate au fost spălate cu apă (300 mL) şi saramură (150 mL) şi uscat pe sulfat de sodiu şi concentrat sub presiune redusă pentru a da 12,94 g (randament 96%) de 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil ca ulei incolor. ESI-MS m/z calc. 247,02, găsit 248,1 (M+1) +; Timp de retenţie: 2,27 minute. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) ppm 1,60 (s, 9H), 7,30 (d, J=7,9 Hz, 1H), 8,05 (d, J=8,2 Hz, 1H).

Sinteză de 3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

A fost pornit un reactor de 50L, şi cămaşa a fost setată la 20°C, cu agitare la 150 rpm, condensator de reflux (10°C) şi purjare cu azot. S-au adăugat MeOH (2,860 L) şi (E)-3-metoxiprop-2-enoat de metil (2,643 kg, 22,76 mol), şi reactorul a fost acoperit. Reacţia a fost încălzită până la o temperatură internă de 40°C, şi sistemul a fost setat pentru a menţine temperatura cămăşii la 40°C. S-a adăugat în porţii, prin pȃlnie de adăugare hidrat de hidrazină (1300 g de 55 %g/g, 22,31 moli) în 30 min. Reacţia a fost încălzită până la 60°C timp de 1 oră. Amestecul de reacţie a fost răcit la 20°C şi s-a adăugat trietiamină (2,483 kg, 3,420 L, 24,54 mol) în porţii, menţinând temperatura de reacţie <30°C. S-a adăugat o soluţie de anhidridă Boc (dicarbonat de di-terţ-butil) (4,967 kg, 5,228 L, 22,76 mol) în MeOH (2,860 L) în porţii menţinând temperatura <45°C. Amestecul de reacţie a fost agitat la 20°C timp de 16 ore. Soluţia de reacţie a fost concentrată parţial pentru a îndepărta MeOH, conducând la un ulei chihlimbariu deschis, clar. Uleiul rezultat a fost transferat în reactorul de 50L, agitat şi s-a adăugat apă (7,150 L) şi heptan (7,150 L). Adăugările au determinat precipitarea unei cantităţi mici de produs. Stratul apos a fost drenat într-un recipient curat, şi stratul de interfaţă şi heptan a fost filtrat pentru a separa solidul (produs). Stratul apos a fost transferat înapoi în reactor, şi solidul colectat a fost plasat înapoi în reactor şi amestecat cu stratul apos. A pâlnie de picurare a fost adăugată la reactor şi încărcată cu acid acetic (1,474 kg, 1,396 L, 24,54 mol) şi adăugat în picătură. Cămaşa a fost setată la 0°C pentru a absorbi exoterma care se stinge. După ce adăugarea a fost completă (pH=5), amestecul de reacţie a fost agitat timp de 1 oră. Solidul a fost colectat prin filtrare şi spălat cu apă (7,150 L), şi spălat a doua oară cu apă (3,575 L). Solidul cristalin a fost transferat într-un balon de 20L al unui evaporator rotativ, şi s-a adăugat heptan (7,150 L). Amestecul a fost suspendat la 45°C timp de 30 minute, şi 1-2 volume de solvent au fost distilate. Suspensia din flaconul evaporatorului rotativ a fost filtrată, şi solidele au fost spălate cu heptan (3,575 L). Solidul a fost uscat mai departe în vid (50°C, 15 mbar) pentru a da 5-oxo-1H-pirazol-2-carboxilat de terţ-butil (2921 g, 71%) ca solid cristalin grosier. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,95 (s, 1H), 7,98 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 5,90 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 1,54 (s, 9H).

Sinteză de 2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etanol

La o soluţie de hidrură de aluminiu litiu (293 mg, 7,732 mmol) în THF (10,00 mL) într-o baie cu gheaţă, s-a adăugat acid 2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]acetic (1,002 g, 5,948 mmol) în THF (3,0 mL) în picătură într-o perioadă de 30 minute menţinând temperatura de reacţie sub 20°C. Amestecul a fost lăsat să se încălzească gradual la temperatura ambiantă şi a fost agitat timp de 18 ore. Amestecul a fost răcit cu o baie cu gheaţă şi stins secvenţial cu apă (294 mg, 295 µL, 16,36 mmol), NaOH (297 µL de 6 M, 1,784 mmol), şi apoi apă (884,0 µL, 49,07 mmol) pentru a da un solid granular în amestec. Solidul a fost separat prin filtrare utilizând celite, şi precipitatul a fost spălat cu eter. Filtratul a fost uscat mai departe cu MgSO4 şi filtrat şi concentrat în vid pentru a da produsul cu THF rezidual şi eter. Amestecul a fost luat direct în etapa următoare fără purificare suplimentară.

Etapa 1: 3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

5-oxo-1H-pirazol-2-carboxilat de terţ-butil (1,043 g, 5,660 mmol), 2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etanol (916 mg, 5,943 mmol), şi trifenil fosfină (1,637 g, 6,243 mmol) au fost combinate în THF (10,48 mL) şi reacţia a fost răcită într-o baie cu gheaţă. S-a adăugat azodicarboxilat de diizopropil (1,288 g, 1,254 mL, 6,368 mmol) în picătură la amestecul de reacţie, şi reacţia a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei timp de 16 ore. Amestecul a fost evaporat, şi materialul rezultat a fost partiţionat între acetat de etil (30 mL) şi IN hidroxid de sodiu (30 mL). Stratul organic a fost separat, spălat cu saramură (30 mL), uscat pe sulfat de sodiu, şi concentrat. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de acetat de etil în hexani (0- 30%) pentru a da 3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,03 g, 57%). ESI-MS m/z calc. 320,13, găsit 321,1 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,72 minute.

Etapa 2: 3-[2-[1-(Trifluorometil)ciclopropil]etoxi]-1H-pirazol

3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,03 g, 3,216 mmol) a fost dizolvat în diclorometan (10,30 mL) cu acid trifluoroacetic (2,478 mL, 32,16 mmol), şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 2 ore. Reacţia a fost evaporată, şi uleiul rezultat a fost partiţionat între acetat de etil (10 mL) şi o soluţie saturată de bicarbonat de sodiu. Stratul organic a fost separat, spălat cu saramură, uscat pe sulfat de sodiu, şi evaporat pentru a da 3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]-1H-pirazol (612 mg, 86%). ESI-MS m/z calc. 220,08, găsit 221,0 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,5 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,86 (s, 1H), 7,50 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 5,63 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 4,14 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,01 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 0,96 - 0,88 (m, 2H), 0,88 - 0,81 (m, 2H).

Etapa 3: 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil

2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (687 mg, 2,770 mmol), 3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]-1H-pirazol (610 mg, 2,770 mmol), şi carbonat de potasiu proaspăt măcinat (459 mg, 3,324 mmol) au fost combinate în DMSO anhidru (13,75 mL). S-a adăugat 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (DABCO (1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan), 62 mg, 0,5540 mmol), şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub azot timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu apă (20 mL) şi agitat timp de 15 minute. Solidul rezultat a fost colectat şi spălat cu apă. Solidul a fost dizolvat în diclorometan şi uscat pe sulfat de magneziu. Amestecul a fost filtrat şi concentrat pentru a da 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,01 g, 84%). ESI-MS m/z calc. 431,12, găsit 432,1 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,88 minute.

Etapa 4: acid 2-Cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,01 g, 2,339 mmol) şi acidul trifluoroacetic (1,8 mL, 23,39 mmol) au fost combinate în diclorometan (10 mL) şi încălzite la 40°C timp de 3 ore. Reacţia a fost concentrată. S-au adăugat hexani, şi amestecul a fost concentrat din nou pentru a da acid 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (873 mg, 99%) ESI-MS m/z calc. 375,06, găsit 376,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,69 minute.

Etapa 5: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

O soluţie de acid 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (0,15 g, 0,3992 mmol) şi carbonil diimidazol (77 mg, 0,4790 mmol) în THF (2,0 mL) a fost agitată timp de o oră, şi s-a adăugat benzensulfonamidă (81 mg, 0,5190 mmol) şi DBU (72 µL, 0,4790 mmol). Reacţia a fost agitată timp de 16 ore, acidulată cu 1 M acid citric apos, şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de metanol în diclorometan (0-5%) pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (160 mg, 78%). ESI-MS mlz calc. 514,07, găsit 515,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,74 minute.

Etapa 6: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3carboxamidă

Un amestec de N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (160 mg, 0,3107 mmol), sare clorhidrat de (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (139 mg, 0,9321 mmol), şi carbonat de potasiu (258 mg, 1,864 mmol) în DMSO (1,5 mL) a fost agitat la 130°C timp de 17 ore. Amestecul de reacţie a fost acidulat cu 1 M acid citric apos şi extras cu acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate pentru a da un produs brut care a fost purificat prin HPLC cu fază inversă utilizȃnd un gradient de 10-99% acetonitril în 5 mM HCl apos pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (87 mg, 47%). ESI-MS m/z calc. 591,21, găsit 592,3 (M+1) +; Timp de retenţie: 2,21 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,48 (s, 1H), 8,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,04 - 7,96 (m, 2H), 7,81 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,77 - 7,70 (m, 1H), 7,70 - 7,62 (m, 2H), 6,92 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6,10 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 4,31 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 2,42 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 2,28 (dd, J = 10,2, 7,0 Hz, 1H), 2,17 - 2,01 (m, 3H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,52 (d, J= 9,4 Hz, 6H), 1,36 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,01 - 0,92 (m, 2H), 0,92 - 0,85 (m, 2H), 0,65 (d, J = 6,3 Hz, 3H). pKa: 4,95±0,06.

Sinteză de sare de sodiu de N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (sarea de sodiu a Compusului 1)

N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (1000 mg, 1,679 mmol) a fost dizolvat în etanol (19,87 ml) sub încălzire, filtrat clar printr-un filtru de seringă (0,2 µm), spălat cu etanol cald (10 ml) şi soluţia caldă a fost tratată cu 1M NaOH (1,679 ml, 1,679 mmol). Soluţia a fost evaporată la 30-35°C, coevaporată de 3 ori cu etanol (~20 ml), pentru a da un solid, care a fost uscat peste noapte sub vid într-un cabinet de uscare la 45°C cu un azot roşu pentru a da 951 mg a unui solid colorat crem. Solidul a fost uscat mai departe sub vid într-un cabinet de uscare la 45°C cu un azot roşu în timpul sfârşitului de săptămână. S-au obţinut 930 mg (89%) de sarea de sodiu de N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă ca un solid amorf alburiu. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,15 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,81 (dd, J = 6,7, 3,1 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 4,9, 2,0 Hz, 3H), 6,74 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,01 (d, J= 2,6 Hz, 1H), 4,29 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 2,93 - 2,78 (m, 2H), 2,07 (t, J= 7,1 Hz, 3H), 1,78 (dd, J = 11,8, 5,6 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 13,6 Hz, 6H), 1,33 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 1,00 - 0,92 (m, 2H), 0,89 (q, J = 5,3, 4,6 Hz, 2H), 0,71 (d, J= 6,3 Hz, 3H). EST-MS m/z calc. 591,2127, găsită 592,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 3,28 minute. XRPD (vezi FIG. 5).

Sinteză alternată de acid 2-Cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

Etapa 1: 3-hidroxi-1H-pirazol-4-carboxilat de etil

Un amestec de EtOH (20,00 L, 10 vol) şi dietil 2-(etoximetilen)propandioat (2000 g, 9,249 mol, 1,0 echiv) a fost adăugat sub azot purjat într-un reactor de 50 L echipat cu un condensator de reflux (10 °C) şi cămaşă setata la 40°C. Amestecul a fost agitat, şi apoi s-a adăugat hidrat de hidrazină (538,9 g de 55 %g/g, 523,7 mL de 55 %g/g, 9,249 mol, 1,00 echiv) în porţii printr-o pâlnie de adăugare. Odată ce adăugarea a fost completă, reacţia a fost încălzită la 75°C timp de 22 ore pentru a da o soluţie de etil 3-hidroxi-1H-pirazol-4-carboxilat care a fost utilizată direct în etapa următoare.

Etapa 2: 1-(terţ-butil) 4-etil 3-hidroxi-1H-pirazol-1,4-dicarboxilat

Soluţia de 3-hidroxi-1H-pirazol-4-carboxilat de etil a fost răcită de la 75°C până la 40°C, apoi s-a adăugat trietilamină (TEA) (46,80 g, 64,46 mL, 462,5 mmol, 0,05 echiv.). S-a adăugat în reactor o soluţie de Boc anhidridă (2,119 kg, 9,711 mol 1,05 echiv) în EtOH (2,000 L, 1 echiv) peste 35 min. Amestecul a fost agitat timp de 4 ore pentru a completa reacţia; s-a adăugat apoi apă (10,00 L, 5,0 vol) peste 15 minute. Amestecul rezultat a fost răcit la 20°C pentru a completa cristalizarea produsului. Cristalele au fost lăsate să se matureze timp de 1 oră, apoi amestecul a fost filtrat. Solidul a fost spălat cu un amestec de EtOH (4,000 L, 2,0 vol) şi apă (2,000 L, 1,0 vol). Solidul a fost apoi uscat în vid pentru a da 1-(terţ-butil)-4-etil-3-hidroxi-1H-pirazol-1,4-dicarboxilat (1530 g, 65%) ca solid cristalin, ca ac fin, incolor. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,61 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 4,20 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,56 (s, 9H), 1,25 (t, J = 7,1 Hz, 3H).

Etapa 3: 1-(terţ-butil) 4-etil 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1,4-dicarboxilat

Un reactor de 5L a fost pornit cu cămaşa setată la 40°C, agitȃnd la 450 rpm, cu condensator de reflux la temperatura camerei şi purjare de azot. Vasul a fost încărcat cu toluen (1,0L, 10,0 vol), 2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etanol (100,0g, 648,8 mmol, 1,0 echiv), şi 1-(terţ-butil) 4-etil 3-hidroxi-1H-pirazol-1,4-dicarboxilat (166,3 g, 648,8 mmol), şi amestecul a fost agitat. Amestecul de reacţie a fost încărcat cu trifenil fosfină (195,7 g, 746,1 mmol, 1,15 echiv), apoi reactorul a fost setat pentru a menţine o temperatura internă de 40°C. S-a adăugat diizopropil azoldicarboxilat (150,9 g, 746,1 mmol, 1,15 echiv) într-o pâlnie de adăugare şi s-a adăugat la reacţie în timp ce s-a menţinut temperatura reacţiei între 40 şi 50°C (adăugarea a fost exotermică, adăugarea exotermei controlată), şi s-a agitat timp de un total de 2,5 ore. Odată ce reacţia a fost considerată completă prin HPLC, s-a adăugat heptan (400 mL, 4 vol), soluţia a fost răcită la 20°C peste 60 minute, şi grupul de complex de trifenilfosfină oxid-DIAD (TPPO-DIAD) a cristalizat. Odată ajuns la temperatura camerei, amestecul a fost filtrat, şi solidul a fost spălat cu heptan (400 mL, 4,0 vol) şi tras uscat. Filtratul a fost utilizat în etapa următoare ca soluţie în toluen-heptan fără purificare suplimentară.

Etapa 4: 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazole4-carboxilat de etil

Un reactor de 500mL a fost pornit cu cămaşa setată la 40°C, agitȃnd la 450 rpm, cu condensator de reflux la temperatura camerei, şi purjare de azot. Vasul a fost încărcat cu o soluţie de toluen constând din aproximativ 160 mmol, 65,0 g de 1-(terţ-butil) 4-etil 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1,4-dicarboxilat în 3 vol de toluen (preparat prin concentrare unei porţiuni de 25% de filtrat din reacţia anterioară până la 4 volume într-un evaporator rotativ). Reacţia a fost setată pentru a menţine o temperatură internă la 40°C şi s-a adăugat KOH (33,1 g, 1,5 echiv. de 45% soluţie apoasă KOH) într-o porţie, conducând la o adăugare exotermică uşoară, în timp ce CO2 a fost generat după îndepărtarea grupării de protecţie. Reacţia a continuat timp de 1,5 ore, a fost monitorizată prin HPLC, cu cristalizarea parţială a produsului în timpul reacţiei. S-a adăugat heptan (160 mL, 2,5 vol) la amestecul de reacţie şi reacţia a fost răcită la temperatura camerei peste 30 minute. Amestecul rezultat a fost filtrat, şi solidul a fost spălat cu heptan (80,00 mL, 1,25 vol), tras uscat, apoi uscat în vid (55°C, vid). S-au obţinut 52,3 g de etil 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-4-carboxilat ca solid brut, incolor care a fost utilizat fără purificare suplimentară.

Etapa 5: acid 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-4-carboxilic

Un reactor de 500mL a fost pornit cu cămaşa setată la 40°C, agitȃnd la 450 rpm, cu condensator de reflux la temperatura camerei, şi purjare de azot. Vasul a fost încărcat cu metanol (150,0 mL, 3,0 vol), o soluţie de etil 3-(2-(1-(trifluorometil) ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-4-carboxilat (50,0 g, 171,1 mmol, 1,0 echiv), şi reacţia a fost agitată pentru a suspenda solidele. Reactorul a fost setat pentru a menţine temperatura internă la 40°C. La amestec s-a adăugat KOH (96 g de 45% KOH apoasă, 1,71 mol, 10,0 echiv) în porţii menţinând temperatura internă <50°C. Odată ce adăugarea a fost completă, reacţia a fost setată pentru a menţine temperatura la 50°C, şi reacţia a continuat timp de 23 ore, şi a fost monitorizată prin HPLC. Odată finalizată, reacţia a fost răcită la 10°C apoi concentrată parţial pe un evaporator rotativ pentru a îndepărta cea mai mare parte din MeOH. Soluţia rezultată a fost diluată cu apă (250 mL, 5,0 vol) şi 2-Me-THF (150 mL, 3,0 vol), şi transferată în reactor, agitată la temperatura camerei, apoi oprită, şi straturile au fost lăsate să se separe. Straturile au fost testat, cu complexul TPPO-DIAD rămas în stratul organic şi produs în stratul apos. Stratul apos a fost spălat din nou cu 2-Me-THF (100 mL, 2,0 vol), straturile separate, şi stratul apos întors în vasul reactorului. Agitatorul a fost pornit şi setat la 450 rpm, şi cămaşa reactorului a fost setată la 0°C. PH-ul a fost ajustat la pH acidic prin adăugarea de 6M HCl apos (427mL, 15 echiv) în porţii, menţinând temperatura internă între 10 şi 30°C. Produsul a început să cristalizeze aproape de pH neutru şi a fost însoţit de evacuări puternice de gaze, şi astfel acidul a fost adăugat încet, şi apoi adăugat mai departe pentru a atinge pH 1 odată ce evacuarea gazelor s-a terminat. La suspensia rezultată s-a adăugat 2-Me-THF (400 mL, 8,0 vol), şi produsul a fost lăsat să se dizolve în stratul organic. Agitarea a fost oprită, straturile au fost separate, şi stratul apos a fost întors în reactor, agitat şi reextras cu 2-Me-THF (100 mL, 2,0 vol). Straturile organice au fost combinate în reactor şi agitate la temperatura camerei, spălate cu saramură (100mL, 2 volume), uscate pe Na2SO4, filtrate prin celite, şi solidul a fost spălat cu 2-Me-THF (50 mL, 1,0 vol). Filtratul a fost transferat în flaconul unui evaporator rotativ curat, agitat, încălzit la 50°C şi s-a adăugat heptan (200 mL, 4,0 vol), şi apoi s-a concentrat parţial cu adăugare de heptan (300 mL, 6,0 vol) şi apoi s-a însămânţat cu 50mg de acid 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-4-carboxilic), şi produsul a cristalizat în timpul îndepărtării solventului. Distilarea a fost oprită când grupul de 2-Me-THF s-a distilat. Încălzitorul băii a fost oprit, vidul îndepărtat, şi amestecul a fost lăsat să se agite şi să se răcească la temperatura camerei. Amestecul a fost filtrat (viteză lentă) şi solidul a fost spălat cu heptan (100 mL, 2,0 vol), şi solidul a fost colectat şi uscat în vid (50°C, evaporator rotativ). S-au obţinut 22,47 g de acid 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-4-carboxilic ca un solid alburiu. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,45 (s, 2H), 8,01 (s, 1H), 4,26 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,05 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 0,92 (m, 4H).

Etapa 6: 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol

Un amestec de toluen (490,0 mL), acid 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-4-carboxilic (70,0 g, 264,9 mmol), şi DMSO (70,00 mL) a fost plasat într-un reactor şi încălzit la 100°C cu agitare. S-a adăugat în reactor DBU (aproximativ 20,16 g, 19,80 mL, 132,4 mmol) peste 15 min. Amestecul a fost agitat timp de 20 ore pentru a completa reacţia şi apoi răcit la 20°C. Amestecul a fost spălat cu apă (350,0 mL), apoi cu 0,5N HCl apos (280,0 mL), apoi apă (2 × 140,0 mL), şi în cele din urmă cu saramură (210,0 mL). Stratul organic a fost uscat cu Na2SO4, şi apoi s-a adăugat cărbune activat (5 g, Darco 100 mesh) la suspensia agitată. Amestecul uscat a fost filtrat prin celite, şi solidul a fost spălat cu toluen (140,0 mL) şi apoi tras uscat. Filtratul a fost concentrat într-un evaporator rotativ (50°C, vac) pentru a da 3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]-1H-pirazol (30,89 g, 53%) ca un ulei chihlimbariu. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,87 (s, 1H), 7,50 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 5,63 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,23 - 4,06 (m, 2H), 2,01 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 1,00 - 0,77 (m, 4H).

Etapa 7: 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de etil

Un amestec de DMF (180,0 mL), 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de etil (aproximativ 29,97 g, 136,2 mmol), 3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]-1H-pirazol (30,0 g, 136,2 mmol), şi K2CO3, (325 mesh, aproximativ 24,48 g, 177,1 mmol) a fost adăugat la un reactor agitat la 20°C. S-a adăugat apoi în reactor DABCO (aproximativ 2,292 g, 20,43 mmol), şi amestecul a fost agitat la 20°C timp de 1 oră, şi apoi temperatura a fost crescută până la 30°C, şi amestecul a fost agitat timp de 24 ore pentru a completa reacţia. Amestecul a fost răcit la 20°C; apoi s-a adăugat încet apă (360 mL). Amestecul a fost apoi drenat din reactor şi solidul a fost izolat prin filtrare. Solidul a fost apoi spălat cu apă (2 × 150 mL), şi apoi solidul a fost uscat sub vid la 55°C pentru a da etil 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxilat (51,37 g, 93%) ca solid fin, colorat în bej. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,44 (d, J= 2,9 Hz, 1H), 8,41 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,21 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,34 (m, 4H), 2,09 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 1,34 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,00 - 0,84 (m, 4H).

Etapa 8: acid 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxilic

O soluţie de 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de etil (50,0 g, 123,8 mmol) în THF (300,0 mL) a fost preparată într-un reactor la 20°C. S-a adăugat EtOH (150,0 mL), urmat de NaOH apoasă (aproximativ 59,44 g de 10 %g/g, 148,6 mmol). Amestecul a fost agitat timp de 1 oră pentru a completa reacţia; apoi s-a adăugat încet IN HCl apos (750,0 mL). Suspensia rezultată a fost agitată timp de 30 min la 10°C, şi apoi solidul a fost izolat prin filtrare. Solidul a fost spălat cu apă (150 mL apoi 2 × 100 mL) şi apoi tras uscat în vid. Solidul a fost apoi uscat mai departe sub vid cu încălzire pentru a da acid 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (42,29 g, 91%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (s, 1H), 8,48 - 8,35 (m, 2H), 7,73 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 6,20 (d, J= 2,9 Hz, 1H), 4,35 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,09 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 1,01 - 0,82 (m, 4H).

Exemplul sintetic 2: Sinteza Compusului 2, (R)-N-(Fenilsulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-(2,2,4-trimetilpirolidin-1-il)nicotinamidă

(R)-N-(Fenilsulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-(2,2,4-trimetilpirolidin-1-il)nicotinamida a fost sintetizată într-un mod analog cu Compusul 1 utilizând N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (1,5 g, 2,91 mmol), carbonat de potasiu (2,0 g, 14,56 mmol), (4R)-2,2,4-trimetilpirolidină (sare clorhidrat) (1,0 g, 6,7 mmol) în NMP (N-Metil-2-pirolidonă) (7,5 mL) şi 1,2-dietoxietan (1,5 mL) rezultând N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4R)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (1,38 g, 79%). ESI-MS m/z calc. 591,2127, găsit 592,0 (M+1) +; Timp de retenţie: 2,3 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,51 (s, 1H), 8,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,03 - 7,96 (m, 2H), 7,81 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,76 - 7,69 (m, 1H), 7,66 (dd, J = 8,3, 6,7 Hz, 2H), 6,91 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,11 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,31 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,41 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 2,27 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 2,07 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 9,4 Hz, 6H), 1,36 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 0,99 - 0,92 (m, 2H), 0,88 (tt, J = 3,9, 1,6 Hz, 2H), 0,64 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 3: Sinteza Compusului 3, (S)-N-((4-Hidroxi-3-metoxifenil) sulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-(2,2,4-trimetilpirolidin-1-il)nicotinamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-((4-hidroxi-3-metoxifenil)sulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil) ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinamidă

O soluţie de acid 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (0,843 g, 2,24 mmol) şi carbonil diimidazol (434 mg, 2,68 mmol) în THF (2,5 mL) a fost agitată timp de 2,5 ore, şi s-au adăugat 4-hidroxi-3-metoxibenzensulfonamidă (0,500 g, 2,46 mmol) şi DBU (0,5 mL, 3,35 mmol). Reacţia a fost agitată timp de 21 ore, diluată cu acetat de etil (5 mL), acidulată cu 1 N acid clorhidric apos (10 mL), şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de acetat de etil în hexani (50-100%) pentru a da 2-cloro-N-((4-hidroxi-3-metoxifenil)sulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinamidă (906 mg, 72%). ESI-MS m/z calc. 560,07, găsit 515,1 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,74 minute.

Etapa B: (S)-N-((4-Hidroxi-3-metoxifenil)sulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil) ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-(2,2,4-trimetilpirelidin-1-il)nicotinamidă

Un amestec de 2-cloro-N-((4-hidroxi-3-metoxifenil)sulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinamidă (906 mg, 1,62 mmol), sare clorhidrat de (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (545 mg, 3,64 mmol), şi carbonat de potasiu (1,29 g, 9,33 mmol) în DMSO (5,5 mL) a fost agitat la 120°C timp de 24 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 15 mL de apă şi 5 mL de acetat de etil. Amestecul de reacţie a fost apoi acidulat cu 6 N acid clorhidric apos, şi straturile au fost separate. Stratul apos a fost extras cu 10 mL de acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate pentru a da un produs brut care a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizȃnd un gradient de acetat de etil în hexani pentru a da (S)-N-((4-hidroxi-3-metoxifenil)sulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil) ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-(2,2,4-trimetilpirolidin-1-il)nicotinamidă (470 mg, 45%). ESI-MS m/z calc. 637,2, găsit 638,2 (M+1) +; Timp de retenţie: 10,07 minute.

Exemplul sintetic 4: Sinteza Compusului 4, N-(o-Tolilsulfonil)-6[3-[2-[1-(trinuorometit)cidoprepit]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxilpirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

La acidul 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (196 mg, 0,5217 mmol) în THF (1,739 mL) s-a adăugat 1,1'-carbonildiimidazol (aproximativ 106,6 mg, 0,6573 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de o oră. S-a adăugat 2-metilbenzensulfonamidă (aproximativ 89,32 mg, 0,5217 mmol), urmată de 1,8-diazabiciclo(5,4,0)undec-7-enă (DBU) (aproximativ 262,2 mg, 257,6 µL, 1,722 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 3 ore. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil şi 1 M acid citric apos şi straturile au fost separate. Straturile organice au fost uscate şi concentrate şi solidul rezultat, 2-cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (aproximativ 252 mg) a fost utilizat pentru etapa următoare fără caracterizare.

Etapa B: N-(o-Tolilsulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

La 2-cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (aproximativ 252 mg) şi carbonat de potasiu (392 mg, 2,84 mmol) în 0,4 mL de DMSO s-a adăugat (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (sare clorhidrat) (212 mg, 1,42 mmol) şi reacţia a fost agitată la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită, diluată cu acetat de etil şi 1 M acid citric apos şi straturile au fost separate. Organicele au fost uscate, concentrate şi reziduul rezultat a fost purificat cu gel de siliciu (24 g) eluând cu 0-14% metanol în diclorometan pentru a da N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (60,6 mg, 19%) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,63 (s, 1H), 8,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,04 (dd, J = 7,9, 1,4 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,58 (td, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H), 7,50 - 7,40 (m, 2H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,10 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,31 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,39 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,16 (ddt, J = 11,8, 9,0, 4,5 Hz, 1H), 2,08 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,6 Hz, 1H), 1,52 (s, 6H), 1,35 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,00 - 0,93 (m, 2H), 0,92 - 0,84 (m, 2H), 0,69 (d, J = 6,2 Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 605,23, găsit 606,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,92 minute

Exemplul sintetic 5: Sinteza Compusului 5, N-(3-Fluorofenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

La acidul 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (0,200 g, 0,532 mmol) în THF (1,7 mL) s-a adăugat 1,1'-carbonildiimidazol (108,8 mg, 0,6707 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 1 oră. S-a adăugat 3-Fluorobenzensulfonamidă (93,25 mg, 0,5323 mmol), urmată de 1,8-diazabiciclo(5,4,0)undec-7-enă (DBU) (267,5 mg, 262,8 µL, 1,757 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 2 ore. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil şi 1 M acid citric apos şi straturile au fost separate. Organicele au fost uscate şi concentrate şi solidul rezultat, 2-cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (aproximativ 259 mg), a fost utilizat în etapa următoare fără caracterizare.

Etapa B: N-(3-Fluorofenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

La 2-cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (aproximativ 259 mg, 0,486 mmol) şi carbonat de potasiu (389,6 mg, 2,819 mmol) în 0,4 mL de DMSO s-a adăugat (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (sare clorhidrat) (211,0 mg, 1,41 mmol) şi reacţia a fost agitată la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită, diluată cu acetat de etil şi 1 M acid citric apos şi straturile au fost separate. Organicele au fost uscate, concentrate şi reziduul rezultat a fost purificat pe gel de siliciu (24 g) eluând cu 0-14% metanol în diclorometan pentru a da N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (50,0 mg, 15%) 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,23 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,96 - 7,89 (m, 1H), 7,87 - 7,77 (m, 2H), 7,65 (td, J = 8,1, 5,3 Hz, 1H), 7,46 (tdd, J = 8,5, 2,5, 1,0 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,95 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,37 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,34 (s, 1H), 2,68 (t, J = 10,3 Hz, 1H), 2,56 - 2,48 (m, 1H), 2,28 - 2,16 (m, 1H), 2,10 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,89 (dd, J = 11,9, 5,7 Hz, 1H), 1,59 (d, J = 9,7 Hz, 6H), 1,48 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,02 - 0,96 (m, 2H), 0,86 - 0,77 (m, 5H). ESI-MS m/z calc. 609,2, găsit 610,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,81 minute

Exemplul sintetic 6: Sinteza Compusului 6,2-[(4S)-3,3-Dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideutetiometil)pirolidin-1-il]-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxilpirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-Cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (0,100 g, 0,266 mmol) şi CDI (aproximativ 51,38 mg, 0,3169 mmol) au fost combinate în THF (600,0 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 4-Hidroxibenzensulfonamidă (aproximativ 50,69 mg, 0,2927 mmol) urmată de DBU (aproximativ 54,41 mg, 53,45 µL, 0,3574 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de încă 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL de 1 M acid citric apos, şi extras cu trei porţii de 10 mL de acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da un solid alb 2-cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (128 mg, 91%) care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. ESI-MS m/z calc. 530,1, găsit 531,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,69 minute.

Etapa B: 2-[(4S)-3,3-Dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil)pirolidin-1-il]-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxilpirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (1,0 g, 1,9 mmol), sare clorhidrat de (S)-2,2-dimetil-4-(metil-d3)pirolidin-3,3-d2 (0,892 g, 5,66 mmol) şi carbonat de potasiu (1,55 g, 11,2 mmol) au fost combinate în DMSO (6 mL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei, şi diluată cu apă (10 mL). După agitare timp de 15 minute s-a adăugat acetat de etil (50 mL) la amestec. Amestecul a fost acidulat cu 1M acid citric apos (pH~3-4) (30 mL) şi straturile au fost separate. Organicele au fost combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut obţinut a fost purificat prin cromatografie pe coloană (24 g de gel de siliciu) utilizȃnd un gradient de 0-30% acetat de etil în heptan. Fracţiunile individuale au fost analizate prin HPLC şi fracţiunile care au îndeplinit specificaţiile de puritate necesare au fost combinate, evaporate şi triturate într-un amestec de 9:1 acetat de etil/MTBE. Organicele au fost evaporate până la 10% şi solidul obţinut a fost filtrat şi uscat peste noapte sub vid înaintat pentru a da 2-[(4S)-3,3-dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil)pirolidin-1-il]-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (0,38 g, 32%) ESI-MS m/z calc. 612,2, găsit 613,7 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,40 minute.

Exemplul sintetic 7: Sinteza Compusului 7, N-(Benzensulfonil)-2-[(4S)-3,3-dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil)pirolidin-1-il]-6-[3-[2-hidroxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un vas de reacţie a fost încărcat cu N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[2-hidroxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (0,500 g, 0,942 mmol), (4S)-3,3-dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil)pirolidină (sare clorhidrat) (320 mg, 2,07 mmol), NMP (3,000 mL) şi 1,2-dietoxietan (500,0 µL) sub o atmosferă de azot. S-a adăugat carbonat de potasiu (650,8 mg, 4,709 mmol) şi amestecul de reacţie a fost încălzit la 130°C. Amestecul de reacţie a fost agitat peste noapte. Amestecul de reacţie a fost răcit şi diluat cu apă (2,000 mL) şi pH-ul ajustat la <3 cu HCl apos (1,3 mL de 6 M, 7,800 mmol), care a fost adăugat în picătură. PH-ul a fost ajustată mai departe cu acid clorhidric (146,0 µL de 6 M, 0,8760 mmol). Stratul apos a fost extras cu acetat de etil (4 mL) de două ori şi straturile organice combinate au fost spălate cu apă de două ori, saramură, şi uscate pe sulfat de sodiu. Stratul organic a fost apoi concentrat la un reziduu care a fost purificat pe gel de siliciu utilizȃnd un gradient de 0-60% acetat de etil în hexani. Acest material a fost apoi triturat într-un amestec de heptani şi MTBE pentru a da N-(benzensulfonil)-2-[(4S)-3,3-dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil)pirolidin-1-il]-6-[3-[2-hidroxi-2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (266 mg, 46%) ESI-MS m/z calc. 612,2, găsit 613,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,67 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,51 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,05 - 7,94 (m, 2H), 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,12 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,57 (dd, J = 5,5, 2,7 Hz, 1H), 4,42 - 4,28 (m, 1H), 4,23 - 4,09 (m, 1H), 3,89 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 2,39 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 2,37 - 2,22 (m, 1H), 2,06 (dd, J = 10,6, 7,0 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 9,7 Hz, 6H), 1,04 - 0,83 (m, 4H).

Sinteză de clorhidrat de (4S)-3,3-Dideuterio-2,2-dimetil-4(trideuteriometil) pirolidină

Etapa A: Metil-d3 4-metil-2-(metil-d3)-4-nitropentanoat-3,3-d2

Un balon de 500 mL, cu trei gâturi cu fund rotund echipat cu o bară de agitare magnetică, o linie de azot şi un termocuplu J-Kem cu manta de încălzire a fost încărcat cu 2-nitropropan (34,3 g, 385 mmol), d8-metil metacrilat (50,0 g, 460 mmol), şi a fost agitat la temperatura ambiantă când s-a adăugat 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-enă (DBU, 1,47 g, 9,62 mmol) într-o porţie. Soluţia de reacţie a fost exotermă de la 20 la ~40°C şi a fost lăsată să se agite fără încălzire sau răcire timp de 16 ore. Reacţia a fost completată numai parţial (HPLC) astfel că soluţia a fost încălzită la 80°C timp de 4 ore. Amestecul de reacţie este diluat cu MTBE (170 mL), spălat cu 1 M HCl (15 mL), uscat pe sulfat de magneziu, filtrat şi concentrat (29« Hg la 60°C) pentru a îndepărta solventul şi orice materii prime reziduale pentru a da produsul ca ulei galben deschis (75 g, 99%). Acesta a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară prin distilare.

Etapa B: Metil-d3 (S)-4-metil-2-(metil-d3)-4-nitropentanoat-3,3-d2

Un balon de 5 L, cu trei gâturi cu fund rotund echipat cu un agitator mecanic la partea superioară, o linie de azot şi un termocuplu J-Kem cu manta de încălzire a fost încărcat cu metil-d3 4-metil-2-(metil-d3)-4-nitropentanoat-3,3-d2 (75 g, 380 mmol) şi 2000 mL de tampon Na-fosfat la pH 7,5 @ 0,8 M. La acestea s-a adăugat lipază din Rhizomucor miehei (sigma L4277, palatază din Novozime) (0,5 vol) şi s-a agitat la 30°C timp de 25 ore. HPLC chirală (ADH 4,6 x250 mm, 5µm, 1,0 mL/min, 98%Heptan /2% IPA) prezintă 99,8/0,2 raport de enantiomeri. Amestecul de reacţie a fost extras de două ori cu MTBE (1 L de fiecare dată). Organicele au inclus orice emulsie formată în timpul extracţiilor. Organicele combinate au fost spălate de două ori cu o soluţie apoasă de bicarbonat de sodiu (5 vol), saramură (5 vol), uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate sub vid pentru a da produsul dorit metil-d3 (S)-4-metil-2-(metil-d3)-4-nitropentanoat-3,3-d2 ca ulei galben pal (32,5 g, randament 43%).

Etapa C: (S)-5,5-Dimetil-3-(metil-d3)pirolidin-2-onă-4,4-d2

Un vas cu presiune ridicată (sticlă de agitare Parr, 500 mL) a fost purjat cu, şi menţinut sub N2. Vasul a fost încărcat secvenţial cu apă deionizată clătită (de 3 ori) Ni Raney®2800 umed (6,1 g), metil-d3 (S)-4-metil-2-(metil-d3)-4-nitropentanoat-3,3-d2 (32,5 g, 165 mmol), şi etanol (290 mL). Vasul a fost etanşat şi evacuat/reumplut cu N2 (de 3 ori). Fără agitare, vasul a fost apoi evacuat şi reumplut cu H2 (30 psi). Sticla Parr a fost agitată în timp ce s-a încălzit conţinutul până la 60°C, şi presiunea H2 a fost menţinută la 30 psi timp de 8 ore. Vasul a fost evacuat/reumplut cu N2 (de 3 ori) şi conţinutul a fost îndepărtat prin filtrare în vid (strat de celite; strat de N2). Flaconul/tamponul de filtrare a fost spălat cu etanol (3 × 50 mL). După spălarea finală, turta filtrată cu solvent umed a fost transferată la un alt receptor şi acoperită cu apă pentru eliminare. Notă: În nici un moment catalizatorul nu trebuie să fie complet uscat (păstrarea umezelii prin procesul de filtrare). Filtratul şi spălările au fost combinate şi concentrate (40°C/40 torr) pentru a da (S)-5,5-dimetil-3-(metil-d3)pirolidin-2-onă-4,4-d2 ca solid alb (20 g, 92%).

Etapa D: clorhidrat de (4S)-3,3-Dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil) pirolidină

Un balon de 1 L, cu trei gâturi, cu fund rotund echipat cu un agitator mecanic la partea sa superioară, o linie de azot şi un termocuplu J-Kem a fost încărcat cu granule de hidrură de aluminiu litiu (7,6 g, 202 mmol) în THF (80 mL, 4 vol) şi încălzit de la 20 - 36°C (căldura amestecului). S-a adăugat o soluţie de (S)-5,5-dimetil-3-(metil-d3)pirolidin-2-onă-4,4-d2 (20 g, 150 mmol) în THF (120 mL, 6 vol) la suspensie peste 30 minute în timp ce s-a permis creşterea temperaturii de reacţie la ~60°C. Temperatura reacţiei a fost crescută aproape de reflux (~68°C) şi menţinută acolo timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost răcit sub 40°C şi diluat cu 200 mL (10 vol) de MTBE. Amestecul a fost stins încet prin adăugarea în picătură a soluţiei apoase saturate de sulfat de sodiu (1 vol) peste 2 ore. Notă: S-a observat degazarea viguroasă (H2), amestecul a devenit gros apoi s-a subţiat, şi amestecul gri închis s-a transformat în alb. După ce adăugarea a fost completată, amestecul de reacţie a fost răcit la temperatura camerei. Solidul a fost îndepărtat prin filtrare (Strat de celite) şi spălat cu acetat de etil (4 vol). Cu răcire externă şi un strat de N2, filtratul şi spălările au fost combinate şi tratate cu adăugarea în picătură de 4 M HCl anhidru în dioxan (38 mL, 152 mmol) în timp ce s-a menţinut temperatura sub 20°C. După ce adăugarea a fost completată (20 minute), suspensia rezultantă a fost concentrată sub vid la 45°C. Suspensia a fost reumplută cu heptani (4 vol) de două ori în timpul concentraţiei. Suspensia a fost răcită sub 30°C când solidul a fost colectat prin filtrare sub un strat de N2. Solidul a fost uscat sub sucţiune de N2 şi uscat mai departe sub vid înaintat la 45°C pentru a da clorhidratul de (4S)-3,3-dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil) pirolidină (17,5 g, 75%). Produsul este aproape higroscopic astfel că el a fost manipulat sub azot.

