KR20060100432A

KR20060100432A - 항-ｉｇｆｒ１ 항체 치료학적 조합물

Info

Publication number: KR20060100432A
Application number: KR1020067009791A
Authority: KR
Inventors: 얀 왕; 조나단 에이. 패치터; 월터 알. 비숍
Original assignee: 쉐링 코포레이션
Priority date: 2003-11-21
Filing date: 2004-11-19
Publication date: 2006-09-20
Also published as: US20050136063A1; JP2007532478A; PL380527A1; SG160412A1; PE20050928A1; HK1087131A1; EP1689782B1; NZ547266A; EP1689782A1; EP2230254B1; ES2343328T3; IL175773A0; DE602004026768D1; CA2546664A1; ZA200604074B; JP2011236253A; EP2230254A2; AU2004292554B2; WO2005052005A1; NO20062885L

Abstract

본 발명은 항-IGFR1 항체와 같은 결합 조성물과 공동으로 화학치료제를 포함하는 조합물을 제공한다. 암과 같은 의학 상태를 치료하기 위해 조합물을 사용하는 방법이 또한 제공된다.

항-IGFR1 항체, 화학치료제, 치료학적 조합물, 면역 글로불린

Description

항-ＩＧＦＲ１ 항체 치료학적 조합물{Anti-IGFR1 antibody therapeutic combinations}

본 원은, 이의 전문이 본원에 참조로 인용된, 2003년 11월 21일자로 출원된 미국 가특허원 제60/524,732호의 이익을 청구한다.

본 발명은 하나 이상의 항-IGFR1 항체 및 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 치료학적 조합물에 관한 것이다.

소마토메딘으로 또한 알려져 있는 인슐린-유사 성장 인자는 인슐린-유사 성장 인자-I(IGF-1) 및 인슐린-유사 성장 인자-II(IGF-II)를 포함한다[참조: Klapper, et al., (1983) Endocrinol. 112: 2215 및 Rinderknecht, (1978) Febs. Lett. 89:283]. 이들 성장 인자는 인슐린-유사 성장 인자 수용체-1(IGFR1)[참조: Sepp-Lorenzino, (1998) Breast Cancer Research and Treatment 47: 235]으로 명명된 일반적인 수용체에 결합함으로써 종양 세포[참조: Macaulay, (1992) Br. J. Cancer 65: 311]를 포함하는 각종의 세포 유형에서 유사분열 활성을 발휘한다. IGF와 IGFR1의 상호작용은 타이로신 잔기상에서 수용체의 자가 포스포릴화를 개 시(triggering)함으로써 수용체를 활성화시킨다[참조: Butler, et (1998) Comparative Biochemistry and Physiology 121: 19]. 일단 활성화되면, IGFR1은 결국 세포내 표적을 포스포릴화시켜 세포내 신호화 경로를 활성화시킨다. 이러한 수용체 활성화는 종양 세포 성장 및 생존을 자극시키는데 있어 중요하다. 따라서, IGFR1 활성의 억제는 사람 암 및 기타 증식 질병의 성장을 치료하거나 예방하는 가치있는 강력한 방법을 나타낸다.

몇몇 주(lines)의 입증은, IGF-I, IGF-II 및 이들의 수용체 IGFR1이 악성 표현형의 중요한 매개인자임을 나타낸다. IGF-I의 혈장 수준은 전립샘 암 위험의 가장 강력한 지표이며[참조: Chan, et al., (1998) Science 279: 563], 유사한 역학적 연구는 유방, 결장 및 폐 암 위험이 있는 혈장 IGF-I 수준과 강력하게 연관되어 있다.

인슐린-유사 성장 인자 수용체-I의 과발현은 또한 수개의 암 세포주 및 종양 조직에서 입증되었다. IGFR1은 모든 유방암 세포주 중 40%에서[참조: Pandini, et al., (1999) Cancer Res. 5: 1935] 및 폐 암 세포주의 15%에서 과발현된다. 유방암 종양 조직에서, IGFR1은 정상 조직과 비교하여 6 내지 14배 과발현되고 IGFR1은 2 내지 4배 더욱 높은 키나제 활성을 나타낸다[참조: Webster, et al., (1996) Cancer Res. 56: 2781 and Pekonen, et al., (1998) Cancer Res. 48: 1343].

더우기, 결직장암 조직은 강력하게 상승된 IGFR1 수준을 나타내는 것으로 보고되었다[참조: Weber et Cancer 95 (10): 2086-95 (2002)]. 주요 경부암 세포 배양물 및 경부암 세포주의 분석은 정상 자궁외 세포와 비교하여 각각 IGFR1의 3배 및 5배 과발현을 나타내었다[참조: Steller, et al., (1996) Cancer Res. 56: 1762]. 윤활막 육종 세포에서 IGFR1의 발현은 또한 응집성 표현형[즉, 전이 및 높은 증식율; 참조: Xie, et al., (1999) Cancer Res. 59: 3588]과 관련되었다.

서서히 진행하는 질병인 말단거대증은 성장 호르몬 및 IGF-I의 고분비로 인하여 유발된다[참조: Ben-Schlomo, et al., (2001) Endocrin. Metab. Clin. North. Am. 30: 565-583]. IGFR1 작용의 길항작용은 당해 질병을 치료하는데 도움이 된다.

당해 분야에 공지된 IGFR1의 활성을 억제하는 항체가 수개 존재한다. 그러나, 이들은 비교적 치료학적 가치가 낮다. 예를 들어, α-IR3[참조: Kull, et al., (1983) J. Biol. Chem. 258: 6561], 1H7[참조: Li et al., (1993) Biochem. Biophys. Res. Comm. 196.92-98 및 Xiong et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A. 89: 5356-5360; Santa Cruz biotechnology, Inc.; Santa Cruz, CA] 및 MAB391[미국 미네소타주 미네아폴리스 소재의 알 앤드 디 시스템스(R&D Systems) 제조원]은 IGFR1과 상호작용하여 자체 활성을 억제하는 마우스 모노클로날 항체이다. 이들은 마우스 항체이므로, 사람에서 이들의 치료학적 용도는 제한되어 있다. 면역적격 사람 환자에게 투여량의 쥐 항체를 투여하는 경우, 대상체는 마우스 면역 글로불린 서열에 대해 항체를 생산하다. 이러한 사람 항-마우스 항체(HAMA)는 치료학적 항체를 중화시키고 급성 독성(즉, HAMA 반응)을 유발한다.

HAMA 반응을 피하는 한가지 방법은 어떠한 외부(예를 들면, 마우스) 아미노산 서열을 결여하고 있는 완전한 사람 항체를 사용하는 것이다. 비록, 완전한-사 람 항체의 사용이 치료학적 항체의 사람 숙주 면역 거부를 감소시키거나 예방시키는 효과적인 방법이라 해도, 완전한 사람 항체의 거부가 일어날 수 있다. 사람 항체의 사람 거부는 사람 항-사람 항체 반응(HAHA 반응)으로 언급될 수 있다. HAHA 반응은 완전한 사람 항체에서 드물고, 낮은 출현의 아미노산 서열과 같은 인자들에 의해 매개될 수 있다. 이러한 이유로, 치료학적 항체는 또한 비-면역원성 또는 단지 약한 면역원성 사람 항체 골격 서열을 혼입시켜 최적화시킬 수 있다. 바람직하게는, 서열은 다른 사람 항체에서도 흔이 일어난다.

비록 항-IGFR1 항체가 수용체에 의해 매개된 의학 상태(예: 암 또는 말단거대증)를 치료하는데 효과적인 수단이라고 해도, 이러한 치료 효능은 하나 이상의 추가의 화학치료제를 사용함에 의해 증진될 수 있다. 예를 들어, 항-IGFR1 항체는 제2 항-IGFR1 항체 또는 소 분자 IGFR1 길항제와 공동으로 대상체에 투여될 수 있다. 본 발명은 특히, 치료시 사용하기 위한 이러한 치료 및 조성물을 제공한다.

발명의 요약

본 발명은, 바람직하게는 (a) (i) 서열 5의 CDR-L1, 서열 6의 CDR-L2 및 서열 7의 CDR-L3를 포함하는 경쇄 아미노산 서열; 및 (ii) 서열 8의 CDR-H1, 서열 9의 CDR-H2 및 서열 10의 CDR-H3를 포함하는 중쇄 아미노산 서열로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원을 포함하는 어떠한 항-IGFR1 항체, 바람직하게는 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체와 같은 하나 이상의 결합 조성물과 공동으로; (b) 하나 이상의 화학치료제 및 임의로, 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조합물을 제공한다.

하나의 양태에서, 결합 조성물(예: 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체)은 서열 5의 CDR-L1, 서열 6의 CDR-L2 및 서열 7의 CDR-L3를 포함하는 경쇄 아미노산 서열; 및 서열 8의 CDR-H1, 서열 9의 CDR-H2 및 서열 10의 CDR-H3를 포함하는 중쇄 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 양태에서, 결합 조성물은 성숙한 LCF(서열 2의 아미노산 20 내지 128)를 포함하는 경쇄 면역 글로불린 및 성숙한 HCA(서열 4의 아미노산 20 내지 137)를 포함하는 중쇄 면역 글로불린을 포함한다.

결합 조성물은 2003년 5월 22일자로 출원된 미국 특허원 제10/443,466호에 설정된 어떠한 결합 조성물(예: 분리된 완전한 사람 모노클로날 항체)일 수 있다.

화학치료제는 탁산, 토포이소머라제 억제제, 시그날 형질도입 억제제, 세포 주기 억제제, IGF/IGFR1 시스템 조정인자, 파르네실 단백질 트랜스퍼라제(FPT) 억제제, 내피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제, HER2 억제제, 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체 억제제, 유사분열물질 활성화된 단백질(MAP) 키나제 억제제, MEK 억제제, AKT 억제제, mTOR 억제제, pI3 키나제 억제제, Raf 억제제, 사이클릭 의존성 키나제(CDK) 억제제, 미세관 안정화제, 미세관 억제제, SERM/항에스트로겐, 아로마타제 억제제, 안트라사이클린, 프로테오솜 억제제, 인슐린-유사 성장 인자(IGF) 생산을 억제하는 제제 및/또는 IGFR1, IGF-1 또는 IGF2의 항-센스 억제제로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 구성원일 수 있다.

탁산은 예를 들면, 파클리탁셀 또는 도세탁셀일 수 있다. 미세관 억제제는 예를 들면, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 포도필로톡신, 에포틸론 B, BMS-247550 또는 BMS-310705일 수 있다. 내피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제는 예를 들면, 게피티 니브, 에를로티니브, 세툭시마브, ABX-EGF, 라파타니브, 카네르티니브, EKB-569 또는 PKI-166일 수 있다. 파르네실 단백질 트랜스퍼라제 억제제는 예를 들면, 로나파르니브 또는 티피파르니브(R155777)일 수 있다. 선택적인 에스트로겐 수용체 조정인자(SERM)/항에스트로겐은 예를 들면, 타목시펜, 랄록시펜, 풀베스트란, 아콜비펜, 피펜독시펜, 아르족시펜, 토레미펜, 라소폭시펜, 바제독시펜(TSE-424), 이독시펜, HMR-3339 및 ZK-186619일 수 있다. 안트라사이클린은 독소루비신, 다우노루비신 또는 에피루비신일 수 있다. HER2 억제제는 예를 들면, 트라스투주마브, HKI-272, CP-724714 또는 TAK-165일 수 있다. 토포이소머라제 억제제는 예를 들면, 에토포시드, 토포테칸, 캄프토테신 또는 이리노테칸일 수 있다.

하나의 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 2의 아미노산 20 내지 128번을 포함하는 경쇄 면역 글로불린 및 서열 4의 아미노산 20 내지 137번을 포함하는 중쇄 면역 글로불린을 포함하는 하나 이상의 결합 조성물(예: 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체)과 공동으로; (b) 하기 식중에서 선택된 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 조합물을 제공한다:

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또한 본 발명에서는 (a) 치료학적 유효량의, 바람직하게는 (i) 서열 5의 CDR-L1, 서열 6의 CDR-L2 및 서열 7의 CDR-L3를 포함하는 경쇄 아미노산 서열; 및 (ii) 서열 8의 CDR-H1, 서열 9의 CDR-H2 및 서열 10의 CDR-H3를 포함하는 중쇄 아미노산 서열로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원을 포함하는, 어떠한 항-IGFR1 항체와 같은 하나 이상의 결합 조성물(예: 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체)과 공동으로; 임의로 (b) 치료학적 유효량의 하나 이상의 화학치료제 및 임의로, 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여(예: 비경구 또는 비-비경구 경로)함을 포함하여, 대상체에서 인슐린-유사 성장 인자 수용체-I의 상승된 발현 또는 활성에 의해 매개된 의학 상태를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명의 하나의 양태에서, 의학 상태는 치료학적 유효량의 본 발명 단독의 어떠한 분리된 항-IGFR 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 치료된다.

하나의 양태에서, 결합 조성물(예: 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체)은 서열 2의 아미노산 20 내지 128번을 포함하는 경쇄 면역 글로불린 및 서열 4의 아미노산 20 내지 137번을 포함하는 중쇄 면역 글로불린을 포함한다. 하나의 양태에서, 화학치료제는 다음 화학식으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 구성원이다:

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하나의 양태에서, 본 발명의 방법으로 치료된 의학 상태는 류마티스 관절염, 그레이브스병(Grave's disease), 다발 경화증, 전신홍반루푸스, 하시모토 갑상선염, 중증 근육 무력증, 자가-면역 갑상선염, 베체트병(Bechet's disease), 말단거대증, 방광암, 윌름스암(Wilm's cancer), 난소암, 췌장암, 전립샘 비대, 유방암, 전립샘 암, 골암, 폐암, 결직장암, 경부암, 윤활막육종, 전이유암종 관련 설사, 혈관활성 장 펩타이드 분비 종양, 거인증, 건선, 죽상경화증, 혈관의 평활근 재협착 및 부적절한 미세혈관 증식으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.

본 발명의 양태는 (a) 치료학적 유효량의, 서열 2의 아미노산 20 내지 128번을 포함하는 경쇄 면역 글로불린 및 서열 4의 아미노산 20 내지 137번을 포함하는 중쇄 면역 글로불린을 포함하는 하나 이상의 결합 조성물(예: 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체)와 공동으로; (b) 치료학적 유효량의 하기 화학식중에서 선택된 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 조합물을 대상체에게 투여함을 포함하여, 대상체의 의학 상태(예: 류마티스 관절염, 그레이브스병, 다발 경화증, 전신홍반루푸스, 하시모토 갑상선염, 중증 근육 무력증, 자가-면역 갑상선염, 베체트병, 말단거대증, 방광암, 윌름스암, 난소암, 췌장암, 전립샘 비대, 유방암, 전립샘 암, 골암, 폐암, 결직장암, 경부암, 윤활막육종, 전이유암종 관련 설사, 혈관활성 장 펩타이드 분비 종양, 거인증, 건선, 죽상경화증, 혈관의 평활근 재협착 및 부적절한 미세혈관 증식)를 치료 또는 예방하는 방법을 포함한다:

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또한 본 발명에서는 (a) 바람직하게는 (i) 서열 5의 CDR-L1, 서열 6의 CDR- L2 및 서열 7의 CDR-L3을 포함하는 경쇄 아미노산 서열; 및 (ii) 서열 8의 CDR-H1, 서열 9의 CDR-H2 및 서열 10의 CDR-H3을 포함하는 중쇄 아미노산 서열로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원을 포함하는 어떠한 분리된 항-IGFR1 항체, 바람직하게는 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체와 같은 하나 이상의 결합 조성물과 공동으로; (b) 하나 이상의 화학치료제, 및 임의로 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조합물과 세포를 접촉시킴을 포함하여, 특정 세포[예: 시험관내 세포 또는 생체내 세포(예: 대상체 신체내 세포], 예를 들면, NCI-H322, A2780 세포, MCF7 세포, 비-소 세포 폐암종 세포, 유방암 세포, 난소암 세포, 결직장암 세포, 전립샘암 세포, 소아암 세포 또는 췌장 암 세포를 포함하나, 이에 한정되지 않는 악성 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법을 제공한다. 하나의 양태에서, 결합 조성물은 서열 2의 아미노산 20 내지 128번을 포함하는 경쇄 면역 글로불린 및 서열 4의 아미노산 20 내지 137번을 포함하는 중쇄 면역 글로불린을 포함한다. 하나의 양태에서, 화학치료제는 다음 화학식으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 구성원이다:

본 발명은 또한 (a) 서열 5의 CDR-L1, 서열 6의 CDR-L2 및 서열 7의 CDR-L3를 포함하는 경쇄 아미노산 서열; 및 서열 8 또는 서열 12의 CDR-H1, 서열 9의 CDR-H2 및 서열 10의 CDR-H3을 포함하는 중쇄 아미노산 서열로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원을 포함하는 하나 이상의 결합 조성물(예: 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체)와 공동으로; (b) 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 키트를 제공한다. 결합 조성물은 화학치료제로부터 별개의 용기내에 존재할 수 있다.

본 발명은 고 수준의 IGFR1 발현, 리간드 결합 또는 활성, 또는 고 수준의 IGF-1 또는 IGF-2로 특징화되는 의학 상태, 예를 들면 암을 치료하기 위한 조합물 및 방법을 제공한다. 의학 상태를 치료하는데 사용할 수 있는 본 발명의 조합물은 하나 이상의 항-IGFR1 항체(예: 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체)와 공동으로 하나 이상의 화학치료제를 포함한다.

본 발명의 조합물은 다른 것과 "공동으로(in association) 또는 함께" 결합 조성물 성분 및 화학치료제 성분을 포함한다. 용어 "공동으로"는, 본 발명의 조합물의 성분들이 연속적인 전달용 단일 조성물로 제형화되거나, 또는 2개 이상의 조성물(예: 키트)로 별개로 제형화됨을 나타낸다. 또한, 본 발명의 조합물의 각각의 성분은 환자에게 다른 성분이 투여되는 시기외에 다른 시기에 투여될 수 있는데; 예를 들어, 각각의 투여는 제공된 기간에 걸쳐 수회의 간격으로 상이한 시간에 제공될 수 있다. 또한, 별개의 성분들은 대상체에게 동일한 경로 또는 상이한 경로(예: 경구, 정맥내, 종양내) 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 IGFR1, IGF-1 및/또는 IGF-2에 의해 매개된 질병을 치료하기 위한 특히 효과적인 수단을 제공한다. 본 발명의 결합 조성물 및 화학치료제 둘다의 치료학적 효능은, 공동으로 투여되는 경우 성분 단독보다 더욱 우수하다.

