KR20240025695A - 스테로이드 및 이의 단백질-접합체 - Google Patents

스테로이드 및 이의 단백질-접합체 Download PDF

Info

Publication number
KR20240025695A
KR20240025695A KR1020247004647A KR20247004647A KR20240025695A KR 20240025695 A KR20240025695 A KR 20240025695A KR 1020247004647 A KR1020247004647 A KR 1020247004647A KR 20247004647 A KR20247004647 A KR 20247004647A KR 20240025695 A KR20240025695 A KR 20240025695A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
examples
alkyl
formula
compound
antibody
Prior art date
Application number
KR1020247004647A
Other languages
English (en)
Inventor
에이미 한
윌리엄 올슨
제이. 앤드류 머피
Original Assignee
리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=60409441&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20240025695(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 filed Critical 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드
Publication of KR20240025695A publication Critical patent/KR20240025695A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
    • C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
    • C07J71/0026—Oxygen-containing hetero ring cyclic ketals
    • C07J71/0031—Oxygen-containing hetero ring cyclic ketals at positions 16, 17
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/566—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol having an oxo group in position 17, e.g. estrone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
    • A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of only two carbon atoms, e.g. pregnane derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0088—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing unsubstituted amino radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
    • C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
    • C07J71/0026—Oxygen-containing hetero ring cyclic ketals

Abstract

본원에는 단백질 스테로이드 접합체가 기재되어 있으며, 이에 의해 글루코코르티코이드 화합물은 바람직하게는 항체인 접합체에 결합된다. 이들은 예를 들면, 세포에 대한 글루코코르티코이드(GC)의 표적-특이적인 전달에 유용하다.