Exemplul sintetic 8: Sinteza Compusului 8,6-[3-(Dispiro[2,0,24,13]beptan-7-ilmetoai)pirazol-1-il]-N-(o-tolilsulfonil)-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-6-[3-(dispiro[2,0,2413]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-1-il]-N-(o-tolilsulfonil) piridin-3-carboxamida (0,170 g, 0,341 mmol) şi (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (Sare clorhidrat) (0,116 g, 1,02 mmol) au fost combinate şi dizolvate în DMSO (2 mL). În final, s-a adăugat carbonat de potasiu măcinat (95 mg, 0,68 mmol). Amestecul de reacţie a fost etanşat şi încălzit peste noapte la 130°C. După răcirea la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil (50 mL) şi spălat cu acid citric apos (1 M, 2Ч 50 mL) şi saramură (1× 50 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Produsul a fost izolat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-20% de metanol în diclorometan pe o coloană de 12 grame cu gel de siliciu pentru a da 6-[3-(dispiro[2,0,24,13]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-1-il]-N-(o-tolilsulfonil)-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (0,030 g, 15%). ESI-MS m/z calc. 575,26, găsit 576,36 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,46 minute.

Exemplul sintetic 9: Sinteza Compusului 9, N-(Benzensulfonil)-2-[4-(hidroximetil)-2,2-dimetil-pirolidin-1-il]-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: ester metilic al acidului 2-Hidroximetil-4-metil-4-nitro-pentanoic

S-a adăugat 1,8-Diazabiciclo[5,4,0]undec-7-enă (3,6 mL, 24 mmol) la 2-nitropropan (26,5 mL, 292 mmol). Acest amestec a fost încălzit la 65°C şi căldura a fost oprită şi s-a adăugat metil 2-(hidroximetil)acrilat (25 mL, 243 mmol) în picătură. Căldura a fost apoi repornită la 80°C. După încălzire timp de 1 oră, căldura a fost oprită şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei peste noapte înainte încălzirea la 80°C timp de alte 2 ore. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil (250 mL) şi spălată cu 1M acid clorhidric (2 × 125 mL), bicarbonat apos (125 mL) şi saramură (125 mL). Amestecul produsului de reacţie a fost cromatografiat pe o coloană de 330g de gel de siliciu în 0-60% hexani:eter eluȃnd la 55-60% pentru a da esterul metilic al acidului 2-hidroximetil-4-metil-4-nitro-pentanoic (29,68g, 60%) ca ulei verde deschis. ESI-MS m/z calc. 205,21, găsit 206,1 (M+1)+. Timp de retenţie: 1,67 minute. 1H RMN (250 MHz, CDCl3) ppm 1,50 - 1,59 (m, 6H) 1,85 - 1,98 (m, 1 H) 2,10 - 2,23 (m, 1 H) 2,36 - 2,50 (m, 1 H) 2,60 (d, J=5,71 Hz, 1 H) 3,66 - 3,77 (s, 3 H).

Etapa B: 3-Hidroximetil-5,5-dimetil-pirolidin-2-onă

Esterul metilic al acidului hidroximetil-4-metil-4-nitro-pentanoic (4,45g, 21,7 mmol) a fost adăugat la etanolul absolut (60 mL) urmat de nichel Raney (1,7g, ~15% g). Reacţia a fost încălzită la 60°C sub 2 bar de H2 peste noapte. S-a adăugat mai mult nichel Raney (1,0g, ~50% g) şi reacţia a fost încălzită la 60°C sub 5 bar H2 timp de 3,5 ore. În acest punct, s-a adăugat mai mult ester metilic al acidului 2-hidroximetil-4-metil-4-nitro-pentanoic (3,95g, 19,3 mmol) şi reacţia a fost încălzită timp de 72 ore reumplȃnd H2 pentru a menţine 5 bar. Reacţia a fost filtrată prin celite şi spălată cu metanol. Reacţia brută a fost cromatografiat pe gel de siliciu şi eluată cu 0-10% diclorometan:metanol la 10%, rezultȃnd 3-hidroximetil-5,5-dimetil-pirolidin-2-onă (3,69g, 63%) ca solid alb. 1H RMN (250 MHz, CDCl3) δ ppm 1,31 (d, J=9,01 Hz, 6 H) 1,72 (dd, J=12,52, 10,33 Hz, 1 H) 2,04 (dd, J=12,58, 8,84 Hz, 1 H) 2,73 - 2,91 (m, 1 H) 3,31 (d, J=4,72 Hz, 1 H) 3,64 - 3,95 (m, 2 H) 5,93 (br. s., 1 H).

Etapa C: (5,5-Dimetil-pirolidin-3-il)-metanol

Hidrura de aluminiu litiu (3,90g, 103,00 mmol) a fost suspendată în tetrahidrofuran (60 mL). S-a adăugat apoi în picătură hidroximetil-5,5-dimetil-pirolidin-2-onă (3,69g, 25,77 mmol) în tetrahidrofuran (30 mL) şi reacţia a fost încălzită la 65°C timp de 40 ore. Reacţia a fost diluată cu 2-metil-tetrahidrofuran (125 mL) şi apoi răcită într-o baie cu gheaţă înainte de a se adăuga în picătură sare Rochelle saturată apoasă (200 mL). Stratul organic a fost extras cu 2-metil-tetrahidrofuran (2 × 200 mL) şi uscat pe sulfat de sodiu pentru a da (5,5-dimetil-pirolidin-3-il)-metanol brut (3,47g, 104%). 1H RMN (250 MHz, CDCl3 δ ppm 1,06 - 1,24 (m, 6 H) 1,29 (dd, J=12,58, 7,20 Hz, 2 H) 1,43 (s, 1 H) 1,68 - 1,89 (bs, 1 H) 2,31 - 2,52 (m, 1 H) 2,83 (dd, J=11,10, 5,49 Hz, 1 H) 3,05 - 3,26 (m, 1 H) 3,48 - 3,71 (m, 1 H).

Etapa D: 4-(terţ-butil-dimetil-silaniloximetil)-2,2-dimetil-pirolidină

La (5,5-dimetil-pirolidin-3-il)-metanol (3,08g, 23,8 mmol), clorură de terţbutildimetilsilil (4,31g, 28,6 mmol) în acetonitril (24 mL), s-a adăugat 1,8-Diazabiciclo[5,4,0]undec-7-enă (5,3 mL, 35,7 mmol). Reacţia a fost agitată timp de 3,5 ore. Reacţia a fost diluată cu cloroform (250 mL) şi spălată cu apă (125 mL) şi saramură (125 mL) apoi uscată pe sulfat de sodiu. Brutul a fost cromatografiat pe gel de siliciu şi eluat cu diclorometan/metanol, eluȃnd la 15-35% metanol pentru a da 4-(terţ-butil-dimetil-silaniloximetil)-2,2-dimetil-pirolidină (3,88g, 67%) ca ulei galben după două coloane. ESI-MS m/z calc. 243,47, găsit 244,2 (M+1)+ Timp de retenţie: 2,52 minute. 1H RMN (250 MHz, CDCl3) δ ppm -0,05 - 0,11 (m, 6 H) 0,89 (s, 9 H) 1,19 (d, J=18,02 Hz, 6 H) 1,25 - 1,32 (m, 1 H) 1,74 (dd, J=12,63, 8,79 Hz, 1 H) 1,92 (br. s., 1 H) 2,32 - 2,50 (m, 1 H) 2,81 (dd, J=11,54, 6,37 Hz, 1 H) 3,11 (dd, J=11,48, 7,97 Hz, 1 H) 3,45 - 3,61 (m, 2H).

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-[4-(hidroximetil)-2,2-dimetil-pirolidin-1-il]-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il] piridin-3-carboxamidă (25 mg, 0,04855 mmol), terţ-butil-[(5,5-dimetilpirolidin-3-il)metoxi]-dimetil-silan (aproximativ 35,45 mg, 0,1456 mmol), şi K2CO3 (aproximativ 33,56 mg, 0,2428 mmol) au fost combinate în DMSO (0,5 mL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost partiţionată între o soluţie 1M de acid citric şi acetat de etil şi organicele au fost separate. Organicele au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(benzensulfonil)-2-[4-[[terţ-butil(dimetil)silil]oximetil]-2,2-dimetil-pirolidin-1-il]-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (15 mg, 43%) ESI-MS m/z calc. 721,2941, găsit 722,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,97 minute.

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-2-[4-(hidroximetil)-2,2-dimetil-pirolidin-1-il]-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-[4-[[terţ-butil(dimetil)silil]oximetil]-2,2-dimetil-pirolidin-1-il]-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (15 mg, 43%) a fost dizolvată în THF (1 mL) şi răcită într-o baie cu gheaţă. S-a adăugat fluorură de tetra-n-butilamoniu în THF (300 µL de 1 M, 0,3000 mmol) şi reacţia a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost agitat timp de 1 oră şi apoi partiţionat între acetat de etil şi soluţie 1M de acid citric. Organicele au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(benzensulfonil)-2-[4-(hidroximetil)-2,2-dimetil-pirolidin-1-il]-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (8,5 mg, 29%) ESI-MS m/z calc. 607,20764, găsit 608,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,9 minute.

Exemplul sintetic 10: Sinteza Compusului 10, N-(Benzensulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

(1-Trifluorometil-ciclobutil)-metanol

Acidul 1-Trifluorometil-ciclobutancarboxilic (5,0 g, 30. mmol) a fost dizolvat în dietil eter (60 mL) şi răcit la 0°C. S-a adăugat hidrură de aluminiu litiu (38,66 mL, 1M în dietil eter) în picătură şi soluţia a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei peste noapte. Soluţia de reacţie a fost răcită la 0°C cu agitare, şi s-a adăugat sulfat de sodiu decahidrat, care a condus la evoluţia graduală a gazului. Adăugarea în porţii a continuat până când nu s-a mai observat barbotare la temperatura camerei. Soluţia de reacţie a fost apoi filtrata peste un pat de Celite, spălȃnd cu dietil eter. Filtratul a fost concentrat sub presiune redusă pentru a da 5,44 g dintr-un amestec conţinând produsul dorit şi unele reziduuri de dietil eter (36% din integrarea RMN). Acest lucru a dat 1-trifluorometil-ciclobutil-metanol (3,46 g, 78%) ca ulei incolor. 1H RMN (250MHz, CDCl3) δ (ppm): 3,82 (s, 2H), 2,39-2,14 (m, 2H), 2,10-1,85 (m, 4H).

Ester terţ-butilic al acidului 3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-pirazol-1-carboxilic

1-Trifluorometil-ciclobutil-metanol (1,50 g, 9,73 mmol) şi esterul terţ-butilic al acidului 3-oxo-2,3-dihidro-pirazol-1-carboxilic (1,63 g, 8,85 mmol) au fost dizolvate în tetrahidrofuran anhidru (32 mL). Soluţia a fost degazată prin sonicare şi stropită cu azot gazos. S-a adăugat trifenilfosfină (2,55 g, 9,73 mmol), şi s-a adăugat apoi în picătură azodicarboxilat de diizopropil (1,92 mL, 9,73 mmol). După terminarea adăugării, reacţia a fost încălzită la 50°C timp de 16 ore. După răcire la temperatura camerei, reacţia a fost diluată cu acetat de etil (100 mL) şi spălată cu 1M soluţie de hidroxid de sodiu (2 × 100 mL), apoi saramură (125 mL). Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrate sub presiune redusă. Ulei galben brut a fost purificat prin cromatografie rapidă utilizând o metodă de gradient de 0-10% acetat de etil în hexani pentru a da esterul terţ-butilic al acidului 3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-pirazol-1-carboxilic (2,48 g, 87%) ca un solid alburiu. ESI-MS m/z calc. 320,31, găsit 321,1 (M+1)+. Timp de retenţie: 3,74 minute

Sare clorhidrat de 3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-1H-pirazol

Esterul terţ-butilic al acidului 3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-pirazol-1-carboxilic (2,48 g, 7,74 mmol) a fost dizolvat în 4M acid clorhidric în dioxan (77 mL). Soluţia a fost agitată peste noapte la temperatura camerei, urmată de îndepărtarea volatilelor sub presiune redusă pentru a da sarea clorhidrat de 3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-1H-pirazol (1,95 g, 98%) ca pulbere albă. ESI-MS m/z calc. 220,20, găsit 221,2 (M+1)+. Timp de retenţie: 2,67 minute.

2-cloro-6-(3-((1-(trifluorometil)ciclobutil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinat de terţ-butil

Sarea clorhidrat de 3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-1H-pirazol (1,95 g, 7,61 mmol) şi esterul terţ-butilic al acidului 2,6-dicloro-nicotinic (1,89 g, 7,62 mmol) au fost dizolvate în dimetilformamidă (15 mL), şi s-a adăugat carbonat de potasiu (4,21 g, 30,5 mmol) urmat de 1,4-diazabiciclo[2,22]octan (0,43 g, 3,8 mmol). Reacţia a fost agitată la temperatura camerei peste noapte, apoi s-a adăugat apă (150 mL) şi stratul apos a fost extras cu 4:1 acetat de etil:hexani (100 mL). Faza organică a fost spălată cu saramură (70 mL), uscată pe sulfat de sodiu, şi concentrată sub presiune redusă. Uleiul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând o metodă de gradient de 0-10% acetat de etil în hexani pentru a da esterul terţ-butilic al acidului 2-cloro-6-[3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-pirazol-1-il]-nicotinic (1,94 g, 66%) ca solid alb. ESI-MS m/z calc. 431,85, găsit 432,2 (M+1)+. Timp de retenţie: 4,61 minute.

Acid 2-cloro-6-[3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-pirazol-1-il]-nicotinic

Esterul terţ-butilic al acidului 2-cloro-6-[3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-pirazol-1-il]-nicotinic (1,9 g, 4,40 mmol) a fost dizolvat în diclorometan (20 mL) şi s-a adăugat acid trifluoroacetic (5,0 mL). Soluţia de reacţie a fost agitată la temperatura camerei peste noapte, după care volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă pentru a da acidul 2-cloro-6-[3-(1-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-pirazol-1-il]-nicotinic (1,61 g, 97%) ca solid alb. ESI-MS m/z calc. 375,74, găsit 376,2 (M+1)+. Timp de retenţie: 3,57 minute.

Sinteză de N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

La o soluţie agitată de acid 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (0,150 g, 0,399 mmol) în tetrahidrofuran anhidru (3,0 mL) s-a adăugat CDI (78 mg, 0,4810 mmol) într-o porţie. Soluţia a fost agitată la temperatura ambiantă timp de 2 ore. Apoi s-a adăugat benzensulfonamidă solidă (76 mg, 0,48 mmol) într-o porţie, urmată de DBU (183 mg, 1,20 mmol) şi soluţia colorată ca ceaiul a fost agitată la temperatura ambiantă pentru încă 2 ore suplimentare. La amestecul de reacţie s-a adăugat încet acid citric (2,5 mL de 1,0 M, 2,500 mmol), urmat de saramură (5 mL). După agitare timp de 10 min, materialul omogen a fost extras cu acetat de etil (3 × 25 mL). Extractele organice combinate au fost spălate cu saramură (10 mL), uscate pe sulfat de sodiu anhidru, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. După uscare sub vid timp de 1 oră, s-a obţinut N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (181 mg, 88%) ca solid alb. Acesta a conţinut unele impurităţi acide iniţiale, şi a fost utilizat în etapa ulterioară fără purificare suplimentară. ESI-MS m/z calc. 514,0689, găsit 515,1 (M+1) + ; Timp de retenţie: 1,98 minute

Sinteză de N-(Benzensulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un amestec de N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]-metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (0,160 g, 0,311 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (139 mg, 0,932 mmol) şi carbonat de potasiu (215 mg, 1,554 mmol) a fost agitat în sulfoxid dimetil anhidru (2,7 mL) sub o atmosferă de azot la 130°C timp de 18 ore. Reacţia a fost lăsată să se răcească la temperatura ambiantă şi diluată cu apă (15 mL) şi extrasă cu acetat de etil (3 × 25 mL). Organicele combinate succesiv au fost spălate cu 1 M acid citric apos (310 µL de 1,0 M, 0,3107 mmol), şi saramură, uscate pe sulfat de sodiu anhidru, filtrate şi evaporate pentru a da un material brut galben. Acesta a fost purificat din sistemul CombiFlashRf utilizând o coloană de aur cu gel de siliciu de 40 g şi eluând cu 0-5 % metanol în clorură de metilen (peste 45 min). Produsul s-a obţinut la 25 min (2,6% metanol). Fracţiunile dorite au fost combinate şi concentrate sub presiune redusă. După uscarea suplimentară peste noapte sub vid înaintat, s-a obţinut N-(benzensulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (sare de HCl, 40 mg, 20%). ESI-MS m/z calc. 591,2127, găsit 592,3 (M+1) +; Timp de retenţie: 2,25 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,49 (s, 1H), 8,22 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,00 (dd, J = 8,2, 2,1 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,72 (tt, J = 8,2, 2,0 Hz, 1H), 7,65 (dt, J = 8,2, 2,0 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,18 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,48 (s, 2H), 2,42 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 2,36 - 2,22 (m, 3H), 2,11 (td, J = 12,1, 5,7 Hz, 4H), 1,95 (qd, J = 9,7, 4,3 Hz, 1H), 1,83 (dd, J = 12,0, 5,6 Hz, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,37 (t, J = 12,2 Hz, 1H), 0,65 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 11: Sinteza Compusului 11, N-(4-Ciano-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin -1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(4-ciano-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

O soluţie de acid 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (186,4 mg, 0,5 mmol) şi 1,1'-carbonildiimidazol (97,29 mg, 0,60 mmol) în THF (2,5 mL) a fost agitată timp de 30 minute, şi s-au adăugat 4-ciano-2-metil-benzensulfonamidă (127,5 mg, 0,65 mmol) şi 1,8-diazabiciclo(5,4,0)undec-7-enă (DBU) (89,7 µL, 0,60 mmol). După 16 ore, reacţia a fost diluată cu 1 M acid citric apos şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu cu 0-5% metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(4-ciano-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (270 mg, 100%) ESI-MS m/z calc. 539,06, găsit 540,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,73 minute.

Etapa B: N-(4-Ciano-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un amestec de 2-cloro-N-(4-ciano-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (270 mg, 0,50 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (168,1 mg, 1,123 mmol), şi carbonat de potasiu (310,4 mg, 2,246 mmol) în DMSO (1,87 mL) a fost agitat la 130°C timp de 15 ore. Reacţiile au fost acidulate cu 1 M acid citric apos şi extrase cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu cu 0-5% metanol în diclorometan pentru a da un produs impur. Produsul impur a fost repurificat utilizând o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o coloană Luna C18 (2) (75 × 30 mm, 5 µm dimensiunea particulei) comercializată de Fenomenex (pn: 00C-4252-U0-AX), şi o rulare cu gradient dual de la 1-99% fază mobilă B peste 15,0 minute. Fază mobilă A = H2O (5 mM HCl). Fază mobilă B = CH3CN. Debit = 50 mL/min, şi temperatura coloanei = 25°C pentru a furniza N-(4-ciano-2-metilfenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (150 mg, 48%) ESI-MS m/z calc. 616,21, găsit 617,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,06 minute. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,96 (s, 1H), 8,23 ― 8,18 (m, 2H), 8,03 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,97 (dd, J = 8,0, 1,8 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,95 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 6,16 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,43 ― 4,32 (m, 2H), 2,67 (s, 3H), 2,27 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 2,25 (s, 1H), 2,17 (dd, J = 11,3, 5,7 Hz, 1H), 1,83 (dd, J = 11,9, 5,3 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 4,4 Hz, 6H), 1,36 (s, 1H), 1,09 (dt, J = 5,5, 1,6 Hz, 4H), 0,70 (d, J = 6,0 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 12: Sinteza Compusului 12, N-(2-Metoxi-4-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(2-metoxi-4-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

O soluţie de acid 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (186,4 mg, 0,5 mmol) şi 1,1'-carbonildiimidazol (97,29 mg, 0,60 mmol) în THF (2,5 mL) a fost agitată timp de 30 minute, şi s-au adăugat 2-metoxi-4-metil-benzensulfonamidă (130,8 mg, 0,65 mmol) şi 1,8-diazabiciclo(5,4,0)undec-7-enă (DBU) (89,7 µL, 0,60 mmol). După 16 ore reacţia a fost diluată cu 1 M acid citric apos şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu cu 0-5% metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(2-metoxi-4-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (210 mg, 77%) ESI-MS m/z calc. 544,1, găsit 545,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,73 minute ca solid incolor.

Etapa B: N-(2-Metoxi-4-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un amestec de 2-cloro-N-(2-metoxi-4-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (210 mg, 0,3854 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (168,1 mg, 1,123 mmol), şi carbonat de potasiu (310,4 mg, 2,246 mmol) în DMSO (1,87 mL) a fost agitat la 130°C timp de 15 ore. Reacţia a fost acidulată cu 1 M acid citric apos şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu cu 0-5% metanol în diclorometan pentru a da un produs impur. Produsul impur a fost repurificat utilizând o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o coloană Luna C18 (2) (75 × 30 mm, 5 µm dimensiunea particulei) comercializată de Fenomenex (pn: 00C-4252-U0-AX), şi o rulare cu gradient dual de la 1-99% fază mobilă B peste 15,0 minute. Faza mobilă A = H2O (5 mM HCl). Faza mobilă B = CH3CN. Debit = 50 mL/min, şi temperatura coloanei = 25°C pentru a furniza N-(2-metoxi-4-metilfenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (95 mg, 39,25%) ESI-MS m/z calc. 621,2, găsit 622,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,19 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,39 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,78 (t, J = 8,5 Hz, 2H), 7,10 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,94 (dd, J= 10,1, 8,1 Hz, 2H), 6,15 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,43 ― 4,30 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 2,49 ― 2,38 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,21 (dd, J = 11,2, 6,1 Hz, 1H), 1,85 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,53 (d, J = 11,0 Hz, 6H), 1,37 (s, 1H), 1,12 ― 1,04 (m, 4H), 0,78 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 13: Sinteza Compusului 13: N-(2,4-Dimetoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(2,4-dimetoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

O soluţie de acid 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (186,4 mg, 0,5 mmol) şi 1,1'-carbonildiimidazol (97,29 mg, 0,60 mmol) în THF (2,5 mL) a fost agitată timp de 30 minute, şi s-au adăugat 2,4-dimetoxibenzensulfonamidă (141,2 mg, 0,65 mmol) şi 1,8-diazabiciclo(5,4,0)undec-7-enă (DBU) (89,7 µL, 0,60 mmol). După 16 ore reacţia a fost diluată cu 1 M acid citric apos şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu cu 0-5% metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(2,4-dimetoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (210 mg, 75%) ESI-MS m/z calc. 560,1, găsit 561,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,71 minute ca solid incolor.

Etapa B: N-(2,4-Dimetoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un amestec de 2-cloro-N-(2,4-dimetoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclo-propil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (210 mg, 0,3744 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (168,1 mg, 1,123 mmol), şi carbonat de potasiu (310,4 mg, 2,246 mmol) în DMSO (1,87 mL) a fost agitat la 130°C timp de 15 ore. Reacţiile au fost acidulate cu 1 M acid citric apos şi extrase cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu cu 0-5% metanol în diclorometan pentru a da un produs impur. Produsul impur a fost repurificat utilizând o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o coloană Luna C18 (2) (75 × 30 mm, 5 µm dimensiunea particulei) comercializată de Fenomenex (pn: 00C-4252-U0-AX), şi o rulare cu gradient dual de la 1-99% fază mobilă B peste 15,0 minute. Fază mobilă A = H2O (5 mM HCl). Fază mobilă B = CH3CN. Debit = 50 mL/min, şi temperatura coloanei = 25°C pentru a furniza N-(2,4-dimetoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (110 mg, 46%) ESI-MS m/z calc. 637,2, găsit 638,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,14 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,34 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,82 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,74 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 6,70 (dd, J= 8,8, 2,3 Hz, 1H), 6,15 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,43 ― 4,31 (m, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 2,54 (s, 1H), 2,42 (dd, J = 10,5, 7,0 Hz, 1H), 2,21 (dd, J = 11,6, 5,9 Hz, 1H), 1,85 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 1,38 (s, 1H), 1,09 (dt, J = 5,9, 1,6 Hz, 4H), 0,80 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 14: Sinteza Compusului 14: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

Un balon de 5000 mL cu 3 gâturi, cu fund rotund, dotat cu un agitator mecanic, o manta de încălzire, o sondă/controlor de temperatură J-Kem, o pâlnie de adăugare, un condensator de reflux răcit cu apă şi o admisie/evacuare de azot. Vasul a fost încărcat sub o atmosferă de azot cu 5-oxo-1H-pirazol-2-carboxilat de terţ-butil (70 g, 0,3800 mol) şi tetrahidrofuran (840 mL, 12 mL/g) care au furnizat o soluţie clară galben pal. S-a început agitarea şi temperatura recipientului a fost înregistrată la 19°C. Vasul a fost apoi încărcat cu [1-(trifluorometil)ciclopropil]metanol (58,56 g, 0,4180 mol) adăugat curat într-o porţie urmat de trifenilfosfină (109,6 g, 0,4180 mol) adăugată ca solid într-o porţie. Soluţia clară galben pal rezultată a fost apoi tratată cu azodicarboxilat de diizopropil (lichid clar rozaliu-portocaliu) (82,3 mL, 0,4180 mol) adăugat curat în picătură într-o oră, conducȃnd la o exotermă graduală la 40°C şi la o soluţie clară chihlimbariu deschis. Amestecul de reacţie a fost apoi încălzit la o temperatură a recipientului de 50°C şi condiţiile au fost menţinute timp de 2 ore când analiza prin LC/MS a indicat consumul complet de materie primă. Amestecul de reacţie clar chihlimbariu a fost concentrat sub presiune redusă şi uleiul clar chihlimbariu închis rezultat a fost suspendat în toluen (560 mL) şi agitat la temperatura camerei timp de 1 oră, timp în care un solid (oxid de trifenilfosfină MW = 278,28) a precipitat. Suspensia groasă a fost filtrată printr-o pȃlnie Buchner fritată de sticlă şi turta de filtru a fost spălată deplasat cu toluen (150 mL) şi apoi trasă timp de 30 minute. Filtratul clar chihlimbariu a fost concentrat sub presiune redusă pentru a furniza un ulei clar chihlimbariu. Materialul a fost purificat prin cromatografie rapidă pe coloană cu gel de siliciu (încărcare solidă pe coloană RediSep de 1,5 kg de celite) eluând cu un gradient de 100% hexan până la 20% EtOAc în hexan colectȃnd fracţiuni de 450 mL. Produsul a eluat în jur de 5% EtOAc în hexan. Fracţiunile dorite au fost combinate şi concentrate sub presiune redusă pentru a furniza un ulei clar galben pal ca produs dorit, 3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (81 g, 0,264 mol, 70%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,10 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,31 (s, 2H), 1,55 (s, 9H), 1,07 (dp, J = 4,9, 1,3 Hz, 4H). ESI-MS m/z calc. 306,11914, găsit 259,0 (M-48)+; Timp de retenţie: 1,76 minute.

Etapa B: 3-[[1-(Trifluorometil)ciclopropil]metoxi]-1H-pirazol

Un balon de 5000 mL cu 3 gâturi, cu fund rotund a fost dotat cu un agitator mecanic, o manta de încălzire, o sondă de temperatură J-Kem, un condensator de reflux răcit cu apă, o pâlnie de adăugare şi o admisie/evacuare de azot. Vasul a fost încărcat sub o atmosferă de azot cu 3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (80 g, 0,2612 mol), diclorometan (320 mL, 4 mL/g) şi alcool metilic (320 mL, 4 mL/g) care au furnizat o soluţie clară galben pal. S-a început agitarea şi temperatura recipientului a fost înregistrată la 19°C. Pâlnia de adăugare a fost încărcată cu 4 M HCl în 1,4-dioxan (195,9 mL, 0,7836 mol) care a fost adăugat ulterior în picătură într-o oră, conducȃnd la o exotermă graduală la 30°C. Soluţia clară galben pal rezultată a fost încălzită la o temperatură a recipientului de 45°C şi condiţiile au fost menţinute timp de 1 oră când analiza prin LC/MS a indicat terminarea reacţiei. Amestecul de reacţie a fost lăsat să se răcească la temperatura camerei şi apoi a fost concentrat sub presiune redusă. Reziduul rămas a fost dizolvat în metil eter de terţ-butil (640 mL) şi apoi transferat la o pâlnie separatoare şi partiţionat cu 2 M soluţie de hidroxid de sodiu (391,8 mL, 0,7836 mol). Stratul organic a fost îndepărtat şi reziduul apos a fost extras cu metil eter de terţ-butil (2 × 200 mL). Organicele combinate au fost spălate cu soluţie de clorură de sodiu saturată (500 mL), uscate pe sulfat de sodiu (300 g) şi apoi filtrate printr-o pȃlnie Buchner fritată de sticlă. Filtratul clar galben pal a fost concentrat sub presiune redusă pentru a furniza un ulei clar galben deschis care s-a solidificat după ce a stat, pentru a furniza un solid alb (49,5 g, 0,240 mol, 92%) ca produs dorit, 3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]-1H-pirazol. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,90 (s, 1H), 7,51 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,67 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,19 (s, 2H), 1,09 ― 0,97 (m, 4H). ESI-MS m/z calc. 206,0667, găsit 207,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,07 minute.

Etapa C: 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]met-oxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil

Un balon de 5000 mL cu 3 gâturi, cu fund rotund a fost dotat cu un agitator mecanic, o baie de răcire utilizată ca izolare secundară, o sondă de temperatură J-Kem, un condensator de reflux răcir cu apă, o pâlnie de adăugare şi o admisie/evacuare de azot. Vasul a fost încărcat sub o atmosferă de azot cu 3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]-1H-pirazol (45 g, 0,2183 mol) şi N,N-dimetilformamidă (540 ml, 12 mL/g) care au furnizat o soluţie clară galben pal. S-a început agitarea şi temperatura recipientului a fost înregistrată la 17°C. Vasul a fost apoi încărcat cu 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (54,16 g, 0,2183 mol) adăugat ca solid într-o porţie. Soluţia clară galben pal rezultată a fost apoi tratată cu carbonat de potasiu (39,22 g, 0,2838 mol) adăugat ca solid într-o porţie urmat de 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (3,67 g, 0,03274 mol) adăugat ca solid într-o porţie. Suspensia galben pal rezultată a fost lăsată să se agite la temperatura camerei timp de 24 ore. Amestecul de reacţie a fost răcit la 10°C cu o baie cu gheaţă zdrobită/apă răcită. Pâlnia de adăugare a fost încărcată cu apă (540 mL) adăugată în picătură peste 45 minute care a condus la o suspensie groasă şi la o exotermă la 15°C. Suspensia rezultată a continuat să fie agitată la 15°C timp de 30 minute şi apoi a fost filtrată printr-o pȃlnie Buchner fritată de sticlă. Turta de filtru a fost spălată deplasat cu apă (2 × 500 ml) şi apoi trasă în Buchner timp de 2 ore. Materialul a fost apoi lăsat la aer uscat peste noapte pentru a furniza (73 g, 0,175 mol, 80%) un solid granular alb ca 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil. ESI-MS m/z calc. 361,0441, găsit 361,9 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,27 minute.

Etapa D: Acid 2-CMor0-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

Un balon de 1000 mL cu 3 gâturi, cu fund rotund a fost dotat cu un agitator mecanic, o manta de încălzire, o sondă/controlor de temperatură J-Kem, o pâlnie de adăugare, un condensator de reflux răcit cu apă şi o admisie/evacuare de azit. Vasul a fost încărcat sub o atmosferă de azot cu 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (70 g, 0,1675 mol) şi 2-propanol (350 mL) care au furnizat o suspensie albicioasă. S-a început agitarea şi temperatura recipientului a fost înregistrată la 19°C. Pâlnia de adăugare a fost încărcată cu 6 MHCl apos (139,6 mL, 0,8375 mol) care a fost adăugat în picătură peste 10 minute, conducȃnd la o exotermă la 30°C. Suspensia rezultată a fost apoi încălzită la reflux (temperatura recipientului ~82°C). După încălzire suspensia se transformă într-o solutie clară galben pal (temperatura recipientului ~75°C în acest punct). După agitare la reflux timp de ~30 minute un solid a început să se precipite. S-a continuat agitarea suspensiei la reflux timp de încă 30 minute suplimentare moment în care s-a adăugat apă (210 mL) în picătură peste 15 minute. Căldura a fost apoi îndepărtată şi s-a continuat agitarea suspensiei şi a fost lăsată să se răcească încet la temperatura camerei. Materialul a fost colectat prin filtrare în vid într-o pȃlnie Bucher fritată de sticlă şi turta de filtru a fost spălată deplasat cu 1:1 apă/2-propanol (100 mL) urmată de apă (2 × 100 mL) şi apoi trasă în Buchner timp de 30 minute. Materialul a fost uscat mai departe într-un cuptor cu vid la 45°C timp de 24 ore pentru a furniza acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (56 g, 0,155 mol, 92%) ca solid alb. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,64 (s, 1H), 8,44 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,41 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,41 (s, 2H), 1,16 ― 1,07 (m, 4H). ESI-MS m/z calc. 361,0441, găsit 361,9 (M+1)+; Timp de retenţie: 3,23 minute

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (150 mg, 0,4144 mmol) a fost dizolvat în THF (2,000 mL). S-a adăugat CDI (aproximativ 80,64 mg, 0,4973 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 1,5 ore. S-a adăugat benzensulfonamidă (aproximativ 84,68 mg, 0,5387 mmol) urmată de DBU (aproximativ 126,2 mg, 124,0 µL, 0,8288 mmol). Amestecul de reacţie a fost lăsat să se agite la temperatura camerei timp de alte 1,5 ore. Amestecul de reacţie a fost concentrat la jumătate din volum, diluat cu diclorometan şi injectat direct pe o coloană cu gel de siliciu de 12 grame şi supus la un gradient de 0-10% metanol în diclorometan; produsul a eluat la 10%. Fracţiunile conţinând produsul dorit au fost combinate şi concentrate. S-a obţinut N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (168 mg, 81%) ca ulei clar incolor. ESI-MS m/z calc. 500,05328, găsit 501,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,92 minute (3 minut run).

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (168 mg, 0,3354 mmol) şi (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (aproximativ 150,6 mg, 1,006 mmol) au fost combinate şi dizolvate în DMSO (0,5 mL). În final s-a adăugat carbonat de potasiu măcinat (aproximativ 278,1 mg, 2,012 mmol), şi amestecul de reacţie a fost lăsat să se agite la 130°C peste noapte. Amestecul de reacţie a fost diluat cu EtOAc (50 mL) şi spălat cu 1 M acid citric apos (2× 50 mL) şi saramură (1Ч 50 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Produsul brut a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu: coloană cu gel de siliiu de 24 grame, 0-5% gradient MeOH/DCM; produsul a eluat la 2,5%. Fracţiunile pure au fost combinate şi concentrate sub presiune redusă, şi azeotropate cu MeOH, pentru a furniza N-(benzensulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (74,9 mg, 39%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,51 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,05 - 7,95 (m, 2H), 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,78 - 7,70 (m, 1H), 7,66 (dd, J = 8,3, 6,7 Hz, 2H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,43 - 4,30 (m, 2H), 2,40 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 2,26 (t, J = 8,6 Hz, 1H), 2,09 (dt, J = 12,3, 6,4 Hz, 1H), 1,82 (dd, J = 12,0, 5,6 Hz, 1H), 1,53 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,36 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,15 - 1,04 (m, 4H), 0,64 (d, J = 6,2 Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 577,1971, găsit 578,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,16 minute (3 minut rulare).

Exemplul sintetic 15: Sinteza Compusului 15: N-(o-Tolilsulfonil)-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

La o soluţie degazată de Ph3P (aproximativ 51,28 g, 195,5 mmol) în toluen (360,0 mL) sub azot gazos la 0°C s-a adăugat DIAD (diizopropilazodicarboxilat) (aproximativ 39,53 g, 37,86 mL, 195,5 mmol) în picătură. Amestecul a fost agitat la 0°C timp de 30 min rezultând o suspensie albă. La amestec s-a adăugat o soluţie de (2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metanol (aproximativ 29,84 g of 70 %g/g, 162,9 mmol) şi 3-hidroxipirazol-1-carboxilat de terţ-butil (30 g, 162,9 mmol) în toluen (600,0 mL) în picătură la ~5°C în 2 ore. Amestecul a fost lăsat să se încălzească la temperatura ambiantă şi agitat timp de 18 ore. Amestecul a fost încălzit la 75°C pentru un total de 6 ore şi apoi lăsat să se răcească la temperatura ambiantă. Suspensia a fost diluată cu heptan (900,0 mL) şi agitată la temperatura ambiantă timp de 3 ore. Suspensia a fost filtrată peste celite şi precipitatul spălat 3X cu 100 mL de heptan. Filtratul a fost concentrat în vid rezultând un ulei galben gros. Produsul brut a fost cromatografiat pe o coloană cu gel de siliciu de 750 grame încărcȃnd cu diclorometan şi eluând cu un gradient de 0-20% EtOAc/hexani. Fracţiunile colectate conţinând produsul au fost concentrate în vid rezultând un solid alburiu. S-a obţinut 3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (30,1 g, 63%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,82 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,88 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 1,61 (s, 9H), 1,12 (s, 6H), 1,04 (s, 6H), 0,70 (t, J = 7,8 Hz, 1H). ESI-MS m/z calc. 294,19434, găsit 295,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,19 minute.

Etapa B: 3-[(2,2,3,3-Tetrametilciclopropil)metoxi]-1H-pirazol

La o soluţie de 3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (127 g, 431,4 mmol) în THF (317,5 mL) şi alcool etilic (635,0 mL) s-a adăugat încet hidroxid de sodiu (aproximativ 431,4 mL de 2 M, 862,8 mmol) şi s-a agitat la temperatura camerei peste noapte. Cea mai mare parte din solvent a fost îndepărtat sub presiune redusă. Reziduul apos a fost diluat cu apă (400 mL) şi extras cu t-butil eter de metil (762,0 mL). Faza organică a fost spălată de două ori cu saramură (2 × 300 mL) şi faza apoasă a fost extrasă înapoi o dată cu t-butil eter de metil (250 mL). Fazele organice combinate au fost uscate, filtrate şi evaporate pentru a da 3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]-1H-pirazol (75 g, 89%) ca ulei vâscos. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,78 (s, 1H), 7,48 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 5,65 (s, 1H), 4,05 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 1,08 (s, 6H), 1,00 (s, 6H), 0,67 (t, J = 7,7 Hz, 1H). ESI-MS m/z calc. 194,1419, găsit 195,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,43 minute.

Etapa C: 2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de etil

La 2,6-dicloropiridin-3-carboxilatul de etil (16,8 g, 76,35 mmol) şi 3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]-1H-pirazol (aproximativ 14,83 g, 76,35 mmol) în DMF (201,6 mL) s-a adăugat carbonat de potasiu (aproximativ 13,72 g, 99,26 mmol) urmat de DABCO (aproximativ 1,284 g, 11,45 mmol). Suspensia a fost agitată la temperatura ambiantă timp de 16 ore. Suspensia fină crem a fost diluată încet cu apă (201,6 mL), şi suspensia groasă rezultată a fost agitată la temperatura ambiantă timp de 30 minute cu un agitator situat la partea superioară. Precipitatul a fost colectat utilizând un mediu fritat şi spălat de 3 ori cu 25 mL de apă. Solidul a fost uscat în aer timp de 30 minute, şi apoi uscat în vid utilizând un azeotrop EtOAc. S-a obţinut 2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de etil (28,8 g, 100%) ca un solid alburiu. ESI-MS m/z calc. 377,1506, găsit 378,37 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,47 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,43 (dd, J = 2,9, 0,9 Hz, 1H), 8,39 (dd, J = 8,5, 0,9 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 8,5, 0,9 Hz, 1H), 6,24 (dd, J = 2,9, 0,9 Hz, 1H), 4,34 (td, J = 7,5, 6,6 Hz, 2H), 4,28 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 1,34 (td, J = 7,1, 0,9 Hz, 3H), 1,11 (s, 6H), 1,05 (s, 6H), 0,75 (t, J = 7,8 Hz, 1H).