본 발명은 하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8)의 하기 표 1에 나타낸 핵산 또는 폴리펩타이드(성숙한 이의 단편 포함) 중 어느 것을 포함하는 특정의 분리된 핵산 또는 분리된 폴리펩타이드(예: 분리된 완전한-사람 모노클로날 항체)를 포함한다.

[표 1]

본 발명의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열의 요약

서열	서열 번호
19D12/15H12 경쇄 F(LCF) 가변 영역 폴리뉴클레오타이드 서열	서열 1
19D12/15H12 경쇄 F 가변 영역 폴리펩타이드 서열	서열 2
19D12/15H12 중쇄 A(HCA) 가변 영역 폴리뉴클레오타이드 서열	서열 3
19D12/15H12 중쇄 A 가변 영역 폴리펩타이드 서열	서열 4
19D12/15H12 경쇄 F CDR-L1 폴리펩타이드 서열	서열 5
19D12/15H12 경쇄 F CDR-L2 폴리펩타이드 서열	서열 6
19D12/15H12 경쇄 F CDR-L3 폴리펩타이드 서열	서열 7
19D12/15H12 중쇄 A CDR-H1 폴리펩타이드 서열	서열 8
19D12/15H12 중쇄 A CDR-H2 폴리펩타이드 서열	서열 9
19D12/15H12 중쇄 A CDR-H3 폴리펩타이드 서열	서열 10
인슐린-유사 성장 인자 수용체-I(IGFR1)의 아미노산 서열	서열 11
다른 19D12/15H12 중쇄 A	서열 12
CDR-H1 폴리펩타이드 서열
19D12/15H12 경쇄 폴리펩타이드 서열	서열 13
19D12/15H12 중쇄 폴리펩타이드 서열	서열 14

분자 생물학

본 발명에 따라서, 당해 분야의 기술내의 통상의 분자생물학, 미생물학 및 재조합 DNA 기술이 사용될 수 있다. 이러한 기술은 문헌[참조: Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Second Edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (본원에서 "Sambrook, et al., 1989"로 언급); DNA Cloning : A Practical Approach, Volumes I and II (D. N. Glover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. (1985); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins, eds. (1984)); Animal Cell Culture (R. Freshney, ed. (1986)); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, (1986) ) ; B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); F. M. Ausubel, et (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)]에 충분히 설명되어 있다.

"폴리뉴클레오타이드", "핵산" 또는 "핵산 분자"는 리보뉴클레오사이드(아데노신, 구아노신, 우리딘 또는 사이티딘; "RNA 분자") 또는 데옥시리보뉴클레오사이드(데옥시아데노신, 데옥시구아노신, 데옥시티미딘 또는 데옥시사이티딘; "DNA 분자"), 또는 이의 특정의 포스포에스테르 유사체, 예를 들면, 포스포로티오에이트 및 티오에스테르의 포스페이트 에스테르 중합체형의 일본쇄 형태, 이본쇄 형태 등을 언급할 수 있다.

"폴리뉴클레오타이드 서열", "핵산 서열" 또는 "뉴클레오타이드 서열"은 DNA 또는 RNA와 같은 핵산내 일련의 뉴클레오타이드 염기(또한 "뉴클레오타이드"로 불림)이며, 2개 이상의 뉴클레오타이드의 특정 쇄를 의미한다.

"암호화 서열" 또는 RNA, 폴리펩타이드, 단백질 또는 효소와 같은 발현 생성물을 "암호화하는" 서열은, 발현되는 경우, 생성물을 생산하는 뉴클레오타이드 서열이다.

용어 "유전자"는, 예를 들면, 유전자가 발현되는 조건을 측정하는 프로모터 서열과 같은 조절 DNA 서열을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있으며, 하나 이상의 RNA 분자, 단백질 또는 효소 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 또는 리보뉴클레오타이드의 특정 서열에 상응하거나 이를 암호화하는 DNA 서열을 의미한다.

유전자는 DNA로 부터 아미노산 서열로 해독될 수 있거나 해독되지 않을 수 있는 RNA로 전사될 수 있다.

본원에 사용된 것으로서 DNA의 "증폭"은 DNA 서열의 혼합물내에서 특정 DNA 서열의 농도를 증가시키기 위한 폴리머라제 쇄 반응(PCR)의 사용을 나타낼 수 있다. PCR의 기술에 대해서는 문헌[참조: Saiki, et al., Science (1988) 239: 487]을 참조한다. 특정 양태에서, 본 발명은 PCR에 의해 증폭될 수 있는, 항-IGFR1 항체, 항-IGFR1 항체 중쇄 또는 경쇄, 항-IGFR1 항체 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 항-IGFR1 항체 중쇄 또는 경쇄 고정 영역 또는 항-IGFR1 항체 CDR(예: CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 또는 CDR-H3)을 암호화하는 핵산을 포함한다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "올리고뉴클레오타이드"는 유전자, mRNA, cDNA 또는 기타 목적 핵산을 암호화하는 게놈 DNA 분자, cDNA 분자 또는 mRNA 분자에 하이브리드화될 수 있는, 일반적으로 10개 이상(예: 10, 11, 12, 13 또는 14), 바람직하게는 15개 이상(예: 15, 16, 17, 18 또는 19), 및 더욱 바람직하게는 20개 이상의 뉴클레오타이드(예: 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30), 바람직하게는 100개 이하의 뉴클레오타이드(예: 40, 50, 60, 70, 80 또는 90)의 핵산을 말한다. 올리고뉴클레오타이드는 예를 들면 ³²P-뉴클레오타이드, ³H-뉴클레오타이드, ¹⁴C-뉴클레오타이드, ³⁵S-뉴클레오타이드 또는 바이오틴과 같은 표지가 공유 접합되어 있는 뉴클레오타이드를 혼입시킴에 의해 표지시킬 수 있다. 하나의 양태에서, 표지된 올리고뉴클레오타이드는 프로브로서 사용되어 핵산의 존재를 검출할 수 있다. 다른 양태에서, 올리고뉴클레오타이드(이들중 하나 또는 둘다는 표지될 수 있다)는 유전자의 완전한 길이 또는 유전자의 단편을 클로닝하거나, 핵산의 존재를 검출하기 위한 PCR 프라이머로서 사용할 수 있다. 일반적으로, 올리고뉴클레오타이드는 바람직하게는 핵산 합성기상에서 합성적으로 제조한다.

특정의 핵산(예: IGFR1 유전자를 암호화하는 핵산 또는 항-IGFR1 항체 또는 이의 단편 또는 일부를 암호화하는 핵산)의 서열을 당해 분야에 공지된 방법(예: 화학적 클로닝 또는 효소적 서열분석)으로 측정할 수 있다. DNA의 "화학적 서열분석"은, DNA를 개개의 염기-특이적인 반응을 사용하여 무작위적으로 분해하는 문헌[참조: Maxam and Gilbert (1977) (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 560]의 방법과 같은 방법을 나타낼 수 있다. DNA의 "효소적 서열분석"은 생거(Sanger) 등의 방법[참조: Sanger, et al., (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 5463]과 같은 방법을 나타낼 수 있다.

본원의 핵산은 천연의 조절(발현 조절) 서열로 플랭킹될 수 있거나, 또는 프로모터, 내부 리보솜 도입 부위(IRES) 및 기타 리보솜 결합 부위 서열, 인핸서, 반응 성분, 리프레서(repressor), 시그날 서열, 폴리아데닐화 서열, 인트론, 5'- 및 3'-비-암호화 영역 등을 포함하는 이종 서열과 연합될 수 있다..

"프로모터" 또는 "프로모터 서열"은 세포내에서 RNA 폴리머라제를 결합시킬 수 있고(예를 들면, 직접적으로, 또는 기타 프로모터-결합된 단백질 또는 물질을 통해), 암호화 서열(예: LCF 또는 HCA)의 전사를 개시할 수 있는 DNA 조절 영역이다. 프로모터 서열은, 일반적으로, 전사 개시 부위에 의해 이의 3' 말단에서 결합되며 상부(5' 말단)로 연장되어 어떠한 수준에서도 전사를 개시하는데 필수적인 최소 수의 염기 또는 성분들을 포함한다. 프로모터 서열내에는 전사 개시 부위(예를 들면, 뉴클레아제 S1으로 맵핑시킴에 의해 편리하게 정의된), 및 RNA 폴리머라제의 결합에 관여하는 단백질 결합 도메인(콘센수스 서열)이 발견될 수 있다. 프로모터는 인핸서 및 리프레서 서열을 포함하는 기타 발현 조절 서열, 또는 본 발명의 핵산과 작동적으로 연합될 수 있다. 유전자 발현을 조절하는데 사용될 수 있는 프로모터는 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터(미국 특허 제5,385,839호 및 제5,168,062호), SV40 얼리 프로모터 영역[참조: Benoist, et al., (1981) Nature 290: 304-310], 레서스 육종 바이러스(Rous sarcoma virus)의 3' 긴 말단 반복단위내에 함유된 프로모터[참조: Yamamoto, et al., (1980) Cell 22:787-797], 헤르페스 티미딘 키나제 프로모터[참조: Wagner, et al., (1981) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 1441-1445], 메탈로티오네인 유전자의 조절 서열[참조: Brinster, et al., (1982) Nature 296: 39-42]; β-락타마제 프로모터와 같은 원핵세포 발현 벡터[참조: Villa-Komaroff, et al., (1978) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 3727-3731], 또는 tac 프로모터[참조: DeBoer, et al., (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 21-25; 또한 문헌, "Useful proteins from recombinant bacteria"in Scientific American (1980) 242: 74-94]; 및 효모 또는 기타 진균으로부터의 프로모터 성분, 예를 들면, Gal 4 프로모터, ADC(알콜 데하이드로게나제) 프로모터, PGK(포스포글리세롤 키나제) 프로모터 또는 알칼린 포스파타제 프로모터를 포함하나, 이에 한정되지는 않는다.

암호화 서열은, 서열이 암호화 서열의 RNA, 바람직하게는 mRNA내로의 RNA 폴리머라제 매개된 전사를 지시하고, 이후에 mRNA는 트랜스-RNA 스플라이싱(이것이 인트론을 함유하는 경우)되고 임의로, 암호화 서열에 의해 암호화된 단백질로 해독되는 경우, 세포내에서 전사 및 해독 조절 서열 "의 조절하에" 있거나, 당해 서열과 "작용적으로 관련되거나", 또는 "당해 서열과 "작동적으로 관련된다".

용어 "발현하다" 및 "발현"은 유전자, RNA 또는 DNA 서열내 정보의 증식을 허용하거나 유발하는 것, 예를 들면 상응하는 유전자의 전사 및 해독에 포함된 세포 작용을 활성화시킴으로써 단백질을 생산하는 것을 의미한다. DNA 서열은 세포내에서 또는 세포에 의해 발현되어 RNA(예: mRNA) 또는 단백질과 같은 '발현 생성물"을 형선한다. 발현 생성물 자체는 또한 세포에 의해 "발현된" 것으로 일컬어질 수 있다.

용어 "벡터", "클로닝 벡터" 및 "발현 벡터"는, DNA 또는 RNA 서열이 숙주 세포내로 도입되어 숙주를 형질전환시키고, 임의로, 도입된 서열의 발현 및/또는 복제를 촉진하는 비히클(예: 플라스미드)를 의미한다.

용어 "형질감염" 또는 "형질전환'은 핵산의 세포내로의 도입을 의미한다. 당해 용어는 항-IGFR1 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산을 세포내로 도입시키는 것을 언급할 수 있다. 도입된 유전자 또는 서열은 "클론"으로 일컬어진다. 도입된 DNA 또는 RNA를 받은 숙주 세포는 "형질전환"되며 "형질전환체" 또는 "클론"이다. 숙주 세포로 도입된 DNA 또는 RNA는 숙주 세포와 동일한 속 또는 종의 세포, 또는 상이한 속 또는 종의 세포를 포함하는 어떠한 공급원으로부터도 기원할 수 있다.

용어 "숙주 세포"는 선택되거나, 개질되거나, 형질감염되거나, 형질전환되거나, 성장하거나, 또는 세포에 의해 물질을 생산하기 위해, 예를 들면, 세포에 의해 유전자, DNA 또는 RNA 서열, 단백질 또는 효소의 발현 또는 복제를 위해 어떠한 방식으로 사용되거나 또는 조작된 어떠한 유기체의 어떠한 세포를 의미한다.

용어 "발현 시스템"은 적합한 조건하에서 벡터에 의해 수행되고 숙주 세포로 도입된 단백질 또는 핵산을 발현할 수 있는 상용성 벡터 및 숙주 세포를 의미한다. 일반적인 발현 시스템은 이. 콜라이(E. coli) 숙주 세포 및 플라스미드 벡터, 곤충 숙주 세포 및 바큘로바이러스 벡터, 및 포유동물 숙주 세포 및 벡터를 포함한다. 특정 양태에서, 본 발명의 IGFR1 또는 항체 및 항원-결합 단편은 사람 배아 신장 세포(HEK293)에서 발현될 수 있다. 기타 적합한 세포는 CHO(차이니즈 햄스터 난소) 세포, HeLa 세포 및 NIH 3T3 세포 및 NSO 세포(비-Ig 생산 쥐 흑색종 세포주)내에서 발현될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편을 암호화하는 핵산인, sIGFR1(상기 참조) 또는 IGFR1은 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제4,952,496호, 제5,693,489호 및 제5,869,320호, 및 문헌[참조: Davanloo, P., et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 2035-2039; Studier, F. W., (1986) J. Mol. Biol. 189: 113-130; Rosenberg, A. H., et al., (1987) Gene 56: 125-135; 및 Dunn, J. J., et al., (1988) Gene 68: 259]에 기술된 바와 같은 이. 콜라이/T7 발현 시스템에서 고 수준으로 발현될 수 있다.

본 발명은 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편에 상응하는 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열에 대해 어떠한 인공의 또는 약간의 변형을 고려한다. 특히, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편을 암호화하는 핵산의 서열 보전적 변이체를 고려한다. 폴리뉴클레오타이드 서열의 "서열 보전 변이체"는, 제공된 코돈에서 하나 이상의 뉴클레오타이드의 변화가 당해 위치에서 암호화된 아미노산에서 변형을 초래하지 않는 것들이다. 본 발명의 항체의 작용-보존 변이체가 또한 본 발명에 의해 고려된다. "작용-보전 변이체"는, 단백질 또는 효소내 하나 이상의 아미노산 잔기가 아미노산의 유사 특성을 갖는 다른 것으로의 치환을 포함하나 이에 한정되지 않는 폴리펩타이드의 전체 구조 및 작용을 변형시키지 않고 변화된 것들이다. 유사한 특성을 갖는 아미노산은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 상호교환적일 수 있는 극성/친수성 아미노산은 아스파라긴, 글루타민, 세린, 시스테인, 트레오닌, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산 및 글루탐산을 포함하며; 상호교환적일 수 있는 비극성/소수성 아미노산은 글라이신, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 프롤린, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판 및 메티오닌을 포함하며; 상호교환적일 수 있는 산성 아미노산은 아스파르트산 및 글루탐산을 포함하고 상호교환적일 수 있는 염기성 아미노산은 히스티딘, 라이신 및 아르기닌을 포함한다.

본 발명은 표 1에 기술된 바와 같은 핵산에 의해 암호화된 항-IGFR1 항체 및 이의 단편, 및 이에 하이브리드화되는 핵산을 포함한다. 바람직하게는, 핵산은 저 스트링전트 조건(stringency condition), 더욱 바람직하게는 온화한 스트링전트 조건 및 가장 바람직하게는 고 스트링전트 조건하에 하이브리드화되며, 바람직하게는 IGFR1 결합 활성을 나타낸다. 핵산 분자는, 핵산 분자의 일본쇄 형이 적절한 조건의 온도 및 용액 이온 강도(참조: Sambrook, et al., 상기 참조)하에서 다른 핵산 분자에 어닐링될 수 있는 경우, cDNA, 게놈 DNA 또는 RNA와 같은 다른 핵산 분자에 "하이브리드화가능"하다. 온도 및 이온 강도의 조건은 하이브리드화의 "스트링전트"를 결정한다. 통상적인 저 스트링전트 하이브리드화 조건은 55℃, 5X SSC, 0.1% SDS 및 포름아미드 미 포함; 또는 42℃에서 30% 포름아미드, 5X SSC, 0.5% SDS를 포함한다. 통상적으로, 온화한 스트링전트 하이브리드화 조건은, 하이브리드화가 40% 포름아미드중에서, 42℃에서 5X 또는 6X SSC 및 0.1% SDS를 사용하여 수행되는 경우를 제외하고는 저 스트링전트 조건과 유사하다. 고 스트링전트 하이브리드화 조건은, 하이브리드화 조건이 42℃ 또는 임의로 고온(예: 57℃, 59℃, 60℃, 62℃, 63℃, 65℃ 또는 68℃)에서 50% 포름아미드, 5X 또는 6X SSC하에 수행되는 것을 제외하고는 저 스트링전트 조건과 유사하다. 일반적으로, SSC는 0.15M NaCl 및 0.015M Na-시트레이트이다. 하이브리드화는, 비록 하이브리드화의 스트링전트에 따라 염기간의 부조화가 가능하다 할지라도, 2개의 핵산이 상보 서열을 함유하는 것을 필요로 한다. 핵산을 하이브리드화하기에 적절한 스트링전트는 핵산의 길이 및 보충 정도, 당해 분야에 잘 공지된 변수에 따른다. 2개의 뉴클레오타이드 서열간의 유사성 또는 동질성의 정도가 클수록, 핵산이 하이브리드화될 수 있는 스트링전트가 높다. 길이가 100개 이상의 뉴클레오타이드인 하이브리드의 경우, 용융 온도를 계산하기 위한 방정식이 유도되어 있다(참조: Sambrook, et al., 상기 참조, 9.50-9.51). 보다 짧은 핵산, 즉, 올리고뉴클레오타이드를 사용한 하이브리드화의 경우, 부조화 위치는 더욱 중요하며, 올리고뉴클레오타이드의 길이는 이의 특이성을 결정한다(참조: Sambrook, et al., 상기 참조, 11.7-11.8).

