CN104144926A

CN104144926A - 噁唑烷-2-酮化合物及其作为磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂的用途

Info

Publication number: CN104144926A
Application number: CN201380010698.9A
Authority: CN
Inventors: G·卡拉瓦蒂; R·A·费尔赫斯特; P·菲雷; F·施陶费尔; F·H·塞勒; H·鲁伊格尔; C·麦卡蒂
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2012-02-24
Filing date: 2013-02-22
Publication date: 2014-11-12
Anticipated expiration: 2033-02-22
Also published as: NZ629198A; AR090121A1; KR101640698B1; AP2014007835A0; PT2817307T; MX353341B; KR20140117581A; HK1199643A1; EP2817307A1; GT201400178A; GEP20156389B; JP2015508096A; JP6154404B2; IL233936A; EP2817307B1; ES2598118T3; CN104144926B; EA201491579A1; MX2014010141A; CO7051028A2

Abstract

本发明涉及作为PI3K(磷脂酰肌醇-3-激酶)抑制剂起作用的

Description

噁唑烷-2-酮化合物及其作为磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂的用途

发明领域

本发明涉及用作PI3K(磷脂酰肌醇-3-激酶)抑制剂的唑烷-2-酮取代的嘧啶化合物以及其药物组合物、它们的制备方法和用于治疗依赖于PI3K的病症、疾病和障碍的用途。

发明背景

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)包含脂质激酶家族，该家族催化磷酸转移至肌醇脂质的D-3′位置以产生磷酸肌醇-3-磷酸(PIP)、磷酸肌醇-3,4-二磷酸(PIP₂)和磷酸肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP₃)，其进而通过将含有普列克底物蛋白-同源物、FYVE、Phox和其它磷脂结合结构域的蛋白质对接至通常位于质膜的多种信号发放复合物中而在信号级联放大中作为第二信使起作用((Vanhaesebroeck等人,Annu.Rev.Biochem70:535(2001)；Katso等人,Annu.Rev.Cell Dev.Biol.17:615(2001))。在两种1类PI3K中，1A类PI3K是由与可为p85α、p55α、p50α、p85β或p55γ的调节亚单位组成型结合的催化p110亚单位(α、β、δ同工型)构成的杂二聚体。1B类亚类具有一个家族成员，即由与两种调节亚单位p101或p84之一结合的催化p110γ亚单位构成的杂二聚体(Fruman等人,Annu Rev.Biochem.67:481(1998)；Suire等人,Curr.Biol.15:566(2005))。p85/55/50亚单位的模块结构域包括Src同源(SH2)结构域，其在特定序列背景下结合活化的受体和细胞质酪氨酸激酶上的磷酸酪氨酸残基，从而导致1A类PI3K的活化和定位。1B类PI3K被结合多种肽和非肽配体的G蛋白偶联受体直接活化(Stephens等人,Cell89:105(1997))；Katso等人,Annu.Rev.Cell Dev.Biol.17:615-675(2001))。因此，所得的1类PI3K的磷脂产物使上游受体与下游细胞活动联系起来，所述细胞活动包括增殖、存活、趋化作用、细胞转运、运动性、代谢、炎性和变应性响应、转录和翻译(Cantley等人,Cell64:281(1991)；Escobedo和Williams,Nature335:85(1988)；Fantl等人,Cell69:413(1992))。

在很多情况下，PIP2和PIP3募集Akt(病毒致癌基因v-Akt的人同源产物)至质膜，在那里其作为对生长和存活极为重要的许多细胞内信号传导途径的节点(Fantl等人,Cell69:413-423(1992)；Bader等人,Nature Rev.Cancer5:921(2005)；Vivanco和Sawyer,Nature Rev.Cancer2:489(2002))。PI3K的异常调节(其通常通过Akt活化来增加存活)是人癌症中最普遍的事件之一，且已证明其在多种水平上发生。肿瘤抑制基因PTEN(其使肌醇环3′位的磷酸肌醇去磷酸化，且由此拮抗PI3K活性)在多种肿瘤中被功能性删除。在其它肿瘤中，p110α同工型PIK3CA的基因和Akt的基因被扩增，且已经在数种人癌症中证实了其基因产物的蛋白表达增加。此外，已在人癌症中描述了用于上调p85-p110复合物的p85α的突变和易位。最后，已经在多种人癌症中以相当高的频率描述了活化下游信号传导途径的PIK3CA的体细胞错义突变(Kang等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA102:802(2005)；Samuels等人,Science304:554(2004)；Samuels等人,Cancer Cell7:561-573(2005))。

在一些肿瘤中，p110β同工型PIK3CB被扩增或过表达。此外，研究显示由PTEN驱动的肿瘤可能对p110β而不是p110α敏感(Jia等人,Nature,454:776-779(2008).Wee等人,PNAS105(35),13057-13062(2008)；Liu等人,Nature Rev.Drug Discovery8:627-644(2009))。

p110δ和p110γ主要在造血系统中表达并且显然在白细胞信号发放中起重要作用(Liu等人Blood110(4),1191-1198(2007))。然而，它们确实还在一些癌症中起作用(Knobbe等人,Brain Pathol.13,507-518(2003)；Kang等人PNAS103(5),1289-1294(2006))。p110δ表达限于白细胞，这意味着其在白细胞介导的疾病中具有潜在作用(Vanhaesebroeck等人PNAS94(9),4330-4335(1997))。p110δ在具有急性髓性白血病的患者中的母细胞中被上调，其中它在细胞存活中起关键作用(Sujobert等人,Blood106(3),1063-1066(2005))，这表明了它在白血病和其它血液恶性病中作为靶标的潜能。p110δ活化在B-细胞恶性病的发生中起重要作用，因此抑制p110δ可以用于治疗B-细胞恶性病，例如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、浆细胞性骨髓瘤和霍奇金淋巴瘤(NH)Castillo等人,ExpertOpin.Investig.Drugs21,15-22(2012))。

这些观察结果显示磷脂酰肌醇-3激酶和这种信号传导途径的上游和下游组分的失调是与人癌症和增殖性疾病相关的最常见的失调之一(Parsons等人,Nature436:792(2005)；Hennessey等人,Nature Rev.Drug Disc.4:988-1004(2005))。

公布的国际专利申请WO2007/084786描述了抑制PI3K的取代的嘧啶分子。

发明概述

仍然需要抑制超过一种的I类PI3K同工型(α、β、δ和γ)活性的化合物，因为与具有独特特异性、例如对PI3K I类家族的一个成员的特异性的化合物相比，这类化合物被认为具有避免由通过其它同工型的途径再缠绕(rewiring)造成的适应机制(adaption mechanism)的能力。

至少一种PI3K同工型的效力的抑制增加(即以更低的浓度抑制至少一种PI3K同工型，尤其是α和β同工型中的一种或这两种)也可能是有利的。例如，在无PTEN肿瘤(PTEN null tumor)的情况下，尽管驱动同工型是p110b，但是完全功效可能需要其它IA类同工型的参与。还需要有效抑制PI3Kα激酶、例如用于治疗主要由编码p110a的基因的致癌形式(例如PIK3CA H1047R或E545K)驱动的癌症以及显示PIK3CA拷贝数增加的肿瘤的化合物。

显示出与mTOR相比有利于一种或多种PI3K同工型(例如α、β、δ和γ同工型中的至少两种、优选三种，例如α、β和δ同工型)的选择性抑制作用的化合物也是合乎需要的，因为mTOR抑制作用通常减小安全窗，更尤其是当化合物比抑制PI3K更强地抑制mTOR时(不利的比例)。

此外，具有减少的脱靶效应(off-target effect)、特别是不具有脱靶效应(例如微管蛋白结合)的PI3K抑制剂是期望的，因为这类效应可能导致与中靶(on target)PI3K抑制作用无关的毒性作用，因此这类化合物可能需要额外谨慎地给药控制，以确保治疗作用是可控的且可归因于PI3K抑制。因此，需要具有减少的或弱化的脱靶效应或者不具有脱靶效应的化合物。

需要寻求表现出改善的对至少一种(例如PI3Kα)、但尤其是两种(例如PI3Kα和PI3Kβ)或三种(例如PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ)或所有四种1类PI3K(PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ)的抑制作用以及减少的脱靶效应(特别是不存在脱靶效应)的化合物。

本发明提供了化合物和其药物组合物，所述化合物是PI3K抑制剂。本发明还提供了包含这些化合物的组合。本发明还提供了用在治疗、预防或改善PI3K介导的疾病例如癌症的方法中的本发明的化合物，所述方法包括给需要其的个体施用有效量的本发明的抑制PI3K的化合物。本发明还提供了用于制备本发明的化合物的中间体。

在一个方面，本发明提供了式(I)的化合物：

其中

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝H且R³＝H；

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH；或

R⁴＝-CH₂OH，且R⁵＝H；

或者

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂CH₂OH、-CH₂CH(OH)CH₃或-CH₂C(OH)(CH₃)₂且R⁵＝H；或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂CH(OH)CH₃或-CH₂C(OH)(CH₃)₂，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵连接并且形成-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH；

或者

R²＝H且R⁴＝H；且

R³和R⁵连接并且形成基团或基团

或者

R³＝H且R⁵＝H；且

R²和R⁴连接并且形成基团

或其药学上可接受的盐。

波浪线表示吗啉与分子其余部分的连接点，并且如果存在，也表示其它所示的基团与分子其余部分的连接点。

在本公开内容的全文中，符号“＝”具有“等于”的标准含义，并且在本发明的定义中，其可以被“等于”或“是”或“表示”替代。作为举例，措词“R³＝H”可以被解读为“R³是H”或“R³表示H”。

认为式(I)的化合物适合例如用于治疗依赖PI3激酶的疾病，尤其是增殖性疾病，例如癌症，例如肿瘤疾病。

可以通过参照下面的描述(包括给出的定义和最后的实施例)更全面地理解本发明。除非另有说明，否则所描述的实施方案应当被独立地、全体地或以任意组合被使用。本文所用的术语“包括”、“含有”和“包含”在本文中以开放式的非限制性的含义被使用。

除非另有说明，否则术语“本发明的化合物”或“本发明化合物”等是指式(I)及其子式(例如式(IA)和(IA’))的化合物和所述化合物的盐以及同位素标记的化合物(包括氘取代物)。

除非另有说明，否则本发明的化合物具有式(I)及其子式中所描绘的立体化学。

附图简要说明

图1是实施例10的结晶物质的差示扫描量热法图。

图2是实施例10的结晶物质的粉末X-射线衍射图。

图3是实施例18批次A的结晶物质的差示扫描量热法图。

图4是实施例18批次A的结晶物质的粉末X-射线衍射图。

图5是实施例18批次B的结晶物质的差示扫描量热法图。

图6是实施例18批次B的结晶物质的粉末X-射线衍射图。

图7是实施例18批次C的结晶物质的差示扫描量热法图。

图8是实施例18批次C的结晶物质的粉末X-射线衍射图。

图9是实施例18批次D的结晶物质的差示扫描量热法图。

图10是实施例18批次D的结晶物质的粉末X-射线衍射图。

图11是实施例18批次E的结晶物质的差示扫描量热法图。

图12是实施例18批次E的结晶物质的粉末X-射线衍射图。

详细描述

本发明的不同实施方案如本文所述。应当理解的是，每个实施方案中所具体给出的特征可以与其它具体给出的特征组合，从而得到本发明的另外的实施方案。本发明的多种(例举的)实施方案也如本文所述。

在一个方面，本发明提供了式(I)的化合物：

其中

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝H且R³＝H；

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH；或

R⁴＝-CH₂OH，且R⁵＝H；

或者

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝H或-CH₃，且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵连接并且形成-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH；

或者

R²＝H且R⁴＝H；且

R³和R⁵连接并且形成基团或基团

或者

R³＝H且R⁵＝H；且

R²和R⁴连接并且形成基团

或其药学上可接受的盐。

在该方面的一个优选的实施方案中，提供了式(I)的化合物，其中

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝H且R³＝H；

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH；或

R⁴＝-CH₂OH，且R⁵＝H；

或者

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂CH₂OH、-CH₂CH(OH)CH₃或-CH₂C(OH)(CH₃)₂且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵连接并且形成-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH；

或者

R²＝H且R⁴＝H；且

R³和R⁵连接并且形成基团或基团

或者

R³＝H且R⁵＝H；且

R²和R⁴连接并且形成基团

或其药学上可接受的盐。

在该方面的一个更优选的实施方案中，提供了式(I)的化合物，其中

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝H且R³＝H；

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH；或

R⁴＝-CH₂OH，且R⁵＝H；

或者

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵连接并且形成-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH；

或其药学上可接受的盐。

在另一个优选的实施方案中，提供了式(I)的化合物

其中

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝H且R³＝H；

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH；或

R⁴＝-CH₂OH，且R⁵＝H；

或者

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵连接并且形成-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

在另一个供替代选择的优选的实施方案中，提供了式(I)的化合物

其中

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²和R³＝H；

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH；或

R⁴＝-CH₂OH，且R⁵＝H；

或者

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH、-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝R⁴＝H；

R²和R⁵连接并且形成-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

就上面举出的实施方案中的任意一个中的式(I)而言，提供了下面的详细描述。

R ^1a

在一个实施方案中，R^1a是H。

在另一个实施方案中，R^1a是-CH₃。

在一个优选的实施方案中，R^1a是H。

本发明的另外的实施方案如下所述。

在一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵＝-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

在还有另一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在还有另一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，优选地，

其中R^1a＝H或-CH₃

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH且R⁵＝H，或

R⁴＝H且R⁵＝CH₃或-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，优选地，

其中R^1a＝H或-CH₃

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂CH₂OH，且

R⁵＝H，

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH、-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝R⁴＝H

R²和R⁵＝-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH、-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝R⁵＝H或-CH₃；

或者

R⁴＝R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH、-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在还有另一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH、-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，优选地，

其中R^1a＝H或-CH₃

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH且R⁵＝H，或

R⁴＝H且R⁵＝CH₃或-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，优选地，

其中R^1a＝H或-CH₃

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃，且

R⁵＝H，

或其药学上可接受的盐。

在另一个优选的实施方案中，

其中R^1a＝H或-CH₃

R²＝-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃，且

R⁵＝H，

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，提供了下面的式(IA’)的化合物：

其中R^1a、R²、R³、R⁴和R⁵如上述给出的实施方案中任意一个中所述。

在一个实施方案中，R^1a可以是氢，从而提供了下面的式(IA)的化合物：

其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在式(IA)的化合物的一个实施方案中，

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在式(IA)的化合物的另一个实施方案中，

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH且R⁵＝H，或

R⁴＝H且R⁵＝CH₃或-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

在式(IA)的化合物的另一个实施方案中，

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂CH₂OH，且

R⁵＝H，

或其药学上可接受的盐。

在式(IA)的化合物的另一个实施方案中，

R²＝-CH₃；

R³＝H；

R⁴＝-CH₂CH₂OH，且

R⁵＝H，

或其药学上可接受的盐。

或者，在一个其中R^1a可以是氢的实施方案中，提供了下面的式(IA)的化合物：

其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH、-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在式(IA)化合物的一个实施方案中，

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

在式(IA)化合物的另一个实施方案中，

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂OH且R⁵＝H，或

R⁴＝H且R⁵＝CH₃或-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

在式(IA)化合物的另一个实施方案中，

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃，且

R⁵＝H，

或其药学上可接受的盐。

在式(IA)化合物的一个优选的实施方案中，

R²＝-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃，且

R⁵＝H，

或其药学上可接受的盐。

提供了如下的另外的实施方案(列举的)：

实施方案1.式(I)的化合物

其中

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝H且R³＝H；

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH；或

R⁴＝-CH₂OH，且R⁵＝H；

或者

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵连接并且形成-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH；

或者

R²＝H且R⁴＝H；且

R³和R⁵连接并且形成基团或基团

或者

R³＝H且R⁵＝H；且

R²和R⁴连接并且形成基团

或其药学上可接受的盐。

实施方案2.根据实施方案1所述的化合物，其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵＝-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

实施方案3.根据实施方案1或实施方案2所述的化合物，其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

实施方案4.根据实施方案1至3中任意一项所述的化合物，其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

实施方案5.根据实施方案1至4中任意一项所述的化合物，其是式(IA’)的化合物

其中R^1a＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

实施方案6.根据实施方案1所述的化合物，其是式(IA)的化合物：

其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

实施方案7.根据实施方案6所述的化合物，其中

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

实施方案8.根据实施方案7所述的化合物，其中

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH且R⁵＝H，或

R⁴＝H且R⁵＝CH₃或-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

实施方案9.根据实施方案8所述的化合物，其中

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃或-CH₂CH₂OH；且

R⁵＝H；

或其药学上可接受的盐。

实施方案10.根据实施方案1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其选自：

(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-甲基-唑烷-2-酮，

(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-羟基甲基-5,5-二甲基-唑烷-2-酮，

外消旋3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-4,5'-联嘧啶-6-基)-4-(羟基甲基)-4-甲基唑烷-2-酮，

(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-4,5'-联嘧啶-6-基)-4-(羟基甲基)-4-甲基唑烷-2-酮(未测定绝对立体化学)，

(R)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-4,5'-联嘧啶-6-基)-4-(羟基甲基)-4-甲基唑烷-2-酮(未测定绝对立体化学)，

(3aS,7aS)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-六氢-苯并唑-2-酮，

(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-甲氧基甲基-唑烷-2-酮，

(4S,5S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-羟基甲基-5-甲基-唑烷-2-酮，

(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-羟基甲基-唑烷-2-酮，

(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-(D8-吗啉-4-基)-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-羟基甲基-5-甲基-唑烷-2-酮，

(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-(2-羟基-乙基)-唑烷-2-酮，

(4S,5R)-3-[2'-氨基-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基]-4-羟基甲基-5-甲基-唑烷-2-酮，

甲酸(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-甲基-2-氧代-唑烷-4-基甲基酯，

(S)-3-[2'-氨基-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基]-4-甲基-唑烷-2-酮，

(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-羟基甲基-唑烷-2-酮，

(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-羟基甲基-4-甲基-唑烷-2-酮，

(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-甲基-唑烷-2-酮，

(S)-3-(2’-氨基-2-D8-吗啉代-4’-(三氟甲基)-[4,5’-联嘧啶]-6-基)-4-甲基唑烷-2-酮，

(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-羟基甲基-5-甲基-唑烷-2-酮，

(4S,5S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-羟基甲基-4-甲基-唑烷-2-酮，

(R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-羟基甲基-唑烷-2-酮，

(3aR,6aR)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)四氢呋喃并[3,4-d]唑-2(3H)-酮，

外消旋(3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-6-羟基六氢-2H-环戊二烯并[d]唑-2-酮，

(3aR,6R,6aR)-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-6-羟基六氢-2H-环戊二烯并[d]唑-2-酮，

(3aS,6S,6aS)-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-6-羟基六氢-2H-环戊二烯并[d]唑-2-酮，和

(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-5-(2-羟基乙基)-4-甲基唑烷-2-酮。

实施方案11.根据实施方案1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其选自

(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-羟基甲基-5-甲基-唑烷-2-酮，和

实施方案12.化合物，其选自

实施方案13.化合物(4S,5R)-3-[2'-氨基-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基]-4-羟基甲基-5-甲基-唑烷-2-酮。

实施方案14.化合物(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-羟基甲基-5-甲基-唑烷-2-酮。

实施方案15.化合物(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-5-(2-羟基乙基)-4-甲基唑烷-2-酮。

实施方案16.实施方案13、实施方案14或实施方案15的化合物的药学上可接受的盐。

在本发明的还有另一个方面，提供了得自实施例10的结晶形式的化合物，其具有与图2中所示的X-射线粉末衍射图谱基本相同的X-射线粉末衍射图谱。

在本发明的还有另一个方面，提供了得自实施例18批次A的结晶形式的化合物，其具有与图4中所示的X-射线粉末衍射图谱基本相同的X-射线粉末衍射图谱。

在本发明的还有另一个方面，提供了得自实施例18批次B的结晶形式的化合物，其具有与图6中所示的X-射线粉末衍射图谱基本相同的X-射线粉末衍射图谱。

在本发明的还有另一个方面，提供了得自实施例18批次C的结晶形式的化合物，其具有与图8中所示的X-射线粉末衍射图谱基本相同的X-射线粉末衍射图谱。

在本发明的还有另一个方面，提供了得自实施例18批次D的结晶形式的化合物，其具有与图10中所示的X-射线粉末衍射图谱基本相同的X-射线粉末衍射图谱。

在本发明的还有另一个方面，提供了得自实施例18批次E的结晶形式的化合物，其具有与图12中所示的X-射线粉末衍射图谱基本相同的X-射线粉末衍射图谱。

涉及X-射线衍射峰位置时术语“基本相同”是指考虑典型的峰位置和强度的差异性。例如，本领域技术人员应当理解的是，峰位置(2θ)将体现一些仪器间的差异性，其典型地为0.2°。此外，本领域技术人员应当理解的是，相对峰强度也将体现仪器间的差异性以及由结晶度、优选方向、制备的样品表面和本领域技术人员公知的其它因素导致的差异性，且相对峰强度仅应当被视为定性量度。