Etapa D: Acid 2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

2-Cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilatul de etil (146 g, 386,4 mmol) în THF (730,0 mL) şi EtOH (292,0 mL) a fost tratat cu NaOH (aproximativ 772,8 mL de 1 M, 772,8 mmol) şi soluţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 5 ore. Cea mai mare parte din solvent a fost îndepărtată sub presiune redusă, şi soluţia a fost acidulată prin adăugare de acid citric (aproximativ 148,5 g, 89,19 mL, 772,8 mmol) sub răcire cu gheaţă. Suspensia groasă formată (pH 2-3) a fost agitată în baia cu gheaţă timp de 1 oră, filtrată, spălată cu multă apă şi uscată într-un cabinet de uscare sub vid la 45°C cu un azot roşu timp de două zile pentru a da acidul 2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (128,2 g, 90%) ca un solid alburiu. ESI-MS m/z calc. 349,11932, găsit 350,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,11 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,64 (s, 1H), 8,69 - 8,22 (m, 2H), 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,28 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 1,08 (d, J = 24,9 Hz, 12H), 0,75 (t, J = 7,8 Hz, 1H).

Etapa E: 2-Cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (150 mg 0,429 mmol) şi a fost dizolvat/suspendat în THF (2 mL), şi s-a adăugat carbonil diimidazol (64,2 mg, 0,396 mmol). Suspensia a fost lăsată să se agite la temperatura camerei timp de 1,5 ore. S-a adăugat apoi 2-metilbenzensulfonamidă (73,4 mg, 0,429 mmol) urmată de DBU (59,2 µL, 0,396 mmol). Soluţia rezultată a fost apoi agitată timp de alte 1,5 ore. Volatilele au fost evaporate. Reziduul rămas a fost preluat în diclorometan (2 mL) şi spălat cu 1 M acid citric apos (1×2 mL). Stratul organic a fost injectat pe o coloană cu gel de siliciu pentru cromatografie: coloană cu gel de siliciu de 12 grame, 0-10% gradient de MeOH/DCM. S-a obţinut 2-cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (115 mg, 53%). ESI-MS m/z calc. 502,14417, găsit 503,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,25 minute.

Etapa F: N-(o-Tolilsulfonil)-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-metilsulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (115 mg, 0,229 mmol) şi (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (106 mg, 0,935 mmol) au fost combinate şi dizolvate în DMSO (1 mL). În final s-a adăugat carbonat de potasiu măcinat (258 mg, 1,87 mmol). Amestecul de reacţie a fost etanşat şi încălzit peste noapte la 130°C. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu EtOAc (50 mL) şi spălat cu acid citric apos (1 M, 2× 50 mL) şi saramură (1× 50 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Produsul a fost izolat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-5% MeOH/DCM pe o coloană cu gel de siliciu de 12 grame. S-a obţinut N-(o-Tolilsulfonil)-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (57,2 mg, 42%). ESI-MS m/z calc. 579,2879, găsit 580,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,52 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,62 (s, 1H), 8,18 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,04 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,59 (td, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H), 7,50 - 7,40 (m, 2H), 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,24 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 2,63 (s, 3H), 2,38 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,16 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 1,6 Hz, 6H), 1,35 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,10 (s, 6H), 1,04 (d, J = 1,1 Hz, 6H), 0,77 - 0,67 (m, 4H).

Exemplul sintetic 16: Sinteza Compusului 16: N-(3-Fluorofenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil) metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (150 mg, 0,429 mmol) a fost dizolvat/suspendat în THF (2 mL), şi s-a adăugat carbonil diimidazol (64,2 mg, 0,396 mmol). Suspensia a fost lăsată să se agite la temperatura camerei timp de 1,5 ore. S-a adăugat apoi 3-fluorobenzensulfonamidă (75,1 mg, 0,429 mmol) urmată de DBU (59,2 µL, 0,396 mmol). Soluţia rezultată a fost apoi agitată timp de alte 1,5 ore. Volatilele au fost evaporate. Reziduul rămas a fost preluat în diclorometan (2 mL) şi spălat cu 1 M acid citric apos (1×2 mL). Stratul organic a fost injectat pe o coloană cu gel de siliciu pentru a fi purificat prin cromatografie: coloană cu gel de siliciu de 12 grame, gradient de 0-10% MeOH/DCM. S-a obţinut 2-cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (150 mg, 70%). ESI-MS m/z calc. 506,11908, găsit 507,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,24 minute.

Etapa B: N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (158 mg, 0,312 mmol), şi (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (Sare clorhidrat) (105,9 mg, 0,935 mmol) au fost combinate şi dizolvate în DMSO (1 mL). În final s-a adăugat carbonat de potasiu măcinat (258 mg, 1,87 mmol). Amestecul de reacţie a fost etanşat şi încălzit peste noapte la 130°C. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu EtOAc (50 mL) şi spălat cu acid citric apos (1 M, 2× 50 mL) şi saramură (1 × 50 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Produsul a fost izolat prin cromatografie pe coloană eluând cu un gradient de 0-5% MeOH/DCM pe o coloană cu gel de siliciu de 12 grame. S-a obţinut N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (28,4 mg, 16%). ESI-MS m/z calc. 583,2629, găsit 584,6 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,46 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,61 (s, 1H), 8,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,87 - 7,81 (m, 2H), 7,79 - 7,71 (m, 2H), 7,63 (tdd, J = 8,6, 2,6, 1,1 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,24 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 2,44 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,36 - 2,26 (m, 1H), 2,13 (td, J = 11,8, 6,0 Hz, 1H), 1,84 (dd, J = 11,8, 5,5 Hz, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 1,39 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,10 (s, 6H), 1,04 (s, 6H), 0,74 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 0,70 (t, J = 6,6 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 17: Sinteza Compusului 17: N-(Benzensulfonil)-2-[(4S)-3,3-dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil)pirolidin-1-il]-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (2 g, 3,884 mmol) a fost dizolvată în NMP (10,00 mL) şi 1,2-dietoxietan (2,000 mL). S-au adăugat carbonat de potasiu (aproximativ 2,684 g, 19,42 mmol) şi (4S)-3,3-dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil)pirolidină (Sare clorhidrat) (aproximativ 1,502 g, 9,710 mmol), şi suspensia rezultată a fost încălzită până la 130°C şi agitată peste noapte. Amestecul de reacţie a fost răcit şi turnat în gheaţă agitată rapid (60,00 mL) şi acid acetic (aproximativ 3,499 g, 3,313 mL, 58,26 mmol). După agitare timp de 20 minute pentru a forma un solid curgător destul de uniform, solidele au fost separate prin filtrare şi spălate cu apă. Turta a fost dizolvată în diclorometan, şi aposul rezultat forţat să iasă a fost separat. Stratul de diclorometan a fost spălat cu apă de două ori şi saramură şi uscat pe sulfat de sodiu şi concentrat. S-a adăugat etanol (20 mL), şi soluţia a fost concentrată la câţiva mililitri. S-a adăugat foarte încet apă în picătură. Suspensia care s-a format a fost încălzită la o suspensie subţire şi lăsată să se răcească peste 30 minute. Solidele cristaline au fost filtrate şi spălate cu o cantitate mică de etanol pentru a da N-(benzensulfonil)-2-[(4S)-3,3-dideuterio-2,2-dimetil-4-(trideuteriometil)pirolidin-1-il]-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol -1-il]piridin-3-carboxamidă (600 mg, 26%).. ESI-MS m/z calc. 596,24, găsit 597,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,29 minute.

Exemplul sintetic 18: Sinteza Compusului 18: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(cis)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-(2-bromoetoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

La o soluţie de 2-bromoetanol (1,69 g, 13,53 mmol), terţ-butil-2,3-dihidro-3-oxopirazol-1-carboxilat (2,08 g, 11,28 mmol) şi trifenilfosfină (3,55 g, 13,53 mmol) în tetrahidrofuran anhidru (45 mL) la 0°C s-a adăugat în picătură azodicarboxilat de diizopropil (2,74 g, 13,53 mmol). După ce adăugarea a fost completă, soluţia de reacţie a fost agitată la 0°C timp de 1 oră, apoi încălzită la temperatura camerei şi agitată timp de 2 ore suplimentare . S-a adăugat eter (400 mL). Soluţia organică a fost spălată cu soluţie saturată de carbonat de sodiu apoasă (80 mL), saramură (50 mL), apoi uscată pe sulfat de magneziu, filtrată şi concentrată sub presiune redusă. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând o metodă cu gradient de hexani-acetat de etil (0 până la 15% acetat de etil) pentru a da 3-(2-bromoetoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (2,56 g, 78%) ca solid alb. 1H RMN (250MHz, CDCl3) δ (ppm): 7,85 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,92 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,63 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,68 (t, J = 6,0 Hz, 2H),1,64 (s, 9H). ESI-MS m/z calc. 292,0 găsit 292,9 (M+1)+. Timp de retenţie: 4,91 minute.

Etapa B: 3-(viniloxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

La soluţie de 3-(2-bromoetoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (2,52 g, 8,66 mmol) în tetrahidrofuran anhidru (90 mL) s-a adăugat terţ-butoxid de potasiu (1,46 g, 13,0 mmol). Soluţia rezultată a fost agitată timp de 2 ore, apoi s-a adăugat diterţ-butil dicarbonat (5,67 g, 26,0 mmol) şi s-a agitată timp de încă o altă oră. S-a adăugat dietil eter (400 mL). Straturile organice au fost spălate cu apă (50 mL), saramură (2 × 50mL), uscate pe sulfat de magneziu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând o metodă cu gradient de hexani-acetat de etil (0 până la 10% acetat de etil) pentru a da 3-(viniloxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,10 g, 60%) ca ulei incolor. 1H RMN (250MHz, CDCl3) δ (ppm): 7,89 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,24 (dd, J = 6, 13,5 Hz, 1H), 5,95 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,88 (dd, J= 1,8, 13,5 Hz, 1H), 4,50 (dd, J = 1,8, 6,0 Hz, 1H), 1,62 (s, 9H). ESI-MS m/z calc. 210,1 găsit 211,0 (M+1)+. Timp de retenţie: 4,74 minute.

Etapa C: 3-(2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

3-(viniloxi)-1H-pirazol-1-carboxilatul de terţ-butil (1,10 g, 5,23 mmol) într-un flacon în formă de pară (100 mL) s-a adăugat apă (20 mL) şi s-a barbotat cu argon timp de 5 minute, apoi s-a adăugat acetat de sodiu (85,8 mg, 1,05 mmol) urmat de clorhidrat de 2,2,2-trifluoroetilamină (3,57 g, 26,17 mmol) şi acid sulfuric concentrat (51,3 mg, 0,523 mmol). Soluţia a fost barbotată cu argon timp de alte 5 minute înainte de a se adăuga bis[rodiu(acid α,α,α',α'-tetrametil-1,3-benzendipropionic)] (397 mg, 0,523 mmol). Soluţia de reacţie a fost ţinută sub argon cu balon în timp ce soluţia apoasă de nitrit de sodiu (2,17 g, 31,4 mmol) în apă (12,8 mL) a fost adăugată printr-o pompă de seringă în 10 ore. După ce adăugarea a fost completă, soluţia rezultată a fost agitată timp de încă 6 ore suplimentare. S-a adăugat dietil eter (300 mL) şi stratul organic a fost separat. Apoi stratul organic a fost spălat cu saramură (30 mL), uscat pe sulfat de magneziu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând metoda cu gradient de hexani - diclorometan (0 până la 100% diclorometan). Reziduul obţinut a fost supus din nou la cromatografie pe gel de siliciu (hexani şi acetat de etil, gradient de 0 până la 10% acetat de etil) pentru a da 3-(1,2-trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil şi 3-(1,2-cis-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil. 3-(1,2-trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil: (366 mg, 24%); un solid alb. 1H RMN (250MHz, CDCl3) δ (ppm): 7,84 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,91 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,49 (m, 1H), 1,75 (m, 1H), 1,62 (s, 9H), 1,56-1,25 (m, 2H). ESI-MS mlz calc. 292,1 găsit 293,1 (M+1)+.Timp de retenţie: 5,22 minute. 3-(1,2-cis-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil: (314mg, 21%); un solid alb. 1H RMN (250MHz, CDCl3) δ (ppm): 7,90 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,92 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,49 (m, 1H), 1,94 (m, 1H), 1,62 (s, 9H), 1,30 (m, 2H). ESI-MS m/z calc. 292,1 găsit 293,1 (M+1)+. Timp de retenţie: 5,48 minute.

Etapa D: 3-(1,2-cis-2-(Trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol

S-a adăugat acid trifluoroacetic (2,76 g, 24,3 mmol) la soluţia de 3-(1,2-cis-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (708 mg, 2,43 mmol) în diclorometan anhidru (24 mL). Soluţia rezultată a fost agitată la temperatura camerei timp de 16 ore. S-a adăugat 1,2-dicloroetan (10 mL) la soluţia de reacţie. Toţi solvenţii au fost îndepărtaţi sub presiune redusă. Reziduul obţinut a fost dizolvat în etil eter (150 mL), spălat cu soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu (30 mL). Soluţia organică a fost uscată pe sulfat de magneziu, filtrată şi concentrată sub presiune redusă pentru a da 3-(1,2-cis-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol brut (461 mg, 99%) ca ulei galben-maro. Produsul brut a fost utilizat direct în etapa următoare fără nici o purificare suplimentară. ESI-MS m/z calc. 192,1 găsit 193,0 (M+1)+. Timp de retenţie: 3,26 minute.

Etapa E: 6-(3-(1,2-cis-2-(trifuorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin -3-carboxilat de terţ-butil

La soluţia de 3-(1,2-cis-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol brut (461 mg, 2,43 mmol) în dimetilformamidă (8 mL) s-a adăugat 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (659 mg, 2,67 mmol), carbonat de potasiu (669 mg, 4,85 mmol) şi 1,4-diazabiciclo [2,2,2]octan (55 mg, 0,49 mmol). Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 48 ore. Soluţia de reacţie a fost diluată cu eter (200 mL), spălată cu apă (4 × 20mL) şi saramură (20 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de magneziu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând o metodă cu gradient de hexani ― diclorometan (0 până la 100% diclorometan) pentru a da 6-(3-(1,2-cis-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (731mg, 68%) ca solid alb. 1H RMN (250MHz, CDCl3) δ (ppm): 8,39 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 8,5Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,5Hz, 1H), 6,01 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,33 (m, 1H), 1,93(m, 1H), 1,62(s, 9H), 1,45-1,26(m, 2H). ESI-MS m/z calc. 403,1 găsit 404,1 (M+1)+. Timp de retenţie: 7,29 minute.

Etapa F: Acid 6-(3-(1,2-cis-2-(Trifluorometil)ciclopropoxi)-]-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilic

Acidul trifluoroacetic (2,03 g, 17,8 mmol) a fost adăugat la soluţia de 6-(3-(1,2-cis-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (718 mg, 1,78 mmol) în diclorometan anhidru (18 mL). Soluţia rezultată a fost agitată la temperatura camerei timp de 16 ore. S-a adăugat 1,2-dicloroetan (10 mL) la soluţia de reacţie. Toţi solvenţii au fost îndepărtaţi sub presiune redusă. La solidul brut obţinut s-a adăugat 10% etil eter în hexani (25 mL) şi s-a sonicat timp de 30 minute, s-a filtrat, s-a spălat cu 10% etil eter în hexani (10 ml), hexani (10 mL) şi s-a uscat sub vid ridicat pentru a da acidul 6-(3-(1,2-cis-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilic (517mg, 84%) ca solid alb. 1H RMN (500MHz, DMSO) δ (ppm): 13,6 (bs, 1H), 8,47 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 8,42 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,27 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,46 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 1,47 (m, 1H), 1,32 (m, 1H). ESI-MS m/z calc. 347,0 găsit 347,9 (M+1)+. Timp de retenţie: 5,20 minute.

Etapa G: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(cis)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 6-(3-(1,2-Cis-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin -3-carboxilic (125 mg, 0,360 mmol) a fost dizolvat în THF (1 mL). S-a adăugat 1,1'-carbonildiimidazol (75,6 mg, 0,431 mmol). Amestecul de reacţie a fost lăsat să se agite la temperatura camerei timp de 1 oră. S-a adăugat benzensulfonamidă (67,8 mg, 0,431 mmol) urmată de DBU (64,5 µL, 0,431 mmol). Amestecul final de reacţie a fost lăsat să se agite peste noapte la temperatura camerei. Volatilele au fost îndepărtate prin evaporare. Acestea au fost preluate în EtOAc (50 mL) şi spălate cu soluţie 1 M de acid citric apos (2Ч 50 mL) şi saramură (1× 50 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. S-a obţinut N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(cis)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi]pirazol-1-il]piridim-3-carboxamidă (201 mg). ESI-MS m/z calc. 486,03763, găsit 486,9 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,67 minute (1 minut rulare).

Etapa H; N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(cis)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(cis)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxamida (175 mg, 0,3595 mmol) a fost dizolvată în DMSO (1 mL). S-a adăugat (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (161 mg, 1,08 mmol) urmată de carbonat de potasiu (298 mg, 2,16 mmol). Amestecul de reacţie a fost lăsat să se agite la 130°C peste noapte. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu EtOAc (50 mL) şi spălat cu acid citric apos (1 M, 2× 50 mL) şi saramură (1× 50 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Produsul a fost izolat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu pe o coloană cu gel de siliciu de 12 grame eluând cu un gradient de 0-10% EtOAc/hexan. S-a obţinut N-(benzensulfonil)-6-[3-[(cis)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (114,3 mg, 56%). ESI-MS m/z calc. 563,1814, găsit 564,5 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,08 minute

Exemplul sintetic 19: Sinteza Compusului 19: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(trans)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-(1,2-trans-2-(Trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol

S-a adăugat acid trifluoroacetic (3,15 g, 27,64 mmol) la o soluţie de 3-(1,2-trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (807 mg, 2,76 mmol) în diclorometan anhidru (28 mL). Soluţia rezultată a fost agitată la temperatura camerei timp de 16 ore. S-a adăugat 1,2-dicloroetan (15 mL) la soluţia de reacţie. Toţi solvenţii au fost îndepărtaţi sub presiune redusă. Reziduul obţinut a fost dizolvat în etil eter (200 mL), spălat cu soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu (30 mL). Soluţia organică a fost uscată pe sulfat de magneziu, filtrată şi concentrată sub presiune redusă pentru a da 3-(1,2-trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol brut (525mg, 99%) ca ulei galben-maro. Produsul brut a fost utilizat direct în etapa următoare fără nici o purificare suplimentară. ESI-MS m/z calc. 192,1 găsit 193,0 (M+1)+. Timp de retenţie: 2,97 minute.

Etapa B: 6-(3-(1,2-trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil

La soluţie de 3-(1,2-trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol brut (525 mg, 2,76 mmoL) în dimetilformamidă (9,2 mL) s-a adăugat 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (751 mg, 3,04 mmol), carbonat de potasiu (763 mg, 5,53 mmol) şi 1,4-diazabiciclo [2,2,2]octan (62 mg, 0,55 mmol). Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 48 ore. Soluţia de reacţie a fost diluată cu eter (250 mL), spălată cu apă (4 × 20 mL) şi saramură (20 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de magneziu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând metoda cu gradient de hexani ― diclorometan (0 până la 100% diclorometan) pentru a da 6-(3-(1,2-trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (314 mg, 21%) ca ulei incolor. ESI-MS m/z calc. 403,1 găsit 404,1 (M+1)+. Timp de retenţie: 6,92 minute. 1H RMN (250MHz, CDCl3) δ (ppm): 8,38 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,73 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,39 (m, 1H), 1,77 (m, 1H), 1,62 (s, 9H), 1,44 (m, 1H), 1,31 (m, 1H).

Etapa C: acid 6-(3-(1,2-Trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilic

S-a adăugat acid trifluoroacetic (2,39 g, 21,0 mmol) la o soluţie de 6-(3-(1,2-trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (847 mg, 2,10 mmol) în diclorometan anhidru (21 mL). Soluţia rezultată a fost agitată la temperatura camerei timp de 20 ore. S-a adăugat 1,2-dicloroetan (15 mL) la amestecul de reacţie. Toţi solvenţii au fost îndepărtaţi sub presiune redusă. Solidul brut obţinut a fost adăugat la 10% etil eter în hexani (30 mL) şi sonicat timp de 30 minute, filtrat, spălat cu 10% etil eter în hexani (10 mL), hexani (10 mL) şi uscat sub vid ridicat pentru a da acidul 6-(3-(1,2-trans-2-(trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilic (600 mg, 82%) ca solid alb. ESI-MS m/z calc. 347,0 găsit 347,9 (M+1)+. Timp de retenţie: 4,91 minute. 1H RMN(500MHz, DMSO) δ (ppm): 8,46 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,41 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,30 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,46 (m, 1H), 2,15 (m, 1H), 1,40 (m, 1H), 1,34 (m, 1H).

Etapa D: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(trans)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 6-(3-(1,2-trans-2-(Trifluorometil)ciclopropoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-cloropiridin-3-carboxilic (125 mg, 0,360 mmol) a fost dizolvat în THF (1 mL). S-a adăugat 1,1'-carbonildiimidazol (75,6 mg, 0,431 mmol). Amestecul de reacţie a fost lăsat să se agite la temperatura camerei timp de 1 oră. S-a adăugat benzensulfonamidă (67,8 mg, 0,431 mmol) urmată de DBU (64,5 µL, 0,431 mmol). Amestecul final de reacţie a fost lăsat să se agite peste noapte la temperatura camerei. Volatilele au fost îndepărtat prin evaporare. Acestea au fost preluate în EtOAc (50 mL) şi spălate cu soluţie apoasă 1 M de acid citric (2× 50 mL) şi saramură (1× 50 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. S-a obţinut N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(trans)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (199 mg). ESI-MS m/z calc. 486,0, găsit 486,9 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,65 minute (1 minut rulare).

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(trans)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(trans)-2-(trifluorometil)ciclopropoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (175 mg, 0,3595 mmol) a fost dizolvată în DMSO (1 mL). S-a adăugat (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (161 mg, 1,08 mmol) urmată de carbonat de potasiu (298 mg, 2,16 mmol). Amestecul de reacţie a fost lăsat să se agite la 130°C peste noapte. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu EtOAc (50 mL) şi spălat cu acid citric apos (1 M, 2× 50 mL) şi saramură (1× 50 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Produsul a fost izolat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu pe o coloană cu gel de siliciu de 12 grame eluând cu un gradient de 0-10% EtOAc/hexan. S-a obţinut N-(benzensulfonil)-6-[3-[(trans)-2-(trifluorometil) ciclopropoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (115,7 mg, 57%). ESI-MS m/z calc. 563,1814, găsit 564,5 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,01 minute.

Exemplul sintetic 20: Sinteza Compusului 20: N-(2-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

O soluţie de acid 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (181 mg, 0,5 mmol) şi carbonildiimidazol (aproximativ 97,3 mg, 0,60 mmol) în DMF (2,5 mL) a fost agitată timp de 30 minute. O soluţie de 2-hidroxibenzensulfonamidă (aproximativ 113 mg, 0,65 mmol) şi hexametildisilazidă de sodiu (aproximativ 600 µL de 1 M, 0,60 mmol) în DMF (2,5 mL) a fost agitată timp de 30 minute. Cele două soluţii au fost combinate şi agitate timp de 15 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost acidulat cu 10mL acid citric apos 1 M, şi extras cu 10 mL acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-5% de metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxamidă (82 mg, 32%) ESI-MS m/z calc. 516,0, găsit 517,2 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,67 minute.

Etapa B: N-(2-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (82 mg, 0,16 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (aproximativ 71 mg, 0,48 mmol), şi carbonat de potasiu (aproximativ 132 mg, 0,95 mmol) au fost combinate în DMSO (793 µL) şi încălzite la 130°C timp de 15 ore. Reacţia a fost filtrată şi purificată utilizând o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o coloană Luna C18 (2) (75 × 30 mm, 5 µm dimensiunea particulei) comercializată de Fenomenex (pn: 00C-4252-U0-AX), şi o rulare cu gradient dual de la 30-99% fază mobilă B peste 15,0 minute [fază mobilă A = H2O (5 mM HCl); fază mobilă B = acetonitril; debit = 50 mL/min, şi temperatura coloanei = 25°C] pentru a da N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (44 mg, 46%) ESI-MS m/z calc. 593,2, găsit 594,3 (M+1) +; Timp de retenţie: 2,07 minute.

Exemplul sintetic 21: Sinteza Compusului 21: N-(3-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(3-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (181 mg, 0,50 mmol) şi carbonil diimidazolul (aproximativ 97 mg, 0,60 mmol) în DMF (2,5 mL) au fost agitate timp de 30 minute. 3-hidroxibenzensulfonamida (aproximativ 113 mg, 0,65 mmol) şi NaH (aproximativ 24,0 mg de 60 %g/g, 0,60 mmol) în DMF (2,5 mL) au fost agitate timp de 30 minute. Cele două soluţii au fost combinate şi agitate timp de 4 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost acidulat cu 10mL de acid citric apos 1 M, şi extras cu 10 mL acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-8% de metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(3-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (250 mg, 97%). ESI-MS m/z calc. 516,0482, găsit 517,2 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,67 minute.

Etapa B: N-(3-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(3-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (290 mg, 0,56 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (Sare clorhidrat) (aproximativ 252 mg, 1,68 mmol), şi carbonatul de potasiu (aproximativ 465 mg, 3,37 mmol) în DMSO (2,80 mL) au fost încălzite la 130°C timp de 15 ore. Reacţia a fost filtrată şi purificată utilizând o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o coloană Luna C18 (2) (75 × 30 mm, 5 µm dimensiunea particulei) comercializată de Fenomenex (pn: 00C-4252-U0-AX), şi o rulare cu gradient dual de la 30-99% faza mobilă B peste 15,0 minute [fază mobilă A = H2O (5 mM HCl); fză mobilă B = acetonitril; debit = 50 mL/min, şi temperatura coloanei = 25°C] pentru a da N-(3-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (37 mg, 11%) ESI-MS m/z calc. 593. 2, găsit 594,3 (M+1) +; Timp de retenţie: 1,98 minute.

Exemplul sintetic 22: Sinteza Compusului 22: N-(4-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (181 mg, 0,50 mmol) şi carbonil diimidazolul (aproximativ 97 mg, 0,60 mmol) în DMF (2,5 mL) au fost agitate timp de 30 minute. 4-hidroxibenzensulfonamida (aproximativ 113 mg, 0,65 mmol) şi NaH (aproximativ 24,0 mg de 60 %g/g, 0,60 mmol) în DMF (2,5 mL) au fost agitate timp de 30 minute. Cele două soluţii au fost combinate şi agitate timp de 4 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost acidulat cu 10mL de acid citric apos 1 M, şi extras cu 10 mL acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-8% de metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (210 mg, 81%) ESI-MS m/z calc. 516,0, găsit 517,2 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,64 minute.

Etapa B: N-(4-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (220 mg, 0,42 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (Sare clorhidrat) (aproximativ 191 mg, 1,28 mmol), şi carbonatul de potasiu (aproximativ 353 mg, 2,56 mmol) în DMSO (2,13 mL) au fost încălzite la 130°C timp de 15 ore. Reacţia a fost filtrată şi purificată utilizând o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o coloană Luna C18 (2) (75 × 30 mm, 5 µm dimensiunea particulei) comercializată de Fenomenex (pn: 00C-4252-U0-AX), şi o rulare cu gradient dual de la 30-99% fază mobilă B peste 15,0 minute [fază mobilă A = H2O (5 mM HCl); fază mobilă B = acetonitril; debit = 50 mL/min, şi temperatura coloanei = 25°C] pentru a da N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (48 mg, 19%) ESI-MS m/z calc. 593,2, găsit 594,3 (M+1) +; Timp de retenţie: 1,98 minute.

Exemplul sintetic 23: Sinteza Compusului 23: N-(o-Tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (200 mg, 0,5529 mmol) şi CDI (aproximativ 107,6 mg, 0,6635 mmol) au fost combinate în THF (960 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 2-metilbenzensulfonamidă (aproximativ 123,1 mg, 0,7188 mmol) urmată de DBU (aproximativ 101,0 mg, 99,21 µL, 0,6635 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. S-a adăugat o soluţie de acid citric 1M (1 mL) şi reacţia a fost agitată timp de 20 min. Solidul rezultat a fost colectat prin filtrare în vid (spălare cu apă) şi uscat sub vid pentru a da o pulbere albă, care a fost utilizată în etapa următoare fără purificare suplimentară. 2-cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (280 mg, 98%) ESI-MS m/z calc. 514,1, găsit 515,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,73 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ d 13,56 - 12,55 (s, 1H), 8,42 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,63 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,47 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 6,23 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,39 (s, 2H), 2,64 (s, 3H), 1,12 - 1,06 (m, 4H).

Etapa B: N-(o-Totytsutfonyt)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazoM-it]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxamida (114,7 mg, 0,2227 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (100 mg, 0,6682) şi, K2CO3 (184,6 mg, 1,336 mmol) au fost combinate în DMSO (0,5 mL) într-un tub cu capac înfiletat şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu 20 mL de acetat de etil, şi 10 mL apă şi transferat la o pâlnie separatoare. S-au adăugat 15 mL de acid citric apos 1 M, şi stratul organic a fost separat. Stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil, şi organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut rezultat a fost purificat prin cromatografie rapidă pe gel de siliciu, eluând cu un gradient de 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (101 mg, 77%). ESI-MS m/z calc. 591,21, găsit 592,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,22 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,74 (s, 1H), 8,38 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 8,33 - 8,22 (m, 2H), 8,21 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,89 - 7,85 (m, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,41 - 4,31 (m, 2H), 3,36 - 3,29 (m, 3H), 2,40 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,27 (t, J = 8,6 Hz, 1H), 2,11 (tt, J = 12,1, 6,3 Hz, 1H), 1,88 - 1,81 (m, 1H), 1,53 (d, J = 9,8 Hz, 6H), 1,39 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,09 (dt, J = 6,7, 2,2 Hz, 4H), 0,68 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 24: Sinteza Compusului 24: N-(p-Tolilsulfonil)-6- [3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(p-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (200 mg, 0,5529 mmol) şi CDI (aproximativ 107,6 mg, 0,6635 mmol) au fost combinate în THF (1,200 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 4-metilbenzensulfonamidă (aproximativ 123,1 mg, 0,7188 mmol) urmată de DBU (aproximativ 101,0 mg, 99,21 µL, 0,6635 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de încă 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acid citric apos 1M şi apă, apoi extras 3x 20 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu 10 mL acid citric 1M, urmate de saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate, apoi purificate prin cromatografie pe gel de siliciu, eluând cu 0-10% metanol/diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(p-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (262 mg, 92%) ESI-MS m/z calc. 514,0689, găsit 515,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,74 minute.

Etapa B: N-(p-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-cloro-N-(p-Tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (114,7 mg, 0,2227), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (Sare clorhidrat) (100 mg, 0,6682) şi, K2CO3 (184,6 mg, 1,336 mmol) au fost combinate în DMSO (0,5 mL) într-un tub cu capac înfiletat şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu 20 mL de acetat de etil, şi 10 mL apă şi transferat la o pâlnie separatoare. S-a adăugat 15 mL de acid citric apos 1M, şi stratul organic a fost separat. Stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil, şi organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut rezultat a fost purificat prin cromatografie rapidă pe gel de siliciu, eluând cu un gradient de 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(p-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (65 mg, 49%). ESI-MS m/z calc. 591,21, găsit 592,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,25 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,74 (s, 1H), 8,38 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 8,33 - 8,22 (m, 2H), 8,21 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,89 - 7,85 (m, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,41 - 4,31 (m, 2H), 3,36 - 3,29 (m, 3H), 2,40 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,27 (t, J = 8,6 Hz, 1H), 2,11 (tt, J = 12,1, 6,3 Hz, 1H), 1,88 - 1,81 (m, 1H), 1,53 (d, J = 9,8 Hz, 6H), 1,39 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,09 (dt, J = 6,7, 2,2 Hz, 4H), 0,68 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 25: Sinteza Compusului 25: N-(3Cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(3-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (200 mg, 0,5529 mmol) şi CDI (aproximativ 107,6 mg, 0,6635 mmol) au fost combinate în THF (1,200 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 3-cianobenzensulfonamidă (aproximativ 131,0 mg, 0,7188 mmol) urmată de DBU (aproximativ 101,0 mg, 99,21 µL, 0,6635 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acid citric apos 1M şi apă, şi extras cu 3x 20 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu 10 mL de acid citric 1M, urmate de saramură, apoi uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate şi utilizate în etapa următoare fără purificare suplimentară. 2-cloro-N-(3-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-l-il] piridin-3-carboxamidă (228 mg, 78%) ESI-MS m/z calc. 525,0485, găsit 526,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,7 minute.

Etapa B: N-(3-cianopbenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(3-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[l-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (117,1 mg, 0,2227), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (100 mg, 0,6682) şi, K2CO3 (184,6 mg, 1,336 mmol) au fost combinate în DMSO (0,5 mL) într-un tub cu capac înfiletat şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu 20 mL acetat de etil, şi 10 mL apă şi transferat la o pâlnie separatoare. S-au adăugat 15 mL de aid citric apos 1 M, şi stratul organic a fost separat. Stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil, şi organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut rezultat a fost purificat prin cromatografie rapidă pe gel de siliciu, eluând cu un gradient de 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(3-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă, (73 mg, 54%) ESI-MS m/z calc. 602,19, găsit 603,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,04 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,74 (s, 1H), 8,38 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 8,30 (ddd, J = 8,1, 1,9, 1,1 Hz, 1H), 8,24 (dt, J = 7,8, 1,3 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,92 - 7,84 (m, 2H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,42 - 4,31 (m, 2H), 2,40 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,27 (t, J = 8,6 Hz, 1H), 2,11 (tt, J = 12,1, 6,3 Hz, 1H), 1,89 - 1,78 (m, 1H), 1,53 (d, J = 9,8 Hz, 6H), 1,39 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,09 (dt, J = 6,7, 2,2 Hz, 4H), 0,68 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 26: Sinteza Compusului 26: N-(2-Cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(2-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (200 mg, 0,5529 mmol) şi CDI (aproximativ 107,6 mg, 0,6635 mmol) au fost combinate în THF (1,200 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 2-cianobenzensulfonamidă (aproximativ 131,0 mg, 0,7188 mmol) urmată de DBU (aproximativ 101,0 mg, 99,21 µL, 0,6635 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. S-a adăugat o soluţie de acid citric 1M (1 mL) şi reacţia a fost agitată timp de 20 minute. Precipitatul solid rezultat a fost colectat prin filtrare în vid (spălare cu apă) pentru a da un solid alb, care a fost uscat sub vid şi utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară, 2-cloro-N-(2-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (279 mg, 96%) ESI-MS m/z calc. 525,0485, găsit 526,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,69 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,23 (s, 1H), 8,49 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,46 - 8,39 (m, 1H), 8,35 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,21 - 8,13 (m, 1H), 7,96 - 7,90 (m, 2H), 7,82 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,27 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,42 (s, 2H), 1,11 (dt, J = 7,6, 2,2 Hz, 4H).

Etapa B: N-(2-Cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(2-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (117,1 mg, 0,2227), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (100 mg, 0,6682) şi, K2CO3 (184,6 mg, 1,336 mmol) au fost combinate în DMSO (0,5 mL) într-un tub cu capac înfiletat şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu 20 mL acetat de etil, şi 10 mL apă şi transferat la o pâlnie separatoare. S-au adăugat 15 mL de soluţie de acid citric apos 1 M, şi stratul organic a fost separat. Stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil, şi organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut rezultat a fost purificat prin cromatografie rapidă pe gel de siliciu, eluând cu un gradient de 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(2-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă, (41 mg, 31%) ESI-MS m/z calc. 602,19, găsit 603,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,12 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 11,77 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,29 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,17 - 8,11 (m, 1H), 8,06 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,94 - 7,87 (m, 2H), 6,97 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,44 - 4,32 (m, 2H), 3,07 - 2,91 (m, 2H), 2,32 (d, J = 19,0 Hz, 1H), 1,98 (q, J = 5,9, 5,5 Hz, 1H), 1,67 (s, 3H), 1,63 (s, 3H), 1,57 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 1,13 - 1,06 (m, 4H), 1,02 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 27: Sinteza Compusului 27: N-(4-Cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(4-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (150 mg, 0,4147 mmol) şi CDI (81 mg, 0,4995 mmol) au fost combinate în THF (900,0 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 4-cianobenzensulfonamidă (98 mg, 0,5379 mmol) urmată de DBU (75 µL, 0,5015 mmol) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat DBU suplimentar (80 µL, 0,5350 mmol), şi reacţia a fost agitată timp deu o oră suplimentară la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 20 mL ai unei soluţii de acid citric 1M şi apă şi extras cu 3x 20 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu 10 mL de acid citric 1M, urmate de saramură, apoi uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul rezultat a fost purificat suplimentar prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-10% de metanol în diclorometan, pentru a da un solid alb; 2-cloro-N-(4-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă(192 mg, 88%) ESI-MS m/z calc. 525,0485, găsit 526,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,71 minute.

Etapa B: N-(4-Cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(4-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol -1-il]piridin-3-carboxamida (117,1 mg, 0,2227), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (100 mg, 0,6682) şi, K2CO3 (184,6 mg, 1,336 mmol) au fost combinate în DMSO (0,5 mL) într-un tub cu capac înfiletat şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu 20 mL acetat de etil, şi 10 mL apă şi transferat la o pâlnie separatoare. S-a adăugat o soluţie de 15 mL acid citric apos 1 M, şi stratul organic a fost separat. Stratul apos a fost extras suplimentar de două orei cu 15 mL acetat de etil, şi organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut rezultat a fost purificat prin cromatografie rapidă pe gel de siliciu, eluând cu un gradient de 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(4-cianofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă, (62 mg, 46%) ESI-MS m/z calc. 602,19, găsit 603,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,04 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,77 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,16 (s, 4H), 7,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,50 - 4,17 (m, 2H), 2,33 (t, J = 10,3 Hz, 1H), 2,20 (dd, J = 10,2, 6,9 Hz, 1H), 2,11 (tt, J = 11,9, 6,4 Hz, 1H), 1,83 (dd, J = 11,8, 5,4 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 5,6 Hz, 6H), 1,37 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,13 - 1,05 (m, 4H), 0,66 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 28: Sinteza Compusului 28: N-(m-Tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluoromethyt)cidopropit]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(m-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxilpirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (200 mg, 0,5529 mmol) şi CDI (aproximativ 107,6 mg, 0,6635 mmol) au fost combinate în THF (964,9 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 3-metilbenzensulfonamidă (aproximativ 123,1 mg, 0,7188 mmol) urmată de DBU (aproximativ 101,0 mg, 99,21 µL, 0,6635 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu o soluţie de acid citric apoasă 1M şi apă, şi extras cu 3x 20 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu 10 mL de acid citric 1M, urmat de saramură, uscate pe sulfat de sodiu, concentrate, şi în final purificate prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol/diclorometan pentru a da un solid alb, 2-cloro-N-(m-tolilstdfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (178 mg, 63%) ESI-MS m/z calc. 514,0689, găsit 515,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,74 minute.