또한, 본 발명에는, 알고리즘의 매개변수를 선택하여 각각의 참조 서열의 전체 길이에 걸쳐 각각의 서열사이에 최대 조화를 제공하는 BLAST 알고리듬으로 비교를 수행하는 경우 표 1의 참조 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열에 대해 약 70% 이상 동일한, 바람직하게는 약 80% 이상 동일한, 더욱 바람직하게는 약 90% 이상 동일한 및 가장 바람직하게는 약 95% 이상 동일한(예를 들면, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 및 100%) 아미노산 서열을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 폴리펩타이드 서열을 포함하는 핵산이 포함된다. 알고리즘의 매개변수를 선택하여 각각의 참조 서열의 전체 길이에 걸쳐 각각의 서열간에 최대 조화를 제공하는 BLAST 알고리즘을 사용하여 비교를 수행하는 경우, 표 1의 참조 아미노산 서열의 어느 것에 대해서 약 70% 이상 유사한, 바람직하게는 약 80% 이상 유사한, 더욱 바람직하게는 약 90% 이상 유사한 및 가장 바람직하게는 약 95% 이상 유사한(예를 들면, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%) 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드가 또한 본 발명에 포함된다.

서열 동질성은 비교하는 2개 서열의 뉴클레오타이드 또는 아미노산간의 정확한 조화를 말한다. 서열 유사성은 동일하지 않거나, 생화학적으로 관련된 아미노산간의 조화외에 비교되는 2개의 폴리펩타이드의 아미노산간의 정확한 조화 둘다를 말한다. 유사한 특성을 공유하며 상호교환적일 수 있는 생화학적으로 관련된 아미노산은 상기 논의되어 있다.

BLAST 알고리즘에 관한 다음 문헌은 본원에 참조로 인용된다: BLAST ALGORITHMS : Altschul, S. F., et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish, W., et al., (1993) Nature Genet. 3: 266-272; Madden, T. L., et al., (1996) Meth. Enzymol. 266: 131-141; Altschul, S. F., (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402; Zhang, J., et al., (1997) Genome Res. 7: 649-656; Wootton, J. C., et al., (1993) Comput. Chem. 17: 149-163; Hancock, J. M. et al., (1994) Comput. Appl. Biosci. 10: 67-70; ALIGNMENT SCORING SYSTEMS: Dayhoff, M. O., et al., "A model of evolutionary change in proteins."in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M. O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found. , Washington, DC; Schwartz, M., et al., "Matrices for detecting distant relationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. "M. O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S. F., (1991) J. Mol. Biol. 219: 555-565; States, D. J., et al., (1991) Methods 3: 66-70; Henikoff, S., et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919; Altschul, S. F., et al., (1993) J. Mol. Evol. 36: 290-300; ALIGNMENT STATISTICS : Karlin, S., et al., (1990) Prob. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268: Karlin, S., et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873-5877; Dembo, A., et al., (1994) Ann. Prob. 22: 2022-2039; 및 Altschul, S. F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments. "in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed. ), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York.

항체 구조

일반적으로, 염기성 항체 구조 단위는 사량체를 포함하는 것으로 알려져 있다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩타이드 쇄를 포함하며, 각각의 쌍은 하나의 "경"(약 25kDa) 및 하나의 "중"쇄(약 50 내지 70kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부위는 항원 인지에 주로 관여하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함할 수 있다. 각각의 쇄의 카복시-말단 부위는 효과기 작용에 주로 관여하는 고정 영역을 정의할 수 있다. 통상적으로, 사람 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로 분류된다. 또한, 사람 중쇄는 통상적으로 mu, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로 분류되며, 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE와 같은 항체 동형을 정의한다. 경쇄 및 중쇄내에서, 가변 및 고정 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 또한 포함하는 중쇄와 결합된다[참조: 모든 목적을 위해 이의 전문이 참조로 인용된 문헌, Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N. Y. (1989)].

각각의 경/중쇄 쌍의 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 즉, 일반적으로, 완전한 IgG 항체는 2개의 결합 부위를 갖는다. 이작용성 또는 이특이적 항체외에, 2개의 결합 부위는 일반적으로 동일하다.

일반적으로, 쇄들 모두는 또한 상보성 결정 영역 또는 CDR로 불리는 3개의 초가변 영역에 결합된 비교적 보존된 골격 영역(FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각각의 쌍의 2개의 쇄로부터의 CDR은 일반적으로 골격 영역에 의해 정렬되어, 특이적 에피토프에 결합할 수 있다. 일반적으로, N-말단에서 C-말단까지, 경쇄 및 중쇄 둘다는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 대한 아미노산의 정렬은 일반적으로 문헌[참조: Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.,; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5^th ed. ; NIH Publ. No. 91-3242(1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32: 1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252: 6609-6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196: 901-917 또는 Chothia. et al., (1989) Nature 342: 878-883]에 따른다.

결합 조성물

본 발명의 조합물의 결합 조성물은 IGFR1에 특이적으로 결합하는 어떠한 조성물도 포함한다. 결합 조성물 또는 결합제는 예를 들면, 천연의 생리학적으로 관련된 단백질-단백질 상호작용시, 공유 또는 비-공유결합으로 예를 들면, 리간드-수용체 유형 양식 또는 항체-항원 상호작용으로 IGFR1에 대해 특이성으로 결합하는 분자, 예를 들면, EGFR1에 특이적으로 관련된 단백질을 말한다. 용어 "결합 조성물"은 본 발명의 소 유기 분자, 핵산 및 폴리펩타이드, 예를 들면, 완전한 항체(바람직하게는 분리된 모노클로날 사람 항체) 또는 이의 항원-결합 단편(예: 항체 19D12/15H12, 항체 19D12/15H12 LCF/HCA 또는 표 1에 설정된 특정 펩타이드)를 포함한다.

항체 및 이의 항원 결합 단편은 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 이특이적 항체, Fab 항체 단편, F(ab)₂ 항체 단편, Fv 항체 단편(예: V_H 또는 V_L), 일본쇄 Fv 항체 단편 및 dsFv 항체 단편을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 본 발명의 항체는 완전한 사람 항체 또는 키메라 항체일 수 있다.

본 발명의 조합물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 2003년 5월 22일자로 출원된 미국 특허원 제10/443,466호 및 제WO03/100008호에 설정된 바와 같은 이러한 항체 또는 항원-결합 단편을 암호화하는 특정의 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 바람직하게는, 항체 분자는 분리된 모노클로날, 완전한 사람 항체이다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 서열 5 내지 10중 어느 하나에 설정된 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의, 더욱 바람직하게는 모든 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 성숙한 19D12/15H12 중쇄 A(HCA)(서열 4)와 쌍을 이루는 성숙한 19D12/15H12 경쇄 F(LCF)(참조: 서열 2)(예: 모노클로날의 완전한-사람 항체 19D12/15H12 LCF/HCA)를 포함한다.

바람직한 항체 쇄의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열은 하기 나타낸다. 점선의, 밑줄친 유형은 시그날 펩타이드를 나타낸다. 검은선의 밑줄친 유형은 CDR을 나타낸다. 명료한 유형은 골격 영역을 나타낸다. 하나의 양태에서, 항체 쇄는 시그날 펩타이드를 결실한 성숙한 단편이다.

19D12/15H12 경쇄-F (LCF; 서열 1)

(서열 2)

19D12/15H12 중쇄-A (HCA; 서열 3)

(서열 4)

15H12/19D12 LCF(κ)(서열 1 및 2의 가변 영역 서열), 15H12/19D12 HCA(γ4)(서열 3 및 4의 가변 영역 서열) 또는 15H12/19D12 HCA(γ1)(서열 3 및 4의 가변 영역 서열)에 작동적으로 연결된 CMV 프로모터를 포함하는 3개의 플라스미드는 2003년 5월 21일자로 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection(ATCC); 미국 버지니아주 20110-2209 마나사스 유니버시티 불러바드 10801 소재]에 기탁되어있다. 당해 플라스미드에 대한 기탁명 및 ATCC 수탁 번호는 하기에 나타낸다:

CMV 프로모터-15H12/19D12 HCA (γ4)-

기탁명: "15H12/19D12 HCA(γ4)";

ATCC 수탁번호: PTA-5214;

CMV 프로모터-15H12/19D12 HCA(γ1)-

기탁명: "15H12/19D12 HCA(γ4)";

ATCC 수탁번호: PTA-5216;

CMV 프로모터-15H12/19D12 LCF(κ)-

기탁명: "15H12/19D12 LCF (κ)";

ATCC 수탁 번호: PTA-5220.

ATCC에 기탁된 플라스미드에 대한 접근에 있어서의 모든 제한은 특허의 승인시 제거될 것이다.

각각의 상기 언급한 플라스미드는 본 발명의 일부를 구성한다. 또한 각각의 발현 카세트내 위치한 핵산은, 당해 핵산내 면역 글로불린 가변 영역과 함께, 임의로 면역 글로불린 고정 영역을 포함하는, 이의 성숙한 프로세싱된 버젼(즉, 시그날 서열을 결실하고 있는 버젼), 특히 서열 3, 성숙한 HCA(서열 3의 뉴클레오타이드 58 내지 411번), 서열 1 또는 성숙한 LCF(서열 1의 뉴클레오타이드 58 내지 384번)과 함께, 임의로 면역 글로불린 고정 영역을 포함하는 성숙한 또는 프로세싱되지 않은 쇄를 포함하는 상기 핵산중 어느 것에 의해 암호화된 어떠한 폴리펩타이드와 함께 본 발명의 일부를 구성한다. 또한, 암호화된 폴리펩타이드중 하나를 포함하는 어떠한 항체 또는 이의 항원-결합 단편도 본 발명의 일부이다.

본 발명의 영역은 어떠한 면역 글로불린 고정 영역에 연결된 본 발명의 항체 가변 영역(즉, 표 1에 나타낸 성숙하거나 프로세싱되지 않은 어떠한 가변 영역)을 포함한다. 경쇄 가변 영역이 고정 영역에 연결될 경우, 바람직하게 이는 κ쇄이다. 중쇄 가변 영역이 고정 영역에 연결되는 경우, 바람직하게 이는 γ1, γ2, γ3 또는 γ4 고정 영역, 더욱 바람직하게는 γ1, γ2 또는 γ4 및 더욱 더 바람직하게는 γ1 또는 γ4이다.

본 발명의 항-IGFR1 항체 분자는 바람직하게는 사람 IGFR1, 바람직하게는 IGFR1의 가용성 단편(즉, sIGFR1), 예를 들면, 서열 11의 아미노산 30 내지 902번을 인지하나; 본 발명은 상이한 종, 바람직하게는 포유동물(예: 마우스, 랫트, 토끼, 양 또는 개)로부터의 IGFR1을 인지하는 항체 분자를 포함한다.

본 발명은 또한 항-IGFR1 항체(예: LCF/HCA) 또는 IGFR1 또는 이의 단편(예: 서열 11의 아미노산 30 내지 902번과 같은 sIGFR1) 또는 세포 표면[예: 사람 IGFR1 또는 MCF7로 안정하게 형질전환된 HEK293 세포(예: ATCC 세포 주 제HTB-22호)]상에서 IGFR1 또는 이의 어떠한 일부 또는 단편을 발현하는 특정 세포와 착화되는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 이러한 복합체는 항체 또는 항체 단편을 IGFR1 또는 IGFR1 단편과 접촉시켜 제조할 수 있다.

바람직한 양태에서, IGFR1에 대해 지시된 완전한-사람 모노클로날 항체는 마우스 시스템보다는 사람 면역 시스템의 일부를 수반하는 유전자도입 마우스를 사용하여 생성시킨다. 본원에서 "HuMAb" 마우스라고 언급될 수 있는 이러한 유전자도입 마우스는 내인성 μ 및 κ 쇄 부위를 불활성화시키는 표적화된 돌연변이와 함께 재배열되지 않은 사람 중(μ 및 γ) 및 κ 경쇄 면역 글로불린 서열을 암호화하는 사람 면역 글로불린 유전자 소부위를 함유한다[참조: Lonberg, N., et al., (1994) Nature 368 (6474): 856-859]. 따라서, 마우스는 마우스 IgM 또는 κ의 감소된 발현을 나타내며 면역화에 대한 반응시, 도입된 사람 중쇄 및 경쇄 삽입유전자(transgene)는 부류 스위칭(class switching) 및 체세포 돌연변이를 겪으면서 고 친화성 사람 IgGκ 모노클로날 항체를 생성한다[참조: Lonberg, N., et al., (1994), 상기 참조; reviewed in Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113: 49-101; Lonberg, N., et al., (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93, 및 Harding, F., et al., (1995) Ann. N. Y Acad. Sci 764: 536-546]. HuMab 마우스의 제조는 일반적으로 당해 분야에 알려져 있으며 예를 들면, 이의 전문이 모두 본원에 참조로 인용된 문헌[참조: Taylor, L., et al., (1992) Nucleic Acids Research 20: 6287-6295; Chen, J., et al., (1993) International Immunology 5: 647-656; Tuaillon, et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci USA 90: 3720-3724; Choi, et al., (1993) Nature Genetics 4: 117-123; Chen, J., et al., (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon, et al., (1994) J Immunol. 152: 2912-2920; Lonberg, et al., (1994) Nature 368 (6474): 856-859; Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113: 49-101; Taylor, L., et al., (1994) International Immunology 6 : 579-591; Lonberg, N., et al., (1995) Intern. Rev. Immunol. Vol. 13: 65-93; Harding, F., et al., (1995) Ann. N. Y Acad. Sci 764: 536-546; Fishwild, D., et al., (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851 및 Harding, et al., (1995) Annals NY Acad. Sci. 764: 536-546]에 기술되어 있다. 또한 이의 전문이 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,789,650호; 제5,877,397호; 제5,661,016호; 제5,814,318호; 제5,874,299호; 제5,770,429호 및 제5,545,807호; 및 국제 특허원 공보 제WO 98/24884호; 제WO 94/25585호; 제WO 93/12227호; 제WO 92/22645호 및 제WO 92/03918호를 참조한다.

IGFR1에 대한 완전한 사람, 모노클로날 항체를 생성시키기 위하여, HuMab 마우스를 문헌[참조: Lonberg, N., (1994) Nature 368 (6474): 856-859; Fishwild, D., et al., (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851 및 제WO 98/24884호]에 기술된 바와 같이 항원성 IGFR1 폴리펩타이드, 바람직하게는 서열 11의 아미노산 30 내지 902번을 사용하여 면역화시킬 수 있다. 바람직하게는, 마우스는 처음 면역화후 6 내지 16주령일 것이다. 예를 들면, IGFR1 또는 sIGFR1의 정제된 제제는 복강내로 HuMab 마우스를 면역화시키는데 사용할 수 있다. 마우스는 또한 IGFR1 유전자로 안정하게 형질감염된 전 HEK293 세포로 면역화시킬 수 있다. "항원성 IGFR1 폴리펩타이드"는 이의 어떠한 단편의 IGFR1 폴리펩타이드, 바람직하게는 HuMab 마우스내에서 항-IGFR1 면역 반응을 유발하는 바람직하게는 서열 11의 아미노산 30 내지 902번을 언급할 수 있다.

일반적으로, HuMAb 유전자도입 마우스는 완전 프루언트 항원보강제중 항원을 복강내(IP)로 초기 면역화시킨 후 불완전 프루언트 항원보강제중 항원을 사용하여 매 다른 주에 IP 면역화(일반적으로 총 6주까지)시키는 경우에 잘 반응한다. 마우스는 우선 IGFR1을 발현하는 세포(예: 안정하게 형질감염된 HEK293 세포)로 면역화시킨 후 IGFR1의 가용성 단편(예: 서열 11의 아미노산 30 내지 902번)으로 면역화시키며 연속해서 2개 항원으로 교호적으로 면역화시킨다. 면역 반응은 안와후 방혈에 의해 수득되는 혈장 샘플을 사용하는 면역화 프로토콜의 과정에 걸쳐 모니터할 수 있다. 혈장을 예를 들면, ELISA에 의해 항-IGFR1 항원의 존재에 대해 스크리닝할 수 있으며, 충분한 역가의 면역 글로불린을 지닌 마우스를 융합에 사용할 수 있다. 마우스는 참수시켜 비장을 제거하기 3일 전에 항원을 정맥내로 부스트할 수 있다. 각각의 항원에 대해 2 내지 3회 융합이 수행을 위해 요구될 수 있는 것으로 예측된다. 몇면 마우스를 각각의 항원에 대해 면역화할 수 있다. 예를 들면 HC07 및 HC012 균주의 총 12마리의 HuMAb 마우스를 면역화시킬 수 있다.

모노클로날의, 완전한 사람 항-IGFR1 항체를 생산하는 하이브리도마 세포는 당해 분야에 일반적으로 공지된 방법으로 생산할 수 있다. 이들 방법은 코흘러(Kohler) 등에 의해 초기 개발된 하이브리도마 기술[참조: Kohler, et al., (1975) (Nature 256: 495-497)], 및 트리오마 기술[참조: Hering, et al., (1988) Biomed. Biochim. Acta. 47: 211-216 및 Hagiwara, et al., (1993) Hum. Antibod. Hybridomas 4: 15], 사람 B-세포 하이브리도마 기술[참조: Kozbor, et al., (1983) Immunology Today 4: 72 및 Cote, et al., (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 80: 2026- 2030], 및 EBV-하이브리도마 기술[참조: Cole, et al., in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96, 1985]을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, 마우스 비장세포를 분리하여 PEG를 사용하여 표준 프로토콜을 기초로 마우스 골수종 세포주에 융합시킨다. 다음 수득되는 하이브리도마를 항원-특이적 항체의 생산에 대해 스크리닝할 수 있다. 예를 들면, 면역화된 마우스로부터의 비장 림프세포의 단일 세포 현탁액을 50% PGE를 사용하여 P3X63-Ag8653 비-분비 마우스 골수종 세포(ATCC, CRL 1580) 수의 1/6에 융합시킬 수 있다. 세포를 평편바닥 미세역가 플레이트내에 대략 2 x 10⁵ 세포/mL에서 플레이팅한 후 20% 태아 클론 혈청, 18% "653" 조건화된 배지, 5% 오리젠(IGEN), 4mM L-글루타민, 1mM L-글루타민, 1mM 나트륨 피루베이트, 5mM HEPES, 0.055mM 2-머캅토에탄올, 50 단위/ml 페니실린, 50mg/ml의 스트렙토마이신, 50mg/ml 젠타마이신 및 1X HAT(Sigma 제조원, HAT는 융합후 24시간 째에 가한다)을 함유하는 선택 배지속에서 2주 배양한다. 2주 후, 세포를 HAT가 HT로 대체된 배지속에서 배양할 수 있다. 이후에 개개의 웰을 사람 항-IGFR1 모노클로날 IgG 항체에 대해 ELISA로 스크리닝할 수 있다. 강력한 하이브리도마 성장이 일어나면, 배지는 일반적으로 10 내지 14일 후에 관측할 수 있다. 항체 분비 하이브리도마를 재플레이팅하고, 다시 스크리닝하며, 여전히 사람 IgG, 항-IGFR1 모노클로날 항체에 대해 양성인 경우, 제한 희석에 의해 2회 이상 아클로닝할 수 있다. 이후에 안정한 아클론을 시험관내에서 배양하여 특성화용 조직 배양 배지에서 소량의 항체를 생성시킬 수 있다.