通过本文所述的具体的例举的化合物提供了具体的实施方案。

本发明提供了用于治疗其中PI3K促进本文所述的疾病的发病机制的疾病、病症和/或障碍的化合物及其药物组合物。

本发明的化合物可以通过包括与化学领域公知的那些方法类似的方法在内的合成途径、特别是参考本文所包含的描述来合成。起始材料一般可获自商业来源例如Aldrich Chemicals(Milwaukee,Wis.)或者可容易地用本领域技术人员公知的方法制备(例如，通过以下文献中概括性描述的方法制备：Louis F.Fieser和Mary Fieser,Reagents for organic Synthesis,第1-19卷,Wiley,纽约(1967-1999版本)，或Beilsteins Handbuch derorganischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,柏林，包括增刊(也可以通过Beilstein在线数据库得到))。

为了举例说明，下面描绘的反应流程图提供了用于合成本发明的化合物以及关键中间体的可能途径。关于各反应步骤的更详细描述，参见下面的实施例部分。本领域技术人员可以理解，其它合成途径也可以用于合成本发明的化合物。尽管在下面的流程图中描绘了并且在下文中讨论了具体的起始材料和试剂，但是可以容易地替代为其它起始材料和试剂，从而提供各种衍生物和/或反应条件。此外，可以参考本公开内容、使用本领域技术人员公知的常规化学方法进一步修饰通过下面所述的方法制备的许多化合物。

在本发明的化合物的制备中，保护中间体的远端官能团(例如伯或仲氨基、羟基或羧基)可能是必要的。对这类保护的需求将根据远端官能团的性质和制备方法的条件而改变。适合的氨基保护基(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苄氧基羰基(CBz)和9-芴基亚甲基氧基羰基(Fmoc)。适合的羟基保护基包括三烷基硅烷基醚，其中一个或两个烷基可以被苯基替代。适合的羧基保护基(C(O)O-Pg)包括烷基酯(例如甲基、乙基或叔丁基)、苄基酯、硅烷基酯等。对这类保护的需求可以容易地由本领域技术人员确定。关于保护基及其应用的概括性描述，参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,纽约,1991。

流程图1(如下)描述了用于制备式(IA’)的化合物的可能途径，其中R¹-R⁵如上文所定义。在存在保护基的情况下，加入脱保护步骤以便将被保护的IA’转化成IA’。

或者，式(IA’)的化合物可以通过颠倒流程图I中所示的步骤来合成，即先进行Suzuki偶联，然后进行与Ib的Buchwald反应。

对于那些不可商购获得的唑烷-2-酮Ib，下面的流程图2提供了用于制备那些所述中间体的方法，其中R²-R⁵如上文所定义。如果在R²-R⁵中存在伯羟基，则在先进行选择性保护步骤，如流程图3中所例举的那样。可以将胺基团在另外的在先步骤中被保护，如流程图4中所示的那样，其中还给出了不同的羟基保护基。

流程图3中被保护的产物可以如流程图2中所概括性给出的并且如流程图5中所具体给出的那样用三光气环化，得到Ib中间体的实例。

流程图4中双重保护的产物可以如流程图6中所给出的那样用氢化钠环化，得到Ib中间体的实例。

流程图7描述了获得流程图4中双重保护的产物的一个供替代选择的途径，然后可以将其如已经在流程图6中所给出的那样环化。

下面的流程图8提供了硼酸酯中间体B的合成。

如流程图1中所给出的那样流程图6中环化产物与4,6-二氯-嘧啶中间体(例如中间体A或来自步骤10.1的产物，两者均在下文中提及)的反应可以得到另外的中间体，具体中间体如下所示：

如流程图1中所给出的那样所形成的中间体与中间体B的另外的反应生成如下的被保护的产物IA’：

因此，本发明的中间体化合物包括下式的化合物：

其中R^1a和R⁴如本文前面所定义，Hal是卤素，例如氯，且PG是保护基，例如形成例如三烷基硅烷基醚的硅烷基保护基，其中一个或两个烷基可以被苯基替代，例如烷基-二苯基-硅烷基醚保护基，特别是二甲基-叔丁基-硅烷基或二苯基-叔丁基-硅烷基。

本发明的另一种中间体化合物包括下式的化合物：

如果R²-R⁵中存在伯羟基，那么关于上文所描绘的其它类似地被保护的中间体化合物的情况，可以参考本文的通式。这类被保护的化合物也包括在本公开物中。例如如果R⁴是基团–CH₂CH₂OH，则它可以被保护，从而得到其中R⁴是–CH₂CH₂O-PG、其中PG如上文所定义的化合物，例如：

生成例如终产物的被保护的产物IA’的叔丁基二苯基硅烷基或叔丁基二甲基硅烷基保护的羟基(通常的硅烷基醚保护)的脱保护可以使用HF.吡啶(例如在THF中)或HCl来实现。

本发明的化合物或本文使用的中间体可以以化合物本身的形式(例如游离碱形式)或以其盐形式被分离和使用，条件是例如化合物的pKA值允许成盐。本文所用的术语“盐”是指本发明的化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保持了本发明的化合物的生物学有效性和性质并且典型地不具有生物学上或其它方面的不希望的特性的盐。本发明的化合物能借助氨基的存在形成酸加成盐。优选本发明的化合物本身。

无机酸或有机酸形成的药学上可接受的酸加成盐包括例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。

用于盐衍生的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

用于盐衍生的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。药学上可接受的碱加成盐可以用无机碱或有机碱形成。

用于盐衍生的无机碱包括例如铵盐和来自周期表I-XII族的金属。在某些实施方案中，盐可以衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适合的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。

用于盐衍生的有机碱包括例如伯、仲和叔胺、取代的胺(包括天然存在的取代的胺)、环状胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星(benzathine)、胆碱酸盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。

在可以形成本发明的药学上可接受的盐的情况下，它们可以由母体化合物的碱性或酸性部分通过常规化学方法合成。一般而言，这类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量的适宜的碱(例如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应或通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量的适宜的酸反应来制备。这类反应典型地在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中进行。一般而言，如果可行，使用非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是合乎需要的。另外的适合的盐的列表可见于例如“Remington's Pharmaceutical Sciences”,第20版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,(1985)以及Stahl和Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use”(Wiley-VCH,Weinheim,德国,2002)。

除非另有说明，否则本文给出的任意结构式还旨在表示未标记的形式。所述化合物的具有氘的同位素标记的形式被表示为用作为取代基的氘替换H。可以制备其它的同位素标记的本发明的化合物，其具有本文给出的结构式所描绘的结构，不同的是一个或多个原子被具有所选择的原子质量或质量数的原子代替。可掺入本发明的化合物的同位素的实例包括：氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别是²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl、¹²⁵I。本发明包括各种同位素标记的本文所定义的化合物，例如其中存在放射性同位素如³H、¹³C和¹⁴C的那些。这类同位素标记的化合物可用于代谢研究(使用¹⁴C)、反应动力学研究(例如使用²H或³H)、检测或成像技术，例如正电子发射断层成象术(PET)或单光子发射计算机断层成象术(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射性治疗。特别地，对于PET或SPECT研究，¹⁸F或标记的化合物可能是特别合乎需要的。一般而言，可以通过进行在流程图中或在下面所述的实施例和制备例中公开的操作、用可容易得到的同位素标记的试剂替换非同位素标记的试剂例如氘标记的吗啉(D8-吗啉)来制备同位素标记的本发明的化合物。

此外，被更重的同位素、特别是氘(即²H或D)取代可因更大的代谢稳定性而提供某些治疗优势，例如增加的体内半衰期、降低的剂量需求、降低的CYP抑制作用(竞争性的或时间依赖性的)或治疗指数的改善。例如，用氘取代可以调节非氘代化合物的不希望的副作用，例如竞争性CYP抑制作用、时间依赖性CYP失活等。应当理解的是，在本文的上下文中氘被视为本发明的化合物的取代基。这类更重的同位素、特别是氘的浓度可以用同位素富集因子来定义。本文所用的术语“同位素富集因子”意指同位素丰度与具体给定的同位素的天然丰度之比。如果本发明的化合物中的取代基是所示的氘，则这种化合物对每个指定的氘原子而言具有至少3500(在每个指定的氘原子上52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)的同位素富集因子。

此外，包括它们的盐在内的本发明的化合物也可以以其水合物的形式被获得或者包括用于其结晶的其它溶剂。本发明的化合物可以固有地或经设计与药学上可接受的溶剂(包括水)形成溶剂合物。因此，本发明既包括溶剂化的形式，也包括非溶剂化的形式。这类溶剂分子是制药领域中常用的那些，已知它们对于接受者是无害的，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子是水的复合物。术语“溶剂合物”是指本发明的化合物(包括其药学上可接受的盐)与一个或多个掺入晶格结构中的溶剂分子的分子复合物。溶剂合物中的溶剂分子可以以有规则的排列和/或无序的排列存在。溶剂合物可以包含化学计量的或非化学计量的溶剂分子。例如，具有非化学计量的溶剂分子的溶剂合物可以因溶剂从溶剂合物中部分缺失而产生。溶剂合物可以以在晶格结构内包含超过一个本发明的分子或化合物的二聚体或寡聚体的形式出现。

包括其盐、水合物和溶剂合物在内的本发明的化合物可以固有地或通过设计形成多晶型物。

本文所用的“多晶型物”是指具有相同化学组成但形成结晶的分子、原子和/或离子空间排列不同的晶形。

本文所用的“无定形”是指不是结晶性的分子、原子和/或离子的固体形式。无定形固体不展示出确定的X-射线衍射图谱。

本发明的药学上可接受的溶剂合物包括其中结晶的溶剂可以是同位素取代的、例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO的那些。

本领域技术人员可以认定的是，本发明的化合物含有手性中心，且因此以异构体形式存在。本文所用的术语“异构体”是指具有相同分子式、但原子排列和构型不同的不同化合物。此外，本文所用的术语“旋光异构体”或“立体异构体”是指本发明的给定化合物可以存在的各种立体异构构型中的任意一种且包括几何异构体。本文所用的术语“异构体”是指具有相同分子式、但原子排列和构型不同的不同化合物。此外，本文所用的术语“旋光异构体”或“立体异构体”是指对于指定的本发明化合物可以存在的任意不同立体异构体构型。应理解的是，取代基可以连接在碳原子的手性中心上。因此，本发明的化合物包括通过在本发明的化合物的结构描绘中在手性中心上给出立体特异性排列而表示的对映体，其中虚楔形键表示连接的取代基或原子位于平面以下，实楔形键表示连接的取代基或原子位于平面以上。

“对映体”是互为不可叠加镜像的一对立体异构体。一对对映体的1:1混合物是“外消旋”混合物。在适宜的情况下，该术语用于指外消旋混合物。

“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子、但是不互为镜像的立体异构体。

绝对立体化学是根据Cahn-lngold-Prelog R-S系统来规定的。当一种化合物是纯对映体时，每个手性碳上的立体化学可以用R或S来说明。拆分的其绝对构型不明的化合物可以根据它们在钠D线波长下旋转平面偏振光的方向(右旋-或左旋-)而被指定为(+)或(-)。本文所述的某些化合物含有一个或多个不对称中心或轴，因此可以产生对映体、非对映体和可以在绝对立体化学上被定义为(R)-或(S)-的其它立体异构形式。

本发明的化合物的任何不对称碳原子(例如碳等)可以以外消旋或对映体富集的形式、例如(R)-或(S)-构型存在。在某些实施方案中，每个不对称原子在针对特定不对称原子(例如手性碳)所述的(R)-或(S)-构型中具有至少50％对映体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％对映体过量或至少99％对映体过量。

因此，本发明的化合物可以是基本上纯的对映体的形式。

任何所得的异构体混合物可以根据组分的理化差异被分离成纯的或基本上纯的旋光异构体，例如通过色谱法和/或分级结晶来分离。

可以使用手性合成子或手性试剂来制备或使用常规技术来拆分旋光(R)-和(S)-异构体。任何所得的终产物或中间体的外消旋物可以用已知方法被拆分成旋光对映体。例如，已知方法包括分离用旋光酸或碱获得的非对映体盐并释放旋光酸或碱化合物。特别地，因此碱性部分可被用于将本发明的化合物拆分成其旋光对映体，例如通过分级结晶用旋光酸例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O'-对-甲苯酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸形成的盐来拆分。外消旋产物也可以通过手性色谱法、例如使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC)来拆分。

如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，则环烷基取代基可具有顺式-或反式-构型。还包括所有互变异构形式。

含有能用作氢键供体和/或受体的基团的本发明的化合物能与适合的共晶形成剂形成共晶。可以通过已知的共晶形成操作由本发明的化合物制备这些共晶。这类操作包括研磨、加热、共升华、共熔或在结晶条件下使本发明的化合物在溶液中接触共晶形成剂并分离由此形成的共晶。适合的共晶形成剂包括WO 2004/078163中所述的那些。因此，本发明还提供了包含本发明的化合物的共晶。

式(I)的化合物抑制PI3激酶(PI3K)，因此可用于治疗蛋白激酶或脂激酶(lipid kinase)依赖性疾病，尤其是依赖于I类PI3激酶、即PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ或者其各激酶成员中的一种或多种或者所述激酶的任意两种或更多种的组合的疾病。

抑制超过一种I类PI3K同工型(α、β、δ和γ)的活性、特别是对IA类成员p110a、p110b和p110d且任选地以及IB类成员p110g基本上等效的化合物被认为是有益的，因为与具有独特特异性、例如对PI3K I类家族的一个成员的特异性的化合物相比，这类化合物被认为具有避免由通过其它同工型的途径再缠绕造成的适应机制的能力。“等效”意指化合物以彼此相当的程度抑制几种同工型，例如如在本文所述的酶或细胞测定法中所测定的那样。

PI3K同工型中至少一种的抑制效力增加(即，在更低的浓度下抑制至少一种PI3K同工型)也可能是有利的。例如，在无PTEN肿瘤的情况中，尽管驱动同工型是p110b，但是完全功效可能需要其它IA类同工型的参与。例如，对α和β同工型的效力可能是有利的。

还需要有效抑制PI3Kα激酶、例如用于治疗主要由编码p110a的基因的致癌形式(例如PIK3CA H1047R或E545K)驱动的癌症以及显示PIK3CA拷贝数增加的肿瘤的化合物。

合乎需要的是，本发明的化合物表现出所述的PI3激酶活性，但不表现出对mTOR的活性，或者至少表现出有利的与mTOR相比抑制一种或多种I类PI3激酶的选择性。例如，显示出与mTOR相比有利于一种或多种PI3K同工型(例如至少两种、优选三种，例如α、β和δ同工型)的选择性抑制作用的化合物是合乎需要的，因为mTOR抑制作用通常减小安全窗，更尤其是当化合物比抑制PI3K更强地抑制mTOR时(不利的比例)。

此外，具有减少的脱靶效应或者不具有脱靶效应、例如不具有微管蛋白结合的PI3K抑制剂是期望的，因为这类效应可能导致与中靶PI3K抑制作用无关的毒性作用，因此这类化合物可能需要额外谨慎地给药控制，以确保治疗作用是可控的且可归因于PI3K抑制。当用本文所述的操作测定时，本发明的化合物表现出弱的脱靶效应或者观察不到脱靶效应(微管蛋白结合)的化合物。

期望的是抑制超过一种I类PI3K同工型(α、β、δ和γ)的活性、特别是对IA类成员p110a、p110b和p110d且任选地以及IB类成员p110g基本上等效的、并且另外还具有减少的脱靶效应或不具有脱靶效应、例如不具有微管蛋白结合或具有减少的微管蛋白结合的化合物。

需要寻求表现出改善的对至少一种(例如PI3Kα)、但尤其是两种(例如PI3Kα和PI3Kβ)或三种(例如PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ)或所有四种1类PI3K(PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ)的抑制作用以及减少的脱靶效应(特别是不存在脱靶效应)(例如，减少的微管蛋白结合和不存在微管蛋白结合)的化合物。期望地，这些化合物还显示出与mTOR相比有利于一种或多种PI3K同工型(例如至少两种，优选三种，例如α、β和δ同工型)的选择性抑制的化合物是合乎需要的。

因此，在另一个方面，本发明的化合物可用于(例如制备药剂以用于)治疗与抑制或拮抗个体(例如哺乳动物、优选人)中PI3激酶相关的疾病、病症或障碍。由于与PI3激酶抑制的相关性，因此本发明的化合物被认为可用于治疗增殖性疾病，例如癌症。本发明的化合物治疗的具体疾病/病症包括良性或尤其是恶性肿瘤、实体瘤、脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳(breast)癌、胃癌(尤其是胃肿瘤)、食道癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌(例如非小细胞肺癌、小细胞肺癌)、阴道癌、甲状腺癌、肉瘤、成胶质细胞瘤、多发性骨髓瘤或胃肠癌、尤其是结肠癌或结肠直肠腺癌、或头和颈肿瘤、其它疾病例如考登综合征、Lhermitte-Duclos病和Bannayan-Zonana综合征、(或其中PI3K/PKB途经被异常活化的疾病)、前列腺增生、瘤形成、尤其是上皮特性的瘤形成、优选乳腺癌(mammary carcinoma)或鳞状细胞癌、B-细胞恶性病例如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、浆细胞性骨髓瘤和霍奇金淋巴瘤(NH)或白血病。所述化合物理想地能导致肿瘤消退和预防肿瘤转移的形成和转移(还有微转移)的生长。还可以使用式(I)的化合物治疗其中涉及几种或尤其是各脂激酶和/或(另外的)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的免疫系统疾病。

除非本文另有说明或者上下文清楚地有相反含义，否则本文所用的术语“一个”、“一种”、“该/所述”以及本发明的上下文中(尤其是在权利要求书的上下文中)所使用的类似术语应理解为既包括单数，又包括复数。

除非本文另有说明或者上下文清楚地有相反含义，否则本文所述的所有方法可以以任意适合的顺序进行。本文提供的任意和所有实施例或举例性语言(例如，“例如”、“如”)的使用仅仅旨在更好地举例说明本发明，不对在另外部分请求保护的本发明的范围构成限制。

本发明的化合物典型地以药物组合物(例如本发明的化合物和至少一种药学上可接受的载体)的形式使用。

因此，在另一个方面，本发明提供了包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。

本发明的化合物可以以无定形形式在组合物中被提供。本发明的化合物可以以其游离形式、即不是以盐形式(游离碱形式)在组合物中被提供。本发明的化合物可以以其游离形式、即不是以盐形式(游离碱形式)在组合物中被提供，并且其也是无定形形式。

如本领域技术人员已知的，本文所用的术语“药学上可接受的载体”包被广泛认为是安全的(GRAS)溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂)、等张剂(isotonic agent)、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料、缓冲剂(例如马来酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、碳酸氢钠、磷酸钠等)等以及其组合(参见例如Remington's PharmaceuticalSciences,第18版,Mack Printing Company,1990,第1289-1329页)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则其在治疗或药物组合物中的应用将被考虑。就本发明的目的而言，溶剂合物和水合物被视为包含本发明的化合物和溶剂(即溶剂合物)或水(即水合物)的药物组合物。

制剂可以用常规溶解和混合操作来制备。例如，将原料药(即，本发明的化合物或所述化合物的稳定化形式(例如，与环糊精衍生物或其它已知复合剂的复合物))在存在一种或多种上述赋形剂的情况下溶解在适合的溶剂中。典型地将本发明的化合物配制成药物剂型以提供易控的药物剂量并为患者提供优美的且易操控的产品。

药物组合物可被配制用于特定的施用途径如口服施用、肠胃外施用和直肠施用等。另外，本发明的药物组合物可被配制成固体形式(包括、但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂或栓剂)或液体形式(包括、但不限于溶液、混悬剂、乳剂)。药物组合物可经受常规药学操作如灭菌和/或可含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及辅剂(adjuvant)如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂和缓冲剂等。

典型地，药物组合物是包含活性成分以及以下物质的片剂或明胶胶囊剂：

a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；

b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇；对于片剂而言，还有

c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要的话，还有

d)崩解剂，例如淀粉类、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；和/或

e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。

可以按照本领域已知的方法给片剂包薄膜衣或肠溶衣。

可以使用活性成分的溶液，还可以使用其混悬液，尤其是等张的水性溶液或混悬液，可能的情况是，例如在冻干组合物的情况中，其仅包含活性成分或者包含活性成分以及载体，例如甘露醇，以便在使用前制备这类溶液或混悬液。药物组合物可以被灭菌和/或可以包含辅剂，如防腐剂、稳定剂、湿润剂和/或乳化剂、稳定剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂；并且以本身已知的方式、例如通过常规的溶解或冻干方法来制备。所述溶液或混悬液可以包含增加粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。