Etapa B: N-(m-Tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(m-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (114,7 mg, 0,2227 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (100 mg, 0,6682) şi, K2CO3 (184,6 mg, 1,336 mmol) au fost combinate în DMSO (0,5 mL) într-un tub cu capac înfiletat şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu 20 mL acetat de etil, şi 10 mL apă şi transferat la o pâlnie separatoare. S-au adăugat 15 mL dintr-o soluţie de acid citric apos 1M, şi stratul organic a fost separat. Stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil, şi organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut rezultat a fost purificat prin cromatografie rapidă pe gel de siliciu, eluând cu un gradient de 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(m-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă, (45 mg, 34%) ESI-MS m/z calc. 591,2, găsit 592,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,24 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,41 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,79 (tt, J = 6,0, 2,5 Hz, 3H), 7,57 - 7,50 (m, 2H), 6,91 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,48 - 4,24 (m, 2H), 2,46 (s, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,29 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 2,11 (dt, J = 13,2, 6,5 Hz, 1H), 1,83 (dd, J = 11,8, 5,5 Hz, 1H), 1,53 (d, J = 12,0 Hz, 6H), 1,38 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,09 (dd, J = 4,5, 3,2 Hz, 4H), 0,66 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 29: Sinteza Compusului 29: Sinteză de N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(1-metilciclopropoxi)metil]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: (1-Metil-1-(prop-2-in-1-iloxi)ciclopropan

1-Metilciclopropan-1-ol (1,0 g, 13,9 mmol) a fost dizolvat în Et2O (50 mL) şi răcit la 0°C. S-a adăugat în porţii NaH (50% în ulei, 0,67 g, 13,9 mmol). Amestecul a fost agitat timp de 10 min la 0 °C înainte ca bromura de propargil (80% în toluen, 3,1 g, 20,9 mmol) să fie adăugată în picătură. Amestecul a fost agitat timp de 1 oră la 0°C. Deoarece reacţia nu a continuat să se desfăşoare, s-a adăugat DMF (20 mL). Amestecul a fost agitat timp de o oră suplimentară la 0° şi stins cu NH4Cl apoasă saturată. Amestecul a fost extras cu Et2O (2×50 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu apă de două ori şi saramură, uscate pe Na2SO4 şi concentrate (la 40°C, 500 mbar) pentru a da (1-metil-1-(prop-2-in-1-iloxi)ciclopropan brut care a fost utilizat ca atare în etapa următoare. 1H RMN (CDCl3, 300 MHz): d 0,39 (m, 2H); 0,85 (m, 2H); 1,40 (s, 3H); 2,37 (s, 1H); 4,10 (s, 2H).

Etapa B: 3-((1-metilciclopropoxi)metil)-1H-pirazol

(1-metil-1-(prop-2-in-1-iloxi)ciclopropanul brut din câteva loturi (max 27,8 mmol, 3,0 g) a fost amestecat cu trimetilsilil diazometan (2,0 M în hexan, 10 mL, 20 mmol) şi agitat într-o eprubetă etanşată la 115°C timp de 18 ore. Amestecul a fost răcit la 40°C şi stins cu MeOH (20 mL) şi concentrat. Cromatografia pe coloană (siliciu; heptani/EtOAc 2:1) a dat 3-((1-metilciclopropoxi)metil)-1H-pirazol ca ulei incolor (1,2 g, 28% în două etape). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz): d 0,44 (m, 2H); 0,85 (m, 2H); 1,44 (s, 3H); 4,60 (s, 2H); 6,23 (s, 1H); 7,51 (s, 1H). 13C-RMN (75 MHz, CDCl3): d 13,4, 20,3, 58,4, 61,9, 103,9, 132,9 (un carbon cuaternar nu este prezentat).

Etapa C: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(1-metilciclopropoxi)metil]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-6-cloro-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamida (83 mg, 0,2035 mmol), 3-[(1-metilciclopropoxi)metil]-1H-pirazol (62 mg, 0,4074 mmol), şi triflatul de scandiu (10 mg, 0,02032 mmol) au fost combinate în DMSO (1,660 mL). S-a adăugat NaH (41 mg de 60 %g/g, 1,025 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 15 minute înainte de a fi etanşată şi încălzită la 160°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită şi partiţionată între acetat de etil şi o soluţie de acid citric 1M. Organicele au fost separate, spălate cu saramură, şi uscate pe sulfat de sodiu. Organicele au fost apoi evaporate sub presiune redusă, şi materialul brut a fost purificat prin HPLC preparativă (1-99 CH3CN în apă cu 5 mM HCl), peste 30 minute. Fracţiuni conţinând produsul au fost diluate cu apă şi extrase cu acetat de etil pentru a da, după concentraţie N-(benzensulfonil)-6-[3-[(1-metilciclopropoxi)metil]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1il]piridin-3-carboxamidă (10 mg, 9%) ESI-MS m/z calc. 523,22534, găsit 524,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,04 minute.

Exemplul sintetic 30: Sinteza Compusului 30: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (200 mg, 0,5717 mmol) şi CDI (111 mg, 0,6846 mmol) au fost combinate în THF (1,2 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat benzensulfonamidă (117 mg, 0,7443 mmol) urmată de DBU (102 µL, 0,6821 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 6 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu o soluţie 1M de acid citric şi apă, şi extras cu 3 × 20 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate, apoi purificate prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând un gradient de 0-10% metanol în diclorometan pentru a da o pulbere albă. N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (250 mg, 89%) ESI-MS m/z calc. 488,1285, găsit 489,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,81 minute.

Etapa B: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (115 mg, 0,2352 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (aproximativ 105,9 mg, 0,7077 mmol), şi carbonatul de potasiu (aproximativ 195,6 mg, 1,415 mmol) au fost combinate în DMSO (575,0 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei, diluată cu 15 mL apă, 15 mL acid citric 1M, şi 30 mL acetat de etil. Straturile apoase şi organice au fost separate, şi stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 30 mL acetat de etil, organicele au fost combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Solidul rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan, şi apoi purificat suplimentar prin cromatografie pe siliciu utilizând 0-100% acetat de etil în diclorometan, pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă (43 mg, 32%) ESI-MS m/z calc. 565,2723, găsit 566,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,43 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,47 (s, 1H), 8,18 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,02 - 7,95 (m, 2H), 7,79 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,76 - 7,69 (m, 1H), 7,68 - 7,62 (m, 2H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,24 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 2,42 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 2,28 (dd, J = 10,2, 7,1 Hz, 1H), 2,17 - 2,03 (m, 1H), 1,82 (dd, J = 11,8, 5,5 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 9,4 Hz, 6H), 1,36 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,10 (s, 6H), 1,04 (s, 6H), 0,73 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 0,65 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 31: Sinteza Compusului 31: N N-(4-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxilpirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (100 mg, 0,2661 mmol) şi CDI (aproximativ 51,38 mg, 0,3169 mmol) au fost combinate în THF (600,0 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 4-hidroxibenzensulfonamidă (aproximativ 50,69 mg, 0,2927 mmol) urmată de DBU (aproximativ 53,45 µL, 0,3574 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL acid citric 1M, şi extras de 3 ori cu 10 mL de acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da un solid alb, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. 2-cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (128 mg, 91%) ESI-MS m/z calc. 530,06384, găsit 531,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,69 minute.

Etapa B: N-(4-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (134 mg, 0,2524 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (113 mg, 0,7550 mmol), şi carbonatul de potasiu (210 mg, 1,519 mmol) au fost combinate în dimetil sulfoxid (670,0 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei, şi s-a adăugat 1 mL de apă. După 15 minute de agitare, conţinuturile fiolei au fost lăsate să se decanteze, porţiunea lichidă a fost îndepărtată cu pipeta şi solidele rămase au fost dizolvate cu 20 mL acetat de etil. Organicele au fost spălate cu 15 mL acid citric 1M. Straturile apoase şi organice au fost separate, şi stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil. Organicele au fost combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Solidul brut rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (43 mg, 28%) ESI-MS m/z calc. 607,20764, găsit 608,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,07 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,25 (s, 1H), 10,58 (s, 1H), 8,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,87 - 7,79 (m, 2H), 7,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,97 - 6,91 (m, 2H), 6,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,10 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,31 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,44 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,16 - 2,09 (m, 1H), 2,26 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 2,07 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,38 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,00 - 0,93 (m, 2H), 0,91 - 0,86 (m, 2H), 0,69 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 32: Sinteza Compusului 32: N-(Benzensulfonil)-6-[5-fluoro-3-[2-[1-(trifluorometil)cidopropi)]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: N-(benzensulfonil)-2,6-dicloro-piridin-3-carboxamidă

Un balon de 5000 mL, cu 3 gâturi, cu fund rotund, a fost dotat cu un agitator mecanic, o baie de răcire, o sondă/controlor de temperatură J-Kem, un condensator de reflux răcit cu apă, o pâlnie de adăugare şi o admisie/evacuare de azot. Vasul a fost încărcat sub o atmosferă de azot cu 60 g% hidrură de sodiu în ulei mineral (26,04 g, 0,6510 mol). Vasul a fost apoi încărcat încet cu N,N-dimetilformamidă (200 mL). S-a început agitarea şi temperatura recipientului a fost înregistrată la 19°C. Pâlnia de adăugare a fost apoi încărcată cu o soluţie de benzensulfonamidă (102,3 g, 0,6510 mol) în N,N-dimetilformamidă (868 ml, ~8,5 mL/g, 0,75M), necesitând o încălzire uşoară pentru a obţine o soluţie omogenă. Soluţia galben pal clară rezultată de benzensulfonamidă a fost adăugată ulterior în picătură într-o oră la balonul cu fund rotund care a condus la o oarecare spumare uşoară şi evoluţie a gazului. După completarea adăugării, temperatura recipientului a fost înregistrată la 28°C. Vasul a fost apoi dotat cu o manta de încălzire şi amestecul gri a fost încălzit la 60°C. Agitarea amestecului a continuat la 60°C timp de 1 oră, moment în care a părut că evoluţia gazului s-a oprit. Agitarea amestecului a continuat în timp ce amestecul a fost lăsat să se răcească la temperatura camerei. Între timp, un balon de 1000 mL, cu 3 gâturi, cu fund rotund, a fost dotat cu un agitator mecanic, o manta de încălzire, o sondă/controlor de temperatură J-Kem, un condensator de reflux cu apă răcită şi o admisie/evacuare de azot. Vasul a fost încărcat sub o atmosferă de azot cu acid 2,6-dicloropiridin-3-carboxilic (100 g, 0,5208 mol) şi N,N-dimetilformamidă (500 mL, 5 ml/g) care au furnizat o soluţie clară galben deschis. S-a început agitarea şi temperatura recipientului a fost înregistrată la 17°C. Vasul a fost apoi încărcat cu carbonil diimidazol (84,45 g, 0,5208 mol) adăugat ca solid în porţii peste 10 minute care au condus la spumarea usoară şi evoluţia gazului, neobservȃnd nici o exotermă. Agitarea soluţiei clare chihlimbariu deschis rezultate a continuat la temperatura camerei timp de 1 oră. Flaconul care a conţinut sarea de sodiu benzensulfonamidă formată anterior în N,N-dimetilformamidă a fost tratat în picătură peste 45 minute cu soluţia clară chihlimbarie (2,6-dicloropiridin-3-il)(1H-imidazol-1-il)metanonă intermediară. După completarea adăugării, vasul a fost dotat cu o manta de încălzire şi amestecul a fost încălzit la 60°C şi condiţiile au fost menţinute timp de 1 oră când analiza prin LC/MS a indicat finslizarea consumului intermediarului. Reacţia a fost lăsată să se răcească la temperatura camerei şi apoi a fost turnată în soluţie de HCl 6M cu gheaţă rece (500 mL). Amestecul rezultat a fost diluat în plus cu apă (500 mL) şi apoi transferat la o pâlnie separatoare şi partiţionat cu acetat de etil (1000 mL). Stratul organic a fost îndepărtat şi aposul rezidual a fost extras cu acetat de etil (2 × 500 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie saturată de clorură de sodiu (3 × 500 mL), uscate pe sulfat de sodiu (300 g) şi apoi filtrate printr-o pȃlnie Buchner fritată de sticlă. Soluţia clară galben pal a fost concentrată sub presiune redusă până la un volum de aproximativ 200 mL. Uleiul rezidual clar a fost diluat cu metil terţ-butil eter (1000 mL) şi apoi concentrat din nou sub presiune redusă, timp în care un solid a început să precipite. Volumul a fost redus până la aproximativ 200 mL. Suspensia rezultată a fost lăsată să stea la temperatura camerei timp de 30 minute şi apoi filtrată printr-o pȃlnie Buchner fritată de sticlă. Turta de filtru a fost spălată deplasat cu metil terţ-butil eter (2 Ч 150 mL) şi apoi trasă în pȃlnia Buchner timp de 30 minute. Materialul a fost uscat mai departe într-un cuptor cu vid la 45°C timp de 2 ore pentru a furniza un solid alb (101 g, 0,305 mol, randament 58%) ca produs dorit, N-(benzensulfonil)-2,6-dicloro-piridin-3-carboxamidă. ESI-MS m/z calc. 329,96326, găsit 330,9 (M+ 1)+ ; Timp de retenţie: 1,22 minute.

Etapa B: N-(benzensulfonil)-6-cloro-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un flacon RB de 5000 mL cu 3 gâturi a fost dotat cu un agitator mecanic, o manta de încălzire, o sondă/controlor de temperatură J-Kem, un condensator de reflux cu apă răcită şi o admisie/evacuare de azot. Vasul a fost încărcat sub o atmosferă de azot cu N-(benzensulfonil)-2,6-dicloro-piridin-3-carboxamidă (100 g, 0,3020 mol), clorhidrat de (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (54,24 g, 0,3624 mol) şi dimetil sulfoxid (500 ml, 5 mL/g) care au furnizat o soluţie clară galben pal. S-a început agitarea şi temperatura recipientului a fost înregistrată la 19°C. Vasul a fost apoi încărcat cu pulbere de carbonat de potasiu (167 g, 1,208 mol, 325 mesh) adăugată ca solid în porţii peste 10 minute care au condus la unele evoluţii minore ale gazului şi spumare. Suspensia albicioasă rezultată a fost agitată la temperatura camerei timp de 10 minute şi apoi încălzită la o temperatură a recipientului de 115°C şi condiţiile au fost menţinute timp de 24 ore. Analiza prin LC/MS a indicat terminarea reacţiei şi suspensia chihlimbarie a fost lăsată să se răcească la temperatura camerei. Un flacon RB de 5000 mL cu 3 gâturi a fost dotat cu un agitator mecanic, o baie de răcire şi o sondă de temperatură J-Kem. Vasul a fost încărcat cu HCl 2M (1057 ml, 2,114 mol) şi s-a început agitarea la o rată viguroasă. Baia de răcire a fost încărcată cu gheată zdrobită/apă şi temperatura recipientului a scăzut până la 0°C. Amestecul de reacţie al suspensiei chihlimbarii a fost adăugat ulterior încet în porţii în 30 minute care au condus la precipitarea unui solid şi la o exotermă la 8°C. Notă: Spumare uşoară după adăugare. După completarea adăugării, suspensia rezultată a continuat să fie agitată la ~5°C timp de 1 oră şi apoi colectată prin filtrare în vid într-o pȃlnie Buchner fritata de sticlă. Turta de filtru a fost spalată deplasat cu apă (4 × 500 mL) şi apoi trasă timp de 2 ore în pȃlnia Buchner pentru a furniza un solid alb (150 g). Un flacon RB de 5000 mL cu 3 gâturi a fost dotat cu un agitator mecanic, o manta de încălzire, o sondă/controlor de temperatură J-Kem, un condensator de reflux răcit cu apă şi o admisie/evacuare de azot. Vasul a fost încărcat sub o atmosferă de azot cu produsul izolat (150g) şi 2-propanol (1050 ml, 7 ml/g) care au furnizat o suspensie galben pal. S-a început agitarea şi temperatura recipientului a fost înregistrată la 19°C. Temperatura recipientului a fost crescută la reflux (~82°C) şi condiţiile au fost menţinute timp de 10 minute care au condus la o soluţie clară chihlimbariu pal. S-a continuat agitarea soluţiei şi soluţia a fost lăsată să se răcească încet la temperatura camerei, timp în care a început să se formeze un solid. S-a continuat agitarea suspensiei şi vasul a fost dotat cu o baie de răcire care a fost încărcată cu gheaţă zdrobită/apă. Temperatura recipientului a fost scăzută până la 0°C şi agitarea suspensiei groase a continuat la 0°C timp de 1 oră. Materialul a fost colectat prin filtrare în vid într-o pȃlnie Buchner fritată de sticlă şi turta de filtru a fost spălată deplasat cu 2-propanol (2 × 50 mL) cu gheaţă rece şi apoi tras în Buchner timp de 30 minute. Materialul a fost uscat mai departe într-un cuptor cu vid la 45°C timp de 15 ore pentru a furniza un solid alb (100 g, 0,245 mol, randament 81%) ca produs, N-(benzensulfonil)-6-cloro-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă ca solvat de 2-propanol cu 11 g% 2-propanol. ESI-MS m/z calc. 407,10703, găsit 408,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,9 minute.

Etapa C: 5-Fluoro-3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]-1H-pirazol

O soluţie de 3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]-1H-pirazol (0,68 g, 3,088 mmol) şi 1-(clorometil)-4-fluoro-1,4-diazoniabiciclo[2,2,2]octan;ditetrafluoroborat (1,3 g, 3,7 mmol) în acetonitril (15 mL) a fost agitată la 50°C timp de 17 ore. Reacţia a fost diluată cu apă şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu apă, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-30% acetat de etil în hexani pentru a da produsul încă impur ca ulei maro care a fost purificat suplimentar utilizând o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o coloană Luna C18 (2) (75 × 30 mm, 5 (µm dimensiunea particulei) comercializată de Fenomenex (pn: 00C-4252-U0-AX), şi o rulare cu gradient dual de la 1-99% fază mobilă B peste 15,0 minute (Fază mobilă A = H2O (5 mM HCl). Fază mobilă B = CH3CN, debit = 50 mL/min, şi temperatura coloanei = 25°C) dând 5-fluoro-3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]-1H-pirazol (90 mg) ca ulei arămiu. ESI-MS m/z calc. 238,07292, găsit 239,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,56 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,70 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,30 - 4,16 (m, 2H), 2,04 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 0,97 - 0,91 (m, 2H), 0,88 - 0,81 (m, 2H).

Etapa D: N-(benzensulfonil)-6-[5-fluoro-3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un amestec de 5-fluoro-3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]-1H-pirazol (87 mg, 0,3653 mmol), N-(benzensulfonil)-6-cloro-2-[(4,S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (79 mg, 0,19 mmol), triflat de scandiu (10 mg, 0,020 mmol) şi hidrură de sodiu (38 mg de 60 %g/g, 0,95 mmol) în DMSO (0,92 mL) a fost agitat la 160°C timp de 15 ore. Reacţia a fost filtrată şi purificată utilizând o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o coloană Luna C18 (2) (75 × 30 mm, 5 µm dimensiunea particulei) comercializată de Fenomenex (pn: 00C-4252-U0-AX), şi o rulare cu gradient dual de la 50-99% faza mobilă B peste 15,0 minute (Fază mobilă A = H2O (5 mM HCl). Fază mobilă B = CH3CN. Debit = 50 mL/min, şi temperatura coloanei = 25 °C) dând N-(benzensulfonil)-6-[5-fluoro-3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (11 mg, 10%). ESI-MS m/z calc. 609,2033, găsit 610,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,3 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,53 (s, 1H), 8,26 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,00 (t, J = 1,3 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,66 (dd, J = 8,2, 6,7 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,41 (s, 2H), 2,38 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 2,29 - 2,21 (m, 1H), 2,10 (q, J = 7,0 Hz, 3H), 1,82 (dd, J = 12,0, 5,5 Hz, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,36 (s, 1H), 0,96 (dd, J = 3,7, 2,4 Hz, 2H), 0,89 (dt, J = 3,7, 1,9 Hz, 2H), 0,64 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 33: Sinteza Compusului 33: N-(4-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-l-il]-2- [(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil) metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (150 mg, 0,4288 mmol) şi CDI (83 mg, 0,5119 mmol) au fost combinate în THF (750 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 4-hidroxibenzensulfonamidă (86 mg, 0,4966 mmol) urmată de DBU (90 µL, 0,6018 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL de acid citric 1M, şi extras cu 3x 10 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu apă, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da un solid alb, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. 2-cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (235 mg, 94%) ESI-MS m/z calc. 504,1234, găsit 505,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,75 minute.

Etapa 2: N-(4-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil) metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (235 mg, 0,4654 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (aproximativ 209,2 mg, 1,398 mmol), şi carbonatul de potasiu (aproximativ 387,4 mg, 2,803 mmol) au fost combinate în DMSO (775,7 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei, şi s-a adăugat 1 mL de apă. După o agitare de 15 minute, conţinutul fiolei a fost lăsat să se decanteze, porţiunea lichidă a fost îndepărtată cu pipeta şi solidele rămase au fost dizolvate cu 20 mL acetat de etil, apoi spălate cu 15 mL acid citric 1M. Straturile apoase şi organice au fost separate, şi stratul apos a fost extras suplimentar de doua ori cu 15 mL acetat de etil. Organicele au fost combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Solidul rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(4-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (30 mg, 11%) ESI-MS m/z calc. 581,2672, găsit 582,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,26 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,24 (s, 1H), 10,58 (s, 1H), 8,18 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,86 - 7,78 (m, 2H), 7,74 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,97 - 6,92 (m, 2H), 6,90 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 4,23 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,26 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 2,10 (dt, J = 13,1, 6,8 Hz, 1H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,4 Hz, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,37 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,10 (s, 6H), 1,04 (s, 6H), 0,73 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 0,69 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 34: Sinteza Compusului 34: N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6- [3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (100 mg, 0,2661 mmol) şi CDI (51 mg, 0,3145 mmol) au fost combinate în THF (600,0 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 2-hidroxibenzensulfonamidă (51 mg, 0,2945 mmol) urmată de DBU (55 µL, 0,3678 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL de acid citric 1M, şi extras cu 3x 10 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu apă, saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da un solid alb, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. 2-cloro-N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (132 mg, 93%) ESI-MS m/z calc. 530,06384, găsit 531,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,7 minute.

Etapa B: N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-l-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

[0443

]

2-Cloro-N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (132 mg, 0,2486 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (190 mg, 1,270 mmol), şi carbonatul de potasiu (345 mg, 2,496 mmol) au fost combinate în DMSO (660,0 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei, şi s-a adăugat 1 mL de apă. După o agitare de 15 minute, conţinutul fiolei a fost lăsat să se decanteze, porţiunea lichidă a fost îndepărtată cu pipeta şi solidele rămase au fost dizolvate cu 20 mL acetat de etil, apoi spălate cu 15 mL de acid citric 1M. Straturile apoase şi organice au fost separate, şi stratul apos a fost extras suplimentar de doua ori cu 15 mL acetat de etil. Organicele au fost combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Solidul rezultat a fost purificat suplimentar prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(2-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropiletoxilpirazol-1-il-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (51 mg, 31%) ESI-MS m/z calc. 607,20764, găsit 608,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,14 minute 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,41 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,79 (dd, J = 8,1, 2,1 Hz, 2H), 7,56 - 7,43 (m, 1H), 7,07 - 6,95 (m, 2H), 6,88 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,11 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,31 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,64 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 2,58 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 2,19 (d, J= 11,0 Hz, 1H), 2,08 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,85 (dd, J = 11,9, 5,6 Hz, 1H), 1,54 (d, J = 8,1 Hz, 6H), 1,39 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,00 - 0,92 (m, 2H), 0,90 (d, J = 10,8 Hz, 2H), 0,82 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 35: Sinteza Compusului 35: N-(3-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(3-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (100 mg, 0,2661 mmol) şi CDI (51 mg, 0,3145 mmol) au fost combinate în THF (600,0 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 3-hidroxibenzensulfonamidă (51 mg, 0,2945 mmol) urmată de DBU (55 µL, 0,3678 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL de acid citric 1 M, şi extras cu 3 Ч 10 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu apă, saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da un solid alb, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. 2-cloro-N-(3-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (135 mg, 96%) ESI-MS m/z calc. 530,06384, găsit 531,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,69 minute.

Etapa B: N-(3-Hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(3-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (135 mg, 0,2543 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (193 mg, 1,290 mmol), şi carbonatul de potasiu (352 mg, 2,547 mmol) au fost combinate în DMSO (508,6 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 or. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei, şi s-a adăugat 1 mL de apă. După o agitare de 15 minute, conţinutul fiolei a fost lăsat să se decanteze şi porţiunea lichidă a fost îndepărtată cu pipeta şi eliminată. Solidele rămase au fost dizolvate în 20 mL acetat de etil şi apoi spălate cu 15 mL de acid citric 1M. Straturile apoase şi organice au fost separate, şi stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil. Organicele au fost combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Solidul rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(3-hidroxifenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (40 mg, 26%) ESI-MS m/z calc. 607,20764, găsit 608,3 (M+1)1; Timp de retenţie: 2,05 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,44 (s, 1H), 10,19 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,44 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,40 - 7,37 (m, 2H), 7,06 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,11 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,31 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,47 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 2H), 2,08 (m, J = 8,1, 7,0 Hz, 2H), 1,84 (dd, J = 11,8, 5,5 Hz, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 1,38 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 0,96 (td, J = 5,0, 3,3 Hz, 2H), 0,90 (d, J = 11,1 Hz, 2H), 0,70 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 36: Sinteza Compusului 36: N-(Benzensulfonil)-6- [3- [dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: Dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metanol

Acidul 2,2,3,3-tetrametilciclopropancarboxilic (1,077 g, 7,574 mmol) a fost dizolvat în dietil eter anhidru într-un balon cu fun rotund de 100 mL purjat cu azot. Amestecul de reacţie a fost răcit la 0°C. S-a adăugat tetradeuterioalumanuidă solidă (sare de litiu) (420 mg, 10,01 mmol) în 3 porţii. Amestecul de reacţie a fost lăsat să atingă gradual temperatura camerei şi s-a agitat pentru un total de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost apoi din nou răcit la 0°C. S-a adăugat HCl (apos, 0,2 N, 5 mL) în picătură, urmat de 20 mL apă. Faza apoasă a fost extrasă cu dietil eter (2 × 30 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu NaHCO3 apoasă, urmată de saramură, apoi uscate pe sulfat de sodiu, filtrate şi evaporate pentru a da dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metanol (920 mg, 93%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 4,11 (s, 1H), 1,04 (s, 6H), 0,93 (s, 6H), 0,37 (s, 1H).

Etapa B: 3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

DIAD (1,4 mL, 7,111 mmol) a fost adăugat în picătură la o soluţie de trifenil fosfină (1,815 g, 6,920 mmol) în 40 mL de toluen anhidru, la 0°C. După 30 minute la 0°C, o soluţie de 3-hidroxipirazole-1-carboxilat de terţ-butil (1,155 g, 6,271 mmol) şi dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metanol (980 mg, 7,525 mmol) în 30 mL toluen a fost adăugată încet prin seringă. Reacţia a fost încălzită la temperatura camerei timp de 45 minute, şi apoi a fost încălzită la 55°C timp de 18 ore. Amestecul a fost evaporat şi materialul rezultat a fost partiţionat între acetatul de etil (30 mL) şi IN hidroxid de sodiu (30 mL). Organicele au fost separate, spălate cu saramură (30 mL), uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-30% acetat de etil în hexani pentru a da un ulei care eventual s-a solidificat la un solid puţin galben: 3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetramelhilciclopropil) metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (820 mg, 44%) ESI-MS m/z calc. 296,2069, găsit 297,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,79 minute.

Etapa C: 3-[Dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]-1H-pirazol

La 3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (800 mg, 2,699 mmol) în 1,2-dimetoxietan (10 mL) s-a adăugat carbonat de sodiu (460 mg, 4,340 mmol) în apă (3 mL), şi amestecul de reacţie a fost încălzit la 90°C timp de 16 ore într-o fiolă cu capac înfiletat. Amestecul de reacţie a fost răcit la temperatura camerei şi diluat cu apă (50 mL) şi acetat de etil (50 mL). Organicele au fost separate, şi stratul apos a fost extras cu 2 × 25 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, şi uscate pe sulfat de sodiu, apoi concentrate pentru a da un ulei incolor. 3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]-1H-pirazol (492 mg, 93%) ESI-MS m/z calc. 196,15446, găsit 197,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,57 minute, 1H RMN(400 MHz, DMSO) δ 11,78 (s, 1H), 7,48 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 5,65 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 1,08 (s, 6H), 1,00 (s, 6H), 0,66 (s, 1H).

Etapa D: Etil 2-cloro-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat

Un balon cu fund rotund a fost încărcat sub azot cu 3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]-1H-pirazol (485 mg, 2,471 mmol), etil 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat (545 mg, 2,477 mmol), K2CO3 (513 mg, 3,712 mmol) (proaspăt măcinat într-un mortar) şi DMF anhidră (4,128 mL). S-a adăugat DABCO (50 mg, 0,4457 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub azot timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil (50 mL) şi apă (50 mL) şi cele două faze au fost separate. Faza apoasă a fost extrasă suplimentar cu acetat de etil (2 × 30 mL), şi extractele combinate au fost spălate cu saramură şi uscate pe sulfat de sodiu, după care solventul a fost îndepărtat sub presiune redusă. Materialul a fost supus la cromatografie rapidă pe gel de siliciu utilizând un gradient de 0-20% acetat de etil în hexani. Fracţiunile pure au fost combinate şi solvenţii îndepărtaţi sub presiune redusă pentru a furniza un solid alb; etil 2-cloro-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1 -il]piridin-3-carboxilat (505 mg, 54%) ESI-MS m/z calc. 379,16318, găsit 380,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,9 minute 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,42 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,39 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,34 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,33 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,11 (s, 6H), 1,04 (s, 6H), 0,74 (s, 1H).

Etapa E: Acid 2-cloro-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

O soluţie de hidroxid de sodiu (275 mg, 6,875 mmol) în apă (2,500 mL) a fost adăugată la o soluţie de etil 2-cloro-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil) metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat (500 mg, 1,316 mmol) în izopropanol (2,500 mL) şi agitată la 90°C timp de 45 minute. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei apoi diluată cu 50 mL acetat de etil, 20 mL de acid citric 1M, şi 10mL apă. Organicele au fost separate, şi porţiunea apoasă a fost extrasă cu 2x 25 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Solidul rezultat a fost triturat în 40 mL apă, pe scurt sonicat, şi colectat prin filtrare apoi uscat pentru a da un solid alb, acid 2-cloro-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (404 mg, 87%) ESI-MS m/z calc. 351,13187, găsit 352,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,77 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,41 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 1,11 (s, 6H), 1,04 (s, 6H), 0,74 (s, 1H).

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[dideuteno-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (100 mg, 0,2842 mmol) şi CDI (55 mg, 0,3392 mmol) au fost combinate în THF (600,0 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat benzensulfonamidă (49 mg, 0,3117 mmol) urmată de DBU (57 µL, 0,3812 mmol) şi reacţia a fost agitată pentru încă 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL de acid citric 1M, şi extras cu 3x 10 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu apă, saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da aproximativ 135 mg dintr-un solid alb, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă ESI-MS m/z calc. 490,14105, găsit 491,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,81 minute.

Etapa G: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil) metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil) metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (135 mg, 0,2749 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (Sare clorhidrat) (128 mg, 0,8553 mmol), şi carbonatul de potasiu (237 mg, 1,715 mmol) au fost combinate în DMSO (458,2 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei, şi s-a adăugat 1 mL de apă. După 15 minute de agitare, conţinutul fiolei a fost lăsat să se decanteze, porţiunea lichidă a fost îndepărtată cu pipeta şi solidele rămase au fost dizolvate cu 20 mL acetat de etil apoi spălate cu 15 mL de acid citric 1M. Straturile apoase şi organice au fost separate, şi stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil. Organicele au fost combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Solidul rezultat a fost purificat suplimentar prin cromatografie pe gel de siliiu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-[dideuterio-(2,2,3,3-tetrametilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă (112 mg, 72%) ESI-MS m/z calc. 567,28485, găsit 568,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,42 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,51 (s, 1H), 8,18 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,99 (dt, J = 7,1, 1,4 Hz, 2H), 7,80 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,76 - 7,70 (m, 1H), 7,70 - 7,62 (m, 2H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 2,40 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,26 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 2,09 (dq, J = 11,7, 6,0 Hz, 1H), 1,82 (dd, J = 11,8, 5,4 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 9,5 Hz, 6H), 1,36 (t, J = 12,2 Hz, 1H), 1,10 (s, 6H), 1,04 (s, 6H), 0,72 (s, 1H), 0,64 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 37: Sinteza Compusului 37: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoximetil]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-(terţ-butoximetil)-1H-pirazol

Alcoolul terţ-butilpropargil (2,5 g, 22,2 mmol) a fost amestecat cu trimetilsilil diazometan (2,0 M în hexan, 11,1 mL, 22,2 mmol) şi agitat într-o eprubetă etanşată la 115°C timp de 18 ore. Amestecul a fost răcit la 40°C şi stins cu metanol (5 mL) şi concentrat. Cromatografia pe coloană (siliciu; heptani/EtOAc 2:1 până la 1:1) a dat 3-(terţ-butoximetil)-1H-pirazol ca ulei incolor (1,5 g, 44%). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz): δ 1,26 (s, 9H); 4,53 (s, 2H); 6,22 (s, 1H); 7,48 (s, 1H). 13C-RMN (75 MHz, CDCl3): δ 27,3, 57,2, 73,9,103,5, 134,0 (un carbon cuaternar nu este prezentat).

Etapa B: 6-[3-(terţ-butoximetil)pirazol-1-il]-2-cloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil

Un balon cu fund rotund de 100 mL a fost încărcat sub azot cu 3-(terţ-butoximetil)-1H-pirazol (1,241 g, 8,047 mmol), terţ-butil 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat (2,0 g, 8,061 mmol), K2CO3 (1,448 g, 10,48 mmol) (proaspăt măcinat într-un mortar) şi DMF anhidră (12,41 mL). S-a adăugat DABCO (163 mg, 1,453 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub azot timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil (50 mL) şi apă şi saramură (50 mL) şi cele două faze au fost separate. Faza apoasă a fost extrasă suplimentar cu acetat de etil (2 × 30 mL). Extractele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi solventul îndepărtat sub presiune redusă. Materialul a fost supuse la cromatografie rapidă pe gel de siliciu utilizând un gradient de acetat de etil (0 până la 10%) în hexani. Fracţiunile pure au fost combinate şi solvenţii îndepărtaţi sub presiune redusă pentru a furniza 6-[3-(terţ-butoximetil)pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,956 g, 66%) ca ulei incolor, care s-a solidificat la un solid alb peste noapte la vid ridicat. ESI-MS m/z calc. 365,1506, găsit 366,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,82 minute

Etapa C: Acid 2-cloro-6-[3-(hidroximetil)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

6-[3-(Terţ-butoximetil)pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxilatul de terţ-butil (538 mg, 1,471 mmol) a fost dizolvat în HCl în dioxan (8,0 mL of 4 M, 32,00 mmol) şi încălzit la 60°C timp de 2 ore. Amestecul de reacţie a fost apoi răcit la temperatura camerei şi concentrat la sec, dând o pulbere albă. Acid 2-cloro-6-[3-(hidroximetil)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (370 mg, 99%) ESI-MS m/z calc. 253,02542, găsit 254,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,33 minute.

Etapa D: Acid 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoximetil]pirazol-1-il] piridin-3-carboxilic

4-metilbenzensulfonatul de [1-(trifluorometil)ciclopropil]metil (1,3 g, 4,417 mmol), şi acidul 2-cloro-6-[3-(hidroximetil)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (370 mg, 1,459 mmol), au fost combinate în DMSO anhidru (9,250 mL). S-a adăugat terţ-butoxipotasiu (660 mg, 5,882 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei. După 30 minute amestecul de reacţie a fost turnat în acid citric 1M (15 mL) şi extras cu 3 × 15 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând un gradient de 0-10% metanol în diclorometan. Fracţiunile conţinând produsul au fost colectate şi concentrate pentru a da un solid alb. Acid 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoximetil]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (292 mg, 53%) ESI-MS m/z calc. 375,05975, găsit 376,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,62 minute.

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoximetil]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoximetil]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (60 mg, 0,1597 mmol) şi CDI (31 mg, 0,1912 mmol) au fost combinate în THF (360,0 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat benzensulfonamidă (28 mg, 0,1781 mmol) urmată de DBU (35 µL, 0,2340 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL de acid citric 1M, şi extras cu 3 Ч 10 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu apă, saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da un solid alb, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoximetil]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (aproximativ 78 mg) ESI-MS m/z calc. 514,0689, găsit 515,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,69 minute.

Etapa G: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoximetil] pirazol-1-il]-2- [(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoximetil]pirazol -1-il]piridin-3-carboxamida (78 mg, 0,1515 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (Sare clorhidrat) (115 mg, 0,7684 mmol), şi carbonatul de potasiu (210 mg, 1,519 mmol) au fost combinate în DMSO (390,0 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei, şi s-a adăugat 1 mL de apă. După 15 minute de agitare, conţinutul fiolei a fost lăsat să se decanteze, porţiunea de lichid a fost îndepărtată cu pipeta şi solidele rămase au fost dizolvate cu 20 mL acetat de etil, apoi spălate cu 15 mL de acid citric 1M. Straturile apoase şi organice au fost separate, şi stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil. Organicele au fost combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Solidul rezultat a fost purificat suplimentar prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoximetil]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă (46 mg, 51%) ESI-MS m/z calc. 591,2127, găsit 592,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,11 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,56 (s, 1H), 8,33 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,04 - 7,97 (m, 2H), 7,89 - 7,79 (m, 1H), 7,73 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 7,70 - 7,60 (m, 2H), 7,07 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 4,55 (s, 2H), 3,59 (s, 2H), 2,42 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,29 (d, J = 96 Hz, 1H), 2,18 - 2,04 (m, 1H), 1,83 (dd, J = 11,7, 5,5 Hz, 1H), 1,54 (d, J = 9,4 Hz, 6H), 1,37 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,03 - 0,94 (m, 2H), 0,91 - 0,80 (m, 2H), 0,65 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 38: Sinteza compusului 38: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[2-hidroxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etape A-B: 1-[1-(Trifluorometil)ciclopropil]prop-2-en-1-ol

[1-(Trifluorometil)ciclopropil]metanol (1 g, 7,138 mmol) a fost agitat în diclorometan uscat (30 mL) şi răcit la 0°C într-o baie de gheaţă. Cloro-hidroxi-dioxo-crom;piridină (2,77 g, 12,85 mmol) s-a adăugat într-o porţie, şi baia cu gheaţă a fost îndepărtată şi reacţia a fost agitată timp de 24 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost turnat în 100 mL dietil eter şi filtrat printr-un strat de siliciu cu un strat de celite pe partea superioară, eluând cu dietil eter. Filtratele rezultate au fost uscate pe sulfat de sodiu, apoi filtrate prin bumbac şi utilizate în etapa următoare fără concentraţie din cauza volatilităţii aldehidei. Filtratul brut a fost răcit la 0°C, şi s-a adăugat încet bromo(vinil)magneziu (14,5 mL de 1 M, 14,50 mmol) (în THF). Amestecul de reacţie a fost lăsat să se încălzească încet aproape de temperatura camerei în 2 ore. Amestecul de reacţie a fost apoi răcit la 0°C, stins cu 1M HCl, şi diluat cu apă. Straturile au fost separate, şi stratul apos a fost extras de 4 ori suplimentar cu dietil eter. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate parţial. Materialul brut rezultat a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. 1-[1-(trifluorometil)ciclopropil]prop-2-en-1-ol (aproximativ 1,25g brut, cu THF rămas substanţial) brut 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 5,95 - 5,84 (m, 1H), 5,36 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,32 (ddd, J = 17,1, 2,1, 1,4 Hz, 1H), 5,18 (ddd, J = 10,4, 2,0, 1,3 Hz, 1H), 4,17 (tt, J = 6,4, 1,4 Hz, 1H), 0,95 - 0,87 (m, 4H).

Etapa C: terţ-butil-dimetil-[1-[1-(trifluorometil)ciclopropil]aliloxi]silan

1-[1-(Trifluorometil)ciclopropil]prop-2-en-1-ol (270 mg, 1,625 mmol) şi imidazol (220 mg, 3,232 mmol) au fost dizolvate în DMF (2 mL) şi răcite la 0°C într-o baie de gheaţă. S-a adăugat apoi TBS-Cl (clorură de terţ-butildimetilsilil) (370 mg, 2,455 mmol) într-o singură porţie, şi după 15 minute baia cu gheaţă a fost îndepărtată şi amestecul de reacţie a fost lăsat să se agite 16 ore la temperatura camerei. S-a adăugat apoi clorura de amoniu saturată apoasă (1 mL), şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 20 minute. Amestecul de reacţie a fost apoi diluat cu 30 mL dietil eter şi 20 mL de apă. Organicele au fost separate, şi stratul apos a fost extras cu 2 Ч 15 mL dietil eter. Organicele combinate au fost spălate cu apă, apoi saramură şi uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate sub vid. Materialul brut a fost apoi trecut printr-un dop de siliciu, eluând cu hexani, şi concentrat la un ulei conţinând impurităţi silil care se suprapun substanţial, dar care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară, terţ-butil-dimetil-[1-[1-(trifluorometil)ciclopropil]aliloxi]silan (aproximativ 317 mg, brut).

