CN1414008A - 含氮甾体化合物及其制备方法 - Google Patents

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CN1414008A
CN1414008A CN 02131190 CN02131190A CN1414008A CN 1414008 A CN1414008 A CN 1414008A CN 02131190 CN02131190 CN 02131190 CN 02131190 A CN02131190 A CN 02131190A CN 1414008 A CN1414008 A CN 1414008A
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彭久合
程津培
朱兴族
季新泉
韩翀
李秉桀
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Nankai University
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Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Nankai University
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Abstract

本发明涉及含氮甾体化合物，具体地讲提供一种糖皮质激素类含氮甾体化合物及其制备方法，该含氮甾体化合物作为药物的用途能选择性抑制iNOS的表达和活性以及作为糖皮质激素类药物。本发明的结构通式为(I)的含氮甾体化合物：其中，R1，R2分别为氢或R1和R2为双键；R3为氢、甲基或氟；R4为氢或氟；R5和R6定义为：R5为β－羟基，则R6为氢；或R5和R6均为氢；或R5和R6为酮基；R7为氢、α－或β－甲基；R8为羟基、C1～C6直链酰氧基、芳香或杂环芳香基；R9定义为含氮取代基。

Description

含氮甾体化合物及其制备方法
所属技术领域
本发明涉及含氮甾体化合物，具体地讲提供一种糖皮质激素类含氮甾体化合物及其制备方法，该含氮甾体化合物作为药物的用途能选择性抑制iNOS的表达和活性。本发明还提供了制备这些化合物的中间体的方法。
背景技术
在过去的十几年中，人们对NO产生的酶学、NO在生理和许多疾病的病理中的作用的研究取得了极大的进展。这使得人们充分认识到了NO的两面性，它犹如一把“双刃剑”(Colasanti，M.and Suzuki，H.The dual personality of NO.TiPS.2000，21，249-252)，除了具有生理信使的一面外，还有病理毒素的另一面。鉴于NO的两面性，药学家们开发了两大类药物，一类可以提高体内NO的含量，如NO及NO供体(Wang，P.G.，etc.Nitric OxideDonors：Chemical Activities and Biological Applications Chem.Rev.2002，102，1091-1134)等，用于治疗由于NO生成量不足引发的疾病(如心绞痛等)；另一类可以降低体内NO的含量，如NOS抑制剂(Lowe III，J.A.Nitric oxide synthase inhibitors：recent patent activity.IDrugs 2000，3，63～72)等，用于治疗由于NO生成量过量引发的疾病(如败血性休克等)。
许多科研机构和制药公司研究和开发了大量NOS抑制剂，从化学结构的角度可以将NOS抑制剂分为：精氨酸类似物及其衍生物、脒类、硫脲类、异硫脲类、2-氨基吡啶类、糖皮质激素类等(Lowe III，J.A.Nitric oxide synthase inhibitors：recent patent activity.IDrugs2000，3，63-72；Radomski，M.W，etc.Glucocorticoids inhibit the expression of an inducible，but not the constitutive，nitric oxide synthase in vascular endothelial cells.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1990，87，10043-10047)。
糖皮质激素类可以用于治疗多种炎症，虽然药学家们已经开发出多种合成糖皮质激素，但目前仍然缺乏安全有效的药物，特别是当用于治疗哮喘、牛皮廯、溃疡性结肠炎及风湿性关节炎时。通常认为糖皮质激素在减轻炎症方面是最出色的药物，但是由于糖皮质激素本身具有多种生物活性，且生物活性极强，使它们存在着严重的副作用，如库欣综合症、改变脂质及骨质代谢、改变循环系统激素水平等，特别是对垂体功能和免疫系统的抑制，使它们的临床应用受到很大限制。为增强糖皮质激素的生物活性同时减小其系统性副作用，多年来人们一直致力于开发选择性较强的糖皮质激素，对其结构进行了大量的修饰，希望找到活性单一的药物，如软药、前药(Kwon，T.，etc.New steroidalanti-inflammatory antedrugs：steroidal[16α，17α-d]-3’-carbethoxyisoxazoli-nes.J.Med.Chem.1995，38，1048～1051)的概念和应用就源于新型糖皮质激素药物的开发。但是，这方面的研究一直没有太大的进展。
1990年，Radomski首次报道此类化合物中的地塞美松和氢化可的松能够抑制iNOS的表达，认为它是一个iNOS抑制剂(Radomski，M.W.，etc.Glucocorticoids inhibit theexpression of an inducible，but not the constitutive，nitric oxide synthase in vascularendothelial cells.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1990，87，10043-10047)。此后关于此类药物的研究大部分仅限于地塞美松、甲泼尼龙等糖皮质激素类药物与NOS的相互作用，而对其结构进行改造，从而改善其与NOS作用的研究则很少(Heiman，A.S.，etc.New steroidalanti-inflammatory antedrugs bind to macrophage glucocorticoid receptors and inhibit nitricoxide generation.Steroids 1998，63，644～649；You Z.，etc.Novel steroid spiro enones：condensation of prednisolone derivatives with diethyl oxalate.Steroids 2000，65，109～105)。值得注意的是糖皮质激素通过下调iNOS的表达直接抑制它的诱导(Geller，D.A.，etc.Cytokines，endotoxin，and glucocorticoids regulate the expression of inducible nitric oxidesynthase in hepatocytes.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993，90，522-526)，而其它NOS抑制剂则是在NOS被诱导后抑制它的酶活性，从这方面讲，糖皮质激素类NOS抑制剂同其它NOS抑制剂的作用机理是不同的，糖皮质激素类NOS抑制NOS的作用更积极、主动。
发明内容
本发明的目的是提供一种含氮甾体化合物及其制备方法，本发明是对已经上市的糖皮质激素类药物进行结构修饰，在C21-位引入含氮基团，以期改善其生物活性。此类化合物能选择性抑制iNOS，其适应症包括甾体抗炎药物的及iNOS抑制剂的所有适应症。
本发明是结构通式为(I)的含氮甾体化合物：
Figure A0213119000071
其中，各取代基的定义如下：R1，R2为氢或R1和R2为双键；R3为氢，甲基，或氟；R4为氢或氟；若R5为β-羟基，则R6为氢；或R5和R6均为氢；或R5和R6为酮基；R7为氢，α-或β-甲基；R8为羟基，C1～C6直链酰氧基，芳香或杂环芳香基；R9定义为含氮取代基，即：
1、伯氨基及其盐，包括盐酸盐、溴氢酸盐、碘氢酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、草酸盐、三氟醋酸盐、富马酸盐、马来酸盐、甲烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐；
2、C1～C12直链或支链烷(或磺)酰胺基，或具有卤素、芳香基、胺基取代基的C1～C12直链或支链烷(或磺)酰胺基；单琥珀酰胺基、单富马酰胺基；取代芳香或杂环芳香(或磺)酰胺基；
3、N-C1～C12直链或支链烷基脲基(或硫脲基)；N-取代芳基或杂芳基脲基(或硫脲基)；N-苯甲酰基或叔丁氧羰基或苄氧羰基脲(或硫脲)；
4、N-苯甲酰基/叔丁氧羰基-N’-取代芳基或杂芳基胍基。
C21-伯氨基糖皮质激素是本发明所要采用的一个重要中间体，文献介绍了两种方法制备此类化合物。一种为应用Gabriel反应引入伯氨基(Krajcsi，P.and Arányi，P.Novelsynthesis of 21-aminopregnanes J.Chem.Research(S)1987，382-383)，以氢化泼尼松C21位引入伯氨基为例，合成路线如下：
Figure A0213119000081
反应条件：a)甲烷磺酰氯b)DMF/邻苯二甲酰亚胺钾c)水合肼/无水乙醇；浓盐酸/氢氧化钠
通过重复文献方法，发现用文献所述的肼解法脱去邻苯二甲酰亚氨基时，虽然有产物生成，但杂质较多，收率很低，产物难于从反应体系中分离。此外，文献还报道了另外一种的引入C21-伯氨基的方法(Smith，L.L.，etc.16α-Hydroxy steroids.XII.21-Aminoderivatives of 9α-fluorohydrocortisone J.Am.Chem.Soc.1962，84，1265-1270)，这种方法的总收率也较低。
本发明提供了一种新型的制备C21-伯氨基糖皮质激素的方法，即通过选择性还原C21-叠氮基糖皮质激素制得C21-伯氨基糖皮质激素，反应通式如下所示：
Figure A0213119000092
其中，取代基R1～R8如上所述，R10为甲烷磺酰氧基、苯磺酰氧基或对甲苯磺酰氧基；卤素，包括氯、溴和碘。
本发明提供了C21-叠氮基糖皮质激素的制备方法，即以C21-甲烷磺酰氧基、苯磺酰氧基、对甲苯磺酰氧基糖皮质激素或者C21-卤代糖皮质激素与叠氮盐、现场制备的叠氮盐、叠氮基三甲基硅等叠氮源在低级醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯、硝基苯、二甲基甲酰胺、二甲亚砜等溶剂中通过置换反应得到的。所用溶剂优选二甲亚砜、二甲基甲酰胺、丙酮(Lewis，H.；etc.21-Azido steroids.US2853486(1958)/CA53：8209h)；叠氮源优选叠氮化钠；反应的温度可以在0℃至溶剂的沸点之间，优选20～50℃；搅拌形式可以为机械搅拌或电磁搅拌，C21-磺酰氧基或C21-卤代糖皮质激素与叠氮源的摩尔配比为1∶1～3，优选1∶2.4～3；此反应一般在2～3小时内结束，反应结束后，将反应液倾入冷水中或者将反应液浓缩至干，再加入水，经过滤、烘干的粗品可以不用精制，直接用于制备C21-叠氮基糖皮质激素。