在油中的混悬液包含常规用于注射目的植物油、合成或半合成油作为油组分。因此尤其可以提及的是液体脂肪酸酯，它们含有作为酸组分的具有8-22个、尤其是12-22个碳原子的长链脂肪酸例如月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸或者相应的不饱和酸例如油酸、反油酸、芥酸、巴西酸(brasidic acid)或亚油酸，如果需要，可加入抗氧化剂，例如维生素E、β-胡萝卜素或3,5-二-叔丁基-4-羟基甲苯。这些脂肪酸酯的醇组分具有最多6个碳原子，并且是单-或多-羟基、例如单-、二-或三-羟基醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或者其异构体，还有尤其是乙二醇和甘油。因此提及下列脂肪酸酯的实例：油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、"Labrafil M2375"(聚氧乙烯甘油三油酸酯,Gattefossé,巴黎),"Miglyol812"(链长为C₈-C₁₂的饱和脂肪酸的甘油三酯,Hüls AG,德国)，还有尤其是植物油，例如棉子油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、豆油，更尤其是花生油。

注射组合物是在无菌条件下以常规方式制备的；这同样适用于将组合物引入安瓿或小瓶中和密封容器。

用于口服施用的药物组合物可以通过以下方法得到：合并活性成分与固体载体，如果需要的话将所得混合物制粒，并且如果需要或必要的话在加入适宜的赋形剂后，将混合物加工成片剂、糖衣丸芯或胶囊剂。也有可能将它们掺入塑料载体中，以使得活性成分以测量的量进行扩散或释放。

用于口服施用的适合的组合物包括片剂、锭剂、水性或油性混悬液、可分散的粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊剂或糖浆剂或酏剂形式的有效量的本发明的化合物。用于口服使用的组合物根据本领域已知的用于制备药物组合物的任意方法制备，这类组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质，以提供美观的、适口的药物制剂。片剂可以含有活性成分以及与其混合的适合用于制备片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂。这些赋形剂是例如：惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂是无包衣的或通过已知技术包衣的，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，且由此提供历经较长期限的持续作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服使用的制剂可以是其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或白陶土混合的硬胶囊或其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的软胶囊的形式。

用于局部施用的药物组合物可以通过以下方法获得：将活性成分与液体载体(例如水性液体载体)混合以溶解或分散活性成分，以及另外任选的配制诸如溶剂/增溶剂、胶凝剂、油、稳定剂、缓冲剂和防腐剂等成分，以得到例如溶液、洗剂、乳膏剂、凝胶剂或软膏剂。用于局部施用的药物组合物可以被提供用于皮肤施用。用于局部施用的药物组合物可以包含约0.1％-约2％的活性成分，该活性成分尤其是式(I)的化合物，特别是本文各实施例中所述的化合物。

用于应用的药物组合物(或制剂)可根据用于施用药物的方法以多种方式进行包装。一般而言，用于分发的物品包括具有以适宜的形式配置于其中的药物制剂的容器。适合的容器是本领域技术人员公知的，包括诸如瓶(塑料瓶和玻璃瓶)、安瓿、塑料袋、金属圆筒等物品。容器还可包括安全防护装置(tamper-proof assemblage)以防止轻率地获得包装内容物。此外，容器还具有配置于其上的描述容器内容物的标签。所述标签还可包括适宜的警告。

包含治疗有效量的本发明的化合物的药物组合物可以被配制用于肠胃外施用。药物组合物(例如静脉内(iv)制剂)可经受常规药学操作如灭菌和/或可含有本领域技术人员已知的常规的惰性稀释剂或缓冲剂以及辅剂如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂和缓冲剂。

本发明还提供了包含本发明的化合物作为活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可以有助于某些化合物的降解。本发明的无水药物组合物和剂型可用无水或含有低水分含量的成分和低水分或低湿度条件来制备。可以制备和储存无水药物组合物以便维持其无水性质。因此，可以用已知防止与水接触的材料来对无水组合物进行包装，以便它们能被包括在适合的制剂盒中。适合的包装的实例包括但不限于气密性密封的箔、塑料、单位剂量容器(例如，小瓶)、泡罩包装和窄条(strip)包装。

本发明还提供了包含一种或多种降低作为活性成分的本发明的化合物分解速度的物质的药物组合物和剂型。这类物质在本文中也称为“稳定剂”，其包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。

本发明的化合物、特别是本文各实施例中所述的化合物可以以无定形形式被提供。

本发明的化合物、特别是本文各实施例中所述的化合物可以被例如如下配制成标准混悬液、纳米混悬液和固体分散体。

标准混悬液:

1.)称量所需量的实施例18批次E的结晶物质，目标是制剂浓度为3mg/ml。

2.)然后将实施例18批次E的结晶物质分散在0.5％[w/w]羧甲基纤维素/0.5％[w/w]吐温80/水中

3.)将混悬液涡旋振荡以匀化

4.)使用探针超声仪超声处理混悬液以减小粒度(2min)

纳米混悬液:

1.)将32mg实施例18批次E的结晶物质精确称重入定制的大理石研磨装置

2.)将2.148g0.2mm氧化锆研磨介质加入到研磨装置中

3.)将0.608ml1％[w/V]HPMC603(羟丙基甲基纤维素603级)/0.05％[/w]SDS(十二烷基硫酸钠)/水加入到研磨装置中

4.)封闭研磨装置并且放入旋转式研磨机

5.)以400rpm将样品研磨4h

6.)使用注射器收集纳米混悬液

固体分散体:

1.)将30mg实施例18批次E的结晶物质称重入冻干小瓶中

2.)将30mg HPMC603(羟丙基甲基纤维素603级)加入到同一小瓶中

3.)将5.6ml二烷加入到小瓶中。用盖子封闭小瓶

4.)在环境条件下将样品搅拌12h

5.)按照下面的条件冷冻干燥得到的溶液

当以固体分散体(所述固体分散体是例如通过以下方法制备的：将化合物与载体(例如聚合物，例如HPMC)和溶剂混合并且冷冻干燥该混合物(目的是提供无定形形式、而非结晶形式的化合物))形式提供本发明的化合物时，为了稳定的目的，可能有利的是增加载体的量与化合物的量之比，以避免放置时化合物重结晶。

在某些情况中，可能有利的是将本发明的化合物与至少一种另外的药物(或治疗剂)(例如抗增殖药或抗癌药或典型地用于化疗的辅助疗法)组合施用。可以将本发明的化合物与一种或多种另外的治疗剂同时施用、在其之前或之后施用。或者，可以将本发明的化合物与其它活性成分同时、在其之前或之后通过相同或不同的施用途径分别施用或者在相同的药物组合物中一起施用。适合的另外的抗癌药包括、但不限于：

HER2和HER3受体抑制剂：如近期在HER2阳性乳癌模型中所例举的，PI3K抑制将通过FoxO依赖性HER2/HER3转录诱导导致途径再活化，这提示了HER2抑制剂在该情况中的应用(Serra等人,2011Oncogene30；Chandarlapaty等人,2011Cancer Cell19；Chakrabarty等人2012,PNAS109)。例如曲妥珠单抗(以商标由Genentech/Roche销售)、帕妥珠单抗(pertuzumab)(以商标Perjeta^TM由Genentech/Roche销售)、来自Genentech/Roche的抗体-药物轭合物Trastuzumab Emtansine(T-DM1)、厄洛替尼(eriotinib)(以商标由Genentech/Roche销售)、吉非替尼(以商标Iressa^TM由AstraZeneca销售)、MOR10703、来那替尼(neratinib)(也称作HKI-272，(2E)-N-[4-[[3-氯-4-[(吡啶-2-基)甲氧基]苯基]氨基]-3-氰基-7-乙氧基喹啉-6-基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺，且描述在PCT公开号WO 05/028443中)、拉帕替尼或二甲苯磺酸拉帕替尼(以商标由GlaxoSmithKline销售)。这类组合可用于例如HER2阳性乳癌和HER2扩增的胃癌。作为治疗靶标，HER3(ErbB3)造成了具有无活性酪氨酸激酶的挑战，从而排除了ATP-模拟酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的效用。战胜该挑战是抗体介导的策略，其旨在阻断配体结合ErbB3(例如MM-121)或阻断ErbB3与ErbB2在过表达ErbB2的细胞中的二聚化(例如帕妥珠单抗)。

雌激素受体下调节剂/芳香酶抑制剂：例如氟维司群(以商品名销售)、来曲唑(以商标由Novartis销售)或依西美坦(以商标由Pfizer销售)。这类组合可用于治疗例如ER阳性乳癌。该组合的原理旨在解决PI3K相关的激素抗性。

促分裂原活化的蛋白激酶激酶(MEK)抑制剂：例如XL-518(Cas No.1029872-29-4，可从ACC Corp.获得)、AZD6244或司美替尼(selumetinib)(AstraZeneca)、GSK1120212(GlaxoSmithKline)、AZD8330(AstraZeneca)或MEK162。这类组合可用于治疗例如KRAS突变肺、结肠直肠癌(CRC)和胰腺癌。

Bcl2/BclXL抑制剂：例如ABT737(Abbott)。

抗雄激素药：例如尼鲁米特(以商品名和销售)、比卡鲁胺(以商品名销售)、氟他胺(以商品名Fulexin^TM销售)、MDV3100(Enzalutamide，以商品名由Medivation销售)和阿比特龙(以商品名由Janssen销售)。这类组合可用于治疗例如具有PTEN失活的激素依赖性前列腺癌。所述组合的原理旨在解决PI3K与雌激素受体途径之间的通讯。

热激蛋白90(HSP90)抑制剂：例如Tanespimycin(17-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素，也称作KOS-953和17-AAG，可从SIGMA获得，且描述在美国专利No.4,261,989中)和5-(2,4-二羟基-5-异丙基-苯基)-4-(4-吗啉-4-基甲基-苯基)-异唑-3-甲酸乙基酰胺(也称作AUY922，且描述在PCT公开号WO2004/072051中)。这类组合可用于治疗例如EGFR依赖性肺癌或用于抑制变得对EGR抑制剂不显疗效的EGRmut或用于HER2阳性乳癌或HER2阳性胃癌。

紫杉烷抗肿瘤药：例如卡巴他赛(Cabazitaxel)(1-羟基-7β,10β-二甲氧基-9-氧代-5β,20-环氧紫杉-11-烯-2α,4,13α-三基-4-乙酸酯-2-苯甲酸酯-13-[(2R,3S)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-2-羟基-3-苯基丙酸酯)、拉罗他赛(larotaxel)((2α,3ξ,4α,5β,7α,10β,13α)-苯甲酸4,10-双(乙酰氧基)-13-({(2R,3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-羟基-3-苯基丙酰基}氧基)-1-羟基-9-氧代-5,20-环氧-7,19-环紫杉-11-烯-2-基酯)；

抗有丝分裂药：例如多西他赛(以商品名由Sanofi-Aventis销售)，其可用于治疗乳癌。

植物生物碱：例如紫杉醇(以商品名Taxol和Onxal^TM销售)和蛋白结合的紫杉醇(以商品名销售)，其可用于治疗前列腺癌；长春碱(也称作硫酸长春碱、长春花碱和VLB，以商品名和销售)、长春新碱(也称作硫酸长春新碱、LCR和VCR，以商品名和Vincasar销售)和长春烯碱(以商品名销售)。

抗胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)抗体：例如Figitumumab(也称作CP-751,871，可从ACC Corp获得)和罗妥木单抗(robatumumab)(CASNo.934235-44-6)。

PARP(聚ADP-核糖聚合酶)抑制剂：例如BSI-201(iniparib)和olaparib。这类组合可用于例如解决PI3K抑制剂对DNA损伤结构的可能的诱导。

用于辅助疗法的适合的治疗剂包括类固醇、抗炎药、抗组胺药、止吐药和本领域技术人员公知的用于改善被治疗的罹患本文所述的疾病、病症或障碍的患者的护理质量的其它物质。

因为PI3K/Akt途经的活化驱动细胞存活，所以该途经的抑制与驱动癌细胞中细胞凋亡的疗法(包括放疗和化疗)组合可导致改善的响应(Ghobrial等人,CA Cancer J.Clin55:178-194(2005))。作为实例，PI3激酶抑制剂与卡铂的组合在体外增殖和细胞凋亡测定法中显示出了协同作用，并且在卵巢癌的异种移植物模型中显示出了体内肿瘤效力(Westfall和Skinner,Mol.Cancer Ther.4:1764-1771(2005))。可以将本发明的化合物与放疗联合施用。

本发明的化合物或其药物组合物可通过下列途径施用：肠内施用，例如鼻施用；直肠或口服施用；肠胃外施用，例如肌内或静脉内施用；或局部施用，例如皮肤施用。用于人的本发明的化合物或其药物组合物优选口服施用(例如以片剂形式口服施用)。

对于约50kg–约70kg的个体而言，本发明的药物组合物或组合可以是约1mg–约1000mg一种或多种活性成分的单位剂量，或者约1mg–约500mg或约1mg–约250mg或约1mg–约150mg或约0.5mg–约100mg或约1mg–约50mg一种或多种活性成分。对于约50kg–约70kg的个体而言，单位剂量也可以是约50mg–约1000mg一种或多种活性成分，或约50mg–约500mg或约50mg–约250mg或约50mg–约150mg或约50mg–约100mg活性成分。对于约50kg–约70kg的个体而言，单位剂量也可以是约100mg–约500mg一种或多种活性成分，或约200mg–约500mg或约300mg–约500mg或约300mg–约400mg活性成分。这些剂量可以作为总日剂量被提供，并且可以以单位剂量或以分次剂量被提供。剂量可以取决于用于递送一种或多种活性成分的具体剂型。一般而言，化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于个体的种类、体重、年龄和个体情况、所治疗的障碍或疾病或其严重性。剂量还可取决于活性成分在治疗的种属中的生物利用度。本领域普通技术的医师、药剂师、临床医生或兽医能容易地确定预防、治疗或抑制障碍或疾病进展所必需的活性成分各自的有效量。

上述剂量性质可以有利地使用哺乳动物例如小鼠、大鼠、狗、猴或离体的器官、组织和其制品在体外和体内试验中证实。本发明的化合物可以以溶液、例如水溶液(其是例如由10mM DMSO储备液制备的)的形式在体外应用，且可以在体内肠内、肠胃外、有利地静脉内(例如以混悬液或以水溶液的形式)应用。体外剂量可以在约10^-3摩尔－约10^-9摩尔浓度范围内。根据施用途经的不同，体内的治疗有效量可以在约0.1-约500mg/kg范围内或在约1-约100mg/kg范围内。

一般而言，给需要治疗的患者施用治疗有效量的本发明的化合物。术语本发明的化合物的“治疗有效量”是指将引起个体的生物学或医药响应的本发明化合物的量，所述响应例如是降低或抑制酶活性或蛋白质活性或蛋白质复合物活性，或者改善症状、缓解病症、减慢或延迟疾病进展，或者预防疾病等。

在还有另一个方面，提供了治疗哺乳动物的癌症的方法，其包括给需要这类治疗的哺乳动物施用有效量的本发明的化合物。

本文所用的术语“个体”是指动物。典型地，所述动物是哺乳动物。个体还指例如灵长类动物(例如人，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述个体是灵长类动物。优选地，所述个体是人。

本文所用的术语“抑制”是指减轻或抑制给定的病症、症状、或障碍、或疾病，或者显著减少生物学活性或过程的基线活性。

本文所用的术语“治疗”任意疾病或障碍或者任意疾病或障碍的“治疗”是指：(i)改善所述疾病或障碍(即，减慢或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发生)；(ii)缓解或改善至少一种物理参数，包括可能不是患者可辨别的那些物理参数；或(iii)预防或延迟所述疾病或障碍的发作或发生或进展。一般而言，术语“治疗”描述了以对抗疾病、病症或障碍为目的的对患者的处置和护理，包括施用本发明的化合物以防止症状或并发症的发作、缓解症状或并发症、或消除疾病、病症或障碍。

如本文所用的那样，如果个体会在生物学上、医学上或生活质量方面从这类治疗中获益，那么该个体是“需要”治疗的。

本发明的另一个方面是包含本发明的化合物和至少一种另外的治疗剂(或药物)的产品，其是组合制剂，用于同时、分别或相继使用在疗法中以增强细胞凋亡。

在本发明的组合疗法中，本发明的化合物和另外的治疗剂可以由相同或不同的制造商制备和/或配制。此外，本发明的化合物和另外的治疗剂(或药物)可以(i)在将组合产品发放给医师之前(例如，在包含本发明的化合物和另外的治疗剂的药盒的情况下)、(ii)在施用前即刻由医师本身(或在医师指导下)、(iii)由患者本身、例如在相继施用本发明的化合物和另外的治疗剂期间被一起用于组合疗法。

因此，本发明提供了本发明的化合物通过抑制或拮抗PI3K来治疗疾病或病症的用途，其中药剂被制备用于与另外的治疗剂一起施用。本发明还提供了另外的治疗剂的用途，其中药剂以本发明的化合物与另外的治疗剂的组合的形式被施用。

通过下面的实施例举例说明了本发明的实施方案。然而，应当理解的是，本发明的实施方案不限于这些实施例的具体内容，因为它们的其它变化形式是已知的或者对本领域技术人员而言在参考本公开内容的情况下是显而易见的。

实施例

除非另有规定，否则起始材料一般可从商品来源例如AldrichChemicals Co.(Milwaukee,Wis.)、Lancaster Synthesis,Inc.(Windham,N.H.)、Acros Organics(Fairlawn,N.J.)、Maybridge Chemical Company,Ltd.(Cornwall,英格兰)、Tyger Scientific(Princeton,N.J.)、Chem-ImpexInternational,Inc.(Wood Dale,IL)和AstraZeneca Pharmaceuticals(London,英格兰)获得。

下面的实施例中所用的缩写具有下面勒出的相应含义。

AcOH 乙酸

AlCl₃ 三氯化铝

API 大气压电离

Boc 叔丁氧基羰基

盐水饱和的(于室温)氯化钠溶液

br.s 宽单峰

ⁿBuOH 正丁醇

^tBu 叔丁基

CDI 羰基二咪唑

Celite Celite Corp.(World Minerals Inc.),Santa Barbara,CA,USA的基于硅藻土的过滤助剂的商标

CH₃CN 乙腈

conc. 浓

d 双峰

DCE 二氯乙烷

DCM 二氯甲烷

DEA 二乙胺

DIEA N,N-二乙基-异丙基胺

DMAP 4-二甲基氨基吡啶

DME 二甲氧基乙烷

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

ES-MS 电喷雾质谱法

Et 乙基

Et₃N 三乙胺

Et₂O 乙醚

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

H 小时

HPLC 高效液相色谱法

Hyflo Hyflo Super

iPr 异丙基

K₂CO₃ 碳酸钾

KOH 氢氧化钾

K₃PO₄ 磷酸钾

LAH 氢化铝锂

LC 液相色谱法

Me 甲基

MeI 甲基碘

MeOH 甲醇

MgSO₄ 硫酸镁

M 多重峰

min 分钟

mL 毫升

m.p. 熔点

MS 质谱法

NaH 氢化钠

NaHCO₃ 碳酸氢钠

Na₂CO₃ 碳酸钠

NaHMDS 六甲基二硅氮烷钠(sodium hexamethyldisilazane)

NaOH 氢氧化钠

Na₂SO₄ 硫酸钠

MgSO₄ 硫酸镁

NaOAc 乙酸钠

NBS N-溴琥珀酰亚胺

NH₄Cl 氯化铵

NH₄OH 氢氧化铵

NMR 核磁共振

POCl₃ 三氯氧磷(III)

RT 室温

R_f TLC保留因子

s 单峰

scCO₂ 超临界CO₂

t 三重峰

TBAF 氟化四丁基铵

TBDPSCl 叔丁基二苯基氯硅烷

TBME 叔丁基甲基醚

TEA 三乙胺

TEMPO 2,2,6,6-四甲基哌啶基氧基

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

TLC 薄层色谱法

TMS 三甲基硅烷基

TMSCl 三甲基氯硅烷

t_R 保留时间

TsCl 对甲苯磺酰氯

TsOH 对甲苯磺酸

UV 紫外

通用方法

1H-NMR测定是用Bruker Ultrashield^TM400(400MHz)、BrukerUltrashield^TM600(600MHz)或500MHz DRX Bruker CryoProbe(500MHz)光谱仪、使用或不使用三甲基硅烷作为内标来进行的。在四甲基硅烷的低场以ppm为单位报道化学位移(d-值)，以Hz为单位给出偶合常数(J)，将光谱分裂模式表示为单峰(s)、双峰(d)、双联双峰(dd)、三重峰(t)、四重峰(q)、多重峰或更多重叠信号(m)、宽信号(br)。在圆括号内给出溶剂。