본 발명의 항-IGFR1 항체 및 항원-결합 단편은 또한 재조합적으로(예를 들면, 상기 논의한 바와 같이 이. 콜라이/T7 발현 시스템내에서) 제조할 수 있다. 당해 양태에서, 본 발명의 항체 분자를 암호화하는 핵산(예: V_H 또는 V_L)은 pET계 플라스미드내로 삽입시키고 이.콜라이/T7 시스템내에서 발현시킬 수 있다. 당해 분야에 공지된 재조합 항체를 제조하는 몇가지 방법들이 존재한다. 항체를 재조합 생산하는 방법 중 하나는 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제4,816,567호에 기재되어 있다. 형질전환은 폴리뉴클레오타이드를 숙주 세로내로 도입시키는 어떠한 공지된 방법으로도 달성할 수 있다. 포유동물 세포내로 이종 폴리뉴클레오타이드를 도입하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며 덱스트란-매개된 형질감염, 캄슐 포스페이트 침전, 폴리브렌-매개된 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 리포좀내 폴리뉴클레오타이드의 봉입, 바이오리스틱 주입(biolistic injection) 및 DNA의 핵내로의 직접적인 미세주입을 포함한다. 또한, 핵산 분자는 바이러스 벡터에 의해 포유동물 세포내로 도입시킬 수 있다. 세포를 형질전환시키는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다(참조: 미국 특허 제4,399,216호; 제4,912,040호; 제4,740,461호 및 제4,959,455호).

항-IGFR1 항체는 또한 미국 특허 제6,331,415호에 설정된 어떠한 방법으로도 합성할 수 있다.

발현용 숙주로서 이용가능한 포유동물 세포주는 당해 분야에 잘 공지되어 있으며 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)으로부터 이용가능한 많은 무한증식 세포를 포함한다. 이들은 특히, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, NSO, SP2 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 사람 간세포 암종 세포(예: Hep G2), A549 세포, 3T3 세포, HEK-293 세포 및 다수의 다른 세포주를 포함한다. 포유동물 숙주 세포는 사람, 마우스, 랫트, 개, 원숭이, 돼지, 염소, 소, 말 및 햄스터 세포를 포함한다. 특히 바람직한 세포주는, 높은 발현 수준을 지닌 세포주를 측정함을 통해 선택한다. 사용될 수 있는 기타 세포주는 Sf9 세포와 같은 곤충 세포, 양서류 세포, 세균 세포, 식물 세포 및 진균 세포이다. 중쇄 또는 이의 항원-결합 부위, 경쇄 및/또는 이의 항원-결합 부위를 암호화하는 재조합 발현 벡터를 포유동물 숙주 세포내로 도입시키는 경우, 항체는 숙주 세포를, 당해 숙주 세포내에서 항체를 발현시키거나, 더욱 바람직하게는, 숙주 세포가 성장하는 배양 배지내로 항체를 분비하는데 충분한 기간 동안 배양함으로써 생산한다.

항체는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 회수할 수 있다. 또한, 생산 세포로부터 본 발명의 항체(또는 이로부터의 기타 잔기)의 발현은 다수의 공지된 기술을 사용하여 증진시킬 수 있다. 예를 들어, 글루타민 신테타제 유전자 발현 시스템(GS 시스템)은 특정 조건하에서 발현을 증진시키기 위한 일반적인 시도이다. GS 시스템은 유럽 특허 제0 216 846호, 제0 256 055호 및 제0 323 997호 및 유럽 특허원 제89303964.4호와 관련하여 전체 또는 일부 논의되어 있다.

상이한 세포주에 의해 또는 유전자삽입 동물내에서 발현된 항체는 각각 서로 상이한 글리코실화를 지닐 것이다. 그러나, 본원에 제공된 핵산 분자에 의해 암호화되거나 본원에서 제공된 아미노산 서열을 포함하는 모든 항체는 항체의 글리코실화에 상관없이 본 발명의 일부이다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 말하는데, 즉, 당해 집단을 포함하는 개개의 항체는, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연적으로 존재하는 돌연변이에 대한 것을 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이며 단일 항원성 부위에 대해 지시된다. 모노클로날 항체는, 이들이 하이브리도마 배양물에 의해 합성되며, 필수적으로 다른 면역 글로불린에 의해 오염되지 않을 수 있다는 점에서 유리하다. 개질제 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 동종인 집단중에서의 항체의 특성을 나타내며, 특정 방법에 의한 항체의 집단을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 상기 언급한 바와 같이, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 문헌[참조: Kohler, et (1975) Nature 256: 495]에 최초 기술된 하이브리도마 방법에 의해 생산될 수 있다.

폴리클로날 항체는 하나 이상의 기타 동일하지 않은 항체중에서 또는 이의 존재하에서 생산된 항체이다. 일반적으로, 폴리클로날 항체는 동일하지 않은 항체를 생산한 몇몇의 기타 B-림프세포의 존재하에서 B-림프세포로부터 생산된다. 통상, 폴리클로날 항체는 면역화된 동물로부터 직접 수득된다.

이특이적 또는 이작용성 항체는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍을 지니며 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 항체이다. 이특이적 항체는 Fab' 단편의 연결 또는 하이브리도마의 융합을 포함하는 각종의 방법으로 생산할 수 있다[참조: Songsivilai, et al., (1990) Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321, Kostelny, et al., (1992) J Immunol. 148 1547-1553]. 또는 이특이적 항체는 "디아보디"[참조: Holliger, et al., (1993) PNAS USA 90:6444-6448] 또는 "자누신스(Janusins)"[참조: Traunecker, et al., (1991) EMBO J. 10: 3655-3659 및 Traunecker, et al., (1992) Int. J. Cancer Suppl. 7: 51-52]로서 형성될 수 있다.

용어 "완전한 사람 항체"는, 사람 면역 글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 말한다. 완전한 사람 항체는 마우스, 마우스 세포 또는 마우스 세포로부터 기원한 하이브리도마에서 생산되는 경우 쥐 탄수화물 쇄를 함유할 수 있다. 유사하게, "마우스 항체"는 마우스 면역 글로불린 서열만을 포함하는 항체를 말한다.

본 발명은 "키메라 항체", 즉 다른 비-사람 종(예: 마우스, 말, 토끼, 개, 소, 닭)으로부터 항체 영역(예: 고정 영역)과 키메라되거나 융합된 본 발명의 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다. 이들 항체는 비-사람 종에서 IGFR1의 발현 또는 활성을 조절하는데 사용할 수 있다.

"일본쇄 Fv" 또는 "sFv 항체 단편"은 항체의 V_H 및 V_L 도메인을 지니며, 여기서, 이들 도메인은 단일 폴리펩타이드 쇄내에 존재한다. 일반적으로, sFv 폴리펩타이드는 또한 sFv가 항원 결합을 위한 바람직한 구조를 형성할 수 있도록 하는 V_H 및 V_L 도메인사이의 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함한다. 일본쇄 항체를 생산하기 위해 기술된 기술(미국 특허 제5,476,786호; 제5,132,405호 및 제4,946,778호)을 항-IGFR1-특이적인 일본쇄 항체를 생산하기 위해 채택할 수 있다. sFv의 고찰을 위해서는 문헌[참조: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, N. Y., pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.

"이황화물 안정화된 Fv 단편" 및 "dsFv"는 이황화물 브릿지에 의해 연결된 가변성 중쇄(V_H) 및 가변성 경쇄(V_L)를 포함하는 항체 분자를 말한다.

본 발명의 영역내 항체 단편은 예를 들면, 펩신에 의해 IgG의 효소적 분해로 생산할 수 있는 F(ab)₂ 단편을 포함한다. Fab 단편은 예를 들면, F(ab)₂를 디티오트레이톨 또는 머캅토에틸아민으로 환원시켜 생산할 수 있다. Fab 단편은 이황화물 브릿지에 의해 V_H-C_H1 쇄로 확장된 V_L-C_L 쇄이다. F(ab)₂ 단편은 결국 2개의 이황화물 브릿지에 의해 확장되는 2개의 Fab 단편이다. F(ab)₂ 분자의 Fab 부위는 이황화물 브릿지가 위치한 Fc 영역의 일부를 포함한다.

Fv 단편은 V_L 또는 V_H 영역이다.

이들의 중쇄의 고정 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 면역 글로불린을 상이한 부류로 지정할 수 있다. 5개 이상의 주요 부류의 면역 글로불린: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하며, 이들 중 몇몇은 또한 아부류(동형), 예를 들면, IgG-1, IgG-2, IgG-3 및 IgG-4; IgA-1 및 IgA-2로 분리할 수 있다.

본 발명의 항-IGFR1 항체 분자는 또한 화학 잔기에 접합시킬 수 있다. 화학 잔기는 특히 중합체, 방사핵종 또는 세포독성 인자일 수 있다. 바람직하게는, 화학 잔기는 대상체내에서 항체 분자의 반감기를 증가시키는 중합체이다. 적합한 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)(예: 분자량이 2kDa, 5kDa, 10kDa, 12kDa, 20kDa, 30kDa 또는 40kDa인 PEG), 덱스트란 및 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜(mPEG)를 포함하나, 이에 한정되지는 않는다. 문헌[참조: Lee, et al., (1999) (Bioconj. Chem. 10: 973-981]은 PEG 접합된 일본쇄 항체를 기술하고 있다. 문헌[참조: Wen, et al., (2001) (Bioconj. Chem. 12: 545-553]은 항체를 방사금속 킬레이터[디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA)]에 부착된 PEG와 접합시키는 것을 기술하고 있다.

본 발명의 항체 및 항체 단편은 또한 ⁹⁹Tc, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ³²P, ¹⁴C, ¹²⁵I, ³H, ¹³¹I, ¹¹C, ¹⁵O, ¹³N, ¹⁸F, ³⁵S, ⁵¹Cr, ⁵⁷To, ²²⁶Ra, ⁶⁰Co, ⁵⁹Fe, ⁵⁷Se, ¹⁵²Eu, ⁶⁷CU, ²¹⁷Ci, ²¹¹At, ²¹²Pb, ⁴⁷Sc, ¹⁰⁹Pd, ²³⁴Th, 및 ⁴⁰K, ¹⁵⁷Gd, ⁵⁵Mn, ⁵²Tr 및 ⁵⁶Fe와 같은 표지로 접합시킬 수 있다.

본 발명의 항체 및 항체 단편은 또한 희토 킬레이트, 플루오레세인 및 이의 유도체와 같은 형광단, 로다민 및 이의 유도체, 이소티오시아네이트, 피코에리트린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, o-프탈알데하이드, 플루오레스카민, ¹⁵²Eu, 단실, 움벨리페론, 루시페린, 루미날 표지, 이소루미날 표지, 방향족 아크리디늄 에스테르 표지, 이미다졸 표지, 아크리디뮴 염 표지, 옥살레이트 에스테르 표지, 애쿼린 표지, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 바이오틴/아비틴, 스핀 표지 및 안정한 유리 라디칼을 포함하는 형광성 표지 또는 화학발광 표지와 접합시킬 수 있다.

항체 분자는 또한 디프테리아 독소, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 외독소 A 쇄, 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데킨 A 쇄, 알파-사르킨, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질 및 화합물(예: 지방산), 디안트린 단백질, 피토이아카 아메리카나(Phytoiacca americana) 단백질 PAPI, PAPII 및 PAP-S, 모모르디카 차란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르킨, 크로틴, 사포나리아 오피키날리스(saponaria officinalis) 억제제, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신 및 에노마이신과 같은 세포독성 인자에 접합시킬 수 있다.

문헌[참조: Hunter, et al., (1962) Nature 144: 945; David, et al., (1974) Biochemistry 13: 1014; Pain, et al., (1981) J. Immunol. Meth. 40: 219; 및 Nygren, J., (1982) Histochem. and Cytochem. 30: 407]에 기술된 방법을 포함하여, 본 발명의 항체 분자를 각종의 잔기에 접합시키기 위한 당해 분야에 공지된 어떠한 방법도 사용할 수 있다. 항체를 접합하기 위한 방법은 통상적이며 당해 분야에 잘 공지되어 있다.

화학치료제

본 발명은 하나 이상의 화학치료제와 공동으로 항-IGFR1 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 같은 하나 이상의 결합 조성물을 포함하는 조합물 및 방법을 포함한다. 화학치료제는 본 발명의 결합 조성물(예: LCF/HCA)의 투여로 치료하는 어떠한 의학적 상태의 치료에도 유용한 치료 효과를 제공한다. 예를 들어, 결합 조성물을 대상체(예: 사람)에서 암을 치료하기 위해 투여하는 경우, 화학치료제는 추가의 항-암 치료 효과 또는 환자의 치료 결과를 개선시킬 다른 일부 치료 효과를 제공한다. 본 발명의 조합물의 화학치료제 성분은 어떠한 메카니즘(즉, 결합 조성물이 작용하는 동일한 메카니즘 또는 상이한 메카니즘)에 의해 작동시킬 수 있다. 본 발명의 조합물 및 방법에서 화학치료제는 시그날 형질도입 억제제, 세포 주기 억제제, IGF/IGFR1 시스템 조절인자(예: 억제제 또는 활성화제), 파르네실 단백질 트랜스퍼라제(FPT) 억제제, 상피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제, HER2 억제제, 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체 억제제, 유사분열 활성화된 단백질(MAP) 키나제 억제제, MEK 억제제, AKT 억제제, mTOR 억제제, pI3 키나제 억제제, Raf 억제제, 사이클린 의존성 키나제(CDK) 억제제, 미소관 안정화제, 미소관 억제제, SERM/항에스트로겐, 아로마타제 억제제, 안트라사이클린, 프로테아좀 억제제 및 인슐린-유사 성장 인자(IGF) 생산 및 IGFR1, IGF-1 또는 IGF2의 항-센스 억제제를 억제하는 제제를 포함하나, 어떠한 의미에서도 이에 한정되지는 않는다.

미국 특허 제5,719,148호 또는 미국 특허 제5,874,442호에 기술된 것과 같은 트리사이클릭 아미드 화합물을 포함하는 FPT 억제제는 항-IGFR 항체와 조합시킬 수 있다. 예를 들어, 하기 화학식 I로 나타낸 특정 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 본 발명의 조합물에 포함시킬 수 있다:

상기 화학식 I에서,

a, b, d 및 d중 하나는 N 또는 NR⁹이고, 여기서, R⁹는 O-, -CH₃ 또는 -(CH₂)nCO₂H이며, 여기서, n은 1 내지 3이고, 나머지 a, b, c 및 d 그룹은 CR¹ 또는 CR²를 나타내거나;

각각의 a, b, c 및 d는 CR¹ 또는 CR²로부터 독립적으로 선택되며;

각각의 R¹ 및 각각의 R²는 H, 할로, -CF₃, -OR¹⁰(예: -OCH₃), -COR¹⁰, -SR¹⁰(예: -SCH₃ 및 -SCH₂C₆H₅), -S(O)_tR¹¹(여기서, t는 0, 1 또는 2이며, 예를 들면, -SOCH₃ 및 -SO₂CH₃이다), -SCN, -N(R¹⁰)₂, -NR¹⁰R¹¹, -NO₂, -OC(O)R¹⁰, -CO₂R¹⁰, -OCO₂R¹¹, -CN, -NHC(O)R¹⁰, -NHSO₂R¹⁰, -CONHR¹⁰, -CONHCH₂CH₂OH, -NR¹⁰COOR¹¹,

, -SR¹¹C(O)OR¹¹(예: -SCH₂CO₂CH₃), -SR¹¹N(R⁷⁵)₂[여기서, 각각의 R⁷⁵는 H 및 -C(O)OR¹¹중에서 독립적으로 선택되며, 예를 들면, -S(CH₂)₂NHC(O)O-t-부 틸 및 -S(CH₂)₂NH₂이다)], 벤조트리아졸-1-일옥시, 테트라졸-5-일티오, 또는 치환된 테트라졸-5-일티오(예: 알킬 치환된 테트라졸-5-일티오, 예를 들면, 1-메틸-테트라졸-5-일티오), 알키닐, 알케닐 또는 알킬중에서 독립적으로 선택되고, 여기서, 상기 알킬 또는 알케닐 그룹은 할로, -OR¹⁰ 또는 -CO₂R¹⁰로 임의 치환되며;

R³ 및 R⁴는 동일하거나 상이하고 각각 독립적으로 H이며, R¹ 및 R², 또는 R³ 및 R⁴의 치환체중 어느 것도 함께 벤젠 환(환 III)에 대해 포화되거나 포화되지 않은 C₅-C₇ 융합 환을 나타내고;

R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸은 각각 독립적으로 H, -CF₃, -COR¹⁰, 알킬 또는 아릴을 나타내며, 상기 알킬 또는 아릴은 -OR¹⁰, -SR¹⁰, -S(O)_tR¹¹, -NR¹⁰COOR¹¹, -N(R¹⁰)₂, -NO₂, -COR¹⁰, -OCOR¹⁰, -OCO₂R¹¹, -CO₂R¹⁰, OPO₃R¹⁰로 임의 치환되거나, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸중 하나는 하기에서 정의한 R⁴⁰과 함께 저급 알킬, 저급 알콕시, -CF₃ 또는 아릴로 치환될 수 있는 -(CH₂)_r-(여기서, r은 1 내지 4이다)을 나타내거나, R⁵는 R⁶과 함께 =O 또는 =S를 나타내고/내거나 R⁷은 R⁸과 함께 =O 또는 =S를 나타내며;

