BR112014020672B1 - Compostos de oxazolidin-2-ona como inibidores de pi3ks, seus usos, e composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

compostos de oxazolidin-2-ona como inibidores de pi3ks, seus usos, e composição farmaceutica. a presente invenção refere-se a compostos de oxazolidin-2- diona pirimidino-substituídos que atuam como inibidores de pi3k (fosfatidilinositol-3-quinase), assim como composições farmacêuticas desses, métodos para sua fabricação e usos para o tratamento de condições, doenças e distúrbios dependentes de pi3k.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção se refere a compostos de oxazolidin-2- diona pirimidino-substituídos que atuam como inibidores de PI3K (fos- fatidilinositol-3-quinase), assim como composições farmacêuticas desses, métodos para sua fabricação e usos para o tratamento de condições, doenças e distúrbios dependentes de PI3K.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Fosfatidilinositol-3-quinases (PI3Ks compreendem uma família de lipídeos quinases que catalisam a transferência de fosfato da posição D-3'de inositol lipídeos para produzir fosfoinositol-3-fosfato (PIP), fosfoinositol-3,4-difosfato (PIP2) e fosfoinositol-3,4,5-trifosfato (PIP3) que, por sua vez, atuam como mensageiros secundários em cascatas de sinalização pelas proteínas de ancoragem que contêm homologia com a pleckstrina, FYVE, Phox e outros domínios de ligação a fosfolipídeo em uma variedade de complexos de sinalização frequentes na membrana plasmática (Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol.17:615 (2001)). Das duas PI3Ks Classe 1, PI3Ks Classe 1A são heterodíme- ros compostos por uma subunidade catalítica p110 (isoformas α,β,δ) associada constitutivamente com uma subunidade regulatória que pode ser p85α, p55α, p50α, p85β ou p55y. A subclasse da Classe 1B tem um membro da família, um heterodímero composto por uma subunidade catalítica p110y associada com uma das duas subunidades regulatórias p101 ou p84 (Fruman et al., Annu Rev. Biochem. 67:481 (1998); Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005)). Os domínios modulares das subunidades p85/55/50 incluem os domínios de Homologia a Src (SH2) que ligam resíduos de fosfotirosina em um contexto de sequên- cia específico sobre o receptor ativado e tirosinas quinases citoplas- máticas, resultando na ativação e localização de PI3Ks da Classe 1A. PI3K da Classe 1B é ativada diretamente pelos receptores acoplados à proteína G que ligam um repertório diverso de ligantes peptídicos e não peptídicos (Stephens et al., Cell89:105 (1997)); Katso et al., An- nu. Rev. Cell Dev. Biol.17:615-675 (2001)). Consequentemente, os produtos fosfolipídicos resultantes de PI3K Classe 1 ligam receptores à montante com atividades celulares a jusante incluindo a proliferação, sobrevida, quimiotaxia, tráfego celular, motilidade, metabolismo, respostas inflamatórias e alérgicas, transcrição e tradução (Cantley et al., Cell64:281 (1991); Escobedo e Williams, Nature335:85 (1988); Fantl et al., Cell69:413 (1992)). Em vários casos, PIP2 e PIP3 recrutam Akt, o produto homólogo humano do oncogene viral v-Akt, para a membrana plasmática onde ele atua como um ponto nodal para várias vias de sinalização intracelular importantes para o crescimento e a sobrevida (Fantl et al., Cell69:413-423(1992); Bader et al., Nature Rev. Cancer 5:921 (2005); Vivanco e Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)). A regulação aberrante de PI3K, que frequentemente aumenta a sobrevida através da ativação de Akt, é um dos eventos mais prevalentes no câncer humano e tem sido mostrada ocorrer em múltiplos níveis. O gene supressor de tumor PTEN, que defosforila fosfoinositídeos na posição 3' do anel de inositol e ao fazer isso antagoniza da atividade de PI3K, está funcionalmente deletado em uma variedade de tumores. Em outros tumores, os genes para a isoforma p110α, PIK3CA, e para Akt são amplificados e a expressão de proteína aumentada de seus produtos tem sido demonstrada em vários cânceres humanos. Além disso, as mutações e a translocação de p85a que servem para regular positivamente o complexo p85-p110, têm sido descritas em cânceres humanos. Finalmente, mutações "missense" somáticas em PIK3CA que ativam as vias de sinalização a jusante, têm sido descritas em frequências significativas em uma grande diversidade de cânceres humanos (Kang at el., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802 (2005); Samuels et al., Science 304:554 (2004); Samuels et al., Cancer Cell 7:561- 573 (2005)).

[003] Em alguns tumores, a isoforma de p110β, PIK3CB é amplificada e superexpressa. Adicionalmente, estudos indicam que tumores direcionados pela perda de PTEN podem ser sensíveis a p110β ao invés de p110a. (Jia et al., Nature,454:776-779 (2008). Wee et al., PNAS 105 (35), 13057-13062 (2008); Liu et al., Nature Rev. Drug Discovery 8:627-644 (2009)).

[004] Ambas p110δ e p110y são expressas primariamente no sistema hematopoiético e parecem desempenhar papéis significativos na sinalização de leucócitos (Liu et al. Blood110(4), 1191-1198 (2007)). Entretanto eles também desempenham papéis em alguns cânceres (Knobbe et al., Brain Pathol.13, 507-518 (2003); Kang et al. PNAS 103(5), 1289-1294 (2006)). A expressão de p110δ está restrita a leucócitos, apontando para seu papel potencial em doenças mediadas por leucócito (Vanhaesebroeck et al. PNAS 94(9), 4330-4335 (1997)). p110δ é regulada positivamente em células blásticas em pacientes com leucemia mieloide aguda, onde ela desempenha um papel importante na sobrevida celular (Sujobert et al., Blood106(3), 1063-1066 (2005)) indicando seu potencial como um alvo na leucemia e outras malignidades hematológicas. A ativação de p110δ desempenha um papel importante no desenvolvimento de malignidades de célula B e, portanto, a inibição de p110δ poderá ser usada para tratar as malignidades de célula B tais como a leucemia linfocítica crônica (LLC), linfo- ma não Hodgkin (LNH), mieloma de célula plasmática e linfoma de Hodgkin (NH) Castillo et al., Expert Opin. Investig. Drugs21, 15-22 (2012)).

[005] Essas observações mostram que a desregulação de fosfoi- nositol-3 quinase e os componentes a montante e a jusante dessa via de sinalização é uma das desregulações mais comuns associadas com cânceres humanos e doenças proliferativas (Parsons et al., Nature436:792 (2005); Hennessey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4:988- 1004 (2005)).

[006] O pedido de patente internacional publicado W02007/084786 descreve moléculas de pirimidina substituída que inibem PI3K.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[007] Permanece uma necessidade por compostos que inibam a atividade de mais do que uma das isoformas de PI3K Classe I (alfa, beta, delta e gama), por que tais compostos são considerados ter a habilidade de evitar mecanismos de adaptação devidos a religação através de outras isoformas, comparados com compostos com especificidade única, por exemplo, especificidade por um membro da família de PI3K Classe I.

[008] A potência de inibição aumentada de pelo menos uma das isoformas de PI3K (isto em inibição de pelo menos uma isoforma de PI3K em concentrações menores, especialmente uma ou ambas das isoformas alfa e beta) também pode ser vantajosa. No caso de tumores nulos para PTEN, por exemplo, embora a isoforma de direcionamento seja p110b, a eficácia completa pode requerer a participação de outras isoformas Classe IA. Há também uma necessidade de compostos que inibam potencialmente a PI3K alfa quinase, por exemplo, para o tratamento de cânceres que são primariamente direcionados pelas formas oncogênicas do gene que codifica p110a (por exemplo, PIK3CA H1047R ou E545K), assim como tumores que mostram um número de cópias aumentado de PIK3CA.

[009] Compostos que mostram a inibição seletiva em favor de uma ou mais isoformas de PI3K (por exemplo, pelo menos duas, preferivelmente três das isoformas alfa, beta, delta e gama, por exemplo, as isoformas alfa, beta e delta) comparadas com mTOR também são desejáveis, já que o efeito inibitório de mTOR geralmente reduz a janela de segurança, mais especialmente quando os compostos inibem mTOR mais acentuadamente do que PI3K (proporção desfavorável).

[0010] Além disso, os inibidores de PI3K que possuem um efeito reduzido, em particular, que não possuem um efeito fora do alvo, tal como a ligação de tubulina, são desejados, já que tal efeito pode causar efeitos tóxicos não conectados com a inibição de PI3K no alvo e, portanto, tais compostos podem requerer um controle de dosagem cuidadoso para assegurar que o efeito terapêutico seja controlável e atribuível à inibição de PI3K. Portanto, há uma necessidade de compostos que possuem um efeito fora do alvo reduzido ou fraco ou que não tenham efeito fora do alvo.

[0011] Compostos desejáveis que apresentam uma inibição aperfeiçoada de pelo menos uma (por exemplo, PISKalfa), mas especialmente duas (por exemplo, PI3Kalfa e PI3Kbeta) ou três (por exemplo, PI3Kalfa, PI3Kbeta e PI3Kdelta) ou todas as quatro PI3Ks da classe 1 (por exemplo, PI3Kalfa, PI3Kbeta, PI3Kdelta e PI3Kgama) assim como um efeito fora do alvo reduzido (em particular, na ausência de) são procurados.

[0012] A presente invenção fornece compostos e composições farmacêuticas desses, cujos compostos são inibidores de PI3K. A invenção também fornece combinações que compreendem esses compostos. A invenção fornece ainda os compostos da invenção para uso nos métodos de tratamento, prevenção ou melhora de uma doença mediada por PI3K tal como o câncer, que compreendem administrar a um indivíduo necessitado uma quantidade eficaz de um composto que inibe PI3K da invenção. A invenção também fornece intermediários úteis na preparação dos compostos da invenção.

[0013] A presente invenção fornece, em um aspecto, um compost de Fórmula (I)

em que,

[0014] R1 = em que R1a = H ou -CH3

[0015] ou R1 = em que D = deutério;

[0016] R2 = H e R3 = H;

[0017] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH; ou

[0018] R4 =-CH2OH, e R5 = H;

[0019] ou

[0020] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[0021] R3 = H;

[0022] R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3OU CH2C(OH)(CH3)2 e R5 = H, OU

[0023] R4 = H, e R5 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 ou - CH2C(OH)(CH3)2, OU

[0024] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH

[0025] ou

[0026] R3 = H e R4 = H;

[0027] R2 e R5são ligados e formam 0 grupo -(CH2)4-;

[0028] ou

[0029] R4 = H e R5 = H; e

[0030] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; ou

[0031] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH;

[0032] ou

[0033] R2 = H e R4 = H; e

[0034] R3 e R5são ligados e formam 0 grupo

ou 0 grupo

ou

[0035] R3 = H e R5 = H; e

[0036] R2 e R4são ligados e formam o grupo

ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[0037] A linha ondulada indica 0 ponto de acoplamento do morfoli- no e também quando presente, o ponto de acoplamento de outros grupos mostrados, ao resto da molécula. Ao longo da descrição, o sinal "=" tem o significado padronizado de "igual" e nas definições da invenção pode ser substituído por "igual" ou "é" ou "representa". Por exemplo, a frase "R3 = H" pode ser lida como "R3 é H" ou "R3 representa H".

[0038] Os compostos de Fórmula (I) são considerados adequados, por exemplo, para serem usados no tratamento de doenças dependentes de PI3 quinase, especialmente doenças proliferativas tais como câncer, por exemplo, doenças tumorais.

[0039] A invenção pode ser mais completamente apreciada com referencia à seguinte descrição, que inclui as definições mencionadas e os exemplos conclusivos. As modalidades descritas podem ser tomadas independentemente, coletivamente ou em qualquer combinação a menos que estabelecido de outra maneira. Como usados aqui, as expressões "incluindo", "contendo" e "compreendendo" são usadas em seu sentido aberto, não limitante.

[0040] A menos que especificado de outra maneira, a expressão "compostos da presente invenção" ou "um composto da presente in-venção" e semelhantes se refere a compostos de Fórmula (I) e suas subFórmulas (por exemplo, Fórmulas (IA) e (IA')) e sais dos compostos, assim como compostos isotopicamente marcados (incluindo substituições com deutério).

[0041] Os compostos da invenção possuem a estereoquímica ilustrada na Fórmula (I) e suas subFórmulas, a menos que estabelecido de outra maneira.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0042] Figura 1 é um gráfico da calorimetria diferencial exploratória do material cristalino do Exemplo 10.

[0043] Figura 2 é o gráfico de difração de pó ao raio X do material cristalino do Exemplo 10.

[0044] Figura 3 é um gráfico da calorimetria diferencial exploratória do material cristalino do Exemplo 18, lote A.

[0045] Figura 4 é o gráfico de difração de pó ao raio X do material cristalino do Exemplo 18, lote B.

[0046] Figura 5 é um gráfico da calorimetria diferencial exploratória do material cristalino do Exemplo 18, lote B.

[0047] Figura 6 é o gráfico de difração de pó ao raio X do material cristalino do Exemplo 18, lote B.

[0048] Figura 7 é um gráfico da calorimetria diferencial exploratória do material cristalino do Exemplo 18, lote C.

[0049] Figura 8 é o gráfico de difração de pó ao raio X do material cristalino do Exemplo 18, lote C.

[0050] Figura 9 é um gráfico da calorimetria diferencial exploratória do material cristalino do Exemplo 18, lote D.

[0051] Figura 10 é o gráfico de difração de pó ao raio X do material cristalino do Exemplo 18, lote D.

[0052] Figura 11 é um gráfico da calorimetria diferencial exploratória do material cristalino do Exemplo 18, lote E.

[0053] Figura 12 é o gráfico de difração de pó ao raio X do material cristalino do Exemplo 18, lote E.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0054] Várias modalidades da invenção estão aqui descritas. Será reconhecido que as características especificadas em cada modalidade podem ser combinadas com outras características especificadas para fornecer modalidades adicionais da presente invenção. Várias modali-dades (enumeradas) da invenção também são aqui descritas.

[0055] A presente invenção fornece em um aspecto um composto de acordo com a Fórmula (I):

em que,

em que

[0056] R1a = H ou -CH3

[0057] ou R1 = em que

[0058] D = deutério;

[0059] R2 = H e R3 = H;

[0060] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH; ou

[0061] R4 = -CH2OH, e R5 = H;

[0062] ou

[0063] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[0064] R3 = H;

[0065] R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3OU - CH2C(OH)(CH3)2 e R5 = H, OU

[0066] R4 = H, e R5 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 ou - CH2C(OH)(CH3)2, OU

[0067] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3

[0068] ou

[0069] R3 = H e R4 = H;

[0070] R2 e R5são ligados e formam 0 grupo -(CH2)4-;

[0071] ou

[0072] R4 = H e R5 = H; e

[0073] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; ou

[0074] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH;

[0075] ou

[0076] R2 = H e R4 = H; e

[0077] R3 e R5são ligados e formam 0 grupo

ou 0 grupo

ou

[0078] R3 = H e R5 = H; e

[0079] R2 e R4são ligados e formam 0 grupo

ou urn sal farmaceuticamente aceitável desse.

[0080] Em uma modalidade preferida desse aspecto, é fornecido um composto de acordo com θ Fórmula (I) em que,

[0081] R1 = em que

[0082] R1a = H ou –CH3

[0083] ou R1 =

[0084] em que

[0085] D = deutério;

[0086] R2 = H e R3 = H;

[0087] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH; ou

[0088] R4 = -CH2OH, e R5 = H;

[0089] ou

[0090] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[0091] R3 = H;

[0092] R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3OU - CH2C(OH)(CH3)2 e R5 = H, ou

[0093] R4 = H, e R5 = -CH3, -CH2OH ou

[0094] R4 = H ou -CH3 e R5 = H OU -CH3

[0095] ou

[0096] R3 = H e R4 = H;

[0097] R2 e R5 são ligados e formam 0 grupo -(CH2)4-;

[0098] ou

[0099] R4 = H e R5 = H; e

[00100] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; OU

[00101] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH;

[00102] ou

[00103] R2 = H e R4 = H; e

[00104] R3 e R5são ligados e formam 0 grupo

ou 0 grupo

ou

[00105] R3 = HeR5 = H;e

[00106] R2 e R4são ligados e formam 0 grupo

ou urn sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00107] Em uma modalidade mais preferida desse aspecto, é fornecido um composto de acordo a Fórmula (I) em que

[00108] R1 = em que

[00109] R1a = H ou -CH3

[00110] ou R1 = em que

[00111] D = deutério;

[00112] R2 = H e R3 = H;

[00113] R4=H, e R5 =-CH3 ou-CH2OH; ou

[00114] R4 = -CH2OH, e R5 = H;

[00115] ou

[00116] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00117] R3 = H;

[00118] R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3OU - CH2C(OH)(CH3)2 e R5 = H, ou

[00119] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00120] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3;

[00121] ou

[00122] R3 = H e R4 = H;

[00123] R2 e R5são ligados e formam -(CH2)4-;

[00124] ou

[00125] R4 = H e R5 = H; e

[00126] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; ou

[00127] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH; ou ou urn sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00128] Em uma modalidade adicional preferida, é fornecido um  composto de Fórmula (I)

em que,

[00129] em que

[00130] R1 = R1a= H ou -CH3

[00131] ou R1 = em que

[00132] D = deutério;

[00133] R2 = H e R3 = H;

[00134] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH; ou

[00135] R4 = -CH2OH, e R5 = H;

[00136] ou

[00137] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00138] R3 = H;

[00139] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH e R5 = H, ou

[00140] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00141] R4 = H ou -CH3 e R5 = H OU -CH3

[00142] ou

[00143] R3 = H θ R4 = H;

[00144] R2 e R5sâo ligados e formam 0 grupo -(CH2)4-;

[00145] ou

[00146] R4 = H e R5 = H; e

[00147] R2 = -CH2OH, e R3 =-CH3; ou

[00148] R2 = H ou-CH3, e R3 =-CH2OH; ou urn sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00149] Em uma modalidade alternativa preferida adicional, é fornecido um composto de acordo com a Fórmula (I)

em que,

[00150] R1 = em que

[00151] R1a = H ou –CH3

[00152] ouR1 = em que

[00153] D = deutério;

[00154] R2eR3 = H;

[00155] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH; ou

[00156] R4 = -CH2OH, e R5 = H;

[00157] ou

[00158] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00159] R3 = H;

[00160] R4 = -CH3, -CH2OH e R5 = H, ou

[00161] R4 = H, e R5 =-CH3,-CH2OH, ou

[00162] R4 = R5 = H ou-CH3

[00163] ou

[00164] R3 = H e R4 = H;

[00165] R2 e R5 são ligados e formam -(CH2)4-;

[00166] ou

[00167] R4 = HeR5 = H;e

[00168] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; ou

[00169] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH; ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00170] Com relação à Fórmula (I) em qualquer uma das modalidades acima mencionadas, é fornecida a seguinte descrição detalhada.

R1a

[00171] Em uma modalidade, R1a é H.

[00172] Em outra modalidade, R1a é -CH3.

[00173] Em uma modalidade preferida, R1a é H.

[00174] Modalidades adicionais da presente invenção estão descritas abaixo.

[00175] Em uma modalidade,

[00176] R1 = em que

[00177] R1a = H ou -CH3

[00178] ou R1 = em que

[00179] D = deutério;

[00180] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00181] R3 = H;

[00182] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00183] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00184] R4 = H ou -CH3 e R5 = H OU -CH3;

[00185] ou

[00186] R3 = H e R4 = H;

[00187] R2eR5 = -(CH2)4-;

[00188] ou

[00189] R4 = H e R5 = H; e

[00190] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; ou

[00191] R2= H ou -CH3, e R3= -CH2OH, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00192] Em outra modalidade,

[00193] R1=

em que

[00194] R1a= H ou -CH3

[00195] ou R1= em que

[00196] D = deutério;

[00197] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00198] R3= H;

[00199] R4= -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5= H, ou

[00200] R4= H, e R5= -CH3 ou -CH2OH, ou

[00201] R4= H ou -CH3 e R5= H ou -CH3;

[00202] ou

[00203] R4= H e R5= H; e

[00204] R2= -CH2OH, e R3= -CH3; ou

[00205] R2= H ou -CH3, e R3= -CH2OH, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00206] Em uma modalidade adicional,

[00207] R1 = em que

[00208] R1a = H ou -CH3

[00209] ou R1 =

[00210] em que

[00211] D = deutério;

[00212] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00213] R3 = H;

[00214] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00215] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00216] R4 = H ou -CH3 e R5 = H OU -CH3I ou urn sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00217] Em uma modalidade adicional,

[00218] R1 = em que

[00219] R1a = H ou-CH3

[00220] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou -CH2OC(O)H;

[00221] R3 = H;

[00222] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H θu

[00223] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00224] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00225] Em outra modalidade,

[00226] R1 = em que

[00227] R1a = H ou -CH3

[00228] R2 = -CH3OU -CH2OH;

[00229] R3 = H;

[00230] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00231] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00232] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00233] Em outra modalidade, preferivelmente

[00234] R1 = em que

[00235] R1a = H ou -CH3

[00236] R2 = -CH3OU -CH2OH;

[00237] R3 = H;

[00238] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH e R5 = H 0(J

[00239] R4= H e R5= CH3 ou -CH2OH, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00240] Em outra modalidade, preferivelmente

[00241] R1 = em que

[00242] R1a = H ou -CH3

[00243] R2 = -CH3 ou -CH2OH;

[00244] R3 = H;

[00245] R4 = -CH3 ou -CH2CH2OH, e

[00246] R5 = H, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00247] Em uma modalidade,

[00248] R1 = em que

[00249] R1a = H ou -CH3

[00250] ou R1 =

em que

[00251] D = deutério;

[00252] R2= _C|_|3-CH2OH, -CH2OCH3J -CH2CH2OH, -CH2OC(O)H;

[00253] R3 = H;

[00254] R4 = -CH3 OU -CH2OH, e R5 = H, OU

[00255] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00256] R4 = RS = H OU _CH3.

[00257] ou

[00258] R3 = R4 = H

[00259] R2 e R5 = -(CH2)4-;

[00260] ou

[00261] R4 = R5 = H;e

[00262] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; ou

[00263] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH,

[00264] ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00265] Em outra modalidade,

[00266] R1 =

em que

[00267] R1a = H ou -CH3

[00268] ou R1 =

em que

[00269] D = deutério;

[00270] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2OC(O)H;

[00271] R3 = H;

[00272] R4 = -CH3 OU -CH2OH, e R5 = H, ou

[00273] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00274] R4 = R5 = H ou -CH3;

[00275] ou

[00276] R4 = R5 = H:e

[00277] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; ou

[00278] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00279] Em uma modalidade adicional,

[00280] R1 = em que

[00281] R1a = H ou-CH3

[00282] ou R1 =

em que

[00283] D = deutério;

[00284] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2OC(O)H;

[00285] R3 = H;

[00286] R4 = -CH3OU -CH2OH, e R5 = H, ou

[00287] R4= H, e R5= -CH3 ou -CH2OH, ou

[00288] R4= R5= H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00289] Em uma modalidade adicional,

[00290] R1 =

em que

[00291] R1a= H ou -CH3

[00292] R2= -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2OC(O)H;

[00293] R3= H;

[00294] R4= -CH3 ou -CH2OH, e R5= H, ou

[00295] R4= H, e R5= -CH3 ou -CH2OH, ou

[00296] R4= R5= H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00297] Em outra modalidade,

[00298] R1 = em que

[00299] R1a = H ou -CH3

[00300] R2 = -CH3 ou -CH2OH;

[00301] R3 = H;

[00302] R4 = -CH3 ou -CH2OH, e R5 = H, ou

[00303] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00304] R4 = R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00305] Em outra modalidade, preferivelmente

[00306] R1=

em que

[00307] R1a= H ou -CH3

[00308] R2= -CH3 ou -CH2OH;

[00309] R3= H;

[00310] R4= -CH3 ou -CH2OH e R5= H ou

[00311] R4= H e R5= CH3 ou -CH2OH, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00312] Em outra modalidade, preferivelmente

[00313] R1= em que

[00314] R1a= H ou -CH3

[00315] R2= -CH3 ou -CH2OH;

[00316] R3 = H;

[00317] R4 = -CH3, e

[00318] R5 = H, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00319] Em outra modalidade preferida,

[00320] R1 =

em que

[00321] R1a = H ou-CH3

[00322] R2 = -CH2OH;

[00323] R3 = H;

[00324] R4 = -CH3, e

[00325] R5 = H, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00326] Em uma modalidade, são fornecidos compostos com a seguinte Fórmula (IA'):

em que R1a, R2, R3, R4 e R5 são como descritos em qualquer uma das modalidades mencionadas acima.

[00327] Em uma modalidade, R1a pode ser hidrogênio, fornecendo assim compostos da seguinte Fórmula (IA):

em que

[00328] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00329] R3 = H;

[00330] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00331] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00332] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00333] Em uma modalidade dos compostos de Fórmula (IA),

[00334] R2 = -CH3OU -CH2OH;

[00335] R3 = H;

[00336] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00337] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00338] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00339] Em outra modalidade dos compostos de Fórmula (IA),

[00340] R2 = -CH3OU -CH2OH;

[00341] R3 = H;

[00342] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00343] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00344] Em outra modalidade dos compostos de Fórmula (IA),

[00345] R2 = -CH3 ou -CH2OH;

[00346] R3 = H;

[00347] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e

[00348] R5 = H ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00349] Em outra modalidade dos compostos de Fórmula (IA),

[00350] R2 = -CH3;

[00351] R3 = H;

[00352] R4 = -CH2CH2OH, e

[00353] R5 = H ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00354] Alternativamente, em uma modalidade onde R1a pode ser hidrogênio, são fornecidos compostos da seguinte Fórmula (IA):

em que,

[00355] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2OC(O)H;

[00356] R3 = H;

[00357] R4 = -CH3OU -CH2OH, e R5 = H, ou

[00358] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00359] R4 = R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00360] Em uma modalidade de compostos de Fórmula (IA),

[00361] R2 = -CH3OU -CH2OH;

[00362] R3 = H;

[00363] R4 = -CH3OU -CH2OH, e R5 = H, ou

[00364] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00365] R4 = R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00366] Em outra modalidade de compostos de Fórmula (IA),

[00367] R2 = -CH3OU -CH2OH;

[00368] R3 = H;

[00369] R4 = -CH3OU -CH2OH, e R5 = H, ou

[00370] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00371] Em outra modalidade de compostos de Fórmula (IA),

[00372] R2 = -CH3 OU -CH2OH;

[00373] R3 = H;

[00374] R4 = -CH3 e

[00375] R5 = H ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00376] Em uma modalidade preferida de compostos de Fórmula (IA),

[00377] R2 = -CH2OH;

[00378] R3 = H;

[00379] R4 = -CH3 e

[00380] R5 = H, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

[00381] Modalidades adicionais (enumeradas) são fornecidas a seguir:

Modalidade 1.

[00382] Um composto de Fórmula (I)

em que,

[00383] R1 = em que

[00384] R1a = H ou -CH3

[00385] ou R1 =

em que

[00386] D = deutério;

[00387] R2 =H e R3 = H;

[00388] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH;

[00389] R4 = -CH2OH, e R5 = H; ou

[00390] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00391] R3 = H;

[00392] R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3OU - CH2C(OH)(CH3)2 e R5= H, ou

[00393] R4= H, e R5= -CH3, -CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 ou - CH2C(OH)(CH3)2, ou

[00394] R4= H ou -CH3 e R5= H ou -CH3; ou

[00395] R3= H e R4= H;

[00396] R2e R5são ligados e formam -(CH2)4-; ou

[00397] R4 = H e R5= H; e

[00398] R2 = -CH2OH, e R3= -CH3; ou

[00399] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH; ou

[00400] R2 = H e R4= H; e

[00401] R3 e R5são ligados e formam o grupo

ou o grupo

ou

[00402] R3= H e R5= H; e

[00403] R2e R4são ligados e formam o grupo

ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

Modalidade 2,

[00404] Um composto de acordo com a Modalidade 1, em que

[00405] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00406] R3 = H;

[00407] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00408] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00409] R4 = H ou -CH3 e R5 = H OU -CH3;

[00410] ou

[00411] R3 = H e R4 = H;

[00412] R2 e R5 =-(CH2)4-;

[00413] ou

[00414] R4 = H e R5 = H; e

[00415] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; OU

[00416] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH,

[00417] ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

Modalidade 3.