Etapele D-F: 3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

Terţ-butil-dimetil-[1-[1-(trifluorometil)ciclopropil]aliloxi]silan (220 mg, 0,7846 mmol) (brut) a fost combinat în dioxan (6 mL) şi apă (2 mL) cu 2,6-dimetilpiridină (185 µL, 1,597 mmol) şi periodat de sodiu (675 mg, 3,156 mmol). S-a adăugat apoi tetraoxoosmiu (420 µL, 0,3139 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 20 ore la temperatura camerei. Reacţia a fost apoi diluată cu 30 mL diclorometan şi 30 mL apă. Organicele au fost separate, şi stratul apos a fost extras cu 2 Ч 25 mL diclorometan. Organicele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate până la aproximativ 8 mL şi utilizate în etapa următoare, fără izolare.

Amestecul brut din etapa anterioară a fost diluat cu metanol (10 mL), şi răcit la 0°C. S-a adăugat borohidrură de sodiu (90 mg, 2,379 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 1 oră. Amestecul de reacţie a fost apoi stins cu acid acetic şi concentrat. Materialul rezultat a fost partiţionat între acetat de etil şi bicarbonat de sodiu apos şi straturile au fost separate. Porţiunea apoasă a fost extrasă cu 2x acetat de etil, şi organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Alcoolul brut rezultat a fost utilizat în etapa următoare fără purificare. Produsul brut a fost combinat cu trifenilfosfină (300 mg, 1,144 mmol) şi 3-hidroxipirazole-1-carboxilat de terţ-butil (145 mg, 0,7872 mmol) dizolvat în THF (15 mL). Amestecul de reacţie a fost răcit la 0°C şi s-a adăugat încet DIAD (230 µL, 1,187 mmol). Baia cu gheaţă a fost îndepărtată, şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de o oră, apoi încălzită la 55°C timp de 16 ore suplimentare. Amestecul de reacţie a fost concentrat parţial, dizolvat în 100 mL acetat de etil, spălat cu 25 mL IN NaOH, saramură, uscat pe sulfat de sodiu şi concentrat. Materialul rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-50% acetat de etil în hexani pentru a da, cu o impuritate activă UV care se suprapune, 3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (63 mg, 18%) ESI-MS m/z calc. 450,21616, găsit 451,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,95 minute.

Etapa G: 3-(2-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol

3-[2-[Terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (63 mg, 0,1398 mmol) (cu o impuritte majoră prezentă) a fost dizolvat în diclorometan (1,312 mL) cu TFA (acid trifluroracetic) (aproximativ 194,3 mg, 131,3 µL, 1,704 mmol) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 30 minute. S-au adăugat hexani (1 mL), şi reacţia a fost evaporată şi uleiul rezultat a fost partiţionat între acetat de etil (10 mL) şi o soluţie saturată de bicarbonat de sodiu. Organicele au fost separate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate pentru a da un ulei incolor, 3-(2-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol (37 mg, 76%) ESI-MS m/z calc. 350,16373, găsit 351,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,81 minute.

Etapa H: 6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxilat de terţ-butil

Un balon cu fund rotund a fost încărcat sub azot cu terţ-butil-dimetil-[2-(1H-pirazol-3-iloxi)-1-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]silan (37 mg, 0,1056 mmol), 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (26 mg, 0,1048 mmol), K2CO3 (25 mg, 0,1809 mmol) (proaspăt măcinat într-un mortar) şi DMF anhidră (250 µL). S-a adăugat DABCO (2 mg, 0,01783 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub azot timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil (15 mL) şi apă (15 mL) şi cele două faze au fost separate. Faza apoasă a fost extrasă suplimentar cu acetat de etil (2 × 15 mL). Extractele combinate au fost spălate cu saramură şi uscate pe sulfat de sodiu şi solventul îndepărtat sub presiune redusă. Materialul a fost supus la cromatografie rapidă pe gel de siliciu utilizând un gradient de acetat de etil (0 până la 20%) în hexani. Fracţiunile pure au fost combinate şi solvenţii îndepărtaţi sub presiune redusă pentru a furniza un ulei incolor, 6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxilat de terţ-butil (20 mg, 34%). ESI-MS m/z calc. 561,20374, găsit 562,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,84 minute, 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,44 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,17 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,44 (dd, J = 10,7, 2,9 Hz, 1H), 0,13 - 0,03 (m, 6H), 4,32 - 4,25 (m, 1H), 3,89 (s, 1H), 1,56 (s, 9H), 0,98 (d, J = 35,8 Hz, 4H), 0,86 (s, 9H).

Etapa I: Acid 6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxilic

6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il] -2-cloro-piridin-3-carboxilat de terţ-butil (20 mg, 0,03558 mmol) şi TFA (50 µL, 0,6490 mmol) au fost combinate în diclorometan (0,75 mL) şi încălzite la 45°C timp de 3 ore. Reacţia a fost evaporată. S-au adăugat hexani şi amestecul a fost evaporat din nou pentru a da un solid alb, acidul 6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxilic (18 mg, 100%) ESI-MS m/z calc. 505,14114, găsit 506,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,59 minute.

Etapa J: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxamidă

Acidul 6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxilic (19 mg, 0,03755 mmol) şi CDI (8 mg, 0,04934 mmol) au fost combinate în THF (200 µL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat benzensulfonamidă (7 mg, 0,04453 mmol) urmată de DBU (10 µL, 0,06687 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 2 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost apoi diluat cu 10 mL de acid citric 1M, şi extras cu 3 × 10 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu apă, saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da un solid alb, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxamidă (aproximativ 22 mg) ESI-MS m/z calc. 644,1503, găsit 645,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,8 minute.

Etapa O: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-cloro-piridin-3-carboxamida (22 mg, 0,03410 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (Sare clorhidrat) (aproximativ 40,83 mg, 0,2728 mmol), şi carbonatul de potasiu (aproximativ 75,40 mg, 0,5456 mmol) au fost combinate în DMSO (180 µL) şi încălzite la 130°C timp de 24 ore. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei şi diluată cu 15 mL acid citric 1M şi 20 mL acetat de etil. Straturile apoase şi organice au fost separate, şi stratul apos a fost extras suplimentar de două ori cu 15 mL acetat de etil. Organicele au fost combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Solidul rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da materialul protejat TBS ca solid alb, N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (8 mg, 32%) ESI-MS m/z calc. 721,2941, găsit 722,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,88 minute.

Etapa P: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[2-hidroxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-6-[3-[2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxi-2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamida (8mg, 0,0341 mmol) a fost apoi dizolvată în THF (0,4 mL), răcită la 0°C, şi s-a adăugat fluorură de tetrabutilamoniu (1M în THF, aproximativ 0,17mL, 0,1705 mmol) prin seringă. După 5 minute reacţia a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei. După 20 minute la temperatura camerei amestecul de reacţie a fost turnat în 10 mL de acid citric 1M, şi extras cu 3 × 10mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate. Materialul brut rezultat a fost apoi purificat de două ori prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(Benzensulfonil)-6-[3-[2-hidroxi-2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (3 mg, 14%) ESI-MS m/z calc. 607,20764, găsit 608,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,99 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,51 (s, 1H), 8,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,97 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,11 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,57 (dd, J = 5,5, 2,6 Hz, 1H), 4,40 - 4,32 (m, 1H), 2,46 - 2,39 (m, 1H), 4,20 - 4,12 (m, 1H), 3,89 (s, 1H), 2,28 (s, 1H), 2,09 (s, 1H), 1,82 (dd, J = 12,1, 5,5 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 9,7 Hz, 6H), 1,43 - 1,36 (m, 1H), 1,03 - 0,89 (m,4H), 0,65 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 39: Sinteza Compusului 39: N-(benzensulfonil)-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-(((1R,2S,4S)-biciclo[2,2,1]heptan-2-il)oxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

3-Hidroxipirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,632 g, 8,860 mmol), (+)-endo-2-norborneol (1 g, 8,915 mmol), şi trifenil fosfină (2,57 g, 9,798 mmol) au fost combinate în THF (21,98 mL) şi reacţia a fost răcită într-o baie de gheaţă. La amestec s-a adăugat DIAD (2 mL, 10,16 mmol) în picătură şi reacţia a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei şi s-a agitat timp de 16 ore. Amestecul a fost evaporat şi materialul rezultat a fost partiţionat între acetat de etil (30 mL) şi IN hidroxid de sodiu (30 mL). Organicele au fost separate, spălate cu saramură (30 mL), uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-30% acetat de etil în hexani pentru a da 3-(((1R,2S,4S)-biciclo [2,2,1]heptan-2-il)oxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (2,08 g, 84%) ESI-MS m/z calc. 278,16306, găsit 279,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,72 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,05 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 6,07 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 2,43 - 2,36 (m, 1H), 2,32 - 2,22 (m, 1H), 1,75 (td, J = 6,7, 2,4 Hz, 1H), 1,54 (s, 9H), 1,53 - 1,49 (m, 2H), 1,42 (ddt, J = 14,8, 7,8, 4,4 Hz, 2H), 1,18 - 1,07 (m, 3H).

Etapa B: 3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxi-1H-pirazol

3-[(1R,2S,4S)-Norbornan-2-il]oxipirazol-1-carboxilat de terţ-butil (2,08 g, 7,473 mmol) a fost dizolvat în CH2Cl2 (20,80 mL) cu acid trifluoroacetic (5,8 mL, 75,28 mmol) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 1 oră. Reacţia a fost evaporată sub presiune redusă şi uleiul rezultat a fost partiţionat între acetat de etil (50 mL) şi o soluţie saturată de bicarbonat de sodiu (30 mL). Organicele au fost separate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate sub vid pentru a da un ulei, 3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxi-1H-pirazol (1,29 g, 97%) ESI-MS m/z calc. 178,11061, găsit 179,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,45 minute.

Etapa C: 2-cloro-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil

Un balon de 100 mL cu fund rotund a fost încărcat sub azot cu 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,796 g, 7,239 mmol), 3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxi-1H-pirazol (1,29 g, 7,238 mmol), şi K2CO3 (1,310 g, 9,479 mmol) (proaspăt măcinat într-un mortar) şi DMF anhidră (12 mL). S-a adăugat DABCO (146 mg, 1,302 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub azot timp de 8 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil (50 mL), apă şi saramură (50 mL) şi cele două faze au fost separate. Faza apoasă a fost extrasă suplimentar cu acetat de etil (2 × 50 mL). Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi solventul îndepărtat sub presiune redusă. Materialul a fost supus la cromatografie rapidă pe gel de siliciu utilizând un gradient de acetat de etil (0 până la 20%) în hexani. Fracţiunile pure au fost combinate şi solvenţii îndepărtaţi sub presiune redusă pentru a furniza 2-cloro-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,814 g, 64%) ESI-MS m/z calc. 389,1506, găsit 390,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,92 minute 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,40 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,32 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,18 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 1,88 - 1,78 (m, 1H), 2,45 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 2,29 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 1,56 (s, 9H), 1,55 - 1,39 (m, 4H), 1,22 - 1,08 (m, 3H).

Etapa D: Acid 2-cloro-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

2-Cloro-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,814 g, 4,653 mmol) şi TFA (5 mL, 64,90 mmol) au fost combinate în diclorometan (18,14 mL) şi încălzite la 40°C timp de 2 ore. Reacţia a fost evaporată. S-au adăugat hexani şi amestecul a fost evaporat din nou pentru a da un solid alb, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. Acidul 2-cloro-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (1,47 g, 79%) ESI-MS m/z calc. 333,088, găsit 334,2 (M-1)+; Timp de retenţie: 0,71 minute.

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (100 mg)) şi CDI (52 mg, 0,323 mmol) au fost combinate în THF şi agitate timp de 2 ore la temperatura camerei. S-au adăugat apoi benzen sulfonamidă (52 mg, 0,331 mmol) şi DBU (0,048 mL, 0,323 mmol) şi reacţia a fost agitată 2 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost apoi turnat în 20 mL acid citric 1M şi extras cu 3x 20 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu apă, apoi saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da aproximativ 122 mg N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă care a fost utilizată în etapa următoare fără purificare suplimentară. ESI-MS m/z calc. 490,12, găsit 491,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,75 minute.

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il] piridin-3-carboxamida (120 mg, 0,2537 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (113,9 mg, 0,7611 mmol), şi carbonatul de potasiu (210,3 mg, 1,522 mmol) au fost combinate în 0,423 mL DMSO într-o fiolă cu capac înfiletat şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost apoi răcit la temperatura camerei, şi s-au adăugat 3 mL de apă, conducând la formarea unui precipitat. După 30 minute, porţiunea lichidă a fost îndepărtat cu seringa şi eliminată, şi solidele rămase au fost dizolvate în 15 mL acetat de etil. Organicele au fost spălate cu 15 mL acid citric 1M, şi stratul apos a fost extras un timp suplimentar cu 15 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu utilizând un gradient de 0-10% metanol în diclorometan. Fracţiunile pure au fost combinate şi concentrate pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-[(1R,2S,4S)-norbornan-2-il]oxipirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (59 mg, 40%). ESI-MS m/z calc. 549,24, găsit 550,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,37 minute 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,50 (s, 1H), 8,17 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,02 - 7,97 (m, 2H), 7,80 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,77 - 7,70 (m, 1H), 7,70 - 7,63 (m, 2H), 6,90 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,08 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,46 - 2,37 (m, 2H), 2,27 (q, J = 10,0, 7,6 Hz, 2H), 2,09 (dq, J = 11,6, 5,9, 5,4 Hz, 1H), 1,86 - 1,77 (m, 1H), 1,56 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 1,53 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,46 (dd, J = 13,8, 6,6 Hz, 3H), 1,36 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,25 - 1,06 (m, 4H), 0,64 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 40: Sinteza Compusului 40: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[[(1R,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

3-Hidroxipirazol-1-carboxilatul de terţ-butil (1,327 g, 7,204 mmol), [(1S,4R)-norbornan-2-il]metanol (1 g, 7,924 mmol) (amestec de endo şi exo), şi trifenil fosfina (2,09 g, 7,968 mmol) au fost combinate în THF (17,87 mL) şi reacţia a fost răcită într-o baie de gheaţă. La amestec s-a adăugat DIAD (1,627 mL, 8,263 mmol) în picătură şi reacţia a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei şi agitată timp de 72 ore. Amestecul a fost evaporat şi materialul rezultat a fost partiţionat între acetat de etil (50 mL) şi IN hidroxid de sodiu (50 mL). Organicele au fost separate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-30% acetat de etil în hexani pentru a da 3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,698 g, 81%) ESI-MS m/z calc. 292,17868, găsit 293,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,77 minute. (2 diastereomeri - amestec de norboran substituit endo şi exo) 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,06 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 6,10 (dd, J = 2,9, 1,0 Hz, 1H), 4,23 - 3,81 (m, 2H), 2,29 - 2,15 (m, 2H), 1,69 (dq, J = 12,1, 4,2 Hz, 1H), 1,54 (d, J = 1,4 Hz, 9H), 1,51 - 1,03 (m, 7H), 0,75 (dd, J = 5,0, 2,4 Hz, 1H).

Etapa B: 3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]-1H-pirazol

3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,698 g, 5,808 mmol) a fost dizolvat în CH2Cl2 (16,98 mL) cu acid trifluoroacetic (aproximativ 6,622 g, 4,474 mL, 58,08 mmol) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 2 ore. Reacţia a fost evaporată şi uleiul rezultat a fost partiţionat între acetat de etil (50 mL) şi o soluţie saturată de bicarbonat de sodiu (30 mL). Organicele au fost separate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate sub vid pentru a da un ulei, 3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]-1H-pirazol (1,11 g, 99%) ESI-MS m/z calc. 192,12627, găsit 193,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,52 minute.

Etapa C: 2-cloro-6-[3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil

Un balon cu fund rotund a fost încărcat sub azot cu 3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]-1H-pirazol (1,11 g, 5,774 mmol) (amestec de doi diastereomeri), 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,433 g, 5,776 mmol), K2CO3 (1,05 g, 7,597 mmol) (proaspăt macinat într-un mortar) şi DMF anhidră (10 mL). S-a adăugat DABCO (117 mg, 1,043 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub azot timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil (50 mL) şi apă (50 mL) şi cele două faze au fost separate. Faza apoasă a fost extrasă suplimentar cu acetat de etil (2 × 30 mL). Extractele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi solventul îndepărtat sub presiune redusă. Materialul a fost supuse la cromatografie rapidă pe gel de siliciu utilizând un gradient de acetat de etil (0 până la 20% ) în hexani. Fracţiunile pure au fost combinate şi solvenţii îndepărtaţi sub presiune redusă pentru a furniza 2-cloro-6-[3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,88 g, 81%) ESI-MS m/z calc. 403,16626, găsit 404,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,94 minute

Etapa D: Acid 2-cloro-6-[3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

2-Cloro-6-[3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,88 g, 4,655 mmol) şi TFA (5 mL, 64,90 mmol) au fost combinate în diclorometan (18,80 mL) şi încălzite la 40°C timp de 2 ore. Reacţia a fost evaporată. S-au adăugat hexani şi amestecul a fost evaporat din nou pentru a da un solid alb, acidul 2-cloro-6-[3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (1,58 g, 98%) ESI-MS m/z calc. 347,10367, găsit 348,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,75 minute.

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[(1R,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol -1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[(1S,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (100 mg, 0,2875 mmol) şi CDI (60,59 mg, 0,3737 mmol) au fost agitate în THF (0,5 mL) la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat apoi benzensulfonamidă (50 mg, 0,3181 mmol), urmată de DBU (0,05588 mL, 0,3737) şi reacţia a fost agitată 4 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost apoi diluat cu 25 mL acetat de etil şi turnat în 25 mL acid citric. Stratul apos a fost extras cu 25 mL suplimentari de acetat de etil, şi organicele combinate au fost spălate cu apă apoi saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[(1R,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (aproximativ 135 mg), care a fost utilizată în etapa următoare fără purificare suplimentară. ESI-MS m/z calc. 486,11, găsit 487,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,84 minute.

Etapa F: N-(benzensulfonil)-6-[3-[[(1R,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[(1R,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida, (135 mg, 0,2772 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (Sare clorhidrat) (124,5 mg, 0,8316 mmol), şi carbonatul de potasiu (229,8 mg, 1,663 mmol) au fost combinate în DMSO într-o fiolă cu capac înfiletat şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost apoi răcit la temperatura camerei, şi s-au adăugat 3 mL de apă, conducând la formarea unui precipitat. După 30 minute, porţiunea lichidă a fost îndepărtat cu seringa şi eliminată, şi solidele rămase au fost dizolvat în 15 mL acetat de etil. Organicele au fost spălate cu 15 mL acid citric 1M, şi stratul apos a fost extras un timp suplimentar cu 15 mL acetat de etil. Organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu utilizând un gradient de 0-10% metanol în diclorometan. Fracţiunile pure au fost combinate şi concentrate pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-[[(1R,4R)-norbornan-2-il]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă, (amestec de endo şi exo norbornan) ESI-MS m/z calc. 563,26, găsit 564,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,45 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,50 (s, 1H), 8,18 (dd, J = 2,8, 1,0 Hz, 1H), 7,99 (dd, J = 7,2, 1,7 Hz, 2H), 7,80 (dd, J = 8,3, 1,1 Hz, 1H), 7,79 - 7,70 (m, 1H), 7,66 (dd, J = 8,3, 6,7 Hz, 2H), 6,92 (dd, J = 8,3, 5,8 Hz, 1H), 6,12 (t, J = 2,9 Hz, 1H), 4,23 - 3,90 (m, 2H), 2,40 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 2,35 - 2,16 (m, 4H), 2,09 (tt, J = 12,3, 6,2 Hz, 1H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,73 (s, 1H), 1,52 (d, J = 9,7 Hz, 7H), 1,50 - 1,45 (m, 1H), 1,42 - 1,27 (m, 4H), 1,21 - 1,08 (m, 2H), 0,75 (ddd, J = 12,5, 5,0, 2,2 Hz, 1H), 0,64 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 41: Sinteza Compusului 41: N-(Benzensulfonil)-6-[3-(2,2-diciclopropiletoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-(2, 2-diciclopropiletoxi) pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

O soluţie de 2,2-diciclopropiletanol (500 mg, 3,962 mmol), 3-hidroxipirazol-1-carboxilat de terţ-butil (730 mg, 3,963 mmol), şi trifenilfosfan (1,1 g, 4,194 mmol) în THF uscat (20,0 mL) a fost răcită într-o baie de gheaţă, şi s-a adăugat încet DIAD (800,0 µL, 4,063 mmol) sub atmosferă de N2. Reacţia a fost lăsată să se încălzească încet la temperatura camerei şi a fost agitată timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil, spălat cu bicarbonat de sodiu apos saturat, saramură, uscat pe sulfat de sodiu, şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu cu 100% hexani până la 50% acetat de etil în hexani pentru a da 3-(2,2-diciclopropiletoxi)pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (783 mg, 68%) ca ulei incolor. ESI-MS m/z calc. 292,17868, găsit 293,3 (M+1) +; Timp de retenţie: 1,98 minute. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,62 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,67 (s, 1H), 4,13 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H), 0,58 (qt, J = 8,2, 5,0 Hz, 2H), 0,36 (tt, J = 8,9, 5,6 Hz, 1H), 0,32 - 0,12 (m, 4H) 0,10 - 0,08 (m, 4H).

Etapa B: 3-(2,2-Diciclopropiletoxi)-1H-pirazol:

O soluţie de 3-(2, 2-diciclopropiletoxi) pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (750 mg, 2,565 mmol) şi acid trifluoroacetic (1,0 mL, 12,98 mmol) în diclorometan (4 mL) a fost agitată timp de 2,5 ore. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă şi reziduul a fost alcalinizat cu bicarbonat de sodiu apos saturat şi extras cu acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate pentru a da 3-(2,2-diciclopropiletoxi)-1H-pirazol ca ulei incolor care a fost utilizat aşa cum este fără purificare suplimentară pentru următoarea reacţie. ESI-MS m/z calc. 192,12627, găsit 193,3 (M+1) +; Timp de retenţie: 1,32 minute.

Etapa C: 2-cloro-6-[3-(2, 2-diciclopropiletoxi) pirazol-1-il] piridin-3-carboxilat de terţ-butil

Un amestec de 3-(2,2-diciclopropiletoxi)-1H-pirazol (493,0 mg, 2,564 mmol), 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (682,0 mg, 2,749 mmol), carbonat de potasiu (430,0 mg, 3,111 mmol), şi 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (60 mg, 0,5349 mmol) în DMSO (20,0 mL) a fost agitat la temperatura camerei timp de 15 ore. Reacţia a fost diluată cu apă şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură şi uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu cu 100% hexani până la 20% acetat de etil în hexani pentru a da 2-cloro-6-[3-(2,2-diciclopropiletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (680 mg, 66%) ca ulei incolor. ESI-MS m/z calc. 403,16626, găsit 404,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,49 minute. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,35 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,98 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 1,61 (s, 9H), 0,92 - 0,75 (m, 2H), 0,70 - 0,56 (m, 1H), 0,54 - 0,36 (m, 4H), 0,32 - 0,13 (m, 4H).

Etapa D: Acid 2-cloro-6-[3-(2,2-diciclopropiletoxi) pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

O soluţie de 2-cloro-6-[3-(2,2-diciclopropiletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (675 mg, 1,671 mmol) în acid trifluoroacetic (1,5 mL, 19,47 mmol) şi diclorometan (4,5 mL) a fost agitată timp de 4 ore la temperatura camerei. Solventul a fost evaporat, şi de două ori reziduul a fost preluat în THF şi concentrat sub vid pentru a da acidul 2-cloro-6-[3-(2, 2-diciclopropiletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (580 mg, 100%). ESI-MS m/z calc. 347,10367, găsit 348,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,95 minute.

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(2, 2-diciclopropiletoxi) pirazol-1-il] piridin-3-carboxamidă

O soluţie de acid 2-cloro-6-[3-(2, 2-diciclopropiletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (100 mg, 0,2875 mmol) şi carbonil diimidazol (60,0 mg, 0,3700 mmol) în THF (2,0 mL) a fost agitată timp de 45 minute. Apoi, s-au adăugat benzensulfonamidă (50 mg, 0,3181 mmol) şi DBU (60 µL, 0,4012 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 2 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost stins cu soluţie saturată de clorură de amoniu şi extras cu acetat de etil. Extractele organice combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(2,2-diciclopropiletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă care a fost utilizată aşa cum este pentru următoarea reacţie. ESI-MS m/z calc. 486,11285, găsit 487,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,79 minute.

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-6-[3-(2, 2-diciclopropiletoxi) pirazol-1-il]-2-[(4S)-2, 2, 4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un amestec de N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(2,2-diciclopropiletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (140,0 mg, 0,2875 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (145,0 mg, 0,9689 mmol), şi carbonat de potasiu (240,0 mg, 1,737 mmol) în DMSO (2 mL) a fost agitat la 130°C timp de 15 ore. Amestecul de reacţie a fost filtrat printr-un disc cu filtru Whatman (puradisc 25 TF) şi filtrat a fost purificat printr-o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o rulare cu gradient dual de la 50-99% fază mobilă B peste 15,0 minute (Fază mobilă A = H2O (5 mM HCl) şi Fază mobilă B = CH3CN) pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-(2,2-diciclopropiletoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (75,9 mg, 45%) ca solid alburiu. ESI-MS m/z calc. 563,25665, găsit 564,5 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,3 minute. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,35 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,18 - 8,08 (m, 2H), 7,66 - 7,47 (m, 5H), 5,96 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 3,48 (dd, J = 10,4, 8,4 Hz, 1H), 3,08 (dd, J = 10,4, 7,6 Hz, 1H), 2,61 (dt, J = 15,3, 7,8 Hz, 1H), 2,14 (dd, J = 12,4, 7,9 Hz, 1H), 1,73 (dd, J = 12,4, 9,5 Hz, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,28 (s, 3H), 1,20 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,81 (qt, J = 8,3, 5,0 Hz, 2H), 0,61 (tt, J = 8,8, 5,6 Hz, 1H), 0,55 - 0,38 (m, 4H), 0,23 (p, J = 4,8 Hz, 4H).

Exemplul sintetic 42: Sinteza Compusului 42: N-(Benzensulfonil)-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

3,3-diciclopropilpropan-1-ol

La o soluţie de acid 3,3-diciclopropilpropanoic (200 mg, 1,297 mmol) în THF uscat (2,000 mL) s-a adăugat hidrură de aluminiu litiu (845,0 µL de 2 M, 1,690 mmol) într-o baie de apă/gheaţă sub atmosferă de N2 încet în picătură. Amestecul a fost lăsat să se încălzească gradual la temperatura camerei şi agitat timp de 16 ore. Flaconul a fost din nou răcită într-o baie cu gheaţă şi stins secvenţial cu apă (70,0 µL, 3,886 mmol) (încet), urmat de NaOH (70,0 µL of 6 M, 0,4200 mmol), apoi apă (200 µL, 11,10 mmol) rezultând un solid granular alb în amestec. La acest amestec, s-a adăugat MgSO4 anhidru şi s-a agitat timp de 10 minute. Amestecul eterogen alb rezultat a fost filtrat prin celite şi precipitatul a fost spălat cu eter. Filtratul a fost concentrat pentru a da 3,3-diciclopropilpropan-1-ol (140 mg, 77%). ESI-MS m/z calc. 140,12012, găsit 141,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,5 minute.

Etapa A: 3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

O soluţie de 3,3-diciclopropilpropan-1-ol (140,0 mg, 0,9984 mmol), 3-hidroxipirazol-1-carboxilat de terţ-butil (185,0 mg, 1,004 mmol), şi trifenilfosfan (278 mg, 1,060 mmol) în THF uscat (7,0 mL) a fost răcită într-o baie cu gheaţă, şi s-a adăugat încet DIAD (200,0 µL, 1,016 mmol) sub o atmosferă de N2. Reacţia a fost lăsată să se încălzească încet la temperatura camerei şi a fost agitată timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil, spălat cu soluţie apoasă saturată de bicarbonat de sodiu, saramură, uscat pe sulfat de sodiu, şi evaporat sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând 100% hexani până la 50% acetat de etil în hexani pentru a da 3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (255 mg, 83%) ca ulei incolor. ESI-MS m/z calc. 306,19434, găsit 307,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,81 minute.

Etapa B: 3-(3,3-diciclopropilpropoxi)-1H-pirazol

O soluţie de 3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (255 mg, 0,8322 mmol) şi acid trifluoroacetic (325,0 µL, 4,218 mmol) în diclorometan (1 mL) a fost agitată timp de 2,5 ore. Volatilele au fost îndepărtate sub vid pentru a da 3-(3,3-diciclopropilpropoxi)-1H-pirazol (Sare trifluoroacetat) ca ulei incolor care a fost utilizat aşa cum este fără purificare suplimentară pentru următoare reacţie. ESI-MS m/z calc. 206,1419, găsit 207,2 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,59 minute.

Etapa C: 2-cloro-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil

Un amestec de 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (220,0 mg, 0,8867 mmol), 3-(3,3-diciclopropilpropoxi)-1H-pirazol (266,0 mg, 0,8305 mmol), carbonat de potasiu (230 mg, 1,664 mmol) şi 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (20 mg, 0,1783 mmol) în DMSO (10 mL) a fost agitată la temperatura camerei timp de 15 ore. Reacţia a fost diluată cu apă şi extrasă cu acetat de etil. Extractele organice combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu utilizând 100% hexani până la 20% acetat de etil în hexani pentru a da 2-cloro-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (245 mg, 71%) ca ulei incolor. ESI-MS m/z calc. 417,18192, găsit 418,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,28 minute.

Etapa D: Acid 2-cloro-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

O soluţie de 2-cloro-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (245,0 mg, 0,5862 mmol) în acid trifluoroacetic (500,0 µL, 6,490 mmol) şi diclorometan (1,5 mL) a fost agitată timp de 4 ore la temperatura camerei. Solventul a fost evaporat, şi reziduul a fost preluat de două ori în THF şi concentrat sub vid pentru a da acidul 2-cloro-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]piridin-3- carboxilic (204 mg, 96%) ca solid alb care a fost utilizat aşa cum este pentru reacţia următoare. ESI-MS m/z calc. 361,11932, găsit 362,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,8 minute. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,47 - 8,32 (m, 2H), 7,73 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,45 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,98 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 0,75 - 0,64 (m, 2H), 0,50 - 0,39 (m, 4H), 0,35 - 0,26 (m, 1H), 0,26 - 0,19 (m, 2H), 0,15 - 0,06 (m, 2H).

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(3, 3-diciclopropilpropoxi) pirazol-1-il] piridin-3-carboxamidă

O soluţie de acid 2-cloro-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (50,0 mg, 0,1382 mmol) şi carbonil diimidazol (30,0 mg, 0,1850 mmol) în THF (2,0 mL) a fost agitată timp de 45 minute. Apoi, s-au adăugat benzensulfonamidă (25,0 mg, 0,1590 mmol) şi DBU (30 µL, 0,2006 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat timp de 2 ore suplimentare la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost stins cu soluţie saturată de clorură de amoniu şi extras cu acetat de etil. Extractele organice combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (84 mg, 121%) ca ulei vȃscos maro deschis care a fost utilizat (considerând conversie de 100%) aşa cum este pentru următoare reacţie. ESI-MS m/z calc. 500,1285, găsit 501,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,83 minute.

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un amestec de N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi) pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (68,0 mg, 0,1357 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (70,0 mg, 0,4677 mmol), şi carbonat de potasiu (115,0 mg, 0,8321 mmol) în DMSO (1 mL) a fost agitat la 130°C timp de 15 ore. Amestecul de reacţie a fost filtrat printr-un disc cu filtru Whatman (puradisc 25 TF) şi filtratul a fost purificat printr-o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o rulare cu gradient dual de la 50-99% fază mobilă B peste 15,0 minute (Fază mobilă A=H2O (5 mM HCl) şi Fază mobilă B=CH3CN pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-(3,3-diciclopropilpropoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (23,1 mg, 29%). ESI-MS m/z calc. 577,2723, găsit 578,5 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,0 minute. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,36 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,64 - 7,57 (m, 2H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 5,94 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,43 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,49 (dd, J = 10,3, 8,5 Hz, 1H), 3,09 (dd, J = 10,4, 7,6 Hz, 1H), 2,70 - 2,56 (m, 1H), 2,14 (dd, J = 12,4, 7,9 Hz, 1H), 1,97 (q, J = 6,8 Hz, 2H), 1,73 (dd, J = 12,4, 9,4 Hz, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,28 (s, 3H), 1,21 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,73 - 0,59 (m, 2H), 0,50 - 0,37 (m, 4H), 0,37 - 0,29 (m, 1H), 0,24 - 0,15 (m, 2H), 0,12 - 0,07 (m, 2H).

Exemplul sintetic 43: Sinteza Compusului 43: N-(2-clorofenil) sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(2-clorofenil) sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil] etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa 1: Clorura de 2-clorobenzensulfonil (50 µL, 0,3667 mmol) a fost dizolvată în amoniac în metanol (150 µL of 7 M, 1,050 mmol) şi agitată la temperatura camerei timp de 30 minute. Amestecul a fost evaporat la sec şi reevaporat din diclorometan. Solidele au fost dizolvate în THF (1 mL) şi s-a adăugat DBU (60 µL, 0,4012 mmol). Amestecul a fost agitat la 70°C timp de 30 minute pentru a elibera orice amoniac rămas din reacţie.

Etapa 2: Acidul 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxilic (100 mg, 0,2661 mmol) şi carbonil diimidazol (53 mg, 0,3269 mmol) au fost combinate în THF (1,000 mL) şi agitate timp de 2 ore. În acest punct, acest amestec a fost adăugat la amestecul de sulfonamidă (din etapa-1) şi reacţia a fost agitată peste noapte la temperatura camerei. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil şi spălată cu o soluţie de acid citric 1M, urmată de saramură. Organicele au fost separate, uscate pe sulfat de magneziu, şi evaporate pentru a da 2-cloro-N-(2-clorofenil) sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă împreună cu materia primă şi amida primară. Amestecul a fost utilizat aşa cum este pentru reacţia următoare. ESI-MS m/z calc. 548,02997, găsit 549,28 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,76 minute.

Etapa B: N-(2-Clorofenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2, 4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un amestec de 2-cloro-N-(2-clorofenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (50,0 mg, 0,09102 mmol) (amestec ca cel din etapa A ), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (50,0 mg, 0,3341 mmol), şi carbonat de potasiu (80,0 mg, 0,5788 mmol) în DMSO (2,0 mL) a fost agitat la 130°C timp de 15 ore. Amestecul de reacţie a fost filtrat printr-un disc cu filtru Whatman (puradisc 25 TF) şi filtratul a fost purificat printr-o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o rulare cu gradient dual de la 50-99% fază mobilă B peste 15,0 minute (Fază mobilă A=H2O (5 mM HCl) şi Fază mobilă B=CH3CN) pentru a da N-(2-clorofenil)sulfonil-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (18,7 mg, 31%). ESI-MS m/z calc. 625,17377, găsit 626,5 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,35 minute. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,43 - 8,36 (m, 1H), 8,32 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,53 - 7,44 (m, 3H), 5,94 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,40 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 3,51 (t, J = 9,5 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 10,6, 8,1 Hz, 1H), 2,73 - 2,55 (m, 1H), 2,16 (dd, J = 12,4, 7,7 Hz, 1H), 2,09 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 1,77 (dd, J = 12,5, 9,6 Hz, 1H), 1,47 (s, 3H), 1,41 (s, 3H), 1,20 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,09 - 0,97 (m, 2H), 0,81 - 0,64 (m, 2H).

Exemplul sintetic 44: Sinteza Compusului 44: Preparare de (S)-N-(fenilsulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-4-(2,2,4-trimetilpirolidin-1-il)nicotinamidă

Etapa A: 6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-4-cloropiridin -3-carboxilat de metil

La soluţie de 3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol (720 mg, 3,27 mmol) şi 4,6-dicloropiridin-3-carboxilat de metil (742 mg, 3,60 mmol) în N,N-dimetilformamidă (11 mL) s-au adăugat carbonat de potasiu (9,36 g, 9,82 mmol) şi 1,4-diazabiciclo [2,2,2]octan (110 mg, 0,98 mmol). Soluţia rezultată a fost încălzită la 80°C timp de 16 ore. Soluţia de reacţie a fost răcită la temperatura camerei şi diluată cu dietil eter (400 mL). S-a adăugat apoi apă (50 mL), şi straturile organice au fost separate. Straturile organice au fost spălate cu soluţie apoasă IN de acid clorhidric (15 mL), saramură (3 × 15 mL), uscate pe sulfat de magneziu, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu utilizând 0 - 20% hexani - acetat de etil pentru a da 6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-4-cloropiridin-3-carboxilat de metil (631 mg, 49%) ca solid alb. 1H RMN (250MHz, CDCl3) δ (ppm): 8,84 (s, 1H), 8,36 (d, J = 2,8Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 5,96 (d, J = 2,8Hz, 1H), 4,42 (t, J = 7,0Hz, 2H), 3,96 (s, 3H), 2,11 (t, J = 7,0Hz, 2H), 1,05 (m, 2H), 0,76 (m, 2H). ESI-MS m/z calc. 389,1 găsit 390,0 (M1). Timp de retenţie: 7,08 minute.

Etapa B: Acid 6-(3-(2-(1-(Trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-4-cloropiridin-3-carboxilic

6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-4-cloropiridin-3-carboxilatul de metil (553 mg, 1,42 mmol) a fost dizolvat într-un amestec de tetrahidrofuran (3,5 mL) şi metanol (3,5 mL), apoi s-a adăugat soluţie apoasă de hidroxid de sodiu 2N (1,4 mL, 2,84 mmol). Soluţia rezultată a fost agitată la temperatura camerei timp de 3 ore. Toţi solvenţii au fost îndepărtaţi sub presiune redusă. Reziduul a fost acidulat cu soluţie apoasă IN de acid clorhidric până când valoarea pH-ului a atins 2 şi a fost apoi extras cu acetat de etil (3 × 80 mL). Stratul organic a fost spălat cu saramură (2 × 20 mL), uscat pe sulfat de magneziu, filtrat şi concentrat pentru a da acidul 6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-4-cloropiridin-3-carboxilic (534 mg, 97%) ca solid alb. 1H RMN (250MHz, DMSO) δ (ppm): 8,85 (s, 1H), 8,51 (d, J = 3,0Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 6,21 (d, J = 3,0Hz, 1H), 4,36 (t, J = 7,0Hz, 2H), 2,11 (t, J = 7,0Hz, 2H), 0,95(m, 2H), 0,90 (m, 2H). ESI-MS m/z calc. 375,1 găsită 376,0 (M+1)+ Timp de retenţie: 5,80 minute.

Etapa C: 4-Cloro-N-(fenilsulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinamidă

Acidul 6-(3-(2-(1-(Trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-4-cloropiridin-3-carboxilic ( 528 mg, 1,40mmol) şi 1,1'-carbonildiimidazol (341 mg, 2,11 mmol) în tetrahidrofuran (9 mL) au fost agitate timp de 2 ore la temperatura camerei, apoi s-au adăugat benzensulfonamidă (220 mg, 1,40 mmol) şi 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-enă (641 mg, 4,21 mmol). Soluţia de reacţie a fost agitată timp de 16 ore suplimentare şi diluată cu acetat de etil (200 mL). Soluţia a fost spălată cu soluţie apoasă saturată de acid tartric (25 mL), apă (40 mL), saramură (40 mL), apoi uscată pe sulfat de magneziu, filtrată şi concentrată. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând acetat de etil pentru a da 4-cloro-N-(fenilsulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinamidă (411 mg, 57%) ca solid alb. 1H RMN (250MHz, DMSO) δ (ppm): 8,56 (s, 1H), 8,47 (d, J = 2,5Hz, 1H), 7,94 (d, J = 6,8Hz, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,59 (m, 3H), 6,16 (d, J = 2,5Hz, 1H), 4,34 (t, J = 7,0Hz, 2H), 2,09 (t, J = 7,0Hz, 2H), 0,94 (m, 2H), 0,89 (m, 2H). ESI-MS m/z calc. 514,1 găsit 515,0 (M1). Timp de retenţie: 6,31 minute.