R¹⁰은 H, 알킬, 아릴 또는 아르알킬(예: 벤질)이고;

R¹¹은 알킬 또는 아릴이며;

X는 N, CH 또는 C를 나타내고, 여기서, C는 탄소 원자 11번에 대한 임의의 이중 결합(점선으로 나타냄)을 함유할 수 있고;

탄소 원자 5번 및 6번 사이의 점선은 임의의 이중 결합을 나타냄으로써, 이중 결합이 존재하는 경우, A 및 B는 독립적으로 -R¹⁰, 할로, -OR¹¹, -OCO₂R¹¹ 또는 -OC(O)R¹⁰을 나타내고, 이중 결합이 탄소 원자 5번 및 6번 사이에 존재하지 않는 경우, A 및 B는 각각 독립적으로 H₂, -(OR¹¹)₂; H 및 할로, 디할로, 알킬 및 H, (알킬)₂, -H 및 -OC(O)R¹⁰, H 및 -OR¹⁰, =O, 아릴 및 H, =NOR¹⁰ 또는 -O-(CH₂)_p-O(여기서, p는 2, 3 또는 4이다)를 나타내며;

R은 하기 정의한 바와 같이 R⁴⁰, R⁴², R⁴⁴ 또는 R⁵⁴를 나타내고;

R⁴⁰은 H, 아릴, 알킬, 사이클로알킬, 알케닐, 알키닐 또는 -D[여기서, -D는 하기 화학식

의 화합물을 나타내고, 여기서, R³ 및 R⁴는 앞서 정의한 바와 같으며, W는 O, S 또는 NR¹⁰(여기서, R¹⁰은 위에서 정의한 바와 같다)를 나타낸다]를 나타내고; 상기 R⁴⁰ 사이클로알킬, 알케닐 및 알키닐 그룹은 할로, -CON(R¹⁰)₂, 아릴, -CO₂R¹⁰, -OR¹², -SR¹², -N(R¹⁰)₂, -N(R¹⁰)CO₂R¹¹, -COR¹², -NO₂ 또는 D중에서 선택된 1 내지 3개의 그룹으로 임의 치환되며, 여기서, -D, R¹⁰ 및 R¹¹은 상기 정의한 바와 같고, R¹²는 R¹⁰, -(CH₂)_mOR¹⁰ 또는 -(CH₂)_qCO₂R¹⁰(여기서, R¹⁰은 앞서 정의한 바와 같고, m은 1 내지 4이며, q는 0 내지 4이다)이고; 상기 알케닐 및 알키닐 R⁴⁰ 그룹은 각각 이중 결합 또는 삼중 결합을 함유하는 탄소 상에 -OH, -SH 또는 -N(R¹⁰)₂을 함유하지 않거나;

R⁴⁰은 -SO₂NH₂, -NHSO₂CH₃, -SO₂NHCH₃, -SO₂CH₃, -SOCH₃, -SCH₃, 또는 -NHSO₂CF₃중에서 선택된 그룹으로 치환된 페닐이고, 바람직하게는 상기 그룹은 페닐 환의 파라(p-) 위치에 위치하거나; 또는

R⁴⁰은

중에서 선택된 그룹이고;

R⁴²는 화학식

을 나타내고, 여기서, R²⁰, R²¹ 및 R⁴⁶은 각각 독립적으로

(1) H;

(2) -(CH₂)_qSC(O)CH₃(여기서, q는 1 내지 3이다)(예: -CH₂SC(O)CH₃);

(3) -(CH₂)_qOSO₂CH₃(여기서, q는 1 내지 3이다)(예: -CH₂OSO₂CH₃);

(4) -OH;

(5) -CS(CH₂)_w(치환된 페닐)(여기서, w는 1 내지 3이고, 상기 치환된 페닐 그룹 상의 치환체는 상기 치환된 페닐에 대해 하기 기술한 바와 동일한 치환체이다)(예: -C-S-CH₂-4-메톡시페닐);

(6) -NH₂;

(7) -NCBZ(여기서, CBZ는 카보닐벤질옥시-를 나타내며, 즉 CBZ는 C(O)OCH₂C₆H₅를 나타낸다);

(8) -NHC(O)OR²²[여기서, R²²는 탄소수 1 내지 5의 알킬 그룹(즉, R²²는 t-부틸이어서 -NHBOC(여기서, BOC는 3급-부틸옥시카보닐-, 즉, BOC는 -C(O)OC(CH₃)₃)을 나타낸다)를 형성하거나, 또는 R²²는 1 내지 3개의 알킬 그룹으로 치환된 페닐(예: 4-메틸페닐)을 나타낸다];

(9) 알킬(예: 에틸);

(10) -(CH₂)_k페닐(여기서, k는 1 내지 6, 일반적으로 1 내지 4, 바람직하게는 1(예: 벤질)이다);

(11) 페닐;

(12) 치환된 페닐(즉, 1 내지 3개의 치환체, 바람직하게는 1개의 치환체로 치환된 페닐)[여기서, 치환체는 할로(예: Br, Cl 또는 I, Br이 바람직하다); NO₂; -OH, -OCH₃; -NH₂, -NHR²²; -N(R²²)₂; 알킬(예: 탄소수 1 내지 3의 알킬, 바람직하게는 메틸); -O(CH₂)_t페닐(여기서, t는 1 내지 3이고 1이 바람직하다); 및 -O(CH₂)_t 치환된 페닐(여기서, t는 1 내지 3이고 1이 바람직하다)로 이루어진 그룹 중에서 선택된다](적합한 페닐의 예는 p-브로모페닐, m-니트로페닐, o-니트로페닐, m-하이드록시-페닐, o-하이드록시페닐, 메톡시페닐, p-메틸페닐, m-메틸-페닐 및 -OCH₂C₆H₅를 포함하나, 이에 한정되지 않는다);

(13) 나프틸;

(14) 치환된 나프틸(여기서, 치환체는 상기 치환된 페닐에 대해 정의한 바와 같다);

(15) 브릿지된 탄소수 5 내지 10의 폴리사이클릭 탄화수소(예: 아다만틸 및 노르보르닐);

(16) 탄소수 5 내지 7의 사이클로알킬(예: 사이클로펜틸 및 사이클로헥실);

(17) 헤테로아릴(예: 피리딜 및 피리딜 N-옥사이드);

(18) 하이드록시알킬[예: -(CH₂)_vOH(여기서, v는 1 내지 3이고, 예를 들면, CH₂OH이다);

(19) 치환된 피리딜 또는 치환된 피리딜 N-옥사이드(여기서, 치환체는 메틸 피리딜, 모르폴리닐, 이미다졸린, 1-피페리디닐, 1-(4-메틸피페라지닐), -S(O)_tR¹¹, 또는 상기 치환된 페닐에 대해 상기 제공된 치환체중 어느 것중에서 선택되며, 상기 치환체는 상기 탄소에 결합된 수소의 치환에 의해 환 탄소에 결합된다);

(23) -NHC(O)-(CH₂)k-페닐 또는 -NH(O)-(CH₂)k-치환된 페닐(여기서, k는 상기 정의한 바와 같으며, 즉 1 내지 6, 일반적으로 1 내지 4 및 바람직하게는 1이다);

(24) 피페리딘 환 V:

,

[여기서, R⁵⁰은 H, 알킬(예: 메틸), 알킬카보닐(예: CH₃C(O)-], 알킬옥시카보닐[예: -C(O)O-t-C₄H₉, -C(O)OC₂H₅ 및 -C(O)OCH₃], 할로알킬(예: 트리플루오로메틸), 또는 -C(O)NH(R¹⁰)(여기서, R¹⁰은 H 또는 알킬이다)을 나타내고; 환 V는

을 포함하며; 환 V의 예는

을 포함한다];

(25) -NHC(O)CH₂C₆H₅ 또는 -NHC(O)CH₂-치환된-C₆H₅, 예를 들면, -NHC(O)CH₂-p-하이드록시페닐, -NHC(O)CH₂-m-하이드록시페닐, 및 -NHC(O)CH₂-o-하이드록시페닐;

(26) -NHC(O)OC₆H₅;

(30) -OC(O)-헤테로아릴, 예를 들면, ;

(31) -O-알킬(예: -OCH₃);

(32) -CF₃;

(33) -CN;

(34) 화학식

의 헤테로사이클로알킬 그룹; 및

(35) 화학식

(여기서, R⁸⁵는 H, 알킬, 또는 -OH 또는 -SCH₃로 치환된 알킬이다)의 피페리디닐 그룹으로 이루어진 그룹 중에서 독립적으로 선택되거나; 또는

R²⁰ 및 R²¹은 함께 =O 그룹을 형성하고 나머지 R⁴⁶은 상기 정의한 바와 같거나;

R²⁰, R²¹ 및 R⁴⁶중 2개는 함께 피페리딘 환 V

를 형성하고, 여기서, R⁵⁰은 H, 알킬(예: 메틸), 알킬카보닐(예: CH₃C(O)-), 알킬옥시카보닐[예: -C(O)O-t-C₄H₉, -C(O)OC₂H₅ 및 -C(O)OCH₃], 할로알킬(예: 트리플루오로-메틸), 또는 -C(O)NH(R¹⁰)(여기서, R¹⁰은 H 또는 알킬이다)이고; 환 V는

를 포함하며, 환 V의 예는

을 포함하고; 단, R⁴⁶, R²⁰ 및 R²¹은 이들이 결합된 탄소 원자가 하나 이상의 이종원 자를 함유하지 않도록 선택되며(즉, R⁴⁶, R²⁰ 및 R²¹은, 이들이 결합된 탄소 원자가 0 또는 1개의 헤테로 원자를 함유하도록 선택된다);

R⁴⁴는 화학식

을 나타내고, 여기서, R²⁵는 헤테로아릴(예: 피리딜 또는 피리딜 N-옥사이드), N-메틸피페리디닐 또는 아릴(예: 피닐 및 치환된 페닐)을 나타내고; R⁴⁸은 H 또는 알킬(예: 메틸)을 나타내며;

R⁵⁴는 화학식 (i), (ii), (iii) 또는 (iv)의 N-옥사이드 헤체로사이클릭 그룹을 나타내고:

여기서, R⁵⁶, R⁵⁸ 및 R⁶⁰은 동일하거나 상이하며 각각 H, 할로, -CF₃, -OR¹⁰, -C(O)R¹⁰, -SR¹⁰, -S(O)_eR¹¹(여기서, e는 1 또는 2이다), -N(R¹⁰)₂, -NO₂, -CO₂R¹⁰, -OCO₂R¹¹, -OCOR¹⁰, 알킬, 아릴, 알케닐 또는 알키닐중에서 독립적으로 선택되고, 당해 알킬은 -OR¹⁰, -SR¹⁰ 또는 -N(R¹⁰)₂로 치환될 수 있으며 알케닐은 OR¹¹ 또는 SR¹¹로 치환될 수 있거나;

R⁵⁴는 화학식 (ia), (iia), (iiia) 또는 (iva)의 N-옥사이드 헤테로사이클릭 그룹을 나타내고:

;

여기서, Y는 N⁺-O^_를 나타내며 E는 N을 나타내거나;

R⁵⁴는 상기 N-옥사이드 헤테로사이클릭 그룹 (i), (ii), (iii), (iv), (ia), (iia), (iiia) 또는 (iva)중 하나로 치환된 알킬 그룹을 타나내고;

Z는 O 또는 S이어서 R은 상기 정의한 바와 같은 R⁵, R⁶, R⁷ 또는 R⁸과 함께 취할 수 있거나, 또는 R은 R⁴⁰, R⁴², R⁴⁴ 또는 R⁵⁴를 나타낸다.

상기 화학식에 대해 R²⁰, R²¹ 및 R⁴⁶의 예는 다음 화학식을 포함한다:

R²⁵ 그룹의 예는 다음 화학식을 포함한다:

[여기서, Y는 N 또는 NO이고, R²⁸은 C₁ 내지 C₄ 알킬, 할로, 하이드록시, NO₂, 아미노(-NH₂), -NHR³⁰ 및 -N(R³⁰)₂(여기서, R³⁰은 C₁-C₆ 알킬이다)로 이루어진 그룹 중에서 선택된다].

하나의 양태에서, 다음 트리사이클릭 아미드가 항-IGFR 항체와 함께 포함된다:

[로나파르니브; Sarasar^TM; 제조원 - 미국 뉴저지주 케닐워쓰 소재의 쉐링-플로우(Schering-plough)]. 다른 양태에서, 하나의 다음 FPT 억제제가 항-IGFR 항체와 함께 포함된다:

.

항-IGFR 항체와 함께 포함될 수 있는 FPT 억제제는 BMS-214662[화학식

; 참조: Hunt et al., J. Med. Chem. 43(20):3587-95(2000); Dancey et al., Curr. Pharm. Des. 8:2259-2267(2002); (R)-7-시아노-2,3,4,5-테트라하이드로-1-(1H-이미다졸-4-일메틸)-3-(페닐메틸)-4-(2-티에닐설포닐)-1H-1,4-벤 조디아제핀)) 및 R155777(티피파르니브; 참조: Garner et al., Drug Metab. Dispos. 30(7):823-30(2002); Dancey et al., Curr. Pharm. Des. 8:2259-2267(2002); (B)-6-[아미노(4-클로로페닐)(1-메틸-1H-이미다졸-5-일)-메틸]-4-(3-클로로페닐)-1-메틸-2(1H)-퀴놀리논];

Zarnestra^TM로 시판[제조원: 미국 뉴저지주 뉴 브룬스윅 소재의 존슨 앤드 존슨(Johnson & Johnson)]되는 화학식

의 화합물을 포함한다.

항-IGFR 항체와 함께 포함될 수 있는 EGF 수용체 또는 HER2의 작용을 길항하는 억제제는 트라스투주마브(Herceptin^®으로 시판, 제조원:미국 캘리포니아주 에스. 샌 프란시스코 소재의 제넨테크 인크(Genentech, Inc.)); CP-724714(

); TAK-165(

); HKI-272(

); 게피티니브[참조: Baselga et al., Drugs 60 Suppl 1:33-40(2000)]; ZD-1893; 4-(3-클로로-4-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린[Iressa^TM로 시판, 제조원: 미국 델라웨어주 윌밍톤 소재의 아스트라제네카(AstraZeneca);

]; OSI-774[

; 참조: erlotinib, Hidalgo et al., J. Clin. Oncol. 19(13):3267-3279(2001)], 라파타니브[

; GW2016; 참조: Rusnak et al., Molecular Cancer Therapeutics 1:85-94(2001); N-{3-클로로-4-[(3-플루오로벤질)옥시]페닐}-6-[5-({[2-(메틸설포닐)에틸]아미노}메틸)-2-푸릴]-4-퀴나졸린아민; PCT 특허원 제WO99/35146호], 카네르티니브[CI-1033;

; Erlichman et al., Cancer Res. 61(2):739-48 (2001); Samill et al., J. Med. Chem. 43(7):1380-97(2000)], ABX-EGF 항체[참조: 제조원 - 미국 캘리포니아주 프리몬트 소재의 아브게닉스 인코포레이티드(Abgenix, Inc.); Yang et al., Cancer Res. 59(6):1236-43(1999); Yang et al., Crit Rev Oncol Hematol. 38(1):17-23(2001)], 에르비툭스(미국 특허 제6,217,866호; IMC-C225, 세툭시마브; 임클론; 미국 뉴욕주 소재), EKB-569(

; 참조: Wissner et al. J. Med. Chem. 46(1): 49-63(2003)), PKI-166(

; CGP-75166), GW-572016, 특정의 항-EGFR 항체 및 특정의 항-HER2 항체.

EGFR을 억제하는데 유용한 것으로 기술되어 있는 다수의 다른 소 분자를 항-IGFR 항체와 결합시킬 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제5,656,655호는 EGFR을 억제하는 스티릴 치환된 헤테로아릴 화합물을 기술하고 있다. 미국 특허 제5,646,153호는 EGFR 및/또는 PDGFR을 억제하는 비스 모노 및/또는 비사이클릭 아릴 헤테로아릴 카보사이클릭 및 헤테로카보사이클릭 화합물을 기술하고 있다. 미국 특허 제5,679,683호는 EGFR을 억제하는 트리사이클릭 피리미딘 화합물을 기술하고 있다. 미국 특허 제5,616,582호는 수용체 타이로신 키나제 억제 활성을 지닌 퀴나졸린 유도체를 기술하고 있다. 문헌[참조: Fry et al., Science 265 1093-1095(1994)]는 EGFR을 억제하는 구조를 갖는 화합물을 기술하고 있다[프라이(Fry) 등의 문헌, 도 1 참조]. 미국 특허 제5,196,446호는 EGFR을 억제하는 헤테로아릴에텐디일 또는 헤테로아릴에텐디일아릴 화합물을 기술하고 있다. 문헌[참조: Panek, et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 283, 1433-1444 91997)]은 수용체의 EGFR, PDGFR 및 FGFR 계열을 억제하는 PD166285로서 확인된 화합물을 기술하고 있다. PD166285는 6-(2,6-디클로로페닐)-2(4-(2-디에틸아미노에톡시)페닐아르니노)-8-메틸-8H-피리도(2,3-d)피리미딘-7-온으로 정의된다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 VEGF 수용체 억제제는 PTK787/ZK222584[참조: Thomas et al., Semin Oncol. 30(3 Suppl 6):32-8(2003)] 및 사람화된 항-VEGF 항체 베바키주마브[Avastin^TM의 상표명으로 시판됨; 제조원 - 미국 캘리포니아주 사우쓰 샌 프란시스코 소재의 제넨테크, 인코포레이티드(Genentech, Inc.)]를 포함한다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 MAP 키나제 억제제는 VX-745[참조: Haddad, Curr Opin. Investig. Drugs 2(8):1070-6(2001)]를 포함한다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 MAP 키나제(MEK) 억제제는 PD 184352[참조: Sebolt-Leopold, et al. Nature Med. 5:810-816 (1999)]를 포함한다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 mTOR 억제제는 라파마이신 및 CCI-779[참조: Sehgal et al., Med. Res. Rev., 14:1-22 (1994); Elit, Curr. Opin. Investig. Drugs 3(8):1249-53(2002)] 를 포함한다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 pI3 키나제 억제제는 LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646[참조: Vlahos et al., J. Biol. Chem. 269 (7): 5241-5248 (1994)] 및 보르트만닌을 포함한다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 Raf 억제제는 BAY-43-9006[참조: Wilhelm et al., Curr. Pharm. Des. 8: 2255-2257 (2002)], ZM336372, L-779,450 또는 문헌[참조: Lowinger et al., Curr. Pharm Des. 8: 2269-2278 (2002)]에 기술된 기타 Raf 억제제를 포함한다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 사이클린 의존성 키나제 억제제는 플라보피리돌[L86-8275/HMR 1275; Senderowicz, Oncogene 19(56): 6600-6606 (2000)] 및 UCN-01[7-하이드록시 스타우로스포린; Senderowicz, Oncogene 19(56): 6600-6606 (2000)]을 포함한다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 IGF/IGFR 억제제는 IGF 억제성 펩타이드(미국 공개된 특허원 제20030092631 A1호; PCT 출원 공보 제WO 03/27246 A2호; 제WO 02/72780호), 4-아미노-5-페닐-7-사이클로부틸-피롤로[2, 3-d]피리미딘 유도체, 예를 들면 PCT 출원 공보 제WO 02/92599호에 기술된 것들(예:

), 쿠에르케틴과 같은 플라보노이드 글리콘(참조; PCT 출원 공보 제WO 03/39538호) 및 본 발명의 화합물외에 항-IGFR1 항체를 포함한다.