[00418] Um composto de acordo com a Modalidade 1 ou Modalidade 2, em que

[00419] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00420] R3 = H;

[00421] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00422] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00423] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3;

[00424] ou

[00425] R4 = H e R5 = H; e

[00426] R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3; ou

[00427] R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH,

[00428] ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

Modalidade 4.

[00429] Um composto de acordo com qualquer uma das Modalidades 1 a 3, em que,

[00430] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00431] R3 = H;

[00432] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00433] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00434] R4 = H e R5 = -CH3 ou -CH2OH ou

[00435] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

Modalidade 5.

[00436] Um composto de acordo com qualquer uma das Modalidades 1 a 4, de Fórmula (IA')

em que

[00437] R1a = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

Modalidade 6.

[00438] Um composto de acordo com a Modalidade 1, de Fórmula (IA):

em que,

[00439] R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H;

[00440] R3 = H;

[00441] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00442] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00443] R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3,

[00444] ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

Modalidade 7,

[00445] Um composto de acordo com a Modalidade 6, em que,

[00446] R2 = -CH3OU -CH2OH;

[00447] R3 = H;

[00448] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou

[00449] R4 = H, e R5 = -CH3 ou -CH2OH, ou

[00450] R4 = H ou -CH3 e R5 = H OU -CH3,

[00451] ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

Modalidade 8,

[00452] Um composto de acordo com a Modalidade 7, em que,

[00453] R2 = -CH3OU -CH2OH;

[00454] R3 = H;

[00455] R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH e R5 = H ou

[00456] R4 = H e R5 = CH3 ou -CH2OH,

[00457] ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

Modalidade 9.

[00458] Um composto de acordo com a Modalidade 8, em que

[00459] R2 = -CH3OU -CH2OH;

[00460] R3 = H;

[00461] R4 = -CH3OU -CH2CH2OH e

[00462] R5 = H,

[00463] ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

Modalidade 10,

[00464] Um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável desse, de acordo com a Modalidade 1, que é selecionado entre

[00465] (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona,

[00466] (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona,

[00467] 3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-4,5'-bipirimidin-6-il)- 4-(hidroximetil)-4-metiloxazolidin-2-ona racêmico,

[00468] (S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-4,5'-bipirimidin- 6-il)-4-(hidroximetil)-4-metiloxazolidin-2-ona (estereoquímica absoluta não determinada),

[00469] (R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-4,5'-bipirimidin- 6-il)-4-(hidroximetil)-4-metiloxazolidin-2-ona (estereoquímica absoluta não determinada),

[00470] (3aS,7aS)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-hexa-hidro-benzoxazol-2-ona,

[00471] (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-metoximetil-oxazolidin-2-ona,

[00472] (4S,5S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona,

[00473] (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-oxazolidin-2-ona,

[00474] (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-(D8-morfolin-4-il)-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona,

[00475] (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-(2-hidróxi-etil)-oxazolidin-2-ona,

[00476] (4S,5R)-3-[2'-Amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'- trifluormetil-[4,5']bipirimidinil-6-il]-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2- ona,

[00477] éster (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-metil-2-oxo-oxazolidin-4-ilmetilico de ácido fór- mico,

[00478] (S)-3-[2'-Amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il]-4-metil-oxazolidin-2-ona,

[00479] (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona,

[00480] (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-4-metil-oxazolidin-2-ona,

[00481] (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-metil-oxazolidin-2-ona,

[00482] (S)-3-(2'-amino-2-D8-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-4-metiloxazolidin-2-ona,

[00483] (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona,

[00484] (4S,5S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-4-metil-oxazolidin-2-ona,

[00485] (R)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona,

[00486] (3aR,6aR)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)tetraidrofuro[3,4-d]oxazol-2(3H)-ona,

[00487] (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)- [4,5'-bipirimidin]-6-il)-6-hidroxihexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona racêmico,

[00488] (3aR,6R,6aR)-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-6-hidroxihexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona,

[00489] (3aS,6S,6aS)-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-6-hidroxihexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona, e

[00490] (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxietil)-4-metiloxazolidin-2-ona.

Modalidade 11.

[00491] Um composto ou urn sal farmaceuticamente aceitável desse, de acordo com a Modalidade 1 que é selecionado entre (4S,5R)-3- [2'-Amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluormetil-[4,5']bipirimidinil-6- il]-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-Amino-2- morfolin-4-il-4'-trifluormetil-[4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil- oxazolidin-2-ona e (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)- [4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxietil)-4-metiloxazolidin-2-ona.

Modalidade 12.

[00492] Um composto que é selecionado entre (4S,5R)-3-[2'-Amino- 2-((S)-3-metil-morfolin-4-yl)-4,-trifluormetil-[4,5']bipirimidinil-6-il]-4- hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona,

[00493] (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona, e (4S,5R)- 3-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2- hidroxietil)-4-metiloxazolidin-2-ona.

Modalidade 13.

[00494] O composto (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4- il)-4'-trifluormetil-[4,5']bipirimidinil-6-il]-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin- 2-ona.

Modalidade 14.

[00495] O composto (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolino-4-il-4'- trifluormetil-[4,5'-bipirimidinil]-6-il)-4-hidroximetil)-5-metil-oxazolidin-2- ona.

Modalidade 15.

[00496] O composto (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolino-4'- (trifluormetil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxietil)-4-metiloxazolidin-2- ona.

[00497] Um sal farmaceuticamente aceitável do composto da Modalidade 13, Modalidade 14 ou Modalidade 15.

[00498] Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma forma cristalina do composto obtido a partir do Exemplo 10 que possui um espectro de difração ao raio X substancialmente igual ao espectro de difração de pó ao raio X mostrado na Figura 2.

[00499] Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma forma cristalina do composto obtido a partir do Exemplo 18, lote A que possui um espectro de difração ao raio X substancialmente igual ao espectro de difração de pó ao raio X mostrado na Figura 4.

[00500] Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma forma cristalina do composto obtido a partir do Exemplo 18, lote B que possui um espectro de difração ao raio X substancialmente igual ao espectro de difração de pó ao raio X mostrado na Figura 6.

[00501] Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma forma cristalina do composto obtido a partir do Exemplo 18, lote C que possui um espectro de difração ao raio X substancialmente igual ao espectro de difração de pó ao raio X mostrado na Figura 8.

[00502] Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma forma cristalina do composto obtido a partir do Exemplo 18, lote D que possui um espectro de difração ao raio X substancialmente igual ao espectro de difração de pó ao raio X mostrado na Figura 10.

[00503] Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma forma cristalina do composto obtido a partir do Exemplo 18, lote E que possui um espectro de difração ao raio X substancialmente igual ao espectro de difração de pó ao raio X mostrado na Figura 12.

[00504] A expressão "essencialmente igual" com relação às posições de pico da difração de raio X significa que a posição de pico e a variabilidade da intensidade são levadas em consideração. Por exemplo, aquele versado na técnica apreciará que as posições de pico (20) mostrarão alguma variabilidade entre os aparelhos, tipicamente no máximo de 0,2°. Adicionalmente, aquele versado na técnica apreciará que as intensidades de pico relativas mostrarão variabilidade entre os aparelhos assim como variabilidade devido ao grau de cristalinidade, orientação preferida, superfície preparada da amostra e outros fatores conhecidos por aqueles versados na técnica e devem ser tomadas apenas como medida qualitativa.

[00505] São fornecidas modalidades específicas pelos compostos exemplificadores específicos aqui descritos.

[00506] A presente invenção fornece compostos e formulações far-macêuticas desses que são úteis no tratamento de doenças, condições e/ou distúrbios nos quais PI3K contribui para a patogênese da doença aqui descrita.

[00507] Os compostos da presente invenção podem ser sintetizados pelas vias sintéticas que incluem processos análogos aqueles bem conhecidos nas técnicas químicas, particularmente, a luz da descrição aqui contida. Os materiais de partida estão geralmente disponíveis em fontes comerciais tais como Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wis.) ou são rapidamente preparados usando métodos bem conhecidos daqueles versados na técnica (por exemplo, preparados pelos métodos descritos de modo geral em Louis F. Fieser e Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, volumes 1-19, New York (1967-1999 ed.) ou Beilsteins Handbuch der organischem Chemie, 4, Aufl. Ed. Sprin- ger-Verlag, Berlin, incluindo suplementos (também disponível através do banco de dados online de Beilstein)).

[00508] Para propósitos ilustrativos, os esquemas de reação descritos abaixo fornecem vias potenciais para a síntese de compostos da presente invenção assim como os intermediários-chave. Para uma descrição mais detalhada das etapas de reação individuais, veja a seção de Exemplos abaixo. Aqueles versados na técnica apreciarão que outras vias sintéticas podem ser usadas para sintetizar os compostos inventivos. Embora materiais de partida específicos e reagentes estejam ilustrados nos esquemas e discutidos abaixo, outros materiais de partida e reagentes podem ser facilmente substituídos para fornecer uma variedade de derivados e/ou condições de reação. Em adição, vários dos compostos preparados pelos métodos descritos abaixo podem ser adicionalmente modificados a luz dessa descrição usando a química convencional bem conhecida daqueles versados na técnica.

[00509] Na preparação de compostos da presente invenção, a proteção de funcionalidade remota (por exemplo, grupos amino primário e secundário, hidroxila e carboxila) de intermediários pode ser necessária. A necessidade de tal proteção variará dependendo da natureza da funcionalidade remota e as condições dos métodos de preparação. Grupos amino protetores adequados (NH-Pg) incluem acetila, trifluora- cetila, t-butoxicarbonila (BOC), benziloxicarbonila (CBz) e 9- fluorenilmetilenoxicarbonila (Fmoc). Grupos hidroxila protetores ade-quados incluem éteres trialquilsilílicos onde um ou dois dos grupos al-quila pode ser substituído por fenila. Grupos protetores carboxila ade-quados (C(O)O-Pg) incluem ésteres alquílicos (por exemplo metílico, etílico ou t-butílico), ésteres benzílicos, ésteres silílico e semelhantes. A necessidade de tal proteção é prontamente determinada por aquele versado na técnica. Para uma descrição geral de grupos protetores e seu uso, veja T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

[00510] O Esquema 1 (abaixo) descreve uma via potencial para a produção de compostos de Fórmula (IA'), onde R1-R5 são como defini-dos acima. Nos casos onde um grupo protetor está presente, uma etapa de desproteção é adicionada para converter IA' protegido em IA'.

Esquema 1

[00511] Alternativamente, os compostos da Fórmula (IA') também podem ser sintetizados pela inversão das etapas mostradas no esquema I, isto é, acoplamento de Suzuki primeiro, seguido pela reação de Buchwald com lb.

[00512] Para essas oxazolidino-2-onas lb que não estão comercialmente disponíveis, o Esquema 2 abaixo fornece um processo para a preparação desses ditos intermediários onde R2-R5 são como definidos acima. Se um grupo hidroxila primário está presente em R2 a R5, uma etapa de proteção seletiva é precedente como exemplificado no Esquema 3. O grupo amino pode ser protegido em uma etapa precedente como mostrado no Esquema 4, onde um grupo de proteção de hidroxila diferente também é mostrado.

Esquema 2

Esquema 3

Esquema 4

[00513] O produto protegido do Esquema 3 pode ser ciclizado com trifosgênio como geralmente mostrado no Esquema 2 e, especificamente, mostrado no Esquema 5 para fornecer um exemplo de um intermediário lb.

Esquema 5

Esquema 6

[00514] O produto duplamente protegido do Esquema 4 pode ser clizado com hidrato de sódio como mostrado no Esquema 6 para fornecer um exemplo de um intermediário lb.

[00515] O Esquema 7 ilustra uma via alternativa ao intermediário duplamente protegido do Esquema 4, que pode ser então ciclizado como já mostrado no Esquema 6.

Esquema 7

[00516] O Esquema 8 abaixo fornece a síntese do éster boronico do intermediário B.

Esquema 8

[00517] A reação do produto ciclizado do Esquema 6 com o inter-mediário 4,6-dicloro-pirimidina (por exemplo, intermediário A ou o produto da etapa 10.1, ambos referidos aqui abaixo) como mostrado no Esquema 1, pode fornecer intermediários adicionais e alguns específicos são mostrados a seguir:

[00518] A reação posterior dos intermediários formados como mostrado no Esquema 1 com o intermediário B, fornece um produto protegido IA', como a seguir:

[00519] Portanto, um composto intermediário da invenção inclui um composto com as seguintes Fórmulas:

[00520] Em que R1ae R4são como previamente definidos aqui, Hal é halogênio, tal como cloro e PG é um grupo de proteção, por exemplo, um grupo de proteção silila que forma, por exemplo, éteres trial- quilsilílicos, onde um ou dois dos grupos alquila pode ser substituído por fenila, por exemplo, um grupo de proteção de éter alquil-difenil- silílico, especificamente dimetil-terc-butil-silílico ou difenil-terc-butil silí- lico.

[00521] Outro composto intermediário da invenção inclui um composto das seguintes Fórmulas:

[00522] Outros compostos intermediários similarmente protegidos como ilustrados aqui acima podem ser previstos com referencia às Fórmulas desse, se um grupo hidroxila primário está presente em R2 a R5. Tais compostos protegidos também são incluídos na descrição. Por exemplo, onde R4 é o grupo -CH2CH2OH, esse pode ser protegido para fornecer compostos em que R4 é -CH2CH2O-PG, em que PG é como definido acima, por exemplo:

[00523] A desproteção do grupo hidroxila protegido de butildifenilsi- lila terciária ou butildimetilsilila terciária (desproteção geral de éteres silílicos) do produto IA' protegido para fornecer, por exemplo, o produto final, pode ser obtida usando HF.piridina (por exemplo, em THF) ou HCI.

[00524] Os compostos da presente invenção ou os intermediários usados aqui podem ser isolados e usados como o composto per se (por exemplo, forma de base livre) ou como seu sal, se por exemplo, o valor de pKA do composto é tal que permita a formação de sal. Como usado aqui, as expressões "sal" ou "sais" se refere a um sal de adição ácida ou de adição básica de um composto da invenção. "Sais" incluem, em particular, "sais farmaceuticamente aceitáveis". A expressão "sais farmaceuticamente aceitáveis" se refere a sais que retêm a eficácia biológica e as propriedades dos compostos dessa invenção e que tipicamente não são biologicamente ou de outra maneira indesejáveis. Os compostos da presente invenção podem ser capazes de formar sais de adição ácida em virtude da presença do grupo amino. São preferidos os compostos perseda invenção.

[00525] Ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos para a formação de sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis incluem, por exemplo, sais de acetato, aspartato, benzoato, besilato, brome- to/hidrobrometo, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, camforsul- fornato, cloreto/hidrocloreto, clorteofilonato, citrato, etandisulfonato, fumarato, gluceptato, gliconato, glicuronato, hipurato, hidroiode- to/iodeto, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, malea- to, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, ni-cotinate, nitrate, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitate, pamoato, fosfato/hidrogênio fosfato/di-hidrogênio fosfato, poligalacturonato, pro-pionate, estearato, succinate, sulfosalicilato, tartrato, tosilato e trifluoa- cetato.

[00526] Ácidos inorgânicos para derivação de sal incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido propiônico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes.

[00527] Ácidos orgânicos para derivação de sal incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tar- tárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanosul- fônico, ácido etanosulfônico, ácido toluenosulfônico, ácido sulfosalicíli- co e semelhantes. Os sais de adição básica farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com bases inorgânicas e orgânicas.

[00528] Bases inorgânicas para derivação de sal incluem, por exemplo, sais de amónia e metais das colunas I a XII da tabela periódica. Em certas modalidades, os sais podem ser derivados de sódio, potássio, amónia, cálcio, magnésio, ferro, prata, zinco e cobre; sais particularmente adequados incluem sais de amónia, potássio, sódio, cálcio e magnésio.

[00529] Bases orgânicas para derivação de sal incluem, por exemplo, aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas que ocorrem naturalmente, aminas cíclicas, resinas de troca de íon e semelhantes. Certas aminas orgânicas incluem isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina e trometamina.

[00530] No caso onde os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser formados, eles podem ser sintetizados a partir de um composto parental, uma porção básica ou ácida, pelos métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados pela reação de formas de ácido livre desses compostos com uma quantidade estequiométrica da base apropriada (tal como hidróxido, carbonato ou bicarbonato de Na, Ca, Mg ou K ou semelhantes) ou pela reação de formas de base livre desses compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido apropriado. Tais reações são realizadas tipicamente em água ou em um solvente orgânico ou em uma mistura dos dois. Geralmente, o uso um meio não aquoso como o éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila é desejável, onde praticável. Listas de sais adequados adicionais podem ser encontradas, por exemplo, em "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); e em "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, e Use" by Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).

[00531] A menos que indicado de outra maneira, qualquer Fórmula dada aqui é pretendida representar formas não marcadas. Formas iso- topicamente marcadas dos compostos com deutério são mostradas com deutério (D) como substituinte no lugar de H. Outros compostos isotopicamente marcados da presente invenção podem ser preparados e ter as estruturas ilustradas pelas Fórmulas dadas aqui exceto que um ou mais átomos são substituídos por um átomo que possui uma massa atômica ou número de massa selecionados. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, tais como 2H, 3H, "C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36CI, 125l, respectivamente. A invenção pode incluir vários compostos isotopica-mente marcados como aqui definidos, por exemplo, aqueles nos quais isótopos radioativos, tais como 3H, 13C 6 14C estão presentes. Tais compostos isotopicamente marcados são úteis em estudos metabólicos (com 14C), estudos de cinética de reação (com, por exemplo, 2H ou 3H), técnicas de detecção ou de imagem, tais como tomografia com emissão de positron (PET) ou tomografia computadorizada com emissão de fóton único (SPECT) incluindo ensaios de distribuição de fár- maco ou de substrato no tecido ou em pacientes de tratamento radioativo. Em particular, 18F ou um composto marcado podem ser particularmente desejáveis para estudos de PET ou SPECT. Compostos iso- topicamente marcados dessa invenção podem ser preparados de modo geral pela realização dos procedimentos descritos nos esquemas ou nos exemplos e preparações descritas abaixo, pela substituição de um reagente marcado isotopicamente disponível por um reagente não isotopicamente marcado, por exemplo, morfolino marcado com deuté- rio (D8-morfolino).

[00532] Além disso, a substituição com isótopos mais pesados, par-ticularmente o deutério (isto é, 2H ou D) pode fornecer certas vantagens terapêuticas que resultam da maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada, necessidade de dosagem reduzida, inibição de CYP reduzida (competitiva ou dependente do tempo) ou uma melhora no índice terapêutico. Por exemplo, a substituição com deutério pode modular efeitos colaterais indesejáveis do composto não deuterado, tal como a inibição competitiva de CYP, inativação de CYP dependente do tempo, etc. é compreendido que o deutério nesse contexto é considerado como um substituinte nos compostos da presente invenção. A concentração de tal isótopo pesado, especificamente o deutério, pode ser definida pelo fator de enriquecimento iso- tópico. A expressão "fator de enriquecimento isotópico" como usada aqui significa a proporção entre a abundancia isotópica e a abundancia natural de um isótopo específico. Se um substituinte em um composto dessa invenção é indicado como deutério, tal composto tem um fator de enriquecimento isotópico para cada átomo de deutério designado de pelo menos 3500 (52,5% de incorporação de deutério em cada átomo de deutério designado), pelo menos 4000 (60% de incorporação de deutério), pelo menos 4500 (67,5% de incorporação de deutério), pelo menos 5000 (75% de incorporação de deutério), pelo menos 5500 (82,5% de incorporação de deutério), pelo menos 6000 (90% de incorporação de deutério), pelo menos 6333,3 (95% de incorporação de deutério), pelo menos 6466,7 (97% de incorporação de deutério), pelo menos 6600 (99% de incorporação de deutério), ou pelo menos 6633,3 (99,5% de incorporação de deutério).

[00533] Além disso, os compostos da presente invenção, incluindo seus sais, também podem ser obtidos na forma de seus hidratos ou incluir outros solventes usados para sua cristalização. Os compostos da presente invenção podem inerentemente ou por projeto formar solvates com solventes farmaceuticamente aceitáveis (incluindo água). Tais moléculas de solvente também são aquelas comumente usadas na técnica farmacêutica, que são conhecidas por serem inócuas para o receptor, por exemplo, água, etanol e semelhantes. A expressão "hidrato" se refere ao complexo onde a molécula de solvente é a água. A expressão "solvente" se refere a um complexo molecular de um composto da presente invenção (incluindo seus sais farmaceuticamente aceitáveis) com uma ou mais moléculas de solvente incorporadas na estrutura reticulada cristalina. As moléculas de solvente no solvato podem estar presentes em um arranjo regular e/ou um arranjo não ordenado. O solvato pode compreender uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica das moléculas do solvente. Por exemplo, um solvato com uma quantidade não estequiométrica de moléculas de solvente pode resultar da perda parcial de solvente do solvato. Solva- tos podem ocorrer como dímeros ou oligômeros que compreendem mais do que uma molécula ou composto de acordo com a presente invenção, dentro da estrutura reticulada cristalina.

[00534] Os compostos da presente invenção incluindo seus sais, hidratos e solvatos podem inerentemente ou por planejamento formar polimorfos.

[00535] Como usado aqui, "polimorfo" se refere a formas cristalinas que possuem a mesma composição química, mas arranjos espaciais diferentes das moléculas, átomos e/ou íons que formam o cristal.

[00536] Como usado aqui, "amorfo"se refere a uma forma sólida da molécula, átomo e/ou íons que não é cristalina. Um sólido amorfo não apresenta um padrão definitivo na difração por raio X.

[00537] Solvatos farmaceuticamente aceitáveis de acordo com a invenção incluem aqueles em que o solvente de cristalização pode ser isotopicamente substituído, por exemplo, D2O, de-acetona, de-DMSO.

[00538] Será reconhecido por aqueles versados na técnica que os compostos da presente invenção contêm centros quirais e como tal existem em formas isoméricas. Como usada aqui, a expressão "isôme- ros" se refere a compostos diferentes que possuem a mesma Fórmula molecular, mas diferem no arranjo e na configuração dos átomos. Também como usada aqui, a expressão "um isômero óptico" ou um "estereoisômero" se refere a qualquer uma das várias configurações estereoisoméricas que podem existir para um dado composto da presente invenção. É compreendido que um substituinte pode ser acoplado em um centro quiral de um átomo de carbono. Portanto, os compostos da invenção incluem enantiômeros, mostrados pelos arranjos estereoespecíficos indicativos em centros quirais na descrição estrutural dos compostos da invenção, em que uma ligação em cunha quebrada indica 0 substituinte acoplado ou que 0 átomo está abaixo do plano e uma ligação em cunha sólida indica 0 substituinte acoplado e 0 átomo está acima do plano.

[00539] "Enantiômeros" são um par de estereoisômeros que não são imagens em espelho superpostas um do outro. Uma mistura 1:1 de um par de enantiômeros é uma mistura "racêmica". A expressão é usada para designar uma mistura racêmica onde apropriado.

[00540] "Diastereoisômeros" são estereoisômeros que possuem pelo menos dois átomos assimétricos, mas que não são imagens em espelho um do outro.

[00541] A estereoquímica absoluta é especificada de acordo com o sistema Cahn-Ingold-Prelog R-S. Quando o composto é um enantiô- mero puro, a estereoquímica de cada carbono quiral pode ser especificada por R ou S. Compostos resolvidos cuja configuração absoluta é desconhecida podem ser designados (+) ou (-), dependendo da direção (dextro ou levorotatória) na qual eles giram no plano de luz polarizada no comprimento de onda da linha D de sódio. Alguns compostos aqui descritos podem conter um ou mais centros assimétricos ou eixos e podem assim dar origem a enantiômeros, diastereoisômeros e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas em termos de estereoquímica absoluta, como (/?)- ou (S)-.

[00542] Qualquer átomo assimétrico (por exemplo, carbono quiral ou semelhantes) dos compostos da presente invenção pode ser enriquecido enantiomericamente, por exemplo, a configuração (/?)- ou (S)- . Em certas modalidades, cada átomo assimétrico tem pelo menos 50% de excesso enantiomérico, pelo menos 60% de excesso enanti- omérico, pelo menos 70% de excesso enantiomérico, pelo menos 80% de excesso enantiomérico, pelo menos 90% de excesso enantiomérico, pelo menos 95% de excesso enantiomérico ou pelo menos 99% de excesso enantiomérico na configuração (/?)- ou (S)- descrita para o átomo assimétrico específico (por exemplo, carbono quiral).

[00543] Consequentemente, um composto da presente invenção pode estar na forma de um enantiômero substancialmente puro.

[00544] Quaisquer misturas de isômeros resultantes podem ser separadas com base nas diferenças físico-químicas dos constituintes, nos isômeros ópticos puros ou substancialmente puros, por exemplo, pela cromatografia e/ou cristalização fracionada.

[00545] Isômeros (/?)- e (S)- opticamente ativos podem ser preparados usando síntons quirais ou reagentes quirais ou resolvidos usando técnicas convencionais. Qualquer racemato resultante de produtos finais ou intermediários pode ser resolvido nos antípodas ópticos por métodos conhecidos. Por exemplo, métodos conhecidos incluem a separação dos sais diastereoisoméricos desses, obtidos com um ácido ou base opticamente ativos e liberando o composto ácido ou básico opticamente ativo. Em particular, uma porção básica pode ser então empregada para resolver os compostos da presente invenção em seus antípodas ópticos, por exemplo, pela cristalização fracionada de um sal formado com um ácido opticamente ativo, por exemplo, ácido tartá- rico, ácido dibenzoil tartárico, ácido di-O,O'-p-toluoil tartárico, ácido mandélico, ácido málico ou ácido canfor-10-sulfônico. Produtos racê- micos também podem ser resolvidos pela cromatografia quiral, por exemplo,m cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) usando um absorvente quiral.

[00546] Se o composto contém uma ligação dupla, o substituinte pode ter a configuração E ou Z. Se o composto contém uma cicloalqui- la di-substituída, o substituinte cicloalquila pode ter uma configuração cis ou trans. Todas as formas tautoméricas também são pretendidas estar incluídas.

[00547] Compostos da invenção que contém grupos capazes de atuar como doadores e/ou aceptores para ligações de hidrogênio podem ser capazes de formar cocristais com formadores de cocristal adequados. Esses cocristais podem ser preparados a partir de compostos da presente invenção por procedimentos de formação de cocristal conhecidos. Tais procedimentos incluem a trituração, aquecimento, cosublimação, cofusão ou contato em compostos em solução da presente invenção com o formador de cocristal sob condições de cristalização e isolamento dos cocristais formados dessa maneira. Formadores de cocristal adequados incluem aqueles descritos no WO 2004/078163. Portanto, a invenção fornece adicionalmente cocristais que compreendem um composto da presente invenção.

[00548] Os compostos da Fórmula (I) inibem PI3 quinases (PIK3) e podem, portanto, ser úteis no tratamento de doenças dependentes de proteína ou lipídeo quinase, especialmente doenças que dependem de PI3 quinases classe I, PI3Kalfa, PI3Kbeta, PI3Kdelta e PI3Kgama ou um ou mais membros individuais de quinase ou qualquer combinação de qualquer duas ou mais das quinases mencionadas.

[00549] Compostos que inibem a atividade de mais do que uma das isoformas de PI3K Classe I (alfa, beta, delta e gama), em particular substancialmente equipotente aos membros da Classe IA p110a, p110b e p110d e opcionalmente assim como o membro da Classe IB p110g, são considerados ser benéficos por que tais compostos são considerados ter a habilidade de evitar os mecanismos de adaptação devido à reativação da via através de outras isoformas, comparados com compostos com especificidade única, por exemplo, especificidade por um membro da família de PI3K Classe I. Por "equipotente" enten- de-se que os compostos inibem várias isoformas em uma extensão comparável, por exemplo, como medido em um ensaio enzimático ou celular aqui descrito.