TLC是用预涂布的硅胶60F₂₅₄玻璃板(Merck,Darmstadt,德国)、使用分别给出的溶剂系统进行的。一般用UV光进行显影(254nm)。

HPLC条件:

LC-MS1:

柱：Acquity HSS T3 2.1x50mm,1.8μm.流速:1.2mL/min。柱温:50℃。梯度：在1.4min中2％-98％B,98％达0.75min,在0.04min中98％-2％B，2％B达0.01min；A＝水+0.05％甲酸+3.75mM乙酸铵,B＝乙腈+0.04％甲酸

检测全扫描:215-350nm

LC-MS2:

柱：Acquity HSS T32.1x50mm,1.8μm。流速:1.2mL/min。柱温:50℃。梯度：在1.4min中2％-98％B，98％B达0.75min,在0.04min中98％-2％B，2％B达0.01min；A＝水+0.05％甲酸+0.05％乙酸铵,B＝乙腈+0.04％甲酸

检测全扫描:215-350nm

LC-MS3:

柱：Acquity HSS T32.1x50mm,1.8μm。流速:1.0mL/min。柱温:60℃。梯度：在1.4min中5％-98％B，98％B达0.75min,在0.04min中98％-5％B，5％B达0.01min；A＝水+0.05％甲酸+3.75mM乙酸铵,B＝乙腈+0.04％甲酸

检测全扫描:215-350nm

HPLC1:

柱：Chromolith性能RP18e4.6x100mm,流速:2.0mL/min。梯度：在4.5min中2％-100％B，100％B达1min,A＝水+0.1％TFA,B＝乙腈+0.1％TFA

检测：215nm

UPLC1:

柱：Acquity UPLC HSS T3C18,1.7μm2.1x50mm,流速:1.0mL/min。梯度：在1.5min中5％-100％B，100％B达1min,A＝水+0.1％TFA,B＝乙腈+0.1％TFA

检测：218nm

中间体A:4-(4,6-二氯-嘧啶-2-基)-吗啉

中间体A是可商购获得的或者可以使用下面的操作制备。

于165℃向2,4,6-三氯嘧啶(5.0mL,42.6mmol)在1,3,5-三甲基苯(80mL)中的溶液中滴加吗啉(4.83mL,55.4mmol)在1,3,5-三甲基苯(20mL)中的溶液，将混悬液在165℃搅拌30min。用H₂O、EtOAc和NaHCO₃处理反应混合物。用H₂O和盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。通过闪式色谱法(己烷/EtOAc,100:0→7:3)纯化残余物。将残余物在己烷中研磨，过滤，得到标题化合物(3.36g,33％).t_R:1.11min(LC-MS1)；ESI-MS:234.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

中间体B:5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-4-三氟甲基-嘧啶-2-基胺

在氩气下向来自步骤B.1的产物(16.2g,66.3mmol)、双(频哪醇合)二硼(bis(pinacolato)diboron)(18.5g,72.9mmol)和KOAc(19.5g,199mmol)在二烷(300mL)中的混悬液中加入PdCl₂(dppf)·CH₂Cl₂加合物(2.4g,2.98mmol)，将该混合物在115℃搅拌4h。将反应混合物冷却至50℃，用EtOAc处理。用Hyflo过滤得到的混悬液，用EtOAc洗涤。浓缩合并的滤液。将残余物混悬于2N NaOH，于室温搅拌5min，然后加入Et₂O和H₂O，通过Hyflo过滤二元混合物。分离滤液各相。用HCl4N将得到的水层的pH调至5-6，然后用EtOAc萃取。用H₂O和盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。将残余物在Et₂O和己烷中研磨，过滤，得到标题化合物(8.33g,42％)。t_R:1.00min(LC-MS1)；ESI-MS:290.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤B1:5-溴-4-三氟甲基-嘧啶-2-基胺

在黑暗中向2-氨基-4-三氟甲基嘧啶(25g,0.15mol)在CH₃CN(800mL)中的溶液中滴加(历经2.5小时)溶于200mL CH₃CN的NBS(34.8g,0.195mol)。将该混合物于室温在黑暗中搅拌4.5h，然后蒸发溶剂。将残余物溶于EtOAc和H2O，将二元混合物转入分液漏斗。分离水层，用EtOAc萃取。用H2O和盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发。通过使用己烷/EtOAc9:1-3:2梯度的硅胶色谱法纯化残余物。蒸发合并的纯级分，将残余物混悬于40mL己烷，搅拌10min，过滤，用2×20mL己烷洗涤，得到标题产物，为米黄色固体(31.2g,85％)。t_R:0.82min(LC-MS1)。

实施例1:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-甲基 - 唑烷-2-酮

将来自步骤1.1的产物(350mg,1.16mmol)、中间体B(449mg,1.51mmol)、Na₂CO₃(2M,1.7mL,3.48mmol)和PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂(95mg,0.17mmol)在DME(10mL)中的溶液在氩气下于80℃搅拌1h。用EtOAc稀释该混合物，用饱和NaHCO₃萃取。用H₂O和盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(CH₂Cl₂/EtOH,99.5:0.5→98:2)纯化残余物。将残余物在己烷中研磨，过滤，干燥。通过制备型HPLC(Waters Sun Fire C18,30×100mm,5um；0.1％TFA-水/乙腈；在20min中梯度乙腈5-100％)纯化残余物，得到标题化合物(260mg,52％)。t_R:0.93min(LC-MS1)；ESI-MS:426.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤1.1:(S)-3-(6-氯-2-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-甲基- 唑烷-2-酮

在氩气气氛下向(S)-4-甲基-2-唑烷酮(432m_g,4.19mmol)在DMF(10mL)中的溶液中缓慢加入NaH(60％矿物油,201mg,5.02mmol)，将该混悬液于室温搅拌30min。将反应混合物冷却至0℃，加入中间体A(1g,4.19mmol)。将混合物于室温搅拌4h。用EtOAc稀释反应混合物，用H₂O萃取。用H₂O和盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(己烷/EtOAc,97:3→1:1)纯化残余物，得到标题化合物(605mg,47％)。t_R:1.00min(LC-MS1)；ESI-MS:299.2/301.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例2:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-羟基甲基-5,5-二甲基- 唑烷-2-酮

将来自步骤2.1的产物(28mg,0.04mmol)和TBAF(2mL,2.0mmol,1M的THF溶液)的溶液于室温搅拌过夜。浓缩反应混合物，通过闪式色谱法(DCM/MeOH,100:0→95:5)纯化残余物，得到标题产物。t_R:0.89min(LC-MS1)；ESI-MS:470.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤2.1:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-5,5-二甲基- 唑烷-2-酮

与实施例1中所用的操作类似地、但使用来自步骤2.2的产物制备了标题化合物。该混合物在100℃进行40min。萃取后，通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→30:70)纯化残余物，得到标题产物。t_R:1.45min(LC-MS1)；ESI-MS:708.4[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤2.2:(S)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-3-(6-氯-2-吗啉-4-基-嘧啶 -4-基)-5,5-二甲基- 唑烷-2-酮

将来自步骤2.3的产物(95mg,0.25mmol)、中间体A(58mg,0.25mmol)、xantphos(10mg,0.02mmol)、Pd₂dba₃(4.5mg,4.95umol)和Cs₂CO₃(121mg,0.37mmol)在二烷中的溶液在氩气下于100℃搅拌3h。将该混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用饱和NaHCO₃溶液萃取。用盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→0:100)纯化残余物，得到标题产物(85mg,56％)。t_R:1.54min(LC-MS1)；ESI-MS:581.4/583.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤2.3:(S)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-5,5-二甲基- 唑烷-2-酮

类似于步骤6.2所用的操作、但使用来自步骤2.4的产物并且使用Et₃N替代咪唑制备了标题化合物。将该混合物于室温搅拌16h。浓缩反应混合物，通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→55:45)纯化，得到标题产物。t_R:1.33min(LC-MS1)；ESI-MS:384.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤2.4:(S)-4-羟基甲基-5,5-二甲基- 唑烷-2-酮

将来自步骤2.5的产物(110mg,0.59mmol)和HCl(4M的二烷溶液,5mL,20mmol)的溶液于室温搅拌4h。浓缩反应混合物，不经进一步纯化即使用残余物。

步骤2.5:(S)-1,1,5,5-四甲基-二氢- 唑并[3,4-c] 唑-3-酮

在氩气下于0℃向来自步骤2.6的产物(190mg,0.73mmol)在DMF(6mL)中的溶液中加入NaH(88mg,2.20mmol,60％在油中)，将该混合物在0℃搅拌6h。用H₂O猝灭反应混合物，浓缩。将残余物在EtOAc中研磨，过滤。干燥过滤的溶液(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→60:40)纯化产物。

步骤2.6:(S)-4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-2,2-二甲基- 唑烷-3-甲酸叔丁酯

在氩气下于0℃向(S)-2,2-二甲基唑烷-3,4-二甲酸3-叔丁酯4-甲酯(500mg,1.93mmol)在THF(15mL)中的溶液中滴加溴化甲基镁(1.4mL,4.24mmol)，将该混合物在0℃搅拌2h。用饱和NH₄Cl溶液猝灭反应，用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→65:35)纯化残余物。t_R:1.01min(LC-MS1)；ESI-MS:260.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例3:外消旋3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-4,5'-联嘧啶-6-基)-4-(羟基甲基)-4-甲基唑烷-2-酮

将中间体B(68mg,0.21mmol)、来自步骤3.1的产物(120mg,021mmol)、2M Na₂CO₃溶液(317uL,0.63mmol)和四(15mg,0.01mmol)在DME(2mL)中的溶液在80℃搅拌3h。用EtOAc稀释反应混合物，加入Na₂SO₄。过滤得到的混悬液，浓缩滤液。用THF(2ML)溶解残余物，加入TBAF(212uL,0.21mmol)。将混合物于室温搅拌16h，浓缩。通过闪式色谱法(DCM/EtOH,99:1→96:4)纯化粗产物。将残余物在DCM/己烷中研磨，得到标题化合物。t_R:0.85min(LC-MS1)；ESI-MS:456.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤3.1:4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-3-(6-氯-2-吗啉-4-基-嘧啶-4- 基)-4-甲基- 唑烷-2-酮

与步骤2.2所述的操作类似地、但使用来自步骤3.2的产物制备了标题化合物。萃取后，通过闪式色谱法(己烷/EtOAc:9:1→1:1)纯化残余物，得到标题化合物。

步骤3.2:4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-4-甲基- 唑烷-2-酮

与步骤6.4所述的操作类似地、但使用4-(羟基甲基)-4-甲基唑烷-2-酮并且使用DCM替代DMF制备了标题化合物。用Et₂O萃取反应混合物。用H₂O和盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。将得到的固体在己烷中研磨，过滤，得到标题化合物。t_R:1.20min(LC-MS1)；ESI-MS:339.2/341.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例3A:3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-4,5'-联嘧啶-6-基)-4-(羟基甲基)-4-甲基唑烷-2-酮的第一个洗脱的对映体

未测定绝对立体化学

在对实施例3的外消旋产物进行制备型手性SFC分离后得到了标题化合物。(柱:Chiralpak AD-H,30×250mm。流速80mL/min。scCO₂/MeOH85:15)。t_R:3.97min(柱:Chiralpak AD-H,4.6×250mm。流速3mL/min。scCO₂/MeOH85:15)。

实施例3B:3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-4,5'-联嘧啶-6-基)-4-(羟基甲基)-4-甲基唑烷-2-酮的第二个洗脱的对映体

未测定绝对立体化学

在对实施例3的外消旋产物进行制备型手性SFC分离后得到了标题化合物。(柱:Chiralpak AD-H,30×250mm。流速80mL/min。scCO₂/MeOH85:15)。t_R:4.49min(柱:Chiralpak AD-H,4.6×250mm。流速3mL/min。scCO₂/MeOH85:15)。

实施例4:(3aS,7aS)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)- 六氢-苯并唑-2-酮

在氩气下将来自步骤4.1的产物(60mg,0.17mmol)、中间体B(54mg,0.17mmol)、Na₂CO₃(2M,260μL,0.52mmol)和钯四(10mg,8.7μmol)在DME(1.5mL)中的溶液在密封小瓶中于80℃搅拌2h。浓缩反应混合物。通过闪式色谱法(CH₂Cl₂/EtOH,99.8:0.2→97.5:2.5)纯化残余物。将残余物溶于DCM(2mL)，然后用己烷(4mL)处理。过滤结晶，用己烷(3ml)洗涤，得到标题化合物(36mg,44％)。t_R:1.10min(LC-MS1)；ESI-MS:466.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤4.1:(3aS,7aS)-3-(6-氯-2-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-六氢-苯并唑-2-酮

与步骤2.2所述的操作类似地、但使用来自步骤4.2的产物制备了标题化合物。反应在100℃进行1h，通过Hyflo过滤反应混合物，浓缩。通过闪式色谱法(己烷/EtOAc:9:1→1:1)纯化残余物，得到标题化合物。t_R:1.20min(LC-MS1)；ESI-MS:339.2/341.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤4.2:(3aS,7aS)-六氢-苯并唑-2-酮

将(1S,2S)-2-氨基环己醇(750mg,6.51mmol)和氯甲酸2-硝基苯酯(1378mg,6.84mmol)在DCE(15mL)中与DIEA(2.39mL,13.68mmol)一起在密封小瓶中于90℃搅拌1h。使反应混合物进入包含50mL EtOAc和50mL饱和NaHCO₃溶液的分液漏斗中。用50mL EtOAc洗涤水层。合并有机层，用50mL H2O、50mL盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(己烷/EtOAc:7:3→3:7)纯化残余物，得到标题化合物(770mg,5.13mmol)。t_R:0.69min(LC-MS1)；¹H NMR(400MHz,<dmso>)δppm1.19-1.44(m,3H)1.45-1.61(m,1H)1.65(d,J＝9.77Hz,1H)1.76(d,J＝11.34Hz,1H)1.82-1.93(m,1H)1.93-2.10(m,1H)3.03-3.23(m,1H)3.74(td,J＝11.34,3.52Hz,1H)7.53(br.s.,1H)

实施例5:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-甲氧基甲基- 唑烷-2-酮

在微波小瓶中，向来自步骤5.1的产物(116mg,0.28mmol)和中间体B(90mg,0.31mmol)在DME(2.1mL)中的溶液中加入饱和Na₂CO₃溶液(0.7ml)和PdCl₂(dppf)₂.CH₂Cl₂(23mg,0.03mmol)。用氩气向混合物鼓泡5min。将其于120℃在微波照射下搅拌15min。将反应混合物用DCM和水吸收。分离各层，用一些DCM将水层再萃取2次。然后合并有机层，用硫酸钠干燥，蒸发。通过闪式色谱法(DCM/MeOH:100％→95％DCM)纯化残余物。通过反相闪式色谱法(MeCN/H2O:10％→100％MeCN)纯化得到的残余物，得到标题化合物(19mg,13％)。t_R:0.91min(LC-MS1)；ESI-MS:456.1[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤5.1:(S)-3-(6-氯-2-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-甲氧基甲基- 唑烷-2-酮

与步骤2.2所述的操作类似地、但使用来自步骤5.2的产物制备了标题化合物。反应在115℃进行80min。浓缩反应混合物，用DCM/水吸收。分离各层，用DCM将水层萃取3次。合并有机层，用硫酸钠干燥。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc:100％→60％庚烷)纯化残余物，得到标题化合物(116mg,22％)。t_R:0.98min(LC-MS1)；ESI-MS:329.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤5.2:(S)-4-甲氧基甲基- 唑烷-2-酮

将TsOH(800mg,4.21mmol)加入到来自步骤5.3的产物(1.013g,4.13mmol)在MeOH(10ml)中的黄色溶液中。将该混合物于室温搅拌90min。然后加入TsOH(140mg,0.74mmol)，将其于室温搅拌70min。然后除去溶剂，将残余物与三乙胺(1.44ml,10.32mmol)一起溶于DCM(6mL)。将三光气(0.613g,2.07mmol)在DCM(4mL)中的溶液缓慢地加入到该混合物中。将反应混合物于室温搅拌2小时30分钟。用几滴水猝灭反应。然后通过加入缓冲液将其酸化至pH＝4，然后分离各层。用一些DCM将水层再萃取1次。合并有机层，用硫酸钠干燥，蒸发。通过闪式色谱法(DCM/MeOH:100％→90％DCM)纯化残余物，得到标题化合物(231mg,38％)。ESI-MS:132.1[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤5.3:(S)-4-甲氧基甲基-2,2-二甲基- 唑烷-3-甲酸叔丁酯

将NaH(265mg,6.63mmol)加入到(S)-1-Boc-2,2-二甲基-4-羟基甲基唑烷(AstaTech Inc.,Bristol,Pennsylvania)(1g,4.19mmol)在THF(10ml)中的黄色溶液中。然后将该混合物在环境温度搅拌15min。将甲基碘(323μL,5.19mmol)加入到黄色混悬液中，将该混合物于室温搅拌2小时30分钟。加入水猝灭反应。除去溶剂。通过闪式色谱法(DCM/MeOH:5％→10％MeOH)纯化残余物，得到标题化合物(1.013g,94％)。ESI-MS:246.1[M+H]⁺(LC-MS1)；1H NMR(400MHz,<cdcl3>)δppm1.48(s,9H)1.53(br.s.,6H)3.30(m,1H)3.36(s,3H)3.41-3.63(m,2H)3.88-4.00(m,2H)

实施例6:(4S,5S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4- 羟基甲基-5-甲基- 唑烷-2-酮

用HF.吡啶的THF溶液(7.14mL,57.5mmol)将来自步骤6.1的产物(600mg,0.82mmol)在THF(5mL)中的溶液在塑料小瓶中于室温处理4天。然后将反应混合物滴加到搅拌的饱和NaHCO₃溶液(300mL)和EtOAc(200mL)的混合物中。加入固体NaHCO3至pH～8，然后分离各层。用100mL EtOAc洗涤水层。合并有机萃取物，用水和盐水洗涤。然后用Na₂SO₄干燥，过滤，蒸发。通过闪式色谱法(DCM/EtOH:99:1→95:5)纯化粗产物。合并级分，浓缩。在DCM中超声处理残余物，然后加入己烷。过滤出得到的晶体，通过闪式色谱法(DCM/EtAOc:9:1→3:7，然后己烷/THF:9:1→1:1，然后己烷/THF:7:3→1:1)再纯化3次，得到标题化合物(243mg,64％)。t_R:0.80min(LC-MS1)；ESI-MS:456.6[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤6.1:(4S,5S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6- 基)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-5-甲基- 唑烷-2-酮

与实施例1所述的操作类似地、但使用来自步骤6.2的产物制备了标题化合物。反应在80℃进行1h。萃取后，通过闪式色谱法(DCM/EtOH:95.5:0.5→97:3)纯化残余物，得到标题化合物。t_R:1.43min(LC-MS1)；ESI-MS:694.5[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤6.2:(4S,5S)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-3-(6-氯-2-吗啉-4-基- 嘧啶-4-基)-5-甲基- 唑烷-2-酮

与步骤2.2所述的操作类似地、但使用来自步骤6.3的产物制备了标题化合物。反应在100℃进行3小时30分钟。用EtOAc吸收反应混合物。用饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc:100％→30％庚烷)纯化残余物，得到标题化合物(116mg,22％)。t_R:1.51min(LC-MS1)；ESI-MS:567.4/569.5[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤6.3:(4S,5S)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-5-甲基- 唑烷-2-酮

将来自步骤6.4的产物(3.2g,9.31mmol)溶于DCM(32ml)，用Et3N(3.25ml,23.29mmol)处理。用氩气净化该溶液，于室温搅拌5min。然后将其用三光气(1.382g,4.66mmol)处理，于室温搅拌16小时。用饱和NH4Cl溶液(10mL)猝灭反应，于室温搅拌10min。分离水层，用水洗涤有机层。用DCM萃取合并的水层三次。用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc:100％→50％庚烷)纯化残余物，得到标题化合物(2.22g,61％)。t_R:1.28min(LC-MS1)；ESI-MS:387.3[M+18]⁺(LC-MS1)。

步骤6.4:(2S,3S)-3-氨基-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁烷-2-醇

将D-苏氨醇(2g,19.02mmol)溶于DMF(15ml)，用咪唑(3.89g,57.1mmol)处理，于室温搅拌5min。然后在氩气下将TBDPS-Cl(5.13ml,19.97mmol)滴加到反应溶液中。将反应溶液于室温搅拌16小时。然后将其用EtOAc稀释，用饱和NaHCO₃溶液洗涤2次，用盐水洗涤1次。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc:100％→0％庚烷)纯化残余物，得到标题化合物(3.21g,47％)。t_R:0.98min(LC-MS1)；ESI-MS:344.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例7:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-羟基甲基- 唑烷-2-酮