C21-卤代糖皮质激素是通过C21-磺酰氧基糖皮质激素与氯化锂、溴化锂或溴化钠或溴化钾、碘化钠或碘化钾通过置换反应制备的，所用溶剂优选二甲亚砜、二甲基甲酰胺、丙酮；反应的温度可以在0℃至溶剂的沸点之间，优选20～80℃；搅拌形式可以为机械搅拌或电磁搅拌；氮气保护有利于防止副产物的生成；C21-磺酰氧基糖皮质激素与金属卤代盐的摩尔配比为1∶1～4，优选1∶2.5～3.5。
C21-磺酰氧基糖皮质激素是通过C21-羟基糖皮质激素与磺酰氯在四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯、硝基苯等有机溶剂中反应制备的，以无机碱如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾；或有机碱如吡啶、三乙胺，为缚酸剂，在一般有机研究人员所熟知的条件下制备。
本发明提供了C21-叠氮基糖皮质激素的还原方法，其中，R1～R8如上所述。所用的还原剂和还原方法包括：硫化氢、硫代硫酸钠、保险粉、硫化钠、三烷基锡烷、三苯基膦、单质金属(如锌、铁、铝、镁)/酸或酸性缓冲体系、催化氢化。还原反应所用溶剂包括：低级醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯、硝基苯、二甲基甲酰胺、二甲亚砜或上述溶剂的任意混合物；或水和上述有机溶剂的混合体系。当还原剂为三苯基膦时，溶剂优选四氢呋喃，反应条件可以参考相关文献(LiangR.，etc.Parallel synthesis and screening of a solid phase carbohydrate library Science 1996，274，1520～1522)；当还原剂为单质金属/酸或酸性缓冲体系时，所用溶剂如上所述，所用酸包括盐酸、溴氢酸、碘氢酸、甲酸、醋酸；或酸性盐，如硫酸铵、硝酸铵、磷酸铵，磷酸氢铵、氯化铵、硫酸铝、氯化铝、硫酸铝、氯化钴等，在一般情形下，还原剂过量20％即可以使反应完全，反应温度控制在10～30℃；当还原方法为催化氢化时，所用溶剂优选低级醇，如甲醇、乙醇、丙醇；或低级醇与水、二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷的混合溶剂；所用催化剂可以是兰尼镍、钯/碳、铂/碳；所用氢源为氢气、水合肼、次亚磷酸或其钠盐、环己烯。反应温度可以在室温之溶剂的沸点之间，反应压力可以是常压或加压反应。C21-伯氨基糖皮质激素还可以通过Gabriel法(Krajcsi，P.and Arányi，P.Novelsynthase of 21-aminopregnanes J.Chem.Research(S)1987，382-383)或还原醛肟的方法(Smith，L.L.，etc.16α-Hydroxy steroids.XII.21-Aminoderivatives of 9α-fluoro-hydrocortisone J.Am.Chem.Soc.1962，84，1265-1270)制备。
本发明提供了制备结构通式为(I)的C21-烷或磺酰胺基糖皮质激素的方法，各取代基的定义如上所述。C21-伯氨基糖皮质激素或现场制备的C21-伯氨基糖皮质激素与过量20～200％的酰氯、酸酐在四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯、硝基苯、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、冰醋酸或上述溶剂的混合体系中，于-20～60℃之间反应，可以得到相应的C21-烷或磺酰胺基糖皮质激素。在酰化的过程中，可以加入无机碱如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾；或有机碱如吡啶、三乙胺，为缚酸剂，缚酸剂的用量所用酰氯或酸酐的1.2～2倍摩尔量。制备烷基酰胺时，反应温度优选0～25℃；制备磺酰胺时，反应温度优选40～60℃。此类化合物还可以通过等摩尔量的C21-伯氨基糖皮质激素与相应的酸通过脱水反应制备，所用脱水剂为1倍摩尔量的DCC等，所用溶剂为无水四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯、硝基苯、二甲基甲酰胺、二甲亚砜或上述溶剂的混合体系中，反应温度优选-5～30℃。此类化合物还可以通过等摩尔量的C21-伯氨基糖皮质激素与酸共热熔融脱水制得(彭久合等。α1-受体拮抗剂DDPH相关的芳氧烷胺类化合物的合成与降压活性。中国药科大学学报1998，29，81～91)。
本发明提供了制备结构通式为(I)的C21-脲基糖皮质激素的方法，各取代基的定义如上所述。其特征为C21-伯氨基糖皮质激素与异氰酸酯或现场制备的异氰酸酯反应，或者脂肪或芳香胺与C21-异氰酸酯基糖皮质激素或现场制备的C21-异氰酸酯基糖皮质激素反应，制备C21-脲基糖皮质激素。所用有机溶剂可以是乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、二溴乙烷、四氢呋喃、苯、甲苯、氯苯、硝基苯或上述溶剂的任意混合物。反应温度可以在-20℃～110℃之间，优选10～40℃。C21-伯氨基糖皮质激素与异氰酸酯或现场制备的异氰酸酯的配比为1∶1～5，为使反应完全一般需要使用过量的异氰酸酯。当R5和R6共同为酮基时，也可由相应的C11-羟基甾体化合物经有机科研工作者所熟知的普氏氧化法制得。
本发明提供了制备结构通式为(I)的C21-硫脲基糖皮质激素的方法，各取代基的定义如上所述。其特征为C21-伯氨基糖皮质激素与异硫氰酸酯或现场制备的异硫氰酸酯反应，或者脂肪或芳香胺与C21-异硫氰酸酯基糖皮质激素或现场制备的C21-异硫氰酸酯基糖皮质激素反应，制备C21-硫脲基糖皮质激素。C21-伯氨基糖皮质激素与异硫氰酸酯或现场制备的异硫氰酸酯的配比为1∶1～5，为使反应完全一般需要使用过量的异硫氰酸酯。所用有机溶剂可以是乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、二溴乙烷、四氢呋喃、苯、甲苯、氯苯、硝基苯或上述溶剂的任意混合物。反应温度可以在-20℃～110℃之间，优选10～40℃。当R5和R6共同为酮基时，也可由相应的C11-羟基甾体化合物经有机科研工作者所熟知的方法氧化制得。N-苯甲酰基或叔丁氧羰基或苄氧羰基硫脲是通过C21-伯氨基糖皮质激素与苯甲酰基或叔丁氧羰基或苄氧羰基异硫氰酸酯或现场制备的苯甲酰基或叔丁氧羰基或苄氧羰基异硫氰酸酯反应制备的。
按照文献方法(Kim，K.S.，and Qian，L.Improved method for the preparation ofguanidines.Tetrahedro Letter 1993，24，7677～7680)由C21-伯氨基糖皮质激素与烷基、芳基或杂芳基硫脲反应制备C21-(N-苯甲酰基/叔丁氧羰基-N’-取代芳基或杂芳基胍基)糖皮质激素。反应溶剂优选二甲基甲酰胺。反应温度可以在-20～100℃之间，优选5～20℃。
本发明提供了一种新型的含氮甾体药物，其有效成分包含结构通式为(I)的新型甾体化合物或其可药用的盐，此类化合物能选择性抑制iNOS。其适应症包括甾体抗炎药物的及iNOS抑制剂的所有适应症。
具体实施方式
下述实施例是为了进一步说明本发明专利，并不构成对本发明的任何限制。
实施例1
制备11β，17α，21-三羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮-21-甲烷磺酸酯
11β，17α，21-三羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮(氢化可的松，30g；82.77mmol)，吡啶(160ml)于250ml三颈瓶中，降温至0℃，在半小时内向其中滴加甲烷磺酰氯(15.5ml，191.64mmol)。于0～5℃反应3小时，反应结束后，将反应液倾入2000ml冰水中，静置2小时以上，抽滤，水洗，烘干，得到粗品33.53g，收率91.95％。
所得的粗品用氯仿/甲醇混合溶剂重结晶，得30.5g纯品。Mp178～180(dec.)℃。
元素分析：C22H32O7S，Cal.C59.98％，H7.32％；Found：59.88％，H7.50％
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：5.55(1H，s)，5.49(1H，s)，5.28(1H，d，JAB17.6Hz)，4.87(1H，d，JAB17.6Hz)，4.35(1H，d，J3.1Hz)，4.25(1H，s)，3.23(3H，s)，1.35(3H，s)，0.77(3H，s)。
实施例2
制备11β，17α，21-三羟基-孕甾-1，4-烯-3，20-二酮-21-甲烷磺酸酯
11β，17α，21-三羟基-孕甾-1，4-烯-3，20-酮(氢化泼尼松，50.33g，139.63mmol)，四氢呋喃(500ml)，三乙胺(46.70ml，335.11mmol)于1000ml三颈瓶中，机械搅拌，在0.5小时内于0℃以下向其中滴加甲烷磺酰氯(25.5ml，329.46mmol)，于0～5℃反应3小时。反应结束后，反应液用1000ml醋酸乙酯萃取，300ml×3水洗涤，取有机相，经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩至干，得到粗品58.2g，收率95.04％。Mp199～200℃。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.33(d，1H，J9.9Hz)，6.17(d，1H，J9.9Hz)，5.90(s，1H)，5.5(s，1H)，5.27(d，1H，JAB17.5Hz)，4.91(d，1H，JAB17.5Hz)，4.8(s，1H)，4.27(s，1H)，3.22(s，3H)，1.37(s，3H)，0.79(s，3H)
[Ref.Krajcsi，P.and Arányi，P.Novel synthesis of 21-aminopregnanes.J.Chem.Research(S)1987，382～383；Simons，S.S.16α-Hydroxy steroids.XII.21-Amino derivativesof 9α-fluorohydrocotisone.J.Org.Chem.1980，45，241；m.p.190～192℃(dioxane/hexane)；IR(KBr，cm-1)：3548，3310(broad)，1730，1660，1615，1600，1350，1165；1HNMR δ(250MHz，DMSO-d6)：7.35(d，1H，J20Hz)，6.2(d，1H，J20Hz)，5.95(s，1H)，5.5(s，1H)，5.1(2H，ABq，J30Hz)，4.75(1H，d，J5Hz)，4.3(s，1H)，3.3(s，3H)，1.4(s，3H)，0.85(s，3H)]
实施例3
制备11β，17α，21-三羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮-21-甲烷磺酸酯