[00550] A potência de inibição aumentada de pelo menos uma das isoformas de PI3K (por exemplo, inibir pelo menos uma isoforma de PI3K em concentrações mais baixas) pode ser vantajosa. No caso de tumores nulos para PTEN, por exemplo, apesar da isoforma direciona- dora ser p110b, a eficácia completa pode requerer a participação de outras isoformas da Classe IA. Por exemplo, a potência sobre as isoformas alfa e beta pode ser vantajosa.

[00551] Há também uma necessidade de compostos que inibam potencialmente a PI3Kalfa quinase, por exemplo, para o tratamento de cânceres que são direcionados primariamente pelas formas oncogêni- cas do gene que codifica p110a (por exemplo, PIK3CA H1047R ou E545K), assim como tumores que mostram um número de cópias au-mentado de PIK3CA.

[00552] É desejável que os compostos da presente invenção exibam a atividade de PI3 quinase mencionada sem apresentar atividade sobre mTOR ou pelo menos exibam uma seletividade favorável para inibir uma ou mais das PI3 Quinases da Classe I sobre mTOR. Por exemplo, compostos que mostram inibição seletiva em favor de uma ou mais isoformas de PI3K (por exemplo, pelo menos duas, preferivelmente três, por exemplo, as isoformas alfa, beta e delta) comparados com mTOR são desejáveis, por que o efeito inibitório de mTOR geralmente reduz a janela de segurança, mais especialmente quando o composto inibe mTOR mais acentuadamente do que PI3K (proporção desfavorável).

[00553] Adicionalmente, os inibidores de PI3K que possuem um efeito fora do alvo reduzido ou não possuem um efeito fora do alvo, tal como os que não possuem ligação à tubulina, são desejados, já que tal efeito pode causar efeitos de toxicidade não conectados com a inibição de PI3K no alvo e, portanto, tais compostos podem requerer um controle de dosagem cuidadoso adicional para assegurar que o efeito terapêutico seja controlável e atribuível à inibição de PI3K. Os compostos da presente invenção, quando medidos usando os procedimentos aqui descritos, mostram um efeito fora do alvo fraco ou não observável (ligação a tubulina).

[00554] Compostos que inibem a atividade de mais do que uma das isoformas de PI3K Classe I (alfa, beta, delta e gama), em particular, substancialmente equipotentes com os membros p110a, p110b e p110d da Classe IA, assim como também opcionalmente com o mem- bro p110g da Classe IB e que adicionalmente possuem um efeito fora do alvo reduzido ou não possuem efeito fora do alvo, tal como não possuindo ligação à tubulina ou ligação reduzida à tubulina, são desejados.

[00555] Os compostos apresentam, desejavelmente, uma inibição melhorada de pelo menos uma (por exemplo, PI3Kalfa), mas especi-almente duas (por exemplo, PI3Kalfa e PI3Kbeta) ou três (por exemplo, PI3Kalfa, PI3Kbeta e PI3Kgama) assim como efeito fora do alvo reduzido (em particular, uma ausência de) (por exemplo, ligação à tu-bulina reduzida ou ausente) são procurados. Desejavelmente, esses compostos também mostram inibição seletiva em favor de uma ou mais isoformas de PI3K (por exemplo, pelo menos duas, preferivelmente três, por exemplo, das isoformas alfa, beta e delta) comparados com mTOR, são desejáveis.

[00556] Consequentemente, em um aspecto adicional, um composto da presente invenção pode ser usado (por exemplo, na fabricação de um medicamento) para o tratamento de doenças, condições ou distúrbios associados com a inibição ou antagonismo de PI3K quinases em um indivíduo (por exemplo, um mamífero, preferivelmente um humano). Devido à relevância da inibição de PI3 quinase, os compostos da presente invenção são, portanto, considerados úteis no tratamento de doenças proliferativas tais como o câncer. Condições/doenças em particular para o tratamento pelos compostos da presente invenção incluem um tumor benigno ou especialmente maligno, tumores sólidos, um carcinoma do cérebro, rim, fígado, glândula adrenal, bexiga, mama, estômago (especialmente tumores gástricos), esôfago, ovários, cólon, reto, tireóide, sarcoma, glioblastomas, mieloma múltiplo ou câncer gastrintestinal, especialmente carcinoma de cólon ou adenoma colo-retal ou um tumor de cabeça e pescoço, outras doenças tais como a síndrome de Cowden, doença de LHermitte-Duclos e síndrome de Bannayan-Zonana (ou doenças nas quais a via de PI3K/PKB está aberrantemente ativada), hiperplasia da próstata, uma neoplasia, es-pecialmente de caráter epitelial, preferivelmente carcinoma mamário ou carcinoma de célula escamosa, malignidades de célula B tais como leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma não Hodgkin (LNH), mielo- ma de célula plasmática e linfoma de Hodgkin (LH) ou uma leucemia. Os compostos são capazes de, desejavelmente, provocar a regressão de tumores e evitar a formação de metástases tumorais e o crescimento de (micro) metástases. Pode ser possível usar os compostos da Fórmula (I) também no tratamento de doenças do sistema imune na medida em que várias, ou especialmente, lipídeo quinases individuais e/ou serina/treonina proteína quinases (adicionais) estejam envolvidas.

[00557] Como usada aqui, a expressão "um/uma", "o/a" e expressões similares usadas no contexto da presente invenção (especialmente no contexto das reivindicações) devem ser consideradas abranger o singular e o plural a menos que indicado de outra maneira ou claramente contradito pelo contexto.

[00558] Todos os métodos aqui descritos podem ser realizados em qualquer ordem adequada, a menos que indicado de outra maneira ou claramente contradito pelo contexto. O uso de qualquer um e de todos os exemplos ou linguagem exemplificadora (por exemplo, "tal como") fornecidos aqui é pretendido meramente ilustrar melhor a invenção e não impor uma limitação no escopo da invenção reivindicada de maneira diferente.

[00559] Os compostos da presente invenção são usados tipicamente como uma composição farmacêutica (por exemplo, um composto da presente invenção e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável).

[00560] Portanto, em outro aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável desse e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

[00561] Um composto da presente invenção pode ser fornecido em uma composição em forma amorfa. Um composto da presente invenção pode ser fornecido em uma composição em sua forma livre, isto é, não na forma de um sal (a forma de base livre). Um composto da presente invenção pode ser fornecido em uma composição em sua forma livre, isto é, não na forma de um sal (a forma de base livre) e estar também em forma amorfa.

[00562] Como usada aqui, a expressão "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui geralmente reconhecidos como seguros (GRAS) sol-ventes, meios de dispersão, revestimentos, tensoativos, antioxidantes, conservantes (por exemplo, agentes antibacterianos, agentes antifún- gicos), agentes isotônicos, agentes que retardam a absorção, sais, conservantes, estabilizadores de fármaco, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegração, lubrificantes, agentes edulcorantes, agentes flavorizantes, corantes, agentes de tamponamento (por exemplo, ácido maleico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido acético, bicarbonato de sódio, fosfato de sódio e semelhantes) e semelhantes e suas combinações, como será conhecido por aqueles versados na técnica (veja, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th. Ed. Mack Printing Company, 1990, pp 1289-1329). Exceto, na medida em que qualquer veículo convencional seja incompatível com o ingrediente ativo, seu uso nas composições terapêutica ou farmacêutica é contemplado. Pra os propósitos dessa invenção, solvatos e hidratos são considerados composições farmacêuticas que compreendem um composto da presente invenção e um solvente (isto é, solvato) ou água (isto é, um hidrato).

[00563] As formulações podem ser preparadas usando procedimentos de dissolução e misturação convencionais. Por exemplo, o concentrado da substancia do fármaco (isto é, o composto da presente invenção ou a forma estabilizada do composto (por exemplo, um complexo com um derivado da ciclodextrina ou outro agente de complexação conhecido) é dissolvido em um solvente adequado na presença de um ou mais dos excipientes descritos acima. O composto da presente invenção é formulado tipicamente em formas de dosagem farmacêutica para fornecer uma dosagem facilmente controlável do fármaco e para dar ao paciente um produto elegante e facilmente manuseável.

[00564] A composição farmacêutica pode ser formulada para vias de administração particulares tais como administração oral, administração parenteral e administração retal etc.. Adicionalmente, as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser feitas em uma forma sólida (incluindo sem limitação cápsulas, comprimidos, pílulas, grânulos, pós ou supositórios) ou em uma forma líquida (incluindo sem limitação, soluções, suspensões ou emulsões). As composições farmacêuticas podem ser submetidas a operações farmacêuticas convencionais tais como a esterilização e/ou podem conter diluentes inertes, agentes de lubrificação ou agentes de tamponamento convencionais, assim como adjuvantes, tais como conservantes, estabilizadores, agentes umectantes, emulsificantes e tampões etc..

[00565] Tipicamente, as composições farmacêuticas são comprimidos ou cápsulas de gelatina que compreendem o ingrediente ativo junto com:

[00566] a) diluentes, por exemplo, lactose, dextrose, sucrose, mani- tol, sorbitol, celulose e/ou glicina;

[00567] b) lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárico, seu sal de magnésio ou cálcio e/ou polietilenoglicol; para comprimidos também

[00568] c) aglutinantes, por exemplo, silicato de magnésio e alumínio, pasta de amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose, carboximetil- celulose de sódio e/ou polivinilpirrolidona; se desejado

[00569] d) desintegrantes, por exemplo, amidos, agar, ácido algíni- co ou seu sal de sódio ou misturas efervescentes; e/ou

[00570] e) absorventes, corantes, flavorizantes e edulcorantes.

[00571] Os comprimidos podem ser revestidos com filme ou ter re-vestimento entérico de acordo com métodos conhecidos na técnica.

[00572] Soluções do ingrediente ativo e também suspensões e, es-pecialmente, soluções ou suspensões aquosas isotônicas podem ser usadas, isso sendo possível, por exemplo, no caso de composições liofilizadas que compreendem o ingrediente ativo sozinho ou junto com um veículo, por exemplo, manitol, para tais soluções ou suspensões a serem produzidas antes do uso. As composições farmacêuticas podem ser esterilizadas e/ou podem compreender adjuvantes, por exemplo, conservantes, estabilizadores, agentes umectantes e/ou emulsifi- cantes, solubilizantes, sais para regulação da pressão osmótica e/ou tampões; e são preparadas de uma maneira conhecida per se, por exemplo, por meio de processos de dissolução ou liofilização convencionais. As ditas soluções ou suspensões podem compreender substancias que aumentam a viscosidade, tais como carboximetilcelulose de sódio, carboximetilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, dextran, poli-vinilpirrolidona ou gelatina.

[00573] Suspensões em óleo compreendem como componente óleo os óleos vegetais, sintéticos ou semissintéticos rotineiramente para propósitos de injeção. Podem ser mencionados como tal, especialmente, ésteres de ácido graxo líquido que contenham como componente ácido um ácido graxo de cadeia longa que possua entre 8 a 22 átomos de carbono, especialmente entre 12 a 22 átomos de carbono, por exemplo ácido láurico, ácido tridecílico, ácido mirístico, ácido pen- tadecílico, ácido palmitico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido beenico ou ácidos insaturados correspondentes, por exemplo, ácido oleico, ácido elaídico, ácido erúcico, ácido brasídico ou ácido linoleico, se desejado com a adição de antioxidantes, por exemplo, vitamina E, beta-caroteno ou 3,5-di-terc-butil-4-hidroxitolueno. O componente álcool desses ésteres de ácido graxo tem um máximo de 6 átomos de carbono e é um álcool mono ou poli-hidroxi, por exemplo, mono, di ou tri-hidróxi-alcool, por exemplo, metanol, etanol, propanol, butanol ou pentanol; ou os isômeros desses, mas especialmente glicol e glicerol. Os exemplos a seguir de ésteres de ácido graxo devem, portanto, ser mencionados: oleato de etila, miristato de isopropila, palmitato de isopropila, "Labrafil M 2375" (trioleato de polioxietileno glicerol, Gattefossé, Paris), "Miglyol 812" (triglicerideo de ácidos graxos saturados com uma extensão de cadeia de C8-C12, Hüls AG, Alemanha), mas especialmente óleos vegetais tais como óleo de semente de algodão, óleo de amêndoas, óleo de oliva, óleo de rícino, óleo de gergelim, óleo de soja e mais especialmente óleo de amendoim.

[00574] Composições injetáveis são preparadas de modo costumeiro sob condições estéreis; o mesmo se aplica também á introdução das composições em ampolas ou frascos e a vedação dos recipientes.

[00575] As composições farmacêuticas para administração oral podem ser obtidas pela combinação do ingrediente ativo com veículos sólidos, se desejado, granulando a mistura resultante e processando a mistura, se desejado ou necessário, depois da adição de excipientes apropriados, em comprimidos, núcleos de drágeas ou cápsulas. Também é possível que eles sejam incorporados em veículos plásticos que permitem que os ingredientes ativos se difundam ou sejam liberados em quantidades medidas.

[00576] As composições adequadas para administração oral incluem uma quantidade eficaz de um composto da invenção na forma de comprimidos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós dispersáveis ou grânulos, emulsão, cápsulas duras ou macias ou xaropes ou elixires. Composições pretendidas para uso oral são preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados do grupo que consiste em agentes edulcorantes, agentes flavorizantes, agentes corantes e agentes conservantes a fim de fornecer preparações farmaceuticamente elegantes e palatáveis. Os comprimidos podem conte o ingrediente ativo em mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos que são adequados para a fabricação de comprimidos. Esses excipientes são, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e de desintegração, por exemplo, amido de milho ou ácido algínico; agentes aglutinantes, por exemplo, amido, gelatina ou acácia; e agentes de lubrificação, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos não são revestidos ou são revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e a absorção no trato gastrintestinal e dessa maneira fornecer uma ação sustentada durante um período mais longo. Por exemplo, um material de ação retardada tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila pode ser empregado. As formulações para uso oral podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim ou como cápsulas de gelatina macia, em que o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou óleo de oliva.

[00577] As composições farmacêuticas para administração tópica podem ser obtidas pela combinação do ingrediente ativo com um veículo líquido (por exemplo, um veículo líquido aquoso) para dissolver ou dispersar o ativo, junto com ingredientes de formulação opcionais tais como solventes/solubilizadores, agentes de gelificação, óleos, estabilizadores, tampões e conservantes para fornecer, por exemplo, uma solução, loção, creme, gel ou unguento. A composição farmacêutica para administração tópica pode ser fornecida, por exemplo, para aplicação dérmica. As composições farmacêuticas para administração tópica podem compreender entre aproximadamente 0,1% a aproximadamente 2% do ingrediente ativo, o ingrediente ativo sendo especialmente um composto de Fórmula (I), em particular, um composto descrito nos exemplos individuais desse.

[00578] A composição farmacêutica (ou formulação) para aplicação pode ser embalada em uma variedade de maneiras dependendo do método usado para a administração do fármaco. Geralmente, um artigo para distribuição inclui um recipiente que possui depositada nele a formulação farmacêutica em uma forma apropriada. Recipientes adequados são bem conhecidos daqueles versados na técnica e incluem materiais tais como frascos (de plástico ou vidro), ampolas, bolsas plásticas, cilindros de metal e semelhantes. O recipiente também pode incluir um conjunto a prova de adulteração para impedir o acesso indiscriminado aos conteúdos da embalagem. Em adição, o recipiente tem depositado sobre ele um rótulo que descreve o conteúdo do recipiente. O rótulo também pode incluir as advertências apropriadas.

[00579] A composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção pode ser formulada para uso como uma administração parenteral. As composições farmacêuticas (por exemplo, formulação intravenosa (iv)) podem ser submetidas a operações farmacêuticas convencionais tais como a esterilização e/ou podem conter diluentes inertes convencionais ou agentes de tamponamento, assim como adjuvantes, tais como conservantes, estabilizadores, agentes umectantes, emulsificantes e tampões bem conhecidos daqueles versados na técnica.

[00580] A presente invenção fornece composições farmacêuticas anidras e formas de dosagem que compreendem os compostos da presente invenção como ingredientes ativos, já que a água pode facilitar a degradação de certos compostos. Composições farmacêuticas anidras e formas de dosagem da invenção podem ser preparadas usando ingredientes anidros ou que contêm pouca umidade e condições de baixa umidade. Uma composição farmacêutica anidra pode ser preparada e armazenada tal que sua natureza anidra seja mantida. Consequentemente, composições anidras são embaladas usando materiais conhecidos para evitar a exposição à água tal que elas possam ser incluídas em kits de receituário adequados. Exemplos de embalagens adequadas incluem, mas não são limitadas a embalagens de alumínio hermeticamente lacradas, plásticos, recipientes de dosagem unitária (por exemplo, frascos), embalagens de blister e embalagens de tira.

[00581] A invenção fornece ainda composições farmacêuticas e formas de dosagem que compreendem um ou mais agentes que reduzem a taxa pela qual o composto da presente invenção como um ingrediente ativo será decomposto. Tais agentes, que são referidos aqui como "estabilizadores" incluem, mas não são limitados a antioxidantes tais como ácido ascórbico, tampões para o pH ou tampões de sal etc..

[00582] Um composto da presente invenção, em particular, um composto descrito nos exemplos individuais desse, pode ser fornecido em uma forma amorfa.

[00583] Um composto da presente invenção, em particular, um composto descrito nos exemplos individuais desse, pode ser formulado como uma suspensão padronizada, nanosuspensão e dispersão sólida, por exemplo, como a seguir.

Suspensão Padronizada:

[00584] 1) A quantidade necessária do material cristalino do Exem- pio 18, Lote E foi pesada com o objetivo de atingir uma concentração da formulação de 3 mg/mL.

[00585] 2) O material cristalino do Exemplo 18, Lote E foi então dis perso em Carboximetilcelulose 0,5% [p/p]/Tween 80 0,5% [p/p]/Água.

[00586] 3) A suspensão foi centrifugada para homogeneizar.

[00587] 4) A suspensão foi sonicada usando um sonicador de son da para reduzir o tamanho da partícula (2 min).

Nanosuspensão

[00588] 1) 32 mg de material cristalino do Exemplo 18, Lote E pre cisamente pesadas em um dispositivo de moagem de mármore feito sob medida.

[00589] 2) 2,148 g de meio de moagem de zircônia 0,2 mm foram adicionados ao dispositivo de moagem

[00590] 3) 0,608 mL de HPMC 603 1% [p/V) (Hidroxipropilmetilcelu- lose grau 603) / SDS 0,05% (DodecilSulfato de Sódio)/Água foram adi-cionados ao dispositivo de moagem

[00591] 4) Os dispositivos de moagem foram fechados e colocados em um moinho rotatório

[00592] 5) A amostra foi moída por 4 h a 400 rpm

[00593] 6) A nanosuspensão foi coletada usando uma seringa

Dispersão Sólida

[00594] 1) 30 mg do material cristalino do Exemplo 18, Lote E foram pesadas em um frasco de liofilização

[00595] 2) 30 mg de HPMC 603 (Hidroxipropilmetilcelulose grau 603) foram adicionadas aos mesmo frasco

[00596] 3) 5,6 mL de Dioxana foram adicionados ao mesmo frasco. O frasco foi fechado com uma tampa.

[00597] 4) A amostra foi agitada em condições ambientes por 12 h

[00598] 5) A solução obtida foi liofilizada de acordo com as seguin tes condições

[00599] Quando se fornece um composto da invenção como uma dispersão sólida, preparada, por exemplo, pela combinação do composto com um veículo (tal como um polímero, por exemplo, HPMC) e solvente e liofilizando a mistura (com a intenção de fornecer o composto em forma amorfa ao invés de em forma cristalina), por razões de estabilidade pode ser vantajoso aumentar a proporção da quantidade de veículo para a quantidade de composto para evitar a recristalização do composto quando em repouso.

[00600] Em certas substancias, pode ser vantajoso administrar o composto da presente invenção em combinação com pelo menos um agente farmacêutico (ou terapêutico) adicional (por exemplo, um agente antiproliferative ou anticâncer ou terapia adjunta tipicamente usada na quimioterapia). O composto da presente invenção pode ser administrado simultaneamente com, antes ou depois de um ou mais outros agentes terapêuticos. Alternativamente, o composto da presente invenção pode ser administrado separadamente, pela mesma ou por uma via diferente de administração ou junto na mesma composição farmacêutica como os outros agentes. Agentes anticâncer adicionais adequados incluem, mas não são limitados a:

[00601] Inibidores do receptor de HER2 e HER3: Como exemplificado recentemente em modelos de câncer de mama positivo para HER2, a inibição de PI3K levará a reativação da via através de uma indução transcricional de HER2 / HER3 dependente de FoxO, o que implica no uso de inibidores de HER2 nesse contexto (Serra et al, 2011 Oncogene 30; Chandarlapaty et al, 2011 Cancer Cell 19; Chakrabarty et al 2012, PNAS 109). Por exemplo, Trastuzumab (vendido sob o nome comercial de Herceptin® por Genetech/Roche), per- tuzumab (vendido sob o nome comercial de Perjeta™ por Genetech/Roche), o conjugado de fármaco-anticorpo Trastuzumab Emtan- sine (T-DM1) da Genetech/Roche, erlotinib (vendido sob o nome comercial de Tarceva® por Genetech/Roche), gefitinib (vendido sob o nome comercial de Iressa™ por AstraZeneca), MOR10703, neratinib (também conhecido como HKI-272, (2E)-N-[4-[[3-cloro-4-[(piridin-2- il)metoxi]fenil]amino]-3-ciano-7-etoxiquinolin-6-il]-4-(dimetilamino)but-2- enamida e descrito na publicação PCT No. WO 05/028443), lapatinib ou ditosilato de lapatinib (vendido sob o nome comercial de Tykerb® por GlaxoSmithKline). Tal combinação será útil em, por exemplo, cânceres de mama positivos para HER2 e cânceres gástricos com HER2 amplificada. Como um alvo terapêutico, HER3 (ErbB3 apresenta o de-safio de ser uma tirosina quinase inativa impedindo assim a utilidade de inibidores de ATP-mimético de tirosina quinase (TKIs). Contornando esse desafio estão as estratégias mediadas por anticorpo destinadas para bloquear a ligação ao ligante de ErbB3 (por exemplo, MM- 121) ou bloquear a dimerização de ErbB3 com ErbB2 em células que expressam ErbB2 (por exemplo, pertuzumab).

[00602] Reguladores negativos do receptor de estrogê- nio/lnibidores da aromatase: Por exemplo, Fulvestrant (vendido sob o nome comercial de Faslodex®, Letrozol (vendido sob o nome comercial de Femara® pela Novartis) ou Examestane (vendido sob o nome comercial de Aromasin® pela Pfizer). Tal combinação é útil no tratamento, por exemplo, de câncer de mama positivo para ER. O fundamento para a combinação tem como objetivo a resistência ao hormônio relacionada com PI3K.

[00603] Inibidores de proteína quinase quinase (MEK) ativada por mitógeno: Por exemplo, XL-518 (Cas No. 1029872-29-4, disponi-bilizado por ACC Corp.), AZD6244 ou selumetinib (AstraZeneca), GSK1120212 (GlaxoSmithKline), AZD8330 (AstraZeneca), ou MEK162, Tal combinação é útil no tratamento de, por exemplo, cânceres de pulmão com KRAS mutante, câncer colo-retal (CRC) e pancreá- tico,

[00604] Inibidores de Bcl2/BclXL: por exemplo, ABT737 (Abbott).

[00605] Anti-androgênios: Por exemplo, Nilutamida (vendido com o nome comercial de Nilandron® e Anandron®), bicalutamida (vendido com o nome comercial de Casodex®), flutamida (vendido com o nome comercial de Fulexin™), MDV3100 (Enzalutamida, vendido com o no-me comercial de Xtandi® por Medivation) e Abiraterona (vendido com o nome comercial de Zytiga® pela Janssen). Tal combinação é útil no tratamento de, por exemplo, câncer de próstata com inativação de PTEN. O fundamento para a combinação tem como objetivo direcionar a intercomunicação entre as vias de PIK3 e Receptor de Androgênio.

[00606] Inibidores de Proteína de Choque Térmico (HSP90): Por exemplo, Tanespimicina (17-alilamino-17-demetoxigeldanamicina, também conhecida como KOS-953 e 17-AAG, disponibilizada pela SIGMA, e descrita na Patente dos U.S. No. 4.261.989) e etilamida de ácido 5-(2,4-Di-hidróxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)- isoxazol-3-carboxílico (também conhecido como AUY922 e descrito na Publicação PCT No. W02004/072051). Tal combinação é útil no tra-tamento de, por exemplo, cânceres de pulmão dependentes de EGFR ou para a inibição de EGRmut que se torna refratário a inibidores de EGR ou em câncer de mama positivo para HER2 ou câncer gástrico positivo para HER2.

[00607] Agentes antineoplásicos Taxane: Por exemplo, Cabazi- taxel (1 -hidroxi-7β, 10β-dimet0xi-9-oxo-5β,20-epoxitax-11 -ene- 2α,4,13a-triil-4-acetato-2-benzoato-13-[(2R,3S)-3-{[(terc- butóxi)carbonil]amino}-2-hidróxi-3-fenilpropanoato), larotaxel ((2a, 3Ç, 4a, 5β, 7a, 10β, 13a)-4,10-bis(acetilóxi)-13-({(2R,3S)-3-[(terc- butoxicarbonil)amino]-2-hidróxi-3-fenilpropanoil}óxi)-1-hidróxi-9-oxo- 5,20-epóxi-7,19-ciclotax-11 -en-2-il benzoato).

[00608] Agentes anti-mitóticos: Por exemplo, paclitaxel (vendido com os nomes comerciais de Taxol e Onxal™) e Paclitaxel ligado a proteína (vendido com o nome comercial de Abraxane®) e útil para o tratamento de câncer de próstata, vinblastina (também conhecida como sulfato de vinblastina, vincaleucoblastina e VLB, vendido com os nomes comerciais de Alkaban-AQ® e Velban®), vincristina (também conhecida como sulfato de vincristina, LCR, e VCR, vendido com os nomes comerciais de Oncovin® e Vincasar Pfs®) e vinorelbina (vendido com o nome comercial de Navelbine®).

[00609] Anticorpos anti-receptor 1 do fator de crescimento se-melhante à insulina: Por exemplo, Figitumumab (também conhecido como CP-751.871, disponibilizado por ACC Corp) e robatumumab (CAS No. 934235-44-6).

[00610] Inibidores de PARP (poli ADP-ribose polimerase): Por exemplo, BSI-201 (iniparib) e olaparib. Tal combinação é útil em, por exemplo, em direcionar a possível indução do maquinário de dano de DNA pelos inibidores de PI3K.

[00611] Agentes terapêuticos adequados para a terapia adjunta incluem esteroides, agentes anti-inflamatórios, anti-histaminas, anti- eméticos e outros agentes bem conhecidos daqueles versados na técnica para uso no aperfeiçoamento da qualidade do cuidado com os pacientes a serem tratados das doenças, condições ou distúrbios aqui descritos,

[00612] Como a ativação da via de PI3K/Akt dirige a sobrevida celular, inibição da via em combinação com terapias que dirigem a apopto- se em células de câncer, incluindo radioterapia e quimioterapia, pode resultar em respostas aperfeiçoadas (Ghobrial et al., CA Câncer J. Clin. 55:178-194 (2005)). Como um exemplo, uma combinação de inibidor de PI3 quinase com carboplatina demonstrou efeitos sinérgicos em ambos os ensaios de proliferação e apotose in vitro assim como na eficácia sobre o tumor in vivo em um modelo de xenoenxerto de câncer de ovário (Westfall e Skinner, Mol. Câncer Ther. 4:1764-1771 (2005)). Compostos da presente invenção podem ser administrados em conjunto com a radioterapia.

[00613] O composto da presente invenção ou composição farmacêutica desse pode ser administrado pelas seguintes vias: enteral, tal como nasal; retal ou oral; parenteral tal como intramuscular ou intravenosa; ou tópica tal como administração dérmica. O composto da presente invenção ou sua composição farmacêutica para uso em humanos é administrado preferivelmente oralmente (por exemplo, na forma de um comprimido).