Description

스테로이드 및 이의 단백질-접합체{STEROIDS AND PROTEIN-CONJUGATES THEREOF}
관련 출원에 대한 교차-참조
본 출원은 2017년 5월 18일자로 출원된 미국 가특허원 제62/508,317호, 및 2016년 11월 8일자로 출원된 미국 가특허원 제62/419,365호에 대한 우선권 및 이의 이익을 청구하며, 이의 각각의 전체 내용은 모든 목적을 위해 이의 전문이 본원에 포함된다.
분야
신규한 스테로이드, 이의 단백질 접합체(protein conjugate), 및 스테로이드 및 접합체를 투여함을 포함하여, 질환, 장애, 및 상태를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
항체-약물 접합체(ADC)는 생물학적으로 활성인 소 분자 약물에 공유결합으로 연결시킴으로써 항체의 표적화 특이성과 소 분자 약물의 작용 방식 및 효능을 조합시킨 항체이다. ADC(들)의 치료학적 유용성이 암 치료시 승인되어 왔으며 연구의 주요한 진행중인 초점이다. ADCE트리스®(벤트룩시맙 베도틴) 및 KADCYLA®(아도-트라스투주맙 엠탄신)은 특정의 암 유형의 치료를 위해 승인된 ADC이며, 적어도 40개의 ADC가 현재 임상 개발 중에 있다.
글루코코르티코이드(GC)는 글루코코르티코이드 수용체(GR)에 결합하는 소 분자 스테로이드이며 소염 및 면역억제 치료요법에서 활용되고 있다. 그러나, 많은 세포 유형에서 글루코코르티코이드 수용체의 편재된 발현으로 인하여, 글루코코르티코이드 치료는 대부분의 기관계에 대한 독성에 의해 절충된다. 따라서, 신규한 글루코코르티코이드 및, 글루코코르티코이드 투여로부터 발생하는 부작용, 특히 비-표적 세포(non-target cell)내에서 활성화되는 글루코코르티코이드 수용체로부터 발생하는 부작용을 최소화하는 신규 치료요법 둘 다에 대한 필요성이 존재한다. 본 개시내용은 본 개시내용이 속한 분야에서 전술한 필요성 뿐만 아니라 다른 충족되지 않은 필요성에 대한 해결책을 제공한다. 본 개시내용에는 글루코코르티코이드 페이로드(payload)를 포함하는 항체-약물 접합체가 포함된다.
다양한 질환, 장애, 또는 상태의 치료에 유용한 화합물 및 방법이 본원에 제공된다. 특정의 국면에서, 화학식 A의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체이성체, 또는 유도체를 갖는다:
(A)
여기서:
R1 및 R2는, 독립적으로, -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이거나; 또는
R1 및 R2는 함께 을 형성하고,
여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이며,
여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은 각각의 예에서 독립적으로 -NRaRb로 임의 치환되고;
R3은 -OH, RZ-C(O)-X-, 헤테로알킬, 피페리디닐, -NRaRb, -옥시아릴-NRaRb 또는 -Z-A(RP)t이며;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 알킬, 또는 아릴알킬이고;
RZ는 알킬이며;
X는 O 또는 NRa이고;
Z는 S, S(O), S(O)2, SO2NRa, O, C(O)NRa, C(O), 또는 NRa이며;
A는 아릴, 아릴알킬, 또는 헤테로아릴이고;
RP는, 각각의 예에서 독립적으로, 할로, 임의 치환된 알킬, -OH, 또는 -NRaRb이며;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H, 임의 치환된 알킬, 또는 임의 치환된 아릴이고;
n은 0 내지 19의 정수이며;
t는 1 내지 3의 정수이고;
단:
(1) (a) R1이 -OH인 경우 또는 (b) R1 및 R2가 함께 (여기서 R4는 C1-9알킬 또는 이다)를 형성하는 경우, R3은 -OH가 아니고
(2) R3은 가 아니다.
특정의 국면에서, 화합물은 항원-결합 단백질, 예컨대, 항체 및 화학식 (A)의 화합물을 포함하는, 단백질-약물 접합체, 예컨대, 항체-약물 접합체이다.
특정의 국면에서, 화합물은 항원-결합 단백질, 예컨대, 항체, 화학식 (A)의 화합물, 및 사이클로덱스트린 모이어티(moiety)를 포함하는, 단백질-약물 접합체, 예컨대, 항체-약물 접합체이다.
도 1은 본원에 기술된 특정의 스테로이드를 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 2는 부데소니드의 1차 알코올 위치를 개질시키기 위한 순서를 나타낸다.
도 3은 플루메타손의 1차 알코올 위치를 개질시키기 위한 순서를 나타냔다.
도 4는 덱사메타손의 1차 알코올 위치를 개질시키기 위한 순서를 나타낸다.
도 5는 표 1에서 화합물 7-1R에 대한 2-차원 핵 오버하우저 효과(Overhauser effect: NOE)를 나타낸다.
도 6은 표 1에서 화합물 7-1S에 대한 2D-NOESY를 나타낸다.
도 7은 표 1에서 11-5R에 대한 2D-NOESY를 나타낸다.
도 8은 표 1에서 화합물 11-5S에 대한 2D-NOESY를 나타낸다.
도 9는 특정의 링커-페이로드(Linker-Payload)를 합성하기 위한 일반적인 시도를 나타낸다.
도 10은 DIBAC-Suc-NHS(화합물 (V))를 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 11은 DIBAC-Suc-PEG4-산/NHS(화합물 (VI))를 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 12는 BCN-PEG4-산(화합물 (VII))을 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 13은 DIBAC-Suc-PEG4-VC-pAB-PNP(화합물 (VIII))를 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 14는 링커-페이로드 1(LP1)을 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 15는 링커-페이로드 2(LP2) 및 링커-페이로드 3(LP3)을 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 16은 링커-페이로드 4-11(LP4-LP11)을 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 17은 링커-페이로드 12(LP12)를 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 18은 링커-페이로드 12(LP13) 및 링커-페이로드 14(LP14)를 제조하기 위한 합성 순서를 나타낸다.
도 19는 LP4와의 [2+3] 클릭 반응(click reaction)을 통한 ADC 접합을 위한 일반적인 합성 공정을 나타낸다.
도 20은 실시예 59에 기술된 바와 같은 항-PRLR 항체, 아지도-작용화된 항-PRLR 항체, 및 항-PRLR 항체-LP4 접합체의 꼬마지에(Coomassie)-염색된 SDS-PAGE 겔을 나타낸다.
도 21은 실시예 59에 기술된 바와 같은 항-PRLR 항체, 아지도-작용화된 항체, 및 4DAR 항-PRLR-LP4 접합체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 나타낸다.
도 22는 실시예 59에 기술된 바와 같은 항-PRLR 항체, 아지도-작용화된 항-PRLR 항체 및 항-PRLR 항체-LP4 접합체의 ESI-MS를 나타낸다.
도 23은 실시예 64에 기술된 바와 같이 스테로이드 ADC 및 부데소니드 대조군에 의한 293/PRLR/GRE-Luc 세포(도 23a) 및 293/MMTV-Luc 세포(도 23b)내에서 선택적인 GR 활성화를 나타낸다.
도 24는 실시예 65에 기술된 바와 같이 293/PRLR/GRE-Luc 세포내에서 시험된 스테로이드 ADC 및 부데소니드 대조군에 의한 GR 활성화에 대한 링커-페이로드 기여를 나타낸다.
도 25는 실시예 66에 기술된 바와 같이 24시간(24), 48시간(48), 또는 72시간(72)에서 부데소니드, 표 1에서 11-5, 및 항-IL2Rγ ncADC에 의한 HEK293/MMTV-luc/IL-2Rγ/IL7R 세포주내 글루코코르티코이드 수용체의 활성화를 나타낸다.
도 26은 링커-페이로드(LP7)를 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 27은 화합물(27b)을 제조하기 위한 합성 공정을 나타낸다.
도 28은 링커-페리로드(LP15 및 LP16)를 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 29는 사이클로덱스트린-링커-페이로드와의 [2+3] 클릭 반응을 통한 ADC 접합을 위한 일반적인 합성 공정을 나타낸다.
도 30은 상대적인 광 단위(RLU) 대 Log10 [M]의 플롯(plot)에서 사이클로덱스트린 링커의 존재 및 부재하에서 스테로이드 ADC의 생물활성(bioactivity)을 나타낸다.
도 31은 본원에 기술된 특정의 스테로이드(페리로드 1 내지 6)을 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 32는 특정의 링커-스테로이드(LP101 내지 LP116)를 합성하기 위한 순서를 나타낸다.
도 33은 [2+3] 클릭 반응을 통한 ADC 접합에 대한 일반적인 합성 공정을 나타낸다.
도 34는 항-PRLR Ab, 항-PRLR Ab-N3, 및 항-PRLR-LP의 ESI-MS를 나타낸다.
도 35는 항-Fel d1 Ab, 항-Fel d1 Ab-PEG3-N3, 및 항- Fel d1 Ab-LP의 ESI-MS를 나타낸다.
도 36은 상대적인 광 단위(RLU) 대 Log10 [M]의 플롯에서 항원 양성 세포(293_PRLR_PBind GR/UAS-Luc 세포, 도 36a) 내에서 대 항원 음성 세포(293_PBind GR/UAS-Luc 세포, 도 36b) 내에서의 스테로이드 ADC의 생물활성을 나타낸다.
도 37a는 화합물 4b 및 6-I에 대해 제공된 평균 혈액 농도-시간을 나타낸다.
도 37b는 실시예 120 내지 121에 기술된 바와 같은 페이로드 4b 및 6-I의 혈액 샘플 속에서의 TNF-α 수준을 나타낸다.
상세한 설명
A. 정의
본원에 사용된 바와 같은, "알킬"은 1가 및 포화된 탄화수소 라디칼 모이어티를 지칭한다. 알킬은 임의 치환되고 직쇄, 측쇄, 또는 사이클릭, 즉, 사이클로알킬일 수 있다. 알킬은 1 내지 20개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-20 알킬; 1 내지 12개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-12 알킬; 1 내지 8개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-8 알킬; 1 내지 6개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-6 알킬; 및 1 내지 3개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-3 알킬을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알킬 모이어티의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, i-부틸, 펜틸 모이어티, 헥실 모이어티, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 및 사이클로헥실을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. "알킬렌"은 2가 알킬이다.
본원에 사용된 바와 같은, "할로알킬"은 상기 정의한 바와 같은 알킬을 지칭하며, 여기서 알킬은 할로겐, 예컨대, F, Cl, Br, 또는 I로부터 선택된 적어도 하나의 치환체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, "알케닐"은 적어도 2개의 탄소 원자 및 하나 이상의 비-방향족 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 1가 탄화수소 라디칼 모이어티를 지칭한다. 알케닐은 임의 치환되고 직쇄, 측쇄, 또는 사이클릭일 수 있다. 알케닐은 2 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 것들, 즉, C2-20 알케닐; 2 내지 12개의 탄소 원자를 함유하는 것들, 즉, C2-12 알케닐; 2 내지 8개의 탄소 원자를 함유하는 것들, 즉, C2-8 알케닐; 2 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 것들, 즉, C2-6 알케닐; 및 2 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 것들, 즉, C2-4 알케닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알케닐 모이어티의 예는 비닐, 프로페닐, 부테닐, 및 사이클로헥세닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. "알케닐렌"은 2가 알케닐이다.
본원에 사용된 바와 같은, "알키닐"은 적어도 2개의 탄소 원자 및 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 1가 탄화수소 라디칼 모이어티를 지칭한다. 알키닐은 임의 치환되고 직쇄, 측쇄, 또는 사이클릭일 수 있다. 알키닐은 2 내지 20개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C2-20 알키닐; 2 내지 12개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C2-12 알키닐; 2 내지 8개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C2-8 알키닐; 2 내지 6개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C2-6 알키닐; 및 2 내지 4개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C2-4 알키닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알키닐 모이어티의 예는 에티닐, 프로피닐, 및 부티닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. "알키닐렌"은 2가 알키닐이다.
본원에 사용된 바와 같은, "알콕시"는 1가 및 포화된 탄화수소 라디칼 모이어티를 지칭하며 여기서 탄화수소는 산소 원자에 대한 단일 결합을 포함하며 여기서 라디칼은 산소 원자 상에 위치하는데, 예컨대, 에톡시의 경우 CH3CH2-O이다. 알콕시 치환체는 이들이 알콕시 치환체의 이러한 산소 원자를 통해 치환하는 화합물에 결합한다. 알콕시는 임의 치환되며 직쇄, 측쇄, 또는 사이클릭, 즉, 사이클로알콕시일 수 있다. 알콕시는 1 내지 20개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-20 알콕시; 1 내지 12개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-12 알콕시; 1 내지 8개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-8 알콕시; 1 내지 6개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-6 알콕시; 및 1 내지 3개의 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C1-3 알콕시를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알콕시 모이어티의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, i-프로폭시, n-부톡시, s-부톡시, t-부톡시, i-부톡시, 펜톡시 모이어티, 헥소시 모이어티, 사이클로프로폭시, 사이클로부톡시, 사이클로펜톡시, 및 사이클로헥소시를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "할로알콕시"는 상기 정의한 바와 같은 알콕시를 지칭하며, 여기서 알콕시는 할로겐, 예컨대, F, Cl, Br, 또는 I로부터 선택된 적어도 하나의 치환체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, "아릴"은 방향족 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며 여기서 환 원자는 탄소 원자이다. 아릴은 임의 치환되며 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭, 예컨대, 비사이클릭 또는 트리사이클릭일 수 있다. 아릴 모이어티의 예는 6 내지 20개의 환 탄소 원자를 갖는 것들, 즉, C6-20 아릴; 6 내지 15개의 환 탄소 원자를 갖는 것들, 즉, C6-15 아릴, 및 6 내지 10개의 환 탄소 원자를 갖는 것들, 즉, C6-10 아릴을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 아릴 모이어티의 예는 페닐, 나프틸, 플루오레닐, 아줄레닐, 안트릴, 페난트릴, 및 피레닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "아릴알킬"은 알킬 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며, 여기서 알킬 화합물은 방향족 치환체로 치환되는데, 즉, 방향족 화합물은 알킬 그룹에 대한 단일 결합을 포함하고 여기서 라디칼은 알킬 그룹 상에 위치한다. 아릴알킬 그룹은 알킬 그룹을 통해 나타낸 화학 구조에 결합한다. 아릴알킬은 구조식, 예컨대, 또는 으로 나타낼 수 있고, 여기서 B는 방향족 모이어티, 예컨대, 페닐이다. 아릴알킬은 임의 치환되는데, 즉, 아릴 그룹 및/또는 알킬 그룹은 본원에 개시된 바와 같이 치환될 수 있다. 아릴알킬의 예는 벤질을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "아릴옥시"는 방향족 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며 여기서 환 원자는 탄소 원자이고 여기서 환은 산소 라디칼로 치환되는데, 즉, 방향족 화합물은 산소 원자에 대한 단일 결합을 포함하고 여기서 라디칼은 산소 원자 상에 위치하는데, 예컨대, 페녹시의 경우 이다. 아릴옥시 치환체는 이들이 이러한 산소 원자를 통해 치환하는 화합물에 결합한다. 아릴옥시는 임의 치환된다. 아릴옥시는 6 내지 20개의 환 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C6-20 아릴옥시; 6 내지 15개의 환 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C6-15 아릴옥시, 및 6 내지 10개의 환 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C6-10 아릴옥시를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 아릴옥시 모이어티의 예는 페녹시, 나프톡시, 및 안트록시를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "RaRbN-아릴옥시"는 방향족 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며 여기서 환 원자는 탄소 원자이고 여기서 환은 RaRbN-치환체 및 산소 라디칼로 치환되는데, 즉, 방향족 화합물은 RaRbN- 치환체에 대한 단일 결합 및 산소 원자에 대한 단일 결합을 포함하며 여기서 라디칼은 산소 원자 위에 위치하는데, 예컨대, 를 포함한다. RaRbN-아릴옥시 치환체는 이들이 이러한 산소 원자를 통해 치환하는 화합물에 결합한다. RaRbN-아릴옥시는 임의 치환된다. RaRbN-아릴옥시는 6 내지 20개의 환 탄소 원자를 가진 것들, 6 내지 15개의 환 탄소 원자를 가진 것들; 및 6 내지 10개의 환 탄소 원자를 가진 것들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. RaRbN-아릴옥시 모이어티의 예는 4-(디메틸-아미노)-페녹시, 를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "아릴렌"은 방향족 화합물의 2가 모이어티를 지칭하며 여기서 환 원자는 탄소 원자 만이다. 아릴렌은 임의 치환되며 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭, 예컨대, 비사이클릭 또는 트리사이클릭일 수 있다. 아릴렌 모이어티의 예는 6 내지 20개의 환 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C6-20 아릴렌; 6 내지 15개의 환 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C6-15 아릴렌, 및 6 내지 10개의 환 탄소 원자를 가진 것들, 즉, C6-10 아릴렌을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "헤테로알킬"은 알킬을 지칭하며 여기서 하나 이상의 탄소 원자는 헤테로원자로 대체된다. 본원에 사용된 바와 같은, "헤테로알케닐"은 알케닐을 지칭하며 여기서 하나 이상의 탄소 원자는 헤테로원자로 대체된다. 본원에 사용된 바와 같은, "헤테로알키닐"는 알키닐을 지칭하며 여기서 하나 이상의 탄소 원자는 헤테로원자로 대체된다. 적합한 헤테로원자는 질소, 산소, 및 황 원자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헤테로알킬은 임의 치환된다. 헤테로알킬 모이어티의 예는 아미노알킬, 설포닐알킬, 설피닐알킬을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헤테로알킬 모이어티의 예는 또한 메틸아미노, 메틸설포닐, 및 메틸설피닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "헤테로아릴"은 방향족 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며 여기서 환 원자는 탄소 원자 및 적어도 하나의 산소, 황, 질소, 또는 인 원자를 함유한다. 헤테로아릴 모이어티의 예는 5 내지 20개의 환 원자; 및 5 내지 15개의 환 원자; 및 5 내지 10개의 한 원자를 가진 것들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헤테로아릴은 임의 치환된다.
본원에 사용된 바와 같은, "헤테로아릴렌"은 아릴렌을 지칭하며 여기서 방향족 환의 하나 이상의 환 원자는 산소, 황, 질소, 또는 인 원자로 대체된다. 헤테로아릴렌은 임의 치환된다.
본원에 사용된 바와 같은, "헤테로사이클로알킬"은 사이클로알킬을 지칭하며 여기서 하나 이상의 탄소 원자는 헤테로원자로 대체된다. 적합한 헤테로원자는 질소, 산소, 및 황 원자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헤테로사이클로알킬은 임의 치환된다. 헤테로사이클로알킬 모이어티의 예는 모르폴리닐, 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 옥사졸리디닐, 티아졸리디닐, 디옥솔라닐, 옥사닐, 또는 티아닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "N-함유 헤테로사이클로알킬"은 사이클로알킬을 지칭하며 여기서 하나 이상의 탄소 원자는 헤테로원자로 대체되며 여기서 적어도 하나는 질소 원자이다. 질소외에 적합한 헤테로원자는 산소 및 황 원자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. N-함유 헤테로사이클로알킬은 임의 치환된다. N-함유 헤테로사이클로알킬 모이어티의 예는 모르폴리닐, 피페리디닐, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리디닐, 옥사졸리디닐, 또는 티아졸리디닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, 라디칼 모이어티를 기술하는데 사용되는 경우, "임의 치환된", 예컨대, 임의 치환된 알킬은, 이러한 모이어티가 하나 이상의 치환체에 임의 결합됨을 의미한다. 이러한 치환체의 예는 할로, 시아노, 니트로, 할로알킬, 아지도, 에폭시, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 헤테로사이클로알킬, , , , , , , , , , , , , , 또는 을 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 여기서 RA, RB, 및 RC는, 각각 존재시 독립적으로, 수소 원자, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이거나, RA 및 RB는 이들이 결합된 원자와 함께 포화되거나 불포화된 카보사이클릭 환을 형성하며, 여기서 환은 임의 치환되고 여기서 하나 이상의 환 원자는 헤테로원자로 임의로 대체된다. 특정의 구현예에서, 라디칼 모이어티가 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 헤테로사이클로알킬, 또는 임의 치환된 포화되거나 불포화된 카보사이클릭 환으로 임의 치환된 경우, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 헤테로사이클로알킬, 또는 임의 치환된 포화되거나 불포화된 카보사이클릭 환 상의 치환체는, 이들이 치환되는 경우, 추가의 치환체로 추가로 임의 치환된 치환체로 치환되지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 그룹이 임의 치환된 경우, 그룹에 결합된 치환체는 달리 명시하지 않는 한 치환되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "결합제"는 제공된 결합 파트너에 대한 특이성으로 결합한 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 일부 구현예에서, 결합제는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편이다.
본원에 사용된 바와 같은, "링커"는 결합제를 본원에 기술된 스테로이드에 공유결합으로 연합시키는 2가 모이어티를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, "아미드 합성 조건"은 예컨대, 카복실산, 활성화된 카복실산, 또는 아실 할라이드와 아민의 반응에 의해, 아미드의 형성을 촉진시키기에 적합한 반응 조건을 지칭한다. 일부 예에서, "아미드 합성 조건"은 카복실산과 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 촉진시키기에 적합한 반응 조건을 지칭한다. 이러한 예 중 일부에서, 카복실산은 우선 활성화된 카복실산이 아민과 반응하여 아미드를 형성하기 전에 활성화된 카복실산으로 전환된다. 아미드의 형성을 실행하기에 적합한 조건은 카복실산과 디사이클로헥실카보디이미드(DCC), 디이소프로필카보디이미드(DIC), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), (7-아자벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyAOP), 브로모트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBrOP), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(HATU), 2-에톡시-1-에톡시카보닐-1,2-디하이드로퀴놀린(EEDQ), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 (EDC), 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸리디늄 헥사플루오로포스페이트(CIP), 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진(CDMT), 및 카보닐디이미다졸(CDI)을 포함하나, 이에 한정되지 않는 아민 사이의 반응을 실행하기 위한 시약을 활용하는 것들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 예에서, 카복실산은 아민과 반응하여 아미드 결합을 형성하기 전에 활성화된 카복실성 에스테르로 먼저 전환된다. 특정의 구현예에서, 카복실산은 시약과 반응한다. 시약은 카복실산을 탈양자화(deprotonating)시킨 후 양자화된 시약 상으로 탈양자화된 카복실산에 의한 친핵성 공격의 결과로서 탈양자화된 카복실산과의 생성물 복합체를 형성함으로써 카복실산을 활성화시킨다. 특정의 카복실산의 경우, 이러한 활성화된 에스테르는 전환되기 전의 카복실산 보다 아민에 의한 친핵성 공격 후 보다 더 민감성이 된다. 이는 아미드 결합 형성을 야기한다. 따라서, 카복실산은 활성화된 것으로 기술된다. 예시적인 시약은 DCC 및 DIC를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, "치료학적 유효량"은 질환 또는 장애의 치료 또는 관리에서 환자에게 치료학적 이점을 제공하거나, 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 지연시키거나 최소화하기 위한 치료학적 이점을 제공하기에 충분한 (화합물의) 양을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, "약제학적으로 허용되는 유도체"는 환자에게 투여시 상기 화합물을 제공하는, 화합물의 임의의 형태, 예컨대, 에스테르 또는 전구약물(prodrug)을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, "약제학적으로 허용되는 염"은 환자에게 투여하기에 적합한 임의의 염을 지칭한다. 적합한 염은 본원에 참고로 포함된, 문헌:Berge et al., "Pharmaceutical salts", J. Pharm. Sci., 1977, 66:1에 개시된 것들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 염의 예는 칼슘 염, 마그네슘 염, 칼륨 염, 나트륨 염, 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말레산, 말론산, 석신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 및 살리실산의 염을 포함하나, 이에 한정되지 않는 산-유도된, 염기-유도된, 유기, 무기, 아민, 및 알칼리 또는 알칼리성 토 금속 염을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
특정의 그룹, 모이어티, 치환체, 및 원자는 이를 통해 그룹, 모이어티, 치환체, 원자가 결합되어 있음을 나타내기 위해 결합 또는 결합들을 교차하거나 캡(capping)시킨 구불구불한 선으로 나타낸다. 예를 들면, 또는 로서 묘사된 프로필 그룹으로 치환된 페닐 그룹은 다음의 구조를 갖는다: . 본원에 사용된 바와 같은, 환 원자 사이의 결합을 통해 사이클릭 그룹(예컨대, 방향족, 헤테로방향족, 융합된 환, 및 포화되거나 불포화된 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬)에 결합된 치환체를 나타내는 표시는 달리 규정하지 않는 한, 사이클릭 그룹이 본원에 설정되거나 본 개시내용이 속한 분야에서 공지된 기술에 따라, 사이클릭 그룹내 임의의 환 위치에서 또는 융합된 환 그룹내 임의의 환 상에서 치환체로 치환될 수 있음을 나타냄을 의미한다. 예를 들면, 그룹, (여기서 아래 첨자 q는 0 내지 4의 정수이고 여기서 치환체 R1의 위치는 일반적으로 기술되는데, 즉, 결합선 구조의 임의의 정점, 즉, 특정의 환 탄소 원자에 직접 부착되지 않는다)은 그룹(여기서 R1은 특정의 환 탄소 원자에 결합된다)의 다음의, 비-제한적인 예를 포함한다: , , ,,, , ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 및 . 또한, 예를 들면, 그룹, (여기서 첨자 n은 0 내지 19의 정수이고 여기서 치환체 R5의 위치는 일반적으로 기술된 바와 같은데, 즉, 결합 선 구조의 임의의 정점에 직접 부착되지 않는 것으로 묘사된다)는 그룹(여기서 치환체 R5는 특정의 환 탄소 원자에 결합된다)의 다음의, 비-제한적인 예를 포함한다: ,
, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 또는 .
본원에 사용된 바와 같은, 어구 "반응성 링커" 또는 약어 "RL"은 (여기서 RG는 반응성 그룹이고 L은 연결 그룹이다)로서 묘사된, 반응성 그룹 및 연결 그룹을 포함하는 1가 그룹을 지칭한다. 연결 그룹은 반응성 그룹을 페이로드에 브릿지(bridge)하는 임의의 2가 모이어티이다. 반응성 링커(RL)는, 이들이 결합된 페이로드와 함께 본원에 기술된 항체 스테로이드 접합체의 제조를 위한 합성 전구체로서 유용한 중간체("링커-페이로드")를 포함한다. 반응성 링커는 반응성 그룹("RG")을 함유하며, 이는 항체, 변형된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편의 반응성 부위와 반응하는 작용 그룹 또는 모이어티이다. 반응성 그룹과 항체, 변형된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편의 반응으로부터 야기되는 모이어티는 연결 그룹과 함께, 본원에 기술된, 접합체의 "결합제 링커"("BL") 부위를 포함한다. 특정의 구현예에서, "반응성 그룹"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 시스테인 또는 라이신 잔기와 반응하는 작용 그룹 또는 모이어티(예컨대, 말레이미드 또는 NHS 에스테르)이다. 특정의 구현예에서, "반응성 그룹"은 클릭 화학 반응을 겪을 수 있는 작용 그룹 또는 모이어티이다. 상기 클릭 화학 반응의 일부 구현예에서, 반응성 그룹은 아지드와 1,3 사이클로부가반응(cycloaddition)을 겪을 수 있는 알킨이다. 이러한 적합한 반응성 그룹을 변형된 알킨(strained alkyne), 예컨대, 변형-촉진된 알킨-아지드 사이클로부가반응(SPAAC)에 적합한 것들, 사이클로알킨, 예컨대, 사이클로옥틴, 벤자뉼화된(benzannulated) 알킨, 및 구리 촉매의 부재하에서 아지드와 1,3 사이클로부가 반응을 겪을 수 있는 알킨을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 알킨은 또한, DIBAC, DIBO, BARAC, DIFO, 치환된, 예컨대, 불소화된 알킨, 아자-사이클로알킨, BCN, 및 이의 유도체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 반응성 그룹을 포함하는 링커-페이로드는 아지도 그룹으로 작용화된 항체를 접합시키는데 유용하다. 이러한 작용화된 항체는 아지도-폴리에틸렌 글리콜 그룹으로 작용화된 항체를 포함한다. 특정의 구현예에서, 이러한 작용화된 항체는 적어도 하나의 글루타민 잔기를 포함하는 항체, 예컨대, 중쇄 Q295(EU 번호매김)를 화학식 H2N-LL-N3(여기서 LL은 2가 폴리에틸렌 글리콜 그룹이다)에 따른 화합물과 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에서 반응시킴으로써 유도된다.
일부 예에서, 반응성 그룹은 알킨, 예컨대, 이며, 이는 클릭 화학을 통해 아지드, 예컨대, 와 반응하여 클릭 화학 생성물, 예컨대, , 이의 레지오이성체(regioisomer), 또는 혼합물을 형성할 수 있다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 알킨, 예컨대, 또는 이고, 이는 클릭 화학을 통해 아지드, 예컨대, 와 반응하여 클릭 화학 생성물, 예컨대, 를 형성할 수 있다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 알킨, 예컨대, 이며, 이는 클릭 화학을 통해 아지드, 예컨대, 와 반응하여 클릭 화학 생성물, 예컨대, , 이의 레지오이성체, 또는 이의 혼합물을 형성한다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 작용 그룹, 예컨대, 이고, 이는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 상의 시스테인 잔기와 반응하여, 이에 대한 결합, 예컨대, (여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고 S는 이를 통해 작용 그룹이 Ab에 결합된 시스테인 잔기 상의 S 원자를 지칭한다)을 형성한다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 작용 그룹, 예컨대, 이고, 이는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 상의 라이신 잔기와 반응하여, 이에 대한 결합, 예컨대, (여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고 N은 이를 통해 작용 그룹이 Ab에 결합한 라이신 잔기 상의 N 원자를 지칭한다)를 형성한다.
본원에 사용된 바와 같은, 어구 "결합제 링커" 또는 "BL"은 결합제(예컨대, 항체 또는 이의 항원-결합)를 본원에 제시된 페이로드 화합물(예컨대, 스테로이드)에 연결시키거나, 접속시키거나(connect), 결합시키는 임의의 2가 그룹 또는 모이어티를 지칭한다. 일반적으로, 본원에 기술된 항체 접합체에 대한 적합한 결합제 링커는 항체의 순환하는 반감기를 이용하는데 충분히 안정하고, 동시에, 접합체의 항원-매개된 내부화 후 이의 페이로드를 방출할 수 있는 것들이다. 링커는 절단가능하거나 절단가능하지 않을 수 있다. 절단가능한 링커는 내부화 후 세포내 대사에 의해 절단되는, 예컨대, 가수분해, 환원, 또는 효소 반응을 통해 절단되는 링커이다. 비-절단가능한 링커는 내부화 후 항체의 라이소좀 분해를 통해 부착된 페이로드를 방출하는 링커이다. 적합한 링커는 산-불안정성 링커, 가수분해-불안정성 링커, 효소적으로 절단가능한 링커, 환원 불안정한 링커, 자가-희생 링커(self-immolative linker), 및 비-절단가능한 링커를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 링커는 또한 글루쿠로니드, 석신이미드-티오에테르, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 단위, 하이드f라존, 말-카프로일 단위(mal-caproyl unit), 이황화물 단위(예컨대, -S-S-, -S-C(R1R2)-(여기서, R1 및 R2는 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌이다)), 카바메이트 단위, 파라-아미노-벤질 단위(PAB), 포스페이트 단위, 예컨대, 모노-, 비스-, 또는 트리스-포스페이트 단위, 및 발린-시트룰린 단위를 포함하나 이에 한정되지 않는, 펩타이드 단위, 예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8개 이상의 아미노산을 함유하는 펩타이드 단위이거나 이를 포함하는 것들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 결합제 링커(BL)는 반응성 링커(RL)의 반응성 그룹(RG)과 결합제, 예컨대, 항체, 변형된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편의 반응성 부위의 반응에 의해 형성된 모이어티를 포함한다.
일부 예에서, BL은 다음의 모이어티를 포함한다: (여기서 는 결합제에 대한 결합이다), 이의 레지오이성체, 또는 이의 혼합물. 일부 예에서, BL은 다음의 모이어티를 포함한다: (여기서 는 결합제에 대한 결합이다), 이의 레지오이성체, 또는 이의 혼합물. 일부 예에서, BL은 다음의 모이어티를 포함한다: (여기서 는 결합제에 대한 결합이다), 이의 레지오이성체, 또는 이의 혼합물. 일부 예에서, BL은 다음의 모이어티를 포함한다: (여기서 는 결합제에 대한 결합이다), 이의 레지오이성체, 또는 이의 혼합물. 일부 예에서, BL은 다음의 모이어티를 포함한다: (여기서 은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 시스테인에 대한 결합이다) 일부 예에서, BL은 다음의 모이어티를 포함한다: (여기서 는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 라이신에 대한 결합이다). 이러한 예에서, 결합제에 대한 결합은 직접적이거나 링커를 통한다. 특수한 구현예에서, 결합제는 아지드로 변형시켜 BL에 대한 연결을 촉진시킨다. 예는 하기에 기술되어 있다.
B. 스테로이드
화학식 (A)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체이성체, 또는 유도체가 본원에 제공된다:
(A)
여기서:
R1 및 R2는, 독립적으로, -H, 알킬, 알킬렌-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이거나; 또는 R1 및 R2는 함께 를 형성하고,
여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이며,
여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은, 각각의 예에서 독립적으로, -NRaRb로 임의 치환되고;
R3은 -OH, RZ-C(O)-X-, 헤테로알킬, 피페리디닐, -NRaRb, -옥시아릴-NRaRb, 또는 -Z-A(RP)t이며;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 알킬, 또는 아릴알킬이고;
RZ는 알킬이며;
X는 O 또는 NRa이고;
Z는 S, S(O), S(O)2, SO2NRa, O, C(O)NRa, C(O), 또는 NRa이며;
A는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
RP는, 각각의 예에서 독립적으로, 할로, 임의 치환된 알킬, -OH, 또는 -NRaRb이며
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 임의 치환된 알킬이고;
n은 0 내지 19의 정수이며;
t는 1 내지 3의 정수이고;
단, (1) (a) R1이 -OH인 경우 또는 (b) R1 및 R2가 함께 (여기서 R4는 C1-9알킬 또는 이다)를 형성하는 경우 R3은 -OH가 아니고 (2) R3은 이 아니다.
일부 구현예에서, 화학식 (A)의 화합물은 화학식 (A 1 )의 구조를 갖는다:
여기서 R1 내지 R3은 위에서 정의한 바와 같고 R5A 및 R5B는 각각 독립적으로, 할로 또는 수소 원자이다.
화학식 (A 1 )의 화합물의 일부 구현예에서, R5A 및 R5B는 수소 원자이다. 화학식 (A 1 )의 화합물의 일부 구현예에서, R5A 및 R5B는 플루오로이다. 화학식 (A 1 )의 화합물의 일부 구현예에서, R5A는 수소 원자이고 R5B는 플루오로이다.
화학식 (A 1 )의 화합물의 일부 구현예에서, R1은 알킬렌-C(O)-O- 또는 -OH이고 R2는 알킬이다.
화학식 (A 1 )의 화합물의 일부 구현예에서, R1 및 R2는 함께 를 형성하며, 여기서 R4는 아릴, 아릴알킬, 또는 알킬이고, 여기서 아릴, 아릴알킬, 및 알킬은 -NRaRb로 임의 치환된다. 일부 구현예에서, R4는 -아릴-NRaRb이다. 일부 구현예에서, R4는 -페닐-NRaRb이다.
화학식 (A 1 )의 화합물의 일부 구현예에서, R1 및 R2는 함께 (여기서 R4는 또는 이다)를 형성한다.
화학식 (A 1 )의 화합물의 일부 구현예에서, R3은 -OH, -NRaRb, RZ-C(O)-X-, 또는 (여기서 RP는 할로이고, t는 0 내지 2의 정수이며, Ra는 H이고, Rb는 H 또는 알킬이며, X는 O 또는 NH이고, RZ는 알킬이다)이다.
화학식 (A 1 )의 화합물의 일부 구현예에서, R3은 -OH, -NH2,
이다.
화학식 (A 1 )의 화합물의 일부 구현예에서, R1 및 R2는 함께 (여기서 R4는 아릴, 아릴알킬, 또는 알킬이고, 여기서 아릴, 아릴알킬, 및 알킬은 -NRaRb로 임의 치환된다)를 형성하고; R3은 -OH, -NRaRb, RZ-C(O)-X-, 또는 (여기서 RP는 할로이고, t는 0 내지 2의 정수이며, Ra는 H이고, Rb는 H 또는 알킬이며, X는 O 또는 NH이고, RZ는 알킬이다)이며; R5는 각각 존재시 독립적으로, 플루오로 또는 수소 원자이다.
화학식 (A 2 )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 n은 0 내지 4의 정수이고 R3는 -OH 또는 RZ-C(O)-O-이며; 여기서 RZ는 알킬이다. 특정의 구현예에서, n은 0 또는 1이다.
화학식 (A 3 )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 n은 1 내지 4의 정수이고 R3은 -OH 또는 RZ-C(O)-O-이며; 여기서 RZ는 알킬이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다.
화학식 (A 4 )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 R3은 -NRaRb이고 R4는 알킬이며, 여기서 Ra 및 Rb는, 각각 독립적으로, 수소 원자 또는 알킬이거나, Ra 및 Rb는 함께 취해져서 3 내지 7원 환을 형성한다. 특정의 구현예에서, R4는 C1-4 알킬이다. 일부 구현예에서, R4는 프로필이다. 특정의 구현예에서, R3은 -NH2, -NHCH3, 또는 -N(CH3)2이다.
화학식 (A 5 )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 R4는 알킬이고, RP1은 할로 또는 수소 원자이고, RP2는 -NRaRb 또는 -OH이며, 여기서 Ra 및 Rb는 각각 독립적으로, 수소 원자 또는 알킬이다. 일부 구현예에서, R4는 C1-4 알킬이고 RP2는 -NH2이다.
화학식 (A 6 )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 R3은 또는 NRaRb이고, 여기서 X는 O 또는 NRa이며, 는 아릴 또는 헤테로아릴이고, RP는 할로이며, t는 0 내지 2의 정수이고, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로, 수소 원자 또는 알킬이며, RZ는 알킬이고, RQ는 알콕시이며, R4는 알킬이다. 일부 구현예에서, R3은 이다.
화학식 (A 7 )의 화합물이 또한 본원에 제시되어 있다.
여기서 R3은 이고, 여기서 X는 O 또는 NRa이며, 는 아릴 또는 헤테로아릴이고, RP는 할로이며, t는 0 내지 2의 정수이고, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로, 수소 원자 또는 알킬이며, R5A는 수소 원자 또는 플루오로이고, R5B는 플루오로이다. 일부 구현예에서, R3는 이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체이성체, 또는 유도체가 본원에 제시되어 있다:
(I)
여기서:
R1 및 R2는, 독립적으로, -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이거나; R1 및 R2는 함께 를 형성하고,
여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이며,
여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은, 각각의 예에서 독립적으로, -NRaRb로 임의 치환되고;
R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, -NRaRb, -NRaRb-아릴옥시, 또는
RaRbN-아릴옥시-이고, 여기서 알킬-C(O)-O- , 헤테로알킬, -NRaRb, 및 RaRbN-아릴옥시-는 할로로 임의 치환되며;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 알킬, 또는 아릴알킬이고;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H 또는 알킬이며;
n은 0 내지 19의 정수이고;
단, (a) 또는 (b)인 경우 R3은 -OH가 아니다: (a) R1은 -OH이거나 (b) R1 및 R2는 함께 (여기서 R4는 C1-9알킬 또는 이다)를 형성한다.
이러한 예 중 일부에서, R1 및 R2는, 독립적으로 -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 및 할로로부터 선택된다. 일부 다른 예에서, R1 및 R2는 함께 를 형성한다. 특정의 예에서, R1은 -H이다. 특정의 다른 예에서, R1은 알킬이다. 일부 예에서, R1은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 다른 예에서, R1은 -OH이다. 특정의 예에서, R1은 할로이다. 특정의 다른 예에서, R1은 -F이다. 일부 예에서, R1은 -Cl이다. 일부 다른 예에서, R1은 -Br이다. 특정의 예에서, R1은 -I이다. 특정의 다른 예에서, R2는 -OH이다. 일부 예에서, R2는 할로이다. 일부 다른 예에서, R2는 -F이다. 특정의 예에서, R2는 -Cl이다. 특정의 다른 예에서, R2는 -Br이다. 일부 예에서, R2는 -I이다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, R5는 -OH이다. 일부 예에서, R5는 -F, -Cl, -Br, 또는 -I와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 할로이다. 일부 예에서, R5는 -F이다. 일부 예에서, R5는 -Cl이다. 일부 예에서, R5는 -Br이다. 일부 예에서, R5는 -I이다. 일부 예에서, R5는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 일부 예에서, R5는 벤질이다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 및 RaRbN-아릴옥시로부터 선택되다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시는 할로로 임의 치환된다. 일부 예에서, R3은 -OH이다. 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
화학식 (I)의 일부 예에서, R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, -NRaRb, 또는 RaRbN-아릴옥시이고, 여기서 알킬-C(O)-O- , 헤테로알킬, -NRaRb, 또는 RaRbN-아릴옥시는 할로로 임의 치환된다. Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이다.
일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시이고, 여기서 Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이다.
일부 예에서, R3는 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시이고, 여기서 Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 이들 실시예 중 일부에서, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환된다. 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸이다. 일부 예에서, R4는 에틸이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸이다. 일부 예에서, R4는 sec-부틸이다. 일부 예에서, R4는 펜틸이다. 일부 예에서, R4는 헥실이다. 일부 예에서, R4는 헵틸이다. 일부 예에서, R4는 옥틸, 또는 노닐이다. 일부 예에서, R4는 페닐 또는 나프틸과 같은 아릴이다. 일부 예에서, R4는 페닐이다. 일부 예에서, R4는 나프틸이다. 일부 예에서, R4는 벤질과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴알킬이다. 일부 예에서, R4는 피페리디닐과 같지만 이에 한정되지 않는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, R4는 4-아미노-페닐이다. 일부 예에서, R4는 할로로 임의 치환된 4-아미노페닐이다.
일부 예에서, R4는 이고, 여기서 Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H 또는 알킬이다.
일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 메틸-아미노, 에틸-아미노, 프로필-아미노, 부틸-아미노, 펜틸-아미노, 헥실-아미노, 헵틸-아미노, 옥틸-아미노, 또는 노닐-아미노와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 아미노로 치환된 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 에틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 펜틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헥실-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헵틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 옥틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 노닐-아미노이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, 본원에서, Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H 및 알킬로부터 선택된다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 H이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 메틸이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 에틸이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 프로필이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 알킬이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 메틸이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 에틸이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 프로필이다.
일부 예에서, n은 0 내지 19의 정수이다. 일부 예에서, n은 0이다. 일부 다른 예에서, n은 1이다. 특정의 예에서, n은 2이다. 일부 다른 예에서, n은 3이다. 특정의 예에서, n은 4이다. 일부 예에서, n은 5이다. 일부 다른 예에서, n은 6이다. 특정의 예에서, n은 7이다. 일부 다른 예에서, n은 8이다. 특정의 예에서, n은 9이다. 일부 예에서, n은 10이다. 일부 다른 예에서, n은 11이다. 특정의 예에서, n은 12이다. 일부 다른 예에서, n은 13이다. 특정의 예에서, n은 14이다. 일부 예에서, n은 15이다. 일부 다른 예에서, n은 16이다. 특정의 예에서, n은 17이다. 일부 다른 예에서, n은 18이다. 특정의 예에서, n은 19이다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, R1이 -OH인 경우 R3은 -OH가 아니다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, R1 및 R2가 함께 (여기서 R4는 C1-9알킬 또는 4-(디메틸-아미노)-페닐이다)를 형성하는 경우 R3은 -OH가 아니다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 R1 및 R2는 함께 를 형성한다. 이러한 예 중 일부에서, R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 특정의 예에서, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환된다. 이러한 실시예 중 일부에서, R4는 알킬이다. 이러한 실시예 중 일부에서, R4는 아릴이다. 이러한 실시예 중 일부에서, R4는 아릴알킬이다. 이러한 실시예 중 일부에서, R4는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같은 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸이다. 일부 예에서, R4는 에틸이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸이다. 일부 예에서, R4는 2급-부틸이다. 일부 예에서, R4는 펜틸이다. 일부 예에서, R4는 헥실이다. 일부 예에서, R4는 헵틸이다. 일부 예에서, R4는 옥틸, 또는 노닐이다. 일부 예에서, R4는 페닐 또는 나프틸과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴이다. 일부 예에서, R4는 페닐이다. 일부 예에서, R4는 나프틸이다. 일부 예에서, R4는 티오펜 또는 페놀과 같지만 이에 한정되지 않는 헤테로아릴-이다. 일부 예에서, R4는 벤질과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴알킬-이다. 일부 예에서, R4는 피페리디닐과 같지만 이에 한정되지 않는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, R4는 4-아미노-페닐이다. 일부 예에서, R4는 할로로 임의 치환된 4-아미노페닐이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R1 및 R2는 함께 를 형성하고, 여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며; 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되고; 여기서 *로 나타낸 탄소의 입체화학은 R 구조이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R1 및 R2는 함께 를 형성하고, 여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며; 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되고; 여기서 *로 나타낸 탄소의 입체화학은 S 구조이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PIa)의 구조를 갖는다:
(PIa).
이러한 실시예 중 일부에서, R1 및 R2는, 독립적으로 -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 및 할로로부터 선택된다. 일부 다른 예에서, R1 및 R2는 함께 를 형성한다. 특정의 예에서, R1은 -H이다. 특정의 다른 예에서, R1은 알킬이다. 일부 예에서, R1은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 다른 예에서, R1은 -OH이다. 특정의 예에서, R1은 할로이다. 특정의 다른 예에서, R1은 -F이다. 일부 예에서, R1은 -Cl이다. 일부 다른 예에서, R1은 -Br이다. 특정의 예에서, R1은 -I이다. 특정의 다른 예에서, R2는 -OH이다. 일부 예에서, R2는 할로이다. 일부 다른 예에서, R2는 -F이다. 특정의 예에서, R2는 -Cl이다. 특정의 다른 예에서, R2는 -Br이다. 일부 예에서, R2는 -I이다.
일부 예에서 화학식 (PIa)에서, R5는 -OH이다. 일부 예에서, R5는 -F, -Cl, -Br, 또는 -I과 같지만 이에 한정되지 않는 할로이다. 일부 예에서, R5는 -F이다. 일부 예에서, R5는 -Cl이다. 일부 예에서, R5는 -Br이다. 일부 예에서, R5는 -I이다. 일부 예에서, R5는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa)에서, R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 및 RaRbN-아릴옥시로부터 선택된다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시는 할로로 임의 치환된다. 일부 예에서, R3은 -OH이다. 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시-이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시-이다. 일부 예에서, R3은 -NRaRb-아릴옥시이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa)에서, R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환된다. 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸이다. 일부 예에서, R4는 에틸이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸이다. 일부 예에서, R4는 펜틸이다. 일부 예에서, R4는 헥실이다. 일부 예에서, R4는 헵틸이다. 일부 예에서, R4는 옥틸, 또는 노닐이다. 일부 예에서, R4는 페닐 또는 나프틸과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴이다. 일부 예에서, R4는 페닐이다. 일부 예에서, R4는 나프틸이다. 일부 예에서, R4는 벤질과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴알킬-이다. 일부 예에서, R4는 피페리디닐과 같지만 이에 한정되지 않는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, R4는 4-아미노-페닐이다. 일부 예에서, R4는 할로로 임의 치환된 4-아미노페닐이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 메틸-아미노, 에틸-아미노, 프로필-아미노, 부틸-아미노, 펜틸-아미노, 헥실-아미노, 헵틸-아미노, 옥틸-아미노, 또는 노닐-아미노와 같이, 그러나 이에 한정되지 않는 아미노로 치환된 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 에틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 펜틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헥실-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헵틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 옥틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 노닐-아미노이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, 본원에서, Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬로부터 선택된다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 -H이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 메틸이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 에틸이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 프로필이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 알킬이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 메틸이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 에틸이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 프로필이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa)에서, n은 0 내지 19의 정수이다. 일부 예에서, n은 0이다. 일부 다른 예에서, n은 1이다. 특정의 예에서, n은 2이다. 일부 다른 예에서, n은 3이다. 특정의 예에서, n은 4이다. 일부 예에서, n은 5이다. 일부 다른 예에서, n은 6이다. 특정의 예에서, n은 7이다. 일부 다른 예에서, n은 8이다. 특정의 예에서, n은 9이다. 일부 예에서, n은 10이다. 일부 다른 예에서, n은 11이다. 특정의 예에서, n은 12이다. 일부 다른 예에서, n은 13이다. 특정의 예에서, n은 14이다. 일부 예에서, n은 15이다. 일부 다른 예에서, n은 16이다. 특정의 예에서, n은 17이다. 일부 다른 예에서, n은 18이다. 특정의 예에서, n은 19이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa)에서, R1이 -OH인 경우 R3은 -OH가 아니다.
일부 예에서, 화학식 (PIa)에서, R1 및 R2가 함께 (여기서 R4는 C1-9알킬 또는 4-(디메틸-아미노)-페닐이다)를 형성하는 경우 R3은 -OH가 아니다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PIb-1) 또는 (PIb-2)의 구조를 갖는다:
또는 (P1b-2).
일부 예에서, 화학식 (PIa)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PIc-1) 또는 (PIc-2)의 구조를 갖는다:
또는 .
일부 예에서, 화학식 (PIa)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PId-1) 또는 (PId-2)의 구조를 갖는다:
또는 .
일부 예에서, n은 0이다. 일부 예에서, n은 1이다. 일부 예에서, n은 2이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PIe-1) 또는 (PIe-2)의 구조를 갖는다:
또는 .
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고 여기서 R3은 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시-로부터 선택되며; 여기서 알킬-C(O)-O-, 또는 RaRbN-아릴옥시-는 할로로 임의 치환된다.
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 할로로 임의 치환된 알킬-C(O)-O-이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 할로로 임의 치환된 RaRbN-아릴옥시-이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 및 RaRbN-아릴옥시-로부터 선택된다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시-는 할로로 임의 치환된다. 일부 예에서, R3은 -OH이다. 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시-이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시-이다. 일부 예에서, R3은 -NRaRb-아릴옥시이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 RaRbN-아릴옥시-이며, 여기서 Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H 또는 알킬이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환된다. 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸이다. 일부 예에서, R4는 에틸이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸이다. 일부 예에서, R4는 펜틸이다. 일부 예에서, R4는 헥실이다. 일부 예에서, R4는 헵틸이다. 일부 예에서, R4는 옥틸, 또는 노닐이다. 일부 예에서, R4는 페닐 또는 나프틸과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴이다. 일부 예에서, R4는 페닐이다. 일부 예에서, R4는 나프틸이다. 일부 예에서, R4는 벤질과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴알킬-이다. 일부 예에서, R4는 피페리디닐과 같지만 이에 한정되지 않는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, R4는 4-아미노-페닐이다. 일부 예에서, R4는 할로로 임의 치환된 4-아미노페닐이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, 화학식 (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), 또는 (PIe-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고 여기서 R4는 메틸-아미노, 에틸-아미노, 프로필-아미노, 부틸-아미노, 펜틸-아미노, 헥실-아미노, 헵틸-아미노, 옥틸-아미노, 또는 노닐-아미노와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 아미노로 치환된 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 에틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 펜틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헥실-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헵틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 옥틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 노닐-아미노이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
화학식 (I)의 화합물은 다음 화합물 중 하나가 아니다:
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PII)의 구조를 갖는다:
(PII).
화학식 (PII)에서, R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 또는 RaRbN-아릴옥시로부터 선택된다. 이러한 실시예 중 일부에서, 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시는 할로로 임의 치환된다. 일부 예에서, R3은 -OH이다. 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시-이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시-이다.
일부 예에서, 화학식 (PII)에서, R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환된다. 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸이다. 일부 예에서, R4는 에틸이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸이다. 일부 예에서, R4는 2급-부틸이다. 일부 예에서, R4는 펜틸이다. 일부 예에서, R4는 헥실이다. 일부 예에서, R4는 헵틸이다. 일부 예에서, R4는 옥틸, 또는 노닐이다. 일부 예에서, R4는 페닐 또는 나프틸과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴이다. 일부 예에서, R4는 페닐이다. 일부 예에서, R4는 나프틸이다. 일부 예에서, R4는 벤질과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴알킬-이다. 일부 예에서, R4는 피페리디닐과 같지만 이에 한정되지 않는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, R4는 4-아미노-페닐이다. 일부 예에서, R4는 할로로 치환된 4-아미노페닐이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 메틸-아미노, 에틸-아미노, 프로필-아미노, 부틸-아미노, 펜틸-아미노, 헥실-아미노, 헵틸-아미노, 옥틸-아미노, 또는 노닐-아미노와 같이, 그러나 이에 한정되지 않는 아미노로 치환된 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 에틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 펜틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헥실-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헵틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 옥틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 노닐-아미노이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, 본원에서, Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H 또는 알킬로부터 선택된다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 -H이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 메틸이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 에틸이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 프로필이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 알킬이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 메틸이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 에틸이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 -H이고 다른 것은 프로필이다.
일부 예에서, 화학식 (PII)에서, n은 0 내지 19로부터 선택된 정수이다. 일부 예에서, n은 0이다. 일부 다른 예에서, n은 1이다. 특정의 예에서, n은 2이다. 일부 다른 예에서, n은 3이다. 특정의 예에서, n은 4이다. 일부 예에서, n은 5이다. 일부 다른 예에서, n은 6이다. 특정의 예에서, n은 7이다. 일부 다른 예에서, n은 8이다. 특정의 예에서, n은 9이다. 일부 예에서, n은 10이다. 일부 다른 예에서, n은 11이다. 특정의 예에서, n은 12이다. 일부 다른 예에서, n은 13이다. 특정의 예에서, n은 14이다. 일부 예에서, n은 15이다. 일부 다른 예에서, n은 16이다. 특정의 예에서, n은 17이다. 일부 다른 예에서, n은 18이다. 특정의 예에서, n은 19이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PIIa) 또는 (PIIb)의 구조를 갖는다:
또는 .
일부 예에서, 화학식 (PIIa) 또는 (PIIb)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R4는 4-아미노-페닐, 4-아미노-1-메틸-페닐, 2-아미노-에틸, 피페리디닐, 또는 프로필로부터 선택된다. 일부 예에서, R4는 4-아미노-페닐이다. 일부 예에서, R4는 4-아미노-1-메틸-페닐이다. 일부 예에서, R4는 2-아미노-에틸이다. 일부 예에서, R4는 피페리디닐이다. 일부 예에서, R4는 프로필이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필이다.
일부 예에서, 화학식 (PIIa) 또는 (PIIb)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3는 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시로부터 선택되며; 여기서 알킬-C(O)-O-, 또는 RaRbN-아릴옥시는 할로로 임의 치환된다.
일부 예에서, 화학식 (PIIa) 또는 (PIIb)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3는 이다.
일부 예에서, 화학식 (PIIa) 또는 (PIIb)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3는 이다.
일부 예에서, 화학식 (PIIa) 또는 (PIIb)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (PIIa) 또는 (PIIb)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PIII)의 구조를 갖는다:
.
화학식 (PIII)에서, R9는 H 또는 -NRaRb로부터 선택된다. 일부 예에서, R9는 H이다. 일부 다른 예에서, R9는 -NRaRb이고, R4, R4, 및 첨자 n은 화학식 I에서 정의하고 상기 나타낸 바와 같다.
화학식 (PIII)에서, R10 및 R11은 각각, 각각의 예에서 독립적으로, H, F, 또는 -NRaRb로부터 선택된다.
일부 예에서, 화학식 (III)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PIIIa) 또는 (PIIIb)의 구조를 갖는다:
또는 .
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PIV)의 구조를 갖는다:
.
화학식 (PIV)에서, -NRaRb, R4, R5, 및 첨자 n은 화학식 I에서 정의하고 상기 나타낸 바와 같다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PV)의 구조를 갖는다:
.
화학식 (PV)에서, R4, R4, 및 첨자 n은 화학식 I에서 정의하고 상기 나타낸 바와 같다.
일부 예에서, 화학식 (PV)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PVa) 또는 (PVb)의 구조를 갖는다:
또는 .
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PVI)의 구조를 갖는다:
.
화학식 (PVI)에서 R3은 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시로부터 선택되고, 여기서 알킬-C(O)-O-, 또는 -NRaRb-아릴옥시는 할로로 임의 치환된다.
일부 예에서, 화학식 (PVI)에서, R4는 -H, -OH, 할로, 또는 알킬로부터 선택된다. 일부 예에서, R4는 -F, -Cl, -Br, 또는 -I와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 할로이다. 일부 예에서, R4는 -F이다. 일부 예에서, R4는 -Cl이다. 일부 예에서, R4는 -Br이다. 일부 예에서, R4는 -I이다. 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 첨자 n은 0 내지 19의 정수이다. 일부 예에서, n은 0이다. 일부 다른 예에서, n은 1이다. 특정의 예에서, n은 2이다. 일부 다른 예에서, n은 3이다. 특정의 예에서, n은 4이다. 일부 예에서, n은 5이다. 일부 다른 예에서, n은 6이다. 특정의 예에서, n은 7이다. 일부 다른 예에서, n은 8이다. 특정의 예에서, n은 9이다. 일부 예에서, n은 10이다. 일부 다른 예에서, n은 11이다. 특정의 예에서, n은 12이다. 일부 다른 예에서, n은 13이다. 특정의 예에서, n은 14이다. 일부 예에서, n은 15이다. 일부 다른 예에서, n은 16이다. 특정의 예에서, n은 17이다. 일부 다른 예에서, n은 18이다. 특정의 예에서, n은 19이다.
일부 예에서, 화학식 (PVI)에서, R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, -NRaRb, 또는 NRaRb-아릴옥시로부터 선택된다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시는 할로로 임의 치환된다. 일부 예에서, R3은 -OH이다. 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시이다.
일부 예에서, R3은 -NRaRb이다. 일부 예에서, R3은 -NH2-이다. 일부 예에서, R3은 -NH(CH-3)이다.
일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시이다.
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PVII)의 구조를 갖는다:
.
화학식 (PVII)에서 R3은 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시로부터 선택되고, 여기서 알킬-C(O)-O-, 또는 RaRbN-아릴옥시는 할로로 임의 치환된다.
일부 예에서, 화학식 (PVII)에서, R4는 -H, -OH, 할로, 또는 알킬로부터 선택된다. 일부 예에서, R4는 -F, -Cl, -Br, 또는 -I와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 할로이다. 일부 예에서, R4는 -F이다. 일부 예에서, R4는 -Cl이다. 일부 예에서, R4는 -Br이다. 일부 예에서, R4는 -I이다. 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 첨자 n은 0 내지 19의 정수이다. 일부 예에서, n은 0이다. 일부 다른 예에서, n은 1이다. 특정의 예에서, n은 2이다. 일부 다른 예에서, n은 3이다. 특정의 예에서, n은 4이다. 일부 예에서, n은 5이다. 일부 다른 예에서, n은 6이다. 특정의 예에서, n은 7이다. 일부 다른 예에서, n은 8이다. 특정의 예에서, n은 9이다. 일부 예에서, n은 10이다. 일부 다른 예에서, n은 11이다. 특정의 예에서, n은 12이다. 일부 다른 예에서, n은 13이다. 특정의 예에서, n은 14이다. 일부 예에서, n은 15이다. 일부 다른 예에서, n은 16이다. 특정의 예에서, n은 17이다. 일부 다른 예에서, n은 18이다. 특정의 예에서, n은 19이다. 일부 예에서, 화학식 (PVII)에서, R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, -NRaRb, 또는 RaRbN-아릴옥시로부터 선택된다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬-C(O)-O- 또는 NRaRb-아릴옥시는 할로로 임의 치환된다. 일부 예에서, R3은 -OH이다. 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시이다.
일부 예에서, R3은 -NRaRb이다. 일부 예에서, R3은 -NH2-이다. 일부 예에서, R3은 -NH(CH-3)이다.
일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시-이다.
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (PVII)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PVIIa)의 구조를 갖는다:
(PVIIa).
일부 예에서, 화학식 (PVII)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PVIIb)의 구조를 갖는다:
(PVIIb).
일부 예에서, 화학식 (PVII), (PVIIa), 또는 (PVIIb)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 할로로 임의 치환된 또는 RaRbN-아릴옥시-이다.
일부 예에서, 화학식 (PVII), (PVIIa), 또는 (PVIIb)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (PVII), (PVIIa), 또는 (PVIIb)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (PVII)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PVIIb-1) 또는 (PVIIb-2)의 구조를 갖는다:
또는 .
일부 예에서, 화학식 (PVII), (PVIIa), (PVIIb), (PVIIb-1), 또는 (PVIIb-2)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 알킬-C(O)-O- 또는 RaRbN-아릴옥시이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 (PVIII)의 구조를 갖는다:
임의의 화학식 (PI), (PIa), (PIb-1), (PIb-2), (PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), (PIe-2), (PII), (PIIa), (PIIb), (PIIIa), (PIIIb), (PIV), (PV), (PVa), (PVb), (PVI), (PVII), (PVIIa), (PVIIb), (PVIIb-1), 또는 (PVIIb-2) 중 어는 것의 일부 예에서, 여기서 할로는, 존재하는 경우, 플루오로이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 예에서, R1 및 R2는, 독립적으로 -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로로부터 선택된다. 일부 다른 예에서, R1 및 R2는 함께 를 형성한다. 특정의 예에서, R1은 -H이다. 특정의 다른 예에서, R1은 알킬이다. 일부 예에서, R1은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 다른 예에서, R1은 -OH이다. 특정의 예에서, R1은 할로이다. 특정의 다른 예에서, R1은 -F이다. 일부 예에서, R1은 -Cl이다. 일부 다른 예에서, R1은 -Br이다. 특정의 예에서, R1은 -I이다. 특정의 다른 예에서, R2는 -OH이다. 일부 예에서, R2는 할로이다. 일부 다른 예에서, R2는 -F이다. 특정의 예에서, R2는 -Cl이다. 특정의 다른 예에서, R2는 -Br이다. 일부 예에서, R2는 -I이다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 알킬, 또는 아릴알킬로부터 선택된다. 일부 예에서, R5는 -OH이다. 일부 예에서, R5는 -F, -Cl, -Br, 또는 -I와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 할로이다. 일부 예에서, R5는 -F이다. 일부 예에서, R5는 -Cl이다. 일부 예에서, R5는 -Br이다. 일부 예에서, R5는 -I이다. 일부 예에서, R5는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 일부 예에서, R5는 벤질이다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환된다. 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸이다. 일부 예에서, R4는 에틸이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸이다. 일부 예에서, R4는 2급-부틸이다. 일부 예에서, R4는 펜틸이다. 일부 예에서, R4는 헥실이다. 일부 예에서, R4는 헵틸이다. 일부 예에서, R4는 옥틸, 또는 노닐이다. 일부 예에서, R4는 페닐 또는 나프틸과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴이다. 일부 예에서, R4는 페닐이다. 일부 예에서, R4는 나프틸이다. 일부 예에서, R4는 벤질과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴알킬-이다. 일부 예에서, R4는 피페리디닐과 같지만 이에 한정되지 않는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, R4는 4-아미노-페닐이다. 일부 예에서, R4는 할로로 임의 치환된 4-아미노페닐이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, R4는 메틸-아미노, 에틸-아미노, 프로필-아미노, 부틸-아미노, 펜틸-아미노, 헥실-아미노, 헵틸-아미노, 옥틸-아미노, 또는 노닐-아미노와 같이, 그러나 이에 한정되지 않는 아미노로 치환된 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 에틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필-아미노이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 2급-부틸이다. 일부 예에서, R4는 펜틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헥실-아미노이다. 일부 예에서, R4는 헵틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 옥틸-아미노이다. 일부 예에서, R4는 노닐-아미노이다.
일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다. 일부 예에서, R4는 이다.
일부 예에서, 본원에서, Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H 또는 알킬로부터 선택된다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 H이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 메틸이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 에틸이다. 일부 예에서, Ra 및 Rb 둘 다는 프로필이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 H이고 다른 것은 알킬이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 H이고 다른 것은 메틸이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 H이고 다른 것은 에틸이다. 일부 예에서, Ra 또는 Rb 중 하나는 H이고 다른 것은 프로필이다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, n은 0 내지 19의 정수이다. 일부 예에서, n은 0이다. 일부 다른 예에서, n은 1이다. 특정의 예에서, n은 2이다. 일부 다른 예에서, n은 3이다. 특정의 예에서, n은 4이다. 일부 예에서, n은 5이다. 일부 다른 예에서, n은 6이다. 특정의 예에서, n은 7이다. 일부 다른 예에서, n은 8이다. 특정의 예에서, n은 9이다. 일부 예에서, n은 10이다. 일부 다른 예에서, n은 11이다. 특정의 예에서, n은 12이다. 일부 다른 예에서, n은 13이다. 특정의 예에서, n은 14이다. 일부 예에서, n은 15이다. 일부 다른 예에서, n은 16이다. 특정의 예에서, n은 17이다. 일부 다른 예에서, n은 18이다. 특정의 예에서, n은 19이다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, R1이 -OH인 경우 R3은 -OH가 아니다.
일부 예에서, 화학식 (I)에서, R1 및 R2가 함께 (여기서 R4는 C1-9알킬 또는 4-(디메틸-아미노)-페닐이다)를 형성하는 경우, R3은 -OH가 아니다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R1 및 R2는 함께 를 형성한다. 이러한 예 중 일부에서, R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 특정의 예에서, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환된다. 이러한 예 중 일부에서, R4는 알킬이다. 이러한 예 중 일부에서, R4는 아릴이다. 이러한 예 중 일부에서, R4는 아릴알킬이다. 이러한 예 중 일부에서, R4는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 또는 노닐과 같지만 이에 한정되지 않는 알킬이다. 일부 예에서, R4는 메틸이다. 일부 예에서, R4는 에틸이다. 일부 예에서, R4는 n-프로필이다. 일부 예에서, R4는 i-프로필이다. 일부 예에서, R4는 n-부틸이다. 일부 예에서, R4는 i-부틸이다. 일부 예에서, R4는 t-부틸이다. 일부 예에서, R4는 2급-부틸이다. 일부 예에서, R4는 펜틸이다. 일부 예에서, R4는 헥실이다. 일부 예에서, R4는 헵틸이다. 일부 예에서, R4는 옥틸이다. 일부 예에서, R4는 노닐이다. 일부 예에서, R4는 페닐 또는 나프틸과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴이다. 일부 예에서, R4는 페닐이다. 일부 예에서, R4는 나프틸이다. 일부 예에서, R4는 벤질과 같지만 이에 한정되지 않는 아릴알킬-이다. 일부 예에서, R4는 피페리디닐과 같지만 이에 한정되지 않는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, R4는 4-아미노-페닐이다. 일부 예에서, R4는 할로로 임의 치환된 4-아미노페닐이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R1 및 R2는 함께 를 형성하고 여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며; 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되고; 여기서 *로 나타낸 탄소의 입체화학은 R이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R1 및 R2는 함께 를 형성하고 여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며; 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되고; 여기서 *로 나타낸 탄소의 입체화학은 S이다.
화학식 (I)에서, R1이 -OH인 경우 또는 R1 및 R2가 함께 (여기서 R4는 C1-9알킬 또는 4-(디메틸-아미노)-페닐이다)를 형성하는 경우, R3은 -OH가 아니다.
일부 예에서, 본원에 제시된 페이로드는 부데소니드 또는 디플로라손의 유도체 또는 유사체이다. 특정의 예에서, 유도체는 부데소니드 또는 디플로라손에 대한 구조에 관련된 분자를 함유하는 아민 또는 아닐린이다. 본원에 제시된 바와 같이, 본원에 제시된 페이로드 뿐만 아니라 다른 스테로이드는 본원에 제시된 방법을 기반으로 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 접합될 수 있다. 본원에 제시된 바와 같이, 본원에 제시된 페이로드 뿐만 아니라 다른 스테로이드는 본원에 제시된 방법을 기반으로 항체, 또는 이의 항원-결합, 및 또한 사이클로덱스트린 모이어티에 접합될 수 있다. 본원에 교시된 바와 같이, 안정한 링커-페이로드를 이러한 접합 방법과 함께 사용하여 항체-스테로이드-접합체를 생산할 수 있다. 일부 예에서, 항체-스테로이드 접합체는 또한 사이클로덱스트린 모이어티를 포함한다.
일부 구현예에서, 화학식 (I 1 )의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체이성체, 또는 유도체가 본원에 제공된다:
(I 1 ),
여기서:
R1 및 R2는, 독립적으로, -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이거나; R1 및 R2는 함께 를 형성하고,
여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이며,
여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은, 각각의 예에서 독립적으로, -NRaRb로 임의 치환되고;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 알킬, 또는 아릴알킬이며;
R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 또는 -X-아릴-NRaRb이고, 여기서 X는 S, S(O), S(O)2, SO2NRa, CONRa, C(O), 또는 NRa로부터 선택되고, 여기서 알킬-C(O)-O- 및 -X-아릴-NRaRb는 할로 또는 전구약물로 임의 치환되며,
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H 또는 알킬, 아릴이고;
Rc는 -H 또는 알킬이며;
n은 0 내지 19의 정수이고;
단, (a) 또는 (b)인 경우: (a) R1이 -OH인 경우 또는 (b) R1 및 R2가 함께 를 형성하고 R4가 C1-9알킬 또는 인 경우, R3는 -OH가 아니다.
이러한 예 중 일부에서, 알킬-C(O)-O- 또는 -X-아릴-NRaRb는 할로로 임의 치환된다. 일부 예에서, R3은 -OH이다. 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서, R3은 RaRbN-아릴옥시이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, R3은 -X-아릴-NRaRb이다.
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 다음 구조 중 하나로부터 선택된 구조를 갖는다:
, , ,, 또는 .
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 이러한 예에서, q는 0 내지 5의 정수이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 다음 구조 중 하나로 부터 선택된 구조를 갖는다:
, , ,, 또는 .
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 이러한 예에서, q는 0 내지 5의 정수이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물이 본원에 제시되어 있고, 여기서 R3은 다음 구조 중 하나로부터 선택된 구조를 갖는다:
, , ,, 또는 .
일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체가 본원에 제시되어 있고, 여기서 화합물은 화학식 1000의 구조를 갖는다:
. 화학식 1000에서, R1 및 R2는, 독립적으로, -H, -OH, 알킬, -O-C(O)-알킬, 및 할로로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; R1 및 R2는 함께 를 형성하고, 여기서 R4는 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이고; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이다. R3은 -OH, -O-C(O)-알킬, -O-아릴, -NRaRb, -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이며; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이다. R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 및 알킬로 이루어진 그룹에서의 치환체로부터 선택되고; n는 0 내지 19의 정수이고; 각각의 R5는 임의의 환 원자 상에 위치한다. Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 및 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; Ra 및 Rb는 폐환되어 이들이 부착된 N인 하나의 헤테로 원자를 포함하는, 3 내지 6개의 환 원자를 지닌 사이클로헤테로알킬을 형성한다. Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, -PO4H, NH2, -C(O)OH, 및 -C(O)CH3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 치환체로 임의 치환된다.
특정의 구현예에서, 화학식 1000에 따른 화합물이 본원에 제공되고, 여기서 R3은 -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이고; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이고; R4는 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이며; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이다.
특정의 구현예에서, 화학식 1000에 따른 화합물이 본원에 제공되며, 여기서 R3은 -OH, -O-C(O)-알킬, -O-아릴, -NRaRb, -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이고; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이며; R4는 -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; 여기서 X 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이며; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이다.
특정의 구현예에서, 화학식 1000에 따른 화합물이 본원에 제공되며, 여기서 R3은 -NRaRb이고; R4는 알킬이다. 특정의 구현예에서, R3은 -NH2이다. 특정의 구현예에서, R4는 n-프로필이다. 특정의 구현예에서, R3은 -NH2이고 R4는 n-프로필이다.
특정의 구현예에서, 화학식 1000의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체는 화학식 1010, 1020, 1030, 또는 1040에 따른다:
특정의 구현예에서, 화학식 1000의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체는 화학식 1110, 1120, 1130, 또는 1140에 따른다:
화학식 1000 내지 1140 중 임의의 것에 따른 특정의 구현예에서, R3은 -OH 또는 -O-C(O)-알킬이고; R4는 -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-NRaRb, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이며; 여기서 X는 부재하거나 -CH2-이다. 특정의 구현예에서, R4는 -알킬렌-NH2, -C6H5-NH2 또는 -CH2-C6H5-NH2이다.
화학식 1000 내지 1140 중 임의의 것에 따른 특정의 구현예에서, R3은 -O-아릴, -NRaRb, -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이고; 여기서 X 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이며; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이고; R4는 알킬, 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이다. 특정의 구현예에서, R3는 -O-아릴렌-NRaRb, -O-헤테로아릴렌-NRaRb이고; 여기서 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 중수소, 하이드록실, 또는 메톡실로 임의 치환된다. 특정의 구현예에서, R3은 -O-페닐-NRaRb, -O-헤테로아릴렌-NRaRb이고; 여기서 페닐 또는 헤테로아릴은 할로겐 또는 중수소로 임의 치환된다. 당해 절에 따른 특정의 구현예에서, R4는 n-프로필이다.
특정의 구현예에서, 화학식 1000 내지 1140 중 임의의 것에 따른 화합물이 본원에 제공되며, 여기서 R3은 -NRaRb이고; R4는 알킬이다. 특정의 구현예에서, R3은 -NH2이다. 특정의 구현예에서, R4는 n-프로필이다. 특정의 구현예에서, R3은 -NH2이고 R4는 n-프로필이다.
화학식 1000 내지 1140 중 임의의 것에서, R3은 상기 제공된 임의의 특정의 R3이다. 특수한 구현예에서, R3은 -NH2, -N(H)CH3, -N(CH3)2, 또는 이다. 특수한 구현예에서, R3은 이다.
특수한 구현예에서, R3은 이다.
특수한 구현예에서, R3은 이다.
화학식 1000 내지 1140 중 임의의 것에서, R4는 상기 제공된 임의의 특정의 R4일 수 있다. 특수한 구현예에서, R4는 -CH2-CH2-NH2, 로부터 선택된다. 특수한 구현예에서, R4는 n-프로필이다.
하기 화학식을 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 입체이성체가 또한 본원에 제시된다:
.
화학식 (I), (I I ), 및 (A 1 ) 내지 (A 7 )의 것들을 포함하는, 본원에 기술된 스테로이드 페이로드의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 결정성 형태, 무정형 형태, 다형성 형태, 레지오이성체(regioismoer), 입체이성체, 전구약물, 예컨대, 포스파타제-전구약물, 글루코즈-전구약물, 에스테르 전구 약물 등, 대사산물, 및 생리학적 부가물이 본 개시내용의 영역내에 포함된다.
C. 단백질 스테로이드 접합체
본원에 기술된 스테로이드의 단백질 접합체가 본원에 제공된다. 이러한 접합체는 단백질, 예컨대, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하며, 이들은 예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 결합제 링커를 통해 상기 단락 B에 기술된 화합물, 예컨대, 화학식 (A), (A 1 ), (A 2 ), (A 3 ), (A 4 ), (A 5 ), (A 6 ), (A 7 ), (I), (I 1 ), (PIa), (PIb-1), (PIb-2), PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), (PIe-2), (PII), (PIIa), (PIIb), (PIII), (PIIIa), (PIIIb), (PIV), (PV), (PVa), (PVb), (PVI), (PVII), (PVIIa), (PVIIb), (PVIIb-1), (PVIIb-2), (PVIII), 및 (1000) 내지 (1140)의 화합물에 공유결합으로 연결된다.
결합제 링커는 예컨대, 아미드, 에테르, 에스테르, 카바메이트, 또는 아민을 통해, 스테로이드의 임의의 적합한 모이어티 또는 위치에서 본원에 기술된 스테로이드에 연결될 수 있다. 예를 들면, 결합제 링커는 R1, R3, 또는 R4 또는 하이드록실 그룹을 통해 화학식 (A 1 )으로 묘사된 화합물에 부착될 수 있다:
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 스테로이드는 스테로이드의 아미노 또는 하이드록실 그룹을 링커 상에 존재하는 적합한 반응성 그룹과 반응함으로써 결합제 링커에 부착된다. 일부 구현예에서, 결합제 링커는 또한 사이클로덱스트린 모이어티를 포함한다. 예를 들면, 사이클로덱스트린 모이어티는 결합제 링커의 화학적 골격 구조에 결합될 수 있다.
특정의 구현예에서, 다음 구조를 갖는 화합물이 본원에 제공되며:
BA-(L-PAY) x
여기서 BA는 본원에 기술된 바와 같은 결합제이고; L은 본원에 기술된 바와 같은 임의의 링커이며; PAY는 본원에 기술된 바와 같은 스테로이드 화합물이고; x는 1 내지 30의 정수이다. 특수한 구현예에서, 각각의 PAY는 화학식 (A), (A 1 ), (A 2 ), (A 3 ), (A 4 ), (A 5 ), (A 6 ), (A 7 ), (I), (I 1 ), (PIa), (PIb-1), (PIb-2), PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), (PIe-2), (PII), (PIIa), (PIIb), (PIII), (PIIIa), (PIIIb), (PIV), (PV), (PVa), (PVb), (PVI), (PVII), (PVIIa), (PVIIb), (PVIIb-1), (PVIIb-2), (PVIII), 및 (1000) 내지 (1140)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화학식에 따른 화합물로부터 원자, 예를 들면, 수소 원자를 제거함으로써 수득가능한 라디칼이다.
특정의 구현예에서, 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제공된다:
여기서 (a) 또는 (b)는 다음과 같고:
(a) R3은 -BL-,-BL-X-, 또는 이고;
R1 및 R2는 각각, 독립적으로, -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이거나; 또는 R1 및 R2는 함께 를 형성하고, 여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이며; 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되거나;
(b) R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, -NRaRb 또는 아릴옥시이고, 여기서 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, 또는 아릴옥시는 -NRaRb, -NRaRb-아릴옥시, 또는 할로로 임의 치환되고, R1 및 R2는 함께 를 형성하며, 여기서 R4는 -BL-, 또는 -BL-Y이고, 여기서 Y는 N-함유 2가 헤테로사이클이고;
-BL-은 2가 결합제 링커이며;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 알킬, 또는 아릴알킬이고;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이며;
RP는, 각각의 예에서 독립적으로, 할로이고;
BA는 -BL-에 결합된 결합제이며;
X는, 각각의 예에서 독립적으로, NRa 또는 O이고;
는 아릴 또는 헤테로아릴이며;
t는 0 내지 2의 정수이고;
x는 1 내지 30의 정수이며;
n은 0 내지 19로부터의 정수이다.
일부 예에서, 첨자 x는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30이다. 일부 예에서, 첨자 x는 0이다. 일부 예에서, 첨자 x는 1이다. 일부 예에서, 첨자 x는 2이다. 일부 예에서, 첨자 x는 3이다. 일부 예에서, 첨자 x는 4이다. 일부 예에서, 첨자 x는 5이다. 일부 예에서, 첨자 x는 6이다. 일부 예에서, 첨자 x는 7이다. 일부 예에서, 첨자 x는 8이다. 일부 예에서, 첨자 x는 9이다. 일부 예에서, 첨자 x는 10이다. 일부 예에서, 첨자 x는 11이다. 일부 예에서, 첨자 x는 12이다. 일부 예에서, 첨자 x는 13이다. 일부 예에서, 첨자 x는 14이다. 일부 예에서, 첨자 x는 15이다. 일부 예에서, 첨자 x는 16이다. 일부 예에서, 첨자 x는 17이다. 일부 예에서, 첨자 x는 18이다. 일부 예에서, 첨자 x는 19이다. 일부 예에서, 첨자 x는 20이다. 일부 예에서, 첨자 x는 21이다. 일부 예에서, 첨자 x는 22이다. 일부 예에서, 첨자 x는 23이다. 일부 예에서, 첨자 x는 24이다. 일부 예에서, 첨자 x는 25이다. 일부 예에서, 첨자 x는 26이다. 일부 예에서, 첨자 x는 27이다. 일부 예에서, 첨자 x는 28이다. 일부 예에서, 첨자 x는 29이다. 일부 예에서, 첨자 x는 30이다.
화학식 (III)의 일부 예에서, R1 및 R2는, 각각 독립적으로, -H, 알킬, 또는 -OH이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R1 또는 R2 중 하나는 -H, 알킬, 또는 -OH이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R1 및 R2 둘 다는 -H, 알킬, 또는 -OH이다.
화학식 (III)의 일부 예에서, R1 및 R2는 함께 를 형성한다. 일부 예에서, R4는 -RL이다. 일부 예에서, R4는 RL-NRa-아릴이다. 일부 다른 예에서, R4는 알킬이다. 특정의 예에서, R4는 아릴알킬이고, 일부 예에서, R4는 아릴이다. 다른 예에서, R4는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 임의 치환된다.
화학식 (III)의 일부 예에서, R5는 -H 또는 할로이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R5는 -H 또는 플루오로이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R5 중 하나는 -H 또는 할로이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R5는 -H 또는 할로이고 n은 2이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R5는 -F이고 n은 1이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R5는 -F이고 n은 2이다.
화학식 (III)의 일부 예에서, R3은 BL이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R3은 RL-NRa-아릴옥시-이다. 화학식 (III)의 일부 다른 예에서, R3은 -OH이다. 화학식 (III)의 일부 다른 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 화학식 (III)의 일부 다른 예에서, R3은 헤테로알킬이다. 화학식 (III)의 일부 다른 예에서, R3은 -N-RaRb이다. 화학식 (III)의 일부 다른 예에서, R3은 아릴이다. 화학식 (III)의 일부 다른 예에서, R3은 아릴옥시이다. 화학식 (III)의 일부 다른 예에서, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, 또는 아릴옥시는 -NRaRb 또는 할로로 임의 치환된다.
화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 -OH이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서 R3은 이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R3은 헤테로알킬이다. 일부 예에서 R3은 또는 이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R3은 또는 이다. 화학식 (III)의 일부 예에서, R3은 -NRaRb이다. 일부 예에서, R3은 -NRaRb-아릴옥시이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서 R3은 아릴옥시이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
화학식 (III)에서, 첨자 n은 0 내지 19의 정수이다. 일부 예에서, n은 0이다. 일부 다른 예에서, n은 1이다. 특정의 예에서, n은 2이다. 일부 다른 예에서, n은 3이다. 특정의 예에서, n은 4이다. 일부 예에서, n은 5이다. 일부 다른 예에서, n은 6이다. 특정의 예에서, n은 7이다. 일부 다른 예에서, n은 8이다. 특정의 예에서, n은 9이다. 일부 예에서, n은 10이다. 일부 다른 예에서, n은 11이다. 특정의 예에서, n은 12이다. 일부 다른 예에서, n은 13이다. 특정의 예에서, n은 14이다. 일부 예에서, n은 15이다. 일부 다른 예에서, n은 16이다. 특정의 예에서, n은 17이다. 일부 다른 예에서, n은 18이다. 특정의 예에서, n은 19이다.
일부 예에서, 화학식 (IIIa)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
(IIIa);
여기서:
BA는 결합제이고;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 또는 알킬이며;
R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, -NRaRb, -NRaRb-아릴옥시, 또는 아릴옥시로부터 선택되고, 여기서 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, 또는 아릴옥시는 -NRaRb 또는 할로로 임의 치환되며;
BL은 결합제 링커이고;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H, 알킬, 및 알킬-C(O)로부터 선택되며;
n은 0 내지 19의 정수이고;
x는 1 내지 30의 정수이다.
일부 예에서, 화학식 (IIIa2)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
(IIIa2);
여기서:
BA는 결합제이고;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 또는 알킬이며;
R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, -NRaRb, -NRaRb-아릴옥시, 또는 아릴옥시이고, 여기서 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, 또는 아릴옥시는 -NRaRb 또는 할로로 임의 치환되며;
BL은 결합제 링커이고;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H, 알킬, 또는 알킬-C(O)로부터 선택되며;
n은 0 내지 19의 정수이고;
x는 0 내지 30의 정수이다.
화학식 (IIIa2)의 일부 예에서, R3은 -OH이다. 화학식 (IIIa2)의 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서 R3은 이다. 화학식 (IIIa2)의 일부 예에서, R3은 헤테로알킬이다. 일부 예에서 R3은 또는 이다. 화학식 (IIIa2)의 일부 예에서, R3은 -NRaRb이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서 R3은 아릴옥시이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서 R3은 이다.
일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서 R3은 이다. 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (IIIa2)의 화합물은 다음 구조를 갖는다:
여기서:
BA는 결합제이고;
R3은 -OH 또는 알킬-C(O)-O-이며;
R5a 및 R5b는 각각, 독립적으로, -F 또는 H이고;
BL은 결합제 링커이며;
x는 1 내지 30의 정수이다.
일부 예에서, 화학식 (IIIb)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
(IIIb);
여기서
BA는 결합제이고;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 또는 알킬이며;
R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬로부터 선택되고, 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되며;
RL은 결합제 링커이고;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H, 알킬, 및 알킬-C(O)로부터 선택되며;
n은 0 내지 19의 정수이고;
x는 0 내지 30의 정수이다.
화학식 (IIIb)의 일부 예에서, R5는 -H 또는 할로이다. 화학식 (IIIb)의 일부 예에서, R5는 플루오로이다. 화학식 (IIIb)의 일부 예에서, n은 적어도 2이고, R5 중 2개의 할로이다. 화학식 (IIIb)의 일부 예에서, R5는 -F이고 n은 1이다. 화학식 (IIIb)의 일부 예에서, R5는 -F이다.
화학식 (IIIb)의 일부 예에서, R4는 알킬이다. 화학식 (IIb)의 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, i-부틸, 펜틸 모이어티, 헥실 모이어티, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실이다. 화학식 (IIIb)의 일부 예에서, R4는 n-프로필이다.
일부 예에서, 화학식 (IIIb)의 화합물은 다음 구조를 갖는다:
여기서:
BA는 결합제이고;
R4는 알킬이며;
R5a 및 R5b는 각각, 독립적으로, -F 또는 H이고;
BL은 결합제 링커이며;
x는 1 내지 30의 정수이다.
일부 예에서, 화학식 (IIIc)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
(IIIc);
여기서
BA는 결합제이고;