본 발명의 항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 기타 항-IGFR1 항체는 예를 들면, 문헌[참조: Burtrum et. al Cancer Research 63: 8912-8921 (2003); 프랑스 특허원 제FR2834990호, 제FR2834991호 및 제FR2834900호, 및 PCT 특허원 공보 제WO 03/59951호; 제WO 04/71529호; 제WO 03/106621호; 제WO 04/83248호; 제WO 04/87756호 및 제WO 02/53596호]에 기술되어 있다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는, IGF 생산을 억제하는 제제는 옥트레오타이드(L-시스테인아미드, D-페닐알라닐-L-시스테이닐-L-페닐알라닐-D-트립토필-L-라이실-L-트레오닐-N-[2-하이드록시-1-(하이드록시메틸)프로필]-, 사이클릭(2_7)-디설파이드; [R, R^*, R^*)];

[참조: Katz et al., Clin Pharm. 8(4): 255-73 (1989); Sandostatin LAR^® Depot로 시판; 제조원 - 미국 뉴저지주 이스트 하노버 소재의 노바티스 파마 코포레이션(Novartis Pharm. Corp)]을 포함한 다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 프로테오좀 억제제는 보르테조미브(

); [(1R)-3-메틸-1-[[(2S)-1-옥소-3-페닐-2-[(피라지닐카보닐)아미노]프로필]아미노]부틸]보론산[Velcade^TM로 시판됨; 제조원 - 미국 매사츄세츠주 캠브릿지 소재의 밀레니움 파마, 인코포레이티드(Millenium Pharm., Inc.]를 포함한다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 미세관 안정화제 및 미세관 탈중합화제/억제제는 파클리탁셀[

; Taxol^®로 시판; 제조원 - 미국 뉴욕주 뉴욕 소재의 브리스톨-마이어스 스퀴브(Bristol-Myers Squibb)] 및 도세탁셀(

; Taxotere^®로 시판; 미국 뉴저지주 브 릿지워터 소재의 아벤티스 파마, 인코포레이티드(Aventis Pharm, Inc.) 제조원]; 빈크리스틴(

), 빈블라스틴(

), 에포틸론 B 및 BMS-247550(

; 참조: Lee et al., Clin. Cancer Res. 7 (5): 1429-37 (2001)], 에토포시드[VP-16;

] 및 BMS- 310705(

)를 포함하는 포도필로톡신 및 이의 유도체를 포함한다.

테모졸로마이드[

; 미국 뉴저지주 케닐워쓰 소재의 쉐링 코포레이션(Schering Corp.)에서 Temodar^®로 시판됨]도 본 발명의 항-IGFR 항체와 결합할 수 있다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 안트라사이클린은 독소루비신[

; Doxil^®로 시판; 미국 뉴저지주 라리탄 소재의 오르토 바이오테크 프로덕츠 엘. 피.(Ortho Biotech Products L. P.) 제조원]; 다우노루비 신[

; Cerubidine^®로서 시판; 미국 오하이오주 베드포드 소재의 벤 베뉴 래보라토리즈, 인코포레이티드(Ben Venue Laboratories, Inc.) 제조원] 및 에피루비신[

; Ellence^®로 시판; 제조원 - 미국 마이애미주 칼라마주 소재의 파마시아 앤드 업존 코포레이션(Pharmacia & Upjohn Co)]을 포함한다.

본 발명의 항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 항-에스트로겐 및 선택적인 에스트로겐 수용체 조정인자(SERM)는 드롤록시펜(3-하이드록시타목시펜), 4-하이드록시타목시펜(

), 타목시펜(

; Nolvadex^®로 시판; 제조원 - 미국 델라웨어주 윌밍톤 소재의 아스트라 제네카(Astra Zeneca)]; 피펜독시펜(

; ERA-923; 참조: Greenberger et al., Clin. Cancer Res. 7(10): 3166-77 (2001)]; 아르족시펜(

; LY353381; 참조: Sato J. Pharmacol. Exp. Ther. 287(1): 1-7 (1998)]; 랄록시펜(

; Evista^®로서 시판; 제조원 - 미국 인디애나주 인디아나폴리스 소재의 일라이 릴리 앤드 코포레이션(Eli Lilly & Co.) 제조원]; 풀베스탄(

, ICI-182780; 파슬로덱스로 시판; 미국 델라웨어주 윌밍톤소재의 아스트라 제네카(Astra Zeneca)]; 아콜비펜(EM-652;

); 토레미핀(

); 라소폭시펜(CP-336,156;

; 참조: Ke et al., Endocrinology 139(4): 2068-76 (1998)]; 이독시펜(피롤리디노-4-요도타목시펜;

; 참조: Nuttall et al., Endocrinology 139(12): 5224-34 (1998)]; TSE-424(

; 참조: 베제독시펜; WAY-140424]; HMR-3339 및 ZK- 186619를 포함한다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 아로마타제 억제제는 아나스트라졸(

; 참조: Dukes et al., J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 58 (4): 439-45 (1996)], 레트로졸(

; Femara^®로 시판; 미국 뉴저지주 이스트 하노버 소재의 노바티스 파마슈티칼스 코포레이션 제조원] 및 엑세메스탄(

; Aromasin^®으로 시판; 제조원 - 미국 미쥬리주 칼라마조 소재의 파마시아 코포레이션(Pharmacia Corp.)]을 포함한다.

옥살리플라틴[

; Eloxatin^®으로 시판; 제조원 - 미국 뉴욕주 뉴욕 소재의 사노피-신텔라보 인코포레이션(Sanofi-Synthelabo Inc.)]도 또한 본 발명의 항-IGFR 항체와 결합시킬 수 있다.

항-IGFR 항체는 또한 레티노산을 지닌 겜시타빈 HCl(

) 또는 문헌[참조: Mitsiades et al., Cancer Cell 5: 221-230 (2004); Garcia-Echeverria et al., Cancer Cell 5: 231-239,2004; 제WO 2004/030627호 또는 제WO 2004/030625호]에 설정된 IGFR 억제제와 결합시킬 수 있다.

항-IGFR 항체와 결합할 수 있는 토포이소머라제 억제제는 캄프토테신(

; 참조: Stork et al., J. Am. Chem. Soc. 93(16): 4074-4075 (1971); Beisler et al., J. Med. Chem. 14 (11): 1116-1117 (1962)], 토포테칸(

; Hycamtin^®로서 시판; 제조원 - 미국 노쓰캐롤라이나주 리서치 트라이앵클 파크 소재의 글락소스미쓰클라인(GlaxoSmithKline); 참조: Rowinski et al., J. Clin. Oncol. 10(4): 647-656 (1992)], 에토포시드(

) 및 이리노테칸(

; Camptosar^®로 시판; 제조원 - 미국 미쥬리주 칼라마주 소재의 파마시아 앤드 업존 코포레이션)을 포함한다.

IGFR1, IGF-1 또는 IGF-2 유전자의 mRNA에 상보적인 안티센스 올리고뉴클레 오타이드를 생산하여 유전자의 전사 또는 해독을 억제하는데 사용할 수 있다. 치료용으로 효과적인 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 생산은 당해 분야에 잘 알려져 있다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 흔히 반감기 또는 생이용성을 증가시키기 위해 유도체화되거나 개질된 뉴클레오타이드를 사용하여 생산한다. IGFR1, IGF-1 또는 IGF-2 유전자의 주요 서열은 일반적으로 햄머해드(hammerhead), 테트라하이메나(tetrahymena) 및 헤어핀(hairpin) 리보자임이다. 리보자임을 설계 및 사용하여 특정 RNA 종을 분해하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다.

많은 앞서의 제제와 관련하여 화학 구조 및 기타 유용한 정보는 문헌[참조: Physicians'Desk Reference, 57^th ed., 2003; Thomson PDR; Montvale, NJ]에서 찾을 수 있다.

특수 제제를 특수 부류(예: FPT 억제제 또는 미세관 안정화제)로 분류하는 것은 단지 기술 목적으로 수행한 것이며 본 발명을 어떠한 방식으로든 한정하는 것을 의미하지는 않는다.

본 발명의 영역은 하나 이상의 앞서의 화학치료제 또는 특정의 염, 수화물, 이성체, 제형, 용매화물 또는 이의 전구약물과 함께, 항-IGFR 항체를 포함하는 조성물 및 방법을 포함한다.

약제학적 조성물

본 발명의 조합물, 또는 이의 어떠한 성분도 생체내에서 대상체에게 투여하기에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 약제학적 조성물내로 혼입시킬 수 있다. 본 발명의 목적은 비-비경구(예: 경구, 안구, 국소 또는 폐(흡입)) 또는 비경구 경로(예: 종양내 주사, 정맥내 주사, 동맥내 주사, 피하 주사 또는 근육내 주사)와 같은 어떠한 경로에 의해서도 대상체에게 투여할 수 있는 약제학적 조성물을 포함한다. 하나의 양태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 하나 이상의 화학치료제 및 약제학적으로 허용되는 담체와 공동으로 15H12/19D12 LCF 및 15H12/19D12 HCA를 포함하는 항체를 포함한다.

상기 기술한 바와 같이, 본 발명의 조합물은 다른 것과 "공동으로" 결합 조성물 성분 및 화학치료제 성분을 포함한다. 용어 "공동으로"는 본 발명의 조합물의 성분들이 2개 이상의 조성물내로 별개로 제형화시키거나(예: 키트) 또는 동시 전달하기위한 단일 조성물로 제형화시킬 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 영역은 대상체에 비경구 투여(예: 정맥내)하기 위해 제형화한 항-IGFR1 항체 및 경구 경로(예: 환제, 정제, 캅셀제)을 위해 제형화시킨 화학치료제를 포함하는 조합물을 포함한다. 달리는, 당해 조합물의 성분들 둘다는 비경구 전달 또는 비-비경구 전달(예: 경구)을 위해 별개로 또는 함께 제형화시킬 수 있다.

제형에 관한 일반적인 정보를 위해 문헌[참조: Gilman, et al., (eds.) (1990), The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8th Ed., Pergamon Press; A. Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania.; Avis, et al., (eds.)(1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications Dekker, New York; Lieberman, et al., (eds. ) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tables Dekker, New York; and Lieberman, et al., (eds.)(1990), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, New York, Kenneth A. Walters (ed.)(2002) Dermatological and Transdermal Formulations (Drugs and the Pharmaceutical Sciences), Vol 119, Marcel Dekker]를 참조한다.

약제학적으로 허용되는 담체는 통상적이며 당해 분야에 아주 잘 공지되어 있다. 예들은 생리학적으로 혼화성인 수성 및 비수성 담체, 안정화제, 항산화제, 용매, 분산 매질, 피복제, 항미생물제, 완충제, 혈청 단백질, 등장성 및 흡수 지연제를 포함한다. 바람직하게는 담체는 대상체의 신체내로 주사하기에 적합하다.

본 발명의 약제학적 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올(예: 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이의 적합한 혼합물, 야채 오일, 예를 들면, 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예를 들면, 에틸 올레이트를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들면, 레시틴과 같은 피복 물질을 사용함에 의해, 분산제의 경우에 필요한 입자 크기를 유지시킴에 의해, 및 표면활성제를 사용함에 의해 유지시킬 수 있다.

α, α-트레할로즈 디하이드레이트와 같은 안정화제는 건조 또는 냉동-건조(freeze-drying)의 붕해 효과로부터 본 발명의 항체 분자를 안정화시키기 위해 포함될 수 있다.

약제학적으로 허용되는 항산화제의 예는 아스코르브산, 시스테인 하이드로클로라이드, 나트륨 비설페이트, 나트륨 메타비스설파이트, 아황산나트륨 등과 같은 수용성 항산화제; 및 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화된 하이드록시아니솔(BHA), 부 틸화된 하이드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등과 같은 지용성 항산화제; 및 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등과 같은 금속 킬레이트제를 포함한다.

미생물의 존재의 예방은 멸균 과정, 및 EDTA, EGTA, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등과 같은 각종 항미생물제의 도입 둘다에 의해 보증될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물에 포함될 수 있는 적합한 완충제는 L-히스티딘계 완충제, 포스페이트계 완충제(예: 포스페이트 완충된 염수, pH 약 7), 소르베이트계 완충제 또는 글리신계 완충제를 포함한다.

본 발명의 약제학적 조성물에 포함될 수 있는 혈청 단백질은 사람 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

당, 에탄올, 폴리알콜(예: 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 만니톨 또는 소르비톨), 시트르산나트륨 또는 염화나트륨(예: 완충된 염수)과 같은 등장성 제제도 또한 본 발명의 약제학적 조성물에 포함될 수 있다.

주사가능한 약제학적 형태의 연장된 흡수는 알루미늄 모노스테아레이트 및/또는 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 제제를 혼입시킴에 의해 수행할 수 있다.

분산액은 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이의 혼합물 및 오일속에서 제조할 수 있다.

약제학적으로 허용되는 담체는 멸균 수용액 또는 분산액, 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 일시적 제조용 멸균 분말을 포함한다. 약제학적으로 활성인 물질의 이러한 매질 및 제제의 사용은 당해 분야에 잘 공지되어 있다.

멸균 주사가능한 용액은 본 발명의 조합물 또는 이의 어떠한 성분(예: 결합 조성물 및/또는 화학치료제)의 조합물을 요구량으로, 적절한 용매속에서, 임의로 경우에 따라 상기 나열한 성분 하나 또는 조합물과 함께 혼입시킨 후 멸균 미세여과함으로써 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산제는 활성 성분(예: 결합 조성물 및/또는 화학치료제)를 염기성 분산 매질 및 위에 나열한 것들로부터의 요구되는 기타 성분들을 함유하는 멸균 비히클내로 활성 성분(예: 결합 조성물 및/또는 화학치료제)를 혼입함으로서 제조한다. 멸균 주사가능한 용액을 제조하기 위한 멸균 산제의 경우에, 제제의 바람직한 방법은 활성 성분 및 앞서 멸균 여과된 이의 용액으로부터의 바람직한 성분의 분발을 수득하는 진공 건조 및 냉동-건조(동결건조: lyophilization)이다.

본 발명의 조합물 또는 이의 어떠한 성분(예: 결합 성분 및/또는 화학치료제)도 또한 경구 투여될 수 있다. 경구 투여용의 약제학적 조성물은 첨가제 및 전분(예: 감자, 옥수수 또는 밀 전분 또는 셀룰로즈), 전분 유도체(예: 미세결정질 셀룰로즈 또는 실리카), 당(예: 락토즈), 활석, 락토즈, 스테아레이트, 탄산마그네슘 또는 인산칼슘과 같은 담체를 포함할 수 있다. 경구 조성물이 환자의 소화계에 의해 잘 견디는 것을 보증하기 위하여, 점액 형성제 또는 수지를 포함시킬 수 있다. 위액에서 불용성인 캅셀속에 제형화함으로써 내성을 증진시키는 것이 바람직할 수 있다. 캅셀제 형태의 본 발명의 예시적인 약제학적 조성물은 표준 2-조각 경 젤라틴 캅셀을 분말 형태의 본 발명의 조합물 또는 이의 성분, 락토즈, 활석 및 마그네슘 스테아레이트로 충전시킴으로써 제조한다. 면역 글로불린의 경구 투여는 기술되어 있다[참조: Foster, et al., (2001) Cochrane Database System rev. 3:CD001816].

본 발명의 조합물 또는 이의 어떠한 성분(예: 결합 조성물 및/또는 화학치료제)를 또한 국소 투여용 약제학적 조성물속에 포함시킬 수 있다. 국소 투여에 적합한 제형은 치료가 요구되는 부위로 피부를 통해 침투하기에 적합한 액체 또는 반-액체 제제, 예를 들면, 도찰제, 로션, 크림, 연고 또는 페이스트, 및 눈, 귀 또는 코에 투여하기에 적합한 점적제를 포함한다.

본 발명에 따른 점적제는 멸균 수성 또는 오일성 용액 또는 현탁액을 포함할 수 있으며, 본 발명의 조합물 또는 이의 어떠한 성분(예: 결합 조성물 및/또는 화학치료제)을 살세균제 및/또는 살진균제 및/또는 특정의 다른 적합한 방부제의 적합한 수용액속에 용해시키고, 표면 활성제를 포함시킴으로써 제조할 수 있다. 이후에 수득되는 용액은 여과로 투명하게 할 수 있다.

본 발명에 따른 로션은 피부 또는 눈에 적용하기에 적합한 것들을 포함한다. 눈 로션은 임의로 살세균제를 함유하는 멸균 수용액을 포함할 수 있으며 점적제의 제조용의 것들과 유사한 방법으로 제조할 수 있다. 피부에 적용시키기 위한 로션 또는 연고는 또한 건조를 신속하게 하고 피부를 냉각시키는 제제, 예를 들면, 알코올 또는 아세톤, 및/또는 습윤화제, 예를 들면, 글리세롤 또는 오일, 예를 들면, 카스터 오일 또는 아라키스 오일을 포함한다.