Etapa D: (S)-N-(Fenilsulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-4-(2,2,4-trimetilpirolidin-1-il)nicotinamidă

La soluţia de 4-cloro-N-(fenilsulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinamidă (54,6 mg, 0,11 mmol) în dimetil sulfoxid (0,5 mL) s-au adăugat clorhidrat de (S)-2,2,4-trimetilpirolidină (96 mg, 0,64 mmol) şi fluorură de cesiu (97 mg, 0,64 mmol). Soluţia rezultată a fost încălzită la 120°C timp de 48 ore. Amestecul a fost purificat prin HPLC cu fază inversă utilizând 5-100% apă-acetonitril (conţinând 0,1% acid trifluoroacetic). Fracţiunile pure au fost combinate şi liofilizate pentru a da produsul ca sare cu acid trifluoroacetic, care a fost redizolvat în 50% apă-acetonitril (0,1% acid clorhidric) şi liofilizat din nou pentru a da sarea acidului clorhidric de (S)-N-(fenilsulfonil)-6-(3-(2-(1-(trifluorometil)ciclopropil)etoxi)-1H-pirazol-1-il)-4-(2,2,4-trimetilpirolidin-1-il)nicotinamidă (27,8 mg, 42%). 1H RMN (250MHz, DMSO) δ (ppm): 12,65 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,08 (d, J = 1,3Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,70 (m, 3H), 7,24 (s, 1H), 6,05 (dd, J = 1,3, 2,5Hz, 1H), 4,34 (d, J = 7,0Hz, 2H), 2,50 (m, 3H), 2,09 (t, J = 7,0Hz, 2H), 2,10 (m, 1H), 1,91 (m, 1H), 1,53 (s, 6H), 0,87 (m, 2H), 0,84 (m, 2H), 0,64 (d, J = 6,0Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 591,2 găsit 592,6 (M1). Timp de retenţie: 2,88 minute.

Exemplul sintetic 45: Sinteza Compusului 45, 46, & 47: N-(amino(oxo)(fenil)-λ6-sulfaneiliden)-6-(3-((1-(trifluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-((S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il)nicotinamidă izomer 1 şi izomer 2

Etapa A: 2,6-difluoropiridin-3-carboxilat de terţ-butil

Acidul 2,6-difluoropiridin-3-carboxilic (1,0 g, 6,3 mmol) a fost dizolvat în 2-metil tetrahidrofuran anhidru (12 mL). S-a adăugat dicarbonat de di-terţ-butil (1,5 g, 6,9 mmol) într-o porţie urmat de 4-(dimetilamino)piridină (462 mg, 3,78 mmol). Amestecul a devenit o suspensie, cu cantitate mare de evoluţie de gaz. Amestecul eterogen a fost agitat la temperatura camerei pe durata sfârşitului de săptămână şi apoi diluat cu metil terţ-butil eter (30 mL). Stratul organic a fost spălat succesiv cu HCl apos 1M (10 mL), soluţie apoasă saturată 5% m/v de bicarbonat de sodiu (10 mL), uscat pe sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu, eluând cu 0-30% acetat de etil în heptani, pentru a furniza 2,6-difluoropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (360 mg, randament 26%) ca ulei galben deschis. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) ppm 1,60 (s, 9 H), 6,88 (ddd, J = 8,4, 3,0, 0,5 Hz, 1 H), 8,40 - 8,47 (m, 1 H). 19F RMN (282 MHz, CDCl3) ppm -61,5 - -61,4 (m, IF), -60,3 (t, J = 8,6 Hz, 1 F).

Etapa B: 2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil

2,6-Difluoropiridin-3-carboxilatul de terţ-butil (1,8 g, 8,4 mmol), 3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]-1H-pirazol (1,8 g, 8,7 mmol) şi carbonatul de potasiu proaspăt macinat (1,7 g, 12 mmol) au fost adăugate la dimetilsulfoxidul anhidru (20 mL). Amestecul a fost agitat la 20°C sub azot timp de 16 ore şi apoi diluat cu acetat de etil (100 mL). Stratul organic a fost spălat cu apă (3 × 30 mL), uscat pe sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu, eluând cu 0-15% acetat de etil în heptani, pentru a da 2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,9 g, randament 57%) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) ppm 0,92 - 0,99 (m, 2 H), 1,13 - 1,18 (m, 2 H), 1,60 (s, 9 H), 4,40 (s, 2 H), 6,00 (d, J= 2,8 Hz, 1 H), 7,61 (d, J= 8,4 Hz, 1 H), 8,30 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 8,37 (t, J = 8,4 Hz, 1 H). 19F RMN (282 MHz, CDCl3) ppm -69,7 (s, 3 F), -62,2 (d, J = 9,2 Hz, 1 F). LCMS: [M+H]+ = 402,1.

Etapa C: Acid 2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

Acidul trifluoroacetic (4 mL) a fost adăugat la o soluţie de 2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (1,9 g, 4,7 mmol) în diclorometan (16 mL). Amestecul a fost agitat la 40°C timp de 4 ore, după care TLC a prezentat conversia deplină. Amestecul a fost concentrat sub presiune redusă şi reziduul a fost triturat cu heptani, filtrat şi uscat sub vid înaintat pentru a furniza acidul 2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (1,6 g, randament 98%) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) ppm 1,06 - 1,11 (m, 4 H), 4,39 (s, 2 H), 6,24 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 7,66 (dd, J = 8,3, 1,0 Hz, 1 H), 8,43 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,47 (dd, J = 9,6, 8,4 Hz, 1 H). 19F RMN (282 MHz, DMSO-d6) ppm -67,9 (s, 3 F), -63,2 (d, J = 7,9 Hz, 1 F). LCMS: [M+H]+ = 346,1.

Etapa D: 2-Fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxamidă

La o suspensie de acid 2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (1,6 g, 4,6 mmol) în diclorometan (20 mL) s-a adăugat o picătură de N,N-dimetilformamidă urmată de adăugarea în picătură a clorurii de oxalil (0,52 mL, 6,0 mmol). Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de două ore până când barbotarea a fost oprită. Solventul a fost îndepărtat sub presiune redusă. Solidul alb rezultat a fost dizolvat în tetrahidrofuran anhidru (10 mL) şi adăugat la un amestec de 28% hidroxid de amoniu (10 mL) şi tetrahidrofuranul (5 mL) a fost răcit cu o baie de apă cu gheaţă. Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 1 oră şi apoi diluată cu acetat de etil (100 mL), spălată cu apă (20 mL), uscată pe sulfat de sodiu anhidru, filtrată şi concentrată sub presiune redusă pentru a da 2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (1,55 g, 98% randament) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) ppm 1,06 - 1,11 (m, 4 H), 4,38 (s, 2 H), 6,21 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 7,61 (dd, J = 8,2, 1,5 Hz, 1 H), 7,76 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 8,33 (dd, J = 9,4, 8,4 Hz, 1 H), 8,4 (d, J = 2,7 Hz, 1 H). 19F RMN (282 MHz, CDCl3) ppm -67,9 (s, 3 F), -66,3 (d, J = 8,9 Hz, 1 F). LCMS: [M+H]+ = 345,1.

Etapa E: 2-Fluoro-N-fenilsulfanil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

S-a adăugat încet brom (0,14 mL, 2,7 mmol) la o suspensie de difenil disulfură (596 mg, 2,73 mmol) în acetonitril anhidru (4 mL) la 0°C. Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 2 minute pentru a da o soluţie. Această soluţie a fost adăugată la o soluţie de 2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (940 mg, 2,73 mmol) în acetonitril anhidru (4 mL) şi piridină (4 mL) la 0°C. Amestecul închis rezultat a fost agitat la temperatura camerei peste noapte, apoi concentrat sub presiune redusă şi coevaporat cu toluen (10 mL). Solidul rezidual maro a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu, eluând cu 0-30% acetat de etil în heptani, pentru a da 2-fluoro-N-fenilsulfanil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (380 mg, 31% randament) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) ppm 0,93 - 1,00 (m, 2 H), 1,14 - 1,19 (m, 2 H), 4,41 (s, 2 H), 6,03 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 7,20 - 7,26 (m, 1 H), 7,30 - 7,42 (m, 4 H), 7,73 (dd, J = 8,4, 1,8 Hz, 1 H), 7,84 (d, J = 15 Hz, 1 H), 8,28 (d, J= 3,0 Hz, 1 H), 8,63 (t, J= 9,0 Hz, 1 H). LCMS: [M+H]+ = 453,0.

Etapa F: rac-N-(benzensulfinil)-2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

S-a adăugat acid meta-cloroperoxibenzoic (469 mg de 77%, 2,1 mmol) la o soluţie de 2-fluoro-N-fenilsulfanil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (860 mg, 1,90 mmol) în diclorometan (30 mL) la 0°C şi reacţia a fost agitată la aceeaşi temperatură timp de 1 oră. Amestecul de reacţie a fost diluat cu diclorometan (70 mL), spălat succesiv cu 10% m/v tiosulfat de sodiu, 5% m/v bicarbonat de sodiu, uscat pe sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu, eluând cu 0-40% acetat de etil în heptani, pentru a da N-(benzonesulfinil)-2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida racemică (700 mg, 78% randament) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) ppm 0,92 - 1,00 (m, 2 H), 1,13 - 1,20 (m, 2 H), 4,38 (d, J= 12,1, 1 H), 4,43 (d, J= 12,1, 1 H), 6,03 (d, J= 3,0 Hz, 1 H), 7,56 - 7,65 (m, 3 H), 7,70 - 7,78 (m, 1 H), 7,80 - 7,88 (m, 2 H), 8,24 (d, J= 3,0 Hz, 1 H), 8,40 (d, J = 12 Hz, 1 H), 9,61 (t, J= 8,5 Hz, 1 H). 19F RMN (282 MHz, CDCl3) ppm -69,7 (s, 3 F), -63,2 (t, J = 10,5 Hz, 1 F). LCMS: [M+H]+ = 469,0.

Etapa G: N-(Benzensulfinil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Clorhidratul de (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (400 mg, 2,67 mmol) a fost dizolvat în N,N-dimetilformamidă anhidră (10 mL), amestecul a fost răcit cu apă cu gheaţă şi s-a adăugat hidrură de sodiu (287 mg de 60% dispersie în ulei mineral, 7,2 mmol). Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 10 minute şi răcită înapoi până la 0°C. S-a adăugat o soluţie de N-(benzensulfinil)-2-fluoro-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă racemică (960 mg, 2,05 mmol) în N,N dimetilformamidă (10 mL). După agitare la temperatura camerei timp de 10 minute amestecul de reacţie a fost agitat la 50°C timp de 3 ore (LCMS a prezentat o conversie de 60%; a existat un lot dintr-o hidrură de sodiu consumată). S-a adăugat tetrahidrofuran anhidru (0,5 mL) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost stins cu apă (10 mL) la 0°C apoi extras cu acetat de etil (80 mL). Stratul organic a fost spălat cu apă (3 × 20 mL), saramură (10 mL), uscat pe sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu, eluând cu 0-50% acetat de etil în heptani. Fracţiunile conţinând produsul şi materia primă au fost combinate şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul a fost agitat într-un amestec de heptani (10 mL) şi diclorometan (10 mL) timp de 30 minute şi apoi filtrat. Filtratul a fost concentrat sub presiune redusă pentru a da N-(benzensulfinil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (500 mg, puritate prin LCMS 88%, randament 38%) ca solid galben care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară. LCMS: [M+H]+ = 562,2.

Etapa H: Sinteză de N-(fenilsulfonimidoyl)-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

S-a adăugat amoniac (7,8 mL a unei soluţii 0,5 M în dioxan, 3,9 mmol) la o soluţie de N-(benzensulfinil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (500 mg, puritate 88%, 0,78 mmol) în acetonitril anhidru (20 mL) la 0°C. S-a adăugat N-clorosuccinimidă (120 mg, 0,90 mmol) într-o porţie (amestecul a devenit portocaliu) şi reacţia a fost agitată la 0°C timp de o oră. S-a adăugat N-clorosuccinimidă (12 mg,0,090 mmol) suplimentară şi reacţia a fost agitată la aceeaşi temperatură timp de 30 minute şi apoi stinsă cu 10% m/v soluţie apoasă de tiosulfat de sodiu şi extrasă cu acetat de etil (50 mL). Stratul organic a fost spălat succesiv cu 5% m/v soluţie apoasă de bicarbonat de sodiu, saramură, uscat pe sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu, eluând cu 5-45% acetat de etil în heptani, pentru a da un solid alb (300 mg) care a fost triturat cu acetonitril (3 mL) pentru a furniza un amestec diastereomeric de N-(amino(oxo)(fenil)-λ6sulfaneiliden)-6-(3-((1-(trifluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)-2-((S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il)nicotinamidă (Compusul 45) (180 mg, puritate 97% prin LCMS, randament 38%) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) ppm 0,89 - 1,06 (m, 5 H), 1,08 - 1,18 (m, 2 H), 1,59 - 1,72 (m, 7 H), 1,81 - 1,95 (m, 1 H), 2,07 - 2,40 (m, 1 H), 2,59 - 2,71 (m, 0,4 H), 2,82 - 2,96 (m, 0,6 H), 3,18 (t, J = 10,6 Hz, 0,4 H), 3,29 (t, J = 10,7 Hz, 0,6 H), 4,32 - 4,43 (m, 2 H), 5,90 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 6,25 (br. s., 2 H), 6,90 - 6,97 (m, 1 H), 7,48 - 7,57 (m, 2 H), 7,58 - 7,66 (m, 1 H), 7,97 - 8,09 (m, 2,6 H), 8,16 (d, J = 8,2 Hz, 0,4 H), 8,20 - 8,23 (m, 1 H). 19F RMN (282 MHz, CDCl3) ppm -69,7 (s, 3 F). LCMS: [M+H]+= 577,2.

Izomerii au fost separaţi prin cromatografie chirală în fluid supercritic utilizȃnd o coloana Fenomenex Lux-1 (250 Ч 21,2 mm), 5µm şi eluând cu 20 % MeOH, 80 % CO2 cu un debit de 70 mL/minut.

Diastereoizomer 1 (Compusul 46): >98 % de ESI-MS m/z calc. 576,2131, găsit 577,4 (M+1) + ; Timp de retenţie: 1,82 minute; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,19 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,95 (dd, J = 8,1, 1,6 Hz, 3H), 7,75 (s, 2H), 7,68 - 7,49 (m, 3H), 6,85 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,12 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,35 (s, 2H), 3,08 (t, J = 10,6 Hz, 1H), 2,76 (dd, J = 10,6, 7,1 Hz, 1H), 2,21 (dq, J = 12,1, 6,2 Hz, 1H), 1,97 - 1,79 (m, 1H), 1,55 (d, J = 1,7 Hz, 6H), 1,44 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 1,09 (dd, J = 4,5,3,1 Hz, 4H), 0,92 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Diastereoizomer 2 (Compusul 47): >98% de. ESI-MS m/z calc. 576,2131, găsit 577,3 (M+1) + ; Timp de retenţie: 1,81 minute; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,19 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,99 - 7,88 (m, 3H), 7,79 (s, 2H), 7,69 - 7,55 (m, 3H), 6,87 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,11 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,44 - 4,28 (m, 2H), 2,63 (t, J = 10,8 Hz, 1H), 2,21 - 2,03 (m, 1H), 1,80 (dd, J = 11,8, 5,4 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 1,7 Hz, 6H), 1,33 (t, J = 12,2 Hz, 2H), 1,09 (dt, J = 5,6, 2,1 Hz, 4H), 0,71 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 46: Sinteza Compusului 48: N-(Benzensulfonil)-6-[3-(ciclopropoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-cictopropoxi-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

La o soluţie de ciclopropanol (30,8 mg, 0,531 mmol), 2,3-dihidro-3-oxopirazol-1-carboxilat de terţ-butil (97,7 mg, 0,531 mmol) şi trifenilfosfină (139,3 mg, 0,531 mmol) în toluen anhidru (2 mL) s-a adăugat azodicarboxilat de di-terţ-butil (122,2 mg, 0,531 mmol). Soluţia a fost purjată cu argon timp de 1 minut, şi agitată la temperatura ambiantă timp de 30 minute. Apoi soluţia de reacţie a fost încălzită la 110°C timp de 5 ore suplimentare înainte de a fi răcită la temperatura ambiantă. Soluţia a fost diluată cu eter (50 mL), spălată cu soluţie apoasă de NaOH, saramură, uscată pe sulfat de sodiu, filtrată şi concentrată sub presiunea redusă. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu (hexan şi acetat de etil, gradient de 0 până la 10% acetat de etil) pentru a da 3-ciclopropoxi-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (52mg, 46%) ca solid alb. ESI-MS m/z calc. 224,116, găsit 225,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 4,38 minute. 1H RMN (250 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7,86 (d, J = 2,8Hz, 1H), 5,93 (d, J = 2,8Hz, 1H), 4,20-4,15 (m, 1H), 1,61 (s, 9H), 0,85-0,72 (m, 4H).

Etapa B: 3-Ciclopropoxi-1H-pirazol

La o soluţie de 3-ciclopropoxi-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (131 mg, 0,584 mmol) în diclorometan (6 mL) s-a adăugat TFA (667 mg, 0,38 mL, 5,84 mmol). Soluţia rezultată a fost agitată la temperatura ambiantă timp de 3 ore. Toţi solvenţii au fost îndepărtaţi sub presiune redusă. Reziduul obţinut a fost dizolvat în eter (100 mL), spălat cu soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu, uscat pe sulfat de magneziu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă pentru a da 3-ciclopropoxi-1H-pirazol ca ulei galben pal. Produs brut obţinut a fost utilizat direct în etapa următoare.

Etapa 3: 2-cloro-6-(3-ciclopropoxi-1H-pirazol-1-il)piridin-3-carboxilat de terţ-butil

3-Ciclopropoxi-1H-pirazolulu brut (73mg, 0,584 mmol), 2,6-dicloro piridin-3-carboxilatul de terţ-butil (159 mg, 0,643 mmol), K2CO3 (162mg, 1,17 mmol) şi DABCO (13 mg, 0,117 mmol) au fost dizolvate în DMF anhidră (1,5 mL). Soluţia de reacţie a fost agitată la temperatura ambiantă timp de 16 ore. Soluţia de reacţie a fost diluată cu eter (100 mL), spălată cu apă (3 × 25 mL) şi saramură (25 mL). Straturile organice au fost separate, uscate pe sulfat de magneziu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu (hexan şi diclorometan, gradient de 0 până la 100% diclorometan) pentru a da 2-cloro-6-(3-ciclopropoxi-1H-pirazol-1-il)piridin-3-carboxilat de terţ-butil (153 mg, 78%) ca ulei lipicios. ESI-MS m/z calc. 335,104, găsit 336,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 6,84 minute.

Etapa D: Acid 2-cloro-6-(3-ciclopropoxi-1H-pirazol-1-il)piridin-3-carboxilic

La o soluţie de 2-cloro-6-(3-ciclopropoxi-1H-pirazol-1-il)piridin-3-carboxilat de terţ-butil (153 mg, 0,456 mmol) în diclorometan (2,2 mL) s-a adăugat TFA (519 mg, 0,35 mL, 4,56 mmol). Soluţia rezultată a fost agitată la temperatura ambiantă timp de 48 ore. Apoi s-a adăugat 1,2-dicloroetan (2 mL), şi toţi solvenţii au fost îndepărtaţi sub presiune redusă. Solidul alb obţinut a fost suspendat în amestecul de hexan şi eter (10 mL, hexan/eter, 19/1), sonicat, filtrat, spălat cu hexan (10 mL) şi uscat pentru a da acidul 2-cloro-6-(3-ciclopropoxi-1H-pirazol-1-il)piridin-3-carboxilic (122 mg, 97%) ca solid alb. ESI-MS m/z calc. 279,041, găsit 279,9 (M+1)+; Timp de retenţie: 4,43 minute. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 13,6 (s, 1H), 8,43 (d, J = 3,0Hz, 1H), 8,39 (d, J = 8,5Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,5Hz, 1H), 6,28 (d, J = 3,0Hz, 1H), 4,16-4,13 (m, 1H), 0,79-0,71 (m, 4H).

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(ciclopropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-(ciclopropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (30 mg, 0,1073 mmol) în DMF (600,0 µL), HATU (1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridiniu 3-oxid hexafluorofosfat) (85 mg, 0,2235 mmol), şi DIEA (diizopropiletilamină) (38 µL, 0,2182 mmol) au fost combinate şi agitate la temperatura camerei timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost filtrat şi purificat pe HPLC cu fază inversă utilizȃnd un gradient de 25-75% acetonitril în apă conţinând 5mM HCl pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(ciclopropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,97 (s, 1H), 8,43 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 9,4 Hz, 2H), 7,77 (s, 1H), 7,69 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 6,31 - 6,26 (m, 1H), 4,16 (s, 1H), 0,76 (s, 4H). ESI-MS m/z calc. 418,05026, găsit 419,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,63 minute (3 min rulare).

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-6-[3-(ciclopropoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Un amestec de N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(ciclopropoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă, (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (aproximativ 24,01 mg,0,1604 mmol), CsF (aproximativ 36,00 mg, 0,2370 mmol), K2CO3 (aproximativ 72,01 mg, 0,5210 mmol) în DMSO (0,5 mL) a fost agitat la 140°C timp de 16 ore. Reacţia a fost filtrată şi purificată pe HPLC cu fază inversă utilizȃnd un gradient de 25-75% acetonitril în apă conţinând 5mM HCl pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-(ciclopropoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (5,6 mg, 11% în 2 etape) ESI-MS m/z calc. 495,19403, găsit 496,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,98 minute] (3 min rulare).

Exemplul sintetic 47: Sinteza compusului 49: N-(3-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: (1-(Trifluorometil)ciclopropil)metanol

Acidul 1-(trifluorometil)ciclopropan-1-carboxilic (858 mg, 5,57 mmol, 1,00 echiv.) a fost dizolvat în dietil eter (15 mL). Amestecul de reacţie a fost răcit la 0°C. S-a adăugat hidrură de aluminiu litiu (274 mg, 7,24 mmol, 1,30 echiv.) în porţii. Amestecul de reacţie a fost agitat peste noapte şi lăsat să ajungă la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost răcit la 0°C. S-a adăugat HCl (apos, 1 N, 25 mL) în picătură. Faza apoasă a fost extrasă cu dietil eter (2 × 25 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu saramură (25 mL), uscate pe sulfat de sodiu, filtrate şi evaporate în vid (T băii < 30°C) pentru a da (1-(trifluorometil)ciclopropil)metanol (547 mg, 3,90 mmol, randament 70%) ca ulei incolor. 1H RMN (CDC13): d 3,73 (s, 2H), 1,58 (br, 1H), 1,07-1,01 (m, 2H), 0,82-0,75 (m, 2H).

Etapa B: 1-(3-hidroxipirazol-1-il)etanonă

Un balon de 100 mL cu fund rotund echipat cu o bară de agitare şi un condensator a fost încărcat cu 1H-pirazol-5-ol (4,97 g, 59,11 mmol) şi piridină (25 mL, 309,1 mmol). Amestecul a fost agitat la 95°C. S-a adăugat în picătură o soluţie de anhidridă acetică (5,6 mL, 59,35 mmol) în piridină (10 mL, 123,6 mmol) într-o perioadă de 3 minute. Amestecul a fost apoi agitat la 95°C timp de 3 ore suplimentare. Solvenţii au fost îndepărtaţi sub presiune redusă. Reziduul solid a fost triturat în 40 mL de dietil eter, filtrat, spălat cu dietil eter şi uscat pentru a da 1-(3-hidroxipirazol-1-il)etanonă (6,96 g, 93%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,96 (s, 1H), 8,13 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 6,01 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 2,48 (s, 3H).

Etapa C: 1-(3-((1-(trifluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)etan-1-onă

1-(3-Hidroxi-1H-pirazol-1-il)etan-1-onă (443 mg, 3,51 mmol, 1,00 echiv.) a fost dizolvată în THF (8 mL). S-au adăugat (1-(trifluorometil)ciclopropil)metanol (547 mg, 3,90 mmol, 1,11 echiv.) şi trifenil fosfină (1,10 g, 4,21 mmol, 1,20 echiv.). Amestecul de reacţie a fost răcit la 0°C. S-a adăugat în picătură azodicarboxilat de diizopropil (829 mL, 851 mg, 4,21 mmol, 1,20 echiv.) (menţinând temperatura < 5°C). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei în timpul sfârşitului de săptămână. Evaporarea volatilelor în vid a dat un ulei puţin galben (2,88 g). Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-25% acetat de etil în heptani pentru a da 1-(3-((1-(trifluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)etan-1-onă (701 mg, 2,82 mmol, 80% randament) ca solid alb. 1H RMN (CDCl3): δ 8,06 (d, 1H), 5,99 (d, 1H), 4,36 (d, 2H), 2,57 (s, 3H), 1,18-1,12 (m, 2H), 0,98-0,90 (m, 2H). 19F RMN (CDCl3): δ - 69,77.

Etapa D: 3-((1-(Trifluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol

1-(3-((1-(Trifluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)etan-1-ona (695 mg, 2,80 mmol, 1,00 echiv.) a fost dizolvată în MeOH (30 mL). S-a adăugat NaOH (apos, 30%, 421 mL, 560 mg, 4,20 mmol, 1,50 echiv.). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. Evaporarea volatilelor în vid a dat un solid alb (940 mg). Reziduul a fost partiţionat între acetat de etil (25 mL) şi apă (25 mL). Faza apoasă a fost extrasă cu acetat de etil (2 × 25 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu saramură (25 mL), uscate pe sulfat de sodiu, filtrate şi evaporate în vid pentru a da 3-((1-(trifluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol (548 mg, 2,66 mmol, randament 95%) ca puţin ulei galben. 1H RMN (CDCl3): δ 9,10 (br, 1H), 7,36 (d, 1H), 5,77 (d, 1H), 4,29 (s, 2H), 1,14-1,08 (m, 2H), 0,96-0,89 (m, 2H). 19F RMN (CDCl3): δ -69,75.

Etapa E: 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil

2,6-dicloropiridin-3-carboxilatul de terţ-butil (aproximativ 451,3 mg, 1,819 mmol), 3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]-1H-pirazol (375 mg, 1,819 mmol), şi carbonatul de potasiu (aproximativ 301,7 mg, 2,183 mmol) (proaspăt măcinat) au fost combinate în DMSO anhidru (9,026 mL). S-a adăugat 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (aproximativ 40,81 mg, 0,3638 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub azot timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil (10 mL) şi apă (2x5 mL) şi cele două faze au fost separate. Organicele au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-30% acetat de etil în hexani pentru a da 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (620 mg, 82%) ESI-MS m/z calc. 417,1067, găsit 418,1 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,85 minute.

Etapa F: Acid 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxilic

2-Cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (620 mg, 1,484 mmol) şi TFA (aproximativ 1,692 g, 1,143 mL, 14,84 mmol) au fost combinate în DCM (5 mL) şi încălzite la 40°C timp de 16 ore. Reacţia a fost evaporată la un solid alb. S-au adăugat hexani şi amestecul a fost evaporat din nou pentru a da acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (500 mg, 93%). ESI-MS m/z calc. 361,0441, găsit 362,1 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,66 minute.

Etapa G: 2-Cloro-N-(3-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3- carboxilic (200 mg, 0,55 mmol) şi carbonildiimidazolul (110 mg, 0,66 mmol) au fost combinate în THF (2 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 3-metoxibenzensulfonamidă (104 mg, 0,55 mmol), urmată de DBU (0,25 mL, 1,66 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 2 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL acetat de etil, şi spălat cu 10 mL acid citric apos 1M. Stratul apos a fost extras cu acetat de etil (2 × 10 mL), şi organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-10% de metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(3-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (217 mg, 74%) ESI-MS m/z calc. 530,06384, găsit 531,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,72 minute.

Etapa H: N-(3-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(3-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (120 mg, 0,23 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (sare clorhidrat) (107 mg, 0,71 mmol), şi carbonatul de potasiu (173 mg, 1,25 mmol) au fost combinate în DMSO (600 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost partiţionată între acetat de etil şi apă. Organicele au fost separate, spălate cu o soluţie de acid citric 1M, saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(3-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (92 mg, 67%) ESI-MS m/z calc. 607,20764, găsit 608,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,17 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,43 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,61 - 7,53 (m, 2H), 7,48 - 7,45 (m, 1H), 7,32 - 7,27 (m, 1H), 6,92 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,42 - 4,31 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,45 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 2,35 - 2,28 (m, 1H), 2,20 - 2,03 (m, 1H), 1,84 (dd, J = 11,9, 5,6 Hz, 1H), 1,53 (d, J = 10,9 Hz, 6H), 1,38 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,12 - 1,05 (m, 4H), 0,67 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 48: Sinteza Compusului 50: N-(2-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(2-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (181 mg, 0,5 mmol) şi carbonildiimidazolul (97 mg, 0,6 mmol) au fost combinate în THF (2,5 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 30 minute. S-a adăugat 2-fluorobenzensulfonamidă (114 mg, 0,65 mmol), urmată de DBU (0,09 mL, 0,6 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 3 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL acetat de etil, şi spălat cu 10 mL acid citric apos 1M. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-8% de metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(2-fluorofenil) sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropi]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (180 mg, 69%) ESI-MS m/z calc. 518,0439, găsit 519,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,70 minute.

Etapa B: N-(2-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(2-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (78 mg, 0,15 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (67 mg, 0,45 mmol), şi carbonatul de potasiu (124 mg, 0,9 mmol) au fost combinate în DMSO (600 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost filtrat şi purificat prin LC/MS utilizȃnd un gradient de 30-99% acetonitril în 5 mM HCl apos pentru a da N-(2-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (28 mg, 31%). ESI-MS m/z calc. 595,1876, găsit 596,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,08 minute.

Exemplul sintetic 49: Sinteza Compusului 51: N-(3-Fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3- carboxilic (181 mg, 0,5 mmol) şi carbonildiimidazolul (97 mg, 0,6 mmol) au fost combinate în THF (2,5 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 30 minute. S-a adăugat 3-fluorobenzensulfonamidă (114 mg, 0,65 mmol), urmată de DBU (0,09 mL, 0,6 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 3 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL acetat de etil, şi spălat cu 10 mL acid citric apos 1M. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-8% de metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(3-fluorofenil) sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (190 mg, 73%) ESI-MS m/z calc. 518,0439, găsit 519,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,72 minute.

Etapa B: N-(3-Fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (78 mg, 0,15 mmol), (4,S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (67 mg, 0,45 mmol), şi carbonatul de potasiu (124 mg, 0,9 mmol) au fost combinate în DMSO (600 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost filtrat şi purificat prin LC-MS pentru a da N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (47 mg, 52%). ESI-MS m/z calc. 595,1876, găsit 596,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,14 minute,1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,21 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,90 - 7,82 (m, 2H), 7,80 - 7,69 (m, 2H), 7,68 - 7,59 (m, 1H), 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,43 - 4,27 (m, 2H), 2,44 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,30 (dd, J = 10,2, 7,0 Hz, 1H), 2,23 - 2,08 (m, 1H), 1,84 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,53 (d, J = 9,7 Hz, 6H), 1,39 (t, J = 12,2 Hz, 1H), 1,17 - 1,02 (m, 4H), 0,69 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 50: Sinteza Compusului 52: N-(4-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(4-fluorofenil)sulfonil-6-13-[[1-(trifluorometil) ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(tnfluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3- carboxilic (181 mg, 0,5 mmol) şi carbonildiimidazolul (97 mg, 0,6 mmol) au fost combinate în THF (2,5 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 30 minute. S-a adăugat 4-fluorobenzensulfonamidă (114 mg, 0,65 mmol), urmată de DBU (0,09 mL, 0,6 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 3 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL acetat de etil, şi spălat cu 10 mL acid citric apos 1M. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu un gradient de 0-8% de metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(4-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (160 mg, 62%). ESI-MS m/z calc. 518,0439, găsit 519,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,72 minute.

Etapa B: N-(4-Fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(4-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (78 mg, 0,15 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (67 mg, 0,45 mmol), şi carbonatul de potasiu (124 mg, 0,9 mmol) au fost combinate în DMSO (600 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost filtrat şi purificat prin LC/MS utilizȃnd un gradient de 30-99% acetonitril în 5 mM HCl apos pentru a da N-(4-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il] -2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (34 mg, 38%). ESI-MS m/z calc. 595,1876, găsit 596,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,16 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,12 - 8,02 (m, 2H), 7,82 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,59 - 7,45 (m, 2H), 6,92 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,43 - 4,30 (m, 2H), 2,37 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,22 (dd, J = 10 1, 7,0 Hz, 1H), 2,18 - 2,05 (m, 1H), 1,83 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 8,8 Hz, 6H), 1,37 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,15 - 1,00 (m, 4H), 0,67 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 51: Sinteza Compusului 53: N-(2-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-cloro-N-(2-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (200 mg, 0,55 mmol) şi carbonildiimidazolul (110 mg, 0,66 mmol) au fost combinate în THF (2 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 2 ore. S-a adăugat 2-metoxibenzensulfonamidă (104 mg, 0,55 mmol), urmată de DBU (0,25 mL, 1,66 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 2 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL acetat de etil, şi spălat cu 10 mL de acid citric apos 1M. Stratul apos a fost extras cu acetat de etil (2 Ч 10 mL), şi organicele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi concentrate sub presiune redusă. Materialul brut a fost utilizat fără purificare suplimentară. 2-Cloro-N-(2-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (286 mg, 97%) ESI-MS m/z calc. 530,06384, găsit 531,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,70 minute.

Etapa B: N-(2-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(2-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (120 mg, 0,23 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (107 mg, 0,71 mmol), şi carbonatul de potasiu (173 mg, 1,25 mmol) au fost combinate în DMSO (600 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost partiţionată între acetat de etil şi apă. Organicele au fost separate, spălate cu o soluţie de acid citric 1M, saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(2-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (82 mg, 60%) ESI-MS m/z calc. 607,20764, găsit 608,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,15 minute.

Exemplul sintetic 52: Sinteza Compusului 54: N-(4-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(4-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (300 mg, 0,83 mmol) şi carbonildiimidazolul (162 mg, 1,0 mmol) au fost combinate în THF (4 mL) şi agitate la temperatura camerei timp de 30 minute. S-a adăugat 4-metoxibenzensulfonamidă (203 mg, 1,08 mmol), urmată de DBU (0,15 mL, 1,0 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 2 ore la temperatura camerei. Amestecul de reacţie a fost diluat cu 10 mL acetat de etil, şi spălat cu 10 mL de acid citric apos 1M. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-8% metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-N-(4-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (430 mg, 97%) ESI-MS m/z calc. 530,06384, găsit 531,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,71 minute.

Etapa B: N-(4-Metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil] metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(4-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (210 mg, 0,39 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (180 mg, 1,2 mmol), şi carbonatul de potasiu (330 mg, 2,39 mmol) au fost combinate în DMSO (2 mL) şi încălzite la 130°C timp de 15 ore. Reacţia a fost partiţionată între acetat de etil şi apă. Organicele au fost separate, spălate cu o soluţie 1M de acid citric, saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-5% metanol în diclorometan. Materialul a fost purificat suplimentar prin LC/MS utilizȃnd un gradient de 30-99% acetonitril în 5 mM HCl apos pentru a da N-(4-metoxifenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (25 mg, 10%) ESI-MS m/z calc. 607,20764, găsit 608,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,16 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,99 - 7,87 (m, 2H), 7,77 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,26 - 7,10 (m, 2H), 6,91 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,44 - 4,28 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,40 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 2,29 - 2,21 (m, 1H), 2,16 - 2,00 (m, 1H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,6 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 10,7 Hz, 6H), 1,37 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,16 - 1,02 (m, 4H), 0,64 (d, J = 6,3 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 53: Sinteza Compusului 55: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[1-(difluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-((1-(difluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

La o soluţie de (1-(difluorometil)ciclopropil)metanol (867 mg, 7,11 mmol), 2,3-dihidro-3-oxopirazole-1-carboxilat de terţ-butil (1,19 g, 6,46 mmol), şi trifenilfosfină (1,86g, 7,11 mmol) în tetrahidrofuran (22 mL) la 0°C s-a adăugat azodicarboxilat de diizopropil (1,44 g, 7,11 mmol) în picătură. După ce adăugarea a fost completă, reacţia a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei, apoi încălzită la 50°C timp de 1 oră. Soluţia de reacţie a fost răcită la temperatura camerei şi s-a adăugat acetat de etil (300 mL). Soluţia a fost apoi spălată cu hidroxid de sodiu apos (20 mL, 1M), apă, saramură şi uscată pe sulfat de magneziu, filtrată şi concentrată. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu (hexan şi diclorometan, gradient 0 până la 100% de diclorometan) pentru a da 3-((1-(difluorometil)ciclopropil) metoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil ca solid alb (1,50 g, randament 80%). ESI-MS m/z calc. 288,1, găsit 289,2 M+1)+. Timp de retenţie: 3,08 minute. 1H RMN (250MHz, CDCl3) δ(ppm): 7,84(d, J= 3,0Hz, 1H), 5,97(t, J= 57,8Hz, 1H), 5,89(d, J= 3,0 Hz, 1H), 4,32(s, 2H), 1,61(s, 9H), 0,97(m, 2H), 0,75(m, 2H).

Etapa B: 3-((1-(Difluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol

S-a adăugat rece de acid clorhidric (30 mL, 4,0M în 1,4-dioxan) la 3-((1-(difluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-carboxilatul de terţ-butil (1,69 g, 5,88 mmol) într-un flacon cu fund rotund, şi soluţia de reacţie a fost încălzită la temperatura camerei şi agitată timp de 3 ore. După îndepărtarea tuturor solvenţilor sub presiune redusă, reziduul astfel obţinut a fost partiţionat între apă (50 mL) şi dietil eter (80 mL). Stratul organic a fost separat şi stratul apos extras cu dietil eter (2 × 80 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu saramură (2 × 30 mL), uscate pe sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul astfel obţinut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu (hexani şi acetat de etil, 0 până la 40% gradient de acetat de etil) pentru a da 3-((1-(difluorometil)ciclopropil)metoxi)-1H-pirazol ca solid alb (997 mg, randament 90%). ESI-MS m/z calc. 188,1, găsit 189,1 (M+1)+. Timp de retenţie: 1,94 minute. 1H RMN (250MHz, DMSO) δ(ppm): 11,87(s, 1H), 7,51(m, 1H), 5,98(t, J= 57,0Hz, 1H), 5,66(m, 1H), 4,10(s, 2H), 0,80(m, 4H).

Etapa C: 2-cloro-6-[3-[[1-(difluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil

2,6-dicloropiridin-3-carboxilatul de terţ-butil (aproximativ 659,2 mg, 2,657 mmol), 3-[[1-(difluorometil)ciclopropil]metoxi]-1H-pirazolul (500 mg, 2,657 mmol), şi carbonatul de potasiu (aproximativ 440,6 mg, 3,188 mmol) (proaspăt măcinat) au fost combinate în DMSO anhidru (13,18 mL). S-a adăugat 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (aproximativ 59,61 mg, 0,5314 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub azot timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu apă (20 mL) şi agitat timp de 15 min. Solidul rezultat a fost colectat şi spălat cu apă. Solidul a fost dizolvat în diclorometan şi cantitatea mică de strat apos îndepărtată. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate pentru a da 2-cloro-6-[3-[[1-(difluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (842 mg, 79%). ESI-MS m/z calc. 399,11612, găsit 400,1 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,82 minute.

Etapa D: Acidul 2-cloro-6-[3[[1-(difluorometil)ciclopropil]metoxil]pirazol-1-il] piridin-3-carboxilic

2-Cloro-6-[3-[[1-(difluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (842 mg, 2,106 mmol) şi TFA (aproximativ 2,401 g, 1,622 mL, 21,06 mmol) au fost dizolvate în diclorometan (8,420 mL) şi încălzite la 40°C timp de 3 ore. Reacţia a fost evaporată şi solidul rezultat a fost triturat cu hexani şi reevaporat pentru a da acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(difluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (710 mg, 98%). ESI-MS m/z calc. 343,05353, găsit 344,1 (M+1) + ; Timp de retenţie: 0,62 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, 1H), 8,43 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,39 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 5,98 (t, J = 56,4 Hz, 1H), 4,32 (s, 2H), 0,93 - 0,84 (m, 4H).

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(difluorometil)ciclopropil] metoxi] pirazol-1-ilpiridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(difluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (200 mg, 0,5819 mmol) şi carbonil diimidazol (aproximativ 113,2 mg, 0,6983 mmol) au fost combinate în THF (2,5 mL) şi agitate timp de 2 ore. În acest punct, s-a adăugat benzensulfonamidă (aproximativ 91,47 mg, 0,5819 mmol) urmată de DBU (aproximativ 265,8 mg, 261,1 µL, 1,746 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 2 ore suplimentare la temperatura camerei. S-a adăugat o soluţie de acid citric 1M (5 mL) şi reacţia a fost agitată timp de 20 min. Soluţia a fost extrasă cu acetat de etil. Organicele au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(difluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (153,6 mg, 55%) ESI-MS m/z calc. 482,0627, găsit 483,1 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,68 minute.