R1 및 R2는, 독립적으로, -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이며;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 또는 알킬로부터 선택되고;
BL은 결합제 링커이며;
n은 0 내지 19의 정수이고;
x는 1 내지 30의 정수이다.
화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R5는 할로이다. 화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R5는 플루오로이다. 화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R5 중 하나는 할로이다. 화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R5 중 2개는 할로이다. 화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R5는 -F이고 n은 2이다.
화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R1은 CH3이다.
화학식 (IIIc)의 다른 예에서, R1은 OH이다.
화학식 (IIIc)의 일부 다른 예에서, R1은 H이다.
화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R2는 CH3이다.
화학식 (IIIc)의 다른 예에서, R2는 OH이다.
화학식 (IIIc)의 일부 다른 예에서, R2는 H이다.
화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R1은 CH3이고 R2는 CH3이다.
화학식 (IIIc)의 일부 다른 예에서, R1는 CH3이고 R2는 OH이다.
화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R1은 CH3이고 R2는 H이다.
화학식 (IIIc)의 일부 다른 예에서, R1은 OH이고 R2는 CH3이다.
화학식 (IIIc)의 일부 다른 예에서, R1은 OH이고 R2는 OH이다.
화학식 (IIIc)의 일부 예에서, R1은 H이고 R2는 H이다.
화학식 (IIIc)의 일부 다른 예에서, R1은 H이고 R2는 OH이다.
하학식 (IIIc)의 일부 다른 예에서, R1은 H이고 R2는 H이다.
일부 구현예에서, 화학식 (IIIc)의 화합물은 다음 구조를 갖는다:
(IIIc)
여기서:
BA는 결합제이고;
R2는 메틸이며;
R5a 및 R5b는 각각, 독립적으로, -F 또는 H이고;
BL은 결합제 링커이며;
x는 0 내지 30의 정수이다.
일부 구현예에서, 화학식 (IIIc)의 화합물은 다음 구조를 갖는다:
BA는 결합제이고;
RG는 반응성 그룹 잔기이고;
CD는 사이클로덱스트린이며;
SP1은 스페이서 그룹(spacer group)이고;
AA4는 아미노산 잔기이며;
AA5는 디펩타이드 잔기이고;
PEG는 폴리에틸렌 글리콜이며;
m은 0 내지 4의 정수이고;
x는 0 내지 30의 정수이며;
R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이고; 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되고;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이며;
BA는 -BL-에 결합된 결합제이고;
SP 1 및 SP 2 는 각각, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고, 여기서 SP 1 은 3가 링커를 포함하며; AA 4 는 아미노산 잔기를 포함하는 3가 링커이며; AA 5 는 디-펩타이드 잔기이고; PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며; 여기서 는 이를 통해 나타낸 화학 그룹이 화학식내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타내고, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이고, 여기서 적어도 하나의 CD는 존재하고, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이며; 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, AA 4 또는 AA 5 중 어느 하나는, 각각의 예에서 독립적으로, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합으로부터 선택된 아미노산을 포함한다. 특정의 구현예에서, AA 4 는 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합으로부터 선택된 아미노산이다. 특정의 구현예에서, AA 4 는 라이신이다. 특정의 구현예에서, AA 4 는 라이신 또는 라이신의 유도체이다. 특정의 구현예에서, AA 5 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 글루타메이트-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 라이신-발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 라이신-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 글루타메이트-발린-시트룰린이다. 일부 예에서, SP 1 은 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, SP 2 는 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이며, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다.
화학식 (B 2 )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 n은 0 내지 4의 정수이고, R3은 -OH 또는 RZ-C(O)-O-이며; 여기서 RZ는 알킬이고, BL은 결합제 링커이며, BA는 결합제이고, x는 1 내지 30의 정수이다. 특정의 구현예에서, n은 0 또는 1이고 x는 1 내지 6의 정수이다. 특정의 구현예에서, x는 4이다.
화학식 (B 3 )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 n은 1 내지 4의 정수이고, R3은 -OH 또는 RZ-C(O)-O-이며; 여기서 RZ는 알킬이고, BL은 결합제 링커이며, BA는 결합제이고, x는 1 내지 30의 정수이다. 특정의 구현예에서, n은 2이고 x는 1 내지 6의 정수이다. 특정의 구현예에서, x는 4이다.
화학식 (B 4 )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 R4는 알킬이고, 여기서 Ra는 수소 원자 또는 알킬이고, BL은 결합제 링커이며, BA는 결합제이다. 특정의 구현예에서, R4는 C1-4 알킬이다. 일부 구현예에서, R4는 프로필이다. 특정의 구현예에서, R3은 -NH2, -NHCH3, 또는 -N(CH3)2이다. 특정의 구현예에서, x는 1 내지 6의 정수이다. 특정의 구현예에서, x는 4이다.
화학식 (B 5 )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 R4는 알킬이고, RP1는 할로 또는 수소 원자이며, X는 NRa 또는 O이고, 여기서 Ra는 수소 원자 또는 알킬이며, BL은 결합제 링커이고, BA는 결합제이며, x는 1 내지 30의 정수이다. 일부 구현예에서, R4는 C1-4 알킬이고, X는 NH이며, x는 1 내지 6의 정수이다. 특정의 구현예에서, x는 4이다.
화학식 (B 6A )의 화합물이 또한 제시되어 있다:
여기서 X는 O 또는 NRa이고, 는 아릴 또는 헤테로아릴이며, RP는 할로이고, t는 0 내지 2의 정수이며, Ra는 수소 원자 또는 알킬이고, BL은 결합제 링커이며, BA는 결합제이고, x는 1 내지 30의 정수이며, R4는 알킬이다. 일부 구현예에서 X는 O이고, R4는 알킬이며, x는 1 내지 6의 정수이다. 특정의 구현예에서, x는 4이다.
화학식 (B 6B )의 화합물이 또한 본원에 제시되어 있다:
여기서 Ra는 수소 원자 또는 알킬이고, BL은 결합제 링커이며, BA는 결합제이고, x는 1 내지 30의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 1 내지 6의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 4이다.
본원에 사용된 바와 같은, 어구 "결합제 링커", 또는 "BL"은 결합제(예컨대, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)를 본원에 제시된 페이로드 화합물(예컨대, 스테로이드)을 연결시키거나, 접속하거나 결합시키는 임의의 2가 그룹 또는 모이어티를 지칭한다. 일반적으로, 본원에 기술된 항체 접합체에 대한 적합한 결합제 링커는 항체의 순환하는 반감기를 이용하기에 충분히 적합하고, 동시에, 접합체의 항원-매개된 내부화 후 이의 페이로드를 방출할 수 있는 것들이다. 링커는 절단가능하거나 절단가능하지 않을 수 있다. 절단가능한 링커는 내부 화, 예컨대, 가수분해, 환원, 또는 효소 반응을 통한 절단 후 세포내 물질대사에 의해 절단되는 링커이다. 절단가능하지 않은 링커는 내부화 후 항체의 라이소좀 분해를 통해 부착된 페이로드를 방출하는 링커이다. 적합한 링커는 산에 불안정한 링커, 가수분해에 불안정한 링커, 효소적으로 절단가능한 링커, 환원에 불안정한 링커, 자가-희생 링커(self-immolative linker), 및 절단가능하지 않은 링커를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 링커는 글루쿠로니드, 석신이미드-티오에테르, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 단위, 카바메이트, 하이드라존, 말-카프로일 단위, 이황화물 단위(예컨대, -S-S-, -S-S- C(R1)(R2) -, 여기서 R1 및 R2는 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌이다), 파라-아미노-벤질(PAB) 단위, 포스페이트 단위, 예컨대, 모노-, 비스-, 및 트리스-포스페이트 단위, 펩타이드, 예컨대, 발린-시트룰린 단위, 발린-알라닌 단위, 발린-아르기닌 단위, 발린-라이신 단위, -라이신-발린-시트룰린 단위, 및 -라이신-발린-알라닌 단위를 포함하나, 이에 한정되지 않는, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8개 이상의 아미노산 단위를 함유하는 펩타이드 단위이거나 이를 포함하는 것들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 접합체의 결합제 링커 그룹은 본원에 기술된 링커-페이로드의 "반응성 링커" 그룹과 항체의 반응성 부위의 반응으로부터 유도된다. 반응성 링커 그룹(RL)은 반응성 그룹 및 (여기서 RG는 반응성 그룹이고, L은 연결 그룹이며, 물결무늬 선은 페이로드에 대한 결합을 나타낸다)로 나타낸, 연결 그룹을 포함하는 1가 그룹을 지칭한다. 연결 그룹은 반응성 그룹을 페이로드에 브릿지하는 임의의 2가 모이어티이다. 연결 그룹은 또한 반응성 그룹, 페이로드 및 사이클로덱스트린 모이어티를 브릿지하는 임의의 3가 모이어티일 수 있다. 일부 예에서, 연결 그룹은 3가이고 연결 그룹내 3가 그룹(예컨대, 라이신 잔기)에 결합된 사이클로덱스트린 모이어티를 포함한다. 이에 이들이 결합된 페이로드와 함께, 반응성 링커(RL)는 본원에 기술된 항체 스테로이드 접합체의 제조를 위한 합성 전구체로서 유용한 중간체("링커-페이로드")를 포함한다. 반응성 링커는 반응성 그룹(RG)을 포함하며, 이는 항체, 개질된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편의 반응성 부위와 반응하는 작용 그룹 또는 모이어티이다. 링커 그룹(L)과 함께, 반응성 그룹(RG)과 항체, 개질된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편의 반응으로부터 생성된 모이어티는 본원에 기술된, 접합체의 "결합제 링커"(BL) 부위를 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, BL은 다음 구조를 갖는다:
여기서 는 결합제에 대한 결합이고, RGN은 링커-페이로드의 반응성 그룹과 결합제의 반응성 부위의 반응으로부터 생성된 모이어티이고, L은 연결 그룹이며, 는 페이로드에 대한 결합이다.
특정의 구현예에서, RGN은 RG와 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 시스테인 또는 라이신 잔기의 반응으로부터 유도된다. 특정의 구현예에서, RGN는 클릭 화학 반응으로부터 유도된다. 상기 클릭 화학 반응의 일부 구현예에서, RGN은 알킨과 아지드 사이의 1,3 사이클로부가 반응으로부터 유도된다. 이러한 RGN의 비-제한적 예는 변형된 알킨으로부터 유도된 것들, 예컨대, 변형-촉진된 알킨-아지드 사이클로부가(SPAAC)에 적합한 것들, 사이클로알킨, 예컨대, 사이클로옥틴, 벤자뉼화된 알킨, 및 구리 촉매의 부재하에서 아지드와 1,3 사이클로부가 반응을 겪을 수 있는 알킨을 포함한다. 적합한 RGN는 또한 DIBAC, DIBO, BARAC, 치환된, 예컨대, 플루오르화된 알킨, 아자-사이클로알킨, BCN, 및 이의 유도체로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 RGN 그룹을 함유하는 접합체는 아지도 그룹으로 작용화된 항체로부터 유도될 수 있다. 이러한 작용화된 항체는 아지도-폴리에틸렌 글리콜 그룹으로 작용화된 항체를 포함한다. 특정의 구현예에서, 이러한 작용화된 항체는 적어도 하나의 글루타민 잔기를 포함하는 항체를 화학식 H2N-LL-N3(여기서 LL은 2가 폴리에틸렌 글리콜 그룹이다)에 따른 화합물과, 효소 트랜스글루타미나제, 에컨대, 미생물 트랜스글루타미나제의 존재하에서 반응시킴으로서 유도된다. 항체의 적합한 글루타민 잔기는 Q295, 또는 삽입 또는 돌연변이, 예컨대, N297Q 돌연변이에 의해 유도된 것들을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 접합체의 BA는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 접합체는 아지도-작용화된 항체로부터 유도된다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 접합체의 BA는 다음과 같고:
여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고, n은 1 내지 10의 정수이며, w는 링커 페이로드 모이어티의 수이고, 는 단일 결합제 링커(BL)에 대한 결합, 예컨대, 알킨과 아지드 사이의 1,3-사이클로부가 반응으로부터 유도된 모이어티에 대한 결합이다. 특정의 구현예에서, w는 3이다. 특정의 구현예에서, w는 2 또는 4이며, 즉, 접합체는 2 또는 4개의 링커 페이로드 모이어티를 포함한다.
일부 구현예에서, BL은 화학식 (BL A )의 2가 모이어티이고;
여기서 RGN는 본원에 정의된 바와 같고;
A는 아미노산 또는 펩타이드이며;
Ra는 H 또는 알킬이고;
B는 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이며, 여기서 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬은 알킬, -OH, 또는 -NRaRb로 임의 치환되며;
SP1 및 SP2는, 독립적으로, 스페이서 그룹이고;
q, z, s, t, u, v, 및 w는 각각의 예에서 독립적으로, 0 또는 1이다.
일부 다른 구현예에서, BL은 화학식 (BL B )의 3가 모이어티이다;
여기서 RGN은 본원에 정의된 바와 같고;
A는 트리펩타이드이며, 여기서 트리펩타이드내 아미노산 중 적어도 하나는 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합되며;
Ra는 H 또는 알킬이고;
B는 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이며, 여기서 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬은 알킬, -OH, 또는 -NRaRb로 임의 치환되고;
SP1 및 SP2는, 독립적으로, 스페이서 그룹이며; q, z, s, t, u, v, 및 w는, 각각의 예에서 독립적으로, 0 또는 1이다.
일부 예에서, 사이클로덱스트린(CD)은 라이신 아미노산 잔기와 같은 아미노산 잔기에 직접 결합된다. 이는 CD가 라이신 아미노산 공유결합 링커로부터 떨러진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 또한 페이로드 모이어티에 직접 결합된다. 이는 공유결합 링커가 본원에 제시된 스테로이드 페이로드와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 페이로드로부터 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 또한 CD 모이어티에 직접 결합된다. 이는 공유결합 링커가 본원에 제시된 CD(들)와 같이, CD로부터 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 라이신 아미노산 또는 이의 유도체이다.
일부 예에서, CD는 연결 그룹(즉, BL)내 공유결합 링커에 간접적으로 결합된다. 이는 CD가 공유결합 링커로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 CD가 다른 모이어티를 통해 공유결합 링커에 결합함을 의미한다. 예를 들면, CD는 공유결합 링커에 결합된 폴리에틸렌 글리콜 그룹에 결합된 말레이미드 그룹에 결합될 수 있다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 또한 페이로드 모이어티에 간접적으로 결합된다. 이는 공유결합 링커는 본원에 제시된 스테로이드 페이로드와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 페이로드로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 공유결합 링커가 다른 모이어티를 통해 페이로드에 결합됨을 의미한다. 예를 들면, 공유결합 링커는 페이로드에 결합될 수 있는 파라-아미노 벤조일에 결합될 수 있는, Val-Ala 또는 Val-Cit와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 디펩타이드에 결합할 수 있다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 또한 사이클로덱스트린 모이어티에 간접적으로 결합된다. 이는 공유결합 링커가 본원에 제시된 사이클로덱스트린과 같은, 사이클로덱스트린으로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 공유결합 링커가 다른 모이어티를 통해 사이클로덱스트린에 결합함을 의미한다. 예를 들면, 공유결합 링커는 사이클로덱스트린에 결합할 수 있는 반응성 그룹에 결합할 수 있는 폴리에틸렌 글리콜 그룹에 결합할 수 있다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 라이신 아미노산 또는 이의 유도체이다.
일부 구현예에서, BL은 -RGN-(SP1)q-(A)z-이다. 일부 구현예에서, BL은 -RGN-(SP1)q-(A)2-이다. 일부 구현예에서, BL은 화학식 (BL A1 )의 모이어티이다:
(BL A 1)
여기서 RAA1 및 RAA2는 각각, 독립적으로, 아미노 산 측쇄이다. 화학식 RLA1의 일부 예에서, SP1은 2가 폴리에틸렌 글리콜 그룹이고 RGN은 알킨과 아지드 사이의 반응의 1,3-사이클로부가 반응 부가물이다.
일부 구현예에서, BL은 -RGN-(SP1)q-(A)z-이다. 일부 구현예에서, BL은 -RGN-(SP1)q-(A)2-이다. 일부 구현예에서, BL은 화학식 (BL B1 )의 모이어티이다:
여기서 RAA1 및 RAA2는 각각, 독립적으로 아미노산 측쇄이다. RAA3은 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합된 아미노산 측쇄이다. 화학식 RLB1의 일부 예에서, SP1는 2가 폴리에틸렌 글리콜 그룹이고 RGN은 알킨과 아지드 사이의 1,3-사이클로부가 반응 부가물이다.
일부 구현예에서, BL은 다음 구조를 갖는다:
-RGN-(SP1)q-Z1-Z2-Z3 0-1-
여기서:
RGN, SP1는 본원에 정의된 바와 같고;
q는 0 또는 1이며;
Z1은 폴리에틸렌 글리콜 또는 카프로일 그룹이고;
Z2은 디펩타이드 또는 트리펩타이드이며;
Z3은 PAB 그룹이다.
특정의 구현예에서, RGN은 클릭-화학 반응성 그룹으로부터 유도되고 Z1은 폴리에틸렌 글리콜 그룹이다. 특정의 구현예에서, RGN-(SP1)q-Z1-는:
또는 이의 혼합물; 또는 이다. 일부 구현예에서, 디펩타이드는 발린-시트룰린 또는 발린 알라닌이다.
일부 구현예에서, BL은 3급 아민을 통해 페이로드에 부착된다. 예를 들면, 스테로이드가 다음의 화합물 인 경우, RL은 다음과 같은 3급 아민에 결합될 수 있다:
.
일부 예에서, 다음과 같은 화합물이 제시되어 있다:
,
여기서:
BL은 상기 정의된 바와 같은 결합제 링커이며;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이다.
일부 예에서, 본원에서 RGN은 클릭-화학 반응성 그룹으로부터 유도된다. 일부 예에서, RGN은:
, , 또는 이의 혼합물;
; 또는 , , 또는 이의 혼합물이고; 여기서 는 결합제이다.
일부 다른 예에서, 본원에서 RGN은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 상에서 시스테인 또는 라이신 잔기와 반응하는 그룹으로부터 선택된다. 일부 예에서, RGN은 이고; 여기서 는 결합제, 예컨대, 항체의 시스테인에 대한 결합이다. 일부 예에서, RGN은 이다.
일부 구현예에서, SP1은 다음으로부터 선택된다:
, , , 및 .
일부 예에서, SP1은 이다. 일부 다른 예에서, SP1은 이다. 다른 예에서, SP1은 이다. 여전히 다른 예에서, SP1은 이다. 일부 다른 예에서, SP1은 이다. 임의의 상기 실시예에서, 첨자 a, b, 및 c는 독립적으로 각각의 예에서, 1 내지 20의 정수이다.
일부 구현예에서, RAA3은 로부터 선택되고, 여기서 CD는 사이클로덱스트린 모이어티이다. 일부 구현예에서, RAA3는 로부터 선택된다.
임의의 화학식 (II), (IIa), (IIb), 또는 (IIc)의 화합물에서, SP1은 다음으로부터 선택된다:
,, , , , 및 .
일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다.
일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다.
일부 구현예에서, BL-SP1은:
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이다. 이러한 예 중 일부에서, 첨자 b, c, 및 d는 각각의 예에서 독립적으로, 1 내지 20의 정수이다.
임의의 화학식 (II), (IIa), (IIb), 또는 (IIc)의 화합물에서, BL-SP1은 다음으로부터 선택된다:
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물; 또는 .
일부 구현예에서, A는 발린-시트룰린, 시트룰린-발린, 라이신-페닐알라닌, 페닐알라닌-라이신, 발린-아스파라긴, 아스파라긴-발린, 트레오닌-아스파라긴, 아스파라긴-트레오닌, 세린-아스파라긴, 아스파라긴-세린, 페닐알라닌-아스파라긴, 아스파라긴-페닐알라닌, 루이신-아스파라긴, 아스파라긴-루이신, 이소루이신-아스파라긴, 아스파라긴-이소루이신, 글리신-아스파라긴, 아스파라긴-글리신, 글루탐산-아스파라긴, 아스파라긴-글루탐산, 시트룰린-아스파라긴, 아스파라긴-시트룰린, 알라닌-아스파라긴, 또는 아스파라긴-알라닌으로부터 선택된 펩타이드이다.
일부 예에서, A는 발린-시트룰린 또는 시트룰린-발린이다.
일부 예에서, A는 발린-알라닌 또는 알라닌-발린이다.
일부 예에서, A는 라이신-발린-알라닌 또는 알라닌-발린-라이신이다.
일부 예에서, A는 라이신-발린-시트룰린 또는 시트룰린-발린-라이신이다.
일부 예에서, A는 발린이다.
일부 예에서, A는 알라닌이다.
일부 예에서, A는 시트룰린이다.
일부 예에서, A는 이다. 이러한 예 중 일부에서, RAA1은 아미노산 측쇄이고, 여기서 RAA2는 아미노산 측쇄이다.
일부 예에서, A는 이다. 이러한 예 중 일부에서, RAA1는 아미노산 측쇄이고, RAA2는 아미노산 측쇄이며, RAA3은 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합된 아미노산 측쇄이다.
일부 예에서, A는 이다.
일부 예에서, A는 이다.
일부 예에서, A는 이고, 여기서 는 사이클로덱스트린 모이어티에 대한 직접 또는 간접 결합을 나타낸다.
임의의 앞서의 것들을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 로부터 선택된다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, A는 이다.
일부 예에서, Ra는 H이다.
일부 예에서, Ra는 알킬이다.
일부 예에서, Ra는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, t-부틸, i-부틸, 또는 펜틸이다.
일부 구현예에서, B는 아릴이다.
일부 예에서, B는 페닐이다.
화학식 (II), (IIa), (IIb), 또는 (IIc)의 화합물의 일부 예에서, B는 페닐 또는 피리디닐이다.
본원의 일부 예에서, B는:
또는 이다.
이러한 예에서, R10은 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 시아노, 니트로, , , , NRaRb, 또는 아지도이다. 이러한 예에서, 첨자 p 및 m은 각각의 예에서 독립적으로 0 내지 4의 정수로부터 선택된다.
본원의 일부 예에서, B는: 이다.
이러한 예에서, p는 0, 1, 2, 3 또는 4이다. 이러한 예 중 일부에서, R1은, 각각의 발생시 독립적으로, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 또는 할로이다. 일부 예에서, R1은 알킬이다. 일부 예에서, R1은 알콕시이다. 일부 예에서, R1은 할로알킬이다. 일부 예에서, R1은 할로이다.
화학식 (BL A )의 일부 구현예에서, -(NRa)s-(B)t-(CH2)u-(O)v-( SP2)w는:
이다.
다음의 화학식을 갖는 항체-스테로이드 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이 본원에 제시되어 있다:
여기서 BA는 결합제이고, x는 1 내지 30의 정수이다. 특수한 구현예에서, BA는 항체이다. 일부 구현예에서, x는 1 내지 4의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 4이다. 일부 구현예에서, x는 2이다.
화학식 1200에 따른 항체-스테로이드 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이 본원에 제시되어 있고:
여기서: BA는 결합제이고; 각각의 L은 임의의 링커이며; BA 또는 L은 R3 또는 R4에 공유 결합되어 있고; x는 1 내지 30의 정수이다. 숙련가는 L이 존재하는 경우, L이 R3 또는 R4에 결합하며; L이 부재하는 경우, BA가 R3 또는 R4에 결합함을 인식할 것이다. 그룹 R3 또는 R4는 하기에 상세히 설명되어 있다. 특수한 구현예에서, BA는 항체이다. 일부 구현예에서, x는 1 내지 4의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 4이다. 일부 구현예에서, x는 2이다.
화학식 1200의 특정의 구현예에서, R1 및 R2는, 독립적으로 -H, -OH, 알킬, -O-C(O)-알킬, 및 할로로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; 또는 R1 및 R2는 함께 를 형성한다. 특정의 구현예에서, R3은 -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; 여기서 X 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이며; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이고; R4는 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이고; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이다.
화학식 1200의 특정의 구현예에서, R3은 -OH, -O-C(O)-알킬, -O-아릴, -NRaRb, -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이고; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이며; R4는 -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; 여기서 X 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이며; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이다.
화학식 1200의 특정의 구현예에서, R3은 -NRaRb이고; R4는 알킬이다.
화학식 1200의 각각의 예에서, BA 또는 L은 R3 또는 R4내 작용 그룹에 결합한다. 예를 들면, R3 또는 R4가 아미노 그룹을 포함하는 경우, BA 또는 L은 수소 원자를 치환하는 아미노 그룹에 결합할 수 있다. 각각의 구현예에서, R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 및 알킬로 이루어진 그룹에서의 치환체로부터 선택되고; n은 0 내지 19의 정수이며; 각각의 R5는 임의의 환 원자 상에 위치한다. 각각의 구현예에서, Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 및 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; Ra 및 Rb는 폐환되어 이들이 부착된 N인, 하나의 헤테로 원자를 포함하는, 3 내지 6원 환 원자를 지닌 사이클로헤테로알킬을 형성한다. 특수한 구현예에서, BA는 항체이다. 일부 구현예에서, x는 1 내지 4의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 4이다. 일부 구현예에서, x는 2이다.
화학식 1210, 1220, 1230, 또는 1240에 따른 항체-스테로이드 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체가 본원에 제시되어 있고:
여기서 R3은 L 또는 BA에 공유결합으로 결합된다.
화학식 1210, 1220, 1230, 또는 1240의 특정의 구현예에서, R1 및 R2는, 독립적으로 -H, -OH, 알킬, -O-C(O)-알킬, 및 할로로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; R1 및 R2는 함께 를 형성한다. 특정의 구현예에서, R3은 -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이고; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이며; 및 R4는 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이고; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이다. 특정의 구현예에서, R3은 -NRaRb이고; R4는 알킬이다. 각각의 구현예에서, BA 또는 L은 예를 들면, 수소 원자를 치환하는 R3내 아미노 그룹에 결합된다. 각각의 구현예에서, Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 및 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; Ra 및 Rb는 폐환되어 이들이 부착된 N인, 하나의 헤테로원자를 포함하는, 3 내지 6원 환 원자를 지닌 사이클로헤테로알킬을 형성한다. 특수한 구현예에서, BA는 항체이다. 일부 구현예에서, x는 1 내지 4의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 4이다. 일부 구현예에서, x는 2이다.
화학식 1310, 1320, 1330, 또는 1340에 따른 항체-스테로이드 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 입체이성체가 본원에 제시되어 있고;
여기서 R4는 L 또는 BA에 공유결합으로 결합된다.
화학식 1310, 1320, 1330, 또는 1340의 특정의 구현예에서, R3은 -OH, -O-C(O)-알킬, -O-아릴, -NRaRb, -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이며; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이고; R4는 -알킬렌-NRaRb, -X-아릴렌-Y-NRaRb, -X-헤테로아릴렌-Y-NRaRb, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이고; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이다. 각각의 구현예에서, BA 또는 L은 예를 들면, 수소 원자를 치환하는, R4내 아미노 그룹에 결합된다. 각각의 구현예에서, Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 및 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; Ra 및 Rb는 폐환되어 이들이 부착된 N인, 하나의 헤테로원자를 포함하는 3 내지 6원의 환 원자를 지닌 사이클로헤테로알킬을 형성한다. 특수한 구현예에서, BA는 항체이다. 일부 구현예에서, x는 1 내지 4의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 4이다. 일부 구현예에서, x는 2이다.
다음의 화학식을 갖는 항체-스테로이드 접합체:
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물이 또한 본원에 제시되어 있고;
여기서 Ab는 항체이고 x는 1 내지 30의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 1 내지 4의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 4이다. 일부 구현예에서, x는 2이다.
다음 또는 이의 혼합물을 갖는 항체-스테로이드 접합체가 본원에 제시되어 있다.
특수한 구현예에서, Ab는 항체이고 x는 1 내지 30의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 1 내지 4의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 4이다. 일부 구현예에서, x는 2이다.
다음 화학식: 를 갖는 항체-스테로이드 접합체가 또한 본원에 제시되어 있다.
다음의 화학식을 갖는 항체-스테로이드 접합체가 또한 본원에 제시되어 있다:
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물;
또는 이의 혼합물.
특수한 구현예에서, Ab는 항체이고 x는 1 내지 30의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 1 내지 4의 정수이다. 일부 구현예에서, x는 4이다. 일부 구현예에서, x는 2이다.
부데소니드 또는 디플로라손의 결합제 접합제가 또한 본원에 제공된다.
본 개시내용에 제공된 임의의 접합체에 대한 적합한 결합제는 항체, 림포킨, 호르몬, 성장 인자, 바이러스 수용체, 인터루킨, 또는 임의의 다른 세포 결합 또는 펩타이드 결합 분자 또는 물질을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 결합제는 항체이다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항체"는 특수한 항원에 특이적으로 결합하거나 이와 상호작용하는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 임의의 항원-결합 분자 또는 분자 복합체를 의미한다. 용어 "항체"는 이황화물 결합에 의해 상호-연결된 2개의 중(H) 쇄 및 2개의 경(L) 쇄의, 4개의 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 면역글로불린 분자 뿐만 아니라, 이의 다량체(예컨대, IgM)도 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 VH로 약술) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3를 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 VL로 약술) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인(CL1)을 포함한다. VH 및 VL 영역은 골격 영역(FR)으로 명명된, 보다 보존된 영역으로 배치된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 명명된, 고가변성의 영역으로 추가로 아분(subdividing)될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단으로부터 카복시-말단까지 다음의 순서로 정렬된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 일부 구현예에서, 항체의 FR(또는 이의 항원-결합 부위)는 사람 배선 서열과 동일하거나, 천연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 컨센수스 서열(consensus sequence)은 2개 이상의 CDR의 나란한 분석(side-by-side analysis)을 기반으로 정의될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항체"는 또한 완전한 항체 분자의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 항체의 "항원-결합 부위", 항체의 "항원-결합 단편" 등은 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 천연적으로 존재하거나, 효소적으로 수득가능하거나, 합성되거나, 유전적으로 가공된(engineered) 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은 예컨대, 단백질분해성 분해 또는 항체 가변 및 임의로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 포함하는 유전 가공 기술과 같은 임의의 적합한 표준 기술을 사용하여 완전한 항체 분자로부터 유도시킬 수 있다. 이러한 DNA는 알려져 있고/있거나 예컨대, 상업적 공급원, DNA 라이브러리(예컨대, 파아지-항체 라이브러리를 포함함)로부터 용이하게 이용가능하거나, 합성될 수 있다. DNA는 서열분석하고 화학적으로 또는 분자 생물학 기술을 사용하여 조작함으로써, 예를 들면 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 구조로 정렬하거나, 코돈을 도입하거나, 시스테인 잔기를 생성하거나, 아미노산 등을 변형, 첨가 또는 결실시킬 수 있다.
항원-결합 단편의 비-제한적 예는: (i) Fab 단편; (ii) 　F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 　단일-쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역(예컨대, CDR3 펩타이드와 같은 단리된 상보성 결정 영역(CDR))을 모사하는 아미노산 잔기, 또는 제한된 FR3-CDR3-FR4 펩타이드로 이루어진 최소의 인식 단위를 포함한다. 도메인-특이적인　항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 　항체, CDR-이식된 항체, 디아보디(diabody), 트리아보디(triabody), 테트라보디(tetrabody), 미니보디(minibody), 나노보디(nanobody)(예컨대, 1가 나노보디, 2가 나노보디 등), 작은 모듈러식(small modular) 면역약제(SMIP), 및 상어 가변성 IgNAR 도메인과 같은 다른 가공된 분자가 또한 본원에 사용된 바와 같은, 표현 "항원-결합 단편"내에 포함된다.
항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성물일 수 있고 하나의 골격 서열에 근접하거나 이와 프레임내에(in frame) 존재하는 적어도 하나의 CDR을 일반적으로 포함할 것이다. VL 도메인과 관련된 VH 도메인을 가진 항원-결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 임의의 적합한 정렬로 서로에 대해 위치할 수 있다. 예를 들면, 가변 영역은 이량체일 수 있고 VH-VH, VH-VL 또는 VL-VL 이량체를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 VH 또는 VL 도메인을 함유할 수 있다.
특정의 구현예에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유결합으로 연결된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 개시내용의 항원-결합 단편내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비-제한적이고, 예시적인 구조는: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL을 포함한다. 임의의 상기 나열된 예시적인 구조를 포함하는, 가변 및 불변 도메인의 임의의 구조내에서, 가변 및 불변 도메인은 서로 직접 연결될 수 있거나 완전하거나 부분적인 힌지(hinge) 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩타이드 분자내에 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 굴곡성 또는 반-굴곡성 연결을 생성하는 적어도 2개(예컨대, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 더욱이, 본 개시내용의 항체의 항원-결합 단편은 하나의 다른 및/또는 하나 이상의 단량체성 VH 또는 VL 도메인과 비-공유결합성 회합(예컨대, 이황화물 결합(들)에 의한)시, 상기 나열된 임의의 가변 및 불변 도메인 구조의 단독-이량체 또는 헤테로-이량체(또는 다른 다량체)를 포함할 수 있다.
완전한 항체 분자를 사용하므로, 항원-결합 단편은 일특이적이거나 다특이적(예컨대, 이특이적)일 수 있다. 항체의 다중특이적 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 2개의 상이한 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서 각각의 가변 도메인은 별도의 항원에 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 본원에 개시된 예시적인 이특이적 항체 양식을 포함하는, 임의의 다특이적인 항체 양식은 당해 분야에서 이용가능한 통상의 기술을 사용하여 본 개시내용의 항체의 항원-결합 단편의 맥락에서 사용하기 위해 채택될 수 있다.
본 개시내용의 항체는 상보체-의존적인 세포독성(CDC) 또는 항체-의존적인 세포-매개된 세포독성(ADCC)을 통해 작용할 수 있다. "상보체-의존적 세포독성"(CDC)은 상보체의 존재하에서 본 개시내용의 항체에 의한 항원-발현 세포의 분해를 지칭한다. "항체-의존적인 세포-매개된 세포독성"(ADCC)은 Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비특이적인 세포독성 세포(예컨대, 천연 킬러(NK) 세포, 호중구, 및 대식구)가 표적 세포 상에서 결합된 항체를 인식함으로써 표적 세포의 분해를 초래하는 세포-매개된 반응을 지칭한다. CDC 및 ADCC는 당해 분야에서 잘 공지되고 이용가능한 검정을 사용하여 측정할 수 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제5,500,362호 및 제5,821,337호, 및 Clynes et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656). 항체의 불변 영역은 상보체를 고정시키고 세포-의존성 세포독성을 매개하는 항체의 능력에 있어 중요하다. 따라서, 항체의 동형은 이것이 항체가 세포독성을 매개하는데 바람직한지를 기반으로 선택될 수 있다.
본원의 화합물에 유용한 항체는 사람 항체를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "사람 항체"는 사람 배선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 사람 항체는 예를 들면, CDR 및 특히 CDR3내에서 사람 배선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예컨대, 시험관내(in vitro)에서 무작위 도는 부위-특이적인 돌연변이유발 또는 생체내(in vivo)에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함한 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "사람 항체"는 마우스와 같은, 다른 포유동물 종의 배선으로부터 유도된 CDR 서열이 사람 골격 서열 상에 이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다. 용어 "사람 항체"는 천연적으로 존재하는, 변형되지 않은 살아있는 유기체내에서 변형 또는 사람 개입(intervention)/조작없이 일반적으로 존재하는 천연적으로 존재하는 분자를 포함하지 않는다.
항체는, 일부 구현예에서, 재조합 사람 항체일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "재조합 사람 항체"는 숙주 세포내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체(하기에 추가로 기술됨), 재조합, 조합 사람 항체 라이브러리로부터 단리된 항체(하기에 추가로 기술됨), 사람 면역글로불린 유전자에 대해 이식유전자성인 동물(예컨대, 마우스)로부터 단리된 항체(참고: 예컨대, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) 또는 사람 면역글로불린 유전자 사열을 다른 DNA 서열로 스플라이싱(splicing)함을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 창조되거나 단리된 항체와 같은, 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 창조되거나 단리된 모든 사람 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 사람 항체는 사람 배선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 특정의 구현예에서, 그러나, 이러한 재조합 사람 항체는 시험관내 돌연변이유발(또는, 사람 Ig 서열에 대해 전이유전자성인 동물이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발)에 적용됨으로써, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 사람 배선 VH 및 VL 서열로부터 유도되고 이와 관련되지만, 생체내에서 사람 항체 배선 레퍼토리내에 천연적으로 존재하지 않을 수 있다.
사람 항체는 힌지 이종성(heterogeneity)과 관련된 2개의 형태로 존재할 수 있다. 하나의 형태에서, 면역글로불린 분자는 대략 150 내지 160 kDa의 안정한 4개의 쇄 작제물을 포함하며, 여기서 이량체는 쇄간 중쇄 이황화물 결합에 의해 서로 유지되다. 제2 형태에서, 이량체는 쇄간 이황화물 결합을 통해 연결되지 않으며 공유결합으로 커플링된 경쇄 및 중쇄(항체의 1/2)로 구성된 약 75 내지 80 kDA의 분자가 형성된다. 이러한 형태는 심지어 친화성 정제 후에도 분리하기가 극도로 어려웠다.
다양한 완전한 IgG 동형에서 제2 형태의 출현 빈도는 항체의 힌지 영역 동형과 관련된 구조적 차이에 기인하지만, 이에 한정되지 않는다. 사람 IgG4 힌지의 힌지 영역내 단일 아미노산 치환은 제2 형태의 출현(Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105)을 전형적으로 사람 IgG1 힌지를 사용하여 관찰된 수준으로 유의적으로 감소시킬 수 있다. 본 개시내용은 예를 들면, 생산시, 목적한 항체 형태의 수율을 증진시키기 위해 바람직할 수 있는 힌지, CH2 또는 CH3 영역내 하나 이상의 돌연변이를 갖는 항체를 포함한다.
본원의 화합물에 유용한 항체는 단리된 항체일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, "단리된 항체"는 이의 천연 환경의 적어도 하나의 성분으로부터 확인되고 분리되고/되거나 회수된 항체를 의미한다. 예를 들면, 유기체의 적어도 하나의 성분으로부터, 또는 항체가 천연적으로 존재하거나 천연적으로 생산되는 조직 또는 세포로부터 분리되거나 제거된 항체는 본 개시내용의 목적을 위한 "단리된 항체"이다. 단리된 항체는 또한 재조합 세포내에서 반응계내(in situ) 항체를 포함한다. 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 또는 단리 단계에 적용된 항체이다. 특정의 구현예에 따라서, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질을 실질적으로 포함하지 않을 수 있다.
본원에 개시된 화합물에 유용한 항체는 이로부터 항체가 유도된 상응하는 배선 서열과 비교하여 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 골격 및/또는 CDR 영역내에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는 본원에 개시된 아미노산 서열을 예를 들면, 공공의 항체 서열 데이타베이스로부터 이용가능한 배선 서열과 비교함으로써 용이하게 확인할 수 있다. 본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 아미노산 서열로부터 유도된, 항체, 및 이의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 하나 이상의 골격 및/또는 CDR 영역내 하나 이상의 아미노산은 이로부터 항체가 유도된 배선 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 다른 사람 배선 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 상응하는 배선 잔기(들)의 보존된 아미노산 치환으로 돌연변이된다(이러한 서열 변화는 본원에서 총칭하여 "배선 돌연변이"로 지칭된다). 당해 분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로 출발하여, 하나 이상의 개개 배선 돌연변이 또는 이의 조합을 포함하는 다수의 항체 및 항원-결합 단편을 용이하게 생산할 수 있다. 특정의 구현예에서, V H 및/또는 V L 도메인내 골격 및/또는 CDR 잔기 모두는 이로부터 항체기 유도된 원래의 배선 서열내에서 발견된 잔기로 역 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 특정의 잔기만이 원래의 배선 서열, 예컨대, FR1의 처음 8개 아미노산내 또는 FR4의 마지막 8개 아미노산 내, 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견된 돌연변이된 잔기만으로 역 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 골격 및/또는 CDR 잔기(들) 중 하나 이상은 상이한 배선 서열(즉, 이로부터 항체가 원래 유도된 배선 서열과는 상이한 배선 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이된다. 더욱이, 본 개시내용의 항체는 골격 및/또는 CDR 영역내에 2개 이상의 배선 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있는데, 예컨대, 여기서 특정의 개개 잔기는 특수한 배선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이되지만 원래의 배선 서열과는 상이한 특정의 다른 잔기는 유지되거나 상이한 배선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이된다. 일단 수득되면, 하나 이상의 배선 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 단편은 증진된 결합 특이성, 증가된 결합 친화성, 증진되거나 향상된 길항적 또는 효능적 생물학적 특성(경우에 따라), 감소된 면역원성 등과 같은 하나 이상의 목적한 특성에 대해 용이하게 시험될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 항체 단편(Fab, Fab', 및 F(ab)2, 미니보디, 디아보디, 트리아보디 등), 또는 이특이적 항체이다. 본원의 항체는 미국 특허 제6,596,541호 및 미국 특허 공보 제2012/0096572호에 기술된 방법을 사용하여 사람화할 수 있으며, 이들은 본원에 참고로 포함된다.
결합제가 항체인 경우, 이는 폴리펩타이드이고 글리코실화되거나 포스포릴화될 수 있는 막횡단(transmembrane) 분자(예컨대, 수용체) 또는 성장 인자일 수 있는 항원 결합 파트너에 결합한다.
결합제가 결합하는 적합한 표적은 이에 대해 스테로이드 전달이 바람직한 임의의 표적을 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제는 항체, 변형된 항체, 또는 다음으로부터 선택된 표적에 결합하는 이의 항원 결합 단편이다: AXL, BAFFR, BCMA, BCR-목록 성분, BDCA2, BDCA4, BTLA, BTNL2 BTNL3, BTNL8, BTNL9, C10orf54, CCR1, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR9, CCR10, CD11c, CD137, CD138, CD14, CD168, CD177, CD19, CD20, CD209, CD209L, CD22, CD226, CD248, CD25, CD27, CD274, CD276, CD28, CD30, CD300A, CD33, CD37, CD38, CD4, CD40, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD5, CD52, CD55, CD56, CD59, CD62E, CD68, CD69, CD70, CD74, CD79a, CD79b, CD8, CD80, CD86, CD90.2, CD96, CLEC12A, CLEC12B, CLEC7A, CLEC9A, CR1, CR3, CRTAM, CSF1R, CTLA4, CXCR1/2, CXCR4, CXCR5, DDR1, DDR2, DEC-205, DLL4, DR6, FAP, FCamR, FCMR, FcR's, Fire, GITR, HHLA2, HLA 부류 II, HVEM, ICOSLG, IFNLR1, IL10R1, IL10R2, IL12R, IL13RA1, IL13RA2, IL15R, IL17RA, IL17RB, IL17RC, IL17RE, IL20R1, IL20R2, IL21R, IL22R1, IL22RA, IL23R, IL27R, IL29R, IL2Rg, IL31R, IL36R, IL3RA, IL4R, IL6R, IL5R, IL7R, IL9R, 인테그린, LAG3, LIFR, MAG/Siglec-4, MMR, MSR1, NCR3LG1, NKG2D, NKp30, NKp46, PDCD1, PROKR1, PVR, PVRIG, PVRL2, PVRL3, RELT, SIGIRR, Siglec-1, Siglec-10, Siglec-5, Siglec-6, Siglec-7, Siglec-8, Siglec-9, SIRPA, SLAMF7, TACI, TCR-목록 성분/회합물(assoc), PTCRA, TCRb, CD3z, CD3, TEK, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, TIGIT, TLR2, TLR4, TROY, TSLPR, TYRO, VLDLR, VSIG4, 및 VTCN1.
결합제 링커는 항체 또는 항원-결합 분자내 특수한 아미노산에서 부착을 통해 결합제, 예컨대, 항체 또는 항원-결합 분자에 결합할 수 있다. 본 개시내용의 이러한 국면의 맥락에서 사용될 수 있는 예시적인 아미노산 부착은 예컨대, 라이신(참고: 예컨대, US 5,208,020; US 2010/0129314; Hollander et al., Bioconjugate Chem., 2008, 19:358-361; WO 2005/089808; US 5,714,586; US 2013/0101546; 및 US 2012/0585592), 시스테인(참고: 예컨대, US 2007/0258987; WO 2013/055993; WO 2013/055990; WO 2013/053873; WO 2013/053872; WO 2011/130598; US 2013/0101546; 및 US 7,750,116), 셀레노시스테인(참고: 예컨대, WO 2008/122039; 및 Hofer et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 105:12451-12456), 포르밀 글리신(참고: 예컨대, Carrico et al., Nat. Chem. Biol., 2007, 3:321-322; Agarwal et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013, 110:46-51, 및 Rabuka et al., Nat. Protocols, 2012, 10:1052-1067), 비-천연 아미노산(참고: 예컨대, WO 2013/068874, 및 WO 2012/166559), 및 산성 아미노산(참고: 예컨대, WO 2012/05982)을 포함한다. 링커는 트랜스글루타미나제-기반의 화학-효소 접합을 통해 글루타민을 경유하여 접합될 수 있다(참고: 예컨대, Dennler et al., Bioconjugate Chem. 2014, 25, 569-578). 링커는 또한 탄수화물에 대한 부착(참고: 예컨대, US 2008/0305497, WO 2014/065661, 및 Ryan et al., Food & Agriculture Immunol., 2001, 13:127-130) 및 이황화물 링커(참고: 예컨대, WO 2013/085925, WO 2010/010324, WO 2011/018611, WO 2014/197854, 및 Shaunak et al., Nat. Chem. Biol., 2006, 2:312-313)를 통해 항원-결합 단백질에 접합될 수 있다. 일부 예에서, 결합제는 항체이고, 항체는 라이신 잔기를 통해 링커에 결합된다. 일부 구현예에서, 항체는 시스테인 잔기를 통해 링커에 결합된다.
D. 화합물의 제조 방법
본원에 기술된 접합체는 본원에 기술된 링커-페이로드를 결합제, 예컨대, 항체와 표준 접합 조건 하에서 커플링시킴으로써 합성할 수 있다(참고: 예컨대, Drug Deliv. 2016 Jun;23(5):1662-6; AAPS Journal, Vol. 17, No. 2, March 2015; 및 Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 561, 이의 전문은 본원에 참고로 포함된다). 링커-페이로드는 목적한 페이로드 및 결합제를 페이로드와 연결시키는 모이어티(또는 이의 부분)로서 궁극적으로 제공되는 연결 모이어티를 포함하는 합성 중간체이다. 링커-페이로드는 결합제와 반응하여 본원에 기술된 접합체를 형성하는 반응성 그룹을 포함한다. 결합제가 항체인 경우, 항체는 하나 이상의 시스테인, 라이신, 또는 항체의 다른 잔기를 통해 링커-페이로드에 커플링될 수 있다. 링커 페이로드는 예를 들면, 항체를 환원제, 예컨대, 디티오트레이톨에 적용시켜 항체의 이황화물 결합을 절단하고, 환원된 항체를 예컨대, 겔 여과에 의해 정제하고, 후속적으로 항체를 반응성 모이어티, 예컨대, 말레이미도 그룹을 함유하는 링커-페이로드와 반응시킴으로써, 시스테인 잔기에 커플링시킬 수 있다. 적합한 용매는 물, DMA, DMF, 및 DMSO를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 반응성 그룹, 예컨대, 활성화된 에스테르 또는 산 할라이드 그룹을 함유하는 링커-페이로드는 라이신 잔기에 커플링될 수 있다. 적합한 용매는 물, DMA, DMF, 및 DMSO를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 접합체는 예를 들면, 크기 배제 크로마토그래피, 투석, 및 한외여과/디아필트레이션(diafiltration)을 포함하는, 공지된 단백질 기술을 사용하여 정제할 수 있다.
결합제, 예컨대, 항체는 또한 클릭 화학 반응을 통해 접합시킬 수 있다. 상기 클릭 화학 반응의 일부 구현예에서, 링커-페이로드는 반응성 그룹, 예컨대, 아지드와 1,3 사이클로부가 반응을 겪을 수 있는 알킨을 포함한다. 이러한 적합한 반응성 그룹은 변형된 알킨, 예컨대, 변형-촉진된 알킨-아지드 사이클로부가(SPAAC)에 적합한 것들, 사이클로알킨, 예컨대, 사이클로옥틴, 벤자뉼화된 알킨, 및 구리 촉매의 존재하에서 아지드와 1,3 사이클로부가 반응을 겪을 수 있는 알킨을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 알킨은 또한, DIBAC, DIBO, BARAC, DIFO, 치환된, 예컨대, 불소화된 알킨, 아자-사이클로알킨, BCN, 및 이의 유도체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 반응성 그룹을 포함하는 링커-페이로드는 아지도 그룹으로 작용화된 항체를 접합시키는데 유용하다. 이러한 작용화된 항체는 아지도-폴리에틸렌 글리콜 그룹으로 작용화된 항체를 포함한다. 특정의 구현예에서, 이러한 작용화된 항체는 적어도 하나의 글루타민 잔기를 포함하는 항체, 예컨대, 중쇄 Q295를 화학식 H2N-LL-N3(여기서 LL은 2가 폴리에틸렌 그룹이다)에 따른 화합물과 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에서 반응시킴으로써 유도된다. 편의상, 본원의 특정의 화학식에서, 항체 Ab는 하나 이상의 공유결합으로 연결된 -LL-N3 그룹을 지닌 변형된 항체, 또는 이의 잔기이다. 바람직하게는, 각각의 -LL-N3는 항체의 글루타민 잔기의 아미노산 측쇄에 공유결합으로 결합된다. 또한, 바람직하게는, -LL-N3은 반응성 그룹 RG이거나 이와 반응하여 링커-페이로드에 대한 공유결합을 형성할 수 있다. 다시 편의상, 본원의 특정의 화학식에서, -LL-N3 그룹은 명확하게 도시된다.
결합제, 예컨대, 항체를 본원에 기술된 링커-페이로드와 접촉시킴을 포함하는, 본원에 기술된 접합체의 합성 방법이 본원에 제시되어 있다. 특정의 구현예에서, 링커-페이로드는 사이클로덱스트린 모이어티를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커 페이로드는 화학식 (II)의 화합물이다:
(II)
(a) R3은 RL-, RL-X- 또는 이거나;
R1 및 R2는 각각, 독립적으로 -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이거나; R1 및 R2는 함께 를 형성하고, 여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이며; 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되거나;
(b) R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, -NRaRb 또는 아릴옥시이고, 여기서 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, 또는 아릴옥시는 -NRaRb 또는 할로로 임의 치환되고, R1 및 R2는 함께 를 형성하며, 여기서 R4는 -RL-, 또는 -RL-Y이고, 여기서 Y는 N-함유 2가 헤테로사이클이고;
RL은 반응성 링커이며;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 알킬, 또는 아릴알킬이고;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이며;
RP는, 각각의 예에서 독립적으로, 할로이고;
X는, 각각의 예에서 독립적으로, NRa 또는 O이며;
는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
n은 0 내지 19의 정수이다.
화학식 (II)의 화합물은 본원에 기술된 접합체의 합성시 합성 중간체로서 유용한 링커-페이로드이다. 이러한 링커-페이로드는 항체와 반응하여 본원에 기술된 접합체를 형성할 수 있는 반응성 그룹을 포함한다.
화학식 (II)의 일부 예에서, R1 및 R2는 각각, 독립적으로 -H, 알킬, 또는 -OH이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R1 또는 R2 중 하나는 -H, 알킬, 또는 -OH이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R1 및 R2는 둘 다 -H, 알킬, 또는 -OH이다.
화학식 (II)의 일부 예에서, R1 및 R2는 함께 를 형성한다. 일부 예에서, R4는 -RL이다. 일부 예에서, R4는 RL-NRa-아릴이다. 일부 다른 예에서, R4는 알킬이다. 특정의 예에서, R4는 아릴알킬이고, 일부 예에서, R4는 아릴이다. 다른 예에서, R4는 N-함유 헤테로사이클로알킬이다. 이러한 예 중 일부에서, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 임의 치환된다.
화학식 (II)의 일부 예에서, R5는 할로이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R5는 플루오로이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R5중 하나는 할로이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R5는 할로이고 n은 2이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R5는 -F이고 n은 1이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R5는 -F이고 n은 2이다.
화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 RL이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 RL-NRa-아릴옥시-이다. 화학식 (II)의 일부 다른 예에서, R3은 -OH이다. 화학식 (II)의 일부 다른 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 화학식 (II)의 일부 다른 예에서, R3은 헤테로알킬이다. 화학식 (II)의 일부 다른 예에서, R3은 -N-RaRb이다. 화학식 (II)의 일부 다른 예에서, R3은 아릴이다. 화학식 (II)의 일부 다른 예에서, R3은 아릴옥시이다. 화학식 (II)의 일부 다른 예에서, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, 또는 아릴옥시는 -NRaRb 또는 할로로 임의 치환된다.
화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 -OH이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 헤테로알킬이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 또는 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 또는 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 -NRaRb이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 아릴옥시이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다.
화학식 (II)의 일부 예에서, R3은 이다.
화학식 (II)에서, 첨자 n은 0 내지 19의 정수이다. 일부 예에서, n은 0이다. 일부 다른 예에서, n은 1이다. 특정의 예에서, n은 2이다. 일부 다른 예에서, n은 3이다. 특정의 예에서, n은 4이다. 일부 예에서, n은 5이다. 일부 다른 예에서, n은 6이다. 특정의 예에서, n은 7이다. 일부 다른 예에서, n은 8이다. 특정의 예에서, n은 9이다. 일부 예에서, n은 10이다. 일부 다른 예에서, n은 11이다. 특정의 예에서, n은 12이다. 일부 다른 예에서, n은 13이다. 특정의 예에서, n은 14이다. 일부 예에서, n은 15이다. 일부 다른 예에서, n은 16이다. 특정의 예에서, n은 17이다. 일부 다른 예에서, n은 18이다. 특정의 예에서, n은 19이다.
일부 예에서, 화학식 (IIa)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
;
여기서:
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 또는 알킬이고;
R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, -NRaRb 또는 아릴옥시로부터 선택되며, 여기서
알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, 또는 아릴옥시는 -NRaRb 또는 할로로 임의 치환되고;
RL은 반응성 링커이며;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H, 알킬, 및 알킬-C(O)로부터 선택되고;
n은 0 내지 19의 정수이다.
일부 예에서, 화학식 (IIa2)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제시된다:
(IIa2);
여기서:
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 또는 알킬이고;
R3은 -OH, 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, -NRaRb 또는 아릴옥시이며, 여기서 알킬-C(O)-O-, 헤테로알킬, 또는 아릴옥시는 -NRaRb 또는 할로로 임의 치환되고;
RL은 반응성 링커이며;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H, 알킬, 또는 알킬-C(O)로부터 선택되고;
n은 0 내지 19의 정수이다.
화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 -OH이다. 화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 알킬-C(O)-O-이다. 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 헤테로알킬이다. 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 -NRaRb이다. 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 아릴옥시이다. 화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 이다. 화학식 (IIa2)의 일부 예에서, R3은 이다.
일부 예에서, 화학식 (IIa2)의 화합물은 다음 구조를 갖는다:
여기서:
R3은 -OH 또는 알킬-C(O)-O-이고;
R5a 및 R5b는 각각, 독립적으로 -F 또는 H이며;
RL은 반응성 링커이다.
일부 예에서, 다음 화학식 (IIb)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
(IIb);
여기서
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 또는 알킬이고;
R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬로부터 선택되며,
여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되고;
RL은 반응성 링커이며;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, H, 알킬, 및 알킬-C(O)로부터 선택되고;
n은 0 내지 19의 정수이다.
화학식 (IIb)의 일부 예에서, R5는 할로이다. 화학식 (IIb)의 일부 예에서, R5는 플루오로이다. 화학식 (IIb)의 일부 예에서, n은 적어도 2이고, R5 중 2개는 할로이다. 화학식 (IIb)의 일부 예에서, R5는 F이고 n은 1이다. 화학식 (IIb)의 일부 예에서, R5는 -F이다.
화학식 (IIb)의 일부 예에서, R4는 알킬이다. 화학식 (IIb)의 일부 예에서, R4는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, i-부틸, 펜틸 모이어티, 헥실 모이어티, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실이다. 화학식 (IIb)의 일부 예에서, R4는 n-프로필이다.
일부 예에서, 화학식 (IIb)의 화합물은 다음 구조를 갖는다:
여기서:
R4는 알킬이고;
R5a 및 R5b는 각각, 독립적으로 -F 또는 H이며;
RL은 반응성 링커이다.
일부 예에서, 화학식 (IIc)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
(IIc);
여기서
R1 및 R2는, 독립적으로 -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이고;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 또는 알킬로부터 선택되며;
RL은 반응성 링커이고;
n은 0 내지 19의 정수이다.
화학식 (IIc)의 일부 예에서, R5는 -할로이다. 화학식 (IIc)의 일부 예에서, R5는 플루오로이다. 화학식 (IIc)의 일부 예에서, R5 중 하나는 할로이다. 화학식 (IIc)의 일부 예에서, R5 중 2개는 할로이다. 화학식 (IIc)의 일부 예에서, R5는 -F이고 n은 2이다.
화학식 (IIc)의 일부 예에서, R1은 CH3이다.
화학식 (IIc)의 다른 예에서, R1은 OH이다.
화학식 (IIc)의 일부 다른 예에서, R1은 H이다.
화학식 (IIc)의 일부 예에서, R2는 CH3이다.
화학식 (IIc)의 다른 예에서, R2는 OH이다.
화학식 (IIc)의 일부 다른 예에서, R2는 H이다.
화학식 (IIc)의 일부 예에서, R1은 CH3이고 R2는 CH3이다.
화학식 (IIc)의 다른 예에서, R1은 CH3이고 R2는 OH이다.
화학식 (IIc)의 일부 예에서, R1은 CH3이고 R2는 H이다.
화학식 (IIc)의 일부 다른 예에서, R1은 OH이고 R2는 CH3이다.
화학식 (IIc)의 다른 예에서, R1은 OH이고 R2는 OH이다.
화학식 (IIc)의 일부 예에서, R1은 H이고 R2는 H이다.
화학식 (IIc)의 일부 다른 예에서, R1은 H이고 R2는 OH이다.
화학식 (IIc)의 다른 예에서, R1은 H이고 R2는 H이다.
일부 구현예에서, 화학식 (IIc)의 화합물은 다음 구조를 갖는다:
(IIc)
여기서:
R2은 메틸이고;
R5a 및 R5b는 각각, 독립적으로 -F 또는 H이며;
RL은 반응성 링커이다.
특정의 구현예에서, 화학식 (III-R)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
여기서:
R3은 이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이거나; R1 및 R2는 함께 를 형성하고, 여기서 R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이며; 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되고;
R5는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 알킬, 또는 아릴알킬이며;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이고;
RP은, 각각의 예에서 독립적으로, 할로이며;
는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
t는 0 내지 2의 정수이며;
x는 1 내지 30의 정수이고; 여기서
RL은 하기 정의한 바와 같은 반응성 링커이며; SP 1 및 SP 2 는 각각, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고, 여기서 SP 1 은 3가 링커를 포함하고; AA 1 은 아미노산 잔기를 포함하는 3가 링커이며; AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고; PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며; 여기서 는 이를 통해 나타낸 화학 그룹이 화학식내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타내고, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이고, 여기서 적어도 하나의 CD는 존재하고, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이며; 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, AA 1 또는 AA 2 중 임의의 하나는, 각각의 예에서 독립적으로, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린으로부터 선택된 아미노산, 이의 유도체, 또는 이의 조합물을 포함한다. 특정의 구현예에서, AA 1 는 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린으로부터 선택된 아미노산, 이의 유도체, 또는 이의 조합물을 포함한다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 라이신이다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 라이신 또는 라이신의 유도체이다. 특정의 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타메이트-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 라이신-발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 라이신-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타메이트-발린-시트룰린이다. 일부 예에서, SP 1 은 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이며, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, SP 2 는 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다.
특정의 구현예에서, 화학식 (IIIc-R)의 구조를 갖는 화합물이 본원에 제공된다:
RL은 반응성 링커이고;
CD는 사이클로덱스트린이며;
SP1은 스페이서 그룹이고;
AA4는 아미노산 잔기이며;
AA5는 디펩타이드 잔기이고;
PEG는 폴리에틸렌 글리콜이며;
m은 0 내지 4의 정수이고;
x는 0 내지 30의 정수이며;
R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이고; 여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은 -NRaRb로 임의 치환되며;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이고;
SP 1 및 SP 2 는 각각, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고, 여기서 SP 1 은 3가 링커이며; AA 4 는 아미노산 잔기를 포함하는 3가 링커이고; AA 5 는 디-펩타이드 잔기이며; PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고; 여기서 는 이를 통해 나타낸 화학 그룹이 화학식내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타내고, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이며, 여기서 적어도 하나의 CD는 존재하고, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이며; 이러한 실시예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, AA 4 또는 AA 5 중 임의의 하나는, 각각의 예에서 독립적으로, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린으로부터 선택된 아미노산, 이의 유도체, 또는 이의 조합이다. 특정의 구현예에서, AA 4 는 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 루이신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린으로부터 선택된 아미노산, 이의 유도체, 또는 이의 조합물이다. 특정의 구현예에서, AA 4 는 라이신이다. 특정의 구현예에서, AA 4 는 라이신 또는 라이신의 유도체이다. 특정의 구현예에서, AA 5 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 글루타메이트-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 라이신-발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 라이신-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 5 는 글루타메이트-발린-시트룰린이다. 일부 예에서, SP 1 은 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이며, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, SP 2 은 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이며, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다.
본원에 사용된 바와 같은, 어구 "반응성 링커," 또는 약어 "RL"은 로서 묘사된, 반응성 그룹 및 연결 그룹(linking group)을 포함하는 1가 그룹을 지칭하며, 여기서 RG는 반응성 그룹이고 L은 연결 그룹이다. 연결 그룹은 반응성 그룹을 페이로드에 브릿지하는 임의의 2가 모이어티이다. 연결 그룹은 또한 반응성 그룹, 사이클로덱스트린 모이어티, 및 페이로드를 브릿지하는 임의의 3가 모이어티를 포함한다. 반응성 링커(RL)는, 이들이 결합된 페이로드와 함께 본원에 기술된 항체 스테로이드 접합체의 제조를 위한 합성 전구체로서 유용한 중간체("링커-페이로드")를 포함한다. 반응성 링커는 반응성 그룹("RG")을 포함하며, 이는 항체, 변형된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편의 반응성 부위와 반응하는 작용 그룹 또는 모이어티이다. 반응성 그룹과 항체, 변형된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편의 반응으로부터 생성된 모이어티는, 연결 그룹과 함께, 본원에 기술된 접합체의 "결합제 링커"("BL") 부위를 포함한다. 특정의 구현예에서, "반응성 그룹"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 시스테인 또는 라이신 잔기와 반응하는 작용 그룹 또는 모이어티(예컨대, 말레이미드 또는 NHS 에스테르)이다. 특정의 구현예에서, "반응성 그룹"은 클릭 화학 반응을 겪을 수 있는 작용 그룹 또는 모이어티이다. 상기 클릭 화학 반응의 일부 구현예에서, 반응성 그룹은 아지드와 1,3 사이클로부가 반응을 겪을 수 있는 알킨이다. 이러한 적합한 반응성 그룹은 변형된 알킨, 예컨대, 변형-촉진된 알킨-아지드 사이클로부가(SPAAC)에 적합한 것들, 사이클로알킨, 예컨대, 사이클로옥틴, 벤자눌화된 알킨, 및 구리 촉매의 부재하에서 알킨과 1,3 사이클로부가 반응을 겪을 수 있는 알킨을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 알킨은 또한 DIBAC, DIBO, BARAC, 치환된, 예컨대, 불소화된 알킨, 아자-사이클로알킨, BCN, 및 이의 유도체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 반응성 그룹을 포함하는 링커-페이로드는 아지도 그룹으로 작용화된 항체를 접합시키는데 유용하다. 이러한 작용화된 항체는 아지도-폴리에틸렌 글리콜 그룹으로 작용화된 항체를 포함한다. 특정의 구현예에서, 이러한 작용화된 항체는 적어도 하나의 글루타민 잔기, 예컨대, 중쇄 Q295를 화학식 H2N-LL-N3(여기서 LL은 예를 들면, 2가 폴리에틸렌 글리콜 그룹이거나, 여기서 LL은 효소 글루타미나제의 존재하에서 폴리에틸렌 글리콜 및 사이클로덱스트린 모이어티를 포함하는 3가 그룹이다)에 따른 화합물과 반응시켜 유도된다. 일부 구현예에서, 항체는 다음의 구조를 갖는 작용화된 항체이다:
여기서 Ab는 항체이고, R은 하이드로카빌이고, n은 1 내지 10의 정수이며, w는 1 내지 10의 정수이다. 특정의 구현예에서, R은 에틸렌이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다. 특정의 구현예에서, w는 2 또는 4이다.
일부 예에서, 반응성 그룹은 알킨, 예컨대, 이고, 이는 아지드, 예컨대, 와의 클릭 화학(click chemistry)을 통해 반응하여, 클릭 화학 생성물, 예컨대, , 이의 레지오이성체, 또는 이의 혼합물을 형성할 수 있다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 알킨, 예컨대, 이고, 이는 클릭 화학을 통해 아지드, 예컨대, 와 반응하여 클릭 화학 생성물, 예컨대, 를 형성한다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 알킨, 예컨대, 이고, 이는 클릭 화학을 통해 아지드, 예컨대, 와 반응하여 클릭 화학 생성물, 예컨대, , 이의 레지오이성체, 또는 이의 혼합물을 형성할 수 있다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 작용 그룹, 예컨대, 이고, 이는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 상의 시스테인 잔기와 반응하여 이에 대한 결합, 예컨대, 를 형성하며, 여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭하고 S는 이를 통해 작용 그룹이 Ab에 결합하는 시스테인 잔기 상의 S 원자를 지칭한다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 작용 그룹, 예컨대, 이고, 이는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 상에서 라이신 잔기와 반응하여, 이에 대한 결합, 예컨대, 를 형성하며, 여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭하고 -NH-는 이를 통해 작용 그룹이 Ab에 결합하는 라이신의 끝을 지칭한다. 일부 예에서, 이를 통해 작용 그룹이 결합하는 라이신 잔기 상의 이러한 N 원자는 본원에서 결합, 예컨대, 위에 문자 N으로 나타낸다.
일부 구현예에서, RL은 화학식 (RL A )의 1가 모이어티이다;
여기서 RG는 반응성 그룹이고;
A는 아미노산 또는 펩타이드이며;
RA는 H 또는 알킬이고;
B는 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이며, 여기서 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬은 알킬, -OH, 또는 -N-RaRb로 임의 치환되고;
SP1 및 SP2는, 독립적으로 스페이서 그룹이며; q, z, s, t, u, v, 및 w는, 각각의 예에서 독립적으로, 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, RL은 RG-(SP1)q-(A)z-이다. 일부 구현예에서, RL은 RG-(SP1)q-(A)2-이다. 일부 구현예에서, RL은 화학식 (RL A1 )의 모이어티이다:
여기서 RAA1 및 RAA2는 각각, 독립적으로 아미노산 측쇄이다. 화학식 RL A1 의 일부 예에서, SP1은 2가 폴리에틸렌 글리콜 그룹이고 RG는 아지드와 1,3-사이클로부가 반응을 겪을 수 있는 알킨을 포함하는 그룹이다.
일부 구현예에서, RL은 다음 구조를 갖는다:
여기서:
RG, SP1, 및 q는 본원에 정의된 바와 같고;
Z1은 폴리에틸렌 글리콜 또는 카프로일 그룹이며;
Z2는 디펩타이드이고;
Z3은 PAB 그룹이다.
일부 다른 구현예에서, BL은 화학식 (BL B )의 3가 모이어티이고;
여기서 RGN은 본원에 정의된 바와 같고;
A는 트리펩타이드이며, 여기서 트리펩타이드내 아미노산 중 적어도 하나는 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합되고;
Ra는 H 또는 알킬이며;
B는 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이고, 여기서 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬은 알킬, -OH, 또는 -NRaRb로 임의 치환되며;
SP1 및 SP2는, 독립적으로 스페이서 그룹이고; q, z, s, t, u, v, 및 w는, 각각의 예에서 독립적으로, 0 또는 1이다.
일부 예에서, 사이클로덱스트린(CD)은 라이신 아미노산 잔기와 같은 아미노산 잔기에 직접 결합된다. 이는 CD가 라이신 아미노산 공유결합 링커로부터 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 또한 페이로드 모이어티에 직접 결합된다. 이는 공유결합 링커는 본원에 제시된 스테로이드 페이로드와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 페이로드로부터 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 또한 CD 모이어티에 직접 결합된다. 이는 공유결합 링커가 본원에 제시된 CD(들)과 같이, CD로부터 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 라이신 아미노산 또는 이의 유도체이다.
일부 예에서, CD는 연결 그룹(예컨대, BL)내 공유결합 링커에 간접적으로 결합된다. 이는 CD가 공유결합 링커로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 CD가 다른 모이어티를 통해 공유결합 링커에 결합됨을 의미한다. 예를 들면, CD는 공유결합 링커에 결합된 폴리에틸렌 글리콜 그룹에 결합된 말레이미드 그룹에 결합될 수 있다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 또한 페이로드 모이어티에 간접적으로 결합된다. 이는 공유결합 링커가 본원에 제시된 스테로이드 페이로드와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 페이로드로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 공유결합 링커가 다른 모이어티를 통해 페이로드에 결합됨을 의미한다. 예를 들면, 공유결합 링커는 Val-Ala 또는 Val-Cit와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 디펩타이드에 결합될 수 있으며, 이는 페이로드에 결합될 수 있는 파라-아미노 벤조일에 결합될 수 있다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 또한 사이클로덱스트린 모이어티에 간접적으로 결합된다. 이는 공유결합 링커가 본원에 제시된 바와 같은 사이클로덱스트린과 같은, 사이클로덱스트린으로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 공유결합 링커가 다른 모이어티를 통해 사이클로덱스트린에 결합됨을 의미한다. 예를 들면, 공유결합 링커는 사이클로덱스트린에 결합될 수 있는 반응성 그룹에 결합될 수 있는 폴리에틸렌 글리콜 그룹에 결합될 수 있다. 이러한 예 중 일부에서, 공유결합 링커는 라이신 아미노산 또는 이의 유도체이다.
일부 구현예에서, BL은 -RGN-(SP1)q-(A)z-이다. 일부 구현예에서, BL은 -RGN-(SP1)q-(A)2-이다. 일부 구현예에서, BL은 화학식 (BL B1 )의 모이어티이다:
여기서 RAA1 및 RAA2는 각각, 독립적으로 아미노산 측쇄이다. RAA3은 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합된 아미노산 측쇄이다. 화학식 RL B1 의 일부 예에서, SP1는 2가 폴리에틸렌 글리콜 그룹이고 RGN는 알킨과 아지드 사이의 반응의 1,3-사이클로부가 반응 부가물이다.
일부 예에서, A는 이다. 이러한 예 중 일부에서, RAA1는 아미노산 측쇄이고, RAA2는 아미노산 측쇄이며, RAA3은 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합된 아미노산 측쇄이다.
일부 예에서, A는 이고, 여기서 는 사이클로덱스트린 모이어티에 대한 직접 또는 간접 결합을 나타낸다.
일부 예에서, 임의의 앞서의 것을 포함하여, CD는, 각각의 예에서 독립적으로,
로부터 선택된다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, CD는 이다.
일부 예에서, A는 이다.
일부 구현예에서, RL은 3급 아민에 부착된다. 예를 들면, 스테로이드는 다음의 화합물, 이고, RL은 다음과 같은 3급 아민에 대한 결합일 수 있다:
.
일부 예에서, 다음과 같은 화합물이 제시되어 있다:
,
여기서:
RL은 상기 정의한 바와 같은 반응성 링커이고;
Ra 및 Rb는, 각각의 예에서 독립적으로, -H 또는 알킬이다.
일부 예에서, 본원에서 RG는 클릭-화학 반응성 그룹이다.
일부 다른 예에서, 본원에서 RG는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 상에 시스테인 또는 라이신 잔기와 반응하는 그룹으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, RG는
, , , , , 또는 이다.
일부 예에서, RG는 이다. 다른 예에서, RG는 이다. 일부 다른 예에서, RG는 이다. 일부 예에서, RG는 이다. 다른 예에서, RG는 이다. 다른 예에서, RG는 이다.
일부 구현예에서, SP1은:
, , , 또는 으로부터 선택될 수 있다.
일부 예에서, SP1은 이다. 일부 다른 예에서, SP1은 이다. 다른 예에서, SP1은 이다. 여전히 다른 예에서, SP1은 이다. 일부 다른 예에서, SP1은 이다.
임의의 상기 예에서, 첨자 a, b, 및 c는 독립적으로 각각의 예에서, 1 내지 20의 정수이다.
임의의 화학식 (II), (IIa), (IIb), 또는 (IIc)의 화합물에서, SP1은:
,, , , , 또는 로부터 선택될 수 있다.
일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다.
일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다. 일부 예에서, SP1은 이다.
일부 구현예에서, RL-SP1은:
로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 이러한 예 중 일부에서, 첨자 b, c, 및 d는 독립적으로 각각의 예에서, 1 내지 20의 정수이다.
일부 예에서 RL-SP1-은 이다. 일부 예에서 RL-SP1은 이다. 일부 예에서 RL-SP1은 이다. 일부 예에서 RL-SP1은 이다. 일부 예에서 RL-SP1은 이다. 일부 예에서 RL-SP1은 이다.
임의의 화학식 (II), (IIa), (IIb), 또는 (IIc)의 화합물에서, RL-SP1은 다음으로부터 선택된다:
로부터 선택된다.
일부 구현예에서, A는 발린-시트룰린, 시트룰린-발린, 라이신-페닐알라닌, 페닐알라닌-라이신, 발린-아스파라긴, 아스파라긴-발린, 트레오닌-아스파라긴, 아스파라긴-트레오닌, 세린-아스파라긴, 아스파라긴-세린, 페닐알라닌-아스파라긴, 아스파라긴-페닐알라닌, 루이신-아스파라긴, 아스파라긴-루이신, 이소루이신-아스파라긴, 아스파라긴-이소루이신, 루이신-아스파라긴, 아스파라긴-루이신, 글루탐산-아스파라긴, 아스파라긴-글루탐산, 시트룰린-아스파라긴, 아스파라긴-시트룰린, 알라닌-아스파라긴, 또는 아스파라긴-알라닌으로부터의 펩타이드이다.
일부 예에서, A는 발린-시트룰린 또는 시트룰린-발린이다.
일부 예에서, A는 발린-알라닌 또는 알라닌-발린이다.
일부 예에서, A는 발린이다.
일부 예에서, A는 알라닌이다.
일부 예에서, A는 시트룰린이다.
일부 예에서, A는 이다. 이러한 예 중 일부에서, RAA1은 아미노산 측쇄이고, 여기서 RAA2는 아미노산 측쇄이다.
일부 예에서, A는 이다.
일부 예에서, A는 이다.
일부 예에서, Ra는 H이다.
일부 예에서, Ra는 알킬이다.
일부 예에서, Ra는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, t-부틸, i-부틸, 또는 펜틸이다.
일부 구현예에서, B는 아릴이다.
일부 예에서, B는 페닐이다.
화학식 (II), (IIa), (IIb), 또는 (IIc)의 화합물의 일부 예에서, B는 페닐 또는 피리디닐이다.
본원의 일부 예에서, B는:
또는 이다.
이러한 예에서, R10은 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 시아노, 니트로, , , , NRaRb, 또는 아지도이다. 이러한 예에서, 첨자 p 및 m은 독립적으로 각각의 예에서, 0 내지 4의 정수로부터 선택된다. 본원의 일부 예에서, B는: 이다.
이러한 예에서, p는 0, 1, 2, 3 또는 4이다. 이러한 예 중 일부에서, R1은, 각각의 존재시 독립적으로, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 또는 할로이다. 일부 예에서, R1은 알킬이다. 일부 예에서, R1은 알콕시이다. 일부 예에서, R1은 할로알킬이다. 일부 예에서, R1은 할로이다.
화학식 (RL A )의 일부 구현예에서, -(NRa)s-(B)t-(CH2)u-(O)v-( SP2)w는:
이다.
또한 부데소니드 또는 디플로라손의 링커-페이로드가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 다음의 구조를 갖는 링커-페이로드가 본원에 제공된다:
여기서 RL은 반응성 링커이다.
링커-페이로드의 예는:
및 이의 염을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
E. 약제학적 조성물 및 치료 방법
본 개시내용은 치료학적 유효량의 본원에 개시된 하나 이상의 화합물을 투여함을 포함하여, 질환, 상태, 또는 장애, 예컨대, 염증성 질환 및 자가면역 장애를 치료하거나, 이의 증상을 관리하는 방법을 포함한다. 글루코코르티코이드 수용체, 글루코코르티코이드 결합, 및/또는 글루코코르티코이드 수용체 신호전달과 관련된 임의의 질환, 장애, 또는 상태가 포함된다. 이러한 방법은 본원에 기술된 스테로이드 페이로드 또는 이의 단백질 접합체를 환자에게 투여함을 포함한다. 따라서, 화학식 (I), (I)1의 화합물 또는 이의 단백질 접합체, 예컨대, 화학식 (III)의 화합물을 상기 질환, 장애, 또는 상태를 가진 환자에게 투여함을 포함하여, 글루코코르티코이드 수용체와 관련된 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 방법이 본 개시내용에 포함된다. (A), (A 1 ), (A 2 ), (A 3 ), (A 4 ), (A 5 ), (A 6 ), (A 7 ), (I), (I 1 ), (PIa), (PIb-1), (PIb-2), PIc-1), (PIc-2), (PId-1), (PId-2), (PIe-1), (PIe-2), (PII), (PIIa), (PIIb), (PIII), (PIIIa), (PIIIb), (PIV), (PV), (PVa), (PVb), (PVI), (PVII), (PVIIa), (PVIIb), (PVIIb-1), (PVIIb-2), (PVIII), 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화학식의 화합물의 단백질 접합체를 투여함을 포함하여, 글루코코르티코이드 수용체와 관련된 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제시되어 있다.
일부 구현예에서, 질환, 장애, 또는 상태는 천식, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 약물 과민증 반응, 통년성(perennial) 또는 계절성 알레르기 비염, 및 혈청병(serum sickness)을 포함하나 이에 한정되지 않는 알레르기 상태; 수포성 포진성피부염(bullous dermatitis herpetiformis), 박탈홍색피부증, 균상식육종, 천포창, 및 중증 다형 홍반(스티븐스-존슨 증후군(Stevens-Johnson syndrome))을 포함하나, 이에 한정되지 않는 피부과 질환; 1차 또는 2차 부신피질부전, 선천성 부신과형성, 암과 관련된 고칼슘혈증, 및 비억제성 갑상선염(nonsuppurative thyroiditis)을 포함하나 이에 한정되지 않는 내분비 장애; 위장 질환; 후천성(자가면역) 용혈성 빈혈, 선천성(적혈구) 재생불량성 빈혈(다이아몬드-블랙팬 빈혈: Diamond-Blackfan anemia), 성인에서 특발성 혈소판감소자색반, 순수 적혈구계 무형성증(pure red cell aplasia), 및 2차 혈소판 감소증을 포함하나, 이에 한정되지 않는 혈액 장애; 선모충병; 거미막밑 차단 또는 임페딩 블록(impending block)을 지닌 결핵성 수막염; 백혈병 및 림프종을 포함하나, 이에 한정되지 않는 신생물 질환; 다발경화증의 급성 병력, 원발성 또는 전이성 뇌 종양, 개두술, 또는 뇌 손상과 관련된 뇌 부종을 포함하나, 이에 한정되지 않는 신경계 장애; 교감성 안염, 측두 동맥염, 포도막염, 및 국소 코르티코스테로이드에 대해 반응하지 않는 눈 염증 상태를 포함하나, 이에 한정되지 않은 안과 질환; 특발성 신증후군에서 이뇨 또는 단백뇨의 차도를 유도하기 위한 또는 홍반성 낭창에 기인함을 포함하나, 이에 한정되지 않는 신장 질환; 베릴륨증(berylliosis), 적절한 항결핵성 화학치료요법과 동시 사용하는 경우 전격성(fulminating) 또는 파종성(disseminated) 폐 결핵, 특발성 호산구성 폐렴, 증상성 유육종증(symptomatic sarcoidosis)을 포함하나, 이에 한정되지 않는 호흡성 질환; 및 급성 통풍 관절염, 급성 류마티스 심장염, 강직성 척추염, 건선관절염, 청소년 류마티스 관절염을 포함하는 류마티스 관절염에서 단기간 투여(환자가 급성 에피소드(acute episode) 또는 악화를 극복하기 위한)를 위한, 및 피부근염, 다발근육염, 및 전신 홍반 루푸스에서 사용하기 위한 보조 치료요법으로서 사용함을 포함하나, 이에 한정되지 않는 류마티스 장애이다.
일부 예예서, 본원에 기술된 스테로이드 페이로드 또는 이의 접합체를 투여함을 포함하여, 자가면역 질환, 알레르기, 관절염, 천식, 호흡 장애, 혈액 장애, 암, 콜라겐 질환, 연결 조직 장애, 피부 질환, 눈 질환, 내분비 문제, 면역학적 질환, 염증 질환, 장 장애, 위장 질환, 신경학적 장애, 기관 이식 상태, 류마티스 장애, 피부 장애, 팽윤 상태, 상처 치유 상태, 및 이의 조합으로부터 선택된 질환, 장애 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제시되어 있다.
일부 예에서, 자가면역 장애는 다발경화증, 자가면역 감염, 대상포진, 전신 홍반 루푸스(즉, 루푸스), 중증 근무력증, 듀켄씨근이영양증, 및 유육종증으로부터 선택된다. 일부 예에서, 호흡 장애는 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 기관지 염증, 및 급성 기관지염으로부터 선택된다. 일부 예에서, 암은 백혈병, 림프모구 백혈병, 급성 림프모구 백혈병, 만성 림프모구 백혈병, 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 비-호지킨 림프종(논-Hodgkin's lymphoma: NHL), 및 다발 골수종으로부터 선택된다. 일부 예에서, 콜라겐 질환은 전신 홍반 루푸스이다. 일부 예에서, 눈 질환은 각막염이다. 일부 예에서, 내분비 문제는 애디슨 질환(Addison's Disease), 부신 기능부전증, 부신피질, 및 선천성 부신과다형성으로부터 선택된다. 일부 예에서, 염증 질환은 관절 염증, 건(tendon) 염증, 활액낭염, 상과염, 크론병(Crohn's disease), 염증성 창자병, 지질성 폐렴 갑상선염(lipid pneumonitis thyroiditis), 심마진(두드러기(hives)), 심낭염, 네프로시스 증후군(nephrotic syndrome), 및 포도막염으로부터 선택된다. 일부 예에서, 장 장애는 궤양성 결장염, 크론병(Crohn's disease), 및 염증성 창자병으로부터 선택된다. 일부 예에서, 류마티스 장애는 류마티스 관절염, 류마티스성 다발근육통증, 건선 관절염, 강직성 척추염, 및 전신 홍반 루푸스로부터 선택된다. 일부 예에서, 피부 장애는 건선, 습진, 및 옻 중독(poison ivy)으로부터 선택된다.　일부 예에서, 신경학적 장애는 만성 염증성 탈수 초성 다발성 신경증이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 쇼크, 뇌 부종, 및 이식체-대-숙주 질환을 포함하나, 이에 한정되지 않는 급성 염증 사건을 치료하기 위해 환자에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 혈액학적 악성종양, 예컨대, 백혈병, 림프종, 및 골수종과 관련된 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는 림프용해성 효과를 치료하기 위해 투여된다.
일부 예에서, 치료학적 유효량의 본원에 기술된 스테로이드 또는 이의 접합체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 염증을 감소시키는 방법이 본원에 제시되어 있다. 일부 예에서, 이를 필요로 하는 대상체에게 치료학적 유효량의 본원에 기술된 스테로이드 또는 이의 접합체를 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 면역계를 조절하는 방법이 본원에 제시되어 있다. 일부 예에서, 이를 필요로 하는 대상체에게 치료학적 유효량의 본원에 기술된 스테로이드 또는 이의 접합체를 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 코르티솔 수준을 조절하는 방법이 본원에 제시되어 있다. 일부 예에서, 이를 필요로 하는 대상체에게 치료학적 유효량의 본원에 기술된 스테로이드 또는 이의 접합체를 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 림프구 이동을 감소시키는 방법이 본원에 제시되어 있다. 일부 예에서, 이를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기술된 스테로이드 페이로드 또는 이의 접합체를 투여함을 포함하여, 암으로 인한 고칼슘혈증, 메니에르 증후군(Meniere's disease), 편두통, 군발성 두통, 중증 아프타 궤양(severe aphtohous ulcer), 후두염, 중증 결핵, 매독에 대한 헤르크스하이머 반응(Herxheimer reaction), 비대상성 심장 마비, 알레르기성 비염 또는 비 용종(nasal polyp)을 치료하는 방법이 본원에 제시되어 있다. 일부 예에서, 본원에 개시된 화합물은 염증성 창자병, 크론병, 또는 궤양성 결장염을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 예에서, 질환, 장애, 또는 상태는 천식, 피부 감염, 및 눈 감염을 포함하나 이에 한정되지 않는 만성 염증 상태이다. 일부 예에서, 본원에 개시된 화합물은 기관 이식을 수행하는 환자에서 면역억제를 위해 사용된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 스테로이드 페이로드 및 이의 접합체는 조현병, 약물 탐닉, 외상후 스트레스 장애(PTSD), 및 감정 장애(mood disorder), 물질 남용, 스트레스, 및 불안증과 같은 정신의학 장애를 포함하나, 이에 한정되지 않는, GR 신호전달과 관련된 신경 장애를 치료하기 위해 환자에게 투여된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 스테로이드 페이로드 및 이의 접합체는 눈 염증(예컨대, 결막염, 각막염, 포도막염), 황반 부종, 및 황반 변성을 포함하나, 이에 한정되지 않는 시각계 장애를 치료하기 위해 환자에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 스테로이드 페이로드 및 이의 접합체는 심혈관 장애를 치료하기 위해 환자에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 스테로이드 페이로드 및 이의 접합체는 글루코즈 및/또는 간 대사 장애를 치료하기 위해 환자에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 스테로이드 페이로드 및 이의 접합체는 근골격계 장애를 치료하기 위해 환자에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 스테로이드 페이로드 및 이의 접합체는 부종 및 건선과 같은 피하 염증 상태를 치료하기 위해 환자에게 투여된다.
본원에 기술된 단백질 접합체는 이의 특수한 세포 또는 기관계에 대한 이의 스테로이드 페이로드의 표적화된 전달에 의해, 유리된 접합되지 않은 스테로이드 페이로드의 투여로부터 생성되는 부작용을 감소시키거나 방지하기 위한 수단을 제공한다. 따라서, 화학식 (I) 또는 (I)1의 접합체를 상기 질환, 장애, 또는 상태를 가진 환자에게 투여함을 포함하여, 글루코코르티코이드 수용체와 관련된 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 접합체의 유리된 스테로이드 페이로드의 투여와 관련된 부작용은 감소된다. 또한, 상기 세포를 화학식 (I) 또는 (I 1 )의 화합물의 접합체 화합물과 접촉시킴을 포함하여, 화학식 (I) 또는 (I 1 )의 화합물을 세포에 전달하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 단백질 접합체는 상기 세포의 표면 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
본원에 기술된 화합물은 단독으로 또는 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가의 치료제는 본원에 기술된 화합물의 투여 직전, 이와 동시에, 또는 직후에 투여될 수 있다. 본 개시내용은 또한 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 본원에 기술된 임의의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 이러한 조합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는 치료 방법을 포함한다.
적합한 추가의 치료제는 제2의 글루코코르티코이드, 자가면역 치료제, 호르몬, 생물학적, 또는 모노클로날 항체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 치료제는 또한 본원에 제시된 화합물의 임의의 약제학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 기술된 화합물은 항바이러스제, 항생제, 진통제, 코르티코스테로이드, 스테로이드, 산소, 항산화제, COX 억제제, 심장보호제, 금속 킬레이터(metal chelator), IFN-감마 및/또는 NSAID와 함께 투여되고/되거나 동시-제형화될 수 있다.
본원에 기술된 방법의 일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물(또는 본원에 기술된 화합물 및 본원에 언급된 추가의 치료제 중 임의의 것의 조합을 포함하는 약제학적 조성물)의 다중 용량을 정의된 시간 과정에 걸쳐 대상체에게 투여할 수 있다. 본 개시내용의 이러한 국면에 따른 방법은 대상체에게 본원에 기술된 화합물의 다중 용량을 순차적으로 투여함을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, "순차적으로 투여하는"은 각각의 용량의 화합물을 대상체에게 상이한 시점, 예컨대, 예정된 간격(예컨대, 시간, 일, 주 또는 개월)으로 나누어진 상이한 날짜에 투여함을 의미한다. 본 개시내용은 환자에게 단일의 초기 용량의 본원에 기술된 화합물에 이어서, 하나 이상의 제2의 용량의 화합물, 및 임의로 이어서 하나 이상의 제3의 용량의 화합물을 순차적으로 투여함을 포함하는 방법을 포함한다.
용어 "초기 용량", "제2 용량", 및 "제3 용량"은 본원에 기술된 화합물의 일시적인 투여 순서를 지칭한다. 따라서, "초기 용량"은 투여 요법(또한 "기본선 용량"으로서 지칭됨)의 시작시 투여되는 용량이고; "제2 용량"은 초기 용량 후 투여되는 용량이며; "제3 용량"은 제2 용량 후 투여되는 용량이다. 초기, 제2, 및 제3 용량은 모두 동일한 양의 본원에 기술된 화합물을 함유할 수 있지만, 일반적으로 투여 빈도의 측면에서 서로 상이할 수 있다. 특정의 구현예에서, 초기, 제2 및/또는 제3의 용량 속에 함유된 화합물의 양은 치료 과정 동안 서로 상이하다(예컨대, 적절하게는 상향 또는 하향으로 조정된다). 특정의 구현예에서, 2회 이상(예컨대, 2, 3, 4, 또는 5회)의 용량은 치료 요법의 개시시 "로딩 용량(loading dose)" 이후에, 거의 흔하지 않은 기본(예컨대, "유지 용량")으로 투여되는 후속적인 용량으로서 투여된다.
본 개시내용의 특정의 예시적인 구현예에서, 각각의 제2 및/또는 제3의 용량은 바로 앞서의 용량 후 1 내지 26(예컨대, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½ 이상) 주에 투여된다. 본원에 사용된 바와 같은, 어구 "바로 앞서의 용량"은 다수 투여의 순서에 있어서, 개입된 용량없이 순서내에서 바로 다음 용량의 투여 전 환자에게 투여되는 화합물의 용량을 의미한다.
본 개시내용의 이러한 국면에 따른 방법은 환자에게 임의의 수의 제2 및/또는 제3의 용량의 화합물을 투여함을 포함할 수 있다. 예를 들면, 특정의 구현예에서, 단일의 제2 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 구현예에서, 2회 이상(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회 이상)의 제2 용량이 환자에게 투여된다. 유사하게, 특정의 구현예에서, 단일의 제3의 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 구현예에서, 2회 이상(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회 이상)의 제3 용량이 환자에게 투여된다. 투여 요법은 특수한 대상체의 일생에 걸쳐 무기한으로, 또는 이러한 치료가 더 이상 치료학적으로 필요하거나 유리하지 않을 때까지 수행될 수 있다.
다수의 제2 용량을 포함하는 구현예에서, 각각의 제2 용량은 다른 제2의 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 제2의 용량은 환자에게 바로 앞서의 용량 후 1 내지 2주 또는 1 내지 2개월째에 투여될 수 있다. 유사하게, 다수의 제3 용량을 포함하는 구현예에서, 각각의 제3 용량은 다른 제3 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 제3의 용량은 환자에게 바로 앞서의 용량후 2 내지 12주째에 투여될 수 있다. 개시내용의 특정의 구현예에서, 제2 및/또는 제3의 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 요법의 과정에 걸쳐 변할 수 있다. 투여 빈도는 또한 임상 시험 후 개개 환자의 필요성에 따라 주치의가 치료 과정 동안 조정할 수 있다.
본 개시내용은 2 내지 6회의 로딩 용량(loading dose)이 제1 빈도(예컨대, 주당 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 1개월에 1회, 2개월마다 1회 등)에서 환자에게 투여된 후 2회 이상의 유지 용량이 환자에게 드문 빈도 기준으로 투여되는 투여 요법을 포함한다. 예를 들면, 본 개시내용의 국면에 따라서, 로딩 용량이 1개월당 1회의 빈도로 투여되는 경우, 유지 용량이 6주마다 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회 등으로 투여될 수 있다.
본 개시내용은 본원에 기술된 화합물 및/또는 접합체, 예컨대, 화학식 (I) 및 (II)의 화합물의 약제학적 조성물, 예컨대, 본원에 기술된 화합물, 이의 염, 입체이성체, 다형체, 및 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 및/또는 부형제를 포함하는 조성물을 포함한다. 적합한 담체, 희석제 및 부형제의 예는 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: 적절한 조성물 pH의 유지를 위한 완충제(예컨대, 시트레이트 완충액, 석시네이트 완충액, 아세테이트 완충액, 포스페이트 완충액, 락테이트 완충액, 옥살레이트 완충액 등), 담체 단백질(예컨대, 사람 혈청 알부민), 나노입자, 염수, 폴리올(예컨대, 트레할로즈, 슈크로즈, 크실리톨, 소르비톨 등), 표면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴리옥살레이트 등), 항미생물제, 및 항산화제.
일부 예에서, 상기 장애를 가진 환자에게 치료학적 유효량의 화학식 I, III의 화합물, 또는 이의 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 질환, 장애 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제시되어 있다.
일부 예에서, 상기 질환을 가진 환자에게 치료학적 유효량의 본원에 제시된 화합물, 또는 이의 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 질환, 장애 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제시되어 있다.
일부 예에서, 면역학적 질환, 자가면역 질환, 염증, 천식, 또는 염증성 창자병, 크론병, 궤양성 결장염으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 질환, 장애 또는 상태의 치료 방법이 본원에 제시되어 있다.