본 발명에 따른 크림, 연고 또는 페이스트는 외부 적용을 위한 활성 성분의 반-고체 제형이다. 이들은 본 발명의 조합물 또는 이의 특정 성분을 미분되거나 분말형으로, 수성 또는 비-수성 유액중 용액 또는 현탁액으로, 적합한 기계의 도움에 의해, 유지성 또는 비-유지성계와 혼합하여 제조할 수 있다. 당해 기재는 경질, 연질 또는 액체 파라핀, 글리세롤, 밀랍, 금속성 비누와 같은 탄화수소; 아교; 아몬드, 옥수수, 아라키스, 참께 또는 올리브 오일과 같은 천연 기원의 오일; 양모 지방 또는 이의 유도체, 또는 스테아르산 또는 올레산과 같은 지방산과 프로필렌 글리콜 또는 마크로겔과 같은 알콜을 포함할 수 있다. 제형은 음이온성, 양이온성 또는 비이온성 표면 활성제, 예를 들면, 소르비탄 에스테르 또는 이의 폴리옥시에틸렌 유도체와 같은 어떠한 적합한 표면 활성제도 혼입할 수 있다. 천연 검, 셀룰로즈 유도체 또는 실리카성 실리카와 같은 무기 물질, 및 라놀린과 같은 다른 성분들과 같은 현탁화제가 또한 포함될 수 있다.

본 발명의 조합물 또는 이의 어떠한 성분(예: 결합 조성물 및/또는 화학치료제)은 또한 흡입에 의해 투여할 수 있다. 흡입용으로 적합한 약제학적 조성물은 에어로졸일 수 있다. 본 발명의 조합물 또는 이의 어떠한 성분을 흡입하기 위한 예시적인 약제학적 조성물은 활성 성분(예: 결합 조성물 및/또는 화학치료제), 윤활제, 예를 들면, 폴리소르베이트 85 또는 올레산을, 프레온과 같은 추진제, 바람직하게는 1,2-디클로로테트라플루오로에탄 및 디플루오로클로로메탄의 조합물속에 분산된 상태로 포함하는, 용량이 15 내지 20ml인 에어로졸 용기를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 비강 또는 경구 흡입 투여용으로 조절된 적절한 에어로졸 용기속에 존재한다.

용량

바람직하게는, 본 발명의 조합물은 바람직하게는 치료되지 않은 대상체에 비해 약 20% 이상, 더욱 바람직하게는 약 40% 이상, 더욱 더 바람직하게는 약 60% 이상, 및 여전히 더욱 바람직하게는 약 80% 내지 100% 까지의 적절한 정도로 질병 또는 상태(예: 종양 성장)을 바람직하게는 억제하는 "치료학적 유효 용량" 또는 "치료학적 유효량"으로 대상체에게 투여된다. 암을 억제하는 본 발명의 조합물 또는 이의 특정 성분의 능력은 사람 종양에서 효능의 예측치인 동물 모델 시스템에서 평가할 수 있다. 달리는, 당해 특성은, 시험관내 종양 세포 성장을 억제하는 본 발명의 조합물 또는 이의 어떠한 성분의 능력을 숙련가에게 잘 공지된 검정에 의해 시험함으로써 평가할 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 대상체의 체격, 대상체 증상의 중증도, 및 선택한 특정 조성물 또는 투여 경로와 같은 이러한 인자들을 기초로 하여 이러한 양을 결정할 수 있을 것이다.

용량 섭생은 최적의 바람직한 반응(예: 치료학적 반응)을 제공하기 위해 조절할 수 있다. 예를 들면, 단일 투여량을 투여할 수 있으며, 수회의 분복 투여량을 기간에 걸쳐 투여하거나 투여량을 치료학적 상황의 요구도에 의해 나타나는 바와 같이 비례적으로 감소시키거나 증가시킬 수 있다. 투여 용이성 및 용량 균질성을 위해 용량 단위 형으로 비경구 조성물을 제형화하는 것이 특히 유리할 수 있다.

당해 분야의 숙련된 기술을 가진 주치의 또는 수의사는 요구된 약제학적 조성물의 유효량을 용이하게 결정하여 처방할 수 있다. 예를 들어, 주치의 또는 수의사는 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편의 출발 투여량을 바람직한 치료 효과를 달성하기 위해 요구되는 것보다 낮은 수준으로 약제학적 조성물중에 사용하고 바람직한 효과가 달성될 때까지 용량을 점진적으로 증가시킬 수 있다. 본 발명의 항체 또는 조합물의 제공된 투여량 또는 치료 섭생의 효능은 예를 들면, 대상체에서 치료된 종양이 수축되거나 성장을 감소하는지를 측정함으로써 측정할 수 있다. 종양의 크기는 예를 들면, X-선, 자기 공명 영상(MRI) 또는 외과 수술시 가시적으로 용이하게 측정할 수 있다.

일반적으로, 본 발명의 조합물 또는 이의 어떠한 성분의 적합한 1일 투여량은 치료학적 효과를 생성하기에 효과적인 최저 투여량인 양일 수 있다. 이러한 유효 투여량은 일반적으로 위에서 기술한 인자에 의존할 것이다. 표적(예: 종양) 부위에 근접하여 주사함으로써 투여하는 것이 바람직하다. 경우에 따라, 본 발명의 항체 또는 항체/화학치료제 조합물의 치료학적으로 유효한 1일 투여량을 하루동안 적절한 간격으로 2회, 3회, 4회, 5회, 6회 이상의 아-투여량으로 별개 투여하는 것과 같이 투여할 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항-IGFR 항체의 "치료학적 유효" 용량은 1일당 약 3mg/kg(체중) 내지 약 10mg/kg(예: 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10mg/kg)의 범위이다. 하나의 양태에서, 화학치료제의 "치료학적 유효 용량은 본원에 참조로 인용된 문헌[참조: Physicians' Desk Reference 2003(Thomson Healthcare; 57^th edition(November 1, 2002)]에 설정된 바와 같다. 예를 들어, 하나의 양태에서, 게피티니브의 1일 투여량은 250mg/일이거나 파클리탁셀의 1일 투여량은 약 135mg/m² 내지 약 175 mg/m²이다.

치료 방법 및 투여

본 발명의 조합물 또는 본 발명의 항-IGFR 항체 또는 이의 항원-결합 단편 단독을 사용하여 악성 세포와 같은 특정 세포의 성장 또는 증식을 시험관내[예: 세포 배양물) 또는 생체내(예: IGFR1의 상승된 발현 또는 활성, 또는 이의 리간드(예: IGF-I 또는 IGF-II)의 상승된 발현에 의해 매개된 질병으로 고생하는 대상체의 신체내]에서 억제하거나 감소시킬 수 있다. 세포의 성장 또는 증식의 이러한 억제 또는 감소는 세포를 조합물과 접촉시킴에 의해 달성할 수 있다.

본 발명의 조합물 또는 본 발명의 항-IGFR 항체 또는 이의 항원-결합 단편 단독은 예를 들면, IGFR1의 상승된 발현 또는 활성에 의해, 또는 이의 리간드(예: IGF-I 또는 IGF-II)의 상승된 발현에 의해 매개되고 IGFR1 리간드 결합, 활성 또는 발현의 조정에 의해 치료되거나 예방될 수 있는 치료 또는 예방이 요구되는 대상체내 특정 질병 또는 상태를 치료 또는 예방하는데 사용할 수 있다. 바람직하게는, 질병 또는 상태는 IGFR1, IGF-I 또는 IGF-II의 증가된 수준에 의해 매개되며, IGFR1 리간드 결합, 활성(예: 자가포스포릴화 활성) 또는 발현을 감소시킴에 의해 치료되거나 예방된다. 바람직하게는, 당해 질병 또는 상태는 악성, 더욱 바람직하게는 방광암, 윌름스 암, 골암, 전립샘 암, 폐암, 결직장암, 유방암, 경부암, 윤활막 육종, 난소암, 췌장암, 전립샘 비대(BPH), 전이유암종과 연관된 설사 및 혈관활성 장 펩타이드 분비 종양[예: VIP종(VIPoma) 또는 베르너-모리슨 증후군(Werner-Morrison syndrome)]이나, 이에 한정되지 않는다. 말단거대증은 또한 본 발명의 조합물로 치료할 수 있다. IGF-I의 길항작용은 말단거대증의 치료용으로 보고되어 있다[참조: Drake, et al., (2001) Trends Endocrin. Metab. 12: 408- 413]. 대상체에서 본 발명의 조합물을 투여함에 의해 또한 치료할 수 있는 다른 비-악성 의학 상태는 거인증, 건선, 죽상경화증, 혈관의 소 근육 재협착 또는 당뇨병, 특히 안구 류마티스 관절염, 그레이브스병, 다발경화증, 전신홍반루푸스, 하시모도 갑상선염, 중증근육무력증, 자가-면역 갑상선염 및 베체트병의 합병증으로서 밝혀진 것과 같은 부적절한 미세혈관 증식을 포함한다.

용어 "대상체"는 특정 유기체, 바람직하게는 동물, 더욱 바람직하게는 포유동물(예: 랫트, 마우스, 개, 고양이, 토끼) 및 가장 바람직하게는 사람을 언급할 수 있다.

본 발명의 양태에서, 가능하게는, 본 발명의 조성물을 문헌[참조: Physicians'Desk Reference 2003 (Thomson Healthcare; 57^th edition (November 1, 2002)]에 따라 대상체에게 투여한다.

본 발명의 조합물 또는 이의 특정 성분은 주사와 같은 침투 경로로 투여할 수 있다(상기 참조). 비-침투 경로(예: 경구; 예를 들면, 환제, 캅셀제 또는 정제)에 의한 투여도 또한 본 발명의 영역내에 있다. 본 발명의 양태에서, 본 발명의 항-IGFR 항체, 또는 이의 약제학적 조성물은 정맥내, 피하내, 근육내, 동맥내 또는 종양내로 투여하는 반면, 본 발명의 화학치료제[예: 게피티니브(예: Iressa^TM)]는 정제 형태로 경구 투여한다. 다른 양태에서, 화학치료제는 정맥내 투여되는 파클리탁셀(예: Taxol^®)이다.

조성물은 당해 분야에 공지된 의학 장치를 사용하여 투여할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 약제학적 조성물은 피하주사 바늘을 사용한 주사로 투여할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 또한 미국 특허 제6,620,135호; 제6,096,002호; 제5,399,163호; 제5,383,851호; 제5,312,335호; 제5,064,413호; 제4,941,880호; 제4,790,824호 또는 제4,596,556호에 기술된 장치와 같은 침이 없는 피하주사 장치를 사용하여 투여할 수 있다.

약제학적 조성물을 투여하는 잘 공지된 이식물 및 모듈의 예는 의약을 조절된 속도로 분산시키기 위한 이식가능한 미세주입 펌프를 기술하고 있는 미국 특허 제4,487,603호; 상세한 주입 속도로 의약을 전달하기 위한 의약 주입 펌프를 기술하고 있는 미국 특허 제4,447,233호; 연속된 약물 전달을 위한 다양한 유동의 이식가능한 주입 장치를 기술하고 있는 미국 특허 제4,447,224호; 다수-챔버 구획을 갖는 삼투압성 약물 전달 시스템을 기술하고 있는 미국 특허 제4,439,196호를 포함한다. 많은 다른 이러한 이식물, 전달 시스템 및 모듈은 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있다.

키트

본 발명은 본 발명의 조합물의 성분들을 키트 형태속에 포함하는 키트를 제공한다. 본 발명의 키트는 본원에 논의한 바와 같은 화학치료제를 포함하나, 이에 한정되지 않는 하나 이상의 추가의 성분들과 공동으로 IGFR1에 특이적으로 결합하는, 본원에 논의된 바와 같은 결합 조성물(예: 19D12/15H12 LCF/HCA)을 포함하나 이에 한정되지 않는 하나 이상의 성분들을 포함한다. 결합 조성물 및/또는 화학치 료제는 순수한 조성물로서 또는 약제학적 조성물속에서 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화될 수 있다.

하나의 양태에서, 키트는 하나의 용기(예: 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)내 본 발명의 결합 조성물(예: 19D12/15H12 LCF/HCA) 또는 이의 약제학적 조성물 및 다른 용기(예: 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 화학치료제 또는 이의 약제학적 조성물을 포함한다.

본 발명의 다른 양태에서, 키트는 단일의 일반 용기속에 임의로 약제학적 조성물 중 약제학적으로 허용되는 담체와 함께, 함께 제형화된 화학치료제 성분과 함께 결합 조성물 성분(예: 19D12/15H12 LCF/HCA)을 포함하는 본 발명의 조합물을 포함한다.

키트가 대상체에 비경구 투여하기 위한 약제학적 조성물을 포함하는 경우, 당해 키트는 이러한 투여를 수행하기 위한 장치를 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트는 위에서 논의한 바와 같은 하나 이상의 피하 침 또는 기타 주사 장치를 포함할 수 있다.

키트는 키트속에 약제학적 조성물 및 용량형에 관한 정보를 포함하는 포장 삽입물을 포함할 수 있다. 일반적으로, 이러한 정보는, 동봉된 약제학적 조성물 및 용량형을 효과적으로 및 안정하게 사용하는데 있어서 환자 및 주치의를 보조한다. 예를 들어, 본 발명의 조합물에 관한 다음 정보를 삽입물속에 공급할 수 있다: 약력학, 약동학, 임상 연구, 효능 매개변수, 지시사항 및 용도, 금기사항, 경고, 주의점, 부작용, 과용량, 적절한 용량 및 투여, 공급 방법, 적절한 저장 조 건, 참조문헌, 제조업자/판매자 정보 및 특허 정보.

하기 실시예는 본 발명을 추가로 기술하기 위해 제공되며 어떠한 방식으로도 본 발명의 영역을 제한하는 것으로 고려되어서는 안된다.

실시예 1: 항-IGFR1 항체 및 화학치료제를 사용한 증식 검정

각종 농도의 19D12/15H12 야생형 또는 19D12/15H12 LCF/HCA 항-IGFR1 항체 및 파클리탁셀, 게피티니브, 로나파르니브 4-하이드록시 타목시펜 또는 독소루비신에 노출되는 경우에 증식하는 배양물내 세포의 능력을 당해 시험에서 평가하였다.

세포 증식. H322 NSCLC 세포 또는 MCF7 세포를 T-75 TC 처리된 여과 플라스크속에서 80% 합치성 이하로 수회 계대배양을 위해 배양하였다. 세포를 트립신처리하고, 계수하고, NEAA(비-필수 아미노산), L-Glu, MEM 비타민 및 PS를 함유하는 10% HI-FBS(열-불활성화시킨 태아 소 혈청) RPMI 배지속에서 25000 세포/ml의 농도로 재현탁시켰다. 100㎕의 세포 현탁액(2500개 세포)를 BD Falcon 96 웰의 검은색의 선명한 바닥의 TC 처리된 플레이트의 각각의 웰에 가하였다. 세포를 부착하도록 하고 37℃에서 밤새 분산시켰다. 10% RPMI 용액을 NEAA, L-Glu, MEM 비타민 및 PS를 함유하는 2% HI-FBS를 함유하는 100㎕의 RPMI로 교체하였다.

용액 제조. 모든 검정 시약을 2% HI-FBS를 함유하는 RPMI속에서 20X 농도로 제조하고 처리당 총 10개의 시험 농도를 위해 일련 희석시켰다. 매 시험시 별개의 검정 플레이트상에서 3개 제조하였다. 각각의 플레이트는 (i) 항체 19D12/15H12 및 파클리탁셀, (ii) 항체 19D12/15H12 및 게피티니브; (iii) 항체 19D12/15H12 LCF/HCA 및 로나파르니브; (iv) 항체 19D12/15H12 및 4-하이드록시타목시펜; 또는 (v) 항체 19D12/15H12 및 독소루비신을 함유하는 시험 웰과 함께 (a) 비처리, (b) 시약 1(파클리탁셀, 게피티니브, 로나파르니브, 4-하이드록시 타목시펜 또는 독소루비신) 단독, 및 (c) 항체 19D12/15H12 또는 19D12/15H12 LCF/HCA 단독을 함유하는 내부 대조군을 포함하였다.

시약 1 및 19D12/15H12 또는 19D12/15H12 LCF/HCA를 투여량 반응 및 각각 서로의 조합물로서 개별적으로 셋팅하였다. 세포 증식을 4일째에 측정하였다.

검정. 세포 증식을 그로메가 세포 역가-Glo발광 세포 생존력 검정[Promega Cell Titer-Glo Luminescent Cell Viability Assay: 미국 위스콘신주 매디슨 소재의 프로메가 코포레이션(Promega Corp.)]을 사용하여 측정하였다. 당해 검정은 대사적으로 활성인 세포의 존재를 나타내는, 배양물중 ATP의 적량을 기초로 배양물중 생존 세포의 수를 측정하기 위한 방법을 제공한다.

검정 시약 및 검정 플레이트를 실온으로 평형화시키고 검정 플레이트에 가하기 직전에 제조하였다. 1 용적의 검정 시약을 검정 플레이트의 각각의 웰에 가하고 10분 이상동안 궤도 플래트폼(orbital platform)에서 진탕시켜 ATP 반응을 평형화시키고 검정 플레이트내 모든 세포가 전체적으로 분해되도록 하였다. 반응은 5시간 30분 동안 지속하였으나 시약 첨가 후 30분 이후에 판독이 수행된 경우는 없었다. 발광을 스태커(stacker)가 있는 왈락 420 플레이트 판독기(Wallac 420 Plate Reader)상에서 검출하였다.

이들 시험으로부터의 결과는 하기 표 2 내지 6에 나타낸다. 표에서 단위(증 식 지표)는 임의적이고 각각의 조건하에서 배양물중에서 관측된 생존 세포의 수에 비례한다. "비 처리" 시험으로부터의 데이타는, 어떠한 약물(즉, 항체 또는 화학치료 조성물)의 부재하에서 관측된 증식 지표를 나타낸다.

표 2 내지 6에서 "㎍"은 마이크로그람을, 및 "μM"은 마이크로몰을 나타낸다.