在氩气下将来自步骤7.1的产物(200mg,0.35mmol)、中间体B(131mg,0.39mmol)、Na₂CO₃(2M,526μL,1.05mmol)和钯四(24mg,0.21mmol)在DME(4mL)中的溶液于80℃搅拌2h。用Na₂SO₄处理反应混合物，用EtOAc稀释，过滤出不溶部分。用EtOAc将滤饼洗涤3次，蒸发滤液。然后将残余物溶于THF，加入TBAF溶液(1N,351μL,0.35mmol)。将该混合物于室温搅拌1h。除去溶剂，通过闪式色谱法(DCM/EtOH:99:1→95:5)纯化残余物，得到标题化合物。t_R:0.74min(LC-MS1)。

步骤7.1:(R)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-3-(6-氯-2-吗啉-4-基-嘧啶 -4-基)- 唑烷-2-酮

与步骤2.2所述的操作类似地、但使用来自步骤7.2的产物制备了标题化合物。反应在100℃进行3h。过滤反应混合物，浓缩滤液。通过闪式色谱法(己烷/EtOAc:9:1→6:4)纯化残余物，得到标题化合物。t_R:1.53min(LC-MS1)；ESI-MS:553.4/555.5[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤7.2:(R)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)- 唑烷-2-酮

与步骤6.4所述操作类似地、但使用(S)-4-(羟基甲基)唑烷-2-酮(SpeedChemical Corp.上海)并且用DCM替代DMF制备了标题化合物。反应于室温进行16h。用水稀释反应混合物，用Et₂O萃取2次。合并有机层，用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，蒸发。通过闪式色谱法(己烷/EtOAc:98:2→4:6)纯化残余物。用己烷和Et₂O处理残余物。过滤出得到的晶体，得到标题化合物。t_R:1.26min(LC-MS1),¹H NMR(400MHz,<dmso>)δppm0.98(s,9H)3.51-3.63(m,2H)3.88(dd,J＝8.60,4.30Hz,1H)4.14(dd,J＝8.60,4.69Hz,1H)4.30-4.38(m,1H)7.37-7.50(m,6H)7.57-7.65(m,4H)7.71(s,1H)。

实施例8:(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-(D8-吗啉-4-基)-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6- 基)-4-羟基甲基-5-甲基- 唑烷-2-酮

与实施例6所述的完整顺序类似地、但使用来自步骤8.1的产物替代中间体A、用D-别-苏氨醇替代D-苏氨醇制备了标题化合物。t_R:0.79min(LC-MS1)；ESI-MS:464.5[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤8.1:4-(4,6-二氯-嘧啶-2-基)-D8-吗啉

将2,4,6-三氯嘧啶与Et₃N和D8-吗啉一起溶于EtOH。将该反应混合物于室温搅拌1小时。然后用饱和NaHCO₃溶液稀释，用EtOAc萃取2次。合并有机萃取物，用盐水洗涤。然后将其用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(己烷/EtOAc:0％己烷→40％)纯化残余物。t_R:0.94min(LC-MS1)；ESI-MS:242.3/244.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例9:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-(2- 羟基-乙基)- 唑烷-2-酮

与实施例6所述的操作类似地、但使用来自步骤9.1的产物制备了标题化合物。用DCM进行萃取。通过制备型HPLC(H₂O/ACN)、然后通过闪式色谱法(DCM/MeOH,100:0→95:5)纯化残余物。t_R:0.78min(LC-MS1)；ESI-MS:456.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤9.1:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-[1,3] 嗪烷-2-酮

与实施例1所述的操作类似地、但使用来自步骤9.2的产物制备了标题化合物。反应在120℃进行15min。将反应混合物溶于DCM，用H₂O萃取。干燥有机层(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,8:2→4:6)纯化残余物。t_R:1.54min(LC-MS1)；ESI-MS:694.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤9.2:(S)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-3-(6-氯-2-吗啉-4-基-嘧啶 -4-基)-[1,3] 嗪烷-2-酮

与步骤2.2所述的操作类似地、但使用来自步骤9.3的产物制备了标题化合物。反应在115℃进行2.5h。浓缩混合物。通过制备型HPLC(H₂O/ACN)、然后通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,9:1→0:100)纯化残余物。t_R:1.49min(LC-MS1)；ESI-MS:567.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤9.3:(S)-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-[1,3] 嗪烷-2-酮

在氩气下向来自步骤9.4的产物(900mg,2.03mmol)在THF(40mL)中的溶液中加入在油中的NaH60％(160mg,4.0mmol)，将混合物于室温搅拌4h。用EtOAc稀释混合物，用H₂O萃取。干燥有机层(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→0:100)纯化残余物。t_R:1.23min(LC-MS1)；ESI-MS:370.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤9.4:[(S)-1-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-3-羟基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯

在0℃向来自步骤9.5的产物(40g,73mmol)在TBME(400mL)中的溶液中滴加LiBH₄(2M的THF溶液,74mL,146mmol)，将该混合物在0℃搅拌10min，然后于室温温热并搅拌5h。用H₂O、然后用0.5M柠檬酸溶液猝灭反应混合物。用TBME萃取该混合物。干燥有机层(MgSO₄)，过滤，浓缩。将产物不经进一步纯化即使用。

步骤9.5:(S)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸苄基酯

与步骤6.4所述的操作类似地制备了标题产物。R_f:0.7(己烷/EtOAc,8:2)

步骤9.6:(S)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-羟基-丁酸苄基酯

在-20℃向Boc-L-天冬氨酸-4-苄基酯(100g,309mmol)在DME(1.8L)中的溶液中加入NMM(34mL,309mmol)，然后滴加氯甲酸异丁酯(40mL,309mmol)，将该混合物在-20℃搅拌20min。过滤反应混合物，将滤液冷却至-20℃。在-20℃滴加NaBH₄(17.5g,463mmol)。使混合物温热并于室温搅拌1h。用20％柠檬酸溶液猝灭混合物，然后用AcOEt萃取。用NaHCO₃溶液、H₂O和盐水洗涤有机层，干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩。将产物不经进一步纯化即用于下一步。

实施例10:(4S,5R)-3-[2'-氨基-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-4'-三氟甲基-[4,5'] 联嘧啶-6-基]-4-羟基甲基-5-甲基- 唑烷-2-酮

与实施例6所述的完整顺序类似地、但使用来自步骤10.1的产物替代中间体A、用D-别-苏氨醇替代D-苏氨醇制备了标题化合物。将该混合物滴加到Na₂CO₃饱和溶液中。添加后，加入NaHCO₃饱和溶液(最终pH约为7-8。将其用水稀释，用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤，蒸发。通过制备型HPLC(Waters Sun Fire C18,30×100mm,5um；0.1％TFA-水/乙腈；梯度乙腈5-100％，20min)纯化残余物。使残余物从Et2O/己烷(3/1)中重结晶。过滤出晶体，用己烷洗涤，得到标题化合物。t_R:2.89min(HPLC1)；ESI-MS:470.3[M+H]⁺(LC-MS1)；m.p.217.7℃(开始)。

步骤10.1:(S)-4-(4,6-二氯-嘧啶-2-基)-3-甲基-吗啉

将2,4,6-三氯嘧啶(100mg,053mmol)与DIPEA(280μL,1.6mmol)和(S)-3-甲基吗啉(54mg,0.53mmol)一起溶于二烷(2mL)。将反应混合物在微波照射下于130℃加热15min。然后用EtOAc稀释，用盐水洗涤。用Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩。通过制备型HPLC(Waters Sun Fire C18,30x100mm,5um；0.1％TFA-水/乙腈；在20min中梯度乙腈5-100％)纯化残余物，得到标题化合物(45mg,34％)。t_R:3.70min(HPLC1)；ESI-MS:248.2/250.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例11(用于对比目的):3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)- 唑烷-2-酮

与实施例5(包括步骤5.1)类似地、但使用来自步骤11.1的产物制备了标题化合物。反应在100℃进行1h。用EtOAc进行萃取。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→0:100)纯化残余物。t_R:0.87min(LC-MS1)；ESI-MS:412.4[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤11.1:3-(6-氯-2-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)- 唑烷-2-酮

与步骤2.2所述的完整顺序类似地、但使用唑烷-2-酮制备了标题化合物。t_R:0.93min(LC-MS1)；ESI-MS:285.5/287.4[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例12:甲酸(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶 -6-基)-5-甲基-2-氧代- 唑烷-4-基甲基酯

将实施例18的化合物(47mg,0.10mmol)溶于甲酸(80μL,2.09mmol)，在5℃贮存4天。然后使其温热至室温，贮存2天。然后用EtOAc吸收，用饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，浓缩。通过制备型HPLC(Waters Sun Fire C18,30x100mm,5um；0.1％TFA-水/乙腈；在20min中梯度乙腈5-70％)纯化残余物，得到标题化合物(57mg,80％)。t_R:0.88min(LC-MS1)；ESI-MS:484.4[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例13:(S)-3-[2'-氨基-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基]-4-甲基- 唑烷-2-酮

与实施例11所述的完整顺序类似地、但使用来自步骤10.1的产物替代中间体A、用(S)-4-甲基-2-唑烷酮替代唑烷-2-酮制备了标题化合物。通过闪式色谱法(DCM/EtOH:99.8/0.2→98/2)、然后通过制备型HPLC(Waters Sun Fire C18,30x100mm,5um；0.1％TFA-水/乙腈；在20min中梯度乙腈5-100％)纯化残余物，得到标题化合物(35mg,32％)。t_R:0.98min(LC-MS1)；ESI-MS:440.1[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例14:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-羟基甲基- 唑烷-2-酮

与实施例6所述的操作类似地、但使用来自步骤14.1的产物制备了标题化合物。通过闪式色谱法(DCM/MeOH,100:0→95:5)纯化残余物。t_R:0.77min(LC-MS1)；ESI-MS:442.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤14.1:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)- 唑烷-2-酮

与实施例5所述的操作类似地、但使用来自步骤14.2的产物制备了标题化合物。反应在油浴中于100℃进行1h。用EtOAc进行萃取。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→0:100)纯化残余物。t_R:1.40min(LC-MS1)；ESI-MS:680.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤14.2:(S)-5-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)-3-(6-氯-2-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)- 唑烷-2-酮

与步骤2.2所述的操作类似地、但使用来自步骤14.3的产物制备了标题化合物。萃取后，通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→40:60)纯化残余物。t_R:1.49min(LC-MS1)；ESI-MS:553.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤14.3:(S)-5-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基甲基)- 唑烷-2-酮

在氩气下向来自步骤14.4的产物(2.72g,8.27mmol)和Et₃N(2.88mL,20.67mmol)在DCM中的溶液中滴加三光气(982mg,3.31mmol)，将该混合物于室温搅拌5h。用NH₄Cl溶液猝灭反应混合物。干燥有机层(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,100:0→0:100)纯化残余物。t_R:1.21min(LC-MS1)；ESI-MS:373.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤14.4:(S)-1-氨基-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙烷-2-醇

与步骤6.4所述的操作类似地、但使用(S)-3-氨基丙烷-1,2-二醇并且使用Et₃N替代咪唑制备了标题化合物。萃取后，通过闪式色谱法(DCM/MeOH,100:0→90/10)纯化残余物。t_R:0.93min(LC-MS1)；ESI-MS:330.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例15:(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6- 基)-5-羟基甲基-4-甲基- 唑烷-2-酮

与实施例6所述的完整顺序类似地、但使用来自步骤15.1的产物替代D-苏氨醇制备了标题化合物。t_R:0.98min(LC-MS1)；ESI-MS:344.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤15.1:(2R,3S)-3-氨基-丁烷-1,2-二醇

与步骤19.1的操作类似地、但使用来自步骤15.2的产物制备了标题化合物。通过闪式色谱法(DCM/EtOH:99.8/0.2→98/2)、然后通过制备型HPLC(Waters Sun Fire C18,30x100mm,5um；0.1％TFA-水/乙腈；在20min中梯度乙腈5-100％)纯化残余物，得到标题化合物(35mg,32％)。t_R:0.98min(LC-MS1)；ESI-MS:440.1[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤15.2:N-苄基-N-[(S)-1-((R)-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊环-4-基)-乙基]-羟基胺

标题化合物是在步骤19.2过程中形成的第二种异构体(1.07g,57％)。t_R:0.91min(LC-MS1)；ESI-MS:252.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例16:(S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-甲基- 唑烷-2-酮

与实施例11类似地、但使用来自步骤16.1的产物替代(R)-4-甲基-2-唑烷酮制备了标题化合物。反应在100℃进行1小时。用EtOAc吸收反应混合物。用饱和NaHCO₃溶液洗涤2次，用盐水洗涤1次。用硫酸钠干燥有机层。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc:0％→85％EtOAc)纯化残余物，得到标题化合物(9.6mg,58％)。t_R:0.94min(LC-MS1)；ESI-MS:426.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

步骤16.1:(S)-5-甲基- 唑烷-2-酮

与步骤6.3所述的操作类似地、但使用(S)-1-氨基丙烷-2-醇制备了标题化合物。反应在室温进行3小时。用饱和NH4Cl溶液(10mL)猝灭反应，于室温搅拌10min。分离水层，用水洗涤有机层。用DCM萃取合并的水层3次。用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc:0％→100％EtOAc)纯化残余物，得到标题化合物(38mg,9％)。¹H NMR(400MHz,<DMSO>)δppm1.27(d,J＝6.25Hz,3H)2.94-3.08(m,1H)3.48-3.58(m,1H)4.62(m,1H)7.37(br.s.,1H)

实施例17:(S)-3-(2’-氨基-2-D8-吗啉代-4’-(三氟甲基)-[4,5’-联嘧啶]-6-基)-4- 甲基唑烷-2-酮

与实施例4所述的操作类似地、但使用来自步骤17.1的产物制备了标题化合物。完成后，用celite过滤反应合物，浓缩。通过闪式色谱法(DCM/EtOH,99.5:0.5→98:2)纯化残余物。将残余物在DCM中研磨，用己烷洗涤，得到标题化合物。t_R:0.89min(LC-MS1)；ESI-MS:434.4[M+H]⁺(LC-MS1)；R_f:0.67(DCM/EtOH,95:5)。

步骤17.1:(S)-3-(6-氯-2-D8-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-甲基- 唑烷-2-酮

与步骤2.2所述的操作类似地、但使用来自步骤8.1的产物和(S)-4-甲基-2-唑烷酮制备了标题化合物。用DCM进行萃取。通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc,9:1→7:3)纯化残余物。t_R:0.97min(LC-MS1)；ESI-MS:307.3/309.3[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例18:(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6- 基)-4-羟基甲基-5-甲基- 唑烷-2-酮

与实施例6所述的完整顺序类似地、但使用D-别-苏氨醇替代D-苏氨醇制备了标题化合物。使反应于室温进行33小时。将该混合物滴加到Na₂CO₃饱和溶液中。添加后，pH为约7-8。用水稀释，用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤，蒸发。通过制备型HPLC(WatersSun Fire C18,30x100mm,5um；0.1％TFA-水/乙腈；在20min中梯度乙腈5-60％)纯化残余物。合并级分，用5％NaHCO₃溶液碱化。产物沉淀出来，过滤。为了消除残留的钯，将产物溶于DCM/MeOH(4/1)，使其通过来自polymerlabs的MP-Thiol的SPE柱，然后蒸发溶剂。基于该方法生产了许多批次，经过几次后处理得到了如下结晶性物质。

批次A:

为了制备该批次，不使产物通过来自polymerlabs的MP-Thiol的SPE柱。合并制备型HPLC后得到的纯级分，用NaHCO3处理。蒸发CH₃CN，此时产物结晶出来。通过过滤收集产物，用水洗涤，干燥，得到标题化合物，为白色固体。m.p.221.3℃(开始)

批次B:

为了制备该批次，不使产物通过来自polymerlabs的MP-Thiol的SPE柱。合并制备型HPLC后得到的纯级分，用固体NaHCO3处理。蒸发CH₃CN，此时产物结晶出来。将水性混合物保持在冷藏箱中1h，过滤，用水洗涤，高真空下干燥过夜，得到白色固体，m＝298mg.m.p.249.9℃(开始)

批次C:

为了制备该批次，不使产物通过来自polymerlabs的MP-Thiol的SPE柱。合并制备型HPLC后得到的纯级分，蒸发。将残余物用CH₃CN吸收，然后加入包含0.1％TFA的水，然后加入固体NaHCO3。浓缩该溶液，过滤沉淀物，用水洗涤，干燥，得到标题化合物，为白色固体。m.p.237.9℃(开始)

批次D:

在通过来自polymerlabs的MP-Thiol的SPE柱后，蒸发溶剂。将残余物溶于CH₃CN，然后用相同量的水稀释。蒸发CH₃CN，恰在此后产物结晶出来，加入一些批次B的晶体。然后完全蒸发CH₃CN，将混悬液用冰箱冷却。然后过滤，收集，在高真空下干燥过夜，得到标题产物，为白色固体,m.p.259.0℃(开始)

批次E:

操作与批次C所述的操作相同，但加入一些批次D的晶体以诱导结晶。得到标题产物，为白色固体,m.p.258.8℃(开始)

实施例19:(4S,5S)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6- 基)-5-羟基甲基-4-甲基- 唑烷-2-酮

与实施例6所述的完整顺序类似地、但使用来自步骤19.1的产物替代D-苏氨醇制备了标题化合物。反应于室温进行16小时30分钟。将该混合物滴加到Na₂CO₃饱和溶液中。添加后，用水稀释，用EtOAc萃取2次。用盐水洗涤有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤，蒸发。通过制备型HPLC(Waters SunFire C18,30×100mm,5um；0.1％TFA-水/乙腈；在20min中梯度乙腈5-80％)纯化残余物，得到标题化合物(16.3mg,75％)。t_R:2.79min(HPLC1)；ESI-MS:456.1[M+H]⁺。

步骤19.1:(2S,3S)-3-氨基-丁烷-1,2-二醇

将来自步骤19.2的产物用HCl的EtOH溶液于室温稀释2小时。除去溶剂，得到标题化合物，为HCl盐(303mg,100％)。¹H NMR(400MHz,<dmso>)δppm1.08(d,J＝6.65Hz,3H)3.18-3.33(m,1H)3.33-3.45(m,1H)3.61-3.72(m,1H)7.85(br.s.,2H)

步骤19.2:(S)-1-((S)-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊环-4-基)-乙基胺

将来自步骤19.3的产物(产物2,最后洗脱,538mg,2.14mmol)溶于具有Pd/C(100mg)的AcOH(25mL)，将反应混合物在H₂条件下于室温搅拌11小时。然后用Celite过滤，然后除去溶剂，得到标题化合物(311mg,100％)。¹H NMR(400MHz,<dmso>)δppm0.90-1.04(m,3H)1.16-1.38(m,6H)2.76-2.90(m,1H)3.75(dd,J＝13.86,7.22Hz,2H)3.90(br.s.,1H)；t_R:3.13min(HPLC1)。

步骤19.3:N-苄基-N-[(R)-1-((S)-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊环-4-基)-乙基]-羟基胺和N-苄基-N-[(S)-1-((S)-2,2-二甲基-[1,3]二氧戊环-4-基)-乙基]-羟基胺

向充分搅拌的1.48g(6.29mmol)来自步骤19.4的产物在80ml Et₂O中的溶液中一次性加入6.29ml(6.29mmol)1M Et₂AlCl的己烷溶液，持续搅拌15min。然后将该混合物冷却至-60℃，用6.29ml(18.87mmol)3M溴化甲基镁的Et₂O溶液处理。将混合物在-60℃搅拌2h，然后在搅拌下缓慢地温热至室温过夜。此后，用NaOH(2M,40ml)处理反应。于室温搅拌15min后，用Et₂O萃取混合物(3x120)。用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩。将残余物溶于MeOH，通过反相制备型HPLC分8次进样纯化(H₂O[+0.1％TFA]/CH₃CN在20min中97:3-50:50):

-将级分1–3收集在一起，用～2g NaHCO₃碱化，然后浓缩。用2x150mlEt₂O萃取得到的层，用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，蒸发至干，得到1.01g无色油状物，其缓慢地结晶(通过1HNMR测定～99％纯度；HPLC Rt＝2.36；ESI-MS:252.2[M+H]⁺(LC-MS1))->产物1

-将级分5–7收集在一起，用～2g NaHCO₃碱化，然后浓缩。用2x150mlEt₂O萃取得到的混悬液，用Na₂SO₄干燥合并的有机层，过滤，蒸发至干，得到363mg白色固体(通过1HNMR测定～99％纯度；HPLC Rt＝2.44；ESI-MS:252.3[M+H]+(LC-MS1))->产物2