일부 예에서, 본원에 기술된 접합체를 투여함을 포함하여 이에 대해 스테로이드 전달이 달성될 수 있는, 항원, 예컨대, 세포-표면 발현 항원을 표적화함으로써 질환, 장애 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 항원은 AXL, BAFFR, BCMA, BCR-목록 성분, BDCA2, BDCA4, BTLA, BTNL2 BTNL3, BTNL8,BTNL9, C10orf54, CCR1, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR9, CCR10, CD11c, CD137, CD138, CD14, CD168, CD177, CD19, CD20, CD209, CD209L, CD22, CD226, CD248, CD25, CD27, CD274, CD276, CD28, CD30, CD300A, CD33, CD37, CD38, CD4, CD40, CD44, CD45, CD47, CD46, CD48, CD5, CD52, CD55, CD56, CD59, CD62E, CD68, CD69, CD70, CD74, CD79a, CD79b, CD8, CD80, CD86, CD90.2, CD96, CLEC12A, CLEC12B, CLEC7A, CLEC9A, CR1, CR3, CRTAM, CSF1R, CTLA4, CXCR1/2, CXCR4, CXCR5, DDR1, DDR2, DEC-205, DLL4, DR6, FAP, FCamR, FCMR, FcR's, Fire, GITR, HHLA2, HLA 부류 II, HVEM, ICOSLG, IFNLR1, IL10R1, IL10R2, IL12R, IL13RA1, IL13RA2, IL15R, IL17RA, IL17RB, IL17RC, IL17RE, IL20R1, IL20R2, IL21R, IL22R1, IL22RA, IL23R, IL27R, IL29R, IL2Rg, IL31R, IL36R, IL3RA, IL4R, IL6R, IL5R, IL7R, IL9R, 인테그린, LAG3, LIFR, MAG/Siglec-4, MMR, MSR1, NCR3LG1, NKG2D, NKp30, NKp46, PDCD1, PROKR1, PVR, PVRIG, PVRL2, PVRL3, RELT, SIGIRR, Siglec-1, Siglec-10, Siglec-5, Siglec-6, Siglec-7, Siglec-8, Siglec-9, SIRPA, SLAMF7, TACI, TCR-목록 성분/회합물(assoc), PTCRA, TCRb, CD3z, CD3, TEK, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, TIGIT, TLR2, TLR4, TROY, TSLPR, TYRO, VLDLR, VSIG4, 또는 VTCN1이다. 일부 구현예에서, 항원은 IL2R-γ이다.
일부 예에서, 면역학적 질환, 자가면역 질환, 염증 질환, 피부 질환, 또는 위장 질환으로부터 선택된 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제시되어 있다.
일부 예에서, 질환은 크론병, 궤양성 결장염, 쿠싱 증후군(Cushing's syndrome), 부신피질 기능저하증, 또는 선천성 부신과형성이다.
일부 예에서, 질환은 염증, 천식, 또는 염증성 창자병이다.
일부 예에서, 질환은 다발경화증, 류마티스 관절염, 염증성 창자병, 궤양성 결장염, 건선, 또는 습진으로부터 선택된 자가면역 질환이다.
일부 예에서, 화학치료요법의 부작용을 감소시키거나 완화시키는 방법이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 이러한 방법은 상기 장애를 가진 환자에게 치료학적 유효량의 본원에 기술된 화합물 또는 조성물을 투여함을 포함한다.
일부 예에서, 면역억제 치료요법의 부작용을 감소시키거나 완화시키는 방법이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 이러한 방법은 상기 장애를 가진 환자에게 치료학적 유효량의 본원에 기술된 화합물 또는 조성물을 투여함을 포함한다.
일부 예에서, 암을 치료하는 방법이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 이러한 방법은 상기 장애를 가진 환자에게 치료학적 유효량의 본원에 기술된 화합물 또는 조성물을 투여함을 포함한다. 일부 예에서, 암은 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프모구성 백혈병, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종(NHL), 또는 다발 골수종, 및 기타로부터 선택된다.
F. 실시예
특정의 구현예는 다음의 비-제한적인 실시예로 나타낸다.
시약 및 용매는 달리 명확하게 기술하지 않는 한, Sinopharm Chemical Reagent Co.(SCRC), Sigma-Aldrich, Alfa, 또는 다른 판매회사와 같은 상업적인 공급원으로부터 수득하였다.
1H NMR 및 다른 NMR 스펙트럼을 Bruker AVIII 400 또는 Bruker AVIII 500에 기록하였다. 데이타는 내부 표준 테트라메틸 실란으로부터 다운필드(downfield)로 백만부(parts per million: ppm) 단위의 양성자 이동(proton shift)을 측정하는 Nuts 소프트웨어 또는 MestReNova 소프트웨어를 사용하여 진행하였다.
HPLC-MS 측정은 Agilent 1200 HPLC/6100 SQ 시스템 상에서 다음 조건을 사용하여 수행하였다:
HPLC-MS 측정을 위한 방법 A는 이동 상으로서: A: 물(0.01% 트리플루오로아세트산 TFA) 및 B: 아세토니트릴(0.01% TFA)을 포함하였다. 구배 상은 15분(min)의 기간에 걸쳐 및 1.0 mL/min의 유동 속도에서 95%의 B까지 증가한 5%의 B이었다. 사용된 컬럼은 SunFire C18, 4.6x50 mm, 3.5 μm이었다. 컬럼 온도는 50℃이었다. 검출기는 아날로그의 디지탈 변환기(Analog to Digital Converter) ELSD(증발 광-산란 검출기(Evaporative　Light-scattering　Detector), 이후 "ADC ELSD"), DAD(다이오드 배열 검출기(Diode array detector), 214 nm 및 254 nm), 및 전기분무 이온화(Electrospray Ionization)-대기압 이온화(Atmospheric Pressure Ionization: ES-API)를 포함하였다.
HPLC-MS 측정을 위한 방법 B는 이동상으로서: A: 물(10mM NH4HCO3) 및 B: 아세토니트릴을 포함하였다. 구배 상은 15분의 기간에 걸쳐 및 1.0 mL/min의 유동 속도에서 95%의 B로 증가한 5%의 B이었다. 사용된 컬럼은 XBridge C18, 4.6x50 mm, 3.5 μm이었다. 컬럼 온도는 50℃이었다. 검출기는 ADC ELSD, DAD(214 nm 및 254 nm), 및 질량-선택적 검출기(MSD ES-API)를 포함하였다.
LC-MS 측정은 Agilent 1200 HPLC/6100 SQ System 상에서 다음 조건을 사용하여 수행하였다:
LC-MS 측정을 위한 방법 A는 WATERS 2767 장치에서 수행하였다. 컬럼은 2개가 나란히 연결된 Shimadzu Shim-Pack, PRC-ODS, 20x250mm, 15μm이었다. 이동상은 다음과 같다: A: 물(0.01% TFA ) 및 B: 아세토니트릴(0.01% TFA). 구배 상은 3분의 기간에 걸쳐서 및 1.8 내지 2.3 mL/min의 유동 속도에서 95%의 B로 증가한 5%의 B이었다. 사용된 컬럼은 SunFire C18, 4.6x50 mm, 3.5 μm이었다. 컬럼 온도는 50℃이었다. 검출기는 아날로그의 디지탈 변환기 ELSD(증발-광 산란 검출기), DAD(다이오드 배열 검출기)(214 nm 및 254 nm), 및 ES-API를 포함하였다.
LC-MS 측정을 위한 방법 B는 Gilson GX-281 장치에서 수행하였다. 컬럼은 Xbridge Prep C18 10 um OBD, 19x250 mm이었다. 이동 상은 다음과 같다: A: 물(10mM NH4HCO3) 및 B: 아세토니트릴. 구배 상은 3분의 기간에 걸쳐서 및 1.8 내지 2.3 mL/min의 유동 속도에서 95%의 B로 증가한 5%의 B이었다. 사용된 컬럼은 XBridge C18, 4.6x50 mm, 3.5 μm이었다. 컬럼 온도는 50℃이었다. 검출기는 ADC ELSD, DAD(214 nm 및 254 nm), 및 질량 선택적 검출기(MSD)(ES-API)를 포함하였다.
제조 고압 액체 크로마토그래피(제조-HPLC)를 Gilson GX-281 장치에서 수행하였다. 2개의 용매 시스템을 사용하였으며, 하나는 산성이고 다른 것은 염기성이었다. 산성 용매 시스템은 Waters SunFire 10 μm C18 컬럼(100 , 250 x 19 mm)을 포함하였다. 제조-HPLC에 대한 용매 A는 수중 0.05% TFA이었고 용매 B는 아세토니트릴이었다. 용출 조건은 20분의 기간에 걸쳐 및 30 mL/min의 유동 속도에서 용매 B가 5%에서 100%로 증가한 선형 구배이었다. 기본 용매 시스템은 Waters Xbridge 10 μm C18 컬럼(100 Å, 250 x 19 mm)을 포함하였다. 제조-HPLC에 대한 용매 A는 수중 10 mM 중탄산암모늄(NH4HCO3)이었고 용매 B는 아세토니트릴이었다. 용출 조건은 20분의 기간에 걸쳐 및 30 mL/min의 유동 속도에서 용매 B가 5%에서 100%로 용매 B가 증가한 선형 구배이었다.
섬광 크로마토그래피를 Biotage 장치에서, Agela 섬광 컬럼 silica-CS를 사용하여 수행하였다. 역상 섬광 크로마토그래피는 달리 명확하게 나타내지 않는 한, Biotage 장치에서, Boston ODS 또는 Agela C18을 사용하여 수행하였다.
다음의 약어는 실시예 및 명세서 전체에 걸쳐 사용된다:
제조 방법
실시예 1
본 실시예는 C22-위치에서 입체화학적 대조군을 사용하여 데소니드의 화학적 유도체를 제조하는 한가지 방법을 증명한다. 도 1 및 2에서, C22 위치는 화합물 7, 8 및 11에 대해 별표, 즉, *로 확인된다. C22-위치에서 입체화학적 대조군을 사용한 스테로이드의 합성은 도 1 및 2에 묘사된 합성 경로에 따라 수행하였다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-6,6,9,13-테트라메틸-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온에 대한 일반명인 데소니드 (1)를 이소부티르산 무수물(화합물 2)과 반응시켜 화합물 1의 1급 알코올 위치에서 에스테르화반응에 의해 중간체 3을 생산하였다. 화합물 3을 일련의 알데하이드(4-1; 4-2; 4-3; 및 4-4, 각각은 이러한 번호 표지의 우측에 나타낸 R-CHO 그룹과 관련하여 상이하다)와 강산 HClO4 조건 하에서 트랜스아세틸화에 의해 반응시켜 알코올 5 및 에스테르 6를 생산하였다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 이러한 알데하이드는 도 1에 나타낸 R 그룹과 관련하여 서로 상이하였다.
알코올 5 및 에스테르 6을 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리하였다.
각각의 알코올 5 또는 에스테르 6을 개별적으로 디에틸아민과 반응시켜 Fmoc-그룹을 제거하거나 Fe/NH4Cl과 반응시켜 니트로를 환원시킴으로써 각각 C22에서 R/S 입체 화학 둘 다를 갖는 에피머(empimer) 화합물 7 및 8을 제공하였다.
하기 상세히 설명한 바와 같이, R 및 S 에피머는 분리되었으며 이들의 R- 및 S-구조가 확인되었다. 예를 들면, 도 1에서 화합물 7 및 8의 R-에피머를 단리하여 1H NMR에 의해 주요 입체이성체가 90% 이상인 것으로 확인하였다. 각각의 에피머의 C22 구조는 2D-NOESY 분광기 연구로 측정하였다.
하기 표 1은 본원에 기술된 방법을 사용하여 제조된 스테로이드를 나타낸다.
[표 1]
하기 표 2는 본원에 기술된 방법을 사용하여 제조된 스테로이드를 나타낸다.
[표 2]
하기 표 3은 본원에 기술된 방법을 사용하여 제조된 링커 페이로드를 나타낸다.
[표 3]
하기 표 4는 본원에 기술된 방법을 사용하여 제조된 링커 페이로드를 나타낸다.
[표 4]
실시예 2
본 실시예는 부데소니드, 덱사메타손, 및 플루메타손의 화학적 유도체를 제조하는 방법을 입증한다. 이러한 방법은 일반적으로 도 2, 3, 및 4에 나타낸 바와 같이 설명된다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 부데소니드의 메실레이트 유사체(9) 또는 이의 디플루오로-유사체(9B)를 알킬 아민 또는 치환된 페놀(10)과 반응시켜 도 2에서의 화합물 11-1 내지 11-23과 같은 아닐린- 또는 아민-포함 화합물(11)을 수득하였다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 덱사메타손의 메실레이트 유사체(12)를 알킬 아민 또는 치환된 페놀(10)과 반응시켜 도 3에서의 아닐린- 또는 아민-포함 화합물(14) 또는 (15)를 수득하였다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 플루메타손의 메실레이트 유사체(13)를 알킬 아민 또는 치환된 페놀(10)과 반응시켜 도 4에서의 아닐린- 또는 아민-포함 화합물(16)을 수득한다.
하기 상세히 설명한 바와 같이, 표 1에서 11-5 S 및 11- 5R 의 입체화학적으로 순수한 에피머를 이들의 상응하는 R/S 이성체의 혼합물로부터 키랄 분리에 의해 수득하였다. 각각의 화합물에 대한 절대 입체화학을 2D-NOESY로 측정하였다. 2D-NOESY 스펙트럼은 H22 및 H18이 11- 5R 과 관련되었고 11- 5S 에서 H22와 H18 사이에 관련성이 없었음을 나타내었다. 유사하게, C22-위치에서 키랄 중심은 2D-NOESY에 의해 표 1에서의 화합물 7-1 S , 7-1 R , 7-4 R , 8-1 R , 11-6 S , 11-6 R , 11-7 R , 11-8 R , 11-12 R , 11-13 R , 및 11-19 R 에 대해 확인되었다.
실시예 3
본 실시예는 표 1에서의 화합물 7-1 S 및 7-1 R 을 제조하는 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 1에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-(4-니트로페닐)-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 2-메틸프로파노에이트(5-1) 및
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-6-(4-니트로페닐)-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온 (6-1).
단계 1: 화합물 3을 이의 전체 내용이 모든 목적을 위해 이의 전문이 참고로 본원에 포함된 제US2007/135398호에서의 과정에 따라 데소니드(1)를 이소부티르산과 아세톤 속에서 반응시켜 합성하였다.
단계 2: 니트로프로판(20 mL) 중 화합물 3의 용액(320 mg, 0.657 mmol)에 과염소산(70%, 1.90 g, 1.33 mmol)을 0℃에서 적가한 후, 4-니트로벤즈알데하이드(4-1, 151 mg, 1.00 mmol)를 적가하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 에틸 아세테이트(80 mL)로 희석하였다. 수득되는 혼합물을 포화된 중탄산나트륨 수용액(30 mL x 3)에 이어 염수(30 mL x 2)로 세척하였다. 이후에, 수득되는 용액을 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 잔사를 석유-에테르중 0 내지 35% 에틸 아세테이트로 용출시키는 섬광 크로마토그래피로 정제하여 1H NMR을 기반으로 3/1 비인 5R/5S 에피머의 혼합물인 화합물(5-1)을 황색 고체(120 mg, 수율 32%)로서 수득하고, 추가로 석유 에테르 중 60 내지 70% 에틸 아세테이트로 용출시켜, 1H NMR을 기반으로 5/1 비인 6R/6S 에피머의 혼합물인 화합물(6-1)을 황색 고체(150 mg, 수율 36%)를 수득하였다(R/S는 측정되지 않음).
화합물(5-1): ESI m/z: 580 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz, 비가 3인 에피머 A 및 B) δ 8.27 및 8.25 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.62 및 7.55 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.28-7.21 (m, 1H), 6.33-6.23 (m, 1H), 6.03 및 6.05 (s, 1H), 5.62 및 6.16 (s, 1H), 5.12 및 5.43 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.97 및 4.77 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.88 및 4.33 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.52 (br s, 1H), 2.80-2.50 (m, 2H), 2.44-2.29 (m, 1H), 2.29-2.05 (m, 3H), 2.01-1.84 (m, 2H), 1.80-1.67 (m, 2H), 1.51 및 1.59 (br s, 1H), 1.46 및 1.48 (s, 3H), 1.29-1.07 (m, 7H), 1.03 및 1.05 (s, 3H) ppm.
화합물 6-1: ESI m/z: 510 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 400 MHz, 비가 5인 에피머 A 및 B) δ 8.26 및 8.24 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.77 및 7.57 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.17 및 6.18 (dd, J = 10.0 Hz, 1.8 Hz, 1H), 5.93 및 5.95 (s, 1H), 5.63 및 6.28 (s, 1H), 5.14 및 5.03 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.99 및 5.35 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.64-4.13 (m, 3H), 2.64-2.51 (m, 1H), 2.37-2.24 (m, 1H), 2.20-1.99 (m, 2H), 1.94-1.57 (m, 5H), 1.40 (s, 3H), 1.14-0.98 (m, 2H), 0.88 (s, 3H) ppm.
단계 3: 표 1에서의 (1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-6-(4-아미노페닐)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(7-1 R ) 및 표 1에서의 (1S,2S,4R,6S,8S,9S,11S,12S,13R)-6-(4-아미노페닐)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0. 02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(7-1 S )의 제조.
철 분말(56.0 mg, 1.00 mmol) 및 염화암모늄(53.5 mg, 1.00 mmol)을 에탄올(3 mL) 및 물(0.5 mL)의 합한 용액 중 화합물 5-1의 용액(51.0 mg, 0.100 mmol)에 동시에 가하였다. 현탁액을 80℃에서 1시간 동안 교반하고 셀라이트(Celite)를 통해 여과하여 고체를 제거하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물 7-1 R (30 mg, 수율 63%)를 백색 고체로서 및 화합물 7-1 S (8 mg, 수율 17%)를 백색 고체로서 수득하였다.
2D-NOESY 분광법을 사용하여 화합물 7-1 R 및 화합물 7-1 S 의 키랄 중심의 입체화학적 구조를 측정하였다. 2D-NOESY 스펙트럼은 화합물 7-1 R 내 H22와 H21 사이에 상관성이 있음을 확인하였으며 이것이 R 구조 키랄 중심을 가짐을 나타낸다. 화합물 7-1 S 내 H22와 H21 사이에 상관관계는 관찰되지 않았으며, 이는 이것이 S 구조 키랄 중심을 가짐을 나타낸다. NMR 연구는 또한 화합물 7-1 R 내 H22의 이동(5.33 ppm)이 화합물 7-1 S 의 것(6.01 ppm)보다 훨씬 더 큼을 나타내었으며, 이는 화합물 7-1 R 의 H22가 보다 저해됨을 나타낸다. 화합물 7-1-22 R 및 화합물 7-1-22 S 의 2D-NOESY 스펙트럼은 도 5 및 6에 나타낸다.
표 1에서의 화합물 7-1 R : ESI m/z: 480 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 400 MHz) δ 7.46 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.67 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.27 (dd, J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.33 (s, 1H), 5.00 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 19.4 Hz, 1H), 4.50-4.39 (m, 1H), 4.31 (d, J = 19.4 Hz, 1H), 2.78-2.61 (m, 1H), 2.47-2.35 (m, 1H), 2.35-2.22 (m, 1H), 2.22-2.10 (m, 1H), 2.04-1.94 (m, 1H), 1.91-1.66 (m, 4H), 1.51 (s, 3H), 1.25-1.11 (m, 1H), 1.07 (dd, J = 11.2 Hz, 3.5 Hz, 1H), 0.99 (s, 3H) ppm.
표 1에서의 화합물 7-1 S : ESI m/z: 480 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 400 MHz) δ 7.47 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.65 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.27 (dd, J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.36 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 4.46-4.31 (m, 2H), 4.12 (d, J = 19.2 Hz, 1H), 2.75-2.61 (m, 1H), 2.47-2.35 (m, 1H), 2.27-2.11 (m, 2H), 2.08-1.97 (m, 1H), 1.96-1.73 (m, 4H), 1.51 (s, 3H), 1.33-1.17 (m, 2H), 1.17-1.09 (m, 1H), 1.01 (s, 3H) ppm.
실시예 4
본 실시예는 표 1에서의 화합물(8-1 R/S ) 및 화합물(8-1 R )의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 1에서 번호매긴 화합물 번호를 지칭한다.
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-6-(4-아미노페닐)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 2-메틸프로파노에이트(8-1 R ).
철 분말(56.0 mg, 1.00 mmol) 및 염화암모늄(53.5 mg, 1.00 mmol)을 에탄올(3 mL) 및 물(1 mL) 중 화합물(6-1)의 용액(58.0 mg, 0.100 mmol)에 동시에 가하였다. 수득되는 현탁액을 80℃에서 1시간 동안 교반하고 셀라이트를 통해 여과하여 고체를 제거하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물(8-1 R ) 및 이의 거울상이성체(즉, C22에서의 S 입체화학)(26 mg, 수율 45%)를 백색 고체로서 수득하였다. R 에피머 대 S-에피머의 비는 HPLC 및 1H NMR에 의해 4:1이다. ESI m/z: 550 (M + H)+.
R-에피머를 추가로 단리하고 구조를 2D NMR로 측정하였다.
화합물(8-1 R ): ESI m/z: 550 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 500 MHz) δ 7.46 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.69 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.27 (dd, J = 10.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.44 (s, 1H), 5.07 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.88 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 4.48-4.44 (m, 1H), 2.73-2.64 (m, 2H), 2.42-2.39 (m, 1H), 2.32-2.24 (m, 1H), 2.19-2.15 (m, 1H), 2.03-1.99 (m, 1H), 1.95-1.92 (m, 1H), 1.90-1.83 (m, 2H), 1.76-1.69 (m, 1H), 1.52 (s, 3H), 1.27-1.12 (m, 7H), 1.09-1.05 (m, 1H), 1.02 (s, 3H) ppm.
실시예 5
본 실시예는 표 1에서의 화합물(7-2 R/S )의 제조방법을 입증한다. 본 실시예는 도 1에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
단계 1: 1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-6-[(4-니트로페닐)메틸]-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온 (5-2).
니트로프로판(10 mL) 중 화합물(3)의 용액(226 mg, 0.464 mmol)에 수성 과염소산(70%, 985 mg, 6.90 mmol)을 0℃에서 적가한 후, 이의 전체 내용이 모든 목적을 위해 이의 전문으로 참고로 본원에 포함된 Synthesis, 2011, 18, 2935-2940에 따라 2-(4-니트로페닐)아세트알데하이드(4-2, 115 mg, 0.696 mmol)를 가하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 에틸 아세테이트(60 mL)로 희석하였다. 혼합물을 포화된 중탄산나트륨 수용액(50 mL x 3)에 이어서, 염수(50 mL x 3)로 세척한 후 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 잔사를 석유 에테르 중 0 내지 35% 에틸 아세테이트로 용출시키는 섬광 크로마토그래피로 정제하여 화합물(6-2)을 갈색 고체(95 mg, 수율 34%, 1H NMR에 의해 >10/1 비의 22R/S 에피머 포함), 및 석유 에테르 중 60 내지 70% 에틸 아세테이트로 추가로 용출시켜 화합물(5-2)(145 mg, 수율 60%)를 갈색 고체로서 수득하였다.
화합물(5-2): ESI m/z: 524 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.09 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.31 (dd, J = 10.1 Hz, 1.8 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 4.92 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.86 (t, J = 3.6 Hz, 1H), 4.52-4.39 (m, 2H), 4.28-4.17 (m, 1H), 3.08 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 2.96 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 2.53-2.40 (m, 1H), 2.32-2.19 (m, 1H), 2.04-1.95 (m, 1H), 1.95-1.82 (m, 2H), 1.60-1.46 (m, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.34 (br s, 1H), 0.91-0.77 (m, 4H), 0.76-0.62 (m, 2H) ppm.
단계 2: (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-6-[(4-아미노페닐)메틸]-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온 (7-2 R/S )
철 분말(78.0 mg, 1.40 mmol) 및 염화암모늄(75.0 mg, 1.40 mmol)을 에탄올(4 mL) 및 물(0.5 mL)의 합한 용액 중 화합물의 용액(5-2)(75.0 mg, 0.143 mmol)에 동시에 가하였다. 현탁액을 80℃에서 1.5시간 동안 교반하고 셀라이트를 통해 여과하여 고체를 제거하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물(7-2 R/S )(26 mg, 수율 37%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 494 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 400 MHz) δ 7.44 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.48 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.30 (dd, J = 10.1 Hz, 1.9 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 4.85-4.77 (m, 2H), 4.51 (d, J = 19.4 Hz, 1H), 4.35-4.29 (m, 1H), 4.24 (d, J = 19.4 Hz, 1H), 2.87-2.72 (m, 2H), 2.62-2.47 (m, 1H), 2.38-2.28 (m, 1H), 2.08-1.93 (m, 1H), 1.90-1.78 (m, 2H), 1.67-1.58 (m, 1H), 1.53-1.37 (m, 5H), 0.91-0.77 (m, 5H), 0.74 (dd, J = 11.2 Hz, 3.4 Hz, 1H) ppm.
실시예 6
본 실시예는 표 1에서의 화합물(8-2 R/S )의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 1에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
단계 1: 2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-[(4-니트로페닐)메틸]-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 2-메틸프로파노에이트(6-2)
화합물 6-2의 합성은 상기 실시예 5에서 기재하였다. 화합물 6-2: ESI m/z: 594 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.15 (d, J = 8.7 Hz, 0.1H) 및 8.09 (d, J = 8.7 Hz, 1.9H), 7.40 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.31 (dd, J = 10.1 Hz, 1.8 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 4.94 (t, J = 3.6 Hz, 1H), 4.87 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 3.09 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 2.73-2.61 (m, 1H), 2.53-2.41 (m, 1H), 2.31-2.21 (m, 1H), 2.07-1.96 (m, 1H), 1.94-1.84 (m, 2H), 1.84-1.76 (m, 1H), 1.63-1.43 (m, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.22 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 0.92-0.82 (m, 4H), 0.76-0.61 (m, 2H) ppm.
단계 2: 2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-6-[(4-아미노페닐)메틸]-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 2-메틸프로파노에이트 (8-2 R/S )
에탄올(5 mL) 및 물(1 mL)의 조합된 용액 중 화합물 6-2의 용액(65.0 mg, 0.109 mmol)에 철 분말(61.0 mg, 1.09 mmol) 및 염화암모늄(58.4 mg, 1.09 mmol)을 동시에 가하였다. 현탁액을 80℃에서 1시간 동안 교반하고 셀라이트를 통해 여과하여 고체를 제거하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물(8-2 R/S )(30 mg, 수율 49%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 564 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.25 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.44 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.31 (dd, J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 4.92-4.84 (m, 2H), 4.80 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.73 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.41 (s, 1H), 3.48 (br s, 1H), 2.85 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 2.75-2.62 (m, 1H), 2.56-2.41 (m, 1H), 2.31-2.19 (m, 1H), 2.05-1.91 (m, 2H), 1.88-1.80 (m, 1H), 1.77-1.70 (m, 1H), 1.55-1.41 (m, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.29-1.18 (m, 8H), 0.91-0.74 (m, 5H) ppm.
실시예 7
본 실시예는 표 1에서의 화합물(8-3 R/S )의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 1에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
단계 1: 2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-6-(2-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}에틸)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 2-메틸프로파노에이트 (6-3)
니트로프로판(5 mL) 중 화합물 3의 용액(240 mg, 0.493 mmol)에 수성 과염소산(70%, 214 mg, 1.49 mmol)을 0℃에서 적가한 후, Fmoc-3-아미노-1-프로파날(4-3, 236 mg, 0.799 mmol)을 이의 내용이 모든 목적을 위해 이의 전문으로 참고로 본원에 포함된 J. Am. Chem. Soc., 2006, 128 (12), 4023-4034에서의 합성에 따라 가하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 에틸 아세테이트(80 mL)로 희석하였다. 혼합물을 포화된 중탄산나트륨 수용액(50 mL x 3)에 이어서, 물(50 mL x 2)에 이어서 염수(50 mL)를 가한 후, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 잔사를 제조-TLC(실리카 겔, 메탄올/메틸렌 클로라이드, v/v = 1/25)로 정제하여 화합물(6-3)(200 mg, 수율 56%, 6R/6S 에피머)을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 724 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.76 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.32-7.20 (m, 3H), 6.28-6.25 (m, 2H), 6.00 (s, 1H), 5.28-5.04 (m, 2H), 4.87-4.76 (m, 1H), 4.46-4.35 (m, 3H), 4.18 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.49 (s, 1H), 3.39-3.24 (m, 2H), 2.77-2.49 (m, 2H), 2.37-2.26 (m, 1H), 2.23-1.96 (m, 3H), 1.96-1.47 (m, 6H), 1.45-1.41 (m, 3H), 1.28-1.06 (m, 10H), 1.02-0.94 (m, 3H) ppm.
단계 2: 2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-6-(2-아미노에틸)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 2-메틸프로파노에이트 (8-3 R/S )
디에틸아민(1 mL) 및 메틸렌 클로라이드(1 mL) 중 화합물(6-3)의 용액(40.0 mg, 55.3 μmol)을 실온에서 밤새 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔시를 제조-HPLC(방법 B)에 이어서 제조-TLC(박층 크로마토그래피)(실리카 겔, 메틸렌 클로라이드/메탄올, v/v = 75/10)로 정제하여 화합물(8-3 R/S )(3 mg, 수율 11%)을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 502 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 400 MHz) δ 7.36 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.16 (dd, J = 10.1 Hz, 1.8 Hz, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.23 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 5.08-4.90 (m, 1H), 4.75-4.65 (m, 1H), 4.38-4.28 (m, 1H), 2.83-2.50 (m, 2H), 2.33-2.23 (m, 1H), 2.13-2.00 (m, 2H), 1.90-1.46 (m, 6H), 1.39 (s, 3H), 1.24-1.12 (m, 2H), 1.23-0.78 (m, 11H) ppm.
실시예 8
본 실시예는 표 1에서의 화합물 7-4 R 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 1에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-6-(piperidin-4-일)-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온 (7-4 R ).
니트로프로판(5 mL) 중 데소니드(1, 0.10 g, 0.25 mmol)의 용액에 수성 과염소산(70%, 0.11 g, 0.75 mmol)을 0℃에서 적가한 후, 1-Boc-4-피페리딘카복스알데하이드(4-4, 64 mg, 0.30 mmol)를 가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 현탁액을 진공하에 농축시켰다. 잔사를 메탄올(7M, 10 mL) 중 암모니아 용액을 첨가하여 염기성화시켰다. 수득되는 혼합물을 진공하에 농축시키고 조 생성물을 제조-HPLC로 2회(방법 B) 정제하여 화합물 7-4 R (15 mg, 수율 13%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 472 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 500 MHz) δ 7.47 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.27 (dd, J = 10.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 4.90 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 19.0 Hz, 1H), 4.46-4.43 (m, 1H), 4.41 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 19.0 Hz, 1H), 3.13-3.09 (m, 2H), 2.71-2.60 (m, 3H), 2.42-2.38 (m, 1H), 2.27-2.13 (m, 2H), 1.99-1.96 (m, 1H), 1.85-1.64 (m, 7H), 1.52 (s, 3H), 1.51-1.38 (m, 2H), 1.14-0.99 (m, 2H), 0.96 (s, 3H) ppm. 화합물 7-4 R 에 대한 입체 화학 R 구조를 2D NMR로 측정하였다.
실시예 9
본 실시예는 표 1에서의 화합물(11-1 R/S )의 제조 방법을 입증한다. 이러한 방법은 일반적으로 도 2에 나타낸 바와 같이 설명된다.
단계 1: 2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8. 002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 메탄설포네이트(9)
이의 알코올로부터 메실레이트의 합성을 위한 일반적인 과정 A: DCM(출발 물질 그램 당 10 mL) 중 알코올의 용액(1.0 당량)에 트리에틸아민 또는 4-디메틸아미노피리딘(2 당량) 및 메탄설포닐 클로라이드(1.2 당량)를 가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후에 또는 출발 물질이 TLC에 따라 소비될 때까지 교반 후, 반응 혼합물을 실리카 겔(100-200 메쉬)에 가하고 진공하에 농축시켰다. 실리카 겔을 지닌 반응 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 메실레이트 생성물을 수득하였다. 대안적으로, 혼합물을 희석된 수성 하이드로클로라이드(1N) 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 2% MeOH)로 정제하여 상응하는 메실레이트 생성물을 수득하였다.
화합물 9를 제조하기 위한 대안적인 방법: 피리딘(5 mL) 중 부데소니드의 용액(0.28 mg, 0.65 mmol)에 4-디메틸아미노피리딘(0.16 g, 1.3 mmol)을 가한 후 메탄설포닐 클로라이드(0.11 g, 0.97 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 수득되는 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)에 부었다. 혼합물을 희석된 수성 하이드로클로라이드(1N) 및 이어서 염수로 희석시키고, 황산나트륨 위에서 건조시키며 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 크로마토그래피(메틸렌 클로라이드중 0 내지 1% 메탄올)로 정제하여 화합물(9)(0.26 g, 수율 85%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 509 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) (which 에피머) δ 7.25 및 7.22 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.30-6.27 (m, 1H), 6.03-6.02 (m, 1H), 5.17-5.11 (m, 1.5H), 5.06-4.96 (m, 1.5 H), 4.87-4.86 (m, 0.5 H), 4.59 (d, J = 4.5 Hz, 0.5 H), 4.52-4.50 (m, 1 H), 3.24 (s, 3H), 2.60-2.53 (m, 1H), 2.36-2.33 (m, 1H), 2.24-2.00 (m, 3H), 1.86-1.62 (m, 4H), 1.53-1.33 (m, 8H), 1.21-1.09 (m, 2 H), 1.02-0.96 (m, 3H), 0.94-0.91 (m, 3H) ppm.
단계 2: (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-8-(2-아미노아세틸)-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-1 R/S )
실온에서 MeOH 중 암모니아의 용액(7 M, 15 mL)에 화합물 9(0.10 g, 0.20 mmol)를 가하였다. 용액을 밀봉하고 40℃에서 밤새 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하고 조 생성물을 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물(11-1 R/S )(8.0 mg, 9% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 429.9 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 400 MHz) δ 7.46 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.22-5.15 (m, 1.5 H), 4.88 (m, 0.6H), 4.58 (m, 0.5H), 4.42 (m, 1H), 3.96-3.81 (m, 0.7H), 3.50-3.41 (m, 0.7H), 2.70-2.63 (m, 1H), 2.40-2.37 (m, 1H), 2.22-1.94 (m, 3H), 1.87-1.25 (m, 11H), 1.17-0.80 (8H) ppm. 분석 HPLC: > 95%, 보유 시간: 7.63 min (방법 B).
실시예 10
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-2 R/S 를 제조하는 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-8-[2-(메틸아미노)아세틸]-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0²,.04,8.0¹³,¹8]이코사-14,17-디엔-16-온 (11-2 R/S )
밀봉된 튜브 속의 메틸아민(THF 중 2 M 용액, 0.5 mL) 중 화합물 9의 용액(51 mg, 0.10 mmol)을 20 내지 25℃에서 4시간 동안 교반한 후, 40℃에서 밤새 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사를 제조-HPLC(방법 A)에 이어서 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물(11-2 R/S )(15 mg, 33% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 444.3 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.26-7.23 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 6.30-6.26 (m, 1H), 6.03-6.02 (m, 1H), 5.20-5.16 (m, 1H), 4.90-4.89 (d, J = 4.8 Hz, 0.5 H), 4.69-4.66 (t, J = 4.8 Hz, 0.5H), 4.49-4.51 (m, 1H), 3.50-3.29 (m, 2H), 2.61-2.52 (m, 1H), 2.37-2.32 (m, 1H), 2.17-2.16 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 2.14-2.08 (m, 3H), 1.86-1.74 (m, 3H), 1.59-1.48 (m, 2H), 1.45 (s, 3H), 1.42-0.89 (m, 12H) ppm.
실시예 11
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-3 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-8-[2-(디메틸아미노)아세틸]-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온 (11-3 R/S )
THF(3 mL) 중 화합물 9의 용액(51 mg, 0.10 mmol)에 THF(2 M, 0.75 mL, 1.5 mmol) 중 디메틸아민의 용액을 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 조 생성물을 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물 11-3 R/S (15 mg, 33% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 458.2 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 400 MHz) δ 7.46 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.21 (t, J = 4.8 Hz, 0.6H), 5.17 (d, J = 7.2 Hz, 0.6H), 4.58 (d, J = 4.4 Hz, 0.4H), 4.44-4.41 (m, 1H), 3.80-3.57 (m, 1H), 3.26 (d, J = 18.8 Hz, 0.7H), 3.08-2.91 (m, 0.7H), 2.70-2.61 (m, 1H), 2.49-2.33 (m, 7H), 2.26-2.11 (m, 2H), 2.02-1.95 (m, 1H), 1.85-1.55 (m, 5H), 1.49 (s, 3H), 1.49-1.30 (m, 3H), 1.09-1.00 (m, 2H), 0.98-0.90 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: > 95%, 보유 시간: 8.34분(방법 B).
실시예 12
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-5 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-8-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8. 002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-5 R/S )
이의 메실레이트 전구체로부터 치환된 페놀 에테르를 제조하기 위한 일반적인 과정 B: 더운 아세토니트릴 또는 아세톤(60 내지 65℃)에 메실레이트 전구체(1 당량), 치환된 페놀(2.0-2.5 당량), 및 탄산칼륨 또는 탄산세슘(2.0-3.0 당량)을 가하였다. 수득되는 현탁액을 2 내지 3시간 동안 환류시키고, 반응을 LCMS 및/또는 TLC로 모니터링하였다. 반응물을 실온으로 냉각시킨 후, 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사에 물을 가하였다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 용액을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 조 생성물을 다음 단계에 직접 사용하거나 섬광 크로마토그래피 또는 제조-HPLC로 정제하였다.
단계 1: 아세톤(10 mL) 중 화합물 9(0.13 g, 0.26 mmol), 4-니트로페놀(10-5, 72 mg, 0.52 mmol) 및 탄산칼륨(72 mg, 0.52 mmol)을 밤새 환류(60℃)시켰다. 여과하여 고체를 제거한 후, 여액을 진공하에 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 크로마토그래피(메틸렌 클로라이드 중 0 내지 1% 메탄올)로 정제하여 니트로-중간체(0.11 g, 수율 77%)를 갈색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 552 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) (에피머 사용) δ 8.23-8.15 (m, 2.4H), 7.26-7.23 (m, 1H), 6.97-6.91 (m, 2.4H), 6.31-6.28 (m, 1H), 6.05-6.04 (m, 1H), 5.22-5.18 (m, 1.4H), 5.10-5.07 (m, 0.6H), 4.93 (d, J = 5.0 Hz, 0.6H), 4.83-4.77 (m, 1H), 4.67 (d, J = 5.0 Hz, 0.6H), 4.56-4.53 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 1H), 2.38-2.5 (m, 1H), 2.24-2.07 (m, 3H), 1.88-1.56 (m, 5H), 1.46-1.40 (m, 6H), 1.20-1.13 (m, 2H), 1.05-0.99 (m, 3H), 0.97-0.94 (m, 3H) ppm.
단계 2: 철 분말(0.10 g, 1.9 mmol) 및 염화암모늄(0.10 g, 1.9 mmol)을 에탄올(20 mL) 및 물(2 mL)의 합한 용액 중 니트로-중간체(0.10 g, 0.19 mmol)의 용액에 동시에 가하였다. 현탁액을 80℃에서 2시간 동안 교반하고 셀라이트를 통해 여과하여 무기 염을 제거하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물(11-5 R/S )(50 mg, 수율 50%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 522 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 500 MHz) (에피머 사용) δ 7.47 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.78-6.70 (m, 4H), 6.29-6.26 (m, 1H), 6.04 (br s, 1H), 5.25 (t, J = 5.0 Hz, 0.4H), 5.20 (d, J = 7.0 Hz, 0.4H), 5.06 (d, J =18.0 Hz, 0.4H), 4.98 (d, J =18.0 Hz, 0.6H), 4.90-4.87 (m, 0.6 H), 4.75-4.66 (m, 1.6H), 4.46-4.44 (m, 1H), 2.71-2.64 (m, 1H), 2.42-2.38 (m, 1H), 2.28-2.18 (m, 2H), 2.06-2.00 (m, 1H), 1.87-1.83 (m, 1H), 1.76-1.73 (m, 1H), 1.69-1.61 (m, 3H), 1.55-1.38 (m, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.20-1.02 (m, 3H), 0.98-0.92 (m, 5H) ppm.
표 1로부터의 화합물 11-5 R 및 화합물 11-5 S 의 2개의 에피머의 혼합물(0.30 g, 0.58 mmol)을 키랄 HPLC(장치: Gilson-281, 컬럼: OZ-H 20*250mm, 10um (Dacel), 이동 상: 헥산(0.1% DEA)/에탄올(0.1% DEA)= 70/30을 60 mL/min의 유동 속도에서 사용하여 단리하고, 214nm에서 검출하였다. 수득되는 용액을 농축시켜 화합물 11-5 S (30 mg, 10% 수율) 및 화합물 11-5 R (50 mg, 17% 수율)을 각각 백색 고체로서 수득하였다. 화합물 11-5 S 및 화합물 11-5 R 의 구조를 2D-NOESY로 측정하였다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-8-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-5 S ): HPLC에서 제1 피크; ESI m/z: 522 (M + H)+. HPLC내 보유 시간(방법 A): 7.54 min; 키랄 SFC (CC4): 보유 시간 4.71 min, 99.5d.e.%; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.21 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.63 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.24 (dd, J = 10.1, 1.6 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.20 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.18 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.99 (d, J = -17.9 Hz, 1H), 4.61 (d, J = -17.9 Hz, 1H), 4.43 (s, 1H), 3.46 (s, 2H), 2.57 (td, J = 13.2, 4.4 Hz, 1H), 2.34 (dd, J = 13.4, 3.2 Hz, 1H), 2.16-2.01 (m, 4H), 1.85-1.68 (m, 3H), 1.59-1.49 (m, 3H), 1.44 (s, 3H), 1.44-1.26 (m, 2H), 1.18-1.09 (2H), 1.00 (s, 3H), 0.91 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 204.0, 186.7, 170.0, 156.3, 151.4, 141.0, 127.9, 122.6, 116.5, 116.4, 108.4, 98.6, 83.2, 72.6, 69.8, 55.3, 53.0, 47.2, 44.2, 41.5, 37.3, 34.1, 33.0, 32.0, 31.1, 21.2, 17.9, 17.7, 14.1 ppm.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-8-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-5 R ): HPLC에서 제2 피크; ESI m/z: 522 (M + H)+; HPLC에서 보유 시간(방법 A): 7.58 min; 키랄 SFC (CC4): 보유 시간 3.80 min, 98.1d.e.%; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.23 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.79 (dd, J = 8.8 Hz, 2H), 6.65 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.27 (dd, J = 10.1, 1.7 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 4.94 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.89 (d, J = -18.0 Hz, 1H), 4.65 (d, J = -18.0 Hz, 1H), 4.61 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.51 (s, 2H), 2.58 (td, J = 13.3, 4.9 Hz, 1H), 2.35 (dd, J = 13.4, 2.8 Hz, 1H), 2.23-1.99 (m, 4H), 1.79-1.61 (m, 6H), 1.46-1.38 (m, 2H), 1.44 (s, 3H), 1.23-1.09 (m, 2H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 204.9, 186.6, 170.0, 156.2, 151.2, 141.0, 127.9, 122.5, 116.3, 116.3, 104.5, 97.6, 81.9, 72.6, 69.9, 55.1, 49.8, 45.7, 44.0, 41.1, 35.0, 34.0, 33.3, 31.9, 30.3, 21.1, 17.5, 17.1, 14.0 ppm.
실시예 13
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-5 S 및 (11-5 R )의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
화합물 9 R 를 (R)-부데소니드로부터, 화합물 9 S 를 (S)-부데소니드로부터, 각각 실시예 9에서의 일반적인 과정 A에 따라 제조하였다. 실시예 12에 기술된 동일한 방법을 사용하여, 화합물(11-5 S )을 화합물(9 S )과 화합물 (10-12)의 반응으로부터, 화합물(11-5 R )을 화합물(9 R )와 화합물(10-9)의 반응으로부터 각각 수득하였다. 대표적인 과정은 다음과 같다. 아세톤(10 mL) 중 화합물 (9 R ) 또는 화합물 (9 S (100 mg)의 용액에 화합물 10-9(2당량) 및 Cs2CO3(2당량)를 동시에 가하였다. 혼합물을 2시간 동안 환류시키고, 조 생성물을 진공하에서 아세톤을 제거하고 조 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 무기 염을 물로 세척하며, 수득되는 생성물을 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 11-5 R 또는 화합물 11-5 S (25 내지 60% 수율)를 담황색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 522 (M + H)+. 분석 HPLC: 98%. 화합물 11-5 R 및 화합물 11-5 S 의 2D-NOESY 스펙트럼은 도 7 및 8에 나타낸다.
실시예 14
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-6 S 및 11-6 R 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,6S,8S,9S,11S,12S,13R)-8-[2-(4-아미노-3-플루오로페녹시)아세틸]-11-하이드록실-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-6 S ) 및 (1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-8-[2-(4-아미노-3-플루오로페녹시)아세틸]-11-하이드록실-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-6 R ).
화합물 11-6R/S의 라세미 혼합물(racemic mixture)을 실시예 12에 제시된 방법에 따라 제조하였다. 라세미 혼합물을 키랄 SFC(단락 2.3의 설명 참고)로 분리하여 화합물 11-6 S (제2 피크) 및 화합물 11-6 R (제 1 피크)을 회백색 고체로서 수득하였다.
화합물 11-6 S (30 mg, 7.9% 수율). ESI m/z: 540.2 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 7.32 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.71-6.62 (m, 2H), 6.49 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 6.19-6.16 (m, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.21 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 5.10 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.02 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.69 (dd, J = 58.9, 28.6 Hz, 4H), 4.31 (s, 1H), 2.56-2.51 (m, 1H), 2.29 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 2.06-1.97 (m, 3H), 1.89 (s, 2H), 1.79-1.72 (m, 1H), 1.30 (m, 10H), 0.88-0.85 (m, 6H) ppm. 보유 시간: 2.94 min, 키랄 SFC(AD) 중 98%. 분석 HPLC: > 96.94%, 보유 시간: 7.94 min (방법 B).
화합물 11-6 R (28 mg, 7.4% 수율). ESI m/z: 540.3 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 7.32 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.72-6.68 (m, 2H), 6.52 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1H), 6.18 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.01 (d, J = 18.3 Hz, 1H), 4.77 (dd, J = 12.9, 3.3 Hz, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.65 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.32 (s, 1H), 3.17 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 2.57-2.51 (m, 1H), 2.30 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.10 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.01-1.99 (m, 1H), 1.84 (s, 2H), 1.62-1.52 (m, 5H), 1.39-1.33 (m, 5H), 1.23 (s, 1H), 1.02-0.95 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.83 (s, 3H) ppm. 보유 시간: 2.25 min, 키랄 SFC(AD) 중 100%. 분석 HPLC: > 98.50%, 보유 시간: 8.01 min (방법 B).
실시예 15
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-7 R 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-8-[2-(4-아미노-3-플루오로페녹시)아세틸]-11-하이드록실-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온 (11-7 S 및 11-7 R )
스테로이드 11-7-22R/S의 라세미 혼합물을 실시예 12에 제시된 방법에 따라 제조하였다. 라세미 생성물을 키랄 SFC(단락 2.3에서의 설명 참고)로 단리하여 화합물 11-7 S (제2 피크) 및 화합물 11-7 R (제1 피크)를 수득하였다.
화합물 11-7 R : ESI m/z: 540.2 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, CDCl3)
δ 7.25 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.87 (dt, J = 15.5, 7.7 Hz, 1H), 6.47 (dd, J = 12.8, 2.4 Hz, 1H), 6.37 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.29 (dd, J = 9.9, 4.4 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.22-4.49 (m, 5H), 3.61 (s, 2H), 2.58 (td, J = 13.5, 4.9 Hz, 1H), 2.36 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 2.19-2.03 (m, 3H), 1.87-1.72 (m, 2H), 1.67-1.55 (m, 3H), 1.51-1.33 (m, 7H), 1.21-1.11 (m, 2H), 1.00-0.90 (m, 6H). 분석 HPLC: > 62.24%, 36.49%, 보유 시간: 7.78, 7.86 min (방법 B).
실시예 16
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-8 R 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록실-9,13-디메틸-8-{2-[4-(메틸아미노)페녹시]아세틸}-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로-[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온 (11-8 R )
스테로이드 11-8을 실시예 13에 제시된 방법에 따라 제조하였다.
화합물(11-8 R )을 백색 고체로서(14 mg, 54% 수율)로서 수득하였다. ESI m/z: 525.3 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.47 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.83-6.80 (m, 2H), 6.65-6.62 (m, 2H), 6.28 (dd, J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 4.99 (d, J = 18.2 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.74 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.66 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.67 (td, J = 13.6, 5.2 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 13.5, 2.7 Hz, 1H), 2.30-2.22 (m, 1H), 2.16-2.12 (m, 1H), 2.02 (dd, J = 13.7, 3.3 Hz, 1H), 1.85 (dd, J = 13.7, 2.6 Hz, 1H), 1.76 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 1.67-1.63 (m, 4H), 1.51 (s, 3H), 1.48-1.44 (m, 2H), 1.17-1.08 (m, 1H), 1.05 (dd, J = 11.2, 3.5 Hz, 1H), 0.98-0.94 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.56 min (방법 A).
실시예 17
본 실시예는 표 1에서의 화합물 (11-10 R/S )의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-8-[2-(4-플루오로페녹시)아세틸]-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-10 R/S ).
스테로이드 11-10 R/S 을 실시예 13에 제시된 방법에 따라 제조하였다.
화합물 11-10R/S을 백색 고체로서(14 mg, 54% 수율) 수득하였다. ESI m/z: 525.2 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.47 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 6.94-6.90 (m, 2H), 6.27 (dd, J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.06 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.90-4.88 (m, 1H), 4.82 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.69 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 2.71-2.63 (m, 1H), 2.42-2.38 (m, 1H), 2.30-2.11 (m, 2H), 2.05-2.01 (m, 1H), 1.89-1.84 (m, 1H), 1.77-1.63 (m, 5H), 1.51-1.41 (m, 5H), 1.18-1.02 (m, 2H), 0.97-0.93 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 9.94 min (방법 A).
실시예 18
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-11 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
N-(4-{2-[(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)아세트아미드(11-11 R/S )
스테로이드 11-11 R/S 를 실시예 13에 제시된 방법에 따라 제조하였다.
화합물 11-11 R/S 을 백색 고체로서(25 mg, 46% 수율) 수득하였다. ESI m/z: 564.3 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.49-7.45 (m, 3H), 6.89 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.28 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.09 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.91-4.89 (m, 1H), 4.83 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.70 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 3 Hz, 1H), 2.72-2.65 (m, 1H), 2.43-2.39 (m, 1H), 2.30-2.22 (m, 1H), 2.18-2.12 (n, 4H), 2.06-2.03 (m, 1H), 1.90-1.86 (m, 1H), 1.77-1.65 (m, 5H), 1.48 (m, 5H), 1.18-1.09 (m, 1H), 1.07-1.04 (m, 1H), 0.99-0.95 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.33 min (방법 B).
실시예 19
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-12 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-12 R/S )
단계 1: 화합물(9B)를 실시예 9에서의 일반 과정 A에 따라 제조하였다. DCM(1 mL) 중 (6S,9R)2F-부데소니드의 용액(80 mg, 0.17 mmol)에 트리에틸아민(34 mg, 0.34 mmol) 및 메탄설포닐 클로라이드(30 mg, 0.26 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 이러한 온도에서 30분 동안 TLC로 모니터링되는, (6S,9R)2F-부데소니드가 소비될 때까지 교반하였다. 이후에, 반응 혼합물을 DCM(100 mL)으로 희석시키고 포화된 수성 염화암모늄(30 mL)으로 퀀칭(quenching)시켰다. 유기 용액을 포화된 수성 염화암모늄 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 2% MeOH)로 정제하여 상응하는 메실레이트 생성물 (9B)을 수득하였다.
단계 2: 화합물 9B를 아세톤(0.5 mL)에 용해하였다. 이 용액에 4-아미노페놀(10-9, 37 mg, 0.34 mmol) 및 탄산세슘(0.11 g, 0.34 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 1.5 시간 또는 (9B)가 TLC 및 LCMS에 따라 완전히 소비될 때까지 이러한 온도에서 교반하였다. 이후에, 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고 여과하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물 11-12 R/S (6.0 mg, (6S,9R)2F-부데소니드로부터의 6.3% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 558 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.34 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.78-6.71 (m, 4H), 6.37-6.33 (m, 2H), 5.63-5.49 (m, 1H), 5.10-4.99 (m, 1H), 4.77-4.63 (m, 2H), 4.33 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 2.74-2.57 (m, 1H), 2.39-2.13 (m, 3H), 1.98-1.31 (m, 12H), 1.03-0.93 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 순도 97.4%, 보유 시간: 7.55 min (방법 B).
(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온 (11-12 R )
화합물 9B R 을 실시예 9에서의 일반적인 과정 A에 따라 제조하였다. 아세토니트릴(20 mL) 중 화합물 9B R (0.90 g, 1.7 mmol)와 4-아미노페놀(0.20 g, 1.8 mmol) 및 탄산세슘(1.1 g, 3.4 mmol)의 반응으로 (11-12 R )(0.20 g, 54% 수율)을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 중 50 내지 80% 에틸 아세테이트)로 정제한 후 황색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 558 (M/+H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 7.26 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 6.50 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 6.30 (dd, J = 10 Hz, 2 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.72-5.65 (m, 0.5H), 5.62-5.55 (m, 0.5H), 5.52-5.48 (m, 1H), 5.0 (s, 0.5H), 4.95 (s, 0.5H), 4.80-4.78 (m, 1H), 4.75-4.65 (m, 1H), 4.24-4.16 (m, 1H), 2.70-2.52 (m, 1H), 2.30-2.21 (m, 1H), 2.11-2.00 (m, 2H), 1.77 (d, J =13.0Hz, 1H), 1.61-1.54 (m, 4H), 1.49 (s, 3H), 1.36 (q, J = 7.5 Hz, 3H), 1.23 (s, 1H), 0.87 (d, J = 7.5 Hz, 3H), 0.83 (s, 3H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 8.44 min (방법 B).
실시예 20
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-13 R 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-[2-(3-아미노페녹시)아세틸]-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-13R).
스테로이드 11-13 R 을 실시예 19에 제시된 방법에 따라 제조하였다.
화합물(11-13 R )을 제조-HPLC로 정제 후 담 오렌지색 고체(9.0 mg, 44% 수율)로서 수득하였다(방법 A). ESI m/z: 558 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.35 (dd, J = 10.1, 1.3 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 6.76-6.70 (m, 3H), 6.40-6.29 (m, 2H), 5.66-5.48 (m, 1H), 5.14 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.93-4.91 (m, 1H), 4.90-4.87 (m, 1H), 4.77 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 2.76-2.62 (m, 1H), 2.41-2.18 (m, 3H), 1.83-1.56 (m, 9H), 1.50 (dt, J = 15.4, 7.6 Hz, 2H), 0.99-0.96 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.77 min (방법 A).
실시예 21
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-14 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-[2-(4-아미노-3-플루오로페녹시)아세틸]-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-14 R/S ).
DMSO(3 mL) 중 (9B)의 용액(0.20 g, 0.37 mmol)에 4-아미노-3-플루오로페놀 (10-14, 0.25 g, 2.0 mmol) 및 수산화칼륨(0.11 g, 2.0 mmol)을 실온에서 가하였다. 수득되는 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 질소 보호하에 반응이 완료될 때까지 교반하고, 이는 TLC 및 LCMS로 모니터링하였다. 실온으로 냉각시키고, 막을 통해 여과한 후, 반응 용액을 제조-HPLC(방법 A)로 직접 정제하여 화합물 11-14 R/S (40 mg, 19% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 576 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.40-7.31 (m, 1H), 7.20 (td, J = 9.1, 1.9 Hz, 1H), 6.91-6.84 (m, 1H), 6.80-6.76 (m, 1H), 6.40-6.30 (m, 2H), 5.57 (ddd, J = 48.6, 9.7, 6.8 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.90-4.79 (m, 2H), 4.75 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.41-4.28 (m, 1H), 2.78-2.57 (m, 1H), 2.40-2.12 (m, 3H), 1.98-1.39 (m, 11H), 1.07-0.92 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 8.10 min (방법 A).
실시예 22
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-15 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
3급-부틸 N-[(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)메틸]카바메이트(N-Boc-11-15 R/S ).
단계 1: 메탄올(70 mL) 및 물(5 mL) 중 4-(아미노메틸)페놀(1.2 g, 10 mmol)의 용액에 Boc2O(2.4 g, 11 mmol)를 실온에서 주사기로 적가하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 1시간 동안 4-(아미노메틸)페놀이 완전히 소비될 때까지 교반하였으며, 이는 LCMS 및 TLC로 모니터링하였다. 휘발물을 진공 하에서 제거하고 잔사를 에틸 아세테이트(150 mL) 속에 용해하였다. 용액을 포화된 수성 시트르산(50 mL x 2) 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켜 N-Boc-4-아미노메틸페놀(2.1 g, 94% 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 246 (M + Na)+. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.12 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.82-6.71 (m, 2H), 4.84 (s, 1H), 4.23 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H) ppm.
단계 2: 화합물(N-Boc-11-15 R/S )을 실시예 19에 제시된 방법에 따라 제조하였다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-{2-[4-(아미노메틸)페녹시]아세틸}-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-15 R/S )
DCM(2 mL) 중 (N-Boc-11-15 R/S )(30 mg, 45 μmol)의 용액에 TFA(0.4 mL)를 0℃에서 주사기로 적가하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 1시간 동안 Boc가 완전히 제거될 때까지 교반하였으며, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사를 제조-HPLC(방법 A)로 정제하여 화합물(11-15 R/S )(15 mg, 49% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 572 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.45-7.32 (m, 3H), 7.01-6.96 (m, 2H), 6.41-6.30 (m, 2H), 5.57 (ddd, J = 18.2, 10.4, 7.3 Hz, 1H), 5.21 (dd, J = 19.7 Hz, 1H), 4.93-4.91 (m, 1H), 4.85 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.77 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.37-4.32 (m, 1H), 4.07 (s, 2H), 2.75-2.58 (m, 1H), 2.40-2.15 (m, 3H), 1.86-1.40 (m, 11H), 1.08-0.92 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.47 min (방법 A).
실시예 23
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-16 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-[2-(4-하이드록시페녹시)아세틸]-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-16 R/S )
화합물 11-16 R/S 를 실시예 12에 제시된 방법에 따라 제조하였다.
화합물 11-16 R/S (20 mg, 38% 수율)를 제조-HPLC에 의한 정제 후(방법 A) 갈색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 523.2 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.47 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.82-6.77 (m, 2H), 6.75-6.70 (m, 2H), 6.28 (dd, J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.00 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.91-4.89 (m, 1H), 4.75 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.67 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 2.68 (td, J = 13.6, 5.8 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 13.5, 2.8 Hz, 1H), 2.31-2.21 (m, 1H), 2.17-2.13 (m, 1H), 2.02 (dd, J = 13.7, 3.3 Hz, 1H), 1.86 (dd, J = 13.7, 2.6 Hz, 1H), 1.80-1.58 (m, 5H), 1.53-1.40 (m, 5H), 1.18-0.93 (m, 8H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 8.92 min (방법 A).
실시예 24
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-17 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-{2-[(6-아미노피리딘-2-일)옥시]아세틸}-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온 (11-17 R/S )
화합물 11-17 R/S 를 실시예 19에 제시된 방법에 따라 제조하였다.
화합물 11-17 R/ )(50 mg, 24% 수율)를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 10 내지 50%)로 정제하여 백색 고체로서 수득하였다. ESI: 559 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 7.35-7.31 (m, 2H), 6.31 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 6.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.84-5.82 (m, 1H), 5.68-5.56 (m, 3H), 5.25-4.72 (m, 4H), 4.29 (br s, 1H), 2.66-2.57 (m, 1H), 2.28-2.05 (m, 4H), 1.63-1.58 (m, 4H), 1.50-1.30 (m, 6H), 0.95-0.87 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 8.65 min (방법 A).
실시예 25
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-19의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-(2-아지도아세틸)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(11-19)
단계 1: 아세톤(15 mL) 중 화합물 9B(1.0 g, 1.8 mmol), 나트륨 아지드(1.2 g, 18 mmol)의 현탁액을 반응이 LCMS에 따라 완결된 경우 50℃에서 밤새 교반하였다. 냉각 후, 반응 혼합물을 냉수(80 mL)에 부었다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 염수(30 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공 속에서 농축시켜 (11-19 R/S )의 조 화합물 아지도 전구체(0.90 g, > 99% 수율)를 백색 고체로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 492 (M + H)+.
(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-(2-아미노아세틸)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온; 트리플루오로아세트산 염(11-19 R/S )
단계 2: THF(20 mL) 중 화합물 11-19 R/S 의 전구체의 용액(0.85 g, 1.7 mmol)에 수성 하이드로클로라이드(1 N, 10 mL)를 가하였다. 혼합물을 28 내지 32℃에서 이것이 선명해질 때까지 교반하고, 이후 여기에 트리페닐포스핀(0.68 g, 2.6 mmol)을 이러한 온도에서 가하였다. 반응이 TLC 및 LCMS에 따라 완료된 경우, 수득되는 황색의 선명한 용액을 28 내지 32℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공하에 농축시키고 잔사를 역상 섬광 크로마토그래피(수성 TFA(0.05%) 중 0 내지 50% 아세토니트릴)로 정제하여 화합물 11-19 R/S (0.56 g, 57% 수율, TFA 염)을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 466 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeODd4) δ 7.33 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.40-6.29 (m, 2H), 5.69-5.45 (m, 1H), 4.93-4.92 (m, 1H), 4.71 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.35-4.27 (m, 2H), 3.90-3.84 (m, 1H), 2.81-2.54 (m, 1H), 2.42-2.06 (m, 3H), 1.82-1.32 (m, 11H), 1.09-0.87 (m, 6H) ppm. 19F NMR (376 MHz, MeOD d4 ) δ -77.01, -166.24, -166.92, -188.81, -188.83 ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 6.86 min (방법 A).
(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-(2-아미노아세틸)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온; 트리플루오로아세트산 염(11-19 R )
단계 1: 상기 기술된 동일한 과정을 사용하여, (11-19 R )의 아지도 전구체(0.12 g, 87% 수율)를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 50% 에틸 아세테이트)로 정제 후 화합물(9B R )로부터 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 492 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.10 (dd, J = 10.2, 1.3 Hz, 1H), 6.44 (s, 1H), 6.38 (dd, J = 10.2, 1.8 Hz, 1H), 5.48-5.31 (m, 1H), 4.92 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 5.6, 2.7 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 18.7 Hz, 1H), 3.94 (d, J = 18.7 Hz, 1H), 2.56-2.39 (m, 2H), 2.32-2.18 (m, 2H), 1.85-1.71 (m, 3H), 1.67-1.54 (m, 7H), 1.46-1.37 (m, 2H), 0.97-0.90 (m, 6H) ppm.
단계 2: 상기 기술된 동일한 과정을 사용하여, 화합물 11-19 R (30 mg, 66% 수율)을 제조-HPLC에 의한 정제 후 백색 고체로서 수득하였다(방법 A). ESI m/z: 466 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.34 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.40-6.30 (m, 2H), 5.65-5.46 (m, 1H), 4.94-4.91 (m, 1H), 4.72 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.34-4.28 (m, 2H), 3.88 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 2.78-2.60 (m, 1H), 2.39-2.34 (m, 1H), 2.33-2.18 (m, 2H), 1.77-1.54 (m, 9H), 1.53-1.40 (m, 2H), 0.99-0.95 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 6.85 min (방법 A).
실시예 26
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-20 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-8-(2-{[(4-메톡시페닐)메틸](메틸)아미노}아세틸)-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온; 트리플루오로아세트산 (11-20 R/S )
아세토니트릴(10 mL) 중 화합물 9B의 용액(0.54 g, 1.0 mmol)에 N-PMB-메틸아민 (0.30 g, 2.0 mmol) 및 탄산칼륨(0.28 g, 2.0 mmol)을 실온에서 연속하여 가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 냉각 후, 혼합물을 DCM으로 희석시키고 여과하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 10 내지 90% 에틸 아세테이트)로 정제하여 조 화합물(11-20 R/S )(0.20 g, 33% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 조 생성물(30 mg)을 제조-HPLC(방법 A)로 추가로 정제하여 순수한 화합물(11-20 R/S )을 백색 고체(12 mg, 13% 수율)로서 수득하였다. ESI m/z: 600 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.50-7.43 (m, 2H), 7.34 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.39-6.30 (m, 2H), 5.56 (ddd, J = 48.5, 10.7, 6.5 Hz, 1H), 5.24-5.21 (m, 1H), 4.94-4.92 (m, 1H), 4.64-4.53 (m, 1H), 4.38-4.16 (m, 4H), 3.86 (s, 3H), 2.92-2.91 (m, 3H), 2.76-2.56 (m, 1H), 2.39-2.31 (m, 1H), 2.28-2.09 (m, 2H), 1.97 (td, J = 13.2, 7.8 Hz, 1H), 1.78-1.23 (m, 10H), 1.08-0.88 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.81 min (방법 A).
실시예 27
본 실시예는 표 1에서의 화합물 11-21 R/S 의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 2에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-8-[2-(메틸아미노)아세틸]-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온; 트리플루오로아세트산 (11-21 R/S )
4 mL의 스크류-뚜껑이 있는 바이알(vial) 속의 화합물 11-20 R/S (30 mg, 0.053 mmol)에 1-클로로에틸 카보노클로리데이트(1 방울) 및 클로로포름(0.4 mL)을 가하였다. 혼합물을 출발 물질이 TLC에 의해 소비될 때까지 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각한 후, 혼합물을 메탄올(1.5 mL)에 가하였다. 혼합물을 반응이 완료될 때까지 70℃에서 1시간 동안 교반하였으며, 이는, TLC 및 LCMS로 모니터링하였다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사를 제조-HPLC(방법 A)로 정제하여 화합물 11-21 R/S (8.0 mg, 28% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 480 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.34 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.41-6.26 (m, 2H), 5.56 (ddd, J = 48.7, 10.0, 6.8 Hz, 1H), 5.28 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.47-4.41 (m, 1H), 4.34-4.30 (m, 1H), 4.07-4.00 (m, 1H), 2.82-2.54 (m, 4H), 2.43-2.09 (m, 3H), 1.96 (td, J = 13.6, 7.9 Hz, 1H), 1.81-1.34 (m, 10H), 1.10-0.85 (m, 6H) ppm. 19F NMR (376 MHz, MeOD d4 ) δ -76.96, -166.28, -166.95, -188.80, -188.83 ppm. 분석 HPLC: 99%, 보유 시간: 6.97 min (방법 A).
실시예 28
본 실시예는 표 1에서의 화합물 14-2의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 3에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1R,2S,8S,10S,11S,13S,14R,15S,17S)-1,8-디플루오로-17-하이드록시-2,13,15-트리메틸-14-[2-(메틸아미노)아세틸]-5-옥소테트라사이클로[8.7.0.02,7.011,15]헵타데카-3,6-디엔-14-일 프로파노에이트(14-2)
메실레이트 플루메타손(12)의 합성은 Bioorg. Med. Chem. Lett., 2015, 25, 2837-2843에 보고되어 있으며, 이의 전체 내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문으로 본원에 참고로 포함된다.
밀봉 튜브 속의 메틸아민(THF 중 2M 용액, 1.5 mL, 3.000 mmol) 중 12의 용액(82 mg 조)을 실온에서 밤새 교반한 후 60℃에서 3시간 동안 반응이 완료될 때까지 가열하였다. 용액을 진공 속에서 농축시키고 잔사를 제조 HPLC(10 mM NH4HCO3가 들어 있는 수 중 0 내지 80% 아세토니트릴)로 정제하여 화합물 14-2(8 mg, 2개의 단계에 대해 수율 11%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 480.2 (M+H). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.27-7.25 (d, J=10.4 Hz, 1H), 6.30-6.27 (dd, J=10.4, 2.0 Hz, 1 H), 6.10 (s, 1H), 5.73-5.56 (m, 1H), 5.43-5.32 (m, 2H), 4.62-4.42 (m, 1H), 4.25-4.18 (m, 1H), 4.15 (brs, 1H), 2.87 (s, 2H), 2.70 (s, 1H), 2.60-2.56 (m, 1H), 2.36-1.90 (m, 7H), 1.49-1.35 (m, 5H), 1.10-0.91 (m, 10H).
실시예 29
본 실시예는 표 1에서의 화합물 15-5의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 3에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1R,2S,8S,10S,11S,13R,14R,15S,17S)-14-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-1,8-디플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸테트라사이클로[8.7.0.02,7.011,15]헵타데카-3,6-디엔-5-온(15-5)
단계 1: 아세톤(15 mL) 중 화합물(12)(0.16 g, 0.33 mmol), 4-니트로페놀(10-5, 92 mg, 0.67 mmol) 및 탄산칼륨(92 mg, 0.67 mmol)의 혼합물을 18시간 동안 환류(60℃)시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 휘발물을 진공하에 제거하였다. 잔사를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 1% 에틸 아세테이트)로 정제하여 니트로-중간체(0.14 g, 수율 79%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 532 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.20 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.43 (br s, 1H), 6.39-6.37 (m, 1H), 5.45-5.32 (m, 1H), 5.26 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.85 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.43-4.40 (m, 1H), 3.21-3.16 (m, 1H), 2.60 (s, 1H), 2.52-2.40 (m, 2H), 2.30-2.20 (m, 2H), 2.06-1.99 (m, 1H), 1.86-1.68 (m, 3H), 1.53-1.48 (m, 2H), 1.09 (s, 3H), 0.99 (d, J = 7.0 Hz, 3H) ppm.
단계 2: 에탄올(20 mL) 및 물(2 mL)의 합한 용액 중 니트로-중간체의 용액(0.13 g, 0.25 mmol)에 철 분말(0.14 g, 2.5 mmol)에 이어서 염화암모늄(0.14 g, 2.5 mmol)을 가하였다. 80℃에서 2시간 동안 교반한 후, 현탁액을 실온으로 냉각시키고 셀라이트를 통해 여과하여 무기 염을 제거하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물 15-5(90 mg, 수율 70%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 502 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 500 MHz) δ 7.27 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.49 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.31-6.28 (m, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.77-5.57 (m, 1H), 5.42-5.39 (m, 1H), 5.22 (s, 1H), 5.07 (d, J = 18.5 Hz, 1H), 4.63 (s, 1 H), 4.59 (d, J = 18.5 Hz, 1H), 4.29-4.10 (m, 1H), 2.99-2.91 (m, 1H), 2.55-2.43 (m, 3H), 2.25-2.19 (m, 3H), 1.71-1.64 (m, 1H), 1.56-1.43 (m, 5H), 1.15-1.10 (m, 1H), 0.88 (s, 3H), 0.83 (d, J = 6.0 Hz, 3H) ppm.
실시예 30
본 실시예는 표 1에서의 화합물 16-5의 제조 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 4에서 번호매긴 화합물을 지칭한다.
(1R,2S,10S,11S,13R,14R,15S,17S)-14-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-1-플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸테트라사이클로[8.7.0.02,7.011,15]헵타데카-3,6-디엔-5-온(16-5)
메실레이트 덱사메타손(13)의 합성은 J. Pharmacol., 172, 1360 (2015)에 보고되어 있으며, 이의 전체 내용은 모든 목적을 위해 이의 전문으로 본원에 참고로 포함된다.
아세톤(10 mL) 중 메실레이트 덱사메타손(13, 94 mg, 0.20 mmol), 4-니트로페놀(10-5, 42 mg, 0.30 mmol) 및 탄산칼륨(55 mg, 0.40 mmol)의 혼합물을 3시간 동안 환류(60℃)시킨 후 농축시켰다. 조 생성물을 진공 속에서 농축시킨 후, 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 50% 에틸 아세테이트)로 직접 정제하여 니트로-중간체(0.10 g, 수율 97%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 514 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 400 MHz) δ 8.23 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.31 (dd, J = 10.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.11 (br s, 1H), 5.41 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.34-4.30 (m, 1H), 3.13-3.06 (m, 1H), 2.79-2.72 (m, 1H), 2.57-2.41 (m, 3H), 2.32-2.26 (m, 1H), 1.94-1.90 (m, 1H), 1.82-1.75 (m, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.62-1.53 (m, 2H), 1.28-1.23 (m, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.92 (d, J = 7.0 Hz, 3 H) ppm.
에탄올(3 mL) 및 물(0.5 mL)의 합한 용액 중 니트로-중간체(즉, 도 4에서의 NO2-유사체, 60 mg, 0.12 mmol)의 용액에 철 분말(67 mg, 1.2 mmol)에 이어 염화암모늄(64 mg, 1.2 mmol)을 가하였다. 80℃에서 1.5 시간 동안 교반한 후, 현탁액을 실온으로 냉각시키고 셀라이트를 통해 여과하여 무기 염을 제거하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물 16-5(20 mg, 수율 35%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 484 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 500 MHz) δ 7.42 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 6.78-6.74 (m, 2H), 6.73-6.70 (m, 2H), 6.31 (dd, J = 10.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.10 (br s, 1H), 5.08 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.30-4.27 (m, 1H), 3.14-3.09 (m, 1H), 2.78-2.71 (m, 1H), 2.54-2.37 (m, 3H), 2.30-2.24 (m, 1H), 1.94-1.89 (m, 1H), 1.81-1.74 (m, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.59-1.52 (m, 2H), 1.26-1.21 (m, 1H), 1.06 (s, 3H), 0.91 (d, J = 7.5 Hz, 3H) ppm.
실시예 31
본 실시예는 본원에 개시된 특정 화합물의 입체이성체를 분리하는 방법을 입증한다.
SFC(초임계 유체 크로마토그래피) 기술을 키랄 화합물을 포함하는, 열적으로 불안정한, 소 분자 화합물의 정제에 사용하였다. SFC는 이동 상으로서 초임계 유체 이산화탄소를 사용하고 정지 상으로서 유기 중합체 결합된 고체 흡수제를 사용하였다. 2개의 상에서 에피머의 상이한 분배 계수를 기반으로 하여, 이동 상의 밀도를 조절함으로써 혼합된 에피머를 분리할 수 있었다. 장치 및 컬럼 조건은 다음과 같이 기술된다: 장치: SFC-80(Thar, Waters), 컬럼: AD 20*250mm, 5um(Decial), 컬럼 온도: 35℃, 이동 상: CO2/EtOH(1% 메탄올 암모니아)= 65/35, 유동 속도: 80 g/min, 역 압력: 100 bar, 검출 파장: 214 nm, 주기 시간: 4.5 min, 샘플 용액: 30 ml의 메탄올에 용해된 130 mg, 주입 용적: 1.5 ml). 키랄 AD-H 컬럼을 사용하여, 20 그램의 22R/S-부데소니드를 분리하여 8.9 그램의 R-부데소니드 및 8.9 그램의 S-부데소니드를 총 89% 의 회수율로 수득하였다. 유사하게 화합물 11-5 R/S 의 2개의 에피머를 또한 SFC로 분리하였다. 세부적인 분리 조건은 표 5에서 하기 기술하였다.
[표 5]
22R/S-부데소니드의 구조를 2D-NOESY에 의해 입체특이적으로 측정하였다. 22R/S-부데소니드의 보고된 양성자 NMR의 데이타와 비교하여, 키랄 SFC로부터의 첫번째 화합물은 R-에피머인 것으로 측정된 반면, 두번째 화합물은 S 에피머인 것으로 측정되었다. C22에서의 구조는 이웃하는 양성자의 자기 공명에 영향을 미친다. J 16βH-15βH = 5.0 Hz 및 J 16βH-15αH = 2.5 Hz를 지닌 이중의 이중선이 S-스펙트럼에서 관찰되었으며, 이는 S-에피머내 C16 양성자를 미차폐하는 22-프로필 치환체로부터 입체 반발력으로부터 생성되었다. 이러한 효과는 R-에피머에서는 관찰되지 않는다. S-에피머에서 C22 양성자는 또한 R-에피머의 것과 비교하여 하부장으로 이동하였으며, 이는 S-에피머에서 C22 양성자의 미차폐가 S-에피머내 17β-케톨 치환체와 22β-프로필 쇄 사이의 입체 반발력에 기인함을 나타낸다. 유사하게, R-에피머내 C22 양성자는 22R-에피머내 C20-카보닐 그룹으로부터의 이방성 효과에 의해 차폐되었다. 상세한 화학 이동은 표 6에서 하기 설명한다.
[표 6]
실시예 32
본 실시예는 일반적으로 링커 및 링커-페이로드를 제조하는 방법을 입증한다.
링커-페이로드를 제조하기 위한 3가지 일반적인 시도가 도 9에 나타나 있다. 도 9에서, R'는 스테로이드 아민 또는 아닐린이고; R"는 단편 A 또는 B와 같은 모이어티를 함유하는 알킨 또는 C와 같은 말레이미드 모이어티이며; R1은 아미노-산 잔기이고; P는 Fmoc 또는 Boc와 같은 보호 그룹이며; n은 0 내지 11의 정수이고; m은 2 내지 4의 정수이며; p는 0 내지 5의 정수이다. 시도(Approach) I은 스테로이드 아민 또는 아닐린(21, Q = NH 또는 NR)과 디펩타이드(22) 사이의 커플링 반응에 이은 N-보호로부터 아미드(23)를 형성한다. 이후에 아민(23)은 도 10에서의 V-5, V-7, V, 도 11에서의 VI-8 및 VI 및 도 12에서의 VII과 같은 산 또는 이의 활성 에스테르(24)와 커플링하여 링커-페이로드(25)를 생성한다. 시도 II는 산 또는 이의 활성 에스테르(26)와 VC-pAB(27) 사이의 커플링 반응에 이은 N-탈보호로부터 아미드(28)를 형성한다. 이후에, 화합물 28은 이의 PNP 유도체로 전환되고 이는 추가로 21과 반응하여 링커-페이로드 카바메이트(29)를 생성한다. 시도 III은 N-보호된-디펩타이드-pAB-PNP(19)와 스테로이드 아민 또는 아닐린(21)에 이은 N-탈보호로부터 카바메이트(30)를 형성하고; 30 내 아민 모이어티는 이후에 산 또는 이의 활성 에스테르(26)와 커플링하여 29를 생성한다.
실시예 33
본 실시예는 링커 DIBAC-Suc-NHS(V)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 10을 지칭한다.
모든 목적을 위해 이의 전문으로 본원에 참고로 포함된 방법 J. Org. Chem., 2010, 75, 627-636을 참고한다.
단계 1: N-[트리사이클로[9.4.0.03,8]펜타데카-1(11),3,5,7,9,12,14-헵타엔-2-일리덴]하이드록실아민(V-2): 무수 에탄올(100 mL) 및 피리딘(200 mL)의 조합 용액 중 디벤조수베레논(V-1)(21 g, 0.10 mol) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드(9.3 g, 0.14 mol)의 혼합물을 교반하고 15시간 동안 환류시켰다. TLC는 출발 물질이 소비되었음을 나타내었다(TLC: 메틸렌 클로라이드중 5% 메탄올). 25℃ 미만으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(500 mL)로 희석시키고 수득되는 용액을 수성(aq.) HCl(1N, 3 x 200 mL)에 이어 염수(200 mL)로 세척하였다. 유기 용액을 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공 속에서 농축시켜 조 V-2(22 g, 98% 조 수율)를 담황색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 222.1 (M + H)+.
단계 2: 2-아자트리사이클로[10.4.0.04-9]헥사데카-1(16),4(9),5,7,10,12,14-헵텐 (V-3): -5℃에서 무수 메틸렌 클로라이드(본원에서 또한 디클로로메탄 또는 DCM)(150 mL) 중 옥심(V-2) (5.5 g, 25 mmol)의 용액에 DIBAL-H(톨루엔 중 1M, 250 mL)를 온도를 -5℃ 이하로 유지하면서 적가하였다. 반응물을 이후 실온에서 밤새 교반하고 후속적으로 0℃에서 물(12 mL) 속의 불화나트륨 고체(38 g, 0.90 mol)의 용액을 사용하여 퀀칭시켰다. 슬러리를 0℃에서 다른 30분 동안 교반하고 셀라이트를 통해 여과하였다. 셀라이트를 메틸렌 클로라이드로 완전히 세척하고 합한 유기 용액을 진공 속에서 농축시켜 V-3(4.6 g, 89% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 222.1 (M + H)+.
단계 3: 4-[2-아자트리사이클로[10.4.0.04,9]헥사데카-1(16),4(9),5,7,10,12,14-헵타엔-2-일]-4-옥소부탄산(V-5): 메틸렌 클로라이드(50 mL) 중 (V-3)의 용액(5.0 g, 24 mmol)에 DIPEA(3.1 g, 24 mmol)에 이어서 석신산 무수물(V-4, 2.9 g, 29 mmol)을 가하였다. 이후에 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 수성 아황산나트륨(1N, 100 mL)으로 퀀칭시키고, 메틸렌 클로라이드(3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 물(100 mL)에 이어 염수(100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공 속에서 농축시켜 (V-5)(7.7 g, 95% 수율)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 308.2 (M + H)+.
단계 4: 4-{10,11-디브로모-2-아자트리사이클로[10.4.0.04,9]헥사데카-1(16),4(9),5,7,12,14-헥사엔-2-일}-4-옥소부탄산(V-6): 메틸렌 클로라이드(200 mL) 중 (V-5)의 용액(15 g, 49 mmol)을 질소로 플러슁(flushing)하고 0℃로 냉각시켰다. 이 용액에 액체 브롬(23 g, 0.14 mol)을 0℃에서 주사기로 적가하였다. 반응물을 이러한 온도에서 2시간 동안 교반하면 TLC는 반응이 완료되었음을 나타내었다(TLC: 메틸렌 클로라이드 중 10% 메탄올). 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(50 mL)로 희석시키고 실온으로 가온되도록 하였다. 유기 용액을 포화된(sat.) 수성 아황산나트륨(3 x 50 mL), 물(50 mL)에 이어서 염수(50 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공 속에서 농축시켜 (V-6)(13 g, 99%의 조 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 467.9 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 7.71 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.25-7.01 (m, 6H), 6.94-6.88 (m, 1H), 5.90 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.84-5.79 (m, 1H), 5.25-5.25 (m, 1H), 4.24-4.10 (m, 1H), 2.87-2.80 (m, 1H), 2.68-2.47 (m, 3H) ppm.
단계 5: 4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04,9]헥사데카-1(16),4(9),5,7,12,14-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄산(V-7): 무수 THF(50 mL) 중 (V-6)의 용액(5.0 g, 11 mmol)을 -40℃로 드라이아이스/아세토니트릴 욕을 사용하여 냉각시키고 이 용액에 테트라하이드로푸란(1N, 37 mL, 37 mmol) 중 칼륨 3급-부타놀레이트의 용액을 아르곤 대기 하에서 적가하였다. 반응 혼합물을 이러한 온도에서 첨가 후 30분 동안 교반하였다. TLC는 반응이 완료되었음을 나타내었다(TLC: 메틸렌 클로라이드중 10% 메탄올). 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고 수성 중황산나트륨(1N)으로 pH 1으로 퀀칭시켰다. 혼합물을 메틸렌 클로라이드(3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 물(50 mL)에 이어서 염수(50 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공 속에서 농축시켜 화합물(V-7)(2.7 g, 95% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 306.1 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d 6, 500 MHz): δ 11.98 (s, 1H), 7.67-7.29 (m, 8H), 5.02 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.61 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 2.61-2.56 (m, 1H), 2.32-2.27 (m, 1H), 2.21-2.16 (m, 1H), 1.80-1.76 (m, 1H) ppm.