11β，17α，21-三羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮(甲泼尼龙，50g，133.52mmol)，用甲烷磺酰氯(23.5ml，303.62mmol)酯化，得到甲烷磺酸酯58.87g，收率97.42％。取1g粗品，经快速柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶0.2)，得到0.9g分析样品。Mp199～201℃。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：7.32(d，1H，J10.21Hz，C1-H)，6.17(d，1H，J9.91Hz，C2-H)，5.81(s，1H，C4-H)，5.48(s，1H，C11-OH)，5.26(d，1H，J17.8Hz，C21-H)，4.87(d，1H，J17.6Hz，C21-H)，4.69(s，1H，C17-OH)，4.27(s，1H，C11-H)，3.23(s，1H，SO3-CH3)，1.37(s，3H，C19-CH3)，1.04(d，1H，J6.0Hz，C6-CH3)，0.80(s，1H，C18-CH3)
HRFAB(M+1)：C23H32O7S理论值453.1941，实测值453.1949。
实施例4
制备9α-氟-11β，17α，21-三羟基-16β-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮-21-甲烷磺酸酯
制备方法同上。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：7.27(d，1H，J10.2Hz)，6.21(dd，1H，J10.0Hz)，6.00(s，1H)，5.41(s，1H)，5.28(s，1H)，5.20(d，1H，JAB18.0Hz)，4.95(d，1H，JAB18.0Hz)，4.12(d，1H，J8.4Hz)，3.21s，3H)，1.48(s，3H)，1.02(d，3H，J7.0Hz)，0.97(s，3H)
HRFAB(M+1)：C23H31FO7S理论值471.1847，实测值471.1846。
实施例5
制备17α，21-二羟基-孕甾-4-烯-3，11，20-三酮-21-甲烷磺酸酯
17α，21-二羟基-孕甾-4-烯-3，11，20-三酮(可的松，13.15g，36.48mmol)，吡啶(55ml)于100ml三颈瓶中，在-5～0℃于0.5小时内滴加甲烷磺酰氯(6.5ml，83.98mmol)，于-5～0℃保温反应3小时。反应结束后，同实施例1进行后处理，得到甲烷磺酸酯15.41g，收率96.32％。
取0.8g粗品，经快速柱层析(CH2Cl2∶CH3OH∶石油醚＝10∶0.1∶1)，得到0.54g分析样品。Mp197～203(dec.)℃。
元素分析：C22H30O7S，Cal.C60.25％，H6.90％；Found：C59.98％，H7.10％
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：5.90(s，1H)，5.63(s，1H)，5.23(d，1H，JAB17.7Hz)，4.95(d，1H，JAB17.6Hz)，3.23(s，3H)，1.30(s，3H)，0.48(s，3H)
实施例6
制备21-叠氮基-11β，17α-二羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮
11β，17α，21-三羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮-21-甲烷磺酸酯(33.53g，76.11mmol)，二甲亚砜(120ml)于250ml三颈瓶中，加入叠氮化钠(13.34g，205.2mmol，2.7eqv.)。50℃保温反应5小时，反应结束后，将反应液冲入3000ml冰水中，经常法后处理，得到粗品28.48g近白色固体粉末。收率96.57％。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：5.55(s，1H)，5.41(s，1H)，4.47(d，1H，JAB18.5Hz)，4.26(d，1H，J6.5Hz)，3.93(d，1H，JAB18.6Hz)，1.35(s，3H)，0.76(s，3H)
HRFAB(M+1)：C21H30N3O4，理论值388.2231，实测值388.2232。
IR(cm-1，KBr)：3589.34，3457.66(br.)，2967.96，2935.02，2910.07，2106.06，1718.8，1651.22，1615.01，1585.67，1519.33，1415.88，1336，1，1273.61，1231.66，1188.97，1111.64，881.82，866.47
实施例7
制备21-叠氮基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
11β，17α-二羟基-21-碘-孕甾-1，4-二烯-3，20-酮-21-甲烷磺酸酯(49.83g，129.36mmol)，二甲基甲酰胺(250ml)于500ml三颈瓶中，加入叠氮化钠(22.04g，339mmol)，反应结束后常法处理，得到粗品49.75g。收率99.77％。
元素分析：C22H27O4N3，Cal.C65.44％，H7.06％，N10.90％；Found：C65.50％，H7.21％，N11.07％
IR(cm-1，KBr)：3436.91(br.)，3278.1(br.)，2942.12，2913.2，2105.33(s)，1721.04，1653.82，1590.77，891.942
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.30(d，1H，J9.8Hz)，6.14(d，1H，J9.8Hz)，5.90(s，1H)，5.4(s，1H)，4.7(s，1H)，4.46(d，1H，JAB 18.5Hz)，4.25(s，1H)，3.93(d，1H，JAB18.5Hz)，1.37(s，3H)，0.78(s，3H)
实施例8
制备21-叠氮基-11β，17α-二羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
11β，17α，21-三羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮-21-甲烷磺酸酯(63.62g，140.58mmol)，经类似实施例6的方法与叠氮化钠进行置换反应得到21-叠氮化物。
元素分析：C22H29O4N3，Cal.C66.15％，H7.32％，N10.52％；Found：66.15％，H7.31％，N10.48％。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：7.31(d，1H，J10.06Hz，C1-H)，6.15(d，1H，J11.52Hz，C2-H)，5.80(s，1H，C4-H)，5.39(s，1H，C11-OH)，4.45(d，1H，JAB19.01Hz，C21-H)，4.63(d，1H，J3.24Hz)，4.26(s，1H，C11-H)，3.92(d，1H，JAB18.60Hz，C21-H)，1.36(s，3H，C19-CH3)，1.03(d，3H，J6.21Hz，C6-CH3)，0.77(s，3H，C18-CH3)
IR(cm-1，KBr)：3444.43，2965.42，2927.33，2879.33，2105.15，1717.84，1653.2，1604.9，1460.92，1410.25，1333.55，1306.61，1239.09，1136.21，1116.95，890.03
实施例9
制备21-叠氮基-9α-氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
9α-氟-11β，17α，21-三羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮-21-甲烷磺酸酯，经类似实施例6的方法与叠氮化钠进行置换反应得到21-叠氮化物。
元素分析：C22H29O4N3，Cal.C63.29％，H6.76％，N10.07％；Found：63.28％，H7.01％，N10.24％。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：7.28(d，1H，J10.0Hz)，6.20(d，1H，J10.6Hz)，5.99(s，1H)，5.28(d，J4.3Hz)，4.45(d，1H，J18.6Hz)，4.12(d，1H，JAB9.7Hz)，3.96(d，1H，JAB18.9Hz)，1.47(s，3H)，0.86(s，3H)，0.79(d，3H，J7.0Hz)
实施例10
制备21-叠氮基-9α-氟-11β，17α-二羟基-16β-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例7。由21-溴-9α-氟-11β，17α-二羟基-16β-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮与叠氮化钠在丙酮中回流制得。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.27(d，1H，J10.4Hz)，6.21(dd，1H，J10.2Hz and2.2Hz)，6.00(s，1H)，5.34(d，1H，J2.2Hz)，4.32(d，1H，JAB19.5Hz)，4.0823(s，1H)，4.0822(d，1H，JAB19.5Hz)，1.48(s，3H)，1.03(d，3H，J7.0Hz)，0.97(s，3H)
HRFAB(M+1)：C22H29FN3O4理论值418.2136，实测值418.2136。
实施例11
制备21-叠氮基-17α-二羟基-孕甾-4-烯-3，11，20-三酮
制备方法同实施例6。
元素分析：C21H27O4N3，Cal.C65.44％，H7.06％，N10.90％；Found：65.36％，H7.13％，N10.89％。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：5.82(1H，s)，5.62(1H，s)，4.40(1H，d，JAB18.7Hz)，4.12(1H，d，JAB19.0Hz)，1.30(3H，s)，0.47(3H，s)。
实施例12
制备21-乙酰胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮
21-叠氮基氢化可的松(2g，5.16mmol)溶解于四氢呋喃(30ml)中，在室温下分次加入三苯基膦(g，mmol)。反应结束后，向反应液中加入三乙胺(1ml，7.17mmol)，降温至5～10℃，滴加醋酸酐(1ml，10.60mmol)。反应20分钟，母液用饱和氯化钠溶液洗涤数次。取有机相减压浓缩至近干，出现黄色沉淀。60℃烘干，得1.25g浅黄色固体粉末。收率60.03％。
样品的纯化：取1g产物，经快速柱层析纯化，得约0.7g白色固体粉末。
元素分析：C23H33O5N，Cal.C68.46％，H8.24％，N3.47％；Found：C68.35％，H8.40％，N3.23％
IR(cm-1，KBr)：3367.48，2869.44，1724.17，1668.68，1648.01，1615.88，1548.5，1390.64，1370.77，1345.02，1232.17，1156.5，1132.99，1113.91，899.29，866.85