[00614] A composição farmacêutica ou combinação da presente invenção pode estar em uma dosagem unitária de cerca de 1 mg a cerca de 1000 mg de ingrediente(s) ativo(s) para um indivíduo com cerca de 50 kg a cerca de 70 kg, ou cerca de 1 mg a cerca de 500 mg ou cerca de 1 mg a cerca de 250 mg ou cerca de 1 mg a cerca de 150 mg ou cerca de 0,5 mg a cerca de 100 mg, ou cerca de 1 mg a cerca de 50 mg de ingredientes ativos. A dosagem unitária também pode ser de cerca de 50 mg a cerca de 1000 mg de ingredientes ativos para um indivíduo com cerca de 50 kg a cerca de 70 kg, ou cerca de 50 mg a cerca de 500 mg ou cerca de 50 mg a cerca de 250 mg ou cerca de 50 mg a cerca de 150 mg ou cerca de 50 mg a cerca de 100 mg de ingredientes ativos. A dosagem unitária também pode ser de cerca de 100 mg a cerca de 500 mg de ingrediente(s) ativo(s) para um indivíduo com cerca de 50 kg a cerca de 70 kg, ou cerca de 200 mg a cerca de 500 mg ou cerca de 300 mg a cerca de 500 mg ou cerca de 300 mg a cerca de 400 mg de ingredientes ativos. Essas dosagens podem ser fornecidas como a dosagem diária total e podem ser fornecidas em dosagem unitária ou dosagens divididas. A dosagem pode depender da forma de dosagem particular usada para a liberação dos ingredientes ativos. Em geral, a dosagem terapeuticamente eficaz de um composto, a composição farmacêutica ou suas combinações, é dependente da espécie do indivíduo, do peso corporal, idade e condição individual, o distúrbio ou a doença ou a severidade dessas a serem tratadas. Um médico, farmacêutico, clínico ou veterinário de conhecimentos comuns podem prontamente determinar a quantidade eficaz de cada um dos ingredientes ativos necessários para evitar, tratar ou inibir a progressão do distúrbio ou doença.

[00615] As propriedades das dosagens acima citadas são demonstráveis em testes in vitroe in vivo usando vantajosamente mamíferos, por exemplo, camundongos, ratos, cães, macacos ou órgãos isolados, tecidos e suas preparações. Os compostos da presente invenção podem ser aplicados in vitrona forma de soluções, por exemplo, soluções aquosas preparadas a partir de, por exemplo, uma solução concentrada de DMSO 10 mM, e in vivo enteralmente, parenteralmente, vantajosamente intravenosamente, por exemplo, como uma suspen- são ou em solução aquosa. A dosagem in vitro pode variar entre con-centrações de cerca de 10’3 molar e 10’9 molar. Uma quantidade tera- peuticamente eficaz in vivo pode variar dependendo da via de adminis-tração entre cerca de 0,1 a cerca de 500 mg/kg ou entre cerca de 1 a cerca de 100 mg/kg.

[00616] Em geral, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção é administrada a um paciente que ne-cessite de tratamento. A expressão "uma quantidade terapeuticamente eficaz" do composto da presente invenção se refere a uma quantidade do composto da presente invenção que desencadeie a resposta biológica ou médica de um indivíduo, por exemplo, redução ou inibição de uma atividade enzimática ou da atividade de uma proteína ou da atividade de um complexo de proteína ou melhorar sintomas, aliviar sintomas, diminuir ou retardar a progressão da doença ou evitar a doença etc..

[00617] Em outro aspecto, é fornecido um método para o tratamento do câncer em um mamífero, que compreende administrar a um mamífero que necessite de tal tratamento, uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção.

[00618] Como usada aqui, a expressão "indivíduo" se refere a um animal. Tipicamente, o animal é um mamífero. Um indivíduo também se refere, por exemplo, a primatas (por exemplo, humanos, homens ou mulheres), vacas, carneiro, cabras, cavalos, cães, gatos, coelhos, ratos, camundongos, peixe, pássaros e semelhantes. Em certas modalidades, o indivíduo é um primata. Preferivelmente, o indivíduo é um humano.

[00619] Como usada aqui, a expressão "inibe", "inibição" ou "inibindo" se refere a redução ou supressão de uma dada condição, sintoma ou distúrbio ou doença ou a uma diminuição significativa na atividade basal de uma atividade ou processo biológicos.

[00620] Como usada aqui, a expressão "tratar", "tratando" ou "tra-tamento" de qualquer doença ou distúrbio, se refere (i) à melhora da doença ou distúrbio (isto é, retardando ou paralisando ou reduzindo o desenvolvimento da doença ou pelo menos um dos seus sintomas clí-nicos); (ii) aliviar ou melhorar pelo menos um parâmetro físico incluindo aqueles que podem não ser discerníveis pelo paciente; ou (iii) prevenir ou retardar o início ou o desenvolvimento ou a progressão da doença ou distúrbio. Em geral, a expressão "tratando" ou "tratamento" descreve o manuseio e o cuidado de um paciente com o propósito de combater a doença, condição ou distúrbio e inclui a administração de um composto da presente invenção para prevenir o aparecimento dos sintomas ou complicações, aliviar os sintomas ou complicações ou eliminar a doença, condição ou distúrbio.

[00621] Como usado aqui, um indivíduo está "necessitado de" um tratamento, se tal indivíduo se beneficiar biologicamente, clinicamente ou em qualidade de vida de tal tratamento (preferivelmente, o indivíduo é um humano).

[00622] Outro aspecto da invenção é um produto que compreende um composto da presente invenção e pelo menos um outro agente terapêutico (ou agente farmacêutico) como uma preparação combinada para uso simultâneo, separado ou sequencial na terapia para intensificar a apoptose.

[00623] Nas terapias de combinação da invenção, o composto da presente invenção e o outro agente terapêutico podem ser fabricados e/ou formulados pelos mesmos ou por fabricantes diferentes. Além disso, o composto da presente invenção e o outro agente terapêutico (ou agente farmacêutico) podem ser colocados juntos em uma terapia de combinação: (i) antes da liberação do produto de combinação para os médicos (por exemplo, no caso de um kit que compreende o composto da invenção e outro agente terapêutico); (ii) pelo próprio médico (ou sob a orientação do médico) imediatamente antes da administração; (iii) no próprio paciente, por exemplo, durante a administração sequencial do composto da invenção e o outro agente terapêutico.

[00624] Consequentemente, a invenção fornece o uso de um composto da presente invenção para o tratamento de uma doença ou condição pela inibição ou antagonismo de PI3K, em que o medicamento é preparado para a administração com outro agente terapêutico. A invenção também fornece o uso de outro agente terapêutico em que o medicamento é administrado como uma combinação do composto da presente invenção com o outro agente terapêutico.

[00625] Modalidades da presente invenção são ilustradas pelos Exemplos a seguir. Deve ficar compreendido, entretanto, que as modalidades da invenção não são limitadas aos detalhes específicos desses Exemplos, já que outras variações desses ficarão conhecidas ou aparentes a luz da presente descrição, para aquele versado na técnica.

EXEMPLOS

[00626] A menos que especificado de outra maneira, os materiais de partida estão geralmente disponíveis a partir de fontes comerciais tais como Aldrich Chemicals Co. (Milwaukee, Wis.), Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, N.H.), Acros Organics (Fairlawn, N.J.), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, England), Tyger Scientific (Prince-ton, N.J.), Chem-lmpex International, Inc. (Wood Dale, IL), e AstraZe-neca Pharmaceuticals (London, England).

[00627] As abreviações usadas nos Exemplos a seguir possuem os significados correspondentes listados abaixo. AcOH ácido acético AICh tricloreto de alumínio API ionização em pressão atmosférica Boc terc-butoxicarbonila Salmoura solução de cloreto de sódio saturada (em rt) br. s singleto amplo nBuOH n-butanol fBu terc-butila CDI carbonil diimidazol Celite marca registrada de Celite Corp. (World Minerais Inc.), Santa Barbara, CA, USA, para auxiliar a filtração baseado em kieselguhr CH3CN acetonitrila conc. concentrado d dubleto DCE dicloroetano DCM diclorometano DEA dietilamina DIEA N,N-dietil-isopropilamina DMAP 4-dimetilaminopiridina DME dimetoxietano DMF N,N-dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido ES-MS espectrometria de massa por eletrospray Et etila Et3N trietilamina Et2O éter dietílico EtOAc acetato de etila EtOH etanol H hora(s) HPLC cromatografia líquida de alta pressão Hyflo iPr Hyflo Super Cel® isopropila K2CO3 carbonato de potássio KOH hidróxido de potássio K3PO4 fosfato de potássio LAH hidreto de litio alumínio LC cromatografia líquida Me metila MeI iodeto de metila MeOH metanol MgSO4 sulfato de magnésio M multipleto min minuto(s) mL mililitro(s) m.p. ponto de fusão MS Espectrometria de Massa NaH hidreto de sódio NaHCO3 bicarbonato de sódio Na2CO3 carbonato de sódio NaHMDS hexametildisilazana de sódio NaOH hidróxido de sódio Na2SO4 sulfato de sódio MgSO4 sulfato de magnésio NaOAc acetato de sódio NBS N-bromosuccinimida NH4Cl cloreto de amônia NH4OH hidróxido de amônia NMR ressonância nuclear magnética POCl3 oxicloreto de fósforo (III) RT temperatura ambiente Rf fator de retenção de TLC s singleto scCO2 CO2 supercrítico t tripleto TBAF fluoreto de tetrabutilamônia TBDPSCI cloreto de terc-Butildifenilsilila TBME terc-butilmetileter TEA trietilamina TEMPO 2,2,6,6-tetrametilpiperidiniloxila TFA ácido trifluoracético TF tetraidrofurano TLC cromatografia de camada fina TMS trimetilsilila TMSCI cloreto de trimetilsilila ÍR tempo de retenção TsCI cloreto de p-toluenosulfonila TsOH ácido p-toluenosulfônico UV ultravioleta

Método Geral

[00628] As medidas de 1H-NMR foram realizadas em espectrofo- tômetro Bruker Ultrashield™ 400 (400 MHz), Bruker Ultrashield™ 600 (600 MHz) ou 500 MHz DRX Bruker CryoProbe (500 MHz) usando ou não trimetilsilano como um padrão interno. As mudanças químicas (va-lores de d) são relatadas em ppm no campo inferior de tetrametilsilano, as constantes de acoplamento (J) são dadas em Hz, o padrão de divisão dos espectros são denominados como singleto (s), dubleto (c/), dubleto duplo (dd), tripleto (f), quadrupleto (q), multipleto ou mais sinais superpostos (m), sinal amplo (br).Os solventes são dados entre parênteses.

[00629] TLC foram realizadas em placas de vidro pré-revestidas com sílica-gel 60 F254 (Merck, Darmstadt, Alemanha) usando os respectivos solventes nomeados. A visualização foi feita de modo geral com luz UV (254 nm).

Condições de HPLC: LC-MS 1:

[00630] Coluna: Acquity HSS T3 2,1 x 50 mm, 1,8 pm. Fluxo: 1,2 mL/min. Temperatura da coluna: 50°C. Gradiente: 2% a 98% B em 1,4 min, 98% B por 0,75 min, 98% a 2% B em 0,04 min, 2% B por 0,01 min; A = água + ácido fórmico 0,05% + acetato de amónia 3,75 mM, B = acetonitrila + ácido fórmico 0,04%.

[00631] Detecção do rastreamento completo: 215 a 350 nm

LC-MS 2:

[00632] Coluna: Acquity HSS T3 2,1 x 50 mm, 1,8 pm. Fluxo: 1,2 mL/min. Temperatura da coluna: 50°C. Gradiente: 2% a 98% B em 1,4 min, 98% B por 0,75 min, 98% a 2% B em 0,04 min, 2% B por 0,01 min; A = água + ácido fórmico 0,05% + acetato de amónia 0,05%, B = acetonitrila + ácido fórmico 0,04%.

[00633] Detecção do rastreamento completo: 215 a 350 nm

LC-MS 3:

[00634] Coluna: Acquity HSS T3 2,1 x 50 mm, 1,8 pm. Fluxo: 1,0 mL/min. Temperatura da coluna: 60°C. Gradiente: 5% a 98% B em 1,4 min, 98% B por 0,75 min, 98% a 5% B em 0,04 min, 5% B por 0,01 min; A = água + ácido fórmico 0,05% + acetato de amónia 3,75 mM, B = acetonitrila + ácido fórmico 0,04%.

[00635] Detecção do rastreamento completo: 215 a 350 nm

HPLC 1:

[00636] Coluna: Chromolith performance RP18e 4,6 x 100 mm, Fluxo: 2,0 mL / min. Gradiente: 2% a 100% B em 4,5 min, 100% B por 1 min, A = água + 0,1% TFA, B = acetonitrila + 0,1% TFA

[00637] Detecção: 215 nm

UPLC 1:

[00638] Coluna: Acquity UPLC HSS T3 C18, 1,7pm 2,1 x 50 mm. Fluxo: 1,0 mL/min. Gradiente: 5% a 100% B em 1,5 min, 100% B por 1 min; A = água + TFA 0,1%, B = acetonitrila + TFA 0,1%, Detecção: 218 nm

Intermediário A: 4-(4,6-dicloro-pirimidin-2-il)-morfolino

[00639] O intermediário A está comercialmente disponível ou pode ser preparado usando o procedimento a seguir.

[00640] A uma solução de 2,4,6-tricloropirimidina (5,0 ml_, 42,6 mmols) em mesitileno (80 ml_) a 165°C foi adicionado por gotejamento uma solução de morfolino (4,83 ml_, 55,4 mmols) em mesitileno (20 ml_) e a suspensão foi agitada a 165°C por 30 min. A mistura de reação foi tratada com H2O, EtOAc e NaHCOs. A camada orgânica foi lavada com H2O e salmoura, seca (toSCU), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano/EtOAc, 100:0 —> 7:3). O resíduo foi triturado em hexano e filtrado para fornecer 0 composto do título (3,36 g, 33 %). tR: 1,11 min (LC-MS 1); ESI-MS: 234,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Intermediário B: 5-(4,4,5,5-Tetrametil-[11312]dioxaborolan-2-il)-4- trifluormetil-pirimidin-2-ilamina

[00641] A uma suspensão do produto da etapa B.1 (16,2 g, 66,3 mmols), bis-pinacolatodiboro (18,5 g, 72,9 mmols) e KOAc (19,5 g, 199 mmols) em dioxana (300 mL) sob argônio foi adicionado um aduto de PdCl2(dppf) CH2Cl2 (2,4 g, 2,98 mmols) e a mistura foi agitada a 115°C por 4 h. A mistura de reação foi resfriada para 50°C e tratada com EtOAc. A suspensão resultante foi filtrada em Hyflo e lavada com EtOAc. O filtrado combinado foi concentrado. O resíduo foi suspenso em NaOH 2 N, agitado em RT por 5 min e depois Et2θ e H2O foram adicionados e a mistura binária foi filtrada através de Hyflo. As fases do filtrado foram separadas. O pH da camada aquosa resultante foi ajustado para 5-6 com HCI 4N e depois extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com H2O e salmoura, seca (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo foi triturado em EÍ2O e hexano, filtrado para fornecer 0 composto do título (8,33 g, 42%). ÍR: 1,00 min (LC-MS 1); ESI-MS: 290,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa B1: 5-Bromo-4-trifluormetil-pirimidin-2-ilamina

[00642] A uma solução de 2-amino-4-trifluormetilpirimidina (25 g, 0,15 mol) em CH3CN (800 mL) foi adicionado por gotejamento (durante 2,5 horas) NBS (34,8 g, 0,195 moles) dissolvido em 200 mL de CH3CN no escuro. A mistura foi agitada 4,5 h em RT no escuro e depois o solvente foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em EtOAc e H2O e a mistura binária foi transferida em um funil separado. A camada aquosa foi separada e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com H2O e salmoura, seca com Na2SO4, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica-gel usando um gradiente de hexano/ EtOAc 9:1 para 3:2. As frações puras combinadas foram eva-poradas e o resíduo suspenso em 40mL de hexano, agitado por 10min., filtrado e lavado com 2x 20mL de hexano para dar o produto do título como um sólido bege (31,2 g, 85%). ÍR: 0,82 min (LC-MS 1). Exemplo 1j(S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona

[00643] Uma solução de produto da etapa 1.1 (350 mg, 1,16 mmols), Intermediário B (449 mg, 1,51 mmols), Na2COs (2M, 1,7 mL, 3,48 mmols) e PdCI2(dppf)-CH2CI2 (95 mg, 0,17 mmols) em DME (10 mL) sob argônio foi agitada a 80°C por 1 h. A mistura foi diluída em EtOAc e extraída com NaHCO3saturado. A camada orgânica foi lavada com H2O e salmoura, seca (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (CH2CI2/EtOH, 99,5:0,5 98:2). O resíduo foi triturado em hexano, filtrado e seco. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Waters Sun Fire C18, 30 x 100mm, 5 um; 0,1% TFA-água/acetonitrila; gradiente de acetonitrila 5-100% em 20 min) para fornecer o composto do título (260 mg, 52%). ÍR: 0,93 min (LC-MS 1); ESI-MS: 426,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 1.1: (S)-3-(6-Cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-metil- oxazolidin-2-ona

[00644] A uma solução de (S)-4-metil-2-oxazolidinona (432 mg, 4,19 mmols) em DMF (10 mL) foi lentamente adicionado NaH (60% em óleo mineral, 201 mg, 5,02 mmols) sob uma atmosfera de argônio e a suspensão foi agitada em rt por 30 min. A mistura de reação foi resfriada para 0°C e o Intermediário A (1 g, 4,19 mmols) foi adicionado. A mistura foi agitada em RT por 4 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc e extraída com H2O. A camada orgânica foi lavada com H2O e salmoura, seca (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano/EtOAc, 97:3 —>• 1:1) para fornecer 0 composto do título (605 mg, 47%). tR: 1,00 min (LC-MS 1); ESI- MS: 299,2/301,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 2:(S)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-515-dimetil-oxazolidín-2-ona

[00645] Uma solução do produto da etapa 2.1 (28 mg, 0,04 mmols) e TBAF (2 mL, 2,0 mmols, 1M em THF) foi agitada em rt por uma noite. A mistura de reação foi concentrado e 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH, 100:0 —► 95:5) para dar o produto do título. tR: 0,89 min (LC-MS 1); ESI-MS: 470,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 2.1:(S)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluormetil- [4l5']bipirimidinil-6-il')-4-(terc-butil-difenil-silaniloximetil)-5,5-dimetil- oxazolidin-2-ona

[00646] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento usado para 0 Exemplo 1, mas usando 0 produto da etapa 2.2. A mistura foi realizada a 100°C por 40 min. Depois da extração, 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 100:0 —> 30:70) para dar 0 produto do título. tR: 1,45 min (LC-MS 1); ESI-MS: 708,4 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 2.2: (S)-4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-3-(6-cloro-2-morfolin- 4-il-pirimidin-4-il)-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona

[00647] Uma solução do produto da etapa 2.3 (95 mg, 0,25 mmols), Intermediário A (58 mg, 0,25 mmols), xantphos (10 mg, 0,02 mmols), Pd2dba3 (4,5 mg, 4,95 umol) e Cs2CO3 (121 mg, 0,37 mmols) em dioxana sob argônio foi agitada a 100°C por 3 h. A mistura foi resfriada para rt, diluída com EtOAc e extraída com uma solução de NaHCO3 saturado. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 100:0 —> 0:100) para dar o produto do título (85 mg, 56%). tR: 1,54 min (LC-MS 1); ESI-MS: 581,4/583,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 2.3: (S)-4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-5,5-dimetil-oxazolidin- 2-ona

[00648] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento usado para o procedimento usado para a etapa 6.2, mas usando o produto da etapa 2.4, e usando Et3N ao invés de imidazol. A mistura foi agitada em RT por 16 h. A mistura de reação foi concentrada e purificada por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 100:0 -> 55:45) para dar o produto do título. tR: 1,33 min (LC-MS 1); ESI-MS: 384.3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 2.4: (S)-4-Hidroximetil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona

[00649] Uma solução do produto da etapa 2.5 (110 mg, 0,59 mmols) e HCI (4M em dioxana, 5 mL, 20 mmols) foi agitada em RT por 4 h. A mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi usado sem purificação adicional. Etapa 2.5: (S)-1,1,5,5-Tetrametil-di-hidro-oxazolo[3,4-c]oxazol-3-ona

[00650] A uma solução do produto da etapa 2.6 (190 mg, 0,73 mmols) em DMF (6 mL) sob argônio a 0°C, foi adicionado NaH (88 mg, 2.20 mmols, 60% em óleo) e a mistura foi agitada a 0°C por 6 h. A mistura de reação foi paralisada com H2O e concentrada. O resíduo foi triturado em EtOAc e filtrado. A solução filtrada foi seca (Na2SO4), filtrada e concentrada. O produto foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 100:0 60:40). Etapa 2.6: éster terc-butílico de ácido (S)-4-(1-Hidróxi-1-metil-etil)-2,2- dimetil-oxazolidino-3-carboxílico

[00651] A uma solução de (S)-3-terc-butil 4-metil 2,2- dimetiloxazolidino-3,4-dicarboxilato (500 mg, 1,93 mmols) em THF (15 mL) sob argônio a 0°C foi adicionado por gotejamento brometo de metil magnésio (1,4 mL, 4,24 mmols) e a mistura foi agitada a 0°C por 2 h. A reação foi paralisada com uma solução de NH4CI saturada e ex- traída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (N32SO4), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromato- grafia flash (heptano/EtOAc, 100:0 65:35). tR: 1,01 min (LC-MS 1); ESI-MS: 260,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 3: 3-(2,-amino-2-morfolino-4'-(trífluormetil)-4,5,-bipirimidin-6- il)-4-(hidroximetil)-4-metiloxazolidin-2-ona racèmica

[00652] Uma solução de intermediário B (68 mg, 0,21 mmols), o produto da etapa 3.1 (120 mg, 0,21 mmols), uma solução 2M de Na2COs (317 uL, 0,63 mmols) e tetracis (15 mg, 0,01 mmols) em DME (2 mL) foi agitada a 80°C por 3 h. A mistura de reação foi diluída em EtOAc e Na2SO4 foi adicionado. A suspensão resultante foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi dissolvido com THF (2 ML) e TBAF (212 uL, 0,21 mmols) foi adicionado. A mistura foi agitada em rt por 16 h e foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromato- grafia flash (DCM/EtOH, 99:1 96:4). O resíduo foi triturado emDCM/hexano para fornecer o composto do título. tR: 0,85 min (LC-MS 1); ESI-MS: 456,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 3.1: 4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il- pirimidin-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona

[00653] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 2.2, mas usando o produto da etapa 3.2. Depois da extração, o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano/EtOAc: 9:1 —> 1:1) para dar o composto do título. Etapa 3.2: 4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-4-metil-oxazolidin-2-ona

[00654] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 6.4, mas usando 4-(hidroximetil)-4- metiloxazolidin-2-ona e usando DCM ao invés de DMF. A mistura de reação foi extraída com Et2θ. A camada orgânica foi lavada com H2O e salmoura, seca (Na2SC>4), filtrada e concentrada. O sólido resultante foi triturado em hexano e filtrado para fornecer 0 composto do título. ÍR: 1,20 min (LC-MS 1); ESI-MS: 339,2/341,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 3A: eluir inicialmente 0 enantiõmero de 3-(2'-amino-2- morfolino-4'-(trifluormetil)-4,5'-bipirimidin-6-il)-4-(hidroximetil)-4- metiloxazolidin-2-ona

[00655] Estereoquímica absoluta não determinada.

[00656] O composto do título foi obtido depois da separação preparativa quiral do produto racêmico do Exemplo 3. (Coluna: Chiralpak AD-H, 30 x 250 mm. Fluxo 80 mL/min. scCO2/MeOH 85:15). ÍR: 3,97 min (Coluna: Chiralpak AD-H, 4.6 x 250 mm. Fluxo 3 mL/min. scCO2/MeOH 85:15). Exemplo 3B: eluir o segundo enantiõmero de 3-(2,-amino-2-morfolino- 4,-(trifluormetil)-4,5,-bipirimidin-6-il)-4-(hidroximetil)-4-metiloxazolidin-2- ona

[00657] Estereoquímica absoluta não determinada.