단계 6: 4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04,9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄산(V): 메틸렌 클로라이드(10 mL) 중 산(V-7)의 용액(50 mg, 0.16 mmol)에 N-하이드록시석신이미드(HOSu, 28 mg, 0.24 mmol) 및 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(EDCI, 47 mg, 0.24 mmol)에 연속적으로 가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 물에 이어서 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공 속에서 농축시켜 중간체 V를 수득하고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다. ESI m/z: 403.0 (M + H)+.
실시예 34
본 실시예는 링커 DIBAC-Suc-PEG4-산/NHS(VI)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 11을 지칭한다.
단계 1: 3급-부틸-1-하이드록시-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오에이트(VI-3): 무수 THF(200 mL) 중 테트라에틸렌 글리콜의 용액(VI-1, 58 g, 0.30 mol)에 나트륨(0.12 g)을 가하고, 혼합물을 나트륨이 소비될 때가지 교반하였다. 이어서 수득되는 용액에 무수 THF(50 mL) 중 3급-부틸 아실레이트(VI-2, 13 g, 0.10 mol)를 적가하고, 수득되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 아세트산(0.1 mL)으로 먼저 및 이후에 물(0.5 mL)로 퀀칭시키고, 수득되는 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 후속적으로 에틸 아세테이트(3 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 물(30 mL)에 이어서 염수(3 x 100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과 및 농축시켜 생성물(VI-3, 26 g, 81% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 340 (M + 18)+.
단계 2: 3급-부틸 1-(메탄설포닐옥시)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오에이트(VI-4): 빙수 욕 속에서 메틸렌 클로라이드(150 mL) 중 (VI-3)(26 g, 81 mmol), 트리에틸아민(12 mL, 89 mmol)의 용액에 DCM(50 mL) 중 메탄설포닐 클로라이드(10 g, 89 mmol)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반한 후, 진공 속에서 농축시켰다. 잔사를 물(30 mL)과 혼합한 후, 에틸 아세테이트(3 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(3 x 100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과, 및 진공 속에서 농축시켜 목적한 생성물(VI-4)(31 g, 95% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 418 (M + 18)+.
단계 3: 3급-부틸 1-아지도-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오에이트(VI-5): DMF(70 mL) 중 (VI-4)(27 g, 67 mmol)의 용액에 나트륨 아지드(6.6 g, 0.10 mol)를 가하고, 이를 이후에 80℃에서 4 내지 16 시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 150 mL)로 희석시켰다. 합한 용액을 물(30 mL)에 이어서 염수(3 x 100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키며, 진공하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트(1% 내지 2% 메탄올 함유) = 4/1)로 정제하여 (VI-5)(18 g, 67% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 365 (M + 18)+.
단계 4: 3급-부틸 1-아미노-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오에이트(VI-6):
에틸 아세테이트(20 mL) 중 (VI-5) (1.5 g, 4.3 mmol)의 용액에 습윤 Pd/C(10%, 0.15 g)를 질소 하에서 가하였다. 이후에 혼합물을 수소로 플러싱하고 실온에서 수소 벌룬(balloon)하에 밤새 교반하였다. 혼합물을 이후에 셀라이트를 통해 여과하였다. 셀라이트를 에틸 아세테이트(10 mL)로 세척하였다. 합한 여액을 진공 속에서 농축시켜 조 (VI-6) (1.4 g)를 담황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 322 (M + H)+.
단계 5: 1-아미노-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오산(oic acid)(VI-7): 메틸렌 클로라이드(10 mL) 중 상기 수득된, (VI-6)(1.4 g)의 용액에 TFA(5 mL)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하여 조 생성물(VI-7)을 이의 TFA 염(1.6 g)으로서 황색 오일로 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 266 (M + H)+.
단계 6: 1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04-9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥산-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오산(VI-8):
DMF(10 mL) 중 4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04,9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄산(도 11에서 V, 1.0 g, 2.5 mmol) 및 (VI-7)(0.91 g, 2.5 mmol)의 혼합물에 트리에틸아민(0.50 g, 5.0 mmol)을 가하였다. 혼합물을 실온에서 교반하였다. 혼합물을 역상 섬광 크로마토그래피(수 중 0 내지 100% 아세토니트릴(NH4HCO3 10 mM))로 직접 정제하여 (VI-8)(1.0 g, VI-5로부터의 단계 3에서 74% 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 553.3 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 400 MHz): δ 7.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64-7.58 (m, 1H), 7.49-7.42 (m, 3H), 7.40-7.30 (m, 2H), 7.28-7.22 (m, 1H), 5.12 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.75-3.68 (m, 3H), 3.63-3.50 (m, 12H), 3.50-3.39 (m, 2H), 3.25 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.76-2.66 (m, 1H), 2.52 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.41-2.30 (m, 1H), 2.21-2.14 (m, 1H), 2.03-1.93 (m, 1H) ppm.
단계 7: 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04-9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥산-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오에이트(VI): 메틸렌 클로라이드(10 mL) 중 (VI-8) (40 mg, 72 μmol)의 용액에 HOSu(1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온, 12 mg, 0.11 mmol) 및 EDCI(21 mg, 0.11 mmol)를 연속적으로 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후 메틸렌 클로라이드(50 mL)로 희석하였다. 유기 용액을 물(50 mL) 및 이후에 염수(50 mL)로 세척한 후, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과하며, 진공 속에서 농축시켜 중간체(VI)를 생성시키고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 650 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 7.70 (m, 1H), 7.66 (m, 1H), 7.55-7.47 (m, 3H), 7.38-7.24 (m, 4H), 6.33 (br s, 1H), 5.13 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.83-3.78 (m, 1H), 3.66-3.60 (m, 13H), 3.47-3.35 (m, 2H), 2.99-2.82 (m, 6H), 2.51-2.43 (m, 2H), 2.20-1.89 (m, 4H) ppm.
실시예 35
본 실시예 1-((1R,8S,9S)-비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일)-3-옥소-2,7,10,13,16-펜타옥사-4-아자노나데칸-19-오산(BCN-PEG4-산, VII)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 12를 참고한다.
테트라하이드로푸란(THF)(5 mL) 중 중간체 VII-1(0.10 g, 0.33 mmol)의 용액에 디이소프로필에틸아민(0.17 g, 1.3 mmol), 중간체(VI-7)(89 mg, 0.33 mmol), 및 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt, 43 mg, 0.33 mmol)을 연속적으로 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 여과하여 불용성 고체를 제거하고, 진공 속에서 농축시킨 후, 반응 혼합물을 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 BCN-PEG4-산(VII)(25 mg, 17% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 5.07 (br s, 1H), 4.14 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.70-3.55 (m, 14H), 3.40-3.31 (m, 2H), 2.58 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.30-2.19 (m, 6H), 1.61-1.52 (m, 2H), 1.43-1.32 (m, 1H), 1.0-0.92 (m, 2H) ppm.
실시예 36
본 실시예는 {4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04,9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 4-니트로페닐 카보네이트(DIBAC-Suc-PEG4-VC-pAB-PNP, VIII)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 13을 참고한다.
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04-9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥산-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-{[4-(하이드록시메틸)페닐]카바모일}부틸]카바모일}-2-메틸프로필]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 (VIII-3)
단계 1: DMF(10 ml) 중 화합물(VIII-1)(300 mg, 0.54 mmol) 및 화합물(VIII-2, 205 mg, 0.54 mmol)의 용액에 HATU(309 mg, 0.81 mmol)에 이어서 DIEA(140 mg, 1.08 mmol)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 여과하여 불용성 고체를 제거하고 진공 속에서 농축시키며, 반응 혼합물을 역 섬광(완충제로서 NH4HCO3)로 직접 정제하고, 백색 고체(VIII-3)(300 mg, 60%)를 수득하였다. ESI m/z: 617(M+1).
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04-9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥산-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 4-니트로페닐 카보네이트(VIII)
단계 2: DMF(10 mL) 중 (VIII-3)(150 mg, 0.16 mmol) 및 (VIII-4)(150 mg, 0.49 mmol)의 용액에 DIEA(63 mg, 0.49 mmol)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 여과하여 불용성 고체를 제거하고 진공 속에서 농축시킨 후, 반응 혼합물을 역 섬광 크로마토그래피(완충제로서 NH4HCO3)로 직접 정제하여, (VIII)를 황색 고체(50 mg, 28%)로서 수득하였다. ESI m/z: 1079 (M+1).
실시예 37
본 실시예는 링커-페이로드(LP1)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 14를 참고한다.
3급-부틸 N-[(1S)-1-({4-[(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-6-일]페닐}카바모일)에틸]카바메이트 (31)
단계 1: DMF(5 mL) 중 Boc-Ala-OH(0.20 g, 0.42 mmol), DIPEA(0.12 g, 0.84 mmol) 및 HATU(0.24 g, 0.63 mmol)의 혼합물을 23℃에서 30분 동안 교반하였다. 이 용액에 이후에 화합물 7-1 R (87 mg, 0.46 mmol)을 가하였다. 23℃에서 다른 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 제조-HPLC(방법 B)에 의해 직접 정제하여 화합물 31(0.11 g, 40% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 651 (M + H)+.
(2S)-2-아미노-N-{4-[(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-6-일]페닐}프로판아미드(32)
단계 2: 메틸렌 클로라이드(3 mL) 중 화합물 31(0.10 g, 0.15 mmol)의 용액에 TFA(0.3 mL)를 적가하였다. 혼합물을 23℃에서 1시간 동안 교반하고, 휘발물을 진공하에 제거하여 조 (32)(83 mg)를 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 551 (M + H)+.
3급-부틸 N-[(1S)-1-{[(1S)-1-({4-[(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-6-일]페닐}카바모일)에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바메이트(33)
단계 3: DMF(5 mL) 중 (32)(83 mg, 0.15 mmol), 트리에틸아민(31 mg, 0.31 mmol) 및 Boc-Val-NHS(58 mg, 0.19 mmol)의 혼합물을 23℃에서 4시간 동안 교반하고 반응 혼합물을 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 (33)(52 mg, 2개의 단계에서 20% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 750 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 10.00 (s, 1H), 8.07 (d, J =7.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.16 (dd, J = 1.5, 10.0 Hz, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.08 (t, J = 6.5Hz, 1H), 4.92 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.78 (d, J =3.0 Hz, 1H), 4.55-4.46 (m, 1H), 4.42 (t, J = 7.0Hz, 1H), 4.29 (s, 1H), 4.21-4.14 (m, 1H), 3.82 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 2.65-2.52 (m, 1H), 2.37-2.25 (m, 1H), 2.18-2.06 (m, 1H), 2.04-1.88 (m, 2H), 1.85-1.57 (m, 5H), 1.40 (s, 3H), 1.37 (s, 9H), 1.29 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.15-0.98 (m, 2H), 0.96-0.76 (m, 9H) ppm.
(2S)-2-아미노-N-[(1S)-1-({4-[(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-6-일]페닐}카바모일)에틸]-3-메틸부탄아미드 (34g)
단계 4: 메틸렌 클로라이드(3 mL) 중 화합물 33(50 mg, 67 μmol)의 용액에 TFA(0.3 mL)를 적가하고, 이를 이후에 23℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하여 조 화합물 34g(42 mg)을 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 650 (M + H)+.
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04,9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥산-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-N-[(1S)-1-{[(1S)-1-({4-[(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-16-옥소-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-6-일]페닐}카바모일)에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 (LP1)
단계 5: DMF(5 mL) 중 DIBAC-suc-PEG4-OH(VI-8, 41 mg, 74 μmol), DIPEA (24 mg, 0.19 mmol) 및 HATU(47 mg, 0.12 mmol)의 용액을 23℃에서 30분 동안 교반한 후, (34g)(40 mg, 62 μmol)를 가하였다. 23℃에서 다른 2시간 동안 교반되도록 한 후, 반응 혼합물을 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 LP1(33 mg, 2개의 단계에서 44% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1185 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.97 (s, 1H), 8.18 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.63-7.56 (m, 3H), 7.53-7.41 (m, 3H), 7.42 7.27 (m, 6H), 6.19-6.14 (m, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.08 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.78 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 4.55-4.46 (m, 1H), 4.42 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.29 (s, 1H), 4.21-4.14 (m, 2H), 3.63-3.55 (m, 3H), 3.50-3.40 (m, 12H), 3.32-3.26 (m, 2H), 3.10-3.05 (m, 2H), 2.65-2.52 (m, 2H), 2.48-2.48 (m, 2H), 2.40-2.25 (m, 3H), 2.18-2.06 (m, 1H), 2.04-1.88 (m, 3H), 1.85-1.57 (m, 5H), 1.40 (s, 3H), 1.28 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.15-0.98 (m, 2H), 0.96-0.84 (m, 6H), 0.84-0.80 (d, J = 7.0 Hz, 3H) ppm.
실시예 38
본 실시예는 링커-페이로드(LP2)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 15를 참고한다.
3급-부틸 N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-[(4-{2-[(1R,2S,8S,10S,11S,13R,14R,15S,17S)-1,8-디플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸-5-옥소테트라사이클로[8.7.0.02,7.011,15]헵타데카-3,6-디엔-14-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바메이트 (34e)
일반적인 과정 C: 유기 용매(예를 들면, DCM 또는 DMF) 중 Boc-Val-Ala-OH 또는 Boc-Val-Cit-OH (1.0 당량)의 용액에 염기(예를 들면, DIPEA)(2.0 당량) 및 HATU(1.2 당량)를 20 내지 25℃에서 가하였다. 혼합물을 20 내지 25℃에서 30분 동안 교반한 후 아닐린(1.1 당량)을 가하였다. 혼합물을 펩타이드가 LCMS에 따라 소비될 때까지 16시간 동안 추가로 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물에 TFA(10 mg의 펩타이드 당 0.05 mL)를 가하였다. 혼합물을 20 내지 25℃에서 다른 1시간 동안 교반하였다. 휘발물을 감압하에 제거하고 잔사를 제조-HPLC로 직접 정제하였다(방법 B).
단계 1: DMF(3 mL) 중 Boc-VC(VC는 Val-Cit이다)(67 mg, 0.18 mmol)의 용액에 HATU(68 mg, 0.18 mmol) 및 NMM(30 mg, 0.30 mmol)를 가하고, 수득되는 용액을 23℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물에 화합물 15-5(75 mg, 0.15 mmol)를 가하였다. 23℃에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(80 mL)에 붓고, 염수로 세척한 후 무수 황산나트륨 위에서 건조시켰다. 합한 유기 용액을 진공 속에서 농축시키고 잔사를 섬광 크로마토그래피(메틸렌 클로라이드중 0-10% 메탄올)로 정제하여 (34e)(0.12 g, 수율 89%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 858 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 500 MHz) δ 7.54-7.47 (m, 2H), 7.36 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.90-6.87 (m, 2H), 6.34 (dd, J = 10.0, 1.5 Hz, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.63-5.50 (m, 1H), 5.20 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.54-4.47 (m, 1H), 4.32-4.30 (m, 1H), 3.92-3.81 (m, 1H), 3.23-3.11 (m, 3H), 2.65-2.52 (m, 1H), 2.43-2.32 (m, 3H), 2.11-1.99 (m, 1H), 1.79-1.58 (m, 9H), 1.46-1.24 (m, 11H), 1.06 (s, 3H), 1.00-0.92 (m, 9H) ppm.
비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 N-(14-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-[(4-{2-[(1R,2S,8S,10S,11S,13R,14R,15S,17S)-1,8-디플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸-5-옥소테트라사이클로[8.7.0.02,7.011,15]헵타데카-3,6-디엔-14-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트(LP2)
단계 2: 메틸렌 클로라이드(2 mL) 중 중간체 화합물 34e(25 mg, 29 μmol)의 용액에 TFA(1 mL)를 가하고, 수득되는 혼합물을 23℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하여 잔사(25 mg, ESI m/z: 758.3 (M + H)+)를 갈색 오일 잔사로서 수득하였다.
DMF(2 mL) 중 BCN-PEG4-산(도 12에서 VII, 18 mg, 41 μmol)의 용액에 HATU(15 mg, 41 μmol) 및 NMM(6.9 mg, 41 μmol)을 가하고, 수득되는 용액을 23℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 용액에 DMF(1 mL) 중 상기 수득된 갈색 오일 잔사의 용액을 가하였다. 23℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 후처리하고 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 LP2(15 mg, 37% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1181.4 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 400 MHz)(회전이성체) δ 9.82 및 9.37 (s, 1H), 8.39 (d, J = 8.0 Hz, 0.4H), 8.09 (d, J = 7.2 Hz, 0.6H), 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 0.4H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 0.6H), 7.55 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.10 (br s, 1H), 6.80 (m, 2H), 6.29 (dd, J = 10.0, 1.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.99-5.94 (m, 1H), 5.72-5.56 (m, 1H), 5.43-5.41 (m, 3H), 5.31 (s, 1H), 5.22 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.37-4.31 (m, 1H), 4.24-4.14 (m, 2H), 4.04 (s, 1H), 4.02 (s, 1H), 3.62-3.56 (m, 2H), 3.50-3.45 (m, 12H), 3.40-3.37 (m, 2H), 3.13-3.08 (m, 2H), 3.00-2.92 (m, 3H), 2.54-2.33 (m, 2H), 2.25-2.08 (m, 8H), 2.09-1.90 (m, 1H), 1.78-1.23 (m, 15H), 1.14-1.09 (m, 1H), 0.89-0.82 (m, 14H) ppm.
실시예 39
본 실시예는 링커-페이로드(LP3)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 15를 참고한다.
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노) 펜탄아미도]페닐}메틸 N-(4-{2-[(1R,2S,8S,10S,11S,13R,14R,15S,17S)-1,8-디플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸-5-옥소테트라사이클로[8.7.0.02,7011,15]헵타데카-3,6-디엔-14-일]-2-옥소에톡시}페닐) 카바메이트 (34f)
일반적인 과정 D: 단계 1: DMF 중 페이로드 아닐린(1.0 당량)의 용액에 Fmoc-vcPAB-PNP(1.1 당량), HOBt(1.5 당량) 및 DIPEA(2.0 당량)를 실온에서 가하였다. 혼합물을 실온(18 내지 30℃)에서 출발 물질이 LCMS에 따라 소비될 때까지 교반하였다. 단계 2: 반응 혼합물에 피페리딘(10 mg의 페이로드당 0.03 mL)을 가하고 혼합물을 실온(18 내지 30℃)에서 1시간 동안 Fmoc가 LCMS에 의해 제거된 것으로 모니터링될 때까지 교반하였다. 막을 통해 여과한 후, 반응 용액을 역상 섬광 크로마토그래피 또는 제조-HPLC로 직접 정제하여 vcPAB 카보네이트를 생성하였다.
N-Boc-vcPAB-PNP를 사용하여 단계 1 반응에서 Fomc-vcPAB-PNP를 대체하는 경우, N-Boc vcPAB 카보네이트를 단계 1로부터 수득하였다. 정제 후, N-Boc vcPAB 카보네이트를 DCM 속에 재용해하고, TFA(TFA 농도 < 25%)로 0℃에서 Boc가 LCMS에 의해 제거된 것으로 모니터링될 때까지 처리하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 휘발물을 제거하고 수득되는 잔사를 크로마토그래피 또는 제조-HPLC로 정제하여 vcPAB 카보네이트를 생성시켰다.
DMF(1 mL) 중 Fomc-vcPAB-PNP(73 mg, 96 μmol)의 용액에 화합물 15-5(40 mg, 80 μmol), DMAP(20 mg, 0.16 mmol), HOBt(23 mg, 0.16 mmol) 및 DIPEA(55 mg, 0.40 mmol)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 (15-5)가 LCMS에 따라 완전히 소비될 때까지 30분 동안 교반하였다. (ESI: 565.3 (M + H)+). 이어서, 수득되는 혼합물에 피페리딘(34 mg, 0.40 mmol)을 실온에서 가하였다. 실온에서 추가로 30분 동안 교반 후, 이를 LCMS로 모니터링하고, 수득되는 혼합물을 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 30% 아세토니트릴)로 정제하여 (34f)(50 mg, 수율 69%)를 담황색 고체로서 수득하였다. ESI: 907 (M + H)+
비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 N-(14-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-{[4-({[(4-{2-[(1R,2S,8S,10S,11S,13R,14R,15S,17S)-1,8-디플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸-5-옥소테트라사이클로[8.7.0.0²,70¹¹,¹5]헵타데카-3,6-디엔-14-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]옥시}메틸)페닐]카바모일}부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트(LP3)
단계 3: DMF(3.6 mL) 중 BCN-PEG4-산(60 mg, 67 μmol)의 용액에 HATU(27 mg, 70 μmol) 및 DIPEA(20 mg, 0.15 mmol)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후 화합물(34f)(50 mg, 60 μmol)를 부분방식으로 가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 화합물 34f가 LCMS에 따라 완전히 소비될 때까지 가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 화합물 LP3(36 mg, 수율 54%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI: 1330 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d 6) δ 10.02 (s, 1H), 9.56 (s, 1H), 8.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 7.27 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.33-6.26 (m, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.98 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 5.75-5.52 (m, 1H), 5.42 (s, 3H), 5.30 (s, 1H), 5.20 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.70 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 4.43-4.35 (m, 1H), 4.26-4.15 (m, 2H), 4.02 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.64-3.55 (m, 2H), 3.49 (s, 11H), 3.38 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.11 (dd, J = 11.8, 5.9 Hz, 2H), 3.05-2.88 (m, 3H), 2.44-2.31 (m, 2H), 2.28-2.08 (m, 9H), 2.02-1.90 (m, 1H), 1.76-1.10 (m, 16H), 0.91-0.77 (m, 14H) ppm. HPLC 순도: >99%, 보유 시간: 7.03 min.
실시예 40
본 실시예는 링커-페이로드(LP4)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 16을 참고한다.
(2S)-2-아미노-N-[(1S)-1-[(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]-3-메틸부탄아미드(34a)
일반적인 과정 E: DMF(10 mg의 펩타이드당 0.2 mL) 중 Fomc-Val-Ala-OH(1.2 당량)의 용액에 DIPEA(3.0 당량) 및 HATU(1.4 당량)를 20 내지 25℃에서 가하였다. 혼합물을 20 내지 25℃에서 5분 동안 교반한 후 아닐린(1.0 당량)을 가하였다. 혼합물을 추가로 2시간 동안 펩타이드가 LCMS에 따라 완전히 소비될 때까지 가하였다. 이어서 반응 혼합물에 피페리딘(5.0 당량)을 가하였다. 혼합물을 20 내지 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 막을 통해 여과한 후, 반응 용액을 역상 섬광 크로마토그래피(수성 중탄산암모늄(10 mM) 중 0-100% 아세토니트릴) 또는 제조-HPLC(방법 B)로 정제하였다. 화합물(34a)를 이러한 일반적인 과정에 따라 수득하였다.
대안적으로, 화합물(34a)는 일반적인 과정 C에 따라 수득하였다. 메틸렌 클로라이드(5 mL) 중 Boc-Val-Ala-OH(0.29 g, 1.0 mmol)의 용액에 DIPEA(0.26 g, 2.0 mmol) 및 HATU(0.46 g, 1.2 mmol)를 가하고, 혼합물을 23℃에서 30분 동안 교반하고 이어서 반응 혼합물에 화합물(11-5)(0.57 g, 1.1 mmol)을 가하였다. 23℃에서 추가로 16시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물에 TFA(1.5 mL)를 가하고 수득되는 혼합물을 23℃에서 다른 1시간 동안 교반하였다. 휘발물을 감압하게 제거하고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 34a(0.17 g, 2개의 단계에서 25% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 692 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 10.00 (s, 1H), 8.47 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.57-7.47 (m, 2H), 7.33 (d, J = 10 Hz, 1H), 6.87-6.82 (m, 2H), 6.18 (d, J = 10 Hz, 1H), 5.93 (s, 3H), 5.25-5.11 (m, 1H), 5.09 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 4.92-4.65 (m, 3H), 4.55-4.40 (m, 1H), 4.40-4.30 (m, 1H), 2.32-2.22 (m, 1H), 2.18-1.80 (m, 5H), 1.65-1.45 (m, 5H), 1.45-1.25 (m, 9H), 1.25-0.98 (m, 2H), 0.96-0.76 (m, 13H) ppm.
비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 N-(14-{[(1S)-1-{[(1S)-1-[(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트 (LP4)
일반적인 과정 F: DMF 중 BCN-PEG4-산 또는 이의 NHS-에스테르의 용액에 HATU(1 당량) 및 DIPEA(2.5 당량)을 가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반한 후 아민의 용액을 가하였다. 25℃에서 2시간 동안 LC-MS로 모니터링하면서 교반한 후, 출발 물질을 소비시키고 혼합물을 제조-HPLC로 직접 정제하여 목적한 아미드를 수득하였다.
DMF(8 mL) 중 BCN-PEG4-산(IX, 70 mg, 0.16 mmol)의 용액에 HATU(66 mg, 0.17 mmol) 및 DIPEA(56 mg, 0.43 mmol)를 연속적으로 가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반한 후 34a(0.10 g, 0.15 mmol)의 용액을 가하였다. 25℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 LP4(25 mg, 16% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z =1116 (M + H)+.
키랄 화합물 11-5R을 출발 물질로서 사용하여, 키랄( R ) - LP4을 일반적인 과정 F에 따라 백색 고체로서(24 mg, 31% 수율) 수득하였다. ESI m/z: 1115 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 )(회전이성체) δ 9.78 (s, 0.5H), 9.69 (s, 0.5H), 8.40 (d, J = 7.5 Hz, 0.5H), 8.15 (d, J = 7.0 Hz, 0.5H), 8.01 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 7.89 (d, J = 9.0 Hz, 0.5H), 7.57 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.85 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 6.18 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.10 (d, J = 18.5 Hz, 1H), 4.86-4.67 (m, 4H), 4.45-4.36 (m, 1H), 4.33 (s, 1H), 4.20 (t, J = 7.5 Hz, 0.5H), 4.10 (t, J = 7.8 Hz, 0.5H), 4.03 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 3.59 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.49-3.45 (m, 11H), 3.39 (s, 2H), 3.30 (s, 2H), 3.11 (dd, J = 11.4, 5.9 Hz, 2H), 2.47-2.43 (m, 1H), 2.38-2.12 (m, 8H), 2.03-1.83 (s, 5H), 1.62-1.51 (m, 6H), 1.42-1.24 (m, 10H), 1.02-0.94 (m, 2H), 0.90-0.82 (m, 14H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 9.49 min (방법 A).
실시예 41
본 실시예는 링커-페이로드(LP5)의 제조방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 16을 참고한다.
(2S)-2-[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)-N-(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)펜탄아미드(34c)
화합물 34c를 일반적인 과정 C에 따라 수득하였다. DMF(10 mL) 중 Boc-vc(0.26 g, 0.50 mmol), DIPEA(0.19 g, 0.60 mmol) 및 HATU(0.23 g, 0.60 mmol)의 혼합물을 23℃에서 30분 동안 교반하고 이어서 혼합물에 11-5(0.28 g, 0.55 mmol)를 가하였다. 23℃에서 16시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 50% 아세토니트릴)로 직접 정제하여 조(ESI m/z 878 (M + H)+)를 수득하고, 이를 메틸렌 클로라이드(8 mL) 속에 용해시키고 TFA(3 mL)로 처리하였다. 수득되는 혼합물을 23℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발물을 감압하에 제거하고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 화합물 34c(0.12 g, 2개의 단계에서 31% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 778 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.97 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 8.10 (m, 1H), 7.51 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 7.32 (dd, J = 10.1, 2.5 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 15.9, 9.0 Hz, 2H), 6.17 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.97 (t, J = 5.0 Hz ,1H), 5.93 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.22 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.09 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 4.83-4.67 (m, 3H), 4.47-4.37 (m, 1H), 4.35 - 4.29 (m, 1H), 3.05 -2.90 (m, 3H), 2.57-2.51(m, 1H), 2.30 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.13-1.74 (m, 7H), 1.70- 1.46 (m, 7H), 1.45-1.29 (m, 7H), 1.17-0.93 (m, 2H), 0.91- 0.82 (m, 9H), 0.77 (dd, J = 6.7, 2.7 Hz, 3H) ppm.
비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 N-(14-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-[(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트 (LP5)
LP5를 다음의 일반적인 과정 F에 따라 수득하였다. 메틸렌 클로라이드(6 mL) 중 BCN-PEG4-산(도 15에서 IX, 0.28 g)의 용액을 DMF(5 mL) 중 HATU(59 mg, 0.15 mmol) 및 DIPEA(50 mg, 0.39 mmol)의 혼합물에 가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하고 여기에 화합물 34c(0.10 g, 0.13 mmol)를 한번에 가하였다. 수득되는 혼합물을 25℃에서 밤새 교반하고 제조-HPLC(방법 B)에 의해 직접 정제하여 LP5(35 mg, 23% 수율)를 담황색 고체로서 수득하였다. ESI m/z =1202 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.61-7.43 (m, 3H), 6.87 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.26 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.29-5.02 (m, 2H), 4.84-4.65 (m, 2H), 4.51-4.44 (s, 2H), 4.22-4.05 (m, 3H), 3.80-3.68 (m, 2H), 3.67-3.45 (m, 14H), 3.22-3.08 (m, 2H), 2.72-2.50 (m, 3H), 2.45-2.33 (m, 1H), 2.30-2.02 (m, 10H), 1.99-1.82 (m, 2H), 1.81-1.32 (m, 17H), 1.26-0.85 (m, 17H) ppm.
실시예 42
본 실시예는 링커-페이로드(LP6)의 제조방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 16을 참고한다.
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N-(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트(34d)
화합물 34d를 일반적인 과정 D에 따라 제조하였다.
단계 1: DMF(3.5 mL) 중 표 1(66 mg, 0.10 mmol)로부터의 화합물(11-5)의 용액에 Boc-vcPAB-PNP(64 mg, 0.12 mmol), HOBt(14 mg, 0.10 mmol) 및 DIPEA(13.0 mg, 0.10 mmol)를 연속적으로 가하였다. 반응 혼합물을 13℃에서 밤새 교반하고 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 중간체 Boc-34d(61 mg, 수율 58%)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1027.3 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 400 MHz) δ 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.38-7.33 (m, 4H), 6.87-6.83 (m, 2H), 6.26 (dt, J = 10.0, 2.0 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.26-5.03 (m, 4.2H), 4.82-4.67 (m, 1.8H), 4.54-4.51 (m, 1H), 4.48-4.43 (m, 1H), 3.91 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.31-3.18 (m, 1H), 3.14-3.08 (m, 1H), 2.70-2.63 (m, 1H), 2.40-2.37 (m, 1H), 2.26-2.00 (m, 4H), 1.94-1.72 (m, 4H), 1.68-1.35 (m, 20H), 1.22-0.92 (m, 14H) ppm.
단계 2: DCM(2 mL) 및 MeOH(1 mL) 중 Boc-34d(59 mg, 58 μmol)의 용액에 디옥산(4 N, 1.5 mL) 중 HCl을 0℃에서 적가하였다. 이후에, 혼합물을 실온(14℃)에서 4시간 동안 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하여 34d(60 mg, 조)를 갈색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 상요하였다. ESI m/z: 927 (M + H)+.
비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 N-(14-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-{[4-({[(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]옥시}메틸)페닐]카바모일}부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트 (LP6)
LP6을 일반적인 과정 F에 따라 백색 고체(24 mg, 31% 수율)로서 수득하였다. ESI m/z: 1350.5 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 400 MHz) δ 10.02 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J =8.4 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.36-7.30 (m, 5H), 7.11 (t, J =4.8 Hz, 1H), 6.84-6.78 (m, 2H), 6.19-6.16 (m, 1H), 5.98 (t, J =5.2 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.23-5.06 (m, 4H), 4.80-4.67 (m, 3H), 4.39-4.31 (m, 2H), 4.23 (t, J =7.2 Hz, 1H), 4.02 (d, J =8.0 Hz, 2H), 3.64-3.55 (m, 2H), 3.49 (m, 12H), 3.42-3.27 (m, 3H), 3.13-2.89 (m, 4H), 2.41-2.12 (m, 9H), 2.03-1.95 (m, 2H), 1.91-1.82 (m, 2H), 1.75-1.68 (m, 1H), 1.61-1.20 (m, 16H), 1.15-0.95 (m, 2H), 0.92-0.81 (m, 15H) ppm. 분석 HPLC: 69%+31%=100%, 보유 시간: 8.86 min 및 8.92 min (방법 B).
실시예 43
본 실시예는 링커-페이로드 LP7의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 16을 참고한다.
(비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 N-(14-{[(1S)-1-{[(1S)-1-[(4-{2-[(1S,2S,4R, 6R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로 [10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트(LP7)
LP7(24 mg, 34a로부터 3개의 단계에서 31% 수율)을 일반적인 과정 F에 따라 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1115 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) (회전이성체) δ 9.78 (s, 0.5H), 9.69 (s, 0.5H), 8.40 (d, J = 7.5 Hz, 0.5H), 8.15 (d, J = 7.0 Hz, 0.5H), 8.01 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 7.89 (d, J = 9.0 Hz, 0.5H), 7.57 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.85 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 6.18 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.10 (d, J = 18.5 Hz, 1H), 4.86-4.67 (m, 4H), 4.45-4.36 (m, 1H), 4.33 (s, 1H), 4.20 (t, J = 7.5 Hz, 0.5H), 4.10 (t, J = 7.8 Hz, 0.5H), 4.03 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 3.59 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.49-3.45 (m, 11H), 3.39 (s, 2H), 3.30 (s, 2H), 3.11 (dd, J = 11.4, 5.9 Hz, 2H), 2.47-2.43 (m, 1H), 2.38-2.12 (m, 8H), 2.03-1.83 (s, 5H), 1.62-1.51 (m, 6H), 1.42-1.24 (m, 10H), 1.02-0.94 (m, 2H), 0.90-0.82 (m, 14H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 9.47 min (방법 A).
실시예 44
본 실시예는 또한 링커-페이로드(LP7)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 26을 참고한다. 다음의 반응 조건을 사용하였다:
DMF(또는 DCM/DMF) 중 산(VI-8)(1.0 내지 2.5 당량)의 용액에 DIPEA(1.5 내지 10 당량) 및 HATU(2.5 내지 4.0 당량)을 실온에서 연속적으로 가하였다. 수득되는 혼합물을 당해 온도에서 0.5 내지 1 시간 교반한 후 아민(26b)(1.0 당량)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 내지 16 시간 동안 LCMS로 모니터링하여, 아민이 완전히 소비될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 막을 통해 여과하고 여액을 농축시킨 후 제조-HPLC(방법 B)로 분리하여 실시예 화합물 LP7(20 내지 69% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2.9 .0 4.8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 (LP7)
ESI m/z: 1227.6 (M + H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) (회전이성체) δ 9.79 (s, 0.5H), 9.70 (s, 0.5H), 8.41 (d, J = 7.5 Hz, 0.5H), 8.17 (d, J = 7.0 Hz, 0.5H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 7.89 (d, J = 8.6 Hz, 0.5H), 7.77 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.53-7.43 (m, 4H), 7.40-7.28 (m, 4H), 6.88-6.82 (m, 2H), 6.18 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.10 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.83-4.67 (m, 4H), 4.45-4.29 (m, 2H), 4.23-4.17 (m, 0.5H), 4.11 (t, J = 7.7 Hz, 0.5H), 3.64-3.40 (m, 15H), 3.31-3.26 (m, 2H), 3.13-3.03 (m, 2H), 2.65-2.52 (m, 2H), 2.47-1.26 (m, 24H), 1.06-0.93 (m, 2H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm.
분석 HPLC: 99%, 보유 시간: 8.55 min (방법 B).
용해도: <0.1 mg/mL 물; 수중 0.06 mg/mL의 20% DMSO; 수중 0.07 mg/mL의 30% DMSO.
실시예 45
본 실시예는 링커-페이로드(LP15)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는도 27 및 28을 참고한다. 도 27에서, 화합물 11b는 도 2에서 화합물 11-5와 동일함에 주목한다.
단계 1: 도 27을 참고로, 화합물(13b)의 제조.
DMF 중 산 Fomc-Val-Ala-OH(12b)의 용액에 HATU(1.0-2.8 당량) 및 TEA(2.0-5.0 당량)를 25℃에서 가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반한 후에, DMF(1 mL) 중 아민(11b, 즉, 페이로드, 1.0 당량)의 용액을 주사기로 가하였다. 수득되는 혼합물을 25℃에서 2 내지 24 시간 동안 아민이 LCMS에 따라 대부분 소비될 때까지 교반하였다. 이어서 혼합물에 피페리딘 또는 디에틸아민(과량)을 가하고, 혼합물을 25℃에서 1 내지 16시간 동안 LCMS에 의해 모니터링하여, Fomc가 전체적으로 제거될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 막을 통해 여과하고 여액을 농축시키고 제조-HPLC (방법 B) 또는 역상 섬광 크로마토그래피로 직접 정제하여 화합물 13b (23-64% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 구체적으로, 다음의 조건을 사용하였다:
단계 2: 도 27을 참고한, 화합물(17a)의 제조.
DMF 중 화합물 13b의 용액에 HATU(1.0 내지 2.8 당량) 및 DIPEA 또는 TEA(2.0 내지 5.0 당량)를 25℃에서 가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반한 후에, DMF (1 mL) 중 Fomc-Lys-(PEG)4-COT(13c, 1.0 당량)의 용액을 주사기로 가하였다. 수득되는 혼합물을 25℃에서 2 내지 24 시간 동안 아민(13b)이 LCMS에 따라 대부분 소비될 때까지 교반하였다. 이어서, 혼합물에 피페리딘 또는 디에틸아민(과량)을 가하고, 혼합물을 25℃에서 1 내지 16 시간 동안 LCMS로 모니터링하여 Fomc가 전체적으로 제거될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 막을 통해 여과하고 여액을 농축시키고 제조-HPLC (방법 B) 또는 역상 섬광 크로마토그래피로 직접 정제하여 화합물(17a)(23 내지 64% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 3: 도 27을 참고한, 화합물(27b)의 제조.
DMF 또는 DMSO 중 알킨(17a)(1.0 당량)의 용액에 α-사이클로덱스트린-아지드(16a)을 가하였다(참고: Synth. Commun., 2002, 32(21), 3367-3372; J. Am. Chem. Soc., 2012, 134(46), 19108-19117; J. Med. Chem., 1997, 40(17), 2755-2761; J. Am. Chem. Soc., 1993, 이들 공보 각각의 전체 내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문으로 본원에 참고로 포함된다, 115(12), 5035-5040)(1.5 내지 3.0 당량). 이어서, 수득되는 혼합물을 20 내지 30℃에서 16시간 내지 3일 동안 LCMS로 모니터링하여, 화합물 16a이 대부분 소비되어 목적한 중간체 질량이 검출될 때까지 교반하였다. 여과 후, 수득되는 혼합물을 제조-HPLC로 직접 정제(또는 직접 사용)하여 화합물 27b(25 내지 58% 수율)를 백색 고체로서(트리아졸 레지오이성체와 함께) 수득하였다. 구체적으로, 다음의 조건을 사용하였다.
단계 4: 도 28을 참고로, (LP15)의 제조.
다음의 반응 조건을 사용하였다:
DMF(또는 DCM/DMF) 중 산(VI-8)(1.0-2.5 당량)의 용액에 DIPEA(1.5 내지 10 당량) 및 HATU(2.5 내지 4.0 당량)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 수득되는 혼합물을 이러한 온도에서 0.5 내지 1 시간 동안 교반한 후 아민(27b)(1.0 당량)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 내지 16 시간 동안 LCMS로 모니터링하여, 아민(27b)이 전체적으로 소비될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물 막을 통해 여과하고, 여액을 농축시킨 다음, 제조-HPLC(방법 B)로 분리하여 실시예 화합물(20 내지 69% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드(LP15)
ESI m/z: 1259.1 (M/2 + H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 )(회전이성체) δ 9.84 (s, 1H), 8.34 (s, 0.5H), 8.15 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.90-7.84 (m, 1H), 7.81-7.74 (m, 1.5H), 7.72-7.56 (m, 4H), 7.56-7.27 (m, 11H), 6.89-6.79 (m, 2H), 6.17 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.64-5.44 (m, 12H), 5.24-5.00 (m, 5H), 4.86-4.51 (m, 16H), 4.40-4.16 (m, 5H), 4.05-3.96 (m, 1H), 3.86-3.73 (m, 10H), 3.67-2.88 (m, 35H), 2.80-2.69 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 1H), 2.41-2.20 (m, 6H), 2.10-1.71 (m, 10H), 1.66-1.07 (m, 26H), 1.05-0.79 (m, 17H) ppm.
분석 HPLC: 97%, 보유 시간: 6.62 및 6.67 min (방법 B). 보유 시간은 2개의 트리아졸-레지오이성체로부터 기인한다.
실시예 46
본 실시예는 링커-페이로드(LP16)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는도 27 및 28을 참고한다. LP16을 제조하는 방법은 도 27 및 28에 나타낸 바와 같이, 상이한 페이로드를 사용하는 것 외에는 실시예 45에서 LP15의 제조 방법과 동일하였다. 다음의 반응 조건을 사용하였다:
DMF(또는 DCM/DMF) 중 산 VI-8(1.0 내지 2.5 당량)의 용액에 DIPEA(1.5 내지 10 당량) 및 HATU(2.5 내지 4.0 당량)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 수득되는 혼합물을 당해 온도에서 0.5 내지 1 시간 동안 교반한 후 아민(27b)(1.0 당량)을 가하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 모니터링하여, 실온에서 2 내지 16 시간 동안 아민(27b)이 전체적으로 소비될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 막을 통해 여과하고 여액을 농축시킨 다음 제조-HPLC(방법 B)로 분리하여 실시예 화합물(20 내지 69% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드(LP16)
ESI m/z: 839.5 (M/3 + H)+, 1259.1 (M/2 + H)+ (60%).
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 )(트리아졸 레지오이성체와 함께) δ 9.77-9.42 (m, 1H), 8.27-8.20 (m, 0.5H), 8.17-8.01 (m, 2H), 7.86-7.74 (m, 2.5H), 7.70-7.60 (m, 4H), 7.57-7.43 (m, 7H), 7.39-7.28 (m, 6H), 6.88-6.81 (m, 2H), 6.21-6.14 (m, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.61-5.42 (m, 10H), 5.16-4.97 (m, 4H), 4.89-4.48 (m, 17H), 4.40-4.28 (m, 4H), 4.16-4.10 (m, 1H), 4.04-3.94 (m, 1H), 3.83-3.74 (m, 7H), 3.65-3.56 (m, 9H), 3.48-3.21 (m, 23H), 3.15-3.06 (m, 4H), 2.97-2.89 (m, 1H), 2.81-2.69 (m, 1H), 2.61-2.53 (m, 2H), 2.40-2.20 (m, 6H), 2.14-2.06 (m, 2H), 2.03-1.95 (m, 4H), 1.91-1.70 (m, 5H), 1.64-1.52 (m, 9H), 1.49-1.25 (m, 14H), 1.13-0.81 (m, 19H) ppm.
분석 HPLC: 98%, 보유 시간: 6.61(59%) 및 6.73 (39%) min (방법 B). 보유 시간은 2개의 트리아졸-레지오이성체로부터 기인한다.
용해도: 수중 0.1 mg/mL의 10% DMSO.
실시예 47
본 실시예는 링커-페이로드(LP8)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 16을 참고한다.
(2S)-2-[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)-N-(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)펜탄아미드(34h)
화합물(34h)을 백색 고체로서 일반적인 과정 C에 따라 제조-HPLC(방법 B)에 의한 정제 후 제조하였다. ESI m/z: 778 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.97 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 8.10 (m, 1H), 7.51 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 7.32 (dd, J = 10.1, 2.5 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 15.9, 9.0 Hz, 2H), 6.17 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.97 (t, J = 5.0 Hz ,1H), 5.93 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.22 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.09 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 4.83-4.67 (m, 3H), 4.47-4.37 (m, 1H), 4.35-4.29 (m, 1H), 3.05-2.90 (m, 3H), 2.57-2.51(m, 1H), 2.30 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.13-1.74 (m, 7H), 1.70- 1.46 (m, 7H), 1.45-1.29 (m, 7H), 1.17-0.93 (m, 2H), 0.91- 0.82 (m, 9H), 0.77 (dd, J = 6.7, 2.7 Hz, 3H) ppm.
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04,9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-N-[(1S)-1-{[(1S)-1-[(4-{2-[(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18] 이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드(LP8)
화합물 LP8(25 mg, 20% 수율)을 백색 고체로서 일반적인 과정 F에 따라서 수득하였다. ESI m/z: 1263 (M/+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 9.79 (s, 0.7H), 9.69 (s, 0.3H),8.41 (d, J = 8.0 Hz, 0.3H), 8.16 (d, J = 8.0 Hz, 0.7H), 8.01 (d, J = 7.6 Hz, 0.3H), 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 0.7H), 7.77 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.64-7.60 (m, 1H), 7.60-7.54 (m, 1H), 7.54-7.44 (m, 4H), 7.40-7.24 (m, 4H), 6.90-6.82 (m, 2H), 6.30 (dd, J = 10 Hz, 1.2 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.72-5.55 (m, 1H), 5.52-5.48 (m, 1H), 5.16-5.08 (m, 1H), 5.06-5.00 (m, 1H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.80-4.76 (m, 1H), 4.74 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 4.42-4.33 (m, 1H), 4.26-4.06 (m, 2H), 3.64-3.54 (m, 3H), 3.50-3.40 (m, 12H), 3.12-3.02 (m, 2H), 2.70-2.55 (m, 2H), 2.40-2.20 (m, 4H), 2.12-1.90 (m, 4H), 1.86-1.70 (m, 2H), 1.64-1.54 (m, 4H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 3H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.90-0.80 (m, 13H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 8.26 min (방법 B).
실시예 48
본 실시예는 링커-페이로드(LP9)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 16을 참고한다.
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04,9]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸 부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N-(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S, 12R,13S,19S)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트(LP9)
화합물(34i)를 백색 고체로서 일반적인 과정 D에 따라 제조하였다.
화합물 LP9(20 mg, 22% 수율)를 일반적인 과정 F에 따라서 수득하였다. ESI m/z: 1499 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 10.02 (s, 1H), 9.59 (s, 1H),8.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.80-7.75 (m, 1H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.65-7.60 (m, 3H), 7.53-7.45 (m, 3H), 7.40-7.28 (m, 7H), 6.84 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.30 (dd, J = 10.4 Hz, J = 1.6 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.10-6.0 (m, 1H), 5.72-5.55 (m,1H), 5.52 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.16-5.05 (m, 4H), 4.88-4.70 (m, 3H), 4.43-4.33 (m, 1H), 4.25-4.20 (m, 2H), 3.65-3.55 (m, 3H), 3.50-3.40 (m, 12H), 3.30-3.25 (m, 2H), 3.12-2.90 (m, 4H), 2.70-2.55 (m, 2H), 2.48-2.43 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 2H), 2.15-1.95 (m, 4H), 1.86-1.75 (m, 2H), 1.64-1.54 (m, 5H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 4H), 1.23 (s, 2H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.83 min (방법 B).
실시예 49
본 실시예는 링커-페이로드(LP10)의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 16을 입증한다.
(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-(2-아미노아세틸)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(34j)
화합물 34j(80 mg, 64% 수율)를 화합물 1-19로부터 일반적인 과정 D에 따라 수득하였다. ESI m/z: 871 (M + H)+.
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트(LP10)
일반적인 과정 F에 따라, 화합물(LP10)(20 mg, 22% 수율)을 34j(43 mg, 50 μmol)와 DIBAC-suc-PEG4-NHS 에스테르(VI)의 반응으로부터, 제조-HPLC(방법 B)에 의한 정제 후 수득하였다. ESI m/z: 1406 (M+H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 500 MHz) δ 9.99 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.80-7.75 (m, 1H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.65-7.60 (m, 3H), 7.53-7.33 (m, 6H), 7.33-7.28 (m, 3H), 6.30 (dd, J = 10.0 Hz 및 1.5 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.10-6.00 (m, 1H), 5.72-5.55 (m, 2H), 5.41 (s, 2H), 5.05-5.01 (m, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.80-4.72 (m, 1H), 4.60-4.58 (m, 1H), 4.43-4.33 (m, 1H), 4.25-4.10 (m, 3H), 3.88-3.80 (m, 1H), 3.65-3.55 (m, 3H), 3.50-3.40 (m, 12H), 3.30-3.25 (m, 2H), 3.12-2.90 (m, 4H), 2.70-2.55 (m, 2H), 2.48-2.35 (m, 2H), 2.30-2.20 (m, 2H), 2.15-1.95 (m, 4H), 1.86-1.65 (m, 3H), 1.64-1.54 (m, 5H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 5H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.40 min (방법 B).
실시예 50
본 실시예는 링커-페이로드 LP11의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 16을 참고한다.
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)메틸]카바메이트(LP11)
화합물 34k(80 mg, 64% 수율)를 (11-19)로부터 일반적인 과정 D에 따라 수득하였다.
일반적인 과정 C에 따라, 화합물(LP11)(18 mg, 31% 수율)을 백색 고체로서 화합물(34k)의 반응으로부터 수득하였다. ESI m/z: 756.5 (M/2 + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 10.02 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76(t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.72(t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.65-7.60 (m, 3H), 7.53-7.45 (m, 3H), 7.40-7.31 (m, 2H), 7.31-7.25 (m, 4H), 7.20-7.15 (m, 2H), 6.86-6.80 (m, 2H), 6.30 (dd, J = 10.4Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.10-6.00 (m, 1H), 5.72-5.55 (m, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.16-5.10 (m, 1H), 5.06-5.00 (m, 1H), 5.00-4.93 (m, 2H), 4.90-4.76 (m, 2H), 4.75 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 4.43-4.33 (m, 1H), 4.25-4.20 (m, 2H), 4.12 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.65-3.55 (m, 3H), 3.50-3.40 (m, 12H), 3.30-3.25 (m, 2H), 3.12-2.90 (m, 4H), 2.70-2.55 (m, 2H), 2.48-2.43 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 2H), 2.15-1.95 (m, 4H), 1.86-1.70 (m, 3H), 1.64-1.54 (m, 5H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 4H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm. 분석 HPLC: 99%, 보유 시간: 7.89 min (방법 B).
실시예 51
본 실시예는 링커-페이로드 LP12의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 17을 참고한다.
[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-포르밀-3-(프로프-2-인-1-일옥시)페녹시]옥산-2-일]메틸 아세테이트(45)
단계 1: [(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-(4-포르밀-3-하이드록시페녹시)옥산-2-일]메틸 아세테이트(43)의 합성은 Carbohydrate Research, 1986, 146, 241-249에 보고되었으며, 이의 전체 내용은 이의 전문으로 본원에 참고로 포함된다. 아세톤(40 mL) 중 중간체 화합물 43(2.8 g, 6.0 mmol)의 용액에 탄산칼륨(1.7 g, 12 mmol) 및 3-브로모프로프-1-인(44, 3.5 g, 30 mmol)을 동시에 가하고, 수득되는 혼합물을 밤새 환류시켰다. 이후에, 혼합물을 진공 속에서 농축시키고 잔사를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 33% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 45(1.9 g, 수율 63%)를 갈색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 507 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 500 MHz) δ 10.26 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 5.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.41 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 4.93 (t, J = 2.5 Hz, 2H), 5.23-5.19 (m, 1H), 5.14 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 4.34-4.30 (m, 1H), 4.22-4.15 (m, 2H), 3.11 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 2.05-1.99 (m, 12H) ppm.
[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-(하이드록시메틸)-3-(프로프-2-인-1-일옥시)페녹시]옥산-2-일]메틸 아세테이트(46)
단계 2: 이소프로판올(50 mL) 중 화합물 45(0.83 g, 1.6 mmol)의 용액에 수소화붕소나트륨(31 mg, 0.82 mmol)을 가하였다. 혼합물을 23℃에서 2시간 동안 교반한 후 진공 속에서 농축시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트로 희석시키고 염수로 세척하였다. 유기 용액을 황산나트륨 위에서 건조시키고 농축시켜 화합물 46(0.70 g, 수율 84%)을 갈색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 526.1 (M + H2O)+. 1H NMR (MeOD d4 , 500 MHz) δ 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.67 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 5.40 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 5.33 (dd, J = 7.5 Hz, 1H), 5.20-5.11 (m, 2H), 4.78 (t, J = 2.5 Hz, 2H), 4.59 (s, 2H), 4.32 (d, J = 12.5, 5.0 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 12.5, 2.5 Hz, 1H), 4.12-4.08 (m, 1H), 3.02 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 2.07-2.0
[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-(4-{[(4-니트로페녹시카보닐) 옥시]메틸}-3-(프로프-2-인-1-일옥시)페녹시)옥산-2-일]메틸 아세테이트(48)
단계 3: 메틸렌 클로라이드(30 mL) 중 화합물 46(0.40 g, 0.79 mmol)의 용액에 4-니트로페닐 카보노클로리데이트(47, 0.24 g, 1.2 mmol), 4-디메틸아미노피리딘(0.19 g, 1.6 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.20 g, 1.6 mmol)을 가하였다. 혼합물을 23℃에서 밤새 교반하고 메틸렌 클로라이드(50 mL)로 희석시켰다. 유기 용액을 포화된 염화암모늄 수용액(50 mL)에 이어서 염수(50 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 농축시켰다. 잔사를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 33% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 48(0.30 g, 수율 57%)을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 691.0 (M + H2O)+. 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 8.27 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.64 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 5.33-5.26 (m, 4H), 5.21-5.17 (m, 1H), 4.76 (t, J = 2.0 Hz, 2H), 4.28 (dd, J = 12.5, 5.0 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 12.5, 2.5 Hz, 1H), 3.89-3.88 (m, 1H), 2.56 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.08-2.04 (m, 12H) ppm.
[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-({[(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]옥시}메틸)-3-(프로프-2-인-1-일옥시)페녹시]옥산-2-일]메틸 아세테이트(49)
단계 4: DMF(5 mL) 중 화합물 48(0.15 g, 0.22 mmol)의 용액에 11-5(0.14 g, 0.26 mmol), HOBt(59 mg, 0.44 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(57 mg, 0.44 mmol)을 연속적으로 가하였다. 혼합물을 23℃에서 밤새 교반한 후 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물 49(0.14 g, 62% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1056.3 (M + H)+. 1H NMR (MeODd4, 400 MHz) δ 7.46 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.35-7.26 (m, 3H), 6.87-6.80 (m, 3H), 6.67 (dd, J = 8.0, 2.4 Hz, 1H), 6.26 (dt, J = 10.0, 2.4 Hz, 1H), 6.03 (br s, 1H), 5.42-5.34 (m, 2.5H), 5.26-5.03 (m, 5.5H), 4.88-4.64 (m, 4H), 4.46-4.43 (m, 1H), 4.34-4.30 (m, 1H), 4.21-4.18 (m, 1H), 4.12-4.08 (m, 1H), 3.03 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 2.71-2.62 (m, 1H), 2.41-2.38 (m, 1H), 2.28-2.15 (m, 2H), 2.06-2.04 (m, 12H), 1.90-1.39 (m, 12H), 1.20-0.89 (m, 8H) ppm.
[2-(프로프-2-인-1-일옥시)-4-{[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-트리하이드록시-6-(하이드록시메틸)옥산-2-일]옥시}페닐]메틸 N-(4-{2-[(1S,2S,4S,8R,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-4,9,13-트리메틸-16-옥소-6-프로필-7-옥사펜타사이클로[10.8. 002,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트(LP12)
단계 5: 메탄올(3 mL) 중 화합물 49(35 mg, 33 μmol)의 용액에 물(1 mL) 속에서 H2O 중 LiOH(14 mg, 0.33 mmol)의 다른 용액을 가하였다. 혼합물을 23℃에서 1.5시간 동안 교반하고 HOAc(20 mg)로 퀀칭시켰다. 혼합물을 진공 속에서 농축시키고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 링커-페이로드 LP12(26 mg, 88% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 888 (M + H)+. 1H NMR (MeODd4, 400 MHz) δ 7.46 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.35-7.30 (m, 3H), 6.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.87-6.83 (m, 2H), 6.74 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 6.27 (dt, J = 10.0, 2.0 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.25 (t, J = 4.8 Hz, 0.5H), 5.19 (d, J = 7.2 Hz, 0.5H), 5.13-5.03 (m, 3H), 4.94-4.91 (m, 1H), 4.82-4.75 (m, 3H), 4.71-4.67 (m, 1H), 4.46-4.43 (m, 1H), 3.91 (dd, J = 12.0, 2.0 Hz, 1H), 3.70 (dd, J = 12.0, 5.2 Hz, 1H), 3.48-3.36 (m, 4H), 2.99 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 2.71-2.62 (m, 1H), 2.40-2.37 (m, 1H), 2.26-2.12 (m, 2H), 2.07-2.00 (m, 1H), 1.88-1.61 (m, 5H), 1.56-1.35 (m, 6H), 1.20-0.92 (m, 8H) ppm.
실시예 52
본 실시예는 링커-페이로드 LP13의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 18을 참고한다.
2-[(1S,2S,4S,8S,9S,11S,12S,13R)-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 N-(2-{[({4-[(2S)-5-(카바모일아미노)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]펜탄아미도]페닐}메톡시)카보닐](메틸)아미노}에틸)-N-메틸카바메이트(LP13)
DMF(1 ml) 중 부데소니드-DME 카보네이트(20 mg, 0.037 mmol)의 용액에 MC-VC-PAB-PNP(22 mg, 0.03 mmol), DIPEA(12 mg, 0.09 mmol), 및 HOBt(6 mg, 0.05mmol)를 연속적으로 가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반한 후, 제조-HPLC를 수행하여 2개의 에피머: 에피머 1: 3.3 mg(수율 10%) 및 에피머 2: 4.1 mg(수율 12%)를 수득하였다.
에피머 1: ESI m/z: 1143.4 (M+1). 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.63-7.62 (m, 2H), 7.50-7.49 (m, 1H), 7.37-7.35 (m, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.29-6.27 (m, 1H), 6.03 (brs, 1H), 5.37-5.08 (m, 5H), 4.83-4.79 (m, 3H), 4.53-4.46 (m, 2H), 4.18-4.15 (m, 1H), 3.69-3.37 (m, 6H), 3.25-3.13 (m, 3H), 3.12-2.96 (m, 5H), 2.90-2.86 (m, 2H), 2.68-2.64 (m, 1H), 2.41-2.40 (m, 1H), 2.31-2.28 (m, 2H), 2.26-1.95 (m, 7H), 1.93-1.77 (m, 11H), 1.51 (s, 3H), 1.42-1.30 (m, 10H), 1.25-0.89 (m, 15H)
에피머 2: ESI m/z: 1143.4 (M+1). 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.62-7.34 (m, 5H), 6.81 (brs, 1H), 6.29-6.23 (m, 1H), 6.05-6.00 (m, 1H), 5.27-5.17 (m, 4H), 4.92-4.79 (m, 2H), 3.75-3.37 (m, 7H), 3.03-2.86 (m, 5H), 2.72-2.63 (m, 1H), 2.41-2.28 (m, 3H), 2.23-2.04 (m, 7H), 1.91-1.32 (m, 31H), 1.19-0.90 (m, 14H).
실시예 53
본 실시예는 링커-페이로드 LP14의 제조 방법을 입증한다. 다음의 실시예는 도 18을 참고한다.
N-[(1S)-1-{[(1S)-1-[(4-{2-[(1S,2S,4R,6R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-1-{2-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)페닐]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드(LP14)
화합물 34h-2(0.18 g, 2개의 단계에서 74% 수율)를 일반적인 과정 F에 따라 수득하였다. ESI m/z: 728 (M + H)+.
화합물 LP14(20 mg, 34h로부터 3개의 단계로 14% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI: 1189 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.81-9.67 (m, 1H), 8.43-8.13 (m, 2H), 8.03-7.84 (m, 1H), 7.61-7.47 (m, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.29-7.21 (m, 3H), 7.17 (s, 2H), 6.88-6.81 (m, 2H), 6.33-6.28 (dd, J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.71-5.56 (m, 1H), 5.51 (s, 1H), 5.12 (d, J = 18.5 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 18.5 Hz, 1H), 4.79-4.76 (m, 1H), 4.74 (t, J = 4.3 Hz, 2H), 4.38-4.33 (m, 1H), 4.25-4.17 (m, 2H), 3.63-3.55 (m, 2H), 3.52-3.44 (m, 14H), 3.42 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.21 (q, J = 5.7 Hz, 1H), 2.69-2.55 (m, 1H), 2.47-2.41 (m, 1H), 2.41-2.34 (m, 1H), 2.29-2.23 (m, 1H), 2.14-2.02 (m, 2H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.82 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 1.65-1.53 (m, 4H), 1.49 (s, 3H), 1.47-1.41 (m, 1H), 1.40-1.33 (m, 2H), 1.29 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 8.45 min (방법 A).
하기 표 7은 LP1-LP16의 특정의 물리적 특성을 요약한다.
[표 7]
실시예 54
본 실시예는 일반적으로 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 페이로드의 부위-특이적인 접합 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 19를 지칭한다.
하나의 예에서, 부위-특이적인 접합체를 미생물 트랜스글루타미나제(MTG EC 2.3.2.13, Zedira, 독일 다름슈타트 소재)(본원에서 "MTG-기반")를 통해 N297Q 또는 N297D 돌연변이된 항체의 2-단계 접합을 생산하였다. 제1 단계에서, 돌연변이된 항체를 MTG 기반 효소 반응을 통해 아지도-PEG3-아민으로 작용화하였다. 참고: 예컨대, 모든 목적을 위해 이의 전문이 참고로 본원에 포함된, "최적화된 트랜스글루타미나제 부위-특이적인 항체 접합체란 명칭의, 2017년 2월 24일자로 출원된 국제 PCT 특허원 제PCT/US17/19537호. 제2 단계에서, 알킨-작용화된 링커-페이로드를 아지도-작용화된 항체에 [2+3] 1,3-이극성 사이클로부가 반응(참고: 예컨대, [2+3] 폐환을 통해 유도된 아지도-작용화된 항체에 접합된 DIBAC-작용화된 링커-페이로드를 나타내는 도 19)을 통해 부착시켰다. 이러한 공정은 부위-특이적이고 화학양론적인 접합체를 약 50 내지 80%의 단리된 수율로 제공하였다.
실시예 55
본 실시예는 항체에 대한 알킨-링커-페이로드의 부위-특이적인 접합을 위한 특이적인 과정을 참고한다.
본 실시예는 도 29에 묘사된 화합물을 지칭한다.
본 실시예에서, 부위-특이적인 접합체를 2 단계로 생산하였다. 제1 단계는 Q-태그(Qtag에 대해 참고)를 갖는 항체에 대한 아지드-PEG3-아민(상기 참고)과 같은 소 분자의 미생물 트랜스글루타미나제(MTG)-기반 효소적 부착이다(이후 "MTG-기반" 접합). 제2 단계는 [2+3] 사이클로부가, 예를 들면, 아지드와 사이클로옥틴 사이의 1,3-이극성 사이클로부가를 통한 아지도-작용화된 항체에 대한 링커-페이로드의 부착을 사용하였다(aka 구리-유리된 클릭 화학). 참고: 이의 전체 내용이 모든 목적을 위해 이의 전문으로 본원에 참고로 포함된, Baskin, J. M.; Prescher, J. A.; Laughlin, S. T.; Agard, N. J.; Chang, P. V.; Miller, I. A.; Lo, A.; Codelli, J. A.; Bertozzi, C. R. PNAS 2007 , 104 (43), 16793-7. [2+3] 사이클로부가를 통해 아지도-작용화된 항체와 접합된 DIBAC 모이어티를 갖는 링커-페이로드의 예가 도 28에 나타나 있다. 이러한 공정은 부위-특이적이고 입체화학적인 접합체를 약 50 내지 80%의 단리된 수율로 제공하였다.
[2+3] 클릭 반응을 통한 ADC 접합.
단계 1: 아지도-작용화된 항체의 제조.
PBS(pH 6.5-8.0) 속에서 글리코실화되지 않은 사람 항체 IgG(IgG1, IgG4, 등) 또는 N297Q 돌연변이를 지닌 사람 IgG1 동형을 ≥ 200 몰 당량의 아지도-dPEG3-아민 (MW= 218.26 g/mol)과 혼합하였다. 수득되는 용액을 MTG(독일 다름슈타트의 Zedira로부터의 EC 2.3.2.13, 또는 Modernist Pantry [L# 210115A] - ACTIVA TI은 일본 Ajinomoto로부터의 말토덱스트린을 함유한다)(25 U/mL; mg의 항체당 5U MTG)와 혼합하여 0.5 내지 5 mg/mL의 항체의 최종 농도를 생성한 후, 용액을 37℃에서 4 내지 24 시간 동안 온화하게 진탕시키면서 항온처리하였다. 반응을 ESI-MS로 모니터링하였다. 반응이 완료되면, 과량의 아민 및 MTG를 SEC 또는 단백질 A 컬럼 크로마토그래피로 제거하여, 아지도-작용화된 항체를 생성하였다. 당해 생성물을 SDS-PAGE 및 ESI-MS로 특징화하였다. 아지도-dPEG3-아민을 항체의 2개의 부위에 가하여 2DAR 항체-PEG3-아지드 접합체에 대한 204 Da 증가를 생성하였다.
구체적인 실험에서, 7 mL의 칼륨을 함유하지 않는 PBS 완충액(pH 7.3) 중 N-말단 Q tag 항체(24 mg)를 > 200 몰 당량의 아지도-PEG3-아민(MW 218.26)과 함께 MTG(0.350 mL, 35 U, mTGase, Zedira, 독일 다름슈타트 소재)의 존재하에서 항온처리하였다. 반응물을 37℃에서 온화하게 혼합하면서 항온처리하였다. 과량의 아지도-PEG3-아민 및 mTGase를 크기 배제 크로마토그래피(SEC, Superdex 200 PG, GE Healthcare)로 제거하였다.
단계 2: 클릭 화학 반응을 사용하여 항체에 대한 약물의 부위-특이적인 접합체의 제조.
표 10에서 사람 IgG(IgG1, IgG4 등)와의 부위-특이적인 항체 약물 접합체를 아지도-작용화된 항체와 알킨 함유 링커-페이로드 사이의 [2+3] 클릭 반응에 의해 제조하였다. 상세한 접합 과정을 다음과 같다. 링커-페이로드(LP)와의 부위-특이적인 항체 접합체를 수성 매질(예컨대, PBS, 5% 글리세롤을 함유하는 PBS, HBS)중 mAb-PEG 3 -N 3 (1 내지 3 mg/mL)를 DMSO, DMF 또는 DMA와 같은 적합한 유기 용매 속에 용해된 ≥6 몰 당량의 LP(즉, 반응 혼합물은 5 내지 20%의 유기 용매, v/v를 함유한다)와 함께 24℃ 내지 37℃에서 6시간에 걸쳐 항온처리함으로써 제조하였다. 반응의 진행을 ESI-MS로 모니터링하고 mAb-PEG 3 -N 3 의 부재는 접합의 완료를 나타내었다. 과량의 LP 및 유기 용매를 SEC에 의해, PBS를 사용한 용출을 통해 또는 산성 완충제를 사용한 용출을 통한 단백질 A 컬럼 크로마토그래피를 통해 및 이어서 트리스(pH 8.0)를 사용한 중화를 통해 제거하였다.
구체적인 실시예에서, 0.800 mL의 PBSg(PBS, 5% 글리세롤, pH 7.4) 중 아지도-작용화된 항체(1 mg)를 6 몰 당량의 DIBAC-PEG4-D-Lys(COT-∝-CD)-VC-PABC-페이로드 (농도 DMSO 중 10 mg/mL)로 6 내지 12 시간 동안 실온에서 처리하고 과량의 링커 페이로드(LP)를 크기 배제 크로마토그래피(SEC, Superdex 200 HR, GE Healthcare)로 제거하였다.
최종 생성물을 한외 원심분리로 농축시키고 UV, SEC, SDS-PAGE 및 ESI-MS로 특징화하였다.
실시예 56
본 실시예는 아지도-작용화된 항체 약물 접합체의 제조 방법을 입증한다.
BupHTM(pH 7.6 내지 7.8) 중 사람 IgG1 동형을 지닌 글리코실화되지 않은 항체를 ≥200 몰 당량의 아지도-dPEG3-아민(MW. 218.26 g/mol)과 혼합하였다. 수득되는 용액을 트랜스글루타미나제(25 U/mL; mg의 항체당 5U MTG, Zedira, 독일 다름슈타트 소재)와 혼합하여 0.5 내지 3 mg/mL에서의 항체의 최종 농도를 생성하고, 이어서 용액을 37℃에서 4 내지 24 시간 동안 온화하게 진탕시키면서 항온처리하였다. 반응물을 SDS-PAGE 또는 ESI-MS로 모니터링하였다. 완료시, 과량의 아민 및 MTG를 크기 배제 크로마토그래피(참고: 도 21)로 제거하여 아지도-작용화된 항체를 생성하였다. 이러한 생성물을 SDS-PAGE(참고: 도 20) 및 ESI-MS(참고: 도 22)에서 분석하였다. 아지도-dPEG3-아민을 항체의 2개의 부위 - Q295 및 Q297-에 가하여 4DAR 글리코실화되지 않은 항체-PEG3-아지드 접합체의 804 Da 증가를 생성하였다. 접합 부위를 확인하고 EEQ링커YQ링커STYR에서 4DAR 아지도-작용화된 항체에 대해 트립신 분해된 중쇄의 펩타이드 서열 맵핑(mapping)을 통해 확인하였다.
실시예 57
본 실시예는 클릭 화학 반응을 사용하여 항체에 대한 약물의 부위-특이적인 접합체를 제조하는 방법을 입증한다.
하기 기술된 표 8에서 N297Q 돌연변이를 함유하는 사람 IgG1과의 부위-특이적인 글리코실화되지 않은 항체 약물 접합체를 아지도-작용화된 항체와 알킨 함유 링커-페이로드 사이의 [2+3] 클릭 반응에 의해 제조하였다. 표 8에 나타낸 바와 같이, 항 Her2-PEG3-N3을 화합물 LP1, LP2, LP3, LP4, LP5, LP6, LP7, LP8, LP9, LP10, 및 LP11에 접합시켰다. 표 8에 나타낸 바와 같이, 항 PRLR-PEG3-N3을 LP1 LP2, LP3, LP4, LP5, LP6, LP7, LP8, LP9, LP10, LP11, LP15, 및 LP16에 접합시켰다. 표 8에 나타낸 바와 같이, 항-IL2Rg-PEG3-N3을 LP4 및 LP7에 접합시켰다. 표 8에 나타낸 바와 같이, 항-Fel d 1-PEG3-N3을 LP4에 접합시켰다.
접합을 위해, 아지도-작용화된 글리코실화되지 않은 사람 IgG1 항체(mAb-PEG 3 -N 3 ) 및 링커-페이로드(LP) 접합체는 수성 매질(예컨대, PBS, 5% 글리세롤을 함유하는 PBS, HBS) 중 mAb-PEG 3 -N 3 (1 내지 3 mg/mL)를 DMSO, DMF 또는 DMA(10 내지 20%의 유기 용매를 함유하는 반응 혼합물, v/v)와 같은 접합한 유기 용매 속에 용해된 ≥6 몰 당량의 LP와 24℃ 내지 37℃에서 6시간에 걸쳐 항온처리함으로써 제조하였다. 반응의 진행을 ESI-MS로 모니터링하였다. 반응을 ESI-MS로 모니터링하고, mAb-PEG 3 -N 3 의 부재는 접합의 완료를 나타내었다. 과량의 LP 및 유기 용매를 PBS로 용출시키는 SEC에 의해 제거하였다. 정제된 접합체를 SEC, SDS-PAGE, 및 ESI-MS로 분석하였다. 상응하는 LP로부터의 비-독성 스테로이드 항체 접합체(ncADC)의 목록, 이들의 분자량 및 ESI-DAR 값을 표 8에 나타낸다. 표 8에서, Ab는 항체를 지칭하고, Ab-N3은 아지드 작용화된 항체를 지칭하고, ncADC는 비-세포독성 항체 약물 접합체를 지칭한다.
[표 8]
실시예 58
본 실시예는 티올-말레이미드 반응을 사용하여 항체에 대한 약물의 비-부위-특이적인 접합을 제조하는 방법을 입증한다.
항체 시스테인을 통한 접합을 Mol Pharm. 2015 Jun 1;12(6):1863-71에 기술된 방법과 유사하게 기술된 방법을 사용하여 2개 단계로 수행하였다.
모노클로날 항체(mAb, 50 mM HEPES 중 10 mg/ml, 150 mM NaCl)를 pH 7.5에서 1 mM 디티오트레이톨(mg의 항체당 0.006 mg) 또는 TCEP(항체에 대해 2.5 몰 당량)로 37℃에서 30분 동안 환원시켰다. 겔 여과(G-25, pH 4.5 아세트산나트륨), DMSO(10 mg/mL) 중 화합물 LP13를 환원된 항체에 가하고, 혼합물을 1 M HEPES(pH 7.4)를 사용하여 pH 7.0로 조절하였다. 반응물을 3 내지 14시간 동안 반응하도록 하였다. 수득되는 접합체를 SEC로 정제하였다. DAR(UV) 값을 ncADC의 측정된 흡광도 및 항체 및 LP13의 흡광 계수(extinction coefficient)를 사용하여 측정하였다.
실시예 59
본 실시예는 항체 및 비-세포독성 항체 약물 접합체(ncADC)를 특성화하는 방법을 입증한다.
항체 및 ncADC는 SDS-PAGE, SEC, 및 MS(ESI)를 사용하여 특성화하였다. 항-PRLR 항체로부터 이의 아지도-작용화된 항체(항-PRLR-PEG3-N3)를 통해 생성시킨 표 8에서의 항-PRLR-LP4 접합체를 비-환원 및 환원 조건 하에서 수행된 SDS-PAGE(도 20), SEC(도 21) 및 ESI-MS(도 22)로 특성화하고, ncADC 형성의 완료를 입증하였다.
SDS-PAGE를 사용하여 ADC의 통합성 및 순도를 분석하였다.
하나의 방법에서, 비-환원 및 환원된 샘플(2 내지 4 μg)과 함께 BenchMark 예비-염색된 단백질 래더(Ladder)(Invitrogen, 제품 번호 10748-010; L# 1671922.)을 포함한 SDS-PAGE 작동 조건을 레인(lane)당 (1.0 mm x 10개의 웰) Novex 4 내지 20% 트리스-글리신 겔로 로딩하고 180 V, 300 mA에서 80분 동안 작동시켰다. 분석 샘플을 Novex 트리스-글리신 SDS 완충제(2X)(Invitrogen, 제품 번호 LC2676)를 사용하여 제조하고 환원 샘플을 10% 2-머캅토에탄올을 함유하는 SDS 샘플 완충제(2X)로 제조하였다.
비-환원 및 환원 조건 하에서 수행된 SDS-PAGE에서 항체 및 ncADC의 분자량을 도 20에 나타낸다. 질량 이동(mass shift)은 질량 변화의 비교적 작은 퍼센트로 인하여 비-환원 조건 하에서 명백하지 않았다. 그러나, 중쇄의 질량은 네이키드(naked) 항체로부터 아지도-작용화된 항체, 및 추가로 ncADC 접합체로 증가하였다. 검출가능한 가교결합된 물질은 없었다.
도 20에 나타낸 바와 같이, SDS-PAGE 레인은 표 9에서의 레인 표지를 기반으로 다음의 종을 포함하였다.
[표 9]
ADC를 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 순도에 대해 분석하였다.
항체 약물 접합체의 순도를 측정하기 위하여, 크기 배제 크로마토그래피를 수행하였다. 분석 SEC 실험을 Waters 600 장치를 사용하여 Superdex 200(1.0 x30cm) HR 컬럼 위에서, 0.80 mL/min의 유동 속도에서 PBS pH 7.4를 사용하여 작동시키고, λ280 nm에서 Waters 2998 PDA를 사용하여 모니터링하였다. 분석 샘플은 200 μL의 PBS(pH 7.4)와 30 내지 100 μL의 시험 샘플로 구성되었다. 제조 SEC 정제를 GE Healthcare로부터의 AKTA 장치를 사용하여, Superdex 200 PG(2.6x60 cm) 컬럼 위에서, PBSg로 pH 7.4에서 용출시키는 2 mL/min의 유동 속도에서 수행하고, λ280nm에서 모니터링하였다. 도 21에서의 SEC 결과는 단량체성 mAb 및 이의 접합체에 대한 대표적인 보유 시간을 나타내었으며 검출가능한 응집 또는 분해가 없었음을 나타내었다.
항체 및 ADC를 LC-ESI-MS에 의해 완전한 질량 분석으로 분석하였다.
LC-ESI-MS에 의한 ncADC 샘플의 완전한 질량의 측정을 수행하여 약물-페이로드 분포 프로파일을 측정하고 완전한 ADC 형태의 평균 DAR을 계산하였다. 각각의 시험 샘플(20 내지 50 ng, 5uL)을 Acquity UPLC 단백질 BEH C4 컬럼(10K psi, 300 , 1.7 μm, 75μm Х 100 mm; 제품 번호 186003810) 상에 로딩하였다. 3분 탈염시킨 후, 단백질을 용출시키고 질량 스펙트럼을 Waters Synapt G2-Si 질량분광기(Waters)에 의해 획득하였다.
도 22에 나타낸 바와 같이, 디콘볼루션된(deconvoluted) 질량 스펙트럼은 분자량이 144579.0 Da인 글리코실화되지 않은 항-PRLR 항체에 대한 우세한 피크, 및 분자량이 145373.0 Da인 이의 아지도 작용화된 항-PRLR 항체에 대한 우세한 피크를 나타내었으며, 이의 글리코실화되지 않은 모 항체(각각의 글리코실화되지 않은 항체에 대한 4 아미노-PEG3-아지드 접합체에 상응)와 비교하여 794.0 Da 증가를 나타낸다. 또한, 항-PRLR-LP4 접합체에 대한 우세한 피크는 149836.0 Da의 분자량을 가졌으며, 글리코실화되지 않은 모 항체(각각의 글리코실화되지 않은 항체에 대해 4 LP4 접합체에 상응)와 비교하여 4463 Da 증가를 나타낸다. 표 8에 요약된 바와 같이, 이러한 서류에서 대부분의 부위-특이적인 ADC는 4DAR을 가진다.
비-부위 특이적인 항체 약물 접합체의 경우, DAR 값을 ESI Q-TOF 질량 분석을 기반으로 측정하였다. ESI Q-TOF 질량 스펙트럼을 최대 엔트로피 알고리즘(Maximum Entropy algorithm)(MassLynx)을 사용하여 제로 전하 질량 스펙트럼으로 디콘볼루션처리하였다. 수득되는 질량 스펙트럼은 항체에 접합된 각각의 약물(들)의 분포를 입증하였다. 피크의 부위 퍼센트는 특수한 약물-로딩된 항체 종의 상대적인 분포를 나타낸다. 평균 DAR을 퍼센트 피크 부위 정보 및 항체에서 약물 부하 수를 사용하여 계산하였다.
실시예 60
본 실시예는 LanthaScreen TR-FRET GR 경쟁적 결합 검정을 사용하여, 본원에 제시된 페이로드 스테로이드가 글루코코르티코이드 수용체(GR)에 결합함을 입증한다.
글루코코르티코이드 수용체(GR)에 결합하는 신규한 스테로이드의 능력을 평가하기 위하여, 세포 유리된 결합 검정을 LanthaScreen TR-FRET GR 경쟁적 결합 검정 키트(Life Technologies, 제품 번호 A15901)를 사용하여 수행하였다. 검정은 제조업자의 설명서에 따라 수행하였다. 부데소니드는 시판되는 GR 스테로이드이며 결합 검정 및 문서에서 후에 기술된 다른 세포 기반 검정에서 참고 대조군으로서 사용하였다. 요약하면, 부데소니드 및 하기 나타낸 유도체 화합물의 3배의 일련의 희석물을 100 nM(최종의 100X)에서 출발하여 100% DMSO 속에서 제조하였다. 일련의 희석물을 핵 수용체 완충제 F 속에서 5mM DTT 및 0.1 mM 안정화 펩타이드를 사용하여 50배로 추가로 희석시키고, 384-웰 검정 플레이트로 이전시켰다. 다음에, Fluormone GS1 Green, GR-LBD(GST) 및 Tb 항-GST 항체를 384-웰 검정 플레이트에 일련으로 가하였다. 이후에, 플레이트를 실온에서 2.5시간 동안 광으로부터 보호하면서 항온처리하였다. 플레이트를 엔비젼 다중표지 플레이트 판독기(Envision Multilabel Plate Reader)(PerkinElmer) 위에서 340 nm로 제시된 여기 및 520 nm 및 486 nm에서 제시된 방출 필터를 사용하여 분석하였다. FRET 비는 520 nm/486 nm로서 계산하였다. IC50 값을 12-점 반응 곡선(GraphPad Prism)에 걸쳐 4-매개변수 로지스틱 방정식(logistic equation)을 사용하여 측정하였다.
표 10에 나타낸 바와 같이, 부데소니드는 GR 검정에서 Fluormone GS1 Green의 결합을 10 내지 100 nM 사이의 IC50 결합으로 경쟁하였다. 부데소니드의 N-유사체는 10 nM 미만 내지 100nM 이상의 범위의 IC50 값으로 결합과 유사하게 경쟁하였다. 본원에서 시험한 신규한 스테로이드는 당해 검정에서 비교가능하거나 더 우수(보다 낮은 IC50 값)하고 부데소니드와 비교하여 GR 리간드에 대해 유사한 대체를 입증하였다. 일반적으로 22R-이성체는 22S-이성체보다 더 강력하거나 22S-이성체와 적어도 동일하다.
[표 10]
완전 활성화: 부데소니드에 의해 유도된 >75%의 배 활성화(fold activation). 부분 활성화: 부데소니드에 유도된 (20%, 75%)의 배 활성화. 활성화 없음: 부데소니드에 의해 유도된 <20%의 배 활성화. 세포 유리 검정을 사용하여 이들의 투과성에 상관없이 재조합 GR LBD에 대한 화합물의 직접적인 결합을 평가한다. 세포 기반 검정을 사용하여 화합물이 혈장 막을 통과한 후 세포내 GR 매개된 전사를 활성화시키는 방법을 측정함으로써 화합물의 투과성은 활성에 대한 전제조건이다.
실시예 61
본 실시예는 PRLR-ncADC가 HEK293/PRLR 세포로 내재화됨을 입증한다.
항-PRLR 항체 및 동형 대조군 항체의 내재화를 완전한 길이의 사람 PRLR(K2E 돌연변이를 지닌 수탁 번호 NP_000940.1의 아미노산 1 내지 622; HEK293/PRLR)을 발현하도록 가공된 HEK293 세포내에서 평가하였다. HEK293 모 세포를 또한 음성 대조군으로서 평가하였다. 세포를 완전 배지 속에서 20,000개의 세포/웰에서 플레이팅(plating)하고 37℃에서 밤새 항온처리하였다. 다음 날, 웰을 PBS로 세척하고, 빙상에 두었다. 0.1 내지 100nM로부터의 항체 일련 희석물을 적절한 웰에 PBS 중 2% FBS 속에 가하고 빙상에서 30분 동안 항온처리하였다. 세포를 PBS로 2회 세척한 후, 빙상에서 30분 동안 Alexa 488 접합된 Fab 단편 염소 항-hIgG(Jackson Immunoresearch, 제품 번호 109-547-003)와 함께 항온처리하였다. 세포를 PBS로 2회 세척한 후 PBS 중 3.7% 포름알데하이드(4℃ 대조군 조건) 속에 고정시키거나 37℃에서 3시간 동안 항온처리하여 내재화되도록 하였다. 3시간 항온처리 후, 세포를 PBS 중 3.7% 포름알데하이드 속에 15분 동안 고정시키고, PBS로 세척하고, Molecular Devices ImagExpress MicroXL로 영상화하였다.
항-PRLR-ncADC 및 모 PRLR 항체를 HEK293/PRLR 세포내로 내재화하였지만, 동형 대조군 ncADC 및 동형 대조군 모 항체는 이들이 시험한 세포 주에서 발견된 단백질에 결합하지 않으므로 내재화되지 않았다. 내재화는 시험한 임의의 샘플의 경우 HEK293 모 세포에서 관찰되지 않았다.
실시예 62
본원에 기술된 생검(bioassay)을 사용하여 유리 스테로이드 및 항-PRLR-ncADC의 효능을 평가하였다. 하나의 예에서, 생검정은 부위-특이적인 항-PRLR-GC 스테로이드 ADC가 세포내로 내재화되어, pBIND-GR에 결합한 후 루시퍼라제 리포터 활성화된 후, 스테로이드 활성을 평가하였다. 이러한 검정을 위해, 293 세포주를 가공하여 사람 완전한 길이의 PRLR을 발현시켰다. 이후에, 이러한 안정한 세포주를 추가로 효모 Gal4 DNA 결합 도메인(pBind-GR, Promega 제품 번호 E1581)에 융합된 GR 리간드 결합 도메인, 및 루시퍼라제 유전자 발현을 구동하는 Gal4 상부 활성인자 서열(9xGal4UAS-Luc2P)로 이루어진 키메라 수용체로 추가로 형질감염시켰다. 이러한 검정 양식은 높은 민감성 및 다른 핵 수용체와의 낮은 교차-반응성을 제공한다. 전체로서 2개의 벡터를 함께 사용하여 GR 리간드 결합 및 트랜스활성화를 모니터링하므로, 수득되는 안정한 세포주는 본원에서 단순화하기 위해 293/PRLR/GRE-Luc로 지칭한다(참고: Improved Dual-Luciferase Reporter Assays for Nuclear Receptors, Current Chem Genomics, 2010; 4: 43-49; Aileen Paguio, Pete Stecha, Keith V Wood, and Frank Fan).
제2의 예에서, 생검정은 유리 스테로이드의 효능 및 임의의 비-특이적인 활성 둘 다를 항-PRLR-ncADC로 검정하였다. 이러한 검정을 위해, 293 세포주를 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro] 벡터(제품 번호 E1360, Promega)로 형질감염시켰다. 수득되는 세포주는 본원에서 293/MMTV-Luc로 지칭한다.
실시예 63
글루코코르티코이드 수용체(GR) 공-활성인자 루시퍼라제 세포 기반 검정을 사용하여 부데소니드 및 본원에 기술된 스테로이드에 의한 GR 활성화를 시간의 함수로서 분석하였다.
293/PRLR/GRE-Luc 세포내 스테로이드의 활성을 72시간의 항온처리에서 연구하였다. 이러한 검정을 위해, 20,000개의 세포를 96-웰 플레이트 속에서 10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 DMEM을 함유하는 배지(완전 배지) 속에 씨딩(seeding)하고 밤새 37℃에서 5% CO2 속에서 성장시켰다. 유리 약물 또는 ncADC 용량 반응 곡선을 위해, 100 nM 내지 5.1 pM 범위의 일련 희석된 시약을 세포에 가하고 72 시간 동안 37℃에서 항온처리하였다. 루시퍼라제 활성을 One-GloTM 시약(Promega, Cat#E6130)을 가함으로써 측정하고 상대적인 광 단위(RLU)를 Victor 광도계(Perkin Elmer)로 측정하였다. EC50 값을 GraphPad Prism을 사용하여 10-점 반응 곡선에 걸쳐 4개의 매개변수 로지스틱 방정식으로부터 측정하였다. 스테로이드의 전달은 293/PRLR/GRE-Luc 세포내에서 Luc 리포터의 활성화를 야기할 것이다.
표 11에 나타낸 바와 같이, 72 시간 시점에서, 부데소니드는 293/PRLR/GRE-Luc 세포를 10 내지 100nM 사이의 IC50 값으로 활성화시켰다. 부데소니드의 N-유사체는 293/PRLR/GRE-Luc 세포를 유사한 배 활성화 및 10nM 미만 내지 100nM 이상의 범위의 IC50 값으로 활성화시켰다.
실시예 64
표적화된 세포주 내에서 ADC에 의한 선택적인 GR 활성화
스테로이드 및 스테로이드 ncADC의 활성을, 293/PRLR/GRE-Luc 세포주 뿐만 아니라 실시예 61에 기술된 바와 같이 PRLR을 발현하지 않는, 293/MMTV-Luc 세포, 및 실시예 62에 기술된 루시퍼라제 리포터를 발현하지 않는, 293/PRLR 세포내에서 내에서 내재화 후, 100 nM 내지 5.1 pM의 농도에서 실시예 63에 요약된 검정 과정을 사용하여 72 시간의 항온처리에서 연구하였다.
PRLR-LP4 접합체(표 8에서) 및 이의 동형 대조군 접합체뿐만 아니라 유리된 페이로드 및 접합되지 않은 항체를 2개 유형의 세포주내에서 연구하였다. PRLR-LP4 접합체(표 8에서 항 PRLR-LP4)는 293/PRLR/GRE-Luc 세포주의 선택적 활성화(도 23a), 및 PRLR을 발현하지 않는 293/MMTV-Luc 세포내에서 GR 활성화 없음(도 23b)을 입증하였다.