Etapa F: N-(benzensulfonil)-6-[3-[[1-(difluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2- [(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(difluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-l-il] piridin-3-carboxamida (116 mg, 0,24 mmol), (4,S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (71 mg, 0,63 mmol), şi carbonatul de potasiu (145 mg, 1,05 mmol) au fost combinate în DMSO (600 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost partiţionată între acetat de etil şi apă. Organicele au fost separate, spălate cu o soluţie 1M de acid citric, saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(benzensulfony)-6-[3-[[1-(difluorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (87 mg, 65%) ESI-MS m/z calc. 559,2065, găsit 560,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,06 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,47 (s, 1H), 8,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,00 (t, J = 1,3 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,76 - 7,70 (m, 1H), 7,65 (tt, J = 6,8, 1,6 Hz, 2H), 6,91 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 2,8 Hz, 2H), 4,32 - 4,23 (m, 2H), 2,47 - 2,37 (m, 1H), 2,28 (dd, J = 10,3, 7,0 Hz, 1H), 2,09 (dq, J = 11,9, 6,2 Hz, 1H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,6 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 9,5 Hz, 6H), 1,36 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 0,87 (dt, J = 5,1, 2,0 Hz, 4H), 0,65 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 54: Sinteza Compusului 56: N-(Benzensulfonil)-2-(2,2,4,4-tetrametilpirolidin-1-il)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: N-(2,4,4-Trimetilpentan-2-il)picolinamidă

La 5°C, la acidul picolinic (20,5 g, 167 mmol) în DMF (200 mL) s-a adăugat HATU (65 g, 171 mmol, ~1,0 echiv), urmat de 2,4,4-trimetilpentan-2-amină (27,0 mL, ~1,0 echiv), şi apoi DIEA (65 mL, ~2,5 eq). Reacţia a fost agitată la RT timp de 1,0 oră. Amestecul de reacţie a fost turnat pe apă cu gheaţă (350 mL) şi extras cu EtOAc (2×600 mL). Extractul combinat a fost spălat cu apă (2×300 mL) şi saramură (150 mL), uscat pe Na2SO4, şi concentrat pentru a da un produs brut, care a fost purificat prin filtrare cu dop printr-un strat de gel de siliciu, eluat cu 25% EtOAc în hexani, dând un ulei galben deschis. N-(2,4,4-trimetilpentan-2-il)picolinamidă (36 g, 92%).; MS [M+1]: 235.

Etapa B: Piridin-2-il(2,2,4,4-tetrametilpirolidin-1-il)metanonă

N-(2,4,4-trimetilpentan-2-il)picolinamida (36,0 g, 153 mmol), Pd(OAc)2 (1,72 g, 5%), PhI(OAc)2 (99,2 g, 308 mmol) au fost amestecate în toluen (600 mL) şi încălzite la 80°C peste noapte (~18 ore). Reacţia a fost concentrată pentru a îndepărta majoritatea toluenului şi reziduul încărcat la o coloană cu gel de siliciu, eluat cu 50% EtOAc în hexani, conducând la un solid galben deschis. Piridin-2-il(2,2,4,4-tetrametilpirolidin-1-il)metanonă (32 g, 90%).; MS [M+1]: 233. 1HNMR (250 MHz, CDCl3) 8,56 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,76 (td, J = 7,7, 1,7 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,35 - 7,25 (m, 1H), 3,36 (s, 2H), 1,79 (s, 2H), 1,67 (s, 6H), 1,08 (s, 6H).

Etapa C: 2,2,4,4-Tetrametilpirolidină (sare de HCl)

Piridin-2-il(2,2,4,4-tetrametilpirolidin-1-il)metanona (6 g, 25,9 mmol) a fost dizolvată într-un amestec de NaOH (9,0 g, 225 mmol) în apă (6 mL) şi EtOH (18 mL) într-un reactor cu presiune mică (~45 mL) şi încălzită la 140°C timp de 48 ore. Reacţia a fost completă. Amestecul a fost dizolvat cu 80 mL de apă şi extras cu Et2O (3×200 mL). Extractul a fost spălat cu apă (2×100 mL) şi uscat pe Mg2SO4. După filtrare, gazul de HCl a fost barbotat prin filtrat timp de 5 min. S-a aformat un ulei pe fundul flaconului. Stratul superior de eter a fost decantat cu grijă, uleiul rămas a fost spălat cu eter (2×30 mL) şi spălatura a fost decantată. Uleiul final a fost evaporat pentru a da un semi-solid alb, care a fost uscat într-un cuptor cu vid la 50°C timp de 1 zi, pentru a da un solid alburiu. 2,2,4,4-tetrametilpirolidină (sare de HCl) (4,0 g, 95%). MS [M+1]: 128. 1H RMN (250 MHz, DMSO-d6) 9,39 (s, 2H), 3,01 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 1,69 (s, 2H), 1,40 (s, 6H), 1,16 (s, 6H).

Etapa D: N-(benzensulfonil)-2-(2,2,4,4-tetrametilpirolidin-1-il)-6-13-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxamida (100 mg, 0,2 mmol), 2,2,4,4-tetrametilpirolidina (sare clorhidrat) (98 mg, 0,6 mmol), şi carbonatul de potasiu (138 mg, 1,0 mmol) au fost combinate în DMSO (500 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost diluată cu apă (3mL) şi agitată timp de 20 min. S-a format un solid şi lichidul apos a fost decantat. Solidul a fost dizolvat în acetat de etil şi spălat cu o soluţie 1M de acid citric, apoi saramură. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(benzensulfonil)-2-(2,2,4,4-tetrametilpirolidin-1-il)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (57 mg, 48%) ESI-MS m/z calc. 591,2127, găsit 592,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,20 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,52 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,04 - 7,97 (m, 2H), 7,82 - 7,72 (m, 2H), 7,72 - 7,63 (m, 2H), 6,94 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,36 (s, 2H), 2,38 (s, 2H), 1,72 (s, 2H), 1,58 (s, 6H), 1,14 - 1,04 (m, 4H), 0,81 (s, 6H).

Exemplul sintetic 55: Sinteza Compusului 57: N-(4-Metoxi-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(4-metoxi-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3- carboxilic (150 mg, 0,4023 mmol) şi carbonil diimidazolul (82 mg, 0,5057 mmol) au fost combinate în THF (1,299 mL) şi agitate timp de 2 ore. În acest punct, s-a adăugat 4-metoxi-2-metil-benzensulfonamidă (85 mg, 0,4224 mmol) urmată de DBU (200 µL, 1,337 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 2 ore suplimentare la temperatura camerei. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil şi spălată cu o soluţie 1M de acid citric, urmată de saramură. Organicele au fost separate, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate pentru a da 2-cloro-N-(4-metoxi-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil]motoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (205 mg, 94%) ESI-MS m/z calc. 544,0795, găsit 545,0 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,73 minute.

Etapa B: N-(4-Metoxi-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil) ciclopropil] metoxi] pirazol-l-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(4-metoxi-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifhiorometil)ciclopropil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (100 mg, 0,18 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (90 mg, 0,6 mmol), şi carbonatul de potasiu (138 mg, 1,0 mmol) au fost combinate în DMSO (500 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost diluată cu apă (3mL) şi agitată timp de 20 min. S-a format un solid şi lichidul apos a fost decantat. Solidul a fost dizolvat în acetat de etil şi spălat cu o soluţie 1M de acid citric, apoi saramură. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(4-metoxi-2-metil-fenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclopropil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (75 mg, 67%) ESI-MS m/z calc. 621,22327, găsit 622,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,23 minute,1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,46 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,01 - 6,94 (m, 2H), 6,92 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,41 - 4,32 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,59 (s, 3H), 2,41 - 2,29 (m, 2H), 2,22 - 2,10 (m, 1H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,6 Hz, 1H), 1,52 (s, 6H), 1,36 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 1,12 - 1,06 (m, 4H), 0,70 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 56: Sinteza Compusului 58: N-(o-Tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil] metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3- carboxilic (150 mg, 0,3992 mmol) şi carbonil diimidazolul (aproximativ 81,69 mg, 0,5038 mmol) au fost combinate în THF (1,339 mL) şi agitate timp de 2 ore. În acest punct, s-a adăugat 2-metilbenzensulfonamidă (aproximativ 71,77 mg, 0,4192 mmol), urmată de DBU (aproximativ 202,6 mg, 199,0 µL, 1,331 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 2 ore suplimentare la temperatura camerei. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil şi spălată cu o soluţie 1 M de acid citric, urmată de saramură. Organicele au fost separate, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate pentru a da 2-cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (208 mg, 99%) ESI-MS m/z calc. 528,0846, găsit 529,0 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,77 minute

Etapa B: N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxamida (100 mg, 0,19 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (90 mg, 0,6 mmol), şi carbonatul de potasiu (138 mg, 1,0 mmol) au fost combinate în DMSO (500 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost diluată cu apă (3mL) şi agitată timp de 20 min. S-a format un solid şi lichidul apos a fost decantat. Solidul a fost dizolvat în acetat de etil şi spălat cu o soluţie 1M de acid citric, apoi saramură. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(o-tolilsulfonil)-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (69 mg, 60%) ESI-MS m/z calc. 605,22833, găsit 606,5 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,33 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,63 (s, 1H), 8,22 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,59 (td, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H), 7,49 - 7,40 (m, 2H), 6,96 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,18 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,48 (s, 2H), 2,63 (s, 3H), 2,39 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,35 - 2,23 (m, 2H), 2,21 - 2,04 (m, 4H), 2,02 - 1,91 (m, 1H), 1,83 (dd, J = 11,9, 5,6 Hz, 1H), 1,53 (s, 6H), 1,35 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 0,69 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 57: Sinteza Compusului 59: N-(3-Fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 2-Cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (150 mg, 0,3992 mmol) şi carbonil diimidazolul (aproximativ 81,69 mg, 0,5038 mmol) au fost combinate în THF (1,339 mL) şi agitate timp de 2 ore. În acest punct, s-a adăugat 3-fluorobenzensulfonamidă (aproximativ 69,93 mg, 0,3992 mmol) urmată de DBU (aproximativ 202,6 mg, 199,0 µL, 1,331 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 2 ore suplimentare la temperatura camerei. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil şi spălată cu o soluţie 1M de acid citric, urmată de saramură. Organicele au fost separate, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate pentru a da 2-cloro-N-(3-fluorofenil) sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil]metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (210 mg, 99%) ESI-MS mlz calc. 532,0595, găsit 533,0 (M+1) +; Timp de retenţie: 0,77 minute.

Etapa B: N-(3-Fluoropbenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil] metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

2-Cloro-N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil] metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (100 mg, 0,19 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (90 mg, 0,6 mmol), şi carbonatul de potasiu (138 mg, 1,0 mmol) au fost combinate în DMSO (500 µL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost diluată cu apă (3mL) şi agitată timp de 20 min. S-a format un solid şi lichidul apos a fost decantat. Solidul a fost dizolvat în acetat de etil şi spălat cu o soluţie 1M de acid citric, apoi saramură. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(3-fluorofenil)sulfonil-6-[3-[[1-(trifluorometil)ciclobutil] metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-l-il]piridin-3-carboxamidă (73 mg, 63%) ESI-MS m/z calc. 609,2033, găsit 610,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,27 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,63 (s, 1H), 8,22 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,78 - 7,70 (m, 2H), 7,66 - 7,59 (m, 1H), 6,96 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,18 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,48 (s, 2H), 2,43 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 2,35 - 2,25 (m, 3H), 2,19 - 2,05 (m, 4H), 1,96 (td, J = 10,0, 5,3 Hz, 1H), 1,84 (dd, J = 11,8, 5,6 Hz, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 1,40 (t, J = 12,2 Hz, 1H), 0,69 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 58: Sinteza compusului 60: N-(Benzensulfonil)-6-[3-(spiro[2,2]pentan-2-ilmetoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: spiro[2,2]Pent-1-il-metanol

La o suspensie de hidrură de aluminiu litiu (888 mg, 23,4 mmol) în tetrahidrofuran (30 mL) s-a adăugat acidul spiro[2,2]pentan-1-carboxilic (1,75g, 15,6 mmol) în tetrahidrofuran (5 mL) în picătură peste 5 minute. Reacţia a fost încălzită la 50°C timp de 16 ore. Reacţia a fost diluată cu dietil eter (20 mL) şi stinsă cu decahidrat de sulfat de sodiu solid. Amestecul a fost diluat cu dietil eter (100 mL), filtrat printr-un strat de celite şi concentrat pentru a da spiro[2,2]pent-1-il-metanol (793 mg, 52%) ca un ulei. ESI-MS m/z calc. 98,15 găsit 98,8 (M+1)+ . Timp de retenţie: 2,54 minute. 1H RMN (250 MHz, CDCl3) ppm 0,58 - 0,89 (m, 4 H) 0,91 - 1,09 (m, 1 H) 1,20 - 1,37 (m, 1H) 1,43 (m, 1H) 3,60 (dd, J = 11,98, 6,37 Hz, 2 H).

Etapa B: Ester de terţ-butilic al acidului 3-(spiro[2,2]Pent-1-ilmetoxi)-pirazol-1-carboxilic

La o soluţie de spiro[2,2]pent-1-il-metanol brut (966 mg, 9,8 mmol) în tetrahidrofuran (40 mL) s-a adăugat trifenil fosfină (2,58 g, 9,8 mmol), ester terţ-butilic al acidului 3-hidroxi-pirazol-1-carboxilic (1,64 g, 8,9 mmol). Amestecul de reacţie a fost răcit într-o baie cu gheaţă urmat de adăugarea de azodicarboxilat de diizopropil (1,9 mL, 9,8 mmol). Baia cu gheaţă a fost îndepărtată şi reacţia a fost agitată timp de 2 ore. Solventul a fost îndepărtat în vid şi amestecul brut a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu utilizând 10-20% hexani-dietil eter pentru a da 3-esterul terţ-butilic al acidului (spiro[2,2]pent-1-ilmetoxi)-pirazol-1-carboxilic (1,20 g, 44%) ca ulei clar. ESI-MS m/z calc. 264,33 găsit 265,1 (M+1)+ . Timp de retenţie: 3,36 minute

Etapa C: 3-(spiro[2,2]Pent-1-ilmetoxi)-1H-pirazol

La esterul terţ-butilic al acidului 3-(spiro[2,2]pent-1-ilmetoxi)-pirazol-1-carboxilic (1,2 g, 4,54 mmol) s-a adăugat diclorometan (30 mL) şi acid trifluoroacetic (3,4 mL, 45 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat timp de 2 ore la temperatura camerei şi concentrat la sec în vid. Reziduul a fost azeotropat de două ori cu 1,2-dicloroetan (15 mL) pentru a da 3-(spiro[2,2]pent-1-ilmetoxi)-1H-pirazol brut (1,87 g, 51%) ca ulei galben. ESI-MS m/z calc. 164,09 găsit 164,6 (M+1)+ . Timp de retenţie: 2,11 minute

Etapa D: Ester metilic al acidului 2-cloro-6-[3-(spiro[2,2]pent-1-ilmetoxi)pirazol-1-il]-nicotinic

La 3-(spiro[2,2]pent-1-ilmetoxi)-1H-pirazolul brut (1,87 g, admis 4,54 mmol) s-a adăugat 2,6-dicloronicotinat de metil (935 mg, 4,54 mmol), 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (102 mg, 0,91 mmol), dimetilformamidă (8 mL) şi carbonat de potasiu (1,9 g, 13,6 mmol). Reacţia a fost agitată timp de 48 ore la temperatura camerei, diluată cu dietil eter (75 mL) şi spălată cu apă conţinând o cantitate mică de saramură (3 x 50 mL) şi saramură (50 mL). Acest strat organic a fost uscat pe sulfat de sodiu şi concentrat în vid. Amestecul de reacţie brut a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu utilizând 0-15% hexani:dietil eter pentru a da esterul metilic al acidului 2-cloro-6-[3-(spiro[2,2]pent-1-ilmetoxi)pirazol-1-il]-nicotinic (1,02 g, 67%) ca un solid alburiu. ESI-MS m/z calc. 333,09 găsit 333,9 (M+1)+ . Timp de retenţie: 3,85 minute.

Etapa E: Acid 2-cloro-6-[3-(spiro[2,2]pent-1-ilmetoxi)-pirazol-1-il]-nicotinic

La esterul metilic al acidului 2-cloro-6-[3-(spiro[2,2]pent-1-ilmetoxi) pirazol-1-il]-nicotinic (990 mg, 2,97 mmol) s-a adăugat apă (6 mL), metanol (6 mL) şi tetrahidrofuran (6 mL) urmate de hidroxid de litiu (285 mg, 11,88 mmol). Reacţia a fost agitată timp de 1 oră şi s-a adăugat acid clorhidric 1M (12 mL). Solidul alb format a fost separat prin filtrare, spălat cu apă şi hexani pentru a da acidul 2-cloro-6-[3-(spiro[2,2]pent-1-ilmetoxi)-pirazol-1-il]-nicotinic (927 mg, 98%) ca solid alb. ESI-MS m/z calc. 319,07 găsit 320,0 (M+1)+ . Timp de retenţie: 3,25 minute 1H RMN (250 MHz, CDC13) ppm: 0,76 - 0,88 (m, 5 H), 1,11-1,13 (m, 1 H), 1,60 - 1,75 (m, 1H), 4,22 (dd, J=7,0, 3,3, Hz, 2H) 6,00 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,76 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,38 (d, J=2,5 Hz, 1H), 8,43 (d, J=8,5 Hz, 1H).

Etapa F: N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(spiro[2,2]pentan-2-ilmetoxi)pirazol-1-il] piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-(spiro[2,2]pentan-2-ilmetoxi)pirazol-l-il]piridin-3-carboxilic (50 mg, 0,16 mmol) şi carbonil diimidazolul (38 mg, 0,23 mmol) au fost combinate în THF (1,5 mL) şi agitate timp de 2 ore. În acest punct, s-a adăugat benzensulfonamidă (25 mg, 0,16 mmol) urmată de DBU (70 µL, 0,47 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 2 ore suplimentare la temperatura camerei. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil şi spălată cu o soluţie 1M de acid citric, urmată de saramură. Organicele au fost separate, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(spiro[2,2]pentan-2-ilmetoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (72 mg, 98%) ESI-MS m/z calc. 458,08154, găsit 459,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,75 minute.

Etapa G: N-(benzensulfonil)-6-[3-(spiro[2,2]pentan-2-ilmetoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(spiro[2,2]pentan-2-ilmetoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (72 mg, 0,16 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (63 mg, 0,42 mmol), şi carbonatul de potasiu (97 mg, 0,7 mmol) au fost combinate în DMSO (1 mL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost diluată cu apă (3mL) şi agitată timp de 20 min. S-a format un solid şi lichidul apos a fost decantat. Solidul a fost dizolvat în acetat de etil şi spălat cu o soluţie 1M de acid citric, apoi saramură. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-(spiro[2,2]pentan-2-ilmetoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (38 mg, 45%) ESI-MS m/z calc. 535,22534, găsit 536,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,22 minute.

Exemplul sintetic 59: Sinteza Compusului 61: (5S)-7-(benzensulfonil)-3,3,5-trimetil-12-(3-{2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi}-1H-pirazol-1-il)-2,7,13-triazatriciclo[7,4,0,02,6]trideca-1(9),10,12-trien-8-onă

N-(Benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamida (52 mg, 0,08789 mmol), NaOAc (14 mg, 0,1707 mmol), apa (16 µL, 0,89 mmol), şi [Ir{dF(CF3)ppy}2(dtbpi)]PF6 (5 mg, 0,004 mmol) au fost combinate în DMA (dimetilacetamidă) (0,9 µL) şi amestecul de reacţie a fost plasat aproape de o sursă de lumină CFL de 23 W timp de 1,5 ore. Reacţia a fost injectată direct pe o coloană cu gel de siliciu fără nici o prelucrare. Amestecul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-100% acetat de etil în hexani pentru a da (5S)-7-(benzensulfonil)-3,3,5-trimetil-12-(3-{2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi}-1H-pirazol-1-il)-2,7,13-triazatriciclo[7,4,0,02,6]trideca-1(9),10,12-trien-8-onă (10 mg, 19%) ESI-MS m/z calc. 589,1971, găsit 590,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,51 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,81 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,73 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,66 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 6,97 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,07 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,02 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 4,36 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,04 (dt J = 12,2, 5,7 Hz, 1H), 2,17 (dd, J = 13,4, 7,3 Hz, 1H), 2,11 (m, 2H), 1,86 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 1,71 (s, 3H), 1,61 (s, 3H), 1,21 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,97 (m, 2H), 0,88 (m, 2H).

Exemplul sintetic 60: Sinteza Compusului 62: (5S)-3,3,5-trimetil-12-(3-{2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi}-1H-pirazol-1-il)-7-oxa-2,13-diazatriciclo [7,4,0,02,6]trideca-1(13),9,11-trien-8-onă

Etapa A: Acid 6-[3-[2-[1-(Trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxilic

La un amestec de acid 2-cloro-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (1 g, 2,661 mmol) şi (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (Sare clorhidrat) (620 mg, 4,143 mmol) în N-metilpirolidinonă (5 mL) şi 1,2-dietoxietan (1 mL) s-a adăugat carbonat de potasiu (1,8 g, 13,02 mmol). Suspensia a fost încălzită la 125°C timp de 68 ore. LC/MS a prezentat o conversie de 40%. S-a adăugat mai multă (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (400 mg) şi reacţia a continuat timp de 18 ore la 135°C. Suspensia de reacţie a fost răcită la temperatura ambiantă şi adăugată încet la o soluţie agitată rapid de HCl (2 mL de 6 M, 12,00 mmol) în gheaţă (spume!) rezultând o suspensie maro. Suspensia a fost extrasă cu acetat de etil. Organicele au fost spălate cu apă, saramură, uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate. Materialul brut a fost cromatografiat pe siliciu utilizând un gradient de hexan/acetat de etil. Produsul a eliminat ~30% acetat de etil. Acid 6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxilic (667,8 mg, 55%). ESI-MS m/z calc. 452,20352, găsit 453,0 (M+1)+; Timp de retenţie: 1,87 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,68 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,92 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,86 (dd, J = 32,9, 7,9 Hz, 1H), 6,29 - 6,01 (m, 1H), 4,31 (s, 2H), 3,54 (s, 1H), 2,89 (s, 1H), 2,33 (s, 1H), 2,08 (s, 2H), 1,95 (s, 1H), 1,74 - 1,46 (m, 7H), 1,12 - 1,01 (m, 3H), 0,92 (d, J = 29,3 Hz, 4H).

Etapa B: (5S)-3,3,5-Trimetil-12-(3-{2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi}-1H-pirazol-1-il)-7-oxa-2,13-diazatriciclo[7,4,0,02,6]trideca-1(13),9,11-trien-8-onă

Acidul 6-[3-[2-[1-(Trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxilic (50 mg, 0,1105 mmol), apa (20 µL, 1,110 mmol), NaOAc (18 mg, 0,22 mmol), şi [Ir{dF(CF3)ppi}2(dtbpi)]PF6 (4 mg, 0,003565 mmol) au fost dizolvate în DMA (0,9 mL) şi amestecul de reacţie a fost plasat aproape de o sursă de lumină CFL de 23 W timp de 1,5 ore. Reacţia a fost injectată direct pe o coloană cu gel de siliciu fără nici o prelucrare. Amestecul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-100% acetat de etil în hexani pentru a da (5S)-3,3,5-trimetil-12-(3-{2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi}-1H-pirazol-1-il)-7-oxa-2,13-diazatriciclo[7,4,0,02,6]trideca-1(13),9,11-trien-8-onă (30,8 mg, 62%). ESI-MS m/z calc. 450,18787, găsit 451,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,35 minute.

Exemplul sintetic 61: Sinteza Compusului 63: N-(Benzensulfonil)-6- [3- [(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-[(3-fluoro-1-biciclo [1,1,1] pentanil)metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

O soluţie de (3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metanol (0,27 g, 2,3 mmol), 3-hidroxipirazole-1-carboxilat de terţ-butil (0,46 g, 2,5 mmol), şi trifenil fosfină (0,67 g, 2,6 mmol) în THF (12 mL) a fost răcită într-o baie cu gheaţă, şi s-a adăugat încet N-izopropoxicarboniliminocarbamatul de izopropil (0,50 mL, 2,6 mmol). Reacţia a fost lăsată să se încălzească încet la temperatura camerei şi a fost agitată timp de trei zile. Ea a fost diluată cu acetat de etil, spălată cu bicarbonat de sodiu apos saturat, uscată pe sulfat de sodiu, şi evaporat sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu cu 0-40% acetat de etil în hexani pentru a da 3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (0,43 g, 66%). ESI-MS m/z calc. 282,13797, găsit 283,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,65 minute.

Etapa B: 3-[(3-Fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]-1H-pirazol

O soluţie de 3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (0,43 g, 1,523 mmol) şi acid trifluoroacetic (587 µL, 7,62 mmol) în diclorometan (4 mL) a fost agitată timp de 5 ore. Volatilele au fost îndepărtate sub vid, şi reziduul a fost alcalinizat cu bicarbonat de sodiu apos saturat şi extras cu acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate pentru a da 3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]-1H-pirazol (0,28 g, 100%) ESI-MS m/z calc. 182,08554, găsit 183,1 (M+1)+ ; Timp de retenţie: 0,39 minute.

Etapa C: 2-cloro-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxilat de terţ-butil

Un amestec de 3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]-1H-pirazol (0,28 g, 1,5 mmol), 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de terţ-butil (0,38 g, 1,5 mmol), carbonat de potasiu (0,26 g, 1,9 mmol), şi 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (34 mg, 0,30 mmol) în DMSO (7,5 mL) a fost agitat la temperatura camerei timp de 16 ore. Reacţia a fost diluată cu apă şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură şi apă, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu cu 0-5% metanol în diclorometan pentru a da 2-cloro-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (0,50 g, 85%) ESI-MS m/z calc. 393,12555, găsit 394,2 (M+1)+ ; Timp de retenţie: 0,86 minute.

Etapa D: Acid 2-cloro-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

O soluţie de 2-cloro-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilat de terţ-butil (0,50 g, 1,270 mmol) şi acid trifluoroacetic (978 µL, 12,7 mmol) în diclorometan (6 mL) a fost agitată timp de 15 ore. Solventul a fost evaporat, şi reziduul a fost preluat în acetonitril. Solventul a fost evaporat pentru a da acidul 2-cloro-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (0,43 g, 100%) ESI-MS m/z calc. 337,06296, găsit 338,1 (M+1)+ ; Timp de retenţie: 0,63 minute 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,43 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,39 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,00 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,51 (s, 2H), 2,13 (d, J = 2,6 Hz, 6H).

Etapa E: N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil) metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-il]piridină -3-carboxilic (100 mg, 0,3 mmol) şi carbonil diimidazolul (58 mg, 0,36 mmol) au fost combinate în THF (1,5 mL) şi agitate timp de 2 ore. În acest punct, s-a adăugat benzensulfonamidă (61 mg, 0,39 mmol) urmată de DBU (54 µL, 0,36 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 16 ore suplimentare la temperatura camerei. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil şi spălată cu o soluţie 1M de acid citric, urmată de saramură. Organicele au fost separate, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi]pirazol-1-il] piridin-3-carboxamidă (190 mg, 135%) ESI-MS m/z calc. 476,07214, găsit 477,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,69 minute.

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil)metoxi] pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1]pentanil) metoxi] pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (140 mg, 0,29 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (131 mg, 0,88 mmol), şi carbonatul de potasiu (243 mg, 1,76 mmol) au fost combinate în DMSO (1,5 mL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost filtrat şi purificat prin LC/MS utilizȃnd un gradient de 30-99% acetonitril în 5 mM HCl apos pentru a da N-(benzensulfonil)-6-[3-[(3-fluoro-1-biciclo[1,1,1] pentanil)metoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (89 mg, 54%) ESI-MS m/z calc. 553,2159, găsit 554,4 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,16 minute,1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,05 - 7,95 (m, 2H), 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,77 - 7,70 (m, 1H), 7,70 - 7,61 (m, 2H), 6,91 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,47 (s, 2H), 2,45 - 2,36 (m, 1H), 2,31 - 2,22 (m, 1H), 2,15 - 2,08 (m, 7H), 1,82 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 9,2 Hz, 6H), 1,36 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 0,64 (d, J = 6,2 Hz, 3H).

Exemplul sintetic 62: Sinteza Compusului 64: N-(Benzensulfonil)-6-[3-(dispiro [2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-il metoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

O soluţie de dispiro[2,0,2,1]heptan-7-il metanol (1,36 g, 11,0 mmol) (Meijere, şi colab., Eur. J. Org. Chem. 2002, 485-492), 3-hidroxipirazole-1-carboxilat de terţ-butil (2,3 g, 12 mmol), şi trifenil fosfină (3,2 g, 12 mmol) în THF (28 mL) a fost răcită într-o baie cu gheaţă, şi s-a adăugat încet azodicarboxilat de diizopropil (DIAD) (2,4 mL, 12 mmol). Baia de răcire a fost îndepărtată, şi reacţia a fost agitată timp de 15 ore. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil, spălată cu bicarbonat de sodiu apos saturat, uscată pe sulfat de sodiu, şi evaporată sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-20% acetat de etil în hexani pentru a da 3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-il metoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,57 g, randament 49%) ca ulei incolor. ESI-MS m/z calc. 290,16306, găsit 291,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,76 minute.

Etapa B: 3-(Dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)-1H-pirazol

O soluţie de 3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-il metoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,57 g, 5,41 mmol) şi acid trifluoroacetic (2,2 mL, 29 mmol) în diclorometan (20 mL) a fost agitată timp de trei ore. Volatilele au fost îndepărtate sub vid, şi reziduul a fost alcalinizat cu bicarbonat de sodiu apos saturat şi extras cu acetat de etil. Extractele combinate au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate pentru a da 3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)-1H-pirazol (0,94 g, randament 91%) ca ulei galben pal. ESI-MS m/z calc. 190,11061, găsit 191,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,52 minute.

Etapa C: 2-Cloro-6-(3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinat de etil

Un amestec de 3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)-1H-pirazol (0,94 g, 4,9 mmol), 2,6-dicloropiridin-3-carboxilat de etil (1,15 g, 5,23 mmol), carbonat de potasiu (0,83 g, 6,0 mmol), şi 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (0,12 g, 1,1 mmol) în DMSO (16 mL) a fost agitat timp de 24 ore. Reacţia a fost diluată cu apă şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură şi apă, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de siliciu eluând cu 0-20% acetat de etil în hexani pentru a da 2-cloro-6-(3-(dispiro [2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinat de etil (1,39 g, randament 75%) ca solid incolor. ESI-MS m/z calc. 373,11932, găsit 374,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,87 minute. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,36 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,96 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,41 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,30 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 1,94 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 1,42 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,02-0,89 (m, 4H), 0,75-0,65 (m, 2H), 0,65-0,53 (m, 2H)

Etapa D: Acid 2-cloro-6-[3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic

O soluţie de 2-cloro-6-(3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinat de etil (1,39 g, 3,72 mmol) şi hidroxid de sodiu (7,5 mL de soluţie 1 M, 7,5 mmol) în THF (6 mL) şi etanol (3 mL) a fost agitată timp de 90 de minute. Volatilele au fost îndepărtate sub vid, şi s-a adăugat apă. Reacţia a fost răcită într-o baie cu gheaţă, şi s-a adăugat încet acid clorhidric (7,5 mL de soluţie 1 M, 7,5 mmol). Reacţia a fost diluată cu apă şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate pentru a da acidul 2-cloro-6-[3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (1,16 g, randament 82%) ca solid incolor. ESI-MS m/z calc. 345,088, găsit 346,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,73 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,41 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,27 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 1,93 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 0,97 - 0,79 (m, 4H), 0,76 - 0,66 (m, 2H), 0,65 - 0,56 (m, 2H)

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi) pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă

O soluţie de acid 2-cloro-6-[3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-l-il]piridin-3-carboxilic (0,10 g, 0,29 mmol) şi carbonil diimidazol (0,06 g, 0,4 mmol) în THF (1,4 mL) a fost agitată timp de 45 minute, şi s-au adăugat benzensulfonamidă (55 mg, 0,35 mmol) şi l,8-diazabiciclo(5,4,0)undec-7-enă (DBU) (130 µL, 0,87 mmol). După 15 ore reacţia a fost diluată cu acid citric apos 1 M şi extrasă cu acetat de etil. Extractele combinate au fost spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida brută (0,16 g) care a fost utilizată în etapa următoare aşa cum este. ESI-MS m/z calc. 484,0972, găsit 485,2 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,81 minute.

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-6-[3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

Un amestec de N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamidă (0,14 g, 0,29 mmol), clorhidrat de (4S)-2,2,4-trimetilpirolidină (0,14 g, 0,94 mmol), şi carbonat de potasiu (0,24 g, 1,7 mmol) în NMP (1,3 mL) a fost agitat la 130°C timp de 15 ore. Reacţia a fost filtrată şi purificată utilizând o metodă HPLC-MS cu fază inversă utilizând o rulare cu gradient dual de la 30-99% acetonitril în 5 mM HCl apos. S-a obţinut N-(benzensulfonil)-6-[3-(dispiro[2,0,2,1]heptan-7-ilmetoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (65 mg, randament 40%). ESI-MS m/z calc. 561,24097, găsit 562,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 2,35 minute.

Exemplul sintetic 63: Sinteza Compusului 65: N-(benzensulfonil)-6-(3-hidroxipirazol-1-il)-2- [(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il] piridin-3-carboxamidă

Etapa A: 3-((1-etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil

La o soluţie de (1-etilciclopropil)metanol (1,68 g, 16,73 mmol), 2,3-dihidro-3-oxopirazole-l-carboxilat de terţ-butil (2,80 g, 15,21 mmol) şi trifenilfosfină (4,39 g, 16,73 mmol) în tetrahidrofuran (40 mL) la 0°C s-a adăugat azodicarboxilat de diizopropil (3,38 g, 16,73 mmol) în picătură. Reacţia a fost încălzită la temperatura camerei, apoi a fost încălzită la 50°C timp de 21 ore. Soluţia de reacţie a fost răcită la temperatura camerei şi s-a adăugat acetat de etil (500 mL). Stratul organic a fost spălat cu 0,3M soluţie apoasă de hidroxid de sodiu (100 mL), saramură (2 x 50 mL) şi uscat pe sulfat de magneziu, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu utilizând o metodă cu gradient de 0 până la 80% hexani/diclorometan pentru a da 3-((1-etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,73 g, 43%) ca ulei galben. ESI-MS m/z calc. 266,2, găsit 267,3 (M+1)+. Timp de retenţie: 3,47 minute. 1HNMR (250MHz, CDCh) δ (ppm): 7,82 (d, J= 2,5Hz, 1H), 5,88 (d, J = 2,5Hz, 1H), 4,09 (s, 2H), 1,60 (s, 9H), 1,48 (q, J = 7,5Hz, 2H), 0,94 (t, J = 7,5Hz, 3H), 0,49 (m, 2H), 0,42 (m, 2H).

Etapa B: 3-((1-Etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol

O soluţie de 4M acid clorhidric în 1,4-dioxan (65 mL) a fost adăugată la 3-((1-etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-carboxilat de terţ-butil (1,73 g, 6,49 mmol) şi soluţia de reacţie a fost agitată la temperatura camerei timp de 16 ore şi concentrată la sec pentru a obţine 3-((1-etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol brut ca un ulei care a fost utilizat direct în etapa următoare. ESI-MS m/z calc. 166,1, găsit 167,3 (M+1)+. Timp de retenţie: 0,60 minute.

Etapa C: 2-Cloro-6-(3-((1-etilciclopropil)methoay)-1H-pirazol-1-il)nicotinat de metil

3-((1-Etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol (6,49 mmol) şi 2,6-dicloronicotinatul de metil (1,81 g, 8 mmol) au fost adăugate în dimetilformamidă (20 mL). Carbonatul de potasiu (2,8 g, 20 mmol) şi 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octan (0,167 g, 1,5 mmol) au fost adăugate în amestecul de reacţie care a fost lăsat să se agite la temperatura camerei timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu apă (60 mL) şi extras cu dietil eter (3 x 60 mL). Stratul organic combinat a fost uscat pe sulfat de sodiu şi evaporat sub presiune redusă. Reziduul a fost supus la cromatografie rapidă pe gel de siliciu utilizând o metodă cu gradient de 0 până la 100% hexani/diclorometan pentru a da 2-cloro-6-(3-((1-etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinat de metil (1,7 g, 77%) ca solid alb. ESI-MS m/z calc. 335,10, găsit 336,5 (M+1)+. Timp de retenţie: 4,29 minute. 1H RMN (250 MHz, DMSO) δ (ppm): 8,43 (d, J = 2,8Hz, 1H), 8,41 (d, J = 8,4Hz, 1 H), 7,74 (d, J = 8,4Hz, 1 H), 6,23 (d, J = 2,8Hz, 1 H), 4,08 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 1,44 (q, J= 7,4Hz, 2H), 0,93 (t, J = 7,4Hz, 3H), 0,53 (m, 2H), 0,42 (m, 2H).

Etapa D: Acid 2-cloro-6-(3-((1-etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinic

2-Cloro-6-(3-((1-etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)nicotinat de metil (1,7 g, 50 mmol) a fost adăugat într-un balon răcit cu gheaţă, cu fund rotund cu tetrahidrofuran (5 mL) şi metanol (5 mL). S-a adăugat încet hidroxid de sodiu (0,4 g, 10 mmol) în apă (5 mL) şi soluţia de reacţie a fost agitată la temperatura camerei timp de 5 ore. Amestecul de reacţie rezultat a fost concentrat sub presiune redusă pentru a îndepărta tetrahidrofuranul şi a fost acidulat cu soluţie apoasă IN de acid clorhidric la pH = 1 în baie de gheaţă. Solidul alb format a fost separat prin filtrare pentru a da acidul 2-cloro-6-(3-((1-etilciclopropil)metoxi)-1H-pirazol-1-il)-nicotinic (1,54 g, 95,0%). ESI-MS m/z calc. 321,09, găsit 322,2 (M+1)+. Timp de retenţie: 3,59 minute. 1H RMN (250 MHz, DMSO) δ (ppm): 8,43 (d, J= 2,8Hz, 1H), 8,42 (d, J= 8,4Hz, 1 H), 7,72 (d, J= 8,4Hz, 1 H), 6,24 (d, J= 2,8Hz, 1 H), 4,09 (s, 2H), 1,45 (q, J = 7,4Hz, 2H), 0,92 (t, J = 7,4Hz, 3H), 0,54 (m, 2H), 0,44 (m, 2H).

Etapa E: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(1-etilciclopropil)metoxi]pirazol-l-il] piridin-3-carboxamidă

Acidul 2-cloro-6-[3-[(1-etilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxilic (157 mg, 0,4879 mmol) şi carbonil diimidazolul (100 mg, 0,6167 mmol) au fost combinate în THF (2 mL) şi agitate timp de 2 ore. În acest punct, s-a adăugat benzensulfonamidă (77 mg, 0,4899 mmol) urmată de DBU (243 µL, 1,625 mmol) şi reacţia a fost agitată 30 minute suplimentare la temperatura camerei. Reacţia a fost diluată cu acetat de etil şi spălată cu o soluţie 1M de acid citric, urmată de saramură. Organicele au fost separate, uscate pe sulfat de sodiu, şi evaporate pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(1-etilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida brută (224 mg, 100%) ESI-MS m/z calc. 460,0972, găsit 461,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,75 minute.

Etapa F: N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-(3-hidroxipirazol-1-il)piridin-3-carboxamidă

N-(Benzensulfonil)-2-cloro-6-[3-[(1-etilciclopropil)metoxi]pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (224 mg, 100%) a fost dizolvată în diclorometan (2 mL) cu TFA (1 mL, 12,98 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 4 ore. Reacţia a fost evaporată la sec pentru a da N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-(3-hidroxipirazol-1-il)piridin-3-carboxamidă (136 mg, 74%) ESI-MS m/z calc. 378,01895, găsit 379,1 (M+1)+; Timp de retenţie: 0,54 minute.