[00658] O composto do título foi obtido depois da separação prepa rativa quiral do produto racêmico do Exemplo 3. (Coluna: Chiralpak AD-H, 30 x 250 mm. Fluxo 80 mL/min. scCO2/MeOH 85:15). ÍR: 4,49 min (Coluna: Chiralpak AD-H, 4,6 x 250 mm. Fluxo 3 mL/min. scCO2/MeOH 85:15). Exemplo 4: (3aS,7aS)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirímidínil-6-il)-hexa-hidro-benzoxazol-2-ona

[00659] Uma solução do produto da etapa 4.1 (60 mg, 0,17 mmols), intermediário B (54 mg, 0,17 mmols), Na2CO3 (2M, 260 pL, 0,52 mmols) e tetracis paládio (10 mg, 8,7 pmol) em DME (1,5 ml_) sob ar- gônio foi agitada a 80°C por 2 h em um frasco lacrado. A mistura de reação foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (CHhCh/EtOH, 99,8:0,2 97,5:2,5). O resíduo foi dissolvido em DCM (2 ml_) e depois tratado em hexano (4 ml_). Os cristais foram filtrados e lavados com hexano (3mL) para dar o composto do título (36 mg, 44 %). tR: 1,10 min (LC-MS 1); ESI-MS: 466,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 4.1: (3aS,7aS)-3-(6-Cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-hexa- hidro-benzoxazol-2-ona

[00660] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 2.2, mas usando o produto da etapa 4.2. A reação foi realizada a 100°C por 1 h. A mistura de reação foi filtrada através de Hyflo e concentrada. O resíduo foi purificado por cromato- grafia flash (hexano/EtOAc: 9:1 1:1) para dar o composto do título. tR: 1,20 min (LC-MS 1); ESI-MS: 339,2/341,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 4.2: (3aS,7aS)-Hexa-hidro-benzoxazol-2-ona

[00661] O (1S,2S)-2-Aminociclohexanol (750 mg, 6,51 mmols) e o Cloroformato de 2-Nitrofenila (1378 mg, 6,84 mmols) foram agitados em DCE (15 mL) com DIEA (2,39 mL, 13,68 mmols) em um frasco la-crado a 90°C for 1 h. A mistura de reação foi colocada em um funil de separação com 50mL EtOAc e 50mL de solução saturada de NaHCOs. A camada aquosa foi lavada com 50mL de EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com 50mL de H2O, 50mL de salmoura, secas com Na2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano/EtOAc: 7:3 —> 3:7) para dar 0 composto do título (770 mg, 5,13 mmols). tR: 0,69 min (LC-MS 1); 1H NMR (400 MHz, <dmso>) δ ppm 1,19 - 1,44 (m, 3 H) 1,45 - 1,61 (m, 1 H) 1,65 (d, J=9,77 Hz, 1 H) 1,76 (d, J=11,34 Hz, 1 H) 1,82 - 1,93 (m, 1 H) 1,93 - 2,10 (m, 1 H) 3,03 - 3,23 (m, 1 H) 3,74 (td, J=11,34, 3,52 Hz, 1 H) 7,53 (br. s„ 1 H) Exemplo 5: (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-metoximetil-oxazolidin-2-ona

[00662] Em um frasco de micro-ondas, a uma solução do produto da etapa 5.1 (116 mg, 0,28 mmols) e intermediário B (90 mg, 0,31 mmols) em DME (2,1 mL) foram adicionados solução saturada de NaHCO3(0,7 mL) e PdCI2(dppf)2.CH2CI2 (23 mg, 0,03 mmols). A mistura foi borbulhada com argônio por 5 min. Ela foi agitada a 120°C por 15 min sob irradiação de micro-ondas. A mistura de reação foi recuperada em DCM e água. As camadas foram separadas e camada aquosa foi extraída mais duas vezes com um pouco de DCM. Depois, as camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH: 100 % -» 95 % DCM). O resíduo obtido foi purificado por cromatografia flash de fase reversa (MeCN/H2O: 10 % 100 % MeCN) para dar o composto do título (19 mg, 13 %). ÍR:0,91 min (LC- MS 1); ESI-MS: 456,1 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 5.1: (S)-3-(6-Cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-metoximetil- oxazolidin-2-ona

[00663] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 2.2, mas usando o produto da etapa 5.2. A reação foi realizada a 115°C por 80 min. A mistura de reação foi concentrada e recuperada com DCM/água. As camadas foram separadas e a aquosa foi extraída três vezes com DCM. As camadas orgânicas foram combinadas e secas sobre sulfato de sódio. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc: 100 % 60 % heptaNo.) para dar o composto do título (116 mg, 22%). ÍR:0,98 min (LC-MS 1); ESI-MS: 329,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 5.2: (S)-4-Metoximetil-oxazolidin-2-ona

[00664] TsOH (800 mg, 4,21 mmols) foi adicionado a uma solução do produto da etapa 5.3 (1,013 g, 4,13 mmols) em MeOH (10 mL). A mistura foi agitada em rt por 90 min. Depois, TsOH (140 mg, 0,74 mmols) foi adicionado e ele foi agitado por 70 min em RT. Depois, o solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em DCM (6 mL) com Trietilamina (1,44 mL, 10,32 mmols). Uma solução de trifosgênio (0,613 g, 2,07 mmols) em DCM (4 mL) foi lentamente adicionada à mistura. A mistura de reação foi agitada em rt por 2 h 30. A reação foi paralisada com algumas gotas de água. Ela foi então acidificada para pH=4 com o tampão que foi adicionado e depois as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída mais uma vez com um pouco de DCM. Camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH: 100 % 90 % DCM) para dar o composto do título (231 mg, 38 %). ESI-MS: 132.1 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 5.3: éster terc-butílico de ácido (S)-4-metoximetil-2,2-dimetil- oxazolidino-3-carboxílico

[00665] NaH (265 mg, 6,63 mmols) foi adicionado a uma solução amarela de (S)-1-Boc-2,2-dimetil-4-hidroximetiloxazolidina (AstaTech Inc., Bristol, Pennsilvania) (1 g, 4,19 mmols) em THF (10 mL). Depois, a mistura foi agitada por 15min em temperatura ambiente, lodeto de metila (323 pL, 5,19 mmols) foi adicionado à suspensão amarela e a mistura foi agitada por 2 h 30 em rt. Depois, água foi adicionada para paralisar a reação. O solvente foi removido. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH: 5 % —> 10 % MeOH) para dar o composto do título (1,013 g, 94 %). ESI-MS: 246,1 [M+H]+ (LC-MS 1); 1H NMR (400 MHz, <cdcl3>) δ ppm 1,48 (s, 9 H) 1,53 (br. s., 6 H) 3,30 (m, 1 H) 3,36 (s, 3 H) 3,41 - 3,63 (m, 2 H) 3,88 - 4,00 (m, 2 H) Exemplo 6: (4S,5S)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona

[00666] Uma solução do produto da etapa 6.1 (600 mg, 0,82 mmols) em THF (5 mL) foi tratada com HF.piridina em THF (7,14 mL, 57,5 mmols) por 4 dias em RT em um frasco de plástico. Depois, a mistura de reação foi adicionada por gotejamento a uma mistura de solução saturada de NaHCOs (300mL) e EtOAc (200mL). Depois, NaHCOs sólido foi adicionado até pH~8 e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com 100mL de EtOAc. Os extratos orgânicos foram combinados e lavados com água e salmoura. Eles  foram então secos sobre Na2SO4, filtrados e evaporados. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (DCM/EtOH: 99:1 95:5). As frações foram combinadas e concentradas. O resíduo foi sonicado em DCM e depois hexano foi adicionado. Os cristais obtidos foram filtrados e repurificados 3 vezes por cromatografia flash (DCM/EtAOc: 9:1 3:7, depois Hexano/THF: 9:1 —► 1:1, então Hexano/THF: 7:3 —► 1:1) para dar o composto do título (243 mg, 64 %). ÍR:0,80 min (LC-MS 1); ESI-MS: 456,6 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 6.1: (4S,5S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluormetil- ^.δ'lbipirimidinil-δ-ilM-fterc-butil-difenil-silaniloximetiD-δ-metil- oxazolidin-2-ona

[00667] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o Exemplo 1, mas usando o produto da etapa 6.2. A reação foi realizada a 80°C por 1 h. Depois da extração, o resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/EtOH: 95.5:0.5 97:3) para dar o composto do título. ÍR:1,43 min (LC-MS 1); ESI-MS: 694,5 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 6.2: (4S,5S)-4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-3-(6-cloro-2- morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-5-metil-oxazolidin-2-ona

[00668] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 2.2, mas usando o produto da etapa 6.3. A reação foi realizada a 100°C for 3 h 30. A mistura de reação foi removida com EtOAc e lavada com solução saturada de NaHCOa e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc: 100 % —> 30 % heptano.) para dar o composto do título (116 mg, 22 %). ÍR: 1,51 min (LC-MS 1); ESI-MS: 567,4/569,5 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 6.3: (4S,5S)-4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-5-metil- oxazolidin-2-ona

[00669] O produto da etapa 6.4 (3,2 g, 9,31 mmols) foi dissolvido em DCM (32 mL) e tratado com Et3N (3,25 mL, 23,29 mmols). A solução foi lavada com Argônio e agitada por 5 min em RT. Depois, ela foi tratada com Trifosgênio (1,382 g, 4,66 mmols) e agitada em RT por 16 h. A reação foi paralisada com uma solução saturada de NH4CI (10 mL) e agitada 10 min em RT. A camada de água foi separada e a camada orgânica lavada com água. As camadas aquosas combinadas foram extraídas 3x com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc: 100 % 50 % hepta no) para dar 0 composto do título (2,22 g, 61%). ÍR: 1,28 min (LC-MS 1); ESI-MS: 387,3 [M+18]+ (LC-MS 1). Etapa 6.4: (2S,3S)-3-Amino-4-(terc-butil-difenil-silanilóxi)-butan-2-ol

[00670] D-treoninol (2 g, 19,02 mmols) foi dissolvido em DMF (15 mL), tratado com imidazol (3,89 g, 57,1 mmols) e agitada em RT por 5 min. Depois, TBDPS-CI (5,13 mL, 19,97 mmols) foi adicionado por go- tejamento à solução de reação sob argônio. A solução de reação foi agitada por 16 h em RT. Depois, ela foi diluída em EtOAc e lavada duas vezes com uma solução saturada de NaHCOs e uma vez com salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc: 100 % -> 0 % heptano) para dar o composto do título (3,21 g, 47 %). tR: 0,98 min (LC-MS 1); ESI-MS: 344,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 7\ (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-oxazolidin-2-ona

[00671] Uma solução do produto da etapa 7.1 (200 mg, 0,35 mmols), intermediário B (131 mg, 0,39 mmols), Na2COs (2M, 526 pL, 1,05 mmols) e tetracis paládio (24 mg, 0,21 mmols) em DME (4 mL) sob argônio foi agitada a 80°C por 2 h. A mistura de reação foi tratada com Na2SÜ4, diluída em EtOAc e as partes insolúveis foram filtradas. O bolo filtrado foi lavado três vezes com EtOAc e o filtrado foi evaporado. Depois o resíduo foi dissolvido em THF e uma solução de TBAF (1N, 351 pL, 0,35 mmols) foi adicionada. A mistura foi agitada por 1h em RT. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por cromato- grafia flash (DCM/EtOH: 99:1 95:5) para dar o composto do título. ÍR:0,74 min (LC-MS 1). Etapa 7.1: (R)-4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-3-(6-cloro-2-morfolin- 4-il-pirimidin-4-il)-oxazolidin-2-ona

[00672] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 2.2, mas usando o produto da etapa 7.2. A reação foi realizada a 100°C por 3 h. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano/EtOAc: 9:1 —► 6:4) para dar o composto do título. ÍR:1,53 min (LC-MS 1); ESI-MS: 553,4/555,5 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 7.2: (R)-4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-oxazolidin-2-ona

[00673] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 6.4, mas usando (S)-4- (hidroximetil)oxazolidin-2-ona (SpeedChemical Corp. Shanghai), e DCM ao invés de DMF. A reação foi realizada em RT por 16 h. A mis-tura de reação foi diluída com água e extraída duas vezes com Et2θ. As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano/EtOAc: 98:2 4:6). O resíduo foi tratada com hexano e Et2θ. Os cristais obtidos foram filtrados para dar o composto do título. ÍR: 1,26 min (LC-MS 1), 1H NMR (400 MHz, <dmso>) õ ppm 0,98 (s, 9 H) 3,51 - 3,63 (m, 2 H) 3,88 (dd, J=8,60, 4,30 Hz, 1 H) 4,14 (dd, J=8,60, 4,69 Hz, 1 H) 4,30 - 4,38 (m, 1 H) 7,37 - 7,50 (m, 6 H) 7,57 - 7,65 (m, 4 H) 7,71 (s, 1 H). Exemplo 8: (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-(D8-morfolin-4-il)-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona

[00674] O composto do título foi preparado em analogia à sequência completa descrita para o Exemplo 6, mas usando o produto da etapa 8.1 ao invés do intermediário A e D-alo-Treoninol ao invés de D- treoninol. tR: 0,79 min (LC-MS 1); ESI-MS: 464,5 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 8.1: 4-(4,6-Dicloro-pirimidin-2-il)-D8-morfolino

[00675] A 2,4,6-tricloropirimidina foi dissolvida em EtOH com EtsN e D8-morfolino. A mistura de reação foi agitada em rt por 1 h. Ela foi diluída com solução saturada de NaHCOs e extraída duas vezes com EtOAc. Os extratos orgânicos foram combinados e lavados com sal-moura. Depois ele foi seco sobre Na2SO4, filtrado e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano/EtOAc: 0% he- xano 40%). tR: 0,94 min (LC-MS 1); ESI-MS: 242,3/244,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 9;(S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-(2-hidróxi-etil)-oxazolidin-2-ona

[00676] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a Exemplo 6 mas usando o produto da etapa 9.1. A extração foi realizada em DCM. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (H2O/ACN) depois por cromatografia flash (DCM/MeOH, 100:0 95:5). tR: 0,78 min (LC-MS 1); ESI-MS: 456,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 9.1:(S)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-(terc-butil-difenil-silaniloximetil)-[1,3]oxazinan-2- ona

[00677] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para 0 Exemplo 1, mas usando 0 produto da etapa 9.2. A reação foi realizada a 120°C por 15 min. A mistura de reação foi dissolvida em DCM e extraída com H2O. A camada orgânica foi seca (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromato-grafia flash (heptano/EtOAc, 8:2 -> 4:6). tR: 1,54 min (LC-MS 1); ESI- MS: 694,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 9.2: (S)-4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-3-(6-cloro-2-morfolin- 4-il-pirimidin-4-il)-[ 1,3]oxazinan-2-ona

[00678] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 2.2, mas usando o produto da etapa 9.3. A reação foi realizada a 115°C por 2,5 h. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (H2O/ACN), depois por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 9:1 -> 0:100). ÍR: 1,49 min (LC- MS 1); ESI-MS: 567,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 9.3: (S)-4-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-[1,3]oxazinan-2-ona

[00679] A uma solução do produto da etapa 9.4 (900 mg, 2,03 mmols) em THF (40 mL) sob argônio foi adicionado NaH 60% em óleo (160 mg, 4,0 mmols) e a mistura foi agitada em rt por 4h. A mistura foi diluída com EtOAc e extraída com H2O. A camada orgânica foi seca (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 100:0 —> 0:100). ÍR: 1,23 min (LC-MS 1); ESI-MS: 370,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 9.4: éster terc-butílico de ácido [(S)-l-(terc-Butil-difenil- silaniloximetil)-3-hidróxi-propil]-carbãmico

[00680] A uma solução de o produto da etapa 9.5 (40 g, 73 mmols) em TBME (400 mL) a 0°C foi adicionado por gotejamento LiBhU (2M em THF, 74 mL, 146 mmols) e a mistura foi agitada a 0°C por 10 min depois aquecida até a rt e agitada por 5 h. A mistura de reação foi paralisada com H2O depois com uma solução de ácido cítrico 0,5 M. A mistura foi extraída com TBME. A camada orgânica foi seca (MgSCU), filtrada e concentrada. O produto foi usado sem purificação adicional. Etapa 9.5: éster benzílico de ácido (S)-3-terc-Butoxicarbonilamino-4- (terc-butil-difenil-silanilóxi)-butírico

[00681] O produto do título foi preparado em analogia ao procedimento descrito para a etapa 6.4. Rt 0,7 (hexano/EtOAc, 8:2) Etapa 9.6: éster benzílico de ácido (S)-3-terc-Butoxicarbonilamino-4- hidróxi-butirico

[00682] A uma solução de Boc- éster 4-benzílico de ácido L- aspártico (100 g, 309 mmols) em DME (1,8 L) a -20°C foi adicionado NMM (34 mL, 309 mmols) depois por gotejamento iso-butilcloroformato (40 mL, 309 mmols) e a mistura foi agitada a -20°C por 20 min. A mistura de reação foi filtrada e 0 filtrado foi resfriado para -20°C. NaBH4 (17,5 g, 463 mmols) foi adicionado em porções a -20°C. A mistura foi deixada aquecer e agitada em rt por 1 h. A mistura foi paralisada com uma solução de ácido cítrico 20% e depois extraída com AcOEt. A camada orgânica foi lavada com uma solução de NaHCOa, H2O e sal- moura, seca (MgSCU), filtrada e concentrada. O produto foi usado sem purificação adicional na próxima etapa. Exemplo 10: (4S,5R)-3-[2'-Amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'- trifluormetil-[4,5'lbipirimidinil-6-il]-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona

[00683] O composto do título foi preparado em analogia a sequência inteira descrita para o Exemplo 6, mas usando o produto da etapa 10.1 ao invés de intermediário A e D-alo-Treoninol ao invés de D- treoninol. A mistura foi adicionada por gotejamento a uma solução saturada de Na2CO3. Depois da adição, uma solução saturada de NaHCOs foi adicionada (o pH final estava em torno de 7-8). Ele foi diluído com água e extraído com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com de salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Waters Sun Fire C18, 30 x 100mm, 5 um; 0,1% TFA-água/acetonitrila; gradiente de acetonitrila 5-100% em 20 min). O resíduo foi recristalizado em Et2O/hexano (3 / 1). Os cristais foram filtrados e lavadas com hexano para dar o composto do título. tR: 2,89 min (HPLC 1); ESI-MS: 470,3 [M+H]+ (LC-MS 1); m.p. 217,7°C (início). Etapa 10.1: (S)-4-(4,6-Dicloro-pirimidin-2-il)-3-metil-morfolino

[00684] A 2,4,6-tricloropirimidina (100 mg, 0,53 mmols) foi dissolvida em dioxana (2 mL) com DIPEA (280 pL, 1,6 mmols) e (S)-3- metilmorfolino (54 mg, 0,53 mmols). A mistura de reação foi aquecida a 130°C sob irradiação de micro-ondas a 15 min. Ela foi diluída com EtOAc e lavada com de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC pre-parativa (Waters Sun Fire C18, 30 x 100mm, 5 um; 0,1% TFA- água/acetonitrila; gradiente de acetonitrila 5-100% em 20 min) para fornecer o composto do título (45 mg, 34 %). ÍR: 3,70 min (HPLC 1); ESI-MS: 248,2/250,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 11 (com propósito de comparação): 3-(2,-Amino-2-morfolin-4- il-4'-trifluormetil-[4,5']bipirimidinil-6-il)-oxazolidin-2-ona

[00685] O composto do título foi preparado em analogia com o Exemplo 5 (incluindo a etapa 5.1), mas usando o produto da etapa 11.1. A reação foi realizada a 100°C por 1 h. A extração foi realizada em EtOAc. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 100:0 0:100). tR: 0,87 min (LC-MS 1); ESI-MS: 412,4 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 11.1: 3-(6-Cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-oxazolidin-2-ona

[00686] O composto do título foi preparado em analogia a sequência inteira descrita para a etapa 2.2, mas usando oxazolidin-2-ona. tR: 0,93 min (LC-MS 1); ESI-MS: 285,5/287,4 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 12: éster (4S,5R)-3-(2,-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5'lbipirimidinil-6-il)-5-metil-2-oxo-oxazolidin-4-ilmetilico de ácido fór- mico

[00687] O composto do Exemplo 18 (47 mg, 0,10 mmols) foi dissolvido em ácido fórmico (80 pL, 2,09 mmols) e armazenado a 5°C por 4 dias. Depois ele foi deixado aquecer até RT e ele foi armazenado por 2 dias. Depois ele foi recuperado em EtOAc e lavado com uma solução saturada de NaHCOs e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Waters Sun Fire C18, 30 x 100mm, 5 um; 0,1% TFA- água/acetonitrila; gradiente de acetonitrila 5-70% em 20 min) para fornecer o composto do título (57 mg, 80 %). ÍR: 0,88 min (LC-MS 1); ESI- MS: 484,4 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 13: (S)-3-[2'-Amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-ill-4-metil-oxazolidin-2-ona

[00688] O composto do título foi preparado em analogia a sequência inteira descrita para o Exemplo 11, mas usando o produto da etapa 10.1 ao invés de intermediário A e (S)-4-metil-2-oxazolidinona ao invés de oxazolidin-2-ona. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/EtOH: 99,8 / 0,2 98 / 2) e depois por HPLC preparativa (Wa ters Sun Fire C18, 30 x 100mm, 5 um; 0.1% TFA-água/acetonitrila; gradiente de acetonitrila 5-100 % em 20 min) para fornecer composto do título (35 mg, 32%). tR: 0,98 min (LC-MS 1); ESI-MS: 440,1 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo14:(S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona

[00689] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o Exemplo 6, mas usando o produto da etapa 14.1. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH, 100:0 95:5). tR: 0,77 min (LC-MS 1); ESI-MS: 442,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 14.1:(S)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-(terc-butil-difenil-silaniloximetil)-oxazolidin-2- ona

[00690] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o Exemplo 5, mas usando o produto da etapa 14.2. A reação foi realizada a 100°C em um banho de óleo por 1 h. A extração foi realizada em EtOAc. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 100:0 0:100). tR: 1,40 min (LC-MS 1); ESI-MS: 680,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 14.2: (S)-5-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-3-(6-cloro-2-morfolin- 4-il-pirimidin-4-il)-oxazolidin-2-ona

[00691] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 2.2, mas usando o produto da etapa 14.3. Depois da extração, o resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 100:0 -+ 40:60). tR: 1,49 min (LC-MS 1); ESI- MS: 553,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 14.3: (S)-5-(terc-Butil-difenil-silaniloximetil)-oxazolidin-2-ona

[00692] A uma solução do produto da etapa 14.4 (2,72 g, 8,27 mmols) e EtsN (2,88 mL, 20,67 mmols) em DCM sob argônio foi adicionado por gotejamento trifosgênio (982 mg, 3,31 mmols) e a mistura foi agitada em rt por 5 h. A mistura de reação foi paralisada com uma solução de NH4CI. A camada orgânica foi seca (Na2SO4), filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hepta- no/EtOAc, 100:0 0:100). tR: 1,21 min (LC-MS 1); ESI-MS: 373,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 14.4: (S)-1-Amino-3-(terc-butil-difenil-silanilóxi)-propan-2-ol

[00693] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 6.4, mas usando (S)-3-aminopropano- 1,2-diol e usando EtsN ao invés de imidazol. Depois da extração, o re-síduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH, 100:0 -> 90/10). tR: 0,93 min (LC-MS 1); ESI-MS: 330,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 15: (4S,5R)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-4-metil-oxazolidin-2-ona

[00694] O composto do título foi preparado em analogia a sequência inteira descrita para o Exemplo 6, mas usando o produto da etapa 15.1 ao invés de D-treoninol. tR: 0,98 min (LC-MS 1); ESI-MS: 344,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 15.1: (2R,3S)-3-Amino-butano-1,2-diol

[00695] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento da etapa 19.1, mas usando o produto da etapa 15.2. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/EtOH: 99,8 / 0,2 -> 98/2) e depois por HPLC preparativa (Waters Sun Fire C18, 30 x 100mm, 5 um; 0,1% TFA-água/acetonitrila; gradiente de acetonitrila 5- 100 % em 20 min) para fornecer o composto do título (35 mg, 32%). tR: 0,98 min (LC-MS 1); ESI-MS: 440,1 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 15.2: N-Benzil-N-[(S)-1-((R)-2,2-dimetil-[1,3]dioxolan-4-il)-etill- hidroxilamina

[00696] O composto do título é o segundo isômero formado durante a etapa 19.2 (1,07 g, 57 %). tR: 0,91 min (LC-MS 1); ESI-MS: 252,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 16: (S)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5'lbipirimidinil-6-iD-5-metil-oxazolidin-2-ona

[00697] O composto do título foi preparado em analogia ao Exemplo 11, mas usando o produto da etapa 16.1 ao invés de (R)-4-metil-2- oxazolidinona. A reação foi realizada a 100°C for 1 h. A mistura de re-ação foi recuperada com EtOAc. Ela foi lavada duas vezes com uma solução saturada de NaHCOs e uma vez com salmoura. A camada or-gânica seca sobre sulfato de sódio. O resíduo foi purificado por croma-tografia flash (heptano/EtOAc: 0 % —> 85 % EtOAc) para dar o com-posto do título (9,6 mg, 58%). tR: 0,94 min (LC-MS 1); ESI-MS: 426,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Etapa 16.1: (S)-5-Metil-oxazolidin-2-ona

[00698] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 6.3, mas usando (S)-1-aminopropan-2- ol. A reação foi realizada em RT por 3 H. A reação foi paralisada com solução saturada de NH4CI (10 mL) e agitada por 10 min a RT. A ca-mada de água foi separada e a camada orgânica lavada com água. A camada aquosa combinada foi extraída 3x com DCM. As camadas or-gânicas combinadas foram secas sobre IS^SOψ filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc: 0 % 100 % EtOAc) para dar 0 composto do título (38 mg, 9 %). 1H NMR (400 MHz, <DMSO>) δ ppm 1,27 (d, J=6,25 Hz, 3 H) 2,94 - 3,08 (m, 1 H) 3,48 - 3,58 (m, 1 H) 4,62 (m, 1 H) 7,37 (br. s., 1 H) Exemplo 17: (S)-3-(2,-amino-2-D8-morfolino-4,-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin1-6-il)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00699] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o Exemplo 4, mas usando o produto da etapa 17.1. Depois da finalização, a mistura de reação foi filtrada através de celite e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/EtOH, 99.5:0.5 -> 98:2). O resíduo foi triturado em DCM e lavado com hexano para fornecer o composto do título. ÍR: 0,89 min (LC- MS 1); ESI-MS: 434,4 [M+H]+ (LC-MS 1); Rf: 0,67 (DCM/EtOH, 95:5). Etapa 17.1 : (S)-3-(6-Cloro-2-D8-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-metil- oxazolidin-2-ona

[00700] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 2.2, mas usando o produto da etapa 8.1 e (S)-4-metil-2-oxazolidinona. A extração foi realizada em DCM. O re-síduo foi purificado por cromatografia flash (heptano/EtOAc, 9:1 7:3). tR: 0,97 min (LC-MS 1); ESI-MS: 307,3/309,3 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 18: (4S,5R)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4,-triflúormetil- [4,5'lbipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona

[00701] O composto do título foi preparado em analogia à sequência inteira descrita para o Exemplo 6, mas usando D-alo-Treoninol ao invés de D-treoninol. A reação foi realizada em RT por 33 h. A mistura foi adicionada por gotejamento a uma solução saturada de Na2COs. Depois da adição, o pH estava em torno de 7-8. Ela foi diluída com água e extraída com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Waters Sun Fire C18, 30 x 100mm, 5 um; 0,1% TFA-água/acetonitrila; gradiente de acetonitrila 5-60% em 20 min). As frações foram combinadas e basificadas com uma solução de NaHCOs 5%. O produto precipitou e foi filtrado. Para eliminar o Paládio residual, o produto foi dissolvido em DCM / MeOH (4 /1) e foi passado através de um cartucho SPE de MP-Thiol da Polymerlabs e depois o solvente foi evaporado. Vários lotes foram produzidos com base nesse método e vários foram desenvolvidos para fornecer um material cristalino como a seguir.

Lote A:

[00702] Para a preparação desse lote, o produto não foi passado através de um cartucho SPE MP-Thiol da Polymerlabs. As frações puras obtidas depois da HPLC preparativa foram combinadas e tratadas com NaHCOa. The CH3CN foi evaporado depois do que 0 produto cristalizou. O produto foi coletado por filtração, lavado com e seco para dar 0 composto do título como um sólido branco, m.p. 221,3°C (início).