도 23a에 나타낸 바와 같이, 293/PRLR/GRE-Luc 세포에서, LP4(표 8에서 항 PRLR-LP4)로 부위-특이적으로 접합된 항-PRLR 항체는 완전한 GRE-Luc 활성화를 < 10 nM의 EC50 값으로 유도하였다. LP4와 접합된 동형 대조군 항체(표 8에서 항 Her2-LP4)는 유의적인 GRE-Luc 활성화를 유도하지 않았다. 접합되지 않은 동형 대조군 항체는 유의적인 GRE-Luc 활성화를 유도하지 않았다. 표 1에서 유리된 페이로드 11-5(LP4의 페이로드)는 완전한 GRE-Luc 활성화를 < 10 nM의 EC50로 유도하였다. 참고 대조군, 부데소니드는 완전한 GRE-Luc 활성화를 EC50 <10 nM로 유도하였다. 도 23b에 나타낸 바와 같이, 293/MMTV-Luc 세포에서, 표 1에서의 유리 페이로드 11-5(LP4의 페이로드) 만이 및 참고 대조군, 부데소니드가 GRE-Luc 활성화를 유도하였고: 표 1에서 11-5(LP4의 페이로드)는 완전한 GRE-Luc 활성화를 10 내지 100 nM의 EC50 값으로, 및 부데소니드는 완전한 GRE-Luc 활성화를 10 내지 100 nM 사이의 EC50 값으로 유도하였다.
본원의 실시예는 표 8에서의 항 PRLR-LP4가 표적 PRLR 및 스테로이드 유도된 GRE 루시퍼라제 리포터 둘 다를 발현하는 293/PRLR/GRE-Luc 세포를 특이적으로 활성화시켰지만 스테로이드 반응성 293-MMTV-Luc 세포주 또는 표적 발현 293-PRLR 세포주에서는 효과가 없음을 입증한다.
실시예 65
ncADC의 GR 활성화에 대한 링커 및 페리오드 기여를 본 실시예에서 시험하였다.
293/PRLR/GRE-Luc 세포주내에서 내재화 후 유리된 스테로이드 및 이들의 상응하는 ncADC의 활성을 실시예 63에 요약된 검정 과정을 사용하여 72 시간의 항온처리에서 100 nM 내지 5.1 pM의 농도에서 연구하였다.
표 11 및 또한 도 24에 나타낸 바와 같이, 293/PRLR/GRE-Luc 세포에서, LP4와 부위-특이적으로 접합된 항-PRLR 항체(표 8에서 항 PRLR-LP4)는 완전한 GRE-Luc 활성화를 EC50 < 10 nM으로 72 시간째에 유도하였다. LP4와 접합된 동형 대조군 항체(표 8에서 항 Her2-LP4)는 유의적인 GRE-Luc 활성화를 유도하지 않았다. 표 1에서 유리된 페이로드, 11-5(LP4의 페이로드)는 완전한 GRE-Luc 활성화를 EC50 <10 nM로 유도하였다.
LP2와 부위-특이적으로 접합된 항-PRLR 항체(표 8에서 항 PRLR-LP2)는 완전한 GRE-Luc 활성화를 EC50 <10 nM로 유도하였다. LP2와 접합된 동형 대조군 항체(표 8에서 항 Her2-LP2)는 유의적인 GRE-Luc 활성화를 유도하지 않았다. 표 1에서 유리된 페이로드 16-5(LP2의 페이로드)는 완전한 GRE-Luc 활성화를 EC50 <10 nM로 유도하였다. 최종적으로, LP1와 부위-특이적으로 접합된 항-PRLR 항체(표 8에서 항 PRLR-LP1)는 완전한 GRE-Luc 활성화를 10 내지 100 nM의 EC50으로 유도하였다. LP1로 접합된 동형 대조군 항체(표 8에서 항 Her2-LP1)는 유의적인 GRE-Luc 활성화를 유도하지 않았다. 표 1에서 유리된 페이로드 7-1 R (LP1의 페이로드)는 완전한 GRE-Luc 활성화를 10 내지 100 nM 사이의 EC50로 유도하였다.
본 실시예는 동일한 항체 및 링커를 사용하여, 표 1에서 페이로드 11-5(LP4의 페이로드)가 표 1에서의 7-1 R (LP1의 페이로드)보다 더 큰 표 1에서의 페이로드 16-5(LP2의 페이로드)보다 더 큼을 입증한다. 표 8에서 항 PRLR-LP4는 표 8에서의 항 PRLR-LP1보다 더 높은 효능을 가진, 표 8에서 항 PRLR-LP2보다 더 높은 효능을 가졌다.
[표 11]
실시예 66
HEK293/MMTV-luc/IL2Rγ/IL7R 세포를 사용한 IL2Rγ-ncADC 생검정.
IL2Rγ 및 CD132로서 또한 공지된, 일반적인 사이토킨 수용체 γ-쇄는 인터루킨-2 (IL-2), IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, 및 IL-21에 대한 신호전달 경로에 대해 일반적인 제I형 사이토킨 수용체이며 면역계의 형성 및 조절에 있어서 중요한 역활을 한다(Rochman et al. 2009). 따라서, IL2Rγ는 주로 면역 세포내에서 발현되므로 스테로이드와 같은 면역억제성 약물을 비-세포독성 항체-약물 접합체(ncADC)를 통해 전달하기 위한 표적으로서 유용할 수 있으며 스테로이드의 전신 투여와 관련된 오프-표적 부작용을 피하면서 면역 세포 활성화를 억제한다.
본원에 기술된 세포-기반 검정을 사용하여 글루코코르티코이드 수용체(GR)의 전사 활성화를 GR 활성화를 연구하는데 사용되었던 쥐 유방 종양 바이러스 긴 말단 반복체(murine mammary tumor virus long terminal repeat: MMTV LTR) 영역을 지닌 ncADC에 의해 검출하였다(Deroo et al. 2001). HEK293 세포주를 우선 생성시켜 본원에서 HEK293/MMTV-luc로서 지칭된, 루시퍼라제 리포터 pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro](Promega, # E136A)을 안정하게 발현시키고, 10% FBS, NEAA, 페니실린/스트렙토마이신/L-글루타민, 및 100μg/mL 하이그로마이신을 함유하는 DMEM(완전 배지) 속에 유지시켰다. 모 HEK293/MMTV-luc 안정성 세포주를 이후에 완전한 길이의 사람 IL2Rγ를 암호화하는 플라스미드(수탁 번호 NP_000197.1의 1 내지 369번 아미노산을 발현)로 형질감염시키고 완전한 길이의 IL7Rα를 암호화하는 플라스미드(수탁 번호 NP_002176.2의 1 내지 459번 아미노산 발현)로 형질유도시키고 IL2Rγ 및 IL7Rα의 고 발현에 대해 유동 세포분석으로 분류하였다. 본원에서 HEK293/MMTV-luc/IL-2Rγ/IL7R로서 지칭된 수득되는 세포주를 1μg/mL 푸로마이신, 및 500μg/mL G418 설페이트로 보충된 완전 배지 속에서 유지시켰다.
생검정을 위해, HEK293/MMTV-luc 또는 HEK293/MMTV-luc/IL2Rγ/IL7R 세포를 96-웰 검정 플레이트 위에 10,000개의 세포/웰에서 완전 배지 속에 씨딩하고 37℃에서 5% CO2 속에서 밤새 항온처리하였다. 다음 날 아침에, GR 활성화를 시험하기 위해, 부데소니드, 표 1에서의 화합물 11-5(LP4 페이로드) 및 표 1에서의 화합물 16-5(LP2 페이로드), 항-IL2Rg-LP4 접합체(표 8에서), 대조군 항체(표 8에서 동형 대조군) 및 네이키드 항체를 200nM 내지 1μM로부터 0.002 내지 0.01nM로 1:3에서 일련 희석시키고, 세포에 가하였다. 농도를 ncADC의 경우 약물-대-항체 비에 따라서 및 당해 분야의 기술자에게 공지된 다른 기술에 따라서 조절하였다. 임의의 시험 물품없이 하나의 웰을 또한 대조군으로서 포함시켰다.
루시퍼라제 활성을 37℃에서 5% CO2에서 Victor X 장치(Perkin Elmer) 속에서 6, 24, 48, 및 72-시간 항온처리 후 측정하였다. 결과는 비선형 회귀(4-매개변수 로지스틱)를 사용하여 Prism 6 소프트웨어(GraphPad)로 분석하여 EC50 값을 수득하였다. 배 활성화를 임의의 시험 물품의 첨가없이 관찰된 루시퍼라제 활성에 대해 각각의 샘플의 루시퍼라제 활성의 비를 측정함으로써 계산하였다.
표 12에 나타낸 바와 같이, 6, 24, 및 48 시간의 항온처리 후, 부데소니드는완전한 활성화로 최대 GR 활성화를 입증하였다; 표 1에서 16-5(LP2 페이로드) 및 표 1에서 11-5(LP4 페이로드)는 부분 활성화를 나타내었다. 보다 긴 72시간의 항온처리시, 표 1에서 16-5(LP2 페이로드) 및 표 1에서 11-5(LP4 페이로드)는 완전한 활성화로 부데소니드에 대한 GR 활성화의 유사한 수준을 나타내었다. 이러한 결과는 표 1에서 부데소니드, 16-5(LP2 페이로드), 및 11-5(LP4 페이로드)가 GR을 10 내지 100 nM의 EC50s로 활성화시킴을 입증한다.
[표 12]
부데소니드, 링커-페이로드 LP4(페이로드 11-5) 및 링커-페이로드 LP7(페이로드 R -11-5), 항-IL2Rγ, 항-IL2Rγ mAbs-ncADC와 LP4 및 LP7(항-IL2Rγ-LP4 및 항-IL2Rγ-LP7로 지칭됨) 뿐만 아니라, 대조군 mAb-LP7 및 접합되지 않은 항-IL2Rγ mAb를 HEK293/MMTV-Luc/IL2Rγ/IL7R 세포에 가하고 24 시간 동안 (A), 48 시간 동안 (B), 72 시간 동안(C) 또는 HEK293/MMTV-Luc 세포를 72 시간 동안 (D) 도 25 및 표 13에서 200nM에서의 최대 농도(RLU, 상대 광 단위)로 항온처리하였다.
표 13 및 도 25에 나타낸 바와 같이, 24시간의 항온처리 후, 부데소니드는 HEK293/MMTV-Luc/IL2Rγ/IL7R 세포에서 최고의 최대 배 활성화를 나타내었으며, 11-5 및 R-11-5는 부데소니드와 비교하여 비교적 더 낮은 수준의 활성화를 나타내었다(도 25a). 48 및 72 시간의 보다 더 긴 항온처리를 사용하면, 11-5 및 R -11-5는 부데소니드에 대해 유사한 수준의 활성화를 나타내었다(도 25b 및 도 25c).
항-IL2Rγ-LP4 및 항-IL2Rγ-LP7은 24시간의 항온처리 후 HEK293/MMTV-Luc/IL2Rγ/IL7R 세포내에서 활성화를 거의 내지 전혀 나타내지 않았지만(도 25a), 48시간 및 72시간의 보다 긴 항온처리를 사용하여 더 높은 수준의 활성화를 나타내었다(도 25b 및 25c). 항-IL2Rγ-ncADC, 항-IL2Rγ-LP4 및 항-IL2Rγ-LP7은 HEK293/MMTV-Luc 세포내에서 활성화를 나타내지 않았으며(도 25d), 이는 스테로이드의 ncADC 활성이 세포 표면에서 IL2Rγ 항원에 대한 결합 및 후속적인 내재화에 의존함을 나타낸다. 대조적으로, 접합되지 않은 항-IL2Rγ 항체, 접합되지 않은 및 접합된 동형 대조군 항체는 임의의 조건에서 임의의 유의적인 활성화를 나타내지 않았다. 부데소니드, 11-5 및 R-11-5는 72 시간의 항온처리에서 HEK293/MMTV-Luc에 있어서 활성화를 나타내었으며, 이는 유리 약물에 의한 GR 활성화를 나타낸다(도 25d).
[표 13]
실시예 67
본 실시예는 사이클로덱스트린 링커의 존재 및 부재하에서 세포독성 ADC의 생활성을 나타낸다(도 30).
CD 함유 세포독성 페이로드의 존재 및 부재하에서 ADC의 비교능을 평가하기 위하여, SKBR3 세포를 사용한 세포독성 검정을 수행하였다. SKBR3 세포를 일반적으로 사용하여 항-Her2 ADC 활성을 평가하였다. 항-PRLR ADC는 SKBR3 세포독성 검정에서 대조군 mAb ADC로 사용하였다. 검정을 위해, 항-PRLR ADC의 시험관내 세포독성을 CellTiter-Glo 검정 키트(Promega, 제품 번호 G7573)를 사용하여 평가하였으며 여기서 존재하는 ATP의 양을 사용하여 배양물 속의 살아있는 세포의 수를 측정하였다. 검정을 위해, SKBR3 세포를 6000개의 세포/웰에서 Nunclon white 96 웰 플레이트내 완전 성장 배지 속에서 씨딩하고 밤새 37℃에서 5% CO2 속에서 성장시켰다. 세포 생존능 곡선을 위해, 1:4의 일련 희석된 ADC 또는 유리된 페이로드를 세포에 비처리 대조군을 포함하는 100 nM에서의 출발하는 농도에서 가한 후 5일 동안 항온처리하였다. 5일 항온처리 후, 세포를 실온에서 100 μL의 CellTiter-Glo 시약과 함께 5분 동안 항온처리하였다. 상대적인 발광 단위(RLU)를 Victor 플레이트 판독기(PerkinElmer)에서 측정하였다. IC50 값을 10-점 반응 곡선(GraphPad Prism)에 걸쳐 4개-매개변수 로지스틱 방정식으로부터 측정하였다. 모든 곡선 및 EC50 값을 페이로드 당량에 대해 교정하였다. 모든 IC50은 nM 농도로 나타내고 사멸된 세포의 퍼센트(사멸%)는 시험한 최대 농도에 대해 기록한다.
사이클로덱스트린 링커의 존재 및 부재하에서 스테로이드 ADC의 생활성을 도 30에 나타낸다.
스테로이드 페이로드를 함유하는 CD의 존재 및 부재하에서 ADC의 비교능을 시험하기 위하여, 293/PRLR/GRE-Luc 세포내에서 이들의 활성을 72시간의 항온처리에서 연구하였다. 이러한 검정을 위해, 20,000개의 세포를 96-웰 플레이트 속에서 10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신으로 보충된 DMEM을 함유하는 배지(완전 배지) 속에 씨딩하고 37℃에서 5% CO2 속에서 밤새 성장시켰다. 유리 약물 또는 ADC 용량 반응 곡선을 위해, 100 nM 내지 5.1 pM 범위의 일련 희석된 시약을 세포에 가하고 72 시간 동안 37℃에서 항온처리하였다. 루시퍼라제 활성을 One-GloTM 시약(Promega, 제품 번호 E6130)을 가하여 측정하고 상대적인 광 단위(RLU)를 Victor 광도계(Perkin Elmer)에서 측정하였다. EC50 값을 4-매개변수 로지스틱 방정식으로부터 10-점 반응 곡선에 걸쳐 GraphPad Prism을 사용하여 측정하였다. 스테로이드의 전달은 293/PRLR/GRE-Luc 세포내에서 Luc 리포터의 활성화를 야기할 것이다. 이러한 검정에서의 완전한 활성화는 유리된 페이로드로 측정한 최대 활성화의 90 내지 100%로 정의된다. 이러한 검정에서 부분 활성화는 유리 페이로드로 측정된 최대 활성화의 10% 내지 90%의 활성화로 정의된다. 이러한 검정에서 최소 활성화는 유리 페이로드로 측정된 최대 활성화의 10% 미만으로 정의된다.
표 13 및 도 30에 나타낸바와 같이, CD를 함유하는 항-PRLR Ab ADC(항-PRLR Ab-Ex46)는 293/PRLR/GRE-Luc 세포내에서 GRE-Luc 리포터를 활성화하는데 있어서 CD를 함유하지 않는 항-PRLR Ab ADC(항-PRLR Ab-Ex44)와 유사한 효능 및 잠재능을 가진다. 이러한 검정에서, 이들이 CD를 함유하거나 함유하지 않는 것과 상관없이, 동형 대조군 ADC 뿐만 아니라 접합되지 않은 항체는 이러한 검정에서 임의의 유의적인 효과를 입증하지 않았다.
[표 13]
[표 14]
[표 15]
[표 16]
실시예 68
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
플루오시놀론 아세토니드(1a), 덱사메타손(1c), 플루메타손(1d), 트리암시놀론(1e), 및 메틸프레드니솔론(1f), 및 트리암시놀론 아세토니드(1g)를 포함하는 시판되는 스테로이드를 출발 물질로서 사용하였다. 화합물 1b는 1a로부터 과염소산의 존재하에서 부티르알데하이드와의 케탈-교환에 의해 수득하고, 이의 2개의 키랄 이성체를 키랄 SFC 분리로부터 수득하였다. 동일한 시도를 취하여, 화합물 1h를 1g로부터 수득하였다. 화합물 1b-f 및 1h를 상응하는 메실레이트 유도체(2b-f, 2h)로 전환시킨 후, 메실레이트 그룹을 아지드 모이어티로 대체하여 화합물 3b-f 및 3h을 형성시키고 이를 추가로 아민(4b-f, 4h)으로 환원시켰다. 화합물 2b 중 메실레이트 모이어티를 또한 아닐린으로 대체하여 5-Iz를 수득하고 알킬아민으로 대체하여 5-II을 제공하고 페놀로 대체하여 6-I 내지 6-III을 수득하였다. 화합물 6-VI을 부데소니드의 메실레이트를 4-아미노-페놀로 대체하여 수득하고, 6-VII는 2f 내 메실레이트를 4-아미노-페놀로 대체하여 수득하였다.
실시예 69
화합물 1b, R-1b, S-1b, 및 1h의 합성
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온(1b)
헵탄(90 mL) 중 플루오시놀론 아세토니트(1a, 0.90 g, 2.0 mmol) 및 실리카 겔 (18 g)의 혼합물에 부틸알데하이드(0.27 mL, 3.0 mmol)를 10℃에서 가하고 현탁액을 10 내지 20℃에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물에 과염소산(70%, 0.68 mL, 8.3 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 이후에 반응 혼합물을 10 내지 20℃에서 밤새 교반하였다. 화합물 1a의 대부분을 TLC 및 LCMS에 따라 소비하였다. 반응 혼합물을 석유 에테르로 희석시키고 포화된 수성 탄산나트륨으로 퀀칭시켰다. 현탁액을 여과하고 고체를 DCM/메탄올(v/v = 1)로 세척하였다. 합한 여액을 진공 속에서 농축시켰다. 잔사를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 1b(0.15 g, 16% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 467.1 (M + H)+. 화합물 1b를 제조-HPLC(방법 B)로 추가로 정제하여 화합물 R- 1b(40 mg, 39% 수율) 및 S -1b(10 mg, 9% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 467 (M + H)+.
(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온( R- 1b)
이의 전체 내용이 모든 목적을 위해 전문으로서 본원에 참고로 포함된, EP0262108A1의 특정의 방법 및/또는 중간체를 사용하였다.
화합물 R-1b는 이다.
1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.34 (dd, J = 10.1, 1.3 Hz, 1H), 6.37-6.32 (m, 2H), 5.65-5.48 (m, 1H), 4.63 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 19.4 Hz, 1H), 4.33-4.28 (m, 2H), 2.74-2.59 (m, 1H), 2.38-2.32 (m, 1H), 2.26-2.16 (m, 2H), 1.70-1.41 (m, 12H), 0.97-0.93 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: >99.9%, 보유 시간: 8.05 min (방법 A).
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S )-12-플루오로-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온(1h)
화합물 1b를 제조하기 위한 과정에 따라서, 화합물 1g(1.3 g, 3.0 mmol)를 화합물 1h(1.1 g, 85% 수율)로 전환시켜 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 449 (M + 1)+.
실시예 70
도 31에서 메실레이트(Ms) 2의 합성을 위한 일반적인 과정 A:
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
피리딘(1의 그램 당 10 mL) 중 화합물 1(1c, 1d, 1e, 1f, 또는 1h, 1 당량)의 용액에 4-디메틸아미노피리딘(2 당량) 및 메탄설포닐 클로라이드(1.5 당량)를 0℃에서 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반하고, 반응을 LCMS으로 화합물 1(1c, 1d, 1e, 1f, 또는 1h, 1 당량)이 전체적으로 소비될 때까지 모니터링한 후, 수득되는 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)에 부었다. 혼합물을 수성 하이드로클로라이드(1N), pH=7 및 염수로 희석하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 2% MeOH)로 정제하여 화합물 2(2c, 2d, 2e, 2f, 또는 2h, 1 당량)를 수득하였다.
실시예 71
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 메탄설포네이트(2b)
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
DCM(3 mL) 중 화합물 1b(0.28 g, 0.65 mmol)의 용액에 트리에틸아민(0.13 g, 1.3 mmol) 및 메탄설포닐 클로라이드(89 mg, 0.78 mmol)를 가하였다. 0℃에서 30분 동안 화합물 1b가 TLC에 따라 소비될 때까지 교반한 후, 반응 혼합물을 진공 속에서 농축시켰다. 실리카 겔 상의 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 2b(0.26 g, >99% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 545 (M + H)+.
실시예 72
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
2-[(1 R ,2 S ,10 S ,11 S ,13 R ,14 R ,15 S ,17 S )-1-플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸-5-옥소테트라사이클로[8.7.0.0 2,7 .0 11,15 ]헵타데카-3,6-디엔-14-일]-2-옥소에틸 메탄설포네이트(2c)
이의 전체 내용이 모든 목적을 위해 이의 전문으로 본원에 참고로 포함된 WO2015/71657 A1에서의 특정의 방법 및/또는 중간체를 사용하였다:
일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 2c(0.32 g, 50% 수율)를 백색 고체로서 덱사메타손(1c, 0.53 g, 1.4 mmol)으로부터 수득하였다. ESI m/z: 471 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 500 MHz) δ 7.42 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.31 (dd, J = 10.0, 2.0 Hz, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.27 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 5.04 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.30-4.27 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 3.10-3.05 (m, 1H), 2.78-2.71 (m, 1H), 2.55-2.40 (m, 1H), 2.36-2.32 (m, 1H), 2.27-2.21 (m, 1H), 1.93-1.88 (m, 1H), 1.82-1.74 (m, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.58-1.51 (m, 2H), 1.25-1.20 (m, 1H), 1.06 (s, 3H), 0.89 (d, J = 7.5 Hz, 3H) ppm.
실시예 73
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭하다.
2-[(1 R ,2 S ,8 S ,10 S ,11 S ,13 R ,14 R ,15 S ,17 S )-1,8-디플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸-5-옥소테트라사이클로[8.7.0.0 2,7 .0 11,15 ]헵타데카-3,6-디엔-14-일]-2-옥소에틸 메탄설포네이트(2d)
이의 전체 내용이 모든 목적을 위해 이의 전문으로 본원에 참고로 포함된 Bioorg. Med. Chem. Lett., 2015, 25, 2837-2843에서의 특정의 방법 및/또는 중간체를 사용하였다:
일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 2d(0.17 g, 71% 수율)를 백색 고체로서 플루메타손(1d, 0.20 g, 0.49 mmol)으로부터 수득하였다. ESI m/z: 489 (M + H)+.
실시예 74
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
2-((8 S ,9 R ,10 S ,11 S ,13 S ,14 S ,16 R ,17 S )-9-플루오로-11,16,17-트리하이드록시-10,13-디메틸-3-옥소-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카하이드로-3 H -사이클로펜타[a]페난트렌-17-일)-2-옥소에틸 메탄설포네이트(2e)
일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 2e(0.38 g, 81% 수율)를 백색 고체로서 트리암시놀론(1e, 0.39 g, 1.0 mmol)으로부터 수득하였다. ESI m/z: 473 (M + H)+.
실시예 75
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
2-((6 S ,8 S ,9 S ,10 R ,11 S ,13 S ,14 S ,17 R )-11,17-디하이드록시-6,10,13-트리메틸-3-옥소-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카하이드로-3 H -사이클로펜타[a]페난트렌-17-일)-2-옥소에틸 메탄설포네이트 (2f)
일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 2f(0.16 g, 35% 수율)를 백색 고체로서 메틸프레드니솔론(1f, 0.38 g, 1.0 mmol)으로부터 수득하였다. ESI m/z: 453 (M + H)+.
실시예 76
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S )-12-플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 메탄설포네이트(2h)
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 2h(0.45 g, 85% 수율)를 백색 고체로서 메틸프레드니솔론(1h, 0.39 g, 1.0 mmol)으로부터 수득하였다. ESI m/z: 528 (M + H)+.
실시예 77
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
스테로이드성 페이로드 4b의 합성.
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-(2-아지도아세틸)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온(3b)
아세톤(15 mL) 중 화합물 2b(1.0 g, 1.8 mmol) 및 나트륨 아지드(1.2 g, 18 mmol)의 현탁액을 50℃에서 밤새 교반하며, 이때 반응은 LCMS 분석에 따라 완료되었다. 현탁액을 냉각한 후, 반응 혼합물을 냉수(80 mL)에 부었다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 염수(30 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공 속에서 농축시켜 화합물 3b(0.90 g, > 99% 수율)를 황색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 492 (M + H)+.
(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-(2-아미노아세틸)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온; 트리플루오로아세트산 염(4b)
100 mL 들이의 환저 플라스크에 화합물 3b(0.85 g, 1.7 mmol)에 이어서, THF(20 mL) 및 수성 하이드로클로라이드(1 N, 10 mL)를 가하였다. 혼합물을 28 내지 32℃에서 이것이 선명해질 때까지 교반하고, 이에 트리페닐포스핀(0.68 g, 2.6 mmol)을 당해 온도에서 가하였다. 반응이 TLC 및 LCMS에 따라 완료된 경우, 수득되는 황색의 선명한 용액을 28 내지 32℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공하에 농축시키고 잔사를 역상 섬광 크로마토그래피(수성 TFA(0.05%) 중 0 내지 50% 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물 4b(0.56 g, 57% 수율, TFA 염)를 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 466 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeODd4) δ 7.33 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.40-6.29 (m, 2H), 5.69-5.45 (m, 1H), 4.93-4.92 (m, 1H), 4.71 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.35-4.27 (m, 2H), 3.90-3.84 (m, 1H), 2.81-2.54 (m, 1H), 2.42-2.06 (m, 3H), 1.82-1.32 (m, 11H), 1.09-0.87 (m, 6H) ppm. 19F NMR (376 MHz, MeOD d4 ) δ -77.01, -166.24, -166.92, -188.81, -188.83 ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 6.86 min (방법 A).
실시예 78
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(1 R ,2 S ,10 S ,11 S ,13 R ,14 R ,15 S ,17 S )-14-(2-아미노아세틸)-1-플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸테트라사이클로[8.7.0.0 2,7 .0 11,15 ]헵타데카-3,6-디엔-5-온 트리플루오로아세테이트(4c)
화합물 2d를 화합물 2c로 치환하는 것을 제외하고는, 화합물 4b를 제조하기 위한 실시예 77에서의 과정에 따라, 화합물 4c를 TFA 염(0.50 g, 2개의 단계에서 53% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 392 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 8.22 (s, 3H), 7.35 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.19 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.60 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.38 (s, 1H), 4.30-4.10 (m, 2H), 3.62 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 2.98-2.83 (m, 1H), 2.65-2.50 (m ,1H), 2.50-2.22 (m, 2H), 2.20-2.01 (m, 2H), 1.80-1.72 (m, 1H), 1.72-1.58 (m, 1H), 1.46 (s, 3H), 1.46-1.25 (m, 2H), 1.13-1.01 (m, 1H), 0.89 (s, 3H), 0.78 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. 19F NMR (376 MHz, DMSO d6 ) δ -73.79, -164.32 ppm. 분석 HPLC: > 99%, 보유 시간: 6.34 min (방법 A).
실시예 79
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(1 R ,2 S ,8 S ,10 S ,11 S ,13 R ,14 R ,15 S ,17 S )-14-(2-아미노아세틸)-1,8-디플루오로-14,17-디하이드록시-2,13,15-트리메틸테트라사이클로[8.7.0.0 2,7 .0 11,15 ]헵타데카-3,6-디엔-5-온 트리플루오로아세테이트(4d)
화합물 2b를 화합물 2d로 치환시키는 것을 제외하고는, 화합물 4b의 제조를 위한 실시예 77에서의 과정에 따라, 화합물 4d를 TFA 염으로서(0.18 g, 2개의 단계에서 21% 수율) 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 410 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 8.17 (s, 3H), 7.36 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 6.29 (dd, J = 10.2, 1.7 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.74-5.54 (m, 2H), 5.42 (s, 1H), 4.28-4.10 (m, 2H), 3.70-3.59 (m, 1H), 3.02-2.89 (m, 1H), 2.58-2.40 (m, 1H), 2.31-2.12 (m, 3H), 2.08 (s, 1H), 1.77-1.64 (m, 1H), 1.51-1.44 (m, 4H), 1.16-1.06 (m, 1H), 0.91 (s, 3H), 0.82 (d, J = 7.2 Hz, 3H).ppm. 19F NMR (376 MHz, DMSO d6 ) δ -73.65, -163.75, -186.04 ppm. 분석 HPLC: > 99%, 보유 시간: 6.36 min (방법 A).
실시예 80
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(8 S ,9 R ,10 S ,11 S ,13 S ,14 S ,16 R ,17 S )-17-(2-아미노아세틸)-9-플루오로-11,16,17-트리하이드록시-10,13-디메틸-7,8,11,12,13,15,16,17-옥타하이드로-6 H -사이클로펜타[a]페난트렌-3(9 H ,10 H ,14 H )-온 트리플루오로아세테이트(4e)
화합물 2b를 화합물 2e로 치환시키는 것을 제외하고는, 화합물 4b의 제조를 위한 실시예 77에서의 과정에 따라, 화합물 4e를 TFA 염으로서(28 mg, 2개의 단계에서 21% 수율) 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 394 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 8.04 (s, 3H), 7.33 (d, J = 10 Hz, 1H), 6.24 (dd, J = 10 Hz, 1.0 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.53 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 5.50-5.45 (m, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.76-4.70 (m, 1H), 4.20-4.12 (m, 2H), 3.68 (d, J = 20 Hz, 1H), 2.66-2.57 (m, 1H), 2.40-2.20 (m, 3H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.90-1.70 (m, 2H), 1.50-1.20 (m, 6H), 0.89 (s, 3H)ppm. 분석 HPLC: > 99%, 보유 시간: 5.79 min (방법 A).
실시예 81
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(6 S ,8 S ,9 S ,10 R ,11 S ,13 S ,14 S ,17 R )-17-(2-아미노아세틸)-11,17-디하이드록시-6,10,13-트리메틸-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카하이드로-3 H -사이클로펜타[a]페난트렌-3-온 (4f)
화합물 2b를 2f로 대체하고 28 내지 32℃가 아닌 60℃에서 교반하는 것을 제외하고는, 화합물 4b의 제조를 위한 실시예 77에서의 과정에 따라, 화합물 4f(10 mg, 2개의 단계에서 14% 수율)를 제조-HPLC(방법 B)에 의한 정제 후 황색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 466 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 8.50 (s, 1H), 7.50 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.27 (dd, J = 1.6 Hz, 10.0 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 4.43-4.42 (m, 1H), 4.32-4.27 (m, 1H), 3.80-3.76 (m, 1H), 2.79-2.73 (m, 2H), 2.29-2.15 (m, 3H), 1.83-1.50 (m, 7H), 1.10-0.80 (m, 8H) ppm.
실시예 82
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
22 R / S 이성체(2:1의 비)를 지닌 (1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S )-8-(2-아미노아세틸)-12-플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온(4h)
화합물 2b를 2h로 대체하는 것을 제외하고는, 화합물 4b의 제조를 위한 실시예 77에서의 과정에 따라, 화합물 4h(5 mg, 2개의 단계에서 6% 수율)를 제조-HPLC (방법 A)로 2회 정제 후 황색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 448 (M + H)+. 1H NMR (500MHz, DMSO d6 ) δ 8.04 (s, 3H), 7.95-7.70 (m, 1H), 7.32 (d, J = 10 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.65-5.55 (m, 1H), 5.18 (t, J = 4 Hz, 0.24H), 5.12 (d, J = 5 Hz, 0.24H), 4.77 (d, J = 5.0 Hz, 0.76H), 4.66 (t, J = 4 Hz, 0.76H), 4.25-4.10 (m, 2H), 3.80-3.70 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.36-2.30 (m, 1H), 2.05-1.95 (m, 2H), 1.85-1.75 (m, 1H), 1.70-1.55 (m, 4H), 1.48 (s, 3H), 1.40-1.30 (m, 3H), 1.25-1.20 (m, 1H), 0.90-0.80 (m, 6H) ppm. 19F NMR (376 MHz, DMSO d6 ) δ -73.51 (3F), -164.50 (0.3F), -165.27 (0.7F) ppm.
실시예 83
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-{2-[(4-아미노페닐)아미노]아세틸}-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온 트리플루오로아세테이트(5-I)
스크류-캡이 장착된 튜브(screw-capped tube)내 DMF(2 mL) 중 화합물 2b(0.10 g, 0.18 mmol)에 4-하이드록시아닐린(0.10 mg, 0.92 mmol), 트리에틸아민(0.20 g, 2.0 mmol) 및 요오드화나트륨(0.10 g, 0.67 mmol)을 가하였다. LCMS로 모니터링한 , 혼합물을 70℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 제조-HPLC(방법 A)로 2회 직접 정제하여 화합물 5-I(10 mg, 8% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 557 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.59 (br s, 3H), 7.50-5.96 (m, 8H), 5.76-3.81 (m, 7H), 2.73-2.55 (m, 1H), 2.28 (s, 1H), 2.20-1.99 (m, 2H), 1.86-1.79 (m, 1H), 1.70-1.27 (m, 10H), 0.93-0.76 (m, 6H) ppm. 19F NMR (376 MHz, DMSO d6 ) δ -73.90, -164.22, -165.02, -186.37 ppm. 분석 HPLC: > 99%, 보유 시간: 7.55 min (방법 A).
실시예 84
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
화합물 2를 페놀로 치환시킴으로써 화합물 6을 제조하기 위한 일반적인 과정 B:
더운 아세토니트릴 또는 아세톤(60 내지 65℃)에 화합물 2(1 당량), 상응하는 페놀(2.0 내지 2.5 당량) 및 탄산칼륨 또는 탄산세슘(2.0 내지 3.0 당량)을 가하였다. 수득되는 현탁액을 2 내지 3시간 동안 환류시키고, LCMS 및 TLC로 모니터링하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 휘발물을 진공 속에서 제거하고 잔사에 물을 가하였다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 용액을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공 속에서 농축시켰다. 조 생성물을 다음 단계에 직접 사용하거나 섬광 크로마토그래피 또는 제조-HPLC로 정제하여 순수한 아릴 에스테르 6을 수득하였다.
실시예 85
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온(6-I)
2b(0.17 mmol로 계산됨)와 아세톤(0.5 mL) 중 4-아미노페놀(37 mg, 0.34 mmol) 및 탄산세슘 (0.11 g, 0.34 mmol)의 반응에서 일반적인 과정 B에 따라, 표제 화합물 6-I(6.0 mg, 1b로부터 6.3% 수율)를 제조-HPLC(방법 B)에 의한 정제 후 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 298 (M/2 + H)+, 558 (M + H)+ (10%). 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.34 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.78-6.71 (m, 4H), 6.37-6.33 (m, 2H), 5.63-5.49 (m, 1H), 5.10-4.99 (m, 1H), 4.77-4.63 (m, 2H), 4.33 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 2.74-2.57 (m, 1H), 2.39-2.13 (m, 3H), 1.98-1.31 (m, 12H), 1.03-0.93 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: purity 97.4%, 보유 시간: 7.55 min (방법 B).
실시예 86
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(1 S ,2 S ,4 R ,6 S ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온( S -6-I)
2b를 S- 2b로 대체하는 것을 제외하고는 일반적인 과정 B에 따라, 화합물 S -6-I(19 mg, S- 2b로부터 2개 단계에서의 19% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 558 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 7.26 (dd, J = 10.2, 1.0 Hz, 1H), 6.65-6.55 (m, 2H), 6.51-6.44 (m, 2H), 6.30 (dd, J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.74-5.46 (m, 2H), 5.23 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 5.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.99 (d, J = 18.2 Hz, 1H), 4.74-4.55 (m, 3H), 4.26-4.12 (m, 1H), 2.65-2.53 (m, 1H), 2.29-2.19 (m, 1H), 2.13-1.94 (m, 2H), 1.86-1.22 (m, 11H), 0.92-0.78 (m, 6H) ppm. 19F NMR (376 MHz, DMSO d6 ) δ -164.26, -186.38 ppm. 분석 HPLC: > 99%, 보유 시간: 7.34 min (방법 B).
실시예 87
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
사용된 경우 이의 전체 내용이 모든 목적을 위해 이의 전문으로 본원에 참고로 포함된 Org. Biomol. Chem., 2014, 12, 7551-7560에서의 특정 방법.
단계 1: 4-아미노(2H4)페놀:
20 mL 들이의 극초단파 튜브에 4-하이드록시아닐린(0.97 g, 8.9 mmol), 산화중수소(D2O, 10 mL) 및 진한 염화중수소(DCl, 125 uL)를 가하여 현탁액을 수득하였다. 튜브를 질소 대기로 충전하고, 밀봉하여 극초단파(CEM Discover SP)로 180℃에서 2.5시간 동안 조사하고, 이를 LCMS로 모니터링하였다. 이후에, 혼합물을 실온(28 내지 32℃)로 냉각시키고 당해 온도를 18시간 동안 유지시켰다. 휘발물을 진공하에 제거하여 갈색 잔사를 수득하고, 이를 20 mL의 극초단파 튜브 속에서 산화중수소(10 mL) 속에 현탁시켰다. 튜브를 질소로 충전하고, 밀봉하며 극초단파로 180℃에서 5.5 시간 동안 조사하였다. 실온(28 내지 32℃)으로 냉각시키고, 혼합물을 당해 온도에서 16시간 동안 유지시켰다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 10 내지 60% 에틸 아세테이트)로 정제하여 4-아미노(2H4)페놀(0.50 g, 50% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 8.31 (s, 1H), 4.36 (s, 2H) ppm.
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-{2-[4-아미노(2,3,5,6-H 4 )페녹시]아세틸}-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온(6-I D)
단계 2: DMSO(3 mL) 중 4-아미노(2H4)페놀(0.10 g, 0.88 mmol)의 혼합물에 수산화칼륨(45 mg, 0.80 mmol)을 가하였다. 28 내지 32℃에서 2분 동안 교반하고 60℃에서 교반한 후, 혼합물에 화합물 2b(0.20 g, 0.40 mmol)를 한번에 가하고 질소 보호하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 제조-HPLC (방법 A)로 직접 및 이후에 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 6-II(10 mg, 4.4% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 562 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 7.27 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.30 (dd, J = 10.1, 1.7 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.74-5.45 (m, 2H), 5.03-4.93 (m, 1H), 4.82-4.58 (m, 4H), 4.27-4.14 (m, 1H), 3.33 (s, 1H), 2.70-2.53 (m, 1H), 2.31-2.20 (m, 1H), 2.14-1.93 (m, 2H), 1.86-1.70 (m, 1H), 1.67-1.24 (m, 10H), 0.92-0.73 (m, 6H) ppm. 19F NMR (376 MHz, DMSO d6 ) δ -164.24, -165.05, -186.35 ppm. 분석 HPLC: 98.41%, 보유 시간: 7.34 min (방법 B)
화합물 6-I D는 예를 들면, 분석 방법을 위해 유용하다.
실시예 88
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-[2-(4-아미노-3-메톡시페녹시)아세틸]-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온 트리플루오로아세테이트(6-II)
일반적인 과정 B에 따라, 화합물 2b(0.50 g, 0.92 mmol)를 아세토니트릴(20 mL) 중 4-아미노-3-메톡시페놀(0.32 g, 2.3 mmol) 및 탄산세슘(0.60 g, 1.8 mmol)과 반응시켜, 화합물 6-II(0.25 g, 47% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 588 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 9.00 (s, 2H), 7.33-7.23 (m, 1H), 7.16-7.08 (m, 1H), 6.77-6.68 (m, 1H), 6.52-6.41 (m, 1H), 6.35-6.27 (m, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.74-5.51 (m, 2H), 5.31-5.11 (m, 2H), 4.98-4.68 (m, 3H), 4.28-4.15 (m, 1H), 3.90-3.83 (m, 3H), 2.74-2.55 (m, 1H), 2.35-2.21 (m, 1H), 2.17-1.97 (m, 2H), 1.88-1.75 (m, 1H), 1.67-1.28 (m, 10H), 0.93-0.78 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: > 99%, 보유 시간: 7.68 및 7.72 min (방법 A).
실시예 89
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
화합물 6-III의 제조
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-8-[2-(4-아미노-3-플루오로페녹시)아세틸]-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-16-온(6-III)
환저 병(round-bottom bottle)에 화합물 2e(0.20 g, 0.37 mmol), 4-아미노-3-플루오로페놀(0.25 g, 2.0 mmol), 수산화칼륨(0.11 g, 2.0 mmol) 및 DMSO(3 mL)를 실온에서 가하였다. 수득되는 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 질소 보호하에서 반응이 완료될 때까지 교반하고, 이를 TLC 및 LCMS로 모니터링하였다. 실온으로 냉각시키고 막을 통해 여과한 후, 반응 용액을 제조-HPLC(방법 A)로 직접 정제하여 표제 화합물 6-III(40 mg, 19% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 576 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.40-7.31 (m, 1H), 7.20 (td, J = 9.1, 1.9 Hz, 1H), 6.91-6.84 (m, 1H), 6.80-6.76 (m, 1H), 6.40-6.30 (m, 2H), 5.57 (ddd, J = 48.6, 9.7, 6.8 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.90-4.79 (m, 2H), 4.75 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.41-4.28 (m, 1H), 2.78-2.57 (m, 1H), 2.40-2.12 (m, 3H), 1.98-1.39 (m, 11H), 1.07-0.92 (m, 6H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 8.10 min (방법 A).
실시예 90
본 실시예는 표 2 및 도 31에서의 화합물을 지칭한다.
(6 S ,8 S ,9 S ,10 R ,11 S ,13 S ,14 S ,17 R )-17-(2-(4-아미노페녹시)아세틸)-11,17-디하이드록시-6,10,13-트리메틸-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카하이드로-3 H -사이클로펜타[a]페난트렌-3-온 (6-VI)
DMF(3 mL) 중 화합물 2f(60 mg, 0.13 mmol)의 용액에 탄산세슘(86 mg, 0.26 mmol) 및 N-Boc-4-아미노페놀(28 mg, 0.13 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시켰다. 유기 용액을 물(10 mL)로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 농축시켰다. 백색 잔사(50 mg, ESI m/z: 566 (M + H)+)를 DCM(5 mL) 속에 용해시키고 이 용액에 TFA(0.5 mL)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 Boc가 LCMS에 따라 완전히 제거될 때가지 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하였다. 잔사를 역상 섬광 크로마토그래피(수 중 0 내지 25% 아세토니트릴)로 정제하여 6-VI(10 mg, 7.5% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 466 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 7.32 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.61-6.58 (m, 2H), 6.51-6.47 (m, 2H), 6.19 (dd, J = 10.0, 1.6 Hz, 1H), 5.82 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 5.39 (s, 1H), 5.04-5.01 (m, 3H), 4.66 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.58 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 2.67-2.50 (m, 2H), 2.13-2.01 (m, 2H), 1.93-1.89 (m, 1H), 1.67-1.61 (m, 3H), 1.45-1.30 (m, 5H), 1.01 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 0.95-0.71 (m, 5H) ppm.
실시예 91
실시예는 표 4에서의 링커-페이로드의 중간체를 제조하기 위한 일반적인 합성 과정을 입증한다.
본 실시예는 표 4 및 도 31 및 33에서의 화합물을 지칭한다.
링커-페이로드(LP1-LP16)의 합성은 아민(4) 또는 아닐린(6)과 보호된 Val-Cit-PAB-PNP(L2a 또는 L2b)의 반응에 이어서 N-탈보호로부터, 또는 아닐린(6)과 Boc 또는 Fomc 보호된 Val-Cit-OH 또는 Fomc-Val-Ala-OH(L3a-c) 사이의 아미드 L4의 생성에 이은 N-보호로부터 카보네이트 L4를 제조함으로써 출발하였다. 화합물 L4를 이후에 L9 또는 L10에 직접 커플링하여 최종 링커-스테로이드 LP1, LP2, LP3, LP13, LP14, LP15 및 LP16를 생성하였다. 화합물 L4는 또한 Fomc-D-Lys-COT L5에 이어 de-Fomc에 커플링시켜 L6을 수득하고, 이를 아지도-사이클로덱스트린(7a) 또는 아지도 설포네이트(7b 또는 7c)와 [3+2] 사이클로부가반응시켜 L8를 생성하였다. 최종적으로, L8과 PEG4 산 또는 NHS 에스테르(L9 또는 L10)의 커플링 반응을 사용하여 링커-페이로드 LP5, LP8, LP10, 및 LP12를 생산하였다.
중간체 L4의 합성을 위한 일반적인 과정 C:
DMF(10 mg의 페이로드 중 1 mL) 중 페이로드 4 또는 6(1.0 당량) 및 Boc-vcPAB-PNP(1.1 당량)의 용액에 HOBt(1.0 당량) 및 DIPEA(2.0 당량)을 실온에서 가하였다. 수득되는 혼합물을 실온(18 내지 30℃)에서 페이로드가 소비될 때까지 밤새 교반하고, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 막을 통해 여과한 후, 반응 용액을 제조-HPLC로 직접 정제하여 Boc-L4(52% 수율)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 DCM(mg의 Boc-L4당 0.6 mL) 속에 용해시켰다. 당해 용액에 TFA(mg의 Boc-L4당 0.2 mL)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 실온(18 내지 30℃)에서 Boc가 제거될 때까지 1시간 동안 교반하고, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 휘발물을 진공하에 제거하여 화합물 L4를 수득하고,이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다.
중간체 L4를 합성하기 위한 일반적인 과정 D:
DMF(10 mg의 페이로드 당 0.3 mL) 중 페이로드 4 또는 6(1.0 당량)의 용액에 Fomc-vcPAB-PNP (1.1 당량), HOBt(1.5 당량) 및 DIPEA(2.0 당량)을 실온에서 가하였다. 혼합물을 실온(18 내지 30℃)에서 페이로드가 전체적으로 소비될 때까지 3시간 동안 교반하고, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 반응 혼합물에 피페리딘(10 mg의 페이로드당 0.03 mL)를 가하고 혼합물을 실온(18 내지 30℃)에서 1시간 동안 Fomc가 제거될 때까지 교반하고, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 막을 통해 여과한 후, 반응 용액을 역상 섬광 크로마토그래피 또는 제조-HPLC로 정제하여 화합물 L4를 수득하였다.
중간체 L4의 합성을 위한 일반적인 과정 E:
DCM(10 mg의 펩타이드 당 0.2 mL) 중 Boc-Val-Ala-OH 또는 Boc-Val-Cit-OH (1.0 당량)의 용액에 DIPEA(2.0 당량) 및 HATU(1.2 당량)를 20 내지 25℃에서 가하였다. 혼합물을 20 내지 25℃에서 30분 동안 교반한 후 아닐린(1.1 당량)을 가하고 펩타이드가 전체적으로 소비될 때까지 16시간 동안 추가로 교반하고, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 이어서 반응 혼합물에 TFA(10 mg의 펩타이드 당 0.05 mL)를 가하였다. 혼합물을 20 내지 25℃에서 다른 1시간 동안 교반하였다. 휘발물을 감압하게 제거하고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 화합물 L4를 수득하였다.
중간체 L4의 합성을 위한 일반적인 과정 F:
DMF(10 mg의 펩타이드 당 0.2 mL) 중 Fomc-Val-Ala-OH (1.2 당량)의 용액에 DIPEA(3.0 당량) 및 HATU(1.4 당량)을 20 내지 25℃에서 가하였다. 혼합물을 20 내지 25℃에서 5분 동안 교반한 후 아닐린(1.0 당량)을 가하고 수득되는 혼합물을 펩타이드가 전체적으로 소비될 때까지 2시간 동안 교반하고, 이를 LCMS로 모니터링하였다. 이어서 반응 혼합물에 피페리딘(5.0 당량)을 가하였다. 혼합물을 20 내지 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 막을 통해 여과한 후, 반응 용액을 역상 섬광 크로마토그래피(수성 중탄산암모늄(10 mM) 중 0 내지 100% 아세토니트릴) 또는 제조-HPLC (방법 B)로 직접 정제하여 화합물 L4를 수득하였다.
실시예 92
본 실시예는 표 4 및 도 33에서의 화합물을 지칭한다.
화합물 L4a, VA- R -6-VI의 제조
(2 S )-2-아미노- N -[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]-3-메틸부탄아미드
일반적인 과정 E(65% 수율) 또는 F(53% 수율)에 따라 R -6-VI로부터, 화합물 L4a를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 692 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.95 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.19-8.09 (m, 1H), 7.54-7.47 (m, 2H), 7.33 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.22-6.13 (m, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.14-5.04 (m, 1H), 4.86-4.77 (m, 2H), 4.75 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.70 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.48-4.38 (m, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.01 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 2.58-2.52 (m, 1H), 2.33-2.25 (m, 1H), 2.13-2.06 (m, 1H), 2.03-2.00 (m, 1H), 1.95-1.89 (m, 1H), 1.88-1.84 (m, 2H), 1.63-1.53 (m, 5H), 1.45-1.33 (m, 6H), 1.32-1.26 (m, 3H), 1.06-0.93 (m, 2H), 0.92-0.82 (m, 10H), 0.80-0.75 (m, 3H) ppm.
실시예 93
본 실시예는 표 4 및 도 33에서의 화합물을 지칭한다.
화합물 L4b, vcPAB-4b의 제조
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트
화합물 4b(93 mg, 0.20 mmol)로부터 일반적인 과정 D 후, 화합물 vcPAB-4b (0.13 g, 73% 수율)를 역상 섬광 크로마토그래피(수성 중탄산암모늄(10 mM) 중 50 내지 80% 아세토니트릴)로 정제 후 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 871 (M + H)+.
실시예 94
본 실시예는 표 4 및 도 33에서의 화합물을 지칭한다.
화합물 L4c, VA-6-I의 제조
(2 S )-2-아미노- N -[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]-3-메틸부탄아미드
화합물 6-I(0.50 g, 0.90 mmol)과 Boc-Val-Ala-OH로부터 일반적인 과정 E에 따라, 조 화합물 L4c(0.69 g, 2개의 단계로 72% 수율)를 정제없이 황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. ESI m/z: 728 (M + H)+.
실시예 95
본 실시예는 표 4 및 도 33에서의 화합물을 지칭한다.
화합물 L4d, VC-PAB-6-I의 제조
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트
화합물 6-I(87 mg, 0.15 mmol)로부터 일반적인 과정 E에 따라, 화합물 L4d(80 mg, 64% 수율)를 제조-HPLC(방법 B)에 의한 정제후 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 963 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 10.22 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 8.69 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.08 (s, 3H), 7.61 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 6.8 Hz, 3H),7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.22-7.0 (m, 1H), 6.84 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 6.30 (dd, J = 8.0 Hz, J = 1.6 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.10-6.0 (m, 1H), 5.72-5.55 (m, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.16-5.05 (m, 3H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.80-4.76 (m, 1H), 4.75-4.70 (m, 1H), 4.55-4.48 (m, 1H), 4.25-4.20 (m, 1H), 3.70-3.60 (m, 1H), 3.12-2.90 (m, 2H), 2.70-2.55 (m, 1H), 2.40-2.20 (m, 1H), 2.15-2.0 (m, 3H), 1.86-1.75 (m, 1H), 1.75-1.65 (m, 1H), 1.64-1.54 (m, 5H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 4H), 0.97-0.91 (m,5H), 0.90-0.85 (m, 4H), 0.85-0.80 (m, 3H) ppm.
실시예 96
본 실시예는 표 4 및 도 33에서의 화합물을 지칭한다.
화합물 L4e, VA-6-II의 제조
(2 S )-2-아미노- N -[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}-2-메톡시페닐)카바모일]에틸]-3-메틸부탄아미드
화합물 6-III(0.10 g, 0.17 mmol)로부터 일반적인 과정 F에 따라서, 조 화합물 L4e(0.12 g, 2개 단계에서 82% 수율)를 수득하고 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 758 (M + H)+.
실시예 97
본 실시예는 표 4 및 도 33에서의 화합물을 지칭한다.
화합물 L4f, VA-6-III의 제조
(2 S )-2-아미노- N -[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}-2-플루오로페닐)카바모일]에틸]-3-메틸부탄아미드
화합물 L4f(95 mg, 0.17 mmol)로부터 일반적인 과정 F에 따라, 조 표제 화합물 L4f(0.10 g, 2개 단계에서 66% 수율)를 수득하고 이를 다음 단계를 위해 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 746 (M + H)+.
실시예 98
본 실시예는 표 4 및 도 33에서의 화합물을 지칭한다.
링커-페이로드 L6의 중간체의 합성
일반적인 과정: DMF(10 mg의 L5 중 0.2 mL) 중 화합물 L5(1.2 당량)의 용액에 HATU(1.4 당량) 및 DIPEA(3 당량)을 실온에서 가하였다. 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후 화합물 L4(1.0 당량)를 가하였다. 반응 혼합물을 이어서 화합물 L4가 전체적으로 소비될 때까지 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이를 LCMS로 모니터링하였다. 막을 통해 여과한 후, 반응 용액을 제조-HPLC로 직접 정제하여 사이클로옥틴 L6을 수득하였다.
실시예 99
중간체 8을 제조하기 위한 일반적인 과정 H
DMF(10 mg의 L6 중 0.5 mL) 중 L6의 용액에 아지도 화합물(L7a (CD-N3), L7b(N3-PEG4-설포네이트) 또는 L7c(N3-두알설포네이트), 1.5 당량 대 L6) 및 DIPEA(10 mg의 L6당 0.1 mL)를 실온에서 가하였다. 30℃에서 24시간 동안 교반한 후, 출발 물질의 대부분이 소비되며, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 반응 혼합물을 제조-HPLC로 직접 정제하여 화합물 L8을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 100
화합물 L8a, aCDCCK-vcPAB-4b의 제조
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트(L8a)
화합물 L6a(0.12 g, 0.10 mmol)와 L7a를 제조하기 위한 일반적인 과정 H에 따라, 화합물 L8a(0.11 g, 51% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1081 (M/2 + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 10.05 (s, 1H), 8.30-7.80 (m, 3H), 7.80-7.55 (m, 2H), 7.50-7.40 (m, 1H), 7.40-7.25 (m, 3H), 6.30 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.0 (s, 1H), 5.80-5.35 (m, 16H), 5.25-5.05 (m, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.90-4.50 (m, 13H), 4.50-4.00 (m, 5H), 3.95-3.55 (m, 22H), 3.30-3.20 (m, 8H), 3.20-3.00 (m, 4H), 3.00-2.85 (m, 5H), 2.25-2.20 (m, 2H), 2.10-1.95 (m, 4H), 1.80-1.00 (m, 30H), 1.00-0.90 (m, 4H),0.90-0.80 (m, 14H) ppm.
실시예 101
화합물 L8d, aCDCCK-VA-2168의 제조
(2 R )-2-아미노- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로 [26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미드(L8d)
L6b(60 mg, 59 μmol)와 L7a로부터 일반적인 과정 H에 따라, 화합물 L8d(40 mg, 34% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1009.5 (M/2 + H)+.
실시예 102
화합물 L8f, aCDCCK-vcPAB-6-I의 제조
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,2]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N-(4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9.04,8.013,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트
L6c(0.10 g, 80 μmol)와 L7a로부터 일반적인 과정 H에 따라, 화합물 L8f(0.11 g, 58% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 751 (M/3 + H)+.
실시예 103
링커-페이로드 LP101 내지 LP116의 제조
화합물 LP1: L6a (COT-dLys-vcPAB-4b)의 제조
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.02,9-12,8-12,18]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트
화합물 L4b(0.20 g, 0.23 mmol)를 제조하기 위한 일반적인 과정 G에 따라, 화합물 L6a(0.12 g, 45% 수율)를 제조-HPLC(방법 B) 후 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1385 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.65-7.55 (m, 2H), 7.40-7.26 (m, 3H), 6.39-6.27 (m, 2H), 5.65-5.45 (m, 1H), 5.13-5.01 (m, 2H), 4.71-4.50 (m, 2H), 4.40-4.14 (m, 4H), 4.11-3.82 (m, 3H), 3.46-3.39 (m, 1H), 3.29-3.09 (m, 4H), 2.76-2.54 (m, 1H), 2.41-2.10 (m, 7H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.96-1.80 (m, 5H), 1.78-1.21 (m, 23H), 1.06-0.82 (m, 12H) ppm.
실시예 104
화합물 LP102: L6b (COT-dLys-VA-6-I)의 제조
(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]헥산아미드
L4c(0.28 g, 0.38 mmol)를 제조하기 위한 일반적인 과정 G에 따라, 화합물 L6b(0.21 g, 46% 수율)를 제조-HPLC(방법 B) 후 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1021.5 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.33-7.60 (m, 3H), 6.87-6.91 (m ,2H), 6.32-6.37 (m, 2H), 5.47-5.65 (m, 1H), 5.07-5.30 (m, 1H), 4.72-4.86 (m, 3H), 4.34-4.51 (m, 3H), 3.83-4.20 (m, 3H), 3.33-3.49 (m, 1H), 3.14-3.27 (m, 3H), 2.59-2.75 (m, 1H), 1.31-2.39 (m, 33 H), 0.93-1.05 (m, 12H) ppm.
실시예 105
화합물 LP103: L6c(COT-dLys-vcPAB-6-I)의 제조
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트
화합물 L4d(0.14 g, 0.15 mmol)를 제조하기 위한 일반적인 과정 G에 따라서, 화합물 L6c(0.10 g, 57% 수율)를 제조-HPLC(방법 B) 후 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1255.5 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.32-7.39 (m, 4H), 6.84-6.88 (m, 2H), 6.31-6.36 (m, 2H), 5.43-5.63 (m, 1H), 5.05-5.16 (m, 3H), 4.71-4.83 (m ,1H), 4.50-4.54 (m,1H), 4.18-4.33 (m 3H), 3.00-2.85 (m, 2H), 3.40-3.51 (m, 1H), 3.00-3.29 (m, 6H), 1.31-2.35 (m, 34 H), 1.29 (t, J =7.2 Hz, 2H), 0.93-1.02 (m ,12H) ppm.
실시예 106
LP104 내지 LP116를 위한 일반적인 과정 I:
DMF(10 mg의 L9 당 1 mL) 중 PEG4-산 L9(1.2 내지 1.3 당량)의 용액에 HATU(1.3 당량) 및 DIPEA(5.0 당량)에 실온에서 가하였다. 혼합물을 실온(19℃)에서 30분 동안 교반한 후 DMF(10 mg의 L4 또는 L8당 0.6 mg) 중 화합물 L4 또는 L8(1.0 당량)의 용액을 가하였다. 수득되는 혼합물을 화합물 L4 또는 L8이 소비될 때까지 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 막을 통해 여과한 후, 여액을 제조-HPLC로 직접 정제하여 화합물 L1(L9a: BCN-PEG4-산, L9b: DIBAC-PEG4-산, L9c: MAL-PEG4-산)을 수득하였다.
LP104 내지 LP116을 위한 일반적인 과정 J
DMF(50 mg 당 1 mL) 중 화합물 L4 또는 L8(1.0 당량)의 용액에 화합물 DIBAC-PEG4-NHS L10b(1.1 내지 1.2 당량) 및 DIPEA(5.0 당량)를 실온에서 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이를 LCMS로 모니터링하였다. 반응 혼합물을 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 화합물 L1을 수득하였다.
실시예 107
화합물 LP104: L11a (DIBAC-PEG4-aCDCCK-vcPAB-4b의 제조
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04 , ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트
화합물 L8a(0.10 g, 46 μmol)과 L9b로부터 일반적인 과정 I 후, 화합물 L1a(26 mg, 22% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1349 (M/2 + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.71 (s, 1H), 8.30-8.00 (m, 3H), 8.00-7.74 (m, 2H), 7.70-7.58 (m, 5H), 7.52-7.20 (m, 12H), 6.35-6.20 (m, 2H), 6.15-5.85 (m, 3H), 5.80-5.35 (m, 18H), 5.25-4.90 (m, 6H), 4.90-4.50 (m, 14H), 4.40-4.25 (m, 4H), 4.25-4.10 (m, 3H), 4.10-3.95 (m, 2H), 3.95-3.55 (m, 22H), 3.55-3.40 (m, 22H), 3.20-3.00 (m, 6H), 3.00-2.85 (m, 3H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.25-2.20 (m, 4H), 2.10-1.95 (m, 6H), 1.80-1.70 (m, 5H), 1.70-1.50 (m, 10H), 1.50-1.45 (m, 9H), 0.90-0.80 (m, 14H) ppm. 분석 HPLC: > 99%, 보유 시간: 6.23 min (방법 B).
실시예 108
화합물 LP105: L11b (BCN-PEG4-aCDCCK-vcPAB-4b의 제조
(1R,8S,9S)-비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 N-(14-{[(1R)-1-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-[(4-{[({2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바모일)옥시]메틸}페닐)카바모일]부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}펜틸]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트
화합물 L8a(22 mg, 10 μmol)와 BCN-PEG4-산 L9a로부터 일반적인 과정 I에 따라서, 화합물 L1b(10 mg, 38% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1293 (M/2 + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.68 (s, 1H), 8.14-7.08 (m, 11H), 6.30 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.67-5.31 (m, 15H), 5.21-3.33 (m, 61H), 3.13-2.60 (m, 22H), 2.30-1.96 (m, 46H), 0.95-0.80 (m, 17H) ppm. 분석 HPLC: 보유 시간: 7.31 min (48%) 및 7.41 (52%) (방법 B).
실시예 109
화합물 LP108: L11e (DIBAC-PEG4-aCDCCK-VA-6-I의 제조
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드
화합물 L8d(19 mg, 9.4 μmol)과 DIBAC-PEG4-NHS L10b로부터 일반적인 과정 J에 따라서, 화합물 L1e(7.0 mg, 29% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1276.8 (M/2 + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 9.80-9.47 (m, 1H), 8.23-7.91 (m, 3H), 7.83-7.11 (m, 13H), 6.87-6.66 (m, 2H), 6.32-6.11 (m, 2H), 5.85-5.23 (m, 14H), 5.14-5.01 (m, 3H), 4.86-3.99 (m, 19H), 3.85-3.40 (m, 38H), 3.27-2.87 (m, 13H), 2.76-2.55 (m, 3H), 2.33-2.20 (m, 4H), 2.12-1.91 (m, 6H), 1.83-1.72 (m, 4H), 1.59-0.98 (m, 31H), 0.89-0.84 (m, 12H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.76 min (방법 B).
실시예 110
화합물 LP110: L11g (DIBAC-PEG4-aCDCCK-vcPAB-6-I의 제조
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04 , ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트
화합물 L8d(0.10 g, 44 μmol)과 DIBAC-PEG4-산 L9b로부터 일반적인 과정 I에 따라서, 화합물 L1g(29 mg, 24% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1394 (M/2 + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d4 ) δ 9.67 (s, 1H), 9.56 (s, 1H), 8.20-8.05 (m, 2H), 7.85-7.70 (m, 2H), 7.70-7.60 (m, 4H), 7.50-7.25 (m, 12H), 6.90-6.80 (m, 2H), 6.30 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.0 (s, 1H), 5.80-5.35 (m, 16H), 5.25-5.00 (m, 6H), 4.90-4.65 (m, 10H), 4.65-4.45 (m, 4H), 4.40-4.00 (m, 6H), 3.95-3.55 (m, 22H), 3.50-3.30 (m, 22H), 3.20-2.85 (m, 12H), 2.65-2.55 (m, 2H), 2.45-2.35 (m, 2H), 2.35-2.20 (m, 3H), 2.15-1.95 (m,5H), 1.90-1.70 (m, 4H), 1.70-1.50 (m, 10H),1.50-1.00 (m, 18H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm. 분석 HPLC: 보유 시간: 7.93 (82%) 및 8.02 (18%) min (방법 B).
실시예 111
화합물 LP112: (DIBAC-PEG 4 -aCDCCK-vcPAB-4b의 제조
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0 4.9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트
화합물 L4b(43 mg, 50 μmol)와 DIBAC-suc-PEG4-산(L9b)로부터 일반적인 과정 J에 따라서, 표제 화합물 L12(16 mg, 23% 수율)을 제조-HPLC(방법 B)로 정제 후 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1406 (M+H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 500 MHz) δ 9.99 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.80-7.75 (m, 1H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.65-7.60 (m, 3H), 7.53-7.33 (m, 6H), 7.33-7.28 (m, 3H), 6.30 (dd, J = 10.0 Hz 및 1.5 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.10-6.00 (m, 1H), 5.72-5.55 (m, 2H), 5.41 (s, 2H), 5.05-5.01 (m, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.80-4.72 (m, 1H), 4.60-4.58 (m, 1H), 4.43-4.33 (m, 1H), 4.25-4.10 (m, 3H), 3.88-3.80 (m, 1H), 3.65-3.55 (m, 3H), 3.50-3.40 (m, 12H), 3.30-3.25 (m, 2H), 3.12-2.90 (m, 4H), 2.70-2.55 (m, 2H), 2.48-2.35 (m, 2H), 2.30-2.20 (m, 2H), 2.15-1.95 (m, 4H), 1.86-1.65 (m, 3H), 1.64-1.54 (m, 5H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 5H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.40 min (방법 B).
실시예 112
화합물 LP113: MAL-PEG4-VA- R -11-5의 제조
1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1 H -피롤-1-일)- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드
화합물 L4a(20 mg, 25 μmol)와 MAL-PEG4-NHS L10c로부터 일반적인 과정 J에 따라서, 화합물 LP113(7 mg, 27% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1119 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 9.89-9.60 (m, 1H), 8.51-6.73 (m, 10H), 6.18 (dd, J = 10.1, 1.7 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.17-4.05 (m, 9H), 4.02-3.52 (m, 13H), 2.71-2.54 (m, 1H), 2.46-2.20 (m, 5H), 2.15-1.77 (m, 5H), 1.63-1.53 (m, 5H), 1.47-1.20 (m, 9H), 1.10-0.94 (m, 2H), 0.95-0.65 (m, 12H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.46 min (방법 B).
실시예 113
화합물 LP114: L11j (DIBAC-PEG4-VA-6-II의 제조
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.04 , ]헥사데카-1(16),4(9),5,7,12,14-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}-2-메톡시페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드
L4e(40 mg, 47 μmol)와 DIBAC-suc-PEG4-산 L9b로부터 일반적인 과정 I에 따라서, 화합물 L1j(25 mg, 41% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1293 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 8.98-8.86 (m, 1H), 8.37-8.30 (m, 1H), 7.94-7.88 (m, 1H), 7.87-7.72 (m, 2H), 7.70-7.57 (m, 2H), 7.52-7.42 (m, 3H), 7.41-7.22 (m, 4H), 6.65-6.59 (m, 1H), 6.44-6.34 (m, 1H), 6.33-6.27 (m, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.77-5.49 (m, 2H), 5.18-5.11 (m, 1H), 5.07-4.98 (m, 1H), 4.91-4.70 (m, 3H), 4.54-4.43 (m, 1H), 4.29-4.16 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.65-3.53 (m, 3H), 3.51-3.38 (m, 12H), 3.30-3.22 (m, 2H), 3.13-3.03 (m, 2H), 2.72-2.54 (m, 2H), 2.47-2.18 (m, 4H), 2.13-1.91 (m, 4H), 1.85-1.72 (m, 2H), 1.64-1.55 (m, 3H), 1.52-1.33 (m, 6H), 1.31-1.23 (m, 3H), 0.99-0.77 (m, 13H) ppm. 분석 HPLC: 99%, 보유 시간: 9.18 및 9.22 min (방법 B).
실시예 114
화합물 LP115: L11k-(DIBAC-PEG4-VA-6-III의 제조
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}-2-플루오로페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드
L4f(82 mg, 0.11 mmol)와 DIBAC-suc-PEG4-산 L9b로부터 일반적인 과정 I에 따라서, 화합물 L1k(50 mg, 35% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1280 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.54 (s, 1H), 8.41-8.15 (m, 1H), 8.01-7.17 (m, 12H), 6.90 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.31 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.77-5.46 (m, 2H), 5.28-4.65 (m, 5H), 4.58-4.42 (m, 1H), 4.29-4.11 (m, 2H), 3.71-3.43 (m, 15H), 3.29 (s, 2H), 3.08 (s, 2H), 2.71-2.54 (m, 2H), 2.47-2.17 (m, 4H), 2.16-1.88 (m, 4H), 1.88-1.69 (m, 2H), 1.69-1.19 (m, 13H), 0.95-0.80 (m, 12H) ppm. 19F NMR (376 MHz, DMSO) δ -121.11 및 -121.92, -165.13 및 -165.14, -186.38 및 -186.40 ppm. 분석 HPLC: >99%, 보유 시간: 8.32 min (방법 B).
실시예 115
화합물 LP116: L11k-(DIBAC-PEG4-VC-PAB-4b)의 제조
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트
화합물 L4k(58 mg, 60 μmol)와 DIBAC-suc-PEG4-산 L9b로부터 일반적인 과정 I에 따라서, 표제 화합물 L1v(20 mg, 22% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1499 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 10.02 (s, 1H), 9.59 (s, 1H),8.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.80-7.75 (m, 1H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.65-7.60 (m, 3H), 7.53-7.45 (m, 3H), 7.40-7.28 (m, 7H), 6.84 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.30 (dd, J = 10.4 Hz, J = 1.6 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.10-6.0 (m, 1H), 5.72-5.55 (m,1H), 5.52 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.16-5.05 (m, 4H), 4.88-4.70 (m, 3H), 4.43-4.33 (m, 1H), 4.25-4.20 (m, 2H), 3.65-3.55 (m, 3H), 3.50-3.40 (m, 12H), 3.30-3.25 (m, 2H), 3.12-2.90 (m, 4H), 2.70-2.55 (m, 2H), 2.48-2.43 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 2H), 2.15-1.95 (m, 4H), 1.86-1.75 (m, 2H), 1.64-1.54 (m, 5H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 4H), 1.23 (s, 2H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm. 분석 HPLC: 100%, 보유 시간: 7.83 min (방법 B).
실시예 116
ADC 접합
스테로이드 항체 접합을 도 33에 요약하였다. 하나의 예에서, 부위-특이적인 접합체를 미생물 트랜스글루타미나제(MTG EC 2.3.2.13, Zedira, 독일 다름슈타트 소재)(본원에서 "MTG-기반")를 통해 N297Q 또는 N297D 돌연변이된 항체의 2-단계 접합을 통해 생산하였다. 제1 단계에서, N297Q-돌연변이된 항체를 아지도-PEG3-아민으로 MTG 기반 효소 반응을 통해 작용화시켰다. 모든 목적을 위해 이의 전문이 본원에 참고로 포함된, 예컨대, 2017년 2월 24일자로 출원된 국제 PCT 특허원 제PCT/US17/19537호를 참고한다. 제2 단계에서, 알킨-작용화된 링커-페이로드를 아지도-작용화된 항체에 [2+3] 1,3-이극성 사이클로부가 반응(도 33은 [2+3] 폐환반응을 통해 유도된 아지도-작용화된 항체로 접합된 DIBAC-작용화된 링커-페이로드 (LP112)를 묘사한다). 이러한 과정은 약 50 내지 80%의 단리된 수율로 부위-특이적이고 화학량론적인 접합체를 제공하였다.
도 33에서 제조한 스테로이드-항체 접합체
본 실시예는 일반적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 페이로드의 부위-특이적인 접합 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 33을 참고한다.
다음의 실시예는 표 16에 나열낸 아지도-작용화된 항체 약물 접합체의 제조 방법을 입증한다.
BupHTM(부포날화된(BupHonalized)3-아민(MW. 218.26 g/mol) 속에서 사람 IgG1 동형을 지닌 pH 7.6lated 항체) 중 사람 IgG1 동형을 지닌 글리코실화되지 않은 항체. 수득되는 용액을 트랜스글루타미나제(25 U/mL; mg의 항체당 5U MTG)와 혼합하여 0.5 내지 3 mg/mL에서의 항체의 최종 온도를 생성하고, 이후에 용액을 37℃에서 4 내지 24시간 동안 온화하게 진탕시키면서 항온처리하였다. 반응을 SDS-PAGE 또는 ESI-MS로 모니터링하였다. 완료시, 과량의 아민 및 MTG를 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)로 제거하여 아지도-작용화된 항체를 생성시켰다. 이러한 생성물을 SDS-PAGE 및 ESI-MS 위에서 분석하였다. 아지도-dPEG3-아민을 항체의 2개 부위 - Q295 및 Q297-에 가하여 4DAR 글리코실화되지 않은 항체-PEG3-아지드 접합체에 대한 804 Da 증가를 야기하였다. 접합 부위를 확인하고 EEQ링커YQ링커STYR에서 4DAR 아지도-작용화된 항체에 대해 트립신 분해된 중쇄의 펩타이드 서열 맵핑을 통해 확인하였다.
다음의 실시예는 클릭 화학 반응을 사용하여 항체에 대한 약물의 부위-특이적인 접합체를 제조하는 방법을 입증한다.
하기 기술된 표 16에서의 N297Q 돌연변이를 함유하는 사람 IgG1과의 부위-특이적인 글리코실화되지 않은 항체 약물 접합체를 아지도-작용화된 항체와 링커-페이로드를 함유하는 알킨 사이의 [2+3] 클릭 반응에 의해 제조하였다. 표 16에 나타낸 바와 같이, 항 PRLR Ab-PEG3-N3을 LP112, LP104, 및 LP116에 접합시키고; 항 Fel D1 Ab-PEG3-N3을 LP112, 및 LP116에 접합시켰다.
상세한 접합 과정을 다음과 같다. 링커-페이로드(LP)와의 부위-특이적인 항체 접합체는 수성 매질(예컨대, PBS, 5% 글리세롤을 함유하는 PBS, HBS) 중 mAb-PEG 3 -N 3 (1 내지 3 mg/mL)을 DMSO, DMF 또는 DMA와 같은 적합한 유기 용매 속에 용해된 ≥6 몰 당량의 LP(즉, 반응 혼합물은 5 내지 20%의 유기 용매, v/v를 함유한다)와 함께 24℃ 내지 37℃에서 6시간에 걸쳐 용해하였다. 반응의 진행을 ESI-MS로 모니터링하며 mAb-PEG 3 -N 3 의 부재는 접합의 완료를 나타내었다. 과량의 LP 및 유기 용매를 SEC에 의해 PBS를 사용한 용출을 통해, 또는 단백질 A 컬럼 크로마토그래피를 통한 산성 완충제를 사용한 용출에 이어 트리스(pH8.0)을 사용한 중화로 제거하였다. 정제된 접합체를 SEC, SDS-PAGE, 및 ESI-MS로 분석하였다. 상응하는 LP로부터의 스테로이드 항체 접합체, 이들의 분자량 및 ESI-DAR 값의 목록을 표 16에 나타낸다.
구체적인 예에서, 0.800 mL의 PBSg(PBS, 5% 글리세롤, pH 7.4) 중 아지도-작용화된 항체(1 mg)를 6몰 과량의 DIBAC-PEG4-d-Lys(COT-∝-CD)-VC-PABC-페이로드 (DMSO 중 농축된 10 mg/mL)로 6 내지 12시간 동안 실온에서 처리하고 과량의 링커 페이로드(LP)를 크기 배제 크로마토그래피(SEC, Superdex 200 HR, GE Healthcare)로 제거하였다. 최종 생성물을 한외-원심분리로 농축시키고 UV, SEC, SDS-PAGE 및 ESI-MS로 특징화하였다.
실시예 117
LC-ESI-MS에 의한 ADC의 특징화
LC-ESI-MS에 의한 ADC 샘플에 대한 완전한 질량의 측정을 수행하여 약물-페이로드 분포 프로파일을 측정하고 평균 DAR을 계산하였다. 각각의 시험 샘플(20 내지 50 ng, 5uL)을 Acquity UPLC 단백질 BEH C4 컬럼(10K psi, 300 , 1.7 μm, 75μm Х 100 mm; 제품 번호 186003810)에 로딩하였다. 3분 탈염 후, 단백질을 용출시키고 질량 스펙트럼을 Waters Synapt G2-Si 질량 분광기로 획득하였다.
다음의 도 34에 나타낸 바와 같이, 디콘볼루션된 질량 스펙트럼은 분자량이 144602 Da인 글리코실화되지 않은 항-PRLR 항체에 대해 우세한 피크, 및 분자량이 145385 Da인 아지도 작용화된 항-PRLR 항체에 대해 우세한 피크를 나타내었으며, 이는 이의 글리코실화되지 않은 모 항체(즉, 각각의 글리코실화되지 않은 항체에 대해 4개의 아미노-PEG3-아지드 접합체에 상응)에 대한 비교시 783 Da 증가를 나타낸다. 또한, 항-PRLR-LP12 접합체에 대한 우세한 피크는 151015 Da의 분자량을 가졌으며, 이는 이의 아지도-작용화된 항체(즉, 각각의 글리코실화되지 않은 항체에 대해 4개의 LP(MW = 1405.6 Da) 접합체에 상응)와 비교시 5630 Da 증가를 나타낸다. 유사하게, 다른 부위-특이적인 항-PRLR-ADC는 3.9 - 4DAR을 가졌다.
다음의 도 35에 나타낸 바와 같이, 디콘볼루션된 질량 스펙트럼은 분자량이 145441 Da인 글리코실화되지 않은 항-Fel D1 항체에 대해 우세한 피크, 및 분자량이 146235 Da인 아지도 작용화된 항-Fel d1 항체에 대해 우세한 피크를 나타내었으며, 이는 이의 글리코실화되지 않은 모 항체(즉, 각각의 글리코실화된 항체에 대해 4개의 아미노-PEG3-아지드 접합체에 상응)에 대해 794 Da 증가를 나타낸다. 또한, 항-Fel d1-LP12 접합체에 대한 우세한 피크는 151871.0 Da의 분자량을 가졌으며, 이의 아지도-작용화된 항체(즉, 각각의 글리코실화되지 않은 항체에 대해 4개의 LP(MW = 1405.6 Da) 접합체에 상응)와 비교하여 5635 Da 증가를 나타낸다. 유사하게, 다른부위-특이적인 항-Fel d1-ADC는 3.9 - 4DAR을 가졌다.
상응하는 LP로부터 비-세포독성 스테로이드 항체 접합체(ncADC), 네이키드 항체의 분자량, 아지도-작용화된 항체, LP, 및 스테로이드 ADC 뿐만 아니라 ESI-DAR 값의 목록을 표 16에 나타낸다. 표에서, Ab는 항체를 지칭하고, Ab-N3은 아지도-작용화된 항체를 지칭하며, ncADC는 비-세포독성 스테로이드 항체 접합체를 지칭한다.
실시예 118
시험관내 효소 검정
카텝신 B 검정에서 링커-페이로드 절단
링커-페이로드를 카텝신 B 검정에서 시험하였다. CapB 억제제(VA074)의 존재 및 부재하에서 카텝신 B(CapB)와 함께 4시간 항온처리 후, 링커-페이로드 및 유리된 페이로드 둘 다를 LC-MS/MS를 사용하여 평가하였다. 결과는 친수성 링커-페이로드 (LP104)가 CapB에 의해 절단될 수 있으며 비-친수성 링커-페이로드(LP12)와 비교하여 더 많은 페이로드(4b)를 방출하였음을 나타내었다.
CapB 검정 과정은 다음과 같다: 링커-페이로드 스톡 용액(DMSO 중 10 mM)을 항온처리 완충액(100 mM NaOAc, 10 mM 디티오트레이톨, pH5)으로 스파이크하여 50 μM의 기질 용액을 수득하였다. 50 mM NaOAc 중 4 μL의 0.47 μg/μL 사람 간 카텝신 B(Athens Research & Technology, Athens, GA), 1 mM EDTA, pH 5를 196 μL의 50 μM 기질 용액에 가하였다. 반응 혼합물을 37℃에서 4시간 동안 항온처리하였다. 이후에, 5μL의 아세트산 및 150μL의 아세토니트릴(내부 표준으로서 오살미드 함유)을 50μL의 반응 혼합물 분취량(aliquot)에 가하였다. 와동시킨 후, 퀀칭된 샘플을 -70℃의 초저온 냉장고(deep freezer)에서 동결시킨 후, 해동하고 14,000 rpm에서 원심분리하였다. 50μL의 분취량의 수득되는 상층액을 이어서 동 용적의 물로 희석시키고 방출된 페이로드에 대해 LC-ESI-MS/MS로 분석하였다.
[표 17]
CapB 검정 실험은 다음의 과정을 포함한다.
1. 예비가열 검정 완충액: 0.1 M NaOAc/0.01 M DTT(pH 5.0)
2. 시험 화합물용 스파이킹 용액: 시험 화합물에 대한 25μM 스파이킹 용액: 2μL의 5 mM 스톡 용액을 398μL의 0.1 M NaOAc/0.01 M DTT 완충액(pH 5.0)에 가한다.
3. 0.47μg/μL의 카텝신 B를 50 mM NaOAc/1 mM EDTA(pH 5.0) 속에서 제조한다. 빙상에 놓는다.
4. CA074 샘플의 부재하에서: 4μL의 0.47μg/μL 카텝신 B를 196μL의 25μM 스파이킹 용액(단계 2로 부터)에 가하고, 37℃에서 튜브를 항온처리한다.
5. CA074 샘플의 존재하에서: 4μL의 0.47μg/μL 카텝신 B와 4μL의 10 mM 억제제(CA074)를 196μL의 25μM 스파이킹 용액(단계 2로부터)에 가하고, 튜브를 37℃에서 항온처리한다.
6. 4시간 후, 5μL의 분취량(CA074의 존재 및 CA074의 부재)을 효소 활성 시험을 위해 취한다(단계 15 내지 17). 한편, 50μL의 분취량을 시점(4시간째)에 취하여, 5μL의 아세트산을 가한 후, 150μL의 ACN(IS)을 가하여 반응을 정지시킨다.
7. 퀀칭 후, 플레이트를 진탕시키고 14000 rpm에서 원심분리한다.
8. 각각의 웰로부터의 50μL의 분취량을 50μL의 초 순수한 물(ultra pure water)(Millipore, ZMQS50F01)을 함유하는 96 웰 샘플 플레이트 내로 LC/MS 분석을 위해 이동시킨다.
CapB 검정 실험은 참고 화합물 및 다음의 과정을 포함하였다.
9. 예비가열 검정 완충액: 1.33 mM EDTA 및 2 mM DTT가 들어있는 100 mM Na/K 포스페이트, pH6.0.
10. 0.024μg/μL 카텝신 B를 제조한다: 1μL의 0.47μg/μL 카텝신 B 스톡을 19μL의 검정 완충액(단계 11로부터)에 가한다.
11. 2μL의 0.024μg/μL 카텝신 B(단계 12로부터)를 불투명한 96-웰 플레이트에 가한다.
12. 96μL의 검정 완충액을 각각의 샘플에 가한다.
13. 2μL의 10 mM 기질 Z-RR-MNA(200μM의 최종 농도)를 가한다.
음성 대조군(억제제 존재)의 경우, 2μL의 10 mM 억제제(CA074)를 가한다.
14. 즉시 샘플을 역학 방식으로 340 nm의 여기/425 nm의 방출에서 판독한다(플레이트를 3분 동안 30초마다 판독한다).
항온처리 샘플 속의 카텝신 B의 안정성:
15. 5 μL의 항온처리 샘플을 93 μL의 검정 완충액(단계 11로부터의)내로 취한 후, 2 μL의 10 mM 기질(Z-RR-MNA)을 가한다.
16. 샘플을 37℃에서 2분 동안 항온처리한다.
17. 샘플을 340 nm의 여기/425 nm의 방출에서 판독한다.
실시예 119
시험관내 세포 유리된 및 세포 기반한 활성
LanthaScreen TR-FRET GR 경쟁적 결합 검정에서 글루코코르티코이드 수용체 (GR)에 대한 세포 유리된 결합
글루코코르티코이드 수용체(GR)에 결합하는 신규한 스테로이드의 능력을 평가하기 위하여, 세포-유리된 결합 검정을 LanthaScreen TR-FRET GR 경쟁적 결합 검정 키트(Life Technologies, 제품 번호 A15901)를 사용하여 수행하였다. 검정은 제조업자의 설명서에 따라 수행하였다. 부데소니드는 시판되는 GR 스테로이드이며 결합 검정 및 서류에 기술된 다른 세포 기반 검정에서 참고 대조군으로서 사용하였다. 요약하면, 하기 나타낸 부데소니드 및 유도체 화합물의 3배 일련 희석물을 100 nM(최종 100X)에서 시작하여 100% DMSO 속에서 제조하였다. 일련의 희석물을 핵 수용체 완충제 F 속에서 5 mM DTT 및 0.1 mM 안정화 펩타이드를 사용하여 50-배 추가로 희석시키고, 384-웰 검정 플레이트로 이동시켰다. 다음에, Fluormone GS1 Green, GR-LBD(GST) 및 Tb 항-GST 항체를 384-웰 검정 플레이트에 순차적으로 가하였다. 플레이트를 Envision 다중표지 플레이트 판독기(PerkinElmer)에서 340 nm에서 제시된 여기 및 520 nm 및 486 nm에서의 방출 필터를 사용하여 분석하였다. FRET 비는 520 nm/486 nm로서 계산하였다. IC50 값은 12-점 반응 곡선(GraphPad Prism)에 걸쳐서 4개의-매개변수 로지스틱 방정식을 사용하여 측정하였다.
표 18에 나타낸 바와 같이, 부데소니드는 GR 검정에서 Fluormone GS1 Green과 10 내지 100 nM의 IC50 값으로 경쟁하였다. 부데소니드의 N-유사체는 10 nM 미만 내지 100nM 초과의 범위의 IC50 값으로 결합을 유사하게 경쟁하였다. 본원에서 시험한 신규 스테로이드는 이러한 검정에서 비교가능하거나 보다 우수하고(더 낮은 IC50 값) 부데소니드와 비교하여 GR 리간드에 대해 유사한 대체를 입증하였다.
[표 18]
표 18에서: +++ < 10 nM; 10 nM = ++ < 50 nM; 50 nM ≤= +; NT = 시험되지 않음; NA = 활성화 없음. 완전한 활성화: 부데소니드에 의해 유도된 배 활성화의 >75%. 부분 활성화: 부데소니드에 의해 유도된 배 활성화의 (20%, 75%). 활성화 없음: 부데소니드에 의해 유도된 배 활성화의 <20%. 세포 유리 검정을 사용하여 이들의 투과성에 상관없이 재조합 GR LBD에 대한 화합물의 직접적인 결합을 평가한다. 세포 기반 검정을 사용하여 화합물이 혈장막을 통과한 후 세포내 GR 매개된 전사를 활성화시키는 방법을 측정하며, 따라서, 화합물의 막 투과성은 활성에 대한 전제조건이다.
실시예 120
글루코코르티코이드 수용체(GR) 공-활성인자 루시퍼라제 리포터 세포 기반 검정
글루코코르티코이드 활성화 검정
스테로이드 페이로드 및 항-PRLR 스테로이드 ncADC의 활성을 실시예 62에 기술된 293/PRLR/GRE-luc 세포주 뿐만 아니라 효모 CAL4 DNA 결합 도메인(pBind-GR, Promega 제품 번호 E1581)에 융합된 GR 리간드 결합 도메인, 및 루시퍼라제 발현을 구동하는 Gal4 상부 활성인자 서열(9XGal4 UAS-Luc)로 이루어진 키메라 수용체를 함유하는 항원 음성 293 세포주를 사용하는 루시퍼라제 리포터 세포 기반 검정을 사용하여 연구하였다. 수득되는 세포주는 293/GRE-Luc로 지칭한다.
생검정을 이러한 2개의 세포주, 테스긴(tesgin) 항-PRLR-LP112, 덱사메타손, 부데소니드, 화합물 4b, 대조군 Ab-LP112 뿐만 아니라, 항-PRLR Ab 단독을 사용하여 실시예 63에 기술된 바와 같이 제시된 검정을 사용하여 수행하였다.
도 36a 및 하기 표에 나타낸 바와 같이, 72 시간의 항온처리 후, 항-PRLR-LP112는 293/PRLR/GRE-luc 세포주에 있어서 최고 배(fold)를 나타내었지만 LP112(4b)의 페이로드는 부데소니드 및 덱사메타손보다 더 우수한 IC50 값을 나타내었다. 대조군 Ab-LP112 및 접합되지 않은 항-PRLR mAb는 이러한 세포주내에서 활성이 없음을 입증하였다.
도 36b 및 하기 표에 나타낸 바와 같이, 72 시간의 항온처리 후, 항-PRLR-LP112는 PRLR을 발현하지 않는 세포주 내에서 활성화를 나타내지 않았으며, 항-PRLR-ncADC에 의한 스테로이드의 전달이 항원-의존성임을 나타낸다. 페이로드 LP112(4b)는 다시 부데소니드 및 덱사메타손보다 더 우수한 IC50 값을 나타내었다. 대조군 Ab-LP112 및 접합되지 않은 항-PRLR Ab는 이러한 세포주내에서 어떠한 활성도 입증하지 않았다.
다음의 표는 도 36a 및 36b를 지칭한다.
표에서, +++<5 nM, 5nM<++<10nM, 10nM<+이다.
실시예 121
본 실시예는 LPS 유도된 사이토킨 방출의 마우스 모델을 기술한다.
본 연구의 목적은 마우스에서 LPS-유도된 사이토킨 방출에 있어서 시험 화합물, 4b 및 6-I를 평가하기 위한 것이다. 시험 화합물을 LPS 챌린지(challenge) 48시간, 24시간 및 2시간 전에 투여하고, TNF-α 및 IL6을 함유하는 혈액 샘플 속의 사이토킨 수준을 LPS 챌린지 2시간 및 4시간 후 측정하였다.
물질 및 시약
이. 콜라이 K12로부터 기원한 지질다당류(LPS)를 Invivogen (미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재, 제품 번호 Tlrl-eklps)로부터 구입하였고, 덱사메타손은 ADAMAS(미국 캘리포니아주 에머리빌 소재, 제품 번호 50-02-2)로부터 구입하였다. 마우스 TNF-α ELISA 키트(kit)는 에비오사이언스(ebioscience)(ThermoFisher Scientific, 제품 번호 88-7324)로부터 구입하였다. 마우스 IL6 ELISA 키트는 에비오사이언스(ThermoFisher Scientific, 제품 번호 88-7064)로부터 구입하였다.
실험 방법
동물 보호:
총 18마리의 나이브(naive) C57BL/6j 마우스를 본 연구에서 사용하였다. 동물은 연구 개시에 체중이 18 내지 20g인, 수컷이었다. 동물은 Shanghai Laboratory Animal Center, CAS (SLAC)에서 구입하여, 챔파트너 동물 사육장(ChemPartner's animal vivarium)에 SPF 환경하에 가두었다. 도착 후, 동물을 외피, 사지, 구멍(orifice) 및 자세 또는 운동에 있어서 비정상적인 신호를 포함하는 건강 조건에 대해 점검하고, 7일 이상 동안 환경에 적응시켰다.
동물을 케이지당 3마리 마우스로 IVC 폴리카보네이트 슈박스 케이지(shoebox cage)에 SPF 환경하에 가두고; 동물 실내를 위한 환경 조절을 20 내지 26℃의 온도, 40 내지 70%의 습도, 및 12-시간의 광/12-시간의 암 주기를 유지하도록 설정하였다.
표준 사료(SLAC-M01, Shanghai Laboratories Animal Center로부터 구입) 및 정제수(여과됨, 국내 수질)를 연구 기간 전체에서 자유로이 제공하였다.
실험 과정
그룹화: 동물을 연구 개시 전에 6개의 그룹(A-F)으로 무작위로 할당하였다. 각각의 그룹은 3마리의 마우스를 포함하였다. 그룹 A에는 나이브 대조군으로서 공급하였고; 그룹 B에는 덱사메타손을 제공하고 양성 대조군으로서 공급하였으며; 그룹 C는 4b로 처리하고 그룹 D 내지 F는 6-I으로 처리하였다.
실험 과정
모든 마우스에게 PBS에 용해된 LPS를 0.5mpk의 투여량으로 복강내 주사로 제공하였다. 그룹 A내 마우스에게는 PBS를 제공하고, 그룹 B내 마우스에게는 Dex (5mpk)를 제공하였으며 그룹 C내 마우스에게는 4b(5mpk)를 복강내 주사로, LPS 챌린지 2시간 전에 제공하고; 그룹 D, E 및 F의 마우스에게는 5mpk의 용량으로 복강내 주사에 의해 LPS 챌린지 2시간, 24시간, 및 48시간 전에 각각 제공하였다.
혈액 샘플을 LPS 챌린지 전 2시간 및 4시간, 24시간 및 48시간째에 헤파린 함유 튜브 내로 수집하였다. 혈액 샘플을 원심분리하고, 혈장 샘플을 수집하여 분석 전에 -80℃에 저장하였다.
혈장 속의 TNFα의 수준을 제조업자가 추천한 표준 과정에 따라서 ELISA 키트로 측정하였다.
PK 결과를 도 37a 및 표 20에 제공한다.
[표 20]
PD 결과
LPS 챌린지를 2시간 샘플링 시점에서 관찰된 이러한 약력학적 모델에 있어서 TNF-α 방출을 유도하였다. 결과는 마우스에서 LPS 챌린지 모델에서 사이토킨 방출의 보고된 동력학과 일치하였으며, TNF-α의 수준은 4시간 시점에서 감소하였다. 따라서, 시험 화합물의 효과는 측정할 수 없을 것이며, 이와 일치하여 4시간 시점에서 그룹들 사이의 유의성은 관찰되지 않았다.
혈액 샘플을 LPS 챌린지 2시간 및 4시간 후에 수집하고; 혈장 속의 TNF-α 수준을 측정하였다. 데이타는 일원 방식에 의해 평균±SEM, *p<0.05, **p<0.01 대 그룹 A로 나타내었다.
도 37a에 나타낸 바와 같이, 2시간 시점에서, 4b는 5mpk의 용량에서 TNF-α 생산을 유의적으로 억제하였으며; 6-I는 시간 의존적인 억제를 입증하였고, 유의적인 TNF-α 생산은 LPS 챌린지 2시간 전에 투여하는 경우 억제되었다. DEX는 2시간의 샘플링 시점에서 TNF-α를 유의적으로 억제할 수 있었다.
혈액 샘플을 LPS 챌린지 2시간 및 4시간 후에 수집하였다; 혈장 속의 TNF-α 수준을 측정하였다. 데이타는 일원 ANOVA 분석에 의해 평균±SEM, *p<0.05, **p<0.01 대 그룹 A로 나타내었다.
ANOVA 분석은 도 37b 및 표 21에 제공된다.
[표 21]
실시예 122
마우스 수지 세포
생체외(ex-vivo) LPS-유도된 염증 면역 반응에 대한 화합물 4b의 효과를 측정하기 위하여, CD11c+ 수지 세포(DC)를 야생형 C57Bl/6 마우스의 비장으로부터 단리하였다(Jackon Labs, 프로토콜 #426.0). 비장 DC를 콜라게나제 D 분해(400U/mL 콜라게나제 D(Roche 제품 번호 11088858001), 20μg/mL DNase I(Roche 제품 번호 10104159001), HEPES-완충된 RPMI-1640 중 2% FCS)를 사용하여 단리하고 37℃에서 25분 동안 항온처리하였다. 항온처리 후, 비장 조직을 RPMI-1640으로 세척하고 70μm 필터를 통해 여과한 후, 적혈구 분해를 ACK 분해 완충액(Gibco 제품 번호 A1049201)을 사용하여 1분 동안 수행하였다. 세포 현탁액을 후속적으로 RPMI-1640을 사용하여 후속적으로 2회 세척하였다. 전통적인 DC를 CD11c 자기 마이크로비드(MicroBeads)(Milteny Biotec 제품 번호 130108338)를 사용하여 단핵 세포 현탁액으로부터 단리하였다. 요약하면, 세포 현탁액을 autoMACS 이동 완충액(running buffer)(Milteny Biotec 제품 번호 130091221)으로 4℃에서 항온처리하기 30분 전에 CD11c+ MicroBeads를 사용하여, Milteny Biotec가 확립한 프로토콜에 따라 2회 세척하였다. CD11c+ 세포를 양성 선택에 의해 단리하고, 세척하고 10%의 FBS(ThermoFisher Scientific, 제품 번호 10082147) 및 1%의 페니실린-스트렙토마이신(ThermoFisher Scientific, 제품 번호 11875093)]을 함유하는 완전-RPMI[RPMI-1640(ThermoFisher Scientific, 제품 번호 15140122) 속에 현탁시키고, 웰당 2x105개의 세포에서 배양하기 전에 계수하였다. 대조군 완전-RPMI, 화합물 4b를 완전-RMPI(10nM 및 100nM에서)으로 처리하거나 덱사메타손(Sigma, 제품 번호 D4902-25MG) 처리된 완전-RMPI(10nM 및 100nM에서)를 96 웰-배양 디쉬내 세포에 가하였다. 화합물 4b 또는 덱사메타손 처리된 세포를 10ng/mL의 LPS로 24시간 동안 자극시키기 전에 37℃에서 24시간 동안 항온처리하였다.
사람 수지 세포:
사람의 고유 면역 세포내에서 생체외 LPS-유도된 염증 면역 반응에서 화합물 4b의 효과를 측정하기 위하여, CD14+ 단핵세포(Lonza 제품 번호 2W-400C)를 단리하고 사람 IL4(50ng/mL)(Milteny Biotec, 제품 번호 130-093-922) 및 사람 GM-CSF(100ng/mL)(Milteny Biotec, 제품 번호 130093866)이 보충된 10%의 FBS(ThermoFisher Scientific, 제품 번호 10082147) 및 1%의 페니실린-스트렙토마이신(ThermoFisher Scientific, 제품 번호 11875093)]을 함유하는 완전-RPMI[RPMI-1640(ThermoFisher Scientific, 제품 번호 15140122)의 존재 하에서 7일 동안 배양하였다. IL4 및 GM-CSF가 들어있는 완전-RPMI을 3일마다 교환하였다. 2개의 특수한 배양 조건을 개발하였다: 조건 1: 대조군 완전-RPMI, 화합물 4b 처리된 완전-RMPI(10nM 및 100nM에서) 또는 덱사메타손(Sigma) 처리된 완전-RMPI(10nM 및 100nM에서)를 사용하여 총 7일 배양 동안 CD14+ 단핵세포의 항온처리 또는 조건 2: 대조군 완전-RMPI를 사용한 항온처리 전 5일 동안 대조군 완전-RPMI, 화합물 4b 처리된 완전-RMPI(10nM 및 100nM에서) 또는 덱사메타손(Sigma, 제품 번호 D4902-25MG) 처리된 완전-RMPI(10nM 및 100nM에서)을 사용하여 7일까지 CD14+ 단핵세포의 항온처리. 7일째에 다양한 실험 그룹을 10ng/mL의 LPS로 24시간 동안 자극시켰다.
LPS 생체외 챌린지 후 24시간째에 상층액 속의 사이토킨의 측정:
상층액을 96-웰 환저 조직 배양 플레이트 내로 LPS 챌린지 후 24시간째에 수집하고 -20℃에서 추가로 분석할 때까지 저장하였다. 상층액 속의 사이토킨 농도를 전-염증성 패널 1(마우스) 멀티플렉스 면역검정 키트(MesoScale Discovery, 제품 번호 K15048D)을 사용하여 제조업자의 설명서에 따라 또는 전염증성 패널 1(사람) 멀티플렉스 면역검정 키트(MesoScale Discovery, 제품 번호 K15049D)를 사용하여 측정하였다. 요약하면, 50μL/웰의 캘리브레이터(calibrator) 및 샘플(희석액 속에 1:2로 희석됨)을 포획 항체로 예비-코팅된 플레이트에 가하고 실온에서 700 rpm에서 2시간 동안 진탕시키면서 항온처리하였다. 이후에, 플레이트를 0.05%(w/v) 트윈-20을 함유하는 1xPBS로 3회 세척한 후, 희석액 45 속에 희석된 25μL의 검출 항체 용액을 첨가하였다. 진탕하면서 실온에서 2시간 항온처리 후, 플레이트를 3회 세척하고, 150μL의 2x 판독 완충제를 각각의 웰에 가하였다. 전기화학발광성을 MSD Spector® 장치에서 즉시 판독하였다. 데이타 분석을 GraphPad PrismTM 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. 그룹내 통계적 유의성을 터키의 다중 비교 사후 시험(Turkey's multiple comparison post-test)을 사용하여 일원 분산분석(one-way Anova)으로 측정하고 평균의 표준 오차(SEM±)를 계산하였다.
결과 요약 및 결론:
표 22에 나타낸 바와 같이, 생체외 LPS 챌린지는 비장 CD11c+ DC에 의한 IL12p70, IL1β, IL6, KC-GRO 및 TNF-α의 풍부한 생산을 유도하였다. 대조적으로, 24시간 동안 용량 증가에서 덱사메타손 및 화합물 4b의 시험관내 투여는 CD11c+ DC에 있어서 LPS-유도된 사이토킨 반응을 유의적으로 감소시켰다.
[표 22]
표 23에 나타낸 바와 같이, 생체외 LPS 챌린지는 사람 단핵세포-기원한 DC에 의해 IL12p70, IL1β, IL6, 및 TNF-α의 풍부한 발현을 유도하였다. 대조적으로 전체 7일의 조건화 기간(조건 1) 동안 화합물 4b 및 덱사메타손(Sigma)과 함께 배양된 단핵세포는 전-염증성 사이토킨 생산을 유의적으로 감소시켰다. 더욱이, 화합물 4b 및 덱사메타손(Sigma)을 사용한 성숙한 단핵세포-기원한 DC의 조건화(conditioning)는 대조군 DC LPS 자극과 비교하여 IL12p70, IL6 및 TNF-α의 생산을 유의적으로 감소시켰다.
[표 23]
상기 기술된 구현예 및 실시예는 단지 설명하기 위한 것이며 비-제한적인 것으로 의도된다. 당해 분야의 숙련가는 단지 통상의 실험, 특정 화합물의 다수의 등가물, 물질 및 과정을 사용하여 확인할 수 있을 것임을 인지할 것이다. 모든 이러한 등가물은 본 발명의 영역내에 있는 것으로 고려되며 첨부된 청구범위에 포함된다.