Etapa G: N-(benzensulfonil)-6-(3-hidroxipirazol-il)-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă

N-(benzensulfonil)-2-cloro-6-(3-hidroxipirazol-1-il)piridin-3-carboxamida (100 mg, 0,26 mmol), (4S)-2,2,4-trimetilpirolidina (sare clorhidrat) (110 mg, 0,76 mmol), şi carbonatul de potasiu (180 mg, 1,3 mmol) au fost combinate în DMSO (0,5 mL) şi încălzite la 130°C timp de 16 ore. Reacţia a fost diluată cu apă (3mL) şi agitată timp de 20 min. S-a format un solid şi lichidul apos a fost decantat. Solidul a fost dizolvat în acetat de etil şi spălat cu o soluţie 1M de acid citric, apoi saramură. Organicele au fost uscate pe sulfat de sodiu şi evaporate. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de siliciu eluând cu 0-10% metanol în diclorometan pentru a da N-(benzensulfonil)-6-(3-hidroxipirazol-l-il)-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (4,6 mg, 4%) ESI-MS m/z calc. 455,16272, găsit 456,3 (M+1)+: Timp de retenţie: 1,50 minute.

Exemplul 5: TESTE & DATE

5A. Teste pentru detectarea şi măsurarea proprietăţilor modulatorilor F508del-CFTR ai compuşilor

Metode optice de potenţial membranar pentru evaluarea proprietăţilor modulatorilor F508del-CFTR

Testul utilizează coloranţi sensibili la tensiunea fluorescentă pentru a măsura modificările în potenţialul membranar utilizând un cititor de placă fluorescent (de exemplu, FLIPR III, Molecular Devices, Inc.) ca citire pentru creşterea funcţionalităţii F508del în celulele 3T3 NIH. Forţa de agrenare pentru răspuns este crearea unui gradient de ioni clorură în conjuncţie cu activarea canalului şi concurent cu tratamentul compusului cu o singură etapă de adăugare de lichid după ce celulele au fost încărcate anterior cu un colorant sensibil la tensiune.

5A-A1. Identificarea modulatorilor F508del-CFTR

Pentru a identifica modulatorii lui F508del, a fost dezvoltat un format de test HTS pe bază de fluorescenţă. Acest test HTS utilizează coloranţi sensibili la tensiunea fluorescentă pentru a măsura modificările în potenţialul membranar pe FLIPR III ca măsură pentru creşterea în intrarea (conductanţa) celulelor 3T3 NIH F508del. Forţa de angrenare pentru răspuns este crearea unui gradient de ioni clorură în conjuncţie cu activarea canalului şi concurent cu tratamentul compusului cu o singură etapă de adăugare a lichidului după ce celulele au fost încărcate anterior cu un colorant sensibil la tensiune. Datele pentru Compuşii 1-65 care au fost obţinute utilizând testul descris aici sunt rezumate în Tabelul 6 de mai jos. De exemplu, utilizând această metodă, Compusul 1 a avut o EC50 mai mică de 3 µM şi o eficacitate % de ≥ 100% faţă de Compusul II.

Soluţii

Soluţia de baie #1: (în mM)NaCl 160, KC14,5, CaCl2 2, MgCl2 1, HEPES 10, pH 7,4 cu NaOH, Glucoză 10.

Soluţia de baie fără clorură: sărurile de clorură din soluţia de baie #1 (mai sus) sunt substituite cu săruri gluconat.

Cultură celulară

Fibroblastele de şoarece NIH3T3 care exprimă stabil F508del sunt utilizate pentru măsurătorile optice ale potenţialului membranar. Celulele sunt menţinute la 37°C în 5% CO2 şi 90% umiditate în mediu Eagle modificat Dulbecco suplimentat cu 2 mM glutamină, 10 % ser fetal bovin, 1 X NEAA, β-ME, 1 X pen/strep, şi 25 mM HEPES în flacoane de cultură de 175 cm2. Pentru toate testele optice, celulele au fost însămânţate la 12.000 celule/godeu în plăci cu 384 de godeuri acoperite cu matrigel şi cultivate timp de 18-24 ore la 37°C pentru testul potenţiator. Pentru testele de corecţie, celulele sunt cultivate la 37°C cu şi fără compuşi timp de 18 - 24 ore.

Teste electrofiziologice pentru evaluarea proprietăţilor de modulare F508del ale compuşilor.

Camera de test Ussing

Experimentele cu camera Ussing au fost efectuate pe celulele epiteliale polarizate ale căilor aeriene care exprimă F508del pentru a caracteriza suplimentar modulatorii F508del identificaţi în testele optice. Epiteliul căilor aeriene non-CF şi CF a fost izolat din ţesutul bronhial, cultivat cum s-a descris anterior (Galietta, L.J.V., Lantero, S., Gazzolo, A., Sacco, 0., Romano, L., Rossi, G.A., & Zegarra-Moran, O. (1998) in vitro Celulă. Dev. Biol. 34, 478-481), şi placat pe filtre Costar® Snapwell™ care au fost preacoperite cu mediu condiţionat NIH3T3. După patru zile mediul apical a fost îndepărtat şi celulele au fost crescute la o interfaţă aer lichid timp de >14 zile înainte de utilizare. Acest lucru a condus la un monostrat de celule columnare complet diferenţiate care au fost ciliate, trăsături care sunt caracteristice epiteliului căilor aeriene. HBE non-CF au fost izolate de la nefumători care nu au avut nici o boală pulmonară cunoscută. CF-HBE au fost izolate de la pacienţi homozigoţi pentru F508del sau heterozigoţi pentru compus pentru F508del cu o boală diferită care determină mutaţii pe alte alele.

HBE crescute pe inserturile de cultură celulară Costar® Snapwell™ au fost montate într-o cameră Ussing (Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA), şi rezistenţa transepitelială şi curentul de scurt-circuit în prezenţa unui gradient Cl- bazolateral la apical (ISC) au fost măsurate utilizând un sistem de tensiune cu clamă (Departmentul de Bioinginerie, Universitatea din Iowa, IA). Pe scurt, HBE au fost examinate în condiţii de înregistrare cu clamă de tensiune (Vhold = 0 mV) la 37°C. Conţinutul de soluţie bazolaterală (în mM) 145 NaCl, 0,83 K2HPO4, 3,3 KH2PO4, 1,2 MgCl2, 1,2 CaCl2, 10 Glucoză, 10 HEPES (pH ajustat până la 7,35 cu NaOH) şi conţinutul de soluţie apicală (în mM) 145 NaGluconat, 1,2 MgCl2, 1,2 CaCl2, 10 glucoză, 10 HEPES (pH ajustat până la 7,35 cu NaOH).

5A-A2. Identificarea modulatorilor F508del-CFTR

Protocolul tipic a utilizat un gradient de concentraţie Cl- a membraneu bazolaterale la apicală. Pentru a seta acest gradient, s-a utilizat ringer normal pe membrana bazolaterală, în timp ce NaCl apical a fost înlocuit cu gluconat de sodiu echimolar (titrat la pH 7,4 cu NaOH) pentru a da un gradient de concentraţie Cl- mare prin epiteliu. Modulatori au fost adăugaţi fie la partea bazolaterală 18 - 24 înainte de test sau fie la partea apicală în timpul testul. S-a adăugat forskolină (10 µM) la partea apicală în timpul testul pentru a stimula transportul Cl- mediat de CFTR.

Înregistrări cu plasture-clamă

Curentul total cr în celulele F508del-NIH3T3 a fost monitorizat utilizând configuraţia de înregistrare cu plasture-perforat cum s-a descris anterior (Rae, J., Cooper, K., Gates, P., & Watsky, M. (1991) J. Neurosci. Methods 37, 15-26). Înregistrările cu clamă de tensiune au fost efectuată la 22°C utilizând un amplificator cu plasture-clamă Axopatch 200B (Axon Instruments Inc., Foster City, CA). Soluţia pipetei a conţinut (în mM) 150 N-metil-D-glucamină (NMDG)-Cl, 2 MgCl2, 2 CaCl2, 10 EGTA, 10 HEPES, şi 240 µg/ mL amfotericină-B (pH ajustat până la 7,35 cu HCl). Conţinutul mediului extracelular (în mM) 150 NMDG-C1, 2 MgCl2, 2 CaCl2, 10 HEPES (pH ajustată până la 7,35 cu HC1). Generarea de impuls, achiziţia de date, şi analiza au fost efectuate utilizând un PC echipat cu o interfaţă A/D Digidata 1320 în conjuncţie cu Clampex 8 (Axon Instruments Inc.). Pentru a activa F508del, s-au adăugat 10 µM forskolină şi 20 µM genisteină în baie şi relaţia curent-tensiune a fost monitorizată la fiecare 30 sec.

5A-A3. Identificarea modulatorilor F508del-CFTR

Abilitatea modulatorilor F508del-CFTR de a creşte curentul Cl- F508del macroscopic (IF508del) în celulele NIH3T3 care exprimă stabil F508del a fost de asemenea investigată utilizând tehnici de înregistrare cu plasture perforat. Modulatorii identificaţi din testele optice au prezentat o creştere dependentă de doză în IΔF508 cu potenţă şi eficacitate similare cu cele observat în testele optice.

Cultură celulară

Fibroblastele de şoarece NIH3T3 care exprimă stabil F508del sunt utilizate pentru înregistrările întregii celule. Celulele sunt menţinute la 37°C în 5% CO2 şi 90% umiditate în Mediu Eagle modificat Dulbecco suplimentat cu 2 mM glutamină, 10% ser fetal bovin, 1 X NEAA, β-ME, 1 X pen/strep, şi 25 mM HEPES în flacoane de cultură de 175 cm2. Pentru înregistrările întregii celule, 2.500 - 5.000 de celule au fost însămânţate pe lamele de sticlă acoperite cu poli-L-lizină şi cultivate timp de 18 - 24 ore în prezenţa sau absenţa modulatorilor la 37°C.

Înregistrări cu un singur canal

Activitatea de intrare a F508del-CFTR exprimată în celulele NIH3T3 după tratamentul cu modulator a fost observată utilizând înregistrări excizate interior-exterior cu plasture membranar cum s-a descris anterior (Dalemans, W., Barbry, P., Champigny, G., Jallat, S., Dott, K., Dreyer, D., Cristal, R.G., Pavirani, A., Lecocq, J-P., Lazdunski, M. (1991) Nature 354, 526 - 528) utilizând un amplificator plasture-clamă Axopatch 200B (Axon Instruments Inc.). Conţinutul pipetei (în mM): 150 NMDG, 150 acid aspartic, 5 CaCl2, 2 MgCl2, şi 10 HEPES (pH ajustat până la 7,35 cu bază Tris). Conţinutul băii (în mM): 150 NMDG-Cl, 2 MgCl2, 5 EGTA, 10 TES, şi 14 bază Tris (pH ajustat până la 7,35 cu HCl). După excizie, ambele g- şi F508del au fost activate prin adăugarea a 1 mM Mg-ATP, 75 nM a subunităţii catalitice a protein kinazei dependentă de AMPc (PKA; Promega Corp. Madison, WI), şi 10 mM NaF pentru a inhiba fosfataza proteinei, care a prevenit dărȃmarea curentă. Potenţialul pipetei a fost menţinut la 80 mV. Activitatea canalului a fost analizată din plasturii membranari conţinând ≤ 2 canale active. Numărul maxim de deschideri simultane a determinat numărul de canale active în decursul unui experiment. Pentru a determina amplitudinea curentului unui singur canal, datele înregistrate la 120 sec de activitate F508del au fost filtrate „off-line« la 100 Hz şi apoi utilizate pentru a construi histogramele de amplitudine în toate punctele care au fost justate cu funcţii multigauss-iene utilizând software-ul de analiză Bio-Patch (Bio-Logic Comp. Franţa). Curentul microscopic total şi probabilitatea de deschidere (P0) au fost determinate la 120 sec de activităte a canalului. P0 a fost determinat utilizând software-ul Bio-Patch sau din relaţia P0 = I/i(N), unde I = curentul mediu, i = amplitudinea curentului singurului canal, şi N = număr de canale active din plasture.

Cultură celulară

Fibroblastele de şoarece NIH3T3 care exprimă stabil F508del sunt utilizate pentru înregistrările plasture-clamă cu membrană excizată. Celulele sunt menţinute la 37°C în 5% CO2 şi 90% umiditate în Mediu Eagle modificat Dulbecco suplimentat cu 2 mM glutamină, 10% ser fetal bovin, 1 X NEAA, β-ME, 1 X pen/strep, şi 25 mM HEPES în flacoane de cultură de 175 cm2. Pentru înregistrările cu un singur canal, 2.500 - 5.000 celule au fost însămânţate pe lamele de sticlă acoperite cu poli-L-lizină şi cultivate timp de 18 - 24 ore în prezenţa sau absenţa modulatorilor la 37°C.

5B. Test de determinare cromatografică a albuminei din ser uman (HSA)

Determinarea cromatografică a valorilor albuminei din ser uman (HSA) a fost efectuată pe un sistem UPLC-MS utilizând o coloana ChiralPak® HSA (p/n: 58469AST) de la Sigma Aldrich. Faza mobilă A a constat din 50 mM tampon de acetat de amoniu în apă ajustată la pH=7,4, şi faza mobilă B a fost 2-propanol. Compartimentul coloanei a fost ţinut la temperatura constantă de 30°C. Determinarea timpului de retenţie pe coloana HSA a fost efectuată prin injectarea a 3 mL de 0,5 mM de compus (în DMSO) utilizând un gradient liniar de la 0% - 30% B în 2,5 minute, urmată de o menţinere la 30 %B timp de 2 minute, şi etapa finală de echilibrare de la 30% - 0% B în 1,5 minute, pentru un timp total de rulare de 6 minute. Debitul a fost ţinut constant prin gradient şi setat la 1,8 mL/min. Timpul de retenţie al compusului pe coloană HSA a fost convertit la valori %HSA în conformitate cu un protocol publicat anterior (Valko, şi colab., 2003) corelȃnd timpii de retenţie ai coloanei cu valorile standard de legare ale proteinei în plasmă (PPB) obţinute din experimentele de dializă. Datele HSA pentru anumiţi compuşi sunt rezumate mai jos în Tabelul 8 de mai jos.

Valko, K., Nunhuck, S., Bevan, C., Abraham, M. H., Reynolds, D. P. Fast Gradient HPLC Methods to Determine Compounds Binding to Human Serum Albumin. Relationships with Octanol/Water and Immobilized Artificial Membrane Lipophilicity. J. of Pharm. Sci. 2003, 92, 2236-2248.

5C. Protocol experimental pentru studiile IV şi PO PK pe şobolan

Compusul testat a fost administrat şobolanilor Sprague-Dawley masculi ca o singură doză intravenoasă nominală de 3,0 mg/kg ca o soluţie în 10% NMP, 10% solutol, 15% EtOH, 35% PEG400 şi 30% D5W. Compusul testat a fost de asemenea administrat şobolanilor Sprague-Dawley masculi la o singură doză orală nominală de 3 mg/kg ca soluţie în 5% NMP, 30% PEG400, 10% TPGS, 5% PVP-K30 la un volum al dozei de 5 mL/kg. Analizele plasmei şi preparările dozei au fost efectuate utilizând LC/MS/MS.

Profilele concentraţie-timp ale plasmei compusului testat la şobolanii Sprague-Dawley la momentele de timp de eşantionare programate (nominale) au fost analizate prin metode farmacocinetice noncompartimentale utilizând funcţia PK din software-ul Watson LIMS, versiunea 7.4.2 (Thermo Scientific Inc, Waltham, MA). Valorile AUC au fost calculate utilizând regula trapezoidală liniară.

5D. Protocol experimental pentru testul PXR

Înclinaţia pentru inducerea de CYP3A4 mediată de PXR este evaluată utilizând linia celulară DPX-2 in vitro. Această linie celulară, care a fost licenţiată de la Puracyp Inc. a fost derivată din celule HepG2 şi au fost stabil transfectată cu gene care codifică PXR uman precum şi un reporter luciferază modificat legat la regiunea promotoare CYP3A4 şi înrudit cu amelioratorii distal şi proximal.

Testul este efectuat în format cu 384 de godeuri şi fiecare articol de test este administrat în 11 doze care variază de la 0,1 până la 60 µM. În ziua 1, celulele DPX-2 care au fost anterior expandate in-house şi crioconservate sunt dezgheţate şi însămânţate în plăci de cultură de ţesut. În ziua următoare, mediul este modificat şi celulele sunt cultivate în mediu conţinând articol de test, control cu vehicul sau compus cu control pozitiv, inductorul CYP3A4 validat clinic, rifampicină. Celulele sunt cultivate în prezenţa articolului de test timp de 48 ore şi apoi viabilitatea celulară este evaluată utilizând testul pe bază de fluorescenţă (Cell Titer-Fluor, Promega) cu un cititor de placă EnVision (PerkinElmer). Ulterior, transactivarea CYP3A4, care este proporţională cu activitatea luciferazei, este măsurată prin citirea luminiscenţei utilizând sistemul reactiv Promega One-Glo utilizând acelaşi cititor de placă.

Procesarea datelor în pachetul software Genedata permite raportarea inducerii plierii maxime în comparaţie cu controlul cu vehicul, o valoare EC50 pentru inductorii CYP3A4 şi o curbă de răspuna la doză în 11 puncte. Godeurile cu viabilitatea celulară mai mică de 70% nu sunt utilizate pentru analiză şi plăcile unde răspunsul de control pozitiv cu rifampicină se încadrează în afara intervalului aşteptat, fie în potenţă sau fie în inducerea plierii maxime, nu sunt raportate.

5E. Datele CFTR ale Compuşilor 1 - 65

Compuşii cu formula (I) sunt utili ca modulatori ai activităţii CFTR. Tabelul 6 de mai jos ilustrează EC50 compuşilor din Tabelul 6 utilizând procedurile descrise mai sus (testul descris mai sus în Exemplul 5A-A1). În Tabelul 6 de mai jos, se aplică următoarele semnificaţii. EC50: „+++« înseamnă < 0,1 µM; „++« înseamnă între 0,1 µM şi 1 µM; „+« înseamnă mai mare decât 1 µM.

Tabelul 6. Activitate CFTR

Nr. comp. EC50 CFTRdF508 (uM) 1 +++ 2 ++ 3 +++ 4 +++ 5 +++ 6 NAa 7 NAa 8 +++ 9 ++ 10 +++ 11 ++ 12 +++ 13 ++ 14 +++ 15 +++ 16 +++ 17 +++ 18 ++ 19 ++ 20 ++ 21 +++ 22 ++ 23 +++ 24 +++ 25 +++ 26 + 27 ++ 28 +++ 29 ++ 30 +++ 31 +++ 32 +++ 33 +++ 34 +++ 35 +++ 36 +++ 37 +++ 38 ++ 39 +++ 40 +++ 41 +++ 42 +++ 43 +++ 44 ++ 45 ++ 46 ++ 47 +++ 48 + 49 +++ 50 +++ 51 +++ 52 ++ 53 +++ 54 +++ 55 +++ 56 ++ 57 +++ 58 +++ 59 +++ 60 ++ 61 (furnizat pentru referinţă) NAa 62 (furnizat pentru referinţă) + 63 ++ 64 +++ 65 (furnizat pentru referinţă) + a: nemăsurat.

5F. Metaboliţi

S-a determinat că Compusul 1 este metabolizat atât in vitro cât şi in vivo, în cea mai mare parte prin metabolism oxidativ. Compusul 1 şi metaboliţi prezentaţi în următorul tabel au fost preparaţi şi testaţi.

Tabelul 7. Date pentru metaboliţi

Metabolit EC50 CFTRdF5 = 08 (uM) Analog deuterat al metabolitului Compusul 1 (Compus părinte) 0,03 Compusul 17 Compusul 38 0,24 Compusul 7 Compusul 62 (furnizat pentru referinţă) >30 Compusul 31 0,03 Compusul 34 0,09

5G. Acilsulfoxamide. Compuşii care cuprind un radical acilsulfoxamidă (adică, radical sulfonimidoilamidă - în care X în Formula I sau II este ales dintre amine substituite sau nesubstituite) au fost determinaţi ca conducȃnd la o scădere a legării albuminei din ser uman şi o sporire a fracţiunii libere în comparaţie cu compuşii care cuprind o grupare acilsulfonamidă (adică, în care X în Formula I sau II este ales dintre O). Datele HAS au fost măsurate cum s-a descris mai sus în Exemplul 5B. Legarea scăzută a albumină din ser uman poate conduce la o cantitate mai ridicată de medicament liber (nelegat) care poate afecta activitate biologică.

Tabelul 8. Date HSA

Acilsulfonamidă Legare HSA Sulfoxamină Legare HSA Compusul 15 99,1% (amestec diastereomeric: Compusul 45)) 98,1% (diastereoizomer 1: Compusul 46) 97,9% (diastereoizomer 2: Compusul 47) 98,4%

Tabelul 8 de mai jos rezumă activitatea CFTR (CFTR dF508 EC50), inducerea de PXR Max, eliminarea IV la şobolan, AUC PO la şobolan, şi datele PO la şobolan pentru anumiţi compuşi descrişi mai sus.

Tabelul 9. Date comparative

Nr. compus Compuşi EC50 CFTR dF508 (µM) Inducere PXR Max (% de rifampicină) CL iv la şobolan (mL/min/kg) AUC po la şobolan(µg. ore/mL la dozaa de 3 mg/kg %F po la şobolan Comp. A 0,06 2 17,8 1,2a 28% Comp. B 0,12 9 29,2 Comp. C 0,26 3 Comp. D 0,4 20 Comp. E 0,21 10 Comp. 49 0,02 19 Comp. 4 0,02 4 Comp. 15 0,02 0 Comp. 16 0,02 2 24,8 0,25 12% Comp. 1 0,03 3 1,6 21 63% Comp. 50 0,03 32 Comp. 23 0,03 22 2,7 12,5 69% Comp. 28 0,03 17 Comp. 31 0,03 7 Comp. 14 0,04 19 2,0 14,7 58% Comp. 53 0,04 39 2,3 13,7 98% Comp. 10 0,04 6 11,2 2,2 41% Comp. 32 0,04 4 Comp. 51 0,05 17 5,2 10,5 100% Comp. 55 0,05 22 Comp. 5 0,05 0 9,6 2,7 50% Comp. 58 0,05 4 Comp. 64 0,05 4 3,4 9b 79% Comp. 43 0,05 12 Comp. 42 0,05 3 5,4 4,4b 51% Comp. 41 0,07 6 1,9 6,4 41% Comp. 24 0,07 9 2,6 20 98% Comp. 37 0,07 8 Comp. 39 0,07 13 Comp. 30 0,09 0 6,1 2,3 26% Comp. 57 0,08 2 Comp. 13 0,11 2 Comp. 33 0,08 0 Comp. 40 0,08 2 Comp. 27 0,27 8 3,6 20,3 100% Comp. 44 0,62 18 5,0 8,5 81% Comp. 22 0,12 4 6,7 3,6 31% a: 10 mg/kg pentru Compus A, şi 3 mg/kg pentru alţi compuşi.

Exemplul 6: Experimente de transport de clorură

Într-un experiment cu cameră Ussing cu celule F508del/F508del-HBE, Compusul 1 a sporit transportul de clorură. Efectul Compusului 1 asupra transportului de clorură a fost aditiv la efectul Compusului II. În plus, F508del-CFTR livrat la suprafaţa celulei fie prin Compusul 1 singur sau fie în combinaţie cu Compusul II a fost potenţiată de Compusul III. Tripla combinaţie Compus 1/Compus II/Compus III a furnizat o creştere superioară (de aproximativ 3 ori) a transportului de clorură în comparaţie cu cele 3 regimuri duale testate în majoritatea afecţiunilor.

Exemplul 7: Experimente de procesare a F508del-CFTR şi trafic in vitro

In vitro, Compusul 1 a îmbunătăţit procesarea şi traficul de F508del-CFTR, crescȃnd prin urmare cantitatea de proteină F508del-CFTR funcţională la suprafaţa celulei. Proteina CFTR livrată la suprafaţa celulei de Compusul 1 singur sau în combinaţie cu Compusul II (Compusul 1/Compus II) a fost potenţiată de Compusul III. În celulele epiteliale bronhiale umane (HBE) studiate in vitro, tripla combinaţie de Compus 1, Compus II, şi Compus III (Compusul 1/Compusul II/Compusul III) a crescut transportul de clorură CFTR mai mult decȃt oricare din combinaţiile duale (Compusul 1/Compusul II, Compusul 1/Compusul III, şi Compusul II/Compusul III) sau componentele individuale (Compusul 1, Compusul II, şi Compusul III) în majoritatea afecţiunilor studiate.

Procesarea şi traficul de F508del-CFTR au fost direct monitorizate prin apariţia unei benzi de la 170 până la 180 kDa. O astfel de monitorizare a stabilit că Compusul 1 este un corector CFTR, deoarece el facilitează procesarea şi traficul de F508del-CFTR pentru a creşte cantitatea de F508del-CFTR funcţional la suprafaţa celulei.

Incubarea de celule F508del/F508del-HBE timp de 16 până la 24 ore cu 1 µM Compus 1 singur sau în combinaţie cu 3 µM Compus II au condus la o creştere în nivelurile de stare stabilă, care ajung la 6,5 ori şi respectiv 18,7 ori din nivelurile netratate.

Alte realizări

Discuţia anterioară divulgă şi descrie numai realizări exemplificative din această divulgare. O persoană calificată în domeniu va recunoaşte cu uşurinţă dintr-o astfel de discuţie şi din desenele însoţitoare şi revendicări, că diferite modificări, modificări şi variaţii pot fi făcute aici fără îndepărtarea de divulgare, cum s-a definit în următoarele revendicări.

Claims

1. Un compus cu Formula I:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care: - unul dintre Y1 şi Y2 este N şi celălalt este CH; - X este ales dintre O, NH, şi grupările N(alchil C1-C4); - R1 este ales dintre grupările -(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1, în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi în care fiecare R este ales în mod independent dintre H, OH, şi grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu unul sau mai mulţi halogeni; - fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; - fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; - fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; - k este 0 sau 1; - r este 0 sau 1; - m este 0, 1, 2, sau 3; - n este 0 sau 1; - p este 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi - q este 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8.

2. Un compus conform revendicării 1, în care compusul este cu Formula II:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care: - X este ales dintre O, NH, şi grupările N(alchil C1-C4); - R1 este ales dintre grupările -(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+i, în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi în care fiecare R este ales în mod independent dintre H, OH, şi grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu unul sau mai mulţi halogeni; - fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; - fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; - fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; - k este 0 sau 1; - r este 0 sau 1; - m este 0, 1, 2, sau 3; - n este 0 sau 1; - p este 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi - q este 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8.

3. Un compus conform revendicării 1, în care compusul este cu Formula III:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricăruia dintre cei anteriori, în care: - R1 este ales dintre grupările -(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+i, în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi în care fiecare R este ales în mod independent dintre H, OH, şi grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu unul sau mai mulţi halogeni; - fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; - fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; - fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; - k este 0 sau 1; - r este 0 sau 1; - m este 0, 1, 2, sau 3; - n este 0 sau 1; - p este 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi - q este 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8.

4. Un compus în conformitate cu oricare dintre revendicările 1-3, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, în care dacă R2 este ciano, atunci respectivul R2 este meta sau para faţă de atomul de sulf.

5. Un compus în conformitate cu oricare dintre revendicările 1-3, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, în care: - fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi - fiecare R este ales în mod independent dintre H şi OH; - fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, şi halogeni; - R4 este F; - k este 0; - p este 0, 1, sau 2; - q este 0, 1, 2, 3, sau 4; - r este 0; şi în care m şi n nu sunt 0 în acelaşi timp.

6. Un compus în conformitate cu revendicarea 5, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, în care: - R1 este ales dintre grupările -O―(CR2)m-Inel A, în care Inelul A este ales dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi - m este 1 sau 2.

7. Un compus în conformitate cu revendicarea 6, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, în care fiecare R3 este o grupare metil şi q este 3 sau 4.

8. Un compus în conformitate cu revendicarea 7 având Formula IV:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, în care: - Inelul A este ales dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni; şi - fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, F, Cl, şi grupările alcoxi C1-C2; - m este 1 sau 2; şi - p este 0, 1, sau 2.

9. Un compus în conformitate cu revendicarea 8, în care: (a) p este 0 sau 1; sau (b) p este 0.

10. Un compus în conformitate cu revendicarea 8 având Formula V:

11. Un compus în conformitate cu oricare dintre revendicările 1-10, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, în care fiecare R2 este ales în mod independent dintre CH3, OH, F, şi OCH3.

12. Un compus în conformitate cu revendicarea 11, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, în care: (a) p este 0 sau 1; sau (b) p este 0.

13. Un compus în conformitate cu revendicarea 10, o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, în care: (a) Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare alchil C1 halogenată sau cu o grupare alchil C2 halogenată; sau (b) Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3; sau (c) m este 1, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3, p este 0 sau 1, şi R2, dacă este prezent, este o grupare metil, o grupare hidroxi, sau o grupare metoxi; sau (d) m este 2, Inelul A este o grupare cicloalchil C3 substituită cu o grupare CF3, p este 0 sau 1, şi R2, dacă este prezent, este o grupare metil, o grupare hidroxi, sau o grupare metoxi; sau (e) m este 2, Inelul A este o grupare ciclopropil substituită cu o grupare CF3, şi p este 0; sau (f) Inelul A este ales dintre grupările bicicloalchil C5 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni; sau (g) Inelul A este o grupare bicicloalchil C5 substituită opţional cu un halogen; sau (h) Inelul A este ales dintre grupările bicicloalchil C7 şi grupările tricicloalchil C7 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni; sau (i) Inelul A este o grupare tricicloalchil C7 nesubstituită.

14. Un compus în conformitate cu revendicarea 1 având o formulă aleasă dintre oricare din formulele reprezentate mai jos:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestora, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori.

15. Un compus în conformitate cu revendicarea 1 având formula următoare:

o sare acceptabilă farmaceutic a acesteia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori.

16. Un compus în conformitate cu revendicarea 15 având formula următoare:

în forma unei săruri acceptabile farmaceutic.

17. Un compus în conformitate cu revendicarea 15 având formula următoare:

18. Un compus în conformitate cu revendicarea 1 având: (a) formula următoare:

o sare acceptabilă farmaceutic a acesteia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori; sau (b) formula următoare:

o sare acceptabilă farmaceutic a acesteia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori; sau (c) formula următoare:

o sare acceptabilă farmaceutic a acesteia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori; sau (d) formula următoare:

o sare acceptabilă farmaceutic a acesteia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori; sau (e) formula următoare:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acesteia. (f) formula următoare:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acesteia; sau (g) formula următoare:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acesteia.

19. O compoziţie farmaceutică cuprinzând compusul, sarea acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, cum s-a definit în revendicarea 15.

20. O compoziţie farmaceutică cuprinzând sarea acceptabilă farmaceutic conform revendicării 16.

21. O compoziţie farmaceutică cuprinzând compusul conform revendicării 17.

22. O compoziţie farmaceutică cuprinzând cel puţin un compus ales dintre compuşii conform oricăreia dintre revendicările 1-18, o sare acceptabilă farmaceutic a acestora, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, şi opţional unul sau mai mulţi dintre: (a) Compusul II:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori; (b) Compusul III:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori; şi (c) un purtător acceptabil farmaceutic.

23. Compoziţia farmaceutică în conformitate cu revendicarea 22 cuprinzând compusul conform revendicării 15 sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, şi opţional unul sau mai mulţi dintre: (a) Compusul II:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia; (b) Compusul III:

sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia; şi (c) un purtător acceptabil farmaceutic.

24. Compoziţia farmaceutică în conformitate cu revendicarea 23, în care compusul având formula:

este în forma unei săruri acceptabile farmaceutic.

25. Compoziţia farmaceutică conform revendicării 22 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

26. Compusul, sarea acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau derivatul deuterat al oricărora dintre cei anteriori, în conformitate cu revendicarea 15 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

27. Sarea acceptabilă farmaceutic în conformitate cu revendicarea 16 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

28. Compusul în conformitate cu revendicarea 17 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

29. Compoziţia farmaceutică în conformitate cu revendicarea 19 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

30. Compoziţia farmaceutică în conformitate cu revendicarea 20 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

31. Compoziţia farmaceutică în conformitate cu revendicarea 21 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

32. Compoziţia farmaceutică în conformitate cu revendicarea 22 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

33. Compoziţia farmaceutică în conformitate cu revendicarea 23 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

34. Compoziţia farmaceutică în conformitate cu revendicarea 24 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice.

35. O metodă de preparare a unui compus cu Formula (IIIa):

a unei săruri acceptabile farmaceutic a acestuia, sau a unui derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu Formula (F) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (G) sau cu o sare a acestuia pentru a genera respectivul compus cu Formula (IIIa) sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori:

în care în fiecare din respectivele formule: - unul dintre Y1 şi Y2 este N şi celălalt este CH; - fiecare R1 este ales în mod independent dintre grupările ―(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1, în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi în care fiecare R este ales în mod independent dintre H, OH, şi grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu unul sau mai mulţi halogeni; - fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; - fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; - fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; - Xa este ales dintre F sau Cl; - fiecare k este în mod independent 0 sau 1; - fiecare r este în mod independent 0 sau 1; - fiecare m este în mod independent 0, 1, 2, sau 3; - fiecare n este în mod independent 0 sau 1; - fiecare p este în mod independent 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi - fiecare q este în mod independent 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8; opţional, în care fiecare Y2 este în mod independent N; şi fiecare Y1 este în mod independent CH.

36. Metoda conform revendicării 35, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (F) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (G) sau cu o sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze.

37. Metoda din revendicările 35 sau 36, în care este utilizată o sare compusului cu Formula (G); opţional, în care respectiva sare compusului cu Formula (G) este o sare de HCl dintr-un compus cu Formula (G).

38. O metodă de preparare a unui compus cu Formula (F) sau a unei săruri a acestuia:

sau a unui derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu Formula (D) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (E) sau cu o sare a acestuia pentru a genera un compus cu Formula (F) sau o sare a acestuia:

în care în fiecare din respectivele formule: - unul dintre Y1 şi Y2 este în mod independent N şi celălalt este în mod independent CH; - fiecare R1 este ales în mod independent dintre grupările ―(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1, în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi în care fiecare R este ales în mod independent dintre H, OH, şi grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu unul sau mai mulţi halogeni; - fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; - fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; - Xa este ales dintre F sau Cl; - fiecare k este în mod independent 0 sau 1; - fiecare r este în mod independent 0 sau 1; - fiecare m este în mod independent 0, 1, 2, sau 3; - fiecare n este în mod independent 0 sau 1; şi - fiecare p este în mod independent 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; opţional, în care fiecare Y2 este în mod independent N; şi fiecare Y1 este în mod independent CH.

39. Metoda conform revendicării 38, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (D) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (E) sau cu o sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze; sau cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu Formula (D-1) cu un reactiv de cuplare şi ulterior cu un compus cu Formula (E-1) în prezenţa unei baze.

40. Metoda conform revendicării 35 care este o metodă de preparare a unui compus cu formula următoare:

sau a unei săruri acceptabile farmaceutic a acestuia, sau a unui derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu Formula (F-1) sau a unei săruri a acestuia, în care Xa este ales dintre F sau Cl, cu un compus cu Formula (G-1) sau cu o sare a acestuia pentru a genera compusul menţionat sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori:

opţional, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (F-1) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (G-1) sau cu o sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze.

41. Metoda conform revendicării 40, în care este utilizată o sare compusului cu Formula (G-1); opţional, în care respectiva sare compusului cu Formula (G-1) este o sare de HCl dintr-un compus cu Formula (G-1).

42. Metoda conform revendicării 38 care este o metodă de preparare a unui compus cu Formula (F-1) sau a unei săruri a acestuia:

sau a unui derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu Formula (D-1) şi a unui compus cu Formula (E-1) pentru a genera un compus cu Formula (F-1) sau o sare a acestuia:

în care fiecare Xa este ales în mod independent dintre F sau Cl.

43. Metoda conform revendicării 42, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (D-1) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (E-1) sau cu o sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze; sau cuprinde punerea în reacţie a unui compus cu Formula (D-1) cu un reactiv de cuplare şi ulterior cu un compus cu Formula (E-1) în prezenţa unei baze.

44. O metodă de preparare a unui compus cu Formula (D) sau a unei săruri a acestuia:

sau a unui derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, cuprinzând: (i) punerea în reacţie a unui compus cu Formula (A) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (B) sau cu o sare a acestuia pentru a genera un compus cu Formula (C) sau o sare a acestuia:

şi (ii) hidrolizarea grupării ―C(O)ORa dintr-un compus cu Formula (C) pentru a genera un compus cu Formula (D) sau o sare a acestuia, în care în fiecare din respectivele formule: - unul dintre Y1 şi Y2 este în mod independent N şi celălalt este în mod independent CH; - fiecare R1 este ales în mod independent dintre grupările ―(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1, în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi în care fiecare R este ales în mod independent dintre H, OH, şi grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu unul sau mai mulţi halogeni; - fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; --fiecare Ra este ales în mod independent dintre alchil C1-C4; - fiecare Xa este ales în mod independent dintre F sau Cl; - fiecare k este în mod independent 0 sau 1; - fiecare r este în mod independent 0 sau 1; - fiecare m este în mod independent 0, 1, 2, sau 3;şi - fiecare n este în mod independent 0 sau 1; opţional, în care fiecare Y2 este în mod independent N; şi fiecare Y1 este în mod independent CH.

45. Metoda conform revendicării 44, în care hidroliza grupării ―C(O)ORa este efectuată în prezenţa unei baze; opţional, în care respectiva punerea în reacţie a unui compus cu Formula (A) sau a unei săruri a acestuia cu un compus cu Formula (B) sau cu o sare a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze.

46. Metoda din oricare dintre revendicările 44 sau 45, în care Ra este etil sau t-butil.

47. Metoda conform revendicării 44 care este o metodă de preparare a unui compus cu Formula (D-1) sau a unei săruri a acestuia:

sau a unui derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, cuprinzând: (i) punerea în reacţie a unui compus cu Formula (A-1) sau a unei săruri a acestuia şi a unui compus cu Formula (B-1) sau a unei săruri a acestuia pentru a genera un compus cu Formula (C-1) sau o sare a acestuia:

şi (ii) hidrolizarea grupării ―C(O)ORa dintr-un compus cu Formula (C-1) sau dintr-o sare a acestuia pentru a genera un compus cu Formula (D-1) sau o sare a acestuia, în care fiecare Ra este ales în mod independent dintre alchil C1-C4; şi fiecare - Xa este ales în mod independent dintre F sau Cl; opţional, în care hidroliza grupării - C(O)ORa este efectuată în prezenţa unei baze.

48. Metoda conform revendicării 47, în care respectiva punere în reacţie a unui compus cu Formula (A-1) sau a unei săruri a acestuia şi a unui compus cu Formula (B-1) sau a unei săruri a acestuia este efectuată în prezenţa unei baze; opţional, în care Ra este etil sau t-butil.

49. O metodă de preparare a unui compus cu Formula (I) sau a unei săruri acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau a unui derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, cuprinzând punerea în reacţie a unui compus cu Formula (L) sau a unei săruri a acestuia cu NR∗ 3 :

în care în fiecare din respectivele formule: -- X este NH sau N(alchil C1-C4); - unul dintre Y1 şi Y2 este în mod independent N şi celălalt este în mod independent CH; - fiecare R1 este ales în mod independent dintre grupările -(CR2)k-O-(CR2)m(CR)n(Inel A)n+1, în care fiecare Inel A este ales în mod independent dintre grupările cicloalchil C3-C10 substituite opţional cu unul sau mai mulţi substituenţi aleşi fiecare în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, grupările alchil C1-C2 halogenate, şi halogeni, şi în care fiecare R este ales în mod independent dintre H, OH, şi grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu unul sau mai mulţi halogeni; - fiecare R2 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2, OH, grupările alcoxi C1-C2, halogeni, şi ciano; - fiecare R3 este ales în mod independent dintre grupările alchil C1-C2 substituite opţional cu una sau mai multe grupări OH; - fiecare R4 este ales în mod independent dintre halogeni; - R∗ este H sau alchil C1-C4; - Xa este ales dintre F sau Cl; - fiecare k este în mod independent 0 sau 1; - fiecare r este în mod independent 0 sau 1; - fiecare m este în mod independent 0, 1, 2, sau 3; - fiecare n este în mod independent 0 sau 1; - fiecare p este în mod independent 0, 1, 2, 3, 4, sau 5; şi - fiecare q este în mod independent 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sau 8.

50. Cel puţin un compus ales dintre compuşii conform oricăreia dintre revendicările 1-18, o sare acceptabilă farmaceutic a acestora, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori, şi opţional unul sau mai mulţi dintre: (a) Compusul II:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori; şi (b) Compusul III:

o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, sau un derivat deuterat al oricărora dintre cei anteriori; pentru utilizare în tratarea fibrozei chistice.