Lote B:

[00703] Para a preparação desse lote o produto não foi passado através de um cartucho SPE MP-Thiol da Polymerlabs. As frações puras obtidas depois da HPLC preparativa foram combinadas e tratadas com NaHCOs sólido. O CH3CN foi evaporado depois do que 0 produto cristalizou. A mistura aquosa foi mantida por 1 h no refrigerador, filtrada, lavada com água e seca sob luz HV por uma noite para fornecer um sólido branco, m = 298 mg. m.p. 249,9°C (início)

Lote C:

[00704] Para a preparação desse lote 0 produto não foi passado através de um cartucho SPE MP-Thiol da polymerlabs. As frações puras obtidas depois da HPLC preparativa foram combinadas e evaporadas. O resíduo foi removido em CH3CN e depois água contendo 0,1% de TFA foi adicionada seguida por NaHCOs sólido. A solução é concentrada e 0 precipitado é filtrado, lavado com água e seco para dar 0 produto do título como um sólido branco, m.p. 237,9°C (início)

Lote D:

[00705] Depois da passagem através do cartucho SPE de MP-Thiol da polymerlabs, 0 solvente foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em CH3CN e depois diluído com a mesma quantidade de água. The CH3CN foi evaporado e pouco antes da cristalização do produto, alguns cristais do Lote B foram adicionados. CH3CN foi então completamente evaporado e a suspensão foi resfriada no refrigerador. Ela foi então filtrada, coletada e seca sob HV por uma noite para fornecer 0 produto do título como um sólido branco, m.p. 259,0°C (início)

Lote E:

[00706] Mesmo procedimento como descrito para 0 Lote C, mais alguns cristais do Lote D foram adicionados para induzir a cristalização. O produto do título foi obtido como um sólido branco, m.p. 258,8°C (início). Exemplo 19: (4S,5S)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4'-triflúormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-4-metil-oxazolidin-2-ona

[00707] O composto do título foi preparado em analogia à sequência inteira descrita para o Exemplo 6, mas usando produto da etapa 19.1 ao invés de D-treoninol. A reação foi realizada em RT for 16 h 30. A mistura foi adicionada por gotejamento à uma solução saturada de N32CO3. Depois da adição, ela foi diluída com água e extraída duas vezes com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Waters Sun Fire C18, 30 x 100mm, 5 um; 0,1% TFA- água/acetonitrila; gradiente de acetonitrila 5-80% in 20 min) para dar o composto do título (16,3 mg, 75%). ÍR: 2,79 min (HPLC 1); ESI-MS: 456,1 [M+H]+. Etapa 19,1: (2S,3S)-3-Amino-butano-1,2-diol

[00708] O produto da etapa 19.2 foi agitado em HCI em solução de EtOH por 2 h em RT. O solvente foi removido para dar o composto do título como um sal de HCI (303 mg, 100%). 1H NMR (400 MHz, <dmso>) δ ppm 1,08 (d, J=6,65 Hz, 3 H) 3,18 - 3,33 (m, 1 H) 3,33 - 3,45 (m, 1 H) 3,61 - 3,72 (m, 1 H) 7,85 (br. s., 2 H). Etapa 19.2: (S)-1-((S)-2,2-Dimetil-[1,3]dioxolan-4-il)-etilamina

[00709] O produto da etapa 19.3 (produto 2, última eluição, 538 mg, 2,14 mmols) foi dissolvido em AcOH (25 mL) com Pd/C (100 mg) e a mistura de reação foi agitada em RT por 11 h sob condições de H2. Ela foi então filtrada sobre Celite e depois 0 solvente foi removido para dar 0 composto do título (311 mg, 100 %). 1H NMR (400 MHz, <dmso>) δ ppm 0,90 - 1,04 (m, 3 H) 1,16 - 1,38 (m, 6 H) 2,76 - 2,90 (m, 1 H) 3,75 (dd, J=13,86, 7,22 Hz, 2 H) 3,90 (br, s„ 1 H); tR: 3,13 min (HPLC 1). Etapa 19.3: N-Benzil-N-[(R)-1-((S)-2,2-dimetil-[1,3]dioxolan-4-il)-etill- hidroxilamina e N-Benzil-N-[(S)-1-((S)-2,2-dimetil-[1,3]dioxolan-4-il)- etill-hidroxilamina

[00710] A uma solução bem agitada de 1,48g (6,29 mmols) do produto da etapa 19.4 em 80 mL de EtsO foi adicionado 6,29 mL (6,29 mmols) de EtzAICI 1M em hexanos em uma porção e a agitação foi continuada por 15 min. A mistura foi então resfriada para -60°C e tratada com 6,29 mL (18,87 mmols) de brometo de metilmagnésio em Et20. A mistura foi agitada por 2h a -60°C e depois deixada aquecer lentamente até a RT sob agitação durante a noite. Depois disso, a reação foi tratada com NaOH (2M, 40mL). Depois de agitar por 15 min em RT, a mistura foi extraída 3 x 120 com EÍ2O. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob vácuo. O resíduo é dissolvido em MeOH e purificada por HPLC prep. de fase reversa em 8 injeções (H2O[+0,1% TFAJ/CHaCN 97:3 para 50:50 em 20min.):

[00711] - Frações 1 - 3 foram coletadas juntas e basificadas com ~2g de NaHCOs, antes de serem concentradas. A camada resultante foi extraída com 2 x 150mL Et2θ e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e evaporadas até secar para dar 1,01 g de um óleo incolor, que cristalizou lentamente (-99% puro por 1HNMR; HPLC Rt = 2,36; ESI-MS: 252,2 [M+H]+ (LC-MS 1)) -> Produto 1

[00712] - Frações 5 - 7 foram coletadas juntas e basificadas com~2g NaHCOs, antes de serem concentradas. A suspensão resultante foi extraída com 2 x 150mL Et2θ e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e evaporadas até secar para dar 363 mg de um sólido branco (-99% puro por 1HNMR; HPLC Rt = 2,44; ESI-MS: 252,3 [M+H]+ (LC-MS 1)) -> Produto 2. Etapa 19.4: óxido de (S,Z)-N-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metileno)-1- fenilmetanamina

[00713] 1,50 g (11,53 mmols) de (R)-2,2-Dimetil-1,3-dioxolano-4- carboxaldeído (Fluorochem, Hadfield, UK) foram dissolvidos em 60mL de DCM e tratadas com 1,64 g (11,53 mmols) de sulfato de sódio. A mistura de reação foi lavada com argônio e tratada com uma solução de 1,42 g (11,53 mmols) de N-benzil-hidroxilamina (preparada a partir do sal de hidrocloreto comercialmente disponível) em 20mL de CH2CI2. A mistura de reação foi agitada sob argônio em RT por 16,5 h e depois filtrada. Sílica-gel foi adicionado ao filtrado e pré-absorvido, antes de ser purificado por cromatografia em sílica-gel (gradiente: Heptano/EtOAc 0% -100% em 30min). Fr. 20 - 80 foram coletadas e evaporadas e secas sob vácuo por uma noite para dar 1,48 g de um sólido branco (-100% puro por HPLC, Rt = 1,43); ESI-MS: 236,2 [M+H]+ (LC- MS 1)) Exemplo 20:(R)-3-(2,-Amino-2-morfolin-4-il-4'-triflúormetil- [4,5'lbipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona

[00714] O composto do título foi preparado em analogia à sequência inteira descrita para o Exemplo 6, mas usando (R)-3- aminopropano-1,2-diol ao invés de D-treoninol. A reação foi realizada em RT por 16 h. Depois, a mistura de reação foi paralisada cuidado-samente com NaHCOs. Depois, ela foi diluída com EtOAc e lavada duas vezes com solução saturada de NaHCOs e uma vez com salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/EtOH: 0% —> 10% MeOH) para dar o composto do título (22,8 mg, 38 %), tp: 0,77 min (HPLC 1); ESI-MS: 442,2 [M+H]+ (LC-MS 1). Exemplo 21: (3aR,6aR)-3-(2,-amino-2-morfolino-4,-(triflúormetil)-[4,5'- bipirimidinl-6-il)tetra-hidrofuro[3,4-d]oxazol-2(3H)-ona

[00715] Uma solução de (3aR,6aR)-3-(6-cloro-2-morfolinopirimidin- 4-il)tetra-hidrofuro[3,4-d]oxazol-2(3H)-ona (100 mg, 0,306 mmols), in-termediário B (115 mg, 0,398 mmols), K3PO4(195 mg, 0,918 mmols) e PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (25 mg, 0,031 mmols) em DME/H2O (2,2 mL) sob argônio foi agitada a 80°C por 1,5 h. A mistura foi diluída em EtOAc e extraída com NaHCO3 saturado. A camada orgânica foi lavada com H2O e salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano-EtOAc 70:30 -> 0:100) para fornecer o composto do título como um sólido incolor (88 mg, 62%): tR= 0,84 min (LC-MS 3); ESI-MS: 454 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 21.1: (3aR,6aR)-3-(6-Cloro-2-morfolinopirimidin-4-il)tetra- hidrofuro[3,4-d]oxazol-2(3H)-ona

[00716] A uma solução de (3aR,6aR)-tetra-hidrofuro[3,4-d]oxazol- 2(3H)-ona (500 mg, 3,87 mmols), 4-(4,6-dicloropirimidin-2-il)morfolino (1088 mg, 4,65 mmols) e CS2CO3 (2,14 g, 6,58 mmols) em dioxana (20 mL) foi adicionado, depois de desgaseificar com argônio, 4,5- bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (157 mg, 0,271 mmols) e Pd2(dba)3 (70,9 mg, 0,077 mmols) e a mistura de reação foi aquecida por 6 h a 85°C. A mistura de reação foi adicionada à uma solução aquosa de NaHCOs 10% e extraída com EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados. O produto bruto foi triturado em MeOH por uma noite, filtrado e seco para fornecer 0 composto do título como um sólido incolor (1,12 g, 87%): tR = 0,92 min (LC-MS 3); ESI-MS: 327, 329 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 21.2: (3aR,6aR)-Tetra-hidrofuro[3,4-dloxazol-2(3H)-ona

[00717] A uma solução de (3R,4R)-4-aminotetra-hidrofuran-3-ol (1,1 g, 7,88 mmols) e DIEA (4,54 mL, 26,0 mmols) em CH2CI2 (30 mL) foi adicionado (bis(triclorometil) carbonato (1,75 g, 5,91 mmols) dissolvido em CH2CI2 (5 mL) em RT durante urn periodo de 30 min. Depois de agitar por 0,5 h a 25°C, a mistura de reação foi adicionada a uma solução aquosa de K2CO3, agitada por 1 h e 0 CH2CI2 foi evaporado. A fase aquosa foi lavada com Et2θ e depois evaporada até secar. O resíduo foi triturado com EtOH/THF 1:1, os sais inorgânicos removidos por filtração através de um plugue de sílica-gel e 0 filtrado foi concentrado para fornecer 0 composto do título como um sólido bege (930 mg, 90%): ESI-MS: 147 [M+NH]+. Exemplo 22: (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2,-Amino-2-morfolino-4,-(triflúormetil)- [4,5'-bipirimidinl-6-il)-6-hidroxihexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona

[00718] A uma solução de (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-amino-2-morfolino- 4'-(triflúormetil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-6-((terc-butildimetilsilil)óxi)hexa- hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona (810 mg, 1,253 mmols) em THF (12 mL), foi adicionado por gotejamento TBAF 1M em THF (1,0 mL, 1,0 mmols) a 0°C. A mistura de reação foi agitado por 30 min a 0°C e 2 h em RT antes da evaporação. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano-THF 60:40 0:100). O resíduo foi triturado emEt2O, filtrado e seco. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Waters Sun Fire C18, 30 x 100mm, 5 um; 0,1% TFA-água/acetonitrila; gradiente de acetonitrila 5-100 % em 20 min) para fornecer 0 composto do título (430 mg, 72%); tR= 0,93 min (UPLC 1), tR = 0,81 min (LC- MS 3); ESI-MS: 468 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 22.1: (3aR*,6R*.6aR*)-3-(2'-Amino-2-morfolino-4,-(triflúormetil)- [4,5'-bipirimidinl-6-il)-6-((terc-butildimetilsilil)óxi)hexa-hidro-2l-l-ciclopenta[dloxazol-2-ona

[00719] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o Exemplo 21 a partir de (3aR*,6R*,6aR*)-6- ((tert-butildimetilsilil)óxi)-3-(6-cloro-2-morfolinopirimidin-4-il)hexa-hidro- 2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona e intermediário B e usando Pd(PFs)4 ao invés de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 e Na2COs ao invés de K3PO4 para fornecer 0 composto do título depois da cristalização em EtOAc/hexano como um sólido branco: ÍR = 1,62 min (UPLC 1), ÍR = 1,47 min (LC-MS 3); ESI-MS: 582 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 22.2: (3aR*.6R*,6aR*)-6-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-(6-cloro-2- morfolinopirimidin-4-il)hexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona

[00720] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 21.1 a partir de (3aR*,6R*,6aR*)-6-((tert- butildimetilsilil)óxi)hexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona e interme-diário A: tR = 1,76 min (UPLC 1), tR = 1,58 min (LC-MS 3); ESI-MS: 455, 457 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 22.3: (3aR*,6R*16aR*)-6-((terc-Butildimetilsilil)óxi)hexa-hidro-2H- ciclopenta[d]oxazol-2-ona

[00721] A uma suspensão de (3aR*,6R*,6aR*)-6-((terc- butildimetilsilil)óxi)-3-((2-nitrofenil)sulfonil)hexa-hidro-2H- ciclopenta[d]oxazol-2-ona (1,47 g, 3,32 mmols) e CS2CO3 (2,164 g, 6,64 mmols) em DMF (25 mL) foi adicionada N-acetil-L-cisteina (0,921 g, 5,65 mmols) e a mistura de reação foi agitada por 16 h em RT. A mistura de reação foi evaporada e 0 resíduo suspenso em uma solução saturada de NaHCO3 e extraída com EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados. O composto do título foi obtido depois da purificação por cromatografia flash (heptano/EtOAc 90:10 50:50) como um oleo amarelo (0,84 g, 98%): TLC (heptano/EtOAc 1:1) Rf= 0,28. Etapa 22.4: (3aR*,6R*,6aR*)-6-((terc-Butildimetilsilil)óxi)-3-((2- nitrofenil)sulfonil)hexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona

[00722] A uma solução de (3aR*,6R*,6aR*)-6-hidróxi-3-((2- nitrofenil)sulfonil)hexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona (1,2 g, 3,66 mmols) e 2,6-lutidina (0,851 mL, 7,31 mmols) em CH2CI2 (25 mL) foi adicionada por gotejamento a 0°C tert-butildimetilsilil triflúormetanosul- fonato (1,091 mL, 4,75 mmols). A mistura de reação foi agitada por 1 h a 0°C seguida por 2 h em RT. A mistura de reação foi diluída com CH2CI2 e lavada com solução aquosa de NaH2PO4 20% e H2O, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. O composto do título foi obtido depois da cristalização em EtOAc/heptano como um sólido branco (1,5 g, 88%): TLC (heptano/EtOAc 1:1) Rf =0,54; tR = 1,58 min (UPLC 1), tR = 1,43 min (LC-MS 3); ESI-MS: 460 [M+NH4]+ (LC-MS 3). Etapa 22.5: (3aR*,6R*16aR*)-6-Hidróxi-3-((2-nitrofenil)sulfonil)hexa- hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona

[00723] A uma solução de (1R*,2S*,5S*)-6-oxabiciclo[3.1.0]hexan- 2-il((2-nitrofenil)sulfonil)carbamato de terc-butila (2,0 g, 5,10 mmols) em MeOH (40 mL) foi adicionado Amberlist 15 (4,0 g) e a suspensão resultante foi agitada por 1,5 h a 25°C. A mistura de reação foi filtrada e concentrada. O composto do título foi obtido depois da purificação por cromatografia flash (heptano-EtOAc 90:10 —► EtOAc) como um só-lido bege (1,24 g, 73%): TLC (heptano/EtOAc 1:2) Rf=0,36; tR = 0,80 min (UPLC 1), tR= 0,77 min (LC-MS 3); ESI-MS: 346 [M+NH4]+ (LC-MS 3). Etapa 22.6: (1R*,2S*,5S*)-6-oxabiciclo[3.1.0lhexan-2-il((2- nitrofenil)sulfonil)carbamato de terc-butila

[00724] A uma suspensão de ciclopent-2-en-1-il((2- nitrofenil)sulfonil)carbamato de terc-butila (2,75 g, 7,46 mmols) e NaHCOs (1,254 g, 14,93 mmols) em CH2CI2 (60 mL) foi adicionada em uma porção ácido meta-cloroperoxibenzoico (2,58 g, 14,93 mmols). A mistura de reação resultante foi agitado por uma noite em RT. A mistu-ra de reação foi diluída com CH2CI2 e lavada com solução aquosa de Na2Sθ3 20%, solução saturada de NaHCO3 e água. A fase orgânica foi seca sobre MgSO4 e concentrada. O composto do título foi obtido depois da cristalização em EtOAc como cristais brancos (2,01 g, 68%): TLC (heptano-EtOAc 1:1) Rf =0,48; tR = 1,20 min (UPLC 1), tR = 1,12 min (LC-MS 3); ESI-MS: 329 [M-isobutileno]+ (LC-MS 3). Etapa 22.7: (ciclopent-2-en-1-il((2-nitrofenil)sulfonil)carbamato de terc- butila

[00725] A uma suspensão de trifenilfosfina (3,09 g, 11,77 mmols), 2-nitrofenilsulfonilcarbamato de terc-butila (3,40 g, 11,23 mmols) e ci- clopent-2-enol (0,900 g, 10,70 mmols) em tolueno (60 mL) foi adicio-nado por gotejamento a -20°C o dietilazodicarboxilato (1,948 mL, 12,30 mmols). A mistura de reação foi agitada a -20°C por 2 h seguidas por 3 h a 0°C. A mistura de reação foi concentrada e o composto do título foi obtido depois da purificação por cromatografia flash (hep- tano/EtOAc 95:5 3:1) como um sólido branco (2,79 g, 67%): tR = 1,34 min (UPLC 1), tR = 1,24 min (LC-MS 3); ESI-MS: 386 M+NH4]+ (LC-MS 3). Exemplo 22A: primeiro enantiômero eluído em Chiralpak AD de (3aR,6R,6aR)- e (3aS16S,6aS)-(2'-Amino-2-morfolino-4,-(triflúormetil)- [4,5'-bipirimidin]-6-il)-6-hidroxihexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona

[00726] Estereoquímica absoluta não determinada.

[00727] O composto do título foi obtido depois da separação por HPLC quiral preparativa do produto racêmico do Exemplo 22. (Coluna: Chiralpak AD 20pm 5 x 500 mm. Fluxo 70 mL/min. heptano/EtOH/DEA 20:80:0.01). tR: 17,7 min (Coluna: Chiralpak AD-H, 4,6 x 250 mm. Flu- xo 1,2 mL/min. heptano/EtOH 70:30). Exemplo 22B: segundo enantiõmero eluído em Chiralpak AD of (3aR,6R,6aR)- e (3aS,6S,6aS)-(2'-Amino-2-morfolino-4,-(triflúormetil)- [4,5'-bipirimidinl-6-il)-6-hidroxihexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona

[00728] Estereoquímica absoluta não determinada.

[00729] O composto do título foi obtido depois da separação por HPLC quiral preparativa do produto racêmico do Exemplo 22. (Coluna: Chiralpak AD 20pm 5 x 500 mm. Fluxo 70 mL/min. heptano/EtOH/DEA 20:80:0.01). ÍR: 23,3 min (Coluna: Chiralpak AD-H, 4.6 x 250 mm. Fluxo 1,2 mL/min. heptano/EtOH 70:30). Exemplo 23: (4S,5R)-3-(2,-Amino-2-morfolino-4,-(triflúormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxietil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00730] A uma solução de (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'- (triflúormetil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2-((tert-butildifenilsilil)óxi)etil)-4- metiloxazolidin-2-ona (2,1 g, 3 mmols) em THF (20 mL), foi adicionado por gotejamento 1M TBAF em THF (3 mL, 3 mmols) a 0°C. A mistura de reação foi agitada por 1 h a 0°C antes da evaporação. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano/EtOAc/MeOH 90:10:1 0:100:10). O produto purificado foi recristalizado em MeOH para fornecer o composto do título como um sólido branco (1,17 g, 83%): ÍR = 0,80 min (UPLC 1), tR = 0,82 min (LC-MS 3); ESI-MS: 470 [M+H]+ (LC- MS 3). Etapa 23.1: (4S,5R)-3-(2,-Amino-2-morfolino-4,-(triflúormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-5-(2-((tert-butildifenilsilil)óxi)etil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00731] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o Exemplo 22.1 a partir de 4S,5R)-5-(2-((tert- butildifenilsilil)óxi)etil)-3-(6-cloro-2-morfolinopirimidin-4-il)-4- metiloxazolidin-2-ona e intermediário B para fornecer o composto do título depois da cristalização em MeOH: tR = 1,72 min (UPLC 1), ÍR = 1,55 min (LC-MS 3); ESI-MS: 708 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 23.2: (4S,5R)-5-(2-((tert-butildifenilsilil)óxi)etil)-3-(6-cloro-2- morfolinopirimidin-4-il)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00732] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para a etapa 21.1 a partir de uma mistura 4:1 dos di-astereoisômeros (4S,5R)- e (4S,5S)- de 5-(2-((terc- butildifenilsilil)óxi)etil)-3-(6-cloro-2-morfolinopirimidin-4-il)-4- metiloxazolidin-2-ona e intermediário A para fornecer, depois da remo-ção do diastereoisômero (4S,5S) pelas duas recristalizações em THF/MeOH apenas o diastereoisômero (4S,5R) do composto do título: ÍR = 1,88 min (UPLC 1), ÍR = 1,64 min (LC-MS 3); ESI-MS: 581, 583 [M+H]+ (LC-MS 3); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,08 (s, 9H), 1,36 (d, 3H), 2,02 (m, 2H), 3,70-3,90 (m,10H), 4,82 (m, 2H), 7,40-7,50 (m, 6H), 7,51 (s, 1H), 7,67 (m, 4H). Etapa 23.3: (4S,5R)- e (4S,5S)-5-(2-((terc-butildifenilsilil)óxi)etil)-4- metiloxazolidin-2-ona

[00733] A uma solução de uma mistura 4:1 dos diastereoisômeros (4S,5R)- e (4S,5S) de 5-(2-((terc-butildifenilsilil)óxi)etil)-3-(4- metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona (4,1 g, 7,8 mmols) em acetonitri- la (40 mL) foi adicionada uma solução de (NH4)2Ce(NOs)6 (10,71 g, 19,5 mmols) em H2O (20 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada por 4 h a 0-5°C. A mistura foi adicionada a água gelada e 0 produto extraído com EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com solução saturada de NaHCO3 e salmoura, secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados. O composto do título foi obtido depois da purificação por cromatografia flash (heptano/EtOAc 10:1 -> EtOAc) como uma mistura 4:1 de diastereoisômeros (2,2 g, 71 %): TLC (hexano-EtOAc 1:1) Rf =0,23; tR = 1,47 min (UPLC 1), tR = 1,33 min (LC-MS 3); ESI-MS: 401 [M+NH4]+ (LC-MS 3). Etapa 23.4: (4S,5R)- e (4S,5S)-5-(2-((terc-butildifenilsilil)óxi)etil)-3-(4- metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00734] A uma solução de uma mistura 4:1 dos diastereoisômeros (4S,5R)- e (4S,5S) de 5-(2-hidroxietil)-3-(4-metoxibenzil)-4- metiloxazolidin-2-ona (2,65 g, 10 mmols) em DMF (30 mL) foi adicio-nada imidazol (1,73 g, 25 mmols ) e TBDPSCI (3,57 g, 13 mmols) a 0- 5°C. A mistura de reação foi deixada aquecer até a RT e foi agitada por uma noite em RT. A mistura de reação foi concentrada e o óleo residual foi dissolvido em TBME e lavado com uma solução aquosa de KHSO410%, H2O, solução saturada de NaHCO3 e salmoura, seco sobre MgSO4, filtrado e concentrado. O composto do título foi obtido depois da purificação por cromatografia flash (heptano/EtOAc 20:1 —> 2:1) como uma mistura 4:1 de diastereoisômeros (4,18 g, 80%): TLC (hexano/EtOAc 3:1) Rf =0,27; tR = 1,70 min (UPLC 1), tR = 1,52 min (LC-MS 3); ESI-MS: 526 [M+Na]+ (LC-MS 3). Etapa 23.5: (4S,5R)- e (4S,5S)-5-(2-hidroxietil)-3-(4-metoxibenzil)-4- metiloxazolidin-2-ona

[00735] Uma mistura 4:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-5-alil-3-(4- metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona (2,67 g, 10 mmols) em CH2CI2- MeOH 2:1 (40 mL) foi ozonizada a -78 °C. Depois de completar a for-mação de ozônio, NaBH4 (0,57 g, 15 mmols) foi adicionado e a mistura de reação foi deixada aquecer até a RT e agitada por 2 h em RT. A mistura de reação foi adicionada a uma solução aquosa de K2CO3 20% e 0 produto foi extraído com EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados para fornecer 0 composto do título como um óleo amarelo claro (2,65 g, 99%): TLC (EtOAc) Rf =0,28; tR = 0,68 min (UPLC 1), tR = 0,69 min (LC-MS 3); ESI-MS: 266 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 23.6: (4S,5R)- e (4S,5S)-5-alil-3-(4-metoxibenzil)-4- metiloxazolidin-2-ona

[00736] A uma solução de uma mistura 4:1 de ((2S,3R)-3- hidroxihex-5-en-2-il)(4-metoxibenzil)carbamato de benzila e ((2S,3S)- 3-hidroxihex-5-en-2-il)(4-metoxibenzil)carbamato de benzila (3,55 g, 9,5 mmols) em THF (60 mL) foi adicionada sob argônio a -50°C uma solução de NaHMDS 1M em THF (10,5 mL). Depois de agitar a mistura de reação por 0,5 h a -40 °C, a mistura foi adicionada a uma solução aquosa gelada de KHSO4 10% e 0 produto foi extraído com EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados. O composto do título foi obtido depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 10:1 -> 1:1) como um óleo incolor (2,4 g, 97%): TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,42; tR = 1,03 min (UPLC 1), tR= 0,99 min (LC-MS 3); ESI-MS: 262 [M+H]+ (LC-MS 3); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): õ 1,06 (d, 2,4H), 1,13 (d, 0,6H), 2,30-2,40 (m, 2H), 3,25 (m, 0,2H), 3,66 (m, 0,8H, NOE acentua-do para sinalizar a 4,54), 3,75 (s, 3H), 4,07 (d, 1H), 4,10 (m, 0,2H), 4,48 (d, 1H), 4,54 (m, 0,8H), 5,05-5,20 (m, 2H), 5,23 (m, 0,2H), 5,78 (m, 0,8H), 6,92 (d, 2H), 7,22 (d, 0,4H), 7,24 (d, 1,6H). Etapa 23.7: (2S.3R)- e (2S,3S)-benzil 4-metoxibenzil(1-oxopropan-2- iDcarbamato

[00737] A uma solução de 4-metoxibenzil(1-oxopropan-2- il)carbamato de (S)-benzila (3,86 g, 10 mmols) em THF (30 mL) foi adicionado pó de zinco (1,64 g, 25 mmols), solução saturada aquosa de NH4C110% (5 mL) e brometo de alila (2,2 mL, 25 mmols) e a mistura de reação foi agitada por 1 h a 25-30°C. A mistura de reação foi diluída com H2O e 0 produto foi extraído em EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com uma solução aquosa de NH4CI 10%, H2O, NaHCOs e salmoura, secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados. O composto do título foi obtido depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 2:1) como um óleo incolor (3,5 g, 97%): tR = 1,25 min e 1,27 min (UPLC 1) (mistura 4:1 de diastereoisômeros (2S,3R)- e (2S,3S)), TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,51; tR = 1,68 min e 1,69 min (LC-MS 3); ESI-MS: 370 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 23.8: 4-metoxibenzil(1-oxopropan-2-il)carbamato de (S)-benzila

[00738] A uma solução de (1-hidroxipropan-2-il)(4- metoxibenzil)carbamato de (S)-benzila (11,8 g, 35,5 mmols) in CH2CI2 foi adicionada NaHCOa (3,28 g, 39 mmols), KBr (0,25 g, 2,1 mmols) e TEMPO 0,168 g, 1,07 mmols). A mistura de reação foi resfriada para 0-5°C e a solução aquosa de NaCIO 5% (85 mL, 71 mmols) foi adicio-nada dentro de 30 min. Depois de agitar por 1 h a 0-5°C, a mistura de reação foi adicionada a uma solução de Na2S2Ü3 e o produto foi extra-ído com EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com solução aquosa de NaH2PO4, H2O e salmoura, secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados para fornecer 0 composto do título como um óleo amarelo (11,2 g, 96%): TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,55; tR = 1,29 min (UPLC 1), tR= 1,15 min (LC-MS 3); ESI-MS: 328 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 23.10: (1-hidroxipropan-2-il)(4-metoxibenzil)carbamato de (S)- benzila

[00739] A uma solução de ácido (S)-2-(((benzilóxi)carbonil)(4- metoxibenzil)amino)propanoico [439589-23-8] (16 g, 41,9 mmols) em THF (150 mL) foi lentamente adicionado sob argônio dimetilssulfeto de boro (8,4 mL, 84 mmols) a 0-5°C. A mistura de reação foi agitada por 1 h a 0-5°C seguida por 3 h a 40-45°C. O boro em excesso foi destruído pela adição cuidadosa de MeOH e a mistura de reação foi evaporada 3x com 200 mL de MeOH e 2x com CHCh. O composto do título foi obtido depois da secagem como um óleo incolor (13,7 g, 99%): TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,22; ÍR = 1,06 min (UPLC 1), ÍR = 1,02 min (LC-MS 3); ESI-MS: 330 [M+H]+ (LC-MS 3). Exemplo 24: eluir primeiro o diastereoisômero em LC-MS 3 de (4S,5R)-3-(2,-amino-2-morfolino-4'-(triflúormetil)-[4,5,-bipirimidin]-6-il)- 5-((R)-2-hidroxipropil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00740] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila não de-terminada, configuração (R) designada arbitrariamente.

[00741] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o Exemplo 23 a partir de (4S,5R)-3-(2'-amino-2- morfolino-4'-(triflúormetil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-((R)-2-((terc- butildifenilsilil)óxi)propil)-4-metiloxazolidin-2-ona e TBAF para fornecer depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 5:1 —> EtOAc/MeOH 10:1) e recristalização a partir de MeOH o composto do título como um sólido branco: TLC (EtOAc) Rf =0,50; ÍR = 0,88 min (LC- MS 3); ESI-MS: 484 [M+H]+ (LC-MS 3).

Etapa 24.1: (4S.5R)-3-(2,-amino-2-morfolino-4,-(triflúormetil)-[4,5,- bipirimidin]-6-il)-5-((R)-2-((terc-butildifenilsilil)óxi)propil)-4- metiloxazolidin-2-ona

[00742] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila protegida não determinada, configuração (R) designada arbitrariamente.

[00743] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 22.1 a partir de (4S,5R)-5-((R)-2-((terc- butildifenilsilil)óxi)propil)-3-(6-cloro-2-morfolinopirimidin-4-il)-4- metiloxazolidin-2-ona e intermediário B para fornecer depois da purifi-cação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 EtOAc) o composto do título como uma espuma amarela clara: TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,45; tR = 1,57 min (LC-MS 3); ESI-MS: 722 [M+H]+ (LC-MS 3).

Etapa 24.2: (4S,5R)-5-((R)-2-((terc-butildifenilsilil)óxi)propil)-3-(6-cloro- 2-morfolinopirimidin-4-il)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00744] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila protegida não determinada, configuração (R) designada arbitrariamente.

[00745] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 21.1 a partir de (4S,5R)-5-((R)-2-((terc- butildifenilsilil)óxi)propil)-4-metiloxazolidin-2-ona e intermediário A para fornecer depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 —> 3:1) o composto do título como um óleo incolor: TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,65; tR = 1,67 min (LC-MS 3); ESI-MS: 595, 597 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 24.3: (4S,5R)-5-((R)-2-((terc-butildifenilsilil)óxi)propil)-4- metiloxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila protegida não de-terminada, configuração (R) designada arbitrariamente.

[00746] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 23.3 a partir de (4S,5R)-5-((R)-2-((terc- butildifenilsilil)óxi)propil)-3-(4-metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona para fornecer depois da purificação por cromatografia flash (hexa-no/EtOAc 20:1 —> EtOAc) o composto do título como um óleo incolor: TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,28; tR = 1,38 min (LC-MS 3); ESI-MS: 415 [M+NH4]+(LC-MS 3).

Etapa 24.4: (4S,5R)-5-((R)-2-((terc-butildifenilsilil)óxi)propil)-3-(4- metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00747] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila protegida não determinada, configuração (R) designada arbitrariamente.

[00748] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 23.4 a partir de (4S,5R)-5-((R)-2- hidroxipropil)-3-(4-metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona (contaminado com 15% do diastereoisômero eluído primeiro (2S,4S,5R) da etapa 24.5) para fornecer depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 EtOAc) o composto do título como um óleo inco-lor: TLC (hexano/EtOAc 3:1) Rf =0,26; tR = 1,55 min (LC-MS 3); ESI- MS: 540 [M+Na]+ (LC-MS 3).

Etapa 24.5: (4S,5R)-5-((S)- e (4S,5R)-5-((R)-2-hidroxipropil)-3-(4- metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00749] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila depois da redução da cetona não foi determinada, a configuração (S) designada arbitrariamente para o primeiro produto eluído do diastereoisômero (4S,5R,5S).

[00750] Primeiro produto eluído do diastereoisômero (4S,5R,5S):

[00751] Segundo produto eluído, mistura de diastereoisômero (2R,4S,5R) (configuração (2R) designada arbitrariamente para a porção 2-hidroxipropila):

[00752] Contaminado com o primeiro diastereoisômero eluído (4S,5R,5S):

[00753] O composto do título foi preparado em analogia ao procedimento descrito para o etapa 23.5 a partir de uma mistura 3:1 do dias- tereoisômero (4S,5R)- e (4S,5S)- de 3-(4-metoxibenzil)-4-metil-5-(2- metilalil)oxazolidin-2-ona para fornecer, depois de múltiplas separações da mistura 3:3:1:1 de isômeros por cromatografia flash (sílica-gel RediSep Rf Gold; hexano/EtOAc 1:1 -> EtOAc e tolueno/EtOAc 3:1 -> EtOAc), os dois diastereoisômeros menores individuais (2S,4S,5S)- e (2R,4S,5S)- e os dois diastereoisômeros maiores individuais (2S,4S,5R)- e (2R,4S,5R)- como óleos incolores:

[00754] Primeiro diastereoisômero eluído (2S,4S,5R)- do composto do título (designado arbitrariamente como configuração (2S)- para a porção 2-hidroxipropila): TLC (EtOAc) Rf =0,39; tR = 0,752 min (UPLC 1); tR = 0,76 min (LC-MS 3); ESI-MS: 280 [M+H]+ (LC-MS 3); 1H NMR (400 MHz, CDCh): δ 1,12 (d, 3H), 1,28 (d, 3H), 1,5-1,63 (m, 1H), 1,81 (m, 1H), 1,90 (d, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 4,03 (d, 1H), 4,14 (m, 1H), 4,60 (ddd, 1H), 4,79 (d, 1H), 6,89 (d, 2H), 7,22 (d, 2H).

[00755] Primeiro diastereoisômero eluído (2R,4S,5R)- do composto do título (designado arbitrariamente como configuração (2R)- para a porção 2-hidroxipropila) contaminada com 15% do primeiro diastereoisômero eluído (2S,4S,5R)-: TLC (EtOAc) Rf =0,35; tR = 0,742 min e 0,752 min (UPLC 1); tR = 0,75 min e 0,76 min (LC-MS 3); ESI-MS: 280 [M+H]+ (LC-MS 3); 1H NMR (400 MHz, CDCh): õ 1,12 (d, 3H), 1,28 (d, 3H), 1,50-1,64 (m, 1H), 1,81 (m, 0,15H), 1,90 (d, 0,15H), 1,94 (m, 0,85H), 2,21 (d, 0,85H), 3,67 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 4,01 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 4,73 (m, 0,85H), 4,79 (d, 0,15H), 4,80 (d, 1H), 6,90 (d, 2H), 7,22 (d, 2H). Etapa 24.6: diastereoisômeros (4S.5R)- e (4S,5S)- de 3-(4- metoxibenzil)-4-metil-5-(2-metilalil)oxazolidin-2-ona

[00756] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 23.6 a partir de uma mistura 3:1 dos di-astereoisômeros (2S,3R)- e (2S,3S)- de ((2S)-3-hidróxi-5-metilhex-5- en-2-il)(4-metoxibenzil)carbamato de benzila para fornecer depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 -> 1:1) o com-posto do título como uma mistura 3:1 dos diastereoisômeros (4S,5R)- e (4S.5S)-: tR =1,112 min (UPLC 1); tR = 1,05 min (LC-MS 3); ESI-MS: 276 [M+H]+ (LC-MS 3); 1H NMR (400 MHz, CDCh): δ 1,13 (d, 2,2H), 1,20 (d, 0,8H), 1,76 (s, 0,8H), 1,80 (s, 2,2H), 2,23 (ddd, 0,25H), 2,27 (dd, 0,75H), 2,39 (dd, 0,25H) 2,46 (dd, 0,75H), 3,28 (m,0,25H), 3,68 (m, 0,75H), 3,83 (s, 3H), 3,99 (d, 0,75H), 4,04 (d, 0,35H), 4,14 (m, 0,25H), 4,62 (m, 0,75H), 4,70-4,90 (m, 4H), 6,90 (d, 2H), 7,25 (d, 2H). Etapa 24.7: diastereoisômeros (2S,3R)- e (2S,3S)- de (3-hidróxi-5- metilhex-5-en-2-il)(4-metoxibenzil)carbamato de benzila

[00757] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 23.7 a partir de 4-metoxibenzil(1- oxopropan-2-il)carbamato de (S)-benzila e 3-bromo-2-metilprop-1-eno para fornecer o composto do título como uma mistura 3:1 dos diaste-reoisômeros (2S,3R)- e (2S,3S)-: tR = 1,322 min (isômero majoritário) e 1,329 min (isômero minoritário) (UPLC 1); tR = 1,23 min (isômero majo-ritário) e 1,24 min (isômero minoritário) (LC-MS 3); ESI-MS: 384 [M+H]+ (LC-MS 3). Exemplo 25: segundo produto de eluição de LC MS 3 que é uma mistura 9:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-3-(2,-amino-2-morfolino-4'-(triflúormetil)- [4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-((S)-2-hidroxipropil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00758] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila não de-terminada, configuração (S) designada arbitrariamente.

[00759] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o Exemplo 23 a partir de uma mistura 8:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(triflúormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-5-((S)-2-((terc-butildifenilsilil)óxi)propil)-4- metiloxazolidin-2-ona e TBAF para fornecer depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 5:1 -> EtOAc/MeOH 10:1) e recris- talização com MeOH o composto do título como um sólido branco: TLC (EtOAc) Rf =0,50; ÍR = 0,87 min (diastereoisômero (4S,5S)- minoritário) e 0,89 min (diastereoisômero majoritário (4S,5R)-) (LC-MS 3); ESI-MS: 484 [M+H]+ (LC-MS 3).

Etapa 25.1: (4S,5R)- e (4S,5S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'- (triflúormetil)-[4,5,-bipirimidin]-6-il)-5-((S)-2-((terc- butildifenilsilil)óxi)propil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00760] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila protegida não determinada, configuração (S) designada arbitrariamente.

[00761] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 22.1 a partir de uma mistura 7:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-5-((R)-2-((terc-butildifenilsilil)óxi)propil)-3-(6-cloro-2- morfolinopirimidin-4-il)-4-metiloxazolidin-2-ona e intermediário B para fornecer depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 EtOAc), o composto do título como uma mistura 8:1 dos dias-tereoisômeros (4S,5R)- e (4S,5S)-: TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,45; tR = 1,58 min (LC-MS 3); ESI-MS: 722 [M+H]+ (LC-MS 3).

Etapa 25.2: (4S.5R)- e (4S15S)-5-((S)-2-((tert-butildifenilsilil)óxi)propil)- 3-(6-cloro-2-morfolinopirimidin-4-il)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00762] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila protegida não determinada, configuração (S) designada arbitrariamente.

[00763] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 21.1 a partir de uma mistura 7:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-5-((S)-2-((tert-butildifenilsilil)óxi)propil)-4- metiloxazolidin-2-ona e intermediário A para fornecer depois da purifi-cação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 —► 3:1) e cristalização com MeOH/THF, o composto do título a partir de uma mistura 7:1 dos diastereoisômeros (4S,5R)- e (4S,5S)-: TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,65; tR = 1,67 min (LC-MS 3); ESI-MS: 595, 597 [M+H]+ (LC-MS 3).

Etapa 25.3: (4S.5R)- e (4S,5S)-5-((S)-2-((terc-butildifenilsilil)óxi)propil)- 4-metiloxazolidin-2-ona

[00764] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila protegida não determinada, configuração (S) determinada arbitrariamente.

[00765] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 23.3 a partir de uma mistura 7:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-5-((S)-2-((tert-butildifenilsilil)óxi)propil)-3-(4- metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona para fornecer depois da purifica-ção por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 -> 2:1) o composto do título como um óleo incolor como uma mistura 10:1 de diastereoisômero (4S,5R)- e (4S,5S)-: TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf =0,30; tR = 1,38 min (LC-MS 3); ESI-MS: 415 [M+NH4]+ (LC-MS 3).

Etapa 25.4: (4S.5R)- e (4S,5S)-5-((S)-2-((terc-butildifenilsilil)óxi)propil)- 3-(4-metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00766] Estereoquímica absoluta da porção 2-hidroxipropila protegida não determinada, configuração (S) determinada arbitrariamente.

[00767] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 23.4 a partir de uma mistura 7:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-5-((S)-2-hidroxipropil)-3-(4-metoxibenzil)-4- metiloxazolidin-2-ona preparada na etapa 24.5 para fornecer depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 EtOAc) o composto do título como uma mistura 7:1 de diastereoisômero (4S,5R)- e (4S,5S)-: TLC (hexano/EtOAc 3:1) Rf =0,26; tR = 1,56 min (LC-MS 3); ESI-MS: 540 [M+Na]+ (LC-MS 3). Exemplo 26: (4S.5R)- e (4S,5S)-3-(2,-amino-2-morfolino-4'- (triflúormetil)-[4,5,-bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidróxi-2-metilpropil)-4- metiloxazolidin-2-ona

[00768] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 22.1 a partir de uma mistura 5:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-3-(6-chloro-2-morfolinopirimidin-4-il)-5-(2-hidróxi-2- metilpropil)-4-metiloxazolidin-2-ona e intermediário B para fornecer de-pois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc/MeOH 90:10:1 10:100:10) e recristalização com MeOH, o composto do tí tulo como um sólido branco e a uma mistura 7:1 de diastereoisômero (4S,5R)- e (4S,5S)-: TLC (EtOAc) Rf =0,43; tR = 0,93 min (LC-MS 3); ESI-MS: 498 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 26.1: (4S.5R)- e (4S,5S)-3-(6-cloro-2-morfolinopirimidin-4-il)-5- (2-hidróxi-2-metilpropil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00769] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 21.1 a partir de uma mistura 5:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-5-((S)-2-((tert-butildifenilsilil)óxi)propil)-4- metiloxazolidin-2-ona e intermediário A para fornecer depois da purifi-cação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 10:1 EtOAc) o composto do título como uma espuma amarela clara e como uma mistura 5:1 de diastereoisômeros (4S,5R)- e (4S,5S)-: TLC (EtOAc/MeOH 10:1) Rf =0,55; tR = 1,02 min (LC-MS 3); ESI-MS: 371, 373 [M+H]+ (LC- MS 3). Etapa 26.2: (4S.5R)- e (4S,5S)-5-(2-hidróxi-2-metilpropil)-4- metiloxazolidin-2-ona

[00770] O composto do título foi preparado em analogia ao proce-dimento descrito para o etapa 23.3 a partir de uma mistura 5:1 de (4S,5R)- e (4S,5S)-5-(2-hidróxi-2-metilpropil)-3-(4-methoxibenzil)-4- metiloxazolidin-2-ona para fornecer depois da purificação por cromato-grafia flash (hexano-EtOAc 1:1 —> EtOAc-MeOH 5:1) o composto do título como um óleo incolor como uma mistura 5:1 de diastereoisômeros (4S,5R)- e (4S,5S)-: TLC (EtOAc/MeOH 10:1) Rf =0,40; tR = 0,41 min (LC-MS 3); ESI-MS: 174 [M+H]+ (LC-MS 3). Etapa 26.3: (4S.5R)- e (4S,5S)-5-(2-hidr0xi-2-metilpropil)-3-(4- metoxibenzil)-4-metiloxazolidin-2-ona

[00771] A uma solução de uma mistura 3:1 de 2-((4S,5R)-3-(4- metoxibenzil)-4-metil-2-oxoxazolidin-5-il)acetato de metila e 2- ((4S,5S)-3-(4-metoxibenzil)-4-metil-2-oxoxazolidin-5-il)acetato de metila (2,0 g, 6,82 mmols) em THF (50 mL), foi adicionada lentamente sob argônio uma solução de cloreto de metilmagnésio 3M em THF (6,82 mL, 20,46 mmols) a -78°C. Depois da adição, a mistura de reação foi deixada aquecer até a RT. Depois da adição de uma solução aquosa de NH4CI 10%, o produto foi extraído com EtOAc. Os extratos combi-nados foram lavados com H2O, secos sobre MgSO4, filtrados e con-centrados para fornecer 0 composto do título depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 EtOAc) como um óleo incolor (1,2 g, 59%, mistura 3:1 de diastereoisômero (4S,5R)- e (4S,5S)-): TLC (CH2CI2/MeOH 10:1) Rf=0,43; tR = 0,80 min e 0,81 min (LC-MS 3); ESI-MS: 294 [M+H]+ (LC-MS 3); 1H NMR (400 MHz, CDCh): δ 1,12 (d, 2,25H), 1,22 (d, 0,75), 1,32 (s, 1,5H), 1,34 (s, 4,5H), 1,68 (dd, 1H), 1,86 (dd, 0,25H), 1,93 (dd, 0,75H), 3,23 (m, 0,25H), 3,64 (m, 0,75H), 3,83 (s, 3H), 3,99 (d, 0,75H), 4,04 (d, 0,25H), 4,26 (d, 0,25H), 4,72 (d, 0,25H), 4,73 (m, 0,75H), 4,80 (d, 0,75H), 6,89 (d, 0,5H), 6,90 (d, 1,5H), 7,23 (d, 0,5H), 7,24 (1,5H). Etapa 26.4: 2-((4S,5R)-3-(4-metoxibenzil)-4-metil-2-oxoxazolidin-5- iDacetato de metila e 2-((4S,5S)-3-(4-metoxibenzil)-4-metil-2- oxoxazolidin-5-il)acetato de metila

[00772] A uma suspensão de uma mistura 3:1 de (3R,4S)- e (3S,4S)-metil 3-hidróxi-4-((4metoxibenzil)amino)pentanoato (4,1 g, 10,74 mmols) em CH2CI2 (80 mL) foi adicionado DIEA (8,44 mL, 48,3 mmols) e a 0°C uma solução de carbonato de (bis(triclorometil) (2,389 g, 8,05 mmols) dissolvido em CH2CI2 (10 mL). Depois de agitar por 0,5 h em RT, a mistura de reação foi adicionada a uma solução saturada de NaHCOs e 0 produto foi extraído com CH2CI2. Os extratos combi- nados foram lavados com H2O, secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados para fornecer 0 composto do título depois da purificação por cromatografia flash (hexano/EtOAc 20:1 EtOAc) como uma espuma amarela clara (2,02 g, 63%, mistura 3:1 dos diastereoisômeros (4S,5R)- e (4S.5S)): TLC (tolueno/EtOAc 1:1) Rf=0,47; tR = 0,84 min (LC-MS 3); ESI-MS: 294 [M+H]+ (LC-MS 3); 1H NMR (400 MHz, CDCh): δ 1,11 (d, 2.25H), 1,27 (d, 0,75H), 2,57 (dd, 0,25H), 2,67 (dd, 0,75H), 2,75 (dd, 0.25H), 2,81 (dd, 0,75H), 3,34 (m, 0.25H), 3,70 (s, 0,75H), 3,73 (s, 2,25H), 3,77 (m, 0,75H), 3,83 (s, 3H), 3,99 (d, 0,75H), 4,04 (d, 0,25H), 4,44 (m, 0,25H), 4,75 (d, 0,25H), 4,78 (d, 0,75H), 4,88 (m, 0,75H), 6,90 (d, 2H), 7,22 (d, 0,5H), 7,23 (d, 1,5H). Etapa 26.5: (3R.4S)- e (3S,4S)-Metil 3-hidróxi-4-((4- metoxibenzil)amino)pentanoato

[00773] A uma suspensão de hidrocloreto de (3R,4S)-metil 4-amino- 3-hidroxipentanoato [111061-25-7] (2,17 g, 11,8 mmols) em CH2CI2 (60 mL) e MeOH (60 mL) foi adicionado NaOAc (1,357 g, 16,54 mmols) e depois de 10 min de agitação p-anisaldeído (1,37 mL, 11,2 mmols) e uma peneira molecular (2 g). A mistura de reação foi agitada por 16 h em RT. Depois da adição de 2 mL de AcOH, NaBHsCN (1,11 g, 17,7 mmols) foi adicionado em porções durante um período de 30 min. Depois de agitar por um adicional de 30 min em RT, a mistura de reação foi filtrada, 0 filtrado acidificado com HCI 4N aquoso e evaporado até secar. O resíduo foi lavado primeiro com Et2θ, depois suspenso em CHLCh/MeOH 1:1 e 0 material inorgânico foi filtrado. O filtrado foi con-centrado para fornecer 0 composto do título depois de secar a 50°C por 4 h como um sólido bege (2,9 g, 80%, mistura 3:1 de diastereoisômeros (3R,4S) e (3S,4S)): tR = 0,46 min (diastereoisômero (3R,4S)) e 0.48 min (diastereoisômero (3S,4S)) (LC-MS 3); ESI-MS: 268 [M+H]+ (LC-MS 3).

[00774] Os dados de H NMR para os compostos dos exemplos acima são fornecidos na seguinte tabela.

Propriedades físicas adicionais

[00775] Os materiais cristalinos obtidos nos exemplos 10 e 18, lotes A - E foram adicionalmente caracterizados como se segue.

Determinação do ponto de fusão

[00776] O ponto de fusão foi determinado pela calorimetria diferencial exploratória (DSC). DSC foi medida usando DSC 2000 da TA Ins-truments, No. de Série 100036. Uma amostra de 1 a 5 mg foi pesada em uma bandeja de alumínio padronizada (bandeja + tampa, TA 900786.901, 900779.001). O instrumento foi operado usando o pro-grama Thermal Advantage Q-Series V.2.6.0.367 e o programa Thermal Advantage V.4.6.9. Os eventos térmicos foram caracterizados usando Universal Analysis V4.3A Buid 4.3.0.6. As amostras foram medidas contra uma bandeja vazia. A amostra foi tratada de acordo com o protocolo abaixo.

[00777] Etapa 1: EQUILIBRAR a -40°C

[00778] Etapa 2: AQUECER 10°C/min/300°C

[00779] Modulação: Não

[00780] Os gráficos obtidos são mostrados nas FiguraS 1, 3, 5, 7, 9 e 11.

Difração de Pó ao Raio X (PXRD):

[00781] Uma quantidade de amostra de cerca de 2 - 5 mg é colocada sobre uma lamina de vidro de objetiva e centralizada no feixe de raios X em um Bruker D8 GADDS Discover com um anodo CuKa (No. de Série 002482). A distância Amostra-Detector era de 30 cm. Dois frames foram registrados entre 5 e 40° 2-teta. Os frames foram fundidos usando o programa GADDS 4.1.27. A avaliação foi conduzida usando EVA 10.0.0.

[00782] Os gráficos obtidos são mostrados nas Figuras 2, 4, 6, 8, 10e 12.

[00783] Os picos 2-teta [°] representativos são fornecidos nas seguintes tabelas: Figura 2 (PXRD Exemplo 10)

Figura 4 (PXRD Exemplo 18A)

Figura 6 (PXRD Exemplo 18B)

Figura 8 (PXRD Exemplo 180

Figura 10 (PXRD Exemplo 18D)

Figura 12 (PXRD Exemplo 18E)

Atividade Biológica

[00784] A eficácia dos compostos da presente invenção como inibidores de PI3 quinase pode ser demonstrada como a seguir:

Preparação de diluições do composto (384 poços)

[00785] Os compostos de teste foram dissolvidos em DMSO (10 mM) e transferidos para tubos Matrix de fundo plano ou em forma de V de 1,4 mL que carregam um único chip de matriz 2D de hubs de composto individual da Novartis. Os números desses chips estavam distintamente ligados a Novartis Pharma Numbers. As soluções-estoque foram armazenadas a -20°C se não usados imediatamente. Para o procedimento de teste, os frascos foram descongelados e identificados por um scanner através do qual uma planilha de trabalho foi gerada, que guiou as etapas de trabalho subsequentes.

[00786] Os compostos foram diluídos manualmente em DMSO para experimentos individuais (96 poços que permitem 10 cpds em 8 concentrações (pontos únicos) como descritos ou preparados como descrito abaixo se testados para o perfilamento em 384 poços. Esse formato possibilitou o ensaio de no máximo 40 compostos de teste individuais em 8 concentrações (pontos únicos) incluindo 4 compostos de referencia. O protocolo de diluição incluiu a produção de "placas de pré-diluição", "placas máster" e "placas de ensaio".

[00787] Placas de pré-diluição: placas de 96 poços de polipropile- no foram usadas como placas de pré-diluição. Um total de 4 placas de pré-diluição foram preparadas incluindo 10 compostos de teste cada uma sobre as posições A1 - A10 da placa, um composto padronizado em A11 e um controle com DMSO em A12. O padrão das etapas de diluição está resumido na Tabela 1. Os programas foram escritos para correr essas etapas de pipetação com robôs HamiltonSTAR. Tabela 1. Padrão de diluição para placas de pré-diluição

[00788] DMSO foi saturado com H2O até uma concentração final de 10%. Vol: Volume, Cone.: Concentração, Prop.diluição: Proporção de diluição, Fin.c: concentração final.

[00789] Placas máster: 100 pL de diluições de composto individual incluindo 0 composto padronizado e os controles das 4 "placas de pré- diuição" foram transferidos para uma "placa máster" de 384 poços in-cluindo as seguintes concentrações 1.820. 564, 182, 54,6, 18,2, 5,46, 1,82 3 0,546 pM, respectivamente em DMSO 90%.

[00790] Placas de ensaio: "Placas de ensaio" idênticas foram preparadas pela pipetação de 50 nl de cada uma das diluições de composto das "placas máster" em "placas de ensaio" de 384 poços. Os compostos foram misturados com 4,5 pL de componentes de ensaio mais 4,5 pL de enzima que corresponde a uma diluição de 1:181, possibilitando a concentração final de 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1, 0,03, 0,01 e 0,003 pM, respectivamente. A preparação das "placas máster" foi manuseada pelo robô Matrix PlateMate Plus e a replicação das "placas de ensaio" pelo robô HummingBird.

Método para gerar construtos de expressão

[00791] PI3Ko, PI3Kβ, PI3KÕ e mTOR humanas cataliticamente ativas foram clonadas, expressas e purificadas como descrito (Maira SM, Stauffer F, Brueggen J, Furet P, Schnell C, Fritsch C, Brachmann S, Chène P, de Pover A, Schoemaker K, Fabbro D, Gabriel D, Simonen M, Murphy L, Finan P, Sellers W, Garcia-Echeverria C (2008), Mol Cancer Ther. 7:1851-63 e Maira SM, Pecchi S, Brueggen J, Huh K, Schnell C, Fritsch C, Nagel T, Wiesmann M, Brachmann S, Dorsch M, Chène P, Schoemaker K, De Pover A, Menezes D, Fabbro D, Sellers W, Garcia-Echeverria C, Voliva CF (2011), Mol. Cancer Ther. aceito).

Ensaios bioquímicos para PI3Kalfa e PI3Kbeta

[00792] O reagente de detecção de ATP baseado em luminescên- cia KinaseGIo foi obtido da Promega (No. de Cat. V6714, Lote No. 236161) através de Catalys, Wallisellen, Suiça. (L-alfa- fospfatidilinositol (Pl), Fígado, Bovino) foi obtida de Avanti Polar Lipid (No. de Cat. 840042C, Lote#LPI-274), Fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato (PIP(4,5)2 (Avanti, No. de Cat. 840046X) ou L-a-fosfatidilinositol (Pl) foi obtida de Avanti Polar Lipid (No. de Cat. 840042C, Lote#LPI-274). L-a-fosfatidilserina (PS) foi obtida de Avanti Polar Lipid (No. de Cat. 840032C), n-Octilglicosideo Avanti Polar Lipid (No. de Cat. 10634425001). A luminescência é uma leitura bem estabelecida para determinar as concentrações de ATP e pode então ser usada para acompanhar a atividade de várias quinases independente de seus substratos. O Ensaio Kinase Gio Luminescent Kinase (Promega, Ma- dison/WI, USA) é um método HTS homogêneo de medição da atividade de quinase pela quantificação da quantidade de ATP remanescente em solução depois da reação de quinase.

[00793] 50 nL de diluições de composto foram dispensados em pla cas pretas de pequeno volume Non Binding Styrene (NBS) de 384 poços (Costar No. de Cat. NBS#3676) como descrito na seção 8.2. L-α- fosfatidilinositol (PI), fornecida como uma solução a 10 mg;mL em me-tanol, foi transferida para um tubo de vidro e seca sob um fluxo de ni-trogênio. Ela foi re-suspensa em Octilglicosídeo 3% por centrifugação e armazenada a 4°C. 5 pL de uma mistura de PI/OG com os subtipos PI3Ka e PI3Kb foram adicionados. As reações de quinase foram iniciadas pela adição de 5 pl de mistura de ATP contendo em um volume final 10 pl de Tris-HCI 10 mM pH 7,5, MgCh 3 mM, NaCI 50 mM, CHAPS 0,05%, DTT 1 mM e ATP 1 pM e ocorreram em temperatura ambiente. As reações foram paralisadas com 10 pl de KinaseGIo e as placas foram lidas 10 min mais tarde em uma leitora Synergy2, usando um tempo de integração de 0,1 segundos por poço. 2,5 pM de NVP- BGT226 (padrão) foram adicionados às placas de ensaio para gerar 100% de inibição da reação de quinase e a inibição de 0% foi dada pelo veículo solvente (90% de DMSO em água). NVP-BGT226 foi usado como o composto de referencia e incluído em todas as placas de ensaio na forma de 16 pontos de diluição em duplicata.

[00794] Os valores de IC50 do percentual de inibição de cada composto em 8 concentrações (geralmente 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1,0,03, 0,01 e 0,003 pM) n=2 foram derivados pelo ajuste de uma curva sigmoidal de dose-resposta para um gráfico de leitura do ensaio sobre a concentração inibidora como descrito. Todos os ajustes foram realizados com 0 programa XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, UK).

Ensaios bioquímicos para PI3Kdelta, PI3Kqama

[00795] O Kit TR-FRET Adapta™ Universal Kinase foi adquirido da Invitrogen Corporation *Carlsbad/CA, USA) *No. de Cat. PV5099). O kit contém os seguintes reagentes: Anticorpo Adapta Eu anti-ADP (an-ticorpo anti-ADP marcado com Európio em salina tamponada com, No. de Cat. PV5097), rastreador de ADP marcado Alexa Fluor® 647 (ras- treador de ADP marcado Alexa Fluor® 647 em salina tamponada com HEPES, No. de Cat. PV5098), tampão de diluição patenteado TR- FRET pH 7,5 (No. de Cat. PV3574).

[00796] O substrato PIK3CD de Fosfatidilinositol foi obtido da Invi-trogen (vesículas consistindo em PI 2 mM em HEPES 50 mM pH 7,5; No. de Cat. PV5371). O substrato PI3CG de Fosfatidilinositol-4,5- bifosfato (PIP(4,5)2 foi obtido da Invitrogen (PIP2:PS grandes vesículas unilamelares que consistem em PIP2 1mM: OS 19 mM em HEPES 50 mM pH 7,5, MgCh 3 mM, EGTA 1mM; No de Cat. PV5100).

[00797] Transferência de Energia de Ressonância por Fluorescência Resolvida no Tempo (TR-FRET) é uma tecnologia baseada na transferência de energia entre dois corantes adjacentes, de um elétron excitado em um corante (0 doador) para um elétron de um corante ad-jacente (0 aceptor) através da ressonância, depois liberada como um fóton. Essa transferência de energia é detectada por um aumento na emissão de fluorescência do aceptor e uma diminuição na emissão de fluorescência do doador. Os ensaios TR-FRET para proteínas quina-ses usam quelatos de um lantanídeo de vida útil longa Térbio ou Euró- pio como a espécie doadora que supera a interferência do composto autofluorescente ou a dispersão da luz de compostos precipitados, pela introdução de um retardo depois da excitação por uma fonte de excitação de luz de flash. Os resultados são geralmente expressos como uma proporção das intensidades dos fluoróforos aceptores e doadores. A natureza raciométrica de tal valor corrige as diferenças nos volumes de ensaio entre os poços, assim como corrige os efeitos da paralisação devida a compostos coloridos. O ensaio Adapta™ pode ser dividido em duas fases: uma fase de reação de quinase e uma fase de detecção de ADP. Na fase de reação de quinase, todos os componentes da reação de quinase são adicionados ao poço e a reação é deixada incubar por um período de ajuste de tempo específico para cada quinase. Depois da reação, uma solução de anticorpo anti-ADP mar-cado com Európio, rastreador de ADP marcado com Alexa Fluor® 647 e EDTA (para paralisar a reação de quinase) são adicionados ao poço de ensaio. O ADP formado pela reação de quinase deslocará o rastreador de ADP marcado com Alexa Fluor® 647 do anticorpo, resultando em uma diminuição no sinal de TR-FRET. Na presença de um inibidor, a quantidade de ADP formado pela reação de quinase está reduzida e a interação anticorpo intacto-marcador resultante mantém um sinal de TR-FRET elevado. No ensaio Adapta™, o anticorpo doador anti-ADP marcado com Európio é excitado a 340 nm e transferirá sua energia para o aceptor (rastreador de ADP marcado com Alexa Fluor® 647). A emissão a partir de Alexa Fluor® 647 pode ser monitorada com um filtro centralizado em 665 nm por que ele está localizado entre os picos de emissão do doador que é medido a 615/620 nm.

[00798] 50 nl_ de diluições de composto foram dispensados em pla cas de poliestireno brancas de pequeno volume de 384 poços como descrito na seção 2.2. Depois, 5 pL de PI3Kd e PI3Kg e de substrato de lipídeo (Pl ou PIP2:PS), seguidos por 5 pL de ATP (volume final do ensaio de 10 pL) são incubados em RT. O tampão de reação padronizado para o ensaio TR-FRET de Adapta™ continha Tris-HCI 10 mM pH 7,5, MgCh 3 mM, NaCI 50 mM, DTT 1 mM, CHAPS 0,05%. As reações foram paralisadas com 5 pL de uma mistura de EDTA contendo o anticorpo anti-ADP marcado com Eu e o rastreador de ADP marcado com Alexa Fluor® 647 em tampão de diluição de TR-FRET (patenteado por IVG). As placas foram lidas 15 a 60 min mais tarde em uma leitora Synergy2, usando um tempo de integração de 0,4 segundos e um retardo de 0,05 segundos. O controle para 100% de inibição da reação de quinase foi realizado pela substituição de PI3K pelo tampão de reação padronizado. O controle para 0% de inibição foi dado pelo veículo solvente dos compostos (DMSO 90% em H2O). O composto padroni-zado NVP-BGT226 foi usado como um composto de referencia e inclu-ído em todas as placas de ensaio na forma de 16 pontos de diluição em duplicata.

[00799] Os dados são analisados usando 0 programa Excel fit ou GraphPad Prism. Os valores de EC50 foram derivados pelo ajuste de uma curva sigmoidal de dose-resposta para um gráfico de leitura do ensaio sobre a concentração inibidora. Todos os ajustes foram realizados com 0 programa XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, UK). A determinação dos valores de EC50 do percentual de inibição de cada composto em 8 concentrações (geralmente 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1, 0,03, 0,01 e 0,003 pM) n=2 foram derivados pelo ajuste de uma curva sig-moidal de dose-resposta para um gráfico de leitura do ensaio sobre a concentração inibidora. Todos os ajustes foram realizados com 0 pro-grama XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, UK).

Ensaio bioquímico para mTOR

[00800] Ensaios TR-FRET para proteínas quinases usam quelatos de lantanídeo de tempo de vida longo Térbio ou Európio como a espécie doadora que supera a interferência do composto autofluorescente ou a dispersão da luz de compostos precipitados, pela introdução de um retardo depois da excitação por uma fonte de excitação de luz de flash. Os resultados são geralmente expressos como uma proporção das intensidades dos fluoróforos aceptores e doadores. A natureza raciométrica de tal valor corrige as diferenças nos volumes de ensaio entre os poços, assim como corrige os efeitos da paralisação devida a compostos coloridos.

[00801] Ensaios de Ligação são baseados na ligação e deslocamento de inibidores de quinase competitivos com o ATP marcados com Alexa Fluor® 647 para a quinase de interesse. "Tracers Kinase"da Invitrogen têm sido desenvolvidos para orientar uma ampla faixa de alvos de quinase e são baseados em inibidores de quinase competitivos com o ATP, tornando-os adequados para a detecção de quaisquer compostos que se ligam ao sítio do ATP ou a um sítio alostérico, alterando a conformação do sítio de ATP. Inibidores que se ligam ao sítio de ATP incluem ambos os inibidores de quinase do Tipo I, que se ligam unicamente ao sítio do ATP, e os inibidores do Tipo II (por exemplo, Gleevec®/lmatinib, Sorafenib, BIRB-796), que se ligam a ambos o sítio de ATP e um sítio hidrofóbico exposto na conformação DFG-out (não ativa). Os inibidores do Tipo III são compostos que não competem com o ATP e são geralmente referidos como inibidores alostéri- cos. Um estudo de 15 inibidores do Tipo III diversos demonstrou que todos, menos um composto eram detectados no ensaio de ligação com potência equivalente aos ensaios de atividade. A única exceção era um composto competitivo pelo substrato e, portanto, não é um inibidor alostérico verdadeiro.

[00802] Em contraste com a maioria dos ensaios de atividade de quinase baseados em fluorescência, LanthaScreen® Eu3+ Kinase Binding Assays podem ser lidos continuamente, o que facilita a avaliação dos compostos com cinética de ligação lenta. Diferente também da maioria dos ensaios de atividade, os ensaios de ligação podem ser realizadas usando preparações de quinase ativa ou não ativada, o que possibilita a caracterização de compostos que se ligam preferencialmente a quinases não ativadas, tais como Gleevec®/lmatinib e alguns inibidores alostéricos.

[00803] No ensaio de ligação de quinase Lanthascreen™, o doador (anticorpo anti-GST-Eu3+) é excitado a 340 nm e transferirá sua energia para o aceptor (inibidor de quinase competitivo por ATP marcado com AlexaFluor® 647 = Tracer 314). A emissão do Tracer-314 (inibidor de AlexaFluor® 647) pode ser monitorada com um filtro centralizado a 665 nm por que ele está localizado entre os picos de emissão do doador, que é medida em 615/620 nm. A ligação de ambos, Tracer-314 e o anticorpo anti-GST-Eu3+, com a quinase resulta em alto grau de FRET do fluoróforo doador de Eu3+ para o fluoróforo aceptor de AlexaFluor® 647 sobre o Tracer-314. A ligação de um inibidor com a quinase compete pela ligação com o rastreador, resultando em perda de FRET.

[00804] 50 nl_ de diluições de composto foram dispensados em pla cas de poliestireno brancas de pequeno volume de 384 poços como descrito na seção 2.2. Depois, 5 pL de GST-mTOR e anticorpo anti- GST-Európio seguidos por 5 pL de Tracer-314 (volume final do ensaio de 10 pL) são incubados em RT. O tampão de reação padronizado para o ensaio para o ensaio de ligação de quinase Lanthascreen™ continha HEPES 50 mM pH 7,5, MgCh 50 mM, EGTA 1 mM, Pluronic F-127 0,01%. As placas são lidas 60 minutos mais tarde em uma leitora Synergy2 usando um tempo de integração de 0,2 microssegundos e um retardo de 0,1 microssegundos.

[00805] Para calcular a taxa de emissão, o sinal emitido a 665 nm do aceptor (Tracer-314 marcado com AlexaFluor® 647) é dividido pelo sinal emitido a 620 nm do doador (anticorpo anti-GST Eu3+).

[00806] O controle para 0% de inibição foi dado pelo veículo solvente dos compostos (DMSO 90% em H2O). O controle para 100% de inibição relativa foi realizado pela adição de 10 pM na mistura que contém GST-mTOR e anticorpo anti-GST Európio. Um controle adicional para 0% de inibição absoluta é dado pelo anticorpo anti-GST Eu3+ sem GST-mTOR.

Ensaios celulares para PI3Kalfa, beta e delta

[00807] AlphaScreen (Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay, ALPHA, Perkin Elmer) é uma tecnologia de ensaio de proximidade baseada em esfera não radioativa para estudar as interações biomoleculares em um formato de placa de microtitulação homogênea. O nome comercial SureFire denota ensaios AlphaScreen que são adaptados para quantificar a fosforilação de proteínas celulares endógenas em lisados celulares, pelo uso de pares de anticorpo combinados, que consistem em um anticorpo anti-fosfo-quinase e um anti- quinase. O ensaio permite a caracterização da sinalização da quinase em células assim como a medida de efeitos inibidores de quinase. A tecnologia AlphaScreen fornece várias vantagens sobre as técnicas de ensaio padronizadas tais como ELISA, já que ela evita procedimentos de lavagem demorados e reduz 0 manuseio da placa. Além disso, ele é miniaturizável para pelo menos um formato de 384 poços e fornece sensibilidade abaixo da faixa femtomolar, dependente da afinidade dos anticorpos incluídos no kit de ensaio individual AlphaScreen SureFire. A alta sensibilidade é atingida por um mecanismo de amplificação intrínseco, que envolve a produção de moléculas de oxigênio isoladas. Os kits de ensaio SureFire estão comercialmente disponíveis para alvos específicos e incluem pares de anticorpos validados (PerkinEI- mer). Esse relato descreve procedimentos comuns aplicados para ensaios AlphaScreen SureFire e as respectivas etapas semi- automatizadas para o perfilamento de inibidor de quinase de rotina em ensaios baseados em célula.

[00808] As linhagens celulares Rat-1 que superexpressam estavel- mente isoformas de PI3K classe I Rat-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110 delta (Rat-1_PI3Kdelta) e Rat-1 pBABEpuro Myr-HA-hp1 Walfa (Rat- 1_PI3Kalfa) e Rat-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110 beta (Rat-1 _PI3beta) foram preparadas como descrito (Maira SM, Stauffer F, Brueggen J, Furet P, Schnell C, Fritsch C, Brachmann S, Chène P, de Pover A, Schoemaker K, Fabbro D, Gabriel D, Simonen M, Murphy L, Finan P, Sellers W, García-Echeverría C (2008), Mol Cancer Ther. 7:1851-63 e Maira SM, Pecchi S, Brueggen J, Huh K, Schnell C, Fritsch C, Nagel T, Wiesmann M, Brachmann S, Dorsch M, Chène P, Schoemaker K, De Pover A, Menezes D, Fabbro D, Sellers W, García-Echeverría C, Voli- va CF (2011), Mol. Cancer Ther., aceito). Todas as linhagens celulares foram cultivadas em meio de crescimento completo (DMEM rico em glicose, 10% (v/v), soro fetal bovino 1% (v/v) MEM NEAA, HEPES 10mM, L-glutamina 2mM, puromicina (10 pg/mL para Rat-1_PI3Kdelta e Rat-1_PI3Kalfa, 4 ug/mL para Rat-1_PI3beta), 1% (v/v) Pen/Strep) até 90% de confluência a 37°C / CO2 5%/ 90% de umidade em uma incubadora umidificada com CO2 e foram divididas duas vezes por semana.

[00809] Os seguintes materiais foram usados para a detecção de p- AKT (S473) em lisados celulares de Rat-1: meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) rico em glicose (Gibco Invitrogen, Basileia, Sui- ça, No. de Cat. 41965), Soro Fetal Bovino Inativado pelo Calor, Qualified (Hl FBS; Gibco Invitrogen, Basileia, Suiça, Lote No. 16140), MEM aminoácidos não essenciais (NEAA; Gibco Invitrogen, Basileia, Suiça, No. de Cat. 11140), HEPES (Gibco Invitrogen, Basileia, Suiça, No. de Cat. 15630), Penicilina/Estreptomicina (Pen/Estrepto, 100x; Gibco Invi-trogen, Basileia, Suiça, No. de Cat. 15140-122), L-Glutamina (Gibco Invitrogen, Basileia, Suiça, No. de Cat. 25030), Puromycin (Sigma Al-drich, Buchs, Suiça, No. de Cat. P9620), DMSO (MERCK, Dietikon, Suiça, No. de Cat. 8.02912.2500), H2O, MilliQ- H2O a menos que de-terminado de outra maneira (MILLIPORE QGARDOOR1, Millipore, Zug, Suiça), Albumina sérica bovina (BSA; Sigma Aldrich, Buchs, Suiça No. de Cat. A8412), SureFire p-Akt 1/2 (Ser473) Assay Kit (Perki- nElmer, Schwerzenbach, Suiça, No. de Cat. TGRAS50K).

[00810] O ensaio SureFire de p-Akt(S473) mede a fosforilação de Akt 1/2 celular endógena na Ser473 em lisados celulares. Usando células Rat-1 que expressam estavelmente versões marcadas de myr- HA das isoformas de subunidade catalítica p110 de PI3Kdelta, PI3Kalfa ou PI3Kbeta, 0 ensaio foi desenvolvido como um protocolo de duas placas em um formato de 384 poços.

[00811] Para testar 0 composto, as células foram semeadas em uma densidade de 4000 (Rat-1_PI3Kdelta), 7500 (Rat-1_PI3Kalpha), ou 6200 (Rat-1 _PI3Kbeta) células em 20 ul de meio de crescimento completo em placas de cultura celular tratadas com 384 poços e foram cultivadas a 37°C / CO2 5% / 90% de umidade por 24 h. Pouco antes da transferência do composto, 0 meio completo foi removido, 30 ul de tampão de ensaio (DMEM rico em glicose, 1x MEM NEAA, HEPES 10 mM, L-glutamina 2 mM, BSA 0,1% (p/v)) foram adicionados e 10 ul de pré-diluições de composto foram transferidos para as células. Para testar depois de Fevereiro de 2010, 0 tampão de ensaio foi substituído por meio de crescimento completo, que revelou resultados similares (dados não mostrados). Depois do tratamento com 0 composto por 1 h, as células foram lisadas pela adição de 20 ul de tampão de lise suplementado com BSA 0,24% (p/v). A detecção de p-AKT (Ser473) foi realizada com o Kit de Ensaio SureFire para p-Akt 1/2 (Ser473) de acordo com as instruções do fabricante usando 5 ul do lisado celular em urn volume de detecção total de 12 ul.

[00812] Os valores de IC50 do percentual de inibição de cada composto em 8 concentrações (geralmente 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1,0,03, 0,01 e 0,003 pM) n=2 foram derivados pelo ajuste de uma curva sigmoidal de dose-resposta para um gráfico de leitura do ensaio sobre a concentração inibidora. Todos os ajustes foram realizados com 0 programa XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, UK).

Ensaio celular para mTor

[00813] Um ensaio baseado em célula (formato de 384 poços) foi desenvolvido para a determinação dos efeitos do composto sobre a atividade de quinase de mTOR celular em células MEF (fibroblastos de embrião de camundongo) derivadas de camundongos que carecem de TSC1 (Complexo 1 de Tuberosclerose), um potente supressor da ati-vidade de quinase de mTOR. Devido a ausência de TCS1, a quinase mTOR é constitutivamente ativada resultando em fosforilação perma-nente de Thr 389 de S6 quinase (S6K1), que é um dos alvos a jusante de mTOR.

[00814] Usando um kit SureFire que permite determinar a fosforilação de Thr389 de S6K1, um ensaio foi desenvolvido, validado e implementado no formato AlphaScreen que permite a determinação quantitativa de fosfo-T389 de S6K1 em lisados celulares. O tratamento das células MEF TSC1-/- com inibidores específico de mTOR (ou da via de mTOR), reduziu dependentemente da dose os níveis de fosfo- T389 de S6K1, permitindo o cálculo dos valores de IC50. Esses estavam em concordância com aqueles valores obtidos com 0 ensaio bioquímico de ligação ao ATP de mTOR, possibilitando uma comparação quantitativa da potência de inibidores de mTOR.

[00815] As células MEFs TSC1-/- (Kwiatkowski, D. J., Zhang, H., Bandura, J. L., Heiberger, K. M., Glogauer, M., el-Hashemite, N., e Onda, H. (2002) Hum. Mol. Genet. 11, 525-534) foram cultivadas em meio DMEM rico em glicose suplementado com FBS 10% (Invitrogen), Glutamina 2mM e Penicilina/Estreptomicina 1% (p/v) a 37°C, CO2 5%.

[00816] O kit SureFire para a determinação da fosforilação de P70S6quinase foi adquirido da PerkinElmer (p70S6K p-T389, #TGR70S50K) e 0 ensaio foi realizado de acordo com as instruções do fornecedor e de acordo com 0 método genérico para os ensaios Sure- Fire. Resumidamente, 5 pL de lisado celular por poço foram transferidos para placas-proxy brancas com 384 poços (para leitura de luminescência) e misturados com 7 pL de A e 5 pL de B (volume final: 12 pL). Depois de 3 h de incubação no escuro em RT, a luminescência foi lida com 0 Envision Reader (PerkinElmer). As células não tratadas foram usadas como controle (controle superior) e as células tratadas com 3 pM de BEZ235 foram usadas como controle inferior. A janela do ensaio entre os sinais obtidos para os controles superior e inferior foi definida como 100% e os efeitos do composto foram expressos como percentual de inibição. Os valores de IC50 foram calculados a partir das curvas de dose resposta pela extrapolação gráfica.

[00817] Os resultados obtidos usando os ensaios descritos acima são fornecidos nas tabelas a seguir onde SEM é 0 erro padrão da média e n é 0 número de medidas dos dados. Bioquímica de PI3Kalfa

uma medida diferente, separada deu um valor de <0,003 uM. Bioquímica de PI3Kbeta

Bioquímica de PI3Kd elta

Bioquímica de PI3Kgama

*2 dos 3 valores >9,1. Nenhum cálculo de SEM foi possível. ** Ambos os valores > 9,1. Nenhum cálculo de SEM foi possível. Ensaio celular de PI3Kalfa

Ensaio celular de PI3Kbeta

1 quarta medida 3,9 uM, atípica 2 * O segundo valor foi > 10, portanto, nenhum cálculo de SEM foi possível. Ensaio celular de PI3Kdelta

* O segundo valor foi > 10, Portanto, nenhum cálculo de SE sível Ensaio celular de mTOR

1 O segundo valor era > 2,27, portanto, nenhum cálculo de SEM foi possível. 2 * 3 dos 4 valores eram > 2,27, Portanto, nenhum cálculo de SEM foi possível. 3 ** 3 dos 5 valores eram > 2,27, Portanto, nenhum cálculo de SEM foi possível. 4 *** Todos os valores eram > 2,27, Portanto, nenhum cálculo de SEM foi possível.

[00818] O efeito fora do alvo (evidência de ligação à tubulina) foi medido como a seguir.

Descrição do ensaio de Cytospin

[00819] Ensaio Cytospin de parada do ciclo celular em G2/M para detectar as atividades de ligação da ligação à tubulina (fora do alvo) de derivados de MAPP: 5 x 105 células A2058 foram plaqueadas em um cluster de 6 poços, com 2 mL de DMEM (rico em glicose contendo pi- ruvato de sódio 1%, glutamina 1% e FCS 10%). 18 horas mais tarde, os itens de teste foram adicionados em uma concentração de 5 pM (semeando 1 pL de uma solução 10 mM do item de teste). 24 horas mais tarde, as células foram tripsinizados e transferidas para tubos cônicos de 15 mL. As células foram então peletizadas por centrifugação e re-suspensas com PBS/O (contendo FCS 10%). As células são contadas com um contador CASY e cada uma das amostras equilibrada para 1 x 106 células/mL. 200 pL (2 x 105 células) foram então transferidas para tubos Cytospin de 1,5 mL (Heraeus Sepatec, Ref 1152) e centrifugadas por 5 min a 50 g a 4°C com um sistema Cytospin, contendo um sistema Sepatech (Heraeus, Ref. #3425), ajustado no topo de uma lamina de microscópio (Thermo-Scientific, Ref.#PH040820. As células foram então fixadas por 15 min em temperatura ambiente e coradas com o ensaio Diff Quick® (Medion Diagnostics, Ref:#130832), de acordo com as recomendações do fabricante. O DNA condensado que reflete a parada em G2/M é revelado pela coloração pontilhada nas células, quando se examina as laminas sob microscópio. A colora- ção foi visualmente avaliada para a presença de DNA condensado e dado um escore onde 0 = sem DNA condensado observado (indicando nenhuma atividade fora do alvo), 1 = (indicando fraca atividade fora do alvo), 2 = (indicando média atividade fora do alvo), 3= grande quanti-dade de DNA condensado observada (indicando acentuada atividade fora do alvo).

[00820] Os dados obtidos usando esse método é mostrado na seguinte tabela:

n.d. = não realizado

Claims (21)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (I),

na qual

R1 = na qual R1a = H ou –CH3 Ou

R1 = na qual D = deutério; R2 = H e R3 = H; R4= H, e R5 = -CH3OU -CH2OH; OU R4 = -CH2OH, e R5 = H; ou R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou -CH2OC(O)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3OU - CH2C(OH)(CH3)2 e R5 = H, ou R4 = H, e R5 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH(OH)CH3OU - CH2C(OH)(CH3)2, OU R4 = H ou -CH3 e R5 = H ou -CH3 ou R3 = H e R4 = H; R2 e R5são ligados e formam -(CH2)4-; ou R4 = H e R5 = H; e R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3;OU R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH; ou R2 = H e R4 = H; e R3 e R5são ligados e formam 0 grupo

ou 0 grupo

ou R3 = H e R5 = H; e R2 e R4são ligados e formam 0 grupo

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou R4 = H, e R5 = -CH3OU -CH2OH, ou R4 = H ou -CH3e R5 = H ou -CH3; ou R3 = He R4 = H; R2 e R5 = -(CH2)4-; ou R4 = H e R5 = H; e R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3;OU R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que: R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou R4 = H, e R5 = -CH3OU -CH2OH, ou R4 = H ou -CH3e R5 = H ou -CH3; ou R4 = H e R5 = H; e R2 = -CH2OH, e R3 = -CH3;OU R2 = H ou -CH3, e R3 = -CH2OH, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que: R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou - CH2OC(O)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou R4 = H, e R5 = -CH3OU -CH2OH, ou R4 = H ou -CH3e R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (IA'):

na qual R1a = H ou -CH3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (IA):

na qual R2 = -CH3I -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH ou -CH2OC(O)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou R4 = H, e R5 = -CH3 OU -CH2OH, ou R4 = H ou -CH3e R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que: R2 = -CH3OU -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH, e R5 = H, ou R4 = H, e R5 = -CH3OU -CH2OH, ou R4 = H ou -CH3e R5 = H ou -CH3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que: R2 = -CH3OU -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH ou -CH2CH2OH e R5 = H ou R4 = He R5 = CH3OU -CH2OH, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

9. Composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que é selecionado dentre: (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona, 3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-4,5'-bipirimidin-6-il)- 4-(hidroximetil)-4-metiloxazolidin-2-ona racêmica, (S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-4,5'-bipirimidin- 6-il)-4-(hidroximetil)-4-metiloxazolidin-2-ona (estereoquímica absoluta não determinada), (R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-4,5'-bipirimidin- 6-il)-4-(hidroximetil)-4-metiloxazolidin-2-ona (estereoquímica absoluta não determinada), (3aS,7aS)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-hexa-hidro-benzoxazol-2-ona, (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-metoximetil-oxazolidin-2-ona, (4S,5S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-(D8-morfolin-4-il)-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-(2-hidróxi-etil)-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-[2'-Amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'- trifluormetil-[4,5']bipirimidinil-6-il]-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2- ona, éster (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-metil-2-oxo-oxazolidin-4-ilmetílico de ácido fór- mico, (S)-3-[2'-Amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il]-4-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-4-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-amino-2-D8-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-4-metiloxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5S)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-4-metil-oxazolidin-2-ona, (R)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona, (3aR,6aR)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)tetra-hidrofuro[3,4-d]oxazol-2(3H)-ona, (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)- [4,5'-bipirimidin]-6-il)-6-hidroxihexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona racêmica, (3aR,6R,6aR)-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-6-hidroxihexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona, (3aS,6S,6aS)-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-6-hidroxihexa-hidro-2H-ciclopenta[d]oxazol-2-ona, e (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxietil)-4-metiloxazolidin-2-ona.

10. Composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que é selecionado dentre: (4S,5R)-3-[2'-Amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'- trifluormetil-[4,5']bipirimidinil-6-il]-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2- ona, (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluormetil- [4,5']bipirimidinil-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona ou (4S,5R)-3-(2'-Amino-2-morfolino-4'-(trifluormetil)-[4,5'- bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxietil)-4-metiloxazolidin-2-ona.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo fato de que é (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4'-(trifluormetil)- [4,5']bipirimidin-6-il)-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin-2-ona, apresen-tando a estrutura:

12. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo fato de que é (4S,5R)-3-[2'-amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4- il)-4'-trifluormetil-[4,5']bipirimidinil-6-il]-4-hidroximetil-5-metil-oxazolidin- 2-ona, apresentando a estrutura:

13. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo fato de que é (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'- (trifluormetil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxietil)-4-metioxazolidin-2- ona, apresentando a estrutura:

14. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.

15. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que é formulada como uma dispersão sólida do dito composto.

16. Combinação, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais agentes terapeuticamente ativos adicionais.

17. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para uso como um medicamento.

18. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para tratamento do câncer.

19. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado dentre um tumor sólido, um carcinoma do cérebro, um carcinoma do rim, um carcinoma do fígado, um carcinoma da glândula adrenal, um carcinoma da bexiga, um car- cinoma da mama, urn carcinoma do estômago, urn carcinoma do esôfago, urn carcinoma dos ovários, urn carcinoma do cólon, urn carcinoma do reto, urn carcinoma da próstata, urn carcinoma do pâncreas, urn carcinoma do pulmão, urn carcinoma da vagina, urn carcinoma da tireoide, sarcoma, glioblastomas, mieloma múltiplo ou câncer gastrointestinal, urn tumor do pescoço, urn tumor da cabeça, carcinoma de célula escamosa, leucemia linfocítica crônica, linfoma de não Hodgkin, mieloma de célula plasmática, linfoma de Hodgkin ou uma leucemia.

20. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato que está na forma amorfa.

21. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizada pelo fato de que o dito composto está na forma amorfa.

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