[표 2]

항-IGFR1 항체 19D12/15H12 및 파클리탁셀("탁솔")의 존재하에서 H322 NSCLC 세포의 증식

[표 3]

항-IGFR1 항체 19D12/15H12 및 제피티니브("이레싸")의 존재하에서 H322 NSCLC 세포의 증식

[표 4]

항-IGFR1 항체 19D12(LCF/HCA) 및 로나파르니브의 존재하에서 H322 NSCLC 세포의 증식

[표 5]

항-IGFR1 항체 19D12/15H12 및 하이드록시 타목시펜의 존재하에서 MCF7 세포의 증식

[표 6]

항-IGFR1 항체 19D12/15H12 및 독소루비신의 존재하에서 MCF7 세포의 증식

실시예 2 : NSCLC 이종이식 모델 H322를 사용한 항-IGFR 및 파클리탁셀의 생체내 종양 억제 검정

당해 시험에서, 종양 성장 억제를 위한 본 발명의 항-IGFR/파클리탁셀 조합물의 효능을 생체내에서 입증하였다.

마트리겔(Matrigel)에서 5백만의 H322 사람 NSCLC 세포를 누드 마우스내로 피하 접종하였다. 항-IGFR 항체 19D12 및/또는 파클리탁셀 처리를 0일째에 종양 크기가 약 105 내지 115mm³에 이르른 경우 개시하였다. 19D12 및 파클리탁셀 둘다는 주당 2회 투여하였다. 항-IGFR 항체 19D12를 마우스당 0.5mg으로 투여하였다. 파클리탁셀은 15mpk이었다. 그룹당 10마리의 동물을 두었다. 종양 용적을 라브카트(Labcat)로 측정하였다.

[표 7]

마우스에서의 종양 성장 억제

본 발명은 본원에 기술된 특정 양태에 의해 영역이 한정되지는 않아야 한다. 또한, 본원에 기술된 것외에 본 발명의 각종 변형이 앞서의 기술 및 동반된 도면들로부터 당해 분야의 숙련가에게 명백할 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구의 범위의 영역내에 속하느 것으로 의도된다.

특허, 특허원, 유전자뱅크 수탁 번호 및 공보들은 본원 전체에서 인용되며, 특히 본원의 모든 기재된 화학식 및 항체 아미노산 서열을 포함하는 이의 기재는 본원에 참조로 인용된다.

SEQUENCE LISTING <110> Schering Corporation <120> ANTI-IGFR1 ANTIBODY THERAPEUTIC COMBINATIONS <130> 5-1998-069738-4 <140> PCT/US2004/038842 <141> November 19, 2004 <150> 60/524,732 <151> November 21, 2003 <160> 14 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 384 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(384) <223> <400> 1 atg tcg cca tca caa ctc att ggg ttt ctg ctg ctc tgg gtt cca gcc 48 Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala 1 5 10 15 tcc agg ggt gaa att gtg ctg act cag agc cca ggt acc ctg tct gtg 96 Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val 20 25 30 tct cca ggc gag aga gcc acc ctc tcc tgc cgg gcc agt cag agc att 144 Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile 35 40 45 ggt agt agc tta cac tgg tac cag cag aaa cca ggt cag gct cca agg 192 Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 50 55 60 ctt ctc atc aag tat gca tcc cag tcc ctc tca ggg atc ccc gat agg 240 Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Ile Pro Asp Arg 65 70 75 80 ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc ctc acc atc agt aga 288 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg 85 90 95 ctg gag cct gaa gat ttc gca gtg tat tac tgt cat cag agt agt cgt 336 Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg 100 105 110 tta cct cac act ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt aca 384 Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 115 120 125 <210> 2 <211> 128 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala 1 5 10 15 Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val 20 25 30 Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile 35 40 45 Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 50 55 60 Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Ile Pro Asp Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg 85 90 95 Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg 100 105 110 Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 115 120 125 <210> 3 <211> 411 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(411) <223> <400> 3 atg gag ttt ggg ctg agc tgg gtt ttc ctt gtt gct ata tta aaa ggt 48 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 gtc cag tgt gag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gga ggc ttg gta aag 96 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30 cct ggg ggg tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc 144 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 agt agc ttt gct atg cac tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg 192 Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg ata tca gtt att gat act cgt ggt gcc aca tac tat gca gac 240 Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 65 70 75 80 tcc gtg aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc 288 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser 85 90 95 ttg tat ctt caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gct gtg tat 336 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 100 105 110 tac tgt gca aga ctg ggg aac ttc tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc 384 Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 115 120 125 caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca 411 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 4 <211> 137 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 65 70 75 80 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser 85 90 95 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 100 105 110 Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser Leu His 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 His Gln Ser Ser Arg Leu Pro His Thr 1 5 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Ser Phe Ala Met His 1 5 <210> 9 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 11 <211> 1367 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 1 5 10 15 Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu Ile 20 25 30 Cys Gly Pro Gly Ile Asp Ile Arg Asn Asp Tyr Gln Gln Leu Lys Arg 35 40 45 Leu Glu Asn Cys Thr Val Ile Glu Gly Tyr Leu His Ile Leu Leu Ile 50 55 60 Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 65 70 75 80 Ile Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 85 90 95 Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val Ile Arg Gly Trp Lys Leu Phe 100 105 110 Tyr Asn Tyr Ala Leu Val Ile Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp Ile 115 120 125 Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn Ile Thr Arg Gly Ala Ile Arg Ile Glu 130 135 140 Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu Ile 145 150 155 160 Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr Ile Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 165 170 175 Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 180 185 190 Glu Lys Thr Thr Ile Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 195 200 205 Asn Arg Cys Gln Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 210 215 220 Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 225 230 235 240 Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 245 250 255 Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 260 265 270 Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn Ile Leu Ser Ala 275 280 285 Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val Ile His Asp Gly Glu Cys Met 290 295 300 Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile Arg Asn Gly Ser Gln Ser Met Tyr 305 310 315 320 Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 325 330 335 Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln Gly 340 345 350 Cys Thr Ile Phe Lys Gly Asn Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly Asn 355 360 365 Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val Val 370 375 380 Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 385 390 395 400 Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu Gly 405 410 415 Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu Trp 420 425 430 Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr Ile Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 435 440 445 Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu Glu 450 455 460 Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr Arg 465 470 475 480 Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr 485 490 495 Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg Tyr 500 505 510 Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys 515 520 525 Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala Cys 530 535 540 Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys 545 550 555 560 Asp Val Glu Pro Gly Ile Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gln 565 570 575 Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp 580 585 590 His Ile Arg Gly Ala Lys Ser Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn Ala 595 600 605 Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser 610 615 620 Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn 625 630 635 640 Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly Tyr 645 650 655 Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg Lys 660 665 670 Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp Ile Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys 675 680 685 Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys 690 695 700 Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys 705 710 715 720 Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro Glu 725 730 735 Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser 740 745 750 Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp Pro 755 760 765 Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn 770 775 780 Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg 785 790 795 800 Ile Asp Ile His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser 805 810 815 Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp 820 825 830 Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser Ile 835 840 845 Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu Met 850 855 860 Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys Val 865 870 875 880 Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu 885 890 895 Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser Gly 900 905 910 Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gln Ala Lys Thr 915 920 925 Gly Tyr Glu Asn Phe Ile His Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala Val 930 935 940 Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His Arg 945 950 955 960 Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser Val 965 970 975 Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp 980 985 990 Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile Thr Met Ser Arg Glu Leu Gly Gln Gly 995 1000 1005 Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu Gly Val Ala Lys Gly Val Val Lys 1010 1015 1020 Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala Ile Lys Thr Val Asn Glu Ala 1025 1030 1035 Ala Ser Met Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu Asn Glu Ala Ser Val 1040 1045 1050 Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val Arg Leu Leu Gly Val 1055 1060 1065 Val Ser Gln Gly Gln Pro Thr Leu Val Ile Met Glu Leu Met Thr 1070 1075 1080 Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg Pro Glu Met 1085 1090 1095 Glu Asn Asn Pro Val Leu Ala Pro Pro Ser Leu Ser Lys Met Ile 1100 1105 1110 Gln Met Ala Gly Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn Ala 1115 1120 1125 Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val 1130 1135 1140 Ala Glu Asp Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg 1145 1150 1155 Asp Ile Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu 1160 1165 1170 Leu Pro Val Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val 1175 1180 1185 Phe Thr Thr Tyr Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp 1190 1195 1200 Glu Ile Ala Thr Leu Ala Glu Gln Pro Tyr Gln Gly Leu Ser Asn 1205 1210 1215 Glu Gln Val Leu Arg Phe Val Met Glu Gly Gly Leu Leu Asp Lys 1220 1225 1230 Pro Asp Asn Cys Pro Asp Met Leu Phe Glu Leu Met Arg Met Cys 1235 1240 1245 Trp Gln Tyr Asn Pro Lys Met Arg Pro Ser Phe Leu Glu Ile Ile 1250 1255 1260 Ser Ser Ile Lys Glu Glu Met Glu Pro Gly Phe Arg Glu Val Ser 1265 1270 1275 Phe Tyr Tyr Ser Glu Glu Asn Lys Leu Pro Glu Pro Glu Glu Leu 1280 1285 1290 Asp Leu Glu Pro Glu Asn Met Glu Ser Val Pro Leu Asp Pro Ser 1295 1300 1305 Ala Ser Ser Ser Ser Leu Pro Leu Pro Asp Arg His Ser Gly His 1310 1315 1320 Lys Ala Glu Asn Gly Pro Gly Pro Gly Val Leu Val Leu Arg Ala 1325 1330 1335 Ser Phe Asp Glu Arg Gln Pro Tyr Ala His Met Asn Gly Gly Arg 1340 1345 1350 Lys Asn Glu Arg Ala Leu Pro Leu Pro Gln Ser Ser Thr Cys 1355 1360 1365 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ala Met His 1 5 10 <210> 13 <211> 128 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala 1 5 10 15 Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Val Pro Asp Phe Gln Ser Val 20 25 30 Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile 35 40 45 Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser 85 90 95 Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg 100 105 110 Leu Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 115 120 125 <210> 14 <211> 137 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 65 70 75 80 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser 85 90 95 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr 100 105 110 Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 130 135

Claims

(a)서열 5의 CDR-L1, 서열 6의 CDR-L2 및 서열 7의 CDR-L3를 포함하는 경쇄 아미노산 서열; 및 서열 8 또는 서열 12의 CDR-H1, 서열 9의 CDR-H2 및 서열 10의 CDR-H3를 포함하는 중쇄 아미노산 서열로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원을 포함하는 하나 이상의 결합 조성물과 공동으로 (b) 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 조합물.
제1항에 있어서, 결합 조성물이 서열 5의 CDR-L1, 서열 6의 CDR-L2 및 서열 7의 CDR-L3를 포함하는 분리된 경쇄 아미노산 서열; 및 서열 8 또는 서열 12의 CDR-H1, 서열 9의 CDR-H2 및 서열 10의 CDR-H3를 포함하는 분리된 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 조합물.
제2항에 있어서, 결합 조성물이 서열 2의 아미노산 20 내지 128번을 포함하는 분리된 경쇄 면역 글로불린 및 서열 4의 아미노산 20 내지 137번을 포함하는 분리된 중쇄 면역 글로불린을 포함하는 조합물.
제1항에 있어서, 화학치료제가 탁산, 토포이소머라제 억제제, 단일의 형질도입 억제제, 세포 주기 억제제, IGF/IGFR1 시스템 조정인자, 파르네실 단백질 트랜스퍼라제(FPT) 억제제, 내피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제, HER2 억제제, 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체 억제제, 유사분열물질 활성화된 단백질(MAP) 키나제 억제제, MEK 억제제, AKT 억제제, mTOR 억제제, pI3 키나제 억제제, Raf 억제제, 사이클린 의존성 키나제(CDK) 억제제, 미세관 안정화제, 미세관 억제제, SERM/항에스트로겐, 아로마타제 억제제, 안트라사이클린, 프로테오솜 억제제, 인슐린-유사 성장 인자(IGF) 생산을 억제하는 제제 및/또는 IGFR1, IGF-1 또는 IGF2의 항-센스 억제제로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 구성원인 조합물.
제4항에 있어서, 화학치료제가 파클리탁셀 및 도세탁셀중에서 선택된 탁산인 조합물.
제4항에 있어서, 화학치료제가 빈크리스틴, 빈블라스틴, 포도필로톡신, 에포틸론 B, BMS-247550 및 BMS-310705로부터 선택된 미세관 억제제인 조합물.
제4항에 있어서, 화학치료제가 게피티니브, 에를로티니브, 세툭시마브, ABX-EGF, 라파타니브, 카네르티니브, EKB-569 또는 PKI-166중에서 선택된 내피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제인 조합물.
제4항에 있어서, 화학치료제가 로나파르니브 또는 티피파르니브(R155777)중에서 선택된 파르네실 단백질 트랜스퍼라제 억제제인 조합물.
제4항에 있어서, 화학치료제가 타목시펜, 랄록시펜, 풀베스트란, 아콜비펜, 피펜독시펜, 아르족시펜, 토레미펜, 라소폭시펜, 바제독시펜(TSE-424), 이독시펜, HMR-3339 및 ZK-186619중에서 선택된 선택적인 에스트로겐 수용체 조정인자(SERM)/항에스트로겐인 조합물.
제4항에 있어서, 화학치료제가 독소루비신, 다우노루비신 및 에피루비신중에서 선택된 안트라사이클린인 조합물.
제4항에 있어서, 화학치료제가 트라스투주마브, HKI-272, CP-724714 또는 TAK-165중에서 선택된 HER2 억제제인 조합물.
제4항에 있어서, 화학치료제가 에토포시드, 토포테칸, 캄프토테신 및 이리노테칸중에서 선택된 토포이소머라제 억제제인 조합물.
제1항에 따른 조합물과 함께 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
(a) 서열 2의 아미노산 20 내지 128번을 포함하는 경쇄 면역 글로불린 및 서열 4의 아미노산 20 내지 137번을 포함하는 중쇄 면역 글로불린을 포함하는 하나 이상의 완전한-사람 모노클로날 항체와 공동으로;

(b) 하기 식중에서 선택된 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 조합물:
치료학적 유효량의 제1항에 따른 조합물을 인슐린-유사 성장 인자 수용체-I(IGFR1)의 상승된 발현 또는 활성에 의해 매개된 의학 상태의 치료 또는 예방이 요구되는 대상체에게 투여함을 포함하여, 상기 대상체에서 인슐린-유사 성장 인자 수용체-I(IGFR1)의 상승된 발현 또는 활성에 의해 매개된 의학 상태를 치료 또는 예방하는 방법.
제15항에 있어서, 결합 조성물이 서열 2의 아미노산 20 내지 128번을 포함하는 분리된 경쇄 면역 글로불린 및 서열 4의 아미노산 20 내지 137번을 포함하는 분리된 중쇄 면역 글로불린을 포함하는 방법.
제15항에 있어서, 화학치료제가 하기 화학식으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 구성원인 방법:
제15항에 있어서, 의학 상태가 말단거대증, 방광암, 윌름스암(Wilm's cancer), 난소암, 췌장암, 전립샘 비대, 유방암, 전립샘 암, 골암, 폐암, 결직장암, 경부암, 윤활막육종, 전이유암종 관련 설사, 혈관활성 장 펩타이드 분비 종양, 거인증, 건선, 죽상경화증, 혈관의 평활근 재협착 및 부적절한 미세혈관 증식, 류마티스 관절염, 그레이브스병(Grave's disease), 다발 경화증, 전신홍반루푸스, 하시모토 갑상선염, 중증 근육 무력증, 자가-면역 갑상선염, 베체트병(Bechet's disease)으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
제15항에 있어서, 조합물이 대상체에게 비경구 경로로 투여되는 방법.
(a) 치료학적 유효량의, 서열 2의 아미노산 20 내지 128번을 포함하는 경쇄 면역 글로불린 및 서열 4의 아미노산 20 내지 137번을 포함하는 중쇄 면역 글로불린을 포함하는 하나 이상의 완전한 사람 모노클로날 항체와 공동으로

(b) 치료학적 유효량의 하기 화학식중에서 선택된 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 조합물을 의학 상태의 치료 또는 예방이 요구되는 대상체에게 투여함을 포함하여, 상기 대상체의 의학 상태를 치료 또는 예방하는 방법:

.
제20항에 있어서, 의학 상태가 말단거대증, 방광암, 윌름스암(Wilm's cancer), 난소암, 췌장암, 전립샘 비대, 유방암, 전립샘 암, 골암, 폐암, 결직장암, 경부암, 윤활막육종, 전이유암종 관련 설사, 혈관활성 장 펩타이드 분비 종양, 거인증, 건선, 죽상경화증, 혈관의 평활근 재협착 및 부적절한 미세혈관 증식, 류마티스 관절염, 그레이브스병, 다발 경화증, 전신홍반루푸스, 하시모토 갑상선염, 중증 근육 무력증, 자가-면역 갑상선염, 베체트병 중에서 선택되는 방법.
악성 세포를 제1항에 따른 조합물과 접촉시킴을 포함하여, 악성 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법.
제22항에 있어서, 세포가 시험관 내에 존재하는 방법.
제22항에 있어서, 결합 조성물이 서열 2의 아미노산 20 내지 128번을 포함하는 분리된 경쇄 면역 글로불린 및 서열 4의 아미노산 20 내지 137번의 분리된 중쇄 면역 글로불린을 포함하는 방법.
제22항에 있어서, 화학치료제가 하기 화학식으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 구성원인 방법:
제22항에 있어서, 세포가 비-소 세포 폐 암종, 유방암 세포, 난소암 세포, 결직장암 세포, 전립샘 암 세포, 소아암 세포 또는 췌장 암 세포중에서 선택되는 방법.
제26항에 있어서, 세포가 NCI-H322 세포, A2780 세포 또는 MCF7 세포인 방법.
서열 5의 CDR-L1, 서열 6의 CDR-L2 및 서열 7의 CDR-L3을 포함하는 분리된 경쇄 아미노산 서열; 및 서열 8 또는 서열 12의 CDR-H1, 서열 9의 CDR-H2 및 서열 10의 CDR-H3를 포함하는 분리된 중쇄 아미노산 서열로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원을 포함하는 하나 이상의 결합 조성물과 공동으로

(b) 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 키트.
제28항에 있어서, 결합 조성물 및 화학치료제가 별개의 용기 내에 존재하는 키트.