WO2019034176A1 - 一种喜树碱-抗体偶联物 - Google Patents

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antibody conjugate
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朱义
李�杰
万维李
卓识
李刚锐
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    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Definitions

  • the present invention relates to the use of camptothecin-antibody conjugates for the treatment of tumors or other diseases, and in particular to the use of a particular hydrophilic ethicone antibody conjugate to increase the stability of the drug in plasma and reduce aggregation.
  • PK pharmacokinetics
  • antibody-conjugated drugs generally consist of three parts: antibody or antibody ligands, small molecule drugs, and linkers that couple ligands to drugs.
  • the antibody-conjugated drug utilizes the specific recognition of the antigen by the antibody, transports the drug molecule to the vicinity of the target cell and effectively releases the drug molecule for therapeutic purposes.
  • FDA US Food and Drug Administration
  • Adecteis TM developed by Seattle Genes for the treatment of Hodgkin's lymphoma and relapsed large cell lymphoma (ALCL).
  • Clinical applications have proven The safety and effectiveness of such drugs.
  • the DNA topoisomerase I inhibitor is a camptothecin derivative developed by the First Triad Corporation. It was advanced to the third phase as a single chemotherapy drug. The main indications are bone cancer and prostate cancer. Breast cancer, pancreatic cancer, etc. However, like most camptothecin drugs, high fat solubility and low water solubility seriously affect the efficacy of their use. In addition, as a topoisomerase inhibitor, the lack of specificity for tumor cells and the use of side effects are large, which limits its clinical application. Increasing water solubility and improving targeting are a major advantage of ADC drugs.
  • the specific antibody binds to the antigen, carries the toxin around the target cell, and effectively kills the tumor cell by releasing the toxin in the vicinity of the target cell, thereby reducing toxic and side effects. Therefore, ezetacetin has considerable application prospects in ADC drugs.
  • Another important factor in the design of antibody-drug conjugates is the amount of drug that each targeting agent is capable of delivering (ie, the amount of cytotoxic agent attached to each targeting agent (eg, antibody), termed a drug Drug load or drug loading).
  • drug Drug load or drug loading the amount of drug that each targeting agent is capable of delivering.
  • higher drug loadings would be preferable to lower drug loadings (eg, 8-unit loading versus 4-unit loading).
  • the theory is that a higher drug-loaded conjugate will deliver more drug (cytotoxic agent) to the target cell.
  • conjugates with higher drug loadings have higher activity in cell lines in vitro. However, some subsequent studies have revealed that this hypothesis has not been confirmed in animal models.
  • Ixeticon is a moderately toxic drug that can be used in ADCs to reduce the side effects of toxins.
  • increasing the exemplified ADC drug-antibody ratio (DAR) can compensate for the lack of efficacy caused by moderate toxicity.
  • DAR drug-antibody ratio
  • DAR the molecular hydrophilicity
  • the molecular hydrophilicity is insufficient, resulting in a decrease in the in vivo efficacy of exenotecan ADC.
  • the present inventors designed an exethiocon ADC with a hydrophilic unit, and surprisingly discovered through experiments that the ADC drug can effectively increase the drug loading amount. At the same time, avoid the above aggregation phenomenon, improve the drug PK, and obtain the desired drug effect in the in vivo model.
  • the present invention aims to provide a hydrophilic exethiocon antibody conjugate, which, unlike CN104755494, the simultaneous use of a nitrogen-containing heterocycle and PEG significantly increases the hydrophilicity of the molecule, resulting in a high DAR exethioconate conjugate. Has a better PK and efficacy.
  • the present invention provides an antibody drug conjugate of the formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • Ab is an antibody, antibody fragment or protein
  • L1 is a hydrophilic extension unit composed of a nitrogen-containing heterocyclic ring and PEG,
  • A, A1 is an L-amino acid
  • n is an integer of 0, 1, 2, 3, 4, and m is an integer of 1-8
  • L2 is a self-elimination unit
  • L3 is a spacer unit
  • D is the drug ezetidine, which is linked to L3 by an amino group, and the wavy line indicates the position of attachment to L3.
  • L1 comprises the following structure:
  • A is an optional extension unit
  • Ar is a nitrogen-containing heterocycle
  • BB1 is a hydrophilic amino acid or an oligopeptide consisting of a hydrophilic amino acid
  • p is a PEG repeating unit number, an integer of 1-30, and the left and right wavy lines respectively represent The binding site to succinimide and AA1, a, b, c is selected from 0, 1. And a+b+c ⁇ 2.
  • AA1 is selected from the group consisting of alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine , isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, valine, serine, threonine, tryptophan, tyrosine, valine.
  • BB1 is selected from the group consisting of lysine, arginine, histidine, aspartic acid, glutamic acid
  • the self-eliminating unit is selected from the group consisting of ethanolamine, 4-hydroxybenzyl alcohol, 4-aminobenzyl alcohol, ethylene diamine, and substituted ethylene diamine.
  • the PEG is a defined PEG having from 1 to 30 monomer units, preferably a defined PEG having from 1 to 12 monomer units.
  • AA1 is a peptide moiety, preferably a dipeptide selected from the group consisting of Val-Cys, Val-Alt.
  • Ar is a nitrogen-containing heterocycle, preferably triazole, tetrazole, and the following structure
  • the substituted ethylenediamine comprises the following structure:
  • L3 is preferably selected from
  • the left and right wavy lines respectively indicate the attachment sites to the self-eliminating unit and the amino group at the 1-position of the drug exenotecan.
  • the trade name includes the product formulation, generic drug, and active pharmaceutical ingredient of the trade name product.
  • alkylene refers to a divalent straight-chain saturated hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms, and includes a group of from 1 to 10 carbon atoms.
  • alkylene groups include, but are not limited to, methylene (-CH2-), ethylene (-CH2-CH2-), n-propyl, n-butylene, n-pentylene and n-hexylene.
  • aryl refers to a polyunsaturated, generally aromatic, hydroxyl group which may be monocyclic or fused or covalently attached polycyclic (up to three rings).
  • arylhetero refers to an aryl (or ring) containing from 1 to 5 heteroatoms selected from N, O or S, wherein the nitrogen and sulfur atoms are optionally oxidized, the nitrogen atom optionally being seasoned Ammonium.
  • a heteroaryl group can be attached to the remainder of the molecule through a heteroatom.
  • Non-limiting examples of aryl groups include phenyl, naphthyl and diphenyl
  • non-limiting examples of heteroaryl groups include: pyridyl, pyridazinyl, pyrazinyl, pyrimindinyl, Triazinyl, quinolyl, quinoxalinyl, quinazolinyl, porphyrinyl, phthalaziniyl, benzotriazinyl, fluorenyl, benzimidazolyl, benzopyrazole, benzene And triazolyl, benzisoxazolyl, isobenzofuranyl, isodecyl, pyridazinyl, benzotriazinyl, thienopyridyl, thienopyrimidinyl, pyridopyrimidinyl, imidazopyridine , benzothiaxolyl, benzofuranyl, benzothienyl, fluorenyl
  • R', R" and R"' each independently denote hydrogen, unsubstituted C1-8 alkyl, unsubstituted aryl, aryl substituted with 1-3 halogens, unsubstituted C1-8 alkyl, a C 1-8 alkoxy group or a C 1-8 thioalkoxy group, or an unsubstituted aryl-C 1-4 alkyl group.
  • R' and R" When R' and R" are bonded to the same nitrogen atom, they may be bonded to the nitrogen The atoms together form a 3-, 4-, 5-, 6- or 7-membered ring.
  • -NR'R" includes 1-pyrrolidinyl and 4-morpholinyl.
  • a “derivative" of a compound as used herein refers to a substance having a chemical structure similar to that of a compound but further containing at least one chemical group not present in the compound and/or lacking a chemical group present in at least one compound.
  • the compounds to which the derivatives are compared are referred to as "parent” compounds.
  • a “derivative” can be produced from a parent compound in one or more chemical reaction steps.
  • a ligand unit is a targeting agent that specifically binds to a target moiety.
  • the ligand is capable of specifically binding to or binding to a cellular component or to other target molecules of interest.
  • the target moiety or target is typically on the cell surface.
  • the function of the Ligand unit is to deliver a drug unit to a particular target cell population with which the Ligand unit interacts.
  • Ligands include, but are not limited to, proteins, polypeptides, and peptides, as well as non-proteins such as sugars.
  • Suitable ligand units include, for example, antibodies, such as full length (intact) antibodies and antigen-binding fragments thereof.
  • the Ligand unit is a non-antibody targeting agent
  • it can be a peptide or polypeptide, or a non-protein molecule.
  • targeting agents include interferons, lymphokines, hormones, growth factors and colony stimulating factors, vitamins, nutrient transport molecules, or any other cell binding molecule or substance.
  • the linker is covalently attached to the sulfur atom of the ligand.
  • the sulfur atom is a sulfur atom of a cysteine residue that forms an interchain disulfide bond of the antibody.
  • the sulfur atom is a sulfur atom that has been introduced into the cysteine residue of the ligand unit, which forms an interchain disulfide bond of the antibody.
  • the sulfur atom is a sulfur atom that has been introduced into the cysteine residue of the ligand unit (eg, by site-directed mutagenesis or chemical reaction).
  • the linker-bonded sulfur atom is selected from a cysteine residue that forms an interchain disulfide bond of the antibody or a cysteine residue that has been introduced into the ligand unit (eg, by site-directed mutagenesis or chemical reaction).
  • antibody or “antibody unit” is within the scope of its disclosure, including any portion of the antibody structure. This unit can bind, responsively associate, or complex a receptor, antigen, or other receptor unit that the cell population has.
  • the antibody can be any protein or proteinaceous molecule that can bind, complex, or react with a portion of the cell population to be treated or bioengineered.
  • the antibody constituting the antibody drug conjugate of the present invention preferably retains the antigen binding ability in its original wild state. Therefore, the antibody of the present invention can, preferably, specifically bind to an antigen.
  • Antigens involved include, for example, tumor associated antigens (TAAs), cell surface receptor proteins and other cell surface molecules, cell survival regulators, cell proliferation regulators, molecules associated with tissue growth and differentiation (as known or predicted) Functional), lymphokines, cytokines, molecules involved in cell cycle regulation, molecules involved in angiogenesis, and molecules involved in angiogenesis (as known or predicted to be functional).
  • TAAs tumor associated antigens
  • cell survival regulators cell proliferation regulators
  • lymphokines cytokines
  • molecules involved in cell cycle regulation molecules involved in angiogenesis
  • angiogenesis as known or predicted to be functional
  • the tumor associated factor may be a cluster differentiation factor (such as a CD protein).
  • Antibodies for use in antibody drug conjugates include, but are not limited to, antibodies directed against cell surface receptors and tumor associated antigens. Such tumor associated antigens are well known in the art and can be prepared by antibody preparation methods and information well known in the art.
  • tumor associated antigens are well known in the art and can be prepared by antibody preparation methods and information well known in the art.
  • transmembrane or other tumor-associated polypeptides are capable of being specifically expressed on the surface of one or more cancer cells with little or no expression on the surface of one or more non-cancer cells.
  • tumor-associated polypeptides are more overexpressed on the surface of cancer cells relative to the surface of non-cancer cells. Confirmation of such tumor-associated factors can greatly enhance the specific targeting characteristics of cancer-based treatment of cancer.
  • Tumor-associated antigens include, but are not limited to, tumor-associated antigens (1)-(36) listed below. For convenience, antigen-related information well known in the art is indicated below, including name, other name, and gene bank accession number. Nucleic acid and protein sequences corresponding to tumor associated antigens can be found in public databases such as Genbank. Antibody-targeting corresponding tumor-associated antigens include all amino acid sequence variants and isoforms, having at least 70%, 80%, 85%, 90%, or 95% homology to the sequences identified in the references, or The tumor-associated antigen sequences cited in the literature have completely identical biological properties and characteristics.
  • inhibiting means reducing the detectable amount or completely preventing it.
  • cancer refers to a physiological condition or disease characterized by dysregulated cell growth.
  • Tumors include cancer cells.
  • autoimmune disease is a disease or disorder that results from tissue or protein directed against the individual's own body.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a pharmaceutically acceptable organic or inorganic salt of a compound (eg, a drug, a drug-linker or a ligand-linker-drug conjugate).
  • the compound may contain at least one amino or carboxyl group and thus may form an addition salt with the corresponding acid or base.
  • Exemplary salts include, but are not limited to, sulfates, trifluoroacetates, citrates, acetates, oxalates, chlorides, bromides, iodides, nitrates, hydrogen sulfates, phosphates, acids Phosphate, isonicotinic acid, lactate, salicylate, acidic citrate, tartrate, oleate, tannic acid, pantothenate, hydrogen tartrate, ascorbate, salicylate, Formate, orthoformate, glutamate, methanesulfonate, ethanesulfonate, benzenesulfonate, p-toluenesulfonate, potassium salt, sodium salt, and the like.
  • pharmaceutically acceptable salts have more than one dotted atom in the structure.
  • An example in which a plurality of charged atoms are part of a pharmaceutically acceptable salt can have multiple counterexamples.
  • a pharmaceutically acceptable salt has one or more charged atoms and/or one or more counter atoms.
  • linker or “linker of antibody drug conjugate” can be divided into two classes: non-cleavable linkers and cleavable linkers.
  • the drug release mechanism is: after the conjugate binds to the antigen and is not endocytosed by the cell, the antibody is hydrolyzed in the lysosome, releasing a small molecule drug, A linker, an active molecule composed of an amino acid residue of an antibody.
  • a linker an active molecule composed of an amino acid residue of an antibody.
  • a cleavable linker can cleave in the target cell and release the active drug (the small molecule drug itself).
  • Breakable linkers can be divided into two main classes: chemically labile linkers and enzyme labile linkers.
  • Chemically labile linkers can be selectively cleaved due to differences in plasma and cytoplasmic properties. Such properties include pH, glutathione concentration, and the like.
  • pH sensitive linkers are often referred to as acid cleavage linkers. Such a linker is relatively stable in the neutral environment of blood (pH 7.3-7.5), but will be in the weakly acidic endosomes (pH 5.0-6.5) and lysosomes (pH 4.5-5.0). hydrolysis. Most of the first generation of antibody drug conjugates use such linkers, such as hydrazine, carbonate, acetal, ketal. Antibody drug conjugates based on such linkers typically have a shorter half-life (2-3 days) due to the limited plasma stability of the acid-cleaved linker. This shorter half-life limits the use of pH-sensitive linkers in a new generation of antibody drug conjugates to some extent.
  • disulfide bond For glutathione-sensitive linkers, it is also called disulfide bond. Drug release is based on a difference between the high concentration (in millimolar range) of intracellular glutathione and the relatively low concentration of glutathione (micromolar range) in the blood. This is especially true for tumor cells, where low oxygen levels result in enhanced reductase activity, resulting in higher glutathione concentrations. Disulfide bonds are thermodynamically stable and therefore have better stability in plasma.
  • Enzyme-labile linkers such as peptide linkers, provide better control of drug release.
  • Peptide linkers are capable of being efficiently cleaved by lysosome in vivo proteases such as cathepsin B or plasmin (an increase in the amount of such enzymes in some tumor tissues). This peptide linkage is believed to be very stable in the plasma circulation because the extracellular pH is inappropriate and the serum protease inhibitors cause the protease to be generally inactive.
  • enzyme-labile linkers are widely used as cleavable linkers for antibody drug conjugates.
  • Typical enzyme-labile linkers include Val-Cit (vc), Phe-Lys, and the like.
  • Suicide linkers are typically chimeric between the cleavable linker and the active drug, or are themselves part of a cleavable linker.
  • the mechanism of action of the suicide linker is that when the cleavable linker is broken under suitable conditions, the suicide linker can spontaneously rearrange the structure and release the active drug attached thereto.
  • Common suicide linkers include p-aminobenzyl alcohols (PAB) and beta-glucuronides.
  • Non-site coupling method after initial purification, the monomer is greater than 95% of the antibody, changing to PBS, the concentration is 10mg/mL, adding 50 times molar equivalent of TCEP/DTT, incubating at 25 ° C for 4h to open the disulfide bond of the antibody
  • the number of free thiol groups was determined by the Ellman method to determine the complete opening of the disulfide bond. After the reduction was completed, 10 times molar equivalent of the small molecule to be coupled was added, and incubation was carried out for 16 hours at 25 ° C. After the coupling was completed, excess small molecules were removed with a 30 KDa ultrafiltration centrifuge tube.
  • PK experiments were performed using radiolabeled antibodies or ADCs.
  • the PK test substance was radiolabeled as follows. Add 55 ⁇ Ci N-succinimidyl propionate, [propionate-2,3- 3 H]- (Moravek Chemical Co., Ltd.) to the antibody and ADC solution in 500 mM potassium phosphate (pH 8.0) and 500 mM sodium chloride. Catalog No.: MT 919, 80 Ci/mmol, 1 mCi/mL, 9:1 hexane: ethyl acetate) / mg antibody or ADC. The resulting mixture was vortexed and allowed to stand at room temperature for 2 hours.
  • the mixture was centrifuged at 4000 xg for 5 minutes and separated into an Amicon Ultra-15 centrifugal filter unit (millipore, catalog number: UFC903024, 30 kDa MWCO). Uncoupled radioactivity was removed by 4 rounds of dilution and centrifuged at 4000 xg. The resulting product was filtered through a sterile 0.22 ⁇ m Ultrafree-MC centrifuge at its unit Millipore, catalog number UFC30GVOS) and the final antibody or ADC concentration was measured spectrophotometrically. The specific activity ( ⁇ Ci/mg) of each product was determined by liquid scintillation counting.
  • ADC hydrophobic interaction chromatography
  • MPB mobile phase B
  • MPB consisting of 1.5 M ammonium sulfate and .025 M sodium phosphate
  • MPB consisting of 0.025 M sodium phosphate, 25% isopropanol.
  • the sample loading was approximately 20 ⁇ g and the gradient elution was completed in 15 minutes.
  • UV 280 nm was used for detection, the stronger the water-transfer sample, the later the peak.
  • Example 24 The compound 24 obtained in Example 24 was dissolved in 40 mL of DMF, EtOAc (EtOAc, EtOAc, EtOAc (EtOAc) 1) Monitoring. After work-up, most of the DMF was concentrated under reduced pressure at 45 ° C with an oil pump, crystallized by adding 100 ml of methyl tert-butyl ether, filtered, and dried to give a solid.

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Abstract

一种喜树碱-抗体偶联物，该类ADC药物可有效提高其载药量，同时避免上述聚集现象发生，改善药物PK，在体内模型中获得理想的药效。

Description

一种喜树碱-抗体偶联物 技术领域
本发明涉及应用喜树碱类药物-抗体偶联物治疗肿瘤或其他疾病，尤其涉及应用一种特殊的亲水性依喜替康抗体偶联物以增加药物在血浆中的稳定性，减少聚集，改善药物代谢动力学(PK)。
背景技术
抗体偶联药物(ADC)作为新型的靶向药物，一般由三部分组成：抗体或抗体类配体，小分子药物以及将配体和药物偶联起来的连接子。抗体偶联药物利用抗体对抗原的特异性识别，将药物分子运输至靶细胞附近并有效释放药物分子，达到治疗目的。2011年8月，美国食品药品监督管理局(FDA)批准西雅图基因公司研制的用于治疗霍奇金淋巴瘤以及复发性变性大细胞淋巴瘤(ALCL)的ADC新药Adecteis TM上市，临床应用已经证明了此类药物的安全性和有效性。
DNA拓扑异构酶I抑制剂依喜替康是喜树碱类衍生物，由第一三共公司开发，前期作为单独化疗药物使用推进至三期临床，主要适应症为骨癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌等。然而，与大多数喜树碱类药物一样，高脂溶性，低水溶性严重影响其使用疗效。另外，作为拓扑异构酶抑制剂，缺少对肿瘤细胞的特异性，使用副作用大，限制了其临床应用。增加水溶性，提高靶向性是ADC类药物的一大优势。特异性抗体与抗原的结合，将毒素携带至靶细胞周围，通过在靶细胞附近释放毒素，有效杀灭肿瘤细胞，降低毒副作用。因此，依喜替康在ADC药物中具有可观的应用前景。
抗体-药物偶联物设计中的另一项重要因素是，每个靶向剂能够递送的药物的量(即，连接至各靶向剂(例如，抗体)的细胞毒剂的数量，称为药物载量(drug load)或载药量(drug loading))。曾经有假设认为，较高的药物载量将优于较低的药物载量(例如，8-单位载量对比4-单位载量)。该理论是，载药量更高的偶联物将向靶细胞递送更多的药物(细胞毒剂)。该理论由如下观察结果支持：具有较高载药量的偶联物在体外对于细胞系具有较高的活性。然而，后续某些研究揭示，该假设在动物模型中并没有得到证实。观察到，具有某种奥瑞他汀的4或8单位药物载量的偶联物在小鼠模型中具有相似活性。参见例如，Hamblett等，Clinical Cancer Res.10:7063-70(2004).Hamblett等进一步报道了更高载体的ADC在动物模型中将被更快的清除出循环。该更快的清除表明，较高载量的物质相比较低载量的物质的PK更加不稳定的倾向，参见Hamblett等。另外，较高载量的偶联物在小鼠中有较低的MTD，并且因此具有较窄的报告治疗指数。相反，报告单克隆抗体中工程改造的位点处载药量为2 的ADC具有与某些4-单位载量ADC相比相同或更好的PK性质和治疗指数。例如，参见Junutula等，Clinical Cancer Res.16:4769(2010).因此，近期的趋势是开发具有低载药量的ADC。
依喜替康属于中等毒性类药物，此类药物应用于ADC中可降低因毒素脱落而带来的毒副作用。为达到理想的治疗效果，与常用的高毒类药物ADC相比，提高依喜替康ADC药物抗体比(DAR)可弥补中等毒性带来的药效不足。然而，因高DAR脂溶性增加，势必会增加依喜替康类ADC体内聚集，反而降低药效。专利CN104755494描述了一类依喜替康ADC，其核心为以四肽为酶切片段，搭配氨甲氧基为自我消除结构，采用非定点偶联技术实现DAR＝8。然而，其缺陷显而易见，在高DAR下，分子亲水性不足，导致依喜替康ADC体内药效降低。
本发明人在对依喜替康类ADC综合理解的基础上，设计出一种具有亲水单元的依喜替康ADC，并通过实验惊奇的发现，该类ADC药物可有效提高其载药量，同时避免上述聚集现象发生，改善药物PK，在体内模型中获得理想的药效。
发明内容
本发明旨在提供一种亲水依喜替康抗体偶联物，与CN104755494不同，含氮杂环与PEG的同时使用显著增加了分子亲水性，使得高DAR的依喜替康偶联物具有更好的PK以及药效。具体的，本发明提供了一种如式I所示的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2018101214-appb-000001
其中
Ab是抗体，抗体片段或蛋白；
L1为含氮杂环与PEG组成的亲水延伸单元，
A、A1为L-氨基酸，n为0,1,2,3,4的整数，m为1-8的整数
L2为自我消除单元；
L3为间隔单元；
D是药物依喜替康，以1位氨基与L3相连，波浪线表示与L3的连接位置
Figure PCTCN2018101214-appb-000002
在另一优选例中，L1包含以下结构：
Figure PCTCN2018101214-appb-000003
其中A为任选的延伸单元，Ar为含氮杂环，BB1为亲水氨基酸或由亲水氨基酸组成的寡肽，p为PEG重复单元数，为1-30的整数，左右波浪线分别表示与丁二酰亚胺及AA1的连接位点，a，b，c选自0,1。且a+b+c≥2。
在另一优选例中，AA1选自以下组成的组：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸。
在另一优选例中，BB1选自以下组成的组：赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸
在另一优选例中，其中自我消除单元选自由以下组成的组：乙醇胺、4-羟基苄醇、4-氨基苄醇、乙二胺和取代的乙二胺。
在另一优选例中，其中所述的PEG是具有1-30个单体单元的确定的PEG，优选地是具有1-12个单体单元的确定的PEG。
在另一优选例中，AA1是肽部分，优选地为二肽，选自Val-Cys、Val-Alt。
在另一优选例中，Ar为含氮杂环，优选地为三氮唑、四氮唑、及以下结构
Figure PCTCN2018101214-appb-000004
在另一优选例中，取代的乙二胺包含以下结构：
Figure PCTCN2018101214-appb-000005
Figure PCTCN2018101214-appb-000006
在另一优选例中，L3优选自
Figure PCTCN2018101214-appb-000007
左右波浪线分别表示与自我消除单元及药物依喜替康1位氨基的连接位点。
具体实施方式
缩写和定义
除非另有说明，否则如本文所用的以下术语和短语旨在具有以下含义。当本文中使用商标名称时，除非上下文中另有指明，否则商标名称包括所述商标名称产品的产品配方、通用药物和活性药物成分。
术语“亚烷基”是指具有1-20个碳原子的二价直链饱和烃基团，包括从1至10碳原子的基团。亚烷基基团的实施例包括但不限于亚甲基(-CH2-),亚乙基(-CH2-CH2-),亚正丙基，亚正丁基，亚正戊基和亚正己基。除非另有说明，术语“芳基”指多不饱和、一般是芳族的羟基团，它可以是单环或者稠合或共价连接的多环(至多三个环)。术语“芳杂基”指含有1-5个选自N、O或S的杂原子的芳基(或环)，其中所述氮和硫原子任选被氧化，所述氮原子任选被季铵化。杂芳基团可通过杂原子连接于分子的其余部分。芳基基团的非限制性例子包括：苯基、萘基和二苯基，而杂芳基团的非限制性例子包括：吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基(pyrimindinyl)、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基(phthalaziniyl)、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲嗪基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡啶并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基(benzothiaxolyl)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、以及噻吩基等。当描述为“取代的”时，上述芳环和杂芳环系统的取代基选自下述可接受的取代基。
除非文中另有说明，烃基(包括通常为称为亚烷基、烯基、炔基和环烷基的那些)的取代基可以是选自下组的多种基团：-卤素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO 2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O) 2R’、 -NH-C(NH 2)＝NH、-NR’C(NH 2)＝NH、-NH-C(NH 2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O) 2R’、-S(O) 2NR’R”、-NR’S(O) 2R”、-CN和-NO 2，取代基数量为0至(2m’+1)，其中m’为该基团中碳原子的总数。R’、R”和R”’各自独立的指代氢、未取代的C 1-8烷基、未取代的芳基、由1-3个卤素取代的芳基、未取代的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基或C 1-8硫代烷氧基、或未取代的芳基-C 1-4烷基。R’和R”连接于同一个氮原子时，它们可与该氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-元环。例如，-NR’R”包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
本文中所用的化合物的“衍生物”是指具有与化合物相似的化学结构但还含有至少一个化合物中不存在的化学基团和/或缺少至少一个化合物中存在的化学基团的物质。衍生物所比较的化合物被称为“母体”化合物。通常，“衍生物”可在一个或多个化学反应步骤中由母体化合物产生。
L-配体
配体单元是与靶标部分特异性结合的靶向剂。所述配体能够特异性结合至细胞组分或结合至细胞组分或结合至其他感兴趣的靶标分子。靶标部分或靶标通常在细胞表面上。在一些方面中，配体单元的作用是将药物单元递送至配体单元与之相互作用的特定靶细胞群。配体包括但不限于蛋白质、多肽和肽，以及非蛋白质如糖。合适的配体单元包括，例如，抗体，例如全长(完整)抗体及其抗原结合片段。在配体单元是非抗体靶向试剂的实施方式中，其可以是肽或多肽，或非蛋白质分子。这类靶向试剂的示例包括干扰素、淋巴因子、激素、生长因子和集落刺激因子、维生素、营养转运分子、或任何其他细胞结合分子或物质。在一些实施方式中，连接子共价连接至配体的硫原子。在一些方面中，硫原子是半胱氨酸残基的硫原子，其形成抗体的链间二硫键。在另一方面中，硫原子是已经导入配体单元的半胱氨酸残基的硫原子，其形成抗体的链间二硫键。在另一方面中，硫原子是已经导入配体单元的半胱氨酸残基的硫原子(例如，通过定点诱变或化学反应)。在其他方面中，连接子结合的硫原子选自形成抗体的链间二硫键的半胱氨酸残基或已经引入配体单元的额半胱氨酸残基(例如，通过定点诱变或化学反应)。在一些实施方式中，按照Kabat(Kabat E.A等，(1991))《免疫学感兴趣的蛋白质序列》(Sequences of proteins of Immunological Interest),第五版，NIH出版物91-3242)中的EU索引编号系统。
如本文所用，“抗体”或“抗体单元”在其所属的范围内，包括抗体结构的任何部分。这一单元可以结合，反应性关联，或者络合一个受体，抗原，或者靶向细胞群体具有的其它受体单元。抗体可以是任何蛋白或蛋白类分子，它可以结合，络合，或者与待治疗或生物改造的细胞群体的一部分发生反应。
本发明中组成抗体药物偶联物的抗体最好保持其原有野生状态时的抗原结合能力。因此， 本发明中的抗体能够，最好专一性的与抗原结合。涉及的抗原包括，例如，肿瘤相关抗原(TAA)，细胞表面受体蛋白和其他细胞表面分子，细胞存活调节因子，细胞增殖调节因子，与组织生长与分化相关的分子(如已知或预知的具有功能性的)，淋巴因子，细胞因子，参与细胞循环调节的分子，参与血管生成的分子，以及与血管生成有关的分子(如已知或预知的具有功能性的)。肿瘤相关因子可以是簇分化因子(如CD蛋白)。与本发明中所述
应用在抗体药物偶联物中的抗体包括，但不局限于，针对细胞表面受体和肿瘤相关抗原的抗体。这样的肿瘤相关抗原是业内所熟知的，可以通过业内熟知的抗体制备方法和信息来制备。为了开发可用于癌症诊断与治疗的有效的细胞水平目标物，研究人员力图找寻跨膜或其他肿瘤相关多肽。这些目标物能够特异性的表达在一种或多种癌细胞表面，而在一种或多种非癌细胞表面表达很少或不表达。通常，相对于非癌细胞表面而言，这样的肿瘤相关多肽在癌细胞表面更加过度表达。确认这样的肿瘤相关因子，可大大提高基于抗体治疗癌症的专一靶向特性。
肿瘤相关抗原包括，但不局限于以下列出的肿瘤相关抗原(1)-(36)。为方便起见，为业内所熟知的抗原相关信息标示如下，包括名称，其他名称，基因库登录号。与肿瘤相关抗原对应的核酸和蛋白序列可参见公开数据库，例如Genbank。抗体靶向对应的肿瘤相关抗原包括所有的氨基酸序列变种和同种，与参考文献中确认的序列具有至少70％，80％，85％，90％，或者95％的同源性，或者具备与引用文献中的肿瘤相关抗原序列具有完全一致的生物性质和特征。
术语“抑制”或“的抑制”指，减少了可检测的量，或完全阻止。
术语“癌症”指的是以失调的细胞生长为特征的生理病症或疾病。“肿瘤”包括癌细胞。
术语“自身免疫疾病”是源自针对个体自身的组织或蛋白质的疾病或紊乱。
本文中所用的短语“药学上可接受的盐”指的是，化合物(例如，药物，药物-接头或配体-接头-药物偶联物)的药学上可接收到有机或无机盐。该化合物可含有至少一个氨基或羧基，并且因此可与相应的酸或碱形成加成盐。示例性的盐包括但不限于：硫酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、甲酸盐、本甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐，钾盐、钠盐等。另外，药学上可接受的盐在结构中具有超过一个的带点原子。其中多个带电原子是药学上可接受的盐的一部分的示例能有多个抗衡例子。例如，药学上可接受的盐具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡原子。
按照在细胞内药物释放的机制，如本文所用，“连接子”或“抗体药物偶联物的连接子” 可被分为两类：不可断裂连接子和可断裂连接子。
对于含有不可断裂连接子的抗体药物偶联物，其药物释放机制为：偶联物与抗原结合并没被细胞内吞后，抗体在溶酶体中被酶解，释放出由小分子药物，连接子，和抗体氨基酸残基共同组成的活性分子。由此带来的药物分子结构改变并不减弱其细胞毒性，但由于活性分子是带电荷的(氨基酸残基)，从而导致其不能渗入邻近细胞。因此，此类活性药物不能杀死邻近不表达靶向抗原(抗原阴性细胞)的肿瘤细胞(旁观者效应，bystander effect)(Ducry等，2010，Bioconjugate Chem.21:5-13)。
可断裂连接子，顾名思义，可以在目标细胞内断裂并释放出活性药物(小分子药物本身)。可断裂连接子可分为两个主要的类别：化学不稳定连接子和酶不稳定连接子。
化学不稳定连接子可以由于血浆和细胞质性质的不同而选择性的断裂。这样的性质包括pH值，谷胱甘肽浓度等。
对pH值敏感的连接子，通常又称为酸断裂连接子。这样的连接子在血液的中性环境下相对稳定(pH7.3-7.5)，但是在弱酸性的内涵体(pH5.0-6.5)和溶酶体(pH4.5-5.0)内将会被水解。第一代的抗体药物偶联物大多应用这类连接子，例如腙，碳酸酯，缩醛，缩酮类。由于酸断裂连接子有限的血浆稳定性，基于此类连接子的抗体药物偶联物通常具有较短的半衰期(2-3天)。这种较短的半衰期在一定程度上限制了pH敏感连接子在新一代抗体药物偶联物中的应用。
对于谷胱甘肽敏感的连接子，又称二硫键连接子。药物释放是基于细胞内谷胱甘肽的高浓度(毫摩尔范围)与血液中相对较低的谷胱甘肽浓度(微摩尔范围)差异引起的。对于肿瘤细胞而言尤其如此，其低含氧量导致还原酶的活性增强，因而导致更高的谷胱甘肽浓度。二硫键具有热力学稳定性，因此在血浆中具有较好的稳定性。
酶不稳定连接子，如肽连接子，能够更好的控制药物释放。肽连接子能够被溶酶体内蛋白酶，如组织蛋白酶(Cathepsin B)或纤溶酶(在一些肿瘤组织中此类酶含量增加)，有效的切断。这种肽连接被认为在血浆循环中非常稳定，这是因为细胞外不合宜的pH值及血清蛋白酶抑制剂导致蛋白酶通常不具备活性。鉴于较高的血浆稳定性和良好的细胞内断裂选择性和有效性，酶不稳定连接子被广泛用做抗体药物偶联物的可断裂连接子。典型的酶不稳定性连接子包括Val-Cit(vc)，Phe-Lys等。
自杀式连接子一般嵌合在可断裂连接子与活性药物之间，或者本身就是可断裂连接子的一部分。自杀式连接子的作用机制是：当可断裂连接子在合宜的条件下断裂后，自杀式连接子能够自发的进行结构重排，进而释放与之连接的活性药物。常见的自杀式连接子包括对氨基苄醇类(PAB)和β-葡萄糖醛酸苷类(β-Glucuronide)等。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，应理解，这些实施例只用于说明本发明，而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比例、比率、或份数按重量计。除非另行定义，文中所使用的所有专业和科学用于与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明下列实施例中采用的通用步骤是：
通用步骤A
非定点偶联方法，经过初步纯化后单体大于95％的抗体，换液至PBS，浓度10mg/mL，加入50倍摩尔当量的TCEP/DTT，25℃孵育4h，以打开抗体的二硫键，用Ellman方法测定游离巯基数确定二硫键完全打开。还原完成后，加入10倍摩尔当量的待偶联小分子，25℃孵育16h，偶联完成后，用30KDa的超滤离心管去除过量小分子。
通用步骤B
药代动力学研究
使用放射性标记的抗体或ADC来进行药代动力学(PK)实验。PK测试物质采用如下方法进行放射性标记。想500mM磷酸钾(pH8.0)和500mM氯化钠中的抗体和ADC溶液添加55μCi N-琥珀酰亚胺丙酸酯、[丙酸酯-2,3- 3H]-(Moravek化学公司，目录号：MT 919,80Ci/mmol、1mCi/mL、9:1己烷：乙酸乙酯)/mg抗体或ADC。所得混合物经涡旋处理，并室温放置2小时。混合物以4000xg离心5分钟，并分离至Amicon Ultra-15离心滤器单元)(密理博(millipore)，目录号：UFC903024,30kDa MWCO)。未偶联的放射性活性通过4轮稀释并以4000xg离心移除。所得的产物过滤通过无菌0.22μm Ultrafree-MC离心率其单元密理博，目录号UFC30GVOS)，并通过分光光度法测量最终的抗体或ADC浓度。各产物的比活(μCi/mg)采用液体闪烁计数测定。
通用步骤C
疏水性相互作用色谱
使用疏水性相互作用色谱(HIC)来进行对ADC的分析。通过0-100％流动相B(MPB)脱，其中流动相A(MPA)由1.5M硫酸铵和.025M磷酸钠组成，并且MPB由0.025M的磷酸钠、25％异丙醇组成。样品上样量约为20μg，梯度洗脱在15分钟完成。用UV280nm进行检测，输水性越强的样品越晚出峰。
实施例1
化合物1的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000008
将6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(MC-OSu，30g，0.097mol)溶于200ml二氯甲烷中，再加入炔丙胺(5.9g,0.1mol)、DIEA(24mL，0.146mol)，室温下搅拌反应。TLC(PE:EA＝1:1)监控。反应完全后，过滤，收集滤液，向滤液中加入纯化水200mL，再用1mol/L的盐酸水溶于调pH至5～6，分液，饱和NaCl水洗二氯甲烷层至中性，于40℃下减压浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析色谱(洗脱剂PE/EA＝3/1～2/1～1/1)得到白色固体纯品7.5g。LC-MS m/z(ES +)：249.1(M+H) +
实施例2
化合物2的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000009
将化合物1(7g，0.028mol)、叠氮聚乙二醇羧基(N 3-PEG 8-COOH，6.62g，0.014mol)、碘化亚铜(3.37g)溶于200mL二氯甲烷中，室温缓慢滴加DIEA(2.8mL，0.017mol)，滴毕室温反应，TLC(DCM：MeOH＝8：1)监控进程。后处理，过滤，滤液减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析色谱(洗脱剂DCM/MeOH＝100/1～50/1～10:1)得到产品9g。LC-MS m/z(ES +)：716.4(M+H) +
实施例3
化合物3的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000010
将化合物1(7g，0.028mol)、叠氮聚乙二醇羧基(N 3-PEG 4-COOH，4.07g，0.014mol)、碘化亚铜(3.37g)溶于200mL二氯甲烷中，室温缓慢滴加DIEA(2.8mL，0.017mol)，滴毕室温反应，TLC(DCM：MeOH＝8：1)监控进程。后处理，过滤，滤液减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析色谱(洗脱剂DCM/MeOH＝100/1～50/1～10:1)得到产品7.7g。LC-MS m/z(ES +)：539.1(M+H) +
实施例4
化合物4的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000011
将化合物6-马来酰亚胺基己酸(6g，28.4mmol)溶于100mL四氢呋喃中，依次加入N-甲基吗啉(5.74g，56.8mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI，6.52g，34mmol)、1-羟基苯并三唑(HOBt，4.63g，34mmol)，氮气保护下0℃下滴加10mL氨基氰(3.15g，56.8mmol)的THF溶液，滴毕室温反应，TLC(展开剂PE/EA＝1/1)监控进程。后处理，过滤，滤液减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析色谱(洗脱剂PE/EA＝15/1～10/1)得到产品6g。LC-MS m/z(ES +)：250.1(M+H) +
实施例5
化合物5的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000012
将化合物4(5g，0.02mol)、半胱氨酸(4.84g，0.04mol)溶于100mL甲醇与0.1M磷酸钠缓冲液的混合液(v/v＝1/1)中，氮气保护40℃反应，TLC(DCM:MeOH＝10:1)监控进程。后处理，过滤，滤液减压浓缩除甲醇，剩余物加入冷却条件下加入稀盐酸调节pH至4左右，用二氯甲烷萃取，有机层用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产品5.1g。LC-MS m/z(ES +)：354.1(M+H) +
实施例6
化合物6的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000013
将化合物5(5g，14.1mmol)溶于60mL四氢呋喃中，依次加入N-甲基吗啉(2.86g，28.2mmol)、EDCI(3.25g，17mmol)、HOBt(2.31g，17mmol)，氮气保护下0℃下滴加20mL氨基聚乙二醇羧基(NH 2-PEG 8-COOH，7.52g，17mmol)的THF溶液，滴毕室温反应，TLC(展开剂DCM/MeOH＝6/1)监控进程。后处理，过滤，滤液减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析色谱(洗脱剂DCM/MeOH＝30/1～10/1)得到产品8.3g。LC-MS m/z(ES +)：777.3(M+H) +
实施例7
化合物7的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000014
将化合物N-苄氧羰基-L-苯丙氨酸(30g，0.1mol)、N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu，13.3g，0.115mol)，N,N'-二环己基碳酰亚胺(DCC，24g，0.115mol)依次加入至1L单口瓶中，再加入500mL四氢呋喃(THF)，氮气保护下室温反应，TLC(DCM/MeOH＝10/1)监控反应进程。反应完毕，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品用甲叔醚搅洗得白色固体37.8g。LC-MS m/z(ES +)：419.1(M+Na) +
实施例8
化合物8的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000015
将化合物N-ε-Boc-L-赖氨酸(14.3g，0.058mol)、碳酸氢钠(12.4g，0.117mol)、300mLTHF加入至1L单口瓶中，室温下滴加200mL化合物7(35g，0.087mol)的THF溶液，滴毕室温反应，TLC(DCM/MeOH＝8/1)监控反应进程。后处理：向反应液中加入1M的硫酸氢钾溶液300mL，用乙酸乙酯萃取(400mLx3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得白色固体36g。LC-MS m/z(ES +)：550.6(M+Na) +
实施例9
化合物9的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000016
将化合物8(20g，37.9mmol)、N-甲基吗啉(7.66g，75.8mmol)、250mLTHF加入至500mL三口瓶中，氮气保护下降至0℃，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI，8.68g，45.48mmol)、1-羟基苯并三唑(HOBt，6.19g，45.48mmol)，滴加50mL对氨基苄醇(8.4g，68.22mmol)的THF溶液，滴毕升至室温反应，TLC(DCM/MeOH＝15/1)监控进程。后处理：加入1M硫酸氢钾水溶液，搅拌，用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得粗品，再经异丙醚搅洗得黄色固体15g。LC-MS m/z(ES +)：655.3 (M+Na) +
实施例10
化合物10的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000017
将化合物9(15g，23.7mmol)、二(对硝基苯)碳酸酯(21.6g，71.1mmol)，150mLDMF，氮气保护下0℃搅拌，滴加N,N-二异丙基乙胺(DIEA，8.2mL，71.1mmol)，滴毕室温反应，TLC(DCM/MeOH＝20/1)监控反应进程。后处理：减压浓缩大部分DMF，加入异丙醚搅洗析晶，过滤，烘干，得类白色固体17g。LC-MS m/z(ES +)：698.3(M+H) +-Boc。
实施例11
化合物11的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000018
将化合物N,N'-二甲基乙二胺(20g，0.226mol)溶于100mL二氯甲烷中，冰水浴下滴加50mLBoc酸酐(14.8g，0.068mol)的二氯甲烷混合液，滴毕室温反应，TLC(DCM:MeOH＝10:1)监控反应进程。过滤，40℃减压浓缩干滤液。过柱，得产品9g。LC-MS m/z(ES +)：89.3(M+H) +-Boc。
实施例12
化合物12的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000019
将化合物羟乙酸苄酯(30g，0.18mol)溶于500mLDMF中，再加入二(对硝基苯)碳酸酯(45.8g，0.15mol)、DIEA(49mL，0.3mol)，氮气保护下室温反应，TLC(DCM:MeOH＝10:1)监控。反应完毕后于45℃下油泵减压浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析色谱(洗脱剂PE/EA＝10/1～8/1～6/1)得产品29g。LC-MS m/z(ES +)：332.1(M+H) +
实施例13
化合物13的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000020
将化合物12(21g，63.8mmol)溶于100mLDMF中，再加入化合物11(10g，53mmol)、DIEA(17.5mL，0.1mol)，氮气保护下室温反应，TLC(DCM:MeOH＝8:1)监控。反应完毕后于45℃下油泵减压浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析色谱(洗脱剂PE/EA＝8/1～4/1)得产品12.3g。LC-MS m/z(ES +)：281.2(M+H) +-Boc
实施例14
化合物14的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000021
将化合物13(12g)溶于干燥的50mlDCM中，再加入三氟乙酸20ml，室温搅拌反应，TLC(PE：EA＝3：1)监测。反应完全后，45℃减压浓缩干，不纯化直接投下一步反应。
实施例15
化合物15的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000022
将实施例14所得化合物14溶于80mLDMF中，依次加入Fmoc-Val-Cit-PAB-PNP(8g，10.4mmol)、DIEA(7mL，41.6mmol)，室温反应，TLC(DCM:MeOH＝12:1)监控。后处理，于45℃下油泵减压浓缩掉大部分DMF，加入200ml甲基叔丁基醚析晶，过滤，干燥得固体7g。LC-MS m/z(ES +)：908.4(M+H) +
实施例16
化合物16的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000023
将化合物15(9g)溶于2.8L甲醇和四氢呋喃(3:1)的混合溶液中，再加入2.7g Pd/BaSO 4，氢气置换三次，室温搅拌反应72小时。TLC(DCM:MeOH＝8:1)监测反应完全后，过滤，45℃减压浓缩干，得黄色固体7.5g。LC-MS m/z(ES +)：818.3(M+H) +
实施例17
化合物17的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000024
将8g化合物16溶于80ml DMF中，再加入16ml二乙胺，氮气保护，室温下搅拌反应。TLC(DCM:MeOH＝1:1)监测反应完全后，45℃油泵减压旋干，不纯化，直接用于下步反应。
实施例18
化合物18的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000025
按照实施例14制备而得的化合物14(6g，21.4mmol)，将其溶于60mLDMF中，依次加入化合物10(11g，14.3mmol)、DIEA(14mL，85.7mmol)，室温反应，TLC(DCM:MeOH＝10:1)监控。后处理，于45℃下油泵减压浓缩掉大部分DMF，加入200ml甲基叔丁基醚析晶，过滤，干燥得固体7.6g。LC-MS m/z(ES +)：954.4(M+H) +
实施例19
化合物19的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000026
将化合物18(7g)溶于1L甲醇和四氢呋喃(3:1)的混合溶液中，再加入2.1g Pd/BaSO 4，氢气置换三次，室温反应，TLC(DCM:MeOH＝2:1)监测反应。后处理，过滤，45℃减压浓缩干，得黄色固体4.8g。LC-MS m/z(ES +)：729.3(M+H) +
实施例20
化合物20的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000027
将化合物N-甲基乙醇胺(20g，0.267mol)溶于200mL二氯甲烷中，加入三乙胺(40mL，0.293mol)，室温搅拌滴加150mLBoc酸酐(29.62g，0.293mol)的二氯甲烷混合溶液，滴毕，室温反应，TLC(PE:EA＝1:1)监控进程。后处理，加入饱和氯化铵溶液300mL，搅拌分液，有机层用水，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得产品45g。
实施例21
化合物21的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000028
将化合物20(10g，57mmol)溶于250mL干燥的二氯甲烷中，氮气鼓泡，0℃下分批加入Dess-Martin氧化剂(DMP，26.6g)，加毕室温反应，TLC(PE/EA＝1/1)监控反应进程。后处理，加入500mL饱和碳酸氢钠水溶液、500mL饱和硫代硫酸钠水溶液及800mL二氯甲烷搅拌30min，分层，有机层用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得黄色油状物8.65g。LC-MS m/z(ES +)：174.2(M+H) +
实施例22
化合物22的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000029
将化合物21(8.6g，50mmol)、二甘醇胺(5.25g，50mmol)溶于100mL甲醇中，室温反应，TLC(PE/EA＝3/2)监控进程。反应完毕后。将反应液冷却至0℃，分批加入硼氢化钠(3.78g，100mmol)，加毕升至室温反应，TLC(PE/EA＝3/2)，反应完，减压浓缩得粗品。经硅胶柱层析色谱(洗脱剂DCM/MeOH＝80/1～50/1～30/1)得产品5.6g。LC-MS m/z(ES +)： 263.3(M+H) +
实施例23
化合物23的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000030
将化合物22(4.5g，17.25mmol)溶于150mL干燥的二氯甲烷中，依次加入化合物12(8.55g，25.8mmol)，DIEA(5.6mL，34.5mmol)，室温反应，TLC(DCM:MeOH＝10:1)监控反应进程。后处理，减压浓缩得粗品，经经硅胶柱层析色谱(洗脱剂DCM/MeOH＝800/1～500/1～100/1)得产品4.4g。LC-MS m/z(ES +)：355.3(M+H) +-Boc
实施例24
化合物24的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000031
将化合物23(4.4g，9.7mmol)溶于50mL干燥二氯甲烷中，加入三氟乙酸5mL，室温反应，TLC(DCM:MeOH＝15:1)监测反应进程,。后处理，减压浓缩，不纯化，直接投下一步反应。
实施例25
化合物25的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000032
将实施例24所得化合物24溶于40mLDMF中，依次加入Fmoc-Val-Cit-PAB-PNP(5g，6.5mmol)、DIEA(6.3mL，38.8mmol)，室温反应，TLC(DCM:MeOH＝6:1)监控。后处理，于45℃下油泵减压浓缩掉大部分DMF，加入100ml甲基叔丁基醚析晶，过滤，干燥得固体3.2g。LC-MS m/z(ES +)：968.4(M+H) +
实施例26
化合物26的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000033
将化合物25(3g)溶于600mL甲醇和四氢呋喃(3:1)的混合溶液中，再加入0.9g Pd/BaSO 4，氢气置换三次，室温搅拌反应。TLC(DCM:MeOH＝8:1)监测进程。反应完全后，过滤，45℃减压浓缩干，得黄色固体2.53g。LC-MS m/z(ES +)：878.3(M+H) +
实施例27
化合物27的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000034
将化合物26(2.5g)溶于20mLDMF中，加入4mL二乙胺，氮气保护下室温反应，TLC(DCM:MeOH＝1:1)监测反应进程。后处理，减压浓缩除去DMF得产品，不纯化，直接用于下步反应。
实施例28
化合物28的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000035
将化合物2(7g，9.8mmol)溶于100ml乙腈中，再加入HOSu(1.24g，10.8mmol)、DCC(2.24g，10.78mmol)，溶清，升温至70℃反应。TLC(DCM：MeOH＝8：1)监测反应完全后，过滤，滤液于40℃减压浓缩，不纯化，直接投下一步。
实施例29
化合物29的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000036
将化合物3(6g，11.1mmol)溶于100ml乙腈中，再加入HOSu(1.41g，12.3mmol)、DCC(2.55g，12.3mmol)，溶清，升温至70℃反应。TLC(DCM：MeOH＝8：1)监测反应完全后，过滤，滤液于40℃减压浓缩，不纯化，直接投下一步。
实施例30
化合物30的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000037
将化合物6(8g，10.3mmol)溶于100ml乙腈中，再加入HOSu(1.3g，11.3mmol)、DCC(2.35g，11.3mmol)，溶清，升温至70℃反应。TLC(DCM：MeOH＝8：1)监测反应完全后，过滤，滤液于40℃减压浓缩，不纯化，直接投下一步。
实施例31
化合物31的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000038
将化合物17(400mg，6.7mmol)溶于6mlDMF中，再加入DIEA(0.22mL，13.4mmol)、化合物28(544mg，6.7mmol)，氮气保护，室温搅拌反应，TLC(DCM：MeOH＝1：1)监测反应。后处理，于45℃油泵减压浓缩,残余物用高效制备液相纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 90％A，10-25min，90％A～70％A，25-60min，70％A～20％A
收集具有31-34min保留时间的馏分并冻干，得产品410mg。LC-MS m/z(ES +)：1315.5 (M+Na) +
实施例32
化合物32的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000039
将化合物31(200mg，0.15mmol)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP，402mg，0.77mmol)溶于10mLDMF中，氮气保护下加入DIEA(0.2mL，1.23mmol)室温搅拌30min，再滴加依喜替康(45mg，0.1mmol)，室温反应，用高效液相色谱监测反应进程。后处理，减压浓缩，残余物用高效液相制备纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 80％A，10-25min，80％A～65％A，25-70min，65％A～30％A
收集具有50-52min保留时间的馏分并冻干，得产品90mg。LC-MS m/z(ES +)：1732.8(M+Na) +
实施例33
化合物33的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000040
将化合物17(400mg，0.67mmol)溶于6mlDMF中，再加入DIEA(0.22mL，1.34mmol)、化合物29(426mg，0.67mmol)，氮气保护，室温搅拌反应，TLC(DCM：MeOH＝1：1)监测反应。后处理，于45℃下油泵减压浓缩,残余物用高效制备液相纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 90％A，10-25min，90％A～70％A，25-60min，70％A～20％A
收集具有28-30min保留时间的馏分并冻干，得产品337mg。LC-MS m/z(ES +)：1138.1(M+Na) +
实施例34
化合物34的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000041
将化合物33(200mg，0.179mmol)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP，465mg，0.895mmol)溶于10mLDMF中，氮气保护下加入DIEA(0.24mL，1.43mmol)室温搅拌30min，再滴加依喜替康(52mg，0.12mmol)，室温反应，用高效液相色谱监测反应进程。后处理，减压浓缩，残余物用高效液相制备纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 80％A，10-25min，80％A～60％A，25-70min，60％A～25％A
收集具有49-51min保留时间的馏分并冻干，得产品95mg。LC-MS m/z(ES +)：1556.6(M+Na) +
实施例35
化合物35的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000042
将化合物17(400mg，0.67mmol)溶于6mlDMF中，再加入DIEA(0.22mL，1.34mmol)、化合物30(585mg，0.67mmol)，氮气保护，室温搅拌反应，TLC(DCM：MeOH＝1：1)监测反应。后处理，于45℃下油泵减压浓缩,残余物用高效制备液相纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 90％A，10-25min，90％A～70％A，25-60min，70％A～20％A
收集具有33-35min保留时间的馏分并冻干，得产品389mg。LC-MS m/z(ES +)：1376.3(M+Na) +
实施例36
化合物36的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000043
将化合物35(200mg，0.147mmol)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP，384mg，0.39mmol)溶于10mLDMF中，氮气保护下加入DIEA(0.19mL，1.18mmol)室温搅拌30min，再滴加依喜替康(43mg，0.10mmol)，室温反应，用高效液相色谱监测反应进程。后处理，减压浓缩，残余物用高效液相制备纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 80％A，10-25min，80％A～60％A，25-70min，60％A～25％A
收集具有52-54min保留时间的馏分并冻干，得产品93mg。LC-MS m/z(ES +)：1793.7(M+Na) +
实施例37
化合物37的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000044
将化合物19(500mg，0.686mmol)溶于6mlDMF中，再加入DIEA(0.22mL，1.34mmol)、化合物28(557mg，0.686mmol)，氮气保护，室温搅拌反应，TLC(DCM：MeOH＝1：1)监测反应。后处理，于45℃下油泵减压浓缩,残余物用高效制备液相纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 90％A，10-25min，90％A～75％A，25-50min，75％A～30％A收集具有32-34min保留时间的馏分并冻干，得产品440mg。LC-MS m/z(ES +)：1448.7(M+Na) +
实施例38
化合物38的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000045
将化合物37(300mg，0.21mmol)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP，547mg，1.05mmol)溶于10mLDMF中，氮气保护下加入DIEA(0.28mL，1.68mmol)室温 搅拌30min，再滴加依喜替康(61mg，0.14mmol)，室温反应，用高效液相色谱监测反应进程。后处理，减压浓缩，残余物用高效液相制备纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 80％A，10-25min，80％A～55％A，25-70min，55％A～20％A收集具有51-53min保留时间的馏分并冻干，得产品118mg。LC-MS m/z(ES +)：1851.8(M+Na) +
实施例39
化合物39的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000046
将100mg化合物38溶于5mL二氯甲烷中，0.5mL加入三氟乙酸，室温反应，HPLC监控进程。后处理，减压浓缩得产品80mg。LC-MS m/z(ES +)：1751.8(M+Na) +
实施例40
化合物40的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000047
将化合物27(500mg，0.76mmol)溶于6mlDMF中，再加入DIEA(0.25mL，1.52mmol)、化合物28(665mg，0.76mmol)，氮气保护，室温搅拌反应，TLC(DCM：MeOH＝1：1)监测反应。后处理，于45℃下油泵减压浓缩,残余物用高效制备液相纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 90％A，10-25min，90％A～75％A，25-60min，75％A～30％A收集具有36-28min保留时间的馏分并冻干，得产品472mg。LC-MS m/z(ES +)：1375.7(M+Na) +
实施例41
化合物41的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000048
将化合物40(200mg，0.147mmol)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP，384mg，0.739mmol)溶于10mLDMF中，氮气保护下加入DIEA(0.19mL，1.18mmol)室温搅拌30min，再滴加依喜替康(43mg，0.1mmol)，室温反应，用高效液相色谱监测反应进程。后处理，减压浓缩，残余物用高效液相制备纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 80％A，10-25min，80％A～55％A，25-70min，55％A～20％A收集具有45-47min保留时间的馏分并冻干，得产品92mg。LC-MS m/z(ES +)：1792.8(M+Na) +
实施例42
化合物42的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000049
将化合物17(400mg，0.67mmol)溶于6mlDMF中，再加入DIEA(0.22mL，1.34mmol)、化合物6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(MC-OSu，30g，0.67mmol)，氮气保护，室温搅拌反应，TLC(DCM：MeOH＝8：1)监测反应。后处理，于45℃下油泵减压浓缩,残余物用经硅胶柱层析色谱(洗脱剂DCM/MeOH＝25/1～15/1)得到纯品300mg。LC-MS m/z(ES +)：789.3(M+H) +
实施例43
化合物43的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000050
将化合物42(200mg，0.25mmol)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP，660mg，1.27mmol)溶于10mLDMF中，氮气保护下加入DIEA(0.33mL，2.03mmol)室温搅拌30min，再滴加依喜替康(79mg，0.18mmol)，室温反应，用高效液相色谱监测反应进程。后处理，减压浓缩，残余物用高效液相制备纯化。
(柱：YMC-C18，50mm*450mm，10μm，采用乙腈/水(0.2％TFA)，流速50mL/min，于λ＝205nm检测)
溶剂A：0.2％TFA水
溶剂B：乙腈
梯度：0-10min 80％A，10-25min，80％A～50％A，25-60min，50％A～30％A收集具有44-46min保留时间的馏分并冻干，得产品106mg。LC-MS m/z(ES +)：1228.5(M+Na) +
实施例44
化合物44的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000051
化合物44的合成方法：以MC-OSu与N-ε-Boc-L-赖氨酸为原料，参照实施例1的方法合成而得。LC-MS m/z(ES +)：440.1(M+H) +
实施例45
化合物45的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000052
化合物45的合成参照实施例28。
实施例46
化合物46的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000053
化合物46的合成参照实施例31，以化合物45及化合物17为原料制备而得。LC-MS m/z(ES +)：1440.8(M+H) +
实施例47
化合物47的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000054
化合物47的合成参照实施例34。LC-MS m/z(ES +)：1571.8(M+Na) +
实施例48
化合物48的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000055
化合物48的合成参考实施例39。LC-MS m/z(ES +)：1471.6(M+Na) +
实施例49
化合物49的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000056
化合物49的合成参照实施例2，以叠氮聚乙二醇羧基和Fmoc-N-丙烯胺为原料制得。LC-MS m/z(ES +)：745.4(M+H) +
实施例50
化合物50的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000057
将3g化合物49加入至50mL反应瓶中，再加入浓硫酸15mL溶解，冰水浴条件下滴加浓硝酸6mL，滴毕缓慢升至室温反应。TLC检测反应进程，反应完毕后将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取。粗品经硅胶层析法纯化，得黄色固体2.5g。LC-MS m/z(ES +)：791.4(M+H) +
实施例51
化合物51的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000058
将化合物50(2.5g，3.16mmol)溶于15mL甲醇中，加入0.25g5％Pd/C，氢化还原硝基。反应完毕，滤掉钯碳，溶剂浓缩得粗品。向粗品中加入10mL1,4-二氧六环及10mL水，再加入DIEA(0.79mL，4.74mmol)，室温下滴入Boc酸酐(3.43g，15.8mmol)，滴毕室温反应，用TLC检测反应进程。反应完全后减压浓缩除去二氧六环，加入DCM萃取，减压浓缩得黄色油状物粗品，经硅胶柱层析色谱分离得产品2.3g。LC-MS m/z(ES +)：760.3(M+H) +-Boc，860.2(M+H) +
实施例52
化合物52的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000059
将2g化合物51溶于20mLDMF中，加入哌啶2mL，室温搅拌脱Fmoc，TLC监测。反应完后油泵减压除去DMF，得粗品。粗品按理论算，参照实施例1得到化合物52。LC-MS m/z(ES +)：831.5(M+H) +
实施例53
化合物53的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000060
化合物53的合成参照实施例28。
实施例54
化合物54的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000061
化合物53的合成参照实施例31。LC-MS m/z(ES +)：1408.5(M+H) +
实施例55
化合物55的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000062
参照实施例32制得化合物55。LC-MS m/z(ES +)：1847.8(M+Na) +
实施例56
化合物56的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000063
参考实施例39制得化合物56。LC-MS m/z(ES +)：1747.8(M+Na) +
实施例57
化合物57的合成
Figure PCTCN2018101214-appb-000064
合成方法参照专利CN104755494。LC-MS m/z(ES +)：1056.5(M+Na) +
实施例58
抗体药物偶联物H-32的制备，参考通用步骤A，获得偶联物经测定平均DAR＝7.4。

Claims (14)

  1. 一种如式I所示的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐：
    Figure PCTCN2018101214-appb-100001
    其中：
    Ab是抗体，抗体片段或蛋白；
    L1为亲水延伸单元；
    A、A 1为L-氨基酸，n选自0,1,2,3或4，m选自1-8的整数；
    L2为自我消除单元；
    L3为间隔单元；
    D是药物依喜替康，以1位氨基与L3相连，波浪线表示与L3的连接位置
    Figure PCTCN2018101214-appb-100002
  2. 如权利要求1所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，L1包含以下结构：
    Figure PCTCN2018101214-appb-100003
    其中A为任选的延伸单元，Ar为含氮杂环，BB1为亲水氨基酸或由亲水氨基酸组成的寡肽，p为PEG重复单元数，选自1-30的整数，左右波浪线分别表示与丁二酰亚胺及AA1的连接位点，a，b，c选自0或1，且a+b+c≥2。
  3. 如权利要求1所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，AA1选自以下组成的组：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯 丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸或缬氨酸中的一种或多种。
  4. 如权利要求2所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，BB1选自以下组成的组：赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸或谷氨酸中的一种或多种。
  5. 如权利要求1所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其中自我消除单元选自由以下组成的组：乙醇胺、4-羟基苄醇、4-氨基苄醇、乙二胺或取代的乙二胺中的一种或多种。
  6. 如权利要求1或2所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其中所述的PEG是具有1-30个单体单元的确定的PEG，优选地是具有1-12个单体单元的确定的PEG。
  7. 如权利要求1所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，AA1是肽部分。
  8. 如权利要求7所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，AA1为二肽，选自Val-Cys或Val-Alt。
  9. 如权利要求2所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，AA1，Ar为含氮杂环。
  10. 如权利要求9所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，AA1，Ar为三氮唑、四氮唑或以下结构
    Figure PCTCN2018101214-appb-100004
    Figure PCTCN2018101214-appb-100005
    中的一种或多种。
  11. 如权利要求3所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，取代的乙二胺包含以下结构：
    Figure PCTCN2018101214-appb-100006
    Figure PCTCN2018101214-appb-100007
    中的一种或多种。
  12. 如权利要求1所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，L3选自
    Figure PCTCN2018101214-appb-100008
    左右波浪线分别表示与自我消除单元及药物依喜替康1位氨基的连接位点。
  13. 一种权利要求中1-12任一所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐，治疗肿瘤、自身免疫疾病或感染性疾病的用途。
  14. 如权利要求13所述的用途，其特征在于，所述的喜树碱-抗体偶联物或其药学上可接受的盐的抗体特异性结合至所述癌症、自身免疫疾病的靶细胞。
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