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.92(1H，s)，5.55(1H，s)，4.33(1H，d，AB，JAB19Hz)，4.24(1H，d)，3.87(1H，d，AB，JAB19Hz)，1.85(3H，s)，1.35(3H，s)，0.73(3H，s)
HRFAB(M+1)：C23H34NO5理论值404.2431，实测值404.2428。
实施例13
制备21-乙酰胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
21-叠氮基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮(20g，51.89mmol)用锌粉(4.09g，62.57mmol，1.21eqv.)冰醋酸还原。反应结束后，降温至5～10℃，在0.5小时内滴加醋酸酐(16ml，169.6mmol)。20分钟后，将反应液倾入水中，静置4小时。抽滤，水洗至中性，60℃烘干，得18.44g黄色固体粉末。收率88.51％。
样品的纯化：取0.8g产物，10ml氯仿/5ml甲醇溶解，经快速柱层析纯化，得到0.55g白色固体粉末。
IR(cm-1，KBr)：3499.96，3400.6，3369.35，3292.16，3096.81，2979.54，2951.08，2933.22，2900.11，2859.89，1726.57，1652.78，1605.55，1593.98，1563.1，1441.57，1406.32，1374.5，1241.85，1168.04，1134.48，1108.98，896.62
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.92(1H，t)，7.31(1H，d，J10Hz)，6.14(1H，d，J10Hz)，5.90(1H，s)，5.28(1H，s)，4.69(1H，s)，4.30(1H，d，AB，J20Hz)，4.25(1H，s)，3.89(1H，d，AB，J20Hz)，1.85(3H，s)，1.37(3H，s)，0.75(3H，s)
HRFAB(M+1)：C23H32NO5，理论值402.2275，实测值402.2275。
实施例14
制备21-烟胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
21-伯氨基氢化泼尼松(3g，mmol)，吡啶(15ml)，于50ml反应瓶中，降至0℃，加入烟酸酐(2.7g，mmol)。室温反应过夜，将反应液倾入300ml冷水中，析出近白色固体粉末，抽滤，烘干，得到2.07g固体粉末。
取1.08g经快速柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶0.2)得到分析样品。
元素分析：Cal.：C27H32N2O5，Cal.：C69.81％，H6.94％，N6.03％；Found：C69.60％，H6.73％，N6.02％。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：9.01(s，1H)，8.79(t，1H)，8.71(d，1H，J5.1Hz)，8.20(d，1H，J8.2Hz)，7.55～7.48(q，1H)，7.34(d，1H，J10.1Hz)，6.16(d，1H，J11.0Hz)，5.91(s，1H)，5.37(s，1H)，4.80(d，1H，J4.3Hz)，4.50(dd，1H，JAB18.3Hz & J5.4Hz)，4.31(s，1H)，4.13(dd，1H，JAB18.4Hz & J5.4Hz)，1.38(s，3H)，0.82(s，3H)
HRFAB(M+1)：C27H33N2O5理论值465.2384，实测值465.2388。
实施例15
制备21-甲烷磺胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例12。所用酰氯为甲烷磺酰氯。所得的粗品经快速柱层析纯化(二氯甲烷∶甲醇∶丙酮＝11∶0.3∶1)得到分析样品。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.32(d，1H，J10.3Hz)，7.18(t，3H)，6.15(d，1H，J10.3Hz)，5.91(s，1H)，5.35(s，1H)，4.71(s，1H)，4.4～4.2(t，2H)，3.9～3.7(d，1H)，2.90(s，3H)，1.38(s，3H)，0.78(s，3H)
HRFAB(M+1)：C22H32NO6S理论值438.1945，实测值438.1949。
实施例16
制备21-苯磺酰胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例12。所用酰氯为苯磺酰氯。所的粗品经快速柱层析纯化(二氯甲烷∶甲醇＝9∶0.2)得到分析样品。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.9～7.4(m，5H)，7.30(d，1H，J10.0Hz)，6.14(dd，1H，J10.3Hz & 1.3Hz)，5.89(s，1H)，5.29(s，1H)，4.72(d，1H，J3.2Hz)，4.22(s，1H)，4.11(dd，1H，JAB18.9Hz & J4.3Hz)，3.66(dd，1H，JAB18.9Hz & J4.3Hz)，1.36(s，3H)，0.65(s，3H)
HRFAB(M+1)：C27H34NO6S理论值500.2101；实测值500.2104。
实施例17
制备21-对甲基苯磺酰胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例12。所用酰氯为苯磺酰氯。所得的粗品经快速柱层析纯化(二氯甲烷∶甲醇∶丙酮＝9∶0.1∶1)得到分析样品。
元素分析：C28H35NO6S，Cal.：C65.47％，H6.87％，N2.73％；Found：C65.36％，H6.92％，N2.66％
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.64(d，1H，J7.5Hz)，7.37(d，1H，J7.9Hz)，7.30(d，1H，J10.3Hz)，6.14(d，1H，J10.0Hz)，5.89(s，1H)，5.25(s，1H)，4.70(s，1H)，4.24(s，1H)，4.2～4.0(q，1H)，3.7～3.5(q，1H)，2.37(s，3H)，1.36(s，3H)，0.68(s，3H)
实施例18
制备21-对氯苯磺酰胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例13。所用酰氯为对氯苯磺酰氯。所得粗品经快速柱层析纯化(二氯甲烷∶甲醇∶丙酮＝11∶0.3∶1)得到分析样品。
元素分析：Cal.C27H32NO6SCl，C60.72％，H6.04％，N2.62％；Found：C60.77％，H5.95％，N2.51％
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：8.1(t，1H)，7.81(d，1H，J8.4Hz)，7.65(d，1H，J8.3Hz)，7.30(d，1H，J10.3Hz)，6.15(d，1H，J11.0Hz)，5.90(s，1H)，5.30(s，1H)，4.70(s，1H)，4.24(s，1H)，4.2～4.0(q，1H)，3.75～3.5(q，1H)，1.36(s，3H)，0.65(s，3H)
IR(cm-1，KBr)：3517.13，3331.37，2935.39，2875.33，2856.03，1718.97，1656.59，1613.81，1476.32，1441.39，1331.4，1163.21，888.96，827.80，760.85，619.59
HRFAB(M+1)：C27H33ClNO6S理论值534.1711，实测值534.1718。
实施例19
制备21-对溴苯磺酰胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例13。所用酰氯为对溴苯磺酰氯。所得粗品经快速柱层析纯化(二氯甲烷∶甲醇∶丙酮＝11∶0.3∶1)得到分析样品。
元素分析：C27H32NO6SBr，Cal.C56.06％，H5.58％，N2.42％；Found：C55.90％，H5.44％，
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.99(t，1H)，7.81～7.70(m，4H)，7.30(d，1H，J10.0Hz)，6.14(dd，1H，J9.8Hz & 1.4Hz)，5.89(s，1H)，5.29(s，1H)，4.71(d，1H，J3.2Hz)，4.24(s，1H)，4.14(dd，1H，J19.4Hz & 5.4Hz)，3.69(dd，1H，J18.9Hz & 5.4Hz)，1.36(s，3H)，0.65(s，3H)
IR(cm-1，KBr)：3515.17，3324.07，2934.83，2854.8，1719.14，1656.93，1614.31，1575.76，1333.21，1163.25，888.92，822.91，744.64，702.69，603.38
实施例20
制备21-单琥珀酰胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例12。所用酸酐为琥珀酸酐。90％甲醇重结晶得到分析样品。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.94(t，1H)，7.31(d，1H，J10.1Hz)，6.15(d，1H，J10.5Hz)，5.90(s，1H)，5.28(s，1H)，4.71(d，1H，J2Hz)，4.27～3.82(m，3H)，2.41(s，2H)，2.07(s，2H)，1.37(s，3H)，0.76(s，3H)
IR(cm-1，KBr)：3399.82，2971.82，2944.84，1711.85，1650.94，1604.66，1589.45，1240.68，893.88
HRFAB(M+1)：C25H33NO7，理论值460.2330，实测值460.2329。
实施例21
制备21-乙酰胺基-11β，17α-二羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例12。所用酸酐为醋酸酐。所的粗品经快速柱层析纯化(二氯甲烷∶甲醇＝8∶0.6)得到分析样品。
IR(cm-1，KBr)：3398.39，2927.1，2875.33，1719.58，1657.36，1614.11，1553.57，1372.55，1307.2，1239.98，1138.25，1117.04，888.85
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.92(1H，t)，7.32(1H，d，J10Hz)，6.16(1H，d，J10Hz)，5.80(1H，s)，5.26(1H，s)，4.69(1H，s)，4.30(1H，d，AB，J1 8.9Hz)，4.25(1H，s)，3.87(1H，d，AB，J18.9Hz)，1.85(3H，s)，1.37(3H，s)，0.76(3H，s)
FAB(M+1)：C24H34NO5，416
实施例22
制备21-烟胺基-6α-甲基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
21-伯氨基-6α-甲基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮(3g，mmol)，吡啶(12ml)于25ml反应瓶中，降至10℃，加入烟酸酐(2.1g，mmol)，反应过夜。次日将反应液冲入300ml冷水中，析出黄白色固体粉末，抽滤，烘干，得到3.7g近白色固体粉末。
取0.82g粗品经快速柱层析纯化(二氯甲烷∶甲醇∶丙酮＝8∶0.3∶1)，得到0.67g白色固体粉末。
元素分析：C28H33N2O5，Cal.C70.27％，H7.16％，N5.85％；Found：C70.15％，H7.10％，N5.80％。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：9.02(s，1H)，8.79(t，1H)，8.71(d，1H，J5.8Hz)，8.22～8.15(m，1H)，7.55～7.40(m，1H)，7.34(d，1H，J10.3Hz)，6.17(dd，1H，J10.0Hz &J1.5Hz)，5.81(s，1H)，5.36(s，1H)，4.80(d，1H，J4.3Hz)，4.49(dd，1H，JAB19.4Hz & J6.4Hz)，4.30(s，1H)，4.13(dd，1H，JAB18.4Hz & J5.4Hz)，1.38(s，3H)，1.04(d，3H，J5.8Hz)，0.81(s，3H)
HRFAB(M+1)：C28H34N2O5，理论值479.2540；实测值479.2540。
实施例23
制备21-乙酰胺基-6α-氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
由21-伯氨基-9α-氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮与苯甲酰氯反应制得。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：7.93(t，1H，NH)，7.30(d，1H，J10.3Hz)，6.22(d，1H，J9.8Hz)，6.00(s，1H)，5.36(d，1H，J4.1Hz)，5.06(s，1H)，4.4～3.2(m，3H)，2.93(m，1H，)，1.86(s，3H)，1.48(s，3H)，0.86(s，3H)，0.77(d，3H，J6.8Hz)
HRFAB(M+1)：C23H33FNO5，理论值434.2337，实测值438.2334。
实施例24
制备21-苯甲酰胺基-6α-氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例12。所用胺为21-伯氨基-9α-氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮，所用酰氯为苯甲酰氯。
元素分析：C29H34FNO5，Cal.C70.28％，H6.91％，N2.83％；Found：C70.20％，H7.15％，N2.91％
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.58(t，1H，NH)，7.89-7.43(m，5H)，7.32(d，1H，J10.25Hz)，6.23(d，1H，J10.55Hz)，6.01(s，1H)，5.47(d，1H，J5.05Hz)，5.10(s，1H)，4.39(dd，1H，J17.85Hz&3.28Hz)，4.17(dd，1H，J18Hz&3.4Hz)，4.20(s，1H)，2.94(m，1H)，1.49(s，3H)，0.81(s，3H)，0.79(d，3H，J7.00)，2.8-2.0(m，5H)，1.8-1.6(m，4H)，1.4-1(m，2H)
HRFAB(M+1)：C29H34FNO5理论值436.2493，实测值496.2498。
实施例25
制备11β，17α-二羟基-21-氯乙酰胺基-孕甾-4-烯-3，20-二酮
21-氨基-11β，17α-二羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮(5g，13.83mmol)，于四氢呋喃(75ml)中，在加入三乙胺(3.5ml，25.11mmol)，降温至5～10℃，加氯乙酰氯(2ml，25.11mmol)。20分钟后，用乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤数次。取有机相，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，滤液经减压浓缩至近干，得到近白色固体粉末5.04g，收率83.2％。
样品的纯化：取1g产物，经柱层析纯化，得0.75g白色结晶性固体粉末。
元素分析：C23H32O5NCl，Cal.C63.08％，H7.36％，N3.20％；Found：C62.85％，H7.58％，N2.95％
IR(cm-1，KBr)：3425.86，3366.53，2971.82，2936.7，2867.61，1723.58，1659.07，1548.72，1393.97，1339.91，1235.33，1132.06，1113.54，866.96
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：8.28(1H，t)，5.55(1H，s)，4.40(1H，dd，ABX，JAX5.4Hz，JAB19Hz)，4.25(1H，s)，4.14(2H，s)，3.93(1H，dd，ABX，JBX5.4Hz，JAB19Hz)，1.35(3H，s)，0.75(3H，s)
HRFAB(M+1)：C23H33ClNO5理论值438.2042，实测值438.2047。
实施例26
制备11β，17α-二羟基-21-氯乙酰胺基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例25。
元素分析：C23H30O5NCl，Cal.C63.37％，H6.94％，N3.21％；Found：C63.45％，H6.65％，N3.03％
IR(cm-1，KBr)：3597.06，3396.37，3319.18，3255.52，3086.33，2977.34，2933.22，2912.2，2879.19，1722.87，1656.9，1615.23，1578.54，1441.49，1397.14，1159.91，1133.68，1114.17，891.28
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：8.30(1H，t)，7.32(1H，d，J10Hz)，6.15(1H，d，J10Hz)，5.90(1H，s)，4.37(1H，dd，ABX，JAX5.5Hz，JAB20Hz)，4.26(1H，s)，4.14(2H，s)，3.94(1H，dd，ABX，JBX5.5Hz，JAB20Hz)，1.37(3H，s)，0.77(3H，s)
HRFAB(M+1)：C23H31ClNO5，理论值436.1885，实测值436.1990。
实施例27
制备21-氯乙酰胺基-11β，17α-二羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮
制备方法同实施例25。
元素分析：C24H32O5NCl，Cal.C64.06％，H7.17％，N3.11％；Found：C63.85％，H7.07％，N2.95％
IR(cm-1，KBr)：3599.03，3421.47，3248.58，3080.69，2968.88，2937.08，2887.7，1722.56，1655.64，1615.68，1566.96，1311.79，1243.84，892.59
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：8.29(1H，t)，7.33(1H，d，J10Hz)，6.16(1H，d，J10Hz)，5.81(1H，s)，5.74(1H，s)，4.37(1H，dd，ABX，JAX5.4Hz，JAB19.4Hz)，4.30(1H，s)，4.27(2H，s)，3.93(1H，dd，ABX，JBX5.4Hz，JAB19.4Hz)，1.84(3H，s)，1.37(3H，s)，1.03(3H，d，J3.1Hz)，0.77(3H，s)
HRFAB(M+1)：C24H33ClNO5理论值450.2042，实测值450.2045。
实施例28
21-氯乙酰胺基-9α-氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-烯-3，20-二酮
由21-氨基-9α-氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-烯-3，20-二酮与氯乙酰氯反应制得。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.30(t，1H，NH)，7.29(d，1H，J10.4Hz，C1-H)，6.21(d，1H，J9.3Hz，C2-H)，6.00(s，1H，C4-H)，5.38(d，1H，J4.4Hz，C11-OH)，5.10(s，1H，C17-OH)，4.33(dd，1H，J19.1Hz&4Hz，C21-H)，4.15(m，3H，ClCH2&C11-H)，3.98(dd，1H，J19.4Hz&3.2Hz，C21-H)，1.47(s，3H，C19-H)，0.86(s，3H，C18-H)，0.77(d，3H，C16-CH3)，2.6-2.0(m，5H)，1.8-1.4(m，3H)，1.4-1(m，2H)
HRFAB(M+1)：C24H32ClFNO5，理论值468.1947；实测值468.1947。
实施例29
制备21-乙酰胺基-17α-羟基-孕甾-1，4-烯-3，11，20-三酮
21-乙酰胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮(9.22g，22.85mmol)，冰醋酸(20ml)于50ml三颈瓶中，机械搅拌，降温。在半小时内滴加氧化剂(铬酐/水：0.51g/5.0ml)，反应7小时。得4.84g粗品。
样品的纯化：取1g产物，经快速柱层析纯化，得到0.74g近白色结晶性固体粉末。
元素分析：C23H31O5N，Cal.C68.81％，H7.78％，N3.49％；Found：C68.54％，H8.02％，N3.25％
IR(cm-1，KBr)：3390.74，2960.24，2933.95，1728.48，1706.68，1672.64，1648.61，1617.13，1543.71，1456.18，1395.13，1372.44，1347.97，1229.89，1132.99，1112.57，899.37，864.35
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.96(1H，t)，5.62(1H，s)，4.12(1H，d，AB，JAB19.4Hz)，3.89(1H，d，AB，JAB19.4Hz)，1.84(3H，s)，1.30(3H，s)，0.45(3H，s)
HRFAB(M+1)：C23H32ClNO5理论值402.2275，实测值402.2284。
实施例30
制备21-乙酰胺基-17α-羟基-孕甾-1，4-二烯-3，11，20-三酮
由21-乙酰胺基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮经氧化制得。
IR(cm-1，KBr)：3354.67，2940.94，1731.14，1707.38，1665.52，1648.22，1622.75，1552.67，1453.39，1394.63，1372.42，1236.2，890.38
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.59(1H，d，J9.9Hz)，6.09(1H，d，J9.9Hz)，6.00(1H，s)，4.10(1H，d，AB，J19Hz)，3.89(1H，d，AB，J19Hz)，1.84(3H，s)，1.34(3H，s)，0.49(3H，s)
HRFAB(M+1)：C23H31ClNO5理论值400.2118，实测值400.2125。
实施例31
制备21-乙酰胺基-17α-羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，11，20-二酮
由21-乙酰胺基-11β，17α-二羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮经氧化制得。
IR(cm-1，KBr)：3313.68，2964.1，2940.94，2913.44，1731.04，1708.68，1664.63，1642.15，1622.83，1605.55，1550.66，1391.67，1373.7，1308.63，1239.36，890.07
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：7.97(1H，t)，7.60(1H，d，J10Hz)，6.11(1H，d，J10Hz)，5.90(1H，s)，5.69(1H，s)，4.10(1H，d，AB，J19Hz)，3.89(1H，d，AB，J19Hz)，2.92(1H，s)，2.85(1H，s)，1.84(3H，s)，1.35(3H，s)，1.07(3H，d，J6.2Hz)，0.49(3H，s)
HRFAB(M+1)：C24H32NO5理论值414.2275，实测值414.2270。
实施例32
制备N-(21-氢化可的松基)-N’-苯基脲
21-氨基-11β，17α-孕甾-4-烯-3，20-二酮(2g)，无水乙醇(30ml)，二氯甲烷(20ml)于反应瓶中，氮气保护，冰水浴冷却。加入异氰酸苯酯(3.5ml)，室温反应20小时。经快速柱层析纯化得到0.43g白色固体粉末。
HRFAB(M+1)：C28H37N2O5，理论值481.2697，实测值481.2692。
实施例33
制备N-(21-氢化泼尼松基)-N’-苯基脲
由21-氨基-11β，17α-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮与现场制备的异氰酸苯酯(三光气与苯胺在无水二氯甲烷中反应制得)反应得到。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：8.03(s，1H)，7.38～6.85(m，5H)，7.26(d，1H，J9.7Hz)，6.31(t，1H)，6.15(dd，1H，J8.2 & J0.9)，5.90(s，1H)，5.35(s，1H)，4.69(d，1H，J3.2Hz)，4.43～3.91(m，3H，C21-H & C11-H)，1.37(s，3H)，0.77(s，3H)
HRFAB(M+1)：C28H35N2O5，理论值479.2540；实测值479.2536。
实施例34
制备N-(21-甲泼尼龙基)-N’-苯基脲
制备方法同实施例33。
1HNMR(δ，200MHz，DMSO-d6)：8.79(s，1H)，7.39～6.84(m，5H)，7.21(d，1H，J7.5)，6.31(t，1H)，6.17(d，1H，J9.7)，5.81(s，1H)，5.34(s，1H)，4.69(d，1H，J3.0Hz)，4.37(dd，1H，JAB20.0Hz & J4.5Hz)，4.29(s，1H)，3.96(dd，1H，JAB20.0Hz & J5.4Hz)，1.37(s，3H)，1.04(d，3H，J6.0Hz)，0.74(s，3H)
HRFAB(M+1)：C29H37N2O5，理论值493.2697；实测值493.2689。
实施例35
N-(21-氢化泼尼松基)-N’-苄基脲
制备方法同上。
HRFAB(M+1)：C29H37N2O5，理论值493.2697；实测值493.2700。
实施例36
制备N-(21-甲泼尼龙基)-N’-苄基脲
制备方法同上。
HRFAB(M+1)：C20H39N2O5，理论值507.2853；实测值507.2857。
实施例37
制备N-(21-甲泼尼龙基)-N’-(p-溴苯基)脲
将对溴苯胺(0.61g，3.51mmol)溶解于干燥的二氯甲烷(30ml)中，置于恒压滴液漏斗中备用。三光气(0.33g，1.12mmol)溶解于干燥的二氯甲烷(20ml)中，在电磁搅拌下滴加胺的溶液，室温反应3小时。加入三乙胺(0.94ml，6.69mmol)，半小时后加入21-氨基-11β，17α-二羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-烯-3，20-二酮(1.8g，5.0mmol)，反应结束后经后处理得到目的物。
元素分析：C29H35BrN2O5，Cal.：C60.95％，H6.17％，N4.90％；Found：C61.16％，H5.86％，N4.91％。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.93(s，1H，ArNH)，7.36(s，4H，ArH)，7.33(d，1H，J10.8Hz，C1H)，6.34(t，1H，C21-NH)，6.17(d，1H，J10.8Hz，C2H)，5.81(s，1H，C4H)，5.32(s，1H，C17OH)，4.68(d，1H，J3.26Hz)，4.35(d，1H，JAB19.56Hz，C21H)，4.29(s，1H，JAB19.56Hz，C21H)，1.37(s，3H，C19H)，1.04(d，3H，J6.48Hz，C6CH3)，0.77(s，3H，C18CH3)
实施例38
制备N-(21-氢化泼尼松基)-N’-(p-溴苯基)脲
制备方法同上。由21-氨基氢化泼尼松与现场制备的对溴苯基异氰酸酯反应制得。
元素分析：C28H33BrN2O5，Cal.C60.33％，H5.97％，N5.03％；Found：C60.29％，H6.02％，N5.17％
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.92(s，1H)，7.36(s，4H)，7.31(d，1H，J10.2Hz)，6.17(t，1H)，6.15(d，1H，J11.5Hz)，5.90(s，1H)，5.31(s，1H)，4.67(d，1H，J3.2Hz)，4.41～3.90(m，3H，C21-H & C11-H)，1.37(s，3H)，0.77(s，3H)
实施例39
N-(21-氢化泼尼松基)-N’-(p-甲基苯基)脲
由对甲基苯胺与三光气现场制备的对甲基苯基异氰酸酯与21-氨基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮反应制得。
元素分析：C29H36N2O5，Cal.：C70.71％，H7.37％，N5.69％；Found：C70.73％，H7.17％，N5.70％。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.66(s，1H，ArNH)，7.31(d，1H，J9.77Hz，C1H)，7.25(d，2H，JAB8.21Hz，2×ArH)，7.01(d，2H，JAB8.17Hz，2×ArH)，6.24(t，1H，C21-NH)，6.15(d，1H，J9.72Hz，C2H)，5.91(s，1H，C4H)，5.33(s，1H，C17OH)，4.68(d，1H，J3.24Hz)，4.36(dd，1H，JAB19.44Hz，C21H)，4.30(s，1H，C11H)，3.94(dd，1H，JAB19.56Hz，C21H)，2.20(s，3H，ArCH3)，1.37(s，3H，C19H)，0.77(s，3H，C18CH3)
FAB(M+1)：C29H37N2O5，493
实施例40
N-(21-甲泼尼龙基)-N’-(p-甲基苯基)脲
由对甲基苯胺与三光气现场制备的对甲基苯基异氰酸酯与21-氨基-11β，17α-二羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮反应制得。
元素分析：C30H38N2O5，Cal.：C71.12％，H7.56％，N5.53％；Found：C70.98％，H7.41％，N5.59％。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.66(s，1H，ArNH)，7.32(d，1H，J10.17Hz，C1H)，7.25(d，2H，JAB8.39Hz，2×ArH)，7.01(d，2H，JAB8.28Hz，2×ArH)，6.24(t，1H，C21-NH)，6.17(d，1H，J11.63Hz，C2H)，5.81(s，1H，C4H)，5.32(s，1H，C17OH)，4.68(d，1H，J3.2Hz)，4.35(dd，1H，JAB19.6Hz，C21H)，4.29(s，1H，C11H)，3.94(dd，1H，JAB19.7Hz，C21H)，2.20(s，3H，ArCH3)，1.37(s，3H，C19H)，1.04(d，3H，J5.79Hz)，0.77(s，3H，C18CH3)
FAB(M+1)：C30H39N2O5，507
实施例41
N-(21-地塞米松基)-N’-苯基脲
由21-氨基-9α-氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-烯-3-酮与苯基异氰酸酯反应制得。
元素分析：C29H35FN2O5，Cal.：C68.22％，H6.91％，N5.49％；Found：C68.15％，H7.16％，N5.42％。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.77(s，1H，ArNH)，7.39-6.85(m，5H，ArH)，7.29(d，1H，J10.5Hz，C1-H)，6.22(s，1H，J9.7Hz，C2-H)，6.00(s，1H，C4-H)，5.34(d，1H，J4.3Hz.C11-OH)，5.11(s，1H，C17-OH)，4.34(dd，1H，J19.44Hz&3.2Hz)，4.15(d，1H，J8.6Hz，C11-H)，3.99(dd，1H，J19.97Hz&3.2Hz)，2.95(m，1H，C16-H)，1.48(s，3H，C19-CH3)，0.87(s，3H，C18-CH3)，0.79(d，1H，J7.14，C16-CH3)，2.62-2.0(m，5H)，1.8-1.5(m，4H)，1.4-1(m，2H)
实施例42
制备N-(21-氢化泼尼松基)-N’-对甲氧基苯基脲
由对甲氧基苯胺在二氯甲烷中与三光气反应现场制备的对甲氧基苯基异氰酸酯与21-氨基氢化泼尼松反应制得。
元素分析：C29H36N2O6，Cal.C68.48％H7.13％N5.51％；Found：C68.60％，H7.00％，N5.42％
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.56(s，1H，ArNH)，7.33～724(m，3H，C1H & 2×ArH)，6.80(d，2H，JAB8.7Hz，2×ArH)，6.18～6.12(m，2H，C2H & C21-NH)，5.90(s，1H，C4H)，5.30(s，1H，C17OH)，4.66(d，1H，J3.24Hz)，4.36(dd，1H，JAB20.5Hz & J3.2Hz，C21H)，4.30(s，1H，C11H)，3.95(dd，1H，JAB20.5Hz & J3.2Hz，C21H)，3.67(s，3H，ArOCH3)，1.37(s，3H，C19H)，0.77(s，3H，C18CH3)实施例43
制备N-(21-氢化泼尼松基)-N’-邻甲基苯基脲
由临甲基苯胺在四氢呋喃中与三光气反应现场制备的临甲基苯基异氰酸酯与21-氨基氢化泼尼松反应制得。
元素分析：C29H36N2O5，Cal.：C70.71％，H7.37％，N5.69％；Found：C70.66％，H7.09％，N5.82％
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：7.96(s，1H，ArNH)，7.80(d，1H，ArH)，7.32(d，1H，J10.0Hz，C1H)，7.12～7.03(m，2H，2×ArH)，6.87(d，1H，J7.3Hz，ArH)，6.82(t，1H，C21-NH)，6.15(d，1H，J10.5Hz，C2H)，5.90(s，1H，C4H)，5.33(s，1H，C17OH)，4.66(s，1H)，4.41(dd，1H，JAB19.4Hz，C21H)，4.29(s，1H，C11H)，3.98(dd，1H，JAB19.4Hz，C21H)，2.18(s，3H，ArCH3)，1.38(s，3H，C19H)，0.79(s，3H，C18CH3)
实施例44
制备N-(21-氢化泼尼松基)-N’-正丙基脲
元素分析：C25H36N2O5，Cal.：C67.54％，H8.16％，N6.30％；Found：C67.62％，H8.29％，N6.02％
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.63(s，1H，ArNH)，7.31(d，1H，J10.2Hz，C1H)，6.20～6.12(m，2H，C2H & C21-NH)，5.90(s，1H，C4H)，5.27(s，1H，C17OH)，4.66(d，1H，J2.8Hz)，4.30(dd，1H，JAB20.5Hz & J4.3Hz，C21H)，4.26(s，1H，C11H)，3.84(dd，1H，JAB20.5.4Hz & J4.3Hz，C21H)，2.90(q，2H，N-CH2)，1.40(s，3H，C19H)，0.78(s，3H，C18CH3)，0.74(s，3H)
实施例45
制备N-(21-氢化泼尼松基)-N’-苯基硫脲
由苯基异硫氰酸酯与21-氨基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮反应制得。
元素分析：C28H34N2O4S，Cal.：C67.99％，H6.93％，N5.66％；Found：C67.76％，H6.80％，N5.70％
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：9.90(s，1H，ArNH)，7.76(t，1H，C21-NH)，7.51～7.06(m，6H，ArH&C1-H)，6.15(dd，1H，J9.6Hz&1.1Hz，C2-H)，5.91(s，1H，C4-H)，5.38(s，1H，C11-OH)，4.78(dd，1H，J20.5Hz&3.2Hz，C21-H)，4.67(d，1H，J3.5Hz，C17-OH)，4.40(dd，1H，J21Hz&3.5Hz，C21-H)，4.29(s，1H，C11-H)，1.37(s，3H，C18-H)，0.80(s，3H，C19-H)
HRFAB(M+1)：C28H35N2O4S，理论值49.2312，实测值495.2309
实施例46
N-(21-氢化可的松基)-N’-苯基硫脲
由苯基异硫氰酸酯与21-氨基-11β，17α-二羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮反应制得。
HRFAB(M+1)：C28H37N2O4S，理论值497.2468，实测值497.2468
实施例47
N-(21-甲泼尼龙基)-N’-苯基硫脲
由苯基异硫氰酸酯与21-氨基-11β，17α-二羟基-6α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3-酮反应制得。
元素分析：C29H36N2O4S，Cal.：C68.47％，H7.13％，N5.51％；Found：C68.52％，H7.12％，N5.69％
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：9.90(s，1H，ArNH)，7.76(t，1H，C21-NH)，7.51～7.07(m，6H，ArH&C1-H)，6.17(d，1H，J10.8，C2-H)，5.81(s，1H，C4H)，5.37(s，1H，C11-OH)，4.78(dd，1H，J21.0Hz&3.2Hz，C21-H)，4.67(d，1H，J3.2Hz，C17-OH)，4.40(dd，1H，J19.4Hz&3.2Hz，C21 C21-H)，4.29(s，1H，C11-H)，1.37(s，3H，C18-H)，1.04(d，1H，J5.8，C6-CH3)，0.80(s，3H，C19-H)13CNMR(δppm，DMSO-d6)：
HRFAB(M+1)：C29H37N2O4S，理论值509.2468，实测值509.2466
实施例48
N-(21-地塞米松基)-N’-苯基硫脲
由苯基异硫氰酸酯与21-氨基-9α-氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-孕甾-1，4-二烯-3-酮反应制得。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：9.90(s，1H，ArNH)，7.77(t，1H，C21-NH)，7.50～7.07(m，6H，ArH&C1-H)，6.22(d，1H，J11.2，C2-H)，6.00(s，1H，C4-H)，5.35(d，1H，J4.2Hz，C11-OH)，5.14(s，1H，C17-OH)，4.74(dd，1H，J20.5Hz&3.2Hz，C21-H)，4.43(dd，1H，J20Hz&3.2Hz，C21-H)，4.15(d，1H，J10.8Hz，C11-H)，2.95(m，1H，C16-H)，2.7-2.0(m，5H)，1.9-1.5(m，3H)，1.47(s，3H，C19-CH3)，1.4-1(m，2H)，0.90(s，3H，C18-CH3)，0.80(d，3H，J7.2Hz，C16-CH3).
HRFAB(M+1)：C29H36N2O4S，理论值527.2374；实测值527.2379实施例49
制备N-(21-氢化可的松基)-N’-对甲基苯基-N”-苯甲酰基胍
21-氨基--11β，17α-二羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮(1g，2.77mmol)，N-对甲基苯基硫脲(0.75g，2.77mmol)，二甲基甲酰胺(10ml)于反应瓶中，为黄色清液。降温至0℃，加入氯化汞(0.65g，2.77mmol)，室温反应19小时，加入三乙胺(0.8ml)。将反应液倾入冰水中，析出灰色固体粉末，过滤，烘干，得到粗品。
所得的粗品经快速柱层析纯化得到0.5g白色固体粉末。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：10.91(br.，1H，D2O exchangeable)，8.84(br.，1H，D2Oexchangeable)，8.2～7.2(m，10H)，5.56(br.，1H)，4.8(d，1H，J19.4Hz)，4.28(br.，2H)，2.22(s，3H)，1.36(s，3H)，0.79(s，3H)
HRFAB(M+1)：C36H44N3O5，计算值598.3275；实测值598.3267
实施例50
制备N-(21-氢化泼尼松基)-N’-对甲基苯基-N”-苯甲酰基胍
制备方法同上。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.02(br.，1H，D2O exchangeable)，7.43～7.2(m，10H)，6.16(d，1H，J10.0Hz)，5.92(s，1H)，5.48(br.，1H，D2O exchangeable)，4.84(d，1H，JAB21.6Hz)，4.65(s，1H)，4.2～4.5(t，2H)，2.32(s，3H)，1.39(s，3H)，0.81(s，3H)
HRFAB(M+1)：C36H42N3O5，计算值596.3119；实测值596.3110
实施例51
制备N-(21-氢化泼尼松基)-N’-苯甲酰基硫脲
硫氰酸铵(0.22g，2.79mmol)与丙酮(20ml)于反应瓶中，在室温下加入苯甲酰氯(0.29ml，2.5mmol)，回流2小时，滤除沉淀物，得到苯甲酰基异硫氰酸酯丙酮溶液，备用。
21-氨基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮(0.5g，1.39mmol)与丙酮(10ml)于反应瓶中，向其中加入上述苯甲酰基异硫氰酸酯丙酮溶液，回流反应7小时，在加入三乙胺(0.2ml)。醋酸乙酯(50ml×3)提取，水(100ml×3)洗涤，取有机相，无水硫酸钠干燥。减压浓缩至干，为油状物，经快速柱层析纯化得到0.2g纯品。
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：11.28(s，1H，D2O exchangeable)，11.10(s，1H，D2Oexchangeable)，7.96～7.47(m，5H)，7.31(d，1H，J10.0Hz)，6.15(d，1H，J10.0Hz)，5.91(s，1H)，5.48(s，1H)，4.9～4.65(dd，1H)，4.6(d，1H)，4.55～4.3(dd，1H)，4.29(s，1H)，1.37(s，3H)，0.81(s，3H)
HRFAB(M+1)：C29H35N2O5S，计算值523.2261；实测值523.2264
实施例52
制备21-氨基-糖皮质激素盐(以制备21-氨基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮的盐酸盐为例)
21-氨基-11β，17α-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮(2g，5.56mmol)溶解于30ml无水乙醇中，通干燥氯化氢气体至pH2～3，室温静置2小时以上，减压浓缩至10ml，于0℃静置3小时，抽滤，烘干，得到近白色固体粉末1.95g。粗品用无水乙醇重结晶，得到纯品(由21-氨基-糖皮质激素与相应的酸反应，经过类似的处理可以得到相应的盐)。
元素分析：C21H30ClNO4，Cal.C63.71％，H7.64％，N3.54％；Found：C63.62％，H7.61％，N3.48％
1HNMR(δppm，DMSO-d6)：8.28(s，3H)，7.37(d，1H，J10.0Hz)，6.14(d，1H，J10.3)，5.90(s，1H)，5.70(s，1H)，4.86(d，1H，J4.2Hz)，4.28(s，1H)，4.16(d，1H，J18.6Hz)，3.57(d，1H，J18.7Hz)1.37(s，3H)，0.79(s，3H)
13HNMR(δppm，DMSO-d6)：205.83，185.09，170.36，156.78，126.89，121.53，88.36，68.02，55.36，51.10，47.30，45.81，43.75，38.67，33.895，33.06，31.35，30.94，23.51，20.76，16.55
实施例53
化合物对NO生成及一氧化氮合酶mRNA生成抑制试验一、方法
上述化合物抑制NO生成及抑制一氧化氮合酶mRNA生成的活性已经或可以用下述方法证实：1.离体培养大鼠巨噬细胞NO生成抑制实验
在无菌条件下，从大鼠腹腔吸取腹腔内组织液，组织液置离心管中，在离心机中以每分钟3000转离心5分钟，沉淀的细胞按1×106细胞/毫升将细胞种植于细胞培养皿中，加DMEM培养剂后，在培养箱内培养2小时。然后，去除上清液，获得的贴壁细胞即为巨噬细胞。该巨噬细胞在含10％小牛血清的DMEM培养剂中培养，观察样品对NO生成的抑制时，每个培养皿中加入脂多糖(5ug/ml)和不同浓度的测试药品，培养24小时。取上清液100微升，加至含显色剂(Griess液)100微升的96孔板中，在550nm波长下检测吸收值(OD值)。以下式计算样品的抑制率2.A172细胞诱导性NO(iNOS)mRNA生成抑制实验
(1)iNOS在A-172细胞中的诱导表达
A-172细胞在37℃ 5％CO2条件下培养致汇合度达到80％左右，加0.5％胰蛋白酶消化后，加入含10％小牛血清的DMEM培养液，计数，并将细胞浓度调至3×105/ml。将细胞悬浮液加至6孔培养板中，每孔3ml，培养16小时至细胞汇合度达70-80％，吸去培养液，用无血清DMEM培养液洗三遍。加无血清DMEM培养液培养24小时，换液，加无血清DMEM，同时加iNOS诱导剂LPS、TNF、IFN以及待测药物。
(2)总RNA制备
在每个细胞培养孔内加1ml Trizol，依此以氯仿，异丙醇和75％乙醇抽提，加1％DEPC处理过的去离子水溶解得RNA溶液。
(3)反转录
以MBI产M-Mulv反转录酶反转录。
(4)PCR：
以反转录所得cDNA作为模板，分别以人诱导型NOS(hiNOS)及人β-actin引物进行PCR，其中以β-actin mRNA作为参照。
(5)Agrose凝胶电泳
将PCR产物经1.5％agrose凝胶电泳，在凝胶成像仪上比较hiNOS及β-actin光密度比值，作为iNOS表达的相对指标。二、实验结果
部分目标化合物抑制离体培养大鼠巨噬细胞NO生成的IC50值及抑制一氧化氮合酶mRNA生成的试验结果如下：
  实施例 NO生成抑制试验IC50(μM) iNOS mRNA抑制有效浓度范围(μM)
    14      40.31
    18      10.79     6.19-50.08
    19      10.75
    22      16.21
    25      9.82     19.02-37.67
    26      9.88     9.65-37.92
    27      11.56     9.33-36.67
    37      9.73
    38      10.85
    39      8.87
    40      9.75     6.51-52.7
    42      18.56

Claims (13)

1、一种含氮甾体化合物，其特征在于它是结构式(I)的化合物：
其中，
R1，R2分别为氢或R1和R2为双键；R3为氢、甲基或氟；R4为氢或氟；
R5和R6定义为：R5为β-羟基，则R6为氢；或R5和R6均为氢；或R5和R6为酮基；
R7为氢、α-或β-甲基；R8为羟基、C1～C6直链酰氧基、芳香或杂环芳香基；
R9定义为含氮取代基，即：
1)伯氨基及其盐，包括盐酸盐、溴氢酸盐、碘氢酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、草酸盐、三氟醋酸盐、富马酸盐、马来酸盐、甲烷磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐；
2)C1～C12直链或支链烷(或磺)酰胺基、或具有卤素、芳香基、氨基取代基的C1～C12直链或支链烷(或磺)酰胺基；单琥珀酰胺基、单富马酰胺基；芳香或杂环芳香(或磺)酰胺基；
3)N-C1～C12直链或支链烷基脲基(或硫脲基)；N-取代芳基或杂芳基脲基(或硫脲基)；N-苯甲酰基或叔丁氧羰基或苄氧羰基脲基(或硫脲基)；
4)N-苯甲酰基/叔丁氧羰基-N’-取代芳基或杂芳基胍基。
2、制备结构通式为(I)的C21-酰胺基糖皮质激素的方法，其特征在于使用C21-伯氨基糖皮质激素、或现场制备的C21-伯氨基糖皮质激素与酰氯或酸酐反应，以无机碱如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾；或有机碱如吡啶、三乙胺，为缚酸剂，在一般有机研究人员所熟知的条件下制备；或C21-伯氨基糖皮质激素与酸在无水溶剂中以草酰氯、DCC为缩合剂制得；或者C21-伯氨基糖皮质激素与酸共热熔融脱水制得；
其中，取代基R1～R8的定义如权利要求1所述；
当R5和R6共同为酮基时也可由相应的C11-羟基甾体化合物经普氏氧化制得。
3、制备结构通式为(I)的C21-脲基糖皮质激素的方法，其特征在于C21-伯氨基糖皮质激素与异氰酸酯反应，或者脂肪或芳香胺与C21-异氰酸酯基糖皮质激素反应，制备C21-脲基糖皮质激素；
其中，取代基R1～R8的定义如权利要求1所述；
当R5和R6共同为酮基时也可由相应的C11-羟基甾体化合物经普氏氧化制得；
所述的C21-异氰酸酯基糖皮质激素的制备方法是C21-伯氨基糖皮质激素在无水有机溶剂中与三光气、或用有机科研工作者所熟知的方法现场制备的光气反应，所用有机溶剂包括二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、二溴乙烷、四氢呋喃、苯、甲苯、氯苯、硝基苯或上述溶剂的混合物。
4、制备结构通式为(I)的C21-硫脲基糖皮质激素的方法，其特征在于C21-伯氨基糖皮质激素与异硫氰酸酯或现场制备的异硫氰酸酯反应，或者脂肪或芳香胺与C21-异硫氰酸酯基糖皮质激素或现场制备的C21-异硫氰酸酯基糖皮质激素反应，制备C21-硫脲基糖皮质激素。
其中，取代基R1～R8的定义如权利要求1所述；
所述的C21-异硫氰酸酯基糖皮质激素的制备方法为C21-伯氨基糖皮质激素在无水有机溶剂中与硫光气反应，所用有机溶剂包括二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、二溴乙烷、四氢呋喃、苯、甲苯、氯苯、硝基苯或上述溶剂的混合物。
5、制备结构通式为(I)的C21-伯氨基糖皮质激素的方法，其特征在于通过选择性还原C21-叠氮基糖皮质激素制得C21-伯氨基糖皮质激素，反应方程式如下所示：
其中，R1～R8如权利要求1定义，R10为甲烷磺酰氧基、苯磺酰氧基或对甲苯磺酰氧基；卤素，包括氯、溴和碘；
所述的还原剂和还原方法包括：硫化氢、硫代硫酸钠、保险粉、硫化钠、三烷基锡烷、三苯基膦、单质金属(如锌、铁、铝、镁)/酸或酸性缓冲体系、催化氢化；还原反应所用溶剂包括：低级醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯、硝基苯、二甲基甲酰胺、二甲亚砜或上述溶剂的混合物；或水和上述有机溶剂的混合体系。
6、按照权利要求5所述的C21-伯氨基糖皮质激素的制备方法，其特征在于所述的还原C21-叠氮基糖皮质激素的方法是：R1～R8如权利要求1定义，当还原剂为单质金属/酸或酸性缓冲体系时，所用溶剂如权利要求5所定义，所用的酸包括盐酸、溴氢酸、碘氢酸、甲酸、醋酸；或酸性盐，如硫酸铵、硝酸铵、磷酸铵，磷酸氢铵、氯化铵、硫酸铝、氯化铝、硫酸铝、硫酸镁或氯化钴。
7、按照权利要求5所述的C21-伯氨基糖皮质激素的制备方法，其特征在于所述的还原C21-叠氮基糖皮质激素的方法是：R1～R8如权利要求1定义，当还原方法为催化氢化时，溶剂为低级醇，如甲醇、乙醇、丙醇；或低级醇与二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷的混合溶剂；所用的催化剂可以是兰尼镍、钯/碳、铂/碳；所用氢源为氢气、水合肼、次亚磷酸或其钠盐、环己烯。
8、权利要求5所述的C21-叠氮基糖皮质激素的制备方法，其特征在于：R1～R8如权利要求1定义，R10如权利要求5定义，通过C21-磺酰氧基或C21-卤代糖皮质激素与叠氮盐在如权利要求5中所定义的溶剂中通过置换反应得到C21-叠氮基糖皮质激素，所用的溶剂是二甲亚砜、二甲基甲酰胺或丙酮。
9、按照权利要求8所述的C21-叠氮基糖皮质激素的制备方法，其特征在于：
所述的C21-磺酰氧基的制备方法是：R1～R8如权利要求1定义，R10如权利要求5定义，通过C21-羟基糖皮质激素与磺酰氯在四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯或硝基苯中反应制备的，以无机碱如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾；或有机碱如吡啶或三乙胺为缚酸剂，在一般有机研究人员所熟知的条件下制备；
所述的C21-卤代糖皮质激素是通过C21-磺酰氧基糖皮质激素与氯化锂、溴化锂或溴化钠或溴化钾、碘化钠或碘化钾通过置换反应制备的，所用溶剂如权利要求5所述。
10、权利要求1所述的C21-(N-苯甲酰基或叔丁氧羰基-N’-烷基、取代芳基或杂芳基)胍基糖皮质激素的制备方法，其特征在于：C21-伯氨基糖皮质激素与N-苯甲酰基/叔丁氧羰基-N’-烷基、芳基或杂芳基硫脲及氯化汞反应制得。
11、权利要求1所述的含氮甾体化合物或它们的盐构成的组合物。
12、权利要求1所述的含氮甾体化合物或它们的盐作为iNOS抑制剂或作为糖皮质激素类药物。
13、按照权利要求1所述的结构式(I)的含氮甾体化合物，其特征在于：
R1，R2分别为氢或R1和R2为双键；R3为氢、甲基；R4为氢或氟；
R5和R6定义为：若R5为β-羟基，则R6为氢；或R5和R6均为氢；或R5和R6为酮基；
R7为氢、α-或β-甲基；R8为羟基；
R9定义为含氮取代基，即：
1)伯氨基及其盐，包括盐酸盐、溴氢酸盐、碘氢酸盐、富马酸盐、甲烷磺酸盐；
2)C1～C12直链烷(或磺)酰胺基、或具有卤素或芳香基取代基的C1～C12直链烷(或磺)酰胺基；单琥珀酰胺基、芳香或杂环芳香(或磺)酰胺基；
3)N-C1～C12直链烷基脲(或硫脲基)；N-取代芳基或杂芳基脲基(或硫脲基)；N-苯甲酰基脲基(或硫脲基)；
4)N-苯甲酰基-N’-取代芳基胍基。
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