步骤19.4:(S,Z)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)亚甲基)-1-苯基甲胺氧化物

将1.50g(11.53mmol)(R)-2,2-二甲基-1.3-二氧戊环-4-甲醛(Fluorochem,Hadfield,UK)溶于60ml DCM，用1.64g(11.53mmol)硫酸钠处理。用氩气净化反应混合物，用1.42g(11.53mmol)N-苄基-羟基胺(由可商购获得的盐酸盐制备)在20ml CH2Cl2中的溶液处理。将反应混合物在氩气下于室温搅拌16.5h，然后过滤。向滤液中加入硅胶，预吸附，然后通过硅胶色谱法(梯度:在30min中庚烷/EtOAc0％-100％)纯化。收集级分20–80，蒸发至干，真空干燥过夜，得到1.48g白色固体(通过HPLC测定～100％纯度,Rt＝1.43)；ESI-MS:236.2[M+H]+(LC-MS1))

实施例20:(R)-3-(2'-氨基-2-吗啉-4-基-4'-三氟甲基-[4,5']联嘧啶-6-基)-5-羟基甲基- 唑烷-2-酮

与实施例6所述的完整顺序类似地、但使用(R)-3-氨基丙烷-1,2-二醇替代D-苏氨醇制备了标题化合物。使反应于室温进行16小时。然后用NaHCO₃小心地猝灭反应混合物。然后用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3溶液洗涤2次，用盐水洗涤1次。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤，蒸发。通过闪式色谱法(DCM/EtOH:0％→10％MeOH)纯化残余物，得到标题化合物(22.8mg,38％)。t_R:0.77min(HPLC1)；ESI-MS:442.2[M+H]⁺(LC-MS1)。

实施例21:(3aR,6aR)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6- 基)四氢呋喃并[3,4-d] 唑-2(3H)-酮

在氩气下将(3aR,6aR)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)四氢呋喃并[3,4-d]唑-2(3H)-酮(100mg,0.306mmol)、中间体B(115mg,0.398mmol)、K₃PO₄(195mg,0.918mmol)和PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂(25mg,0.031mmol)在DME/H₂O(2.2mL)中的溶液于80℃搅拌1.5h。用EtOAc稀释混合物，用饱和NaHCO₃萃取。用H₂O和盐水洗涤有机层，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩。通过闪式色谱法(己烷-EtOAc70:30→0:100)纯化残余物，得到标题化合物，为无色固体(88mg,62％):t_R＝0.84min(LC-MS3)；ESI-MS:454[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤21.1:(3aR,6aR)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)四氢呋喃并[3,4-d] 唑 -2(3H)-酮

在用氩气脱气后向(3aR,6aR)-四氢呋喃并[3,4-d]唑-2(3H)-酮(500mg,3.87mmol)、4-(4,6-二氯嘧啶-2-基)吗啉(1088mg,4.65mmol)和Cs₂CO₃(2.14g,6.58mmol)在二烷(20mL)中的溶液中加入4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(157mg,0.271mmol)和Pd₂(dba)₃(70.9mg,0.077mmol)，将反应混合物在85℃加热6h。将反应混合物加入到10％NaHCO₃水溶液，用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。将粗产物在MeOH中研磨过夜，过滤出来，干燥，得到标题化合物，为无色固体(1.12g,87％):t_R＝0.92min(LC-MS3)；ESI-MS:327,329[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤21.2:(3aR,6aR)-四氢呋喃并[3,4-d] 唑-2(3H)-酮

历经在30min于室温向(3R,4R)-4-氨基四氢呋喃-3-醇(1.1g,7.88mmol)和DIEA(4.54ml,26.0mmol)在CH₂Cl₂(30mL)中的溶液中加入溶于CH₂Cl₂(5mL)的碳酸(双(三氯甲基)酯(1.75g,5.91mmol)。在25℃搅拌0.5h后，将反应混合物加入到K₂CO₃水溶液中，搅拌1h，蒸发CH₂Cl₂。用Et₂O洗涤水相，此后蒸发至干。将残余物与EtOH/THF1:1一起研磨，通过经硅胶垫过滤除去无机盐，浓缩滤液，得到标题化合物，为米黄色固体(930mg,90％):ESI-MS:147[M+NH]⁺。

实施例22:(3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-6-羟基六氢-2H-环戊二烯并[d] 唑-2-酮

于0℃向(3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-6-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)六氢-2H-环戊二烯并[d]唑-2-酮(810mg,1.253mmol)在THF(12mL)中的溶液中滴加1M TBAF的THF溶液(1.0mL,1.0mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30min，于室温搅拌2h，然后蒸发。通过闪式色谱法(己烷-THF60:40→0:100)纯化残余物。将残余物在Et₂O中研磨，过滤，干燥。通过制备型HPLC(Waters Sun FireC18,30×100mm,5um；0.1％TFA-水/乙腈；在20min中梯度乙腈5-100％)纯化残余物，得到标题化合物(430mg,72％)；t_R＝0.93min(UPLC1),t_R＝0.81min(LC-MS3)；ESI-MS:468[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤22.1:(3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-6-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)六氢-2H-环戊二烯并[d] 唑-2-酮

与实施例21所述的操作类似地由(3aR*,6R*,6aR*)-6-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)六氢-2H-环戊二烯并[d]唑-2-酮和中间体B并且使用Pd(PPh₃)₄替代PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂、用Na₂CO₃替代K₃PO₄制备了标题化合物，从EtOAc/己烷结晶后得到标题化合物，为白色固体:t_R＝1.62min(UPLC1),t_R＝1.47min(LC-MS3)；ESI-MS:582[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤22.2:(3aR*,6R*,6aR*)-6-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)六氢-2H-环戊二烯并[d] 唑-2-酮

与步骤21.1所述的操作类似地由(3aR*,6R*,6aR*)-6-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)六氢-2H-环戊二烯并[d]唑-2-酮和中间体A制备了标题化合物:t_R＝1.76min(UPLC1),t_R＝1.58min(LC-MS3)；ESI-MS:455,457[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤22.3:(3aR*,6R*,6aR*)-6-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)六氢-2H-环戊二烯并[d] 唑-2-酮

向(3aR*,6R*,6aR*)-6-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3-((2-硝基苯基)磺酰基)六氢-2H-环戊二烯并[d]唑-2-酮(1.47g,3.32mmol)和Cs₂CO₃(2.164g,6.64mmol)在DMF(25mL)中的混悬液中加入N-乙酰-L-半胱氨酸(0.921g,5.65mmol)，将反应混合物于室温搅拌16h。蒸发反应混合物，将残余物混悬于饱和NaHCO3溶液，用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。在通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc90:10→50:50)纯化后得到标题化合物，为黄色油状物(0.84g,98％):TLC(庚烷/EtOAc1:1)R_f＝0.28。

步骤22.4:(3aR*,6R*,6aR*)-6-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3-((2-硝基苯基)磺酰基)六氢-2H-环戊二烯并[d] 唑-2-酮

于0℃向(3aR*,6R*,6aR*)-6-羟基-3-((2-硝基苯基)磺酰基)六氢-2H-环戊二烯并[d]唑-2-酮(1.2g,3.66mmol)和2,6-二甲基吡啶(0.851mL,7.31mmol)在CH₂Cl₂(25mL)中的溶液中滴加三氟甲磺酸叔丁基二甲基硅烷基酯(1.091mL,4.75mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1h，然后于室温搅拌2h。用CH₂Cl₂稀释反应混合物，用20％NaH₂PO₄水溶液和H₂O洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩。从EtOAc/庚烷结晶后得到标题化合物，为白色固体(1.5g,88％):TLC(庚烷/EtOAc1:1)R_f＝0.54；t_R＝1.58min(UPLC1),t_R＝1.43min(LC-MS3)；ESI-MS:460[M+NH₄]⁺(LC-MS3)。

步骤22.5:(3aR*,6R*,6aR*)-6-羟基-3-((2-硝基苯基)磺酰基)六氢-2H-环戊二烯并[d] 唑-2-酮

向(1R*,2S*,5S*)-6-氧杂二环[3.1.0]己烷-2-基((2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g,5.10mmol)在MeOH(40mL)中的溶液中加入Amberlyst15(4.0g)，将得到的混悬液在25℃搅拌1.5h。过滤反应混合物，浓缩。在通过闪式色谱法(庚烷-EtOAc90:10→EtOAc)纯化后得到标题化合物，为米黄色固体(1.24g,73％):TLC(庚烷/EtOAc1:2)R_f＝0.36；t_R＝0.80min(UPLC1),t_R＝0.77min(LC-MS3)；ESI-MS:346[M+NH₄]⁺(LC-MS3)。

步骤22.6:(1R*,2S*,5S*)-6-氧杂二环[3.1.0]己烷-2-基((2-硝基苯基)磺酰基)- 氨基甲酸叔丁酯

向环戊-2-烯-1-基((2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(2.75g,7.46mmol)和NaHCO₃(1.254g,14.93mmol)在CH₂Cl₂(60mL)中的溶液中一次性加入间-氯过苯甲酸(2.58g,14.93mmol)。将得到的反应混合物于室温搅拌过夜。用CH₂Cl₂稀释反应混合物，用20％Na₂SO₃水溶液、饱和NaHCO₃溶液和水洗涤。用MgSO₄干燥有机相，浓缩。从EtOAc中结晶后得到标题化合物，为白色晶体(2.01g,68％):TLC(庚烷-EtOAc1:1)R_f＝0.48；t_R＝1.20min(UPLC1),t_R＝1.12min(LC-MS3)；ESI-MS:329[M-异丁烯]⁺(LC-MS3)。

步骤22.7:环戊-2-烯-1-基((2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯

于-20℃向三苯膦(3.09g,11.77mmol)、2-硝基苯基磺酰基氨基甲酸叔丁酯(3.40g,11.23mmol)和环戊-2-烯醇(0.900g,10.70mmol)在甲苯(60mL)中的混悬液中滴加偶氮二甲酸二乙酯(1.948mL,12.30mmol)。将反应混合物在-20℃搅拌2h，然后在0℃搅拌3h。浓缩反应混合物，通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc95:5→3:1)纯化后得到标题化合物，为白色固体(2.79g,67％):t_R＝1.34min(UPLC1),t_R＝1.24min(LC-MS3)；ESI-MS:386M+NH₄]⁺(LC-MS3)。

实施例22A:(3aR,6R,6aR)-和(3aS,6S,6aS)-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-6-羟基六氢-2H-环戊二烯并[d] 唑-2-酮的在 Chiralpak AD上第一个洗脱的对映体

未测定绝对立体化学。

在对实施例22的外消旋产物进行制备型手性HPLC分离后得到了标题化合物。(柱:Chiralpak AD20μm5×500mm。流速70mL/min。庚烷/EtOH/DEA20:80:0.01)。t_R:17.7min(柱:Chiralpak AD-H,4.6×250mm。流速1.2mL/min。庚烷/EtOH70:30)。

实施例22B:(3aR,6R,6aR)-和(3aS,6S,6aS)-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-6-羟基六氢-2H-环戊二烯并[d] 唑-2-酮的在 Chiralpak AD上第二个洗脱的对映体

未测定绝对立体化学。

在对实施例22的外消旋产物进行制备型手性HPLC分离后得到了标题化合物。(柱:Chiralpak AD20μm5×500mm。流速70mL/min。庚烷/EtOH/DEA20:80:0.01)。t_R:23.3min(柱:Chiralpak AD-H,4.6×250mm。流速1.2mL/min。庚烷/EtOH70:30)。

实施例23:(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6- 基)-5-(2-羟基乙基)-4-甲基唑烷-2-酮

于0℃向(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-5-(2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)乙基)-4-甲基唑烷-2-酮(2.1g,3mmol)在THF(20mL)中的溶液中滴加1M TBAF的THF溶液(3mL,3mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1h，然后蒸发。通过闪式色谱法(己烷/EtOAc/MeOH90:10:1→0:100:10)纯化残余物。使纯化的产物从MeOH中重结晶，得到标题化合物，为白色固体(1.17g,83％):t_R＝0.80min(UPLC1),t_R＝0.82min(LC-MS3)；ESI-MS:470[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤23.1:(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6- 基)-5-(2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)乙基)-4-甲基唑烷-2-酮

与实施例22.1所述的操作类似地由4S,5R)-5-(2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)乙基)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-4-甲基唑烷-2-酮和中间体B制备了标题化合物，在从MeOH中结晶后得到了标题化合物:t_R＝1.72min(UPLC1),t_R＝1.55min(LC-MS3)；ESI-MS:708[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤23.2:(4S,5R)-5-(2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)乙基)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-4-甲基唑烷-2-酮

与步骤21.1所述的操作类似地由5-(2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)乙基)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-4-甲基唑烷-2-酮的(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的4:1的混合物和中间体A制备了标题化合物，在通过两次从THF/MeOH中重结晶除去(4S,5S)-非对映异构体后得到单独的标题化合物的(4S,5R)-非对映异构体:t_R＝1.88min(UPLC1),t_R＝1.64min(LC-MS3)；ESI-MS:581,583[M+H]⁺(LC-MS3)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ1.08(s,9H),1.36(d,3H),2.02(m,2H),3.70-3.90(m,10H),4.82(m,2H),7.40-7.50(m,6H),7.51(s,1H),7.67(m,4H)。

步骤23.3:(4S,5R)-和(4S,5S)-5-(2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)乙基)-4-甲基唑烷-2-酮

于0℃向5-(2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)乙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮的(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的4:1的混合物(4.1g,7.8mmol)在乙腈(40mL)中的溶液中加入(NH₄)₂Ce(NO₃)₆(10.71g,19.5mmol)在H₂O(20mL)中的溶液。将反应混合物在0-5℃搅拌4h。将混合物加入到冰-水中，用EtOAc萃取产物。用饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩。在通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc10:1→EtOAc)纯化后得到标题化合物，为4:1的非对映异构体混合物(2.2g,71％):TLC(己烷-EtOAc1:1)R_f＝0.23；t_R＝1.47min(UPLC1),t_R＝1.33min(LC-MS3)；ESI-MS:401[M+NH4]⁺(LC-MS3)。

步骤23.4:(4S,5R)-和(4S,5S)-5-(2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)乙基)-3-(4- 甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮

于0-5℃向5-(2-羟基乙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮的(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的4:1混合物(2.65g,10mmol)在DMF(30mL)中的溶液中加入咪唑(1.73g,25mmol)和TBDPSCl(3.57g,13mmol)。将反应混合物温热至室温，于室温搅拌过夜。浓缩反应混合物，将残余油状物溶于TBME，用10％KHSO₄水溶液、H₂O、饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩。在通过闪式色谱法(庚烷/EtOAc20:1→2:1)纯化后得到标题化合物，为4:1的非对映异构体的混合物(4.18g,80％):TLC(己烷/EtOAc3:1)R_f＝0.27；t_R＝1.70min(UPLC1),t_R＝1.52min(LC-MS3)；ESI-MS:526[M+Na]⁺(LC-MS3)。

步骤23.5:(4S,5R)-和(4S,5S)-5-(2-羟基乙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮

于-78℃使(4S,5R)-和(4S,5S)-5-烯丙基-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮的4:1混合物(2.67g,10mmol)在CH₂Cl₂-MeOH2:1(40mL)中的溶液臭氧化。完全形成臭氧化物后，加入NaBH₄(0.57g,15mmol)，将反应混合物温热至室温，于室温搅拌2h。将反应混合物加入到20％K₂CO₃水溶液中，用EtOAc萃取产物。用盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物，为淡黄色油状物(2.65g,99％):TLC(EtOAc)R_f＝0.28；t_R＝0.68min(UPLC1),t_R＝0.69min(LC-MS3)；ESI-MS:266[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤23.6:(4S,5R)-和(4S,5S)-5-烯丙基-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2- 酮

在氩气下于-50℃向((2S,3R)-3-羟基己-5-烯-2-基)(4-甲氧基苄基)氨基甲酸苄基酯和((2S,3S)-3-羟基己-5-烯-2-基)(4-甲氧基苄基)氨基甲酸苄基酯的4:1混合物(3.55g,9.5mmol)在THF(60mL)中的溶液中加入1MNaHMDS的THF溶液(10.5mL)。在-40℃将反应合物搅拌0.5h后，将混合物加入到冷10％KHSO₄水溶液中，用EtOAc萃取产物。用盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩。在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc10:1→1:1)纯化后得到标题化合物，为无色油状物(2.4g,97％):TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.42；t_R＝1.03min(UPLC1),t_R＝0.99min(LC-MS3)；ESI-MS:262[M+H]⁺(LC-MS3)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ1.06(d,2.4H),1.13(d,0.6H),2.30-2.40(m,2H),3.25(m,0.2H),3.66(m,0.8H,在4.54的信号强NOE),3.75(s,3H),4.07(d,1H),4.10(m,0.2H),4.48(d,1H),4.54(m,0.8H),5.05-5,20(m,2H),5.23(m,0.2H),5.78(m,0.8H),6.92(d,2H),7.22(d,0.4H),7.24(d,1.6H)。

步骤23.7:(2S,3R)-和(2S,3S)-4-甲氧基苄基(1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸苄基酯

向(S)-4-甲氧基苄基(1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸苄基酯(3.86g,10mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入锌粉(1.64g,25mmol)、饱和NH₄Cl水溶液(5mL)和烯丙基溴(2.2mL,25mmol)，将反应混合物在25-30℃搅拌1h。用H₂O稀释反应混合物，用EtOAc萃取产物。用10％KHSO₄水溶液、H₂O、NaHCO₃和盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→2:1)纯化后得到标题化合物，为无色油状物(3.5g,97％):t_R＝1.25min和1.27min(UPLC1)((2S,3R)-和(2S,3S)-非对映异构体的4:1混合物),TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.51；t_R＝1.68min和1.69min(LC-MS3)；ESI-MS:370[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤23.8:(S)-4-甲氧基苄基(1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸苄基酯

向(S)-(1-羟基丙烷-2-基)(4-甲氧基苄基)氨基甲酸苄基酯(11.8g,35.5mmol)在CH₂Cl₂中的溶液中加入NaHCO₃(3.28g,39mmol)、KBr(0.25g,2.1mmol)和TEMPO0.168g,1.07mmol)。将反应混合物冷却至0-5℃，在30min内加入5％NaClO水溶液(85mL,71mmol)。在0-5℃搅拌1h后，将反应混合物加入到Na₂S₂O₃溶液中，用EtOAc萃取产物。用NaH₂PO₄水溶液、H₂O和盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物，为黄色油状物(11.2g,96％):TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.55；t_R＝1.29min(UPLC1),t_R＝1.15min(LC-MS3)；ESI-MS:328[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤23.10:(S)-(1-羟基丙烷-2-基)(4-甲氧基苄基)氨基甲酸苄基酯

于0-5℃在氩气下向(S)-2-(((苄基氧基)羰基)(4-甲氧基苄基)氨基)丙酸[439589-23-8](16g,41.9mmol)在THF(150mL)中的溶液中缓慢地加入硼烷二甲硫(8.4mL,84mmol)。将反应混合物在0-5℃搅拌1h，然后在40-45℃搅拌3h。通过小心地添加MeOH破坏过量的硼烷，将反应混合物与200mL MeOH一起蒸发3次，与CHCl₃一起蒸发2次。干燥后得到标题化合物，为无色油状物(13.7g,99％):TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.22；t_R＝1.06min(UPLC1),t_R＝1.02min(LC-MS3)；ESI-MS:330[M+H]⁺(LC-MS3)。

实施例24:(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6- 基)-5-((R)-2-羟基丙基)-4-甲基唑烷-2-酮的在LC-MS3上第一个洗脱的非对映异构体

未测定2-羟基丙基部分的绝对立体化学，任意指定为(R)-构型。

与实施例23所述的操作类似地由(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-5-((R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-4-甲基唑烷-2-酮和TBAF制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc5:1→EtOAc/MeOH10:1)纯化和从MeOH中重结晶后得到了标题化合物，为白色固体:TLC(EtOAc)R_f＝0.50；t_R＝0.88min(LC-MS3)；ESI-MS:484[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤24.1:(4S,5R)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6- 基)-5-((R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-4-甲基唑烷-2-酮

未测定被保护的2-羟基丙基部分的绝对立体化学，任意指定为(R)-构型。

与步骤22.1所述的操作类似地由(4S,5R)-5-((R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-4-甲基唑烷-2-酮和中间体B制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→EtOAc)纯化后得到了标题化合物，为淡黄色泡沫：TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.45；t_R＝1.57min(LC-MS3)；ESI-MS:722[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤24.2:(4S,5R)-5-((R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-4-甲基唑烷-2-酮

与步骤21.1所述的操作类似地由(4S,5R)-5-((R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-4-甲基唑烷-2-酮和中间体A制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→3:1)纯化后得到了标题化合物，为无色油状物:TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.65；t_R＝1.67min(LC-MS3)；ESI-MS:595,597[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤24.3:(4S,5R)-5-((R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-4-甲基唑烷-2-酮