Claims (43)

  1. 화학식 (A 1 )의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체:

    여기서:
    R1 및 R2는 함께 를 형성하고,
    하기 (a) 또는 (b)이고:
    (a) R3은 -X-C6-10아릴렌-NRaRb이고; 여기서 X는 -NH- 또는 -O-이고; 여기서 -X-C6-10아릴렌-NRaRb의 아릴렌은 할로겐, 중수소, 또는 메톡실로 임의 치환되고;
    R4는 C1-20알킬임;
    (b) R3은 -NRaRb이고;
    R4는 C1-20알킬임;
    R5A 및 R5B는, 각각의 경우에서 독립적으로, -H, -OH, 할로, 및 C1-20알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    Ra 및 Rb는, 각각의 경우에서 독립적으로, -H 및 C1-20알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; Ra 및 Rb는 폐환되어, 이들이 부착된 N인 하나의 헤테로 원자를 포함하는, 3 내지 6개의 환 원자를 지닌 사이클로헤테로알킬을 형성한다.
  2. 제1항에 있어서, R5A 및 R5B는 각각 독립적으로, 할로 또는 수소 원자인 화합물.
  3. 제2항에 있어서, R1 및 R2가 함께 를 형성하며, 여기서 R4는 C1-6알킬인 화합물.
  4. 제1항에 있어서, R3이 (여기서 RP는 할로이고, t는 0 내지 2의 정수이며, Ra는 H이고, Rb는 H 또는 C1-6알킬이다)인 화합물.
  5. 제1항에 있어서, 화학식 (A 4 )에 따른 화합물:

    여기서 R3은 -NRaRb이고 R4는 C1-20알킬이며, 여기서 Ra 및 Rb는, 각각 독립적으로, 수소 원자 또는 C1-20알킬이거나, Ra 및 Rb는 폐환되어 이들이 부착된 N인 하나의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 6개의 환 원자를 지닌 사이클로헤테로알킬을 형성한다.
  6. 제5항에 있어서, R4가 C1-4 알킬인 화합물.
  7. 제5항에 있어서, R3이 -NH2, -NHCH3, 또는 -N(CH3)2인 화합물.
  8. 제1항에 있어서, 화학식 (A 5 )에 따른 화합물:

    여기서 R4는 C1-20알킬이고, RP1은 할로 또는 수소 원자이고, RP2는 -NRaRb이며, 여기서 Ra 및 Rb는 각각 독립적으로, 수소 원자 또는 C1-20알킬이다.
  9. 제1항에 있어서, 화학식 (A 6 )에 따른 화합물:

    여기서 R3은 -O-C6-10아릴렌-NRaRb 또는 NRaRb이고, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로, 수소 원자 또는 C1-20알킬이며, R4는 C1-20알킬이다.
  10. 제1항에 있어서, R1 및 R2는 함께 를 형성하고,
    R3은 -NRaRb이고;
    R4는 C1-20알킬이고;
    R5A 및 R5B는, 각각의 경우에서 독립적으로, -H, -OH, 할로, 및 C1-20알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    Ra 및 Rb는, 각각의 경우에서 독립적으로, -H 및 C1-20알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물.
  11. 제1항에 있어서, R3이 -NH2인 화합물.
  12. 제1항에 있어서, 화학식 1110, 1120, 1130, 또는 1140에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체인 화합물:
    .
  13. 제12항에 있어서,
    R3이 -NRaRb이고;
    R4가 n-프로필인 화합물.
  14. 제13항에 있어서, 화학식 1120에 따른 화합물.
  15. 제12항에 있어서,
    R3이 -X-C6-10아릴렌-NRaRb이고; 여기서 X는 -NH- 또는 -O-이며;
    R4는 C1-20알킬이고;
    여기서 -X-C6-10아릴렌-NRaRb의 아릴렌은 할로겐, 중수소, 또는 메톡실로 임의 치환되는 화합물.
  16. 제15항에 있어서, R3이 -O-C6-10아릴렌-NRaRb이고; 여기서 아릴렌은 할로겐, 중수소, 또는 메톡실로 임의 치환되는 화합물.
  17. 제15항에 있어서, R3이 -O-페닐렌-NRaRb이고; 여기서 페닐렌은 할로겐 또는 중수소로 임의 치환되는 화합물.
  18. 제15항에 있어서, R3이 인 화합물.
  19. 제15항에 있어서, R3이 인 화합물.
  20. 제15항에 있어서, R4가 n-프로필인 화합물.
  21. 제1항에 있어서, 화합물이:




    또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체인 화합물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물에 접합된 결합제로서의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 단백질-스테로이드 접합체.
  23. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물에 접합된 결합제로서의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 사이클로덱스트린(CD)을 포함하는 단백질-스테로이드 접합체.
  24. 제23항에 있어서, CD가

    로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 는 이를 통해 CD가 단백질-스테로이드 접합체에 연결되는 결합을 나타내는 단백질-스테로이드 접합체.
  25. 제23항에 있어서, 결합제가 항체인 단백질-스테로이드 접합체.
  26. 제22항에 있어서, 결합제가 항체인 단백질-스테로이드 접합체.
  27. 하기 화학식에 따른 단백질-스테로이드 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체:

    여기서:
    R1 및 R2는 함께 를 형성하고,
    하기 (a) 또는 (b)이고:
    (a) R3은 -X-C6-10아릴렌-NRaRb이고; 여기서 X는 -NH- 또는 -O-이고; 여기서 -X-C6-10아릴렌-NRaRb의 아릴렌은 할로겐, 중수소, 또는 메톡실로 임의 치환되고;
    R4는 C1-20알킬임;
    (b) R3은 -NRaRb이고;
    R4는 C1-20알킬임;
    R5A 및 R5B는, 각각의 경우에서 독립적으로, -H, -OH, 할로, 및 C1-20알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    Ra 및 Rb는, 각각의 경우에서 독립적으로, -H 및 C1-20알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; Ra 및 Rb는 폐환되어, 이들이 부착된 N인 하나의 헤테로 원자를 포함하는, 3 내지 6개의 환 원자를 지닌 사이클로헤테로알킬을 형성하고;
    BA는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
    각각의 L은 임의의 링커이며;
    BA 또는 L은 R3 또는 R4에 공유결합으로 결합되고;
    x는 1 내지 30의 정수이다.
  28. 제27항에 있어서, 화학식 1210, 1220, 1230, 또는 1240에 따른 단백질-스테로이드 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체:

    여기서 R3은 L 또는 BA에 공유결합으로 결합된다.
  29. 제27항에 있어서, 화학식 1310, 1320, 1330, 또는 1340에 따른 단백질-스테로이드 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체:

    여기서 R4는 L 또는 BA에 공유결합으로 결합된다.
  30. 제22항에 있어서, 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질-스테로이드 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체인 단백질-스테로이드 접합체:




    여기서, 각각의 L은 임의의 링커이고;
    각각의 BA는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이며;
    각각의 x는 1 내지 30의 정수이다.
  31. 제22항에 있어서, 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질-스테로이드 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체인 단백질-스테로이드 접합체:













    여기서 x는 1 내지 30의 정수이고;
    Ab는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
  32. 제22항에 있어서, 글루코코르티코이드 수용체 신호전달과 관련된 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 데 사용하기 위한 것으로서, 상기 질환, 장애, 또는 상태가 염증 질환, 장애, 또는 상태인, 단백질-스테로이드 접합체.
  33. 링커(linker)를 통해 반응성 그룹에 연결된 제1항의 화합물을 포함하는 링커-페이로드(linker-payload)로서, 반응성 그룹은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 반응성 부위와 반응하는 작용기인, 링커-페이로드.
  34. 제33항에 있어서, 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 링커-페이로드:








    .
  35. 제1항에 있어서, 화합물이 , 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체인 화합물.
  36. 제1항에 있어서, 화합물이 , 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체인 화합물.
  37. 제22항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 , 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체에 접합되는 단백질-스테로이드 접합체.
  38. 제22항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 , 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체에 접합되는 단백질-스테로이드 접합체.
  39. 제22항에 있어서, 단백질-스테로이드 접합체가
    , 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체인 단백질-스테로이드 접합체:
    여기서 x는 1 내지 30의 정수이고; Ab는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
  40. 제33항에 있어서, 화합물이 , 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체인 링커-페이로드.
  41. 제33항에 있어서, 화합물이 , 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체인 링커-페이로드.
  42. 제22항의 단백질-스테로이드 접합체의 치료학적 유효량을 포함하는, 글루코코르티코이드 수용체 신호전달과 관련된 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 데 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 상기 질환, 장애, 또는 상태가 염증 질환, 장애, 또는 상태인 약제학적 조성물.
  43. 제42항에 있어서, 약제학적 조성물이 제27항의 단백질-스테로이드 접합체의 치료학적 유효량을 포함하는 약제학적 조성물.
KR1020247004647A 2016-11-08 2017-11-07 스테로이드 및 이의 단백질-접합체 KR20240025695A (ko)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662419365P 2016-11-08 2016-11-08
US62/419,365 2016-11-08
US201762508317P 2017-05-18 2017-05-18
US62/508,317 2017-05-18
PCT/US2017/060434 WO2018089373A2 (en) 2016-11-08 2017-11-07 Steroids and protein-conjugates thereof
KR1020197015823A KR20190074310A (ko) 2016-11-08 2017-11-07 스테로이드 및 이의 단백질-접합체

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197015823A Division KR20190074310A (ko) 2016-11-08 2017-11-07 스테로이드 및 이의 단백질-접합체

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240025695A true KR20240025695A (ko) 2024-02-27

Family

ID=60409441

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197015823A KR20190074310A (ko) 2016-11-08 2017-11-07 스테로이드 및 이의 단백질-접합체
KR1020247004647A KR20240025695A (ko) 2016-11-08 2017-11-07 스테로이드 및 이의 단백질-접합체

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197015823A KR20190074310A (ko) 2016-11-08 2017-11-07 스테로이드 및 이의 단백질-접합체

Country Status (16)

Country Link
US (4) US10711032B2 (ko)
EP (1) EP3538539A2 (ko)
JP (2) JP7330101B2 (ko)
KR (2) KR20190074310A (ko)
CN (2) CN115651056A (ko)
AU (1) AU2017359043B2 (ko)
BR (1) BR112019009019A2 (ko)
CA (1) CA3042428A1 (ko)
CL (1) CL2019001259A1 (ko)
CO (1) CO2019005966A2 (ko)
IL (2) IL307357A (ko)
MX (2) MX2019005330A (ko)
PH (1) PH12019501021A1 (ko)
SG (1) SG10202104259RA (ko)
WO (1) WO2018089373A2 (ko)
ZA (1) ZA201902871B (ko)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6843891B2 (ja) 2016-06-02 2021-03-17 アッヴィ・インコーポレイテッド グルココルチコイド受容体アゴニスト及びこのイムノコンジュゲート
IL307357A (en) 2016-11-08 2023-11-01 Regeneron Pharma Steroids and their protein conjugates
US11491237B2 (en) 2017-05-18 2022-11-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cyclodextrin protein drug conjugates
CA3080857A1 (en) 2017-11-07 2019-05-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Hydrophilic linkers for antibody drug conjugates
MX2020005583A (es) 2017-12-01 2020-11-25 Abbvie Inc Agonista del receptor de glucocorticoides e inmunoconjugados de este.
MX2020006994A (es) * 2018-01-08 2020-11-06 Regeneron Pharma Esteroides y conjugados de anticuerpos de los mismos.
US11377502B2 (en) 2018-05-09 2022-07-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-MSR1 antibodies and methods of use thereof
CN114585623A (zh) 2019-08-02 2022-06-03 梅尔莎纳医疗公司 双[N-((5-氨基甲酰基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡唑-5-甲酰胺]衍生物和相关化合物作为STING（干扰素基因刺激物）激动剂用于治疗癌症
CN115175737A (zh) 2020-02-28 2022-10-11 瑞泽恩制药公司 结合her2的双特异性抗原结合分子及其使用方法
BR112023000489A2 (pt) 2020-07-13 2023-03-28 Regeneron Pharma Análogos de camptotecina conjugados a um resíduo de glutamina em uma proteína, e seu uso
EP4232481A1 (en) 2020-10-22 2023-08-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-fgfr2 antibodies and methods of use thereof
WO2022103724A1 (en) 2020-11-10 2022-05-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Selenium antibody conjugates
JP2023552559A (ja) * 2020-12-04 2023-12-18 ダイン セラピューティクス，インコーポレーテッド 抗体－オリゴヌクレオチド複合体およびそれらの使用
WO2022135332A1 (zh) * 2020-12-21 2022-06-30 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体偶联物
TW202245796A (zh) * 2021-02-04 2022-12-01 大陸商上海森輝醫藥有限公司 糖皮質激素受體激動劑的藥物偶聯物及其在醫藥上的應用
WO2022171101A1 (zh) * 2021-02-10 2022-08-18 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体偶联物
TW202304462A (zh) 2021-03-23 2023-02-01 美商美國禮來大藥廠 糖皮質素受體激動劑
TW202304464A (zh) 2021-03-23 2023-02-01 美商美國禮來大藥廠 新穎糖皮質素受體激動劑
AR125079A1 (es) 2021-03-23 2023-06-07 Lilly Co Eli Agonistas de receptores de glucocorticoides sustituidos con carboxi
CN113264983A (zh) * 2021-05-20 2021-08-17 联宁（苏州）生物制药有限公司 一种用于抗体偶联药物的连接子lnd1088的合成方法
WO2023025248A1 (zh) * 2021-08-26 2023-03-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
CN114394933B (zh) * 2022-01-07 2023-08-22 厦门沃克沃德医药科技有限公司 11,12-二氢-γ-氧代-二苯并[f]偶氮-5-(6h)-丁酸的合成方法
US20230287138A1 (en) 2022-01-12 2023-09-14 Regneron Pharmaceuticals, Inc. Protein-drug conjugates comprising camptothecin analogs and methods of use thereof
US20240067640A1 (en) 2022-03-11 2024-02-29 Firefly Bio, Inc. Phenyl maleimide linker agents
US20240082414A1 (en) 2022-05-13 2024-03-14 Eli Lilly And Company Human tumor necrosis factor alpha antibody glucocorticoid conjugates
TW202400266A (zh) * 2022-05-18 2024-01-01 大陸商成都百利多特生物藥業有限責任公司 配體藥物偶聯物及其應用
WO2023235738A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Eli Lilly And Company Human interleukin-4 receptor alpha antibody glucocorticoid conjugates
WO2023250341A2 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Eli Lilly And Company Human cd33 antibodies and glucocorticoid conjugates
WO2024020164A2 (en) 2022-07-21 2024-01-25 Firefly Bio, Inc. Glucocorticoid receptor agonists and conjugates thereof
WO2024064779A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 Eli Lilly And Company Glucocorticoid receptor agonists

Family Cites Families (148)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2737518A (en) * 1955-01-19 1956-03-06 Schering Corp 1-hydroxycortisone, 1-hydroxyhydrocortisone and esters thereof
US2968655A (en) * 1956-11-23 1961-01-17 Upjohn Co 11-oxygenated-6-methyl progesterone and intermediates therefor
US2920999A (en) 1957-06-07 1960-01-12 Pfizer & Co C 21-nitrogen derivatives of corticosteroids
DE1165595B (de) 1958-03-04 1964-03-19 Olin Mathieson Verfahren zur Herstellung von Triamcinolonacetonid-21-hemisuccinat und dessen Salzen
GB889766A (en) 1958-03-04 1962-02-21 Olin Mathieson Improvements in steroids and the synthesis thereof
US3197469A (en) 1958-08-06 1965-07-27 Pharmaceutical Res Products In 16, 17-acetals and ketals of 6-halo-16, 17-dihydroxy steroids of the pregnane seriesand intermediates therefor
US3007923A (en) * 1959-01-22 1961-11-07 Lab Francais Chimiotherapie Process for the fluorination of 9beta, 11beta-epoxy and 5alpha, 6alpha-epoxy steroids
GB898291A (en) 1959-03-18 1962-06-06 Upjohn Co Improvements in or relating to steroids and the manufacture thereof
US3033873A (en) 1960-05-11 1962-05-08 Pfizer & Co C 21-aminomethyl-pregnenes
US3033874A (en) 1960-05-11 1962-05-08 Pfizer & Co C 17beta-propenoyl steroids and process for preparing same
US3020275A (en) 1960-06-07 1962-02-06 American Cyanamid Co 21-nitrogen substituted steroids of the pregnane series and methods of preparing the same
DE1169444B (de) * 1961-02-22 1964-05-06 Schering Ag Verfahren zur Herstellung von ?-16ª‡-Methylsteroiden
US3047468A (en) * 1961-06-06 1962-07-31 American Cyanamid Co Method of preparing delta1, 4-3-keto steroids of the pregnane series
US3383394A (en) * 1965-08-30 1968-05-14 Schering Corp Novel 17-acylating process and products thereof
US3798216A (en) 1969-03-07 1974-03-19 Fabrication Des Antibiotique S 9-fluoro-11beta,21-dihydroxy-16alpha,17-(2-propenylidenedioxy)-pregna-1,4-diene-3,20-dione and derivatives thereof
DE2047105C3 (de) 1970-09-18 1979-02-15 Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen 17-Chlorsteroide und Verfahren zu ihrer Herstellung
IT1057859B (it) 1972-04-28 1982-03-30 Sigma Tao Ind Farmaceutiche Sp Perivato del triamoinolone
SE378109B (ko) 1972-05-19 1975-08-18 Bofors Ab
SE378110B (ko) 1972-05-19 1975-08-18 Bofors Ab
US4076737A (en) 1975-02-20 1978-02-28 Ciba-Geigy Corporation Aldehydes of the pregnane series and derivatives thereof
IL73337A (en) 1984-10-28 1988-09-30 Yissum Res Dev Co Antitumor steroid-platinum complexes and method for the preparation thereof
ES8605537A1 (es) 1985-07-03 1986-02-01 Elmu Sa Procedimiento de obtencion de cetales ciclicos de corticoi- des y sus 21-c esteres
SE8604059D0 (sv) 1986-09-25 1986-09-25 Astra Pharma Prod A method of controlling the epimeric distribution in the preparation of 16,17-acetals of pregnane derivatives
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5116829A (en) 1990-04-23 1992-05-26 Kao Corporation Steroid compounds
US5183815A (en) 1991-01-22 1993-02-02 Merck & Co., Inc. Bone acting agents
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
ATE183192T1 (de) 1993-01-08 1999-08-15 Astra Ab Neue colon-oder ilean-spezifische steroid derivate
DE4311987A1 (de) 1993-04-07 1994-10-13 Schering Ag Neue Glucocorticoide
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5824669A (en) 1996-03-22 1998-10-20 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated compounds and compositions and their use for treating respiratory disorders
US5837698A (en) 1996-05-02 1998-11-17 G. D. Searle & Co. Steroid nitrite and nitrate ester derivatives useful as anti-inflammatory drugs
AU3703900A (en) 1999-02-24 2000-09-14 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated steroids for the treatment of cardiovascular diseases and disorders
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20070258987A1 (en) 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
SE0101220D0 (sv) 2001-04-04 2001-04-04 Astrazeneca Ab New use
US6908934B2 (en) 2001-06-11 2005-06-21 Merck & Co., Inc. Therapeutic compounds for treating dyslipidemic conditions
ITMI20020148A1 (it) 2002-01-29 2003-07-29 Nicox Sa Nuovi corticosteroidi
US20050009798A1 (en) 2002-02-20 2005-01-13 Sepracor Inc. Carbonate and carbamate modified forms of glucocorticoids in combination with B2 adrenergic agonists
US7190468B2 (en) 2002-07-17 2007-03-13 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Background document rendering system and method
ES2556641T3 (es) 2002-07-31 2016-01-19 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de fármacos y su uso para tratar cáncer, una enfermedad autoinmune o una enfermedad infecciosa
US7985422B2 (en) * 2002-08-05 2011-07-26 Torrent Pharmaceuticals Limited Dosage form
US20040157810A1 (en) 2002-08-23 2004-08-12 Teicher Martin H. Corticosteroid conjugates and uses thereof
AU2003278764C1 (en) 2002-09-06 2010-09-16 Cerulean Pharma Inc. Cyclodextrin-based polymers for therapeutic delivery
CN1414008A (zh) 2002-10-17 2003-04-30 南开大学 含氮甾体化合物及其制备方法
US7015349B2 (en) 2003-03-26 2006-03-21 The Gillette Company Reduction of hair growth
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
WO2005063777A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Corus Pharma Benzylphosphate and substituted benzylphosphate prodrugs for the treatment of pulmonary inflammation
US20050192257A1 (en) 2004-02-26 2005-09-01 Peyman Gholam A. Predictors for patients at risk for glaucoma from steroid therapy
AR048098A1 (es) 2004-03-15 2006-03-29 Wyeth Corp Conjugados de caliqueamicina
NZ579482A (en) 2004-06-01 2011-02-25 Genentech Inc Antibody drug conjugates and methods
EP1602931A1 (en) 2004-06-03 2005-12-07 Universiteit Leiden SR-A antagonists
US7541330B2 (en) 2004-06-15 2009-06-02 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
ATE411053T1 (de) 2004-08-09 2008-10-15 Deutsches Krebsforsch Albuminkonjugate, die eine glucuron-verknüpfung enthalten
TW200616604A (en) 2004-08-26 2006-06-01 Nicholas Piramal India Ltd Nitric oxide releasing prodrugs containing bio-cleavable linker
US20080305044A1 (en) 2004-11-29 2008-12-11 Seattle Genetics, Inc. Engineered Antibodies and Immunoconjugates
WO2006135371A1 (en) 2005-06-09 2006-12-21 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
CA2612364A1 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Corus Pharma, Inc. Substituted phenylphosphates as mutual prodrugs of steroids and .beta.-agonists the treatment of pulmonary inflammation and bronchoconstriction
CA2622640A1 (en) 2005-11-02 2007-05-18 Sicor Inc. Improved process for the preparation of ciclesonide
CA2633523A1 (en) 2005-12-22 2007-07-05 Baxter International Inc. Improved monocyte activation test better able to detect non-endotoxin pyrogenic contaminants in medical products
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
ES2601102T3 (es) 2007-02-05 2017-02-14 Nicox S.A. Esteroides que liberan óxido nítrico
WO2008122039A2 (en) 2007-04-02 2008-10-09 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Selenocysteine mediated hybrid antibody molecules
EP3561513A1 (en) 2007-05-23 2019-10-30 Ventana Medical Systems, Inc. Polymeric carriers for immunohistochemistry and in situ hybridization
US9138484B2 (en) 2007-06-25 2015-09-22 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
CA2692021A1 (en) 2007-06-28 2008-12-31 Capsutech Ltd Targeting conjugates comprising active agents encapsulated in cyclodextrin-containing polymers
CN101397328A (zh) 2007-09-27 2009-04-01 天津药业研究院有限公司 一氧化氮供体型糖皮质激素
DK2214646T3 (da) 2007-10-05 2021-10-04 Univ Wayne State Dendrimers for sustained release of compounds
JP2011507878A (ja) 2007-12-21 2011-03-10 シェーリング コーポレイション Ｃ２０−ｃ２１置換グルココルチコイド受容体アゴニスト
CN102099368A (zh) 2007-12-21 2011-06-15 先灵公司 作为糖皮质激素受体激动剂的c-21硫醚
CN104258413A (zh) 2008-04-30 2015-01-07 伊缪诺金公司 有效的偶联物和亲水性连接体
JP2011522895A (ja) 2008-06-10 2011-08-04 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 治療において使用するためのβ−アゴニスト化合物と連結したコルチコステロイド
ES2536882T3 (es) 2008-07-21 2015-05-29 Polytherics Limited Nuevos reactivos y procedimiento de conjugación de moléculas biológicas
AU2009273251B2 (en) 2008-07-22 2014-12-18 Ablynx Nv Amino acid sequences directed against multitarget scavenger receptors and polypeptides
ES2471145T3 (es) 2009-03-09 2014-06-25 Mikasa Seiyaku Co,. Ltd. Compuesto esteroide
WO2010126953A1 (en) 2009-04-29 2010-11-04 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid linked beta-agonist compounds for use in therapy
WO2010132743A1 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid beta-agonist compounds for use in therapy
EP2464972A1 (en) 2009-08-10 2012-06-20 UCL Business PLC Reversible covalent linkage of functional molecules
WO2011020107A2 (en) 2009-08-14 2011-02-17 Georgetown University Compositions and methods for detection and treatment of breast cancer
GB0917044D0 (en) 2009-09-29 2009-11-18 Cytoguide As Agents, uses and methods
GB0917054D0 (en) 2009-09-29 2009-11-11 Cytoguide As Agents, uses and methods
WO2011081937A1 (en) 2009-12-15 2011-07-07 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid-beta-agonist-muscarinic antagonist compounds for use in therapy
WO2011090940A1 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Cerulean Pharma Inc. Cyclodextrin-based polymers for therapeutic delivery
US9375473B2 (en) 2010-02-19 2016-06-28 Cornell Research Foundation, Inc. Method to treat autoimmune demyelinating diseases and other autoimmune or inflammatory diseases
CA2793890C (en) 2010-04-15 2017-08-15 Spirogen Developments Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20130244905A1 (en) 2010-07-06 2013-09-19 Ed Grabczyk Reporter for RNA Polymerase II Termination
SI2601298T1 (sl) 2010-08-02 2017-03-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Miši, ki ustvarjajo proteine za vezavo, obsegajoče vl domene
UA109150C2 (xx) 2010-09-01 2015-07-27 Аміди n-(тетразол-5-іл)- або n-(триазол-5-іл)арилкарбонової кислоти та їх застосування як гербіцидів
EA201390575A1 (ru) 2010-10-29 2014-01-30 Иммьюноджен, Инк. Неантагонистические egfr-связывающие молекулы и их иммуноконъюгаты
US20120302505A1 (en) 2011-04-21 2012-11-29 Fetzer Oliver S Cyclodextrin-based polymers for therapeutic delivery
CA2837167A1 (en) 2011-05-27 2012-12-06 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
KR101961976B1 (ko) 2011-10-14 2019-03-25 시애틀 지네틱스, 인크. 피롤로벤조디아제핀 및 표적 접합체
CN103987384A (zh) 2011-10-14 2014-08-13 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
WO2013053873A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines
CN104011018B (zh) 2011-10-14 2016-12-14 麦迪穆有限责任公司 可用于制备吡咯并苯并二氮杂卓的合成方法和中间体
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
US20130224228A1 (en) 2011-12-05 2013-08-29 Igenica, Inc. Antibody-Drug Conjugates and Related Compounds, Compositions, and Methods
GB201122325D0 (en) 2011-12-23 2012-02-01 Cytoguide As Novel formulations
KR20150023729A (ko) 2012-06-14 2015-03-05 암브룩스, 인코포레이티드 핵 수용체 리간드 폴리펩티드에 접합된 항-psma 항체
EP2906245B1 (en) 2012-10-11 2021-01-13 Ascendis Pharma A/S Diagnosis, prevention and treatment of diseases of the joint
EP2908818A4 (en) 2012-10-16 2016-07-13 Endocyte Inc CONJUGATES OF DRUG DELIVERY CONTAINING ARTIFICIAL AMINO ACIDS AND METHODS OF USE
EP2911699B1 (en) 2012-10-23 2017-11-15 SynAffix B.V. Modified antibody, antibody-conjugate and process for the preparation thereof
WO2014065575A1 (ko) 2012-10-25 2014-05-01 주식회사유한양행 4,5-다이하이드로-1h-피라졸 유도체 또는 그의 염 및 이를 포함하는 약학 조성물
BR112015015289A2 (pt) 2012-12-24 2017-08-15 Abbvie Inc Proteínas que se ligam ao receptor de prolactina e usos das mesmas
MX2015011367A (es) 2013-03-13 2015-12-16 Seattle Genetics Inc Ciclodextrina y formulaciones de conjugados anticuerpo-farmaco.
EP2988786A4 (en) 2013-04-22 2016-12-21 Avelas Biosciences Inc COMPOSITIONS AND METHODS OF USE FOR SELECTIVE DRUG DELIVERY
WO2014197854A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel linkers for antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use
JP6744212B2 (ja) 2013-06-21 2020-08-19 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． ポリペプチドの酵素的結合
US20160158369A1 (en) 2013-07-10 2016-06-09 Seikagaku Corporation Pharmaceutical composition for respiratory administration
TWI641620B (zh) 2013-08-21 2018-11-21 再生元醫藥公司 抗－ｐｒｌｒ抗體及其用途
KR102538993B1 (ko) 2013-10-15 2023-06-02 씨젠 인크. 개선된 리간드-약물 컨쥬게이트 약물동력학을 위한 peg화된 약물-링커
GB201320091D0 (en) 2013-11-14 2014-01-01 Univ Manchester Selective glucocorticoid receptor ligands
CN103694375B (zh) 2013-12-13 2016-10-05 北京大学 一种三萜-环糊精共价化合物及其制备方法和用途
US10485811B2 (en) 2014-01-24 2019-11-26 Centre National De La Recherche Scientifique Orally available compounds, a process for preparing the same and their uses as anti-adhesive drugs for treating E. coli induced inflammatory bowel diseases such as crohn's disease
EP3125943A4 (en) 2014-04-04 2017-12-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
IL300540B1 (en) 2014-04-10 2024-04-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Preparation method for drug conjugates - antibody against - HER3
US20170189549A1 (en) 2014-06-13 2017-07-06 Glykos Finland Oy Payload-Polymer-Protein Conjugates
JP6751393B2 (ja) 2014-12-03 2020-09-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ抗体リファマイシン抱合体及びその使用
CN107206102A (zh) 2014-12-03 2017-09-26 豪夫迈·罗氏有限公司 抗金黄色葡萄球菌抗体利福霉素缀合物及其用途
EP3230283A1 (en) 2014-12-09 2017-10-18 AbbVie Inc. Bcl-xl inhibitory compounds and antibody drug conjugates including the same
JP2018508463A (ja) 2014-12-09 2018-03-29 アッヴィ・インコーポレイテッド 低細胞透過性を有するＢｃｌ−ｘＬ阻害性化合物およびこれを含む抗体薬物コンジュゲート
US10233210B2 (en) 2015-01-30 2019-03-19 Coral Drugs Pvt. Ltd. Process for preparation of glucocorticoid steroids
JP2018507844A (ja) 2015-02-06 2018-03-22 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． 抗体薬物コンジュゲート
WO2017006279A1 (en) 2015-07-08 2017-01-12 Aten Porus Lifesciences Cyclodextrin-polymer complexes and compostions and methods of making and using the same
CN117567535A (zh) 2015-09-10 2024-02-20 坦伯公司 生物正交组合物
EP3359194A4 (en) 2015-10-06 2019-04-24 Merck Sharp & Dohme Corp. ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATE FOR ANTI-INFLAMMATORY APPLICATIONS
US10869929B2 (en) 2016-01-29 2020-12-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphonate linkers and their use to facilitate cellular retention of compounds
WO2017147542A2 (en) 2016-02-26 2017-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimized transglutaminase site-specific antibody conjugation
UA125510C2 (uk) 2016-03-25 2022-04-13 Сіджен Інк. Спосіб отримання пегильованої сполуки лікарський препарат-лінкер, де лікарським препаратом є ауристатин, та її проміжних сполук
GB201608936D0 (en) 2016-05-20 2016-07-06 Polytherics Ltd Novel conjugates and novel conjugating reagents
JP6843891B2 (ja) 2016-06-02 2021-03-17 アッヴィ・インコーポレイテッド グルココルチコイド受容体アゴニスト及びこのイムノコンジュゲート
JP2019522643A (ja) 2016-06-08 2019-08-15 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｃｄ９８抗体及び抗体薬物コンジュゲート
MX2019003325A (es) 2016-09-23 2019-08-05 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-steap2, conjugados anticuerpo-farmaco, y moleculas de fijacion al antigeno biespecificas que se fijan a steap2 y cd3, y usos de estos.
IL307357A (en) 2016-11-08 2023-11-01 Regeneron Pharma Steroids and their protein conjugates
AU2018229277A1 (en) 2017-02-28 2019-10-10 Immunogen, Inc. Maytansinoid derivatives with self-immolative peptide linkers and conjugates thereof
JP2020520926A (ja) 2017-05-18 2020-07-16 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド ビス−オクタヒドロフェナントレンカルボキサミド及びそのタンパク質コンジュゲート
US11491237B2 (en) 2017-05-18 2022-11-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cyclodextrin protein drug conjugates
WO2018218004A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Linkers for antibody drug conjugates
WO2019034176A1 (zh) 2017-08-18 2019-02-21 四川百利药业有限责任公司 一种喜树碱-抗体偶联物
CN108853514B (zh) 2017-08-18 2022-07-22 四川百利药业有限责任公司 具有两种不同药物的抗体药物偶联物
CA3080857A1 (en) 2017-11-07 2019-05-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Hydrophilic linkers for antibody drug conjugates
MX2020006994A (es) 2018-01-08 2020-11-06 Regeneron Pharma Esteroides y conjugados de anticuerpos de los mismos.
EA202092410A1 (ru) 2018-04-06 2021-02-09 Сиэтл Дженетикс, Инк. Конъюгаты камптотецина с пептидом
US11377502B2 (en) 2018-05-09 2022-07-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-MSR1 antibodies and methods of use thereof
MX2021007524A (es) 2018-12-21 2021-08-05 Regeneron Pharma Analogos de rifamicina y conjugados de farmaco-anticuerpo de los mismos.
SG11202107212QA (en) 2019-01-08 2021-07-29 Regeneron Pharma Traceless linkers and protein-conjugates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
US11760775B2 (en) 2023-09-19
IL307357A (en) 2023-11-01
MX2019005330A (es) 2019-09-11
KR20190074310A (ko) 2019-06-27
CA3042428A1 (en) 2018-05-17
CL2019001259A1 (es) 2019-07-19
JP2019536765A (ja) 2019-12-19
PH12019501021A1 (en) 2019-06-24
US20210040144A1 (en) 2021-02-11
AU2017359043B2 (en) 2022-06-16
IL266353A (en) 2019-06-30
WO2018089373A3 (en) 2018-06-21
US20240101594A1 (en) 2024-03-28
IL266353B1 (en) 2023-11-01
EP3538539A2 (en) 2019-09-18
AU2017359043A1 (en) 2019-05-23
JP7330101B2 (ja) 2023-08-21
US10711032B2 (en) 2020-07-14
ZA201902871B (en) 2023-12-20
CO2019005966A2 (es) 2019-07-10
IL266353B2 (en) 2024-03-01
WO2018089373A9 (en) 2018-07-12
CN110291097A (zh) 2019-09-27
MX2021012927A (es) 2022-01-31
SG10202104259RA (en) 2021-06-29
CN115651056A (zh) 2023-01-31
US20210332080A1 (en) 2021-10-28
BR112019009019A2 (pt) 2019-07-09
WO2018089373A2 (en) 2018-05-17
US20180155389A1 (en) 2018-06-07
JP2023153988A (ja) 2023-10-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11760775B2 (en) Steroids and protein-conjugates thereof
KR20200108002A (ko) 스테로이드 및 이의 항체-접합체
US20230035898A1 (en) Cyclodextrin protein drug conjugates
KR20210114008A (ko) 흔적이 없는 링커 및 이의 단백질-접합체
AU2018269568A1 (en) Bis-octahydrophenanthrene carboxamides and protein conjugates thereof
KR20200085807A (ko) 항체 약물 접합제용 친수성 링커
US20230119539A1 (en) Traceless linkers and protein-conjugates thereof
EA045579B1 (ru) Стероиды и их конъюгаты с белками
NZ793831A (en) Steroids and protein-conjugates thereof
EA045111B1 (ru) Стероиды и их антитело-конъюгаты

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent