KR20140117581A

KR20140117581A - 옥사졸리딘-2-온 화합물 및 pi3k 억제제로서의 그의 용도

Info

Publication number: KR20140117581A
Application number: KR1020147023243A
Authority: KR
Inventors: 조르지오 카라바티; 로빈 알렉 페어허스트; 파스칼 피레; 프레데릭 스타우퍼; 프랑크 한스 사일러; 하인리히 뤼거; 클리브 맥카시
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2012-02-24
Filing date: 2013-02-22
Publication date: 2014-10-07
Also published as: NZ629198A; AR090121A1; KR101640698B1; AP2014007835A0; PT2817307T; MX353341B; HK1199643A1; EP2817307A1; GT201400178A; GEP20156389B; JP2015508096A; JP6154404B2; IL233936A; EP2817307B1; ES2598118T3; CN104144926B; EA201491579A1; CN104144926A; MX2014010141A; CO7051028A2

Abstract

본 발명은 PI3K (포스파티딜이노시톨-3-키나제) 억제제로서 작용하는 옥사졸리딘-2-온 치환된 피리미딘 화합물, 뿐만 아니라 그의 제약 조성물, 그의 제조 방법, 및 PI3K에 의존성인 상태, 질환 및 장애의 치료를 위한 용도에 관한 것이다.

Description

옥사졸리딘-2-온 화합물 및 PI3K 억제제로서의 그의 용도 {OXAZOLIDIN-2-ONE COMPOUNDS AND USES THEREOF AS PI3KS INHIBITORS}

포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K)는, 이노시톨 지질의 D-3' 위치에 대한 포스페이트의 전달을 촉매화하여 포스포이노시톨-3-포스페이트 (PIP), 포스포이노시톨-3,4-디포스페이트 (PIP₂) 및 포스포이노시톨-3,4,5-트리포스페이트 (PIP₃)를 생성하며, 또한 플렉스트린-상동성인 FYVE, Phox 및 다른 인지질-결합 도메인을 함유하는 단백질을 종종 형질 막에서 다양한 신호전달 복합체 내에 도킹함으로써 신호전달 캐스케이드에서 제2 메신저로서 작용하는 지질 키나제의 패밀리를 구성한다 (문헌 [Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615 (2001)]). 2종의 클래스 1 PI3K 중, 클래스 1A PI3K는 p85α, p55α, p50α, p85β 또는 p55γ일 수 있는 조절 서브유닛과 구성적으로 연관된 촉매 p110 서브유닛 (α, β, δ 이소형)으로 구성된 이종이량체이다. 클래스 1B 서브-클래스는 2종의 조절 서브유닛, p101 또는 p84 중 하나와 연관된 촉매 p110γ 서브유닛으로 구성된 이종이량체인 하나의 패밀리 구성원을 갖는다 (문헌 [Fruman et al., Annu Rev. Biochem. 67:481 (1998); Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005)]). p85/55/50 서브유닛의 모듈 도메인은, 활성화 수용체 및 세포질 티로신 키나제 상의 특이적 서열에서 포스포티로신 잔기를 결합시켜 클래스 1A PI3K의 활성화 및 국재화를 유발하는 Src 상동성 (SH2) 도메인을 포함한다. 클래스 1B PI3K는 펩티드 및 비-펩티드 리간드의 각종 레퍼토리를 결합시키는 G 단백질-커플링된 수용체에 의해 직접적으로 활성화된다 (문헌 [Stephens et al., Cell 89:105 (1997)); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615-675 (2001)]). 결과적으로, 클래스 I PI3K의 생성된 인지질 산물은 상류 수용체를 증식, 생존, 화학주성, 세포 트래픽킹, 운동성, 대사, 염증성 및 알레르기 반응, 전사 및 번역을 비롯한 하류 세포 활성과 연결시킨다 (문헌 [Cantley et al., Cell 64:281 (1991); Escobedo and Williams, Nature 335:85 (1988); Fantl et al., Cell 69:413 (1992)]).

다수의 경우에, PIP2 및 PIP3은 바이러스 종양유전자 v-Akt의 인간 상동체의 산물인 Akt를 형질 막에 동원하고, 여기서 이는 성장 및 생존에 중요한 다수의 세포내 신호전달 경로를 위한 중심점으로서 작용한다 (문헌 [Fantl et al., Cell 69:413-423(1992); Bader et al., Nature Rev. Cancer 5:921 (2005); Vivanco and Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)]). 종종 Akt 활성화를 통해 생존을 증가시키는 PI3K의 이상 조절은, 인간 암에서 가장 보편적인 사건 중 하나이며, 다양한 수준으로 발생하는 것으로 나타났다. 이노시톨 고리의 3' 위치에서 포스포이노시티드를 탈인산화하고, 이렇게 하여 PI3K 활성을 길항하는 종양 억제 유전자 PTEN은, 다양한 종양에서 기능적으로 결실되어 있다. 다른 종양에서, p110α 이소형, PIK3CA 및 Akt에 대한 유전자가 증폭되며, 이들의 유전자 산물의 증가된 단백질 발현은 여러 인간 암에서 입증되었다. 또한, p85-p110 복합체를 상향조절하는 작용을 하는 p85α의 돌연변이 및 전위가 인간 암에서 기재되었다. 최종적으로, 하류 신호전달 경로를 활성화시키는 PIK3CA에서의 체성 과오 돌연변이는 매우 다양한 인간 암에서 상당한 빈도로 기재되었다 (문헌 [Kang at el., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802 (2005); Samuels et al., Science 304:554 (2004); Samuels et al., Cancer Cell 7:561-573 (2005)]).

일부 종양에서 p110β 이소형, PIK3CB는 증폭되거나 과다발현된다. 또한, 연구는 PTEN 손실에 의해 유도된 종양이 p110α 보다는 p110β에 대해 감수성일 수 있다는 것을 나타낸다 (문헌 [Jia et al., Nature, 454:776-779 (2008). Wee et al., PNAS 105 (35), 13057-13062 (2008); Liu et al., Nature Rev. Drug Discovery 8:627-644 (2009)]).

p110δ 및 p110γ 둘 다는 주로 조혈계에서 발현되며, 백혈구 신호전달에서 상당한 역할을 하는 것으로 보인다 (문헌 [Liu et al. Blood 110(4), 1191-1198 (2007)]). 그러나, 이들은 또한 일부 암에서 역할을 한다 (문헌 [Knobbe et al., Brain Pathol. 13, 507-518 (2003); Kang et al. PNAS 103(5), 1289-1294 (2006)]). p110δ 발현은 백혈구로 제한되며, 이는 백혈구-매개 질환에서의 그의 잠재적 역할을 시사한다 (문헌 [Vanhaesebroeck et al. PNAS 94(9), 4330-4335 (1997)]). p110δ는 급성 골수성 백혈병을 갖는 환자 내 모세포에서 상향 조절되고, 여기서 이는 세포 생존에서 주요한 역할을 하며 (문헌 [Sujobert et al., Blood 106(3), 1063-1066 (2005)]), 이는 백혈병 및 다른 혈액 악성종양에서의 표적으로서의 그의 잠재력을 나타낸다. p110δ 활성화는 B-세포 악성종양의 발생에서 중요한 역할을 하며, 따라서 p110δ의 억제는 B-세포 악성종양, 예컨대 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 골수종 및 호지킨 림프종 (NH)을 치료하는데 사용될 수 있다 (문헌 [Castillo et al., Expert Opin. Investig. Drugs 21, 15-22 (2012)]).

이들 관찰은 포스포이노시톨-3 키나제 및 이러한 신호전달 경로의 상류 및 하류 성분의 탈조절이 인간 암 및 증식성 질환과 연관된 가장 흔한 탈조절 중 하나인 것을 나타낸다 (문헌 [Parsons et al., Nature 436:792 (2005); Hennessey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4:988-1004 (2005)]).

공개 국제 특허 출원 WO2007/084786은 PI3K를 억제하는 치환된 피리미딘 분자를 기재하고 있다.

클래스 I PI3K 이소형 (알파, 베타, 델타 및 감마) 중 1종 초과의 활성을 억제하는 화합물에 대한 필요성이 여전히 존재하며, 이는 고유한 특이성, 예를 들어 클래스 I PI3K 패밀리의 1종의 구성원에 대한 특이성을 갖는 화합물에 비해, 이러한 화합물이 다른 이소형을 통한 경로 재배선으로 인한 적응 메카니즘을 회피하는 능력을 갖는 것으로 여겨지기 때문이다.

PI3K 이소형 중 적어도 1종의 증가된 억제 효력 (즉, 보다 낮은 농도에서 적어도 1종의 PI3K 이소형, 특히 알파 및 베타 이소형 중 1종 또는 둘 다를 억제함)이 유리할 수도 있다. PTEN 부재 종양의 경우에, 예를 들어 유도 이소형이 p110b이지만, 완전한 효능은 다른 클래스IA 이소형의 참여를 필요로 할 수 있다. 예를 들어 주로 p110a를 코딩하는 유전자의 종양원성 형태 (예를 들어, PIK3CA H1047R 또는 E545K)에 의해 유도되는 암, 뿐만 아니라 PIK3CA의 증가된 카피수를 나타내는 종양의 치료를 위해, PI3K알파 키나제를 강력하게 억제하는 화합물에 대한 필요성이 또한 존재한다.

mTOR에 비해 1종 이상의 PI3K 이소형 (예를 들어, 알파, 베타, 델타 및 감마 이소형 중 적어도 2종, 바람직하게는 3종, 예를 들어 알파, 베타 및 델타 이소형)에 대해 선택적 억제를 나타내는 화합물이 또한 바람직하며, 이는 보다 특히 화합물이 PI3K보다 mTOR를 더 강하게 억제하는 경우에 (불리한 비), mTOR 억제 효과가 일반적으로 안전성 윈도우를 감소시키기 때문이다.

또한, 감소된 오프-표적 효과, 예컨대 튜불린 결합을 가지고, 특히 이러한 효과를 보유하지 않는 PI3K 억제제가 요망되며, 이는 이러한 효과가 온-표적 PI3K 억제와 연관되지 않은 독성 효과를 초래할 수 있으며, 이에 따라 이러한 화합물은 치료 효과가 PI3K 억제에 대해 제어가능하고 기여가능하는 것이 보장되도록 추가의 조심스러운 투여 제어를 필요로 할 수 있기 때문이다. 따라서, 감소되거나 약한 오프-표적 효과를 갖거나 또는 오프-표적 효과를 갖지 않는 화합물에 대한 필요성이 존재한다.

바람직하게는, 적어도 1종 (예를 들어, PI3K알파), 특히 2종 (예를 들어, PI3K알파 및 PI3K베타) 또는 3종 (예를 들어, PI3K알파, PI3K베타 및 PI3K델타) 또는 모든 4종의 클래스 1 PI3K (PI3K알파, PI3K베타, PI3K델타 및 PI3K감마)의 개선된 억제 뿐만 아니라 감소된 (특히, 부재인) 오프-표적 효과를 나타내는 화합물이 요구된다.

본 발명은 PI3K 억제제인 화합물 및 그의 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 이러한 화합물을 포함하는 조합물을 또한 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 PI3K 억제 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, PI3K 매개 질환, 예컨대 암을 치료, 예방 또는 개선하는 방법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 추가로 제공한다. 본 발명은 본 발명의 화합물의 제조에 유용한 중간체를 또한 제공한다.

본 발명은 한 측면에서 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = H이고, R³ = H이고;

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나; 또는

R⁴ = -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나;

또는

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂CH₂OH, -CH₂CH(OH)CH₃ 또는 -CH₂C(OH)(CH₃)₂이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂CH(OH)CH₃ 또는 -CH₂C(OH)(CH₃)₂이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = H이고, R⁴ = H이고;

R² 및 R⁵는 연결되어 -(CH₂)₄-를 형성하거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이거나;

또는

R² = H이고, R⁴ = H이고;

R³ 및 R⁵는 연결되어 기

또는 기

를 형성하거나;

또는

R³ = H이고, R⁵ = H이고;

R² 및 R⁴는 연결되어 기

를 형성한다.

파상선은 모르폴린의 부착 지점 및 또한 존재하는 경우에 분자의 나머지에 대한 다른 도시된 기의 부착 지점을 나타낸다.

본 개시내용 전반에 걸쳐 부호 "="는 "같다"의 표준 의미를 가지며, 본 발명의 정의에서 "같다" 또는 "이다" 또는 "나타낸다"에 의해 대체될 수 있다. 예로서, 어구 "R³ = H"는 "R³은 H이다" 또는 "R³은 H를 나타낸다"로서 해석될 수 있다.

화학식 I의 화합물은, 예를 들어 PI3 키나제에 의존성인 질환, 특히 증식성 질환, 예컨대 암, 예를 들어 종양 질환의 치료에 사용하기에 적합한 것으로 여겨진다.

본 발명은 언급된 정의 및 종결부의 실시예를 비롯한 하기 설명을 참조로 보다 완전하게 인지될 수 있다. 기재된 실시양태는 달리 언급되지 않는 한, 독립적으로, 집합적으로 또는 임의의 조합으로 취해진다. 본원에 사용된 용어 "비롯한", "함유하는" 및 "포함하는"은 본원에서 이들의 개방적, 비제한적 의미로 사용된다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "본 발명의 화합물들" 또는 "본 발명의 화합물" 등은 화학식 I 및 그의 하위화학식 (예를 들어, 화학식 IA 및 IA')의 화합물 및 화합물의 염, 뿐만 아니라 동위원소 표지된 화합물 (중수소 치환 포함)을 지칭한다.

본 발명의 화합물은 달리 언급되지 않는 한, 화학식 I 및 그의 하위화학식에 도시된 입체화학을 갖는다.

도 1은 실시예 10의 결정질 물질의 시차 주사 열량측정 그래프이다.
도 2는 실시예 10의 결정질 물질의 분말 X선 회절 그래프이다.
도 3은 실시예 18, 배치 A의 결정질 물질의 시차 주사 열량측정 그래프이다.
도 4는 실시예 18, 배치 A의 결정질 물질의 분말 X선 회절 그래프이다.
도 5는 실시예 18, 배치 B의 결정질 물질의 시차 주사 열량측정 그래프이다.
도 6은 실시예 18, 배치 B의 결정질 물질의 분말 X선 회절 그래프이다.
도 7은 실시예 18, 배치 C의 결정질 물질의 시차 주사 열량측정 그래프이다.
도 8은 실시예 18, 배치 C의 결정질 물질의 분말 X선 회절 그래프이다.
도 9는 실시예 18, 배치 D의 결정질 물질의 시차 주사 열량측정 그래프이다.
도 10은 실시예 18, 배치 D의 결정질 물질의 분말 X선 회절 그래프이다.
도 11은 실시예 18, 배치 E의 결정질 물질의 시차 주사 열량측정 그래프이다.
도 12는 실시예 18, 배치 E의 결정질 물질의 분말 X선 회절 그래프이다.

본 발명의 다양한 실시양태가 본원에 기재된다. 각 실시양태에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 실시양태를 제공할 수 있는 것으로 인지될 것이다. 본 발명의 다양한 (열거된) 실시양태가 또한 본원에 기재된다.

본 발명은 한 측면에서 하기 화학식 I에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = H이고, R³ = H이고;

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나; 또는

R⁴ = -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나;

또는

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = H이고, R⁴ = H이고;

R² 및 R⁵는 연결되어 -(CH₂)₄-를 형성하거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이거나;

또는

R² = H이고, R⁴ = H이고;

R³ 및 R⁵는 연결되어 기

또는 기

를 형성하거나;

또는

R³ = H이고, R⁵ = H이고;

R² 및 R⁴는 연결되어 기

를 형성한다.

상기 측면의 바람직한 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = H이고, R³ = H이고;

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나; 또는

R⁴ = -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나;

또는

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = H이고, R⁴ = H이고;

R² 및 R⁵가 연결되어 -(CH₂)₄-를 형성하거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이거나;

또는

R² = H이고, R⁴ = H이고;

R³ 및 R⁵가 연결되어 기

또는 기

를 형성하거나;

또는

R³ = H이고, R⁵ = H이고;

R² 및 R⁴가 연결되어 기

를 형성하는 것인

화학식 I에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

상기 측면의 보다 바람직한 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = H이고, R³ = H이고;

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나; 또는

R⁴ = -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나;

또는

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = H이고, R⁴ = H이고;

R² 및 R⁵가 연결되어 -(CH₂)₄-를 형성하거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH인

추가의 바람직한 실시양태에서, 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = H이고, R³ = H이고;

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나; 또는

R⁴ = -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나;

또는

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = H이고, R⁴ = H이고;

R² 및 R⁵는 연결되어 -(CH₂)₄-를 형성하거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이다.

추가의 대안적 바람직한 실시양태에서, 하기 화학식 I에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² 및 R³ = H이고;

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나; 또는

R⁴ = -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나;

또는

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = R⁴ = H이고;

R² 및 R⁵는 연결되어 -(CH₂)₄-를 형성하거나;

또는

R⁴ = R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이다.

상기 언급된 실시양태 중 어느 하나에서 화학식 I에 대해, 하기 상세한 설명이 제공된다.

R^1a

한 실시양태에서, R^1a는 H이다.

또 다른 실시양태에서, R^1a는 -CH₃이다.

바람직한 실시양태에서, R^1a는 H이다.

본 발명의 추가 실시양태가 하기 기재된다.

한 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = H이고, R⁴ = H이고;

R² 및 R⁵ = -(CH₂)₄-이거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이다.

또 다른 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이다.

추가 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

추가 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이고;

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

또 다른 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이고;

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

또 다른 실시양태에서, 바람직하게는

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이고;

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = CH₃ 또는 -CH₂OH이다.

또 다른 실시양태에서, 바람직하게는

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이고;

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂CH₂OH이고,

R⁵ = H이다.

한 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = R⁴ = H이고,

R² 및 R⁵ = -(CH₂)₄-이거나;

또는

R⁴ = R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이다.

또 다른 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R⁴ = R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이다.

추가 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

추가 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이고;

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

또 다른 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이고;

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

또 다른 실시양태에서, 바람직하게는

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이고;

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = CH₃ 또는 -CH₂OH이다.

또 다른 실시양태에서, 바람직하게는

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이고;

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃이고,

R⁵ = H이다.

또 다른 바람직한 실시양태에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이고;

R² = -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃이고,

R⁵ = H이다.

한 실시양태에서, 하기 화학식 IA'의 화합물이 제공된다.

<화학식 IA'>

상기 식에서, R^1a, R², R³, R⁴ 및 R⁵는 임의의 상기 언급된 실시양태에 기재된 바와 같다.

한 실시양태에서, R^1a는 수소일 수 있으며, 이에 따라 하기 화학식 IA의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

<화학식 IA>

상기 식에서,

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

화학식 IA의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서,

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

화학식 IA의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 또 다른 실시양태에서,

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = CH₃ 또는 -CH₂OH이다.

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂CH₂OH이고;

R⁵ = H이다.

R² = -CH₃이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₂CH₂OH이고;

R⁵ = H이다.

대안적으로, R^1a가 수소일 수 있는 한 실시양태에서, 하기 화학식 IA의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

<화학식 IA>

상기 식에서,

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH, -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

화학식 IA의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 실시양태에서,

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = CH₃ 또는 -CH₂OH이다.

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃이고,

R⁵ = H이다.

화학식 IA의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 바람직한 실시양태에서,

R² = -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃이고,

R⁵ = H이다.

(열거된) 추가 실시양태는 하기와 같이 제공된다:

실시양태 1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹ =

(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,

또는 R¹ =

(여기서, D = 중수소임)이고;

R² =H이고, R³ = H이고;

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나; 또는

R⁴ = -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나;

또는

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = H이고, R⁴ = H이고;

R² 및 R⁵는 연결되어 -(CH₂)₄-를 형성하거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이거나;

또는

R² = H이고, R⁴ = H이고;

R³ 및 R⁵는 연결되어 기

또는 기

를 형성하거나;

또는

R³ = H이고, R⁵ = H이고;

R² 및 R⁴는 연결되어 기

를 형성한다.

실시양태 2. 실시양태 1에 있어서,

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R³ = H이고, R⁴ = H이고;

R² 및 R⁵ = -(CH₂)₄-이거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH인

화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

실시양태 3. 실시양태 1 또는 실시양태 2에 있어서,

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;

또는

R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;

R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는

R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH인

화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

실시양태 4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 한 실시양태에 있어서,

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃인

화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

실시양태 5. 실시양태 1 내지 4 중 어느 한 실시양태에 있어서, 하기 화학식 IA'의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

<화학식 IA'>

상기 식에서, R^1a = H 또는 -CH₃이다.

실시양태 6. 실시양태 1에 있어서, 하기 화학식 IA의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

<화학식 IA>

상기 식에서,

R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이다.

실시양태 7. 실시양태 6에 있어서,

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는

R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃인

화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

실시양태 8. 실시양태 7에 있어서,

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는

R⁴ = H이고, R⁵ = CH₃ 또는 -CH₂OH인

화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

실시양태 9. 실시양태 8에 있어서,

R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;

R³ = H이고;

R⁴ = -CH₃ 또는 -CH₂CH₂OH이고;

R⁵ = H인

화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

실시양태 10. 실시양태 1에 있어서,

(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-옥사졸리딘-2-온,

(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5,5-디메틸-옥사졸리딘-2-온,

라세미 3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-4,5'-비피리미딘-6-일)-4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온,

(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-4,5'-비피리미딘-6-일)-4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 (절대 입체화학은 결정되지 않음),

(R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-4,5'-비피리미딘-6-일)-4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 (절대 입체화학은 결정되지 않음),

(3aS,7aS)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-헥사히드로-벤조옥사졸-2-온,

(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메톡시메틸-옥사졸리딘-2-온,

(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,

(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-옥사졸리딘-2-온,

(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-(D8-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,

(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-(2-히드록시-에틸)-옥사졸리딘-2-온,

(4S,5R)-3-[2'-아미노-2-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일]-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,

포름산 (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-메틸-2-옥소-옥사졸리딘-4-일메틸 에스테르,

(S)-3-[2'-아미노-2-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일]-4-메틸-옥사졸리딘-2-온,

(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-옥사졸리딘-2-온,

(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-4-메틸-옥사졸리딘-2-온,

(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,

(S)-3-(2'-아미노-2-D8-모르폴리노-4'-트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온,

(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,

(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-4-메틸-옥사졸리딘-2-온,

(R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-옥사졸리딘-2-온,

(3aR,6aR)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)테트라히드로푸로[3,4-d]옥사졸-2(3H)-온,

라세미 (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-히드록시헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온,

(3aR,6R,6aR)-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-히드록시헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온,

(3aS,6S,6aS)-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-히드록시헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온, 및

(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(2-히드록시에틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

으로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

실시양태 11. 실시양태 1에 있어서,

(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온, 및

으로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

실시양태 12. (4S,5R)-3-[2'-아미노-2-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일]-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,

으로부터 선택된 화합물.

실시양태 13. 화합물 (4S,5R)-3-[2'-아미노-2-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일]-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온.

실시양태 14. 화합물 (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온.

실시양태 15. 화합물 (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(2-히드록시에틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온.

실시양태 16. 실시양태 13 내지 15 중 어느 한 실시양태의 화합물의 제약상 허용되는 염.

본 발명의 또 다른 측면에서, 실시예 10으로부터 수득된 화합물의 결정질 형태는 도 2에 제시된 X선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 X선 회절 스펙트럼을 갖도록 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 실시예 18, 배치 A로부터 수득된 화합물의 결정질 형태는 도 4에 제시된 X선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 X선 회절 스펙트럼을 갖도록 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 실시예 18, 배치 B로부터 수득된 화합물의 결정질 형태는 도 6에 제시된 X선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 X선 회절 스펙트럼을 갖도록 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 실시예 18, 배치 C로부터 수득된 화합물의 결정질 형태는 도 8에 제시된 X선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 X선 회절 스펙트럼을 갖도록 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 실시예 18, 배치 D로부터 수득된 화합물의 결정질 형태는 도 10에 제시된 X선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 X선 회절 스펙트럼을 갖도록 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 실시예 18, 배치 E로부터 수득된 화합물의 결정질 형태는 도 12에 제시된 X선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 X선 회절 스펙트럼을 갖도록 제공된다.

X선 회절 피크 위치와 관련하여 용어 "실질적으로 동일한"은 전형적 피크 위치 및 강도 변동성이 고려되는 것을 의미한다. 예를 들어, 당업자는 피크 위치 (2θ)가 약간의 장치간 변동성, 전형적으로 0.2° 정도를 나타낼 것임을 인지할 것이다. 또한, 당업자는, 관련 피크 강도가 장치간 변동성 뿐만 아니라 결정화도, 바람직한 배향, 제조된 샘플 표면 및 당업자에게 공지된 다른 인자로 인한 변동성을 나타낼 것이며, 정성적 척도로서만 취해져야 함을 인지할 것이다.

구체적 실시양태는 본원에 기재된 구체적 예시 화합물에 의해 제공된다.

본 발명은 PI3K가 본원에 기재된 질환 발병기전의 원인이 되는 질환, 상태 및/또는 장애의 치료에 유용한 화합물 및 그의 제약 제제를 제공한다.

본 발명의 화합물은, 특히 본원에 포함된 설명에 비추어 볼 때 화학업계에 널리 공지되어 있는 것과 유사한 공정을 포함하는 합성 경로에 의해 합성될 수 있다. 출발 물질은 일반적으로 상업적 공급원, 예컨대 알드리치 케미칼스(Aldrich Chemicals) (미국 위스콘신주 밀워키)로부터 입수가능하거나, 또는 당업자에게 널리 공지된 방법을 사용하여 용이하게 제조된다 (예를 들어, 문헌 [Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, volumes 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.); 또는 Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, 부록 포함 (바일스타인(Beilstein) 온라인 데이터베이스를 통해 또한 입수가능함)]에 일반적으로 기재된 방법에 의해 제조됨).

예시적 목적을 위해, 하기 도시된 반응식은 본 발명의 화합물 뿐만 아니라, 주요 중간체를 합성하기 위한 잠재적 경로를 제공한다. 개별 반응 단계의 보다 상세한 설명에 대해, 하기 실시예 섹션을 참조한다. 당업자는 본 발명의 화합물을 합성하기 위해 다른 합성 경로를 사용할 수 있음을 인지할 것이다. 구체적 출발 물질 및 시약이 반응식에 도시되고 하기에 논의되어 있지만, 다른 출발 물질 및 시약이 용이하게 치환되어 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공할 수 있다. 또한, 하기 기재된 방법에 의해 제조된 다수의 화합물은 당업자에게 널리 공지된 통상의 화학을 사용하여 본 개시내용에 비추어 추가로 개질될 수 있다.

본 발명의 화합물의 제조에서, 중간체의 원위 관능기 (예를 들어, 1급 또는 2급 아미노, 히드록실 또는 카르복실 기)의 보호가 필요할 수 있다. 이러한 보호에 대한 필요성은 원위 관능기의 특성 및 제조 방법의 조건에 따라 달라질 것이다. 적합한 아미노-보호기 (NH-Pg)는 아세틸, 트리플루오로아세틸, t-부톡시카르보닐 (BOC), 벤질옥시카르보닐 (CBz) 및 9-플루오레닐메틸렌옥시카르보닐 (Fmoc)을 포함한다. 적합한 히드록실 보호기는 알킬 기 중 1 또는 2개가 페닐에 의해 대체될 수 있는 트리알킬실릴 에테르를 포함한다. 적합한 카르복실 보호기 (C(O)O-Pg)는 알킬 에스테르 (예를 들어, 메틸, 에틸 또는 t-부틸), 벤질 에스테르, 실릴 에스테르 등을 포함한다. 이러한 보호에 대한 필요성은 당업자에 의해 용이하게 결정된다. 보호기 및 그의 사용의 일반적 설명에 대해, 문헌 [T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991]을 참조한다.

반응식 1 (하기)은 R¹-R⁵가 상기 정의된 바와 같은 화학식 IA'의 화합물을 제조하기 위한 잠재적 경로를 기재한다. 보호기가 존재하는 경우에, 탈보호 단계가 추가되어 보호된 IA'가 IA'로 전환된다.

<반응식 1>

대안적으로, 화학식 IA'의 화합물은 반응식 1에 제시된 단계를 역전시킴으로써, 즉 먼저 스즈키 커플링에 이어서 Ib와의 부흐발트 반응에 의해 합성될 수도 있다.

상업적으로 입수가능하지 않은 옥사졸리딘-2-온 Ib를 위해, 하기 반응식 2는 R²-R⁵가 상기 정의된 바와 같은 상기 중간체를 제조하는 공정을 제공한다. 1급 히드록실 기가 R² 내지 R⁵ 중에 존재하는 경우에는, 하기 반응식 3에 예시된 바와 같이 선택적 보호 단계가 선행한다. 아민 기는 하기 반응식 4에 제시된 바와 같이 추가의 선행 단계에서 보호될 수 있으며, 여기서 또한 다양한 히드록실 보호기가 제시된다.

<반응식 2>

<반응식 3>

<반응식 4>

반응식 2에 일반적으로 제시되고, Ib 중간체의 한 예를 제공하기 위해 하기 반응식 5에 구체적으로 제시된 바와 같이, 반응식 3의 보호된 생성물은 트리포스겐을 사용하여 고리화된다.

<반응식 5>

Ib 중간체의 한 예를 제공하기 위해 하기 반응식 6에 제시된 바와 같이, 반응식 4의 2중-보호된 생성물은 수소화나트륨을 사용하여 고리화된다.

<반응식 6>

하기 반응식 7은 반응식 4의 2중-보호된 중간체에 대한 대안적 경로를 도시하며, 상기 중간체는 이어서 이미 반응식 6에 제시된 바와 같이 고리화될 수 있다.

<반응식 7>

하기 반응식 8은 보론산 에스테르 중간체 B의 합성을 제공한다.

<반응식 8>

반응식 1에 제시된 바와 같은 반응식 6의 고리화 생성물과 4,6-디클로로-피리미딘 중간체 (예를 들어, 둘 다가 하기 본원에 언급된 중간체 A 또는 단계 10.1로부터의 생성물)의 반응은, 추가의 중간체를 제공할 수 있으며, 구체적인 것은 하기와 같이 제시된다:

반응식 1에 제시된 바와 같은 형성된 중간체와 중간체 B의 추가의 반응은 하기와 같이 보호된 생성물 IA'를 제공한다:

따라서, 본 발명의 중간체 화합물은 하기 화학식의 화합물을 포함한다:

상기 식에서, R^1a 및 R⁴는 본원에 상기 정의된 바와 같고, Hal은 할로겐, 예컨대 클로로이고, PG는 보호기, 예컨대 예를 들어 알킬 기 중 1 또는 2개가 페닐에 의해 대체될 수 있는 트리알킬실릴 에테르를 형성하는 실릴 보호기, 예를 들어 알킬-디페닐-실릴 에테르 보호기, 구체적으로 디메틸-tert부틸-실릴 또는 디페닐-tert부틸 실릴이다.

본 발명의 또 다른 중간체 화합물은 하기 화학식의 화합물을 포함한다:

1급 히드록실 기가 R² 내지 R⁵ 중에 존재하는 경우에, 상기 도시된 바와 같은 다른 유사하게 보호된 중간체 화합물이 본원의 화학식과 관련하여 예상될 수 있다. 이러한 보호된 화합물이 본 개시내용에 또한 포함된다. 예를 들어, R⁴가 기 -CH₂CH₂OH인 경우에, 이는 보호되어 R⁴가 -CH₂CH₂O-PG이고, 여기서 PG가 상기 정의된 바와 같은 것인 화합물, 예를 들어 하기가 제공될 수 있다:

예를 들어 최종 생성물을 제공하기 위한, 보호된 생성물 IA'의 3급부틸디페닐실릴 또는 3급부틸디메틸실릴 보호된 히드록실 기의 탈보호 (실릴 에테르의 일반적 탈보호)는, HF.피리딘 (예를 들어, THF 중) 또는 HCl을 사용하여 달성될 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 본원에 사용된 중간체는, 화합물 그 자체 (예를 들어, 유리 염기 형태)로서, 또는 예를 들어 화합물의 pKA 값이 염 형성을 허용할 정도의 것인 경우에는 그의 염으로서 단리 및 사용될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "염" 또는 "염들"은 본 발명의 화합물의 산 부가염 또는 염기 부가염을 지칭한다. "염"은 특히 "제약상 허용되는 염"을 포함한다. 용어 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하며, 전형적으로 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 염을 지칭한다. 본 발명의 화합물은 아미노 기의 존재로 인해 산 부가염을 형성하는 것이 가능할 수 있다. 본 발명의 화합물 그 자체가 바람직하다.

제약상 허용되는 산 부가염의 형성을 위한 무기 산 및 유기 산은, 예를 들어 아세테이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 캄포르술포네이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 트리플루오로아세테이트 염을 포함한다.

염 유도를 위한 무기 산은, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다.

염 유도를 위한 유기 산은, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 술포살리실산 등을 포함한다. 제약상 허용되는 염기 부가염은 무기 및 유기 염기를 사용하여 형성될 수 있다.

염 유도를 위한 무기 염기는, 예를 들어 암모늄 염 및 주기율표의 I 내지 XII족으로부터 금속을 포함한다. 특정 실시양태에서, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 은, 아연 및 구리로부터 유도될 수 있고; 특히 적합한 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다.

염 유도를 위한 유기 염기는, 예를 들어 1급, 2급 및 3급 아민, 자연 발생한 치환된 아민을 비롯한 치환된 아민, 시클릭 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 특정의 유기 아민은 이소프로필아민, 벤자틴, 콜리네이트, 디에탄올아민, 디에틸아민, 리신, 메글루민, 피페라진 및 트로메타민을 포함한다.

본 발명의 제약상 허용되는 염이 형성될 수 있는 경우에, 이들은 통상의 화학적 방법에 의해 모 화합물, 염기성 또는 산성 모이어티로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 유리 산 형태의 이들 화합물을 화학량론적 양의 적절한 염기 (예컨대, Na, Ca, Mg 또는 K 히드록시드, 카르보네이트, 비카르보네이트 등)와 반응시킴으로써, 또는 유리 염기 형태의 이들 화합물을 화학량론적 양의 적절한 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로 물 또는 유기 용매, 또는 이들 2종의 혼합물 중에서 수행된다. 일반적으로, 실시가능한 경우에, 비-수성 매질, 예컨대 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴의 사용이 바람직하다. 추가의 적합한 염의 목록은, 예를 들어 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); 및 "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]에서 찾아볼 수 있다.

달리 나타내지 않는 한, 본원에 주어진 임의의 화학식은 비표지 형태를 나타내고자 하는 것이다. 중수소로 동위원소 표지된 형태의 화합물은 H 대신에 치환기로서 중수소 (D)를 갖도록 제시된다. 다른 동위원소 표지된 본 발명의 화합물이 제조될 수 있으며, 1개 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체된 것을 제외하고는 본원에 주어진 화학식에 의해 도시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예컨대 각각 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸F, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ³⁶Cl, ¹²⁵I를 포함한다. 본 발명은 다양한 동위원소 표지된 본원에 정의된 바와 같은 화합물, 예를 들어 ³H, ¹³C 및 ¹⁴C와 같은 방사성 동위원소가 존재하는 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 대사 연구 (¹⁴C 사용), 반응 동역학적 연구 (예를 들어, ²H 또는 ³H 사용), 검출 또는 영상화 기술, 예컨대 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT), 예컨대 약물 또는 기질 조직 분포 검정, 또는 환자의 방사성 치료에 유용하다. 특히, ¹⁸F 또는 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 동위원소 표지된 본 발명의 화합물은 일반적으로 동위원소 표지되지 않은 시약을 용이하게 입수가능한 동위원소 표지된 시약, 예를 들어 중수소 표지된 모르폴린 (D8-모르폴린)으로 대체함으로써 하기 기재된 반응식 또는 실시예 및 제조예에 기재된 절차를 수행하여 제조될 수 있다.

또한, 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소 (즉, ²H 또는 D)로의 치환은 보다 큰 대사 안정성으로부터 생성되는 특정 치료 이점, 예를 들어 증가된 생체내 반감기, 감소된 투여량 요건, 감소된 CYP 억제 (경쟁적 또는 시간 의존성) 또는 치료 지수의 개선을 제공할 수 있다. 예를 들어, 중수소로의 치환은 중수소화되지 않은 화합물의 바람직하지 않은 부작용, 예컨대 경쟁적 CYP 억제, 시간 의존성 CYP 불활성화 등을 조정할 수 있다. 이와 관련하여 중수소는 본 발명의 화합물 내 치환기로서 간주되는 것으로 이해된다. 이러한 보다 무거운 동위원소, 구체적으로 중수소의 농도는, 동위원소 농축 계수에 의해 규정될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "동위원소 농축 계수"는 명시된 동위원소의 동위원소 존재비와 천연 존재비 사이의 비를 의미한다. 본 발명의 화합물 내 치환기가 표시된 중수소인 경우에, 이러한 화합물은 각각의 지정된 중수소 원자에 대해 적어도 3500 (각각의 지정된 중수소 원자에서 52.5% 중수소 혼입), 적어도 4000 (60% 중수소 혼입), 적어도 4500 (67.5% 중수소 혼입), 적어도 5000 (75% 중수소 혼입), 적어도 5500 (82.5% 중수소 혼입), 적어도 6000 (90% 중수소 혼입), 적어도 6333.3 (95% 중수소 혼입), 적어도 6466.7 (97% 중수소 혼입), 적어도 6600 (99% 중수소 혼입) 또는 적어도 6633.3 (99.5% 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다.

또한, 본 발명의 화합물 (그의 염 포함)은 또한 그의 수화물 형태로 수득될 수 있거나, 또는 그의 결정화에 사용된 다른 용매를 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물은 본질적으로 또는 설계에 의해 제약상 허용되는 용매 (물 포함)와 용매화물을 형성할 수 있다. 이러한 용매 분자는 수용자에게 무해한 것으로 공지된, 제약 업계에서 흔히 사용되는 것들, 예를 들어 물, 에탄올 등이다. 용어 "수화물"은 용매 분자가 물인 복합체를 지칭한다. 용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물 (그의 제약상 허용되는 염 포함)과 결정질 격자 구조에 혼입된 1개 이상의 용매 분자와의 분자 복합체를 지칭한다. 용매화물 내 용매 분자는 규칙적 배열 및/또는 비-규칙적 배열로 존재할 수 있다. 용매화물은 화학량론적 또는 비화학량론적 양의 용매 분자를 또한 포함할 수 있다. 예를 들어, 비화학량론적 양의 용매 분자를 갖는 용매화물은 용매화물로부터의 용매의 부분적 손실로부터 생성될 수 있다. 용매화물은 결정질 격자 구조 내에 1개 초과의 분자 또는 본 발명에 따른 화합물을 포함하는 이량체 또는 올리고머로서 발생할 수 있다.

본 발명의 화합물 (그의 염, 수화물 및 용매화물 포함)은 본질적으로 또는 설계에 의해 다형체를 형성할 수 있다.

본원에 사용된 "다형체"는 동일한 화학적 조성을 가지고 있지만, 결정을 형성하는 분자, 원자 및/또는 이온의 상이한 공간 배열을 갖는 결정질 형태를 지칭한다.

본원에 사용된 "무정형"은 결정질이 아닌 분자, 원자 및/또는 이온의 고체 형태를 지칭한다. 무정형 고체는 명확한 X선 회절 패턴을 나타내지 않는다.

본 발명에 따른 제약상 허용되는 용매화물은 결정화의 용매가 동위원소 치환될 수 있는 것들, 예를 들어 D₂O, d₆-아세톤, d₆-DMSO를 포함한다.

당업자는 본 발명의 화합물이 키랄 중심을 함유하며, 따라서 이성질체 형태로 존재한다는 것을 알 것이다. 본원에 사용된 용어 "이성질체"는 동일한 분자식을 가지고 있지만, 원자의 배열 및 배위에서 차이가 있는 상이한 화합물을 지칭한다. 또한 본원에 사용된 용어 "광학 이성질체" 또는 "입체이성질체"는 본 발명의 주어진 화합물에 대해 존재할 수 있는 임의의 다양한 입체 이성질체 배위를 지칭한다. 치환기는 탄소 원자의 키랄 중심에 부착될 수 있는 것으로 이해된다. 따라서, 본 발명의 화합물은 본 발명의 화합물의 구조적 도시에서 키랄 중심에서의 입체특이적 배열을 표시함으로써 제시된 거울상이성질체를 포함하며, 여기서 쐐기형 파선 결합은 부착된 치환기 또는 원자가 평면 아래에 있는 것을 나타내고, 쐐기형 실선 결합은 부착된 치환기 또는 원자가 평면 위에 있는 것을 나타낸다.

"거울상이성질체"는 서로 중첩가능하지 않은 거울상인 한 쌍의 입체이성질체이다. 한 쌍의 거울상이성질체의 1:1 혼합물은 "라세미" 혼합물이다. 상기 용어는 적절한 경우에 라세미 혼합물을 지정하는데 사용된다.

"부분입체이성질체"는 2개 이상의 비대칭 원자를 가지고 있지만, 서로 거울상이 아닌 입체이성질체이다.

절대 입체화학은 칸-인골드-프렐로그(Cahn-Ingold-Prelog) R-S 시스템에 따라 명시된다. 화합물이 순수한 거울상이성질체인 경우에, 각 키랄 탄소에서의 입체화학은 R 또는 S에 의해 명시될 수 있다. 절대 배위가 공지되지 않은 분해된 화합물은, 이들이 나트륨 D 선의 파장에서 평면 편광을 회전시키는 방향 (우선성 또는 좌선성)에 따라 (+) 또는 (-) 지정될 수 있다. 본원에 기재된 특정 화합물은 1개 이상의 비대칭 중심 또는 축을 함유하며, 따라서 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 절대 입체화학의 관점에서 (R)- 또는 (S)-로서 규정될 수 있는 다른 입체이성질체 형태를 생성시킬 수 있다.

본 발명의 화합물(들)의 임의의 비대칭 원자 (예를 들어, 키랄 탄소 등)는 거울상이성질체적으로 풍부할 수 있으며, 예를 들어 (R)- 또는 (S)- 배위일 수 있다. 특정 실시양태에서, 각 비대칭 원자는 구체적 비대칭 원자 (예를 들어, 키랄 탄소)에 대해 기재된 (R)- 또는 (S)- 배위에서 적어도 50%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 60%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 70%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 80%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 90%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 95%의 거울상이성질체 과잉률 또는 적어도 99%의 거울상이성질체 과잉률을 갖는다.

따라서, 본 발명의 화합물은 실질적으로 순수한 거울상이성질체 형태로 존재할 수 있다.

임의의 생성된 이성질체 혼합물은 구성성분의 물리화학적 차이를 기초로 하여, 예를 들어 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 순수하거나 실질적으로 순수한 광학 이성질체로 분리될 수 있다.

광학 활성 (R)- 및 (S)- 이성질체는 키랄 합성단위체 또는 키랄 시약을 사용하여 제조될 수 있거나, 또는 통상의 기술을 사용하여 분해될 수 있다. 최종 생성물 또는 중간체의 임의의 생성된 라세미체는 공지된 방법에 의해 광학 대장체로 분해될 수 있다. 예를 들어, 공지된 방법은 광학 활성 산 또는 염기를 사용하여 수득되고, 광학 활성 산성 또는 염기성 화합물을 유리시키는 그의 부분입체이성질체 염의 분리를 포함한다. 특히, 염기성 모이어티는 따라서, 예를 들어 광학 활성 산, 예를 들어 타르타르산, 디벤조일 타르타르산, 디아세틸 타르타르산, 디-O,O'-p-톨루오일 타르타르산, 만델산, 말산 또는 캄포르-10-술폰산과 형성된 염의 분별 결정화에 의해, 본 발명의 화합물을 그의 광학 대장체로 분해하는데 사용될 수 있다. 라세미 생성물은 키랄 크로마토그래피, 예를 들어 키랄 흡착제를 사용한 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 또한 분해될 수 있다.

화합물이 이중 결합을 함유하는 경우에, 치환기는 E 또는 Z 배위일 수 있다. 화합물이 이치환된 시클로알킬을 함유하는 경우에, 시클로알킬 치환기는 시스- 또는 트랜스-배위를 가질 수 있다. 모든 호변이성질체 형태가 또한 포함되는 것으로 한다.

수소 결합에 대한 공여자 및/또는 수용자로서 작용하는 것이 가능한 기를 함유하는 본 발명의 화합물은 적합한 공-결정 형성제를 사용하여 공-결정을 형성하는 것이 가능할 수 있다. 이들 공-결정은 공지된 공-결정 형성 절차에 의해 본 발명의 화합물로부터 제조될 수 있다. 이러한 절차는 분쇄, 가열, 공동-승화, 공동-용융, 또는 결정화 조건 하에 용액 중에서 본 발명의 화합물을 공-결정 형성제와 접촉시키고, 이에 의해 형성된 공-결정을 단리하는 것을 포함한다. 적합한 공-결정 형성제는 WO 2004/078163에 기재된 것들을 포함한다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 포함하는 공-결정을 추가로 제공한다.

화학식 I의 화합물은 PI3 키나제 (PI3K)를 억제하며, 따라서 단백질 또는 지질 키나제 의존성 질환, 특히 클래스 I PI3키나제, PI3K알파, PI3K베타, PI3K델타 및 PI3K감마 또는 1종 이상의 그의 개별 키나제 구성원 또는 임의의 2종 이상의 언급된 키나제의 임의의 조합에 의존성인 질환의 치료에 유용할 수 있다.

특히 클래스IA 구성원 p110a, p110b 및 p110d 뿐만 아니라, 임의로 클래스IB 구성원 p110g에 대해 실질적으로 동등효력으로, 클래스 I PI3K 이소형 (알파, 베타, 델타 및 감마) 중 1종 초과의 활성을 억제하는 화합물이 유익한 것으로 여겨지며, 이는 고유한 특이성, 예를 들어 PI3K 클래스 I 패밀리의 1종의 구성원에 대한 특이성을 갖는 화합물에 비해, 이러한 화합물이 다른 이소형을 통한 경로 재배선으로 인해 적응 메카니즘을 회피하는 능력을 갖는 것으로 여겨지기 때문이다. "동등효력"이란, 예를 들어 본원에 기재된 효소 또는 세포 검정에서 측정시에, 화합물이 여러 이소형을 비슷한 정도로 억제하는 것을 의미한다.

PI3K 이소형 중 적어도 1종의 증가된 억제 효력 (즉, 보다 낮은 농도에서 적어도 1종의 PI3K 이소형을 억제)이 유리할 수도 있다. PTEN 부재 종양의 경우에, 예를 들어 유도 이소형이 p110b이지만, 완전한 효능은 다른 클래스IA 이소형의 참여를 필요로 할 수 있다. 예를 들어, 알파 및 베타 이소형에 대한 효력이 유리할 수 있다.

예를 들어 주로 p110a를 코딩하는 유전자의 종양원성 형태 (예를 들어, PIK3CA H1047R 또는 E545K)에 의해 유도되는 암, 뿐만 아니라 PIK3CA의 증가된 카피수를 나타내는 종양의 치료를 위해, PI3K알파 키나제를 강력하게 억제하는 화합물에 대한 필요성이 또한 존재한다.

본 발명의 화합물이 mTOR에 대한 활성을 나타내지 않고 언급된 PI3 키나제 활성을 나타내거나, 또는 적어도 mTOR에 비해 1종 이상의 클래스 I PI3 키나제를 억제하는 것에 대해 유리한 선택성을 나타내는 것이 바람직하다. 예를 들어, mTOR에 비해 1종 이상의 PI3K 이소형 (예를 들어, 적어도 2종, 바람직하게는 3종, 예를 들어 알파, 베타 및 델타 이소형)에 대해 선택적 억제를 나타내는 화합물이 바람직하며, 이는 보다 특히 화합물이 PI3K보다 mTOR를 더 강하게 억제하는 경우에 (불리한 비), mTOR 억제 효과가 일반적으로 안전성 윈도우를 감소시키기 때문이다.

또한, 감소된 오프-표적 효과, 예컨대 튜불린 결합을 가지고, 특히 이러한 효과를 보유하지 않는 PI3K 억제제가 요망되며, 이는 이러한 효과가 온-표적 PI3K 억제와 연관되지 않은 독성 효과를 초래할 수 있으며, 이에 따라 이러한 화합물은 치료 효과가 PI3K 억제에 대해 제어가능하고 기여가능하는 것이 확보되도록 추가의 조심스러운 투여 제어를 필요로 할 수 있기 때문이다. 본 발명의 화합물은, 본원에 기재된 절차를 사용하여 측정된 경우에, 약한 오프-표적 효과 (튜불린 결합)를 나타내거나, 관찰가능한 상기 효과를 나타내지 않았다.

특히 클래스IA 구성원 p110a, p110b 및 p110d 뿐만 아니라, 임의로 클래스IB 구성원 p110g에 대해 실질적으로 동등효력으로, 클래스 I PI3K 이소형 (알파, 베타, 델타 및 감마) 중 1종 초과의 활성을 억제하고, 또한 감소된 오프-표적 효과를 갖거나 또는 오프-표적 효과를 보유하지 않는, 예컨대 튜불린 결합을 보유하지 않거나 감소된 튜불린 결합을 갖는 화합물이 바람직하다.

바람직하게는, 적어도 1종 (예를 들어, PI3K알파), 특히 2종 (예를 들어, PI3K알파 및 PI3K베타) 또는 3종 (예를 들어, PI3K알파, PI3K베타 및 PI3K델타) 또는 모든 4종의 클래스 1 PI3K (PI3K알파, PI3K베타, PI3K델타 및 PI3K감마)의 개선된 억제 뿐만 아니라 감소된 (특히, 부재인) 오프-표적 효과 (예를 들어, 감소된 또는 부재인 튜불린 결합)를 나타내는 화합물이 요구된다. 바람직하게는, mTOR에 비해 1종 이상의 PI3K 이소형 (예를 들어, 적어도 2종, 바람직하게는 3종, 예를 들어 알파, 베타 및 델타 이소형)에 대해 선택적 억제를 또한 나타내는 이들 화합물이 바람직하다.

결과적으로, 추가 측면에서 본 발명의 화합물은 대상체 (예를 들어, 포유동물, 바람직하게는 인간)에서 PI3 키나제의 억제 또는 길항작용과 연관된 질환, 상태 또는 장애의 치료에 (예를 들어, 의약의 제조에) 사용될 수 있다. PI3 키나제 억제에 대한 관련성으로 인해, 본 발명의 화합물은 따라서 증식성 질환, 예컨대 암의 치료에 유용한 것으로 여겨진다. 본 발명의 화합물에 의한 치료를 위한 특정한 질환/조건은 양성 또는 특히 악성 종양, 고형 종양, 뇌, 신장, 간, 부신, 방광, 유방, 위 (특히, 위 종양), 식도, 난소, 결장, 직장, 전립선, 췌장, 폐 (예를 들어, 비소세포 폐암, 소세포 폐암), 질, 갑상선의 암종, 육종, 교모세포종, 다발성 골수종 또는 위장암, 특히 결장 암종 또는 결장직장 선종, 또는 두경부의 종양, 다른 질환, 예컨대 코우덴 증후군, 레르미트-두크로스병 및 바나얀-조나나 증후군 (또는 PI3K/PKB 경로가 비정상적으로 활성화된 질환), 전립선 비대증, 신생물, 특히 상피성의 신생물, 바람직하게는 유방 암종 또는 편평 세포 암종, B-세포 악성종양, 예컨대 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 골수종 및 호지킨 림프종 (NH) 또는 백혈병을 포함한다. 화합물은 바람직하게는 종양의 퇴행을 일으키고, 종양 전이의 형성 및 (또한 미세) 전이의 성장을 방지할 수 있다. 여러 또는 특히 개별 지질 키나제 및/또는 (추가의) 세린/트레오닌 단백질 키나제가 관여되어 있는 한, 면역계 질환의 치료에서 화학식 I의 화합물을 사용하는 것이 또한 가능할 수 있다.

본 발명의 문맥에서 (특히, 특허청구범위의 문맥에서) 사용된, 본원에 사용된 단수 용어 및 유사한 용어는 본원에 달리 나타내거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 단수형 및 복수형 둘 다를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다.

본원에 기재된 모든 방법은 본원에 달리 나타내거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 어휘 (예를 들어, "예컨대")의 사용은 단지 본 발명을 보다 잘 예시하고자 하는 것이며, 달리 청구된 본 발명의 범주에 대한 제한을 제기하는 것은 아니다.

본 발명의 화합물은 전형적으로 제약 조성물 (예를 들어, 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체)로서 사용된다.

따라서, 또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물은 조성물 중에 무정형 형태로 제공될 수 있다. 본 발명의 화합물은 조성물 중에 그의 유리 형태, 즉 염 형태가 아닌 형태 (유리 염기 형태)로 제공될 수 있다. 본 발명의 화합물은 조성물 중에 그의 유리 형태, 즉 염 형태가 아닌 형태 (유리 염기 형태)이며, 무정형 형태이기도 한 형태로 제공될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 담체"는 당업자에게 공지된 바와 같은, 일반적으로 안전한 것으로 인식되는 (GRAS) 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제 (예를 들어, 항박테리아제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료, 완충제 (예를 들어, 말레산, 타르타르산, 락트산, 시트르산, 아세트산, 중탄산나트륨, 인산나트륨 등) 등 및 그의 조합을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329] 참조). 임의의 통상의 담체가 활성 성분과 비상용성인 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에서의 그의 용도가 고려된다. 본 발명의 목적을 위해, 용매화물 및 수화물은 본 발명의 화합물 및 용매를 포함하는 제약 조성물 (즉, 용매화물) 또는 본 발명의 화합물 및 물을 포함하는 제약 조성물 (즉, 수화물)로 여겨진다.

제제는 통상의 용해 및 혼합 절차를 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 벌크 약물 물질 (즉, 본 발명의 화합물 또는 안정화된 형태의 화합물 (예를 들어, 시클로덱스트린 유도체 또는 다른 공지된 착화제와의 복합체))을 하나 이상의 상기 기재된 부형제의 존재 하에 적합한 용매 중에 용해시킨다. 본 발명의 화합물은 전형적으로 제약 투여 형태로 제제화되어, 용이하게 제어가능한 투여량의 약물을 제공하고, 환자에게 우아하고 용이하게 취급가능한 생성물을 제공한다.

제약 조성물은 특정 투여 경로, 예컨대 경구 투여, 비경구 투여 및 직장 투여 등을 위해 제제화될 수 있다. 또한, 본 발명의 제약 조성물은 고체 형태 (예컨대 비제한적으로 캡슐, 정제, 환제, 과립, 분말 또는 좌제) 또는 액체 형태 (예컨대 비제한적으로 용액, 현탁액 또는 에멀젼)로 제조될 수 있다. 제약 조성물은 통상의 제약 작업, 예컨대 멸균으로 처리될 수 있고/거나, 통상의 불활성 희석제, 윤활제 또는 완충제 뿐만 아니라, 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제 및 완충제 등을 함유할 수 있다.

전형적으로, 제약 조성물은 활성 성분을 하기와 함께 포함하는 정제 또는 젤라틴 캡슐이다:

a) 희석제, 예를 들어 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로스 및/또는 글리신;

b) 윤활제, 예를 들어 실리카, 활석, 스테아르산, 그의 마그네슘 또는 칼슘 염 및/또는 폴리에틸렌글리콜; 정제의 경우에 또한

c) 결합제, 예를 들어 규산알루미늄마그네슘, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈; 원하는 경우에

d) 붕해제, 예를 들어 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염 또는 발포성 혼합물; 및/또는

e) 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제.

정제는 당업계에 공지된 방법에 따라 필름 코팅 또는 장용 코팅될 수 있다.

활성 성분의 용액 및 또한 현탁액, 특히 등장성 수용액 또는 현탁액이 사용될 수 있으며, 예를 들어 활성 성분을 단독으로, 또는 담체, 예를 들어 만니톨과 함께 포함하는 동결건조된 조성물의 경우에, 이러한 용액 또는 현탁액을 사용 전에 제조하는 것이 가능하다. 제약 조성물은 멸균될 수 있고/거나, 아주반트, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 및/또는 유화제, 가용화제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 포함할 수 있으며; 그 자체로 공지된 방식으로, 예를 들어 통상의 용해 또는 동결건조 공정에 의해 제조된다. 상기 용액 또는 현탁액은 점도-증가 물질, 예컨대 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈 또는 젤라틴을 포함할 수 있다.

오일 중 현탁액은 오일 성분으로서 주사 목적에 통상적인 식물성, 합성 또는 반합성 오일을 포함한다. 이러한 것으로서 특히, 산 성분으로서 8-22개의 탄소 원자, 특히 12-22개의 탄소 원자를 갖는 장쇄 지방산, 예를 들어 라우르산, 트리데실산, 미리스트산, 펜타데실산, 팔미트산, 마르가르산, 스테아르산, 아라키드산, 베헨산, 또는 상응하는 불포화 산, 예를 들어 올레산, 엘라이드산, 에루스산, 브라시드산 또는 리놀레산을 함유하는 액체 지방산 에스테르가 언급될 수 있으며, 원하는 경우에 항산화제, 예를 들어 비타민 E, 베타-카로틴 또는 3,5-디-tert-부틸-4-히드록시톨루엔이 첨가된다. 이들 지방산 에스테르의 알콜 성분은 최대 6개의 탄소 원자를 가지며, 모노- 또는 폴리-히드록시, 예를 들어 모노-, 디- 또는 트리-히드록시; 알콜, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 또는 펜탄올; 또는 그의 이성질체, 특히 글리콜 및 글리세롤이다. 따라서, 지방산 에스테르의 하기 예가 언급된다: 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, "라브라필(Labrafil) M 2375" (폴리옥시에틸렌 글리세롤 트리올레에이트, 가테포세(Gattefosse), 파리), "미글리올(Miglyol) 812" (C₈-C₁₂의 쇄 길이를 갖는 포화 지방산의 트리글리세리드, 휠스 아게(Huels AG), 독일), 특히 식물성 오일, 예컨대 목화씨 오일, 아몬드 오일, 올리브 오일, 피마자 오일, 참깨 오일, 대두 오일, 보다 특히 땅콩 오일.

주사가능한 조성물은 멸균 조건 하에 통상적인 방식으로 제조되며; 조성물을 앰플 또는 바이알에 도입하고 용기를 밀봉하는 것에도 동일하게 적용된다.

경구 투여를 위한 제약 조성물은 활성 성분을 고체 담체와 조합하고, 원하는 경우에 생성된 혼합물을 과립화하고, 원하거나 필요한 경우에 적절한 부형제를 첨가한 후에 혼합물을 정제, 당의정 코어 또는 캡슐로 가공함으로써 수득될 수 있다. 이들을 활성 성분이 확산하거나 측정된 양으로 방출되도록 하는 플라스틱 담체에 도입하는 것도 가능하다.

경구 투여에 적합한 조성물은 유효량의 본 발명의 화합물을 정제, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 또는 시럽 또는 엘릭시르 형태로 포함한다. 경구 사용을 위해 의도된 조성물은 제약 조성물의 제조에 대해 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조되며, 이러한 조성물은 제약상 우아하고 맛우수한 제제를 제공하기 위해 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 정제는 활성 성분을 정제의 제조에 적합한 비독성의 제약상 허용되는 부형제와 혼합하여 함유할 수 있다. 이들 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예를 들어 옥수수 전분 또는 알긴산; 결합제, 예를 들어 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석이다. 정제는 코팅되지 않거나, 또는 공지된 기술에 의해 코팅되어 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시켜 보다 장기간에 걸쳐 지속되는 작용을 제공한다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 사용될 수 있다. 경구 사용을 위한 제제는, 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합되어 있는 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예를 들어 땅콩 오일, 액상 파라핀 또는 올리브 오일과 혼합되어 있는 연질 젤라틴 캡슐로서 제공될 수 있다.

국소 투여를 위한 제약 조성물은 활성 성분을, 추가의 임의적인 제제화 성분, 예컨대 용매/가용화제, 겔화제, 오일, 안정화제, 완충제 및 보존제와 함께, 활성 성분을 용해 또는 분산시키는 액체 담체 (예를 들어, 수성 액체 담체)와 조합하여, 예를 들어 용액, 로션, 크림, 겔 또는 연고를 제공함으로써 수득될 수 있다. 국소 투여를 위한 제약 조성물은, 예를 들어 피부 적용을 위해 제공될 수 있다. 국소 투여를 위한 제약 조성물은 대략 0.1% 내지 대략 2%의 활성 성분을 포함할 수 있으며, 상기 활성 성분은 화학식 I의 화합물, 특히 본원에서 개별 실시예에 기재된 화합물이다.

적용을 위한 제약 조성물 (또는 제제)은 약물을 투여하기 위해 사용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 포장될 수 있다. 일반적으로, 분배를 위한 물품은 그 안에 제약 제제가 적절한 형태로 배치되어 있는 용기를 포함한다. 적합한 용기는 당업자에 널리 공지되어 있으며, 병 (플라스틱 및 유리), 앰플, 플라스틱 백, 금속 실린더 등과 같은 물질을 포함한다. 용기는 패키지의 내용물에 무분별하게 접근하는 것을 방지하기 위해 용이하게 조작할 수 없는 집합체를 또한 포함할 수 있다. 또한, 용기는 용기의 내용물을 기재하는 표지가 그 위에 배치된다. 표지는 적절한 경고문을 또한 포함할 수 있다.

치료 유효량의 본 발명의 화합물을 포함하는 제약 조성물은 비경구 투여로서의 사용을 위해 제제화될 수 있다. 제약 조성물 (예를 들어, 정맥내 (iv) 제제)은 통상의 제약 작업, 예컨대 멸균으로 처리될 수 있고/거나, 당업자에게 널리 공지된 통상의 불활성 희석제 또는 완충제 뿐만 아니라, 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제 및 완충제를 함유할 수 있다.

본 발명은 활성 성분으로서 본 발명의 화합물을 포함하는 무수 제약 조성물 및 투여 형태를 추가로 제공하며, 이는 물이 특정 화합물의 분해를 용이하게 할 수 있기 때문이다. 본 발명의 무수 제약 조성물 및 투여 형태는 무수 또는 저수분 함유 성분 및 저수분 또는 저습도 조건을 사용하여 제조될 수 있다. 무수 제약 조성물은 그의 무수 특성이 유지되도록 제조 및 보관될 수 있다. 따라서, 무수 조성물은 이들이 적절한 규정 키트에 포함될 수 있도록 물에 대한 노출을 방지하는 것으로 공지된 물질을 사용하여 포장된다. 적합한 포장의 예는 기밀 호일, 플라스틱, 단위 투여 용기 (예를 들어, 바이알), 블리스터 팩 및 스트립 팩을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명은 활성 성분으로서의 본 발명의 화합물이 분해될 속도를 감소시키는 하나 이상의 작용제를 포함하는 제약 조성물 및 투여 형태를 추가로 제공한다. 본원에서 "안정화제"로서 언급되는 이러한 작용제는 항산화제, 예컨대 아스코르브산, pH 완충제 또는 염 완충제 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 화합물, 특히 본원에서 개별 실시예에 기재된 화합물은 무정형 형태로 제공될 수 있다.

본 발명의 화합물, 특히 본원에서 개별 실시예에 기재된 화합물은, 예를 들어 하기와 같이 표준 현탁액, 나노현탁액 및 고체 분산액으로서 제제화될 수 있다.

표준 현탁액:

1.) 실시예 18, 배치 E의 결정질 물질의 요구량을 3mg/ml의 제제 농도를 표적하는 목적 하에 칭량하였다.

2.) 이어서, 실시예 18, 배치 E의 결정질 물질을 0.5% [w/w] 카르복시메틸셀룰로스/ 0.5% [w/w] 트윈80(Tween80)/물 중에 분산시켰다.

3). 현탁액을 와동시켜 균질화하였다.

4.) 현탁액을 프로브 소니케이터를 사용하여 초음파처리하여 입자 크기를 감소시켰다 (2분).

나노현탁액:

1.) 실시예 18, 배치 E의 결정질 물질 32mg을 주문-제작된 대리석 밀링 장치에 정확하게 칭량해 넣었다.

2.) 0.2mm 지르코니아 밀링 매질 2.148g을 밀링 장치에 첨가하였다.

3.) 1% [w/V] HPMC 603 (히드록시프로필메틸셀룰로스 등급 603)/ 0.05% [/w] SDS (소듐도데실술페이트)/물 0.608ml를 밀링 장치에 첨가하였다.

4.) 밀링 장치를 밀폐하고, 회전 밀에 넣었다.

5.) 샘플을 400rpm에서 4시간 동안 분쇄하였다.

6.) 시린지를 사용하여 나노현탁액을 수집하였다.

고체 분산액:

1.) 실시예 18, 배치 E의 결정질 물질 30mg을 동결건조 바이알에 칭량해 넣었다.

2.) HPMC603 (히드록시프로필메틸셀룰로스 등급 603) 30mg을 동일한 바이알에 첨가하였다.

3.) 디옥산 5.6ml를 바이알에 첨가하였다. 바이알을 덮개로 밀폐하였다.

4.) 샘플을 주위 조건 하에 12시간 동안 교반하였다.

5.) 수득된 용액을 하기 조건에 따라 냉동-건조시켰다.

본 발명의 화합물을, 예를 들어 화합물을 담체 (예컨대, 중합체, 예를 들어 HPMC) 및 용매와 조합하고, 혼합물을 냉동-건조시킴으로써 제조되는 고체 분산액으로서 제공하는 경우에 (화합물을 결정질 형태보다는 무정형 형태로 제공하고자 함), 안정성 이유로 인해 담체의 양 대 화합물의 양의 비를 증가시켜 정치시에 화합물의 재결정화를 회피하는 것이 유리할 수 있다.

특정 경우에서, 본 발명의 화합물을 하나 이상의 추가의 제약 (또는 치료) 작용제 (예를 들어, 항증식제 또는 항암제 또는 화학요법에서 전형적으로 사용되는 보조 요법)와 조합하여 투여하는 것이 유리할 수 있다. 본 발명의 화합물은 하나 이상의 다른 치료제(들)와 동시에, 또는 그 전에 또는 그 후에 투여될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 화합물은 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 개별적으로, 또는 기타 작용제(들)와 동일한 제약 조성물로 함께 투여될 수 있다.

적합한 추가의 항암제는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다:

HER2 및 HER3 수용체 억제제: 최근에 HER2 양성 유방암 모델에서 예시된 바와 같이, PI3K 억제는 FoxO 의존성 HER2 / HER3 전사 유도를 통해 경로 재활성화를 유도할 것이며, 이는 이러한 세팅에서의 HER2 억제제의 용도를 내포한다 (문헌 [Serra et al., 2011 Oncogene 30; Chandarlapaty et al., 2011 Cancer Cell 19; Chakrabarty et al. 2012, PNAS 109]). 예를 들어, 트라스투주맙 (제넨테크/로슈(Genentech/Roche)에 의해 상표 헤르셉틴(Herceptin)® 하에 시판됨), 페르투주맙 (제넨테크/로슈에 의해 상표 페르제타(Perjeta)™ 하에 시판됨), 제넨테크/로슈로부터의 항체-약물 접합체 트라스투주맙 엠타신 (T-DM1), 에를로티닙 (제넨테크/로슈에 의해 상표 타르세바(Tarceva)® 하에 시판됨), 게피티닙 (아스트라제네카(AstraZeneca)에 의해 상표 이레사(Iressa)™ 하에 시판됨), MOR10703, 네라티닙 (HKI-272, (2E)-N-[4-[[3-클로로-4-[(피리딘-2-일)메톡시]페닐]아미노]-3-시아노-7-에톡시퀴놀린-6-일]-4-(디메틸아미노)부트-2-엔아미드로도 공지되어 있고, PCT 공개 번호 WO 05/028443에 기재되어 있음), 라파티닙 또는 라파티닙 디토실레이트 (글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)에 의해 상표 타이커브(Tykerb)® 하에 시판됨). 이러한 조합은, 예를 들어 HER2 양성 유방암 및 HER2 증폭된 위암에 유용하다. 치료 표적으로서, 불활성 티로신 키나제를 가지고 이에 따른 ATP-모방체 티로신 키나제 억제제 (TKI)의 유용성을 배제한다는 과제를 갖는 HER3 (ErbB3)이 존재한다. 이러한 과제를 회피하는 것은 ErbB3 (예를 들어, MM-121)에 대한 리간드 결합을 차단하거나 또는 ErbB2-과다발현 세포에서 ErbB3과 ErbB2의 이량체화를 차단하는 것 (예를 들어, 페르투주맙)을 목적으로 하는 항체-매개 전략이다.

에스트로겐 수용체 하향조절제/아로마타제 억제제: 예를 들어, 풀베스트란트 (상표명 파슬로덱스(Faslodex)® 하에 시판됨), 레트로졸 (노파르티스(Novartis)에 의해 상표 페마라(Femara)® 하에 시판됨) 또는 엑세메스탄 (화이자(Pfizer)에 의해 상표 아로마신(Aromasin)® 하에 시판됨). 이러한 조합은, 예를 들어 ER 양성 유방암의 치료에 유용하다. 조합에 대한 근거는 PI3K 관련 호르몬 내성을 다루는 것을 목적으로 한다.

미토겐-활성화 단백질 키나제 키나제 (MEK) 억제제: 예를 들어, XL-518 (ACC 코포레이션(ACC Corp.)으로부터 입수가능한 Cas 번호 1029872-29-4), AZD6244 또는 셀루메티닙 (아스트라제네카), GSK1120212 (글락소스미스클라인), AZD8330 (아스트라제네카) 또는 MEK162. 이러한 조합은, 예를 들어 KRAS 돌연변이 폐, 결장직장암 (CRC) 및 췌장암의 치료에 유용하다.

Bcl2/BclXL 억제제: 예를 들어, ABT737 (애보트(Abbott)).

항안드로겐: 예를 들어, 닐루타미드 (상표명 닐란드론(Nilandron)® 및 아난드론(Anandron)® 하에 시판됨), 비칼루타미드 (상표명 카소덱스(Casodex)® 하에 시판됨), 플루타미드 (상표명 풀렉신(Fulexin)™ 하에 시판됨), MDV3100 (엔잘루타미드, 메디베이션(Medivation)에 의해 상표명 엑스탄디(Xtandi)® 하에 시판됨) 및 아비라테론 (얀센(Janssen)에 의해 상표명 자이티가(Zytiga)® 하에 시판됨). 이러한 조합은, 예를 들어 PTEN 불활성화를 갖는 호르몬 의존성 전립선암의 치료에 유용하다. 조합에 대한 근거는 PI3K와 안드로겐 수용체 경로 사이의 교차 대화를 다루는 것을 목적으로 한다.

열 쇼크 단백질90 (HSP90) 억제제: 예를 들어, 타네스피마이신 (KOS-953 및 17-AAG로도 공지되어 있고, 시그마(SIGMA)로부터 입수가능하고, 미국 특허 번호 4,261,989에 기재되어 있는 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신) 및 5-(2,4-디히드록시-5-이소프로필-페닐)-4-(4-모르폴린-4-일메틸-페닐)-이속사졸-3-카르복실산 에틸아미드 (AUY922로도 공지되어 있고, PCT 공개 번호 WO2004/072051에 기재되어 있음). 이러한 조합은, 예를 들어 EGFR 의존성 폐암의 치료에, 또는 EGR 억제제에 불응성이 된 EGRmut를 억제하기에, 또는 HER2 양성 유방암 또는 HER2 양성 위암에 유용하다.

탁산 항신생물제: 예를 들어, 카바지탁셀 (1-히드록시-7β,10β-디메톡시-9-옥소-5β,20-에폭시탁스-11-엔-2α,4,13α-트리일-4-아세테이트-2-벤조에이트-13-[(2R,3S)-3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-2-히드록시-3-페닐프로파노에이트), 라로탁셀 ((2α,3ξ,4α,5β,7α,10β,13α)-4,10-비스(아세틸옥시)-13-({(2R,3S)-3-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-2-히드록시-3-페닐프로파노일}옥시)-1-히드록시-9-옥소-5,20-에폭시-7,19-시클로탁스-11-엔-2-일 벤조에이트).

항유사분열제: 예를 들어, 유방암의 치료에 유용한 도세탁셀 (사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis)에 의해 상표명 탁소테레(Taxotere)® 하에 시판됨).

식물 알칼로이드: 예를 들어, 파클리탁셀 (상표명 탁솔(Taxol) 및 온살(Onxal)™ 하에 시판됨) 및 단백질-결합되고 전립선암의 치료에 유용한 파클리탁셀 (상표명 아브락산(Abraxane)® 하에 시판됨), 빈블라스틴 (빈블라스틴 술페이트, 빈카류코블라스틴 및 VLB로도 공지되어 있고, 상표명 알카반-AQ(Alkaban-AQ)® 및 벨반(Velban)® 하에 시판됨), 빈크리스틴 (빈크리스틴 술페이트, LCR 및 VCR로도 공지되어 있고, 상표명 온코빈(Oncovin)® 및 빈카사르 Pfs(Vincasar Pfs)® 하에 시판됨) 및 비노렐빈 (상표명 나벨빈(Navelbine)® 하에 시판됨).

항-인슐린-유사 성장 인자-1 수용체 (IGF-1R) 항체: 예를 들어, 피기투무맙 (ACC 코포레이션으로부터 입수가능한 CP-751,871로도 공지되어 있음) 및 로바투무맙 (CAS 번호 934235-44-6).

PARP (폴리 ADP-리보스 폴리머라제) 억제제: 예를 들어, BSI-201 (이니파립) 및 올라파립. 이러한 조합은, 예를 들어 PI3K 억제제에 의한 DNA 손상 기작의 가능한 유도를 다루기에 유용하다.

보조 요법에 적합한 치료제는 스테로이드, 항염증제, 항히스타민제, 항구토제, 및 본원에 기재된 질환, 상태 또는 장애로 치료받은 환자에 대한 관리의 질을 개선하는데 사용하기 위한 당업자에게 널리 공지된 기타 작용제를 포함한다.

PI3K/Akt 경로의 활성화가 세포 생존을 유도하기 때문에, 방사선요법 및 화학요법을 비롯한 암 세포에서 아폽토시스를 유도하는 요법과 조합된 경로의 억제는 개선된 반응을 유발할 수 있다 (문헌 [Ghobrial et al., CA Cancer J. Clin 55:178-194 (2005)]). 예로서, PI3 키나제 억제제와 카르보플라틴의 조합은 시험관내 증식 및 아폽토시스 검정 둘 다에서 뿐만 아니라, 난소암의 이종이식편 모델에서의 생체내 종양 효능에서 상승작용 효과를 입증하였다 (문헌 [Westfall and Skinner, Mol. Cancer Ther. 4:1764-1771 (2005)]). 본 발명의 화합물은 방사선요법과 함께 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 그의 제약 조성물은 하기 경로에 의해 투여될 수 있다: 경장, 예컨대 비강; 직장 또는 경구; 비경구, 예컨대 근육내 또는 정맥내; 또는 국소, 예컨대 피부 투여. 인간에서의 사용을 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약 조성물은 바람직하게는 경구로 (예를 들어, 정제 형태로) 투여된다.

본 발명의 제약 조성물 또는 조합물은 약 50 kg 내지 약 70 kg의 대상체에 대해 약 1 mg 내지 약 1000 mg의 활성 성분(들), 또는 약 1 mg 내지 약 500 mg 또는 약 1 mg 내지 약 250 mg 또는 약 1 mg 내지 약 150 mg 또는 약 0.5 mg 내지 약 100 mg 또는 약 1 mg 내지 약 50 mg의 활성 성분들의 단위 투여량일 수 있다. 단위 투여량은 또한 약 50 kg 내지 약 70 kg의 대상체에 대해 약 50 mg 내지 약 1000 mg의 활성 성분(들), 또는 약 50 mg 내지 약 500 mg 또는 약 50 mg 내지 약 250 mg 또는 약 50 mg 내지 약 150 mg 또는 약 50 mg 내지 약 100 mg의 활성 성분(들)을 가질 수 있다. 단위 투여량은 또한 약 50 kg 내지 약 70 kg의 대상체에 대해 약 100 mg 내지 약 500 mg의 활성 성분(들), 또는 약 200 mg 내지 약 500 mg 또는 약 300 mg 내지 약 500 mg 또는 약 300 mg 내지 약 400 mg의 활성 성분(들)을 가질 수 있다. 이들 투여량은 총 1일 투여량으로서 제공될 수 있고, 단위 투여량 또는 분할된 투여량으로 제공될 수 있다. 투여량은 활성 성분(들)을 전달하는데 사용되는 특정한 투여 형태에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 화합물, 제약 조성물 또는 그의 조합의 치료 유효 투여량은 대상체의 종, 체중, 연령 및 개별 상태, 치료할 장애 또는 질환 또는 그의 중증도에 따라 달라진다. 투여량은 또한 치료할 종에서의 활성 성분의 생체이용률에 따라 달라질 수 있다. 통상의 기술을 갖는 의사, 약사, 임상의 또는 수의사는 장애 또는 질환의 진행을 예방, 치료 또는 억제하는데 필요한 각 활성 성분의 유효량을 용이하게 결정할 수 있다.

상기 인용된 투여량 특성은 유리하게는 포유동물, 예를 들어 마우스, 래트, 개, 원숭이, 또는 단리된 기관, 조직 및 그의 제제를 사용한 시험관내 및 생체내 시험에서 입증가능하다. 본 발명의 화합물은, 예를 들어 10 mM DMSO 원액으로부터 제조된 용액, 예를 들어 수용액 형태로 시험관내 적용될 수 있고, 경장으로, 비경구로, 유리하게는 정맥내로, 예를 들어 현탁액 또는 수용액으로 생체내 적용될 수 있다. 시험관내 투여량은 약 10^-3 몰 내지 약 10^-9 몰 농도 범위일 수 있다. 생체내 치료 유효량은 투여 경로에 따라 약 0.1 내지 약 500 mg/kg, 또는 약 1 내지 약 100 mg/kg 범위일 수 있다.

일반적으로, 치료 유효량의 본 발명의 화합물이 치료를 필요로 하는 환자에게 투여된다. 본 발명의 화합물의 용어 "치료 유효량"은 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 효소 활성 또는 단백질 활성 또는 단백질 복합체 활성의 감소 또는 억제를 도출하거나, 또는 증상을 개선하거나, 상태를 완화하거나, 질환 진행을 감속 또는 지연시키거나, 또는 질환을 예방하는 등 하는 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.

또 다른 측면에서, 유효량의 본 발명의 화합물을 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.

본원에 사용된 용어 "대상체"는 동물을 지칭한다. 전형적으로 동물은 포유동물이다. 대상체는, 예를 들어 영장류 (예를 들어, 인간, 남성 또는 여성), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 어류, 조류 등을 또한 지칭한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 영장류이다. 바람직하게는, 대상체는 인간이다.

본원에 사용된 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 주어진 상태, 증상 또는 장애 또는 질환의 감소 또는 저해, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기저 활성에서의 유의한 감소를 지칭한다.

본원에 사용된 임의의 질환 또는 장애에 대한 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 (i) 질환 또는 장애의 개선 (즉, 질환 또는 그의 임상적 증상 중 하나 이상의 발생의 감속 또는 정지 또는 감소); (ii) 환자가 인식할 수 없는 것들을 비롯한 하나 이상의 물리적 파라미터의 완화 또는 개선; 또는 (iii) 질환 또는 장애의 발병 또는 발생 또는 진행의 예방 또는 지연을 지칭한다. 일반적으로, 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 질환, 상태 또는 장애를 방지하는 목적을 위한 환자의 관리 및 치료를 기재하며, 증상 또는 합병증의 발병을 예방하거나, 또는 증상 또는 합병증을 완화시키거나, 또는 질환 또는 장애를 제거하기 위한 본 발명의 화합물의 투여를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 이러한 대상체가 이러한 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로, 또는 삶의 질에서 유익할 경우에 대상체는 치료를 "필요로 한다" (바람직하게는, 대상체는 인간임).

본 발명의 또 다른 측면은 아폽토시스를 증진시키기 위한 요법에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 다른 치료제 (또는 제약 작용제)를 포함하는 생성물이다.

본 발명의 조합 요법에서, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 동일하거나 상이한 제조업체에 의해 제조 및/또는 제제화될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제 (또는 제약 작용제)는 (i) (예를 들어, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제를 포함하는 키트의 경우에) 의사에 대한 조합 생성물의 배포 전에; (ii) 의사 자신에 의한 (또는 의사의 지시 하의) 투여 직전에; (iii) 예를 들어 본 발명의 화합물 및 다른 치료제의 순차적 투여 동안에 환자 자신에서, 조합 요법으로 합해질 수 있다.

따라서, 본 발명은 의약이 또 다른 치료제와의 투여를 위해 제조되는 것인, PI3K를 억제 또는 길항함으로써 질환 또는 상태를 치료하기 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다. 본 발명은 의약이 본 발명의 화합물과 다른 치료제의 조합물로서 투여되는 것인, 또 다른 치료제의 용도를 또한 제공한다.

본 발명의 실시양태는 하기 실시예에 의해 예시된다. 그러나, 본 발명의 실시양태의 다른 변형이 당업자에게 공지되어 있거나, 또는 본 개시내용에 비추어 볼 때 당업자에게 명백할 것이기 때문에, 본 발명의 실시양태는 이들 실시예의 구체적 세부사항에 제한되지는 않는 것으로 이해되어야 한다.

실시예

달리 명시되지 않는 한, 출발 물질은 일반적으로 상업적 공급원, 예컨대 알드리치 케미칼스 캄파니 (미국 위스콘신주 밀워키), 랭커스터 신테시스, 인크.(Lancaster Synthesis, Inc.) (미국 뉴햄프셔주 윈드햄), 아크로스 오가닉스(Acros Organics) (미국 뉴저지주 페어론), 메이브리지 케미칼 캄파니, 리미티드(Maybridge Chemical Company, Ltd.) (영국 코른월), 타이거 사이언티픽(Tyger Scientific) (미국 뉴저지주 프린스턴), 켐-임펙스 인터내셔널, 인크.(Chem-Impex International, Inc.) (미국 일리노이주 우드 데일) 및 아스트라제네카 파마슈티칼스 (영국 런던)로부터 입수가능하다.

하기 실시예에 사용된 약어는 하기 열거된 상응하는 의미를 갖는다.

AcOH 아세트산

AlCl₃ 삼염화알루미늄

API 대기압 이온화

Boc tert-부톡시카르보닐

염수 (실온에서) 포화 염화나트륨 용액

br. s 넓은 단일선

ⁿBuOH n-부탄올

^tBu tert-부틸

CDI 카르보닐 디이미다졸

셀라이트 규조토 기재의 여과 보조제에 대한, 미국 캘리포니아주 산타 바바라 소재의 셀라이트 코포레이션(Celite Corp.) (월드 미네랄즈 인크.(World Minerals Inc.))의 상표

CH₃CN 아세토니트릴

conc. 진한

d 이중선

DCE 디클로로에탄

DCM 디클로로메탄

DEA 디에틸아민

DIEA N,N-디에틸-이소프로필아민

DMAP 4-디메틸아미노피리딘

DME 디메톡시에탄

DMF N,N-디메틸포름아미드

DMSO 디메틸술폭시드

ES-MS 전기분무 질량 분광측정법

Et 에틸

Et₃N 트리에틸아민

Et₂O 디에틸 에테르

EtOAc 에틸 아세테이트

EtOH 에탄올

H 시간

HPLC 고성능 액체 크로마토그래피

하이플로(Hyflo) 하이플로 슈퍼 셀(Hyflo Super Cel)®

iPr 이소프로필

K₂CO₃ 탄산칼륨

KOH 수산화칼륨

K₃PO₄ 인산칼륨

LAH 수소화알루미늄리튬

LC 액체 크로마토그래피

Me 메틸

MeI 메틸 아이오다이드

MeOH 메탄올

MgSO₄ 황산마그네슘

M 다중선

min 분

mL 밀리리터

m.p. 융점

MS 질량 분광측정법

NaH 수소화나트륨

NaHCO₃ 중탄산나트륨

Na₂CO₃ 탄산나트륨

NaHMDS 소듐 헥사메틸디실라잔

NaOH 수산화나트륨

Na₂SO₄ 황산나트륨

MgSO₄ 황산마그네슘

NaOAc 아세트산나트륨

NBS N-브로모숙신이미드

NH₄Cl 염화암모늄

NH₄OH 수산화암모늄

NMR 핵 자기 공명

POCl₃ 옥시염화인(III)

RT 실온

R_f TLC 체류 인자

s 단일선

scCO₂ 초임계 CO₂

t 삼중선

TBAF 테트라부틸암모늄 플루오라이드

TBDPSCl tert-부틸디페닐실릴 클로라이드

TBME tert-부틸메틸에테르

TEA 트리에틸아민

TEMPO 2,2,6,6-테트라메틸피페리디닐옥실

TFA 트리플루오로아세트산

THF 테트라히드로푸란

TLC 박층 크로마토그래피

TMS 트리메틸실릴

TMSCl 트리메틸실릴 클로라이드

t_R 체류 시간

TsCl p-톨루엔술포닐 클로라이드

TsOH p-톨루엔술폰산

UV 자외선

일반적 방법

내부 표준으로서 트리메틸실란을 사용하거나 사용하지 않고 브루커 울트라쉴드(Bruker Ultrashield)™ 400 (400 MHz), 브루커 울트라쉴드™ 600 (600 MHz) 또는 500 MHz DRX 브루커 크리오프로브(DRX Bruker CryoProbe) (500 MHz) 분광계 상에서 1H-NMR 측정을 수행하였다. 화학적 이동 (d-값)을 테트라메틸실란으로부터의 ppm 다운필드 단위로 보고하고, 커플링 상수 (J)를 Hz 단위로 제공하고, 스펙트럼 분할 패턴을 단일선 (s), 이중선 (d), 이중선의 이중선 (dd), 삼중선 (t), 사중선 (q), 다중선 또는 그 초과의 중첩 신호 (m), 넓은 신호 (br)로 지정하였다. 용매를 괄호 안에 제공하였다.

각각 지명된 용매계를 사용하여 예비코팅된 실리카 겔 60 F₂₅₄ 유리 플레이트 (머크(Merck), 독일 다름슈타트)로 TLC를 수행하였다. 가시화는 일반적으로 UV 광 (254 nm)에 의해 행하였다.

HPLC 조건:

LC-MS 1:

칼럼: 액퀴티(Acquity) HSS T3 2.1 x 50 mm, 1.8 μm. 유량: 1.2 mL/min. 칼럼 온도: 50℃. 구배: 1.4분 이내 2% → 98% B, 0.75분 동안 98% B, 0.04분 이내 98% → 2% B, 0.01분 동안 2% B; A = 물 + 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄, B = 아세토니트릴 + 0.04% 포름산

검출 풀 스캔: 215-350 nm

LC-MS 2:

칼럼: 액퀴티 HSS T3 2.1 x 50 mm, 1.8 μm. 유량: 1.2 mL/min. 칼럼 온도: 50℃. 구배: 1.4분 이내 2% → 98% B, 0.75분 동안 98% B, 0.04분 이내 98% → 2% B, 0.01분 동안 2% B; A = 물 + 0.05% 포름산 + 0.05% 아세트산암모늄, B = 아세토니트릴 + 0.04% 포름산

검출 풀 스캔: 215-350 nm

LC-MS 3:

칼럼: 액퀴티 HSS T3 2.1 x 50 mm, 1.8 μm. 유량: 1.0 mL/min. 칼럼 온도: 60℃. 구배: 1.4분 이내 5% → 98% B, 0.75분 동안 98% B, 0.04분 이내 98% → 5% B, 0.01분 동안 5% B; A = 물 + 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄, B = 아세토니트릴 + 0.04% 포름산

검출 풀 스캔: 215-350 nm

HPLC 1:

칼럼: 크로모리스 퍼포먼스(Chromolith performance) RP18e 4.6 x 100 mm, 유량: 2.0 mL / min. 구배: 4.5분 이내 2% → 100% B, 1분 동안 100% B, A = 물 + 0.1% TFA, B = 아세토니트릴 + 0.1% TFA

검출: 215 nm

UPLC 1:

칼럼: 액퀴티 UPLC HSS T3 C18, 1.7 μm, 2.1 x 50 mm, 유량: 1.0 mL / min. 구배: 1.5분 이내 5% → 100% B, 1분 동안 100% B, A = 물 + 0.1% TFA, B = 아세토니트릴 + 0.1% TFA

검출: 218 nm

중간체 A: 4-(4,6-디클로로-피리미딘-2-일)-모르폴린

중간체 A는 상업적으로 입수가능하거나 또는 하기 절차를 사용하여 제조될 수 있다.

165℃에서 메시틸렌 (80 mL) 중 2,4,6-트리클로로피리미딘 (5.0 mL, 42.6 mmol)에 메시틸렌 (20 mL) 중 모르폴린의 용액 (4.83 mL, 55.4 mmol)의 용액을 적가하고, 현탁액을 165℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H₂O, EtOAc 및 NaHCO₃으로 처리하였다. 유기 층을 H₂O 및 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 100:0 → 7:3)에 의해 정제하였다. 잔류물을 헥산으로 연화처리하고, 여과하여 표제 화합물을 수득하였다 (3.36 g, 33%).

중간체 B: 5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-4-트리플루오로메틸-피리미딘-2-일아민

아르곤 하에 디옥산 (300 mL) 중 단계 B.1로부터의 생성물 (16.2 g, 66.3 mmol), 비스-피나콜레이토디보론 (18.5 g, 72.9 mmol) 및 KOAc (19.5 g, 199 mmol)의 현탁액에 PdCl₂(dppf)ㆍCH₂Cl₂ 부가물 (2.4 g, 2.98 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 115℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 50℃로 냉각시키고, EtOAc로 처리하였다. 생성된 현탁액을 하이플로 상에서 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 2 N NaOH 중에 현탁시키고, 실온에서 5분 동안 교반시킨 다음, Et₂O 및 H₂O를 첨가하고, 2원 혼합물을 하이플로를 통해 여과하였다. 여과물의 상을 분리하였다. 생성된 수성 층의 pH를 HCl 4N을 사용하여 5-6으로 조정한 다음, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 H₂O 및 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 Et₂O 및 헥산으로 연화처리하고, 여과하여 표제 화합물을 수득하였다 (8.33 g, 42%).

단계 B1: 5-브로모-4-트리플루오로메틸-피리미딘-2-일아민

암실 중에서 CH₃CN (800 mL) 중 2-아미노-4-트리플루오로메틸피리미딘 (25 g, 0.15 mol)의 용액에 CH₃CN 200 mL 중에 용해된 NBS (34.8 g, 0.195 mol)를 (2.5시간에 걸쳐) 적가하였다. 혼합물을 암실 중에서 실온에서 4.5시간 동안 교반한 다음, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc 및 H₂O 중에 용해시키고, 2원 혼합물을 분리 깔때기로 옮겼다. 수성 층을 분리하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 헥산/ EtOAc 9:1 → 3:2의 구배를 사용하여 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 합한 순수한 분획을 증발시키고, 잔류물을 40mL 헥산 중에 현탁시키고, 10분 동안 교반하고, 여과하고, 2x 20mL 헥산으로 세척하여 표제 생성물을 베이지색 고체로서 수득하였다 (31.2 g, 85%).

실시예 1: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-옥사졸리딘-2-온

아르곤 하에 DME (10 mL) 중 단계 1.1로부터의 생성물 (350 mg, 1.16 mmol), 중간체 B (449 mg, 1.51 mmol), Na₂CO₃ (2M, 1.7 mL, 3.48 mmol) 및 PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂ (95 mg, 0.17 mmol)의 용액을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO₃으로 추출하였다. 유기 층을 H₂O 및 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/EtOH, 99.5:0.5 → 98:2)에 의해 정제하였다. 잔류물을 헥산으로 연화처리하고, 여과하고, 건조시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (워터스 선 파이어(Waters Sun Fire) C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-물/아세토니트릴; 20분 이내 구배 아세토니트릴 5-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (260 mg, 52%).

단계 1.1: (S)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-4-메틸-옥사졸리딘-2-온

아르곤 분위기 하에 DMF (10 mL) 중 (S)-4-메틸-2-옥사졸리디논 (432 mg, 4.19 mmol)의 용액에 NaH (60% 광유, 201 mg, 5.02 mmol)를 천천히 첨가하고, 현탁액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 중간체 A (1 g, 4.19 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, H₂O로 추출하였다. 유기 층을 H₂O 및 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc, 97:3 → 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (605 mg, 47%).

실시예 2: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5,5-디메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 2.1로부터의 생성물 (28 mg, 0.04 mmol) 및 TBAF (2 mL, 2.0 mmol, THF 중 1M)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 100:0 → 95:5)에 의해 정제하여 표제 생성물을 수득하였다.

단계 2.1: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-5,5-디메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 1에 대해 사용된 절차와 유사하게, 그러나 단계 2.2로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 혼합을 100℃에서 40분 동안 수행하였다. 추출 후, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 30:70)에 의해 정제하여 표제 생성물을 수득하였다.

단계 2.2: (S)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-5,5-디메틸-옥사졸리딘-2-온

아르곤 하에 디옥산 중 단계 2.3으로부터의 생성물 (95 mg, 0.25 mmol), 중간체 A (58 mg, 0.25 mmol), 크산트포스 (10 mg, 0.02 mmol), Pd₂dba₃ (4.5 mg, 4.95 umol) 및 Cs₂CO₃ (121 mg, 0.37 mmol)의 용액을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO₃ 용액으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 0:100)에 의해 정제하여 표제 생성물을 수득하였다 (85 mg, 56%).

단계 2.3: (S)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-5,5-디메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 6.2에 대해 사용된 절차와 유사하게, 그러나 단계 2.4로부터의 생성물을 사용하고 이미다졸 대신에 Et₃N을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 55:45)에 의해 정제하여 표제 생성물을 수득하였다.

단계 2.4: (S)-4-히드록시메틸-5,5-디메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 2.5로부터의 생성물 (110 mg, 0.59 mmol) 및 HCl (디옥산 중 4M, 5 mL, 20 mmol)의 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 추가 정제 없이 사용하였다.

단계 2.5: (S)-1,1,5,5-테트라메틸-디히드로-옥사졸로[3,4-c]옥사졸-3-온

0℃에서 아르곤 하에 DMF (6 mL) 중 단계 2.6으로부터의 생성물 (190 mg, 0.73 mmol)의 용액에 NaH (88 mg, 2.20 mmol, 오일 중 60%)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H₂O로 켄칭하고, 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 연화처리하고, 여과하였다. 여과된 용액을 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 60:40)에 의해 정제하였다.

단계 2.6: (S)-4-(1-히드록시-1-메틸-에틸)-2,2-디메틸-옥사졸리딘-3-카르복실산 tert-부틸 에스테르

0℃에서 아르곤 하에 THF (15 mL) 중 (S)-3-tert-부틸 4-메틸 2,2-디메틸옥사졸리딘-3,4-디카르복실레이트 (500 mg, 1.93 mmol)의 용액에 메틸마그네슘 브로마이드 (1.4 mL, 4.24 mmol)를 적가하고, 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH₄Cl 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 65:35)에 의해 정제하였다.

실시예 3: 라세미 3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-4,5'-비피리미딘-6-일)-4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

DME (2 mL) 중 중간체 B (68 mg, 0.21 mmol), 단계 3.1로부터의 생성물 (120 mg, 021 mmol), 2M Na₂CO₃ 용액 (317 uL, 0.63 mmol) 및 테트라키스 (15 mg, 0.01 mmol)의 용액을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, Na₂SO₄를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 THF (2 ML)로 용해시키고, TBAF (212 uL, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/EtOH, 99:1 → 96:4)에 의해 정제하였다. 잔류물을 DCM/헥산으로 연화처리하여 표제 화합물을 수득하였다.

단계 3.1: 4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-4-메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 2.2에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 3.2로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 추출 후, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc: 9:1 → 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.

단계 3.2: 4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-4-메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 6.4에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온을 사용하고 DMF 대신에 DCM을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응 혼합물을 Et₂O로 추출하였다. 유기 층을 H₂O 및 염수로 세척하고, 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성된 고체를 헥산으로 연화처리하고, 여과하여 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 3A: 3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-4,5'-비피리미딘-6-일)-4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 제1 용리 거울상이성질체

절대 입체화학은 결정되지 않았음.

실시예 3의 라세미 생성물의 정제용 키랄 SFC 분리 후, 표제 화합물을 수득하였다. (칼럼: 키랄팩(Chiralpak) AD-H, 30 x 250 mm. 유량 80 mL/min. scCO₂/MeOH 85:15). t_R: 3.97 min (칼럼: 키랄팩 AD-H, 4.6 x 250 mm. 유량 3 mL/min. scCO₂/MeOH 85:15).

실시예 3B: 3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-4,5'-비피리미딘-6-일)-4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 제2 용리 거울상이성질체

절대 입체화학은 결정되지 않았음.

실시예 3의 라세미 생성물의 정제용 키랄 SFC 분리 후, 표제 화합물을 수득하였다. (칼럼: 키랄팩 AD-H, 30 x 250 mm. 유량 80 mL/min. scCO₂/MeOH 85:15). t_R: 4.49 min (칼럼: 키랄팩 AD-H, 4.6 x 250 mm. 유량 3 mL/min. scCO₂/MeOH 85:15).

실시예 4: (3aS,7aS)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-헥사히드로-벤조옥사졸-2-온

아르곤 하에 DME (1.5 mL) 중 단계 4.1로부터의 생성물 (60 mg, 0.17 mmol), 중간체 B (54 mg, 0.17 mmol), Na₂CO₃ (2M, 260 μL, 0.52 mmol) 및 팔라듐 테트라키스 (10 mg, 8.7 μmol)의 용액을 밀봉된 바이알 중에서 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/EtOH, 99.8:0.2 → 97.5:2.5)에 의해 정제하였다. 잔류물을 DCM (2 mL) 중에 용해시킨 다음, 헥산 (4 mL) 중에서 처리하였다. 결정을 여과하고, 헥산 (3ml)으로 세척하여 표제 화합물을 수득하였다 (36 mg, 44%).

단계 4.1: (3aS,7aS)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-헥사히드로-벤조옥사졸-2-온

단계 2.2에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 4.2로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 100℃에서 1시간 동안 수행하였다. 반응 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc: 9:1 → 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.

단계 4.2: (3aS,7aS)-헥사히드로-벤조옥사졸-2-온

(1S,2S)-2-아미노시클로헥산올 (750 mg, 6.51 mmol) 및 2-니트로페닐 클로로포르메이트 (1378 mg, 6.84 mmol)를 밀봉된 바이알 중 DIEA (2.39 mL, 13.68 mmol)를 포함하는 DCE (15 mL) 중에서 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 50mL EtOAc 및 50mL 포화 NaHCO₃ 용액을 사용하여 반응 혼합물을 분리 깔때기에 넣었다. 수성 층을 50mL EtOAc로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 50mL H₂O, 50mL 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc: 7:3 → 3:7)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (770 mg, 5.13 mmol).

실시예 5: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메톡시메틸-옥사졸리딘-2-온

마이크로웨이브 바이알 중에서, DME (2.1 mL) 중 단계 5.1로부터의 생성물 (116 mg, 0.28 mmol) 및 중간체 B (90 mg, 0.31 mmol)의 용액에 포화 Na₂CO₃ 용액 (0.7 ml) 및 PdCl₂(dppf)₂.CH₂Cl₂ (23 mg, 0.03 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 아르곤으로 5분 동안 버블링하였다. 이것을 마이크로웨이브 조사 하에 120℃에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM 및 물에 녹였다. 층을 분리하고, 수성 층을 약간의 DCM으로 2회 더 추출하였다. 이어서, 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/MeOH: 100% → 95% DCM)에 의해 정제하였다. 수득된 잔류물을 역상 플래쉬 크로마토그래피 (MeCN/H₂O: 10% → 100% MeCN)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (19 mg, 13%).

단계 5.1: (S)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-4-메톡시메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 2.2에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 5.2로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 115℃에서 80분 동안 수행하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, DCM/물로 녹였다. 층을 분리하고, 수성의 것을 DCM으로 3회 추출하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc: 100% → 60% 헵탄.)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (116 mg, 22%).

단계 5.2: (S)-4-메톡시메틸-옥사졸리딘-2-온

TsOH (800 mg, 4.21 mmol)를 MeOH (10 ml) 중 단계 5.3으로부터의 생성물 (1.013 g, 4.13 mmol)의 황색 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 이어서, TsOH (140 mg, 0.74 mmol)를 첨가하고, 이것을 실온에서 70분 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 제거하고, 잔류물을 트리에틸아민 (1.44 ml, 10.32 mmol)을 포함하는 DCM (6 mL) 중에 용해시켰다. DCM (4 mL) 중 트리포스겐 (0.613 g, 2.07 mmol)의 용액을 혼합물에 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 30분 동안 교반하였다. 반응물을 몇 방울의 물로 켄칭하였다. 이어서, 완충액을 첨가하여 이것을 pH=4로 산성화시킨 다음, 층을 분리하였다. 수성의 것을 약간의 DCM으로 1회 더 추출하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/MeOH: 100% → 90% DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (231 mg, 38%).

단계 5.3: (S)-4-메톡시메틸-2,2-디메틸-옥사졸리딘-3-카르복실산 tert-부틸 에스테르

NaH (265 mg, 6.63 mmol)를 THF (10 ml) 중 (S)-1-Boc-2,2-디메틸-4-히드록시메틸옥사졸리딘 (아스타테크 인크.(AstaTech Inc.), 미국 펜실베니아주 브리스톨) (1 g, 4.19 mmol)의 황색 용액에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 주위 온도에서 15분 동안 교반하였다. 메틸아이오다이드 (323 μL, 5.19 mmol)를 황색 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 30분 동안 교반하였다. 이어서, 물을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 용매를 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/MeOH: 5% → 10% MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (1.013 g, 94%).

실시예 6: (4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온

THF (5 mL) 중 단계 6.1로부터의 생성물 (600 mg, 0.82 mmol)의 용액을 플라스틱 바이알 중에서 실온에서 4일 동안 THF 중 HF.피리딘 (7.14 mL, 57.5 mmol)으로 처리하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃ 용액 (300mL) 및 EtOAc (200mL)의 교반된 혼합물에 적가하였다. 이어서, 고체 NaHCO₃을 pH~8까지 첨가하고, 층을 분리하였다. 수성의 것을 100mL EtOAc로 세척하였다. 유기 추출물을 합하고, 물 및 염수로 세척하였다. 이어서, 이것을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/EtOH: 99:1 → 95:5)에 의해 정제하였다. 분획을 합하고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중에서 초음파처리한 다음, 헥산을 첨가하였다. 수득된 결정을 여과하고, 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/EtAOc: 9:1 → 3:7, 이어서 헥산/THF: 9:1 → 1:1, 이어서 헥산/THF: 7:3 → 1:1)에 의해 3회 재정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (243 mg, 64%).

단계 6.1: (4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-5-메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 1에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 6.2로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 80℃에서 1시간 동안 수행하였다. 추출 후, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/EtOH: 95.5:0.5 → 97:3)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.

단계 6.2: (4S,5S)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-5-메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 2.2에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 6.3으로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 100℃에서 3시간 30분 동안 수행하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 녹이고, 포화 NaHCO₃ 용액 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc: 100% → 30% 헵탄.)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (116 mg, 22%).

단계 6.3: (4S,5S)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-5-메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 6.4로부터의 생성물 (3.2 g, 9.31 mmol)을 DCM (32 ml) 중에 용해시키고, Et₃N (3.25 ml, 23.29 mmol)으로 처리하였다. 용액을 아르곤으로 플러싱하고, 실온에서 5분 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 트리포스겐 (1.382 g, 4.66 mmol)으로 처리하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH₄Cl 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 실온에서 10분 동안 교반하였다. 수층을 분리하고, 유기 층을 물로 세척하였다. 합한 수성 층을 DCM으로 3x 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc: 100% → 50% 헵탄.)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (2.22 g, 61%).

단계 6.4: (2S,3S)-3-아미노-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-부탄-2-올

D-트레오닌올 (2 g, 19.02 mmol)을 DMF (15 ml) 중에 용해시키고, 이미다졸 (3.89 g, 57.1 mmol)로 처리하고, 실온에서 5분 동안 교반하였다. 이어서, 아르곤 하에 TBDPS-Cl (5.13 ml, 19.97 mmol)을 반응 용액에 적가하였다. 반응 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO₃ 용액으로 2회 및 염수로 1회 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc: 100% → 0% 헵탄.)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (3.21 g, 47%).

실시예 7: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-옥사졸리딘-2-온

아르곤 하에 DME (4 mL) 중 단계 7.1로부터의 생성물 (200 mg, 0.35 mmol), 중간체 B (131 mg, 0.39 mmol), Na₂CO₃ (2M, 526 μL, 1.05 mmol) 및 팔라듐 테트라키스 (24 mg, 0.21 mmol)의 용액을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 Na₂SO₄로 처리하고, EtOAc로 희석하고, 불용성 부분을 여과하였다. 필터 케이크를 EtOAc로 3회 세척하고, 여과물을 증발시켰다. 이어서, 잔류물을 THF 중에 용해시키고, TBAF 용액 (1N, 351 μL, 0.35 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/EtOH: 99:1 → 95:5)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.

단계 7.1: (R)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-옥사졸리딘-2-온

단계 2.2에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 7.2로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 100℃에서 3시간 동안 수행하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc: 9:1 → 6:4)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.

단계 7.2: (R)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-옥사졸리딘-2-온

단계 6.4에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 (S)-4-(히드록시메틸)옥사졸리딘-2-온 (스피드케미칼 코포레이션(SpeedChemical Corp.), 상하이) 및 DMF 대신에 DCM을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 실온에서 16시간 동안 수행하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, Et₂O로 2회 추출하였다. 유기 층을 합하고, 물 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc: 98:2 → 4:6)에 의해 정제하였다. 잔류물을 헥산 및 Et₂O로 처리하였다. 수득한 결정을 여과하여 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 8: (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-(D8-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 6에 대해 기재된 전체 순서와 유사하게, 그러나 중간체 A 대신에 단계 8.1로부터의 생성물 및 D-트레오닌올 대신에 D-알로-트레오닌올을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.

단계 8.1: 4-(4,6-디클로로-피리미딘-2-일)-D8-모르폴린

2,4,6-트리클로로피리미딘을 Et₃N 및 D8-모르폴린을 포함하는 EtOH 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 포화 NaHCO₃ 용액으로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염수로 세척하였다. 이어서, 이것을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc: 0% 헥산 → 40%)에 의해 정제하였다.

실시예 9: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-(2-히드록시-에틸)-옥사졸리딘-2-온

실시예 6에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 9.1로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 추출을 DCM 중에서 수행하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (H₂O/ACN)에 이어서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 100:0 → 95:5)에 의해 정제하였다.

단계 9.1: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-[1,3]옥사지난-2-온

실시예 1에 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 9.2로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 120℃에서 15분 동안 수행하였다. 반응 혼합물을 DCM 중에 용해시키고, H₂O로 추출하였다. 유기 층을 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 8:2 → 4:6)에 의해 정제하였다.

단계 9.2: (S)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-[1,3]옥사지난-2-온

단계 2.2에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 9.3으로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 115℃에서 2.5시간 동안 수행하였다. 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (H₂O/ACN)에 이어서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 9:1 → 0:100)에 의해 정제하였다.

단계 9.3: (S)-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-[1,3]옥사지난-2-온

아르곤 하에 THF (40 mL) 중 단계 9.4로부터의 생성물 (900 mg, 2.03 mmol)의 용액에 오일 중 NaH 60% (160 mg, 4.0 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, H₂O로 추출하였다. 유기 층을 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 0:100)에 의해 정제하였다.

단계 9.4: [(S)-1-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-3-히드록시-프로필]-카르밤산 tert-부틸 에스테르

0℃에서 TBME (400 mL) 중 단계 9.5로부터의 생성물 (40 g, 73 mmol)의 용액에 LiBH₄ (THF 중 2M, 74 mL, 146 mmol)를 적가하고, 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반한 다음, 실온에서 가온하고, 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H₂O에 이어서 0.5M 시트르산 용액으로 켄칭하였다. 혼합물을 TBME로 추출하였다. 유기 층을 건조 (MgSO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.

단계 9.5: (S)-3-tert-부톡시카르보닐아미노-4-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-부티르산 벤질 에스테르

단계 6.4에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 생성물을 제조하였다.

단계 9.6: (S)-3-tert-부톡시카르보닐아미노-4-히드록시-부티르산 벤질 에스테르

-20℃에서 DME (1.8 L) 중 Boc-L-아스파르트산-4-벤질 에스테르 (100 g, 309 mmol)의 용액에 NMM (34 mL, 309 mmol)을 첨가한 다음, 이소-부틸클로로포르메이트 (40 mL, 309 mmol)를 적가하고, 혼합물을 -20℃에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 -20℃로 냉각시켰다. -20℃에서 NaBH₄ (17.5 g, 463 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 가온되도록 하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 20% 시트르산 용액으로 켄칭한 다음, AcOEt로 추출하였다. 유기 층을 NaHCO₃ 용액, H₂O 및 염수로 세척하고, 건조 (MgSO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.

실시예 10: (4S,5R)-3-[2'-아미노-2-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일]-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 6에 대해 기재된 전체 순서와 유사하게, 그러나 중간체 A 대신에 단계 10.1로부터의 생성물 및 D-트레오닌올 대신에 D-알로-트레오닌올을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 혼합물을 Na₂CO₃의 포화 용액에 적가하였다. 첨가한 후, NaHCO₃의 포화 용액을 첨가하였다 (최종 pH는 약 7-8이었음). 이것을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (워터스 선 파이어 C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-물/아세토니트릴; 20분 이내 구배 아세토니트릴 5-100%)에 의해 정제하였다. 잔류물을 Et₂O/헥산 (3 / 1) 중에서 재결정화하였다. 결정을 여과하고, 헥산으로 세척하여 표제 화합물을 수득하였다.

단계 10.1: (S)-4-(4,6-디클로로-피리미딘-2-일)-3-메틸-모르폴린

2,4,6-트리클로로피리미딘 (100 mg, 053 mmol)을 DIPEA (280 μL, 1.6 mmol) 및 (S)-3-메틸모르폴린 (54 mg, 0.53 mmol)을 포함하는 디옥산 (2 mL) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 130℃에서 15분 동안 가열하였다. 이어서, 이것을 EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (워터스 선 파이어 C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-물/아세토니트릴; 20분 이내 구배 아세토니트릴 5-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (45 mg, 34%).

실시예 11 (비교 목적용): 3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-옥사졸리딘-2-온

실시예 5 (단계 5.1 포함)와 유사하게, 그러나 단계 11.1로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 100℃에서 1시간 동안 수행하였다. 추출을 EtOAc 중에서 수행하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 0:100)에 의해 정제하였다.

단계 11.1: 3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-옥사졸리딘-2-온

단계 2.2에 대해 기재된 전체 순서와 유사하게, 그러나 옥사졸리딘-2-온을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.

실시예 12: 포름산 (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-메틸-2-옥소-옥사졸리딘-4-일메틸 에스테르

실시예 18의 화합물 (47 mg, 0.10 mmol)을 포름산 (80 μL, 2.09 mmol) 중에 용해시키고, 5℃에서 4일 동안 보관하였다. 이어서, 이것을 실온으로 가온되도록 하고, 이것을 2일 동안 보관하였다. 이어서, 이것을 EtOAc로 녹이고, 포화 NaHCO₃ 용액 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (워터스 선 파이어 C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-물/아세토니트릴; 20분 이내 구배 아세토니트릴 5-70%)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (57 mg, 80%).

실시예 13: (S)-3-[2'-아미노-2-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일]-4-메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 11에 대해 기재된 전체 순서와 유사하게, 그러나 중간체 A 대신에 단계 10.1로부터의 생성물 및 옥사졸리딘-2-온 대신에 (S)-4-메틸-2-옥사졸리디논을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/EtOH: 99.8 / 0.2 → 98 / 2)에 이어서 정제용 HPLC (워터스 선 파이어 C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-물/아세토니트릴; 20분 이내 구배 아세토니트릴 5-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (35 mg, 32%).

실시예 14: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 6에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 14.1로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 100:0 → 95:5)에 의해 정제하였다.

단계 14.1: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-옥사졸리딘-2-온

실시예 5에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 14.2로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 오일조 중에서 100℃에서 1시간 동안 수행하였다. 추출을 EtOAc 중에서 수행하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 0:100)에 의해 정제하였다.

단계 14.2: (S)-5-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-옥사졸리딘-2-온

단계 2.2에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 14.3으로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 추출 후, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 40:60)에 의해 정제하였다.

단계 14.3: (S)-5-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시메틸)-옥사졸리딘-2-온

아르곤 하에 DCM 중 단계 14.4로부터의 생성물 (2.72 g, 8.27 mmol) 및 Et₃N (2.88 mL, 20.67 mmol)의 용액에 트리포스겐 (982 mg, 3.31 mmol)을 적가하고, 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NH₄Cl 용액으로 켄칭하였다. 유기 층을 건조 (Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 100:0 → 0:100)에 의해 정제하였다.

단계 14.4: (S)-1-아미노-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-프로판-2-올

단계 6.4에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 (S)-3-아미노프로판-1,2-디올을 사용하고 이미다졸 대신에 Et₃N을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 추출 후, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 100:0 → 90/10)에 의해 정제하였다.

실시예 15: (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-4-메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 6에 대해 기재된 전체 순서와 유사하게, 그러나 D-트레오닌올 대신에 단계 15.1로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.

단계 15.1: (2R,3S)-3-아미노-부탄-1,2-디올

단계 19.1의 절차와 유사하게, 그러나 단계 15.2로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/EtOH: 99.8 / 0.2 → 98 / 2)에 이어서 정제용 HPLC (워터스 선 파이어 C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-물/아세토니트릴; 20분 이내 구배 아세토니트릴 5-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (35 mg, 32%).

단계 15.2: N-벤질-N-[(S)-1-((R)-2,2-디메틸-[1,3]디옥솔란-4-일)-에틸]-히드록실아민

표제 화합물은 단계 19.2 동안에 형성된 제2 이성질체이다 (1.07 g, 57%).

실시예 16: (S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 11과 유사하게, 그러나 (R)-4-메틸-2-옥사졸리디논 대신에 단계 16.1로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 100℃에서 1시간 동안 수행하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 녹였다. 이것을 포화 NaHCO₃ 용액으로 2회 및 염수로 1회 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc: 0% → 85% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (9.6 mg, 58%).

단계 16.1: (S)-5-메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 6.3에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 (S)-1-아미노프로판-2-올을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 실온에서 3시간 동안 수행하였다. 반응물을 포화 NH₄Cl 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 실온에서 10분 동안 교반하였다. 수층을 분리하고, 유기 층을 물로 세척하였다. 합한 수성 층을 DCM으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc: 0% → 100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (38 mg, 9%).

실시예 17: (S)-3-(2'-아미노-2-D8-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

실시예 4에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 17.1로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/EtOH, 99.5:0.5 → 98:2)에 의해 정제하였다. 잔류물을 DCM 중에서 연화처리하고, 헥산으로 세척하여 표제 화합물을 수득하였다.

단계 17.1: (S)-3-(6-클로로-2-D8-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-4-메틸-옥사졸리딘-2-온

단계 2.2에 대해 기재된 절차와 유사하게, 그러나 단계 8.1로부터의 생성물 및 (S)-4-메틸-2-옥사졸리디논을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 추출을 DCM 중에서 수행하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 9:1 → 7:3)에 의해 정제하였다.

실시예 18: (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 6에 대해 기재된 전체 절차와 유사하게, 그러나 D-트레오닌올 대신에 D-알로-트레오닌올을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 실온에서 33시간 동안 수행하였다. 혼합물을 Na₂CO₃의 포화 용액에 적가하였다. 첨가한 후, pH는 약 7-8이었다. 이것을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (워터스 선 파이어 C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-물 / 아세토니트릴; 20분 이내 구배 아세토니트릴 5-60%)에 의해 정제하였다. 분획을 합하고, 5% NaHCO₃ 용액으로 염기성화시켰다. 침전된 생성물을 여과하였다. 잔류 팔라듐을 제거하기 위해, 생성물을 DCM / MeOH (4 / 1) 중에 용해시키고, 폴리머랩스(polymerlabs)로부터의 MP-티올(MP-Thiol)의 SPE 카트리지에 통과시킨 다음, 용매를 증발시켰다. 이 방법을 기초로 하여 다수의 배치를 생성시키고, 여러회 후처리하여 하기와 같은 결정질 물질을 수득하였다.

배치 A:

이 배치의 제조를 위해, 생성물을 폴리머랩스로부터의 MP-티올의 SPE 카트리지에 통과시키지 않았다. 정제용 HPLC 후에 수득된 순수한 분획을 합하고, NaHCO₃으로 처리하였다. CH₃CN을 증발시켰으며, 이때 생성물이 결정화되었다. 생성물을 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.

배치 B:

이 배치의 제조를 위해, 생성물을 폴리머랩스로부터의 MP-티올의 SPE 카트리지에 통과시키지 않았다. 정제용 HPLC 후에 수득된 순수한 분획을 합하고, 고체 NaHCO₃으로 처리하였다. CH₃CN을 증발시켰으며, 이때 생성물이 결정화되었다. 수성 혼합물을 냉장고 중에서 1시간 동안 유지하고, 여과하고, 물로 세척하고, HV 하에 밤새 건조시켜 백색 고체, m = 298 mg을 수득하였다.

배치 C:

이 배치의 제조를 위해, 생성물을 폴리머랩스로부터의 MP-티올의 SPE 카트리지에 통과시키지 않았다. 정제용 HPLC 후에 수득된 순수한 분획을 합하고, 증발시켰다. 잔류물을 CH₃CN에 녹인 다음, 0.1% TFA를 함유하는 물에 이어서 고체 NaHCO₃을 첨가하였다. 용액을 농축시키고, 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 건조시켜 표제 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.

배치 D:

폴리머랩스로부터의 MP-티올의 SPE 카트리지에 통과시킨 후, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 CH₃CN 중에 용해시킨 다음, 동일한 양의 물로 희석하였다. CH₃CN을 증발시키고, 생성물의 결정화 직전에 배치 B의 약간의 결정을 첨가하였다. 이어서, CH₃CN을 완전히 증발시키고, 현탁액을 냉장고 중에서 냉각시켰다. 이어서, 이것을 여과하고, 수집하고, HV 하에 밤새 건조시켜 표제 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.

배치 E:

배치 C에 대해 기재된 바와 동일한 절차이나, 배치 D의 약간의 결정을 첨가하여 결정화를 유도하였다. 표제 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.

실시예 19: (4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-4-메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 6에 대해 기재된 전체 순서와 유사하게, 그러나 D-트레오닌올 대신에 단계 19.1로부터의 생성물을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 실온에서 16시간 30분 동안 수행하였다. 혼합물을 Na₂CO₃의 포화 용액에 적가하였다. 첨가한 후, 이것을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (워터스 선 파이어 C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-물 / 아세토니트릴; 20분 이내 구배 아세토니트릴 5-80%)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (16.3 mg, 75%).

단계 19.1: (2S,3S)-3-아미노-부탄-1,2-디올

단계 19.2로부터의 생성물을 EtOH 중 HCl 용액 중에서 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하여 표제 화합물을 HCl 염으로서 수득하였다 (303 mg, 100%).

단계 19.2: (S)-1-((S)-2,2-디메틸-[1,3]디옥솔란-4-일)-에틸아민

단계 19.3으로부터의 생성물 (생성물 2, 마지막 용리, 538 mg, 2.14 mmol)을 Pd/C (100 mg)를 포함하는 AcOH (25 mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 H₂ 조건 하에 실온에서 11시간 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 셀라이트로 여과한 다음, 용매를 제거하여 표제 화합물을 수득하였다 (311 mg, 100%).

단계 19.3: N-벤질-N-[(R)-1-((S)-2,2-디메틸-[1,3]디옥솔란-4-일)-에틸]-히드록실아민 및 N-벤질-N-[(S)-1-((S)-2,2-디메틸-[1,3]디옥솔란-4-일)-에틸]-히드록실아민

80ml Et₂O 중 단계 19.4로부터의 생성물 1.48g (6.29mmol)의 잘 교반된 용액에 헥산 중 1M Et₂AlCl 6.29ml (6.29mmol)를 한번에 첨가하고, 15분 동안 계속 교반하였다. 이어서, 혼합물을 -60℃로 냉각시키고, Et₂O 중 3M 메틸마그네슘 브로마이드 6.29ml (18.87mmol)로 처리하였다. 혼합물을 -60℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 밤 동안 교반 하에 실온으로 천천히 가온되도록 하였다. 그 후, 반응물을 NaOH (2M, 40ml)로 처리하였다. 실온에서 15분 동안 교반한 후, 혼합물을 3 x 120 Et₂O로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 MeOH 중에 용해시키고, 8회 주입으로 역상 정제용 HPLC (20분 이내 H₂O[+0.1% TFA]/CH₃CN 97:3 → 50:50)에 의해 정제하였다:

- 분획 1 - 3을 함께 수집하고, ~2g NaHCO₃으로 염기성화시킨 후에, 농축시켰다. 생성된 층을 2 x 150ml Et₂O로 추출하고, 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켜 무색 오일 1.01g을 수득하고, 이를 천천히 결정화시켰다 (1H NMR에 의해 ~99% 순도; HPLC Rt = 2.36; ESI-MS: 252.2 [M+H]⁺ (LC-MS 1)) -> 생성물 1

- 분획 5 - 7을 함께 수집하고, ~2g NaHCO₃으로 염기성화시킨 후에, 농축시켰다. 생성된 현탁액을 2 x 150ml Et₂O로 추출하고, 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켜 백색 고체 363mg을 수득하였다 (1H NMR에 의해 ~99% 순도; HPLC Rt = 2.44; ESI-MS: 252.3 [M+H]+ (LC-MS 1)) -> 생성물 2

단계 19.4: (S,Z)-N-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸렌)-1-페닐메탄아민 옥시드

1.50g (11.53mmol) (R)-2,2-디메틸-1.3-디옥솔란-4-카르복스알데히드 (플루오로켐(Fluorochem), 영국 해드필드)를 DCM 60ml 중에 용해시키고, 1.64g (11.53mmol) 황산나트륨으로 처리하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, CH₂Cl₂ 20ml 중 1.42g (11.53mmol) N-벤질-히드록실아민 (상업적으로 입수가능한 히드로클로라이드 염으로부터 제조됨)의 용액으로 처리하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 실온에서 16.5시간 동안 교반한 다음, 여과하였다. 실리카겔을 첨가하여 여과물을 예비 흡수시킨 후, 실리카겔 상에서 크로마토그래피 (구배: 30분 이내 헵탄/EtOAc 0% -100%)에 의해 정제하였다. 분획 20 - 80을 수집하고, 증발 건조시키고, 진공 하에 밤새 건조시켜 백색 고체 1.48g을 수득하였다 (HPLC에 의해 ~100% 순도, Rt = 1.43).

실시예 20: (R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-옥사졸리딘-2-온

실시예 6에 대해 기재된 전체 순서와 유사하게, 그러나 D-트레오닌올 대신에 (R)-3-아미노프로판-1,2-디올을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 반응을 실온에서 16시간 동안 수행하였다. 이어서, 반응 혼합물을 NaHCO₃으로 조심스럽게 켄칭하였다. 이어서, 이것을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO₃ 용액으로 2회 및 염수로 1회 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM/EtOH: 0% → 10% MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (22.8 mg, 38%).

실시예 21: (3aR,6aR)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)테트라히드로푸로[3,4-d]옥사졸-2(3H)-온

아르곤 하에 DME/H₂O (2.2 mL) 중 (3aR,6aR)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)테트라히드로푸로[3,4-d]옥사졸-2(3H)-온 (100 mg, 0.306 mmol), 중간체 B (115 mg, 0.398 mmol), K₃PO₄ (195 mg, 0.918 mmol) 및 PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂ (25 mg, 0.031 mmol) 용액을 80℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO₃으로 추출하였다. 유기 층을 H₂O 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산-EtOAc 70:30 → 0:100)에 의해 정제하여 표제 화합물을 무색 고체로서 수득하였다 (88 mg, 62%).

단계 21.1: (3aR,6aR)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)테트라히드로푸로[3,4-d]옥사졸-2(3H)-온

아르곤으로 탈기한 후, 디옥산 (20 mL) 중 (3aR,6aR)-테트라히드로푸로[3,4-d]옥사졸-2(3H)-온 (500 mg, 3.87 mmol), 4-(4,6-디클로로피리미딘-2-일)모르폴린 (1088 mg, 4.65 mmol) 및 Cs₂CO₃ (2.14 g, 6.58 mmol)의 용액에 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐 (157 mg, 0.271 mmol) 및 Pd₂(dba)₃ (70.9 mg, 0.077 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 10% 수성 NaHCO₃ 용액에 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 MeOH 중에서 밤새 연화처리하고, 여과하고, 건조시켜 표제 화합물을 무색 고체로서 수득하였다 (1.12 g, 87%).

단계 21.2: (3aR,6aR)-테트라히드로푸로[3,4-d]옥사졸-2(3H)-온

CH₂Cl₂ (30 mL) 중 (3R,4R)-4-아미노테트라히드로푸란-3-올 (1.1 g, 7.88 mmol) 및 DIEA (4.54 ml, 26.0 mmol)의 용액에 CH₂Cl₂ (5 mL) 중에 용해된 (비스(트리클로로메틸) 카르보네이트 (1.75 g, 5.91 mmol)를 실온에서 30분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 수성 K₂CO₃ 용액에 첨가하고, 1시간 동안 교반하고, CH₂Cl₂를 증발시켰다. 수성 상을 Et₂O로 세척한 다음, 증발 건조시켰다. 잔류물을 EtOH/THF 1:1로 연화처리하고, 실리카 겔의 플러그를 통해 여과하여 무기 염을 제거하고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다 (930 mg, 90%).

실시예 22: (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-히드록시헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온

0℃에서 THF (12 mL) 중 (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온 (810 mg, 1.253 mmol)의 용액에 THF 중 1M TBAF (1.0 mL, 1.0 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 및 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산-THF 60:40 → 0:100)에 의해 정제하였다. 잔류물을 Et₂O로 연화처리하고, 여과하고, 건조시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (워터스 선 파이어 C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-물/아세토니트릴; 20분 이내 구배 아세토니트릴 5-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (430 mg, 72%).

단계 22.1: (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온

(3aR*,6R*,6aR*)-6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온 및 중간체 B로부터 실시예 21에 대해 기재된 절차와 유사하게 PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂ 대신에 Pd(PPh₃)₄ 및 K₃PO₄ 대신에 Na₂CO₃을 사용하여 표제 화합물을 제조하여 EtOAc/헥산으로부터 결정화한 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.

단계 22.2: (3aR*,6R*,6aR*)-6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온

(3aR*,6R*,6aR*)-6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온 및 중간체 A로부터 단계 21.1에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하였다.

단계 22.3: (3aR*,6R*,6aR*)-6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온

DMF (25 mL) 중 (3aR*,6R*,6aR*)-6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-((2-니트로페닐)술포닐)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온 (1.47 g, 3.32 mmol) 및 Cs₂CO₃ (2.164 g, 6.64 mmol)의 현탁액에 N-아세틸-L-시스테인 (0.921 g, 5.65 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 포화 NaHCO₃ 용액 중에 현탁시키고, EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc 90:10 → 50:50)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다 (0.84 g, 98%).

단계 22.4: (3aR*,6R*,6aR*)-6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-((2-니트로페닐)술포닐)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온

0℃에서 CH₂Cl₂ (25 mL) 중 (3aR*,6R*,6aR*)-6-히드록시-3-((2-니트로페닐)술포닐)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온 (1.2 g, 3.66 mmol) 및 2,6-루티딘 (0.851 mL, 7.31 mmol)의 용액에 tert-부틸디메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (1.091 mL, 4.75 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간에 이어서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석하고, 20% 수성 NaH₂PO₄ 용액 및 H₂O로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. EtOAc/헵탄으로부터 결정화한 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (1.5 g, 88%).

단계 22.5: (3aR*,6R*,6aR*)-6-히드록시-3-((2-니트로페닐)술포닐)헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온

MeOH (40 mL) 중 tert-부틸 (1R*,2S*,5S*)-6-옥사비시클로[3.1.0]헥산-2-일((2-니트로페닐)술포닐)카르바메이트 (2.0 g, 5.10 mmol)의 용액에 앰버리스트(Amberlyst) 15 (4.0 g)를 첨가하고, 생성된 현탁액을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄-EtOAc 90:10 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다 (1.24 g, 73%).

단계 22.6: (tert-부틸 (1R*,2S*,5S*)-6-옥사비시클로[3.1.0]헥산-2-일((2-니트로페닐)술포닐)카르바메이트

CH₂Cl₂ (60 mL) 중 tert-부틸 시클로펜트-2-엔-1-일((2-니트로페닐)술포닐)카르바메이트 (2.75 g, 7.46 mmol) 및 NaHCO₃ (1.254 g, 14.93 mmol)의 현탁액에 메타-클로로퍼옥시벤조산 (2.58 g, 14.93 mmol)을 한번에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석하고, 20% 수성 Na₂SO₃ 용액, 포화 NaHCO₃ 용액 및 물로 세척하였다. 유기 상을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. EtOAc로부터 결정화한 후, 표제 화합물을 백색 결정으로서 수득하였다 (2.01 g, 68%).

단계 22.7: (tert-부틸 시클로펜트-2-엔-1-일((2-니트로페닐)술포닐)카르바메이트

-20℃에서 톨루엔 (60 mL) 중 트리페닐포스핀 (3.09 g, 11.77 mmol), tert-부틸 2-니트로페닐술포닐카르바메이트 (3.40 g, 11.23 mmol) 및 시클로펜트-2-엔올 (0.900 g, 10.70 mmol)의 현탁액에 디에틸아조디카르복실레이트 (1.948 mL, 12.30 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -20℃에서 2시간에 이어서 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc 95:5 → 3:1)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (2.79 g, 67%).

실시예 22A: (3aR,6R,6aR)- 및 (3aS,6S,6aS)-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-히드록시헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온의 키랄팩 AD 상에서의 제1 용리 거울상이성질체

절대 입체화학은 결정되지 않았음.

실시예 22의 라세미 생성물의 정제용 키랄 HPLC 분리 후, 표제 화합물을 수득하였다. (칼럼: 키랄팩 AD 20μm 5 x 500 mm. 유량 70 mL/min. 헵탄/EtOH/DEA 20:80:0.01). t_R: 17.7 min (칼럼: 키랄팩 AD-H, 4.6 x 250 mm. 유량 1.2 mL/min. 헵탄/EtOH 70:30).

실시예 22B: (3aR,6R,6aR)- 및 (3aS,6S,6aS)-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-히드록시헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온의 키랄팩 AD 상에서의 제2 용리 거울상이성질체

절대 입체화학은 결정되지 않았음.

실시예 22의 라세미 생성물의 정제용 키랄 HPLC 분리 후, 표제 화합물을 수득하였다. (칼럼: 키랄팩 AD 20μm 5 x 500 mm. 유량 70 mL/min. 헵탄/EtOH/DEA 20:80:0.01). t_R: 23.3 min (칼럼: 키랄팩 AD-H, 4.6 x 250 mm. 유량 1.2 mL/min. 헵탄/EtOH 70:30).

실시예 23: (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(2-히드록시에틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

0℃에서 THF (20 mL) 중 (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)에틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 (2.1 g, 3 mmol)의 용액에 THF 중 1M TBAF (3 mL, 3 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc/MeOH 90:10:1 → 0:100:10)에 의해 정제하였다. 정제된 생성물을 MeOH로부터 재결정화하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (1.17 g, 83%).

단계 23.1: (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)에틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)-5-(2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)에틸)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 및 중간체 B로부터 실시예 22.1에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 MeOH로부터 결정화한 후, 표제 화합물을 수득하였다.

단계 23.2: (4S,5R)-5-(2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)에틸)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

5-(2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)에틸)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 4:1 혼합물 및 중간체 A로부터 단계 21.1에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 THF/MeOH로부터 2회 재결정화하여 (4S,5S)-부분입체이성질체를 제거한 후, 표제 화합물의 (4S,5R)-부분입체이성질체만을 수득하였다.

단계 23.3: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-(2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)에틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

0℃에서 아세토니트릴 (40 mL) 중 5-(2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)에틸)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 4:1 혼합물 (4.1 g, 7.8 mmol)의 용액에 H₂O (20 mL) 중 (NH₄)₂Ce(NO₃)₆ (10.71 g, 19.5 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0-5℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 빙수에 첨가하고, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 포화 NaHCO₃ 용액 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc 10:1 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 부분입체이성질체의 4:1 혼합물로서 수득하였다 (2.2 g, 71%).

단계 23.4: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-(2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)에틸)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

0-5℃에서 DMF (30 mL) 중 5-(2-히드록시에틸)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 4:1 혼합물 (2.65 g, 10 mmol)의 용액에 이미다졸 (1.73 g, 25 mmol) 및 TBDPSCl (3.57 g, 13 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류 오일을 TBME 중에 용해시키고, 10% 수성 KHSO₄ 용액, H₂O, 포화 NaHCO₃ 용액 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc 20:1 → 2:1)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 부분입체이성질체의 4:1 혼합물로서 수득하였다 (4.18 g, 80%).

단계 23.5: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-(2-히드록시에틸)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

CH₂Cl₂-MeOH 2:1 (40 mL) 중 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-알릴-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 (2.67 g, 10 mmol)의 4:1 혼합물을 -78℃에서 오존화하였다. 완전한 오존화물 형성 후, NaBH₄ (0.57 g, 15 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20% 수성 K₂CO₃ 용액에 첨가하고, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 담황색 오일로서 수득하였다 (2.65 g, 99%).

단계 23.6: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-알릴-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

아르곤 하에 -50℃에서 THF (60 mL) 중 벤질 ((2S,3R)-3-히드록시헥스-5-엔-2-일)(4-메톡시벤질)카르바메이트 및 벤질 ((2S,3S)-3-히드록시헥스-5-엔-2-일)(4-메톡시벤질)카르바메이트의 4:1 혼합물 (3.55 g, 9.5 mmol)의 용액에 THF 중 NaHMDS의 1M 용액 (10.5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 차가운 10% 수성 KHSO₄ 용액에 첨가하고, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 10:1 → 1:1)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다 (2.4 g, 97%).

단계 23.7: (2S,3R)- 및 (2S,3S)-벤질 4-메톡시벤질(1-옥소프로판-2-일)카르바메이트

THF (30 mL) 중 (S)-벤질 4-메톡시벤질(1-옥소프로판-2-일)카르바메이트 (3.86 g, 10 mmol)의 용액에 아연 분진 (1.64 g, 25 mmol), 포화 수성 NH₄Cl 용액 (5 mL) 및 알릴 브로마이드 (2.2 mL, 25 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 25-30℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H₂O로 희석하고, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 10% 수성 KHSO₄ 용액, H₂O, NaHCO₃ 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → 2:1)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다 (3.5 g, 97%).

단계 23.8: (S)-벤질 4-메톡시벤질(1-옥소프로판-2-일)카르바메이트

CH₂Cl₂ 중 (S)-벤질 (1-히드록시프로판-2-일)(4-메톡시벤질)카르바메이트 (11.8 g, 35.5 mmol)의 용액에 NaHCO₃ (3.28 g, 39 mmol), KBr (0.25 g, 2.1 mmol) 및 TEMPO (0.168 g, 1.07 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0-5℃로 냉각시키고, 5% 수성 NaClO 용액 (85 mL, 71 mmol)을 30분 내에 첨가하였다. 0-5℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 Na₂S₂O₃ 용액에 첨가하고, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 수성 NaH₂PO₄ 용액, H₂O 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다 (11.2 g, 96%).

단계 23.10: (S)-벤질 (1-히드록시프로판-2-일)(4-메톡시벤질)카르바메이트

아르곤 하에 0-5℃에서 THF (150 mL) 중 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(4-메톡시벤질)아미노)프로판산 [439589-23-8] (16 g, 41.9 mmol)의 용액에 보란 디메틸술피드 (8.4 mL, 84 mmol)를 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 0-5℃에서 1시간에 이어서 40-45℃에서 3시간 동안 교반하였다. MeOH를 조심스럽게 첨가하여 과량의 보란을 파괴하고, 반응 혼합물을 200 mL MeOH와 함께 3x 및 CHCl₃과 함께 2x 증발시켰다. 건조시킨 후, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다 (13.7 g, 99%).

실시예 24: (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-((R)-2-히드록시프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 LC-MS 3 상에서의 제1 용리 부분입체이성질체

2-히드록시프로필 모이어티의 절대 입체화학은 결정되지 않고, (R)-배위가 임의 지정되었음.

(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-((R)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 및 TBAF로부터 실시예 23에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 5:1 → EtOAc/MeOH 10:1)에 의해 정제하고, MeOH로부터 재결정화한 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.

단계 24.1: (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-((R)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

보호된 2-히드록시프로필 모이어티의 절대 입체화학은 결정되지 않고, (R)-배위가 임의 지정되었음.

(4S,5R)-5-((R)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 및 중간체 B로부터 단계 22.1에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 담황색 발포체로서 수득하였다.

단계 24.2: (4S,5R)-5-((R)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)-5-((R)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 및 중간체 A로부터 단계 21.1에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → 3:1)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다.

단계 24.3: (4S,5R)-5-((R)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)-5-((R)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온으로부터 단계 23.3에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다.

단계 24.4: (4S,5R)-5-((R)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)-5-((R)-2-히드록시프로필)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 (단계 24.5로부터의 15%의 제1 용리 (2S,4S,5R)-부분입체이성질체로 오염됨)으로부터 단계 23.4에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다.

단계 24.5: (4S,5R)-5-((S)- 및 (4S,5R)-5-((R)-2-히드록시프로필)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

케톤의 환원 후의 2-히드록시프로필 모이어티의 절대 입체화학은 결정되지 않고, 제1 용리 생성물 (4S,5R,5S)-부분입체이성질체에 대해 (S)-배위가 임의 지정되었음.

제1 용리 생성물은 (4S,5R,5S)-부분입체이성질체이다:

제1 용리 (4S,5R,5S)-부분입체이성질체:

로 오염된, (2R,4S,5R)-부분입체이성질체 (2-히드록시프로필 모이어티에 대해 임의 지정된 (2R)-배위):

의 혼합물인 제2 용리 생성물.

3-(4-메톡시벤질)-4-메틸-5-(2-메틸알릴)옥사졸리딘-2-온의 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 3:1 혼합물로부터 단계 23.5에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (레디셉 Rf 골드(RediSep Rf Gold) 실리카 겔; 헥산/EtOAc 1:1 → EtOAc 및 톨루엔/EtOAc 3:1 → EtOAc)에 의해 3:3:1:1 이성질체 혼합물을 다중 분리한 후, 개별적인 2종의 소수 (2S,4S,5S)- 및 (2R,4S,5S)-부분입체이성질체 및 개별적인 2종의 주요 (2S,4S,5R)- 및 (2R,4S,5R)-부분입체이성질체를 무색 오일로서 수득하였다.

표제 화합물의 제1 용리 (2S,4S,5R)-부분입체이성질체 (2-히드록시프로필 모이어티에 대해 임의 지정된 (2S)-배위):

15%의 제1 용리 (2S,4S,5R)-부분입체이성질체로 오염된, 표제 화합물의 제2 용리 (2R,4S,5R)-부분입체이성질체 (2-히드록시프로필 모이어티에 대해 임의 지정된 (2R)-배위):

단계 24.6: 3-(4-메톡시벤질)-4-메틸-5-(2-메틸알릴)옥사졸리딘-2-온의 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체

벤질 ((2S)-3-히드록시-5-메틸헥스-5-엔-2-일)(4-메톡시벤질)카르바메이트의 (2S,3R)- 및 (2S,3S)-부분입체이성질체의 3:1 혼합물로부터 단계 23.6에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → 1:1)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 3:1 혼합물로서 수득하였다.

단계 24.7: 벤질 (3-히드록시-5-메틸헥스-5-엔-2-일)(4-메톡시벤질)카르바메이트의 (2S,3R)- 및 (2S,3S)-부분입체이성질체

(S)-벤질 4-메톡시벤질(1-옥소프로판-2-일)카르바메이트 및 3-브로모-2-메틸프로프-1-엔으로부터 단계 23.7에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 표제 화합물을 (2S,3R)- 및 (2S,3S)-부분입체이성질체의 3:1 혼합물로서 수득하였다.

실시예 25: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-((S)-2-히드록시프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 9:1 혼합물인, LC MS 3 상에서의 제2 용리 생성물

2-히드록시프로필 모이어티의 절대 입체화학은 결정되지 않고, (S)-배위가 임의 지정되었음.

(4S,5R)- 및 (4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-((S)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 8:1 혼합물 및 TBAF로부터 실시예 23에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 5:1 → EtOAc/MeOH 10:1)에 의해 정제하고, MeOH로부터 재결정화한 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.

단계 25.1: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-((S)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

보호된 2-히드록시프로필 모이어티의 절대 입체화학은 결정되지 않고, (S)-배위가 임의 지정되었음.

(4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-((R)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 7:1 혼합물 및 중간체 B로부터 단계 22.1에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 8:1 혼합물로서 수득하였다.

단계 25.2: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-((S)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-((S)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 7:1 혼합물 및 중간체 A로부터 단계 21.1에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → 3:1)에 의해 정제하고, MeOH/THF로부터 결정화한 후, 표제 화합물을 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 7:1 혼합물로서 수득하였다.

단계 25.3: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-((S)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-((S)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 7:1 혼합물로부터 단계 23.3에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → 2:1)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 무색 오일로서 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 10:1 혼합물로서 수득하였다.

단계 25.4: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-((S)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

단계 24.5에서 제조된 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-((S)-2-히드록시프로필)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 7:1 혼합물로부터 단계 23.4에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 7:1 혼합물로서 수득하였다.

실시예 26: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(2-히드록시-2-메틸프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)- 및 (4S,5S)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-5-(2-히드록시-2-메틸프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 5:1 혼합물 및 중간체 B로부터 단계 22.1에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc/MeOH 90:10:1 → 10:100:10)에 의해 정제하고, MeOH로부터 재결정화한 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 7:1 혼합물로서 수득하였다.

단계 26.1: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-5-(2-히드록시-2-메틸프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-((S)-2-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 5:1 혼합물 및 중간체 A로부터 단계 21.1에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 10:1 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 담황색 발포체로서 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 5:1 혼합물로서 수득하였다.

단계 26.2: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-(2-히드록시-2-메틸프로필)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-(2-히드록시-2-메틸프로필)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온의 5:1 혼합물로부터 단계 23.3에 대해 기재된 절차와 유사하게 표제 화합물을 제조하여 플래쉬 크로마토그래피 (헥산-EtOAc 1:1 → EtOAc-MeOH 5:1)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 무색 오일로서 (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 5:1 혼합물로서 수득하였다.

단계 26.3: (4S,5R)- 및 (4S,5S)-5-(2-히드록시-2-메틸프로필)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸옥사졸리딘-2-온

아르곤 하에 -78℃에서 THF (50 mL) 중 메틸 2-((4S,5R)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸-2-옥소옥사졸리딘-5-일)아세테이트 및 메틸 2-((4S,5S)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸-2-옥소옥사졸리딘-5-일)아세테이트의 3:1 혼합물 (2.0 g, 6.82 mmol)의 용액에 THF 중 3M 메틸마그네슘 클로라이드 용액 (6.82 ml, 20.46 mmol)을 천천히 첨가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하였다. 10% 수성 NH₄Cl 용액을 첨가한 후, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 H₂O로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다 (1.2 g, 59%, (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 3:1 혼합물).

단계 26.4: 메틸 2-((4S,5R)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸-2-옥소옥사졸리딘-5-일)아세테이트 및 메틸 2-((4S,5S)-3-(4-메톡시벤질)-4-메틸-2-옥소옥사졸리딘-5-일)아세테이트

CH₂Cl₂ (80 mL) 중 (3R,4S)- 및 (3S,4S)-메틸 3-히드록시-4-((4-메톡시벤질)아미노)펜타노에이트의 3:1 혼합물 (4.1 g, 10.74 mmol)의 현탁액에 DIEA (8.44 ml, 48.3 mmol)를 첨가하고, 0℃에서 CH₂Cl₂ (10 mL) 중에 용해된 (비스(트리클로로메틸) 카르보네이트 (2.389 g, 8.05 mmol)의 용액을 첨가하였다. 실온에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃ 용액에 첨가하고, 생성물을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 합한 추출물을 H₂O로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 20:1 → EtOAc)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 담황색 발포체로서 수득하였다 (2.02 g, 63%, (4S,5R)- 및 (4S,5S)-부분입체이성질체의 3:1 혼합물).

단계 26.5: (3R,4S)- 및 (3S,4S)-메틸 3-히드록시-4-((4-메톡시벤질)아미노)펜타노에이트

CH₂Cl₂ (60 mL) 및 MeOH (60 mL) 중 (3R,4S)-메틸 4-아미노-3-히드록시펜타노에이트 히드로클로라이드 [111061-25-7] (2.17 g, 11.8 mmol)의 현탁액에 NaOAc (1.357 g, 16.54 mmol)를 첨가하고, 10분 동안 교반한 후, p-아니스알데히드 (1.37 mL, 11.2 mmol) 및 분자체 (2 g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. AcOH 2 mL를 첨가한 후, NaBH₃CN (1.11 g, 17.7 mmol)을 30분의 기간에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 실온에서 추가로 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 4N 수성 HCl로 산성화시키고, 증발 건조시켰다. 잔류물을 먼저 Et₂O로 세척한 다음, CH₂Cl₂/MeOH 1:1 중에 현탁시키고, 무기물을 여과하였다. 여과물을 농축시켜 50℃에서 4시간 동안 건조시킨 후, 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다 (2.9 g, 80%, (3R,4S)- 및 (3S,4S)-부분입체이성질체의 3:1 혼합물).

상기 실시예의 화합물에 대한 ¹H NMR 데이터를 하기 표에 제공한다.

추가의 물리적 특성

실시예 10 및 18, 배치 A - E로부터 수득된 결정질 물질을 하기와 같이 추가로 특성화하였다.

융점 결정:

시차 주사 열량측정법 (DSC)에 의해 융점을 결정하였다. TA 인스트루먼츠(TA Instruments), DSC 2000, 일련 번호 100036을 사용하여 DSC를 측정하였다. 샘플 1-5 mg을 표준 알루미늄 팬 (팬 + 덮개, TA 900786.901, 900779.901)에 칭량해 넣었다. 써말 어드밴티지 Q-시리즈(Thermal Advantage Q-Series) 소프트웨어 V.2.6.0.367 및 써말 어드밴티지 소프트웨어 V4.6.9를 사용하여 기기를 작동시켰다. 유니버셜 어낼리시스(Universal Analysis) V4.3A 빌드 4.3.0.6을 사용하여 열적 사건을 특성화하였다. 샘플을 비어있는 팬에 대해 측정하였다. 샘플을 하기 프로토콜에 따라 처리하였다:

단계 1: -40℃에서 평형화

단계 2: 가열 10℃/min/ 300℃

조절: 없음

수득된 그래프를 도 1, 3, 5, 7, 9 및 11에 제시한다.

분말 X선 회절 (PXRD):

샘플 양 약 2-5 mg을 대물 유리 슬라이드에 놓고, CuKa 애노드를 갖춘 브루커 D8 GADDS 디스커버(Bruker D8 GADDS Discover) (일련 번호 002482) 상에서 X선 빔을 집중시켰다. 샘플-검출기 거리는 30 cm였다. 5 내지 40° 2-세타에서 2 프레임을 기록하였다. GADDS 소프트웨어 4.1.27을 사용하여 프레임을 병합하였다. EVA 10.0.0을 사용하여 평가를 수행하였다.

수득된 그래프를 도 2, 4, 6, 8, 10 및 12에 제시한다.

대표적인 2-세타 [°] 피크를 하기 표에 제공한다:

생물학적 활성

PI3 키나제 억제제로서의 본 발명의 화합물의 효능은 하기와 같이 입증될 수 있다:

화합물 희석액 (384-웰)의 제조

시험 화합물을 DMSO 중에 용해시키고 (10 mM), 개별 노파르티스 화합물 허브에 의한 고유한 2D 매트릭스 칩을 보유하는 1.4 mL 편평 바닥 또는 V자형 매트릭스 튜브로 옮겼다. 이들 칩의 수는 노파르티스 파마(Novartis Pharma) 번호에 특징적으로 연결되었다. 원액을 즉시 사용하지 않는 경우에는 -20℃에서 보관하였다. 시험 절차를 위해 바이알을 해동시키고, 스캐너에 의해 확인하여 후속 작업 단계를 지시하는 작업 시트를 작성하였다.

화합물을, 하기 기재된 바와 같이 개별 실험 (8가지 (단일 포인트) 농도의 10종의 화합물을 가능하게 하는 96 웰) 동안에 수동으로 DMSO로 희석하거나, 또는 384-웰에서 프로파일링에 대해 시험되는 경우에는 하기 기재된 바와 같이 제조하였다. 이러한 포맷은 4종의 참조 화합물을 포함하는 8가지 농도 (단일 포인트)의 최대 40종의 개별 시험 화합물의 검정을 가능하게 하였다. 희석 프로토콜은 "예비희석 플레이트", "마스터 플레이트" 및 "검정 플레이트"의 제조를 포함하였다.

예비희석 플레이트: 96 폴리프로필렌 웰 플레이트를 예비희석 플레이트로서 사용하였다. 플레이트 위치 A1-A10 상의 각각의 10종의 시험 화합물, A11 상의 1종의 표준 화합물 및 A12 상의 1종의 DMSO 대조군을 포함하는 총 4개의 예비희석 플레이트를 제조하였다. 희석 단계의 패턴을 표 1에 요약하였다. 해밀턴스타(HamiltonSTAR) 로봇 상에서 이들 피펫팅 단계를 구동하도록 프로그램을 기록하였다.

<표 1>

DMSO는 H₂O를 사용하여 10% 농도로 포화되었음. Vol: 부피, Conc: 농도, Dil. 비: 희석 비, Fin. c: 최종 농도.

마스터 플레이트: 4개의 "예비희석 플레이트"의 표준 화합물 및 대조군을 포함하는 개별 화합물 희석액 100μL를 90% DMSO 중 각각 다음 농도 1,820, 564, 182, 54.6, 18.2, 5.46, 1.82 및 0.546μM로 포함하는 384 "마스터 플레이트"로 옮겼다.

검정 플레이트: 이어서, 각각의 화합물 희석액 50nL를 384-웰 "검정 플레이트"로 피펫팅함으로써 동일한 "검정 플레이트"를 제조하였다. 화합물을 1:181 희석에 상응하도록 검정 성분 4.5μL + 효소 4.5μL와 혼합하여 각각 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.03, 0.01 및 0.003 μM의 최종 농도를 가능하게 하였다. "마스터 플레이트"의 제조는 매트릭스 플레이트메이트 플러스(Matrix PlateMate Plus) 로봇에 의해 취급되고, "검정 플레이트"의 복제는 허밍버드(HummingBird) 로봇에 의해 취급되었다.

발현 구축물의 생성 방법

촉매 활성 인간 PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kδ 및 mTOR을 문헌 [Maira SM, Stauffer F, Brueggen J, Furet P, Schnell C, Fritsch C, Brachmann S, Chene P, de Pover A, Schoemaker K, Fabbro D, Gabriel D, Simonen M, Murphy L, Finan P, Sellers W,　 Garcia-Echeverria C (2008), Mol Cancer Ther. 7:1851-63; 및 Maira SM, Pecchi S, Brueggen J, Huh K, Schnell C, Fritsch C, Nagel T, Wiesmann M,　 Brachmann S, Dorsch M, Chene P, Schoemaker K, De Pover A, Menezes D, Fabbro D, Sellers W,　 Garcia-Echeverria C, Voliva CF (2011), Mol. Cancer Ther. accepted]에 기재된 바와 같이 클로닝하고, 발현시키고, 정제하였다.

PI3K알파, PI3K베타에 대한 생화학적 검정

발광-기반 ATP 검출 시약 키나제글로(KinaseGlo) (카탈로그 번호 V6714, 로트 번호 236161)를 스위스 발리젤렌 소재의 카탈리스(Catalys)를 통해 프로메가(Promega)로부터 입수하였다. (L-알파-포스파티딜이노시톨 (PI), 간, 소) (카탈로그 번호 840042C, 로트#LPI-274)를 아반티 폴라 리피드(Avanti Polar Lipid)로부터 입수하고, 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 (PIP(4,5)2 (아반티 카탈로그 번호 840046X)) 또는 L-α-포스파티딜이노시톨 (PI) (카탈로그 번호 840042C, 로트#LPI-274)을 아반티 폴라 리피드로부터 입수하였다. L-α-포스파티딜세린 (PS) (카탈로그 번호 840032C)을 아반티 폴라 리피드로부터, n-옥틸글루코시드 (카탈로그 번호 10634425001)를 아반티 폴라 리피드로부터 입수하였다. 발광은 ATP 농도를 결정하기 위한 잘 확립된 판독치이며, 따라서 다수의 키나제의 활성을 그의 기질에 관계없이 추적하는데 사용될 수 있다. 키나제 글로 발광 키나제 검정 (프로메가, 미국 위스콘신주/매디슨)은 키나제 반응 후에 용액에 남아 있는 ATP의 양을 정량함으로써 키나제 활성을 측정하는 동질 HTS 방법이다.

화합물 희석액 50 nL를 섹션 8.2에 기재된 바와 같이 흑색 384-웰 저부피 비 결합 스티렌 (NBS) 플레이트 (코스타(Costar) 카탈로그 번호 NBS#3676) 상에 분배하였다. 메탄올 중 10 mg/ml 용액으로서 제공된 L-α-포스파티딜이노시톨 (PI)를 유리 튜브로 옮기고, 질소 빔 하에 건조시켰다. 이어서, 이를 와동시킴으로써 3% 옥틸글루코시드 중에 재현탁시키고, 4℃에서 보관하였다. PI/OG와 PI3Ka 및 Pi3Kb 하위유형과의 혼합물 5 μL를 첨가하였다. 최종 부피 10 μL 중에 10 mM 트리스-HCl pH 7.5, 3mM MgCl₂, 50 mM NaCl, 0.05% CHAPS, 1mM DTT 및 1 μM ATP를 함유하는 ATP-혼합물 5 μl의 첨가에 의해 키나제 반응을 개시하였으며, 실온에서 수행하였다. 키나제글로 10 μl를 사용하여 반응을 정지시키고, 10분 후에 시너지2(Synergy2) 판독기에서 웰당 0.1초의 통합 시간을 사용하여 플레이트를 판독하였다. NVP-BGT226 (표준) 2.5 μM을 검정 플레이트에 첨가하여 키나제 반응의 100% 억제를 생성시키고, 용매 비히클 (물 중 90% DMSO)에 의해 0% 억제를 제공하였다. NVP-BGT226을 참조 화합물로서 사용하였으며, 모든 검정 플레이트에 16개의 희석 포인트의 형태로 2중으로 포함시켰다.

S자형 용량-반응 곡선을 기재된 바와 같은 억제제 농도에 걸친 검정 판독치의 플롯에 피팅함으로써 8가지 농도 (통상적으로 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 및 0.003 μM) n=2에서의 각 화합물의 억제 백분율의 IC₅₀ 값을 유도하였다. 모든 피트는 프로그램 XLfit4 (ID 비즈니스 솔루션즈(ID Business Solutions), 영국 길포드)를 사용하여 수행되었다.

PI3K델타, PI3K감마에 위한 생화학적 검정

TR-FRET 어댑타(Adapta)™ 유니버셜 키나제 어세이 키트(Universal Kinase Assay Kit) (카탈로그 번호 PV5099)를 인비트로젠 코포레이션(Invitrogen Corporation) (미국 캘리포니아주/칼스배드)으로부터 입수하였다. 키트는 하기 시약을 함유한다: 어댑타 Eu-항-ADP 항체 (HEPES 완충 염수 중 유로퓸 표지된 항-ADP 항체, 카탈로그 번호 PV5097), 알렉사 플루오르(Alexa Fluor)® 647-표지된 ADP 추적자 (HEPES 완충 염수 중 알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자, 카탈로그 번호 PV5098), 독점적 TR-FRET 희석 완충제 pH 7.5 (카탈로그 번호 PV3574).

PIK3CD 기질 포스파티딜이노시톨을 인비트로젠으로부터 입수하였다 (50mM HEPES pH7.5 중 2 mM PI로 구성된 소포; 카탈로그 번호 PV5371). PIK3CG 기질 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 (PIP(4,5)2)를 인비트로젠으로부터 입수하였다 (50mM HEPES pH7.5 중 1mM PIP2: 19mM PS, 3mM MgCl₂, 1mM EGTA로 구성된 PIP2:PS 대형 단층 소포; 카탈로그 번호 PV5100).

시간-분해 형광 공명 에너지 전달 (TR-FRET)은, 공명을 통해 광자로서 방출되는, 1개의 염료 (공여자)에서의 여기 전자로부터 인접한 염료 (수용자)의 전자로의 2개의 인접한 염료들 사이의 에너지 전달을 기반으로 하는 기술이다. 이러한 에너지 전달은 수용자의 형광 방출의 증가 및 공여자의 형광 방출의 감소에 의해 검출된다. 단백질 키나제에 대한 TR-FRET 검정은 공여자 종으로서 장수명 란타나이드 테르븀 또는 유로퓸 킬레이트를 사용하며, 이는 플래쉬램프 여기원에 의한 여기 후에 지연을 도입함으로써 화합물 자가형광 또는 침전된 화합물로부터의 광 산란으로 인한 간섭을 극복하게 한다. 결과는 종종 수용자 및 공여자 형광단의 강도의 비로 표현된다. 이러한 값의 비율측정 특성은 웰들 사이의 검정 부피에서의 차이에 대해 보정될 뿐만 아니라, 착색된 화합물로 인한 소광 효과에 대해 보정된다. 어댑타™ 검정은 2 상: 키나제 반응 상 및 ADP 검출 상으로 나누어질 수 있다. 키나제 반응 상에서, 모든 키나제 반응 성분을 웰에 첨가하고, 반응물을 각 키나제에 특이적인 세트 시간 주기 동안 인큐베이션되도록 한다. 반응 후에, Eu-표지된 항-ADP 항체, 알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자 및 EDTA (키나제 반응을 정지시키기 위함)의 검출 용액을 검정 웰에 첨가한다. 키나제 반응에 의해 형성된 ADP는 항체로부터 알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자를 대체하여 TR-FRET 신호의 감소를 유발할 것이다. 억제제의 존재 하에, 키나제 반응에 의해 형성된 ADP의 양은 감소되고, 생성된 무손상 항체-추적자 상호작용은 높은 TR-FRET 신호를 유지시킨다. 어댑타™ 검정에서, 공여자 (유로퓸-항-ADP 항체)는 340nm에 여기되며, 그의 에너지를 수용자 (알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자)로 전달할 것이다. 알렉사 플루오르® 647로부터의 방출은 615/620 nm에서 측정되는 공여자의 방출 피크들 사이에 위치하기 때문에, 665 nm에 집중시키는 필터를 사용하여 모니터링될 수 있다.

화합물 희석액 50 nL를 섹션 2.2에 기재된 바와 같이 백색 384-웰 소부피 폴리스티렌 플레이트 상에 분배하였다. 이어서, PI3Kg 및 PI3Kd 및 지질 기질 (PI 또는 PIP2:PS) 5 μL에 이어서 ATP 5 μL (최종 검정 부피 10 μL)를 실온에서 인큐베이션하였다. 어댑타™ TR-FRET 검정을 위한 표준 반응 완충제는 10mM 트리스-HCl pH 7.5, 3mM MgCl₂, 50mM NaCl, 1mM DTT, 0.05% CHAPS를 함유하였다. TR-FRET 희석 완충제 (IVG에 대해 독점적) 중 Eu-표지된 항-ADP 항체 및 알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자를 함유하는 EDTA의 혼합물 5 μL를 사용하여 반응을 정지시켰다. 15 내지 60분 후에 시너지2 판독기에서 0.4초의 통합 시간 및 0.05초의 지연을 사용하여 플레이트를 판독하였다. PI3K를 표준 반응 완충제에 의해 대체함으로써 키나제 반응의 100% 억제를 위한 대조군을 수행하였다. 화합물의 용매 비히클 (H₂O 중 90% DMSO)에 의해 0% 억제에 대한 대조군을 제공하였다. 표준 화합물 NVP-BGT226을 참조 화합물로서 사용하였으며, 모든 검정 플레이트에 16개의 희석 포인트의 형태로 2중으로 포함시켰다.

엑셀(Excel) 피트 소프트웨어 또는 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism)을 사용하여 데이터를 분석하였다. S자형 용량-반응 곡선을 억제제 농도에 걸친 검정 판독치의 플롯에 피팅함으로써 EC₅₀ 값을 유도하였다. 모든 피트는 프로그램 XLfit4 (ID 비즈니스 솔루션즈, 영국 길포드)를 사용하여 수행되었다. S자형 용량-반응 곡선을 억제제 농도에 걸친 검정 판독치의 플롯에 피팅함으로써 8가지 농도 (통상적으로 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 및 0.003 μM) n=2에서의 각 화합물의 억제 백분율의 EC₅₀ 값의 결정을 유도하였다. 모든 피트는 프로그램 XLfit4 (ID 비즈니스 솔루션즈, 영국 길포드)를 사용하여 수행되었다.

mTOR에 대한 생화학적 검정

단백질 키나제에 대한 TR-FRET 검정은 공여자 종으로서 장수명 란타나이드 테르븀 또는 유로퓸 킬레이트를 사용하며, 이는 플래쉬램프 여기원에 의한 여기 후에 지연을 도입함으로써 화합물 자가형광 또는 침전된 화합물로부터의 광 산란으로 인한 간섭을 극복하게 한다. 결과는 종종 수용자 및 공여자 형광단의 강도의 비로 표현된다. 이러한 값의 비율측정 특성은 웰들 사이의 검정 부피에서의 차이에 대해 보정될 뿐만 아니라, 착색된 화합물로 인한 소광 효과에 대해 보정된다.

결합 검정은 관심 키나제에 대한 알렉사 플루오르® 647-표지된 ATP-경쟁적 키나제 억제제의 결합 및 대체를 기반으로 한다. 인비트로젠의 "키나제 추적자"는 광범위한 키나제 표적을 다루기 위해 개발되었으며, 이들을 ATP 부위에 또는 ATP 부위의 입체형태를 변경시키는 알로스테릭 부위에 결합하는 임의의 화합물의 검출에 적합하게 하는 ATP-경쟁적 키나제 억제제를 기재로 한다. ATP 부위를 결합시키는 억제제는 ATP 부위에만 결합하는 유형 I 키나제 억제제, 및 ATP 부위 및 DFG-아웃 (비-활성) 입체형태로 노출된 소수성 부위 둘 다에 결합하는 유형 II 억제제 (예를 들어, 글리벡(Gleevec)®/이마티닙, 소라페닙, BIRB-796) 둘 다를 포함한다. 유형 III 억제제는 ATP와 경쟁하지 않는 화합물이며, 막연히 알로스테릭 억제제로서 언급된다. 15종의 유형 III 억제제의 연구는 결합 검정에서 1종을 제외한 모든 화합물이 활성 검정에 대해 동등한 효력을 갖는 것으로 검출되었다는 것을 입증하였다. 유일한 예외는 기질-경쟁적 화합물이며, 따라서 진정한 알로스테릭 억제제는 아니다.

대부분의 형광-기반 키나제 활성 검정과는 대조적으로, 란타스크린(Lanthascreen)® Eu³⁺ 키나제 결합 검정은 연속적으로 판독될 수 있으며, 이는 느린 결합 동역학을 갖는 화합물의 평가를 용이하게 한다. 또한, 대부분의 활성 검정과는 달리, 결합 검정은 활성 또는 비-활성화 키나제 제제를 사용하여 수행될 수 있으며, 이는 비-활성화 키나제, 예컨대 글리벡®/이마티닙 및 일부 알로스테릭 억제제에 우선적으로 결합하는 화합물의 특성화를 가능하게 한다.

란타스크린™ 키나제 결합 검정에서, 공여자 (Eu³ ⁺-항-GST 항체)는 340nm에 여기되며, 그의 에너지를 수용자 (알렉사 플루오르® 647-표지된 ATP-경쟁적 키나제 억제제 = 추적자-314)로 전달할 것이다. 추적자-314 (알렉사 플루오르® 647 억제제)로부터의 방출은 615/620 nm에서 측정되는 공여자의 방출 피크들 사이에 위치하기 때문에, 665 nm에 집중시키는 필터를 사용하여 모니터링될 수 있다. 키나제에 대한 추적자-314 및 Eu³ ⁺-항-GST 항체 둘 다의 결합은 Eu³ ⁺-공여자 형광단으로부터 추적자-314 상의 알렉사-플루오르® 647-수용자 형광단으로의 고도의 FRET를 유발한다. 키나제에 대한 억제제의 결합은 추적자와의 결합에 대해 경쟁하여 FRET의 손실을 유발한다.

화합물 희석액 50 nL를 섹션 2.2에 기재된 바와 같이 백색 384-웰 소부피 폴리스티렌 플레이트 상에 분배하였다. 이어서, GST-mTOR 및 유로퓸-항-GST 항체 5 μL에 이어서 추적자-314 5 μL (최종 검정 부피 10 μL)를 실온에서 인큐베이션하였다. 란타스크린™ 키나제 결합 검정을 위한 표준 반응 완충제는 50mM HEPES pH 7.5, 5mM MgCl₂, 1mM EGTA, 0.01% 플루로닉(Pluronic) F-127을 함유하였다. 60분 후에 시너지2 판독기에서 0.2 마이크로초의 통합 시간 및 0.1 마이크로초의 지연을 사용하여 플레이트를 판독하였다.

방출 비를 계산하기 위해, 수용자 (알렉사 플루오르® 647-표지된 추적자-314)로부터 665 nm에서 방출된 신호를 공여자 (Eu³ ⁺항-GST 항체)로부터 620 nm에서 방출된 신호로 나누었다.

화합물의 용매 비히클 (H₂O 중 90% DMSO)에 의해 0% 억제를 위한 대조군을 제공하였다. GST-mTOR 및 유로퓸 항-GST 항체를 함유하도록 혼합물 중 10 μM로 첨가함으로써 상대적 100% 억제를 위한 대조군을 수행하였다. GST-mTOR 없이 Eu³ ⁺항-GST 항체에 의해 절대적 0% 억제를 위한 추가의 대조군을 제공하였다.

PI3K알파, 베타 및 델타를 위한 세포 검정

알파스크린(AlphaScreen) (증폭된 발광 근접 동질 검정(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay), ALPHA, 퍼킨 엘머(PerkinElmer))는 동질 마이크로타이터 플레이트 포맷에서 생체분자 상호작용을 연구하기 위한 비-방사성 비드-기반 근접 검정 기술이다. 상표명 슈어파이어(SureFire)는 항-포스포-키나제 및 항-키나제 항체로 구성된 매칭된 항체 쌍을 사용함으로써 세포 용해물 중 내인성 세포성 단백질의 인산화를 정량하는데 적합화된 알파스크린 검정을 나타낸다. 검정은 세포 내 키나제 신호전달의 특성화 뿐만 아니라, 키나제 억제제 효과의 측정을 가능하게 한다. 알파스크린 기술은 시간-소비적 세척 절차를 회피하고, 플레이트 취급을 간소화하기 때문에, 표준 검정 기술, 예컨대 ELISA에 대해 여러 이점을 제공한다. 또한, 이는 적어도 384-웰 포맷으로 최소화가능하며, 개별 알파스크린 슈어파이어 검정 키트에 포함된 항체의 친화도에 따라 펨토몰 범위에 이르는 감도를 제공한다. 높은 감도는 일중항 산소 분자의 생산을 수반하는 고유 증폭 메카니즘에 의해 달성된다. 슈어파이어 검정 키트는 특이적 표적에 대해 상업적으로 입수가능하며, 확인된 항체의 쌍을 포함한다 (퍼킨엘머). 이러한 보고는 알파스크린 슈어파이어 검정에 대해 적용되는 공통 절차 및 세포-기반 검정에서의 상용 키나제 억제제 프로파일링을 위한 각각의 반-자동화된 단계를 기재한다.

PI3K 클래스 I 이소형 Rat-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110 델타 (Rat-1_PI3K델타) 및 Rat-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110알파 (Rat-1_PI3K알파) 및 Rat-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110 베타 (Rat-1_PI3베타)를 안정하게 과다발현하는 Rat-1 세포주를 문헌 [Maira SM, Stauffer F, Brueggen J, Furet P, Schnell C, Fritsch C, Brachmann S, Chene P, de Pover A, Schoemaker K, Fabbro D, Gabriel D, Simonen M, Murphy L, Finan P, Sellers W,　 Garcia-Echeverria C (2008), Mol Cancer Ther. 7:1851-63; 및 Maira SM, Pecchi S, Brueggen J, Huh K, Schnell C, Fritsch C, Nagel T, Wiesmann M,　 Brachmann S, Dorsch M, Chene P, Schoemaker K, De Pover A, Menezes D, Fabbro D, Sellers W,　 Garcia-Echeverria C, Voliva CF (2011), Mol. Cancer Ther., accepted]에 기재된 바와 같이 제조하였다. 모든 세포주를 가습 CO₂ 인큐베이터에서 37℃ / 5% CO₂ / 90% 습도 하에 완전 성장 배지 (DMEM 고글루코스, 10% (v/v) 태아 소 혈청, 1% (v/v) MEM NEAA, 10mM HEPES, 2mM L-글루타민, 퓨로마이신 (Rat-1_PI3K델타 및 Rat-1_PI3K알파에 대해 10 μg/mL, Rat-1_PI3베타에 대해 4 ug/ml), 1% (v/v) Pen/Strep) 중에서 전면생장률 90%로 배양하고, 1주일에 2회 분할하였다.

Rat-1 세포 용해물 중 p-AKT(S473) 검출을 위해 하기 물질을 사용하였다: 둘베코(Dulbecco)의 개질된 이글(Eagle) 배지 (DMEM) 고글루코스 (깁코 인비트로젠(Gibco Invitrogen), 스위스 바젤, 카탈로그 번호 41965), 적합화된 열 불활성화 태아 소 혈청 (HI FBS; 깁코 인비트로젠, 스위스 바젤, 로트. 번호 16140), MEM 비 필수 아미노산 (NEAA; 깁코 인비트로젠, 스위스 바젤, 카탈로그 번호 11140), HEPES (깁코 인비트로젠, 스위스 바젤, 카탈로그 번호 15630), 페니실린/스트렙토마이신 (Pen/Strep, 100x; 깁코 인비트로젠, 스위스 바젤, 카탈로그 번호 15140-122), L-글루타민 (깁코 인비트로젠, 스위스 바젤, 카탈로그 번호 25030), 퓨로마이신 (시그마 알드리치(Sigma Aldrich), 스위스 부흐스, 카탈로그 번호 P9620), DMSO (머크, 스위스 디에티콘, 카탈로그 번호 8.02912.2500), H₂O, 달리 언급되지 않는 한, 밀리큐-H₂O(MilliQ-H₂O) (MILLIPORE QGARDOOR1, 밀리포어(Millipore), 스위스 주크), 소 혈청 알부민 (BSA; 시그마 알드리치, 스위스 부흐스, 카탈로그 번호 A8412), 슈어파이어 p-Akt 1/2 (Ser473) 검정 키트 (퍼킨엘머, 스위스 슈베르첸바흐, 카탈로그 번호 TGRAS50K).

p-Akt(S473) 슈어파이어 검정은 세포 용해물 중 Ser473에서의 내인성 세포 Akt 1/2의 인산화를 측정한다. 인간 PI3K델타, PI3K알파 또는 PI3K베타 p110 촉매 서브유닛 이소형의 myr-HA-태그부착된 버전을 안정하게 발현하는 Rat-1 세포를 사용하여, 384-웰 포맷으로의 2-플레이트 프로토콜로서 검정이 개발되었다.

화합물 시험을 위해, 세포 배양 처리된 384-웰 플레이트에 세포를 20 ul 완전 성장 배지 중 4000개 (Rat-1_PI3K델타), 7500개 (Rat-1_PI3K알파) 또는 6200개 (Rat-1_PI3K베타)의 세포 밀도로 파종하고, 37℃ / 5% CO₂ / 90% 습도 하에 24시간 동안 성장시켰다. 화합물을 옮기기 직전에, 완전 배지를 제거하고, 30 ul 검정 완충제 (DMEM 고글루코스, 1x MEM NEAA, 10 mM HEPES, 2 mM L-글루타민, 0.1% (w/v) BSA)를 첨가하고, 화합물 예비희석액 10 ul를 세포로 옮겼다. 2010년 2월 후의 시험을 위해, 검정 완충제를 완전 성장 배지로 치환하였으며, 이는 유사한 결과를 나타내었다 (데이터는 제시되지 않음). 1시간 동안 화합물로 처리한 후, 0.24% (w/v) BSA로 보충된 20 ul 용해 완충제의 첨가에 의해 세포를 용해시켰다. 제조업체의 지시에 따라 슈어파이어 p-Akt 1/2 (Ser473) 검정 키트를 사용하여 전체 검출 부피 12 ul 중 세포 용해물 5 ul를 사용하여 p-AKT(Ser473)의 검출을 수행하였다.

S자형 용량-반응 곡선을 기재된 바와 같은 억제제 농도에 걸친 검정 판독치의 플롯에 피팅함으로써 8가지 농도 (통상적으로 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 및 0.003 μM) n=2에서의 각 화합물의 억제 백분율의 IC₅₀ 값을 유도하였다. 모든 피트는 프로그램 XLfit4 (ID 비즈니스 솔루션즈, 영국 길포드)를 사용하여 수행되었다.

mTOR에 대한 세포 검정

세포 기반 검정 (384-웰 포맷)은 mTOR 키나제 활성의 강력한 저해제인 TSC1 (결절성 경화증 복합체1) 결여 마우스로부터 유도된 MEF (마우스 배 섬유아세포) 세포에서의 세포 mTOR 키나제 활성에 대한 화합물 효과의 결정을 위해 개발되었다. TSC1의 결여로 인해, mTOR 키나제가 구성적으로 활성화되어 mTOR의 하류 표적 중 하나인 S6 키나제 1 (S6K1)의 Thr 389의 영구적 인산화가 유발된다.

S6K1 상의 Thr389의 인산화를 결정할 수 있게 하는 슈어파이어 키트를 사용하여, 세포 용해물 중 S6K1의 포스포-T389의 정량적 결정을 가능하게 하는 알파-스크린 포맷으로 검정을 개발, 확인 및 실행하였다. mTOR 특이적 (또는 mTOR 경로-) 억제제를 사용한 MEF TSC1-/- 세포의 처리는 S6K1 상의 포스포-T389의 수준을 용량-의존적으로 감소시켜 IC50 값의 계산을 가능하게 한다. 이들은 생화학적 mTOR ATP-결합 검정에 의해 수득된 값들과 일치하여, mTOR 억제제의 효력의 정량적 비교를 가능하게 한다.

TSC1-/- MEF 세포 (문헌 [Kwiatkowski, D. J., Zhang, H., Bandura, J. L., Heiberger, K. M., Glogauer, M., el-Hashemite, N., and Onda, H. (2002) Hum. Mol. Genet. 11, 525-534])를 10% FBS (인비트로젠), 2mM 글루타민 및 1% (w/v) 페니실린/스트렙토마이신으로 보충된 DMEM 고글루코스 배지 중에서 37℃, 5% CO₂ 하에 배양하였다.

P70S6키나제 인산화의 결정을 위한 슈어파이어 키트 (p70S6K p-T389, #TGR70S50K)를 퍼킨 엘머로부터 구입하였으며, 공급업체의 지시 및 슈어파이어 검정을 위한 일반적 방법에 따라 검정을 수행하였다. 간략하게, 웰당 5 μL 세포 용해물을 (발광 판독을 위해) 384-웰 백색 프록시-플레이트로 옮기고, 7 μL A 및 5 μL B (최종 부피: 12 μL)와 혼합하였다. 암실 중에서 실온에서 3시간 동안 인큐베이션한 후, 엔비전(Envision) 판독기 (퍼킨 엘머)를 사용하여 발광을 판독하였다. 미처리 세포를 대조군 (고 대조군)으로서 사용하고, 3 μM BEZ235로 처리된 세포를 저 대조군으로서 사용하였다. 고 및 저 대조군에 대해 수득된 신호들 사이의 검정 윈도우를 100%로서 규정하고, 화합물 효과를 억제 퍼센트로서 표현하였다. IC50 값을 용량 반응 곡선으로부터 그래픽 외삽에 의해 계산하였다.

상기 기재된 검정을 사용하여 수득된 결과를 하기 표에 제공하였으며, 여기서 SEM은 평균의 표준 오차이고, n은 데이터 측정의 수이다.

* 다양한 별개의 측정은 <0.003 uM의 값을 제공하였음.

* 3개의 값 중 2개는 > 9.1. SEM 계산은 가능하지 않았음.

** 둘 다의 값 > 9.1. SEM 계산은 가능하지 않았음.

* 제4 측정 3.9 uM, 극단치

** 제2 값은 > 10이었음. 따라서, SEM 계산은 가능하지 않았음.

* 제2 값은 > 10이었음. 따라서, SEM 계산은 가능하지 않았음.

* 제2 값은 > 2.27이었음. 따라서, SEM 계산은 가능하지 않았음.

** 4개의 값 중 3개는 > 2.27이었음. 따라서, SEM 계산은 가능하지 않았음.

*** 5개의 값 중 3개는 > 2.27이었음. 따라서, SEM 계산은 가능하지 않았음.

**** 모든 값은 > 2.27이었음. 따라서, SEM 계산은 가능하지 않았음.

오프-표적 효과 (튜불린 결합의 증거)를 하기와 같이 측정하였다.

시토스핀 검정 기재:

MAPP 유도체의 튜불린 결합 (오프-표적) 결합 활성을 검출하기 위한 세포 주기 G2/M 정지 시토스핀 검정: 5 x 10⁵개 세포의 A2058 세포를 DMEM (1% 피루브산나트륨, 1% 글루타민 및 10%FCS를 함유하는 고글루코스) 2 mL를 사용하여 6-웰 클러스터에 플레이팅하였다. 18시간 후에, 시험 항목을 농도 5 μM로 첨가하였다 (시험 항목의 10 mM 용액 1 μL 첨가). 24시간 후에, 세포를 트립신화하고, 15 mL 원추형 튜브로 옮겼다. 이어서, 세포를 원심분리에 의해 펠릿으로 만들고, PBS/O (10% FCS 함유)로 재현탁시켰다. CASY 카운터 및 1 x 10⁶개의 세포 / mL로 평형화된 각 샘플을 사용하여 세포를 카운팅하였다. 이어서, 200 μL (2 x 10⁵개의 세포)를 1.5 mL 시토스핀 튜브 (헤라우스 세파텍(Heraeus Sepatec), Ref 1152)로 옮기고, 현미경 슬라이드 (써모-사이언티픽(Thermo-Scientific), Ref:#PH040820)의 상부에서 조정되는 세파테크(Sepatech) 시스템 (헤라우스, Ref #3425)을 함유하는 시토스핀 시스템을 사용하여 4℃에서 5분 동안 50 x g로 원심분리하였다. 이어서, 세포를 실온에서 15분 동안 고정하고, 제조업체의 권장에 따라 디프 퀵(Diff Quick)® 검정 (메디온 다이아그노스틱스(Medion Diagnostics), Ref:#130832)으로 염색하였다. 현미경 하의 슬라이드를 검사할 때, G2/M 정지를 반영하는 응축 DNA는 세포 내 천공된 염색에 의해 나타났다. 염색을 응축 DNA의 존재에 대해 가시적으로 평가하고, 점수를 제공하였으며, 여기서 0 = 응축 DNA가 관찰되지 않음 (오프 표적 활성이 없음을 나타냄), 1 = (약간의 오프 표적 활성을 나타냄), 2 = (중간의 오프 표적 활성을 나타냄), 3 = 대량의 응축 DNA가 관찰됨 (강한 오프-표적 활성을 나타냄)이다.

이 방법을 사용하여 수득된 데이터를 하기 표에 제시한다:

n.d. = 수행되지 않음

Claims

하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
<화학식 I>

상기 식에서,
R¹ =
(여기서, R^1a = H 또는 -CH₃임)이거나,
또는 R¹ =
(여기서, D = 중수소임)이고;
R² = H이고, R³ = H이고;
R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나; 또는
R⁴ = -CH₂OH이고, R⁵ = H이거나;
또는
R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;
R³ = H이고;
R⁴ = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂CH₂OH, -CH₂CH(OH)CH₃ 또는 -CH₂C(OH)(CH₃)₂이고, R⁵ = H이거나, 또는
R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂CH(OH)CH₃ 또는 -CH₂C(OH)(CH₃)₂이거나, 또는
R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;
또는
R³ = H이고, R⁴ = H이고;
R² 및 R⁵는 연결되어 -(CH₂)₄-를 형성하거나;
또는
R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;
R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는
R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH이거나;
또는
R² = H이고, R⁴ = H이고;
R³ 및 R⁵는 연결되어 기
또는 기
를 형성하거나;
또는
R³ = H이고, R⁵ = H이고;
R² 및 R⁴는 연결되어 기
를 형성한다.
제1항에 있어서,
R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;
R³ = H이고;
R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는
R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는
R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;
또는
R³ = H이고, R⁴ = H이고;
R² 및 R⁵ = -(CH₂)₄-이거나;
또는
R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;
R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는
R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH인
화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 또는 제2항에 있어서,
R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;
R³ = H이고;
R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는
R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는
R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이거나;
또는
R⁴ = H이고, R⁵ = H이고;
R² = -CH₂OH이고, R³ = -CH₃이거나; 또는
R² = H 또는 -CH₃이고, R³ = -CH₂OH인
화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;
R³ = H이고;
R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는
R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는
R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃인
화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 IA'의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
<화학식 IA'>

상기 식에서, R^1a = H 또는 -CH₃이다.
제1항에 있어서, 하기 화학식 IA의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
<화학식 IA>

상기 식에서,
R² = -CH₃, -CH₂OH, -CH₂OCH₃, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂OC(O)H이고;
R³ = H이고;
R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는
R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는
R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃이다.
제6항에 있어서,
R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;
R³ = H이고;
R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는
R⁴ = H이고, R⁵ = -CH₃ 또는 -CH₂OH이거나, 또는
R⁴ = H 또는 -CH₃이고, R⁵ = H 또는 -CH₃인
화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제7항에 있어서,
R² = -CH₃ 또는 -CH₂OH이고;
R³ = H이고;
R⁴ = -CH₃, -CH₂OH 또는 -CH₂CH₂OH이고, R⁵ = H이거나, 또는
R⁴ = H이고, R⁵ = CH₃ 또는 -CH₂OH인
화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서,
(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-옥사졸리딘-2-온,
(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5,5-디메틸-옥사졸리딘-2-온,
라세미 3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-4,5'-비피리미딘-6-일)-4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온,
(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-4,5'-비피리미딘-6-일)-4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 (절대 입체화학은 결정되지 않음),
(R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-4,5'-비피리미딘-6-일)-4-(히드록시메틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온 (절대 입체화학은 결정되지 않음),
(3aS,7aS)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-헥사히드로-벤조옥사졸-2-온,
(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메톡시메틸-옥사졸리딘-2-온,
(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,
(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-옥사졸리딘-2-온,
(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-(D8-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,
(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-(2-히드록시-에틸)-옥사졸리딘-2-온,
(4S,5R)-3-[2'-아미노-2-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일]-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,
포름산 (4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-메틸-2-옥소-옥사졸리딘-4-일메틸 에스테르,
(S)-3-[2'-아미노-2-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일]-4-메틸-옥사졸리딘-2-온,
(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-옥사졸리딘-2-온,
(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-4-메틸-옥사졸리딘-2-온,
(S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,
(S)-3-(2'-아미노-2-D8-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-메틸옥사졸리딘-2-온,
(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,
(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-4-메틸-옥사졸리딘-2-온,
(R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-5-히드록시메틸-옥사졸리딘-2-온,
(3aR,6aR)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)테트라히드로푸로[3,4-d]옥사졸-2(3H)-온,
라세미 (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-히드록시헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온,
(3aR,6R,6aR)-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-히드록시헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온,
(3aS,6S,6aS)-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-6-히드록시헥사히드로-2H-시클로펜타[d]옥사졸-2-온, 및
(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(2-히드록시에틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온
으로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
(4S,5R)-3-[2'-아미노-2-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일)-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일]-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온,
(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-메틸-옥사졸리딘-2-온, 또는
(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(2-히드록시에틸)-4-메틸옥사졸리딘-2-온
으로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
치료 유효량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
치료 유효량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 하나 이상의 추가의 치료 활성제를 포함하는 조합물.
치료 유효량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
암의 치료를 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.