与步骤23.3所述的操作类似地由(4S,5R)-5-((R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→EtOAc)纯化后得到了标题化合物，为无色油状物:TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.28；t_R＝1.38min(LC-MS3)；ESI-MS:415[M+NH₄]⁺(LC-MS3)。

步骤24.4:(4S,5R)-5-((R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮

与步骤23.4所述的操作类似地由(4S,5R)-5-((R)-2-羟基丙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮(被15％的来自步骤24.5的第一个洗脱的(2S,4S,5R)-非对映异构体污染)制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→EtOAc)纯化后得到了标题化合物，为无色油状物:TLC(己烷/EtOAc3:1)R_f＝0.26；t_R＝1.55min(LC-MS3)；ESI-MS:540[M+Na]⁺(LC-MS3)。

步骤24.5:(4S,5R)-5-((S)-和(4S,5R)-5-((R)-2-羟基丙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮

未测定酮还原后的2-羟基丙基部分的绝对立体化学，将(S)-构象任意地指定给第一个洗脱的产物(4S,5R,5S)-非对映异构体。

第一个洗脱的产物是(4S,5R,5S)-非对映异构体:

第二个洗脱的产物是被第一个洗脱的(4S,5R,5S)-非对映异构体:

污染的(2R,4S,5R)-非对映异构体(任意指定2-羟基丙基部分为(2R)-构型)的混合物:

与步骤23.5所述的操作类似地由3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基-5-(2-甲基烯丙基)唑烷-2-酮的(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的3:1混合物制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(RediSep Rf Gold硅胶；己烷/EtOAc1:1→EtOAc和甲苯/EtOAc3:1→EtOAc)多次分离后得到了3:3:1:1的异构体混合物，各自为两种次要的(2S,4S,5S)-和(2R,4S,5S)-非对映异构体和各自为两种主要的(2S,4S,5R)-和(2R,4S,5R)-非对映异构体，为无色油状物：

标题化合物的第一个洗脱的(2S,4S,5R)-非对映异构体(任意指定2-羟基丙基部分是(2S)-构型):TLC(EtOAc)R_f＝0.39；t_R＝0.752min(UPLC1)；t_R＝0.76min(LC-MS3)；ESI-MS:280[M+H]⁺(LC-MS3)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ1.12(d,3H),1.28(d,3H),1.5-1.63(m,1H),1.81(m,1H),1.90(d,1H),3.68(m,1H),3.82(s,3H),4.03(d,1H),4.14(m,1H),4.60(ddd,1H),4.79(d,1H),6.89(d,2H),7.22(d,2H)。

标题化合物的第二个洗脱的(2R,4S,5R)-非对映异构体(任意指定2-羟基丙基部分是(2R)-构型)，其被15％的第一个洗脱的(2S,4S,5R)-非对映异构体污染:TLC(EtOAc)R_f＝0.35；t_R＝0.742min和0.752min(UPLC1)；t_R＝0.75min和0.76min(LC-MS3)；ESI-MS:280[M+H]⁺(LC-MS3)；¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ1.12(d,3H),1.28(d,3H),1.50-1.64(m,1H),1.81(m,0.15H),1.90(d,0.15H).1.94(m,0.85H),2.21(d,0.85H),3.67(m,1H),3.82(s,3H),4.01(m,1H),4.13(m,1H),4.73(m,0.85H),4.79(d,0.15H),4.80(d,1H),6.90(d,2H),7.22(d,2H)。

步骤24.6:3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基-5-(2-甲基烯丙基) 唑烷-2-酮的 (4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体

与步骤23.6所述的操作类似地由((2S)-3-羟基-5-甲基己-5-烯-2-基)(4-甲氧基苄基)氨基甲酸苄基酯的(2S,3R)-和(2S,3S)-非对映异构体的3:1混合物制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→1:1)纯化后得到了标题化合物，为(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的3:1混合物:t_R＝1.112min(UPLC1)；t_R＝1.05min(LC-MS3)；ESI-MS:276[M+H]⁺(LC-MS3)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ1.13(d,2.2H),1,20(d,0.8H),1.76(s,0.8H),1.80(s,2.2H),2.23(ddd,0.25H),2.27(dd,0.75H),2.39(dd,0.25H)2.46(dd,0.75H),3.28(m,0.25H),3.68(m,0.75H),3.83(s,3H),3.99(d,0.75H),4.04(d,0.35H),4.14(m,0.25H),4.62(m,0.75H),4.70-4.90(m,4H),6.90(d,2H),7.25(d,2H)。

步骤24.7:(3-羟基-5-甲基己-5-烯-2-基)(4-甲氧基苄基)氨基甲酸苄基酯的 (2S,3R)-和(2S,3S)-非对映异构体

与步骤23.7所述的操作类似地由(S)-4-甲氧基苄基(1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸苄基酯和3-溴-2-甲基丙烷-1-烯制备了标题化合物，得到标题化合物，为(2S,3R)-和(2S,3S)-非对映异构体的3:1混合物:t_R＝1.322min(主要异构体)和1.329min(次要异构体)(UPLC1)；t_R＝1.23min(主要异构体)和1.24min(次要异构体)(LC-MS3)；ESI-MS:384[M+H]⁺(LC-MS3)。

实施例25:在LC MS3上第二个洗脱的产物，其为(4S,5R)-和(4S,5S)-3-(2'- 氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-5-((S)-2-羟基丙基)-4-甲基- 唑烷-2-酮的9:1混合物

未测定2-羟基丙基部分的绝对立体化学，任意指定为(S)-构型。

与实施例23所述的操作类似地由(4S,5R)-和(4S,5S)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-5-((S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-4-甲基唑烷-2-酮的8:1混合物和TBAF制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc5:1→EtOAc/MeOH10:1)纯化和从MeOH中重结晶后得到了标题化合物，为白色固体:TLC(EtOAc)R_f＝0.50；t_R＝0.87min(次要的(4S,5S)-非对映异构体)和0.89min(主要的(4S,5R)-非对映异构体)(LC-MS3)；ESI-MS:484[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤25.1:(4S,5R)-和(4S,5S)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-5-((S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-4-甲基唑烷-2-酮

未测定被保护的2-羟基丙基部分的绝对立体化学，任意指定为(S)-构型。

与步骤22.1所述的操作类似地由(4S,5R)-和(4S,5S)-5-((R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-4-甲基唑烷-2-酮的7:1混合物和中间体B制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→EtOAc)纯化后得到了标题化合物，为(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的8:1混合物:TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.45；t_R＝1.58min(LC-MS3)；ESI-MS:722[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤25.2:(4S,5R)-和(4S,5S)-5-((S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-4-甲基唑烷-2-酮

与步骤21.1所述的操作类似地由(4S,5R)-和(4S,5S)-5-((S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-4-甲基唑烷-2-酮的7:1混合物和中间体A制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→3:1)纯化和从MeOH/THF中结晶后得到了标题化合物，为(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的7:1混合物:TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.65；t_R＝1.67min(LC-MS3)；ESI-MS:595,597[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤25.3:(4S,5R)-和(4S,5S)-5-((S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-4- 甲基唑烷-2-酮

与步骤23.3所述的操作类似地由(4S,5R)-和(4S,5S)-5-((S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮的7:1混合物制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→2:1)纯化后得到了标题化合物，为无色油状物，为(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的10:1混合物:TLC(己烷/EtOAc1:1)R_f＝0.30；t_R＝1.38min(LC-MS3)；ESI-MS:415[M+NH₄]⁺(LC-MS3)。

步骤25.4:(4S,5R)-和(4S,5S)-5-((S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮

与步骤23.4所述的操作类似地由步骤24.5中制备的(4S,5R)-和(4S,5S)-5-((S)-2-羟基丙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮的7:1混合物制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→EtOAc)纯化后得到了标题化合物，为(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的7:1混合物:TLC(己烷/EtOAc3:1)R_f＝0.26；t_R＝1.56min(LC-MS3)；ESI-MS:540[M+Na]⁺(LC-MS3)。

实施例26:(4S,5R)-和(4S,5S)-3-(2'-氨基-2-吗啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-联嘧啶]-6-基)-5-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-甲基唑烷-2-酮

与步骤22.1所述的操作类似地由(4S,5R)-和(4S,5S)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-5-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-甲基唑烷-2-酮的5:1混合物和中间体B制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc/MeOH90:10:1→10:100:10)纯化并且从MeOH中重结晶后得到了标题化合物，为白色固体，为(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的7:1混合物:TLC(EtOAc)R_f＝0.43；t_R＝0.93min(LC-MS3)；ESI-MS:498[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤26.1:(4S,5R)-和(4S,5S)-3-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-5-(2-羟基-2-甲基- 丙基)-4-甲基唑烷-2-酮

与步骤21.1所述的操作类似地由(4S,5R)-和(4S,5S)-5-((S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基)氧基)丙基)-4-甲基唑烷-2-酮的5:1混合物和中间体A制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc10:1→EtOAc)纯化后得到了标题化合物，为淡黄色泡沫，为(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的5:1混合物:TLC(EtOAc/MeOH10:1)R_f＝0.55；t_R＝1.02min(LC-MS3)；ESI-MS:371,373[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤26.2:(4S,5R)-和(4S,5S)-5-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-甲基唑烷-2-酮

与步骤23.3所述的操作类似地由(4S,5R)-和(4S,5S)-5-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮的5:1混合物制备了标题化合物，在通过闪式色谱法(己烷-EtOAc1:1→EtOAc-MeOH5:1)纯化后得到了标题化合物，为无色油状物，为(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的5:1混合物:TLC(EtOAc/MeOH10:1)R_f＝0.40；t_R＝0.41min(LC-MS3)；ESI-MS:174[M+H]⁺(LC-MS3)。

步骤26.3:(4S,5R)-和(4S,5S)-5-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基唑烷-2-酮

于-78℃在氩气下向2-((4S,5R)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基-2-氧代唑烷-5-基)乙酸甲酯和2-((4S,5S)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基-2-氧代唑烷-5-基)乙酸甲酯的3:1混合物(2.0g,6.82mmol)在THF(50mL)中的溶液中缓慢地加入3M氯化甲基镁的THF溶液(6.82ml,20.46mmol)。添加后，将反应混合物温热至室温。在添加10％NH4Cl水溶液后，用EtOAc萃取产物。用H₂O洗涤合并的萃取物，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→EtOAc)纯化后得到了标题化合物，为无色油状物(1.2g,59％,(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的3:1混合物):TLC(CH₂Cl₂/MeOH10:1)R_f＝0.43；t_R＝0.80min和0.81min(LC-MS3)；ESI-MS:294[M+H]⁺(LC-MS3)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ1.12(d,2.25H),1.22(d,0.75),1.32(s,1.5H),1.34(s,4.5H),1.68(dd,1H),1.86(dd,0.25H),1.93(dd,0.75H),3.23(m,0.25H),3.64(m,0.75H),3.83(s,3H),3.99(d,0.75H),4.04(d,0.25H),4.26(d,0.25H),4.72(d,0.25H),4.73(m,0.75H),4.80(d,0.75H),6.89(d,0.5H),6.90(d,1.5H),7.23(d,0.5H),7.24(1.5H)。

步骤26.4:2-((4S,5R)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基-2-氧代唑烷-5-基)乙酸甲酯和2-((4S,5S)-3-(4-甲氧基苄基)-4-甲基-2-氧代唑烷-5-基)乙酸甲酯

向(3R,4S)-和(3S,4S)-3-羟基-4-((4甲氧基苄基)氨基)戊酸甲酯的3:1混合物(4.1g,10.74mmol)在CH₂Cl₂(80mL)中的混悬液中加入DIEA(8.44ml,48.3mmol)，在0℃加入溶于CH₂Cl₂(10mL)的碳酸双(三氯甲基)酯(2.389g,8.05mmol)的溶液。于室温搅拌0.5h后，将反应混合物加入到饱和NaHCO₃溶液中，用CH₂Cl₂萃取产物。用H₂O洗涤合并的萃取物，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩，在通过闪式色谱法(己烷/EtOAc20:1→EtOAc)纯化后得到了标题化合物，为淡黄色泡沫(2.02g,63％,(4S,5R)-和(4S,5S)-非对映异构体的3:1混合物):TLC(甲苯/EtOAc1:1)R_f＝0.47；t_R＝0.84min(LC-MS3)；ESI-MS:294[M+H]⁺(LC-MS3)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ1.11(d,2.25H),1.27(d,0.75H),2.57(dd,0.25H),2.67(dd,0.75H),2.75(dd,0.25H),2.81(dd,0.75H),3.34(m,0.25H),3.70(s,0.75H),3.73(s,2.25H),3.77(m,0.75H),3.83(s,3H),3.99(d,0.75H),4.04(d,0.25H),4.44(m,0.25H),4.75(d,0.25H),4.78(d,0.75H),4.88(m,0.75H),6.90(d,2H),7.22(d,0.5H),7.23(d,1.5H)。

步骤26.5:(3R,4S)-和(3S,4S)-3-羟基-4-((4-甲氧基苄基)氨基)戊酸甲酯

向(3R,4S)-4-氨基-3-羟基戊酸甲酯盐酸盐[111061-25-7](2.17g,11.8mmol)在CH₂Cl₂(60mL)和MeOH(60mL)中的混悬液中加入NaOAc(1.357g,16.54mmol)，搅拌10min后，加入对甲氧基苯甲醛(1.37mL,11.2mmol)和分子筛(2g)。将反应混合物于室温搅拌16h。添加2mL AcOH后，历经30min的时间分份加入NaBH₃CN(1.11g,17.7mmol)。于室温再搅拌30min后，过滤反应混合物，用4N HCl水溶液酸化滤液，蒸发至干。首先用Et₂O洗涤残余物，然后混悬于CH₂Cl₂/MeOH1:1中，过滤出无机物。浓缩滤液，在50℃干燥4h后得到标题化合物，为米黄色固体(2.9g,80％,(3R,4S)-和(3S,4S)-非对映异构体的3:1混合物):t_R＝0.46min((3R,4S)-非对映异构体)和0.48min((3S,4S)-非对映异构体)(LC-MS3)；ESI-MS:268[M+H]+(LC-MS3)。

下表中提供了上述实施例的化合物的¹H NMR数据。

另一些物理性质

由实施例10和18批次A–E获得的结晶物质被进一步表征如下。

熔点测定:

通过差示扫描量热法(DSC)测定熔点。使用TA Instruments,DSC2000,顺序号100036测定DSC。将1-5mg样品称重入标准铝盘(盘+盖,TA900786.901,900779.901)。使用Thermal Advantage Q-Series软件V.2.6.0.367和Thermal Advantage软件V4.6.9操作该仪器。使用Universal AnalysisV4.3A Build4.3.0.6表征热事件。相对于空盘测定样品。根据如下方案处理样品：

步骤1:在-40℃平衡

步骤2:加热10℃/min/300℃

调整：无

得到的图如图1、3、5、7、9和11中所示。

粉末X-射线衍射(PXRD):

将约2-5mg量的样品置于物镜载玻片上并且使其位于具有CuKa阳极的Bruker D8GADDS Discover(顺序号002482)上的X-射线束的中心。样品-检测器距离为30cm。记录5与40°2-θ之间的两个框架。使用GADDS软件4.1.27合并所述框架。使用EVA10.0.0进行评价。

得到的图如图2、4、6、8、10和12中所示。

将代表性的2-θ[°]峰提供在下面的表中：

图2(PXRD实施例10)

2-θ[°]	强度
		9.9	中
14.2	中
		20.1	高
23.2	中
		29.7	中

图4(PXRD实施例18A)

2-θ[°]	强度
		8.7	中
10.6	高
		18.5	低
25.3	中
		30.3	中

图6(PXRD实施例18B)

2-θ[°]	强度
		10.3	中
15.2	高
		16.0	中
22.7	中
		23.7	中

图8(PXRD实施例18C)

2-θ[°]	强度
		10.3	中
15.2	高
		16.0	中

20.3	中
		29.0	低

图10(PXRD实施例18D)

2-θ[°]	强度
		10.3	中
15.2	高
		16.0	中
16.8	低
		20.3	中

图12(PXRD实施例18E)

2-θ[°]	强度
		10.2	中
15.1	高
		15.9	中
20.1	中
		29.0	中

生物学活性

可以如下证明本发明的化合物作为PI3激酶抑制剂的效力：化合物稀释液的制备(384-孔)

将测试化合物溶于DMSO(10mM)，使用各Novartis化合物套管转入带有独特2D基质芯片的1.4mL平底或V-形基质试管中。这些芯片的编号可区分地与Novartis Pharma Numbers关联。如果不即刻使用，则将储备液贮存在–20℃。为了进行测试操作，将小瓶解冻，用扫描器鉴定，由此生成指导随后操作步骤的操作表。

如果在384-孔中测试性质，则如下文所述的那样对各实验用DMSO手动稀释化合物(96个孔能容纳8个(单点)浓度的10个化合物)或者如下文所述的那样制备化合物。这种方式能容纳最多8个浓度的40个测试化合物(单点)的测定，包括4个参比化合物。稀释方案包括制作“预稀释板”、“主板”和“测定板”。

预稀释板：用96孔聚丙烯板作为预稀释板。制备总计4个预稀释板，在板位置A1-A10上各自包括10个测试化合物，在A11上包括1个标准化合物，在A12上包括1个DMSO对照。在表1中总结了稀释步骤的方式。程序已经被设计成在HamiltonSTAR机器人上运行这些移液步骤。

表1预稀释板的稀释方式

用H₂O将DMSO饱和至10％浓度。Vol:体积，Conc:浓度，Dil.ratio:稀释比，Fin.c:终浓度。

主板：将4个“预稀释板”的100μL各化合物稀释液(包括标准化合物和对照)转到384孔“主板”中，包括如下浓度：1’820、564、182、54.6、18.2、5.46、1.82和0.546μM，分别在90％DMSO中。

测定板：然后通过将50nL“主板”的各化合物稀释液移液入384-孔“测定板”中制备相同的“测定板”。将化合物与相当于1:181稀释液的4.5μL测定组分+4.5μL酶混合，从而使得分别达到终浓度10、3.0、1.0、0.3、0.1、0.03、0.01和0.003μM。“主板”的制备由Matrix PlateMate Plus机器人处理，并且用HummingBird机器人复制“测定板”。

生成表达构建体的方法

如所述的那样(Maira SM,Stauffer F,Brueggen J,Furet P,Schnell C,Fritsch C,Brachmann S,Chène P,de Pover A,Schoemaker K,Fabbro D,Gabriel D,Simonen M,Murphy L,Finan P,Sellers W,García-EcheverríaC(2008),Mol Cancer Ther.7:1851-63和Maira SM,Pecchi S,Brueggen J,Huh K,Schnell C,Fritsch C,Nagel T,Wiesmann M,Brachmann S,Dorsch M,Chène P,Schoemaker K,De Pover A,Menezes D,Fabbro D,Sellers W,García-Echeverría C,Voliva CF(2011),Mol.Cancer Ther.，已接受)克隆、表达和纯化催化活性人PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和mTOR。

PI3Kα、PI3Kβ的生物化学测定

基于发光的ATP检测试剂KinaseGlo是通过Catalys,Wallisellen,瑞士得自Promega,(目录号V6714,批次236161)。(L-α-磷脂酰肌醇(PI),肝,牛)得自Avanti Polar Lipid(目录号840042C,Lot#LPI-274)，磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP(4,5)2(Avanti,目录号840046X)或L-α-磷脂酰肌醇(PI)得自Avanti Polar Lipid(目录号840042C,Lot#LPI-274)。L-α-磷脂酰丝氨酸(PS)来自Avanti Polar Lipid(目录号840032C)，正-辛基葡糖苷来自AvantiPolar Lipid(目录号10634425001)。发光是充分确立的读数，用以确定ATP浓度，因此可用于跟踪许多激酶的活性，与它们的底物无关。激酶Glo发光激酶测定法(Promega,Madison/WI,USA)是通过在激酶反应后对溶液中剩余的ATP的量进行定量来测定激酶活性的同质HTS方法。

如章节8.2中所述的那样将50nL化合物稀释液调配到黑色384-孔小体积非结合苯乙烯(NBS)板(Costar目录号NBS#3676)上。将以10mg/ml甲醇溶液形式提供的L-α-磷脂酰肌醇(PI)转入玻璃试管中并且在氮气流下干燥。然后通过涡旋将其重新混悬于3％辛基葡糖苷中并且贮存在4℃。加入5μL PI/OG与PI3Ka和Pi3Kb亚型的混合物。通过添加5μl ATP-混合物启动激酶反应，所述ATP-混合物在终体积中包含10μL10mMTRIS-HCl pH7.5、3mM MgCl₂、50mM NaCl、0.05％CHAPS、1mM DTT和1μM ATP，且该反应在室温下进行。用10μl KinaseGlo停止反应，10min后用Synergy2读出器、使用0.1秒/孔的积分时间对板进行读数。将2.5μM NVP-BGT226(标准品)加入到测定板中，以产生100％的激酶反应抑制，用溶剂媒介物(90％DMSO的水溶液)得到0％抑制。将NVP-BGT226用作参比化合物并且一式两份地以16个稀释点的形式被包括在所有测定板中。

在8个浓度(通常为10、3.0、1.0、0.3、0.1、0.030、0.010和0.003μM)下每个化合物的百分比抑制的IC₅₀值(n＝2)是通过使S形剂量-响应曲线拟合至抑制剂浓度范围的测定读数的图来得出的。所有拟合均使用程序XLfit4(ID Business Solutions,Guildford,UK)进行。

PI3Kδ、PI3Kγ的生物化学测定

TR-FRET Adapta^TM通用激酶测定试剂盒购自Invitrogen Corporation(Carlsbad/CA,USA)(目录号PV5099)。该试剂盒含有如下试剂：AdaptaEu-抗-ADP抗体(在HEPES缓冲盐水中的铕标记的抗-ADP抗体，目录号PV5097)、Alexa647–标记的ADP示踪物(在HEPES缓冲盐水中的Alexa647–标记的ADP示踪物，目录号PV5098)、专属TR-FRET稀释缓冲液pH7.5(目录号PV3574)。

PIK3CD底物磷脂酰肌醇得自Invitrogen(由在50mM HEPES pH7.5中的2mM PI组成的囊泡；目录号PV5371)。PIK3CG底物磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP(4,5)2得自Invitrogen(由在50mM HEPES pH7.5、3mMMgCl2、1mM EGTA中的1mM PIP2:19mM PS组成的PIP2:PS大单层囊泡；目录号PV5100)。

时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)是基于两种相邻染料之间的通过共振从一种染料中激发的电子(供体)到相邻染料的电子(受体)的能量转移、然后作为光子释放的技术。该能量转移是通过受体荧光发射的增加和供体荧光发射的减少来检测的。用于蛋白激酶的TR-FRET测定法使用长寿命镧系元素铽或铕螯合物作为供体种类，其通过在被闪光灯激发源激发后引入延迟克服了来自化合物自体荧光或沉淀化合物的光散射的干扰。通常将结果表示为受体与供体荧光团的强度之比。这类值的比值计算性质校正了孔之间的测定体积差异，并且校正了因有色化合物导致的猝灭效应。可以将Adapta^TM测定法分成两个阶段：激酶反应阶段和ADP检测阶段。在激酶反应阶段中，将所有激酶反应组分加入到孔中并且使反应孵育对每种激酶而言特定的一段设定时间。反应后，将Eu-标记的抗-ADP抗体、Alexa647–标记的ADP示踪物和EDTA(用于停止激酶反应)的检测溶液加入到测定孔中。通过激酶反应形成的ADP将从抗体中置换Alexa647–标记的ADP示踪物，从而导致TR-FRET信号减少。在存在抑制剂的情况下，通过激酶反应形成的ADP的量减少，得到的完整抗体-示踪物相互作用维持高TR-FRET信号。在Adapta^TM测定法中，供体(铕-抗-ADP抗体)在340nm被激发并且将其能量转移至受体(Alexa647–标记的ADP示踪物)。来自Alexa647的发射可以使用中心为665nm的过滤器监测，因为它位于在615/620nm测定的供体发射峰之间。

如章节2.2中所述的那样将50nL化合物稀释液调配到白色384-孔小体积聚苯乙烯板上。然后将5μL PI3Kg和PI3Kd和脂质底物(PI或PIP2:PS)、然后是5μL ATP(最终测定体积10μL)于室温孵育。用于Adapta^TMTR-FRET测定法的标准反应缓冲液含有10mM Tris-HCl pH7.5、3mM MgCl2,50mM NaCl、1mM DTT、0.05％CHAPS。用5μL在TR-FRET稀释缓冲液(IVG专属)中含有Eu-标记的抗-ADP抗体和Alexa647–标记的ADP示踪物的EDTA混合物停止反应。15-60min后用Synergy2读数器、使用0.4秒的积分时间和0.05秒的延迟对板进行读数。通过用标准反应缓冲液替代PI3K进行激酶反应的100％抑制的对照。用化合物的溶剂媒介物(90％DMSO的H₂O溶液)得到0％抑制的对照。用标准化合物NVP-BGT226作为参比化合物并且一式两份地以16个稀释点的形式包括在所有测定板中。

使用Excel拟合软件或Graphpad Prism分析数据。通过使S形剂量-响应曲线拟合至抑制剂浓度范围的测定读数的图得到EC₅₀值。所有拟合均使用程序XLfit4(ID Business Solutions,Guildford,UK)进行。在8个浓度(通常为10、3.0、1.0、0.3、0.1、0.030、0.010和0.003μM)下每个化合物的百分比抑制的EC₅₀值的测定(n＝2)是通过使S形剂量-响应曲线拟合至抑制剂浓度范围的测定读数的图来得出的。所有拟合均使用程序XLfit4(IDBusiness Solutions,Guildford,UK)进行。

mTOR的生物化学测定

用于蛋白激酶的TR-FRET测定法使用长寿命镧系元素铽或铕螯合物作为供体种类，其通过在被闪光灯激发源激发后引入延迟克服了来自化合物自体荧光或沉淀化合物的光散射的干扰。通常将结果表示为受体与供体荧光团的强度之比。这类值的比值计算性质校正了孔之间的测定体积差异，并且校正了因有色化合物导致的猝灭效应。结合测定基于Alexa647-标记的ATP-竞争性激酶抑制剂结合和置换所关注的激酶。Invitrogen的“激酶示踪物”已经被研发用以针对宽范围的激酶靶标，其基于ATP-竞争性激酶抑制剂，使得它们适合用于检测结合ATP位点或改变ATP位点构象的别构位点的任意化合物。结合ATP位点的抑制剂包括仅结合ATP位点的I型激酶抑制剂和结合ATP位点和脱离DFG(非活性)构象中暴露的疏水位点二者的II型抑制剂(例如/伊马替尼、索拉非尼(Sorafenib)、BIRB-796)。III型抑制剂是不与ATP竞争的化合物，其被不严谨地称作别构抑制剂。15种不同的III型抑制剂的研究显示除一种化合物外所有化合物均在结合测定中被检测，所述结合测定与活性测定具有相等的效力。唯一的例外是一种底物竞争性化合物，因此不是真正的别构抑制剂。

与大部分基于荧光的激酶活性测定法相反，Eu³⁺激酶结合测定法可以连续读数，其有利于评价具有缓慢结合动力学的化合物。此外，不同于大部分活性测定法，结合测定法可以使用活性或非活化的激酶制品进行，这使得能表征优先结合非活化的激酶的化合物，例如/伊马替尼和一些别构抑制剂。

在Lanthascreen^TM激酶结合测定法中，供体(Eu³⁺-抗-GST抗体)在340nm被激发并且将其能量转移至受体(Alexa647–标记的ATP-竞争性激酶抑制剂＝示踪物-314)。来自示踪物-314(Alexa647抑制剂)的发射可以使用中心在665nm的过滤器监测，因为它位于在615/620nm测定的供体发射峰之间。示踪物-314和Eu³⁺-抗-GST抗体与激酶的结合导致从Eu³⁺-供体荧光团至示踪物-314上的647-受体荧光团的高度FRET。抑制剂与激酶的结合竞争与示踪物的结合，从而导致FRET损失。

如章节2.2中所述的那样将50nL化合物稀释液调配到白色384-孔小体积聚苯乙烯板上。然后将5μL GST-mTOR和铕-抗-GST抗体、然后是5μL示踪物-314(最终测定体积10μL)于室温孵育。用于Lanthascreen^TM激酶结合测定的标准反应缓冲液含有50mM HEPES pH7.5、5mM MgCl2、1mM EGTA、0.01％普流罗尼克F-127。60min后用Synergy2读数器、使用0.2微秒的积分时间和0.1微秒的延迟对板进行读数。

为了计算发射比，用来自受体(Alexa647-标记的示踪物-314)的在665nm发射的信号除以来自供体(Eu³⁺抗-GST抗体)的在620nm发射的信号。

用化合物的溶剂媒介物(90％DMSO的H₂O溶液)得到0％抑制的对照。通过在含有GST-mTOR和铕抗-GST抗体的混合物中添加10μM进行相对100％抑制的对照。用Eu³⁺抗-GST抗体、不使用GST-mTOR得到另外的绝对0％抑制的对照。

PI3Kα、β和δ的细胞测定

AlphaScreen(扩增的发光亲近均匀性测定法(Amplified LuminescentProximity Homogeneous Assay),ALPHA,Perkin Elmer)是一种研究均匀微量滴定板格式中的生物分子相互作用的基于非放射性珠的亲近测定技术。商标名SureFire表示适合于通过使用匹配的由抗-磷酸-激酶和抗-激酶抗体组成的抗体对来定量细胞裂解物中的内源性细胞蛋白的磷酸化的AlphaScreen测定法。该测定法允许表征细胞中的激酶信号发放以及测定激酶抑制剂作用。与标准测定技术例如ELISA相比AlphaScreen技术提供了多个优点，因为它避免了耗时的洗涤操作并且减少了板处理。此外，它至少小型化至384-孔格式并且提供了低至毫微微摩尔范围的敏感度，这取决于各AlphaScreen SureFire测定试剂盒中所包括的抗体的亲和性。高敏感度是通过内在扩增机制实现的，其涉及单态氧分子的产生。SureFire测定试剂盒是可商购获得的，针对特定靶标，包括经验证的抗体对(PerkinElmer)。该报道描述了应用于AlphaScreen SureFire测定的常用操作和用于基于细胞的测定法中常规激酶抑制剂性质评测的各半自动化步骤。

如所述的那样(Maira SM,Stauffer F,Brueggen J,Furet P,Schnell C,Fritsch C,Brachmann S,Chène P,de Pover A,Schoemaker K,Fabbro D,Gabriel D,Simonen M,Murphy L,Finan P,Sellers W,García-EcheverríaC(2008),Mol Cancer Ther.7:1851-63和Maira SM,Pecchi S,Brueggen J,Huh K,Schnell C,Fritsch C,Nagel T,Wiesmann M,Brachmann S,Dorsch M,Chène P,Schoemaker K,De Pover A,Menezes D,Fabbro D,Sellers W,García-Echeverría C,Voliva CF(2011),Mol.Cancer Ther.,已接受)制备稳定过表达活化的PI3K I类同工型Rat-1pBABEpuroMyr-HA-hp110δ(Rat-1_PI3Kδ)和Rat-1pBABEpuro Myr-HA-hp110α(Rat-1_PI3Kα)和Rat-1pBABEpuro Myr-HA-hp110β(Rat-1_PI3β)的Rat-1细胞系。将所有细胞系在37℃/5％CO₂/90％湿度下在加湿的CO₂培养箱中在完全生长培养基(DMEM高葡萄糖、10％(v/v)胎牛血清、1％(v/v)MEM NEAA、10mM HEPES、2mM L-谷氨酰胺、嘌罗霉素(对于Rat-1_PI3Kδ和Rat-1_PI3Kα而言10μg/mL；对于Rat-1_PI3β而言4ug/mL),1％(v/v)Pen/Strep)中培养至90％汇合，每周分开2次。

使用下列物质进行Rat-1细胞裂解物中p-AKT(S473)的检测：Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM)高葡萄糖(Gibco Invitrogen,Basel,瑞士,目录号41965)，合格的热灭活的胎牛血清(HI FBS；Gibco Invitrogen,Basel,瑞士,批次16140)，MEM非必需氨基酸(NEAA；Gibco Invitrogen,Basel,瑞士,目录号11140)，HEPES(Gibco Invitrogen,Basel,瑞士,目录号15630)，青霉素/链霉素(Pen/Strep,100x；Gibco Invitrogen,Basel,瑞士,目录号15140-122)，L-谷氨酰胺(Gibco Invitrogen,Basel,瑞士,目录号25030)，嘌罗霉素(Sigma Aldrich,Buchs,瑞士,目录号P9620)，DMSO(MERCK,Dietikon,瑞士,目录号8.02912.2500)，H₂O，MilliQ-H₂O,另有说明的除外(MILLIPORE QGARDOOR1,Millipore,Zug,瑞士)，牛血清白蛋白(BSA；Sigma Aldrich,Buchs,瑞士目录号A8412)，SureFire p-Akt1/2(Ser473)测定试剂盒(PerkinElmer,Schwerzenbach,瑞士,目录号TGRAS50K)。

p-Akt(S473)SureFire测定法测定细胞裂解物中内源性细胞Akt1/2在Ser473的磷酸化。使用稳定表达myr-HA-标记形式的人PI3Kδ、PI3Kα或PI3Kβp110催化亚单位同工型的Rat-1细胞，该测定被开发为在384-孔格式中的两板方案。

为了进行化合物测试，将细胞以4000个(Rat-1_PI3Kδ)、7500(Rat-1_PI3Kα)或6200(Rat-1_PI3Kβ)细胞的密度在20ul完全生长培养基中接种到细胞培养物处理的384-孔板中并且使其在37℃/5％CO₂/90％湿度下生长24h。在化合物转移前即刻除去完全培养基，加入30ul测定缓冲液(DMEM高葡萄糖、1×MEM NEAA、10mM HEPES、2mM L-谷氨酰胺、0.1％(w/v)BSA)，将10ul化合物预稀释液转移到细胞中。为了在2010年2月后测试，用测定缓冲液替换完全生长培养基，其揭示了类似的结果(数据未给出)。在用化合物处理1h后，通过添加补充了0.24％(w/v)BSA的20ul裂解缓冲液裂解细胞。根据制造商的说明使用SureFire p-Akt1/2(Ser473)测定试剂盒进行p-AKT(Ser473)的检测，在12ul的总检测体积中使用5ul细胞裂解物。

mTOR的细胞测定

开发了基于细胞的测定法(384-孔格式)用于测定化合物对MEF(小鼠胚胎成纤维细胞)中的细胞mTOR激酶的作用，所述MEF(小鼠胚胎成纤维细胞)原子缺乏TSC1(肺结核复合物1(Tuberosclerosis Complex1))(一种有效的mTOR激酶活性抑制剂)的小鼠。由于缺乏TSC1，mTOR激酶被组成型活化，导致为mTOR下游靶标之一的S6激酶1(S6K1)的Thr389持久磷酸化。

使用能测定S6K1上Thr389磷酸化的SureFire试剂盒，以能定量测定细胞裂解物中S6K1的磷酸-T389的Alpha-Screen方式开发、验证并且应用了测定法。用mTOR特异性(或mTOR途径-)抑制剂处理MEFTSC1-/-细胞剂量依赖性地降低了S6K1上磷酸-T389的水平，从而能计算IC50值。这些值与使用生物化学mTOR ATP-结合测定法得到的那些值一致，从而能定量比较mTOR抑制剂的效力。

将TSC1-/-MEFs细胞(Kwiatkowski,D.J.,Zhang,H.,Bandura,J.L.,Heiberger,K.M.,Glogauer,M.,el-Hashemite,N.和Onda,H.(2002)Hum.Mol.Genet.11,525–534)在补充了10％FBS(Invitrogen)、2mM谷氨酰胺和1％(w/v)青霉素/链霉素的DMEM高葡萄糖培养基中在37℃、5％CO₂下培养。

用于测定P70S6激酶磷酸化的SureFire试剂盒购自Perkin Elmer(p70S6K p-T389,#TGR70S50K)，按照供应商的说明并且根据用于SureFire测定的一般方法进行测定。简言之，将5μL细胞裂解物转移到384-孔白色代用板(proxy-plate)(用于发光读数)中，与7μL A和5μL B混合(终体积：12_μL)。在黑暗中于室温孵育3h后，用Envision读数器(PerkinElmer)对发光进行读数。将未处理的细胞用作对照(高对照)，将用3μMBEZ235处理的细胞用作低对照。将高对照与低对照得到的信号之间的测定窗定义为100％，将化合物作用表示为抑制百分比。根据剂量响应曲线、通过图外推计算IC50值。

在下面的表中提供了使用上述测定法得到的结果，其中SEM是平均值的标准误差，n是数据测量值的数值。

生物化学PI3Kα

*不同的独立的测定产生了＜0.003uM的值。

生物化学PI3Kβ

生物化学PI3Kδ

生物化学PI3Kγ

*3个值中2个值＞9.1。不能计算SEM。

**两个值都＞9.1。不能计算SEM。

细胞测定PI3Kα

细胞测定PI3Kβ

*第四次测定3.9uM，异常值

**第二个值＞10。因此不能计算SEM。

细胞测定PI3Kδ

*第二个值＞10。因此不能计算SEM。

细胞测定mTOR

*第二个值＞2.27。因此不能计算SEM。

**4个值中3个值＞2.27。因此不能计算SEM。

***5个值中3个值＞2.27。因此不能计算SEM。

****所有值都＞2.27。因此不能计算SEM。

如下测定了脱靶效应(微管蛋白结合的证据)。

细胞离心涂片器(cytopin)测定描述:

细胞周期G2/M阻止细胞离心涂片器测定，以便检测MAPP衍生物的微管蛋白结合(脱靶)的结合活性：将5×10⁵个细胞A2058细胞在具有2mLDMEM(含有1％丙酮酸钠、1％谷氨酰胺和10％FCS的高葡萄糖)铺板在6-孔群中。18小时后，以5μM的浓度加入测试品(添加1μL10mM的测试品溶液)。24小时后，对细胞进行胰蛋白酶消化并且转到15mL锥形试管中。然后通过离心沉淀细胞，重新用PBS/O(含有10％FCS)混悬。用CASY计数器对细胞进行计数，将每个样品平衡至1×10⁶个细胞/mL。然后将200μL(2×10⁵个细胞)转入1.5mL细胞离心涂片器试管(HeraeusSepatec,Ref1152)中，使用含有调整在显微镜载玻片(Thermo-Scientific,Ref:#PH040820)上部的Sepatech系统(Heraeus,Ref#3425)的细胞离心涂片器系统在4℃以50x g离心5min。然后将细胞在室温固定15min，按照制造商的建议用Diff测定法(Medion Diagnostics,Ref:#130832)染色。当在显微镜下检查载玻片时，通过在细胞中加强染色显示了反映G2/M抑制的凝聚的DNA。目测评价染色以确定凝聚的DNA的存在并且给出得分，其中0＝未观察到凝聚的DNA(表示无脱靶活性)，1＝(表示弱脱靶活性)，2＝(表示中度脱靶活性)，3＝观察到大量凝聚的DNA(表示强脱靶活性)。

在下面的表中给出了使用该方法得到的数据：

实施例号	得分
		18	0
15	0
		1	0
4	0
		10	0
19	0
		13	0
20	1-2
		6	0
8	0
		5	0
16	0
		7	n.d.
12	0
		2	n.d.
3	0

n.d.＝未进行

Claims

1.式(I)的化合物

其中

其中R^1a＝H或-CH₃

或其中D＝氘；

R²＝H且R³＝H；

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH；或

R⁴＝-CH₂OH，且R⁵＝H；

或者

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵连接并且形成-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH；

或者

R²＝H且R⁴＝H；且

R³和R⁵连接并且形成基团或基团

或者

R³＝H且R⁵＝H；且

R²和R⁴连接并且形成基团

或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R³＝H且R⁴＝H；

R²和R⁵＝-(CH₂)₄-；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃；

或者

R⁴＝H且R⁵＝H；且

R²＝-CH₂OH，且R³＝-CH₃；或

R²＝H或-CH₃，且R³＝-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

4.根据权利要求1至3中任意一项所述的化合物，其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

5.根据权利要求1至4中任意一项所述的化合物，其是式(IA’)的化合物

其中R^1a＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

6.根据权利要求1所述的化合物，其是式(IA)的化合物：

其中

R²＝-CH₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH或-CH₂OC(O)H；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

7.根据权利要求6所述的化合物，其中

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH，且R⁵＝H，或

R⁴＝H，且R⁵＝-CH₃或-CH₂OH，或

R⁴＝H或-CH₃且R⁵＝H或-CH₃，

或其药学上可接受的盐。

8.根据权利要求7所述的化合物，其中

R²＝-CH₃或-CH₂OH；

R³＝H；

R⁴＝-CH₃、-CH₂OH或-CH₂CH₂OH且R⁵＝H，或

R⁴＝H且R⁵＝CH₃或-CH₂OH，

或其药学上可接受的盐。

9.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其选自

10.选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：

11.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1至10中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的载体。

12.组合产品，其包含治疗有效量的权利要求1至10中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，和一种或多种另外的治疗活性剂。

13.治疗癌症的方法，其包括给个体施用治疗有效量的权利要求1至10中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

14.根据权利要求1至10中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药剂。

15.根据权利要求1至10中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症。

16.权利要求1至10中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药剂中的用途。